FR2492828A1 - Derives d'aprosamine a activite antimicrobienne contre les bacteries gram-positives et gram-negatives - Google Patents

Abstract

DE NOUVEAUX DERIVES D'APROSAMINE, AYANT UNE ACTIVITE ANTIMICROBIENNE RENFORCEE CONTRE LES BACTERIES GRAM-POSITIVES ET GRAM-NEGATIVES, AVEC DE MOINDRES EFFETS SECONDAIRES QUE L'APRAMYCINE, SONT PRODUITS EN MODIFIANT CHIMIQUEMENT LE GROUPE 8-HYDROXY DE L'APROSAMINE OBTENUE EN HYDROLYSANT L'APRAMYCINE.

Description

1. La présente invention se rapporte à de nouveaux

dérivés d'aprosamine.

Des modifications chimiques d'antibiotiques cons-

titués d'aminoglucosides ont été étudiées de manière im-

portante pour renforcer l'activité antimicrobienne et ré- duire les effets secondaires. La demanderesse a trouvé que

la modification chimique du groupe 8'-hydroxy de l'aprosami-

ne qui est préparée par hydrolyse d'apramycine (par exem-

ple, décrite sous le nom de facteur II de nébramycine dans la demande de brevet japonais soumise à l'examen et publiée no 51-36358) renforce l'effet antimicrobien. La présente

invention a été obtenue sur le base de ce résultat.

La présente invention se rapporte à de nouveaux dérivés d'aprosamine ayant la formule générale suivante (1):

2. 2492828

', CH MiHOH cn2-(CR,),-CH-CH2 22ni E OH ii 1NH ao

o n vaut O ou 1 et la ligne ondulée représente la configura-

tion axiale ou équatoriale.

Dans la présente invention,les dérivés d'aprosamine ayant la formule (I) comprennent également la base libre et ses sels, en particulier les sels d'addition avec les acides non toxiques,pharmaceutiquement acceptables. Comme acides qui peuvent former des sels, par exemple,on mentionne des acides minéraux (l'acide chlorhydrique,l'acide bromhydrique,

l'acide iodhydrique,l'acide sulfurique, l'acide phosphori-

que, l'acide carbonique, etc.) et des acides organiques (l'acide acétique, l'acide fumarique,iVacide malique,l'acide

tartrique,l'acide maléique, l'acide citrique,1'acide mandé-

lique,l'acide ascorbique, l'acide gallique, etc.).

Les composés (I) dans la présente invention sont

produits selon la séquence de réactions suivante.

(Séquence de réactions) À

H2N + 5H3

HO-' 1 lNR OHR Première étape , > oHydrolyse 2o35-31 35. --3t (II) HO CH NH (Izi)

COX

I OH

NCH

-O X^NH COX

(IV) OX

COX o I OH NOO oXl NECOX

(V) 0IZNIKOX

0]OX Y-O

2 5 COX

OH

NCH3 |

Z111C X v NHCOX

ON1CO3

Deuxième étape Protection de groupes amino Troisième étape Protection des groupes - et 6-hydroxy Quatrième étape Ac"lation du groupe 8'-hydroxy Cinquième étape Traitement par une base (vi) 3. 4. NHCOX Sixième étape Echange des groupes de protection en positions et 6 Septième étape Remplacement du groupe 8'-acyloxy par un atome d'halogène Huitième étape _ t _

HOCH2-CH ' 2

Il oc X) Neuvième étape Hydrolyse Z2

(XI)

(viii) (Dx) 5. CH

1 3 OH

N2 2 H N2

(I) HO NH2

CE, CHOHo

H2-(CH2) --CH2-C O C

fI2'( 2 n 2 O'N

NH2 OH HN.OR

(XII) Ho 1') Dans ces différentes formules, COX est un groupe de protection du groupe amino, Y est un groupe cyclique de protection du groupe hydroxy, Z1 est un groupe acyle, Z2

est un groupe de protection du groupe hydroxy, R est un ha-

logbne, et n et la ligne ondulée ont la même signification

2-l que celle mentionnée ci-dessus.

(Première étape) Cette étape comprend l'hydrolyse de l'apramycine et peut être conduite selon le procédé qui a été décrit

dans Journal of Organic Chemistry 41, 2087 (1976). Pour aug-

menter le rendement, l'isolement et la purification peu-

vent être obtenus avec des résines échangeuses d'ions.

(Deuxième étape) Cette étape comprend la protection des groupes 1-,

3-, 2'- et 7'-amino de l'aprosamine. Comme groupe de pro-

3U tection à introduire, on emploie de préférence des groupes

qui peuvent être facilement éliminés. Par exemple, on men-

tionne le groupe benzyloxycarbonyle, o le noyau de benzène

peut être substitué, les groupes formyle, t-butoxycarbony-

le, t-amloxycarbonyle, mêthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle,

p-tolubnesulfonyle, phtaloyle, m-nitrophénylthio et triphé-

nylméth>lthiio et,en particulier, on préfère le groupe ben-

z lo\xcarbonyle.

6. 2492828

L'introduction de groupes de protection est ef-

fectuée suivant le procédé connu; par exemple, si le groupe

de protection est un groupe benzyloxycarbonyle,on peut em-

ployer plus de 4 quantités équivalentes de chlorure de car-

bobenzoxy. (Troisième étape)

Cette étape comprend la protection des groupes 5-

et 6-hydroxy. Comme groupe de protection, on préfère des groupes qui peuvent relier les groupes 5- et 6-hydroxy pour

former un noyau. Par exemple, on emploie comme agent de pro-

tection un dialkylcétal de cyclohexanone et un dialcoxypro-

pane, etc. et, en particulier, on préfère le diméthylcétal de cyclohexanone. L'agent de protection peut être employé en

quantité équivalente ou en excès et,'de préférence, en quan-

tité de 1,8-équivalents.

Cette étape est un procédé classique dans le do-

maine de la chimie des sucres et peut être conduite dans un solvant inerte convenable (benzène, toluène, xylène, etc.)

en présence d'une quantité catalytique d'-un acide (acide for-

mique, acide acétique, acide p-toluènesulfonique).

(Quatrième étape)

Cette étape comprend l'acylation du groupe 8!-hy-

droxy. Comme groupe acyle à introduire, le groupe formyle et le groupe acétyle sont préférés et peuvent être utilisés sous la forme de l'anhydride carboxylique correspondant et

de l'halogénure d'acide carboxylique correspondant (par exem-

ple, chlorure d'acide carboxylique, bromure d'acide carbo-

xylique), etc., à la température ambiante ou en chauffant.

Par exemple, si le groupe acétyle est introduit, de l'anhy-

dride acétique peut être employé en quantité équivalente ou en quantité en excès, et, de préférence, en quantité de 1-3 équivalents.

Les agents d1acylation dans ces étapes réagis-

sent également avec le groupe 6'-hydroxy pour fournir le dérivé diprotégé en 6',8' en tant que sous-produit. Dans ce cas, seul le dérivé protégé en 8F peut être séparé par des

procédés classiques comme la chromatographie.

7. (Cinquième étape)

Cette étape comprend la condensation intramolécu-

laire entre le groupe 6'-hydroxy et le groupe de protection du groupe 7'1amino et peut être conduite dans un solvant convenable (par exemplel'hexane, l'éther diéthylique, le té- trahydrofurane, la diméthylformamide, le toluène) en présence d'une base. Comme base employée on peut utiliser un hydrure de métal alcalin (lhydrure de lithium, l'hydrure de sodium, l'hydrure de potassium, etc.), un hydroxyde de métal alcalin (la soude, la potasse, etc.), un alcoolate de métal alcalin (l'éthylate de sodium, l'-éthylate de potassium, etc.) et un

hydrure de métal alcalin; particulièrement, l'hydrure de so-

dium est préféré.

(Sixième étape)

Cette étape comprend l'élimination d'un groupe cy-

clique de protection du groupe hydroxy, aux positions 5 et

6, qui a été introduit à la troisième étape et l'introduc-

tion ultérieure d'un groupe de protection du groupe hydroxy

respectivement dans le groupe hydroxy aux positions 5 et 6.

L'élimination est obtenue par hydrolyse avec un

acide. Par exemple, on peut de préférence employer des aci-

des minéraux (l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique,

l'acide phosphorique, etc.) et des acides organiques (l'aci-

de formique, l'acide acétique, etc.) selon le genre de grou-

pes de protection. Cette réaction est conduite à la tempéra-

ture ambiante et peut être favorisée par le chauffage.

L'introduction ultérieure de groupes de protec-

tion peut être effectuée de la même manière que dans la qua-

trième étape et on peut également utiliser les mêmes agents

de protection que ceux présentés dans la quatrième étape.

Dans cette réaction, on peut employer plus de 2 quantités

équivalentes de l'agent de protection.

(Septième étape) Cette étape comprend le remplacement du groupe 8'acyloxy par un atome d'-halogène et peut être réalisée par

un procédé classique. Comme agent d'-halogénation, on mention-

né un acide halogénhydrique gazeux, un halogénure de phospho-

8. re, du brome ou de l'iode avec du phosphore, du chlorure de

thionyle et du chlorure de sulfuryle, et un acide halogénhy-

drique gazeux, particulièrement l'acide chlorhydrique gazeux, peut de préférence être introduit dans le mélange réactionnel en refroidissant. (Huitième étape)

Cette étape comprend la condensation entre les com-

posés (IX) et (X) et ces deux composés peuvent être mis à réagir en présence d'un composé d'argent. Comme composé

d'argent, du carbonate d'argent et/ou du perchlorate d'ar-

gent sont préférés. La réaction peut de préférence être condui-

te sous une atmosphère d'azote, avec protection, à la tempé-

rature ambiante. De préférence, on peut ajouter dans le mi-

lieu réactionnel un agent siccatif tel que du sulfate de cal-

cium anhydre et du carbonate de calcium anhydre,

Les produits (XI) se composent de quatre stéréoiso-

mères par suite des atomes de carbone à la position 8' et sont indiqués par * dans la formule; ces produits peuvent

être séparés par des modes opératoires de séparation classi-

que comme la chromatographie, (Neuvième étape) Cette étape comprend la coupure par hydrolyse du substituant cyclique introduit dans la huitième étape pour fournir une forme de chaîne et l'élimination par hydrolyse des groupes de protection introduits dans la seconde et dans la sixième étape. L'hydrolyse est conduite en présence d'un alcali tel que la soude, la potasse et la chaux selon

le procédé connu.

Les produits résultants se composent de stéréoiso-

mères et, si cela est nécessaire, ils peuvent être séparés

par des modes opératoires de séparation comme la chromatogra-

phie. Les produits peuvent de préférence être traités avec

un acide tel que l'acide sulfurique pour donner le sel d'ad-

dition avec un acide.

Les dérivés d'aprosamine dans la présente invention

et leurs sels non toxiques ont des activités antimicrobien-

nes supérieures et sont plus puissants, contre certains gen-

9. res de bactéries gram-positives et gram-négatives, que l'apramycine. Dans les composés o n vaut 0 et o la ligne

ondulée représente la configuration équatoriale dans la for-

mule générale (I) et dans l'apramycine, les concentrations d'inhibition minima (CIM, pg/ml) sont présentées comme suit.

tI..... 4 {t ComposéApra-

dans la mycine Organisme présente

inven-

tion À _ _ Staphylococcus aureus APOI AAD(4') 3,13 6,25

" FDA 209PJC-1 0,78 1,56

" S-25 0,78 1,56

" No.74 1,56 3,13 Staphylococcus epidermidis ATCC-14990 0,2 0,39

" EP-18 0,39 0,78

" TB-172 0,2 0,39

Klebsiella pneumoniae K1-159 25 50 Pseudomonas aeruginosa TB-766 25 >100 Serratia marcescens MA-23 3,13 6,25

" MA-81 3,13 6,25

Enterobacter aerogenes AE-16 3,13 6,25

" AE-27 3,13 6,25

Proteus rettgeri Ret-48 12,5 25 " Ret-55 25 50 Proteus morganii Morg-74 3, 13 6,25 " Morg-96 50 >100 i Proteus vulgaris ATCC-6390 1,56 313

Comme présenté dans le tableau ci-dessus, les com-

posés (I) dans la présente invention ont des activités anti-

microbiennes puissantes contre les bactéries gram-positives et gramnégatives, et ainsi ils sont utiles comme produits

pharmaceutiques ou comme produits vétérinaires pour les ani-

maux et sont utilisés pour le traitement ou la prévention

de diverses maladies infectieuses provoquées par les orga-

nismes indiqués ci-dessus. En outre, les composés (I) dans la présente invention peuvent être ajoutés à des produits alimentaires périssables, en tant que germicide, et peuvent 10. être appliqués aux emplacements et aux ustensiles o

s'introduisent des bactéries, en tant que produit désinfec-

tant.

Les composés (1) dans la présente invention peu-

vent être administrés aux êtres humains et à d'autres ani- maux par voie orale ou parentérale. Particulièrement, des

sels pharmacologiquement acceptables (par exemple, le sul-

fate) peuvent être administrés sous forme d'injection intra-

veineuse, intramusculaire ou sous-cutanée sous la forme de solutions aqueuses. Les composés (1) peuvent être gardés dans des ampoules sous la forme de solutions et peuvent être,

de préférence, conservés dans des ampoules ou dans des fio-

les sous la forme de cristaux, de poudre, de cristaux fins ou de lyophilisats, et dissous dans l'eau immédiatement avant

l'utilisation. Un stabilisant peut être ajouté.

En outre, les composés (1) peuvent être adminis-

trés avec des composants pharmaceutiques tels que des di-

luants (par exemple l'amidon, le saccharose, le lactose, le carbonate de calcium, le kaolin), des agents donnant de la masse (par exemple le lactose, l'amidon, le carbonate de calcium, le phosphate de calcium, le kaolin, la bentonite, le talc), des lubrifiants (par exemple l'acide stéarique,

la paraffine, l'acide borique, la silice, le benzoate de so-

dium, le polyéthylèneglycol) sous la forme de poudres, de

tablettes, de granulés, de capsules,de trochisques, de si-

rops secs, de suppositoires, de suspensions, d'émulsions, de produits d'inhalation, d'instillations, de poudres pour

l'application locale ou d'onguents.

Quand les composés (I) sont appliqués lors du trai-

tement de maladies infectieuses sendibles d'êtres humains etd 'animaux, ils sont généralement administrés à une dose de 0,01-5 g (injection), de 0,01-10 g (administration orale) ou de 0,01-10 g (administration locale) par jour par kg de poids corporel, toutes les 3-12 heures, La dose est cependant augmentée ou diminuée selon la sensibilité des bactéries pathogènes, la fréquence d'administration ou

11. 2492828

l'état du malade.

L'exemple suivant montrera bien la présente inven-

tion avec plus de détail.

EXEMPLE

3-amino-2-hydroxypropyl-p-aprosaminide (a) Aprosamine (III) Du trihydrate d'apramycine (II) (11,880 g, 20 mmoles) est dissous dans de l'acide chlorhydrique 4N (500 ml) et agité en chauffant à 95 C pendant 5 heures et demie. Du carbone actif (20 g) est ajouté au mélange réactionnel pour la décoloration, celui-ci est filtré et concentré sous pression réduite. De l'eau (100 ml) est ajoutée au résidu et

encore concentrée sous pression réduite, et puis ce mode opé-

ratoire est répété une fois de plus pour donner une matière

en forme de mousse jaune pale (18,28 g). La matière résultan-

te est dissoute dans de l'eau (100 ml) et adsorbée sur une résine échangeuse d'ions dite Dowex 50W x 2 (H+) (240 ml) pendant une période de 36 minutes. La colonne est lavée

avec de l'eau (300 ml),suivi d'élution avec de l'acide chlo-

rhydrique à 5 pour donner 8 fractions et puis avec de

l'acide chlorhydrique à 10 % après la neuvième fraction suc-

cessivement (1 fraction: 100 ml). Les fractions 3-5 sont

combinées et évaporées sous pression réduite. Le résidu ré-

sultant est dissous dans l'eau (20 ml), décoloré avec du

carbone actif (1 g) et puis évaporé à sec sous pression ré-

duite pour donner du chlorhydrate de 4-amino-4-désoxy-D-

glucopyranose (4,077 g) avec un rendement de 85,8 %.

Les fractions 13-24 sont combinées et concen-

trées sous pression réduite. De l'eau est ajoutée au résidu sirupeux résultant et concentrée de nouveau sous pression réduite. Le résidu est dissous dans l'eau (10 ml) et de l'acétone (200 ml) y est ajoutée, puis la paroi du ballon

est frottée avec un barreau de verre. La liqueur surnagean-

te est retirée par décantation et le résidu huileux résul-

tant est dissous dans de l'eau (3 ml) et nouveau. De l'acé-

tone (150 ml) y est ajoutée et la paroi du ballon est frot-

tée avec un barreau de verre. La poudre résultante est ras-

12. 2492828

12. semblée par filtration,lavée avec de l'acétone, dissoute dans l'eau (150 ml) et décolorée avec du carbone actif (3 g). Le filtrat et les lavages sont combinés et évaporés

à sec sous pression réduite pour donner le trihydrate du té-

trachlorhydrate du composé indiqué en titre (10,280 g)

sous forme de poudre blanche avec un rendement de 88,8 %.

[a]22'0 + 53,0 - 0,90C (c=1,075, H20) D2 Analyse élémentaire Calculée (pour C15H30N407.4HCl.3H20) (%):

C,31,15; H,6,97; C1,24,52; N,9,69

Trouvé (%)

C,31,36; H,6,95; C1,24,72; N,9,82

RMN:6 D20 6,40(d,H1,J=4Hz), 6,10(d,J=4Hz), 5,80(d,J=9Hlz), ppm 3,45(s) (b) 1,3,2',7'-tétra-N-benzyloxycarbonylaprosamine (IV: COX=COOCH2Ph) Le produit obtenu en (a) (2,312 g, 4 mmoles) est dissous dans l'eau(20 mi), et du carbonate de sodium (1,90 g), 17,9 mmoles) et de leacétone (20 ml) y sont ajoutés, puis du chlorure de carbobenzoxy (2,56 ml, 17,8

mmoles, 1,12 équivalent) est ajouté an refroidissant et agi-

té. Après 10 minutes, le mélange est chauffé jusqu'à la température ambiante, agité pendant 3 heures, et le mélange réactionnel est extrait avec de l'acétate d'éthyle. La

couche organique est lavée avec de l'eau, séchée sur du sul-

fate de sodium et concentrée sous pression réduite, et puis

de l'éther y est ajouté' Le précipité résultant est rassem-

blé par filtration, dissous dans du méthanol, et de l'éther

est ajouté pour fournir de nouveau un précipité. Le préci-

pité est séché sur du pentoxyde de phosphore sous pression réduite pour donner le composé indiqué en titre (3,477 g) avec un rendement de 94,0 %. Une partie de ce produit est dissoute dans du chloroforme-éthanol et de l'hexane est

ajouté pour la cristallisation pour donner le composé indi-

qué en titre sous forme de prismes fins purs.

p.f. 233-234,5 C..

13. [2]22,0 + 48,8 + 0,9 (c=1,005, DMF) IR V Nujol 3570, 3366, 1692, 1531 cm1 max Analyse élémentaire Calculée (pour C47H54N4015. 0.5H20) (%)

C,61,10; H,6,00; N,6,06

Trouvé (%):

C,61,05; H,5,94; N,6,09

(c) 1,3,2',7'-tétra-N-benzyloxycarbonyl-5,6-0-cyclohexyli-

dèneaprosamine (V: COX=COOCH2Ph; Y =) Le produit obtenu en (b) (2,823 g, 3,09 mmoles) est dissous dans de la diméthylformamide (110 ml), et on ajoute du diméthylcétal de cyclohexanone (3,03 ml, 20,43 mmoles; 6,6 équivalents) et de l'acide p-toluènesulfonique

(360 mg), puis le mélange est agité en chauffant à une tempé-

rature interne de 500C sous pression réduite de 20 mm Hg pendant 7,5 heures. Le mélange réactionnel est refroidi

* jusqu'à la température ambiante et, aprbs addition de trié-

thylamine (1 ml), déversé dans de l'eau et de la glace (400 ml). Le précipité est rassemblé par filtration, lavé avec de l'eau, dissous dans du chloroforme, séché sur du sulfate de

sodium et évaporé sous pression réduite. Le résidu résul-

tant (4 g) est chromatographié sur une colonne [Adsorbant: gel dit Kiesel gel 60 (de la société dite Merck Co.) 110 g; éluant: benzène-acétate d'éthyle (3: 1-1: l)],et l'éluat est concentré sous pression réduite pour donner le composé indiqué en titre (2,575 g) avec un rendement de 84 %.Une

partie du produit est recristallisée dans du chloroforme-

éther pour donner des prismes fins très petits sous for-

me de spécimen pur.

p.f. 142-1500C.

[a]D2,0 + 33,0 - 0,70 (c= 1,022, CHC13) IR Nujol 3430, 3375, 3340, 1720, 1698, 1665, 1545, max -1 1523 cm Analyse élémentaire Calculée (pour C53H62N4015.1,5H20) (%)

C,62,28; H,6,41; N,5,48

14. 2492828

Trouvé ( %):

C,62,29; H,6,32; N,5,37

(d) 8'-0-acétyl-1,3,2',7'-tétra-N-benzyloxycarbonyl-5,6-

0-cyclohexylidèneaprosamine (VI: COX=COOCH2Ph; Y =

; Z = CH3CO)

Le produit obtenu en (c) (23,50 g), 23,6 mmoles) est dissous dans de la pyridine (450 ml), et de la pyridine (20 ml) est retirée sous pression réduite. De l'anhydride

acétique (4,7 ml, 50 mmoles, 2,1 équivalents) y est ajou-

té en refroidissant par de la glace et le mélange est maintenu à O C pendant 3 jours, suivi de concentration sous pression réduite. Le résidu est dissous dans de l'éther

(150 ml), et les cristaux d'ensemencement du composé indi-

qué en titre sont ajoutés et puis maintenus à la températu-

re ambiante. Les cristaux résultants (19,6 g) sont encore re-

cristallisés dans du chloroforme-éthanol pour donner le com-

posé indiqué en titre (15,964 g) sous forme de prismes avec

un rendement de 65,3 %. Une partie de ce produit est enco-

re recristallisée dans le méthanol.

p.f. 210-2120C.

[] 3,0 + 32,0 + 0,70 (c = 1,012, CHC13) Nujol 3 IR: VNajl 3585, 3360, 1755, 1697, 1525 cm- 1 Analyse élémentaire Calculée (pour C55H64N4016) (%)

C,63,64; H,6,22; N,5,40

Trouvé ():

C,63,37; H,6,22; N,5,40

La liqueur mère (6 g) obtenue dans la première

cristallisation et celle (3,6 g) obtenue après recristalli-

sation sont combinées et chromatographiées sur une colonne [Adsorbant: gel dit Kiesel gel 60 (de la société dite Merck Co.) 190 g; éluant: benzène-acétate d'éthyle

(8:2)] pour donner la 6'",8"'-di-0-acétyl-l,3,2t,7'-tétra-N-

benzyloxycarbonyl-5,6-0-cyclohexylidèneaprosamine (2,589

g) avec un rendement de 10,1 % sous forme de sous-produit.

15. 2492828

23,515

23,5 + 37,2 - 0,7 (c=1,047, CHC13)

[3]D 3

CHC 1 -1

IR:VmaCHC13 3440, 1752, 1720, 1511 cm Max Analyse élémentaire Calculée (pour C58H66N4017) (%)

C,63,44; H,6,16; N,5,19

Trouvé (%):

C,63,26; H,6,11; N,5,15

En outre,l'élution avec du benzène-acétate d'éthy-

le (7,5: 2,5) donne une quantité supplémentaire du compo-

sé indiqué en titre (5,0 9). Il est recristallisé dans du chloroformeéther pour fournir des prismes (3,602 g) à

point de fusion de 203-206 C avec un rendement de 14,8 %.

Rendement total en composé indiqué en titre: 19,566 g

(80,1 %).

(e) 8'-0-acétyl-l,3,2'-tri-N-benzyloxycarbonyl-7'-N-6'-0-

carbonyl-5,6-0-cyclohexylidèneaprosamine (VII: COX=COOCH2Ph; Y = <; Zl=CH3CO) Le produit obtenu en (d) (25,780 g, 24,86 mmoles) est dissous dans de la diméthylformamide (200 ml) et du tétrahydrofurane (800 ml) et refroidi avec de la glace en agitant sous une atmosphère d'azote, et puis on ajoute sans lavage de l'hydrure de sodium à 50 % (1,40 g, 29,16 mmoles, 1,17 équivalent). Après 50 minutes, on ajoute de l'acide acétique (1,8 ml, 30 mmoles) et le solvant est retiré sous pression réduite. De la pyridine (200 ml) et de l'anhydride

acétique (100 ml) sont ajoutés au résidu, maintenus à la tem-

pérature ambiante pendant 2 heures et concentrés sous pres-

sion réduite, et puis le résidu est déversé dans de la gla-

ce et de l'eau.Le précipité est rassemblé par filtration, lavé avec de l'eau,dissous dans du chloroforme, séché sur du sulfate de sodium et concentré sous pression réduite.Dans

la solution concentrée,on ajoute du n-hexane, et le préci-

pité résultant est rassemblé par filtration pour donner le

composé indiqué en titre (24 g) sous forme de produit brut.

Une partie de ce composé est purifiée par chromatographie

sur colonne [Adsorbant: gel dit Kiesel gel 60 (de la socié-

té dite Merck Co.); éluant: chloroforme contenant 1 % de 16. méthanol]. [2]23 + 32,7 - 0,7 (c-0,952, CHC13)

C 3C

IR: Vmax3HC 3440 1762, 1720, 1512 cm -1 Analyse élémentaire Calculée (pour C48H56N4015) (%):

C,62,06; H,6,08; N,6,03

Trouvé (%):

C,61,84; H,6,07; N,5,94

(f) 5,6,8'-tri-0-acétyl-1,3,2-tri-N-benzyloxycarbony1-7'-N-

6',0-carbonylaprosamine (VIII: COX-COOCH2Ph; Z1=Z2-CH3CO).

Le produit brut (23,9 g) obtenu en (e) est dissous

dans de l'acide acétique (200 ml) et de l'eau (50 ml), agi-

té en chauffant à 60 C pendant une heure et puis refroidi

jusqu'à 3 C. Le précipité résultant est rassemblé par fil-

tration, lavé avec de lIacétone et de ltéther successive-

ment, et dissous dans de la pyridine (200 ml) et de l'anhydride acétique (100 ml). La solution résultante est chauffée à 600C pendant 8 heures, laissée au repos toute la nuit à la température ambiante et déversée dans de l'eau et

de la glace. Le précipité est rassemblé par filtration, la-

yé avec de l'eau, dissous dans du chloroforme, lavé avec de

l'acide chlorhydrique à 10 %, de l'eau,du bicarbonate de so-

dium à 5 % et de lteau, successivement, séché sur du sulfa-

te de sodium et évaporé sous pression réduite.Le résidu ré-

sultant est chromatographié [Adsorbant: gel dit Kiesel gel (de la société dite Merck Co.); éluant: chloroforme et chloroforme-méthanol (98: 2)]. L'éluat est évaporé à sec

sous pression réduite et recristallisé dans du chloroforme-

éthanol pour produire le composé indiqué en titre.

Première récolte: 18,113 g (rendement: 78,1 %) p.f. 261,5-2630C Deuxième récolte: 1,009 g (rendement: 4,8 %) p.f. 262-263 C

Rendement total: 19,122 g (82,9 %).

Une partie des premiers cristaux récoltés est recris-

tallisée de nouveau dans du chloroforme-hexane pur donner le composé indiqué en titre sous forme de spécimen pur,

17. 2492828

p.f.: 263-265 C.

[a]25 + 34,5 + 0,7 (c=1,041, CHC13) IR:Vmaujol 3360, 1758, 1744, 1697, 1531 cm-1 I R:Max Analyse élémentaire Calculée (pour C46H52N4017) (%)

C,59,22; H,5,62; N,6,06

Trouvé (%O):

C,59,24; H,5,55; N,6,00

(g) chlorure de 5,6-di-0-acétyl-l,3,2'-tri-N-benzyloxycar-

bonyl-7'-N-6'-0-carbonylaprosaminyle (IX:COX=COOCH2Ph; Z2=

CH3CO; R=C1).

Le produit obtenu en (f) (3,000 g, 3,22 mmoles) est dissous dans du chloroforme sec (105 ml) et environ 10 ml du solvant sont retirés par distillation azéotropique sous la pression atmosphérique. De l'anhydride acétique (0,38 ml) est ajouté en refroidissant, et on y introduit pendant 3 heures et demie de l'acide chlorhydrique gazeux, puis le solvant est évaporé sous pression réduite à la

température ambiante pour donner le composé indiqué en ti-

tre (3,153 g). Ce produit est recristallisé deux fois dans

un mélange de chloroforme et d'acétonitrile et successive-

ment une fois dans l'acétonitrile pour donner le composé indiqué en titre (2,047 g) sous forme d'aiguilles fines

avec un rendement de 70,0 %.

P-f. 257-257,5 C (décomposition).

[a]26,5 - 35,1 + 0,8 (e=l,001, DMF) Analyse élémentaire Calculée (pour C44H49C1N4015) (%)

C,58,11; H,5,43; C1,3,90; N,6,16

Trouvé (%):

C,58,16; H,5,37; C1,4,12; N,6,16

(h) (2-oxazolidin-5-yl)méthyl-5,6-di-0-acétyl-l,3,2'-tri-N-

benzyloxycarbonyl-7-N-6'-0-carbonyl-6-aprosaminide (XI:

COX=COOCH2Ph; Z2=CH3CO; n=0).

Le produit obtenu en (g) (2,000 g, 2,2 moles) et de la 5-hydroxyméthyl-2oxazolidinone (X) (produite par le procédé décrit dans la demande de brevet japonaise publiée

18. 2492828

sans examen no 51-16661) (618 mg, 5,28 mmoles, 2,4 équiva-

lents) sont dissous dans du chloroforme sec (600 mi) et con-

centrés sous la pression atmosphérique jusqu'à environ 400

ml. Ensuite, on y ajoute successivement, sous une atmosphè-

re d'azote à la température ambiante, du carbonate d'argent (1,280 g, 4, 64 mmoles, 1,14 équivalent), du produit dit Drierite (séché sous pression réduite à 110 C sur du pento-

xyde de phosphore [de la société dite W.A. Hammond Drierite, Co., Xenia, Ohio, Etats-Unis dlAmérique] (8,780 g) et du perchlorate d'argent (130 mg, 0,627 mmole), et le mélange est agité en le protégeant,à la température ambiante. Après

une heure et demie, la matière minérale est retirée par fil-

tration et lavée avec du chloroforme. Le filtrat et les la-

vages sont combinés, lavés avec une solution à 5 %O de bicar-

bonate de sodium et de l'eau, séchés sur du sulfate de so-

dium et évaporés sous pression réduite. Le résidu (2,23 g)

est appliqué à la chromatographie en phase liquide en uti-

lisant deux colonnes pré-tassées (dimension B; de la socié-

té dite Merck Co.) agencées en série et élué avec de l'acê-

tonitrile-chloroforme (1: 1) jusqu'à la fraction 150 et avec de l'acétonitrile après la fraction 151 (1 fraction: 20 ml, débit: 10 ml/mn). Les fractions 54-130 sont combinées

et le solvant est retiré sous pression réduite, puis le ré-

sidu résultant (1,349 g) est élué sur la même colonne que celle mentionnée ci-dessus avec du chloroforme-méthanol

(19: 1) (1 fraction: 15 ml, débit: 15 ml/mn). Les frac-

tions 27-42 sont combinées, puis le solvant est retiré sous pression réduite et,ensuite, le résidu résultant

(1,243 g) est précipité avec du chioroforme-hexane pour don-

ner un mélange de stéréoisombres du composé indiqué en ti-

tre (dans la formule générale (Xi), la ligne ondulée indi-

que la configuration équatoriale (1,241 g) sous forme de

poudre avec un rendement de 56,0 %.

[(24,5 21,8 + 0,6 (C=1,060, CHC13)

LaD CHCl 3)-

IR:vCHC13 3480, 3430, 3303, 1755, 1717, 1509 cm1 :max,, Analyse élémentaire Calculée (pour C48H55N5018.H2O)

C,57,19; H,5,70; N,6,95.

-19. Trouvé (M):

C,57,41; H,5,58; N,6,75

RMN CDC1 -CD30D(2:l) 7,38(s), 5,10(s), 2,74(s), 1,86(s), 1,77(s).

Les fractions 152-161 dans la première chromatogra-

phie sont combinées, et le solvant est retiré pour donner un des stéréoisomères (a) du composé indiqué en titre (dans

la formule générale (XI), la ligne ondulée indique la confi-

guration axiale) (100 mg).

Les fractions 162-210 sont combinées, et le sol-

vant est retiré par distillation sous pression réduite pour

donner un mélange de stéréoisomères (a+b) du composé indi-

qué en titre (dans la formule générale (XI), la ligne ondu-

lée indique la configuration axiale) (584 mg). Le mélange

est chromatographié sur la même colonne que celle mention-

née ci-dessus et élué avec du chloroforme-méthanol (19: 1) (1 fraction: 20 ml, débit: 8 ml/mn). Les fractions 10-14 sont combinées, et le solvant est retiré par distillation sous pression réduite.Le résidu résultant (240 mg) et le

stéréoisomère (a) ci-dessus (100 mg) sont combinés et pré-

cipités avec du chloroforme-hexane pour donner le stéréoiso-

mère (a) du composé indiqué en titre (dans la formule géné-

rale (XI), la ligne ondulée indique la configuration axiale) (323 mg) avec un rendement de 14,6 %O Les fractions 16-27 sont combinées,le solvant est retiré par distillation sous pression réduite et puis le

résidu résultant (328 mg) est précipité avec du chlorofor-

me-hexane pour donner le stéréoisomère (b) du composé indi-

qué en titre (la ligne ondulée indique la configuration axia-

le) (317 mg) avec unrendement de 14,5 %, Stéréoisomère (a) [a]D 4,5 - 21, 8 - 0,60 (c=1,071, CHC13) IR:VCHCl3 3425, 3290, 1756, 1720, 1505 cm-1 max Analyse élémentaire Calculée (pour C48H55N5018H20) (%)

C,57,19; H,5,70; N,6,95

Trouvé (o):

C,56,92; H,5,42; N,6,82.

RMN:-CDC13-CD30D(2:l) 7,40(s), 5,07(s), 2,55(s), 1,83(s) ppm 1,70(s) Stéréoisomère (b) []4,5 + 4,0 + 0,4 (c=0,986, CHC13) IR:V CHCl3 3430 3290, 1758, 1720, 1513 cm 1 max Analyse élémentaire Calculée (pour C48H55N5018.H20) (%)

C,57,19; H,5,70; N,6,95

Trouvé (M):

<1 C,56,92; H,5,38; N,6,85

RMN:5CDC13-CD30D(2:l) 7,38(s), 5,10(s), 2,60(s), 1,86(s), ppm 1,83(s)

(i) 3-amino-2-hydroxypropyl-e-aprosaminide (I:n=O).

Un mélange de stéréoisomères (dans la formule gé-

nérale (XI), la ligne ondulée indique la configuration

équatoriale) (600 mg, 0,595 mmole) obtenu en (h) est dis-

sous dans du dioxane (7,2 ml), et puis de l'eau (7,2 ml) et une solution de soude 2N (17,8 ml), 35,6 mmoles, 59,8 équivalents) sont ajoutées et chauffées au reflux sous une atmosphère d'azote pendant 3 heures, Le mélange réactionnel est refroidi à la température ambiante et réglé à un pH de 7 avec de l'acide chlorhydrique à 10 % (12 ml). La solution

résultante est adsorbée sur une résine échangeuse d'ions di-

te Amberlite CG-50 (NH4+)(144 ml), et la colonne est lavée avec de l'eau (720 ml) et éluée avec de l'eau (1 litre) et de l'ammoniaque 0,3N (1 litre) par le procédé par gradient jusqu'à la fraction 150 et avec de l'ammoniaque iN après la fraction 151 (1 fraction: O10 ml). Toutes les fractions

après la fraction 151 sont concentrées sous pression rédui-

te, lè résidu résultant (188 mg) est adsorbé sur le pro-

duit dit CG-50 (NH4+) (132 ml) de nouveau, et la colonne est lavée avec de l'eau (660 ml) et éluée avec de l'eau (1 litre) et de l'ammoniaque IN (1 litre) par le procédé

par gradient (1 fraction: 13 ml)..

Les fractions 74-85 sont combinées, concentrées 20. 21.

sous pression réduite, le résidu résultant (180 mg) est ad-

sorbé sur le produit dit CM-Séphadex C-25 (NH4+) (132 ml), et puis la colonne est lavée avec de l'eau (660 ml) et éluée avec de l'eau (1 litre) et de l'ammoniaque 0,5N (1 litre) par le procédé par gradient (1 fraction: 14 ml). Les fractions 82-93 sont combinées et concentrées

sous pression réduite. Le résidu résultant (162 mg est ré-

glé à un pH de 4,50 avec de lacide sulfurique 0,lN (15 ml), concentré sous pression réduite jusquFà environ 1-2 ml, et de l'éthanol y est ajouté. Le précipité résultant est rassemblé par filtration, lavé avec de l'éthanol, dissous dans l'eau et traité avec du carbone actif (23 mg). Après minutes, le mélange est filtré à travers un filtre en verre (de la société dite Millipore Corp.), lavé avec de l'eau, et le filtrat et les lavages sont combinés et puis

lyophilisés. Le résidu résultant est maintenu dans un des-

sicateur contenant du bromure de sodium (200 g) et de l'eau (100 ml) jusqu"à ce que le poids soit constant pour donner lecomposé indiqué en titre sous forme de sulfate (251 mg)

avec un rendement de 49,6 '.

[a]23 + 66,8 T 1,00 (c=1,066, H20) Analyse élémentaire Calculée (pour C18H37N508. 2,5H2S4.8,H2) ()

C,25,44; H,7,00; N,8,24; 5,9,43

Trouvé (o%):

C,25,35; H,6,93; N,8,33; S,9,58

RMN:6 D20 6,33(d,J=4Hz), 5,57(d,J=9Hz), 3,38(s) ppm

Les fractions 120-150 dans la première chromatogra-

phie sont combinées, concentrées sous pression réduite, et le

résidu résultant (98 mg) est adsorbé sur du produit dit CM-

Séphadex C-25 (NH4+) (60 ml). La colonne est lavée avec de

l'eau (300 ml) et éluée avec de l'eau (1 litre) et de l'am-

moniaque 0,15N (1 litre) par le procédé par gradient (1

fraction: 11 ml). Les fractions 82-97 sont combinées, con-

centrées sous pression réduite, et le résidu résultant (90 mg) est dissous dans lFeau (1 ml) et réglé à un pH de 4,50

avec de l'acide sulfurique 0,lN (5 ml). La solution est con-

22. 2492828

centrée sous pression réduite jusqu'à environ 1-2 ml et de l'éthanol y est ajouté. Le précipité résultant est rassemblé par filtration, lavé avec del 'éthanol, dissous dans l'eau et traité avec du carbone actif (10 mg). Après 30 minutes, le mélange est filtré à travers un filtre en verre (de la société dite Millipore Corp.) et le filtrat et les lavages sont combinés et puis lyophilisés. Le résidu résultant est maintenu dans un dessicateur contenant du bromure de sodium

(200 g) et de l'eau (lO0 ml) jusqulà ce que le poids devien-

lO ne constant pour donner du sulfate de 3-amino-2-hydroxypro-

pyl-l,3-N,N-carbonyl-8-aprosaminide (XII: n=O) (120 mg), en tant que sousproduit, avec un rendement de

26,8 %.

t2ll4,0 + 93,1 - 1,3 (c=l,001, H20) Analyse élémentaire Calculée (pour C19H35N509.1,5H2SO4 7H20) ()

C,30,40; H,6,98; N,9,33;5,6,41

Trouvé (%):

C,30,53; H,6,97; N,9,41; 5,6,50

RMN:6D 20 5,93 (d, J=4Hz), 5,60 (d,J=9Hz), 3,40(s) ppm

La présente invention n'est pas limitée aux exem-

ples de réalisation qui viennent d'être décrits, elle est au contraire susceptible de modifications et de variantes qui

apparaîtront à l'homme de l1art.

*23. 2492828

23,

Claims (3)

REVENDICATIONS

1 - Dérivé d'aprosamine, caractérisé en ce qu'il a la formule générale suivante:

CH3NH OH

H2N-CH 2-(CH2) n-CH-CH2 -

H2NNH

HOIIILH

o n vaut O ou 1, et la ligne ondulée indique la configura-

tion axiale ou équatoriale, et ses sels d'addition avec les

acides, pharmaceutiquement acceptables.

2 - Dérivé d'aprosamine selon la revendication 1, caractérisé en ce que n vaut 0 et la ligne ondulée indique

la configuration équatoriale.

3 - Composition antibactérienne à activité contre les bactéries grampositives et gram-négatives, caractérisée en ce qu'elle renferme, en tant qu'ingrédient actif, au moins un

des dérivés d'aprosamine de la revendication 1, en associa-

tion avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement

acceptables. -