Procédé de préparation de 6-désoxytétracyclines
La présente invention a pour objet un procédé de préparation 6-désoxytétracyclines.
Les composés obtenus par le procédé selon rinvention peuvent répondre à la formule :
EMI1.1
dans laquelle R, est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxyle. A partir de ces 6-désoxytétracy- clines on peut préparer les sels thérapeutiquement actifs, acides et basiques ainsi que les complexes et leurs épimères 4, par exemple les sels d'acides miné- raux, les sels alcalins et les sels alcalino-terreux, ainsi que divers complexes tels que ceux formés avec des sels d'aluminium, de magnésium et de calcium.
Les composés mentionnés sont apparentés à la tétracycline et à l'oxytétracycline, antibiotiques à large spectre bien connus et largement utilisés. Les 6 désoxytétracyclines diffèrent essentiellement des antibiotiques précédents par le fait que le groupe hydroxyle en position 6 du noyau naphtacène est remplacé par un atome d'hydrogène. Cette modification produit une différence frappante dans l'activité des composés obtenus, qui apparaissent plus efficaces vis-à-vis de certaines souches de bactéries résistantes à la tétracycline.
Il est très surprenant que les 6-dés oxytétracyclines, particulièrement la 6-désoxytétracy- cline proprement dite, gardent l'activité antibactérienne à large spectre qui caractérise les tétracyclines, surtout lorsqu'on sait que l'anhydrotétracycline, qui est aussi dépourvue de groupe hydroxyle en position 6 du noyau naphtacène, ne présente qu'une activité antibactérienne très inférieure à celle du composé dont elle dérive.
Suivant la nomenclature internationale, le nom chimique correct de cet analogue de la tétracycline est 4-diméthylamino-1, 4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-octahydro- 3, 10, 12, 1 2a-tétrahydroxy-6-méthyl-1, 1 1-dioxo-naph- tacène-2-carboxamide. L'analogue de roxytétracy- cline présente un groupe hydroxyle en position 5 du noyau et on le désigne de façon similaire.
L'un des avantages les plus importants que possè- dent ces nouveaux composés par rapport aux tétracyclines décrites antérieurement est leur stabilité accrue en présence d'acides et d'alcalis. L'instabilité de la tétracycline en milieu acide et l'instabilité de la chlorotétracycline en milieu alcalin sont bien connues.
La chlorotétracycline en solution aqueuse avec un tampon au carbonate de sodium à pH 9, 85 perd 50% de son activité en 29, 2 minutes à 230 C. Par contre, la 6-désoxytétracycline ne perd pas plus de 1% de son activité en 24 heures dans les mêmes conditions.
La tétracycline a une demi-vie inférieure à 1 minute dans 1'acide chlorhydrique 3 N à 100"C. La 6-dés- oxytétracycline par contre a une demi-vie de 27 heures dans les mêmes conditions. La 6-désoxy-oxytétra- cycline dans les mêmes conditions a une demi-vie de 45 heures. La tétracycline a une demi-vie d'environ 6 minutes dans une solution de soude 0, 1 N à 100 C.
Par contre, la 6-désoxytétracycline a une demi-vie de 9 t/2 heures dans les mêmes conditions, et la 6-dés oxy-oxytétracycline a une demi-vie de 10 vu heures dans ces mêmes conditions. Ces propriétés inattendues sont très précieuses étant donné que l'instabilité de la tétracycline en milieu acide et l'instabilité de la chlorotétracycline en milieu alcalin limitent ou excluent entièrement l'usage de ces antibiotiques dans de nombreuses applications. Grâce à la stabilité bien meilleure des 6-désoxytétracyclines, il est possible de préparer de nombreux produits pharmaceutiques qui ne pourraient pas être préparés de façon satisfaisante avec les tétracyclines antérieurement connues.
D'autre part, la stabilité accrue permet d'améliorer les mé thodes de récupération et de purification, car on peut utiliser des conditions de pH et de température plus sévères sans détruire les composés nouveaux.
Comme on ra indiqué plus haut, l'activité antibactérienne des 6-désoxytétracyclines est tout à fait similaire à de nombreux égards à celle des tétracyclines antérieurement connues, et ainsi le médecin peut administrer les composes nouveaux de la même façon et approximativement aux mêmes doses que les tétracyclines actuellement utilisées. De plus, étant donné que les nouvelles 6-désoxytétracyclines présentent l'activité antibiotique à spectre large qui caractérise les tétracyclines antérieurement connues, elles peuvent servir à traiter diverses infections produites par des bactéries Gram + aussi bien que Gram- , là où le traitement de ces infections par la tétracycline ou l'oxytétracycline est indiqué.
Le spectre antibactérien des nouveaux composés, représentant la quantité nécessaire pour inhiber la croissance de diverses bactéries typiques, est déterminé de façon usuelle par la méthode des bandes à dilution d'agar-agar qui sert communément à essayer les nouveaux antibiotiques. Les concentrations minima d'inhibition de la 6-désoxytétracycline et de la 6-désoxy-oxytétracycline exprimées en gammas par cm3, vis-à-vis de divers organismes essayés, sont indiquées dans le tableau ci-dessous. A titre de comparaison, on indique aussi l'activité antibactérienne de la tétracycline vis-à-vis des mêmes organismes.
Tableau 1
Organismeoxytetra-.J'-de'
cycline tetracycline cycline
Mycobacterium ranae 0, 2 0, 2 0, 4
Mycobacterium smegmatis
ATCC 607 0, 2 0, 2 0, 4 Staphylococcus aureus
ATCC 6538P 0, 2 0, 8 0, 4 (Micrococcus pyogenes var aureus)
Sarcina Lutea
ATCC 9341 0, 2 0, 4 0, 4
Bacillus subtilis
ATCC 6633 0, 2 ¯ 0, 1 0, 4
Streptococcus hemolyticus, ¯ hémolytique 0, 8 0, 2 6 Organisme d'Chlorhydrate
cycline tetracycline cycline
Streptococcus hemolyticus, g hémolytique > 50 6 25
Staphylococcus albus > 50 6 25
Streptococcus hemolyticus Groupe D > 50 6 25
Staphylococcus aureus 1, 5 1, 5 1, 5
Bacillus cereus
ATCC 10702 1, 5 1, 5 0,
8
Proteus vulgaris 12 12 6
Escherichia coli
ATCC 9637 12 12 6
Salmonella gallinarum 12 12 6
D'après ce qui précède, on remarquera qu'à bien des points de vue, le spectre antibactérien des nouveaux composes est étroitement parallèle à celui de la tétracycline, mais qu'en outre, la 6-désoxytétracycline est efficace vis-à-vis de certaines souches de bactéries résistantes à la tétracycline, telles que le Streptococcus hemolyticus gamma hémolytique, le Staphylococcus albus et le Streptococcus hemolyticus groupe D. En outre, ces deux composés nouveaux sont beaucoup plus efficaces vis-à-vis du Streptococcus hemolyticus bêta hémolytique que la tétracycline.
Selon la présente invention, on prépare les 6-désoxytétracyclines par une réduction catalytique assez remarquable de la tétracycline correspondante, en solution dans un solvant, en présence d'une substance qui est capable de former un noyau chélaté avec un noyau hydronaphtalène péri-dioxygéné ; on peut préparer ainsi la 6-désoxytétracycline en réduisant catalytiquement la tétracycline, la chlorotétracycline ou la bromotétracycline, et on peut préparer la 6-désoxy- oxytétracycline en réduisant catalytiquement l'oxyté- tracycline.
On peut conduire le procédé de réduction en mettant en contact avec de l'hydrogène une solution de la tétracycline correspondante dans un solvant, en présence d'un catalyseur approprié, tel que le palladium métallique finement divisé ou un autre métal de la famille du platine, sur du charbon de bois, ou bien l'hydroxyde de palladium sur du charbon de bois.
Des composés appropriés qui possèdent la propriété de former un noyau chélaté et qui peuvent servir avec succès dans le présent procédé de réduction sont 1'acide borique, les trihalogénures de bore tels que le trifluorure de bore, les sels d'aluminium et de magnésium tels que le chlorure d'aluminium, l'acétate de magnésium, etc. L'acide borique ou les trihalogé- nures de bore semblent être les composés les plus utiles au point de vue du rendement en produit désiré.
Habituellement, l'acide borique ou le trihalogénure de bore est utilisé en quantité au moins équimolaire. On peut conduire la réduction à des températures variant de 0 à 1000 C, et de préférence entre la température ambiante et 500 C environ, et sous des pressions d'hydrogène de 0, 5 à 100 atmosphères environ.
Les solvants inertes appropries qui peuvent servir dans la réaction sont les solvants polaires divers tels que 1'eau, le dioxane, l'acide acétique glacial, le 2 éthoxy-éthanol, et l'acétate d'éthyle. On a trouvé qu'un rapport de 1 : 1 entre 1'eau et la diméthylformamide donnait un mélange solvant particulièrement bon pour cette réaction. On ajoute habituellement une petite quantité d'acide perchlorique à la solution. Une concentration de catalyseur d'au moins 5% en poids de la tétracycline correspondante est généralement nécessaire, et on peut en utiliser jusqu'à 100% environ. On conduit habituellement l'hydrogénolyse jusqu'à ce qu'une mole d'hydrogène soit absorbée, lorsque la matière première est la tétracycline, et à ce moment le taux d'absorption tend à diminuer.
Quand on utilise la chlorotétracycline, il faut évidemment 2 moles d'hydrogène. Il faut veiller à ne pas prolonger l'hydrogénation pendant un temps excessif, car il pourrait se dérouler des réductions plus poussées et indésirables avec formation de produits moins intéressants.
Les substances capables de former un noyau chélaté comme indiqué ci-dessus et qui sont utilisées dans le processus de réduction décrit, sont des réactifs très importants car ils jouent apparemment le rôle de formateurs de complexes et ont pour effet d'empêcher la réduction des fonctions oxygénées en position 11 et 12 du noyau naphtacène. Ces réactifs sont très importants dans la réduction, car en l'absence de ces agents, la réduction se fait en position 12 de préférence à la position 6, et le composé résultant ne possède aucune activité biologique. Mais dans le processus de réduction décrit, la chélation a pour effet de bloquer ces fonctions oxygénées et d'empêcher leur réduction, de sorte que l'activité antibactérienne du composé se conserve.
Une fois l'hydrogénation achevée, on peut récupérer la 6-désoxytétracycline ou la 6-désoxy-oxytétra- cycline par tous moyens désirés, par exemple en éli- minant le catalyseur et en concentrant la solution.
On peut évaporer le produit jusqu'à siccité, le purifier par précipitation fractionnée dans le méthanol et on peut encore purifier en recristallisant dans l'alcool de façon usuelle. On peut convertir le produit neutre ainsi formé en un sel d'acide minéral, par exemple en chlorhydrate, en le traitant par des acides tels que l'acide chlorhydrique, à un pH inférieur à 4 environ. On peut former de façon similaire d'autres sels d'acides, tels que le sulfate, le phosphate, le trichloracétate, etc. De préférence, on peut mettre les 6-désoxytétracyclines en suspension dans un solvant approprié pendant l'acidification. On peut former simplement les sels alcalins et alcalino-terreux en traitant le composé amphotère par un équivalent environ de la base choisie, par exemple la soude, la potasse, la chaux, la baryte, etc.
On peut préparer les sels métalliques en solution aqueuse ou dans un solvant approprié. De préférence, on prépare les sels basiques à un pH de 6 ou supérieur. On peut obtenir la base libre à un pH de 4 à 6 environ. On peut former les complexes, par exemple le complexe de 6-désoxyté- tracycline et de gluconate d'aluminium, en mélangeant simplement le chlorhydrate du composé nouveau et le gluconate d'aluminium en solution aqueuse.
Pour former les épimères 4 des 6-désoxytétracyclines, c'est-à-dire ceux qui ont une forme épimère sur l'atome de carbone en position 4, ainsi qu'on l'a décrit à propos des autres composés de la série tétracycline, on peut ajuster simplement le pH d'une solution concentrée de l'antibiotique entre 3, 0 et 5, 0 et laisser reposer la solution jusqu'à ce que l'isomérisa- tion soit parvenue à l'équilibre.
Le plus commode est de conduire l'isomérisation à la température ambiante, bien que l'on obtienne un taux de conversion plus élevé aux températures supérieures. Le pH doit être compris entre 3, 0 et 5, 0 environ, de préférence entre 3, 5 et 4, 5. Il se produit une certaine épimérisation aux pH qui sortent de ces intervalles, et même dans 1'eau distillée ; mais la vitesse d'épimérisation est très faible. La concentration de l'antibiotique dans la solution aqueuse doit être aussi forte que possible, afin de donner les plus grandes vitesses d'épimérisation. L'équilibre complet peut nécessiter un laps de temps d'environ 24 heures à 25o C, mais un équilibre satisfaisant peut être obtenu en un temps beaucoup plus court dans des conditions particulières.
Toutefois, en général, on obtient les meilleurs résultats en laissant reposer les solutions pendant une durée d'une semaine ou plus. Il semble que l'équilibre soit atteint dans la plupart des cas à 50% environ ; autrement dit, la moitié environ de l'antibiotique se convertit en épimère à l'équilibre.
Etant donné que la concentration est un facteur important pour obtenir des rendements élevés pendant de courts laps de temps, il est préférable de choisir un système solvant qui donne la plus forte concentration en antibiotique. Il est généralement indiqué de tamponner ces systèmes de manière à obtenir un pH situé dans l'intervalle préférentiel.
Comme solvants, on citera le méthanol, l'éthanol, le butanol, l'acétone, le 2-éthoxyéthanol, le 2-méthaxy- propanol, l'acide acétique glacial, le tétrahydrofurane, la diméthylformamide, et les mélanges de ces solvants. On peut utiliser encore d'autres solvants. Un tampon préférentiel est le phosphate monosodique, mais on peut utiliser d'autres tampons et couples de tampons qui maintiennent le pH dans l'intervalle dé- sire.
Exemple 1
On met en suspension 12 g de chlorhydrate de tétracycline dans 10 volumes d'un mélange à 1 : 1 d'eau et de diméthylformamide. Au mélange, on ajoute 1, 48 g d'acide borique, 12 g de palladium non réduit à 5% sur charbon, et 0, 5 cm3 d'acide perchlorique. On conduit l'hydrogénation par réaction sur l'hydrogène à environ 2, 8 kg/cm2, sur une secoueuse
Parr, pendant 2 Vs heures environ. On arrête l'hydrogénation dès que 1 mole d'hydrogène environ a été absorbée. On filtre la solution et on lave le catalyseur avec 10 cm3 de diméthylformamide, puis on lave une deuxième fois avec 10cm3 d'eau.
On ajuste à pH 3, 0 le filtrat obtenu par le procédé décrit à 1'exemple 1, à l'aide d'ammoniaque concentrée, et on évapore sous vide jusqu'à siccité. On ajoute 50cm3 de butanol saturé d'eau, on agite le mélange et on filtre. On concentre l'activité dans l'eau et on ajuste le pH à 3, 0, puis on filtre. On ajuste le filtrat à pH 1, 5 et on extrait en retour avec 100 cm3 de butanol. On concentre l'extrait jusqu'à environ 5-10 cm3 sous atmosphère d'azote. On ensemence la solution et on la laisse reposer pendant 18 heures à la température ambiante. On filtre les cristaux, on les lave à l'acétone puis à l'éther et on sèche sous vide à 40O C pendant 20 heures pour obtenir 179 mg de 6-désoxytétracycline.
Exemple 2
On délaie 2/3 de gramme de 6-désoxytétracycline dans 13, 5 cm3 d'alcool éthylique. On ajoute 0, 5 cm3 d'acide chlorhydrique concentré pour ajuster le pH à 0, 8-1, 0. On laisse reposer la solution pendant 3 1/2 heures. Il se forme des cristaux de chlorhydrate de 6-désoxytétracycline que l'on sèche sous vide pendant 20 heures à 100 C.
Analyse : calculée pour CW, H2-, N C107 : C 56, 7 ;
H 5, 38 ; N 6, 02 ; Cl 7, 69 ; O 24, 1 ; effective : C 56, 52 ; H 5, 46 ; N 5, 94 ; Cl 7, 71 ; O 23, 89.
Le produit a une rotation optique [a] 20 de-292¯ dans H2SOY U, 1 N.
On détermine le spectre d'absorption d'ultraviolet sur un échantillon du composé dans H¯SO4 0, 1 N, à une concentration de 30, 65 gammas par cm3.
On détermine le spectre d'absorption d'infrarouge sur un échantillon du composé mélangé à des cristaux de KBr et comprimé en un disque.
Exemple 3
On répète l'opération de l'exemple 1, à cette seule exception près que l'on utilise 12 g d'oxytétra- cycline comme matière première au lieu du chlorhydrate de tétracycline utilisé dans ledit exemple. A la solution de réduction ainsi obtenue, on ajoute 5 g de terre d'infusoires et on filtre le mélange. On lave le gâteau filtre avec 50 cm3 d'un mélange à 50/50 de diméthylformamide et d'eau. On réunit le filtrat et les liqueurs de lavage pour obtenir un volume de 168 cm3. On ajuste le pH des liqueurs de lavage et du filtrat réunis à 3, 0 à l'aide d'ammoniaque concentrée et on évapore la solution sous vide jusqu'à siccité à 40-600 C.
On extrait les solides avec 75 cm3 d'eau pendant une heure avec agitation. On filtre la bouillie. On ajuste le pH de la solution à 1, 0 avec de l'acide chlorhydrique. On extrait à deux reprises l'ac- tivité dans du butanol. On réunit les extraits et on les évapore jusqu'à siccité. On ajoute 7 cm3 d'acé- tone à l'extrait sec, et on ajoute de l'acide chlorhydrique pour ajuster le pH à 1, 0. On élimine les solides par centrifugation. On ensemence le liquide qui surnage et on laisse reposer 6 heures les cristaux formés, on filtre et on lave à l'acétone, puis à l'éther. On sèche les cristaux sous vide à 400 C pendant 12 heures. Rendement : 84, 7 mg de 6-désoxy-oxytétracy- cline.
Analyse calculée pour CH., N., C10g : C 54, 90 ;
H 5, 20 ; N5, 83 ; C17, 38 ; 026, 70 ; analyse effective : C 54, 48 ; H 4, 81 ; N 5, 50 ; Cl 7, 74 ; 0 26, 55.
Le produit a une rotation optique [a] 25' de-251¯ dans HoSO4 S04 0, 1 N.
On détermine le spectre d'absorption d'ultraviolet sur un échantillon du composé dans H. S04 0, 1 N à une concentration de 40, 76 gammas par cm3.
On détermine le spectre d'absorption d'infrarouge sur un échantillon du composé mélangé à des cristaux de KBr et comprimé en un disque.
Exemple 4
A 1, 0 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cms d'un mélange à 1 : 1 de diméthylformamide et d'eau. On ajoute 3 cm3 (10 équivalents molaires) de trifluorure de bore à 45% dans l'éther, et on ajuste le pH à 1, 3 avec 2 cm3 de triéthylamine. On ajoute 1, 0 g de palladium à 5% sur carbone et on place le mélange sur une secoueuse Parr et on laisse réagir sur l'hydrogène pendant 100 minutes (absorption d'hydrogène 1 mole). On filtre le mélange et on rince les insolubles avec 10 cep d'eau. On obtient de la 6-désoxytétracycline.
Exemple 5
A 2, 5 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 d'un mélange à 1 : 5 de diméthylforma- mide et d'eau. On ajoute 1, 1 g d'acétate de magnésium, Mg (C2HSO2) 2, 4HLO. On ajuste le pH à 1, 8 avec de l'acide chlorhydrique. On ajoute 2, 5 g de palladium à 5% sur charbon et 2 gouttes d'acide perchlorique, et on place le mélange sur une se coueuse Parr et on le fait réagir sur l'hydrogène pendant 71 minutes (absorption d'hydrogène : 1 mole).
On filtre la solution réduite et on rince les insolubles avec de l'acide chlorhydrique 0, 1 N. On obtient de la 6-désoxytétracycline.
Exemple 6
A 2, 5 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 d'un mélange à 1 : 1 de diméthylfor- mamide et d'eau. On ajuste le pH à 1, 8 avec de 1'acide chlorhydrique. On ajoute 0, 55 g de chlorure de calcium, 2 gouttes d'acide perchlorique et 2, 5 g de palladium sur charbon. On place le mélange sur une secoueuse Parr et on laisse réagir sur rhydro- gène pendant 97 minutes (absorption : 1 mole de H2).
On filtre le mélange et on le rince avec 5 cm3 d'acide chlorhydrique 0, 1 N. On obtient de la 6-désoxytétra- cycline.
Exemple 7
A 1 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 d'un mélange à 1 : 1 de diméthylformamide et d'eau contenant 0, 27 g de chlorure d'aluminium.
On ajuste le pH à 1, 5 avec de 1'acide perchlorique.
On ajoute 1, 0 g de palladium à 5% sur charbon et on place le mélange sur une secoueuse Parr pendant 150 minutes (absorption 1 mole de HJ. On filtre le mélange. On obtient de la 6-désoxytétracycline.
Exemple 8
A 5 mg de 6-désoxytétracycline, on ajoute 1 cm3 d'acide acétique glacial. On agite le mélange et on le laisse s'équilibrer à la température ambiante pendant 18 heures, puis on filtre. La chromatographie sur papier montre la présence de la 6-désoxy-4-épi- tétracycline.
Exemple 9
A 5 mg de 6-désoxy-oxytétracycline, on ajoute 1 cm3 d'acide acétique glacial. On agite le mélange et on le laisse s'équilibrer à la température ambiante pendant 18 heures puis on filtre. La chromatographie sur bande de papier montre la présence de 6-désoxy 4-épioxytétracycline.
Exemple 10
A 1, 0 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 0, 13 g d'acide borique dissous dans 28 cm3 d'un mélange à 1 : 1 de diméthylformamide et d'eau.
On ajuste le pH à 2, 1 avec de l'acide chlorhydrique.
A 13 cm3 de cette solution, on ajoute 0, 75 g de palladium à 5% sur charbon. On place le mélange dans un autoclave en acier inoxydable et on le laisse réagir sur l'hydrogène à une pression de 133 kg/cm2 pendant 80 minutes. On filtre le mélange et on lave les insolubles avec de 1'eau. Des titrages spectrophotométriques du filtrat de réduction indiquent la présence de 6-désoxytétracycline.
Exemple I1
On suit la méthode de l'exemple 1, sauf que ron utilise comme matière première le chlorhydrate de chlorotétracycline au lieu de chlorhydrate de tétracy- cline. On ajoute le chlorhydrate de chlorotétracycline à 15 cm3 d'un mélange à 50 : 50 de diméthylforma- mide et d'eau et on conduit l'hydrogénation comme dans 1'exemple 1 jusqu'à ce que deux moles d'hydrogène aient été absorbées. L'examen chromatographique du produit révèle la présence de la 6-désoxytétra- cycline.
Exemple 12
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32, 5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5, 67 mg de 4-épioxytétracycline neutre (J. A. C. S. 79, 2849, 1957). On ajoute 7mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2, 1 kg/cm2 pendant 6 heures. L'analyse chromatographique sur papier et l'analyse spectrophotométrique indiquent la présence de 6-désoxy-4-épioxytétracy- cline.
Exemple 13
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32, 5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5, 0 mg de sel d'ammonium de 4-épi-bromotétracycline (J. A. C. S. 79, 2849, 1957).
On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2, 1 kg/cm2 pendant 6 heures. L'analyse chromatographique sur papier et l'analyse spec trophotométrique indiquent la présence de 6-désoxy 4-épitétracycline.
Exemple 14
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32, 5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5, 0 mg de chlorhydrate de 4-épi chlorotétracycline (J. A. C. S. 79, 2849, 1957). On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2, 1 kg/cm2 pendant 7 heures. L'analyse chromatographique sur papier et 1'analyse spectrophotométrique indiquent la présence de 6-désoxy-4- épitétracycline.
Exemple 15
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32, 5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 6, 0 mg de bromotétracycline. On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2, 1 kg/cm2, pendant 6 heures. L'analyse chromatographique sur papier et 1'analyse spec trophotométrique montrent la présence de 6-désoxytétracycline.
Exemple 16
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32, 5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5, 0 mg de 4-épitétracycline (J. A. C. S. 79, 2849, 1957). On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2, 1 kg/ cm2 pendant 4 heures. L'analyse chromatographique sur papier et 1'analyse spectrophotométrique indiquent la présence de 6-désoxy-4-épitétracycline.