BRPI0714943A2 - micropartÍculas de liberaÇço modificada baseada em copolÍmero anfifÍlico e em princÍpio(s) ativo(s) e formulaÇÕes farmacÊuticas compreendendo as mesmas - Google Patents

Abstract

MICROPARTÍCULAS DE LIBERAÇçO MODIFICADA BASEADA EM COPOLÍMERO ANFIFÍLICO E EM PRINCÍPIO(S) ATIVOS(S) E FORMULAÇOES FARMACÉUTICAS COMPREENDENDO AS MESMAS. A presente invenção se refere a novas micropartículas formadas de poliaminoácidos anfifílicos os quais transportam princípio(s) ativos(s), PA(s), em particular princípio(s) ativos(s) protéicos e peptídeos, e a novas formulações farmacêuticas de liberação modificada compreendendo as referidas micropartículas de PA. O objetivo da invenção é desenvolver novas micropartículas, carregadas com PA, obtidas por agregação de nanopartículas de poliaminoácidos anfifílicos e que tenham propriedades melhoradas, em particular na forma sólida seca, em relação a sua capacidade de ser dispersa e, no que diz respeito à suspensão reconstituida, sua estabilidade e sua capacidade de ser facilmente manipulada e injetada. A invenção se refere primeiramente as micropartículas de poliaminoácido anfifílico (PO) compreendendo pelo menos um PA (não-covalentemente associado) o qual forma espontaneamente uma suspensão coloidal de nanopartículas em água, o pH 7,0, sob condições isotônicas; cujas micropartículas a. são obtidas por atomização de uma solução ou suspensão coloidal de PO compreendendo pelo menos um PA, b. têm um tamanho de entre 0,5 e 100 micra, c.e são dispersíveis em suspensão coloidal. A invenção também se refere ao processo para a preparação destas micropartículas, a uma formulação líquida compreendendo uma suspensão destas micropartículas de PO/PA, a um processo de reconstituição e um kit para esta formulação e a uma forma seca desta formulação.

Description

"MICROPARTÍCULAS DE LIBERAÇÃO MODIFICADA BASEADA EM COPOLÍMERO ANFIFÍLICO E EM PRINCÍPIO(S) ATIVOS(S) E FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS COMPREENDENDO AS MESMAS"

A presente invenção se refere a novos transportadores de princípio(s) ativos(s) (PAs)1 em particular princípio(s) ativos(s) protéico(s) e peptídeos, e a novas formulações farmacêuticas de liberação modificada compreendendo os referidos transportadores de PA. Há muitas aplicações terapêuticas (humanas e veterinárias) dessas formulações.

A referência PA usada por todo o presente relatório tem como objetivo pelo menos um princípio ativo.

0 termo "liberação modificada" denota uma liberação prolongada e/ou retardada e/ou pulsátil.

Mais especificamente, os novos transportadores de PA objetos da invenção são micropartículas formadas de polímeros anfifílicos, por exemplo, pofiaminoácidos modificados por grupos hidrofóbicos. Micropartículas estas compreendem pelo menos um PA associado ao polímero e podem ser fornecidas na forma de suspensões coloidais ou na forma seca.

Na área da liberação prolongada de PAs farmacêuticos, em particular peptídeos/proteínas terapêuticas, a objetivo é muito freqüentemente a máxima reprodução possível no paciente de uma concentração plasmática de peptídeo ou proteína próxima ao valor observado no indivíduo saudável.

Esse objetivo conflita com o baixo tempo de vida de proteínas no plasma, o qual resulta na proteína terapêutica sendo repetidamente injetada. A concentração plasmática de proteína terapêutica exibe então um perfil de "dente de serra" caracterizado por picos elevada de concentração e concentração mínima muito baixa. Os picos de concentração, os quais são muito mais altos do que a concentração basal no indivíduo saudável, têm efeitos prejudiciais muito marcantes devido à elevada toxicidade das proteínas terapêuticas, tal como interleuquina IL-2. Além disso, a concentração mínima está abaixo da concentração necessária a têm um efeito terapêutico, o qual resulta em pobre cobertura terapêutica do paciente e sérios efeitos colaterais a longo prazo.

Consequentemente, para reproduzir no paciente uma concentração plasmática de proteína terapêutica próxima ao valor ideal para o tratamento do paciente, é importante que as formulações farmacêuticas sob consideração tornem possível a liberação da proteína terapêutica durante um período de tempo prolongado, de forma a limitar as variações na concentração plasmática ao longo do tempo.

Além disso, essa formulação ativa deveria satisfazer preferencialmente às seguintes especificações, já conhecidas por um técnico no assunto:

1 - liberação prolongada de uma proteína terapêutica ativa e não-desnaturada, por exemplo, uma proteína humana ou sintética, de modo que a concentração plasmática seja mantida no nível terapêutico; 2 - viscosidade suficientemente baixa em injeção para ser facilmente injetável;

3 - forma biocompatível e biodegradável;

4 - forma que não exibe toxicidade ou imunogenicidade;

- forma com excelente tolerância local.

Na teste de alcançar esses objetivos, um das melhores abordagens fornecidas na anterioridade foi a de desenvolver formas de proteína(s) terapêutica(s) de liberação prolongada composta de suspensões líquidas de baixa viscosidade de nanopartículas carregadas com proteínas terapêuticas. Essas suspensões têm tornado possível a pronta administração de proteínas terapêuticas nativas.

Assim, a proteína terapêutica tem sido associada com nanopartículas de um copoliaminoácido compreendendo grupos hidrofóbicos e grupos hidrofílicos.

A patente US-B-5.904.936 divulga partículas em escala de sub-mícron (NPV), com um tamanho médio de entre 0,01 e 0,5 μιτι, e partículas em escala de mícron (MPV), com um tamanho médio de entre 0,5 e 20 pm, de copolímero anfifílico de poliaminoácidos compreendendo pelo menos dois tipos de aminoácidos, um sendo neutro e hidrofóbico e o outro sendo ionizável. As proteínas, tal como insulina, são espontaneamente absorvidas em solução aquosa nessas partículas. O copolímero de poliaminoácido é, por exemplo, um copolímero em bloco de poli(L-leucina-b-(sódio L-glutamato)). Essa patente divulga a agregação de NPV para dar MPV por adição a uma suspensão coloidal de poli-Leu/GIu de sais monocatiônicos (sulfato de amônio), sais policatiônicos (Fe2+, Fe3+, Zn2+, Ca2+, Al2+, Al3+ ou Cu2+), de ácido (HCI) ou de polímeros catiônicos (polilisina).

O pedido de patente WO-A-03/104303 divulga poliaminoácidos anfifílicos compreendendo resíduos aspárticos e/ou resíduos glutâmicos, pelo menos uma porção desses resíduos contendo enxertos que compreendem pelo menos uma unidade de alfa- tocoferol, por exemplo: (poliglutamato ou poliaspartato enxertado por alfa tocoferol de origem sintética ou natural). Esses homopoliaminoácidos "hidrofobicamente modificados" formam espontaneamente, em água, uma suspensão coloidal de nanopartículas que são capazes de associarem-se facilmente em suspensão aquosa o pH 7,4 com pelo menos uma proteína ativa (insulina).

A duração de liberação in vivo da(s) proteína(s) ativa(s) (por exemplo, insulina) "vetorizada(s)" pelas suspensões de acordo com US-B-5,904,936 & W0-A-2003/104303 poderia ser aumentada.

O aumento na duração de liberação foi parcialmente obtido pelas formas farmacêuticas divulgadas em Pedido de Patente PCT WO-A-05/051416. Este pedido de patente divulga uma suspensão coloidal de nanopartículas (0,001-0,5 pm) de poli(sódio L- glutamato) hidrofobicamente modificado o qual é injetado em uma concentração tal que, após injeção subcutânea, um gel é formado in situ no paciente em contato com a albumina endógena. A proteína é então lentamente liberada durante um período típico de uma semana. Entretanto, quando a concentração de proteína terapêutica a ser administrada é relativamente elevada, como é o caso, por exemplo, para hormônio de crescimento humano, a duração de liberação é limitada a apenas poucos dias.

É possível melhorar essa anterioridade fornecendo-se uma formulação farmacêutica para a liberação prolongada de PA:

• que torna possível, após injeção pela via parenteral (por exemplo, subcutaneamente), obter uma prolongada duração de liberação in vivo para PAs (por

exemplo, proteínas terapêuticas, peptídeos terapêuticos e pequenas moléculas) que não são desnaturadas e altamente concentradas, por exemplo, em diversos mg/mL,

• e que é estável no armazenamento, tanto físico-quimicamente e biologicamente.

Para fazê-lo, recomenda-se agregar as nanopartículas da formulação juntas de

acordo com WO 05/051416 para dar micropartículas, por meio de íons polivalentes de polaridade oposta àquela dos grupos ionizáveis (IG) do poliaminoácido anfifílico, os referidos íons estando presentes em proporções bem definidas. Isso resulta em uma seleção de uma população específica de micropartículas o qual torna possível uma significativa extensão na duração de liberação do PA (por exemplo, proteína ou peptídeo) com o qual eles são combinados. Alguns íons polivalentes, tal como Mg2+, Ca2+, Zn2+, Fe2+, Cu2+ ou suas misturas e/ou Al3+, Fe3 ou suas misturas, conferem excelente tolerância em tal formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de PA. A formulação pode, por exemplo, compreender uma suspensão coloidal aquosa de baixa viscosidade baseada em partículas em escala de mícron de poliglutamato enxertado por alfa-tocoferol de origem sintética com um tamanho de entre 0,5 e 100 micra, que compreende íons polivalentes Mg2+, Ca2+, Zn2+, Fe2+, Cu2+ Al3+ ou Fe3+, com um produto r, que tem a fórmula

Lv//]

r = η χ ι \1G\

- η é a valência dos referidos íons polivalentes,

- [M1] é à concentração molar de íons polivalentes,

- [IG] é a concentração molar de grupos ionizáveis IG, estando r entre 0,3 e 10. Essas partículas selecionadas em escala de mícron resultam da agregação de um grande

número de nanopartículas de copolímero anfifílico.

Uma suspensão de micropartículas carregadas com PA (por exemplo, hGH) pode assim ser produzida por floculação com íons polivalentes Mg2+, Ca2+, Zn2+, Fe2+, Cu2+ Al3+ ou Fe3+, essa floculação sendo seguida por maturação e lavagem. A suspensão pode ser em seguida Iiofilizada ou atomizada e então reconstituída com água para produzir uma formulação pronta para injeção.

É claro que essas formas secas em pó de micropartículas são um priori vantajoso em relação ao armazenamento. Especificamente, eles deveriam tornar possível o aumento da estabilidade física destas micropartículas e a estabilidade do PA.

Entretanto, no contexto de uso desses pós microparticulados para aplicações terapêuticas pela via parenteral, a dificuldade consiste em ser capaz de dispersar (ou suspender) facilmente esses pós a tempo de usá-los para obter uma forma microparticulada líquida reconstituída, mais especificamente uma suspensão, a qual é estável, por exemplo, pelo menos por alguns minutos, mesmo por pelo menos algumas dezenas de minutos, em temperatura ambiente. Essa estabilidade é desejável em particular para tornar possível a manipulação fácil dessa suspensão reconstituída. É também importante que essa suspensão reconstituída seja capaz de ser facilmente injetada passando-se através de uma agulha oca em combinação com uma seringa ou com uma caneta de injeção (do tipo caneta para insulina). Finalmente, recomenda-se a levar em consideração o fato de que as operações de dispersão, manipulação e injeção da suspensão reconstituída devem ser realizadas por pacientes ou profissionais de saúde.

Nesse contexto, um dos objetivos essenciais da invenção seria fornecer novas micropartículas obtidas por agregação de nanopartículas de polímero anfifílico biodegradável e hidrossolúvel, por exemplo, do tipo daqueles de acordo com a formulação divulgada em WO-A-05/051416, micropartículas estas sendo carregadas com PA e sendo capazes de exibir propriedades melhoradas, em particular na forma sólida seca, especialmente em relação a sua capacidade de ser dispersa ("dispersibilidade") e, em relação à suspensão reconstituída, sua estabilidade e sua capacidade de ser facilmente manipulada e injetada.

Um outro objetivo da invenção é fornecer novas micropartículas obtidas por agregação de nanopartículas de polímero anfifílico biodegradável e hidrossolúvel, as referidas micropartículas sendo carregadas com PA e que tem boas propriedades de dispersão, se na fase aquosa ou na fase orgânica e enquanto mantendo a integridade das referidas micropartículas.

Um outro objetivo da invenção é fornecer novas micropartículas obtidas por agregação de nanopartículas de polímero anfifílico biodegradável e hidrossolúvel, as referidas micropartículas sendo carregadas com PA e com excelentes propriedades de estabilidade na forma sólida e seca.

Um outro objetivo da invenção é fornecer um novo processo para a preparação de micropartículas na forma sólida e seca, micropartículas estas sendo ainda:

- obtidas por agregação de nanopartículas de polímero anfifílico biodegradável e hidrossolúvel, por exemplo, do tipo daqueles de acordo com a formulação divulgada em WO-A-05/051416,

- carregadas com PA

- e como definidas nos objetivos acima.

Um outro objetivo da invenção é fornecer um processo para a preparação de

micropartículas na forma sólida e seca do tipo daquelas que são meta no objetivo acima e o que é, além disso, simples, econômico e industrial.

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica compreendendo novas micropartículas obtidas por agregação de nanopartículas de polímero anfifílico biodegradável e hidrossolúvel, por exemplo, do tipo daquelas de acordo com a formulação divulgada em WO-A-03/104303, micropartículas estas sendo ainda:

- carregadas com PA

- e como definidas nos objetivos acima.

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica para a liberação prolongada de PA a qual supere as deficiências da anterioridade e em particular a qual torna possível, após injeção pela via parenteral (por exemplo, subcutaneamente), obter uma duração prolongada de liberação in vivo para PAs não-desnaturados (por exemplo, proteínas, peptídeos terapêuticos ou pequenas moléculas).

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica a qual torne possível, após injeção pela via parenteral (por exemplo, subcutaneamente), obter uma duração prolongada de liberação in vivo para proteínas ou peptídeos terapêuticos altamente concentrados, por exemplo, em diversos mg/ml_.

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica para liberação prolongada do PA in vivo a qual seja estável em armazenamento, tanto físico- quimicamente como biologicamente.

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica para liberação prolongada do PA in vivo a qual exiba pelo menos uma das seguintes propriedades: biocompatibilidade, biodegradabilidade, atoxicidade e boa tolerância local.

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica para a liberação prolongada lenta de um PA in vivo compreendendo micropartículas de polímero anfifílico PO as quais sejam auto-associadas com pelo menos um PA (micropartículas de PO/PA), o polímero PO sendo um polímero biodegradável e hidrossolúvel carregando grupos hidrofóbicos (HG) e grupos hidrofílicos [preferencialmente grupos ionizáveis (IG) pelo menos parcialmente ionizados], que formam espontaneamente em água uma suspensão de nanopartículas coloidais, esse polímero PO sendo, por exemplo, um poliaminoácido no qual a cadeia principal é formada por resíduos aspárticos ou resíduos glutâmicos, pelo menos uma porção dessas unidades sendo modificadas por enxerto de pelo menos um grupo hidrofóbico HG na cadeia e/ou na extremidade da cadeia.

Um outro objetivo da invenção é fornecer um kit para reconstituir a formulação como definida nos objetivos definidos acima, esse kit sendo, por exemplo, de uso simples de modo que ele possa ser facilmente empregado pelo paciente ou pelos profissionais de saúde.

Um outro objetivo da invenção é fornecer um processo para reconstituir a formulação como definida nos objetivos definidos acima, esse processo sendo, por exemplo, de realização simples, em particular para o paciente ou para os profissionais de saúde.

Um outro objetivo da invenção é fornecer uma formulação farmacêutica sólida para a liberação prolongada de PA, em particular uma forma seca em pó para inalação e administração pulmonar:

• baseada em micropartículas de PO associadas com pelo menos um PA, como são definidas nos objetivos definidos acima;

• ou obtida da formulação como definida nos objetivos definidos acima.

Para alcançar esses objetivos, dentre outros, os inventores tiveram o crédito da

descoberta, após extensa e laboriosa pesquisa, que, de um modo inteiramente surpreendente e inesperado, a atomização de formulações baseadas em POs anfifílicos (por exemplo, em copoliaminoácidos) e em PA resulta em micropartículas secas de PO/PA as quais são muito estáveis, o que permite a reconstituição de suspensões aquosas de micropartículas em um meio líquido e que têm um tamanho entre 0,5 e 100 micra.

Além disso, os inventores tiveram o crédito do desenvolvimento de meios para reconstituir uma suspensão de micropartículas estas, os referidos meios tornando possível otimizar sua dispersão tanto em uma fase líquida aquosa e em uma fase líquida orgânica.

Isso ocorre porque uma dispersão fácil e estável de boa qualidade é uma pré- condição para o uso dessas suspensões, reconstituídas de micropartículas secas de PO/PA, como formulações injetáveis.

A atomização é uma técnica industrial conhecida para a produção de partículas secas de uma solução ou suspensão do material constituinte das referidas partículas. A atomização (ou liofilização) consiste em se evaporar muito rapidamente, em uma corrente de ar quente ou gás quente inerte, gotículas nebulizadas dessa solução ou suspensão.

Nessa área de formulações farmacêuticas, a atomização pode ser problemática na medida em que impõe uma tensão de calor que pode provar ser absolutamente inaceitável para alguns PAs termo-sensíveis, tal como PAs baseados em proteínas ou outros compostos peptídeos. Redirecionar a atomização para produzir partículas secas baseadas em veículos e em PA não é, portanto, óbvio, exceto pela escolha de veículos capazes de evitar, até mesmo de minimizar, a desnaturação de PA peptídeos.

Assim é que o pedido de patente US-A-2005/0158392 divulga a preparação por atomização de micropartículas sólidas lipofílicas carregadas com PA peptídeo. Esta atomização consiste tanto em atomizar uma solução aquosa compreendendo ácido hialurônico, PA e um agente tensoativo lipofílico (por exemplo, lecitina), até mesmo um outro tensoativo do tipo Tween® 80, como, em uma primeira etapa, em atomizar uma solução aquosa compreendendo ácido hialurônico, PA e opcionalmente um tensoativo do tipo Tween® 80, para obter partículas primárias, e, em uma segunda etapa, em atomizar uma solução alcoólica de agente tensoativo lipofílico (por exemplo, lecitina) na qual as partículas primárias estejam dispersas. A ênfase nesse Pedido de patente US é colocada na combinação protetora de ácido hialurônico e agente tensoativo lipofílico (por exemplo, lecitina), pretendendo-se que o último forme um filme de revestimento para as micropartículas baseadas em ácido hialurônico e em PA. Esse documento não menciona nem mesmo faz alusão ao uso de POs anfifílicos e muito menos de anfifílicos copoliaminoácidos como veículos nem transportadores de PA juntos que formam as micropartículas.

Um outro exemplo de atomização é aquele descrito no trabalho de Maa et al., J. Pharm. Sci., 87(2), 152-159, 1988. De acordo com esse documento, o PA (hormônio de crescimento humano) é complexado por zinco na presença de biodegradável tensoativos antes de ser atomizado para dar as micropartículas.

É assim aparente que a atomização de proteínas é uma operação difícil que necessita do uso de formulações complexas compreendendo diversos veículos presentes para proteger o PA durante o processo e garantir sua estabilidade de armazenamento, o qual é particularmente crucial para certas moléculas sensíveis, tal como hormônio de crescimento humano (hGH).

Além disso, o crédito aos inventores é todo a maior como a anterioridade ensina nada em relação à difícil problema da dispersão e da estabilização em um líquido de micropartículas secas (em particular em relação às micropartículas de POs anfifílicos) projetadas para a liberação prolongada de PA.

Decorre daí que a invenção se refere, em um primeiro aspecto, as micropartículas de polímero (PO) compreendendo pelo menos um princípio ativo (PA), o polímero PO

• sendo um copolímero anfifílico hidrossolúvel e biodegradável que carrega grupos hidrofóbicos (HG) e grupos hidrofílicos,

• que formam espontaneamente uma suspensão coloidal de nanopartículas em água, em pH 7,0, sob condições isotônicas,

• e estando não-covalentemente associado com o PA;

cujas micropartículas

a. são obtidas por atomização de uma solução ou suspensão coloidal de PO compreendendo pelo menos um PA, b. têm um tamanho, medido em um teste T, de entre 0,5 e 100 micra, preferencialmente entre 1 e 70 micra, preferencialmente entre 2 e 40 micra,

c. e são dispersíveis em suspensão coloidal em um teste DPI de "dispersibilidade".

Em um segundo aspecto, a invenção se refere a um processo para a preparação

de micropartículas de PO que são associadas com pelo menos um princípio ativo (PA), micropartículas estas de PO/PA sendo em particular aquelas definidas acima de acordo com o primeiro aspecto da invenção,

i. o polímero PO

• sendo um copolímero anfifílico hidrossolúvel e biodegradável que carrega grupos hidrofóbicos (HG) e grupos hidrofílicos [preferencialmente grupos ionizáveis (IG) pelo menos parcialmente ionizados],

• que formam espontaneamente uma suspensão coloidal de nanopartículas em água, em pH 7,0, sob condições isotônicas,

• e estando não-covalentemente associados com o PA;

ii. as referidas micropartículas com um tamanho, medido em um teste T, de entre 0,5 e 100 micra, preferencialmente entre 1 e 70 micra, preferencialmente entre 2 e 40 micra, que compreende essencialmente atomizar uma solução ou uma suspensão coloidal de PO que contém PA. De acordo com uma interessante variante, as micropartículas obtidas por atomização são redispersas em um meio líquido essencialmente aquoso (preferencialmente compreendendo íons multivalente como meios de dispersão) então a dispersão obtida é liofilizada.

Em um terceiro aspecto, a invenção se refere a uma formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de PA, a qual compreende uma suspensão coloidal, de "baixa" viscosidade, baseada em micropartículas de PO que contém pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas definidas acima de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou aquelas obtidas pelos processos definidos acima de acordo com o segundo aspecto da invenção.

Em um quarto aspecto, a invenção se refere a um kit de reconstituição, em particular para reconstituir a formulação como definida acima de acordo com um terceiro aspecto da invenção, o qual compreende:

• micropartículas de PO que compreendem pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas definidas acima de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou aquelas obtidas pelos processos definidos acima de acordo com o segundo aspecto da invenção;

• e um líquido de reconstituição selecionado a partir do grupo que consiste em:

- líquidos essencialmente aquosos;

- líquidos essencialmente orgânicos miscíveis em água; - e líquidos essencialmente orgânicos imiscíveis em água. Em um quinto aspecto, a invenção se refere a um processo de reconstituição, em particular para reconstituir a formulação como definida acima de acordo com um terceiro aspecto da invenção, o qual compreende essencialmente:

• misturar micropartículas de PO que compreendem pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas definidas acima de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou aquelas obtidas pelos processos definidos acima de acordo com o segundo aspecto da invenção;

e um líquido de reconstituição selecionado a partir do grupo que consiste em:

- líquidos essencialmente aquosos;

- líquidos essencialmente orgânicos miscíveis em água;

- e líquidos essencialmente orgânicos imiscíveis em água;

• e agitar esta mistura.

Em um sexto aspecto, a invenção se refere a uma formulação farmacêutica sólida para a liberação prolongada de PA, a qual compreende uma forma seca em pó para inalação e administração pulmonar:

• baseada em micropartículas de PO que compreendem pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas definidas acima de acordo com o primeiro aspecto da invenção ou aquelas obtidas pelos processos definidos acima de acordo com o segundo aspecto da invenção;

• ou obtida da formulação como definida acima de acordo com um terceiro aspecto da invenção.

Vantagens:

Sem desejar estar vinculado a uma teoria, pode-se acreditar que os grupos hidrofóbicos dos polímeros PO, os quais podem ser reunidos para dar domínios hidrofóbicos, desempenham um papel importante no processo para liberação modificada do PA, assim como na estabilização do último.

Pode-se supor que as interações físicas (não-covalente) ocorrem entre os domínios hidrofóbicos do polímero anfifílico PO e o PA, em particular protéico. Esta forte afinidade da proteína com o polímero resulta em sua liberação prolongada após administração subcutânea. Este mecanismo de liberação difere em particular de, e pode opcionalmente ser combinado com, aquele observado para as micropartículas de ácido polilático, de ácido polilático-glicol ou também com aqueles de hialuronato de sódio no qual a liberação do PA é essencialmente relacionada com a difusão do princípio ativo e a decomposição/erosão da partícula.

A afinidade da proteína para o polímero PO torna possível limitar o fenômeno de agregação de proteínas e outro evento prejudiciais os quais podem ocorrer durante a processo de atomização, sem a necessidade de redirecionar a outros agentes estabilizantes (por exemplo, açúcares, tensoativos, e similares). Esse efeito protetor do PO também torna possível obter facilmente uma formulação líquida a qual seja estável em armazenamento. Finalmente, quando o PO tem uma natureza essencialmente amorfa (em particular quando o PO é um poliaminoácido), isto confere excelentes propriedades de estabilidade física nas micropartículas quando elas são armazenadas na forma seca.

É assim aparente que a presença desses poliaminoácido POs anfifílicos introduz meios adicionais para controlar a liberação modificada do PA e sua estabilização em relação á agregação ou possíveis decomposições químicas.

Além disso, a natureza anfifílica do polímero PO torna possível, durante o processo de atomização, que seja capaz o uso tanto de uma fase inteiramente aquosa ou uma fase inteiramente orgânica volátil ou uma mistura volátil de fase aquosa e orgânica, a qual oferece grande flexibilidade na implementação do processo.

Além disso, devido a sua natureza química, as micropartículas formadas de PO do tipo (co)poliaminoácido são biodegradáveis e biocompatíveis e geralmente têm boas propriedades de tolerância local.

Em relação ao processo para a produção de micropartículas sólidas e secas de acordo com a invenção, ou seja, atomização, é por natureza facilmente conversível à escala industrial.

Finalmente, as micropartículas de acordo com a invenção e as formulações compreendendo as mesmas são atóxicas e localmente bem toleradas.

Definições:

Em todo o pedido de patente, a conjunção "ou" deveria ser entendida com o sentido inclusivo de "um ou o outro ou ambos". Assim, por exemplo, uma alquila linear a qual poderia conter pelo menos um hetero átomo (O, N ou S) ou pelo menos uma insaturação pode ter dois hetero átomos, N e S, e uma insaturação.

Por todo o presente relatório, diferente das micropartículas de acordo com a invenção, o termo "partículas em escala de sub-mícron" ou "nanopartículas" denota partículas de um tamanho (medido em um teste T descrito abaixo), por exemplo, de mais do que ou igual a 1 nm e de menos do que 500 nm, preferencialmente de entre 5 e 250 nm.

Dentro do significado da invenção e por todo o presente relatório, o termo "poliaminoácido" abrange tanto poliaminoácidos naturais e poliaminoácidos sintéticos, e também oligoaminoácidos compreendendo de 2 a 20 resíduos de aminoácido no mesmo modo como poliaminoácidos compreendendo mais do que 20 resíduos de aminoácido.

Os resíduos de aminoácido preferidos da cadeia principal de poliaminoácido são aqueles que têm a configuração L; o tipo de ligação preferida é o tipo alfa, o que significa uma ligação peptídica entre um grupo alfa-amino de um aminoácido e o grupo carboxílico, na posição 1, de um outro alfa-aminoácido.

Dentro do significado da invenção, o termo "proteína" denota, por exemplo, tanto uma proteína como um peptídeo, seja um oligopeptídeo ou um polipeptídeo. Essa proteína ou esse peptídeo pode ou não ser modificado, por exemplo, por enxerto de um ou mais grupos polioxietileno.

Dentro do significado da invenção e por todo o presente relatório, os termos "associação" ou "associar" empregados para descrever as relações entre um ou mais PAs e os polímeros POs significam em particular que o princípio ou princípios ativos são ligados ao(s) polímero(s) PO(s) por uma ligação não-covalente, por exemplo, por interação eletrostática ou hidrofóbica ou ponte de hidrogênio ou interferência estérica.

Primeiro aspecto da invenção: as micropartículas

Característica (a):

O fato de se associar, antes da atomização, o PA, por exemplo, uma proteína ou um outro composto peptídeo, com um polímero anfifílico PO, tal como um (co)poliaminoácido anfifílico, exibe diversas vantagens, tanto em relação ao próprio processo e a propriedades das micropartículas produzidas por atomização.

O tratamento por atomização física confere na micropartículas secas sólidas obtidas, uma estrutura específica a qual é a fonte de um bom número de suas vantajosas propriedades. Esta estrutura é corretamente caracterizada por esse método de produção por atomização, assim como pelas funções anexas a essas vantajosas propriedades.

Característica (b)

Esta característica é definida objetivamente pelo teste T descrito abaixo.

Teste T para medida do tamanho das micropartículas por difracão a laser:

a- Teste TO no caso onde as micropartículas estão na forma seca 1- Equipamento e condições operacionais

Dimensionador de partícula a laser Malvern Mastersizer 2,000 Unidade Hidro 2000SM via líquida Volume do fluido do veículo de dispersão 150 mL Comprimentos de onda (azul e vermelho) 466 e 632 nm Velocidade de agitação 2.400 rev/min Variação analítica 0,02 pm a 2,000 pm Modelo ótico (Teoria Mie) Valores dos índices refrativos usados: Fluido de dispersão (água) rifado = 1,39 + iO l"l|átex de poliestireno — 1,59 + Í0 Látex de poliestireno Valores de obscurecimento para dar início à análise Entre 5% e 20% Tempo de aquisição 10 s

2- Preparação da amostra

- Uma solução a 0,1% de Span 80 em heptano é preparada (para fazê-la, 0,01g de Span 80 em pó é pesado em um frasco de 20 ml_ e então se acrescenta heptano por pesagem para obter um peso final de 10 g),

- aproximadamente 6 mg de pó são pesados em um tubo de ensaio de 5 ml_,

- 0,7 g de heptano compreendendo 0,1% de Span 80 são acrescentados ao tubo de

ensaio,

- o tubo de ensaio é colocado por 2 minutos em um banho ultrassônico para dispersar vigorosamente o pó

3- Análise da amostra

O fluido de circulação armazenado no sistema de dispersão para via líquida em repouso é esvaziado e substituído por heptano. A agitação do rotor Hidro2000SM é ajustada a 2.400 rev/min.

A medida é iniciada com as condições experimentais mencionadas acima: - Alinhamento do feixe de laser,

- Gravação do ruído de fundo.

Após estas etapas, o operador irá introduzir a amostra para ser analisada do seguinte modo: a amostra diluída é acrescentada por gotejamento (com uma pipeta Pasteur) até que o obscurecimento seja de entre 5% e 20% e aquisição seja iniciada. Os dados referentes a D50, que é o diâmetro abaixo do qual 50% dos objetivos

analisados são encontrados, são obtidos.

A média de D50 de 3 medidas realizadas em 3 diferentes preparações é produzida. b- Teste T1 no caso onde as micropartículas estão na forma de uma dispersão

aquosa

1- Equipamento e condições operacionais

Dimensionador de partícula a laser Malvern Mastersizer 2,000 Unidade Hidro 2000SM via líquida Volume do fluido do veículo de dispersão 150 mL Comprimentos de onda (azul e vermelho) 466 e 632 nm Velocidade de agitação 2.400 rev/min Variação analítica 0,02 μιτι a 2,000 μπι Modelo ótico (Teoria Mie) Valores dos índices refrativos usados: Fluido de dispersão (água) Látex de poliestireno Hfluido = 1.33 + iO riiálex de poliestireno — 1,59 + Í0 Valores de obscurecimento para dar início à análise Entre 5% e 20% Tempo de aquisição 10 s

2- Preparação da amostra

A amostra a ser analisada é introduzida na célula na forma em que está ou pode ser opcionalmente rediluída com água no caso de amostras altamente dispersas.

3- Análise da amostra

O fluido de circulação armazenado no sistema de dispersão para via líquida em repouso é esvaziado e substituído por água desmineralizada fresca. A agitação do rotor Hidro2000SM é ajustada a 2.400 rev/min.

A medida é iniciada com as condições experimentais mencionados acima:

- Alinhamento da feixe de laser,

- Gravação do ruído de fundo.

Após estas etapas, o operador irá introduzir a amostra a ser analisada do seguinte modo: a amostra diluída é acrescentada por gotejamento com uma pipeta Pasteur) até que o obscurecimento seja de entre 5% e 20% e aquisição seja iniciada.

Os dados referentes a D50, que é o diâmetro abaixo do qual 50% dos objetivos

analisados são encontrados, são obtidos.

A média de D50 de 3 medidas realizadas em 3 diferentes preparações é produzida. c- Teste T2 no caso onde as micropartículas estão em dispersão em um solvente

orgânico

Esse teste é análogo ao teste T1. Contudo, nesse caso, é necessário substituir a

água por um solvente que seja completamente miscível com a dispersão líquida e no qual as partículas não inchem. Em muitos casos, o heptano é usado. 1- Equipamento e condições operacionais

Dimensionador de partícula a laser Malvern Mastersizer 2,000 Unidade Hidro 2000SM via líquida Volume do fluido do veículo de 150 mL dispersão Comprimentos de onda (azul e vermelho) 466 e 632 nm Velocidade de agitação 2,000 rev/min Variação analítica 0,02 μιτι a 2,000 pm Modelo ótico (Teoria Mie) Valores dos índices refrativos usados: Fluido de dispersão (água) Látex de poliestireno ITfluido= 1.39 +i0 l~l|átex de poliestireno ~ 1159 + Í0 Valores de obscurecimento para dar início à análise Entre 5% e 20% Tempo de aquisição 10 s

2- Preparação da amostra

Para se preparar a amostra a ser analisada, 400 μΙ_ da amostra a ser analisada devem ser diluídos em um tubo de ensaio de 5 ml_ com 600 μΙ_ de heptano e então a preparação deve ser vortexada por 10 segundos (10 ± 5).

3- Análise da amostra

O fluido de circulação armazenado no sistema de dispersão para a via líquida em repouso é esvaziado e substituído por água desmineralizada fresca. A agitação do rotor Hidro2000SM é ajustada a 2.400 rev/min.

A medida é iniciada com as condições experimentais mencionados acima: - Alinhamento da feixe de laser,

- Gravação do ruído de fundo.

Após estas etapas, o operador irá introduzir a amostra a ser analisada do seguinte modo: a amostra diluída é acrescentada por gotejamento (com uma pipeta Pasteur) até que o obscurecimento seja de entre 5% e 20% e aquisição seja iniciada. Os dados referentes a D50, que é o diâmetro abaixo do qual 50% dos objetivos

analisados são encontrados, são obtidos.

A média de D50 de 3 medidas realizadas em 3 diferentes preparações é produzida.

Característica (c):

Esta característica é definida objetivamente pelo teste DP 1 descrito abaixo. Teste de "dispersibilidade" DPI dos pós:

Aproximadamente 30 mg de partícula pó são introduzidos em um frasco de 3 mL equipado com um septo. O peso exato das partículas é então determinado (W1). 1 mL de solução de reconstituição é acrescentado ao pó através do septo usando uma seringa de 1 mL equipada com uma agulha 25G χ 5/8 (0,5 χ 16 mm) (de BD Microlance tipo 3, por exemplo) e ο frasco e agitado intermitentemente a mao por um period ο de 15 minutos. O frasco e pesado, de forma a determinar ο peso exato de solu^ao introduzida (w2). No final desse tempo, tod a a suspensao e sugada atraves de uma seringa de 1 mL (do tipo Braun Injeckt-F Luer 1 mL, ref. 9166017V) equipada com uma agulha de 25G e decantada em um frasco novo previamente tarado, e ο peso w3 de solugao recuperada e determinado.

O aspecto qualitative) da dispersao (tendencia de se dispersar, opacidade, homogeneidade visual da solugao), a possibilidade ou nao de injeta-la atraves de uma agulha de 25G e a percentagem de solugao recuperada:

% = W3 χ 100/(wi+w2)

e ο tamanho das microparticulas e medido de acordo com um teste T1 ou T2

(dependendo se a dispersao liquids e uma solugao aquosa ou um Iiquido organico).

Considera-se que ο ρό tenha boas propriedades de dispersao em l_do se:

■ a suspensao obtida compreenda microparticulas com um diametro medio de entre 2 e 40 μηι,

■ a aparencia da suspensao seja homogenea

■ possa ser injetada atraves de uma agulha de 25G e se

■ pelo menos 80% da suspensao possam ser assim recuperados.

Alem das caracteristicas (a), (b) & (c)，as microparticulas de acordo com a invengao podem ser objetivamente definidas pelo fato de que elas sao estaveis em um teste ST1 e/ou em um teste ST2.

Teste ST1 de estabilidade fisica das microparticulas secas:

O tamanho das microparticulas presentes no ρό atomizado seco e medido na semana seguinte a atomizagao do ρό em um dimensionador de particula a laser de acordo com ο teste A. O ρό e entao colocado em um forno a 30°C por uma semana. Uma amostra "controle" e deixada a 5°C. Uma medida de tamanho e novamente realizada apos a dispersao sob as mesmas condig5es que no tempo tO. As distribuigdes das particulas antes de e apos ο passar do tempo sao comparadas.

Teste ST2 de estabilidade coloidal das particulas em suspensao:

O ρό de microparticula e disperso na dispersao IiqukJa com agita^ao magnetica na concentragao na qual e desejavel observar sua estabilidade e e deixada em agitagao com agitagao magnetica moderada por pelo menos 2 h (medida tO).

O tamanho das particulas e medido em um dimensionador de particula a laser de acordo com ο teste T1 ou T2 de acordo com ο meio de dispersao (aquoso ou organico).

A suspensao e em seguida deixada em repouso por 7 dtas a 5°C. O pellet de sedimentagao e disperso por agitagao por alguns minutos (ate que uma suspensao seja obtida e que seja homogenea apos observagao visual). Uma medida de tamanho e

novamente realizada Apos a dispersao sob as mesmas condigdes como no tempo tO. O polimero PO Os polimeros POs de acordo com a invengao sao polimeros hidrossoliiveis e biodegradaveis que carrega grupos hidrofobicos HG e grupos hidrofilicos [preferencialmente grupos ionizaveis IGs que sao pelo menos parcialmente ionizados]. Os grupos hidrofobicos HG podem ser pequenos em niimero com relagao ao restante da cadeia e pode estar situado Iateralmente a cadeia ou inserido na cadeia e pode ser distribuido aleatoriamente (copolimero randomico) ou distribuido na forma de sequencias ou enxertos (copolimeros em bloco ou copolimeros sequenciais).

De acordo com uma modalidade preferida da inverigao, ο polimero PO e um (co)poliaminoacido anfifilico.

Tal escolha de PO fornece excelente compatibilidade com os PAs de tipo proteina/peptideo. E possivel assim simplificar grandemente a composigao da solu^ao de partida ou suspensao do PA de tipo proteina/peptideo com ο polimero PO. Esta solugao de partida ou suspensao pode compreender apenas ο PA e ο PO em uma fase aquosa e/ou organica. A faIta de outros ingredientes torna possivel que tal solu^ao de partida ou suspensao possa ser filtrada (atraves de um filtro de 0,2 μηη) antes da atomizagao, ο que torna possivel realizar a iiltima sob οοηάίςδβε assepticas.

De acordo com uma modalidade preferida da invengao, ο PO e escolhido de (co)poliaminoacidos anfifilicos e suas misturas.

Preferencialmente, os poliaminoacidos de acordo com a presente inven^ao sao oligomeros ou homopolimeros compreendendo uma repetigao de residuos de acido glutamico ou aspartico ou copolimeros compreendendo uma mistura desses dois tipos de residuos de amirioacido. Os residuos sob consideragao nesses polimeros sao aminoacidos que tem a configura^ao D ou L ou D/L e sao Iigados via suas posig5es α ou γ para a glutamato ou glutamico residue e suas a ou β posi?5es para ο residuo aspartico ou aspartato·

De acordo com uma modalidade da inven^ao ainda mais preferida, ο polimero PO e um poliaminoacido formado por residuos asparticos e/ou residuos glutamicos, pelo menos uma porgao desses residuos contendo enxertos com pelo menos um grupo hidrofobico HG. Esses poliaminoacidos sao em particular do tipo daqueles divulgadas no Pedido de Patente PCT WO-A-00/30618.

De acordo com uma primeira possibilidade，ο PO(s) e(sao) definido(s) pela seguinte formula geral (I) (o radical -COOR3 inclui formas onde a Iiga^ao entre ο carboxilico e R3 e uma Iigagao ionica -COO-+R3): 岡

NHR1

I

onde:

■ R1 representa um H, uma alquila linear C2 a Ci0 ou ramificado C3 a C1O, uma benzila, ou -R4-[HG];

■ NHR1 e um residuo terminal de aminoacido;

_ R2 representa um H, um grupo acila linear C2 a C10 ou ramificado C3 a C10, ou -R4-

[HG];

■ R2 e um residuo terminal de piroglutamato;

■ R3 e um H, ou

■ +R3 e preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em:

- cations metalicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende:

sodio, potassio, calcio e magnesio,

-cations organicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende:

• cations baseados em amina,

• cations baseados em oligoamina,

· cations baseados em poliamina (polietilenoimina sendo particularmente preferida),

• cations baseados em aminoacido(s) vantajosamente escolhidos da classe que compreende cations baseados em Iisina ou em arginina,

-ou poliaminoacidos cationicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende polilisina ou oligolisina;

■ R4 representa uma Iiga^ao direta ou um espagador baseado em 1 a 4 residuos de

aminoacido;

■ A indeperidentemente representa um radical -CH2- (unidade aspartica) ou um radical -CH (unidade glutamica);

■ n/(n+m) e definido como a taxa de enxerto molar e seu valor e suficientemente

baixo para PO, dissolvidos em agua ο pH = 7 e a 25°C, a forma uma suspensao coloidal de

particulas em escala de sub-micron de PO; preferencialmente n/(n+m) e compreendido entre 1 e 25 mol % e mais preferencialmente entre 1 e 15 mol %;

■ η + m e definido como ο grau de polimerizagao e varia de 10 a 1000，

preferencialmente entre 50 e 300; ■ HG representa um grupo hidrofobico compreendendo 6 a 30 atomos de carbono.

Em uma modalidade preferida da invengao, a grupo hidrofobico HG e escolhido do grupo compreendendo radicals alcoxi do tipo: -OCH2(CH2-CH2)3.8-CH3, oleila, tocoferila ou colesterila, e R4 representa uma Iigagao simples.

De acordo com uma segundo possibilidade, PO corresponde a uma das seguintes

formulas gerais (II), (III) e (IV) (o radical -COORS' inclui formas onde a Iiga^ao entre ο carboxilico e R31 e uma Iigagao ionica -COO-+R3'):

O

[HGJ

[HG]

H O

/

COOR

3·

H

EHG] i.,

\ 4 Z

R

A

O

O

Y" r

O H

Z n· RSO

Att^

COOR

H O

H

m' R

[HGj

(HI)

COOR

H A

/

fHG]

\

FT

H

^tiii rtw

ΟΛ»

Re

-tHG]

(IV)

onde:

■ HG representa um grupo hidrofobico compreendendo 6 a 30 atomos de carbono; ■ R30 e uma cadeia alquileno C2 a C6 linear bivalente;

■ R3 έ um H ou,

■ +R3 e preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em:

-cations metalicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende: sodio, potassio, calcio e magnesio, - cations organicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende:

• cations baseados em amina,

• cations baseados em oligoamina,

• cations baseados em poliamina (polietilenoimina sendo particularmente preferida),

• cations baseados em aminoacido(s) vantajosamente escolhidos da classe que

compreende cations baseados em Iisina ou em arginina, -ou poliaminoacidos cationicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende polilisina ou oligolisina;

■ R50 e uma cadeia alquileno C1 a C8 linear bivalente na qual uma ou duas unidade(s) metileno, preferencialmente em cada final de R50j pode ser independentemente substituido por -O ou -NH;

■ R4 represents uma Iiga^ao direta ou um espa^ador baseado em 1 a 4 residuos de aminoacido;

■ A independentemente representa um radical -CH2- (unidade aspartica) ou um radical -CH2-CH2- (unidade glutamica);

■ n' + m' ou n" e definido como ο grau de polimerizagao e varia de 10 a 1000, preferencialmente entre 50 e 300.

De acordo com uma forma alternativa vantajosa, ο grupo R4 representa uma Iiga^ao

simples.

De acordo com uma terceira possibilidade, ο PO e uma copolidroxialquilglutamina essencialmente neutra (preferencialmente a alquila e etila) compreendendo diversos grupos hidrofobicos pendentes (HGs) os quais sao identicos ou diferentes uns dos outros. A copolidroxialquilglutamina tambem carrega grupos hidroxialquilamina. Estes grupos Ndroxialquilamina sao preferencialmente Iigados ao copolimero via uma Iiga^ao amida. Os grupos hidroxialquilamina que podem ser usados para amidificar ο carboxilico dos residuos de gIutamato e para formar esta copolidroxialquilglutamina sao identicos ou diferentes uns dos outros e sao, por exemplo, escolhidos a partir dos seguintes grupos: 2-hidroxietilamina, 3-hidroxipropilamina, 2,3-diidroxipropilamina, tris(hidroximetil)aminometano e 6- hidroxihexilamina.

Vantajosamente, pelo menos um dos grupos hidrofobicos HGs e incluido em um enxerto hidrofobico compreendendo pelo menos uma uniao espagadora (ou unidade) (espagador) que torna possivel conectar ο grupo hidrofobico HG a uma cadeia de copoliglutamatos. Essa uniao pode compreender, por exemplo, pelo menos uma liga?ao covalente direta ou pelo menos uma Iigagao amida ou pelo menos uma Iiga^ao ester. Por exemplo, a uniao pode ser do tipo daquelas pertencentes ao grupo compreendendo em particular: residuos de aminoacidos, derivados de aminoalcoois, derivados de poliaminas (por exemplo, diaminas), derivados de poiiois (por exemplo, diois) e derivados de hidroxi acidos. O enxerto de HGs a cadeia de copoliglutamato ou polialquilglutamina pode envolver ο uso de precursores de HG capazes de ser Iigados a cadeia de copoliglutamato ou de copolidroxialquilglutamina. Os precursores de HGs sao na pratica, e sem que isso seja limitante, selecionado a partir do grupo que consiste em alcoois e aminas, sendo possivel que estes compostos sejam facilmente funcionalizados por um tecnico no assunto. Para mais detalhes em rela^ao a essa copolidroxialquilglutamina (preferencialmente a alquila e etila), sera feita referenda a FR-A-2,881,140. De acordo com uma forma alternativa vantajosa, em particular de acordo com pelo menos uma das tres possibilidades objetivadas acima, todos ou parte dos radicals hidrofobicos HGs dos POs sao independentemente escolhidos a partir do grupo de radicals que compreende:

■ um alcoxi linear ou ramificado que compreende de 6 a 30 atomos de carbono e que pode compreender pelo menos um heteroatomo (preferencialmente O, N ou S) e/ou pelo menos uma insaturag§o,

■ um alcoxi que compreende de 6 a 30 atomos de carbono e que tern uma ou mais cicloalquilas Iigados e opcionalmente compreende pelo menos uma insaturagao ou pelo menos um heteroatomo (preferencialmente O, N ou S),

■ uma alcoxiarila ou uma ariloxialquila de 7 a 30 atomos de carbono e que pode compreender pelo menos uma insaturagao ou pelo menos um heteroatomo (preferencialmente O, N ou S).

De acordo com uma outra forma alternativa vantajosa, em particular de acordo com pelo menos uma das tres possibilidades objetivadas acima, ο grupo hidrofobico HG e selecionado a partir do grupo que consiste em radicals alcoxi do tipo: -OCH2(CH2-CH2)3-S- CH3, oleila, tocoferila ou colesterila,

e R4 representa uma Iigagao simples.

De acordo com uma outro forma alternativa vantajosa, os η grupos HG de PO, em particular de acordo com pelo menos uma das tres possibilidades objetivas acima, representam cada uma, independentemente uma da outra, um radical monovalente da seguinte formula:

onde:

-R5 representa uma metila (alanina), isopropila (valina), isobutila (leucina), sec- butila (isoleucina) ou benzila (fenilalanina);

-R6 representa um radical hidrofobico compreendendo de 6 a 30 atomos de

carbono;

-1 varia de O a 6.

H O

(HG)

De acordo com uma notavel caracteristica da invengao，todos ou parte dos grupos hidrofobicos R6 dos POs sao independentemente escolhidos a partir do grupo de radicals que compreende:

■ um alcoxi linear ou ramificado que compreende de 6 a 30 atomos de carbono e que pode compreender pelo menos um heteroatomo (preferencialmente O, N ou S) ou pelo menos uma insaturagao,

■ um alcoxi que compreende de 6 a 30 atomos de carbono e que tern um ou mais

Iigados cicloalquilas e opcionalmente compreende pelo menos uma insaturagao ou pelo menos um heteroatomo (preferencialmente O, N ou S),

■ uma alcoxiarila ou uma ariloxialquila de 7 a 30 atomos de carbono a qual pode compreender pelo menos uma insaturagao ou pelo menos um heteroatomo

(preferencialmente O, N ou S).

Na pratica, e sem que isso seja limitante, ο radical hidrofobico R6 do enxerto do PO e selecionado a partir do grupo que consiste em radicals alcoxi do tipo: -OCH2(CH2CH2)3-8- CH3, oleila, tocoferila ou colesterila, e R4 representa uma Iigagao simples.

Vantajosamente, a cadeia principal do poliaminoacido e: — um copolimero σ-L-glutamato ou homopolimero σ-L-glutamico;

-> um homopolimero σ-L-aspartato ou σ-L-aspartico;

—ou um a-L-aspartato/a-L-glutamato ou a-L-aspartico/a-L-glutamico.

Em um modo notavel, a distribuigao dos residuos asparticos ou glutamicos da principal cadeia de poliaminoacido do PO e tal que ο polimero assim formado e tanto do tipo randomico como de bloco ou do tipo multibloco.

De acordo com um outro metodo de defini^ao, PO tern uma massa molar que fica entre 2,000 e 100.000 g/mol e preferencialmente entre 5.000 e 40.000 g/mol.

De acordo com uma forma alternativa, ο PO carrega pelo menos um enxerto do tipo polialquileno glicol Iigado a um residuo de glutamato ou aspartato. Vantajosamente, esse enxerto do tipo polialquileno glicol e da seguinte formula (V):

b

(V)

onde:

-R'4 representa uma IigagSo direta ou um "espagador" baseado em 1 a 4 residuos de aminoacido;

-X e um heteroatomo selecionado a partir do grupo que consiste em oxigenio,

nitrogenio e enxofre;

-R7 e R8 representam independentemente um H ou uma linear alquila C1 a C4; -n'" varia de 10 a 1000, preferencialmente de 50 a 300.

Na pratica, ο polialquileno glicol e, por exemplo, um polietileno glicol.

E desejavel, de acordo com a invengao, para a percentagem molar de enxerto ao polialquileno glicol para variar de 1 a 30%.

Alem disso, os poliaminoacidos POs sao extremamente vantajoso devido ao fato de

que, com um ajustavel grau de enxerto, eles se dispersam em agua em pH = 7,4 (por exemplo, com um tampao fosfato) para dar suspensoes coloidais.

Alem disso, os principios ativos PAs1 tal como proteinas, peptideos ou pequenas moleculas, podem se unir espontaneamente com nanoparticulas compreendendo esses poliaminoacidos POs.

Deveria ser entendido que os POs compreendem grupos funcionais ionizaveis os quais sao, dependendo do pH e da composigao, tan to neutros (por exemplo, -COOH) ou ionizados (por exemplo, -COO). Por esta razao, a solubilidade em uma fase aquosa e diretamente uma fungao do nivel de grupos funcionais ionizados e assim do pH. Em solugao aquosa, no caso de grupos funcionais carboxila, a contra-ίο η pode ser um cation metalico, tal como sodio, calcio ou magnesio, ou um cation organico, tal como as formas com protons da trietanolamina, tris(hidroximetil)aminometano ou uma poliamina, tal como polietilenoimina.

Os POs do tipo poliaminoacido sao obtidos, por exemplo, por metodos conhecidos por um tecnico no assunto. Os poliaminoacidos randomicos podem ser obtidos por enxerto do enxerto hidrofobico, previamente funcionalizado pelo espagador, diretamente ao polimero por uma reagao de acoplamento convencional. Os poliaminoacidos POs em bloco ou multibloco podem ser obtidos por polimerizagao sequencial dos anidridos de N- carboxiaminoacido (NCA) correspondentes. Um poliaminoacido que e um homopoliglutamato, um homopoliaspartato ou um

bloco, multibloco ou copolimero randomico de glutamato/aspartato e preparado, por exemplo, de acordo com metodos convencionais.

A tecnica mais amplamente usada para se obter um poliaminoacido de um tipo e com base na polimerizagao de anidridos de N-carboxiaminoacido (NCA) descrita, por exemplo, no trabalho "Biopolymersi 1976，15，1869" e no trabalho de H.R. Kricheldorf, "alpha-Amino acid N-carboxy Anhydride and related Heterocyclesut Springer Verlag (1987). Quando a cadeia lateral tern uma fun?ao de acido carboxilico, os derivados de NCA sao preferencialmente derivados NCA-O-Me, NCA-O-Et ou NCA-O-Bz (Me = metila, Et = etila e Bz = benzila). Os polimeros sao em seguida hidrolisados sob condi?5es apropriadas para se obter ο polimero em sua forma acida. Estes metodos sao inspirados pela descrigao dada na patente FR-A-2 801 226 do Requerente. Um certo niimero de polimeros que podem ser usados de acordo com a invengao, por exemplo, do tipo poli(a-L-aspartico), poli(a-L- glutamico), poli(a-D-glutamico) e poli(Y-L-glutamico) com pesos variaveis estao disponiveis comercialmente. A poliaspartico de tipo a、β έ obtido por condensagao de acido aspartico (para se obter uma polissuccinimida), seguida por hidrolise basica (cf. Tomida et al., Polymer 1997，38, 4733-36).

O acoplamento do enxerto com um grupo funcional acido do polimero e facilmente realizado por rea^ao do poliaminoacido na presents de uma carbodiimida como agente de acoplamento e opcionalmente um catalisador, tal como 4-dimetilaminopiridina, e em um solvente apropriado, tal como dimetilformamida (DMF), N-metilpirrolidona (NMP) ou dimetil sulfoxido (DMSO). A carbodiimida e， por exemplo, diciclohexilcarbodiimida ou diisopropilcarbodiimida. O grau de enxerto e controlado quimicamente pela estequiometria dos constituintes e reagentes ου ο tempo de reagao. Os enxertos hidrofobicos funcionalizados por um "espagador" sao obtidos por acoplamento peptideo convencional ou por condensagao direta por acido catalise. Estas tecnicas sao bem conhecidas por um tecnico 门ο essunto.

Os derivados NCA previamente sintetizados com ο enxerto hidrofobico sao usados para a sintese de copolimero em bloco ou multibloco. Por exemplo, ο derivado NCA- hidrofobo e copolimerizado com a NCA-O-benzila e entao os grupos benzila sao seletivamente removidos por hidrolise.

Os priricipio(s) ativos(s) PA(S)

Em relagao a ο PA, e preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em: proteinas, glicoproteinas, proteinas Iigadas a uma ou mais cadeias de polialquileno glicol [preferencialmente polietileno glicol (PEG): "proteinas PEGuiIadas"], peptideos, polissacarideos, lipossacarideos, oligonucleotideos, polinucleotideos e suas misturas, e， mais preferencialmente ainda, do subgrupo de eritropoietina, oxitocina, vasopressins, hormonio adrenocorticotropico, fa tor de crescimento epidermico, fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGF)j fatores que estimulam a hematopoiese e suas misturas, fatores Vlll e IX，hemoglobina, citocromos, albuminas, prolactina, luliberina, hormonio de Iiberagao de hormonio Iuteinizante (LHRH), antagonistas de LHRH, competidores de LHRH， hormonios de crescimento humano，suino ou bo vino (GHs), fator de Iibera^ao de hormonio do crescimento, insulina，somatostatina, glucagon, interleuquinas ou suas misturas (IL-2, IL- 11, IL-12), interferons-α, -β ou -γ, gastrina, tetragastrina, pentagastrina, urogastrona, secretina, calcitonina, encefalina, endomorfinas, angiotensinas, hormonio de Iiberagao de tirotropiria (TRH), fator de necrose tumoral (TNF), fator de crescimento neuronal (NGF), fator estimulante de colonia de granulocitos (G-CSF)1 fator estimulante de colonia de granulocitos e macrofagos (GM-CSF), fator estimulante de colonia de macrofagos (M-CSF), heparinase, proteina morfogenetica ossea (BMP), hANP, peptideo do tipo glucagon (GLP-1), VEG-F1 antigeno superficie de hepatite B recombinante (rHBsAg), renina, citoquinas, bradiquinina， bacitracinas, polimixinas, colistinas, tirocidina, gramicidinas, ciclosporinas e analogos sinteticos, e modifica^des farmaceuticamente ativas e fragmentos de enzimas, de citoquinas, de anticorpos, de antigenos e de vacinas.

De acordo com uma forma aIternativa, ο principio ativo e um molecula organica "pequena" hidrofobica ou hidrofilica, opcionalmente ionica, do tipo daqueles que pertencem a familia da antraciclinas, taxoides ou camptotecinas ou do tipo daqueles que pertencem a familia dos peptideos，tal como Ieuprolida ou ciclosporina, e suas misturas.

No significado da presente relatorio, uma molecula "pequena" e em particular uma molecula pequena nao-proteica, por exemplo, destituida de aminoacidos. De acordo com uma outra forma alternativa, ο principio ativo e vantajosamente

escolhido a partir de pelo menos uma das seguintes familias de substancias ativas: agentes para a tratamento de abuso do alcool, agentes para ο tratamento de mal de Alzheimer, anestesicos， agentes para a tratamento de acromegalia, analgesicos, antiasmaticos, agentes para a tratamento de alergias, agentes anticancerigenos, anti-inflamatorios, anticoagulantes e antitromboticos, anticonvulsivantes, antiepileticos, antidiabeticos, antiemeticos, antiglaucomas，anti-histaminicos, anti-infecciososs, antibioticos, antifiingicos, antivirais, antiparquinsonianos, anticolinergicos, antitussigenos, inibidores de anidrase carbonica, agentes cardiovasculares, hipolipidemicos, antiarritmicos, vasodilatores， antianginals, anti-hipertensivos, vasoprotetores, inibidores de colinesterase, agentes para ο tratamento de distiirbios da sistema nervoso central, estimulantes da sistema nervoso central, contraceptivos, promotores de fertilidade, indutores e inibidores da contra^ao uterina, agentes para a tratamento de mucoviscidose, agonistas do receptor de dopamina, agentes para a tratamento de endometriose, agentes para a tratamento de disfung5es ereteis, agentes para a tratamento de fertilidade, agentes para a tratamento de distiirbios gastrointestinais, imunomoduladores e imunosupressores，agentes para a tratamento de distiirbios de memoria, antienxaquecosos, relaxantes musculares, analogos nucleosideo, agentes para ο tratamento de osteoporose, parassimpatomimeticos, prostaglandinas, agentes psicoterapeuticos, sedativos, hipnoticos e tranquilizantes, neuroleticos, anxioliticos， psicoestimulantes, antidepressivos, agentes para tratamentos dermatologicos, esteroides e hormonios, anfetaminas, anoreticos, medicamentos nao-analgesicos para a dor, barbituratos，benzodiazepinas, laxativos, psicotropicos e qualquer combinagao desses produtos.

Quantitativamente, e particularmente vantajoso que a fragao por peso de PA nao associado com as particulas em escala de micron [PA nao-associado] como % por peso seja tal que:

-[PA nao-associado] <1 -preferencialmente [PA nao-associado] <0,5. Sequndo aspecto da inve门c§o: ο processo para a producao das microparticulas por atomizacao de uma solucao ou suspensao coloidal de PO compreendendo ο PA

De acordo com uma forma preferida do processo de acordo com a invengao, ο PO presente na solugao ou suspensao coloidal que se pretende atomizar esta pelo menos parcialmente na forma de nanoparticulas de PO com um tamanho, medido no teste T1, de menos do que 500 nm, preferencialmente de entre 10 e 300 nm e mais preferencialmente ainda de entre 10 e 100 nm.

Vantajosamentej a concentragao de PO na solucao ou suspensao coloidal a ser atomizado e’ por exemplo，entre 5 mg/mL e 100 mg/mL, preferencialmente entre 10 mg/mL e 40 mg/mL.

No contexto da invengao, a associagao PA/PO e produzida antes de e/ou durante a etapa de atomizacao.

Para esta associagao, ο PO e/ou ο PA pode estar na forma solida (preferencialmente um ρό) na forma de uma suspensao liquida. As tecnicas para se associar um ou mais PAs com ο PO antes da etapa de

atomizagao sao descritas em particular no pedido de patente WO-A-00/30618. Elas consistem, por exemplo, em misturar uma suspensao coloidal de PO com uma solucao ou suspensao de PA. De acordo com uma forma alternativa, ο PA na forma em ρό e misturado com a suspensao de PO. De acordo com uma variante interessante desse processo para producao, as

microparticulas do polimero PO associado com pelo menos um principio ativo (PA) sao dispersas em um meio Iiquido essencialmente aquoso，os referidos meios contendo preferencialmente um meio de dispersao M1, e a dispersao obtida e liofilizada.

O Iiofilizado obtido assim facilita a preparagao da formulagao liquida baseada em microparticulas (terceiro aspecto da invenq^o descrito em seguida), porque esse Iiofilizado se disperse rapidamente no Iiquido de reconstituigao usado para preparar a referida formula^ao liquida.

Vantajosamente, ο meio de dispersao M1 e escolhido a partir do seguinte grupo:

i. ions multivalentes cuja polahdade e oposta a polaridade dos grupos ionizaveis do polimero PO e que estao contidas na fase aquosa continua;

ii. pelo menos um composto hidrofilico (preferencialmente utilizavel para uma preparagao injetavel) acrescentado na suspensao/solugao de PO a se atomizar e assim contido nas microparticulas atomizadas de PO/PA;

iii. pelo menos um revestimento de microparticula com pelo menos um filme de pelo menos um composto hidrofilico (preferencialmente utilizavel para uma preparagao injetavel);

iv. a mudanga de pH;

v. e combinag5es de pelo menos dois dos meios (i) a (iv); ο meio (i) sendo particularmente preferido. Para mais detalhes a cerca das modalidades dos meios M1 (i) a (iv), sera feita referencia a seguinte descrigao de meio de dispersao M2.

Do mesmo modo, no que diz respeito ao meio Iiquido de dispersao, ele pode conter os mesmo aditivos como aqueles descritos para ο Iiquido de reconstituigao definido abaixo.

Terceiro aspect。da invencao: Formulacao Iiquida com base rias microparticulas obtidas por atomizacao de uma solucao ou suspensao coloidal de PO compreendendo ο PA

A formulagao de acordo com a invengao pode ser uma formulagao farmaceutica Iiquida para a Iibera^ao prolongada de PA compreendendo uma suspensao coloidal, de baixa viscosidade, baseada em microparticulas de PO assoctado com pelo menos um PA1 microparticulas estas sendo aquelas como definidas acima ou aquelas obtidas pelos proprios processos tambem como definidos acima e nos exemplos abaixo.

Essa formulagao tern a vantagem de ser parenteralmente injetavel e de ser Iiquida sob as condigdes de injegao.

De acordo com a invengao, os qualificadores viscosidade "baixa" ou "muito baixa" vantajosamente correspondem a uma viscosidade dinamica a 20oC de menos do que ou igual a 1000 mPa.s. Preferencialmerite, a viscosidade dinamica da formulagao, medido em 20°C, para um gradiente de cisalhamento de 1000 s-l, e preferencialmerite menos do que ou igual a 500 mPa.s, preferencialmerite entre 2 e 200 mPa.s, por exemplo，entre 1,0 e 100 mPa.s, ate mesmo entre 1,0 e 50 mPa.s.

Medida da viscosidade dinamica

A medida referencia para a viscosidade dinamica pode ser realizada，por exemplo, a 20°C com ο uso de um reometro AR 1000 (ΤΑ Instruments) equipado com geometria em cone/placa (4 cm, 2°). A viscosidade ν e medida para um gradiente de cisalhamento de 10 s"1.

Essa baixa viscosidade torna as formuIa^des da invengao facilmente injetaveis parenteralmente, em particular pelas vias mucosa, subcutanea, intramuscular, intradermica, intraperitoneal ou intracerebral ou em um tumor. A formulagao de acordo com a invengao pode tambem ser administrada atraves da via oral, nasal, pulmonar, vaginal ou ocular, inter alia.

A viscosidade da formulagao Iiquida da invengao e baixa, tanto em temperaturas de injegao correspondentes a temperatura ambiente, por exemplo, entre 4 e 30。C，e na temperatura fisiologica.

As microparticulas secas formadas por atomizagao de POs anfifilicos (por exemplo, poliaminoacido) podem, alem disso, ser facilmente redispersas para formar suspensdes ou solugdes de microparticulas de baixa viscosidade.

Meios de dispersao Mo

Em relagao especificamente a dispersao ou suspensao das microparticulas atomizadas de PO/PA em um Iiquido de reconstituigao para preparer a formulagao, da-se de acordo com a invengao que a referida formuIagao compreende um meio M2 para dispersao de microparticulas de PO/PA.

Esse meio de dispersao M2 pode diferir de acordo com a natureza da fase continua (o que significa dizer do Iiquido de reconstituigao) da suspensao usada para formar a formulagao.

Assim, quatro possibilidades podem ser consideradas em particular de acordo com a invengao:

1. A fase continua da suspensao e essencialmente aquosa.

2. A fase continua da suspensao e uma fase essencialmente organica miscivel em

3. A fase continua da suspensao e uma fase essencialmente organica imiscivel em

4. A fase continua da suspensao e uma fase essencialmente organica miscivel ou agua.

O termo "fase continua essencialmente aquosa" e entendido como ο meio, por exemplo, um Iiquido compreendendo pelo menos 60% em massa de agua.

O termo "fase continua essencialmente organica" e entendido como ο meio, por exemplo, um Iiquido compreendendo pelo menos 60% em massa de fase organica. 1. A fase continua da suspensao e essencialmente aquosa

Diversos tipos de meios de dispersao M2, opcionalmente combinados um com os outros, podem ser considerados ο que significa dizer que ο meio de dispersao M2 © escolhido, por exemplo, a partir do seguinte grupo:

i. ions multivalentes cuja polaridade e oposta a polaridade dos grupos ionizaveis do polimero PO e que estao contidas na fase aquosa continua;

ii. pelo menos um composto hidrofilico (preferencialmente utilizavel para uma preparagao irijetavel) acrescentado na suspensao/solugao de PO para atomizar e assim contido nas microparticulas atomizadas de PO/PA;

iit. pelo menos um revestimento de microparticula com pelo menos um filme de pelo menos um composto hidrofilico (preferencialmente utilizavel para uma preparagao injetavel);

iv. a mudanga de pH;

v. e combinagdes de pelo menos dois dos meios (i) a (iv). ο meio (i) sendo particularmente preferido.

(i) Meios de dispersao baseados em ions polivalentes No caso onde PO exibe grupos ionizaveis IGs, ο meio de dispersao M2 pode

compreender ions polivalentes, a polaridade dos quais e a oposta da polaridade dos grupos ionizaveis IGs (pelo menos parcialmente ionizados) do polimero PO, que sao introduzidos

10

agua. agua. nao em na fase continua aquosa durante a reconstituigao da suspensao/solugao que forma a suspensao.

Dentro do significado da inven^ao, ο termo "ions polivalentes" denota, por exemplo, ions divalentes, ions trivalentes, ions tetravalentes e misturas desses ions.

No caso onde ο PO exibe grupos IG anionicos, os ions polivalentes sao cations

polivalentes, preferencialmente cations divalentes, mats preferencialmente ainda selecionados a partir do grupo que consiste em: Mg2+, Ca2+, Zn2+, Fe2+’ Cu2+ e suas misturas, ou cations trivalentes, mais preferencialmente ainda selecionados a partir do grupo que consiste em: Al3+, Fe3+ ou suas misturas. E possivel que a formulagao de acordo com a invengao, alem de ions polivalentes,

compreenda ions monovalentes (por exemplo, cations), os quais podem ser ativos na agregagao da nanoparticulas para dar microparticulas.

Esses ions polivalentes sao introduzidos na formulagao da invengao preferencialmente na forma de uma solugao aquosa de sal (organico ou inorganico), por exemplo, uma solugao de sulfate, cloreto，acetato, gluconato ou gIutamato (ou outro aminoacido anionico) de cations polivalentes.

Esse meio de dispersao M2 baseado em ions polivalentes e mais preferencialmente adequado no caso onde os POs anfifilicos (por exemplo, um (co)poliaminoacido) sao relativamente hidrofilicos. (ii) e (Hi) Meios de dispersao M2 baseados em composto hidrofilico(s) ou

compreendendo pelo menos um revestimento baseado em composto hidrofilico(s)

O meio de dispersao M2 pode compreender essencialmente:

-pelo menos um composto hidrofilico (preferencialmente que possa ser usado para uma preparagao injetavel) acrescentado da suspensao/solugao de PO para ser atomizado e assim presente nas microparticulas atomizadas de PO/PA;

-ou pelo menos um revestimento das microparticulas com pelo menos um filme de pelo menos um composto hidrofilico (preferencialmente que possa ser usado para uma preparagao injetavel).

Esse meio de dispersao M2 pode ser incorporado na formulagao de acordo com diversos metodos.

De acordo com um primeiro metodo, pelo menos um composto hidrofilico escolhido dentre aqueles que podem ser usados em uma preparagao injetavel e acrescentado a suspensao/solugao de PO para ser atomizado, esse composto hidrofilico preferencialmente sendo selecionado a partir do grupo que consiste em: — aminoacidos (por exemplo, lisina, arginina, glicina);

polialquileno glicois, preferencialmente polietileno glicois;

—copolialquileno glicois, preferencialmente etileno glico/propileno glicol copolimeros (do tipo poloxamero ou Pluronico ou Lutrol); — polimeros de celulose e seus derivados, preferencialmente carboxialquilceluloses (por exemplo, carboximetilceluloses) ou alquilceluloses (por exemplo， metilceluloses);

—> sacarideos hidrogenados ou nao-hidrogenados, tais como trealose, sorbitol, manitol ou sucrose;

—poliois, tais como propileno glicol ou glicerol;

—gelatirias, preferencialmente gelatinas hidrolisadas;

—(co)polimeros nitrogenosos, preferencialmente aqueles presentes no grupo compreendendo poliacrilamidas, poli-N-vinilamidas, polivinilpirrolidonas (PVPs) e poli-N-vinil- lactamas;

—> poli(alcool vinilico)s (PVAs);

—poli(glutamato de sodio);

—e suas misturas;

os referidos compostos do revestimento hidrofilico preferencialmente compreendendo pelo menos um polimero hidrofilico.

De acordo com um segundo metodo, as microparticulas sao revestidas com pelo menos uma camada de pelo menos um composto hidrofilico como definido acima.

Nesse segundo metodo, ο composto hidrofilico preferencialmente compreende pelo menos um polimero hidrofilico escolhido a partir de compostos hidrofilicos como definido acima.

O meio de dispersao M2 (ii) baseado em pelo menos um composto hidrofilico tern provado ser particularmente adequado para os POs anfifilicos exibindo uma hidrofobicidade suficientemente elevada, por exemplo, um nivel de grupos HG de mais do que ou igual a 10 mol% para um PO composto de pelo menos um poliaminoacido.

O revestimento [meio M2 (iii)] das microparticulas com tal camada de composto hidrofilico e biocompativel pode ser realizado, por exemplo, por duas atomizagdes sucessivas, a segunda atomizagao sendo realizada em uma suspensao de particulas em um solvente imiscivel com as referidas microparticulas pode contribuir para facilitar a dispersao dessas particulas.

Tal meio de dispersao (iii) por revestimento hidrofilico das microparticulas permite que a suspensao de microparticulas permanega confiavel e est^vel pelo menos por alguns dias, ο que torna facil a manipulagao.

Vantajosamente, a combinagao de um meio (ii) ou (iii) para a dispersao das microparticulas baseadas em composto(s) hidrofilico(s) e de um meio (i) para a dispersao baseada em ions divalentes presentes na fase aquosa durante a reconstitui^ao da formulagao torna possivel a dispersao acelerada. De acordo com uma outra modalidade especifica, a fase aquosa continua ou ο revestimento hidrofilico pode tambem compreender pelo menos um tensoativo injetavel, tal como Tween® 80，lecitina, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina ou um copolimero de polioxipropileno/polioxietileno (nome comercial: Poloxamero1 Pluronico1 Lutrol).

(iv) Meios de dispersao M2 pormudanga de pH

Um outro meio de dispersao que pode ser considerado de acordo com a invengao consiste em um meio de dispersao por mudan^a de pH，preferencialmente antes da atomizagao. Esse tipo de meio tem provado ser adequado em particular no caso onde os POs anfifilicos (por exemplo, poliaminoacido) sao um composto que carregam grupos funcionais ionizavel e que sao, alem disso, altamente hidrofilicos, ο que significa dizer que compreende, por exemplo, menos do que 10 mol% de grupos hidrofobicos HGs.

Na verdade, ο uso de tal meio M2 (iv) torna possivel ο aumento da hidrofobicidade dos POs anfifilicos por Ievar ο pH a um valor tal que os grupos funcionais ionizaveis do PO (por exemplo, da poliaminoacido) se tornem nao-ionizados (por exemplo, acidificagao no caso onde ο PO e um poliaminoacido hidrofilico de tipo poliGlu ou poliAsp).

Preferencialmente, esse meio de dispersao M2 (iv) por mudanga de pH antes da atomizagao e aplicado a suspensao/solugao de PO imediatamente antes da atomizagao.

Esse meio de dispersao M2 (iv) por mudanga de pH antes da atomizagao pode ou nao ser combinado:

• com ο meio de dispersao M2 (i) baseada em ions polivalentes empregados apos atomizagao, na eta pa de reconstitui^ao; ou

• com ο meio de dispersao M2 (ii) ou (iii) baseado em composto hidrofilico, preferencialmente por revestimento M2 (iii) as microparticulas de pelo menos um polimero

hidrofilico.

2. A fase continua da suspensao e uma fase essencialmente orqanica miscivel em

agua

O meio de dispersao consiste nesta fase organica miscivel em agua.

Esta fase pode assim, por exemplo, compreender etanol, N-MetiIPirroIidona (NMP)， DiMetiI Sulfoxido (DMSO), isopropanol，glicerol ou glicofurol (polietileno glicol eter de alcool tetraidrofurfurilico).

3. A fase continua da suspensao e uma fase essencialmente orqanica imiscivel em

agua

De acordo com uma modalidade vantajosa, ο meio de dispersao compreende um Iiquido lipofilico, cujo ponto de fusao e preferencialmente menos do que ou igual a 15°C, presente na fase continua organica imiscivel em agua.

Preferencialmente, ο Iiquido lipofilico compreende pelo menos uma mistura de triglicerideos de acidos graxos saturados ou pelo menos um oleo vegetal ou pelo menos um Iipideo ou pelo menos um derivado de Iipideo ou pelo menos um acido graxo ou pelo menos um derivado de acido graxo.

Mais preferencialmente, ο Iiquido Iipofilico compreende:

• uma mistura de triglicerideos de acidos graxos C8-C10 saturados resultantes de oleo de coco, por exemplo, que sao comercializados sob ο nome "Miglyol 812" por Sasol;

• pelo menos um oleo vegetal, preferencialmente oleo de soja, oleo de palma, oleo de linhaga, oleo de semente de algodao, oleo de gergelim, oleo de girassol ou oleo de amendoim;

• pelo menos um lipideo, preferencialmente uma Iecitina liquida, vitamina E sintetica ou natural;

• pelo menos um derivado de lipideo, preferencialmente araquidoilfosfatidilcolina e estearoilfosfatidilcolina,

• pelo menos um acido graxo, preferencialmente acido oleico, acido miristico, acido palmitico, acido estearico e seus sais;

• pelo menos um derivado de acido graxo, preferencialmente um derivado mono-, di- ou triclicerideo, oleato de etila, Iauril lactato, estearato de glicerila’ palmitato de sorbitan, estearato de sorbitan, monoleato ou polissorbato de sorbitan;

• e suas misturas;

com a condi9§o de acordo com a qual, no caso oride alguns da produtos Iistados acima considerados separadamente nao sao Iiquidos em uma temperatura de menos do que ou igual, por exemplo, a 15°C, entao esses produtos sao misturados com outros de modo que eles sejam Iiquidos em uma temperatura de menos do que ou igual, por exemplo, a 15°C.

Derivados de triglicerideos de acidos graxos sao particularmente preferidos, em particular uma mistura de triglicerideos de acidos graxos C8-C10 saturados resultantes de oleo de coco, por exemplo, que sao comercializados sob ο nome "Miglyol 812" por Sasol. Outros triglicerideos compreendendo cadeias Iongas de acidos graxos estao presentes em particular em oleo vegetais, tal como oleo de soja, oleo de palma, oleo de linhaga, oleo de semente de algodao, oleo de gergelim, oleo de girassol ou oleo de amendoim.

Os pos atomizados de PO/PA sao facilmente dispersos nesta fase organica imiscivel em agua para dar suspens5es estaveis de microparticulas as quais permanecem integra s por di versos dias e sao assim novamente de facil manipula^ao aqui. Essa dispersao e particularmente rapida sem que seja necessario adicionar um outro ou outros meios de dispersao, mesmo que esta possibilidade possa ser considerada.

4. A fase contiriua da susoensao e uma fase essencialmente organica miscivel ou imiscivel em aqua De acordo com um vantajoso processamento alternative) compativel com a segunda e a terceira possibilidade em relagao a natureza da fase continua da suspensao/solu?ao que constitui a formulagao, ο meio de dispersao compreende um revestimento das microparticulas com pelo menos um composto de revestimento formador de filme (preferencialmente que possa ser usado para uma preparagao injetavel).

Preferencialmente, ο composto de revestimento formador de filme compreende pelo menos um polimero hidrofobico selecionado a partir do grupo que consiste em polilactidas; poliglicolidas; poli(lactida-co-glicolida)s; poliortoesteres; polianidridas; poli(acido hidroxibutirico)s; policaprolactonas; poli(carbonato de alquila)s; polimeros PO irisolijveis em agua; seus derivados e suas misturas.

De acordo com uma forma alternativa, ο composto de revestimento formador de filme e de Iipideo natureza e exibe um ponto de fusao preferencialmente de mais do que ou igual a 15°C e compreende pelo menos um Iipideo ou pelo menos um derivado de lipideo, ou pelo menos um oleo vegetal, ou pelo menos um acido graxo ou pelo menos um derivado de acido graxo ou pelo menos uma mistura de triglicerideos de saturado acidos graxos ou uma mistura desses produtos.

De acordo com uma outra modalidade vantajosa, a fase continua organica，por exemplo, hidrofobica, ou ο revestimento hidrofobica pode tambem compreender pelo menos um tensoativo injetavel, tal como Tween® 80, lecitina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina ou um copolimero de polioxipropileno/polioxietileno (nome comercial: Poloxamero, Pluronico, Lutrol).

Veiculos/estabilizantes

Tambem pode ser vantajoso, para facilitar as propriedades de dispersao na fase aquosa e/ou para ainda melhorar a estabilidade das suspensoes aquosas，que a formuIa^ao injetavel compreenda outros aditivos, por um lado, aqueles denotados abaixo por "veiculos/estabilizantes" e, por outro lado, veiculos convencionais.

Os veiculos/estabilizantes podem ser selecionados a partir do grupo que consiste

em:

一 nanoparticulas de pelo menos um polimero PO, ο PO sendo um copolimero anfifilico hidrossoliivel e biodegradavel que carrega grupos hidrofobicos (HGs) e grupos ionizaveis Ndrofilicos pelo menos parcialmente ionizados (IGs) que formam espontaneamente uma suspensao coloidal de nanoparticulas em agua, em pH = 7,0, sob condiQ5es isotonicas;

—aminoacidos;

— polialquileno glicois, preferencialmente polietileno glicois;

—copolialquileno glicois, preferencialmente copolimeros de etileno glicol/propileno

glicol (do tipo Poloxamero, Pluronico ou Lutrol); 一 polimeros de celulose e seus derivados, preferencialmente carboxialquilceluloses (por exemplo, carboximetilceluloses) ou alquilceluloses (por exemplo, metilceluloses);

esteres de sorbitan e de acido(s) graxo(s), preferencialmente esteres de polioxialquileno (por exemplo, etileno) glico丨 e de pelo menos um acido (por exemplo, acido oleico), do tipo Tween (ou polissorbato);

—tensoativos baseados em fosfolipidios e em polialquileno glicois, preferencialmente em polietileno glicois;

—sacarideos hidrogenados ou nao-hidrogenados, tais como trealose, sorbitol, manitol ou sucrose;

—> poliois, tais como propileno glicol ou glicerol; —gelatinas, preferencialmente gelatinas hidrolisadas;

—(co)polimeros nitrogenosos, preferencialmente do grupo compreendendo poliacrilamidas, poli-N-vinilamidas, polivinilpirrolidonas (PVPs) e poli-N-vinil-lactamas; — poli(alcool vinilico)s (PVAs);

—e suas misturas.

Um dos veiculos preferidos (estabilizantes) de acordo com a invengao e formado por nanoparticulas de pelo menos um polimero PO que e identico a ou diferente de (preferencialmente identicos a) aquele que constitui as microparticulas. A quantidade de veiculo/estabilizante empregada na formulagao e

preferencialmente entre 0,01 e 10% por peso e mais preferencialmente ainda entre 0,1 e 5% porpeso.

Em relagao aos estabilizantes compreendendo nanoparticulas, eles sao vantajosamente usados na formulagao em uma proporgao de 1,5 a 3,5% por peso, por exemplo, de 2,0 a 3,0 («2,5)% por peso.

O Iiquido de reconstituicao

Em adigao ao meio de dispersao descrito acima, ο Iiquido de reconstituicao empregado na prepara^ao da formulagao de acordo com a invengao pode compreender, por exemplo:

- pelo menos um tampao ou pelo menos um sal injetavel (tampao fosfato, tampao

citrato, cloreto de sodio) em uma concentragao, por exemplo, entre 0,001 M e 0,1 M1 preferencialmente entre 0,005 M e 0,02 M, esse tampao ou esse sal injetavel tornando possivel ajustar ο pH da solugao;

-pelo menos um tensoativo injetavel, preferencialmente do tipo polissorbato, tal como Tween® 20 e Tween® 80，ou doe tipo Poloxamero, tal como Lutrol® F38，Lutrol® F68 ou Lutrol® F127, em concentra$6es，por exemplo, de entre 0,01% e 2%, preferencialmente

entre 0,05 e 0,5%. O Iiquido de reconstituigao pode adicionalmente compreendem agentes de densificagao, tal como sacarideos, ou seja, inter alia, sucrose, D-manitol ou trealose, em concentrates de entre 0,1% e 10%, preferencialmente entre 0,5 e 5%. A solugao de reconstituigao pode tambem compreender um polimero viscosificante injetavel selecionado a partir do grupo que consiste em polissacarideos, polimeros sinteticos (por exemplo, carboximetilcelulose de sodio), poli(alcool vinilico), polivinilpirrolidona, polialquileno glicois (por exemplo, polietileno glicois), e suas misturas.

O uso de microparticulas secas de POs anfifilicos (por exemplo, poliaminoacido) e ο uso de um meio de reconstituiQao ad hoc tornam assim possivel alcan^ar um objetivo duplo, que e ser capaz de obter formuIagSes farmaceuticas que sao tanto estaveis como facilmente dispersiveis para permitir que elas sejam injetados parenteralmente.

Em adigao aos veiculos/estabilizantes objetivados acima para a melhora da dispersao e a estabilidade, os outros veiculos convencionais que podem ser acrescentados a suspensao/solu^ao a ser atomizada ou a formulagao de acordo com a invengao sao, por exemplo, antimicrobianos, tamp5es, antioxidantes ou agentes que tornam possivel ajustar a isotonicidade os quais sao conhecidos por um tecnico no assunto. Pode-se fazer referencia, por exemplo, ao trabalho: Injectable Drug Development, P.K. Gupta et al.，Interpharm Press, Denver, Colorado, 1999.

Essa adigao de veiculos convencionais pode ser realizada tanto na fase aquosa de dispersao ou na solugao/suspensao antes da atomizagao.

Aplicacao da formulacao Iiauido de acordo com a invencao

Embora a formulagao de acordo com a inven?ao seja preferencialmente uma formulagao farmaceutica, isto, entretanto, nao exclui formulag5es cosmeticas, de alimentos saudaveis ou de protegao vegetal compreendendo pelo menos um PO como definido acima e pelo menos um PA.

Quarto aspecto da invencao: Kit para reconstituir a formulacao de acordo com a

inve 门

As microparticulas de PQIPk e os Iiquidos de reconstituigao essencialmente aquosos, os Iiquidos de reconstituigao essencialmente organicos misciveis em agua e os Iiquidos de reconstituigao essencialmente organicos imisciveis em agua sao definidos acima.

Quinto aspecto da invencao: Reconstituir processo, em particular para reconstituir a formulacao de acordo com a invencao

As microparticulas de PO/PA e os Iiquidos de reconstituigao essencialmente aquosos, os Iiquidos de reconstituigao essencialmente organicos misciveis em agua e os Iiquidos de reconstituigao essencialmente organicos imisciveis em agua sao definidos

acima. De acordo com a ΐηνβηςϊδο，e possivel considerar a realiza^ao de uma filtragao esterilizante, atraves de filtro com uma porosidade igual，por exemplo, a 0,2 μηι, da suspensao Iiquida de nanoparticulas da qual resultam as particulas em escala de micron da formuIagao de acordo com a invengao. A agregagao sob condigdes estereis de acordo com ο metodo de preparagao descrito acima torna assim possivel injetar diretamente a formulagao em um paciente.

Sexto aspecto da invencao: Formulacao farmaceutica solida

Essa formulagao para a Iiberagao prolongada de PA compreende uma forma seca em ρό para inalagao e administragao pulmonar baseada em microparticulas de POIPA como definido acima.

Outros aspectos da invenpao

A presente invengao e tambem objetivada em produtos solidos derivados das microparticulas de PO de acordo com a invengao.

Na pratica, esses produtos derivados podem ser compostos em particular de pos, geis, implantes ou filmes, inter alia.

Assim, a inven^ao e objetivada em produtos derivados da formulagao de acordo com a invengao, considerados como tal, independente de seu processo de preparagao.

A inven?ao tambem se refere a um metodo de tratamento terapeutico que consiste essencialmente em administrar a formulagao como descrita no presente relatorio pelas vias parenteral, mucosal, subcutanea, intramuscular, intradermica, intraperitoneal ou intracerebral ou em um tumor. A formulagao de acordo com a invengao pode tambem ser administrada pelas vias oral, nasal, pulmonar, vaginal ou ocular, inter alia.

De acordo com uma forma alternativa especifica da invengao, esse metodo de tratamento terapeutico consiste em administrar a formulagao como descrita acima por inje^ao parenteral: subcutanea, intramuscular, intradermica, intraperitoneal ou intracerebral ou injegao em um tumor, preferencialmente de modo que ela forme uma camada depositada no local de injegao.

A invengao ira ser mais bem entendida e suas vantagens e modalidades alternatives irao claramente emergir dos seguintes exemplos que descrevem a sintese dos POs formados por poliaminoacidos enxertados por um grupo hidrofobico, sua conversao a um sistema para Iiberagao prolongada de PA, ou seja, a uma formulagao de acordo com a invengao (ρό de microparticulas secas), e as caracteristicas de estabilidade e redispersibilidade de tais sistemas.

Exemplos:

Exemplo 1: Sintese de um Polimero Anfifilico PO-A

Sintese de um poliqlutamato enxertado por α-tocoferol de oriqem sintetica

g de um poli(acido α-L-glutamico) (com um peso equivalente a aproximadamente 16.900 Da em relagao a um padrao de polioxietileno e obtido por polimerizagao de NCAGIuOMe1 seguida por hidrolise, como sao divulgados no pedido de patente FR-A-2 801 226) sao dissolvidos em 288 mL de dimetilformamida (DMF) por aquecimento em 80°C ate ο polimero ter sido dissolvido. A solu^ao e resfriada a 15°C e 2,5 g de D,L-a-tocoferol (>98%, obtido de Fluka®), dissolvidos previamente em 8 mL de DMF1 280 mg de 4-dimetilaminopiridina, dissolvidos previamente em 1 mL de DMF1 e 1,6 g de diisopropilcarbodiimida, dissolvidos previamente em 6 mL de DMF1 sao sucessivamente acrescentados. Apos agitagao por 3 horas, ο meio reacional e vertido em 1200 mL de agua compreendendo 15% de cloreto de sodio e acido cloridrico (pH = 2). O polimero precipitado e recuperado em seguida por filtragao e Iavado com acido cloridrico a 0,1 N, com agua e com diisopropil eter. O polimero e em seguida seco em um forno a vacuo em 40°C. Um rendimento da ordem de 90% e obtido. A massa molar, medida por cromatografia de exclusao esterica, e 15.500 em relagao a um padrao de polioxietileno. O nivel de tocoferol enxertado, estimado por proton RMN espectroscopia, e 5,1 mol%. Uma suspensao de nanoparticulas de polimero em agua e obtida por dissolu^ao da mesma em agua, ο pH sendo ajustado (neutralizagao de carboxilatos) a 7 +/-1 ·

Exemplo 2: Sintese de um Polimero Anfifilico PO-B

O Exemplo 2 e adaptado do exemplo 1, uma taxa de enxerto de 20% sendo objetivada.

Exemplo 3: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A Contendo IFN-o2b

Preparacao de uma solucao compreendendo 20 mq/q de polimero e 0.25 ma/a de

IFN

200 g de solucao a 30 mg/g de polimero PO-A sao introduzidos em um frasco de 500 mL. 68 g de agua sao em seguida introduzidos no frasco compreendendo ο polimero. Uma solugao congelada de IFN-A-2b concentradas a 2,8 mg/g e descongelada a 25°C por 1 h e 26,8 g desta solugao descongelada sao introduzidos no frasco compreendendo a solugao de polimero. A mistura e deixada em temperatura ambiente por 14 h.

A solugao e filtrada atraves de um filtro esterilizante de 0,2 μηι.

Atomizaoao da Solucao de PoIimero-IFN

A solugao e atomizada em um dispositivo de Iiofilizagao do tipo Bijchi B290. A solucao Iiquida e sugada em um taxa de 5 mL/min e nebulizada atraves de um bocal de aspersao alimentado com nitrogenio (7 bar, 900L7h). A taxa do fluxo de sucgao (ar secante) e de 40 m3/h. A temperatura de entrada e mantida em 90°C, ο que results, sob estas condi^oes, em uma temperatura de saida de 45°C.

Caracterizacao das microparticulas obtidas:

O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 5 μηη. Apos a dispersao do ρό em agua na concentragao por atomiza?ao, ο ensaio IFN por HPLC e identico aquele da solugao antes da atomiza^ao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 4: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A Contendo 1FN-A2b E Polissorbato 80

A solugao de polimero PO e de interferon e preparada de um modo identico ao exemplo 3. 0,9 g de polissorbato 80 sao acrescentados a solugao antes da atomiza?ao. Atomizacao da Solucao de PoIimero-IFN na Presenca de Polissorbato A solugao e atomizada sob condi^es identicas aquelas descritas no exemplo 3. Caracterizacao das Microparticulas Obtidas:

O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 5 μιη. Apos a dispersao do ρό em agua na conceritragao por atomizagao, ο ensaio de IFN por HPLC e identico aquele da solu?ao antes da atomizagao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 5: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala Acidificadas de

Polimero PO-A Contendo IFN-g2b

A solugao de polimero PO-A e de IFN e preparada de um modo identico ao exemplo 3. E em seguida diluida por adigao de agua de modo que a concentragao de polimero PO-A seja de 15 mg/g (a concentragao de IFN entao sendo 0,188 mg/g). Apos filtragao atraves de um filtro de 0,2 μιη, a solu?ao e acidificada pela adigao de HCI a 1N ate que um pH de 4 e obtido. A solugao assim obtida e opalina.

Atomizacao da Solucao Acidificada de PoIimero-IFN

A solu?ao e atomizada sob condigdes identicas aquelas descritas no exemplo 3. Caracterizacao das Microparticulas Obtidas: O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 5 μηι.

Apos a dispersao do ρό em agua na concentragao por atomizagao, ο ensaio de IFN por HPLC e identico aquele da solugao antes da atomiza?ao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 6: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A que sao Revestidas com PVP e que Contem IFN-a2b

Um ρό formado de microparticulas secas de polimero PO-A e de IFN e obtido de uma mistura de PO-A/IFN de acordo com ο protocolo usado no exemplo 3.

Na conclusao da etapa de atomizagao, 1,5 g desse ρό e ressuspenso em um solugao etanolica compreendendo 7 g/L de polivinilpirrolidona (PVP) de grau injetavel do tipo PVP K30. A suspensao etanolica e agitada por 2 h e entao e em seguida atomizada uma segurida vez no dispositivo de Iiofiliza^ao do tipo Biichi B290 equipado com um sifao para extragao para solverite organico (Inert Loop a -20。C) e operando como um circuito fechado sob nitrogenio. A solu?ao Iiquida e sugada em um taxa de 5 ml_/min e nebulizada atraves de um bocal de aspersao alimentado com nitrogenio (7 bar - 670 l_/h). A taxa do fluxo de sucgao (ar secante) e de 40 m3/h. A temperatura de entrada e mantida em 80°C, ο que results, sob estas condigoes, em uma temperatura de saida de 55°C.

Caracterizacao das Microparticulas Obtidas:

O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 6 μηπ.

Apos a dispersao do ρό em agua na concentrag^o por atomizagao, ο ensaio de IFN por HPLC e identico aquele da solugao antes da atomizagao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 7: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero Po-B

Contendo IFN-a2b

O protocolo para ο preparo da solugao de polimero-IFN e para atomizar e identico aquele descrito no exemplo 3’ ο polimero PO-A sendo substituido pelo polimero PO-B.

Caracterizacao das Microparticulas Obtidas: O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 4 pm.

Apos a dispersao do ρό em agua na concentragao por atomiza?ao, ο ensaio de IFN por HPLC e identico aquele da solugao antes da atomizagao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 8: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A Contendo hGH

Preparacao da solucao concentrada de hGH:

60 g de uma solu?ao de hormonio de crescimento humano recombinante (concentragao de 3,9 mg/g) sao descongelados a 25°C por 1h e 30min e concentrados aproximadamente 6 vezes por ultrafiltragao frontal atrav6s de um membrana com 10 kD ate uma que concentra?ao de 24 mg/g e obtida (monitorando-se por HPLC).

Mistura com a solucao de polimero

52 g de um solugao concentrada a 30 mg/g de polimero PO-A sao diluidos a 19,5 mg/g por adigao de 28 g de agua. 8 g da solucao a 24 mg/g de hGH sao Ientamente vertidos sobre a solucao de polimero assim diluida. A mistura e deixada durante a noite em temperatura ambiente e entao filtrada atraves de um filtro esterilizante de 0,2 μιτι.

Atomizacao da Solucao de Polimero/hGH

A solugao e atomizada sob condigoes identicas aquelas descritas no exemplo 3.

Caracterizacao das Microparticulas Obtidas:

O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 5 μιη. Apos a dispersao do ρό em agua na concentra?ao por atomizagao, a hGH ensaio

por HPLC e identico aquele da solugao antes da atomizagao e nenhuma forma desnaturada e detectada. Exemplo 9: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A Contendo 11-2

Preparacao da solucao concentrada de IL-2:

100 g de uma solugao congelada de IL-2 na concentragao de 2 g/L estabilizada por SDS sao descongelados em temperature ambiente e entao a soluQao e resfriada a uma temperatura de entre O e 2°C. 100 g de etanol absoluto sao Ientamente acrescentados a essa solugao de forma a precipitar a proteina. O precipitado e recuperado por filtragao atraves de uma membrana com 0,65/0,45 μιη em uma celula de frontal diafiltragao e Iavado com 200 g de agua. O precipitado e seco por aplicagao de uma corrente de nitrogenio. O precipitado e entao dissolvido em 10 g de pre-resfriado (<5。C) hidroxido de sodio a 0,02N de forma a obter uma solugao Iimpida de proteina a 20 mg/g e pH = 12 destituida de SDS. O ensaio exato da solugao e determinado por um metodo HPLC.

Mistura com a Solucao de Polimero

96 g de uma solucao concentrada de polimero PO do exemplo 1 (a 30 mg/g) sao diluidos por adi^ao de 39 g de agua. 9 g da solucao anterior concentrada a 20 mg/g de IL-2 sao Ientamente vertidos sob re a solugao de polimero assim diluida.

A mistura compreendendo 20 mg/g de polimero PO e 1,25 mg/g de IL-2 e deixada durante a noite em temperatura ambiente e entao filtrada atraves de um filtro esterilizante com 0,2 μιτι.

Atomizacao da Solucao de Polimero-IL-2

A solugao e atomizada sob condig5es identicas aquelas descritas no exemplo 3.

Caracterizacao das Microparticulas Obtidas:

O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 5 μπη.

Apos a dispersao do ρό em agua na concentragao por atomizagao, a IL-2 ensaio por HPLC e identico aquele da solucao antes da atomizagao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 10: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A Contendo Insulina

Preparacao de 40 q de uma solucao concentrada a 20.3 mq/q de insulina:

0,83 g de insulina humana recombinante (em ρό) com uma atividade de 28,7 Ul/g e com um conteuido de agua de 2,5% sao introduzidos em um fraco de vidro. 23,62 g de agua sao acrescentados e a insulina e dispersas com agitagao magnetica lenta. 6,22 g de HCI a 1N sao acrescentados ate que uma solucao acidica e Iimpida de insulina e obtida. 9,32 g de hidroxido de sodio a 1N sao entao acrescentados de forma obter uma solucao final Iimpida com um pH de entre 7 e 8. A solucao de insulina e filtrada atraves de um filtro esterilizante de 0,2 μιη.

Mistura com a Solucao de Polimero 37,66 g da solugao de insulina anterior concentrada sao Ientamente vertidos (com agitagao magnetica) sobre 220 g de solugao de polimero PO a 30 mg/g. 72,34 g de agua sao acrescentados a solugao. A mistura e deixada em temperatura ambiente por 4 horas e entao filtrada atraves de um filtro de 0,2 μιτι.

Atomizacao da Solucao de Polimero-Insulina

A solugao e em seguida atomizada em um dispositivo de Iiofilizagao do tipo Biichi B290. A solugao Iiquida e sugada em um taxa de 5 mUmin e nebulizada atraves de um bocal de aspersao alimentado com nitrogenio (7 bar - 900 Uh). A taxa do fluxo de suc^ao (ar secante) e de 40 m3/h. A temperatura de entrada e mantida em 120oC，ο que results, sob estas condig5es, em uma temperatura de saida de 70°C.

Atomizacao da solucao de Polimero-Insulina

A solugao e atomizada sob condigdes identicas aquelas descritas no exemplo 3.

Caracterizacao das Microparticulas Obtidas:

O tamanho das particulas obtidas (de acordo com ο teste TO) e D50 = 5 pm. Apos a dispersao do ρό em agua na concentragao por atomiza^ao, a insulina

ensaio por HPLC e ideritico aquele da solugao antes da atomizagao e nenhuma forma desnaturada e detectada.

Exemplo 11: Caracteristicas das Microparticulas Obtidas de acordo com a Irivencao: Tamanho e Estabilidade O tamanho das microparticulas e medido de acordo com ο teste TO e a estabilidade

de acordo com ο teste S1. A desnaturagao da proteina e avaliada por HPLC comparando-se um cromatograma da formulagao antes de e apos a atomizagao.

Exemplos Tamanho D50 de acordo com TO (Mm) Tamanho D50 apos submeter a estabilidade de acordo com ST1 (μιτι) Des门aturag§o da proteina realizada pela atomiza?ao* 3 5 5 nenhuma 4 5 5 nenhuma 5 5 nenhuma 6 6 5 nenhuma 7 4 5 门 enhumsi 8 5 5 nenhuma 9 5 5 nenhuma 5 5 nenhuma

Os resultados demonstram que a atomizagao das proteinas na presenga de um poliaminoacido anfifilico torna possivel reter a estabilidade da proteina. Na forma solida, ο ρό e estavel de acordo com ο protocolo descrito. E uma condigao inevitavel e e antecipada que a estabilidade dos pos e de pelo menos dois anos a 5°C. A atomizagao e um metodo capaz de desnaturar a proteina. A analise por HPLC mostra que nenhuma forma de desnaturagao e observada em comparagao aos cromatogramas antes de e apos a atomizagao.

A atomizagao de uma proteina na presents de um poliaminoacido anfifilico resulta em microparticulas que sao estaveis ao Iongo do tempo e nao causa desriaturagao da proteina.

Esses pos podem ser usados em uma forma solida (inala^ao, inje?ao sem agulha por uma pistola de pressao, por exemplo) ou na forma de uma suspensao injetavel apos reconstituigao em um meio apropriado.

Exemplo 12: Reconstituicao de Suspensao de Partida dos Pos dos ExemDlos 3 a

IO1

Os pos sao reconstituidos em tres meios diferentes de acordo com ο protocolo descrito para a realiza?ao do teste DP 1:

A. Uma solugao salina aquosa de tampao fosfato em pH 7,4

B. Uma solugao aquosa de cloreto de magnesio a 0,1 M

C. Uma solugao de triclicerideo de acido caprico (Miglyol® 812)

As amostras sao em seguida avaliadas pela realiza^ao das seguinte etapas:

-dispersao em um dos meios citados acima

-transferencia para uma seringa e entao injegao atraves de uma agulha de 25G.

A suspensao e considerada como tendo boas propriedades se pelo menos 80% forem recuperados por sucgao/injegao atraves de uma agulha de 25G.

Resultados:

Exemplos Meio A Meio B Meio C Teste DP1 Estabilida de ST2 Teste DP1 Estabilida de ST2 Teste DP1 Estabilida de ST2 3 Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo 4 Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Nao esta de acordo Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo 6 Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo 7 Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo 8 Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo 9 Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Nao esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo Esta de acordo

Tambem tem sido medido que a proteina nao e desnaturada apos reconstitui^ao nos meios A, B e C durante ο teste de estabilidade.

Esses resultados mostram que apenas com a composi^ao do Exemplo 7 e possivel obter uma suspensao estavel e injetavel das microparticulas em agua tamponade por PBS em pH = 7,4. Para a maioria dos exemplos (exceto ο 5)， ο meio de reconstituigao compreendendo um sal divalente torna possivel melhorar essas propriedades. Em meio Miglyol, tod a as formulag5es sao facilmente dispersiveis, injetaveis e estaveis.

A combinagao dessas propriedades nao e obtida facilmente de acordo com ο polimero usado. E credito dos inventores ter descoberto, apos diversas testes, que certos veiculos e meios de reconstitui^ao tornam possivel obte-las.

Exemplo 13: Medida de Viscosidade das Formulacoes de Reconstituicao Uma dispersao a 30 mg/mL dos pos nos meios BeC dos exemplos anteriores (exceto ο 5 no meio B) da suspensoes estaveis de baixa viscosidade; no meio B, a viscosidades medidas sao todas menos do que 10 mPa.s e no meio C as viscosidades sao todas da ordem de 30 a 40 mPa.s.

Por modo de comparagao, uma composigao dos mesmos polimeros na forma nanoparticulada de acordo com a anterioridade nao pode ser obtida Nessa concentragao (30 mg/mL) com valores de viscosidade aceitaveis (<100 mPa.s).

Exemplo 14: Preparacao de Particulas Secas em Micro-Escala de Polimero PO-A contendo !FN-a2b obtida em uma Forma de Po Liofilizado

As particulas sao primeiramente preparadas como descrito no exemplo 3. A etapa de atomizagao e realizada sob condi^des assepticas e as particulas sao recuperadas em um recipiente esteril.

Redispersao das Particulas na Presenca de Ions Mq2+ Logo apos a fase de atomizagao, as particulas sao recuperadas e redispersas sob

condig5es assepticas em uma solugao aquosa de MgCI2 a 0,1 M. A quantidade de soIugao de MgCI2 acrescentada e ajustada de modo que a concentragao do polimero PO-A na suspensao seja de aproximadamente 40 mg/mL. O pH e ajustado em 6,5 por adigao de hidróxido de sódio a 1N.

Liofilizacão

A suspensão é dividida em recipientes do tipo Lyoguard® o que permite manter a suspensão estéril durante a liofilização: os recipientes são então Iiofilizados de uma maneira estéril por um ciclo de 72h em um Iiofilizador de laboratório (uma unidade laboratorial de mesa Christ1 Osterode, Alemanha). O pó é dividido em frascos de uma maneira estéril antes de uso.

Exemplo 15: Comparação da Reconstituicão dos Pós de Micropartículas obtidos a partir do Exemplo 3 e os Pós de Micropartículas dos Exemplos 14. Para essa comparação, os volumes das suspensões reconstituídas são idênticos

em ambos os casos (aproximadamente 1 ml_) e os frascos de reconstituição são idênticos (3 mL frascos de vidro). As quantidades dos pós são ajustadas de modo que ambas as suspensões contenham no final 40 mg/mL de polímero e 0,5 mg/mL de IFN-a2b. O pó do exemplo 3 é reconstituído em uma solução aquosa de MgCI2 a 0,1 M e o pó do exemplo 14 (o qual já contem íons Mg2+) é reconstituído em água pura.

De uma primeira vez, os frascos são manualmente agitados. Quando o pó do exemplo 3 precisa de pelo menos 15 minutos para se redispersar, a dispersão é mais rápida com o pó do exemplo 14 e com menos do que 5 minutos, uma suspensão homogênea é obtida. Uma barra de agitação magnética é então inserida nos frascos e ambos os frascos são agitados de uma maneira idêntica por 1h.

No final dessa agitação, as características de ambas as suspensões são comparadas: o tamanho das partículas e a viscosidade de ambas as suspensões são similares.

Velocidade de redispersão sob agitação manual Características após uma agitação manual de 1h D50 (teste T1) Viscosidade (20°C, 1000 s1) Pó do exemplo 3 Aprox. 15 min 12 pm 54 mPa.s Pó do exemplo 14 < 5 min 10 pm 53 mPa.s

Exemplo 16: Farmacocinética de IFN em um Cão após uma Injeção Sub-Cutânea de uma Formulação Baseada em Poliaminoácidos Anfifílicos em uma Forma Microparticulada

Oito cães Beagle naive (peso 9 ± 0,6 kg) foram tratados com as seguintes formulações: Formulação Número de cães [IFN] (mg/mL) [PO] (mg/mL) pH/ mOsm Dose (Mg/g) Dose em Volume (mL/kg) IFN IR 4 0,5 0 6,5 / 354 60 0,12 Formulação 1 4 0,5 40 6,5/560 60 0,12

IFN IR (IR para liberação imediata) corresponde a uma solução de interferon humano recombinante (lote PCGen, IB05.0516) ajustada em concentração, pH e osmolaridade ([IFN] = 0,5 mg/mL, pH = 6,5, e 354 mOsm).

A partículas da formulação 1 são preparadas de acordo com o exemplo 14 partindo do mesmo interferon de lote PCGen: o pó Iiofilizado é ressuspenso em água de uma maneira estéril (sob uma capela de fluxo laminar de ar) de acordo com um processo análogo ao processo descrito no exemplo 15.

Os resultados farmacocinéticos são reunidos na seguinte tabela:

Formulação QnaxiDP (ng/mL) T>50 pg/mL ± DP (h) AUQjd ± DP (ng,h/mL) RBA (%) Tgo%aic ± DP (h) IFNIR 25,2 ±0,4 22,6 ±0,6 162,5 ±27,2 100 5,1 ±0,7 IFNIR Formulação 1 0,5 ±0,2 225,0 ±15,3 54,7 ±7,5 34 99,5± 11,9 Formulação 1

onde:

Cmax é a concentração sérica máxima de IFN;

T > 50 pg/mL é o tempo onde a IFN concentração sérica é mais altos do que 50

pg/mL;

AUC representa a área sob a curva correspondentes à concentração sérica de IFN em função de tempo;

RBA representa a biodisponibilidade em relação a uma formulação de liberação

imediata;

T5o%auc representa o tempo necessário para coagular 50% do total de IFN coagulado.

IFN IR representa um perfil de liberação rápida com uma concentração sérica máxima de 25,2 ± 0,4 ng/mL, obtido após um tempo mediano de 5h (variação: 3-5h). O IFN em circulação não é mais quantificável após 24h.

A formulação 1 oferece uma modificação principal do perfil farmacocinético de IFN, com uma liberação muito lenta, e uma concentração sérica máxima de 0,5 ± 0,2 ng/mL (50 vezes menor do que a concentração sérica máxima da forma IR) obtida após um tempo mediano de 60 h (variação: 48-96 h). O aspecto geral da farmacocinética é um perfil nivelado com um pseudo-platô. O nível de IFN em circulação é uma concentração não- quantificável entre 192 h e 240 h (8 e 10 dias). Essa formulação tem um AUC menor: uma perda de 66 % da biodisponibilidade relativa (RBA = 34 %) T50Ozoauc é aproximadamente 20 vezes mais alto do que Tso%auc de IFN IR.

Exemplo 17: Farmacodinâmica de Insulina em um Cão após uma Injeção Sub- Cutânea de uma Formulação Baseada em Poliaminoácidos Anfifílicos em um Forma Microparticulada

A referência desse exemplo, Lantus®, é um análogo de insulina modificado (insulina glargina - Sanofi Aventis). A modificação de dois aminoácidos na estrutura primária de insulina humana confere propriedades de liberação prolongada a Lantus® durante um período de 24 h através de uma precipitação in situ.

Um grupo de 6 cães Beagle saudáveis (peso 11,4 ± 1 kg) foram tratados com a formulação Lantus® durante um teste cruzado de dois períodos e um grupo de 8 cães Beagle saudáveis (peso 11,8 ± 1 kg) foram tratados com a formulação 2, dois a dois, durante um teste cruzado de quatro períodos. A tabela recapitulativa dos tratamentos é resumida abaixo:

Número de cães [insulina] (iu/g) [PO] (mg/g) Dose (U l/kg) Dose em Volume (ML/kg) Lantus® (lote 40N300) 12 100 0 1 10 Formulação 2 8 100 30 1 10

As partículas da formulação 2 são preparadas de acordo com o exemplo 10 objetivando uma proporção de 30 mg de polímero PO para 3,5 mg (100 IU) de insulina. A formulação é preparada por dispersão do pó atomizado em MgCI2 a 0,1 M e por agitação magnética da suspensão por 1h. O pH da formulação é 6,2 e a osmolaridade é de 348mOsm. O tamanho de partícula correspondente, medido com um teste T1, é: D50 =12 pm e a viscosidade da formulação é de aproximadamente 5mPa.s s 20°C.

A glicemia é dosada por método enzimático (hexoquinase) com um aparelho de análise bioquímica sangüínea (Advia 1650, Bayer Diagnostics).

Os resultados da análise da farmacodinâmica são com base na percentagem da glicemia basal em relação ao tempo.

Os dados farmacodinâmicos são reunidos na seguinte tabela:

Cmin ± DP APGC0-36h + DP APG Cformulação 1 / Ts0%APGC ± (%) (%.h) APGC[_antus ± DP (%) DP (h) Lantus® 40 ±6 1250 ±342 13,3 ±3,1 Formulação 2 50 ±17 948 ±491 76 ±39 16,5 ±6,2

onde:

- Cmin é a percentagem mínima observada da glicemia basal;

- APGC0-36h (Área Percentual sob a Curva Glicêmica) representa a superfície entre a glicemia basal (100%) e a curva que representa a evolução da glicemia (expressa em %

da glicemia basal) ao longo do tempo entre 0 e 36 h pós-dose;

- t50o7o apgc representa o tempo necessário para se obter 50% de APGC0-36h-

A administração da referência Lantus® leva a um rápido decréscimo da glicemia na primeira hora. A ação hipoglicêmica de glargina insulina é então mantida durante um período compreendido entre 18 e 36 h (a glicemia é trazida de volta ao seu nível basal após 30 h em média).

Em comparação, a administração de formulação 2 leva também a um rápido decréscimo da glicemia das primeiras horas. A percentagem da glicemia basal é então mantida em um platô até 36 h em média. A Cmin obtida com a formulação 1 é em média mais alta do que a Cmin da referência Lantus®, isso poderia permitir reduzir consideravelmente graves fenômenos de hipoglicemia com pacientes diabéticos.

A duração de ação de formulação 2 é claramente mais alta do que a duração de ação do Lantus® de longa ação referência. Isso é ilustrado pelo valor médio de T50%apgc mais alto com a formulação 2.

Uma perda de APGC0-36h de apenas 24% foi observada com a formulação 2 em relação à referência Lantus®.

Claims (41)

1. Micropartícula de polímero (PO)1 CARACTERIZADA pelo fato de que compreende pelo menos um princípio ativo (PA), o polímero PO • sendo um copolímero anfifílico hidrossolúvel e biodegradável que carrega grupos hidrofóbicos (HG) e grupos hidrofílicos, • formando espontaneamente uma suspensão coloidal de nanopartículas em água, em pH = 7,0, sob condições isotônicas, • e estando não-covalentemente associado com o PA; cuja micropartícula a. é obtida por atomização de uma solução ou suspensão coloidal de PO compreendendo pelo menos um PA, b. tem um tamanho, medido em um teste T, de entre 0,5 e 100 micra, preferencialmente entre 1 e 70 micra, preferencialmente entre 2 e 40 micra, c. e é dispersível em suspensão coloidal em um teste DPI de "dispersibilidade".

2. Micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é estável em um teste ST1 ou em um teste ST2.

3. Micropartícula, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que PO é um copolímero de bloco ou do tipo randômico.

4. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADA pelo fato de que os grupos hidrofílicos do PO são grupos ionizáveis (IG) que são pelo menos parcialmente ionizados.

5. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, onde o polímero PO é um (co)poliaminoácido anfifílico ou uma mistura de (co)poliaminoácidos anfifílicos.

6. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADA pelo fato de que PO é um poliaminoácido que tem uma cadeia principal formada por unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, pelo menos uma porção dessas unidades sendo modificada por enxerto de pelo menos um grupo hidrofóbico (HG) na cadeia ou na extremidade da cadeia.

7. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADA pelo fato de que o PO é definido pela seguinte fórmula geral (I) (o radical -COOR3 inclui formas onde a ligação entre o carboxílico e R3 é uma ligação iônica - COO+R3): <formula>formula see original document page 49</formula> onde: ■ R1 representa um H, uma alquila linear C2 a C10 ou ramificado C3 a C10, um benzila, ou -R4-[HG]; ■ NHR1 é um resíduo terminal de aminoácido; · R representa um H1 um grupo acila linear C2 a C10 ou ramificado C3 a C10, ou -R - [HG]; ■ R2 é um resíduo terminal de piroglutamato; ■ R3 é um H, ou ■ +R3 é preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em: - cátions metálicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende: sódio, potássio, cálcio e magnésio, - cátions orgânicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende: • cátions baseados em amina, • cátions baseados em oligoamina, · cátions baseados em poliamina (polietilenoimina sendo particularmente preferida), • cátions baseados em aminoácido(s) vantajosamente escolhidos da classe que compreende cátions baseados em Iisina ou em arginina, - ou poliaminoácidos catiônicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende polilisina ou oligolisina; ■ R4 representa uma ligação direta ou um espaçador baseado em 1 a 4 resíduos de aminoácido; ■ A independentemente representa um radical -CH2- (unidade aspártica) ou um radical -CH2-CH2- (unidade glutâmica); ■ n/(n+m) é definido como a taxa de enxerto molar e seu valor é suficientemente baixo para PO1 dissolvidos em água o pH = 7 e a 25°C, a forma uma suspensão coloidal de partículas em escala de sub-mícron de PO; preferencialmente n/(n+m) é compreendido entre 1 e 25 mol % e mais preferencialmente entre 1 e 15 mol %; ■ η + m é definido como o grau de polimerização e varia de 10 a 1000, preferencialmente entre 50 e 300; ■ HG representa um grupo hidrofóbico compreendendo 6 a 30 átomos de carbono.

8. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADA pelo fato de que o PO ou os POs correspondem a uma das seguintes fórmulas gerais (II), (III) e (IV) (o radical -COOR3' inclui formas onde a ligação entre o carboxílico e R31 é uma ligação iônica -COO-tR3): <formula>formula see original document page 50</formula> onde: ■ HG representa um grupo hidrofóbico compreendendo 6 a 30 átomos de carbono; ■ R30 é uma cadeia alquileno C2 a C6 linear bivalente; ■ R3 é um H ou, ■ +R3 é preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em: - cátions metálicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende: sódio, potássio, cálcio e magnésio, - cátions orgânicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende: • cátions baseados em amina, · cátions baseados em oligoamina, • cátions baseados em poliamina (polietilenoimina sendo particularmente preferida), • cátions baseados em aminoácido(s) vantajosamente escolhidos da classe que compreende cátions baseados em Iisina ou em arginina, - ou poliaminoácidos catiônicos vantajosamente escolhidos do subgrupo que compreende polilisina ou oligolisina; ■ R50 é uma cadeia alquileno C1 a C8 linear bivalente na qual uma ou duas unidade(s) metileno, preferencialmente em cada final de R501 pode ser independentemente substituído por -O ou -NH; ■ R4 representa uma ligação direta ou um espaçador baseado em 1 a 4 resíduos de aminoácido; ■ A independentemente representa um radical -CH2- (unidade aspártica) ou um radical -CH2-CH2- (unidade glutâmica); ■ n' + m' ou n" é definido como o grau de polimerização e varia de 10 a 1000, preferencialmente entre 50 e 300.

9. Micropartícula, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, CARACTERIZADA pelo fato de que o grupo R4 representa uma ligação simples.

10. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de que o PO ou POs compreendem pelo menos um "essencialmente neutro" copolidroxialquilglutamina (preferencialmente a alquila é etila) compreendendo diversos grupos hidrofóbicos pendentes (HGs) os quais são idênticos ou diferentes uns dos outros.

11. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, CARACTERIZADA pelo fato de que todos ou parte dos radicais hidrofóbicos HGs dos POs são independentemente escolhidos a partir do grupo de radicais que compreende: ■ um alcóxi linear ou ramificado que compreende de 6 a 30 átomos de carbono e que pode compreender pelo menos um heteroátomo (preferencialmente O ou N ou S) ou pelo menos uma insaturação, ■ um alcóxi que compreende de 6 a 30 átomos de carbono e que tem um ou mais carbociclos ligados e opcionalmente que contém pelo menos uma insaturação ou pelo menos um heteroátomo (preferencialmente O ou N ou S), ■ uma alcoxiarila ou uma ariloxialquila de 7 a 30 átomos de carbono e que pode compreender pelo menos uma insaturação ou pelo menos um heteroátomo (preferencialmente O ou N ou S).

12. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, CARACTERIZADA pelo fato de que o grupo hidrofóbico HG é selecionado a partir do grupo que consiste em radicais alcóxi do tipo: -OCH2(CH2-CH2)3^-CH3, oleíla, tocoferila ou colesterila, e R4 representa uma ligação simples.

13. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, CARACTERIZADA pelo fato de que os grupos η HG do PO representam cada um, independentemente um do outro, um radical monovalente da seguinte fórmula: <formula>formula see original document page 52</formula> onde: - R5 representa um metila, isopropila, isobutila, sec-butila, benzila; - R6 representa um radical hidrofóbico compreendendo de 6 a 30 átomos de carbono; -1 varia de 0 a 6.

14. Micropartícula, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADA pelo fato de que todos ou parte dos radicais hidrofóbicos R6 dos POs são independentemente escolhidos a partir do grupo de radicais que compreende: - um alcóxi linear ou ramificado que compreende de 6 a 30 átomos de carbono e que pode compreender pelo menos um heteroátomo (preferencialmente O ou N ou S) ou pelo menos uma insaturação, - um alcóxi que compreende de 6 a 30 átomos de carbono e que tem um ou mais carbociclos ligados e opcionalmente compreende pelo menos uma insaturação ou pelo menos um heteroátomo (preferencialmente O ou N ou S), - uma alcoxiarila ou uma ariloxialquila de 7 a 30 átomos de carbono a qual pode compreender pelo menos uma insaturação ou pelo menos um heteroátomo (preferencialmente O ou N ou S).

15. Micropartícula, de acordo com a reivindicação 13 ou 14, CARACTERIZADA pelo fato de que o radical hidrofóbico R6 do enxerto do PO é selecionado a partir do grupo que consiste em radicais alcóxi do tipo: -OCH2(CH2-CH2)S-S-CH3, oleíla, tocoferila ou colesterila.

16. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6a9e11a15, CARACTERIZADA pelo fato de que a cadeia principal do poliaminoácido é um a-L- glutamato ou homopolímero σ-L-glutâmico.

17. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6a9e11 a15, CARACTERIZADA pelo fato de que a cadeia principal do poliaminoácido é um homopolímero σ-L-aspartato ou σ-L-aspártico.

18. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6a9e11 a15, CARACTERIZADA pelo fato de que a cadeia principal do poliaminoácido é um copolímero a-L-aspartato/a-L-glutamato ou σ-L-aspártico/a-L-glutâmico.

19. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 18, CARACTERIZADA pelo fato de que PO compreende HG1 (n/n+m) na fórmula (I), em um nível de pelo menos 10 mol%, preferencialmente de pelo menos 15 mol%.

20. Micropartícula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 19, CARACTERIZADA pelo fato de que a massa molar do PO fica entre 2,000 e 100.000 g/mol e preferencialmente entre 5.000 e 40.000 g/mol.

21. Processo para a preparação de micropartículas de PO, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende pelo menos um princípio ativo (PA), micropartículas estas estando em particular, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, i. o polímero PO • sendo um copolímero anfifílico hidrossolúvel e biodegradável que carrega grupos hidrofóbicos (HG) e grupos hidrofílicos [preferencialmente grupos ionizáveis (IG) pelo menos parcialmente ionizados], • que formam espontaneamente uma suspensão coloidal de nanopartículas em água, em pH = 7,0, sob condições isotônicas, • e estando não-covalentemente associado com o PA; ii. as referidas micropartículas com um tamanho, medido em um teste T1, de entre 0,5 e 100 micra, preferencialmente entre 1 e 70 micra, preferencialmente entre 2 e 40 micra, cujo processo compreende essencialmente atomizar uma solução ou uma suspensão coloidal de PO compreendendo o PA.

22. Processo, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o PO presente na solução ou suspensão coloidal é pelo menos parcialmente na forma de nanopartículas de PO com um tamanho, medido no teste T1, de menos do que 500 nm, preferencialmente de entre 10 e 300 nm e mais preferencialmente ainda de entre 10 e 100 nm.

23. Processo, de acordo com as reivindicações 21 ou 22, CARACTERIZADO pelo fato de que as micropartículas de polímero PO associado com pelo menos um princípio ativo (PA) são dispersas em um meio líquido essencialmente aquoso, os referidos meios contendo preferencialmente um meio de dispersão M1, e onde a dispersão obtida é liofilizada.

24. Processo, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que os meios de dispersão M1 são escolhidos a partir do seguinte grupo: i. íons multivalentes cuja polaridade é oposta à polaridade dos grupos ionizáveis do polímero PO e que estão contidas na fase aquosa contínua; ii. pelo menos um composto hidrofílico (preferencialmente utilizável para uma preparação injetável) acrescentado na suspensão/solução de PO para atomizar e assim contido nas micropartículas atomizadas de PO/PA; iii. pelo menos um revestimento de micropartícula com pelo menos um filme de pelo menos um composto hidrofílico (preferencialmente utilizável para uma preparação injetável); iv. a mudança de pH; v. e combinações de pelo menos dois dos meios (i) a (iv), « o meio (i) sendo particularmente preferido.

25. Formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de PA1 CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma suspensão coloidal, de baixa viscosidade, baseada em uma micropartícula de PO compreendendo pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20 ou aquelas obtidas pelo processo de acordo com a reivindicação 21 a 24.

26. Formulação, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um meio M2 para dispersar micropartículas de PO associado com pelo menos um PA.

27. Formulação, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, CARACTERIZADA pelo fato de que a fase contínua da suspensão é essencialmente aquosa.

28. Formulação, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, CARACTERIZADA pelo fato de que a fase contínua da suspensão é uma fase essencialmente orgânica miscível em água.

29. Formulação, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, CARACTERIZADA pelo fato de que a fase contínua da suspensão é uma fase essencialmente orgânica imiscível em água.

30. Formulação, de acordo com as reivindicações 25 ou 26, eventualmente 27, CARACTERIZADA pelo fato de que o meio de dispersão M2 é escolhido a partir do seguinte grupo: i. íons multivalentes cuja polaridade é oposta à polaridade dos grupos ionizáveis do polímero PO e que estão contidas na fase aquosa contínua; ii. pelo menos um composto hidrofílico (preferencialmente utilizável para uma preparação injetável) acrescentado na suspensão/solução de PO para atomizar e assim contido nas micropartículas atomizadas de PO/PA; iii. pelo menos um revestimento de micropartícula com pelo menos um filme de pelo menos um composto hidrofílico (preferencialmente utilizável para uma preparação injetável); iv. a mudança de pH; v. e combinações de pelo menos dois dos meios (i) a (iv), o meio (i) sendo particularmente preferido.

31. Formulação, de acordo com a reivindicação 30, CARACTERIZADA pelo fato de que o composto do revestimento hidrofílico é selecionado a partir do grupo que consiste em: —► aminoácidos; —► polialquileno glicóis, preferencialmente polietileno glicóis; —► copolialquileno glicóis, preferencialmente etileno glico/propileno glicol Λ copolímeros (do tipo poloxâmero ou Plurônico ou Lutrol); —> polímeros de celulose e seus derivados, preferencialmente carboxialquilceluloses ou alquilceluloses; —► sacarídeos hidrogenados ou não-hidrogenados, tais como trealose, sorbitol, manitol ou sucrose; —► polióis, tais como propileno glicol ou glicerol; -> gelatinas, preferencialmente gelatinas hidrolisadas; —► (co)polímeros nitrogenosos, preferencialmente aqueles presentes no grupo compreendendo poliacrilamidas, poli-N-vinilamidas, polivinilpirrolidonas (PVPs) e poli-N-vinil- lactamas; —> poli(álcool vinílico)s (PVAs); —»■ poli(glutamato de sódio); —> e suas misturas; os referidos compostos do revestimento hidrofílico preferencialmente compreendendo pelo menos um polímero hidrofílico.

32. Formulação, de acordo com as reivindicações 25 e 27 ou 28, « CARACTERIZADA pelo fato de que o meio de dispersão compreende um líquido lipofílico, cujo ponto de fusão é preferencialmente menos do que ou igual a 15°C, presente na fase contínua miscível em água ou imiscível em água.

33. Formulação, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADA pelo fato de que o líquido lipofílico compreende pelo menos uma mistura de triglicerídeos de saturado ácidos graxos ou pelo menos um óleo vegetal ou pelo menos um lipídeo ou pelo menos um derivado de lipídeo ou pelo menos um ácido graxo ou pelo menos um derivado de ácido graxo.

34. Formulação, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADA pelo fato de que o líquido lipofílico compreende pelo menos uma mistura de triglicerídeos de ácidos graxos C8-C10 saturados resultantes de óleo de coco; • pelo menos um óleo vegetal, preferencialmente óleo de soja, óleo de palma, óleo de linhaça, óleo de semente de algodão, óleo de gergelim, óleo de girassol ou óleo de amendoim; • pelo menos um lipídeo, preferencialmente uma Iecitina líquido, vitamina E sintética ou natural; • pelo menos um derivado de lipídeo, preferencialmente araquidoilfosfatidilcolina e estearoilfosfatidilcolina, • pelo menos um ácido graxo, preferencialmente ácido oléico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico e seus sais; • pelo menos um derivado de ácido graxo, preferencialmente um derivado de mono- I , ou triclicerídeo, oleato de etila, Iauril lactato, estearato de glicerila, palmitato de sorbitan, estearato de sorbitan, monoleato ou polissorbato de sorbitan; • e suas misturas; com a condição de acordo com a qual, no caso onde alguns da produtos listados acima considerados separadamente não são líquidos em uma temperatura de menos do que ou igual, por exemplo, a 15°C, então esses produtos são misturados com outros de modo que eles sejam líquidos em uma temperatura de menos do que ou igual, por exemplo, a 15°C.

35. Formulação, de acordo com as reivindicações 25 e 27 ou 28 e opcionalmente 32, 33 ou 34, CARACTERIZADA pelo fato de que o meio de dispersão compreende um revestimento de micropartículas com pelo menos um composto de revestimento formador de filme (preferencialmente que possa ser usado para uma preparação injetável).

36. Formulação, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que o composto de revestimento formador de filme compreende pelo menos um polímero hidrofóbico selecionado a partir do grupo que consiste em polilactidas; poliglicolidas; poli(lactida-co-glicolida)s; poliortoésteres; polianidridas; poli(ácido hidroxibutírico)s; policaprolactonas; poli(carbonato de alquila)s; polímeros PO insolúveis em água; seus derivados e suas misturas.

37. Formulação, de acordo com as reivindicações 25 e 27 ou 29 e opcionalmente pelo menos uma das reivindicações 31 a 35, CARACTERIZADA pelo fato de que o composto de revestimento formador de filme é de natureza lipídica e exibe um ponto de fusão preferencialmente de mais do que ou igual a 15°C e compreende pelo menos uma mistura de triglicerídeos de ácidos graxos saturados ou pelo menos um óleo vegetal ou pelo menos um lipídeo ou pelo menos um derivado de lipídeo ou pelo menos um ácido graxo ou pelo menos um derivado de ácido graxo ou uma mistura destes produtos.

38. Kit de reconstituição, em particular para reconstituir a formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 37, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: micropartículas de PO que compreendem pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20 ou aquelas obtidas pelo processo de acordo com a reivindicação 21 ou 22; • e um líquido de reconstituição selecionado a partir do grupo que consiste em: —► líquidos essencialmente aquosos; —>■ líquidos essencialmente orgânicos miscíveis em água; —> e líquidos essencialmente orgânicos imiscíveis em água.

39. Processo de reconstituição, em particular para reconstituir a formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 37, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende essencialmente: • misturar —► micropartículas de PO que compreendem pelo menos um PA1 micropartículas estas sendo aquelas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20 ou aquelas obtidas pelo processo de acordo com a reivindicação 21 ou 22; —► e um líquido de reconstituição selecionado a partir do grupo que consiste em: —► líquidos essencialmente aquosos; —► líquidos essencialmente orgânicos miscíveis em água; —> e líquidos essencialmente orgânicos imiscíveis em água. • e agitar esta mistura.

40. Formulação farmacêutica sólida para a liberação de PA, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma forma seca em pó: • baseada em micropartículas de PO que compreendem pelo menos um PA, micropartículas estas sendo aquelas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20 ou aquelas obtidas pelo processo de acordo com a reivindicação 21 ou 22; • ou obtida da formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 37.

41. Formulação farmacêutica sólida, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADA pelo fato de que é para inalação e administração pulmonar.