BR112016010261B1 - Compostos pirrolo [1,2-f] [1,2,4] triazinas, formulação farmacêutica e seu uso no tratamento de infecções por vírus sincicial respiratório - Google Patents

Compostos pirrolo [1,2-f] [1,2,4] triazinas, formulação farmacêutica e seu uso no tratamento de infecções por vírus sincicial respiratório Download PDF

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Abstract

pirrolo[pirrolo [1,2-f] [1,2,4] triazinas úteis para tratamento de infecções por vírus sincicial respiratório a presente invenção refere-se a formulações, métodos e compostos tetra-hidrofuranil-pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazina-4-amina de fórmula (i) para tratamento de infecções por vírus pneumovirinae, inclu-indo infecções por vírus sincicial respiratório, bem como métodos e intermediários para síntese de compostos tetra-hidrofuranil-pirrolo[1,2-fj] [i,2,4]-triazina-4-amina.

Description

CAMPO
[0001] A presente invenção refere-se a compostos tetra-hidrofura- nil-pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazina-4-amina substituídos, métodos e formulações farmacêuticas para tratamento de infecções por vírus Pneumovi- rinae, particularmente incluindo infecções por vírus sincicial respiratório, bem como métodos e intermediários úteis para preparação dos compostos.
ANTECEDENTES
[0002] Vírus Pneumovirinae são vírus de RNA, de filamento único, de sentido negativo, que são responsáveis por muitas doenças humanas e animais prevalentes. A subfamília de vírus Pneumovirinae é uma parte da família Paramyxoviridae e inclui vírus sincicial respiratório humano (HRSV de Human Respiratory Syncytial Virus). Quase todas as crianças terão tido uma infecção por HRSV até dois anos. HRSV é a principal causa de infecções do trato respiratório inferior na primeira infância e infância com 0,5% a 2% das infectadas necessitando hospitalização. Os idosos e adultos com doença cardíaca, pulmonar crônica ou aqueles que são imunossuprimidos também têm um risco alto de desenvolver doença HRSV severa (http://www.cdc.gov/rsv/index.html). Nenhuma vacina para prevenir infecção por HRSV está atualmente disponível. O anticorpo monoclonal palivizumabe está disponível para imunoprofilaxia, mas seu uso é restrito a bebês sob risco alto, por exemplo, bebês prematuros ou aqueles com doença cardíaca ou pul-monar congênita, e o custo para uso geral é frequentemente proibitivo. Ainda, o análogo de nucleosídeo ribavirina foi aprovado como o único agente antiviral para tratar infecções por HRSV, mas tem eficácia limitada. Desta maneira, há a necessidade de agentes terapêuticos anti-
Pneumovirinae.
[0003] Exemplos de compostos pirrolo[2,3-d]pirimidina úteis para tratamento de infecções virais são descritos nas U.S. 2012/0009147 A1 (Cho e outros), U.S. 2012/0020921 A1 (Cho e outros), WO 2008/089105 A2 (Babu e outros), WO 2008/141079 A1 (Babu e outros), WO 2009/132135 A1 (Butler e outros), WO 2010/002877 A2 (Francom), WO 2011/035231 A1 (Cho e outros), WO 2011/035250 A1 (Butler e outros), WO 2011/150288 A1 (Cho e outros), WO 2012/012465 (Cho e outros), WO 2012/012776 A1 (Mackman e outros), WO2012/037038 (Clarke e outros), WO 2012/087596 A1 (Delaney e outros) e WO 2012/142075 A1 (Girijavallabhan e outros).
[0004] Permanece uma necessidade de novos agentes antivirais úteis em tratamento de infecções virais por Paramyxoviridae, incluindo infecções virais por Pneumovirinae, tais como infecções por HRSV, que são eficazes e têm perfis de toxidez aceitáveis.
SUMÁRIO
[0005] São providos compostos, métodos e formulações farmacêuticas para o tratamento de infecções causadas pela família de vírus Pneumovirinae, incluindo tratamento de infecções causadas por vírus sincicial respiratório humano.
[0006] É provido aqui um composto de Fórmula (I) ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0001
onde:R1 é H ou F; R2 é H ou F;R3 é OH ou F;R4 é CN, C1-C4 alquila, C2-C4 alquenila, C2-C4 alquinila, C3-C4cicloalquila, azido, halogênio ou C1-C2 haloalquila;R6 é OH;R5 é selecionado do grupo de H e:
Figure img0002
onde:n’ é selecionado de 1, 2, 3 e 4;R8 é selecionado de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila, -O-benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6 cicloalquila e CF3;R9 é selecionado de fenila, 1-naftila, 2-naftila,
Figure img0003
R10 é selecionado de H e CH3;R11 é selecionado de H ou C1-C6 alquila;R12 é selecionado de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloal- quila e -CH2-C3-C6 cicloalquila.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0007] Uma modalidade da presente invenção compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde R1 é H, e todas as outras variáveis, incluindo R2, R3, R4, R5 6 7 8 9 10 11 12, R , R , R , R , R , R , R e n são conforme acima definido para a Fórmula (I).
[0008] Outra modalidade da presente invenção compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde R2 é H, e todas as outras variáveis, incluindo R1, R3, R4, R5 6 7 8 9 10 11 12, R , R , R , R , R , R , R e n são conforme acima definido para a Fórmula (I).
[0009] Uma modalidade adicional da presente invenção compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde ambos R1 e R2 são H, e todas as outras variá- 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12veis, incluindo R , R , R , R , R , R , R , R , R , R e n são conforme acima definido para a Fórmula (I).
[0010] Ainda outra modalidade da presente invenção compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde R1, R2 e R5 são H, e todas as outras variáveis, inclu- 3 4 6 7 8 9 10 11 12indo R , R , R , R , R , R , R , R , R e n são conforme acima definido para a Fórmula (I).
[0011] Outra modalidade separada da presente invenção compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde ambos R1 e R2 são H, R3 é OH e todas as ou- 4 5 6 7 8 9 10 11 12tras variáveis, incluindo R , R , R , R , R , R , R , R , R e n são conforme acima definido para a Fórmula (I).
[0012] Outra modalidade separada da presente invenção compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde ambos R1 e R2 são H, R3 é F, e todas as outras 4 5 6 7 8 9 10 11 12variáveis, incluindo R , R , R , R , R , R , R , R , R e n são conforme acima definido para a Fórmula (I).
[0013] Outra modalidade provida aqui compreende um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0004
onde:R3 é OH ou F;R4 é CN, C1-C4 alquila, C2-C4 alquenila, C2-C4 alquinila, C3-C4cicloalquila, azido, halogênio ou C1-C2 haloalquila;R5 é selecionado do grupo de H e:
Figure img0005
onde:n’ é selecionado de 1, 2, 3 e 4;R8 é selecionado de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila, -O-benzila, -CH2-C3-C6 ccicloalquila, -O-CH2-C3-C6 cicloalquila e CF3;R9 é fenila;R10 é selecionado de H e CH3;R11 é selecionado de H ou C1-C6 alquila; R12 é selecionado de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 ciclo- alquila e -CH2-C3-C6 cicloalquila.
[0014] Uma modalidade adicional compreende um composto de Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde: R3 é OH ou F;R4 é CN, metila, etila, etinila, etinila, azido, F, Cl, -CH2Cl, - CH2F, -CHF2 ou -CF3;e R5 e todos os outros grupos são conforme definido para a Fórmula (II).
[0015] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é F.
[0016] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é OH.
[0017] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é F e R4é CN.
[0018] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é OH e R4 é CN.
[0019] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde ambos R1 e R2 são H, R3 is F, and R4 é metila, etila, vinila ou etinila.
[0020] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é OH e R4 é metila, etila, vinila ou etinila.
[0021] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é F e R4é halometila.
[0022] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R3 é OH e R4 é halometila.
[0023] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R5 é H.
[0024] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde cada um de R5 é H, R3 é OH e R4 é metila, etila, vinila ou etinila.
[0025] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R5 é H, R3 é F e R4 é halometi- la.
[0026] É também provida uma modalidade compreendendo um composto de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme acima descrito, onde R5 é H, R3 é OH e R4 é halo- metila.
[0027] Dentro de cada uma das modalidades descritas acima compreendendo um composto de Fórmula (II), ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo, onde R5 pode ser outro que não H, há uma modalidade adicional onde todas as variáveis são conforme descrito para a modalidade e R5 é selecionado do grupo de:
Figure img0006
Figure img0007
onde:R8 é selecionado de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila e -CH2-C3-C6 cicloalquila; eR12 é selecionado de C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloal-quila e -CH2-C3-C6 cicloalquila.
[0028] Dentro de cada uma das modalidades descritas imediatamente acima há uma modalidade adicional compreendendo um composto de Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde todas as outras variáveis são conforme imediatamente descrito acima, exceto que R8 e R9 são, cada um, selecionados de C1-C8 alquila. Dentro de cada uma das modalidades descritas na última frase há uma modalidade adicional compreendendo um composto de Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde todas as outras variáveis são conforme imediatamente descrito cima, exceto que R8 e R9 são, cada um, selecionados de C1-C6 alquila. Dentro de cada uma das modalidades descritas na última frase há uma modalidade adicional compreendendo um composto de Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde todas as outras variáveis são conforme imediatamente descrito acima, exceto que R8 e R9 são, cada um, selecionados de C1-C5 alquila. Dentro de cada uma das modalidades descritas na última frase há uma modalidade adicional compreendendo um composto de Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde todas as outras variáveis são conforme imediatamente descrito acima, exceto que R8 e R9 são, cada um, selecionados de C1-C4 alquila.
[0029] Dentro de cada uma das modalidades descritas aqui com-preendendo um composto de Fórmula (I) ou de Fórmula (II) há uma modalidade adicional onde todas as variáveis são conforme definido para a modalidade particular e compreendendo ainda a condição que quando R3 for F, R4 não seja metila.
Definições
[0030] Os termos halo e halogênio se referem a átomos de halo- gênio selecionados de F, Cl, Br e I.
[0031] "Azido" se refere a um grupo azida, isto é, o grupo -N3. O termo "n" conforme aqui usado se refere a um inteiro, tal como um inteiro selecionado de 1-166-176-17, 18, 19 e 20, i.e. 2 a 20 ou 2-20. Em alguns casos, "n" se refere a grupos de inteiros tais como 1 a 3, 1 a 4, 1 a 6, 1 a 8, 2 a 4, 2 a 6, 2 a 8, etc.
[0032] O termo "haloalquila" conforme aqui usado se refere a uma alquila conforme aqui definido, onde um ou mais átomos de hidrogênio são cada um substituídos por um substituinte halo. Por exemplo, uma (C1-C6)haloalquila é uma (C1-C6)alquila onde um ou mais dos átomos de hidrogênio foram substituídos por um substituinte halo. Tal faixa inclui um substituinte halo no grupo alquila para completar halogena- ção do grupo alquila.
[0033] O termo "(C1-n)haloalquila" conforme aqui usado, onde n é um inteiro, ou sozinho ou em combinação com um outro radical, pretende significar um radical alquila tendo 1 a n átomos de carbono conforme acima definido onde um ou mais átomos de hidrogênio são cada um substituídos por um substituinte halo. Exemplos de (C1-n)haloalquila, onde n é 2, incluem, mas não estão limitados a, clorometila, cloroetila, dicloroetila, bromometila, bromometila, dibromoetila, fluormetila, difluo- rmetila, trifluormetila, fluormetila e difluoretila.
[0034] O termo "(C1-n)alquila" conforme aqui usado, onde n é um inteiro, ou sozinho ou em combinação com um outro radical, pretende significar radicais alquila acíclicos, de cadeia reta ou ramificada, con-tendo de 1 a n átomos de carbono. "(C1-C4)alquila" inclui, mas não está limitado a, metila, etila, propila (n-propila), butila (n-butila), 1-metile- tila (iso-propila), 1-metilpropila (sec-butila), 2-metilpropila (iso-butila) e 1,1-dimetiletila (terc-butila ou t-butila). A abreviação Me significa um grupo metila; Et significa um grupo etila, Pr significa um grupo propila, iPr significa um grupo 1-metiletila, Bu significa um grupo butila e tBu significa um grupo 1,1-dimetiletila.
[0035] O termo "alquila" se refere a um hidrocarboneto contendo átomos normais, secundários ou terciários. Por exemplo, um grupo alquila pode ter 1 a 4 átomos de carbono (isto é, (i.e, (C1-C4)alquila), 1 a 3 átomos de carbono (i.e., (C1-C3)alquila) ou 1 ou 2 átomos de carbono (i.e., (C1-C2)alquila). Exemplos de grupos alquila adequados incluem, mas não estão limitados a, (Me, -CH3), etila (Et, -CH2CH3), 1-propila (n-Pr, n-propila, -CH2CH2CH3), 2-propila (i-Pr, i-propila, -CH (CH3)2), 1- butila (n-Bu, n-butila, -CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1-propila (i-Bu, i-butila, -CH2CH(CH3)2), 2-butila (s-Bu, s-butila, -CH(CH3)CH2CH3) e 2-metil-2- propila (t-Bu, t-butila, -C(CH3)3). "Alquila" se refere também a um radical hidrocarboneto saturado, de cadeia reta ou ramificada tendo dois centros de radical monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogênio dos mesmos átomos de carbono ou de dois átomos de carbono diferentes de um alcano parental. Radicais alquila típicos in-cluem, mas não estão limitados a, metileno (-CH2-), 1,1-etila (-CH(CH3)-), 1,2-etila (-CH2CH2-), 1,1-propila (-CH(CH2CH3)-), 1,2-propila (-CH2CH (CH3)-), 1,3-propila (-CH2CH2CH2-), 1,4-butila (-CH2CH2CH2CH2-) e similar.
[0036] "Alquenila" é um hidrocarboneto reto ou ramificado contendo átomos de carbono normais, secundários ou terciários com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, uma ligação dupla carbono-carbono sp2. Como exemplos, um grupo alquenila pode ter 2 a 4 átomos de carbono (isto é, C2-C4 alquenila) ou 2 a 3 átomos de carbono (isto é, C2-C3 alque- nila). Exemplos de grupos alquenila adequados incluem, mas não estão limitados a, etileno ou vinila (-CH=CH2) e alila (-CH2CH=CH2).
[0037] O termo "(C2-n)alquenila", conforme aqui usado, onde n é um inteiro, ou sozinho ou em combinação com um outro radical, pretende significar um radical de cadeia insaturado, acíclico de cadeia reta ou ramificada contendo dois a n átomos de carbono, pelo menos dois dos quais são ligados um ao outro por uma ligação dupla. Exemplos de tais radicais incluem, mas não estão limitados a, etenila (vini- la), 1-propenila, 2-propenila e 1-butenila. A menos que de outro modo especificado, o termo "(C2-n)alquenila" é entendido compreender este- reoisômeros individuais onde possível, incluindo, mas não limitado a, isômeros (E) e (Z), e misturas dos mesmos. Quando um grupo (C2-n) alquenila é substituído, ele é compreendido ser substituído em qualquer átomo de carbono do mesmo que de outro modo carregaria um átomo de hidrogênio, a menos que especificado de outro modo, de maneira que a substituição daria origem a um composto quimicamente estável, de maneira que são reconhecidos por aqueles versados na técnica.
[0038] "Alquinila" é um hidrocarboneto reto ou ramificado contendo átomos de carbono normais, secundários ou terciários com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, uma ligação tripla sp, carbono- carbono. Por exemplo, um grupo alquinila pode ter 2 a 4 átomos de carbono (isto é, C2-C4 alquinila) ou 2 a 3 átomos de carbono (isto é, C2-C3 alcina). Exemplos de grupos alquinila adequados incluem, mas não estão limitados a, acetilênico (-C=CH), propargila (-CH2C=CH) e similar.
[0039] O termo "(C2-n)alquinila", conforme aqui usado, onde n é um inteiro, ou sozinho ou em combinação com um outro radical, pretende significar um radical insaturado, acíclico de cadeia reta ou ramificada contendo dois a n átomos de carbono, pelo menos dois dos quais são ligados uns aos outros por uma ligação tripla. Exemplos de tais radicais onde n é 4 incluem, mas não estão limitados a, etinila, 1-propinila, 2-propinila e 1-butinila. Quando (C2-n)alquinila é substituído, ele é compreendido ser substituído em qualquer átomo de carbono do mesmo que de outra maneira carregaria um átomo de hidrogênio, a menos que de outro modo especificado, de maneira que a substituição daria origem a um composto quimicamente estável, tal como reconhecido por aqueles versados na técnica.
[0040] O termo cicloalquila se refere a um grupo alifático cíclico. Os grupos cicloalquila da presente invenção podem ser referidos pelo número de átomos de carbono no seu anel, tal como "C3-C4 cicloalqui- la" se referindo a um anel cicloalquila com 3 ou 4 átomos de carbono no anel ou "C3-C6 cicloalquila" indicando um anel cicloalquila com 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono no anel, isto é, um anel ciclopropila, ciclobu- tila, ciclopentila ou cicloexila.
[0041] O termo "carbociclo" ou "carbociclila" se refere a um anel saturado (isto é, cicloalquila) ou parcialmente insaturado (por exemplo, cicloalquenila, cicloalcadienila, etc) tendo o número de átomos de car-bono especificado, tal como 3 a 4 átomos de carbono ou 3 a 6 átomos de carbono como um sistema de anel monocíclico. Em uma modalidade, o carbociclo é um monociclo compreendendo 3-6 carbonos no anel (isto é, (C3-C6)carbociclo). Exemplos não limitantes de carbociclos mo- nocíclicos incluem anéis ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, 1-ciclo- pent-1-enila, 1-ciclopent-2-enila, 1-ciclopent-3-enila, cicloexila, 1-ciclo- ex-1-enila, 1-cicloex-2-enila, 1-cicloex-3-enila e cicloexa-1,3-dienila.
[0042] Cada grupo carbociclo pode ser substituído por 0, 1, 2 ou 3 substituintes independentemente selecionados de halogênio, -OH, -CN, - NO2, -NH2, -NH(C1-C6 alquila), -N(C1-C6 alquila)2, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi e -CF3.
Formulações Farmacêuticas
[0043] É também provida aqui uma formulação farmacêutica com-preendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceuticamen- te aceitável. São também providas formulações farmacêuticas separadas, cada uma compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceu- ticamente aceitável.
[0044] Os presentes compostos são formulados com carreadores e excipientes convencionais, que serão selecionados de acordo com prática comum. Os comprimidos conterão excipientes, glidantes, cargas, ligantes e similar. Formulações aquosas são preparadas em forma estéril e quando pretendidas para administração através de outra que não administração oral geralmente serão isotônicaa. Todas as formulações conterão opcionalmente excipientes tais como aqueles mostrados no "Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986). Exci- pientes incluem ácido ascórbico e outros antioxidantes, agentes de quelação tal como EDTA, carboidratos tais como dextrano, hidroxial- quilcelulose, hidroxialquilmetilcelulose, ácido esteárico e similar. O pH das formulações varia de a partir de cerca de 3 a cerca de 11, mas é geralmente cerca de 7 a 10.
[0045] Embora seja possível que os ingredientes ativos sejam ad-ministrados sozinhos, pode ser preferível apresentá-los como formula-ções farmacêuticas. As formulações, para ambos os usos veterinário e humano, compreendem pelo menos um ingrediente ativo, conforme acima definido, junto com um ou mais carreadores aceitáveis e opcio- nalmente outros ingredientes terapêuticos, particularmente aqueles ingredientes terapêuticos adicionais conforme aqui discutido. O(s) car- reador(es) deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e fisiologicamente inócuo para o seu recipiente.
[0046] As formulações incluem aquelas adequadas para as vias de administração acima. As formulações podem ser convenientemente apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas através de qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Técnicas e formulações geralmente são encontradas em Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tais métodos incluem a etapa de trazer em associação o ingredi-ente ativo com o carreador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral as formulações são preparadas trazendo em as-sociação uniformemente e intimamente o ingrediente ativo com carre- adores líquidos ou carreadores sólidos finamente divididos ou ambos, e então, se necessário, modelagem do produto.
[0047] Formulações adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades individuais tais como cápsulas, cachets ou comprimidos cada um contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso; ou como emulsão líquida óleo-em-água ou uma emulsão líquida água-em- óleo. O ingrediente ativo pode também ser administrado como um bolo, eletuário ou pasta.
[0048] Um comprimido é feito através de compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessório. Comprimidos prensados podem ser preparados prensando em uma máquina adequada o ingrediente ativo em uma forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um ligante, lubrificante, diluente inerte, conservante, agente tensoativo ou de dispersão. Com-primidos moldados podem ser feitos através de moldagem em uma máquina adequada de uma mistura do ingrediente ativo em pó ume- decido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem ser op-cionalmente revestidos ou entalhados e são opcionalmente formulados de modo a prover liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo a partir do mesmo.
[0049] Para infecções do olho ou outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são preferivelmente aplicadas como um unguento ou creme tópico contendo o(s) ingrediente(s) ati- vo(s) em uma quantidade de, por exemplo, 0,075 a 20% p/p (incluindo o(s) ingrediente(s) ativo(s) em uma faixa entre 0,1% e 20% em incrementos de 0,1% p/p tal como 0,6% p/p, 0,7% p/p, etc), preferivelmente 0,2 a 15% p/p e, sobretudo, preferivelmente 0,5 a 10% p/p. Quando formulados em um unguento, os ingredientes ativos podem ser empregados com uma base de unguento ou parafínica ou miscível em água. Alternativamente, os ingredientes ativos podem ser formulados em um creme com uma base de creme óleo-em-água.
[0050] Se desejado, a fase aquosa da base de creme pode incluir, por exemplo, pelo menos 30% p/p de um álcool poli-hídrico, isto é, um álcool tendo dois ou mais grupos hidroxila tais como propileno glicol, butano 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno glicol (incluindo PEG 400) e misturas dos mesmos. As formulações tópicas podem incluir desejavelmente um composto que aumenta a absorção ou penetração do ingrediente ativo através da pele ou outras áreas afetadas. Exemplos de tais potencializadores de penetração dermal incluem sul- fóxido de dimetila e análogos relacionados.
[0051] A fase oleosa das emulsões pode ser constituída de ingredientes conhecidos de uma maneira conhecida. Embora a fase possa compreender apenas um emulsificante (de outra maneira conhecido como um emulgente), é desejável compreender uma mistura de pelo menos um emulsificante com uma gordura ou um óleo ou com ambos uma gordura e um óleo. Preferivelmente, um emulsificante hidrofílico é incluído junto com um emulsificante lipofílico que age como um estabi- lizante. É também preferido incluir ambos um óleo e uma gordura. Juntos, o(s) emulsificante(s) com ou sem estabilizante(s), formam a chamada cera emulsificante, e a cera junto com o óleo e gordura formam a chamada base de unguento emulsificante que forma a fase dispersa oleosa das formulações de creme.
[0052] Emulgentes e estabilizadores de emulsão adequados para uso na formulação incluem Tween®60, Span® 80, álcool de cetoeste- arila, álcool benzílico, álcool de miristina, monoestearato de glicerila e lauril sulfato de sódio.
[0053] A escolha de óleos ou gorduras adequados para a formulação é baseada na obtenção das propriedades cosméticas desejadas. O creme deve ser preferivelmente um produto não gorduroso, que não manche e lavável com consistência adequada para evitar vazamento dos tubos ou outros recipientes. Ésteres de alquila de cadeia reta ou modificada, mono- ou dibásicos tais como di-isoadipato, estearato de isocetila, diéster de propileno glicol de ácidos graxos de coco, miristato de isopropila, oleato de decila, palmitato de isopropila, estearato de butila, palmitato de 2-etilexila ou uma mistura de ésteres de cadeia ramificada conhecidos como Crodamol CAP podem ser usados, os três últimos sendo ésteres preferidos. Estes podem ser sozinhos ou em combinação dependendo das propriedades requeridas. Alternativamente, lipídeos de ponto de fusão alto tais como parafina mole branca e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais são usados.
[0054] Formulações farmacêuticas aqui compreendem uma combinação junto com um ou mais carreadores ou excipientes farmaceuti- camente acetáveis e opcionalmente outros agentes terapêuticos. For- mulações farmacêuticas contendo o ingrediente ativo podem estar em qualquer forma adequada para o método de administração pretendido. Quando usadas para uso oral, por exemplo, comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersá-veis, emulsões, cápsulas duras ou moles, soluções, xaropes ou elixires podem ser preparados. Composições pretendidas para uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes incluindo agentes adoçantes, agentes saborizantes, agentes de coloração e agentes de conservação, a fim de prover uma preparação palatável. Comprimidos contendo o ingrediente ativo em mistura com excipiente farmaceuticamen- te aceitável não tóxico que são adequados para fabricação de comprimidos são aceitáveis. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tal como carbonato de cálcio ou sódio, lactose, fosfato de cálcio ou sódio; agentes de granulação e desintegração, tais como amido de milho ou ácido algínico; agentes de ligação; ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos através de técnicas conhecidas incluindo microencapsula- ção para retardar desintegração e adsorção no trato gastrintestinal e desta maneira prover uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, um material de retardo de tempo tal como mo- noestearato de glicerila ou diestearato de glicerila sozinho ou com uma cera pode ser empregado.
[0055] Formulações para uso oral podem ser também apresentadas como cápsulas de gelatina dura onde o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macias onde o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio de óleo, tal como óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.
[0056] Suspensões aquosas contêm os materiais ativos em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes incluem um agente de suspensão, tais como car- boximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropil metilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidina, goma tragacanto e goma acácia e agentes de dispersão ou umectantes tais como um fosfatídeos de ocorrência natural (por exemplo, lecitina), um produto de condensação de um óxido de alquileno com um ácido graxo (por exemplo, estearato de polioxietileno), um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa (por exemplo, heptadecaetilenooxi- cetanol), um produto de condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um anidrido de hexitol (por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano). A suspensão aquosa pode também conter um ou mais conservantes tal como p-hidroxi- benzoato de etila ou n-propila, um ou mais agentes de coloração, um ou mais agentes saborizantes e um ou mais agentes adoçantes, tal como sacarose ou sacarina.
[0057] Suspensões de óleo podem ser formuladas através de suspensão do ingrediente ativo em um óleo vegetal, tal como óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de sésamo ou óleo de coco ou em um óleo mineral tal como parafina líquida. As suspensões orais podem conter um agente de espessamento, tal como cera de abelha, parafina líquida ou álcool de cetila. Agentes adoçantes, tais como aqueles mostrados acima, e agentes saborizantes podem ser adicionados para prover uma preparação oral palatável. Estas composições podem ser preservadas através da adição de um antioxidante tal como ácido as- córbico.
[0058] Pós e grânulos dispersáveis adequados para preparação de uma suspensão aquosa através da adição de água proveem o ingrediente ativo em mistura com um agente de dispersão ou umectante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes de dis-persão ou umectantes e agentes de suspensão adequados são exem-plificados por aqueles revelados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, de saborização e coloração, podem também estar presentes.
[0059] As composições farmacêuticas podem também estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, tal como óleo de oliva ou óleo de amendoim, um óleo mineral, tal como parafina líquida ou uma mistura desses. Agentes emulsificantes adequados incluem gomas de ocorrência natural, tal como goma acácia e goma tragacanto, fosfatídeos de ocorrência natural, tal como lecitina de soja, ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, tal como monooleato de sorbitano, e produtos de condensação destes ésteres parciais com óxido de etileno, tal como monooleato de polioxietileno sorbitano. A emulsão pode também conter agentes adoçantes e saborizantes. Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, tal como glicerol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações podem também conter um agente demulcente, um conservante, um saborizante ou um de coloração.
[0060] As composições farmacêuticas podem estar na forma de preparações injetáveis ou intravenosas estéreis, tal como suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser for-mulada de acordo com a técnica conhecida usando aqueles agentes de dispersão ou umectantes e agentes de suspensão adequados que foram mencionados acima. A preparação injetável ou intravenosa estéril pode ser também uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável não tóxico, tal como uma solução em 1,3-butano-diol ou preparada como um pó liofilizado. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônica. Ainda, óleos fixos estéreis podem ser convenientemente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerí- deos sintéticos. Ainda, ácidos graxos tal como ácido oleico podem da mesma maneira ser usados na preparação de injetáveis.
[0061] A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com o material carreador para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do hospedeiro tratado e do modo de administração particular. Por exemplo, uma formulação de liberação com o tempo pretendida para administração oral a humanos pode conter aproximadamente 1 a 1000 mg de material ativo composto com uma quantidade apropriada e conveniente de material carreador que pode variar de a partir de cerca de 5 a cerca de 95% das composições totais (pe- so:peso). A composição farmacêutica pode ser preparada para prover quantidades facilmente mensuráveis para administração. Por exemplo, uma solução aquosa pretendida para infusão intravenosa pode conter de a partir de cerca de 3 a 500 μg do ingrediente ativo por mililitro de solução a fim de que infusão de um volume adequado em uma taxa de cerca de 30 mL/h possa ocorrer.
[0062] Formulações adequadas para administração tópica ao olho também incluem gotas para o olho onde o ingrediente ativo é dissolvido ou suspenso em um carreador adequado, especialmente um solvente aquoso para o ingrediente ativo. O ingrediente ativo está preferivelmente presente em tais formulações em uma concentração de 0,5 a 20%, vantajosamente 0,5 a 10% e particularmente cerca de 1,5% p/p.
[0063] Formulações adequadas para administração tópica na boca incluem pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em uma base saborizada, geralmente sacarose e acácia ou tragacanto; pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em uma base inerte tais como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia; e enxaguatórios bucais com- preendendo o ingrediente ativo em um carreador líquido adequado.
[0064] Formulações para administração retal podem ser apresentadas como um supositório com uma base adequada compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicilato.
[0065] Formulações adequadas para administração intrapulmonar ou nasal têm um tamanho de partícula, por exemplo, na faixa de 0,1 a 500 mícrons, tal como 0,5, 1, 30, 35, etc, que são administradas através de inalação rápida através da passagem nasal ou através de inalação pela boca de maneira a atingir os sacos alveolares. Formulações adequadas incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente ativo. Formulações adequadas para administração com aerossol ou pó seco podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais e podem ser administradas com outros agentes terapêuticos tais como compostos até agora usados no tratamento ou profilaxia de infecções por Pneumovirinae conforme descrito abaixo.
[0066] Outras modalidades proveem uma composição inalável nova, eficaz, segura, não irritante e fisiologicamente compatível compre-endendo um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, adequada para tratamento de infecções por Pneumovirinae e bronquiolite potencialmente associada. Sais farmaceuticamente aceitáveis preferidos são sais de ácido inor-gânicos incluindo sais de cloridrato, bromidrato, sulfato ou fosfato uma vez que eles causam menos irritação pulmonar. Preferivelmente, a formulação inalável é administrada ao espaço endobronquial em um aerossol compreendendo partículas com um diâmetro aerodinâmico médio de massa (MMAD) entre cerca de 1 e cerca de 5 μm. Preferi-velmente, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é formulado para administração aerossol usando um nebulizador, inalador de dose medida pressurizado (pMDI) ou inalador de pó seco (DPI).
[0067] Exemplos não limitantes de nebulizadores incluem nebuli- zadores de atomização, jato, ultrassônicos, pressurizados, placa porosa vibrante, incluindo aqueles nebulizadores utilizando tecnologia de administração aerossol adaptativa (Denyer, J. Aerosol medicine Pul-monary Drug Delivery 2010, 23 Suppl. 1, S1-S10). Um nebulizador a jato utiliza pressão a ar para quebrar uma solução líquida em gotículas de aerossol. Um nebulizador ultrassônico trabalha através de um cristal piezelétrico que quebra um líquido em gotículas aerossóis pequenas. Um sistema de nebulização pressurizado força solução sob pressão através de poros pequenos para gerar gotículas aerossóis. Um dispositivo de placa porosa vibrante utiliza vibração rápida para quebrar uma corrente de líquido em tamanhos de gotícula apropriados.
[0068] Em uma modalidade preferida, a formulação para nebuliza- ção é administrada ao espaço endobronquial em um aerossol compreendendo partículas com um MMAD predominantemente entre cerca de 1 μm e cerca de 5 μm usando um nebulizador capaz de aerossolizar a formulação do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) em partículas do MMAD requerido. Para ser otimamente terapeuticamente eficaz e evitar efeitos colaterais respiratórios superiores e sistêmicos, a maioria das partículas aerossolizadas não deve ter um MMAD maior do que cerca de 5 μm, as partículas são depositadas nas vias aéreas superiores diminuindo a quantidade de fármaco administrado ao sítio de inflamação e broncoconstrição no trato respiratório inferior. Se o MMAD do aerossol for menor do que cerca de 1 μm, então as partículas têm uma tendência a permanecer suspensas no ar inalado e são subsequentemente exaladas durante a respiração.
[0069] Quando formulada e administrada de acordo com o presente método, a formulação aerossol para nebulização administra uma dose terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) ao sítio de infecção por Pneumovirinae suficiente para tratar a infecção por Pneumovirinae. A quantidade de fármaco administrada de- ve ser ajustada para refletir a eficiência da administração de uma dose terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II). Em uma modalidade preferida, uma combinação da formulação aerossol aquosa com o nebulizador de atomização, a jato, pressurizado, de placa porosa vibrante ou ultrassônico permite, dependendo do nebuli- zador, cerca de, pelo menos, 20, a cerca de 90%, tipicamente cerca de 70% de administração da dose administrada do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) nas vias aéreas. Em uma modalidade preferida, pelo menos cerca de 30 a cerca de 50% do composto ativo são administrados. Mais preferivelmente, cerca de 70 a cerca de 90% do composto ativo são administrados.
[0070] Em outra modalidade, um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado como um pó inalável seco. Os compostos são administrados en- dobronquialmente como uma formulação de pó seco para administração eficaz de partículas finas de composto ao espaço endobronquial usando inaladores de pó seco ou dose medida. Para administração através de DPI, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é processado em partículas com, predominantemente, MMAD entre cerca de 1 μm e cerca de 5 μm através de secagem por pulverização de moagem, processamento de fluido supercrítico ou precipitação a partir da solução. Dispositivos e procedimentos de moagem de meio, moagem a jato e secagem por pulverização capazes de produção dos tamanhos de partícula com um MMAD entre cerca de 1 μm e cerca de 5 μm são bem conhecido na técnica. Em uma modalidade, excipientes são adicionados ao composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) antes do processamento em partículas dos tamanhos requeridos. Em outra modalidade, excipientes são misturados com as partículas do tamanho requerido para auxiliar na dispersão das partículas de fármaco, por exemplo, usando lactose como um excipiente.
[0071] Determinações de tamanho de partícula são feitas usando dispositivos bem conhecidos na técnica. Por exemplo, um impactador de cascata Anderson de multiestágio ou outro meio adequado tais como aqueles especificados mencionados na US Pharmacopoeia Capítulo 601 como dispositivos caracterizantes para aerossóis dentro de inaladores de dose medida e de pó seco.
[0072] Em outra modalidade preferida, um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é administrado como um pó seco usando um dispositivo tal como um inalador de pó seco ou outros dispositivos de dispersão de pó seco. Exemplos não limitantes de inaladores e dispositivos de pó seco incluem aqueles revelados nas US 5.458.135; US5.740.794; US5775320; US5.785.049; US3.906.950; US4.013.075; US4.069.819; US4.995.385; US5.522.385; US4.668.218; US4.667.668; US4.805.811 e US5.388.572. Há dois projetos principais de inaladores de pó seco. Um projeto é um dispositivo de medição onde um reservatório para o fármaco é posto dentro do dispositivo e o paciente adiciona uma dose do fármaco na câmara de inalação. O segundo projeto é um dispositivo medido na fábrica onde cada dose individual foi fabricada em um recipiente sepa-rado. Ambos os sistemas dependem da formulação do fármaco em partículas pequenas de MMAD de 1 μm e cerca de 5 μm e frequente-mente envolvem co-formulação com partículas excipientes grandes tal como, mas não limitado a, lactose. Fármaco em pó é posto na câmara de inalação (ou através de medição do dispositivo ou através de quebra de uma dose medida na fábrica) e o fluxo de inspiração do paciente acelera o pó para fora do dispositivo para a cavidade oral. Características de fluxo não laminar do curso de pó fazem com que o excipien- te-fármaco agregue para decompor, e a massa das partículas excipi- entes grandes causa sua impactação na parte posterior da garganta, enquanto as partículas de fármaco menores são depositadas mais profundamente nos pulmões. Em modalidades preferidas, um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é administrado como um pó seco usando qualquer tipo de inalador de pó seco conforme aqui descrito, onde o MMAD do pó seco, exclusivo de quaisquer excipientes, está predominantemente na faixa de 1 μm a cerca de 5 μm.
[0073] Em outra modalidade, um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é administrado como um pó seco usando um inalador de dose medida. Exemplos não limitantes de inaladores e dispositivos de dose medida incluem aqueles revelados nas US5.261.538; US5.544.647; US5.622.163; US4.955.371; US3.565.070; US3.361.306 e US6.116.234. Em modalidades preferidas, um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é administrado como um pó seco usando um inalador de dose medida onde o MMAD do pó seco, exclusivo de quaisquer excipientes, está predominantemente na faixa de cerca de 1-5 μm.
[0074] Formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em spray contendo em adição ao ingrediente ativo tais carreadores como são conhecidos na técnica como sendo apropriado.
[0075] Formulações adequadas para administração parenteral incluem soluções de injeção estéril aquosas e não aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do recipiente pretendido; e sus-pensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes de espessamento.
[0076] As formulações são apresentadas em recipientes de dose unitária ou multidose, por exemplo, ampolas e frascos vedados, e podem ser armazenadas em condição seca por congelamento (liofiliza- da) necessitando apenas a adição do carreador líquido estéril, por exemplo, água para injeção, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões de injeção extemporâneas são preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos do tipo previamente descrito. Formu-lações de dosagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dose diária ou subdose diária unitária, como aqui acima mencionado, ou uma fração apropriada da mesma, do ingrediente ativo.
[0077] Deve ser compreendido que em adição aos ingredientes particularmente mencionados acima as formulações podem incluir outros agentes convencionais na técnica com relação ao tipo de formulação em questão, por exemplo, aquelas adequadas para administração oral podem incluir agentes saborizantes.
[0078] São ainda providas aqui composições veterinárias compreendendo pelo menos um ingrediente ativo conforme acima definido junto com um carreador veterinário para as mesmas.
[0079] Carreadores veterinários são materiais úteis para o propósito de administração da composição e podem ser materiais sólidos, líquidos ou gasosos que são de outro modo inertes ou aceitáveis na técnica veterinária e são compatíveis com o ingrediente ativo. Estas composições veterinárias podem ser administradas oralmente, paren- teralmente ou através de qualquer outra via desejada.
[0080] Os presentes compostos são usados para prover formulações farmacêuticas de liberação controlada contendo como ingrediente ativo um ou mais dos compostos ("formulações de liberação controlada") onde a liberação do ingrediente ativo é controlada e regulada para permitir menos frequência de dosagem ou para aperfeiçoar o perfil farmacocinético ou de toxidez de um dado ingrediente ativo.
[0081] Dose eficaz de ingrediente ativo depende pelo menos da natureza da condição sendo tratada, toxidez, seja o composto sendo usado profilaticamente (doses menores) ou contra uma infecção viral ativa, o método de administração e a formulação farmacêutica, e será determinada pelo médico usando estudos de escalonamento de dose convencionais. Ela pode ser esperada ser de a partir de cerca de 0,0001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia; tipicamente de a partir de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dia; mais tipicamente de a partir de cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dia; mais tipicamente de a partir de cerca de 0,005 a cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal por dia. Por exemplo, a dose candidata diária para um humano adulto de aproximadamente 70 kg de peso corporal variará de 1 mg a 1000 mg, preferivelmente entre 5 mg e 500 mg e pode tomar a forma de doses únicas ou múltiplas.
Vias de Administração
[0082] Um ou mais dos compostos (aqui referidos como os ingredientes ativos) são administrados através de qualquer via apropriada para a condição a ser tratada. Vias adequadas incluem oral, retal, nasal, pulmonar, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal e parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, intradermal, in- tratecal e epidural) e similar. Será compreendido que a via preferida pode variar com, por exemplo, a condição do recipiente. Uma vantagem dos compostos aqui é que eles são oralmente biodisponíveis e podem ser oralmente dosados.
Terapia de Combinação
[0083] Composições são também usadas em combinação com outros ingredientes ativos. Para o tratamento de infecções por vírus Pneumoviridae, preferivelmente, o outro agente terapêutico ativo é ativo contra infecções por vírus Pneumoviridae, particularmente infecções por vírus sincicial respiratório. Exemplos não limitantes desses outros agentes terapêuticos ativos são ribavirina, palivizumabe, mota- vizumabe, RSV-IGIV (RespiGam®), MEDI-557, A-60444 (também co-nhecido como RSV604), MDT-637, BMS-433771, ALN-RSV0, ALX- 0171 e misturas dos mesmos.
[0084] Muitas das infecções dos vírus Pneumovirinae são infecções respiratórias. Desta maneira, agentes terapêuticos ativos adicionais usados para tratar sintomas respiratórios e sequelas de infecção podem ser usados em combinação com os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II). Os agentes adicionais são preferivelmente administrados oralmente ou através de inalação direta. Por exemplo, outros agentes terapêuticos adicionais preferidos em combinação com os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) para o tratamento de infecções respiratórias virais incluem, mas não estão limitados a, broncodi- latadores e corticosteroides.
[0085] Glucocorticoides, que foram primeiro introduzidos como uma terapia para asma em 1950 (Carryer, Journal of Allergy, 21, 282287, 1950), permanecem a terapia mais potente e consistentemente eficaz para esta doença, embora seu mecanismo de ação não seja ainda completamente compreendido (Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985). Infelizmente, terapias com glucocorticoide oral estão associadas com efeitos colaterais indesejáveis profundos tais como obesidade truncal, hipertensão, glaucoma, intolerância à glicose, aceleração de formação de catarata, perda mineral óssea e efeitos psicológicos, todos eles limitam seu uso como agentes terapêuticos a longo prazo (Goodman e Gilman, 10a edição, 2001). Uma solução para efeitos colaterais sistêmicos é administrar fármacos esteroides direta-mente ao sítio de inflamação. Corticosteroides inalados (ICS) foram desenvolvidos para mitigar os efeitos adversos severos de esteroides orais. Exemplos não limitantes de corticosteroides que podem ser usados em combinação com os compostos de Formula (I) ou Fórmula (II) são dexametasona, fosfato de sódio de dexametasona, fluormeto- lona, acetato de fluormetolona, loteprednol, etabonato de loteprednol, hidrocortisona, prednisolona, fludrocortisonas, triamcinolona, triancino- lona acetonida, betametasona, dipropionato de beclometasona, metil- prednisolona, fluocinolona, fluocinolona acetonida, flunisolida, fluocor- tin-21-butilato, flumetasona, pivalato de flumetasona, budenosida, propionato de halobetasol, furoato de mometasona, propionato de flutica- sona, cicelsonida; ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[0086] Outros agentes anti-inflamatórios que funcionam através de mecanismos de cascata anti-inflamatórios são também úteis como agentes terapêuticos adicionais em combinação com os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) para o tratamento de infecções respiratórias virais. Aplicação de "moduladores de transdução de sinal anti-inflama- tórios" (referidos neste texto como AISTM), tais como inibidores de fos- fodiesterase (por exemplo, específico para PDE-4, PDE-5 ou PDE-7), inibidores de fator de transcrição (por exemplo, bloqueio de NFKB através de inibição de IKK) ou inibidores de cinase (por exemplo, bloqueio de P38 MAP, JNK, PI3K, EGFR ou Syk) é uma abordagem lógica para parar inflamação uma vez que essas moléculas pequenas se direcionam a um número limitado de cursos intracelulares comuns - aqueles cursos de transdução de sinal que são pontos críticos para a intervenção terapêutica anti-inflamatória (vide revisão de P.J. Barnes, 2006). Estes agentes terapêuticos adicionais não limitantes incluem: (2-dimetilamino-etil)-amida do ácido 5-(2,4-difluor-fenoxi)-1-isobutil-1H- indazol-6-carboxílico (inibidor de P38 Map cinase ARRY-797); 3-Ciclo- propilmetoxi-N-(3,5-dicloro-piridin-4-il)-4-difluorormetoxi-benzamida (inibidor de PDE-4 Roflumilaste); 4-[2-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-2- fenil-etil]-piridina (inibidor de PDE-4 CDP-840); N-(3,5-dicloro-4-piridi- nil)-4-(difluormetoxi)-8-[(metilsulfonil)amino]-1-dibenzofurancarboxami- da (inibidor de PDE-4 Oglemilaste); N-(3,5-Dicloro-piridin-4-il)-2-[1-(4- fluorbenzil)-5-hidroxi-1H-indol-3-il]-2-oxo-acetamida (inibidor de PDE-4 AWD 12-281); (3,5-dicloro-1-oxi-piridin-4-il)-amida do ácido 8-Metoxi-2- trifluormetil-quinolino-5-carboxílico (inibidor de PDE-4 Sch 351591); 4- [5-(4-Fluorfenil)-2-(4-metanossulfinil-fenil)-1H-imidazol-4-il]-piridina (ini- bidor de P38 SB-203850); 4-[4-(4-Fluor-fenil)-1-(3-fenil-propil)-5-piridin- 4-il-1H-imidazol-2-il]-but-3-in-1-ol (inibidor de P38 RWJ-67657); 2-dieti- lamino-etil éster do ácido 4-Ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi-fenil)-ci- cloexanecarboxílico (produto de 2-dietil-etil éster de Cilomilaste, inibidor de PDE-4r); (3-Cloro-4-fluorfenil)-[7-metoxi-6-(3-morfolin-4-il-propo- xi)-quinazolin-4-il]-amina (Gefitinibe, inibidor de EGFR); e 4-(4-Metil- piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]- benzamida (Imatinibe, inibidor de EGFR).
[0087] Combinações compreendendo broncodilatadores agonistas de β2-adrenorreceptor inalados tal como formoterol, albuterol ou sal- meterol com os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) são também combinações adequadas, mas não limitantes, úteis para o tratamento de infecções virais respiratórias.
[0088] Combinações de broncodilatadores agonistas de β2-adre- norreceptor inalados tal como formoterol ou salmeterol com ICS’s são também usadas para tratar ambos a broncoconstrição e a inflamação (Symbicort® e Advair®, respectivamente). As combinações compreen-dendo esses ICS e combinações de agonista de β2-adrenorreceptor junto com os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) são também adequadas, mas combinações úteis, não limitantes, para o tratamento de infecções virais respiratórias.
[0089] Para o tratamento ou profilaxia de broncoconstrição pulmonar, anticolinérgicos são de uso potencial e, desta maneira, úteis como um agente terapêutico adicional em combinação com os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) para o tratamento de infecções respiratórias virais. Estes anticolinérgicos incluem, mas não estão limitados a, anta-gonistas do receptor muscarínico (particularmente do subtipo M3) que mostraram eficácia terapêutica em homens para o controle de tom co- linérgico em CPD (Witek, 1999); ácido 1-{4-Hidroxi-1-[3,3,3-tris-(4-fluor -fenil)-propionil]-pirrolidino-2-carbonil}-pirrolidino-2-carboxílico (1-metil- piperidin-4-ilmetil)-amida; 3-[3-(2-Dietilamino-acetoxi)-2-fenil-propioni- loxi]-8-isopropil-8-metil-8-azonia-biciclo[3.2.1]octano (Ipratrópio-N,N- dietilglicinato); 1-aza-biciclo[2.2.2]oct-3-il éster do ácido 1-cicloexil-3,4- di-hidro-1H-isoquinolino-2-carboxílico (Solifenacin); 1-aza-biciclo[2.2.2] oct-3-il éser do ácido 2-hidroximetil-4-metanossulfinil-2-fenil-butírico (Revatropato); 2-{1-[2-(2,3-Di-hidro-benzofuran-5-il)-etil]-pirrolidin-3-il}- 2,2-difenil-acetamida (Darifenacina); 4-Azepan-1-il-2,2-difenil-butirami- da (Buzepida); 7-[3-(2-Dietilamino-acetoxi)-2-fenil-propioniloxi]-9-etil-9- metil-3-oxa-9-azonia-triciclo[3.3.1.02,4]nonana (Oxitrópio-N,N-dietilgli- cinato); 7-[2-(2-Dietilamino-acetoxi)-2,2-di-tiophen-2-il-acetoxi]-9,9-di- metil-3-oxa-9-azonia-triciclo[3.3.1.02,4]nonana (Tiotrópio-N,N-dietilgli- cinato); 2-(3-di-isopropilamino-1-fenil-propil)-4-metil-fenil éster do ácido dimetilamino-acético (Tolterodina-N,N-dimetilglicinato); 3-[4,4-Bis-(4- fluor-fenil)-2-oxo-imidazolidin-1-il]-1-metil-1-(2-oxo-2-piridin-2-il-etil)- pirrolidínio; 1-[1-(3-Fluor-benzil)-piperidin-4-il]-4,4-bis-(4-fluor-fenil)-imi- dazolidin-2-ona; 1-Ciclooctil-3-(3-metoxi-1-aza-biciclo[2.2.2]oct-3-il)-1- fenil-prop-2-in-1-ol; 3-[2-(2-Dietilamino-acetoxi)-2,2-di-tiofen-2-il-aceto- xi]-1-(3-fenoxi-propil)-1-azonia-biciclo[2.2.2]octana (Aclidínio-N,N-die- tilglicinato); ou 1-metil-1-(2-fenoxi-etil)-piperidin-4-il éster do ácido (2- dietilamino-acetoxi)-di-tiofen-2-il-acético.
[0090] Os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) podem também ser combinados com agentes mucolíticos para tratar ambos a infecção e os sintomas de infecções respiratórias. Um exemplo não limi- tante de um agente mucolítico é ambroxol. Similarmente, os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) podem ser combinados com expec- torantes para tratar ambos a infecção e sintomas de infecções respiratórias. Um exemplo não limitante de um expectorante é guaifenesina.
[0091] Solução salina hipertônica nebulizada é usada para melhorar eliminação imediata e a longo prazo das pequenas vias aéreas em pacientes com doenças pulmonares (Kuzik, J. Pedriatics 2007, 266). Os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) podem ser também com-binados com solução salina hipertônica nebulizada particularmente quando a infecção pelo vírus Pneumoviridae é complicada com bron- quiolite. A combinação dos compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) com solução salina hipertônica pode também compreender qualquer um dos agentes adicionais discutidos acima. Em uma modalidade, solução salina hipertônica cerca de 3% nebulizada é usada.
[0092] É também possível combinar qualquer composto com um ou mais agentes terapêuticos ativos adicionais em uma forma de dosagem unitária para administração simultânea ou sequencial a um paciente. A terapia de combinação pode ser administrada como um regime simultâneo ou sequencial. Quando administrada sequencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais administrações.
[0093] Co-administração de um composto aqui com um ou mais outros agentes terapêuticos ativos geralmente se refere à administração simultânea ou sequencial de um composto e um ou mais outros agentes terapêuticos ativos, de maneira que quantidades terapeutica- mente eficazes do composto e um ou mais outros agentes terapêuticos ativos esejam ambos presentes no corpo do paciente.
[0094] Co-administração inclui administração de dosagens unitárias dos compostos antes ou após administração de dosagens unitárias de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos, por exemplo, administração dos compostos dentro de segundos, minutos ou horas da administração de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos. Por exemplo, uma dose unitária de um composto pode ser administrada primeiro, seguido dentro de segundos ou minutos pela administração de um dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos. Alternativamente, uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos pode ser administrada primeiro, seguido pela administração de uma dose unitária de um composto dentro de segundos ou mi- nutos. Em alguns casos, pode ser desejável administrar uma dose uni-tária de um composto primeiro, seguido, após um período de horas (por exemplo, 1-12 horas), pela administração de uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos. Em outros casos, pode ser desejável administrar uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos primeiro, seguido, após um período de horas (por exemplo, 1-12 horas), pela administração de uma dose unitária de um composto da presente invenção.
[0095] A terapia de combinação pode prover "sinergia" e "sinergís- tico", isto é, o efeito obtido quando os ingredientes ativos usados juntos é maior do que a soma dos efeitos que resultam do uso de compostos separadamente. Um efeito sinergístico pode ser obtido quando os ingredientes ativos são: (1) co-formulados e administrados ou dis-tribuídos simultaneamente em formulação combinada; (2) distribuídos através de revezamento ou em paralelo como formulações separadas; ou (3) através de algum outro regime. Quando distribuídos em terapia de revezamento, um efeito sinergístico pode ser obtido quando os compostos são administrados ou distribuídos sequencialmente, por exemplo, em comprimidos, pílulas ou cápsulas separados, ou através de injeções diferentes em seringas separadas. Em geral, durante terapia de revezamento de fármaco, uma dosagem eficaz de cada ingrediente ativo é administrada sequencialmente, isto é, serialmente, enquanto em terapia de combinação, dosagens eficazes de dois ou mais ingredientes ativos são administradas juntas. Um efeito antiviral siner- gístico significa um efeito antiviral que é maior do que os efeitos puramente aditivos previstos dos compostos individuais da combinação.
[0096] Em ainda outra modalidade, o presente pedido provê um método de tratamento de infecção pelo vírus Pneumoviridae em um humano, o método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou éster do mesmo. São também providos métodos separados de tratamento de infecção pelo vírus Pneumovirinae em um humano, cada um compreendendo admi-nistrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz e uma farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipientes farmaceuticamente aceitável.
[0097] Em outra modalidade, é provido aqui um método de tratamento de uma infecção por Pneumovirinae em um humano através da admi-nistração ao humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um racemato, enantiômero, diastereômero, tautômero, polimorfo, pseudopo- limorfo, forma amorfa, hidrato ou solvato de um composto de Fórmula (I) ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0098] São ainda providos métodos separados de tratamento de uma infecção pelo vírus Pneumovirinae em um humano com necessidade do mesmo, cada método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um racemato, enantiôme- ro, diastereômero, tautômero, polimorfo, pseudopolimorfo, forma amorfa, hidrato ou solvato de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo.
[0099] Em ainda outra modalidade, o presente pedido provê um método de tratamento de infecção por vírus sincicial respiratório humano em um humano, o método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo.
[00100] Em ainda outra modalidade, o presente pedido provê um método de tratamento de infecção por vírus sincicial respiratório hu- mano em um humano, o método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e pelo menos um agente terapêutico ativo adicional.
[00101] São ainda providos métodos separados de tratamento de uma infecção por vírus sincicial respiratório humano em um humano com necessidade do mesmo, cada método compreendendo administração ao humano de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo.
[00102] São também providos métodos separados de tratamento de uma infecção foi vírus sincicial respiratório humano em um humano com necessidade do mesmo, cada método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e pelo menos um agente terapêutico ativo adicional.
[00103] São também providos métodos separados de tratamento de uma infecção por vírus sincicial respiratório humano em um humano com necessidade do mesmo, onde o humano também está sofrendo de bronquiolite, cada método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo.
[00104] São também providos métodos separados de tratamento de uma infecção por vírus sincicial respiratório humano em um humano com necessidade do mesmo, onde o humano está também sofrendo de pneumonia, cada método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), ou de um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo.
[00105] São também providos métodos separados de aperfeiçoamento de sintomas respiratórios em um humano sofrendo de uma infecção pelo vírus sincicial respiratório humano, cada método compreendendo administrar ao humano uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo.
[00106] Sintomas respiratórios em um humano sofrendo uma infecção por vírus sincicial respiratório podem incluir nariz congestionado ou escorrendo, tosse, chiado, espirros, respiração ofegante ou dificuldade para respirar, apneia, bronquiolite e pneumonia.
[00107] É também provida uma modalidade compreendendo o uso de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de infecção pelo vírus Pneumovirinae ou uma infecção pelo vírus sincicial respiratório.
[00108] É também provida uma modalidade compreendendo o uso de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma infecção pelo vírus Pneumovirinae ou uma infecção pelo vírus sincicial respiratório.
[00109] É também provida uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. É ainda provida uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00110] É também provida uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de pelo menos um agente terapêutico ativo adicional. É ainda provida uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (II) ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato e/ou éster do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceuti- camente aceitável e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de pelo menos um agente terapêutico ativo adicional.
[00111] São também providas modalidades separadas compreendendo um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), ou um dos compostos específicos dos presentes compostos, ou um sal farmaceuticamen- te aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, para uso no tratamento de uma infecção pelo vírus Pneumovirinae ou uma infecção pelo vírus sincicial respiratório em um humano.
[00112] São também providas modalidades separadas compreendendo um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), ou um dos compostos específicos dos presentes compostos, ou um sal farmaceuticamen- te aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, para uso como um medicamento.
[00113] São também providas modalidades separadas compreendendo um método para fabricação de um medicamento pretendido pa ra tratamento de uma infecção pelo vírus Pneumovirinae ou uma infecção pelo vírus sincicial respiratório em um humano, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I), Fórmula (II), ou um dos compostos específicos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, é usado.
[00114] É também provido um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato e/ou éster do mesmo, para o tra-tamento de uma infecção pelo vírus Pneumovirinae ou uma infecção pelo vírus sincicial respiratório em um humano.
[00115] São também providas aqui modalidades separadas com-preendendo um composto de Fórmula (II), ou um dos compostos es-pecíficos dos presentes exemplos, ou um sal farmaceuticamente acei-tável, solvato e/ou éster do mesmo, para o tratamento de uma infecção pelo vírus Pneumovirinae ou uma infecção pelo vírus sincicial respiratório em um humano.
[00116] É ainda provido um composto conforme descrito no presente pedido. É também provida uma composição farmacêutica conforme descrito no presente pedido. É também provido um método de uso de um composto de Fórmula (I), conforme descrito no presente pedido. É ainda provido um método de fabricação de um composto de Fórmula (I), conforme descrito no presente pedido.
Metabolitos dos Compostos
[00117] Também dentro do escopo da presente invenção estão os produtos metabólicos in vivo dos compostos descritos aqui, até o ponto que tais produtos sejam novos e não óbvios com relação à técnica anterior. Tais produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, re-dução, hidrólise, amidação, esterificação e similar do composto admi-nistrado, principalmente devido a processos enzimáticos. Desta maneira, estão incluídos compostos novos e não óbvios produzidos através de um processo compreendendo contato de um composto com um mamífero por um período de tempo suficiente para fornecer um produto metabólico do mesmo. Tais produtos tipicamente são identificados através da preparação de um composto radiomarcado (por exemplo, 14C ou 3H), administrando-o parenteralmente em uma dose detectável (por exemplo, mais do que cerca de 0,5 mg/kg) a um animal tal como um rato, camundongo, porquinho-da-índia, macaco ou a um homem, dando tempo suficiente para que o metabolismo ocorra (tipicamente cerca de 30 segundos a 30 horas) e isolamento de seus produtos de conversão a partir da urina, sangue ou outras amostras biológicas. Esses produtos são facilmente isolados uma vez que eles são marcados (outros são isolados através do uso de anticorpos capazes de ligação a epítopos sobrevivendo no metabolito). As estruturas de metabolito são determinadas de maneira convencional, por exemplo, através de análise MS ou NMR. Em geral, análise de metabolitos é feita da mesma maneira que estudos de metabolismo de fármaco convencionais bem conhecidos daqueles versados na técnica. Os produtos de conversão, contanto que eles não sejam de outro modo encontrados in vivo, são úteis em ensaios de diagnóstico para dosagem terapêutica dos compostos mesmo se eles não possuírem nenhuma atividade antiviral HSV por si só.
[00118] Receitas e métodos para determinação da estabilidade de compostos em secreções gastrintestinais substitutas são conhecidos. Compostos são definidos aqui como estáveis no trato gastrintestinal onde menos do que cerca de 50 por cento em mol dos grupos protegidos são desprotegidos em suco intestinal ou gástrico substituto quando da incubação por 1 hora a 37°C. Simplesmente porque os compostos são estáveis no trato gastrintestinal não significa que eles não podem ser hidrolisados in vivo. Os profármacos serão tipicamente estáveis no sistema digestivo, mas podem ser substancialmente hidrolisa- dos para o fármaco parental no lúmen digestivo, fígado, pulmão ou ou- tro órgão metabólico, ou dentro de células em geral. Conforme aqui usado, um profármaco é compreendido ser um composto que é quimi-camente projetado para liberar eficientemente o fármaco parental após superação das barreiras biológicas para administração oral.
Abreviações
[00119] Certas abreviações e acrônimos são usados na descrição dos detalhes experimentais. Embora a maioria desses sejam compreendidos por um versado na técnica, a Tabela 1 contém uma lista de muitas dessas abreviações e acrônimos.Tabela 1. Lista de abreviações e acrônimos
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Esquema 1
[00120] O Esquema 1 mostra uma síntese geral de intermediários começando com uma reação de iodinação (por exemplo, NIS) paragerar nucleobase S1b.
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Esquema 2
[00121] O Esquema 2 mostra uma síntese geral de intermediários começando com uma reação de fluoração (por exemplo, HBF4, Na-NO2) de uma maneira similar àquela descrita no WO2012037038A1 para fornecer o intermediário S2b. O intermediário S2b pode ser entãoiodado (por exemplo, NIS) para gerar nucleobase S2c.
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Esquema 3
[00122] O Esquema 3 mostra uma síntese geral de compostos co- meçando com reação de troca de lítio-halogênio (por exemplo, n-BuLi, [-CH2SiMe2Cl]2) com uma nucleobase apropriada S3b, seguido pelaadição à lactona S3a. Redução do grupo hidroxila 1’ pendente sob condições ácidas Lewis (por exemplo, BF^Et2O, Et3SiH) gera interme-diário S3c. O intermediário S3c pode ser primeiro protegido (por exemplo, BzCl, Pyr; NH4OH) na funcionalidade nitrogênio, e os grupos benzila podem ser então removidos sob condições de redução (por exemplo, HCO2H, Pd/C, BCl3, BBr3) para fornecer o intermediário S3d. Uma sequência envolvendo primeiro proteção de hidroxila 5’ seletiva (por exemplo, DMTrCl) então proteção de hidroxila 2’ e 3’ (por exemplo, TBSCl), seguido por remoção seletiva do grupo de proteção hidro- xila 5’ sob condições ácidas (por exemplo, TsOH) fornece o intermediário S3e. O grupo hidroxila 5’ pode então ser convertido no iodeto correspondente (por exemplo, (PhO)3PMeI), que é então exposto a condições básicas (isto é, KOtBu) para realizar uma reação de eliminação gerando intermediário S3f. Oxidação da olefina S3f (por exemplo, DMDO) seguido por tratamento com um nucleófilo adequado (por exemplo, TMSCN) sob condições ácidas Lewis (por exemplo, InBr3) e remoção dos grupos de proteção de hidroxila (por exemplo, CsF) fornece intermediário S3g. Remoção do grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH2Me) fornece os compostos finais do tipo S3h.
Figure img0013
Esquema 4
[00123] O Esquema 4 mostra uma síntese geral de compostos co-meçando com oxidação da olefina S3f (por exemplo, DMDO) seguido por tratamento com um nucleófilo apropriado (por exemplo, TMSN3) sob condições ácidas Lewis (por exemplo, InBr3) de uma maneira similar àquela descrita em J. Med. Chem. 2007, 50, 5463-5470. Remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exempl, CsF) então fornece o intermediário S4a. Remoção do grupo de proteção nitrogênio (por exemplo, NH2Me) fornece os compostos finais do tipo S4b.
Figure img0014
Esquema 5
[00124] O Esquema 5 mostra uma síntese geral de compostos co-meçando com oxidação da olefina S3f (por exemplo, DMDO) na presença do álcool apropriado HORa seguido por remoção dos grupos de proteção de hidroxila (por exemplo, CsF) para fornecer intermediárioS5a. Remoção do grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo,NH2Me) fornece os compostos finais do tipo S5b.
Figure img0015
Esquema 6
[00125] O Esquema 6 mostra uma síntese geral de compostos co- meçando com oxidação da olefina S3f (por exemplo, DMDO) seguidopor tratamento com um nucleófilo adequado (por exemplo, (HC=C)3Al) de uma maneira similar àquela descrita em Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acids 2005, 24, 343-347. Remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, CsF) então fornece intermediário S6a. Remoção do grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH2Me) fornece os compostos finais do tipo S6b. Elaboração do composto final através de condições de hidrogenação (por exemplo, H2, Pd/C ou con dições de Lindlar) pode seletivamente fornecer os compostos finais do tipo S6c e Sd6, respectivamente. Elaboração do composto final S6d através de condições de ciclopropanação (por exemplo, CH2N2) podefornecer o composto final do tipo S6e.
Figure img0016
Esquema 7
[00126] O Esquema 7 mostra uma síntese geral de compostos co-meçando com uma sequência sintética para proteger o nitrogênio (por exemplo, TMSCl, Pyr; BzCl, Pyr; NH4OH) de intermediário S7a, sinteti-zado de uma maneira similar à descrita no WO2012037038A1. Proteção seletiva do grupo hidroxila 5’ (por exemplo, DMTrCl) então gera in-termediário S7b. Proteção do grupo hidroxila 2’ (por exemplo, TBSCl) seguido por remoção do grupo hidroxila 5’ sob condições ácidas (por exemplo, TsOH) fornece intermediário S7e. Conversão do grupo hidroxi- la 5’ no aldeído sob condições oxidativas (por exemplo, EDCI-HCl, Pyr, TFA, DMSO) seguido por condensação do enolato correspondente com formaldeído e redução (por exemplo, NaBH4) fornece intermediário S7f. Proteção seletiva sequencial das porções hidroxila com grupos de proteção ortogonais (por exemplo, DMTrCl e TBSCl) seguido por remoção do grupo de proteção mais lábil sob condições ácidas (por exemplo, TsOH) então fornece o intermediário S7g. Conversão do grupo hidroxila no aldeído sob condições oxidativas (por exemplo, EDCI-HCl, Pyr, TFA, DMSO) gera intermediário S7h. Elaboração do aldeído S7h no intermediário halo-olefina S7i pode ser realizada sob condições de olefinação Wittig (por exemplo, [Ph3PCH2Br]+Br-, KOtBu). Uma reação de eliminação sob condições básicas (por exemplo, KOt- Bu) gera a alcina, e remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, TBAF) e grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compostos finais do tipo S7j.
Figure img0017
Esquema 8
[00127] O Esquema 8 mostra uma síntese geral de compostos co-meçando com formação de oxima (por exemplo, NH2OH^HCl), seguido por conversão da oxima em um grupo nitrila (por exemplo, CDl). Re-moção do grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH4OH) e grupos de proteção hidroxila (por exemplo, HF^Pyr) então fornece os compostos finais do tipo S8a.
Figure img0018
Esquema 9
[00128] O Esquema 9 mostra uma síntese geral de compostos começando com a elaboração do aldeído S7h para a olefina com condiPetição 870160018140, de 06/05/2016, pág. 58/219ções de olefinação Wittig (por exemplo, [Ph3PCH3]+Br-, KOtBu). Remo-ção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, TBAF) e grupo deproteção de nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compostosfinais do tipo S9a. Condições de redução (por exemplo, H2, Pd/C) então podem gerar os compostos finais do tipo S9b e condições de ciclopropanação (por exemplo, CH2N2) podem gerar os compostos finais dotipo S9c.
Figure img0019
[00129] O Esquema 10 mostra uma síntese geral de compostoscomeçando com uma reação Appel (por exemplo, Ph3P, CCl4) paraconverter o grupo hidroxila em um cloro. Remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, TBAF) e grupo de proteção de nitrogênio(por exemplo, NH4OH) fornece os compostos finais do tipo S10a
Figure img0020
[00130] O Esquema 11 mostra uma síntese geral de compostoscomeçando com proteção do grupo hidroxila livre de intermediário S7g com um grupo de proteção lábil (por exemplo, PMBCl, K2CO3). Remoção seletiva dos grupos de proteção sililóxi 2’ e 5’ (por exemplo, TBAF), seguido por reproteção com grupos de proteção robustos (por exemplo, BnBr, NaH) e remoção do grupo de proteção hidroxila lábil sob condições ácidas (por exemplo, AcOH) fornece intermediário S11a. Conversão do grupo hidroxila no flúor (por exemplo, DAST) seguido por remoção dos grupos de proteção de hidroxila (por exemplo, BBr3) e grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compostos finais do tipo S11b.
Figure img0021
Esquema 12
[00131] O Esquema 12 mostra uma síntese geral de compostos começando com conversão do grupo hidroxila 5’ no iodeto correspon-dente (por exemplo, (PhO)3PMeI), que é então tratado com condições básicas (isto é, KOtBu) para realizar uma reação de eliminação gerando intermediário S12a. Oxidação da olefina S12a (por exemplo, DMDO) seguido por tratamento com um nucleófilo apropriado (por exemplo, TMSN3) sob condições ácidas Lewis (por exemplo, SnCl4) de uma ma-neira similar àquela descrita em J. Med. Chem. 2007, 50, 5463-5470, e remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, CsF) e grupo de proteção nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compostos finais do tipo S12b.
Figure img0022
Esquema 13
[00132] O Esquema 13 mostra uma síntese geral de compostos começando com oxidação da olefina S12a (por exemplo, DMDO) na presença do álcool apropriado HORa e remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, CsF). Remoção do grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH2Me) fornece os compostos finais do tipo S13a.
Figure img0023
[00133] O Esquema 14 mostra uma síntese geral de compostos começando com formação de xantana (por exemplo, PhOC(S)Cl,DMAP) seguido por uma reação de desoxigenação Barton-McCombie (por exemplo, (TMS)3SiH, AIBN) para gerar intermediários S14a. Re-moção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, TBAF) e grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compos-tos finais do tipo S14b.
Figure img0024
[00134] O Esquema 15 mostra uma síntese geral de compostos começando com intermediário S15a preparado de uma maneira similar àquela descrita em Biosci. Biotech. Biochem. 1993, 57, 1433-1438. Remoção dos grupos de proteção de acetato usando condições hidro- líticas (por exemplo, K2CO3, MeOH), seguido por condições de oxidação quimiosseletivas (por exemplo, NIS, Bu4NI) e proteção do grupo hidroxila 2’ (por exemplo, BnBr, Ag2O) gera intermediário S15b. Troca de lítio-halogênio (por exemplo, n-BuLi, [-CH2SiMe2Cl]2) com uma nu- cleobase apropriada S3b e adição à lactona S15b, seguido por redução do grupo hidroxila 1’ sob condições ácidas Lewis (por exemplo, BF^Et2O, Et3SiH) e desproteção (por exemplo, H2, Pd negro), fornece os compostos finais do tipo S15c. Esquema 16
Figure img0025
[00135] O Esquema 16 mostra uma síntese geral de compostos começando com conversão do grupo hidroxila 5’ no aldeído sob condi-ções oxidativas (por exemplo, EDCI-HCl, Pyr, TFA, DMSO) seguido por condensação do enolato correspondente com formaldeído e redução (por exemplo, NaBH4) para fornecer intermediário S16a. Proteção seletiva sequencial das porções hidroxila com grupos de proteção ortogonais (por exemplo, DMTrCl e TBSCl) seguido por remoção do grupo de proteção mais lábil sob condições ácidas (por exemplo, TsOH) então fornece intermediário S16b. Uma reação Appel (por exemplo, Ph3P, CCl4) então pode converter o grupo hidroxila em um cloro, e remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, TBAF) e grupo de proteção nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compostos finais do tipo S16c.
Figure img0026
[00136] O Esquema 17 mostra uma síntese geral começando com proteção do grupo hidroxila livre de intermediário S16b com um grupo de proteção lábil (por exemplo, PMBCl, K2CO3). Remoção seletiva dos grupos de proteção sililóxi 2’, 3’ e 5’ (por exem- plo, TBAF), seguido por reproteção dos grupos de proteção robustos (por exemplo, BnBr, NaH) e remoção do grupo de proteção hidroxila lábil sob condições ácidas (por exemplo, AcOH) fornece intermediário S17a. Conversão do grupo hidroxila no flúor (por exemplo, DAST) seguido por remoção dos grupos de proteção hidroxila (por exemplo, BBr3) e grupo de proteção de nitrogênio (por exemplo, NH4OH) fornece os compostos finais do tipo S17b.
Figure img0027
Esquema 18
[00137] O Esquema 18 mostra uma síntese geral de compostos através de reações de halogenação eletrofílica apropriadas de intermediário S18a para fornecer os compostos finais do tipo S18b (por exemplo, NCS), S18c (por exemplo, NIS) e S18d (por exemplo, Select-fluor).
Figure img0028
[00138] O Esquema 19 mostra uma síntese geral de compostos começando com uma reação de acoplamento cruzado (por exemplo, Zn(CN)2, Pd(PtBu)3) para fornecer os compostos finais do tipo S19a. O composto S19a pode ser então elaborado através de uma reação de hidrólise da nitrila (por exemplo, H2O2,compostos do tipo S19b.
Figure img0029
[00139] O Esquema 20 mostra uma síntese geral de compostos começando com uma reação Sonogashira (por exemplo, CuI,PdCl2(PPh3)2) para fornecer os compostos finais do tipo S20a.
Figure img0030
Esquema 21
[00140] O Esquema 21 mostra uma síntese geral de compostos começando com uma reação de acoplamento cruzado (por exemplo,Pd(dppf)Cl2, Cs2CO3) para fornecer os compostos finais do tipo S21a.
Figure img0031
Esquema 22
[00141] O Esquema 22 mostra uma síntese geral de compostos en-volvendo síntese de análogos fosforilados do tipo S22b.
Figure img0032
Esquema 23
[00142] O Esquema 23 mostra uma síntese geral de compostos en-volvendo síntese de análogos fosforilados do tipo S23b.
Figure img0033
Esquema 24
[00143] O Esquema 24 mostra uma síntese geral de compostos en-volvendo síntese de análogos fosforilados do tipo S24b.Experimentais
Figure img0034
Intermediário 1b
[00144] A uma solução de intermediário 1a (50 mg, 373 mmol) emDMF (1 mL) foi carregada N-iodossuccinimida (84 mg, 373 mmol) como um sólido em RT. Após 1,5 h, a mistura de reação foi diluída com solução de NaOH 1M (10 mL) e a pasta fluida resultante foi agitada em RT. Após 1 h, os sólidos foram coletados através de filtragem a vácuo e secos sob pressão reduzida para fornecer intermediário 1b.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,89 (s, 1H), 7,78 (s amplo, 1H), 6,98 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,30 (s amplo, 1H).LC/MS: tR = 1,21 min, MS m/z = 261,02 [M+1]; Sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min- 3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% 2μl/min.HPLC: tr = 1,536 min; Sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0035
Intermediário 1d - (2S,3R,4R,5R)-2-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] triazin-7-il)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloximetil)tetra-hidrofuran-2-ol.
[00145] n-Butillítio (2,5M em hexanos, 34,4 mL, 86,0 mmol) foi adicionado rapidamente a uma suspensão de 7-iodopirrolo[pirrolo[1,2-f] [1,2,4]triazin-4-amina 1b (6,84 g, 26,3 mmol) e 1,2-bis(clorodimetilsilil) etano (5,66 g, 26,3 mmol) em THF (200 mL) a -78°C sob uma atmosfera de argônio. Durante o curso da adição a temperatura interna da mistura de reação aumentou para -40,5°C e a mistura de reação se tornou uma solução marrom claro. Depois de 15 minutos, uma solução de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloximetil)di-hidrofuran-2(3H)-ona (1c, comprada da Carbosynth, 10 g, 23,9 mmol) em tetra-hidrofurano (40 mL) pré-esfriada para -78°C foi adicionada rapi damente através de cânula. Após 1 h, a mistura de reação foi extinta com ácido acético (15 mL) e a mistura resultante foi deixada aquecer para RT. A mistura resultante foi diluída com acetato de etila (800 mL) e foi lavada com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (500 mL) e salmoura (500 mL). A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna SiO2 (Combiflash HP Gold Column SiO2 220 g, acetato de etila/hexanos 0-100%) para intermediário 1d.LC/MS: tR = 1,50 min, MS m/z = 553,34 [M+1]; Sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min- 2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2%.HPLC: tr = 3,442 min; Sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98%a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila, Rf = 0,5 (UV)
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Intermediário 1e - 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloximetil) tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina.
[00146] A uma solução de intermediário 1d (4,74 g, 8,58 mmol) e trietilsilano (3,56 mL, 22,3 mmol) em DCM (43 mL) foi adicionado dietil eterato de trifluoreto de boro (1,59 ml, 12,9 mmol) lentamente através de seringa a 0°C sob uma atmosfera de argônio. Depo is de 2 h, a mistura de reação foi lentamente diluída com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (100 mL) e a mistura resultante foi extraída com acetato de etila (2 x 150 mL), foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna SiO2 (Combiflash HP Gold Column SiO2 24 g, acetato de etila/hexanos 0-100%) para fornecer intermediário 1e.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,88 (s, 1H), 7,37 - 7,22 (m, 15H), 6,73 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,66 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,71 (s, 2H), 4,60 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,45 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,39 (dt, J = 7,1, 3,6 Hz, 1H), 4,25 (t, J = 4,6 Hz, 1H), 4,14 - 4,10 (m, 1H), 3,78 (dd, J = 10,7, 3,4 Hz, 1H), 3,65 (dd, J = 10,7, 4,0 Hz, 1H).LC/MS: tR = 2,01 min, MS m/z = 537,41 [M+1]; Sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2100%, 1,5 min-2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2%a 2μl/min.HPLC: tR = 3,596 min; Sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solvenets: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98%a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila, Rf = 0,3 (UV)
Figure img0037
Intermediário 1f - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloxi- metil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00147] A uma solução de intermediário 1e (3,94 g, 7,34 mmol) em piridina (36,7 mL) foi adicionado cloreto de benzoíla (1,69 mL, 14,68 mmol) lentamente em RT sob uma atmosfera de argônio. Após 1 h, mais cloreto de benzoíla (1,69 ml, 14,68 mmol) foi adicionado lentamente. Após 19 h, água (20 mL) foi adicionada lentamente e a mistura de reação se tornou levemente nebulosa. Hidróxido de amônio (~10 mL) foi então lentamente adicionado até que a mistura de reação ficasse básica em pH=10. Depois de 1h, água (150 mL) foi adicionada em gotas através de funil de adição e sólidos brancos começaram a precipitar lentamente a partir da mistura de reação durante o curso da adição. A mistura resultante foi agitada por 24 h e os sólidos brancos foram coletados através de filtragem a vácuo e foram secos azeotropi- camente a partir de tolueno para fornecer intermediário 1f.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,23 (s amplo, 1H), 7,62 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,38 - 7,21 (m, 18H), 7,17 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,69 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 4,71 (s, 2H), 4,63 - 4,44 (m, 4H), 4,43 - 4,39 (m, 1H), 4,22 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,15 - 4,10 (m, 1H), 3,79 (dd, J = 10,8, 3,2 Hz, 1H), 3,65 (dd, J = 10,7, 3,7 Hz, 1H).LC/MS: tR = 1,91 min, MS m/z = 641,18 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min- 2,5 min ACN 2% a 2μl/min.TLC: eluente: acetato de etila 50% em hexanos, Rf= 0,6 (UV)
Figure img0038
if 1gIntermediário 1g - N-(7-((2S,3R,4S,5R)-3,4-di-hidroxi-5-(hidroximetil) tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00148] Etanol (68,5 mL) e ácido fórmico (51,7 mL, 1,37 mol) foram adicionados sequencialmente a uma mistura de intermediário 1f (4,39 g, 6,85 mmol) e paládio sobre carbono (10% em peso, 2,2 g) em RT sob uma atmosfera de argônio. Após 3 d, a mistura de reação foi filtrada em uma almofada de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi azeotropado com tolueno (3 x 20 mL) para fornecer intermediário 1g, que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,15 (s, 1H), 7,67 - 7,40 (m, 5H), 7,23 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,44 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,17 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,03 (q, J = 4,3 Hz, 1H), 3,81 (dd, J = 12,1, 3,5 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 12,0, 4,5 Hz, 1H).LC/MS: tR = 1,04 min, MS m/z = 371,15 [M+1]; sistema LC:Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min- 2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2% a 2μl/min;HPLC: tR = 2,055 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0039
Intermediário 1h - N-(7-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil) me- toxi)metil)-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] triazin-4-il)benzamida.
[00149] Cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (2,23 g, 6,59 mmol) foi adicionado como um sólido em uma porção a uma solução de intermediário 1g (2,44 g, 6,59 mmol) em piridina (32,5 mL) em RT. Após 5,5 h, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (300 mL) e a mistura resultante foi lavada com salmoura (3 x 200 mL). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Combiflash HP Gold Column SiO2 80 g, acetato de etila/hexanos 0-100%) para fornecer intermediário 1h.LC/MS: tR = 1,68 min, MS m/z = 673,22 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 m;Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min- 2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 4,270 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 50% em hexanos, Rf = 0,15 (UV)
Figure img0040
Intermediário 1i - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)meto- xi)metil)-3,4-bis( terc- butildimetilsililoxi)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo [1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00150] Cloreto de terc-butildimetilsilila (2,47 g, 16,4 mmol) foi adicionado a uma solução de intermediário 1h (1,84 g, 2,74 mmol) e imi- dazol (2,23 g, 32,8 mmol) em N,N-dimetilformamida (28,2 mL) em RT. Após 17 h, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (500 mL) foi adicionada lentamente à mistura de reação. A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (500 ml) e a camada orgânica foi lavada com salmoura (2 x 400 mL), foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Combiflash HP Gold Column SiO2 80 g, acetato de etila/hexanos 0-100%) para fornecer o intermediário 1i.LC/MS: tR = 3,43 min, MS m/z = 901,37 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min- 3,55 min ACN 100%, 3,55 min-4,2 min 100%-ACN 2% a 2μl/minHPLC: tR = 5,724 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 50% em hexanos, Rf = 0,75 (UV)
Figure img0041
Intermediário 1j - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis( terc- butildimetilsililoxi)-5- (hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il) benzamida.
[00151] Uma solução de monoidrato do ácido p-toluenossulfônico (509 mg, 2,67 mmol) em metanol (3,7 mL) foi lentamente adicionada a uma solução de intermediário 1i (2,41 g, 2,67 mmol) em diclorometano (22,3 mL) a 0°C. Após 1,5 h, a mistura de reação fo i diluída com solução de bicarbonato aquosa saturada (100 mL) e a mistura resultante foi extraída com diclorometano (2 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro e foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Combiflash HP Gold Column SiO2 120 g, acetato de etila/hexanos 0-100%) para fornecer intermediário 1j.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,72 (s amplo, 1H), 8,16 (t amplo, J = 7,1 Hz, 2H), 8,07 (t amplo, J = 7,7 Hz, 3H), 7,49 - 7,43 (m, 1H), 5,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 8,1, 4,7 Hz, 1H), 4,81 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,70 - 4,63 (m, 1H), 4,44 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,30 (s, 9H), 0,65 (s, 3H), 0,64 (s, 3H), 0,41 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).LC/MS: tR = 2,66 min, MS m/z = 599,19 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min- 3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 5,622 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2- 98%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 50% em hexanos, Rf = 0,55
Figure img0042
Intermediário 1k - N-(7-((2S,3S,4R,5S)-3,4-bis( terc- butildimetilsililoxi)- 5-(iodometil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il) benzamida.
[00152] O intermediário 1j (1,19 g, 1,99 mmol) foi adicionado a uma solução de iodeto de metiltrifenoxifosfônio (0,99 g, 2,19 mmol) em DMF (9,9 mL) em RT. Após 3 h, uma porção adicional de iodeto de metiltrifenoxifosfônio (0,99 g, 2,19 mmol) foi adicionada. Após 1 h, A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (200 mL) e foi lavada com salmoura (3 x 100 mL). A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Combiflash HP Gold Column SiO2 80 g, acetato de etila 0-100%/hexanos) para fornecer intermediário 1k.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,21 (s amplo, 1H), 7,61 (t amplo, J = 7,2 Hz, 1H), 7,53 (t amplo, J = 7,5 Hz, 3H), 7,05 (s amplo, 1H), 5,44 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,52 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 4,08 - 3,99 (m, 2H), 3,55 (dd, J = 10,7, 5,2 Hz, 1H), 3,38 (dd, J = 10,7, 5,0 Hz, 1H), 0,93 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 0,16 (s, 3H), 0,11 (s, 3H), -0,01 (s, 3H), -0,11 (s, 1H).LC/MS: tR = 3,06 min, MS m/z = 709,16 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mm Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min- 3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 5,837 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 20% em hexanos, Rf = 0,45 (UV)
Figure img0043
Intermediário 1l - N-(7-((2S,3S,4S)-3,4-bis( terc- butildimetilsililoxi)-5-me- tilenotetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benza- mida.
[00153] t-Butóxido de potássio (700 mg, 6,24 mmol) foi adicionado a uma solução de intermediário 1k (1,77 g, 2,5 mmol) em piridina (25 mL) em RT. Após 2 h, a mistura de reação foi diluída com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (25 mL) e salmoura (200 mL). A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (300 mL). A camada orgânica foi então lavada com salmoura (200 mL), foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Com- biflash HP Gold Column SiO2 40 g, acetato de etila/hexanos 0-100%) para fornecer intermediário 1l.LC/MS: tR = 2,87 min, MS m/z = 581,37 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 5,750 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 50% em hexanos, Rf = 0,20 (UV)
Figure img0044
Intermediário 1m - N-(7-((2S,3S,4S)-3,4-bis(terc-butildimetilsililoxi)-5- hidroxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] triazin-4-il)benzamida.
[00154] DMDO (solução 0,07M em acetona, 13,8 mL, 0,964 mmol) foi adicionado a um solução de intermediário 1l (560 mg, 0,964 mmol) em acetona (4,82 mL) a 0°C. Após 10 min, a mistura de reação que foi concentrada sob pressão reduzida foi seca azeotropicamente com to- lueno (2 x 10 mL) para fornecer 1m que foi usado imediatamente na etapa seguinte sem purificação adicional.LC/MS: tR = 2,57 min, MS m/z = 615,14 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mm Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 minACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.
Figure img0045
Intermediário 1n - N-(7-((2S,3S,4S)-3,4-bis(terc-butildimetilsililoxi)-5- ciano-5-((trimetilsililoxi)metil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f] [1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00155] A uma solução de intermediário bruto 1m (~592 mg, ~0,964 mmol) e cianida de trimetilsilila (640 μl, 4,80 mmol) em diclorometano (19,2 mL) foi adicionado brometo de índio (III) (681 mg, 1,92 mmol) a 0°C sob atmosfera de argônio. Após 4,5 h, a mistura de reação foi extinta com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (6 mL) e foi deixada aquecer para temperatura ambiente. A mistura resultante foi dividida entre diclorometano (20 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (20 mL). As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro e foram con-centradas sob pressão reduzida para fornecer intermediário 1n (mistura diastereomérica 1:1) (710 mg) que foi usada diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.LC/MS: primeiro isomer de eluição tr = 2,91 min, MS m/z = 696,28 [M+1], segundo isômero de eluição tR = 3,02 min, MS m/z = 696,19 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mm Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min- 3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2 μl/min.
Figure img0046
Intermediário 1o - N-(7-((2S,3R,4S)-5-ciano-3,4-di-hidroxi-5-(hidroximetil) tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00156] A uma solução de intermediário bruto 1n (668,23 mg, 0,96 mmol) em DMF (9,6 mL) foi adicionado fluoreto de césio (729 mg, 4,8 mmol) em RT. Depois de 5 h, a mistura de reação foi diluída com salmoura (100 mL) e a mistura resultante foi extraída com diclorometano (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro e foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer intermediário 1o (mistura diastereomérica 1:1) que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.LC/MS: primeiro isômero de eluição tR = 1,31 min, MS m/z = 396,19 [M+1], segundo isômero de eluição tR = 1,32 min, MS m/z = 396,19 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min- 3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2 μl/min.
Figure img0047
Exemplo 1 - (2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-3,4-di-hidroxi-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila.
[00157] Metilamina (40% em água, 0,3 mL) foi adicionada a uma solução de intermediário 1o bruto em metanol (1 mL) em RT. Após 2,5 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e foi diretamente purificada através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Luna 5u C18 100Â 100 x 30 mm, gradiente acetonitrila/água 5-15%, 25 min). As frações contendo o produto desejado e o anômero 4’ foram combinados e foram concentrados sob pressão reduzida. Os anôme- ros 4’ foram então separados através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Luna 5u C18 100Â 100 x 30 mm, gradiente acetonitri- la/água 5-15%, 25 min). As frações contendo o produto desejado foram combinadas e foram liofilizadas para fornecer Exemplo 1.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,79 (s, 1H), 6,85 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,45 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,59 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 12,0 Hz, 1H).LC/MS: tR = 0,29 min, MS m/z = 292,16 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB- C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min- 2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2% a 2μl/min. HPLC: tR = 0,377 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.; HPLC: tR = 6,643 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Luna 5μ C18(2) 110A, 250 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila, Àgua; Gradiente: ACN 5-15% durante 10 min a 2 mL/min
Figure img0048
Intermediário 2b - N-(7-((2S,3R,4R,5R)-3-fluor-4-hidroxi-5-(hidroximetil) tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00158] A um frasco purgado com N2 foi adicionado intermediário 2a, (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol (preparado de acordo com o WO2012037038A1, 1,20 g, 4,01 mmol) (seco através de co-evapora- ção com piridina 3 vezes), que foi então dissolvido em piridina (18 mL). Clorotrimetilsilano (1,54 mL, 13,13 mmol) foi adicionado em uma porção a 0°C e a mistura resultante foi agitada sob um a atmosfera de N2 por 1 h. Cloreto de benzoíla (675 μL, 5,82 mmol) foi adicionado em gotas e a mistura de reação foi agitada por 1 h. Uma porção adicional de cloreto de benzoíla (100 μL) foi adicionada para consumir o material de partida restante. Uma mistura de produtos mono- e bis-Bz protegidos foi observada. A reação foi extinta com H2O (5 mL) e a mistura resultante foi agitada por 5 min. Então NH4OH(aq) concentrado (8 mL) foi adicionado em uma porção e deixado agitar por 15 minutos ponto no qual o produto bis-Bz foi convertido no produto desejado. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e então o resíduo foi coevapo- rado com CH3OH. O intermediário 2b foi isolado após purificação atra- vés de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 50%-100% em hexanos.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 - 7,91 (m, 2H), 7,88 - 7,79 (m, 1H), 7,61 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,56 - 7,36 (m, 2H), 7,37 - 7,24 (m, 1H), 7,10 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 5,53 (d, J = 23,4 Hz, 1H), 5,45 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 5,16 - 4,91 (m, 1H), 4,86 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,21 - 4,04 (m, 1H), 3,82 (dd, J = 8,0, 3,9 Hz, 1H), 3,71 (ddd, J = 12,3, 5,6, 2,6 Hz, 1H), 3,52 (ddd, J = 12,2, 5,7, 4,5 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -196,33 (dt, J = 55,1, 22,5 Hz).LC/MS: tR = 0,77 min, MS m/z = 373,14 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0049
Intermediário 2c - N-(7-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)me- toxi)metil)-3-fluor-4-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] triazin-4-il)benzamida.
[00159] Intermediário 2b (1,3 g, 3,49 mmol) foi seco através de co- evaporação com piridina. O material seco foi então dissolvido em piri- dina (15 mL) sob uma atmosfera de N2. Cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (1,71 g, 5,0 mmol) foi adicionado em uma porção em temperatura am-biente e deixado agitar por 2 h. Etanol (2 mL) foi adicionado e a solu ção resultante foi agitada por 5 min. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 0%-100% em he- xanos, para fornecer intermediário 2c.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 - 8,02 (m, 2H), 7,61 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,36 (ddt, J = 6,0, 4,7, 2,0 Hz, 2H), 7,31 - 7,04 (m, 7H), 6,90 - 6,73 (m, 4H), 5,62 (d, J = 24,4 Hz, 1H), 5,49 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,27 - 5,01 (m, 1H), 4,32 - 4,13 (m, 1H), 4,06 - 3,95 (m, 1H), 3,69 (s, 4H), 3,28 (s, 3H), 3,12 (dd, J = 10,4, 5,2 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -195,58 (dt, J = 52,1, 24,7 Hz).LC/MS: tR = 1,37 min, MS m/z = 675,29 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min 2% ACN.
Figure img0050
Intermediário 2d - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-3- fluor-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] tria- zin-4-il)benzamida.
[00160] A uma solução de intermediário 2c (1,47 g, 2,18 mmol) em DMF (8 mL), preparada sob uma atmosfera de N2, foi adicionado imi- dazol (251 mg, 3,70 mmol), seguido por terc-butilclorodimetilsilano (492 mg, 3,27 mmol). A solução foi deixada agitar em temperatura ambiente por 16 h. A solução foi diluída com H2O (5 mL) e então os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre EtOAc e H2O. As camadas foram separadas e a fase orgânica foi então lavada com salmoura. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, que foi removido através de filtragem, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O material bruto foi usado como é na etapa seguinte.
[00161] O material bruto foi dissolvido em CHCl3 (15 mL) e esfriado para 0°C. Hidrato do ácido p-toluenossulfônico (414 mg, 2,18 mmol) dissolvido em CH3OH (6 mL) foi adicionado em gotas à mistura e foi deixado agitar por 15 min. A reação foi extinta com NaHCO3(aq) saturado. Os orgânicos foram lavados com salmoura e secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 0%-5% em hexanos, para fornecer intermediário 2d.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 - 7,98 (m, 2H), 7,51 (dt, J = 39,9, 7,5 Hz, 3H), 7,12 - 6,86 (m, 2H), 5,48 (d, J = 21,9 Hz, 1H), 5,07 (dt, J = 54,6, 3,8 Hz, 1H), 4,86 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,28 (ddd, J = 17,8, 7,1,4,4 Hz, 1H), 3,83 - 3,72 (m, 1H), 3,63 (ddd, J = 12,1, 5,2, 3,0 Hz, 1H), 3,43 (ddd, J = 12,1, 6,0, 4,2 Hz, 1H), 0,80 (s, 9H), 0,01 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -198,05 (dt, J = 54,2, 19,8 Hz).LC/MS: tR = 1,35 min, MS m/z = 487,24 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 minACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.1. DMSO, Tol, EDCI, Pyr, TFA
Figure img0051
Intermediário 2e - N-(7-((2S,3S,4R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-fluor- 5,5-bis(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]tria- zin-4-il)benzamida.
[00162] À solução de intermediário 2d (856 mg, 1,75 mmol) em to- lueno (4 mL) e DMSO (6 mL), preparada sob uma atmosfera de N2, foi adicionado cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDCl) (504 mg, 2,63 mmol). A esta mistura foram adicionados piridina (150 μl) e TFA (70 μL) e a mistura foi agitada em RT por 15 min. Mais EDCl (100 mg) e piridina (100 μL) foram adicionados e a mistura foi agitada por mais 45 min. A reação foi extinta com H2O (10 mL) e CH2Cl2 (10 mL). Os orgânicos foram lavados com salmoura e secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o aldeído bruto, que foi usado como é para a etapa seguinte.
[00163] O aldeído bruto foi dissolvido em dioxana (5 mL) e formal- deído(aq) 37% (925 μL) foi adicionado seguido por NaOH 2N (925 μL). Após agitar em temperatura ambiente por 3 h, a reação foi extinta com AcOH, diluída com EtOAc e lavada com H2O. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o produto aldol bruto, que foi levado adiante como é para a etapa seguinte.
[00164] O produto aldol bruto foi dissolvido em EtOH (9 mL) sob uma atmosfera de N2 e esfriado para 0°C. NaBH 4 (80 mg, 2,1 mmol) foi adicionado em uma porção e a reação foi agitada por 10 min. A reação foi extinta com AcOH, diluída com CH2Cl2 e lavada com uma solução 1:1 de água e NaHCO3(aq) saturado. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 0%-100% em hexanos, para fornecer intermediário 2.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,20 - 7,99 (m, 2H), 7,51 (dt, J = 39,5, 7,5 Hz, 3H), 7,15 - 6,93 (m, 2H), 5,50 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 5,24 (dt, J = 54,2, 5,4 Hz, 1H), 4,78 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 10,7, 4,8 Hz, 1H), 4,34 (dd, J = 6,7, 4,9 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 11,9, 4,9 Hz, 1H), 3,55 - 3,35 (m, 3H), 0,82 (s, 9H), 0,07 (s, 3H), -0,09 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -200,37 (d, J = 51,1 Hz).LC/MS: tR = 1,25 min, MS m/z = 517,21 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0052
Intermediário 2f - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil) metoxi) metil)-4-( terc- butildimetilsililoxi)-5-(( terc- butildimetilsililoxi)metil)-3-fluor- tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00165] Intermediário 2e (370 mg, 0,717 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (10 mL) e TEA (200 μL) sob uma atmosfera de N2, e foi então esfriado para 0°C. Cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (0,364 g, 1,07 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura de reação foi deixada agitar por 30 min. CH3OH (2 mL) foi adicionado e a solução foi diluída com CH2Cl2 e NaHCO3(aq) saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em Na2SO4, filtrada e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 5%-100% me he- xanos, para fornecer o produto bruto como uma mistura de produtos bis-DMTr e 4’β. Esta mistura foi levada adiante sem purificação adicional.
[00166] Ao produto bruto (574 mg, mistura) em DMF (3 mL), sob uma atmosfera de N2, foi adicionado imidazol (143 mg, 2,10 mmol), seguido por terc-butilclorodimetilsilano (158 mg, 1,05 mmol). A solução foi deixada agitar em temperatura ambiente por 2 h. A solução foi diluída com CH3OH (1 mL) e EtOAc. Os orgânicos foram lavados com H2O e então com salmoura. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 0%-50% em hexanos, para fornecer intermediário 2f que continha um pouco de material bis-DMTr.LC/MS: tR = 2,25 min, MS m/z = 933,52 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0053
Intermediário 2g - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-5- ((terc- butildimetilsililoxi)metil)-3-fluor-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2- il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00167] O intermediário 2f foi dissolvido em CHCl3 (5 mL) e foi esfriado para 0°C. Hidrato do ácido p-toluenossulfônico (90 mg, 0,474 mmol), dissolvido em CH3OH (4 mL), foi adicionado em gotas à mistura e a mistura de reação foi deixada agitar por 5 min. A mistura de reação foi extinta com NaHCO3(aq) saturado. Os orgânicos foram lavados com salmoura, secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatogra- fia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 0%-40% em hexanos, para fornecer intermediário 2g.1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,09 - 7,88 (m, 2H), 7,48 (dt, J = 35,4, 7,4 Hz, 3H), 7,30 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,69 (dd, J = 18,8, 4,2 Hz, 1H), 5,05 (dt, J = 54,6, 4,7 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 14,9, 5,1 Hz, 1H), 3,91 - 3,64 (m, 3H), 0,92 - 0,70 (m, 18H), 0,13 - 0,04 (m, 6H), 0,01 (m, 6H).19F NMR (376 MHz, CDCI3) δ -196 (m)LC/MS: tR = 2,61 min, MS m/z = 631,43 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrile com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%. 2. brometo de bromo- lhenylmetil trifenil fosfônio, lide,
Figure img0054
Intermediário 2h - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-5-((E)-2-bromovinil)-4-( terc- bu- tildimetilsililoxi)-5-(( terc- butildimetilsililoxi)metil)-3-fluortetra-hidrofuran- 2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00168] À solução de intermediário 2g (228 mg, 0,361 mmol) em to- lueno (0,75 mL) e DMSO (0,15 mL) foi adicionado cloridrato de 1-etil-3- (3-dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDCl) (208 mg, 1,08 mmol) sob uma atmosfera de N2. A esta mistura foram adicionados piridina (30 μL) e TFA (15 μL) e a mistura foi agitada em RT por 30 min. A reação foi diluída com EtOAc e lavada com H2O seguido por salmoura. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o aldeído bruto. Este material foi usado como é na etapa seguinte.
[00169] A uma suspensão de brometo de bromometiltrifenilfosfônio (314 mg, 0,72 mmol) em THF (4 mL) a -40°C foi adici onado KOtBu (1,0M em THF, 1,08 mL, 1,08 mmol) e a mistura de reação foi agitada por 2 h sob uma atmosfera de N2. O aldeído bruto foi dissolvido em THF (4 mL) e adicionado em gotas. A mistura de reação foi removida do banho frio e deixada aquecer para 10°C durante 1 h. A mistura de reação foi novamente esfriada para -40°C e a mistura de reação foi extinta com NH4Cl(aq) saturado. As camadas foram separadas e os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatogra- fia de sílica gel, usando um eluente de EtOAc 0-50% em hexanos, para fornecer intermediário 2h.1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,08 - 7,85 (m, 2H), 7,62 - 7,36 (m, 2H), 7,34 - 7,01 (m, 3H), 6,92 (s, 1H), 6,60 - 6,45 (m, 1H), 6,35 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,61 (d, J = 25,1 Hz, 1H), 4,82 (dd, J = 56,3, 4,9 Hz, 1H), 4,69 - 4,46 (m, 1H), 3,97 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 3,53 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 0,84 (d, J = 3,9 Hz, 18H), 0,13 - -0,10 (m, 12H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -190,60 (m).LC/MS: tR = 2,10 min, MS m/z = 705,54/707,29 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 minACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0055
Intermediário 2i - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-( terc- butildimetilsililoxi)-5- ((terc- butildimetilsililoxi)metil)-5-etinil-3-fluortetra-hidrofuran-2-il)pirrolo [pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00170] O intermediário 2h (204 mg, 0,289 mmol) foi dissolvido em THF (8 mL) sob uma atmosfera de N2 e esfriado para -40°C. KotBu (1,0M em THF, 1,08 mL, 1,08 mmol) foi lentamente adicionado. A reação foi deixada agitar por 20 min uma vez que foi esfriada com NH4Cl(aq) saturado. A solução foi diluída com EtOAc e lavada com salmoura. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 0%-5% em hexanos, para fornecer intermediário 2i.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,12 - 7,88 (m, 2H), 7,51 (dt, J = 36,5, 7,5 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,79 (d, J = 22,1 Hz, 1H), 5,02 (ddd, J = 55,3, 5,1, 3,2 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 18,1, 5,1 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,83 - 3,62 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 0,90 (dd, J = 25,3, 1,6 Hz, 18H), 0,20 - -0,08 (m, 12H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -193,10 (s amplo).LC/MS: tR = 1,88 min, MS m/z = 625,24 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0056
Intermediário 2j - N-(7-((2S,3R,4R,5R)-5-etinil-3-fluor-4-hidroxi-5-(hidro- ximetil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benza- mida.
[00171] A uma solução de intermediário 2i (152 mg, 0,243 mmol) em THF (3,5 mL) sob uma atmosfera de N2 foi adicionado TBAF (1,0M em THF, 700 μL, 0,700 mmol) em temperatura ambiente e a mistura foi deixada agitar por 30 min. Solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de EtOAc 40%-100% em hexa- nos, para fornecer intermediário 2j.LC/MS: tR = 0,88 min, MS m/z = 397,16 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mm Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0057
Exemplo 2 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-2-etinil-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol.
[00172] A uma solução de intermediário 2j (71 mg, 0,179 mmol) em CH3OH (2 mL) foi adicionado NH4OH(aq) concentrado e a solução resul-tante foi agitada em temperatura ambiente por 16 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica gel, usando um aumento de eluente de CH3OH 0%-20% em CH2Cl2, seguido por HPLC de fase reversa, usando um aumento de eluente de ACN 0%-20% em H2O, para fornecer o exemplo 2.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,77 (s, 1H), 6,90 - 6,70 (m, 2H), 5,62 (dd, J = 25,5, 2,6 Hz, 1H), 5,18 (ddd, J = 56,0, 5,4, 2,7 Hz, 1H), 4,57 (dd, J = 20,5, 5,4 Hz, 1H), 3,93 - 3,59 (m, 2H), 3,02 (d, J = 0,7 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -193,76 (ddd, J = 56,0, 25,5, 20,4 Hz).LC/MS: tR = 0,45 min, MS m/z = 293,13 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1% Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 minACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.HPLC: tR = 3,112 min; sistema HPLC: Agilent 1100 series.Coluna: Phenomenex Kinetex C18 2,6 μm 100A, 4,6 x 100mmSolventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%Gradiente: 0 min-8,0 min 2-ACN 98% a 1,5 mL/min.
Figure img0058
Intermediário 3a - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-5- ((terc- butildimetilsililoxi)metil)-3-fluor-5-formiltetra-hidrofuran-2-il)pirrolo [pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00173] A uma solução de intermediário 2g (1,13 g, 1,79 mmol) em DMSO (1 mL) e tolueno (10 mL), preparada sob uma atmosfera de N2, foram adicionados EDCI.HCl (1,02 g, 5,36 mmol) e piridina (149 μL, 1,92 mmol). TFA (74 μL, 0,97 mmol) foi adicionado em gotas. Após 1 h a reação foi checada através de LC/MS. Um pico único foi observado, com um tempo de retenção similar ao do material de partida, mas com um pico M+1 igual àquele esperado para o produto. Outros 50 μL de piridina foram adicionados e a reação foi agitada por mais 15 min. Nenhuma mudança através de LC/MS. A reação foi diluída com EtOAc e extinta com uma mistura 1:1 de NaHCO3(aq) saturado. A mistura foi dividida entre EtOAc e mais H2O. A camada orgânica foi separada e lavada com H2O, salmoura e então seca em Na2SO4. O agente de secagem foi removido através de filtragem a vácuo e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi absorvido em CH2Cl2, concentrado e o material resultante foi posto sob vácuo alto por 1 h. O produto, intermediário 3a, foi usado como é na reação seguinte.LC/MS: tR = 1,90 min, MS m/z = 629,46 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 minACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0059
Intermediário 3b - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-5- ((terc- butildimetilsililoxi)metil)-3-fluor-5-((E)-(hidroxi-imino)metil)tetra- hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00174] A uma solução de intermediário 3a (material bruto da etapa anterior, suposto 1,79 mmol) em piridina (11 mL), preparada sob uma atmosfera de N2, foi adicionado HONH2.HCl em uma porção em tem-peratura ambiente. A reação foi checada através de LC/MS 5 minutos depois; material de partida foi consumido. A reação foi checada nova-mente 25 minutos depois. Não houve nenhuma mudança do primeiro ponto de tempo. A reação foi concentrada e o resíduo foi dividido entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em Na2SO4 e filtrada. O filtrado foi concentrado, absorvido emCH2Cl2, concentrado novamente e o resíduo foi posto sob vácuo alto.O produto intermediário 3b foi usado como é na reação seguinte.LC/MS: tR = 1,83 min, MS m/z = 644,55 [M+1]; sistema LC:Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1% Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 minACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0060
Intermediário 3c - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-5- ((terc- butildimetilsililoxi)metil)-5-ciano-3-fluortetra-hidrofuran-2-il)pirrolo [pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00175] A uma solução de intermediário 3b (material bruto da etapa anterior, suposto 1,79 mmol) em ACN (16 mL) foi adicionado CDI (436 mg, 2,69 mmol) em uma porção única. A reação foi realizada sob uma atmosfera de N2. A reação foi checada através de LC/MS após 20 mi-nutos. Picos com a massa de material de partida e produto são escas-samente resolvidos no tempo. A reação foi checada 1,5 h depois. O pico de UV correspondendo ao material de partida estava quase desfeito e a intensidade do pico de massa foi diminuída. A reação foi diluída com CH2Cl2 e extinta com uma mistura 1:1 de NaHCO3(aq) saturado e H2O. As camadas foram separadas, a aquosa foi retroextraída com CH2Cl2 e as camadas orgânicas combinadas foram extraídas com uma mistura 1:1 de salmoure e H2O, secas em Na2SO4 e filtradas. O filtrado foi concentrado e intermediário 3c foi isolado através de cromatografia de coluna de sílica gel usando o aumento de solvente que segue: EtOAc 0% em hexanos aumentando para EtOAc 20% em hexanos, pausa em EtOAc 20% em hexanos e então aumento para EtOAc 40% em hexanos.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,31 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,65 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,15 (d, 4 Hz, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,82 (d, J = 24 Hz, 1H), 5,51 (ddd, J = 52, 4,8, 2,8 Hz, 1H), 4,70 (dd, J = 18,4, 4,4 Hz, 1H), 3,94 (dd, J = 53,2, 11,2 Hz, 2H), 0,93 (s, 9H, ), 0,84 (s, 9H), 0,17 (s, 3H), 0,16 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,01 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6~) δ -194,658 (dt, J = 53, 21,4 Hz).LC/MS: tR = 1,84 min, MS m/z = 626,60 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0061
Intermediário 3d - (2R,3R,4S,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] triazin-7-il)-3-( terc- butildimetilsililoxi)-2-(( terc- butildimetilsililoxi)metil)-4- fluortetra-hidrofuran-2-carbonitrila.
[00176] A uma solução de intermediário 3c (770 mg, 1,23 mmol) em MeOH (11,2 mL), esfriada em um banho de água gelada, foi adicionado NH4OH(aq) concentrado (3,74 mL). O banho frio foi removido e a solução heterogênea resultante foi agitada de um dia para o outro. No dia seguinte a reação estava incompleta conforme determinado através de LC/MS. NH4OH(aq) concentrado adicional (4 mL) e 2-Me THF (12 mL) foram adicionados. A reação se tornou homogênea, mas após 20 minutos não havia nenhum progresso de reação adicional. A reação foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em THF (15 mL). A esta mistura foi adicionado NH4OH(aq) concentrado (5 mL) e MeOH suficiente (1,9 mL) para tornar a solução homogênea e monofásica. A reação foi agitada em temperatura ambiente por 22 h. A reação estava quase completa (cerca de 5% do material de partida permanecem). A reação foi diluída com CH2Cl2 e H2O. As camadas foram separadas e a cama- da aquosa foi diluída com NaHCO2(aq) saturado e extraída com CH2Cl2. A camada aquosa foi neutralizada com HCl 2N e então extraída com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, que foi removido através de filtragem. O filtrado foi concentrado e in-termediário 3d foi isolado do resíduo através de cromatografia de coluna de sílica gel usando o aumento de solvente que segue: EtOAc 0% em hexanos aumentando para EtOAc 50% em hexanos, pausa em EtOAc 50% em hexanos e então aumento para EtOAc 100% em he- xanos.LC/MS: tR = 1,59 min, MS m/z = 522,47 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,8 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0062
Exemplo 3 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-4-fluor-3-hidroxi-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila.
[00177] A uma solução de intermediário 3d (100 mg, 0,191 mmol) em THF (2 mL), em um tubo de polipropileno, foi adicionado HF.Piridi- na 70% (60 μL, 0,478 mmol) a 0°C, sob uma atmosfera de N2. A reação foi checada após 20 minutos; não houve nenhuma reação, então mais HF.Piridina 70% em piridina (150 μL) foi adicionada e o banho frio foi removido. Após 1 hora e 50 minutos mais HF.Piridina 70% em piri- dina (150 μL) foi adicionada. Após mais 2 horas mais HF.Piridina 70% em piridina (300 μL) foi adicionado. Após mais 2 horas e 15 minutos mais HF.Piridina 70% em piridina (1 mL) foi adicionado. A reação fica transparente e homogênea quando desta adição final de HF.Piridina 70% em piridina. A reação foi agitada de um dia para ou outro. A reação estava completa no dia seguinte. A reação foi esfriada em um banho gelado e extinta com H2O e uma quantidade pequena de NaHCO3(aq) saturado. A mistura foi concentrada e o resíduo foi absorvido em DMSO. Material insolúvel restante foi removido através de filtragem e o filtrado foi semipurificados através de HPLC. O material isolado foi dissolvido em DMF e purificado através de HPLC. O Exemplo 3 foi isolado, com 0,5% como um sal de TFA.1H NMR (400 MHz, DMF-d7) δ 7,92 (s, 1H), 6,99 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 6 Hz, 1H), 5,92 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,83 (dd, J = 25,2, 2 Hz, 1H), 5,40 (ddd, J = 54,8, 4,8, 2,4 Hz, 1H), 4,75 (dt, J = 22, 5,2 Hz, 1H), 4,02 (dd, J = 12, 6,4Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 12, 6,4 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, DMF-d7) δ -74,92 (s), -193,726 (dt, J = 54,5, 23,3 Hz).LC/MS: tR = 0,56 min, MS m/z = 294,10 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,8 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.HPLC: tR = 3,220 min; sistema HPLC: série Agilent 1100.; Coluna: Phenomenex Kinetex C18 2,6 μm 100A, 4,6 x 100 mm; Sol-ventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com 0,1% TFAGradiente: 0 min-8,0 min 2-ACN 98% a 1,5 mL/min.
Figure img0063
Intermediário 4b - (3aR,5R,6aS)-5-((R)-2,2-dimetil-1.3-dioxolan-4-il)- 2,2-dimetildi-hidrofuro[3,2-d][ 1,3]dioxol-6(3aH)-ona.
[00178] Em um frasco de fundo redondo de 4 gargalos e 10 L foi posta uma solução de intermediário 4a, (3aR,5S,6S,6aR)-5-((R)-2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-6-ol (500 g, 1,90 mol) em diclorometano/água (2,7 L / 2,3 L) em temperatura ambiente. A isto foi adicionado carbonato de sódio (290 g, 3,42 mol). Adição de carbonato de potássio (451 g, 3,24 mol) foi em seguida. Isto foi seguido pela adição de 2,2,6,6-tetrametilpiperidinoóxi (TEMPO, 15,2 g, 96,31 mmol). À mistura foi adicionado brometo de tetrabutilamônio (31 g, 95,20 mmol). Ao acima foi adicionada N- bromossuccinimida (514 g, 2,86 mol), em porções a 35°C. A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, por 2 h em temperatura ambiente. A solução resultante foi extraída com 2 x 1 L de diclorome- tano e as camadas orgânicas combinadas. A mistura resultante foi lavada com 1 x 1,5 L de água. A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. Isto resultou em intermediário 4b (bruto).
Figure img0064
Intermediário 4c - (3aR.5S.6R.6aR)-5-((R)-2.2-dimetil-1.3-dioxolan-4- il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-6-ol.
[00179] A um frasco de fundo redondo de 4 gargalos 2 L foi posta uma solução de intermediário 4b (370 g. 1.29 mol) em metanol (1300 mL). Ao acima foi adicionado boroidreto de sódio (26.4 g. 706.38 mmol). em porções em temperatura ambiente. A solução resultante foi deixada reagir. com agitação. por 2 h em temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. A reação foi então extinta através da adição de 1000 mL de solução de cloreto de amônio aquosa 5%. A solução resultante foi extraída com 3 x 500 mL de diclo- rometano e as camadas orgânicas combinadas. A solução resultante foi lavada com 2 x 300 mL de água. A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O produto bruto foi purificado através de recristalização a partir de éter de petróleo. Isto resultou no intermediário 4c.
Figure img0065
Intermediário 4d.
[00180] A um frasco de fundo redondo de 4 gargalos 5000 mL foi posta uma solução de intermediário 4c (350 g, 1,34 mol) em dicloro- metano (700 mL). À mistura foi adicionado hidróxido de sódio/água 50% (700 g). Ao acima foi adicionado 2-(bromometil)naftaleno (340 g, 1,54 mol) em várias bateladas. A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, por 4 h em temperatura ambiente. A reação foi então extinta através da adição de 1800 mL de diclorometano/água (1:1). A solução resultante foi extraída com 2 x 1 L de diclorometano e as camadas orgânicas combinadas. A mistura resultante foi lavada com 1 x 1000 mL de água. O resíduo foi dissolvido em 1000/1000 mL de éter de petróleo/água. O produto bruto foi purificado através de recristaliza- ção a partir de éter de petróleo. Isto resultou em intermediário 4d.
Figure img0066
Intermediário 4e - (R)-1-((3aR,5R,6R,6aR)-2,2-dimetil-6- (naftalen-2-ilmetoxi)tetra-hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-5-il)etano-1,2- diol.
[00181] A um frasco de fundo redondo de 4 gargalos 5 L foi posto intermediário 4d (500 g, 1,25 mol). A isto foi adicionado ácido acético (1,8 L). À mistura foi adicionada água (600 mL). A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, de um dia para o outro em temperatura ambiente. Os sólidos foram filtrados. A solução resultante foi extraída com 3 x 1 L de éter de petróleo e as camadas aquosas combinadas. A solução resultante foi diluída com 2 L de acetato de etila. A mistura resultante foi lavada com 2 x 2 L de cloreto de sódio(aq). O valor do pH da solução foi ajustado para 8 com carbonato de sódio (50%). A solução resultante foi extraída com 2 x 1 L de acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas e concentradas sob vácuo. Isto resultou em intermediário 4e.
Figure img0067
Intermediário 4f - (3aR,5S,6R,6aR)-2,2-dimetil-6-(naftalen-2-ilmetoxi) tetra-hidrofuro[3,2-d][ 1,3]dioxol-5-carbaldeído.
[00182] A um frasco de fundo redondo de 4 gargalos 10 L foi posta uma solução de intermediário 4e (300 g, 833,33 mmol) em 1,4-dioxana (2100 mL) em temperatura ambiente. Isto foi seguido pela adição de uma solução de periodato de sódio (250 g) em água (4000 mL) em temperatura ambiente em 0,5 h. A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, por 0,5 h em temperatura ambiente. Os sólidos foram filtrados. A solução resultante foi extraída com 3 x 1000 mL de acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas. A mistura resultante foi lavada com 2 x 1000 mL de cloreto de sódio(aq). A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. Isto resultou em intermediário 4f.
Figure img0068
Intermediário 4g - ((3aR,6S,6aR)-2,2-dimetil-6-(naftalen-2-ilmetoxi) te- tra-hidrofuro[3,2-d][ 1,3]dioxol-5,5-di-il)dimetanol.
[00183] Em um frasco de fundo redondo de 4 gargalos 10 L foi posta uma solução de intermediário 4f (250 g, 761,36 mmol) em água/tetra -hidrofurano (1250/1250 mL) em temperatura ambiente. Ao acima foi adicionado hidróxido de sódio(aq) 2N (1500 mL) em gotas com agitação a 0-15°C. À mistura foi adicionado formaldeído (620 mL). A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, de um dia para o outro em temperatura ambiente. A solução resultante foi extraída com 2 x 2000 mL de acetato de etila. A mistura resultante foi lavada com 2 x 2000 mL de cloreto de sódio(aq). As camadas orgânicas combinadas e secas em sulfato de sódio anidro. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com éter de petróleo:acetato de etila (2/1). O produto bruto foi recristalizado a partir de acetato de etila:etanol na razão de 1g/(1 mL:1 mL). Isto resultou em intermediário 4g. Intermediário 4h - ((3aR,5R,6S,6aR)-5-((terc-butildifenilsililoxi)metil)- 2,2-dimetil-6-(naftalen-2-ilmetoxi)tetra-hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-5-il) metanol.
Figure img0069
[00184] A um frasco de fundo redondo de 4 gargalos 5L purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogênio inerte foi posta uma solução de intermediário 4g (125 g, 346,84 mmol) em diclorometano (2500 mL) em temperatura ambiente. À mistura foi adicionada trietilamina (157,5 mL) em temperatura ambiente. Ao acima foi adicionado cloreto de terc- butildifenilsilila (157,5 mL) em gotas com agitação a 0-10°C. A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, de um dia para o outro em temperatura ambiente. A reação foi então extinta através da adição de 37,5 mL de metanol. A mistura resultante foi lavada com 2 x 500 mL de cloreto de hidrogênio(aq) 5% e 2 x 500 mL de bicarbonato de só- dio(aq). A mistura resultante foi lavada com 2 x 500 mL de hidróxido de sódio(aq) 1N. A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O produto bruto foi purificado através de recristaliza- ção a partir de diclorometano/hexano. Isto resultou em intermediário 4h.
Figure img0070
Intermediário 4i - terc- butil(((3aR,5R,6S,6aR)-5-(iodometil)-2,2-dimetil- 6-(naftalen-2-ilmetoxi)tetra-hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-5-il)metoxi)dife- nilsilano.
[00185] A um frasco de fundo redondo de 3 gargalos 1000 mL purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foi posta uma solução de intermediário 4h (20 g, 31,73 mmol) em tolueno (320 mL), trifenilfosfina (35 g, 132,11 mmol), imidazol (8,96 g, 132,26 mmol). Isto foi seguido pela adição de iodo (16,95 g, 66,8 mmol) em várias bateladas a 60°C. A solução resultante foi agitada de um dia para o outro a 80°C em um banho de óleo. A mistura de reação foi e sfriada para temperatura ambiente com um banho de água/gelo. A solução resultante foi diluída com 1000 mL de acetato de etila. A mistura resultante foi lavada com 2 x 300 mL de tiossulfato de sódio(aq). A mistura resultante foi lavada com 1 x 3000 mL de cloreto de sódio(aq). A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com acetato de etila/éter de petróleo (1:10). Isto resultou em intermediário 4i.
Figure img0071
Intermediário 4j - terc-butildifenil(((3aR,5R,6S,6aR)-2,2,5-trimetil-6- (naftalen-2-ilmetoxi)tetra-hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-5-il)metoxi)silano.
[00186] A um frasco de fundo redondo de 2000 mL purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogênio inerte foi posta uma solução de intermediário 4i (66 g, 88,47 mmol) em etanol/acetato de etila (600/600 mL), trietilamina (20,7 g, 202,52 mmol), paládio sobre carbono (10% em peso, 24,8 g, 23,30 mmol). A solução resultante foi agitada por 3 horas a 40°C. Os sólidos foram filtrados. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. A solução resultante foi diluída com 1500 mL de acetato de etila. A mistura resultante foi lavada com 1 x 500 mL de cloreto de sódio(aq). A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. Isto resultou em intermediário 4j.
Figure img0072
Intermediário 4k - (3aR,5R,6S,6aR)-5-((terc-butildifenilsililoxi)metil)- 2,2,5-trimetiltetra-hidrofuro[3,2-d][ 1,3]dioxol-6-ol.
[00187] A um frasco de fundo redondo de 500 mL foi posta uma solução de intermediário 4j (1,0 g, 1,63 mmol) em diclorometano (15 mL), água (1,25 mL) e 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ, 780 mg, 3,40 mmol). A solução resultante foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. A solução resultante foi diluída com 50 mL de dicloro- metano. A mistura resultante foi lavada com 1 x 30 mL de água e 2 x 30 mL de bicarbonato de sódio(aq). A mistura resultante foi lavada com 1 x 30 mL de cloreto de sódio(aq). A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com acetato de etila/éter de petróleo (1:20~1:10).Isto resultou em intermediário 4k.
Figure img0073
Intermediário 4l - (3aR,5R,6S,6aR)-5-(hidroximetil)-2,2,5-trimetiltetra- hidrofuro[3,2-d][1,3]dioxol-6-ol.
[00188] A um frasco de fundo redondo de 50 mL foi posta uma solução de intermediário 4k (520 mg, 1,12 mmol) em tetra-hidrofurano (9 mL), fluoreto de tetrabutilamônio (369 mg, 1,40 mmol). A solução resultante foi agitada por 2 h em temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em coluna de sílica gel com diclorometano/metanol (100:1). Isto resultou em intermediário 4l.1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 5,64 (d, J = 3,9Hz, 1H), 4,96 (d, J = 6,6Hz, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,24 - 3,30 (m, 1H), 3,11 - 3,18 (m, 1H), 1,50 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,16 (s, 1H).BnBr,NaH Bn° O
Figure img0074
Intermediário 4m - (3aR,5R,6S,6aR)-6-(benziloxi)-5-(benziloximetil)- 2,2,5-trimetiltetra-hidrofuro[3,2-d][ 1,3]dioxol.
[00189] A um frasco de fundo redondo de 3 gargalos 50 mL purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio foi posta uma solução de intermediário 4l (180 mg, 0,84 mmol) em tetra-hidrofurano (4 mL). Isto foi seguido pela adição de hidreto de sódio (60% em peso, 140 mg, 3,50 mmol), em porões a 0°C. A solução resu ltante foi agitada por 30 minutos a 0°C. A solução resultante foi deixada reagir, com agitação, por mais 30 min em temperatura ambiente. A isto foi adicionado brometo de benzila (452 mg, 2,62 mmol) em gotas com agitação a 0°C. A solução resultante foi deixada reagir, com a gitação, por mais 3 h em temperatura ambiente. A reação foi então extinta através da adição de 30 mL de cloreto de amônio(aq). A solução resultante foi extraída com 50 mL de diclorometano e as camadas orgânicas foram combinadas e secas em sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com acetato de eti- la/éter de petróleo (1:30-1:20). Isto resultou em intermediário 4m.
Figure img0075
Intermediário 4n - diacetato de (2R,3R,4S,5R)-4-(benziloxi)-5-(benzilo- ximetil)-5-metiltetra-hidrofuran-2,3-di-ila.
[00190] A um frasco de fundo redondo de 1000 mL foi posto intermediário 4m (também preparado de acordo com Biosci. Biotech. Bio- chem. 1993, 57, 1433-1438, 45 g, 111,19 mmol), ácido acético (270 mL), anidrido acético (90 mL), ácido sulfúrico (45 d). A solução resultante foi agitada por 30 min em temperatura ambiente. A reação foi então extinta através da adição de 1000 mL de água/gelo. A solução resultante foi diluída com 3000 mL de acetato de etila. A mistura resultante foi lavada com 2 x 1000 mL de água e 4 x 10000 mL de bicarbonato de sódio(aq). A mistura resultante foi lavada com 2 x 1000 mL de cloreto de sódio(aq). A mistura foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com acetato de etila/éter de petróleo (1:30-1:20). Isto resultou em intermediário 4n.1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,28 - 7,38 (m, 10H), 6,13 (s, 1H), 5,37 (d, J = 4,8Hz, 1H), 4,44 - 4,68 (m, 4H), 4,33 (d, J = 5,1Hz, 1H), 3,33 - 3,45 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,88 (s, 3H), 1,35 (s, 3H).MS m/z = 451[M+Na]
Figure img0076
Intermediário 4o - (3R,4S,5R)-4-(benziloxi)-5-(benziloximetil)-3-hidroxi- 5-metildi-hidrofuran-2(3H)-ona.
[00191] O intermediário 4n (1,3 g, 3 mmol) foi dissolvido em MeOH anidro (15 mL). Pó de carbonato de potássio (456 mg, 3,3 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 1 h. A mistura de reação foi então concentrada sob pressão reduzida. Acetonitrila adicionada e agitada por 5 minutos. Filtrado o insolúvel e lavado com acetoni- trila. Filtrado concentrado sob pressão reduzida. Material resultante dissolvido em DCM anidro (20 mL). Iodeto de tetrabutilamônio adicionado (1,66 g, 4,5 mmol) e N-iodo-succinimida (NIS, 1,69 g, 2,5 mmol). Agitada a mistura de reação no escuro por 16 h. Adicionado mais NIS (0,85 g, 1,25 mmol) e agitado por 4 horas. Adicionado mais NIS (0,85 g, 1,25 mmol) e agitado por 2 dias no escuro. Diluída a reação com EtOAc e lavada com solução de tiossulfato de sódio aquosa duas vezes e então com solução de cloreto de sódio aquosa saturada. A porção orgânica seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. Purificada com coluna de sílica gel (EtOAc 0-30% em hexanos) para fornecer intermediário 4o.1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7,35 - 7,22 (m, 10H), 4,82 (bs, 1H), 4,75 - 4,66 (m, 2H), 4,55 - 4,44 (m, 2H), 4,13 (d, J = 8Hz, 1H), 3,70-3,45 (m, 2H), 1,38 (s, 3H).LC/MS: tR = 2,58 min, MS m/z = 342,9 [M+1], 360,0 [M+H2O]; LC/Sistema MS: Thermo LCQ Advantage; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético em Água 0,1%; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Acetonitrila Tampão B 5-100% em 2,5 min então 100% para 0,9 min @ 2 mL/min.HPLC: tR = 3,78 min; sistema HPLC: Agilent 1100; Phenome- nex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em Acetonitrila; Tampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.
Figure img0077
Intermediário 4p - (3R,4S,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloximetil)-5- metildi-hidrofuran-2(3H)-ona.
[00192] Intermediário 4o dissolvido (955 mg, 2,79 mmol) em EtOAc (10 mL). Adicionados brometo de benzila (400 μL, 3,35 mmol) e óxido de prata(I) (712 mg, 3,07 mmol). Agitado a 60°C sob N2(g) no escuro por 3 h. Adicionado mais brometo de benzila (400 μL, 3,35 mmol) e agitado a 60°C sob N 2(g) no escuro por 16 h. Adicionado mais óxido de prata(I) (350 mg, 1,5 mmol) e agitado a 60°C sob N2(g) no escuro por 8 h. Esfriado para temperatura ambiente. Sólidos filtrados e lavados com EtOAc. Filtrado concentrado sob pressão reduzida para fornecer um óleo. Hexanos adicionados e agitados por 2 h para fornecer sólido. Sólido coletado e lavado com hexanos. Sólido seco sob vácuo alto para fornecer intermediário 4p.1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7,35 - 7,16 (m, 15H), 5,03 (d, J = 12Hz, 1H), 4,79 - 4,71 (m, 2H), 4,52 - 4,40 (m, 4H), 4,06 (d, J = 6Hz, 1H), 3,49 - 3,39 (m, 2H), 1,38 (s, 3H).LC/MS: tR = 2,91 min, MS m/z = 433,1 [M+1], 450,1 [M+H2O]; LC/Sistema MS: Thermo LCQ Advantage; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético 0,1% em Água; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Acetonitrila; Tampão B 5-100% em 2,5 mins então 100% para 0,9min @ 2 mL/min. HPLC: tR = 4,54 min; sistema HPLC: Agilent 1100; Phenome- nex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em AcetonitrilaTampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.
Figure img0078
Intermediário 4q - (3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]tri- azin-7-il)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloximetil)-5-metiltetra-hidrofuran-2- ol.
[00193] O intermediário 1b (148 mg, 0,570 mmol) e 1,2-bis(clorodi- metilsilil)etano (123 mg, 0,570 mmol) foram dissolvidos em THF anidro (20 mL) e agitados sob Ar(g) a -70°C. n-Butillítio adicionado (solução 2,5M em hexanos, 684 μL, 1,71 mmol) em gotas à mistura de reação enquanto mantendo a temperatura interna abaixo de -65°C. A reação foi deixada aquecer para -40°C e mantida por 15 min . Uma solução de intermediário 4p (224 mg, 0,518 mmol) em THF (10 mL) pré-esfriada para -70°C foi então adicionada à mistura de reação sob Ar(g). A solução resultante foi agitada por 2 h a -40°C. A mistu ra de reação foi então despejada em uma mistura em agitação de EtOAc e ácido cítri- co(aq). Agitada por 5 min. A camada orgânica coletada e lavada com NaCl(aq) saturado. A camada orgânica seca em Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. Purificada com HPLC preparativa para fornecer intermediário 4q.LC/MS: tR = 2,60 min, MS m/z = 567,3 [M+1], 565,1 [M-1]; sis-tema LC/MS: Thermo LCQ Advantage; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético 0,1% em água; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Acetonitrila; Tampão B 5-100% em 2,5 mins então 100% para 0,9min @ 2 mL/min. HPLC: tR = 3,22 min; sistema HPLC: Agilent 1100; Phenome- nex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em Acetonitrila; Tampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.
Figure img0079
Intermediário 4r - 7-((2S,3S,4S,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-(benziloximetil) -5-metiltetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina.
[00194] Intermediário 4q (81 mg, 0,143 mmol) foi dissolvido em DCM anidro (15 mL) e agitado sob N2(g) em um banho gelado. Trietil- silano adicionado (114 μL, 0,715 mmol) em uma porção. Dietil eterato de trifluoreto de boro adicionado (27 μL, 0,215 mmol) em gotas. Agitado por 15 min e então removido banho gelado. Agitado por 60 min. Adicionada trietilamina (100 μL, 0,715 mmol) e concentrada sob pressão reduzida. Dissolvida em EtOAc e lavada com NaHCO3(aq) (2x) e então saturada com NaCl(aq). Orgânico seco em Na2SO4 anidro e concentrado sob pressão reduzida. Purificado com coluna de sílica gel (EtOAc 0-80% em hexanos) para fornecer intermediário 4r.1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7,71 (s, 1H), 7,35 - 7,10 (m, 16H), 6,82-6,78 (m, 1H), 5,57 (d, J=4,4Hz, 1H), 4,70 - 4,45 (m, 6H), 4,25 - 4,15 (m, 2H), 3,55 - 3,40 (m, 2H), 1,42 (s, 3H).LC/MS: tR = 2,75min, MS m/z = 551,4 [M+1]; sistema LC/MS: Thermo LCQ AdvantagePhenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético 0,1% em Água; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Ace- tonitrila; Tampão B 5-100% em 2,5 mins então 100% para 0,9min @ 2 mL/min.HPLC: tR = 3,57min; sistema HPLC: Agilent 1100; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em Acetonitrila; Tampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.
Figure img0080
Exemplo 4 - (2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-2-(hidroximetil)-2-metiltetra-hidrofuran-3,4-diol
[00195] O intermediário 4r (230 mg, 0,042 mmol) foi dissolvido em uma solução de ácido fórmico/MeOH (1:9, 10 mL). Negro de paládio adicionado e agitado a 60°C por 90 min. Esfriado pa ra temperatura ambiente e filtrado em Celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Purificado através de HPLC preparativa. Concentrado sob pressão reduzida. Dissolvido em NaHCO3(aq) e purificado com HPLC sob condição natural para fornecer Exemplo 4.Sistema HPLC Prep: Gilson 215 Liquid Handler; Phenomenex Gemini, C18 4u, 100 x 30,0 mmTampão A: TFA 0,1% em Água; Tampão B: TFA 0,1% em Ace- tonitrila; Tampão B 5-100% em 13 minutos @ 20 mL/min.1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8,01 (s, 1H), 7,41 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,53-4,49 (m, 1H), 4,15 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,50 (m, 2H), 1,27 (s, 3H).LC/MS: tR = 0,30min, MS m/z = 281,3 [M+1], 279,0 [M-1]; LC/Sistema MS: Thermo LCQ Advantage; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético 0,1% em Água; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Acetonitrila; 5-Tampão B 100% em 2,5 min então 100% para 0,9min @ 2 mL/min.HPLC: tR = 0,42 min; HPsistema LC: Agilent 1100; Phenome- nex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em Acetonitrila; Tampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.
Figure img0081
Intermediário 5a - N-(7-((2S,3S,4S,5R)-5-azido-3,4-bis(terc-butildime- tilsililoxi)-5-((trimetilsililoxi)metil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f] [1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00196] A uma solução de intermediário bruto 1m, N-(7-((2S,3S,4S)- 3,4-bis(terc-butildimetilsililoxi)-5-hidroxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran- 2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida, (~110 mg, ~0,18 mmol) e azidotrimetilsilano (242 μl, 1,84 mmol) em diclorometano (1,5 mL) foi adicionado brometo de índio (III) (130 mg, 0,369 mmol) em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. Após 1 h, a mistura de reação foi extinta com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (1 mL). A mistura resultante foi dividida entre diclorometano (20 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (20 mL). As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclo- rometano (20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro e foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer intermediário 5a que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.LC/MS: tR = 3,52 min, MS m/z = 712,16 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,55 min ACN 100%, 3,55 min-4,2 min ACN 100%-2% a 2μl/min.
Figure img0082
Intermediário 5b - N-(7-((2S,3R,4S,5R)-5-azido-3,4-di-hidroxi-5-(hidro- ximetil)tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benza- mida.
[00197] A uma solução de intermediário bruto 5a (~120 mg, ~0,168 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado fluoreto de césio (256 mg, 1,68 mmol) em temperatura ambiente. Após 25 h, a mistura de reação foi diluída com salmoura (100 mL) e a mistura resultante foi extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro e foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer intermediário 5b que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.LC/MS: tR = 1,40 min, MS m/z = 412,17 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 2,46 min’ sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0083
Exemplo 5 - (2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-2-azido-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3,4-diol.
[00198] Hidróxido de amônio concentrado (1 mL) foi adicionado a uma solução de intermediário 5b bruto em metanol (1 mL) em temperatura ambiente. Após 2 dias, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e foi diretamente purificada através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila/água 5-100%). As frações contendo o desejado foram combinadas e foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo novamente purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (coluna Combiflash HP Gold de SiO2 4g, metanol/diclorometano 0-20%) para fornecer o Exemplo 5.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,79 (s, 1H), 6,86 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,63 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,69 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 12,0 Hz, 1H).LC/MS: tR = 0,76 min, MS m/z = 308,08 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min- 2,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 1,287 min; sistema HPLC: série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2- 98%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.;TLC: eluente: metanol 20% em diclorometano, Rf= 0,4 (UV)
Figure img0084
Exemplo 6 (também referido como TP-1) -trifosfato de tetra-hidrogênio ((2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano -4-fluor-3-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metila.
[00199] O Exemplo 3 (15,0 mg, 0,05 mmol) foi seco em um frasco sob vácuo de um dia para o outro. Trimetilfosfato (0,5 mL) e 1,8-bis(di- metilamino)naftaleno (25 mg, 0,12 mmol) foram adicionados ao frasco e a solução foi d eixada agitar sob N2 esfriado por um banho de ge- lo/água. Oxicloreto fosforoso destilado (10 μL, 0,11 mmol) foi adicionado e a reação foi deixada agitar por 4 h com esfriamento. Tributilamina (0,1 ml, 0,42 mmol) e pirofosfato de tributilamônio (0,8 mL de uma solução 0,5M em DMF, 0,4 mmol) foram adicionados e a reação foi deixada agitar por mais 45 min com esfriamento. A reação foi extinta com bicarbonato de trietilamônio (0,5 M, 5 mL). Os solventes foram removidos através de evaporação giratória e a mistura bruta restante foi dissolvida em 2 mL de água. O produto foi purificado usando uma coluna Sephadex DEAE A-25 com um gradiente linear de bicarbonato de trie- tilamônio 0-1 M. As frações contendo produto foram agrupadas e concentradas para fornecer o Exemplo 6 (TP1), que foi então dissolvido em 1 mL de água para fornecer uma solução 10 M.MS m/z = 532,0 [M-1]Tempo de retenção de HPLC de Troca de Íon: 12,015 min; Co-luna: DNAPac PA-100 4 x 250 mm SNSolvente A: água milliQ; Solvente B: brometo de tetraetilamônio 0,5 M; Programa de gradietne de sovlente: equilibrar usando A 100% por 10 min, então aumentar B 0-80% durante 14min; Fluxo: 1 mL/min.
Figure img0085
Exemplo 7 (também TP2) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R, 4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-4-fluor- 3-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metila.
[00200] O Exemplo 2 (16,0 mg, 0,055 mmol) foi seco em um frasco sob vácuo de um dia para o outro. Trimetilfosfato (0,5 mL) e 1,8- bis(dimetilamino)naftaleno (28 mg, 0,13 mmol) foram adicionados ao frasco e a solução foi deixada agitar sob N2 esfriado por um banho de gelo/água. Oxicloreto fosforoso destilado (11 μL, 0,12 mmol) foi adicio-nado e a reação foi deixada agitar por 4 h com esfriamento. Tributila- mina (0,11 mL, 0,42 mmol) e pirofosfato de tributilamônio (0,9 mL de uma solução 0,5m em DMF, 0,45 mmol) foram adicionados e a reação foi deixada agitar por mais 45 min com esfriamento. A reação foi extinta com bicarbonato de trietilamônio (0,5 M, 5 mL). Os solventes foram removidos através de evaporação giratória e a mistura bruta resultante foi dissolvida em 2 mL de água. O produto foi purificado usando uma coluna Sephadex DEAE A-25 com um gradiente linear de bicarbonato de trietilamônio 0-1 M. As frações contendo produto foram agrupadas a concentradas para fornecer o Exemplo 7 (TP2), que foi então dissolvido em 1,4 mL de água para fornecer uma solução 10 mM.MS m/z = 531,0 [M-1]Tempo de Retenção de HPLC de Troca de Íon: 19,829 min; Coluna: DNAPac PA-100 4 x 250 mm SNSolvente A: água milliQ; Solvente B: brometo de tetraetilamônio 0,5 M; Programa de gradiente de solvente: equilibrar usando A 100% por 10 min, então aumentar B 0-80% durante 14 min.; Fluxo: 1 mL/min
Figure img0086
Exemplo 8 (TP3) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3S,4R,5S)-5- (4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]tríazin-7-il)-2-ciano-3,4-di-hidroxitetra -hidrofuran-2-il)metila.
[00201] A uma solução de Exemplo 1 (5,0 mg, 0,017 mmol) em PO(OMe)3 (0,6 mL) a 0°C foi adicionado POCl 3 (45 mg, 0,29 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 10 h, ponto quando HPLC de troca de íon mostrou aproximadamente 50% de conversão. Uma solução de sais de pirofosfato de tributilamina (250 mg) em ACN (0,6 mL) foi adicionada, seguido por tributilamina (110 mg, 0,59 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 0,5 h e HPLC de troca de íon mostrou que a reação estava completa. A reação foi extinta com tampão de bicarbonato de trietilamônio (1 M, 5 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 0,5 h, então concentrada e coe- vaporada com água duas vezes. O resíduo foi dissolvido em H2O (5 mL) e carregado em uma coluna de troca de íon, eluído com H2O, então tampão de bicarbonato de trietilamônio 5-35% (1M)-H2O. As frações de produto foram combinadas, concentradas e coevaporadas com H2O. O resíduo foi purificado através de coluna de troca de íon novamente para fornecer material bruto. 31P NMR mostrou que este material continha impurezas, então o material foi novamente purificado com coluna C-18, eluído com ACN-H2O 0-15% contendo TEA 0,05% e as frações contendo produto foram combinadas e concentradas para fornecer 3,6 mg de material, que continha apenas 1,5 equiv. de TEA conforme indicado por análise de 1H NMR. O material foi dissolvido em H2O (1 mL) e tampão de bicarbonato de trietilamônio (1 M, 0,1 mL) foi adicionado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e coevaporada com H2O duas vezes sob pressão reduzida para fornecer o Exemplo 8 (TP3) como um sal de tetra-TEA.1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,78 (s, 1H), 6,85 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,65 - 4,55 (m, 2H), 4,20 - 4,08 (m, 2H), 3,15 - 3,00 (m, 24H), 1,18 - 1,08 (m, 36H).31P NMR (162 MHz, D2O): δ -6,25 (d, J = 52 Hz), -12,21 (d, J = 52 Hz), -22,32 (t, J = 52 Hz).MS m/z = 530,2 [M-1], 532,1 [M+1]
Figure img0087
Exemplo 9 (TP4) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3S,4R,5S)-5- (4-aminopirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-2-azido-3,4-di-hidroxitetra-hidro- furan-2-il)metila.
[00202] A uma solução do Exemplo 5 (6,0 mg, 0,019 mmol) em PO(OMe)3 (0,6 mL) a 0°C foi adicionado POCl 3 (45 mg, 0,29 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 10 h, ponto quando HPLC de troca de íon mostrou aproximadamente 50% de conversão. Uma solução de sais de pirofosfato de tributilamina (250 mg) em ACN (0,6 mL) foi adicionada, seguido por tributilamina (110 mg, 0,59 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 6 h. A reação fo i extinta com tampão de bicarbonato de trietilamônio (1 M, 5 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 0,5 h, então concentrada e coe- vaporada com água duas vezes. O resíduo foi dissolvido em H2O (5 mL) e carregado em uma coluna de troca de íon, eluído com H2O, en- tão tampão de bicarbonato de trietilamônio 5-35% (1M)-H2O. As frações de produto foram combinadas, concentradas e coevaporadas com H2O. O resíduo foi purificado através de coluna de troca de íon novamente para fornecer material bruto. 31P NMR mostrou que este material continha impurezas, então o material foi novamente purificado com coluna de troca de íon para fornecer material bruto. O material foi tratado com NaHCO3 (10 mg) e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo sólido foi dissolvido em 0,5 mL de H2O e 40 μL de NaOH (1N) foram adicionados. A mistura resultante foi purificada com coluna C-18, eluída com H2O e as frações contendo produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o Exemplo 9 (TP4) como o sal de tetrassódio.1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,76 (s, 1H), 6,88 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,59 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,60 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 3,99 (qd, J = 11,2, 5,5 Hz, 3H).31P NMR (162 MHz, D2O): δ -8,13 (d, J = 19,8 Hz), -14,04 (d, J = 18,9 Hz), -24,00 (t, J = 19,3 Hz).MS m/z = 546,1 [M-1], 547,9 [M+1]
Figure img0088
Intermediário PD1a - 2,2-dimetilpropanotioato de S-2-hidroxietila.
[00203] A uma solução de 2-tioetanol (3,50 mL, 50,0 mmol) e trieti- lamina (7,02 mL, 50,0 mmol) em CH2Cl2, que tinha sido esfriada para - 78°C, foi adicionado cloreto de pivalila (6,15 mL, 50,0 mmol) em gotas durantes 30 min. A reação foi deixada aquecer lentamente para a tem-peratura ambiente e progressão foi monitorada através de TLC. Após 30 min, a reação foi determinada estar completa e foi extinta com água. As camadas foram separadas e a aquosa foi lavada com CH2Cl2. Os orgânicos foram combinados e secos em sulfato de sódio. Os sólidos foram filtrados e o solvente foi removido sob pressão redu- zida. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel EtOAc/hexanos 0-50% para fornecer intermediário PD1a.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,89 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,49 -3,36 (m, 2H), 2,86 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,14 (s, 9H).
Figure img0089
[00204] Obter oxicloreto fosforoso (281 μL, 3,08 mmol) em CH2Cl2 (5 mL) e esfriar a solução para -78°C. Obter o tioéster PD1a (1,00 g, 6,17 mmol) em CH2Cl2 (5 mL) e adicionar lentamente à solução de POCl3. Em seguida adicionar TEA (891 μL, 6,16 mmol) em gotas e deixar agitar frio por 30 min. Então aquecer para a temperatura ambiente e deixar agitar por 2 h. Adicionar o p-nitrofenol (428 mg, 3,08 mmol) em uma porção seguido por uma adição lenta de TEA (449 μL, 3,08 mmol). Agitar em temperatura ambiente por 30 min. TLC (Hexa- nos/EtOAc 70:30) mostrou apenas um ponto, mas LC/MS tinha dois picos (produto e bis-p-nitrofenolato). A solução foi diluída com éter e os sólidos foram removidos através de filtragem e descartados. O licor- mãe foi concentrado e purificado através de cromatografia de sílica gel para fornecer uma mistura de produto e bis-p-nitrofenolato. A mistura foi então novamente purificada através de HPLC para fornecer intermediário PD1b, bis(2,2-dimetilpropanotioato) de S,S'-2,2'-((4- nitrofenoxi)fosforil)bis(oxi)bis(etano-2,1-di-ila).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,29 - 8,21 (m, 2H), 7,46 - 7,36 (m, 2H), 4,23 (q amplo,, J = 7,7 Hz, 4H), 3,16 (t amplo, J = 6,7 Hz, 4H), 1,23 (s, 18H).31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ -7,72 (s).
Figure img0090
Exemplo 10 (também referido como PD1) - bis(oxi)bis(etano-2,1-di-il) bis(2,2-dimetilpropanotioato) de S,S'-2,2'-((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-amino— pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofu- ran-2-il)metoxi)fosforila).
[00205] O Exemplo 1 (6,0 mg, 0,02 mmol) foi dissolvido em NMP (0,1 mL) e THF (0,2 mL) foi adicionado. Cloreto de terc-butil magnésio (solução 1,0 M em THF, 0,031 mL, 0,031 mmol) foi então adicionado em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. Após 10 min, uma solução de intermediário PD1b (15,7 mg, 0,031 mmol) em THF (0,1 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi aquecida para 50°C. Após 5 h, o resíduo resultante foi purificado através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila/água 40-100%). As frações contendo o produto desejado foram combinadas e foram liofilizadas para fornecer o Exemplo 10 (PD1).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,82 (s, 1H), 6,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,56 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,61 (s amplo, 2H), 4,45 - 4,32 (m, 2H), 4,22 - 4,06 (m, 4H), 3,13 (dt, J = 11,7, 6,7 Hz, 4H), 1,23 (s, 9H), 1,21 (s, 9H).31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ -2,34 (s).LC/MS: tR = 1,70 min, MS m/z = 660,02 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mmSolventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 3,204 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2-98%, 5,0 min-6,0 min ACN98% a 2 mL/min.
Figure img0091
Exemplo 11 (PD2) - bis(2,2-dimetilpropanotioato) de S,S'-2,2'-((((2R, 3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano-4- fluor-3-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metoxi)fosforil)bis(oxi)bis(etano-2,1- di-ila).
[00206] Exemplo 3 (10,5 mg, 0,036 mmol) foi dissolvido em NMP (0,1 mL) e THF (0,1 mL) foi adicionado. Cloreto de terc-butil magnésio (solução 1,0 M em THF, 0,054 mL, 0,054 mmol) foi então adicionado em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. Após 10 min, uma solução de intermediário PD1b (27,3 mg, 0,054 mmol) em THF (0,1 ml) foi adicionada e a mistura resultante foi aquecida para 50°C. Após 24 h, o resíduo resultante foi purificad o através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila/água 40-100%). As frações contendo o produto desejado foram combinadas e foram liofilizadas para fornecer Exemplo 11 (PD2).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,94 (s, 1H), 6,75 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,77 (dd, J = 27,8, 1,4 Hz, 1H), 5,43 (ddd, J = 55,2, 4,9, 1,3 Hz, 1H), 4,93 (dd, J = 21,2, 4,9 Hz, 1H), 4,49 (dd, J = 11,3, 7,8 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 11,3, 7,8 Hz, 1H), 4,10 (ddt, J = 15,9, 8,0, 6,7 Hz, 4H), 3,16 - 3,04 (m, 4H), 1,23 (s, 9H), 1,21 (s, 9H).31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ -2,10 (s).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -191,64 (ddd, J = 55,0, 27,8, 21,3 Hz).LC/MS: tR = 1,85 min, MS m/z = 662,03 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 3,385 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Co- luna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila comTFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2-98%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0092
Intermediário PD3c - 2-((4-nitrofenoxi)(fenoxi) fosforilamino)propanoato de (2S)-2-etilbutila.
[00207] Diclorofosfato de fenila dissolvido PD3a (1,5 mL, 10 mmol) em 30 mL de DCM anidro e agitado sob N2(g) em um banho gelado. Sal de HCl de amino éster PD3b, cloridrato de 2-aminopropanoato de (S)-2-etilbutila (preparado de acordo com Eur. J. Med. Chem. 2009,44, 3765-3770, 2,1 g, 10 mmol) em uma porção. TEA adicionado (3 mL, 22 mmol) em gotas. Agitado por 1 h a 0°C. Adicionad o p-nitrofenol (1,4 g, 10 mmol) em uma porção e TEA (1,5 mL, 11 mmol). A mistura de reação foi então agitada em temperatura ambiente por 16 h. Diluída com DCM e lavada com NaHCO3(aq) saturado. Orgânico seco em Na2SO4 anidro e concentrado sob pressão reduzida. Purificado com coluna de sílica gel (EtOAc 0-15% em hexanos) para fornecer inter-mediário PD3c.1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,23 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,41 - 7,30 (m, 4H), 7,25 - 7,19 (m, 3H), 4,10 - 4,00 (m, 3H), 3,90-3,83 (m, 1H), 1,55 - 1,45 (m, 1H), 1,42 - 1,31 (m, 7H), 0,87 (t, J = 7,2Hz, 6H).31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ -3,04 (s), -3,10 (s).LC/MS: tR = 2,87min, MS m/z = 451,1 [M+1], 449,0 [M-1]; sistema LC/MS: Thermo LCQ Advantage; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético 0,1% em Água; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Acetonitrila; Tampão B 5-100% em 2,5 min então 100% para 0,9min @ 2 mL/min.HPLC: tR = 4,40min; sistema HPLC: Agilent 1100; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em Acetonitrila; Tampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.Example 12
Figure img0093
Exemplo 12 (PD3) - 2-((((2R.3R.4R.5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1.2- f][1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano-4-fluor-3-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metoxi) (fenoxi)pfosforilamino)propanoato de (2S)-2-etilbutila.
[00208] O Exemplo 3 foi dissolvido (15 mg, 0,051 mmol) em DMF anidro (1 mL) e agitado sob N2(g). p-nitrofenilfosfoamidato PD3c foi dissolvido (35 mg, 0,077 mmol) em DMF anidro (0,5 mL) e adicionado à mistura de reação em uma porção. tBuMgCl em THF foi adicionado (1 M em THF, 77 μL, 0,077 mmol) em gotas. Agitado por 2 h. Mais p- nitrofenilfosfoamidato foi adicionado (35 mg em DMF anidro 0,5 mL) e mais tBuMgCl (1 M em THF, 50 μL, 0,050 mmol). Agitado por 2 h. Adi- cionado mais p-nitrofenilfosfoamidato (35 mg em DMF anidro 0,5 mL) e mais solução de t BuMgCl (1M em THF, 50 μL, 0,050 mmol). Agitado por 16 horas. Diluído com EtOAc e lavado com NaHCO3(aq) saturado (3x). Lavado com NaCl(aq) saturado e o orgânico seco em Na2SO4 anidro. Concentrado sob pressão reduzida. Purificado com coluna de sílica gel (MeOH 0-5% em DCM). As frações combinadas e concentradas sob pressão reduzida. Purificadas com HPLC preparatória com TFA como modificador para fornecer Exemplo 12 (PD3).Sistema HPLC prep: Gilson 215 Liquid Handler; Phenomenex Gemini, C18 4u, 100 x 30,0 mmTampão A: TFA 0,1% em Água; Tampão B: TFA 0,1% em Ace- tonitrila; Tampão B 5-100% em 13 minutos @ 20 mL/min.1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,89 (s, 1H), 7,31 - 7,13 (m, 6H), 6,80-6,75 (m, 1H), 5,80 - 5,70 (m, 1H), 5,35 - 5,20 (m, 1H), 4,80 - 4,62 (m, 1H), 4,60 - 4,45 (m, 2H), 4,35 - 4,10 (m, 1H), 4,06 - 3,96 (m, 3H), 1,49 - 1,28 (m, 8H), 0,90 - 0,82 (m, 6H).31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 2,36 (s), 2,22 (s).HPLC: tR = 3,00min; sistema HPLC: Agilent 1100; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 50 x 4,6 mm; Tampão A: TFA 0,05% em Água; Tampão B: TFA 0,05% em Acetonitrila; Tampão B 2-98% em 5 minutos @ 2mL/min.LC/MS: tR = 2,39min, MS m/z = 605,1 [M+1], 603,0 [M-1]; sistema LC/MS: Thermo LCQ Advantage; Phenomenex Gemini, C18, 5u, 110A, 30 x 4,6 mm; Tampão A: Ácido acético 0,1% em Água; Tampão B: Ácido acético 0,1% em Acetonitrila; Tampão B 5-100% em 2,5 min então 100% para 0,9min @ 2 mL/min.
Figure img0094
Intermediário 6a - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsililoxi)-5- ((terc- butildimetilsililoxi)metil)-3-fluor-5-viniltetra-hidrofuran-2-il)pirrolo [pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida
[00209] Intermediário 2g N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsili- loxi)-5-((terc-butildimetilsililoxi)metil)-3-fluor-5-(hidroximetil)tetra-hidro- furan-2-il)pirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-il)benzamida (220 mg, 0,35 mmol) foi dissolvido em 5 mL de DMSO anidro e agitado sob N2(g). EDCl foi adicionado (100 mg, 0,52 mmol) e então TFA-Piridina (34 mg, 0,18 mmol). Agitado por 1 h. Mais EDCl adicionado (100 mg, 0,52 mmol) e agitado por 1 h. Monitoramento através de LC/MS mostrou que material de partida álcool permaneceu. Mais EDCl foi adicionado (100 mg, 0,52 mmol) e agitado por 1 h. Monitoramento através de LC/MS mostrou que a reação atingiu conversão completa. Diluído com acetato de etila e lavado com NaHCO3(aq) saturado (2x) e então NaCl(aq) saturado. A camada orgânica seca em Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. Purificada com coluna de sílica gel (EtOAc 0-20% em hexanos). As frações foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer aldeído como sólido. Brometo de metil trifenilfosfônio (500 mg, 1,40 mmol) em THF anidro 10 mL e agitado a -78°C sob Ar (g). Solução de n-butillítio 2,5 M foi adicionada (560 μL, 1,40 mmol) em gotas. A mistura de reação foi agitada em um banho gelado por 1 h para fornecer uma mistura amarela. O aldeído preparado acima foi dissolvido em 5 mL de THF anidro e adicionado à reação em gotas. O banho gelado foi removido e a reação deixada aquecer para RT. Agitada por 3 h em temperatura ambiente. Solução de NH4Cl aquosa saturada foi adicionada e extraída com acetato de etila. O extrato orgânico foi lavado com NaHCO3(aq) e então NaCl(aq) saturado. O orgânico foi seco em Na2SO4 anidro e concentrado sob pressão reduzida. Purificado com coluna de sílica gel (EtOAc 020% em hexanos) para fornecer intermediário 6a. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,22 (s amplo, 1H), 8,03 (s amplo, 2H), 7,58 (dt, J = 40,4, 7,4 Hz, 3H), 7,12 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,01 (dd, J = 17,5, 10,9 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 22,8 Hz, 1H), 5,46 (dd, J = 17,5, 2,1 Hz, 1H), 5,25 (dd, J = 11,0, 2,0 Hz, 1H), 5,14 (ddd, J = 55,4, 4,9, 2,7 Hz, 1H), 4,61 (dd, J = 20,8, 4,8 Hz, 1H), 3,63 - 3,40 (m, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,84 (s, 9H), 0,09 (d, J = 8,4 Hz, 6H), 0,00 (d, J = 14,1 Hz, 6H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -191,86 (d, J = 56,8 Hz).Exemplo 13 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4] tria- zin-7-il)-4-fluor-2-(hidroximetil)-2-viniltetra-hidrofuran-3-ol
[00210] O intermediário 6a (146 mg, 0,23 mmol) foi dissolvido em THF (10 mL) e a solução resultante foi agitada em um banho gelado. Solução de TBAF 1 M foi adicionada em THF (700 μL, 0,70 mmol) e agitada por 2 h. Diluída com EtOAc e lavada com NaCl(aq) saturado (5x). A camada orgânica foi seca em Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. Dissolvida em amônia 7M em MeOH (7 mL) e agitada por 18 h. A reação foi concentrada sob pressão reduzida. Purificada com HPLC preparativa C18 com TFA como modificador. As frações foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. Dissolvidas em NaHCO3(aq) e novamente purificadas com HPLC preparativa sob condição normal. As frações foram combinadas e secas por congelamento para fornecer o Exemplo 13.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,54 (s, 1H), 6,62 - 6,49 (m, 2H), 5,98 - 5,79 (m, 1H), 5,55 - 5,36 (m, 2H), 5,31 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 5,11 (ddd, J = 54,8, 5,2, 2,9 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 20,6, 4,8 Hz, 1H), 3,62 - 3,43 (m, 2H).
Figure img0095
Exemplo 14 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]tria- zin-7-il)-2-etil-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol
[00211] O Exemplo 13 (5 mg, 0,017 mmol) foi dissolvido em metanol (2 mL). Catalisador Degussa Pd/C 10% (2 mg) foi então adicionado e a mistura resultante foi agitada sob atmosfera de gás hidrogênio. Após 40 min, a mistura resultante foi filtrada para remover Pd/C e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água e seco por congelamento para fornecer Exemplo 14.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,67 (s, 1H), 6,79 - 6,55 (m, 2H), 5,54 - 5,12 (m, 2H), 4,46 (dd, J = 15,1, 5,5 Hz, 1H), 3,65 - 3,44 (m, 2H), 1,89 - 1,44 (m, 2H), 0,84 (t, J = 7,6 Hz, 3H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -197,62 (ddd, J = 54,5, 20,6, 15,0Hz).
Figure img0096
Exemplo 15 (PD4) - bis(2,2-dimetilpropanotioato) de S,S'-2,2'-((((2R, 3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-3- hidroxi-2-viniltetra-hidrofuran-2-il)metoxi)fosforil)bis(oxi)bis(etano-2,1- di-ila)
[00212] O Exemplo 13 (5 mg, 0,017 mmol) foi dissolvido em DMF anidro (0,5 mL). p-nitro-fenonato (13 mg, 0,026 mmol) foi adicionado em uma porção. Cloreto de t-butilmagnésio 1M foi adicionado em THF (25 μL, 0,026 mmol) em gotas. Agitado por 1 h. Aquecido para 50°C e agitado por 2 h. Mais p-nitro-fenonato foi adicionado (13 mg, 0,026 mmol) e agitado por 2 h. Mais cloreto de t-butilmagnésio 1M em THF foi adicionado (25 μL, 0,026 mmol) e agitado por 16 h a 50°C. Esfriado para temperatura ambiente. A mistura resultante foi purificada diretamente através de coluna de HPLC preparatória e eluída com gradiente linear ACN 0-100% em água para fornecer Exemplo 15 (PD4).1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,84 (s, 1H), 6,92 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,10 (dd, J = 17,4, 10,9 Hz, 1H), 5,67 (dd, J = 5,8, 1,9 Hz, 1H), 5,61 (s, 1H), 5,45 - 5,35 (m, 1H), 5,15 (ddd, J = 55,6, 5,0, 2,2 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 22,5, 5,1 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 11,1, 5,2 Hz, 1H), 4,08 - 3,95 (m, 5H), 3,06 (dd, J = 7,0, 6,1 Hz, 4H), 1,21 (s, 9H), 1,18 (s, 9H).19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ 192,99 (td, J = 55,7, 23,6 Hz). MS m/z = 663,0 [M+1].
Figure img0097
Exemplo 16 (PD5) - 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-2-azido-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metoxi)(fenoxi) fosforil)amino)propanoato de (2S)-2-etilbutila.
[00213] O Exemplo 5 (5 mg, 0,016 mmol) foi dissolvido em N-metil- 2-pirrolidona anidra (0,2 mL) em THF (0,1 mL) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Cloreto de terc-butil magnésio (1M em THF, 24 μL, 0,024 mmol) foi então adicionado em temperatura ambiente e sólidos brancos precipitaram. Depois de 5 min, uma solução de p- nitrofenilfosfoamidato PD3c (15 mg, 0,032 mmol) em THF (0,1 mL) foi adicionada à mistura de reação em uma porção, e a mistura resultante foi aquecida para 50°C. Depois de 3,5 h, a mistura de reação foi deixada ir para a temperatura ambiente e foi agitada por 18 h. p- Nitrofenilfosfoamidato PD3c (50 mg, 0,111 mmol) e cloreto de terc-butil magnésio (1M em THF, 24 μL, 0,024 mmol) foram então adicionados e a mistura de reação foi agitada por mais 5 dias. O resíduo resultante foi então purificado diretamente através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila/água 40-100%). As frações contendo o produto desejado foram combinadas e foram liofilizadas para fornecer o Exemplo 16 (PD5) (mistura diastereomérica 2:1).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,88 (s amplo, 1H), 7,33 - 7,22 (m amplo,, 2H), 7,22 - 7,10 (m amplo,, 3H), 6,69 (d amplo, J = 4,4 Hz, 1H), 6,61 (d amplo, J = 4,5 Hz, 1H), 5,64 - 5,56 (m, 1H), 4,54 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 4,50 - 4,20 (m, 3H), 4,11 - 3,94 (m, 3H), 3,90 - 3,76 (m, 1H), 1,49 (s, J = 6,2 Hz, 1H), 1,40 - 1,24 (m, 7H), 0,86 (t, J = 7,4 Hz, 6H).31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 2,68 (s), 2,56 (s).LC/MS: tR = 1,70 min, MS m/z = 619,09 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC.Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 3,010 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0098
Exemplo 17 (TP5) - Trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)- 5-(4-aminopirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-3-hidroxi-2-viniltetra- hidrofuran-2-il)metila.
[00214] A uma solução do Exemplo 13 (6,0 mg, 0,020 mmol) em PO(OMe)3 (0,6 mL) a 0°C foi adicionado POCl 3 (50 mg, 0,32 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 6 h, ponto quando HPLC de troca de íon mostrou aproximadamente 90% de conversão. Uma solução de sais de pirofosfato de tributilamina (250 mg) em ACN (0,6 mL) foi adicionada, seguido por tributilamina (110 mg, 0,59 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 1h. A reação foi extinta com tampão de bicarbonato de trietilamônio (1 M, 5 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente pro 0,5 h, então concentrada e coe- vaporada com água duas vezes. O resíduo foi dissolvido em H2O (5 mL) e carregado em uma coluna de troca de íon, eluído com H2O, então tampão de bicarbonato de trietilamônio 5-35% (1M)-H2O. As frações de produto foram combinadas, concentradas e coevaporadas com H2O. O resíduo sólido foi dissolvido em 3 mL de H2O e 100 μL de NaOH (1N) foram adicionados. A mistura resultante foi purificada com coluna C-18, eluída com H2O e as frações contendo produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer Exemplo 17 (TP5) como o sal de tetrassódio.1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,74 (s, 1H), 6,89 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,00 (dd, J = 17,4, 11,1 Hz, 1H), 5,72 (d, J = 23,3 Hz, 1H), 5,49 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 54,0, 4,6 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 23,7, 4,5 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 11,3, 5,8 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 11,6, 3,8 Hz, 1H).31P NMR (162 MHz, D2O): δ -8,38 (d, J = 20,5 Hz), -13,67 (d, J = 19,3 Hz), -24,20 (t, J = 19,9 Hz).19F NMR (376 MHz, CDCI3) δ -194,58 (dt, J = 55,0, 23,8 Hz).MS m/z = 533,0[M-1], 535,0 [M+1].
Figure img0099
Exemplo 18 (TP6) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)-5- (4-aminopirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-2-etil-4-fluor-3-hidroxitetra-hidro- furan-2-il)metila
[00215] A uma solução de Exemplo 14 (5,0 mg, 0,017 mmol) em PO(OMe)3 (0,6 mL) a 0°C foi adicionado POCl3 (45 mg , 0,30 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 6 h, ponto quando HPLC de troca de íon mostrou aproximadamente 90% de conversão. Uma solução de sais de pirofosfato de tributilamina (250 mg) em ACN (0,6 mL) foi adicionada, seguido por tributilamina (110 mg, 0,59 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C por 1 h. A reação fo i extinta com tampão de bicarbonato de trietilamônio (1 M, 5 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 0,5 h, então concentrada e coe- vaporada com água duas vezes. O resíduo foi dissolvido em H2O (5 mL) e carregado em uma coluna de troca de íon, eluído com H2O, então tampão de bicarbonato de trietilamônio 5-35% (1M)-H2O. As frações de produto foram combinadas, concentradas e coevaporadas com H2O. O resíduo sólido foi dissolvido em 3 mL de H2O e 100 μL de NaOH (1N) foram adicionados. A mistura resultante foi purificada com coluna C-18, eluída com H2O e as frações contendo produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 18 (TP6) como o sal de tetrassódio.1H NMR (400 MHz, D2O): δ 7,73 (s, 1H), 6,86 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 21,9, 3,5 Hz, 1H), 5,23 (dt, J = 55,2, 4,2 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 20,6, 5,3 Hz, 1H), 4,08 - 3,84 (m, 3H), 1,83 (dq, J = 14,4, 7,4, 6,9 Hz, 1H), 1,62 (dq, J = 15,0, 7,5 Hz, 1H), 0,87 (t, J = 7,5 Hz, 3H).31P NMR (162 MHz, D2O): -5,72 (d, J = 20,2 Hz), -10,81 (d, J = 19,3 Hz), -21,60 (t, J = 19,8 Hz).19F NMR (376 MHz, CDCI3) δ -194,77 (dt, J = 55,2, 21,2 Hz).MS m/z = 535,1[M-1], 536,9,0 [M+1].
Figure img0100
Intermediário 8a - N-(7-((2S,3R,4R,5S)-3-fluor-4-hidroxi-5-(iodometil) tetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00216] A um frasco purgado com argônio foi adicionado 2b (68 mg, 0,183 mmol) em DMF (2 mL) seguido iodeto de metiltrifenoxifosfônio (124 mg, 0,274 mmol). A reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 5 minutos onde conversão completa em produto foi observada através de LCMS. A reação foi extinta com metanol e solventes foram removidos sob pressão reduzida. O material bruto foi dividido entre EtOAc e H2O. Os orgânicos foram separados e lavados com salmoura. O material resultante foi seco em Na2SO4, filtrado e solvente removido sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 20-10%/hexanos) para fornecer intermediário 8a.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,17 (m, 3H), 7,63 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,17 - 6,96 (m, 2H), 5,74 (s, 1H), 5,60 (d, J = 24,9 Hz, 1H), 5,19 (ddd, J = 54,6, 4,5, 2,1 Hz, 1H), 4,09 - 3,92 (m, 1H), 3,72 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,63 (dd, J = 11,0, 3,4 Hz, 1H), 3,44 (dd, J = 11,0, 5,9 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -194,23 (m).LC/MS: tR = 1,13 min, MS m/z = 483,23 [M+1]Sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0101
Intermediário 8b - (3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 4-fluor-2-metilenotetra-hidrofuran-3-ol.
[00217] O intermediário 8a (80 mg, 0,166 mmol) foi dissolvido em THF. DBU (0,074 mL, 0,498 mmol) foi adicionado em uma porção. A reação foi então aquecida para 60°C em um banho de óleo por 16 h. A reação foi esfriada para a temperatura ambiente e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-70%/Hex) para fornecer intermediário 8b.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34-8,05 (m, 3H), 7,63 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,97 - 5,82 (m, 2H), 5,39 - 5,13 (m, 1H), 4,89 - 4,69 (m, 1H), 4,38 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 1,8 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -198,14 (ddd, J = 53,9, 24,7, 20,9 Hz). LC/MS: tR = 1,05 min, MS m/z = 355,15 [M+1]Sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0102
Intermediário 8c - (2S,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 7-il)-2-azido-4-fluor-2-(iodometil)tetra-hidrofuran-3-ol.
[00218] Cloreto de benziltrimetilamônio (55 mg, 0,296 mmol) e azi- da de sódio (19,3 mg, 0,296 mmol) foram dissolvidos em ACN (1 mL). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro e foi então filtrada e adicionada através de seringa a uma solução de intermediário 8b (50 mg, 0,141 mmol) em THF (1 mL). N- Metilmorfolina (0,078 mL, 0,706 mmol) foi então adicionada seguido pela adição em gotas de uma solução de iodo (65 mg, 0,25 mmol) em THF (1 mL). Após 15 minutos, N-acetil cisteína foi adicionada até que a evolução do gás não fosse mais observável. Então tiossulfato de sódio aquoso saturado foi adicionado até que a solução fosse amarelo claro. A mistura bruta foi dividida entre EtOAc e H2O. As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-60%/Hex) para fornecer intermediário 8c.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,31-8,05 (m, 3H), 7,63 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,34 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,80 (d, J = 23,7 Hz, 1H), 5,55 - 5,31 (m, 1H), 4,62 (dt, J = 21,9, 5,9 Hz, 1H), 3,78 - 3,56 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -194,44 (dt, J = 54,7, 22,8 Hz).LC/MS: tR = 1,19 min, MS m/z = 524,09 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0103
Intermediário 8d - acetato de (2S,3R,4S,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-il)-2-azido-4-fluor-2-(iodometil)tetra-hidrofuran-3-ila.
[00219] A uma solução de intermediário 8c (40 mg, 0,076 mmol) em THF (1 mL) foi adicionado anidrido de ácido acético (0,009 mL, 0,092 mmol) seguido por DMAP (10 mg, 0,082 mmol) em temperatura ambiente. Após 15 min, a mistura de reação foi extinta com metanol e a mistura resultante concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-50%/Hex) pa-ra fornecer intermediário 8d.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,15-8,02 (m, 3H), 7,62 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,95 - 5,80 (m, 1H), 5,70 - 5,43 (m, 2H), 3,71 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,60 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCI3) δ -192,78 (ddd, J = 55,7, 24,6, 18,5 Hz).LC/MS: tR = 1,35 min, MS m/z = 566,14 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0104
Intermediário 8e - benzoato de ((2R,3R,4S,5S)-3-acetoxi-2- azido-5-(4-benzamidopirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-4-fluortetra- hidrofuran-2-il)metila.
[00220] A uma solução de intermediário 8d (30 mg, 0,053 mmol) em DMF (2 mL) foram adicionados 15-Coroa-5 (0,105 mL, 0,531 mmol) e benzoato de sódio (77 mg, 0,531 mmol) em temperatura ambiente. A reação foi então aquecida para 105°C. Após 30 h, a mistura de reação foi deixada ir para a temperatura ambiente e foi dividida entre LiCl(aq) 5% e EtOAc. As fases foram separadas e a fase aquosa foi lavada com EtOAc (2x). Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro e foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-60%/Hex) para fornecer intermediário 8e.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,25 - 7,97 (m, 4H), 7,69 - 7,40 (m, 6H), 7,36 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 6,95 - 6,80 (m, 1H), 5,90 (d, J = 25,0 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,62 - 5,48 (m, 1H), 4,69 (dd, J = 79,3, 12,0 Hz, 2H), 2,20 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -192,57 (ddd, J = 53,9, 25,1, 22,0 Hz).LC/MS: tR = 1,45 min, MS m/z = 560,14 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0105
Exemplo 19 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-fl[1,2,41triazin-7-il)- 2-azido-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol.
[00221] A um intermediário 8e (24 mg, 0,043 mmol) foi adicionado NH3 7N em CH3OH (2 mL) em temperatura ambiente. Após 16 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de HPLC de fase reversa sem modificador ácido para fornecer Exemplo 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7,81 (s, 1H), 6,85 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,80 (dd, J = 24,7, 1,9 Hz, 1H), 5,22 (ddd, J = 55,6, 5,1, 1,9 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 22,9, 5,1 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 3,70 (d, J = 12,2 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, Metanol-d4) δ -195,30 (ddd, J = 55,5, 24,6, 22,9 Hz).LC/MS: tR = 0,61 min, MS m/z = 310,02 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mmSolventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2%.
Figure img0106
Intermediário 9b - ((3aR,5R,6S,6aR)-6-(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[2,3-d][ 1,3]dioxol-5-il)metanol
[00222] ((3aR,6S,6aR)-6-(benziloxi)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[2,3- d][1,3]dioxol-5,5-di-il)dimetanol (9a, comprado da Carbosynth, 10,0 g, 32,2 mmol) foi adicionado a uma solução de hidreto de sódio (60% em peso, 1,55 g, 38,7 mmol) em THF (100 mL) a 0°C sob uma atmosfera de argônio. Após 10 min, brometo de benzila (4,54 mL, 38,6 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente. Após 2 h, a reação foi extinta com solução de cloreto de amônio aquosa saturada (500 mL). A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (500 mL). A fase orgânica foi então lavada com salmoura (400 mL), foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um óleo incolor. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (coluna Combiflash HP Gold SiO2 220 g, acetato de etila 0-100%/hexanos) para fornecer intermediário 9a (9,49 g, 73%) como um óleo incolor.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,38 - 7,19 (m, 10H), 5,68 (app t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,73 (q, J = 4,4 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,49 - 4,36 (m, 3H), 4,24 (s amplo, 1H), 4,20 - 4,13 (m, 1H), 3,81 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 3,56 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 3,46 (q, J = 10,3 Hz, 2H), 1,47 (s, 3H), 1,25 (s, 3H). LC/MS: tR = 1,88 min, MS m/z = 423,31 [M+Na]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 3,79 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 40% em hexanos, Rf = 0,4 (UV)
Figure img0107
Intermediário 9c - (3aR,5R,6S,6aR)-6-(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)- 2,2-dimetiltetra-hidrofuro[2,3-d][ 1,3]dioxol-5-carbaldeído
[00223] Periodinana Dess-Martin (3,1 g, 7,3 mmol) foi adicionada a a uma solução de intermediário 9b (1,95 g, 4,87 mmol) em diclorome- tano (24,5 mL) em temperatura ambiente. Após 1,5 h, a mistura de reação foi purificada através de cromatografia de coluna de SiO2 (Coluna Combiflash HP Gold de SiO2 80 g, acetato de etila 0-100%/hexanos) para fornecer intermediário 9c (1,94 g, 100%) como um óleo incolor.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,91 (s, 1H), 7,36 - 7,11 (m, 10H), 5,84 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,59 - 4,58 (m, 1H), 4,52 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,68 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 1,60 (s, 3H), 1,35 (s, 3H).LC/MS: tR = 1,99 min, MS m/z = 421,25 [M+Na]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Colu- na: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 4,09 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etial 40% em hexanos, Rf = 0,6 (UV)
Figure img0108
Intermediário 9d - (3aR,5R,6S,6aR)-6-(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)- 2,2-dimetil-5-viniltetra-hidrofuro[2,3-d][1,3]dioxol
[00224] n -Butillítio 2,5M (6,02 mL) foi adicionado a uma solução de brometo de metiltrifenilfosfônio (5,38 g, 15,1 mmol) em tetra-hidrofura- no (20 mL) a -78°C. A reação foi deixada aquecer pa ra 0°C e uma solução de intermediário 9c (2,00 g, 5,02 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) foi lentamente adicionada através de seringa. A mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada por 4 h. A mistura de reação foi então extinta com solução de cloreto de amônio aquosa saturada (10 mL) e foi dividida entre água (200 mL) e acetato de etila (200 mL). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura (200 mL), seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Coluna Combiflash HP Gold SiO2 120 g, acetato de etila 0-50%/hexanos) para fornecer intermediário 9d (1,01 g, 51%) como um óleo incolor.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,42 - 7,17 (m, 10H), 6,19 (dd, J = 17,6, 11,0 Hz, 1H), 5,76 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,52 (dd, J = 17,5, 1,9 Hz, 1H), 5,25 (dd, J = 11,1, 1,8 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,62 - 4,55 (m, 2H), 4,52 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,25 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 3,32 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 1,52 (s, 3H), 1,29 (s, 3H)LC/MS: tR = 2,13 min, MS m/z = 419,24 [M+Na]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 4,37 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 50% em hexanos, Rf = 0,55 (UV)
Figure img0109
Intermediário 9e - (3R,4S,5R)-4-(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-2- metoxi-5-viniltetra-hidrofuran-3-ol
[00225] HCl 4M em dioxana (320 μL) foi adicionado a uma solução de intermediário 9d (1,01 g, 2,55 mmol) em metanol (12,5 mL) em temperatura ambiente. Depois de 1,25 h, a mistura de reação foi dividida entre acetato de etila (100 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (100 mL). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com salmoura (100 mL), foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer intermediário bruto 9e (1,05 g, mistura ~2,5:1 de anômeros 1’) como um óleo incolor. LC/MS: anômero maior tR = 2,00 min, MS m/z = 393,22 [M+Na], anômero menor tR = 1,98 min, MS m/z = 393,22 [M+Na]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: anômero maior tR = 4,01 min, anômero menor tR = 3,955 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2-98%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 25% em hexanos, Anômero maior Rf= 0,30 (UV), Anômero menor Rf= 0,25 (UV)
Figure img0110
Intermediário 9f - (2R,3S,4R)-3,4-bis(benziloxi)-2-((benziloxi)metil)-5- metoxi-2-viniltetra-hidrofurano
[00226] NaH (60% em peso, 130 mg, 3,2 mmol) foi adicionado como um sólido a uma solução de intermediário 9e (1,0 g, 2,7 mmol) em THF (13,5 mL) em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argô- nio. Depois de 15 min, brometo de benzila (0,38 mL, 3,2 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 4 h. A mistura de reação foi extinta com solução de cloreto de amônio aquosa saturada (5 mL) e foi dividida entre acetato de etila (100 mL) e salmoura (100 mL). As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer intermediário bruto 9f (1,57 g, mistura ~2:1 de anômeros 1’) como um óleo incolor.LC/MS: anômero maior tR = 1,88 min, MS m/z = 483,36 [M+Na], anômero menor tR = 1,83 min, MS m/z = 483,36 [M+Na]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: anômero maior tR = 4,83 min, anômero menor tR = 4,62 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2-98%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0111
Intermediário 9g - (3R,4S,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-5- viniltetra-hidrofuran-2-ol
[00227] Uma solução de TFA (16 mL) e água (1,6 mL) foi adicionada a intermediário 9f (1,5 g, 3,2 mmol) a 0°C e a m istura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente. Após 9 h, água (1 mL) foi adicionada e a mistura de reação foi deixada agitar mais 10 h. A mistura de reação foi então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em acetato de etila (200 mL) e foi lavado com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (2 x 150 mL) e salmoura (150 mL). A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Coluna Combiflash HP Gold SiO2 24 g, acetato de etila 0-100%/hexanos). As frações contendo o produto desejado foram combinadas para fornecer intermediário 9g (580 mg) como um óleo incolor que era uma mistura com outras impurezas. A mistura foi usada diretamente na etapa seguinte.LC/MS: tR = 3,13 min, MS m/z = 463,88 [M+OH]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 4,34 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0112
Intermediário 9h - (3R,4S,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-5- vinildi-hidrofuran-2(3H)-ona
[00228] Perrutenato de tetrapropilamônio (45,7 mg, 130 μmol) e N- óxido de 4-metilmorfolina (457 mg, 3,89 mmol) foram adicionados a uma solução de intermediário 9g (580 mg, 1,30 mmol) e MS 4Â (100 mg) em DCM (6,45 mL) em temperatura ambiente. Depois de 1h, sílica gel (~500 mg) foi adicionada à mistura de reação e a pasta fluida resultante foi filtrada em uma almofada de sílica gel (~1 g). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Coluna Combiflash HP Gold SiO2 12 g, acetato de etila 0-100%/hexanos) para fornecer intermediário 9h (254 mg, 18% em duas etapas) como um óleo incolor.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,38 - 7,23 (m, 13H), 7,20 - 7,13 (m, 2H), 5,91 (dd, J = 17,5, 11,2 Hz, 1H), 5,49 (dd, J = 17,5, 0,9 Hz, 1H), 5,33 (dd, J = 11,2, 0,9 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 12,0 Hz, 1H). 4,74 - 4,68 (m, 2H), 4,55 - 4,47 (m, 3H), 4,39 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,55 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,46 (d, J = 10,8 Hz, 1H)LC/MS: tR = 2,19 min, MS m/z = 444,78 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 4,53 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila 25% em hexanos, Rf = 0,45 (UV)
Figure img0113
Intermediário 9i - (3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-5-viniltetra-hidrofuran-2-ol
[00229] n -Butillítio (2,5M em hexanos, 1,0 mL, 2,5 mmol) foi adicionado rapidamente a uma suspensão de intermediário 1b (0,21 g, 0,81 mmol) e 1,2-bis(clorodimetilsilil)etano (0,17 g, 0,81 mmol) em THF (4 mL) a -78°C sob uma atmosfera de argônio. A mistura resultante foi então transferida através de cânula a uma solução de 9h (0,18 g, 0,41 mmol) em THF (1 mL) a -78°C sob uma atmosfera de ar gônio. Após 20 min, a mistura de reação foi deixada aquecer para 0°C e foi agitada por 15 min. A mistura de reação foi extinta com solução de cloreto de amônio aquosa saturada (1 mL). A mistura resultante foi diluída com acetato de etila (100 mL) e foi lavada com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (100 mL) e salmoura (100 mL). A camada or-gânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Coluna Combiflash HP Gold SiO2 12 g, acetato de etila 0-100%/hexanos) para fornecer intermediário 9i (11,1 mg, 5%, mistura de isômeros) como um óleo incolor.LC/MS: tR = 1,97 min, MS m/z = 579,27 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 3,37 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila, Rf= 0,3 (UV)
Figure img0114
Intermediário 9j - 7-((2S,3S,4S,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi) me- til)-5-viniltetra-hidrofuran-2-il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-amina
[00230] A uma solução de intermediário 9i (11,0 mg, 19,0 μmol) e trietilsilano (0,5 mL) em DCM (1 mL) foi adicionado dietil eterato de tri- fluoreto de boro (0,1 mL) lentamente a 0°C sob uma atmosfera de ar- gônio. Depois de 1 h, a mistura de reação foi lentamente diluída com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (10 mL) e a mistura resultante foi extraída com acetato de etila (2 x 10 mL), foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de SiO2 (Coluna Combiflash HP Gold SiO2 4 g, acetato de etila 0-100%/hexanos) para fornecer intermediário 9j (7,7 mg, 72%) como uma película incolor.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,87 (s, 1H), 7,37 - 7,17 (m, 15H), 6,73 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,23 (dd, J = 17,5, 10,9 Hz, 1H), 5,70 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,59 (dd, J = 17,5, 1,8 Hz, 1H), 5,32 (dd, J = 10,9, 1,7 Hz, 1H), 4,72 - 4,56 (m, 4H), 4,49 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 4,43 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 5,6, 4,0 Hz, 1H), 3,56 (s, 2H).LC/MS: tR = 2,32 min, MS m/z = 563,33 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 3,51 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.TLC: eluente: acetato de etila, Rf = 0,40 (UV)
Figure img0115
Exemplo 20 - (2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)-2-viniltetra-hidrofuran-3,4-diol
[00231] Tribrometo de boro (1M, 0,06 mL, 60 μmol) foi adicionado em gotas a uma solução de intermediário 9j (7,7 mg, 13,7 μmol) em diclorometano (1 mL) a -78°C sob uma atmosfera de a rgônio. Após 1 h, a mistura de reação foi deixada aquecer para 0°C e foi agitada mais 1,5 h. A reação foi esfriada para -78°C e foi extinta com uma solução de metanol/piridina 2:1 (1,5 mL). A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila 0-100%/água) para fornecer Exemplo 20 (0,5 mg, 13%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,78 (s, 1H), 6,88 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,02 (dd, J = 17,4, 11,0 Hz, 1H), 5,47 (dd, J = 17,4, 2,0 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 10,9, 2,1 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 8,2, 5,7 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,60 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 11,8 Hz, 1H)LC/MS: tR = 0,84 min, MS m/z = 293,19 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-1,5 min ACN 2-100%, 1,5 min-2,2 min ACN 100%, 2,2 min-2,4 min ACN 100%-2%, 2,4 min-2,5 min ACN 2% a 2μl/minHPLC: tR = 2,181 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0116
Exemplo 21 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-5-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4]tria-zin-7-il)-2-azido-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol
[00232] O Exemplo 19 (237 mg, 0,766 mmol) e selectfluor (407 mg, 1,15 mmol) foram suspensos em acetonitrila (5 mL) e AcOH (0,2 mL) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 min e foi então neutralizada com solução de bicarbonato de sódio e filtrada para remover sólidos. Quando da concentração a vácuo, o resíduo foi purificado através de HPLC preparativa (acetonitri- la 0 a 30% em água) para fornecer o Exemplo 21 (27 mg, 11%) como um sólido esbranquiçado.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,73 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 5,80 (dd, J = 23,9, 1,7 Hz, 1H), 5,16 (ddd, J = 55,3, 5,0, 1,7 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 23,5, 5,0 Hz, 1H), 3,94 - 3,60 (m, 2H)19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -161,76 (s), -195,42 (d, J = 55,4 Hz)MS m/z = 328 [M+H]. Sistema MS: Thermo LCQ Fleet
Figure img0117
Intermediário 11b - 2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina.
[00233] O intermediário 11a (2,0 g, 13,4 mmoLl) foi carregado em um tubo polyTube. O recipiente de reação foi então posto em um banho gelado e ambos HF 70%/Pyr (18 mL) e piridina (9 mL) foram adicionados sequencialmente. Imediatamente após a adição de piridina, tBuNO2 (2,07 mL, 17,43 mmol) foi então adicionado lentamente durante 20 min. A solução vai de castanho para preto com um exoterma e desgaseificação. A reação foi então agitada por mais 20 min e a mistura de reação foi então diluída com água e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dividido entre acetato de etila e água. Os orgânicos foram separados e a aquosa foi lavada com acetato de etila três vezes. Os orgânicos foram combinados e lavados com salmoura. O produto bruto foi seco em Na2SO4, filtrado e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de croma- tografia de sílica gel (EtOAc 50-100%/Hex) para fornecer intermediário 11b (1,68 g, 82%) como um sólido castanho. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,49 - 8,09 (m, 2H), 7,58 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 4,5, 1H), 6,59 (d, J = 4,5, 1H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -73,42 (s).LC/MS: tR = 1,03 min, MS m/z = 153,08 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0118
Intermediário 11c - 7-bromo-2-fluorpirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-amina.
[00234] Uma solução de 11b (3,36 g, 22,1 mmol) em DMF (50 mL) foi esfriada para 0°C em um banho gelado. Uma solução de 1,3- dibromo-5,5-dimetilidantoína (3,16 g, 11,0 mmol) em DMF (50 mL) foi adicionada em gotas através de funil de adição durante 40 min. Após 1 h, a reação foi extinta com Na2S2O3(aq) saturado e o bruto foi dividido entre EtOAc e LiCl(aq) 5%. Os orgânicos foram extraídos com LiCl(aq) 5% (4x) seguido por salmoura. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, os sólidos foram removidos através de filtragem e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi sonificado com CH2Cl2 e os sólidos foram coletados através de filtragem e foram secos sob vácuo alto para fornecer intermediário 11c (3,93 g, 77%) como um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,49-8,44 (m, 2H), 7,08 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 4,6 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -71,45 (s).LC/MS: tR = 1,22 min, MS m/z = 232,98 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0119
Intermediário 11e - (3R,4R,5R)-2-(4-amino-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-4-(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-3-fluortetra-hidrofuran-2-ol.
[00235] A uma solução de 11c (2,09 g, 9,08 mmol) em THF (30 mL) foi adicionado 1,2-bis(clorodimetilsilil)etano (STABASE, 1,96 g, 9,08 mmol) em uma porção e a mistura resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente por 1 h. A reação foi então esfriada para -78°C usando um banho de gelo seco com metanol. nBuLi (2,5M em hexa- nos, 10,9 mL, 27,2 mmol) foi adicionado de uma maneira para manter uma temperatura interna de -65°C. Uma solução de in termediário 11d (Preparado de acordo com WO2012012776, 2,5 g, 7,5 mmol) em THF (25 mL) foi então adicionada à mistura de reação durante 1 min. Após 5 min, a mistura de reação foi extinta com ácido acético e foi deixada ir para a temperatura ambiente. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi absorvido em acetato de etila. Os orgânicos foram lavados com água seguido por salmoura. As camadas foram separadas e os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 11e bruto como uma mistu- ra de isômeros, que foi usada como é na etapa seguinte.LC/MS: tR = 1,32 e 1,40 min, MS m/z = 483,15 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetoni- trila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min- 1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0120
Intermediário 11f - 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)- 3-fluortetra-hidrofuran-2-il)-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina.
[00236] O intermediário 11e (1,99 g, 3,72 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (80 mL) e TES (4,75 mL, 29,7 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura de reação foi esfriada para 0°C e BF3^Et2O (1,07 mL, 4,09 mmol) foi lentamente adicionado. Depois de 15 minutos, a mistura de reação foi extinta com NaHCO3(aq) saturado e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com CH2Cl2. As camadas orgânicas foram combinadas e foram lavadas com NaHCO3(aq) saturado. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e foram concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado através de cromato- grafia de sílica gel (EtOAc 0-60%/Hex) para fornecer intermediário 11f (1,12 g, 64%, mistura 2:1 de anômeros 1’).LC/MS: tR = 1,55 min, MS m/z = 467,47 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0121
Intermediário 11g - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2, 4]triazin-7-il)-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol
[00237] O intermediário 11f (0,82 g, 1,76 mmol) foi dissolvido em ácido acético (25 mL). O recipiente de reação foi purgado com Argônio e Pd/C 10% (468 mg, 0,439 mmol) foi adicionado. O recipiente foi evacuado e retrocheio com H2(g) (3x). Após 1 h, o recipiente de reação foi purgado com nitrogênio. A mistura resultante foi filtrada em uma almofada de celite e a torta de filtro foi lavada com CH3OH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e então evaporado com acetato de etila seguido por hexanos para fornecer intermediário 11g (503 mg, 98%, mistura 2:1 de anômeros 1’).LC/MS: tR = 0,81 min, MS m/z = 286,97 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0122
Intermediário 11h - (2S,3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2, 4]triazin-7-il)-4-fluor-2-(iodometil)tetra-hidrofuran-3-ol.
[00238] A um frasco purgado com argônio foi adicionada uma solução de 11g (283 mg, 0,989 mmol) em DMF (10 mL) seguido por uma solução de iodeto de metil trifenoxifosfônio (0,536 g, 1,19 mmol) em 4 mL de DMF. A mistura de reação foi deixada agitar a 0°C por 10 min e foi então aquecida para temperatura ambiente. Depois de 30 minutos, a reação foi extinta com Na2S2O3(aq) saturado. O material bruto foi dividido entre EtOAc e LiCl(aq) 5%. Os orgânicos foram separados e lavados com salmoura. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi absorvido em ACN e purificado através de HPLC sem modificador ácido para fornecer intermediário 11h (201 mg, 52%, mistura 2:1 de anômeros 1’) como um sólido branco.LC/MS: tR = 1,08 min, MS m/z = 397,12 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a1,8mL/min.
Figure img0123
Intermediário 11i - (3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-4-fluor-2-metilenotetra-hidrofuran-3-ol.
[00239] A uma solução de 11h (356 mg, 0,899 mmol) em THF (8 mL) foi adicionado DBU (0,403 mL, 2,70 mmol) e a mistura resultante foi aquecida para 60°C. Depois de 3 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 40-100%/Hex) para fornecer inter-mediário 11i (201 mg, 83%, mistura 2:1 de anômeros 1’) como um sólido branco.LC/MS: tR = 1,04 min, MS m/z = 269,14 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0124
Intermediário 11j - (2S,3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-2-azido-4-fluor-2-(iodometil)tetra-hidrofuran-3-ol
[00240] Cloreto de benziltrimetilamônio (292 mg, 1,57 mmol) e azi- da de sódio (102 mg, 1,57 mmol) foram dissolvidos em ACN (4 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 4 h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi adicionado a uma solução de 11i (0,201 g, 0,749 mmol) em THF (4 mL). NMM (0,412 mL, 3,75 mmol) foi adicionado seguido pela adição em gotas de uma solução de iodo (0,342 g, 1,35 mmol) em THF (4 mL). Após 15 minutos, N-acetil cisteína foi adicionada em porções até que nenhuma desgaseificação fosse observada. Na2S2O3(aq) foi adicionado até que a solução fosse um amarelo claro. A mistura resultante foi dividida entre água e acetato de etila. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 20-100%/Hex) para fornecer intermediário 11j (183 mg, 56%) como um isômero único.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,44 (d, J = 28,6 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,32 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 23,8, 2,5 Hz, 1H), 5,36 (ddd, J = 54,9, 5,0, 2,6 Hz, 1H), 4,60 (ddd, J = 21,5, 6,9, 5,0 Hz, 1H), 3,63 (ABq, Δδ = 0,09ppm, J = 8Hz, 2H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -71,74 (s), -194,57 (ddd, J = 54,9, 24,0, 21,7 Hz)LC/MS: tR = 1,71 min, MS m/z = 437,93 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0125
Intermediário 11k - Isobutirato de (2S,3R,4S,5S)-5-(4-amino-2-fluor- pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-azido-4-fluor-2-(iodometil)tetra-hidro- furan-3-ila.
[00241] A uma solução de 11j (0,183 g, 0,419 mmol) em THF (10 mL) foram adicionados anidrido isobutírico (0,083 mL, 0,502 mmol), TEA (0,118 mL, 0,837 mmol) e DMAP (10 mg, 0,084 mmol). A reação foi deixada agitar em temperatura ambiente por 15 minutos e a reação foi extinta com CH3OH. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-50%/Hex) para fornecer intermediário 11k (0,198 g, 93%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,48 (d, J = 30,7 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,77 - 5,47 (m, 3H), 3,69 (ABq, Δδ = 0,05ppm, J = 12 Hz, 2H), 2,70 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 1,24 - 1,05 (d, J = 7,0 Hz, 6H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -71,58 (s), -194,89 (ddd, J = 55,0, 24,3, 16,8 Hz).LC/MS: tR = 1,56 min, MS m/z = 508,13 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0126
Intermediário 11l - 3-clorobenzoato de ((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-2- fluorpirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-2-azido-4-fluor-3-(isobutiriloxi)tetra- hidrofuran-2-il)metila.
[00242] O intermediário 11k (0,153 g, 0,302 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (10 mL) e H2O (6 mL). Fosfato de potássio dibásico (0,138 g, 0,603 mmol), bissulfato de tetrabutilamônio (0,210 g, 0,618 mmol) e ácido 3-clorobenzoico (0,097 g, 0,618 mmol) foram adicionados se-quencialmente. A mistura resultante foi esfriada para 0°C e MCPBA (0,203 g, 0,905 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e foi agitada por 16 h. A mistura de reação foi então extinta com Na2S2O3(aq) saturado e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo aquoso bruto foi diluído com ACN e purificado através de HPLC preparativa sem modificador ácido para fornecer intermediário 11l (20 mg, 13%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,46 (d, J = 26,4 Hz, 2H), 7,96 - 7,81 (m, 2H), 7,81 - 7,66 (m, 1H), 7,62 - 7,46 (m, 1H), 6,94 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,73 (s, 3H), 4,60 (ABq, Δδ = 0,08ppm, J = 12 Hz, 2H), 2,66 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 1,20 - 1,01 (m, 6H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ = -71,45 (s), -193,41 (ddd, J = 54,4, 25,4, 21,2 Hz,). LC/MS: tR = 2,22 min, MS m/z = 536,17 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0127
Exemplo 22 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4]tria- zin-7-il)-2-azido-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol
[00243] A uma solução de intermediário 11l (22 mg, 0,041 mmol) em CH3OH (1 mL) foi adicionado NH4OH concentrado (1 mL) em tem-peratura ambiente. Após 30 min, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi diluído com H2O mínima e foi purificado através de HPLC preparativa sem modificador para fornecer Exemplo 22 (10 mg, 77%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,40 (d, J = 30,9 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,89 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,61 (dd, J = 23,8, 2,1 Hz, 1H), 5,44 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 5,18 (ddd, J = 55,3, 5,1, 2,2 Hz, 1H), 4,44 (ddd, J = 23,7, 7,5, 5,0 Hz, 1H), 3,59 (ddd, J = 48,5, 12,0, 6,1 Hz, 2H).19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -71,18 (s), -193,48 (dt, J = 55,3, 23,8 Hz).LC/MS: tR = 1,13 min, MS m/z = 327,86 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0128
Intermediário 12a - (2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5-fluorpirrolo[2,1-f][1,2, 4]triazin-7-il)-3-(( terc- butildimetilsilil)oxi)-2-((( terc- butildimetilsilil) oxi) metil)-4-fluortetra-hidrofuran-2-carbonitrila
[00244] A uma solução de intermediário 3d (57 mg, 0,109 mmol) em ACN (3 mL) foi adicionado Selecfluor II em uma porção (52 mg, 0,164 mmol). Após 1,5 h, a reação foi extinta através da adição de NaHCO3(aq) saturado. Acetato de etila (4 mL) foi adicionado e a mistura bifásica foi agitada vigorosamente por 5 min. A reação foi diluída mais com EtOAc e NaHCO3(aq) saturado. As camadas foram separadas e a fase orgânica foi extraída com água e então salmoura. A camada orgânica foi seca em Na2SO4. O agente de secagem foi removido através de filtragem a vácuo e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Intermediário 12a (11 mg, 18,7%) foi isolado do material bruto concentrado através de cromatografia de coluna de sílica gel usando o aumento de solvente que segue: EtOAc 0% em hexanos aumentando para EtOAc 70% em hexanos, aumentando rapidamente para EtOAc 100% uma vez o material de partida eluindo da coluna.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,72 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 5,65 (dd, J = 24,8, 2,4 Hz, 1H), 5,38 (dq, J = 54,4, 2 Hz, 1H), 4,88 (dd, J = 19,2, 4,4 Hz, 1H), 3,96 (ABq, ΔδAB= 0,141ppm, J = 11 Hz, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,86 (s, 9H), 0,21 (s, 6H), 0,07 (s, 3H), -0,02 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -161,795 (s), -194,806 (ddd, J = 54,5, 19,2, 18,8 Hz).LC/MS: RT = 2,06 min, MS m/z = 540,64 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3 min ACN 2%.
Figure img0129
Exemplo 23 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-5-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4] tria- zin-7-il)-4-fluor-3-hidroxi-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila
[00245] A uma solução de intermediário 12a (29 mg, 0,054 mmol) em THF (2 mL) em um tubo de polipropileno foi adicionado HF.Piridina 70% em piridina (51 μL, 1,97 mmol) a 0°C, sob uma atmosfera de N2. Após 1,5 h, A reação foi removida do banho gelado. Mais HF.Piridina 70% em piridina foi adicionado após 3 h (150 μL), 5 h 45 min (200 μL) e 21 h 15 min (0,7 mL). A mistura de reação foi então agitada por mais 24 h ponto onde a mistura de reação foi esfriada em um banho gelado e então extinta com água e NaHCO3(aq) saturado. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi absorvido em DMF. A solu- ção/suspensão resultante foi filtrada em um filtro de seringa (Whatman 0,45 μm PTFE w/GMF). O filtrado foi injetado em uma HPLC e o produto semipurificado foi purificado adicionalmente através de cromato- grafia de coluna de sílica gel usando o aumento de solvente que segue: MeOH 0% em DCM aumentando para MeOH 20% em DCM. Frações contendo produto foram concentradas e o resíduo foi liofilizado para fornecer Exemplo 23 (5 mg, 30%) como um pó branco.1H NMR (400 MHz, DMF-d7) δ 7,74 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 5,75 (dd, J = 25,2, 1,6 Hz, 1H), 5,23 (ddd, J = 54,8, 4,8, 1,6 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 22, 4,4 Hz, 1H), 3,90 (ABq, ΔδAB = 0,151ppm, J = 12 Hz, 2H) . 19F NMR (376 MHz, DMF-d7) δ -161,727 (s), -193,726 (ddd, J =54,5, 22,9, 21,8 Hz).LC/MS: RT = 0,81 min, MS m/z = 312,13 [M+1]; LC: ThermoAccela 1250 UHPLC; MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,8 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%,
Figure img0130
Intermediário 13a - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(( terc- butildimetilsilil)oxi)-5- (((terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-3-fluor-5-(iodometil)tetra-hidrofuran-2- il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00246] A uma solução de trifenilfosfina (973 mg, 3,71 mmol) e imi- dazol (252 mg, 3,71 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado iodo (253 mg, 1,86 mmol) em temperatura ambiente. Quando da dissolução completa do iodo, uma solução de composto 2g (650 mg, 0,93 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada em gotas lentamente. A mistura resultante foi agitada a 80°C por 3 dias e foi então con centrada a vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de sílica gel (EtOAc 0 a 50% em hexanos) para fornecer intermediário 13a (230 mg, 33%) como um óleo.MS m/z = 742 [M+H]. Sistema MS: Thermo LCQ Fleet.
Figure img0131
Intermediário 13b - N-(7-((2S,3S,4R,5R)-4-(( terc- butildimetilsilil)oxi)-5- (((terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-3-fluor-5-metiltetra-hidrofuran-2-il)pirro- lo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)benzamida.
[00247] O intermediário 13a (200 mg, 0,243 mmol) foi dissolvido em metanol (10 mL) e sob atmosfera de nitrogênio, Pd/C 10% (100 mg, 0,094 mmol) e TEA (0,035 mL, 0,243 mmol) foram adicionados. A mistura resultante foi então agitada sob atmosfera de H2 (balão) em temperatura ambiente por 40 minutos. A mistura resultante foi filtrada e concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado através de cromatogra- fia de coluna de sílica gel (EtOAc 0 a 40% em hexanos) para fornecer intermediário 13b (145 mg, 72%) como um sólido branco com 75% de pureza.MS m/z = 616 [M+H]. Sistema MS: Thermo LCQ Fleet
Figure img0132
Exemplo 24 - (2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 4-fluor-2-(hidroximetil)-2-metiltetra-hidrofuran-3-ol.
[00248] O intermediário 13b (145 mg, 75% de pureza, 0,177 mmol) foi dissolvido em THF (10 mL) e TBAF (1M em THF, 0,53 mL, 0,531 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 h e então amônia metanólica (7N, 10 mL) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada por 24 h e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de HPLC pre-parativa (acetonitrila 0 a 35% em água em 20 min) para fornecer Exemplo 24 (30 mg, 60%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,78 (s, 1H), 6,84 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,53 (dd, J = 21,5, 4,0 Hz, 1H), 5,25 (ddd, J = 55,5, 5,3, 4,1 Hz, 1H), 4,44 (dd, J = 17,2, 5,2 Hz, 1H), 3,65 - 3,43 (m, 2H), 1,27 (s, 3H)19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -197,08 (ddd, J = 55,4, 21,5, 17,1 Hz)MS m/z = 282 [M+H]. Sistema MS: Thermo LCQ Fleet.
Figure img0133
Intermediário 14a - (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 7-il)-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3,4-diol.
[00249] O intermediário 1e (2,64 g, 4,91 mmol) foi dissolvido em ácido acético (50 mL). O frasco foi purgado com Argônio e Pd/C 10% (1,05 g, 0,982 mmol) foi adicionado. O frasco foi evacuado e retrocheio com H2(g) três vezes. A mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de H2(g). Após 1 h, o frasco foi purgado com nitrogênio e a mistura de reação foi filtrada em uma almofada de celite com lavagens com CH3OH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e então coe- vaporado com EtOAc seguido por hexanos. O resíduo foi posto sob vácuo alto para fornecer intermediário 14a (1,31 g, 99%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,80 (s, 1H), 7,66 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 5,06-4,56 (m, 3H), 4,21 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,93 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 3,77 (q, J = 4,5 Hz, 1H), 3,48 (ddd, J = 38,9, 11,8, 4,4 Hz, 2H).LC/MS: tR = 0,47 min, MS m/z = 267,13 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0134
Intermediário 14b - ((3aR,4R,6S,6aS)-6-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metanol.
[00250] O intermediário 14a (3,13 g, 11,7 mmol) foi dissolvido em acetona (80 mL) e TsOH (6,00 g, 31,5 mmol) foi adicionado. Trietilorto- formato (6,0 mL, 36,1 mmol) foi lentamente adicionado durante 10 min. A mistura resultante foi deixada agitar em temperatura ambiente de um dia para o outro. Solução de carbonato de sódio aquosa saturada foi adicionada até que a mistura de reação tivesse pH=8. Os sólidos foram removidos através de filtragem e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dividido entre EtOAc e salmoura. As fases foram separadas e os orgânicos foram secos em Na2SO4, foram filtrados e foram concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 60- 100%/Hex - MeOH 20%/EtOAc) para fornecer intermediário 14b (2,55 g, 71%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,83 (s, 1H), 7,71 (s, 2H), 6,83 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 6,6, 4,9 Hz, 1H), 4,84 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,71 (dd, J = 6,7, 3,7 Hz, 1H), 3,99 - 3,85 (m, 1H), 3,46 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,48 (s, 3H), 1,29 (s, 3H).LC/MS: tR = 0,87 min, MS m/z = 307,21 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.H2N H2N
Figure img0135
Intermediário 14c - 7-((3aS,4S,6R,6aR)-6-((( terc- butildimetilsilil)oxi)me- til)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]tria- zin-4-amina.
[00251] O intermediário 14b (2,55 g, 8,32 mmol) foi dissolvido em DMC (50 mL) e a mistura foi esfriada para 0°C. Imid azol (1,70 g, 24,9 mmol) foi adicionado seguido por TBSCl (1,88 g, 12,5 mmol). Depois de 16 h, A reação foi extinta com metanol. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi dividido entre água e EtOAc. Os orgânicos foram secos em Na2SO4, foram filtrados e foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 50-100%/Hex) para fornecer intermediário 14c (2,60 g, 74%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,83 (s, 1H), 7,74 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 6,5, 4,5 Hz, 1H), 4,71 (dd, J = 6,5, 3,7 Hz, 1H), 3,97 (td, J = 5,1, 3,6 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 1,48 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), -0,02 (s, 6H).LC/MS: tR = 1,91 min, MS m/z = 421,60 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0136
(7-((3aS,4S,6R,6aR)-6-((( terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][ 1,3]dioxol-4-il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4] triazin-4-il)carbamato de terc- butila.
[00252] O intermediário 14c (2,59 g, 6,16 mmol) foi dissolvido em THF (60 mL) e a solução resultante foi esfriada para 0°C. Boc 2O (2,69 g, 12,3 mmol) e DMAP (0,3 g, 2,46 mmol) foram então adicionados. TEA (2,56 mL, 18,3 mmol) foi adicionado lentamente e a mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente. Após 3 h, a mistura de reação foi esfriada para 0°C e MeOH (10 mL) foi adicionado seguido por NH4OH(aq) concenctrado. A mistura resultante foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada de um dia para o outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi dividido entre EtOAc e água. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-100%/Hex) para fornecer intermediário 14d (2,82 g, 88%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,46 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,19 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 6,5, 4,3 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 6,5, 3,6 Hz, 1H), 4,01 (q, J = 5,0 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,32 (d, J = 22,7 Hz, 6H), 0,82 (s, 9H), -0,03 (s, 6H).LC/MS: tR = 1,89 min, MS m/z = 521,27 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0137
Intermediário 14e - (7-((3aS,4S,6R,6aR)-6-(hidroximetil)-2,2-dimetilte- tra-hidrofuro[3,4-d][ 1,3]dioxol-4-il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)carba- mato de terc- butila.
[00253] O intermediário 14 (2,8 g, 5,4 mmol) foi dissolvido em THF (50 mL) e TBAF (1,0M em THF, 5,92 mL, 5,92 mmol) foi adicionado. Após 30 min, mais TBAF (1,0M em THF, 5,92 mL, 5,92 mmol) foi adicionado. Após mais 30 minutos, a mistura de reação foi extinta com água e a mistura resultante foi extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, foram secas em Na2SO4, foram filtradas e foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 10-100%/Hex) para fornecer intermediário 14e (2,19 g, 86%) como um sólido branco). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,46 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 5,29 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,03 (dd, J = 6,6, 4,7 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 6,6, 3,6 Hz, 1H), 4,05 - 3,90 (m, 1H), 3,46 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 1,50 (s, 12H), 1,29 (s, 3H).LC/MS: tR = 1,52 min, MS m/z = 407,05 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0138
Intermediário 14f - (7-((3aS,4S,6aS)-6,6-bis(hidroximetil)-2,2-dimetilte- tra-hidrofuro[3,4-d][ 1,3]dioxol-4-il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)carba- mato de terc- butila.
[00254] O intermediário 14e (1,78 g, 4,38 mmol) foi dissolvido em DMSO (20 mL) e tolueno (15 mL). Piridina (0,35 mL, 4,38 mmol) e EDCl (1,26 g, 6,56 mmol) foram adicionados seguido por TFA (0,178 mL, 2,39 mmol). Após 90 minutos, mais piridina (0,35 mL, 4,38 mmol) e EDCl (1,26 g, 6,56 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada por mais 30 minutos. A reação foi extinta com água e a mistura resultante foi extraída com CH2Cl2. A aquosa foi retroextraída com CH2Cl2. As camadas orgânicas foram combinadas e foram lavadas com salmoura, foram secas em Na2SO4, foram filtradas e foram concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi posto sob vácuo alto por 15 minutos, então foi usado como é para a etapa seguinte.
[00255] O resíduo bruto foi dissolvido em dioxana (15 mL) e formal- deído (37% em água, 5,0 mL, 37,2 mmol) e NaOH 2N (5,34 mL, 10,7 mmol) foram adicionados sequencialmente. Após 10 minutos, a reação foi extinta com AcOH e a mistura resultante foi dividida entre NaHCO3(aq) saturado e CH2Cl2. A camada aquosa foi retroextraída com CH2Cl2. As camadas orgânicas foram combinadas e foram lavadas com salmoura, foram secas em Na2SO4, foram filtradas e foram concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi posto sob vácuo alto por 15 minutos, então foi levado diretamente para a reação seguinte.
[00256] O resíduo bruto foi dissolvido em EtOH (50 mL) e NaBH4 (0,324 g, 8,76 mmol) foi adicionado em pequenas porções. Após 20 minutos, a mistura de reação foi extinta com AcOH e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dividido entre EtOAc e NaHCO3(aq) saturado. A camada orgânica foi separada, foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 50- 100%/Hex) para fornecer intermediário 14f (1,91 g, 68%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,45 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,19 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,06 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,79-4,74 (m, 2H), 4,45 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,73 - 3,46 (m, 3H), 3,40 - 3,30 (m, 1H), 1,50 (s, 12H), 1,27 (s, 3H).LC/MS: tR = 1,45 min, MS m/z = 437,09 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min. BocHN BocHN
Figure img0139
Intermediário 14g - (7-((3aS,4S,6S,6aS)-6-((bis(4-metoxifenil)(fenil) metoxi)metil)-6-(hidroximetil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol -4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-il)carbamato de terc- butila.
[00257] O intermediário 14f (1,15 g, 2,63 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (50 mL) e TEA (0,73 mL, 5,27 mmol) foi adicionado. A solução resultante foi esfriada para 0°C e DMTrCl (1,35 g, 3,95 mmol) foi adicionado. Após 10 minutos, a mistura de reação foi extinta com CH3OH e foi então diluída com CH2Cl2. A mistura resultante foi lavada com NaHCO3(aq) saturado e salmoura. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0- 100%/Hex) para fornecer 14 g (1,95 g, 79%) como um sólido esbranquiçado.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10,46 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,56 - 7,07 (m, 10H), 7,07 - 6,70 (m, 5H), 5,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,04 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,93 - 4,71 (m, 2H), 3,80 - 3,59 (m, 7H), 3,52 (dd, J = 10,9, 4,8 Hz, 1H), 3,25 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,09 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 1,50 (s, 9H), 1,25 (s, 3H), 1,21 (s, 3H).LC/MS: tR = 2,54 min, MS m/z = 739,28 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0140
Intermediário 14h - (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-((bis(4-metoxifenil)(fenil)me- toxi)metil)-6-((( terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro [3,4-d][1,3]dioxol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-il)carbamato de terc- butila.
[00258] O intermediário 14g (1,53 g, 2,08 mmol) foi dissolvido em DMF (10 mL) e imidazol (0,42 g, 6,23 mmol) foi adicionado seguido por TBSCl (0,47 g, 3,11 mmol). Após 1 h, a reação foi extinta com metanol e dividida entre EtOAc e LiCl(aq) 5%. As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura, foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-50%/Hex) para fornecer 14h (1,77 g, 78%) como um sólido esbranquiçado.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,47 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,56 - 6,66 (m, 15H), 5,31 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 6,5, 4,9 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 3,72 (s, 6H), 3,53 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,08 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 1,50 (s, 9H), 1,25 (s, 3H), 1,22 (s, 3H), 0,75 (s, 9H), -0,04 (s, 3H), -0,08 (s, 3H).LC/MS: tR = 2,34 min, MS m/z = 853,50 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,0 min ACN 2-100%,1,0 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0141
Intermediário 14i - (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-((( terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-6-(hidroximetil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-il)carbamato de terc- butila.
[00259] O intermediário 14h (1,38 g, 1,62 mmol) foi dissolvido em clorofórmio (20 mL) e a solução resultante foi esfriada para 0°C. Uma solução de TsOH (0,34 g, 1,78 mmol) em CH3OH (16 mL) foi então adicionada lentamente. Após 30 min, a reação foi extinta com NaHCO3(aq) saturado e a mistura resultante foi dividida entre EtOAc e salmoura. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-100%/Hex) para fornecer intermediário 14i (0,84 g, 94%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,42 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,37 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,05 (dd, J = 6,2, 4,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 4,51 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,70 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,49 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 1,49 (s, 12H), 1,28 (s, 3H), 0,82 (s, 9H), -0,01 (s, 3H), -0,02 (s, 3H).LC/MS: tR = 1,88 min, MS m/z = 551,25 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLCSistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,0 min ACN 2- 100%,1,0 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0142
Intermediário 14j - (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((terc-butildimetilsilil)oxi) metil)-6-ciano-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][ 1,3]dioxol-4-il)pirrolo[2,1 - f][1,2,4]triazin-4-il)carbamato de terc- butila.
[00260] O intermediário 14i (0,838 g, 1,52 mmol) foi dissolvido em DMSO (5 mL) e tolueno (3 mL). Piridina (0,14 mL, 1,67 mmol) e EDCl (0,438 g, 2,28 mmol) foram adicionados seguido por TFA (0,057 mL, 0,761 mmol). Após 30 minutos, mais piridina (0,14 mL, 1,67 mmol) e EDCl (0,438 g, 2,28 mmol) foram adicionados. Após 1 h, mais piridina (0,14 mL, 1,67 mmol) e EDCl (0,438 g, 2,28 mmol) foram adicionados. Após 2 h, a mistura de reação foi extinta com NaHCO3(aq) ^ saturado e foi dividida entre EtOAc e NaHCO3(aq) ^ sat. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2, foi concentrado sob vácuo alto por 1 h para fornecer um resíduo que foi usado diretamente na etapa seguinte.
[00261] O resíduo foi dissolvido em piridina (8 mL) e cloridrato de hidroxilamina (0,159 g, 2,28 mmol) foi adicionado em uma porção. Após 15 minutos, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e foi dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi posto sob vácuo alto por 30 minutos e usado como é para a terceira etapa.
[00262] O resíduo bruto foi dissolvido em ACN (8 mL). CDl (0,37 g, 2,28 mmol) foi adicionado em uma porção. Após 45 minutos, mais CDl (0,37 g, 2,28 mmol) foi adicionado. Após 1 h, a reação foi extinta com NaHCO3(aq) ^ saturado. O produto bruto foi dividido entre EtOAc e NaHCO3(aq) 1Z> saturado. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca em Na2SO4, foi filtrada e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-50%/Hex) para fornecer intermediário 14j (0,72 g, 87%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,53 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,00 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,62 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 6,6, 3,7 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,83 (s, 2H), 1,62 (s, 3H), 1,50 (s, 9H), 1,33 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).LC/MS: tR = 2,50 min, MS m/z = 546,15 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0143
Intermediário 14k - (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4] tri- azin-7-il)-4-((( terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro [3,4-d][ 1,3]dioxol-4-carbonitrila.
[00263] O intermediário 14j (0,688 g, 1,26 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (15 mL). Brometo de zinco (0,567 g, 2,52 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente. Após 3 h, a mistura de reação foi adicionada a um cartucho de carga de sílica e foi purificada através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 40-100%/Hex) para fornecer intermediário 14k (0,56 g, 99%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,86 (s, 1H), 7,80 (s, 2H), 6,85 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,55 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,25 (dd, J = 6,6, 3,8 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,82 (s, 2H), 1,61 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), -0,13 (s, 6H).LC/MS: tR = 2,27 min, MS m/z = 446,68 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0144
Intermediário 14l - N-(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-((( terc- butildimetilsilil) oxi)metil)-6-ciano-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)pirrolo [2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)acetamida.
[00264] O intermediário 14k (0,20 g, 0,449 mmol) foi dissolvido em piridina (2 mL), então anidrido acético (0,21 mL, 2,24 mmol) foi adicio-nado e a reação foi agitada em temperatura ambiente. Após 30 minutos, a mistura de reação foi extinta com metanol e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado diretamente através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-100%/Hex) para fornecer in-termediário 14I (0,185 g, 85%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,87 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,24 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,29 (dd, J = 6,6, 3,6 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,84 (s, 2H), 2,36 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,00 (s, 3H), - 0,01 (s, 3H).LC/MS: tR = 1,14 min, MS m/z = 488,38 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0145
Intermediário 14m - N-(5-bromo-7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((terc-butildi- metilsilil)oxi)metil)-6-ciano-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4- il)pirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)acetamida.
[00265] O intermediário 14l (80 mg, 0,164 mmol) foi dissolvido em DMF (2 mL) e NBS (29 mg, 0,164 mmol) foi adicionado em uma porção. Após 45 minutos, a reação foi diluída com metanol. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de cromatografia de sílica gel (EtOAc 0-50%/Hex) para fornecer inter-mediário 14m (50 mg, 54%) como um sólido esbranquiçado.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,13 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,65 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,29 (dd, J = 6,6, 3,2 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 3,84 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,02 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).LC/MS: tR = 1,79 min, MS m/z = 566,40 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Colu- na: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0146
Intermediário 14n - N-(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-((( terc- butildimetilsilil)oxi) metil)-6-ciano-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)-5-fluorpir- rolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-4-il)acetamida.
[00266] O intermediário 14m (50 mg, 0,088 mmol) foi dissolvido em THF (2 mL) e a solução foi esfriada para -78°C. nBuLI (2,5M em hexa- nos, 0,071 mL, 0,18 mmol) foi adicionado. Após 5 minutos, N- fluorbenzenossulfonimida (NSFI, 33,4 mg, 0,106 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada por 5 min. A reação foi então extinta com AcOH. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado através de HPLC de fase reversa para fornecer intermediário 14n (10 mg, 22%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,13 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,65 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 6,7, 3,6 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 1,7 Hz, 2H), 2,37 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,08 (s, 6H).19F NMR (376 MHz, Metanol-d4) δ -156,43 (s).LC/MS: tR = 1,65 min, MS m/z = 506,18 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min ACN 2-100%, 2,4 min-2,80 min ACN 100%, 2,8 min-2,85 min ACN 100%-2%, 2,85 min-3,0 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0147
Exemplo 25 - (2R,3S,4R,5S)-5-(4-amino-5-fluorpirrolo[2,1-f][1,2,4] tria- zin-7-il)-3,4-di-hidroxi-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila.
[00267] O intermediário 14n (11 mg, 0,022 mmol) foi posto em uma solução de TFA 50% em água em temperatura ambiente. Após 2 h, a mistura de reação foi extinta com Na2CO3 sólido para atingir um pH = 8. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado através de HPLC de fase reversa. As frações contendo Exemplo 25 foram combinadas e reservadas e as frações contendo a N6-Acila foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo intermediário N6-Acila foi posto em NH4OH(aq) concentrado (1 mL) e a mistura foi deixada agitar em temperatura ambiente. Após 30 minutos, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado através de HPLC. As frações contendo Exemplo 25 foram combinadas com as frações anteriormente reservadas contendo Exemplo 25 para fornecer Exemplo 25 (4 mg, 58%) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, Metanol-d6) δ 7,71 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,44 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,48 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,83 ((ABq, Δδ = 0,05ppm, J = 12 Hz, 2H).19F NMR (376 MHz, Metanol-d4) δ -161,81 (s).LC/MS: tR = 0,47 min, MS m/z = 310,13 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico 0,1%, Água com ácido fórmico 0,1%; Gradiente: 0 min-1,4 min ACN 2-100%, 1,4 min-1,80 min ACN 100%, 1,8 min-1,85 min ACN 100%-2%, 1,85 min-2 min ACN 2% a 1,8mL/min.
Figure img0148
Intermediário 15a - (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((terc-butildimetilsilil)oxi) metil)-6-(clorometil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)pirro- lo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-il)carbamato de terc- butila.
[00268] O intermediário 14i (100 mg, 0,18 mmol) foi dissolvido em piridina anidra (5 mL). Cloreto de trifluormetanossulfonila (23 μL, 0,22 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura de reação foi agitada por 45 minutos em temperatura ambiente. Mais cloreto de trifluormeta- nossulfonila (100 μL) foi então adicionado. Após 30 minutos, mais cloreto de trifluormetanossulfonila (100 μL) foi adicionado. Após mais 30 minutos, mais cloreto de trifluormetanossulfonila (100 μL) foi adicionado e a reação foi agitada por 30 minutos, ponto onde a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em DMF anidro (5 mL) e cloreto de lítio (153 mg, 3,6 mmol) foi então adicionado em uma porção. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 16 h. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (50 mL) e foi lavada com solução de cloreto de sódio aquosa saturada (3 x 20 mL). A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado com cromatografia de sílica gel (acetato de etila 020% em hexanos) para fornecer intermediário 15a.MS m/z = 569,0 [M+H]. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage
Figure img0149
Exemplo 26 - (2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 2-(clorometil)-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3,4-diol.
[00269] O intermediário 15a foi dissolvido em uma solução de TFA e água (1:1, 5 mL) e a mistura resultante foi agitada por 16 h. A mistura de reação foi então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em solução de bicarbonato de sódio aquosa e ace- tonitrila e foi purificada através de HPLC preparativa para fornecer o Exemplo 26 (19 mg, 34%) como pó branco.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,61 (s, 1H), 6,72 - 6,64 (m, 2H), 5,19 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,73 - 4,66 (m, 1H), 4,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,72 - 3,57 (m, 2H).MS m/z = 315,3 [M+H]. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage
Figure img0150
Exemplo 27 (também TP7) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-azido-4- fluor-3-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metila.
[00270] O Exemplo 27 foi preparado como o sal de tetrassódio de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP4 começando com o Exemplo 19. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,76 (s, 1H), 6,83 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,94 (d, J = 25,2 Hz, 1H), 5,24 (dd, J = 55,2, 5,2 Hz, 1H), 4,78 (dd, J = 26,8, 5,2 Hz, 1H), 4,08 - 4,18 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -193,74 - -194,02 (m).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -4,60 (d, J = 53,2 Hz, 1P), -10,25 (d, J = 48,4 Hz, 1P), -20,28 (t, J = 48,4 Hz, 1P).
Figure img0151
Exemplo 28 - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-5-fluorpirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-2-azido-4-fluor-3-hidroxite- tra-hidrofuran-2-il)metila.
[00271] O Exemplo 28 foi preparado como o sal de tetrassódio de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP4 começando com Exemplo 21.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,64 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 5,90 (d, J = 24,4 Hz, 1H), 5,20 (dd, J = 54,8, 4,8 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 27,2, 4,8 Hz, 1H), 4,05 - 4,18 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -161,00 (s), -196,39 - -196,69 (m).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -8,24 (d, J = 50,4 Hz), -14,20 (d, J = 46,0 Hz), -24,08 (t, J = 48,4 Hz).MS m/z = 567,87 [M+1]. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage Exemplo 29 - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)-5-(4- amino-2-fluorpirrolo[2,1 -f][ 1,2,41triazin-7-il)-2-azido-4-fluor-3-hidroxite- tra-hidrofuran-2-il)metila.
Figure img0152
[00272] O Exemplo 29 foi preparado como o sal de tetrassódio de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP4 começando com Exemplo 22.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 6,81 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,81 (d, J = 24,4 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 54,4, 4,8 Hz, 1H), 4,70 (dd, J = 26,8, 4,4 Hz, 1H), 4,02-4,12 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -75,95 (s), -196,51 - -196,80 (m).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -8,29 (d, J = 53,2 Hz), -14,22 (d, J = 48,4 Hz), -24,09 (t, J = 48,4 Hz).MS m/z = 567,59 [M+1]. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage
Figure img0153
Exemplo 30 - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)-5-(4- amino-5-fluorpirrolo[2,1-f1[1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano-4-fluor-3-hidroxitetra - hidrofuran-2-il)metila.
[00273] O Exemplo 30 foi preparado como o sal de tetrassódio de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP4 comecando com o Exemplo 23.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,64 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,87 (d, J = 24,8 Hz, 1H), 5,26 (dd, J = 53,6, 4,0 Hz, 1H), 4,82 (dd, J = 25,2, 4,4 Hz, 1H), 4,26-4,35 (m, 2H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -161,05 (s), -194,92 - -195,19 (m).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -8,22 (d, J = 50,8 Hz), -14,48 (d, J = 48,4 Hz), -24,01 (t, J = 48,4 Hz). MS m/z = 551,91 [M+1]. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage
Figure img0154
Exemplo 31 (também TP11) - trifosfato de tetra-hidrogênio do e ((2R, 3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-3-hidroxi-2- metiltetra-hidrofuran-2-il)metila.
[00274] O Exemplo 31 foi preparado como o sal de tetrassódio de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP4 começando com o Exemplo 24.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,66 (s, 1H), 6,78 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,58 (dd, J = 23,6, 2,4 Hz, 1H), 5,16 (ddd,J = 55,2, 5,2, 2,8 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 23,2, 5,2 Hz, 1H), 3,88 (dd, J = 11,6, 6,0 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 10,8, 4,0 Hz, 1H), 1,2 (s, 3H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -195,74 - -196,01 (m).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -8,24 (d, J = 50,4 Hz), -13,54 (d, J =45,6 Hz), -24,11 (t, J = 48,0 Hz).
Figure img0155
Exemplo 32 (também TP12) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R, 3S.4R.5S)-5-(4-amino-5-fluorpirrolo[2.1-f1[1.2.41triazin-7-il)-2-ciano-3.4- di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metila.
[00275] O Exemplo 32 foi preparado como o sal de tetrassódio de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP4 começando com o Exemplo 25. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,59 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,44 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 5,6 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 11,6, 6,0 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 11,2, 5,2 Hz, 1H).19F NMR (376 MHz, D2O) δ -161,25 (s).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -8,29 (d, J = 48,4 Hz), -14,49 (d, J = 53,2 Hz), -24,15 (t, J = 48,4 Hz).MS m/z = 549,90 [M+1]. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage
Figure img0156
Exemplo 33 (também TP13) - trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R.3S.4R.5S)-5-(4~aminopirrolo[2.1-f1[1.2.4ttriazin-7-il)-2-(clorometil)- 3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metila.
[00276] O Exemplo 33 foi preparado como o sal de tetra-trietilamina de uma maneira similar àquela descrita para o Exemplo TP3 começando com o Exemplo 26.1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,76 (s, 1H), 6,92 (s amplo, 1H), 6,85 (s amplo, 1H), 5,32 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,78 (dd, J =8, 6,4 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 10,0, 4,0 Hz, 1H), 3,83 - 3,95 (m, 3H), 3,07 (q, J = 7,6 Hz, 24 H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 36 H).31P NMR (162 MHz, D2O) δ -9,44 (d, J = 45,6 Hz), -11,51 (d, J = 48,8 Hz), -22,95 (t, J = 48,4 Hz).MS m/z = 555,06 [M+1l. Sistema MS: Thermo LCQ Advantage
Figure img0157
Exemplo 34 (também PD6) - 2-(((((2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo [2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano-4-fluor-3-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)me- toxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-2-etilbutila.
[00277] O Exemplo 1 (3,8 mg, 0,013 mmol) foi dissolvido em N-metil -2-pirrolidona anidra (0,2 mL) e THF (0,1 mL) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Cloreto de terc-butil magnésio (1M em THF, 20 μL, 0,024 mmol) foi então adicionado em temperatura ambiente e sólidos brancos precipitaram. Após 5 minutos, uma solução de p-nitrofe- nilfosforamidato PD3c (12 mg, 0,026 mmol) em THF (0,1 mL) foi adici-onada à mistura de reação em uma porção e a mistura resultante foi aquecida para 50°C. Após 20 h, A mistura de reação foi deixada esfriar para a temperatura ambiente e foi então purificada diretamente através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila 40-100%/água). As frações contendo o produto desejado foram combinadas e foram liofilizadas para fornecer o Exemplo 34 (2,9 mg, 37%, mistura diastereomérica 3:2) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,80 (s, 0,3H), 7,78 (s, 0,6H), 7,38 - 7,10 (m, 5H), 6,85 (dd amplo, J = 4,7, 2,2 Hz, 1H), 6,75 - 6,71 (m, 1H), 5,54 - 5,46 (m, 1H), 4,65 - 4,58 (m, 1H), 4,53 - 4,31 (m, 3H), 4,07 - 3,84 (m, 3H), 1,54 - 1,39 (m, 1H), 1,38 - 1,19 (m, 7H), 0,92 - 0,81 (m, 6H) 29H31P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,25 (s amplo).LC/MS: tR = 1,55 min, MS m/z = 603,19 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: tR = 2,98 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 298%, 5,0 min-6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
Figure img0158
Exemplo 35 (também PD7) - 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo [2,1 -f][ 1,2,4]triazin-7-il)-2-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)meto- xi)(fenoxi)fosforil)amino) propanoato de (2S)-etila.
[00278] O Exemplo 1 (19 mg, 65,3 μmol) foi dissolvido em NMP (0,2 mL). THF (0,1 mL) foi adicionado seguido por cloreto de terc-butil magnésio (solução 1,0M em tetra-hidrofurano, 0,098 mL) em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. Após 5 minutos, uma solução de intermediário PD7a (Preparada de acordo com US20120009147A1, 51,4 mg, 130 μmol) em THF (0,1 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi aquecida para 50°C. Após 1 h, a mistura d e reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e foi purificada diretamente através de HPLC preparativa (coluna Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, gradiente de acetonitrila/água). As frações contendo produto foram combinadas e concentradas e o resíduo resultante foi novamente purificado através de HPLC preparativa (coluna Phenomi- nex Luna 5u C18 100 x 30 mm, gradiente de acetonitrila 5-100%/água) para fornecer Exemplo 35 (12 mg, 34%, mistura de diastereômeros 3:2) como um sólido branco.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,80 (d, J = 2,3 Hz, 0,4H), 7,78 (d, J = 2,3 Hz, 0,6H), 7,36 - 7,12 (m, 5H), 6,88 - 6,81 (m, 1H), 6,76 - 6,70 (m, 1H), 5,53 - 5,46 (m, 1H), 4,66 - 4,60 (m, 1H), 4,55 - 4,30 (m, 3H), 4,15 - 3,98 (m, 2H), 3,93 - 3,79 (m, 1H), 1,30 - 1,12 (m, 6H).31P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,27 (s amplo).LC/MS: diastereômero maior tR = 1,28 min, MS m/z = 547,14 [M+H], diastereômero menor tR = 1,30 min, MS m/z = 547,04 [M+H]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; Sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido acético 0,1%, Água com ácido acético 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min ACN 2-100%, 2,0 min-3,05 min ACN 100%, 3,05 min-3,2 min ACN 100%-2%, 3,2 min-3,5 min ACN 2% a 2μl/min.HPLC: diastereômero maior tR = 2,44 min, diastereômero menor tR = 2,46 min; sistema HPLC: Série Agilent 1100; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: Acetonitrila com TFA 0,1%, Água com TFA 0,1%; Gradiente: 0 min-5,0 min ACN 2-98%, 5,0 min- 6,0 min ACN 98% a 2 mL/min.
[00279] São também providas modalidades separadas compreendendo, respectivamente, compostos de Fórmula (A), Fórmula (B), Fórmula (C), Fórmula (D) e Fórmula (E):
Figure img0159
onde, em cada caso, X1 representa um grupo de proteção de oxigênio e X2 representa um grupo de proteção amino.
[00280] Grupos de proteção de oxigênio úteis incluem um grupo de proteção de éter de silila ou um grupo de proteção do tipo benzila, in-cluindo grupos metoxibenzila.
[00281] Grupos de proteção de éter de silila úteis incluem grupos de proteção de Trimetilsilila (TMS), Trietilsilila (TES), Dimetilisopropilsilila (IPDMS), Dietilisopropilsilila (DEIPS), Dimetiltexilsilila (TDS), t-Butildi- metilsilila (TBS ou TBDMS), t-Butildifenilsilila (TBDPS), Tribenzilsilila, Tri-p-xililxilila, Tri-isopropilsilila (TIPS), Difenilmetilsilila (DPMS), Di-t- butilmetilsilila (DTBMS), Trifenilsilila (TPS), Metildifenilsilila (MDPS), t- butilmetoxifenilsilila, Tris(trimetilsilil)silila (sisila), (2-Hidroxiestiril) dime- tilsilila (HSDMS), (2-Hidroxistiril)di-isopropilsilila (HSDIS). t-Butilme- toxifenilsilila (TBMPS) e t-Butoxidifenilsilila (DPTBOS).
[00282] Grupos de proteção do tipo benzila úteis incluem benzila, benzila halogenada, p-metoxibenzila, benziloximetila, 2,4-dimetoxiben- zila, 3,4-dimetoxibenzila, 2,6-dimetoxibenzila, p-CF3-benzila, p-metil- benzila, p-metoxilbenzila, 3,5-dimetilbenzila, p-terc-butilbenzila, o-nitro- benzila, p-nitrobenzila, p-halobenzila, incluindo p-Br-benzila, 2,6-diclo- robenzila, p-cianobenzila, p-fenilbenzila, 2,6-difluorbenzila, p-acilami- nobenzila (PAB), p-azidobenzila (Azb), 4-azido-3-clorobenzila, 2-triflu- ormetilbenzila, p-(metilsulfinil)benzila, 2-picolila, 4-picolila, N-óxido de 3-metil-2-picolila, 2-quinolinilmetila, difenilmetila (DPM), p,p’-dinitroben- zidrila, trifenilmetila, alfa-naftildifenilmetila, p-metoxifenildifenilmetila, di(p-metoxifenil)fenilmetila, tri(p-metoxifenil)metila, 4,4’,4"-tris(benzoilo- xifenil)metila e 2-naftilmetila.
[00283] Grupos de proteção amina úteis incluem grupos de proteção p-metoxibenzil carbonila (Moz ou MeOZ), acetila (Ac), benzoíla (Bz), p-metoxibenzila (PMB), 3,4-dimetoxibenzila (DMPM), p-metoxi- fenila (PMP), tosila (Ts ou Tos), trifluoracetamida e tritila. Grupos de proteção amina úteis também incluem grupos de proteção carbamato e amida. Exemplos de grupos de proteção de carbamato incluem car- bamatos de metila e etila tais como carbamatos de 9-fluorenilme- tiloxicarbonila (FMOC), 9-(2-sulfo)fluorenilmetila, 9-(2,7-dibromo)fluore- nilmetila, 17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenilmetila (Tbfmoc), 2-cloro-3-inde- nilmetila (Climoc), benz[f]inden-3-ilmetila (Bimoc), 2,7-di-t-butil[9-(10,10- dioxo-10,10,10,10-tetra-hidrotioxanil)]metila (DBD-Tmoc), [2-(1,3-ditia- nil)metila (Dmoc) e 1,1-dioxobenzo[b]tiofeno-2-ilmetila (Bsmoc).
[00284] Exemplos de carbamatos de etila substituídos úteis incluem 1,1-dimetil-2-cianoetila, 2-fosfonioetila (Peoc), 2-metiltioetila, 2-(p-tolu- enossulfonil)etila, 2,2,2,-tricloroetila (Troc), 2-(trimetilsilil)etila (Teoc), 2- feniletila (hZ), 1-(1-adamantil)-1-metiletila (Adpoc), 1,1-dimetil-2-bro- moetila, 1,1-dimetil-2-cloroetila, 1,1-dimetil-2,2-dibromoetila (DB-t- BOC), 1,1-dimetil-2,2,2-tricloroetila (TCBOC), 1-metil-1-(4-bifenilil)etila (Bpoc), 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-metiletila (t-Bumeoc), 2-(2’piridil)etila, 2- (4’piridil)etila, 2,2-bis(4’-nitrofenil)etila (Bnpeoc), N-(2-pivaloilamino)- 1,1,dimetiletila, 2-[(2-nitrofenil)ditio]-1-feniletila (NpSSPeoc), 2-(N,N- dicicloexilcarboxamido)etila, t-butila (Boc ou BOC), 1-adamantila (1- Adoc), 2-adamantila (2-Adoc), vinila (Voc), alila (Aloc ou alloc), 1-isso- propilalila (Ipaoc), cinamila (Coc), 4-nitrocinamila (Noc), 3-(3’-piridil) prop-2-enila (Paloc), 8-quinolila e N-hidroxipiperidinila, carbamatos, bem como alquilditio carbamatos, incluindo metilditio, etilditio, isopropi- lditio, t-butilditio e fenilditio carbamatos.
[00285] Também úteis são carbamatos contendo arila e contendo arila substituída tais como benzila, p-metoxibenzila, p-nitrobenzila, p- bromobenzila, p-clorobenzila, 2,4-diclorobenzila, 4-metilsulfinilbenzila (Msz), 9-antrilmetila, 4-metiltiofenila (Mtpc), 1-metil-1-(trifenilfosfo- nio)etila (2-trifenilfosfonioisopropila) (Ppoc), 2-dansiletila (Dnseoc), 2- (4-nitrofenil)etila (Npeoc), 4-fenilacetoxibenzila (FAcOZ), 4-azidoben- zila (ACBZ), 4-azidometoxibenzila, m-cloro-p-aciloxibenzila, p-(di- hidroxiboril)benzila, carbobenzilóxi (Cbz), 4-benzisoxazolilmetila (Bic), 2-(trifluormetil)-6-cromonilmetila (Tcroc), fenil e difenilmetil carbamatos. Carbamatos adicionais incluem butinil, ciclopentil, cicloexil, ciclopropi- lmetil, 1-metilciclobutil, 1-metilcicloexil, 1,1-dimetilpropinil e 1-metil-1- ciclopropilmetil carbamatos.
[00286] Grupos de proteção amida úteis para aminas incluem N- formil, N-acetil, N-cloroacetil, N-tricloroacetil, N-trifluoracetil (TFA), N- fenilacetil, N-3-fenilpropionil, N-4-pentenoil, N-picolinoil, N-3-piridilcar- boxamido, N-benzoilfenilalanil, N-benzoil e N-p-fenilbenzoil amidas. Atividade Antiviral
[00287] Outra modalidade se refere a métodos de inibição de infecções virais compreendendo a etapa de tratamento de uma amostra ou indivíduo suspeito necessitar tal inibição com uma composição da pre-sente invenção.
[00288] São consideradas aqui amostras suspeitas conter um vírus incluindo materiais naturais ou feitos pelo homem tais como organismos vivos; culturas de tecido ou célula; amostras biológicas tais como amostras de material biológico (sangue, soro, urina, fluido cerebroes- pinhal, lágrimas, esputo, saliva, amostras de tecido e similar); amostras de laboratório; amostras de alimento, água ou ar; amostras de bi- oproduto tais como extratos de células, particularmente células recom- binantes sintetizando uma glicoproteína desejada; e similar. Tipicamente a amostra será suspeita conter um organismo que induz uma infecção viral, frequentemente um organismo patogênico tal como um vírus de tumor. As amostras podem estar contidas em qualquer meio incluindo água e misturas de solvente orgânico/água. Amostras incluem organismos vivos tais como humanos e materiais feitos pelo homem tais como culturas de célula.
[00289] Se desejado, a atividade antivírus de um composto após aplicação da composição pode ser observada através de qualquer mé-todo incluindo métodos diretos e indiretos de detecção de tal atividade. Métodos quantitativos, qualitativos e semiquantitativos de determinação de tal atividade são compreendidos. Tipicamente um dos métodos de avaliação descritos acima é aplicado, no entanto, qualquer outro método tal como observação das propriedades fisiológicas de um organismo vivo é também aplicável.
[00290] A atividade antiviral de um composto pode ser medida usando protocolos de avaliação padrão que são conhecidos. Por exemplo, a atividade antiviral de um composto pode ser medida usando os protocolos gerais que seguem.Ensaios de atividade antiviral e citotoxicidade de vírus sincicial respira-tório (RSV)
Atividade anti-RSV
[00291] Atividade antiviral contra RSV é determinada usando um ensaio de proteção de célula citopática infecciosa em células HEp-2. Neste ensaio, compostos inibindo infecção e/ou replicação viral produzem um efeito citoprotetor contra a morte de célula induzida por vírus que pode ser quantificado usando um reagente de viabilidade de célula. As técnicas usadas aqui são adaptações novas de métodos descritos na literatura publicada (Chapman e outros, Antimicrob Agents Chemother. 2007, 51(9):3346-53).
[00292] Células HEp-2 são obtidas da ATCC (Manassas, VI) e mantidas em meio MEM suplementado com soro bovino fetal 10% e penici- lina/estreptomicina. As células são passadas duas vezes por semana e mantidas em estágio subconfluente. Estoque comercial de cepa RSV A2 (Advanced Biotechnologies, Columbia, MD) é titulado antes do teste de composto para determinar a diluição apropriada do estoque de vírus que gera efeito citopático desejável em células HEp-2.
[00293] Para testes antivirais, células HEp-2 são cultivadas em frascos de cultura de célula grandes para próximo da confluência, mas não total. Os compostos a serem testados são pré-diluídos em DMSO em placas de diluição de composto de 384 cavidades, ou em um formato de resposta de dose padronizado de 8 ou 40 amostras por placa. Aumentos de diluição serial de 3 vezes de cada composto de teste são preparados nas placas e amostras de teste são transferidas através de aparelho de transferência acústico (Echo, Labcyte) a 100 nl por cavidade nas placas de 384 cavidades de ensaio de cultura de célula. Cada diluição de composto é transferida para amostras simples ou em quadruplicata para placas de ensaio secas, que são armazenadas até que o ensaio esteja pronto para ser realizado. Os controles positivos e negativos são postos em extremidades opostas da placa em blocos verticais (1 coluna).
[00294] Subsequentemente, uma mistura infecciosa é preparada usando uma diluição apropriada de estoque de vírus previamente determinada através de titulação com células em uma densidade de 50.000/ml e 20 uL/cavidade são adicionados a placas de teste com compostos através de automação (uFlow, Biotek). Cada placa inclui controles negativos e positivos (16 réplicas cada uma) para criar padrões de inibição de vírus de 0% e 100%, respectivamente. Seguindo a infecção com RSV, as placas de teste são incubadas por 4 dias em uma incubadora de cultura de célula a 37°C. Após a incubação, um reagente de viabilidade de célula, Cell TiterGlo (Promega, Madison, WI), é adicionado às placas de ensaio, que são incubadas rapidamente, e uma leitura luminescente é medida (Envision, PerkinElmer) em todas as placas de ensaio. O efeito citopático induzido por RSV, inibição percentual, é determinado a partir dos níveis de viabilidade de célula restante. Esses números são calculados para cada concentração testada com relação aos controles de inibição de 0% e 100%, e o valor EC50 para cada composto é determinado através de regressão não linear como uma concentração inibindo o efeito citopático induzido por RSV em 50%. Vários compostos-ferramenta anti-RSV potentes são usados como controles positivos para atividade antiviral.Ensaio de Citotoxidez em Células HEp-2
[00295] A citotoxidez de compostos testados é determinada em células HEp-2 não infectadas em paralelo com a atividade antiviral usando o reagente de viabilidade celular de uma maneira similar àquela descrita antes para outros tipos de célula (Cihlar e outros, Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65). O mesmo protocolo que aque- le para a determinação de antividade antiviral é usado para a medição de citotoxidez de composto exceto que as células não são infectadas com RSV. Ao invés disso, uma mistura de célula não infectada na mesma densidade é adicionada a 20 ul/cavidade a placas contendo compostos pré-diluídos, também em 100 nl/amostra. Placas de ensaio são então incubadas por 4 dias seguido por um teste de viabilidade de célula usando as mesmas adição de reagente CellTiter Glo e medição de leituras luminescentes. Célula não tratada e células tratadas a 2 uM de puromicina (Sigma, St. Louis, MO) servem como controle de viabilidade de célula 100% e 0%, respectivamente. A porcentagem de viabilidade de célula é calculada para cada concentração de composto testado com relação aos controles 0% e 100% e o valor CC50 é determinado através de regressão não linear como uma concentração de composto reduzindo a viabilidade de célula em 50%.Ensaio de Citotoxidez em Células MT-4
[00296] A linhagem de célula MT-4 foi obtida da NIH AIDS Researc and Reference Reagent Program (Germantown, MD) e culturada em meio RPMI-1640 (Irvine Scientific, Santa Ana, CA, No. Cat. 9160) su-plementado com FBS 10%, 100 unidades/mL de penicilina, 100 unida- des/mL de estreptomicina e L-Glutamina 2 mM. As células MT-4 foram passadas duas vezes por semana para manter as densidades de célula abaixo de 0,6 x 106 células/mL. Meio RPMI-1640 completo contendo concentrações 100x de composto serialmente diluído 3 vezes, variando de 26 nM a 530 μM, foi pulverizado em quadruplicata em placas de 384 cavidades pretas. Após adição de composto, 2 x 103 células MT-4 foram adicionadas a cada cavidade usando um aplicador de líquido MicroFlo (BioTek, Winooski, VT) e as células foram culturadas por 5 dias a 37°C em uma incubadora de CO 2 5%. Seguindo a incubação as células foram deixadas equilibrar para 25°C e viabi lidade de célula foi determinada através da adição de 25 μL de reagente de viabilidade Cell-Titer Glo. A mistura foi incubada por 10 minutos a 25°C e o sinal luminescente foi quantificado em uma leitura de placa Victor Lumines-cence. O valor de CC50 é definido como a concentração de composto que reduz a viabilidade de célula em 50% conforme determinado pelo sinal Cell-Titer Glo. Os dados foram analisados usando software Pipeline Pilot Plate Data Analytics Collection (Versão 7.0, Accelrys, San Diego, CA). Valores de CC50 foram calculados a partir de uma análise de regressão não linear usando uma equação de dose-resposta sigmoidal de 4 parâmetros: Y = Parte Inferior + (Parte Superior-Parte Infe- rior)/(1+10A[(LogCC50-X)*HillSlope]) onde a Parte Superior e a Parte Inferior foram fixadas em viabilidade de célula de 100% e 0%, respec-tivamente. Valores de CC50 foram calculados como a média ± desvio padrão de 3 experimentos independentes.
Figure img0160
Figure img0161
[00297] Um outro benefício se refere à vantagem que compostos carregando substituição de R4 proveem em comparação com compostos sem substituição de R4 (isto é, aqueles onde R4 = H) com relação à citotoxicidade de MT-4. Por exemplo, o composto (2S,3R,4S,5R)-2-(4- aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetra-hidrofu- ran-3,4-diol (Patil, S. A.; Otter, R. A.; Klein, R. S. Tetrahedron Lett. 1994, 35, 5339-5342) tendo a estrutura:
Figure img0162
uma CC50 MTA-4 = 0,007 μM; enquanto os Exemplos 1, 4, 5, 20 e 26 todos exibem uma CC50 MT-4 > 53 μM. Ainda, o composto (2 R ,3 R, 4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-2-(hidro- ximetil)tetra-hidrofuran-3-ol (WO2012037038A1) tendo a estrutura:
Figure img0163
exibe uma CC50 MT-4 = 30 μM; enquanto os Exemplos 2, 3, 13 e 14 exibem todos uma CC50 MT-4 > 106 μM.
[00298] Um outro benefício se refere à vantagem que compostos R3 = F carregando substituição R4 proveem em comparação com com- postos sem substituição R4 (isto é, aqueles onde R4 = H) com relação à atividade anti-RSV HEp-2. Por exemplo, o composto (2R,3R,4R,5S)- 5-(4-aminopirrolo[pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-2-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3-ol (WO2012037038A1) tendo a estrutura cima tem uma EC50 = >100 μM HEp-2; enquanto os exemplos 2, 3, 13, 14, 19, 21, 22, 23 e 24 todos exibem EC50 = <100uM.Preparação de RSV RNP
[00299] Complexos de ribonucleoproteína RSV (RNP) foram preparados a partir de um método modificado de Mason e outros (1). Células HEp-2 foram plaqueadas em uma densidade de 7,1 x 104 célu- las/cm2 em MEM + soro bovino fetal 10% (FBS) e deixadas se ligar de um dia para o outro a 37°C (CO 2 5%). Seguindo a ligação, as células foram infectadas com RSV A2 (MOI=5) em 35 mL de MEM + FBS 2%. 20 horas pós-infecção, o meio foi substituído com MEM + FBS 2% suplementado com 2 μg/mL de actinomicina D e retornou para 37°C por uma hora. As células foram então lavadas uma vez com PBS e tratadas com 35 mL de PBS + 250 μg/mL de liso-lecitina por um minuto, após o que todo o líquido tinha aspirado. As células foram coletadas raspando-as em 1,2 mL de tampão A [TRIS acetato 50 mM (pH 8,0), acetato de potássio 100 mM, DTT 1 mM e 2 μg/mL de actinomicina D] e lisadas através de passagem repetida por uma agulha de 18 gauge (10 vezes). O lisato de célula foi posto em gelo por 10 minutos e então centrifugado a 2400 g por 10 minutos a 4°C. O sobre nadante (S1) foi removido e o pelete (P1) foi rompido em 600 uL de Tampão B [acetato Tris 10 mM (pH 8,0), acetato de potássio 10 mM e MgCl2 1,5 mm] suplementado com Triton X-100 1% através de passagem repetida por uma agulha de 18 gauge (10 vezes). O pelete ressuspenso foi posto em gelo por 10 minutos e então centrifugado a 2400 g por 10 minutos a 4°C. O sobrenadante (S2) foi removido e o pelete (P2) foi rompido em 600 uL de Tampão B suplementado com desoxicolato 0,5% e Tween 40 0,1%. O pelete ressuspenso foi posto em gelo por 10 minutos e então centrifugado a 24000 g por 10 minutos a 4°C. A fração de sobrenadante (S3), contendo os complexos de RSV RNP enriquecidos, foi coletada e a concentração de proteína determinada através de absorbância UV a 280 nm. Frações de RSV RNP S3 separadas em alíquotas foram removidas a -80°C.Ensaio de RSV RNP
[00300] Reações de transcrição continham 25 μg de complexos de RSV RNP brutos em 30 μL de tampão de reação [TRIS-acetato 50 mM (pH 8,0), acetato de potássio 120 mM, glicerol 5%, MgCl2 4,5 mM, DTT 3 mM, ácido etilenoglicol-bis(2-aminoetileter)-tetraacético 2 mM (EG- TA), BSA 50 μg/mL, Rnasin 2,5 U (Promega), ATP, GTP, UTP, CTP e 1,5 uCi [α-32P] NTP (3000 Ci/mmol)]. O nucleotídeo radiomarcado usado no ensaio de transcrição foi selecionado para ser compatível com o análogo de nucleotídeo sendo avaliado quanto à inibição de transcrição de RSV RNP. NTP competitivo, frio, foi adicionado em uma concentração final de metade de sua Km (ATP=20 μM, GTP=12,5 μM, UTP=6 μM e CTP=2 μM). Os três nucleotídeos restantes foram adicionados em uma concentração final de 100 μM.
[00301] Para determinar se análogos de nucleotídeo inibiram transcrição de RSV RNP, compostos foram adicionados usando uma diluição serial de 6 etapas em aumentos de 5 vezes. Seguindo uma incubação de 90 minutos a 30°C, as reações de RNP foram paradas com 350 μL de tampão de lise Qiagen RLT e o RNA foi purificado usando um Qiagen Rneasy 96 kit. RNA purificado foi desnaturado em tampão de carregamento de amostra de RNA (Sigma) a 65°C po r 10 minutos e alimentado em um gel de agarose 1,2%/MOPS contendo formaldeído 2M. O gel de agarose foi seco e exposto à avaliação de Storm phos-phorimager e desenvolvido usando um Storm phospohimager (GE Healthcare). A concentração de composto que reduziu os transcritos radiomarcados totais em 50% (IC50) foi calculada através de análise de regressão não linear de duas réplicas.Referência Mason, S., Lawetz, C., Gaudette, Y., Do, F., Scouten, E., Lagace, L., Simoneau, B. e Liuzzi, M. (2004) Polyadenylation-dependent screening assay for respiratory syncytial virus RNA transcriptase activity and identification of an inhibitor. Nucleic Acids Research, 32, 4758-4767.
Figure img0164
[00302] Uma consideração adicional se refere à vantagem que compostos exemplificados exibem inibição potente de transcrição de RSV RNP em comparação com compostos com substituição de 2’CME. Por exemplo, trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)- 5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4-di-hidroxi-4-metiltetra- hidrofuran-2-il)metila (WO2008089105A2 e WO2010002877A2), tendo a estrutura:
Figure img0165
exibe uma IC50 = 8,5 μM; enquanto o Exemplo TP3 exibe uma IC50 = 0,025 μM. Ainda, o composto trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluor-3- hidroxi-4-metitetra-hidrofuran-2-il)metila (WO 2011035231 A1), tendo a estrutura:
Figure img0166
exibe uma IC50 = > 100 μM; enquanto o Exemplo TP1 exibe uma IC50 = 0,086 μM e o TP2 exibe uma IC50 = 1 μM.

Claims (20)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0167
em que:R1 é H ou F;R2 é H ou F;R3 é OH ou F;R4 é CN, C1-C4 alquila, C2-C4 alquenila, C3-C4 cicloalquila, azido, halogênio ou C1-C2 haloalquila;R6 é OH;R5 é selecionado do grupo de H e:
Figure img0168
onde:n’ é selecionado de 1, 2, 3 e 4;R8 é selecionado de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila,-O-benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6cicloalquila e CF3;R9 é selecionado de fenila, 1-naftila, 2-naftila,
Figure img0169
R10 é selecionado de H e CH3;R11 é selecionado de H e C1-C6 alquila;R12 é selecionado de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila e -CH2-C3-C6 cicloalquila.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato que R1 é H.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ousal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é H.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (II):
Figure img0170
em que:R3 é OH ou F;R4 é CN, C1-C4 alquila, C2-C4 alquenila, C3-C4 cicloalquila, azido, halogênio ou C1-C2 haloalquila;R5 é selecionado do grupo de H e:
Figure img0171
Figure img0172
onde:n’ é selecionado de 1, 2, 3 e 4;R8 é selecionado de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila,-O-benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6cicloalquila, e CF3;R9 é fenila;R10 é selecionado de H e CH3;R11 é selecionado de H e C1-C6 alquila;R12 é selecionado de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila, e -CH2-C3-C6 cicloalquila.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R4 é CN, metila, etila, etinila, azido, F, Cl, -CH2Cl, -CH2F, -CHF2, ou -CF3.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R3 é F.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R3 é OH.
8. Composto de acordo com a reivindicação 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R4 é CN.
9. Composto de acordo com a reivindicação 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R4 é metila, etila, vinila ou etinila.
10. Composto de acordo com a reivindicação 6 ou 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R4 é halometila.
11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é H.
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é selecionado do grupo de:
Figure img0173
onde:R8 é selecionado de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila e-CH2-C3-C6 cicloalquila; eR12 é selecionado de C1-C8 alquila, benzila, C3-C6cicloalquila, e -CH2-C3-C6 cicloalquila.
13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que:(A) R8 é selecionado de C1-C8 alquila; ou (B) R8 é selecionado de C1-C6 alquila; ou(C) R8 é selecionado de C1-C5 alquila; ou(D) R8 é selecionado de C1-C4 alquila; ou(E) R12 é selecionado de C1-C8 alquila; ou(F) R12 é selecionado de C1-C4 alquila.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende ainda com a condição de que quando R3 é F, R4 é diferente de metila.
15. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é selecionado do grupo de H e:
Figure img0174
16. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um salfarmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato deque é selecionado do grupo de:
Figure img0175
Figure img0176
Figure img0177
Figure img0178
17. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
18. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para preparação de uma composição, formulação ou medicamento para o tratamento de infecção por vírus Pneumovirinae em um humano.
19. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre Fórmula (A), Fórmula (B), Fórmula (C), Fórmula (D) e Fórmula (E):
Figure img0179
em que X1 é um grupo de proteção de oxigênio que éum grupo de proteção de éter de silila selecionado de Trimetilsilila (TMS), Trietilsilila (TES), Dimetilisopropilsilila (IPDMS), Dietilisopropilsilila (DEIPS), Dimetiltexilsilila (TDS), t-Butildimetilsilila (TBS ou TBDMS), t-Butildifenilsilila (TBDPS), Tribenzilsilila, Tri-p- xililxilila, Tri-isopropilsilila (TIPS), Difenilmetilsilila (DPMS), Di-t- butilmetilsilila (DTBMS), Trifenilsilila (TPS), Metildifenilsilila (MDPS), t- butilmetoxifenilsilila, Tris(trimetilsilil)silila (sisila), (2-Hidroxiestiril) dimetilsilila (HSDMS), (2-Hidroxistiril)di-isopropilsilila (HSDIS). t- Butilmetoxifenilsilila (TBMPS) e t-Butoxidifenilsilila (DPTBOS); ouum grupo de proteção do tipo benzila selecionado de benzila, benzila halogenada, p-metoxibenzila, benziloximetila, 2,4- dimetoxibenzila, 3,4-dimetoxibenzila, 2,6-dimetoxibenzila, p-CF3- benzila, p-metilbenzila, p-metoxilbenzila, 3,5-dimetilbenzila, p-terc- butilbenzila, o-nitrobenzila, p-nitrobenzila, p-halobenzila, incluindo p- Br-benzila, 2,6-diclorobenzila, p-cianobenzila, p-fenilbenzila, 2,6- difluorbenzila, p-acilaminobenzila (PAB), p-azidobenzila (Azb), 4-azido- 3-clorobenzila, 2-trifluormetilbenzila, p-(metilsulfinil)benzila, 2-picolila, 4-picolila, N-óxido de 3-metil-2-picolila, 2-quinolinilmetila, difenilmetila (DPM), p,p’-dinitrobenzidrila, trifenilmetila, alfa-naftildifenilmetila, p- metoxifenildifenilmetila, di(p-metoxifenil)fenilmetila, tri(p-metoxifenil)metila, 4,4’,4"-tris(benzoiloxifenil)metila e 2-naftilmetila;e X2 é um grupo de proteção de amina que éselecionado de proteção p-metoxibenzil carbonila (Moz ou MeOZ), acetila (Ac), benzoíla (Bz), p-metoxibenzila (PMB), 3,4- dimetoxibenzila (DMPM), p-metoxifenila (PMP), tosila (Ts ou Tos), trifluoracetamida e tritila; ouum grupo de proteção de carbamato selecionado de carbamatos de 9-fluorenilmetiloxicarbonila (FMOC), 9-(2- sulfo)fluorenilmetila, 9-(2,7-dibromo)fluorenilmetila, 17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenilmetila (Tbfmoc), 2-cloro-3-indenilmetila(Climoc), benz[f]inden-3-ilmetila (Bimoc), 2,7-di-t-butil[9-(10,10-dioxo- 10,10,10,10-tetra-hidrotioxanil)]metila (DBD-Tmoc), [2-(1,3-ditianil)metila (Dmoc), 1,1-dioxobenzo[b]tiofeno-2-ilmetila (Bsmoc), 1,1- dimetil-2-cianoetila, 2-fosfonioetila (Peoc), 2-metiltioetila, 2-(p-toluenossulfonil)etila, 2,2,2,-tricloroetila (Troc), 2-(trimetilsilil)etila (Teoc), 2-feniletila (hZ), 1-(1-adamantil)-1-metiletila (Adpoc), 1,1- dimetil-2-bromoetila, 1,1-dimetil-2-cloroetila, 1,1-dimetil-2,2-dibromoetila (DB-t-BOC), 1,1-dimetil-2,2,2-tricloroetila (TCBOC), 1- metil-1-(4-bifenilil)etila (Bpoc), 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-metiletila (t-Bumeoc), 2-(2’piridil)etila, 2-(4’piridil)etila, 2,2-bis(4’-nitrofenil)etila (Bnpeoc), N-(2-pivaloilamino)-1,1,dimetiletila, 2-[(2-nitrofenil)ditio]-1- feniletila (NpSSPeoc), 2-(N,N-dicicloexilcarboxamido)etila, t-butila (Boc ou BOC), 1-adamantila (1-Adoc), 2-adamantila (2-Adoc), vinila (Voc), alila (Aloc ou alloc), 1-issopropilalila (Ipaoc), cinamila (Coc), 4- nitrocinamila (Noc), 3-(3’-piridil) prop-2-enila (Paloc), 8-quinolila, N- hidroxipiperidinila, metilditio, etilditio, isopropilditio, t-butilditio, fenilditio, benzila, p-metoxibenzila, p-nitrobenzila, p-bromobenzila, p-clorobenzila, 2,4-diclorobenzila, 4-metilsulfinilbenzila (Msz), 9- antrilmetila, 4-metiltiofenila (Mtpc), 1-metil-1-(trifenilfosfonio)etila (2- trifenilfosfonioisopropila) (Ppoc), 2-dansiletila (Dnseoc), 2-(4- nitrofenil)etila (Npeoc), 4-fenilacetoxibenzila (FAcOZ), 4-azidobenzila (ACBZ), 4-azidometoxibenzila, m-cloro-p-aciloxibenzila, p-(di-hidroxiboril)benzila, carbobenzilóxi (Cbz), 4-benzisoxazolilmetila (Bic), 2-(trifluormetil)-6-cromonilmetila (Tcroc), fenil, difenilmetil, butinil, ciclopentil, cicloexil, ciclopropilmetil, 1-metilciclobutil, 1-metilcicloexil, 1,1-dimetilpropinil e 1-metil-1-ciclopropilmetil carbamatos;ou um grupo de proteção amida selecionado de N-formil, N- acetil, N-cloroacetil, N-tricloroacetil, N-trifluoracetil (TFA), N-fenilacetil, N-3-fenilpropionil, N-4-pentenoil, N-picolinoil, N-3-piridilcarboxamido, N-benzoilfenilalanil, N-benzoil e N-p-fenilbenzoil amidas;e R1 é H ou F;ou(ii) um composto selecionado de:
Figure img0180
20. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para preparação de uma composição, formulação ou medicamento para o tratamento em um humano de uma infecção por vírus Pneumovirinae ou uma infecção por vírus sincicial respiratório humano.
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