JPS62137564A - 乾式分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は合成バインダーを少くとも一層に含む乾式分析
要素に関し、さらに詳しくは水性液体中の蛋白質例えば
アルブミンあるいは総蛋白の定量分析用の乾式操作可能
な一体型多層分析要素に、関するものである。

〔従来の技術〕

水性液体中のアルブミンや総蛋白のように蛋白質を定量
分析するときに用いられる乾式一体型多層分析要素では
試薬を安定にしたり、他の蛋白質との競合反応を避ける
ため、非蛋白性親水性ポリマーバインダーとしてポリア
クリルアミド、ポリ−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、ア
クリルアミド−Ｎ−２−ビニルピロリドン共重合体ある
いはアがロースを用いることが特開昭５８−７７６６４
号公報及び同５７−５０６６０号公報に提案されている
。これらの要素はポリエチレンテレフタレート支持体上
に試薬及び緩衝剤を上記の非蛋白性親水性ポリマーバイ
ンダーに分散した試薬層と多孔性展開層をこの順に塗布
積層したものである。展開層にヒト血清を点着すると展
開層から試薬層に水分が供給されて両層が液体接触状態
になり、試薬層から試薬等が供給され展開層に拡散移行
して展開層でアルブミン又は総蛋白が試薬と反応して発
色するので、色濃度を測定して比色測字の原理により各
々の含有量を求める乾式操作の要素である。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながらこれらの要素は用いられている非蛋白性親
水性ポリマーバインダーが通常は硬化し難いため、製造
される乾式分析要素の品質、特に膜質か弱いという問題
があった。またアルブミン分析要素では測定時間が長引
くとグロブリンの妨害が無視できない程度に現われるこ
とも判明した。

本発明の目的は非蛋白性親水性ポリマーバインダーが架
橋硬化可能で硬化により膜質が強化され、安定製造可能
な乾式分析要素を提供することにある。

本発明の他の目的は簡単な層構成でグロブリン、その他
の蛋白質の妨害による誤差を低減したアルブミン分析用
乾式分析要素を提供することにある。

本発明の他の目的は硬化可能な非蛋白性親水性ポリマー
バインダーの使用により膜質の強化された総蛋白分析用
乾式分析要素を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明のこのような目的は、メタリルアルコールとアク
リルアミドもしくはその誘導体、アクリル酸、メタクリ
ル酸もしくはそれらの誘導体又はＮ−ビニル−２−ピロ
リドンとの共重合体を非蛋白性親水性ポリマーバインダ
ーとして少なくとも一層に含む乾式の一体型多層分析要
素によって達成される。

メタリルアルコールＨ１２−メチルアリルアルコールと
も呼ばれ、重合単位（構成繰り返し単位）としては、下
記の構造をとると考えられる。

Ｈ３ 壬ＣＨ２Ｃ＋ Ｈ２０Ｈ メタリルアルコールと共重合されるコモノマーとしては
アクリルアミドおよびその誘導体（例えばメタクリルア
ミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド、ジアセトンア
クリルアミド、　Ｎ　−（ｔｅｒｔ−ブチル）アクリル
アミド、Ｎ−（イソプロピル）アクリルアミド、２−ア
クリルアミｐ−２−メチルグロノクンスルホン酸、Ｎ−
（３−（ジメチルアミノ）プロピルコアクリルアミド等
）、アクリル酸、メタクリル酸およびそれらの誘導体（
例えば、メチルメタクリレート、ｎ−ブチルメタクリレ
ート、ヒＰロキシエチルアクリレート、ヒドロキシエチ
ルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、
（ジエチルアミノ）エチルメタクリレート等）、並びＫ
Ｎ−ビニル−２−ピロリドン等がある。これらの中でア
クリルアミド、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、アクリル
酸及びメチルメタクリレートが好ましく、特にアクリル
アミド及びＮ−ビニル−２−ピロリドンが好ましい。こ
れらのコモノマーは二つ以上併用することもできる。

共重合比はメタリルアルコール単位が０．５〜５０モル
チ程度、好ましくは３〜３０モル多程度であり、従りて
アクリルアミド等の他のビニル化合物単位が５０〜９９
．５モルチ程度、好ましくは７０〜９７モルチ程度であ
る。

これらのメタリルアルコールを含む共重合体は「高分子
合成法Ｉ　Ｊ　（Ｃ，Ｇ、Ｏｖｅｒｂｅｒｇｅｒ編、湊
宏訳、東京化学同人、１９６９年発行）あるいは「高分
子合成の実験法」（大津随行、木下雅悦共著、化学同人
、１９７２年発行）ｔ−参考に触媒、反応溶媒を適当に
えらべば容易に合成することができる。

共重合体の中ではアクリルアミＰメタリルアルコール共
重合体、アクリルアミドＮ−ビニル−２−ピロリドン−
メタリルアルコール共重合体、アクリルアミドアクリル
酸−メタリルアルコール共重合体が好ましい。

合成された共重合体は架橋剤を添加すれば容易に架橋し
て硬化する。架橋剤にはホルマリン、グルタルアルデヒ
ドのようなアルデヒド、テトラエチレングリコール、エ
チレングリコールジグリシノルエーテルのような少くと
も二個以上のグリシジル基を含むエポキシ化合物及びジ
ビニルスルホン、エチレンビスビニルスルホニルアセト
アミド、ビス（ビニルスルホニルメチル）エーテルのヨ
ウな少くとも二個の電子吸引性ビニル基を含む化合物を
用いることができる、架橋剤の添加量はメタリル共重合
体に対し、１．２５重量％以上、好ましくは２〜２０重
量％の範囲から選択される。架橋は一般には加熱により
行うが、その温度は共重合体の組成及び架橋剤の種類に
よりて異り約２０℃から約２００℃の温度範囲で架橋で
きるが、乾式分析要素においては約２０℃から約８０℃
、好ましくは約３０℃から約６０℃の温度範囲から選択
される。

本発明の乾式分析要素は通常は光透過性水不透過性支持
体の上に少くとも一層の前記親水性ポリマーバインダ一
層とその上に設けられて試料を均一に拡散せしめる多孔
性展開層とからなっている。

このような水性液体測定用の多層分析要素の典型的な例
は米国特許第３，９９２，１５８号及び同第４．０４２
，３３５号に開示されている。場合によっては米国特許
３．４８５．５８７号の如く単一ゾーンからなる要素で
あってもよい。

多孔性展開層としては、特開昭５５−１６４３５６号公
報、特開昭５７−６６３５９号公報等に記載の織物展開
層（例、ブロード、ボデリン等の平織等）、特開昭６０
−２２２７６９号公報等に記載の編物展開層（例、トリ
コット編、ダブル）　ＩＪコツト編、ミラニーズ編等）
、特開昭５７−１４８２５０号公報に記載の有機、ｔ？
　ＩＪマー繊維パルプ含有抄造紙からなる展開層、特公
昭５３−２１６７７号公報、ＵＳＰ　３．９９２．１５
８等に記載のメンブランフィルタ−（プランシュポリマ
一層）、ポリマーミクロビーズ、ガラスミクロビーズ、
珪藻土が親水性ポリマーバインダーに保持されてなる連
続微空隙含有多孔性層等の非繊維等方的多孔性展開層、
特開昭５５−９０８５９号公報に記載のポリマーミクロ
ビーズが水で膨潤しないポリマー接着剤で点接触状に接
着されてなる連続微空隙含有多孔性層（三次元格子状粒
状構造物層）からなる非繊維等方的多孔性展開層、その
他特開昭５７−１４８２５０号公報に記載のポリエチレ
ン・ぐルデ含有抄造紙からなる展開層、特開昭５６−２
４５７６号公報、特開昭５７−９４６５８号公報に記載
のＰ紙からなる展開層、特開昭５７−１２５８４７号公
報に記載されている繊維分散液を塗布した繊維質展開層
等を用いることができる。これらの多孔性展開層のうち
で指示薬を含有保持させやすい点で織物展開層、編物展
開層に代表される繊維質展開層が好ましい。このような
多好性の展開層を設けることにより血清、尿のような水
性液体試料を均一に拡散せしめて分析精度及び分析の再
現性を高めることができる。

親水性？リマーパインダ一層は前記メタリルアルコール
共重合体の未架橋物、部分架橋物または架橋物を主成分
とする吸水性の層で水に接触して膨潤し水を吸収できる
層である。

水吸収時の膨潤率は３０℃で約１５０チから約２０００
ｑ６、好ましくは約２５０チから約１５００チの範囲が
適当である。

親水性ポリマーバインダ一層に用いられる前記の親水性
ポリマーバインダーの含有量は１ｍ２当り約７Ｉ！から
約７０１！、好ましくは約１０．Ｆから約５ＯＮの範囲
である。親水性ポリマーバインダーは必要により他の親
水性バインダーと併用して用いることもできる。

この親水性ポリマーバインダ一層の乾燥時の厚さは約１
μｍから約１００μｍ、好ましくは約３μｍから約３０
μｍの範囲、被覆量では約１１７ｍ２から約１００ｇ／
ｍ２、好ましくは約３１７ｍ２から約３０９７ｍ　２の
範囲が適当である。

この親水性ポリマーバインダ一層には液体試料を適用し
ての分析操作実施時の５値を２．０から１０．０の範囲
の所望の値に緩衝できる公知の緩衝剤から適宜選択して
含有させることができる。

用いうる緩衝剤としては、日本化学金網「化学便覧基礎
編」（東京、丸善■、１９６６年発行）１３１２−１３
２０頁＋　Ｒ，Ｍ、Ｃ，Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａ１編ｒ
Ｄａｔａ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｅｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ３ｅ
ａｒｃｈＪ　第２版０ｘｆｏｒｄａｔ　ｔｈｅ　Ｃ１ａ
ｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、　１９６９年発行）４７６
−５０８頁、　［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｊ　５　＊
　４６７頁以降（１９６６年）。

ｒＡｎａ−１ｙｔｉｃａｌ　Ｂｊｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｊ１０４　＊　３００−３１０頁（１９８０年）等に記
載の一緩衝剤系がある。

ＰＨ２，Ｏ〜１０．０の範囲の一緩衝剤の具体例として
、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒ　ｉ
　ｓ　）を含む緩衝剤：燐酸塩を含む緩衝剤：硼酸塩を
含む緩衝剤：酢酸または酢酸塩を含む緩衝剤；拘柵酸ま
たは拘橘酸塩を含む緩衝剤ニゲリシンを含む緩衝剤：リ
ンゴ酸；ゴノ−り酸：マロン酸；酒石酸ニゲルタル酸：
３．３ジメチルグルタル酸；Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロ
キシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）：　Ｎ　−２−
ヒト９０キシエチルピ（ラジンーＮ’−２−ヒｒロキシ
デロノ４ンー３−スルホン酸（ＨＥＰＰＳ）　Ｎａ塩ま
たはに塩等二Ｎ−２−ヒドロキシエチルピイラノン−Ｎ
′−３−スルホン酸（ＥＰＰＳ）Ｎａ塩またはに塩等：
Ｎ−（）リス（ヒドロキシメチル）メチル〕−３−アミ
ノプロノｆンスルホン酸（ＴＡＰＳ）　Ｎａ塩またはに
塩等：Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ被ラジンーＮ′−２
−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）Ｎａ　＠またはに塩
等：およびこれらのいずれかと必要により組合せられる
酸、アルカリまたは塩がある。好ましい緩衝剤の具体例
として、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム：
Ｔｒｉｓ−硼酸ナトリウム：Ｔｒｉｓ−硼酸ナトリウム
−ＥＤＴＡ・２Ｎａ塩：　ＴｒｉｌＩ−拘塘酸：酢酸−
酢酸ナトリウム：拘塘酸−燐酸二水素ナトリウム：　Ｂ
　ｉ　ｃ　ｔ　ｎｅ　：　ＨＥＰＰＳ　”ｅ耶ｐｐｓナ
トリウム塩：　ＥＰＰＳ　：　ＥＰＰＳナトリウム塩：
ＴＡＰＳ　：　ＴＡＰＳナトリウム塩；耶ＰＥＳ　：リ
ンゴ酸；コハク酸：マロン酸：酒石酸；グルタル酸：　
３，３−ジメチルグルタル酸等がある。

ｐｉ（緩衝剤または酸の要素中における含有量はＩ）当
り約３０ミリ当量から約５００ミリ当量、好ましくは約
５０ミリ当量から約３００ミリ当量の範囲である。

親水性ポリマーバインダ一層には被検体あるいは試薬等
に悪影響を及ぼさない諸種の成分を含有させることがで
きる。その例としてノニオン性界面活性剤がある。ノニ
オン性界面活性剤の具体例として、ｐ−オクチルフェノ
キシプリエトキシエタノール、ｐ−ノニルフェノキシポ
リエトキシエタノール、ポリオキシエチレンオレイルエ
ーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート
、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドール、オクチルグ
ルコシド等がある。ノニオン性界面活性剤を親水性ポリ
マーバインダ一層に含有させることにより分析操作時に
水性液体試料中の水が親水性ポリマーバインダ一層に実
質的に一様に吸収されやすくなり、また多孔性展開層と
の液体接触が迅速にかつ実質的に一様になる。

親水性ポリマーバインダ一層は必要に応じて２層以上設
けることができる。２層以上の親水性ポリマーバインダ
一層を設ける場合には、多孔性展開層に近い層に低分子
量の一緩衝剤組成物または低分子量の酸を含有させ、多
孔性展開層から遠い層に高分子量の一緩衝剤または高分
子量の酸を含有させることが好ましい。用いることがで
きる高分子量の酸の例として、公知のカルボキシル基含
有ポリマー、スルホン酸基含有ポリマーがある。

親水性ｙｆｆ　＋Ｊママ−インダ一層にはそのほか公知
の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることができる
。親水性ポリマーバインダ一層は実質的に透明であるこ
とが好ましいが、必要に応じて吸水層中に二酸化チタン
微粒子、硫酸バリウム微粒子、カーざンブラック等を少
量分散含有させて光学的性能を調節することができる。

親水性ポリマーバインダ一層に後記の試薬組成物を含有
させて試薬層としての機能をもたせることができる。こ
の場合には親水性ポリマーバインダ一層と支持体との間
にさらに吸水層を設けることもできる。

吸水層は水を吸収して膨潤する親水性ポリマーを主成分
とする層で、吸水層の界面に到達または浸透した水性液
体試料の水を吸収できる層であり、全血試料を用いる場
合には水性液体成分である血漿の試薬層または試薬組成
物含有展開層への浸透を促進する作用を有している。吸
水層に用いられる親水性ポリマーは水吸収時の膨潤率が
３０“℃で約１５０％から約２０００チ、好ましくは約
２５０チから約１．５００　％の範囲のポリマーである
。親水性＆　ＩＪママ−具体例として前記メタリルアル
コール共重合体の架皓していないもの′＃開昭５９−１
７１８６４、特開昭６０−１１５８５９等に開示の酸処
理ゼラチン、脱イオンゼラチン等のゼラチン、メタル化
ゼラチン、ヒーロキシアクリレートグラフトゼラチン等
のゼラチン誘導体、特開昭５９−１７１８６４、特開昭
６０−１１５８５９等に開示のアガロース、ゾルラン、
プルラン誘導体、ぼりアクリルアミげ１．ｉｆ　ＩＪビ
ニルアルコール。

プリビニルピロリドン等がある。これらの親水性−リマ
ーは単独で、あるいは２種以上を組合せて用いることが
できる。

吸水層の乾燥時の厚さは約１μｍから約１００μｍ、好
ましくは約３μｍから約３０＃ＩｃＤｗ、囲、被覆量で
は約１９／ｍから約１００ＪＦ／ｍ、好ましくは約３９
７ｍ２から約３０１！／ｍ２の範囲である。吸水層には
公知のＰ［′（緩衝剤、有機カルゲン酸、酸性ポリマー
、塩基性ポリマー等を含有させて使用時（分析操作実施
時）の−を調節することができる。さらに吸水層には公
知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることができ
る。吸水層は実質的に透明であることが好ましいが、必
要に応じて吸水層中に二酸化チタン微粒子、薄酸バリウ
ム微粒子、カーダンブラック等を少量分散含有させて光
学的性能を調節することができる。

親水性ポリマーバインダ一層あるいは多孔性展開層等に
水性液体試料中の予め定められた成分と反応して検出可
能な変化を生じさせる少なくとも１種の酵素を含む試薬
組成物を一層にあるいは適宜分散させて実質的に一様に
含有せしめる。検出可能な変化とは主として光学的測定
方法により検出できる変化を意味し、例えば色変化、発
色（呈色）、螢光発生、紫外線領域における吸収波長の
変化、混濁発生等である。

この試薬組成物は水性液体試料中の被検成分とこの成分
を分析するために選択した酵素が関与する（触媒する）
生化学反応または化学反応によって決り、選択した反応
が２種以上の酵素が関与する反応の場合にはそｎらの酵
素を含む試薬組成物を一つの試薬層に混合して含有させ
ることもできるし、必要に応じて試薬組成物を２層以上
の別個の層に分けて含有させることもできる。

酵素を少なくとも１種含む試薬組成物の例としては、米
国特許３．９９２．１５８、特公昭５３−２１６７７、
特開昭５４−２６７９３、特開昭５５−１６４３５６、
特開昭５９−２０８５３、特開昭５９−４６８５４、特
開昭５９−５４９６２、特公昭５５−２５８４０等に記
載のグルコースオキシダーゼトヘルオキシダーゼを含む
グルコース分析用改良トラインダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ）
試薬組成物、特公昭５６−４５５９９、特開昭５９−１
９３３５２等＜記載のコレステロールオキシダーゼ、ペ
ルオキシダーゼと必要により配合されるコレステロール
エステラーゼを含むコレステロール分析用試薬組成物、
特開昭５２−３４８８、特開昭５８−７７６６１、特開
゛昭５６−７０４６０等に記載のウレアーゼを含む尿素
態窒素（ＢＵＮ）分析用試薬組成物、特開昭５３−２４
８９３等に記載のリポプロテインリノ母−ゼ　ｆ　ＩＪ
セロールキナ−セ、α−グリセロール−３−燐酸オキシ
ダーゼ、硬ルオｄ−シダーゼを含むトリグリセリドまた
はグリセロール分析用試薬組成物、特開昭５４−１５１
１９３、特開昭６０−７８５８０に記載のビリルビン特
異的酸化酵素とペルオキシダーゼを含むビリルビン分析
用試薬組成物、特開昭５３−２６１８８、特開昭５９−
１９３３５２等に記載のウリカーゼとペルオキシダーゼ
を含む尿酸分析用試薬組成物、特開昭５５−１２４４９
９、特開昭５８−８６４５７等に記載のペルオキシダー
ゼを含む過酸化水素検出用呈色試薬組成物等がある。

本発明の一実施態様であるアルブミン分析用乾式分析要
素の場合にはアルブミンと結合して色変化する指示薬と
して、コルトホフ（Ｉ　、Ｍ、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ　）著
「酸−塩基指示薬（Ａｃｉｄ−Ｂａｓｅ　Ｉｎｄｉｃａ
ｔｏｒｓ）　ｊ（Ｍａｃ　Ｍｉｌｌａｎ社、１９３７年
発行）　３５０−３５３頁等に記載の蛋白誤差（ｐｒｏ
ｔｅｉｎｅｒｒｏｒ）を示す酸塩基指示薬色素を含有さ
せることが好ましい。蛋白誤差を示す酸塩基指示薬色素
の例としてブロムクレゾールクリーン、ブロムクレゾー
ルパープル、ブロムチモールブルー、フロムフェノール
ブルー、クロルフェノールレッド、フェノールレッド、
クレゾールレッド、チモールブルー、クレゾールフタレ
イン等のスルホンフタレイン指示薬色素、インジゴカル
ミン等のインノボイド色素、メチルレッド、メチルオレ
ンジ等のアゾ色素系指示薬がある。これらの指示薬のう
ちで、スルホンフタレイン指示薬色素が好ましく、ブロ
ムクレゾールグリーン（ＢＣＧ）とブロムクレゾールパ
ープル（ＢＣＰ）が最も好ましい。

この指示薬は通常は前記の多孔性展開層に含有させる。

その場合、酸塩基指示薬色素の量は１ｍ２当り約０．２
．９から約３．０，９．好ましくは約０．！ＩＭから約
１．５　Ｎの範囲である。指示薬は他の層、例えば親水
性ポリマーバインダ一層に含有させてもよい。

…緩衝剤は分析操作時に液体接触領域の多孔性展開層の
５値を約２．０から約４．０、好ましくけ約３．２から
約３．４の範囲に維持できる低分子量の声緩衝剤組成物
または低分子量の酸を用いる。このような−緩衝剤の例
としては、リンゴ酸、乳酸、コハク酸、マロン酸、拘柵
酸、酒石酸等の低分子量カルビン酸およびそれらの塩、
ＵＳＰ　３，４３８，７３７、日本化学金線「化学便覧
基礎編」（東京、丸善、１９６６年発行）１３１２−１
３２０頁等に記載のその他の低分子量の一緩衝剤組成物
を挙げることができる。これらのうちでリンゴ酸が好ま
しい。

やはり本発明の一実施態様である総蛋白分析用乾式分析
要素の場合には、例えばビウレット試薬が利用される。

すなわち、水溶性第二銅塩、例えば硫酸銅、硝酸鋼等、
キレート化剤、例えば酒石酸塩、クエン酸塩、エチレン
ノアミン等、及びアルカリ、例えば水酸化リチウム、水
酸化カルシウム等が含有せしめられる。ビウレット試薬
を用いた総蛋白分析用乾式分析要素の例は特開昭５４−
１０１３９８号公報、特開昭５８−７７６６４号公報、
特開昭５９−５１３５６号公報、特頭昭６０−１３２０
５７号明細書などに開示されている。このビウレット試
薬はメタリルアルコール共重合体を架橋した親水性７＋
？リマーバインダ一層に含有せしめるのがよい。

他のものを分析する場合には分析対象物に応じた試薬を
多孔性展開層あるいは親水性ポリマーバインダ一層等に
含有させる。

光透過性水不透過性支持体は従来の一体型多層分析要素
に用いられる公知のものを用いることができる。その具
体例としては、プリエチレンテレフタレート、ビスフェ
ノールＡのポリカルケネート、ポリスチレン、セルロー
スエステル（ＩＭ、セルロースアセテート、セルロース
トリアセテート、セルロースアセテートプロピオネート
等）のポリマーからなる厚さ約５０μｍから約ｈ１好ま
しくは約８０μｍから約３００μｍの範囲の透明な、す
なわち波長約２００　ｎｍから約９００ｎｍの範囲の少
なくとも一部の波長範囲の電磁輻射線を透過させる。

平滑平面状の支持体を用いることができる。支持体の表
面には公知の下塗層または接着層を設けて現水性ポリマ
ーバインダ一層または吸水層との接着を強固にすること
ができる。

このようなメタリルアルコール共重合体の架橋物の親水
性ポリマーバインダ一層を含む一体型多層分析要素は、
例えばまず透明支持体上に、メタリルアルコール共重合
体、架橋剤及び該層に含有せしめる試薬等を含む溶液を
塗布し、この塗布物を硬化温度範囲のなかから適宜選ば
れた温度において加熱処理することにより親水性ポリマ
ーバインダ一層を形成する。そしてその上に多孔性展開
層を積層すればよい。

本発明の乾式分析要素は一辺約１５１ｍから約３０１ｍ
の正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、
特開昭５４−１５６０７９号公報、実開昭５６−１４２
４５４号公報、特開昭５７−６３４５２号公報、実開昭
５８−３２３５０号公報、特開昭５８−５０１１４４号
公報等に記載のスライド枠に収めてアルブミン分析用化
学分析スライドとして用いることが、製造、包装、輸送
、保存、測定操作停会ての観点で好ましい。使用目的に
よっては、長いテープ状でカセットまたはマガジンに収
めて用いること、または小片を開口のあるカードに貼付
または収めて用いることなどもできる。

本発明の乾式分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により液体試料中の分析を実施できる。例えば、６
μｌから１５μｌの範囲の血漿、血清等の水性液体試料
筒を多孔性展開層に点着し、１分から１０分の範囲で、
好ましくは３７℃近傍の温度でインクベーションし、光
透過性支持体側から発色の吸収極大波長またはその近傍
の波長の光を用いて試薬展開層の光学濃度を反射測光し
、予め作成した検量線を用いて比色測定法の原理により
液体試料中の分析対象物の量を求めることができる。点
着する水性液体試料の量、インクペーション時間と温度
は一定にすることにより定量分析を高精度で実施できる
。この測定操作は特開昭５６−７７７４６号公報、特開
昭５８−２１５６６号公報、特開昭５８−１６１８６７
号公報等に記載の化学分析装置により極めて容易な操作
で高精度の測定をすることができる。

〔作用〕

メタリルアルコールを共重合させることによって親水性
を付与するとともにその水酸基に架橋剤を反応させて硬
化させることができる。コモノマーであるアクリルアミ
ド、Ｎ−ビニルピロリドン等も共重合体に親水性を付与
している。

このようなメタリルアルコール共重合体の架橋物を親水
性？リマーノぐインダ一層に飲用するとｐＨ緩衝剤を含
む親水性ポリマーバイング一層７４　ｐＨ緩衝剤と水に
接触して膨潤し水を吸収する。この混水性１１？リマー
バインダ一層は分析操作時に多孔性展開層に点着された
水性液体試料中の水がこの層に到達し両層が液体接触状
態になった時に低分子量の一緩衝剤を多孔性展開層に拡
散により供給して多孔性展開層の液体試料の存在領域を
予め定められた一定の５値またはその近傍の値に維持す
る機能を有する。

〔実施例〕

実施例１ 本発明のアクリルアミド・Ｎ−２−ビニルピロリドン・
メタタリルアルコール三元共重合体（Ａ・Ｗ・■と略称
、モル比５８：３８：４．粘度４００ｃｐ〔２０％溶液
、４０℃、Ｂ型粘度計〕）に試薬としてりんご酸及び共
重合体に対し１重量％のホルマリン、６Ｎ−塩酸数滴を
添加して塗布液をつくり、１８０μｍの透明ポリエチレ
ンテレフタレート（ＰＥＴ）支持体上に乾燥厚さ３５μ
ｍとなるように塗布した。比較例として特開昭５７−５
０６６０で使用されているアクリルアミド−Ｎ−２ビニ
ルピロリドン共重合体（Ａ−ＮＶと略称、モル比６０　
：　４０、粘度４００ｃｐ　（２０％溶液４０℃、Ｂ型
粘朋計〕）を使用して同じように塗布した。次に厚さ約
１４０μｍのブロムクレゾールグリーン約０．７１７ｍ
２を含む綿紡績糸（１００Ｓ　）製ブロード布地をラミ
ネートし多孔性展開層とした。このように作成したサン
プルの試薬の塗布隘は次の曲りである。

第１−１表 このようにして作成した二つの塗布物を７０℃の温水に
浸漬したところ、本発明のサンプルは溶けなかったが、
比較サンプルは溶は出して、膜質に差のあることが示さ
れた。

次に濃度の異る人アルブミン溶液を点着し発色濃度を６
４０ｎｍで測定した。その結果いずれの濃度でも本発明
の架橋硬化可能な非蛋白性バインダーを用いた分析素子
の発色光学濃度の高いことが示された。これは顕微鏡観
察の結果本発明のサンプルは試薬層と展開層がはっきり
分離状態を示しているのに対し、比較例のサンプルは展
開層が試薬層に陥没しているためと分った。

実施例−２ 本発明の共重合体と特開昭５８−７７６６４に記載のア
クリルアミド−Ｎ−２−ビニルピロリドン共重合体（実
施例１と同じ）を使用して表２の１のようなビウレット
試薬を塗布し、厚さ１４０μｍのＰＥＴ紡績糸（１００
８相当）製平織布地をラミネートした。作成した総蛋白
分析要素を４０℃の温水に浸漬したところ本発明のサン
プルの試薬層は溶けないが、比較例のサンプルの試薬層
は溶は出すことが分った。

表２−１ 次にａ度の異る牛アルブミン（ＢＳＡ）含有生理食塩水
を作成したサンプル上に１０μ４点着し５４０ｎｍで発
色濃度を測定した。実施例１と同様、比較サンプルと比
較し本発明のサンプルの濃度が高かったが、これは試薬
層が硬化されたため膜質が強く、展開層が試薬層に陥没
していないことによるものであることが分った。

次にメタリルアルコール共重合体の合成例を示す。

合成例１ 反応容器の中にメタノール２２０ｍ１．蒸留水８０ｍ１
，７クリルアミド３０１１．Ｎ−ビニル−２−ピロリド
ン３０ｇ及びメタリルアルコール５ｇを入れ攪拌しなが
ら十分窒素置換する。アゾビスイソブチロニトリル０．
５ｇを加え６０℃で２時間攪拌する。次いで、アセトン
中に反応物を投下し生成物を沈殿せしめる。十分乾燥し
た９ち２０％（重量）の浴液を調整し、Ｂ型粘度計で粘
度を測定した結果４２０ｃｐ（４０℃）あった。また、
元素分析値ばＣ：　５７．８５　％　、　Ｈ：　７．７
０　ｃｓ、　Ｎ　：１５．６４％であった。

この共重合体溶液にホルマリン、ドデシルベンゼンスル
ホン酸ナトリウム（ＳＤＳ）　、触媒とし塩酸を添加し
、１７０μのポリエチレンテレフタレート支持体上に厚
み２６μとなるように塗布、６０℃で２０分間乾燥した
。各々のサンプルを膨潤膜を用い、３７℃で平衡膨潤膜
厚を測定し、元の膜厚に対する膨潤倍率を求めた。硬化
剤としてホルマリンを添加したサンプルはホルマリン添
加量の多いほど膨潤率が低く、硬化が進んでいることを
示しているのに対し、ホルマリンを添加しないサンプル
は３７℃の蒸留水に浸すと直ちに溶解した。

したがって、本発明の硬化性樹脂を用いると温和な条件
で硬化ができる（メタリルアルコールの水酸基が含まれ
ている。）ことが示された。

合成例２ 攪拌装置付の反応容器にメタノール１２０＋＋Ｊ！。

蒸留水９５ｍ１．アクリルアミド３０ｇ、メｐ　ＩＪ　
／ｌ／アルコール５ｇ及びアゾビスイソブチロニトリル
１８０ｍｑを加え、窒素置換したのち６０℃で２時間攪
拌した。生成物はアセトン中に投下し粉末としたのち６
０℃で真空乾燥した。収ｆｆｉ　２８．５　ｇ（収率８
１．４％）。２０％水溶液の粘度は５００ｃｐ（Ｂ型粘
度計４０℃）であった。元素分析値は次の通りであった
。

Ｃ：５２゜１７％、Ｈニア、４２％、Ｎ：１７．９０％
合成例３ 攪拌装置付の反応容器にメタノール１４０　ｍ、ｌ　。

蒸留水８５ｍ／！、アクリルアミド３２．！ｉＴ、アク
リルｉｆｆＦＭ、メタリルアルコール５ＩＩ及び２．２
７−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）２ｏ
ｏｒｎ９を加え窒素置換後６０℃で２時間攪拌した。生
成物はアセトンに投下して粉末としてから６０℃で真空
乾燥した。

収量３５！９（収率８３．３％）。２０チの水溶液の粘
度は３５０　ｃｐであった（Ｂ型粘度計、４０℃）。

元素分析値は次の通りであった。

Ｃ：５１．５８係、Ｈニア、０９％、Ｎ：１５．９３チ
〔発明の効果〕 本発明の乾式分析要素は非蛋白性親水性ポリマーバイン
ダーが架橋硬化可能なため架橋便化してよって該層に充
分な強度を与えることができる。その結果、製造、保存
、使用が容易になる。また、総蚕白あるいはアルブミン
分析用に使用した場合に発色光学濃度が高く、測定精度
、感度ともに向上することが認められた。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）メタリルアルコールとアクリルアミドもしくはそ
   の誘導体、アクリル酸、メタクリル酸もしくはそれらの
   誘導体又はＮ−ビニル−２−ピロリドンとの共重合体を
   親水性ポリマーバインダーとして少なくとも一層に含む
   乾式の一体型多層分析要素
2. （２）親水性ポリマーバインダーが架橋された前記共重
   合体である特許請求の範囲（１）に記載の多層分析要素
3. （３）親水性ポリマーバインダーが架橋されていない前
   記共重合体である特許請求の範囲（１）に記載の多層分
   析要素
4. （４）共重合体がメタリルアルコールとアクリルアミド
   又はＮ−ビニル−２−ピロリドンとを共重合して得られ
   たものである特許請求の範囲（１）に記載の多層分析要
   素
5. （５）分析対象物がアルブミンである特許請求の範囲（
   １）に記載の多層分析要素
6. （６）分析対象物が総蛋白である特許請求の範囲（１）
   に記載の多層分析要素