JPS63196849A - 一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は水性液体試料中の予め定められた成分を分析す
るための改良された乾式の一体型多層分析要素に関する
もので、詳しくは水性液体試料。

特に血液、リンパ液、唾液、尿等の生物体液を水性液体
試料として用いる臨床検査に有用な一体型多層分析要素
に間するものである。

［従来の技術］ 乾式分析要素の一形態として、透明光透過性水不透過性
支持体の上に呈色反応試薬を親水性ポリマーバインダー
に分散含有させた吸水性の呈色試薬層と最外層に多孔性
展開層（展開層ということがある）を接着積層した一体
型多層分析要素（多層分析要素ということがある）が多
数提案されている。多層分析要素の展開層はその上側表
面（透明支持体から遠い側の表面）に点着供給された水
性液体試料（例、血液（全血、血漿、血清）、リンパ液
、唾液、髄液、ｌ！！液、尿；飲料水、酒類、河川水；
種々の排水等）を液体試料中に含有されている成分を実
質的に偏在させることなしに横方向に拡げ単位面積当り
ほぼ一定容量の割合で吸水性の呈色試薬層に代表される
親水性ポリマーバインダーを含有する吸水性の層に供給
する作用（メータリング作用）をする層である。

特開昭６２−６１６７には弗素化界面活性剤が含有され
た全乳酸デヒドロゲナーゼ定量用一体型多層分析要素が
記載されている。この多層分析要素では展開層、下塗層
、試薬層、記録層（ＲｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎＬａｙｅ
ｒ）のいずれかの１層又は２以上の層に弗素化界面活性
剤を含有させることにより、精度の改善（偶然誤差に起
因する偏差係数値の減少）が達成されている。しかし、
この多層分析要素の多孔性展開層はポリマーミクロビー
ズ、ガラスミクロビーズ、珪藻土が親水性ポリマーバイ
ンダーに保持されてなる連続微空隙含有非繊維等方的多
孔性展開層（特公昭５３−２１６７７、米国特許３９９
２１５８等に記載）、ポリマーミクロビーズが水で膨潤
しないポリマー接着剤で点接触状に接着されてなる連続
微空隙含有多孔性層（三次元格子状粒状構造物層、特開
昭５５−９０８５９に記載）からなる非繊維等方的多孔
性展開層に限られている。

［従来の技術の問題点］ 展開層に界面活性剤、好ましくはｐ−ノニルフェノキシ
ポリエトキシエタノール等のノニオン性界面活性剤を含
有させることにより水性液体試料の展開作用（メータリ
ング作用）がより良好になることが知られている。しか
し、ノニオン性界面活性剤で良化できる展開作用の範囲
は狭いことも知られている。

一方、特開昭６２−６１６７にに記載の弗素化界面活性
剤が含有された全乳酸デヒドロゲナーゼ定量用一体型多
層分析要素における精度の改善（偶然誤差に起因する偏
差係数値の減少）は、非繊維等方的多孔性展開層と弗素
化界面活性剤を組合せた態様において、弗素化界面活性
剤がアナライト（測定対象成分）である乳酸デヒドロゲ
ナーゼ（Ｌ　Ｄ　Ｈ）とその基質との反応に連携するこ
とによりＬＤＨのレベルが低い範囲において測定精度が
向上することに依るとされている。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明の目的は展開作用くメータリング作用）が損なわ
れることなしに広範囲にわたって展開面積をコントロー
ルできる多孔性展開層を有する一体型多層分析要素を提
供することである。

本発明の他の目的は展開層の素材の種類を問わず展開作
用（メータリング作用）が損なわれることなしに広範囲
にわたって展開面積をコントロールできる多孔性展開層
を有し、高い定量分析精度の多層分析要素を提供するこ
とである。

本発明の他の目的は繊維質の布く織物又は編物）からな
る多孔性展開層において特にメータリング作用が損なわ
れることなしに広範囲にわたって展開面積をコントロー
ルできる多孔性展開層を有し。

高い定量分析精度の多層分析要素を提供することである
。

本発明の他の目的はメータリング作用の損なわれること
なしに広範囲にわたって展開面積をコントロール可能な
展開層を設けることにより、精度の高い微量生体成分の
定量分析の実施可能な多層分析要素を提供することであ
る。

［発明の構成］ 本発明は、光透過性水不透過性支持体の上に少なくとも
１層の試薬層と多孔性展開層がこの順に積層されてなる
一体型多層分析要素において、少なくとも前記展開層に
弗素含有界面活性剤が含有されている一体型多層分析要
素である。

［発明の構成の詳細な説明コ 本発明の一体型多層分析要素の光透過性水不透過性支持
体としては従来公知の多層分析要素に用いられている光
透過性（透明な）水不透過性支持体を用いることができ
る。その具体例としてはポリエチレンテレフタレート、
ビスフェノールへのポリカルボネート、ポリスチレン、
セルロースエステル（例、セルロースジアセテート、セ
ルローストリアセテート、セルロースアセテートピロビ
オネート等）等のポリマーからなる厚さ約５０ｕｍから
約１ｍｍ、好ましくは約８０ｕｍから約３００ｕｍの範
囲の透明な、すなわち波長的２００ｎｍから約９００ｎ
ｍの範囲内の少なくとも一部の波長範囲の電磁輻射線を
透過させる平滑な表面を有するフィルム状（シート状）
または平板状の支持体を用いることができる。支持体の
表面には必要に応じて公知の下塗層または接着層を設け
て支持体の上に設けられる吸水層または呈色試薬層等と
支持体との接着を強固にすることができる。

試薬層は水性液体試料中の測定対象成分（アナライト）
と反応して検出可能な変化を生じさせる１種類の試薬又
は複数の成分からなる試薬組成物（以下両者を総称して
単に試薬組成物又は試薬という）と親水性ポリマーバイ
ンダーを含む実質的に非孔性で吸水性の層又は微多孔性
で水浸透性の層である。検出可能な変化とは主として光
学的測定方法により検出できる変化を意味しており９例
えば色変化９発色（呈色）、蛍光発生、紫外線領域にお
ける吸収波長の変化、混濁発生等である。

試薬層に含有される試薬組成物は水性液体試料中のアナ
ライトとこのアナライトを分析するために選択した化学
反応、又は酵素が関与する（触媒する）生化学反応又は
化学反応によって決り９選択した化学反応が２種以上の
試薬成分又は酵素が関与する反応の場合にはそれらの試
薬成分又は酵素を１つの試薬層内に混合して含有させる
こともできるし、２種以上の試薬成分又は酵素を必要に
応じて２層以上の別個の層に含有させることもできる。

試薬層に含有させる試薬組成物として前記の諸特許明細
書に記載の酵素を含む試薬組成物やその他の公知の分析
試薬組成物及び臨床診断用試薬組成物等がある。

試薬層に含有させる酵素を少なくとも１種含む試薬組成
物の例としては、米国特許３９９２１５８゜特公昭５３
−２１６７７　、特開昭５４−２６７９３　、特開昭５
５−１６４３５６、特開昭５９−２０８５３　、特開昭
５９−４６８５４　、特開昭５９−５４９６２　、特公
昭５５−２５８４０等に記載のグルコースオキシダーゼ
とペルオキシダーゼを含むグルコース分析用改良トライ
ンダー（’ｌ’　ｒｉｎｄｅｒ）試薬組成物、特公昭５
６−４５５９９．特開昭５９−１９３３５２等に記載の
コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼと必要
により配合されるコレステロールエステラーゼを含むコ
レステロール分析用試薬組成物、特開昭５２−３４８８
．特開昭５８−７７６６１　、特開昭５５−７０４６０
等に記載のウレアーゼを含む尿素態窒素（ＢＵＮ）分析
用試薬組成物、特開昭５３−２４８９３等に記載のリボ
プロティンリパーゼ、グリセロールキナーゼ。

α−グリセロール−３−燐酸オキシダーゼ、ペルオキシ
ダーゼを含むトリグリセリドまたはグリセロール分析用
試薬組成物、特開昭５４−１５１１９３　、特開昭６０
−７８５８０に記載のビリルビン特異的酸化酵素とペル
オキシダーゼを含むビリルビン分析用試薬組成物、特開
昭５３−２６１８８．特開昭５９−１９３３５２等に記
載のウリカーゼとペルオキシダーゼを含む尿酸分析用試
薬組成物、特開昭５５−１２４４９９．特開昭５８−８
６４５７等に記載のペルオキシダーゼを含む過酸化水素
検出用呈色試薬組成物等がある。

実質的に非孔性で吸水性の試薬層（非孔性試薬層という
ことがある）に用いられる親水性ポリマーバインダーは
、少なくとも、試薬組成物を実質的に均一に溶解又は分
散させる媒体として作用し。

また水性液体試料中の水を吸収して水とともにアナライ
トを試薬層に到達させる作用を有するものである。親水
性ポリマーバインダーとしては、後述する吸水層に用い
られるのと同様な親水性ポリマーバインダー用いること
ができる。

非孔性試薬層の乾燥時厚さは約３ＬＩｌｌ＋から約５０
ＬＪＩ＋。

好ましくは約５ＬＩＩ１１から約４０ｕｍの範囲、被覆
量では約３ｇ１ｍ２から約５０ｇ／ｍ２．好ましくは約
５８７Ｉ１２から約４０３／ａ２の範囲である。

微多孔性で水浸透性の試薬層は固体微粒子と親水性ポリ
マーバインダーから構成されている微多孔性構造体層又
は後述する多孔性展開層に用いられるのと同様の繊維質
又は非ａｌｌ！質の微多孔性構造体層に試薬組成物が含
有保持されている微多孔性試薬層である。ここでいう固
体微粒子と親水性ポリマーバインダーから構成されてい
る微多孔性構造体層は、微多孔性微粒子又は非多孔性微
粒子と微粒子間を接着して微多孔性連続微空隙構造を保
持する親水性ポリマーバインダーからなる構造物の層で
、特開昭５９−１２０９５７　、特開昭５９−１４５９
６５　。

特開昭６０−２２２７７０等に詳細に記載されている試
薬層である。微多孔性試薬層の乾燥厚さは、固体微粒子
と親水性ポリマーバインダーから構成されている場合に
は約７−から約５０１ＪｒＩ＋、好ましくは約１０ｔＪ
Ｔ１から約４０＋ｊｎの範囲、後述する多孔性展開層に
用いられるのと同様の繊維質又は非繊維質の微多孔性構
造体層の場合には約５０ｕｍから約３００−９好ましく
は約８０ｕｍから約２５０ｕｍの範囲である。

いずれのタイプの試薬層にも公知のｐＨ緩衝剤。

有機カルボン酸、酸性ポリマー、塩基性ポリマー等を含
有させて分析操作時のｐ）Ｉを調節することができる。

さらに試薬層には公知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含
有させることができる。

非孔性試薬層は光透過性水不透過性支持体の上に前記の
諸特許明細書等に記載の公知の塗布方法により設けるこ
とができる。微多孔性試薬層は特開昭５９−１２０５９
７　、特開昭５９−１４５９６５等に記載の方法により
設けることができる。必要に応じて支持体の表面を公知
の物理化学的活性化処理又は化学的活性化処理し、ある
いは透明な下塗層（例、ゼラチン下塗層）を設けて支持
体と試薬層の間の接着力を強くすることができる。

本発明の多層分析要素においては、支持体と試薬層の間
に吸水層を設けることができる。吸水層は水を吸収して
膨潤する親水性ポリマーを主成分とする層で、吸水層の
界面に到達または浸透した水性液体試料の水を吸収でき
る層であり、全血試料を用いる場合には水性液体成分、
血漿の下側非繊維質多孔性シート（多孔性試薬層）への
浸透を促進する作用を有している。吸水層に用いられる
親水性ポリマーは水吸収時の膨潤率が３０℃で約１５０
％から約２０００％、好ましくは約２５０％から約１５
００％の範囲のポリマーである。親水性ポリマーの具体
例として特開昭５９−１７１８６４．特開昭６０−１１
５８５９等に開示の酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン
等のゼラチン、フタル化ゼラチン、ヒドロキシアクリレ
ートグラフトゼラチン等のゼラチン誘導体、特開昭５９
−１７１８６４．特開昭６０−１１５８５９等に開示の
アガロース、プルラン、プルラン誘導体、ポリアクリル
アミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン
等がある。これらの親水性ポリマーは単独で、あるいは
２種以上を組合せて用いることができる。吸水層には一
般的にはゼラチンまたはゼラチン誘導体が好ましいが、
アナライトがアルブミンや総蛋白等の場合には蛋白誘導
体のゼラチン以外の親水性ポリマー、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルアルコール等を用いるのが好ましい。

吸水層の乾燥時の厚さは約１１．ｆｆＩ＋から約１００
ｕｎ、好ましくは約３−から約３０ｕｍの範囲、被覆量
では約１ｇｅｍ２から約１００ｇ／ｍ２．好ましくは約
３ｇ／ｌ１２から約３０ｇｅｒｍ２の範囲である。吸水
層には公知のｐＨ緩衝剤。

有機カルボン酸、酸性ポリマー、塩基性ポリマー等を含
有させて使用時（分析操作実施時）のｐＨを調節するこ
とができる。さらに吸水層には公知の媒染剤、ポリマー
媒染剤等を含有させることができる。

試薬層及び吸水層は実質的に透明であることが好ましい
が、必要に応じて試薬層又は吸水層中に二酸化チタン微
粒子、硫酸バリウム微粒子、カーボンブラック等を少量
分散含有させて光学的性能を調節することができる。

麻工至亘 多孔性展開層としては特開昭５５−１６４３５６．特開
昭５７−６６３５９等に記載の織物展開層（例、ブロー
ド、ボブリン等の平織等）、特開昭６０−２２２７６９
等に記載の編物展開層（例、トリコット編、ダブルトリ
コット編、ミラニーズ編等）、特開昭５７−１４８２５
０に記載の有機ポリマー！Ｉｔバルブ含有抄造紙からな
る屓開層、特公昭５３−２１６７７、米国特許３９９２
１５８等に記載のメンブランフィルタ（プラッシュポリ
マ一層）。

ポリマーミクロビーズ、ガラスミクロビーズ、珪藻土が
親水性ポリマーバインダーに保持されてなる連続微空隙
含有多孔性層等の非繊維等方的多孔性展開層、特開昭５
５−９０８５９に記載のポリマーミクロビーズが水で膨
潤しないポリマー接着剤で点接触状に接着されてなる連
続微空隙含有多孔性層（三次元格子状粒状構造物層）か
らなる非！ｔｉ維等方的多孔性展開層等を用いることが
できる。

これらの多孔性展開層のうちで試薬組成物を展開層中に
含有保持させる態様（微多孔性試薬層を有する態様の１
種）においては、試薬組成物を展開層中に含有保持させ
やすい点で織物展開層、榎物展開層に代表される繊維質
展開層が好ましい。

また、この態様においては、吸水層の上に直接。

又は光遮蔽層、接着層を介して、展開層を設けた構成と
することが好ましい。

多孔性展開層に用いられる織物生地または編物生地は特
開昭５７−６６３５９に記載のグロー放電処理またはコ
ロナ放電処理に代表される物理的活性化処理を布生地の
少なくとも片面に施すか、または特開昭５５−１６４３
５６．特開昭５７−６６３５９等に記載の水洗脱脂処理
、親水性ポリマー含浸等親水化処理、またはこれらの処
理工程を適宜に組み合せて逐次実施することにより布生
地を親水化し、下側（支持体に近い側）の層との接着力
を増大させることができる。

試薬層または吸水層と展開層との間に色遮蔽層または光
反射層を設けることができる。色遮蔽層または光反射層
は光遮蔽性または光遮蔽性と光反射性を兼ね備えた二酸
化チタン微粒子または硫酸バリウム微粒子等の白色微粒
子をゼラチン等の親水性ポリマーバインダーに分散含有
してなる乾燥時の厚さ約２１ＪＩｒ＋から約２０−の範
囲の層である。

さらに試薬層、吸水層２色遮蔽層または光反射層の上に
は展開層を強固に接着一体化する目的でゼラチンに代表
される親水性ポリマーからなる公知の接着層を設けるこ
とができる。接着層の乾燥時の厚さは約０．５層ｍから
約５−の範囲である。

本発明の一体型多層分析要素には液体試料を適用しての
分析操作実施時のｐＨ値を２．０から１０．０の範囲の
所望の値に緩衝できる公知の緩衝剤から適宜選択して多
孔性展開層、試薬層、吸水層、接着層、光遮蔽層等のい
ずれか１層又は２以上の層に含有させることができる。

用いうる緩衝剤としては９日本化学会編「化学便覧　基
礎編」（東京、丸善■、１９６６年発行）　１３１２−
１３２０頁、　Ｒ、Ｍ、　Ｃ、Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａ
ｔ編ｒＤａｔａ　ｆｏｒＢ　１ｏｃｈｅａ＋１ｃａｌ　
Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ第５ｅａｒｃｈＪｒｄ　ａｔ　ｔｈ
ｅＣＩａｒｅｎｄｏｎＰ　ｒｅｓｓ、１９６９年発行）
４７６−５０８頁。

ｒ　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　互、　４６７−４
７７頁（１９６６年）＋’Ａｎａ−Ｉｙｔｉｃａｌ　　
ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　Ｐａ、　３００−３１０
頁（１９８０年）等に記載のｐＨ１ｌ衝剤系がある。

ｐＨ２，０から１Ｏ１０の範囲のｐｕｌｌ衝剤の具体例
としてトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒ
ｉｓ）を含む緩衝剤；燐酸塩を含む緩衝剤；硼酸塩を含
む緩衝剤；ｎ備酸又はｒａｍ酸塩を含む緩衝剤；グリシ
ンを含む緩衝剤；　　Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエ
チル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）　：　　Ｎ−２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−ヒドロキシプロパ
ン−３−スルホン酸（）ＩＥＰＰｓ）Ｎａ塩又はに塩等
；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−３−ス
ルホン酸（ＥＰＰＳ）　Ｎａ塩又はに塩等；Ｎ−［）リ
ス（ヒドロキシメチル）メチル］−３・アミノプロパン
スルホン酸（ＴＡＰＳ）　Ｎａ塩又はに塩等；Ｎ−２−
ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホ
ン酸（ＨＥＰＥＳ）Ｎａ塩またはに塩等；及びこれらの
いずれかと必要により組合せられる酸、アルカリ又は塩
がある。好ましい緩衝剤の具体例として。

燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム；Ｔｒｉｓ
−硼酸ナトリウム；Ｔｒｉｓ−硼酸ナトリウム−ＥＤＴ
Ａ・２Ｎａ塩；Ｔｒｉｓ−杓幡酸：酢酸−酢酸ナトリウ
ム；杓鴫酸−燐酸二水素ナトリウム；　Ｂｉｃｉｎｅ　
：ＨＥＰＰＳ　；　ＨＥＰＰＳナトリウム塩；　ＥＰＰ
Ｓ　；　ＥＰＰＳナトリウム塩；　ＴＡＰＳ　；　ＴＡ
ＰＳナトリウム塩等がある。

本発明の一体型多層分析要素の多孔性展開層又は試薬組
成物含有多孔性展開層に含有させる弗素含有界面活性剤
は、２５℃における０、１”／Ｗ％水溶液の表面張力が
約４５ｄｙｎｅ／ｃｍ以下、好ましくは約３０ｄｙｎｅ
／ｃｍ以下のフルオロアルキル基含有有機化合物である
。弗素含有界面活性剤の例として、高橋。

電波、小池、小林共著「界面活性剤ハンドブック」（東
京、工学図書■、１９８０年増補８版発行）３０〜３４
頁等に記載の公知のフルオロアルキル基含有有機化合物
がある。フルオロアルキル基のうちで、好ましいものは
、炭素原子数３以上のベルフルオロアルキル基である。

弗素含有界面活性剤の例として。

炭素原子数３以上のベルフルオロアルキル基を少なくと
も１個含有するスルホン酸又はその塩、カルボン酸又は
その塩、スルホンンアミド、アルキルポリエトキシエタ
ノール、ベタイン化合物、第四級アンモニウム塩、及び
二塩基カルボン酸モノエステルがある。弗素含有界面活
性剤の具体例を以下に示す。

以下の化学式において記号は次の意味を表す。

Ｍｅ：メチル基　　Ｅｔ：エチル基 Ｐｒ：ブロビル基　−Ｐｈｎ−：フエニレン基■炭素原
子数３以上のベルフルオロアルキル基を少なくとも１個
含有するカルボン酸又はその塩：Ｃ，Ｆ、３ＣＯＯＨ ０７ＦＩＳＣＯＯＨ ＣｅＦ　１７ＣＯＯＨ ０１０Ｆ２１ＣＯＯＨ （ＣＦ３）ＣＦ（ＣＦ２）４ＣＯＯＨ ０１１Ｆ２３ＣＯＯＨ （ＣＦ３）２（ＣＦ２）ＳＣＨ：ＣＨＣＨ２ＣＯＯＨＣ
７Ｆｔｓ−Ｐｈｎ−ＣＯＯＨ 上記の化合物のＮａ塩、に塩、Ｌｉ塩 塩度炭素原子数３以上ベルフルオロアルキル基を少なく
とも１個含有するスルホン酸又はその塩：Ｃ３Ｆ１７Ｓ
Ｏ３Ｈ Ｃ９Ｆ１９Ｓ０３Ｈ Ｃ，、Ｆ２３ＳＯ３Ｈ Ｃ６Ｆ１７−Ｐｈｎ−Ｓ　０３Ｈ ＣｇＦｌｇ−Ｐｈｎ−３０３Ｈ 上記の化合物のＮａ塩、に塩、Ｌｉ塩 塩度炭素原子数３以上ベルフルオロアルキル基を少なく
とも１個含有するスルホンアミド化合物：ＣｇＦ　１ｇ
−５０２−Ｎ−ＣＨ２ＣＯＯＫｒ ＣＢＦ　１７−５０２−Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２０）ＩＩＨ
Ｅ　ｔ　　　　　　　　（ｎ：平均１４）Ｃ１１Ｆ２３
−Ｓ０２−Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２０）ｍＨＭ　ｅ　　　　
　　　（ｎ　：平均１５）■炭素原子数３以上のベルフ
ルオロアルキル基を少なくとも１個含有するアルキルポ
リエトキシエタノール化合物： Ｃ７Ｆ１５ＣＨ２０−（ＣＨ２ＣＨ２０）ｈＨ（ｎ：平
均１５）Ｃ１１Ｆ２３ＣＨ２０−（ＣＨ２ＣＨ２０）＋
＝Ｈ（ｎ：平均３０）Ｃ３Ｆ７ＣＨ２０−（ＣＨ２ＣＨ
２０）、Ｈ（ｎ：平均５）Ｃ９Ｆ１９ＣＯＯＣＨ２ＣＨ
２０−（ＣＨ２ＣＨ２０）、Ｈ（ｎ：平均１５） ■炭素原子数３以上のベルフルオロアルキル基を少なく
とも１個含有するベタイン型化合物：Ｃ６Ｆ１４−３０
２Ｎ　Ｈ−（ＣＨｚ）３−Ｎ”Ｍｅ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ
Ｏ− ＣｇＦ　１ｇ−ＣＯＮ　Ｈ−（ＣＨｚ）３−Ｎ”Ｍｅ２
ＣＨ２ＣＯＯ− ■炭素原子数３以上のベルフルオロアルキル基を少なく
とも１個含有する第四級アンモニウム塩化合物： Ｃ７Ｆ　１５−ＣＯＮ　Ｈ−（ＣＨｚ）３−Ｎ”Ｍｅ３
　＊　Ｉ　３ＣＢＦ１７−Ｓ　０２Ｎ　Ｈ−（ＣＨｚ）
３−Ｎ”Ｍｅ３　・ＣＩ−■炭素原子数３以上のベルフ
ルオロアルキル基を少なくとも１個含有する二基基カル
ボン酸モノエステル化合物： 上記の化合物のＮａ塩、に塩、Ｌｉ塩 木本発明多層分析要素に弗素含有界面活性剤として用い
ることができるベルフルオロアルキル基を少なくとも１
個含有する弗素含有化合物は上記の例示化合物に限定さ
れず、水溶液の表面張力が前記の範囲になるような弗素
含有化合物であれば用いることができることはいうまで
もない。また弗素含有化合物は２種類以上を混合して、
あるいは２種類以上の混合物を用いることができる。弗
素含有界面活性剤の多孔性展開層又は試薬組成物含有多
孔性展開層における含有量は一般的には約１１Ｉｇ／ｍ
２〜約１０．０ｇ／ｎ＋２．好ましくは約１０１１３／
Ｉ”　〜約５．０ｇ／ｍ”の範囲である。

多孔性展開層に弗素含有界面活性剤を含有させるための
処理方法としては、弗素含有界面活性剤の溶液に展開層
用の多孔性構造物シート状物（織物生地、ｌｉ物生地、
メンブランフィルタ等）を浸漬し乾燥させて多孔性構造
物シート状物中に弗素含有界面活性剤を含浸保持させ、
その後に一ト状物を試薬層、接着層又は光遮蔽層に接着
一体化する方法、完成した多層分析要素の多孔性展開層
の上から弗素含有界面活性剤の溶液を塗布（オーバーコ
ート）シ、溶媒を乾燥除去して展開層中に弗素含有界面
活性剤を残留させる方法等がある。いずれの方法におい
ても弗素含有界面活性剤を溶解する溶媒としては、水、
有機溶媒（例、メタノール、エタノール、アセトン）、
水と有機溶媒との混合溶媒を用いることができる。

弗素含有界面活性剤は他の種類の界面活性剤と併用する
ことができる。併用できる界面活性剤の例としてノニオ
ン性界面活性剤がある。

試薬層、吸水層９色遮蔽層または光反射層、接着層、展
開層、試薬組成物を含有する展開層等には界面活性剤を
含有させることができる。その例としてノニオン性界面
活性剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例として、
ｐ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｐ−
ノニルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシ
エチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシ
ドール、オクチルグルコシド等がある。ノニオン性界面
活性剤を弗素含有界面活性剤とともに展開層に含有させ
ることにより水性液体試料の展開作用（メータリング作
用）がより良好になる。ノニオン性界面活性剤を試薬層
または吸水層に含有させることにより分析操作時に水性
液体試料中の水が試薬層または吸水層に実質的に一様に
吸収されやすくなり、また展開層との液体接触が迅速に
かつ実質的に一様になる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書に記載の公
知の方法により調製することができる。

本発明の多層分析要素は一辺約１５＋ｓ■から約３０ｍ
−の正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し
、特公昭５７−２８３３１　、実開昭５６−１４２４５
４．特開昭５７−６３４５２．実開昭５８−３２３５０
．特表昭５８−５０１１４４等に記載のスライド枠に収
めて化学分析スライドとして用いることが、ｌｌ造、包
装、輸送、保存、測定操作等諸種の観点で好ましい。使
用目的によっては。

長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて用いる
こと、または小片を間口のあるカードに貼付または収め
て用いることなどもできる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により液体試料中の被検成分の分析を実施できる。

すなわち約６μＬから約３０μＬ、好ましくは８μＬか
ら１５μＬの範囲の全血、血漿、血清等の水性液体試料
中を展開層に点着し、１分から１０分の範囲で、約２０
℃から約４０℃の範囲の実質的に一定の温度で、好まし
くは３７℃近傍の実質的に一定の温度でインクベーショ
ンし、光透過性支持体側から要素内の色、蛍光、混濁ま
たは紫外線の吸収極大波長またはその近傍の波長の光を
用いて試薬展開層の光学濃度を反射渕光し、予め作成し
た検量線を用いて比色測定法の原理により液体試料中の
被検成分含有量を求めることができる。点着する水性液
体試料の量、インクベーション時間と温度は一定にする
ことにより被検成分の定量分析を高精度で実施できる。

この測定操作は特開昭５６−７７７４６　、特開昭５８
−２１５６６、特開昭５８−１６１８６７等に記載の化
学分析装置により極めて容易な操作で高精度の測定をす
ることができる。

ｍ百 実施例１及び比較例１ 厚さ１８０ｕｍの無色透明ポリエチレンフタレート（Ｐ
　Ｅ　Ｔ）フィルム（支持体）の上に下記の被覆量のｐ
Ｈ緩衝剤含有吸水層を水溶液を塗布し乾燥して設けた。

ｐＨ緩衝剤含有吸水層の被覆量 林檎酸　　　　　　　　　　　　　　　３．０ｇ／ａ２
ＮａＯＨでｐＨ３，０に調整 Ｎ−ビニルピロリドン−アクリルアミド−メタリルアル
コール（組成重量比４Ｂ　−４８−４％）３元コポリマ
ー（親水性バインダー）　　３０ｇ／ｓ２次にｐＨ緩衝
剤含有吸水層を一様に水で湿潤させ。

吸水層の上に太さ１００番手相当のＰＥＴ紡績糸で織ら
れた厚さ１５０ｕｍのブロード織物布地を重ねて接着し
乾燥させて多孔性展開層を設けた。

展開層の上から第１表の成分被覆量になるように指示薬
と界面活性剤のメタノール溶液をオーバーコートし乾燥
させ、展開層中に指示薬と界面活性剤を含有させて２種
類のアルブミン定量分析用一体型多層分析要素（要素Ａ
１：本発明：要素Ｃ１：比較例）を調製した。

第　　１　　表 水性液体試料として９人血清アルブミン（ＨＳＡ）をそ
れぞれ１．５％、３．２％、４．５％、６．４％溶解含
有する生理食塩水の各ｌＯμＬを要素ＡＩ、ＣＩそれぞ
れの展開層に点着し、３７℃で６分インクベーションし
、中心波長６４０ｎ−の可視光で要素の発色光学濃度を
ＰＥＴ支持体側から反射測光し、さらにその際に展開層
側から水性液体試料の展開面積を測定し、第２表に記載
の結果を得た。

第　　２　　表 第２表のデータから９本発明の弗素含有界面活性剤を含
有させたアルブミン定量分析用一体型多層分析要素では
、弗素含有界面活性剤不含の比較要素（従来技術）に比
べて、水性液体試料の展開面積が約３０％小さくなり９
発色光学濃度値は大きくなり、その結果検量線の勾配が
平均約９０％大きくなり、Ｉｌ定精度が改善されること
が明らかになった。

実施例２及び比較例２ 厚さ１８０ｕｍの無色透明ＰＥＴフィルムの上に下記の
被覆量のビウレット試薬層を水溶液を塗布し乾燥して設
けた。

Ｌ　ｉ　ＯＨ９，６ｇ／ｗ２ Ｃｕ　Ｓ　０．　　　　　　　　　　　　　　８．０ｇ
／ｍ２酒石酸２　Ｎａ　　　　　　　　　　　　　２．
９ｇ／ｍ２酒石酸　　　　　　　　　　　　　　　４．
５ｇ／■２アクリルアミドーＮ−ビニルとロリドン（Ｈ
成型量比５０−５０％）２元コポリマー（親水性バイン
ダー”）　　　　　　　　３０ｇ／閤２ついでビウレッ
ト試薬層の上に実施例１と同様にして太さ１００番手相
当のＰＥＴ紡績糸で織られた厚さ１５０ＬＩＴ＋のブロ
ード織物布地を重ねて接着し乾燥させて多孔性展開層を
設けた。

ついで展開層の上から第３表の成分被覆量になるように
界面活性剤のメタノール溶液をオーバーコートし乾燥さ
せ、展開層中に界面活性剤を含有させて２種類の総蛋白
定量分析用一体型多層分析要素（要素Ａ２：本発明；要
素Ｃ２：比較例）をｖ４製した。

第　　３　　表 水性液体試料として、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）をそ
れぞれ３．１％、４．２％、５．５％、６．６％、８．
７％溶解含有する生理食塩水及びＢＳＡ不含の生理食塩
水の各ｌＯμＬを要素Ａ２．Ｃ２それぞれの展開層に点
着し、３７℃で６分インクベーションし、中心波長５４
０ｎ−の可視光で要素の発色光学濃度をＰＥＴ支持体側
から反射測光し、さらにその際に展開層側から水性液体
試料の展開面積を測定し、第４表に記載の結果を得た。

第　　４　　表 第　４　表（続き） 第４表のデータから９本発明の弗素含有界面活性剤を含
有させた総蛋白定量分析用一体型多層分析要素では、弗
素含有界面活性剤不含の比較要素（従来技術）に比べて
、水性液体試料の展開面積が約３０％小さくなり９発色
光学濃度値は大きくなり。

その結果検量線の勾配が平均約３５％大きくなり。

測定精度が改善されることが明らかになった。

実施例３及び比較例３ 厚さ１８０１Ｊ１１の無色透明ＰＥＴフィルムの上に下
記の被覆量の吸水層を水溶液を塗布し乾燥して設けた。

脱イオンゼラチン（Ｉｉ１水性バインダー）　　３０ｇ
／＋ｓ２ついで吸水層の上に実施例１と同様にして太さ
１００番手相当のＰＥＴ紡績糸で織られた厚さ１５０Ｉ
Ｊｎのブロード織物布地を重ねて接着し乾燥させて多孔
性展開層を設けた。

展開層の上から第５表の成分被覆量になるように界面活
性剤の水−メタノール混合溶媒（容積比１：１）溶液を
オーバーコートし乾燥させ、展開層中に界面活性剤を含
有させて２種類のヘモグロビン濃度定量分析用一体型多
層分析要素（要素Ａ３：本発明；要素Ｃ３：比較例）を
調製した。

■ＴＩ亘 第　　５　　表 弗素含有界面活性剤の化学式： ％式％ （−Ｐｈｎ−はフェニレン基を表す） 水性液体試料として９人ヘモグロビン（ＨＨｂ）　　　
　−をそれぞれ５ｇ／ｄＬ、　１０ｇ／ｄＬ、　１５３
／ｄＬ、２０ｇ／ｄＬ含有するコントロール血清及びＨ
Ｈｂ不含の生理食塩水の各１０ｕＬを要素Ａ３．Ｃ３そ
れぞれの展開層に点着し、中心波長５００ｎａ＋の可視
光で要素の発色光学濃度をＰＥＴ支持体側から反射測光
し、第６表に記載の結果を得た。さらにその際に展開層
側から水性液体試料の展開面積を測定したところ９本発
明の弗素含有界面活性剤を含有させたヘモグロビン濃度
定量分析用一体型多層分析要素では、弗素含有界面活性
剤不含の比較要素（従来技術）に比べて。

水性液体試料の展開面積が約３０％小さくなっていた。

第　　６　　表 第６表のデータから２本発明の弗素含有界面活性剤を含
有させたヘモグロビン濃度定量分析用一体型多層分析要
素では、弗素含有界面活性剤不合の比較要素（従来技術
）に比べて２発色光学濃度値は大きくなり、その結果検
量線の勾配が平均約２０％大きくなり、測定精度が改善
されることが明らかになった。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）光透過性水不透過性支持体の上に少なくとも１層
   の試薬層と多孔性展開層がこの順に積層されてなる一体
   型多層分析要素において、少なくとも前記展開層に弗素
   含有界面活性剤が含有されていることを特徴とする一体
   型多層分析要素。
2. （２）前記弗素含有界面活性剤が炭素原子数３以上のベ
   ルフルオロアルキル基を少なくとも１個含有するスルホ
   ン酸又はその塩、カルボン酸又はその塩、スルホンンア
   ミド、アルキルポリエトキシエタノール、ベタイン化合
   物、第四級アンモニウム塩、又は二塩基カルボン酸モノ
   エステルである特許請求の範囲第１項に記載の多層分析
   要素。
3. （３）前記展開層が繊維質展開層である特許請求の範囲
   第１項に記載の多層分析要素。
4. （４）前記繊維質展開層が織物又は編物布地からなって
   いる繊維質展開層である特許請求の範囲第３項に記載の
   多層分析要素。