CN102232932B - 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 - Google Patents
果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102232932B CN102232932B CN201010189969XA CN201010189969A CN102232932B CN 102232932 B CN102232932 B CN 102232932B CN 201010189969X A CN201010189969X A CN 201010189969XA CN 201010189969 A CN201010189969 A CN 201010189969A CN 102232932 B CN102232932 B CN 102232932B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- amycin
- conjugates
- pectin
- preparation
- suspension
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 title abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 78
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000006070 nanosuspension Substances 0.000 claims description 101
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 66
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 57
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 35
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 35
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 35
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims description 29
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 claims description 27
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 26
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 26
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 25
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 21
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 claims description 13
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 8
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 7
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 7
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 7
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 7
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 7
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 7
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims description 7
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 7
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 6
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 6
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 6
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 6
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 6
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 6
- JGSARLDLIJGVTE-UHFFFAOYSA-N 3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Chemical compound O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 5
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 229960003943 hypromellose Drugs 0.000 claims description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009837 dry grinding Methods 0.000 claims description 3
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 36
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 33
- 238000011068 loading method Methods 0.000 abstract description 22
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 abstract description 17
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 57
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 30
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N (4s,4as,5as,6s,12ar)-4-(dimethylamino)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4,4a,5,5a-tetrahydrotetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]4(O)C(=O)C3=C(O)C2=C1O NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N 0.000 description 12
- 229930195573 Amycin Natural products 0.000 description 12
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N doxorubicine Natural products O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 7
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 7
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000013409 condiments Nutrition 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N Doxorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 229960002918 doxorubicin hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229920000344 molecularly imprinted polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010021703 Indifference Diseases 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- LGZXYFMMLRYXLK-UHFFFAOYSA-N mercury(2+);sulfide Chemical compound [S-2].[Hg+2] LGZXYFMMLRYXLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036211 photosensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Abstract
本发明属于制药领域,具体涉及果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法。为了解决果胶-阿霉素轭合物(以下简称PAC)的难溶性问题,提高生物利用度,便于制剂,发明人将PAC制成纳米混悬剂,但是由于该纳米混悬剂的长期稳定性差,发明人提出将该纳米混悬剂制成冻干制剂,即将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液或纳米混悬液,加入冻干支撑剂,进行冷冻干燥处理,制成冻干制剂。将纳米混悬剂制备成冻干产品后,纳米粒径稳定性增强,载药量稳定性增强,为临床应用PAC提供了一种全新的方案。
Description
技术领域
本发明属于制药领域,具体涉及果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法。
背景技术
中国专利申请名称为实体瘤被动靶向性抗癌前药及其制备方法,申请号为200910311854.0,公开了一种由果胶与阿霉素键合而成的实体瘤被动靶向性抗癌前药,它是由Mw(Mw,即weight-average molecular weight,重均分子量,属于高分子化合物分子量表示方法之一种)0.5~4.5万的小分子的果胶与阿霉素反应得到的Mw为10~100万的果胶-阿霉素偶联物,制成混悬剂后通过纳米超高压均质机处理得到粒径100nm-200nm,熔点220℃~245℃实体瘤被动靶向性抗癌前药;其中,果胶与阿霉素通过酰胺键连接,果胶与果胶之间通过果胶分子的羧基与羟基缩合成的酯键连接。具体地,该果胶-阿霉素偶联物是果胶和阿霉素(adriamycin,ADM)在脱水剂EDC·HCl[即1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐]的作用下,果胶分子上面的羧基(-COOH)和阿霉素上面的氨基(-NH2)反应生成酰胺键,偶合成分子量数万的大分子前药。
该果胶-阿霉素偶联物在本专利称作果胶-阿霉素轭合物(Pectin-adriamycin coniuncate,以下简称PAC),发明人在应用PAC时发现其溶解性很差,多次溶解性试验表明为难溶。难溶性药物临床应用存在两大难题,一是药物溶解度低从而生物利用度低,二是常规制剂方式对难溶性药物的应用也有一定限制。
为了解决PAC的难溶性问题,本发明提供了如下方案。
发明内容
目前针对难溶性药物,一种新的制剂形式越来越受到关注——纳米混悬液(nanosuspension)。与常规制剂方式相比,纳米混悬液具有很多优势,如混悬液中一般采用水作分散体系,并且主药含量高,既能够避免采用某些非水溶剂带来的不良反应,也为注射给药方式提供了可能;依据Ostwald-Freundlich方程(lnC2/C1=2σM/RTp(1/r2-1/r1),r为粒径,c为溶解度),混悬液中药物粒径小、比表面积大,一定程度上能够增加药物的溶解性和生物利用度;另外如果将药物粒径控制在200nm以下,纳米粒子借助EPR效应能更好的实现靶向性。为克服PAC的难溶性缺陷,发明人将PAC制成纳米混悬剂,欲通过该技术手段解决其难溶的技术问题,并达到提高生物利用度,便于制剂的目的。具体地,将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、稳定剂,研磨成混悬液,再制成纳米混悬液。
但是,发明人发现将其制成纳米混悬剂后,纳米混悬液中粒子由于表面自由能比较大,相互间容易聚集,即使处方中加入了两种稳定剂(如PVP K-30和泊洛沙姆188),混悬液的长期稳定性情况仍不理想。由于纳米粒子粒径不稳定,PAC纳米混悬剂不能以混悬液的状态长期储存,影响制剂临床使用效果。
为了克服PAC纳米混悬剂不稳定的缺陷,确保其长期稳定性,发明人提出将该纳米混悬剂制成冻干制剂。具体的,将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液或纳米混悬液,加入冻干支撑剂,进行冷冻干燥处理,制成冻干制剂。
其中,所用冻干支撑剂为甘露醇、右旋糖苷、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇或氯化钠中至少一种。选择依据是质地疏松,外形饱满,复溶性好,且冻干前后粒径无大的差别,为达到上述要求,冻干支撑剂的添加量为40-120mg/mL。
优选,蔗糖以80mg/mL加入混悬液或纳米混悬液中。
冷冻干燥处理的方法为:
A、将混悬液分装至西林瓶中,在-40℃至-80℃的条件下预冻4-8小时;
B、再置于冷冻干燥机中,冷冻干燥,即可。
优选预冻温度条件为:在-40℃的条件下预冻。优选预冻时间为6小时。采用冷冻干燥机干燥,干燥时间优选:至少24小时。
将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、稳定剂,研磨成混悬液。研磨成混悬液后为提高生物利用度,可再将其制成纳米混悬液,采用高压均质仪将混悬液制成纳米混悬液是目前较有效的、常规的、常用的、便利的处理方式。
采用的稳定剂是PVP、泊洛沙姆、十二烷基磺酸钠、聚山梨醇酯或羟丙甲纤维素的至少一种。
PVP即聚乙烯吡咯烷酮,做稳定剂用,亲水性辅料;优选PVP K-30。
泊洛沙姆(Poloxamer,做稳定剂用,亲水性辅料)可采用泊洛沙姆188或泊洛沙姆407,优选泊洛沙姆188。
十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)为离子型表面活性剂,可提供电荷稳定效应,做稳定剂用。
聚山梨醇酯,非离子型表面活性剂,做稳定剂用。优选聚山梨醇酯-80(Tween 80)。
羟丙甲纤维素(hydroxypropyl methyl cellulose,HPMC),属高分子聚合物,做稳定剂用。
制备混悬液或纳米混悬液所用稳定剂可采用上述类型的表面活性剂或高温分子聚合物,能够实现稳定电荷,起稳定作用的均可。
制备混悬液或纳米混悬液所用稳定剂可采用上述类型的表面活性剂或高温分子聚合物,能够实现稳定电荷,起稳定作用的均可。
具体地,本发明冻干制剂,按照每100mL灭菌注射用水中加入PAC 500-900mg、PVP K-303000-6000mg、Poloxamer 188500-900mg、蔗糖4000-12000mg进行配制,然后再进行冷冻干燥,制成冻干制剂。优选处方为:
PAC(主药):776mg(2mg/mL的阿霉素当量按载药量换算,载药量25.8%);
PVP K-30(PVP即聚乙烯吡咯烷酮,K-30按其分子量分类,稳定剂,亲水性辅料):4000mg(w/v,4%);
Poloxamer 188(Poloxamer即泊洛沙姆,188为型号稳定剂,亲水性辅料):700mg(w/v,0.7%);
蔗糖(冻干赋形剂):80mg/mL;(相当于每100mL含蔗糖8000mg。)
灭菌注射用水(溶剂):100mL。
相当于本发明冻干制剂是按照每100mL灭菌注射用水中加入PAC 776mg、PVP K-304000mg、Poloxamer 188700mg、蔗糖8000mg进行配制,然后再进行冷冻干燥,制成冻干制剂。
具体地,制备工艺为:在前述PAC纳米混悬液中,按40-120mg/mL(优选80mg/mL)的量,加入冻干支撑剂蔗糖,超声使充分溶解。为保证产品冻干的充分性,一般应控制液层高度不超过2cm。
在实验室中的制备方法为:将需冻干的PAC纳米混悬液(已添加冻干支撑剂)按2mL/瓶的量分装于体积10mL的西林瓶中,盖上丁字形的塞子后(注意要留缝隙,以保证冻干升华过程中水分能够散出),置于-40℃至-80℃(优选-40℃)冰箱中预冻4-8小时(优选6小时),后置于冷冻干燥机中,冻干至少24h,即可。
按上述方法制成的冻干产品,外观为橘红色饼状、疏松、形状饱满无塌陷,复溶性好,加入处方量的灭菌注射用水轻摇即可完全复溶,复溶后与冻干前相比性状和粒径基本没有变化,马尔文激光纳米粒度仪测得复溶后的平均粒径在200nm以下,PDI值小于0.25。
附图说明
图1PAC纳米混悬剂中粒子形态。
图2半年后PAC纳米混悬剂粒径结果。
图3PAC纳米混悬剂粒径结果。混悬剂中,纳米粒子平均粒径167.3nm;粒径分布范围窄,PDI值仅为0.141。
具体实施方式
本发明提供的冻干制剂是将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液或纳米混悬液,加入冻干支撑剂,进行冷冻干燥处理,制成冻干制剂。
其中,将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液或纳米混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、稳定剂,研磨成混悬液。
可再将混悬液制成纳米混悬液。具体地,是采用高压均质仪将混悬液制成纳米混悬液。
采用的稳定剂是PVP、泊洛沙姆、十二烷基磺酸钠、聚山梨醇酯或羟丙甲纤维素的至少一种。
PVP即聚乙烯吡咯烷酮,做稳定剂用,亲水性辅料;优选PVP K-30。
泊洛沙姆(Poloxamer,做稳定剂用,亲水性辅料)可采用泊洛沙姆188或泊洛沙姆407,优选泊洛沙姆188。
十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)为离子型表面活性剂,可提供电荷稳定效应,做稳定剂用。
聚山梨醇酯,非离子型表面活性剂,做稳定剂用。优选聚山梨醇酯-80(Tween 80)。
羟丙甲纤维素(hydroxypropyl methyl cellulose,HPMC),属高分子聚合物,做稳定剂用。
制备混悬液或纳米混悬液所用稳定剂可采用上述类型的表面活性剂或高温分子聚合物,能够实现稳定电荷,起稳定作用的均可。
进一步地,将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、PVP K-30 3000-6000mg和泊洛沙姆188500-900mg,研磨成混悬液。然后再制成纳米混悬液即可。
具体地,优选下述配比:
PAC(主药):776mg(处方中溶剂即灭菌注射用水100mL,按照2mg/mL的阿霉素当量,需200mg的阿霉素,PAC的载药量为25.8%,200/25.8%=775.19mg,取整定为776mg);
PVP K-30:4000mg(w/v,4%);
泊洛沙姆188(即Poloxamer 188):700mg(w/v,0.7%);
灭菌注射用水(溶剂):100mL。
即:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、PVP K-303000-6000mg和泊洛沙姆188 500-900mg,研磨成混悬液。若要获得纳米混悬剂,再进一步制备即可。
按照上述处方参照下述方法制备本发明纳米混悬剂:
A、取PVP K-30,用灭菌注射用水配成PVP K-30溶液;
B、取PAC、泊洛沙姆188干磨使混合均匀(研磨目的是将PAC研磨的粒径较小和均匀即可),然后加入少许PVP K-30溶液充分研磨(充分是为了使PAC混悬液的粒径更小更均匀,防止堵塞高压均匀仪的均质阀门,则研磨至PAC混悬液的初步粒径小于80微米即可);
C、分次加入剩余的PVP K-30溶液研磨;(此操作的目的是使洗净研钵上面附着的PAC,防止原料大量损失。)
D、将研磨后的混悬液超声,使其充分混合,制成混悬液;
E、将步骤D混合均匀的混悬液用高压均质仪(EmulsiFlex C-3 high-pressure homogenizer,Avestin Inc.,Canada)处理;先控制仪器压力为4000-8000PSI(该操作目的是使仪器有个适应过程,防止堵塞现象的发生,优选5000PSI),样品循环处理3-10分钟(该操作目的是使仪器有个适应过程,防止堵塞现象的发生,优选3分钟);后固定仪器压力为20000PSI-30000PSI(目前市售仪器压力上限一般都是30000PSI,即200Mpa;优选25000PSI),样品循环处理15-30分钟(在该范围内处理时间越长,纳米混悬剂中纳米粒子的均匀性PDI值将会越好,考虑到成本因素,处理20分钟即可),即得PAC纳米混悬剂。
需要注意的是:为防止仪器在高压处理过程中温度升高对药物理化性质的影响,整个处理过程中,使用热交换器恒定仪器温度为20-40℃(优选25℃)。阿霉素具有光敏感性,所有操作都在避光条件下进行。
具体地,在实验室制备可采用如下方法:
A、按照处方量精密称取PVP K-30,用处方量的灭菌注射用水配成溶液;
B、精密称取PAC、泊洛沙姆188置于玛瑙研钵中,干磨使混合均匀,然后加入少许PVPK-30溶液充分研磨至粒径80微米以下(试验确定研钵20分钟可以使其到达要求);
C、分数次加入剩余的溶液研磨,混悬液转移至锥形瓶中,并将附着于研磨上的混悬液用少许PVP K-30的溶液清洗干净;合并液体,超声处理使充分混合(一般五分钟即可);
D、前处理后的样品(相当于阿霉素当量2mg/mL)用高压均质仪处理:先控制仪器压力为4000-8000PSI(优选5000PSI),样品循环处理3-10分钟(优选3分钟);后固定仪器压力为20000PSI-30000PSI(优选25000PSI),样品循环处理15-30分钟(优选20分钟);温度控制在20-40℃(优选25℃)。
经检测,按照上述方法制备的纳米混悬剂平均粒径为167.3nm,多分散性PDI值为0.141(见图3),Zeta电位-17.5mV。该结果表明高压均质法制备PAC纳米混悬剂能够满足各种质控指标,粒径较小,符合注射用纳米混悬剂的粒径要求。同时该粒径分布还符合EPR效应对粒径的要求(ERP效应中粒径要求小于200nm),使PAC纳米混悬剂能最大限度的发挥EPR的肿瘤靶向性;PDI值小于0.2,说明粒径分布范围较窄,能保证混悬液中大粒子的存在比例;Zeta电位-17.5mV,具有较高的电位稳定性。透射电镜(Transmission Electron Microscopy,TEM)观察纳米混悬剂中粒子形态。TEM能够清楚的观察到PAC纳米混悬剂中粒子形态为规则的类球形(见图1),粒径200nm左右,这与纳米激光粒度仪测定的结果基本相一致。
由于纳米混悬液中粒子由于表面自由能比较大,相互间容易聚集,对PAC纳米混悬液的长期稳定性进行考察,方法如下:
将新制备的PAC纳米混悬液按照2mg/mL的量分装于6个西林瓶中,避光后置于恒温恒湿箱中,控制温度为25℃,湿度为60%+10%。按照3天、10天、25天、50天、90天、6个月的间隔时间每次取样一瓶,测定粒径和多分散性。纳米混悬液稳定性试验结果表明,混悬状态的纳米混悬液放置50天以后,粒子之间开始聚集,粒径由最开始的167.3nm增加至458nm左右;半年以后平均粒径增大(平均粒径增至895纳米),混悬液中粒子聚集严重,纳米、微米粒子共存(参见图2),混悬液中粒子聚集严重,纳米、微米粒子共存,粒径测定中微米范围出现严重拖尾峰,而且多分散性变的很差(PDI值为0.602)。这一现象表明,纳米混悬液中即使加入了大量的稳定剂,长期稳定性仍不理想。因此由于纳米粒子粒径不稳定,PAC纳米混悬剂不能以混悬液的状态长期储存。
本发明纳米混悬剂还可以采用如下方法制备:
1、将0.3-0.6gPAC,加入0.4-1.6gPVP、2-6ml甘油和1-3%的卵磷脂溶液40-60ml做溶剂,制成混悬液。采用高压均质仪处理,制成纳米混悬液。
具体地,将0.468g大分子难溶性果胶-阿霉素偶联物,加入1g PVP,3ml甘油和2%的卵磷脂溶液50ml做溶剂,研磨处理制成混悬液。再经纳米超高压匀质仪(T-200D型河北廊坊通用机器制造有限公司)处理。分3次分别进纳米超高压匀质仪处理,第一次压力120mpa,第二次压力180mpa,第三次压力190mpa。
2、将0.3-0.6gPAC,加入0.4-1.6gPVP、40-60ml水和DMSO的混合溶剂,制成混悬液;其中,水∶DMSO=0.5-0.85∶0.15-0.5。采用高压均质仪处理,制成纳米混悬液。
具体地,将0.468g大分子难溶性果胶-阿霉素偶联物,加入1g PVP,50ml水和DMSO的混合溶剂(水∶DMSO=0.75∶0.25),制成混悬剂,或进一步采用采用高压均质仪处理,制成纳米混悬液。具体地,采用纳米超高压匀质仪处理制备纳米混悬液,每次压力不大于200mpa。(发明人采用T-200D型河北廊坊通用机器制造有限公司),具体地,可分3次分别进纳米超高压匀质仪处理,第一次压力120mpa,第二次压力180mpa,第三次压力190mpa。
按照上述方法制备的纳米混悬剂粒径在200nm以下,PDI值小于0.25电位绝对值高于10mV。高压均质法能够将难溶性药物PAC制备成纳米混悬剂;质量检测结果表明纳米混悬剂中,纳米粒子粒径、多分散性符合要求,Zeta电位值较大,使混悬液具有较高的电位稳定性,透射电镜下观察粒子形态为规则的类球形。
稳定性主要分为两种:即物理稳定性和化学稳定性。物理稳定性是指PAC纳米混悬剂中纳米粒子的空间稳定性,可用粒径及多分散指数随时间的变化来直接表征,也可用体系的Zeta电位间接说明;化学稳定性则是指混悬剂中有效药物浓度随时间的降解程度。鉴于PAC混悬液或其纳米混悬液存在的长期稳定性差的缺陷均为体系的物理稳定性差。
为解决PAC纳米混悬剂的长期稳定性缺陷,发明人尝试过以下方法:
(1)加入大量的PVPk-30,增加体系粘度,防止纳米粒子的聚集:PVPk-30起助悬作用,增加分散体系的粘度,根据stock方程(V=2r2(ρ1-ρ2)g/9η,η-为分散介质的粘度),体系粘度越大,药物粒子的沉降越慢,稳定性越好。试验中,曾尝试加入8%的PVPk30,增加体系粘度,但是随着体系粘度的大大增加,在制备过程中高压均质仪所负担的压力就需要加大,对仪器的磨损加大。即使这样,最后制备出的PAC纳米混悬剂粒径效果也不好,平均粒径大于300nm,PDI值大于0.25,所以该方法不可行。
(2)加入离子型表面活性剂,如十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)等提供电荷稳定效应。在PAC纳米混悬剂中加入大量的SDS,使体系的Zeta电位绝对值大于30Mv。但是稳定性试验结果仍然不理想,6个月后,混悬体系粒径和PDI值都大大增加,甚至出现明显的沉淀,所以该方法仍然不可行。
第二种方法根本无法保证制剂长期放置的稳定性,不可取;第一种方法中,加入大量的PVP既增加了生产成本,同时制备出的纳米混悬剂粒径和PDI值不是最优。
综合考虑各方面因素,最终,发明人提出将该纳米混悬剂制成冻干制剂。并最终验证,PAC纳米混悬液冻干产品的外形、复溶性以及粒径等都满足条件。
冻干产品中一般需加入冻干支撑剂,甘露醇、右旋糖苷、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、氯化钠等多种物质都可以作为冻干支撑剂,具体视药物和处方的不同,支撑剂的用量也不同,用量不统一,且相差很大,可从毫克到克级别。同时,虽然上述物质均可以作为冻干支撑剂,但是不同的冻干支撑剂对冻干制品的外观形态、质地、复溶性以及冻干前后纳米混悬剂粒径变化等影响明显,所以发明人以外观、复溶性以及冻干前后的粒径差别为指标,选择能够使冻干产品质地疏松,外形饱满,复溶性好,且冻干前后粒径无大的差别的冻干支撑剂。外观形态、复溶快慢、复溶前后粒径变化等,具体见表1。
表1各类冻干支撑剂的筛选
冻干支撑剂 | 复溶前后粒径差别 | 外观形态 | 复溶快慢 |
甘露醇 | 75-150nm | 疏松饱满 | 快 |
右旋糖苷 | >100nm | 疏松空洞 | 较快 |
乳糖 | >100nm | 疏松空洞 | 较快 |
蔗糖 | <50nm | 疏松饱满 | 快 |
葡萄糖 | >200nm | 萎缩 | 慢 |
山梨醇 | <50nm | 疏松空洞 | 较快 |
氯化钠 | 75-150nm | 疏松饱满 | 快 |
由筛选试验可以看出,在众多的冻干支撑剂中,蔗糖的冻干效果最佳,外观形态,复溶快慢以及复溶前后粒径差别等都最优,所以欲选择蔗糖为纳米混悬剂的冻干支撑剂。
同时,发明人分别考察了加入乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇以及不加任何支撑剂6种条件下,将PAC纳米混悬液制成冻干制剂的情况,其中5中支撑剂的加入量分别定为40mg/mL、80mg/mL、120mg/mL。试验结果表明,6种情况中,加入80mg/mL蔗糖的产品最佳,外观和复溶性好,冻干前后几乎无差别。所以处方中优选冻干支撑剂定为80mg/mL的蔗糖。
具体的,本发明冻干制剂的处方如下:本发明冻干制剂,按照每100mL灭菌注射用水中加入PAC 500-900mg、PVP K-30 3000-6000mg、Poloxamer 188 500-900mg、蔗糖4000-12000mg进行配制,然后再进行冷冻干燥,制成冻干制剂。优选每100mL灭菌注射用水中加入PAC 776mg、PVP K-30 4000mg、Poloxamer 188 700mg、蔗糖8000mg进行配制(然后再进行冷冻干燥,制成冻干制剂)。具体制备工艺如下:在按前述方法制成PAC纳米混悬液后,按40-120mg/mL(优选80mg/mL)的量,加入冻干支撑剂蔗糖,超声使充分溶解。为保证产品冻干的充分性,一般应控制液层高度不超过2cm。冻干时,将欲冻干的纳米混悬剂置于-40℃冰箱中预冻6个小时,后置于冷冻干燥机中(Thermo Modulyo(savanf),ThermoScientific Corp.USA),冻干24h即可。
也可以将下述混悬剂制成冻干制剂:即将0.468g PAC,加入1g PVP,3ml甘油和2%的卵磷脂溶液50ml做溶剂,研磨处理制成混悬剂(上述混悬剂也可以将0.3-0.6gPAC,加入0.4-1.6gPVP、2-6ml甘油和1-3%的卵磷脂溶液40-60ml做溶剂,制成混悬液),经纳米超高压匀质仪(T-200D型河北廊坊通用机器制造有限公司)处理。分3次分别进纳米超高压匀质仪处理,每次压力不大于200mpa(第一次压力120mpa,第二次压力180mpa,第三次压力190mpa),制成混悬剂后,加入40-120mg/mL的乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇按照上述冷冻干燥工艺制成冻干制剂,优选蔗糖作为冻干支撑剂,添加量优选80mg/mL。
也可以将0.468gPAC,加入1g PVP,50ml水和DMSO的混合溶剂(水∶DMSO=0.75∶0.25),制成混悬剂(上述混悬剂也可以将0.3-0.6gPAC,加入0.4-1.6gPVP、40-60ml水和DMSO[其中,水∶DMSO=0.5-0.85∶0.15-0.5]的混合溶剂,制成研磨剂),经纳米超高压匀质仪(T-200D型河北廊坊通用机器制造有限公司)处理。分3次分别进纳米超高压匀质仪处理,第一次压力120mpa,第二次压力180mpa,第三次压力190mpa,制成混悬剂后,加入40-120mg/mL的乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇按照上述冷冻干燥工艺制成冻干制剂,优选蔗糖作为冻干支撑剂,添加量优选80mg/mL。
为考察冻干粉针的长期稳定性,进行了如下实验:抽取6瓶冻干处理后纳米混悬液(该冻干混悬液按照优选的冻干制剂处方配制:即每100mL灭菌注射用水中加入PAC 776mg、PVPK-304000mg、Poloxamer 188700mg、蔗糖8000mg),避光后置于恒温恒湿箱中,控制温度为25℃,湿度为60%+10%。按照3天、10天、25天、50天、90天、半年的间隔时间每次取样一瓶,测定粒径和多分散性。相同试验条件下,PAC纳米混悬液冻干产品在常温条件下放置半年后测定粒径为182.3nm,与新制备的混悬液冻干产品的172.6nm相比,粒径几乎无大的变化。该试验结果表明,将混悬液制备成冻干产品后,相对于混悬的储存状态,稳定性有大大的提高。从纳米混悬剂的粒径稳定性方面出发,将PAC纳米混悬剂制备成冻干产品,能够保证储存的长期稳定性。
本发明PAC纳米混悬剂的拟定给药途径是静脉注射,所以应该严格控制粒径。经过6个月稳定性试验结果显示,PAC纳米混悬剂初始平均粒径167.3nm,6个月后平均粒径895nm;而且粒径聚集程度严重,纳米微米粒子共存。冻干后的PAC纳米混悬剂初始平均粒径172.6nm,6个月后平均粒径182.3nm,粒径几乎无大的变化。该结果表明PAC纳米混悬剂不能以混悬状态长期保存;冻干产品长期稳定性良好,能长期保存。PAC纳米混悬剂的拟定给药途径是静脉注射,故对粒径的控制应该严加要求。普通纳米混悬剂和冻干的纳米混悬剂相比,后者在保证粒径稳定性方面具有绝对的优势。
发明人还针对PAC制剂长期储存过程中载药量进行了监测,方法如下:
1.方法
1.1载药量测定方法
1.1.1盐酸阿霉素标准曲线的绘制
精密称取10.7mg盐酸阿霉素置于100mL容量瓶中,灭菌注射用水定容做储备液,超声5分钟使混合均匀。取盐酸阿霉素的储备液各0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2ml置于5ml容量瓶中,分别用灭菌注射用水定容,摇匀。紫外分光光度法,在480nm处测定上述一系列浓度梯度阿霉素溶液的吸光度A值。以吸光度A为纵坐标,阿霉素的质量浓度C (mg·mL-1)为横坐标,进行线性回归,得方程:A=0.0178C+0.0284,R2=0.9994(n=3)。
1.1.2PAC纳米混悬液载药量测定
精密吸取PAC纳米混悬液(按照优选方案制备)1mL置于50mL容量瓶中(PAC纳米混悬剂浓度7.76mg/mL),灭菌注射用水定容置振摇均匀后取适量于480nm出测定吸光度,带入标准曲线得阿霉素浓度Cx。PAC载药量=(Cx/7.76)*100%。
1.1.3PAC冻干制剂载药量测定
取PAC冻干制剂(按照优选方案制备)1瓶,2mL灭菌注射用水复溶成均匀的纳米混悬液。精密吸取复溶后的PAC纳米混悬液1mL置于50mL容量瓶中(PAC纳米混悬剂浓度7.76mg/mL),灭菌注射用水定容置振摇均匀后取适量于480nm出测定吸光度,带入标准曲线得阿霉素浓度Cx。PAC载药量=(Cx/7.76)*100%。
1.2PAC纳米混悬液的载药量监测
将新制备的PAC纳米混悬液按照2mg/mL的量分装于6个西林瓶中,避光后置于恒温恒湿箱中,控制温度为25℃,湿度为60%+10%。按照3天、10天、25天、50天、90天、6个月的间隔时间每次取样一瓶,按1.1.2项下测定载药量。
1.3PAC冻干制剂的载药量监测
抽取6瓶冻干处理后PAC纳米混悬液(参见冻干制剂的制备),避光后置于恒温恒湿箱中,控制温度为25℃,湿度为60%+10%。按照3天、10天、25天、50天、90天、半年的间隔时间每次取样一瓶,按照1.1.3项下测定载药量。
2.结果
制备PAC纳米混悬剂的原料药载药量为25.8%。PAC纳米混悬剂的载药量在放置过程中,有逐渐降低的趋势,6个月后的载药量变为20.3%。相较于没有冻干的纳米混悬液,PAC冻干制剂的载药量在放置过程中趋向于稳定,6个月后的载药量为24.6%。
将阿霉素(adriamycin,ADM)和果胶反应制备成的PAC是一种大分子前药。前药是一种无活性药物前体,在递送到靶部位之前不具有或者只具有很低的活性,到达靶部位后,经酶的催化或者非酶作用被激活,释放出活性物质从而发挥药理作用。PAC如果在储存过程中,就缓慢释放出ADM,对其体内的被动靶向抗癌活性将有很大影响。故PAC纳米混悬剂和纳米混悬剂的冻干制剂相比,冻干制剂具有明显的优势。
3.结论
从原料药载药量稳定性方面考虑,纳米混悬剂在放置过程中,纳米粒子粒径不稳定,有聚集增大的趋向;将纳米混悬剂制备成冻干产品后,纳米粒径稳定性增强;同时PAC在以水为介质的纳米混悬剂中,载药量不稳定,从最开始的25.8%降低至21.6%;将其制备成冻干产品后,载药量稳定性增强。因此将PAC纳米混悬剂制备成的冻干产品,能够更好的保证PAC储存的长期稳定性。
Claims (28)
1.果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液或纳米混悬液,加入冻干支撑剂,进行冷冻干燥处理,制成冻干制剂;
所述冻干支撑剂的添加量为40-120mg/mL;所述冻干支撑剂为甘露醇、右旋糖苷、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇或氯化钠中至少一种。
2.根据权利要求1所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂,其特征在于:所述冻干支撑剂为蔗糖。
3.根据权利要求1所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂,其特征在于:所述冻干支撑剂的添加量为80mg/mL。
4.权利要求1-3任一项所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:它包括如下步骤:
(1)将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液或纳米混悬液;
(2)加入冻干支撑剂,冷冻干燥,即可;
其中,所述冷冻干燥处理的方法为:
A、将混悬液分装至西林瓶中,在-40℃至-80℃的条件下预冻4-8小时;
B、再置于冷冻干燥机中,冷冻干燥,即可。
5.根据权利要求4所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:步骤A的预冻条件为:在-40℃的条件下预冻。
6.根据权利要求4或5所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:步骤A的预冻条件为:预冻6小时。
7.根据权利要求4所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:步骤B采用冷冻干燥机干燥至少24小时。
8.根据权利要求4所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、稳定剂,研磨成混悬液。
9.根据权利要求8所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:研磨成混悬液后,再制成纳米混悬液。
10.根据权利要求9所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:采用高压均质仪将混悬液制成纳米混悬液。
11.根据权利要求8所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:所述稳定剂是PVP、泊洛沙姆、十二烷基磺酸钠、聚山梨醇酯或羟丙甲纤维素中的至少一种。
12.根据权利要求11所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:所述PVP为PVP K-30。
13.根据权利要求12所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188或泊洛沙姆407。
14.根据权利要求11所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯-80。
15.根据权利要求4所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物500-900mg、PVP K-30 3000-6000mg和泊洛沙姆188 500-900mg,研磨成混悬液。
16.根据权利要求15所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:在每100mL灭菌注射用水中,加入果胶-阿霉素轭合物776mg、PVP K-30 4000mg和泊洛沙姆188 700mg,研磨成混悬液。
17.根据权利要求15所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:它是按照每100mL灭菌注射用水中加入PAC500-900mg、PVP K-30 3000-6000mg、泊洛沙姆188 500-900mg、蔗糖4000-12000mg进行配制,然后再进行冷冻干燥,制成冻干制剂。
18.根据权利要求17所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:它是按照每100mL灭菌注射用水中加入PAC776mg、PVP K-30 4000mg、泊洛沙姆188700mg、蔗糖8000mg进行配制,然后再进行冷冻干燥,制成冻干制剂。
19.根据权利要求4所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:将0.3-0.6gPAC,加入0.4-1.6gPVP、2-6ml甘油和1-3%的卵磷脂溶液40-60ml做溶剂,制成混悬液。
20.根据权利要求19所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:将0.468g PAC,加入1g PVP,3ml甘油和2%的卵磷脂溶液50ml做溶剂,研磨制成混悬液。
21.根据权利要求4-7任一项所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:将0.3-0.6gPAC,加入0.4-1.6gPVP、40-60ml水和DMSO的混合溶剂,制成混悬液;其中,水:DMSO=0.5-0.85:0.15-0.5。
22.根据权利要求21所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:将难溶性果胶-阿霉素轭合物制成混悬液的方法如下:将0.468gPAC,加入1g PVP,50ml水和DMSO的混合溶剂,制成混悬液;其中,所述水:DMSO=0.75:0.25。
23.根据权利要求21所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:所述水:DMSO=0.75:0.25。
24.根据权利要求19-23任一项所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:制成混悬液后,采用高压均质仪处理,制成纳米混悬液。
25.根据权利要求24所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:采用高压均质仪处理制备纳米混悬液,每次压力不大于200mpa。
26.根据权利要求25所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:采用高压均质仪处理制备纳米混悬液,第一次压力120mpa,第二次压力180mpa,第三次压力190mpa。
27.权利要求15或16所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:按权利要求15或16称取各组分,然后按照如下方法制备果胶-阿霉素轭合物的纳米混悬液:
A、取PVP K-30,用灭菌注射用水配成PVP K-30溶液;
B、取PAC、泊洛沙姆188干磨使混合均匀,然后加入少许PVP K-30溶液充分研磨;
C、分次加入剩余的PVP K-30溶液研磨;
D、将研磨后的混悬液超声,使其充分混合,制成混悬液;
E、将步骤D混合均匀的混悬液用高压均质仪处理:先控制仪器压力为4000-8000PSI,样品循环处理3-10分钟,后固定仪器压力为20000-30000PSI,样品循环处理15-30分钟;即得纳米混悬液。
28.根据权利要求27所述的所述的果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂的制备方法,其特征在于:步骤E所述用高压均质仪处理:先控制仪器压力为5000PSI,样品循环处理3分钟,后固定仪器压力为25000PSI,样品循环处理20分钟。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010189969XA CN102232932B (zh) | 2010-04-27 | 2010-06-03 | 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 |
CA2795275A CA2795275C (en) | 2010-04-27 | 2011-04-22 | Lyophilized formulation of pectin-adriamycin conjugate and preparation method thereof |
JP2013506468A JP5848326B2 (ja) | 2010-04-27 | 2011-04-22 | ペクチン−アドリアマイシン共役体の凍結乾燥製剤および製造方法 |
PCT/CN2011/073153 WO2011134368A1 (zh) | 2010-04-27 | 2011-04-22 | 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 |
US13/695,048 US20130172283A1 (en) | 2010-04-27 | 2011-04-22 | Lyophilized formulation of pectin-adriamycin conjugate and preparation method thereof |
EP11774359.1A EP2564874B1 (en) | 2010-04-27 | 2011-04-22 | Lyophilized formulation of pectin-adriamycin conjugate and preparation method thereof |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010157856.1 | 2010-04-27 | ||
CN201010157856 | 2010-04-27 | ||
CN201010189969XA CN102232932B (zh) | 2010-04-27 | 2010-06-03 | 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102232932A CN102232932A (zh) | 2011-11-09 |
CN102232932B true CN102232932B (zh) | 2013-06-05 |
Family
ID=44860860
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201010189969XA Active CN102232932B (zh) | 2010-04-27 | 2010-06-03 | 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130172283A1 (zh) |
EP (1) | EP2564874B1 (zh) |
JP (1) | JP5848326B2 (zh) |
CN (1) | CN102232932B (zh) |
CA (1) | CA2795275C (zh) |
WO (1) | WO2011134368A1 (zh) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105311642B (zh) * | 2014-05-28 | 2018-11-02 | 重庆莱美药业股份有限公司 | 一种果胶抗癌前药的合成工艺 |
CN106551919B (zh) * | 2015-09-30 | 2020-12-18 | 北京天衡药物研究院有限公司 | 新型吸入制剂 |
CN105879052B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-02-15 | 北京林业大学 | 一种果胶-多臂聚乙二醇自组装制备纳米药物的方法 |
CN109771660A (zh) * | 2019-03-07 | 2019-05-21 | 北京林业大学 | 一种具有pH响应果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子的制备 |
CN110152013B (zh) * | 2019-06-18 | 2022-04-26 | 四川瀛瑞医药科技有限公司 | 一种果胶-阿霉素轭合物及其制备方法和用途 |
WO2020252648A1 (zh) * | 2019-06-18 | 2020-12-24 | 四川瀛瑞医药科技有限公司 | 一种果胶-阿霉素轭合物及其制备方法和用途 |
CN112608364B (zh) * | 2020-12-09 | 2023-08-29 | 四川瀛瑞医药科技有限公司 | 一种果胶-阿霉素轭合物及其中间体的制备方法 |
CN113332250B (zh) * | 2021-07-15 | 2022-11-04 | 诺言医药科技(上海)有限公司 | 一种谷氨酰胺酶抑制剂冻干粉及其制备方法和应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101134109A (zh) * | 2007-09-17 | 2008-03-05 | 成都市药友科技发展有限公司 | 一种抗癌前药及其制备方法和用途 |
CN101721714A (zh) * | 2009-12-18 | 2010-06-09 | 重庆莱美药业股份有限公司 | 实体瘤被动靶向性抗癌前药及其制备方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5576016A (en) * | 1993-05-18 | 1996-11-19 | Pharmos Corporation | Solid fat nanoemulsions as drug delivery vehicles |
US6277828B1 (en) * | 1993-08-20 | 2001-08-21 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Pharmaceutical formulations of nerve growth factor |
DE4440337A1 (de) * | 1994-11-11 | 1996-05-15 | Dds Drug Delivery Services Ges | Pharmazeutische Nanosuspensionen zur Arzneistoffapplikation als Systeme mit erhöhter Sättigungslöslichkeit und Lösungsgeschwindigkeit |
EP1269994A3 (en) * | 2001-06-22 | 2003-02-12 | Pfizer Products Inc. | Pharmaceutical compositions comprising drug and concentration-enhancing polymers |
US8232245B2 (en) * | 2006-07-26 | 2012-07-31 | Sandoz Ag | Caspofungin formulations |
FR2904219B1 (fr) * | 2006-07-28 | 2010-08-13 | Flamel Tech Sa | Microparticules a base de copolymere amphiphile et de principe(s) actif(s) a liberation modifiee et formulations pharmaceutiques en contenant |
EP2337580B1 (en) * | 2008-09-03 | 2012-03-28 | Octapharma AG | Stabilized compositions for recombinantly produced factor viii |
CN100588429C (zh) * | 2008-12-23 | 2010-02-10 | 重庆莱美药业股份有限公司 | 一种pH敏感型抗癌前药及其制备方法和用途 |
-
2010
- 2010-06-03 CN CN201010189969XA patent/CN102232932B/zh active Active
-
2011
- 2011-04-22 EP EP11774359.1A patent/EP2564874B1/en active Active
- 2011-04-22 JP JP2013506468A patent/JP5848326B2/ja active Active
- 2011-04-22 CA CA2795275A patent/CA2795275C/en active Active
- 2011-04-22 WO PCT/CN2011/073153 patent/WO2011134368A1/zh active Application Filing
- 2011-04-22 US US13/695,048 patent/US20130172283A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101134109A (zh) * | 2007-09-17 | 2008-03-05 | 成都市药友科技发展有限公司 | 一种抗癌前药及其制备方法和用途 |
CN101721714A (zh) * | 2009-12-18 | 2010-06-09 | 重庆莱美药业股份有限公司 | 实体瘤被动靶向性抗癌前药及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20130172283A1 (en) | 2013-07-04 |
EP2564874A1 (en) | 2013-03-06 |
CA2795275C (en) | 2014-08-19 |
EP2564874B1 (en) | 2019-08-14 |
EP2564874A4 (en) | 2016-03-09 |
CN102232932A (zh) | 2011-11-09 |
JP5848326B2 (ja) | 2016-01-27 |
JP2013525385A (ja) | 2013-06-20 |
CA2795275A1 (en) | 2011-11-03 |
WO2011134368A1 (zh) | 2011-11-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102232932B (zh) | 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法 | |
Yang et al. | Recent advances in the application of vitamin E TPGS for drug delivery | |
Qu et al. | Docetaxel-loaded human serum albumin (HSA) nanoparticles: synthesis, characterization, and evaluation | |
Kalaria et al. | Design of biodegradable nanoparticles for oral delivery of doxorubicin: in vivo pharmacokinetics and toxicity studies in rats | |
EP2019664B1 (en) | Stable pharmaceutical composition containing docetaxel and a method of manufacturing the same | |
US6537579B1 (en) | Compositions and methods for administration of pharmacologically active compounds | |
Yang et al. | In vivo biodistribution, biocompatibility, and efficacy of sorafenib-loaded lipid-based nanosuspensions evaluated experimentally in cancer | |
Shi et al. | Recent advances in intravenous delivery of poorly water-soluble compounds | |
CN102327230B (zh) | 一种包裹紫杉烷类药物的蛋白纳米颗粒及其制备方法 | |
Sui et al. | Synergistic chemotherapeutic effect of sorafenib-loaded pullulan-Dox conjugate nanoparticles against murine breast carcinoma | |
CN101495148B (zh) | 包括至少一种抗癌药和至少一种聚合物的药物组合物 | |
He et al. | Encapsulation of teniposide into albumin nanoparticles with greatly lowered toxicity and enhanced antitumor activity | |
CN102357077B (zh) | 一种包裹难溶性药物的蛋白纳米颗粒及其制备方法 | |
Pang et al. | Human serum albumin nanoparticulate system with encapsulation of gefitinib for enhanced anti-tumor effects in non-small cell lung cancer | |
CN101843582B (zh) | 紫杉醇纳米混悬剂及其制备方法 | |
Gong et al. | Multifunctional nanoplatform based on star-shaped copolymer for liver cancer targeting therapy | |
CN100508969C (zh) | 紫杉烷环糊精包合物纳米粒及其制备方法 | |
CN102665689B (zh) | 奥沙利铂纳米颗粒及其制备方法 | |
Xu et al. | Anti-Cancer activity based on the high docetaxel loaded poly (2-Oxazoline) s micelles | |
CN106852911B (zh) | 一种稳定的卡巴他赛白蛋白组合物及其制备方法 | |
Huang et al. | Tumor-targeted paclitaxel-loaded folate conjugated poly (ethylene glycol)-poly (L-lactide) microparticles produced by supercritical fluid technology | |
US20160128971A1 (en) | Nanoparticle Compositions | |
CN102357076B (zh) | 一种包裹难溶性药物的蛋白纳米颗粒的制备方法 | |
Dehghan et al. | Enhanced in vitro and in vivo anticancer activity through the development of Sunitinib-Loaded nanoniosomes with controlled release and improved uptake | |
CN103263672A (zh) | 一种紫杉烷类药物纳米粒的制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200409 Address after: 610041 1-5 floors of the 1480 hatchery in the north section of Tianfu Avenue, Chengdu high tech Zone, Sichuan Patentee after: Sichuan Yingrui Pharmaceutical Technology Co.,Ltd. Address before: 401123 No. 8, Rose Road, Nan'an District, Chongqing Patentee before: CHONGQING LUMMY PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
TR01 | Transfer of patent right |