BRPI0611966B1 - Composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e composição farmacêutica os compreendendo - Google Patents

Composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e composição farmacêutica os compreendendo Download PDF

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BRPI0611966B1
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amide
carboxylic acid
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BRPI0611966-2A
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Charles D. Smith
Kevin J. French
Yan Zhuang
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Apogee Biotechnology Corporation
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Abstract

COMPOSTO OU SOLVATO, HIDRATO OU SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DO MESMO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, PROCESSO, E, MÉTODOS DE INIBIÇÃO DE ESFINGOSINA-CINASE EM UM PACIENTE EM NECESSIDADE DE TAL INIBIÇÃO, PARA TRATAR UM DISTÚRBIO E UMA DOENÇA. A invenção refere-se aos compostos de adamantano substituídos, às suas composições farmacêuticas, aos processos para a sua preparação, e aos métodos para inibir esfingosina-cinase e para tratar ou prevenir doença hiperproliferativa, doença inflamatória, ou doença angiogênica.

Description

REFERÊNCIA AOS PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido é um pedido não provisório reivindicando prioridade sob 35 U.S. C. section 119(e) ao pedido provisório No. 60/691.563 depositado aos 17 de junho de 2005, cujo conteúdo é aqui incorporado como referência.
PATROCÍNIO GOVERNAMENTAL
[002] Esta invenção foi feita com o suporte governamental Grant R43 CA097833 concedido pelo United States Public Health Service. Conseqüentemente, o governo US possui certos direitos nesta invenção.
CAMPO DA INVENÇÃO
[003] A invenção refere-se aos compostos que são capazes de inibir esfingosina cinase e aos processos para a síntese destes compostos. A invenção também se refere às composições farmacêuticas compreendendo estes compostos e aos métodos para o uso destes compostos e composições farmacêuticas para tratar ou prevenir doença hiperproliferativa, doença inflamatória, ou doença angiogênica.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[004] Os mecanismos e efeitos da interconversão de esfingolipídeos têm sido os temas de um corpo crescente de investigação científica. Esfingomielina é não apenas um bloco de construção para membranas celulares mas também serve como o precursor para mensageiros lipídicos potentes que possuem efeitos celulares profundos. Como descrito abaixo, metabolismo destes lipídeos induzido por estímulo está criticamente envolvido na biologia de doenças hiperproliferativas, inflamatórias, e angiogênicas. Conseqüentemente, manipulação destas rotas metabólicas é um método novo para a terapia de uma variedade de doenças.
[005] Ceramida é produzida pela hidrólise de esfingomielina em resposta a vários estímulos, incluindo fatores de crescimento e citocinas inflamatórias. Ceramida induz apoptose em células cancerosas. Adicionalmente, ceramida pode ser hidrolisada pela ação de ceramidase para produzir esfingosina. Esfingosina é então fosforilada por esfingosina cinase (SK) para produzir esfingosina-1-fosfato (S1P). Evidência demonstra que S1P é um segundo mensageiro crítico que exerce ações proliferativas e anti- apoptóticas. Adicionalmente, ceramida intensifica apoptose em resposta às drogas anti-câncer incluindo Taxol e etoposida. Em adição, ceramida parece induzir apoptose em células de tumor sem matar células normais quiescentes. Estudos em várias linhagens de célula consistentemente indicaram que S1P é capaz de induzir proliferação e proteger células da apoptose. Juntos, os dados demonstram que o equilíbrio entre níveis celulares de ceramida e de S1P determina se uma célula cancerosa se prolifere ou morre por apoptose. Portanto, alteração deste equilíbrio pela redução da produção de S1P dentro de células hiperproliferativas é um método efetivo para tratar distúrbios decorrentes da proliferação anormal de células.
[006] Esfingosina cinase é responsável pela produção de S1P em células. RNA codificador de SK é expressado na maioria dos tecidos, com níveis maiores muitas vezes ocorrendo em tecido de tumor do que em tecido normal correspondente. Uma variedade de fatores proliferativos, incluindo ativadores de Proteína Cinase C (PKC), soro fetal bovino, Fator de Crescimento Derivado de Plaqueta, Fator de Crescimento Epidérmico, e Fator-alfa de Necrose Tumoral (TNFα) rapidamente elevam a atividade de SK celular. Isto promove a proliferação e inibe apoptose de células alvo. Adicionalmente, um papel oncogênico de SK tem sido demonstrado. Nestes estudos, transfecção de SK para dentro de fibroblastos NIH/3T3 foi suficiente para promover formação de focos e crescimento celular em ágar macio, e para permitir que estas células formem tumores em camundongos NOD/SCID. Adicionalmente, inibição de SK por transfecção com uma SK negativa dominante mutante ou pelo tratamento das células com o inibidor de SK não específico D-eritro-N,N-dimetil-esfingosina (DMS) bloqueou transformação mediada por H-Ras oncogênico. Visto que ativação anormal de Ras, bem como superexpressão e mutação de genes da família ras, freqüentemente ocorre em câncer, estas descobertas indicam um papel significativo de SK nesta doença.
[007] Em adição a seu papel em regulação de proliferação e apoptose de célula, tem sido mostrado que S1P possui vários efeitos importantes sobre células que medeiam funções imunes. Plaquetas, monócitos e mastócitos secretam S1P sob ativação, promovendo cascatas inflamatórias no sítio de dano de tecido. Ativação de SK é requerida para as respostas de sinalização porque a capacidade de TNFα para induzir expressão de molécula de adesão via ativação de Fator Nuclear Capa B (NFKB) é imitada por S1P e é bloqueada por DMS. Similarmente, S1P imita a capacidade de TNFα para induzir a expressão de Ciclooxigenase-2 (COX-2) e a síntese de prostaglandina E2 (PGE2), e enfraquecimento de SK por interferência de RNA bloqueia estas respostas ao TNFα mas não S1P. S1P também é um mediador de influxo de Ca2+ durante ativação de neutrófilo por TNFα e outros estímulos, acarretando a produção de superóxido e outros radicais tóxicos. Portanto, redução da produção de S1P dentro de células imunes e seus tecidos alvo pode ser um método efetivo para tratar distúrbios decorrentes de inflamação anormal. Exemplos de tais distúrbios incluem doença inflamatória do intestino, artrite, aterosclerose, asma, alergia, doença inflamatória do rim, choque circulatório, esclerose múltipla, doença pulmonar obstrutiva crônica, inflamação de pele, doença periodontal, psoríase e doenças de imunidade mediadas por célula T. Angiogênese refere-se ao estado no corpo no qual vários fatores de crescimento ou outros estímulos promovem a formação de vasos sanguíneos novos, e este processo é crítico para a patologia de uma variedade de doenças. Em cada caso, angiogênese excessiva permite a progressão da doença e/ou produz efeitos indesejados no paciente. Visto que mecanismos bioquímicos conservados regulam a proliferação de células endoteliais vasculares que formam estes vasos sanguíneos novos, é esperado que a identificação de métodos para inibir estes mecanismos tenha utilidade para o tratamento e a prevenção de uma variedade de doenças. Mais especificamente, certos fatores de crescimento têm sido identificados os quais acarretam a angiogênese patogênica. Por exemplo, Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF) possui capacidades angiogênicas e mitogênicas. Especificamente, VEGF induz proliferação celular endotelial vascular, favorecendo a formação de vasos sanguíneos novos. Esfingosina cinase é um mediador importante das ações de VEGF. Por exemplo, tem sido mostrado que SK medeia ativação de Proteína Cinases induzida por VEGF. Também tem sido mostrado que VEGF especificamente induz receptores de S1P, associados com respostas de sinalização intracelular intensificadas ao S1P e a potenciação de suas ações angiogênicas. Produção de S1P por SK estimula atividade de NFKB acarretando a produção de COX-2, produção de moléculas de adesão e produção adicional de VEGF, todos os quais promovem angiogênese. Em adição, a expressão de isoformas endoteliais de óxido nítrico sintase (eNOS) é regulada por SK, e eNOS também subseqüentemente modula angiogênese. Portanto, redução da produção de S1P dentro de células endoteliais é provavelmente um método efetivo para tratar distúrbios decorrentes de angiogênese anormal. Exemplos de tais distúrbios incluem artrite, câncer, psoríase, sarcoma de Kaposi, hemangiomas, angiogênese miocardial, aterosclerose, e doenças angiogênicas vasculares.
[008] A despeito do nível alto de interesse em sinalização derivada de esfingolipídeo, há muitos poucos inibidores conhecidos das enzimas desta rota e a utilidade de inibição farmacológica de SK in vivo não tem sido previamente demonstrada. Em particular, o campo sofre de uma falta de inibidores potentes e seletivos de SK. Estudos farmacológicos até o presente têm usado três compostos para inibir a atividade de SK: DMS, D,L-treo-di- hidro-esfingosina e N,N,N-trimetil-esfingosina. Contudo, estes compostos não são inibidores específicos de SK e tem sido mostrado que inibem várias outras proteína e lipídeo cinases. Portanto inibidores de SK melhorados são requeridos para uso como agentes antiproliferativos, antiinflamatórios e antiangiogênicos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[009] Neste pedido, descrevemos compostos novos que exibem as atividades desejáveis mencionadas acima. Conseqüentemente, a invenção inclui os compostos de fórmula (I), mostrada abaixo, processos para a síntese destes compostos, composições farmacêuticas contendo tais compostos, e métodos empregando tais compostos ou composições no tratamento ou na prevenção de doença hiperproliferativa, doença inflamatória, ou doença angiogênica, e mais especificamente compostos que são capazes de inibir SK.
[0010] Em um aspecto, a invenção proporciona compostos de fórmula I:
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e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na qual: L é uma ligação ou é -C(R3,R4)-; X é -C(R33R4)N(R5)-, -C(O)N(R4)-, -N(R4)C(O)-, -C(R4,R5)-, - N(R)-, -O-, -S-, -C(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R4)- ou -N(R)S(O)2-; RI é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-1-heterociclo-alquila, acil, aroil, halogênio, halo-alquila, alcóxi, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio-carbamoíla; R2 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alqull-heterociclo-alquila, acil, aroil, halogênio, halo-alquila, alcóxi, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -COzCalquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, mono ou dialquil-tio-carbamoíla, alquil-S-alquila, -heteroaril-arila, -alquil-heteroaril-arila, -C(O)-NH-arila, - alquenil-heteroarila, -C(O)-heteroarila, ou -alquenil-heteroaril-arila; R3 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, oxo (=O), -COOH, OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, - CO2(alquil), -OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio- carbamoíla; no qual a porção de anel e alquila de cada um dos grupos R1, R2, e R3 acima está opcionalmente substituída com até 5 grupos que são independentemente (C1-C6) alquila, halogênio, halo-alquila, -OC(O)(C1-C6 alquil), -C(O)O(CrC6 alquil), -CONR’R”, -OC(O)NR’R”, -NR’C(O)R”, -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 alcoxila, hidróxi-alquila, -CN, -CO2H, -SH, -S-alquila, - SOR’R”, -SO2R, -NO2, ou NRR", nos quais R e R" são independentemente H ou (C1-C6) alquila, e nos quais cada porção alquila de um substituinte está opcionalmente adicionalmente substituída com 1, 2, ou 3 grupos independentemente selecionados de halogênio, CN, OH, e NH2; e R4 e R5 são independentemente H ou alquila, com a condição de que quando R3 e R4 estiverem no mesmo carbono e R3 será oxo, então R4 está ausente.
[0011] A invenção também proporciona processos para a síntese de compostos de fórmula I.
[0012] A invenção também proporciona composições farmacêuticas compreendendo um composto ou sal de fórmula I e pelo menos um diluente, adjuvante, solvente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
[0013] A invenção também proporciona métodos para o tratamento ou a prevenção de doença hiperproliferativa, doença inflamatória, ou doença angiogênica.
[0014] A invenção também proporciona métodos para inibição de esfingosina cinase em uma célula. Os compostos da invenção são inibidores potentes e seletivos de SK. Portanto, a invenção proporciona inibidores de SK que são úteis como agentes antiproliferativos, antiinflamatórios e antiangiogênicos. Modalidades preferidas específicas da invenção se tornarão evidentes a partir da seguinte descrição mais detalhada de certas modalidades preferidas e as reivindicações.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0015] Figura 1. Inibição de crescimento de tumor por inibidores de SK. Camundongos fêmeas Balb/c foram subcutaneamente injetados com células de adenocarcinoma murino JC suspensas em PBS. Após crescimento de tumor palpável, animais foram tratados por gavagem oral quer de 100 μL de PEG400 (controle, quadrados vazios) ou 100 mg/kg de Composto 62 (triângulos) ou Composto 57 (círculos) em dias ímpares. Medição de peso corporal inteiro e de volume de tumor foram realizadas por até 18 dias. * p < 0,05. Inseto: pesos corporais médios de camundongos de cada grupo durante o curso do estudo.
[0016] Figura 2. Relações de dose-resposta para inibição de crescimento de tumor pelo Composto 62. Camundongos fêmeas Balb/c foram injetados subcutaneamente com células JC suspensas em PBS. Após crescimento de tumor palpável, animais foram tratados por gavagem oral quer de 100 μL de PEG400 (controle, quadrados vazios) ou Composto 62 a 3,5 mg/kg (círculos), 10 mg/kg (triângulos invertidos), 35 mg/kg (triângulos) ou 100 mg/kg (quadrados) nos dias ímpares. Medições de peso corporal total e de volume de tumor foram realizadas por até 18 dias.
[0017] Figura 3. Efeitos de Composto 62 sobre vazamento vascular induzido por VEGF. Camundongos nus foram injetados intraperitonealmente com DMSO (Controle, barra vazia) ou 75 mg/kg de Composto 62 (barra hachurada) ou dando 100 mg/kg de Composto 62 por gavagem oral (barra sólido). Após 30 minutos, corante Azul de Evan foi injetado intravenosamente e os animais receberam injeções subcutâneas subseqüentes quer de PBS quer de 400 ng de VEGF. As áreas de vazamento vascular em cada animal foram então quantificadas. Valores representam a média ± SD de áreas de vazamento vascular. *p < 0,01.
[0018] Figura 4. Efeitos de Composto 62 sobre permeabilidade vascular retinal em ratos diabéticos. Ratos foram tornados diabéticos pela administração de estreptozotocina, e foram deixados não tratados por 45 dias. Do Dia 45 ao Dia 87, ratos de Controle (barras vazias) e ratos Diabéticos foram tratados com solvente (barras sombreadas) ou Composto 62 a 25 mg/kg (barras horizontalmente hachuradas) ou 75 mg/kg (barras inclinadamente hachuradas). No Dia 87, vazamento retinal em cada animal foi medido. Valores representam a média ± sd para 3-5 ratos por grupo.
[0019] Figura 5. Inibição pelo Composto 62 da ativação de NFKB induzida por TNFα. Fibroblastos transfectados com um promotor responsivo a TNFα ligado em luciferase foram tratados com as concentrações indicadas de Composto 62 e então tratados com TNFα por 6 horas. A quantidade de luciferase expressada pelas células foi então medida por luminescência. Valores representam a média ± sd de atividade de luciferase em amostras em triplicata em um experimento típico.
[0020] Figura 6. Inibição pelo Composto 62 da atividade de Cox-2 induzida por TNFα. Células IEC6 de rato (Painel A) ou células endoteliais de humano (Painel B) foram incubadas por 18 horas com dimetil-sulfóxido (DMSO) como um controle de solvente, ou 100 ng de TNFα/mL na presença de DMSO ou 10 μg/mL de Composto 62. Níveis de PGE2 secretado para dentro do meio foram quantificados por ELISA. Valores representam a média ± sd para amostras triplicatas em um experimento típico.
[0021] Figura 7. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre DAI em modelo de DSS-colite aguda. Camundongos C57BL/6 foram tratados por 6 dias como segue: água potável normal e administração oral diária de PEG (sem DSS), 2% DSS na água potável e administração oral diária de PEG (DSS apenas); 2% DSS na água potável e administração oral diária de 50 mg/kg de Composto 62 em PEG (DSS + Composto 62), ou 2% DSS em água potável e administração oral diária de 50 mg/kg de Dipentum em PEG (DSS + Dipentum). No dia indicado, o Índice de Atividade de Doença foi calculado para cada grupo. Valores representam a média ± sd por 5-6 camundongos por grupo.
[0022] Figura 8. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre o comprimento de cólon no modelo de DSS-colite aguda. Camundongos do experimento descrito em Figura 7 foram mortos no Dia 6, e o cólon foi colhido de cada animal e medido. Dados representam a média ± sd de comprimento de cólon.
[0023] Figura 9. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre o Escore de Histologia de cólon no modelo de DSS-colite aguda. Camundongos do experimento descrito em Figura 7 foram mortos no Dia 6, e o cólon foi colhido de cada animal e o Escore de Histologia foi determinado. Valores representam a média ± sd para 5-6 camundongos por grupo.
[0024] Figura 10. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre infiltração de neutrófilo para dentro de cólon no modelo de DSS-colite aguda. Atividade de mieloperoxidase dos cólons dos animais descritos em Figura 7 foi medida. Valores da média ± sd de atividade de MPO em unidades por grama de tecido.
[0025] Figura 11. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre níveis de citocina colônica no modelo de DSS-colite aguda. Amostras de cólon de camundongos descritos em Figura 7 foram extraídas e ensaiadas para os níveis das citocinas indicadas. Valores representam a média ± sd de quantidade de cada citocina em 4-5 amostras por grupo.
[0026] Figura 12. Efeitos de Composto 62 sobre os níveis de S1P nos cólons dos animais no modelo de DSS-colite. Amostras de cólon dos camundongos em Figura 7 foram extraídas e ensaiadas para os níveis de S1P por LC/MS/MS. Valores representam a média ± sd para 4-5 amostras por grupo.
[0027] Figura 13. Efeitos de Composto 62 sobre DAI no modelo de DSS-colite crônica. Camundongos receberam 2 ciclos (7 dias por ciclo) de DSS (1,5% ciclo 1 e 1% ciclo 2), 2 ciclos de água potável normal e foram randomizados por DAI no Dia 28 em grupos de 8 camundongos. Os camundongos foram então tratados como segue: Sem DSS (^)-água potável normal e oralmente dosados com PEG400 todos os dias por 7 dias (controle - água); DSS sozinho (A)-água potável contendo 1,5% DSS e oralmente dosados com PEG diariamente por 7 dias; DSS + Composto 62 (^)-água potável contendo 1,5% DSS e oralmente dosados com Composto 62 (50 mg/kg) todos os dias por 7 dias; DSS + Dipentum (^)-água potável contendo 1,5% DSS e oralmente dosados com Dipentum (50 mg/kg). *p < 0,001 versus grupo Sem DSS.
[0028] Figura 14. Efeitos de Composto 62 sobre níveis de S1P nos cólons dos animais no modelo de DSS-colite crônica. Amostras de cólon dos camundongos descritos em Figura 13 foram extraídas e ensaiadas para os níveis de S1P por LC/MS/MS. Valores representam a média ± sd para 8 amostras por grupo; * p<0,05 versus grupo Sem DSS.
[0029] Figura 15. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre níveis de citocina colônica no modelo de DSS-colite crônica. Amostras de cólon dos camundongos descritos em Figura 13 foram extraídas, e ensaiadas para os níveis de citocinas indicadas. Valores representam a média ± SD de quantidade em 8 amostras por grupo.
[0030] Figura 16. Efeitos de Composto 62 e Dipentum sobre níveis de citocina sérica no modelo de DSS-colite crônica. Soro dos camundongos descritos em Figura 13 foi ensaiado para os níveis das citocinas indicadas. Valores representam a média ± SD de quantidade em 8 amostras por grupo.
[0031] Figura 17. Efeitos de Composto 62 sobre progressão da doença no modelo de CIA em camundongos. Camundongos fêmeas DBA/1 foram injetados com colágeno, reforçados após 3 semanas e então monitorados para sintomas de artrite. Sob manifestação da doença, grupos de camundongos foram tratados por 12 dias como segue: (A) Composto 62 (100 mg/kg dados oralmente cada dia por 6 dias por semana); ou (■) veículo (PEG400 dado sob o mesmo planejamento). No Dia de tratamento indicado, o escore clínico médio (A) e o diâmetro médio de para traseira (B) foram determinados. * p < 0,05 versus grupo de PEG400 sozinho.
[0032] Figura 18. Efeitos de Composto 62 sobre progressão da doença em modelo de artrite induzida por adjuvante em ratos. Ratos machos Lewis foram injetados subcutaneamente com Mycobacterium butyricum, e sintomas de reatividade imune estiveram presentes após 2 semanas. Ratos responsivos foram randomizados nos grupos de tratamento (n = 8 por grupo), e receberam doses orais diárias de: solvente sozinho (0,375% Tween-80); 100 mg/kg de Composto 62 (ABC294640); 35 mg/kg de Composto 62; ou 5 mg/kg de Composto 62, ou injeções intraperitoneais de indometacina (5 mg/kg) dia sim, dia não. A severidade de doença em cada animal foi quantificada pela medição da espessura da pata traseira. Painel A. Curso de tempo de resposta artrítica de para traseira. Painel B. Medições de espessura de para traseira no Dia final (Dia 10). Painel C. Mudança em espessura de pata do grupo respectivo versus ratos não-artríticos (não-experimentados) no Dia 10. *, p<0,05; ***, p<0,001 versus grupos de solvente apenas.
DESCRIÇÃO DA MODALIDADE PREFERIDA
[0033] Todas as patentes e publicações aqui referidas são por meio desta incorporadas como referências para todos os propósitos.
[0034] A não ser que os substituintes para uma fórmula particular sejam expressamente definidos para aquela fórmula, são entendidos para trazerem as definições descritas em conexão com a fórmula precedente à qual a fórmula particular faz referência.
[0035] Como notado acima, a invenção proporciona compostos de fórmula I:
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e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na qual: L é uma ligação ou é -C(R3,R4)-; X é -C(R3,R4)N(R5)-, - C(O)N(R4)-, -N(R4)C(O)-, -C(R4,R5)-, -N(R)-, -O-, -S-, -C(O)-, -S(O)2-, - S(O)2N(R4)- ou -N(R4)S(O)2-; RI é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio-carbamoíla; R2 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, 5 alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -COzCalquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, mono ou dialquil-tio-carbamoíla, alquil-S-alquila, -heteroaril-arila, -alquil-heteroaril-arila, -C(O)-NH-arila, - alquenil-heteroarila, -C(O)-heteroarila, ou -alquenil-heteroaril-arila; R3 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, oxo (=O), -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, - CO2(alquil), -OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio- carbamoíla; no qual a porção de anel e alquila de cada um dos grupos R1, R2, e R3 acima está opcionalmente substituída com até 5 grupos que são independentemente (C1-C6) alquila, halogênio, halo-alquila, -OC(O)(C1-C6 alquil), -C(O)O(C1-C6 alquil), -CONR'R", -OC(O)NR’R”, -NRC(O)R", -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 alcoxila, hidróxi-alquila, -CN, -CO2H, -SH, -S-alquila, - SOR'R", -SO2R’, -NO2, ou NR’R”, nos quais R’ e R” são independentemente H ou (C1-C6) alquila, e nos quais cada porção alquila de um substituinte está opcionalmente adicionalmente substituída com 1, 2, ou 3 grupos independentemente selecionados de halogênio, CN, OH, NH2; e R4 e R5 são independentemente H ou alquila, com a condição de que quando R3 e R4 estiverem no mesmo carbono, e R3 for oxo, então R4 estará ausente.
[0036] Compostos de fórmula I preferidos incluem compostos nos quais L é uma ligação.
[0037] Compostos de fórmula I preferidos também incluem compostos nos quais L é uma ligação e X é -C(R3R4)-. Mais preferivelmente, R3 e R4 formam um grupo oxo (=O). Compostos de fórmula I preferidos também incluem compostos nos quais R1 é H.
[0038] Compostos de fórmula I preferidos também incluem compostos nos quais R1 é arila opcionalmente substituída. Preferivelmente, arila é fenila. Também preferivelmente, fenila está não substituída ou substituída com halogênio. Substituintes halogênio preferidos são Cl e F.
[0039] Compostos de fórmula I preferidos incluem adicionalmente compostos nos quais R2 is OH. Compostos de fórmula I preferidos incluem adicionalmente compostos nos quais R2 é C1-C6 alquila, mais preferivelmente C1-C3 alquila, e ainda mais preferivelmente, CH3.
[0040] Compostos de fórmula I preferidos incluem adicionalmente compostos nos quais R2 é alquenil-arila. Preferivelmente, a porção arila de alquenil-arila é fenila ou naftila, opcionalmente substituída com 1 ou 2 de halogênio, ciano, ou hidroxila. Os compostos de fórmula I preferidos incluem adicionalmente compostos nos quais R2 é -alquenil-heteroarila.
[0041] Compostos de fórmula I preferidos incluem adicionalmente compostos nos quais R2 é -alquenil-heteroaril-arila.
[0042] Compostos de fórmula I preferidos incluem compostos de fórmula 1-1:
Figure img0003
e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na qual: R1 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-O heterociclo- alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi- alquila, alcanoíla, -COOH,-OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, - CO2(alquil)5-0C(0)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio- carbamoíla; e R2 é H3 alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, 5 alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, mono ou dialquil-tio-carbamoíla, alquil-S-alquila, -0 heteroaril-arila, -alquil-heteroaril-arila, -NH-arila, - alquenil-heteroarila, -heteroarila, -NH-alquila, -NH-ciclo-alquila, ou - alquenil-heteroaril-arila, no qual a porção de anel e alquila de cada um dos grupos R1 e R2 acima está opcionalmente substituída com até 5 grupos que são independentemente (C1-C6) alquila, halogênio, halo-alquila, -OC(O)(C1- C6 alquil), -C(O)O(C1-C6 alquil), -CONRR", -OC(O)NR’R”, 5-NRC(O)R", - CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 alcoxila, hidróxi-alquila, -CN, -CO2H, -SH, -S- alquila, -SORR", -SO2R, -NO2, ou NRR", nos quais R e R" são independentemente H ou (C1-C6) alquila, e nos quais cada porção alquila de um substituinte está opcionalmente adicionalmente substituída com 1, 2, ou 3 grupos independentemente selecionados de halogênio, CN, OH, NH2.
[0043] Compostos de fórmula I preferidos incluem aqueles de fórmula II:
Figure img0004
e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na qual: Y é -C(R4,R5)-, -N(R)-, -O-, ou -C(O)-; 5 RI é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo- alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil), -OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio- carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio-carbamoíla; R2 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH, -OH, -SH,-S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono 5 ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, mono ou dialquil-tio-carbamoíla, alquil-S-alquila, -heteroaril-arila, -alquil-heteroaril-arila, -C(O)-NH-arila, - alquenil-heteroarila, -C(O)-heteroarila, ou -alquenil-heteroaril-arila; R3 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, oxo (=O), -COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, - CO2(alquil), -OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, monoou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou 5 dialquil-tio- carbamoíla; no qual a porção de anel e alquila de cada um dos grupos R1, R2, e R3 acima está opcionalmente substituída com até 5 grupos que são independentemente (C1-C6) alquila, halogênio, halo-alquila, -OC(O)(C1-C6 alquil), -C(O)O(C1-C6 alquil), -CONR’R”, -OC(O)NR’R”, -NR’C(O)R”, - CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 alcoxila, hidróxi-alquila, -CN, -CO2H, -SH, -S- alquila, O-SOR'R", -SO2R, -NO2, ou NR’R”, nos quais R’ e R” são independentemente H ou (C1-C6) alquila, e nos quais cada porção alquila de um substituinte está opcionalmente adicionalmente substituída com 1, 2, ou 3 grupos independentemente selecionados de halogênio, CN, OH, NH2; e R4 e R5 são independentemente H ou alquila.
[0044] Compostos de fórmula II mais preferidos incluem aqueles nos quais: Y é -C(R4,R5)- ou -N(R)-; R1 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, O-COOH, -OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil), - OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, ou mono ou dialquil-tio-carbamoíla; R2 é H, alquila, ciclo-alquila, ciclo-alquil-alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, alquil-arila, alquenil-arila, heterociclila, heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil-heterociclo-alquila, acila, aroíla, halogênio, halo-alquila, alcoxila, halo-alcoxila, hidróxi-alquila, alcanoíla, -COOH,-OH, -SH, -S-alquila, -CN, -NO2, -NH2, -CO2(alquil)3- OC(O)alquila, carbamoíla, mono ou dialquil-amino-carbamoíla, mono ou dialquil-carbamoíla, mono ou dialquil-amino, amino-alquila, mono-ou dialquil-amino-alquila, tio-carbamoíla, mono ou dialquil-tio-carbamoíla, alquil-S-alquila, -5 heteroaril-arila, -alquil-heteroaril-arila, -C(O)-NH-arila, - alquenil-heteroarila, -C(O)-heteroarila, ou -alquenil-heteroaril-arila; no qual a porção de anel e alquila de cada um dos grupos R1 e R2 acima está opcionalmente substituída com até 5 grupos que são independentemente (C1C6) alquila, halogênio, halo-alquila, -OC(O)(CI-C alquil), -C(O)O(C1-C6 alquil), -CONR4R5, -OCONR4R5, -NR4COR5, -CF3, 0-OCF3, -OH, C1-C6 alcoxila, hidróxi-alquila, -CN, -CO2H, -SH, -S-alquila, -SOR4R5, -SO2R4R5, - NO2, ou NR4R5, e nos quais cada porção alquila de um substituinte está opcionalmente adicionalmente substituída com 1, 2, ou 3 grupos independentemente selecionados de halogênio, CN, OH, NH2; R3 é H, alquila, ou oxo (=O); e R4 e R5 são independentemente H ou (C1-C6)alquila. Compostos de fórmula II mais preferidos incluem aqueles nos quais Y é -NH-.
[0045] Compostos de fórmula II preferidos incluem aqueles nos quais R3 é oxo.
[0046] Compostos de fórmula II preferidos incluem aqueles nos quais R3 é metila.
[0047] Compostos de fórmula II preferidos também incluem aqueles nos quais R1 é H.
[0048] Compostos de fórmula II preferidos incluem adicionalmente aqueles nos quais R1 é arila opcionalmente substituída. Preferivelmente, a arila é fenila, quer não-substituída quer substituída com 1 ou 2 grupos halogênio. Preferivelmente, halogênio é cloro ou fluoro.
[0049] Compostos de fórmula II preferidos também incluem compostos nos quais R2 é alquila ou ciclo-alquila.
[0050] Compostos de fórmula II preferidos também incluem compostos nos quais R2 é arila ou -alquil-arila. Arila preferida em qualquer grupo é fenila. Alquila preferida em alquil-arila é C1-C3 alquila, de cadeia quer linear quer ramificada. Os grupos arila podem estar não substituídos ou substituídos. Substituintes preferidos incluem 1, 2, 3, 4, ou 5 (preferivelmente 1 ou 2) grupos independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, alquila, ciano-alquila, amino-alquila, tio-alcoxila, trifluorometila, halo-alcoxila, aril- oxila, e alcoxila.
[0051] Compostos de fórmula II preferidos também incluem compostos nos quais R2 é heterocicloalquila ou -alquil-heterociclo-alquila. Heterocicloalquila preferida em qualquer grupo é piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, e morfolinila. Os heterocicloalquila podem estar não substituídos ou substituídos. Substituintes preferidos incluem 1, 2, 3, 4, ou 5 (preferivelmente 1 ou 2) grupos independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, alquila, ciano-alquila, amino-alquila, tio-alcoxila, trifluorometila, halo-alcoxila, aril-oxila, oxo, e alcoxila.
[0052] Compostos de fórmula II preferidos também incluem compostos nos quais R2 é heteroarila ou -alquil-heteroarila. Heteroarila preferida em qualquer grupo é piridinila, imidazolila, indolila, carbazolila, tiazolila, benzotiazolila, benzooxazolila, purinila, e tienila. Os grupos heteroarila podem estar não substituídos ou substituídos. Substituintes preferidos incluem 1, 2, 3, 4, ou 5 (preferivelmente 1 ou 2) grupos independentemente escolhidos de halogênio, hidroxila, alquila, ciano-alquila, amino-alquila, tio-alcoxila, trifluorometila, halo-alcoxila, aril-oxila, e alcoxila.
[0053] A invenção também proporciona métodos para tratar um paciente que possui, ou na prevenção de um paciente de adquirir, uma doença ou condição selecionada do grupo consistindo de uma doença hiperproliferativa, uma doença inflamatória, ou uma doença angiogênica, que inclui a administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto de fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto de fórmula II ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, a um paciente em necessidade de tal tratamento ou prevenção.
[0054] Uma doença hiperproliferativa preferida que os compostos da invenção são úteis no tratamento ou na prevenção é câncer, incluindo como seus exemplos não limitantes tumores sólidos tais como cânceres de cabeça e pescoço, cânceres de pulmão, cânceres de trato gastrointestinal, cânceres de mama, cânceres ginecológicos, cânceres testiculares, cânceres de trato urinário, cânceres neurológicos, cânceres endócrinos, cânceres de pele, sarcomas, cânceres mediastinais, cânceres retroperitoneais, cânceres cardiovasculares, mastocitose, carcinossarcomas, cilindroma, cânceres dentais, estesioneuroblastoma, câncer uracal, carcinoma de célula de Merkel e paragangliomas, e cânceres hematopoiéticos tais como linfoma de Hodgkin, linfoma de não-Hodgkin, leucemias crônicas, leucemias agudas, cânceres mieloproliferativos, discrasias de célula de plasma, e síndromes mielodisplásicas. A lista acima é por meio de exemplo, e não é intencionada para ser limitante ou exaustiva.
[0055] Outras doenças preferidas que podem ser tratadas ou prevenidas com os compostos da invenção incluem doenças inflamatórias, tais como inter alia doença inflamatória do intestino, artrite, aterosclerose, asma, alergia, doença inflamatória do rim, choque circulatório, esclerose múltipla, doença pulmonar obstrutiva crônica, inflamação de pele, doença periodontal, psoríase e doenças de imunidade mediadas por célula T, incluindo encefalomielite alérgica, neurite alérgica, rejeição de transplante de aloenxerto, doença de enxerto versus hospedeiro, miocardite, tiroidite, nefrite, lúpus eritematoso sistêmico, e diabete melito dependente de insulina.
[0056] Outras doenças preferidas que podem ser tratadas ou prevenidas com os compostos da invenção incluem doença angiogênicas, tais como retinopatia diabética, artrite, psoríase, sarcoma de Kaposi, hemangiomas, angiogênese miocardial, neovascularização de placa aterosclerótica, e doenças angiogênicas vasculares tais como neovascularização coroidal, retinopatia de prematuridade (fibroplasias retrolentais), degeneração macular, rejeição de enxerto corneal, rubeose, glaucoma neuroscular e síndrome de Oster Webber.
[0057] A invenção adicionalmente proporciona um processo para preparação de inibidores de esfingosina cinase. Em uma modalidade, o processo compreende contatar um composto possuindo a fórmula:
Figure img0005
com um composto possuindo a fórmula: H2N-R2 sob condições suficientes para produzir compostos possuindo a fórmula:
Figure img0006
na qual: RI e R2 são como definidos acima.
[0058] O processo adicionalmente compreende reduzir uma adamantil-amida, como mostrada acima, para uma adamantil-amina pelo contato com Zn(BH4)2.
[0059] Em outra modalidade, o processo de preparação de inibidores de esfingosina cinase compreende contatar um composto precursor possuindo a fórmula:
Figure img0007
com um composto possuindo a fórmula: R2-Br ou R2C(O)Cl sob condições suficientes para produzir compostos possuindo a fórmula:
Figure img0008
na qual: R1, R2 e R3 são como definidos no início.
[0060] Em uma outra modalidade, o processo compreende contatar um composto possuindo a fórmula:
[0061]
Figure img0009
[0062] com composto possuindo a fórmula: H2N-R2 ou R2C(O)H sob condições suficientes para produzir compostos possuindo a fórmula:
Figure img0010
na qual: R1, R2 e R3 são como definidos no início.
[0063] A invenção também proporciona composições farmacêuticas que incluem um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou um composto de fórmula II ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como ingrediente ativo, em combinação com um agente auxiliar, meio, ou veículo farmaceuticamente aceitável.
[0064] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas em várias formas para administração, incluindo tabletes, microcápsulas, pílulas ou drágeas, ou podem ser adicionadas em recipientes adequados, tais como cápsulas, ou no caso de suspensões, podem ser adicionadas em garrafas. Como aqui usado “meio farmaceuticamente aceitável” inclui qualquer e todos os solventes, diluentes, ou outro veículo líquido; auxiliares de dispersão ou de suspensão; agentes tensoativos; conservantes; aglutinantes sólidos; lubrificantes e semelhantes, como adequados para a forma de dosagem particular desejada. Vários agentes de transporte e veículos usados na formulação de composições farmacêuticas e técnicas conhecidas para a preparação delas são descritos em “Remington 's Pharmaceutical Sciences” (Osol et al. eds., 15th ed., Mack Publishing Co.: Easton, PA, 1975). Exceto à medida que qualquer meio de veículo convencional for incompatível com os compostos químicos da presente invenção, tal como pela produção de algum efeito biológico indesejável ou por interação diferente em uma maneira prejudicial com qualquer outro componente da composição farmacêutica, o uso do meio veículo é contemplado como estando dentro do escopo desta invenção.
[0065] Nas composições farmacêuticas da presente invenção, o agente ativo pode estar presente em uma quantidade de pelo menos 1% e não maior do que 99% em peso, baseado no peso total da composição, incluindo meio veículo e agentes auxiliares. Preferivelmente, a proporção de agentes ativos varia entre 1% e 70% em peso da composição. Meio veículo líquido ou sólido orgânico ou inorgânico farmacêutico adequado para administração parenteral ou enteral pode ser usado para compor a composição. Gelatina, lactose, amido, estearato de magnésio, talco, óleos e gorduras animais e vegetais, poli(alquileno-glicol) goma, ou outros excipientes ou diluentes para medicamentos podem ser todos adequados como meio veículo.
[0066] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas usando qualquer quantidade e qualquer rota de administração efetiva para tratar quer possui, ou na prevenção de um paciente adquirir, uma doença ou condição selecionada do grupo consistindo de uma doença hiperproliferativa, uma doença inflamatória, e uma doença angiogênica. Assim a expressão "quantidade terapeuticamente efetiva," como aqui usada, refere-se a uma quantidade suficiente de agente ativo para proporcionar o efeito desejado contra células alvo. A quantidade exata requerida variará de indivíduo para indivíduo, dependendo da espécie, da idade, e da condição geral do indivíduo; do inibidor de SK particular; de seu modo de administração; e semelhante. Os compostos farmacêuticos da presente invenção são preferivelmente formulados em forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. "Forma de dosagem unitária," como aqui usada, refere-se a uma unidade fisicamente discreta de agente terapêutico apropriado para o animal a ser tratado. Cada dosagem deve conter a quantidade de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado quer como tal, quer em associação com o meio veículo farmacêutico selecionado. Tipicamente, a composição farmacêutica será administrada em unidades de dosagem contendo de cerca de 0,1 mg a cerca de 10.000 mg de agente, com uma faixa de cerca de 1 mg a cerca de 1.000 mg sendo preferida.
[0067] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas oral ou parenteralmente, tal como por injeção intramuscular, injeção intraperitoneal, ou injeção intravenosa. As composições farmacêuticas podem ser administradas oralmente ou parenteralmente em níveis de dosagem de cerca de 0,1 a cerca de 1.000 mg/kg, e preferivelmente de cerca de 1 a cerca de 100 mg/kg, de peso corporal animal por dia, uma ou mais vezes ao dia, para obter o efeito terapêutico desejado.
[0068] Embora as composições farmacêuticas da presente invenção possam ser administradas a qualquer indivíduo que possa ser beneficiar dos efeitos terapêuticos das composições, as composições são intencionadas particularmente para o tratamento de doenças em humanos. As composições farmacêuticas da presente invenção tipicamente serão administradas de 1 a 4 vezes ao dia, de modo a liberarem a dosagem diária como aqui descrito. Alternativamente, dosagens dentro destas faixas podem ser administradas por infusão constante durante um período de tempo prolongado, normalmente de 1 a 96 horas, até que os benefícios terapêuticos desejados tenham sido obtidos. Contudo, o regime exato para administração dos compostos químicos e das composições farmacêuticas aqui descritos será necessariamente dependente das necessidades do animal sendo tratado, do tipo de tratamentos sendo administrados, e do julgamento do médico atendente.
[0069] Em certas situações, os compostos desta invenção podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos, de modo que os compostos podem existir em formas estereoisoméricas diferentes. Estes compostos podem ser, por exemplo, racematos, quirais não-racêmicos ou diastereômeros. Nestas situações, os enantiômeros individuais, i.e., formas opticamente ativas, podem ser obtidos por síntese assimétrica ou por resolução dos racematos. Resolução dos racematos pode ser realizada, por exemplo, por métodos convencionais tais como cristalização na presença de um agente de resolução; cromatografia, usando, por exemplo uma coluna quiral de HPLC; ou derivação da mistura racêmica com um reagente de resolução para gerar diastereômeros, separação dos diastereômeros via cromatografia, e remoção do agente de resolução para gerar o composto original em forma enantiomericamente enriquecida. Qualquer um dos procedimentos acima pode ser repetido para aumentar a pureza enantiomérica de um composto.
[0070] Quando os compostos aqui descritos contêm ligações duplas olefínicas ou outros centros de assimetria geométrica, e a não ser que seja especificado de outro modo, é intencionado que os compostos incluam as configurações cis, trans, Z e E. Igualmente, todas as formas tautoméricas também são intencionadas para serem incluídas.
[0071] Sais farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos dos compostos da presente invenção incluem, mas não são limitados aos sais de ácido inorgânicos tais como clorídrico, sulfúrico, fosfórico, difosfórico, bromídrico, e nítrico ou sais de ácidos orgânicos tais como fórmico, cítrico, málico, maleico, fumárico, tartárico, succínico, acético, lático, metano-sulfônico, p- tolueno-sulfônico, 2-hidróxi-etil-sulfônico, salicílico e esteárico. Similarmente, cátions farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a sódio, potássio, cálcio, alumínio, lítio e amônio. Aquelas pessoas experientes na arte reconhecerão uma ampla variedade de sais de adição farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos. A invenção também inclui pró- drogas dos compostos da presente invenção.
[0072] Aquelas pessoas experientes na arte reconhecerão várias metodologias de síntese, que podem ser empregadas para preparar os sais de adição farmaceuticamente aceitáveis e as pró-drogas dos compostos incluídos pela presente invenção.
[0073] A invenção proporciona compostos de fórmula I e II que são inibidores de SK, e que são úteis para modulação da rota de transdução de sinal de esfingomielina, e no tratamento e na prevenção de doenças hiperproliferativas, doenças inflamatórias, e doenças angiogênicas. Os compostos da invenção podem ser preparados por uma pessoa experiente na arte baseado apenas sobre o conhecimento da estrutura química do composto. A química para a preparação dos compostos desta invenção é conhecida por aquelas pessoas experientes na arte. De fato, há mais do que um processo para preparar os compostos da invenção. Exemplos específicos de métodos de preparação podem ser encontrados aqui e na arte.
[0074] Como discutido acima, esfingolipídeos são criticamente importantes na regulação do equilíbrio entre proliferação e apoptose celular. Esfingosina-1-fosfato é produzido pela enzima SK e estimula a proliferação de células de tumor. Depleção concorrente de ceramida pela ação de SK bloqueia apoptose. Os compostos da invenção são inibidores de SK de humano. Portanto, a inibição da atividade de SK de acordo com a invenção atenuará a proliferação de células de tumor e promoverá apoptose. Portanto, os compostos da invenção são agentes anticâncer úteis. Além disso, visto que a hiperproliferação celular é um processo requerido no desenvolvimento de aterosclerose e psoríase, os compostos da invenção, que são Inibidores de SK, são úteis no tratamento destas e de outras doenças hiperproliferativas. Adicionalmente, ativação e/ou proliferação inapropriada de classes específicas de linfócitos resulta em doenças autoimunes e inflamatórias crônicas. Conseqüentemente, os compostos da invenção também são úteis no tratamento destas doenças. Adicionalmente, angiogênese inapropriada resulta em uma variedade de doenças, como descrito abaixo. Conseqüentemente, os compostos da invenção também são úteis no tratamento destas doenças.
Definições
[0075] As definições e explicações abaixo são para os termos como usados em todo este documento inteiro, incluindo tanto o relatório descritivo quanto as reivindicações.
[0076] Deve ser notado que, como usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexadas, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem suas referências plurais a não ser que o conteúdo dite claramente o contrário. Assim, por exemplo, referência a uma composição contendo “um composto” inclui uma mistura de dois ou mais compostos. Também deve ser notado que o termo “ou” é geralmente empregado em seu sentido incluindo “e/ou” a não ser que o conteúdo dite claramente o contrário.
[0077] O símbolo "-" em geral representa uma ligação entre dois átomos na cadeia. Assim, CH3-O-CH2-CH(Ri)-CH3 representa um composto 2-substituído-1-metóxi-propano. Em adição, o símbolo "-" representa o ponto de ligação do substituinte em um composto. Assim, por exemplo aril(C1- C6)alquil- indica um grupo alquil-arila, tal como benzila, ligado no composto no grupo alquila.
[0078] Onde múltiplos substituintes forem indicados como estando ligados em uma estrutura, é para ser entendido que os substituintes podem ser iguais ou diferentes. Assim, por exemplo "Rm opcionalmente substituído com 1, 2 ou 3 grupos Rq " indica que Rm está substituído com 1, 2, ou 3 grupos Rq onde os grupos Rq podem ser iguais ou diferentes.
[0079] A frase "opcionalmente substituído(a)" é usada intercambiavelmente com a frase “substituído(a) ou não-substituído(a)”. A não ser que seja indicado de outro modo, um grupo opcionalmente substituído pode possuir um substituinte em cada posição substituível do grupo, e cada substituinte é independente do outro.
[0080] Como aqui usados, os termos "halogênio" ou "halo" indicam flúor, cloro, bromo, ou iodo.
[0081] O termo "heteroátomo" significa nitrogênio, oxigênio ou enxofre e inclui qualquer forma oxidada de nitrogênio e enxofre, e a forma quaternizada de qualquer nitrogênio básico. Também o termo "nitrogênio" inclui um nitrogênio substituível em um anel heterocíclico. Como um exemplo, em um anel saturado ou parcialmente insaturado possuindo 0-3 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, o nitrogênio pode ser N (como em 3,4-di-hidro-2H-pirrolila), NH (como em pirrolidinila) ou NR+ (como em pirrolidinila N-substituída).
[0082] O termo "alquila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um hidrocarboneto alifático saturado incluindo grupos de cadeia linear, cadeia ramificada ou cíclica (também chamado "ciclo-alquila"). Exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, iso-, sec- e terc-butila, pentila, hexila, heptila, 3-etil-butila, e semelhante. Preferivelmente, o grupo alquila possui 1 a 20 átomos de carbono (sempre que uma faixa numérica, e.g. "1-20", for aqui enunciada, ela significa que o grupo, neste caso o grupo alquila, pode conter 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc. até e incluindo 20 átomos de carbono). Com maior preferência, é uma alquila de tamanho médio possuindo 1 a 10 átomos de carbono. Mais preferivelmente, é uma alquila inferior possuindo 1 a 4 átomos de carbono. A ciclo-alquila pode ser monocíclica, ou um sistema policíclico fusionado. Exemplos de grupos ciclo- alquila incluem ciclo-propila, ciclo-butila, ciclo-pentila, ciclo-hexila, ciclo- heptila, ciclo-octila, e adamantila. O grupo alquila ou ciclo-alquila pode estar não-substituído ou substituído com 1, 2, 3 ou mais substituintes. Exemplos de tais substituintes incluem, sem limitação, halo, hidroxila, amino, alcoxila, alquil-amino, dialquil-amino, ciclo-alquila, arila, aril-oxila, aril-alquil-oxila, radical heterocíclico, e (radical heterocíclico)óxi. Exemplos incluem fluorometila, hidróxi-etila, 2,3-di-hidróxi-etila, (2-ou 3-furanil)-metila, ciclo- propil-metila, benzil-oxil-etila, (3-piridinil)-metila, (2-tienil)-etila, hidróxi- propila, amino-ciclo-hexila, 2-dimetil-amino-butila, metóxi-metila, N- piridinil-etila, e dietil-amino-etila.
[0083] O termo "ciclo-alquil-alquila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um grupo C3-C1o ciclo-alquila ligado no grupo molecular parental através de um grupo alquila, como definido acima. Exemplos de grupos ciclo-alquil-alquila incluem ciclo-propil- metila e ciclo-pentil-etila
[0084] O termo "alquenila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um hidrocarboneto alifático possuindo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono, incluindo grupos de cadeia linear, cadeia ramificada ou cíclica possuindo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono. Preferivelmente, o grupo alquenila possui 2 a 20 átomos de carbono. Com maior preferência, é uma alquenila de tamanho médio possuindo 2 a 10 átomos de carbono. Mais preferivelmente, é uma alquenila inferior possuindo 2 a 6 átomos de carbono. O grupo alquenila pode estar não- substituído ou substituído com 1, 2, 3 ou mais substituintes. Exemplos de tais substituintes incluem, sem limitação halo, hidroxila, amino, alcoxila, alquil- amino, dialquil-amino, ciclo-alquila, arila, aril-oxila, aril-alquil-oxila, radical heterocíclico, e (radical heterocíclico)óxi. Dependendo da posição da ligação dupla e dos substituintes, se houver, a geometria da ligação dupla pode ser entgegen (E) (lados opostos) ou zusammen (Z) (mesmo lado), cis, ou trans. Exemplos de grupos alquenila incluem etenila, propenila, cis-2-butenila, trans-2-butenila, e 2-hidróxi-2-propenila.
[0085] O termo "alquinila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um hidrocarboneto alifático possuindo pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono, incluindo grupos de cadeia linear, cadeia ramificada ou cíclica possuindo pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono. Preferivelmente, o grupo alquinila possui 2 a 20 átomos de carbono. Com maior preferência, é uma alquinila de tamanho médio possuindo 2 a 10 átomos de carbono. Mais preferivelmente, é uma alquinila inferior possuindo 2 a 6 átomos de carbono. O grupo alquinila pode estar não- substituído ou substituído com 1, 2, 3 ou mais substituintes. Exemplos de tais substituintes incluem, sem limitação, halo, hidroxila, amino, alcoxila, alquil- amino, dialquil-amino, ciclo-alquila, arila, aril-oxila, aril-alquil-oxila, radical heterocíclico, e (radical heterocíclico)óxi. Exemplos de grupos alquinila incluem etinila, propinila, 2-butinila, e 2-hidróxi-3-butinila
[0086] O termo "alcoxila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, representa um grupo alquila de número indicado de átomos de carbono ligado no grupo molecular parental através de uma ponte de oxigênio. Exemplos de grupos alcoxila incluem, por exemplo, metoxila, etoxila, propoxila e isopropoxila. Radicais alcoxila podem estar adicionalmente substituídos com um ou mais átomos de halogênio, tais como fluoro, cloro ou bromo, para proporcionar radicais "halo-alcoxila". Exemplos de tais radicais incluem fluorometoxila, clorometoxila, trifluorometoxila, e fluoroetoxila.
[0087] O termo "arila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um sistema de anel de hidrocarboneto aromático contendo pelo menos um anel aromático. O anel aromático pode estar opcionalmente fusionado ou diferentemente ligado em outros anéis de hidrocarboneto aromático ou anéis de hidrocarboneto não-aromático. Adicionalmente, o grupo arila pode estar não-substituído ou substituído com vários grupos tais como hidrogênio, halo, hidroxila, alquila, halo-alquila, alcoxila, nitro, ciano, alquil-amina, carboxila ou alcóxi-carbonila. Exemplos de grupos arila incluem, por exemplo, fenila, naftila, 1,2,3,4-tetra-hidro- naftaleno, benzodioxol, e bifenila. Exemplos preferidos de grupos arila não- substituídos incluem fenila e bifenila. Substituintes de grupo arila preferidos incluem hidrogênio, halo, alquila, halo-alquila, hidroxila e alcoxila.
[0088] O termo "heteroalquila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um radical alquila como aqui definido com um ou mais heteroátomos substituindo um átomo de carbono com o grupo. Tais grupos heteroalquila são alternativamente referidos como usando os termos éter, tio-éter, amina e semelhante.
[0089] O termo "heterociclila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a radicais na forma de anel contendo heteroátomo saturado, parcialmente insaturado e insaturado, onde os heteroátomos podem ser selecionados de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Os citados grupos heterociclila podem estar não-substituídos ou substituídos em um ou mais átomos dentro do sistema de anel. O anel heterocíclico pode conter um ou mais grupos oxo.
[0090] O termo "heterociclo-alquila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um sistema de anel não-aromático contendo pelo menos um heteroátomo selecionado de nitrogênio, oxigênio, e enxofre. O anel de heterociclo-alquila pode estar opcionalmente fusionado em ou diferentemente ligado em outros anéis heterociclo-alquila e/ou anéis de hidrocarboneto não-aromático. Grupos heterociclo-alquila preferidos possuem de 3 a 7 membros. Exemplos de grupos heterociclo-alquila incluem, por exemplo, piperazina, morfolina, piperidina, tetra-hidro-furano, pirrolidina e pirazol. Grupos heterociclo-alquila monocíclicos preferidos incluem piperidila, piperazinila, morfolinila, pirrolidinila, tio-morfolinila, tiazolidinila, 1,3-dioxolanila, 1,4-dioxanila, tetra-hidro-furanila, tetra-hidro-tiofenila, tetra- hidro-tiopiranila, e semelhante. Radicais heterociclo-alquila também podem ser parcialmente insaturados. Exemplos de tais grupos incluem di-hidro- tienila, di-hidro-piranila, di-hidro-furila, e di-hidro-tiazolila.
[0091] O termo "heteroarila", como aqui usado sozinho ou como parte de um grupo maior, refere-se a um sistema de anel aromático contendo pelo menos um heteroátomo selecionado de nitrogênio, oxigênio, e enxofre. O anel de heteroarila pode estar fusionado ou diferentemente ligado em um ou mais anéis heteroarila, anéis de hidrocarboneto aromáticos ou não-aromáticos ou anéis de heterociclo-alquila. Adicionalmente o grupo heteroarila pode estar não substituído ou substituído em um ou mais átomos do sistema de anel, ou pode conter um ou mais grupos oxo. Exemplos de grupos heteroarila incluem, por exemplo, piridina, furano, tiofeno, carbazol e pirimidina. Exemplos preferidos de grupos heteroarila incluem tienila, benzotienila, piridila, quinolila, pirazinila, pirimidila, imidazolila, benzimidazolila, furanila, benzofuranila, tiazolila, benzotiazolila, isoxazolila, oxadiazolila, isotiazolila, benzisotiazolila, triazolila, tetrazolila, pirrolila, indolila, pirazolila, benzopirazolila, purinila, benzooxazolila, e carbazolila.
[0092] O termo "acila" significa um grupo H-C(O)-ou alquil-C(O)- no qual o grupo alquila, cadeia linear, ramificada ou cíclica, é como previamente descrito. Grupos acila exemplares incluem formila, acetila, propanoíla, 2- metil-propanoíla, butanoíla, e caproíla.
[0093] O termo "aroíla" significa um grupo aril-C(O)- no qual o grupo arila é como previamente descrito. Grupos aroíla exemplares incluem benzoíla e 1- e 2-naftoíla.
[0094] O termo "solvato" significa uma associação física de um composto desta invenção com uma ou mais moléculas de solvente. Esta associação física envolve graus variados de ligação iônica e co valente, incluindo ponte de hidrogênio. Em certas circunstâncias, o solvato será capaz de isolamento, por exemplo quando uma ou mais moléculas de solvente estiverem incorporadas no retículo cristalino do sólido cristalino. “Solvato” inclui solvatos tanto isoláveis quanto em fase de solução. Solvatos exemplares incluem etanolatos, metanolatos, e semelhante. "Hidrato" é um solvato no qual a(s) molécula(s) de solvente é/são H2O.
[0095] Compostos que possuem a mesma fórmula molecular mas diferem em natureza ou seqüência de ligação de seus átomos ou arranjo de seus átomos no espaço são chamados “isômero”. Isômeros que diferem no arranjo de seus átomos no espaço são chamados “estereoisômeros”. Estereoisômeros que não são imagens especulares uns dos outros são chamados “diastereômeros” e aqueles que são imagens especulares incapazes de serem sobrepostas umas sobre as outras são chamados “enantiômeros”. Quando um composto possui um centro assimétrico, por exemplo, um átomo de carbono que está ligado em quatro grupos diferentes, um par de enantiômeros é possível. Um enantiômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta de seu centro assimétrico e é descrito pelas regras de Cahn e Prelog de seqüenciamento R e S, que são bem conhecidas por aquelas pessoas experientes na arte. Adicionalmente, enantiômeros podem ser caracterizados pela maneira na qual uma solução do composto gira um plano de luz polarizada e designados como dextrorrotatórios ou levorrotatórios (i.e. como isômeros (+) ou (-) respectivamente). Um composto quiral pode existir quer como enantiômero individual quer como uma mistura dos mesmos. Uma mistura contendo proporções iguais de enantiômeros é chamada de uma “mistura racêmica”.
[0096] Os compostos desta invenção podem possuir um ou mais centros assimétricos; tais compostos portanto podem ser produzidos como estereoisômeros (R) ou (S) individuais ou como suas misturas. A não ser que seja indicado de outro modo, o relatório descritivo e as reivindicações são indicados para incluírem tanto enantiômeros individuais quanto misturas, racêmicas, ou diferentes, dos mesmos.
[0097] Certos compostos desta invenção podem exibir o fenômeno de tautomerismo e/ou isomerismo estrutural. Por exemplo, certos compostos aqui descritos podem adotar uma configuração E ou Z ao redor de uma ligação dupla de carbono-carbono ou podem ser uma mistura de E e Z. Esta invenção inclui qualquer forma isomérica estrutural ou tautomérica e suas misturas.
[0098] A não ser que seja enunciado de outro modo, estruturas aqui mostradas também significam a inclusão de compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, compostos possuindo as presentes estruturas exceto para a substituição de um hidrogênio por um deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono por um átomo de carbono enriquecido com 13C ou com 14C estão dentro do escopo desta invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como sondas ou ferramentas úteis em ensaios biológicos.
[0099] Como aqui usado, "distúrbio relacionado com SK ", "distúrbio conduzido por SK ", e "atividade de SK anormal" se referirão todos a uma condição caracterizada por atividade catalítica inapropriada, i.e., infra- catalítica ou, mais comumente, supra-catalítica de SK. Atividade catalítica pode decorrer como o resultado de qualquer um de: (1) expressão de SK em células que normalmente não expressam SK, (2) atividade catalítica de SK aumentada acarretando processo celular indesejado, tal como, sem limitação, proliferação celular, regulação de gene, resistência à apoptose, e/ou diferenciação. Tais mudanças na expressão de SK podem ocorrer por expressão de SK e/ou mutação de SK aumentada de tal modo que sua atividade catalítica é intensificada, (3) atividade catalítica de SK diminuída acarretando reduções indesejadas em processos celulares. Alguns exemplos de distúrbios relacionados com SK, sem limitação, são descritos alhures neste pedido.
[00100] O termo "método" refere-se às maneiras, aos meios, às técnicas e aos procedimentos para realizar uma dada tarefa incluindo, mas não limitados a, àquelas maneiras, àqueles meios, àquelas técnicas e àqueles procedimentos quer conhecidos pelos, ou prontamente desenvolvidos das maneiras, dos meios, das técnicas e dos procedimentos conhecidos pelos praticantes das artes química, farmacêutica, biológica, bioquímica e médica.
[00101] O termo "modulação" ou "modular" refere-se à alteração da atividade catalítica de SK. Em particular, modulação refere-se a uma ativação ou, preferivelmente, inibição da atividade catalítica de SK, dependendo da concentração do composto ou do sal à qual SK é exposta.
[00102] O termo "atividade catalítica" como aqui usado refere-se à velocidade de fosforilação de esfingosina sob a influência de SK.
[00103] O termo "contato” ou “contatar" como aqui usado refere-se ao contato de um composto desta invenção com SK em uma tal maneira que o composto possa afetar a atividade catalítica de SK, quer diretamente, i.e., por interação com a própria SK, quer indiretamente, i.e., por alteração da localização intracelular de SK. Tal "contatar" pode ser realizado in vitro, i.e. em um tubo de ensaio, uma placa de Petri ou semelhante. Em um tubo de ensaio, o contato pode envolver apenas um composto e SK ou pode envolver células inteiras. Células também podem ser mantidas ou crescidas em placas de cultura celular e contatadas com um composto naquele ambiente. Neste contexto, a capacidade de um composto particular de afetar um distúrbio relacionado com SK pode ser determinada antes de ser tentado o uso dos compostos in vivo com organismos vivos mais complexos. Para células fora do organismo, há múltiplos métodos que são bem conhecidos por aquelas pessoas experientes na arte, para permitir o contato dos compostos com SK incluindo, mas não limitados a, microinjeção celular direta e numerosas técnicas para promover o movimento de compostos através de uma membrana biológica.
[00104] O termo "in vitro" como aqui usado refere-se aos procedimentos realizados em um ambiente artificial, tal como por exemplo, sem limitação, em um tubo de ensaio ou sistema de cultura celular. O técnico experiente entenderá que, por exemplo, uma enzima SK isolada pode ser contatada com um modulador em um ambiente in vitro. Alternativamente, uma célula isolada pode ser contatada com um modulador em um ambiente in vitro.
[00105] O termo "in vivo" como aqui usado refere-se aos procedimentos realizados dentro de um organismo vivo tal como, por exemplo, um humano, camundongo, rato, coelho, bovino, eqüino, porcino, canino, felino, ou primata.
[00106] O termo "IC50" ou "concentração 50% inibitória" como aqui usado refere-se à concentração de um composto que reduz um processo biológico em 50%. Estes processos podem incluir, mas não são limitados a, reações enzimática, i.e., inibição da atividade catalítica de SK, ou propriedades celulares, i.e. proliferação celular, apoptose ou produção celular de S1P.
[00107] Como aqui usado, "administrar" ou "administração" refere-se à liberação de um composto ou sal da presente invenção ou de uma composição farmacêutica contendo um composto ou sal desta invenção a um organismo para o propósito de prevenção ou tratamento de um distúrbio relacionado com SK.
[00108] Como aqui usados, os termos "prevenir", "prevenindo" e "prevenção" referem-se a um método para evitar que um organismo adquire um distúrbio relacionado com SK.
[00109] Como aqui usados os termos “tratar”, “tratando” e “tratamento” referem-se a um método de alívio ou abolição de um distúrbio mediado por SK e/ou de seus sintomas resultantes.
[00110] O termo "organismo" refere-se a qualquer entidade viva compreendida de pelo menos uma célula. Um organismo vivo pode ser tão simples como, por exemplo, uma única célula eucariótica ou tão complexo como um mamífero. Em um aspecto preferido desta invenção, o organismo é um mamífero. Em um aspecto particularmente preferido desta invenção, o mamífero é um ser humano.
[00111] Uma “composição farmacêutica” refere-se a uma mistura de um ou mais compostos aqui descritos, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, com outros componentes químicos, tais como excipientes e veículos fisiologicamente aceitáveis. O propósito de uma composição farmacêutica é facilitar a administração de um composto a um organismo.
[00112] O termo "sal farmaceuticamente aceitável” refere-se àqueles sais que mantêm a efetividade biológica do composto parental. Tais sais incluem: (1) sal de adição de ácido que é obtido pela reação da base livre do composto parental com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, e ácido perclórico e semelhante, ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido (D) ou (L)-málico, ácido maleico, ácido metano-sulfônico, ácido etano- sulfônico, ácido p-tolueno-sulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ou ácido malônico e semelhante, preferivelmente ácido clorídrico ou ácido (L)-málico; ou (2) sais formados quando um próton ácido presente no composto parental é quer substituído por um íon de metal, e.g. um íon de metal alcalino, um íon de metal alcalino-terroso, ou um íon de alumínio; ou coordena com uma base orgânica tal como etanol-amina, dietanol-amina, trietanol-amina, trometamina, N-metil-glutamina, e semelhante.
[00113] Como aqui usado, o termo um "veículo fisiologicamente aceitável" refere-se a um veículo ou diluente que não causa irritação significativa a um organismo e não anula a atividade biológica e as propriedades do composto administrado. Tipicamente, isto inclui aquelas propriedades e/ou substâncias que são aceitáveis para o paciente de um ponto de vista farmacológico/toxicológico e para o químico farmacêutico fabricante de um ponto de vista físico-químico em relação à composição, formulação, estabilidade, aceitação do paciente e biodisponibilidade.
[00114] Um "excipiente" refere-se a uma substância inerte adicionada em uma composição farmacêutica para adicionalmente facilitar a administração de um a composto. Exemplo, sem limitações, de excipientes incluem carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares e tipos de amido, derivados de celulose (incluindo celulose microcristalina), gelatina, óleos vegetais, poli(etileno-glicóis), diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, aglutinantes, agentes desintegrantes, e semelhante.
[00115] O termo "quantidade terapeuticamente efetiva " como aqui usado refere-se àquela quantidade do composto sendo administrada que é efetiva para reduzir ou minorar pelo menos um sintoma da doença sendo tratada ou para reduzir ou retardar o início de um ou mais sintomas ou marcadores clínicos da doença. Em referência ao tratamento de câncer, uma quantidade terapeuticamente efetiva refere-se àquela que possui o efeito de: (1) reduzir o tamanho do tumor, (2) inibir, i.e. tornar mais lenta em alguma extensão, preferivelmente interromper, metástase de tumor, (3) inibir, i.e. tornar mais lenta em alguma extensão, preferivelmente interromper, crescimento de tumor e/ou (4) aliviar em alguma extensão, preferivelmente eliminar, um ou mais sintomas associados com o câncer.
[00116] Os compostos desta invenção também podem atuar como pró- droga. O termo "pró-droga" refere-se a um agente que é convertido na droga parental in vivo. Pró-drogas são muitas vezes úteis porque, em algumas situações, podem ser mais fáceis de administrar do que a droga parental. Podem estar, por exemplo, biodisponíveis por administração oral enquanto que a droga parental não. A pró-droga também pode possuir solubilidade melhorada em composições farmacêuticas em relação à droga parental. Um exemplo, sem limitação, de uma pró-droga seria um composto da presente invenção que é administrado como um éster (a “pró-droga”), carbamato ou uréia.
[00117] Os compostos desta invenção também podem ser metabolizados por enzimas no corpo do organismo, tal como um ser humano, para gerar um metabólito que pode modular a atividade de SK. Tais metabólitos estão dentro do escopo da presente invenção.
Indicações
[00118] Esfingosina cinase (SK), cuja atividade catalítica é modulada pelos compostos e composições desta invenção, é uma enzima chave na sinalização de rotas que são anormalmente ativadas em uma variedade de doenças. A discussão seguinte descreve os papéis de SK em doenças hiperproliferativas, inflamatórias e angiogênicas, e conseqüentemente proporciona exemplos de usos dos compostos e composições desta invenção. O uso destes compostos e composições para a prevenção e/ou o tratamento de doenças adicionais nas quais SK está anormalmente ativada também está dentro do escopo da presente invenção.
Doenças hiperproliferativas.
[00119] A presente invenção refere-se aos compostos, às composições farmacêuticas e aos métodos úteis para o tratamento e/ou a prevenção de doenças hiperproliferativas. Mais especificamente, a invenção refere-se aos compostos e às composições farmacêuticas que inibem a atividade enzimática de SK para o tratamento e/ou a prevenção de doenças hiperproliferativas, tais como câncer, psoríase, distúrbios proliferativos de célula mesangial, aterosclerose e restenose. A discussão seguinte demonstra o papel de SK em várias destas doenças hiperproliferativas. Porque os mesmos processos estão envolvidos nas doenças listadas acima, os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção serão úteis para o tratamento e/ou a prevenção de uma variedade de doenças.
[00120] Esfingosina-1-fosfato e ceramida possuem efeitos opostos sobre proliferação e apoptose de células de câncer. Esfingomielina é não apenas um bloco de construção para membranas celulares, mas também serve como o precursor para mensageiros lipídicos potentes que possuem efeitos celulares profundos. Metabolismo destes lipídeos induzido por estímulo está criticamente envolvido em biologia celular do câncer. Conseqüentemente, estas rotas metabólicas oferecem alvos excitantes para o desenvolvimento de drogas anticâncer.
[00121] Ceramida é produzida pela hidrólise de esfingomielina em resposta aos fatores de crescimento ou outros estímulos. Ceramida induz apoptose em células de tumor, mas pode ser adicionalmente hidrolisada pela ação de ceramida para produzir esfingosina. Esfingosina é então rapidamente fosforilada por SK para produzir SP1, que é um segundo mensageiro crítico que exerce ações proliferativas e antiapoptóticas. Por exemplo, microinjeção de S1P em oócitos de camundongo induz síntese de DNA. Adicionalmente, S1P efetivamente inibe apoptose induzida por ceramida em associação com ativação de caspase diminuída. Além disso, ceramida intensifica apoptose em resposta às drogas de anticâncer incluindo Taxol e etoposida. Estes estudos em várias linhagens celulares consistentemente indicam que S1P é capaz de induzir proliferação e proteger células da apoptose induzida por ceramida.
[00122] Um equilíbrio crítico, que pode ser chamado de reostato de ceramida/S1P, tem sido considerado como hipótese para determinar o destino da célula. Neste modelo, o equilíbrio entre as concentrações celulares de ceramida e S1P determina se uma célula prolifera ou sofre apoptose. Sob exposição aos mitógenos ou às oncoproteínas intracelulares, as células experimentam um aumento rápido nos níveis intracelulares de S1P e depleção de níveis de ceramida. Esta situação promove sobrevivência e proliferação celulares. Em contraste, ativação de esfingomielinase na ausência de ativação de ceramidase e/ou SK resulta no acúmulo de ceramida e subseqüente apoptose.
[00123] SK é a enzima responsável pela produção de S1P em células. RNA codificador de SK é detectado na maioria dos tecidos. Uma variedade de fatores proliferativos, incluindo ativadores de PKC, fator de crescimento derivado de plaqueta e soro fetal bovino (Olivera et al., 1993, Nature 365: 557), EGF, e TNFα (Dressier et al., 1992, Science 255: 1715) rapidamente elevam a atividade de SK celular. Atividade de SK é aumentada por fosforilação da enzima por ERK (Pitson et al., 2003, EMBO J 22: 5491), enquanto que S1P promove sinalização através da rota Ras-Raf-Mek-Erk, configurando a cascata de amplificação de proliferação celular.
[00124] Esfingosina cinase e S1P desempenham papéis importantes em patogênese de câncer. Um papel oncogênico de SK tem sido demonstrado. Nestes estudos, transfecção de SK em fibroblastos NIH/3T3 foi suficiente para promover formação de focos e crescimento de células em ágar macio, e para permitir que estas células formem tumores em camundongos NOD/SCID (Xia et al., 2000, Curr Biol 10: 1527). Adicionalmente, inibição de SK por transfecção com um mutante de SK negativo-dominante ou pelo tratamento de células com o inibidor de SK não específico DMS bloqueou a transformação mediada por H-Ras oncogênico. Visto que ativação anormal de Ras freqüentemente ocorre em câncer, estas descobertas sugerem um papel significativo de SK nesta doença. SK também tem sido ligada à sinalização de estrogênio e tumorgênese dependente de estrogênio em células MCF-7 (Nava et al., 2002, Exp Cell Res 281: 115). Outras rotas ou alvos às quais a atividade de SK tem estado ligada em doenças hiperproliferativas incluem sinalização de VEGF via a rota de Ras e MAP cinase (Shu et al., 2002, Mol Cell Biol 22: 7758), Proteína Cinase C (Nakade et al., 2003, Biochim BiophysActa 1635: 104), TNFα (Vann et al., 2002, J Biol Chem 277: 12649), fator-1 nuclear de hepatócito e receptor alfa de ácido retinóico, ativação de caspase e cálcio intracelular. Embora a elucidação de alvos a jusantes de S1P permaneça um problema interessante em biologia celular, validação suficiente destas rotas tem sido estabelecida para justificar o desenvolvimento de inibidores de SK como tipos novos de drogas antiproliferativas.
[00125] Hiperproliferação celular é uma característica de uma variedade de doenças, incluindo, sem limitação, câncer, psoríase, distúrbios proliferativos de célula mesangial, aterosclerose e restenose. Portanto, os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção serão úteis para a prevenção e/ou o tratamento de câncer, incluindo tumores sólidos, cânceres hematopoiéticos e metástases de tumor. Tais cânceres podem incluir, sem limitação, tumores sólidos tais como cânceres de cabeça e pescoço, cânceres de pulmão, cânceres de trato gastrointestinal, cânceres de mama, cânceres ginecológicos, cânceres testiculares, cânceres de trato urinário, cânceres neurológicos, cânceres endócrinos, cânceres de pele, sarcomas, cânceres mediastinais, cânceres retroperitoneais, cânceres cardiovasculares, mastocitose, carcinossarcomas, cilindroma, cânceres dentais, estesioneuroblastoma, câncer uracal, carcinoma de célula de Merkel e paragangliomas. Adicionalmente, tais cânceres incluem, sem limitação, cânceres hematopoiéticos tais como linfoma de Hodgkin, linfoma de não- Hodgkin, leucemias crônicas, leucemias agudas, cânceres mieloproliferativos, discrasias de célula de plasma, e síndromes mielodisplásicas.
[00126] Psoríase é uma doença desfigurante de pele crônica comum que é caracterizada por placas bem demarcadas, vermelhas, endurecidas e escamosas que podem estar limitadas ou disseminadas. Embora a doença seja raramente fatal, ela possui sérios efeitos prejudiciais sobre a qualidade de vida do paciente, e isto é adicionalmente complicado pela falta de terapias efetivas. Portanto há uma necessidade grande não atendida por drogas efetivas e seguras para esta condição. Psoríase é caracterizada por hiperproliferação de queratinócito local, inflamação mediada por célula T e por angiogênese localizada. Ativação anormal de SK tem estado implicada em todos estes processos. Portanto, é esperado que inibidores de SK sejam usados em terapia de psoríase.
[00127] Distúrbios hiperproliferativos de célula mesangial referem-se aos distúrbios ocasionados pela proliferação anormal de células mesangiais nos rins. Distúrbios hiperproliferativos mesangiais incluem várias doenças renais de humano tais como glomerulonefrite, nefropatia diabética, e nefrosclerose maligna, bem como tais distúrbios como síndrome de microangiopatia trombótica, rejeição de transplante, e glomerulopatias. Visto que a hiperproliferação de células mesangiais é induzida por fatores de crescimento cuja ação é dependente de sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos inibitórios de SK, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção sejam usados na terapia destes distúrbios hiperproliferativos de célula mesangial.
[00128] Em adição aos processos inflamatórios discutidos abaixo, aterosclerose e restenose são caracterizadas por hiperproliferação de células de músculo liso vascular nos sítios das lesões. Visto que a hiperproliferação de células de músculo liso vascular é induzida por fatores de crescimento cuja ação é dependente de sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos inibitórios de SK s desta invenção sejam usados na terapia destes distúrbios vasculares.
Doenças inflamatórias.
[00129] A presente invenção também se refere aos compostos, às composições farmacêuticas e aos métodos úteis para o tratamento e/ou a prevenção de doenças inflamatórias. Mais especificamente, a invenção refere- se aos compostos e às composições farmacêuticas que inibem a atividade enzimática de SK para o tratamento e/ou a prevenção de doenças inflamatórias, tais como doença inflamatória do intestino, artrite, aterosclerose, asma, alergia, doença inflamatória do rim, choque circulatório, esclerose múltipla, doença pulmonar obstrutiva crônica, inflamação de pele, doença periodontal, psoríase e doenças de imunidade mediadas por célula T, incluindo encefalomielite alérgica, neurite alérgica, rejeição de transplante de aloenxerto, doença de enxerto versus hospedeiro, miocardite, tiroidite, nefrite, lúpus eritematoso sistêmico, e diabete melito dependente de insulina. A discussão seguinte demonstra o papel de SK em várias destas doenças inflamatórias. Visto que os mesmos processos estão envolvidos nas doenças listadas acima, os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção serão úteis para o tratamento e/ou a prevenção de uma variedade de doenças.
[00130] Doença inflamatória do intestino (IBD) inclui um grupo de distúrbios caracterizados por inflamação patológica do intestino delgado. Doença de Crohn e colite ulcerativa são as formas melhor conhecidas de IBD, e ambas caem dentro da categoria de IBD “idiopática” porque suas etiologias permanecem para serem elucidadas, embora os mecanismos propostos impliquem mediadores infecciosos e imunológicos. Estudos sobre a etiologia e a terapia de IBD têm sido grandemente facilitados pelo desenvolvimento de vários modelos animais que imitam os distúrbios clínicos e imunopatológicos vistos em humanos. Dos estudos com estes modelos, está claro que as manifestações totais de IBD são dependentes da sinergia entre as respostas imunes celulares e humorais. A noção de que células imunes e citocinas desempenham papéis críticos na patogênese de IBD está bem estabelecida; contudo, os mecanismos moleculares pelos quais isto ocorre ainda não estão claramente definidos. Como discutido abaixo, citocinas que promovem inflamação no intestino afligido por IBD, todas ativam um mediador comum, esfingosina cinase (SK). Mais proeminentemente, tem sido mostrado que factor-α de necrose tumoral (TNFα) desempenha um papel significativo em IBD, de tal modo que terapia de anticorpo direcionado contra esta citocina, i.e. Remicade, pode ser um tratamento promissor. TNFα activa vários processos que como mostrado contribuem para IBD e é necessário para ambas iniciação e persistência da resposta de Th1. Por exemplo, tem sido mostrado que TNFα atua através da indução de fator capa B nuclear (NFKB) que tem estado implicado no aumento das enzimas pró-inflamatórias óxido nítrico sintase (NOS) e ciclooxigenase-2 (COX-2). Tem sido mostrado que COX-2 desempenha um papel chave na inflamação de IBDs através de sua produção de prostaglandinas, e também tem sido mostrado que estresse oxidativo tal como aquele mediado por óxido nítrico produzido por NOS exacerba a inflamação de IBD.
[00131] Uma rota comum de ativação imune em IBDs é o influxo local de mastócitos, monócitos, macrófagos e neutrófilos polimorfonucleares que resulta na amplificação secundária do processo de inflamação e produz as manifestações clínicas das doenças. Isto resulta em números marcantemente aumentados de mastócitos na mucosa do íleo e do cólon de pacientes com IBD, que está acompanhado por aumentos dramáticos em TNFα (He, 2004, World J Gasfroertterology 10 (3): 309). Produtos secretórios de mastócito adicionais, incluindo histamina e triptase, podem ser importantes em IBDs. Portanto, está claro que cascatas inflamatórias desempenham papéis críticos na patologia de IBDs. Os mecanismos e os efeitos da interconversão de esfingolipídeo têm sido os temas de um corpo crescente de investigação científica. Esfingomielina não é apenas um componente estrutural de membranas celulares, mas também serve como o precursor para os lipídeos bioativos potentes ceramida e esfingosina 1-fosfato (S1P). Um reostato de ceramida: S1P é considerado para determinar o destino da célula, de tal modo que as concentrações celulares relativas de ceramida e S1P determinam se a célula se prolifera ou sofre apoptose. Ceramida é produzida pela hidrólise de esfingomielina em resposta aos estresses inflamatórios, incluindo TNFα, e pode ser hidrolisada por ceramidase para produzir esfingosina. Esfingosina é então rapidamente fosforilada por esfingosina cinase (SK) para produzir S1P. Ceramidase e SK também são ativadas por citocinas e fatores de crescimento, acarretando aumentos rápidos nos níveis intracelulares de S1P e depleção de níveis de ceramida. Esta situação promove proliferação celular e inibe apoptose. Desregulação de apoptose em fagócitos é um componente importante do estado inflamatório crônico em IBDs, e tem sido mostrado que S1P protege neutrófilos da apoptose em resposta a Fas, TNFα e ceramida. Similarmente, apoptose de macrófagos é bloqueada por S1P. Em adição ao seu papel na regulação de proliferação e apoptose celulares, tem sido mostrado que S1P possui vários efeitos importantes sobre células que medeiam funções imunes. Plaquetas, monócitos e mastócitos secretam S1P sob ativação, promovendo cascatas inflamatórias no sítio de dano de tecido. Ativação de SK é requerida para as respostas de sinalização, porque a capacidade de TNFα para induzir expressão de molécula de adesão via ativação de NFKB é imitada por S1P e é bloqueada pelo inibidor de SK dimetil-esfingosina (Xia et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95: 14196). Similarmente, S1P imita a capacidade de TNFα para induzir a expressão de COX-2 e a síntese de PGE2, e enfraquecimento de SK por interferência de RNA bloqueia estas respostas ao TNFα mas não ao S1P (Pettus et al., 2003, FASEB J 17: 1411). S1P também é um mediador de influxo de Ca2+ durante ativação de neutrófilo por TNFα e outros estímulos, acarretando a produção de superóxido e de outros radicais tóxicos (Mackinnon, 2002, Journal of Imunology 169(11): 6394).
[00132] Um modelo para os papéis de metabólitos de esfingolipídeo na patologia de IBDs envolve uma combinação de eventos nas células epiteliais de cólon e mastócitos, macrófagos e neutrófilos recrutados. Inicialmente na doença, reações imunológicas ou outros sinais de ativação promovem a liberação de citocinas inflamatórias, particularmente de TNFα de macrófagos e mastócitos. As ações de TNFα são mediadas através de sua ativação de produção de S1P. Por exemplo, TNFα induz a produção de S1P em células endotelial (Xia et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95: 14196), neutrófilos (Niwa et al., 2000, Life Sci 66: 245) e monócitos pela ativação de esfingomielinase, ceramidase e SK. S1P é um componente central na rota porque possui ações pleiotrópicas sobre as células epiteliais mucosais, macrófagos, mastócitos e neutrófilos. Dentro das células mucosais, S1P ativa NFKB induzindo deste modo a expressão de moléculas de adesão, COX-2 resultando em síntese de PGE2, e NOS produzindo óxido nítrico. Juntos, estes quimioatraentes e as moléculas de adesão promovem infiltração de neutrófilos para dentro da mucosa. Ao mesmo tempo, S1P ativa os neutrófilos resultando na liberação de radicais livres de oxigênio que adicionalmente inflamam e destroem tecido epitelial. Similarmente, S1P promove a ativação e a desgranulação de mastócitos.
[00133] Visto que os processos envolvidos em IBDs são induzidos por citocinas e fatores de crescimento cuja ação é dependente da sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos inibitórios de SK desta invenção sejam usados na terapia de IBDs.
[00134] Artrite reumatóide (RA) é uma doença sistêmica, crônica que é caracterizada por hiperplasia sinovial, infiltração celular massiva, erosão da cartilagem e do osso, e uma resposta imune anormal. Estudos sobre etiologia e a terapia de artrite reumatóide têm sido grandemente facilitados pelo desenvolvimento de modelos animais que imitam os distúrbios clínicos e imunopatológicos vistos em humanos. Dos estudos nestes modelos, está claro que as manifestações totais de RA são dependentes da sinergia entre as respostas imunes celulares e humorais. A noção de que células imunes, especialmente neutrófilos, e citocinas desempenham papéis críticos na patogênese de artrite está bem estabelecida. Contudo, os mecanismos pelos quais isto ocorre não estão totalmente elucidados.
[00135] A fase inicial de inflamação reumática é caracterizada por infiltração de leucócitos para dentro de tecidos, especialmente por neutrófilos. Neste caso de RA, isto ocorre primariamente em articulações onde infiltração de leucócito resulta em sinovite e espessamento de sinóvia produzindo os sintomas típicos de aquecimento, vermelhidão, inchamento e dor. À medida que a doença progride, a coleção aberrante de células invade e destrói a cartilagem e o osso dentro da articulação acarretando deformidades e dor crônica. As citocinas inflamatórias TNFα, IL-1β e IL-8 atuam como mediadores críticos desta infiltração, e estas citocinas estão presentes no fluido sinovial de pacientes com RA.
[00136] Leucócitos localizam-se em sítios de lesão inflamatória como um resultado das ações integradas de moléculas de adesão, citocinas, e fatores quimiotáticos. Em artrite induzida por lipossacarídeo em coelho, a produção de TNFα e IL-1β na fase inicial de inflamação igualou-se ao curso de tempo de infiltração de leucócito. A aderência de neutrófilos no endotélio vascular é a primeira etapa no extravasamento de células para dentro de interstício. Este processo é mediado por selectinas, integrinas e moléculas de adesão endotelial, e.g. ICAM-1 e VCAM-1. Visto que TNFα induz a expressão de ICAM-1 e VCAM-1 e está presente em concentrações altas em articulações artríticas, é provável que esta proteína desempenha um papel central na patogênese da doença. Isto é confirmado pela atividade clínica de terapias anti-TNFα tal como Remicade. Após aderência no endotélio, leucócitos migram ao longo de um gradiente de concentração quimioatraente. Um outro processo crítico na progressão de RA é a intensificação do fornecimento de sangue para a sinóvia através de angiogênese. Expressão do fator angiogênico chave VEGF é potencialmente induzida pelas citocinas pró-inflamatórias incluindo TNFα. Juntos, estes dados apontam para papéis importantes de TNFα, leucócitos, moléculas de adesão em leucócito, quimioatraentes de leucócito e angiogênese na patogênese de lesão artrítica.
[00137] Inicialmente na doença, reações imunológicas ou outros sinais de ativação promovem a liberação de citocinas inflamatórias, particularmente de TNFα e de IL-1β de macrófagos e mastócitos. Ceramida é produzida pela hidrólise de esfingomielina em resposta aos estresses inflamatórios, incluindo TNFα e IL-1β (Dressier et al., 1992, Science 255: 1715). Ceramida pode ser adicionalmente hidrolisada por ceramidase para produzir esfingosina que é então rapidamente fosforilada por SK para produzir S1P. Ceramidase e SK também são ativadas por citocinas e fatores de crescimento, acarretando o aumento rápido nos níveis intracelulares de S1P e depleção de níveis de ceramida. Esta situação promove a proliferação celular e inibe apoptose. Desregulação de apoptose em fagócitos é um componente importante do estado inflamatório crônico em artrite, e tem sido mostrado que S1P protege neutrófilos da apoptose em resposta a Fas, TNFα e ceramida. Similarmente, apoptose de macrófagos é bloqueada por S1P. Em adição ao seu papel em regulação de apoptose e proliferação celulares, S1P é um componente central na rota porque possui ações pleiotrópicas sobre células endoteliais, leucócitos, condrócitos e células sinoviais. Dentro de células, S1P ativa NFKB induzindo deste modo a expressão de múltiplas moléculas de adesão e COX-2 resultando em síntese de PGE2. Juntos, este quimioatraente e as moléculas de adesão promovem infiltração de neutrófilos para dentro da sinóvia. Ao mesmo tempo, S1P diretamente ativa os neutrófilos resultando na liberação de radicais de oxigênio livre que destroem o tecido da articulação. Progressão de RA está associada com uma mudança do ambiente de Th1 para Th2, e esfingosina é seletivamente inibitória para células Th1. Conseqüentemente, inibição da conversão de esfingosina para S1P deve atenuar a progressão da doença. Plaquetas, monócitos e mastócitos secretam S1P sob ativação, promovendo cascatas inflamatórias no sítio de dano de tecido (Yatomi et al., Blood 86: 193 (1995)). S1P também promove a seleção de proteases de condrócitos que contribuem para a destruição da articulação. Finalmente, expressão de VEGF mediada por S1P promove a angiogênese necessária para suportar a hiperproliferação de células sinoviais. Conseqüentemente, inibição da conversão de esfingosina em S1P deve atenuar a progressão da doença.
[00138] À medida que processos envolvidos em artrite são induzidos por citocinas e fatores de crescimento cuja ação é dependente da sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos inibitórios de SK desta invenção sejam usados na prevenção e/ou no tratamento de artrite.
[00139] Aterosclerose é uma doença vascular complexa que envolve uma série de eventos moleculares e celulares coordenados característicos de reações inflamatórias. Em resposta à lesão vascular, as primeiras lesões ateroscleróticas são iniciadas por reações inflamatórias agudas, em sua maioria medidas por monócitos, plaquetas e linfócitos T. Estas células inflamatórias são ativadas e recrutadas para dentro do espaço vascular subendotelial através de fatores quimiotáticos localmente expressados e moléculas de adesão expressadas sobre a superfície celular endotelial. Recrutamento contínuo de células inflamatórias circulantes adicionais na parede vascular lesionada potencializa a reação inflamatória pela ativação adicional da proliferação e migração de célula de músculo liso vascular (VSM). Esta reação inflamatória vascular crônica acarreta formação de capa fibrosa, que é um meio inflamatório rico em oxidante composto de monócitos/macrófagos e células de VSM. No decorrer do tempo, esta capa fibrosa pode ser desestabilizada e rompida por metaloproteinases extracelulares secretadas por monócitos/macrófagos resistentes. A capa fibrosa rompida pode facilmente ocluir os vasos resultando em isquemia cerebral ou cardíaca aguda. Este mecanismo subjacente de aterosclerose indica que a ativação de monócito/macrófago e as proliferação e migração de célula de VSM desempenham papéis críticos no desenvolvimento e na progressão de lesões ateroscleróticas. O importante, também sugere que uma abordagem terapêutica que bloqueia as atividades destas células inflamatórias vasculares ou a proliferação de célula de músculo deve capaz de prevenir a progressão e/ou o desenvolvimento de aterosclerose.
[00140] SK é elevadamente expressada em plaquetas permitindo que ela fosforila esfingosina circulante para produzir S1P. Em resposta à lesão de vaso, plaquetas liberam quantidades grandes de S1P para dentro dos sítios de lesão que podem exercer efeitos mitogênicos sobre células de VSM pela ativação de receptores de S1P. S1P também é produzido em células de VSM e endoteliais ativadas. Nestas células, S1P intracelularmente produzido funciona como uma molécula mensageira secundária, regulando hemostasia de Ca2+ associada com proliferação celular e supressão de apoptose. Adicionalmente, desregulação de apoptose em fagócitos é um componente importante do estado inflamatório crônico de aterosclerose, e S1P protege granulócitos da apoptose.
[00141] Juntos, estes estudos indicam que ativação de SK altera metabolismo de esfingolipídeo em favor da formação de S1P, resultando em respostas celulares pró-inflamatórias e hiperproliferativas.
[00142] Em adição ao seu papel na regulação de apoptose e proliferação celular, tem sido mostrado que S1P possui vários efeitos importantes sobre células que medeiam funções imunes. Plaquetas e monócitos secretam citocinas, fatores de crescimento e S1P sob ativação, promovendo cascatas inflamatórias no sítio de dano de tecido. Por exemplo, tem sido mostrado que TNFα atua através de indução de fator nuclear capa B (NFKB), que tem estado implicado no aumento das enzimas pró-inflamatórias óxido nítrico sintase (NOS) e ciclooxigenase-2 (COX-2). COX-2 pode desempenhar um papel chave na inflamação de aterosclerose através de sua produção de prostaglandinas, e também tem sido mostrado que estresse oxidativo tal como aquele mediado por óxido nítrico produzido por NOS exacerba a inflamação. Ativação de SK é requerida para respostas de sinalização porque a capacidade de citocinas inflamatórias de induzirem a expressão de molécula de adesão via ativação de NFKB é imitada por S1P. Similarmente, S1P imita a capacidade de TNFα para induzir a expressão de COX-2 e a síntese de PGE2, e enfraquecimento de SK por interferência de RNA bloqueia estas resposta aoTNFα mas não ao S1P. S1P também é um mediador de influxo de Ca2+ durante ativação de granulócito, acarretando a produção de superóxido e de outros radicais tóxicos.
[00143] Juntos, estes estudos indicam que SK é um alvo molecular novo para aterosclerose. O uso de inibidores de SK como agentes anti- aterosclerose evitará a ativação deletéria de leucócitos, bem como prevenirá a infiltração e a proliferação de células de músculo liso, tornando os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção úteis para o tratamento e/ou a prevenção de aterosclerose.
[00144] O ponto final fisiológico em patologia de asma é estreitamento dos tubos bronquiais devido à inflamação. Em uma porção grande dos casos de asma, a inflamação é iniciada e mais tarde amplificada pela exposição a alérgenos. Sob inalação, estes alérgenos, se ligam em IgE circulante e então se ligam em receptores de superfície de afinidade alta FcεRI expressados pelas células inflamatórias residindo na mucosa bronquial. Esta ligação extracelular acarreta uma cascata de eventos de sinalização dentro das células inflamatórias, culminando em ativação destas células e secreção de fatores múltiplos que disparam as células revestindo as vias bronquiais para incharem, resultando em tubos bronquiais restringidos e troca de ar diminuída. O processo de inflamação em resposta à exposição inicial ao alérgeno pode não ser completamente diminuído. Ademais, exposições adicionais podem acarretar uma resposta exagerada chamada hiperatividade bronquial. Este estado hiperreativo pode acarretar uma condição permanente de vias aéreas restringidas através de remodelagem de vias aéreas. Conseqüentemente, respostas inflamatória não checadas à exposição de alérgeno inicial podem resultar em inflamação crônica e constrição bronquiolar permanente. Portanto, inibição ou diminuição desta inflamação exagerada provavelmente diminuiria os sintomas associados com asma. Muitos estudos têm revelado o envolvimento de mastócitos no processo inflamatório acarretando asma, e tem sido mostrado que SK está envolvida em ativação de mastócito estimulada por alérgeno, uma etapa crítica no processo inflamatório bronquial. Em células RB1-2H3 de leucemia basofílica de rato, ligação de IgE/Ag em receptor de afinidade alta FcεRI acarreta ativação de SK e conversão de esfingosina em S1P (Choi et al., 1996, Nature 380: 634). O S1P recém-formado aumenta os níveis de cálcio intracelular, que é necessário para ativação de mastócito. Alternativamente, concentrações altas de esfingosina diminuem síntese de leucotrieno mediada por exposição a IgE/Ag e diminuem transcrição e secreção de citocina (Prieschl et al., 1999, J Exp Med 190: 1).
[00145] Em adição ao papel chave de SK e de S1P em ativação de mastócito, S1P também possui efeitos diretos sobre sinalização a montante na rota de inflamação de arma. Ammit e colaboradores demonstram níveis de S1P aumentados no fluido de lavagem bronquioalveolar (BAL) colhido de pacientes asmáticos 24 horas após desafio de alérgeno comparado com indivíduos não asmáticos (Ammit et al., 2001, FASEB J 15: 1212). Conjuntamente com a descoberta de que mastócitos ativados produzem e secretam S1P, estes resultados revelam uma correlação entre S1P e a resposta inflamatória asmática. Para avaliar um papel possível de exposição de SK e S1P para resposta celular, culturas ASM foram crescidas na presença de S1P (Ammit et al.,, 2001 Id). Ademais, células de músculo liso de via aérea (ASM) são responsivas aos estímulos dependentes de S1P e de SK, tais como TNFα e IL-1β. Tratamento com S1P aumenta hidrólise de fosfoinositida e mobilização de cálcio intracelular, ambos os quais promovem a contração de ASM. Ademais, tratamento com S1P aumenta a síntese de DNA, o número de células e a progressão acelerada de células de ASM da fase G1 para S.
[00146] Em adição aos efeitos diretos sobre as células de ASM, S1P também regula a secreção de citocinas e a expressão de moléculas de adesão celular que amplificam a resposta inflamatória através de recrutamento de leucócitos e facilitação da interação de componentes extracelulares. S1P, como TNFα, induz secreção de IL-6 e aumenta a expressão de moléculas de adesão celular tais como VCAM-1, ICAM-1 e E-selectina (Shimamura et al, 2004, Eur J Pharmacol 486: 141). Em adição aos efeitos de S1P sobre ativação de mastócito, os múltiplos papéis de S1P, e como conseqüência de SK, na fase inflamatória bronquiolar de patogênese da asma indicam claramente uma oportunidade para intervenção farmacológica em ambas as fases aguda e crônica desta doença.
[00147] Além de tudo, SK é um alvo para novas terapias de anti-asma. O uso de inibidores de SK como agentes de anti-asma inibirá ativação de leucócitos mediada por citocina, prevenindo deste modo a ativação deletéria de leucócitos, bem como prevenindo a hiperproliferação de células de músculo liso das vias aéreas, tornando os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção úteis para o tratamento e/ou a prevenção de asma.
[00148] Doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), como asma, envolve obstrução das vias aéreas e hiperresponsividade que está associada com ativação aberrante de neutrófilo no tecido pulmonar. Isto é clinicamente manifesto como bronquite crônica, fibrose ou enfisema, que juntas compõem a quarta causa líder de morte nos Estados Unidos. Visto que ativação de células inflamatórias por insultos químicos em COPD ocorre através de rotas mediadas por NFKB similares àquelas ativadas durante asma, é provável que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção também sejam úteis para o tratamento e/ou a prevenção de COPD.
[00149] Inflamação está envolvida em uma variedade de distúrbios de pele, incluindo psoríase, dermatite atópica, sensibilidade de contato e acne, que afetam mais do que 20% da população. Embora corticosteróides tópicos tenham sido amplamente usados, seus efeitos adversos previnem o uso de longa duração. Visto que as respostas inflamatórias tipicamente envolvem ativação aberrante de rotas de sinalização detalhadas acima, é provável que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção também sejam úteis para o tratamento destas doenças de pele.
[00150] Uma variedade de doenças incluindo encefalomielite alérgica, neurite alérgica, rejeição de transplante de aloenxerto, doença de enxerto versus hospedeiro, miocardite, tiroidite, nefrite, lúpus eritematoso sistêmico, e diabete melito dependente de insulina pode ser induzida por ativação inapropriada de células T. Características comuns da patogênese destas doenças incluem infiltração por células mononucleares, expressão de células T autorreativas a CD4 e CD 8, e sinalização hiperativa por mediadores inflamatórios tais como IL-1, IL-6 e TNFα. Visto que as respostas inflamatórias tipicamente envolvem ativação aberrante de rotas de sinalização detalhadas acima, é provável que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção também sejam úteis para o tratamento destas doenças de imunidade mediadas por célula T.
Doenças angiogênicas.
[00151] A presente invenção também se refere aos compostos, às composições farmacêuticas e aos métodos úteis para o tratamento e/ou a prevenção de doenças que envolvem angiogênese indesejada. Mais especificamente, a invenção refere-se ao uso de compostos e composições químicas que inibem a atividade enzimática de esfingosina cinase para o tratamento e/ou a prevenção de doenças angiogênicas, tais como retinopatia diabética, artrite, câncer, psoríase, sarcoma de Kaposi, hemangiomas, angiogênese miocardial, neovascularização de placa aterosclerótica, e doenças angiogênicas vasculares tais como neovascularização coroidal, retinopatia de prematuridade (fibroplasias retrolentais), degeneração macular, rejeição de enxerto corneal, rubeose, glaucoma neuroscular e síndrome de Oster Webber. A discussão seguinte demonstra o papel de SK em várias destas doença angiogênicas. Visto que os mesmos processos estão envolvidos nas doenças listadas acima, os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção serão úteis para o tratamento e/ou a prevenção de uma variedade de doenças.
[00152] Angiogênese refere-se a um estado no corpo no qual vários fatores de crescimento ou outros estímulos promovem a formação de vasos sanguíneos novos. Como discutido abaixo, este processo é crítico para a patologia de uma variedade de doenças. Em cada caso, angiogênese excessiva permite a progressão da doença e/ou produz efeitos indesejados no paciente. Visto que mecanismos bioquímicos conservados regulam a proliferação de células endoteliais vasculares que formam estes vasos sanguíneos novos, i.e. neovascularização, é esperado que a identificação dos métodos para inibir estes mecanismos tenha utilidade para o tratamento e/ou a prevenção de uma variedade de doenças. A seguinte discussão proporciona detalhes adicionais de como os compostos, as composições e os métodos da presente invenção podem ser usados para inibir angiogênese em várias destas doenças.
[00153] Retinopatia diabética é uma causa líder de enfraquecimento de visão, e elevação na expressão de fatores de crescimento contribui para angiogênese patogênica nesta doença. Em particular, fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) é um contribuinte proeminente para a formação de vasos novos em retina diabética (Frank et al., 1997, Arch Ophthalmol 115: 1036, Sone et al., 1997, Diabetologia 40: 726), e tem sido mostrado que VEGF pode ser elevado em pacientes com retinopatia diabética proliferativa (Aiello et al., 1994, N Engl J Med 331: 1480). Em adição à retinopatia diabética,várias outras doenças oculares debilitantes, incluindo degeneração macular relacionada com a idade e neovascularização coroidal, estão associadas com angiogênese excessiva que é mediada por VEGF e outros fatores de crescimento (Grant et al., 2004, Expert Opin Investig Drugs 13: 1275).
[00154] Na retina, VEGF é expressado no epitélio de pigmentação, na retina neurossensorial, nos periscitos e a camada de músculo liso vascular. VEGF induz proliferação celular endotelial, favorecendo a formação de vasos novos na retina (Pe'er et al., 1995, Lab Invest 72: 638). Ao mesmo tempo, o fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF) na retina é ativado, e este fator atua em sinergia com VEGF de tal modo que os dois juntos induzem a formação de vasos novos nos quais a matriz subendotelial é muito mais fraca do que em vasos normais. Adicionalmente, VEGF facilita a extravazão de fluido no interstício, onde exsudatos formam no tecido retinal. VEGF também promove a fenestração de células endoteliais, um processo que pode fazer com que fluidos vazem através de canais intercelulares, e rompe junções estreitas entre as células. Assim, é provável que a redução de atividade de VEGF na retina eficientemente reduza o desenvolvimento e a progressão de angiogênese retinal e o vazamento vascular que estão por trás do processo de retinopatia.
[00155] Também tem sido demonstrado que a citocina pró-inflamatória TNFα desempenha um papel em retinopatia diabética porque altera o citoesqueleto de células endoteliais, resultando em função de barreira vazada e ativação de célula endotelial (Camussi et al., 1991, Int Arch Alergia Appl Imunol 96: 84). Estas mudanças em células endoteliais retinais são centrais nas patologias de retinopatia diabética.
[00156] Uma ligação entre as ações ded VEGF e de SK pode estar envolvida na condução de retinopatia. Tem sido mostrado que SK medeia ativação VEGF-induzida de Proteína Cinases ativadas por ras e por mitógeno (Shu et al., 2002, Mol Cell Biol 22: 7758). Tem sido mostrado que VEGF intensifica as respostas de sinalização a S1P, aumentando deste modo suas ações angiogênicas (Igarashi et al., 2003, Proc Natl Acad Sci USA 100: 10664). Também tem sido mostrado que S1P estimula atividade de NFKB (Xia et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95: 14196) acarretando a produção de COX-2, moléculas de adesão e produção de VEGF adicional, todos os quais têm estado ligados à angiogênese. Ademais, a expressão da isoforma endotelial de óxido nítrico sintase (eNOS), uma molécula sinalizadora chave em células endoteliais vasculares e modula uma ampla variedade de funções incluindo respostas angiogênicas, é regulada por SK (Igarashi et al.,, 2000 J Biol Chem 275: 32363). Claramente, SK é um regulador central de angiogênese, confirmando nossa hipótese de que sua manipulação fisiológica pode ser terapeuticamente útil. Também tem sido mostrado que S1P estimula a produção de NFKB que como tem sido demonstrado é angiogênico. NFKB acarreta a produção de Cox2, moléculas de adesão e produção de VEGF adicional, todos os quais têm estado ligados à angiogênese. Um dos sítios mais atrativos de intervenção nesta rota é a conversão de esfingosina em S1P pela enzima SK. SK é a enzima chave responsável pela produção de síntese de S1P em células de mamífero, que facilita a proliferação e a sobrevivência celulares, e medeia os processos críticos envolvidos em angiogênese e inflamação, incluindo respostas ao VEGF (Shu et al., 2002, MoI Cell Biol 22: 7758) e TNFα (Xia et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95: 14196). Portanto, inibição da produção de S1P é um ponto potencialmente importante de intervenção terapêutica para retinopatia diabética. O papel de angiogênese em câncer está bem reconhecido. Crescimento de um tumor é dependente de neovascularização de modo que nutrientes possam ser proporcionados às células de tumor. O fator maior que promove a proliferação de célula endotelial durante a neovascularização de tumor é VEGF. Como discutido acima, sinalização através de receptores de VEGF é dependente das ações de SK. Portanto, os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos desta invenção terão utilidade no tratamento de câncer.
[00157] Mais de 50 doenças oculares têm estado ligadas à formação de neovascularização coroidal, embora as três doenças principais que causam esta patologia sejam degeneração macular relacionada com idade, miopia e trauma ocular. Embora a maioria destas causas sejam idiopáticas, dentre as causas conhecidas estão as relacionadas com degeneração, infecções, tumores coroidais e/ ou trauma. Dentre os usuários de lentes de contato gelatinosas, neovascularização coroidal pode ser causada pela falta de oxigênio no globo ocular. Visto que a neovascularização coroidal é induzida pelos fatores de crescimento cuja ação é dependente da sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos inibitórios de SK desta invenção sejam usados na terapia de distúrbios de neovascularização coroidal.
[00158] Hemangiomas são doenças angiogênicas caracterizadas pela proliferação de endotélio capilar com acúmulo de mastócitos, fibroblastos e macrófagos. Representam os tumores mais freqüentes de infância, e são caracterizados por rápido crescimento neonatal (fase de proliferação). Pela idade de 6 a 10 meses, a velocidade de crescimento de hemangioma torna-se proporcional à velocidade de crescimento da criança, seguida por uma regressão muito lenta para os próximos 5 a 8 anos (fase involuta). A maioria dos hemangiomas ocorre com tumores únicos, enquanto que cerca de 20% dos infantes afetados possuem múltiplos tumores, que podem parecer em qualquer sítio do corpo. Vários estudos têm proporcionado discernimento na patologia destas lesões. Em particular, hemangiomas proliferantes expressam níveis altos de antígeno nuclear de célula proliferante (um marcador para células na fase S), colagenase de tipo IV, VEGF e FGF-2. Visto que os hemangiomas são induzidos por fatores de crescimento cuja ação é dependente da sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos inibitórios de SK desta invenção sejam usados na terapia de hemangiomas.
[00159] Psoríase e sarcoma de Kaposi são distúrbios angiogênicos e proliferativos da pele. Lesões psoriáticas hipervasculares expressam níveis altos de indutor angiogênico IL-8, enquanto que a expressão de TSP-1 é diminuída. Sarcoma de Kaposi (KS) é o tumor mais comum associado com infecção causada por vírus da imunodeficiência humana (HIV) e está neste ambiente quase sempre associado com infecção pelo vírus do herpes humano 8. Características típicas de KS são células fusiformes proliferantes, considerando as células de tumor e as células endoteliais como as formadoras dos vasos sanguíneos. KS é uma doença mediada por citocina, elevadamente responsiva aos diferentes mediadores inflamatórios como IL-1β, TNF-α e IFN-Y e fatores angiogênicos. Visto que as progressões de psoríase e de KS são induzidas por fatores de crescimento cuja ação é dependente de sinalização aumentada através de SK, é esperado que os compostos, as composições farmacêuticas e os métodos inibitórios de SK desta invenção sejam usados na terapia destas doenças.
EXEMPLOS
[00160] A presente invenção pode ser melhor entendida com referência aos seguintes exemplos. Estes exemplos são intencionados para serem representativos de modalidades específicas da invenção, e não são intencionados como limitantes do escopo da invenção.
[00161] Compostos representativos da invenção incluem aqueles nas Tabelas 1 e 2. Estruturas foram nomeadas usando Chemdraw Ultra, version 7.0.1, disponível na CambridgeSoft Corporation, 100 CambridgePark Drive, Cambridge, MA 02140, USA. Tabela 1. Compostos representativos da invenção.
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Tabela 2. Compostos representativos da invenção.
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Métodos gerais.
[00162] Espectros de NMR foram obtidos em instrumentos Varian 300 em CDCh; DMSO-dó. Deslocamentos químicos são citados em relação a TMS para espectros de 1H- e 13C-NMR. Solventes foram secos e destilados antes do uso. Reações requerendo condições anidras foram conduzidas sob uma atmosfera de nitrogênio e cromatografia em coluna foi realizada sobre gel de sílica (Merck, gel de sílica 60, malha 230-400). Todos os reagentes e materiais comercialmente disponíveis foram usados sem purificação adicional.
Exemplo 1. Método para a síntese de (piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. Composto 62.
[00163] Como um exemplo, um processo para a síntese de Composto 62 é descrito no Esquema 1. A bromação direta de acido adamantano-1- carboxílico (1) na presença de cloreto de alumínio (AlCl3) deu o derivado 3- bromado (2) de 1 que foi convertido em (3) pela reação de Friedell-Crafts. 3 foi reagido com cloreto de tionila (SOCl2) para dar cloretos de 3-R- substituído-1-adamantano-carbonila 4. Pela reação de 4 com uma amina substituída, por exemplo, 4-amino-metil-piridina (5), em THF, (6, também representado como Composto 62) e compostos de amida relacionados foram obtidos. Esquema 1.
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[00164] Mais especificamente, ácido adamantano-1-carboxílico (1) (45 g, 0,25 mol) foi adicionado na mistura de AlCl3 (45 g, 0,34 mol) e Br2 (450 g) a 0oC e agitado at 0-100C por 48 h, mantido a 5 h a cerca de 20oC, derramado sobre 500 g de gelo triturado, diluído com 300 mL de CHCl3 e descolorido com Na2S2O5 sólido. A fase aquosa foi extraída com Et2O (50 mL x 2). a solução orgânica combinada foi lavada com H2O e extraída com NaOH 10%. A extração alcalina foi acidulada com H2SO4 2 N e proporcionou 49 g (rendimento = 75,7%) de ácido 3-bromo-adamantano-1-carboxílico (2).
[00165] Durante um período de 30 minutos, ácido 3-bromo- adamantano-1-carboxílico (2) (16,0 g, 61,7 mmol) em 50 mL de cloro- benzeno seco a -100C foi adicionado em 100 mL de cloro-benzeno seco e 9,3 g, AlCl3 70 mmol. A mistura foi então aquecida para a temperatura ambiente por 1 hora e então foi aquecida a 90oC por 10 horas. A mistura foi então derramada sobre 200 g de gelo triturado, e filtrada para proporcionar 14,2 g (rendimento = 79,3 %) de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico (3).
[00166] 3 reagiu com uma quantidade quimolar de 1,1’-carbonil- diimidazol (CDI) para dar o intermediário 3-R-substituído-1-adamantano- carbonil-imidazol (4). Pela reação de 4 com uma amina substituída, foi obtida a adamantil-amida correspondente.
[00167] For exemplo, reação de 3 com 4-amino-metil-piridina (5), em tolueno, produziu {(piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico} (6 também representada como Composto 62) com um rendimento of 92,6% e um ponto de fusão de 128-130oC. 1H NMR(300 MHz, CDClβ) δ 1,72-2,25(m, 12H, Admant-CH), 4,44-4,46 (d, J = 6 Hz, 2H, CH2-Py), 6,18 (m, IH, HN), 7,13-7,15 (d, J = 6Hz, 2H, H-Py), 7,15-7,30 (m, 4H, H-Ph), 8,52-8,54 (d, J = 6 Hz, 2H, H-Py); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,98, 35,73, 36,71, 38,77, 42,18, 42,37, 44,88, 122,38, 125,30, 126,57, 128,56, 129,26, 148,39, 150,20 177,76; MS m/z (intensidade rel.) 381,50 (MH+, 100), 383,41 (90), 384,35 (80).
Exemplo 2. Um segundo método para a síntese de Composto 62.
[00168] Um segundo método para a síntese de Composto 62 e de adamantil-amidas relacionadas é descrito no Esquema2. Intermediário 3-fenil- substituído (3) foi preparado como descrito acima. 3 reagiu com 1,1’- carbonil-diimidazol (CDI) para dar intermediário 3-R-substituído-1- adamantano-carbonil-imidazol-(4). Pela reação de 4 com uma amina substituída, por exemplo 4-amino-metil-piridina 5, em tolueno, foi obtida {(piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1- carboxílico}. Esquema 2.
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[00169] Um conjunto diverso de aril-adamantanos substituídos pode ser eficientemente sintetizado por condensação de vários compostos aromáticos com 2, e uma variedade de tais compostos está comercialmente disponível. Adicionalmente, amidação de 3 pode ser eficientemente completada usando uma variedade de reagentes de copulação e de compostos contendo amina primária. O Exemplo seguinte proporciona vários representantes dos produtos deste processo; contudo, estes métodos podem ser adaptados para produzir muitas adamantil-amidas estruturalmente relacionadas que são consideradas temas desta invenção.
Exemplo 3. Síntese de adamantil-amidas.
[00170] Os métodos descritos em Exemplo 1 ou 2 foram usados para preparar uma biblioteca de adamantil-amidas substituídas. Dados proporcionados abaixo incluem: a quantidade sintetizada, o rendimento da reação de amidação, o ponto de fusão (p.f.) do composto, dados de espectro de massa (MS) para o composto, e dados de espectro de NMR para o composto.
[00171] Composto 1: Isopropil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico. Rendimento = 81%; p.f.: 140-141,5oC; MS m/z (intensidade rel.) 332 (MH+, 95).
[00172] Composto 2: Ciclo-propilamida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico. 90 mg, Rendimento = 78,3%; p.f.: 145-148oC; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0,44-0,46 (m, 2H, CH), 0,76-0,78 (m, 2H, CH), 1,59-1,92 (m, 12H, Admant-CH), 2,25 (s, 2H, Admant-CH), 2,62-2,65 (m, IH, CH)5 5,64 (m, 1H, HN), 7,28-7,30 (m, 4H, H-Ph); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 6,7, 22,7, 28,8, 35,5, 36,5, 38,4, 42,0, 44,5, 126,2, 128,1, 131,4, 148,2, 178,5; MS m/z (intensidade rel.) 330,46 (MH+, 100), 331,47 (25), 332,46(35).
[00173] Composto 3: (2-Etil-sulfanil-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 180 mg, Rendimento = 92,0%; p.f.: 101- 103oC; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 1,24-1,29 (t, J=7,5 Hz, 3H, CH3), 1,741,97 (m, 12H, Admant-CH), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 2,52-2,59 (q, J=7,5 Hz, 2H, CH2), 2,65-2,70 (t, J=7,5 Hz, 2H, CH2), 3,41-3,47 (m, 2H, CH2), 6,12 (m, 1H, HN), 7,24-7,28 (m, 4H, Ar-H), 7,38-7,45 (m, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 15,1, 25,75 29,0, 31,6, 35,8, 36,7, 38,3 , 38,6, 42,0, 42,3, 44,7, 126,6, 128,5, 148,6, 177,6; MS m/z (intensidade rel.) 373,6 (MH+, 100), 374,6 (25), 375,6(40).
[00174] Composto 4: Fenil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico. 120 mg, Rendimento = 68,5%; p.f.: 190-192oC; MS m/z (intensidade rel.) 366 (MH+, 35).
[00175] Composto 5: (4-Hidróxi-fenil)-amida de ácido damantano-1- carboxílico. 77 mg, Rendimento = 57%; p.f.: 224-226oC; MS m/z (intensidade rel.) 272 (MH+, 50).
[00176] Composto 6: (4-Hidróxi-fenil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. Rendimento = 66%; p.f.: 240-242oC; 1H NMR(200 MHz, CDCh) δ 0,86-2,32(m, 14H, Admant-H), 6,75-6,78 (d, J = 9 Hz, 2H, Ar-H), 7,26-7,33 (m, 6H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 23,7, 28,8, 29,4, 29,7, 30,3, 35,5, 38,5,3, 38,7, 42,0, 44,6, 115,7, 122,5, 126,3, 128,3, 140,6, 173,6; MS m/z (intensidade rel.) 382 (MH+, 50).
[00177] Composto 7: 4-{[3-(4-Cloro-fenil)-adamantano-1-carbonil]- amino}-fenil-éster de ácido acético. 140 mg, Rendimento = 85%; p.f.: 176- 178oC; MS m/z (intensidade rel.) 424 (MH+, 75), 425(50), 426(55).
[00178] Composto 8: (2,4-di-Hidróxi-fenil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 5 mg, Rendimento = 4%; p.f.: 242-244oC; MS m/z (intensidade rel.) 398 (MH+, 20).
[00179] Composto 9: (3-Hidróxi-metil-fenil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 74 mg, Rendimento = 38%; p.f.: 173- 175oC; MS m/z (intensidade rel.) 396 (MH+, 90).
[00180] Composto 10: (4-Ciano-metil-fenil)-amida de ácido adamantano-1-carboxílico. 5,1 mg, Rendimento = 4%; p.f.: 184-1860C; MS m/z (intensidade rel.) 295 (MH+, 50).
[00181] Composto 11: (4-Ciano-metil-fenil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 92 mg, Rendimento = 46%; mp: 157-1590C; MS m/z (intensidade rel.) 405 (MH+, 20).
[00182] Composto 12: Benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico. 144 mg, Rendimento = 75,8%; p.f.: 134-136oC; MS m/z (intensidade rel.) 380 (MH+, 75).
[00183] Composto 13: 4-terc-Butil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 35 mg, Rendimento = 62%; p.f.: 187-189oC; MS m/z (intensidade rel.) 436 (MH+, 30).
[00184] Composto 14: 4-Metil-sulfanil-benzilamida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 100 mg, Rendimento = 47%; p.f.: 139-141oC; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 1,73-1,98 (m, 12H, Admant-CH), 2,26 (s, 2H, Admant-CH), 2,47 (s, 3H, SCH3), 4,38-4,40 (d, J=6 Hz, 2H, CH2), 5,84 (s(br), 1H, HN), 7,16-7,24 (m, 4H, Ar-H), 7,26-7,30 (m, 4H, Ar- H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 15,9, 28,8, 35,5, 36,5, 38,4, 41,7, 42,0, 42,9, 44,6, 126,2, 126,7, 128,2, 131,4, 135,2, 137,5, 148,1, 177,2; MS m/z (intensidade rel.) 426,6 (MH+, 100), 427,6 (30), 428,6 (32).
[00185] Composto 15: 3-Trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 190 mg, Rendimento = 81%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,58-2,00 (m, 12H, Admant-CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,50-4,52 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,02 (m, 1H, HN), 7,26-7,29 (m, 4H, Ar-H), 7,44-7,54 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,8, 35,5, 36,5, 38,5, 41,8, 42,0, 42,8, 44,5, 124,0, 126,2, 128,1, 129,0, 130,7, 139,9, 148,3, 177,2; MS m/z (intensidade rel.) 448,2 (MH+, 100).
[00186] Composto 16: 4-Trifluorometil-benzilamida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 180 mg, Rendimento = 80%; p.f.:165- 167oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,74-1,99 (m, 12H, Admant-CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,48-4,50 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,03 (m, 1H, HN), 7,24-7,30 (m, 4H, Ar-H), 7,34-7,36 (d, J=6 Hz, 2H, Ar-H), 7,57-7,59 (d, J=6 Hz, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCI3) δ 29,0, 35,7, 36,7, 38,3, 38,7, 42,2, 42,3, 43,1, 43,9, 44,8, 125,9, 126,6, 127,9, 128,5, 131,9, 142,9, 148,4, 177,8; MS m/z (intensidade rel.) 448,2 (MH+, 100).
[00187] Composto 17: 3,5-Bis-trifluorometil-benzilamida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 168 mg, Rendimento = 65%; p.f.:125-127oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,75-2,00 (m, 12H, Admant- CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,53-4,55 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,24 (m, 1H, HN), 7,23-7,30 (m, 4H, Ar-H), 7,69 (s, 2H, Ar-H), 7,77 (s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,9, 35,6, 36,7, 38,6, 42,0, 42,2, 42,6, 44,7, 121,5, 125,5, 126,5, 127,6, 128,5, 131,8, 141,8, 148,4, 178,1; MS m/z (intensidade rel.) 516,2 (MH+, 100).
[00188] Composto 18: 3-Fluoro-5-trifluorometil-benzilamida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 210 mg, Rendimento = 90%; p.f.: 92-94oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,75-2,00 (m, 12H, Admant-CH), 2,29 (s, 2H, Admant-CH), 4,48-4,50 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,07 (m, 1H, HN), 7,14-7,29 (m, 7H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,9, 35,6, 36,6, 38,3, 38,7, 42,0, 42,1, 42,6, 44,7, 111,7, 112,0, 117,7, 118,0, 119,8, 126,5, 128,5, 131,8, 143,2, 148,4, 161,2, 164,5, 178,1; MS m/z (intensidade rel.) 466,2 (MH+, 100).
[00189] Composto 19: 2-Fluoro-4-trifluorometil-benzilamida de ácido 3-(4-Cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 156 mg, Rendimento = 67%; p.f.:190-192oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,60-1,96 (m, 12H, Admant- CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,51-4,53 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,08 (m, 1H, HN), 7,26-7,44 (m, 7H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 15,7, 29,0, 35,7, 36,7, 38,7, 42,2, 44,8, 113,3, 121,5, 126,6, 128,5, 130,8, 131,9, 148,4, 177,7; MS m/z (intensidade rel.) 466,1 (MH+, 100).
[00190] Composto 20: 3,5-Difluoro-benzilamida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 160 mg, Rendimento = 85%; p.f.: 59-61oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,75-2,03 (m, 12H, Admant-CH), 2,29 (s, 2H, Admant-CH), 4,38-4,41 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,00 (m, 1H, HN), 6,67-6,81 (m, 3H, Ar-H), 7,29(s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDClβ) δ 28,9, 35,7, 36,7, 38,1, 38,7, 42,1, 42,3, 42,8, 44,1, 44,7, 103,0, 110,2, 126,6, 128,5, 131,9, 148,4, 164,9, 178,0; MS m/z (intensidade rel.) 416,59 (MH+, 100), 417,59 (35), 418,59(40), 419,60(20).
[00191] Composto 21: 3,4-Difluoro-benzilamida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 179 mg, Rendimento = 86%; p.f.: 100- 102oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,74-1,98 (m, 12H, Admant-CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,38-4,41 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 5,96 (m, 1H, HN), 6,98 (s, 1H, Ar-H), 7,06-7,12 (m, 2H, Ar-H), 7,24-7,30 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,0, 35,7, 36,7, 38,7, 42,0, 42,1, 42,7, 44,8, 116,7, 117,7, 123,7, 126,6, 128,5, 148,5, 177,8; MS m/z (intensidade rel.) 416,4 (MH+, 100).
[00192] Composto 22: 3,4,5-Trifluoro-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 195 mg, Rendimento = 90%; p.f.:106- 108oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,75-1,98 (m, 12H, Admant-CH), 2,29 (s, 2H, Admant-CH), 4,36-4,38 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,03 (m, 1H, HN), 6,82-6,89 (t, J=7,5 Hz, 2H, Ar-H), 7,28 (s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,9, 35,6, 36,7, 38,7, 42,1, 42,4, 44,7, 111,3, 111,4, 111,5, 123,3, 125,5, 126,6, 128,5, 129,8, 131,8, 135,6, 148,4, 178,0; MS m/z (intensidade rel.) 434,5 (MH+, 100).
[00193] Composto 23: 3-Cloro-4-fluoro-benzilamida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 143 mg, Rendimento = 66,2%; p.f.: 112-114oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,74-1,98 (m, 12H, Admant-CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,37-4,39 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 5,99 (m, 1H, HN), 7,08 (s, 1H, Ar-H), 7,10-7,12 (m, 1H, Ar-H), 7,28-7,30 (m, 5H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,8, 35,5, 36,5, 38,5, 41,8, 42.O5 42,3, 44,6, 116,8, 126,2, 127,2, 128,2, 129,6, 148,0, 177,2; MS m/z (intensidade rel.) 432,5 (MH+, 50).
[00194] Composto 24: 4-Fluoro-3-trifluorometil-benzilamida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 220 mg, Rendimento = 94%; p.f.: 111-113oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,72-1,96 (m, 12H, Admant-CH), 2,25 (s, 2H, Admant-CH), 4,39-4,41 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,31-6,34 (m, 1H, HN), 7,03-7,22 (m, 2H, Ar-H), 7,25-7,29 (m, 3H, Ar-H), 7,38-7,45 (m, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,8, 35,5, 36,7, 37,7, 38,6, 38,7, 42,1, 42,3, 43,2, 44,7, 117,3, 126,2, 126,5, 128,5, 133,2, 148,4, 177,8; MS m/z (intensidade rel.) 466,6 (MH+, 100).
[00195] Composto 25: 2-Cloro-4-fluoro-benzilamida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 145 mg, Rendimento = 97,3%; p.f.: 132-134oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,72-2,03 (m, 12H, Admant-CH), 2,25 (s, 2H, Admant-CH), 4,45-4,47 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,23 (m, 1H, HN), 6,90-6,96 (m, 1H, Ar-H), 7,08-7,18 (m, 2H, Ar-H), 7,26-7,33 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(3OO MHz, CDCl3) δ 29,0, 35,7, 36,7, 38,4, 38,6, 41,2, 42,2, 42,4, 44,7, 114,4, 117,0, 126,6, 128,5, 131,5, 148,5, 163,7, 177,7; MS m/z (intensidade rel.) 432,54 (MH+, 100), 433,55 (25), 434,54(80), 435,54(30), 436,64(25).
[00196] Composto 26: 4-Cloro-3-trifluorometil-benzilamida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 136 mg, Rendimento = 92,0%; p.f.:77-79oC; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,58-1,99 (m, 12H, Admant-CH), 2,29 (s, 2H, Admant-CH), 4,45-4,47 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,05 (m, 1H, HN), 7,26-7,31 (m, 4H, H-Ph), 7,36-7,39 (d, J=9 Hz, 1H, Ar-H), 7,44-7,47(d, J=9 Hz, 1H, Ar-H), 7,66 (s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,7, 35,5, 36,5, 38,5, 41,9, 42,3, 44,6, 126,2, 126,4, 128,3, 131,6, 131,8, 137,8, 148,0, 177,3; MS m/z (intensidade rel.) 482,55 (MH+, 100), 483,55 (35), 484,35(70).
[00197] Composto 27: 3-Amino-metil-2,4,5,6-tetracloro-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 70 mg, Rendimento- 31%; p.f.: 170-172oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,60 (s, 2H, NH), 1,721,94 (m, 12H, Admant-CH), 2,25 (s, 2H, Admant-CH), 4,19 (s, 2H, CH), 4,79-4,81 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 5,91 (m(br), 1H, HN), 7,26-7,27 (m, 4H, Ar- H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,7, 35,5, 36,4, 38,4, 40,95 41,9, 43,7, 44,5, 122,9, 125,2, 125,9, 126,2, 128,1, 129,3, 131,4, 131,8, 134,1, 134,3, 139,2, 148,0, 176,6; MS m/z (intensidade rel.) 546,9 (MH+, 100).
[00198] Composto 28: [1-(4-Cloro-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 113 mg, Rendimento = 53%; p.f.: 204-206oC(B); 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,44-1,46 (d, J=6 Hz, 3H, CH3), 1,58-1,94 (m, 12H, Admant-CH), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 5,06-5,11 (m, 1H, CH), 5,75-5,78 (m(br), 1H, HN), 7,20-7,31 (m, 8H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 22,0, 29,0, 35,7, 36,7, 38,6, 38,7, 41,8, 42,2, 44,8, 48,1, 126,3, 126,6, 127,7, 128,5, 129,0, 131,8, 133,2, 142,3, 148,5, 176,6; MS m/z (intensidade rel.) 428,4 (MH+, 100).
[00199] Composto 29: [1-(4-Bromo-fenil)-etilj-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 69 mg, Rendimento = 29%; p.f.: 218- 220oC; MS m/z (intensidade rel.) 472 (MH+, 80), 474(MH+, 100).
[00200] Composto 30: 4-Metano-sulfonil-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 189 mg, Rendimento = 82%; p.f.:l 15- 117oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,75-2,00 (m, 12H, Admant-CH), 2,29 (s, 2H, Admant-CH), 3,02(s, 3H, CH3), 4,51-4,53 (d, J=6 Hz, 2H, CH2), 6,19 (m, 1H, HN), 7,16-7,28 (m, 4H, Ar-H), 7,40-7,43 (d, J=9 Hz, 2H, Ar-H), 7,84-7,87 (d, J=9 Hz, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 29,0, 35,5, 35,7, 36,7, 37,7, 38,5, 38,7, 42,0, 42,2, 44,6, 44,7, 117,7, 125,6, 126,6, 127,7, 128,1, 129,9, 131,7, 137,4, 139,1, 145,9, 148,6, 178,0; MS m/z (intensidade rel.) 458,3 (MH+, 100).
[00201] Composto 31: 4-Dimetil-amino-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 161 mg, Rendimento = 76,1%; p.f.: 154-156oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,72-1,97 (m, 12H, Admant-CH), 2,36 (s, 2H, Admant-CH), 2,94 (s, 6H, N(CH3)2), 4,32-4,34 (d, J=6 Hz, 2H, CH2), 5,73 (m, 1H, HN), 6,68-6,71 (d, J=9 Hz, 2H, Ar-H), 7,13-7,16(d, J=9 Hz, 2H, Ar-H), 7,28 (s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCI3) δ 15,7, 29,0, 35,8, 38,7, 40,9, 42,3, 43,4, 44,8, 112,9, 126,6, 128,5, 129,2, 137,7, 140,9, 173,4; MS m/z (intensidade rel.) 422,66 (M+, 100), 423,66 (MH+, 90), 424,64(60).
[00202] Composto 32: 4-Trifluorometóxi-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 200 mg, Rendimento = 86,2%; p.f.: 119-121oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,72-2,02(m, 12H, Admant-CH), 2,24 (s, 2H, Admant-CH), 4,39-4,41 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,27 (s, 1H, HN), 7,06-7,26 (m, 8H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,0, 35,7, 35,8, 36,7, 38,4, 38,7, 42,1, 42,4, 42,8, 43,6, 44,8, 121,2, 121,6, 126,3, 126,6, 128,5, 128,7, 129,1, 137,5, 148,4, 177,9; MS m/z (intensidade rel.) 464,4 (MH+, 70).
[00203] Composto 33: 3-Trifluorometil-óxi-benzil-amida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 200 mg, Rendimento = 86%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,75-2,00 (m, 12H, Admant-CH), 2,28 (s, 2H, Admant-CH), 4,45-4,47 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 6,00 (m, 1H, HN), 7,01-7,19 (m, 3H, Ar-H), 7,24-7,38 (m, 5H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,0, 35,7, 36,7, 38,7, 42,0, 42,2, 42,8, 44,8, 119,8, 125,9, 126,6, 128,5, 130,2, 131,8, 141,5, 148,6, 149,7, 177,8; MS m/z (intensidade rel.) 464,2 (MH+, 100).
[00204] Composto 34: 4-Fenóxi-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 170 mg, Rendimento = 72,0%; p.f.:121- 123oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,58-1,99 (m, 12H, Admant-CH), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 4,41-4,43 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 5,88 (m, 1H, HN), 6,95-7,02 (m, 3H, Ar-H), 7,09-7,14(m, 1H, Ar-H), 7,20-7,36(m, 9H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,8, 35,6, 36,5, 38,5, 42,0, 42,9, 43,9, 44,6, 118,8, 118,9, 123,3, 128,2, 129,0, 129,6, 131,4, 133,1, 148,1, 156,5, 156,9, 176,9; MS m/z (intensidade rel.) 472,36 (MH+, 100), 473,36 (30), 474,37(30).
[00205] Composto 35: 3,4-Di-hidróxi-benzil-amida de ácido adamantano-1-carboxílico. 143 mg, Rendimento = 48%; p.f.: 184-186oC; MS m/z (intensidade rel.) 302 (MH+, 8).
[00206] Composto 36: 3,4-Di-hidróxi-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 134 mg, Rendimento = 65%; p.f.: 73- 75oC; MS m/z (intensidade rel.) 412 (MH+, 10).
[00207] Composto 37: Fenetil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico. 150 mg, Rendimento = 76%; p.f.: 123-125oC; MS m/z (intensidade rel.) 394 (MH+, 14).
[00208] Composto 38: [2-(4-Fluoro-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 156 mg, Rendimento = 78%; p.f.: 103-105oC; MS m/z (intensidade rel.) 412 (MH+, 52), 413(17), 414(20).
[00209] Composto 39: [2-(4-Bromo-fenil)-eti]-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 30 mg, Rendimento = 55%; p.f.: 114- 116oC; MS m/z (intensidade rel.) 472 (MH+, 38), 474(MH+, 42).
[00210] Composto 40: [2-(4-Hidróxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 112 mg, Rendimento = 55%; p.f.: 174-176oC; MS m/z (intensidade rel.) 410 (MH+, 100), 411(25), 412(33).
[00211] Composto 41: [2-(4-Metóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 159 mg, Rendimento = 75%; p.f.: 108-1100C; MS m/z (intensidade rel.) 424 (MH+, 55), 425(18), 426(20).
[00212] Composto 42: [2-(3-Bromo-4-metóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 220 mg, Rendimento = 87,5%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,63-1,89 (m, 12H, Admant-CH), 2,25 (s, 2H, Admant-CH), 2,71-2,76(t, J=7,5 Hz, 2H, CH), 3,42-3,48 (q, J=12 Hz, 2H, NCH2), 3,87 (s, 3H, OCH3), 5,62 (s(br), 1H, NH), 6,82-6,84 (d, J==6 Hz, 1H, Ar-H), 7,07-7,09 (d, J=6 Hz, 1H, Ar-H), 7,27-7,30 (m, 4H, Ar- H), 7,36 (s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 29,0, 34,6, 35,7, 36,7, 38,6, 40,8, 41,9, 42,2, 44,8, 56,5, 112,3, 111,7, 126,6, 128,5, 128,6, 129,0, 132,8, 133,9, 148,6, 154,7, 177,6; MS m/z (intensidade rel.) 502 (MH+, 80), 503 (25), 504(MH+, 100), 505 (33);
[00213] Composto 43: [2-(3,4-Di-hidróxi-fenil)-etil]-amida de ácido adamantano-1-carboxílico. 69 mg, Rendimento = 24%; mp: 98-1000C; 1H NMR(300 MHz, DMSOdô) δ 0,94-0,98(m, 2H, CH), 1,60-1,95 (m, 15H, Admant-CH), 3,12-3,15 (m, 2H, CH), 6,39-6,41 (d, J = 6 Hz, 1H, Ar-H), 6,54(s, 1H, Ar-H), 6,60-6,62 (d, J = 6 Hz, 1H, Ar-H), 7,35 (s, 1H, NH); 13C NMR(300 MHz, DMSO-dô) 6 27,6, 29,4, 35,1, 36,9, 37,8, 38,6, 44,6, 46,4, 114,8, 116,9, 119,4, 131,4, 145,6, 164,4; MS m/z (intensidade rel.) 316,5 (MH+, 50), 317,5 (8).
[00214] Composto 44: [2-(3,4-Di-hidróxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 100 mg, Rendimento = 47,0%; p.f.: 124-126oC; MS m/z (intensidade rel.) 426 (MH+, 100).
[00215] Composto 45: (2-Benzo[l,3]dioxol-5-il-etil)-amida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 190 mg, Rendimento = 87%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,71-1,90(m, 12H, Admant-CH), 2,24 (s, 2H, Admant-CH), 2,70-2,75(t, J= 6 Hz, 2H, CH), 3,42-3,48(q, J= 6 Hz, 2H, CH2), 5,61 (m, 1H, NH), 5,93 (s, 2H, CH), 6,60-6,63(d, J = 9 Hz,, IH,Ar-H), 6,67(s, 1H, Ar-H), 6,73-6,76(d, J = 9 Hz,5 IH,Ar-H), 7,26-7,29 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,6, 28,8, 35,4, 35,5, 36,4, 38,3, 40,6, 41,6, 42.O5 43,8, 44,5, 100,8, 108,2, 109,0, 121,5, 126,2, 128,1, 132,5, 146,0, 148,2, 177,0; MS m/z (intensidade rel.) 438,28 (MH+, 100), 439,29 (45), 440,28(55).
[00216] Composto 46: [2-(3-Fenóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 200 mg, Rendimento = 82%; p.f.: 114-116oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,70-1,95 (m, 12H, Admant-CH), 2,23 (s, 2H, Admant-CH), 2,75-2,80(t, J=7,5 Hz, 2H, CH), 3,45-3,51(q, J=12 Hz, 2H, NCH2), 5,63 (s (br), 1H, NH), 6,83-7,01 (m, 5H, Ar-H), 7,07-7,18 (m, 2H, Ar-H), 7,22-7,35 (m, 6H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,8, 29,0, 35,8, 36,7, 38,6, 40,7, 41,9, 42,3, 44,8, 116,9, 117,1, 119,2, 119,4, 123,5, 123,6, 123,9, 126,6, 128,5, 130,0, 130,2, 141,7, 148,3, 157,4, 177,7; MS m/z (intensidade rel.) 486,58 (MH+, 93), 487,56 (60), 488,55(68), 489. 54 (25).
[00217] Composto 47: [2-(4-Fenóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4- Cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 224 mg, Rendimento = 92%; p.f.: 88- 90oC; 1HNMR (300 MHz, CDCh) δ 1,71-1,90 (m, 12H, Admant-CH), 2,24 (s, 2H, Admant-CH), 2,77-2,81(t, J=6 Hz, 2H, CH), 3,48-3,51(m, 2H, NCH2), 5,63 (s(br), 1H, NH), 6,94-7,00 (m, 4H, Ar-H), 7,09-7,35 (m, 9H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,1, 29,3, 35,2, 35,8, 36,7, 38,7, 40,9, 41,9, 42,3, 44,8, 118,9, 119,4, 123,5, 126,6, 128,6, 129,3, 130,0, 130,4, 131,8, 134,2, 148,7, 156,1, 157,6, 177,5; MS m/z (intensidade rel.) 486,58 (MH+, 93), 487,56 (60), 488,55(68), 489. 54 (25).
[00218] Composto 48: (3-Fenil-propil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 195 mg, Rendimento = 59%; p.f.: 97-100oC; MS m/z (intensidade rel.) 408 (MH+, 55).
[00219] Composto 49: (Bifenil-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 200 mg, Rendimento = 87,7 %; p.f.: 208-2100C; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,74-2,09 (m, 12H, Admant-CH), 2,26 (s, 2H, Admant-CH), 4,48-4,50 (d, J=6 Hz, 2H, CH), 5,94 (m, 1H, HN), 7,29-7,37 (m, 6H, Ar-H), 7,42-7,46(m, 3H, Ar-H), 7,55-7,59(m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 15,7, 29,0, 35,8, 36,7, 38,8, 42,0, 42,3, 43,4, 44,9, 126,6, 127,3, 127,6, 127,7, 128,4, 128,5, 129,0, 137,7, 140,9, 148,5, 177,4; MS m/z (intensidade rel.) 456,59 (MH+, 90), 457,57 (20), 458,56(30).
[00220] Composto 50: (1-Metil-piperidin-4-il)-amida de ácido adamantano-1-carboxílico. 120 mg, Rendimento = 76%; p.f.: 157-159oC; MS m/z (intensidade rel.) 277 (MH+, 100).
[00221] Composto 51: (1-Metil-piperidin-4-il)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico, 136 mg, Rendimento = 74,4%; p.f.: 146-148oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,06-2,77(m, 25H, Admant-CH,
Figure img0023
, 4,44-3,70 (m, 1H, CH), 5,41-5,43 (m, 1H, HN), 7,26-7,29 (m, 4H, H-Ar); 13C NMR(300 MHz, CDCI3) δ 11,6, 29,1, 32,5, 35,8, 36,7, 38,6, 41,9, 42,2, 44,8, 46,0, 46,4, 54,7, 126,6, 128,5, 131,8, 148,6, 176,8; MS m/z (intensidade rel.) 387 (MH+, 100).
[00222] Composto 52: (4-Metil-piperazin-1-il)-amida de ácido 3-(4- Cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 182 mg, Rendimento = 66,2%; p.f.: 142-1470C; MS m/z (intensidade rel.) 387 (MH+, 48).
[00223] Composto 53: (3-terc-Butil-amino-propil)-amida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 160 mg, Rendimento = 79%; óleo; 1U NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,1 l(s, 9H, 3CH3), 1,69-1,95 (m, 14H, Admant-CH, CH2), 2,18 (m, 1H, HN), 2,25 (s, 2H, Admant-CH), 2,70-2,74 (t, J=6 Hz, 2H, CH2), 3,33-3,38 (m, 2H, CH2), 7,16-7,27 (m, 4H, Ar-H), 7,42 (m, 1H, HN); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,5, 28,7, 29,1, 29,4, 35,9, 36,7, 38,8, 39,3, 39,7, 41,1, 41,8, 42,3, 42,6, 45,0, 46,0, 51,8, 126,3, 128,3, 128,4, 148,8, 177,8; MS m/z (intensidade rel.) 403,1 (MH+, 100).
[00224] Composto 54: (3-Pirrolidin-1-il-propil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 184 mg, Rendimento = 92%; p.f.: 86- 88oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,63-1,92 (m, 18H, Admant-CH, CH2), 2,24 (s, 2H, Admant-CH), 2,50 (s,4H, CH2), 2,58-2,62 (t, J=6 Hz, 2H, CH2), 3,33-3,38 (m, 2H, CH2), 7,19-7,28 (m, 4H, Ar-H), 7,92 (m, 1H, HN); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 23,7, 26,5, 29,1, 35,9, 36,7, 38,7, 40,7, 41,7, 42,3, 44,9, 54,4, 56,4, 126,6, 128,4, 129,6, 131,6, 148,8, 177,6; MS m/z (intensidade rel.) 401,25(MH+5 100).
[00225] Composto 55: [3-(2-Oxo-pirrolidin-1-il)-propil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 190 mg5 Rendimento = 98 %; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,60-2,12 (m, 16H, ciclo-CH2, Admant-CH), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 2,36-2,47 (t, J=7,5 Hz, 2H, ciclo- CH2), 3,15-3,20 (t, J=7,5 Hz, 2H, CH2), 3,32-3,42 (m, 4H, CH2), 7,09 (m, 1H, HN), 7,18-7,32 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 18,2, 26,5, 29,1, 31,1, 35,0, 35,9, 36,7, 38,5, 39,5, 42,0, 42,4, 44,8, 47,6, 126,7, 128,4, 166,5, 177,9; MS m/z (intensidade rel.) 415,6 (MH+, 100).
[00226] Composto 56: [2-(1-Metil-pirrolidin-2-il)-etil]-amida de ácido adamantano-1-carboxílico. 23 mg, Rendimento = 33%; p.f.: 82-84oC; MS m/z (intensidade rel.) 291 (MH+, 100).
[00227] Composto 57: [2-(1-Metil-pirrolidin-2-il)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 200 mg, Rendimento = 61,7%; Óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,68-2,36(m,24H, Admant-CH,
Figure img0024
[00228] 2,98-3,04 (m, 1H, CH*), 3,17-3,27 (m, 1H, Ha), 3,45-3,53 (m, 1H, Hb), 7,24-7,30 (m, 4H, H-Ar); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 22,9, 28,6, 29,1, 29,5, 35,9, 36,7, 38,6, 40,9, 41,7, 42,4, 44,7, 57,3, 65,0, 126,5, 128,4, 131,6, 148,8, 177,4; MS m/z (intensidade rel.) 401 (MH+, 100). HCL salt: p.f.: 68-70oC.
[00229] Composto 58: (2-Morfolin-4-il-etil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 147 mg, Rendimento = 73%; p.f.: 110-112oC; MS m/z (intensidade rel.) 403 (MH+, 100).
[00230] Composto 59: (2-Piperazin-1-il-etil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 144 mg, Rendimento = 72%, óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,65-1,97 (m, 15H, NH, ciclo-CH2, Admant-CH), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 2,36-2,50 (m, 6H, ciclo-CH2), 2,87-2,90 (m, 2H, CH), 3,30-3,95 (m, 2H, CH), 6,34 (m, 1H, HN), 7,18-7,29 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,8, 35,6, 36,4, 38,4, 41,6, 42,1, 44,5, 46,2, 52,7, 54,1, 56,8, 126,3, 128,2, 148,4, 156,2, 177,3; MS m/z (intensidade rel.) 402,6 (MH+, 100).
[00231] Composto 60: (Piridin-4-il-metil)-amida de ácido adamantano- 1-carboxílico. 200 mg, Rendimento = 74%; p.f.: 155-157oC; MS m/z (intensidade rel.) 285,63 (MH+, 100), 286,71 (40).
[00232] Composto 61: (Piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-fluoro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 105 mg, Rendimento = 97%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 365 (MH+, 90).
[00233] Composto 62: (Piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. Rendimento = 92,6%; p.f.: 128-130oC; 1HNMRpOO MHz, CDCh) δ 1,72-2,25(m, 12H, Admant-CH), 4,44-4,46 (d, J = 6 Hz, 2H, CH2-Pi ), 6,18 (m, 1H, HN), 7,13-7,15 (d, J = 6Hz, 2H, H-Py), 7,15-7,30 (m, 4H, H-Ph), 8,52-8,54 (d, J = 6 Hz, 2H, H-Py); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,98, 35,73, 36,71, 38,77, 42,18, 42,37, 44,88, 122,38, 125,30, 126,57, 128,56, 129,26, 148,39, 150,20 177,76; MS m/z (intensidade rel.) 381,50 (MH+, 100), 383,41 (90), 384,35(80).
[00234] Composto 63: (2-Piridin-4-il-etil)-amida de ácido adamantano- 1-carboxílico. 175 mg, Rendimento = 61%; p.f.: 151-153oC; MS m/z (intensidade rel.) 285 (MH1", 100).
[00235] Composto 64: (2-Piridin-4-il-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 70 mg, Rendimento = 55,7%; p.f.: 144- 147oC; MS m/z (intensidade rel.) 395 (MH+, 100).
[00236] Composto 65: (3-Imidazol-1-il-propil)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 195 mg, Rendimento = 95%; p.f.:128- 130oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,70-2,00 (m, 14H, CH2, Admant-CH), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 3,25-3,32 (m, 2H, CH), 3,96-4,00 (m, 2H, CH), 5,65 (m, 1H, HN), 6,95 (s, 1H, imdazol-H), 7,07 (s, 1H, imidazol-H), 7,267,28 (m, 4H, Ar-H), 7,49 (s, 1H, imidazol-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,0, 31,5, 35,7, 36,7, 37,0, 38,6, 41,9, 42,2, 44,8, 45,0, 119,1, 126,3, 126,6, 128,5, 129,8, 131,8, 137,3, 148,5, 178,0; MS m/z (intensidade rel.) 398,66 (MH+, 100), 399,62 (45), 400,63(60), 401,60(20).
[00237] Composto 66: 3-(4-Cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico acid (2-metil-1H-indo1-5-il)-amida de ácido. Rendimento = 56%; p.f.: 145- 147oC; MS m/z (intensidade rel.) 419 (MH+, 35).
[00238] Composto 67: (1H-Tetrazol-5-il)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 120 mg, Rendimento = 67%; p.f.: >240oC; MS m/z (intensidade rel.) 358,2 (MH+, 100), 359,1 (35), 361,1(60).
[00239] Composto 68: (9-Etil-9H-carbazol-3-il)-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. 111 mg, Rendimento = 46%; p.f.: 165-1670C; MS m/z (intensidade rel.) 482,67 (MH+, 100), 483,67(65), 484,66(55).
[00240] Composto 69: [4-(4-Cloro-fenil)-tiazol-2-il]-amida de ácido adamantano-1-carboxílico. 182 mg, Rendimento = 49%; p.f.: 162-164oC; MS m/z (intensidade rel.) 373 (MH+, 100).
[00241] Composto 70: [4-(4-Cloro-fenil)-tiazol-2-il]-amida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. Rendimento = 56%; p.f.: 172- 174oC; MS m/z (intensidade rel.) 483 (MH+, 20).
[00242] Composto 71: Benzotiazol-2-il-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. Rendimento-48,8%; p.f.: 209-211oC; MS m/z (intensidade rel.) 423 (MH+, 50).
[00243] Composto 72: (5-Cloro-benzo-oxazol-2-il)-amida de ácido 3- (4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico. Rendimento = 45%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 441 (MH+, 18).
[00244] Composto 73: (9H-Purin-6-il)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico. 180 mg, Rendimento = 88,2%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,84-2,21 (m, 13H, NH, Admant-CH), 2,38 (s, 2H, Admant-CH), 7,07 (s, 1H, Ar-H), 7,30 (m, 4H, Ar-H), 7,63 (s, 1H, Ar-H), 8,38 (s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,8, 35,5, 3 6,7, 37,7, 38,7, 42,1, 44,6, 45,1, 117,7, 123,2, 125,5, 126,5, 126,6, 128,7, 129,9, 130,1, 132,1, 137,4, 147,8, 174,3; MS m/z (intensidade rel.) 408,6 (MH+, 100).
Exemplo 4. Método para a conversão de adamantil-amidas em adamantil- aminas.
[00245] Como um exemplo, é descrito no Esquema 3 um processo para a síntese de compostos de adamantil-amina. Numerosas adamantil-amidas, preparadas como descrito acima, foram convertidas em suas correspondentes adamantil-aminas por redução do grupo carbonila com Zn(BH4)2 (Esquema 3).
[00246] Boro-hidreto de zinco (Zn(BH4)2) foi preparado por métodos conhecidos na arte. Resumidamente, 20,8 g (165 mmol) de ZnCl2 recém- fundido e 12,9 g (330 mmol) de NaBH4 foram adicionados em frasco de saída lateral de 250 mL seco equipado com um condensador de refluxo. Neste, 250 mL de THF seco foram adicionados usando uma agulha de extremidade dupla, e a mistura foi agitada por 24 h na temperatura ambiente. O conteúdo de hidreto ativo da solução sobrenadante foi estimado por alíquotas de extinção com H2SO4 2 N e estimando a quantidade de hidrogênio que foi liberada usando uma bureta de gás. A solução sobrenadante final continha Zn(BH4)2 a 0,66 M, e foi usada para outras reações como segue.
[00247] O método geral para a conversão de adamantil-amidas em adamantil-aminas correspondentes envolveu a combinação de 100 mg de uma adamatanil-amida com 2,0 mL de Zn(BH4)2 (0,36 M, 2,3 mmol) em THF. A mistura foi refluxada por 24 h, e qualquer excesso de hidreto presente foi extinto pela adição de 1 mL de água. Tipicamente, a mistura foi então saturada com K2CO3 e a camada sobrenadante foi filtrada e seca sobre K2CO3, e o solvente foi removido por evaporação. O resíduo foi então purificado por cromatografia flash (acetato de etila/hexano = 1:4) para dar o composto de adamantil-amina. Esquema 3.
Figure img0025
[00248] O seguinte Exemplo proporciona vários representantes dos produtos deste processo; contudo, estes métodos podem ser adaptados para produzir muitas adamantil-aminas estruturalmente relacionadas que são consideradas temas desta invenção.
Exemplo 5. Síntese de adamantil-aminas.
[00249] Os métodos descritos em Exemplo 4 foram usados para preparar uma biblioteca de adamantil-aminas substituídas. Dados proporcionados abaixo incluem: a quantidade sintetizada, o rendimento da reação de redução; o ponto de fusão (p.f.) do composto; dados de espectro de massa (MS) do composto; e dados de espectro de NMR para o composto.
[00250] Composto 75: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]- isopropil-amina. 39 mg, Rendimento = 41%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 318 (MH+, 20).
[00251] Composto 76: 4-{[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]- amino}-fenol. 75 mg, Rendimento-66%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,60-1,86(m, 12H, Admant-H), 2,22(s, 2H, Admant-H), 2,58-2,62(m, 1H, NH), 2,83(s, 2H, CH), 6,53-6,56(d, J=9 Hz, 2H, Ax-H), 6,68-6,71(d, J=9 Hz, 2H, Ar-H), 7,28(s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 14,3, 29,0, 34,9, 36,1, 36,7, 39,9, 42,6, 46,3, 57,4, 114,1, 116,1, 126,3, 128,1, 131,2, 143,2, 147,3, 148,9; MS m/z (intensidade rel.) 368,6 (MH+, 100), 369,6 (50), 370,6(30).
[00252] Composto 77: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4- trifluorometil-benzil)-amina. 23 mg, Rendimento = 28%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,55-1,83(m, 13H, Admant-H, NH), 2,18(s, 2H, Admant-H), 2,32(s, 2H, NCH2), 3,84(s, 2H, NCH2), 7,27(s, 4H, Ar-H), 7,43-7,45(d, J=6 Hz, 2H, Ar-H), 7,56-7,58(d, J=6 Hz, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,1, 34,7, 36,3, 36,7, 40,0, 42,7, 46,5, 54,1, 61,7, 125,1, 126,3, 128,0, 131,1, 144,9, 149,1; MS m/z (intensidade rel.) 434,4 (MH+, 60), 435,4 (25), 436,4(30).
[00253] Composto 78: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(2- fluoro-4-trifluorometil-benzil)-amina. 21 mg, Rendimento = 24%; óleo; !HNMR(300 MHz, CDCI3) δ 1,55-1,83(m, 12H, Admant-H), 2,20(s, 2H, Admant-H), 2,32(s, 2H, CH), 3,88(s, 2H, Ar-CH2), 7,26-7,27(s, 4H, Ar-H), 7,29-7,31 (m, 2H, Ar-H), 7,49-7,53 (m, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 29,0, 34,6, 36,2, 36,7, 39,9, 42,7, 46,5, 47,6, 61,7, 112,4, 112,7, 120,8, 126,3, 128,0, 130,4, 131,8, 149,1; MS m/z (intensidade rel.) 452,7 (MH+, 100), 453,7 (30), 454,7(40).
[00254] Composto 79: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4- fluoro-3-trifluorometil-benzil)-amina. 24 mg, Rendimento = 38%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,28-1,82(m, 12H, Admant-H), 2,19(s, 2H, Admant-H), 2,51-2,55(m, 1H, CH), 2,88-2,90(m, 1H, CH), 3,40(s, 1H, NH), 3,76-3,80(m, 1H, CH), 4,08-4,13(m, 1H, CH), 7,14-7,29(m, 5H, Ar-H), 7,57 (m, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,5, 34,3, 35,5, 36,4, 39,8, 41,9, 42,1, 46,3, 61,2, 66,7, 117,4, 117,7, 126,0, 128,2, 129,0, 130,5, 131,6, 135,9, 147,7, 158,1, 161,5; MS m/z (intensidade rel.) 452,4 (MH+, 100), 453,4 (50), 454,4(60).
[00255] Composto 80: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4- fluorometóxi-benzil)-amina. 23 mg, Rendimento = 36%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,28-1,80(m, 12H, Admant-H), 2,15(s, 2H, Admant-H), 2,53- 2,57(m, 1H, NCH2), 2,84-2,90(m, 1H, NCH2), 3,38(m, 1H, NH), 3,68-3,75(m, 1H, NCH2), 4,14-4,19(m, 1H, NCH2), 7,13-7,16(d, J=9 Hz, 2H, Ar-H), 7,36- 7,39(d, J=9 Hz, 2H, Ar-H), 7,2-5-7,27(m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,5, 29,0, 34,6, 36,3, 39,7, 40,0, 42,7, 46,5, 53,9, 61,7, 66,2, 120,7, 121,2, 126,0, 126,3, 128,1, 129,0, 131,6, 132,9, 147,9; MS m/z (intensidade rel.) 450,6 (MH+, 70), 451,6 (30), 452,6(40).
[00256] Composto 81: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-[2-(3- fenóxi-fenil)-etil]-amina. 27 mg, Rendimento = 42%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,50-1,82 (m, 13H, Admant-CH, NH), 2,16 (s, 2H, Admant- CH), 2,34(s, 2H, CH2), 2,76-2,84(m, 4H, NCH2), 5,63 (s(br), 1H, NH), 6,837,01 (m, 5H, Ar-H), 7,07-7,18 (m, 2H, Ar-H), 7,22-7,35 (m, 6H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCI3) δ 29,1, 34,6, 36,1, 36,7, 40,0, 42,7, 46,5, 52,1, 62,3, 116,4, 118,8, 119,1, 123,1, 123,6, 126,3, 128,0, 129,5, 142,2, 149,1, 157,1; MS m/z (intensidade rel.) 472,4 (MH+, 100), 473,3 (70), 474,3(80).
[00257] Composto 82: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(1- metil-piperidin-4-il)-amina. 12 mg, Rendimento = 6%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 373,6 (MH+, 100), 374,6 (25), 375,6(36).
[00258] Composto 83: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4- metil-piperazin-1-il)-amina. Rendimento = 12%; óleo; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 1,54-1,82(m, 12H, Admant-H), 2,17(s, 2H, Admant-H), 2,52(s, 2H, CH2), 2,63(s, 3H, NCH3), 2,77-2,80(m, 4H, NCH2), 2,98-3,15 (m, 4H, NCH2), 7,28(s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,8, 29,0, 34,3, 36,2, 39,8, 40,0, 42,3, 42,6, 45,9, 46,5, 50,4, 51,5, 54,6, 58,5, 59,6, 60,3, 126,3, 128,0, 131,2, 148,1, 149,4; MS m/z (intensidade rel.) 374,7 (MH+, 30), 375,7(5), 376,7(8).
[00259] Composto 84: N-terc-Butil-N'-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1- il-metil]-propane-l,3-diamina. Rendimento = 18%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1,29-1,32 (m,6H, CH), 1,55-1,90 (m, 21H, Admant-CH, C(CH3)3), 2,21-2,46 (m, 2H, Admant-CH), 2,42-2,87 (m, 2H, NH), 3,29-3,3 l(d, J=6 Hz, 2H, CH2), 7,26-7,28 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 26,4, 26,6, 28,6, 28,7, 28,8, 36,2, 38,2, 38,4, 38,6, 39,7, 42,7, 44,6, 126,3, 128,0; MS m/z (intensidade rel.) 389,6 (MH+,100).
[00260] Composto 85: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(3- pirrolidin-1-il-propil)-amina. 15 mg, Rendimento = 15%; p.f.: 138-140oC; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 1,56-1,91 (m, 18H, Admant-CH, CH2), 2,21-2,46 (m, 5H, Admant-CH, NH, CH), 2,72-2,89 (m,6H, CH), 3,52(m, 2H, CH2), 7,26-7,28 (m, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 22,8, 22,9, 23,3, 28,6, 29,8, 34,6, 35,6, 36,6, 39,6, 39,8, 42,1, 42,2, 46,1, 56,6, 61,2, 61,3, 62,2, 126,2, 128,2, 131,5, 147,9; MS m/z (intensidade rel.) 387,6 (MH+,100), 388,6 (60), 389,6(65).
[00261] Composto 86: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-[2-(1- metil-pirrolidin-2-il)-etil]-amina. 23 mg, Rendimento = 24%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,54-1,87(m, 2OH, CH2, Admant-H), 2,18(s, 2H, Admant-H), 2,29-2,41 (m, 4H, CH), 2,62(m, 3H, NCH3), 2,87-3,18(m, 1H, NCH), 3,36 (m, 1H, NH), 7,27(s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 29,0, 36,2, 36,7, 40,0, 40,6, 42,7, 46,6, 48,6, 57,2, 64,7, 126,3, 128,0; MS m/z (intensidade rel.) 387,4 (MH+,100), 388,4 (33), 389,4(40).
[00262] Composto 87: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(2- morfolin-4-il-etil)-amina. 9 mg, Rendimento = 9%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,57-1,90(m, 16H, Admant-H), 2,25(s, 2H, Admant-H), 2,36- 2,47(m, 4H, CH), 2,73-2,99(m, 4H, NCH2), 3,57-3,58(m, 2H, NCH2), 4,32 (m, 1H, NH), 7,27(s, 4H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,6, 29,1, 35,7, 36,2, 39,7, 40,0, 46,6, 47,4, 53,8, 54,5, 55,4, 62,9, 67,1, 126,1, 16,3, 128,0, 128,2; MS m/z (intensidade rel.) 389,7 (MH+,100), 390,7 (33), 391,7(40).
[00263] Composto 88: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]- piridin-4-il-metil-amina. Rendimento = 72%; óleo; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 1,55-1,84(m, 12H, Admant-H), 2,20(s, 2H, CH), 2,29(s, 2H, Admant-H), 3,90(s, 2H, Ar-CH2), 7,26-7,28(s, 4H, Ar-H), 7,49-7,51 (d, J = 6 Hz, 2H, Ar-H), 8,59-8,51 (d, J=6 Hz, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,9, 34,6, 36,0, 36,5, 39,8, 42,5, 46,3, 52,6, 61,7, 123,9, 126,2, 127,9, 128,0, 131,0, 146,8, 148,9, 154,6; MS m/z (intensidade rel.) 367,7 (MH+, 100), 368,7(35), 369,7(60).
[00264] Composto 89: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(9-etil- 9H-carbazol-3-il)-amina. 77 mg, Rendimento = 81%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 468 (MH+, 20).
[00265] Composto 90: [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-[5-(4- cloro-fenil)-tiazol-2-il]-amina. 15,5 mg, Rendimento = 21 %; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 469 (MH+, 30).
Exemplo 6. Métodos para a síntese de compostos de adamantil-etil-amina e adamantil-etil-amida.
[00266] Como um exemplo, um processo para a síntese de compostos de adamantil-etil-amina e adamantil-etil-amida é descrito em Esquema 4. Cloretos de substituído-1-adamantano-carbonila (4) foram preparados como descrito em Exemplo 1. Reação de 4 com malonato de dimetila em tolueno na presença de hidróxido de sódio deu (3-R-substituído-fenil-1-adamantano- carbonil-malonatos de dimetila (5), que foram hidrolisados por uma mistura de ácido acético com água e ácido sulfúrico (razão de CH3COOH-H2O- H2SO410:3:1) para dar a correspondente 3-R-substituida-fenil-1-adamantil- metil-cetonae (6). Cetona 6 foi reagida com formamida e ácido fórmico (reação de Leukart) para dar 7, que pode ser modificado por alquilação ou por acilação para produzir compostos de adamantil-etil-amina (8) ou compostos de adamantil-etil-amida (9). Esquema 4
Figure img0026
[00267] Um segundo método para a síntese de composto de adamantil- etil-amina é descrito em Esquema 5. 3-R-substituída-fenil-1-adamantil-metil- cetona (6) foi preparada como descrito acima. Pela reação de 6 com uma amina primária substituída em ácido fórmico, i.e. uma reação de Wallach, o composto de adamantil-etil-amina correspondente (8) pode ser obtido. Por exemplo, pela reação de 4-cloro-6 com 4-amino-1-metil-piperidina, que foi sintetizada pela conversão de N-metil-piperidona à oxima correspondente seguida pela redução para o composto aminado usando hidreto de lítio e alumínio (LiAlH4), {1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(1-metil- piperidin-4-il)-amina, também referida como Composto 107, foi obtida. Esquema 5
Figure img0027
[00268] O seguinte Exemplo proporciona vários representantes dos produtos destes processos; contudo, estes métodos podem ser adaptados para produzir muitos compostos de adamantiletil-amina ou adamantil-etil-amida estruturalmente relacionados.
Exemplo 7. Síntese de compostos de adamantil-etil-amina.
[00269] Os métodos descritos em Exemplo 6 foram usados para preparar uma biblioteca de compostos de adamantil-etil-amina substituída. Dados proporcionados abaixo incluem: a quantidade sintetizada, o rendimento da reação; o ponto de fusão (p.f.) do composto; e dados de espectro de massa (MS) para o composto.
[00270] Composto 91: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil-amina. Rendimento = 77%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 0,95-0,98(m, 3H, CH3), 1,30-2,22(m, 16H, Admant-CH, NH2), 4,24-4,30 (m, 1H, CH ), 7,267,29 (m, 4H, H-Ar); MS m/z (intensidade rel.) 290,4 (MH+, 40).
[00271] Composto 92: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- isopropil-amina. Rendimento = 27%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 0,91-0,94 (d, J=6 Hz, 6H, 2CH3), 1,15-1,68(m, 12H, Admant-CH), 1,81 (m, 3H, CH3), 2,19 (s, 2H, Admant-CH), 3,74-3,76 (m, 1H, HN), 4,24-4,30 (m, 1H, CH ), 7,26-7,29 (m, 4H, H-Ar).
[00272] Composto 93: Fenil-[1-(3-fenil-adamantan-1-il)-etil]-amina.
[00273] Composto 94: {1-[3-(4-Fluoro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- fenil-amina.
[00274] Composto 95: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- fenil-amina. Rendimento = 19%; óleo.
[00275] Composto 96: (l-Adamantan-l-il-etil)-benzil-amina. Rendimento = 64%; p.f.: 62-64oC; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,12-1,16(d J=8 Hz, 3H, CH3), 1,56-2,01(m, 17H, Admant-CH, CH), 3,03 (m, 1H, HN), 4,24-4,40 (m, 1H, CH ), 7,26-7,30 (m, 4H, Ar-H), 8,32(s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 11,6, 29.I5 32,5, 35,8, 36,7, 38,6, 41,9, 42,2, 44,8, 46,0, 46,4, 54,7, 126,6, 128,5, 131,8, 148,6; MS m/z (intensidade rel.) 270,5 (MH+, 10).
[00276] Composto 97: Benzil-[1-(3-fenil-adamantan-1-il)-etil]-amina. Rendimento = 41%; óleo.
[00277] Composto 98: Benzil-{1-[3-(4-fluoro-fenil)-adamantan-1-il]- etil}-amina. Rendimento = 42%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 0,92-0,95 (d, J=6 Hz, 3H, CH3), 1,49-2,10 (m, 21H, Admant-CH, CH), 2,19-2,29 (m, 6H, NCH), 2,79-2,94 (m, 1H, HN), 6,94-7,04 (m, 2H, Ar-H), 7,28-7,35 (m, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,98, 35,73, 36,71, 38,77, 42,18, 42,37, 44,88, 122,38, 125,3O5 126,57, 128,56, 129,26, 148,39, 150,2; MS m/z (intensidade rel.) 364,5 (MH+, 75), 365,5 (20).
[00278] Composto 99: Benzil-{1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]- etil}-amina. Rendimento = 25%; óleo; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 1,13- 1,17(d, J=8 Hz, 3H, CH3), 1,59-2,05(m, 15H, Admant-CH, CH), 2,23(s, 2H, Admant-H), 3,03 (m, 1H, HN), 4,04-4,10 (m, 1H, CH ), 7,20-7,31 (m, 8H, Ar-H), 8,33-8,35(s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 11,6, 29,1, 32,5, 35,8, 36,7, 38,6, 41,9, 42,2, 44,8, 46,0, 46,4, 54,7, 126,6, 128,5, 131,8, 148,6; MS m/z (intensidade rel.) 380,4 (MH+, 80).
[00279] Composto 100: (4-terc-Butil-benzil)-{1-[3-(4-cloro-fenil)- adamantan-1-il]-etil}-amina. Rendimento = 2%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 436,3 (MH+, 30).
[00280] Composto 101: [1-(4-Bromo-fenil)-etil]-{1-[3-(4-cloro-fenil)- adamantan-1-il]-etil}-amina. Rendimento = 3%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 472,2 (MH+, 98), 474,2 (MH+, 100).
[00281] Composto 102: (1-Adamantan-1-il-etil)-[2-(4-bromo-fenil)- etil]-amina. Rendimento = 0,4%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 362,2 (M- H+, 98), 364,2 (M-H+, 100).
[00282] Composto 103: [2-(4-Bromo-fenil)-etil]-{1-[3-(4-cloro-fenil)- adamantan-1-il]-etil}-amina. Rendimento = 11%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 472,1 (MH+, 50), 474,1(MH+, 60).
[00283] Composto 104: (1-Adamantan-1-il-etil)-(1-metil-piperidin-4- il)-amina. Rendimento = 16%; óleo; 1HNMR(300 MHz, CDCh) δ 0,91-0,94 (d, J=9 Hz, 3H, CH3), 1,43-2,00 (m, 23H, Admant-CH, CH2), 2,25 (m, 3H, NCH3), 2,47-2,50 (m, 1H, NH), 2,76-2,80 (m, 2H, HC-N); MS m/z (intensidade rel.) 275,2 (M-H+, 45).
[00284] Composto 105: (1-Metil-piperidin-4-il)-[1-(3-fenil-adamantan- 1-il)-etil]-amina. Rendimento = 29%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 0,92-0,95 (d, J=6 Hz, 3H, CH3), 1,49-2,10 (m, 21H, Admant-CH, CH), 2,192,29 (m, 6H, NCH), 2,79-2,94 (m, 1H, HN), 6,94-7,04 (m, 2H, Ar-H), 7,287,35 (m, 5H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 28,98, 35,73, 36,71, 38,77, 42,18, 42,37, 44,88, 122,38, 125,3O5 126,57, 128,56, 129,26, 148,39, 150,2; MS m/z (intensidade rel.) 353,6 (MH+, 85), 354,6 (25).
[00285] Composto 106: {1-[3-(4-Fluoro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- (1-metil-piperidin-4-il)-amina. Rendimento = 11%; óleo; 1HNMR(300 MHz, CDCl3) δ 0,92-0,95 (d, J=6 Hz, 3H, CH3), 1,49-2,10 (m, 21H, Admant-CH, CH2), 2,19-2,29 (m, 6H, NCH), 2,79-2,94 (m, 1H, HN), 6,94-7,04 (m, 2H, Ar-H), 7,28-7,35 (m, 2H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCh) δ 28,98, 35,73, 36,71, 38,77, 42,18, 42,37, 44,88, 122,38, 125,30, 126,57, 128,56, 129,26, 148,39, 150,2; MS m/z (intensidade rel.) 371,5 (MH+, 85), 372,5 (50), 373,5(8).
[00286] Composto 107: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(1- metil-piperidin-4-il)-amina. Rendimento = 28%; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 0,95-0,98(d, J=6 Hz, 3H, CH3), 1,30-2,75(m, 29H, Admant-CH,
Figure img0028
, 3,74-3,76 (m, 1H, HN), 4,24-4,30 (m, 1H, CH ), 7,26-7,29 (m, 4H, H-Ar); MS m/z (intensidade rel.) 387,3 (MH+, 65).
[00287] Composto 108: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(4- metil-piperazin-1-il)-amina. Rendimento = 23%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 389,2 (MH+, 100).
[00288] Composto 109: [1-(3-Fenil-adamantan-1-il)-etil]-piridin-4-il- metil-amina. Rendimento = 16%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 347,2 (MH+, 30).
[00289] Composto 110: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(6- cloro-piridin-3-il-metil)-amina. Rendimento = 18%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 415,2 (MH+, 20).
[00290] Composto 111: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(2- piridin-4-il-etil)-amina. Óleo.
[00291] Composto 112: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- (3H-imidazol-4-il-metil)-amina. Óleo.
[00292] Composto 113: {1-[3-(4-Cnloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- (2-metil-1H-indo1-5-il)-amina. Rendimento = 5%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 417,2 (M+-H, 15).
[00293] Composto 114: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(9- etil-9H-carbazol-3-il)-amina. Rendimento = 60%; p.f.: 70-72oC; MS m/z (intensidade rel.) 482 (M+, 50), 483(MH+, 25), 484(20).
[00294] Composto 115: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(9- etil-9H-carbazol-3-il-metil)-amina. Rendimento = 13%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 496,2 (M-H+, 30).
[00295] Composto 116: 9-Etil-9H-carbazol-3-carboxílico acid {1-[3- (4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-amida de ácido. Rendimento = 28.
[00296] Composto 117: 1-{1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- 3-(4-cloro-3-trifluorometil-fenil)-uréia. Rendimento = 6%; p.f.: 103-105oC; MS m/z (intensidade rel.) 511,2 (MH+, 5).
[00297] Composto 118: 1-{1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}- 3-(4-cloro-3-trifluorometil-fenil)-uréia. m.p: 103-105oC; 1H NMR(300 MHz, DMSO-dô) δ 1,05-1,07 (d, J=6 Hz, 3H, CH3), 1,50-1,80 (m, 12H, Admant- CH), 2,18 (s, 2H, Admant-CH), 3,62-3,68 (m, 1H, CH), 4,83-4,86 (m, 1H, HN), 6,91-6,94 (m, 1H, NH-Ar), 7,20-7,28 (m, 4H, Ar-H), 7,32-7,35 (d, J=9 Hz, 1H, Ar-H), 7,48-7,51 (d, J=9 Hz, 1H, Ar-H), 7,60 (s, 1H, Ar-H); 13C NMR(300 MHz, CDCl3) δ 15,2, 28,8, 36,0, 36,5, 37,6, 37,8, 42,4, 54,0, 56,1, 117,8, 122,8, 126,2, 128,1, 131,8, 132,7, 154,6; MS m/z (intensidade rel.) 511 (MH+, 5).
[00298] Composto 119: (4-Bromo-tiofen-2-il-metil)-{1-[3-(4-cloro- fenil)-adamantan-1-il]-etil}-amina. Rendimento = 8%; óleo; MS m/z (intensidade rel.) 464,1 (MH+, 50).
[00299] Composto 120: {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(4- fenil-tiofen-2-il-metil)-amina. Rendimento = 8%; óleo; m/z (intensidade rel.) 463,0 (MH+, 100).
Exemplo 8. Método para a síntese de adamantil-propenonas.
[00300] Como um exemplo, um processo para a síntese de compostos de adamantil-propenona é descrito em Esquema 5. 3-R-substituída-fenil-1- adamantil-metil-cetona (6) foi preparada como descrito acima. Pela reação de 6 com um aldeído substituído, o composto de adamantil-propenona correspondente (10) pode ser obtido. Por exemplo, pela reação de 4-cloro-6 com 4-hidróxi-benzil-aldeído, 1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3-(4- hidróxi-fenil)-propenona, também referida como Composto 132, foi obtida.
Exemplo 9. Síntese de adamantil-propenonas.
[00301] Os métodos descritos em Exemplo 6 foram usados para preparar uma biblioteca de compostos de adamantil-propenona substituída. Dados proporcionados abaixo incluem: o rendimento da reação; o ponto de fusão (p.f.) do composto; e dados de espectro de massa (MS) para o composto.
[00302] Composto 121: Ácido 3-fenil-adamantano-1-carboxílico.
[00303] Composto 122: Ácido 3-(4-fluoro-fenil)-adamantano-1- carboxílico.
[00304] Composto 123: Ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1- carboxílico. Rendimento = 79%;.
[00305] Composto 124: 1-Adamantan-1-il-etanona. p.f.: 44-46oC.
[00306] Composto 125: 1-(3-Fenil-adamantan-1-il)-etanona. Rendimento = 54%; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,73-2,10 (m, 12H, Admant-CH), 2,14 (s, 3H, CH3), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 7,25-7,26(m, 1H, Ar-H), 7,30-7,36 (m, 4H, H-Ar).
[00307] Composto 126: 1-[3-(4-Fluoro-fenil)-adamantan-1-il]-etanona. Rendimento = 59%; 59 %; óleo; 1H NMR(300 MHz, CDCh) δ 1,73-1,90(m, 12H, Admant-CH), 2,10 (s, 3H, CH3), 2,27 (s, 2H, Admant-CH), 6,96- 7,04(m, 2H, Ar-H), 7,28-7,35 (m, 2H, H-Ar).
[00308] Composto 127: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etanona. Rendimento = 54% (2 steps); p.f.: 54-56oC.
[00309] Composto 128: Dimetil-éster de ácido 2-(adamantano-1- carbonil)-malônico. Rendimento = 80%; óleo.
[00310] Composto 129: Dimetil-éster de ácido 2-[3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carbonil]-malônico. Rendimento = 91%; óleo.
[00311] Composto 130: 3-(4-Cloro-fenil)-1-[3-(4-cloro-fenil)- adamantan-1-il]-propenona. Rendimento = 18%.
[00312] Composto 131: 4-{3-[3-(4-Cloro-plienil)-adamantan-1-il]-3- oxo-propenil} -benzonitrila.
[00313] Composto 132: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3-(4- hidróxi-fenil)-propenona. Rendimento = 16%; p.f.: 87-89oC; MS m/z (intensidade rel.) 393,2 (MH+, 100).
[00314] Composto 133: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3- naftalen-2-il-propenona. Rendimento = 20%; p.f.: 82-84oC.
[00315] Composto 134: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3-(6- cloro-piridin-3-il)-propenona. Rendimento = 4%.
[00316] Composto 135: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3-(1 H- imidazol-4-il)-propenona. Rendimento-3%; óleo.
[00317] Composto 136: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3-(9-etil- 9H-carbazol-3-il)-propenona. Rendimento = 3%; p.f.: 138-140oC.
[00318] Composto 137: 1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-3-(4- fenil-tiofen-2-il)-propenona. Rendimento = 13%.
Exemplo 10. Ensaios para a inibição de atividade de SK de humano.
[00319] Um ensaio para identificar inibidores de SK recombinante de humano tem sido estabelecido (French et al., 2003, Cancer Res 63: 5962). cDNA para SK de humano foi subclonado em um vetor de expressão bacteriana pGEX, que resulta em expressão da enzima como uma proteína de fusão com glutationa-S-transferase, e a proteína de fusão é então purificada em uma coluna de glutationa imobilizada. Atividade de SK é medida por incubação da SK recombinante com [3H]esfingosina e ATP 1 mM sob condições definidas, seguida pela extração da mistura de ensaio com clorofórmio: metanol sob condições básicas. Isto resulta na partição da [3H]esfingosina não reagida para dentro da fase orgânica, enquanto que o [3H]S1P recém-sintetizado é particionado para a fase aquosa. Radioatividade em alíquotas da fase aquosa é então quantificada como uma medição da formação de [3H]S1P. Há um nível de fundo baixo de partição de [3H]esfingosina para dentro da fase aquosa, e adição da SK recombinante aumenta sobremaneira a formação de [3H]S1P. Um controle positivo, DMS, inibe completamente a atividade de SK em concentrações acima de 25 μM.
[00320] Em um procedimento de ensaio alternativo, a SK recombinante de humano foi incubada com esfingosina não marcada e ATP como descrito acima. Após 30 minutos, as reações foram terminadas pela adição de acetonitrila para diretamente extrair o S1P recém-sintetizado. A quantidade de S1P nas amostras é então quantificada como segue. C17 base D- eritro-esfingosina e C17 S1P são usados como padrões internos para esfingosina e S1P, respectivamente. Estes esfingolipídeos ligados em ácido graxo de dezessete carbonos não são naturalmente produzidos, tornando estes análogos excelentes padrão. Os lipídeos são então fracionados por Cromatografia Líquida de Desempenho Alto usando coluna de fase reversa C8 eluída com formiato de amônio metanólico 1 mM/formiato de amônio aquoso 2 mM. Um Finnigan LCQ Classic LC-MS/MS é usado no modo de ionização positiva de monitoração de reações múltiplas para adquirir íons em m/z de 300 (íon precursor) ^ 282 (íon produto) para esfingosina e 380 ^ 264 para S1P. Curvas de calibração são geradas por plotagem das razões de área de pico dos padrões sintéticos para cada esfingolipídeo, e usadas para determinar as quantidades normalizadas de esfingosina e S1P nas amostras.
Exemplo 11. Inibição de SK de humano por compostos desta invenção.
[00321] Cada Composto desta invenção foi detectado para a sua capacidade para inibir SK recombinante usando o ensaio de LC/MS/MS descrito acima. Tipicamente, os Compostos foram individualmente dissolvidos em dimetil-sulfóxido e testados em uma concentração final de 6 μg/mL. Os resultados para os ensaios são mostrados na Tabela 3. Os dados demonstram que os compostos de fórmula I demonstram uma variedade de capacidades para inibir a atividade in vitro de SK recombinante. Vários Compostos causaram supressão completa de atividade de SK na concentração de 6 microgramas/mL (correspondentemente aproximadamente 15 micromolar). Como detalhado nos Exemplos abaixo, concentrações significativamente maiores dos compostos podem ser alcançadas no sangue de camundongos recebendo os Compostos por administração oral, indicando que os Compostos são suficientemente potentes para serem terapeuticamente úteis.
[00322] Embora muitos dos compostos inibissem a enzima SK purificada, foi útil a determinação de suas capacidades para inibir SK endógena em uma célula intacta. Temos previamente descrito um ensaio de célula intacto no qual, após o tratamento com um composto de teste, células de carcinoma de mama de humano MDA-MB-231 são incubadas com [3H] esfingosina em uma concentração final de 1 μM (French et al., Cancer Res 63: 5962 (2003)). As células captam a [3H] esfingosina exógena e a convertem em [3H]S1P através da ação de SK endógena. O [3H]S1P resultante é isolado via separação baseada em carga como indicado acima. Os resultados deste ensaio são indicados na Tabela 3. Os dados demonstram que muitos dos compostos que inibem SK purificada também inibem a atividade de SK na célula intacta. Para estudos de potência, células MDA-MB-231 foram expostas às concentrações variadas de um Composto de teste e então ensaiadas para a conversão de [3H]esfingosina em [3H]S1P. Cada um dos Compostos diminuiu a formação de [3H]S1P em um modo dependente de dose, com valores de IC50 variando de 15 a 64 μM. Estes resultados demonstram que os compostos de fórmula I ou II efetivamente inibem a atividade de SK em células intactas. Tabela 3. Inibição da atividade de SK. SK de humano foi incubada com 6 μg/mL de compostos indicados, e então ensaiados para a atividade como descrito acima. Valores na coluna encabeçada por “SK Recombinante (inibição %)” representam a percentagem de atividade de SK que foi inibida. Células MD A-MB-231 foram incubadas com 20 μg/mL de compostos indicados e então ensaiadas para atividade de SK endógena como indicado acima. Valores na coluna encabeçada por “S1P Celular (inibição %)” representam a percentagem de produção de S1P que foi inibida. Adicionalmente, células MDA-MB-231 foram tratadas com concentração variada de certos compostos e a quantidade de S1P produzida pelas células foi determinada. Valores na coluna encabeçada por "IC50 de S1P Celular (μM)" representam a concentração de composto requerida para inibir em 50% a produção de S1P. ND = não determinado.
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Exemplo 12. Seletividade de inibidores de SK desta invenção.
[00323] Um problema comum com as tentativas de desenvolvimento de inibidores de Proteína Cinase é a falta de seletividade para a cinase alvo porque a maior parte destes compostos interage com domínios de ligação de nucleotídeo que estão elevadamente conservados dentre as cinases. Para determinar se os compostos desta invenção são inibidores de cinase não- seletivos, os efeitos do inibido de SK, Composto 62, sobre um painel diverso de 20 cinases purificadas foi determinado. O composto foi testado em uma única concentração de 50 μM. As cinases e os efeitos do inibidor de SK são mostrados na Tabela 4.
[00324] Os dados indicam a especificidade alta de Composto 62 para SK pelo fato de que nenhumas das 20 cinases diversas testadas foram significativamente inibidas por este composto. O painel incluiu ambas serina/treonina cinases e tirosina cinases, bem como várias daquelas são reguladas por sua interação com lipídeos. Além de tudo, os dados indicam que os efeitos biológicos dos compostos desta invenção não são mediados por inibição fora de alvo de Proteína Cinases. Tabela 4. Seletividade de Composto 62. Valores representam a percentagem da atividade de controle da cinase indicada na presença de 50 μM de Composto 62.
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[00325] Cinase, Composto 62, Cinase, Composto 62, Calcomodulina, MEK cinase Proteína Cinase, Proteína Cinase, ciclina, cinase 1, cinase 2
Exemplo 13. Perfis de citotoxicidade de inibidores de SK desta invenção.
[00326] Para adicionalmente avaliar as eficácias biológicas dos Compostos em células intactas, cada Composto foi avaliado para citotoxicidade usando linhagens de célula de câncer de humano. Estes experimentos seguiram métodos que têm sido extensivamente usados. Linhagens de célula incluíram células de adenocarcinoma de mama de humano MCF-7 e células epiteliais de mama de humano não-transformadas MCF-10A. As linhagens de célula indicadas foram tratadas com doses variadas de Composto de teste por 48 h. Sobrevivência celular foi então determinada usando ensaio de ligação de SRB (Skehan et al., 1990, J Natl Cancer Inst 82: 1107), e a concentração de composto que inibiu em 50% a proliferação (a IC50) foi calculada. As citotoxicidades dos compostos desta invenção são resumidas na Tabela 5. Valores (em μM) representam a média ± sd testes repetidos. Como os dados mostram, os compostos desta invenção são antiproliferativos em nível de sub-micromol a micromol baixo. Em muitos casos, as células MCF-7 transformadas foram significativamente mais sensíveis do que as células MCF-10A não-transformadas. Isto indica que os Compostos inibirão o crescimento de células de tumor sem induzirem toxicidade às células normais dentro do paciente. Além de tudo, os dados demonstram que estes Compostos são capazes de entrarem em células intactas e evitarem a sua proliferação, tornado-os úteis para as indicações acima descritas. Tabela 5. Atividade de anticâncer de compostos desta invenção. Foram determinadas as citotoxicidades dos Compostos indicados para células de câncer de mama de humano (MCF-7) e células epiteliais de mama de humano não-transformadas (MCF-10A). Valores representam a IC50 média para inibição de proliferação celular. ND = não determinado.
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Exemplo 14. Sobrevivência de atividade anticâncer de inibidores de SK desta invenção.
[00327] Os dados proporcionados acima demonstram as capacidades de compostos desta invenção para inibirem a proliferação de células de carcinoma de mama de humano. Para examinar a faixa de atividade de anticâncer de compostos representativos, foram determinadas as potências quimioterapêuticas de Compostos 62 e 57 na direção de um painel de linhagens de célula de tumor de humano variadas representando vários tipos de tumores maiores. Os dados são descritos na Tabela 6, e demonstram que os compostos desta invenção possuem atividade de anticâncer contra uma ampla variedade de cânceres. Tabela 6. Potências de inibidores de SK na direção de linhagens de célula de tumor de humano. Células esparsamente plaqueadas foram tratadas com um inibidor de SK por 48 horas, e a viabilidade das células foi determinada usando coloração de sulfo-rodamina B comparada com as das células tratadas com veículo (DMSO). Valores são a média ± sd para pelo menos três experimentos separados.
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Exemplo 15. Toxicididade in vivo de inibidores de SK desta invenção.
[00328] Por exemplo, foi verificado que os Compostos 62 e 57 são solúveis em pelo menos 15 mg/mL (~30-40 mM) em DMSO: PBS para administração intraperitoneal (IP) ou PEG400 para dosagem oral. Estudos de toxicidade aguda usando dosagem IP demonstraram nenhuma toxicidade imediata ou retardada em camundongos fêmeas Swiss-Webster tratados com até pelo menos 50 mg/kg de Compostos 62 e 57. Injeções repetidas nos mesmos camundongos dia sim, dia não, durante 15 dias mostraram falta similar de toxicidade. Cada um dos compostos também pôde ser administrado oralmente aos camundongos em doses de até pelo menos 100 mg/kg sem toxicidade notável.
Exemplo 16. Farmacocinética de inibidores de SK desta invenção.
[00329] Estudos farmacocinéticos orais foram realizados em Compostos 62 e 57. Cada composto foi dissolvido em PEG400 e administrado aos camundongos fêmeas Swiss-Webster em uma dose de 100 mg/kg por gavagem oral. Camundongos foram anestesiados e sangue foi removido via punção cardíaca em 5 minutos, 30 minutos, 1, 2, e 8 horas. Concentrações dos compostos de teste foram determinadas usando extração de líquido-líquido, padrões internos apropriados e HPLC em fase reversa com detecção de UV. Amostras de sangue de controle foram corridas para identificar picos composto-específicos. Parâmetros farmacocinéticos foram calculados usando o pacote de programas de computador WINNONLIN analysis (Pharsight). Modelos compartimentais e não-compartimentais foram testados, com os resultados mostrados na Tabela 7 derivados das equações melhor ajustadas. Tabela 7. Dados farmacocinéticos orais para inibidores de SKI.
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[00330] Estes estudos demonstram que quantidades substanciais de cada composto podem ser detectadas no sangue 1 h após a dosagem oral. Ambos os compostos possuem excelentes propriedades PK, com valores de Área Sob a Curva (AUC) e Cmax (concentração máxima alcançada no sangue) ultrapassando a IC5o para atividade catalítica de SK recombinante, bem como para a formação de S1P no modelo de célula intacta por pelo menos 8n h. A meia-vida alta sugere atividade prolongada, que diminuirá a necessidade de regimes de dosagem freqüentes. Estas propriedades PK demonstram que os compostos desta invenção possuem excelentes propriedades de droga, especificamente disponibilidade oral alta e toxicidade baixa.
[00331] Estudos de biodisponibilidade oral foram realizados no Composto 62 dissolvido em Tween-80 0,375%. Camundongos fêmeas Swiss- Webster foram dosados com 50 mg/kg de Composto 62 quer intravenosa quer oralmente. Camundongos foram anestesiados e o sangue foi removido por punção cardíaca em instantes de tempo variando de 1 minuto a 8 horas. Concentrações de Composto 62 foram quantificadas usando extração de líquido-líquido e HPLC em fase reversa acoplada em um espectrômetro de massa quadripolar com coletor de íons. Amostras de sangue de controle foram inoculadas com quantidades conhecidas de padrão interno e analito para identificar picos composto-específicos e para desenvolver curvas padrão para quantificação. Parâmetros farmacocinéticos foram calculados usando o pacote de programas de computador WINNONLIN analysis (Pharsight). Modelos compartimentais e não-compartimentais foram testados, com os resultados mostrados dos modelos melhor ajustados mostrados na Tabela 8. Tabela 8. Dados de biodisponibilidade para Composto 62
Figure img0040
[00332] Níveis de Composto 62 em sangue ultrapassaram a IC50 para inibição da atividade de SK durante o estudo inteiro. Comparação de farmacocinéticas oral versus intravenosa de of Composto 62 revelou boas propriedades de biodisponibilidade oral (F = AUC (oral)/ AUC (iv) = 0,66). Estes resultados demonstram que o Composto 62 possui excelentes propriedades de droga, especificamente boa disponibilidade oral com toxicidade baixa.
Exemplo 17. Atividade antitumoral de inibidores de SK desta invenção.
[00333] As atividades antitumorais dos inibidores de SK representativos foram avaliadas usando um modelo de tumor singeneico que usa a linhagem de célula de adenocarcinoma mamário JC de camundongo crescendo subcutaneamente em camundongos Balb/c imunocompetentes (Lee et al.,2003, Oncol Res 14: 49). Estas células expressam níveis elevados de atividade de Sk em relação às células não-transformadas, bem como o fenótipo de resistência a múltiplas drogas devido à atividade de glicoproteína- P.
[00334] Os dados são mostrados em Figuras 1 e 2. Em Figura 1, camundongos Balb/c, 6-8 semanas de idade, foram injetados subcutaneamente com 106 células JC suspensas em solução salina tamponada com fosfato. Os inibidores de SK Compostos 62 e 57 foram dissolvidos em PEG400 e administrados aos camundongos dia sim, dia não em uma dose de 100 mg/kg. Pesos corporais e volumes de tumor foram monitorados diariamente. Em Figura 1, crescimento de tumor é expressado como o volume de tumor relativo ao Dia 1 para cada animal.
[00335] Como indicado na Figura 1, crescimento de tumor em animais tratados com qualquer inibidor de SK foi significativamente menor (> 70% diminuído no Dia 16) do que o crescimento de tumor em animais de controle. Compostos 62 e 57 inibiram o crescimento de tumor em relação aos controles em 69% e 78%, respectivamente. O inserto de Figura 1 indica o peso corporal dos animais durante este experimento. Nenhuma diferença significativa nos pesos corporais de animais nos três grupos foi observada, indicando a falta de toxicidade evidente de qualquer inibidor de SK.
[00336] Estudos de dose-resposta com o Composto 62 demonstraram que o composto possui atividade antitumoral quando oralmente administrado em doses de 35 kg/kg [sic] ou maiores (Figura 2). Nenhuma toxicidade para os camundongos foi observada em qualquer dose.
[00337] Compostos adicionais desta invenção foram testados para a sua capacidade de inibir o crescimento de células de adenocarcinoma JC em camundongos. Os resultados são resumidos na Tabela 9. Tabela 9. Atividade antitumoral in vivo de inibidores de SK. Os compostos indicados foram testados em modelo de tumor JC usando administração quer intraperitoneal (ip) quer oral (po). Um composto é indicado como sendo ativo se ele suprimiu o crescimento de tumor em pelo menos 60% em relação aos tumores em animais de controle.
Figure img0041
Exemplo 18. Efeitos in vivo de inibidores de SK sobre permeabilidade vascular induzida por VEGF.
[00338] Os efeitos de VEGF sobre vazamento vascular in vivo foram medidos como descrito por Miles e Miles (Miles et al., 1952, J Physiol 118: 228). Grupos de camundongos fêmeas nus atímicos (aproximadamente 20 g) receberam injeções intraperitoneais de DMSO sozinho ou Composto 62 (75 mg/kg) em um volume de 50 microlitros. Em alguns experimentos, Composto 62 foi administrado por gavagem oral em uma dose de 100 mg/kg. Após 30 minutos, 100 μL de corante azul de Evan a 0,5% foram administrados por injeção em veia de cauda. Trinta minutos mais tarde, camundongos receberam a primeira das 3 injeções intradermais seqüenciais (a cada 30 minutos) de VEGF (400 ng em 20 μL de PBS por injeção) no flanco posterior esquerdo. Trinta minutos após a última injeção, vazamento do corante da vasculatura para dentro da pele foi avaliado por medição do comprimento e da largura das manchas de pele coloriza de azul usando compassos de calibre.
[00339] Administração de bolo intradermal de VEGF resulta em vazamento do corante ligado em proteína para dentro da pele indicando um aumento local em permeabilidade vascular. Como indicado em Figura 3, quando o Composto 62 foi administrado quer por injeção intraperitoneal quer por gavagem oral uma hora antes do tratamento com VEGF, vazamento vascular (determinado três horas mais tarde) foi marcantemente reduzido. Portanto, inibidores de SK desta invenção possuem a capacidade para suprimirem o vazamento vascular in vivo em resposta ao VEGF.
Exemplo 19. Efeitos in vivo de inibidores de SK sobre retinopatia diabética.
[00340] Ratos machos Sprague-Dawley pesando 150-175 g foram usados. Diabete foi produzida por injeção intraperitoneal de estreptozotocina (65 mg/kg em tampão citrato) após jejum durante a noite. Animais não- diabéticos falsamente injetados também foram usados como controles. Glicose sanguínea foi medida três dias após a injeção e os animais com glicose sanguínea acima de 250 mg/dL foram utilizados como ratos diabéticos no estudo. Níveis de glicose sanguínea e pesos corporais foram monitorados semanalmente em todo o estudo. No Dia 45, permeabilidade vascular retinal foi medida em um grupo de ratos de controle e diabéticos (Antonetti et al., 1998, Diabetes 47: 1953, Barber et al., 2005, Invest Ophthalmol Vis Sci 46: 2210). Resumidamente, animais foram pesados, anestesiados com cetamina/xilazina (80/0,8 mg/kg) e injetados com albumina de soro bovino conjugada com isotiocianato de fluoresceína (FITC-BSA; número de catálogo da Sigma de A-9771) para dentro da veia femoral. Após 30 minutos de circulação de FITC-BSA, os ratos foram mortos por decapitação. Sangue de tronco foi colhido para medir a concentração de FITC-BSA, e olhos foram rapidamente enucleados. Cada olho foi deixado em paraformaldeído 4% por 1 hora e congelado em meio de embebimento em um banho de isopentano e gelo seco. Os olhos embebidos em parafina foram seccionados em um micrótomo fazendo seções de 10 μm. Seções foram desparafinadas e vistas com um microscópio de fluorescência Olympus OM-2 equipado com uma câmara de vídeo Sony CLD. Intensidades de fluorescência de imagens digitais foram medidas usando Leica Confocal Software (Version 2,61, build 1538, LCS Lite, 2004). A intensidade retinal média para cada olho foi então normalizada para controles não-injetados analisados na mesma maneira e para fluorescência de plasma do animal. Através de seccionamento serial do olho, esta técnica permite quantificação de permeabilidade vascular variada na retina (Antonetti et al., 1998, Diabetes 47: 1953, Barber et al., 2005, Ibid).
[00341] Os animais de controle restantes foram mantidos por um adicional de 6 semanas, i.e. até Dia 87, como o foram os ratos diabéticos restantes que foram divididos em grupos não tratados, de tratamento de dose baixa de Composto 62 (25 mg/kg) ou de dose alta de Composto 62 (75 mg/kg). Composto 62 foi administrado por injeção intraperitoneal (dissolvida em Tween-80 0,375%) 5 dias por semana do Dia 45 até o Dia 87. No Dia 87, todos os animais restantes foram testados para permeabilidade vascular retinal como descrito acima. Seções também foram coradas para imunorreatividade de SK usando anticorpos policlonais de coelho, e contra-coradas para núcleos usando corante de Hoescht.
[00342] Ratos hiperglicêmicos foram deixados não tratados por 45 dias para permitir a progressão da retinopatia. Naquele momento, ratos de controle e diabéticos foram avaliados para permeabilidade vascular retinal pela medição do vazamento de BSA marcada com FITC para dentro da retina usando análises quantitativas de imagem. Os animais diabéticos tiveram aumentos substanciais no vazamento da BSA marcada para dentro das camadas nucleares externas e plexiformes internas da retina. Quantificação das imagens indicou que houve um aumento de aproximadamente 4 vezes na quantidade de vazamento de FITC-BSA para dentro das retinas de ratos diabéticos. Portanto, dano vascular substancial induzido por diabete esteve presente antes da iniciação do tratamento com o inibidor de SK.
[00343] Todos os ratos sobreviventes foram mortos no Dia 87 e retinopatia foi medida como o vazamento de FITC-BSA para dentro da retina. Como indicado na Figura 4, permeabilidade vascular retinal nos ratos diabéticos foi significativamente elevada comparada com os ratos de controle. Animais diabéticos que haviam sido tratados com o inibidor de SK Composto 62, em qualquer dose, tiveram níveis substancialmente reduzidos de vazamento de FITC-BSA do que os ratos diabéticos não tratados. Este efeito do composto foi manifestado em embas a camada plefixorme interna e a camada nuclear externa da retina.
[00344] Imuno-histoquímica com o anticorpo SK descrito acima foi usada para avaliar a expressão de SK nas retinas destes animais. Fluorescência no epitélio pigmentado retinal e no segmento externo foi não específica porque esteve presente em amostras incubadas na ausência de anticorpo SK. Seções retinais dos ratos de controle tiveram apenas níveis baixos de coloração específica para SK; enquanto que, expressão de SK foi marcantemente elevada na camada de célula de gânglio e em corpos celulares específicos e projeções na interface da camada nuclear interna e da camada plexiforme interna. Expressão de SK elevada também foi observada em ambos os animais tratados com dose baixa e com dose alta de Composto 62. Portanto, o estado hiperglicêmico de duração longa parece estar associado com elevação dos níveis retinais de SK que não são normalizados pelo tratamento com o inibidor de SK. Estes dados de expressão indicam que o Composto 62 suprime muito efetivamente a atividade de SK em retina diabética, prevenindo deste modo a permeabilidade vascular aumentada presente em retinopatia.
Exemplo 20. Inibição por inibidores de SK da indução de NFKB por TNFα.
[00345] A excelente solubilidade aquosa de Composto 62 permitiu que ele fosse avaliado em uma linhagem de célula repórter NFKB (Figura 5). Fibroblastos transfectados com um elemento de resposta NFKB ligado em luciferase produzem níveis altos de luciferase sob exposição a TNFα. Ativação de NFKB por TNFα foi dose-dependentemente suprimida pelo inibidor de SK, Composto 62.
Exemplo 21. Inibição por inibidores de SK da expressão de molécula de adesão induzida por TNFα.
[00346] Como células endoteliais no corpo, HUVECs proliferará em resposta a vários fatores de crescimento, e responderá às citocinas inflamatórias tais como TNFα e IL-1β. Análises de Western foram conduzidas com células endoteliais de humano para avaliar os efeitos dos inibidores de SK sobre proteínas de sinalização conhecidas que são reguladas por TNFα. Nestes experimentos, as células foram soro-enfraquecidas por 24 horas e então expostas a TNFα (100 ng/mL) por 6 horas. Lisatos celulares das células tratadas foram ensaiados para as moléculas de adesão ICAM-1 e VCAM-1. TNFα causou aumentos notáveis nos níveis de expressão de proteínas de adesão envolvidas em recrutamento de leucócitos, incluindo ICAM-1 e VCAM-1. Estes efeitos de TNFα foram inibidos pelo tratamento das células com o Composto 62, de tal modo que a indução de ambas as proteínas foi completamente eliminada por 25 μM de Composto 62.
Exemplo 22. Inibição pelos inibidores de SK da síntese de prostaglandina induzida por TNFα.
[00347] Para determinar os efeitos dos inibidores de SK sobre atividade de Cox-2, foi usado um ensaio ELISA para medir a produção de PGE2 por células endoteliais de humano e células epiteliais intestinais de rato IEC6 tratadas com TNFα. Exposição a qualquer tipo de célula a TNFα resultou em aumentos notáveis em atividade de Cox-2, medidos como a produção de PGE2 (Figura 6). Esta indução de atividade de Cox-2 por TNFα foi fortemente suprimida pelo Composto 62.
[00348] Além de tudo, estes dados demonstram que a inibição de SK será efetiva no bloqueio da cascata inflamatória em células iniciadas por TNFα. É esperado que isto alivie a patologia de doenças de várias doenças inflamatórias, incluindo IBD, artrite, aterosclerose e asma.
Exemplo 23. Efeitos in vivo de inibidores de SK em um modelo agudo de doença inflamatória do intestino.
[00349] Temos conduzido experimentos com inibidores de SK usando o modelo de IBD de dextrano-sulfato de sódio (DSS). Nestes experimentos, camundongos machos C57BL/6 foram proporcionados com dieta de roedor padrão e água ad libitum. Após sua aclimatação, os animais foram randomicamente divididos em grupos de 5 ou 6 para DSS (PM de 40.000 de ICN Biomedicals, Inc., Aurora, OH)-e tratamento com droga. Os inibidores de SK foram dissolvidos em PEG400, e dados apenas uma vez ao dia por gavagem oral em um volume de 0,1 mL por dose. Dipentum, uma droga anti- colite aprovada por FDA cujo ingrediente ativo, olsalazina, é convertida em ácido 5-amino-salicínico in vivo, foi usado como um controle positivo. Os camundongos receberam água potável normal ou DSS 2% e foram tratados oralmente com um inibidor de SK ou Dipentum em uma dose de 50 mg/kg diariamente. O peso corporal de cada animal foi medido em cada dia, e o Índice de Atividade de Doença (DAI) foi determinado para cada animal nos Dias 4-6. No Dia 6, os animais foram mortos por deslocamento cervical e o cólon inteiro foi removido e medido na precisão de 0,1 cm. Porções dos cólons foram então fixadas, seccionadas e suas histologias foram avaliadas em uma base cega para determinar seu Escore de Histologia. Outras porções dos cólons foram usadas para análises bioquímicas de marcadores de inflamação.
[00350] O DAI monitora perda de peso, consistência das fezes e sangue nas fezes e é uma medida da severidade da doença. Animais recebendo água potável normal e PEG como um controle de solvente tiveram DAIs muito baixos durante todo o experimento (Figura 7). Exposição dos camundongos a DSS em sua água potável induziu marcantemente sintomas de IBD, incluindo perda de peso e a produção de fezes sanguinolentas, soltas. A intensidade da doença progressivamente aumentou do Dia 4 até o momento quando os camundongos foram mortos no Dia 6. Tratamento dos animais recebendo DSS com Composto 62 ou Dipentum reduziu a intensidade das manifestações de IBD nos camundongos, mais dramaticamente no Dia 6. Os inibidores de SK e Dipentum foram essencialmente equivalentes em suas capacidades para reduzir o DAI dos camundongos recebendo DSS. Deve ser notado que este modelo agudo produz sintomas rápidos e dramáticos de IBD, tornando-o um ensaio muito estringente para o teste de droga.
[00351] No Dia 6, os animais foram mortos por deslocamento cervical e o cólon inteiro foi medido para avaliar o encurtamento devido ao dano e à escoriação, e foram então fixados, seccionados e examinados histologicamente em uma base cega. Comparados com o grupo de água de controle, os cólons de camundongos tratados com DSS e PEG foram significativamente encurtados (Figura 8). Camundongos tratados com DSS que também foram tratados com Composto 62 ou Dipentum tiveram cólons de comprimento intermediário, indicando proteção substancial pelas drogas. De novo, a resposta a qualquer um dos inibidores de SK foi pelo menos tão boa quanto aquela dos camundongos tratados com Dipentum.
[00352] Exame histológico de seções de cólon dos vários grupos de tratamento foram consistentes com o ponto final de DAI, revelando dano marcante no grupo de apenas DSS que foi reduzido ou negativo nos animais tratados com inibidor de SK. Cólons de camundongos de controle tratados com água demonstraram morfologia normal, cólons brancos dos camundongos tratados apenas com DSS foram severamente inflamados e danificados. Numerosos neutrófilos estavam presentes em toda a seção, juntamente com criptas severamente danificadas, e infiltração inflamatória moderada com edema submucosal. Cólons de animais tratados com DSS e Composto 62 mostraram nenhum dano na cripta ou dano suave na cripta, nenhuns níveis ou níveis baixos de infiltração de célula inflamatória e nenhum edema na submucosa.
[00353] Como uma medida quantificável do dano, os cólons foram graduados para seu Escore de Histologia, que é baseado em severidade de inflamação, extensão de inflamação, dano da cripta e a percentagem de área superficial demonstrando a característica. Estas morfologias foram determinadas em uma base cega. Como indicado na Figura 9, animais recebendo DSS em sua água potável tiveram Escores de Histologia (representando IBD moderada-a-severa) substancialmente maior do que os animais recebendo água potável normal (que tiveram alguma inflamação suave, possivelmente devido ao veículo PEG). Como com os outros ensaios, os Escores de Histologia de camundongos que receberam um inibidor de SK ou Dipentum foram consistentemente menores do que os dos animais tratados apenas com DSS, embora nem todos os animais estivessem totalmente protegidos. Escores de DAI e escores de histologia correlacionam-se bem para os animais individuais, confirmando o escore de DAI como um indicador excelente de inflamação e dano de cólon.
[00354] Atividade de mieloperoxidase (MPO), que é refletiva do influxo de neutrófilos para dentro do cólon, é muitas vezes usada como medição de inflamação, e foi ensaiada nos cólons dos camundongos dos estudos de DSS-colite. Como indicado na Figura 10, atividade de MPO foi elevadamente aumentada nos animais tratados apenas com DSS em comparação com os camundongos de controle tratados com água. O aumento em atividade de MPO foi marcantemente atenuado em camundongos recebendo doses diárias de Composto 62 ou Dipentum. Esta redução na atividade do marcador de neutrófilo está consistente com a ocorrência diminuída de granulócitos observados nas seções de cólon coradas com H&E. Portanto, o nível de MPO colônica parece ser um biomarcador excelente para a extensão de infiltração de tecido pelos leucócitos inflamatórios.
[00355] Várias citocinas envolvidas em inflamação foram medidas usando o Luminex 100 System que permite a quantificação de múltiplas citocinas e de múltiplos fatores de crescimento em um volume de amostra pequeno. Examinamos a Th1 citocina IFN-y, a citocina regulatória IL-10, bem como as citocinas pró-inflamatórias derivadas de macrófago, TNFα, IL- 1 β, IL-6 em amostras de cólon de camundongos no modelo DSS de colite. Figura 11 mostra os resultados destes ensaios, e indica que o tratamento de DSS promoveu o acúmulo de todas as citocinas no cólon. O importante é que elevações de todas as proteínas pró-inflamatórias, i.e. IFN-Y, IL-1β, IL-6 e TNFα, foram atenuadas em camundongos tratados quer com inibidor de SK quer com Dipentum. Inversamente, níveis de citocina anti-inflamatória IL-10, não foram suprimidos pelos inibidores de SK.
[00356] Como uma medição final dos efeitos dos inibidores de SK neste modelo agudo, nívei de S1P foram ensaiados nos cólons dos animais tratados com DSS usando um método de LC-MS/MS. Esta técnica permite que examinemos correlações entre atividade biológica e mudanças em níveis de S1P em animais tratados com os inibidores de SK. Amostras de cólons dos animais dos experimentos de DSS-colite foram homogeneizadas em PBS frio, inoculadas com padrões internos (análogos de C17 de esfingosina e S1P) e processadas por extração de líquido-líquido. Razões de analito para o padrão interno para cada esfingolipídeo foram determinadas. Níveis de S1P foram marcantemente maiores nos cólons de camundongos tratados com DSS em comparação com os camundongos de controle tratado com água (Figura 12). O importante é que os animais tratados com o Composto 62 tiveram níveis marcantemente menores de S1P colônico do que as amostras de apenas DSS.
Exemplo 24. Efeitos in vivo de inibidores de SK em um modelo crônico de doença inflamatória do intestino.
[00357] Um modelo de 35 dias de IBD foi usado para avaliar a efetividade dos inibidores de SK em camundongos que experimentam múltiplos ciclos de inflamação induzida por DSS. Este modelo crônico é similar ao modelo agudo, exceto que a concentração de DSS na água potável é menor e os animais recebem exposição periódica ao DSS (DSS nos Dias 17, água nos Dias 8-13, DSS nos Dias 14-21, água nos Dias 22-27 e então DSS até a completitude do estudo no Dia 35). Nestes experimentos, tratamento dos camundongos com um inibidor de SK ou Dipentum começou no Dia 28 e continuou diariamente até a completitude do estudo. O índice de DAI foi monitorado dia sim, dia não até o Dia 28 e então diariamente até o Dia 35. Animais foram mortos no Dia 35, e mudanças em comprimento de cólon e em perfis de citocina foram medidas.
[00358] Exposição cíclica de camundongo a DSS em sua água potável causou aumentos reversíveis em DAI (Figura 13). Tratamento dos camundongos com Composto 62 ou Dipentum durante a terceira exposição a DSS suprimiu significativamente o aumento em DAI experimentado pelos camundongos de controle (P < 0,001 para todos os três compostos no Dia 35). Os comprimentos de cólon de camundongos tratados com DSS foram significativamente mais curtos do que os dos camundongos de controle tratados com água (4,9 ± 0,2 cm versus7,8 ± 0,3 cm) refletindo escoriação induzida por inflamação. Como no modelo agudo, os cólons de animais tratados com Composto 62 ou Dipentum foram de comprimento intermediário (6,2 ± 0,2 e 6,1 ± 0,2 cm, respectivamente). Esta é uma descoberta significativa porque os animais foram não tratados para os primeiro e segundo ciclos de DSS. Portanto, supressão de contração de cólon induzida por inflamação pode ser revertida pelas drogas efetivas anti-IBD.
[00359] Imuno-histoquímica revelou que a expressão de SK estava presente em níveis baixos nos cólons de camundongos de controle, não tratados com DSS. Expressão de SK foi elevada nos cólons de camundongos tratados com DSS em comparação com os camundongos de controle tratados com água com esta expressão claramente reduzida em camundongos DSS também recebendo o Composto 62.
[00360] Níveis de S1P nos cólons de camundongos de modelo de colite crônica foram avaliados em uma maneira idêntica como descrito para o modelo agudo, e revelaram resultados similares àqueles no modelo agudo com os níveis elevados de S1P em camundongos tratados apenas com DSS em comparação com os camundongos de controle tratados com água (Figura 14). Tratamento com Composto 62 (50mg/kg oral diariamente; 7 dias antes da morte) resultou em reduções significativas de níveis de S1P (Figura 14).
[00361] Os níveis das citocinas pró-inflamatórias TNFα, IL-lβ, IFN-y e IL-6 foram substancialmente aumentados nos cólons de camundongos tratados cronicamente com DSS; enquanto que, o nível de IL-10 não foi modificado (Figura 15). Camundongos tratados com o Composto 62 durante o ciclo final de DSS tiveram níveis reduzidos de citocinas pró-inflamatórias, enquanto que os animais tratados com Dipentum expressaram perfis de citocina equivalentes aos do grupo de apenas DSS. Isto pode refletir a presença de números altos de células imunes residentes nos cólons de camundongos expostos cronicamente a DSS. Contudo, a elevação em níveis de citocina nos camundongos tratados com inibidor de SK não resulta em DAI aumentado ou encurtamento de cólon, indicando que sinalização induzida pelas citocinas inflamatórias havia sido bloqueada.
[00362] Para comparação, os níveis de mesmas citocinas no soro dos camundongos no momento da morte também foram determinados. Como indicado na Figura 16, os níveis circulantes destas citocinas são marcantemente menores do que os níveis colônicos refletindo a inflamação local neste modelo. DSS aumentou nos níveis circulantes de IL-1β, IFN-y, IL- 6 e IL-10, enquanto que TNFα permaneceu abaixo do limite de detecção do ensaio. Nenhum dos compostos de teste afetou os níveis circulantes de IL-I β ou INF-Y; contudo, tanto Composto 62 quanto Dipentum reduziram o nível sérico de IL-6. Portanto, níveis séricos de IL-6 podem ser um marcador farmacodinâmico útil para os efeitos antiinflamatórios dos inibidores de SK durante o teste clínico.
Exemplo 25. Efeitos in vivo dos inibidores de SK no modelo de artrite induzida por colágeno em camundongos.
[00363] As atividades de anti-artrite do inibidor de SK Composto 62 foram avaliadas no modelo de Artrite Induzida por Colágeno (CIA). Camundongos fêmeas DBA/1 foram injetados na cauda com colágeno de tipo II de grau de imunização de galinha (Chondrex) emulsificado em adjuvante completo de Freund (Sigma) a 2 mg/mL. Três semanas mais tarde, os camundongos receberam um reforço de colágeno em adjuvante de Freund incompleto e foram monitorados diariamente depois para sintomas artríticos. Uma vez tendo os camundongos alcançado uma espessura de pata e escore clínico limites, foram randomizados nos seguintes grupos de tratamento: Composto 62 (100 mg/kg dados diariamente a cada dia por 6 dias por semana) ou veículo (Tween-80 0,375% dado sob o mesmo planejamento de horário). A severidade da doença em cada animal foi quantificada pela medição do volume da pata traseira com compassos de calibre digitais. Cada pata foi classificada baseado na atividade inflamatória percebida, na qual cada pata recebe um escore de 0-3 como segue: 0 = normal; 1 = vermelhidão e inchamento médios, mas definidos do tornozelo e do pulso e 3 = vermelhidão e inchamento severos da pata inteira incluindo dedos, com um escore total variando de 0-12. Diferenças entre os grupos de tratamento foram testadas usando ANOVA.
[00364] Como indicado na Figura 17, tratamento com qualquer inibidor de SK tornou dramaticamente mais lenta a resposta de inflamação, medida quer como Escore Clínico Médio (Figura 10A) quer como Diâmetro Médio da Pata Traseira (Figura 10B), com diminuições significativas começando no Dia 5 de tratamento para ambos os pontos finais. Pelo fim do experimento no Dia 12, Composto 62 causou uma redução de 90% no aumento da espessura da para traseira, e uma redução de 67% no escore clínico comparado com os camundongos tratados com veículo.Visto que uma redução de 30% em sintomas é considerada demonstrativa da atividade anti- artrítica neste ensaio, o inibidor de SK suplanta os critérios para eficácia neste modelo.
[00365] No Dia 12, os camundongos foram mortos e seus membros traseiros foram removidos, estripados de pele e músculo, fixados em formalina, decalcificados e embebidos em parafina. Os membros foram então seccionados e corados com hematoxilina/eosina. Articulações tibiotarsais foram avaliadas histologicamente para a severidade da inflamação e da hiperplasia sinovial. Artrite induzida por colágeno resultou em um fenótipo severo comparado com os camundongos não-induzidos, manifestado como inflamação e infiltração de célula sinovial severas, bem como reabsorção óssea significativa. Camundongos que haviam sido tratados com Composto 62 tiveram dano histológico significativamente reduzido, correlacionando com dados de escore clínico e espessura de pata.
Exemplo 26. Efeitos in vivo de inibidores de SK no modelo de artrite induzida por adjuvante em ratos.
[00366] Artrite induzida por adjuvante é outro ensaio amplamente usado que recapitula muitas características de artrite reumatóide em humano, e assim é útil na avaliação de novos candidatos à droga. Ratos machos Lewis igualados por peso e idade (150-170 g) foram injetados subcutaneamente na cauda com 1 mg de Mycobacterium butyricum (Difco, seco morto) suspenso em 0,1 mL de óleo mineral leve. Sintomas de reatividade imune estiveram presentes após 2 semanas. Ratos responsivos foram randomizados em grupos de tratamento, e receberam doses diárias orais (1 mL) de: solvente apenas (Tween-80 0,375%); 100 mg/kg de Composto 62; 35 mg/kg de Composto 62; ou 5 mg/kg de Composto 62, ou injeções intraperitoneais de indometacina (5 mg/kg) dia sim, dia não como um controle positivo. A severidade da doença em cada animal foi quantificada pela medição da espessura da pata traseira. Como acima, uma redução d 30% ou maior foi considerada uma indicação de atividade antiinflamatória neste modelo.
[00367] Como indicado na Figura 17, ratos tratados apenas com solvente demonstraram um aumento progressivo na espessura da pata no decorrer do curso dos 10 dias seguintes. Composto 62 inibiu esta resposta artrítica em uma maneira dependente de dose, com a dose mais alta possuindo eficácia terapêutica similar à da indometacina. Composto 62 em doses de 5, 35 ou 100 mg/kg resultou em reduções de 13, 42 e 76 por cento na resposta artrítica, respectivamente. Assim, Composto 62 é elevadamente efetivo neste modelo de artrite.

Claims (28)

1. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser de fórmula I:
Figure img0042
na qual: X é -C(R3,R4)N(R5)- ou -C(O)N(R4)-; R1 é fenila substituída com 1 ou dois halogênios; R2 é heteroarila, alquil-heteroarila, heterociclo-alquila, alquil- heterociclo-alquila, mono ou dialquil-aminoalquil-S-alquila, -heteroaril-arila, -alquil-heteroaril-arila, -C(O)-NH-arila, ou -C(O)-heteroarila; R3 é H ou (C1-C4) alquila; R4 e R5 são independentemente H ou (C1-C4) alquila; no qual a porção alquila de cada um dos grupos R2 acima é independentemente (C1-C4) alquila e as porções de anel e alquila de cada um dos grupos R2 acima estão opcionalmente substituídas com até 5 grupos que são independentemente (C1-C6) alquila, halogênio, halo-alquila, -OC(O)(C1- C6 alquil), -C(O)O(C1-C6 alquil), -OC(O)NR’R”, -NR’C(O)R”, -CF3, -OCF3, -OH, C1-C6 alcoxila, hidróxi-alquila, -CN, -SH, -S-alquila, -SOR’R”, -SO2R’, -NO2, ou NR’R”, nos quais R’ e R” são independentemente H ou (C1-C6) alquila, e nos quais cada porção alquila de um substituinte está opcionalmente adicionalmente substituído com 1, 2, ou 3 grupos independentemente selecionados de halogênio, CN, OH, e NH2; e cada arila é independentemente fenila, naftila, 1,2,3,4-tetra- hidronaftaleno, benzodioxole ou bifenila; cada heterocicloalquila é independentemente um piperidila, piperazinila, morfolinila, pirrolidinila, tiomorfolinila, tiazolidinila, 1,3- dioxolanila, 1,4-dioxanila, tetra-hidrofuranila, tetra-hidrotiofenila ou tetra- hidrotiopiranila; e cada heteroarila é independentemente tienila, benzotienila, piridila, quinolila, pirazinila, pirimidila, benzimidazolila, furanila, benzofuranila, tiazolila, benzotiazolila, triazolila, tetrazolila, pirrolila, indolila, pirazolila, benzopirazolila, purinila, benzooxazolila ou carbazolila.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é arila, -alquil-arila, -alquil-heteroarila ou fenoxifenila.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R2 é benzila, 2-feniletil-, 3-fenilpropil-, (bifenil) metil, 2- (benzo [1,3] dioxolil) etila, fenoxifenila ou fenila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é -heteroarila ou -alquil-heteroarila.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que R2 é piridinilmetila, 2-piridiniletila, imidazolilpropila, indolila, tetrazolila, carbazolila, benzotiazolila, benzooxazolila, purinila ou tiofenilmetila.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é -heteroaril-arila ou -alquil-heteroaril-arila.
7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R2 é fenil-tiazolil- ou fenil-tiofenil-metil-.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é -C(R3, R4)N(R5) e R2 é -C(O)-NH-arila, ou -C(O)- heteroarila.
9. Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que R2 é fenila, C(O)-NH-fenila ou -C(O)-carbazolila.
10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a porção arila ou heteroarila de R2 é não substituída ou substituída com 1, 2 ou 3 grupos selecionados independentemente de alquila, halogênio, hidroxi, hidroxialquil-, acetiloxi-, cianoalquil-, aminoalquil-, alquil-S-, trifluorometil, trifluorometoxi, -SO2-Me, haloalcoxi-, alcoxi- ou dialquilamino-.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é -heterocicloalquila ou -alquil-heterocicloalquila, monoou dialquilaminoalquil- ou alquil-S-alquil-.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que R2 é piperidin-4-il-, 3-(monoalquilamino) propil-, 3-(pirrolidinil) propil-, 3- (2-oxo-pirrolidinil) -propil-, 2-(pirrolidinil) etil-, 2-(morfolinil) etil- ou 2-(piperazinil) etila.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a porção cicloalquila de R2 é não substituída ou é substituída por um (C1-C4) alquila.
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11, caracterizado pelo fato de que X é -C(R3, R4)N(R5).
15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que R3 é metila e R4 é H.
16. Composto, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que R5 é H.
17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que X é C (O) NR4.
18. Composto, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que R4 é H.
19. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser: (2-Etil-sulfanil-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; Fenil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1- carboxílico; (4-Hidróxi-fenil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-{[3-(4-Cloro-fenil)-adamantano-1-carbonil]-amino}-fenil- éster de ácido acético; (2,4-di-Hidróxi-fenil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (3-Hidróxi-metil-fenil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; Ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico; Benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1- carboxílico; 4-terc-Butil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Metil-sulfanil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3-Trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3,5-Bis-trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3-Fluoro-5-trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; 2-Fluoro-4-trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; 3,5-Difluoro-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3,4-Difluoro-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3,4,5-Trifluoro-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3-Cloro-4-fluoro-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Fluoro-3-trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; 2-Cloro-4-fluoro-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Cloro-3-trifluorometil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; 3-Amino-metil-2,4,5,6-tetracloro-benzil-amida de ácido 3-(4- cloro-fenil)-adamantano-1-carboxílico; [1-(4-Cloro-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; [1-(4-Bromo-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Metano-sulfonil-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Dimetil-amino-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Trifluorometóxi-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 3-Trifluorometóxi-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Fenóxi-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano- 1-carboxílico; 3,4-Di-hidróxi-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; Fenetil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano-1- carboxílico; [2-(4-Fluoro-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; [2-(4-Bromo-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; [2-(4-Hidróxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; 4-Fenóxi-benzil-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adatnantane- 1-carboxílico; [2-(3-Bromo-4-metóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; [2-(3,4-Di-hidróxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (2-Benzo[l,3]dioxo1-5-il-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; [2-(3-fenóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; [2-(4-Fenóxi-fenil)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (3-Fenil-propil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano- 1-carboxílico; (Bifenil-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (1-Metil-piperidin-4-il)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (4-Metil-piperazin-1-il)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (3-terc-Butil-amino-propil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (3-Pirrolidin-1-il-propil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; [3-(2-Oxo-pirrolidin-1-il)-propil]-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; [2-(1-metil-pirrolidin-2-il)-etil]-amida de ácido 3-(4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico; (2-Morfolin-4-il-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (2-Piperazin-1-il-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (Piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-fluoro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (Piridin-4-il-metil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (2-Piridin-4-il-etil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (3-Imidazol-1-il-propil)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (2-Metil-1H-indo1-5-il)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (1H-tetrazol-5-il)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; [4-(4-Cloro-fenil)-tiazol-2-il]-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; Benzotiazol-2-il-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano- 1-carboxílico; (5-Cloro-benzooxazol-2-il)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico; (9H-purin-6-il)-amida de ácido 3-(4-cloro-fenil)-adamantano- 1-carboxílico; 4-{[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-amino}-fenol; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4-trifluorometil- benzil)-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(2-fluoro-4- trifluoromemil-benzil)-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4-fluoro-3- trifluorometil-benzil)-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4-trifluorometóxi- benzil)-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-[2-(3-fenóxi-fenil)- etil]-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(1-metil-piperidin-4- il)-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(4-metil-piperazin-1- il)-amina; N-terc-Butil-N'-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]- propano-1,3-diamina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(3-pirrolidin-1-il- propil)-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-[2-(1-metil- pirrolidin-2-il)-etil]-amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(2-morfolin-4-il-etil)- amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-piridin-4-il-metil- amina; [3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-(9-etil-9H-carbazol- 3-il)-amina; [3-4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il-metil]-[5-(4-cloro-fenil)- tiazol-2-il]-amina; {1-[3-(4-Fluoro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-fenil-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-fenil-amina; Benzil-{1-[3-(4-fluoro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-amina; Benzil-{1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-amina; (4-terc-Butil-benzil)-{1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]- etil}-amina; [1-(4-Bromo-fenil)-etil]-{1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]- etil}-amina; [2-(4-Bromo-fenil)-etil]-{1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan-1-il]- etil}-amina; {1-[3-(4-Fluoro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(1-metil- piperidin-4-il)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(1-metil-piperidin- 4-il)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(4-metil-piperazin- 1-il)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(6-cloro-piridin-3- il-metil)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(2-piridin-4-il- etil)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(3H-imidazol-4-il- metil)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(2-metil-1 H- indo1-5-il)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(9-etil-9H- carbazol-3-il)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(9-etil-9H- carbazol-3-il-metil)-amina; {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-amida de ácido 9- etil-9H-carbazol-3-carboxílico; 1-{1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-3-(4-cloro-3- trifluorometil-fenil)-uréia; (4-Bromo-tiofen-2-il-metil)-{1-[3-(4-cloro-fenil)-adamantan- 1-il]-etil}-amina; ou {1-[3-(4-Cloro-fenil)-adamantan-1-il]-etil}-(4-fenil-tiofen-2-il- metil)-amina, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
20. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pleo fato de ser (piridin-4-ilmetil)-amida do ácido 3- (4-cloro-fenil)- adamantano-1-carboxílico, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é [2- (3,4-di-hidroxi-fenil) -etil]-amida do ácido 3- (4-cloro- fenil)-adamantano-1-carboxílico.
22. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreende o composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, em combinação com um agente auxiliar, meio, ou carreador farmaceuticamente aceitável.
23. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou composição, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de ser para inibir a esfingosina quinase em um paciente com necessidade de tal inibição.
24. Composto ou sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou uma composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de ser para o tratamento de um distúrbio em um paciente, o referido distúrbio tendo ativação anormal de esfingosina quinase.
25. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou composição, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de ser para o tratamento de um distúrbio em um paciente, o referido distúrbio tendo ativação anormal de esfingosina quinase.
26. Composto ou sal ou uma composição de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a citada doença é doença hiperproliferativa é selecionada do grupo consistindo em câncer, aterosclerose, restenose, distúrbios proliferativos de célula mesangial, e psoríase.
27. Composto ou sal ou uma composição de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a citada doença é um câncer selecionado do grupo consistindo de cânceres de cabeça e pescoço, cânceres de pulmão, cânceres de trato gastrointestinal, cânceres de mama, cânceres ginecológicos, cânceres testiculares, cânceres de trato urinário, cânceres neurológicos, cânceres endócrinos, cânceres de pele, sarcomas, cânceres mediastinais, cânceres retroperitoneais, cânceres cardiovasculares, mastocitose, carcinossarcomas, cilindroma, cânceres dentais, estesioneuroblastoma, câncer uracal, carcinoma de célula de Merkel, paragangliomas, linfoma de Hodgkin, linfoma de não-Hodgkin, leucemias crônicas, leucemias agudas, cânceres mieloproliferativos, discrasias de célula de plasma, e síndromes mielodisplásicas.
28. Composto ou sal ou uma composição de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a citada doença é uma doença inflamatória selecionada do grupo consistindo em doença inflamatória do intestino, artrite, aterosclerose, asma, alergia, doença inflamatória do rim, choque circulatório, esclerose múltipla, doença pulmonar obstrutiva crônica, inflamação de pele, doença periodontal, psoríase e doenças de imunidade mediadas por célula T.
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