CH345975A

CH345975A - Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Novobiocin

Info

Publication number: CH345975A
Authority: CH
Inventors: Anthony Kaczka Edward
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1955-04-21
Filing date: 1956-04-16
Publication date: 1960-04-30

Description

<Desc/Clms Page number 1>
Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Novobioein Das neue Antibioticum Novobiocin wirkt auf pathogene Bakterien, namentlich grampositive Mikroorganismen, wachstumshemmend. Diese Substanz wird durch Züchten einer bisher unbekannten Mi- kroorganismenart, nämlich Streptomyces spheroides, auf einem geeigneten wässrigen Nährboden unter aeroben Bedingungen erzeugt.

Eine Kultur dieses Novobiocin erzeugenden Organismus wurde bei der Fermentation Section of the Northern Utilization Re- search Branch of the United States Department of Agriculture, Peoria, Illinois, hinterlegt und in die Dauerkultursammlung unter der Bezeichnung NRRL 2449 aufgenommen.

Gegenstand des vorliegenden Patentes ist ein Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Novo- biocin, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine alkalische Lösung von Novobiocin ansäuert und den so erhaltenen Novobiocinniederschlag von der Lösung abtrennt.

Das schwachsaure Antibioticum Novobiocin ist in saurer wässriger Lösung praktisch unlöslich und kann daher leicht durch Ansäuern aus einer alkalischen Lösung isoliert und gleichzeitig weitgehend gereinigt werden. Das erfindungsgemässe Verfahren eignet sich insbesondere zur Gewinnung von Novo- biocin aus filtrierten alkalischen Gärflüssigkeiten, die durch Züchten von Streptomyces spheroides auf geeignetem wässrigem Nährboden unter aeroben Bedingungen erhalten wurden.

Die alkalische Gär- flüssigkeit wird beispielsweise mit Salzsäure auf einen pII von etwa 2 angesäuert, wobei Novobiocin im wesentlichen vollständig ausgefällt und als feste Substanz gewonnen wird. Ein erheblicher Teil der in der Gärflüssigkeit vorhandenen Verunreinigungen sind in der sauren Lösung löslich und werden mithin gleichzeitig von dem ausgefällten Novobiocin abgetrennt. Das Antibioticum wird vorzugsweise in Gegenwart eines Diatomeenfiltrierhilfsmittels oder eines ähnlichen Stoffes ausgefällt; Novobiocin lässt sich dann leicht und bequem durch Filtration gewinnen.

Hierfür genügen etwa 2,27 kg des Filtrierhilfsmit- tels je 378 1 der das Antibioticum enthaltenden Lösung, um einen leicht filtrierbaren Niederschlag zu erzeugen. Die angewandte Menge des Filtrierhilfsmit- tels kann der jeweiligen Lösung angepasst werden, aus welcher Novobiocin ausgefällt werden soll.

Zur Ausfällung von Novobiocin aus wässriger alkalischer Lösung verwendet man vorteilhaft eine Halogenwasserstoffsäure, wie Salzsäure, um die Gär- flüssigkeit anzusäuern. Andere Säuren, welche das Antibioticum nicht schädigen, können in ähnlicher Weise herangezogen werden. Salzsäure ist besonders zu empfehlen, weil viele Verunreinigungen der Gär- flüssigkeit in wässriger Salzsäure löslich sind und daher von dem ausgefällten Antibioticum leicht abgetrennt werden können.

Novobiocin, welches aus einer alkalischen Gärflüssigkeit durch Ansäuern ausgefällt wurde, kann dadurch weiter gereinigt werden, dass der Niederschlag in einem Novobiocin lösenden löslichen Sol- vens, z. B. Äthanol, Methanol, Aceton, Dioxan, Me- thyläthylketon aufgelöst, das Solvens abgedampft und eine wässrige alkalische Lösung des Rückstandes, vorzugsweise von einem PH von etwa 9,0, mit Bu- tanol extrahiert wird. Hierbei geht das Mononatriumsalz von Novobiocin in die Butanolschicht über und wird von den in diesem Lösungsmittel unlöslichen Verunreinigungen abgetrennt.

Durch Ansäuern wässriger, alkalischer Gärflüssig- keiten ausgefälltes Novobiocin kann auch durch Verreiben mit Petroläther weitergereinigt werden; hierdurch werden die mit Novobiocin ausgefällten

Verunreinigungen ohne Schädigung von Novobiocin entfernt. Diese Reinigungsmöglichkeit ist namentlich zur Entfernung öliger Nebenprodukte der Gärung, die mit Novobiocin ausgefällt werden, angebracht.

Aus den Butanolextrakten gewonnenes Novobiocin kann ebenfalls durch Verreiben mit Petroläther weiter gereinigt werden, indem beispielsweise die Butanolextrakte eingedampft werden, der Rückstand in wässriger alkalischer Lösung aufgelöst und Novo- biocin durch Ansäuerung nach obigen Angaben niedergeschlagen wird.

Das ausgefällte Novobiocin wird unter vermindertem Druck getrocknet und gründlich mit Petroläther verrieben, wobei etwa 20-251/o, der öligen Nebenprodukte der Gärung entfernt werden, welche durch die vorausgegangenen Reinigungsstufen mitgeschleppt waren.

Ausgefälltes Novobiocin kann ferner dadurch weiter gereinigt werden, dass eine Lösung von Novo- biocin in einem Lösungsmittel, wie Methanol, Ätha- nol, Aceton, Dioxan, Methyläthylketon usw., in innige Berührung mit sauergewaschenem Aluminiumoxyd gebracht wird. Um das Produkt genügend zu reinigen, benötigt man Aluminiumoxyd im Verhältnis von wenigstens 50:1, bezogen auf die gesamten Feststoffe in der Lösung.

Wenn man chargenweise arbeiten will, bringt man das sauergewaschene Aluminiumoxyd mit einer Lösung des. Antibioticums zusammen, filtriert das die Verunreinigungen als Adsorbat enthaltende Aluminiumoxyd ab und gewinnt das Antibioticum aus der verbleibenden Lösung. Zweckmässig schickt man aber eine Novobiocinlösung durch eine Säule des sauergewaschenen Aluminiumoxyds und wäscht die Säule mit einem Lösungsmittel für Novobiocin aus. Hierdurch wird Novo- biocin erheblich gereinigt und kann aus der abziehenden Flüssigkeit in Kristallform gewonnen werden.

Für die Reinigung in einer Säule verwendet man vorteilhaft Novobiocin in äthylalkoholischer Lösung und gewinnt dieses aus der Aluminiumoxydsäule durch Auswaschen mit weiterem Äthanol; Novobiocin wird durch Einengen des Äthanoleluates auf ein kleines Volumen und Stehenlassen der wässrigen Äthanol- lösung in Kristallform erhalten. Praktisch reine kristallines Novobiocin fällt beim Umkristallisieren aus Aceton-Petroläther an.

Zu diesem Zwecke werden die unreinen Novobiocinkristalle in wasserfreiem Aceton zu einer etwa 5 o/oigen Lösung gelöst; sodann wird so viel Petroläther zugesetzt, dass eine leichte Trübung auftritt. Beim Stehenlassen der Lösung kristallisiert praktisch reines Novobiocin aus. Eine weitere Reinigung während der Umkristallisation lässt sich dadurch herbeiführen, dass dieAcetonlösung von Novo- biocin mit Aktivkohle behandelt, diese entfernt und Petroläther in die filtrierte Acetonlösung eingetragen wird; die abgeschiedenen Kristalle bestehen aus praktisch reinem Novobiocin.

Die oben beschriebenen Massnahmen zur weiteren Reinigung von Novobiocin können getrennt angewandt werden, um verschiedene Verunreinigungen enthaltendes Novobiocin zu reinigen. Anderseits können diese Massnahmen miteinander vereinigt werden, beispielsweise bei der Gewinnung von Novobiocin aus Gärflüssigkeiten zwecks Gewinnung des Antibio- ticums in Kristallform. Die Reihenfolge der Massnahmen kann abgeändert werden; in einigen Fällen sind sie für die Reinigung gewisser unreiner Novo- biocinprodukte entbehrlich.

Beispiel Reines Novobiocin wurde aus einer Gärflüssig- keit isoliert, die durch Züchten von Streptomyces spheroides in einer wässrigen Nährflüssigkeit hergestellt war: Nach Filtrieren der ganzen Gärflüssigkeit bei einem pi, von 9,0 wurden 2,27 kg Diatomeenerde- Filtrierhilfsmittel ( Hyflo Supercel , eingetragene Marke eines diatomeenartigen Filtrierhilfsmittels) je 378 1 der filtrierten Flüssigkeit zugesetzt. Sodann wurde mit Salzsäure bis auf einen pH von 2,0 langsam angesäuert.

Nach 10 Minuten langem Schütteln wurde die Masse filtriert und der Filterkuchen mit Wasser gewaschen. In dem sauren Filtrat war eine Aktivität nicht nachweisbar. Die ausgefällten Feststoffe, ausschliesslich des Filtrierhilfsmittels, hatten einen Reinheitsgrad von 0,2 bis 0,31/o.

Der Filterkuchen der sauren Ausfällung wurde zweimal mit 85 %igem wässrigem Methanol bei einem pH von 9,0 extrahiert, wobei annähernd ein Zehntel des ursprünglichen Volumens der Gärflüssig- keit für jede Extraktion benutzt wurde. Diese Extraktion lieferte insgesamt etwa 800/m der gesamten Bio- aktivität der Gärflüssigkeit. Die Feststoffe hatten in Lösung einen Reinheitsgrad von 1 bis 1,5%.

Die wässrige Methanollösung wurde auf etwa ein Zehntel des Volumens der ursprünglichen Methanollösung konzentriert. Das pH wurde auf 9,0 mit Ätznatron eingestellt und die Lösung zweimal mit gleichen Raumteilen n-Butanol extrahiert. Das scheinbare Verteilungsverhältnis bei einem PH von 9,0 beträgt etwa 40 : 1. Die Feststoffe des Butanolextraktes hatten einen Reinheitsgrad von 4-60/9.

Der Butanolextrakt wurde auf 1/1o des ursprünglichen Volumens eingeengt und in 15 Raumteile Wasser, pH-Wert = 9,0, eingetragen. Danach wurde ein Filtrierhilfsmittel ( Hyflo Supercel ) in einer Menge von 0,5 g je 3,78 1, bezogen auf das ursprünb liche Volumen der Gärflüssigkeit, eingetragen, und der p,1-Wert langsam durch Zuführung von Salzsäure auf 2,0 eingestellt. Die gesamte Bioaktivität wird hierbei auf dem Filtrierhilfsmittel niedergeschlagen und abfiltriert. Der Reinheitsgrad der Feststoffe, ausschliesslich des Filtrierhilfsmittels, betrug etwa 10 bis 12 0/m.

Der Kuchen wurde im Vakuum bei 40 getrocknet, vermahlen und mit Petroläther verrieben, bis das Filtrat farblos war. Hierbei wurden 20-25 0/0 ausgeschieden und die inaktiven öligen Gärungs-

produkte, welche in der Masse verblieben waren, entfernt. Durch das Verreiben ging keine Bioaktivi- tät verloren. Die verbleibenden Feststoffe hatten einen Reinheitsgrad von 12-1504.

Der Kuchen wurde mit wasserfreiem Äthanol extrahiert, bis die Extrakte schwach hellgelb gefärbt waren. Die Extrakte wurden vereinigt und auf 15 bis 201/o Farbstoffe mit etwa 200 000 Einheiten/cm3 Bioaktivität konzentriert. Der Feststoff hatte einen Reinheitsgrad von 20-30% und 1000-1500 Ein- heiten/mg Bioaktivität. Die konzentrierte Äthanollösung wurde an säuregewaschenem Aluminiumoxyd chromatographiert. Ein Aluminiumoxydverhältnis von 50: 1, bezogen auf die Gesamtmenge an Feststoffen in der Beschickungslösung, musste zur Erzielung einer ausreichenden Reinigung angewandt werden.

Die A1203 Säule wurde zur Gewinnung von Novobiocin mit Äthanol eluiert. Etwa 951/o der Bioaktivität waren in dem 2,5-3fachen Säulenleerraum. Ein grosser Teil der festen Fremdstoffe blieb in der Säule zurück.
EMI3.25

<tb> Tabelle
<tb> Vol.

<SEP> Bioaktivität <SEP> mg/cm3 <SEP> Einh./mg <SEP> Gesamtcm3 <SEP> Einh./cm3 <SEP> einheiten
<tb> Säulenbeschickung <SEP> 1000 <SEP> 220000 <SEP> 265 <SEP> 830 <SEP> 220 <SEP> X <SEP> 10s
<tb> Fraktion <SEP> 1+ <SEP> 1000 <SEP> 460 <SEP> 2,5 <SEP> 183 <SEP> 0,46 <SEP> X <SEP> 10s
<tb> <SEP> 2 <SEP> 1000 <SEP> 42000 <SEP> 19,6 <SEP> 2140 <SEP> 42 <SEP> X <SEP> 10s
<tb> <SEP> 3 <SEP> 1000 <SEP> 76000 <SEP> 31,3 <SEP> 2420 <SEP> 76 <SEP> X <SEP> 10s
<tb> <SEP> 4 <SEP> 1000 <SEP> 62000 <SEP> 22,3 <SEP> 2780 <SEP> 62 <SEP> X <SEP> 106
<tb> <SEP> 5 <SEP> 1000 <SEP> 37000 <SEP> 13,4 <SEP> 2760 <SEP> 37 <SEP> X <SEP> 106
<tb> <SEP> 6 <SEP> 1000 <SEP> 13000 <SEP> 4,5 <SEP> 3020 <SEP> 13 <SEP> X <SEP> 106
<tb> <SEP> 7 <SEP> 1000 <SEP> 4500 <SEP> 1,3 <SEP> 3450 <SEP> 4,5 <SEP> X <SEP> 106
<tb> Mittel <SEP> 7000 <SEP> 33500 <SEP> 13,2 <SEP> 2520
<tb> A1203-Vol.

<SEP> = <SEP> 8000 <SEP> cm3
<tb> Säulenleerraum <SEP> = <SEP> 2600 <SEP> cm3
<tb> -+- <SEP> erste <SEP> Farbe
Das Äthanoleluat der A1203 Säule wurde auf etwa 5019 Feststoffe konzentriert. Wasser wurde bis zur Trübung zugesetzt; hierfür wurde etwas mehr als die gleiche Raummenge benötigt; das Produkt wurde zur Auskristallisation des Antibioticums sich selbst überlassen. Die Kristallbildung verlief sehr langsam.

Nach 5 Tagen waren noch bis zu 15 0/9 der ursprünglichen Bioaktivität in der überstehenden Flüssigkeit. Rühren und bzw. oder Temperaturänderung hat augenscheinlich auf die Geschwindigkeit der Kristallbildung wenig Einfluss. Die Novobiocinkristalle hatten etwa 2500-3000 Einheiten/mg Bioaktivität.

Der Kristallbrei wurde in wasserfreiem Aceton zu einer 300/9igen Lösung aufgelöst, die mit Darco G-60 (eingetragene Marke) in der doppelten Gewichtsmenge des gelösten Kristallbreis behandelt wurde. eDarco wurde abfiltriert und mit Aceton wiederholt gewaschen, um die Lösung auf etwa 51/o Feststoffe zu verdünnen. Petroläther wurde bis zur Trübung zugesetzt und die Kristallbildung von Novo- biocin abgewartet. 90-95% der Bioaktivität wurden gewonnen; die Kristalle des Antibioticums zeigten 4500-5000 Einheiten/mg Bioaktivität.

Die Herstellung von Novobiocin durch submerse Gärung kann folgendermassen erfolgen: Eine Blake-Flasche mit 25 cm' eines sterilen wässrigen Agarmediums aus 10/9 Hefeextrakt l0/9 Dextrose 0,121/o Na2HP04 0,075()/o- KH2P04 0,05 0/9 MgS04 * 7H20 20/9 Agar in wässriger Lösung wurde mit einer sehr geringen Menge Erde einer Erd'ekultur von Streptomyces spheroides MA-319 (NRRL 2449)

beimpft und 4 bis 5 Tage bis zur ausreichenden Sporenbildung bei 26 bebrütet.

20 cm3 steriles Wasser wurden in die Blake- Flasche eingegossen und die Sporen zu einer Suspension verrieben. Etwa 5 cm3 der Sporensuspension wurden in einen 2-1-Erlenmeyerkolben eingetragen, in dem sich 750 cm3 eines sterilen wässrigen Mediums aus 0,3 % Rindfleischextrakt 1,0% Caseinhydrolysat (NZ-amin) 1% Dextrose 0,5 % Chlornatrium

mit einem pH-Wert von etwa 7,2 befanden.

Der Kolben wurde mit Baumwolle verschlossen und bei 26 48 Stunden lang auf einer Rotationsschüttel- maschine bebrütet.

Die vegetative Kultur wurde dann in ein 189-1- Gärgefäss aus rostfreiem Stahl eingetragen, in dem sich etwa 95-113 1 sterilen Rindfleischextraktmediums der oben angegebenen Zusammensetzung befanden. Nach Zusatz von 3% Alkaterge C (ein substituiertes Oxazolin) in Mineralöl als Antischaummittel wurde das Medium bei 26 48 Stunden lang bebrütet. Das Medium wurde hierbei geschüttelt und sterile Luft mit einer Geschwindigkeit von etwa 85,2 1/Min. hindurchgeleitet.

Ein Gärgefäss aus rostfreiem Stahl von etwa 756 1 wurde dann mit etwa 378 1 eines wässrigen Mediums beschickt, das folgende Zusammensetzung hatte: 3% Sojabohnenmehl ( Staley 4S-50 ) 2 % Dextrose 0,75 % lösliche Schlempebestandteile 0,25 % Chlornatrium Das Medium hatte einen pH-Wert von etwa 7,1.

Nachdem das Medium mit Dampf bei etwa 120 während 30 Minuten sterilisiert war, wurde das Gär- gefäss mit etwa 8,4 0/m der vegetativen Impfkultur, die in dem 189-1-Gärgefäss nach obigen Angaben bereitet war, beimpft. Das Gut wurde dann bei 26 unter Schütteln und 340,8 1/Min- Luftdurchtritt bebrütet. Nach 96 Stunden hatte die vergorene Novo- biocin enthaltende Flüssigkeit eine Aktivität von etwa 410 Einheiten/cm3.

Novobiocin reagiert wie eine saure organische Verbindung und . ist in alkalischen Lösungen, z. B. w ässrigen Lösungen der Alkalihydroxyde, -carbonate und -bicarbonate sowie in Methanol, Äthanol, n-Butanol, sec. Butanol, Essigsäure; Dioxanaceton, Methyläthylaceton, Athylacetat, - leicht löslich, unlöslich oder kaum löslich dagegen in Äther, Benzol, Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff, Äthylendichlorid, Wasser, Salzsäure. Es wird aus alkalischer Lösung durch Ansäuern ausgefällt.

In der beschriebenen Weise gereinigtes Novo- biocin kann in zwei Kristallarten vorliegen. Die eine Kristallart in Form von Rosetten hat einen Schmelzpunkt von etwa 152-154 ; die andere Kristallart in Form flacher Nadeln schmilzt bei etwa 170-172 . Diese zuweilen gemeinsam anfallenden Kristallarten, lassen sich mechanisch voneinander trennen.

Eine Novobiocinlösung in 0,1 n-Natriumhydroxyd zeigt eine charakteristische Ultraviolettabsorption mit einer Spitze bei etwa 3070 A (E 0/m 600). Eine Lösung in 0,1 n-Salzsäure in wässrigem Methanol zeigt auch eine charakteristische Ultraviolettab5orption, mit einer Spitze bei etwa 3240 A (E 0/m 390).

Das Infrarötabsorptionsspektrum von praktisch reinem amorphem Novobiocin, welches in einem Mineralöl ( Nujol , eingetragene Marke) suspendiert ist, wurde in einem Infrarot-Spektrophotometer, Modell 12B Baird Associates mit einem Chlornatriumprisma ermittelt; es zeigte mehrere charakteristische Spitzen, die ausgeprägteren haben folgende Frequenzen, ausgedrückt in Mikron: 5,8-6,0 (breit), 6,10, 6,21, 6,30, 6,49, 6,63, 7,4-7,6 (breite Schulter), 7,78, 7,96, 8,27 (schwach), 8,60 (Schulter), 8,7 (Schulter), 9,13, 9,40, 10,0-10,1 (breit), 10,28, 10,60 (breit), l2,0-12,30 (breit), 12,60-12,75 (breit), 13,07 und 13,39.

Das für die Bestimmung des Spektrums benutzte amorphe Novobiocin wurde aus kristallinem Novobiocin durch Normalisierung hergestellt.

Eine Lösung von 1 g kristallinem Novobiocin in 100 ems Aceton wurde rasch mit 1 1 Petroläther versetzt, worauf sich amorphes Novobiocin aus der Lösung abschied. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und unter vermindertem Druck bei l00 getrocknet.

Novobiocin besteht aus den Elementen Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff und Sauerstoff. Die Elementaranalyse von kristallinem Novobiocin ergibt folgende Zusammensetzung: Kohlenstoff 60,24; 60,26 % Wasserstoff 6,56; 6,49 % Stickstoff 4,86% Sauerstoff 29,3 %i Novobiocin ist eine saure Substanz, die sich mit Basen zu Salzen umsetzt.

Bei der Umsetzung mit 1 Äquivalent Natriumhydroxyd entsteht das Mononatriumsalz, bei Umsetzung mit 2 Äquivalenten das Dinatriumsalz. Andere anorganische Basen bilden die entsprechenden Metallsalze. Umsetzung mit einer organischen Base, z. B. einem Amin, ergibt die entsprechenden Aminsalze. Novobiocin bildet so mit Methylamin das entsprechende Methylaminsalz.

Die Acidität von Novobiocin ist ein Kriterium für dieses neue Antibioticum. Beim Titrieren von Novobiocin mit Natriumhydroxyd werden zwei ba- senbindende Gruppen festgestellt. Die erste zum Mononatriumsalz führende Bindung erfolgt bei einem PH von etwa 7,0 und hat ein ph von etwa 3,8. Die zweite Bindung findet bei einem pff von etwa 11,0 statt und zeigt ein pi; von etwa 9,4.

Kristallines Novobiocin hat eine mikrobiologische Aktivität von etwa 4000-5000 Einheiten/mg nach den üblichen Schalen-Plattendiffusionsmethoden mit Bacillus megatherium ATCC 9885 bei Verwendung von praktisch reinem Novobiocin als Prüfobjekt. Es ist die gleiche Methode, wie sie für die Bestimmung von Bacitracin verwendet wird.

Novobiocin hemmt in erster Linie gram-posi- tive Erreger, ist aber auch gegen gram-negative Erreger wirksam. Erreger, deren Wachstum schon durch sehr niedrige Novobiocinmengen oder deren Salze gehemmt wird, sind u. a. folgende:

M. pyogenes var. albus, M. pyogenes var. aureus, Diplococcus pneumoniae, Corynebact. diphtheriae gravis, Coryne- baet. diphtheriae intermedius, Corynebact. diphthe-

riae mitis, Corynebact. xerose, Corynebact. renale, Neisseria meningitidis, Sarcina lutea (VD), M.

Au- reus, M. pyogenes var. aureus (resistent gegen Aureo- mycin), M. pyogenes var. aureus (resistent gegen Streptomycin-Streptothricin) und M. pyogenes var. aureus (resistent gegen Penicillin).

Das Natriumsalz von Novobiocin hemmt bei der Prüfung mit einer agarhaltigen Verdünnung das Wachstum verschiedener Species von M. pyogenes var. aureus, M. pyogenes var. albus, Neisseria menin- gitidis (Nr. 274) und Sarcina lutea (VD) bei Konzentrationen unter 0,5 mg/cm3. Andere Mikroben werden durch Novobiocin oder dessen Salze in wechselndem Masse angegriffen.

Novobiocin und dessen Salze sind wirksame Mittel in der Mikrobenbekämpfung. Sie können beispielsweise zur Entfernung empfindlicher Mikroben aus pharmazeutischer Ausrüstung usw. oder zum Abtrennen bestimmter Mikroben aus Mikrobengemische enthaltenden Lösungen dienen. Sie sind auch für die Behandlung von Tieren geeignet, welche mit Mikroben infiziert sind, die auf das neue Anti- bioticum ansprechen.

Novobiocin und dessen Salze erweisen sich als aktiv gegen penicillinresistente Styphylococcen, ferner gegen Streptococcen und Pneumococcen. Da die meisten bakteriellen Infektionen der Atmungsorgane auf diese Mikroben zurückzuführen sind, kann Novobiocin zur Behandlung dieser Infektionen in der Humanmedizin angewandt werden. Hierfür wird das Natriumsalz oral in Form von Kapseln appliziert, die beispielsweise etwa 100-500 mg Antibioticum bei einer Tagesdosierung von 1-2 g enthalten.

Novobiocin ist auch für die Behandlung und Kontrolle von Pflanzenkrankheiten anwendbar, z. B. von Meltau, der durch Xanthomonas phaseoli verursacht ist. Die Pflanzen werden mit einer wässrigen Lösung besprüht, die etwa 100 Teile Natriumnovo- biocin je Million Teile enthalten. Die Spritzmittel können verschiedene Netz- oder Verteilungsmittel und bzw. oder andere aktive Zusätze enthalten und in bekannter Weise hergestellt werden.

Claims

PATENTANSPRUCH Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Novo- biocin, dadurch gekennzeichnet, dass man eine alka- lische Lösung von Novobiocin ansäuert und den so erhaltenen Novobiocinniederschlag von der Lösung abtrennt. UNTERANSPRÜCHE 1.

Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man eine alkalische Novobiocin- lösung mit Salzsäure auf einen pn-Wert von etwa 2 ansäuert. 2. Verfahren nach Unteranspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man eine filtrierte alkalische Gärflüssigkeit, die Diatomeenerde enthält, mit Salzsäure auf einen pn-Wert von etwa 2 ansäuert. 3.

Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man den Novobiocinniederschlag in einem organischen Lösungsmittel löst und diese Lösung mit säuregewaschenem Aluminiumoxyd in einer Menge in innige Berührung bringt, die wenigstens 50 Gewichtsteilen Aluminiumoxyd, bezogen auf die Feststoffe in der Lösung, äquivalent ist, das mit den Verunreinigungen beladene Aluminiumoxyd abtrennt und eine das gereinigte Novobiocin enthaltende Lösung gewinnt. 4.

Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man den Novobiocinniederschlag in Äthanol löst und diese Lösung durch eine Aluminiumoxydsäule leitet, die Aluminiumoxyd in einer Menge enthält, die wenigstens 50 Gewichtsteilen, bezogen auf die Feststoffe der Äthanollösung, äquivalent ist, die Säule mit Äthanol auswäscht und das gereinigte Novobiocin aus der Äthanollösung gewinnt. 5. Verfahren nach Unteranspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass man die Äthanollösung auf etwa 501@ Feststoffe konzentriert, Wasser bis zur Trübung zusetzt und das Novobiocin auskristallisieren lässt. 6.

Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man den Novobiocinniederschlag in Aceton löst, in diese Acetonlösung Petroläther bis zur Trübung zusetzt und Novobiocin auskristalli- sieren lässt.