JPS63219400A - 尿酸分析用一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は水性液体試料中の尿酸を分析するための改良さ
れた乾式の一体型多層分析要素に関するもので、詳しく
は水性液体試料、特に血液、リンパ液、唾液、尿等の生
物体液を水性液体試料として用いる臨床検査に有用な尿
酸定量分析用一体型多層分析要素に関するものである。

［従来の技術］ 乾式分析要素の一形態として、透明光透過性水不透過性
支持体の上に呈色反応試薬を親水性ポリマーバインダー
に分散含有させた吸水性の呈色試薬層と最外層に多孔性
展開履く展開層ということがある）を接着積層した尿酸
分析用、特に尿酸の定量分析に適した一体型多層分析要
素（多層分析要素ということがある）が特公昭５７−５
５１９．特開昭５９−１９３３５２．特開昭５９−１９
３３５３　、特開昭６１−４９６０等に提案され実用に
供されている。これらの諸特許明細書に記載の尿酸分析
用多層分析要素においては２体液中の尿酸の含有量が少
ないので発色光学濃度を増大させるために、呈色試薬組
成物中にトリアリールイミダゾールロイコ色素又はジア
リールイミダゾールロイコ色素を色原体として用いてい
る。

特公昭５６−３９１９８にはＬ−アスコルビン酸（ビタ
ミンＣ）が含まれる体液を用いる場合に発生する大きな
負誤差を排除する目的でアスコルビン酸オキシダーゼの
共存下にウレアーゼとレドックス呈色試薬系で尿酸の定
量分析を実施するのが有効であることを記載している。

特開昭５３−２７０９３　、特開昭５９−１９３３５２
．特開昭５９−１９３３５３　、特開昭６１−４９６０
には、ウレアーゼ含有尿酸分析用呈色試薬層と多孔性展
開層の間にアスコルビン酸オキシダーゼを含む約３．０
ｕｍ〜約４．０１ｆｆｉのゼラチン層を設けてアスコル
ビン酸が含まれる体液を用いる場合に発生する大きな負
誤差を排除した尿酸定量分析用多層分析要素が記載され
ている。

［従来の技術の問題点］ 前述の諸特許明細書に記載の尿酸分析用多層分析要素に
おいては、水性液体試料として全血を用いる場合に、高
ヘマトクリット値の全血において大きな負誤差が生じる
ことが判明した。前記の諸特許明細書に記載の層厚のア
スコルビン酸オキシダーゼ含有層を有する多層分析要素
においては。

アスコルビン酸に起因する負誤差が充分に減少しない場
合があることが見出された。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明の目的は水性液体試料としてアスコルビン酸が含
まれる体液を用いる場合にも負誤差充分に減少して、高
精度の尿酸の定量分析が実施できる多層分析要素を提供
することである。

本発明の他の目的は水性液体試料として広い範囲のへマ
ドクリット値の全血を含めて諸種の生物体液を用いる場
合に実質的に同等の高精度の尿酸の定量分析が実施でき
る一体型多層分析要素を提供することである。

本発明の他の目的は多層分析要素の製造時に親水性ポリ
マーバインダーを含む複数の層を容易に塗布でき、かつ
ウリカーゼの活性低下又は劣化の恐れなしに親水性ポリ
マーバインダーを含む複数の層の架橋硬化が生じさせる
ように架橋剤を要素内に含有させることにより高精度の
尿酸の定量分析が実施できる多層分析要素を提供するこ
とである。

本発明の他の目的はウリカーゼの活性低下又は劣化の恐
れなしに多量のアルカリ剤又はアルカリ性ｐｌ＋緩衝剤
を要素内に含有させることにより高精度の尿酸の定量分
析が実施できる多層分析要素を提供することである。

［発明の構成］ 本発明は、光透過性水不透過性支持体の上に親水性ポリ
マーを含む吸水層、ウリカーゼ含有呈色試薬組成物が親
水性ポリマーバインダーに分散含有されている呈色試薬
層、及び多孔性展開層がこの順に接着積層されてなる尿
酸分析用一体型多層分析要素において。

■アスコルビン酸オキシダーゼが前記呈色試薬層より上
側のく光遮蔽層、接着層、アスコルビン酸オキシダーゼ
を含む親水性ポリマ一層すなわちＬ−アスコルビン酸除
去層、又は多孔性展開層のうちの）いずれか１層又は２
以上の層に厚さ５ＩｊＴＩ以上の範囲にわたって含まれ
ている尿酸分析用一体型多層分析要素。

■架橋剤が前記吸水層に含まれている尿酸分析用一体型
多層分析要素、及び ■分析条件下にウリカーゼの周囲ｐＨをｐ）１７．４よ
り高い値に維持しうるアルカリ剤成分又はｐｌ（緩衝剤
成分が前記吸水層に含まれている尿酸分析用一体型多層
分析要素、である。

［発明の構成の詳細な説明］ 本発明の一体型多層分析要素の光透過性水不透過性支持
体としては従来公知の多層分析要素に用いられている光
透過性（透明な）水不透過性支持体を用いることができ
る。その具体例としてはポリエチレンテレフタレート、
ビスフェノールへのポリカルボネート、ポリスチレン、
セルロースエステルく例、セルロースジアセテート、セ
ルローストリアセテート、セルロースアセテートピロビ
オネート等）等のポリマーからなる厚さ約５０ｕｍから
約１ｗｍ、好ましくは約８０ｕｍから約３００１１Ｔｌ
の範囲の透明な、すなわち波長約２０Ｏｎ＋ａから約９
００ｎｍの範囲内の少なくとも一部の波長範囲の電磁輻
射線を透過させる平滑な表面を有するフィルム状（シー
ト状）または平板状の支持体を用いることができる。必
要に応じて支持体の表面を公知の物理化学的活性化処理
又は化学的活性化処理し、あるいは透明な下塗層（例、
ゼラチン下塗ＰＩ）を設けて支持体と吸水層の間の接着
力を強くすることができる。

支持体の上には吸水層が設けるられる。吸水層は水を吸
収して膨潤する親水性ポリマーを主成分とする層で、吸
水層の界面に到達または浸透した水性液体試料の水を吸
収できる層であり、全血試料を用いる場合には水性液体
成分、血漿の呈色試薬層への浸透を促進する作用を有し
ている。吸水層に用いられる親水性ポリマーは水吸収時
の膨潤率が３０℃で約１５０％から約２０００％、好ま
しくは約２５０％から約１５００％の範囲の親水性ポリ
マーである。親水性ポリマーの具体例として特開昭５９
−１７１８６４　、特開昭６０−１１５８５９等に記載
の酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン等のゼラチン、フ
タル化ゼラチン、ヒドロキシアクリレートグラフトゼラ
チン等のゼラチン誘導体、特開昭５９−１７１８６４　
、特開昭６０−１１５８５９等に開示のアガロース、プ
ルラン。

プルラン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアル
コール、ポリビニルとロリドン等がある。

これらの親水性ポリマーは単独で、あるいは２種以上を
組合せて用いることができる。吸水層には一般的にはゼ
ラチンまたはゼラチン誘導体が好ましい。

吸水層の乾燥時の厚さは約１ｕｍから約１ＯＯｕｒＩ＋
、好ましくは約３ＬＩｒ１１から約３０１ｆｆ１１の範
囲、被覆量では約１ｇ１Ｉ２から約１００３／ｍ２．好
ましくは約３ｇ／ｍ２から約３０８１ｎ１２の範囲であ
る。吸水層には公知のアルカリ性ｐＨ緩衝剤、アルカリ
性化合物、塩基性ポリマー等を含有させて分析条件下（
分析操作実施時）のウリカーゼの周囲ｐＨを約７．４よ
り高い値の範囲、好ましくは約７．４〜約９．５の範囲
に調節することができる。また、吸水層には架橋剤（硬
化剤又は硬膜剤ともいわれる）を含有させることができ
る。吸水層にはアルカリ性ｐＨ緩衝剤又はアルカリ性化
合物と架橋剤をともに含有させることができる。さらに
吸水層には公知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させ
ることができる。

呈色試薬層は水性液体試料中のアナライト（測定対象成
分）である尿酸と反応して検出可能な変化を生じさせる
１種類の試薬又は複数の成分からなる試薬組成物（以下
両者を総称して単に呈色試薬組成物又は試薬という）が
親水性ポリマーバインダー中に実質的に一様に分散含有
されている吸水性の層である。検出可能な変化とは主と
して光学的測定方法により検出できる変化を意味してお
り９例えば色変化９発色（呈色）、蛍光発生、紫外線領
域における吸収波長の変化等である。

呈色試薬層に含有させる酵素ウリカーゼ（尿酸オキシダ
ーゼ；ＥＣ１，をｐＨ７．３，３）を含む呈色試薬組成
物の例としては、特公昭５７−５５１９．特開昭５９−
１９３３５２、特開昭５９−１９３３５３．特開昭６１
−４９６０に記載のウリカーゼ、ペルオキシダーゼと色
原体としてトリアリールイミダゾールロイコ色素又はジ
アリールイミダゾールロイコ色素を含む尿酸分析用呈色
試薬組成物、ｒｃＩｉｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｊ設、２２７−２３１（１９８０）、特開昭５５−１３
８６５６に記載のウリカーゼ、ペルオキシダーゼ、３．
５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼンスルホン酸、４
−アミノアンチピリン及びフェロシアン化物を含む尿酸
分析用呈色試薬組成物。

特開昭５５−１２４４９９　、特開昭５８−８６４５７
等に記載のウリカーゼとペルオキシダーゼの共役酵素系
と併用できる過酸化水素検出用呈色試薬組成物等がある
。これらの試薬組成物のうちで、ウリカーゼ。

ペルオキシダーゼと色原体としてトリアリールイミダゾ
ールロイコ色素又はジアリールイミダゾールロイコ色素
を含む尿酸分析用呈色試薬組成物が好ましい。

ウリカーゼ（尿酸オキシダーゼ）としては、馬場。

和田、北村、奥田編著「臨床酵素ハンドブック」（講談
社、１９８２年）、丸尾、田宮監修「酵素ハンドブック
」（朝倉書店、１９８２年）、Ｔ、Ｅ、Ｂａｒｍａｎ著
ｒＥｎｚｙｍｅ　Ｈａｎｄ−ｂｏｏｋＪ（Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ　Ｖｅｒｌａ３，１９６９年）、米国特許４０６２
−７３１等に記載のＥＣ１，をｐＨ７．３，３に属する
ブタ肝由来。

酵母由来等のウリカーゼを用いることができる。

ウリカーゼの多層分析要素中での含有量は約１ＯＯＵＩ
１１２〜約１万Ｕ／ｍ２．好ましくは約２００　Ｕ　／
ｒａ２〜約８千ＵＩＩ１２の範囲である。分析操作時に
ウリカーゼの周囲ｐＨが７．４〜９．０．好ましくはｐ
ＨをｐＨ７．４〜８．５の範囲に維持されるように公知
のアルカリ剤又はアルカリ性ｐＨ緩衝剤を多層分析要素
中に含有させることが好ましい。

ペルオキシダーゼとしては、馬場、和田、北村、奥田編
著「臨床酵素ハンドブック」（講談社、１９８２年）。

丸尾、田宮監修「酵素ハンドブック」（朝倉書店。

１９８２年）、Ｔ、Ｅ、Ｂａｒａ＋ａｎ著ｒＥｎｚｙｎ
＋ｅ　Ｈａｎ、ｄｂｏｏｋＪ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅ
ｒｌａｇ、１９６９年）、特公昭５６−４５５９９　、
特公昭５７−５５２０等に記載の植物由来及び動物由来
のＥＣ１，１１，１，７に属するペルオキシダーゼ、特
公昭５８−５０３５等に記載の微生物起原のＥＣ１，１
１，１，７に属するペルオキシダーゼを用いることがで
きる。これらのうちでは植物起源または微生物起原の非
特異的ペルオキシダーゼが好ましい。好ましいペルオキ
シダーゼの例として、西洋わさびペルオキシダーゼ、大
根ペルオキシダーゼ、　Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ属。

Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ属の微生物から抽出したペルオキ
シダーゼがある。ペルオキシダーゼの多層分析要素中で
の含有量は約ｌ千〇／ｗ２〜約１万Ｕ／ｍ２．好ましく
は約２千Ｕ／Ｉ２〜約８千Ｕ１ｍ２の範囲である。ペル
オキシダーゼの最適ｐＨ範囲は５．０〜８．０にあるが
、ウリカーゼの好適周囲ｐＨ範囲に調整すれば充分であ
る。ペルオキシダーゼの多層分析要素中での含有量は約
ｌ千Ｕ　／ｍ２〜約１０万Ｕ／＋ｇ２．好ましくは約２
千Ｕ　／ｗｈ２〜約６万Ｕ／ｌ１１２の範囲である。

ロイコ色素として、特公昭５７−５５１９に記載の２−
（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）−４
，５−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニルコイミダ
ゾール等のトリアリールイミダゾールロイコ色素；特開
昭５９−１９３３５２に記載の２−（３，５−ジメトキ
シ−４−ヒドロキシフェニル）−４−［４−（ジメチル
アミノ）フェニルゴー５−フェネチルイミダゾール等の
ジアリールイミダゾールロイコ色素；特開昭６１−４９
６０に記載の２−（２−フェニル−３−インドリル）−
４，５−ジ［４−（ジメチルアミノ）フェニルコイミダ
ゾール等のジアリールインドリルイミダゾールロイコ色
素；特開昭６１−２２９８８８に記載の２−（４−ヒド
ロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）−３−アセチル
−４，５−ビス［４−（ジエチルアミノ）フェニルコイ
ミダゾール等のトリアリールモノアシルイミダゾールロ
イコ色素；２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシ
フェニル）−３−メチル−４，５−ビス［４−（ジエチ
ルアミノ）フェニルコイミダゾール等のトリアリールモ
ノアルキルイミダゾールロイコ色素等がある。ロイコ色
素の多層分析要素中での含有量は約２５０ｍｇ／ｍ２〜
約５．０ｇ／ｗ２．好ましくは約５００ｍｇ／ｍ２〜約
４．０ｇ／ａ＋２の範囲である。

呈色試薬層に用いられる親水性ポリマーバインダーは、
少なくとも、試薬組成物を実質的に均一に溶解又は分散
させる媒体として作用し、また水性液体試料中の水を吸
収して水とともにアナライトである尿酸を呈色試薬層に
到達させる作用を有するものである。親水性ポリマーバ
インダーとしては、前述した吸水層に用いられるのと同
様な親水性ポリマーバインダーを用いることができる。

呈色試薬層の乾燥時厚さは約３ＬＩＴ＋から約５０…、
好ましくは約５ＩＪＴＩから約４０ｕｍの範囲、被覆量
では約３ｇ／ｆｆ１２から約５０３／ｍ”’　、好まし
くは約５３／ｍ”から約４０ｇ／ｌ１１２の範囲である
。

呈色試薬層には公知のアルカリ性ｐＨ１ｌ衝剤、アルカ
リ性化合物、塩基性ポリマー等を含有させて分析条件下
（分析操作時実施時）のウリカーゼの周囲ｐＨを約７．
４より高い範囲、好ましくは約７．４〜約９．５の範囲
に調節することができる。さらに試薬層には公知の媒染
剤、ポリマー媒染剤等を含有させることができる。

呈色試薬層は光透過性水不透過性支持体の上に前記の諸
特許明細書等に記載の公知の塗布方法により設けること
ができる。

吸水層及び呈色試薬層は実質的に透明であることが好ま
しいが、必要に応じて層中に二酸化チタン微粒子、硫酸
バリウム微粒子、カーボンブラック等を少量分散含有さ
せて光学的性能を調節することができる。

昭］ジ１団 多孔性展開層としては特開昭５５−１６４３５６　、特
開昭５７−６６３５９等に記載の織物展間Ｎ（例、ブロ
ード。

ボブリン等の平織等）、特開昭６０−２２２７６９等に
記載の膳物展開層（例、トリコット編、ダブルトリコッ
ト編、ミラニーズ編等）、特開昭５７−１４８２５０に
記載の有機ポリマー繊維バルブ含有抄造紙からなる展ｒ
ＷＩａ、特公昭５３−２１６７７、米国特許３９９２１
５８等に記載のメンブランフィルタ（プラッシュポリマ
ーＭ＞、ポリマーミクロビーズ、ガラスミクロビーズ。

珪藻土が親水性ポリマーバインダーに保持されてなる連
続微空隙含有多孔性層等の非繊維等方的多孔性展開層、
特開昭５５−９０８５９に記載のポリマーミクロビーズ
が水で膨潤しないポリマー接着剤で点接触状に接着され
てなる連続微空隙含有多孔性層（三次元格子状粒状構造
物ＦＪ）からなる非繊維等方的多孔性展開層等を用いる
ことができる。

これらの多孔性展開層のうちで後述するようにアスコル
ビン酸オキシダーゼ又は展開制御用親水性ポリマーを展
開層中に含有保持させる態様においては、それらを眉間
層中に含有保持させやすい点で織物展開層２編物層間層
に代表される繊維質展開層が好ましい。

多孔性展開層に用いられる織物布地または編物布地は特
開昭５７−６６３５９に記載のグロー放電処理またはコ
ロナ放電処理に代表される物理的活性化処理を布生地の
少なくとも片面に施すか、または特開昭５５−１６４３
５６．特開昭５７−６６３５９等に記載の水洗脱脂処理
、親水性ポリマー含浸等親木化処理。

またはこれらの処理工程を適宜に組み合せて逐次実施す
ることにより布生地を親水化し、下側（支持体に近い側
）の層との接着力を増大させることができる。

展開制御の目的で多孔性展開層に含有させる親水性ポリ
マーとして特開昭６０−２２２７７０等に記載の親水性
セルロース誘導体、特開昭５９−１７１８６４　、特開
昭６０−１１５８５９等に記載のアガロース、ポリアク
リルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリ
ドン、特開昭５９−１７１８６４　、特開昭６０−１１
５８５９等に記載の酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン
等のゼラチン、フタル化ゼラチン、ヒドロキシアクリレ
ートグラフトゼラチン等のゼラチン誘導体等のうちで、
アナライトの分析に対する妨害が僅少又は実質的にない
ポリマーがある。

これらの親水性ポリマーのうちで展開制御性能にすぐれ
、アナライトの分析に対する妨害が僅少又は実質的にな
い好ましいポリマーとして、親水性セルロース誘導体が
ある。親水性セルロース誘導体のうちでは、炭素原子数
１から３の低級アルキル基、又は炭素原子数１から４の
ヒドロキシ基置換低級アルキル基によりヒドロキシル基
の一部又は実質的に全部がエーテル化された水溶性セル
ロースエーテル類が好ましい、水溶性セルロースエーテ
ルは、一般に分子量約８千から約１００万、好ましくは
約１万から約３０万の範囲のものを用いることができる
。セルロースエーテルの例として、メチルセルロース、
エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメ
チルセルロースがあり、これらのうちでメチルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルメチルセルロースが好ましい、
これらの親水性ポリマーは単独で、あるいは２種以上を
組合せて用いることができる。展開制御用親水性ポリマ
ーの被覆量は約０．５ｇ／＋ｗ２から約１５８／ｍ２．
好ましくは約０．７３／ｍ２から約１０ｇ／ｍ２の範囲
である。

多孔性層ｒＷｉ層に親水性ポリマーを含有させる方法と
して、親水性ポリマーを含む水溶液（又は水分散液）、
水−有機溶媒混合溶媒溶液（又は分散液）又は有機溶媒
溶液（又は分散液）（有機溶媒の例：メタノール、エタ
ノール、イソプロピルアルコール等の脂肪族アルコール
；アセトン、メチルエチルケトン等のジアルキルケトン
；ジメチルエーテル等のジアルキルエーテル；テトラヒ
ドロフラン。

ジオキサン等の脂肪族環状エーテル；アセトニトリル；
ヘキサン等）を展開層の上から公知の方法により実質的
に均一に塗布又は噴霧し乾燥する方法、前記ポリマー溶
液に展開層用の素材を浸漬し乾燥又は半乾燥状態で呈色
試薬層、光遮蔽層又は接着層等に積層し一体化する方法
等がある０Ｍ水性ポリマーとともに後述する界面活性剤
、アスコルビン酸オキシダーゼ、ｐＨＩ衝剤等を展開層
に同時に含有させることもできる。

呈色試薬層と展開層との間に光遮蔽層（又は光反射層）
を設けることができる。水性液体試料として全血を適用
するための多層分析要素で、展開層の光遮蔽又は光反射
の機能が不充分な場合にはに光遮蔽層は必須である。光
遮蔽層は光遮蔽性又は光遮蔽性と光反射性を兼ね備えた
二酸化チタン微粒子または硫酸バリウム微粒子等の白色
微粒子をゼラチン等の親水性ポリマーバインダーに分散
含有してなる乾燥時の厚さ約２ｕｍから約２０＋ｍの範
囲の層である。

呈色試薬層、吸水層、光遮蔽Ｆｊ（又は光反射層）の上
には展開層を強固に接着一体化する目的でゼラチンに代
表される親水性ポリマーからなる公知の接着層を設ける
ことができる。接着層の乾燥時の厚さは約０．５ＬＩＴ
＋から約５ＬＩＴ＋の範囲である。光遮蔽層とその上の
接着層にアスコルビン酸オキシダーゼを含有させる態様
においては９両層の乾燥厚さの合計は約５ｕｍ以上にな
るようにする。

多層分析要素中には水性液体試料を適用しての分析操作
実施時にウリカーゼの周囲ｐＨ値を約７．４〜約９．０
．好ましくは約７．４〜約８．５の範囲の値に維持でき
る公知のアルカリ性緩衝剤又はアルカリ剤（以下、アル
カリ性緩衝剤ということがある）から適宜選択して含有
させることが好ましい。

用いうる緩衝剤としては２日本化学会編「化学便覧　基
礎編」（東京、丸善■、１９６６年発行）　１３１２−
１３２０頁、　Ｒ，Ｍ、Ｃ，Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａ１
編ｒ　Ｄａｔａ　ｆｏｒＢ　ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈＪ第５ｅａｒｃｈＪｒｄ　ａｔ　ｔｈｅ
ＣｌａｒｅｎｄｏｎＰｒｅｓｓ、１９６９年発行）　４
７６−５０８頁。

ｒ　Ｂ　１ｏｃｈｅｎ＋１ｓｔｒｙＪ　Ｌ　４６７頁以
降（１９６６年）＋　ｒＡｎａ−１ｙｔｉｃａｌ　Ｂｉ
ｏｃｈｅｎ＋１ｓｔｒｙＪ　ＩＪＩＬ　３００−３１０
頁（１９８０年）等に記載のｐＨＩ衝剤基剤系る。

ρ■約７．４〜約９．０の範囲のρＩ緩衝剤の具体例と
してトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉ
ｓ）を含む緩衝剤；燐酸塩を含む緩衝剤：炭酸塩を含む
緩衝剤；硼酸塩を含む緩衝剤；グリシンを含む緩衝剤；
グルタル酸塩を含む緩衝剤；　Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒド
ロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）　；　Ｎ−２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−ヒドロキシ
プロパン−３−スルホン酸（ＨＥＰＰＳ）Ｎａ塩又はに
塩等；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３
−スルホン酸（ＥＰＰＳ）Ｎａ塩又はに塩等；　Ｎ−［
）リス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロ
パンスルホン酸（ＴＡＰＳ）Ｎａ塩又はに塩等；Ｎ−２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸（ＨＥＰＥＳ）Ｎａ塩又はに塩等；及びこれらの
いずれかと必要により組合せられる酸。

アルカリまたは塩がある。好ましい緩衝剤の具体例とし
て、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム；Ｔｒ
ｉｓ−硼酸ナトリウム；Ｔｒｉｓ−硼酸ナトリウム−Ｅ
ＤＴＡ・２Ｎａ塩；硼酸−塩化カリウムー水酸化ナトリ
ウム；硼酸−水酸化ナトリウム；硼酸−塩化カリウムー
炭酸ナトリウム等がある。

全血中の尿酸定量に適したく血漿、血清、尿等の生物体
液にも同等に適した）多層分析要素の態様においては、
要素中でのアルカリ性緩衝剤含有量は、前述の諸特許明
細書に記載の尿酸分析用多層分析要素における含有量の
約４倍〜２０倍量、具体的には約１５ｎｍｏ１／ｍ２〜
５０ｍｍｏｌ／ｍ２の範囲である。

このような多量のアルカリ性ｐｌ＋緩衝剤の含有により
、高ヘマトクリット値の全血試料においても負誤差が僅
少になり、全血、血漿、血清いずれの試料についても同
等の高精度の尿酸定量分析が達成できる。アルカリ性緩
衝剤は展開層、接着層、光遮蔽層、呈色試薬層、吸水層
等のいずれか１層に。

又は２以上の層にふりわけて含有させることができる。

全血、血漿、血清、尿等の生物体液中の尿酸定量に適し
た多層分析要素の態様においては、呈色試薬層より上側
の１層又は２以上の層に９層厚合計で約５ｕｍ以上の範
囲にわたってアスコルビン酸オキシダーゼ（以下、ＡＳ
Ｏと略記することがある）を含有させることが好ましい
。また、　ＡＳＯを含有する独立の親水性ポリマーバイ
ンダ一層又は微多孔性層（Ｌ−アスコルビン酸除去層）
を１層設けてもよい。

親水性ポリマーバインダー含有層にＡＳＯを含有させる
場合には約５１１Ｔ１〜約３０ｕｍ＋好ましくは約６Ｌ
ＩＴ１〜約２０ｕｍの範囲、多孔性展開層又は多孔性展
開層と親水性ポリマーバインダー含有層にＡＳＯを含有
させる場合には約５ｕＩＴ１〜約５００ＩＪｎ、好まし
くは約５ｕｒ１１〜約３００ｕｍの範囲にわたってＡＳ
Ｏを含有させる。多孔性展開層にＡＳＯを含有させる場
合には、その層の厚さ方向に約５Ｌｆｆｒ＋以上にわた
って含有させればよく、例えば、展開層の下側（接着層
又は光遮蔽層側）に約５ｕｍ以上にわたって含有させる
。あるいは、接着６　　　　　　　　　ｑ又は光遮蔽層
全体と展開層の下側にあわせて約５１Ｊ′１１以上にわ
たって含有させればよい。アスコルビン酸オキシダーゼ
の被覆量は前記の層厚全体で約１千Ｕ／ＩＩ２〜約１万
Ｕ／ｎ＋”、好ましくは約２千Ｕ／１１２〜約７千Ｕ／
Ｗ２の範囲である。

アスコルビン酸オキシダーゼとしては、馬場。

和田、北村、奥田編著「臨床酵素ハンドブック」（講談
社、１９８２年）、丸尾、田宮監修「酵素ハンドブック
」（朝食書店、　１９８２年）、Ｔ、Ｅ、Ｂａｒｎ＋ａ
ｎ著ｒＥｎｚｙｍｅ　Ｈａｎｄ−ｂｏｏｋＪ（Ｓｐｒｉ
ｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ、１９６９年）、特公昭５８−
４５５５　。

特公昭５８−４９１６等に記載のＥＣ１，１０，３，３
に属する西洋カポチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｐｅｐｏ
　ｍｅｄｕｌｌｏｓａ）又は微生物等から由来のし一ア
スコルビン酸オキシダーゼを用いることができる。ＡＳ
Ｏの最適ｐＨ値範囲は約６．８〜約７．２にあるが、ウ
リカーゼの好適周囲ｐＨ値範囲に調整すれば実用上充分
である。

多層分析要素中には架橋剤（硬化剤又は硬膜剤ともいわ
れる）を含有させることができる。態様によっては架橋
剤の含有が好ましいか必須の場合がある。架橋剤として
は、ハロゲン化銀ゼラチン写真乳剤技術分野で周知のゼ
ラチン用の諸種の無機及び有機架橋剤、蛋白化学分野及
び有機ポリマー化学分野で周知の諸種の無機及び有機架
橋剤を用いることができる。ゼラチン用の有機架橋剤と
しては、Ｔ、Ｈ，Ｊａｍｅｓ編ｒＴｈｅ　Ｔｈｅｏｒｙ
ｏｆ　ＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃＰｒｏｃｅｓＳＪ第４
版（Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｍａｃｍｉｌｌａｎ　Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇＣｏ、　、　１９７７年）７Ｂ　−８９頁
等に記載のグルタルアルデヒド、グリオキサール、ジア
ルデヒド澱粉に代表されるジアルデヒド類、２，５−ヘ
キサンジオンに代表されるジケトン類、アジピン酸ジ（
１−ピリジニオメチル）エステル等のカルボン酸誘導体
類、ビス（ビニルスルホニルメチル）エーテル、ビス（
ビニルスルホニルメチル）メタノール、ビス［（ビニル
スルホニルメチルカルボニル）アミノコメタン、ビス（
ビニルスルホニル）メタン、ビス（ビニルスルホニル）
メタンスルホン酸塩（例、Ｎａ塩）に代表されるビニル
スホン基含有化合物類、２，４−ジクロロ−６−ヒドロ
キシ−９４リアジン；１，３．５−トリアクリロイル−
Ｓ−トリアジンに代表されるＳ−トリアジン類；ブタジ
ェンオキシドに代表されるエポキシド類等がある。

ポリビニルアルコール用の有機架橋剤としては。

ジメチル尿素等がある。これらの架橋剤のうちでゼラチ
ン用の架橋剤として、グルタルアルデヒド。

ビス（ビニルスルホニルメチル）メタノール、ビス（ビ
ニルスルホニルメチル）エーテル、ビス（ビニルスルホ
ニルメチルカルボニルアミノ）メタン、ビス（ビニルス
ルホニルメチル）エーテル、ビス（ビニルスルホニル）
メタン、ビス（ビニルスルホニル）メタンスルホン酸Ｎ
ａ塩が好ましい。

架橋剤の多層分析要素中での含有量は、架橋硬化させる
目的の層の被覆量と硬化の程度に応じて選択しうるが、
一般的に被覆量で約３０ｍｇ／ｍ”〜約１０００ｍｇ／
ｍ２．好ましくは約約５０１ｇ／Ｉｗ２〜約８００ｍｇ
／ｍ２の範囲である。架橋剤は吸水層、呈色試薬層、光
遮蔽層、接着層等のいずれか１層に、又は２以上の層に
ふりわけて含有させることができる。これらの層のうち
では、吸水層に含有させるのが、酵素含有呈色試薬組成
物への悪影響の可能性が僅少でかつ架橋剤の上側の層へ
の移行により架橋硬化可能な親水性ポリマーバインダ一
層の硬化が適度に生じる点で好ましい。また、架橋剤の
吸水層への添加は、吸水層には多量の架橋剤を含有させ
うる点でも好ましい。

吸水層、呈色試薬層、光遮蔽層（又は光反射Ｎ）。

接着層、展開層２等には界面活性剤を含有させることが
できる。好ましい界面活性剤としてノニオン性界面活性
剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例として、ｐ−
オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｐ−ノニ
ルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエチ
レンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレート、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドー
ル、オクチルグルコシド等がある。ノニオン性界面活性
剤を展開層に含有させることにより水性液体試料の展開
作用（メータリング作用）がより良好になる。

ノニオン性界面活性剤を呈色試薬層又は吸水層に含有さ
せることにより分析操作時に水性液体試料中の水が試薬
層または吸水層に実質的に一様に吸収されやすくなり、
また展開層との液体接触が迅速にかつ実質的に一様にな
る。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書に記載の公
知の方法により調製することができる。

本発明の多層分析要素は一辺約１５ｍｍから約３Ｏｎ＋
ｍの正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し
、特公昭５７−２８３３１．実開昭５６−１４２４５４
．特開昭５７−６３４５２．実開昭５８−３２３５０　
、特表昭５８−５０１１４４等に記載のスライド枠に収
めて化学分析スライドとして用いることが、製造、包装
、輸送、保存、測定操作等諸種の観点で好ましい。使用
目的によっては。

長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて用いる
こと、または小片を間口のあるカードに貼付または収め
て用いることなどもできる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により液体試料中の尿酸の分析を実施できる。すな
わち約５ＬＩＬから約３０ｕＬｔ好ましくは８μＬから
１５ｕＬの範囲の全血、血漿、血清、尿等の水性液体試
料滴を展開層に点着し、１分から１０分の範囲で、約２
０℃から約４０℃の範囲の実質的に一定の温度で、好ま
しくは３７℃近傍の実質的に一定の温度てインクベーシ
ョンし、要素内の発色又は変色を可視光又は紫外光の吸
収極大波長またはその近傍の波長の光を用いて光透過性
支持体側から反射測光し、予め作成した検量線を用いて
比色測定法の原理により液体試料中の尿酸の含有量を求
めることができる。あるいは、要素内の蛍光の強度を測
光し、予め作成した検量線を用いて液体試料中の尿酸含
有量を求めることができる０点着する液体試料の量、イ
ンクベーション時間及び温度を一定にすることにより尿
酸の定量分析を高精度で実施できる。測定操作は特開昭
６０−１２５５４３　、特開昭６０−２２０８６２　、
特開昭６１−２９４３６７、特開昭５８−１６１８６７
等に記載の化学分析装置により極めて容易な操作で高精
度の定量分析を実施できる。

貝工ｉ部 実施例１ ゼラチン下塗層が設けられている厚さ１８０ｕｍの無色
透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）シート（支
持体）の上に下記の被覆量になるように架橋剤含有吸水
層を水溶液を用いて塗布し、？！燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　６．６ｇ／ｍ２ノ
ニルフエノキシボリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　　３３０ｍｇ／ｍ
”ビス［（ビニルスルホニルメチル− カルボニル）アミノコメタン　　　３８０１ｇ／１１２
架橋剤含有吸水層の上に下記の被覆量になるようにして
呈色試薬層を水分散液を用いて塗布し。

乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　２５ｇ／ｎ＋２ノニ
ルフエノキシボリグリシドール （平均ｌＯグリシドール単位含有）　　１０ｇ１０＋２
ペルオキシダーゼ（ＥＣ１，＋１．１．７）２４０００
Ｕ／ｍ２ウリカーゼ（ＥＣ１，をｐＨ７．３，３）　　
　　　５４００Ｕ／ｍ２２−（３，５−ジメトキシ−４
−ヒドロキシフェニル）−４−［４−（ジメチルアミノ
）フェニル］−５−フェネチルイミダゾール　ロイコ色
素　　２．４ｇ／ｍ２［：ｐｌ（ＩＩ衝剤］ 硼酸　　　　　　　　　　　２．３ｇ（３７ｍｎ＋ｏｌ
）／ｍ２塩化カリウム　　　　　　　　　　　２．８ｇ
／ｍ２この液に５Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を添加し
てｐｉ（８，１にＳｌ！Ｉ！！シた 呈色試薬層の上に下記の被覆量で乾燥層厚７１ｊＴｌに
なるようにして光遮蔽層を水分散液を用いて塗布し、乾
燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　２．９ｇ／鹸ルチル
型二酸化チタン微粒子　　　１３．ｇ／ｍ２ノニルフェ
ノキシポリグリシドール （平均１０グリシド一ル単位含有）　４００ｍｇ／ｍ２
［ｐＨ１ｉ衝剤］ 硼酸　　　　　　　　　１６０ｍｇ（２，６１１ｍｏｌ
）／ｍ２この液に５Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を添加
してｐＨ８，２に調整した 光遮蔽層の上に下記の被覆量で乾燥層厚５ＩＪＴｌにな
るようにして接着層を水分散液を用いて塗布し。

乾燥して設けた。

アルカリ処理ゼラチン　　　　　　　６．７３＃ａ２ノ
ニルフエノキシボリグリシドール （平均ｌＯグリシドール単位含有）　６００ｍｇ／ｍ２
［ｐ１１緩衝剤］ 硼酸　　　　　　　　　１６０ｍｇ（２，６ｍｍｏｌ）
／ｍ２この液に５Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を添加し
てｐＨ８，２に調整した ついで接着層の表面に水を３０３／ｍ”の割合でほぼ一
様に供給して湿潤させ、その上に５０デニール相当のＰ
ＥＴ紡績糸３６ゲージ編した厚さ約２５０ｕｍのトリコ
ット編物布地をほぼ一様に軽く圧力かけてラミネート接
着して多孔性展開層を設けた。

次に下記の被覆量になるようにして展開コントロール用
ポリマー含有エタノール分散液を展開層の上から塗布し
乾燥して尿酸定量分析用一体型多層分析要素を調製した
。

ヒドロキシプロピルセルロース （メトキシ基２８〜３０％、ヒドロキシ−プロポキシ基
７〜１２％含有、２％水溶液の２０℃での粘度５０ｃｐ
ｓ）　　　　　３．０ｇ／ｍ２ノニルフエノキシボリエ
トキシー エタノール （平均４０オキシＩｆｌ、ン単位含有）５００−ｇｅｍ
２得られた尿酸定量分析用多層分析要素を１辺１５ｍｏ
ｗの正方形チップに裁断し、特開昭５８−３２３５０に
記載のスライド枠に収めて尿酸定量用生化学分析スライ
ドを完成した。

比較例１ 呈色試薬層、光遮蔽層、接着層の硼酸被覆量をそれぞれ
下記のように実施例１の多層分析要素の被覆量の２０％
に減じて前記各層のｐＨ緩衝能力を減じたほかは実施例
１と同様にして従来技術に従った尿酸定量用生化学分析
スライドを完成した。

硼酸被覆量 呈色試薬Ｈ４６０ｍｇ（をｐＨ７．４ｍｍｏｌ）／ｍ２
光遮蔽層　　　　　　　　３２ｍｇ（０、５２ｍｍｏ　
Ｉ　）／ｍ２接着層　　　　　　　　３２ｍｇ（０，５
２ａ＋ａ＋ｏ　Ｉ　）／ｎ＋２実施例１及び比較例１の
性能評 価実験■検量線の作成 ヘパリン採血したヘマトクリット値４０％の正常者人血
液に尿酸を添加して約１０時間冷暗所に放置し、尿酸含
有量３．３　：　５．２　；　７．０　：　８．７　：
　１０．６ｍｇ／ｄＬの６レベルの人全血試料（尿酸含
有量は各全血試料を遠心分離して得た血漿をウリカーゼ
−ペルオキシダーゼ法（溶液法）で測定した）を調製し
た。

作成した２種類の尿酸定量用生化学分析スライドの展開
層に５レベルの全血試料を各１０μＬ点着し。

３７℃で６分インクベーションし、直ちに中心波長６４
０ｎｎ＋の可視光でＰＥＴ支持体側から反射測光して多
層分析要素の発色光学濃度を測定して、第１表に記載の
結果を得た。

第　１表　　多層分析要素の発色光学濃度値■ヘマトク
リット１１（Ｎｅｔ）の異なるレベルのコントロール全
血試料の調製 前記の）Ｉｃｔ　４０％、尿酸含有Ｒ３，３ｍｇ／ｄＬ
　；　７．Ｏｍｇ／ｄＬ　：　１０．６ｎ＋ｇ／ｄＬの
３レベルの全血試料それぞれについて、全血を遠心して
血漿と血餅を分離した。

血漿をＯｃｔ　０％のコントロール試料とした。

血漿で遠心分離前の全血を２倍に希釈してＨｃｔ　２０
％のコントロール全血試料。

遠心分離前の全血又は血漿に血餅の適当量を添加してＨ
ｃｔ　５０％；６０％のコントロール全血試料をそれぞ
れ調製した。

■尿酸定量分析用多層分析要素の性能評価このようにし
て調製したコントロール全血試料を用いて前記の検量線
の作成の際の操作と同様にして多層分析要素の発色光学
濃度を測定し９作成した検量線により尿酸含有量に変換
したところ。

第２表に記載の結果が得られた。

第２表　　多層分析要素での測定値（ｍｇ／ｄＬ）尿酸
　　　コントロール全血試料のＨａｔ％第２表の結果か
ら本発明の尿酸定量分析用一体型多層分析要素において
は、ヘマトクリットＯ％（血漿）から通常の人全血での
最大値である６０％までの範囲で従来技術に比べて尿酸
含有量測定値の誤差が小さい範囲にとどまっていること
が明らかである。

実施例２ アスコルビン酸オキシダーゼ（ＥＣ１，１０，３，３）
を接着層に被覆量　１４００　Ｕ　／ｍ２光遮蔽層に被
覆量　３４００　Ｕ　／ｌａ２の割合で上記２層の乾燥
層厚合計１２ｕｍにわたって含有させたほかは実施例１
と同様にして尿酸定量分析用一体型多層分析要素を調製
した。

比較例２ 接着層のアリカリ処理ゼラチンの被覆量を４．０ｇ１０
＋２で乾燥層厚３．８層ｍになるようにし、アスコルビ
ン酸オキシダーゼを被覆量４８００　Ｕ　／ｌａ２の割
合で接着層の全層厚にわたって含有させたほかは実施例
１と同様にして尿酸定量分析用一体型多層分析要素を調
製した。

■アスコルビン酸含有量の異なるレベルのコントロール
全血試料の調製 ヘマトクリット値４０％、尿酸含有量３．３ｍｇ／ｄＬ
　：？、Ｏｎ＋３／ｄＬ　；　１０．６ｍｇ／ｄ１．の
３レヘルのコントロール全血試料それぞれに７スコルビ
ン酸を２．５　；　５．０：　１０．０ｍ３／ｄＬの割
合で添加したコントロール全血試料を調製した。

■尿酸定量分析用多層分析要素の性能評価上記のアスコ
ルビン酸添加コントロール全血試料及び無添加コントロ
ール全血試料を用いて実施例１の検量線の作成の際の操
作と同様にして本発明の多層分析要素（実施例２）及び
従来技術の多層分析要素（比較例１及び２）の発色光学
濃度を測定し９作成した検量線により尿酸含有量に変換
したところ、第３表に記載の結果が得られた。

第３表の結果から本発明の尿酸定量分析用一体型多層分
析要素においては、アスコルビン酸無添加の全血からア
スコルビン酸１０．０ｍｇ／ｄＬまでの添加量範囲で従
来技術に比べて尿酸含有量測定値の誤差が小さい範囲に
とどまっていることが明らかである。

■］ヨ【部 第３表　　多層分析要素での測定値（ｍｇ／ｄＬ）実施
例３ アスコルビン酸オキシダーゼ（ＥＣ１，１０，３，３）
を展開層に被覆量　４８００　Ｕ　／ｍ”になるように
展開コントロール用ポリマー含有エタノール分散液に添
加したほかは実施例１と同様にして尿酸定量分析用一体
型多層分析要素を調製した。

一方、ヘマトクリット値４０％、尿酸含有量３．３ｍｇ
／ｄＬ　；　７．Ｏｍｇ／ｄＬ　；　１０．６１ｇ／ｄ
Ｌの３レベルのコントロール全血試料それぞれにアスコ
ルビン酸を２．５；　ｓ、ｏ　；　ｔｏ、軸ｇ／ｄＬの
割合で添加したコントロール全血試料を調製した。

上記のアスコルビン酸添加コントロール全血試料及び無
添加コントロール全血試料を用いて実施例１の検量線の
作成の際の操作と同様にして本発明の多層分析要素（実
施例３）及び従来技術の多層分析要素（比較例１）の発
色光学濃度を測定し２作成した検量線により尿酸含有量
に変換したところ。

第４表に記載の結果が得られた。

第４表の結果から本発明の尿酸定量分析用一体型多層分
析要素においては、アスコルビン酸無添加の全血から７
スコルビン酸１０．０ｍｇ／ｄＬまでの添加量範囲で従
来技術に比べて尿酸含有量測定値の誤差が小さい範囲に
とどまっていることが明らかである。

昭ココ【社

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）光透過性水不透過性支持体の上に親水性ポリマー
   を含む吸水層、ウリカーゼ含有呈色試薬組成物が親水性
   ポリマーバインダーに分散含有されている呈色試薬層、
   及び多孔性展開層がこの順に接着積層されてなる尿酸分
   析用一体型多層分析要素において、アスコルビン酸オキ
   シダーゼが前記呈色試薬層より上側のいずれか少なくと
   も１層に厚さ５μｍ以上の範囲にわたって含まれている
   ことを特徴とする尿酸分析用一体型多層分析要素。
2. （２）前記呈色試薬層と前記展開層の間に光遮蔽層が設
   けられており、アスコルビン酸オキシダーゼが前記光遮
   蔽層に含まれている特許請求の範囲第１項に記載の尿酸
   分析用一体型多層分析要素。
3. （３）前記呈色試薬層と前記展開層の間に接着層が設け
   られており、アスコルビン酸オキシダーゼが前記接着層
   に含まれている特許請求の範囲第１項に記載の尿酸分析
   用一体型多層分析要素。
4. （４）アスコルビン酸オキシダーゼが前記展開層に含ま
   れている特許請求の範囲第１項に記載の尿酸分析用一体
   型多層分析要素。
5. （５）前記光遮蔽層と前記展開層の間に接着層が設けら
   れており、アスコルビン酸オキシダーゼが前記光遮蔽層
   と前記接着層の両層に含まれている特許請求の範囲第２
   項に記載の尿酸分析用一体型多層分析要素。
6. （６）前記呈色試薬層と前記展開層の間に親水性ポリマ
   ーバインダーからなる層が設けられており、アスコルビ
   ン酸オキシダーゼが前記親水性ポリマーバインダーから
   なる層に含まれている特許請求の範囲第１項に記載の尿
   酸分析用一体型多層分析要素。
7. （７）光透過性水不透過性支持体の上に親水性ポリマー
   を含む吸水層、ウリカーゼ含有呈色試薬組成物が親水性
   ポリマーバインダーに分散含有されている呈色試薬層、
   及び多孔性展開層がこの順に接着積層されてなる尿酸分
   析用一体型多層分析要素において、架橋剤が前記吸水層
   に含まれていることを特徴とする尿酸分析用一体型多層
   分析要素。
8. （８）前記呈色試薬層と多孔性展開層の間に順に光遮蔽
   層と接着層が設けられている特許請求の範囲第７項に記
   載の尿酸分析用一体型多層分析要素。
9. （９）分析条件下にウリカーゼの周囲ｐＨをｐＨ７．４
   より高い値に維持しうるアルカリ剤成分又はｐＨ緩衝剤
   成分が前記呈色試薬層又はその上側のいずれか少なくと
   も１層に含まれている特許請求の範囲第７項又は第８項
   に記載の尿酸分析用一体型多層分析要素。
10. （１０）前記アルカリ剤成分又はｐＨ緩衝剤成分が多層
    分析要素１ｍ＾２当り１５ｍｍｏｌから５０ｍｍｏｌの
    範囲で含有されている特許請求の範囲第９項に記載の尿
    酸分析用一体型多層分析要素。
11. （１１）光透過性水平透過性支持体の上に親水性ポリマ
    ーを含む吸水層、ウリカーゼ含有呈色試薬組成物が親水
    性ポリマーバインダーに分散含有されている呈色試薬層
    、及び多孔性展開層がこの順に接着積層されてなる尿酸
    分析用一体型多層分析要素において、分析条件下にウリ
    カーゼの周囲ｐＨをｐＨ７．４より高い値に維持しうる
    アルカリ剤成分又はｐＨ緩衝剤成分が前記吸水層に含ま
    れていることを特徴とする尿酸分析用一体型多層分析要
    素。
12. （１２）前記アルカリ剤成分又はｐＨ緩衡剤成分が多層
    分析要素１ｍ＾２当り１５ｍｍｏｌから５０ｍｍｏｌの
    範囲で含有されている特許請求の範囲第１１項に記載の
    尿酸分析用一体型多層分析要素。
13. （１３）前記呈色試薬層と多孔性展開層の間に順に光遮
    蔽層と接着層が設けられている特許請求の範囲第１１項
    又は第１２項に記載の尿酸分析用一体型多層分析要素。