BR112019005726A2 - Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao cd27 humano, polipeptídeo isolado, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, métodos de produção de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno, de tratamento de câncer e de tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa, e, uso do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno. - Google Patents

Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao cd27 humano, polipeptídeo isolado, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, métodos de produção de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno, de tratamento de câncer e de tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa, e, uso do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno. Download PDF

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Abstract

A presente invenção refere-se aos anticorpos anti-CD27, e, também ao uso destes anticorpos no tratamento de doenças como câncer e doença infecciosa.

Description

1 / 500
ANTICORPO OU FRAGMENTO DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO DO MESMO QUE SE LIGA AO CD27 HUMANO, POLIPEPTÍDEO ISOLADO, ÁCIDO NUCLEICO ISOLADO, VETOR DE EXPRESSÃO, CÉLULA HOSPEDEIRA, COMPOSIÇÃO, MÉTODOS DE PRODUÇÃO
DE UM ANTICORPO OU DE UM FRAGMENTO DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO, DE TRATAMENTO DE CÂNCER E DE TRATAMENTO DE UMA INFECÇÃO OU DE UMA DOENÇA INFECCIOSA, E, USO DO ANTICORPO OU DO FRAGMENTO DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se aos tratamentos de condições melhoradas pela estimulação de uma resposta imune, em particular pela estimulação de linfócitos-T antígeno-específicos. Os vários aspectos da presente invenção são adequados para o tratamento de qualquer condição conhecida ou suposta em ser melhorada pela estimulação de células imunes CD27+ ou pela inibição de uma ou mais proteínas(s) de ponto de checagem imune. As condições adequadamente tratadas pela invenção são aquelas melhoradas pela estimulação imune, como doenças infecciosas e cânceres. Mais especificamente, a presente invenção refere-se aos anticorpos anti- CD27, e, também, ao uso destes anticorpos no tratamento de doenças como câncer e doença infecciosa.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] CD27, um membro da família dos receptores de TNF, foi identificado como uma molécula membranar sobre células-T humanas (van Lier et al., 1987, J. Immunol. 139:1589-96). De acordo com a evidência atual, CD27 tem um ligante único, CD70, que é, também, um membro da família dos receptores de TNF (Goodwin et al., 1993, Cell 73:447-56).
[003] CD27 é exclusivamente expressado por células hematopoiéticas, em particular por aquelas da linhagem linfocítica, isto é células-T, células-B, e células NK. CD27 foi originalmente definido como
2 / 500 uma molécula coestimulatória de célula-T humana que incrementa a resposta proliferativa à estimulação de TCR (van Lier et al., 1987, J. Immunol. 139:1589-96). A presença de CD70, o ligante de CD27, dita a sincronização temporal (timing) e a persistência da coestimulação mediada por CD27.
[004] A expressão transgênica de CD70 em células dendríticas imaturas foi suficiente para converter a tolerância imunológica a vírus ou tumores em responsividade de célula-T CD8+. Igualmente, CD70 solúvel agonístico promoveu a resposta de célula-T CD8+ em tal imunização peptídica (Rowley et al., 2004, J. Immunol. 172:6039-6046) e em camundongos transgênicos CD70, a formação de células efetoras CD4+ e CD8+ em resposta à estimulação de TCR foi enormemente facilitada (Arens et al. 2001, Immunity 15:801-12; Tesselaar et al., 2003, Nat. Immunol. 4:49- 54; Keller et al. 2008, Immunity 29: 334-346). Em modelos de linfoma em camundongo, a rejeição de tumor foi melhorada após a transgênese de CD70 ou a injeção de um anticorpo anti-CD27 de camundongo (Arens et al., 2003, J. Exp. Med. 199:1595-1605; French et al., 2007, Blood 109: 4810-15; Sakanishi e Yagita, 2010, Biochem. Biophys. Res. Comm. 393: 829-835; WO 2008/051424; WO 2012/004367).
[005] Em WO2012/004367 foi descrito o primeiro anticorpo agonístico anti-humano (chamado de hCD27.15) que não exige ligação cruzada para ativar a coestimulação mediada por CD27 da resposta imune. Além disso, foi revelado que um anticorpo anti-CD27 humano, chamado de 1F5, ativa CD27 após ligação cruzada (WO2011/130434 e Vitale et al., Clin. Cancer Res., 2012, 18(14): 3812-3821). Entretanto, ainda há uma necessidade na técnica para desenvolver anticorpos anti-CD27-humano tendo características aprimoradas, incluindo a capacidade para se ligarem ao CD27 humano tendo os A59T SNP e CD27 de macacos Cynomolgus (cinomolgo).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[006] A invenção fornece anticorpos anti-CD27 e fragmentos de
3 / 500 ligação ao antígeno dos mesmos compreendendo as características estruturais e funcionais especificadas abaixo.
[007] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; e (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; e (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus (reso) com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco
4 / 500 Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL- 2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF-κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[008] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que
5 / 500
X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL- 2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e
6 / 500 aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF-κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[009] Em outra modalidade da invenção, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1,
7 / 500
2, ou 3 substituições conservativas; e uma região variável de cadeia leve CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas.
Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a
8 / 500 produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0010] Em outra modalidade da invenção, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende: um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia leve de imunoglobulina, uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina ou ambas uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve e uma de cadeia pesada selecionadas a partir do grupo que consiste em: um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:7 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:8 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:9 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:9 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de
9 / 500 aminoácidos da SEQ ID NO:14 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:14 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:32 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:33 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:34 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:35 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:39 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:40 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:10-13 ou uma sequência de aminoácidos que difere de uma das SEQ ID NOs:10-13 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável selecionada a partir do grupo que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18 ou uma sequência de aminoácidos que difere de uma das SEQ ID NOs:15-18 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; um anticorpo ou um
10 / 500 fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:10 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:10 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:15 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas.
Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação
11 / 500 ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0011] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região
12 / 500 variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é humanizado.
Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:9, 10, 11, 12, 13, 32, 34 e 39; e uma região variável de cadeia leve selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:14, 15, 16, 17, 18, 33, 35 e 40. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:10, 11, 12 ou 13; e uma região variável de cadeia leve compreendendo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:15, 16, 17 ou 18. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID NOs:10, 11, 12 ou 13; e uma região variável de cadeia leve compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID
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NOs:15, 16, 17 ou 18. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano.
Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais
14 / 500 embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0012] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:10, 11, 12 ou 13; e uma região variável de cadeia leve compreendendo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:15, 16, 17 ou 18. Em uma modalidade, as variações em sequência propostas ocorrem apenas nas regiões framework (arcabouço) do anticorpo.
[0013] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6; em que o anticorpo ou o fragmento de ligação
15 / 500 ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com uma região variável de cadeia pesada selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:9-13 e uma região variável de cadeia leve compreendendo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com uma região variável de cadeia leve selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:14-18. Nesta modalidade supracitada, as variações em sequência ocorrem apenas nas regiões framework, e o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de
16 / 500 KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL- 2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF-κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0014] Em ainda uma outra modalidade da invenção, é fornecido um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao
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CD27 humano compreendendo ambas uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve e uma de cadeia pesada selecionadas a partir do grupo que consiste em: um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:9 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:10-13 e uma cadeia leve variável selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:15-18; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:10 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15; um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que compreende a cadeia pesada variável de qualquer uma das SEQ ID NOs:10-12 e a cadeia leve variável de qualquer uma das
18 / 500 SEQ ID NOs:15-17; e um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que compreende a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:13 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:18.
[0015] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a
19 / 500 produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0016] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo: uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7 e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se ao CD27 humano.
[0017] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo isolado ou a um fragmento de ligação ao antígeno isolado que se liga ao CD27 humano compreendendo: uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7 ou variante da mesma compreendendo até 25 substituições de aminoácido, e/ou uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8 compreendendo até 25 substituições de aminoácido. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de
20 / 500 acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano.
Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados.
Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3
21 / 500 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0018] Em qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser isolado.
[0019] Em qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo recombinante.
[0020] Em qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo pode ser um anticorpo de comprimento completo.
[0021] Em qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser um anticorpo humanizado.
[0022] Em qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser um anticorpo humanizado compreendendo duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, e opcionalmente é um anticorpo IgG intacto. Em uma modalidade, as cadeias pesadas são do isótipo IgG. Em uma modalidade, as cadeias pesadas são do isótipo IgG1. Em outra modalidade, as cadeias pesadas são do isótipo IgG2. Em outra modalidade, as cadeias pesadas são do isótipo IgG4. Em outra modalidade, as cadeias pesadas são do isótipo IgGM. Em uma modalidade, o anticorpo compreende o domínio constante da cadeia pesada da SEQ ID NO:30 ou SEQ ID NO:28.
[0023] Em outro aspecto da invenção, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos
22 / 500 da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S, e o domínio constante da cadeia pesada é de isótipo IgG1 ou IgG4. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET);; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que
23 / 500 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[0024] Em qualquer uma das modalidades supracitadas, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção pode compreender uma uma região da cadeia pesada consistindo em: (a) qualquer uma das cadeias pesadas variáveis descritas acima e (b) um peptídeo líder (por exemplo, o peptídeo líder da SEQ ID NO:26). Em qualquer uma das modalidades supracitadas, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção pode compreender uma região da cadeia leve consistindo em: (a) qualquer uma das cadeias leves descritas acima e (b) um peptídeo líder (por exemplo, o peptídeo líder da SEQ ID NO:27).
[0025] Em qualquer uma das modalidades supracitadas da invenção, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser um anticorpo compreendendo qualquer uma das regiões variáveis da cadeia pesada descritas acima e qualquer domínio constante da cadeia pesada humana. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é do isótipo IgG, e compreende um domínio constante da cadeia pesada humana de IgG1 humana, IgG2 humana, IgG3 humana ou IgG4
24 / 500 humana. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção compreende um domínio constante da cadeia pesada humana de IgG1 (SEQ ID NO:30) ou uma variante da mesma, em que a variante compreende até 20 substituições de aminoácido relativa à SEQ ID NO:30. Em outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um domínio constante da cadeia pesada humana de IgG4, em que o aminoácido na posição 228 (usando o esquema de numeração EU) tem sido substituído de Ser para Pro (SEQ ID NO:28). Em outra modalidade, as cadeias pesadas são do isótipo IgGM.
[0026] Em qualquer uma das modalidades supracitadas, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode compreender qualquer uma das regiões variáveis da cadeia leve descritas acima e um domínio constante da cadeia leve humana. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um domínio constante da cadeia leve kappa humana compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29.
[0027] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende uma estrutura tetramérica completa tendo duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve compreende: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana e uma região constante da cadeia leve lambda humana; e cada cadeia leve compreende: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39, e uma região constante de IgG1 humana (SEQ ID NO:30).
[0028] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende uma estrutura tetramérica completa tendo duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve compreende: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana ou um domínio constante da cadeia leve
25 / 500 lambda humana; e cada cadeia leve compreende: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39, e uma região constante de IgM humana.
[0029] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende uma estrutura tetramérica completa tendo duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve compreende: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana ou um domínio constante da cadeia leve lambda humana; e cada cadeia leve compreende: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39, e uma região constante de IgG2 humana.
[0030] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:36; e cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:37.
[0031] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção consiste em duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:36; e cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:37.
[0032] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:36; e cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:38.
[0033] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção consiste em duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:36; e cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:38.
[0034] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia
26 / 500 leve consiste em: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana ou um domínio constante da cadeia leve lambda humana; e cada cadeia leve consiste em: uma região variável consistindo em qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39 e uma região constante de IgM humana.
[0035] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção consiste em duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana ou um domínio constante da cadeia leve lambda humana; e cada cadeia leve consiste em: uma região variável consistindo em qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39 e uma região constante de IgM humana.
[0036] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção compreende duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em: uma região variável consistindo em qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana ou um domínio constante da cadeia leve lambda humana; e cada cadeia leve consiste em: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39, e uma região constante de IgG1 humana.
[0037] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 da invenção consiste em duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em que cada cadeia leve consiste em: uma região variável consistindo em qualquer uma das SEQ ID NOs:14-18, 33, 35 e 40 e uma cadeia leve kappa humana ou um domínio constante da cadeia leve lambda humana; e cada cadeia leve consiste em: uma região variável compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOs:9-13, 32, 34 e 39, e uma região constante de IgG1 humana.
[0038] Em outro aspecto da invenção, qualquer um dentre o anticorpo ou os fragmentos de ligação ao antígeno acima compreende um padrão de glicosilação característico da expressão por uma célula de mamífero ou uma
27 / 500 célula CHO.
[0039] Em determinadas modalidades, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é conjugado com pelo menos um agente terapêutico. Em uma modalidade, o agente terapêutico é um segundo anticorpo ou fragmento do mesmo, um imunomodulador, um hormônio, um agente citotóxico, uma enzima, um radionuclídeo, um segundo anticorpo conjugado com pelo menos um imunomodulador, uma enzima, um marcador radioativo, um hormônio, um oligonucleotídeo antissenso, ou um agente citotóxico, ou uma combinação dos mesmos.
[0040] A invenção também fornece polipeptídeos isolados compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs:1-18, 32-40 e 44-45 ou um fragmento de qualquer uma das ditas sequências.
[0041] A invenção também fornece ácido nucleicos isolados que codificam qualquer um dos anticorpos anti-CD27 ou dos fragmentos de ligação ao antígeno da invenção. Em uma modalidade, a invenção fornece ácido nucleicos isolados que codificam qualquer um dos polipeptídeos das SEQ ID NOs:1-18, 32-40 e 44-45, em que os ditos polipeptídeos podem opcionalmente compreender uma sequência líder. Em outra modalidade, a invenção fornece um ácido nucleico isolado compreendendo SEQ ID NO:46 ou SEQ ID NO:47, ou ambas. A invenção também fornece vetores de expressão compreendendo um ácido nucleico que codifica qualquer um dos polipeptídeos das SEQ ID NOs:1-18, 32-40 e 44-45 (em que os ditos polipeptídeos podem opcionalmente compreender uma sequência líder) ou um ácido nucleico compreendendo SEQ ID NO:46 ou SEQ ID NO:47, ou ambas. Estes ácidos nucleicos isolados e os vetores de expressão compreendendo-os podem ser usados para expressar os anticorpos da invenção ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos em células hospedeiras recombinantes. Portanto, a invenção também fornece células hospedeiras compreendendo
28 / 500 ácidos nucleicos que codificam qualquer um dos polipeptídeos das SEQ ID NOs:1-18, 32-40 e 44-45 (em que os ditos polipeptídeos podem opcionalmente compreender uma sequência líder) ou um ácido nucleico compreendendo SEQ ID NO:46 ou SEQ ID NO:47, ou ambas. Em uma modalidade, a célula hospedeira é uma célula bacteriana, uma célula humana, uma célula de mamífero, uma célula Pichia, uma célula de planta, um célula HEK293, ou uma célula de ovário de hamster chinês. Em uma modalidade, a célula hospedeira é célula de ovário de hamster chinês. Em uma modalidade, a célula hospedeira é uma célula de levedura, por exemplo uma célula Pichia ou uma célula hospedeira Pichia pastoris.
[0042] A invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção e um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a composição compreende um outro agente farmacêutico. Em uma modalidade, o outro agente farmacêutico é selecionado a partir do grupo que consiste em: um anticorpo anti-LAG3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIGIT ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-VISTA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-BTLA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIM3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CTLA4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-HVEM ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD70 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-OX40 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD28 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-GITR ou um fragmento de ligação ao
29 / 500 antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ICOS ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-SIRPα ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e um anticorpo anti-ILT5 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-4-1BB (CD137) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2A ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2C ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2E ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TSLP ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-IL-10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; IL-10 ou IL-10 PEGuilada; um agonista de STING; um antagonista de CXCR2; e um inibidor de PARP.
[0043] Em uma modalidade das composições farmacêuticas da invenção, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6.
[0044] A invenção também compreende uma combinação compreendendo um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao
30 / 500 antígeno da invenção, em combinação com um, dois ou mais agentes terapêuticos; em que o segundo agente terapêutico é selecionado a partir do grupo que consiste em: um anticorpo anti-LAG3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIGIT ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-VISTA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-BTLA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIM3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CTLA4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-HVEM ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD70 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-OX40 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD28 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-GITR ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ICOS ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-SIRPα ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT5 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti 4-1BB ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2A ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2C ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2E ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TSLP ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-IL-10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; IL-10 ou IL-10 PEGuilada;
31 / 500 um agonista de STING; um antagonista de CXCR2; e um inibidor de PARP.
[0045] Em uma modalidade das combinações da invenção, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6.
[0046] A invenção também fornece um vaso ou um recipiente de injeção compreendendo qualquer um dos anticorpos anti-CD27 ou dos fragmentos de ligação ao antígeno da invenção. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um
32 / 500 anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
[0047] A invenção também fornece um método para produzir um anticorpo anti-CD27 ou de um fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreendendo: cultivar uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada e/ou uma cadeia leve de um anticorpo da invenção (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) sob condições favoráveis para a expressão do polinucleotídeo; e opcionalmente, recuperar o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno da célula hospedeira e/ou do meio de cultura. Em uma modalidade, o polinucleotídeo que codifica a cadeia pesada e o polinucleotídeo que codifica a cadeia leve estão em um vetor único. Em outra modalidade, o polinucleotídeo que codifica a cadeia pesada e o polinucleotídeo que codifica a cadeia leve estão em vetores diferentes. Em uma modalidade, o polinucleotídeo que codifica a cadeia pesada e o polinucleotídeo que codifica a cadeia leve codificam um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada
33 / 500 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada e um polinucleotídeo que codifica uma cadeia leve de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
[0048] A invenção também fornece um método de tratamento de câncer em um sujeito que necessita do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-CD27 ou de um fragmento de ligação ao antígeno da invenção, opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico. Em uma modalidade, o sujeito a ser tratado é um sujeito humano. Em uma modalidade,
34 / 500 o outro agente farmacêutico é selecionado a partir do grupo que consiste em: um anticorpo anti-LAG3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIGIT ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-VISTA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-BTLA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIM3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CTLA4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-HVEM ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD70 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-OX40 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD28 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-GITR ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ICOS ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-SIRPα ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT5 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e um anticorpo anti-4-1BB ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2A ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2C ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2E ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TSLP ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-IL-10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-IL-10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; IL-10 ou IL-10 PEGuilada; um agonista de
35 / 500 STING; um antagonista de CXCR2; e um inibidor de PARP.
[0049] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
[0050] Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição compreendendo: (i) um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao
36 / 500 antígeno da invenção; e (ii) um anticorpo anti-PD1 compreendendo a sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO:53 e a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO:48. Em outra modalidade, a invenção fornece uma composição compreendendo: (a) um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção; e (b) um anticorpo anti-PD1 compreendendo a sequência variável de cadeia pesada da SEQ ID NO:52 e a sequência variável de cadeia leve da SEQ ID NO:78. Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD1 é administrado antes da administração de um anticorpo anti-CD27. Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD1 é administrado 4-10 dias antes da administração do anticorpo anti-CD27. Em uma modalidade, pré-tratamento com anticorpo anti-PD1 pode modular células imunes resultando em função mediada por Fc intensificada dos anticorpos anti-CD27. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6.
[0051] A invenção também fornece um método de tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno da invenção, opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico. Em uma
37 / 500 modalidade, o sujeito a ser tratado é um sujeito humano.
Em uma modalidade, o outro agente farmacêutico é selecionado a partir do grupo que consiste em: um anticorpo anti-LAG3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIGIT ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-VISTA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-BTLA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TIM3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CTLA4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-HVEM ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD70 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-OX40 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-CD28 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-PDL2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-GITR ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ICOS ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-SIRPα ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-ILT5 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e um anticorpo anti-4-1BB ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2A ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2C ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-NKG2E ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-TSLP ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; um anticorpo anti-IL-10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; IL-10 ou IL-10 PEGuilada; um agonista de
38 / 500 STING; um antagonista de CXCR2; e um inibidor de PARP.
[0052] Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
[0053] A invenção também fornece uma vacina compreendendo um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção. Em uma
39 / 500 modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S. Em uma modalidade, a vacina compreende, adicionalmente, um antígeno.
[0054] A invenção também fornece um método para detecção da presença de um peptídeo de CD27 ou um fragmento do mesmo em uma
40 / 500 amostra compreendendo colocar em contato a amostra com um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção e detectar a presença de um complexo entre o anticorpo ou o fragmento e o peptídeo; em que a detecção do complexo indica a presença do peptídeo de CD27. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
[0055] A invenção também fornece um método de aumento da
41 / 500 atividade de uma célula imune, compreendendo colocar a célula imune em contato com qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção.
Em uma modalidade, a invenção fornece um método de aumento da atividade de uma célula imune, compreendendo administrar ao sujeito que necessita da mesma uma quantidade eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígenos da invenção.
Em uma modalidade, o método é usado para: o tratamento de câncer, o tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa, ou como um adjuvante de vacina.
Em uma modalidade, o aumento em atividade de uma célula imune pode ser detectado pela medição da proliferação da célula imune.
Por exemplo, um aumento em atividade de uma célula-T pode ser detectado pela medição da proliferação da célula-T.
Em uma modalidade, o aumento em atividade de uma célula imune pode ser detectado pela medição da ativação da célula-T ex vivo em uma amostra derivada do sujeito.
Em uma modalidade, o aumento em atividade da célula-T é determinado por: (i) medição de reações de linfócitos mistos ou estimulação direta por mAb anti-CD3 da sinalização de receptor de célula-T (TCR) para induzir a produção de uma citocina selecionada a partir do grupo que consiste em: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, IL-1β, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 e IL-13; (ii) medição da produção induzida por SEB de uma ou mais citocinas selecionadas a partir do grupo que consiste em: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 e IL-13; ou (iii) medição de produção induzida por TT de uma citocina selecionada a partir do grupo que consiste em: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 e IL-13. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2; (iii)
42 / 500 uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao CD27 humano compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo: (i) uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; (ii) uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; (iii) uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; (iv) uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; (v) uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e (vi) uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
DESCRIÇÃO BREVE DAS FIGURAS
[0056] A Figura 1 mostra que o anticorpo hCD27.15 não se liga ao CD27 A59T. CD27 e CD27 A59T foram expressados sobre CHO-K1 por transfecção transiente. Ligação de hCD27.15 (6B humanizado) e ligação de Fc-mCD70 ao CD27 e ao CD27 A59T foram medidas por citometria de fluxo. Embora Fc-mCD70 ligue-se a ambos CD27 e CD27 A59T, hCD27.15 liga-se apenas ao CD27.
[0057] A Figura 2 mostra que o anticorpo hCD27.15 não se liga ao CD27 de Macaca mulatta. HsCD27 e MmCD27 foram expressados sobre
43 / 500 CHO-K1 por transfecção transiente. Ligação de hCD27.15 (c-4 quimérico) ao HsCD27 e ao MmCD27 foi medida por citometria de fluxo.
[0058] A Figuras 3A-3B mostram um alinhamento das regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve de vários anticorpos anti-CD27 da invenção com as sequências VH e VL de linhagem germinativa: 131AVH6 (SEQ ID NO:10), 131AVH7 (SEQ ID NO:11), 131A parental VH (SEQ ID NO:7), 131AVH8 (SEQ ID NO:12), 131AVH9 (SEQ ID NO:13), VH1-102 (SEQ ID NO:64), VH1-146 ( SEQ ID NO:65); 131AVL6 (SEQ ID NO:15), 131AVL7 (SEQ ID NO:16), 131A parental VL (SEQ ID NO:8), 131AVL8 (SEQ ID NO:17), 131AVL9 (SEQ ID NO:18), VK1-O2 (SEQ ID NO:66), VK3-L6 ( SEQ ID NO:67).
[0059] A Figura 4 mostra a atividade antitumoral de 131AVH6VL6- huIgG1 em comparação com 1F5-huIgG1 em camundongos knock-in huCD27 com tumores MC38 conforme medida pelo volume de tumor e dias após o tratamento.
[0060] A Figura 5 mostra a atividade antitumoral de 131AVH6VL6- huIgG1 em combinação com anti-PD-1 em camundongos knock-in huCD27 com tumores MB49.
[0061] A Figuras 6A-6C. hCD27.131AVH6VL6-huIgG1 induz a ativação de NF-κB em células 293FT expressoras de CD27. Células renais embrionárias humanas contendo um constructo repórter de NF-κB-luciferase (células 293FT-NF-κB-luciferase) foram transientemente transfectadas com plasmídeos que codificam CD27 Humano WT, CD27 A59T ou CD27 de Macaco Rhesus. As células foram estimuladas durante 16-20 horas na presença ou na ausência de anticorpos anti-CD27 humano, então, foram ensaiadas para a ativação de NF-κB, como lido por atividade de luciferase. São mostrados os valores de Alteração em Vezes relativos às células não estimuladas para a atividade de luciferase após a estimulação de (A) hCD27 WT, (B) hCD27 A59T, ou (C) células HEK293FT expressoras de CD27 de
44 / 500 Macaco Rhesus com mAbs hCD27.131AVH6VHL6 huIgG1, 1F5 huIgG1, ou hCD27.15-4B IgG4. Os dados representam as medições em triplicata de 1 experimento (±DP). Os dados são representativos de 3-6 experimentos independentes.
[0062] As Figuras 7A e 7B. Variantes de humanização de hCD27.131A IgG1 e IgG4 induzem a ativação de NF-κB em células 293FT expressoras de CD27. Células renais embrionárias humanas contendo um constructo repórter de NF-κB-luciferase (células 293FT-NF-κB-luciferase) foram transientemente transfectadas com plasmídeo que codifica CD27 humano WT. As células foram estimuladas durante 16-20 horas na presença ou na ausência de anticorpos anti-CD27 humano, então, foram ensaiadas para a ativação de NF-κB, como lido por atividade de luciferase. São mostrados os valores de Alteração em Vezes relativos às células não estimuladas para a atividade de luciferase após a estimulação com anticorpos humanizados hCD27.131A em (A) IgG1 humana ou (B) frameworks de IgG4.
[0063] A Figura 8. Bioatividade de 131AVH6VL6-IgG1 em Culturas de TIL (Tumor Infiltrating Lymphocytes, Linfócitos Infiltrantes de Tumor) de Tumor Humano Primário. Tecidos de tumor humano (N=20, 16 NSCLC, 3 RCC, e 1H&N) obtidos de resseções cirúrgicas foram digeridos em uma suspensão de célula única usando colagenase de tipo I e DNase I. Células vivas enriquecidas contendo uma mistura de vários tipos de células tumorais foram tratadas com 0,1, 1, 10, ou 20µg/mL de 131AVH6VL6-hIgG1 na presença de 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3. Os tratamentos também incluem o isótopo de controle (IgG1 e IgG4, 20µg/mL) e 10µg/mL de anticorpo anti-PD-1 (pembrolizumabe). Sobrenadantes foram coletados para medição de interferon-gama (IFNγ) no Dia 6. São mostrados os teores médios de IFNγ e o erro padrão da média. Os valores de P para comparação entre os grupos de tratamento e os grupos com isótipo de controle foram determinados pelo teste-T bicaudal, paramétrico, emparelhado. IFNγ = interferon-gama;
45 / 500 IgG1 = imunoglobulina G, subclasse 1; IgG4 = imunoglobulina G, subclasse 4; EPM = erro padrão da média.
[0064] A Figura 9. Comparação da Bioatividade de 131AVH6VL6- IgG1 com hCD27.15-4BIgG4 e IF5-IgG1 em culturas de TIL de Tumor Humano Primário. Células tumorais humanas digeridas de 13 tumores (12 NSCLC e 1 câncer H&N) de 20 [sic] foram também testadas com hCD27.15- 4BIgG4 e IF5-IgG1 ao mesmo tempo. As células vivas enriquecidas contendo uma mistura de vários tipos de células foram tratadas com 0,1, 1, 10, ou 20µg/mL de 131AVH6VL6-hIgG1, hCD27.15-4BIgG4, e IF5-IgG1, incluindo o isótopo de controle (IgG1 e IgG4, 20µg/mL) e 10µg/mL de anticorpo anti-PD1 (pembrolizumabe). 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3 solúvel (BioLegend, clone OKT3) foram usados como a estimulação. Os sobrenadantes foram coletados para a medição de interferon-gama (IFNγ) no Dia 6. São mostrados os teores médios de IFNγ e o erro padrão da média. Os valores de P para comparação entre os grupos de tratamento e os grupos com isótipo de controle teste-T bicaudal, paramétrico, emparelhado. IFNγ = interferon-gama; IgG1 = imunoglobulina G, subclasse 1; IgG4 = imunoglobulina G, subclasse 4; EPM = erro padrão da média.
[0065] A Figura 10. Ligação de hCD27.131A de camundongo (IgG1 de camundongo), hCD27.15 humanizado (IgG4 humana, Clone 6B), 1A4 (Beckman Coulter IM2034, Clone 1A4CD27, IgG1 de camundongo), 9F4 (Sanquin PeliCluster CD27; Artigo de número M1455, Clone CLB-CD27/1, 9F4, IgG2a de camundongo) e 1F5IgG1 por citometria de fluxo para mutantes de alanina de hCD27 expressados sobre células CHO-K1. As variantes de hCD27 que foram testadas estão listadas. Os aminoácidos correspondem à sequência UniProt P26842-1. Os aminoácidos 1-20 constituem o peptídeo de sinal. A ligação é expressada como a média geométrica do sinal de FITC, relativa à ligação do anticorpo ao hCD27, que foi ajustada em 100%.
[0066] A Figura 11. Composição das estruturas de complexo
46 / 500 131AVH6VL6Fab-CD27 e de complexo M2177Fab-CD27 (Obmolova et al. Mol Immunol. 2017 Mar; 83:92-99, 2017): as coordenadas são mostradas como fita após a superposição das estruturas de antígeno; CD27 em linhas grossas pretas, e Fabs em linhas finas, pretas, cinzas claras para 131AVH6VL6Fab e M2177Fab, respectivamente. As coordenadas para o complexo M2177-CD27 são obtidas de PDB 5TLK usando as cadeias A, B e X para a cadeia leve de Fab, a cadeia pesada de Fab, e antígeno, respectivamente.
[0067] As Figuras 12A e 12B. Composição das estruturas de complexo 131AVH6VL6Fab-CD27 (A) e de complexo M2177Fab-CD27 (B), vista de perto: os modelos de entrada e a orientação do desenho são os mesmos que na Figura 11, mas a vista está ampliada sobre a interface de Fab- antígeno para melhor mostrar a comparação. As mesmas representação de fitas, convenções de cor e espessura são usadas como na Figura 11 (exceto a coestrutura de M2177-CD27 que é colorida em cinza claro), mas as cadeias laterais dos resíduos envolvidos nas interações polares são indicadas como bastões. Ligações de H e pontes salinas com um corte de distância 3,30Å são mostradas como linhas tracejadas, usando traços mais curtos para pontes salinas.
[0068] As Figuras 13A e 13B. Anticorpo anti-hCD27 clone hCD27.131A de camundongo não compete cruzadamente 1F5IgG1 pela ligação ao hCD27 em ELISAs baseados em célula. hCD27.131A de camundongo e hCD27.15 de camundongo foram testados para ligação competitiva com 1F5IgG1 ao hCD27. (A) Painel esquerdo: Configuração experimental. Painel direito: Dados de competição cruzada de uma diluição serial de 1F5IgG1 seguida por 1 μg/mL de hCD27.131A de camundongo, hCD27.15 de camundongo ou isótipo de controle IgG1 de camundongo. (B) Painel esquerdo: Configuração experimental. Painel direito: Dados de competição cruzada de uma diluição serial de hCD27.131A de camundongo,
47 / 500 hCD27.15 de camundongo ou isótipo de controle IgG1 de camundongo, seguida por 1 μg/mL de 1F5IgG1. Os pontos de dados com barras de erro representam a média de medições em duplicata com faixa.
[0069] Figura 14. Bioatividade de 131AVH6VL6-hIgG1 e de 1F5- hIgG1 em ensaio de coestimulação de célula-T CD8 primária.
DESCRIÇÃO DETALHADA Abreviações
[0070] Em toda a descrição detalhada e nos exemplos as seguintes abreviações serão usadas: ADCC Citotoxicidade celular dependente de anticorpo CDC Citotoxicidade dependente de complemento CDR Região determinante de complementaridade nas regiões variáveis de imunoglobulina, definida usando o sistema de numeração de Kabat CHO Ovário de hamster chinês ELISA Ensaio imunoabsorvente ligado à enzima FR Região framework de anticorpo: as regiões variáveis de imunoglobulina excluindo as regiões CDR. HRP Peroxidase de raiz-forte IFN Interferon CI50 Concentração resultando em inibição de 50% IgG Imunoglobulina G Kabat Um sistema de numeração e alinhamento de imunoglobulinas desenvolvido por Elvin A. Kabat ((1991) “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) mAb ou Mab ou Anticorpo monoclonal MAb SEB Enterotoxina B de Staphylococcus TCR Receptor de célula-T TT Toxoide do tétano Região V O segmento de cadeias de Ig que é variável em sequência entre anticorpos diferentes. Estende-se até o resíduo Kabat 107 na cadeia leve e 113 na cadeia pesada. VH Região variável de cadeia pesada de imunoglobulina VK Região variável de cadeia leve kappa de imunoglobulina Definições
[0071] De modo que a invenção possa ser mais facilmente entendida, determinados termos técnicos e científicos são especificamente definidos abaixo. A não ser que sejam especificamente definidos alhures neste documento, todos os outros termos técnicos e científicos aqui usados têm o significado comumente entendido por uma pessoa comumente versada na técnica à qual esta invenção pertence.
[0072] Como aqui usadas, incluindo as reivindicação em anexo, as
48 / 500 formas no singular de palavras como “um”, “uma”, “o”, e “a”, incluem as suas referências no plural correspondentes a não ser que o contexto dite claramente em contrário.
[0073] “Administração” e “tratamento”, como aplicados a um animal, um humano, um sujeito experimental, uma célula, um tecido, um órgão, ou um fluido biológico, referem-se ao contato de um agente diagnóstico, terapêutico, farmacêutico exógeno, ou de uma composição com um animal, um humano, um sujeito experimental, uma célula, um tecido, um órgão, ou um fluido biológico. O tratamento de uma célula abrange o contato de um reagente com a célula, e, também, o contato de um reagente com um fluido, sendo que o fluido está em contato com a célula. “Administração” e “tratamento” também significam tratamentos in vitro e ex vivo, por exemplo, de uma célula, por um composto ligante, diagnóstico, reagente, ou por outra célula.
[0074] “Tratar” ou “tratamento” significa administrar um agente terapêutico, como uma composição contendo qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da presente invenção, interna ou externamente a um sujeito ou paciente tendo um ou mais sintomas de doença, ou sendo suspeito em ter uma doença, para a qual o agente tem atividade terapêutica. Tipicamente, o agente é administrado em uma quantidade eficaz para aliviar um ou mais sintomas da doença no sujeito tratado ou na população tratada, quer pela indução da regressão de tal(ais) sintoma(s) quer pela inibição da progressão de tal(ais) sintoma(s) por qualquer grau clinicamente mensurável. A quantidade de um agente terapêutico que é eficaz para aliviar qualquer sintoma de doença específico pode variar de acordo com fatores como o estádio da doença, a idade, e o peso do paciente, e a capacidade do fármaco em provocar uma resposta desejada no sujeito. Se um sintoma da doença tem sido aliviado pode ser avaliado por qualquer medição clínica tipicamente usado por médicos ou outros provedores versados do
49 / 500 cuidado com a saúde para avaliar a severidade ou o status de progressão daquele sintoma. CD27
[0075] Em uma modalidade da invenção, a sequência de aminoácidos de CD27 humano compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19 ou da SEQ ID NO:20 (que é idêntica à SEQ ID NO:19 mas inclui um SNP – A59T). A frequência do alelo rs25680 (comumente chamado de A59T) tem uma média total, baseada na base de dados ExAC, de 19,78%.
[0076] Em uma modalidade da invenção, a sequência de aminoácidos de CD27 de macaco Cynomolgus, por exemplo, CD27 de Macaca fascicularis, ou CD27 de Macaca Mulatta (mmCD27) compreende a sequência de aminoácidos revelada em SEQ ID NO:21. Anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos
[0077] A presente invenção fornece anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam ao CD27 humano e usos de tais anticorpos ou fragmentos. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-CD27 são isolados.
[0078] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-CD27 ou os fragmentos de ligação ao antígeno da invenção ligam-se ao CD27 humano (SEQ ID NO:19 ou SEQ ID NO:20) com uma KD de cerca de 5-10 nM. Em uma modalidade, o anticorpo da invenção que se liga ao CD27 humano também reage cruzadamente com mmCD27. Como aqui usada, “reatividade cruzada” refere-se à capacidade de um anticorpo para reagir com uma proteína homóloga de outra espécie. Se um anticorpo liga-se ao CD27 humano ou ao mmCD27 pode ser determinado usando qualquer ensaio conhecido na técnica. Exemplos de ensaios conhecidos na técnica para determinar a afinidade de ligação incluem ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET).
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[0079] A presente invenção inclui anticorpos anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. Como aqui usado, o termo “anticorpo” refere-se a qualquer forma de anticorpo que apresenta a atividade biológica desejada. Portanto, é utilizado no sentido mais amplo e especificamente abrange, mas não se limita a, anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento completo compreendendo duas cadeias leves e duas cadeias pesadas), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), anticorpos humanizados, anticorpos completamente humanos, e anticorpos quiméricos.
[0080] A presente invenção inclui fragmentos de ligação ao antígeno anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. Como aqui usado, salvo indicação em contrário, “fragmento de anticorpo” ou “fragmento de ligação ao antígeno” refere-se aos fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos, isto é fragmentos de anticorpo que mantêm a capacidade para se ligarem especificamente ao antígeno ligado pelo anticorpo de comprimento completo, por exemplo fragmentos que mantêm uma ou mais regiões CDR. Exemplos de fragmentos de ligação ao antígeno incluem, mas não se limitam a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, e Fv; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia única, por exemplo, sc-Fv; anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo.
[0081] A presente invenção inclui fragmentos Fab anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. Uma “fragmento Fab” é compreendido de uma cadeia leve e o domínio CH1 e as regiões variáveis de uma cadeia pesada. A cadeia pesada de uma molécula de Fab não pode formar uma ligação dissulfeto com outra molécula de cadeia pesada. Um “fragmento Fab” pode ser o produto da clivagem de um anticorpo por papaína.
[0082] A presente invenção inclui anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que compreendem uma região Fc e métodos de uso dos mesmos. Uma região “Fc” contém dois fragmentos de
51 / 500 cadeia pesada compreendendo os domínios CH3 e CH2 de um anticorpo. Os dois fragmentos de cadeia pesada são mantidos juntos por duas ou mais ligações dissulfeto e por interações hidrofóbicas dos domínios CH3.
[0083] A presente invenção inclui fragmentos anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. Um “fragmento Fab'” contém uma cadeia leve e uma porção ou um fragmento de uma cadeia pesada que contém o domínio VH e o domínio C H1 e também a região entre os domínios CH1 e C H2, de modo que uma ligação dissulfeto intracadeia pode ser formado entre as duas cadeias pesadas dos dois fragmentos Fab' para formar uma molécula F(ab')2.
[0084] A presente invenção inclui fragmentos F(ab')2 anti-CD27e métodos de uso dos mesmos. Um “fragmento F(ab')2” contém duas cadeias leves e duas cadeias pesadas contendo uma porção da região constante entre os domínios CH1 e CH2, de modo que uma ligação dissulfeto intracadeia é formada entre as duas cadeias pesadas. Um fragmento F(ab')2 portanto é composto de dois fragmentos Fab' que são mantidos juntos por uma ligação dissulfeto entre as duas cadeias pesadas. Um fragmento “F(ab')2” pode ser um produto da clivagem de um anticorpo por pepsina.
[0085] A presente invenção inclui fragmentos Fv anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. A “região Fv” compreende as regiões variáveis de ambas as cadeias pesada e leve, mas não possui as regiões constantes.
[0086] A presente invenção inclui fragmentos scFv anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. o termo anticorpo “Fv de cadeia única” ou “scFv” refere-se aos fragmentos de anticorpo compreendendo os domínios VH e VL de um anticorpo, em que estes domínios estão presentes em uma única cadeia de polipeptídeo. Em geral, o polipeptídeo Fv compreende, adicionalmente, um linker polipeptídico entre os domínios VH e VL que permite que o scFv forme a estrutura desejada para a ligação ao antígeno. Para uma revisão de scFv, consulte Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF ANTICORPOS MONOCLONAIS, vol. 113, editores Rosenburg e Moore, Springer-
52 / 500 Verlag, New York, pp. 269-315. Consulte também, Publicação de Pedido de Patente Internacional nº WO 88/01649 e Patentes U.S. nºs 4.946.778 e
5.260.203.
[0087] A presente invenção inclui anticorpos bivalentes anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. Um “anticorpo bivalente” compreende dois sítios de ligação ao antígeno. Em alguns casos, os dois sítios de ligação têm as mesmas especificidades antigênicas. Entretanto, os anticorpos bivalentes podem ser biespecíficos (veja abaixo).
[0088] A presente invenção inclui diacorpos anti-CD27 e métodos de uso dos mesmos. Como aqui usado, o termo “diacorpos” refere-se aos fragmentos pequenos de anticorpo com dois sítios de ligação ao antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) na mesma cadeia de polipeptídeo (VH-VL ou VL-VH). Pelo uso de um linker que é também curto para permitir o pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a parearem com os domínios complementares de outra cadeia e criarem dois sítios de ligação ao antígeno. Diacorpos são descritos mais detalhadamente em, por exemplo, EP 404.097; WO 93/11161; e Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448. Para uma revisão de variantes de anticorpo modificadas consulte, em geral, Holliger e Hudson (2005) Nat. Biotechnol. 23:1126-1136.
[0089] Tipicamente, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção que é modificado em alguma maneira mantém pelo menos 10% de sua atividade de ligação (quando comparado com o anticorpo parental) quando aquela atividade é expressada em uma base molar. Preferencialmente, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção mantém pelo menos 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 100% ou mais da afinidade de ligação ao CD27 em comparação com o anticorpo parental. Também é pretendido que um anticorpo ou um fragmento de ligação
53 / 500 ao antígeno da invenção possa incluir substituições conservativas ou não conservativas de aminoácidos (chamados de “variantes conservativas” ou “variantes com função conservada” do anticorpo) que não alteram substancialmente sua atividade biológica.
[0090] A presente invenção inclui anticorpos anti-CD27 isolados e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos isolados e métodos de uso dos mesmos. Anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos “isolados” estão pelo menos parcialmente isentos de outras moléculas biológicas das células ou culturas de células nas quais eles são produzidos. Tais moléculas biológicas incluem ácidos nucleicos, proteínas, lipídios, carboidratos, ou outro material como restos celulares e meio de crescimento. Um anticorpo isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno isolado pode estar adicionalmente pelo menos parcialmente isento de componentes do sistema de expressão como moléculas biológicas de uma célula hospedeira ou do meio de crescimento da mesma. Em geral, o termo “isolado” não é pretendido para se referir a uma ausência completa de tais moléculas biológicas ou a uma ausência de água, agentes tamponantes, ou sais ou componentes de uma formulação farmacêutica que inclui os anticorpos ou fragmentos.
[0091] A presente invenção inclui anticorpos quiméricos anti-CD27 (por exemplo, domínio constante humano/domínio variável de camundongo) e métodos de uso dos mesmos. Como aqui usado, um “anticorpo quimérico” é um anticorpo tendo o domínio variável de um primeiro anticorpo e o domínio constante de um segundo anticorpo, sendo que os primeiro e segundo anticorpos são de espécies diferentes. (Patente U.S. nº 4.816.567; e Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855). Tipicamente, os domínios variáveis são obtidos de um anticorpo de um animal experimental (o “anticorpo parental”), como um roedor, e as sequências de domínio constante são obtidas de anticorpos humanos, de modo que é menos provável que o
54 / 500 anticorpo quimérico resultante produza uma resposta imune adversa em um sujeito humano do que o anticorpo parental (por exemplo, de camundongo).
[0092] A presente invenção inclui anticorpos humanizados anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos (por exemplo, anticorpos de rato ou de camundongo que têm sido humanizados) e métodos de uso dos mesmos. A invenção inclui qualquer vírus humanizada do anticorpo 131A. Como aqui usado “anticorpo 131A” e “hCD27.131A” são utilizados intercambiavelmente para se referirem a um anticorpo compreendendo a região VH da SEQ ID NO:7 e a região VL da SEQ ID NO:8. Como aqui usado, o termo “anticorpo humanizado” refere-se às formas de anticorpos que contêm sequências de ambos anticorpos humanos e não humanos (por exemplo, de camundongo ou de rato). Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente pelo menos um, e, tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana, e todas ou substancialmente todas as regiões framework (FR) são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado pode opcionalmente compreender pelo menos uma porção de uma região constante (Fc) de imunoglobulina humana. Para mais detalhes sobre anticorpos humanizados, consulte, por exemplo, Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992); e Clark, Immunol. Today 21: 397-402 (2000).
[0093] Em geral, a unidade estrutural básica do anticorpo compreende um tetrâmero. Cada tetrâmero inclui dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia “leve” (cerca de 25 kDa) e uma cadeia “pesada” (cerca de 50-70 kDa). A porção amino-terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis pelo reconhecimento do antígeno. A porção carboxi-terminal da cadeia pesada pode definir uma região constante
55 / 500 principalmente responsável pela função efetora. Tipicamente, as cadeia leves humanas são classificadas como cadeias leves kappa e lambda. Ademais, as cadeias pesadas humanas são tipicamente classificadas como mu, delta, gama, alfa, ou epsílon, e definem o isótipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA, e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são unidas por uma região “J” de cerca de 12 ou mais aminoácidos com a cadeia pesada também incluindo um região “D” de cerca de 10 mais aminoácidos. Consulte, em geral, “Fundamental Immunology”, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989).
[0094] As regiões variáveis de cada par de cadeia leve/cadeia pesada formam o sítio de ligação do anticorpo. Portanto, em geral, um anticorpo intacto tem dois sítios de ligação. Exceto em anticorpos bifuncionais ou biespecíficos, os dois sítios de ligação são, em geral, os mesmos.
[0095] Tipicamente, os domínios variáveis de ambas as cadeias pesadas e leves compreendem três regiões hipervariáveis, também chamadas de regiões determinantes de complementaridade (CDRs), localizadas dentro das regiões framework (FR) relativamente conservadas. As CDRs são habitualmente alinhadas pelas regiões framework, permitindo a ligação a um epítopo específico. Em geral, do N-terminal para o C-terminal, os domínios variáveis de ambas cadeias leves e pesadas compreendem FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição de aminoácidos a cada domínio é, em geral, de acordo com as definições de “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed.; NIH Publ. nº 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917 ou Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883.
[0096] Como aqui usado, o termo resíduos “framework” ou “FR” refere-se àqueles resíduos de domínio variável diferentes dos resíduos de
56 / 500 região hipervariável aqui definidos como resíduos CDR.
[0097] Como aqui usado, o termo “região hipervariável” refere-se aos resíduos de aminoácidos de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que são responsáveis pela ligação ao antígeno. A região hipervariável compreende resíduos de aminoácidos de uma CDR (isto é CDRL1, CDRL2 e CDRL3 no domínio variável de cadeia leve e CDRH1, CDRH2 e CDRH3 no domínio variável de cadeia pesada). Consulte Kabat et al. (1991) “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (que define as regiões CDR de um anticorpo pela sequência); consulte, também, Chothia e Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 (que define as regiões CDR de um anticorpo pela estrutura).
[0098] “Molécula de ácido nucleico isolada” ou “polinucleotídeo isolado” significa um DNA ou RNA de origem genômica, mRNA, cDNA, ou de origem sintética ou alguma combinação dos mesmos, que não está associada(o) com a totalidade ou uma porção de um polinucleotídeo em que o o polinucleotídeo isolado é encontrado na natureza, ou está ligada(o) a um polinucleotídeo ao qual não está ligada(o) na natureza. Para os propósitos desta revelação, deve ser entendido que “uma molécula de ácido nucleico compreendendo” uma sequência de nucleotídeos específica não abrange cromossomos intactos. Moléculas de ácido nucleico isoladas “compreendendo” sequências de ácidos nucleicos específicas podem incluir, adicionalmente às sequências específicas, sequências que codificam até dez ou mesmo até vinte ou mais outras proteínas ou porções de fragmentos das mesmas, ou podem incluir sequências regulatórias funcionalmente ligadas que controlam a região codificadora das sequências de ácidos nucleicos citadas, e/ou podem incluir sequências de vetores.
[0099] A frase “sequências de controle” refere-se às sequências de DNA necessárias para a expressão de uma sequência codificadora,
57 / 500 funcionalmente ligada, em um organismo hospedeiro específico. As sequências de controle que são adequadas para procariotos, por exemplo, incluem um promotor, opcionalmente uma sequência de operador, e um sítio de ligação ao ribossomo. É sabido que células eucarióticas usam promotores, sinais de poliadenilação, e intensificadores.
[00100] Um ácido nucleico ou polinucleotídeo está “funcionalmente ligado” quando está posicionado em uma relação funcional com outra sequência de ácido nucleico. Por exemplo, DNA para uma pré-sequência ou uma sequência líder secretória está funcionalmente ligado ao DNA para um polipeptídeo se ele é expressado como uma pré-proteína que participa na secreção do polipeptídeo; um promotor ou intensificador está funcionalmente ligado a uma sequência codificadora se ele afeta a transcrição da sequência; ou um sítio de ligação ao ribossomo está funcionalmente ligado a uma sequência codificadora se ele está posicionado de modo a facilitar a tradução. Em geral, mas nem sempre, “funcionalmente ligado” significa que as sequências de DNA sendo ligadas são contíguas, e, no caso de uma sequência líder secretória, são contíguas e em fase de leitura. Entretanto, os intensificadores não têm que ser contíguos. A conexão (linking) é realizada pela ligação em sítios de restrição convenientes. Se tais sítios não existem, conectores (linkers) ou adaptadores oligonucleotídicos sintéticos são usados de acordo com a prática convencional.
[00101] Como aqui usadas, as expressões “célula”, “linhagem celular”, e “cultura celular” são utilizadas intercambiavelmente e todas tais designações incluem progênie. Portanto, as palavras “transformantes” e “células transformadas” incluem a célula individual primária e culturas derivadas da mesma sem considerar o número de transferências. Também é entendido que nem toda a progênie terá teor de DNA precisamente idêntico, devido às mutações deliberadas ou acidentais. A progênie que tem a mesma função ou atividade biológica como verificada na célula originalmente
58 / 500 transformada é incluída. Onde designações diferentes são pretendidas, será evidente a partir do contexto.
[00102] Como aqui usada, “sequência de linhagem germinativa” refere-se a uma sequência das sequências de DNA de imunoglobulinas não arranjadas. Qualquer fonte adequada de sequências de imunoglobulinas não rearranjadas pode ser usada. As sequências de linhagem germinativa humanas podem ser obtidas, por exemplo, na base de dados de linhagens germinativas JOINSOLVER no site da Web do “National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases of the United States National Institutes of Health”. As sequências de linhagens germinativas de camundongo podem ser obtidas, por exemplo, como descrito em Giudicelli et al. (2005) Nucleic Acids Res. 33:D256-D261. Propriedades físicas e funcionais de anticorpos anti-CD27 exemplificadores
[00103] A presente invenção fornece anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos tendo características estruturais e funcionais específicas, e métodos de uso dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos no tratamento ou na prevenção de doença (por exemplo, câncer ou doença infecciosa).
[00104] Um “anticorpo anti-CD27 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção” inclui: qualquer anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que é aqui discutido (por exemplo, hCD27.131A ou versões humanizadas do mesmo reveladas na Tabela 12) ou uma variante do mesmo (por exemplo, variante de sequência ou variante funcional); qualquer anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreendendo qualquer uma ou mais das CDRs apresentadas na Tabela 12.
[00105] Como mencionado acima, anticorpos e fragmentos que se ligam ao mesmo epítopo como qualquer um dos anticorpos anti-CD27 ou dos fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da presente invenção também
59 / 500 formam parte da presente invenção.
Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo CD27 humano como um anticorpo compreendendo a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:10 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:15. Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao mesmo epítopo de CD27 humano como um anticorpo compreendendo a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:7 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:8. Há vários métodos disponíveis para mapeamento de epítopos de anticorpo em antígenos-alvo, incluindo: H/D-Ex Mass Spec (HDX-MS) (troca de hidrogênio/deutério por espectrometria de massas), cristalografia de raios-X, análise Pepscan, varredura por alaninas, footprinting com radical hidroxila e mutagênese sítio-direcionada.
Por exemplo, HDX (Hydrogen Deuterium Exchange, Troca de Hidrogênio/Deutério) acoplada com proteólise e espectrometria de massas pode ser usada para determinar o epítopo de um anticorpo sobre um antígeno específico Y.
HDX-MS baseia-se nas medição e comparação acuradas do grau de incorporação de deutério por um antígeno por si mesmo quando incubado em D2O e na presença de seu anticorpo em vários intervalos de tempo.
O deutério é trocado por hidrogênio na cadeia principal amida das proteínas em áreas expostas enquanto que as regiões do antígeno ligadas ao anticorpo serão protegidas e mostrarão menos ou nenhuma troca após a análise por LC-MS/MS de fragmentos proteolíticos.
Em uma modalidade, o epítopo é determinado pelas resolução da estrutura de cristal por raios-X de um complexo entre CD27 ou fragmento do mesmo e um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento do mesmo e identificação de um ou mais resíduos de CD27 dentro de 4Å do anticorpo anti-resíduos-de-CD27. Em outra modalidade, o epítopo inclui por exemplo, resíduos de CD27 que têm contato por forças de van der Waals, interação polar, ponte de sal ou ligação de hidrogênio com o anticorpo anti-resíduos-de-CD27. Em outra modalidade, o epítopo é determinado por mutagênese (por exemplo varredura por alaninas)
60 / 500 de resíduos de CD27 e análise da perda de ligação ao anticorpo anti-CD27 como resultado da mutagênese.
[00106] A invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que, quando ligado ao CD27 humano, liga-se pelo menos a um resíduo selecionado a partir do grupo que consiste em Leu18, Asp34, Gln35, e Lys38 da SEQ ID NO:19. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se pelo menos a um, dois, três ou quatro resíduos selecionados a partir do grupo que consiste em Leu18, Asp34, Gln35, e Lys38 da SEQ ID NO:19. A invenção também fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que, quando ligado ao CD27 humano, liga-se pelo menos a um resíduo selecionado a partir do grupo que consiste em Gln35 e Lys38 da SEQ ID NO:19. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se pelo menos às Gln35 e Lys38 da SEQ ID NO:19.
[00107] Em outra modalidade das modalidades precedentes, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno liga-se, adicionalmente, a um ou mais resíduos (um, dois, três, quatro, cinco ou seis resíduos) selecionados a partir do grupo que consiste em Pro8, Glu9, His11, Lys17, His36, e Arg37 da SEQ ID NO:19. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno liga-se, adicionalmente, a um ou mais resíduos (um, dois, três, ou quatro resíduos) selecionados a partir do grupo que consiste em em Glu9, Lys17, His36, e Arg37 da SEQ ID NO:19. Em outro aspecto da invenção, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga- se aos resíduos Pro8, Glu9, His11, Lys17, Leu18, Asp34, Gln35, His36, Arg37 e Lys38 da SEQ ID NO:19. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno liga-se aos resíduos Glu9, Lys17, Leu18, Asp34, Gln35, His36, Arg37 e Lys38 da SEQ ID NO:19.
[00108] Em uma modalidade das modalidades precedentes, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo opcionalmente tem pelo
61 / 500 menos uma das seguintes características: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano.
Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente
62 / 500 transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[00109] Exemplos das cadeias de imunoglobulina de anticorpos anti- CD27 da invenção e, também, de suas CDRs, incluem, mas não se limitam àquelas reveladas na Tabela 12 (SEQ ID NOs:7-18 e 32-40). A presente invenção inclui qualquer polipeptídeo compreendendo ou consistindo nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs:7-18 e 32-40, and 44-45, e nucleotídeos recombinantes que codificam tais polipeptídeos.
[00110] O escopo da presente invenção inclui anticorpos anti-CD27 isolados e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos isolados (por exemplo, anticorpos humanizados), compreendendo uma variante de uma cadeia de imunoglobulina aqui apresentada, por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NOs:7-18, 32-40, e 44-45; em que a variante apresenta uma ou mais das seguintes propriedades: liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano;
63 / 500 aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD-27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano. Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF- κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3. Em uma modalidade, a variante compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID NOs:7-18, 32-40 e 44-45.
[00111] Em outras modalidades, a invenção fornece anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam ao CD27 humano (por exemplo, anticorpos humanizados) e têm domínios VL e domínios VH com pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%
64 / 500 de identidade de sequência com pelo menos uma das SEQ ID NOs:7-18 e 32- 40; em que uma variante apresenta as propriedades e ligação desejadas, por exemplo, liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 200 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula, liga-se ao CD27 A59T humano com uma CE50 de menos que 150 pM, ou de menos que 250 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM, ou de menos que 150 pM de acordo com o ensaio no formato ELISA baseado em célula; liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET); reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus; bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; aumenta a inativação de célula-T; estimula a produção de IL-2 e de IFNγ por célula-T antígeno-específica; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD- 27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células- T CD4+ ou CD8+; aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano.
Em uma modalidade, as células expressoras de CD27 humanas, de CD27A59T humano, ou de CD27 de macaco Rhesus são células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de
65 / 500 NF-κB-luciferase com plasmídeos codificadores de CD27 transientemente transfectados. Em uma modalidade, a ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+, e há uma média de aumento de cerca de 1,5-2 vezes em ativação de célula-T CD8+. Em outra modalidade, o aumento na produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 é de pelo menos 1,5 vezes a 20µg/mL de anticorpo anti-CD27, e a 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3.
[00112] Em outras modalidades, a invenção fornece anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam ao CD27 humano (por exemplo, anticorpos humanizados) e têm domínios VL e domínios VH com pelo menos 95% de identidade de sequência com qualquer um dos domínios VL das SEQ ID NOs:8, 14-18, 33, 35 e 40, e qualquer um dos domínios VH das SEQ ID NOs:7, 9-13, 32, 34, e 39. Em outras modalidades, a invenção fornece anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam ao CD27 humano (por exemplo, anticorpos humanizados) e têm domínios VL e domínios VH com qualquer um dos domínios VL das SEQ ID NOs:8, 14-18, 33, 35 e 40, e qualquer um dos domínios VH das SEQ ID NOs:7, 9-13, 32, 34, e 39. Em outras modalidades, a invenção fornece anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam ao CD27 humano (por exemplo, anticorpos humanizados) e têm domínios VL e domínios VH com pelo menos 99% de identidade de sequência com qualquer um dos domínios VL das SEQ ID NOs:8, 14-18, 33, 35 e 40, e qualquer um dos domínios VH das SEQ ID NOs:7, 9-13, 32, 34, e 39.
[00113] “Variantes conservativamente modificadas” ou “variantes conservativas” refere-se às substituições de aminoácidos em uma proteína por outros aminoácidos tendo característica similares (por exemplo carga, tamanho da cadeia lateral, hidrofobicidade/hidrofilicidade, rigidez e conformação da cadeia principal, etc.), de modo que as alterações podem ser
66 / 500 frequentemente realizadas sem alteração da atividade biológica da proteína. Aquelas pessoas versadas na técnica reconhecem que, em geral, substituições de aminoácido único em regiões não essenciais de um polipeptídeo não alteram substancialmente a atividade biológica (consulte, por exemplo, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)). Além disso, as substituições de aminoácidos estrutural e ou funcionalmente similares são menos propensas a interromperem a atividade biológica. Substituições conservativas exemplificadoras são apresentas na Tabela 1. TABELA 1: Substituições conservativas de aminoácidos exemplificadoras Resíduo original Substituição conservativa Ala (A) Gly; Ser Arg (R) Lys; His Asn (N) Gln; His Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala His (H) Asn; Gln Ile (I) Leu; Val Leu (L) Ile; Val Lys (K) Arg; His Met (M) Leu; Ile; Tyr Phe (F) Tyr; Met; Leu Pro (P) Ala Ser (S) Thr Thr (T) Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe Val (V) Ile; Leu
[00114] As variantes conservativas em função dos anticorpos da invenção são também consideradas pela presente invenção. “Variantes conservativas em função”, como aqui usadas, referem-se aos anticorpos ou fragmentos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos têm sido alterados sem alteração de uma propriedade desejada, como uma afinidade e/ou especificidade antigênica. Tais variantes incluem, mas não se limitam a, substituição de um aminoácido por um aminoácido tendo propriedades similares, como as substituições conservativas de aminoácido da Tabela 1. Também são fornecidos polipeptídeos isolados compreendendo os domínios
67 / 500 VL dos anticorpos anti-CD27 da invenção (por exemplo, SEQ ID NOs:8, 14- 18, 33, 35 e 40), e polipeptídeos isolados compreendendo os domínios VH dos anticorpos anti-CD27 da invenção (por exemplo, SEQ ID NOs:7, 9-13, 32, 34, e 39) tendo até 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais substituições de aminoácido.
[00115] Em outra modalidade, é fornecido um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 e tem domínios VL e domínios VH com pelo menos 99% 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80% ou 75% de identidade de sequência com um ou mais dos domínios VL ou domínios VH aqui descritos, e apresenta ligação específica ao CD27. Em outra modalidade the anticorpo ligante ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção compreende domínios VL e domínios VH (com e sem sequência de sinalização) tendo até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais substituições de aminoácido, e apresenta ligação específica ao CD27. Polinucleotídeos e polipeptídeos
[00116] A presente invenção compreende, adicionalmente, polinucleotídeos que codificam qualquer um dos polipeptídeos ou qualquer uma das cadeias de imunoglobulina de anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da invenção. Por exemplo, a presente invenção inclui os polinucleotídeos que codificam os aminoácidos descritos qualquer uma das SEQ ID NOs:1-18, 32-40, e 44-45. Em outra modalidade, a invenção fornece um ácido nucleico isolado compreendendo a SEQ ID NO:46 ou a SEQ ID NO:47, ou ambas.
[00117] Em uma modalidade, é fornecido um polinucleotídeo isolado, por exemplo DNA, que codifica as cadeias de polipeptídeo dos anticorpos isolados ou dos fragmentos de ligação ao antígeno isolados aqui apresentados. Em uma modalidade, o polinucleotídeo isolado codifica um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo pelo menos um
68 / 500 domínio de um domínio variável de cadeia leve (VL) de imunoglobulina madura de acordo com a invenção e/ou pelo menos um domínio variável de cadeia pesada (VH) de imunoglobulina madura de acordo com a invenção. Em algumas modalidades o polinucleotídeo isolado codifica ambas uma cadeia leve e uma cadeia pesada por uma única molécula de polinucleotídeo, e em outras modalidades as cadeias leve e pesada são codificadas por moléculas de polinucleotídeo separadas. Em outra modalidade os polinucleotídeos codificam, adicionalmente, uma sequência de sinalização.
[00118] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica um domínio VH ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo CDR-H1 (SEQ ID NO:1), CDR-H2 (SEQ ID NO:2) e CDR-H3 (SEQ ID NO:3).
[00119] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica um domínio VL ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo CDR-L1 (SEQ ID NO:4), CDR-L2 (SEQ ID NO:5) e CDR-L3 (SEQ ID NO:6).
[00120] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica o domínio VH da SEQ ID NO:7.
[00121] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica o domínio VL da SEQ ID NO:8.
[00122] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica o domínio VH de qualquer uma das SEQ ID NOs:10-13.
[00123] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica o domínio VH da SEQ ID NO:10.
[00124] Em uma modalidade, a invenção compreende um polinucleotídeo isolado que codifica o domínio VL de qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18.
[00125] Em uma modalidade, a invenção compreende um
69 / 500 polinucleotídeo isolado que codifica o domínio VL da SEQ ID NO:15.
[00126] Esta presente invenção também fornece vetores, por exemplo, vetores de expressão, como plasmídeos, compreendendo os polinucleotídeo isolados da invenção, em que o polinucleotídeo está funcionalmente ligado às sequências de controle que são reconhecidas por uma célula hospedeira quando a célula hospedeira é transfectada com o vetor. Também são fornecidas células hospedeiras compreendendo a vector da presente invenção e métodos para produção do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de polipeptídeo aqui revelado compreendendo cultivar uma célula hospedeira hospedando um vetor de expressão ou um ácido nucleico que codifica as cadeias de imunoglobulina do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo em meio de cultura, e isolar o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da célula hospedeira ou do meio de cultura.
[00127] Também são incluídos na presente invenção polipeptídeos, por exemplo, polipeptídeos de imunoglobulina, compreendendo sequências de aminoácidos que são pelo menos cerca de 75% idênticas, 80% idênticas, mais preferencialmente pelo menos cerca de 90% idênticas e com a máxima preferência pelo menos cerca de 95% idênticas (por exemplo, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) às sequências de aminoácidos dos anticorpos aqui fornecidos quando a comparação é realizada por um algoritmo BLAST em que os parâmetros do algoritmo são selecionados para fornecerem a coincidência mais elevada entre as respectivas sequências ao longo do comprimento inteiro das respectivas sequências de referência (por exemplo limiar previsto: 10; tamanho de palavra: 3; coincidências máximas em uma faixa de consulta: 0; matriz BLOSUM 62; custos de lacunas: existência 11, extensão 1; ajuste de matriz composicional condicional de escores).
[00128] A identidade de sequência refere-se ao grau no qual os aminoácidos de dois polipeptídeos são os mesmos em posições equivalentes
70 / 500 quando as duas sequências são otimamente alinhadas.
[00129] As seguintes referências referem-se aos algoritmos BLAST com frequência usados para análise de sequências: BLAST ALGORITHMS: Altschul et al. (2005) FEBS J. 272(20): 5101-5109; Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3:266-272; Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7:649-656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17:149-163; Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67- 70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., “A model of evolutionary change in proteins.” em Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., “Matrices for detecting distant relationships.” em Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3.” M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3:66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22:2022- 2039; e Altschul, S.F. “Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments.” em Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York Afinidade de ligação
[00130] À guisa de exemplo, e sem limitação, os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno aqui revelados podem ligar-se ao CD27 humano ou ao CD27A59T (SEQ ID NO:19 ou SEQ ID NO:20) com um valor de KD bivalente de 10 x 10-9 M ou menor conforme determinado por
71 / 500 ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET) conforme medido com uma proteína de fusão CD27-humano-Fc ou uma proteína de fusão CD27A59T- humano-Fc. Em uma modalidade, os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno aqui revelados podem ligar-se ao CD27 humano ou ao CD27A59T com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 x 10-9 M conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície (por exemplo, BIACORE) ou uma técnica similar (por exemplo KinExa ou OCTET) conforme medido com uma proteína de fusão CD27-humano-Fc ou uma proteína de fusão CD27A59T-humano-Fc. Ativação de célula imune
[00131] Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção aumentam a atividade de uma célula imune. O aumento da atividade de uma célula imune pode ser detectado usando qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, o aumento em atividade de uma célula imune pode ser detectado pela medição da proliferação da célula imune. Por exemplo, um aumento em atividade de uma célula-T pode ser detectado pela medição da proliferação da célula-T ou de eventos de transdução de sinais como fosforilação da tirosina de receptores imunes ou de cinases a jusante que transmitem sinais para reguladores transcricionais. Em outras modalidades, o aumento em atividade de uma célula imune pode ser detectado pela medição de função citotóxica de célula CTL ou NK sobre células-alvo específicas ou respostas à citocina IFNγ, que estão associadas com a estimulação de imunidade antitumoral. Em ainda outra modalidade, o aumento em atividade de uma célula imune pode ser detectado pela medição da ativação da célula-T ex vivo em uma amostra derivada do sujeito. Em uma modalidade, o aumento em atividade da célula-T é determinado por: (i) medição de produção induzida por SEB (Staphylococcus Enterotoxin B, Enterotoxina B de Staphylococcus) de uma ou mais citocinas
72 / 500 inflamatórias selecionadas a partir do grupo que consiste em: IL-2, TNFα, IL- 17, IFNγ, IL-1β, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 e IL-13; ou (ii) medição de reações de linfócitos mistos ou estimulação direta por mAb anti- CD3 de sinalização de TCR para induzir a produção de uma citocina selecionada a partir do grupo que consiste em: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, IL- 1β, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 e IL-13. Em determinadas modalidades, o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção estimulará a produção por célula-T antígeno- específica de IL-2 e/ou de IFNγ em pelo menos 1,5 vezes.
[00132] Em algumas modalidades, a capacidade dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção para aumentar a atividade de uma célula imune pode ser detectada por suprarregulação de CD25 e CD69 por citometria de fluxo. Capacidade de anticorpos anti-hCD27 para bloquearem a ligação ao hCD70
[00133] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-CD27 ou os fragmentos de ligação ao antígeno da invenção são capazes de bloquear a ligação de CD27 humano ao CD70 humano. A capacidade para bloquear a ligação de CD27 humano ao CD70 humano pode ser determinada usando qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, a capacidade dos anticorpos para bloquear a ligação de CD27 humano ao CD70 humano é determinada usando um ensaio ELISA. Métodos de preparação de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos
[00134] Portanto, a presente invenção inclui métodos para preparação de um anticorpo anti-CD27 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção compreendendo cultivar uma célula de hibridoma que expressa o anticorpo ou o fragmento sob condições favoráveis para tal expressão e, opcionalmente, isolar o anticorpo ou o fragmento do
73 / 500 hibridoma e/ou do meio de crescimento (por exemplo meio de cultura celular).
[00135] Os anticorpos anti-CD27 aqui revelados podem também ser produzidos recombinantemente (por exemplo, em um sistema de expressão T7 de E. coli, um sistema de expressão de célula de mamífero ou um sistema de expressão de eucarioto inferior). Nesta modalidade, ácidos nucleicos que codificam as moléculas de imunoglobulina anticorpo da invenção (por exemplo, VH ou VL) podem ser inseridas em um plasmídeo à base de pET e expressados no sistema de expressão T7 de E. coli. Por exemplo, a presente invenção inclui métodos para expressão de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou de cadeia de imunoglobulina do mesmo em uma célula hospedeira (por exemplo, célula hospedeira bacteriana como E.coli como BL21 ou BL21DE3) compreendendo expressar T7-RNA- polimerase na célula que também inclui um polinucleotídeo que codifica uma cadeia de imunoglobulina que está funcionalmente ligada a um promotor T7. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, uma célula hospedeira bacteriana, como uma E. coli, inclui um polinucleotídeo que codifica o gene T7-RNA-polimerase funcionalmente ligado a um promotor lac e a expressão da polimerase e da cadeia é induzida pela incubação da célula hospedeira com IPTG (isopropil-beta-D-tiogalactopiranosídeo).
[00136] Há vários métodos pelos quais produzem-se anticorpos recombinantes que são conhecidos na técnica. Um exemplo de um método para produção recombinante de anticorpos é revelado na Patente U.S. nº
4.816.567.
[00137] Transformação pode ser por qualquer método conhecido para introdução de polinucleotídeos em uma célula hospedeira. Os métodos para introdução de polinucleotídeos heterólogos em células de mamífero são bem conhecidos na técnica e incluem transfecção mediada por dextrana, precipitação por fosfato de cálcio, transfecção mediada por polibreno, fusão
74 / 500 protoplástica, eletroporação, encapsulação do(s) polinucleotídeo(s) em lipossomas, injeção biolística e microinjeção direta do DNA para dentro de núcleos. Além disso, as moléculas de ácido nucleico podem ser introduzidas em células de mamífero por vetores virais. Métodos para transformação de células são bem conhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, as Patentes U.S. nºs 4.399.216; 4.912.040; 4.740.461 e 4.959.455.
[00138] Portanto, a presente invenção inclui métodos recombinantes para preparação de um anticorpo anti-CD27 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção, ou de uma cadeia de imunoglobulina do mesmo, compreendendo introduzir um polinucleotídeo que codifica uma ou mais cadeias de imunoglobulina do anticorpo ou do fragmento (por exemplo, cadeia pesada e/ou cadeia leve de imunoglobulina); cultivar a célula (por exemplo, CHO ou Pichia ou Pichia pastoris) sob condição favorável para tal expressão, e isolar o anticorpo ou o fragmento ou a cadeia da célula hospedeira e/ou do meio no qual a célula hospedeira é crescida.
[00139] Anticorpos anti-CD27 podem também ser sintetizados por qualquer um dos métodos apresentados na Patente U.S. nº 6.331.415.
[00140] Células hospedeiras eucarióticas e procarióticas, incluindo células de mamífero como células hospedeiras para expressão dos anticorpos ou fragmentos ou das cadeias de imunoglobulina aqui revelados são bem conhecidos na técnica e incluem muitas linhagens de células imortalizadas disponíveis junto à “American Type Culture Collection (ATCC)”. Estas incluem, inter alia, células de ovário de hamster chinês (CHO, Chinese Hamster Ovary), células NSO, células SP2, células HeLa, células renais de filhote de hamster (BHK, Baby Hamster Kidney), células renais de macaco (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (por exemplo, Hep G2), células A549, células 3T3, células HEK-293 e numerosas outras linhagens celulares. Células hospedeiras de mamífero incluem células de humano, de
75 / 500 camundongo, de rato, de cão, de macaco, de porco, de cabra, de bovino, de cavalo e de hamster. As linhagens celulares de preferência específica são selecionadas mediante a determinação de quais linhagens celulares têm os níveis de expressão mais altos. Outras linhagens celulares que podem ser usadas são linhagens celulares de inseto, como células Sf9, célula de anfíbio, células bacterinas, células de planta e células fúngicas. As células fúngicas incluem células de leveduras e de fungos filamentosos, por exemplo Pichia pastoris, Pichia finlandica, Pichia trehalophila, Pichia koclamae, Pichia membranaefaciens, Pichia minuta (Ogataea minuta, Pichia lindneri), Pichia opuntiae, Pichia thermotolerans, Pichia salictaria, Pichia guercuum, Pichia pijperi, Pichia stiptis, Pichia methanolica, Pichia sp., Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, Kluyveromyces sp., Kluyveromyces lactis, Candida albicans, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, Fusarium sp., Fusarium gramineum, Fusarium venenatum, Physcomitrella patens e Neurospora crassa. Pichia sp., qualquer Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, qualquer Kluyveromyces sp., Candida albicans, qualquer Aspergillus sp., Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, qualquer Fusarium sp., Yarrowia lipolytica, e Neurospora crassa. Quando vetores de expressão recombinantes, que codificam a cadeia pesada ou a porção de ligação ao antígeno da mesma ou o fragmento de ligação ao antígeno da mesma, a cadeia leve e/ou o fragmento de ligação ao antígeno da mesma, são introduzidos em células hospedeiras de mamífero, os anticorpos são produzidos pela cultura das células hospedeiras durante um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo ou fragmento ou da cadeia nas células hospedeiras ou a secreção do anticorpo ou fragmento ou da cadeia para dentro do meio de cultura no qual as células hospedeiras são crescidas.
[00141] Os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos
76 / 500 mesmos e as cadeias de imunoglobulina podem ser recuperados do meio de cultura usando métodos de purificação de proteína padrão. Ademais, a expressão de anticorpos e de fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos e de cadeias de imunoglobulina da invenção (ou outras porções dos mesmos) das linhagens celulares de produção pode ser intensificada usando numerosas técnicas conhecidas. Por exemplo, o sistema de expressão de gene glutamina- sintetase (o sistema GS) é uma abordagem comum para intensificar a expressão sob determinadas condições. O sistema GS é discutido no todo ou em parte em conexão com as Patentes Europeias nºs 0.216.846, 0.256.055, e
0.323.997 e Pedido de Patente Europeu nº 89303964.4. Portanto, em uma modalidade da invenção, as células hospedeiras de mamífero (por exemplo, CHO) apresentam falta de um gene glutamina-sintetase e são crescidas na ausência de glutamina no meio em que, entretanto, o polinucleotídeo que codifica a cadeia de imunoglobulina compreende um gene glutamina-sintetase que complementa a falta do gene na célula hospedeira.
[00142] Em geral, glicoproteínas produzidas em uma linhagem celular específica ou animal transgênico específico terão um padrão de glicosilação que é característico das glicoproteínas produzidas na linhagem celular ou no animal transgênico. Por conseguinte, o padrão de glicosilação específico de um anticorpo dependerá da linhagem celular específica ou do animal transgênico específico usado para produzir o anticorpo. Entretanto, todos os anticorpos codificados pelas moléculas de ácido nucleico aqui fornecidas, ou compreendendo as sequências de aminoácidos aqui fornecidas, compreendem a presente invenção, independente do padrão de glicosilação que os anticorpos podem ter. Similarmente, em modalidades específicas, os anticorpos com um padrão de glicosilação compreendendo apenas N-glicanas não fucosiladas podem ser vantajosos, porque tem sido mostrado que estes anticorpos tipicamente apresentam eficácia mais potente do que suas contrapartes fucosiladas tanto in vitro quanto in vivo (consulte, por exemplo,
77 / 500 Shinkawa et al., J. Biol. Chem. 278: 3466-3473 (2003); Patentes U.S. nºs
6.946.292 e 7.214.775). Estes anticorpos com N-glicanas não fucosiladas provavelmente não serão imunogênicos porque as estruturas de carboidrato deles são um componente normal da população que existe em IgG sérica humana.
[00143] A presente invenção inclui anticorpos biespecíficos e bifuncionais e fragmentos de ligação ao antígeno tendo uma especificidade de ligação por CD27 e outro antígeno como, por exemplo, PD-1, PD-L1 ou LAG-3, e métodos de uso dos mesmos. Em uma modalidade da invenção, a cadeias anti-CD27 compreende qualquer uma das sequências VH/VL descritas na Tabela 12, e as cadeias anti-PD1 compreendem a sequência de aminoácidos das SEQ ID NOs:48 e 53 ou das SEQ ID NOs:78 e 52 (ou um fragmento de ligação ao antígeno de qualquer uma das ditas sequências). Um anticorpo biespecífico ou bifuncional é um anticorpo híbrido artificial tendo dois pares diferentes de cadeia pesada/cadeia leve e dois sítios de ligação diferentes. Anticorpos biespecíficos podem ser produzidos por uma variedade de métodos incluindo fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab'. Consulte, por exemplo, Songsivilai, et al., (1990) Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321, Kostelny, et al., (1992) J. Immunol.. 148:1547- 1553. Além disso, anticorpos biespecíficos podem ser formados como “diacorpos” (Holliger, et al., (1993) PNAS USA 90:6444-6448) ou como “Janusinas” (Traunecker, et al., (1991) EMBO J. 10:3655-3659 e Traunecker, et al., (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7:51-52).
[00144] A presente invenção inclui, adicionalmente, fragmentos de ligação ao antígeno anti-CD27 dos anticorpos anti-CD27 aqui revelados. Os fragmentos de anticorpos incluem fragmentos F(ab)2, que podem ser produzidos por clivagem enzimática de uma IgG, por exemplo, por pepsina. Fragmentos Fab podem ser produzidos, por exemplo, pela redução de F(ab)2 com ditiotreitol ou mercaptoetilamina.
78 / 500
[00145] Imunoglobulinas podem ser atribuídas a classes diferentes dependendo das sequências de aminoácidos do domínio constante das cadeias pesadas delas. Em algumas modalidades, domínios constantes diferentes podem ser anexados às regiões VL e VH humanizadas derivadas das CDRs aqui fornecidas. Há pelo menos cinco classes principais de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e várias destas podem ser adicionalmente divididas em subclasses (isótipos), por exemplo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4; IgA1 e IgA2. A invenção compreende anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno de qualquer uma destas classes ou subclasses de anticorpos.
[00146] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende um região constante da cadeia pesada, por exemplo um região constante humana, como região constante da cadeia pesada humana 1, 2, 3, ou 4 ou uma variante da mesma. Em outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia leve, por exemplo uma região constante da cadeia leve humana, como região constante da cadeia leve humana lambda ou kappa ou variante da mesma. À guisa de exemplo, e sem limitação, a região constante da cadeia pesada humana pode ser 4 e a região constante da cadeia leve humana pode ser kappa. Em uma modalidade alternativa, a região Fc do anticorpo é 4 com uma mutação Ser228Pro (Schuurman, J et. al., Mol. Immunol. 38: 1-8, 2001).
[00147] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende um região constante da cadeia pesada do subtipo IgG1. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende um região constante da cadeia pesada do subtipo IgG2. Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende um região constante da cadeia pesada do subtipo IgG4. Modificação de anticorpo
[00148] São adicionalmente incluídas modalidades nas quais os
79 / 500 anticorpos anti-CD27 e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são anticorpos modificados para incluir modificações nos resíduos de framework dentro dos domínios variáveis do anticorpo monoclonal parental hCD27.131A, por exemplo para melhorar as propriedades do anticorpo ou fragmento. Tipicamente, tais modificações em framework são realizadas para decrescer a imunogenicidade do anticorpo ou fragmento. Isto é habitualmente realizado pela substituição de resíduos de não CDR nos domínios variáveis (isto é resíduos de framework) em um anticorpo parental ou fragmento do mesmo (por exemplo de roedor) por resíduos análogos do repertório imune da espécie na qual o anticorpo é para ser usado, por exemplo resíduos humanos no caso de agentes terapêuticos para humanos. Um tal anticorpo ou fragmento é aqui chamado de um anticorpo ou um fragmento “humanizado”. Em alguns casos é desejável aumentar a afinidade, ou alterar a especificidade de um anticorpo modificado (por exemplo humanizado). Uma abordagem é “retromutar” um ou mais resíduos de framework para a sequência de linhagem germinativa correspondente. Mais especificamente, um anticorpo ou um fragmento que tem sido submetido à mutação somática pode conter resíduos de framework que diferem da sequência de linhagem germinativa da qual o anticorpo é derivado. Tais resíduos podem ser identificados pela comparação das sequências de framework do anticorpo ou fragmento com as sequências de linhagem germinativa da qual o anticorpo ou o fragmento é derivado. Outra abordagem é reverter o resíduo parental original (por exemplo, de roedor) em uma ou mais posições do anticorpo modificado (por exemplo humanizado), por exemplo para restaurar a afinidade de ligação que pode ter sido perdida no processo de substituição dos resíduos de framework. (Consulte, por exemplo, Patente U.S. nº 5.693.762, Patente U.S. nº 5.585.089 e Patente U.S. nº 5.530.101).
[00149] Em determinadas modalidades, os anticorpos anti-CD27 e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são modificados (por exemplo
80 / 500 humanizados) para incluírem modificações na região framework e/ou nas CDRs para melhorar as propriedades deles.
Tais alterações modificadas podem ser baseadas em modelagem molecular.
Um modelo molecular para a região variável para a sequência de anticorpo parental (não humana) pode ser construído para entender as características estruturais do anticorpo e ser usado para identificar as regiões potenciais no anticorpo que interagem com o antígeno.
As CDRs convencionais são baseadas no alinhamento de sequências de imunoglobulina e identificação de regiões variáveis.
Kabat et al., (1991) “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed.; NIH Publ. nº 91-3242; Kabat (1978) Adv.
Prot.
Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J.
Biol.
Chem. 252:6609-6616. Chothia e colaboradores cuidadosamente examinaram conformações das alças em estruturas de cristal de anticorpos e propuseram alças hipervariáveis.
Chothia, et al., (1987) J.
Mol.
Biol. 196:901-917 ou Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883. Há variações entre as regiões classificadas como “CDRs” e “alças hipervariáveis”. Estudos posteriores (Raghunathan et al, (2012) J.
Mol.
Recog. 25, 3, 103-113) analisaram vários complexos cristalinos de anticorpo–antígeno e observaram que as regiões de ligação ao antígeno em anticorpos não necessariamente se conformam rigorosamente com os resíduos de “CDR” ou as alças “hipervariáveis”. O modelo molecular para a região variável do anticorpo não humano pode ser usado para orientar a seleção de regiões que podem potencialmente se ligar ao antígeno.
Na prática, as regiões de ligação potencial ao antígeno baseadas em modelo diferem das “CDRs” convencionais ou das alças “hipervariáveis”. O programa de computador científico comercial como MOE (Chemical Computing Group) pode ser usado para modelagem molecular.
Os frameworks humanos podem ser selecionado com base nas melhores coincidências com a sequência não humana nos frameworks e nas CDRs.
Para FR4 (framework 4) em VH, as regiões VJ para as linhagens germinativas
81 / 500 humanas são comparadas com a região não humana correspondente. No caso de FR4 (framework 4) em VL, as regiões J-kappa e J-lambda das sequências de linhagem germinativa humana são comparadas com a região não humana correspondente. Quando frameworks humanos adequados são identificados, as CDRs são enxertadas nos frameworks humanos selecionados. Em alguns casos, determinados resíduos na interface VL-VH podem ser mantidos como na sequência não humana (parenteral). Modelos moleculares também podem ser usados para identificar os resíduos que podem potencialmente alterar as conformações de CDR e, consequentemente, a ligação ao antígeno. Em alguns casos, estes resíduos são mantidos na sequência não humana (parental). Os modelos moleculares podem também ser usados para identificar aminoácidos expostos a solventes que pode resultar em efeitos indesejados como glicosilação, desamidação e oxidação. Filtros de capacidade de desenvolvimento podem ser introduzidos cedo no estágio de design para eliminar/minimizar estes problemas potenciais.
[00150] Outro tipo de modificação em framework envolve a mutação de um ou mais resíduos dentro da região framework, ou mesmo dentro de uma ou mais regiões CDR, para remover os epítopos de célula-T para, assim, reduzir a imunogenicidade potencial do anticorpo. Esta abordagem é também chamada de “desimunização” e é descrita em mais detalhe na Patente U.S. nº
7.125.689.
[00151] Em modalidades específicas, será desejável alterar determinados aminoácidos contendo cadeias laterais expostas para outro resíduo de aminoácido com o propósito de fornecer estabilidade química maior ao anticorpo final, de modo a evitar a desamidação ou a isomerização. A desamidação de asparagina pode ocorrer nas sequências NG, DG, NG, NS, NA, NT, QG ou QS e pode resultar na criação de um resíduo de ácido isoaspártico que introduz um kink (distorção bizarra, dobra aguda) na cadeia de polipeptídeo e decresce sua estabilidade (efeito do ácido isoaspártico).
82 / 500 Isomerização pode ocorrer nas sequências DG, DS, DA ou DT. Em determinadas modalidades, os anticorpos da presente revelação não contêm sítios de isomerismo de asparagina ou de desamidação.
[00152] Por exemplo, um resíduo de asparagina (Asn) pode ser alterado para Gln ou Ala para reduzir o potencial para a formação de isoaspartato em quaisquer sequências Asn-Gly, particularmente dentro de uma CDR. Um problema similar pode ocorrer em uma sequência Asp-Gly. Reissner e Aswad (2003) Cell. Mol. Life Sci. 60:1281. Formação de isoaspartato pode debilitar ou completamente anular a ligação de um anticorpo ao seu antígeno-alvo. Consulte, Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 a 734. Em uma modalidade, a asparagina é alterada para glutamina (Gln). Também pode ser desejável alterar um aminoácido adjacente a um resíduo de asparagina (Asn) ou de glutamina (Gln) para reduzir a possibilidade de desamidação, que ocorre em taxas mais altas quando aminoácidos pequenos ocorrem adjacentes à asparagina ou glutamina. Consulte, Bischoff & Kolbe (1994) J. Chromatog. 662:261. Além disso, quaisquer resíduos de metionina (tipicamente Met exposta a solvente) em CDRs podem ser alterados para Lys, Leu, Ala, ou Phe ou outros aminoácidos com o propósito de reduzir a possibilidade de que o enxofre da metionina se oxide, o que poderia reduzir a afinidade de ligação ao antígeno e também contribuir para heterogeneidade molecular na preparação do anticorpo final. Id. Adicionalmente, com a finalidade de prevenir ou minimizar ligações peptídicas Asn-Pro cindíveis potenciais, pode ser desejável alterar quaisquer combinações de Asn-Pro encontrada em uma CDR para Gln-Pro, Ala-Pro, ou Asn-Ala. Anticorpos com tais substituições são subsequentemente examinados para garantir que as substituições não decrescem a afinidade ou a especificidade do anticorpo por CD27, ou outra atividade biológica desejada para níveis inaceitáveis. TABELA 2: Variantes de CDR estabilizadoras exemplificadoras Resíduo de CDR Sequência variante estabilizadora
83 / 500 Asn-Gly Gln-Gly, Ala-Gly, ou Asn-Ala (N-G) (Q-G), (A-G), ou (N-A) Asp-Gly Glu-Gly, Ala-Gly ou Asp-Ala (D-G) (E-G), (A-G), ou (D-A) Met Lys, Leu, Ala, ou Phe (M) (K), (L), (A), ou (F) Asn Gln ou Ala (N) (Q) ou (A) Asn-Pro Gln-Pro, Ala-Pro, ou Asn-Ala (N-P) (Q-P), (A-P), ou (N-A) Modificação do anticorpo na região Fc
[00153] Os anticorpos (por exemplo, anticorpos humanizados) e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) também podem ser modificados para incluir modificações dentro da região Fc, tipicamente para alterar uma ou mais das propriedades do anticorpo, como meia-vida sérica, fixação ao complemento, ligação ao receptor de Fc, e/ou função efetora (por exemplo, citotoxicidade celular dependente de anticorpo. Além disso, os anticorpos e os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser quimicamente modificados (por exemplo, uma ou mais porções químicas podem ser ligadas ao anticorpo) ou podem ser modificados para alterar sua glicosilação, de novo para alterar uma ou mais propriedades do anticorpo ou fragmento. Cada uma destas modalidades é descrita em mais detalhes abaixo. A numeração de resíduos na região Fc é aquela do índice EU de Kabat.
[00154] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) também incluem anticorpos e fragmentos com regiões Fc modificadas (ou bloqueadas) para se obterem funções efetoras alteradas. Consulte, por exemplo, Patente U.S. nº 5.624.821; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702. Tais modificações podem ser usadas para intensificar ou suprimir várias reações do sistema imune, com possíveis efeitos benéficos em diagnose e terapia. Alterações da região Fc incluem alterações de aminoácido (substituições, deleções e
84 / 500 inserções), glicosilação ou desglicosilação, e adição de múltiplas regiões Fc. Alterações no Fc podem também alterar a meia-vida de anticorpos em anticorpos terapêuticos, permitindo dosagem menos frequente e, por conseguinte, conveniência aumentada e uso decrescido de material. Consulte Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 a 734-35.
[00155] Em uma modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) é um anticorpo ou um fragmento de isótipo IgG4 compreendendo uma mutação de Serina para Prolina em uma posição correspondendo à posição 228 (S228P; índice EU) na região de dobradiça da região constante da cadeia pesada. Tem sido relatado que esta mutação suprime a heterogeneidade das pontes de dissulfeto intercadeias pesadas na região de dobradiça (Angal et al. supra; posição 241 é baseada no sistema de numeração de Kabat).
[00156] Em uma modalidade da invenção, a região de dobradiça de CH1 é modificada de tal maneira que o número de resíduos de cisteína na região de degradação é aumentado ou decrescido. Esta abordagem é descrita com mais detalhes na Patente U.S. nº 5.677.425. O número de resíduos de cisteína na região de dobradiça de CH1 é alterado, por exemplo, para facilitar a montagem das cadeias leves e pesadas ou para aumentar ou decrescer a estabilidade do anticorpo.
[00157] Em outra modalidade, a região de dobradiça de Fc de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) é mutada para decrescer a meia-vida biológica do anticorpo ou fragmento. Mais especificamente, uma ou mais mutações de aminoácido são introduzidas na região de interface do domínio CH2-CH3 do fragmento de dobradiça de Fc de modo que o anticorpo ou o fragmento tem ligação de proteína-A estafilocócica prejudicada relativa à ligação de SpA ao domínio de dobradiça de Fc nativo. Esta abordagem é descrita com mais detalhes na Patente U.S. nº
85 / 500
6.165.745.
[00158] Em outra modalidade, o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) é modificado para aumentar sua meia-vida biológica. Várias abordagens são possíveis. Por exemplo, uma ou mais das seguintes mutações podem ser introduzidas: T252L, T254S, T256F, conforme descritas na Patente U.S. nº 6.277.375. Alternativamente, para aumentar a meia-vida biológica, o anticorpo pode ser alterado dentro da região CH1 ou CL para conter um epítopo de ligação ao receptor de salvamento obtido de duas alças de um domínio CH2 de uma região Fc de uma IgG, como descrito nas Patentes U.S. nºs 5.869.046 e 6.121.022.
[00159] Em ainda outras modalidades, a região Fc é alterada pela substituição de pelo menos um resíduo de aminoácido por um resíduo de aminoácido diferente para alterar a(s) função(ões) efetora(s) do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Por exemplo, um ou mais aminoácidos selecionados dentre os resíduos de aminoácidos 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 e 322 podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tenha uma afinidade alterada por um ligante efetor e mantenha a capacidade de ligação ao antígeno do anticorpo parental. O ligante efetor cuja afinidade é alterada pode ser, por exemplo, um receptor de Fc ou o componente C1 do complemento. Esta abordagem é descrita com mais detalhes nas Patentes U.S. nºs 5.624.821 e 5.648.260.
[00160] Em outro exemplo, um ou mais resíduo de aminoácido selecionados dentre os resíduos de aminoácidos 329, 331 e 322 podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tenha ligação ao C1q alterada, ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC) reduzida ou abolida. Esta abordagem é descrita com mais detalhes na Patente U.S. nº 6.194.551.
[00161] Em outro exemplo, um ou mais resíduos de aminoácidos
86 / 500 dentro das posições de aminoácido 231 e 239 são alterados para deste modo alterar a capacidade do anticorpo para se ligar ao complemento. Esta abordagem é descrita com mais detalhes na Publicação PCT nº WO 94/29351.
[00162] Em ainda outro exemplo exemplo, a região Fc é modificada para decrescer a capacidade do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) para mediar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou para decrescer a afinidade do anticorpo ou fragmento por um receptor de Fcγ pela modificação de um ou mais aminoácidos nas seguintes posições: 238, 239, 243, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ou 439. Esta abordagem é descrita com mais detalhes na Publicação PCT nº WO 00/42072. Além disso, os sítios de ligação na IgG1 humana aos FcγR1, FcγRII, FcγRIII e FcRn têm sido mapeados e variantes com ligação aprimorada têm sido descritas (consultar Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604).
[00163] Em uma modalidade da invenção, a região Fc é modificada para decrescer a capacidade do anticorpo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) para mediar a função efetora e/ou aumentar as propriedades anti-inflamatórias pela modificação dos resíduos 243 e 264. Em uma modalidade, a região Fc do anticorpo ou fragmento é modificada pela alteração dos resíduos nas posições 243 e 264 para alanina. Em uma modalidade, a região Fc é modificada para decrescer a capacidade do anticorpo ou fragmento para mediar a função efetora e/ou para aumentar as propriedades anti-inflamatórias pela modificação dos resíduos 243, 264, 267 e
328. Função efetora alterada
87 / 500
[00164] Em algumas modalidades, a região Fc de um anticorpo anti- CD27 é modificada para aumentar ou reduzir a capacidade do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno para mediar a função efetora e/ou para aumentar/decrescer a ligação deles aos receptores de Fc-gama (FcγRs).
[00165] O termo “Função Efetora”, como aqui usado, significa que se refere a uma ou mais dentre respostas mediadas pelas atividade de citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC), atividade de citotoxicidade dependente de complemento (CDC), fagocitose mediada por Fc ou fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) e reciclo de anticorpo via o receptor FcRn.
[00166] Acredita-se que a interação entre a região constante de uma proteína de ligação ao antígeno e vários receptores de Fc (FcR) incluindo FcgamaRI (CD64), FcgamaRII (CD32) e FcgamaRIII (CD16) medeia as funções efetoras, como ADCC e CDC, da proteína de ligação ao antígeno. O receptor de Fc é também importante para a ligação cruzada de anticorpos, que podem ser importantes para imunidade antitumoral.
[00167] A função efetora pode ser medida em numerosas maneiras incluindo, por exemplo, via a ligação de FcgamaRIII às Células Assassinas Naturais ou via a ligação de FcgamaRI a monócitos/macrófagos para medir a função efetora ADCC. Por exemplo uma proteína de ligação ao antígeno da presente invenção pode ser avaliada para a função efetora ADCC em um ensaio com células assassinas naturais. Exemplos de tais ensaios podem ser encontrados em Shields et al, 2001 J. Biol. Chem., Vol. 276, p 6591-6604; Chappel et al, 1993 J. Biol. Chem., Vol 268, p 25124-25131; Lazar et al, 2006 PNAS, 103; 4005-4010.
[00168] Tem sido mostrado que as regiões constantes de IgG1 humana contendo mutações específicas ou glicosilação alterada no resíduo Asn297 reduzem a ligação aos receptores de Fc. Em outros casos, também tem sido mostrado que as mutações intensificam ADCC e CDC (Lazar et al. PNAS
88 / 500 2006, 103; 4005-4010; Shields et al. J. Biol. Chem. 2001, 276; 6591-6604; Nechansky et al. Mol. Immunol., 2007, 44; 1815-1817).
[00169] Em uma modalidade da presente invenção, tais mutações estão em uma ou mais posições selecionadas dentre 239, 332 e 330 (IgG1), ou nas posições equivalentes nos outros isótopos de IgG. Exemplos de mutações adequadas são S239D e I332E e A330L. Em uma modalidade, a proteína de ligação ao antígeno da invenção aqui descrita está mutada nas posições 239 e 332, por exemplo S239D e I332E ou em uma outra modalidade está mutada em três ou mais posições selecionadas dentre 239 e 332 e 330, por exemplo S239D e I332E e A330L. (numeração por índice EU).
[00170] Em uma modalidade alternativa da presente invenção, é fornecido um anticorpo compreendendo um região constante da cadeia pesada com um perfil de glicosilação alterado de modo que a proteína de ligação ao antígeno tem função efetora intensificada. Por exemplo, em que o anticorpo tem ADCC intensificada ou CDC intensificada ou em que tem ambas funções efetoras ADCC e CDC intensificadas. Exemplos de metodologias adequadas para produzir proteínas de ligação ao antígeno com um perfil de glicosilação alterado são descritos em WO2003011878, WO2006014679 e EP1229125.
[00171] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece anticorpos “não fucosilados” ou “afucosilados”. Os anticorpos não fucosilados hospedam uma estrutura central (de núcleo) trimanosil de N- glicanas do tipo complexo de Fc sem o resíduo de fucose. Estes glicoanticorpos modificados que não possuem o resíduo de fucose central das Fc-N-glicanas pode apresentar ADCC mais forte do que os equivalentes fucosilados devido à intensificação da capacidade de ligação ao FcgamaRIIIa.
[00172] A presente invenção também fornece um método para produção de um anticorpo de acordo com a invenção compreendendo as etapas de: a) cultivar uma célula hospedeira recombinante compreendendo um vetor de expressão compreendendo o ácido nucleico isolado como aqui
89 / 500 descrito, em que a célula hospedeira recombinante não compreende uma alfa- 1,6-fucosiltransferase; e b) recuperar a proteína de ligação ao antígeno. A célula hospedeira recombinante normalmente pode não conter um gene que codifica uma alfa-1,6-fucosiltransferase (por exemplo células hospedeiras de levedura Pichia sp.) ou pode ter sido geneticamente modificada para inativar uma alfa-1,6-fucosiltransferase. Células hospedeiras recombinantes que têm sido geneticamente modificadas para inativar o gene FUT8 que codifica uma alfa-1,6-fucosiltransferase estão disponíveis. Consulte, por exemplo, o sistema de tecnologia POTELLIGENT™ disponível junto à BioWa, Inc. (Princeton, N.J.) em que as células CHOK1SV, que não possuem um cópia funcional do gene FUT8, produzem anticorpos monoclonais tendo atividade de citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) intensificada que é aumentada relativa a um anticorpo monoclonal idêntico produzido em uma célula com o gene FUT8 funcional. Aspectos do sistema de tecnologia POTELLIGENT™ são descritos em US7214775, US6946292, WO0061739 e WO0231240. Aquelas pessoas comumente versadas na técnica também reconhecerão outros sistemas apropriados.
[00173] Será evidente para aquelas pessoas versadas na técnica que tais modificações podem não apenas ser usadas sozinhas, mas podem ser utilizadas em combinação entre si para adicionalmente intensificar ou decrescer a função efetora. Produção de anticorpos com glicosilação modificada
[00174] Em ainda outra modalidade, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) compreendem um padrão de glicosilação específico. Por exemplo, um anticorpo ou um fragmento afucosilado ou um anticorpo ou um fragmento aglicosilado pode ser preparado (isto é, o anticorpo não possui fucose ou glicosilação, respectivamente). O padrão de glicosilação de um anticorpo ou um fragmento pode ser alterado para, por exemplo, aumentar a
90 / 500 afinidade ou avidez do anticorpo ou fragmento por um antígeno CD27. Tais modificações podem ser realizadas, por exemplo, por alteração de um ou mais sítios de glicosilação dentro da sequência de anticorpo ou fragmento. Por exemplo, podem ser realizadas uma ou mais ou substituições de aminoácido que resultam na remoção de um ou mais dos sítios de glicosilação de regiões framework de regiões variáveis para deste modo eliminar a glicosilação naquele sítio. Tal aglicosilação pode aumentar a afinidade ou avidez do anticorpo ou fragmento por antígeno. Consulte, por exemplo, Patentes U.S. nºs 5.714,350 e 6.350.861.
[00175] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ainda incluir aqueles produzidos em células hospedeiras eucarióticas inferiores, em particular em células hospedeiras fúngicas como leveduras e fungos filamentosos, que têm sido geneticamente modificadas para produzir glicoproteínas que têm padrões de glicosilação de mamífero ou de humano (consulte, por exemplo, Choi et al, (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. 100: 5022- 5027; Hamilton et al., (2003) Science 301: 1244-1246; Hamilton et al., (2006) Science 313: 1441-1443; Nett et al., Yeast 28(3):237-52 (2011); Hamilton et al., Curr. Opin. Biotechnol. Oct;18(5):387-92 (2007)). Uma vantagem específica destas células hospedeiras geneticamente modificadas sobre as linhagens celulares de mamífero atualmente usadas é a capacidade para controlar o perfil de glicosilação de glicoproteínas que são produzidas nas células de tal modo que composições de glicoproteínas podem ser produzidas em que predomina uma estrutura de N-glicana específica (consulte, por exemplo, Patente U.S. nº 7.029.872 e Patente U.S. nº 7.449.308). Estas células hospedeiras geneticamente modificadas têm sido usadas para produzir anticorpos que têm estruturas de N-glicana predominantemente específicas (consulte, por exemplo, Li et al., (2006) Nat. Biotechnol. 24: 210-215).
[00176] Em modalidades específicas, os anticorpos e fragmentos de
91 / 500 ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) incluem, ainda, aqueles produzidos em células hospedeiras eucarióticas inferiores e que compreendem N-glicanas híbridas e complexas fucosiladas e não fucosiladas, incluindo as espécies bisseccionadas e multiantenárias, incluindo, mas não se limitando às N- glicanas como GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2; Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2; NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2.
[00177] Em modalidades específicas, os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui fornecidos (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem compreender anticorpos ou fragmentos tendo pelo menos uma N-glicana híbrida selecionada a partir do grupo que consiste em GlcNAcMan5GlcNAc2; GalGlcNAcMan5GlcNAc2; e NANAGalGlcNAcMan5GlcNAc2. Em aspectos específicos, a N-glicana híbrida é a espécie de N-glicana predominante na composição.
[00178] Em modalidades específicas, os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui fornecidos (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) compreendem anticorpos e fragmentos tendo pelo menos uma N-glicana complexa selecionada a partir do grupo que consiste em GlcNAcMan3GlcNAc2; GalGlcNAcMan3GlcNAc2; NANAGalGlcNAcMan3GlcNAc2; GlcNAc2Man3GlcNAc2; GalGlcNAc2Man3GlcNAc2; Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; e NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2. Em aspectos específicos, as N-glicanas complexas não as espécies de N- glicana predominantes na composição. Em outros aspectos, a N-glicana complexa é uma espécie de N-glicana específica que compreende cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, ou 100% das N-glicanas complexas na composição. Em uma modalidade, os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui fornecidos compreendem N-glicanas complexas, em que pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%,
92 / 500 97%, 98%, 99%, ou 100% das N-glicanas complexas compreendem a estrutura NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2, em que tal estrutura é afucosilada. Tais estruturas podem ser produzidas, por exemplo, em células hospedeiras Pichia pastoris modificadas.
[00179] Em modalidades específicas, a N-glicana é fucosilada. Em geral, a fucose está em uma ligação-α1,3 com a GlcNAc na extremidade redutora da N-glicana, uma ligação-α1,6 com a GlcNAc na extremidade redutora da N-glicana, uma ligação-α1,2 com a Gal na extremidade não redutora da N-glicana, uma ligação-α1,3 com a GlcNac na extremidade não redutora da N-glicana, ou uma ligação-α1,4 com a GlcNAc na extremidade não redutora da N-glicana.
[00180] Portanto, em aspectos específicos das composições de glicoproteína acima, a glicoforma está em uma fucose α1,3-ligada ou α1,6- ligada para produzir uma glicoforma selecionada a partir do grupo que consiste em Man5GlcNAc2(Fuc), GlcNAcMan5GlcNAc2(Fuc), Man3GlcNAc2(Fuc), GlcNAcMan3GlcNAc2(Fuc), GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), e NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc); em uma fucose α1,3-ligada ou α1,4-ligada para produzir uma glicoforma selecionada a partir do grupo que consiste em GlcNAc(Fuc)Man5GlcNAc2, GlcNAc(Fuc)Man3GlcNAc2, GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, GalGlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, NANAGal2GlcNAc2(Fuc1- 2)Man3GlcNAc2, e NANA2Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2; ou em uma fucose α1,2-ligada para produzir uma glicoforma selecionada a partir do grupo que consiste em Gal(Fuc)GlcNAc2Man3GlcNAc2, Gal2(Fuc1- 2)GlcNAc2Man3GlcNAc2, NANAGal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2, e NANA2Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2.
[00181] Em outros aspectos, os anticorpos (por exemplo, anticorpos
93 / 500 humanizados) ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos compreendem N-glicanas altas em manose, incluindo mas não se limitando a, Man8GlcNAc2, Man7GlcNAc2, Man6GlcNAc2, Man5GlcNAc2, Man4GlcNAc2, ou N-glicanas que consistem na estrutura de N-glicana Man3GlcNAc2.
[00182] Em outros aspectos das N-glicanas acima, as N-glicanas complexas incluem, ainda, espécies bisseccionadas e multiantenárias fucosiladas e não fucosiladas.
[00183] Como aqui usado, os termos “N-glicana” e “glicoforma” são usados intercambiavelmente e referem-se a um oligossacarídeo N-ligado, por exemplo, um que é ligado por uma ligação asparagina-N-acetilglicosamina a um resíduo de asparagina de um polipeptídeo. As glicoproteínas N-ligadas contêm um resíduo de N-acetilglicosamina ligado ao nitrogênio de amida de um resíduo de asparagina na proteína. Os açúcares predominantes encontrados em glicoproteínas são glicose, galactose, manose, fucose, N- acetilgalactosamina (GalNAc), N-acetilglicosamina (GlcNAc) e ácido siálico (por exemplo, ácido N-acetil-neuramínico (NANA)). O processamento dos grupos açúcar ocorre cotraducionalmente no lúmen do RE (Retículo Endoplasmático) e continua pós-traducionalmente no aparelho de Golgi para as glicoproteínas N-ligadas.
[00184] As N-glicanas têm um núcleo pentassacarídeo comum de Man3GlcNAc2 (“Man” refere-se à manose; “Glc” refere-se à glicose; e “NAc” refere-se a N-acetil; GlcNAc refere-se à N-acetilglicosamina). Habitualmente, as estruturas da N-glicana são apresentadas com a extremidade não redutora à esquerda e a extremidade redutora à direita. A extremidade redutora da N- glicana é a extremidade que é ligada ao resíduo Asn compreendendo o sítio de glicosilação da proteína. As N-glicanas diferem com respeito ao número de ramificações (antenas) compreendendo açúcares periféricos (por exemplo, GlcNAc, galactose, fucose e ácido siálico) que são adicionados à estrutura de núcleo (central) Man3GlcNAc2 (“Man3”) que também é chamada de o
94 / 500 “núcleo trimanose”, o “núcleo pentassacarídeo” ou o “núcleo paucimanose”. As N-glicanas são classificadas de acordo com os constituintes ramificados delas (por exemplo, altas em manose, complexas ou híbridas). Um N-glicana do tipo “alta em manose” tem cinco ou mais resíduos de manose. Uma N- glicana do tipo “complexa” tipicamente tem pelo menos uma GlcNAc ligada ao braço 1,3-manose e pelo menos uma GlcNAc ligada ao braço 1,6-manose de um núcleo “trimanose”. As N-glicanas complexas também têm resíduos de galactose (“Gal”) ou de N-acetilgalactosamina (“GalNAc”) que são opcionalmente modificados com ácido siálico ou derivados (por exemplo, “NANA” ou “NeuAc”, onde “Neu” refere-se um ácido neuramínico “Ac” refere-se a acetil). As N-glicanas complexas podem também ter substituições intracadeia compreendendo GlcNAc “bisseccionada” e fucose de núcleo (“Fuc”). As N-glicanas complexas podem também ter múltiplas antenas no “núcleo trimanose”, com frequência chamadas de “glicanas multiantenárias”. Uma N-glicana “híbrida” tem pelo menos uma GlcNAc no terminal do braço 1,3-manose do núcleo trimanose e zero ou mais manoses no braço 1,6-manose do núcleo trimanose. As várias N-glicanas também podem ser chamadas de “glicoformas”.
[00185] Com respeito às N-glicanas complexas, os termos “G-2”, “G- 1”, “G0”, “G1”, “G2”, “A1”, e “A2” significam o seguinte. “G-2” refere-se a uma estrutura de N-glicana Man3GlcNAc2; o termo “G-1” refere-se a uma estrutura de N-glicana que pode ser caracterizada como GlcNAcMan3GlcNAc2; o termo “G0” refere-se a uma estrutura de N-glicana que pode ser caracterizada como GlcNAc2Man3GlcNAc2; o termo “G1” refere-se a uma estrutura de N-glicana que pode ser caracterizada como GalGlcNAc2Man3GlcNAc2; o termo “G2” refere-se a uma estrutura de N- glicana que pode ser caracterizada como Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; o termo “A1” refere-se a uma estrutura de N-glicana que pode ser caracterizada como NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; e, o termo “A2” refere-se a uma estrutura
95 / 500 de N-glicana que pode ser caracterizada como NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2. Salvo indicação em contrário, os termos G-2”, “G-1”, “G0”, “G1”, “G2”, “A1”, e “A2” referem-se às espécies de N- glicana que não possuem fucose ligada ao resíduo GlcNAc na extremidade redutora da N-glicana. Quando o termo inclui um “F”, o “F” indica que a espécie de N-glicana contém um resíduo de fucose no resíduo de GlcNAc na extremidade redutora da N-glicana. Por exemplo, todas G0F, G1F, G2F, A1F, e A2F indicam que a N-glicana inclui, ainda, um resíduo fucose ligado ao resíduo de GlcNAc na extremidade redutora da N-glicana. Eucariotos inferiores como leveduras e fungos filamentosos normalmente não produzem N-glicanas que produzem fucose.
[00186] Com respeito às N-glicanas multiantenárias, o termo “N- glicana multiantenária” refere-se às N-glicanas que compreendem, adicionalmente, um resíduo de GlcNAc no resíduo de manose compreendendo a extremidade não redutora do braço-1,6 ou do braço-1,3 da N-glicana ou um resíduo de GlcNAc em cada um dos resíduos de manose compreendendo a extremidade não redutora do braço-1,6 e do braço-1,3 da N- glicana. Portanto, as N-glicanas multiantenárias são caracterizadas pelas fórmulas GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2, Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2, ou NANA(1-4)GalGlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2. O termo “1-4” refere-se a 1, 2, 3, ou 4 resíduos.
[00187] Com respeito às N-glicanas bisseccionadas, o termo “N- glicana bisseccionada” refere-se às N-glicanas nas quais o resíduo de GlcNAc está ligado ao resíduo manose na extremidade redutora da N-glicana. Uma N- glicana bisseccionada pode ser caracterizada pela fórmula GlcNAc3Man3GlcNAc2 em que cada resíduo de manose está ligado em sua extremidade não redutora a um resíduo GlcNAc. Em contraste, quando uma N-glicana multiantenária é caracterizada como GlcNAc3Man3GlcNAc2, a fórmula indica que dois resíduos de GlcNAc estão ligados ao resíduo de
96 / 500 manose na extremidade não redutora de um dos dois braços da N-glicana e um resíduo de GlcNAc está ligado ao resíduo de manose na extremidade não redutora do outro braço da N-glicana. Propriedades físicas dos anticorpos
[00188] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem conter, ainda, um ou mais sítios de glicosilação na região variável de cadeia leve ou da cadeia pesada de imunoglobulina. Tais sítios de glicosilação podem resultar em imunogenicidade aumentada do anticorpo ou fragmento ou uma alteração do pK do anticorpo devido à ligação ao antígeno alterada (Marshall et al. (1972) Annu. Rev. Biochem. 41:673-702; Gala e Morrison (2004) J. Immunol. 172:5489-94; Wallick et al (1988) J. Exp. Med. 168:1099-109; Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol. Immunol. 37:697-706). É bem sabido que a glicosilação ocorre nos motivos contendo uma sequência N-X-S/T.
[00189] Cada anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, 131A ou versões humanizadas dos mesmos) terá um ponto isoelétrico (pI) único (pI), que em geral cai na faixa de pH entre 6 e 9,5. O pI de um anticorpo gG1 anticorpo tipicamente cai na faixa de pH de 7-9,5 e O pI de um anticorpo IgG4 tipicamente cai na faixa de pH de 6-8.
[00190] Cada anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, 131A ou versões humanizadas dos mesmos) terá um temperatura de fusão característica, com temperatura de fusão mais alta indicando estabilidade total mais elevada in vivo (Krishnamurthy R e Manning MC (2002) Curr. Pharm. Biotechnol. 3:361-71). Em geral, a TM1 (a temperatura de desnovelamento inicial) pode ser maior que 60°C, maior que 65°C, ou maior que 70°C. O ponto de fusão de um anticorpo ou um fragmento pode ser medido usando calorimetria diferencial de varredura (Chen et al (2003)
97 / 500 Pharm. Res. 20:1952-60; Ghirlando et al (1999) Immunol. Lett. 68:47-52) ou dicroísmo circular (Murray et al. (2002) J. Chromatogr. Sci. 40:343-9).
[00191] Em uma outra modalidade, são selecionados os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) que não se degradam rapidamente. A degradação de um anticorpo ou um fragmento pode ser medida pelo uso de eletroforese capilar (CE, Capillary Electrophoresis) e MALDI-MS (Alexander AJ e Hughes DE (1995) Anal. Chem. 67:3626-32).
[00192] Em uma outra modalidade, são selecionados os anticorpos (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que têm mínimos efeitos de agregação, o que pode resultar na ativação de uma resposta imune indesejada e/ou em propriedades farmacocinéticas desfavoráveis. Em geral, são aceitáveis os anticorpos e fragmentos com agregação de 25% ou menos, 20% ou menos, 15% ou menos, 10% ou menos, ou 5% ou menos. A agregação pode ser medida por várias técnicas, incluindo cromatografia em coluna por exclusão de tamanho (SEC, Size-Exclusion Column), cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC, High Performance Liquid Chromatography), e espalhamento de luz. Conjugados de anticorpo
[00193] Os anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem também ser conjugados com uma porção química. A porção química pode ser, inter alia, um polímero, um radionuclídeo ou um fator citotóxico. Em modalidades específicas, a porção química é um polímero que aumenta a meia-vida do anticorpo ou fragmento no corpo de um sujeito. Polímeros adequados incluem, mas não se limitam a, polímeros hidrofílicos que incluem mas não se limitam a poli(glicol etilênico) (PEG) (por exemplo, PEG com um peso molecular de 2kDa, 5 kDa, 10 kDa,
98 / 500 12kDa, 20 kDa, 30kDa ou 40kDa), dextrana e monometoxipoli(glicol etilênico) (mPEG). Lee, et al., (1999) (Bioconj. Chem. 10:973-981) revelam anticorpos de cadeia única conjugados com PEG. Wen, et al., (2001) (Bioconj. Chem. 12:545-553) revelam conjugação de anticorpos com PEG que é ligado a um agente quelante de radiometal (ácido etilenodiaminopentaacético (DTPA)).
[00194] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem também ser conjugados com marcadores 99 como Tc,90Y, 111 In, 32 P, 14 C, 125 I, 3H, 131 I, 11C, 15 O, 13 N, 18 F, 35S, 51 Cr, 57 To, 226 Ra, 60Co, 59Fe, 57Se, 152Eu, 67CU, 217Ci, 211At, 212Pb, 47Sc, 109Pd, 234Th, e 40K, 157 Gd, 55Mn, 52Tr, e 56Fe.
[00195] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem também ser PEGuilados, por exemplo para aumentar sua meia-vida biológica (por exemplo, sérica). Para PEGuilar um anticorpo ou um fragmento, o anticorpo ou o fragmento, tipicamente é reagido com uma forma reativa de poli(glicol etilênico) (PEG), como um derivado de aldeído ou éster reativo de PEG, sob condições nas quais um ou mais grupos PEG tornam-se ligados ao anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em modalidades específicas, a PEGuilação é realizada via uma reação de acilação ou uma reação de alquilação com uma molécula de PEG reativa (ou um polímero análogo reativo solúvel em água). Como aqui usado, o termo “poli(glicol etilênico)” é pretendido para abranger qualquer uma das formas de PEG que têm sido usadas para derivar outras proteínas, como monoalcoxi(C1-C10)- ou ariloxi- poli(glicol etilênico) ou poli(glicol etilênico)-maleimida. Em determinadas modalidades, o anticorpo ou o fragmento a ser PEGuilado é um anticorpo ou um fragmento aglicosilado. Métodos para PEGuilação de proteínas são conhecidos na técnica e podem ser aplicados aos. Consulte, por exemplo, EP
99 / 500
0.154.316 e EP 0.401.384.
[00196] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem também ser conjugados com marcadores fluorescentes ou quimioluminescentes, incluindo fluoróforos como quelatos de metais de terra rara, fluoresceína e seus derivados, rodamina e seus derivados, isotiocianato, 152 ficoetitrina, ficocianina, aloficocianina, o-ftalaldeído, fluorescamina, Eu, dansil, umbeliferona, luciferina, marcador luminal, marcador isoluminal, um marcador à base de éster de acridínio aromático, um marcador à base de imidazol, um marcador à base de sal de acridínio, um marcador à base de éster de oxalato, um marcador à base de aequorina, 2,3-di- hidroftalazinadionas, biotina/avidina, marcadores de spin e radicais livres estáveis.
[00197] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem também ser conjugados com um fator citotóxico como toxina da difteria, cadeia de exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa, cadeia de ricina A, cadeia de abrina A, cadeia de modecina A, alfa-sarcina, compostos (por exemplo, ácidos graxos) e proteínas de Aleurites fordii, proteínas diantina, proteínas PAPI, PAPII, e PAP-S de Phytoiacca americana, inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Saponaria officinalis, mitogelina, restrictocina, fenomicina, e enomicina.
[00198] Qualquer método conhecido na técnica para conjugação de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) com várias porções pode ser utilizado, incluindo aqueles descritos por Hunter, et al., (1962) Nature 144:945; David, et al., (1974) Biochemistry 13:1014; Pain, et al., (1981) J. Immunol. Meth. 40:219; e Nygren, J., (1982) Histochem. and Cytochem. 30:407. Os métodos para conjugação de anticorpos e fragmentos
100 / 500 são convencionais e muito bem conhecidos na técnica. Usos terapêuticos de anticorpos anti-CD27
[00199] São adicionalmente fornecidos métodos para tratamento de sujeitos, incluindo sujeitos humanos, que necessitam de tratamento com os anticorpos isolados ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos isolados aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo). Em uma modalidade da invenção, tal sujeito sofre de uma infecção ou de uma doença infecciosa. A invenção também fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção para uso no tratamento de câncer; ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa. A invenção também fornece o uso do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção para a fabricação de um medicamento para aumentar a ativação de célula imune; tratamento de câncer; ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa.
[00200] Em outra modalidade da invenção, tal sujeito sofre de câncer. Em uma modalidade o câncer é, por exemplo, osteossarcoma, rabdomiossarcoma, neuroblastoma, câncer de rim, leucemia, câncer de células transicionais renais, câncer de bexiga, câncer de Wilm, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de osso, câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas), câncer gástrico, câncer colorretal, câncer cervical, sarcoma sinovial, câncer de cabeça e pescoço, carcinoma de células escamosas, mieloma múltiplo, câncer de célula renal, retinoblastoma, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, melanoma, tumor rabdoide do rim, sarcoma de Ewing, condrossarcoma, câncer de cérebro, glioblastoma, meningioma, adenoma da pituitária, schwannoma vestibular, um tumor neuroectodérmico primitivo, meduloblastoma, astrocitoma, astrocitoma anaplásico, oligodendroglioma, ependimoma, papiloma do plexo coroide, policitemia vera, trombocitemia, mielofibrose idiopática, sarcoma de tecido mole, câncer de tireoide, câncer
101 / 500 endometrial, câncer carcinoide ou câncer de fígado, câncer de mama ou câncer gástrico. Em uma modalidade da invenção, o câncer é câncer metastásico, por exemplo, das variedades descritas acima.
[00201] Os cânceres que podem ser tratados pelos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno, composições e métodos da invenção incluem, mas não se limitam a: Cardíaco: sarcoma (angiossarcoma, fibrossarcoma, rabdomiossarcoma, lipossarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; Pulmão: carcinoma broncogênico (célula escamosa, célula pequena indiferenciada, célula grande indiferenciada, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinal: esôfago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma), pâncreas (adenocarcinoma dutal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma) colorretal; Trato Geniturinário: rim (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), bexiga e uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células transicionais, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiais, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiossarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; Osso: sarcoma osteogênico (osteossarcoma), fibrossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células do retículo), mieloma múltiplo, cordoma-tumor maligno de células gigantes, osteocrondroma (exostoses osteocartilaginosas),
102 / 500 condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide e tumores de células gigantes; Sistema nervoso: crânio (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante), meninges (meningioma, meningiossarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congênitos), neurofibroma da medula espinhal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológico: útero (carcinoma endometrial), colo uterino (carcinoma cervical, displasia cervical pré-tumoral), ovários (carcinoma ovariano [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma não classificado], tumores das células granulosas da teca, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrossarcoma, melanoma), vagina (carcinoma das células claras, carcinoma das células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiossarcoma embrionário), trompas de Falópio (carcinoma), mama; Hematológico: sangue (leucemia mieloide [aguda e crônica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, doenças mieloproliferativas, mieloma múltiplo, síndrome mielodisplásica), doença de Hodgkin, doença de não Hodgkin [linfoma maligno]; Pele: melanoma maligno, carcinoma basocelular, carcinoma das células escamosas, sarcoma de Karposi, nevos displásicos, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoríase; e Glândulas adrenais: neuroblastoma. Portanto, o termo “célula cancerosa” como aqui apresentado, inclui célula afligidas por qualquer uma das condições indicadas acima.
[00202] Em uma modalidade, os cânceres que podem ser tratados pelos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados, composições e métodos da invenção incluem, mas não se limitam a: câncer de pulmão, câncer pancreático, câncer de cólon, câncer colorretal, leucemia mieloide, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crônica, leucemia
103 / 500 mielomonocítica crônica, câncer de tireoide, síndrome mielodisplásica, carcinoma de bexiga, carcinoma epidérmico, melanoma, câncer de mama, câncer de próstata, cânceres de cabeça e pescoço, câncer ovariano, cânceres cerebrais, cânceres de origem mesenquimal, sarcomas, tetracarcinomas, neuroblastomas, carcinomas renais, hepatomas, linfoma de não Hodgkin, mieloma múltiplo, e carcinoma anaplásico de tireoide.
[00203] Em uma modalidade, a invenção fornece métodos para tratamento de sujeitos usando um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo), em que o sujeito sofre de uma infecção viral. Em uma modalidade, a infecção viral é uma infecção com um vírus selecionado a partir do grupo que consiste em vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da hepatite (A, B, ou C), vírus do herpes (por exemplo, VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-II, e CMV, vírus Epstein-Barr), adenovírus, vírus da influenza, flavivírus, ecovírus, rinovírus, vírus Coxsackie, coronavírus, vírus sincicial respiratório, vírus da caxumba, rotavírus, vírus do sarampo, vírus da rubéola, parvovírus, vírus da vacínia, vírus HTLV, vírus da dengue, papilomavírus, vírus do molusco, vírus da poliomielite, vírus da raiva, vírus JC ou vírus da encefalite arboviral.
[00204] Em uma modalidade, a invenção fornece métodos para tratamento de sujeitos usando um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção, em que o sujeito sofre de uma infecção bacteriana. Em uma modalidade, a infecção bacteriana é infecção com uma bactéria selecionada a partir do grupo que consiste em Chlamydia, bactérias riquettsiais, micobactérias, estafilococos, estreptococos, pneumococos, meningococos e gonococos, Klebsiella, Proteus, Serratia, Pseudomonas, Legionella, Corynebacterium diphtheriae, Salmonella, bacilos, Vibrio cholerae, Clostridium tetan, Clostridium botulinum, Bacillus anthricis, Yersinia pestis, Mycobacterium leprae, Mycobacterium lepromatosis, e
104 / 500 Borriella.
[00205] Em uma modalidade, a invenção fornece métodos para tratamento de sujeitos usando um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção, em que o sujeito sofre de uma infecção fúngica. Em uma modalidade, a infecção fúngica é uma infecção com um fungo selecionado a partir do grupo que consiste em Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Gênero Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum.
[00206] Em uma modalidade, a invenção fornece métodos para tratamento de sujeitos usando um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção, em que o sujeito sofre de uma infecção parasítica. Em uma modalidade, a infecção parasítica é uma infecção com um parasita selecionado a partir do grupo que consiste em Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleria fowleri, Acanthamoeba, Giardia lambia, Cryptosporidium, Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii e Nippostrongylus brasiliensis.
[00207] Um “sujeito” pode ser um mamífero como um humano, cão, cavalo, vaca, camundongo, rato, macaco (por exemplo, macaco Cynomolgus, por exemplo, Macaca fascicularis) ou coelho. Em modalidades preferidas da invenção, o sujeito é um sujeito humano.
[00208] O termo “em associação com” indica que os componentes administrados em um método da presente invenção (por exemplo, um anticorpo anti-CD27 (por exemplo, anticorpo humanizado) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) juntamente com um agente anticâncer podem ser formulados como uma composição única para liberação simultânea ou
105 / 500 podem ser formulados separadamente em duas ou mais composições (por exemplo, um kit). Cada componente pode ser administrado a um sujeito em um tempo diferente de quando o outro componente é administrado; por exemplo, cada administração pode ser dada não simultaneamente (por exemplo, separada ou sequencialmente) em vários intervalos ao longo de um período de tempo. Além disso, os componentes separados podem ser administrados a um sujeito pela mesma rota ou por uma rota diferente.
[00209] Em modalidades específicas, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A ou versões humanizadas dos mesmos) podem ser usados sozinhos, ou em associação com outros agentes terapêuticos adicionais e/ou procedimentos terapêuticos, para tratamento ou prevenção de qualquer doença como câncer, por exemplo, como aqui discutido, em um sujeito que necessita de tal tratamento ou prevenção. Composições, por exemplo, composições farmacêuticas compreendendo um carreador farmaceuticamente aceitável, compreendendo tais anticorpos e fragmentos em associação com outros agentes terapêuticos também são parte da presente invenção.
[00210] Por conseguinte, a presente invenção fornece um método de tratamento de câncer em um sujeito humano, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno aqui revelado, opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico. A presente invenção também fornece um método de tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa em um sujeito humano, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno aqui revelado, opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico. A presente invenção também fornece um método de aumento da atividade de uma célula imune, compreendendo administrar ao sujeito que necessita da mesma uma quantidade eficaz de um anticorpo ou de
106 / 500 um fragmento de ligação ao antígeno aqui revelado. Em uma modalidade, o método é usado para: o tratamento de câncer; o tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa; ou como um adjuvante de vacina. Em outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção, para uso em: tratamento de câncer; aumento da atividade de uma célula imune; ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa em combinação com um outro agente farmacêutico. Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece o uso do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção para a fabricação de um medicamento para aumentar a ativação de célula imune; tratamento de câncer; ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa em combinação com um outro agente farmacêutico. Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma combinação de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno da invenção e um outro agente farmacêutico para o tratamento de câncer; aumento da atividade de uma célula imune; ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa.
[00211] Em outras modalidades, a invenção fornece um método de tratamento de câncer ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa em um sujeito humano, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno da invenção, ou de um vetor de expressão ou de uma célula hospedeira de acordo com a invenção opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico.
[00212] Em modalidades específicas, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser usados sozinhos, ou em associação com vacinas antitumorais. Exemplos de vacinas antitumorais incluem mas não se limitam às vacinas para câncer causado por infecção por Papilomavírus Humano (HPV) como Gardasil®, Gardasil® e Cervarix®;
107 / 500 vacinas que previnem câncer de fígado causado pelo vírus da hepatite B como Engerix-B® e Recombivax HB®; terapia viral oncolítica que aciona a resposta imune como Imlygic®; vacinas de DNA como vacina de DNA plasmidial Synchotrope MA2M e ZYC101; vacina de DNA mamaglobina-a (consulte, Clinical Cancer Res. 2014 20(23):5964-75); vacinas baseadas em vetor como PSA-TRICOM (prostvac), PANVAC-VF, vacina de PSA baseada em Listeria monocytogenes (consulte Therapeutic Advances in Vaccines, 2014, 2(5) 137- 148), Listeria-mesotelina Adeno-CEA; vacinas alogênicas como GVAX, BLP-25 (anti-Ankara-mucina 1), Belagempumatucel-L, TG4010, vacina de fator de crescimento epidérmico CIMAvax, NY-ESO, GM.CD40L-CCL21; vacinas autólogas como: Adeno-CD40L, BCG, INGN-225, vacinas de células dendríticas como Provenge® (Sipuleucel-T), rF-CEA-MUC1-TRICOM (panvac-DC); vacinas antigênicas como MUC-1 (stimuvax), NY-ESO-1, GP- 100, MAGE-A3 (gene A3 codificador de antígeno de melanoma), INGN-225 (consulte Pharmacology & Therapeutics 153 (2015) 1-9).
[00213] Em modalidades específicas, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser usados sozinhos, ou em associação com agentes quimioterapêuticos.
[00214] Em modalidades específicas, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser usados sozinhos, ou em associação com radioterapia.
[00215] Em modalidades específicas, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser usados sozinhos, ou em associação com terapias direcionadas. Exemplos de terapias direcionadas include: terapias hormonais, inibidores de transdução de sinal (por exemplo, inibidores de EGFR, como cetuximabe (Erbitux) e erlotinibe (Tarceva));
108 / 500 inibidores de HER2 (por exemplo, trastuzumabe (Herceptina) e pertuzumabe (Perjeta)); inibidores de BCR-ABL (como imatinibe (Gleevec) e dasatinibe (Sprycel)); inibidores de ALK (como crizotinibe (Xalkori) e ceritinibe (Zykadia)); inibidores de BRAF (como vemurafenibe (Zelboraf) e dabrafenibe (Tafinlar)), moduladores de expressão gênica, indutores de apoptose (por exemplo, bortezomibe (Velcade) e carfilzomibe (Kyprolis)), inibidores de angiogênese (por exemplo, bevacizumabe (Avastin) e ramucirumabe (Cyramza), anticorpos monoclonais ligados a toxinas (por exemplo, brentuximabe vedotina (Adcetris) e ado-trastuzumabe entansina (Kadcyla)).
[00216] Em modalidades específicas, os anticorpos anti-CD27 ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser usados em combinação com um agente terapêutico anticâncer ou fármaco imunomodulatório como um inibidor de receptor imunomodulatório, por exemplo, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente ao receptor.
[00217] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) é usado em associação com um ou mais dentre: anticorpo anti-PD1, anticorpo anti-PDL1, anticorpo anti-TIGIT, anticorpo anti-CTLA4, anticorpo anti-CS1 (por exemplo, elotuzumabe), anticorpo anti-KIR2DL1/2/3 (por exemplo, lirilumabe), anticorpo anti-CD137 (por exemplo, urelumabe), anticorpo anti-GITR (por exemplo, TRX518), anticorpo anti-PD1 (por exemplo, pembrolizumabe, nivolumabe, pidilizumabe (CT-011)), anticorpo anti-PD-L1 (por exemplo, BMS-936559, Durvalumabe, MSB0010718C ou MPDL3280A), anti- anticorpo PD-L2, anticorpo anti-ILT1, anticorpo anti-ILT2, anticorpo anti- ILT3, anticorpo anti-ILT4, anticorpo anti-ILT5, anticorpo anti-ILT6, anticorpo
109 / 500 anti-ILT7, anticorpo anti-ILT8, anticorpo anti-CD40, anticorpo anti-OX40, anticorpo anti-ICOS, anticorpo anti-SIRPα, anticorpo anti-KIR2DL1, anticorpo anti-KIR2DL2/3, anticorpo anti-KIR2DL4, anticorpo anti- KIR2DL5A, anticorpo anti-KIR2DL5B, anticorpo anti-KIR3DL1, anticorpo anti-KIR3DL2, anticorpo anti-KIR3DL3, anticorpo anti-NKG2A, anticorpo anti-NKG2C, anticorpo anti-NKG2E, anticorpo anti-4-1BB (por exemplo, PF- 05082566), anticorpo anti-TSLP, anticorpo anti-IL-10, IL-10 ou IL-10 PEGuilada, ou qualquer inibidor molecular orgânico pequeno de tais alvos.
[00218] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-PD1 (por exemplo, pembrolizumabe, nivolumabe, pidilizumabe (CT-011)).
[00219] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-PDL1 (por exemplo, BMS-936559, Durvalumabe, MSB0010718C ou MPDL3280A).
[00220] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-CTLA4.
[00221] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-CS1.
[00222] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação
110 / 500 com um anticorpo anti-KIR2DL1/2/3.
[00223] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-CD137 (por exemplo, urelumabe).
[00224] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-GITR (por exemplo, TRX518).
[00225] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-PD-L2.
[00226] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL1.
[00227] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL2.
[00228] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL3.
[00229] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anti-ITL4 anticorpo.
111 / 500
[00230] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL5.
[00231] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL6.
[00232] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL7.
[00233] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ITL8.
[00234] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-CD40.
[00235] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-OX40.
[00236] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR2DL1.
[00237] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou
112 / 500 um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR2DL2/3.
[00238] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR2DL4.
[00239] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR2DL5A.
[00240] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR2DL5B.
[00241] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR3DL1.
[00242] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR3DL2.
[00243] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-KIR3DL3.
[00244] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo,
113 / 500 anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-NKG2A.
[00245] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-NKG2C.
[00246] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-ICOS.
[00247] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-SIRPα.
[00248] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-4-1BB.
[00249] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-IL-10.
[00250] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um anticorpo anti-TSLP.
[00251] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação
114 / 500 com IL-10 ou IL-10 PEGuilada.
[00252] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um ou mais de um inibidor (por exemplo, uma molécula orgânica pequena ou um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) como: um inibidor de MTOR (alvo mamífero de rapamicina), um agente citotóxico, um agente de platina, um inibidor de EGFR, um inibidor de VEGF, um estabilizador de microtúbulo, um taxano, um inibidor de CD20, um inibidor de CD52, um inibidor de CD30, um inibidor de RANK (ativador do receptor de fator nuclear kappa-B), um agonista de STING, um antagonista de CXCR2, um inibidor de RANKL (ativador de receptor do ligante de fator nuclear kappa-B), um inibidor de ERK, um inibidor de MAP-Cinase, um inibidor de AKT, um inibidor de MEK, um inibidor de PARP, um inibidor de PI3K, um inibidor de HER1, um inibidor de HER2, um inibidor de HER3, um inibidor de HER4, um inibidor de Bcl2, um inibidor de CD22, um inibidor de CD79b, um inibidor de ErbB2, ou um inibidor da farnesil-proteína- transferase.
[00253] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com qualquer um ou mais dentre: ácido 13-cis-retinoico, 3-[5- (metilsulfonilpiperadinametil)-indolil]-quinolona, 4-hidroxitamoxifeno, 5- desoxiuridina, 5'-desoxi-5-fluorouridina, 5-fluorouracil, 6-mecaptopurina, 7- hidroxistaurosporina, A-443654, acetato de abiraterona, abraxano, ABT-578, acolbifeno, ADS-100380, ALT-110, altretamina, amifostina, aminoglutetimida, anrubicina, Ansacrina, anagrelida, anastrozol, angiostatina, AP-23573, ARQ-197, arzoxifeno, AS-252424, AS-605240, asparaginase, AT- 9263, atrasentana, axitinibe, AZD1152, vacina contra Bacillus Calmette-
115 / 500
Guerin (BCG), batabulina, BC-210, besodutox, bevacizumabe, bicalutamida, Bio111, BIO140, bleomicina, BMS-214662, BMS-247550, BMS-275291, BMS-310705, bortezimibe, buserelina, bussulfano, calcitriol, camptotecina, canertinibe, capecitabina, carboplatina, carmustina, CC8490, Cediranibe, CG- 1521, CG-781, clamidocina, clorambucil, clorotoxina, cilengitida, cimitidina, cisplatina, cladribina, clodronato, COL-3, CP-724714, ciclofosfamida, ciproterona, acetato de ciproterona, citarabina, citosina-arabinosídeo, dacarbazina, dacinostate, dactinomicina, dalotuzumabe, danusertibe, dasatanibe, daunorrubicina, decatanibe, deguelina, denileucina, desoxicoformicina, depsipeptídeo, diarilpropionitrila, dietilstilbestrol, diftitox, docetaxel, dovitinibe, doxorubicina, droloxifeno, edotecarina, ítrio-90 edotreotida marcado com ítrio-90, edotreotida, EKB-569, EMD121974, endostatina, enzalutamida, enzastaurina, epirubicina, epitilona BE, ERA-923, Erbitux, erlotinibe, estradiol, estramustina, etoposídeo, everolimo, exemestano, ficlatuzumabe, finasterida, flavopiridol, floxuridina, fludarabina, fludrocortisona, fluoximesterona, flutamida, regime FOLFOX, Fulvestranto, galeterona, gefitinibe, gencitabina, gimatecana, goserelina, acetato de goserelina, gossipol, GSK461364, GSK690693, HMR-3339, caproato de hidroxiprogesterona, hidroxiureia, IC87114, idarrubicina, idoxifeno, ifosfamida, IM862, imatinibe, IMC-1C11, INCB24360, INO1001, interferon, interleucina-12, ipilimumabe, irinotecano, JNJ-16241199, cetoconazol, KRX- 0402, lapatinibe, lasofoxifeno, letrozol, leucovorina, leuprolida, acetato de leuprolida, levamisol, paclitaxel capturado por lipossoma, lomustina, lonafarnibe, lucantona, LY292223, LY292696, LY293646, LY293684, LY294002, LY317615, marimastate, meloretamina, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, melfalana, mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitramicina, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, tozasertibe, MLN8054, neovastate, Neratinibe, neuradiabe, nilotinibe, nilutimida, nolatrexed, NVP-BEZ235, oblimerseno, octreotida, ofatumumabe,
116 / 500 olaparibe, oregovomabe, orteronel, oxaliplatina, paclitaxel, palbociclibe, pamidronato, panitumumabe, pazopanibe, PD0325901, PD184352, PEG- interferon, pemetrexede, pentostatina, perifosina, mostarda de fenilalanina, PI-103, pictilisibe, PIK-75, pipendoxifeno, PKI-166, plicamicina, porfimer, prednisona, procarbazina, progestinas, PX-866, R-763, raloxifeno, raltitrexede, razoxin, ridaforolimo, rituximabe, romidepsina, RTA744, rubitecana, scriptaid, Sdx102, seliciclibe, selumetinibe, semaxanibe, SF1126, sirolimo, SN36093, sorafenibe, espironolactona, esqualamina, SR13668, estreptozocina, SU6668, suberoilanalida ácido hidroxâmico, sunitinibe, estrogênio sintético, talampanel, talimogene laerparepveque, tamoxifeno, temozolomida, tensirolimo, teniposídeo, tesmilifeno, testosterona, tetrandrina, TGX-221, talidomida, tioguanina, tiotepa, ticilimumabe, tipifarnibe, tivozanibe, TKI-258, TLK286, topotecana, citrato de toremifeno, trabectedina, trastuzumabe, tretinoína, tricostatina A, fosfato de triciribina mono-hidrato, pamoato de triptorelina, TSE-424, mostarda de uracil, ácido valproico, valrubicina, vandetanibe, vatalanibe, VEGF-Trap, vimblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, vitaxina, vitespan, vorinostate, VX-745, wortmanina, Xr311, zanolimumabe, ZK186619, ZK-304709, ZM336372, ZSTK474.
[00254] Exemplos não limitadores de agentes anticâncer adequados a serem usados em combinação com um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção incluem agentes citostáticos, agentes citotóxicos, agentes terapêuticos direcionados (moléculas pequenas, agentes biológicos, siRNA e microRNA) contra cânceres e doenças neoplásicas: 1) Antimetabólitos (como metotrexato, 5-fluorouracil, gencitabina, fludarabina, capecitabina), 2) Agentes alquilantes, como temozolomida, ciclofosfamida, 3) Agentes interativos com DNA e danificadores de DNA,
117 / 500 como cisplatina, oxaliplatina, doxorubicina, 4) Irradiação ionizante, como radioterapia, 5) Inibidores de topoisomerase II, como etoposídeo, doxorubicina, 6) Inibidores de topoisomerase I, como irinotecano, topotecano, 7) Agentes que interagem com tubulina, como paclitaxel, docetaxel, abraxano, epotilonas, 8) Inibidores de proteínas motoras cinosinas com função específica na formação dos fusos mitóticos e meióticos, 9) Inibidores dos pontos de checagem dos fusos celulares, 10) Inibidores de poli(ADP-ribose)-polimerase (PARP), como olaparibe, niraparibe e veliparibe, 11) Inibidores das metaloproteases da matriz (MMP), 12) Inibidores de proteases, como inibidores de catepsina D e de catepsina K, 13) Inibidores de proteassoma ou de ubiquitinação, como bortezomibe, 14) Ativador de p53 mutante para restaurar sua atividade de p53 de tipo selvagem, 15) p53-Adenoviral, 16) Inibidores de Bcl-2, como ABT-263, 17) Moduladores de proteínas de choque térmico (HSP), como geldanamicina e 17-AAG, 18) Inibidores de histona-desacetilase (HDAC), como vorinostate (SAHA), 19) Agentes moduladores de hormônios sexuais: a. antiestrogênios, como tamoxifeno, fulvestranto, b. moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERM),
118 / 500 como raloxifeno, c. antiandrogênios, como bicalutamida, flutamida, d. agonistas de LHRH, como leuprolida, e. inibidores de 5α-redutase, como finasterida, f.
Citocromo-P450-C17-liase (CYP450c17, também chamada de 17αC); g. inibidores de aromatase, como letrozol, anastrozol, exemestano, 20) Inibidores de EGFR-cinase, como gefitinibe, erlotinibe, laptinibe, 21) Inibidores duais de erbB1 e erbB2, como lapatinibe, 22) Inibidores de cinases multidirecionadas (serina/treonina- e/ou tirosina-cinase): a. inibidores de ABL-cinase, imatinibe e nilotinibe, dasatinibe, b. inibidores de EGFR-1, VEGFR-2, PDGFR, KDR, FLT, c- Kit, Tie2, Raf, MEK e ERK, como sunitinibe, sorafenibe, candetanibe, pazopanibe, PLX-4032, axitinibe, PTK787, GSK-1120212, c. inibidores de cinase Polo-like, d.
Inibidores de aurora-cinase, e. inibidor de JAK, f. inibidores de c-MET-cinase, g. inibidores de PI3K e de mTOR, como GDC-0941, BEZ- 235, BKM-120 e AZD-8055, h.
Rapamicina e seus análogos, como tensirolimo, everolimo, e deforolimo, i. agonista de STING (Estimulador de Genes de Interferon), j. inibidor de CXCR (Receptor de Quimiocina CXC), agonista de CXCR2, 23) e outros agentes anticâncer (também conhecidos como
119 / 500 agentes antineoplásicos) incluem mas não se limitam a ara-C, adriamicina, citoxana, Carboplatina, Mostarda de uracil, Clormetina, Ifosfomida, Melfalana, Clorambucil, Pipobromana, Trietilenomelamina, Trietilenotiofosforamina, Bussulfano, Carmustina, Lomustina, Estreptozocina, Dacarbazina, Floxuridina, Citarabina, 6-Mercaptopurina, 6- Tioguanina, Fosfato de fludarabina, Pentostatina, Vimblastina, Vincristina, Vindesina, Vinorelbina, Navelbina, Bleomicina, Dactinomicina, Daunorubicina, Doxorubicina, Epirubicina, teniposídeo, citarabina, pemetrexede, Idarrubicina, Mitramicina, Desoxicoformicina, Mitomicina-C, L-Asparaginase, Teniposídeo, Etinilestradiol, Dietilstilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Propionato de dromostanolona, Testolactona, Acetato de megestrol, Metilprednisolona, Metiltestosterona, Prednisolona, Triancinolona, Clorotrianiseno, Hidroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramustina, Flutamida, Acetato de medroxiprogesterona, Toremifeno, goserelina, Carboplatina, Hidroxiureia, Ansacrina, Procarbazina, Mitotano, Mitoxantrona, Levamisol, Droloxafine, Hexametilmelamina, Bexxar, Zevalina, Trisenox, Profimer, Tiotepa, Altretamina, Doxil, Ontak, Depocyt, Aranesp, Neupogen, Neulasta, Kepivance.
[00255] 24) Inibidores da farnesil-proteína-transferase, como, SARASAR™ (4-[2-[4-[(11R)-3,10-dibromo-8-cloro-6,11-di-hidro-5H- benzo[5,6]ciclo-hepta[1,2-b]piridin-11-il-]-1-piperidinil]-2-oxoetil]- piperidinacarboxamida, tipifarnibe, 25) Interferons, como Intron A, Peg-Intron, 26) Anticorpos anti-erbB1, como Cetuximabe, Panitumumabe, 27) Anticorpos anti-erbB2, como Trastuzumabe, 28) Anticorpos anti-CD52, como Alentuzumabe, 29) Anticorpos anti-CD20, como Rituximabe, 30) Anticorpos anti-CD33, como Gentuzumabe ozogamicina, 31) Anticorpos anti-VEGF, como Avastin,
120 / 500 32) Ligantes TRIAL (TRAIL), como Lexatumumabe, mapatumumabe, e AMG-655 33) Anticorpos anti-CTLA-4, como ipilimumabe, 34) Anticorpos contra CTA1, CEA, CD5, CD19, CD22, CD30, CD44, CD44V6, CD55, CD56, EpCAM, FAP, MHCII, HGF, IL-6, MUC1, PSMA, TAL6, TAG-72, TRAILR, VEGFR, IGF-2, FGF, 35) Anticorpos anti-IGF-1R, como dalotuzumabe (MK-0646) e robatumumabe (SCH 717454).
[00256] “Moduladores de receptor de estrogênio” referem-se aos compostos que interferem com ou inibem a ligação do estrogênio ao receptor, independente do mecanismo. Exemplos de moduladores de receptor de estrogênio incluem, mas não se limitam a, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY117081, toremifeno, fulvestranto, 4-[7-(2,2-dimetil-1- oxopropoxi-4-metil-2-[4-[2-(1-piperidinil)etoxi]fenil]-2H-1-benzopiran-3-il]- fenil-2,2-dimetilpropanoato, 4,4’-di-hidroxibenzofenona-2,4-dinitrofenil- hidrazona, e SH646.
[00257] “Moduladores de receptor de androgênio” referem-se aos compostos que interferem com ou inibem a ligação de androgênios ao receptor, independente do mecanismo. Exemplos de moduladores de receptor de androgênio incluem finasterida e inibidores de 5α-redutase, nilutamida, flutamida, bicalutamida, liarozol, e acetato de abiraterona.
[00258] “Moduladores de receptor de retinoide” referem-se aos compostos que interferem com ou inibem a ligação de retinoide ao receptor, independente do mecanismo. Exemplos de tais moduladores de receptor de retinoide incluem bexaroteno, tretinoína, ácido 13-cis-retinoico, ácido9-cis- retinoico, α-difluorometilornitina, ILX23-7553, trans-N-(4’-hidroxifenil) retinamida, e N-4-carboxifenilretinamida.
[00259] “Agentes citotóxicos/citostáticos” referem-se aos compostos que causam morte celular ou inibem a proliferação celular principalmente
121 / 500 pela interação direta com o funcionamento da célula ou inibem ou interferem com a miose celular, incluindo agentes alquilantes, fatores de necrose tumoral, intercaladores, compostos ativáveis por hipóxia, inibidores de microtúbulo/agentes estabilizadores de microtúbulo, inibidores de cinesinas mitóticas, inibidores de histona-desacetilase, inibidores de cinases envolvidas em progressão mitótica, inibidores de cinases envolvidas nas vias de transdução de sinais de citocinas e de fatores de crescimento, antimetabólitos, modificadores de resposta biológica, agentes terapêuticos hormonais/anti- hormonais, fatores de crescimento hematopoiético, agentes terapêuticos direcionados por anticorpos monoclonais, inibidores de topoisomerase, inibidores de proteassoma, inibidores de ubiquitina-ligase, e inibidores de aurora-cinase.
[00260] Exemplos de agentes citotóxicos/citostáticos incluem, mas não se limitam a, compostos coordenadores de platina, sertenef, caquectina, ifosfamida, tasonermina, lonidamina, carboplatina, altretamina, prednimustina, dibromodulcitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatina, oxaliplatina, temozolomida, heptaplatina, estramustina, tosilato de improsulfano, trofosfamida, nimustia, cloreto de dibrospídio, pumitepa, lobaplatina, satraplatina, profiromicina, cisplatina, irofulveno, dexifosfamida, cis-aminadicloro(2-metil-piridina)platina, benzilguanina, glifosfamida, GPX100, tetracloreto de (trans,trans,trans)-bis-mu-(hexano-1,6-diamina)-mu- [diamina-platina(II)]bis[diamina(cloro)platina(II)], diarizidinilespermina, trióxido arsênico, 1-(11-dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina, zorrubicina, idarrubicina, daunorrubicina, bisantreno, mitoxantrona, pirarubicina, pinafide, valrubicina, anrubicina, antineoplastona, 3’-desamino- 3’-morfolino-13-desoxo-10-hidroxicarminomicina, anamicina, galarrubicina, elinafide, MEN10755, 4-demetoxi-3-deamino-3-aziridinil-4-metilsulfonil- daunoreubicina (consulte WO 00/50032).
[00261] Um exemplo de um composto ativável por hipóxia é
122 / 500 tirapazamina.
[00262] Exemplos de inibidores de proteassoma incluem mas não se limitam a lactacistina e MLN-341 (Velcade).
[00263] Exemplos de inibidores de microtúbulo/agentes estabilizadores de microtúbulo incluem taxanos em geral. Compostos específicos incluem paclitaxel (Taxol®), sulfato de vindesina, 3’,4’-didesidro-4’-desoxi-8’- norvincaleucoblastina, docetaxol (Taxotere®), rizoxina, dolastatina, isetionato de mivobulina, auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunina, criptoficina, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4- metoxifenil)benzenossulfonamida, vimblastina anidra, N,N-dimetil-L-valil-L- valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolina-t-butilamida, (SEQ ID NO:68), TDX258, as epotilonas (consulte por exemplo as Patentes U.S. nºs 6.284.781 e 6.288.237) e BMS188797.
[00264] Alguns exemplos de inibidores de topoisomerase são topotecano, hicaptamina, irinotecano, rubitecano, 6-etoxipropionil-3’,4’-O- exo-benzilideno-cartreusina, 9-metoxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo[3,4,5- kl]acridina-2-(6H)-propanamina, 1-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-di-hidro-9- hidroxi-4-metil-1H,12H-benzo[de]pirano[3’,4’:b,7]- indolizino[1,2b]quinolina-10,13(9H,15H)diona, lurtotecano, 7-[2-(N- isopropilamino)etil]-(20S)-camptotecina, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de etoposídeo, teniposídeo, sobuzoxano, 2’-dimetilamino- 2’-desoxi-etoposídeo, GL331, N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidroxi-5,6-dimetil- 6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida, asulacrina, (5a,5aB,8aa,9b)-9-[2- [N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hydroxi-3,5- dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a,9-hexo-hidrofuro(3’,4’:6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol- 6-ona, 2,3-(metilenodioxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridínio, 6,9-bis[(2-aminoetil)amino]benzo[g]isoguinolina-5,10-diona, 5-(3- aminopropilamino)-7,10-di-hidroxi-2-(2-hidroxietilaminometil)-6H- pirazolo[4,5,1-de]acridin-6-ona, N-[1-[2(dietilamino)etilamino]-7-metoxi-9-
123 / 500 oxo-9H-tioxanten-4-ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridina-4- carboxamida, 6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3-hidroxi-7H-indeno[2,1-c] quinolin-7-ona, e dimesna.
[00265] Exemplos de inibidores de cinesinas mitóticas, e em particular da cinecina mitótica humana KSP, são descritos em detalhes nas Publicações WO03/039460, WO03/050064, WO03/050122, WO03/049527, WO03/049679, WO03/049678, WO04/039774, WO03/079973, WO03/099211, WO03/105855, WO03/106417, WO04/037171, WO04/058148, WO04/058700, WO04/126699, WO05/018638, WO05/019206, WO05/019205, WO05/018547, WO05/017190, US2005/0176776. Em uma modalidade inibidores de cinesinas mitóticas incluem, mas não se limitam a inibidores de KSP, inibidores de MKLP1, inibidores de CENP-E, inibidores de MCAK e inibidores de Rab6-KIFL.
[00266] Exemplos de “inibidores de histona-desacetilase” incluem, mas não se limitam a, SAHA, TSA, oxanflatina, PXD101, MG98 e scriptaid. Referências adicionais a outros inibidores de histona-desacetilase podem ser encontradas no seguinte manuscrito; Miller, T.A. et al. J. Med. Chem. 46(24):5097-5116 (2003).
[00267] “Inibidores de cinases envolvidas em progressão mitótica” incluem, mas não se limitam a, inibidores de aurora-cinase, inibidores de cinases Polo-like (PLK; em particular inibidores de PLK-1), inibidores de bub-1 e inibidores de bub-R1. Um exemplo de um “inibidor de aurora-cinase” é VX-680.
[00268] “Agentes antiproliferativos” incluem oligonucleotídeos de RNA e DNA antissenso como G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231, e INX3001, e antimetabólitos como enocitabina, carmofur, tegafur, pentostatina, doxifluridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, ocfosfato de citarabina, fosteabina sódica hidrato, raltitrexede, paltitrexid, emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexede, pemetrexede,
124 / 500 nelzarabina, 2’-desoxi-2’-metilidenecitidina, 2’-fluorometileno-2’- desoxicitidina, N-[5-(2,3-di-hidro-benzofuril)sulfonil]-N’-(3,4- diclorofenil)ureia, N6-[4-desoxi-4-[N2-[2(E),4(E)- tetradecadienoil]glicilamino]-L-glicero-B-L-mano-heptopiranosil]adenina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetra- hidro-3H-pirimidino[5,4-b][1,4]tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-L-glutâmico, aminopterina, 5-flurouracil, alanosina, éster 11-acetil-8-(carbamoiloximetil)- 4-formil-6-metoxi-14-oxa-1,11-diazatetraciclo(7.4.1.0.0)-tetradeca-2,4,6- trien-9-ílico de ácido acético, swainsonina, lometrexol, dexrazoxano, metioninase, 2’-ciano-2’-desoxi-N4-palmitoil-1-B-D- arabinofuranosilcitosina, 3-aminopiridina-2-carboxaldeído-tiossemicarbazona e trastuzumabe.
[00269] Exemplos de agentes terapêuticos direcionados por anticorpos monoclonais incluem aqueles agentes terapêuticos que têm agentes citotóxicos ou radioisótopos ligados a um anticorpo monoclonal específico para célula cancerosa ou específico para célula-alvo. Exemplos incluem Bexxar.
[00270] “Inibidor de prenil-proteína-transferase” refere-se a um composto que inibe qualquer uma ou qualquer combinação das enzimas prenil-proteína-transferase, incluindo farnesil-proteína-transferase (FPTase), geranilgeranil-proteína-transferase tipo-I (GGPTase-I), e geranilgeranil- proteína-transferase tipo-II (GGPTase-II, também chamada de Rab GGPTase).
[00271] Exemplos de inibidores de prenil-proteína-transferase podem ser encontrados nas seguintes publicações e patentes: WO 96/30343, WO 97/18813, WO 97/21701, WO 97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO 98/29119, WO 95/32987, Patente U.S. nº 5.420.245, Patente U.S. nº
5.523.430, Patente U.S. nº 5.532.359, Patente U.S. nº 5.510.510, Patente U.S. nº 5.589.485, Patente U.S. nº 5.602.098, Publicação de Patente Europeia nº
125 / 500
0.618.221, Publicação de Patente Europeia nº 0.675.112, Publicação de Patente Europeia nº 0.604.181, Publicação de Patente Europeia nº 0.696.593, WO 94/19357, WO 95/08542, WO 95/11917, WO 95/12612, WO 95/12572, WO 95/10514, Patente U.S. nº 5.661.152, WO 95/10515, WO 95/10516, WO 95/24612, WO 95/34535, WO 95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO 96/06193, WO 96/16443, WO 96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO 96/24611, WO 96/24612, WO 96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736, Patente U.S. nº 5,571,792, WO 96/17861, WO 96/33159, WO 96/34850, WO 96/34851, WO 96/30017, WO 96/30018, WO 96/30362, WO 96/30363, WO 96/31111, WO 96/31477, WO 96/31478, WO 96/31501, WO 97/00252, WO 97/03047, WO 97/03050, WO 97/04785, WO 97/02920, WO 97/17070, WO 97/23478, WO 97/26246, WO 97/30053, WO 97/44350, WO 98/02436, e Patente U.S. nº 5.532.359. Para um exemplo da função de um inibidor de prenil-proteína-transferase sobre angiogênese consulte European J. of Cancer, Vol. 35, No. 9, pp.1394-1401 (1999).
[00272] “Inibidores de angiogênese” referem-se aos compostos que inibem a formação de novos vasos sanguíneos, independente do mecanismo. Exemplos de inibidores de angiogênese incluem, mas não se limitam a, inibidores de tirosina-cinase, como inibidores dos receptores de tirosina- cinase Flt-1 (VEGFR1) e Flk-1/KDR (VEGFR2), inibidores de fatores de crescimento derivados de epiderme, derivados de fibroblasto, ou derivados de plaqueta, inibidores de MMP (metaloprotease da matriz), bloqueadores de integrinas, interferon-α, interleucina-12, polissulfato de pentosana, inibidores de ciclo-oxigenase, incluindo anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) como aspirina e ibuprofeno e, também, inibidores seletivos de ciclo- oxigenase-2 como celecoxibe e rofecoxibe (PNAS, Vol. 89, p. 7384 (1992); JNCI, Vol. 69, p. 475 (1982); Arch. Opthalmol., Vol. 108, p.573 (1990); Anat. Rec., Vol. 238, p. 68 (1994); FEBS Letters, Vol. 372, p. 83 (1995); Clin, Orthop. Vol. 313, p. 76 (1995); J. Mol. Endocrinol., Vol. 16, p.107 (1996);
126 / 500 Jpn. J. Pharmacol., Vol. 75, p. 105 (1997); Cancer Res., Vol. 57, p. 1625 (1997); Cell, Vol. 93, p. 705 (1998); Intl. J. Mol. Med., Vol. 2, p. 715 (1998); J. Biol. Chem., Vol. 274, p. 9116 (1999)), anti-inflamatórios não esteroidais (como corticosteroides, mineralocorticoides, dexametasona, prednisona, prednisolona, metilprednisolana, betametasona), carboxiamidotriazol, combretastatina A-4, esqualamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol, talidomida, angiostatina, troponina-1, agonistas de angiotensina II (consulte Fernandez et al., J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)), e anticorpos para VEGF (consulte, Nature Biotechnology, Vol. 17, pp.963-968 (October 1999); Kim et al., Nature, 362, 841-844 (1993); WO 00/44777; e WO 00/61186).
[00273] Outros exemplos de inibidores de angiogênese incluem, mas não se limitam a, endostatina, ukraína, rampirnase, IM862, 5-metoxi-4-[2- metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1-oxaespiro[2,5]oct-6- il(cloroacetil)carbamato, acetildinanalina, 5-amino-1-[[3,5-dicloro-4-(4- clorobenzoil)fenil]metil]-1H-1,2,3-triazol-4-carboxamida, CM101, esqualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, fosfato de manopentose sulfatada, 7,7-(carbonil-bis[imino-N-metil-4,2-pirrolocarbonilimino[N-metil- 4,2-pirrol]-carbonilimino]-bis-(1,3-naftaleno-dissulfonato), e 3-[(2,4- dimetilpirrol-5-il)metileno]-2-indolinona (SU5416).
[00274] Outros agentes terapêuticos que modulam ou inibem a angiogênese e podem também ser usados em combinação com os compostos da presente invenção incluem os agentes que modulam ou inibem os sistemas de coagulação e fibrinólise (consulte a revisão em Clin. Chem. La. Med. 38:679-692 (2000)). Exemplos de tais agentes que modulam ou inibem as vias de coagulação e fibrinólise incluem, mas não se limitam a, heparina (consulte Thromb. Haemost. 80:10-23 (1998)), heparinas de peso molecular baixo e inibidores de carboxipeptidase U (também conhecidos como inibidores de inibidor da fibrinólise ativável pela tromina na sua forma ativada [TAFIa]) (consulte Thrombosis Res. 101:329-354 (2001)). Os inibidores de TAFIa têm
127 / 500 sido descritos nos documentos U.S. de números seriais 60/310.927 (depositado em 8 de Agosto de 2001) e 60/349.925 (depositado em 18 de Janeiro de 2002).
[00275] “Agentes que interferem com interfere aos receptores tirosina- cinases (RTKs)” referem-se aos compostos que inibem os RTKs e por conseguinte os mecanismos envolvidos na oncogênese e na progressão de tumor. Tais agentes incluem inibidores de c-Kit, Eph, PDGF, Flt3 e c-Met. Outros agentes incluem inibidores de RTKs como descritos por Bume-Jensen e Hunter, Nature, 411:355-365, 2001.
[00276] “Inibidores da via de sinalização de sobrevivência e da proliferação celular” referem-se aos compostos que inibem as cascatas de transdução de sinal a jusante dos receptores de superfície celular. Tais agentes incluem inibidores de serina/treonina-cinases (incluindo mas não se limitando a inibidores de Akt como descritos em WO 02/083064, WO 02/083139, WO 02/083140, US 2004-0116432, WO 02/083138, US 2004-0102360, WO 03/086404, WO 03/086279, WO 03/086394, WO 03/084473, WO 03/086403, WO 2004/041162, WO 2004/096131, WO 2004/096129, WO 2004/096135, WO 2004/096130, WO 2005/100356, WO 2005/100344, US 2005/029941, US 2005/44294, US 2005/43361, 60/734188, 60/652737, 60/670469), inibidores de Raf-cinase (por exemplo PLX-4032 ), inibidores de MEK (por exemplo Arry-162, RO-4987655 e GSK-1120212), inibidores de mTOR (por exemplo AZD-8055, BEZ-235 e everolimo), e inibidores de PI3K (por exemplo GDC-0941, BKM-120).
[00277] Como usados acima, “bloqueadores de integrinas” referem-se aos compostos que seletivamente antagonizam, inibem ou impedem a ligação de um ligante fisiológico à integrina v3, aos compostos que seletivamente antagonizam, inibem ou impedem a ligação de um ligante fisiológico à integrina αvβ5, aos compostos que seletivamente antagonizam, inibem ou impedem a ligação de um ligante fisiológico às ambas integrina v3 e
128 / 500 integrinav5, e aos compostos que seletivamente antagonizam, inibem ou impedem a atividade da(s) integrina(s) específica(s) expressada(s) sobre células endoteliais capilares. O termo refere-se, também, aos antagonistas das integrinas v6, v8, 11, 21, 51, 61 e 64. O termo refere-se, outrossim, aos antagonistas de qualquer combinação de integrinas v3, v5, v6, v8, 11, 21, 51, 61 e 64.
[00278] Alguns exemplos específicos de inibidores de tirosina-cinase incluem N-(trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida, 3-[(2,4- dimetilpirrol-5-il)metilidenil)indolin-2-ona, 17-(alilamino)-17- demetoxigeldanamicina, 4-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-metoxi-6-[3-(4- morfolinil)propoxil]quinazolina, N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)-4- quinazolinamina, BIBX1382, 2,3,9,10,11,12-hexa-hidro-10-(hidroximetil)- 10-hidroxi-9-metil-9,12-epoxi-1H-di-indolo[1,2,3-fg:3’,2’,1’-kl]pirrolo[3,4- i][1,6]benzodiazocin-1-ona, SH268, genisteína, STI571, CEP2563, 4-(3- clorofenilamino)-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinammetanossulfonato, 4-(3-bromo-4-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina, 4-(4’- hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina, SU6668, STI571A, N-4- clorofenil-4-(4-piridilmetil)-1-ftalazinamina, e EMD121974.
[00279] Combinações dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno presentemente reivindicados com agonistas de PPAR-γ (isto é, PPAR-gama) e agonistas de PPAR-δ (isto é, PPAR-delta) podem ser úteis no tratamento de determinadas malignidades. PPAR-γ e PPAR-δ são os receptores γ e δ ativados por proliferador de peroxissomo nuclear. A expressão de PPAR-γ sobre células endoteliais e seu envolvimento na angiogênese têm sido relatados na literatura (consulte J. Cardiovasc. Pharmacol. 1998; 31:909-913; J. Biol. Chem. 1999;274:9116-9121; Invest. Oftalmol Vis. Sci. 2000; 41:2309-2317). Mais recentemente, tem sido mostrado que os agonistas de PPAR-γ inibem a resposta angiogênica ao VEGF in vitro; tanto troglitazona quanto maleato rosiglitazona inibem o
129 / 500 desenvolvimento de neovascularização retiniana em camundongos. (Arch. Oftamol. 2001; 119:709-717). Exemplos de agonistas de PPAR-γ e de agonistas de PPAR-γ/α incluem, mas não se limitam a, Lynparza®, Rucaparib®, Talazoparib®, niraparibe, Veliparib®, tiazolidinadionas (como DRF2725, CS-011, troglitazona, rosiglitazona, e pioglitazona), fenofibrato, genfibrozil, clofibrato, GW2570, SB219994, AR-H039242, JTT-501, MCC- 555, GW2331, GW409544, NN2344, KRP297, NP0110, DRF4158, NN622, GI262570, PNU182716, DRF552926, ácido 2-[(5,7-dipropil-3-trifluorometil- 1,2-benzisoxazol-6-il)oxi]-2-metilpropiônico, e ácido2(R)-7-(3-(2-cloro-4-(4- fluorofenoxi)fenoxi)propoxi)-2-etilcromano-2-carboxílico.
[00280] O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção pode, também, ser útil para tratamento ou prevenção de câncer de mama em combinação com inibidores de aromatase. Exemplos de inibidores de aromatase incluem, mas não se limitam: anastrozol, letrozol e exemestano.
[00281] O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção pode, outrossim, ser útil para tratamento de câncer em combinação com os seguintes agentes quimioterapêuticos: abarelix (Plenaxis depot®); aldesleucina (Prokine®); Aldesleucina (Proleukin®); Alentuzumabe (Campath®); alitretinoína (Panretin®); alopurinol (Zyloprim®); altretamina (Hexalen®); amifostina (Ethyol®); anastrozol (Arimidex®); trióxido arsênico (Trisenox®); asparaginase (Elspar®); azacitidina (Vidaza®); cloridrato de bendamustina (Treanda®); bevacuzimabe (Avastin®); cápsulas de bexaroteno (Targretin®); gel de bexaroteno (Targretin®); bleomicina (Blenoxane®); bortezomibe (Velcade®); brefeldina A; bussulfano intravenoso (Busulfex®); busulfan oral (Myleran®); calusterona (Metosarb®); capecitabina (Xeloda®); carboplatina (Paraplatin®); carmustina (BCNU®, BiCNU®); carmustina (Gliadel®); carmustina com Polifeprosan 20 Implant (Gliadel Wafer®); celecoxibe (Celebrex®); cetuximabe (Erbitux®); clorambucil (Leukeran®); cisplatina (Platinol®); cladribina (Leustatin®, 2-CdA®); clofarabina
130 / 500
(Clolar®); ciclofosfamida (Cytoxan®, Neosar®); ciclofosfamida (Cytoxan Injection®); ciclofosfamida (Cytoxan Tablet®); citarabina (Cytosar-U®); citarabina lipossomal (DepoCyt®); dacarbazina (DTIC-Dome®); dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen®); injeção de dalteparina sódica (Fragmin®); Darbepoetina alfa (Aranesp®); dasatinibe (Sprycel®); daunorrubicina lipossomal (DanuoXome®); daunorrubicina, daunomicina (Daunorubicin®); daunorrubicina, daunomicina (Cerubidin®); degarelix (Firmagon®); Denileucina diftitox (Ontak®); dexrazoxano (Zinecard®); cloridrato de dexrazoxano (Totect®); didemnin B; 17-DMAG; docetaxel (Taxotere®); doxorrubicina (Adriamicina PFS®); doxorrubicina (Adriamicina®, Rubex®); doxorrubicina (Adriamicina PFS Injection®); doxorrubicina lipossomal (Doxil®); propionato de dromostanolona (Dromostanolona ®); propionato de dromostanolona (Masterone Injection®); injeção de eculizumabe (Soliris®); Solução B de Elliott (Elliott's B Solution®); eltrombopag (Promacta®); epirubicina (Ellence®); Epoetina alfa (epogen®); erlotinibe (Tarceva®); estramustina (Emcyt®); etinilestradiol; fosfato de etoposídeo (Etopofos®); etoposídeo, VP-16 (Vepesid®); comprimidos de everolimo (Afinitor®); exemestano (Aromasin®); ferumoxitol (Feraheme Injection®); Filgrastim (Neupogen®); floxuridina (intra-arterial) (FUDR®); fludarabina (Fludara®); fluorouracil, 5-FU (Adrucil®); fulvestrant (Faslodex®); gefitinibe (Iressa®); geldanamicina; gencitabina (Gemzar®); gentuzumabe ozogamicina (Mylotarg®); acetato de goserelina (Zoladex Implant®); acetato de goserelina (Zoladex®); acetato de histrelina (Histrelin Implant®); hidroxiureia (Hydrea®); Ibritumomabe Tiuxetana (Zevalin®); idarrubicina (Idamycin®); ifosfamida (IFEX®); mesilato de imatinibe (Gleevec®); interferon alfa 2a (Roferon A®); Interferon alfa-2b (Intron A®); injeção de iobenguane I 123 (AdreView®); irinotecano (Camptosar®); ixabepilona (Ixempra®); comprimidos de lapatinibe (Tykerb®); lenalidomide (Revlimid®); letrozol (Femara®);
131 / 500 leucovorina (Wellcovorin®, Leucovorin®); Acetato de Leuprolide (Eligard®); levamisol (Ergamisol®); lomustina, CCNU (CeeBU®); mecloretamina, mostarda de nitrogênio (Mustargen®); acetato de megestrol (Megace®); melfalana, L-PAM (Alkeran®); mercaptopurina, 6-MP (Purinathol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex Tabs®); metotrexato (Methotrexate®); metoxsaleno (Uvadex®); 8-metoxipsoraleno; mitomicina C (Mutamycin®); mitotano (Lysodren®); mitoxantrona (Novantrone®); mitramicina; fempropionato de nandrolona (Durabolin-50®); nelarabina (Arranon®); nilotinibe (Tasigna®); Nofetumomabe (Verluma®); ofatumumabe (Arzerra®); Oprelvecina (Neumega®); oxaliplatina (Eloxatin®); paclitaxel (Paxene®); paclitaxel (Taxol®); partículas ligadas a proteína-paclitaxel (Abraxano®); palifermina (Kepivance®); pamidronato (Aredia®); panitumumabe (Vectibix®); comprimidos de pazopanibe (Votrient®); pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargase (Oncaspar®); Pegfilgrastim (Neulasta®); pemetrexede dissódico (Alimta®); pentostatina (Nipent®); pipobromana (Vercyte®); plerixafor (Mozobil®); plicamicina, mitramicina (Mithracin®); porfimer sódico (Photofrin®); injeção de pralatrexato (Folotyn®); procarbazina (Matulane®); quinacrina (Atabrine®); rapamicina; Rasburicase (Elitek®); cloridrato de raloxifeno (Evista®); Rituximabe (Rituxan®); romidepsina (Istodax®); romiplostim (Nplate®); sargramostim (Leukine®); Sargramostim (Prokine®); sorafenibe (Nexavar®); estreptozocina (Zanosar®); maleato de sunitinibe (Sutent®); talco (Sclerosol®); tamoxifeno (Nolvadex®); temozolomida (Temodar®); tensirolimo (Torisel®); teniposídeo, VM-26 (Vumon®); testolactona (Teslac®); tioguanina, 6-TG (Thioguanine®); tiopurina; tiotepa (Thioplex®); topotecana (Hycamtin®); toremifeno (Fareston®); Tositumomabe (Bexxar®); Tositumomabe/I-131 tositumomabe (Bexxar®); ácido trans-retinoico; Trastuzumabe (Herceptin®); tretinoína, ATRA (Vesanoid®); trietilenomelamina; Mostarda de Uracil (Uracil Mustard Capsules®);
132 / 500 valrubicina (Valstar®); vimblastina (Velban®); vincristina (Oncovin®); vinorelbina (Navelbine®); vorinostato (Zolinza®); wortmanina; e zoldronato (Zometa®).
[00282] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é usado em associação com um ou mais agentes antieméticos incluindo, mas não se limitando a: casopitanto (GlaxoSmithKline), Netupitanto (MGI-Helsinn) e outros antagonistas de receptor de NK-1, palonosetrona (vendida como Aloxi pela MGI Pharma), aprepitanto (vendido como Emend pela Merck and Co.; Rahway, NJ), difenhidramina (vendida como Benadryl® pela Pfizer; New York, NY), hidroxizina (vendida como Atarax® pela Pfizer; New York, NY), metoclopramida (vendida como Reglan® pela AH Robins Co.; Richmond, VA), lorazepam (vendido como Ativan® pela Wyeth; Madison, NJ), alprazolam (vendido como Xanax® pela Pfizer; New York, NY), haloperidol (vendido como Haldol® pela Ortho-McNeil; Raritan, NJ), droperidol (Inapsine®), dronabinol (vendido como Marinol® pela Solvay Pharmaceuticals, Inc.; Marietta, GA), dexametasona (vendida como Decadron® pela Merck and Co.; Rahway, NJ), metilprednisolona (vendida como Medrol® pela Pfizer; New York, NY), proclorperazina (vendida como Compazine® pela Glaxosmithkline; Research Triangle Park, NC), granisetrona (vendida como Kytril® pela Hoffmann-La Roche Inc.; Nutley, NJ), ondansetrona (vendida como Zofran® pela Glaxosmithkline; Research Triangle Park, NC), dolasetrona (vendida como Anzemet® pela Sanofi- Aventis; New York, NY), tropisetrona (vendida como Navoban® pela Novartis; East Hanover, NJ).
[00283] Outros efeitos colaterais do tratamento de câncer incluem deficiência de células vermelhas do sangue e de células brancas do sangue. Consequentemente, em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-
133 / 500 CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) está em associação com um agente que trata ou previne uma tal deficiência, como, por exemplo, filgrastim, PEG-filgrastim, eritropoietina, epoetina alfa ou darbepoetina alfa.
[00284] Em uma modalidade da invenção, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é administrado em associação com radioterapia anticâncer. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, a radioterapia é terapia com feixes externos (EBT, External Beam Therapy): uma método para liberação de um feixe de raios-X de alta energia para a localização do tumor. O feixe é gerado fora do paciente (por exemplo, por um acelerador linear) e é direcionado para o sítio do tumor. Estes raios-X podem destruir as células cancerosas e o planejamento cuidadoso do tratamento permite que os tecidos normais circundantes sejam poupados. Fontes radioativas não são posicionadas dentro do corpo do paciente. Em uma modalidade da invenção, a radioterapia é terapia com feixe de prótons: um tipo de terapia conformal que bombardeia o tecido doente com prótons ao invés de raios-X. Em uma modalidade da invenção, a radioterapia é radioterapia com feixe externo conformal external: um procedimento que usa tecnologia avançada para ajustar a radioterapia às estruturas corporais do indivíduo. Em uma modalidade da invenção, a radioterapia é braquiterapia: o posicionamento temporário de materiais radioativos dentro do corpo, habitualmente utilizada para aplicar uma dose extra—ou um reforço—de radiação a uma área.
[00285] Em uma modalidade da invenção, um procedimento cirúrgico que é administrado em associação com um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) é tumorectomia cirúrgica.
[00286] Em uma outra modalidade, o paciente recebe infusão de
134 / 500 células-T autólogas expandidas ex vivo com anticorpos específicos anti-CD27 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Em outra modalidade, o paciente é administrado com células-T autólogas em combinação com os anticorpos específicos anti-CD27 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Em ainda outra modalidade, o paciente é vacinado com uma vacina anticâncer, e recebe infusão de células-T autólogas expandidas ex vivo com anticorpos específicos anti-CD27 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. As células-T autólogas podem ser linfócitos infiltrantes autólogos, célula-T transduzidas com receptores de células-T de alta afinidade contra antígenos tumorais ou célula-T transduzidas com receptores de antígeno quiméricos compostos de cadeias leves híbridas de imunoglobulina com endo-domínios de moléculas de sinalização de células-T. Consulte Kalos M. e June C. H., Immunity, 39, 2013, p49-60; Wu R. et al., Cancer J. 2012; 18(2): 160-175; e June, C. H., J. Clin. Invest. 117:1466-1476 (2007). Usos experimentais e diagnósticos
[00287] Os anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) podem ser usados como agentes de purificação por afinidade. Neste processo, os anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são imobilizados sobre uma fase sólida como um Sephadex, vidro ou resina de agarose ou papel de filtro, usando métodos bem conhecidos na técnica. o anticorpo ou o fragmento imobilizado é colocado em contato com uma amostra contendo a proteína CD27 (ou um fragmento da mesma) a ser purificada, e depois, o suporte é lavado com um solvente adequado que removerá substancialmente todo o material na amostra exceto a proteína CD27, que está ligada ao anticorpo ou fragmento imobilizado. Finalmente, o suporte é lavado com um solvente que elui a proteína CD27 ligada (por exemplo, proteína A). Tais anticorpos e fragmentos imobilizados formam parte da presente invenção.
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[00288] São adicionalmente fornecidos antígenos para geração de anticorpos secundários que são úteis, por exemplo, para realização de transferências de Western (Western blots) e outros imunoensaios aqui discutidos.
[00289] Os anticorpos anti-CD27 (por exemplo, anticorpos humanizados) e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem também ser úteis em ensaios diagnósticos para proteína CD27, por exemplo, detecção de sua expressão em células específicas, tecidos específicos, ou soro específico, por exemplo, célula tumorais como células de melanoma. Tais métodos diagnósticos podem ser úteis em diagnoses de várias doenças.
[00290] A presente invenção inclui ensaios ELISA (ensaio imunoabsorvente ligado à enzima) incorporando o uso de um anticorpo anti- CD27 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aqui revelado (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo).
[00291] Por exemplo, um tal método compreende as seguintes etapas: (a) revestir um substrato (por exemplo, superfície de um poço de placa de microtitulação, por exemplo, uma placa de plástico) com o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; (b) aplicar uma amostra a ser testada para a presença de CD27 no substrato; (c) lavar a placa, de modo que o material não ligado na amostra seja removido; (d) aplicar anticorpos detectavelmente marcados (por exemplo, anticorpos ligados à enzima) que são específicos para o antígeno CD27; (e) lavar o substrato, de modo que os anticorpos marcados, não ligados ao antígeno, sejam removidos; (f) se os anticorpos marcados estão ligados à enzima, aplicar um composto químico que é convertido pela enzima em um sinal fluorescente; e
136 / 500 (g) detectar a presença do anticorpo marcado.
[00292] A detecção do marcador associado com o substrato indica a presença da proteína CD27.
[00293] Em uma outra modalidade, o anticorpo marcado ou fragmento marcado de ligação ao antígeno do mesmo é marcado com peroxidase que reage com ABTS (por exemplo, ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6- sulfônico)) ou 3,3’,5,5’-Tetrametilbenzidina para produzir uma alteração de cor que é detectável. Alternativamente, o anticorpo marcado ou fragmento marcado é marcado com um radioisótopo detectável (por exemplo, 3H) que pode ser detectado por um contador de cintilação na presença de um agente cintilante.
[00294] Um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) pode ser usado em um procedimento de transferência de Western ou de transferência de proteína-imune. Um tal procedimento forma parte da presente invenção e inclui por exemplo: (1) opcionalmente transferir proteínas de uma amostra a ser testada para a presença de CD27 (por exemplo, de uma separação eletroforética PAGE ou SDS-PAGE das proteínas na amostra) sobre uma membrana ou outro substrato sólido usando um método conhecido na técnica (por exemplo, transferência semisseca ou transferência em tanque); colocar a membrana ou outro substrato sólido, a ser testada(o) para a presença de proteína CD27 ligada ou um fragmento do mesmo, em contato com um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção. Uma tal membrana pode estar na forma de uma membrana à base de nitrocelulose ou vinílica (por exemplo, poli(fluoreto de vinilideno) (PVDF)) para a qual as proteínas a serem testadas para a presença de CD27 em um gel PAGE (PolyAcrylamide Gel Electrophoresis, eletroforese em gel de poliacrilamida) sem desnaturante ou um gel SDS-PAGE (Sodium Dodecyl
137 / 500 Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis, eletroforese em gel de poliacrilamida com desnaturante dodecilsulfato de sódio) têm sido transferidas (por exemplo, após separação eletroforética no gel). Antes de colocar a amostra em contato com o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento do mesmo, a membrana é opcionalmente bloqueada, por exemplo, com leite em pó desnatado ou semelhantes de modo a ligar sítios de ligação de proteína não específicos sobre a membrana.
[00295] (2) lavar a membrana uma ou mais vezes para remover o anticorpo anti-CD27 não ligado ou fragmento do mesmo não ligado e outras substâncias não ligadas; e (3) detectar o anticorpo anti-CD27 ligado ou fragmento do mesmo ligado.
[00296] A detecção do anticorpo ligado ou do fragmento ligado indica que a proteína CD27 está presente sobre a membrana ou o substrato e na amostra. A detecção do anticorpo ligado ou do fragmento ligado do mesmo pode ser pela ligação do anticorpo ou do fragmento do mesmo a um anticorpo secundário (um anticorpo anti-imunoglobulina) que está detectavelmente marcado e, então, pela detecção da presença do anticorpo secundário.
[00297] Os anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem também ser usados para imuno-histoquímica. Um tal método forma parte da presente invenção e compreende, por exemplo: (1) colocar uma célula (por exemplo, uma célula tumoral como uma célula de melanoma) a ser testada para a presença da proteína CD27 em contato com um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção; e (2) detectar o anticorpo ou o fragmento do mesmo sobre a célula ou dentro da célula.
[00298] Se o próprio anticorpo ou fragmento está detectavelmente
138 / 500 marcado, ele pode ser diretamente detectado. Alternativamente, o anticorpo ou o fragmento do mesmo pode estar ligado a um anticorpo secundário detectavelmente marcado que é detectado.
[00299] Determinados anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) também podem ser usados para imageamento de tumor in vivo. Um tal método pode incluir injeção de um anticorpo anti-CD27 radiomarcado ou fragmento radiomarcado de ligação ao antígeno do mesmo para dentro do corpo de um paciente a ser testado para a presença de um tumor associado com a expressão de CD27 (por exemplo, que expressa CD27, por exemplo, sobre a superfície da célula tumoral) seguida por imageamento nuclear do corpo do paciente para detectar a presença do anticorpo marcado ou fragmento marcado do mesmo por exemplo, em lócus que compreendem uma alta concentração do anticorpo ou do fragmento que estão ligados ao tumor. A detecção dos lócus indica a presença de células tumorais e de tumor CD27+.
[00300] As técnicas de imageamento incluem imageamento por SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography, tomografia computadorizada por emissão de fóton único) ou imageamento por PET (Positron Emission Tomography, tomografia por emissão de pósitrons). As marcações incluem por exemplo, Iodo-123 (123I) e Tecnécio-99m (99mTc), por exemplo, juntamente com imageamento por SPECT ou 11C, 13N, 15O ou 18F, por exemplo, juntamente com imageamento por PET ou Índio-111 (consulte por exemplo, Gordon et al., (2005) International Rev. Neurobiol. 67:385- 440). Composições farmacêuticas e administração
[00301] Para preparar composições farmacêuticas ou estéreis dos anticorpos anti-CD27 e fragmentos de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo), o anticorpo
139 / 500 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é misturado com um excipiente ou carreador farmaceuticamente aceitável. Consulte, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences e U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984).
[00302] As formulações para agentes terapêuticos ou diagnósticos podem ser preparadas pela misturação com carreadores, excipientes, ou estabilizantes aceitáveis na forma de, por exemplo, pós liofilizados, pastas fluidas, soluções aquosas ou suspensões aquosas (consulte, por exemplo, Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, e Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner e Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY).
[00303] A toxicidade e a eficácia terapêutica dos anticorpos da invenção, administrados sozinhos ou em combinação com outro agente terapêutico, podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, para determinação de DL50 (a dose letal para 50% da população) e a DE50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A razão de doses entre efeito tóxico e efeito terapêutico é o índice terapêutico (DL50/DE50). Os dados obtidos dos ensaios de cultura celular e de estudos com animal podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em ser humano. A dosagem de tais compostos está, preferencialmente, dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma
140 / 500 de dosagem utilizada e da rota de administração.
[00304] Em uma outra modalidade, um outro agente farmacêutico que é administrado a um sujeito em associação com um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou versões humanizadas dos mesmos) está de acordo com o “Physicians' Desk Reference 2003” (Thomson Healthcare; 57th edition (November 1, 2002)).
[00305] O modo de administração pode variar. Rotas de administração incluem oral, retal, transmucosal, intestinal, parenteral; intramuscular, subcutânea, intradérmica, intramedular, intratecal, intraventricular direta, intravenosa, intraperitoneal, intranasal, intraocular, inalação, insuflação, tópica, cutânea, transdérmica, ou intra-arterial.
[00306] Em modalidades específicas, os anticorpos anti-CD27 ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser administrados por uma rota invasiva como por injeção. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica do mesmo, é administrado intravenosa, subcutânea, intramuscular, intrarterial, intratumoralmente, ou por inalação, liberação por aerossol. Administração por rotas não invasivas (por exemplo, oralmente; por exemplo, em uma pílula, uma cápsula ou um comprimido) também está dentro do escopo escopo da presente invenção.
[00307] A presente invenção fornece um recipiente (por exemplo, um frasco de plástico ou de vidro, por exemplo, com uma tampa ou uma coluna de cromatografia, agulha de calibre ou um cilindro de seringa) compreendendo qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) ou uma composição farmacêutica do mesmo. A presente invenção também fornece um dispositivo para injeção compreendendo qualquer um dos
141 / 500 anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) ou uma composição farmacêutica do mesmo.
Um dispositivo para injeção é um dispositivo que introduz uma substância para dentro do corpo de um paciente via uma rota parenteral, por exemplo, intramuscular, subcutânea ou intravenosa.
Por exemplo, um dispositivo para injeção pode ser uma seringa (por exemplo, preenchida com a composição farmacêutica como um autoinjetor) que, por exemplo, inclui um cilindro ou barril para armazenar o fluido a ser injetado (por exemplo, anticorpo ou fragmento ou uma composição farmacêutica do mesmo), uma agulha para perfurar a pele e/ou os vasos sanguíneos para injeção do fluido; e um êmbolo para empurrar o fluido para fora do cilindro e através do calibre oco da agulha.
Em uma modalidade da invenção, um dispositivo para injeção que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção ou uma composição farmacêutica do mesmo é um dispositivo para injeção intravenosa (IV). Um tal dispositivo o anticorpo ou o fragmento ou uma composição farmacêutica do mesmo em uma cânula ou trocarte/agulha que pode ser acoplada(o) a um tubo que pode ser acoplado a uma bolsa ou um reservatório para armazenamento do fluido (por exemplo, solução salina; ou solução de Ringer lactada compreendendo NaCl, lactato de sódio, KCl, CaCl2 e opcionalmente incluindo glicose) introduzido para dentro do corpo do paciente através da cânula ou trocarte/agulha. o anticorpo ou o fragmento ou uma composição farmacêutica do mesmo pode, em uma modalidade da invenção, ser introduzido(a) no dispositivo quando o trocarte e a cânula são inseridos na veia de um sujeito e o trocarte é removido da cânula inserida.
O dispositivo IV pode, por exemplo, ser inserido em uma veia periférica (por exemplo, na mão ou no braço); a veia cava superior ou a veia cava inferior, ou dentro do átrio direito do coração (por exemplo, uma IV central); ou para dentro de uma veia subclávia, uma veia jugular interna, ou uma veia femoral e, por exemplo,
142 / 500 avançado para o coração até que alcance a veia cava superior ou o átrio direito (por exemplo, uma linha venosa central). Em uma modalidade da invenção, um dispositivo para injeção é um autoinjetor; um injetor de jato ou uma bomba de infusão externa. Um injetor de jato usa um jato de líquido estreito de alta pressão que penetra a epiderme para introduzir o anticorpo ou o fragmento ou uma composição farmacêutica do mesmo em um corpo de paciente. Bombas de infusão externas são dispositivos médicos que liberam o anticorpo ou o fragmento ou uma composição farmacêutica do mesmo para dentro do corpo de um paciente em quantidades controladas. As bombas de infusão externas podem ser acionadas eletricamente ou mecanicamente. Diferentes bombas operam em madeiras diferentes, por exemplo, um bomba de seringa armazena o fluido no reservatório de uma seringa, e um pistão móvel controla a liberação de fluido, uma bomba elastomérica armazena o fluido em um reservatório de balão elástico, uma pressão das paredes elásticas do balão aciona a liberação de fluido. Em uma bomba peristáltica, um conjunto de roletes aplica contração e relaxamento sucessivos sobre um comprimento de tubo flexível, empurrando o fluido para frente. Em uma boba de multicanais, os fluidos podem ser liberados de reservatórios múltiplos em velocidades múltiplas.
[00308] As composições farmacêuticas aqui reveladas podem também ser administradas com um dispositivo para injeção hipodérmica sem agulha ; como os dispositivos revelados nas Patentes U.S. nºs 6.620.135; 6.096.002;
5.399.163; 5.383.851; 5.312.335; 5.064.413; 4.941.880; 4.790.824 ou
4.596.556. Os dispositivos sem agulha compreendendo a composição farmacêutica são também parte da presente invenção. As composições farmacêuticas aqui reveladas podem também ser administradas por infusão. Exemplos de implantes e módulos bem conhecidos para administração das composições farmacêuticas incluem aqueles revelados em: Patente U.S. nº
4.487.603, que revela uma bomba de microinfusão injetável para dispensar
143 / 500 medicação em uma velocidade controlada; Patente U.S. nº 4.447.233, que revela um bomba de infusão de medicação para liberar a medicação em uma velocidade de infusão precisa; Patente U.S. nº 4.447.224, que revela um aparelho de infusão implantável de fluxo variável para liberação contínua de fármaco; Patente U.S. nº 4.439.196, que revela um sistema de liberação osmótica de fármaco tendo compartimentos com múltiplas câmaras. Muitos outros tais implantes, sistemas de liberação, e módulos são bem conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica compreendendo as composições farmacêuticas da presente invenção estão dentro do escopo da presente invenção.
[00309] Alternativamente, pode-se administrar o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) em um local ao invés de uma maneira sistêmica, por exemplo, via injeção do anticorpo ou fragmento diretamente para dentro de um tumor, por exemplo, um tumor CD27+. Ademais, pode-se administrar o anticorpo ou o fragmento do mesmo em um sistema de liberação de fármaco direcionada, por exemplo, em um lipossoma revestido com um anticorpo específico para tecido, direcionando-o, por exemplo, para um tumor por exemplo, um tumor CD27+, por exemplo, caracterizado por imunopatologia. Os lipossomas serão direcionados para, e capturados seletivamente pelo, tecido afligido. Tais métodos e lipossomas são parte da presente invenção.
[00310] O regime de administração depende de vários fatores, incluindo a taxa de utilização (turnover) do anticorpo terapêutico ou fragmento de ligação ao antígeno, o nível de sintomas, a imunogenicidade do anticorpo terapêutico, e a acessibilidade das células-alvo na matriz biológica. Preferencialmente, o regime de administração libera suficiente anticorpo terapêutico ou fragmento terapêutico do mesmo para melhoria do estado da doença-alvo, enquanto que simultaneamente minimiza os efeitos colaterais
144 / 500 indesejados. Consequentemente, a quantidade de agente biológico liberada depende em parte do anticorpo terapêutico específico e da severidade da condição sendo tratada. Orientação sobre a seleção de doses apropriadas de anticorpos terapêuticos ou fragmentos terapêuticos dos mesmos está disponível (consulte, por exemplo, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, Reino Unido; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert, et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602).
[00311] A determinação da dose apropriada é feita pelo médico clínico, por exemplo, usando parâmetros ou fatores conhecidos ou presumidos na técnica que afetam o tratamento. Em geral, a dose inicia com uma quantidade um pouco mais baixa que a dose ótima e é aumentada por incrementos pequenos até que o efeito desejado ou ótimo seja alcançado relativo a quaisquer efeitos colaterais negativos. Medições diagnósticas importantes incluem aquelas de sintomas de, por exemplo, a inflamação ou o nível de citocinas inflamatórias. Em geral, é desejável que um agente biológico que será utilizado seja derivado da mesma espécie que a espécie do animal direcionado para o tratamento, minimizando, assim, qualquer resposta imune ao reagente. No caso de sujeitos humanos, por exemplo, anticorpos humanizados e anticorpos completamente humanos podem ser desejáveis.
[00312] Anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui revelados (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) podem ser fornecidos por infusão contínua, ou por doses
145 / 500 administradas, por exemplo, diariamente, 1-7 vezes por semana, semanal, bissemanal, mensal, bimensal, trimestral, semianual, anualmente etc. Doses podem ser fornecidas, por exemplo, intravenosa, subcutânea, tópica, oral, nasal, retal, intramuscular, intracerebral, intraespinhalmente, ou por inalação. Uma dose semanal total é, em geral de pelo menos 0,05 μg/kg de peso corporal, mais geralmente de pelo menos 0,2 μg/kg, 0,5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0,25 mg/kg, 1,0 mg/kg, 2,0 mg/kg, 5,0 mg/mL [sic], 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg ou mais (consulte, por exemplo, Yang, et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold, et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu, et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451- 456; Portielji, et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:151-144). Doses podem também ser fornecidas para alcançar uma concentração-alvo predeterminada de anticorpo anti-CD27 no soro do sujeito, como 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100, 300µg/mL ou mais. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD27 da presente invenção é administrado, por exemplo, subcutânea ou intravenosamente, em uma base semanal, bissemanal, “a cada 4 semanas”, mensal, bimensal, ou trimestral a 10, 20, 50, 80, 100, 200, 500, 1.000 ou
2.500 mg/sujeito [sic].
[00313] Como aqui usado, o termo “quantidade eficaz” refere-se a uma quantidade de um anticorpo anti-CD27 ou de um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) que, quando administrado sozinho ou em combinação com um agente terapêutico adicional a uma célula, tecido, ou sujeito, é eficaz para causar uma melhoria mensurável em um ou mais sintomas de doença, por exemplo câncer e na progressão de câncer. Uma dose eficaz refere-se, ainda, àquela quantidade do anticorpo ou do fragmento suficiente para resultar em pelo menos melhoria parcial dos sintomas, por exemplo, encolhimento ou eliminação do tumor, falta de crescimento do tumor, tempo de sobrevivência aumentado. Quando aplicada a um ingrediente
146 / 500 ativo individual administrado sozinho, uma dose eficaz refere-se àquele ingrediente sozinho. Quando aplicada a um combinação, uma dose eficaz refere-se às quantidades combinadas dos ingredientes ativos que resultam no efeito terapêutico, administrados em combinação, serialmente ou simultaneamente. Uma quantidade eficaz de um agente terapêutico resultará em uma melhoria de uma medição diagnóstica ou de um parâmetro diagnóstico em pelo menos 10%; habitualmente em pelo menos 20%; preferencialmente pelo menos cerca de 30%; mais preferencialmente pelo menos 40%, e com a máxima preferência em pelo menos 50%. Uma quantidade eficaz pode também resultar em uma melhoria em uma medição subjetiva nos casos nos quais medições subjetivas são utilizadas para avaliar a severidade da doença. Kits
[00314] São ainda fornecidos kits compreendendo um ou mais componentes que incluem, mas não se limitam a, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno, como aqui discutido (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) em associação com um ou mais componentes adicionais incluindo, mas não se limitando a um carreador farmaceuticamente aceitável e/ou um agente terapêutico, como aqui discutido. o anticorpo ou o fragmento e/ou o agente terapêutico podem ser formulados como uma composição pura em combinação com um carreador farmaceuticamente aceitável, em uma composição farmacêutica.
[00315] Em uma modalidade, o kit inclui um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A ou uma versão humanizada do mesmo) ou uma composição farmacêutica do mesmo em um recipiente (por exemplo, em um fraco de vidro ou de plástico estéril) e/ou um agente terapêutico e uma composição farmacêutica do mesmo em outro recipiente (por exemplo, em um fraco de vidro ou de plástico estéril).
147 / 500
[00316] Em outra modalidade, o kit compreende uma combinação da invenção, incluindo um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, 131A humanizado) juntamente com um carreador farmaceuticamente aceitável, opcionalmente em combinação com um ou mais agentes terapêuticos formulados juntos, opcionalmente, em uma composição farmacêutica, em um recipiente único, comum.
[00317] Se o kit inclui uma composição farmacêutica para administração parenteral a um sujeito, o kit pode incluir um dispositivo para realizar tal administração. Por exemplo, o kit pode incluir uma ou mais agulhas hipodérmicas ou outros dispositivos para injeção como discutidos acima.
[00318] O kit pode incluir um encarte na embalagem que inclui informação relacionada às composições farmacêuticas e formas de dosagem no kit. Em geral, tal informação ajuda de modo eficaz e seguro os pacientes e os médicos no uso das composições farmacêuticas e formas de dosagens contidas no kit. Por exemplo, a seguinte informação relacionada a uma combinação da invenção pode ser fornecida no encarte: farmacocinética, farmacodinâmica, estudos clínicos, parâmetros de eficácia, indicações e uso, contraindicações, advertências, precauções, reações adversas, superdosagem, dosagem apropriada e administração apropriada, como fornecido, condições de armazenamento apropriadas, referências, informação sobre o fabricante/distribuidor e informação de patente. Kits de detecção e kits terapêuticos
[00319] Como uma questão de conveniência, um anticorpo anti-CD27 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da invenção (por exemplo, anticorpo 131A e as versões humanizadas do mesmo) pode ser fornecido em um kit, isto é, uma combinação embalada de reagentes em quantidades predeterminadas com instruções para realização do ensaio de
148 / 500 diagnóstico ou de detecção. Se o anticorpo ou o fragmento está marcado com uma enzima, o kit incluirá substratos e cofatores exigidos pela enzima (por exemplo, um precursor de substrato que fornece o cromóforo ou fluoróforo detectável). Além disso, outros aditivos podem estar incluídos como estabilizantes, agentes tamponantes (por exemplo, um agente tamponante bloqueador ou um agente tamponante de lise) e semelhantes. As quantidades relativas dos vários reagentes podem ser amplamente variadas para fornecer concentrações em solução dos reagentes que substancialmente otimizam a sensibilidade do ensaio. Particularmente, os reagentes podem ser fornecidos como pós secos, habitualmente liofilizados, incluindo excipientes que após dissolução fornecerão uma solução de reagente tendo a concentração apropriada.
[00320] Também são fornecidos reagentes de diagnóstico ou de detecção e kits compreendendo um ou mais de tais reagentes para uso em uma variedade de ensaios de detecção, incluindo por exemplo, imunoensaios como ELISA (tipo-sanduíche ou formato competitivo). Os componentes do kit podem estar pré-ligados a um suporte sólido, ou podem ser aplicados à superfície de um suporte sólido quando o kit é utilizado. Em algumas modalidades da invenção, o meio de geração de sinal pode ser fornecido pré- associado com um anticorpo ou um fragmento da invenção ou pode exigir combinação com um ou mais componentes, por exemplo, agentes tamponantes, conjugados de anticorpo-enzima, substratos de enzimas, ou semelhantes, antes do uso. Os kits podem, outrossim, incluir reagentes adicionais, por exemplo, reagentes bloqueadores para reduzir ligação não específica ao suporte de fase sólida, reagentes para lavagem, substratos de enzimas, e semelhantes. A superfície de fase sólida pode estar na forma de um tubo, uma esfera, uma placa de microtitulação, uma microesfera, ou outros materiais adequados para imobilização de proteínas, peptídeos, ou polipeptídeos. Em aspectos específicos, uma enzima que catalisa a formação
149 / 500 de um produto quimioluminescente ou cromogênico ou a redução de um substrato quimioluminescente ou cromogênico é um componente do meio de geração de sinal. Tais enzimas são bem conhecidas na técnica. Os kits podem compreender qualquer um dos agentes de captura e agentes de detecção aqui descritos. Opcionalmente o kit pode também compreender instruções para realização dos métodos da invenção.
[00321] Também é fornecido um kit compreendendo um anticorpo anti-CD27 (por exemplo, anticorpo humanizado) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo embalado em um recipiente, como um fraco ou uma garrafa, e compreende, adicionalmente, um rótulo colado no recipiente ou embalado com o recipiente, o rótulo descrevendo os conteúdos do recipiente e fornecendo indicações e/ou instruções relacionadas ao uso dos conteúdos do recipiente para tratar um ou mais estados de doença como aqui descritos.
[00322] Em um aspecto, o kit é para o tratamento de câncer e compreende um anticorpo anti-CD27 (por exemplo, anticorpo humanizado) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e um outro agente farmacêutico ou uma vacina. O kit pode opcionalmente ainda incluir uma seringa para administração parenteral, por exemplo, intravenosa. Em outro aspecto, o kit compreende um anticorpo anti-CD27 (por exemplo, anticorpo humanizado) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e um rótulo colado no recipiente ou embalado com o recipiente descrevendo o uso do anticorpo ou do fragmento com a vacina ou outro agente terapêutico. Em ainda outro aspecto, o kit compreende uma vacina ou outro agente terapêutico e um rótulo colado no recipiente ou embalado com o recipiente descrevendo o uso da vacina ou de outro agente terapêutico com o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento do mesmo. Em determinadas modalidades, um anticorpo anti- CD27 e a vacina ou o outro agente terapêutico estão em frascos separados ou estão combinados juntos na mesma composição farmacêutica. Adicionalmente às vacinas antitumorais descritas acima, vacinas para doença infecciosa
150 / 500 podem ser usadas em combinação com o anticorpo anti-CD27 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por exemplo, COMVAX®, M-M-R® II, Pedvax HIB®, PNEUMOVAX® 23, ProQuad®, RotaTeq®, VARIVAX®, e ZOSTAVAX®.
[00323] Como discutido acima na seção de terapia de combinação, a administração concomitante dos dois agentes terapêuticos não exige que os agentes sejam administrados ao mesmo tempo ou pela mesma rota, desde que haja uma sobreposição no período de tempo durante a qual os agentes estão exercendo o efeito terapêutico deles. Administração simultânea ou sequencial é considerada, do mesmo modo a administração em dias ou semanas diferentes.
[00324] Podem também ser preparados kit terapêutico e kit de detecção que compreendem pelo menos um dentre anticorpo, peptídeo, fragmento de ligação ao antígeno, ou polinucleotídeo aqui revelados e instruções para uso da composição como um reagente de detecção ou um reagente terapêutico. Recipientes para uso em tais kits podem tipicamente compreender pelo menos um pote, um tubo de ensaio, um frasco, uma garrafa, uma seringa ou outro recipiente adequado, dentro do(a) qual, um ou mais dentre o(s) composto(s) de detecção e/ou terapêutico(s) podem estar adicionados, e preferencialmente adicionalmente aliquotados. Se um segundo agente terapêutico é também fornecido, o kit pode, outrossim, conter um segundo recipiente separado dentro do qual esta segunda composição de detecção e/ou terapêutica pode estar adicionada. Alternativamente, pode ser preparada uma pluralidade de compostos em uma única composição farmacêutica, e pode ser embalada em um único recipiente, como um pote, um frasco, uma seringa, uma garrafa ou outro recipiente único adequado. Os kits aqui revelados também tipicamente incluirão um meio para conter o(s) frasco(s) em confinamento fechado para venda comercial, como, por exemplo, recipientes de plástico moldados por sopro ou por injeção dentro dos quais o(s) frasco(s) desejado(s) está(ão)
151 / 500 retido(s). Se um marcador radioativo, cromogênico, ou fluorigênico, ou outro tipo de marcador detectável ou meio de detecção está incluído dentro do kit, o agente marcador quer pode ser fornecido no mesmo recipiente como a própria composição terapêutica ou de detecção, quer pode estar alternativamente adicionado em um segundo recipiente separado dentro do qual esta segunda composição pode ser adicionada e adequadamente aliquotada. Alternativamente, o reagente de detecção e o marcador podem ser preparados em um recipiente único, e na maioria dos casos, o kit tipicamente também incluirá um meio para conter o(s) frasco(s) em confinamento fechado para venda comercial e/ou embalagem e distribuição convenientes.
[00325] É também fornecido um dispositivo ou aparelho para realizar os métodos de detecção ou de monitoração aqui descritos. Um tal aparelho pode incluir uma câmara ou um tubo para dentro da(o) qual amostra pode ser introduzida, um sistema de manuseio de fluido opcionalmente incluindo válvulas e bombas para direcionar o fluxo da amostra através do dispositivo, opcionalmente filtros para separar plasma ou soro do sangue, câmaras de misturação para a adição de agentes de captura ou reagentes de detecção, e opcionalmente um dispositivo de detecção para detectar a quantidade de marcador detectável ligado ao imunocomplexo de agente de captura. O fluxo de amostra pode ser passivo (por exemplo, por capilaridade, hidrostático, ou outras forças que não exigem manipulação adicional do dispositivo quando a amostra é aplicada) ou ativo (por exemplo, pela aplicação de força gerada via bombas mecânicas, bombas eletro-osmóticas, força centrífuga, ou pressão de ar aumentada), ou por uma combinação de forças ativas e passivas.
[00326] Em outras modalidades, é também fornecido um processador, uma memória legível por computador, e uma rotina armazenada na memória legível por computador e adaptada para ser executada no processador para realizar qualquer um dos métodos aqui descritos. Exemplos de sistemas de computador incluem computadores pessoais, computadores de servidor,
152 / 500 dispositivos de mão ou portáteis (laptop), sistemas com multiprocessadores, sistemas baseados em microprocessadores, conversores (set top boxes), dispositivos eletrônicos programáveis pelo consumidor, computadores pessoais em rede, minicomputadores, computadores de grande porte, ambientes de computação distribuídos que incluem qualquer um dos sistemas ou dispositivos acima, ou quaisquer outros sistemas conhecidos na técnica.
MÉTODOS GERAIS
[00327] Métodos-padrão em biologia molecular são descritos em Sambrook, Fritsch e Maniatis (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook e Russell (2001) Molecular Cloning, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Métodos-padrão também aparecem em Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, que descrevem a clonagem de células bacterianas e mutagênese de DNA (Vol. 1), clonagem em células de mamífero e em levedura (Vol. 2), glicoconjugados e expressão de proteína (Vol. 3), e bioinformática (Vol. 4).
[00328] Métodos para purificação de proteínas incluindo imunoprecipitação, cromatografia, eletroforese, centrifugação, e cristalização são descritos (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Análise química, modificação química, modificação pós-transducional, produção de proteínas de fusão, glicosilação de proteínas são descritas (consulte, por exemplo, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory,
153 / 500 Piscataway, N.J., pp. 384-391). Produção, purificação, e fragmentação de anticorpos monoclonais e policlonais são descritas (Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow e Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow e Lane, supra). Técnicas padrão para caracterização de interações entre ligante e receptor estão disponíveis (consulte, por exemplo, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).
[00329] Anticorpos monoclonais, policlonais, e humanizados podem ser preparados (consulte, por exemplo, Sheperd e Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann e Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow e Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote e Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; Patente U.S. nº 6.329.511).
[00330] Uma alternativa à humanização é o uso de bibliotecas de anticorpos humanos apresentadas em fago ou de bibliotecas de anticorpos humanos em camundongos transgênicos (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom e Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:397-399).
[00331] Anticorpos de cadeia única e diacorpos são descritos (consulte,
154 / 500 por exemplo, Malecki et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:213-218; Conrath et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:7346-7350; Desmyter et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:26285-26290; Hudson e Kortt (1999) J. Immunol. Methods 231:177-189; e Patente U.S. nº 4.946.778). Anticorpos bifuncionais são fornecidos (consulte, por exemplo, Mack, et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:7021-7025; Carter (2001) J. Immunol. Methods 248:7-15; Volkel, et al. (2001) Protein Engineering 14:815-823; Segal, et al. (2001) J. Immunol. Methods 248:1-6; Brennan, et al. (1985) Science 229:81-83; Raso, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:27623; Morrison (1985) Science 229:1202-1207; Traunecker, et al. (1991) EMBO J. 10:3655-3659; e Patentes U.S. nºs 5,932,448, 5.532.210, e 6.129.914).
[00332] Anticorpos biespecíficos são também fornecidos (consulte, por exemplo, Azzoni et al. (1998) J. Immunol. 161:3493; Kita et al. (1999) J. Immunol. 162:6901; Merchant et al. (2000) J. Biol. Chem. 74:9115; Pandey et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:38633; Zheng et al. (2001) J. Biol Chem. 276:12999; Propst et al. (2000) J. Immunol. 165:2214; Long (1999) Ann. Rev. Immunol. 17:875).
[00333] Purificação de antígeno não é necessária para a geração de anticorpos. Animais podem ser imunizados com células possuindo o antígeno de interesse. Esplenócitos podem, então, ser isolados dos animais imunizados, e os esplenócitos podem ser fusionados com uma linhagem celular de mieloma para produzir um hibridoma (consulte, por exemplo, Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13:233-242; Preston et al., supra; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157-5164).
[00334] Anticorpos podem ser conjugados, por exemplo, com moléculas farmacêuticas pequenas, enzimas, lipossomas, poli(glicol etilênico) (PEG). Anticorpos são úteis para terapia, diagnose, kit ou outros propósitos, e incluem anticorpos acoplados, por exemplo, em corantes, radioisótopos, enzimas, ou metais, por exemplo, ouro coloidal (consulte, por exemplo, Le
155 / 500 Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing e Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804- 2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883-889).
[00335] Métodos para citometria de fluxo, incluindo, separação de células ativadas por fluorescência (Fluorescence Activated Cell Sorting, FACS), estão disponíveis (consulte, por exemplo, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Reagentes fluorescentes adequados para modificação de ácidos nucleicos, incluindo iniciadores de ácido nucleico e sondas de ácido nucleico, polipeptídeos, e anticorpos, para uso, por exemplo, como reagentes diagnósticos, estão disponíveis (Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).
[00336] Métodos-padrão de histologia do sistema imune são descritos (consulte, por exemplo, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, e Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).
[00337] Pacotes de programas de computador e bases de dados para determinação, por exemplo, de fragmentos antigênicos, sequências líderes, enovelamento de proteína, domínios funcionais, sítios de glicosilação, e alinhamentos de sequências, estão disponíveis (consulte, por exemplo, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741- 742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742;
156 / 500 Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690). EXEMPLO 1: Imunização e seleção de anticorpos anti-CD27 Imunização de camundongos com cDNA codificador de CD27
[00338] Para gerar anticorpos anti-hCD27, o cDNA que codifica a matriz de leitura aberta de comprimento completo de hCD27 foi subclonado no vetor pCI-neo (Promega, Madison, WI). Expressão do vetor obtido foi checada por transfecção transiente de pCI-neo-hCD27 em células CHO-K1 (American Type Culture Collection, Manassas, VA) e citometria de fluxo usando 10 μg/mL de IgG1 de camundongo anti-hCD27 (BD Pharmingen nº555439), seguido por anticorpo de cabra anti-IgG1-de-camundongo conjugado com FITC (1:100) (Southern Biotechnology, Birmingham, AL).
[00339] Os camundongos foram imunizados por imunização por pistola gênica usando uma Pistola Gênica Helios® (BioRad, Hercules, CA) e partículas de ouro revestidas com DNA (BioRad) seguindo as instruções do fabricante. De modo resumido, partículas de ouro de 1 µm foram revestidas com pCI-neo-hCD27 cDNA e vetores de expressão comerciais para Flt3L de camundongo e GM-CSF de camundongo em uma razão de 2:1:1 (ambos da Aldevron, Fargo, ND). Um total de 1 µg de DNA plasmidial foi usado para revestir 500 µg de partículas de ouro.
[00340] Especificamente, camundongos BALB/c fêmeas de 7-8 semanas de idade foram imunizados nas orelhas com uma pistola gênica, recebendo 3 ciclos de um disparo em ambas as orelhas. Aproximadamente, um título de anticorpo anti-hCD27 de 1:4.000 foi detectado por Ensaio no formato ELISA baseado em célula em soro de camundongo após imunizações com DNA. No Ensaio no formato ELISA baseado em célula, todas as etapas de incubação foram seguidas por uma etapa de lavagem com PBST (PBS com 0,01% de Tween 20). Células CHO-K1 parentais ou células CHO-K1.hCD27
157 / 500 foram semeadas (40.000 células/poço) em placas de cultura de tecido e incubadas de um dia para o outro a 37°C. No dia seguinte, o meio de cultura foi removido e as células foram incubadas durante 1 hora com (diluições de) soro de camundongo a 37°C. A seguir, as células foram lavadas com PBST e incubadas durante 1 hora a 37°C com anticorpo de cabra anti-IgG-de- camundongo conjugado com HRP 1:1.000 (Southern Biotechnology, nº1030- 05).
[00341] Subsequentemente, as células foram lavadas 6 vezes com PBST e imunorreatividade anti-hCD27 foi visualizada com 100 µL de substrato “OptiEIA TMB” [TMB, 3,3',5,5'-TetraMetilBenzidina] (BD Biosciences, Franklin Lake, NJ). As reações foram interrompidas com 100 µL de H2SO4 0,5 M e as absorbâncias foram lidas a 460 nm e 620 nm. Os camundongos que demonstraram reatividade contra hCD27 foram imunizados durante um quarto tempo final, e foram mortos quatro dias mais tarde.
[00342] Populações de células de baço depletadas em eritrócitos foram preparadas como previamente descrito (Steenbakkers et al., 1992, J. Immunol. Meth. 152: 69-77; Steenbakkers et al., 1994, Mol. Biol. Rep. 19: 125-134) e congeladas a -140°C. Seleção de células-B produtoras de anticorpos anti-hCD27
[00343] Para selecionar clones de células-B produtoras de anticorpos anti-hCD27, 1,5x107 esplenócitos depletados em eritrócitos foram depletados em monócitos. Células-B específicas para hCD27 foram selecionadas pela ligação sobre células transfectantes CHO-K1.hCD27 irradiadas (3.000 RAD) a 4°C ou a 37°C, que haviam crescidas para confluência em um frasco T25. Após lavagem extensiva para deletar células-B não específicas, as células-B ligadas foram coletadas por tratamento com Tripsina (Invitrogen, nº de cat. 25200-056) de acordo com as instruções do fabricante. A seguir, as células-B foram cultivadas como descrito por Steenbakkers et al., 1994, Mol. Biol. Rep. 19: 125-134. De modo resumido, as células-B selecionadas foram misturadas
158 / 500 com sobrenadante de células-T a 7,5% (v/v) e 50.000 células nutrientes EL-4 B5 irradiadas (2.500 RAD) em um volume final de 200 µL de DMEM F12/P/S/10%BCS em placas de cultura de tecido de fundo plano de 96 poços.
[00344] No oitavo dia, os sobrenadantes foram examinados por Ensaio no formato ELISA baseado em célula para a reatividade ao hCD27 como descrito acima. Além disso, os sobrenadantes reativos a hCD27 foram testados para a ligação ao CD27 de Macaca mulatta (mmCD27) expressado sobre células CHO-K1. [CD27 de Macaca mulatta com número de acesso ao Genbank de gi109095214]. No Ensaio no formato ELISA baseado em célula, todas as etapas de incubação foram seguidas por uma etapa de lavagem com PBST (PBS com 0,01% de Tween 20). Células CHO-K1 parentais, células CHO-K1.hCD27, ou células CHO-K1.mmCD27 foram semeadas (40.000 células/poço) em placas de cultura de tecido e incubadas de um dia para o outro a 37°C. No dia seguinte, o meio de cultura foi removido e as células foram incubadas durante uma hora com (diluições de) sobrenadantes de células-B a 37°C. A seguir, as células foram lavadas com PBST e incubadas durante uma hora a 37°C com anticorpo de cabra anti-IgG1-de-camundongo conjugado com HRP 1:1.000 (Southern Biotechnology, nº1030-05). Subsequentemente, as células foram lavadas 6 vezes com PBST e imunorreatividade anti-hCD27 foi visualizada com 100 µL de cromogênio TMB estabilizado [“TMB Stabilized Chromagen”] (Invitrogen, nº de cat. SB02). As reações foram interrompidas com 100 µL de H2SO4 0,5 M e as absorbâncias foram lidas a 460 nm e 620 nm.
[00345] Subsequentemente, 64 clones de células-B dos sobrenadantes que mostraram a ligação ao hCD27 e ao mmCD27 foram imortalizados por milieletrofusão seguindo os procedimentos publicados (Steenbakkers et al., 1992, J. Immunol. Meth. 152: 69-77; Steenbakkers et al., 1994, Mol. Biol. Rep. 19:125-34). Especificamente, as células-B foram misturadas com 106 células de mieloma Sp2/0-Ag14, e o soro foi removido por lavagem com
159 / 500 meio DMEM F12. As células foram tratadas com solução de Pronase (Calbiochem, nº de cat. 4308070.536) durante 3 minutos e lavadas com Solução Tampão Iso-osmolar para Eletrofusão [“Electrofusion Isoosmolar Buffer”] (Eppendorf, nº de cat. 53702). As eletrofusões foram realizadas em uma câmara de fusão de 50 µL por um campo elétrico alternado de 30 s, 2 MHz, 400 V/cm seguido por um pulso de campo alto, quadrado de 10 µs, 3 kV/cm e de novo por um campo elétrico alternado de 30 s, 2 MHz, 400 V/cm.
[00346] Os conteúdos da câmara foram transferidos para o meio seletivo de hibridoma e plaqueados em uma placa de 96 poços sob condições de diluição limitante. Nos oitavo e nono dias após as fusões, os sobrenadantes de hibridomas foram examinados para reatividade contra hCD27, como descrito acima. Os sobrenadantes de hibridomas foram testados em experimentos de Ensaio no formato ELISA baseado em célula para a ligação às células CHO-K1.mmCD27 ou às células CHO-K1 expressoras de hCD27 (A59T), como descrito acima. Além disso, competição cruzada dos sobrenadantes de hibridomas com o anticorpo hCD27.15 foi investigada usando um ensaio de Fluorescência Homogênea Resolvida no Tempo (HTRF). Anticorpo hCD27.15 tem sido descrito em WO2012/004367 que descreve um anticorpo produzido por um hibridoma depositado na ATCC tendo o Número de Acesso de Depósito de PTA-11008, e tendo a região VH da SEQ ID NO:3 e uma região VL da SEQ ID NO:4 (referências às SEQ ID NOs em WO2012/004367). Neste ensaio hCD27.15 biotinilado 0,6 nM foi incubado com rhCD27-Fc 1,2 nM (R&D Systems, 382-CD-100), Estreptavidina-K 1,33 nM (Aceptor) e anticorpo anti-Fc-D2-humano 1,25 nM (Doador). Uma diluição serial dos sobrenadantes foi adicionada. Competição cruzada com hCD27.15 resulta em transferência de energia reduzida do doador para o aceptor e é expressada como Delta F ((Razão 665/615 Amostra – Razão 665/615 Sinal de Fundo) / Razão 665/615 Sinal de Fundo, em que o Sinal de Fundo é determinado sem adição de rhCD27-Fc). Fluorescência foi
160 / 500 medida no espectrofotômetro Victor2 (PerkinElmer) a 615 nm e 665 nm.
[00347] Finalmente, os sobrenadantes de hibridomas foram testados para a capacidade deles para acionar a sinalização de CD27. Células HEK293T que foram cotransfectadas com hCD27-pcDNA e um constructo repórter de NF-κB-luciferase foram expostas durante 24 horas às diluições seriais dos sobrenadantes de hibridoma. A atividade de luciferase foi medida usando um sistema “Steady Lite Plus High Sensitivity Luminescence Reporter Gene Assay System” (PerkinElmer, 6016757) e o espectrofotômetro Victor (PerkinElmer).
[00348] A seguir, 46 hibridomas foram selecionados para subclonagem por uma rodada única sob condições de diluição limitante. Após análise dos sobrenadantes sob condições de diluição limitante para a ligação às células CHO-K1.hCD27, os clones foram selecionados para congelamento e armazenamento. Análise adicional dos sobrenadantes sob condições de diluição limitante para ligação às células CHO-K1.hCD27, a competição cruzada com hCD27.15, e estimulação de NF-κB, como descrito acima, permitiram a seleção de 18 hibridomas para a produção de anticorpos isentos de soro. EXEMPLO 2: Purificação e caracterização de anticorpos anti-hCD27
[00349] Os hibridomas adequados foram cultivados no meio isento de soro durante 7 dias e os sobrenadantes foram colhidos. Os anticorpos foram purificados por misturação com resina “MAb Select SuRe Prot A” (GE Healthcare 17-5438) e eluição das colunas de cromatografia “Poly-prep” (BioRad 731-1550), de acordo com as instruções do fabricante. A seguir, os anticorpos foram dessalinizados e retamponados em PBS de pH 7,4 (Gibco) usando colunas dessalinizantes “Zeba™ Spin Desalting Columns” (Life Technologies 89889) e quantificados usando espectrofotometria.
[00350] Os anticorpos purificados foram subsequentemente caracterizados em uma série de experimentos. Como descrito acima, a
161 / 500 capacidade deles para se ligarem às células CHO-K1.hCD27 e às células CHO-K1.mmCD27 foi determinada por Ensaio no formato ELISA baseado em célula. Também foi investigado se mostraram competição cruzada com hCD27.15 pelo ensaio de HTRF e se foram capazes de induzir sinalização de CD27 no ensaio com constructo repórter de NF-κB-luciferase. Além disso, se os anticorpos tiveram um efeito estimulatório sobre células-T CD8+ humanas naïve foi examinado como segue. Células-T CD8+ naïve intactas foram isoladas de creme leucocitário usando o Coquetel RosetteSep™ para Enriquecimento de Células-T CD8+ Humanas (StemCell nº 15063) e centrifugação em gradiente de densidade em Ficoll®, seguida por seleção negativa baseada em MACS usando o kit BD IMag™ para Enriquecimento de Células-T CD8+ Naïve Humanas (BD número de cat. 558569), essencialmente de acordo com as instruções do fabricante. As células-T CD8+ isoladas foram checadas para pureza e condição naïve por citometria de fluxo usando anticorpos anti-CD8 e anti-CD45RA. A seguir, as células foram semeadas em placas de 96 poços a uma concentração de 1,5x105 células/poço. As células foram estimuladas com mAb anti-CD3 solúvel (OKT-3) a uma concentração final de 0,125µg/mL e mAb anti-CD28 (Sanquin, clone 15E8) a uma concentração final de 1,0µg/mL, na presença de diluições seriais dos anticorpos purificados. Após 4 dias, a viabilidade das células foi determinada usando iodeto de propídio (IP) e o número de células ativadas foi determinado por citometria de fluxo.
[00351] Com base nos resultados obtidos com os experimentos acima, o anticorpo hCD27.131A foi selecionado para análise adicional. O anticorpo hCD27.131A (ou “anticorpo 131A parental de camundongo”) é um anticorpo IgG1 de camundongo tendo a região VH da SEQ ID NO:7 e uma região VL da SEQ ID NO:8. EXEMPLO 3: Afinidade de anticorpo hCD27.15 por hCD27 (A59T) e por mmCD27
162 / 500
[00352] Previamente, anticorpo agonístico hCD27.15 foi isolado como descrito em WO2012/004367. hCD27.15 foi humanizado para produzir hCD27.15-6B (versão humanizada hCD27.15 da WO2012/004367 com regiões CDR idênticas, SEQ ID NOs:24 e 25) e hCD27.15-c4 quimérico (regiões variáveis de hCD27.15 de camundongo e região constante de IgG4 humana, SEQ ID NOs:22 e 23). Como mostrado nas Figuras 1 e 2, respectivamente, estas versões de anticorpo hCD27.15 não se ligam a um SNP ocorrente frequente em hCD27 (A59T) e não se ligam ao CD27 de macaco Cynomolgus (também chamado aqui de MmCD27 ou CD27 de Macaca mulatta). Em contraste, o anticorpo hCD27.131A foi especificamente selecionado para se ligar a ambos SNP ocorrente frequente em hCD27 (A59T) e CD27 de macaco Cynomolgus. EXEMPLO 4: Humanização de anticorpo hCD27.131A
[00353] O anticorpo hCD27.131A de camundongo foi humanizado usando métodos descritos no relatório descritivo. A partir do anticorpo hCD27.131A de camundongo, as seguintes cadeias pesadas variáveis humanizadas foram construídas: 131AVH6, 131AVH7, 131AVH8, 131AVH9 (SEQ ID NOs:10-13); e as seguintes cadeias leves variáveis humanizadas foram construídas: 131AVL6, 131AVL7, 131AVL8, 131AVL9 (SEQ ID NOs:15-18). Foram preparados os anticorpos 131AVH6VL6, 131AVH6VL7, 131AVH6VL8, 131AVH7VL6, 131AVH7VL7, 131AVH7VL8, 131AVH8VL6, 131AVH8VL7, 131AVH8VL8, e 131AVH9VL9 com regiões constantes de IgG1 humana, ou de IgG2 humana ou de IgG4 humana. EXEMPLO 5: Ligação ao CD27 de superfície celular
[00354] Os anticorpos 131AVH6VL6-hIgG1 e 131AVH6VL6-hIgG2 foram expressados em células CHO-EXP1 ou células HEK293EXP1. 1F5 hIgG1 (ou “1F5”, ou “1F5IgG1”, tem regiões variáveis de 1F5 em US2011/0274685) foi expressada em células HEK293EXP1. Os anticorpos purificados foram ensaiados para ligação às células CHOK1 expressoras de
163 / 500 CD27 humanas, às células CHOK1 expressoras de CD27 A59T humano, e para reatividade cruzada com células CHOK1 expressoras de CD27 de macaco Rhesus usando o ensaio no formato ELISA baseado em célula. Células CHOK1 expressoras de CD27 humanas, células CHOK1 expressoras de CD27 A59T humano, e células CHOK1 expressoras de CD27 de macaco Rhesus foram plaqueadas em placas de cultura de tecido de 96 poços em 50 μL de DMEM/F12, 10% de BCS e gentamicina (meio CHO-K1). As células foram plaqueadas quer a 2x104 células/poço dois dias antes do ensaio quer a 4x104 células/poço um dia antes do ensaio. O meio foi removido dos poços antes do ensaio seguido por incubação de mAb em 100 µL de meio de cultura novo a uma concentração inicial de 10µg/mL e diluições seriais 1:4 em 8 etapas. Os anticorpos foram incubados durante 30-60 minutos à temperatura ambiente e foram lavados 3 vezes com PBS/0,05% Tween 20 usando um protocolo de lavagem de Ensaio no formato ELISA baseado em célula na lavadora de placas “Biotek EL405x Select CW Plate Washer”. Cinquenta microlitros da solução de anticorpo de detecção (anticorpo de cabra anti-IgG- humana conjugado com HRP (Jackson, nº de cat. 109-036-098)), foram adicionados a uma diluição de 1:5.000 em meio CHO-K1 e incubados à temperatura ambiente durante 30-60 minutos. As placas de ensaio foram lavadas como acima e reveladas com TMB e a revelação foi interrompida com solução de interrupção de TMB (KPL nº de cat. 50-85-06) ou ácido fosfórico 0,1N. A placa foi lida em um leitor de placas “Molecular Devices VersaMax Plate Reader” a 450 nm/650 nm. As curvas de titulação foram usadas para determinar a concentração efetiva para obtenção de metade do efeito máximo (CE50).
[00355] Sangues de voluntários humanos saudáveis foram coletados, como parte do programa de doação voluntária de sangue de Palo Alto, para dentro de tubos contendo K2-EDTA (BD Vacutainer, BD Biosciences, nº de catálogo 367863). Sangues de macacos Rhesus foram coletados na
164 / 500
BioReclamation para dentro de tubos contendo K2-EDTA (BD Vacutainer, BD Biosciences, nº de catálogo 367863), cuidadosamente invertidos, armazenados a 4°C, e enviados a 4°C de um dia para outro para Merck Research Laboratories, Palo Alto, CA.
Após o recebimento, foi visualmente confirmado se o sangue estava isento de sinais óbvios de lise ou de coagulação.
Cem microlitros de sangue foram incubados em blocos de 96 poços (Costar, nº de catálogo 3960) com um coquetel de anticorpos fenotípicos e as concentrações indicadas de anticorpo de teste ou de anticorpo de controle durante 30 minutos a 4°C no escuro.
Células vermelhas do sangue (Red Blood Cells, RBCs) foram então lisadas por incubação com 1,7 mL de solução de Amônio-Cloreto-Potássio [Cloreto de Amônio + Bicarbonato de Potássio + EDTA] para lise de células vermelhas do sangue (Solução ACK para Lise, Life Tecnologies, nº de catalogo A10492-01) durante 5 minutos.
A etapa de lise foi repetida mais uma vez com 2 mL de Solução ACK para Lise, e então de novo com 300 mL de Solução ACK para Lise.
As células foram então lavadas após a adição de 1,7 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS Fosfate Buffered Saline) (Hyclone, nº de catálogo SH30028.02). As células foram então ressuspensas em 100 µL de PBS contendo 0,1 µL de solução de corante de viabilidade fixável “Fixable Viability Dye eFluor506” (eBioscience, nº de catálogo 65-0866-18) e incubadas no escuro a 4°C durante 30 minutos.
As células marcadas foram lavadas por ressuspensão em 2 mL de solução tampão de coloração (SB, Staining Buffer) contendo 2% de soro fetal bovino (SAFC, nº de catálogo 12103C) e EDTA 2 mM (Life Technologies, nº de catálogo 15575-038) em solução salina tamponada com fosfato (Phosphate Buffered Saline, PBS) (Hyclone, nº de catálogo SH30028.02) seguido por centrifugação a 1.300 rpm durante 5 minutos.
A etapa de lavagem foi repetida com SB como descrito e então as células foram fixadas por incubação com paraformaldeído 1% (Electron Microscopy Sciences, nº de catálogo 15710) em PBS durante 15 minutos a 4°C no escuro.
Após a lavagem final em SB, as
165 / 500 amostras foram adquiridas em um citômetro de fluxo “LSR-Fortessa” (BD Biosciences) usando o amostrador de alto desempenho e os dados foram analisados pelo programa de computador “FlowJo” (Tree Star Inc.). TABELA 3: Ligação de 131AVH6VL6-hIgG1 e de 1F5-hIgG1 ao CD27 de superfície celular Ensaio no formato IMF - Citometria de fluxo ELISA baseado células em células-T de sangue periférico transfectantes CD27- Anticorpo Alvo Células-T CD8+ Células-T CD4+
CHO CE50 ± DP CE50 ± DP (nM) n CE50 ± DP (nM) n n (nM) CD27 Humano 0,072 ± 0,013 2 0,30 ± 0,07 4 0,32 ± 0,07 4 CD27 A59T 131AVH6VL 0,097 ± 0,008 2 Não testadas Não testadas Humano 6-hIgG1 CD27 Macaco 0,054 ± 0,005 2 0,22 ± 0,08 4 0,17 ± 0,07 4 Rhesus CD27 Humano 0,325 ± 0,068 2 1,30 ± 0,595 4 1,54 ± 0,789 4 CD27 A59T 0,326 ± 0,049 2 Não testadas Não testadas 1F5-hIgG1 Humano CD27 Macaco 0,193 ± 0,063 2 1,92 ± 3,81 4 1,58 ± 0,289 4 Rhesus CE50= concentração efetiva para obtenção de metade do efeito máximo; DP = desvio-padrão; IMF = intensidade média de fluorescência
[00356] As CE50s para ligação ao CD27 humano de superfície celular sobre células CHO transfectadas (ELISA baseado em célula) ou células-T primárias (citometria de fluxo) foram aproximadamente 4 vezes mais baixas para 131AVH6VL6-hIgG1 em comparação com 1F5-hIgG1 (Tabela 3).
[00357] Anticorpos 131A-hIgG1 humanizado e 131A-hIgG4 variante foram expressados em células CHO-EXP1 ou em células HEK293EXP1. Os anticorpos purificados foram ensaiados para ligação às células CHOK1 expressoras de CD27 humanas usando um ensaio no formato ELISA baseado em célula. As células CHOK1 expressoras de CD27 humanas foram plaqueadas em placas de cultura de tecido de 96 poços em 50 μL de DMEM/F12, 10% de BCS (Bovine Calf Serum, soro de bezerro bovino) (meio CHO-K1). As células foram plaqueadas quer a 2x104 células/poço dois dias antes do ensaio quer a 4x104 células/poço um dia antes do ensaio. O meio foi removido dos poços antes do ensaio seguido por incubação de mAb em 100 µL de meio de cultura novo a uma concentração inicial de 10µg/mL e diluições seriais de 1:5 em 8 etapas (anticorpos hIgG4) ou concentração inicial de 50µg/mL e diluições seriais de 1:5 em 8 etapas (anticorpos hIgG1).
166 / 500 Os anticorpos foram incubados durante 30-60 minutos à temperatura ambiente e lavados 3 vezes com PBS/0,05% de Tween 20 usando um protocolo de lavagem de Ensaio no formato ELISA baseado em célula no lavadora de placas “Biotek EL405x Select CW Plate Washer”. Cinquenta microlitros da solução de anticorpo de detecção (anticorpo de cabra anti-IgG- humana conjugado com HRP (Southern Biotech, nº de cat. 2014-05), foram adicionados a uma diluição de 1:2.000 em meio CHO-K1 e incubados à temperatura ambiente durante 30-60 minutos. As placas de ensaio foram lavadas como acima e reveladas com TMB e a revelação foi interrompida com solução de interrupção de TMB (KPL nº de cat. 50-85-06) ou ácido fosfórico 0,1N. A placa foi lida em um leitor de placas “Molecular Devices SpectraMax Plus 384 Plate Reader” a 450 nm/650 nm. Curvas de titulação foram usadas para determinar a concentração efetiva para obtenção de metade do efeito máximo (CE50). TABELA 4: Ligação ao CD27 de superfície celular: anticorpos 131A anti-CD27 humanizados Ensaio no formato ELISA baseado em célula, CE50 (pM) Cadeias pesada e leve do anticorpo hIgG1 hIgG4 131A VH7 / VL6 162 42 131A VH7 / VL7 207 84 131A VH7 / VL8 144 86 131A VH6/VL6 155 101 131A VH6/VL7 130 132 131A VH6/VL8 131 103 131A VH8/VL6 298 97 131A VH8/VL7 262 88 131A VH8/VL8 145 129 131A VH9/VL9 111 130
[00358] Todos os anticorpos 131A-hIgG1 humanizado e 131A-hIgG4 variante tiveram EC50s para ligação ao CD27 humano de superfície celular sobre células CHO transfectadas (ELISA baseado em célula) que estiveram dentro de 2 vezes a CE50 para 131AVH6VL6-hIgG1 (Tabela 4), enquanto que a CE50 para 1F5-hIgG1 foi aproximadamente 4 vezes mais alta em comparação com 131AVH6VL6-hIgG1 (Tabela 3).
[00359] Sangues de voluntários humanos saudáveis foram obtidos como cremes leucocitários do Stanford Blood Center e células mononucleares
167 / 500 de sangue periférico (Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs) foram isolados por centrifugação em gradiente de densidade usando “Ficoll™- Plaque Plus” (GE Healthcare, nº 17-1440-03). As células vermelhas do sangue (RBCs) restantes na fração de PBMC foram então lisadas pela incubação com 2 mL de solução de Amônio-Cloreto-Potássio (ACK) [Cloreto de Amônio + Bicarbonato de Potássio + EDTA] para lise de células vermelhas do sangue (Solução ACK para Lise, Life Tecnologies, nºA10492- 01) durante 5 minutos à temperatura ambiente, e então foram lavadas com 10 mL de solução tampão de coloração (SB) contendo 2% de soro fetal bovino (SAFC, nº 12103C) e EDTA 2 mM (Life Technologies, nº 15575-038) em solução salina tamponada com fosfato (PBS) (Hyclone, nº SH30028.02) seguido por centrifugação a 300g durante 5 minutos.
As células foram então contadas usando um contador de células automático “Vicell Automated Cell Counter” (Beckman Coulter nº 383556) e 2x105 de células por poço foram distribuídas em uma placa de 96 poços de fundo em U.
As células foram então ressuspensas em 100 µL de PBS contendo 0,1 µL de solução de corante de viabilidade fixável “Fixable Viability Dye eFluor506” (eBioscience, nº 65- 0866-18) e incubadas no escuro a 4°C durante 30 minutos.
As células marcadas foram lavadas por ressuspensão delas em 150 µL de solução tampão de coloração (SB) seguido por centrifugação a 300g durante 5 minutos.
As células foram então ressuspensas em 100 µL de SB contendo anticorpos anti- CD27 primários em várias concentrações, incubadas no escuro a 4°C durante 30 minutos, seguido por etapas de lavagem e centrifugação como previamente descrito.
A seguir, as células foram coradas com um anticorpo secundário de camundongo anti-IgG1-humana conjugado com PE (Southern Biotech nº HP6001) para detectar os clones de anticorpo anti-CD27 humanizado, ou um anticorpo secundário de asno (Equus asinus) anti-IgG-de-camundongo conjugado com Alexa Fluor® 555 [“Donkey anti-mouse Alexa555”] (Thermofisher nº A-31570) para detectar o anticorpo parental de camundongo
168 / 500 anti-CD27. As células foram incubadas durante 30 minutos a 4°C no escuro, seguido por etapas de lavagem e centrifugação. A seguir, as células foram coradas com um coquetel de anticorpos fenotípicos para marcadores de superfície (CD3, CD4, CD8, CD11b) e incubadas durante 30 minutos a 4°C no escuro, seguido por etapas de lavagem e centrifugação. Finalmente, as células foram fixadas por incubação com 100 µL de solução “BD Cytofix” (BD Biosciences nº 554655) durante 10 minutos a 4°C no escuro, seguido por etapas de lavagem e centrifugação. As amostras foram adquiridas em um citômetro de fluxo “LSR-Fortessa” (BD Biosciences) usando o amostrador de alto desempenho e os dados foram analisados pelo programa de computador “FlowJo” (Tree Star Inc.). TABELA 5: Ligação de anticorpos 131A anti-CD27 humanizados ao CD27 de superfície celular em células-T humanas Anticorpo Alvo CE50 (nM) ± DP CE50 (nM) ± DP células CD4+ * células CD8+ * CD27 131A Humanizado 0,1371 ±0,00509 0,1234 ±0,0349 VH6/VL6-hIgG1 CD27 131A Humanizado CD27 0,1235 ±0,00014 0,1097 ±0,03 VH6/VL7-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,12625 ±0,00714 0,1240 ±0,018 VH6/VL8-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,12815 ±0,00361 0,1269 ±0,0314 VH7/VL6-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,11345 ±0,00191 0,1113 ±0,0249 VH7/VL7-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,11825 ±0,00163 0,1180 ± 0,0130 VH7/VL8-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,12445 ± 0,00785 0,1127 ±0,0203 VH8/VL6-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,11475 ±0,00728 0,1105 ±0,0178 VH8/VL7-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,13465 ±0,00431 0,1312 ±0,0293 VH8/VL8-hIgG1 Humano CD27 131A Humanizado CD27 0,07736 ±0,00467 0,0721 ±0,0174 VH9/VL9-hIgG1 Humano Quimera de Camundongo e Humano CD27 0,06644 ±0,00157 0,0649 ±0,0186 CD27 131A-hIgG1 Humano 131A Parental de Camundongo CD27 0,06446 ±0,0102 0,0194 ±0,0145 Humano CE50 = Concentração efetiva para obtenção de metade do efeito máximo; DP = desvio-padrão; IMF = intensidade média de fluorescência *IMF por citometria de fluxo em células-T do sangue periférico (N=2 doadores)
[00360] Todos os anticorpos 131A-hIgG1 variantes humanizados tiveram EC50s para ligação às células-T primárias (citometria de fluxo) que foram comparáveis (dentro de 10%) ou mais baixas que a CE50 para
169 / 500 131AVH6VL6-hIgG1 (Tabela 5), enquanto que a CE50 para 1F5-hIgG1 foi aproximadamente 5 vezes mais alta em comparação com 131AVH6VL6- hIgG1 (Tabela 3). EXEMPLO 6: Determinação da afinidade pela ligação de anticorpos anti-CD27 à proteína recombinante humana CD27
[00361] As atividades cinéticas de ligação de anticorpos anti-CD27- humano 131AVH6VL6-hIgG1 e 131AVH6VL6-hIgG2 foram medidas por ressonância de plasmon de superfície usando um sistema “Biacore T200 System” (Biacore, GE Healthcare, Piscataway, NJ). Aproximadamente 400 UR (unidades de ressonância) de proteína de fusão CD27-Fc-humana, aproximadamente 2.000 UR de proteína de fusão CD27-A59T-Fc-humana ou aproximadamente 300 UR de proteína de fusão CD27-Fc-de-macaco-Rhesus foram imobilizadas via uma química de acoplamento de amina em um chip sensor “Series S CM5”, número de catálogo BR-1005-30. Solução tampão HBS-EP+ (BR-1006-69) foi usada como a solução tampão de corrida com uma taxa de fluxo de 50 µL/min. Concentrações variadas de 131AVH6VL6- hIgG1 e de 131AVH6VL6-hIgG2, na faixa de 4,1 nM a 400 nM foram injetadas sobre as superfícies antigênicas. As injeções de anticorpo demoraram 180 segundos e após as injeções a dissociação foi monitorada durante 900 segundos. Após cada ciclo de injeções, a superfície antigênica foi regenerada com uma injeção de MgCl2 3M durante 30 segundos.
[00362] Sensogramas foram “duplamente referenciados” pela subtração da resposta de uma superfície branca e aquela de uma injeção de solução tampão e usados para analisar a constante de velocidade de associação (ka) e a constante de velocidade de dissociação (kd), e a constante de dissociação em equilíbrio KD. Os conjuntos de dados resultantes foram ajustados com um Modelo de Langmuir de Ligação de 1:1 usando o programa de computador de avaliação “Biacore T200” (versão 2.0). A Tabela 6 resume as afinidades dos anticorpos anti-CD27-humano pela proteína de fusão CD27-
170 / 500 Fc-humana, pela proteína de fusão CD27-A59T-Fc-humana e pela proteína de fusão CD27-Fc-de-macaco-Rhesus. TABELA 6: Medição da afinidade de anticorpos anti-CD27-humano pelo antígeno CD27 usando BIAcore. Biacore ka Biacore kd Biacore KD Anticorpo Antígeno (M-1s-1) (s-1) (nM) 131AVH6VL6-hIgG1 huCD27 2,2E+05 1,1E-03 5,1 131AVH6VL6-hIgG2 huCD27 2,4E+05 1,5E-03 6,4 131AVH6VL6-hIgG1 huCD27 A59T 1,5E+05 1,1E-03 7,3 131AVH6VL6-hIgG2 huCD27 A59T 1,4E+05 1,2E-03 8,2 131AVH6VL6-hIgG1 rhCD27 2,3E+05 1,0E-03 4,3 131AVH6VL6-hIgG2 rhCD27 2,6E+05 1,4E-03 5,5
[00363] Experimentos de ressonância de plasmon de superfície (SPR, Surface Plasmon Resonance) foram realizados usando um sistema “Biacore 4000 System” (Biacore, GE Healthcare, Piscataway, NJ) para determinar a atividade cinética de ligação de anticorpos variantes hIgG1 e hIgG4 anti- CD27.131A humanizados às proteínas recombinantes CD27 de macaco Cynomolgus e de humano etiquetadas com His9G (“His9G” revelada como SEQ ID NO:69) (transecção com plasmídeo transiente de células HEK293, em nosso laboratório). A superfície de um chip sensor “Series S CM5” (GE/Biacore, nº de cat. BR-1005-30) foi preparada via acoplamento de amina de anticorpo de camundongo anti-IgG(Fc)-humana (Kit de Captura de Anticorpo Humano [“Human Antibody Capture Kit”], GE/Biacore, nº de cat. BR-1008-39) seguindo o protocolo do fabricante, produzindo cerca de 9.000 UR de anticorpo imobilizado. Os ensaios foram realizados a 25°C em solução tampão de corrida HBS-EP+ desgaseificada e filtrada, de pH 7,4 (GE/Biacore, nº de cat. 1006-69). As variantes e quimeras anti-CD27.131A foram capturadas a 6,6 nM (1µg/mL) durante 120 segundos em uma taxa de fluxo de 10 µL/minuto. As manchas na célula de fluxo modificadas com anticorpo anti-Fc-humano mas destituídas de anticorpos anti-CD27 foram usadas como referências. Uma diluição serial dupla de cinco pontos (3,13 nM a 50 nM) de proteína CD27 de macaco Cynomolgus ou de humano etiquetada com His9G- (“His9G” revelada como SEQ ID NO:69) foi injetada sobre a superfície de anticorpo durante 180 segundos (fase de associação) a 30 µL/minuto seguidos
171 / 500 por 600 segundos de fluxo de solução tampão (fase de dissociação). A superfície do chip foi regenerada com uma injeção de MgCl2 3M durante 30 segundos após cada ciclo de injeções.
[00364] Os dados foram duplamente referenciados pela subtração da resposta de uma superfície branca e daquela de uma injeção de solução tampão e usados para analisar a constante de velocidade de associação (ka) e a constante de velocidade de dissociação (kd), e a constante de dissociação em equilíbrio KD. Os conjuntos de dados resultantes foram ajustados com um Modelo de Langmuir de Ligação de 1:1 usando o programa computador de avaliação Biacore 4000 BIAevaluation, versão 1.0 (GE/Biacore). A Tabela 7 resume as afinidades das variantes de hIgG1 e hIgG4 anti-CD27.131A humanizadas pelas proteínas CD27/His de macaco Cynomolgus e de humano. TABELA 7: Dados de afinidade pela interação de variantes de hIgG1 e de hIgG4 anti-CD27.131A humanizadas com proteínas CD27 de macaco Cynomolgus e de humano etiquetadas com His9G (“His9G” revelada como SEQ ID NO:69). Variantes anti-CD27 humanizadas KD (M) CD27/His de humano CD27/His de macaco Cynomolgus 131A quimera huIgG1 2,92E-08 4,04E-08 hCD27.131A VH6VL6 huIgG1 6,52E-08 5,15E-08 hCD27.131A VH6VL7 huIgG1 7,17E-08 4,19E-08 hCD27.131A VH6VL8 huIgG1 6,82E-08 5,65E-08 hCD27.131A VH7VL6 huIgG1 4,13E-08 3,48E-08 hCD27.131A VH7VL7 huIgG1 3,89E-08 3,17E-08 hCD27.131A VH7VL8 huIgG1 4,49E-08 3,65E-08 hCD27.131A VH8VL6 huIgG1 6,44E-08 4,66E-08 hCD27.131A VH8VL7 huIgG1 6,33E-08 4,41E-08 hCD27.131A VH8VL8 huIgG1 6,10E-08 3,23E-08 hCD27.131A VH9VL9 huIgG1 6,22E-08 1,05E-07 131A quimera huIgG4 4,34E-08 3,12E-08 hCD27.131A VH6VL6 huIgG4 1,68E-07 7,30E-08 hCD27.131A VH6VL7 huIgG4 1,08E-07 8,20E-08 hCD27.131A VH6VL8 huIgG4 9,91E-08 5,52E-08 hCD27.131A VH7VL6 huIgG4 6,57E-08 5,82E-08 hCD27.131A VH7VL7 huIgG4 8,24E-08 3,67E-08 hCD27.131A VH7VL8 huIgG4 5,85E-08 4,01E-08 hCD27.131A VH8VL6 huIgG4 1,32E-07 5,97E-08 hCD27.131A VH8VL7 huIgG4 8,93E-08 7,68E-08 hCD27.131A VH8VL8 huIgG4 1,10E-07 9,67E-08 hCD27.131A VH9VL9 huIgG4 1,04E-07 7,29E-08 EXEMPLO 7: Atividade antitumoral de 131AVH6VL6-hIgG1 em comparação com 1F5-hIgG1 em um modelo de tumor em camundongo
[00365] Camundongos: Camundongos B6.Cg-Cd27tm1(CD27)Jbo/Tac
172 / 500 (camundongos huCD27KI) foram gerados pela troca do domínio extracelular do gene CD27 de camundongo pelo domínio extracelular do gene CD27 de humano seguido por retrocruzamento com o camundongo C56BL6/J com genótipo residual até que uma análise de 1.449 SNP mostrasse 97,95%- 98,99% de genoma recipiente de camundongo C57BL/6. Camundongos huCD27KI fêmeas de aproximadamente oito a doze semanas de idade com um peso corporal médio de 20.3 gramas (faixa de 17,5–23,5 gramas) foram obtidos de uma Colônia de Procriação de Camundongos da Merck no Taconic Laboratory (Germantown, NY). Comida animal convencional e água foram fornecidos ad libitum.
[00366] Reagentes anticorpos: Anticorpos monoclonais foram obtidos de fontes internas como estoques congelados (-80°C). O anticorpo 131AVH6VL6-hIgG1 e 1F5-hIgG1 foram produzidos por linhagens celulares recombinantes. O isótipo de controle IgG2a de camundongo (isótipo de controle) foi produzida da cultura de células de hibridoma e foi específica para o vírus da doença bursal infecciosa VP2-4-3_GV.
[00367] Formulações de reagentes anticorpos: As soluções tampão de formulação foram específicas para cada anticorpo para estabilizar proteínas e evitar a precipitação. As formulações foram como segue: isótipo de controle: Acetato de Sódio 20 mM, Sacarose 9%, pH 5,5; 131AVH6VL6-hIgG1: Acetato de Sódio 20 mM, Sacarose 9%, pH 5,5; 1F5-hIgG1: Fosfato de Na 10mM + NaCl 75mM + Sacarose 3%, pH 7.4.
[00368] Preparação e implante de linhagem celular tumoral: MC38 é uma linhagem celular derivada de um adenocarcinoma de cólon de camundongo C57BL6/J. As células MC38 de um estoque congelado foram mantidas in vitro como uma cultura de monocamada em meio DMEM (Cellgro, nº de cat. 10-013CV) suplementado com 10% de soro fetal bovino (Hyclone, nº de cat. SH30088.03) a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2 em ar. 1x106 Células MC38 em fase-log e sub-confluentes foram injetadas
173 / 500 subcutaneamente (SC) em um volume de 100 μL de meio basal DMEM no flanco direito dorsal de cada camundongo. Os camundongos tiveram primeiro o pelo removido com tosquiadores eletrônicos na área que seria usada para o implante.
[00369] Medições de tumor e pesos corporais: Os tumores foram medidos no dia antes da primeira dose e depois duas vezes por semana. O comprimento e a largura do tumor foram medidos usando compassos de calibre eletrônicos e o volume de tumor foi determinado usando a fórmula: Volume (mm3) = 0,5 x Comprimento x Largura2, na qual o comprimento é a dimensão mais longa. Os camundongos foram pesados periodicamente para monitorar a saúde geral. Antes do tratamento, os camundongos foram pesados e os tumores dos camundongos individuais foram medidos. Para evitar viés, quaisquer camundongos com valores atípicos de peso ou de volume de tumor foram removidos e os camundongos restantes foram distribuídos para grupos de tratamento com tamanho médio de tumor equivalente. Quando o volume médio de tumor nos camundongos possuindo tumor MC38 alcançou ~85 mm3 (faixa de 70-100 mm3), cerca de 5 dias após o implante, a dosagem foi iniciada. Os animais foram administrados com anticorpos como descrito abaixo.
[00370] Preparação de solução de dosagem, administração, e análises: Os estoques congelados de anticorpos a serem testados no modelo animal foram descongelados e transferidos para gelo seco. Para evitar congelamento-descongelamento repetidos, cada frasco de estoque foi descongelado uma vez e armazenado a 4°C. Quando descongelados, os anticorpos foram usados dentro de um mês. Antes de cada dosagem, a solução de estoque de cada anticorpo foi diluída para a concentração nominal no diluente apropriado e dosada imediatamente. As alíquotas das soluções de dosagem foram rapidamente congeladas em gelo seco e armazenadas a -80°C até as análises. As soluções de dosagem foram avaliadas usando a plataforma
174 / 500 “Meso Scale Discovery” (MSD®, Rockville, MD) que é baseada em tecnologia de multiarranjos; uma combinação de arranjos padronizado e de detecção eletroquimioluminescente.
[00371] Dosagem e resultados: Camundongos knock-in huCD27 possuindo tumor MC38 foram administrados com 131AVH6VL6-hIgG1, 1F5- hIgG1, ou isótipo de controle a uma dose de 5mg/kg, IP, a cada 3-4 dias em um total de 7 doses. Após a dosagem, os animais continuaram a ser monitorados e os volumes de tumor foram medidos duas vezes por semana. Como demonstrado pelos resultados, que são mostrados na Figura 4, a resposta antitumoral ao 131AVH6VL6-hIgG1 foi maior que a resposta antitumoral ao 1F5-hIgG1. EXEMPLO 8: Atividade antitumoral de 131AVH6VL6-hIgG1 em combinação com anticorpo anti-PD-1 em um modelo de tumor em camundongo
[00372] Camundongos: Camundongos fêmeas B6.Cg- Cd27tm1(CD27)Jbo/Tac (huCD27KI) de aproximadamente dez a treze semanas de idade com um peso corporal médio de 21,21 gramas (faixa de 18,06-23,21 gramas) foram obtidos de uma colônia de procriação mantida no Taconic Laboratory (Germantown, NY). Comida animal convencional e água foram fornecidos ad libitum.
[00373] Reagentes anticorpos: Anticorpos monoclonais foram obtidos de fontes internas como estoques congelados (-80°C). A 131AVH6VL6- hIgG1 e o anticorpo IgG1 de camundongo anti-PD1-murino (muDX400) foram produzidos por linhagens celulares recombinantes. O isótipo de controle foi uma IgG2a de camundongo específica para o vírus da doença bursal infecciosa VP2-4-3_GV e foi produzido da cultura de células de hibridoma.
[00374] Formulações de reagentes anticorpos: Todos os anticorpos foram formulados em Acetato de Sódio 20 mM, Sacarose 9%, pH 5,5 para
175 / 500 estabilizar proteínas e evitar a precipitação.
[00375] Preparação e implante de linhagem celular tumoral: MB49 é uma linhagem celular tumoral derivada de um carcinoma de bexiga de camundongo C57BL6/J. As células MB49 de um estoque congelado foram mantidas in vitro como uma cultura de monocamada em meio DMEM (Cellgro, nº de cat. 10-013CV) suplementado com 10% de soro fetal bovino (Hyclone, nº de cat. SH30088.03) a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2 em ar. 5x105 Células MB49 em fase-log e sub-confluentes foram injetadas subcutaneamente (SC) em um volume de 100 μL de meio basal DMEM no flanco direito dorsal de cada camundongo. Os camundongos tiveram primeiro o pelo removido com tosquiadores eletrônicos na área que seria usada para o implante.
[00376] Medições de tumor e pesos corporais: Os tumores foram medidos no dia antes da primeira dose e depois duas vezes por semana. O comprimento e a largura do tumor foram medidos usando compassos de calibre eletrônicos e o volume de tumor foi determinado usando a fórmula: Volume (mm3) = 0,5 x Comprimento x Largura2, na qual o comprimento é a dimensão mais longa. Os camundongos foram pesados periodicamente para monitorar a saúde geral. Antes do tratamento, os camundongos foram pesados e os tumores dos camundongos individuais foram medidos. Para evitar viés, quaisquer camundongos com valores atípicos de peso ou de volume de tumor foram removidos e os camundongos restantes foram distribuídos para grupos de tratamento com tamanho médio de tumor equivalente. Quando o volume médio de tumor nos camundongos possuindo tumor MB49 alcançou ~91,56 mm3 (faixa de 80,94-102,89 mm3), cerca de 7 dias após o implante, a dosagem foi iniciada. Os animais foram administrados com anticorpos como descrito abaixo.
[00377] Preparação de solução de dosagem, administração, e análises: Os estoques congelados de anticorpos a serem testados no modelo
176 / 500 animal foram descongelados e transferidos para gelo seco. Para evitar congelamento-descongelamento repetidos, cada frasco de estoque foi descongelado uma vez e alíquotas foram preparadas em volumes suficientes para uso uma vez. Tubos de polipropileno, de baixa adesão, foram utilizados para este propósito. As alíquotas foram rapidamente congeladas em gelo seco e armazenadas a -80°C. Antes de cada dosagem, uma alíquota foi descongelada e diluída para a concentração nominal no diluente apropriado e dosada imediatamente. Alíquotas de soluções de dosagem foram congeladas rapidamente em gelo seco e armazenadas a -80°C até as análises. As soluções de dosagem foram avaliadas usando a plataforma “Meso Scale Discovery” (MSD®, Rockville, MD) que é baseada em tecnologia de multiarranjos; uma combinação de arranjos padronizado e de detecção eletroquimioluminescente.
[00378] Dosagem e resultados: Os camundongos huCD27 KI possuindo tumor MB49 foram administrados com 131AVH6VL6-hIgG1, muDX400, 131AVH6VL6-hIgG1 +muDX400, ou isótipo de controle a uma dose de 5mg/kg, IP. 131AVH6VL6-hIgG1 foi administrado a cada 3-4 dias em um total de 6 doses. muDX400 foi administrado semanalmente em um total de 4 doses. Após a dosagem, os animais continuaram a ser monitorados e os volumes de tumor foram medidos duas vezes por semana. Como demonstrado pelos resultados, que são mostrados na Figura 5, houve resposta antitumoral mínima a 131AVH6VL6-hIgG1 ou a muDX400 sozinho, entretanto a terapia de combinação com 131AVH6VL6-hIgG1 + muDX400 resultou em eficácia antitumoral significativamente intensificada. EXEMPLO 9: Ensaio de ativação de NF-κB
[00379] Células: Células renais embrionárias humanas HEK293FT contendo um constructo repórter de NF-κB-luciferase (pNiFty2-Luc, Invivogen) foram previamente criadas por métodos de transfecção estável usando seleção de fármaco Zeocina (células 293FT-NF-κB-luciferase).
[00380] Cultura celular: Células 293FT-κB-luciferase foram crescidas
177 / 500 em DMEM + Glutamina 2mM, (Cellgro) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino Inativado por Calor (Hyclone), Penicilina/Estreptomicina/Glutamina 1X (Cellgro), e Zeocina 200µg/mL (Life Technologies).
[00381] Anticorpos: Anticorpos hCD27.131A IgG1 e IgG4 foram produzidos por expressão transiente quer em células CHO-EXPI quer em células 293-EXPI. 1F5 IgG1 foi produzida por expressão transiente em células293-EXPI. hCD27.15-4B IgG4 foi produzida por expressão estável em células CHO. Todos os anticorpos foram purificados pela metodologia com Proteína-A padrão.
[00382] Transfecções: cDNAs de comprimento completo que codificam a proteína CD27 humana WT (de tipo selvagem) (Referência de Sequência: NP_001233), variante de CD27 humana p.Ala59Thr (“A59T”, Frequência Alélica: 0,2, Referência de Sequência: rs25680) ou CD27 de Macaco Rhesus/Macaco Cinomolgo (Referência de Sequência: XP_001104337.1/XP_005569963.1) foram clonados no vetor de expressão pCI-neo. Os plasmídeos que codificam CD27 foram transientemente transfectados para dentro de células NF-κB-luciferase, usando Lipofectamine® 2000 (Life Technologies). Citometria de fluxo foi utilizada para confirmar a expressão na superfície de todos os constructos de CD27.
[00383] Estimulações com anticorpos: Aproximadamente 16-20h após a transfecção transiente de constructos de CD27, as células foram colhidas com Solução Tampão para Dissociação de Células [“Cell Dissociation Buffer”] (Millipore) ou “TyrpLE Express” (Life), contadas e replaqueadas em “Opti-MEM” (Life Technologies) a 5.000-10.000 células por poço em placas de luminescência de fundo transparente de 96 poços (Corning) e permitidas repousarem/aderirem durante 30-180 minutos a 37ºC antes da estimulação com anticorpos solúveis anti-CD27. Anticorpos solúveis hCD27.131A IgG1 anti-hCD27 ou hCD27.131A IgG4 anti-hCD27 (dose máxima de 10µg/mL),
178 / 500 1F5 IgG1 anti-hCD27 (dose máxima de 10µg/mL) e hCD27.15-4B IgG4 anti- hCD27 (dose máxima de 160µg/mL) foram então adicionados às células em triplicata com uma diluição serial de 4 vezes ou de 10 vezes, como indicado, as células foram incubadas durante 16-20 horas a 37ºC.
[00384] Ensaio para a atividade de NF-κB: Após a incubação com os anticorpos durante 16-20h a 37ºC, as células foram repousadas à temperatura ambiente durante 5 minutos antes da adição de “Bright-Glo” (Promega). As placas foram então protegidas da luz e incubadas durante 10 minutos à temperatura ambiente antes de serem analisadas em um leitor de placas de Luminescência/Luminômetro (Molecular Device-LJL BioSystem ou Envision System). Os valores de alteração em vezes com anticorpo foram calculados sob condições sem anticorpo. Os valores de alteração em vezes foram usados para aplicar ajustes em curva não linear para as respostas às doses usando o programa de computador “GraphPad Prism” [modelo: log(agonista) vs. resposta – coeficiente angular variável (quatro parâmetros) sem restrições aplicadas].
[00385] A comparação da atividade em forma solúvel com todas as isoformas de CD27, a hCD27.131A VH6VL6 huIgG1 apresentou o potencial mais alto para indução de atividade de NF-κB em todas as isoformas (Fig. 6). hCD27.131A VH6VL6 huIgG1 mostrou potência comparável para CD27 humano WT e CD27 humano A59T (CE50 média de 2,22 nM e 4,72 nM respectivamente), e potência aproximadamente 7 vezes mais forte para CD27 de macaco Rhesus (CE50 média de 0,29 nM) (Tabela 8). Em contraste, 1F5 huIgG1 não foi consistentemente ativa em forma solúvel e consequentemente os valores de CE50 não puderam ser calculados para 1F5 huIgG1 (Fig. 6).
[00386] hCD27.15-4B IgG4 (versão humanizada de hCD27.15 de WO2012/004367 com regiões CDR idênticas, SEQ ID NOs:41 e 42) mostrou consistentemente atividade contra células expressoras de hCD27 WT mas não contra células expressoras de CD27 A59T ou expressoras de CD27 de macaco
179 / 500 Rhesus. Isto sugere que hCD27.15-4B não seria ativo contra o alelo A59T de CD27, presente globalmente em uma frequência de 20%. A mesma tendência foi vista para o clone parental hCD27.15 (dados não mostrados). Além disso, o mAb hCD27.15-4B IgG4 é menos potente na indução de atividade de NF- κB em comparação com hCD27.131AVH6VL6-huIgG1. Nestes experimentos, hCD27.15-4B IgG4 não induziu um platô para sinalização de NF-κB mesmo em doses de 160µg/mL e consequentemente um valor de CE50 foi incalculável. A Tabela 9 mostra os valores de alteração em vezes para a ativação de NF-κB em uma concentração única de 2,5µg/mL para ilustrar as diferenças de atividade em doses mais baixas. Por exemplo, a 2,5µg/mL em células expressoras de WT CD27, a hCD27.131A VH6VL6 huIgG1 mostra potência mais alta em comparação com a hCD27.15-4B IgG4 (Alteração Média em Vezes: 2,52±0,45 em comparação com 1,82±0,38, vapor-p de teste- t emparelhado: 0,01) ou em comparação com a 1F5 huIgG1 (Alteração em Vezes: 1,34±0,29, valor-p: 0,001). No todo, estes dados mostram que hCD27.131A VH6VL6 huIgG1 mostra atividade de NF-κB-luciferase evidente contra WT CD27 e o alelo variante menor A59T de CD27 e também CD27 de macaco Rhesus e ilustram como hCD27.131A VH6VL6 huIgG1 mostra atividade mais alta em comparação com a 1F5 huIgG1 e atividade mais potente em comparação com hCD27.15-4B IgG4.
[00387] Várias variantes humanizadas de hCD27.131A foram testadas para atividade de NF-κB-luciferase induzida por CD7 (Figura 7). Todas as variantes humanizadas mostraram atividade mais alta do que 1F5 IgG1. A comparação direta de anticorpos quiméricos de camundongo-humano hCD27.131A mostrou ativação similar de huIgG1 quimérica ou frameworks de huIgG4 sobre a atividade de NF-κB-luciferase (Fig 7A). No todo, todas as variantes humanizadas de hCD27.131A huIgG1 comportaram-se similarmente entre si mostrando atividade de NF-κB-luciferase evidentemente mais alta em relação à 1F5 huIgG1 (10µg/mL, alteração média em vezes: 5,32
180 / 500 em comparação com 2,23, Fig 7A). Similarmente, todas as variantes humanizadas de hCD27.131A IgG4 mostraram atividade mais alta em relação à 1F5 huIgG1 (10µg/mL, alteração média em vezes: 3,06 em comparação com 1,73), com uma faixa de atividade mais larga observada entre os anticorpos 131A IgG4 individuais (Fig 7B). TABELA 8: Bioatividade de hCD27.131A VH6VL6 huIgG1, 1F5 huIgG1, hCD27.15-4B IgG4 em um ensaio com constructo repórter de NF-κB-luciferase: Valores de CE50 e Emáx baseados nas curvas de dose-resposta ajustadas. Emáx ± DP N = número de Anticorpo Alvo CE50 ± DP (nM) (alteração em ajustes de curva vezes) determinável CD27 Humano 2,22 ± 2,17 2,955 ± 0,362 6 hCD27.131A CD27 A59T 4,72 ± 1,87 3,220 ± 0,445 5 VH6VL6 Humano huIgG1 CD27 Macaco 0,29 ± 0,16 2,111 ± 0,193 5 Rhesus NA (Atividade CD27 Humano 1,482 ± 0,266 5 Baixa) CD27 A59T NA (Atividade 1F5 huIgG1 1,299 ± 0,220 5 Humano Baixa) CD27 Macaco NA (Atividade 1,333 ± 0,218 3 Rhesus Baixa) CD27 Humano NA (Sem Platô) NA (Sem Platô) 0 CD27 A59T NA (Atividade NA (Atividade hCD27.15-4B 0 Humano Baixa) Baixa) IgG4 CD27 Macaco NA (Atividade NA (Atividade 0 Rhesus Baixa) Baixa) TABELA 9: Bioatividade de hCD27.131A VH6VL6 huIgG1, 1F5 huIgG1, hCD27.15-4B IgG4 em um ensaio com constructo repórter de NF-κB-luciferase: Valores de alteração em vezes a 2,5µg/mL. Valores de alteração em vezes a Anticorpo Alvo n 2,5µg/mL ± DP CD27 Humano 2,52 ± ,45 6 CD27 A59T hCD27.131A VH6VL6 2,61 ± ,58 5 Humano huIgG1 CD27 Macaco 2,11 ± ,35 5 Rhesus CD27 Humano 1,34 ± ,29 6 CD27 A59T 1,23 ± ,22 5 1F5 huIgG1 Humano CD27 Macaco 1,22 ± ,13 5 Rhesus CD27 Humano 1,82 ± ,38 3 CD27 A59T 0,97 ± ,02 2 hCD27.15-4B IgG4 Humano CD27 Macaco 0,99 ± ,06 2 Rhesus EXEMPLO 10: Bioatividade em ensaios de coestimulação de células-T de macaco Rhesus e de células-T humanas primárias
[00388] Células-T CD8+ humanas enriquecidas foram obtidas de
181 / 500 cremes leucocitários usando Coquetel RosetteSep™ para Enriquecimento de Células-T CD8+ Humanas (StemCell Technologies, Vancouver, Canadá) de acordo com as instruções do fabricante. De modo resumido, o creme leucocitário foi incubado com um coquetel de anticorpos, diluído com PBS + 2% de FBS, então foi centrifugado sobre um meio de densidade boiante Ficoll-Paque™ Plus (GE Healthcare, Reino Unido) para peletizar as células indesejadas juntamente com as RBCs. As células-T CD8+ enriquecidas foram então removidas do plasma e da interface do meio de densidade, foram extensivamente lavadas e lisadas com Solução Tampão ACK para Lise (Thermofisher, MA, EUA). Células-T CD8+ naïve foram isoladas por processamento adicional da amostra usando o Conjunto para Enriquecimento de Células-T CD8+ Naïve Humanas [Human Naïve CD8+ T Cell Enrichment Set] (BD Biosciences, CA, EUA).
[00389] As células foram usadas frescas ou congeladas para utilização em experimentos futuros.
[00390] Para o ensaio de ativação, células-T CD8+ naïve foram ressuspensas para 7,5x105 células/mL em DMEM-F12 (Gibco, CA, EUA), 5% de soro humano inativado por calor (Sigma, MO, EUA), 50 μM de 2- mercaptoetanol (Sigma, MO, EUA), 100 U/mL de penicilina e 100µg/mL de estreptomicina (Lonza, Suíça). 1,5x105 Células foram cultivadas na presença de uma dose subótima de αCD3 (0,025-0,05 μg/mL de clone OKT3, Biolegend, CA, EUA) e αCD28 (1 μg/mL de clone 15E8, Cell Sciences, MA, EUA) com 131AVH6VL6-hIgG1 solúvel, 1F5-hIgG1 solúvel, isótipo solúvel ou anticorpo anti-CD3/anti-CD28 sozinho solúvel em uma placa de 96 poços de fundo plano durante 3 dias em uma incubadora com 5% de CO2, a 37 graus Celsius. Após a estimulação, as células foram lavadas com PBS, e então foram coradas com um corante de viabilidade fixável (eBioscience, CA, EUA) durante 30 minutos a 4°C. O excesso de corante foi removido por lavagem e as células foram bloqueadas com “TruStain FcX” (Biolegend, CA,
182 / 500 EUA). As células foram então incubadas com anticorpos fenotípicos (anticorpo de camundongo anti-CD69-humano conjugado com FITC (clone FN50, BD Biosciences, CA, EUA), anticorpo de camundongo anti-CD4- humano conjugado com PE/CF594 (clone L200, BD Biosciences, CA, EUA), anticorpo de camundongo anti-CD25-humano conjugado com PE/Cy7 (clone M-A251, BD Biosciences, CA, EUA) e anticorpo de camundongo anti-CD3- humano conjugado com Azul Pacífico (clone SP34-2, BD Biosciences, CA, EUA) e anticorpo de camundongo anti-Cd8a-humano conjugado com APC/Cy7 (clone RPA-T8, Biolegend, CA, EUA)) durante 30 minutos a 4°C antes de serem lavadas e fixadas com paraformaldeído 1%. A ativação das células-T foi medida citometria de fluxo no “BD LSRFortessa™” (BD Biosciences, CA, EUA) para os marcadores de superfície CD25 e CD69. A ativação de célula-T CD8+ é medida pela % de células-T CD8+ que são CD25+CD69+.
[00391] 131AVH6VL6-hIgG1, em forma solúvel, teve atividade no ensaio com células-T CD8+ primárias (aumento médio de 2,3 vezes em relação ao isótipo de controle), enquanto que 1F5-hIgG1 não teve atividade (Figura 14). TABELA 10 mAb Alteração em vezes em % de células-TCD8+ ativadas relativa ao isótipo de controle doador doador doador doador doador doador doador doador Média DP 87 84 91 11 49 56 816 641 131AVH6VL6- 1,55 2,98 1,63 1,96 1,64 0,98 2,43 3,87 2,13 0,93 hIgG1 1F5-hIgG1 1,30 0,96 0,99 1,18 1,05 0,62 0,74 1,13 1,00 0,23 EXEMPLO 11: Bioatividade em culturas de tumores humanos primários
[00392] Espécimes de tumores humanos de pacientes com carcinoma de pulmão de células não pequenas (NSCLC, Non-Small Cell Lung Carcinoma), carcinoma de células renais (RCC, Renal Cell Carcinoma), e carcinoma de cabeça e pescoço (H&N, Head & Neck Carcinoma) foram obtidos de fornecedores comerciais de acordo com as regulações federal e estadual.
183 / 500 Digestão de tumor humano para gerar TIL (linfócitos infiltrantes de tumor) mistos
[00393] Tecidos tumorais frescos foram coletados nos locais de operação e enviados em meio AQIX (AQIX, Reino Unido) de um dia para o outro a 4°C para Merck Research Laboratories, Palo Alto, CA. Célula única foi dissociada dos tumores por corte fino com um bisturi, seguido por uma incubação durante 30 minutos a 37°C em meio de digestão contendo 10 mL de Meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, Dulbecco’s Modified Eagle Medium) (Cellgro, nº de cat. 10-013-CV ) com 100 mg/mL de colagenase tipo I (Invitrogen, nº de cat. 17100-017), e 10.000 U/mL de DNase I (Worthington Biochemical, nº de cat. LS002060). As amostras digeridas foram pipetadas para cima e para baixo várias vezes, filtradas através de coador de 70 µm, e lavadas com em meio completo DMEM. Se a viabilidade celular foi menor que 30%, Separação em Gradiente de Densidade em Ficoll® foi realizada para enriquecimento de células vivas. As células misturadas da digestão de tumor foram aplicadas à centrifugação em gradiente de densidade em “Ficoll-Paque™ Plus” (GE Healthcare, nº de cat. 17-1440- 03) a 1.000×g durante 20 minutos. As células vivas enriquecidas foram coletadas da interface de meio:Ficoll e lavadas 2 vezes com solução salina de Dulbecco tamponada em fosfato (DPBS, Dulbecco’s Fosfate-Buffered Saline). Detecção de IFNγ em sobrenadantes de cultura de linfócitos infiltrantes de tumor (TIL) para ativação de células-T infiltrantes de tumor
[00394] 0,1×106 Células tumorais digeridas/poço, no total, foram cultivadas em placas de fundo redondo de 96 poços e estimuladas com 10 ng/mL de anticorpo solúvel anti-CD3 (BioLegend, clone OKT3, nº de cat. 371304) na presença de concentração indicada de 131AVH6VL6-hIgG1 (Transfecção transiente com plasmídeo de células CHO-EXPI - cultura em suspensão), anticorpo anti-PD1 (pembrolizumabe), ou hCD27.15-4BIgG4,
184 / 500 IF5-hIgG1, ou isótipos (anti-PCSK9, IgG1 e IgG4). Os sobrenadantes foram coletados no sexto dia e IFNγ foi medido usando o kit de cultura de célula tecidual produtora de IFNγ humano [Human IFNγ Tissue Culture Kit] (MSD, nº de cat. K151AEB).
[00395] Visto que CD27 é expressado sobre células-T naïve T e, também, sobre células-T de memória, hipotetizamos que 131AVH6VL6- hIgG1 poderia ter efeitos coestimulatórios em células-T de memória infiltrantes de tumor. Para avaliar a capacidade de 131AVH6VL6-hIgG1 para ativar célula-T no ambiente supressivo imune de tumor humano, usamos a população de células mistas da digestão de tumor humano para os experimentos. 0,1, 1, 10, e 20 μg/mL de 131AVH6VL6-hIgG1 foram adicionados à cultura de célula tumoral única digerida durante 6 dias na presença de 10 ng/mL de anticorpo anti-CD3. IFNγ foi medido nos sobrenadantes no sexto dia. O resultado de 20 tumores é mostrado na Figura
8. 131AVH6VL6-hIgG1 intensificou a produção de IFNγ de TILs de tumor induzida pelo anticorpo anti-CD3 em uma maneira dependente da dose com uma alteração estatisticamente significativa a 10 e 20 μg/mL (p<0.001 e p<0,01, respectivamente). 131AVH6VL6-hIgG1 foi também estudada pela comparação com os dois outros mAbs anti-CD27, h27.15-4BIgG4 e IF5- IgG1, no ensaio de produção de IFNγ de TIL de 13 tumores (Fig. 9). 131AVH6VL6-hIgG1 foi o único mAb que mostra um aumento estatisticamente significativo da produção de IFNγ induzida pelo anticorpo anti-CD3 (p< 0,05). EXEMPLO 12: Varredura por alaninas para identificação de epítopo de anticorpos anti-CD27
[00396] A capacidade de vários anticorpos anti-hCD27 para se ligarem a uma série de mutantes de alanina de hCD27 foi determinada usando células CHO-K1, transientemente transfectadas pelo vetor vazio pCI-neo, pCI- neo.hCD27 e vários constructos mutantes de pCI-neo.CD27Ala. As
185 / 500 transfecções foram realizadas em placas de 6 poços com 4 μg de DNA plasmidial e 10 μL de reagente “Lipofectamine® 2000 Reagent” (Invitrogen, 11668-019) por poço, ambos diluídos em OPTI-MEMI (Gibco, nº de cat. 31985), de acordo com as instruções do fabricante.
[00397] Após incubação das células transfectadas durante um dia a 37°C e 5% de CO2 em uma incubadora umidificada, as células foram lavadas uma vez em DPBS, descoladas com 400 µL de solução de dissociação isenta de enzima (Gibco, 13151-014) e coletadas em 800 µL de solução tampão MACS gelada (Miltenyi Biotec, 130-091-221). As células descoladas foram transferidas para placas de fundo redondo de 96 poços a aproximadamente 1,2x105 células/poço. Após a centrifugação das células, a rejeição dos sobrenadantes e a ressuspensão das células no volume residual, os anticorpos primários foram adicionados e incubados durante 30 minutos a 4°C. As células foram lavadas três vezes com DPBS/BSA 1%, seguido por centrifugação, rejeição dos sobrenadantes e ressuspensão no volume residual. A ligação dos anticorpos primários foi detectada por coloração durante 30 minutos a 4°C com anticorpo de cabra anti-IgG-de-camundongo conjugado com FITC (BD Bioscience, 349031, 2 μL/poço) ou anticorpo de cabra anti- IgG-humana conjugado com FITC (específico para cadeia γ) (SouthernBiotech, 2040-02, 2 μL/poço). Após a lavagem uma vez, a ligação de anticorpos foi detectada usando o leitor de placas HTS (FACS Canto II) e o programa de computador “FlowJo” para análise dos dados. Restos de células, células mortas, e dubletes de células foram excluídos da análise. A ligação foi expressada como a média geométrica do sinal de FITC, relativa à ligação do anticorpo ao hCD27, que foi ajustada em 100%.
[00398] Como mostrado na Figura 10, a mutação de aminoácidos P8, H36, R37 e K38 resulta em perda de ligação de hCD27.131A de camundongo ao hCD27, como é indicado pela hachura. hCD27.131A mostra um perfil de ligação diferente de hCD27.15, 1A4, e 1F5IgG1.
186 / 500 EXEMPLO 13: Mapeamento de epítopo de CD27 e de 131AVH6VL6- hIgG1 por estrutura de cristal por raios-X Formação e purificação de complexo
[00399] Complexo de CD27/131AVH6VL6Fab foi formado pela incubação em uma razão molar de 2:1 de 06AOV (CD27) e 01APN (Fab) respectivamente durante 48 horas a 4°C. A mistura de reação foi então carregada em uma coluna “Superdex 200 HiLoad 16/600” (120mL) e as frações foram reunidas com base na análise por SEC-UPLC. O pool de complexo foi então dialisado contra Tris 25 mM, NaCl 100 mM, de pH 8,0. O material dialisado foi centrifugado e filtrado em um filtro de seringa de 22 µm. Procedimento de cristalização de CD27+Fab
[00400] As amostras para cristalização foram preparadas pela adição de 6,25 µL de uma solução de estoque de cloreto de cádmio 40 mM a uma alíquota de 25 µL de um complexo CD27-Fab em uma solução tampão consistindo em Tris 25 mM de pH=8,0 e cloreto de sódio 100 mM. A concentração final da proteína da amostra foi de 12,6 mg/mL e a concentração de cloreto de cádmio foi de 8,0 mM. As amostras foram mantidas à temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora antes da configuração.
[00401] A triagem (screening) inicial foi realizada usando um sistema microfluídico de difusão em interface livre Topaz, “Topaz 4.96 chips” (Fluidigm) e kits para triagem de cristalização (screens) disponíveis para comercialização. Os chips foram configurados à temperatura ambiente e subsequentemente mantidos a 18oC. As seguintes condições foram escolhidas para a translação para um sistema de difusão de vapor: Kit para triagem de cristalização (Screen): Rigaku Wizard Cryo 1-2 (nº de cat. 1008649) Condição: imidazol 0,1 M pH=8,0 + PEG 400 40% v/v Kit para triagem de cristalização (Screen): Jena Bioscience
187 / 500 Classic HTS1 (nº de cat. CS-201L) Condição: Tris 0,1 M pH=8,5 + PEG 3000 30% v/v + sulfato de lítio 0,2 M
[00402] Os cristais para estudos de difração de raios-X foram produzidos usando um método de difusão de vapor em gota sentada. As condições dos poços das placas consistindo em Tris 100 mM pH 8,0-8,5 e PEG 400 30-50% v/v foram dispensadas usando um Formulador (Formulatrix). Gotas consistindo em volumes iguais de poço e de proteína (0,22 µL + 0,22 µL) foram dispensadas à temperatura ambiente usando um Oryx4 (Douglas Instruments) e subsequentemente mantidas a 18oC. Os cristais cresceram durante um período de um mês.
[00403] Os cristais foram também produzidos pela adição de uma solução de estoque de sementes de cristais preparada em uma solução tampão consistindo em Tris 100 mM pH=8,5 e PEG 400 40% v/v. Gotas consistindo em 0,30 µL de proteína + 0,20 µL de poço + 0,1 µL de solução de estoque de sementes de cristais foram dispensadas à temperatura ambiente usando um Oryx4 (Douglas Instruments) e subsequentemente mantidas a 18oC. Os cristais cresceram durante um período de um mês. Colheita de cristais e coleta dos dados
[00404] Uma forma de cristal do teste de cristalização nº 4482 gota F 1 foi colhida da gota de cristalização com um Litholoop de malha (mesh) de 0,3 mm (Molecular Dimensions Ltd, Suffold, Reino Unido) e criocongelada em nitrogênio líquido. A coleta de dados foi realizada na linha de luz do “Industrial Macromolecular Crystallography Association (IMCA)”, setor 17 do “Advanced Photon Source (APS)” no “Argonne National Laboratory” (ANL, Lemont, IL). Os dados foram coletados em um comprimento de onda de 1,0Å usando um detector “Pilatus 6M” (Dectris AG, Baden-Dättwil, Suíça). Os dados foram processados usando o programa de computador de processamento automático “autoPROC” com chamadas para XDS para
188 / 500 indexação e integração, AIMLESS para escalonamento, POINTLESS para análise de dados e STARANISO para aplicação dos limites de difração anisotrópica. O parâmetro cela unitária do cristal é a=114,20, b=126,10, c=131,600, α=90°, β=90°, γ=90°, grupo espacial C222(1). Elucidação e refinamento da estrutura
[00405] A estrutura foi solucionada por Substituição Molecular usando o programa MOLREP. As entradas 2XTJ e 5TLS de PDB foram usadas como sondas de pesquisa para o Fab e o antígeno, respectivamente. Usando os parâmetros-padrão, a região VH+VL foi localizada primeiro (Rf/sigma = 7,91, TF/sigma = 10,83), então o fragmento CH1+CL usando a região variável como modelo de entrada fixa para a tradução (Rf/sigma = 11,56, TF/sigma=23,70). Entretanto neste estágio, o antígeno não pôde ser posicionado inequivocamente (melhor “solução” Rf = 4,73, Tf/sigma = 3,77). O modelo foi então redefinido usando o programa de computador autoBUSTER. Embora os valores de Rfree e Rwork fossem altos (41,4% e 8.4%, respectivamente), o mapa de densidade de elétrons mostrou consistência com a maioria das substituições e inserções ou deleções em sequência entre o Fab usado como sonda e a estrutura final. Estes foram corrigidos usando o programa COOT. A estrutura resultante foi refinada de novo com autoBUSTER para Rfree e Rwork de 34,3% e 30,8%, respectivamente. A Substituição Molecular foi tentada de novo usando este modelo como coordenadas fixas, que resultou em uma solução inequívoca para a função de tradução (TF/sigma=17,67). Etapas adicionais de reconstrução e refinamento resultaram em valores finais de Rfree e Rwork de 22,4% e 20,0%, respectivamente. O modelo final contém os resíduos 6 a 88 e 94 a 100 de CD27, os resíduos 1 a 212 da cadeia leve de Fab, os resíduos 1 a 131 e 137 a 217 da cadeia pesada de Fab, 6 cátions de Cádmio, uma molécula de PEG 400 e 288 águas. Não foram encontrados sítios de glicosilação ordenados. Análise das interações Fab-antígeno
189 / 500
[00406] A seguinte tabela lista todos os contatos entre o Fab e o antígeno (ligações de H em negrito “H”, pontes de sal em negrito itálico (“SB”), um corte de 3,30Å é usado para interações polares): TABELA 11 Lista de contatos ≤ 4,0Å entre Anticorpo e CD27 Cadeia leve de Fab Antígeno Distância (Å) Tyr 31 Oh Pro 8 Ca 3,82 Tyr 31 Oh Pro 8 C 3,81 Tyr 31 Cz Pro 8 Cb 3,74 Tyr 31 Ce2 Pro 8 Cb 3,73 Tyr 31 Ce1 Glu 9 N 3,93 Tyr 31 Oh Glu 9 N 2,95 H Tyr 31 Cz Glu 9 N 3,61 Tyr 31 Oh Glu 9 Ca 3,77 Tyr 31 Oh Glu 9 Cb 3,47 Trp 90 Ch2 His 11 Ce1 3,83 Trp 90 Ch2 His 11 Ne2 3,72 Trp 90 Cz3 His 11 Ne2 3,81 Asp 49 Od2 Arg 37 Cz 3,83 Asp 49 Od1 Arg 37 Cz 3,61 Trp 90 Cz2 Arg 37 Nh1 3,86 Asp 49 Od2 Arg 37 Nh1 3,78 Asp 49 Cg Arg 37 Nh1 3,68 Asp 49 Od1 Arg 37 Nh1 2,81 SB Asp 49 Od2 Arg 37 Nh2 2,98 SB Asp 49 Cg Arg 37 Nh2 3,66 Asp 49 Od1 Arg 37 Nh2 3,53 Tyr 93 Oh Lys 38 Cd 3,47 Tyr 93 Oh Lys 38 Ce 3,53 Tyr 93 Cz Lys 38 Nz 3,98 Tyr 93 Oh Lys 38 Nz 2,93 H Phe 95 Ce2 Lys 38 Nz 3,85 Phe 95 Cz Lys 38 Nz 3,52 Cadeia pesada de Fab Antígeno Distância (Å) Asn 31 Nd2 Lys 17 Cd 3,60 Asn 31 Nd2 Lys 17 Ce 3,86 Asn 31 Od1 Lys 17 Nz 3,29 H Asn 31 Nd2 Lys 17 Nz 3,87 Asn 31 Cg Lys 17 Nz 3,93 Asn 31 O Leu 18 Cd2 3,32 Asn 31 Cb Leu 18 Cd2 3,82 Thr 30 O Asp 34 O 3,52 Asn 54 Cb Asp 34 O 3,89 Asn 54 Od1 Asp 34 Cb 3,84 Asn 54 Cg Asp 34 Cb 3,93 Asn 52 Nd2 Asp 34 Cg 3,85 Asn 52 Nd2 Asp 34 Od1 3,24 H Asn 52 Nd2 Asp 34 Od2 3,82 Asn 54 Od1 Asp 34 Od2 3,57 Thr 55 Cg2 Asp 34 Od2 3,30 Asn 54 Cb Asp 34 Od2 3,90 Asn 31 O Gln 35 Ca 3,50 Asn 31 O Gln 35 C 3,61 Asn 52 Nd2 Gln 35 Cg 3,43 Asn 52 Od1 Gln 35 Cg 3,40
190 / 500 Asn 52 Cg Gln 35 Cg 3,45 Gly 33 N Gln 35 Cd 3,79 Thr 53 N Gln 35 Cd 3,57 Asn 52 Od1 Gln 35 Cd 3,28 Tyr 32 C Gln 35 Cd 3,94 Thr 53 Og1 Gln 35 Cd 3,64 Asn 52 Cg Gln 35 Cd 3,68 Ile 51 O Gln 35 Oe1 3,98 Gly 33 Ca Gln 35 Oe1 3,12 Gly 33 N Gln 35 Oe1 3,21 H Thr 53 N Gln 35 Oe1 2,76 H Asn 52 Od1 Gln 35 Oe1 3,49 Asn 52 Cg Gln 35 Oe1 3,75 Asn 52 C Gln 35 Oe1 3,43 Thr 53 Ca Gln 35 Oe1 3,79 Thr 53 Cb Gln 35 Oe1 3,94 Tyr 32 C Gln 35 Oe1 3,49 Tyr 32 O Gln 35 Oe1 3,63 Asn 52 Ca Gln 35 Oe1 3,29 Trp 50 Cz3 Gln 35 Oe1 3,81 Thr 53 Og1 Gln 35 Oe1 3,18 H Thr 53 N Gln 35 Ne2 3,90 Asn 52 Od1 Gln 35 Ne2 3,65 Thr 53 Og1 Gln 35 Ne2 3,25 H Tyr 32 N Gln 35 Ne2 3,83 Asn 31 C Gln 35 Ne2 3,76 Asn 54 N Gln 35 Ne2 3,57 Asn 54 Cb Gln 35 Ne2 3,72 Thr 30 O Gln 35 Ne2 2,87 H Thr 30 C Gln 35 Ne2 3,67 Asn 31 O His 36 N 2,88 H Asn 31 O His 36 Ca 3,83 Tyr 32 Cd2 His 36 Cb 3,58 Asn 31 O His 36 Cb 3,62 Tyr 32 Ce2 His 36 Cb 3,66 Tyr 32 Ce2 His 36 Cg 3,72 Asp 101 Od1 His 36 Cd2 3,87 Gly 100 C His 36 Cd2 3,59 Gly 100 Ca His 36 Cd2 3,78 Tyr 32 Ce2 His 36 Cd2 3,71 Tyr 32 Cd2 His 36 Cd2 3,97 Gly 100 O His 36 Cd2 3,44 Asp 101 Od1 His 36 Ce1 3,65 Asp 101 Od1 His 36 Ne2 2,80 SB Asp 101 Cg His 36 Ne2 3,95 Gly 100 O His 36 Ne2 3,79 Gly 100 C His 36 Ne2 3,92 Gly 100 O Arg 37 Cd 3,74 Asp 101 Od1 Arg 37 Ne 3,47 Asp 101 Ca Arg 37 Cz 3,99 Asp 101 Od1 Arg 37 Cz 3,65 Asp 101 Cg Arg 37 Nh2 3,77 Asp 101 Od1 Arg 37 Nh2 3,44 Trp 50 Ch2 Lys 38 Cg 3,93 Trp 50 Ch2 Lys 38 Cd 3,85 Trp 50 Cz2 Lys 38 Cd 3,96 Trp 50 Cz3 Lys 38 Ce 3,80 Trp 50 Ch2 Lys 38 Ce 3,71 Trp 50 Cz2 Lys 38 Ce 3,81
191 / 500 Trp 50 Ce3 Lys 38 Ce 3,99 Trp 50 Ce2 Lys 38 Ce 3,99 Glu 99 Cg Lys 38 Ce 3,89 Glu 99 Cg Lys 38 Nz 3,82
[00407] Adicionalmente aos numerosos contatos por forças de van der Waals, várias ligações de H e pontes de sal estão envolvidas na interface. O parátopo envolve todas as 3 regiões determinantes de complementaridade (CDR Complementary Determining Regions) de cada uma das cadeias leve e pesada. O epítopo, entretanto, está limitado ao 1º domínio rico em cisteína (CRD). Adicionalmente a um segmento próximo à terminação-N, todos os contatos dos resíduos 8 a 11 e do resíduo 17, são feitos com os resíduos 34 a 38 (consulte Figuras 11 e 12). A quantidade total de superfície enterrada após a formação do complexo de antígeno-anticorpo é de 679Å2 e 616Å2 das superfícies de CD27 e de Fab acessíveis a solvente, respectivamente (consulte a Figura 11). EXEMPLO 14: Estudos de competição de anticorpos anti-CD27 pela ligação ao hCD27
[00408] Células CHO-K1, que expressam estavelmente hCD27, foram semeadas em placas de 96 poços (Nunc, 167008) a 4x104 células/poço e incubadas a 37°C e 5% de CO2 em uma incubadora umidificada. Diluições seriais de anticorpos anti-hCD27 foram realizadas para ligação durante 2 horas a 37°C e 5% de CO2. A seguir, um segundo anticorpo anti-hCD27 anticorpo foi adicionado em uma concentração fixa e incubado durante 1 hora a 37°C e 5% de CO2. A lavadora ELx405 BioTEK foi usada para lavar as células três vezes em DPBS/0,05% de Tween. A ligação do anticorpo anti- hCD27 que foi adicionado em uma concentração fixa foi detectada pela adição de quer anticorpo de cabra anti-IgG-humana conjugado com HRP (Jackson Immuno Research, 109-035-088, diluição de 1:1.000) quer anticorpo de cabra anti-IgG-de-camundongo conjugado com HRP (Southern Biotech, 1030-05, diluição de 1:5.000). As placas foram incubados durante 1 hora a 37°C e 5% de CO2 e lavadas três vezes, como descrito acima. Cromogênio
192 / 500 TMB Estabilizado [“TMB Stabilized Chromogen”] (Invitrogen, SB02) foi adicionado e as células foram incubadas durante aproximadamente 10 minutos à temperatura ambiente. A reação foi interrompida pela adição de um volume igual deH2SO4 0,5 M. Finalmente, o “iEMS Reader MF” (Labsystems) ou o leitor de placas “Envision Plate Reader” (Perkin Elmer) foi usado para medir a absorbância a 460 nm e 620 nm.
[00409] Para determinar de hCD27.131A de camundongo e hCD27.15 de camundongo foram capazes de competirem cruzadamente com 1F5IgG1 pela ligação ao hCD27, foram realizados ELISAs de competição baseados em células. Uma diluição serial de 1F5IgG1 foi permitida para ligação ao hCD27 expressado sobre células CHO-K1. A seguir foi detectada a ligação de hCD27.131A de camundongo ou de hCD27.15 de camundongo. O experimento reverso também foi realizado, no qual diluições seriais de hCD27.131A de camundongo ou de hCD27.15 de camundongo foram permitidas para ligação, seguidas pela detecção da ligação de 1F5IgG1. Como é mostrado na Figura 13, hCD27.131A de camundongo não interfere com a ligação de 1F5IgG1, indicando que estes dois anticorpos ligam-se a epítopos diferentes em hCD27. Dados similares foram obtidos para hCD27.15 de camundongo, que não mostrou que compete com 1F5IgG1 pela ligação ao hCD27. Apenas quando 1F5IgG1 foi permitido ligar primeiro, uma perda moderada de ligação de hCD27.15 de camundongo pôde ser observada em concentrações altas.
[00410] Este pedido reivindica a prioridade ao pedido provisório U.S. nº 62/399.837 e ao pedido provisório U.S. nº 62/546.214 aqui incorporados em suas totalidades como referências. Todas as referências aqui citadas são incorporadas como referências na mesma extensão como se cada publicação, entrada de base de dados (por exemplo entradas de sequências de Genbank ou de GeneID), pedido de patente, ou patente individual, fosse específica e individualmente indicada(o) como sendo incorporada(o) como referência.
193 / 500 Esta declaração de incorporação como referência é intencionada pelos Requerentes, conforme 37 C.F.R. §1.57(b)(1), para se referir a toda(o) e qualquer publicação, entrada de base de dados (por exemplo entradas de sequências de Genbank ou de GeneID), pedido de patente, ou patente, cada um(a) dos(as) quais é claramente identificada(o) de acordo com 37 C.F.R. §1.57(b)(2), mesmo se cada citação não estiver imediatamente adjacente a uma declaração consignada de incorporação como referência. A inclusão de declarações consignadas de incorporação como referência, se houver, dentro do relatório descritivo não infirma em nenhuma maneira esta declaração geral de incorporação como referência. A citação das referências aqui não é pretendia como uma admissão de que a referência é técnica anterior pertinente, nem constitui qualquer admissão quanto aos conteúdos ou dados destas publicações ou destes documentos. Na medida em que as referências fornecem uma definição para um termo reivindicado que conflita com as definições fornecidas no presente relatório descritivo, as definições fornecidas no presente relatório descritivo devem ser utilizadas para interpretar a invenção reivindicada.
[00411] A presente invenção não deve ser limitada em escopo pelas modalidades aqui descritas. De fato, várias modificações da invenção adicionalmente àquelas aqui descritas tornar-se-ão evidentes para aquelas pessoas versadas na técnica a partir da descrição precedente e das Figuras acompanhantes. Tais modificações são pretendidas para caírem dentro do escopo das reivindicação em anexo.
[00412] O relatório descritivo escrito precedente é considerado como sendo suficiente para permitir que uma pessoa versada na técnica pratique a invenção. Várias modificações da invenção adicionalmente àquelas aqui mostradas e descritas tornar-se-ão evidentes para aquelas pessoas versadas na técnica partir da descrição precedente e caem dentro do escopo das reivindicação em anexo.
194 / 500 TABELA 12: Informação de Sequências Descrição SEQ ID NO: SEQUÊNCIA 131A H - CDR1 1 NYGX1N X1= M, V, L, I, G, A, S, T 131A H - CDR2 2 WIX1X2X3X4GEPTYAEEFKG X1 = N ou qualquer aminoácido exceto M, C X2 = T ou qualquer aminoácido exceto M, C X3 = N ou qualquer aminoácido exceto M, C X4 = T ou qualquer aminoácido exceto M, C 131A H - CDR3 3 EGDAX1DY X1 = M ou qualquer aminoácido exceto M, C 131A L - CDR1 4 SASSSVSYX1H X1= M, V, L, I, G, A, S, T 131A L - CDR2 5 X1X2SKLAS X1 = D ou qualquer aminoácido exceto M, C X2 = T ou qualquer aminoácido exceto M, C 131A L - CDR3 6 QQX1X2X3YPFT X1 = W ou qualquer aminoácido exceto M, C X2 = N ou qualquer aminoácido exceto M, C, P X3 = S ou qualquer aminoácido exceto M, C, P 131A VH 7 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWV
PARENTAL KQAPGKGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFAFSLET SATTAYLQINNLKNEDTATYFCAREGDAMDYWGQG
TSVTVSS 131 VL PARENTAL 8 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQ
KSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISS
MEAEDAATYYCQQWNSYPFTFGSGTKLEIK 131 VH gênero 9 EIQLVQSGAEVKKPGASVKX1SCKASGYTFTNYGX2N humanizado WVX3QAPGQGLKWX4GX5IX6X7X8X9GEPTYAEEFKGRF TFTLX10TSX11X12TAYX13EX14SSLRX15EDTAVYYCAR EGX16X17X18DYWGQGTTVTVSS X1= V, I X2= M, V, L, I, G, A, S, T X3= K, R X4= M, V, L, I X5= W ou qualquer aminoácido exceto M ou C X6= N ou qualquer aminoácido exceto M, C X7= T ou qualquer aminoácido exceto M, C X8= N ou qualquer aminoácido exceto M, C X9= T ou qualquer aminoácido exceto M, C X10= D, E X11= I, A X12= S, T X13= M, L, V, I X14= L, I X15= S, N X16= D ou qualquer aminoácido exceto M, C X17= A ou qualquer aminoácido exceto M, C X18= M ou qualquer aminoácido exceto C 131A VH6 10 EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNW (HUMANIZADA) VKQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTFTL
DTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGDAMDYWGQ
GTTVTVSS 131A VH7 11 EIQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNW (HUMANIZADA) VKQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTFTL
DTSATTAYLEISSLRSEDTAVYYCAREGDAMDYWGQ
GTTVTVSS 131A VH8 12 EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNW (HUMANIZADA) VKQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTFTL
DTSISTAYMELSSLRNEDTAVYYCAREGDAMDYWGQ GTTVTVSS
195 / 500 131A VH9 13 EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNW (HUMANIZADA) VRQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTFTL
DTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGDAMDYWG
QGTTVTVSS 131A VL gênero 14 X1IX2LTQSPX3TX4SX5SX6GX7RX8TX9X10CSASSSVSYX11 humanizado HWYQQKPGX12APKRX13IYX14X15SKLASGVPARFSGS GSGTX16YX17LTISSX18X19PEDX20AX21YYCQQX22X23X2 4YPFTFGQGTKLEIK X1= E, D, X2= V, Q X3= A, S X4= L, X5= L, A X6= P, V X7= E, D X8= A, V X9= L, I X10= S, T X11= M, V, L, I, G, A, S, T X12= Q, K X13= W ou qualquer aminoácido exceto M, C X14= D ou qualquer aminoácido exceto M, C X15= T ou qualquer aminoácido exceto M, C X16= D, S X17= S, T X18= L, M, V, I X19= E, Q X20= F, V, L, I, T X21= V, T X22= W ou qualquer aminoácido exceto M, C X23= N ou qualquer aminoácido exceto M, C, P X24= S ou qualquer aminoácido exceto M, C, P 131A VL6 15 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQK (HUMANIZADA) PGQAPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTDYSLTISS
LEPEDFAVYYCQQWNSYPFTFGQGTKLEIK 131A VL7 16 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQK (HUMANIZADA) PGQAPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISS
LEPEDFATYYCQQWNSYPFTFGQGTKLEIK 131A VL8 17 EIVLTQSPATLSASPGERVTLSCSASSSVSYMHWYQQK (HUMANIZADA) PGQAPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTDYSLTISS
MEPEDFAVYYCQQWNSYPFTFGQGTKLEIK 131A VL9 18 DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCSASSSVSYMHWYQQK (HUMANIZADA) PGKAPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISS
LQPEDFATYYCQQWNSYPFTFGQGTKLEIK CD27 Humano 19 TPAPKSCPERHYWAQGKLCCQMCEPGTFLVKDCDQ
HRKAAQCDPCIPGVSFSPDHHTRPHCESCRHCNSGLL VRNCTITANAECACRNGWQCRDKECTECDPLPNPSL TARSSQALSPHPQPTHLPYVSEMLEARTAGHMQTLA DFRQLPARTLSTHWPPQRSLCSSDFIRILVIFSGMFLV FTLAGALFLHQRRKYRSNKGESPVEPAEPCRYSCPRE
EEGSTIPIQEDYRKPEPACSP CD27 Humano 20 TPAPKSCPERHYWAQGKLCCQMCEPGTFLVKDCDQ (A59T) HRKTAQCDPCIPGVSFSPDHHTRPHCESCRHCNSGLL
VRNCTITANAECACRNGWQCRDKECTECDPLPNPSL TARSSQALSPHPQPTHLPYVSEMLEARTAGHMQTLA DFRQLPARTLSTHWPPQRSLCSSDFIRILVIFSGMFLV FTLAGALFLHQRRKYRSNKGESPVEPAEPCRYSCPRE EEGSTIPIQEDYRKPEPACSP
196 / 500 mmCD27 21 TPAPKSCPERHYWAQGKLCCQMCEPGTFLVKDCDQ
HRKAAQCHPCIPGVSFSPDHHTRPHCESCRHCNSGLL IRNCTITANAVCACRNGWQCRDKECTECDPPPNPSLT TWPSQALGPHPQPTHLPYVNEMLEARTAGHMQTLA DFRHLPARTLSTHWPPQRSLCSSDFIRILVIFSGMFLV FTLAGTLFLHQQRKYRSNKGESPMEPAEPCPYSCPRE
EEGSTIPIQEDYRKPEPASSP Cadeia pesada de 22 EVRLQQSGADLVKPGASVKLSCTASGFIIKATYMHW anticorpo quimérico VRQRPEQGLEWIGRIDPANGETKYDPKFQVKATITA C4-hCD27.15 DTSSSTAYLQLNSLTSDDTAVYYCARYAWYFDVWG
AGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVES KYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSLGK Cadeia leve de 23 DIQMTQSPASLSASVGDTVTITCRASENIYSFLAWYH anticorpo quimérico QKQGRSPQLLVYHAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSL C4-hCD27.15 KINSLQAEDFGSYYCQHYYGSPLTFGAGTKLEVKRT
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSYSLSSTLTLSK
ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia pesada de 24 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFIIKATYMH anticorpo humanizado WVRQAPGQRLEWMGRIDPANGETKYDPKFQVRVTI hCD27.15 6B TADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYAWYFDV
WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRV ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK GLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSLGK Cadeia leve de 25 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSFLAWYQ anticorpo humanizado QKPGKAPKLLIYHAKTLAEGVTSRFSGSGSGTDFTLT hCD27.15 6B ISSLQPEDSATYYCQHYYGSPLTFGQGTRLEIKRTVA
APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQW KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD
YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia pesada de 26 MEWSWVFLFFLSVTTGVHS sequência líder Cadeia leve de 27 MSVPTQVLGLLLLWLTDARC sequência líder Domínio constante da 28 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT cadeia pesada – IgG4 VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS S228P LGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPA
PEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQE DPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD
KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Domínio constante da 29 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA cadeia leve kappa KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLT
LSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
197 / 500 Domínio constante da 30 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV cadeia pesada –IgG1 TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS
SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS
PGK Domínio constante da 31 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT cadeia pesada –IgG2 VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSN
FGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPA PPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVS VLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD
KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 131 VH genus1 32 Y1IQLVQSGY2EY3KKPGY4Y5VKX1SCKASGYTFTNYG (gênero1) X2NWVX3QAPGY6GLKWX4GX5IX6X7X8X9GEPTYAEEFK GRFY7FY8LX10TSX11X12TAYX13EX14SSLRX15EDTAVY YCAREGX16X17X18DYWGQGTY9VTVSS Y1= E ou Q Y2= A ou P Y3= V ou L Y4= A ou E Y5= S ou T Y6= Q ou K Y7= A ou T Y8= T ou S Y9= T ou S X1= V, I X2= M, V, L, I, G, A, S, T X3= K, R X4= M, V, L, I X5= W ou qualquer aminoácido exceto M ou C X6= N ou qualquer aminoácido exceto M, C X7= T ou qualquer aminoácido exceto M, C X8= N ou qualquer aminoácido exceto M, C X9= T ou qualquer aminoácido exceto M, C X10= D, E X11= I, A X12= S, T X13= M, L, V, I X14= L, I X15= S, N X16= D ou qualquer aminoácido exceto M, C X17= A ou qualquer aminoácido exceto M, C X18= M ou qualquer aminoácido exceto C
198 / 500 131 VL genus1 33 X1IX2LTQSPX3Y1X4SX5SX6GX7Y2X8TX9X10CSASSSVSY (gênero1) X11HWYQQKY3GX12Y4PKRX13IYX14X15SKLASGVPARF SGSGSGTX16YX17LTISSX18X19Y5EDX20AX21YYCQQX22 X23X24YPFTFGQGTKLEIK Y1= T ou I Y2= K ou R Y3= P ou S Y4= A ou S Y5= A ou P X1= E, D, Q X2= V, Q X3= A, S X4= L, M X5= L, A X6= P, V X7= E, D X8= A, V X9= L, I, M X10= S, T X11= M, V, L, I, G, A, S, T X12= Q, K, T X13= W ou qualquer aminoácido exceto M, C X14= D ou qualquer aminoácido exceto M, C X15= T ou qualquer aminoácido exceto M, C X16= D, S X17= S, T X18= L, M, V, I X19= E, Q X20= F, V, L, I, T, A X21= V, T X22= W ou qualquer aminoácido exceto M, C X23= N ou qualquer aminoácido exceto M, C, P X24= S ou qualquer aminoácido exceto M, C, P
199 / 500 131 VH genus2 34 Y1IQLVQSGY2EY3KKPGY4Y5VKX1SCKASGYTFTNYG (gênero2) X2NWVX3QAPGY6GLY7WX4GX5IX6X7X8X9GEPTYAEEF KGRFY8FY9LX10TSX11X12TAYX13EX14SSLRX15EDTAV YYCAREGX16X17X18DYWGQGTY10VTVSS Y1= E ou Q Y2= A ou P Y3= V ou L Y4= A ou E Y5= S ou T Y6= Q ou K Y7= K ou E Y8= A ou T Y9= T ou S Y10= T ou S X1= V, I X2= M, V, L, I, G, A, S, T X3= K, R X4= M, V, L, I X5= W, F, ou Y X6= N ou Q X 7= T X8= N ou Q X 9= T X10= D, E X11= I, A X12= S, T X13= M, L, V, I X14= L, I X15= S, N X16= D X17= A X18= M, L, V, I
200 / 500 131 VL genus2 35 X1IX2LTQSPX3Y1X4SX5SX6GX7Y2X8TX9X10CSASSSVSY (gênero2) X11HWYQQKY3GX12Y4PKY5X13IYX14X15SKLASGVPARF SGSGSGTX16YX17LTISSX18X19Y6EDX20AX21YYCQQX22 X23X24YPFTFGQGTKLEIK Y1= T ou I Y2= K ou R Y3= P ou S Y4= A ou S Y5= R ou L Y6= A ou P X1= E, D, Q X2= V, Q X3= A, S X4= L, M X5= L, A X6= P, V X7= E, D X8= A, V X9= L, I, M X10= S, T X11= M, V, L, I, G, A, S, T X12= Q, K, T X13= W ou L X14= D X15= T X16= D, S X17= S, T X18= L, M, V, I X19= E, Q X20= F, V, L, I, T, A X21= V, T X22= W, F, ou Y X23= N ou Q X24= S Cadeia leve 131A6 36 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQ (humanizada) KPGQAPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTDYSLTI
SSLEPEDFAVYYCQQWNSYPFTFGQGTKLEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQW KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD
YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia pesada 131A6 37 EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMN IgG1 (humanizada) WVKQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTF
TLDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGDAMDYW GQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP KSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
201 / 500 Cadeia pesada 131A6 38 EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMN IgG2 (humanizada) WVKQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTF
TLDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGDAMDYW GQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVE RKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPGK 131 VH humanizada 39 EIQLVQSGAEVKKPGASVKX1SCKASGYTFTNYGX2N consenso WVX3QAPGQGLKWX4GX5IX6X7X8X9GEPTYAEEFKGRF TFTLX10TSX11X12TAYX13EX14SSLRX15EDTAVYYCAR EGX16X17X18DYWGQGTTVTVSS X1= V, I X 2= M X3= K, R X 4= M X 5= W X 6= N X 7= T X 8= N X 9= T X10= D X11= I, A X12= S, T X13= M, L X14= L, I X15= S X16= D X17= A X18= M
202 / 500 131 VL humanizada 40 X1IX2LTQSPX3TX4SX5SX6GX7RX8TX9X10CSASSSVSYX11 consenso HWYQQKPGX12APKRX13IYX14X15SKLASGVPARFSGS GSGTX16YX17LTISSX18X19PEDX20AX21YYCQQX22X23X2 4YPFTFGQGTKLEIK X1= E, D, X2= V, Q X3= A, S X4= L, X5= L, A X6= P, V X7= E, D X8= A, V X9= L, I X10= S, T X11= M X12= Q, K X13= W X14= D X15= T X16= D, S X17= S, T X18= L, M X19= E, Q X20= F X21= V, T X22= W X23= N X24= S Cadeia pesada de 41 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFIIKATYMH hCD27.15 4B WVRQAPGQRLEWMGRIDPANGETKYDPKFQVRVTI
TADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYAWYFDV WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRV ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK GLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSLGK Cadeia leve de 42 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSFLAWYQ hCD27.15 4B QKPGKAPKLLIYHAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTI
SSLQPEDFATYYCQHYYGSPLTFGQGTKVEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQW KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD
YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CD27 (06AOV) 43 TPAPKSCPERHYWAQGKLCCQMCEPGTFLVKDCDQ
HRKAAQCDPCIPGVSFSPDHHTRPHCESCRHCNSGLL VRNCTITANAECACRNGWQCRDKECTECDPLPNPSL TARSSQALSPHPQPTHLPYVSEMLEARTAGHMQTLA
DFRQLPARTLSTHHHHHHHH Cadeia pesada de 44 EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMN 131AVH6VL6 Fab WVKQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYAEEFKGRFTF
TLDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGDAMDYW GQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP KSCDKTHT
203 / 500 Cadeia leve de 45 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQ 131AVH6VL6 Fab KPGQAPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTDYSLTI
SSLEPEDFAVYYCQQWNSYPFTFGQGTKLEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQW KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD
YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de DNA 46 ATGGACATGCGGGTGCCAGCTCAGCTGCTGGGCCT que codifica cadeia GCTGCTGCTGTGGCTGAGAGGCGCCAGATGCGAG leve de ATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCCACCCTGTCTCT 131AVH6VL6 GAGCCCTGGCGAGAGAGCCACCCTGAGCTGCTCCG (peptídeo de sinal CCTCCTCCTCCGTGTCCTACATGCACTGGTATCAGC sublinhado) AGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAAGCGGTGGATCTA
CGACACCTCCAAGCTGGCCTCCGGCGTGCCCGCCA GATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTACTCC CTGACCATCTCCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGC CGTGTACTACTGCCAGCAGTGGAACTCCTACCCCT TCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAG CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCG CCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTC TGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAG AGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCT CCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAG CAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCA GCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAA ACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGG
GCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGG GGAGAGTGTTGA(códon de terminação)
204 / 500 Sequência de DNA 47 ATGGGCTCCACCGCCATCCTGGGACTGCTGCTGGC que codifica cadeia TGTGCTGCAGGGCGTGTGCGCCGAGATCCAGCTGG pesada de TGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGC 131AVH6VL6 CTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACA (peptídeo de sinal CCTTCACCAACTACGGCATGAACTGGGTGAAACAG sublinhado) GCCCCAGGCCAGGGCCTGAAGTGGATGGGCTGGA
TCAACACCAACACCGGCGAGCCCACCTACGCCGA AGAGTTCAAGGGCCGGTTCACCTTCACCCTGGACA CCTCCATCTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCC TGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCC CGAGAGGGCGACGCCATGGACTATTGGGGCCAGG GCACAACCGTGACCGTGTCCTCCGCTAGCACCAAG GGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAA GAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCC TGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTG TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCA CACCTTCCCGGCCGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGC AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA TCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAG GTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATG CCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGAC CGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC ACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG CGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGT GCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAG TACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCAC CGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGT ACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCC CCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGC AGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCC TGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGAC ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGG AGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACC GTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCT TCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAAC
CACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGG TAAATGA(códon de terminação) VH1-102 64 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTWVRQA
PGQGLEWMGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTA
VYYCAR VH1-146 65 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTWVRQA
PGQGLEWMGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTA
VYYCAR VK1-O2 66 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKLLI
YGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC VK3-L6 67 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCWYQQKPGQAPRLLI
YGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC TABELA 13. Sequências de anticorpos anti-PD1 exemplificadoras Característica do Sequência de aminoácidos SEQ ID NO. anticorpo Cadeia Leve de Pembrolizumabe CDR1 RASKGVSTSGYSYLH 75 CDR2 LASYLES 76 CDR3 QHSRDLPLT 77
205 / 500 TABELA 13. Sequências de anticorpos anti-PD1 exemplificadoras Característica do Sequência de aminoácidos SEQ ID NO. anticorpo Região Variável EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHW 78
YQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTL
TISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK Cadeia Leve EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHW 48
YQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTL TISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAA PSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK
HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia Pesada de Pembrolizumabe CDR1 NYYMY 49 CDR2 GINPSNGGTNFNEKFKN 50 CDR3 RDYRFDMGFDY 51 Região Variável QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYW 52
VRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTD SSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDY
WGQGTTVTVSS Cadeia Pesada QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYW 53
VRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTD SSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDY WGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKY GPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLT
VDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Cadeia Leve de Nivolumabe CDR1 RASQSVSSYLA 54 CDR2 DASNRAT 55 CDR3 QQSSNWPRT 56 Região Variável EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQ 57
KPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSL
EPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK Cadeia Leve EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQ 58
KPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV
YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia Pesada de Nivolumabe CDR1 NSGMH 59 CDR2 VIWYDGSKRYYADSVKG 60 CDR3 NDDY 61 Região Variável QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWV 62
RQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRD NSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLV TVSS
206 / 500 TABELA 13. Sequências de anticorpos anti-PD1 exemplificadoras Característica do Sequência de aminoácidos SEQ ID NO. anticorpo Cadeia Pesada QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWV 63
RQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRD NSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS SSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPA PEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQE
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK TABELA 14: Coordenadas de estrutura da estrutura do cristal de complexo de CD27 e 131AVH6VL6Fab (Tabela revela SEQ ID NOs:70- 74, respectivamente, na ordem de surgimento)
[00413] ÁTOMO 1 O SER A 6 -8,803 -39,519 13,045 1,00 82,60 O ÁTOMO 2 N SER A 6 -5,820 -40,853 12,360 1,00 85,52 N ÁTOMO 3 CA SER A 6 -7,246 -41,157 12,225 1,00 83,74 C ÁTOMO 4 C SER A 6 -8,079 -40,476 13,335 1,00 80,98 C ÁTOMO 5 CB SER A 6 -7,470 -42,668 12,227 1,00 86,62 C ÁTOMO 6 OG SER A 6 -7,019 -43,264 13,431 1,00 95,24 O ÁTOMO 7 N CYS A 7 -7,966 -40,963 14,593 1,00 69,90 N ÁTOMO 8 CA CYS A 7 -8,687 -40,428 15,760 1,00 65,48 C ÁTOMO 9 C CYS A 7 -7,716 -39,655 16,652 1,00 67,51 C ÁTOMO 10 O CYS A 7 -6,507 -39,865 16,540 1,00
207 / 500
67,71 O ÁTOMO 11 CB CYS A 7 -9,350 -41,557 16,550 1,00 61,81 C ÁTOMO 12 SG CYS A 7 -10,673 -42,420 15,667 1,00 65,96 S ÁTOMO 13 N PRO A 8 -8,230 -38,834 17,599 1,00 62,53 N ÁTOMO 14 CA PRO A 8 -7,327 -38,139 18,528 1,00 62,23 C ÁTOMO 15 C PRO A 8 -6,703 -39,122 19,538 1,00 62,80 C ÁTOMO 16 O PRO A 8 -6,993 -40,316 19,500 1,00 59,20 O ÁTOMO 17 CB PRO A 8 -8,219 -37,078 19,197 1,00 63,97 C ÁTOMO 18 CG PRO A 8 -9,601 -37,363 18,767 1,00 67,86 C ÁTOMO 19 CD PRO A 8 -9,537 -38,155 17,515 1,00 64,20 C ÁTOMO 20 N GLU A 9 -5,835 -38,624 20,428 1,00 60,43 N ÁTOMO 21 CA GLU A 9 -5,171 -39,468 21,426 1,00 58,00 C ÁTOMO 22 C GLU A 9 -6,208 -40,046 22,396 1,00 56,70 C ÁTOMO 23 O GLU A 9 -7,195 -39,377 22,702 1,00 55,78 O ÁTOMO 24 CB GLU A 9 -4,087 -38,688 22,193 1,00 60,92 C
208 / 500
ÁTOMO 25 CG GLU A 9 -2,938 -39,562 22,668 1,00 75,31 C ÁTOMO 26 CD GLU A 9 -1,948 -39,953 21,584 1,00104,77 C ÁTOMO 27 OE1 GLU A 9 -1,472 -39,051 20,857 1,00103,10 O ÁTOMO 28 OE2 GLU A 9 -1,631 -41,160 21,478 1,00 98,24 O ÁTOMO 29 N ARG A 10 -6,008 -41,310 22,814 1,00 50,38 N ÁTOMO 30 CA ARG A 10 -6,901 -42,064 23,701 1,00 47,14 C ÁTOMO 31 C ARG A 10 -8,282 -42,335 23,064 1,00 47,30 C ÁTOMO 32 O ARG A 10 -9,236 -42,621 23,782 1,00 44,44 O ÁTOMO 33 CB ARG A 10 -7,017 -41,411 25,101 1,00 48,88 C ÁTOMO 34 CG ARG A 10 -5,713 -41,472 25,872 1,00 61,89 C ÁTOMO 35 CD ARG A 10 -5,748 -40,691 27,166 1,00 73,75 C ÁTOMO 36 NE ARG A 10 -4,476 -40,821 27,885 1,00 85,72 N ÁTOMO 37 CZ ARG A 10 -4,204 -40,268 29,064 1,00 98,18 C ÁTOMO 38 NH1 ARG A 10 -5,119 -39,529 29,691 1,00 79,44 N ÁTOMO 39 NH2 ARG A 10 -3,018 -40,453 29,633
209 / 500
1,00 85,59 N ÁTOMO 40 N HIS A 11 -8,373 -42,304 21,715 1,00 45,23 N ÁTOMO 41 CA HIS A 11 -9,597 -42,625 20,976 1,00 44,43 C ÁTOMO 42 C HIS A 11 -9,295 -43,733 19,975 1,00 48,94 C ÁTOMO 43 O HIS A 11 -8,140 -43,927 19,608 1,00 50,15 O ÁTOMO 44 CB HIS A 11 -10,152 -41,421 20,206 1,00 46,11 C ÁTOMO 45 CG HIS A 11 -10,785 -40,363 21,043 1,00 49,09 C ÁTOMO 46 ND1 HIS A 11 -10,052 -39,624 21,948 1,00 50,70 N ÁTOMO 47 CD2 HIS A 11 -12,040 -39,866 20,990 1,00 51,51 C ÁTOMO 48 CE1 HIS A 11 -10,893 -38,754 22,472 1,00 51,05 C ÁTOMO 49 NE2 HIS A 11 -12,102 -38,849 21,907 1,00 51,94 N ÁTOMO 50 N TYR A 12 -10,336 -44,426 19,504 1,00 44,82 N ÁTOMO 51 CA TYR A 12 -10,199 -45,497 18,520 1,00 45,01 C ÁTOMO 52 C TYR A 12 -11,328 -45,442 17,496 1,00 52,06 C ÁTOMO 53 O TYR A 12 -12,419 -44,954 17,799 1,00 50,50 O
210 / 500
ÁTOMO 54 CB TYR A 12 -10,161 -46,868 19,208 1,00 42,79 C ÁTOMO 55 CG TYR A 12 -11,478 -47,277 19,826 1,00 41,00 C ÁTOMO 56 CD1 TYR A 12 -11,886 -46,756 21,048 1,00 40,15 C ÁTOMO 57 CD2 TYR A 12 -12,293 -48,223 19,217 1,00 42,89 C ÁTOMO 58 CE1 TYR A 12 -13,087 -47,144 21,633 1,00 38,61 C ÁTOMO 59 CE2 TYR A 12 -13,516 -48,589 19,772 1,00 42,98 C ÁTOMO 60 CZ TYR A 12 -13,906 -48,054 20,989 1,00 45,55 C ÁTOMO 61 OH TYR A 12 -15,099 -48,416 21,564 1,00 42,17 O ÁTOMO 62 N TRP A 13 -11,058 -45,961 16,291 1,00 51,96 N ÁTOMO 63 CA TRP A 13 -12,029 -46,011 15,206 1,00 55,00 C ÁTOMO 64 C TRP A 13 -12,959 -47,196 15,465 1,00 59,39 C ÁTOMO 65 O TRP A 13 -12,486 -48,326 15,551 1,00 59,17 O ÁTOMO 66 CB TRP A 13 -11,296 -46,159 13,868 1,00 57,28 C ÁTOMO 67 CG TRP A 13 -12,151 -46,037 12,647 1,00 61,73 C ÁTOMO 68 CD1 TRP A 13 -12,304 -46,971 11,665
211 / 500
1,00 67,19 C ÁTOMO 69 CD2 TRP A 13 -12,844 -44,867 12,200 1,00 63,42 C ÁTOMO 70 NE1 TRP A 13 -13,063 -46,459 10,641 1,00 69,98 N ÁTOMO 71 CE2 TRP A 13 -13,420 -45,173 10,948 1,00 70,88 C ÁTOMO 72 CE3 TRP A 13 -13,052 -43,594 12,744 1,00 64,03 C ÁTOMO 73 CZ2 TRP A 13 -14,203 -44,257 10,240 1,00 72,61 C ÁTOMO 74 CZ3 TRP A 13 -13,830 -42,685 12,046 1,00 68,06 C ÁTOMO 75 CH2 TRP A 13 -14,389 -43,015 10,804 1,00 71,93 C ÁTOMO 76 N ALA A 14 -14,270 -46,935 15,619 1,00 56,55 N ÁTOMO 77 CA ALA A 14 -15,274 -47,957 15,920 1,00 56,51 C ÁTOMO 78 C ALA A 14 -16,317 -48,081 14,818 1,00 64,02 C ÁTOMO 79 O ALA A 14 -16,631 -47,090 14,156 1,00 65,10 O ÁTOMO 80 CB ALA A 14 -15,981 -47,596 17,216 1,00 55,00 C ÁTOMO 81 N GLN A 15 -16,865 -49,305 14,630 1,00 62,17 N ÁTOMO 82 CA GLN A 15 -17,957 -49,591 13,685 1,00 65,61 C
212 / 500
ÁTOMO 83 C GLN A 15 -17,720 -49,083 12,241 1,00 73,48 C ÁTOMO 84 O GLN A 15 -18,682 -49,002 11,474 1,00 76,16 O ÁTOMO 85 CB GLN A 15 -19,279 -48,979 14,223 1,00 66,71 C ÁTOMO 86 CG GLN A 15 -19,626 -49,315 15,687 1,00 78,93 C ÁTOMO 87 CD GLN A 15 -20,419 -50,593 15,843 1,00100,32 C ÁTOMO 88 OE1 GLN A 15 -21,419 -50,817 15,153 1,00 97,14 O ÁTOMO 89 NE2 GLN A 15 -20,050 -51,429 16,809 1,00 93,09 N ÁTOMO 90 N GLY A 16 -16,462 -48,773 11,855 1,00 70,23 N ÁTOMO 91 CA GLY A 16 -16,157 -48,222 10,534 1,00 73,11 C ÁTOMO 92 C GLY A 16 -16,801 -46,837 10,313 1,00 77,68 C ÁTOMO 93 O GLY A 16 -17,189 -46,543 9,185 1,00 80,88 O ÁTOMO 94 N LYS A 17 -16,930 -45,997 11,376 1,00 71,01 N ÁTOMO 95 CA LYS A 17 -17,599 -44,684 11,248 1,00 71,20 C ÁTOMO 96 C LYS A 17 -17,369 -43,660 12,400 1,00 70,85 C ÁTOMO 97 O LYS A 17 -17,370 -42,463 12,109
213 / 500
1,00 71,77 O ÁTOMO 98 CB LYS A 17 -19,126 -44,858 11,030 1,00 74,62 C ÁTOMO 99 CG LYS A 17 -19,751 -46,059 11,754 1,00 83,72 C ÁTOMO 100 CD LYS A 17 -21,061 -45,782 12,501 1,00 89,88 C ÁTOMO 101 CE LYS A 17 -22,179 -46,715 12,096 1,00 99,90 C ÁTOMO 102 NZ LYS A 17 -23,332 -46,635 13,031 1,00105,06 N ÁTOMO 103 N LEU A 18 -17,239 -44,092 13,673 1,00 63,17 N ÁTOMO 104 CA LEU A 18 -17,067 -43,180 14,817 1,00 60,28 C ÁTOMO 105 C LEU A 18 -15,676 -43,242 15,444 1,00 61,62 C ÁTOMO 106 O LEU A 18 -15,061 -44,302 15,437 1,00 60,54 O ÁTOMO 107 CB LEU A 18 -18,060 -43,566 15,930 1,00 58,45 C ÁTOMO 108 CG LEU A 18 -19,518 -43,752 15,549 1,00 64,20 C ÁTOMO 109 CD1 LEU A 18 -20,310 -44,282 16,718 1,00 62,59 C ÁTOMO 110 CD2 LEU A 18 -20,120 -42,474 15,073 1,00 67,55 C ÁTOMO 111 N CYS A 19 -15,231 -42,134 16,073 1,00 57,40 N
214 / 500
ÁTOMO 112 CA CYS A 19 -14,017 -42,113 16,893 1,00 56,18 C ÁTOMO 113 C CYS A 19 -14,558 -42,153 18,324 1,00 54,32 C ÁTOMO 114 O CYS A 19 -15,261 -41,229 18,706 1,00 53,32 O ÁTOMO 115 CB CYS A 19 -13,153 -40,875 16,660 1,00 59,52 C ÁTOMO 116 SG CYS A 19 -12,060 -40,981 15,212 1,00 67,70 S ÁTOMO 117 N CYS A 20 -14,304 -43,237 19,079 1,00 47,18 N ÁTOMO 118 CA CYS A 20 -14,785 -43,396 20,461 1,00 43,78 C ÁTOMO 119 C CYS A 20 -13,637 -43,186 21,402 1,00 43,86 C ÁTOMO 120 O CYS A 20 -12,522 -43,552 21,050 1,00 41,32 O ÁTOMO 121 CB CYS A 20 -15,364 -44,794 20,661 1,00 43,12 C ÁTOMO 122 SG CYS A 20 -16,797 -45,180 19,633 1,00 48,76 S ÁTOMO 123 N GLN A 21 -13,903 -42,707 22,636 1,00 40,51 N ÁTOMO 124 CA GLN A 21 -12,846 -42,621 23,647 1,00 39,59 C ÁTOMO 125 C GLN A 21 -12,604 -44,033 24,119 1,00 40,37 C ÁTOMO 126 O GLN A 21 -13,565 -44,777 24,325
215 / 500
1,00 39,21 O ÁTOMO 127 CB GLN A 21 -13,240 -41,788 24,880 1,00 41,38 C ÁTOMO 128 CG GLN A 21 -12,957 -40,314 24,748 1,00 64,78 C ÁTOMO 129 CD GLN A 21 -14,126 -39,437 25,123 1,00 83,23 C ÁTOMO 130 OE1 GLN A 21 -14,726 -39,596 26,194 1,00 80,48 O ÁTOMO 131 NE2 GLN A 21 -14,459 -38,470 24,265 1,00 73,73 N ÁTOMO 132 N MET A 22 -11,338 -44,391 24,336 1,00 36,78 N ÁTOMO 133 CA MET A 22 -10,980 -45,711 24,845 1,00 36,42 C ÁTOMO 134 C MET A 22 -11,432 -45,844 26,301 1,00 39,59 C ÁTOMO 135 O MET A 22 -11,712 -44,845 26,972 1,00 38,93 O ÁTOMO 136 CB MET A 22 -9,454 -45,921 24,795 1,00 38,78 C ÁTOMO 137 CG MET A 22 -8,878 -45,994 23,402 1,00 44,78 C ÁTOMO 138 DP MET A 22 -7,091 -46,261 23,563 1,00 50,58 S ÁTOMO 139 CE MET A 22 -6,482 -45,469 22,164 1,00 49,85 C ÁTOMO 140 N CYS A 23 -11,460 -47,073 26,792 1,00 36,74 N
216 / 500
ÁTOMO 141 CA CYS A 23 -11,785 -47,338 28,191 1,00 35,73 C ÁTOMO 142 C CYS A 23 -10,649 -46,865 29,056 1,00 36,92 C ÁTOMO 143 O CYS A 23 -9,498 -47,012 28,673 1,00 35,59 O ÁTOMO 144 CB CYS A 23 -12,044 -48,822 28,415 1,00 36,05 C ÁTOMO 145 SG CYS A 23 -13,586 -49,417 27,700 1,00 41,15 S ÁTOMO 146 N GLU A 24 -10,964 -46,331 30,229 1,00 34,16 N ÁTOMO 147 CA GLU A 24 -9,950 -45,886 31,179 1,00 34,33 C ÁTOMO 148 C GLU A 24 -9,256 -47,092 31,827 1,00 35,25 C ÁTOMO 149 O GLU A 24 -9,836 -48,180 31,837 1,00 32,32 O ÁTOMO 150 CB GLU A 24 -10,605 -45,049 32,295 1,00 36,84 C ÁTOMO 151 CG GLU A 24 -11,093 -43,686 31,819 1,00 52,17 C ÁTOMO 152 CD GLU A 24 -10,002 -42,654 31,608 1,00 82,21 C ÁTOMO 153 OE1 GLU A 24 -9,189 -42,452 32,539 1,00 87,94 O ÁTOMO 154 OE2 GLU A 24 -9,970 -42,030 30,521 1,00 83,01 O ÁTOMO 155 N PRO A 25 -8,053 -46,898 32,420
217 / 500
1,00 33,02 N ÁTOMO 156 CA PRO A 25 -7,392 -47,965 33,173 1,00 32,41 C ÁTOMO 157 C PRO A 25 -8,331 -48,393 34,301 1,00 34,90 C ÁTOMO 158 O PRO A 25 -9,005 -47,546 34,873 1,00 33,20 O ÁTOMO 159 CB PRO A 25 -6,141 -47,284 33,739 1,00 34,85 C ÁTOMO 160 CG PRO A 25 -5,887 -46,136 32,862 1,00 38,86 C ÁTOMO 161 CD PRO A 25 -7,170 -45,723 32,250 1,00 35,27 C ÁTOMO 162 N GLY A 26 -8,426 -49,690 34,577 1,00 32,28 N ÁTOMO 163 CA GLY A 26 -9,314 -50,180 35,629 1,00 32,48 C ÁTOMO 164 C GLY A 26 -10,737 -50,440 35,161 1,00 34,53 C ÁTOMO 165 O GLY A 26 -11,589 -50,726 35,992 1,00 34,04 O ÁTOMO 166 N THR A 27 -10,993 -50,381 33,846 1,00 30,91 N ÁTOMO 167 CA THR A 27 -12,302 -50,696 33,268 1,00 31,44 C ÁTOMO 168 C THR A 27 -12,086 -51,594 32,038 1,00 35,38 C ÁTOMO 169 O THR A 27 -10,942 -51,852 31,650 1,00 35,01 O
218 / 500
ÁTOMO 170 CB THR A 27 -13,102 -49,401 32,910 1,00 33,54 C ÁTOMO 171 OG1 THR A 27 -12,552 -48,797 31,743 1,00 33,25 O ÁTOMO 172 CG2 THR A 27 -13,142 -48,377 34,046 1,00 26,78 C ÁTOMO 173 N PHE A 28 -13,178 -52,084 31,443 1,00 31,97 N ÁTOMO 174 CA PHE A 28 -13,122 -52,897 30,227 1,00 31,35 C ÁTOMO 175 C PHE A 28 -14,306 -52,547 29,352 1,00 36,32 C ÁTOMO 176 O PHE A 28 -15,330 -52,105 29,859 1,00 36,35 O ÁTOMO 177 CB PHE A 28 -13,080 -54,403 30,520 1,00 32,57 C ÁTOMO 178 CG PHE A 28 -14,347 -54,983 31,102 1,00 34,95 C ÁTOMO 179 CD1 PHE A 28 -14,618 -54,885 32,464 1,00 37,23 C ÁTOMO 180 CD2 PHE A 28 -15,246 -55,675 30,301 1,00 37,68 C ÁTOMO 181 CE1 PHE A 28 -15,787 -55,432 33,002 1,00 38,93 C ÁTOMO 182 CE2 PHE A 28 -16,416 -56,219 30,841 1,00 41,16 C ÁTOMO 183 CZ PHE A 28 -16,673 -56,101 32,188 1,00 38,96 C ÁTOMO 184 N LEU A 29 -14,177 -52,792 28,056
219 / 500
1,00 35,00 N ÁTOMO 185 CA LEU A 29 -15,199 -52,441 27,074 1,00 36,44 C ÁTOMO 186 C LEU A 29 -16,403 -53,371 27,033 1,00 42,33 C ÁTOMO 187 O LEU A 29 -16,258 -54,578 26,833 1,00 43,83 O ÁTOMO 188 CB LEU A 29 -14,563 -52,362 25,676 1,00 37,20 C ÁTOMO 189 CG LEU A 29 -15,406 -51,618 24,627 1,00 42,73 C ÁTOMO 190 CD1 LEU A 29 -14,775 -50,323 24,246 1,00 42,68 C ÁTOMO 191 CD2 LEU A 29 -15,627 -52,456 23,414 1,00 44,91 C ÁTOMO 192 N VAL A 30 -17,604 -52,793 27,202 1,00 39,41 N ÁTOMO 193 CA VAL A 30 -18,871 -53,513 27,085 1,00 41,21 C ÁTOMO 194 C VAL A 30 -19,482 -53,213 25,707 1,00 46,02 C ÁTOMO 195 O VAL A 30 -19,950 -54,128 25,034 1,00 47,76 O ÁTOMO 196 CB VAL A 30 -19,837 -53,135 28,228 1,00 45,82 C ÁTOMO 197 CG1 VAL A 30 -21,221 -53,759 28,016 1,00 47,98 C ÁTOMO 198 CG2 VAL A 30 -19,263 -53,567 29,566 1,00 45,02 C
220 / 500
ÁTOMO 199 N LYS A 31 -19,509 -51,938 25,316 1,00 41,83 N ÁTOMO 200 CA LYS A 31 -20,091 -51,500 24,052 1,00 43,31 C ÁTOMO 201 C LYS A 31 -19,307 -50,299 23,527 1,00 43,94 C ÁTOMO 202 O LYS A 31 -18,775 -49,519 24,321 1,00 41,40 O ÁTOMO 203 CB LYS A 31 -21,564 -51,086 24,305 1,00 48,54 C ÁTOMO 204 CG LYS A 31 -22,522 -51,318 23,139 1,00 71,10 C ÁTOMO 205 CD LYS A 31 -23,697 -52,236 23,506 1,00 87,51 C ÁTOMO 206 CE LYS A 31 -23,296 -53,686 23,667 1,00 96,81 C ÁTOMO 207 NZ LYS A 31 -24,467 -54,549 23,980 1,00106,62 N ÁTOMO 208 N ASP A 32 -19,256 -50,127 22,202 1,00 40,83 N ÁTOMO 209 CA ASP A 32 -18,613 -48,948 21,603 1,00 40,22 C ÁTOMO 210 C ASP A 32 -19,469 -47,713 21,890 1,00 45,15 C ÁTOMO 211 O ASP A 32 -20,641 -47,833 22,274 1,00 44,59 O ÁTOMO 212 CB ASP A 32 -18,503 -49,092 20,069 1,00 43,48 C ÁTOMO 213 CG ASP A 32 -17,539 -50,151 19,586
221 / 500
1,00 50,06 C ÁTOMO 214 OD1 ASP A 32 -16,467 -50,308 20,212 1,00 48,33 O ÁTOMO 215 OD2 ASP A 32 -17,808 -50,757 18,531 1,00 54,24 O ÁTOMO 216 N CYS A 33 -18,911 -46,523 21,639 1,00 43,00 N ÁTOMO 217 CA CYS A 33 -19,680 -45,287 21,764 1,00 43,55 C ÁTOMO 218 C CYS A 33 -20,714 -45,314 20,622 1,00 47,10 C ÁTOMO 219 O CYS A 33 -20,476 -45,974 19,607 1,00 47,00 O ÁTOMO 220 CB CYS A 33 -18,770 -44,056 21,690 1,00 43,96 C ÁTOMO 221 SG CYS A 33 -18,121 -43,687 20,036 1,00 49,80 S ÁTOMO 222 N ASP A 34 -21,875 -44,677 20,824 1,00 43,01 N ÁTOMO 223 CA ASP A 34 -22,940 -44,589 19,811 1,00 44,20 C ÁTOMO 224 C ASP A 34 -22,996 -43,161 19,209 1,00 48,29 C ÁTOMO 225 O ASP A 34 -23,871 -42,862 18,387 1,00 48,66 O ÁTOMO 226 CB ASP A 34 -24,308 -45,011 20,406 1,00 46,75 C ÁTOMO 227 CG ASP A 34 -24,754 -44,274 21,661 1,00 57,67 C
222 / 500
ÁTOMO 228 OD1 ASP A 34 -24,019 -43,373 22,118 1,00 58,91 O ÁTOMO 229 OD2 ASP A 34 -25,801 -44,641 22,221 1,00 60,93 O ÁTOMO 230 N GLN A 35 -22,065 -42,278 19,638 1,00 42,81 N ÁTOMO 231 CA GLN A 35 -21,969 -40,893 19,188 1,00 43,04 C ÁTOMO 232 C GLN A 35 -20,485 -40,598 18,935 1,00 45,91 C ÁTOMO 233 O GLN A 35 -19,647 -40,986 19,741 1,00 43,23 O ÁTOMO 234 CB GLN A 35 -22,510 -39,951 20,277 1,00 43,90 C ÁTOMO 235 CG GLN A 35 -23,986 -40,127 20,619 1,00 41,63 C ÁTOMO 236 CD GLN A 35 -24,919 -39,587 19,576 1,00 51,47 C ÁTOMO 237 OE1 GLN A 35 -25,450 -38,489 19,713 1,00 49,14 O ÁTOMO 238 NE2 GLN A 35 -25,221 -40,364 18,548 1,00 46,18 N ÁTOMO 239 N HIS A 36 -20,166 -39,904 17,842 1,00 45,31 N ÁTOMO 240 CA HIS A 36 -18,788 -39,563 17,482 1,00 44,53 C ÁTOMO 241 C HIS A 36 -18,101 -38,713 18,574 1,00 47,23 C ÁTOMO 242 O HIS A 36 -18,690 -37,769 19,090
223 / 500
1,00 45,88 O ÁTOMO 243 CB HIS A 36 -18,790 -38,846 16,126 1,00 47,91 C ÁTOMO 244 CG HIS A 36 -17,451 -38,404 15,633 1,00 51,77 C ÁTOMO 245 ND1 HIS A 36 -16,450 -39,309 15,324 1,00 52,55 N ÁTOMO 246 CD2 HIS A 36 -17,005 -37,156 15,386 1,00 54,50 C ÁTOMO 247 CE1 HIS A 36 -15,436 -38,581 14,881 1,00 53,18 C ÁTOMO 248 NE2 HIS A 36 -15,732 -37,276 14,894 1,00 54,90 N ÁTOMO 249 N ARG A 37 -16,864 -39,087 18,935 1,00 44,51 N ÁTOMO 250 CA ARG A 37 -16,036 -38,444 19,963 1,00 43,70 C ÁTOMO 251 C ARG A 37 -16,686 -38,429 21,363 1,00 47,06 C ÁTOMO 252 O ARG A 37 -16,444 -37,518 22,160 1,00 47,70 O ÁTOMO 253 CB ARG A 37 -15,581 -37,047 19,522 1,00 45,20 C ÁTOMO 254 CG ARG A 37 -14,521 -37,113 18,440 1,00 48,90 C ÁTOMO 255 CD ARG A 37 -13,864 -35,772 18,225 1,00 49,68 C ÁTOMO 256 NE ARG A 37 -12,902 -35,824 17,124 1,00 50,76 N
224 / 500
ÁTOMO 257 CZ ARG A 37 -11,978 -34,901 16,869 1,00 65,51 C ÁTOMO 258 NH1 ARG A 37 -11,881 -33,816 17,634 1,00 55,67 N ÁTOMO 259 NH2 ARG A 37 -11,146 -35,053 15,848 1,00 60,89 N ÁTOMO 260 N LYS A 38 -17,442 -39,486 21,684 1,00 42,28 N ÁTOMO 261 CA LYS A 38 -18,019 -39,683 23,013 1,00 41,17 C ÁTOMO 262 C LYS A 38 -17,441 -40,974 23,596 1,00 43,23 C ÁTOMO 263 O LYS A 38 -16,715 -41,701 22,911 1,00 42,89 O ÁTOMO 264 CB LYS A 38 -19,555 -39,684 22,981 1,00 43,69 C ÁTOMO 265 CG LYS A 38 -20,156 -38,361 22,520 1,00 43,89 C ÁTOMO 266 CD LYS A 38 -19,885 -37,206 23,482 1,00 42,15 C ÁTOMO 267 CE LYS A 38 -20,455 -35,924 22,978 1,00 36,14 C ÁTOMO 268 NZ LYS A 38 -19,792 -34,752 23,603 1,00 41,15 N ÁTOMO 269 N ALA A 39 -17,700 -41,223 24,871 1,00 39,17 N ÁTOMO 270 CA ALA A 39 -17,129 -42,380 25,560 1,00 37,31 C ÁTOMO 271 C ALA A 39 -17,765 -43,711 25,213
225 / 500
1,00 41,29 C ÁTOMO 272 O ALA A 39 -18,984 -43,808 25,053 1,00 42,27 O ÁTOMO 273 CB ALA A 39 -17,192 -42,166 27,067 1,00 37,51 C ÁTOMO 274 N ALA A 40 -16,926 -44,756 25,145 1,00 37,60 N ÁTOMO 275 CA ALA A 40 -17,382 -46,141 24,997 1,00 36,76 C ÁTOMO 276 C ALA A 40 -18,008 -46,529 26,340 1,00 39,81 C ÁTOMO 277 O ALA A 40 -17,688 -45,906 27,355 1,00 37,62 O ÁTOMO 278 CB ALA A 40 -16,195 -47,061 24,707 1,00 35,94 C ÁTOMO 279 N GLN A 41 -18,897 -47,535 26,359 1,00 37,98 N ÁTOMO 280 CA GLN A 41 -19,507 -47,988 27,610 1,00 37,92 C ÁTOMO 281 C GLN A 41 -18,517 -48,991 28,230 1,00 39,59 C ÁTOMO 282 O GLN A 41 -18,250 -50,031 27,638 1,00 36,25 O ÁTOMO 283 CB GLN A 41 -20,886 -48,626 27,360 1,00 41,38 C ÁTOMO 284 CG GLN A 41 -21,717 -48,786 28,636 1,00 59,82 C ÁTOMO 285 CD GLN A 41 -22,262 -50,180 28,824 1,00 80,54 C
226 / 500
ÁTOMO 286 OE1 GLN A 41 -21,904 -50,886 29,773 1,00 78,64 O ÁTOMO 287 NE2 GLN A 41 -23,147 -50,605 27,931 1,00 71,47 N ÁTOMO 288 N CYS A 42 -17,903 -48,622 29,363 1,00 37,80 N ÁTOMO 289 CA CYS A 42 -16,889 -49,436 30,005 1,00 37,75 C ÁTOMO 290 C CYS A 42 -17,290 -49,772 31,424 1,00 41,34 C ÁTOMO 291 O CYS A 42 -17,585 -48,858 32,192 1,00 41,87 O ÁTOMO 292 CB CYS A 42 -15,541 -48,716 29,983 1,00 37,77 C ÁTOMO 293 SG CYS A 42 -15,030 -48,137 28,345 1,00 42,12 S ÁTOMO 294 N ASP A 43 -17,211 -51,059 31,800 1,00 37,48 N ÁTOMO 295 CA ASP A 43 -17,531 -51,521 33,159 1,00 37,21 C ÁTOMO 296 C ASP A 43 -16,249 -51,620 33,983 1,00 37,85 C ÁTOMO 297 O ASP A 43 -15,192 -51,862 33,412 1,00 35,75 O ÁTOMO 298 CB ASP A 43 -18,213 -52,907 33,130 1,00 40,32 C ÁTOMO 299 CG ASP A 43 -19,722 -52,906 32,975 1,00 55,05 C ÁTOMO 300 OD1 ASP A 43 -20,321 -51,809 32,955
227 / 500
1,00 59,52 O ÁTOMO 301 OD2 ASP A 43 -20,303 -54,002 32,841 1,00 59,29 O ÁTOMO 302 N PRO A 44 -16,333 -51,504 35,321 1,00 35,04 N ÁTOMO 303 CA PRO A 44 -15,117 -51,616 36,138 1,00 33,83 C ÁTOMO 304 C PRO A 44 -14,507 -53,016 36,211 1,00 37,49 C ÁTOMO 305 O PRO A 44 -15,222 -54,021 36,168 1,00 37,52 O ÁTOMO 306 CB PRO A 44 -15,595 -51,212 37,536 1,00 36,41 C ÁTOMO 307 CG PRO A 44 -17,038 -51,530 37,556 1,00 41,52 C ÁTOMO 308 CD PRO A 44 -17,529 -51,281 36,164 1,00 36,85 C ÁTOMO 309 N CYS A 45 -13,196 -53,069 36,466 1,00 34,81 N ÁTOMO 310 CA CYS A 45 -12,497 -54,322 36,755 1,00 35,43 C ÁTOMO 311 C CYS A 45 -12,849 -54,662 38,213 1,00 37,20 C ÁTOMO 312 O CYS A 45 -13,441 -53,836 38,916 1,00 36,50 O ÁTOMO 313 CB CYS A 45 -10,986 -54,181 36,570 1,00 35,93 C ÁTOMO 314 SG CYS A 45 -10,456 -53,899 34,863 1,00 39,57 S
228 / 500
ÁTOMO 315 N ILE A 46 -12,483 -55,852 38,673 1,00 33,32 N ÁTOMO 316 CA ILE A 46 -12,824 -56,299 40,028 1,00 34,48 C ÁTOMO 317 C ILE A 46 -11,638 -56,144 40,981 1,00 38,11 C ÁTOMO 318 O ILE A 46 -10,671 -56,889 40,827 1,00 37,43 O ÁTOMO 319 CB ILE A 46 -13,317 -57,764 39,960 1,00 38,33 C ÁTOMO 320 CG1 ILE A 46 -14,418 -57,947 38,887 1,00 38,73 C ÁTOMO 321 CG2 ILE A 46 -13,786 -58,241 41,335 1,00 39,59 C ÁTOMO 322 CD1 ILE A 46 -15,654 -57,116 39,054 1,00 47,23 C ÁTOMO 323 N PRO A 47 -11,712 -55,225 41,992 1,00 36,72 N ÁTOMO 324 CA PRO A 47 -10,594 -55,057 42,940 1,00 37,81 C ÁTOMO 325 C PRO A 47 -10,144 -56,388 43,545 1,00 41,77 C ÁTOMO 326 O PRO A 47 -10,973 -57,120 44,084 1,00 42,22 O ÁTOMO 327 CB PRO A 47 -11,154 -54,108 44,017 1,00 40,91 C ÁTOMO 328 CG PRO A 47 -12,248 -53,380 43,361 1,00 44,71 C ÁTOMO 329 CD PRO A 47 -12,804 -54,272 42,279
229 / 500
1,00 38,78 C ÁTOMO 330 N GLY A 48 -8,854 -56,735 43,375 1,00 38,47 N ÁTOMO 331 CA GLY A 48 -8,281 -57,975 43,910 1,00 39,27 C ÁTOMO 332 C GLY A 48 -8,430 -59,204 42,993 1,00 42,73 C ÁTOMO 333 O GLY A 48 -7,886 -60,242 43,332 1,00 43,38 O ÁTOMO 334 N VAL A 49 -9,156 -59,100 41,854 1,00 40,03 N ÁTOMO 335 CA VAL A 49 -9,382 -60,230 40,925 1,00 40,03 C ÁTOMO 336 C VAL A 49 -8,969 -59,918 39,489 1,00 40,57 C ÁTOMO 337 O VAL A 49 -8,412 -60,789 38,830 1,00 39,24 O ÁTOMO 338 CB VAL A 49 -10,860 -60,693 41,005 1,00 45,05 C ÁTOMO 339 CG1 VAL A 49 -11,158 -61,823 40,016 1,00 45,50 C ÁTOMO 340 CG2 VAL A 49 -11,206 -61,101 42,427 1,00 46,81 C ÁTOMO 341 N SER A 50 -9,234 -58,705 38,990 1,00 35,94 N ÁTOMO 342 CA SER A 50 -8,838 -58,347 37,633 1,00 33,71 C ÁTOMO 343 C SER A 50 -8,374 -56,902 37,528 1,00 35,99 C
230 / 500
ÁTOMO 344 O SER A 50 -8,600 -56,099 38,434 1,00 36,25 O ÁTOMO 345 CB SER A 50 -9,968 -58,657 36,655 1,00 36,17 C ÁTOMO 346 OG SER A 50 -11,095 -57,827 36,872 1,00 38,18 O ÁTOMO 347 N PHE A 51 -7,659 -56,583 36,445 1,00 32,04 N ÁTOMO 348 CA PHE A 51 -7,095 -55,250 36,261 1,00 29,14 C ÁTOMO 349 C PHE A 51 -6,901 -54,890 34,799 1,00 32,56 C ÁTOMO 350 O PHE A 51 -6,971 -55,746 33,935 1,00 31,66 O ÁTOMO 351 CB PHE A 51 -5,739 -55,175 36,993 1,00 29,13 C ÁTOMO 352 CG PHE A 51 -4,630 -55,964 36,343 1,00 28,17 C ÁTOMO 353 CD1 PHE A 51 -4,511 -57,333 36,554 1,00 29,81 C ÁTOMO 354 CD2 PHE A 51 -3,696 -55,338 35,529 1,00 27,50 C ÁTOMO 355 CE1 PHE A 51 -3,504 -58,066 35,922 1,00 29,84 C ÁTOMO 356 CE2 PHE A 51 -2,716 -56,079 34,867 1,00 28,98 C ÁTOMO 357 CZ PHE A 51 -2,619 -57,435 35,078 1,00 27,36 C ÁTOMO 358 N SER A 52 -6,631 -53,620 34,533
231 / 500
1,00 29,38 N ÁTOMO 359 CA SER A 52 -6,296 -53,147 33,189 1,00 29,06 C ÁTOMO 360 C SER A 52 -5,409 -51,902 33,393 1,00 32,84 C ÁTOMO 361 O SER A 52 -5,882 -50,907 33,934 1,00 32,41 O ÁTOMO 362 CB SER A 52 -7,539 -52,889 32,342 1,00 30,73 C ÁTOMO 363 OG SER A 52 -8,389 -51,920 32,922 1,00 37,68 O ÁTOMO 364 N PRO A 53 -4,098 -52,008 33,095 1,00 29,99 N ÁTOMO 365 CA PRO A 53 -3,162 -50,916 33,381 1,00 30,41 C ÁTOMO 366 C PRO A 53 -3,249 -49,652 32,542 1,00 35,49 C ÁTOMO 367 O PRO A 53 -2,704 -48,641 32,978 1,00 35,51 O ÁTOMO 368 CB PRO A 53 -1,783 -51,567 33,197 1,00 32,77 C ÁTOMO 369 CG PRO A 53 -2,002 -52,773 32,375 1,00 35,90 C ÁTOMO 370 CD PRO A 53 -3,438 -53,136 32,400 1,00 30,40 C ÁTOMO 371 N ASP A 54 -3,868 -49,678 31,363 1,00 34,35 N ÁTOMO 372 CA ASP A 54 -3,878 -48,483 30,524 1,00 36,60 C
232 / 500
ÁTOMO 373 C ASP A 54 -5,175 -48,300 29,750 1,00 38,50 C ÁTOMO 374 O ASP A 54 -6,066 -49,142 29,842 1,00 38,49 O ÁTOMO 375 CB ASP A 54 -2,668 -48,523 29,570 1,00 41,23 C ÁTOMO 376 CG ASP A 54 -1,990 -47,160 29,419 1,00 62,91 C ÁTOMO 377 OD1 ASP A 54 -2,649 -46,223 28,921 1,00 63,05 O ÁTOMO 378 OD2 ASP A 54 -0,827 -47,016 29,872 1,00 76,03 O ÁTOMO 379 N HIS A 55 -5,282 -47,179 29,010 1,00 33,79 N ÁTOMO 380 CA HIS A 55 -6,426 -46,889 28,145 1,00 33,82 C ÁTOMO 381 C HIS A 55 -6,454 -47,966 27,055 1,00 36,99 C ÁTOMO 382 O HIS A 55 -5,406 -48,281 26,495 1,00 37,92 O ÁTOMO 383 CB HIS A 55 -6,320 -45,480 27,517 1,00 35,97 C ÁTOMO 384 CG HIS A 55 -6,435 -44,397 28,536 1,00 39,79 C ÁTOMO 385 ND1 HIS A 55 -5,336 -43,965 29,260 1,00 42,24 N ÁTOMO 386 CD2 HIS A 55 -7,530 -43,735 28,969 1,00 41,07 C ÁTOMO 387 CE1 HIS A 55 -5,795 -43,065 30,110
233 / 500
1,00 42,04 C ÁTOMO 388 NE2 HIS A 55 -7,108 -42,880 29,956 1,00 42,15 N ÁTOMO 389 N HIS A 56 -7,606 -48,587 26,817 1,00 32,75 N ÁTOMO 390 CA HIS A 56 -7,665 -49,715 25,896 1,00 33,13 C ÁTOMO 391 C HIS A 56 -9,080 -49,974 25,395 1,00 37,42 C ÁTOMO 392 O HIS A 56 -10,019 -49,303 25,805 1,00 37,11 O ÁTOMO 393 CB HIS A 56 -7,122 -50,983 26,615 1,00 32,46 C ÁTOMO 394 CG HIS A 56 -8,064 -51,522 27,648 1,00 33,84 C ÁTOMO 395 ND1 HIS A 56 -8,814 -52,647 27,409 1,00 34,70 N ÁTOMO 396 CD2 HIS A 56 -8,447 -50,985 28,830 1,00 34,33 C ÁTOMO 397 CE1 HIS A 56 -9,559 -52,816 28,487 1,00 33,79 C ÁTOMO 398 NE2 HIS A 56 -9,361 -51,844 29,372 1,00 33,76 N ÁTOMO 399 N THR A 57 -9,211 -50,968 24,520 1,00 35,36 N ÁTOMO 400 CA THR A 57 -10,474 -51,373 23,912 1,00 36,44 C ÁTOMO 401 C THR A 57 -10,748 -52,884 24,091 1,00 40,44 C
234 / 500
ÁTOMO 402 O THR A 57 -11,658 -53,395 23,436 1,00 42,37 O ÁTOMO 403 CB THR A 57 -10,449 -50,990 22,418 1,00 39,91 C ÁTOMO 404 OG1 THR A 57 -9,388 -51,692 21,770 1,00 42,78 O ÁTOMO 405 CG2 THR A 57 -10,273 -49,506 22,204 1,00 36,11 C ÁTOMO 406 N ARG A 58 -10,019 -53,597 24,984 1,00 36,40 N ÁTOMO 407 CA ARG A 58 -10,256 -55,047 25,161 1,00 36,92 C ÁTOMO 408 C ARG A 58 -11,596 -55,265 25,871 1,00 40,95 C ÁTOMO 409 O ARG A 58 -11,891 -54,528 26,812 1,00 40,53 O ÁTOMO 410 CB ARG A 58 -9,116 -55,740 25,960 1,00 34,53 C ÁTOMO 411 CG ARG A 58 -7,699 -55,544 25,419 1,00 35,34 C ÁTOMO 412 CD ARG A 58 -7,592 -55,879 23,949 1,00 43,83 C ÁTOMO 413 NE ARG A 58 -7,909 -57,298 23,720 1,00 49,81 N ÁTOMO 414 CZ ARG A 58 -8,709 -57,793 22,775 1,00 59,77 C ÁTOMO 415 NH1 ARG A 58 -9,312 -56,980 21,905 1,00 47,98 N ÁTOMO 416 NH2 ARG A 58 -8,909 -59,102 22,686
235 / 500
1,00 50,31 N ÁTOMO 417 N PRO A 59 -12,387 -56,280 25,471 1,00 38,74 N ÁTOMO 418 CA PRO A 59 -13,675 -56,527 26,131 1,00 38,89 C ÁTOMO 419 C PRO A 59 -13,581 -57,357 27,434 1,00 41,04 C ÁTOMO 420 O PRO A 59 -14,534 -58,047 27,805 1,00 41,72 O ÁTOMO 421 CB PRO A 59 -14,495 -57,223 25,036 1,00 42,78 C ÁTOMO 422 CG PRO A 59 -13,492 -57,974 24,269 1,00 48,48 C ÁTOMO 423 CD PRO A 59 -12,275 -57,075 24,230 1,00 42,93 C ÁTOMO 424 N HIS A 60 -12,463 -57,243 28,155 1,00 35,45 N ÁTOMO 425 CA HIS A 60 -12,248 -57,925 29,423 1,00 34,60 C ÁTOMO 426 C HIS A 60 -11,118 -57,219 30,162 1,00 38,20 C ÁTOMO 427 O HIS A 60 -10,394 -56,403 29,580 1,00 36,57 O ÁTOMO 428 CB HIS A 60 -11,878 -59,419 29,190 1,00 36,05 C ÁTOMO 429 CG HIS A 60 -10,628 -59,598 28,379 1,00 38,86 C ÁTOMO 430 ND1 HIS A 60 -10,683 -59,824 27,021 1,00 41,96 N
236 / 500
ÁTOMO 431 CD2 HIS A 60 -9,330 -59,468 28,741 1,00 38,40 C ÁTOMO 432 CE1 HIS A 60 -9,427 -59,872 26,608 1,00 40,51 C ÁTOMO 433 NE2 HIS A 60 -8,578 -59,662 27,614 1,00 38,97 N ÁTOMO 434 N CYS A 61 -10,957 -57,573 31,432 1,00 37,29 N ÁTOMO 435 CA CYS A 61 -9,859 -57,125 32,279 1,00 36,48 C ÁTOMO 436 C CYS A 61 -8,856 -58,274 32,319 1,00 37,87 C ÁTOMO 437 O CYS A 61 -9,229 -59,415 32,092 1,00 37,13 O ÁTOMO 438 CB CYS A 61 -10,354 -56,790 33,684 1,00 37,27 C ÁTOMO 439 SG CYS A 61 -11,404 -55,331 33,760 1,00 41,49 S ÁTOMO 440 N GLU A 62 -7,606 -57,977 32,650 1,00 34,49 N ÁTOMO 441 CA GLU A 62 -6,542 -58,977 32,805 1,00 33,63 C ÁTOMO 442 C GLU A 62 -6,763 -59,657 34,142 1,00 36,33 C ÁTOMO 443 O GLU A 62 -7,114 -58,982 35,102 1,00 34,77 O ÁTOMO 444 CB GLU A 62 -5,164 -58,291 32,836 1,00 33,97 C ÁTOMO 445 CG GLU A 62 -4,864 -57,415 31,631
237 / 500
1,00 36,09 C ÁTOMO 446 CD GLU A 62 -4,928 -58,187 30,334 1,00 43,71 C ÁTOMO 447 OE1 GLU A 62 -6,009 -58,203 29,706 1,00 37,36 O ÁTOMO 448 OE2 GLU A 62 -3,937 -58,878 30,015 1,00 34,40 O ÁTOMO 449 N SER A 63 -6,557 -60,975 34,227 1,00 33,89 N ÁTOMO 450 CA SER A 63 -6,722 -61,674 35,493 1,00 33,61 C ÁTOMO 451 C SER A 63 -5,503 -61,426 36,363 1,00 37,78 C ÁTOMO 452 O SER A 63 -4,378 -61,525 35,871 1,00 37,22 O ÁTOMO 453 CB SER A 63 -6,867 -63,178 35,265 1,00 37,53 C ÁTOMO 454 OG SER A 63 -8,072 -63,491 34,590 1,00 44,08 O ÁTOMO 455 N CYS A 64 -5,715 -61,139 37,654 1,00 35,84 N ÁTOMO 456 CA CYS A 64 -4,615 -61,014 38,609 1,00 38,42 C ÁTOMO 457 C CYS A 64 -3,997 -62,394 38,798 1,00 43,03 C ÁTOMO 458 O CYS A 64 -4,741 -63,369 38,902 1,00 43,07 O ÁTOMO 459 CB CYS A 64 -5,112 -60,488 39,953 1,00 41,22 C
238 / 500
ÁTOMO 460 SG CYS A 64 -5,968 -58,900 39,863 1,00 45,41 S ÁTOMO 461 N ARG A 65 -2,659 -62,474 38,917 1,00 40,94 N ÁTOMO 462 CA ARG A 65 -1,981 -63,739 39,226 1,00 42,73 C ÁTOMO 463 C ARG A 65 -2,246 -64,060 40,699 1,00 50,59 C ÁTOMO 464 O ARG A 65 -2,498 -63,143 41,488 1,00 47,96 O ÁTOMO 465 CB ARG A 65 -0,462 -63,660 38,966 1,00 42,53 C ÁTOMO 466 CG ARG A 65 0,328 -62,666 39,849 1,00 44,59 C ÁTOMO 467 CD ARG A 65 1,821 -62,847 39,684 1,00 47,03 C ÁTOMO 468 NE ARG A 65 2,234 -62,737 38,282 1,00 41,68 N ÁTOMO 469 CZ ARG A 65 2,512 -61,615 37,620 1,00 45,98 C ÁTOMO 470 NH1 ARG A 65 2,432 -60,431 38,231 1,00 35,56 N ÁTOMO 471 NH2 ARG A 65 2,872 -61,664 36,345 1,00 34,94 N ÁTOMO 472 N HIS A 66 -2,181 -65,350 41,064 1,00 53,75 N ÁTOMO 473 CA HIS A 66 -2,415 -65,809 42,436 1,00 57,95 C ÁTOMO 474 C HIS A 66 -1,089 -66,172 43,088 1,00
239 / 500
60,73 C ÁTOMO 475 O HIS A 66 -0,259 -66,829 42,457 1,00 60,16 O ÁTOMO 476 CB HIS A 66 -3,344 -67,033 42,446 1,00 62,92 C ÁTOMO 477 CG HIS A 66 -4,512 -66,902 41,518 1,00 67,42 C ÁTOMO 478 ND1 HIS A 66 -4,607 -67,669 40,365 1,00 70,55 N ÁTOMO 479 CD2 HIS A 66 -5,569 -66,057 41,571 1,00 69,55 C ÁTOMO 480 CE1 HIS A 66 -5,726 -67,288 39,768 1,00 69,97 C ÁTOMO 481 NE2 HIS A 66 -6,340 -66,318 40,459 1,00 69,56 N ÁTOMO 482 N CYS A 67 -0,895 -65,750 44,350 1,00 57,25 N ÁTOMO 483 CA CYS A 67 0,307 -66,047 45,120 1,00 58,83 C ÁTOMO 484 C CYS A 67 -0,065 -67,179 46,096 1,00 71,24 C ÁTOMO 485 O CYS A 67 -0,155 -66,958 47,301 1,00 72,76 O ÁTOMO 486 CB CYS A 67 0,800 -64,797 45,851 1,00 57,41 C ÁTOMO 487 SG CYS A 67 1,035 -63,346 44,781 1,00 57,53 S ÁTOMO 488 N ASN A 68 -0,340 -68,383 45,546 1,00 72,87 N
240 / 500
ÁTOMO 489 CA ASN A 68 -0,744 -69,550 46,358 1,00 78,32 C ÁTOMO 490 C ASN A 68 0,421 -70,074 47,203 1,00 87,39 C ÁTOMO 491 O ASN A 68 1,429 -70,522 46,652 1,00 87,06 O ÁTOMO 492 CB ASN A 68 -1,361 -70,678 45,504 1,00 83,46 C ÁTOMO 493 CG ASN A 68 -0,515 -71,155 44,343 1,00111,51 C ÁTOMO 494 OD1 ASN A 68 -0,601 -70,625 43,227 1,00104,57 O ÁTOMO 495 ND2 ASN A 68 0,353 -72,132 44,589 1,00105,22 N ÁTOMO 496 O SER A 69 2,613 -68,877 50,926 1,00 97,30 O ÁTOMO 497 N SER A 69 0,300 -69,956 48,545 1,00 88,43 N ÁTOMO 498 CA SER A 69 1,305 -70,337 49,557 1,00 92,23 C ÁTOMO 499 C SER A 69 2,319 -69,208 49,775 1,00 94,76 C ÁTOMO 500 CB SER A 69 1,998 -71,668 49,246 1,00 99,50 C ÁTOMO 501 OG SER A 69 3,179 -71,523 48,471 1,00108,86 O ÁTOMO 502 N GLY A 70 2,846 -68,613 48,684 1,00 86,65 N ÁTOMO 503 CA GLY A 70 3,782 -67,497 48,762
241 / 500
1,00 84,70 C ÁTOMO 504 C GLY A 70 3,085 -66,235 49,284 1,00 85,99 C ÁTOMO 505 O GLY A 70 1,851 -66,166 49,320 1,00 85,72 O ÁTOMO 506 N LEU A 71 3,885 -65,232 49,669 1,00 79,59 N ÁTOMO 507 CA LEU A 71 3,368 -63,971 50,216 1,00 77,19 C ÁTOMO 508 C LEU A 71 3,142 -62,997 49,049 1,00 72,56 C ÁTOMO 509 O LEU A 71 3,509 -63,311 47,915 1,00 69,12 O ÁTOMO 510 CB LEU A 71 4,316 -63,344 51,275 1,00 79,65 C ÁTOMO 511 CG LEU A 71 5,393 -64,243 51,941 1,00 87,68 C ÁTOMO 512 CD1 LEU A 71 6,771 -63,964 51,355 1,00 87,45 C ÁTOMO 513 CD2 LEU A 71 5,451 -64,021 53,438 1,00 93,95 C ÁTOMO 514 N LEU A 72 2,537 -61,832 49,333 1,00 65,30 N ÁTOMO 515 CA LEU A 72 2,279 -60,794 48,341 1,00 61,42 C ÁTOMO 516 C LEU A 72 3,191 -59,606 48,602 1,00 63,54 C ÁTOMO 517 O LEU A 72 3,126 -59,005 49,673 1,00 64,71 O
242 / 500
ÁTOMO 518 CB LEU A 72 0,814 -60,330 48,397 1,00 60,90 C ÁTOMO 519 CG LEU A 72 -0,196 -61,290 47,770 1,00 64,83 C ÁTOMO 520 CD1 LEU A 72 -1,363 -61,547 48,701 1,00 67,47 C ÁTOMO 521 CD2 LEU A 72 -0,695 -60,772 46,446 1,00 61,31 C ÁTOMO 522 N VAL A 73 4,035 -59,268 47,626 1,00 57,45 N ÁTOMO 523 CA VAL A 73 4,911 -58,099 47,696 1,00 57,01 C ÁTOMO 524 C VAL A 73 4,038 -56,887 47,373 1,00 55,93 C ÁTOMO 525 O VAL A 73 4,194 -55,834 47,989 1,00 55,91 O ÁTOMO 526 CB VAL A 73 6,101 -58,213 46,708 1,00 60,68 C ÁTOMO 527 CG1 VAL A 73 6,954 -56,943 46,721 1,00 61,41 C ÁTOMO 528 CG2 VAL A 73 6,955 -59,435 47,033 1,00 62,36 C ÁTOMO 529 N ARG A 74 3,143 -57,041 46,376 1,00 48,50 N ÁTOMO 530 CA ARG A 74 2,212 -56,004 45,944 1,00 45,91 C ÁTOMO 531 C ARG A 74 0,851 -56,650 45,712 1,00 49,19 C ÁTOMO 532 O ARG A 74 0,779 -57,679 45,044
243 / 500
1,00 48,25 O ÁTOMO 533 CB ARG A 74 2,721 -55,363 44,646 1,00 42,04 C ÁTOMO 534 CG ARG A 74 2,239 -53,942 44,375 1,00 48,38 C ÁTOMO 535 CD ARG A 74 2,887 -53,406 43,099 1,00 51,48 C ÁTOMO 536 NE ARG A 74 2,348 -54,060 41,899 1,00 44,28 N ÁTOMO 537 CZ ARG A 74 3,001 -54,265 40,749 1,00 52,67 C ÁTOMO 538 NH1 ARG A 74 4,269 -53,880 40,610 1,00 38,62 N ÁTOMO 539 NH2 ARG A 74 2,394 -54,874 39,735 1,00 32,16 N ÁTOMO 540 N ASN A 75 -0,221 -56,060 46,258 1,00 46,73 N ÁTOMO 541 CA ASN A 75 -1,582 -56,565 46,042 1,00 46,00 C ÁTOMO 542 C ASN A 75 -2,053 -56,170 44,652 1,00 46,93 C ÁTOMO 543 O ASN A 75 -1,578 -55,172 44,105 1,00 44,44 O ÁTOMO 544 CB ASN A 75 -2,563 -55,972 47,063 1,00 50,08 C ÁTOMO 545 CG ASN A 75 -2,362 -56,476 48,469 1,00 78,19 C ÁTOMO 546 OD1 ASN A 75 -2,311 -57,685 48,705 1,00 72,92 O
244 / 500
ÁTOMO 547 ND2 ASN A 75 -2,295 -55,574 49,446 1,00 75,87 N ÁTOMO 548 N CYS A 76 -3,031 -56,913 44,113 1,00 43,83 N ÁTOMO 549 CA CYS A 76 -3,631 -56,569 42,837 1,00 42,07 C ÁTOMO 550 C CYS A 76 -4,596 -55,401 43,046 1,00 44,28 C ÁTOMO 551 O CYS A 76 -5,402 -55,433 43,972 1,00 45,68 O ÁTOMO 552 CB CYS A 76 -4,344 -57,754 42,188 1,00 42,61 C ÁTOMO 553 SG CYS A 76 -4,559 -57,561 40,392 1,00 45,25 S ÁTOMO 554 N THR A 77 -4,504 -54,385 42,184 1,00 38,93 N ÁTOMO 555 CA THR A 77 -5,386 -53,218 42,158 1,00 37,81 C ÁTOMO 556 C THR A 77 -6,042 -53,265 40,782 1,00 37,95 C ÁTOMO 557 O THR A 77 -5,600 -54,044 39,940 1,00 34,24 O ÁTOMO 558 CB THR A 77 -4,589 -51,912 42,354 1,00 47,00 C ÁTOMO 559 OG1 THR A 77 -3,827 -51,635 41,183 1,00 52,34 O ÁTOMO 560 CG2 THR A 77 -3,669 -51,957 43,564 1,00 48,24 C ÁTOMO 561 N ILE A 78 -7,052 -52,423 40,526 1,00
245 / 500
34,74 N ÁTOMO 562 CA ILE A 78 -7,727 -52,440 39,221 1,00 32,87 C ÁTOMO 563 C ILE A 78 -6,832 -51,967 38,054 1,00 34,22 C ÁTOMO 564 O ILE A 78 -7,246 -52,115 36,919 1,00 31,53 O ÁTOMO 565 CB ILE A 78 -9,084 -51,696 39,222 1,00 35,74 C ÁTOMO 566 CG1 ILE A 78 -8,952 -50,234 39,719 1,00 35,66 C ÁTOMO 567 CG2 ILE A 78 -10,114 -52,489 40,041 1,00 36,24 C ÁTOMO 568 CD1 ILE A 78 -10,064 -49,391 39,304 1,00 39,66 C ÁTOMO 569 N THR A 79 -5,607 -51,459 38,309 1,00 31,55 N ÁTOMO 570 CA THR A 79 -4,687 -51,066 37,244 1,00 30,47 C ÁTOMO 571 C THR A 79 -3,338 -51,805 37,296 1,00 34,54 C ÁTOMO 572 O THR A 79 -2,495 -51,553 36,439 1,00 35,67 O ÁTOMO 573 CB THR A 79 -4,466 -49,536 37,282 1,00 35,81 C ÁTOMO 574 OG1 THR A 79 -3,816 -49,184 38,504 1,00 37,07 O ÁTOMO 575 CG2 THR A 79 -5,763 -48,750 37,150 1,00 32,44 C
246 / 500
ÁTOMO 576 N ALA A 80 -3,107 -52,680 38,277 1,00 30,96 N ÁTOMO 577 CA ALA A 80 -1,819 -53,347 38,406 1,00 31,21 C ÁTOMO 578 C ALA A 80 -1,958 -54,767 38,929 1,00 35,69 C ÁTOMO 579 O ALA A 80 -2,756 -55,035 39,831 1,00 35,56 O ÁTOMO 580 CB ALA A 80 -0,918 -52,540 39,332 1,00 32,83 C ÁTOMO 581 N ASN A 81 -1,122 -55,665 38,395 1,00 31,83 N ÁTOMO 582 CA ASN A 81 -1,123 -57,068 38,775 1,00 31,50 C ÁTOMO 583 C ASN A 81 -0,544 -57,282 40,171 1,00 34,61 C ÁTOMO 584 O ASN A 81 0,219 -56,452 40,677 1,00 33,14 O ÁTOMO 585 CB ASN A 81 -0,322 -57,899 37,756 1,00 31,63 C ÁTOMO 586 CG ASN A 81 -0,760 -59,340 37,647 1,00 35,72 C ÁTOMO 587 OD1 ASN A 81 -1,474 -59,868 38,492 1,00 31,77 O ÁTOMO 588 ND2 ASN A 81 -0,309 -60,026 36,625 1,00 31,52 N ÁTOMO 589 N ALA A 82 -0,883 -58,425 40,777 1,00 32,98 N ÁTOMO 590 CA ALA A 82 -0,312 -58,828 42,056
247 / 500
1,00 33,88 C ÁTOMO 591 C ALA A 82 1,136 -59,211 41,803 1,00 36,40 C ÁTOMO 592 O ALA A 82 1,468 -59,646 40,701 1,00 34,67 O ÁTOMO 593 CB ALA A 82 -1,058 -60,032 42,630 1,00 35,42 C ÁTOMO 594 N GLU A 83 1,997 -59,032 42,804 1,00 34,63 N ÁTOMO 595 CA GLU A 83 3,398 -59,444 42,733 1,00 35,26 C ÁTOMO 596 C GLU A 83 3,664 -60,360 43,922 1,00 45,22 C ÁTOMO 597 O GLU A 83 3,365 -59,978 45,052 1,00 45,33 O ÁTOMO 598 CB GLU A 83 4,335 -58,241 42,709 1,00 35,74 C ÁTOMO 599 CG GLU A 83 4,312 -57,536 41,361 1,00 38,29 C ÁTOMO 600 CD GLU A 83 4,982 -58,293 40,227 1,00 39,60 C ÁTOMO 601 OE1 GLU A 83 6,020 -58,944 40,471 1,00 37,67 O ÁTOMO 602 OE2 GLU A 83 4,464 -58,239 39,092 1,00 33,86 O ÁTOMO 603 N CYS A 84 4,176 -61,580 43,661 1,00 46,59 N ÁTOMO 604 CA CYS A 84 4,408 -62,600 44,689 1,00 50,51 C
248 / 500
ÁTOMO 605 C CYS A 84 5,857 -62,692 45,154 1,00 56,34 C ÁTOMO 606 O CYS A 84 6,767 -62,144 44,535 1,00 54,93 O ÁTOMO 607 CB CYS A 84 3,930 -63,970 44,209 1,00 52,50 C ÁTOMO 608 SG CYS A 84 2,338 -63,963 43,346 1,00 55,78 S ÁTOMO 609 N ALA A 85 6,051 -63,457 46,239 1,00 56,45 N ÁTOMO 610 CA ALA A 85 7,354 -63,789 46,820 1,00 59,32 C ÁTOMO 611 C ALA A 85 7,234 -65,102 47,595 1,00 67,61 C ÁTOMO 612 O ALA A 85 6,138 -65,454 48,033 1,00 66,03 O ÁTOMO 613 CB ALA A 85 7,829 -62,683 47,746 1,00 61,11 C ÁTOMO 614 O CYS A 86 9,789 -65,864 50,035 1,00 80,95 O ÁTOMO 615 N CYS A 86 8,352 -65,823 47,747 1,00 70,04 N ÁTOMO 616 CA CYS A 86 8,406 -67,079 48,506 1,00 73,93 C ÁTOMO 617 C CYS A 86 8,999 -66,800 49,883 1,00 81,58 C ÁTOMO 618 CB CYS A 86 9,220 -68,131 47,758 1,00 75,75 C ÁTOMO 619 SG CYS A 86 8,510 -68,637 46,167
249 / 500
1,00 77,80 S ÁTOMO 620 O ARG A 87 10,966 -68,856 51,499 1,00 93,44 O ÁTOMO 621 N ARG A 87 8,628 -67,615 50,882 1,00 82,66 N ÁTOMO 622 CA ARG A 87 9,152 -67,478 52,247 1,00 86,62 C ÁTOMO 623 C ARG A 87 10,609 -67,957 52,266 1,00 93,77 C ÁTOMO 624 CB ARG A 87 8,311 -68,300 53,244 1,00 90,21 C ÁTOMO 625 CG ARG A 87 6,862 -67,814 53,373 1,00102,71 C ÁTOMO 626 CD ARG A 87 5,855 -68,945 53,538 1,00117,92 C ÁTOMO 627 NE ARG A 87 4,501 -68,533 53,151 1,00127,83 N ÁTOMO 628 CZ ARG A 87 3,660 -67,820 53,902 1,00144,91 C ÁTOMO 629 NH1 ARG A 87 4,016 -67,412 55,118 1,00137,73 N ÁTOMO 630 NH2 ARG A 87 2,454 -67,506 53,440 1,00128,40 N ÁTOMO 631 O ASN A 88 12,123 -69,760 54,308 1,00100,54 O ÁTOMO 632 N ASN A 88 11,451 -67,357 53,130 1,00 92,99 N ÁTOMO 633 CA ASN A 88 12,872 -67,726 53,238 1,00 95,23 C
250 / 500
ÁTOMO 634 C ASN A 88 13,063 -69,146 53,806 1,00100,81 C ÁTOMO 635 CB ASN A 88 13,632 -66,706 54,103 1,00 99,16 C ÁTOMO 636 CG ASN A 88 15,124 -66,958 54,200 1,00131,25 C ÁTOMO 637 OD1 ASN A 88 15,760 -67,438 53,255 1,00126,92 O ÁTOMO 638 ND2 ASN A 88 15,729 -66,618 55,332 1,00127,85 N ÁTOMO 639 O ASP A 94 9,704 -67,692 39,489 1,00 73,11 O ÁTOMO 640 N ASP A 94 10,269 -69,594 36,923 1,00 76,76 N ÁTOMO 641 CA ASP A 94 9,121 -68,883 37,478 1,00 72,67 C ÁTOMO 642 C ASP A 94 9,610 -67,653 38,260 1,00 72,46 C ÁTOMO 643 CB ASP A 94 8,283 -69,836 38,368 1,00 75,16 C ÁTOMO 644 CG ASP A 94 6,962 -69,267 38,867 1,00 83,13 C ÁTOMO 645 OD1 ASP A 94 6,180 -68,756 38,033 1,00 82,79 O ÁTOMO 646 OD2 ASP A 94 6,687 -69,383 40,082 1,00 85,88 O ÁTOMO 647 O LYS A 95 9,445 -63,752 39,792 1,00 58,23 O ÁTOMO 648 N LYS A 95 9,918 -66,548 37,542
251 / 500
1,00 64,62 N ÁTOMO 649 CA LYS A 95 10,353 -65,294 38,179 1,00 61,76 C ÁTOMO 650 C LYS A 95 9,199 -64,628 38,960 1,00 59,06 C ÁTOMO 651 CB LYS A 95 10,930 -64,306 37,136 1,00 63,69 C ÁTOMO 652 CG LYS A 95 9,877 -63,631 36,254 1,00 61,55 C ÁTOMO 653 CD LYS A 95 10,458 -63,036 34,990 1,00 56,57 C ÁTOMO 654 CE LYS A 95 9,357 -62,586 34,067 1,00 47,71 C ÁTOMO 655 NZ LYS A 95 9,895 -61,924 32,850 1,00 44,34 N ÁTOMO 656 N GLU A 96 7,946 -65,028 38,670 1,00 51,16 N ÁTOMO 657 CA GLU A 96 6,767 -64,483 39,328 1,00 47,79 C ÁTOMO 658 C GLU A 96 6,452 -65,102 40,698 1,00 53,73 C ÁTOMO 659 O GLU A 96 5,500 -64,649 41,318 1,00 51,16 O ÁTOMO 660 CB GLU A 96 5,550 -64,578 38,385 1,00 46,46 C ÁTOMO 661 CG GLU A 96 5,723 -63,777 37,098 1,00 46,51 C ÁTOMO 662 CD GLU A 96 5,931 -62,283 37,282 1,00 56,44 C
252 / 500
ÁTOMO 663 OE1 GLU A 96 5,605 -61,761 38,374 1,00 47,31 O ÁTOMO 664 OE2 GLU A 96 6,408 -61,627 36,326 1,00 40,33 O ÁTOMO 665 N CYS A 97 7,227 -66,111 41,186 1,00 54,71 N ÁTOMO 666 CA CYS A 97 7,038 -66,714 42,517 1,00 57,34 C ÁTOMO 667 C CYS A 97 5,582 -67,130 42,819 1,00 59,38 C ÁTOMO 668 O CYS A 97 5,113 -66,975 43,946 1,00 58,58 O ÁTOMO 669 CB CYS A 97 7,573 -65,776 43,594 1,00 59,57 C ÁTOMO 670 SG CYS A 97 9,187 -65,050 43,208 1,00 65,12 S ÁTOMO 671 N THR A 98 4,875 -67,628 41,798 1,00 56,33 N ÁTOMO 672 CA THR A 98 3,497 -68,101 41,922 1,00 56,86 C ÁTOMO 673 C THR A 98 3,531 -69,509 42,570 1,00 64,64 C ÁTOMO 674 O THR A 98 2,565 -69,898 43,231 1,00 64,61 O ÁTOMO 675 CB THR A 98 2,780 -68,010 40,550 1,00 67,68 C ÁTOMO 676 OG1 THR A 98 2,314 -66,665 40,377 1,00 69,41 O ÁTOMO 677 CG2 THR A 98 1,605 -68,975 40,412
253 / 500
1,00 69,92 C ÁTOMO 678 N GLU A 99 4,659 -70,249 42,387 1,00 63,98 N ÁTOMO 679 CA GLU A 99 4,902 -71,579 42,956 1,00 67,53 C ÁTOMO 680 C GLU A 99 6,206 -71,525 43,771 1,00 74,19 C ÁTOMO 681 O GLU A 99 7,172 -70,901 43,320 1,00 72,07 O ÁTOMO 682 CB GLU A 99 5,051 -72,635 41,842 1,00 70,22 C ÁTOMO 683 CG GLU A 99 3,904 -72,679 40,836 1,00 81,49 C ÁTOMO 684 CD GLU A 99 4,178 -72,104 39,455 1,00103,65 C ÁTOMO 685 OE1 GLU A 99 5,323 -72,237 38,962 1,00101,28 O ÁTOMO 686 OE2 GLU A 99 3,223 -71,582 38,834 1,00 92,97 O ÁTOMO 687 N CYS A 100 6,225 -72,166 44,967 1,00 74,67 N ÁTOMO 688 CA CYS A 100 7,392 -72,212 45,860 1,00 77,43 C ÁTOMO 689 C CYS A 100 7,622 -73,654 46,338 1,00 85,72 C ÁTOMO 690 O CYS A 100 7,952 -74,538 45,551 1,00 86,74 O ÁTOMO 691 CB CYS A 100 7,204 -71,267 47,048 1,00 77,96 C
254 / 500
ÁTOMO 692 SG CYS A 100 6,750 -69,568 46,600 1,00 78,35 S ÁTOMO 693 CD CD A9901 -7,490 -41,157 31,507 0,50 62,49 CD ÁTOMO 694 CD CD A9902 -6,163 -59,542 27,858 1,00 39,29 CD ÁTOMO 695 N GLU B 1 -16,461 -26,648 36,434 1,00 66,26 N ÁTOMO 696 CA GLU B 1 -16,304 -25,892 35,191 1,00 63,97 C ÁTOMO 697 C GLU B 1 -14,864 -25,409 35,022 1,00 68,14 C ÁTOMO 698 O GLU B 1 -14,252 -24,969 35,997 1,00 70,24 O ÁTOMO 699 CB GLU B 1 -17,259 -24,686 35,173 1,00 64,42 C ÁTOMO 700 CG GLU B 1 -17,296 -23,947 33,847 1,00 72,66 C ÁTOMO 701 CD GLU B 1 -18,367 -22,878 33,729 1,00 92,40 C ÁTOMO 702 OE1 GLU B 1 -19,570 -23,226 33,767 1,00 83,52 O ÁTOMO 703 OE2 GLU B 1 -17,999 -21,696 33,539 1,00 84,58 O ÁTOMO 704 N ILE B 2 -14,352 -25,433 33,770 1,00 62,46 N ÁTOMO 705 CA ILE B 2 -13,013 -24,931 33,439 1,00 62,90 C ÁTOMO 706 C ILE B 2 -13,223 -23,594 32,711 1,00
255 / 500
63,43 C ÁTOMO 707 O ILE B 2 -13,939 -23,538 31,709 1,00 61,42 O ÁTOMO 708 CB ILE B 2 -12,071 -25,936 32,686 1,00 66,24 C ÁTOMO 709 CG1 ILE B 2 -11,426 -25,308 31,422 1,00 65,76 C ÁTOMO 710 CG2 ILE B 2 -12,747 -27,276 32,367 1,00 66,51 C ÁTOMO 711 CD1 ILE B 2 -10,366 -26,070 30,866 1,00 72,40 C ÁTOMO 712 N VAL B 3 -12,613 -22,522 33,235 1,00 59,20 N ÁTOMO 713 CA VAL B 3 -12,742 -21,176 32,690 1,00 57,38 C ÁTOMO 714 C VAL B 3 -11,638 -20,926 31,664 1,00 59,89 C ÁTOMO 715 O VAL B 3 -10,461 -21,101 31,983 1,00 61,71 O ÁTOMO 716 CB VAL B 3 -12,712 -20,125 33,834 1,00 63,01 C ÁTOMO 717 CG1 VAL B 3 -12,856 -18,704 33,291 1,00 62,18 C ÁTOMO 718 CG2 VAL B 3 -13,804 -20,412 34,865 1,00 62,58 C ÁTOMO 719 N LEU B 4 -12,020 -20,485 30,446 1,00 53,70 N ÁTOMO 720 CA LEU B 4 -11,085 -20,140 29,376 1,00 53,06 C
256 / 500
ÁTOMO 721 C LEU B 4 -11,001 -18,612 29,315 1,00 58,51 C ÁTOMO 722 O LEU B 4 -12,030 -17,950 29,155 1,00 57,19 O ÁTOMO 723 CB LEU B 4 -11,559 -20,701 28,028 1,00 50,15 C ÁTOMO 724 CG LEU B 4 -11,644 -22,224 27,914 1,00 52,38 C ÁTOMO 725 CD1 LEU B 4 -12,192 -22,628 26,562 1,00 49,24 C ÁTOMO 726 CD2 LEU B 4 -10,294 -22,869 28,132 1,00 56,14 C ÁTOMO 727 N THR B 5 -9,787 -18,053 29,488 1,00 57,12 N ÁTOMO 728 CA THR B 5 -9,545 -16,612 29,492 1,00 57,49 C ÁTOMO 729 C THR B 5 -8,755 -16,226 28,244 1,00 62,49 C ÁTOMO 730 O THR B 5 -7,591 -16,606 28,115 1,00 64,71 O ÁTOMO 731 CB THR B 5 -8,829 -16,210 30,792 1,00 64,16 C ÁTOMO 732 OG1 THR B 5 -9,615 -16,656 31,899 1,00 61,62 O ÁTOMO 733 CG2 THR B 5 -8,622 -14,706 30,907 1,00 64,87 C ÁTOMO 734 N GLN B 6 -9,392 -15,478 27,330 1,00 57,23 N ÁTOMO 735 CA GLN B 6 -8,780 -15,010 26,088
257 / 500
1,00 57,57 C ÁTOMO 736 C GLN B 6 -8,200 -13,609 26,227 1,00 65,40 C ÁTOMO 737 O GLN B 6 -8,845 -12,745 26,822 1,00 65,16 O ÁTOMO 738 CB GLN B 6 -9,805 -15,033 24,948 1,00 55,44 C ÁTOMO 739 CG GLN B 6 -10,142 -16,440 24,518 1,00 58,07 C ÁTOMO 740 CD GLN B 6 -11,047 -16,457 23,319 1,00 61,09 C ÁTOMO 741 OE1 GLN B 6 -12,254 -16,645 23,435 1,00 50,30 O ÁTOMO 742 NE2 GLN B 6 -10,491 -16,247 22,143 1,00 50,28 N ÁTOMO 743 N SER B 7 -6,996 -13,377 25,655 1,00 64,70 N ÁTOMO 744 CA SER B 7 -6,319 -12,075 25,708 1,00 66,73 C ÁTOMO 745 C SER B 7 -5,802 -11,675 24,312 1,00 70,20 C ÁTOMO 746 O SER B 7 -5,273 -12,531 23,601 1,00 69,56 O ÁTOMO 747 CB SER B 7 -5,149 -12,106 26,693 1,00 73,95 C ÁTOMO 748 OG SER B 7 -5,320 -13,078 27,711 1,00 85,76 O ÁTOMO 749 N PRO B 8 -5,891 -10,382 23,933 1,00 67,08 N
258 / 500
ÁTOMO 750 CA PRO B 8 -6,555 -9,260 24,611 1,00 66,41 C ÁTOMO 751 C PRO B 8 -8,047 -9,281 24,239 1,00 66,56 C ÁTOMO 752 O PRO B 8 -8,455 -10,091 23,401 1,00 63,39 O ÁTOMO 753 CB PRO B 8 -5,836 -8,040 24,029 1,00 69,44 C ÁTOMO 754 CG PRO B 8 -5,503 -8,455 22,641 1,00 73,38 C ÁTOMO 755 CD PRO B 8 -5,140 -9,917 22,751 1,00 69,21 C ÁTOMO 756 N ALA B 9 -8,852 -8,374 24,826 1,00 62,75 N ÁTOMO 757 CA ALA B 9 -10,283 -8,275 24,497 1,00 59,18 C ÁTOMO 758 C ALA B 9 -10,422 -7,798 23,048 1,00 60,93 C ÁTOMO 759 O ALA B 9 -11,145 -8,410 22,262 1,00 57,16 O ÁTOMO 760 CB ALA B 9 -10,985 -7,309 25,443 1,00 59,92 C ÁTOMO 761 N THR B 10 -9,679 -6,735 22,695 1,00 59,34 N ÁTOMO 762 CA THR B 10 -9,622 -6,197 21,336 1,00 58,27 C ÁTOMO 763 C THR B 10 -8,158 -6,209 20,896 1,00 63,97 C ÁTOMO 764 O THR B 10 -7,299 -5,732 21,640 1,00
259 / 500
66,81 O ÁTOMO 765 CB THR B 10 -10,212 -4,783 21,288 1,00 65,78 C ÁTOMO 766 OG1 THR B 10 -11,542 -4,832 21,810 1,00 64,14 O ÁTOMO 767 CG2 THR B 10 -10,233 -4,195 19,868 1,00 62,11 C ÁTOMO 768 N LEU B 11 -7,874 -6,767 19,709 1,00 58,45 N ÁTOMO 769 CA LEU B 11 -6,526 -6,820 19,147 1,00 59,88 C ÁTOMO 770 C LEU B 11 -6,550 -5,961 17,892 1,00 63,08 C ÁTOMO 771 O LEU B 11 -7,034 -6,403 16,848 1,00 61,01 O ÁTOMO 772 CB LEU B 11 -6,113 -8,276 18,833 1,00 59,83 C ÁTOMO 773 CG LEU B 11 -4,713 -8,487 18,236 1,00 66,84 C ÁTOMO 774 CD1 LEU B 11 -3,620 -7,868 19,113 1,00 69,57 C ÁTOMO 775 CD2 LEU B 11 -4,425 -9,967 18,049 1,00 68,76 C ÁTOMO 776 N SER B 12 -6,094 -4,700 18,022 1,00 60,82 N ÁTOMO 777 CA SER B 12 -6,085 -3,725 16,931 1,00 59,54 C ÁTOMO 778 C SER B 12 -4,750 -3,781 16,181 1,00 66,36 C
260 / 500
ÁTOMO 779 O SER B 12 -3,742 -3,296 16,695 1,00 68,95 O ÁTOMO 780 CB SER B 12 -6,343 -2,321 17,473 1,00 61,03 C ÁTOMO 781 OG SER B 12 -7,545 -2,264 18,225 1,00 59,35 O ÁTOMO 782 N LEU B 13 -4,742 -4,389 14,972 1,00 61,99 N ÁTOMO 783 CA LEU B 13 -3,552 -4,515 14,115 1,00 64,21 C ÁTOMO 784 C LEU B 13 -3,915 -4,162 12,663 1,00 68,04 C ÁTOMO 785 O LEU B 13 -5,080 -4,297 12,288 1,00 63,88 O ÁTOMO 786 CB LEU B 13 -3,008 -5,948 14,169 1,00 64,67 C ÁTOMO 787 CG LEU B 13 -2,533 -6,450 15,532 1,00 70,50 C ÁTOMO 788 CD1 LEU B 13 -2,338 -7,955 15,506 1,00 69,97 C ÁTOMO 789 CD2 LEU B 13 -1,250 -5,748 15,966 1,00 76,02 C ÁTOMO 790 N SER B 14 -2,939 -3,681 11,859 1,00 68,35 N ÁTOMO 791 CA SER B 14 -3,173 -3,305 10,453 1,00 68,36 C ÁTOMO 792 C SER B 14 -3,015 -4,520 9,513 1,00 72,45 C ÁTOMO 793 O SER B 14 -2,397 -5,504 9,921 1,00
261 / 500
72,71 O ÁTOMO 794 CB SER B 14 -2,176 -2,235 10,012 1,00 76,14 C ÁTOMO 795 OG SER B 14 -2,104 -1,139 10,908 1,00 88,84 O ÁTOMO 796 N PRO B 15 -3,510 -4,442 8,241 1,00 69,11 N ÁTOMO 797 CA PRO B 15 -3,303 -5,542 7,286 1,00 69,65 C ÁTOMO 798 C PRO B 15 -1,819 -5,655 6,930 1,00 78,54 C ÁTOMO 799 O PRO B 15 -1,171 -4,641 6,663 1,00 80,10 O ÁTOMO 800 CB PRO B 15 -4,158 -5,144 6,079 1,00 69,78 C ÁTOMO 801 CG PRO B 15 -5,220 -4,292 6,634 1,00 71,64 C ÁTOMO 802 CD PRO B 15 -4,601 -3,552 7,789 1,00 68,61 C ÁTOMO 803 N GLY B 16 -1,278 -6,878 6,977 1,00 77,14 N ÁTOMO 804 CA GLY B 16 0,134 -7,142 6,736 1,00 80,94 C ÁTOMO 805 C GLY B 16 0,838 -7,494 8,053 1,00 86,59 C ÁTOMO 806 O GLY B 16 1,821 -8,232 8,019 1,00 89,09 O ÁTOMO 807 N GLU B 17 0,353 -6,967 9,209 1,00 81,49 N
262 / 500
ÁTOMO 808 CA GLU B 17 0,953 -7,263 10,516 1,00 82,40 C ÁTOMO 809 C GLU B 17 0,663 -8,702 10,959 1,00 84,44 C ÁTOMO 810 O GLU B 17 -0,209 -9,370 10,401 1,00 81,35 O ÁTOMO 811 CB GLU B 17 0,466 -6,282 11,606 1,00 82,63 C ÁTOMO 812 CG GLU B 17 0,950 -4,853 11,438 1,00 93,06 C ÁTOMO 813 CD GLU B 17 0,713 -3,988 12,663 1,00110,22 C ÁTOMO 814 OE1 GLU B 17 1,356 -4,242 13,708 1,00100,30 O ÁTOMO 815 OE2 GLU B 17 -0,138 -3,072 12,588 1,00101,98 O ÁTOMO 816 N ARG B 18 1,409 -9,166 11,968 1,00 82,58 N ÁTOMO 817 CA ARG B 18 1,280 -10,506 12,533 1,00 81,15 C ÁTOMO 818 C ARG B 18 0,391 -10,433 13,778 1,00 82,43 C ÁTOMO 819 O ARG B 18 0,608 -9,564 14,625 1,00 83,25 O ÁTOMO 820 CB ARG B 18 2,674 -11,074 12,872 1,00 83,89 C ÁTOMO 821 CG ARG B 18 2,660 -12,393 13,638 1,00 94,10 C ÁTOMO 822 CD ARG B 18 3,789 -13,313 13,217
263 / 500
1,00105,86 C ÁTOMO 823 NE ARG B 18 3,869 -14,499 14,073 1,00109,81 N ÁTOMO 824 CZ ARG B 18 4,557 -15,605 13,794 1,00126,65 C ÁTOMO 825 NH1 ARG B 18 5,243 -15,703 12,657 1,00120,71 N ÁTOMO 826 NH2 ARG B 18 4,561 -16,624 14,644 1,00112,23 N ÁTOMO 827 N ALA B 19 -0,605 -11,342 13,887 1,00 74,95 N ÁTOMO 828 CA ALA B 19 -1,521 -11,397 15,031 1,00 72,03 C ÁTOMO 829 C ALA B 19 -1,317 -12,678 15,822 1,00 75,61 C ÁTOMO 830 O ALA B 19 -1,129 -13,737 15,230 1,00 74,37 O ÁTOMO 831 CB ALA B 19 -2,959 -11,320 14,555 1,00 69,03 C ÁTOMO 832 N THR B 20 -1,358 -12,573 17,157 1,00 72,69 N ÁTOMO 833 CA THR B 20 -1,212 -13,702 18,069 1,00 73,06 C ÁTOMO 834 C THR B 20 -2,342 -13,556 19,104 1,00 74,31 C ÁTOMO 835 O THR B 20 -2,355 -12,600 19,882 1,00 73,95 O ÁTOMO 836 CB THR B 20 0,265 -13,789 18,581 1,00 90,30 C
264 / 500
ÁTOMO 837 OG1 THR B 20 0,843 -15,022 18,139 1,00 92,46 O ÁTOMO 838 CG2 THR B 20 0,417 -13,666 20,106 1,00 91,87 C ÁTOMO 839 N LEU B 21 -3,350 -14,446 19,016 1,00 68,30 N ÁTOMO 840 CA LEU B 21 -4,521 -14,459 19,896 1,00 65,65 C ÁTOMO 841 C LEU B 21 -4,298 -15,577 20,900 1,00 68,48 C ÁTOMO 842 O LEU B 21 -4,028 -16,695 20,480 1,00 68,53 O ÁTOMO 843 CB LEU B 21 -5,800 -14,732 19,087 1,00 62,61 C ÁTOMO 844 CG LEU B 21 -6,278 -13,614 18,155 1,00 66,57 C ÁTOMO 845 CD1 LEU B 21 -5,452 -13,557 16,865 1,00 68,10 C ÁTOMO 846 CD2 LEU B 21 -7,744 -13,808 17,793 1,00 66,13 C ÁTOMO 847 N SER B 22 -4,389 -15,288 22,207 1,00 64,91 N ÁTOMO 848 CA SER B 22 -4,132 -16,278 23,255 1,00 66,06 C ÁTOMO 849 C SER B 22 -5,391 -16,739 23,990 1,00 67,57 C ÁTOMO 850 O SER B 22 -6,364 -15,995 24,088 1,00 64,89 O ÁTOMO 851 CB SER B 22 -3,117 -15,733 24,257
265 / 500
1,00 74,58 C ÁTOMO 852 OG SER B 22 -3,684 -14,816 25,180 1,00 85,87 O ÁTOMO 853 N CYS B 23 -5,343 -17,978 24,513 1,00 64,28 N ÁTOMO 854 CA CYS B 23 -6,405 -18,615 25,301 1,00 62,53 C ÁTOMO 855 C CYS B 23 -5,697 -19,297 26,483 1,00 68,85 C ÁTOMO 856 O CYS B 23 -4,734 -20,036 26,275 1,00 69,65 O ÁTOMO 857 CB CYS B 23 -7,191 -19,618 24,451 1,00 60,39 C ÁTOMO 858 SG CYS B 23 -8,582 -20,425 25,303 1,00 62,06 S ÁTOMO 859 N SER B 24 -6,126 -18,989 27,714 1,00 66,17 N ÁTOMO 860 CA SER B 24 -5,555 -19,540 28,941 1,00 67,93 C ÁTOMO 861 C SER B 24 -6,639 -20,319 29,684 1,00 69,58 C ÁTOMO 862 O SER B 24 -7,686 -19,750 29,989 1,00 67,28 O ÁTOMO 863 CB SER B 24 -5,025 -18,413 29,824 1,00 73,52 C ÁTOMO 864 OG SER B 24 -4,551 -18,904 31,068 1,00 85,22 O ÁTOMO 865 N ALA B 25 -6,384 -21,604 29,994 1,00 66,33 N
266 / 500
ÁTOMO 866 CA ALA B 25 -7,331 -22,468 30,711 1,00 64,71 C ÁTOMO 867 C ALA B 25 -7,006 -22,520 32,207 1,00 72,28 C ÁTOMO 868 O ALA B 25 -5,835 -22,434 32,579 1,00 75,00 O ÁTOMO 869 CB ALA B 25 -7,293 -23,866 30,128 1,00 64,17 C ÁTOMO 870 N SER B 26 -8,036 -22,653 33,067 1,00 68,25 N ÁTOMO 871 CA SER B 26 -7,843 -22,730 34,522 1,00 70,50 C ÁTOMO 872 C SER B 26 -7,155 -24,046 34,917 1,00 76,92 C ÁTOMO 873 O SER B 26 -6,318 -24,047 35,823 1,00 79,16 O ÁTOMO 874 CB SER B 26 -9,172 -22,576 35,254 1,00 72,51 C ÁTOMO 875 OG SER B 26 -10,107 -23,553 34,832 1,00 78,97 O ÁTOMO 876 N SER B 27 -7,502 -25,155 34,230 1,00 72,77 N ÁTOMO 877 CA SER B 27 -6,878 -26,473 34,408 1,00 73,84 C ÁTOMO 878 C SER B 27 -6,429 -26,995 33,028 1,00 76,35 C ÁTOMO 879 O SER B 27 -6,773 -26,393 32,009 1,00 74,05 O ÁTOMO 880 CB SER B 27 -7,835 -27,446 35,093
267 / 500
1,00 76,56 C ÁTOMO 881 OG SER B 27 -9,062 -27,576 34,395 1,00 84,78 O ÁTOMO 882 N SER B 28 -5,640 -28,080 32,996 1,00 73,77 N ÁTOMO 883 CA SER B 28 -5,076 -28,614 31,747 1,00 72,82 C ÁTOMO 884 C SER B 28 -6,100 -29,091 30,694 1,00 72,96 C ÁTOMO 885 O SER B 28 -7,062 -29,774 31,031 1,00 70,71 O ÁTOMO 886 CB SER B 28 -4,096 -29,744 32,047 1,00 77,29 C ÁTOMO 887 OG SER B 28 -3,024 -29,279 32,849 1,00 89,12 O ÁTOMO 888 N VAL B 29 -5,851 -28,753 29,412 1,00 68,69 N ÁTOMO 889 CA VAL B 29 -6,670 -29,146 28,253 1,00 66,05 C ÁTOMO 890 C VAL B 29 -5,746 -29,659 27,149 1,00 71,82 C ÁTOMO 891 O VAL B 29 -4,564 -29,321 27,145 1,00 73,88 O ÁTOMO 892 CB VAL B 29 -7,616 -28,027 27,741 1,00 67,49 C ÁTOMO 893 CG1 VAL B 29 -8,763 -27,814 28,707 1,00 66,23 C ÁTOMO 894 CG2 VAL B 29 -6,877 -26,722 27,483 1,00 68,50 C
268 / 500
ÁTOMO 895 N SER B 30 -6,287 -30,448 26,206 1,00 67,52 N ÁTOMO 896 CA SER B 30 -5,499 -31,109 25,163 1,00 68,55 C ÁTOMO 897 C SER B 30 -5,754 -30,627 23,725 1,00 71,50 C ÁTOMO 898 O SER B 30 -4,840 -30,063 23,114 1,00 75,11 O ÁTOMO 899 CB SER B 30 -5,713 -32,621 25,242 1,00 71,25 C ÁTOMO 900 OG SER B 30 -5,577 -33,110 26,567 1,00 85,11 O ÁTOMO 901 N TYR B 31 -6,952 -30,888 23,173 1,00 61,50 N ÁTOMO 902 CA TYR B 31 -7,275 -30,609 21,771 1,00 59,42 C ÁTOMO 903 C TYR B 31 -8,187 -29,371 21,642 1,00 61,50 C ÁTOMO 904 O TYR B 31 -9,401 -29,497 21,460 1,00 58,79 O ÁTOMO 905 CB TYR B 31 -7,920 -31,868 21,154 1,00 59,05 C ÁTOMO 906 CG TYR B 31 -6,937 -32,971 20,818 1,00 61,39 C ÁTOMO 907 CD1 TYR B 31 -6,432 -33,807 21,801 1,00 64,53 C ÁTOMO 908 CD2 TYR B 31 -6,607 -33,251 19,499 1,00 61,86 C ÁTOMO 909 CE1 TYR B 31 -5,566 -34,853 21,491
269 / 500
1,00 66,11 C ÁTOMO 910 CE2 TYR B 31 -5,743 -34,293 19,173 1,00 63,96 C ÁTOMO 911 CZ TYR B 31 -5,206 -35,080 20,174 1,00 71,35 C ÁTOMO 912 OH TYR B 31 -4,366 -36,127 19,869 1,00 73,45 O ÁTOMO 913 N MET B 32 -7,585 -28,171 21,737 1,00 58,11 N ÁTOMO 914 CA MET B 32 -8,303 -26,888 21,710 1,00 55,98 C ÁTOMO 915 C MET B 32 -8,949 -26,559 20,350 1,00 55,87 C ÁTOMO 916 O MET B 32 -8,293 -26,666 19,315 1,00 55,56 O ÁTOMO 917 CB MET B 32 -7,343 -25,753 22,121 1,00 60,50 C ÁTOMO 918 CG MET B 32 -8,010 -24,403 22,364 1,00 63,40 C ÁTOMO 919 DP MET B 32 -9,069 -24,377 23,829 1,00 66,79 S ÁTOMO 920 CE MET B 32 -7,881 -24,105 25,096 1,00 66,47 C ÁTOMO 921 N HIS B 33 -10,226 -26,122 20,372 1,00 48,77 N ÁTOMO 922 CA HIS B 33 -10,974 -25,722 19,175 1,00 46,33 C ÁTOMO 923 C HIS B 33 -11,124 -24,210 19,150 1,00 49,53 C
270 / 500
ÁTOMO 924 O HIS B 33 -11,194 -23,588 20,208 1,00 49,20 O ÁTOMO 925 CB HIS B 33 -12,366 -26,366 19,146 1,00 44,26 C ÁTOMO 926 CG HIS B 33 -12,366 -27,863 19,196 1,00 46,92 C ÁTOMO 927 ND1 HIS B 33 -11,430 -28,613 18,506 1,00 49,65 N ÁTOMO 928 CD2 HIS B 33 -13,240 -28,702 19,793 1,00 47,01 C ÁTOMO 929 CE1 HIS B 33 -11,742 -29,878 18,740 1,00 48,36 C ÁTOMO 930 NE2 HIS B 33 -12,830 -29,978 19,497 1,00 47,24 N ÁTOMO 931 N TRP B 34 -11,168 -23,625 17,944 1,00 45,71 N ÁTOMO 932 CA TRP B 34 -11,312 -22,185 17,728 1,00 44,73 C ÁTOMO 933 C TRP B 34 -12,417 -21,920 16,710 1,00 47,48 C ÁTOMO 934 O TRP B 34 -12,510 -22,632 15,703 1,00 46,46 O ÁTOMO 935 CB TRP B 34 -10,004 -21,565 17,235 1,00 45,07 C ÁTOMO 936 CG TRP B 34 -8,893 -21,604 18,238 1,00 47,99 C ÁTOMO 937 CD1 TRP B 34 -8,023 -22,631 18,461 1,00 52,28 C ÁTOMO 938 CD2 TRP B 34 -8,451 -20,517 19,059
271 / 500
1,00 49,06 C ÁTOMO 939 NE1 TRP B 34 -7,091 -22,266 19,408 1,00 53,74 N ÁTOMO 940 CE2 TRP B 34 -7,335 -20,974 19,797 1,00 55,33 C ÁTOMO 941 CE3 TRP B 34 -8,917 -19,212 19,277 1,00 49,76 C ÁTOMO 942 CZ2 TRP B 34 -6,675 -20,166 20,728 1,00 56,59 C ÁTOMO 943 CZ3 TRP B 34 -8,246 -18,404 20,181 1,00 53,00 C ÁTOMO 944 CH2 TRP B 34 -7,133 -18,877 20,887 1,00 55,99 C ÁTOMO 945 N TYR B 35 -13,254 -20,894 16,975 1,00 42,77 N ÁTOMO 946 CA TYR B 35 -14,364 -20,516 16,103 1,00 40,95 C ÁTOMO 947 C TYR B 35 -14,249 -19,067 15,695 1,00 44,85 C ÁTOMO 948 O TYR B 35 -13,894 -18,229 16,516 1,00 44,61 O ÁTOMO 949 CB TYR B 35 -15,717 -20,727 16,809 1,00 39,67 C ÁTOMO 950 CG TYR B 35 -15,913 -22,159 17,231 1,00 40,42 C ÁTOMO 951 CD1 TYR B 35 -16,385 -23,110 16,334 1,00 41,22 C ÁTOMO 952 CD2 TYR B 35 -15,507 -22,594 18,486 1,00 41,05 C
272 / 500
ÁTOMO 953 CE1 TYR B 35 -16,428 -24,458 16,668 1,00 41,70 C ÁTOMO 954 CE2 TYR B 35 -15,600 -23,932 18,850 1,00 41,03 C ÁTOMO 955 CZ TYR B 35 -16,067 -24,863 17,939 1,00 46,65 C ÁTOMO 956 OH TYR B 35 -16,164 -26,191 18,274 1,00 46,99 O ÁTOMO 957 N GLN B 36 -14,589 -18,767 14,439 1,00 41,80 N ÁTOMO 958 CA GLN B 36 -14,605 -17,397 13,930 1,00 41,65 C ÁTOMO 959 C GLN B 36 -16,048 -16,955 13,872 1,00 43,53 C ÁTOMO 960 O GLN B 36 -16,882 -17,731 13,413 1,00 42,02 O ÁTOMO 961 CB GLN B 36 -14,006 -17,316 12,516 1,00 43,16 C ÁTOMO 962 CG GLN B 36 -13,890 -15,873 11,994 1,00 46,31 C ÁTOMO 963 CD GLN B 36 -13,693 -15,826 10,500 1,00 54,64 C ÁTOMO 964 OE1 GLN B 36 -14,636 -16,029 9,731 1,00 47,51 O ÁTOMO 965 NE2 GLN B 36 -12,468 -15,577 10,046 1,00 43,33 N ÁTOMO 966 N GLN B 37 -16,342 -15,710 14,293 1,00 39,68 N ÁTOMO 967 CA GLN B 37 -17,684 -15,146 14,187
273 / 500
1,00 38,25 C ÁTOMO 968 C GLN B 37 -17,618 -13,721 13,644 1,00 43,10 C ÁTOMO 969 O GLN B 37 -16,907 -12,885 14,206 1,00 42,94 O ÁTOMO 970 CB GLN B 37 -18,438 -15,148 15,526 1,00 38,79 C ÁTOMO 971 CG GLN B 37 -19,927 -14,852 15,318 1,00 41,09 C ÁTOMO 972 CD GLN B 37 -20,759 -14,844 16,568 1,00 43,99 C ÁTOMO 973 OE1 GLN B 37 -20,293 -14,519 17,659 1,00 38,85 O ÁTOMO 974 NE2 GLN B 37 -22,047 -15,106 16,411 1,00 35,28 N ÁTOMO 975 N LYS B 38 -18,410 -13,433 12,592 1,00 39,87 N ÁTOMO 976 CA LYS B 38 -18,518 -12,090 12,009 1,00 39,92 C ÁTOMO 977 C LYS B 38 -19,883 -11,515 12,408 1,00 43,53 C ÁTOMO 978 O LYS B 38 -20,780 -12,304 12,713 1,00 40,65 O ÁTOMO 979 CB LYS B 38 -18,331 -12,142 10,484 1,00 42,03 C ÁTOMO 980 CG LYS B 38 -16,943 -12,663 10,102 1,00 46,18 C ÁTOMO 981 CD LYS B 38 -16,493 -12,203 8,731 1,00 50,59 C
274 / 500
ÁTOMO 982 CE LYS B 38 -15,021 -12,437 8,512 1,00 55,26 C ÁTOMO 983 NZ LYS B 38 -14,685 -12,470 7,065 1,00 61,75 N ÁTOMO 984 N PRO B 39 -20,043 -10,154 12,456 1,00 42,90 N ÁTOMO 985 CA PRO B 39 -21,298 -9,524 12,922 1,00 42,12 C ÁTOMO 986 C PRO B 39 -22,591 -10,034 12,267 1,00 44,27 C ÁTOMO 987 O PRO B 39 -22,654 -10,162 11,045 1,00 43,72 O ÁTOMO 988 CB PRO B 39 -21,072 -8,028 12,646 1,00 44,44 C ÁTOMO 989 CG PRO B 39 -19,604 -7,869 12,564 1,00 49,12 C ÁTOMO 990 CD PRO B 39 -19,107 -9,129 11,945 1,00 44,70 C ÁTOMO 991 N GLY B 40 -23,605 -10,365 13,100 1,00 40,97 N ÁTOMO 992 CA GLY B 40 -24,905 -10,868 12,646 1,00 39,89 C ÁTOMO 993 C GLY B 40 -24,868 -12,255 11,987 1,00 42,71 C ÁTOMO 994 O GLY B 40 -25,853 -12,642 11,357 1,00 43,22 O ÁTOMO 995 N GLN B 41 -23,761 -13,011 12,134 1,00 37,37 N ÁTOMO 996 CA GLN B 41 -23,636 -14,344 11,548
275 / 500
1,00 36,16 C ÁTOMO 997 C GLN B 41 -23,334 -15,355 12,642 1,00 36,54 C ÁTOMO 998 O GLN B 41 -22,759 -15,013 13,672 1,00 36,09 O ÁTOMO 999 CB GLN B 41 -22,513 -14,381 10,502 1,00 38,18 C ÁTOMO 1000 CG GLN B 41 -22,705 -13,413 9,344 1,00 52,04 C ÁTOMO 1001 CD GLN B 41 -21,473 -13,371 8,470 1,00 77,06 C ÁTOMO 1002 OE1 GLN B 41 -20,890 -14,409 8,134 1,00 76,18 O ÁTOMO 1003 NE2 GLN B 41 -21,050 -12,177 8,064 1,00 70,40 N ÁTOMO 1004 N ALA B 42 -23,691 -16,610 12,393 1,00 32,84 N ÁTOMO 1005 CA ALA B 42 -23,420 -17,710 13,315 1,00 31,84 C ÁTOMO 1006 C ALA B 42 -21,902 -17,981 13,369 1,00 35,92 C ÁTOMO 1007 O ALA B 42 -21,218 -17,679 12,384 1,00 35,98 O ÁTOMO 1008 CB ALA B 42 -24,142 -18,971 12,841 1,00 31,79 C ÁTOMO 1009 N PRO B 43 -21,372 -18,578 14,477 1,00 32,48 N ÁTOMO 1010 CA PRO B 43 -19,945 -18,949 14,502 1,00 33,86 C
276 / 500
ÁTOMO 1011 C PRO B 43 -19,633 -20,046 13,442 1,00 38,94 C ÁTOMO 1012 O PRO B 43 -20,540 -20,726 12,955 1,00 38,14 O ÁTOMO 1013 CB PRO B 43 -19,721 -19,477 15,931 1,00 35,40 C ÁTOMO 1014 CG PRO B 43 -20,847 -18,936 16,727 1,00 38,52 C ÁTOMO 1015 CD PRO B 43 -22,007 -18,816 15,789 1,00 32,73 C ÁTOMO 1016 N LYS B 44 -18,356 -20,181 13,086 1,00 36,90 N ÁTOMO 1017 CA LYS B 44 -17,843 -21,142 12,105 1,00 37,55 C ÁTOMO 1018 C LYS B 44 -16,636 -21,815 12,714 1,00 41,70 C ÁTOMO 1019 O LYS B 44 -15,783 -21,104 13,259 1,00 40,89 O ÁTOMO 1020 CB LYS B 44 -17,321 -20,391 10,853 1,00 42,52 C ÁTOMO 1021 CG LYS B 44 -18,255 -20,311 9,655 1,00 54,87 C ÁTOMO 1022 CD LYS B 44 -17,550 -19,585 8,497 1,00 57,24 C ÁTOMO 1023 CE LYS B 44 -18,292 -19,641 7,180 1,00 62,53 C ÁTOMO 1024 NZ LYS B 44 -19,476 -18,739 7,152 1,00 62,92 N ÁTOMO 1025 N ARG B 45 -16,496 -23,156 12,558
277 / 500
1,00 37,53 N ÁTOMO 1026 CA ARG B 45 -15,287 -23,856 13,001 1,00 37,89 C ÁTOMO 1027 C ARG B 45 -14,124 -23,303 12,160 1,00 43,62 C ÁTOMO 1028 O ARG B 45 -14,270 -23,152 10,947 1,00 42,49 O ÁTOMO 1029 CB ARG B 45 -15,439 -25,376 12,836 1,00 35,88 C ÁTOMO 1030 CG ARG B 45 -14,189 -26,180 13,215 1,00 38,81 C ÁTOMO 1031 CD ARG B 45 -14,300 -27,660 12,899 1,00 44,81 C ÁTOMO 1032 NE ARG B 45 -14,284 -27,916 11,454 1,00 49,62 N ÁTOMO 1033 CZ ARG B 45 -14,013 -29,087 10,877 1,00 57,98 C ÁTOMO 1034 NH1 ARG B 45 -13,730 -30,155 11,616 1,00 46,92 N ÁTOMO 1035 NH2 ARG B 45 -14,012 -29,196 9,553 1,00 41,99 N ÁTOMO 1036 N TRP B 46 -13,019 -22,914 12,817 1,00 43,32 N ÁTOMO 1037 CA TRP B 46 -11,867 -22,321 12,136 1,00 45,71 C ÁTOMO 1038 C TRP B 46 -10,631 -23,197 12,294 1,00 51,80 C ÁTOMO 1039 O TRP B 46 -10,094 -23,677 11,295 1,00 52,82 O
278 / 500
ÁTOMO 1040 CB TRP B 46 -11,630 -20,887 12,650 1,00 44,76 C ÁTOMO 1041 CG TRP B 46 -11,049 -20,002 11,603 1,00 47,19 C ÁTOMO 1042 CD1 TRP B 46 -9,741 -19,642 11,470 1,00 52,39 C ÁTOMO 1043 CD2 TRP B 46 -11,719 -19,516 10,435 1,00 46,66 C ÁTOMO 1044 NE1 TRP B 46 -9,579 -18,869 10,345 1,00 52,63 N ÁTOMO 1045 CE2 TRP B 46 -10,771 -18,793 9,678 1,00 52,22 C ÁTOMO 1046 CE3 TRP B 46 -13,036 -19,601 9,963 1,00 46,11 C ÁTOMO 1047 CZ2 TRP B 46 -11,093 -18,168 8,475 1,00 51,50 C ÁTOMO 1048 CZ3 TRP B 46 -13,364 -18,952 8,784 1,00 47,71 C ÁTOMO 1049 CH2 TRP B 46 -12,398 -18,246 8,053 1,00 50,27 C ÁTOMO 1050 N ILE B 47 -10,195 -23,423 13,537 1,00 48,59 N ÁTOMO 1051 CA ILE B 47 -9,077 -24,311 13,847 1,00 49,89 C ÁTOMO 1052 C ILE B 47 -9,625 -25,312 14,846 1,00 53,75 C ÁTOMO 1053 O ILE B 47 -10,351 -24,923 15,755 1,00 51,44 O ÁTOMO 1054 CB ILE B 47 -7,819 -23,574 14,389
279 / 500
1,00 54,90 C ÁTOMO 1055 CG1 ILE B 47 -7,425 -22,418 13,442 1,00 55,55 C ÁTOMO 1056 CG2 ILE B 47 -6,641 -24,564 14,588 1,00 57,33 C ÁTOMO 1057 CD1 ILE B 47 -6,154 -21,702 13,785 1,00 60,87 C ÁTOMO 1058 N TYR B 48 -9,314 -26,598 14,661 1,00 52,51 N ÁTOMO 1059 CA TYR B 48 -9,753 -27,659 15,568 1,00 51,57 C ÁTOMO 1060 C TYR B 48 -8,586 -28,584 15,856 1,00 55,31 C ÁTOMO 1061 O TYR B 48 -7,604 -28,578 15,116 1,00 55,78 O ÁTOMO 1062 CB TYR B 48 -10,966 -28,422 15,011 1,00 51,70 C ÁTOMO 1063 CG TYR B 48 -10,680 -29,256 13,781 1,00 55,49 C ÁTOMO 1064 CD1 TYR B 48 -10,538 -28,669 12,530 1,00 58,03 C ÁTOMO 1065 CD2 TYR B 48 -10,578 -30,642 13,867 1,00 56,79 C ÁTOMO 1066 CE1 TYR B 48 -10,249 -29,431 11,400 1,00 59,64 C ÁTOMO 1067 CE2 TYR B 48 -10,309 -31,417 12,741 1,00 58,73 C ÁTOMO 1068 CZ TYR B 48 -10,143 -30,808 11,507 1,00 66,61 C
280 / 500
ÁTOMO 1069 OH TYR B 48 -9,858 -31,552 10,383 1,00 69,66 O ÁTOMO 1070 N ASP B 49 -8,663 -29,323 16,971 1,00 51,22 N ÁTOMO 1071 CA ASP B 49 -7,619 -30,252 17,411 1,00 52,44 C ÁTOMO 1072 C ASP B 49 -6,282 -29,523 17,618 1,00 57,54 C ÁTOMO 1073 O ASP B 49 -5,219 -30,047 17,279 1,00 57,96 O ÁTOMO 1074 CB ASP B 49 -7,500 -31,454 16,434 1,00 54,46 C ÁTOMO 1075 CG ASP B 49 -8,690 -32,406 16,448 1,00 59,93 C ÁTOMO 1076 OD1 ASP B 49 -9,538 -32,292 17,359 1,00 57,16 O ÁTOMO 1077 OD2 ASP B 49 -8,763 -33,282 15,561 1,00 66,68 O ÁTOMO 1078 N THR B 50 -6,361 -28,279 18,153 1,00 54,10 N ÁTOMO 1079 CA THR B 50 -5,232 -27,382 18,429 1,00 56,18 C ÁTOMO 1080 C THR B 50 -4,659 -26,738 17,175 1,00 61,25 C ÁTOMO 1081 O THR B 50 -4,566 -25,518 17,142 1,00 60,88 O ÁTOMO 1082 CB THR B 50 -4,126 -28,075 19,260 1,00 62,52 C ÁTOMO 1083 OG1 THR B 50 -4,720 -28,630 20,430
281 / 500
1,00 62,24 O ÁTOMO 1084 CG2 THR B 50 -3,006 -27,126 19,665 1,00 59,52 C ÁTOMO 1085 N SER B 51 -4,217 -27,545 16,185 1,00 60,20 N ÁTOMO 1086 CA SER B 51 -3,523 -27,087 14,978 1,00 61,75 C ÁTOMO 1087 C SER B 51 -4,168 -27,443 13,624 1,00 65,82 C ÁTOMO 1088 O SER B 51 -3,609 -27,037 12,607 1,00 68,03 O ÁTOMO 1089 CB SER B 51 -2,103 -27,651 14,998 1,00 66,64 C ÁTOMO 1090 OG SER B 51 -2,114 -29,070 14,985 1,00 71,98 O ÁTOMO 1091 N LYS B 52 -5,289 -28,194 13,568 1,00 59,53 N ÁTOMO 1092 CA LYS B 52 -5,870 -28,542 12,264 1,00 58,69 C ÁTOMO 1093 C LYS B 52 -6,749 -27,413 11,740 1,00 63,24 C ÁTOMO 1094 O LYS B 52 -7,645 -26,962 12,448 1,00 61,69 O ÁTOMO 1095 CB LYS B 52 -6,664 -29,858 12,312 1,00 58,90 C ÁTOMO 1096 CG LYS B 52 -5,853 -31,056 12,784 1,00 67,94 C ÁTOMO 1097 CD LYS B 52 -6,698 -32,319 12,753 1,00 73,07 C
282 / 500
ÁTOMO 1098 CE LYS B 52 -6,055 -33,486 13,455 1,00 79,98 C ÁTOMO 1099 NZ LYS B 52 -7,006 -34,620 13,605 1,00 87,87 N ÁTOMO 1100 N LEU B 53 -6,516 -26,974 10,495 1,00 62,00 N ÁTOMO 1101 CA LEU B 53 -7,309 -25,909 9,878 1,00 61,40 C ÁTOMO 1102 C LEU B 53 -8,542 -26,506 9,203 1,00 64,71 C ÁTOMO 1103 O LEU B 53 -8,455 -27,582 8,605 1,00 65,02 O ÁTOMO 1104 CB LEU B 53 -6,482 -25,145 8,830 1,00 63,57 C ÁTOMO 1105 CG LEU B 53 -5,140 -24,583 9,275 1,00 70,86 C ÁTOMO 1106 CD1 LEU B 53 -4,452 -23,882 8,121 1,00 72,90 C ÁTOMO 1107 CD2 LEU B 53 -5,298 -23,627 10,446 1,00 72,79 C ÁTOMO 1108 N ALA B 54 -9,689 -25,810 9,284 1,00 59,69 N ÁTOMO 1109 CA ALA B 54 -10,917 -26,261 8,621 1,00 58,17 C ÁTOMO 1110 C ALA B 54 -10,790 -26,015 7,104 1,00 64,70 C ÁTOMO 1111 O ALA B 54 -9,942 -25,221 6,684 1,00 64,60 O ÁTOMO 1112 CB ALA B 54 -12,119 -25,517 9,173
283 / 500
1,00 56,50 C ÁTOMO 1113 N SER B 55 -11,607 -26,702 6,285 1,00 62,64 N ÁTOMO 1114 CA SER B 55 -11,539 -26,554 4,822 1,00 64,02 C ÁTOMO 1115 C SER B 55 -11,875 -25,116 4,396 1,00 68,19 C ÁTOMO 1116 O SER B 55 -12,873 -24,546 4,854 1,00 66,10 O ÁTOMO 1117 CB SER B 55 -12,466 -27,547 4,127 1,00 67,64 C ÁTOMO 1118 OG SER B 55 -12,311 -27,509 2,717 1,00 78,36 O ÁTOMO 1119 N GLY B 56 -11,001 -24,520 3,565 1,00 66,16 N ÁTOMO 1120 CA GLY B 56 -11,144 -23,146 3,100 1,00 65,31 C ÁTOMO 1121 C GLY B 56 -10,328 -22,147 3,935 1,00 67,72 C ÁTOMO 1122 O GLY B 56 -10,112 -21,031 3,461 1,00 68,58 O ÁTOMO 1123 N VAL B 57 -9,859 -22,529 5,153 1,00 61,01 N ÁTOMO 1124 CA VAL B 57 -9,096 -21,625 6,021 1,00 59,84 C ÁTOMO 1125 C VAL B 57 -7,686 -21,461 5,431 1,00 65,21 C ÁTOMO 1126 O VAL B 57 -6,979 -22,458 5,339 1,00 65,74 O
284 / 500
ÁTOMO 1127 CB VAL B 57 -9,067 -22,123 7,490 1,00 61,18 C ÁTOMO 1128 CG1 VAL B 57 -8,169 -21,243 8,361 1,00 61,69 C ÁTOMO 1129 CG2 VAL B 57 -10,480 -22,183 8,063 1,00 57,87 C ÁTOMO 1130 N PRO B 58 -7,278 -20,227 5,021 1,00 63,08 N ÁTOMO 1131 CA PRO B 58 -5,952 -20,011 4,412 1,00 65,68 C ÁTOMO 1132 C PRO B 58 -4,745 -20,491 5,234 1,00 70,54 C ÁTOMO 1133 O PRO B 58 -4,815 -20,562 6,460 1,00 68,54 O ÁTOMO 1134 CB PRO B 58 -5,914 -18,495 4,205 1,00 67,57 C ÁTOMO 1135 CG PRO B 58 -7,318 -18,108 4,068 1,00 69,05 C ÁTOMO 1136 CD PRO B 58 -8,033 -18,957 5,058 1,00 62,40 C ÁTOMO 1137 N ALA B 59 -3,632 -20,796 4,535 1,00 70,63 N ÁTOMO 1138 CA ALA B 59 -2,378 -21,291 5,132 1,00 73,06 C ÁTOMO 1139 C ALA B 59 -1,738 -20,325 6,141 1,00 76,94 C ÁTOMO 1140 O ALA B 59 -0,988 -20,775 7,012 1,00 77,91 O ÁTOMO 1141 CB ALA B 59 -1,371 -21,620 4,035
285 / 500
1,00 77,06 C ÁTOMO 1142 N ARG B 60 -2,010 -19,005 6,013 1,00 71,54 N ÁTOMO 1143 CA ARG B 60 -1,493 -17,995 6,944 1,00 71,68 C ÁTOMO 1144 C ARG B 60 -1,978 -18,201 8,384 1,00 73,05 C ÁTOMO 1145 O ARG B 60 -1,354 -17,669 9,298 1,00 74,05 O ÁTOMO 1146 CB ARG B 60 -1,822 -16,567 6,472 1,00 71,21 C ÁTOMO 1147 CG ARG B 60 -3,305 -16,208 6,461 1,00 74,34 C ÁTOMO 1148 CD ARG B 60 -3,505 -14,781 6,006 1,00 78,85 C ÁTOMO 1149 NE ARG B 60 -4,898 -14,493 5,674 1,00 77,99 N ÁTOMO 1150 CZ ARG B 60 -5,524 -14,853 4,555 1,00 87,93 C ÁTOMO 1151 NH1 ARG B 60 -4,881 -15,533 3,608 1,00 76,36 N ÁTOMO 1152 NH2 ARG B 60 -6,800 -14,533 4,370 1,00 67,82 N ÁTOMO 1153 N PHE B 61 -3,088 -18,948 8,588 1,00 66,10 N ÁTOMO 1154 CA PHE B 61 -3,597 -19,258 9,921 1,00 64,28 C ÁTOMO 1155 C PHE B 61 -2,885 -20,476 10,488 1,00 69,61 C
286 / 500
ÁTOMO 1156 O PHE B 61 -2,547 -21,396 9,745 1,00 70,31 O ÁTOMO 1157 CB PHE B 61 -5,106 -19,540 9,894 1,00 62,73 C ÁTOMO 1158 CG PHE B 61 -5,943 -18,297 9,759 1,00 62,60 C ÁTOMO 1159 CD1 PHE B 61 -6,368 -17,604 10,883 1,00 64,47 C ÁTOMO 1160 CD2 PHE B 61 -6,301 -17,815 8,508 1,00 64,32 C ÁTOMO 1161 CE1 PHE B 61 -7,151 -16,457 10,758 1,00 64,38 C ÁTOMO 1162 CE2 PHE B 61 -7,079 -16,670 8,384 1,00 65,84 C ÁTOMO 1163 CZ PHE B 61 -7,497 -15,994 9,509 1,00 63,15 C ÁTOMO 1164 N SER B 62 -2,678 -20,487 11,806 1,00 66,32 N ÁTOMO 1165 CA SER B 62 -2,061 -21,614 12,499 1,00 67,24 C ÁTOMO 1166 C SER B 62 -2,434 -21,592 13,972 1,00 69,68 C ÁTOMO 1167 O SER B 62 -2,704 -20,526 14,521 1,00 69,05 O ÁTOMO 1168 CB SER B 62 -0,542 -21,602 12,332 1,00 74,31 C ÁTOMO 1169 OG SER B 62 0,052 -20,447 12,904 1,00 85,34 O ÁTOMO 1170 N GLY B 63 -2,459 -22,771 14,602
287 / 500
1,00 65,57 N ÁTOMO 1171 CA GLY B 63 -2,791 -22,909 16,014 1,00 64,13 C ÁTOMO 1172 C GLY B 63 -1,791 -23,831 16,702 1,00 70,06 C ÁTOMO 1173 O GLY B 63 -1,291 -24,772 16,088 1,00 70,03 O ÁTOMO 1174 N SER B 64 -1,483 -23,533 17,969 1,00 67,66 N ÁTOMO 1175 CA SER B 64 -0,557 -24,305 18,792 1,00 69,46 C ÁTOMO 1176 C SER B 64 -0,968 -24,184 20,254 1,00 72,46 C ÁTOMO 1177 O SER B 64 -1,911 -23,456 20,567 1,00 70,44 O ÁTOMO 1178 CB SER B 64 0,875 -23,801 18,600 1,00 77,56 C ÁTOMO 1179 OG SER B 64 1,076 -22,504 19,141 1,00 86,08 O ÁTOMO 1180 N GLY B 65 -0,266 -24,887 21,146 1,00 71,07 N ÁTOMO 1181 CA GLY B 65 -0,564 -24,838 22,572 1,00 70,85 C ÁTOMO 1182 C GLY B 65 -0,349 -26,161 23,270 1,00 75,44 C ÁTOMO 1183 O GLY B 65 -0,241 -27,212 22,635 1,00 74,06 O ÁTOMO 1184 N SER B 66 -0,318 -26,100 24,595 1,00 74,55 N
288 / 500
ÁTOMO 1185 CA SER B 66 -0,084 -27,265 25,435 1,00 76,47 C ÁTOMO 1186 C SER B 66 -0,573 -26,987 26,858 1,00 81,99 C ÁTOMO 1187 O SER B 66 -0,439 -25,863 27,346 1,00 83,12 O ÁTOMO 1188 CB SER B 66 1,412 -27,586 25,451 1,00 83,75 C ÁTOMO 1189 OG SER B 66 1,732 -28,667 26,311 1,00 94,88 O ÁTOMO 1190 N GLY B 67 -1,130 -28,014 27,516 1,00 77,57 N ÁTOMO 1191 CA GLY B 67 -1,587 -27,938 28,901 1,00 77,30 C ÁTOMO 1192 C GLY B 67 -2,581 -26,821 29,210 1,00 78,60 C ÁTOMO 1193 O GLY B 67 -3,778 -27,002 29,010 1,00 74,79 O ÁTOMO 1194 N THR B 68 -2,084 -25,682 29,723 1,00 77,44 N ÁTOMO 1195 CA THR B 68 -2,912 -24,563 30,180 1,00 76,28 C ÁTOMO 1196 C THR B 68 -2,919 -23,336 29,241 1,00 79,65 C ÁTOMO 1197 O THR B 68 -3,811 -22,505 29,399 1,00 77,30 O ÁTOMO 1198 CB THR B 68 -2,471 -24,196 31,623 1,00 89,54 C ÁTOMO 1199 OG1 THR B 68 -3,619 -23,956 32,434
289 / 500
1,00 89,46 O ÁTOMO 1200 CG2 THR B 68 -1,510 -23,008 31,695 1,00 91,77 C ÁTOMO 1201 N ASP B 69 -1,945 -23,192 28,312 1,00 77,83 N ÁTOMO 1202 CA ASP B 69 -1,855 -22,026 27,418 1,00 77,02 C ÁTOMO 1203 C ASP B 69 -1,973 -22,433 25,949 1,00 78,50 C ÁTOMO 1204 O ASP B 69 -1,252 -23,329 25,511 1,00 80,10 O ÁTOMO 1205 CB ASP B 69 -0,532 -21,282 27,653 1,00 82,57 C ÁTOMO 1206 CG ASP B 69 -0,404 -20,722 29,054 1,00 96,01 C ÁTOMO 1207 OD1 ASP B 69 -1,224 -19,854 29,423 1,00 95,53 O ÁTOMO 1208 OD2 ASP B 69 0,510 -21,157 29,785 1,00106,12 O ÁTOMO 1209 N TYR B 70 -2,890 -21,780 25,197 1,00 70,97 N ÁTOMO 1210 CA TYR B 70 -3,147 -22,053 23,777 1,00 68,56 C ÁTOMO 1211 C TYR B 70 -3,176 -20,765 22,956 1,00 73,46 C ÁTOMO 1212 O TYR B 70 -3,391 -19,688 23,517 1,00 73,56 O ÁTOMO 1213 CB TYR B 70 -4,463 -22,830 23,619 1,00 65,52 C
290 / 500
ÁTOMO 1214 CG TYR B 70 -4,297 -24,297 23,937 1,00 65,72 C ÁTOMO 1215 CD1 TYR B 70 -4,220 -24,739 25,252 1,00 67,72 C ÁTOMO 1216 CD2 TYR B 70 -4,123 -25,232 22,926 1,00 65,72 C ÁTOMO 1217 CE1 TYR B 70 -3,976 -26,073 25,551 1,00 67,27 C ÁTOMO 1218 CE2 TYR B 70 -3,886 -26,573 23,214 1,00 66,49 C ÁTOMO 1219 CZ TYR B 70 -3,828 -26,993 24,531 1,00 72,77 C ÁTOMO 1220 OH TYR B 70 -3,617 -28,316 24,842 1,00 73,72 O ÁTOMO 1221 N SER B 71 -2,924 -20,868 21,632 1,00 70,12 N ÁTOMO 1222 CA SER B 71 -2,878 -19,692 20,758 1,00 70,18 C ÁTOMO 1223 C SER B 71 -3,355 -19,946 19,329 1,00 71,24 C ÁTOMO 1224 O SER B 71 -3,308 -21,073 18,841 1,00 69,77 O ÁTOMO 1225 CB SER B 71 -1,452 -19,147 20,684 1,00 77,69 C ÁTOMO 1226 OG SER B 71 -0,894 -18,886 21,961 1,00 90,01 O ÁTOMO 1227 N LEU B 72 -3,774 -18,857 18,656 1,00 66,31 N ÁTOMO 1228 CA LEU B 72 -4,166 -18,827 17,245
291 / 500
1,00 64,79 C ÁTOMO 1229 C LEU B 72 -3,331 -17,692 16,640 1,00 70,72 C ÁTOMO 1230 O LEU B 72 -3,393 -16,572 17,149 1,00 71,03 O ÁTOMO 1231 CB LEU B 72 -5,676 -18,560 17,090 1,00 61,72 C ÁTOMO 1232 CG LEU B 72 -6,245 -18,564 15,651 1,00 64,98 C ÁTOMO 1233 CD1 LEU B 72 -7,662 -19,108 15,623 1,00 61,85 C ÁTOMO 1234 CD2 LEU B 72 -6,256 -17,157 15,027 1,00 66,99 C ÁTOMO 1235 N THR B 73 -2,517 -17,984 15,603 1,00 68,65 N ÁTOMO 1236 CA THR B 73 -1,624 -16,999 14,978 1,00 70,53 C ÁTOMO 1237 C THR B 73 -1,968 -16,754 13,501 1,00 73,74 C ÁTOMO 1238 O THR B 73 -2,367 -17,680 12,800 1,00 72,13 O ÁTOMO 1239 CB THR B 73 -0,162 -17,471 15,160 1,00 79,88 C ÁTOMO 1240 OG1 THR B 73 0,157 -17,433 16,549 1,00 81,62 O ÁTOMO 1241 CG2 THR B 73 0,857 -16,624 14,394 1,00 79,28 C ÁTOMO 1242 N ILE B 74 -1,778 -15,505 13,030 1,00 71,50 N
292 / 500
ÁTOMO 1243 CA ILE B 74 -1,980 -15,113 11,628 1,00 71,40 C ÁTOMO 1244 C ILE B 74 -0,664 -14,464 11,194 1,00 79,41 C ÁTOMO 1245 O ILE B 74 -0,290 -13,440 11,761 1,00 79,98 O ÁTOMO 1246 CB ILE B 74 -3,197 -14,168 11,438 1,00 71,75 C ÁTOMO 1247 CG1 ILE B 74 -4,418 -14,696 12,228 1,00 68,88 C ÁTOMO 1248 CG2 ILE B 74 -3,526 -14,020 9,941 1,00 71,80 C ÁTOMO 1249 CD1 ILE B 74 -5,588 -13,837 12,206 1,00 73,61 C ÁTOMO 1250 N SER B 75 0,071 -15,090 10,252 1,00 78,64 N ÁTOMO 1251 CA SER B 75 1,388 -14,603 9,817 1,00 82,42 C ÁTOMO 1252 C SER B 75 1,347 -13,211 9,178 1,00 87,14 C ÁTOMO 1253 O SER B 75 2,162 -12,356 9,533 1,00 88,95 O ÁTOMO 1254 CB SER B 75 2,051 -15,607 8,875 1,00 87,62 C ÁTOMO 1255 OG SER B 75 1,248 -15,869 7,737 1,00 94,12 O ÁTOMO 1256 N SER B 76 0,401 -12,988 8,252 1,00 82,09 N ÁTOMO 1257 CA SER B 76 0,217 -11,700 7,567
293 / 500
1,00 82,20 C ÁTOMO 1258 C SER B 76 -1,282 -11,441 7,393 1,00 82,22 C ÁTOMO 1259 O SER B 76 -1,908 -12,063 6,537 1,00 80,72 O ÁTOMO 1260 CB SER B 76 0,920 -11,708 6,211 1,00 88,43 C ÁTOMO 1261 OG SER B 76 0,681 -10,512 5,486 1,00 96,36 O ÁTOMO 1262 N LEU B 77 -1,850 -10,528 8,209 1,00 76,84 N ÁTOMO 1263 CA LEU B 77 -3,283 -10,196 8,203 1,00 72,92 C ÁTOMO 1264 C LEU B 77 -3,815 -9,691 6,857 1,00 77,19 C ÁTOMO 1265 O LEU B 77 -3,216 -8,799 6,259 1,00 78,61 O ÁTOMO 1266 CB LEU B 77 -3,589 -9,118 9,261 1,00 72,06 C ÁTOMO 1267 CG LEU B 77 -3,456 -9,526 10,722 1,00 76,55 C ÁTOMO 1268 CD1 LEU B 77 -3,193 -8,312 11,600 1,00 77,54 C ÁTOMO 1269 CD2 LEU B 77 -4,691 -10,251 11,198 1,00 75,30 C ÁTOMO 1270 N GLU B 78 -4,972 -10,225 6,424 1,00 72,28 N ÁTOMO 1271 CA GLU B 78 -5,711 -9,801 5,229 1,00 71,21 C
294 / 500
ÁTOMO 1272 C GLU B 78 -7,040 -9,187 5,736 1,00 70,61 C ÁTOMO 1273 O GLU B 78 -7,466 -9,537 6,843 1,00 68,30 O ÁTOMO 1274 CB GLU B 78 -6,026 -10,996 4,312 1,00 72,49 C ÁTOMO 1275 CG GLU B 78 -4,812 -11,635 3,656 1,00 87,48 C ÁTOMO 1276 CD GLU B 78 -4,022 -10,763 2,703 1,00112,73 C ÁTOMO 1277 OE1 GLU B 78 -4,620 -9,856 2,080 1,00110,91 O ÁTOMO 1278 OE2 GLU B 78 -2,805 -11,016 2,551 1,00112,15 O ÁTOMO 1279 N PRO B 79 -7,706 -8,302 4,944 1,00 65,02 N ÁTOMO 1280 CA PRO B 79 -8,970 -7,679 5,373 1,00 61,28 C ÁTOMO 1281 C PRO B 79 -10,086 -8,645 5,834 1,00 60,72 C ÁTOMO 1282 O PRO B 79 -10,835 -8,311 6,751 1,00 58,19 O ÁTOMO 1283 CB PRO B 79 -9,396 -6,879 4,140 1,00 62,94 C ÁTOMO 1284 CG PRO B 79 -8,135 -6,506 3,486 1,00 70,44 C ÁTOMO 1285 CD PRO B 79 -7,172 -7,637 3,736 1,00 68,02 C ÁTOMO 1286 N GLU B 80 -10,194 -9,824 5,203
295 / 500
1,00 56,30 N ÁTOMO 1287 CA GLU B 80 -11,226 -10,813 5,534 1,00 53,71 C ÁTOMO 1288 C GLU B 80 -11,016 -11,525 6,900 1,00 56,40 C ÁTOMO 1289 O GLU B 80 -11,966 -12,110 7,424 1,00 53,35 O ÁTOMO 1290 CB GLU B 80 -11,337 -11,857 4,403 1,00 55,59 C ÁTOMO 1291 CG GLU B 80 -10,193 -12,863 4,378 1,00 68,69 C ÁTOMO 1292 CD GLU B 80 -9,827 -13,412 3,013 1,00 97,64 C ÁTOMO 1293 OE1 GLU B 80 -8,829 -12,932 2,427 1,00100,61 O ÁTOMO 1294 OE2 GLU B 80 -10,516 -14,347 2,544 1,00 91,35 O ÁTOMO 1295 N ASP B 81 -9,797 -11,485 7,464 1,00 54,10 N ÁTOMO 1296 CA ASP B 81 -9,474 -12,158 8,733 1,00 53,36 C ÁTOMO 1297 C ASP B 81 -10,008 -11,455 9,967 1,00 56,43 C ÁTOMO 1298 O ASP B 81 -10,130 -12,090 11,016 1,00 55,62 O ÁTOMO 1299 CB ASP B 81 -7,949 -12,273 8,904 1,00 57,40 C ÁTOMO 1300 CG ASP B 81 -7,242 -12,953 7,763 1,00 64,20 C
296 / 500
ÁTOMO 1301 OD1 ASP B 81 -7,891 -13,751 7,049 1,00 63,36 O ÁTOMO 1302 OD2 ASP B 81 -6,048 -12,665 7,554 1,00 71,18 O ÁTOMO 1303 N PHE B 82 -10,268 -10,151 9,878 1,00 52,95 N ÁTOMO 1304 CA PHE B 82 -10,706 -9,365 11,027 1,00 51,87 C ÁTOMO 1305 C PHE B 82 -12,131 -9,787 11,419 1,00 52,04 C ÁTOMO 1306 O PHE B 82 -13,036 -9,733 10,591 1,00 50,63 O ÁTOMO 1307 CB PHE B 82 -10,553 -7,861 10,735 1,00 54,14 C ÁTOMO 1308 CG PHE B 82 -9,102 -7,462 10,536 1,00 58,34 C ÁTOMO 1309 CD1 PHE B 82 -8,307 -7,110 11,615 1,00 62,40 C ÁTOMO 1310 CD2 PHE B 82 -8,537 -7,435 9,269 1,00 61,95 C ÁTOMO 1311 CE1 PHE B 82 -6,971 -6,754 11,435 1,00 65,79 C ÁTOMO 1312 CE2 PHE B 82 -7,199 -7,073 9,089 1,00 67,27 C ÁTOMO 1313 CZ PHE B 82 -6,428 -6,725 10,173 1,00 66,48 C ÁTOMO 1314 N ALA B 83 -12,285 -10,316 12,648 1,00 46,96 N ÁTOMO 1315 CA ALA B 83 -13,532 -10,898 13,174
297 / 500
1,00 44,03 C ÁTOMO 1316 C ALA B 83 -13,345 -11,212 14,673 1,00 47,01 C ÁTOMO 1317 O ALA B 83 -12,292 -10,889 15,225 1,00 48,83 O ÁTOMO 1318 CB ALA B 83 -13,837 -12,202 12,423 1,00 43,57 C ÁTOMO 1319 N VAL B 84 -14,340 -11,848 15,324 1,00 41,13 N ÁTOMO 1320 CA VAL B 84 -14,216 -12,290 16,722 1,00 40,65 C ÁTOMO 1321 C VAL B 84 -13,793 -13,754 16,685 1,00 44,54 C ÁTOMO 1322 O VAL B 84 -14,269 -14,500 15,831 1,00 43,86 O ÁTOMO 1323 CB VAL B 84 -15,510 -12,086 17,558 1,00 41,88 C ÁTOMO 1324 CG1 VAL B 84 -15,368 -12,686 18,961 1,00 41,89 C ÁTOMO 1325 CG2 VAL B 84 -15,860 -10,604 17,656 1,00 40,84 C ÁTOMO 1326 N TYR B 85 -12,893 -14,159 17,588 1,00 42,41 N ÁTOMO 1327 CA TYR B 85 -12,420 -15,541 17,671 1,00 42,97 C ÁTOMO 1328 C TYR B 85 -12,637 -16,085 19,063 1,00 48,03 C ÁTOMO 1329 O TYR B 85 -12,177 -15,468 20,020 1,00 49,51 O
298 / 500
ÁTOMO 1330 CB TYR B 85 -10,939 -15,628 17,307 1,00 45,67 C ÁTOMO 1331 CG TYR B 85 -10,707 -15,379 15,838 1,00 45,85 C ÁTOMO 1332 CD1 TYR B 85 -10,551 -14,087 15,348 1,00 47,32 C ÁTOMO 1333 CD2 TYR B 85 -10,708 -16,426 14,926 1,00 45,53 C ÁTOMO 1334 CE1 TYR B 85 -10,359 -13,848 13,993 1,00 47,60 C ÁTOMO 1335 CE2 TYR B 85 -10,518 -16,201 13,567 1,00 46,72 C ÁTOMO 1336 CZ TYR B 85 -10,336 -14,909 13,102 1,00 53,44 C ÁTOMO 1337 OH TYR B 85 -10,188 -14,702 11,751 1,00 51,93 O ÁTOMO 1338 N TYR B 86 -13,323 -17,236 19,182 1,00 43,51 N ÁTOMO 1339 CA TYR B 86 -13,582 -17,888 20,470 1,00 43,19 C ÁTOMO 1340 C TYR B 86 -12,844 -19,192 20,544 1,00 47,49 C ÁTOMO 1341 O TYR B 86 -12,954 -19,977 19,609 1,00 45,45 O ÁTOMO 1342 CB TYR B 86 -15,072 -18,211 20,631 1,00 41,61 C ÁTOMO 1343 CG TYR B 86 -15,977 -17,004 20,629 1,00 40,75 C ÁTOMO 1344 CD1 TYR B 86 -16,332 -16,376 21,813
299 / 500
1,00 42,52 C ÁTOMO 1345 CD2 TYR B 86 -16,554 -16,546 19,450 1,00 39,56 C ÁTOMO 1346 CE1 TYR B 86 -17,226 -15,309 21,827 1,00 43,46 C ÁTOMO 1347 CE2 TYR B 86 -17,443 -15,475 19,448 1,00 39,13 C ÁTOMO 1348 CZ TYR B 86 -17,763 -14,845 20,638 1,00 46,08 C ÁTOMO 1349 OH TYR B 86 -18,644 -13,793 20,669 1,00 45,53 O ÁTOMO 1350 N CYS B 87 -12,158 -19,466 21,668 1,00 47,69 N ÁTOMO 1351 CA CYS B 87 -11,518 -20,760 21,891 1,00 48,62 C ÁTOMO 1352 C CYS B 87 -12,560 -21,608 22,630 1,00 49,15 C ÁTOMO 1353 O CYS B 87 -13,528 -21,055 23,154 1,00 46,52 O ÁTOMO 1354 CB CYS B 87 -10,190 -20,652 22,652 1,00 52,40 C ÁTOMO 1355 SG CYS B 87 -10,286 -19,868 24,288 1,00 57,94 S ÁTOMO 1356 N GLN B 88 -12,424 -22,936 22,593 1,00 45,22 N ÁTOMO 1357 CA GLN B 88 -13,372 -23,849 23,241 1,00 42,45 C ÁTOMO 1358 C GLN B 88 -12,691 -25,152 23,625 1,00 46,38 C
300 / 500
ÁTOMO 1359 O GLN B 88 -11,897 -25,674 22,843 1,00 47,02 O ÁTOMO 1360 CB GLN B 88 -14,529 -24,155 22,280 1,00 40,68 C ÁTOMO 1361 CG GLN B 88 -15,647 -25,055 22,846 1,00 42,62 C ÁTOMO 1362 CD GLN B 88 -15,772 -26,410 22,162 1,00 51,06 C ÁTOMO 1363 OE1 GLN B 88 -15,816 -26,515 20,933 1,00 42,02 O ÁTOMO 1364 NE2 GLN B 88 -15,948 -27,479 22,927 1,00 41,44 N ÁTOMO 1365 N GLN B 89 -13,041 -25,708 24,797 1,00 42,41 N ÁTOMO 1366 CA GLN B 89 -12,504 -26,993 25,248 1,00 42,78 C ÁTOMO 1367 C GLN B 89 -13,621 -28,045 25,323 1,00 45,27 C ÁTOMO 1368 O GLN B 89 -14,790 -27,709 25,533 1,00 42,06 O ÁTOMO 1369 CB GLN B 89 -11,731 -26,856 26,583 1,00 45,86 C ÁTOMO 1370 CG GLN B 89 -12,566 -26,473 27,816 1,00 48,91 C ÁTOMO 1371 CD GLN B 89 -13,360 -27,612 28,428 1,00 58,10 C ÁTOMO 1372 OE1 GLN B 89 -12,980 -28,785 28,353 1,00 50,12 O ÁTOMO 1373 NE2 GLN B 89 -14,473 -27,295 29,079
301 / 500
1,00 46,79 N ÁTOMO 1374 N TRP B 90 -13,240 -29,317 25,149 1,00 43,48 N ÁTOMO 1375 CA TRP B 90 -14,143 -30,472 25,206 1,00 42,34 C ÁTOMO 1376 C TRP B 90 -13,533 -31,605 26,079 1,00 48,13 C ÁTOMO 1377 O TRP B 90 -13,926 -32,759 25,939 1,00 47,04 O ÁTOMO 1378 CB TRP B 90 -14,479 -30,972 23,778 1,00 39,82 C ÁTOMO 1379 CG TRP B 90 -13,291 -31,452 22,996 1,00 42,22 C ÁTOMO 1380 CD1 TRP B 90 -12,282 -30,690 22,486 1,00 46,21 C ÁTOMO 1381 CD2 TRP B 90 -12,984 -32,808 22,650 1,00 42,49 C ÁTOMO 1382 NE1 TRP B 90 -11,355 -31,487 21,862 1,00 46,65 N ÁTOMO 1383 CE2 TRP B 90 -11,761 -32,794 21,946 1,00 47,73 C ÁTOMO 1384 CE3 TRP B 90 -13,644 -34,033 22,834 1,00 43,26 C ÁTOMO 1385 CZ2 TRP B 90 -11,184 -33,957 21,427 1,00 47,77 C ÁTOMO 1386 CZ3 TRP B 90 -13,064 -35,187 22,333 1,00 45,41 C ÁTOMO 1387 CH2 TRP B 90 -11,848 -35,143 21,641 1,00 47,43 C
302 / 500
ÁTOMO 1388 N ASN B 91 -12,614 -31,261 27,004 1,00 47,97 N ÁTOMO 1389 CA ASN B 91 -11,971 -32,226 27,903 1,00 50,26 C ÁTOMO 1390 C ASN B 91 -12,892 -32,662 29,018 1,00 54,80 C ÁTOMO 1391 O ASN B 91 -12,780 -33,797 29,489 1,00 53,62 O ÁTOMO 1392 CB ASN B 91 -10,692 -31,638 28,519 1,00 54,00 C ÁTOMO 1393 CG ASN B 91 -9,549 -31,598 27,549 1,00 78,58 C ÁTOMO 1394 OD1 ASN B 91 -9,320 -30,601 26,869 1,00 75,71 O ÁTOMO 1395 ND2 ASN B 91 -8,840 -32,704 27,422 1,00 73,65 N ÁTOMO 1396 O SER B 92 -15,973 -30,214 29,820 1,00 53,47 O ÁTOMO 1397 N SER B 92 -13,750 -31,747 29,497 1,00 52,61 N ÁTOMO 1398 CA SER B 92 -14,671 -32,051 30,590 1,00 52,75 C ÁTOMO 1399 C SER B 92 -15,962 -31,270 30,446 1,00 53,91 C ÁTOMO 1400 CB SER B 92 -14,018 -31,722 31,930 1,00 58,69 C ÁTOMO 1401 OG SER B 92 -13,721 -30,337 32,038 1,00 67,43 O ÁTOMO 1402 N TYR B 93 -17,048 -31,801 31,019
303 / 500
1,00 49,07 N ÁTOMO 1403 CA TYR B 93 -18,350 -31,144 31,006 1,00 47,17 C ÁTOMO 1404 C TYR B 93 -18,430 -30,177 32,203 1,00 50,89 C ÁTOMO 1405 O TYR B 93 -17,932 -30,514 33,281 1,00 51,68 O ÁTOMO 1406 CB TYR B 93 -19,496 -32,162 31,091 1,00 47,60 C ÁTOMO 1407 CG TYR B 93 -19,624 -33,024 29,857 1,00 48,53 C ÁTOMO 1408 CD1 TYR B 93 -19,987 -32,475 28,633 1,00 48,47 C ÁTOMO 1409 CD2 TYR B 93 -19,428 -34,399 29,922 1,00 50,28 C ÁTOMO 1410 CE1 TYR B 93 -20,128 -33,267 27,495 1,00 48,36 C ÁTOMO 1411 CE2 TYR B 93 -19,573 -35,205 28,793 1,00 50,27 C ÁTOMO 1412 CZ TYR B 93 -19,929 -34,636 27,580 1,00 52,39 C ÁTOMO 1413 OH TYR B 93 -20,053 -35,409 26,449 1,00 47,02 O ÁTOMO 1414 N PRO B 94 -19,053 -28,994 32,034 1,00 45,75 N ÁTOMO 1415 CA PRO B 94 -19,670 -28,475 30,807 1,00 43,75 C ÁTOMO 1416 C PRO B 94 -18,618 -27,971 29,813 1,00 46,73 C
304 / 500
ÁTOMO 1417 O PRO B 94 -17,566 -27,486 30,232 1,00 47,63 O ÁTOMO 1418 CB PRO B 94 -20,561 -27,334 31,324 1,00 45,47 C ÁTOMO 1419 CG PRO B 94 -19,843 -26,838 32,548 1,00 51,32 C ÁTOMO 1420 CD PRO B 94 -19,241 -28,071 33,172 1,00 47,46 C ÁTOMO 1421 N PHE B 95 -18,877 -28,116 28,496 1,00 40,21 N ÁTOMO 1422 CA PHE B 95 -17,969 -27,570 27,485 1,00 39,48 C ÁTOMO 1423 C PHE B 95 -18,007 -26,068 27,663 1,00 43,23 C ÁTOMO 1424 O PHE B 95 -19,069 -25,524 27,959 1,00 41,42 O ÁTOMO 1425 CB PHE B 95 -18,397 -27,951 26,059 1,00 39,28 C ÁTOMO 1426 CG PHE B 95 -18,239 -29,399 25,644 1,00 40,62 C ÁTOMO 1427 CD1 PHE B 95 -17,686 -30,340 26,511 1,00 44,44 C ÁTOMO 1428 CD2 PHE B 95 -18,659 -29,827 24,394 1,00 41,19 C ÁTOMO 1429 CE1 PHE B 95 -17,507 -31,660 26,107 1,00 45,39 C ÁTOMO 1430 CE2 PHE B 95 -18,494 -31,153 24,001 1,00 43,39 C ÁTOMO 1431 CZ PHE B 95 -17,911 -32,057 24,857
305 / 500
1,00 42,95 C ÁTOMO 1432 N THR B 96 -16,855 -25,407 27,572 1,00 41,95 N ÁTOMO 1433 CA THR B 96 -16,784 -23,968 27,795 1,00 42,74 C ÁTOMO 1434 C THR B 96 -16,094 -23,273 26,668 1,00 47,87 C ÁTOMO 1435 O THR B 96 -15,230 -23,845 26,011 1,00 48,17 O ÁTOMO 1436 CB THR B 96 -16,095 -23,646 29,123 1,00 48,68 C ÁTOMO 1437 OG1 THR B 96 -14,905 -24,428 29,244 1,00 48,40 O ÁTOMO 1438 CG2 THR B 96 -16,998 -23,889 30,307 1,00 47,75 C ÁTOMO 1439 N PHE B 97 -16,462 -22,013 26,477 1,00 43,76 N ÁTOMO 1440 CA PHE B 97 -15,899 -21,142 25,466 1,00 43,33 C ÁTOMO 1441 C PHE B 97 -15,188 -20,007 26,161 1,00 50,88 C ÁTOMO 1442 O PHE B 97 -15,564 -19,625 27,271 1,00 51,63 O ÁTOMO 1443 CB PHE B 97 -17,023 -20,552 24,605 1,00 42,06 C ÁTOMO 1444 CG PHE B 97 -17,737 -21,534 23,708 1,00 40,37 C ÁTOMO 1445 CD1 PHE B 97 -17,321 -21,728 22,397 1,00 40,99 C
306 / 500
ÁTOMO 1446 CD2 PHE B 97 -18,901 -22,164 24,129 1,00 39,39 C ÁTOMO 1447 CE1 PHE B 97 -18,026 -22,572 21,542 1,00 39,83 C ÁTOMO 1448 CE2 PHE B 97 -19,613 -22,996 23,267 1,00 39,99 C ÁTOMO 1449 CZ PHE B 97 -19,163 -23,206 21,985 1,00 37,63 C ÁTOMO 1450 N GLY B 98 -14,202 -19,425 25,494 1,00 49,49 N ÁTOMO 1451 CA GLY B 98 -13,544 -18,227 26,001 1,00 51,19 C ÁTOMO 1452 C GLY B 98 -14,500 -17,039 25,742 1,00 52,41 C ÁTOMO 1453 O GLY B 98 -15,479 -17,187 25,010 1,00 47,63 O ÁTOMO 1454 N GLN B 99 -14,237 -15,881 26,362 1,00 50,95 N ÁTOMO 1455 CA GLN B 99 -15,097 -14,696 26,206 1,00 48,95 C ÁTOMO 1456 C GLN B 99 -15,001 -14,060 24,797 1,00 51,79 C ÁTOMO 1457 O GLN B 99 -15,858 -13,248 24,437 1,00 50,22 O ÁTOMO 1458 CB GLN B 99 -14,835 -13,670 27,332 1,00 51,64 C ÁTOMO 1459 CG GLN B 99 -13,528 -12,869 27,232 1,00 68,39 C ÁTOMO 1460 CD GLN B 99 -12,368 -13,491 27,964
307 / 500
1,00 85,35 C ÁTOMO 1461 OE1 GLN B 99 -12,224 -14,721 28,017 1,00 76,51 O ÁTOMO 1462 NE2 GLN B 99 -11,464 -12,665 28,473 1,00 81,45 N ÁTOMO 1463 N GLY B 100 -13,963 -14,416 24,017 1,00 48,68 N ÁTOMO 1464 CA GLY B 100 -13,786 -13,935 22,652 1,00 47,98 C ÁTOMO 1465 C GLY B 100 -12,769 -12,800 22,563 1,00 54,37 C ÁTOMO 1466 O GLY B 100 -12,646 -11,999 23,490 1,00 55,57 O ÁTOMO 1467 N THR B 101 -12,051 -12,737 21,434 1,00 51,18 N ÁTOMO 1468 CA THR B 101 -11,072 -11,694 21,142 1,00 52,85 C ÁTOMO 1469 C THR B 101 -11,459 -11,061 19,815 1,00 55,49 C ÁTOMO 1470 O THR B 101 -11,479 -11,759 18,800 1,00 54,25 O ÁTOMO 1471 CB THR B 101 -9,657 -12,288 21,088 1,00 59,98 C ÁTOMO 1472 OG1 THR B 101 -9,238 -12,578 22,418 1,00 58,56 O ÁTOMO 1473 CG2 THR B 101 -8,639 -11,352 20,423 1,00 60,05 C ÁTOMO 1474 N LYS B 102 -11,749 -9,752 19,808 1,00 51,10 N
308 / 500
ÁTOMO 1475 CA LYS B 102 -12,081 -9,066 18,561 1,00 49,56 C ÁTOMO 1476 C LYS B 102 -10,785 -8,679 17,860 1,00 55,44 C ÁTOMO 1477 O LYS B 102 -10,052 -7,823 18,352 1,00 56,75 O ÁTOMO 1478 CB LYS B 102 -12,957 -7,818 18,794 1,00 50,04 C ÁTOMO 1479 CG LYS B 102 -13,420 -7,168 17,489 1,00 50,49 C ÁTOMO 1480 CD LYS B 102 -14,335 -5,972 17,713 1,00 55,49 C ÁTOMO 1481 CE LYS B 102 -14,869 -5,432 16,407 1,00 63,54 C ÁTOMO 1482 NZ LYS B 102 -15,701 -4,212 16,594 1,00 70,94 N ÁTOMO 1483 N LEU B 103 -10,503 -9,321 16,718 1,00 51,50 N ÁTOMO 1484 CA LEU B 103 -9,348 -8,997 15,892 1,00 52,92 C ÁTOMO 1485 C LEU B 103 -9,859 -7,856 15,011 1,00 56,83 C ÁTOMO 1486 O LEU B 103 -10,659 -8,077 14,099 1,00 55,12 O ÁTOMO 1487 CB LEU B 103 -8,896 -10,225 15,088 1,00 53,04 C ÁTOMO 1488 CG LEU B 103 -7,818 -10,012 14,047 1,00 59,35 C ÁTOMO 1489 CD1 LEU B 103 -6,578 -9,370 14,644
309 / 500
1,00 62,10 C ÁTOMO 1490 CD2 LEU B 103 -7,470 -11,318 13,391 1,00 60,99 C ÁTOMO 1491 N GLU B 104 -9,461 -6,624 15,368 1,00 54,35 N ÁTOMO 1492 CA GLU B 104 -9,941 -5,362 14,801 1,00 52,67 C ÁTOMO 1493 C GLU B 104 -8,902 -4,667 13,895 1,00 59,92 C ÁTOMO 1494 O GLU B 104 -7,704 -4,819 14,125 1,00 62,89 O ÁTOMO 1495 CB GLU B 104 -10,306 -4,472 16,000 1,00 53,24 C ÁTOMO 1496 CG GLU B 104 -11,095 -3,228 15,665 1,00 60,41 C ÁTOMO 1497 CD GLU B 104 -10,419 -1,909 15,975 1,00 77,51 C ÁTOMO 1498 OE1 GLU B 104 -9,176 -1,816 15,854 1,00 73,51 O ÁTOMO 1499 OE2 GLU B 104 -11,143 -0,959 16,346 1,00 65,92 O ÁTOMO 1500 N ILE B 105 -9,352 -3,948 12,844 1,00 55,66 N ÁTOMO 1501 CA ILE B 105 -8,434 -3,263 11,918 1,00 58,22 C ÁTOMO 1502 C ILE B 105 -7,838 -2,002 12,552 1,00 63,24 C ÁTOMO 1503 O ILE B 105 -8,589 -1,115 12,955 1,00 61,14 O
310 / 500
ÁTOMO 1504 CB ILE B 105 -9,109 -2,922 10,556 1,00 60,89 C ÁTOMO 1505 CG1 ILE B 105 -9,492 -4,210 9,816 1,00 60,92 C ÁTOMO 1506 CG2 ILE B 105 -8,161 -2,075 9,682 1,00 64,50 C ÁTOMO 1507 CD1 ILE B 105 -10,268 -4,039 8,503 1,00 70,71 C ÁTOMO 1508 N LYS B 106 -6,495 -1,884 12,551 1,00 63,25 N ÁTOMO 1509 CA LYS B 106 -5,810 -0,686 13,041 1,00 65,26 C ÁTOMO 1510 C LYS B 106 -5,658 0,221 11,842 1,00 70,42 C ÁTOMO 1511 O LYS B 106 -5,169 -0,195 10,787 1,00 71,21 O ÁTOMO 1512 CB LYS B 106 -4,453 -0,972 13,683 1,00 70,36 C ÁTOMO 1513 CG LYS B 106 -3,914 0,227 14,467 1,00 85,15 C ÁTOMO 1514 CD LYS B 106 -2,697 -0,113 15,335 1,00 99,27 C ÁTOMO 1515 CE LYS B 106 -2,774 0,524 16,703 1,00111,93 C ÁTOMO 1516 NZ LYS B 106 -1,600 0,181 17,549 1,00126,28 N ÁTOMO 1517 N ARG B 107 -6,111 1,453 12,007 1,00 66,11 N ÁTOMO 1518 CA ARG B 107 -6,185 2,465 10,973
311 / 500
1,00 65,54 C ÁTOMO 1519 C ARG B 107 -5,486 3,722 11,451 1,00 70,00 C ÁTOMO 1520 O ARG B 107 -5,151 3,820 12,635 1,00 70,45 O ÁTOMO 1521 CB ARG B 107 -7,676 2,770 10,767 1,00 63,82 C ÁTOMO 1522 CG ARG B 107 -8,080 2,936 9,334 1,00 71,44 C ÁTOMO 1523 CD ARG B 107 -9,246 3,880 9,209 1,00 69,88 C ÁTOMO 1524 NE ARG B 107 -8,786 5,273 9,205 1,00 77,15 N ÁTOMO 1525 CZ ARG B 107 -9,155 6,218 8,338 1,00 91,04 C ÁTOMO 1526 NH1 ARG B 107 -10,041 5,954 7,382 1,00 76,11 N ÁTOMO 1527 NH2 ARG B 107 -8,647 7,441 8,431 1,00 81,81 N ÁTOMO 1528 N THR B 108 -5,310 4,706 10,559 1,00 66,82 N ÁTOMO 1529 CA THR B 108 -4,753 5,990 10,971 1,00 69,09 C ÁTOMO 1530 C THR B 108 -5,872 6,696 11,738 1,00 71,48 C ÁTOMO 1531 O THR B 108 -7,053 6,506 11,419 1,00 67,72 O ÁTOMO 1532 CB THR B 108 -4,261 6,817 9,772 1,00 79,28 C
312 / 500
ÁTOMO 1533 OG1 THR B 108 -5,305 6,925 8,800 1,00 76,46 O ÁTOMO 1534 CG2 THR B 108 -3,018 6,225 9,135 1,00 81,09 C ÁTOMO 1535 N VAL B 109 -5,512 7,458 12,777 1,00 69,90 N ÁTOMO 1536 CA VAL B 109 -6,497 8,166 13,592 1,00 67,67 C ÁTOMO 1537 C VAL B 109 -7,332 9,092 12,703 1,00 70,41 C ÁTOMO 1538 O VAL B 109 -6,775 9,815 11,872 1,00 72,05 O ÁTOMO 1539 CB VAL B 109 -5,821 8,935 14,758 1,00 73,33 C ÁTOMO 1540 CG1 VAL B 109 -6,773 9,952 15,396 1,00 71,74 C ÁTOMO 1541 CG2 VAL B 109 -5,293 7,959 15,806 1,00 73,97 C ÁTOMO 1542 N ALA B 110 -8,662 9,040 12,867 1,00 62,90 N ÁTOMO 1543 CA ALA B 110 -9,602 9,877 12,127 1,00 61,06 C ÁTOMO 1544 C ALA B 110 -10,496 10,573 13,134 1,00 64,18 C ÁTOMO 1545 O ALA B 110 -11,096 9,905 13,968 1,00 63,18 O ÁTOMO 1546 CB ALA B 110 -10,440 9,018 11,196 1,00 59,63 C ÁTOMO 1547 N ALA B 111 -10,567 11,904 13,086
313 / 500
1,00 62,07 N ÁTOMO 1548 CA ALA B 111 -11,396 12,672 14,016 1,00 61,29 C ÁTOMO 1549 C ALA B 111 -12,875 12,567 13,619 1,00 61,25 C ÁTOMO 1550 O ALA B 111 -13,164 12,492 12,424 1,00 59,38 O ÁTOMO 1551 CB ALA B 111 -10,972 14,135 14,006 1,00 64,06 C ÁTOMO 1552 N PRO B 112 -13,809 12,588 14,595 1,00 57,11 N ÁTOMO 1553 CA PRO B 112 -15,230 12,525 14,248 1,00 54,57 C ÁTOMO 1554 C PRO B 112 -15,769 13,860 13,745 1,00 57,94 C ÁTOMO 1555 O PRO B 112 -15,499 14,899 14,349 1,00 57,84 O ÁTOMO 1556 CB PRO B 112 -15,907 12,145 15,577 1,00 55,27 C ÁTOMO 1557 CG PRO B 112 -14,998 12,664 16,619 1,00 61,79 C ÁTOMO 1558 CD PRO B 112 -13,617 12,460 16,055 1,00 59,47 C ÁTOMO 1559 N SER B 113 -16,571 13,819 12,672 1,00 52,50 N ÁTOMO 1560 CA SER B 113 -17,291 14,996 12,197 1,00 51,51 C ÁTOMO 1561 C SER B 113 -18,548 14,963 13,071 1,00 51,97 C
314 / 500
ÁTOMO 1562 O SER B 113 -19,288 13,970 13,036 1,00 49,85 O ÁTOMO 1563 CB SER B 113 -17,653 14,872 10,720 1,00 53,97 C ÁTOMO 1564 OG SER B 113 -16,477 14,810 9,930 1,00 66,05 O ÁTOMO 1565 N VAL B 114 -18,716 15,965 13,939 1,00 46,85 N ÁTOMO 1566 CA VAL B 114 -19,819 16,000 14,894 1,00 45,32 C ÁTOMO 1567 C VAL B 114 -20,995 16,802 14,324 1,00 48,58 C ÁTOMO 1568 O VAL B 114 -20,784 17,830 13,683 1,00 48,53 O ÁTOMO 1569 CB VAL B 114 -19,346 16,530 16,277 1,00 50,19 C ÁTOMO 1570 CG1 VAL B 114 -20,440 16,375 17,338 1,00 48,89 C ÁTOMO 1571 CG2 VAL B 114 -18,077 15,805 16,728 1,00 51,02 C ÁTOMO 1572 N PHE B 115 -22,231 16,308 14,534 1,00 44,22 N ÁTOMO 1573 CA PHE B 115 -23,459 16,971 14,082 1,00 42,95 C ÁTOMO 1574 C PHE B 115 -24,507 16,871 15,190 1,00 46,54 C ÁTOMO 1575 O PHE B 115 -24,619 15,819 15,812 1,00 46,20 O ÁTOMO 1576 CB PHE B 115 -24,014 16,310 12,798
315 / 500
1,00 43,15 C ÁTOMO 1577 CG PHE B 115 -23,038 16,204 11,651 1,00 44,57 C ÁTOMO 1578 CD1 PHE B 115 -22,203 15,101 11,526 1,00 46,42 C ÁTOMO 1579 CD2 PHE B 115 -22,924 17,228 10,718 1,00 47,28 C ÁTOMO 1580 CE1 PHE B 115 -21,272 15,022 10,490 1,00 47,73 C ÁTOMO 1581 CE2 PHE B 115 -21,996 17,145 9,676 1,00 50,26 C ÁTOMO 1582 CZ PHE B 115 -21,177 16,043 9,569 1,00 48,05 C ÁTOMO 1583 N ILE B 116 -25,284 17,940 15,425 1,00 42,16 N ÁTOMO 1584 CA ILE B 116 -26,345 17,930 16,435 1,00 41,52 C ÁTOMO 1585 C ILE B 116 -27,683 18,171 15,742 1,00 44,82 C ÁTOMO 1586 O ILE B 116 -27,770 19,015 14,854 1,00 45,21 O ÁTOMO 1587 CB ILE B 116 -26,083 18,901 17,620 1,00 45,51 C ÁTOMO 1588 CG1 ILE B 116 -27,075 18,616 18,773 1,00 44,96 C ÁTOMO 1589 CG2 ILE B 116 -26,120 20,383 17,175 1,00 47,17 C ÁTOMO 1590 CD1 ILE B 116 -26,788 19,383 20,097 1,00 50,62 C
316 / 500
ÁTOMO 1591 N PHE B 117 -28,719 17,415 16,130 1,00 40,34 N ÁTOMO 1592 CA PHE B 117 -30,047 17,523 15,528 1,00 38,63 C ÁTOMO 1593 C PHE B 117 -31,083 17,841 16,607 1,00 45,82 C ÁTOMO 1594 O PHE B 117 -31,190 17,089 17,580 1,00 45,97 O ÁTOMO 1595 CB PHE B 117 -30,411 16,208 14,822 1,00 37,51 C ÁTOMO 1596 CG PHE B 117 -29,438 15,813 13,741 1,00 37,97 C ÁTOMO 1597 CD1 PHE B 117 -29,533 16,356 12,467 1,00 39,10 C ÁTOMO 1598 CD2 PHE B 117 -28,463 14,852 13,978 1,00 39,97 C ÁTOMO 1599 CE1 PHE B 117 -28,676 15,942 11,445 1,00 40,25 C ÁTOMO 1600 CE2 PHE B 117 -27,605 14,436 12,954 1,00 42,48 C ÁTOMO 1601 CZ PHE B 117 -27,710 14,993 11,696 1,00 40,72 C ÁTOMO 1602 N PRO B 118 -31,841 18,946 16,455 1,00 45,09 N ÁTOMO 1603 CA PRO B 118 -32,879 19,259 17,437 1,00 45,31 C ÁTOMO 1604 C PRO B 118 -34,092 18,334 17,227 1,00 49,18 C ÁTOMO 1605 O PRO B 118 -34,194 17,684 16,182
317 / 500
1,00 46,92 O ÁTOMO 1606 CB PRO B 118 -33,210 20,730 17,150 1,00 47,56 C ÁTOMO 1607 CG PRO B 118 -32,884 20,932 15,748 1,00 51,11 C ÁTOMO 1608 CD PRO B 118 -31,803 19,959 15,378 1,00 46,29 C ÁTOMO 1609 N PRO B 119 -35,008 18,255 18,209 1,00 48,02 N ÁTOMO 1610 CA PRO B 119 -36,187 17,422 17,994 1,00 47,42 C ÁTOMO 1611 C PRO B 119 -37,046 18,010 16,858 1,00 50,41 C ÁTOMO 1612 O PRO B 119 -37,065 19,219 16,645 1,00 51,03 O ÁTOMO 1613 CB PRO B 119 -36,912 17,449 19,350 1,00 50,01 C ÁTOMO 1614 CG PRO B 119 -36,196 18,448 20,190 1,00 55,19 C ÁTOMO 1615 CD PRO B 119 -35,195 19,151 19,367 1,00 50,65 C ÁTOMO 1616 N SER B 120 -37,724 17,149 16,127 1,00 46,48 N ÁTOMO 1617 CA SER B 120 -38,611 17,562 15,045 1,00 45,63 C ÁTOMO 1618 C SER B 120 -39,898 18,135 15,638 1,00 50,81 C ÁTOMO 1619 O SER B 120 -40,253 17,812 16,769 1,00 49,99 O
318 / 500
ÁTOMO 1620 CB SER B 120 -38,947 16,366 14,161 1,00 45,74 C ÁTOMO 1621 OG SER B 120 -39,828 15,466 14,817 1,00 48,70 O ÁTOMO 1622 N ASP B 121 -40,604 18,967 14,868 1,00 49,41 N ÁTOMO 1623 CA ASP B 121 -41,889 19,536 15,296 1,00 50,62 C ÁTOMO 1624 C ASP B 121 -42,951 18,443 15,395 1,00 53,32 C ÁTOMO 1625 O ASP B 121 -43,837 18,535 16,245 1,00 54,69 O ÁTOMO 1626 CB ASP B 121 -42,348 20,651 14,339 1,00 53,45 C ÁTOMO 1627 CG ASP B 121 -41,474 21,893 14,384 1,00 66,85 C ÁTOMO 1628 OD1 ASP B 121 -40,793 22,109 15,419 1,00 66,32 O ÁTOMO 1629 OD2 ASP B 121 -41,474 22,656 13,391 1,00 75,46 O ÁTOMO 1630 N AGLU B 122 -42,837 17,400 14,554 0,50 48,70 N ÁTOMO 1631 CA AGLU B 122 -43,751 16,256 14,541 0,50 48,23 C ÁTOMO 1632 C AGLU B 122 -43,694 15,516 15,884 0,50 50,26 C ÁTOMO 1633 O AGLU B 122 -44,740 15,186 16,440 0,50 50,69 O ÁTOMO 1634 CB AGLU B 122 -43,392 15,278 13,399
319 / 500
0,50 48,42 C ÁTOMO 1635 CG AGLU B 122 -43,555 15,861 12,003 0,50 55,52 C ÁTOMO 1636 CD AGLU B 122 -42,272 16,342 11,353 0,50 61,34 C ÁTOMO 1637 OE1AGLU B 122 -41,715 17,363 11,819 0,50 43,76 O ÁTOMO 1638 OE2AGLU B 122 -41,822 15,699 10,379 0,50 49,62 O ÁTOMO 1639 N BGLU B 122 -42,864 17,408 14,539 0,50 48,39 N ÁTOMO 1640 CA BGLU B 122 -43,791 16,274 14,564 0,50 47,80 C ÁTOMO 1641 C BGLU B 122 -43,703 15,544 15,913 0,50 49,98 C ÁTOMO 1642 O BGLU B 122 -44,740 15,234 16,497 0,50 50,33 O ÁTOMO 1643 CB BGLU B 122 -43,486 15,294 13,414 0,50 47,88 C ÁTOMO 1644 CG BGLU B 122 -44,538 14,210 13,232 0,50 52,69 C ÁTOMO 1645 CD BGLU B 122 -44,305 13,277 12,061 0,50 64,91 C ÁTOMO 1646 OE1BGLU B 122 -43,199 13,317 11,474 0,50 52,72 O ÁTOMO 1647 OE2BGLU B 122 -45,226 12,492 11,739 0,50 61,22 O ÁTOMO 1648 N GLN B 123 -42,475 15,278 16,402 1,00 45,06 N
320 / 500
ÁTOMO 1649 CA GLN B 123 -42,270 14,580 17,678 1,00 44,94 C ÁTOMO 1650 C GLN B 123 -42,759 15,406 18,858 1,00 50,36 C ÁTOMO 1651 O GLN B 123 -43,385 14,847 19,762 1,00 49,32 O ÁTOMO 1652 CB GLN B 123 -40,796 14,206 17,902 1,00 44,97 C ÁTOMO 1653 CG GLN B 123 -40,619 13,279 19,109 1,00 44,15 C ÁTOMO 1654 CD GLN B 123 -39,195 12,935 19,425 1,00 47,60 C ÁTOMO 1655 OE1 GLN B 123 -38,258 13,662 19,082 1,00 40,87 O ÁTOMO 1656 NE2 GLN B 123 -39,013 11,867 20,187 1,00 35,78 N ÁTOMO 1657 N LEU B 124 -42,482 16,722 18,848 1,00 48,30 N ÁTOMO 1658 CA LEU B 124 -42,917 17,624 19,909 1,00 50,36 C ÁTOMO 1659 C LEU B 124 -44,442 17,657 20,030 1,00 57,38 C ÁTOMO 1660 O LEU B 124 -44,938 17,783 21,146 1,00 58,17 O ÁTOMO 1661 CB LEU B 124 -42,358 19,042 19,688 1,00 50,61 C ÁTOMO 1662 CG LEU B 124 -40,841 19,179 19,840 1,00 54,63 C ÁTOMO 1663 CD1 LEU B 124 -40,359 20,491 19,260
321 / 500
1,00 54,80 C ÁTOMO 1664 CD2 LEU B 124 -40,419 19,070 21,288 1,00 57,16 C ÁTOMO 1665 N LYS B 125 -45,189 17,457 18,916 1,00 54,79 N ÁTOMO 1666 CA LYS B 125 -46,656 17,407 18,967 1,00 55,96 C ÁTOMO 1667 C LYS B 125 -47,149 16,200 19,817 1,00 57,32 C ÁTOMO 1668 O LYS B 125 -48,211 16,288 20,432 1,00 59,10 O ÁTOMO 1669 CB LYS B 125 -47,261 17,374 17,549 1,00 59,50 C ÁTOMO 1670 CG LYS B 125 -48,772 17,633 17,519 1,00 82,76 C ÁTOMO 1671 CD LYS B 125 -49,194 18,695 16,493 1,00 95,44 C ÁTOMO 1672 CE LYS B 125 -49,106 18,211 15,065 1,00104,43 C ÁTOMO 1673 NZ LYS B 125 -49,641 19,222 14,112 1,00113,34 N ÁTOMO 1674 N SER B 126 -46,357 15,112 19,890 1,00 50,44 N ÁTOMO 1675 CA SER B 126 -46,663 13,934 20,718 1,00 49,24 C ÁTOMO 1676 C SER B 126 -46,230 14,108 22,209 1,00 53,01 C ÁTOMO 1677 O SER B 126 -46,458 13,198 23,015 1,00 51,52 O
322 / 500
ÁTOMO 1678 CB SER B 126 -46,032 12,678 20,119 1,00 49,01 C ÁTOMO 1679 OG SER B 126 -44,662 12,539 20,458 1,00 53,59 O ÁTOMO 1680 N GLY B 127 -45,596 15,254 22,560 1,00 51,44 N ÁTOMO 1681 CA GLY B 127 -45,198 15,597 23,932 1,00 52,67 C ÁTOMO 1682 C GLY B 127 -43,856 15,027 24,410 1,00 54,98 C ÁTOMO 1683 O GLY B 127 -43,618 14,986 25,615 1,00 56,14 O ÁTOMO 1684 N THR B 128 -42,966 14,666 23,479 1,00 49,82 N ÁTOMO 1685 CA THR B 128 -41,624 14,131 23,754 1,00 48,90 C ÁTOMO 1686 C THR B 128 -40,599 14,858 22,875 1,00 50,82 C ÁTOMO 1687 O THR B 128 -40,967 15,427 21,846 1,00 48,54 O ÁTOMO 1688 CB THR B 128 -41,577 12,640 23,439 1,00 55,72 C ÁTOMO 1689 OG1 THR B 128 -42,047 12,433 22,100 1,00 52,09 O ÁTOMO 1690 CG2 THR B 128 -42,389 11,825 24,407 1,00 55,78 C ÁTOMO 1691 N ALA B 129 -39,318 14,815 23,264 1,00 47,60 N ÁTOMO 1692 CA ALA B 129 -38,259 15,497 22,523
323 / 500
1,00 46,69 C ÁTOMO 1693 C ALA B 129 -36,966 14,717 22,577 1,00 50,52 C ÁTOMO 1694 O ALA B 129 -36,382 14,585 23,650 1,00 52,29 O ÁTOMO 1695 CB ALA B 129 -38,043 16,889 23,103 1,00 48,80 C ÁTOMO 1696 N SER B 130 -36,518 14,203 21,416 1,00 44,66 N ÁTOMO 1697 CA SER B 130 -35,260 13,478 21,268 1,00 42,46 C ÁTOMO 1698 C SER B 130 -34,256 14,415 20,612 1,00 45,91 C ÁTOMO 1699 O SER B 130 -34,575 15,046 19,603 1,00 45,83 O ÁTOMO 1700 CB SER B 130 -35,440 12,256 20,380 1,00 42,20 C ÁTOMO 1701 OG SER B 130 -36,417 11,377 20,904 1,00 42,28 O ÁTOMO 1702 N VAL B 131 -33,057 14,520 21,184 1,00 41,62 N ÁTOMO 1703 CA VAL B 131 -31,980 15,360 20,659 1,00 39,96 C ÁTOMO 1704 C VAL B 131 -30,892 14,375 20,300 1,00 40,80 C ÁTOMO 1705 O VAL B 131 -30,533 13,549 21,143 1,00 39,10 O ÁTOMO 1706 CB VAL B 131 -31,480 16,397 21,698 1,00 45,31 C
324 / 500
ÁTOMO 1707 CG1 VAL B 131 -30,610 17,444 21,022 1,00 45,09 C ÁTOMO 1708 CG2 VAL B 131 -32,645 17,070 22,422 1,00 45,92 C ÁTOMO 1709 N VAL B 132 -30,429 14,392 19,040 1,00 38,45 N ÁTOMO 1710 CA VAL B 132 -29,446 13,429 18,543 1,00 37,72 C ÁTOMO 1711 C VAL B 132 -28,118 14,116 18,237 1,00 43,59 C ÁTOMO 1712 O VAL B 132 -28,091 15,139 17,553 1,00 40,69 O ÁTOMO 1713 CB VAL B 132 -29,994 12,652 17,308 1,00 39,35 C ÁTOMO 1714 CG1 VAL B 132 -28,916 11,770 16,662 1,00 37,62 C ÁTOMO 1715 CG2 VAL B 132 -31,214 11,812 17,691 1,00 38,39 C ÁTOMO 1716 N CYS B 133 -27,022 13,516 18,726 1,00 43,57 N ÁTOMO 1717 CA CYS B 133 -25,663 13,933 18,441 1,00 45,44 C ÁTOMO 1718 C CYS B 133 -25,055 12,811 17,612 1,00 45,60 C ÁTOMO 1719 O CYS B 133 -25,119 11,649 18,026 1,00 43,13 O ÁTOMO 1720 CB CYS B 133 -24,872 14,159 19,721 1,00 49,38 C ÁTOMO 1721 SG CYS B 133 -23,190 14,764 19,439
325 / 500
1,00 56,38 S ÁTOMO 1722 N LEU B 134 -24,495 13,142 16,438 1,00 41,51 N ÁTOMO 1723 CA LEU B 134 -23,869 12,158 15,544 1,00 39,97 C ÁTOMO 1724 C LEU B 134 -22,366 12,407 15,505 1,00 44,72 C ÁTOMO 1725 O LEU B 134 -21,950 13,543 15,305 1,00 44,75 O ÁTOMO 1726 CB LEU B 134 -24,470 12,265 14,124 1,00 38,04 C ÁTOMO 1727 CG LEU B 134 -23,730 11,552 12,969 1,00 40,51 C ÁTOMO 1728 CD1 LEU B 134 -23,798 10,045 13,114 1,00 38,88 C ÁTOMO 1729 CD2 LEU B 134 -24,311 11,972 11,627 1,00 40,63 C ÁTOMO 1730 N LEU B 135 -21,565 11,345 15,704 1,00 41,00 N ÁTOMO 1731 CA LEU B 135 -20,098 11,363 15,605 1,00 41,97 C ÁTOMO 1732 C LEU B 135 -19,822 10,484 14,404 1,00 44,74 C ÁTOMO 1733 O LEU B 135 -20,012 9,274 14,496 1,00 43,15 O ÁTOMO 1734 CB LEU B 135 -19,441 10,746 16,840 1,00 42,81 C ÁTOMO 1735 CG LEU B 135 -19,313 11,619 18,065 1,00 47,57 C
326 / 500
ÁTOMO 1736 CD1 LEU B 135 -20,682 11,976 18,646 1,00 45,53 C ÁTOMO 1737 CD2 LEU B 135 -18,423 10,926 19,092 1,00 52,20 C ÁTOMO 1738 N ASN B 136 -19,447 11,078 13,266 1,00 42,96 N ÁTOMO 1739 CA ASN B 136 -19,294 10,330 12,020 1,00 42,15 C ÁTOMO 1740 C ASN B 136 -17,857 10,054 11,580 1,00 47,55 C ÁTOMO 1741 O ASN B 136 -17,021 10,958 11,585 1,00 49,26 O ÁTOMO 1742 CB ASN B 136 -20,029 11,085 10,904 1,00 41,37 C ÁTOMO 1743 CG ASN B 136 -20,616 10,190 9,844 1,00 51,90 C ÁTOMO 1744 OD1 ASN B 136 -21,276 9,205 10,146 1,00 44,17 O ÁTOMO 1745 ND2 ASN B 136 -20,409 10,507 8,581 1,00 47,56 N ÁTOMO 1746 N ASN B 137 -17,602 8,804 11,148 1,00 43,79 N ÁTOMO 1747 CA ASN B 137 -16,358 8,338 10,532 1,00 45,11 C ÁTOMO 1748 C ASN B 137 -15,088 8,625 11,325 1,00 50,60 C ÁTOMO 1749 O ASN B 137 -14,222 9,361 10,858 1,00 52,71 O ÁTOMO 1750 CB ASN B 137 -16,248 8,922 9,112
327 / 500
1,00 47,23 C ÁTOMO 1751 CG ASN B 137 -17,433 8,599 8,231 1,00 61,25 C ÁTOMO 1752 OD1 ASN B 137 -18,151 7,618 8,456 1,00 50,10 O ÁTOMO 1753 ND2 ASN B 137 -17,680 9,421 7,214 1,00 51,12 N ÁTOMO 1754 N PHE B 138 -14,945 7,980 12,488 1,00 46,69 N ÁTOMO 1755 CA PHE B 138 -13,786 8,163 13,358 1,00 48,08 C ÁTOMO 1756 C PHE B 138 -13,085 6,847 13,723 1,00 51,74 C ÁTOMO 1757 O PHE B 138 -13,678 5,771 13,650 1,00 49,10 O ÁTOMO 1758 CB PHE B 138 -14,216 8,908 14,630 1,00 49,40 C ÁTOMO 1759 CG PHE B 138 -15,186 8,155 15,508 1,00 48,95 C ÁTOMO 1760 CD1 PHE B 138 -14,729 7,316 16,511 1,00 52,66 C ÁTOMO 1761 CD2 PHE B 138 -16,557 8,273 15,321 1,00 48,13 C ÁTOMO 1762 CE1 PHE B 138 -15,619 6,613 17,321 1,00 51,64 C ÁTOMO 1763 CE2 PHE B 138 -17,449 7,570 16,135 1,00 49,29 C ÁTOMO 1764 CZ PHE B 138 -16,974 6,755 17,136 1,00 48,25 C
328 / 500
ÁTOMO 1765 N TYR B 139 -11,817 6,959 14,130 1,00 51,54 N ÁTOMO 1766 CA TYR B 139 -10,994 5,830 14,574 1,00 52,33 C ÁTOMO 1767 C TYR B 139 -9,969 6,356 15,622 1,00 57,69 C ÁTOMO 1768 O TYR B 139 -9,383 7,406 15,374 1,00 57,85 O ÁTOMO 1769 CB TYR B 139 -10,264 5,159 13,385 1,00 54,15 C ÁTOMO 1770 CG TYR B 139 -9,572 3,896 13,834 1,00 56,42 C ÁTOMO 1771 CD1 TYR B 139 -10,269 2,697 13,924 1,00 55,93 C ÁTOMO 1772 CD2 TYR B 139 -8,299 3,945 14,397 1,00 59,79 C ÁTOMO 1773 CE1 TYR B 139 -9,700 1,567 14,503 1,00 56,81 C ÁTOMO 1774 CE2 TYR B 139 -7,735 2,831 15,012 1,00 61,40 C ÁTOMO 1775 CZ TYR B 139 -8,426 1,633 15,036 1,00 66,36 C ÁTOMO 1776 OH TYR B 139 -7,844 0,526 15,609 1,00 67,92 O ÁTOMO 1777 N PRO B 140 -9,736 5,656 16,768 1,00 54,87 N ÁTOMO 1778 CA PRO B 140 -10,313 4,383 17,238 1,00 52,80 C ÁTOMO 1779 C PRO B 140 -11,744 4,520 17,769
329 / 500
1,00 56,42 C ÁTOMO 1780 O PRO B 140 -12,290 5,621 17,803 1,00 55,80 O ÁTOMO 1781 CB PRO B 140 -9,315 3,940 18,314 1,00 56,32 C ÁTOMO 1782 CG PRO B 140 -8,826 5,225 18,901 1,00 62,48 C ÁTOMO 1783 CD PRO B 140 -8,750 6,185 17,735 1,00 58,28 C ÁTOMO 1784 N ARG B 141 -12,342 3,389 18,183 1,00 52,96 N ÁTOMO 1785 CA ARG B 141 -13,720 3,330 18,693 1,00 51,71 C ÁTOMO 1786 C ARG B 141 -13,925 4,112 19,999 1,00 57,68 C ÁTOMO 1787 O ARG B 141 -15,039 4,571 20,265 1,00 55,60 O ÁTOMO 1788 CB ARG B 141 -14,138 1,862 18,916 1,00 50,28 C ÁTOMO 1789 CG ARG B 141 -15,639 1,653 19,145 1,00 57,39 C ÁTOMO 1790 CD ARG B 141 -15,895 1,022 20,500 1,00 77,69 C ÁTOMO 1791 NE ARG B 141 -17,298 0,667 20,723 1,00 85,89 N ÁTOMO 1792 CZ ARG B 141 -17,925 -0,385 20,195 1,00 91,53 C ÁTOMO 1793 NH1 ARG B 141 -17,288 -1,202 19,358 1,00 73,57 N
330 / 500
ÁTOMO 1794 NH2 ARG B 141 -19,200 -0,618 20,484 1,00 73,45 N ÁTOMO 1795 N GLU B 142 -12,866 4,260 20,810 1,00 57,75 N ÁTOMO 1796 CA GLU B 142 -12,949 4,945 22,103 1,00 59,18 C ÁTOMO 1797 C GLU B 142 -13,297 6,418 21,896 1,00 64,31 C ÁTOMO 1798 O GLU B 142 -12,537 7,142 21,260 1,00 65,59 O ÁTOMO 1799 CB GLU B 142 -11,636 4,801 22,903 1,00 63,33 C ÁTOMO 1800 CG GLU B 142 -11,400 3,400 23,459 1,00 70,25 C ÁTOMO 1801 CD GLU B 142 -11,058 2,319 22,450 1,00 79,12 C ÁTOMO 1802 OE1 GLU B 142 -10,233 2,590 21,547 1,00 62,08 O ÁTOMO 1803 OE2 GLU B 142 -11,634 1,210 22,544 1,00 65,27 O ÁTOMO 1804 N ALA B 143 -14,482 6,830 22,375 1,00 60,05 N ÁTOMO 1805 CA ALA B 143 -14,992 8,195 22,251 1,00 60,25 C ÁTOMO 1806 C ALA B 143 -15,937 8,492 23,413 1,00 64,55 C ÁTOMO 1807 O ALA B 143 -16,697 7,613 23,808 1,00 63,46 O ÁTOMO 1808 CB ALA B 143 -15,748 8,343 20,935
331 / 500
1,00 58,79 C ÁTOMO 1809 N LYS B 144 -15,902 9,717 23,954 1,00 63,21 N ÁTOMO 1810 CA LYS B 144 -16,783 10,102 25,057 1,00 63,15 C ÁTOMO 1811 C LYS B 144 -17,698 11,234 24,606 1,00 64,62 C ÁTOMO 1812 O LYS B 144 -17,220 12,234 24,074 1,00 64,21 O ÁTOMO 1813 CB LYS B 144 -15,965 10,524 26,288 1,00 68,96 C ÁTOMO 1814 CG LYS B 144 -16,710 10,327 27,611 1,00 89,48 C ÁTOMO 1815 CD LYS B 144 -16,363 9,010 28,347 1,00101,00 C ÁTOMO 1816 CE LYS B 144 -17,045 7,757 27,817 1,00107,47 C ÁTOMO 1817 NZ LYS B 144 -16,234 6,991 26,826 1,00113,21 N ÁTOMO 1818 N VAL B 145 -19,015 11,060 24,803 1,00 58,70 N ÁTOMO 1819 CA VAL B 145 -20,027 12,058 24,465 1,00 56,79 C ÁTOMO 1820 C VAL B 145 -20,631 12,553 25,776 1,00 61,26 C ÁTOMO 1821 O VAL B 145 -20,996 11,734 26,627 1,00 61,28 O ÁTOMO 1822 CB VAL B 145 -21,111 11,474 23,537 1,00 57,49 C
332 / 500
ÁTOMO 1823 CG1 VAL B 145 -22,171 12,525 23,217 1,00 56,36 C ÁTOMO 1824 CG2 VAL B 145 -20,485 10,928 22,259 1,00 56,26 C ÁTOMO 1825 N GLN B 146 -20,742 13,884 25,934 1,00 57,91 N ÁTOMO 1826 CA GLN B 146 -21,286 14,498 27,141 1,00 58,76 C ÁTOMO 1827 C GLN B 146 -22,366 15,513 26,749 1,00 60,79 C ÁTOMO 1828 O GLN B 146 -22,095 16,424 25,970 1,00 60,97 O ÁTOMO 1829 CB GLN B 146 -20,138 15,151 27,937 1,00 63,02 C ÁTOMO 1830 CG GLN B 146 -20,525 15,781 29,273 1,00 81,67 C ÁTOMO 1831 CD GLN B 146 -21,055 14,769 30,256 1,00101,31 C ÁTOMO 1832 OE1 GLN B 146 -20,292 14,067 30,923 1,00 99,91 O ÁTOMO 1833 NE2 GLN B 146 -22,371 14,695 30,410 1,00 90,85 N ÁTOMO 1834 N TRP B 147 -23,594 15,322 27,255 1,00 55,77 N ÁTOMO 1835 CA TRP B 147 -24,729 16,209 26,985 1,00 54,82 C ÁTOMO 1836 C TRP B 147 -24,811 17,330 28,040 1,00 61,88 C ÁTOMO 1837 O TRP B 147 -24,635 17,056 29,229
333 / 500
1,00 63,01 O ÁTOMO 1838 CB TRP B 147 -26,055 15,413 26,994 1,00 51,74 C ÁTOMO 1839 CG TRP B 147 -26,329 14,639 25,743 1,00 50,01 C ÁTOMO 1840 CD1 TRP B 147 -26,211 13,293 25,565 1,00 51,63 C ÁTOMO 1841 CD2 TRP B 147 -26,789 15,172 24,497 1,00 48,35 C ÁTOMO 1842 NE1 TRP B 147 -26,571 12,953 24,281 1,00 48,77 N ÁTOMO 1843 CE2 TRP B 147 -26,909 14,092 23,597 1,00 50,07 C ÁTOMO 1844 CE3 TRP B 147 -27,063 16,468 24,037 1,00 49,60 C ÁTOMO 1845 CZ2 TRP B 147 -27,342 14,265 22,280 1,00 47,70 C ÁTOMO 1846 CZ3 TRP B 147 -27,501 16,634 22,736 1,00 49,20 C ÁTOMO 1847 CH2 TRP B 147 -27,636 15,541 21,872 1,00 48,13 C ÁTOMO 1848 N LYS B 148 -25,130 18,566 27,610 1,00 58,30 N ÁTOMO 1849 CA LYS B 148 -25,332 19,712 28,510 1,00 60,71 C ÁTOMO 1850 C LYS B 148 -26,619 20,443 28,111 1,00 65,11 C ÁTOMO 1851 O LYS B 148 -26,851 20,668 26,921 1,00 63,98 O
334 / 500
ÁTOMO 1852 CB LYS B 148 -24,155 20,703 28,479 1,00 63,88 C ÁTOMO 1853 CG LYS B 148 -22,779 20,072 28,617 1,00 77,60 C ÁTOMO 1854 CD LYS B 148 -21,693 21,133 28,765 1,00 88,29 C ÁTOMO 1855 CE LYS B 148 -20,333 20,627 28,351 1,00 99,31 C ÁTOMO 1856 NZ LYS B 148 -19,256 21,605 28,660 1,00112,28 N ÁTOMO 1857 N VAL B 149 -27,450 20,799 29,105 1,00 62,45 N ÁTOMO 1858 CA VAL B 149 -28,714 21,515 28,916 1,00 61,78 C ÁTOMO 1859 C VAL B 149 -28,569 22,808 29,737 1,00 66,99 C ÁTOMO 1860 O VAL B 149 -28,625 22,746 30,965 1,00 67,90 O ÁTOMO 1861 CB VAL B 149 -29,905 20,624 29,360 1,00 65,16 C ÁTOMO 1862 CG1 VAL B 149 -31,217 21,396 29,334 1,00 65,00 C ÁTOMO 1863 CG2 VAL B 149 -30,003 19,375 28,480 1,00 62,45 C ÁTOMO 1864 N ASP B 150 -28,293 23,951 29,059 1,00 63,79 N ÁTOMO 1865 CA ASP B 150 -27,964 25,252 29,682 1,00 66,94 C ÁTOMO 1866 C ASP B 150 -26,665 25,100 30,502
335 / 500
1,00 76,26 C ÁTOMO 1867 O ASP B 150 -26,588 25,507 31,664 1,00 78,68 O ÁTOMO 1868 CB ASP B 150 -29,124 25,835 30,533 1,00 69,01 C ÁTOMO 1869 CG ASP B 150 -30,327 26,308 29,741 1,00 71,79 C ÁTOMO 1870 OD1 ASP B 150 -30,173 26,595 28,530 1,00 70,87 O ÁTOMO 1871 OD2 ASP B 150 -31,419 26,423 30,336 1,00 74,21 O ÁTOMO 1872 N ASN B 151 -25,658 24,442 29,883 1,00 74,05 N ÁTOMO 1873 CA ASN B 151 -24,336 24,155 30,457 1,00 76,87 C ÁTOMO 1874 C ASN B 151 -24,361 23,221 31,701 1,00 83,21 C ÁTOMO 1875 O ASN B 151 -23,322 23,066 32,348 1,00 85,06 O ÁTOMO 1876 CB ASN B 151 -23,579 25,462 30,764 1,00 82,11 C ÁTOMO 1877 CG ASN B 151 -22,138 25,425 30,321 1,00113,45 C ÁTOMO 1878 OD1 ASN B 151 -21,777 25,941 29,256 1,00105,66 O ÁTOMO 1879 ND2 ASN B 151 -21,294 24,762 31,101 1,00110,93 N ÁTOMO 1880 N ALA B 152 -25,511 22,568 32,002 1,00 78,34 N
336 / 500
ÁTOMO 1881 CA ALA B 152 -25,645 21,670 33,147 1,00 78,90 C ÁTOMO 1882 C ALA B 152 -25,420 20,232 32,672 1,00 81,83 C ÁTOMO 1883 O ALA B 152 -26,232 19,696 31,913 1,00 78,13 O ÁTOMO 1884 CB ALA B 152 -27,028 21,809 33,771 1,00 79,41 C ÁTOMO 1885 N LEU B 153 -24,301 19,625 33,113 1,00 80,85 N ÁTOMO 1886 CA LEU B 153 -23,903 18,248 32,772 1,00 79,40 C ÁTOMO 1887 C LEU B 153 -25,063 17,260 32,979 1,00 80,64 C ÁTOMO 1888 O LEU B 153 -25,703 17,290 34,031 1,00 81,20 O ÁTOMO 1889 CB LEU B 153 -22,686 17,812 33,622 1,00 82,41 C ÁTOMO 1890 CG LEU B 153 -21,589 17,104 32,849 1,00 87,34 C ÁTOMO 1891 CD1 LEU B 153 -20,707 18,102 32,106 1,00 88,51 C ÁTOMO 1892 CD2 LEU B 153 -20,736 16,229 33,765 1,00 92,60 C ÁTOMO 1893 N GLN B 154 -25,344 16,410 31,973 1,00 74,56 N ÁTOMO 1894 CA GLN B 154 -26,447 15,443 32,030 1,00 72,41 C ÁTOMO 1895 C GLN B 154 -25,960 14,033 32,365
337 / 500
1,00 76,58 C ÁTOMO 1896 O GLN B 154 -24,771 13,734 32,220 1,00 76,89 O ÁTOMO 1897 CB GLN B 154 -27,204 15,429 30,692 1,00 70,53 C ÁTOMO 1898 CG GLN B 154 -27,877 16,755 30,338 1,00 75,29 C ÁTOMO 1899 CD GLN B 154 -29,096 17,045 31,190 1,00 85,67 C ÁTOMO 1900 OE1 GLN B 154 -30,108 16,341 31,118 1,00 78,23 O ÁTOMO 1901 NE2 GLN B 154 -29,056 18,105 31,993 1,00 79,95 N ÁTOMO 1902 N SER B 155 -26,891 13,167 32,816 1,00 72,43 N ÁTOMO 1903 CA SER B 155 -26,583 11,771 33,149 1,00 71,75 C ÁTOMO 1904 C SER B 155 -27,849 10,909 33,296 1,00 73,00 C ÁTOMO 1905 O SER B 155 -28,813 11,331 33,942 1,00 72,41 O ÁTOMO 1906 CB SER B 155 -25,758 11,695 34,435 1,00 79,51 C ÁTOMO 1907 OG SER B 155 -24,402 11,392 34,151 1,00 91,92 O ÁTOMO 1908 N GLY B 156 -27,826 9,692 32,704 1,00 67,51 N ÁTOMO 1909 CA GLY B 156 -28,912 8,717 32,819 1,00 65,86 C
338 / 500
ÁTOMO 1910 C GLY B 156 -30,145 8,940 31,943 1,00 67,02 C ÁTOMO 1911 O GLY B 156 -31,125 8,218 32,123 1,00 66,32 O ÁTOMO 1912 N ASN B 157 -30,118 9,907 31,008 1,00 62,63 N ÁTOMO 1913 CA ASN B 157 -31,252 10,154 30,101 1,00 60,49 C ÁTOMO 1914 C ASN B 157 -30,831 10,095 28,615 1,00 61,02 C ÁTOMO 1915 O ASN B 157 -31,612 10,498 27,748 1,00 59,01 O ÁTOMO 1916 CB ASN B 157 -31,960 11,480 30,454 1,00 60,32 C ÁTOMO 1917 CG ASN B 157 -31,079 12,704 30,469 1,00 74,28 C ÁTOMO 1918 OD1 ASN B 157 -29,851 12,635 30,290 1,00 59,89 O ÁTOMO 1919 ND2 ASN B 157 -31,692 13,857 30,718 1,00 67,62 N ÁTOMO 1920 N SER B 158 -29,620 9,551 28,325 1,00 55,90 N ÁTOMO 1921 CA SER B 158 -29,101 9,406 26,967 1,00 53,60 C ÁTOMO 1922 C SER B 158 -28,739 7,946 26,689 1,00 56,48 C ÁTOMO 1923 O SER B 158 -28,461 7,193 27,621 1,00 57,31 O ÁTOMO 1924 CB SER B 158 -27,880 10,295 26,752
339 / 500
1,00 56,49 C ÁTOMO 1925 OG SER B 158 -26,738 9,800 27,431 1,00 63,69 O ÁTOMO 1926 N GLN B 159 -28,744 7,555 25,409 1,00 49,85 N ÁTOMO 1927 CA GLN B 159 -28,380 6,204 24,990 1,00 48,14 C ÁTOMO 1928 C GLN B 159 -27,501 6,279 23,760 1,00 48,42 C ÁTOMO 1929 O GLN B 159 -27,720 7,117 22,882 1,00 46,22 O ÁTOMO 1930 CB GLN B 159 -29,618 5,333 24,746 1,00 48,47 C ÁTOMO 1931 CG GLN B 159 -30,077 4,623 26,008 1,00 60,61 C ÁTOMO 1932 CD GLN B 159 -31,061 3,531 25,698 1,00 74,74 C ÁTOMO 1933 OE1 GLN B 159 -31,915 3,676 24,823 1,00 65,28 O ÁTOMO 1934 NE2 GLN B 159 -30,957 2,403 26,391 1,00 69,75 N ÁTOMO 1935 N GLU B 160 -26,495 5,413 23,723 1,00 43,16 N ÁTOMO 1936 CA GLU B 160 -25,484 5,376 22,688 1,00 42,59 C ÁTOMO 1937 C GLU B 160 -25,624 4,142 21,805 1,00 44,01 C ÁTOMO 1938 O GLU B 160 -26,049 3,083 22,277 1,00 40,63 O
340 / 500
ÁTOMO 1939 CB GLU B 160 -24,101 5,372 23,360 1,00 46,21 C ÁTOMO 1940 CG GLU B 160 -23,067 6,266 22,717 1,00 59,67 C ÁTOMO 1941 CD GLU B 160 -22,110 6,871 23,721 1,00 82,32 C ÁTOMO 1942 OE1 GLU B 160 -22,489 7,872 24,371 1,00 76,02 O ÁTOMO 1943 OE2 GLU B 160 -20,996 6,323 23,882 1,00 81,97 O ÁTOMO 1944 N SER B 161 -25,250 4,289 20,522 1,00 40,24 N ÁTOMO 1945 CA SER B 161 -25,218 3,192 19,555 1,00 39,43 C ÁTOMO 1946 C SER B 161 -24,028 3,427 18,640 1,00 43,55 C ÁTOMO 1947 O SER B 161 -23,806 4,559 18,232 1,00 42,87 O ÁTOMO 1948 CB SER B 161 -26,502 3,125 18,740 1,00 41,55 C ÁTOMO 1949 OG SER B 161 -26,503 1,948 17,952 1,00 46,47 O ÁTOMO 1950 N VAL B 162 -23,255 2,375 18,342 1,00 40,28 N ÁTOMO 1951 CA VAL B 162 -22,059 2,460 17,501 1,00 40,87 C ÁTOMO 1952 C VAL B 162 -22,214 1,456 16,365 1,00 45,52 C ÁTOMO 1953 O VAL B 162 -22,662 0,336 16,602
341 / 500
1,00 44,96 O ÁTOMO 1954 CB VAL B 162 -20,769 2,153 18,308 1,00 45,94 C ÁTOMO 1955 CG1 VAL B 162 -19,534 2,668 17,582 1,00 46,43 C ÁTOMO 1956 CG2 VAL B 162 -20,845 2,737 19,715 1,00 47,46 C ÁTOMO 1957 N THR B 163 -21,814 1,834 15,146 1,00 42,14 N ÁTOMO 1958 CA THR B 163 -21,870 0,920 14,011 1,00 40,76 C ÁTOMO 1959 C THR B 163 -20,678 -0,015 14,098 1,00 46,05 C ÁTOMO 1960 O THR B 163 -19,743 0,236 14,866 1,00 46,24 O ÁTOMO 1961 CB THR B 163 -21,794 1,696 12,670 1,00 44,21 C ÁTOMO 1962 OG1 THR B 163 -20,598 2,475 12,635 1,00 42,58 O ÁTOMO 1963 CG2 THR B 163 -22,983 2,594 12,448 1,00 39,52 C ÁTOMO 1964 N GLU B 164 -20,681 -1,064 13,258 1,00 42,71 N ÁTOMO 1965 CA GLU B 164 -19,534 -1,959 13,127 1,00 43,35 C ÁTOMO 1966 C GLU B 164 -18,502 -1,185 12,300 1,00 48,75 C ÁTOMO 1967 O GLU B 164 -18,853 -0,214 11,630 1,00 47,54 O
342 / 500
ÁTOMO 1968 CB GLU B 164 -19,905 -3,258 12,382 1,00 43,58 C ÁTOMO 1969 CG GLU B 164 -20,941 -4,126 13,070 1,00 47,89 C ÁTOMO 1970 CD GLU B 164 -20,526 -4,753 14,386 1,00 69,07 C ÁTOMO 1971 OE1 GLU B 164 -19,318 -4,727 14,717 1,00 62,05 O ÁTOMO 1972 OE2 GLU B 164 -21,417 -5,296 15,078 1,00 66,26 O ÁTOMO 1973 N GLN B 165 -17,250 -1,629 12,315 1,00 48,38 N ÁTOMO 1974 CA GLN B 165 -16,171 -0,980 11,560 1,00 49,62 C ÁTOMO 1975 C GLN B 165 -16,509 -1,009 10,055 1,00 55,31 C ÁTOMO 1976 O GLN B 165 -16,901 -2,058 9,546 1,00 55,76 O ÁTOMO 1977 CB GLN B 165 -14,849 -1,691 11,865 1,00 52,40 C ÁTOMO 1978 CG GLN B 165 -13,627 -0,826 11,689 1,00 60,35 C ÁTOMO 1979 CD GLN B 165 -12,393 -1,435 12,293 1,00 67,84 C ÁTOMO 1980 OE1 GLN B 165 -12,333 -2,632 12,593 1,00 56,87 O ÁTOMO 1981 NE2 GLN B 165 -11,353 -0,635 12,425 1,00 63,60 N ÁTOMO 1982 N ASP B 166 -16,427 0,145 9,366
343 / 500
1,00 53,07 N ÁTOMO 1983 CA ASP B 166 -16,826 0,258 7,955 1,00 53,01 C ÁTOMO 1984 C ASP B 166 -16,078 -0,676 6,977 1,00 59,36 C ÁTOMO 1985 O ASP B 166 -14,854 -0,792 7,029 1,00 60,34 O ÁTOMO 1986 CB ASP B 166 -16,709 1,704 7,468 1,00 55,20 C ÁTOMO 1987 CG ASP B 166 -17,418 1,949 6,151 1,00 59,71 C ÁTOMO 1988 OD1 ASP B 166 -18,669 1,950 6,142 1,00 59,68 O ÁTOMO 1989 OD2 ASP B 166 -16,722 2,130 5,129 1,00 59,98 O ÁTOMO 1990 N SER B 167 -16,835 -1,292 6,050 1,00 56,31 N ÁTOMO 1991 CA SER B 167 -16,315 -2,227 5,049 1,00 57,19 C ÁTOMO 1992 C SER B 167 -15,273 -1,608 4,105 1,00 61,95 C ÁTOMO 1993 O SER B 167 -14,359 -2,317 3,690 1,00 62,89 O ÁTOMO 1994 CB SER B 167 -17,466 -2,827 4,244 1,00 60,76 C ÁTOMO 1995 OG SER B 167 -18,241 -1,811 3,629 1,00 73,16 O ÁTOMO 1996 N LYS B 168 -15,388 -0,293 3,791 1,00 58,37 N
344 / 500
ÁTOMO 1997 CA LYS B 168 -14,447 0,403 2,905 1,00 59,84 C ÁTOMO 1998 C LYS B 168 -13,346 1,174 3,653 1,00 63,38 C ÁTOMO 1999 O LYS B 168 -12,168 0,911 3,422 1,00 64,86 O ÁTOMO 2000 CB LYS B 168 -15,198 1,351 1,946 1,00 62,47 C ÁTOMO 2001 CG LYS B 168 -14,269 2,264 1,131 1,00 83,02 C ÁTOMO 2002 CD LYS B 168 -14,900 2,799 -0,158 1,00 94,89 C ÁTOMO 2003 CE LYS B 168 -14,596 4,264 -0,391 1,00110,05 C ÁTOMO 2004 NZ LYS B 168 -14,582 4,617 -1,832 1,00121,69 N ÁTOMO 2005 N ASP B 169 -13,724 2,163 4,483 1,00 58,13 N ÁTOMO 2006 CA ASP B 169 -12,754 3,035 5,171 1,00 58,45 C ÁTOMO 2007 C ASP B 169 -12,375 2,593 6,608 1,00 58,86 C ÁTOMO 2008 O ASP B 169 -11,598 3,297 7,226 1,00 59,24 O ÁTOMO 2009 CB ASP B 169 -13,230 4,514 5,153 1,00 59,93 C ÁTOMO 2010 CG ASP B 169 -14,593 4,792 5,768 1,00 66,31 C ÁTOMO 2011 OD1 ASP B 169 -14,877 4,252 6,856
345 / 500
1,00 65,52 O ÁTOMO 2012 OD2 ASP B 169 -15,355 5,594 5,187 1,00 67,95 O ÁTOMO 2013 N SER B 170 -12,892 1,457 7,130 1,00 52,83 N ÁTOMO 2014 CA SER B 170 -12,551 0,920 8,468 1,00 51,74 C ÁTOMO 2015 C SER B 170 -12,756 1,893 9,683 1,00 54,52 C ÁTOMO 2016 O SER B 170 -12,112 1,713 10,719 1,00 54,26 O ÁTOMO 2017 CB SER B 170 -11,121 0,376 8,475 1,00 56,38 C ÁTOMO 2018 OG SER B 170 -10,912 -0,598 7,465 1,00 61,79 O ÁTOMO 2019 N THR B 171 -13,678 2,870 9,581 1,00 50,06 N ÁTOMO 2020 CA THR B 171 -13,979 3,788 10,688 1,00 49,35 C ÁTOMO 2021 C THR B 171 -15,274 3,377 11,383 1,00 51,64 C ÁTOMO 2022 O THR B 171 -16,048 2,563 10,867 1,00 49,92 O ÁTOMO 2023 CB THR B 171 -14,165 5,245 10,192 1,00 53,05 C ÁTOMO 2024 OG1 THR B 171 -15,281 5,301 9,296 1,00 45,64 O ÁTOMO 2025 CG2 THR B 171 -12,905 5,831 9,567 1,00 51,38 C
346 / 500
ÁTOMO 2026 N TYR B 172 -15,518 4,001 12,534 1,00 48,20 N ÁTOMO 2027 CA TYR B 172 -16,731 3,847 13,322 1,00 46,06 C ÁTOMO 2028 C TYR B 172 -17,550 5,127 13,218 1,00 48,04 C ÁTOMO 2029 O TYR B 172 -17,003 6,203 12,962 1,00 47,47 O ÁTOMO 2030 CB TYR B 172 -16,375 3,648 14,800 1,00 47,86 C ÁTOMO 2031 CG TYR B 172 -15,664 2,347 15,070 1,00 50,29 C ÁTOMO 2032 CD1 TYR B 172 -14,281 2,249 14,961 1,00 54,19 C ÁTOMO 2033 CD2 TYR B 172 -16,373 1,207 15,436 1,00 49,40 C ÁTOMO 2034 CE1 TYR B 172 -13,622 1,046 15,205 1,00 56,13 C ÁTOMO 2035 CE2 TYR B 172 -15,726 0,002 15,687 1,00 50,21 C ÁTOMO 2036 CZ TYR B 172 -14,353 -0,080 15,553 1,00 58,65 C ÁTOMO 2037 OH TYR B 172 -13,732 -1,266 15,836 1,00 57,48 O ÁTOMO 2038 N SER B 173 -18,853 5,005 13,449 1,00 42,52 N ÁTOMO 2039 CA SER B 173 -19,781 6,128 13,554 1,00 41,39 C ÁTOMO 2040 C SER B 173 -20,567 5,872 14,829
347 / 500
1,00 44,26 C ÁTOMO 2041 O SER B 173 -20,687 4,717 15,243 1,00 42,74 O ÁTOMO 2042 CB SER B 173 -20,688 6,231 12,336 1,00 42,46 C ÁTOMO 2043 OG SER B 173 -19,968 6,785 11,247 1,00 48,33 O ÁTOMO 2044 N LEU B 174 -21,067 6,926 15,473 1,00 41,73 N ÁTOMO 2045 CA LEU B 174 -21,758 6,794 16,750 1,00 41,45 C ÁTOMO 2046 C LEU B 174 -22,885 7,807 16,895 1,00 45,24 C ÁTOMO 2047 O LEU B 174 -22,722 8,965 16,500 1,00 44,85 O ÁTOMO 2048 CB LEU B 174 -20,711 6,948 17,870 1,00 43,33 C ÁTOMO 2049 CG LEU B 174 -21,169 6,802 19,328 1,00 48,59 C ÁTOMO 2050 CD1 LEU B 174 -20,045 6,224 20,192 1,00 50,45 C ÁTOMO 2051 CD2 LEU B 174 -21,589 8,146 19,925 1,00 52,10 C ÁTOMO 2052 N SER B 175 -24,022 7,377 17,494 1,00 40,43 N ÁTOMO 2053 CA SER B 175 -25,159 8,257 17,785 1,00 39,27 C ÁTOMO 2054 C SER B 175 -25,413 8,287 19,306 1,00 43,68 C
348 / 500
ÁTOMO 2055 O SER B 175 -25,371 7,237 19,955 1,00 44,00 O ÁTOMO 2056 CB SER B 175 -26,419 7,749 17,098 1,00 39,91 C ÁTOMO 2057 OG SER B 175 -26,842 6,540 17,710 1,00 46,16 O ÁTOMO 2058 N SER B 176 -25,725 9,460 19,850 1,00 39,04 N ÁTOMO 2059 CA SER B 176 -26,103 9,626 21,255 1,00 39,59 C ÁTOMO 2060 C SER B 176 -27,460 10,313 21,229 1,00 43,39 C ÁTOMO 2061 O SER B 176 -27,584 11,352 20,588 1,00 42,69 O ÁTOMO 2062 CB SER B 176 -25,083 10,467 22,009 1,00 44,01 C ÁTOMO 2063 OG SER B 176 -25,406 10,533 23,388 1,00 53,29 O ÁTOMO 2064 N THR B 177 -28,494 9,694 21,813 1,00 39,57 N ÁTOMO 2065 CA THR B 177 -29,853 10,234 21,800 1,00 38,89 C ÁTOMO 2066 C THR B 177 -30,309 10,614 23,207 1,00 45,78 C ÁTOMO 2067 O THR B 177 -30,455 9,739 24,061 1,00 46,82 O ÁTOMO 2068 CB THR B 177 -30,820 9,242 21,152 1,00 42,72 C ÁTOMO 2069 OG1 THR B 177 -30,292 8,833 19,885
349 / 500
1,00 41,05 O ÁTOMO 2070 CG2 THR B 177 -32,216 9,833 20,964 1,00 40,93 C ÁTOMO 2071 N LEU B 178 -30,578 11,912 23,423 1,00 44,32 N ÁTOMO 2072 CA LEU B 178 -31,063 12,457 24,691 1,00 45,67 C ÁTOMO 2073 C LEU B 178 -32,572 12,606 24,560 1,00 51,59 C ÁTOMO 2074 O LEU B 178 -33,017 13,348 23,691 1,00 50,54 O ÁTOMO 2075 CB LEU B 178 -30,421 13,829 24,939 1,00 46,50 C ÁTOMO 2076 CG LEU B 178 -30,877 14,609 26,178 1,00 51,65 C ÁTOMO 2077 CD1 LEU B 178 -30,287 14,020 27,432 1,00 52,40 C ÁTOMO 2078 CD2 LEU B 178 -30,473 16,062 26,066 1,00 55,19 C ÁTOMO 2079 N THR B 179 -33,359 11,906 25,400 1,00 50,94 N ÁTOMO 2080 CA THR B 179 -34,823 11,978 25,341 1,00 51,02 C ÁTOMO 2081 C THR B 179 -35,379 12,693 26,588 1,00 54,86 C ÁTOMO 2082 O THR B 179 -35,180 12,233 27,712 1,00 54,95 O ÁTOMO 2083 CB THR B 179 -35,427 10,576 25,091 1,00 62,65 C
350 / 500
ÁTOMO 2084 OG1 THR B 179 -34,903 10,049 23,857 1,00 67,28 O ÁTOMO 2085 CG2 THR B 179 -36,950 10,604 24,996 1,00 60,77 C ÁTOMO 2086 N LEU B 180 -36,077 13,813 26,374 1,00 50,66 N ÁTOMO 2087 CA LEU B 180 -36,713 14,588 27,429 1,00 52,20 C ÁTOMO 2088 C LEU B 180 -38,189 14,686 27,132 1,00 52,81 C ÁTOMO 2089 O LEU B 180 -38,622 14,406 26,020 1,00 49,03 O ÁTOMO 2090 CB LEU B 180 -36,147 16,020 27,458 1,00 53,77 C ÁTOMO 2091 CG LEU B 180 -34,650 16,163 27,669 1,00 59,65 C ÁTOMO 2092 CD1 LEU B 180 -34,262 17,619 27,663 1,00 61,07 C ÁTOMO 2093 CD2 LEU B 180 -34,213 15,535 28,986 1,00 63,66 C ÁTOMO 2094 N SER B 181 -38,962 15,152 28,107 1,00 52,27 N ÁTOMO 2095 CA SER B 181 -40,374 15,437 27,886 1,00 52,01 C ÁTOMO 2096 C SER B 181 -40,429 16,787 27,163 1,00 56,45 C ÁTOMO 2097 O SER B 181 -39,449 17,538 27,208 1,00 55,99 O ÁTOMO 2098 CB SER B 181 -41,117 15,518 29,217
351 / 500
1,00 55,17 C ÁTOMO 2099 OG SER B 181 -40,678 16,608 30,012 1,00 55,33 O ÁTOMO 2100 N LYS B 182 -41,550 17,091 26,483 1,00 53,85 N ÁTOMO 2101 CA LYS B 182 -41,731 18,386 25,811 1,00 53,81 C ÁTOMO 2102 C LYS B 182 -41,730 19,486 26,880 1,00 59,10 C ÁTOMO 2103 O LYS B 182 -41,168 20,556 26,641 1,00 58,25 O ÁTOMO 2104 CB LYS B 182 -43,045 18,404 25,009 1,00 55,66 C ÁTOMO 2105 CG LYS B 182 -43,313 19,643 24,163 1,00 60,45 C ÁTOMO 2106 CD LYS B 182 -44,810 19,791 23,894 1,00 74,61 C ÁTOMO 2107 CE LYS B 182 -45,160 20,802 22,829 1,00 90,09 C ÁTOMO 2108 NZ LYS B 182 -46,478 20,502 22,212 1,00104,17 N ÁTOMO 2109 N ALA B 183 -42,314 19,206 28,075 1,00 57,91 N ÁTOMO 2110 CA ALA B 183 -42,348 20,175 29,186 1,00 60,15 C ÁTOMO 2111 C ALA B 183 -40,933 20,547 29,645 1,00 63,82 C ÁTOMO 2112 O ALA B 183 -40,628 21,728 29,711 1,00 64,74 O
352 / 500
ÁTOMO 2113 CB ALA B 183 -43,155 19,624 30,354 1,00 62,70 C ÁTOMO 2114 N ASP B 184 -40,057 19,551 29,888 1,00 59,31 N ÁTOMO 2115 CA ASP B 184 -38,658 19,805 30,266 1,00 59,12 C ÁTOMO 2116 C ASP B 184 -37,892 20,439 29,114 1,00 59,87 C ÁTOMO 2117 O ASP B 184 -37,064 21,317 29,358 1,00 58,39 O ÁTOMO 2118 CB ASP B 184 -37,931 18,520 30,705 1,00 60,60 C ÁTOMO 2119 CG ASP B 184 -38,336 17,989 32,069 1,00 75,85 C ÁTOMO 2120 OD1 ASP B 184 -39,246 18,580 32,695 1,00 78,40 O ÁTOMO 2121 OD2 ASP B 184 -37,744 16,980 32,511 1,00 81,02 O ÁTOMO 2122 N TYR B 185 -38,163 20,001 27,858 1,00 54,33 N ÁTOMO 2123 CA TYR B 185 -37,502 20,561 26,681 1,00 52,13 C ÁTOMO 2124 C TYR B 185 -37,741 22,083 26,569 1,00 57,95 C ÁTOMO 2125 O TYR B 185 -36,799 22,842 26,347 1,00 56,10 O ÁTOMO 2126 CB TYR B 185 -37,919 19,823 25,390 1,00 50,32 C ÁTOMO 2127 CG TYR B 185 -37,251 20,371 24,146
353 / 500
1,00 48,96 C ÁTOMO 2128 CD1 TYR B 185 -35,883 20,192 23,937 1,00 48,51 C ÁTOMO 2129 CD2 TYR B 185 -37,948 21,152 23,239 1,00 49,40 C ÁTOMO 2130 CE1 TYR B 185 -35,246 20,747 22,829 1,00 45,64 C ÁTOMO 2131 CE2 TYR B 185 -37,335 21,666 22,096 1,00 49,58 C ÁTOMO 2132 CZ TYR B 185 -35,976 21,467 21,898 1,00 53,23 C ÁTOMO 2133 OH TYR B 185 -35,340 21,992 20,798 1,00 51,78 O ÁTOMO 2134 N GLU B 186 -38,984 22,526 26,783 1,00 57,91 N ÁTOMO 2135 CA GLU B 186 -39,346 23,944 26,712 1,00 59,03 C ÁTOMO 2136 C GLU B 186 -38,786 24,798 27,873 1,00 63,83 C ÁTOMO 2137 O GLU B 186 -38,666 26,010 27,707 1,00 63,68 O ÁTOMO 2138 CB GLU B 186 -40,869 24,107 26,593 1,00 61,14 C ÁTOMO 2139 CG GLU B 186 -41,381 23,633 25,240 1,00 71,13 C ÁTOMO 2140 CD GLU B 186 -42,880 23,453 25,094 1,00 96,57 C ÁTOMO 2141 OE1 GLU B 186 -43,583 23,317 26,122 1,00 96,32 O
354 / 500
ÁTOMO 2142 OE2 GLU B 186 -43,345 23,410 23,932 1,00 90,42 O ÁTOMO 2143 N LYS B 187 -38,405 24,181 29,014 1,00 60,66 N ÁTOMO 2144 CA LYS B 187 -37,822 24,909 30,161 1,00 62,47 C ÁTOMO 2145 C LYS B 187 -36,365 25,392 29,933 1,00 65,88 C ÁTOMO 2146 O LYS B 187 -35,863 26,146 30,764 1,00 67,25 O ÁTOMO 2147 CB LYS B 187 -37,858 24,048 31,442 1,00 65,07 C ÁTOMO 2148 CG LYS B 187 -39,228 23,898 32,081 1,00 80,48 C ÁTOMO 2149 CD LYS B 187 -39,160 22,926 33,265 1,00 88,59 C ÁTOMO 2150 CE LYS B 187 -40,470 22,755 33,995 1,00 98,81 C ÁTOMO 2151 NZ LYS B 187 -41,385 21,808 33,306 1,00105,15 N ÁTOMO 2152 N HIS B 188 -35,667 24,929 28,867 1,00 60,49 N ÁTOMO 2153 CA HIS B 188 -34,268 25,306 28,622 1,00 60,34 C ÁTOMO 2154 C HIS B 188 -34,062 25,826 27,224 1,00 61,88 C ÁTOMO 2155 O HIS B 188 -34,881 25,566 26,341 1,00 59,68 O ÁTOMO 2156 CB HIS B 188 -33,350 24,109 28,873
355 / 500
1,00 60,80 C ÁTOMO 2157 CG HIS B 188 -33,661 23,424 30,155 1,00 66,48 C ÁTOMO 2158 ND1 HIS B 188 -34,364 22,237 30,181 1,00 67,83 N ÁTOMO 2159 CD2 HIS B 188 -33,429 23,822 31,423 1,00 70,78 C ÁTOMO 2160 CE1 HIS B 188 -34,511 21,935 31,457 1,00 68,91 C ÁTOMO 2161 NE2 HIS B 188 -33,964 22,865 32,239 1,00 71,45 N ÁTOMO 2162 N LYS B 189 -32,942 26,536 27,020 1,00 60,07 N ÁTOMO 2163 CA LYS B 189 -32,587 27,161 25,743 1,00 59,64 C ÁTOMO 2164 C LYS B 189 -31,446 26,439 25,010 1,00 61,56 C ÁTOMO 2165 O LYS B 189 -31,626 26,054 23,861 1,00 59,51 O ÁTOMO 2166 CB LYS B 189 -32,210 28,637 25,998 1,00 63,64 C ÁTOMO 2167 CG LYS B 189 -31,897 29,482 24,750 1,00 86,76 C ÁTOMO 2168 CD LYS B 189 -33,007 29,508 23,672 1,00100,09 C ÁTOMO 2169 CE LYS B 189 -34,381 29,919 24,164 1,00116,24 C ÁTOMO 2170 NZ LYS B 189 -34,390 31,269 24,792 1,00126,05 N
356 / 500
ÁTOMO 2171 N VAL B 190 -30,279 26,270 25,660 1,00 59,07 N ÁTOMO 2172 CA VAL B 190 -29,086 25,696 25,022 1,00 57,13 C ÁTOMO 2173 C VAL B 190 -29,007 24,187 25,207 1,00 59,87 C ÁTOMO 2174 O VAL B 190 -29,004 23,721 26,339 1,00 60,57 O ÁTOMO 2175 CB VAL B 190 -27,775 26,351 25,534 1,00 62,46 C ÁTOMO 2176 CG1 VAL B 190 -26,594 25,966 24,641 1,00 61,26 C ÁTOMO 2177 CG2 VAL B 190 -27,903 27,877 25,631 1,00 63,39 C ÁTOMO 2178 N TYR B 191 -28,870 23,441 24,089 1,00 54,33 N ÁTOMO 2179 CA TYR B 191 -28,695 21,995 24,056 1,00 52,43 C ÁTOMO 2180 C TYR B 191 -27,375 21,755 23,359 1,00 55,56 C ÁTOMO 2181 O TYR B 191 -27,231 22,150 22,204 1,00 53,17 O ÁTOMO 2182 CB TYR B 191 -29,836 21,346 23,283 1,00 51,40 C ÁTOMO 2183 CG TYR B 191 -31,107 21,388 24,087 1,00 52,89 C ÁTOMO 2184 CD1 TYR B 191 -31,421 20,367 24,976 1,00 55,24 C ÁTOMO 2185 CD2 TYR B 191 -31,918 22,517 24,080
357 / 500
1,00 52,54 C ÁTOMO 2186 CE1 TYR B 191 -32,530 20,451 25,811 1,00 56,20 C ÁTOMO 2187 CE2 TYR B 191 -33,045 22,603 24,892 1,00 53,78 C ÁTOMO 2188 CZ TYR B 191 -33,343 21,567 25,764 1,00 60,22 C ÁTOMO 2189 OH TYR B 191 -34,444 21,607 26,576 1,00 57,44 O ÁTOMO 2190 N ALA B 192 -26,389 21,184 24,071 1,00 53,86 N ÁTOMO 2191 CA ALA B 192 -25,047 20,981 23,534 1,00 53,95 C ÁTOMO 2192 C ALA B 192 -24,563 19,554 23,704 1,00 58,41 C ÁTOMO 2193 O ALA B 192 -24,882 18,900 24,688 1,00 58,37 O ÁTOMO 2194 CB ALA B 192 -24,075 21,925 24,223 1,00 57,15 C ÁTOMO 2195 N CYS B 193 -23,760 19,100 22,745 1,00 55,78 N ÁTOMO 2196 CA CYS B 193 -23,131 17,791 22,738 1,00 56,08 C ÁTOMO 2197 C CYS B 193 -21,626 18,050 22,745 1,00 57,94 C ÁTOMO 2198 O CYS B 193 -21,149 18,719 21,839 1,00 56,41 O ÁTOMO 2199 CB CYS B 193 -23,554 17,011 21,493 1,00 55,44 C
358 / 500
ÁTOMO 2200 SG CYS B 193 -22,629 15,479 21,250 1,00 59,78 S ÁTOMO 2201 N GLU B 194 -20,890 17,564 23,755 1,00 56,17 N ÁTOMO 2202 CA GLU B 194 -19,434 17,743 23,838 1,00 57,92 C ÁTOMO 2203 C GLU B 194 -18,767 16,390 23,593 1,00 60,48 C ÁTOMO 2204 O GLU B 194 -18,995 15,445 24,355 1,00 59,51 O ÁTOMO 2205 CB GLU B 194 -19,027 18,319 25,195 1,00 61,77 C ÁTOMO 2206 CG GLU B 194 -17,550 18,666 25,297 1,00 74,55 C ÁTOMO 2207 CD GLU B 194 -17,129 19,093 26,686 1,00 96,82 C ÁTOMO 2208 OE1 GLU B 194 -17,270 18,274 27,621 1,00 85,14 O ÁTOMO 2209 OE2 GLU B 194 -16,641 20,237 26,837 1,00 99,73 O ÁTOMO 2210 N VAL B 195 -17,935 16,313 22,536 1,00 56,28 N ÁTOMO 2211 CA VAL B 195 -17,273 15,088 22,087 1,00 54,95 C ÁTOMO 2212 C VAL B 195 -15,775 15,118 22,382 1,00 60,96 C ÁTOMO 2213 O VAL B 195 -15,094 16,053 21,963 1,00 60,69 O ÁTOMO 2214 CB VAL B 195 -17,532 14,890 20,567
359 / 500
1,00 56,65 C ÁTOMO 2215 CG1 VAL B 195 -16,738 13,705 20,011 1,00 56,05 C ÁTOMO 2216 CG2 VAL B 195 -19,027 14,741 20,283 1,00 53,80 C ÁTOMO 2217 N THR B 196 -15,261 14,055 23,039 1,00 59,14 N ÁTOMO 2218 CA THR B 196 -13,839 13,873 23,344 1,00 61,70 C ÁTOMO 2219 C THR B 196 -13,334 12,670 22,527 1,00 63,94 C ÁTOMO 2220 O THR B 196 -13,985 11,623 22,507 1,00 61,61 O ÁTOMO 2221 CB THR B 196 -13,644 13,679 24,850 1,00 74,19 C ÁTOMO 2222 OG1 THR B 196 -14,285 14,761 25,532 1,00 76,14 O ÁTOMO 2223 CG2 THR B 196 -12,172 13,614 25,251 1,00 75,74 C ÁTOMO 2224 N HIS B 197 -12,196 12,838 21,829 1,00 61,96 N ÁTOMO 2225 CA HIS B 197 -11,605 11,795 20,982 1,00 61,16 C ÁTOMO 2226 C HIS B 197 -10,122 12,097 20,682 1,00 68,85 C ÁTOMO 2227 O HIS B 197 -9,753 13,262 20,519 1,00 69,73 O ÁTOMO 2228 CB HIS B 197 -12,396 11,689 19,664 1,00 59,08 C
360 / 500
ÁTOMO 2229 CG HIS B 197 -11,947 10,574 18,778 1,00 61,45 C ÁTOMO 2230 ND1 HIS B 197 -11,075 10,793 17,733 1,00 64,08 N ÁTOMO 2231 CD2 HIS B 197 -12,277 9,264 18,806 1,00 61,56 C ÁTOMO 2232 CE1 HIS B 197 -10,883 9,612 17,172 1,00 62,74 C ÁTOMO 2233 NE2 HIS B 197 -11,573 8,658 17,797 1,00 61,59 N ÁTOMO 2234 N GLN B 198 -9,292 11,039 20,580 1,00 67,35 N ÁTOMO 2235 CA GLN B 198 -7,847 11,117 20,282 1,00 70,53 C ÁTOMO 2236 C GLN B 198 -7,505 11,978 19,037 1,00 75,67 C ÁTOMO 2237 O GLN B 198 -6,481 12,657 19,038 1,00 78,55 O ÁTOMO 2238 CB GLN B 198 -7,258 9,684 20,165 1,00 72,19 C ÁTOMO 2239 CG GLN B 198 -5,966 9,542 19,350 1,00 91,00 C ÁTOMO 2240 CD GLN B 198 -5,167 8,296 19,647 1,00109,12 C ÁTOMO 2241 OE1 GLN B 198 -3,935 8,341 19,703 1,00106,91 O ÁTOMO 2242 NE2 GLN B 198 -5,818 7,144 19,790 1,00 99,27 N ÁTOMO 2243 N GLY B 199 -8,365 11,973 18,008
361 / 500
1,00 70,22 N ÁTOMO 2244 CA GLY B 199 -8,154 12,744 16,779 1,00 70,28 C ÁTOMO 2245 C GLY B 199 -8,398 14,255 16,928 1,00 74,85 C ÁTOMO 2246 O GLY B 199 -8,050 15,002 16,015 1,00 74,21 O ÁTOMO 2247 N LEU B 200 -8,999 14,700 18,056 1,00 72,59 N ÁTOMO 2248 CA LEU B 200 -9,288 16,108 18,346 1,00 73,59 C ÁTOMO 2249 C LEU B 200 -8,262 16,658 19,343 1,00 82,02 C ÁTOMO 2250 O LEU B 200 -7,944 15,975 20,320 1,00 81,96 O ÁTOMO 2251 CB LEU B 200 -10,692 16,226 18,961 1,00 71,26 C ÁTOMO 2252 CG LEU B 200 -11,825 15,587 18,164 1,00 72,51 C ÁTOMO 2253 CD1 LEU B 200 -13,085 15,475 19,002 1,00 70,73 C ÁTOMO 2254 CD2 LEU B 200 -12,068 16,347 16,875 1,00 74,05 C ÁTOMO 2255 N SER B 201 -7,761 17,893 19,113 1,00 82,62 N ÁTOMO 2256 CA SER B 201 -6,787 18,543 20,012 1,00 86,82 C ÁTOMO 2257 C SER B 201 -7,428 18,852 21,369 1,00 92,27 C
362 / 500
ÁTOMO 2258 O SER B 201 -6,815 18,607 22,407 1,00 94,46 O ÁTOMO 2259 CB SER B 201 -6,240 19,826 19,389 1,00 92,04 C ÁTOMO 2260 OG SER B 201 -7,279 20,740 19,081 1,00 99,16 O ÁTOMO 2261 N SER B 202 -8,663 19,384 21,347 1,00 87,20 N ÁTOMO 2262 CA SER B 202 -9,465 19,681 22,538 1,00 86,89 C ÁTOMO 2263 C SER B 202 -10,922 19,245 22,249 1,00 86,91 C ÁTOMO 2264 O SER B 202 -11,279 19,145 21,072 1,00 84,09 O ÁTOMO 2265 CB SER B 202 -9,408 21,172 22,873 1,00 91,46 C ÁTOMO 2266 OG SER B 202 -9,888 21,971 21,804 1,00 97,96 O ÁTOMO 2267 N PRO B 203 -11,758 18,993 23,292 1,00 82,94 N ÁTOMO 2268 CA PRO B 203 -13,141 18,558 23,060 1,00 79,66 C ÁTOMO 2269 C PRO B 203 -13,979 19,502 22,171 1,00 81,40 C ÁTOMO 2270 O PRO B 203 -14,067 20,701 22,459 1,00 81,97 O ÁTOMO 2271 CB PRO B 203 -13,718 18,438 24,472 1,00 82,03 C ÁTOMO 2272 CG PRO B 203 -12,561 18,115 25,319
363 / 500
1,00 89,24 C ÁTOMO 2273 CD PRO B 203 -11,369 18,792 24,704 1,00 86,84 C ÁTOMO 2274 N VAL B 204 -14,577 18,950 21,086 1,00 74,31 N ÁTOMO 2275 CA VAL B 204 -15,402 19,710 20,144 1,00 71,83 C ÁTOMO 2276 C VAL B 204 -16,842 19,717 20,631 1,00 70,82 C ÁTOMO 2277 O VAL B 204 -17,394 18,656 20,932 1,00 68,32 O ÁTOMO 2278 CB VAL B 204 -15,288 19,152 18,703 1,00 75,22 C ÁTOMO 2279 CG1 VAL B 204 -16,276 19,839 17,757 1,00 73,55 C ÁTOMO 2280 CG2 VAL B 204 -13,865 19,315 18,185 1,00 77,39 C ÁTOMO 2281 N THR B 205 -17,456 20,911 20,681 1,00 66,25 N ÁTOMO 2282 CA THR B 205 -18,834 21,086 21,127 1,00 64,05 C ÁTOMO 2283 C THR B 205 -19,699 21,583 19,984 1,00 65,32 C ÁTOMO 2284 O THR B 205 -19,350 22,562 19,325 1,00 65,30 O ÁTOMO 2285 CB THR B 205 -18,915 22,066 22,306 1,00 68,69 C ÁTOMO 2286 OG1 THR B 205 -17,991 21,661 23,317 1,00 70,58 O
364 / 500
ÁTOMO 2287 CG2 THR B 205 -20,319 22,147 22,902 1,00 62,87 C ÁTOMO 2288 N LYS B 206 -20,835 20,911 19,764 1,00 59,26 N ÁTOMO 2289 CA LYS B 206 -21,832 21,304 18,776 1,00 57,07 C ÁTOMO 2290 C LYS B 206 -23,101 21,561 19,579 1,00 59,72 C ÁTOMO 2291 O LYS B 206 -23,423 20,777 20,474 1,00 58,87 O ÁTOMO 2292 CB LYS B 206 -22,036 20,204 17,717 1,00 57,42 C ÁTOMO 2293 CG LYS B 206 -20,795 19,932 16,858 1,00 64,65 C ÁTOMO 2294 CD LYS B 206 -20,429 21,085 15,921 1,00 63,94 C ÁTOMO 2295 CE LYS B 206 -19,183 20,783 15,124 1,00 68,88 C ÁTOMO 2296 NZ LYS B 206 -19,039 21,682 13,948 1,00 79,66 N ÁTOMO 2297 N SER B 207 -23,775 22,691 19,327 1,00 56,17 N ÁTOMO 2298 CA SER B 207 -24,972 23,044 20,084 1,00 55,72 C ÁTOMO 2299 C SER B 207 -25,976 23,832 19,259 1,00 58,40 C ÁTOMO 2300 O SER B 207 -25,691 24,239 18,134 1,00 57,77 O ÁTOMO 2301 CB SER B 207 -24,577 23,847 21,327
365 / 500
1,00 61,27 C ÁTOMO 2302 OG SER B 207 -24,055 25,122 20,989 1,00 69,57 O ÁTOMO 2303 N PHE B 208 -27,165 24,024 19,829 1,00 54,71 N ÁTOMO 2304 CA PHE B 208 -28,222 24,838 19,236 1,00 53,49 C ÁTOMO 2305 C PHE B 208 -29,049 25,502 20,342 1,00 58,74 C ÁTOMO 2306 O PHE B 208 -29,086 25,008 21,477 1,00 57,67 O ÁTOMO 2307 CB PHE B 208 -29,126 24,013 18,304 1,00 52,41 C ÁTOMO 2308 CG PHE B 208 -29,924 22,933 18,997 1,00 52,75 C ÁTOMO 2309 CD1 PHE B 208 -31,149 23,219 19,587 1,00 54,84 C ÁTOMO 2310 CD2 PHE B 208 -29,460 21,627 19,044 1,00 52,67 C ÁTOMO 2311 CE1 PHE B 208 -31,873 22,227 20,244 1,00 54,65 C ÁTOMO 2312 CE2 PHE B 208 -30,193 20,634 19,683 1,00 54,36 C ÁTOMO 2313 CZ PHE B 208 -31,403 20,933 20,266 1,00 52,70 C ÁTOMO 2314 N ASN B 209 -29,718 26,609 19,993 1,00 56,87 N ÁTOMO 2315 CA ASN B 209 -30,626 27,327 20,883 1,00 58,08 C
366 / 500
ÁTOMO 2316 C ASN B 209 -32,043 26,901 20,482 1,00 62,33 C ÁTOMO 2317 O ASN B 209 -32,355 26,913 19,292 1,00 60,45 O ÁTOMO 2318 CB ASN B 209 -30,446 28,834 20,727 1,00 58,83 C ÁTOMO 2319 CG ASN B 209 -29,077 29,323 21,146 1,00 79,26 C ÁTOMO 2320 OD1 ASN B 209 -28,414 28,737 22,010 1,00 68,87 O ÁTOMO 2321 ND2 ASN B 209 -28,625 30,428 20,566 1,00 75,32 N ÁTOMO 2322 N ARG B 210 -32,868 26,443 21,442 1,00 60,89 N ÁTOMO 2323 CA ARG B 210 -34,233 25,986 21,149 1,00 60,59 C ÁTOMO 2324 C ARG B 210 -35,012 27,071 20,368 1,00 69,52 C ÁTOMO 2325 O ARG B 210 -35,045 28,226 20,789 1,00 70,27 O ÁTOMO 2326 CB ARG B 210 -34,960 25,598 22,449 1,00 56,73 C ÁTOMO 2327 CG ARG B 210 -36,408 25,154 22,258 1,00 56,48 C ÁTOMO 2328 CD ARG B 210 -37,033 24,683 23,557 1,00 57,39 C ÁTOMO 2329 NE ARG B 210 -36,967 25,712 24,593 1,00 63,13 N ÁTOMO 2330 CZ ARG B 210 -37,759 26,782 24,679
367 / 500
1,00 77,20 C ÁTOMO 2331 NH1 ARG B 210 -38,730 26,977 23,789 1,00 65,86 N ÁTOMO 2332 NH2 ARG B 210 -37,591 27,662 25,660 1,00 59,34 N ÁTOMO 2333 N GLY B 211 -35,593 26,698 19,214 1,00 69,48 N ÁTOMO 2334 CA GLY B 211 -36,327 27,627 18,352 1,00 71,07 C ÁTOMO 2335 C GLY B 211 -35,357 28,440 17,492 1,00 78,25 C ÁTOMO 2336 O GLY B 211 -35,430 29,663 17,487 1,00 80,21 O ÁTOMO 2337 N GLU B 212 -34,461 27,747 16,772 1,00 76,19 N ÁTOMO 2338 CA GLU B 212 -33,428 28,309 15,888 1,00 76,94 C ÁTOMO 2339 C GLU B 212 -32,367 29,108 16,659 1,00 81,95 C ÁTOMO 2340 O GLU B 212 -32,603 30,233 17,092 1,00 82,60 O ÁTOMO 2341 CB GLU B 212 -34,032 29,140 14,735 1,00 78,34 C ÁTOMO 2342 CG GLU B 212 -35,167 28,457 13,985 1,00 91,48 C ÁTOMO 2343 CD GLU B 212 -34,833 27,101 13,398 1,00122,56 C ÁTOMO 2344 OE1 GLU B 212 -34,225 27,062 12,304 1,00124,80 O
368 / 500
ÁTOMO 2345 OE2 GLU B 212 -35,199 26,079 14,022 1,00119,86 O ÁTOMO 2346 CD CD B9901 -18,857 6,410 6,358 1,00126,83 CD ÁTOMO 2347 CD CD B9902 -33,656 22,074 34,366 1,00101,06 CD ÁTOMO 2348 O1 2PE B9911 -22,872 -9,867 16,331 1,00 62,50 O ÁTOMO 2349 C2 2PE B9911 -22,071 -10,991 16,674 1,00 63,56 C ÁTOMO 2350 C3 2PE B9911 -21,935 -11,146 18,163 1,00 65,44 C ÁTOMO 2351 O4 2PE B9911 -20,834 -10,369 18,641 1,00 66,79 O ÁTOMO 2352 C5 2PE B9911 -21,040 -9,788 19,931 1,00 64,28 C ÁTOMO 2353 C6 2PE B9911 -19,727 -9,445 20,570 1,00 62,37 C ÁTOMO 2354 O7 2PE B9911 -19,494 -10,301 21,691 1,00 60,69 O ÁTOMO 2355 C8 2PE B9911 -18,188 -10,856 21,782 1,00 59,26 C ÁTOMO 2356 C9 2PE B9911 -17,274 -9,906 22,475 1,00 61,42 C ÁTOMO 2357 O10 2PE B9911 -15,949 -10,431 22,475 1,00 63,12 O ÁTOMO 2358 C11 2PE B9911 -14,979 -9,603 21,849 1,00 65,29 C ÁTOMO 2359 C12 2PE B9911 -14,612 -8,454 22,735
369 / 500
1,00 69,11 C ÁTOMO 2360 O13 2PE B9911 -14,469 -7,280 21,939 1,00 72,89 O ÁTOMO 2361 C14 2PE B9911 -14,725 -6,052 22,615 1,00 77,60 C ÁTOMO 2362 C15 2PE B9911 -15,447 -5,108 21,699 1,00 80,79 C ÁTOMO 2363 O16 2PE B9911 -16,827 -5,016 22,050 1,00 84,78 O ÁTOMO 2364 C17 2PE B9911 -17,094 -4,168 23,171 1,00 90,27 C ÁTOMO 2365 C18 2PE B9911 -18,054 -4,834 24,111 1,00 91,97 C ÁTOMO 2366 O19 2PE B9911 -17,687 -4,558 25,466 1,00 95,36 O ÁTOMO 2367 C20 2PE B9911 -17,491 -5,710 26,284 1,00 96,33 C ÁTOMO 2368 C21 2PE B9911 -18,803 -6,194 26,819 1,00 95,30 C ÁTOMO 2369 O22 2PE B9911 -18,660 -7,493 27,385 1,00 94,55 O ÁTOMO 2370 C23 2PE B9911 -19,090 -8,542 26,525 1,00 91,87 C ÁTOMO 2371 C24 2PE B9911 -18,693 -9,866 27,094 1,00 92,15 C ÁTOMO 2372 O25 2PE B9911 -19,003 -10,901 26,162 1,00 89,40 O ÁTOMO 2373 C26 2PE B9911 -18,469 -12,180 26,492 1,00 87,56 C
370 / 500
ÁTOMO 2374 C27 2PE B9911 -19,251 -12,799 27,621 1,00 86,27 C ÁTOMO 2375 028 2PE B9911 -19,209 -14,218 27,573 1,00 84,51 O ÁTOMO 2376 N GLU C 1 -22,618 -29,854 1,438 1,00 63,58 N ÁTOMO 2377 CA GLU C 1 -23,717 -30,821 1,519 1,00 63,31 C ÁTOMO 2378 C GLU C 1 -24,332 -30,855 2,927 1,00 61,30 C ÁTOMO 2379 O GLU C 1 -25,562 -30,934 3,036 1,00 61,09 O ÁTOMO 2380 CB GLU C 1 -23,250 -32,227 1,101 1,00 66,84 C ÁTOMO 2381 CG GLU C 1 -24,314 -33,319 1,157 1,00 82,05 C ÁTOMO 2382 CD GLU C 1 -25,611 -33,021 0,422 1,00109,67 C ÁTOMO 2383 OE1 GLU C 1 -25,551 -32,432 -0,682 1,00110,68 O ÁTOMO 2384 OE2 GLU C 1 -26,689 -33,395 0,940 1,00104,39 O ÁTOMO 2385 N ILE C 2 -23,504 -30,833 3,999 1,00 51,48 N ÁTOMO 2386 CA ILE C 2 -24,059 -30,861 5,352 1,00 47,04 C ÁTOMO 2387 C ILE C 2 -24,625 -29,480 5,729 1,00 47,71 C ÁTOMO 2388 O ILE C 2 -23,925 -28,470 5,624 1,00
371 / 500
45,78 O ÁTOMO 2389 CB ILE C 2 -23,058 -31,378 6,415 1,00 48,86 C ÁTOMO 2390 CG1 ILE C 2 -22,700 -32,866 6,161 1,00 49,65 C ÁTOMO 2391 CG2 ILE C 2 -23,644 -31,168 7,838 1,00 46,14 C ÁTOMO 2392 CD1 ILE C 2 -21,523 -33,450 7,026 1,00 47,83 C ÁTOMO 2393 N GLN C 3 -25,870 -29,453 6,222 1,00 43,58 N ÁTOMO 2394 CA GLN C 3 -26,493 -28,215 6,675 1,00 42,22 C ÁTOMO 2395 C GLN C 3 -27,422 -28,456 7,873 1,00 43,24 C ÁTOMO 2396 O GLN C 3 -28,128 -29,463 7,913 1,00 42,56 O ÁTOMO 2397 CB GLN C 3 -27,279 -27,571 5,520 1,00 44,23 C ÁTOMO 2398 CG GLN C 3 -27,799 -26,166 5,849 1,00 66,49 C ÁTOMO 2399 CD GLN C 3 -27,461 -25,147 4,789 1,00 94,56 C ÁTOMO 2400 OE1 GLN C 3 -26,284 -24,843 4,550 1,00 93,02 O ÁTOMO 2401 NE2 GLN C 3 -28,476 -24,556 4,160 1,00 84,87 N ÁTOMO 2402 N LEU C 4 -27,416 -27,515 8,839 1,00 37,54 N
372 / 500
ÁTOMO 2403 CA LEU C 4 -28,322 -27,497 9,987 1,00 35,69 C ÁTOMO 2404 C LEU C 4 -29,240 -26,293 9,752 1,00 37,93 C ÁTOMO 2405 O LEU C 4 -28,736 -25,183 9,626 1,00 34,85 O ÁTOMO 2406 CB LEU C 4 -27,554 -27,318 11,308 1,00 34,43 C ÁTOMO 2407 CG LEU C 4 -26,555 -28,411 11,693 1,00 39,46 C ÁTOMO 2408 CD1 LEU C 4 -26,104 -28,237 13,129 1,00 37,91 C ÁTOMO 2409 CD2 LEU C 4 -27,122 -29,796 11,492 1,00 41,20 C ÁTOMO 2410 N VAL C 5 -30,561 -26,514 9,621 1,00 35,79 N ÁTOMO 2411 CA VAL C 5 -31,519 -25,437 9,367 1,00 35,25 C ÁTOMO 2412 C VAL C 5 -32,391 -25,265 10,586 1,00 35,99 C ÁTOMO 2413 O VAL C 5 -33,154 -26,161 10,918 1,00 34,91 O ÁTOMO 2414 CB VAL C 5 -32,386 -25,701 8,102 1,00 40,70 C ÁTOMO 2415 CG1 VAL C 5 -33,389 -24,564 7,876 1,00 40,07 C ÁTOMO 2416 CG2 VAL C 5 -31,506 -25,886 6,869 1,00 41,08 C ÁTOMO 2417 N GLN C 6 -32,333 -24,097 11,211
373 / 500
1,00 33,06 N ÁTOMO 2418 CA GLN C 6 -33,158 -23,799 12,378 1,00 32,21 C ÁTOMO 2419 C GLN C 6 -34,440 -23,054 12,027 1,00 36,16 C ÁTOMO 2420 O GLN C 6 -34,502 -22,364 11,005 1,00 34,87 O ÁTOMO 2421 CB GLN C 6 -32,361 -22,988 13,389 1,00 31,67 C ÁTOMO 2422 CG GLN C 6 -31,222 -23,775 13,990 1,00 33,35 C ÁTOMO 2423 CD GLN C 6 -30,507 -22,998 15,048 1,00 37,99 C ÁTOMO 2424 OE1 GLN C 6 -29,304 -22,789 14,961 1,00 32,51 O ÁTOMO 2425 NE2 GLN C 6 -31,204 -22,608 16,108 1,00 34,83 N ÁTOMO 2426 N SER C 7 -35,442 -23,145 12,912 1,00 33,10 N ÁTOMO 2427 CA SER C 7 -36,714 -22,436 12,728 1,00 32,33 C ÁTOMO 2428 C SER C 7 -36,530 -20,904 12,916 1,00 34,33 C ÁTOMO 2429 O SER C 7 -35,486 -20,441 13,402 1,00 32,67 O ÁTOMO 2430 CB SER C 7 -37,790 -22,996 13,663 1,00 34,45 C ÁTOMO 2431 OG SER C 7 -37,340 -23,094 15,005 1,00 35,38 O
374 / 500
ÁTOMO 2432 N GLY C 8 -37,536 -20,129 12,496 1,00 31,79 N ÁTOMO 2433 CA GLY C 8 -37,499 -18,664 12,499 1,00 30,41 C ÁTOMO 2434 C GLY C 8 -37,561 -17,981 13,867 1,00 36,01 C ÁTOMO 2435 O GLY C 8 -37,760 -18,623 14,905 1,00 34,46 O ÁTOMO 2436 N ALA C 9 -37,403 -16,640 13,835 1,00 33,40 N ÁTOMO 2437 CA ALA C 9 -37,415 -15,754 15,005 1,00 32,51 C ÁTOMO 2438 C ALA C 9 -38,680 -15,933 15,864 1,00 36,53 C ÁTOMO 2439 O ALA C 9 -39,776 -16,123 15,326 1,00 35,95 O ÁTOMO 2440 CB ALA C 9 -37,297 -14,299 14,553 1,00 32,54 C ÁTOMO 2441 N GLU C 10 -38,514 -15,861 17,196 1,00 32,54 N ÁTOMO 2442 CA GLU C 10 -39,591 -16,043 18,164 1,00 33,03 C ÁTOMO 2443 C GLU C 10 -39,707 -14,842 19,084 1,00 37,36 C ÁTOMO 2444 O GLU C 10 -38,696 -14,324 19,553 1,00 36,85 O ÁTOMO 2445 CB GLU C 10 -39,315 -17,292 19,032 1,00 34,31 C ÁTOMO 2446 CG GLU C 10 -39,313 -18,599 18,253
375 / 500
1,00 39,42 C ÁTOMO 2447 CD GLU C 10 -40,668 -19,160 17,863 1,00 50,94 C ÁTOMO 2448 OE1 GLU C 10 -41,708 -18,572 18,239 1,00 42,37 O ÁTOMO 2449 OE2 GLU C 10 -40,684 -20,185 17,146 1,00 50,90 O ÁTOMO 2450 N VAL C 11 -40,946 -14,421 19,373 1,00 35,06 N ÁTOMO 2451 CA VAL C 11 -41,231 -13,301 20,272 1,00 34,90 C ÁTOMO 2452 C VAL C 11 -42,306 -13,780 21,230 1,00 40,99 C ÁTOMO 2453 O VAL C 11 -43,376 -14,192 20,788 1,00 42,78 O ÁTOMO 2454 CB VAL C 11 -41,638 -12,035 19,496 1,00 36,50 C ÁTOMO 2455 CG1 VAL C 11 -41,698 -10,828 20,427 1,00 35,68 C ÁTOMO 2456 CG2 VAL C 11 -40,656 -11,786 18,359 1,00 35,29 C ÁTOMO 2457 N LYS C 12 -41,998 -13,797 22,526 1,00 38,39 N ÁTOMO 2458 CA LYS C 12 -42,875 -14,357 23,553 1,00 39,13 C ÁTOMO 2459 C LYS C 12 -43,030 -13,439 24,750 1,00 43,69 C ÁTOMO 2460 O LYS C 12 -42,196 -12,567 24,985 1,00 41,69 O
376 / 500
ÁTOMO 2461 CB LYS C 12 -42,269 -15,685 24,050 1,00 40,54 C ÁTOMO 2462 CG LYS C 12 -42,082 -16,767 22,986 1,00 40,87 C ÁTOMO 2463 CD LYS C 12 -43,385 -17,464 22,642 1,00 43,40 C ÁTOMO 2464 CE LYS C 12 -43,234 -18,398 21,470 1,00 49,33 C ÁTOMO 2465 NZ LYS C 12 -44,526 -19,027 21,098 1,00 60,76 N ÁTOMO 2466 N LYS C 13 -44,084 -13,682 25,538 1,00 43,27 N ÁTOMO 2467 CA LYS C 13 -44,349 -12,946 26,772 1,00 44,58 C ÁTOMO 2468 C LYS C 13 -43,672 -13,730 27,900 1,00 48,51 C ÁTOMO 2469 O LYS C 13 -43,477 -14,941 27,741 1,00 47,08 O ÁTOMO 2470 CB LYS C 13 -45,860 -12,867 27,055 1,00 48,66 C ÁTOMO 2471 CG LYS C 13 -46,686 -12,183 25,969 1,00 54,31 C ÁTOMO 2472 CD LYS C 13 -46,569 -10,668 25,985 1,00 57,75 C ÁTOMO 2473 CE LYS C 13 -47,609 -10,047 25,081 1,00 65,70 C ÁTOMO 2474 NZ LYS C 13 -47,421 -8,585 24,928 1,00 75,98 N ÁTOMO 2475 N PRO C 14 -43,359 -13,079 29,052
377 / 500
1,00 46,94 N ÁTOMO 2476 CA PRO C 14 -42,788 -13,806 30,180 1,00 47,12 C ÁTOMO 2477 C PRO C 14 -43,771 -14,860 30,685 1,00 51,78 C ÁTOMO 2478 O PRO C 14 -44,981 -14,614 30,686 1,00 51,43 O ÁTOMO 2479 CB PRO C 14 -42,535 -12,708 31,217 1,00 49,87 C ÁTOMO 2480 CG PRO C 14 -42,284 -11,487 30,418 1,00 52,81 C ÁTOMO 2481 CD PRO C 14 -42,928 -11,667 29,071 1,00 47,65 C ÁTOMO 2482 N GLY C 15 -43,257 -16,053 31,042 1,00 48,78 N ÁTOMO 2483 CA GLY C 15 -44,082 -17,158 31,533 1,00 50,33 C ÁTOMO 2484 C GLY C 15 -44,502 -18,130 30,431 1,00 53,71 C ÁTOMO 2485 O GLY C 15 -44,949 -19,224 30,750 1,00 54,84 O ÁTOMO 2486 N ALA C 16 -44,368 -17,752 29,141 1,00 49,31 N ÁTOMO 2487 CA ALA C 16 -44,747 -18,631 28,027 1,00 48,16 C ÁTOMO 2488 C ALA C 16 -43,645 -19,659 27,746 1,00 49,44 C ÁTOMO 2489 O ALA C 16 -42,606 -19,656 28,407 1,00 47,16 O
378 / 500
ÁTOMO 2490 CB ALA C 16 -45,003 -17,792 26,780 1,00 47,36 C ÁTOMO 2491 N SER C 17 -43,867 -20,529 26,757 1,00 46,84 N ÁTOMO 2492 CA SER C 17 -42,863 -21,495 26,317 1,00 45,71 C ÁTOMO 2493 C SER C 17 -42,603 -21,337 24,814 1,00 48,77 C ÁTOMO 2494 O SER C 17 -43,441 -20,803 24,076 1,00 47,69 O ÁTOMO 2495 CB SER C 17 -43,270 -22,926 26,675 1,00 51,76 C ÁTOMO 2496 OG SER C 17 -44,464 -23,326 26,024 1,00 66,12 O ÁTOMO 2497 N VAL C 18 -41,405 -21,746 24,378 1,00 44,66 N ÁTOMO 2498 CA VAL C 18 -40,986 -21,671 22,971 1,00 42,57 C ÁTOMO 2499 C VAL C 18 -40,295 -22,984 22,619 1,00 45,17 C ÁTOMO 2500 O VAL C 18 -39,628 -23,557 23,468 1,00 44,37 O ÁTOMO 2501 CB VAL C 18 -40,069 -20,431 22,706 1,00 44,23 C ÁTOMO 2502 CG1 VAL C 18 -38,754 -20,510 23,478 1,00 43,39 C ÁTOMO 2503 CG2 VAL C 18 -39,800 -20,240 21,221 1,00 42,49 C ÁTOMO 2504 N LYS C 19 -40,449 -23,445 21,376
379 / 500
1,00 42,15 N ÁTOMO 2505 CA LYS C 19 -39,828 -24,671 20,886 1,00 41,47 C ÁTOMO 2506 C LYS C 19 -39,072 -24,335 19,609 1,00 42,91 C ÁTOMO 2507 O LYS C 19 -39,684 -23,911 18,631 1,00 43,64 O ÁTOMO 2508 CB LYS C 19 -40,888 -25,751 20,634 1,00 45,01 C ÁTOMO 2509 CG LYS C 19 -40,308 -27,156 20,448 1,00 49,05 C ÁTOMO 2510 CD LYS C 19 -41,418 -28,215 20,426 1,00 60,62 C ÁTOMO 2511 CE LYS C 19 -40,902 -29,617 20,650 1,00 79,35 C ÁTOMO 2512 NZ LYS C 19 -42,009 -30,605 20,812 1,00 88,79 N ÁTOMO 2513 N VAL C 20 -37,738 -24,469 19,637 1,00 37,38 N ÁTOMO 2514 CA VAL C 20 -36,871 -24,175 18,489 1,00 35,44 C ÁTOMO 2515 C VAL C 20 -36,495 -25,507 17,860 1,00 38,00 C ÁTOMO 2516 O VAL C 20 -36,146 -26,430 18,585 1,00 36,91 O ÁTOMO 2517 CB VAL C 20 -35,611 -23,375 18,931 1,00 37,50 C ÁTOMO 2518 CG1 VAL C 20 -34,650 -23,152 17,759 1,00 36,60 C
380 / 500
ÁTOMO 2519 CG2 VAL C 20 -36,016 -22,038 19,552 1,00 36,75 C ÁTOMO 2520 N SER C 21 -36,574 -25,615 16,531 1,00 34,47 N ÁTOMO 2521 CA SER C 21 -36,224 -26,848 15,830 1,00 34,87 C ÁTOMO 2522 C SER C 21 -34,903 -26,650 15,077 1,00 40,61 C ÁTOMO 2523 O SER C 21 -34,486 -25,518 14,820 1,00 39,50 O ÁTOMO 2524 CB SER C 21 -37,344 -27,262 14,883 1,00 37,26 C ÁTOMO 2525 OG SER C 21 -37,457 -26,351 13,803 1,00 48,80 O ÁTOMO 2526 N CYS C 22 -34,236 -27,757 14,773 1,00 37,95 N ÁTOMO 2527 CA CYS C 22 -32,951 -27,774 14,074 1,00 38,24 C ÁTOMO 2528 C CYS C 22 -32,951 -29,009 13,165 1,00 42,29 C ÁTOMO 2529 O CYS C 22 -32,783 -30,117 13,660 1,00 43,00 O ÁTOMO 2530 CB CYS C 22 -31,816 -27,820 15,100 1,00 38,86 C ÁTOMO 2531 SG CYS C 22 -30,172 -28,148 14,408 1,00 42,75 S ÁTOMO 2532 N LYS C 23 -33,185 -28,822 11,862 1,00 39,28 N ÁTOMO 2533 CA LYS C 23 -33,231 -29,916 10,893
381 / 500
1,00 39,83 C ÁTOMO 2534 C LYS C 23 -31,852 -30,134 10,289 1,00 43,79 C ÁTOMO 2535 O LYS C 23 -31,302 -29,223 9,686 1,00 42,31 O ÁTOMO 2536 CB LYS C 23 -34,254 -29,611 9,787 1,00 43,14 C ÁTOMO 2537 CG LYS C 23 -34,474 -30,785 8,825 1,00 52,94 C ÁTOMO 2538 CD LYS C 23 -35,742 -30,618 7,995 1,00 58,08 C ÁTOMO 2539 CE LYS C 23 -35,928 -31,725 6,979 1,00 60,42 C ÁTOMO 2540 NZ LYS C 23 -36,619 -32,901 7,555 1,00 59,48 N ÁTOMO 2541 N ALA C 24 -31,310 -31,351 10,425 1,00 42,99 N ÁTOMO 2542 CA ALA C 24 -29,998 -31,718 9,891 1,00 43,47 C ÁTOMO 2543 C ALA C 24 -30,144 -32,476 8,573 1,00 48,66 C ÁTOMO 2544 O ALA C 24 -31,098 -33,241 8,411 1,00 49,47 O ÁTOMO 2545 CB ALA C 24 -29,276 -32,604 10,890 1,00 44,42 C ÁTOMO 2546 N SER C 25 -29,178 -32,302 7,652 1,00 44,71 N ÁTOMO 2547 CA SER C 25 -29,148 -33,037 6,384 1,00 45,72 C
382 / 500
ÁTOMO 2548 C SER C 25 -27,706 -33,238 5,922 1,00 50,57 C ÁTOMO 2549 O SER C 25 -26,822 -32,512 6,371 1,00 49,51 O ÁTOMO 2550 CB SER C 25 -29,960 -32,303 5,314 1,00 49,16 C ÁTOMO 2551 OG SER C 25 -29,436 -31,022 5,006 1,00 50,85 O ÁTOMO 2552 N GLY C 26 -27,468 -34,242 5,053 1,00 49,05 N ÁTOMO 2553 CA GLY C 26 -26,155 -34,522 4,467 1,00 49,32 C ÁTOMO 2554 C GLY C 26 -25,287 -35,531 5,217 1,00 53,45 C ÁTOMO 2555 O GLY C 26 -24,162 -35,785 4,780 1,00 54,80 O ÁTOMO 2556 N TYR C 27 -25,778 -36,114 6,324 1,00 48,38 N ÁTOMO 2557 CA TYR C 27 -25,002 -37,088 7,103 1,00 46,86 C ÁTOMO 2558 C TYR C 27 -25,932 -37,981 7,925 1,00 51,13 C ÁTOMO 2559 O TYR C 27 -27,143 -37,750 7,938 1,00 50,12 O ÁTOMO 2560 CB TYR C 27 -24,001 -36,349 8,015 1,00 45,84 C ÁTOMO 2561 CG TYR C 27 -24,643 -35,614 9,175 1,00 43,92 C ÁTOMO 2562 CD1 TYR C 27 -25,131 -34,323 9,024
383 / 500
1,00 44,44 C ÁTOMO 2563 CD2 TYR C 27 -24,730 -36,201 10,432 1,00 43,61 C ÁTOMO 2564 CE1 TYR C 27 -25,684 -33,627 10,100 1,00 43,30 C ÁTOMO 2565 CE2 TYR C 27 -25,284 -35,520 11,515 1,00 42,32 C ÁTOMO 2566 CZ TYR C 27 -25,766 -34,234 11,345 1,00 47,43 C ÁTOMO 2567 OH TYR C 27 -26,322 -33,590 12,424 1,00 44,79 O ÁTOMO 2568 N THR C 28 -25,363 -38,986 8,621 1,00 49,09 N ÁTOMO 2569 CA THR C 28 -26,132 -39,907 9,466 1,00 49,25 C ÁTOMO 2570 C THR C 28 -26,422 -39,195 10,792 1,00 51,29 C ÁTOMO 2571 O THR C 28 -25,548 -39,106 11,649 1,00 50,53 O ÁTOMO 2572 CB THR C 28 -25,378 -41,240 9,638 1,00 59,68 C ÁTOMO 2573 OG1 THR C 28 -25,036 -41,741 8,344 1,00 59,87 O ÁTOMO 2574 CG2 THR C 28 -26,197 -42,289 10,394 1,00 58,03 C ÁTOMO 2575 N PHE C 29 -27,644 -38,652 10,926 1,00 46,66 N ÁTOMO 2576 CA PHE C 29 -28,109 -37,880 12,083 1,00 44,45 C
384 / 500
ÁTOMO 2577 C PHE C 29 -27,841 -38,536 13,439 1,00 46,44 C ÁTOMO 2578 O PHE C 29 -27,371 -37,866 14,353 1,00 44,51 O ÁTOMO 2579 CB PHE C 29 -29,618 -37,587 11,943 1,00 45,95 C ÁTOMO 2580 CG PHE C 29 -30,193 -36,720 13,040 1,00 45,40 C ÁTOMO 2581 CD1 PHE C 29 -29,801 -35,396 13,178 1,00 45,67 C ÁTOMO 2582 CD2 PHE C 29 -31,106 -37,239 13,954 1,00 46,43 C ÁTOMO 2583 CE1 PHE C 29 -30,325 -34,596 14,194 1,00 45,11 C ÁTOMO 2584 CE2 PHE C 29 -31,652 -36,430 14,951 1,00 47,75 C ÁTOMO 2585 CZ PHE C 29 -31,255 -35,117 15,069 1,00 44,49 C ÁTOMO 2586 N THR C 30 -28,108 -39,844 13,546 1,00 44,66 N ÁTOMO 2587 CA THR C 30 -27,971 -40,605 14,793 1,00 44,62 C ÁTOMO 2588 C THR C 30 -26,521 -40,998 15,170 1,00 46,75 C ÁTOMO 2589 O THR C 30 -26,341 -41,611 16,214 1,00 44,59 O ÁTOMO 2590 CB THR C 30 -28,879 -41,843 14,734 1,00 54,91 C ÁTOMO 2591 OG1 THR C 30 -28,458 -42,673 13,653
385 / 500
1,00 58,28 O ÁTOMO 2592 CG2 THR C 30 -30,354 -41,475 14,559 1,00 52,29 C ÁTOMO 2593 N ASN C 31 -25,495 -40,624 14,366 1,00 43,46 N ÁTOMO 2594 CA ASN C 31 -24,084 -40,936 14,667 1,00 43,21 C ÁTOMO 2595 C ASN C 31 -23,329 -39,787 15,353 1,00 44,04 C ÁTOMO 2596 O ASN C 31 -22,212 -39,999 15,817 1,00 44,02 O ÁTOMO 2597 CB ASN C 31 -23,344 -41,333 13,378 1,00 43,58 C ÁTOMO 2598 CG ASN C 31 -23,662 -42,722 12,874 1,00 59,56 C ÁTOMO 2599 OD1 ASN C 31 -24,315 -43,539 13,539 1,00 52,70 O ÁTOMO 2600 ND2 ASN C 31 -23,206 -43,018 11,674 1,00 53,16 N ÁTOMO 2601 N TYR C 32 -23,923 -38,584 15,414 1,00 40,04 N ÁTOMO 2602 CA TYR C 32 -23,294 -37,394 15,983 1,00 38,44 C ÁTOMO 2603 C TYR C 32 -24,233 -36,723 16,960 1,00 41,02 C ÁTOMO 2604 O TYR C 32 -25,401 -36,561 16,637 1,00 40,60 O ÁTOMO 2605 CB TYR C 32 -22,961 -36,394 14,850 1,00 38,37 C
386 / 500
ÁTOMO 2606 CG TYR C 32 -22,034 -36,960 13,799 1,00 40,01 C ÁTOMO 2607 CD1 TYR C 32 -22,526 -37,722 12,745 1,00 41,48 C ÁTOMO 2608 CD2 TYR C 32 -20,662 -36,775 13,883 1,00 41,23 C ÁTOMO 2609 CE1 TYR C 32 -21,673 -38,280 11,796 1,00 41,39 C ÁTOMO 2610 CE2 TYR C 32 -19,796 -37,339 12,949 1,00 43,02 C ÁTOMO 2611 CZ TYR C 32 -20,306 -38,083 11,898 1,00 48,67 C ÁTOMO 2612 OH TYR C 32 -19,468 -38,606 10,938 1,00 49,51 O ÁTOMO 2613 N GLY C 33 -23,733 -36,290 18,125 1,00 37,23 N ÁTOMO 2614 CA GLY C 33 -24,545 -35,563 19,098 1,00 36,84 C ÁTOMO 2615 C GLY C 33 -24,838 -34,150 18,599 1,00 40,03 C ÁTOMO 2616 O GLY C 33 -24,157 -33,661 17,693 1,00 39,15 O ÁTOMO 2617 N MET C 34 -25,861 -33,501 19,173 1,00 35,88 N ÁTOMO 2618 CA MET C 34 -26,236 -32,144 18,797 1,00 34,40 C ÁTOMO 2619 C MET C 34 -26,134 -31,239 20,019 1,00 39,38 C ÁTOMO 2620 O MET C 34 -26,831 -31,463 21,009
387 / 500
1,00 40,01 O ÁTOMO 2621 CB MET C 34 -27,666 -32,111 18,229 1,00 35,96 C ÁTOMO 2622 CG MET C 34 -28,039 -30,776 17,579 1,00 37,38 C ÁTOMO 2623 DP MET C 34 -26,998 -30,373 16,152 1,00 39,09 S ÁTOMO 2624 CE MET C 34 -27,629 -31,496 14,976 1,00 35,89 C ÁTOMO 2625 N ASN C 35 -25,253 -30,232 19,949 1,00 35,27 N ÁTOMO 2626 CA ASN C 35 -25,070 -29,236 21,010 1,00 34,40 C ÁTOMO 2627 C ASN C 35 -26,072 -28,130 20,849 1,00 37,48 C ÁTOMO 2628 O ASN C 35 -26,507 -27,859 19,735 1,00 36,13 O ÁTOMO 2629 CB ASN C 35 -23,682 -28,578 20,927 1,00 32,88 C ÁTOMO 2630 CG ASN C 35 -22,531 -29,545 21,095 1,00 45,03 C ÁTOMO 2631 OD1 ASN C 35 -22,213 -29,971 22,211 1,00 36,36 O ÁTOMO 2632 ND2 ASN C 35 -21,893 -29,927 20,006 1,00 37,11 N ÁTOMO 2633 N TRP C 36 -26,393 -27,451 21,956 1,00 34,97 N ÁTOMO 2634 CA TRP C 36 -27,235 -26,258 21,970 1,00 33,48 C
388 / 500
ÁTOMO 2635 C TRP C 36 -26,364 -25,194 22,617 1,00 35,71 C ÁTOMO 2636 O TRP C 36 -25,736 -25,477 23,633 1,00 35,70 O ÁTOMO 2637 CB TRP C 36 -28,554 -26,471 22,725 1,00 32,77 C ÁTOMO 2638 CG TRP C 36 -29,505 -27,349 21,972 1,00 34,47 C ÁTOMO 2639 CD1 TRP C 36 -29,633 -28,704 22,096 1,00 38,31 C ÁTOMO 2640 CD2 TRP C 36 -30,277 -26,977 20,822 1,00 33,76 C ÁTOMO 2641 NE1 TRP C 36 -30,519 -29,182 21,154 1,00 37,71 N ÁTOMO 2642 CE2 TRP C 36 -30,908 -28,147 20,343 1,00 37,56 C ÁTOMO 2643 CE3 TRP C 36 -30,552 -25,753 20,188 1,00 34,01 C ÁTOMO 2644 CZ2 TRP C 36 -31,801 -28,127 19,270 1,00 36,52 C ÁTOMO 2645 CZ3 TRP C 36 -31,473 -25,728 19,152 1,00 34,99 C ÁTOMO 2646 CH2 TRP C 36 -32,075 -26,905 18,693 1,00 36,19 C ÁTOMO 2647 N VAL C 37 -26,225 -24,029 21,962 1,00 31,77 N ÁTOMO 2648 CA VAL C 37 -25,368 -22,931 22,408 1,00 31,68 C ÁTOMO 2649 C VAL C 37 -26,214 -21,647 22,471
389 / 500
1,00 35,29 C ÁTOMO 2650 O VAL C 37 -26,931 -21,340 21,522 1,00 33,99 O ÁTOMO 2651 CB VAL C 37 -24,172 -22,788 21,412 1,00 34,93 C ÁTOMO 2652 CG1 VAL C 37 -23,336 -21,531 21,676 1,00 34,09 C ÁTOMO 2653 CG2 VAL C 37 -23,300 -24,046 21,423 1,00 35,24 C ÁTOMO 2654 N LYS C 38 -26,111 -20,898 23,574 1,00 33,55 N ÁTOMO 2655 CA LYS C 38 -26,828 -19,631 23,766 1,00 32,90 C ÁTOMO 2656 C LYS C 38 -25,879 -18,433 23,539 1,00 36,90 C ÁTOMO 2657 O LYS C 38 -24,732 -18,444 24,001 1,00 35,60 O ÁTOMO 2658 CB LYS C 38 -27,403 -19,567 25,201 1,00 34,99 C ÁTOMO 2659 CG LYS C 38 -28,113 -18,248 25,543 1,00 35,35 C ÁTOMO 2660 CD LYS C 38 -28,588 -18,249 26,978 1,00 39,90 C ÁTOMO 2661 CE LYS C 38 -29,184 -16,929 27,403 1,00 34,43 C ÁTOMO 2662 NZ LYS C 38 -29,763 -17,022 28,775 1,00 38,69 N ÁTOMO 2663 N GLN C 39 -26,384 -17,382 22,865 1,00 33,51 N
390 / 500
ÁTOMO 2664 CA GLN C 39 -25,650 -16,136 22,683 1,00 32,91 C ÁTOMO 2665 C GLN C 39 -26,573 -14,967 23,027 1,00 36,70 C ÁTOMO 2666 O GLN C 39 -27,387 -14,546 22,200 1,00 35,72 O ÁTOMO 2667 CB GLN C 39 -25,074 -16,007 21,265 1,00 33,64 C ÁTOMO 2668 CG GLN C 39 -24,267 -14,717 21,087 1,00 35,85 C ÁTOMO 2669 CD GLN C 39 -23,282 -14,813 19,955 1,00 40,10 C ÁTOMO 2670 OE1 GLN C 39 -23,590 -15,333 18,884 1,00 34,17 O ÁTOMO 2671 NE2 GLN C 39 -22,099 -14,253 20,121 1,00 33,15 N ÁTOMO 2672 N ALA C 40 -26,462 -14,465 24,262 1,00 35,19 N ÁTOMO 2673 CA ALA C 40 -27,256 -13,328 24,726 1,00 35,91 C ÁTOMO 2674 C ALA C 40 -26,802 -12,042 23,985 1,00 42,15 C ÁTOMO 2675 O ALA C 40 -25,671 -12,015 23,489 1,00 41,64 O ÁTOMO 2676 CB ALA C 40 -27,120 -13,172 26,237 1,00 37,19 C ÁTOMO 2677 N PRO C 41 -27,681 -11,015 23,846 1,00 40,24 N ÁTOMO 2678 CA PRO C 41 -27,300 -9,803 23,094
391 / 500
1,00 40,39 C ÁTOMO 2679 C PRO C 41 -26,025 -9,141 23,636 1,00 44,02 C ÁTOMO 2680 O PRO C 41 -25,911 -8,909 24,837 1,00 44,30 O ÁTOMO 2681 CB PRO C 41 -28,538 -8,894 23,208 1,00 42,20 C ÁTOMO 2682 CG PRO C 41 -29,652 -9,805 23,576 1,00 46,06 C ÁTOMO 2683 CD PRO C 41 -29,025 -10,859 24,436 1,00 41,75 C ÁTOMO 2684 N GLY C 42 -25,036 -8,940 22,757 1,00 40,30 N ÁTOMO 2685 CA GLY C 42 -23,757 -8,345 23,127 1,00 40,77 C ÁTOMO 2686 C GLY C 42 -22,812 -9,293 23,876 1,00 45,52 C ÁTOMO 2687 O GLY C 42 -21,745 -8,838 24,279 1,00 48,05 O ÁTOMO 2688 N GLN C 43 -23,160 -10,596 24,043 1,00 39,62 N ÁTOMO 2689 CA GLN C 43 -22,328 -11,545 24,791 1,00 40,29 C ÁTOMO 2690 C GLN C 43 -21,691 -12,601 23,865 1,00 43,71 C ÁTOMO 2691 O GLN C 43 -21,931 -12,611 22,655 1,00 41,68 O ÁTOMO 2692 CB GLN C 43 -23,168 -12,233 25,898 1,00 42,01 C
392 / 500
ÁTOMO 2693 CG GLN C 43 -23,863 -11,283 26,883 1,00 58,06 C ÁTOMO 2694 CD GLN C 43 -22,892 -10,511 27,738 1,00 86,83 C ÁTOMO 2695 OE1 GLN C 43 -22,255 -11,069 28,638 1,00 88,11 O ÁTOMO 2696 NE2 GLN C 43 -22,754 -9,211 27,490 1,00 80,98 N ÁTOMO 2697 N GLY C 44 -20,879 -13,487 24,455 1,00 42,03 N ÁTOMO 2698 CA GLY C 44 -20,186 -14,559 23,752 1,00 41,97 C ÁTOMO 2699 C GLY C 44 -21,034 -15,828 23,709 1,00 44,75 C ÁTOMO 2700 O GLY C 44 -22,256 -15,760 23,819 1,00 44,03 O ÁTOMO 2701 N LEU C 45 -20,378 -16,986 23,571 1,00 41,38 N ÁTOMO 2702 CA LEU C 45 -21,051 -18,286 23,471 1,00 38,74 C ÁTOMO 2703 C LEU C 45 -21,096 -19,009 24,820 1,00 41,07 C ÁTOMO 2704 O LEU C 45 -20,115 -19,017 25,558 1,00 41,06 O ÁTOMO 2705 CB LEU C 45 -20,354 -19,142 22,400 1,00 37,85 C ÁTOMO 2706 CG LEU C 45 -20,165 -18,444 21,029 1,00 40,26 C ÁTOMO 2707 CD1 LEU C 45 -19,302 -19,273 20,106
393 / 500
1,00 39,97 C ÁTOMO 2708 CD2 LEU C 45 -21,512 -18,127 20,365 1,00 39,04 C ÁTOMO 2709 N LYS C 46 -22,254 -19,604 25,137 1,00 36,64 N ÁTOMO 2710 CA LYS C 46 -22,491 -20,356 26,363 1,00 36,49 C ÁTOMO 2711 C LYS C 46 -23,068 -21,720 25,970 1,00 37,74 C ÁTOMO 2712 O LYS C 46 -24,114 -21,778 25,336 1,00 35,53 O ÁTOMO 2713 CB LYS C 46 -23,482 -19,579 27,259 1,00 38,67 C ÁTOMO 2714 CG LYS C 46 -23,730 -20,181 28,639 1,00 47,96 C ÁTOMO 2715 CD LYS C 46 -22,544 -20,014 29,567 1,00 59,13 C ÁTOMO 2716 CE LYS C 46 -22,893 -20,303 31,011 1,00 66,31 C ÁTOMO 2717 NZ LYS C 46 -21,727 -20,086 31,910 1,00 72,38 N ÁTOMO 2718 N TRP C 47 -22,391 -22,810 26,350 1,00 36,18 N ÁTOMO 2719 CA TRP C 47 -22,844 -24,174 26,054 1,00 35,61 C ÁTOMO 2720 C TRP C 47 -24,004 -24,522 26,986 1,00 39,00 C ÁTOMO 2721 O TRP C 47 -23,853 -24,431 28,197 1,00 39,05 O
394 / 500
ÁTOMO 2722 CB TRP C 47 -21,693 -25,160 26,260 1,00 34,55 C ÁTOMO 2723 CG TRP C 47 -21,961 -26,568 25,810 1,00 35,04 C ÁTOMO 2724 CD1 TRP C 47 -21,904 -27,043 24,532 1,00 37,01 C ÁTOMO 2725 CD2 TRP C 47 -22,128 -27,714 26,658 1,00 35,28 C ÁTOMO 2726 NE1 TRP C 47 -22,099 -28,405 24,526 1,00 36,66 N ÁTOMO 2727 CE2 TRP C 47 -22,197 -28,848 25,820 1,00 38,90 C ÁTOMO 2728 CE3 TRP C 47 -22,225 -27,893 28,048 1,00 37,36 C ÁTOMO 2729 CZ2 TRP C 47 -22,360 -30,139 26,322 1,00 38,56 C ÁTOMO 2730 CZ3 TRP C 47 -22,374 -29,180 28,548 1,00 39,47 C ÁTOMO 2731 CH2 TRP C 47 -22,451 -30,283 27,690 1,00 39,81 C ÁTOMO 2732 N MET C 48 -25,164 -24,876 26,420 1,00 34,50 N ÁTOMO 2733 CA MET C 48 -26,359 -25,221 27,204 1,00 34,00 C ÁTOMO 2734 C MET C 48 -26,370 -26,703 27,577 1,00 38,45 C ÁTOMO 2735 O MET C 48 -26,899 -27,080 28,623 1,00 38,74 O ÁTOMO 2736 CB MET C 48 -27,624 -24,887 26,406
395 / 500
1,00 34,84 C ÁTOMO 2737 CG MET C 48 -27,707 -23,431 26,014 1,00 36,90 C ÁTOMO 2738 DP MET C 48 -29,006 -23,169 24,819 1,00 39,77 S ÁTOMO 2739 CE MET C 48 -30,444 -23,408 25,832 1,00 37,72 C ÁTOMO 2740 N GLY C 49 -25,787 -27,534 26,710 1,00 34,76 N ÁTOMO 2741 CA GLY C 49 -25,736 -28,969 26,881 1,00 34,43 C ÁTOMO 2742 C GLY C 49 -25,755 -29,614 25,502 1,00 37,75 C ÁTOMO 2743 O GLY C 49 -25,497 -28,945 24,496 1,00 36,33 O ÁTOMO 2744 N TRP C 50 -26,087 -30,892 25,449 1,00 35,13 N ÁTOMO 2745 CA TRP C 50 -26,178 -31,620 24,185 1,00 34,61 C ÁTOMO 2746 C TRP C 50 -27,186 -32,747 24,308 1,00 39,74 C ÁTOMO 2747 O TRP C 50 -27,604 -33,081 25,417 1,00 40,68 O ÁTOMO 2748 CB TRP C 50 -24,798 -32,163 23,758 1,00 33,36 C ÁTOMO 2749 CG TRP C 50 -24,315 -33,329 24,572 1,00 35,59 C ÁTOMO 2750 CD1 TRP C 50 -23,927 -33,312 25,879 1,00 38,84 C
396 / 500
ÁTOMO 2751 CD2 TRP C 50 -24,170 -34,685 24,128 1,00 36,15 C ÁTOMO 2752 NE1 TRP C 50 -23,561 -34,572 26,280 1,00 39,22 N ÁTOMO 2753 CE2 TRP C 50 -23,711 -35,439 25,229 1,00 40,58 C ÁTOMO 2754 CE3 TRP C 50 -24,398 -35,340 22,908 1,00 37,44 C ÁTOMO 2755 CZ2 TRP C 50 -23,456 -36,813 25,144 1,00 40,47 C ÁTOMO 2756 CZ3 TRP C 50 -24,166 -36,707 22,829 1,00 39,61 C ÁTOMO 2757 CH2 TRP C 50 -23,704 -37,429 23,939 1,00 41,17 C ÁTOMO 2758 N ILE C 51 -27,582 -33,321 23,172 1,00 36,40 N ÁTOMO 2759 CA ILE C 51 -28,504 -34,444 23,143 1,00 36,37 C ÁTOMO 2760 C ILE C 51 -27,886 -35,575 22,345 1,00 40,89 C ÁTOMO 2761 O ILE C 51 -27,328 -35,348 21,267 1,00 37,88 O ÁTOMO 2762 CB ILE C 51 -29,929 -34,067 22,632 1,00 38,96 C ÁTOMO 2763 CG1 ILE C 51 -30,880 -35,296 22,714 1,00 40,23 C ÁTOMO 2764 CG2 ILE C 51 -29,903 -33,497 21,207 1,00 38,66 C ÁTOMO 2765 CD1 ILE C 51 -32,294 -34,955 22,868
397 / 500
1,00 42,97 C ÁTOMO 2766 N ASN C 52 -27,993 -36,803 22,887 1,00 39,50 N ÁTOMO 2767 CA ASN C 52 -27,517 -37,998 22,221 1,00 40,16 C ÁTOMO 2768 C ASN C 52 -28,559 -38,324 21,145 1,00 44,28 C ÁTOMO 2769 O ASN C 52 -29,687 -38,655 21,484 1,00 45,11 O ÁTOMO 2770 CB ASN C 52 -27,356 -39,143 23,230 1,00 40,73 C ÁTOMO 2771 CG ASN C 52 -26,756 -40,402 22,660 1,00 48,81 C ÁTOMO 2772 OD1 ASN C 52 -27,157 -40,886 21,593 1,00 40,43 O ÁTOMO 2773 ND2 ASN C 52 -25,828 -41,006 23,380 1,00 44,29 N ÁTOMO 2774 N THR C 53 -28,194 -38,208 19,866 1,00 40,01 N ÁTOMO 2775 CA THR C 53 -29,122 -38,445 18,759 1,00 40,61 C ÁTOMO 2776 C THR C 53 -29,458 -39,923 18,540 1,00 47,82 C ÁTOMO 2777 O THR C 53 -30,422 -40,206 17,835 1,00 49,05 O ÁTOMO 2778 CB THR C 53 -28,614 -37,778 17,481 1,00 42,11 C ÁTOMO 2779 OG1 THR C 53 -27,330 -38,317 17,157 1,00 40,46 O
398 / 500
ÁTOMO 2780 CG2 THR C 53 -28,556 -36,254 17,619 1,00 36,13 C ÁTOMO 2781 N ASN C 54 -28,702 -40,858 19,145 1,00 45,92 N ÁTOMO 2782 CA ASN C 54 -28,969 -42,291 19,027 1,00 47,26 C ÁTOMO 2783 C ASN C 54 -29,991 -42,778 20,074 1,00 52,16 C ÁTOMO 2784 O ASN C 54 -30,904 -43,526 19,728 1,00 52,80 O ÁTOMO 2785 CB ASN C 54 -27,677 -43,085 19,172 1,00 46,35 C ÁTOMO 2786 CG ASN C 54 -27,825 -44,510 18,724 1,00 63,63 C ÁTOMO 2787 OD1 ASN C 54 -28,026 -45,408 19,535 1,00 57,04 O ÁTOMO 2788 ND2 ASN C 54 -27,739 -44,747 17,422 1,00 57,72 N ÁTOMO 2789 N THR C 55 -29,808 -42,393 21,350 1,00 49,15 N ÁTOMO 2790 CA THR C 55 -30,681 -42,799 22,467 1,00 49,96 C ÁTOMO 2791 C THR C 55 -31,715 -41,737 22,858 1,00 52,55 C ÁTOMO 2792 O THR C 55 -32,695 -42,079 23,519 1,00 53,10 O ÁTOMO 2793 CB THR C 55 -29,839 -43,107 23,716 1,00 55,75 C ÁTOMO 2794 OG1 THR C 55 -29,190 -41,906 24,149
399 / 500
1,00 52,46 O ÁTOMO 2795 CG2 THR C 55 -28,826 -44,217 23,482 1,00 53,38 C ÁTOMO 2796 N GLY C 56 -31,461 -40,455 22,541 1,00 47,53 N ÁTOMO 2797 CA GLY C 56 -32,335 -39,350 22,933 1,00 46,25 C ÁTOMO 2798 C GLY C 56 -31,983 -38,788 24,307 1,00 49,63 C ÁTOMO 2799 O GLY C 56 -32,654 -37,852 24,733 1,00 48,46 O ÁTOMO 2800 N GLU C 57 -30,936 -39,327 24,998 1,00 47,35 N ÁTOMO 2801 CA GLU C 57 -30,527 -38,851 26,326 1,00 47,15 C ÁTOMO 2802 C GLU C 57 -30,029 -37,401 26,231 1,00 48,06 C ÁTOMO 2803 O GLU C 57 -29,088 -37,147 25,471 1,00 45,81 O ÁTOMO 2804 CB GLU C 57 -29,398 -39,723 26,910 1,00 49,45 C ÁTOMO 2805 CG GLU C 57 -28,947 -39,321 28,314 1,00 64,29 C ÁTOMO 2806 CD GLU C 57 -27,633 -39,929 28,774 1,00 82,18 C ÁTOMO 2807 OE1 GLU C 57 -27,256 -41,002 28,252 1,00 71,99 O ÁTOMO 2808 OE2 GLU C 57 -26,986 -39,337 29,670 1,00 70,32 O
400 / 500
ÁTOMO 2809 N PRO C 58 -30,625 -36,469 27,023 1,00 43,61 N ÁTOMO 2810 CA PRO C 58 -30,164 -35,082 27,019 1,00 41,79 C ÁTOMO 2811 C PRO C 58 -29,218 -34,848 28,196 1,00 45,66 C ÁTOMO 2812 O PRO C 58 -29,383 -35,454 29,263 1,00 43,86 O ÁTOMO 2813 CB PRO C 58 -31,459 -34,304 27,185 1,00 42,77 C ÁTOMO 2814 CG PRO C 58 -32,263 -35,157 28,134 1,00 48,63 C ÁTOMO 2815 CD PRO C 58 -31,883 -36,592 27,801 1,00 45,10 C ÁTOMO 2816 N THR C 59 -28,221 -33,981 28,001 1,00 40,90 N ÁTOMO 2817 CA THR C 59 -27,287 -33,608 29,057 1,00 40,69 C ÁTOMO 2818 C THR C 59 -27,391 -32,114 29,144 1,00 45,94 C ÁTOMO 2819 O THR C 59 -27,143 -31,444 28,145 1,00 44,05 O ÁTOMO 2820 CB THR C 59 -25,873 -34,060 28,718 1,00 48,14 C ÁTOMO 2821 OG1 THR C 59 -25,850 -35,490 28,612 1,00 49,83 O ÁTOMO 2822 CG2 THR C 59 -24,840 -33,583 29,745 1,00 45,08 C ÁTOMO 2823 N TYR C 60 -27,775 -31,584 30,306
401 / 500
1,00 44,41 N ÁTOMO 2824 CA TYR C 60 -27,914 -30,145 30,501 1,00 44,47 C ÁTOMO 2825 C TYR C 60 -26,797 -29,627 31,364 1,00 51,94 C ÁTOMO 2826 O TYR C 60 -26,498 -30,236 32,385 1,00 53,63 O ÁTOMO 2827 CB TYR C 60 -29,240 -29,845 31,204 1,00 45,68 C ÁTOMO 2828 CG TYR C 60 -30,431 -30,400 30,466 1,00 45,61 C ÁTOMO 2829 CD1 TYR C 60 -30,909 -29,785 29,314 1,00 45,81 C ÁTOMO 2830 CD2 TYR C 60 -31,038 -31,580 30,877 1,00 46,46 C ÁTOMO 2831 CE1 TYR C 60 -31,989 -30,309 28,613 1,00 45,64 C ÁTOMO 2832 CE2 TYR C 60 -32,123 -32,112 30,187 1,00 46,88 C ÁTOMO 2833 CZ TYR C 60 -32,601 -31,470 29,057 1,00 47,97 C ÁTOMO 2834 OH TYR C 60 -33,652 -31,990 28,339 1,00 44,87 O ÁTOMO 2835 N ALA C 61 -26,227 -28,462 31,013 1,00 49,04 N ÁTOMO 2836 CA ALA C 61 -25,216 -27,821 31,860 1,00 49,52 C ÁTOMO 2837 C ALA C 61 -25,974 -27,254 33,079 1,00 54,51 C
402 / 500
ÁTOMO 2838 O ALA C 61 -27,166 -26,964 32,960 1,00 52,25 O ÁTOMO 2839 CB ALA C 61 -24,502 -26,713 31,092 1,00 49,03 C ÁTOMO 2840 N GLU C 62 -25,319 -27,159 34,251 1,00 55,04 N ÁTOMO 2841 CA GLU C 62 -25,946 -26,732 35,523 1,00 56,11 C ÁTOMO 2842 C GLU C 62 -26,909 -25,546 35,427 1,00 58,34 C ÁTOMO 2843 O GLU C 62 -28,005 -25,610 35,988 1,00 58,41 O ÁTOMO 2844 CB GLU C 62 -24,878 -26,431 36,598 1,00 59,36 C ÁTOMO 2845 CG GLU C 62 -24,475 -27,642 37,422 1,00 74,93 C ÁTOMO 2846 CD GLU C 62 -25,560 -28,214 38,315 1,00 98,93 C ÁTOMO 2847 OE1 GLU C 62 -26,317 -27,423 38,925 1,00 87,04 O ÁTOMO 2848 OE2 GLU C 62 -25,662 -29,460 38,394 1,00 96,62 O ÁTOMO 2849 N GLU C 63 -26,520 -24,486 34,702 1,00 53,32 N ÁTOMO 2850 CA GLU C 63 -27,346 -23,286 34,554 1,00 52,26 C ÁTOMO 2851 C GLU C 63 -28,607 -23,497 33,690 1,00 54,16 C ÁTOMO 2852 O GLU C 63 -29,485 -22,635 33,696
403 / 500
1,00 54,82 O ÁTOMO 2853 CB GLU C 63 -26,509 -22,127 33,975 1,00 53,10 C ÁTOMO 2854 CG GLU C 63 -25,405 -21,652 34,906 1,00 67,32 C ÁTOMO 2855 CD GLU C 63 -24,459 -20,632 34,303 1,00 93,33 C ÁTOMO 2856 OE1 GLU C 63 -24,904 -19,491 34,041 1,00 97,70 O ÁTOMO 2857 OE2 GLU C 63 -23,263 -20,960 34,126 1,00 87,08 O ÁTOMO 2858 N PHE C 64 -28,701 -24,618 32,951 1,00 47,53 N ÁTOMO 2859 CA PHE C 64 -29,822 -24,918 32,066 1,00 45,54 C ÁTOMO 2860 C PHE C 64 -30,636 -26,135 32,532 1,00 52,73 C ÁTOMO 2861 O PHE C 64 -31,354 -26,737 31,738 1,00 51,76 O ÁTOMO 2862 CB PHE C 64 -29,286 -25,087 30,626 1,00 44,42 C ÁTOMO 2863 CG PHE C 64 -28,575 -23,846 30,133 1,00 43,34 C ÁTOMO 2864 CD1 PHE C 64 -29,277 -22,826 29,511 1,00 44,21 C ÁTOMO 2865 CD2 PHE C 64 -27,227 -23,649 30,394 1,00 44,03 C ÁTOMO 2866 CE1 PHE C 64 -28,638 -21,645 29,125 1,00 44,23 C
404 / 500
ÁTOMO 2867 CE2 PHE C 64 -26,579 -22,488 29,972 1,00 45,82 C ÁTOMO 2868 CZ PHE C 64 -27,285 -21,499 29,326 1,00 43,21 C ÁTOMO 2869 N LYS C 65 -30,582 -26,460 33,833 1,00 53,05 N ÁTOMO 2870 CA LYS C 65 -31,364 -27,563 34,386 1,00 54,38 C ÁTOMO 2871 C LYS C 65 -32,677 -26,997 34,922 1,00 60,28 C ÁTOMO 2872 O LYS C 65 -32,646 -26,027 35,682 1,00 61,57 O ÁTOMO 2873 CB LYS C 65 -30,594 -28,270 35,517 1,00 58,48 C ÁTOMO 2874 CG LYS C 65 -29,411 -29,071 35,006 1,00 70,31 C ÁTOMO 2875 CD LYS C 65 -28,699 -29,850 36,095 1,00 77,70 C ÁTOMO 2876 CE LYS C 65 -27,540 -30,631 35,525 1,00 83,81 C ÁTOMO 2877 NZ LYS C 65 -26,829 -31,422 36,565 1,00 97,06 N ÁTOMO 2878 N GLY C 66 -33,820 -27,585 34,527 1,00 56,71 N ÁTOMO 2879 CA GLY C 66 -35,135 -27,178 35,027 1,00 57,44 C ÁTOMO 2880 C GLY C 66 -36,113 -26,782 33,936 1,00 59,55 C ÁTOMO 2881 O GLY C 66 -37,103 -27,486 33,715
405 / 500
1,00 60,68 O ÁTOMO 2882 N ARG C 67 -35,852 -25,646 33,274 1,00 52,60 N ÁTOMO 2883 CA ARG C 67 -36,747 -25,085 32,262 1,00 50,96 C ÁTOMO 2884 C ARG C 67 -36,421 -25,479 30,817 1,00 51,95 C ÁTOMO 2885 O ARG C 67 -37,259 -25,241 29,957 1,00 50,60 O ÁTOMO 2886 CB ARG C 67 -36,782 -23,550 32,397 1,00 48,23 C ÁTOMO 2887 CG ARG C 67 -37,183 -23,066 33,795 1,00 48,48 C ÁTOMO 2888 CD ARG C 67 -37,270 -21,547 33,905 1,00 45,81 C ÁTOMO 2889 NE ARG C 67 -35,997 -20,907 33,543 1,00 47,15 N ÁTOMO 2890 CZ ARG C 67 -35,775 -20,114 32,491 1,00 57,65 C ÁTOMO 2891 NH1 ARG C 67 -36,767 -19,797 31,660 1,00 40,82 N ÁTOMO 2892 NH2 ARG C 67 -34,563 -19,614 32,276 1,00 39,93 N ÁTOMO 2893 N PHE C 68 -35,266 -26,137 30,556 1,00 46,54 N ÁTOMO 2894 CA PHE C 68 -34,836 -26,517 29,202 1,00 43,54 C ÁTOMO 2895 C PHE C 68 -35,079 -28,010 28,927 1,00 46,49 C
406 / 500
ÁTOMO 2896 O PHE C 68 -34,752 -28,847 29,769 1,00 45,31 O ÁTOMO 2897 CB PHE C 68 -33,351 -26,153 28,985 1,00 43,64 C ÁTOMO 2898 CG PHE C 68 -33,079 -24,678 29,189 1,00 44,64 C ÁTOMO 2899 CD1 PHE C 68 -32,984 -24,140 30,471 1,00 48,34 C ÁTOMO 2900 CD2 PHE C 68 -32,999 -23,812 28,105 1,00 44,72 C ÁTOMO 2901 CE1 PHE C 68 -32,830 -22,767 30,662 1,00 48,00 C ÁTOMO 2902 CE2 PHE C 68 -32,821 -22,439 28,300 1,00 47,45 C ÁTOMO 2903 CZ PHE C 68 -32,756 -21,926 29,578 1,00 46,55 C ÁTOMO 2904 N THR C 69 -35,661 -28,338 27,746 1,00 42,97 N ÁTOMO 2905 CA THR C 69 -35,935 -29,722 27,352 1,00 43,22 C ÁTOMO 2906 C THR C 69 -35,421 -29,977 25,935 1,00 44,51 C ÁTOMO 2907 O THR C 69 -35,897 -29,348 24,990 1,00 43,05 O ÁTOMO 2908 CB THR C 69 -37,432 -30,054 27,479 1,00 50,82 C ÁTOMO 2909 OG1 THR C 69 -37,892 -29,634 28,757 1,00 50,33 O ÁTOMO 2910 CG2 THR C 69 -37,719 -31,541 27,326
407 / 500
1,00 50,08 C ÁTOMO 2911 N PHE C 70 -34,456 -30,900 25,788 1,00 40,32 N ÁTOMO 2912 CA PHE C 70 -33,929 -31,290 24,482 1,00 38,86 C ÁTOMO 2913 C PHE C 70 -34,630 -32,580 24,043 1,00 45,20 C ÁTOMO 2914 O PHE C 70 -34,671 -33,530 24,820 1,00 44,98 O ÁTOMO 2915 CB PHE C 70 -32,407 -31,524 24,536 1,00 39,78 C ÁTOMO 2916 CG PHE C 70 -31,544 -30,405 25,075 1,00 40,33 C ÁTOMO 2917 CD1 PHE C 70 -31,901 -29,072 24,888 1,00 42,65 C ÁTOMO 2918 CD2 PHE C 70 -30,340 -30,681 25,708 1,00 41,10 C ÁTOMO 2919 CE1 PHE C 70 -31,090 -28,040 25,378 1,00 42,65 C ÁTOMO 2920 CE2 PHE C 70 -29,536 -29,654 26,193 1,00 43,12 C ÁTOMO 2921 CZ PHE C 70 -29,910 -28,340 26,017 1,00 41,49 C ÁTOMO 2922 N THR C 71 -35,204 -32,607 22,823 1,00 43,02 N ÁTOMO 2923 CA THR C 71 -35,862 -33,804 22,275 1,00 43,93 C ÁTOMO 2924 C THR C 71 -35,455 -33,983 20,817 1,00 47,17 C
408 / 500
ÁTOMO 2925 O THR C 71 -34,690 -33,169 20,291 1,00 44,33 O ÁTOMO 2926 CB THR C 71 -37,396 -33,742 22,437 1,00 50,03 C ÁTOMO 2927 OG1 THR C 71 -37,894 -32,582 21,770 1,00 48,76 O ÁTOMO 2928 CG2 THR C 71 -37,830 -33,748 23,891 1,00 44,13 C ÁTOMO 2929 N LEU C 72 -35,915 -35,087 20,196 1,00 45,85 N ÁTOMO 2930 CA LEU C 72 -35,616 -35,420 18,808 1,00 46,48 C ÁTOMO 2931 C LEU C 72 -36,822 -35,973 18,082 1,00 52,69 C ÁTOMO 2932 O LEU C 72 -37,747 -36,499 18,707 1,00 53,00 O ÁTOMO 2933 CB LEU C 72 -34,582 -36,559 18,737 1,00 47,11 C ÁTOMO 2934 CG LEU C 72 -33,302 -36,466 19,539 1,00 50,90 C ÁTOMO 2935 CD1 LEU C 72 -32,699 -37,828 19,682 1,00 51,59 C ÁTOMO 2936 CD2 LEU C 72 -32,297 -35,525 18,878 1,00 50,84 C ÁTOMO 2937 N ASP C 73 -36,732 -35,958 16,743 1,00 49,46 N ÁTOMO 2938 CA ASP C 73 -37,622 -36,664 15,826 1,00 51,42 C ÁTOMO 2939 C ASP C 73 -36,673 -37,173 14,740
409 / 500
1,00 55,97 C ÁTOMO 2940 O ASP C 73 -36,407 -36,476 13,757 1,00 55,22 O ÁTOMO 2941 CB ASP C 73 -38,765 -35,798 15,262 1,00 53,45 C ÁTOMO 2942 CG ASP C 73 -39,806 -36,585 14,472 1,00 63,69 C ÁTOMO 2943 OD1 ASP C 73 -39,536 -37,759 14,127 1,00 65,24 O ÁTOMO 2944 OD2 ASP C 73 -40,890 -36,028 14,199 1,00 68,96 O ÁTOMO 2945 N THR C 74 -36,089 -38,358 14,986 1,00 53,14 N ÁTOMO 2946 CA THR C 74 -35,080 -38,958 14,110 1,00 52,84 C ÁTOMO 2947 C THR C 74 -35,614 -39,316 12,732 1,00 56,08 C ÁTOMO 2948 O THR C 74 -34,821 -39,346 11,794 1,00 54,60 O ÁTOMO 2949 CB THR C 74 -34,404 -40,163 14,789 1,00 57,27 C ÁTOMO 2950 OG1 THR C 74 -35,399 -41,100 15,188 1,00 63,17 O ÁTOMO 2951 CG2 THR C 74 -33,574 -39,757 15,993 1,00 51,44 C ÁTOMO 2952 N SER C 75 -36,936 -39,548 12,584 1,00 54,66 N ÁTOMO 2953 CA SER C 75 -37,542 -39,841 11,274 1,00 55,95 C
410 / 500
ÁTOMO 2954 C SER C 75 -37,401 -38,644 10,304 1,00 58,67 C ÁTOMO 2955 O SER C 75 -37,318 -38,858 9,098 1,00 59,17 O ÁTOMO 2956 CB SER C 75 -39,009 -40,248 11,419 1,00 59,94 C ÁTOMO 2957 OG SER C 75 -39,842 -39,153 11,766 1,00 65,14 O ÁTOMO 2958 N ILE C 76 -37,327 -37,404 10,833 1,00 53,62 N ÁTOMO 2959 CA ILE C 76 -37,127 -36,198 10,018 1,00 52,30 C ÁTOMO 2960 C ILE C 76 -35,811 -35,481 10,396 1,00 52,90 C ÁTOMO 2961 O ILE C 76 -35,688 -34,286 10,139 1,00 52,08 O ÁTOMO 2962 CB ILE C 76 -38,375 -35,265 10,064 1,00 55,25 C ÁTOMO 2963 CG1 ILE C 76 -38,765 -34,893 11,512 1,00 54,74 C ÁTOMO 2964 CG2 ILE C 76 -39,551 -35,936 9,346 1,00 57,07 C ÁTOMO 2965 CD1 ILE C 76 -39,674 -33,697 11,624 1,00 59,04 C ÁTOMO 2966 N SER C 77 -34,810 -36,228 10,941 1,00 47,96 N ÁTOMO 2967 CA SER C 77 -33,493 -35,716 11,360 1,00 45,97 C ÁTOMO 2968 C SER C 77 -33,567 -34,338 12,068
411 / 500
1,00 46,80 C ÁTOMO 2969 O SER C 77 -32,818 -33,422 11,725 1,00 44,01 O ÁTOMO 2970 CB SER C 77 -32,552 -35,642 10,159 1,00 48,90 C ÁTOMO 2971 OG SER C 77 -32,426 -36,897 9,513 1,00 55,71 O ÁTOMO 2972 N THR C 78 -34,488 -34,194 13,033 1,00 43,04 N ÁTOMO 2973 CA THR C 78 -34,685 -32,918 13,717 1,00 41,49 C ÁTOMO 2974 C THR C 78 -34,436 -33,027 15,224 1,00 43,81 C ÁTOMO 2975 O THR C 78 -34,818 -34,000 15,860 1,00 43,23 O ÁTOMO 2976 CB THR C 78 -36,075 -32,345 13,362 1,00 47,21 C ÁTOMO 2977 OG1 THR C 78 -36,103 -32,132 11,948 1,00 44,47 O ÁTOMO 2978 CG2 THR C 78 -36,375 -31,012 14,059 1,00 43,17 C ÁTOMO 2979 N ALA C 79 -33,777 -32,002 15,772 1,00 40,03 N ÁTOMO 2980 CA ALA C 79 -33,491 -31,853 17,191 1,00 39,14 C ÁTOMO 2981 C ALA C 79 -34,285 -30,622 17,640 1,00 40,85 C ÁTOMO 2982 O ALA C 79 -34,321 -29,621 16,915 1,00 38,22 O
412 / 500
ÁTOMO 2983 CB ALA C 79 -32,000 -31,621 17,401 1,00 39,04 C ÁTOMO 2984 N TYR C 80 -34,936 -30,699 18,810 1,00 37,50 N ÁTOMO 2985 CA TYR C 80 -35,729 -29,592 19,343 1,00 36,80 C ÁTOMO 2986 C TYR C 80 -35,178 -29,102 20,655 1,00 41,15 C ÁTOMO 2987 O TYR C 80 -34,569 -29,860 21,410 1,00 40,69 O ÁTOMO 2988 CB TYR C 80 -37,183 -30,006 19,566 1,00 38,97 C ÁTOMO 2989 CG TYR C 80 -37,867 -30,508 18,320 1,00 40,94 C ÁTOMO 2990 CD1 TYR C 80 -38,435 -29,621 17,407 1,00 42,18 C ÁTOMO 2991 CD2 TYR C 80 -37,946 -31,865 18,046 1,00 42,77 C ÁTOMO 2992 CE1 TYR C 80 -39,058 -30,078 16,249 1,00 42,98 C ÁTOMO 2993 CE2 TYR C 80 -38,568 -32,336 16,895 1,00 44,82 C ÁTOMO 2994 CZ TYR C 80 -39,149 -31,441 16,009 1,00 52,02 C ÁTOMO 2995 OH TYR C 80 -39,785 -31,894 14,875 1,00 55,03 O ÁTOMO 2996 N MET C 81 -35,454 -27,842 20,952 1,00 38,31 N ÁTOMO 2997 CA MET C 81 -35,036 -27,209 22,185
413 / 500
1,00 38,86 C ÁTOMO 2998 C MET C 81 -36,239 -26,427 22,707 1,00 41,32 C ÁTOMO 2999 O MET C 81 -36,659 -25,461 22,070 1,00 39,90 O ÁTOMO 3000 CB MET C 81 -33,846 -26,290 21,900 1,00 40,92 C ÁTOMO 3001 CG MET C 81 -33,025 -25,970 23,109 1,00 46,42 C ÁTOMO 3002 DP MET C 81 -33,577 -24,533 24,001 1,00 53,17 S ÁTOMO 3003 CE MET C 81 -33,005 -23,230 22,863 1,00 48,11 C ÁTOMO 3004 N GLU C 82 -36,858 -26,913 23,796 1,00 37,33 N ÁTOMO 3005 CA GLU C 82 -38,014 -26,258 24,386 1,00 37,62 C ÁTOMO 3006 C GLU C 82 -37,588 -25,565 25,668 1,00 44,17 C ÁTOMO 3007 O GLU C 82 -36,774 -26,093 26,417 1,00 45,34 O ÁTOMO 3008 CB GLU C 82 -39,171 -27,238 24,636 1,00 40,33 C ÁTOMO 3009 CG GLU C 82 -40,395 -26,570 25,248 1,00 51,38 C ÁTOMO 3010 CD GLU C 82 -41,705 -27,317 25,105 1,00 76,33 C ÁTOMO 3011 OE1 GLU C 82 -41,691 -28,567 25,161 1,00 74,04 O
414 / 500
ÁTOMO 3012 OE2 GLU C 82 -42,755 -26,648 24,973 1,00 77,13 O ÁTOMO 3013 N LEU C 83 -38,131 -24,377 25,906 1,00 40,98 N ÁTOMO 3014 CA LEU C 83 -37,829 -23,592 27,084 1,00 42,46 C ÁTOMO 3015 C LEU C 83 -39,148 -23,130 27,673 1,00 48,00 C ÁTOMO 3016 O LEU C 83 -39,932 -22,526 26,960 1,00 48,75 O ÁTOMO 3017 CB LEU C 83 -36,944 -22,413 26,673 1,00 41,74 C ÁTOMO 3018 CG LEU C 83 -36,536 -21,413 27,746 1,00 48,28 C ÁTOMO 3019 CD1 LEU C 83 -36,137 -22,094 29,047 1,00 50,54 C ÁTOMO 3020 CD2 LEU C 83 -35,436 -20,481 27,197 1,00 50,96 C ÁTOMO 3021 N SER C 84 -39,423 -23,482 28,936 1,00 44,74 N ÁTOMO 3022 CA SER C 84 -40,671 -23,138 29,624 1,00 46,15 C ÁTOMO 3023 C SER C 84 -40,465 -21,954 30,571 1,00 49,18 C ÁTOMO 3024 O SER C 84 -39,322 -21,561 30,811 1,00 47,21 O ÁTOMO 3025 CB SER C 84 -41,176 -24,344 30,411 1,00 49,92 C ÁTOMO 3026 OG SER C 84 -40,189 -24,773 31,333
415 / 500
1,00 60,20 O ÁTOMO 3027 N SER C 85 -41,577 -21,392 31,105 1,00 46,34 N ÁTOMO 3028 CA SER C 85 -41,566 -20,246 32,026 1,00 46,41 C ÁTOMO 3029 C SER C 85 -40,521 -19,203 31,589 1,00 47,84 C ÁTOMO 3030 O SER C 85 -39,610 -18,866 32,340 1,00 46,67 O ÁTOMO 3031 CB SER C 85 -41,324 -20,717 33,459 1,00 51,60 C ÁTOMO 3032 OG SER C 85 -42,365 -21,581 33,885 1,00 62,77 O ÁTOMO 3033 N LEU C 86 -40,622 -18,760 30,327 1,00 44,01 N ÁTOMO 3034 CA LEU C 86 -39,673 -17,809 29,741 1,00 42,04 C ÁTOMO 3035 C LEU C 86 -39,483 -16,535 30,581 1,00 47,78 C ÁTOMO 3036 O LEU C 86 -40,457 -15,984 31,097 1,00 48,21 O ÁTOMO 3037 CB LEU C 86 -40,082 -17,445 28,302 1,00 40,04 C ÁTOMO 3038 CG LEU C 86 -39,816 -18,512 27,241 1,00 41,12 C ÁTOMO 3039 CD1 LEU C 86 -40,629 -18,242 25,989 1,00 38,91 C ÁTOMO 3040 CD2 LEU C 86 -38,345 -18,569 26,870 1,00 38,83 C
416 / 500
ÁTOMO 3041 N ARG C 87 -38,217 -16,110 30,738 1,00 44,37 N ÁTOMO 3042 CA ARG C 87 -37,793 -14,918 31,486 1,00 45,33 C ÁTOMO 3043 C ARG C 87 -37,173 -13,939 30,477 1,00 47,34 C ÁTOMO 3044 O ARG C 87 -36,679 -14,395 29,447 1,00 43,73 O ÁTOMO 3045 CB ARG C 87 -36,691 -15,291 32,500 1,00 46,43 C ÁTOMO 3046 CG ARG C 87 -37,122 -16,210 33,635 1,00 56,09 C ÁTOMO 3047 CD ARG C 87 -36,368 -15,919 34,923 1,00 77,75 C ÁTOMO 3048 NE ARG C 87 -34,995 -16,435 34,903 1,00 93,41 N ÁTOMO 3049 CZ ARG C 87 -34,611 -17,651 35,302 1,00109,85 C ÁTOMO 3050 NH1 ARG C 87 -35,505 -18,530 35,754 1,00 94,20 N ÁTOMO 3051 NH2 ARG C 87 -33,330 -18,001 35,244 1,00 95,36 N ÁTOMO 3052 N SER C 88 -37,084 -12,628 30,806 1,00 45,15 N ÁTOMO 3053 CA SER C 88 -36,450 -11,653 29,900 1,00 43,88 C ÁTOMO 3054 C SER C 88 -34,957 -11,972 29,646 1,00 46,23 C ÁTOMO 3055 O SER C 88 -34,465 -11,716 28,554
417 / 500
1,00 44,31 O ÁTOMO 3056 CB SER C 88 -36,622 -10,224 30,414 1,00 48,56 C ÁTOMO 3057 OG SER C 88 -35,889 -10,005 31,604 1,00 62,20 O ÁTOMO 3058 N GLU C 89 -34,286 -12,630 30,618 1,00 44,67 N ÁTOMO 3059 CA GLU C 89 -32,879 -13,049 30,535 1,00 43,02 C ÁTOMO 3060 C GLU C 89 -32,670 -14,199 29,545 1,00 44,03 C ÁTOMO 3061 O GLU C 89 -31,520 -14,531 29,258 1,00 42,78 O ÁTOMO 3062 CB GLU C 89 -32,340 -13,468 31,914 1,00 45,89 C ÁTOMO 3063 CG GLU C 89 -32,405 -12,377 32,972 1,00 57,40 C ÁTOMO 3064 CD GLU C 89 -33,556 -12,509 33,951 1,00 82,31 C ÁTOMO 3065 OE1 GLU C 89 -34,719 -12,338 33,520 1,00 65,11 O ÁTOMO 3066 OE2 GLU C 89 -33,299 -12,783 35,145 1,00 88,49 O ÁTOMO 3067 N ASP C 90 -33,759 -14,826 29,045 1,00 39,75 N ÁTOMO 3068 CA ASP C 90 -33,675 -15,859 28,014 1,00 38,16 C ÁTOMO 3069 C ASP C 90 -33,601 -15,215 26,629 1,00 38,48 C
418 / 500
ÁTOMO 3070 O ASP C 90 -33,443 -15,942 25,650 1,00 37,24 O ÁTOMO 3071 CB ASP C 90 -34,869 -16,822 28,076 1,00 40,23 C ÁTOMO 3072 CG ASP C 90 -35,003 -17,524 29,405 1,00 45,99 C ÁTOMO 3073 OD1 ASP C 90 -33,969 -17,957 29,954 1,00 46,86 O ÁTOMO 3074 OD2 ASP C 90 -36,147 -17,682 29,879 1,00 45,07 O ÁTOMO 3075 N THR C 91 -33,726 -13,876 26,522 1,00 35,50 N ÁTOMO 3076 CA THR C 91 -33,588 -13,185 25,245 1,00 34,04 C ÁTOMO 3077 C THR C 91 -32,173 -13,469 24,735 1,00 36,90 C ÁTOMO 3078 O THR C 91 -31,213 -13,192 25,446 1,00 36,84 O ÁTOMO 3079 CB THR C 91 -33,869 -11,684 25,414 1,00 38,72 C ÁTOMO 3080 OG1 THR C 91 -35,226 -11,536 25,849 1,00 37,88 O ÁTOMO 3081 CG2 THR C 91 -33,604 -10,875 24,124 1,00 33,64 C ÁTOMO 3082 N ALA C 92 -32,052 -14,080 23,550 1,00 32,89 N ÁTOMO 3083 CA ALA C 92 -30,754 -14,492 23,003 1,00 32,23 C ÁTOMO 3084 C ALA C 92 -30,927 -15,108 21,636
419 / 500
1,00 34,59 C ÁTOMO 3085 O ALA C 92 -32,054 -15,347 21,198 1,00 33,75 O ÁTOMO 3086 CB ALA C 92 -30,130 -15,565 23,924 1,00 33,21 C ÁTOMO 3087 N VAL C 93 -29,796 -15,417 20,984 1,00 31,52 N ÁTOMO 3088 CA VAL C 93 -29,760 -16,228 19,776 1,00 31,04 C ÁTOMO 3089 C VAL C 93 -29,386 -17,640 20,285 1,00 34,81 C ÁTOMO 3090 O VAL C 93 -28,436 -17,778 21,065 1,00 34,37 O ÁTOMO 3091 CB VAL C 93 -28,763 -15,738 18,699 1,00 33,19 C ÁTOMO 3092 CG1 VAL C 93 -28,569 -16,797 17,611 1,00 32,03 C ÁTOMO 3093 CG2 VAL C 93 -29,243 -14,426 18,080 1,00 32,68 C ÁTOMO 3094 N TYR C 94 -30,117 -18,668 19,840 1,00 31,06 N ÁTOMO 3095 CA TYR C 94 -29,852 -20,054 20,201 1,00 30,70 C ÁTOMO 3096 C TYR C 94 -29,388 -20,787 18,970 1,00 35,19 C ÁTOMO 3097 O TYR C 94 -30,042 -20,687 17,936 1,00 34,82 O ÁTOMO 3098 CB TYR C 94 -31,114 -20,716 20,768 1,00 30,69 C
420 / 500
ÁTOMO 3099 CG TYR C 94 -31,479 -20,138 22,111 1,00 31,16 C ÁTOMO 3100 CD1 TYR C 94 -32,306 -19,028 22,214 1,00 32,73 C ÁTOMO 3101 CD2 TYR C 94 -30,902 -20,629 23,276 1,00 31,99 C ÁTOMO 3102 CE1 TYR C 94 -32,605 -18,460 23,446 1,00 33,76 C ÁTOMO 3103 CE2 TYR C 94 -31,201 -20,077 24,519 1,00 32,65 C ÁTOMO 3104 CZ TYR C 94 -32,051 -18,989 24,601 1,00 37,49 C ÁTOMO 3105 OH TYR C 94 -32,313 -18,424 25,826 1,00 37,85 O ÁTOMO 3106 N TYR C 95 -28,259 -21,513 19,066 1,00 31,75 N ÁTOMO 3107 CA TYR C 95 -27,737 -22,291 17,948 1,00 31,12 C ÁTOMO 3108 C TYR C 95 -27,759 -23,750 18,294 1,00 36,58 C ÁTOMO 3109 O TYR C 95 -27,510 -24,120 19,447 1,00 35,65 O ÁTOMO 3110 CB TYR C 95 -26,263 -21,943 17,634 1,00 32,42 C ÁTOMO 3111 CG TYR C 95 -25,965 -20,480 17,390 1,00 33,70 C ÁTOMO 3112 CD1 TYR C 95 -26,113 -19,917 16,128 1,00 35,21 C ÁTOMO 3113 CD2 TYR C 95 -25,446 -19,681 18,402
421 / 500
1,00 34,49 C ÁTOMO 3114 CE1 TYR C 95 -25,821 -18,576 15,894 1,00 35,70 C ÁTOMO 3115 CE2 TYR C 95 -25,145 -18,340 18,181 1,00 34,92 C ÁTOMO 3116 CZ TYR C 95 -25,333 -17,789 16,924 1,00 41,88 C ÁTOMO 3117 OH TYR C 95 -25,012 -16,475 16,680 1,00 40,68 O ÁTOMO 3118 N CYS C 96 -27,978 -24,587 17,282 1,00 34,61 N ÁTOMO 3119 CA CYS C 96 -27,748 -26,015 17,382 1,00 35,50 C ÁTOMO 3120 C CYS C 96 -26,408 -26,170 16,648 1,00 37,03 C ÁTOMO 3121 O CYS C 96 -26,126 -25,405 15,716 1,00 35,03 O ÁTOMO 3122 CB CYS C 96 -28,856 -26,836 16,729 1,00 37,04 C ÁTOMO 3123 SG CYS C 96 -29,122 -26,492 14,973 1,00 41,53 S ÁTOMO 3124 N ALA C 97 -25,552 -27,065 17,104 1,00 32,70 N ÁTOMO 3125 CA ALA C 97 -24,263 -27,275 16,443 1,00 32,65 C ÁTOMO 3126 C ALA C 97 -23,846 -28,724 16,581 1,00 37,32 C ÁTOMO 3127 O ALA C 97 -23,861 -29,269 17,689 1,00 36,14 O
422 / 500
ÁTOMO 3128 CB ALA C 97 -23,205 -26,343 17,016 1,00 33,19 C ÁTOMO 3129 N ARG C 98 -23,501 -29,364 15,455 1,00 35,53 N ÁTOMO 3130 CA ARG C 98 -23,169 -30,787 15,460 1,00 36,66 C ÁTOMO 3131 C ARG C 98 -21,906 -31,073 16,237 1,00 40,15 C ÁTOMO 3132 O ARG C 98 -20,907 -30,397 16,034 1,00 40,12 O ÁTOMO 3133 CB ARG C 98 -23,005 -31,329 14,026 1,00 35,79 C ÁTOMO 3134 CG ARG C 98 -22,807 -32,845 13,990 1,00 38,52 C ÁTOMO 3135 CD ARG C 98 -22,636 -33,404 12,589 1,00 38,54 C ÁTOMO 3136 NE ARG C 98 -21,245 -33,332 12,126 1,00 38,05 N ÁTOMO 3137 CZ ARG C 98 -20,738 -34,037 11,116 1,00 49,66 C ÁTOMO 3138 NH1 ARG C 98 -21,499 -34,887 10,439 1,00 40,39 N ÁTOMO 3139 NH2 ARG C 98 -19,462 -33,906 10,783 1,00 40,88 N ÁTOMO 3140 O GLU C 99 -20,182 -34,722 16,824 1,00 39,36 O ÁTOMO 3141 N GLU C 99 -21,923 -32,123 17,062 1,00 36,01 N ÁTOMO 3142 CA GLU C 99 -20,726 -32,562 17,752
423 / 500
1,00 36,27 C ÁTOMO 3143 C GLU C 99 -19,980 -33,514 16,790 1,00 40,48 C ÁTOMO 3144 CB GLU C 99 -21,078 -33,238 19,099 1,00 37,68 C ÁTOMO 3145 CG GLU C 99 -19,875 -33,508 19,991 1,00 44,26 C ÁTOMO 3146 CD GLU C 99 -18,977 -32,335 20,350 1,00 60,17 C ÁTOMO 3147 OE1 GLU C 99 -19,425 -31,169 20,241 1,00 45,39 O ÁTOMO 3148 OE2 GLU C 99 -17,841 -32,591 20,811 1,00 51,81 O ÁTOMO 3149 O GLY C 100 -16,575 -33,913 16,434 1,00 43,26 O ÁTOMO 3150 N GLY C 100 -19,169 -32,932 15,881 1,00 37,95 N ÁTOMO 3151 CA GLY C 100 -18,379 -33,664 14,895 1,00 38,68 C ÁTOMO 3152 C GLY C 100 -16,913 -33,565 15,299 1,00 44,00 C ÁTOMO 3153 O ASP C 101 -14,521 -30,532 14,281 1,00 43,47 O ÁTOMO 3154 N ASP C 101 -16,041 -33,121 14,375 1,00 40,89 N ÁTOMO 3155 CA ASP C 101 -14,621 -32,881 14,665 1,00 41,53 C ÁTOMO 3156 C ASP C 101 -14,653 -31,430 15,107 1,00 44,27 C
424 / 500
ÁTOMO 3157 CB ASP C 101 -13,746 -33,099 13,413 1,00 44,48 C ÁTOMO 3158 CG ASP C 101 -13,577 -34,553 13,004 1,00 52,29 C ÁTOMO 3159 OD1 ASP C 101 -13,902 -35,445 13,821 1,00 51,22 O ÁTOMO 3160 OD2 ASP C 101 -13,120 -34,801 11,864 1,00 58,70 O ÁTOMO 3161 O ALA C 102 -17,404 -30,524 16,084 1,00 39,71 O ÁTOMO 3162 N ALA C 102 -14,970 -31,221 16,409 1,00 40,87 N ÁTOMO 3163 CA ALA C 102 -15,295 -29,940 17,052 1,00 39,67 C ÁTOMO 3164 C ALA C 102 -16,752 -29,657 16,664 1,00 41,18 C ÁTOMO 3165 CB ALA C 102 -14,386 -28,803 16,573 1,00 40,92 C ÁTOMO 3166 N MET C 103 -17,258 -28,449 16,913 1,00 36,68 N ÁTOMO 3167 CA MET C 103 -18,620 -28,119 16,494 1,00 34,23 C ÁTOMO 3168 C MET C 103 -18,497 -27,662 15,044 1,00 38,48 C ÁTOMO 3169 O MET C 103 -18,429 -26,474 14,750 1,00 37,28 O ÁTOMO 3170 CB MET C 103 -19,222 -27,086 17,430 1,00 35,01 C ÁTOMO 3171 CG MET C 103 -19,225 -27,573 18,861
425 / 500
1,00 37,82 C ÁTOMO 3172 DP MET C 103 -20,069 -26,458 19,960 1,00 39,84 S ÁTOMO 3173 CE MET C 103 -19,518 -27,119 21,566 1,00 37,25 C ÁTOMO 3174 N ASP C 104 -18,373 -28,653 14,146 1,00 36,75 N ÁTOMO 3175 CA ASP C 104 -18,044 -28,445 12,739 1,00 37,51 C ÁTOMO 3176 C ASP C 104 -19,171 -27,881 11,878 1,00 40,69 C ÁTOMO 3177 O ASP C 104 -18,870 -27,272 10,866 1,00 41,02 O ÁTOMO 3178 CB ASP C 104 -17,461 -29,730 12,106 1,00 40,15 C ÁTOMO 3179 CG ASP C 104 -18,243 -31,015 12,300 1,00 41,59 C ÁTOMO 3180 OD1 ASP C 104 -19,360 -30,960 12,859 1,00 41,81 O ÁTOMO 3181 OD2 ASP C 104 -17,732 -32,080 11,909 1,00 45,34 O ÁTOMO 3182 N TYR C 105 -20,433 -28,066 12,252 1,00 38,20 N ÁTOMO 3183 CA TYR C 105 -21,558 -27,501 11,506 1,00 37,29 C ÁTOMO 3184 C TYR C 105 -22,482 -26,830 12,500 1,00 39,73 C ÁTOMO 3185 O TYR C 105 -22,862 -27,450 13,483 1,00 38,23 O
426 / 500
ÁTOMO 3186 CB TYR C 105 -22,299 -28,582 10,708 1,00 39,27 C ÁTOMO 3187 CG TYR C 105 -21,439 -29,141 9,606 1,00 43,09 C ÁTOMO 3188 CD1 TYR C 105 -21,252 -28,441 8,419 1,00 45,85 C ÁTOMO 3189 CD2 TYR C 105 -20,722 -30,319 9,789 1,00 44,77 C ÁTOMO 3190 CE1 TYR C 105 -20,408 -28,922 7,420 1,00 48,74 C ÁTOMO 3191 CE2 TYR C 105 -19,864 -30,802 8,805 1,00 47,26 C ÁTOMO 3192 CZ TYR C 105 -19,708 -30,101 7,618 1,00 55,46 C ÁTOMO 3193 OH TYR C 105 -18,870 -30,560 6,624 1,00 57,88 O ÁTOMO 3194 N TRP C 106 -22,796 -25,554 12,270 1,00 35,79 N ÁTOMO 3195 CA TRP C 106 -23,669 -24,770 13,131 1,00 34,32 C ÁTOMO 3196 C TRP C 106 -24,925 -24,425 12,381 1,00 38,63 C ÁTOMO 3197 O TRP C 106 -24,862 -24,157 11,177 1,00 39,38 O ÁTOMO 3198 CB TRP C 106 -22,974 -23,459 13,527 1,00 32,65 C ÁTOMO 3199 CG TRP C 106 -21,848 -23,643 14,486 1,00 33,67 C ÁTOMO 3200 CD1 TRP C 106 -20,643 -24,225 14,230
427 / 500
1,00 37,22 C ÁTOMO 3201 CD2 TRP C 106 -21,779 -23,142 15,825 1,00 33,03 C ÁTOMO 3202 NE1 TRP C 106 -19,856 -24,190 15,354 1,00 36,90 N ÁTOMO 3203 CE2 TRP C 106 -20,526 -23,526 16,350 1,00 37,50 C ÁTOMO 3204 CE3 TRP C 106 -22,672 -22,442 16,649 1,00 33,13 C ÁTOMO 3205 CZ2 TRP C 106 -20,139 -23,224 17,659 1,00 36,59 C ÁTOMO 3206 CZ3 TRP C 106 -22,293 -22,153 17,952 1,00 34,77 C ÁTOMO 3207 CH2 TRP C 106 -21,039 -22,540 18,444 1,00 36,16 C ÁTOMO 3208 N GLY C 107 -26,057 -24,338 13,093 1,00 35,05 N ÁTOMO 3209 CA GLY C 107 -27,302 -23,858 12,496 1,00 34,89 C ÁTOMO 3210 C GLY C 107 -27,139 -22,326 12,324 1,00 38,88 C ÁTOMO 3211 O GLY C 107 -26,186 -21,751 12,863 1,00 37,72 O ÁTOMO 3212 N GLN C 108 -28,033 -21,674 11,562 1,00 35,72 N ÁTOMO 3213 CA GLN C 108 -27,940 -20,218 11,349 1,00 34,48 C ÁTOMO 3214 C GLN C 108 -28,236 -19,417 12,623 1,00 36,52 C
428 / 500
ÁTOMO 3215 O GLN C 108 -27,866 -18,249 12,708 1,00 35,28 O ÁTOMO 3216 CB GLN C 108 -28,813 -19,748 10,165 1,00 36,25 C ÁTOMO 3217 CG GLN C 108 -30,320 -19,534 10,427 1,00 37,04 C ÁTOMO 3218 CD GLN C 108 -31,133 -20,801 10,402 1,00 42,51 C ÁTOMO 3219 OE1 GLN C 108 -30,613 -21,915 10,552 1,00 40,06 O ÁTOMO 3220 NE2 GLN C 108 -32,439 -20,672 10,236 1,00 31,88 N ÁTOMO 3221 N GLY C 109 -28,898 -20,044 13,606 1,00 33,66 N ÁTOMO 3222 CA GLY C 109 -29,227 -19,415 14,874 1,00 33,01 C ÁTOMO 3223 C GLY C 109 -30,686 -19,012 14,839 1,00 36,49 C ÁTOMO 3224 O GLY C 109 -31,227 -18,754 13,761 1,00 36,95 O ÁTOMO 3225 N THR C 110 -31,333 -19,007 16,003 1,00 32,70 N ÁTOMO 3226 CA THR C 110 -32,728 -18,594 16,144 1,00 32,46 C ÁTOMO 3227 C THR C 110 -32,788 -17,523 17,217 1,00 34,68 C ÁTOMO 3228 O THR C 110 -32,420 -17,797 18,356 1,00 33,77 O ÁTOMO 3229 CB THR C 110 -33,633 -19,782 16,496
429 / 500
1,00 40,27 C ÁTOMO 3230 OG1 THR C 110 -33,657 -20,692 15,393 1,00 36,94 O ÁTOMO 3231 CG2 THR C 110 -35,063 -19,350 16,824 1,00 36,82 C ÁTOMO 3232 N THR C 111 -33,266 -16,320 16,863 1,00 30,46 N ÁTOMO 3233 CA THR C 111 -33,426 -15,225 17,830 1,00 30,94 C ÁTOMO 3234 C THR C 111 -34,693 -15,485 18,616 1,00 34,43 C ÁTOMO 3235 O THR C 111 -35,740 -15,734 18,022 1,00 35,46 O ÁTOMO 3236 CB THR C 111 -33,559 -13,850 17,128 1,00 35,59 C ÁTOMO 3237 OG1 THR C 111 -32,469 -13,673 16,229 1,00 36,40 O ÁTOMO 3238 CG2 THR C 111 -33,572 -12,686 18,115 1,00 34,29 C ÁTOMO 3239 N VAL C 112 -34,607 -15,402 19,930 1,00 30,68 N ÁTOMO 3240 CA VAL C 112 -35,761 -15,543 20,811 1,00 31,81 C ÁTOMO 3241 C VAL C 112 -35,812 -14,269 21,639 1,00 37,05 C ÁTOMO 3242 O VAL C 112 -34,865 -13,998 22,371 1,00 37,54 O ÁTOMO 3243 CB VAL C 112 -35,666 -16,790 21,725 1,00 35,23 C
430 / 500
ÁTOMO 3244 CG1 VAL C 112 -36,822 -16,834 22,728 1,00 35,87 C ÁTOMO 3245 CG2 VAL C 112 -35,610 -18,081 20,906 1,00 34,03 C ÁTOMO 3246 N THR C 113 -36,904 -13,497 21,536 1,00 34,53 N ÁTOMO 3247 CA THR C 113 -37,098 -12,286 22,337 1,00 34,18 C ÁTOMO 3248 C THR C 113 -38,182 -12,558 23,369 1,00 37,78 C ÁTOMO 3249 O THR C 113 -39,293 -12,942 22,998 1,00 36,82 O ÁTOMO 3250 CB THR C 113 -37,485 -11,096 21,457 1,00 37,79 C ÁTOMO 3251 OG1 THR C 113 -36,453 -10,895 20,497 1,00 34,63 O ÁTOMO 3252 CG2 THR C 113 -37,681 -9,804 22,269 1,00 36,47 C ÁTOMO 3253 N VAL C 114 -37,867 -12,345 24,657 1,00 35,36 N ÁTOMO 3254 CA VAL C 114 -38,836 -12,507 25,743 1,00 36,70 C ÁTOMO 3255 C VAL C 114 -39,070 -11,115 26,326 1,00 41,49 C ÁTOMO 3256 O VAL C 114 -38,121 -10,477 26,790 1,00 41,38 O ÁTOMO 3257 CB VAL C 114 -38,376 -13,514 26,821 1,00 40,57 C ÁTOMO 3258 CG1 VAL C 114 -39,460 -13,700 27,882
431 / 500
1,00 41,97 C ÁTOMO 3259 CG2 VAL C 114 -37,999 -14,855 26,189 1,00 39,76 C ÁTOMO 3260 N SER C 115 -40,323 -10,642 26,289 1,00 37,44 N ÁTOMO 3261 CA SER C 115 -40,650 -9,318 26,789 1,00 37,71 C ÁTOMO 3262 C SER C 115 -42,138 -9,137 27,039 1,00 44,81 C ÁTOMO 3263 O SER C 115 -42,973 -9,742 26,374 1,00 45,12 O ÁTOMO 3264 CB SER C 115 -40,180 -8,255 25,799 1,00 36,58 C ÁTOMO 3265 OG SER C 115 -40,711 -6,980 26,119 1,00 45,95 O ÁTOMO 3266 N SER C 116 -42,453 -8,250 27,971 1,00 43,52 N ÁTOMO 3267 CA SER C 116 -43,817 -7,862 28,299 1,00 45,24 C ÁTOMO 3268 C SER C 116 -44,396 -6,913 27,224 1,00 47,63 C ÁTOMO 3269 O SER C 116 -45,613 -6,738 27,173 1,00 48,53 O ÁTOMO 3270 CB SER C 116 -43,833 -7,150 29,644 1,00 50,86 C ÁTOMO 3271 OG SER C 116 -45,164 -6,936 30,077 1,00 71,06 O ÁTOMO 3272 N ALA C 117 -43,532 -6,272 26,399 1,00 42,07 N
432 / 500
ÁTOMO 3273 CA ALA C 117 -43,971 -5,331 25,359 1,00 41,82 C ÁTOMO 3274 C ALA C 117 -44,864 -5,969 24,297 1,00 46,42 C ÁTOMO 3275 O ALA C 117 -44,794 -7,171 24,044 1,00 45,12 O ÁTOMO 3276 CB ALA C 117 -42,773 -4,679 24,685 1,00 40,90 C ÁTOMO 3277 N SER C 118 -45,711 -5,140 23,693 1,00 45,26 N ÁTOMO 3278 CA SER C 118 -46,643 -5,541 22,648 1,00 45,54 C ÁTOMO 3279 C SER C 118 -46,135 -5,030 21,311 1,00 45,34 C ÁTOMO 3280 O SER C 118 -45,396 -4,048 21,266 1,00 43,82 O ÁTOMO 3281 CB SER C 118 -48,030 -4,970 22,931 1,00 51,75 C ÁTOMO 3282 OG SER C 118 -48,564 -5,534 24,118 1,00 64,79 O ÁTOMO 3283 N THR C 119 -46,530 -5,706 20,224 1,00 40,43 N ÁTOMO 3284 CA THR C 119 -46,141 -5,338 18,862 1,00 37,93 C ÁTOMO 3285 C THR C 119 -46,515 -3,880 18,584 1,00 41,88 C ÁTOMO 3286 O THR C 119 -47,667 -3,494 18,805 1,00 43,45 O ÁTOMO 3287 CB THR C 119 -46,814 -6,283 17,848
433 / 500
1,00 41,22 C ÁTOMO 3288 OG1 THR C 119 -46,490 -7,624 18,206 1,00 40,13 O ÁTOMO 3289 CG2 THR C 119 -46,390 -6,010 16,401 1,00 34,48 C ÁTOMO 3290 N LYS C 120 -45,542 -3,074 18,132 1,00 36,14 N ÁTOMO 3291 CA LYS C 120 -45,779 -1,670 17,809 1,00 36,50 C ÁTOMO 3292 C LYS C 120 -44,846 -1,208 16,692 1,00 39,05 C ÁTOMO 3293 O LYS C 120 -43,648 -1,455 16,766 1,00 39,04 O ÁTOMO 3294 CB LYS C 120 -45,584 -0,780 19,048 1,00 37,54 C ÁTOMO 3295 CG LYS C 120 -46,175 0,615 18,845 1,00 39,66 C ÁTOMO 3296 CD LYS C 120 -45,645 1,638 19,823 1,00 35,79 C ÁTOMO 3297 CE LYS C 120 -45,912 3,051 19,361 1,00 36,99 C ÁTOMO 3298 NZ LYS C 120 -44,934 3,522 18,337 1,00 42,09 N ÁTOMO 3299 N GLY C 121 -45,387 -0,522 15,681 1,00 35,36 N ÁTOMO 3300 CA GLY C 121 -44,591 0,019 14,583 1,00 33,69 C ÁTOMO 3301 C GLY C 121 -43,882 1,303 15,055 1,00 36,60 C
434 / 500
ÁTOMO 3302 O GLY C 121 -44,329 1,922 16,014 1,00 35,09 O ÁTOMO 3303 N PRO C 122 -42,780 1,695 14,403 1,00 33,96 N ÁTOMO 3304 CA PRO C 122 -42,072 2,915 14,815 1,00 33,88 C ÁTOMO 3305 C PRO C 122 -42,771 4,217 14,414 1,00 39,19 C ÁTOMO 3306 O PRO C 122 -43,578 4,246 13,489 1,00 38,22 O ÁTOMO 3307 CB PRO C 122 -40,739 2,828 14,054 1,00 34,32 C ÁTOMO 3308 CG PRO C 122 -41,064 2,022 12,806 1,00 37,97 C ÁTOMO 3309 CD PRO C 122 -42,127 1,038 13,243 1,00 34,54 C ÁTOMO 3310 N SER C 123 -42,409 5,299 15,104 1,00 37,89 N ÁTOMO 3311 CA SER C 123 -42,766 6,659 14,727 1,00 38,91 C ÁTOMO 3312 C SER C 123 -41,485 7,111 14,055 1,00 41,92 C ÁTOMO 3313 O SER C 123 -40,405 6,842 14,589 1,00 42,38 O ÁTOMO 3314 CB SER C 123 -43,061 7,533 15,943 1,00 44,48 C ÁTOMO 3315 OG SER C 123 -44,341 7,237 16,473 1,00 55,10 O ÁTOMO 3316 N VAL C 124 -41,572 7,719 12,866
435 / 500
1,00 37,46 N ÁTOMO 3317 CA VAL C 124 -40,384 8,138 12,128 1,00 35,79 C ÁTOMO 3318 C VAL C 124 -40,343 9,655 12,076 1,00 41,49 C ÁTOMO 3319 O VAL C 124 -41,287 10,282 11,602 1,00 42,53 O ÁTOMO 3320 CB VAL C 124 -40,322 7,489 10,723 1,00 37,10 C ÁTOMO 3321 CG1 VAL C 124 -39,030 7,869 10,008 1,00 35,76 C ÁTOMO 3322 CG2 VAL C 124 -40,433 5,971 10,841 1,00 35,79 C ÁTOMO 3323 N PHE C 125 -39,252 10,237 12,587 1,00 37,30 N ÁTOMO 3324 CA PHE C 125 -39,049 11,677 12,649 1,00 36,95 C ÁTOMO 3325 C PHE C 125 -37,808 12,042 11,840 1,00 40,08 C ÁTOMO 3326 O PHE C 125 -36,850 11,278 11,837 1,00 37,20 O ÁTOMO 3327 CB PHE C 125 -38,854 12,103 14,116 1,00 38,71 C ÁTOMO 3328 CG PHE C 125 -39,985 11,673 15,020 1,00 39,28 C ÁTOMO 3329 CD1 PHE C 125 -41,274 12,145 14,818 1,00 41,37 C ÁTOMO 3330 CD2 PHE C 125 -39,759 10,804 16,079 1,00 40,99 C
436 / 500
ÁTOMO 3331 CE1 PHE C 125 -42,325 11,728 15,638 1,00 42,44 C ÁTOMO 3332 CE2 PHE C 125 -40,804 10,410 16,919 1,00 43,79 C ÁTOMO 3333 CZ PHE C 125 -42,075 10,895 16,706 1,00 42,60 C ÁTOMO 3334 N PRO C 126 -37,795 13,212 11,181 1,00 39,92 N ÁTOMO 3335 CA PRO C 126 -36,608 13,602 10,420 1,00 39,47 C ÁTOMO 3336 C PRO C 126 -35,514 14,166 11,326 1,00 40,00 C ÁTOMO 3337 O PRO C 126 -35,806 14,769 12,360 1,00 39,10 O ÁTOMO 3338 CB PRO C 126 -37,143 14,700 9,484 1,00 42,36 C ÁTOMO 3339 CG PRO C 126 -38,200 15,362 10,284 1,00 47,50 C ÁTOMO 3340 CD PRO C 126 -38,833 14,264 11,125 1,00 42,41 C ÁTOMO 3341 N LEU C 127 -34,255 13,975 10,909 1,00 35,97 N ÁTOMO 3342 CA LEU C 127 -33,065 14,574 11,516 1,00 35,80 C ÁTOMO 3343 C LEU C 127 -32,630 15,558 10,413 1,00 41,86 C ÁTOMO 3344 O LEU C 127 -31,912 15,193 9,476 1,00 39,52 O ÁTOMO 3345 CB LEU C 127 -31,980 13,532 11,819
437 / 500
1,00 34,86 C ÁTOMO 3346 CG LEU C 127 -32,335 12,473 12,869 1,00 36,48 C ÁTOMO 3347 CD1 LEU C 127 -31,303 11,375 12,882 1,00 34,90 C ÁTOMO 3348 CD2 LEU C 127 -32,428 13,093 14,265 1,00 36,49 C ÁTOMO 3349 N ALA C 128 -33,200 16,769 10,454 1,00 40,92 N ÁTOMO 3350 CA ALA C 128 -33,007 17,769 9,396 1,00 42,03 C ÁTOMO 3351 C ALA C 128 -31,552 18,225 9,221 1,00 46,13 C ÁTOMO 3352 O ALA C 128 -30,868 18,419 10,221 1,00 45,47 O ÁTOMO 3353 CB ALA C 128 -33,900 18,974 9,656 1,00 44,04 C ÁTOMO 3354 N PRO C 129 -31,082 18,428 7,968 1,00 45,18 N ÁTOMO 3355 CA PRO C 129 -29,709 18,909 7,770 1,00 48,35 C ÁTOMO 3356 C PRO C 129 -29,532 20,332 8,302 1,00 59,59 C ÁTOMO 3357 O PRO C 129 -30,449 21,147 8,180 1,00 59,01 O ÁTOMO 3358 CB PRO C 129 -29,510 18,845 6,249 1,00 49,63 C ÁTOMO 3359 CG PRO C 129 -30,860 18,885 5,688 1,00 52,25 C
438 / 500
ÁTOMO 3360 CD PRO C 129 -31,770 18,234 6,677 1,00 46,36 C ÁTOMO 3361 N SER C 130 -28,365 20,618 8,906 1,00 63,13 N ÁTOMO 3362 CA SER C 130 -28,063 21,940 9,470 1,00 67,28 C ÁTOMO 3363 C SER C 130 -27,376 22,840 8,440 1,00 76,61 C ÁTOMO 3364 O SER C 130 -27,081 22,400 7,323 1,00 76,81 O ÁTOMO 3365 CB SER C 130 -27,193 21,805 10,722 1,00 73,73 C ÁTOMO 3366 OG SER C 130 -25,802 21,860 10,440 1,00 87,12 O ÁTOMO 3367 N SER C 131 -27,117 24,106 8,834 1,00 76,52 N ÁTOMO 3368 CA SER C 131 -26,457 25,118 7,999 1,00 78,64 C ÁTOMO 3369 C SER C 131 -25,328 25,793 8,782 1,00 84,72 C ÁTOMO 3370 O SER C 131 -24,161 25,684 8,404 1,00 85,42 O ÁTOMO 3371 CB SER C 131 -27,469 26,164 7,540 1,00 82,74 C ÁTOMO 3372 OG SER C 131 -28,231 26,661 8,629 1,00 92,26 O ÁTOMO 3373 N GLY C 137 -19,451 22,330 3,155 1,00 70,36 N ÁTOMO 3374 CA GLY C 137 -19,227 21,411 2,042
439 / 500
1,00 69,22 C ÁTOMO 3375 C GLY C 137 -20,110 20,163 2,136 1,00 68,93 C ÁTOMO 3376 O GLY C 137 -20,907 19,916 1,232 1,00 67,73 O ÁTOMO 3377 N THR C 138 -19,989 19,395 3,235 1,00 62,57 N ÁTOMO 3378 CA THR C 138 -20,756 18,156 3,435 1,00 59,19 C ÁTOMO 3379 C THR C 138 -21,771 18,336 4,580 1,00 59,81 C ÁTOMO 3380 O THR C 138 -21,435 18,897 5,623 1,00 60,22 O ÁTOMO 3381 CB THR C 138 -19,820 16,922 3,591 1,00 67,18 C ÁTOMO 3382 OG1 THR C 138 -20,572 15,804 4,071 1,00 70,05 O ÁTOMO 3383 CG2 THR C 138 -18,647 17,165 4,519 1,00 66,68 C ÁTOMO 3384 N ALA C 139 -23,018 17,870 4,366 1,00 53,15 N ÁTOMO 3385 CA ALA C 139 -24,111 17,970 5,337 1,00 50,79 C ÁTOMO 3386 C ALA C 139 -24,601 16,590 5,758 1,00 49,65 C ÁTOMO 3387 O ALA C 139 -24,678 15,695 4,925 1,00 48,16 O ÁTOMO 3388 CB ALA C 139 -25,268 18,746 4,731 1,00 51,34 C
440 / 500
ÁTOMO 3389 N ALA C 140 -24,965 16,430 7,036 1,00 43,44 N ÁTOMO 3390 CA ALA C 140 -25,513 15,172 7,548 1,00 41,09 C ÁTOMO 3391 C ALA C 140 -27,009 15,332 7,759 1,00 42,87 C ÁTOMO 3392 O ALA C 140 -27,457 16,384 8,185 1,00 42,46 O ÁTOMO 3393 CB ALA C 140 -24,853 14,796 8,864 1,00 41,79 C ÁTOMO 3394 N LEU C 141 -27,779 14,302 7,445 1,00 39,12 N ÁTOMO 3395 CA LEU C 141 -29,219 14,285 7,670 1,00 38,24 C ÁTOMO 3396 C LEU C 141 -29,595 12,854 8,031 1,00 42,42 C ÁTOMO 3397 O LEU C 141 -28,747 11,963 7,947 1,00 43,71 O ÁTOMO 3398 CB LEU C 141 -29,999 14,805 6,443 1,00 38,37 C ÁTOMO 3399 CG LEU C 141 -29,873 13,998 5,131 1,00 42,64 C ÁTOMO 3400 CD1 LEU C 141 -31,098 13,129 4,892 1,00 41,82 C ÁTOMO 3401 CD2 LEU C 141 -29,684 14,920 3,933 1,00 45,29 C ÁTOMO 3402 N GLY C 142 -30,826 12,623 8,454 1,00 36,49 N ÁTOMO 3403 CA GLY C 142 -31,201 11,272 8,819
441 / 500
1,00 35,92 C ÁTOMO 3404 C GLY C 142 -32,652 11,143 9,235 1,00 39,79 C ÁTOMO 3405 O GLY C 142 -33,435 12,077 9,071 1,00 39,99 O ÁTOMO 3406 N CYS C 143 -32,994 9,984 9,771 1,00 36,21 N ÁTOMO 3407 CA CYS C 143 -34,328 9,680 10,278 1,00 37,37 C ÁTOMO 3408 C CYS C 143 -34,159 9,019 11,632 1,00 39,29 C ÁTOMO 3409 O CYS C 143 -33,326 8,126 11,753 1,00 38,92 O ÁTOMO 3410 CB CYS C 143 -35,079 8,759 9,321 1,00 38,59 C ÁTOMO 3411 SG CYS C 143 -35,870 9,604 7,927 1,00 44,04 S ÁTOMO 3412 N LEU C 144 -34,954 9,430 12,629 1,00 34,45 N ÁTOMO 3413 CA LEU C 144 -34,971 8,825 13,957 1,00 33,07 C ÁTOMO 3414 C LEU C 144 -36,175 7,882 13,945 1,00 35,80 C ÁTOMO 3415 O LEU C 144 -37,301 8,337 13,732 1,00 34,17 O ÁTOMO 3416 CB LEU C 144 -35,105 9,907 15,056 1,00 33,74 C ÁTOMO 3417 CG LEU C 144 -35,398 9,423 16,496 1,00 36,68 C
442 / 500
ÁTOMO 3418 CD1 LEU C 144 -34,327 8,469 16,995 1,00 36,40 C ÁTOMO 3419 CD2 LEU C 144 -35,520 10,608 17,456 1,00 37,03 C ÁTOMO 3420 N VAL C 145 -35,922 6,567 14,098 1,00 32,86 N ÁTOMO 3421 CA VAL C 145 -36,933 5,503 14,089 1,00 31,94 C ÁTOMO 3422 C VAL C 145 -37,173 5,126 15,550 1,00 36,81 C ÁTOMO 3423 O VAL C 145 -36,453 4,301 16,116 1,00 34,76 O ÁTOMO 3424 CB VAL C 145 -36,439 4,301 13,245 1,00 34,65 C ÁTOMO 3425 CG1 VAL C 145 -37,533 3,249 13,121 1,00 33,48 C ÁTOMO 3426 CG2 VAL C 145 -35,974 4,769 11,858 1,00 34,52 C ÁTOMO 3427 N LYS C 146 -38,204 5,715 16,147 1,00 35,25 N ÁTOMO 3428 CA LYS C 146 -38,459 5,611 17,573 1,00 35,58 C ÁTOMO 3429 C LYS C 146 -39,548 4,640 18,025 1,00 38,97 C ÁTOMO 3430 O LYS C 146 -40,602 4,553 17,402 1,00 40,05 O ÁTOMO 3431 CB LYS C 146 -38,803 7,023 18,114 1,00 39,35 C ÁTOMO 3432 CG LYS C 146 -37,801 7,567 19,131
443 / 500
1,00 48,41 C ÁTOMO 3433 CD LYS C 146 -38,452 8,299 20,251 1,00 54,56 C ÁTOMO 3434 CE LYS C 146 -37,530 8,445 21,435 1,00 54,44 C ÁTOMO 3435 NZ LYS C 146 -37,415 7,195 22,225 1,00 59,15 N ÁTOMO 3436 N ASP C 147 -39,309 3,991 19,187 1,00 32,81 N ÁTOMO 3437 CA ASP C 147 -40,278 3,178 19,926 1,00 32,65 C ÁTOMO 3438 C ASP C 147 -41,031 2,108 19,118 1,00 36,32 C ÁTOMO 3439 O ASP C 147 -42,230 2,223 18,885 1,00 38,15 O ÁTOMO 3440 CB ASP C 147 -41,283 4,133 20,601 1,00 34,77 C ÁTOMO 3441 CG ASP C 147 -40,648 5,156 21,525 1,00 43,50 C ÁTOMO 3442 OD1 ASP C 147 -39,502 4,933 21,963 1,00 43,44 O ÁTOMO 3443 OD2 ASP C 147 -41,301 6,177 21,812 1,00 47,34 O ÁTOMO 3444 N TYR C 148 -40,340 1,055 18,733 1,00 31,65 N ÁTOMO 3445 CA TYR C 148 -40,958 -0,058 18,004 1,00 30,87 C ÁTOMO 3446 C TYR C 148 -40,642 -1,348 18,724 1,00 32,58 C
444 / 500
ÁTOMO 3447 O TYR C 148 -39,721 -1,401 19,531 1,00 31,62 O ÁTOMO 3448 CB TYR C 148 -40,492 -0,119 16,539 1,00 29,90 C ÁTOMO 3449 CG TYR C 148 -39,010 -0,366 16,368 1,00 30,49 C ÁTOMO 3450 CD1 TYR C 148 -38,510 -1,656 16,218 1,00 30,97 C ÁTOMO 3451 CD2 TYR C 148 -38,109 0,696 16,310 1,00 31,12 C ÁTOMO 3452 CE1 TYR C 148 -37,146 -1,888 16,060 1,00 30,32 C ÁTOMO 3453 CE2 TYR C 148 -36,747 0,478 16,120 1,00 30,49 C ÁTOMO 3454 CZ TYR C 148 -36,264 -0,818 16,031 1,00 36,71 C ÁTOMO 3455 OH TYR C 148 -34,926 -1,044 15,829 1,00 34,36 O ÁTOMO 3456 N PHE C 149 -41,430 -2,374 18,451 1,00 29,78 N ÁTOMO 3457 CA PHE C 149 -41,247 -3,685 19,045 1,00 28,55 C ÁTOMO 3458 C PHE C 149 -41,977 -4,700 18,158 1,00 34,99 C ÁTOMO 3459 O PHE C 149 -43,120 -4,441 17,777 1,00 35,21 O ÁTOMO 3460 CB PHE C 149 -41,803 -3,733 20,500 1,00 30,35 C ÁTOMO 3461 CG PHE C 149 -41,651 -5,089 21,147
445 / 500
1,00 31,30 C ÁTOMO 3462 CD1 PHE C 149 -40,484 -5,429 21,822 1,00 32,84 C ÁTOMO 3463 CD2 PHE C 149 -42,626 -6,068 20,987 1,00 33,45 C ÁTOMO 3464 CE1 PHE C 149 -40,297 -6,720 22,321 1,00 33,55 C ÁTOMO 3465 CE2 PHE C 149 -42,440 -7,357 21,492 1,00 35,85 C ÁTOMO 3466 CZ PHE C 149 -41,283 -7,672 22,165 1,00 33,11 C ÁTOMO 3467 N PRO C 150 -41,363 -5,862 17,868 1,00 32,34 N ÁTOMO 3468 CA PRO C 150 -40,010 -6,326 18,211 1,00 31,46 C ÁTOMO 3469 C PRO C 150 -39,048 -5,869 17,117 1,00 35,48 C ÁTOMO 3470 O PRO C 150 -39,430 -5,138 16,194 1,00 33,77 O ÁTOMO 3471 CB PRO C 150 -40,172 -7,858 18,192 1,00 33,13 C ÁTOMO 3472 CG PRO C 150 -41,212 -8,076 17,132 1,00 37,85 C ÁTOMO 3473 CD PRO C 150 -42,195 -6,972 17,374 1,00 34,21 C ÁTOMO 3474 N GLU C 151 -37,819 -6,366 17,172 1,00 31,95 N ÁTOMO 3475 CA GLU C 151 -36,885 -6,169 16,081 1,00 30,85 C
446 / 500
ÁTOMO 3476 C GLU C 151 -37,346 -7,111 14,938 1,00 33,62 C ÁTOMO 3477 O GLU C 151 -38,072 -8,065 15,207 1,00 32,36 O ÁTOMO 3478 CB GLU C 151 -35,468 -6,521 16,529 1,00 31,57 C ÁTOMO 3479 CG GLU C 151 -34,927 -5,542 17,553 1,00 36,89 C ÁTOMO 3480 CD GLU C 151 -33,419 -5,433 17,528 1,00 55,05 C ÁTOMO 3481 OE1 GLU C 151 -32,899 -4,717 16,642 1,00 43,17 O ÁTOMO 3482 OE2 GLU C 151 -32,757 -6,131 18,330 1,00 50,96 O ÁTOMO 3483 N PRO C 152 -36,952 -6,860 13,681 1,00 30,67 N ÁTOMO 3484 CA PRO C 152 -36,103 -5,778 13,207 1,00 29,57 C ÁTOMO 3485 C PRO C 152 -36,886 -4,715 12,473 1,00 34,73 C ÁTOMO 3486 O PRO C 152 -38,026 -4,931 12,058 1,00 34,13 O ÁTOMO 3487 CB PRO C 152 -35,162 -6,500 12,240 1,00 31,06 C ÁTOMO 3488 CG PRO C 152 -36,071 -7,528 11,577 1,00 35,02 C ÁTOMO 3489 CD PRO C 152 -37,055 -7,943 12,667 1,00 31,45 C ÁTOMO 3490 N VAL C 153 -36,230 -3,581 12,284
447 / 500
1,00 33,27 N ÁTOMO 3491 CA VAL C 153 -36,676 -2,464 11,466 1,00 34,10 C ÁTOMO 3492 C VAL C 153 -35,628 -2,419 10,355 1,00 36,23 C ÁTOMO 3493 O VAL C 153 -34,461 -2,727 10,615 1,00 36,00 O ÁTOMO 3494 CB VAL C 153 -36,749 -1,137 12,293 1,00 39,53 C ÁTOMO 3495 CG1 VAL C 153 -35,885 -0,021 11,708 1,00 40,72 C ÁTOMO 3496 CG2 VAL C 153 -38,186 -0,652 12,433 1,00 39,76 C ÁTOMO 3497 N THR C 154 -36,017 -2,040 9,142 1,00 32,69 N ÁTOMO 3498 CA THR C 154 -35,055 -1,852 8,055 1,00 32,45 C ÁTOMO 3499 C THR C 154 -35,212 -0,447 7,522 1,00 34,76 C ÁTOMO 3500 O THR C 154 -36,319 0,091 7,526 1,00 34,11 O ÁTOMO 3501 CB THR C 154 -35,229 -2,890 6,938 1,00 37,98 C ÁTOMO 3502 OG1 THR C 154 -36,540 -2,768 6,405 1,00 35,51 O ÁTOMO 3503 CG2 THR C 154 -34,983 -4,304 7,412 1,00 36,93 C ÁTOMO 3504 N VAL C 155 -34,112 0,147 7,055 1,00 31,22 N
448 / 500
ÁTOMO 3505 CA VAL C 155 -34,135 1,494 6,488 1,00 31,26 C ÁTOMO 3506 C VAL C 155 -33,399 1,498 5,170 1,00 35,98 C ÁTOMO 3507 O VAL C 155 -32,309 0,939 5,073 1,00 38,41 O ÁTOMO 3508 CB VAL C 155 -33,529 2,578 7,419 1,00 34,20 C ÁTOMO 3509 CG1 VAL C 155 -33,774 3,986 6,850 1,00 34,32 C ÁTOMO 3510 CG2 VAL C 155 -34,081 2,462 8,831 1,00 33,57 C ÁTOMO 3511 N SER C 156 -33,981 2,136 4,168 1,00 31,85 N ÁTOMO 3512 CA SER C 156 -33,329 2,390 2,889 1,00 31,67 C ÁTOMO 3513 C SER C 156 -33,532 3,890 2,648 1,00 35,07 C ÁTOMO 3514 O SER C 156 -34,326 4,511 3,358 1,00 32,90 O ÁTOMO 3515 CB SER C 156 -33,909 1,527 1,763 1,00 33,56 C ÁTOMO 3516 OG SER C 156 -35,139 1,994 1,233 1,00 38,04 O ÁTOMO 3517 N TRP C 157 -32,798 4,469 1,696 1,00 33,68 N ÁTOMO 3518 CA TRP C 157 -32,892 5,887 1,354 1,00 34,59 C ÁTOMO 3519 C TRP C 157 -33,226 6,021 -0,124
449 / 500
1,00 40,18 C ÁTOMO 3520 O TRP C 157 -32,605 5,344 -0,956 1,00 40,14 O ÁTOMO 3521 CB TRP C 157 -31,588 6,599 1,694 1,00 33,76 C ÁTOMO 3522 CG TRP C 157 -31,442 6,848 3,163 1,00 34,18 C ÁTOMO 3523 CD1 TRP C 157 -30,921 6,004 4,099 1,00 36,15 C ÁTOMO 3524 CD2 TRP C 157 -31,921 7,992 3,872 1,00 33,96 C ÁTOMO 3525 NE1 TRP C 157 -31,019 6,568 5,350 1,00 35,46 N ÁTOMO 3526 CE2 TRP C 157 -31,641 7,786 5,239 1,00 37,15 C ÁTOMO 3527 CE3 TRP C 157 -32,553 9,186 3,478 1,00 35,25 C ÁTOMO 3528 CZ2 TRP C 157 -31,972 8,725 6,215 1,00 35,97 C ÁTOMO 3529 CZ3 TRP C 157 -32,889 10,111 4,452 1,00 36,69 C ÁTOMO 3530 CH2 TRP C 157 -32,567 9,891 5,796 1,00 36,63 C ÁTOMO 3531 N ASN C 158 -34,244 6,845 -0,448 1,00 37,21 N ÁTOMO 3532 CA ASN C 158 -34,702 7,060 -1,831 1,00 38,69 C ÁTOMO 3533 C ASN C 158 -35,024 5,740 -2,555 1,00 42,14 C
450 / 500
ÁTOMO 3534 O ASN C 158 -34,682 5,562 -3,729 1,00 42,39 O ÁTOMO 3535 CB ASN C 158 -33,682 7,917 -2,604 1,00 40,22 C ÁTOMO 3536 CG ASN C 158 -33,522 9,295 -2,008 1,00 46,21 C ÁTOMO 3537 OD1 ASN C 158 -34,342 9,733 -1,212 1,00 40,14 O ÁTOMO 3538 ND2 ASN C 158 -32,487 10,024 -2,400 1,00 38,65 N ÁTOMO 3539 N SER C 159 -35,668 4,807 -1,818 1,00 37,79 N ÁTOMO 3540 CA SER C 159 -36,079 3,491 -2,301 1,00 38,40 C ÁTOMO 3541 C SER C 159 -34,904 2,654 -2,844 1,00 41,77 C ÁTOMO 3542 O SER C 159 -35,106 1,830 -3,724 1,00 41,19 O ÁTOMO 3543 CB SER C 159 -37,190 3,635 -3,343 1,00 41,54 C ÁTOMO 3544 OG SER C 159 -38,272 4,392 -2,822 1,00 47,75 O ÁTOMO 3545 N GLY C 160 -33,693 2,846 -2,281 1,00 38,65 N ÁTOMO 3546 CA GLY C 160 -32,482 2,137 -2,689 1,00 39,01 C ÁTOMO 3547 C GLY C 160 -31,542 2,951 -3,596 1,00 43,01 C ÁTOMO 3548 O GLY C 160 -30,411 2,527 -3,788
451 / 500
1,00 43,49 O ÁTOMO 3549 N ALA C 161 -31,981 4,093 -4,154 1,00 41,35 N ÁTOMO 3550 CA ALA C 161 -31,123 4,921 -5,027 1,00 42,93 C ÁTOMO 3551 C ALA C 161 -29,924 5,544 -4,287 1,00 46,99 C ÁTOMO 3552 O ALA C 161 -28,918 5,833 -4,928 1,00 48,13 O ÁTOMO 3553 CB ALA C 161 -31,942 6,031 -5,687 1,00 44,18 C ÁTOMO 3554 N LEU C 162 -30,031 5,766 -2,957 1,00 41,98 N ÁTOMO 3555 CA LEU C 162 -28,964 6,368 -2,158 1,00 40,66 C ÁTOMO 3556 C LEU C 162 -28,381 5,330 -1,195 1,00 43,86 C ÁTOMO 3557 O LEU C 162 -29,060 4,889 -0,271 1,00 41,50 O ÁTOMO 3558 CB LEU C 162 -29,533 7,567 -1,389 1,00 39,63 C ÁTOMO 3559 CG LEU C 162 -28,580 8,332 -0,469 1,00 42,63 C ÁTOMO 3560 CD1 LEU C 162 -27,376 8,842 -1,225 1,00 43,36 C ÁTOMO 3561 CD2 LEU C 162 -29,306 9,486 0,193 1,00 43,56 C ÁTOMO 3562 N THR C 163 -27,135 4,922 -1,438 1,00 42,81 N
452 / 500
ÁTOMO 3563 CA THR C 163 -26,435 3,914 -0,627 1,00 42,79 C ÁTOMO 3564 C THR C 163 -25,122 4,420 -0,023 1,00 48,11 C ÁTOMO 3565 O THR C 163 -24,741 3,965 1,055 1,00 49,40 O ÁTOMO 3566 CB THR C 163 -26,143 2,677 -1,500 1,00 51,93 C ÁTOMO 3567 OG1 THR C 163 -25,384 3,079 -2,650 1,00 54,16 O ÁTOMO 3568 CG2 THR C 163 -27,414 1,975 -1,952 1,00 49,57 C ÁTOMO 3569 N SER C 164 -24,402 5,295 -0,741 1,00 45,94 N ÁTOMO 3570 CA SER C 164 -23,113 5,830 -0,316 1,00 47,16 C ÁTOMO 3571 C SER C 164 -23,266 6,742 0,914 1,00 51,49 C ÁTOMO 3572 O SER C 164 -24,199 7,546 0,974 1,00 50,70 O ÁTOMO 3573 CB SER C 164 -22,465 6,596 -1,470 1,00 52,38 C ÁTOMO 3574 OG SER C 164 -21,112 6,917 -1,197 1,00 64,54 O ÁTOMO 3575 N GLY C 165 -22,380 6,570 1,910 1,00 48,80 N ÁTOMO 3576 CA GLY C 165 -22,378 7,373 3,132 1,00 48,55 C ÁTOMO 3577 C GLY C 165 -23,538 7,086 4,100
453 / 500
1,00 49,65 C ÁTOMO 3578 O GLY C 165 -23,696 7,844 5,054 1,00 50,49 O ÁTOMO 3579 N VAL C 166 -24,329 6,016 3,883 1,00 42,72 N ÁTOMO 3580 CA VAL C 166 -25,470 5,686 4,745 1,00 40,16 C ÁTOMO 3581 C VAL C 166 -25,000 4,874 5,958 1,00 43,26 C ÁTOMO 3582 O VAL C 166 -24,337 3,861 5,769 1,00 43,80 O ÁTOMO 3583 CB VAL C 166 -26,566 4,900 3,966 1,00 42,30 C ÁTOMO 3584 CG1 VAL C 166 -27,690 4,421 4,901 1,00 40,35 C ÁTOMO 3585 CG2 VAL C 166 -27,133 5,731 2,819 1,00 41,87 C ÁTOMO 3586 N HIS C 167 -25,385 5,284 7,184 1,00 38,32 N ÁTOMO 3587 CA HIS C 167 -25,079 4,544 8,404 1,00 37,74 C ÁTOMO 3588 C HIS C 167 -26,377 4,320 9,154 1,00 40,29 C ÁTOMO 3589 O HIS C 167 -26,933 5,278 9,681 1,00 40,72 O ÁTOMO 3590 CB HIS C 167 -24,093 5,295 9,316 1,00 40,12 C ÁTOMO 3591 CG HIS C 167 -22,748 5,542 8,714 1,00 45,66 C
454 / 500
ÁTOMO 3592 ND1 HIS C 167 -21,895 4,506 8,392 1,00 47,59 N ÁTOMO 3593 CD2 HIS C 167 -22,144 6,712 8,410 1,00 49,56 C ÁTOMO 3594 CE1 HIS C 167 -20,807 5,065 7,902 1,00 48,72 C ÁTOMO 3595 NE2 HIS C 167 -20,907 6,398 7,901 1,00 50,53 N ÁTOMO 3596 N THR C 168 -26,874 3,077 9,191 1,00 35,88 N ÁTOMO 3597 CA THR C 168 -28,071 2,714 9,963 1,00 35,19 C ÁTOMO 3598 C THR C 168 -27,558 2,063 11,235 1,00 39,47 C ÁTOMO 3599 O THR C 168 -26,951 0,993 11,177 1,00 39,80 O ÁTOMO 3600 CB THR C 168 -29,014 1,829 9,147 1,00 36,19 C ÁTOMO 3601 OG1 THR C 168 -29,437 2,596 8,022 1,00 34,80 O ÁTOMO 3602 CG2 THR C 168 -30,242 1,387 9,939 1,00 31,62 C ÁTOMO 3603 N PHE C 169 -27,768 2,727 12,376 1,00 33,66 N ÁTOMO 3604 CA PHE C 169 -27,248 2,281 13,652 1,00 33,21 C ÁTOMO 3605 C PHE C 169 -27,932 1,027 14,179 1,00 38,49 C ÁTOMO 3606 O PHE C 169 -29,115 0,826 13,902
455 / 500
1,00 36,76 O ÁTOMO 3607 CB PHE C 169 -27,371 3,405 14,708 1,00 34,82 C ÁTOMO 3608 CG PHE C 169 -26,378 4,504 14,457 1,00 37,02 C ÁTOMO 3609 CD1 PHE C 169 -26,692 5,572 13,621 1,00 39,48 C ÁTOMO 3610 CD2 PHE C 169 -25,085 4,406 14,934 1,00 38,66 C ÁTOMO 3611 CE1 PHE C 169 -25,753 6,563 13,347 1,00 41,07 C ÁTOMO 3612 CE2 PHE C 169 -24,145 5,376 14,635 1,00 42,25 C ÁTOMO 3613 CZ PHE C 169 -24,477 6,447 13,835 1,00 40,95 C ÁTOMO 3614 N PRO C 170 -27,220 0,226 15,014 1,00 37,64 N ÁTOMO 3615 CA PRO C 170 -27,876 -0,919 15,637 1,00 36,91 C ÁTOMO 3616 C PRO C 170 -28,952 -0,416 16,590 1,00 39,98 C ÁTOMO 3617 O PRO C 170 -28,785 0,647 17,194 1,00 38,00 O ÁTOMO 3618 CB PRO C 170 -26,741 -1,620 16,398 1,00 39,13 C ÁTOMO 3619 CG PRO C 170 -25,528 -1,261 15,681 1,00 44,32 C ÁTOMO 3620 CD PRO C 170 -25,748 0,119 15,129 1,00 40,17 C
456 / 500
ÁTOMO 3621 N ALA C 171 -30,048 -1,172 16,732 1,00 37,84 N ÁTOMO 3622 CA ALA C 171 -31,127 -0,797 17,652 1,00 37,38 C ÁTOMO 3623 C ALA C 171 -30,666 -0,839 19,100 1,00 40,61 C ÁTOMO 3624 O ALA C 171 -29,804 -1,637 19,458 1,00 40,78 O ÁTOMO 3625 CB ALA C 171 -32,308 -1,735 17,483 1,00 37,47 C ÁTOMO 3626 N VAL C 172 -31,237 0,026 19,933 1,00 37,47 N ÁTOMO 3627 CA VAL C 172 -30,945 0,044 21,358 1,00 37,51 C ÁTOMO 3628 C VAL C 172 -32,266 -0,167 22,054 1,00 40,36 C ÁTOMO 3629 O VAL C 172 -33,243 0,510 21,730 1,00 40,15 O ÁTOMO 3630 CB VAL C 172 -30,243 1,343 21,822 1,00 42,01 C ÁTOMO 3631 CG1 VAL C 172 -30,056 1,348 23,337 1,00 43,19 C ÁTOMO 3632 CG2 VAL C 172 -28,893 1,497 21,135 1,00 41,67 C ÁTOMO 3633 N LEU C 173 -32,294 -1,100 23,010 1,00 36,43 N ÁTOMO 3634 CA LEU C 173 -33,475 -1,382 23,802 1,00 36,35 C ÁTOMO 3635 C LEU C 173 -33,518 -0,339 24,929
457 / 500
1,00 44,13 C ÁTOMO 3636 O LEU C 173 -32,555 -0,209 25,697 1,00 44,92 O ÁTOMO 3637 CB LEU C 173 -33,394 -2,817 24,373 1,00 35,69 C ÁTOMO 3638 CG LEU C 173 -34,542 -3,260 25,278 1,00 40,30 C ÁTOMO 3639 CD1 LEU C 173 -35,871 -3,230 24,534 1,00 38,92 C ÁTOMO 3640 CD2 LEU C 173 -34,275 -4,664 25,852 1,00 43,69 C ÁTOMO 3641 N GLN C 174 -34,630 0,404 25,020 1,00 41,93 N ÁTOMO 3642 CA GLN C 174 -34,832 1,442 26,034 1,00 42,66 C ÁTOMO 3643 C GLN C 174 -35,531 0,826 27,250 1,00 46,20 C ÁTOMO 3644 O GLN C 174 -36,099 -0,265 27,133 1,00 42,26 O ÁTOMO 3645 CB GLN C 174 -35,660 2,594 25,433 1,00 44,53 C ÁTOMO 3646 CG GLN C 174 -34,969 3,287 24,229 1,00 51,59 C ÁTOMO 3647 CD GLN C 174 -35,915 3,885 23,210 1,00 62,45 C ÁTOMO 3648 OE1 GLN C 174 -35,838 5,076 22,881 1,00 58,44 O ÁTOMO 3649 NE2 GLN C 174 -36,730 3,052 22,581 1,00 43,24 N
458 / 500
ÁTOMO 3650 N SER C 175 -35,503 1,524 28,416 1,00 46,90 N ÁTOMO 3651 CA SER C 175 -36,145 1,046 29,654 1,00 49,01 C ÁTOMO 3652 C SER C 175 -37,661 0,848 29,493 1,00 53,54 C ÁTOMO 3653 O SER C 175 -38,252 0,084 30,256 1,00 54,70 O ÁTOMO 3654 CB SER C 175 -35,850 1,977 30,833 1,00 56,29 C ÁTOMO 3655 OG SER C 175 -35,934 3,339 30,447 1,00 68,49 O ÁTOMO 3656 N SER C 176 -38,276 1,506 28,488 1,00 48,91 N ÁTOMO 3657 CA SER C 176 -39,689 1,336 28,135 1,00 48,23 C ÁTOMO 3658 C SER C 176 -40,004 -0,069 27,584 1,00 49,92 C ÁTOMO 3659 O SER C 176 -41,181 -0,423 27,482 1,00 49,96 O ÁTOMO 3660 CB SER C 176 -40,079 2,345 27,057 1,00 49,39 C ÁTOMO 3661 OG SER C 176 -39,322 2,146 25,871 1,00 50,49 O ÁTOMO 3662 N GLY C 177 -38,975 -0,823 27,143 1,00 44,04 N ÁTOMO 3663 CA GLY C 177 -39,147 -2,140 26,541 1,00 41,89 C ÁTOMO 3664 C GLY C 177 -39,260 -2,024 25,012
459 / 500
1,00 42,93 C ÁTOMO 3665 O GLY C 177 -39,486 -3,036 24,357 1,00 42,28 O ÁTOMO 3666 N LEU C 178 -39,110 -0,809 24,439 1,00 38,86 N ÁTOMO 3667 CA LEU C 178 -39,198 -0,606 22,994 1,00 38,16 C ÁTOMO 3668 C LEU C 178 -37,835 -0,262 22,465 1,00 39,69 C ÁTOMO 3669 O LEU C 178 -37,031 0,363 23,169 1,00 39,65 O ÁTOMO 3670 CB LEU C 178 -40,165 0,529 22,629 1,00 39,12 C ÁTOMO 3671 CG LEU C 178 -41,553 0,412 23,243 1,00 47,25 C ÁTOMO 3672 CD1 LEU C 178 -42,316 1,689 23,084 1,00 49,72 C ÁTOMO 3673 CD2 LEU C 178 -42,333 -0,750 22,645 1,00 48,05 C ÁTOMO 3674 N TYR C 179 -37,606 -0,595 21,197 1,00 32,89 N ÁTOMO 3675 CA TYR C 179 -36,354 -0,311 20,517 1,00 31,68 C ÁTOMO 3676 C TYR C 179 -36,410 1,029 19,789 1,00 34,45 C ÁTOMO 3677 O TYR C 179 -37,491 1,508 19,423 1,00 32,55 O ÁTOMO 3678 CB TYR C 179 -36,048 -1,407 19,493 1,00 31,24 C
460 / 500
ÁTOMO 3679 CG TYR C 179 -35,866 -2,771 20,114 1,00 33,01 C ÁTOMO 3680 CD1 TYR C 179 -34,622 -3,194 20,562 1,00 34,09 C ÁTOMO 3681 CD2 TYR C 179 -36,938 -3,651 20,237 1,00 33,66 C ÁTOMO 3682 CE1 TYR C 179 -34,446 -4,459 21,119 1,00 34,49 C ÁTOMO 3683 CE2 TYR C 179 -36,780 -4,908 20,816 1,00 34,17 C ÁTOMO 3684 CZ TYR C 179 -35,532 -5,309 21,256 1,00 39,19 C ÁTOMO 3685 OH TYR C 179 -35,390 -6,551 21,817 1,00 39,50 O ÁTOMO 3686 N SER C 180 -35,224 1,597 19,531 1,00 31,13 N ÁTOMO 3687 CA SER C 180 -35,072 2,814 18,741 1,00 31,06 C ÁTOMO 3688 C SER C 180 -33,736 2,809 18,041 1,00 35,97 C ÁTOMO 3689 O SER C 180 -32,766 2,228 18,541 1,00 35,27 O ÁTOMO 3690 CB SER C 180 -35,166 4,068 19,607 1,00 35,60 C ÁTOMO 3691 OG SER C 180 -36,493 4,283 20,050 1,00 46,10 O ÁTOMO 3692 N LEU C 181 -33,683 3,480 16,897 1,00 33,23 N ÁTOMO 3693 CA LEU C 181 -32,450 3,666 16,146
461 / 500
1,00 33,56 C ÁTOMO 3694 C LEU C 181 -32,552 4,860 15,246 1,00 37,99 C ÁTOMO 3695 O LEU C 181 -33,648 5,366 15,003 1,00 38,13 O ÁTOMO 3696 CB LEU C 181 -32,047 2,415 15,341 1,00 32,57 C ÁTOMO 3697 CG LEU C 181 -32,981 1,912 14,235 1,00 36,26 C ÁTOMO 3698 CD1 LEU C 181 -32,790 2,686 12,914 1,00 37,15 C ÁTOMO 3699 CD2 LEU C 181 -32,694 0,435 13,923 1,00 39,02 C ÁTOMO 3700 N SER C 182 -31,407 5,290 14,719 1,00 35,19 N ÁTOMO 3701 CA SER C 182 -31,337 6,361 13,736 1,00 34,28 C ÁTOMO 3702 C SER C 182 -30,638 5,814 12,503 1,00 35,76 C ÁTOMO 3703 O SER C 182 -29,878 4,852 12,590 1,00 33,49 O ÁTOMO 3704 CB SER C 182 -30,569 7,561 14,283 1,00 36,84 C ÁTOMO 3705 OG SER C 182 -31,440 8,441 14,970 1,00 44,76 O ÁTOMO 3706 N SER C 183 -30,940 6,407 11,354 1,00 33,35 N ÁTOMO 3707 CA SER C 183 -30,297 6,110 10,075 1,00 31,96 C
462 / 500
ÁTOMO 3708 C SER C 183 -29,869 7,446 9,541 1,00 35,95 C ÁTOMO 3709 O SER C 183 -30,696 8,351 9,455 1,00 35,40 O ÁTOMO 3710 CB SER C 183 -31,249 5,422 9,107 1,00 32,59 C ÁTOMO 3711 OG SER C 183 -30,574 5,155 7,889 1,00 36,23 O ÁTOMO 3712 N VAL C 184 -28,577 7,612 9,276 1,00 33,92 N ÁTOMO 3713 CA VAL C 184 -28,038 8,886 8,819 1,00 35,09 C ÁTOMO 3714 C VAL C 184 -27,325 8,724 7,483 1,00 40,08 C ÁTOMO 3715 O VAL C 184 -26,886 7,628 7,144 1,00 39,18 O ÁTOMO 3716 CB VAL C 184 -27,109 9,531 9,880 1,00 39,70 C ÁTOMO 3717 CG1 VAL C 184 -27,849 9,751 11,197 1,00 38,39 C ÁTOMO 3718 CG2 VAL C 184 -25,839 8,705 10,098 1,00 40,03 C ÁTOMO 3719 N VAL C 185 -27,187 9,833 6,758 1,00 37,40 N ÁTOMO 3720 CA VAL C 185 -26,466 9,896 5,494 1,00 38,30 C ÁTOMO 3721 C VAL C 185 -25,799 11,270 5,358 1,00 43,11 C ÁTOMO 3722 O VAL C 185 -26,386 12,281 5,759
463 / 500
1,00 41,97 O ÁTOMO 3723 CB VAL C 185 -27,370 9,548 4,274 1,00 41,49 C ÁTOMO 3724 CG1 VAL C 185 -28,521 10,541 4,113 1,00 41,26 C ÁTOMO 3725 CG2 VAL C 185 -26,551 9,450 2,986 1,00 41,92 C ÁTOMO 3726 N THR C 186 -24,559 11,297 4,829 1,00 41,34 N ÁTOMO 3727 CA THR C 186 -23,822 12,538 4,579 1,00 42,71 C ÁTOMO 3728 C THR C 186 -23,867 12,806 3,084 1,00 47,23 C ÁTOMO 3729 O THR C 186 -23,590 11,909 2,287 1,00 46,50 O ÁTOMO 3730 CB THR C 186 -22,407 12,478 5,138 1,00 48,72 C ÁTOMO 3731 OG1 THR C 186 -21,753 11,301 4,669 1,00 48,98 O ÁTOMO 3732 CG2 THR C 186 -22,399 12,500 6,651 1,00 46,29 C ÁTOMO 3733 N VAL C 187 -24,253 14,017 2,703 1,00 45,84 N ÁTOMO 3734 CA VAL C 187 -24,396 14,406 1,298 1,00 46,95 C ÁTOMO 3735 C VAL C 187 -23,729 15,761 1,077 1,00 53,16 C ÁTOMO 3736 O VAL C 187 -23,512 16,485 2,057 1,00 52,77 O
464 / 500
ÁTOMO 3737 CB VAL C 187 -25,905 14,433 0,906 1,00 49,45 C ÁTOMO 3738 CG1 VAL C 187 -26,569 13,094 1,232 1,00 47,20 C ÁTOMO 3739 CG2 VAL C 187 -26,659 15,583 1,597 1,00 49,08 C ÁTOMO 3740 N PRO C 188 -23,439 16,140 -0,191 1,00 50,85 N ÁTOMO 3741 CA PRO C 188 -22,881 17,477 -0,416 1,00 52,31 C ÁTOMO 3742 C PRO C 188 -23,950 18,504 -0,032 1,00 55,32 C ÁTOMO 3743 O PRO C 188 -25,117 18,319 -0,372 1,00 53,37 O ÁTOMO 3744 CB PRO C 188 -22,565 17,501 -1,922 1,00 55,35 C ÁTOMO 3745 CG PRO C 188 -22,518 16,080 -2,331 1,00 58,18 C ÁTOMO 3746 CD PRO C 188 -23,491 15,369 -1,450 1,00 51,79 C ÁTOMO 3747 N SER C 189 -23,578 19,540 0,712 1,00 53,46 N ÁTOMO 3748 CA SER C 189 -24,528 20,567 1,139 1,00 53,84 C ÁTOMO 3749 C SER C 189 -25,212 21,269 -0,064 1,00 58,42 C ÁTOMO 3750 O SER C 189 -26,388 21,622 0,036 1,00 56,23 O ÁTOMO 3751 CB SER C 189 -23,849 21,570 2,071
465 / 500
1,00 58,51 C ÁTOMO 3752 OG SER C 189 -22,635 22,048 1,520 1,00 73,56 O ÁTOMO 3753 N SER C 190 -24,515 21,383 -1,217 1,00 57,74 N ÁTOMO 3754 CA SER C 190 -25,083 21,977 -2,441 1,00 59,38 C ÁTOMO 3755 C SER C 190 -26,289 21,165 -2,994 1,00 61,93 C ÁTOMO 3756 O SER C 190 -27,193 21,747 -3,589 1,00 61,60 O ÁTOMO 3757 CB SER C 190 -24,008 22,111 -3,518 1,00 64,69 C ÁTOMO 3758 OG SER C 190 -23,314 20,885 -3,690 1,00 73,17 O ÁTOMO 3759 N SER C 191 -26,326 19,843 -2,750 1,00 57,00 N ÁTOMO 3760 CA SER C 191 -27,443 18,992 -3,188 1,00 54,73 C ÁTOMO 3761 C SER C 191 -28,734 19,180 -2,345 1,00 56,38 C ÁTOMO 3762 O SER C 191 -29,772 18,649 -2,732 1,00 54,22 O ÁTOMO 3763 CB SER C 191 -27,034 17,519 -3,181 1,00 56,06 C ÁTOMO 3764 OG SER C 191 -27,060 16,965 -1,874 1,00 59,55 O ÁTOMO 3765 N LEU C 192 -28,691 19,927 -1,220 1,00 53,23 N
466 / 500
ÁTOMO 3766 CA LEU C 192 -29,883 20,138 -0,392 1,00 51,91 C ÁTOMO 3767 C LEU C 192 -30,963 20,981 -1,091 1,00 55,14 C ÁTOMO 3768 O LEU C 192 -32,144 20,791 -0,813 1,00 52,70 O ÁTOMO 3769 CB LEU C 192 -29,505 20,763 0,961 1,00 52,37 C ÁTOMO 3770 CG LEU C 192 -28,583 19,926 1,865 1,00 55,88 C ÁTOMO 3771 CD1 LEU C 192 -28,270 20,674 3,142 1,00 56,85 C ÁTOMO 3772 CD2 LEU C 192 -29,177 18,563 2,166 1,00 54,65 C ÁTOMO 3773 N GLY C 193 -30,574 21,877 -2,011 1,00 54,57 N ÁTOMO 3774 CA GLY C 193 -31,528 22,694 -2,755 1,00 55,72 C ÁTOMO 3775 C GLY C 193 -32,011 22,031 -4,060 1,00 61,36 C ÁTOMO 3776 O GLY C 193 -32,898 22,589 -4,709 1,00 62,19 O ÁTOMO 3777 N THR C 194 -31,407 20,891 -4,473 1,00 58,05 N ÁTOMO 3778 CA THR C 194 -31,758 20,205 -5,733 1,00 57,84 C ÁTOMO 3779 C THR C 194 -32,144 18,715 -5,611 1,00 60,18 C ÁTOMO 3780 O THR C 194 -32,796 18,203 -6,521
467 / 500
1,00 60,53 O ÁTOMO 3781 CB THR C 194 -30,600 20,337 -6,733 1,00 59,06 C ÁTOMO 3782 OG1 THR C 194 -29,519 19,488 -6,339 1,00 57,56 O ÁTOMO 3783 CG2 THR C 194 -30,124 21,771 -6,902 1,00 54,99 C ÁTOMO 3784 N GLN C 195 -31,705 18,009 -4,554 1,00 54,49 N ÁTOMO 3785 CA GLN C 195 -31,974 16,581 -4,374 1,00 52,91 C ÁTOMO 3786 C GLN C 195 -32,915 16,368 -3,192 1,00 54,66 C ÁTOMO 3787 O GLN C 195 -32,746 17,002 -2,155 1,00 53,86 O ÁTOMO 3788 CB GLN C 195 -30,643 15,829 -4,136 1,00 54,19 C ÁTOMO 3789 CG GLN C 195 -30,754 14,304 -4,008 1,00 72,46 C ÁTOMO 3790 CD GLN C 195 -31,323 13,648 -5,239 1,00 86,87 C ÁTOMO 3791 OE1 GLN C 195 -30,937 13,967 -6,364 1,00 91,30 O ÁTOMO 3792 NE2 GLN C 195 -32,240 12,709 -5,068 1,00 71,05 N ÁTOMO 3793 N THR C 196 -33,898 15,476 -3,352 1,00 50,65 N ÁTOMO 3794 CA THR C 196 -34,850 15,126 -2,297 1,00 49,27 C
468 / 500
ÁTOMO 3795 C THR C 196 -34,312 13,884 -1,558 1,00 49,76 C ÁTOMO 3796 O THR C 196 -33,700 13,017 -2,190 1,00 47,34 O ÁTOMO 3797 CB THR C 196 -36,247 14,899 -2,901 1,00 61,55 C ÁTOMO 3798 OG1 THR C 196 -36,673 16,111 -3,521 1,00 62,45 O ÁTOMO 3799 CG2 THR C 196 -37,274 14,494 -1,863 1,00 61,37 C ÁTOMO 3800 N TYR C 197 -34,528 13,825 -0,217 1,00 44,93 N ÁTOMO 3801 CA TYR C 197 -34,078 12,725 0,651 1,00 42,40 C ÁTOMO 3802 C TYR C 197 -35,245 12,150 1,432 1,00 45,32 C ÁTOMO 3803 O TYR C 197 -35,835 12,854 2,249 1,00 44,98 O ÁTOMO 3804 CB TYR C 197 -32,975 13,207 1,605 1,00 42,62 C ÁTOMO 3805 CG TYR C 197 -31,729 13,597 0,847 1,00 43,63 C ÁTOMO 3806 CD1 TYR C 197 -30,946 12,634 0,221 1,00 45,06 C ÁTOMO 3807 CD2 TYR C 197 -31,410 14,936 0,632 1,00 44,12 C ÁTOMO 3808 CE1 TYR C 197 -29,886 12,989 -0,609 1,00 47,00 C ÁTOMO 3809 CE2 TYR C 197 -30,313 15,303 -0,147
469 / 500
1,00 45,53 C ÁTOMO 3810 CZ TYR C 197 -29,556 14,324 -0,774 1,00 50,78 C ÁTOMO 3811 OH TYR C 197 -28,449 14,638 -1,528 1,00 47,61 O ÁTOMO 3812 N ILE C 198 -35,606 10,885 1,147 1,00 41,27 N ÁTOMO 3813 CA ILE C 198 -36,717 10,190 1,796 1,00 40,27 C ÁTOMO 3814 C ILE C 198 -36,176 8,897 2,394 1,00 42,85 C ÁTOMO 3815 O ILE C 198 -35,609 8,100 1,658 1,00 43,61 O ÁTOMO 3816 CB ILE C 198 -37,849 9,880 0,759 1,00 43,87 C ÁTOMO 3817 CG1 ILE C 198 -38,453 11,182 0,162 1,00 45,20 C ÁTOMO 3818 CG2 ILE C 198 -38,966 9,018 1,390 1,00 42,53 C ÁTOMO 3819 CD1 ILE C 198 -39,164 10,993 -1,177 1,00 47,15 C ÁTOMO 3820 N CYS C 199 -36,385 8,655 3,694 1,00 38,95 N ÁTOMO 3821 CA CYS C 199 -35,992 7,381 4,304 1,00 37,58 C ÁTOMO 3822 C CYS C 199 -37,198 6,464 4,219 1,00 37,49 C ÁTOMO 3823 O CYS C 199 -38,322 6,921 4,408 1,00 36,74 O
470 / 500
ÁTOMO 3824 CB CYS C 199 -35,504 7,552 5,744 1,00 38,53 C ÁTOMO 3825 SG CYS C 199 -36,774 8,077 6,929 1,00 43,26 S ÁTOMO 3826 N ASN C 200 -36,978 5,195 3,891 1,00 33,95 N ÁTOMO 3827 CA ASN C 200 -38,060 4,216 3,760 1,00 34,51 C ÁTOMO 3828 C ASN C 200 -37,888 3,245 4,910 1,00 36,82 C ÁTOMO 3829 O ASN C 200 -36,941 2,470 4,916 1,00 36,20 O ÁTOMO 3830 CB ASN C 200 -38,011 3,500 2,405 1,00 37,20 C ÁTOMO 3831 CG ASN C 200 -37,611 4,407 1,280 1,00 44,47 C ÁTOMO 3832 OD1 ASN C 200 -36,480 4,369 0,806 1,00 38,46 O ÁTOMO 3833 ND2 ASN C 200 -38,482 5,318 0,910 1,00 34,99 N ÁTOMO 3834 N VAL C 201 -38,753 3,340 5,912 1,00 33,44 N ÁTOMO 3835 CA VAL C 201 -38,680 2,509 7,115 1,00 32,43 C ÁTOMO 3836 C VAL C 201 -39,695 1,366 7,027 1,00 36,27 C ÁTOMO 3837 O VAL C 201 -40,873 1,619 6,803 1,00 36,91 O ÁTOMO 3838 CB VAL C 201 -38,907 3,383 8,367
471 / 500
1,00 34,96 C ÁTOMO 3839 CG1 VAL C 201 -38,753 2,562 9,656 1,00 34,55 C ÁTOMO 3840 CG2 VAL C 201 -37,945 4,568 8,366 1,00 34,28 C ÁTOMO 3841 N ASN C 202 -39,250 0,122 7,210 1,00 32,13 N ÁTOMO 3842 CA ASN C 202 -40,152 -1,027 7,170 1,00 32,50 C ÁTOMO 3843 C ASN C 202 -40,048 -1,791 8,481 1,00 35,35 C ÁTOMO 3844 O ASN C 202 -38,947 -2,073 8,959 1,00 34,29 O ÁTOMO 3845 CB ASN C 202 -39,827 -1,952 5,985 1,00 35,75 C ÁTOMO 3846 CG ASN C 202 -40,905 -2,964 5,659 1,00 69,46 C ÁTOMO 3847 OD1 ASN C 202 -42,031 -2,909 6,159 1,00 68,86 O ÁTOMO 3848 ND2 ASN C 202 -40,578 -3,943 4,838 1,00 63,99 N ÁTOMO 3849 N HIS C 203 -41,192 -2,111 9,068 1,00 32,54 N ÁTOMO 3850 CA HIS C 203 -41,253 -2,904 10,295 1,00 31,61 C ÁTOMO 3851 C HIS C 203 -42,271 -4,017 10,026 1,00 36,97 C ÁTOMO 3852 O HIS C 203 -43,465 -3,845 10,254 1,00 38,03 O
472 / 500
ÁTOMO 3853 CB HIS C 203 -41,617 -2,018 11,491 1,00 32,05 C ÁTOMO 3854 CG HIS C 203 -41,663 -2,748 12,799 1,00 34,54 C ÁTOMO 3855 ND1 HIS C 203 -42,846 -2,909 13,479 1,00 36,65 N ÁTOMO 3856 CD2 HIS C 203 -40,673 -3,351 13,497 1,00 34,43 C ÁTOMO 3857 CE1 HIS C 203 -42,550 -3,592 14,571 1,00 35,40 C ÁTOMO 3858 NE2 HIS C 203 -41,253 -3,884 14,621 1,00 34,84 N ÁTOMO 3859 N LYS C 204 -41,786 -5,134 9,453 1,00 33,51 N ÁTOMO 3860 CA LYS C 204 -42,628 -6,274 9,090 1,00 35,51 C ÁTOMO 3861 C LYS C 204 -43,444 -6,849 10,260 1,00 39,45 C ÁTOMO 3862 O LYS C 204 -44,613 -7,156 10,033 1,00 39,43 O ÁTOMO 3863 CB LYS C 204 -41,808 -7,392 8,411 1,00 37,95 C ÁTOMO 3864 CG LYS C 204 -41,383 -7,055 6,983 1,00 59,99 C ÁTOMO 3865 CD LYS C 204 -40,254 -7,979 6,488 1,00 75,65 C ÁTOMO 3866 CE LYS C 204 -40,468 -8,523 5,093 1,00 89,72 C ÁTOMO 3867 NZ LYS C 204 -40,459 -7,456 4,063
473 / 500
1,00 98,79 N ÁTOMO 3868 N PRO C 205 -42,889 -6,924 11,511 1,00 34,46 N ÁTOMO 3869 CA PRO C 205 -43,669 -7,486 12,626 1,00 34,26 C ÁTOMO 3870 C PRO C 205 -45,016 -6,787 12,912 1,00 40,22 C ÁTOMO 3871 O PRO C 205 -45,938 -7,472 13,350 1,00 42,16 O ÁTOMO 3872 CB PRO C 205 -42,698 -7,408 13,801 1,00 34,66 C ÁTOMO 3873 CG PRO C 205 -41,356 -7,530 13,172 1,00 37,43 C ÁTOMO 3874 CD PRO C 205 -41,487 -6,694 11,929 1,00 33,27 C ÁTOMO 3875 N SER C 206 -45,151 -5,471 12,609 1,00 36,17 N ÁTOMO 3876 CA SER C 206 -46,398 -4,713 12,784 1,00 37,09 C ÁTOMO 3877 C SER C 206 -47,056 -4,313 11,446 1,00 45,52 C ÁTOMO 3878 O SER C 206 -48,057 -3,587 11,460 1,00 46,22 O ÁTOMO 3879 CB SER C 206 -46,133 -3,451 13,600 1,00 37,24 C ÁTOMO 3880 OG SER C 206 -45,481 -2,468 12,815 1,00 39,38 O ÁTOMO 3881 N ASN C 207 -46,501 -4,765 10,305 1,00 44,74 N
474 / 500
ÁTOMO 3882 CA ASN C 207 -46,968 -4,420 8,959 1,00 46,37 C ÁTOMO 3883 C ASN C 207 -46,954 -2,893 8,750 1,00 51,08 C ÁTOMO 3884 O ASN C 207 -47,877 -2,330 8,164 1,00 52,75 O ÁTOMO 3885 CB ASN C 207 -48,348 -5,039 8,668 1,00 51,57 C ÁTOMO 3886 CG ASN C 207 -48,734 -5,047 7,199 1,00 84,75 C ÁTOMO 3887 OD1 ASN C 207 -47,888 -5,160 6,298 1,00 80,06 O ÁTOMO 3888 ND2 ASN C 207 -50,024 -4,920 6,913 1,00 79,89 N ÁTOMO 3889 N THR C 208 -45,895 -2,229 9,243 1,00 46,28 N ÁTOMO 3890 CA THR C 208 -45,734 -0,776 9,148 1,00 45,98 C ÁTOMO 3891 C THR C 208 -44,659 -0,441 8,109 1,00 49,44 C ÁTOMO 3892 O THR C 208 -43,551 -0,980 8,176 1,00 48,86 O ÁTOMO 3893 CB THR C 208 -45,379 -0,203 10,537 1,00 51,02 C ÁTOMO 3894 OG1 THR C 208 -46,494 -0,374 11,410 1,00 50,03 O ÁTOMO 3895 CG2 THR C 208 -44,994 1,271 10,495 1,00 52,32 C ÁTOMO 3896 N LYS C 209 -45,007 0,417 7,140
475 / 500
1,00 45,59 N ÁTOMO 3897 CA LYS C 209 -44,097 0,942 6,119 1,00 44,94 C ÁTOMO 3898 C LYS C 209 -44,286 2,450 6,160 1,00 48,08 C ÁTOMO 3899 O LYS C 209 -45,421 2,906 6,027 1,00 49,70 O ÁTOMO 3900 CB LYS C 209 -44,415 0,401 4,708 1,00 47,52 C ÁTOMO 3901 CG LYS C 209 -43,607 -0,845 4,335 1,00 60,67 C ÁTOMO 3902 CD LYS C 209 -43,547 -1,105 2,822 1,00 68,70 C ÁTOMO 3903 CE LYS C 209 -44,819 -1,659 2,229 1,00 79,44 C ÁTOMO 3904 NZ LYS C 209 -44,942 -3,128 2,426 1,00 90,37 N ÁTOMO 3905 N VAL C 210 -43,209 3,214 6,404 1,00 42,04 N ÁTOMO 3906 CA VAL C 210 -43,271 4,679 6,496 1,00 41,81 C ÁTOMO 3907 C VAL C 210 -42,211 5,272 5,578 1,00 45,20 C ÁTOMO 3908 O VAL C 210 -41,067 4,830 5,608 1,00 44,94 O ÁTOMO 3909 CB VAL C 210 -43,045 5,153 7,961 1,00 45,14 C ÁTOMO 3910 CG1 VAL C 210 -43,168 6,675 8,080 1,00 45,33 C
476 / 500
ÁTOMO 3911 CG2 VAL C 210 -44,010 4,459 8,922 1,00 45,25 C ÁTOMO 3912 N ASP C 211 -42,588 6,271 4,778 1,00 42,34 N ÁTOMO 3913 CA ASP C 211 -41,678 7,018 3,919 1,00 41,90 C ÁTOMO 3914 C ASP C 211 -41,670 8,429 4,488 1,00 47,72 C ÁTOMO 3915 O ASP C 211 -42,726 9,066 4,503 1,00 50,20 O ÁTOMO 3916 CB ASP C 211 -42,175 7,056 2,465 1,00 43,60 C ÁTOMO 3917 CG ASP C 211 -42,166 5,711 1,779 1,00 52,70 C ÁTOMO 3918 OD1 ASP C 211 -41,161 4,981 1,914 1,00 51,11 O ÁTOMO 3919 OD2 ASP C 211 -43,156 5,390 1,096 1,00 63,38 O ÁTOMO 3920 N LYS C 212 -40,526 8,908 4,996 1,00 41,79 N ÁTOMO 3921 CA LYS C 212 -40,451 10,257 5,554 1,00 41,69 C ÁTOMO 3922 C LYS C 212 -39,464 11,107 4,774 1,00 44,76 C ÁTOMO 3923 O LYS C 212 -38,279 10,792 4,736 1,00 43,28 O ÁTOMO 3924 CB LYS C 212 -40,092 10,237 7,053 1,00 42,89 C ÁTOMO 3925 CG LYS C 212 -40,062 11,641 7,694
477 / 500
1,00 52,40 C ÁTOMO 3926 CD LYS C 212 -41,179 11,885 8,695 1,00 64,22 C ÁTOMO 3927 CE LYS C 212 -42,575 11,953 8,125 1,00 78,55 C ÁTOMO 3928 NZ LYS C 212 -43,444 10,866 8,657 1,00 90,01 N ÁTOMO 3929 N LYS C 213 -39,953 12,210 4,195 1,00 43,38 N ÁTOMO 3930 CA LYS C 213 -39,131 13,173 3,463 1,00 44,27 C ÁTOMO 3931 C LYS C 213 -38,375 14,004 4,506 1,00 47,22 C ÁTOMO 3932 O LYS C 213 -38,991 14,502 5,444 1,00 47,71 O ÁTOMO 3933 CB LYS C 213 -40,033 14,070 2,588 1,00 48,79 C ÁTOMO 3934 CG LYS C 213 -39,311 14,910 1,543 1,00 67,33 C ÁTOMO 3935 CD LYS C 213 -40,324 15,788 0,808 1,00 83,39 C ÁTOMO 3936 CE LYS C 213 -39,715 16,704 -0,225 1,00 99,34 C ÁTOMO 3937 NZ LYS C 213 -40,684 17,733 -0,697 1,00109,18 N ÁTOMO 3938 N VAL C 214 -37,040 14,082 4,391 1,00 43,34 N ÁTOMO 3939 CA VAL C 214 -36,184 14,827 5,318 1,00 42,97 C
478 / 500
ÁTOMO 3940 C VAL C 214 -35,825 16,116 4,604 1,00 52,25 C ÁTOMO 3941 O VAL C 214 -35,042 16,086 3,660 1,00 52,40 O ÁTOMO 3942 CB VAL C 214 -34,937 14,003 5,716 1,00 44,58 C ÁTOMO 3943 CG1 VAL C 214 -34,052 14,771 6,695 1,00 43,89 C ÁTOMO 3944 CG2 VAL C 214 -35,356 12,662 6,314 1,00 43,24 C ÁTOMO 3945 N GLU C 215 -36,417 17,238 5,034 1,00 53,37 N ÁTOMO 3946 CA GLU C 215 -36,239 18,544 4,391 1,00 55,97 C ÁTOMO 3947 C GLU C 215 -35,388 19,506 5,228 1,00 62,07 C ÁTOMO 3948 O GLU C 215 -35,449 19,455 6,456 1,00 59,01 O ÁTOMO 3949 CB GLU C 215 -37,621 19,180 4,165 1,00 57,99 C ÁTOMO 3950 CG GLU C 215 -38,511 18,370 3,237 1,00 69,95 C ÁTOMO 3951 CD GLU C 215 -39,907 18,931 3,064 1,00 99,06 C ÁTOMO 3952 OE1 GLU C 215 -40,554 19,249 4,088 1,00 96,25 O ÁTOMO 3953 OE2 GLU C 215 -40,369 19,021 1,904 1,00100,10 O ÁTOMO 3954 N PRO C 216 -34,630 20,421 4,570
479 / 500
1,00 64,54 N ÁTOMO 3955 CA PRO C 216 -33,890 21,440 5,317 1,00 67,05 C ÁTOMO 3956 C PRO C 216 -34,951 22,418 5,830 1,00 73,58 C ÁTOMO 3957 O PRO C 216 -35,415 23,272 5,075 1,00 75,08 O ÁTOMO 3958 CB PRO C 216 -32,955 22,057 4,267 1,00 69,95 C ÁTOMO 3959 CG PRO C 216 -33,618 21,819 2,976 1,00 73,76 C ÁTOMO 3960 CD PRO C 216 -34,516 20,629 3,111 1,00 67,15 C ÁTOMO 3961 N LYS C 217 -35,421 22,196 7,062 1,00 71,52 N ÁTOMO 3962 CA LYS C 217 -36,490 22,981 7,683 1,00 73,15 C ÁTOMO 3963 C LYS C 217 -35,916 24,214 8,389 1,00 77,06 C ÁTOMO 3964 O LYS C 217 -35,811 25,276 7,778 1,00 76,66 O ÁTOMO 3965 CB LYS C 217 -37,283 22,094 8,671 1,00 76,19 C ÁTOMO 3966 CG LYS C 217 -38,705 22,587 8,990 1,00 97,50 C ÁTOMO 3967 CD LYS C 217 -38,758 23,599 10,147 1,00107,97 C ÁTOMO 3968 CE LYS C 217 -40,162 23,851 10,650 1,00117,10 C
480 / 500
ÁTOMO 3969 NZ LYS C 217 -40,963 24,677 9,709 1,00125,01 N ÁTOMO 3970 CD CD C9901 -22,410 2,405 7,030 0,70 74,10 CD ÁTOMO 3971 CD CD C9902 -42,496 -21,639 17,273 0,70 68,69 CD ÁTOMO 3972 OW WAT W 1 -43,686 6,507 20,633 1,00 37,64 O ÁTOMO 3973 OW WAT W 2 -7,515 -55,973 40,942 1,00 34,99 O ÁTOMO 3974 OW WAT W 3 -16,190 -32,676 18,735 1,00 49,40 O ÁTOMO 3975 OW WAT W 4 -17,557 -57,264 27,490 1,00 49,31 O ÁTOMO 3976 OW WAT W 5 -6,453 -52,025 23,346 1,00 34,24 O ÁTOMO 3977 OW WAT W 6 -4,793 -51,902 29,479 1,00 34,78 O ÁTOMO 3978 OW WAT W 7 1,021 -54,897 36,399 1,00 30,59 O ÁTOMO 3979 OW WAT W 8 -22,290 -23,802 30,481 1,00 54,43 O ÁTOMO 3980 OW WAT W 9 -29,894 19,889 12,291 1,00 45,45 O ÁTOMO 3981 OW WAT W 10 -4,843 -65,658 37,110 1,00 52,73 O ÁTOMO 3982 OW WAT W 11 -13,185 -6,989 13,786 1,00 52,53 O ÁTOMO 3983 OW WAT W 12 -29,240 0,950 5,923
481 / 500
1,00 42,90 O ÁTOMO 3984 OW WAT W 13 -7,340 -61,094 23,749 1,00 48,50 O ÁTOMO 3985 OW WAT W 14 -43,809 -9,689 23,593 1,00 40,85 O ÁTOMO 3986 OW WAT W 15 -36,983 6,868 25,062 1,00 43,15 O ÁTOMO 3987 OW WAT W 16 -19,890 -39,199 26,687 1,00 59,47 O ÁTOMO 3988 OW WAT W 17 -47,034 -12,817 30,547 1,00 68,03 O ÁTOMO 3989 OW WAT W 18 -8,001 1,396 20,051 1,00 52,96 O ÁTOMO 3990 OW WAT W 19 -38,870 4,456 24,555 1,00 38,93 O ÁTOMO 3991 OW WAT W 20 -22,038 -2,265 17,233 1,00 64,74 O ÁTOMO 3992 OW WAT W 21 -4,829 -23,889 19,435 1,00 55,04 O ÁTOMO 3993 OW WAT W 22 -13,553 -58,794 35,421 1,00 47,74 O ÁTOMO 3994 OW WAT W 23 3,472 -56,247 37,587 1,00 37,92 O ÁTOMO 3995 OW WAT W 24 -9,774 -61,094 20,609 1,00 55,83 O ÁTOMO 3996 OW WAT W 25 -1,424 -58,706 31,053 1,00 34,00 O ÁTOMO 3997 OW WAT W 26 -14,822 -20,200 29,926 1,00 51,09 O
482 / 500
ÁTOMO 3998 OW WAT W 27 -48,117 -0,157 15,298 1,00 50,50 O ÁTOMO 3999 OW WAT W 28 -18,464 -54,748 39,058 1,00 49,62 O ÁTOMO 4000 OW WAT W 29 -16,944 14,679 26,129 1,00 61,00 O ÁTOMO 4001 OW WAT W 30 -38,364 16,745 35,129 1,00 41,91 O ÁTOMO 4002 OW WAT W 31 -15,959 -35,971 25,563 1,00 59,27 O ÁTOMO 4003 OW WAT W 32 -12,962 -32,423 10,242 1,00 47,37 O ÁTOMO 4004 OW WAT W 33 -17,151 -34,677 22,424 1,00 41,49 O ÁTOMO 4005 OW WAT W 34 -39,535 2,389 -1,048 1,00 52,38 O ÁTOMO 4006 OW WAT W 35 -16,188 -53,762 40,168 1,00 36,04 O ÁTOMO 4007 OW WAT W 36 -15,801 -27,934 32,197 1,00 51,21 O ÁTOMO 4008 OW WAT W 37 -42,619 12,844 4,552 1,00 48,29 O ÁTOMO 4009 OW WAT W 38 -40,075 -7,299 29,641 1,00 45,60 O ÁTOMO 4010 OW WAT W 39 -25,307 -43,940 25,007 1,00 46,30 O ÁTOMO 4011 OW WAT W 40 -13,473 -59,058 32,594 1,00 39,53 O ÁTOMO 4012 OW WAT W 41 -13,787 -45,903 30,958
483 / 500
1,00 41,44 O ÁTOMO 4013 OW WAT W 42 -1,167 -62,434 35,598 1,00 45,52 O ÁTOMO 4014 OW WAT W 43 -8,824 13,349 11,279 1,00 60,80 O ÁTOMO 4015 OW WAT W 44 -9,014 -54,295 21,103 1,00 48,13 O ÁTOMO 4016 OW WAT W 45 -33,709 -17,937 9,821 1,00 47,87 O ÁTOMO 4017 OW WAT W 46 -42,571 23,661 29,793 1,00 53,44 O ÁTOMO 4018 OW WAT W 47 -23,013 -36,129 28,963 1,00 57,82 O ÁTOMO 4019 OW WAT W 48 -39,976 -30,578 24,711 1,00 49,01 O ÁTOMO 4020 OW WAT W 49 -12,230 -37,480 14,745 1,00 52,37 O ÁTOMO 4021 OW WAT W 50 -40,880 -7,265 1,223 1,00 46,91 O ÁTOMO 4022 OW WAT W 51 -36,217 -8,573 26,196 1,00 45,73 O ÁTOMO 4023 OW WAT W 52 -27,369 -42,522 26,037 1,00 50,82 O ÁTOMO 4024 OW WAT W 53 -30,085 -1,525 26,270 1,00 46,62 O ÁTOMO 4025 OW WAT W 54 -21,459 -42,917 23,254 1,00 56,77 O ÁTOMO 4026 OW WAT W 55 -48,128 -9,341 16,581 1,00 52,04 O
484 / 500
ÁTOMO 4027 OW WAT W 56 -41,161 2,175 3,473 1,00 53,80 O ÁTOMO 4028 OW WAT W 57 -32,959 -33,970 6,634 1,00 57,70 O ÁTOMO 4029 OW WAT W 58 -22,679 -27,983 34,019 1,00 57,71 O ÁTOMO 4030 OW WAT W 59 -35,865 -35,113 26,946 1,00 52,15 O ÁTOMO 4031 OW WAT W 60 -38,088 17,218 7,521 1,00 43,82 O ÁTOMO 4032 OW WAT W 61 -17,695 -4,736 10,101 1,00 59,45 O ÁTOMO 4033 OW WAT W 62 -29,006 23,048 5,525 1,00 54,53 O ÁTOMO 4034 OW WAT W 63 -2,632 -61,249 33,270 1,00 49,17 O ÁTOMO 4035 OW WAT W 64 -30,677 9,217 -4,428 1,00 46,60 O ÁTOMO 4036 OW WAT W 65 -2,089 -24,886 12,106 1,00 63,36 O ÁTOMO 4037 OW WAT W 66 -46,157 -15,581 24,252 1,00 46,20 O ÁTOMO 4038 OW WAT W 67 -40,525 -32,892 20,549 1,00 55,06 O ÁTOMO 4039 OW WAT W 68 -41,514 -13,927 14,806 1,00 62,38 O ÁTOMO 4040 OW WAT W 69 -22,302 -40,343 25,447 1,00 53,17 O ÁTOMO 4041 OW WAT W 70 -22,643 -30,586 32,221
485 / 500
1,00 47,03 O ÁTOMO 4042 OW WAT W 71 -41,750 -11,218 15,132 1,00 42,49 O ÁTOMO 4043 OW WAT W 72 -16,498 -38,238 11,084 1,00 59,10 O ÁTOMO 4044 OW WAT W 73 -32,508 6,114 19,320 1,00 50,45 O ÁTOMO 4045 OW WAT W 74 -47,798 -8,546 21,176 1,00 54,03 O ÁTOMO 4046 OW WAT W 75 5,501 -62,333 33,875 1,00 40,22 O ÁTOMO 4047 OW WAT W 76 -0,630 -56,746 51,323 1,00 58,43 O ÁTOMO 4048 OW WAT W 77 -14,253 -16,896 30,328 1,00 64,63 O ÁTOMO 4049 OW WAT W 78 -16,129 -44,953 29,427 1,00 44,23 O ÁTOMO 4050 OW WAT W 79 -44,049 14,182 28,247 1,00 40,45 O ÁTOMO 4051 OW WAT W 80 -30,357 -0,086 -3,432 1,00 43,64 O ÁTOMO 4052 OW WAT W 81 -17,609 -55,150 36,210 1,00 47,81 O ÁTOMO 4053 OW WAT W 82 -5,620 -0,309 7,737 1,00 64,98 O ÁTOMO 4054 OW WAT W 83 -35,333 -36,792 24,625 1,00 55,50 O ÁTOMO 4055 OW WAT W 84 -3,864 -28,110 9,290 1,00 58,03 O
486 / 500
ÁTOMO 4056 OW WAT W 85 -22,868 -47,176 23,771 1,00 57,37 O ÁTOMO 4057 OW WAT W 86 0,090 -50,852 36,108 1,00 45,20 O ÁTOMO 4058 OW WAT W 87 -8,183 -1,151 21,020 1,00 62,51 O ÁTOMO 4059 OW WAT W 88 -33,018 -7,725 22,304 1,00 45,47 O ÁTOMO 4060 OW WAT W 89 -31,655 -1,393 7,537 1,00 42,27 O ÁTOMO 4061 OW WAT W 90 -32,662 17,636 2,924 1,00 46,29 O ÁTOMO 4062 OW WAT W 91 -17,465 -38,109 26,276 1,00 56,12 O ÁTOMO 4063 OW WAT W 92 -6,887 -60,668 45,840 1,00 56,69 O ÁTOMO 4064 OW WAT W 93 -39,318 -11,867 32,764 1,00 53,22 O ÁTOMO 4065 OW WAT W 94 -8,364 -47,344 15,912 1,00 52,70 O ÁTOMO 4066 OW WAT W 95 -13,110 -2,409 20,213 1,00 59,42 O ÁTOMO 4067 OW WAT W 96 -30,405 -3,733 15,635 1,00 43,90 O ÁTOMO 4068 OW WAT W 97 2,111 -65,266 36,755 1,00 50,54 O ÁTOMO 4069 OW WAT W 98 -12,718 -10,231 25,834 1,00 56,71 O ÁTOMO 4070 OW WAT W 99 -20,180 -52,382 20,505
487 / 500
1,00 56,19 O ÁTOMO 4071 OW WAT W 100 -13,218 -54,275 21,382 1,00 65,09 O ÁTOMO 4072 OW WAT W 101 -0,687 -48,919 38,318 1,00 48,28 O ÁTOMO 4073 OW WAT W 102 -3,838 -62,253 43,700 1,00 49,16 O ÁTOMO 4074 OW WAT W 103 -39,718 4,768 29,789 1,00 49,94 O ÁTOMO 4075 OW WAT W 104 -31,944 -3,089 12,979 1,00 46,48 O ÁTOMO 4076 OW WAT W 105 -33,765 -18,248 12,740 1,00 32,36 O ÁTOMO 4077 OW WAT W 106 -37,214 -0,117 4,446 1,00 29,24 O ÁTOMO 4078 OW WAT W 107 -19,351 -15,874 11,194 1,00 36,71 O ÁTOMO 4079 OW WAT W 108 -21,775 -21,417 10,614 1,00 39,48 O ÁTOMO 4080 OW WAT W 109 -26,619 -35,038 14,715 1,00 32,72 O ÁTOMO 4081 OW WAT W 110 -35,620 13,559 15,135 1,00 36,10 O ÁTOMO 4082 OW WAT W 111 -36,996 -10,846 16,382 1,00 44,68 O ÁTOMO 4083 OW WAT W 112 -36,912 -6,950 24,030 1,00 33,68 O ÁTOMO 4084 OW WAT W 113 -33,516 14,817 16,865 1,00 35,25 O
488 / 500
ÁTOMO 4085 OW WAT W 114 -29,783 -1,424 12,325 1,00 39,43 O ÁTOMO 4086 OW WAT W 115 -18,166 -16,800 25,381 1,00 43,01 O ÁTOMO 4087 OW WAT W 116 -24,077 10,140 -0,068 1,00 45,52 O ÁTOMO 4088 OW WAT W 117 -24,361 -0,261 19,500 1,00 42,65 O ÁTOMO 4089 OW WAT W 118 -37,730 14,775 30,946 1,00 36,06 O ÁTOMO 4090 OW WAT W 119 -20,173 -22,700 28,237 1,00 47,60 O ÁTOMO 4091 OW WAT W 120 -24,540 20,221 13,439 1,00 39,18 O ÁTOMO 4092 OW WAT W 121 -17,942 4,938 9,763 1,00 42,28 O ÁTOMO 4093 OW WAT W 122 -38,874 -5,521 9,526 1,00 31,42 O ÁTOMO 4094 OW WAT W 123 -16,780 -29,944 20,969 1,00 38,26 O ÁTOMO 4095 OW WAT W 124 -24,266 -15,743 26,088 1,00 44,60 O ÁTOMO 4096 OW WAT W 125 -29,109 5,403 16,817 1,00 36,92 O ÁTOMO 4097 OW WAT W 126 -26,521 -36,987 26,430 1,00 48,99 O ÁTOMO 4098 OW WAT W 127 -33,883 -9,961 20,793 1,00 33,74 O ÁTOMO 4099 OW WAT W 128 -32,376 -31,327 21,059
489 / 500
1,00 37,71 O ÁTOMO 4100 OW WAT W 129 -38,219 -21,030 16,400 1,00 32,53 O ÁTOMO 4101 OW WAT W 130 -38,266 7,048 -1,804 1,00 26,87 O ÁTOMO 4102 OW WAT W 131 -40,459 8,361 23,021 1,00 36,24 O ÁTOMO 4103 OW WAT W 132 -21,073 -36,674 18,501 1,00 36,84 O ÁTOMO 4104 OW WAT W 133 -36,873 -8,310 19,156 1,00 44,97 O ÁTOMO 4105 OW WAT W 134 -31,678 -18,920 28,463 1,00 36,27 O ÁTOMO 4106 OW WAT W 135 -21,806 -18,434 9,776 1,00 43,63 O ÁTOMO 4107 OW WAT W 136 -46,153 -9,807 14,720 1,00 51,20 O ÁTOMO 4108 OW WAT W 137 -24,475 -44,424 16,285 1,00 47,32 O ÁTOMO 4109 OW WAT W 138 -37,829 -30,269 23,129 1,00 40,12 O ÁTOMO 4110 OW WAT W 139 -29,743 3,061 18,200 1,00 39,38 O ÁTOMO 4111 OW WAT W 140 -26,353 -16,935 10,862 1,00 38,95 O ÁTOMO 4112 OW WAT W 141 -27,059 12,054 29,756 1,00 51,89 O ÁTOMO 4113 OW WAT W 142 -25,585 6,342 -3,334 1,00 43,68 O
490 / 500
ÁTOMO 4114 OW WAT W 143 -29,744 -2,526 23,600 1,00 38,01 O ÁTOMO 4115 OW WAT W 144 -28,349 6,767 20,043 1,00 31,75 O ÁTOMO 4116 OW WAT W 145 -10,172 -29,271 24,638 1,00 50,15 O ÁTOMO 4117 OW WAT W 146 -21,497 -32,672 22,980 1,00 43,68 O ÁTOMO 4118 OW WAT W 147 -45,840 -1,515 22,524 1,00 38,43 O ÁTOMO 4119 OW WAT W 148 -30,947 7,489 17,609 1,00 35,91 O ÁTOMO 4120 OW WAT W 149 -35,715 16,046 1,011 1,00 43,17 O ÁTOMO 4121 OW WAT W 150 -34,097 6,759 21,605 1,00 32,44 O ÁTOMO 4122 OW WAT W 151 -31,153 -29,424 6,931 1,00 52,76 O ÁTOMO 4123 OW WAT W 152 -17,488 -27,746 8,560 1,00 51,05 O ÁTOMO 4124 OW WAT W 153 -13,184 -8,413 8,214 1,00 52,08 O ÁTOMO 4125 OW WAT W 154 -9,649 -15,709 6,299 1,00 50,09 O ÁTOMO 4126 OW WAT W 155 -30,314 4,934 20,366 1,00 39,36 O ÁTOMO 4127 OW WAT W 156 -32,747 18,271 0,227 1,00 42,14 O ÁTOMO 4128 OW WAT W 157 -24,802 -10,885 20,391
491 / 500
1,00 46,19 O ÁTOMO 4129 OW WAT W 158 -18,677 -24,593 10,969 1,00 35,79 O ÁTOMO 4130 OW WAT W 159 -25,286 -39,676 26,160 1,00 44,70 O ÁTOMO 4131 OW WAT W 160 -25,878 23,640 27,286 1,00 51,31 O ÁTOMO 4132 OW WAT W 161 -40,111 -30,248 12,723 1,00 46,12 O ÁTOMO 4133 OW WAT W 162 -48,933 11,765 22,678 1,00 39,67 O ÁTOMO 4134 OW WAT W 163 -43,012 -16,049 18,180 1,00 46,36 O ÁTOMO 4135 OW WAT W 164 -24,923 -25,595 8,909 1,00 38,70 O ÁTOMO 4136 OW WAT W 165 -35,301 -33,872 29,546 1,00 51,23 O ÁTOMO 4137 OW WAT W 166 -23,108 -1,358 11,523 1,00 49,25 O ÁTOMO 4138 OW WAT W 167 -21,256 20,978 -1,257 1,00 50,39 O ÁTOMO 4139 OW WAT W 168 -20,045 -30,634 4,149 1,00 58,57 O ÁTOMO 4140 OW WAT W 169 -18,550 -10,595 15,754 1,00 61,81 O ÁTOMO 4141 OW WAT W 170 -18,747 12,952 7,864 1,00 42,13 O ÁTOMO 4142 OW WAT W 171 -24,751 11,499 -2,308 1,00 45,78 O
492 / 500
ÁTOMO 4143 OW WAT W 172 -22,547 -39,523 8,065 1,00 46,22 O ÁTOMO 4144 OW WAT W 173 -30,806 2,957 0,490 1,00 40,34 O ÁTOMO 4145 OW WAT W 174 -15,757 -32,291 9,949 1,00 47,94 O ÁTOMO 4146 OW WAT W 175 -44,573 16,854 28,331 1,00 52,33 O ÁTOMO 4147 OW WAT W 176 -7,977 -15,083 21,992 1,00 53,44 O ÁTOMO 4148 OW WAT W 177 -25,074 9,003 -3,979 1,00 50,70 O ÁTOMO 4149 OW WAT W 178 -10,590 0,899 18,154 1,00 47,60 O ÁTOMO 4150 OW WAT W 179 -7,736 -52,251 45,643 1,00 45,32 O ÁTOMO 4151 OW WAT W 180 -44,390 -9,173 18,853 1,00 43,31 O ÁTOMO 4152 OW WAT W 181 -36,893 -15,564 11,325 1,00 40,98 O ÁTOMO 4153 OW WAT W 182 -18,668 -1,614 16,801 1,00 53,28 O ÁTOMO 4154 OW WAT W 183 -36,728 -37,278 22,169 1,00 51,45 O ÁTOMO 4155 OW WAT W 184 -4,056 -59,087 45,469 1,00 47,73 O ÁTOMO 4156 OW WAT W 185 -34,977 17,331 12,959 1,00 50,25 O ÁTOMO 4157 OW WAT W 186 -15,254 -15,990 6,954
493 / 500
1,00 53,33 O ÁTOMO 4158 OW WAT W 187 -25,008 -19,043 9,149 1,00 50,15 O ÁTOMO 4159 OW WAT W 188 -12,479 -14,878 6,876 1,00 58,96 O ÁTOMO 4160 OW WAT W 189 -21,761 -15,537 27,605 1,00 53,73 O ÁTOMO 4161 OW WAT W 190 -13,699 -32,590 19,546 1,00 46,79 O ÁTOMO 4162 OW WAT W 191 -1,653 -67,263 38,821 1,00 49,26 O ÁTOMO 4163 OW WAT W 192 -16,337 -34,412 32,445 1,00 55,13 O ÁTOMO 4164 OW WAT W 193 -40,988 10,137 21,044 1,00 38,32 O ÁTOMO 4165 OW WAT W 194 -8,330 -30,065 33,366 1,00 51,30 O ÁTOMO 4166 OW WAT W 195 -35,850 -26,313 11,313 1,00 45,94 O ÁTOMO 4167 OW WAT W 196 -44,254 -21,966 29,984 1,00 48,92 O ÁTOMO 4168 OW WAT W 197 -14,556 -52,288 19,703 1,00 47,54 O ÁTOMO 4169 OW WAT W 198 -45,543 6,721 4,393 1,00 56,24 O ÁTOMO 4170 OW WAT W 199 -1,510 -52,502 46,012 1,00 49,88 O ÁTOMO 4171 OW WAT W 200 -37,221 -8,769 3,755 1,00 48,71 O
494 / 500
ÁTOMO 4172 OW WAT W 201 -15,008 -9,692 6,521 1,00 54,03 O ÁTOMO 4173 OW WAT W 202 -9,154 -10,150 2,409 1,00 64,21 O ÁTOMO 4174 OW WAT W 203 -39,318 -31,340 8,710 1,00 57,51 O ÁTOMO 4175 OW WAT W 204 -45,582 -10,139 21,126 1,00 51,87 O ÁTOMO 4176 OW WAT W 205 -44,026 -10,354 16,431 1,00 43,73 O ÁTOMO 4177 OW WAT W 206 -36,210 7,117 -5,687 1,00 45,43 O ÁTOMO 4178 OW WAT W 207 -37,799 14,409 16,431 1,00 36,95 O ÁTOMO 4179 OW WAT W 208 -34,076 -3,333 14,608 1,00 39,15 O ÁTOMO 4180 OW WAT W 209 -21,963 20,042 12,700 1,00 49,97 O ÁTOMO 4181 OW WAT W 210 -38,664 -5,379 25,427 1,00 34,19 O ÁTOMO 4182 OW WAT W 211 -27,013 -1,595 20,048 1,00 59,63 O ÁTOMO 4183 OW WAT W 212 -34,179 -15,986 14,105 1,00 32,00 O ÁTOMO 4184 OW WAT W 213 -24,410 -21,562 10,160 1,00 36,16 O ÁTOMO 4185 OW WAT W 214 -39,138 -10,516 14,813 1,00 47,91 O ÁTOMO 4186 OW WAT W 215 -38,147 -4,980 6,998
495 / 500
1,00 40,50 O ÁTOMO 4187 OW WAT W 216 -21,263 -24,053 10,299 1,00 37,28 O ÁTOMO 4188 OW WAT W 217 -18,371 5,558 23,186 1,00 61,33 O ÁTOMO 4189 OW WAT W 218 -36,916 -12,555 18,483 1,00 34,96 O ÁTOMO 4190 OW WAT W 219 -38,067 -30,490 11,033 1,00 53,39 O ÁTOMO 4191 OW WAT W 220 -27,273 -1,669 22,879 1,00 60,24 O ÁTOMO 4192 OW WAT W 221 -11,236 -0,446 20,423 1,00 57,47 O ÁTOMO 4193 OW WAT W 222 -38,966 -27,165 28,768 1,00 48,50 O ÁTOMO 4194 OW WAT W 223 -27,052 12,746 -2,875 1,00 54,30 O ÁTOMO 4195 OW WAT W 224 -30,772 -4,221 20,144 1,00 59,60 O ÁTOMO 4196 OW WAT W 225 -35,463 18,522 -0,106 1,00 60,87 O ÁTOMO 4197 OW WAT W 226 -15,335 -26,347 9,375 1,00 44,12 O ÁTOMO 4198 OW WAT W 227 2,572 -63,931 34,456 1,00 55,50 O ÁTOMO 4199 OW WAT W 228 -16,786 -3,932 14,055 1,00 56,34 O ÁTOMO 4200 OW WAT W 229 -9,872 -43,050 35,117 1,00 60,32 O
496 / 500
ÁTOMO 4201 OW WAT W 230 -37,011 -39,791 17,769 1,00 49,70 O ÁTOMO 4202 OW WAT W 231 -22,797 24,445 17,168 1,00 56,75 O ÁTOMO 4203 OW WAT W 232 0,236 -53,672 47,725 1,00 56,69 O ÁTOMO 4204 OW WAT W 233 -26,383 1,765 2,046 1,00 49,47 O ÁTOMO 4205 OW WAT W 234 -37,667 -27,913 10,243 1,00 48,69 O ÁTOMO 4206 OW WAT W 235 -20,876 9,097 5,925 1,00 38,12 O ÁTOMO 4207 OW WAT W 236 -15,798 -51,507 16,541 1,00 52,77 O ÁTOMO 4208 OW WAT W 237 -32,462 -42,802 17,632 1,00 63,08 O ÁTOMO 4209 OW WAT W 238 -41,086 16,561 32,871 1,00 51,80 O ÁTOMO 4210 OW WAT W 239 -48,040 1,597 7,571 1,00 61,28 O ÁTOMO 4211 OW WAT W 240 -36,279 11,284 -3,308 1,00 51,42 O ÁTOMO 4212 OW WAT W 241 0,800 -54,597 50,511 1,00 56,31 O ÁTOMO 4213 OW WAT W 242 -5,692 -65,042 32,265 1,00 50,05 O ÁTOMO 4214 OW WAT W 243 -26,785 27,800 17,578 1,00 44,32 O ÁTOMO 4215 OW WAT W 244 -32,984 -23,778 34,134
497 / 500
1,00 63,27 O ÁTOMO 4216 OW WAT W 245 -4,702 -50,027 23,969 1,00 61,44 O ÁTOMO 4217 OW WAT W 246 -20,411 -37,034 8,519 1,00 52,44 O ÁTOMO 4218 OW WAT W 247 -28,495 -35,410 8,773 1,00 54,57 O ÁTOMO 4219 OW WAT W 248 -29,060 14,857 34,292 1,00 62,48 O ÁTOMO 4220 OW WAT W 249 -45,852 -2,251 25,140 1,00 52,91 O ÁTOMO 4221 OW WAT W 250 -29,476 27,814 17,211 1,00 47,88 O ÁTOMO 4222 OW WAT W 251 -13,400 11,724 9,810 1,00 67,92 O ÁTOMO 4223 OW WAT W 252 -24,572 12,847 29,078 1,00 55,98 O ÁTOMO 4224 OW WAT W 253 -33,478 -13,068 13,678 1,00 51,91 O ÁTOMO 4225 OW WAT W 254 -21,816 -47,789 18,087 1,00 56,15 O ÁTOMO 4226 OW WAT W 255 -24,270 -47,301 16,995 1,00 51,11 O ÁTOMO 4227 OW WAT W 256 -43,497 -1,869 26,469 1,00 43,86 O ÁTOMO 4228 OW WAT W 257 -29,905 -39,279 8,951 1,00 65,07 O ÁTOMO 4229 OW WAT W 258 -44,193 7,821 11,648 1,00 54,88 O
498 / 500
ÁTOMO 4230 OW WAT W 259 -20,151 8,692 25,972 1,00 62,13 O ÁTOMO 4231 OW WAT W 260 -7,665 -55,864 29,627 1,00 32,10 O ÁTOMO 4232 OW WAT W 261 -5,906 -54,231 28,345 1,00 36,88 O ÁTOMO 4233 OW WAT W 262 4,919 -62,040 41,051 1,00 36,45 O ÁTOMO 4234 OW WAT W 263 -0,849 -56,077 31,823 1,00 33,23 O ÁTOMO 4235 OW WAT W 264 -19,126 2,342 10,361 1,00 47,44 O ÁTOMO 4236 OW WAT W 265 -20,601 -0,660 9,523 1,00 55,13 O ÁTOMO 4237 OW WAT W 266 -25,961 1,094 7,475 1,00 51,67 O ÁTOMO 4238 OW WAT W 267 -42,861 -22,137 19,876 1,00 43,74 O ÁTOMO 4239 OW WAT W 268 -27,314 -12,468 20,423 1,00 42,25 O ÁTOMO 4240 OW WAT W 269 -31,904 -11,852 21,052 1,00 36,97 O ÁTOMO 4241 OW WAT W 270 -29,659 -11,156 19,733 1,00 42,01 O ÁTOMO 4242 OW WAT W 271 -30,753 -11,559 16,905 1,00 44,60 O ÁTOMO 4243 OW WAT W 272 -44,416 -3,925 6,661 1,00 56,55 O ÁTOMO 4244 OW WAT W 273 -23,508 1,254 8,908
499 / 500
1,00 38,10 O ÁTOMO 4245 OW WAT W 274 -30,753 -6,646 21,311 1,00 49,58 O ÁTOMO 4246 OW WAT W 275 -30,261 -7,376 17,204 1,00 53,52 O ÁTOMO 4247 OW WAT W 276 -32,174 -7,535 24,895 1,00 48,16 O ÁTOMO 4248 OW WAT W 277 -43,043 8,906 19,447 1,00 43,35 O ÁTOMO 4249 OW WAT W 278 -37,512 4,508 27,820 1,00 61,81 O ÁTOMO 4250 OW WAT W 279 -36,941 0,000 0,000 0,50 55,93 O ÁTOMO 4251 OW WAT W 280 -23,733 -24,004 33,240 1,00 62,39 O ÁTOMO 4252 OW WAT W 281 -8,167 -30,315 8,553 1,00 68,84 O ÁTOMO 4253 OW WAT W 282 -28,958 1,148 1,356 1,00 55,08 O ÁTOMO 4254 OW WAT W 283 12,591 -61,771 32,569 1,00 46,20 O ÁTOMO 4255 OW WAT W 284 -1,581 -49,613 41,371 1,00 58,06 O ÁTOMO 4256 OW WAT W 285 -26,246 -48,282 18,626 1,00 59,66 O ÁTOMO 4257 OW WAT W 286 2,540 -50,918 39,971 1,00 45,68 O ÁTOMO 4258 OW WAT W 287 -3,856 -43,098 21,755 1,00 61,68 O
500 / 500
ÁTOMO 4259 OW WAT W 288 -36,642 23,118 18,736 1,00 62,84 O

Claims (45)

1 / 17 REIVINDICAÇÕES
1. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende: a. uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, b. uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, c. uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, d. uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, e. uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, e f. uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6.
2. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende: a. uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; b. uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T; c. uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M; d. uma CDR1 de região variável de cadeia leve
2 / 17 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M; e. uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D e X2=T; e f. uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S.
3. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende: a. uma CDR1 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, em que X1= M; ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; b. uma CDR2 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:2, em que X1= N, X2= T, X3=N e X4=T, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; c. uma CDR3 de região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:3, em que X1= M, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; d. uma CDR1 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:4, em que X1= M, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; e. uma CDR2 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:5, em que X1= D
3 / 17 e X2=T, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; e f. uma CDR3 de região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:6, em que X1= W, X2=N e X3=S, ou uma sequência de aminoácidos que difere da dita sequência por 1, 2, ou 3 substituições conservativas.
4. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia leve de imunoglobulina, uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina ou ambas uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve e uma de cadeia pesada selecionadas a partir do grupo que consiste em: a. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:7 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:8 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; b. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:9 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:9 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:14 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; c. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32 ou uma sequência de
4 / 17 aminoácidos que difere da SEQ ID NO:32 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:33 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; d. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:34 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:35 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; e. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:39 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:40 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; f. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:10-13 ou uma sequência de aminoácidos que difere de uma das SEQ ID NOs:10-13 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável selecionada a partir do grupo que consiste em qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18 ou uma sequência de aminoácidos que difere de uma das SEQ ID NOs:15-18 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; g. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:10 ou uma sequência de
5 / 17 aminoácidos que difere da SEQ ID NO:10 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas e/ou uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15 ou uma sequência de aminoácidos que difere da SEQ ID NO:15 por 1, 2, ou 3 substituições conservativas; h. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo pelo menos 90% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:10-13 e/ou uma cadeia leve variável compreendendo pelo menos 90% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18; i. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo pelo menos 90% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:10-13 e/ou uma cadeia leve variável compreendendo pelo menos 90% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18, em que quaisquer variações de sequência ocorrem nas regiões framework do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno; j. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID NOs:10-13 e/ou uma cadeia leve variável compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18; e k. um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreendendo uma cadeia pesada variável compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID NOs:10-13 e/ou uma cadeia leve variável compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácido com respeito a qualquer uma das SEQ ID NOs:15-18, em que as substituições de aminoácido ocorrem nas regiões framework do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno.
6 / 17
5. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve e uma de cadeia pesada selecionadas a partir do grupo que consiste em: a. uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:9 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:14; b. uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33; e c. uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:34 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:35.
6. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada selecionadas a partir do grupo que consiste em: a. uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:7 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:8; b. uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:39 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40; c. uma cadeia pesada variável selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:10-13 e uma cadeia leve variável selecionadas a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs:15-18; e d. uma cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:10 e uma cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:15.
7 / 17
7. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve.
8. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento do mesmo tem pelo menos uma das seguintes características: a) liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 100 pM em um ensaio no formato ELISA baseado em célula; b) liga-se ao CD27 humano (A59T) com uma CE50 de menos que 150 pM em um ensaio no formato ELISA baseado em célula; e c) liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 100 pM em um ensaio no formato ELISA baseado em célula.
9. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento do mesmo tem pelo menos uma das seguintes características: a) liga-se ao CD27 humano e ao CD27 (A59T) humano com um valor de KD bivalente de cerca de 5-10 nM conforme determinado por ressonância de plasmon de superfície; b) liga-se ao CD27 humano com uma CE50 de menos que 200 pM em um ensaio no formato ELISA baseado em célula; c) liga-se ao CD27 humano (A59T) com uma CE50 de menos que 250 pM em um ensaio no formato ELISA baseado em célula; d) liga-se ao CD27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 150 pM em um ensaio no formato ELISA baseado em célula; e) reage cruzadamente com CD27 de macaco Cynomolgus ou de macaco Rhesus;
8 / 17 f) bloqueia a ligação de CD27 humano ao CD70 humano; e g) aumenta a inativação de célula-T.
10. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento do mesmo tem pelo menos uma das seguintes características: a) induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27 humanas com uma CE50 de menos que 5 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; b) induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD27A59T humanas com uma CE50 de menos que 10 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; c) induz a ativação de NF-κB em células expressoras de CD- 27 de macaco Rhesus com uma CE50 de menos que 1 nM quando o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está em forma solúvel; d) tem uma CE50 de menos que 0,5 nM para ligação ao CD27 humano sobre células-T CD4+ ou CD8+; e) aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; e f) aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti- CD3 em cultura de tumor humano.
11. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao CD27 humano, caracterizado pelo fato de que compreende a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:10 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:15.
12. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a cadeia pesada variável de qualquer uma das SEQ ID NOs:10-12 e a cadeia leve variável de qualquer uma das SEQ ID NOs:15-17; ou compreende a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:13 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:18.
9 / 17
13. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao mesmo epítopo de CD27 humano como um anticorpo compreendendo a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:10 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:15; ou que se liga ao mesmo epítopo de CD27 humano como um anticorpo compreendendo a cadeia pesada variável da SEQ ID NO:7 e a cadeia leve variável da SEQ ID NO:8.
14. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que, quando se liga ao CD27 humano, liga-se a pelo menos um resíduo selecionado a partir do grupo que consiste em Leu18, Asp34, Gln35, e Lys38 da SEQ ID NO:19.
15. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que, quando se liga ao CD27 humano, liga-se a pelo menos um resíduo selecionado a partir do grupo que consiste em Gln35 e Lys38 da SEQ ID NO:19.
16. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se, adicionalmente, a um ou mais resíduos selecionadas a partir do grupo que consiste em Pro8, Glu9, His11, Lys17, His36, e Arg37 da SEQ ID NO:19.
17. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se, adicionalmente, a um ou mais resíduos selecionadas a partir do grupo que consiste em Glu9, Lys17, His36, e Arg37 da SEQ ID NO:19.
18. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se aos resíduos Pro8, Glu9, His11, Lys17, Leu18, Asp34, Gln35, His36, Arg37 e Lys38 da SEQ ID NO:19.
10 / 17
19. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo liga-se aos resíduos Glu9, Lys17, Leu18, Asp34, Gln35, His36, Arg37 e Lys38 da SEQ ID NO:19.
20. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 19, caracterizado pelo fato de que aumenta a ativação de célula-T CD8+ em forma solúvel; ou aumenta a produção de IFNγ induzida por anticorpo anti-CD3 em cultura de tumor humano.
21. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo humanizado compreendendo duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, e é uma IgG.
22. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo do isótipo IgG1.
23. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo do isótipo IgG4.
24. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende o domínio constante da cadeia pesada da SEQ ID NO:30.
25. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende o domínio constante da cadeia pesada da SEQ ID NO:28.
26. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que que se liga ao CD27 humano consistindo em duas cadeias leves e duas cadeias pesadas, em
11 / 17 que cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:36; e cada cadeia leve consiste em SEQ ID NO:37.
27. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um padrão de glicosilação característico da expressão por uma célula de mamífero.
28. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um padrão de glicosilação característico da expressão por uma célula CHO.
29. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs:1-18, 32-40 e 44-45.
30. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica: qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 26, ou qualquer um dos polipeptídeos como definido na reivindicação 29.
31. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que compreende a SEQ ID NO:46 ou a SEQ ID NO:47, ou ambas.
32. Vetor de expressão, caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico isolado como definido na reivindicação 30 ou
31.
33. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo, fragmento de ligação, polipeptídeo, polinucleotídeo ou vetor de expressão como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a
32.
34. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 33, caracterizada pelo fato de que é uma célula bacteriana, uma célula humana,
12 / 17 uma célula de mamífero, uma célula Pichia, uma célula de planta, uma célula HEK293, ou uma célula de ovário de hamster chinês.
35. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 28 e um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável.
36. Composição de acordo com a reivindicação 35, caracterizada pelo fato de que compreende, adicionalmente, um agente selecionado a partir do grupo que consiste em: a. um anticorpo anti-LAG3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; b. um anticorpo anti-TIGIT ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; c. um anticorpo anti-VISTA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; d. um anticorpo anti-BTLA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e. um anticorpo anti-TIM3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; f. um anticorpo anti-CTLA4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; g. um anticorpo anti-HVEM ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; h. um anticorpo anti-CD70 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; i. um anticorpo anti-OX40 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; j. um anticorpo anti-CD28 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo;
13 / 17 k. um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; l. um anticorpo anti-PDL1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; m. um anticorpo anti-PDL2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; n. um anticorpo anti-GITR ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; o. um anticorpo anti-ICOS ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ; p. um anticorpo anti-SIRPα ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; q. um anticorpo anti-ILT2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; r. um anticorpo anti-ILT3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; s. um anticorpo anti-ILT4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; t. um anticorpo anti-ILT5 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; u. um anticorpo anti-4-1BB ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; v. um anticorpo anti-NK2GA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; w. um anticorpo anti-NK2GC ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; x. um anticorpo anti-NK2GE ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; y. um anticorpo anti-TSLP ou um fragmento de ligação ao
14 / 17 antígeno do mesmo; e z. um anticorpo anti-IL10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
37. Composição de acordo com a reivindicação 36, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste em: pembrolizumabe ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e nivolumabe ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
38. Método de produção de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno, caracterizado pelo fato de que compreende: a. cultivar uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo que codifica a cadeia pesada e/ou a cadeia leve de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno como definidos nas reivindicações 1 a 28 sob condições favoráveis para a expressão do polinucleotídeo; e b. opcionalmente, recuperar o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno da célula hospedeira e/ou do meio de cultura.
39. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que é para uso em: a. tratamento de câncer; ou b. tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa.
40. Uso do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para aumentar a ativação de célula imune; tratamento de câncer; ou tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa.
41. Método de tratamento de câncer em um sujeito humano, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma
15 / 17 quantidade eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 28, ou de um vetor de expressão como definido na reivindicação 32, ou de uma célula hospedeira como definida em qualquer uma das reivindicações 33 e 34, ou de uma composição como definida na reivindicação 35, opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico.
42. Método de tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa em um sujeito humano, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 28, ou de um vetor de expressão como definido na reivindicação 32, ou de uma célula hospedeira como definida em qualquer uma das reivindicações 33 e 34, ou de uma composição como definida na reivindicação 35, opcionalmente em associação com um outro agente farmacêutico ou procedimento terapêutico.
43. Método de acordo com a reivindicação 41 ou 42, caracterizado pelo fato de que o outro agente farmacêutico é selecionado a partir do grupo que consiste em: a. um anticorpo anti-LAG3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; b. um anticorpo anti-TIGIT ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; c. um anticorpo anti-VISTA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; d. um anticorpo anti-BTLA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; e. um anticorpo anti-TIM3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; f. um anticorpo anti-CTLA4 ou um fragmento de ligação ao
16 / 17 antígeno do mesmo; g. um anticorpo anti-HVEM ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; h. um anticorpo anti-CD70 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; i. um anticorpo anti-OX40 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; j. um anticorpo anti-CD28 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; k. um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; l. um anticorpo anti-PDL1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; m. um anticorpo anti-PDL2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; n. um anticorpo anti-GITR ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; o. um anticorpo anti-ICOS ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ; p. um anticorpo anti-SIRPα ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; q. um anticorpo anti-ILT2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; r. um anticorpo anti-ILT3 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; s. um anticorpo anti-ILT4 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; t. um anticorpo anti-ILT5 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo;
17 / 17 u. um anticorpo anti-4-1BB ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; v. um anticorpo anti-NK2GA ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; w. um anticorpo anti-NK2GC ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; x. um anticorpo anti-NK2GE ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; y. um anticorpo anti-TSLP ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; z. um anticorpo anti-IL10 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; aa. um agonista de STING; bb. um antagonista de CXCR2; e cc. um inibidor de PARP.
44. Método de acordo com a reivindicação 41 ou 42, caracterizado pelo fato de que a administração é em associação com um anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
45. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é pembrolizumabe, nivolumabe ou um fragmento de ligação ao antígeno dos mesmos.
Vetor vazio Espécime Espécime Espécime
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 539/1062 1/15
Espécime Espécime Espécime
% de células positivas
Vetor vazio camundongos individuais
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 543/1062 com camundongos com tumores MC38
Isótopo de controle
Volume de tumor (mm3) 5/15
Dias após o início do tratamento camundongos individuais
Volume de tumor (mm3) (Média ± EPM) Dias após o início do tratamento Volume de tumor (mm3)
Dias após o início do tratamento em camundongos huCD27 KI com tumores MB49
Volume de tumor (mm3)
Dia após o início do tratamento
Isótipo de controle Volume de tumor (mm3)
Isótipo de controle camundongos individuais Volume de tumor (mm3)
Dia após o início do tratamento Dia após o início do tratamento Volume de tumor (mm3) Volume de tumor (mm3)
camundongos individuais camundongos individuais
Dia após o início do tratamento Dia após o início do tratamento
Alteração em vezes NFκB-Luc
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 545/1062 Alteração em vezes NFκB-Luc 7/15
Alteração em vezes NFκB-Luc
Variantes de IgG1 Humanizadas 131A Variantes de IgG4 Humanizadas 131A
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 546/1062 huIgG1 quimera 131A huIgG4 quimera 131A
Alteração em vezes NFκB-Luc Alteração em vezes NFκB-Luc 8/15
Conc.
Ab anti-CD27 µg/mL Conc.
Ab anti-CD27 µg/mL huIgG4 quimera 131A Não tratada Não tratada
IFN-gama (Média ± EPM)
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 547/1062 Não estimulada
Isótipo IgG1
Isótipo IgG4 9/15
IFN-gama (Média ± EPM)
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 548/1062 Não estimulada
Isótipo IgG1 Isótipo IgG4 10/15
Ligação
Perda de ligação hCD27.131A hCD27.15 1A4 9F4 (IgG1 de (IgG2a de Mutante de CD27 de Camundongo Humanizado camundongo) camundongo)
Vetor vazio
ELISA de competição baseado em célula Competição-cruzada: Abs 1F15 / hCD27
Abs hCD27
Petição 870190027750, de 22/03/2019, pág. 552/1062 Isótipo mIgG1
Ligação de anticorpo 14/15
ELISA de competição reversa Competição-cruzada: baseado em célula Abs hCD27
Isótipo mIgG1/1F5 Abs hCD27
Ligação de anticorpo [Abs hCD27]
Doador 91
Isótipo
Doador 11
Isótipo
Doador 816
Isótipo
BR112019005726A 2016-09-26 2017-09-25 Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga ao cd27 humano, polipeptídeo isolado, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, métodos de produção de um anticorpo ou de um fragmento de ligação ao antígeno, de tratamento de câncer e de tratamento de uma infecção ou de uma doença infecciosa, e, uso do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno BR112019005726A8 (pt)

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