CA1046058A - Procede de preparation d'un nouveau derive aminoglycosidique et ses sels - Google Patents
Procede de preparation d'un nouveau derive aminoglycosidique et ses selsInfo
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- CA1046058A CA1046058A CA239,007A CA239007A CA1046058A CA 1046058 A CA1046058 A CA 1046058A CA 239007 A CA239007 A CA 239007A CA 1046058 A CA1046058 A CA 1046058A
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Abstract
L'invention a pour objet un procédé de préparation d'un nouveau dérivé aminoglycosidique, à savoir la 4-O¢2',6'-diamino 2',3',6'-tridésoxy .alpha.,D-ribohexopyranosyl! 6-O-¢3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy .alpha.,D-xylohexopyranosyl! 2-désoxy-streptamine de formule: ainsi que de ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables. Ledit procédé consiste essentiellement à synthétiser le nouveau dérivé au départ de la 5,6-O-cyclohexylidène tétra N-carbométhoxy néamine et du 1-O-acétyl 2-O-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl) amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose. Les produits obtenus par le procédé de l'invention ont une activité antibiotique.
Description
~a pr~sente invention a pour objet un procédé de préparation d'un nouveau dérivé aminoglycosidique, à savoir la 4-0-~ 2',6'-diamino 2'~3'~6'-tridésoxy a,D-ribohexopyranosy ~ 6-0-3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy a,D-xylohexopyranosy~
2-désoxystreptamine de formule:
NH2 CH3 0 (I~
~ H
<¦ 3~ _ ~ .
OH
.. .
ainsi que de ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.
De tels sels peuvent être par exemple un chlorhydrate~
un bromhydrate, un nitrate, un sulfate? un phosphate, un acétate, u~ formiate, un benzoate, un mal~ate, un fumarate, un succinate~
un tartrate, un citrate, un oxalate, un benzylate, un glyoxylate, un aspartate, un alcanesulfonate ou un arylsulfonate.
~ e produit de formule I et ses sels d'addition pharma-ceutiquement acceptables, possèdent une très intéressante activité
antibiotique, dtune part sur les bactéries gram~ telles que les Staphylocoques, les Streptocoques et not~mment les Staphylocoques pénicillino-résistants, et d'autre part, sur les bactéries gram-et notammènt sur les bactéries coliformesO
Ces propriétés rendent aptes le produit de formule I, ainsi que ses sels thérapeutiquement compatibles, à être utilisés à titre de médicaments notamment dans le traitement des Staphy-lococcies telles que septicémies à staphylocoques, staphylococcies - 1 - ~
malignes de la face~ staphylococcies cutanées, pyodernites, plaies septiques et suppurantes, anthrax, phlegmons, érésypèles, sta-phylococcies aigu~s primitives ou post-grippales, bronchopneu-monies, suppurations pulmonaires et collibacilloses. Ces produits peuvent être utilisés par voie parentérale~ buccale, rectale ou par voie locale en application topique sur la peau ou les muqueuses.
Ils peuvent être présentés par exemple sous forme de solutions ou de suspensions injectables, de poudres stériles pour préparations injectables extemporanées, de comprimés, de comprimés enrobés, de capsules, de sirops, de suppositoires, de crèmes, de pommades et de préparations en aérosols. Ces formes pharmaceuti-ques sont préparées selon les procédés classiques. La dose usuel-le, variable selon le produit utilisé, le sujet traité et l'affec-tion en cause, peut être par exemple de 100 mg à 1 g par jour chez l~homme par voie parentérale.
~ e produit de formule I, ainsi que ses sels thérapeu-tiquement compatibles peuvent etre emplo~és pour préparer des compositions pharmaceutiques renfermant, à titre de principe actif, l~un au moins desdits produits.
~ e procédé de préparation du produit de formule I, telle que définie ci-dessus, et de ses sels dladdition avec les acides minérau~ ou org~niques, est caractérisé en ce que l~on fait réagir le produit de formule:
CH2NHC0 2CH3 ¦
H0~ - ~ 0 ~ HC02CH3 ~ECo2cx3 ~ (II) 1046~58 avec le chlorure de tosyle, en présence d'une base organique, pour obtenir le produit de formule:
~ O~H H ~ NHC02CH3 H ~ ~ (III) que l~on traite par un ioduré alcalin pour obtenir le produit de formule:
H ~ ~ ~ HC02CH3 I ~HC02CH3 ~ (IY) que l~on traite par l'hydrogène en présence d~un catalyseur pour obtenir le produit de formule:
qH2~HC02CH3 ~HC02CH3 O~H- H ~ NHCO~CH3 ~0 ~( ,.
\ ~ (V) NHC02CH3 ~
~J .
que l'on traite par l'anhydride acétique en présence d'une base organique pour obtenir le produit de formule:
~ 3 H~HC02CH3 CH3C00~ \~ (VI) ~HCO 2CH3 J,~
que l'on fait réagir avec un agent acide pour obtenir le pro-duit de formule:
CH2NHC0 2CH3 ~HCO 2CH3 /Lo H H~HCO 2CH3 CH3COJ~-- O J ~a~ (VII ) ~HCO 2CH3 OH
que l'on fait réagir sur le produit de formule:
CH
~ (VIII) en présence d~un catalyseur pour obtenir le produit de con-densation correspondant sous forme d'un mélange atanomères a et ~ de formules:
~ 4 -~ " 10460S8 CH3C00 ~ ~ ~ NC02CN3 NHC02CH3 ~ o H o (IX) ~L I
et ~H2NHco2cH I 3 ~o 3 ~HC02CH3 CH3COO `
HC02CH3 ~ O (IX~) ~11 CH2c 6H5 mélange que l'on traite par l~hydrogane en présence d!~un cataly-seur et dont on libère les fonctions aminées et la fonction hydro-xyle estérifiée par traitement en milieu alcalin pour obtenir le mélange des produits de formules:
NH2 CH3 ~I) OH
`` 1046058 et ~H2NH2 NH2 ~ O H H ~ H2 H~ 0 1~
~H2 CH3 ~Lo,l (X) H
OH
mélange dont on sépare le produit de formule I cherché, produit de formule I que l'on salifie le ca~ échéant par action d'un t acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable.
Dans la réalisation du procédé ci-dessus décrit, les opérations dlhydrogénolyse et d'hydrolyse permettant de passer des produits IX et IX' aux produits I et X, peuvent Aetre effec-tuées en commençant soit par l'hydrogénolyse, soit par l'hydrolyse.
Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du procéd~ énoncé ci-des~us, on opère comme suit: la base orga-nique en présence de laquelle on fait réagir le chlorure de tosyle sur le produit de formule II est de préférence la pyri-dine, mais on peut également employer par exemple une lutidine ou la collidine; l'iodure alcalin que l'on utilise pour traiter le produit de formule III eet choisi parmi les iodures de sodium ou de potassium; le catalyseur que l'on utilise pour traiter par l'hydrogène le produit de formule IV est de préf~rence le nickel'de Raney, mais on peut également utiliser~ par exemple, le palladium, des sels de palladium ou des dérivés du platine;
la base organique en présence de laquelle on fait réagir l'an-hydride acétique sur le produit de formule V est de pré~érence la pyridine, mai~ on peut également utiliser par exemple une lutidine ou la collidine; l'agent acide que l'on utilise pour traiter le produit de formule VI est de préférence l'acide ; - 6 ---```' 10460S8 acétique aqueux, mais on peut également utiliser d'autres acides organiques tels que par exemple l'acide formique ou l'acide oxalique ou des acides minéraux aqueux tels que par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.
~ a condensation entre les produits de formule VII et VIII est une réaction du type habituellement désigné sous le nom de réaction de EOENI~S-KNORR; elle est donc réalisée en présence dlun catalyseur qui est avantageusement constitué par du cyanure mercurique, mais on peut également utiliser un autre sel de mercure, un sel d'argent ou de cadmium ou une ~m;ne tertiaire telle que la collidine par exemple.
Comme catalyseur d'hydrogénation pour transformer le mélange des produits de formules IX et IX', on utilise avanta-geusement le palladium déposé sur charbon, mais on peut également utiliser des sels de palladium ou bien du platine, des dérivés du platine et d'autres catalyseurs usuels tels que le rhoaium~
le ruthénium ou le nickel; l'agent alcalin que l'on utilise ensuite pour libérer les fonctions aminées et la fonction hydro-xyle estérifiée est avantageusement de la baryte dissoute dans une solution hydroalcoolique, mais on peut utiliser dtautres bases aqueuses comme, par exemple, l'hydroxyde de sodium, de potassium ou de lithium.
~ a séparation des produits de formules I et X peut etre réalisée par les méthodes habituelles; on utilise avanta-geusement la chromatographie sur silice, mais on peut également utiliser la chromatographie sur alumine, sur cellulose, sur silicate de magnésium ou encore la cristallisation fractionnée ou la méthode dite de séparation ~ contre-courantO On utilise pour mener à bien de telles séparations différents solvants ou ~0 mélanges de solvants organiques purs ou aqueux.
~ a salification du produit de formule I peut ~tre r~alisée par les méthodes usuellesO Elle peut etre obtenue par ~ 046058 action sur ce produit d'acides tels que par exemple les acides chlorhydrique, bromhydrique~ nitrique, sulfurique, phosphorique, acétique, formique~ benzoique, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, benzylique, glyoxylique, asparti-que, alcane sulfoniques et arylsulfoniques. Cette sa~ification est réalisée de préférence dans un solvant ou un mélange de æolvants tels que l'eau~ ltéther éthylique~ le méthanol ou l'acétone.
~ ~e produit de formule VIII utilisé dans le procédé de l'invention peut être préparé selon un procédé décrit dans le brevet belge n 814 724.
Ce procédé est caractérisé en ce que l'on fait réagir le produit de formule: ~
O H
~vec un agent alcalin à température ordinaire pour obtenir le produit de formule:
H
(XII) ¦ OC2H5 OH
~ue l~on traite par un halogénl~e de benzyle en présence d'un agent alcalin pour obtenir le produit de formule:
NH2 CH3 0 (I~
~ H
<¦ 3~ _ ~ .
OH
.. .
ainsi que de ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.
De tels sels peuvent être par exemple un chlorhydrate~
un bromhydrate, un nitrate, un sulfate? un phosphate, un acétate, u~ formiate, un benzoate, un mal~ate, un fumarate, un succinate~
un tartrate, un citrate, un oxalate, un benzylate, un glyoxylate, un aspartate, un alcanesulfonate ou un arylsulfonate.
~ e produit de formule I et ses sels d'addition pharma-ceutiquement acceptables, possèdent une très intéressante activité
antibiotique, dtune part sur les bactéries gram~ telles que les Staphylocoques, les Streptocoques et not~mment les Staphylocoques pénicillino-résistants, et d'autre part, sur les bactéries gram-et notammènt sur les bactéries coliformesO
Ces propriétés rendent aptes le produit de formule I, ainsi que ses sels thérapeutiquement compatibles, à être utilisés à titre de médicaments notamment dans le traitement des Staphy-lococcies telles que septicémies à staphylocoques, staphylococcies - 1 - ~
malignes de la face~ staphylococcies cutanées, pyodernites, plaies septiques et suppurantes, anthrax, phlegmons, érésypèles, sta-phylococcies aigu~s primitives ou post-grippales, bronchopneu-monies, suppurations pulmonaires et collibacilloses. Ces produits peuvent être utilisés par voie parentérale~ buccale, rectale ou par voie locale en application topique sur la peau ou les muqueuses.
Ils peuvent être présentés par exemple sous forme de solutions ou de suspensions injectables, de poudres stériles pour préparations injectables extemporanées, de comprimés, de comprimés enrobés, de capsules, de sirops, de suppositoires, de crèmes, de pommades et de préparations en aérosols. Ces formes pharmaceuti-ques sont préparées selon les procédés classiques. La dose usuel-le, variable selon le produit utilisé, le sujet traité et l'affec-tion en cause, peut être par exemple de 100 mg à 1 g par jour chez l~homme par voie parentérale.
~ e produit de formule I, ainsi que ses sels thérapeu-tiquement compatibles peuvent etre emplo~és pour préparer des compositions pharmaceutiques renfermant, à titre de principe actif, l~un au moins desdits produits.
~ e procédé de préparation du produit de formule I, telle que définie ci-dessus, et de ses sels dladdition avec les acides minérau~ ou org~niques, est caractérisé en ce que l~on fait réagir le produit de formule:
CH2NHC0 2CH3 ¦
H0~ - ~ 0 ~ HC02CH3 ~ECo2cx3 ~ (II) 1046~58 avec le chlorure de tosyle, en présence d'une base organique, pour obtenir le produit de formule:
~ O~H H ~ NHC02CH3 H ~ ~ (III) que l~on traite par un ioduré alcalin pour obtenir le produit de formule:
H ~ ~ ~ HC02CH3 I ~HC02CH3 ~ (IY) que l~on traite par l'hydrogène en présence d~un catalyseur pour obtenir le produit de formule:
qH2~HC02CH3 ~HC02CH3 O~H- H ~ NHCO~CH3 ~0 ~( ,.
\ ~ (V) NHC02CH3 ~
~J .
que l'on traite par l'anhydride acétique en présence d'une base organique pour obtenir le produit de formule:
~ 3 H~HC02CH3 CH3C00~ \~ (VI) ~HCO 2CH3 J,~
que l'on fait réagir avec un agent acide pour obtenir le pro-duit de formule:
CH2NHC0 2CH3 ~HCO 2CH3 /Lo H H~HCO 2CH3 CH3COJ~-- O J ~a~ (VII ) ~HCO 2CH3 OH
que l'on fait réagir sur le produit de formule:
CH
~ (VIII) en présence d~un catalyseur pour obtenir le produit de con-densation correspondant sous forme d'un mélange atanomères a et ~ de formules:
~ 4 -~ " 10460S8 CH3C00 ~ ~ ~ NC02CN3 NHC02CH3 ~ o H o (IX) ~L I
et ~H2NHco2cH I 3 ~o 3 ~HC02CH3 CH3COO `
HC02CH3 ~ O (IX~) ~11 CH2c 6H5 mélange que l'on traite par l~hydrogane en présence d!~un cataly-seur et dont on libère les fonctions aminées et la fonction hydro-xyle estérifiée par traitement en milieu alcalin pour obtenir le mélange des produits de formules:
NH2 CH3 ~I) OH
`` 1046058 et ~H2NH2 NH2 ~ O H H ~ H2 H~ 0 1~
~H2 CH3 ~Lo,l (X) H
OH
mélange dont on sépare le produit de formule I cherché, produit de formule I que l'on salifie le ca~ échéant par action d'un t acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable.
Dans la réalisation du procédé ci-dessus décrit, les opérations dlhydrogénolyse et d'hydrolyse permettant de passer des produits IX et IX' aux produits I et X, peuvent Aetre effec-tuées en commençant soit par l'hydrogénolyse, soit par l'hydrolyse.
Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du procéd~ énoncé ci-des~us, on opère comme suit: la base orga-nique en présence de laquelle on fait réagir le chlorure de tosyle sur le produit de formule II est de préférence la pyri-dine, mais on peut également employer par exemple une lutidine ou la collidine; l'iodure alcalin que l'on utilise pour traiter le produit de formule III eet choisi parmi les iodures de sodium ou de potassium; le catalyseur que l'on utilise pour traiter par l'hydrogène le produit de formule IV est de préf~rence le nickel'de Raney, mais on peut également utiliser~ par exemple, le palladium, des sels de palladium ou des dérivés du platine;
la base organique en présence de laquelle on fait réagir l'an-hydride acétique sur le produit de formule V est de pré~érence la pyridine, mai~ on peut également utiliser par exemple une lutidine ou la collidine; l'agent acide que l'on utilise pour traiter le produit de formule VI est de préférence l'acide ; - 6 ---```' 10460S8 acétique aqueux, mais on peut également utiliser d'autres acides organiques tels que par exemple l'acide formique ou l'acide oxalique ou des acides minéraux aqueux tels que par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.
~ a condensation entre les produits de formule VII et VIII est une réaction du type habituellement désigné sous le nom de réaction de EOENI~S-KNORR; elle est donc réalisée en présence dlun catalyseur qui est avantageusement constitué par du cyanure mercurique, mais on peut également utiliser un autre sel de mercure, un sel d'argent ou de cadmium ou une ~m;ne tertiaire telle que la collidine par exemple.
Comme catalyseur d'hydrogénation pour transformer le mélange des produits de formules IX et IX', on utilise avanta-geusement le palladium déposé sur charbon, mais on peut également utiliser des sels de palladium ou bien du platine, des dérivés du platine et d'autres catalyseurs usuels tels que le rhoaium~
le ruthénium ou le nickel; l'agent alcalin que l'on utilise ensuite pour libérer les fonctions aminées et la fonction hydro-xyle estérifiée est avantageusement de la baryte dissoute dans une solution hydroalcoolique, mais on peut utiliser dtautres bases aqueuses comme, par exemple, l'hydroxyde de sodium, de potassium ou de lithium.
~ a séparation des produits de formules I et X peut etre réalisée par les méthodes habituelles; on utilise avanta-geusement la chromatographie sur silice, mais on peut également utiliser la chromatographie sur alumine, sur cellulose, sur silicate de magnésium ou encore la cristallisation fractionnée ou la méthode dite de séparation ~ contre-courantO On utilise pour mener à bien de telles séparations différents solvants ou ~0 mélanges de solvants organiques purs ou aqueux.
~ a salification du produit de formule I peut ~tre r~alisée par les méthodes usuellesO Elle peut etre obtenue par ~ 046058 action sur ce produit d'acides tels que par exemple les acides chlorhydrique, bromhydrique~ nitrique, sulfurique, phosphorique, acétique, formique~ benzoique, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, benzylique, glyoxylique, asparti-que, alcane sulfoniques et arylsulfoniques. Cette sa~ification est réalisée de préférence dans un solvant ou un mélange de æolvants tels que l'eau~ ltéther éthylique~ le méthanol ou l'acétone.
~ ~e produit de formule VIII utilisé dans le procédé de l'invention peut être préparé selon un procédé décrit dans le brevet belge n 814 724.
Ce procédé est caractérisé en ce que l'on fait réagir le produit de formule: ~
O H
~vec un agent alcalin à température ordinaire pour obtenir le produit de formule:
H
(XII) ¦ OC2H5 OH
~ue l~on traite par un halogénl~e de benzyle en présence d'un agent alcalin pour obtenir le produit de formule:
3 ~ O\ ~
(XIII) ¦ OC2H5 " ~046058 que l'on txaite par l'anhydride ac~tique dans l'acide acétique, en presence d'un acide fort, pour obtenir le produit de formule:
c~3 (XIV) OC0~H3 que l'on traite par de l'acide chlorhydrique anhydre en présence de chlorure d'acétyle au sein d'un solvant organique pour obtenir le produit cherche de formule VIII.
Le trait ondule, qui relie les substituants de l'atome de carbone en position 1 du cycle des produits de formules VIII, XI, XII, XIII et XIV indique que ces substituants peuvent se trouver en position a ou ~ de ce cycle. Ces produits existent donc sous forme d'anomère a ou ~ ou sous forme d'un mélange de ces anomeres.
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter.
Exemple 1: 4-0-/ 2',6'-diamino 2',3',6'-tridesoxy a,D-ribohexo-pyranosyl_7 6-0-~ 3"-methylamino 3",4",6"-tridesoxy a,D-xylohexo-pyranosyl 7 2-desoxy streptamine Stade A:_ 5,6-0-cycloh_x_l_dene 3'-0-t_syl_tetra-N-carbométhoxy _éamine:_ _ On dissout 100 g de 5,6-0-cyclohexylidene tetra-N-carbomethoxy neamine (preparee selon J. of Antibiotics, 1971, p. 711) dans 2 litres de pyridine. On refroidit a 0C et on A~
~ 04~QS8 ajoute par fractions en une heure 150 g de chlorure de tosyle.
On laisse revenir à température ambiante et on agite 18 heures à
24C. On ajoute alors en trois heures, 52,5 g de formiate de sodium. On concentre sous pression réduite et on verse le résidu dans l'eau. On extrait au chloroforme, lave la phase organique à l'eau et sèche sur sulfate de sodium. Après évapo-ration du solvant et séchage sous vide à 40C, on obtient 112 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-0-tosyl tétra-N-carbométhoxy néamine cristallisée utilisable dans le stade suivant.
Ce produit peut être recristallis~ à l'aide d'un mélan-ge acétate dtéthyle-éther.
Chromatographie en couche mince (silice, chloroforme-méthanol g5-5): Rf = 0,3.
Stade ~:_ 5,6 O-_ycloh_x~lid_ne 3'-desox 3~=iOao tétra-N-carbo-méthox~ né_mine:
On mélange 393 g d'iodure de sodium et 790 ml de diméthylfo~mamideO On chauffe à 95C et on ajoute à la solution obtenue 76 g du produit obtenu au stade précédent. On chauffe à
103C pendant 16 heures puis, après refroidissement, on ajoute 2,5 l de chlorure de méthylèneO On essore le solide présent que l'on rince au chlorure de méthylène. On lave le filtrat à
l'eau et évapore à sec la phase organique. On reprend le résidu cristallin obtenu par du chlorure de méthylane, lave deux fois la solution chlorométhylènique à l~eau et la sèche sur sulfate de magnésium. On évapore à sec le chlorure de méthylène et on obtient 50~2 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-désoxy 3'-iodo tétra-N-carbométhoxy néamine que l'on utilise télle quelle pour le stade suivant.
Chromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-méthanol 95_5): Rf - 0,4.
Stade C: 5,6-0-cyclohex~lidène ~'-desox~ tétra-~-carbom_tho3y néamine:
On m~lange 47,7 g du produit obtenu au stade précédent, 1,5 1 de méthanol~ 95 cm3 de triéthylamine et environ 300 cm3 d'une suspension aqueuse de nickel de Raney. On fait barboter dans le mélange précédent agité, un lent courant d'hydrogène pendant 4 heures. On purge alors le mélange en faisant barboter de l'azote et filtre, en rincant le produit retenu sur le filtre avec du méthanol. On évapore le filtrat à sec~ reprend le résidu obtenu au chlorure de méthylène, sèche sur sulfate de magnésium et évapore ~ sec. On obtient ainsi 50 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-désoxy tétra-~-carbométhoxy né~mine quton peut utiliser telle ~uelle pour le stade suivant.
Un échantillon chromatographié sur silice en éluant avec un mé-lange chloroforme-méthanol (95-5) a les caractéristiques suivan-tes:
Anal~Se: (C26H42N4013) Calculé: C % 50,5 H ~ 6,85 ~ % 9,06 Trouvé : 50,1 6,9 8,7 /a/D = + 3 (c = 0,85 ~, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (silice, chloroforme-méthanol 95-5) Rf = 0~25.
Stade D:_ 5,6-0-~ycl_h_x~l_d_ne 4'-acé~yl ~'=desox~ tétra-~-carbométhoxy néamine: ~
On dissout 50 g du produit obtenu au stade précédent dans 500 cm3 de pyridine contenant 250 cm3 d~anhydride acétique.
Au bout de 5 heures à température ambiante, on évapore à sec en éliminant totalement les liquides présents ~ i~aide de toluèneO
On obtient ainsi 55 g de 5,6-0-cyclohexylidène 4'-acétyl 3'-désoxy tétra-~-carbométhoxy néamine que l'on utilise telle quelle dans le stade suivant.
ahromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-méthanol 95-5): Rf - 0,45.
llU46Q58 Stade E:_ 4'=acétyl 3'-dés_x té_ra-N-_arbométhoxy néamine:
On dissout 55 g du produit obtenu au stade précédent dans 500 cm3 d'acide acétique contenant 20 ~ d'eau. On chauffe pendant 3 heures à 60C puis, après refroidissement, évapore ~
sec sous vide. ~e résidu obtenu est chromatographié sur ~ilice en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol (96-4). On obtient 2~ g de 4'-acétyl 3'-désoxy tetra-N-carbométhoxy néamine, /a/D20 =--~ 605 (c = 0,55 ~, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (Silice~ chloroforme-méthanol 95-5): Rf = 0,30.
tade ~:_ 4-0-C 2' 6'-di-N=carbomé_h_x~ami_o_4'-0-_cétyl_2',~', 6t-tridéso~y_D-rlb _h_xop2ranosY17 6-0-C 3"-(M-_a_bét_o~y ~-méthyl) am_no 2"-0-b_nzyl 3"l4"~6"=tridéso~y_c D-x~l_h_x~p~ranos 1~3-_imé_h~l_x~c_rbo_yl 2-désoxy_s_rep_amine.
On dissout 3,1 g de 1-o-acétyl 2-0-benzyl 3-(~-carbé-thoxy N-méthyl) amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose dans 33 cm3 de dioxane contenant 10 ~ d'acide chlorhydrique gazeux et 6,6 cm3 de chlorure d'acétyle. On agite le mélange pendant 2 heures a température ambiante et évapore sous vide. On re-prend le résidu obtenu dans 6,6 cm3 de dioxane et on verse lasolution obtenue dans une solution à 60C de 2~2 g de 4'-acétyl 3'-désoxy tétra-N-carbométhoxy néamine dans 77 cm3 de dioxane contenant 3,3 g de cyanure mercurique. On maintient sous agita-tion pendant 4 heures 30 à 600e, puis ajoute à nouveau ~,3 g de cyanure mercurique et le dérivé chloré provenant de 3,1 g de l-O-acétyl 2-0-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl) amino,3,4,6,-tridésoxy D-xylohexopyranose. On agite encore pendant 17 heures à 60C, puis évapore le dioxane. On ajoute une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 45 ~ l et extrait au chloroforme.
Apras séchage de la phase organique sur sulfate de magnésium et évaporation ~ sec, on chromatographie le résidu sur silice en éluant avec un mélange chloroforme-acétone (7-3). 0~ obtient iO46058 2~8 g de 4-0 ~ 2'~6'-di-N-carbométhoxyamino 4.'-0-acétyl 2',3', 6'-tridésoxy D-ribohexopyranosy y 6-0-~ 3"-(N-carbéthoxy ~-méthyl) amino 2"-0-benzyl 3"~4"~6"-tridésoxy a,D-xylohexopyra-nosyy 1~3-diméthyloxycarbonyl 2-désoxy streptamine sous forme d'un solide blanc, /a/D = ~ 52 (c = 0,55 %, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-acétone 7-3):
Rf = 0,25.
Stade G:_ 4-_-~ 2'~6'-_i_min_ 2' 3',6'-t_idéso_y_a~D-r_b_h_xo-~yranosyy _6_0-r 3"-mé_h~lamino ~nl4ll~6"-t_idéso~y_alD-x~lo-hexo~yranosy~_2_désox~ stre~tamine:
On dissout 4,5 g du produit obtenu selon le mode opé-ratoire précédent dans 80 cm3 dtéthanol contenant quelques gout-tes de chlorure de méthylène~ 0,32 cm3 d'acide chlorhydrique con-centré et 2,7 g de palladium sur charbon ~ 10%. On agite enatmosphère d'hydrogène pendant l heure 30. On filtre le cata-lyseur et évapore i~ sec- On chromatographie le r~sidu sur silice en éluant avec un mélange chloroformeméthanol (95-5).
l g de produit pur obtenu, ayant en chromatographie en couche mince avec l'éluant précédent un Rf de 0,15, est dissous dans un mélange contenant 4 cm3 d'éthanol, 8 cm3 d'eau et 7,87 g de baryte hydratée. On agite pendant 4 heures ~ 90-94C~ puis refroidit et filtre le mélange réactionnel. On amène le filtrat à pX 3 à l'aide di'acide sulfurique normal, essore le sulfate de baryum qui a précipité et neutralise le filtrat ainsi obtenu l'aide d'une résine échangeuse d'ions mise sous forme basi~ue.
On sépare la résine et amène à sec le filtrat. ~e résidu obtenu est purifié par passage sur une colonne de résine éch~ngeuse d'ions de`type carboxyligue mise sous forme ammonium par ~lution a l~'aide di'ammoniaque 0,15 ~, puis 0,5 ~. Le produit élué par l'ammoniaque 0,5 N est chromatographié sur silice pour séparer .les a~omères en position 1" en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol-ammoniaque (2-2-l). On obtient ainsi 58 mg d'anomère ~
~046i~)58 du produit attendu et 143 mg d'anomère a.
Anomère a: /a/D = ~ 124 (c = 0,5 %~ eau) Rf= 0,5 (Silice, chloroforme-méthanol-ammonia~ue 2-2-l);
Anomère ~: /a/20 = + 52~5 (c = 0~2 %~ eau) R~- 0,6 (Silice, chloroforme-méthanol-ammoniaque 2-2-l).
~ e l-O-acétyl 2-0-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl) amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose utilisé au départ du stade ~ peut être obtenu de la façon suivante:
Stade 1: ethyl 3-(N-carbé_h_~ N-mé_h~ll _m_no ~4~6-tridésox~
D-xylohexo~yranoside.
On dissout 67 g d~'éthyl 3-(N-carbéthoxy ~-méthyl) amino ~4~6 tridésoxy 2-0-éthoxycarbonyl D-xylohexopyranoside ~préparé
selon J. Org. Chem., 1965, 30, 1287) dans 500 cm3 d'éthanol, puis ajoute 200 cm3 de soude 2 N.
On agite une heure à température ambiante puis on dilue à l'eau et extrait au chlorure de méthylène. On lave la phase organique à l'eau et on l'évapore à sec sous vide. On obtient 57 g de produit attendu sous forme d'une huile jaune que l'on utilise tel quel dans le stade suivant.
Stade 2:_ éthyl _-0-be_z~l_3-(~-_arbéthoxy N-méthyl) amino 3,4,6 -tridésoxy_D_x l_h_xop~ranoside:
On met en suspension 12 g d'hydrure de sodium en dispersion dans ~'huile minérale dans 300 cm3 de tétrahydrofu-rane. On ajoute~ sous agitation, la solution de 57 g du produit obtenu au stade précédent dans 100 cm3 de tétrahydrofurane. On chauffe à l'ébullition au reflux pendant quinze minutes, puis refroidit ~ 25Co On ajoute 29 cm3 de bromure de benzyle et laisse pendant quinze heures ~ température ambiante. On dilue à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. Apras évaporation de l'acétate dléthyle, on chromatographie l'huile obtenue sur silice à l'aide d~un mélange benz~ène-acétate d'éthyle (8-2).
On obtient 60 g de produit attendu sous forme d'un solide 1(~46QS8 cristallisé blanc. ~ = 65C.
Stade 3: l-O-acét~l 2-0-ben~yl 3-~ -carbéthox N-méthyl~ amino 3,4,6-tridés_x~ D-~ylohexo~yranose.
On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux jusqu'à saturation, dans un mélange de 600 cm3 d'acide acétique et 60 cm3 d'anhydride acétique à 25C. On ajoute 60 g du pro-duit obtenu au stade précédent et on laisse seize heures à tem-pérature ambiante en maintenant le barbotage di'acide chlorhydri-que. On évapore alors à sec~ sous vide~ sans dépasser 40C.
On chromatographie l'huile obtenue sur silice à l'aide d'un mélange chloroforme-acétone (9-l).
On obtient 60 g de produit attendu sous forme d'un solide cristallisé blanc.
~'anomère a a été obtenu pur par recristallisation dans l'éther isopropyliqué. ~ - 87C.
Anal~se: (C19H27~6) Calculé: C % 62~45 H % 7~45 N ~ 3,83 ~rouvé : 62~7 7,7 3~7 Exemple 2: Sulfate de 4-- C 2',6'-diamino 2',3',6'-tridésox~
a.D-ribohexoP~ranos~ ~ 6-0-r 3i'-méth~lamino 3"~4",6"-tridésox~
a D-xylohexop~ranos~l7 2-désox~ streptamine On dissout 169 mg de ~'anomère a obtenu selon l'exemple précédent dans 20 cm3 d'eau. On neutralise la solution obtenue à l'aide d!'acide sulfurique décinormal en suivant la neutrali-sation à l'aide d'un pH-mètre. On utilise ainsi 16,5 cm3 d'acide.
On filtre la solution obtenue~ concentre le filtrat sous vide et ajoute du méthanol, ce qui fait précipiter le sulfate attendu.
On obtient 230 mg de sulfate de 4-0-~ 2',6'-diamino 2',3',6'-tIidéE~y a,D-ribohexopyranosyy 6-0-C 3"-méthylamino 3"~4"~6"-tridésoxy a~D-xylohexopyranosy y 2-désoxy streptamine sous forme d'un solide blanc de formule C1gH3 ~ 507, 5/2 H2~04.
.
~ .C)4~1S8 /a/D = + 89 (c - 0,8 %, eau) Rf = 0,5 (Silice, chloroforme-méthanol-ammoniaque 2-2-1).
Exemple 3 On a réalisé une préparation pour injection de for-mule:
- Produit décrit ~ l'exemple 2 . ... . . . . . . . . 50 mg ;
- Excipient aqueux stérile . . . . . . . . . . . . . 1 cm3.
Etude ~harmacologique du produit décrit a 1~ eYemple 2:
a) Activité ant_bacté_ienne_i_ vitro:
~activité antibactérienne a été mesurée in vitro par la méthode des dilutions en milieu liquide.
On prépare une série de tubes dans lesquels on répartit une même quantité de milieu nutritif. On distribue des quantités croissantes de l~antibiotique étudié puis chaque tube est ense-mencé avec une souche bactérienne. Après une incubation de dix-huit, vingt-quatre ou quarante-huit heures ~ l~étuve à 37C, llinhibition de la croissance bactérienne est appréciée par transillumination, ce qui permet de déterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMI) du produit, exprimées ici en ~ ~ cm3 de base.
.. ._ . . ..
Souches _ .
Staphylococcus aureus 40 481..... 0,1 0~1 0,2 Staphylococcus aureus 40 511..... 0,2 0,6 Staphylococcus aureus 40 821..... 0~1 0,1 0,1 Staph~lococcus aureus 38 691..... ~0,05 0,1 0,1 Streptococcus pyogenes A 561..... ~0~05 ~0,05 ~ 0,05 Streptococcus faecalis 99 F 74... ~20 _ Bacillus subtilis................~ 0,05 ~0,05 ~0,05 Escherichia coli 9 911.. O.O.... D 0,6 0,6 0,2 Escherichia coli 9 9650.......... 0,6 1 2 Escherichia coli 1560~ o~ ~4 0,6 Salmonella anatum 23348~o~o~ 1 3 15 Salmonella typhi murium 420 ..... 2 5 20 Salmonella typhi murium 1 374 ... 1 5 10 Enterobacter aerogenes Co86...... 0,6 0,6 0,6 Enterobacter aerogenes Coll...... ~4 ~4 Serratia marcescens CoB3500O..... 10 40 4o b) Acti_ité antibactérienne in vivo:
~ activité antibac~érienne a été mesurée in vivo sur une infection expérimentale ~ Elebsiella pneumoniaeO 40 souris m~les d'un poids moyen de 21 g sont réparties en 4 séries de 10 animaux. On pratique une infection intrapéritonéale avec 0,5 cm3 d'une culture de Klebsiella pneumoniae n 52 145 en milieu nutritif, diluée au millième avec de l'eau distillée stérile. On traite par administration sous-cutanée de produit par trois fois, une heure, cinq heures et vingt-quatre heures après l'infection; on note la mortalité à des temps diff~rents après l~infection et le nombre de souris survivantes après huit .
1~46058 jours. ~es résultats sont résumés dans le tableau suivant:
Dose totale _ _ ~ _ administrée Mortalité à Survie a (calculée libre) 28 H 31 45 ~ 49 ~ 70 H 5 j8ème jour 0,03 mg 1 9 0,05 mg _ 10 10 0'075 mg _ _ _ _ 10 distillée 1 1 6 1 1 _ 0 ~ es résultats précédents montrent la bonne activité an-tibiotique du produit décrit à l'exemple 2.
(XIII) ¦ OC2H5 " ~046058 que l'on txaite par l'anhydride ac~tique dans l'acide acétique, en presence d'un acide fort, pour obtenir le produit de formule:
c~3 (XIV) OC0~H3 que l'on traite par de l'acide chlorhydrique anhydre en présence de chlorure d'acétyle au sein d'un solvant organique pour obtenir le produit cherche de formule VIII.
Le trait ondule, qui relie les substituants de l'atome de carbone en position 1 du cycle des produits de formules VIII, XI, XII, XIII et XIV indique que ces substituants peuvent se trouver en position a ou ~ de ce cycle. Ces produits existent donc sous forme d'anomère a ou ~ ou sous forme d'un mélange de ces anomeres.
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter.
Exemple 1: 4-0-/ 2',6'-diamino 2',3',6'-tridesoxy a,D-ribohexo-pyranosyl_7 6-0-~ 3"-methylamino 3",4",6"-tridesoxy a,D-xylohexo-pyranosyl 7 2-desoxy streptamine Stade A:_ 5,6-0-cycloh_x_l_dene 3'-0-t_syl_tetra-N-carbométhoxy _éamine:_ _ On dissout 100 g de 5,6-0-cyclohexylidene tetra-N-carbomethoxy neamine (preparee selon J. of Antibiotics, 1971, p. 711) dans 2 litres de pyridine. On refroidit a 0C et on A~
~ 04~QS8 ajoute par fractions en une heure 150 g de chlorure de tosyle.
On laisse revenir à température ambiante et on agite 18 heures à
24C. On ajoute alors en trois heures, 52,5 g de formiate de sodium. On concentre sous pression réduite et on verse le résidu dans l'eau. On extrait au chloroforme, lave la phase organique à l'eau et sèche sur sulfate de sodium. Après évapo-ration du solvant et séchage sous vide à 40C, on obtient 112 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-0-tosyl tétra-N-carbométhoxy néamine cristallisée utilisable dans le stade suivant.
Ce produit peut être recristallis~ à l'aide d'un mélan-ge acétate dtéthyle-éther.
Chromatographie en couche mince (silice, chloroforme-méthanol g5-5): Rf = 0,3.
Stade ~:_ 5,6 O-_ycloh_x~lid_ne 3'-desox 3~=iOao tétra-N-carbo-méthox~ né_mine:
On mélange 393 g d'iodure de sodium et 790 ml de diméthylfo~mamideO On chauffe à 95C et on ajoute à la solution obtenue 76 g du produit obtenu au stade précédent. On chauffe à
103C pendant 16 heures puis, après refroidissement, on ajoute 2,5 l de chlorure de méthylèneO On essore le solide présent que l'on rince au chlorure de méthylène. On lave le filtrat à
l'eau et évapore à sec la phase organique. On reprend le résidu cristallin obtenu par du chlorure de méthylane, lave deux fois la solution chlorométhylènique à l~eau et la sèche sur sulfate de magnésium. On évapore à sec le chlorure de méthylène et on obtient 50~2 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-désoxy 3'-iodo tétra-N-carbométhoxy néamine que l'on utilise télle quelle pour le stade suivant.
Chromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-méthanol 95_5): Rf - 0,4.
Stade C: 5,6-0-cyclohex~lidène ~'-desox~ tétra-~-carbom_tho3y néamine:
On m~lange 47,7 g du produit obtenu au stade précédent, 1,5 1 de méthanol~ 95 cm3 de triéthylamine et environ 300 cm3 d'une suspension aqueuse de nickel de Raney. On fait barboter dans le mélange précédent agité, un lent courant d'hydrogène pendant 4 heures. On purge alors le mélange en faisant barboter de l'azote et filtre, en rincant le produit retenu sur le filtre avec du méthanol. On évapore le filtrat à sec~ reprend le résidu obtenu au chlorure de méthylène, sèche sur sulfate de magnésium et évapore ~ sec. On obtient ainsi 50 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-désoxy tétra-~-carbométhoxy né~mine quton peut utiliser telle ~uelle pour le stade suivant.
Un échantillon chromatographié sur silice en éluant avec un mé-lange chloroforme-méthanol (95-5) a les caractéristiques suivan-tes:
Anal~Se: (C26H42N4013) Calculé: C % 50,5 H ~ 6,85 ~ % 9,06 Trouvé : 50,1 6,9 8,7 /a/D = + 3 (c = 0,85 ~, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (silice, chloroforme-méthanol 95-5) Rf = 0~25.
Stade D:_ 5,6-0-~ycl_h_x~l_d_ne 4'-acé~yl ~'=desox~ tétra-~-carbométhoxy néamine: ~
On dissout 50 g du produit obtenu au stade précédent dans 500 cm3 de pyridine contenant 250 cm3 d~anhydride acétique.
Au bout de 5 heures à température ambiante, on évapore à sec en éliminant totalement les liquides présents ~ i~aide de toluèneO
On obtient ainsi 55 g de 5,6-0-cyclohexylidène 4'-acétyl 3'-désoxy tétra-~-carbométhoxy néamine que l'on utilise telle quelle dans le stade suivant.
ahromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-méthanol 95-5): Rf - 0,45.
llU46Q58 Stade E:_ 4'=acétyl 3'-dés_x té_ra-N-_arbométhoxy néamine:
On dissout 55 g du produit obtenu au stade précédent dans 500 cm3 d'acide acétique contenant 20 ~ d'eau. On chauffe pendant 3 heures à 60C puis, après refroidissement, évapore ~
sec sous vide. ~e résidu obtenu est chromatographié sur ~ilice en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol (96-4). On obtient 2~ g de 4'-acétyl 3'-désoxy tetra-N-carbométhoxy néamine, /a/D20 =--~ 605 (c = 0,55 ~, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (Silice~ chloroforme-méthanol 95-5): Rf = 0,30.
tade ~:_ 4-0-C 2' 6'-di-N=carbomé_h_x~ami_o_4'-0-_cétyl_2',~', 6t-tridéso~y_D-rlb _h_xop2ranosY17 6-0-C 3"-(M-_a_bét_o~y ~-méthyl) am_no 2"-0-b_nzyl 3"l4"~6"=tridéso~y_c D-x~l_h_x~p~ranos 1~3-_imé_h~l_x~c_rbo_yl 2-désoxy_s_rep_amine.
On dissout 3,1 g de 1-o-acétyl 2-0-benzyl 3-(~-carbé-thoxy N-méthyl) amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose dans 33 cm3 de dioxane contenant 10 ~ d'acide chlorhydrique gazeux et 6,6 cm3 de chlorure d'acétyle. On agite le mélange pendant 2 heures a température ambiante et évapore sous vide. On re-prend le résidu obtenu dans 6,6 cm3 de dioxane et on verse lasolution obtenue dans une solution à 60C de 2~2 g de 4'-acétyl 3'-désoxy tétra-N-carbométhoxy néamine dans 77 cm3 de dioxane contenant 3,3 g de cyanure mercurique. On maintient sous agita-tion pendant 4 heures 30 à 600e, puis ajoute à nouveau ~,3 g de cyanure mercurique et le dérivé chloré provenant de 3,1 g de l-O-acétyl 2-0-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl) amino,3,4,6,-tridésoxy D-xylohexopyranose. On agite encore pendant 17 heures à 60C, puis évapore le dioxane. On ajoute une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 45 ~ l et extrait au chloroforme.
Apras séchage de la phase organique sur sulfate de magnésium et évaporation ~ sec, on chromatographie le résidu sur silice en éluant avec un mélange chloroforme-acétone (7-3). 0~ obtient iO46058 2~8 g de 4-0 ~ 2'~6'-di-N-carbométhoxyamino 4.'-0-acétyl 2',3', 6'-tridésoxy D-ribohexopyranosy y 6-0-~ 3"-(N-carbéthoxy ~-méthyl) amino 2"-0-benzyl 3"~4"~6"-tridésoxy a,D-xylohexopyra-nosyy 1~3-diméthyloxycarbonyl 2-désoxy streptamine sous forme d'un solide blanc, /a/D = ~ 52 (c = 0,55 %, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-acétone 7-3):
Rf = 0,25.
Stade G:_ 4-_-~ 2'~6'-_i_min_ 2' 3',6'-t_idéso_y_a~D-r_b_h_xo-~yranosyy _6_0-r 3"-mé_h~lamino ~nl4ll~6"-t_idéso~y_alD-x~lo-hexo~yranosy~_2_désox~ stre~tamine:
On dissout 4,5 g du produit obtenu selon le mode opé-ratoire précédent dans 80 cm3 dtéthanol contenant quelques gout-tes de chlorure de méthylène~ 0,32 cm3 d'acide chlorhydrique con-centré et 2,7 g de palladium sur charbon ~ 10%. On agite enatmosphère d'hydrogène pendant l heure 30. On filtre le cata-lyseur et évapore i~ sec- On chromatographie le r~sidu sur silice en éluant avec un mélange chloroformeméthanol (95-5).
l g de produit pur obtenu, ayant en chromatographie en couche mince avec l'éluant précédent un Rf de 0,15, est dissous dans un mélange contenant 4 cm3 d'éthanol, 8 cm3 d'eau et 7,87 g de baryte hydratée. On agite pendant 4 heures ~ 90-94C~ puis refroidit et filtre le mélange réactionnel. On amène le filtrat à pX 3 à l'aide di'acide sulfurique normal, essore le sulfate de baryum qui a précipité et neutralise le filtrat ainsi obtenu l'aide d'une résine échangeuse d'ions mise sous forme basi~ue.
On sépare la résine et amène à sec le filtrat. ~e résidu obtenu est purifié par passage sur une colonne de résine éch~ngeuse d'ions de`type carboxyligue mise sous forme ammonium par ~lution a l~'aide di'ammoniaque 0,15 ~, puis 0,5 ~. Le produit élué par l'ammoniaque 0,5 N est chromatographié sur silice pour séparer .les a~omères en position 1" en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol-ammoniaque (2-2-l). On obtient ainsi 58 mg d'anomère ~
~046i~)58 du produit attendu et 143 mg d'anomère a.
Anomère a: /a/D = ~ 124 (c = 0,5 %~ eau) Rf= 0,5 (Silice, chloroforme-méthanol-ammonia~ue 2-2-l);
Anomère ~: /a/20 = + 52~5 (c = 0~2 %~ eau) R~- 0,6 (Silice, chloroforme-méthanol-ammoniaque 2-2-l).
~ e l-O-acétyl 2-0-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl) amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose utilisé au départ du stade ~ peut être obtenu de la façon suivante:
Stade 1: ethyl 3-(N-carbé_h_~ N-mé_h~ll _m_no ~4~6-tridésox~
D-xylohexo~yranoside.
On dissout 67 g d~'éthyl 3-(N-carbéthoxy ~-méthyl) amino ~4~6 tridésoxy 2-0-éthoxycarbonyl D-xylohexopyranoside ~préparé
selon J. Org. Chem., 1965, 30, 1287) dans 500 cm3 d'éthanol, puis ajoute 200 cm3 de soude 2 N.
On agite une heure à température ambiante puis on dilue à l'eau et extrait au chlorure de méthylène. On lave la phase organique à l'eau et on l'évapore à sec sous vide. On obtient 57 g de produit attendu sous forme d'une huile jaune que l'on utilise tel quel dans le stade suivant.
Stade 2:_ éthyl _-0-be_z~l_3-(~-_arbéthoxy N-méthyl) amino 3,4,6 -tridésoxy_D_x l_h_xop~ranoside:
On met en suspension 12 g d'hydrure de sodium en dispersion dans ~'huile minérale dans 300 cm3 de tétrahydrofu-rane. On ajoute~ sous agitation, la solution de 57 g du produit obtenu au stade précédent dans 100 cm3 de tétrahydrofurane. On chauffe à l'ébullition au reflux pendant quinze minutes, puis refroidit ~ 25Co On ajoute 29 cm3 de bromure de benzyle et laisse pendant quinze heures ~ température ambiante. On dilue à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. Apras évaporation de l'acétate dléthyle, on chromatographie l'huile obtenue sur silice à l'aide d~un mélange benz~ène-acétate d'éthyle (8-2).
On obtient 60 g de produit attendu sous forme d'un solide 1(~46QS8 cristallisé blanc. ~ = 65C.
Stade 3: l-O-acét~l 2-0-ben~yl 3-~ -carbéthox N-méthyl~ amino 3,4,6-tridés_x~ D-~ylohexo~yranose.
On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux jusqu'à saturation, dans un mélange de 600 cm3 d'acide acétique et 60 cm3 d'anhydride acétique à 25C. On ajoute 60 g du pro-duit obtenu au stade précédent et on laisse seize heures à tem-pérature ambiante en maintenant le barbotage di'acide chlorhydri-que. On évapore alors à sec~ sous vide~ sans dépasser 40C.
On chromatographie l'huile obtenue sur silice à l'aide d'un mélange chloroforme-acétone (9-l).
On obtient 60 g de produit attendu sous forme d'un solide cristallisé blanc.
~'anomère a a été obtenu pur par recristallisation dans l'éther isopropyliqué. ~ - 87C.
Anal~se: (C19H27~6) Calculé: C % 62~45 H % 7~45 N ~ 3,83 ~rouvé : 62~7 7,7 3~7 Exemple 2: Sulfate de 4-- C 2',6'-diamino 2',3',6'-tridésox~
a.D-ribohexoP~ranos~ ~ 6-0-r 3i'-méth~lamino 3"~4",6"-tridésox~
a D-xylohexop~ranos~l7 2-désox~ streptamine On dissout 169 mg de ~'anomère a obtenu selon l'exemple précédent dans 20 cm3 d'eau. On neutralise la solution obtenue à l'aide d!'acide sulfurique décinormal en suivant la neutrali-sation à l'aide d'un pH-mètre. On utilise ainsi 16,5 cm3 d'acide.
On filtre la solution obtenue~ concentre le filtrat sous vide et ajoute du méthanol, ce qui fait précipiter le sulfate attendu.
On obtient 230 mg de sulfate de 4-0-~ 2',6'-diamino 2',3',6'-tIidéE~y a,D-ribohexopyranosyy 6-0-C 3"-méthylamino 3"~4"~6"-tridésoxy a~D-xylohexopyranosy y 2-désoxy streptamine sous forme d'un solide blanc de formule C1gH3 ~ 507, 5/2 H2~04.
.
~ .C)4~1S8 /a/D = + 89 (c - 0,8 %, eau) Rf = 0,5 (Silice, chloroforme-méthanol-ammoniaque 2-2-1).
Exemple 3 On a réalisé une préparation pour injection de for-mule:
- Produit décrit ~ l'exemple 2 . ... . . . . . . . . 50 mg ;
- Excipient aqueux stérile . . . . . . . . . . . . . 1 cm3.
Etude ~harmacologique du produit décrit a 1~ eYemple 2:
a) Activité ant_bacté_ienne_i_ vitro:
~activité antibactérienne a été mesurée in vitro par la méthode des dilutions en milieu liquide.
On prépare une série de tubes dans lesquels on répartit une même quantité de milieu nutritif. On distribue des quantités croissantes de l~antibiotique étudié puis chaque tube est ense-mencé avec une souche bactérienne. Après une incubation de dix-huit, vingt-quatre ou quarante-huit heures ~ l~étuve à 37C, llinhibition de la croissance bactérienne est appréciée par transillumination, ce qui permet de déterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMI) du produit, exprimées ici en ~ ~ cm3 de base.
.. ._ . . ..
Souches _ .
Staphylococcus aureus 40 481..... 0,1 0~1 0,2 Staphylococcus aureus 40 511..... 0,2 0,6 Staphylococcus aureus 40 821..... 0~1 0,1 0,1 Staph~lococcus aureus 38 691..... ~0,05 0,1 0,1 Streptococcus pyogenes A 561..... ~0~05 ~0,05 ~ 0,05 Streptococcus faecalis 99 F 74... ~20 _ Bacillus subtilis................~ 0,05 ~0,05 ~0,05 Escherichia coli 9 911.. O.O.... D 0,6 0,6 0,2 Escherichia coli 9 9650.......... 0,6 1 2 Escherichia coli 1560~ o~ ~4 0,6 Salmonella anatum 23348~o~o~ 1 3 15 Salmonella typhi murium 420 ..... 2 5 20 Salmonella typhi murium 1 374 ... 1 5 10 Enterobacter aerogenes Co86...... 0,6 0,6 0,6 Enterobacter aerogenes Coll...... ~4 ~4 Serratia marcescens CoB3500O..... 10 40 4o b) Acti_ité antibactérienne in vivo:
~ activité antibac~érienne a été mesurée in vivo sur une infection expérimentale ~ Elebsiella pneumoniaeO 40 souris m~les d'un poids moyen de 21 g sont réparties en 4 séries de 10 animaux. On pratique une infection intrapéritonéale avec 0,5 cm3 d'une culture de Klebsiella pneumoniae n 52 145 en milieu nutritif, diluée au millième avec de l'eau distillée stérile. On traite par administration sous-cutanée de produit par trois fois, une heure, cinq heures et vingt-quatre heures après l'infection; on note la mortalité à des temps diff~rents après l~infection et le nombre de souris survivantes après huit .
1~46058 jours. ~es résultats sont résumés dans le tableau suivant:
Dose totale _ _ ~ _ administrée Mortalité à Survie a (calculée libre) 28 H 31 45 ~ 49 ~ 70 H 5 j8ème jour 0,03 mg 1 9 0,05 mg _ 10 10 0'075 mg _ _ _ _ 10 distillée 1 1 6 1 1 _ 0 ~ es résultats précédents montrent la bonne activité an-tibiotique du produit décrit à l'exemple 2.
Claims (6)
1. Procédé de préparation de la 4-O-[2', 6'-diamino 2',3',6'-tridésoxy .alpha.,D-ribohexopyranosyl] 6-O-[3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy .alpha.,D-xylohexopyranosyl] 2-désoxystreptamine de formule:
(I) ainsi que de ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, caractérisé en ce que l'on traite un mélange d'anomères .alpha. et .beta. de formules:
(IX) et (IX') par l'hydrogène en présence d'un catalyseur et en libère les fonctions aminées et la fonction hydroxyle estérifiée par traitement en milieu alcalin pour obtenir le mélange des pro-duits de formules:
(I) et (X) mélange dont on sépare le produit de formule I cherché, produit de formule I que l'on salifie, le cas échéant, par action d'un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable pour en former le sel cherché.
(I) ainsi que de ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, caractérisé en ce que l'on traite un mélange d'anomères .alpha. et .beta. de formules:
(IX) et (IX') par l'hydrogène en présence d'un catalyseur et en libère les fonctions aminées et la fonction hydroxyle estérifiée par traitement en milieu alcalin pour obtenir le mélange des pro-duits de formules:
(I) et (X) mélange dont on sépare le produit de formule I cherché, produit de formule I que l'on salifie, le cas échéant, par action d'un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable pour en former le sel cherché.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que, pour préparer le mélange d'anoméres .alpha. et .beta. de formules IX et IX', telles que définies à la revendication 1, l'on fait réagir le produit de formule:
(VII) sur le produit de formule:
(VIII) en présence d'un catalyseur.
(VII) sur le produit de formule:
(VIII) en présence d'un catalyseur.
3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que, pour préparer le produit de formule VII, telle que définie à la revendication 2, l'on fait réagir le produit de formule:
(II) avec le chlorure de tosyle, en présence d'une base organique, pour obtenir le produit de formule:
(III) que l'on traite par un iodure alcalin pour obtenir le produit de formule:
(IV) que l'on traite par l'hydrogène en présence d'un catalyseur pour obtenir le produit de formule:
(V) que l'on traite par l'anhydride acétique en présence d'une base organique pour obtenir le produit de formule:
(VI) que l'on fait réagir avec un agent acide pour obtenir le produit de formule VII cherché.
(II) avec le chlorure de tosyle, en présence d'une base organique, pour obtenir le produit de formule:
(III) que l'on traite par un iodure alcalin pour obtenir le produit de formule:
(IV) que l'on traite par l'hydrogène en présence d'un catalyseur pour obtenir le produit de formule:
(V) que l'on traite par l'anhydride acétique en présence d'une base organique pour obtenir le produit de formule:
(VI) que l'on fait réagir avec un agent acide pour obtenir le produit de formule VII cherché.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir l'anomère .alpha. du produit de formule I, la 4-O-[2',6'-diamino 2',3',6'-tridésoxy .alpha.,D-ribohexopyranosyl]
6-O-[3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy .alpha.,D-xylohexopyranosyl]
2-désoxy streptamine, avec de l'acide sulfurique en présence de méthanol pour obtenir le sel correspondant.
6-O-[3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy .alpha.,D-xylohexopyranosyl]
2-désoxy streptamine, avec de l'acide sulfurique en présence de méthanol pour obtenir le sel correspondant.
5. Le sulfate de 4-O-[2',6'-diamino 2',3',6'-tri-désoxy .alpha.,D-ribohexopyranosyl] 6-O-[3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy .alpha.,D-xylohexopyranosyl] 2-désoxy streptamine chaque fois qu'il est obtenu par un procédé selon la revendication 4 ou ses équivalents chimiques manifestes.
6. Le produit de formule I, tel que défini à la reven-dication 1, et ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, chaque fois qu'ils sont préparés par un procédé selon les revendications 1, 2 et 3.
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