TW202315607A - 抗病毒化合物 - Google Patents

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達斯汀 Ｓ 賽吉兒
大衛 史倍朗迪歐
楊海
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Abstract

本發明提供用於治療各種疾病之化合物，該等疾病係由諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、HRV、hMPV、伊波拉病毒(ebola Virus)、茲卡病毒(Zika Virus)、西尼羅病毒(West Nile Virus)、登革熱病毒(Dengue Virus)及HCV感染所引起。

Description

抗病毒化合物
本發明係關於用於治療各種疾病之化合物，該等疾病係由諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、HRV、hMPV、伊波拉病毒(ebola Virus)、茲卡病毒(Zika Virus)、西尼羅病毒(West Nile Virus)、登革熱病毒(Dengue Virus)及HCV感染所引起。
肺病毒科( Pneumoviridae)病毒為造成許多流行性人類及動物疾病之反義單股RNA病毒。肺病毒科病毒家族包括人類呼吸道融合性病毒(HRSV)及人類間質肺炎病毒。幾乎所有兒童在兩歲前都會經歷HRSV感染。HRSV為嬰兒期及孩童期中下呼吸道感染之主要原因，其中0.5%至2%的感染者需要住院。
目前還沒有可用於預防HRSV感染的疫苗。單株抗體帕利珠單抗(palivizumab)可用於免疫預防，但其使用限於高風險的嬰兒，例如早產嬰兒或患有先天性心臟或肺部疾病之嬰兒，並且就一般使用而言成本通常過高。另外，核苷類似物利巴韋林(ribavirin)已作為唯一的用於治療HRSV感染之抗病毒劑審批通過，但功效有限。因此，需要抗肺病毒科治療劑。
適用於治療病毒感染的吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物之實例描述於以下文獻中：美國2012/0009147 A1 (Cho等人)、美國2012/0020921 A1 (Cho等人)、WO 2008/089105 A2 (Babu等人)、WO 2008/141079 A1 (Babu等人)、WO 2009/132135 A1 (Butler等人)、WO 2010/002877 A2 (Francom)、WO 2011/035231 A1 (Cho等人)、WO 2011/035250 A1 (Butler等人)、WO 2011/150288 A1 (Cho等人)、WO 2012/012465 (Cho等人)、WO 2012/012776 A1 (Mackman等人)、WO 2012/037038 (Clarke等人)、WO 2012/087596 A1 (Delaney等人)及WO 2012/142075 A1 (Girijavallabhan等人)。
因此，需要有效且具有可接受毒性概況的用於治療肺病毒科病毒感染(諸如HRSV感染)、黃病毒科( Flaviviridae)感染(包括登革熱(dengue))及EBOV感染的組合物及方法。本發明解決此等及其他需要。
在一個實施例中，本發明提供一種式(Ia)化合物：
Figure 02_image003
式(Ia)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基，其中R 1及R 2中之至少一者為H； 或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-，其中各R 2A及R 2B獨立地為H、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基； R 3為-N(H)(R 3A)； R 3A為H或-C(O)R 3A1，其中R 3A1為視情況經-NH 2取代之C 1-18烷基； R 4A為O或S；且 R 4B及R 4C各自獨立地為： (A)   -OH； (B)   -OR 4B1，其中 R 4B1為視情況經1至3個R 4B2基團取代之C 1-6烷基；C 1-6鹵烷基；C 3-8環烷基；C 6-12芳基；或具有1至3個各自獨立地選自N、O或S之雜原子的5員至6員雜芳基，其中 各R 4B2基團獨立地為C 1-6烷氧基、-S-R 4B3或-S(O) 2-R 4B3，且 各R 4B3基團獨立地為C 1-6烷基； (C)
Figure 02_image005
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基；視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基；-C(O)OR 4D3；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3， 各R 4D2獨立地為C 1-3烷氧基，且 各R 4D3獨立地為C 1-3烷基； (D)
Figure 02_image007
，其中 X 1及X 2各自獨立地為-O-或-N(R 4H)-； R 4E1及R 4E2各自獨立地為H；視情況經1至3個R 4E3基團取代之C 1-6烷基；或C 3-6環烷基，其中 各R 4E3基團獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-C 1-6伸烷基-C 6-12芳基、C 3-6環烷基或C 6-12芳基，且 各R 4E4基團獨立地為C 1-6烷基； 或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
Figure 02_image009
； 各R 4G1獨立地為-OH；C 1-6烷基；C 1-3烷氧基；-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3；C 1-3鹵烷基；-N(R 4G8) 2；-C(O)N(R 4G8) 2；視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或C 6-12芳基； 各R 4G2獨立地為C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 1-3鹵烷基、-OH、-NH 2或C 6-12芳基； 各R 4G3獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-8環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)OR 4G5取代，且其中該環烷基視情況經C 1-6烷基取代； 各R 4G5獨立地為C 1-6烷基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G8獨立地為H或C 1-6烷基； 各R 4G9獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基或-NH 2； 各R 4G10獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或側氧基； 各R 4G11獨立地為C 10-18烷基或苯甲基； R 4H為H； 或R 4E1及R 4H與其所連接之原子組合形成具有1至2個選自N、O及S之額外雜原子的5員至6員雜環基；且 下標n為0或1；或 (E)    -(OP(O)(OH)) 1-2-OH；或 (F)
Figure 02_image011
，其中 R 4J1及R 4J2各自獨立地為H、-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中 R 4J1及R 4J2中之至少一者為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3， 各R 4J3獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且 至少一個R 4J3為C 10-18烷基； 替代地，R 2及R 4C與其所連接之原子組合形成六員環，且R 1為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基， 其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式：
Figure 02_image013
， 且R 4G為乙基或2-乙基丁基時，R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-， 其限制條件為該式(Ia)化合物不具有以下結構：
Figure 02_image015
， 且其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式時：
Figure 02_image017
， R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-。
在另一實施例中，本發明提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之肺病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之小核糖核酸病毒科( Picornaviridae)病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之黃病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之絲狀病毒科( Filoviridae)病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之肺病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2020年2月18日申請且名稱為「ANTIVIRAL COMPOUNDS」的美國臨時專利申請案第62/978,192號之優先權益，該申請案之全部內容以引用的方式併入本文中。 I . 綜述
本發明提供用於治療病毒感染之2',3'-二羥基-4'-氰基核苷及單酯化合物，該等病毒感染諸如伊波拉(Ebola)、茲卡(zika)、西尼羅(West Nile)、黃熱病(Yellow Fever)、登革熱(Dengue)、HCV、RSV及其他病毒感染。 II . 定義
「烷基」為直鏈或分支鏈飽和單價烴。舉例而言，烷基可具有1至18個碳原子(亦即，C 1-18烷基)、或1至8個碳原子(亦即，C 1-8烷基)、或1至6個碳原子(亦即，C 1-6烷基)、或1至4個碳原子(亦即，C 1-4烷基)。烷基之實例包括(但不限於)甲基(Me、-CH 3)、乙基(Et、-CH 2CH 3)、1-丙基( n-Pr、正丙基、-CH 2CH 2CH 3)、2-丙基( i-Pr、異丙基、-CH(CH 3) 2)、1-丁基( n-Bu、正丁基、-CH 2CH 2CH 2CH 3)、2-甲基-1-丙基( i-Bu、異丁基、-CH 2CH(CH 3) 2)、2-丁基( s-Bu、二級丁基、-CH(CH 3)CH 2CH 3)、2-甲基-2-丙基( t-Bu、三級丁基、-C(CH 3) 3)、1-戊基(正戊基、-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 3)、2-戊基(-CH(CH 3)CH 2CH 2CH 3)、3-戊基(-CH(CH 2CH 3) 2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH 3) 2CH 2CH 3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH 3)CH(CH 3) 2)、3-甲基-1-丁基(-CH 2CH 2CH(CH 3) 2)、2-甲基-1-丁基(-CH 2CH(CH 3)CH 2CH 3)、1-己基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2CH 3)、2-己基(-CH(CH 3)CH 2CH 2CH 2CH 3)、3-己基(-CH(CH 2CH 3)(CH 2CH 2CH 3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH 3) 2CH 2CH 2CH 3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH 3)CH(CH 3)CH 2CH 3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH 3)CH 2CH(CH 3) 2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH 3)(CH 2CH 3) 2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH 2CH 3)CH(CH 3) 2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH 3) 2CH(CH 3) 2)及3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH 3)C(CH 3) 3)。其他烷基包括庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十五基、十六基、十七基及十八基。
「烯基」係指具有至少2個碳原子及至少一個雙鍵之直鏈或分支鏈烴。烯基可包括任何數目之碳，諸如C 2、C 2-3、C 2-4、C 2-5、C 2-6、C 2-7、C 2-8、C 2-9、C 2-10、C 3、C 3-4、C 3-5、C 3-6、C 4、C 4-5、C 4-6、C 5、C 5-6及C 6。烯基可具有任何合適數目之雙鍵，包括(但不限於) 1、2、3、4、5或更多個。烯基之實例包括(但不限於)乙烯基(vinyl/ethenyl)、丙烯基、異丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、異戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基、2,4-己二烯基或1,3,5-己三烯基。烯基可經取代或未經取代。
「烷氧基」係指具有將烷基連接至連接點之氧原子的烷基：烷基-O-。就烷基而言，烷氧基可具有任何合適數目個碳原子，諸如C 1-6。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基等。烷氧基可進一步經本文所描述之各種取代基取代。烷氧基可經取代或未經取代。
「烷氧基-烷氧基」係指連接至第二烷氧基之烷氧基，該第二烷氧基連接至化合物之其餘部分。烷氧基如上文所定義，且可包括(但不限於)甲氧基-甲氧基(CH 3OCH 2O-)、甲氧基-乙氧基(CH 3OCH 2CH 2O-)及其他基團。
「羥基」係指-OH。
如本文所使用，「鹵基」或「鹵素」係指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)及碘(-I)。
如本文所使用，「鹵烷基」係指烷基之一或多個氫原子獨立地經鹵基取代基置換的如本文所定義之烷基，該鹵基取代基可相同或不同。舉例而言，C 1-4鹵烷基係C 1-4烷基之一或多個氫原子已經鹵基取代基置換的C 1-4烷基。鹵烷基之實例包括(但不限於)氟甲基、氟氯甲基、二氟甲基、二氟氯甲基、三氟甲基、1,1,1-三氟乙基及五氟乙基。
「環烷基」係指具有3至20個環碳原子(亦即，C 3-20環烷基)，例如3至12個環原子，例如3至10個環原子，或3至8個環原子，或3至6個環原子，或3至5個環原子，或3至4個環原子之單飽和或部分不飽和全碳環。術語「環烷基」亦包括多重縮合、飽和及部分不飽和全碳環系統(例如包含2、3或4個碳環之環系統)。因此，環烷基包括多環碳環，諸如雙環碳環(例如，具有約6至12個環碳原子之雙環碳環，諸如雙環[3.1.0]己烷及雙環[2.1.1]己烷)，及多環碳環(例如具有多達約20個環碳原子之三環及四環碳環)。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。單環環烷基之非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基及1-環己-3-烯基。
如本文所使用，「雜環基」或「雜環」或「雜環烷基」係指在環中具有至少一個雜原子(亦即，選自氧、氮及硫之至少一個環雜原子)之單飽和或部分不飽和非芳環或非芳族多環系統。除非另外說明，否則雜環基具有3至約20個環原子，例如3至12個環原子，例如3至10個環原子，或3至8個環原子，或3至6個環原子，或3至5個環原子，或4至6個環原子，或4至5個環原子。因此，術語包括在環中具有約1至6個環碳原子及約1至3個選自由氧、氮及硫組成之群的環雜原子之單飽和或部分不飽和環(例如3員、4員、5員、6員或7員環)。多重縮合環(例如雙環雜環基)系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。雜環包括(但不限於)氮雜環丁烷、氮丙啶、咪唑啶、嗎啉、環氧乙烷(環氧化物)、氧雜環丁烷、硫雜環丁烷、哌𠯤、哌啶、吡唑啶、哌啶、吡咯啶、吡咯啶酮、四氫呋喃、四氫噻吩、二氫吡啶、四氫吡啶、
Figure 111149986-A0304-1
啶、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、6-氧雜-1-氮雜螺[3.3]庚-1-基、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基、2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、2-氮雜雙環[2.1.1]己基、2-氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基、4-氮雜螺[2.4]庚基、5-氮雜螺[2.4]庚基及其類似物。
如本文所使用之「芳基」係指單全碳芳環或多重縮合全碳環系統，其中至少一個環為芳環。舉例而言，在某些實施例中，芳基具有6至20個碳原子、6至14個碳原子或6至12個碳原子。芳基包括苯基。芳基亦包括具有約9至20個碳原子之多重縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中至少一個環係芳環且其中其他環可為芳環或不為芳環(亦即碳環)。該等多重縮合環系統於多重縮合環系統之任何碳環部分上視情況經一或多個(例如1、2或3個)側氧基取代。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。亦應理解，當提及某一原子範圍之員數之芳基(例如6員至10員芳基)時，原子範圍係針對芳基之總環原子。舉例而言，6員芳基將包括苯基且10員芳基將包括萘基及1,2,3,4-四氫萘基。芳基之非限制性實例包括(但不限於)苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氫萘基、蒽基及其類似基團。
「烷基-芳基」係指具有烷基組分及芳基組分之基團，其中烷基組分將芳基組分連接至連接點。烷基組分如上文所定義，不同之處在於烷基組分為至少二價的伸烷基以連接至芳基組分及連接點。烷基組分可包括任何數目之碳，諸如C 0-6、C 1-2、C 1-3、C 1-4、C 1-5、C 1-6、C 2-3、C 2-4、C 2-5、C 2-6、C 3-4、C 3-5、C 3-6、C 4-5、C 4-6及C 5-6。在一些情況下，烷基組分可不存在。芳基組分如上文所定義。烷基-芳基之實例包括(但不限於)苯甲基及乙基-苯。烷基-芳基可經取代或未經取代。
如本文所使用之「雜芳基」係指環中具有至少一個除碳以外的原子之單芳環，其中該原子選自由氧、氮及硫組成之群；「雜芳基」亦包括具有至少一個此類芳環之多重縮合環系統，該等多重縮合環系統進一步描述於下文中。因此，「雜芳基」包括具有約1至6個碳原子及約1至4個選自由氧、氮及硫組成之群的雜原子之單芳環。硫及氮原子亦可以氧化形式存在，其限制條件為環為芳環。例示性雜芳環系統包括(但不限於)吡啶基、嘧啶基、㗁唑基或呋喃基。「雜芳基」亦包括多重縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中如上文所定義之雜芳基與一或多個選自雜芳基(形成例如1,8-㖠啶基)、雜環(形成例如1,2,3,4-四氫-1,8-㖠啶基)、碳環(形成例如5,6,7,8-四氫喹啉基)及芳基(形成例如吲唑基)之環縮合形成多重縮合環系統。因此，雜芳基(單芳環或多重縮合環系統)在雜芳環內具有約1至20個碳原子及約1至6個雜原子。該等多重縮合環系統可於縮合環之碳環或雜環部分上視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)側氧基取代。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。應理解，多重縮合環系統之個別環可相對於彼此以任何次序連接。應理解，雜芳基或雜芳基多重縮合環系統之連接點可在雜芳基或雜芳基多重縮合環系統之任何適合原子處，包括碳原子及雜原子(例如氮)。亦應理解，當提及某一原子範圍之員數之雜芳基(例如5員至10員雜芳基)時，原子範圍係針對雜芳基之總環原子且包括碳原子及雜原子。舉例而言，5員雜芳基將包括噻唑基且10員雜芳基將包括喹啉基。例示性雜芳基包括(但不限於)吡啶基、吡咯基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、呋喃基、㗁二唑基、噻二唑基、喹啉基、異喹啉基、苯并噻唑基、苯并㗁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氫異喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫茚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮及三唑基。
「本發明化合物」包括本文所揭示之化合物，例如，本發明化合物包括式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)及(Ii)化合物，包括實例之化合物。
「醫藥學上有效量」係指提供所希望之治療或醫藥結果的調配物或其組合中本發明化合物的量。
「醫藥學上可接受之賦形劑」包括(但不限於)任何佐劑、載劑、賦形劑、助滑劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、風味增強劑、界面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑，其已經美國食品與藥物管理局(the United States Food and Drug Administration)批准為可接受用於人類或家畜。
如本文所使用，「治療(treatment/treat/treating)」係指用於獲得有益或所希望之結果的方法。出於本發明之目的，有益或所希望之結果包括(但不限於)症狀緩解及/或症狀程度減輕及/或預防與疾病或病況相關之症狀的惡化。在一個實施例中，「治療(treatment/treating)」包括以下中之一或多者：a)抑制疾病或病況(例如，減少由疾病或病況引起之一或多種症狀，及/或減弱疾病或病況之程度)；b)減緩或遏制與疾病或病況相關之一或多種症狀的發展(例如，使疾病或病況穩定、延緩疾病或病況之惡化或進展)；及c)緩解疾病或病況，例如使臨床症狀消退、改善疾病狀態、延緩疾病進展、提高生活品質及/或延長存活期。
「預防」係指預防或延遲患有病毒感染之患者之臨床疾病之發展。
如本文所使用之「治療有效量」或「有效量」係指有效地引發所要生物學或醫學反應之量，包括在向個體投與以用於治療疾病時足以實現此類疾病治療之化合物的量。有效量將視化合物、待治療個體之疾病及其嚴重程度及年齡、體重等而變化。有效量可包括一定範圍之量。如所屬領域中所瞭解，有效量可以是一或多次劑量，亦即，達成所需治療終點可能需要單次劑量或多次劑量。因此，在投與一或多種治療劑之情形下可考慮有效量，且若與一或多種其他藥劑結合可獲得或已獲得所希望或有利的結果，則單一藥劑可視為以有效量投與。任何共投與化合物之適合劑量可視情況因化合物之組合作用(例如累加或協同效應)而減少。
如本文所使用，「共同投與」包括在投與單位劑量之一或多種額外治療劑之前或之後投與單位劑量之本文所揭示化合物，例如在投與一或多種額外治療劑的數秒、數分鐘或數小時內投與本文所揭示化合物。舉例而言，在一些實施例中，首先投與單位劑量之本發明化合物，隨後在數秒或數分鐘內投與單位劑量之一或多種額外治療劑。或者，在其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種其他治療劑，接著在數秒或數分鐘內投與單位劑量之本發明化合物。在一些實施例中，首先投與單位劑量之本發明化合物，接著在數小時(例如1至12小時)之後投與單位劑量之一或多種其他治療劑。在其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種其他治療劑，接著在數小時(例如1至12小時)之後投與單位劑量之本發明化合物。本文所揭示化合物與一或多種其他治療劑之共同投與通常係指同時或依序投與本文所揭示化合物及一或多種其他治療劑，使得在患者體內存在治療有效量之每種藥劑。
亦提供本文所描述之化合物的醫藥學上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、互變異構形式、多晶型物及前藥。「醫藥學上可接受」或「生理學上可接受」係指適用於製備適用於獸醫學或人類醫藥用途之醫藥組合物的化合物、鹽、組合物、劑型及其他物質。
本文所描述之化合物可製備及/或調配為醫藥學上可接受之鹽或在適當時製備及/或調配為游離鹼。醫藥學上可接受之鹽為具有游離鹼之所需藥理學活性的化合物之游離鹼形式之無毒鹽。此等鹽可衍生自無機或有機酸或鹼。舉例而言，含有鹼氮之化合物可藉由使該化合物與無機酸或有機酸接觸而製備為醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽之非限制性實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸單氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽及杏仁酸鹽(mandelate)。其他適合的醫藥學上可接受之鹽的清單見於Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, Lippincott Wiliams and Wilkins, Philadelphia, Pa., 2006中。
本文所揭示化合物之「醫藥學上可接受之鹽」的實例亦包括衍生自適當鹼之鹽，該鹼諸如鹼金屬(例如，鈉、鉀)、鹼土金屬(例如，鎂)、銨及NX 4 +(其中X為C 1-C 4烷基)。亦包括諸如鈉鹽或鉀鹽之鹼加成鹽。
亦提供本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物，其中連接至碳原子之1至n個氫原子可經氘原子或D置換，其中n為分子中之氫原子的數目。如此項技術中已知，氘原子為氫原子之非放射性同位素。該等化合物可增加代謝抗性，且因此當向哺乳動物投與時，可適用於增加本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物之半衰期。參見例如，Foster, 「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism」, Trends Pharmacol. Sci., 5(12):524-527 (1984)。藉由此項技術中熟知之手段，例如藉由採用其中一或多個氫原子已經氘置換之起始物質，合成此等化合物。
可併入所揭示化合物中之同位素之實例亦包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯及碘之同位素，諸如分別為 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 13N、 15N、 15O、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 36Cl、 123I及 125I。經正電子發射同位素(諸如 11C、 18F、 15O及 13N)取代可適用於正電子發射斷層攝影術(PET)研究，以檢查受質受體佔用率。經同位素標記之式(I)化合物可通常藉由熟習此項技術者已知的習知技術或藉由與如下文闡述之實例中所描述之方法類似的方法，使用合適的經同位素標記之試劑代替先前所用之未經標記之試劑來製備。
本文所揭示之實施例之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可含有一或多個不對稱中心，且可因此產生對映異構體、非對映異構體及其他立體異構形式，該等立體異構形式就絕對立體化學而言可定義為( R)-或( S)-，或針對胺基酸定義為(D)-或(L)-。本發明意謂包括所有該等可能的異構體，以及其外消旋及光學純形式。具光學活性之(+)及(-)、( R)-及( S)-或(D)-及(L)-異構體可使用對掌性合成子或對掌性試劑來製備，或使用習知技術(例如層析及分步結晶)來解析。用於製備/分離個別對映異構體之習知技術包括自適合之光學純前驅體進行對掌性合成或使用例如對掌性高壓液相層析(HPLC)對外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)進行解析。當本文所描述之化合物含有烯系雙鍵或其他幾何不對稱中心時且除非另外說明，否則意欲化合物包括E與Z型幾何異構體。同樣，亦意欲包括所有互變異構形式。在化合物以其對掌性形式表示時，應理解，實施例涵蓋但不限於特定非對映異構性或對映異構性增濃形式。在未指定但存在對掌性時，應理解，實施例係針對特定非對映異構性或對映異構性增濃形式；或此類化合物之外消旋或非外消旋混合物。如本文中所使用，「非外消旋混合物」為比率不為1:1的立體異構體之混合物。
「外消旋體」係指對映異構體之混合物。該混合物可包含相等或不相等量之各對映異構體。
「立體異構體(stereoisomer/stereoisomers)」係指一或多個立體中心之對掌性不同的化合物。立體異構體包含對映異構體及非對映異構體。若化合物具有一或多個不對稱中心或不對稱取代之雙鍵，則其可以立體異構形式存在且因此可以單獨的立體異構體或以混合物形式產生。除非另外指明，否則該描述意欲包括個別立體異構體以及混合物。判定立體化學及分離立體異構體之方法為此項技術中所熟知(參見例如Advanced Organic Chemistry, 第4章, 第4版, 3月期刊, John Wiley及Sons, 紐約, 1992)。
「互變異構體」係指質子位置不同的化合物之替代形式，諸如烯醇-酮基及亞胺-烯胺互變異構體，或含有連接至環-NH-及環=N-兩者之環原子之雜芳基的互變異構形式，諸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑及四唑。
除非另有定義，否則本文中所用的所有技術及科學術語均具有與一般熟習此項技術者通常所理解相同的意義。在化學基團之前端或末端處之短劃線為出於方便之目的；可在具有或不具有一或多個短劃線之情況下描繪化學基團而不會丟失其普通含義。穿過結構中之線所繪製的波浪線指示基團之連接點。虛線指示視情況存在之鍵。除非在化學上或結構上需要，否則書寫化學基團之次序或其與分子其餘部分之連接點不指示或暗示方向。舉例而言，基團「-SO 2CH 2-」等效於「-CH 2SO 2-」，且兩者可沿任一方向連接。類似地，「芳基烷基」例如可在該基團之芳基或烷基部分處連接至分子之其餘部分。諸如「C u-v」或(C u-C v)之前綴指示以下基團具有u至v個碳原子。舉例而言，「C 1-6烷基」及「C 1-C 6烷基」均指示烷基具有1至6個碳原子。
如本文所使用，「溶劑合物」係指溶劑與化合物之相互作用之產物。亦提供本文所描述之化合物之鹽的溶劑合物。亦提供本文所描述之化合物之水合物。
如本文所使用之「前藥」係指藥物之衍生物，其在投與人體時根據一些化學或酶促路徑轉化成母體藥物。 III. 化合物
本發明提供式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)及(Ii)之化合物。
在一些實施例中，本發明提供一種式(Ia)化合物：
Figure 02_image019
式(Ia)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基，其中R 1及R 2中之至少一者為H； 或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-，其中各R 2A及R 2B獨立地為H、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基； R 3為-N(H)(R 3A)； R 3A為H或-C(O)R 3A1，其中R 3A1為視情況經-NH 2取代之C 1-18烷基； R 4A為O或S；且 R 4B及R 4C各自獨立地為： (A)   -OH； (B)   -OR 4B1，其中 R 4B1為視情況經1至3個R 4B2基團取代之C 1-6烷基；C 1-6鹵烷基；C 3-8環烷基；C 6-12芳基；或具有1至3個各自獨立地選自N、O或S之雜原子的5員至6員雜芳基，其中 各R 4B2基團獨立地為C 1-6烷氧基、-S-R 4B3或-S(O) 2-R 4B3，且 各R 4B3基團獨立地為C 1-6烷基； (C)
Figure 02_image021
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基；視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基；-C(O)OR 4D3；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3， 各R 4D2獨立地為C 1-3烷氧基，且 各R 4D3獨立地為C 1-3烷基； (D)
Figure 02_image023
，其中 X 1及X 2各自獨立地為-O-或-N(R 4H)-； R 4E1及R 4E2各自獨立地為H；視情況經1至3個R 4E3基團取代之C 1-6烷基；或C 3-6環烷基，其中 各R 4E3基團獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-C 1-6伸烷基-C 6-12芳基、C 3-6環烷基或C 6-12芳基，且 各R 4E4基團獨立地為C 1-6烷基； 或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
Figure 02_image025
； 各R 4G1獨立地為-OH；C 1-6烷基；C 1-3烷氧基；-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3；C 1-3鹵烷基；-N(R 4G8) 2；-C(O)N(R 4G8) 2；視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或C 6-12芳基； 各R 4G2獨立地為C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 1-3鹵烷基、-OH、-NH 2或C 6-12芳基； 各R 4G3獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-8環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)OR 4G5取代，且其中該環烷基視情況經C 1-6烷基取代； 各R 4G5獨立地為C 1-6烷基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G8獨立地為H或C 1-6烷基； 各R 4G9獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基或-NH 2； 各R 4G10獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或側氧基； 各R 4G11獨立地為C 10-18烷基或苯甲基； R 4H為H； 或R 4E1及R 4H與其所連接之原子組合形成具有1至2個選自N、O及S之額外雜原子的5員至6員雜環基；且 下標n為0或1；或 (E)    -(OP(O)(OH)) 1-2-OH；或 (F)
Figure 02_image027
，其中 R 4J1及R 4J2各自獨立地為H、-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中 R 4J1及R 4J2中之至少一者為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3， 各R 4J3獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且 至少一個R 4J3為C 10-18烷基； 替代地，R 2及R 4C與其所連接之原子組合形成六員環，且R 1為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基， 其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式：
Figure 02_image029
， 且R 4G為乙基或2-乙基丁基時，R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-， 其限制條件為該式(Ia)化合物不具有以下結構：
Figure 02_image031
， 且其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式時：
Figure 02_image033
， R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)表示，其限制條件為該式(Ia)化合物不具有以下結構：
Figure 02_image035
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)表示，其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式：
Figure 02_image037
， 且R 4G為乙基、2-乙基丁基或環己基時，R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基，其中R 1及R 2中之至少一者為H；或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-，其中各R 2A及R 2B獨立地為H、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H，且R 2可為-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基，且R 2可為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-，其中各R 2A及R 2B獨立地為H、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-，其中各R 2A及R 2B獨立地為H、C 1-4烷基或C 1-3烷氧基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基，其中R 1及R 2中之至少一者為H；或R 1及R 2組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H且R 2可為-C(O)R 1A，其中R 1A為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)R 1A，其中R 1A為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基，且R 2可為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可各自為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為乙基、異丙基或三級丁基，其中R 1及R 2中之至少一者為H；或R 1及R 2組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H且R 2可為-C(O)R 1A，其中R 1A為乙基、異丙基或三級丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)R 1A，其中R 1A為乙基、異丙基或三級丁基，且R 2可為H。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H且R 2可為-C(O)-乙基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H且R 2可為-C(O)-異丙基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H且R 2可為-C(O)-三級丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)-乙基且R 2可為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)-異丙基且R 2可為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)-三級丁基且R 2可為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(O)-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(Me) 2-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-CH(OEt)-。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3為-N(H)(R 3A)；R 3A為H或-C(O)R 3A1，其中R 3A1為視情況經-NH 2取代之C 1-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3為-NH 2。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3為-NHC(O)R 3A1，其中R 3A1為視情況經-NH 2取代之C 1-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3為-NHC(O)R 3A1，其中R 3A1為視情況經-NH 2取代之C 1-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3A1可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十六基或十八基，其各自視情況經-NH 2取代。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3A1可為正丙基、異丙基、異丁基、庚基或十二基，其各自視情況經-NH 2取代。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3A1可為正丙基、異丙基、庚基或十二基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 3A1可為1-胺基異丁基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4A可為O或S。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4A可為S。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A可為乙基、異丙基或三級丁基，其中R 1及R 2中之至少一者可為H；或R 1及R 2組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H；R 2可為-C(O)-乙基；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H；R 2可為-C(O)-異丙基；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為H；R 2可為-C(O)-三級丁基；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)-乙基；R 2可為H；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)-異丙基；R 2可為H；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1可為-C(O)-三級丁基；R 2可為H；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(O)-；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-C(Me) 2-；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 1及R 2可組合形成-CH(OEt)-；R 3可為NH 2；且R 4A可為O。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C可各自獨立地為： (A)   -OH； (B)   -OR 4B1，其中 R 4B1可為視情況經1至3個R 4B2基團取代之C 1-6烷基；C 1-6鹵烷基；C 3-8環烷基；C 6-12芳基；或具有1至3個各自獨立地選自N、O或S之雜原子的5員至6員雜芳基，其中 各R 4B2基團可獨立地為C 1-6烷氧基、-S-R 4B3或-S(O) 2-R 4B3，且 各R 4B3基團可獨立地為C 1-6烷基； (C)
Figure 02_image039
，其中 下標m可為0、1、2、3、4或5；且 各R 4D可獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基；視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基；-C(O)OR 4D3；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團可獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3， 各R 4D2可獨立地為C 1-3烷氧基，且 各R 4D3可獨立地為C 1-3烷基； (D)
Figure 02_image041
，其中 X 1及X 2可各自獨立地為-O-或-N(R 4H)-； R 4E1及R 4E2可各自獨立地為H；視情況經1至3個R 4E3基團取代之C 1-6烷基；或C 3-6環烷基，其中 各R 4E3基團可獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-C 1-6伸烷基-C 6-12芳基、C 3-6環烷基或C 6-12芳基，且 各R 4E4基團可獨立地為C 1-6烷基； 或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G可為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
Figure 02_image043
； 各R 4G1可獨立地為-OH；C 1-6烷基；C 1-3烷氧基；-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3；C 1-3鹵烷基；-N(R 4G8) 2；-C(O)N(R 4G8) 2；視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或C 6-12芳基； 各R 4G2可獨立地為C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 1-3鹵烷基、-OH、-NH 2或C 6-12芳基； 各R 4G3可獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5； 各R 4G4可獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-8環烷基，其中該C 1-6烷基可視情況經OH、NH 2或-NHC(O)OR 4G5取代，且其中該環烷基可視情況經C 1-6烷基取代； 各R 4G5可獨立地為C 1-6烷基； R 4G6及R 4G7可各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者可為-OR 4G11； 各R 4G8可獨立地為H或C 1-6烷基； 各R 4G9可獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基或-NH 2； 各R 4G10可獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或側氧基； 各R 4G11可獨立地為C 10-18烷基或苯甲基； R 4H可為H； 或R 4E1及R 4H與其所連接之原子組合形成具有1至2個選自N、O及S之額外雜原子的5員至6員雜環基；且 下標n可為0或1；或 (E)    -(OP(O)(OH)) 1-2-OH；或 (F)
Figure 02_image045
，其中 R 4J1及R 4J2可各自獨立地為H、-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中 R 4J1及R 4J2中之至少一者可為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3， 各R 4J3可獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且 至少一個R 4J3可為C 10-18烷基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 2及R 4C可與其所連接之原子組合形成六員環。在一些實施例中，該式(Ia)化合物可具有以下結構：
Figure 02_image047
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為-OH。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為-OR 4B1，其中R 4B1為視情況經1至3個R 4B2基團取代之C 1-6烷基、C 1-6鹵烷基、C 3-8環烷基、C 6-12芳基或具有1至3個各自獨立地選自N、O或S之雜原子的5員至6員雜芳基，其中各R 4B2基團獨立地為C 1-6烷氧基、-S-R 4B3或-S(O) 2-R 4B3，且各R 4B3基團獨立地為C 1-6烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B1可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、-CH 2F、-CHF 2、-CF 3、2,2,2-三氟乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-(硫代甲基)乙基、2-(甲基磺醯基)乙基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、萘基或吡啶基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B1可為異丙基、2,2,2-三氟乙基、2-甲氧基乙基、2-(硫代甲基)乙基、2-(甲基磺醯基)乙基、環戊基、萘基或吡啶基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為
Figure 02_image049
， 其中下標m為0、1、2、3、4或5；且各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基、視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基、-C(O)OR 4D3或-C(O)N(R 4D3) 2，其中各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3，各R 4D2獨立地為C 1-3烷氧基，且各R 4D3獨立地為C 1-3烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4D可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、甲氧基甲基、2-甲氧基乙氧基、-C(O)OMe、-C(O)OEt、-C(O)NMe 2或
Figure 02_image051
。 在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4D可為三級丁基、2-甲氧基乙氧基、-C(O)OEt、-C(O)NMe 2或
Figure 02_image053
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為
Figure 02_image055
， 其中X 1及X 2各自獨立地為-O-或-N(R 4H)-； R 4E1及R 4E2各自獨立地為H、視情況經1至3個R 4E3基團取代之C 1-6烷基或C 3-6環烷基，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-C 1-6伸烷基-C 6-12芳基、C 3-6環烷基或C 6-12芳基，且各R 4E4基團獨立地為C 1-6烷基；或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
Figure 02_image057
； 各R 4G1獨立地為-OH；C 1-6烷基；C 1-3烷氧基；-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3；C 1-3鹵烷基；-N(R 4G8) 2；-C(O)N(R 4G8) 2；視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或C 6-12芳基；各R 4G2獨立地為C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 1-3鹵烷基、-OH、-NH 2或C 6-12芳基；各R 4G3獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-8環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)OR 4G5取代，且其中該環烷基視情況經C 1-6烷基取代； 各R 4G5獨立地為C 1-6烷基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G8獨立地為H或C 1-6烷基； 各R 4G9獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基或-NH 2；各R 4G10獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或側氧基；各R 4G11獨立地為C 10-18烷基或苯甲基； R 4H為H；或R 4E1及R 4H與其所連接之原子組合形成具有1至2個選自N、O及S之額外雜原子的5員至6員雜環基；且下標n為0或1。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中X 1及X 2各自獨立地為-O-或-NH-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中X 1及X 2各自為-O-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中X 1及X 2各自為-NH-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中X 1可為-O-且X 2可為-NH-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中X 1可為-NH-且X 2可為-O-。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4F1及R 4F2各自為H。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4F1及R 4F2組合一起為側氧基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中下標n為0。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中下標n為1。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為
Figure 02_image059
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4E1可為H、視情況經1至3個R 4E3基團取代之C 1-6烷基或C 3-6環烷基，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-C 1-6伸烷基-C 6-12芳基、C 3-6環烷基或C 6-12芳基，且各R 4E4基團獨立地為C 1-6烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4E1可為視情況經1個R 4E3基團取代之C 1-6烷基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-苯甲基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基或苯基，且各R 4E4基團獨立地為甲基、乙基、異丙基、正丁基或異丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R E1可為甲基、乙基、異丙基、正丁基、異丁基、環丙基甲基、環戊基、環己基或苯甲基，其中該甲基、乙基及丁基各自視情況經-NH 2、-NHC(O)Me、-NHC(O)O-苯甲基、-C(O)O-丁基、-C(O)O-戊基取代。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4E1可為甲基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基，其中各R 4G1獨立地為-OH、C 1-6烷基、C 1-3烷氧基、-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3、C 1-3鹵烷基、-N(R 4G8) 2、-C(O)N(R 4G8) 2、視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-8環烷基、視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基或C 6-12芳基；各R 4G8獨立地為H或C 1-6烷基；各R 4G9獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基或-NH2；且各R 4G10獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或側氧基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為 視情況經-(CH 2OCH 2) 2-CH 3取代之甲基、環丙基、環丁基、視情況經CF 3或NH 2取代之環己基、視情況經CH 2CF 3取代之哌啶、
Figure 111149986-A0304-1
啶、氧雜環丁烷、四氫-2H-哌喃或苯基， 視情況經NMe 2或N(iPr) 2取代之乙基， 視情況經甲氧基取代之正丙基或嗎啉， 視情況經C(O)NH 2取代之異丙基， 正丁基， 視情況經甲氧基、OH或CF 3取代之異丁基， 戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基或2-乙基-丁基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、
Figure 02_image061
Figure 02_image063
Figure 02_image065
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為C 7-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十六基或十八基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為辛基、十二基、十六基或十八基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基，其中各R 4G2獨立地為C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 1-3鹵烷基、-OH、-NH 2或C 6-12芳基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基，其中各R 4G2獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、F、Cl、-CH 2F、-CHF 2、-CF 3、-CH 2CF 3、-NH 2或苯基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基或環辛基，其各自視情況經1至2個R 4G2取代，其中各R 4G2獨立地為甲基、三級丁基、甲氧基、F、-CF 3、-NH 2或苯基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為環丁基、環戊基、環己基、環庚基或環辛基，其中該環己基可視情況經1至2個R 4G2取代，其中各R 4G2獨立地為甲基、三級丁基、甲氧基、F、-CF 3、-NH 2或苯基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、
Figure 02_image067
Figure 02_image069
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基，其中各R 4G3獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為吡咯啶、哌啶、氮雜環庚烷、
Figure 111149986-A0304-1
啶、氧雜環丁烷、四氫呋喃、四氫哌喃、哌𠯤或嗎啉，其各自視情況經1至3個R 4G3取代，其中各R 4G3獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為吡咯啶、哌啶、氮雜環庚烷、
Figure 111149986-A0304-1
啶、氧雜環丁烷、四氫呋喃、四氫哌喃、哌𠯤或嗎啉，其各自視情況經1至3個R 4G3取代，其中各R 4G3獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、F、Cl、-CH 2F、-CHF 2、-CF 3、-CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-C 1-4烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為吡咯啶、哌啶、氮雜環庚烷、
Figure 111149986-A0304-1
啶、氧雜環丁烷、四氫呋喃、四氫哌喃或嗎啉，其各自視情況經1至3個R 4G3取代，其中各R 4G3獨立地為甲基、乙基、F、-CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為：視情況經甲基、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基取代之吡咯啶；視情況經甲基、乙基、F或-C(O)Me取代之哌啶；氮雜環庚烷；
Figure 111149986-A0304-1
啶；氧雜環丁烷；視情況經甲基取代之四氫呋喃；視情況經甲基取代之四氫哌喃；或嗎啉。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為：
Figure 02_image071
Figure 02_image073
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為-C(O)R 4G4，其中各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-8環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)OR 4G5取代，且其中該環烷基視情況經C 1-6烷基取代。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為-C(O)R 4G4，其中各R 4G4獨立地為甲基、視情況經NH 2取代之乙基、正丙基、異丙基、正丁基、視情況經NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代之異丁基、二級丁基、視情況經OH取代之三級丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十六基、十八基、視情況經甲基取代之環丙基、環丁基、環戊基或環己基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為-C(O)R 4G4，其中各R 4G4獨立地為視情況經NH 2取代之乙基、視情況經NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代之異丁基、視情況經OH取代之三級丁基、十一基、視情況經甲基取代之環丙基或環己基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為
Figure 02_image075
Figure 02_image077
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為-C(O)OR 4G5，其中各R 4G5獨立地為C 1-6烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G5可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G5可為異丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為：
Figure 02_image079
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為
Figure 02_image081
其中R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11；且各R 4G11獨立地為C 10-18烷基或苯甲基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G6可為H且R 4G7可為-OR 4G11，其中R 4G11可為C 10-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G6及R 4G7各自獨立地為-OR 4G11，其中各R 4G11獨立地為C 10-18烷基或苯甲基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G可為：
Figure 02_image083
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為-(OP(O)(OH)) 1-2-OH。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C中之一者可為
Figure 02_image085
， 其中R 4J1及R 4J2各自獨立地為H、-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中R 4J1及R 4J2中之至少一者為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，各R 4J3獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且至少一個R 4J3為C 10-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1可為H且R 4J2可為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中各R 4J3獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且至少一個R 4J3為C 10-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1及R 4J2各自獨立地為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中各R 4J3獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且至少一個R 4J3為C 10-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1可為-OR 4J3，其中R 4J3可為C 1-6烷基、C 2-6烯基或苯甲基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1可為-OR 4J3，其中R 4J3可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基或苯甲基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1可為-OR 4J3，其中R 4J3可為甲基、丙-2-烯基或苯甲基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J2可為-OR 4J3，其中R 4J3可為C 10-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J2可為-OR 4J3，其中R 4J3可為十二基、十一基、十二基、十六基或十八基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J2可為-OR 4J3，其中R 4J3可為十六基或十八基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1及R 4J2各自為-OC(O)R 4J3，其中R 4J3為C 10-18烷基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1及R 4J2各自為-OC(O)R 4J3，其中R 4J3可為十二基、十一基、十二基、十五基、十六基或十八基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4J1及R 4J2各自為-OC(O)R 4J3，其中R 4J3可為十五基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B及R 4C各自獨立地為：
Figure 02_image087
，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基、視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基、-C(O)OR 4D3或-C(O)N(R 4D3) 2，其中各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OMe，各R 4D2為甲氧基，且各R 4D3獨立地為甲基或乙基；或
Figure 02_image089
，其中 X 1及X 2各自獨立地為-O-或-NH-； R 4E1為視情況經1個R 4E3基團取代之C 1-6烷基或C 3-6環烷基，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)Me、-C(O)O-正丁基、-C(O)O-戊基、-NH 2、-NHC(O)Me、-NHC(O)O-苯甲基、C 3-6環烷基或苯基； R 4E2為H；或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
Figure 02_image091
； 各R 4G1獨立地為-OH；羥甲基；甲氧基；-(CH 2OCH 2) 2-CH 3；-CF 3；-N(Me) 2；-C(O)NH 2；視情況經1至2個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至2個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或苯基； 各R 4G2獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、甲氧基、F、Cl、Br、CF 3、-NH 2或苯基； 各R 4G3獨立地為甲基、乙基、F、Cl、CF 3、CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-7環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代，且其中該環烷基視情況經甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基取代； 各R 4G5獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G9獨立地為甲基、CF 3或-NH 2； 各R 4G10獨立地為甲基、CF 3、CH 2CF 3或側氧基；且 各R 4G11獨立地為十六烷、十八烷或苯甲基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4C可為： (D)
Figure 02_image093
，其中 X 1及X 2各自獨立地為-O-或-NH-； R 4E1為視情況經1個R 4E3基團取代之C 1-6烷基或C 3-6環烷基，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)Me、-C(O)O-正丁基、-C(O)O-戊基、-NH 2、-NHC(O)Me、-NHC(O)O-苯甲基、C 3-6環烷基或苯基； R 4E2為H；或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
Figure 02_image095
； 各R 4G1獨立地為-OH；羥甲基；甲氧基；-(CH 2OCH 2) 2-CH 3；-CF 3；-N(Me) 2；-C(O)NH 2；視情況經1至2個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至2個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或苯基； 各R 4G2獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、甲氧基、F、Cl、Br、CF 3、-NH 2或苯基； 各R 4G3獨立地為甲基、乙基、F、Cl、CF 3、CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-7環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代，且其中該環烷基視情況經甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基取代； 各R 4G5獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G9獨立地為甲基、CF 3或-NH 2； 各R 4G10獨立地為甲基、CF 3、CH 2CF 3或側氧基；且 各R 4G11獨立地為十六烷、十八烷或苯甲基。
在一些實施例中，該化合物具有式(Ib)：
Figure 02_image097
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物具有式Ic：
Figure 02_image099
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B可為：
Figure 02_image101
， 其中下標m為1；且 R 4D獨立地為甲基、乙基、正丙基或三級丁基，其各自視情況經1至3個R 4D1基團取代，其中各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OMe，或 R 4D為甲氧基、乙氧基或丙氧基，其各自視情況經甲氧基取代，或 R 4D為-C(O)OMe、-C(O)OEt或-C(O)N(Me) 2；且 R 4C可為：
Figure 02_image103
， 其中R 4E1為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊烷、新戊烷或正己烷，其各自視情況經1個R 4E3基團取代，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)Me、-C(O)O-正丁基、-C(O)O-戊基、-NH 2、-NHC(O)Me或-NHC(O)O-苯甲基，或 R 4E1為環丙基、環丙基甲基、環丁基、環丁基甲基、環戊基、環戊基甲基、環己基或環己基甲基，或 R 4E1為苯甲基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4B可為
Figure 02_image105
，且 R 4C可為
Figure 02_image107
， 其中R E1可為甲基、乙基、異丙基、正丁基、異丁基、環丙基甲基、環戊基、環己基或苯甲基，其中該甲基、乙基及丁基各自視情況經-NH 2、-NHC(O)Me、-NHC(O)O-苯甲基、-C(O)O-丁基、-C(O)O-戊基取代；且 R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、辛基、十二基、十六基、十八基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、
Figure 02_image109
Figure 02_image111
Figure 02_image113
。
在一些實施例中，該化合物具有式(Id)：
Figure 02_image115
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物具有式(Ie)：
Figure 02_image117
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物具有式(If)：
Figure 02_image119
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物具有式(Ig)：
Figure 02_image121
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物具有式(Ih)：
Figure 02_image123
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物具有式(Ii)：
Figure 02_image125
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中該化合物或其醫藥學上可接受之鹽係其中R 4C為以下之化合物：
Figure 02_image127
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中該化合物或其醫藥學上可接受之鹽係其中R 4C為以下之化合物：
Figure 02_image129
。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊烷、新戊烷、正己烷、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十五烷、十六烷或十八烷，其各自視情況經1至2個R 4G1取代，其中各R 4G1獨立地為-OH、羥甲基、甲氧基、-(CH 2OCH 2) 2-CH 3、-CF 3、-N(Me) 2或-C(O)NH 2。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基或環辛基，其各自視情況經1至2個R 4G2取代，其中各R 4G2獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、OMe、F、CF 3、-NH 2或苯基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基、環庚基甲基或環辛基甲基，其各自視情況經1至2個R 4G2取代，其中各R 4G2獨立地為甲基、CF 3或-NH 2。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為吡咯啶、哌啶、氮雜環庚烷、
Figure 111149986-A0304-1
啶、氧雜環丁烷、四氫呋喃、四氫哌喃、嗎啉或1,3-二氧雜環戊烯，其各自視情況經1至2個R 4G3取代，其中各R 4G3獨立地為甲基、乙基、F、CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為哌啶甲基、
Figure 111149986-A0304-1
啶甲基、氧雜環丁烷甲基、四氫呋喃甲基、四氫哌喃甲基、嗎啉甲基、2-嗎啉-乙基、3-嗎啉-丙基或1,3-二氧雜環戊烯甲基，其各自視情況經1至2個R 4G10取代，其中各R 4G10獨立地為甲基、CH 2CF 3或側氧基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為苯甲基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為-C(O)R 4G4，其中R 4G4為：C 1-6烷基，其選自由以下組成之群：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊烷、新戊烷、正己烷、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基及2-乙基-丁基；C 7-18烷基，其選自由以下組成之群：庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十五烷、十六烷及十八烷；或C 3-8環烷基，其選自由以下組成之群：環丙基、環丁基、環戊基或環己基，其中各C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代，且其中各C 3-8環烷基視情況經甲基取代。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為-C(O)OR 4G5，其中R 4G5為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為
Figure 02_image131
，其中 R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11，且 各R 4G11獨立地為十六烷、十八烷或苯甲基。
在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其中R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、辛基、十二基、十六基、十八基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、
Figure 02_image133
Figure 02_image135
Figure 02_image137
。
在一些實施例中，本發明提供表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H、表1I或表1J之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1A之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1B之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1C之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1D之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1E之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1F之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1G之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1H之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1I之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該化合物為表1J之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 表1A.
Figure 02_image139
Figure 02_image141
Figure 02_image143
Figure 02_image145
表1B.
Figure 02_image147
Figure 02_image149
Figure 02_image151
Figure 02_image153
表1C.
Figure 02_image155
Figure 02_image157
Figure 02_image159
Figure 02_image161
Figure 02_image163
表1D.
Figure 02_image165
Figure 02_image167
Figure 02_image169
Figure 02_image171
Figure 02_image173
Figure 02_image175
Figure 02_image177
表1E.
Figure 02_image179
Figure 02_image181
Figure 02_image183
Figure 02_image185
Figure 02_image187
Figure 02_image189
表1F.
Figure 02_image191
Figure 02_image193
Figure 02_image195
Figure 02_image197
Figure 02_image199
表1G.
Figure 02_image201
Figure 02_image203
Figure 02_image205
Figure 02_image207
Figure 02_image209
表1H.
Figure 02_image211
Figure 02_image213
Figure 02_image215
Figure 02_image217
Figure 02_image219
表1I.
Figure 02_image221
Figure 02_image223
Figure 02_image225
Figure 02_image227
Figure 02_image229
表1J.
Figure 02_image231
Figure 02_image233
Figure 02_image235
Figure 02_image237
Figure 02_image239
在一些實施例中，本發明提供具有以下結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image241
Figure 02_image243
Figure 02_image245
Figure 02_image247
。
在一些實施例中，本發明提供具有以下結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image249
Figure 02_image251
Figure 02_image253
。
在一些實施例中，其限制條件為當式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物具有下式：
Figure 02_image255
， 且R 4G為乙基或2-乙基丁基時，R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-。在一些實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)表示，其限制條件為該化合物不為：
Figure 02_image257
。
就本文所描述之化合物之活體內代謝產物相對於先前技術為新穎且不顯著的而言，此類產物亦在本文之範疇內。此類產物可例如由所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、酯化及其類似作用產生，主要由於酶促過程產生。因此，包括藉由包含使化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物的時間段之製程而製備的新穎及非顯著化合物。此類產物通常由製備放射性標記(例如 14C或 3H)之化合物，將其以可偵測劑量(例如大於約0.5 mg/kg)非經腸投與動物(諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴)或人類，使代謝進行充足的時間(通常約30秒至約30小時)且自尿液、血液或其他生物樣品分離其轉化產物來鑑別。此等產物因為其經標記而容易分離(其他藉由使用能夠結合代謝物中留存之抗原決定基的抗體進行分離)。代謝物結構係以習知方式，例如藉由MS或NMR分析確定。一般而言，以與習知藥物代謝研究相同之方式進行代謝物之分析。轉化產物只要未以其他方式在活體內發現，則適用於診斷分析以用於化合物之治療性給藥，即使其自身不具有HSV抗病毒活性。
用於測定替代性胃腸道分泌物中化合物之穩定性的配方及方法為已知的。化合物在本文中定義為在胃腸道中穩定，其中在37℃下培育1小時後，在替代性腸液或胃液中少於約50莫耳%之受保護基團脫除保護基。僅因為化合物對胃腸道穩定並不意謂其無法活體內水解。前藥通常在消化系統中將為穩定的，但可在消化腔、肝臟、肺或其他代謝器官中或一般在細胞內實質上水解成母體藥物。如本文所用，前藥應理解為化學設計成在克服經口遞送的生物學障壁之後有效釋放母體藥物之化合物。 IV. 醫藥調配物
在一些實施例中，本發明提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。本文亦提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)及(Ii)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物及/或酯，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
本文之化合物與習知載劑及賦形劑一起調配，該等載劑及賦形劑將根據普通實踐選擇。錠劑將含有賦形劑、助滑劑、填充劑、黏合劑及其類似物。水性調配物以無菌形式製備，且在意欲藉由除經口投藥以外的方式遞送時通常為等滲的。所有調配物將視情況含有賦形劑，諸如「Handbook of Pharmaceutical Excipients」(1986)中所闡述之賦形劑。賦形劑包括抗壞血酸及其他抗氧化劑、螯合劑(諸如EDTA)、碳水化合物(諸如聚葡萄糖)、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素、硬脂酸及其類似物。調配物之pH值在約3至約11範圍內，但通常為約7至10。
儘管活性成分可單獨投與，但其較佳可呈醫藥調配物形式。用於獸醫及人類用途之調配物均包含至少一種如上文所定義之活性成分，以及一或多種可接受之載劑及視情況選用之其他治療成分，尤其如本文所論述之彼等額外治療成分。載劑必須在與調配物之其他成分相容及對其受體生理學無害之意義上為「可接受」的。
調配物包括適用於前述投藥途徑之調配物。調配物可宜以單位劑型呈現且可利用藥劑學技術中熟知之任何方法來製備。技術及調配物通常見於Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)中。該等方法包括使活性成分與構成一或多種附屬成分之載劑結合的步驟。一般而言，藉由使活性成分與液體載劑或細粉狀固體載劑或兩者均勻且緊密結合且隨後視需要使產物成形來製備調配物。
適合於經口投與的調配物可呈現為離散單元形式，諸如各含有預定量之活性成分的膠囊、扁囊劑或錠劑；粉末或粒子形式；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或水包油液體乳液或油包水液體乳液形式。活性成分亦可以推注、舐劑或糊劑形式投與。
錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或模製來製造。壓縮錠劑可藉由在適合機器中壓縮視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的呈自由流動形式之活性成分(諸如粉末或粒子)來製備。模製錠劑可藉由在適合機器中模製經惰性液體稀釋劑濕潤之粉末狀活性成分之混合物來製備。可將錠劑視情況包覆包衣或刻痕且視情況調配，以便提供活性成分自其之緩慢或控制釋放。
對於眼部或其他外部組織(例如口腔及皮膚)感染，調配物較佳以含有例如0.075至20% w/w (包括以0.1% w/w (諸如0.6% w/w、0.7% w/w等)遞增之在0.1%與20%之間的範圍內的活性成分)，較佳0.2至15% w/w且最佳0.5至10% w/w之量的活性成分的局部軟膏或乳膏形式施用。當調配成軟膏時，活性成分可與石蠟或水可混溶性軟膏基劑一起使用。或者，活性成分可與水包油乳膏基劑一起調配成乳膏。
視需要，乳膏基劑之水相可包括例如至少30% w/w之多元醇，亦即具有兩個或更多個羥基之醇，諸如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、丙三醇及聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部調配物宜包括增強活性成分經由皮膚或其他受影響區域吸收或滲透之化合物。該等經皮滲透增強劑之實例包括二甲亞碸及相關類似物。
乳液之油相可由已知成分以已知方式構成。儘管該相可僅包含乳化劑(或稱為利泄劑)，但其宜包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪及油之混合物。較佳地，包括親水性乳化劑以及充當穩定劑之親脂性乳化劑。較佳亦包括油與脂肪。乳化劑與穩定劑一起或不與穩定劑一起構成所謂乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起構成所謂乳化軟膏基劑，其形成乳膏調配物之油性分散相。
適用於調配物之利泄劑及乳液穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、鯨蠟硬脂醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯及月桂基硫酸鈉。
用於調配物之適合的油或脂肪之選擇係基於實現所需化妝品特性。乳膏應較佳為非油膩、非染色及可洗產物，具有適合的稠度以避免自試管或其他容器洩漏。可使用直鏈或分支鏈、單元或二元烷基酯，諸如二異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸之丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或分支鏈酯之摻合物(稱為Crodamol CAP)，最後三者為較佳酯。視所需特性而定，此等酯可單獨或組合使用。或者，使用高熔點脂質，諸如白色軟石蠟及/或液體石蠟或其他礦物油。
本文之醫藥調配物包含與一或多種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及視情況使用之其他治療劑的組合。含有活性成分之醫藥調配物可呈適用於所欲投藥方法之任何形式。當用於例如經口投與時，可製備錠劑、糖衣錠、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散粉末或粒子、乳液、硬或軟膠囊、溶液、糖漿或酏劑。可根據製造醫藥組合物之技術中已知的任何方法製備意欲用於經口使用的組合物，且該等組合物可含有一或多種劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以便提供可口製劑。含有與適用於製造錠劑之醫藥學上可接受無毒賦形劑混合的活性成分之錠劑為可接受的。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化及崩解劑，諸如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可未經包覆或可利用已知技術(包括微囊封裝)包覆以延緩在胃腸道中之崩解及吸附，且因此提供較長時段的持久作用。舉例而言，可單獨或與蠟一起使用諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之延時材料。
用於經口使用之調配物亦可呈硬明膠膠囊形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油介質(諸如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
水性懸浮液含有與適用於製造水性懸浮液之賦形劑摻合的活性材料。此類賦形劑包括懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯膠；及分散劑或潤濕劑，諸如天然存在之磷脂(例如卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物(例如十七伸乙氧基鯨蠟醇)、環氧乙烷與衍生自脂肪酸之偏酯及己糖醇酐之縮合產物(例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色劑；一或多種調味劑及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可藉由使活性成分懸浮於植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)中或礦物油(諸如液體石蠟)中來調配。口服懸浮液可含有增稠劑，諸如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟基醇。可添加甜味劑(諸如上述甜味劑)及調味劑，以提供適口之口服製劑。此等組合物可藉由添加抗氧化劑(諸如抗壞血酸)來保存。
適合於藉由添加水來製備水性懸浮液的可分散粉末及粒子提供活性成分與分散劑或潤濕劑、懸浮劑及一或多種防腐劑之混合物。合適之分散劑或潤濕劑及懸浮劑由上文所揭示之彼等試劑例示。亦可存在額外賦形劑，例如甜味劑、調味劑及著色劑。
醫藥組合物亦可呈水包油乳液形式。油相可為植物油，諸如橄欖油或花生油，礦物油，諸如液體石蠟，或此等物質之混合物。適合的乳化劑包括天然存在之膠，諸如阿拉伯膠及膠狀黃蓍；天然存在之磷脂，諸如大豆卵磷脂；來源於脂肪酸及己糖醇酐之酯或偏酯，諸如脫水山梨糖醇單油酸酯；及此等偏酯與環氧乙烷之縮合產物，諸如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳液亦可含有甜味劑及調味劑。糖漿及酏劑可與甜味劑(諸如丙三醇、山梨糖醇或蔗糖)一起調配。此類調配物亦可含有緩和劑、防腐劑、調味劑或著色劑。
醫藥組合物可呈無菌可注射或靜脈內製劑形式，諸如呈無菌可注射水性或油性懸浮液形式。此懸浮液可根據已知技術使用上文已提及之彼等適合分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射或靜脈內製劑亦可為於無毒非經腸可接受稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，諸如於1,3-丁二醇中之溶液；或製備成凍乾粉末。在可接受之媒劑及溶劑中，可採用的有水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等滲氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發性油可常用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成性單甘油酯或二甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸同樣可用於製備可注射劑。
可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分的量將視所治療之主體及特定投藥模式而變化。舉例而言，意欲用於向人類經口投與之延時釋放調配物可含有大約1至1000 mg活性材料化合物與適當且適宜量之載劑材料的混配物，該量可在總組合物之約5%至約95% (重量:重量)範圍內變化。醫藥組合物可製備成提供容易量測之量以供投與。舉例而言，意欲用於靜脈內輸注之水溶液每毫升溶液可含有約3至500 μg活性成分，以便可以約30 mL/hr之速率進行適合體積之輸注。
適用於局部投與至眼睛之調配物亦包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於適合載劑中，尤其用於活性成分之水性溶劑中。活性成分較佳以0.5至20%，有利地0.5至10%且尤其約1.5% w/w之濃度存在於此類調配物中。
適用於在口腔中局部投與之調配物包括在調味基劑(通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍)中包含活性成分之口含錠；在惰性基劑(諸如明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯膠)中包含活性成分之片劑；以及在適合液體載劑中包含活性成分之漱口水。
用於直腸投與之調配物可以具有適合的基劑(包含例如可可脂或水楊酸酯)之栓劑形式呈現。
適用於肺內或經鼻投與之調配物具有例如在0.1至500微米範圍內之粒度，諸如0.5、1、30、35等，其藉由經鼻孔快速吸入或藉由經口腔吸入以便達到肺泡來投與。適合的調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適用於以氣霧劑或乾燥粉末形式投與之調配物可根據習知方法製備且可與其他治療劑一起遞送，該等治療劑諸如迄今為止用於治療或預防如下文所描述之肺病毒科感染的化合物。
另一實施例提供一種新穎、有效、安全、無刺激性及生理上相容的包含式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的可吸入組合物，其適用於治療肺病毒科感染及潛在相關的細支氣管炎。較佳醫藥學上可接受之鹽為無機酸鹽，包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽或磷酸鹽，因為其可引起較少肺部刺激。較佳地，可吸入調配物係以包含質量中數氣動粒徑(MMAD)在約1與約5 µm之間的粒子的氣霧劑遞送至支氣管內空間。較佳地，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物經調配以供使用噴霧器、加壓定劑量吸入器(pMDI)或乾粉吸入器(DPI)進行氣霧劑遞送。
噴霧器之非限制性實例包括霧化、噴射、超音波、加壓、振動多孔板或等效噴霧器，包括利用適應性氣霧劑遞送技術之彼等噴霧器(Denyer, J. Aerosol medicine Pulmonary Drug Delivery2010, 23增刊1, S1-S10)。噴射式噴霧器利用空氣壓力將溶液破碎成氣霧劑液滴。超音噴霧器藉由壓電晶體將液體剪切成小氣霧劑液滴來起作用。加壓噴霧系統在壓力下迫使溶液穿過小孔以產生氣霧劑液滴。振動式多孔板裝置利用快速振動將液體流剪切成適當液滴大小。
在一較佳實施例中，用於噴霧之調配物係以包含MMAD主要介於約1 µm與約5 µm之間的粒子的氣霧劑之形式，使用能夠使式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物之調配物霧化為所需MMAD之粒子的噴霧器遞送至支氣管內空間。為達到最佳治療效果且避免上呼吸道及全身副作用，大多數霧化粒子之MMAD不應大於約5 µm。若氣霧劑含有大量MMAD大於5 µm之粒子，則該等粒子沈積於上呼吸道中，由此減少遞送至炎症部位之藥物的量及下呼吸道中之支氣管收縮。若氣霧劑之MMAD小於約1 µm，則該等粒子傾向於保持懸浮於吸入之空氣中且隨後在呼氣期間呼出。
當根據本文中之方法調配及遞送時，用於噴霧之氣霧劑調配物將足以治療肺病毒科感染的治療有效劑量之式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物遞送至肺病毒科感染部位。必須調節所投與之藥物之量以反映治療有效劑量之式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物之遞送效率。在一較佳實施例中，視噴霧器而定，水性氣霧劑調配物與霧化、噴射、加壓、振動多孔板或超音波噴霧器之組合准許約至少20%至約90%，通常約70%所投與劑量之式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物遞送至呼吸道中。在一較佳實施例中，遞送至少約30%至約50%之活性化合物。更佳地，遞送約70%至約90%之活性化合物。
在另一實施例中，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以乾燥可吸入粉末形式遞送。該等化合物係使用乾燥粉末或定劑量吸入器以乾燥粉末調配物形式經支氣管內投與以將化合物之細粒有效遞送至支氣管內空間。對於藉由DPI遞送，藉由研磨噴霧乾燥、臨界流體處理或自溶液沈澱將式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物處理為MMAD主要介於約1 µm與約5 µm之間的粒子。能夠製造MMAD在約1 µm與約5 µm之間的粒度的介質研磨、噴射研磨及噴霧乾燥裝置及程序係此項技術中熟知的。在一個實施例中，賦形劑在加工成所需大小之粒子之前添加至式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物中。在另一實施例中，將賦形劑與所需大小之粒子共混合以幫助藥物粒子之分散，例如藉由使用乳糖作為賦形劑。
粒度測定係使用此項技術中熟知之裝置進行。舉例而言，多級Anderson級聯衝擊器或其他適合方法，諸如美國藥典第601章內特別引用的方法，作為表徵定劑量及乾燥粉末吸入器內之氣霧劑的裝置。
在另一較佳實施例中，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物係使用諸如乾燥粉末吸入器之裝置或其他乾燥粉末分散裝置以乾燥粉末形式遞送。乾燥粉末吸入器及裝置之非限制性實例包括揭示於以下文獻中之彼等者：US5,458,135；US5,740,794；US5775320；US5,785,049；US3,906,950；US4,013,075；US4,069,819；US4,995,385；US5,522,385；US4,668,218；US4,667,668；US4,805,811；及US5,388,572。乾燥粉末吸入器有兩種主要設計。一種設計係計量裝置，其中藥物之儲集器置放於該裝置內且患者將一定劑量藥物添加至吸入腔室中。第二種設計係工廠計量裝置，其中各個別劑量係在獨立容器中製造。兩種系統均取決於將藥物調配成MMAD為約1 µm至約5 µm之小粒子且通常涉及與較大賦形劑粒子(諸如但不限於乳糖)共調配。將藥物粉末置放於吸入腔室(藉由裝置計量或藉由工廠計量劑量耗損)中且患者之吸氣流體加快粉末離開裝置且進入口腔。粉末路徑之非層流特徵使賦形劑-藥物聚集物分散，且大賦形劑粒子之質量造成其衝擊喉底，而較小藥物粒子於肺中深部沈積。在較佳實施例中，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以乾燥粉末形式使用如本文所描述之任一類型的乾燥粉末吸入器遞送，其中不包括任何賦形劑之乾燥粉末之MMAD主要在1 µm至約5 µm範圍內。
在另一實施例中，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物係以乾燥粉末形式使用定劑量吸入器遞送。定劑量吸入器及裝置之非限制性實例包括以下文獻中所揭示之彼等者：US5,261,538；US5,544,647；US5,622,163；US4,955,371；US3,565,070；US3,361306；及US6,116,234。在較佳實施例中，式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以乾燥粉末形式使用定劑量吸入器遞送，其中不包括任何賦形劑之乾燥粉末之MMAD主要在約1至5 µm範圍內。
適用於經陰道投與之調配物可呈現為子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、發泡體或噴霧調配物形式，該等調配物除了含有活性成分以外，亦含有諸如此項技術中已知為合適之載劑。
適於非經腸投與之調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質的水性及非水性無菌注射溶液；及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。
調配物可於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中呈現，且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，其僅需要在臨使用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。自先前所描述種類之無菌粉末、粒子及錠劑製備即用型注射溶液及懸浮液。較佳單位劑量調配物為含有如上文中所述之日劑量或單位每日子劑量或其適當部分之活性成分的彼等調配物。
應理解，除上文特定提及之成分之外，該等調配物亦可包括關於所討論調配物之類型的此項技術中習知的其他藥劑，例如適用於經口投與之調配物可包括調味劑。
進一步提供包含至少一種如上文所定義之活性成分以及其相關獸醫用載劑之獸醫用組合物。
獸醫用載劑為適用於投與組合物之目的的物質且可為固體、液體或氣體物質，其另外為惰性的或在獸醫領域中可接受且與活性成分相容。此等獸醫用組合物可經口、非經腸或藉由任何其他所需途徑投與。
本文中之化合物用於提供控制釋放醫藥調配物，其含有一或多種化合物(「控制釋放調配物」)作為活性成分，其中該活性成分之釋放經控制及調節以實現不太頻繁地給藥或改良給定活性成分之藥物動力學或毒性概況。
活性成分之有效劑量至少取決於所治療之病況之性質、毒性、預防性(較低劑量)或針對活性病毒感染使用化合物、遞送方法及醫藥調配物，且將由臨床醫師使用習知劑量遞增研究決定。其可預期為每天約0.0001至約100毫克/公斤體重；通常為每天約0.01至約10毫克/公斤體重；更通常每天約0.01至約5毫克/公斤體重；最通常每天約0.05至約0.5毫克/公斤體重。舉例而言，用於約70 kg體重之成人之日候選劑量將在1 mg至1000 mg範圍內，較佳在5 mg與500 mg之間，且可呈單劑量或多劑量形式。 V. 投藥途徑
式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物中之一或多者(在本文中稱為活性成分)藉由適合於待治療之病況的任何途徑投與。適合的途徑包括經口、經直腸、經鼻、經肺、局部(包括頰內及舌下)、經陰道及非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外)及其類似途徑。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病況而變化。
本發明之化合物(在本文中亦稱為活性成分)可藉由適用於待治療之病況之任何途徑投與。適合途徑包括經口、經直腸、經鼻、局部(包括經頰及舌下)、經皮、經陰道及非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外)及其類似途徑。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病況而變化。本文所揭示之某些化合物之優勢為其為經口生物可用的且可經口給藥。
本發明化合物可根據有效給藥方案向個體投與持續所需時間段或持續時間，諸如至少約一個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約6個月或至少約12個月或更久。在一個變化形式中，化合物按每日或間歇性時程投與個體生命之持續時間。
本發明之化合物之劑量或給藥頻率可在治療療程內基於投藥醫師之判斷來調節。
可向個體(例如，人類)投與有效量之化合物。在某些實施例中，化合物每日投與一次。
化合物可藉由任何適用途徑及方式，諸如藉由經口或非經腸(例如靜脈內)投與來投與。化合物之治療有效量可包括每日每公斤體重約0.00001 mg至每日每公斤體重約10 mg，諸如每日每公斤體重約0.0001 mg至每日每公斤體重約10 mg，或諸如每日每公斤體重約0.001 mg至每日每公斤體重約1 mg，或諸如每日每公斤體重約0.01 mg至每日每公斤體重約1 mg，或諸如每日每公斤體重約0.05 mg至每日每公斤體重約0.5 mg，或諸如每日約0.3 mg至約30 mg，或諸如每日約30 mg至約300 mg。
本發明化合物可以任何劑量之本發明化合物(例如，1 mg至1000 mg化合物)與一或多種額外治療劑組合。治療有效量可包括每劑量約1 mg至每劑量約1000 mg，諸如每劑量約50 mg至每劑量約500 mg，或諸如每劑量約100 mg至每劑量約400 mg，或諸如每劑量約150 mg至每劑量約350 mg，或諸如每劑量約200 mg至每劑量約300 mg。本發明化合物之其他治療有效量係每劑量約100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或約500 mg。本發明化合物之其他治療有效量為每劑量約100 mg，或每劑量約125、150、175、200、225、250、275、300、350、400、450或約500 mg。單次劑量可每小時、每日或每週投與。舉例而言，單次劑量可每隔1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時投與一次或每隔24小時投與一次。單次劑量亦可每隔1天、2天、3天、4天、5天、6天投與一次或每隔7天投與一次。單次劑量亦可每隔1週、2週、3週投與一次或每隔4週投與一次。在某些實施例中，單次劑量可每週投與一次。單次劑量亦可每月投與一次。
本發明化合物之其他治療有效量係每劑量約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或約100 mg。
本發明化合物之給藥頻率將由個別患者之需求確定，且可為例如每日一次或每日兩次或更多次。化合物之投與持續治療病毒感染所必需的時長。舉例而言，可向感染病毒之人類投與化合物持續20天至180天之時間段，或例如20天至90天之時間段，或例如30天至60天之時間段。
投與可為間歇性的，其中在數天或更多天之時段期間患者接受日劑量之本發明化合物，接著在數天或更多天之時段期間患者不接受日劑量之化合物。舉例而言，患者可每隔一天或每週三次接受一劑量之化合物。再次藉助於實例，患者可每天接受一劑量之化合物持續1至14天之時段，隨後在7至21天之時段期間患者不接受一劑量之化合物，隨後在後續時段(例如，1至14天)期間患者再次接受日劑量之化合物。可視治療患者之臨床需要來重複交替時段之化合物投與，繼而化合物不投與。
在一個實施例中，提供醫藥組合物，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種(例如，一種、兩種、三種、四種、一或兩種、一至三種或一至四種)額外治療劑的組合，及醫藥學上可接受之賦形劑。
在一個實施例中，提供套組，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種(例如一種、兩種、三種、四種、一或兩種、一至三種或一至四種)額外治療劑的組合。
在某些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一種、兩種、三種、四種或更多種額外治療劑組合。在某些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與兩種額外治療劑組合。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與三種額外治療劑組合。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與四種額外治療劑組合。一種、兩種、三種、四種或更多種額外治療劑可為選自相同類別之治療劑的不同治療劑及/或其可選自不同類別之治療劑。
在某些實施例中，當本發明之化合物與如本文所述之一或多種額外治療劑組合時，組合物之組分按同時或依序方案投與。當依序投與時，該組合可以兩次或更多次投與形式投與。
在某些實施例中，本發明之化合物與一或多種額外治療劑以單一劑型組合以用於同時向患者投與，例如呈用於經口投與之固體劑型。
在某些實施例中，本發明之化合物與一或多種額外治療劑共同投與。
為延長本發明化合物之作用，通常需要減慢化合物自皮下或肌肉內注射吸收。此可藉由使用具有不良水溶性之結晶或非晶形材料之液體懸浮液來達成。則化合物之吸收率視其溶解率而定，溶解率又可視晶體尺寸及結晶形態而定。或者，藉由將化合物溶解或懸浮於油媒劑中來實現非經腸投與之化合物之延遲吸收。藉由在諸如聚丙交酯-聚乙交酯之生物可降解聚合物中形成化合物之微膠囊基劑來製造可注射積存形式。視化合物與聚合物之比率及所使用之特定聚合物的性質而定，可控制化合物釋放速率。其他可生物降解之聚合物的實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。亦藉由將化合物包覆於與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備儲槽式可注射調配物。 VI. 組合療法
本文所提供之式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合用於治療病毒感染，諸如肺病毒科、小核糖核酸病毒科、黃病毒科或絲狀病毒科病毒感染。 用於治療肺病毒科之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療肺病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗肺病毒科病毒感染，尤其呼吸道融合性病毒感染及/或間質肺炎病毒感染之活性。具有抗RSV活性的此等其他活性治療劑之非限制性實例為利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗(motavizumab)、RSV-IGIV (RespiGam ®)、MEDI-557、A-60444 (亦稱作RSV604)、MDT-637、BMS-433771、ALN-RSV0、ALX-0171及其混合物。具有抗呼吸道融合性病毒感染活性的其他活性治療劑之其他非限制性實例包括呼吸道融合性病毒蛋白F抑制劑，諸如AK-0529、RV-521、ALX-0171、JNJ-53718678、BTA-585及普沙托韋(presatovir)；RNA聚合酶抑制劑，諸如盧米西他濱(lumicitabine)及ALS-8112；抗RSV G蛋白抗體，諸如抗G蛋白mAb；病毒複製抑制劑，諸如硝唑沙奈(nitazoxanide)。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防RSV之疫苗，包括(但不限於) MVA-BN RSV、RSV-F、MEDI-8897、JNJ-64400141、DPX-RSV、SynGEM、GSK-3389245A、GSK-300389-1A、RSV-MEDI δM2-2疫苗、VRC-RSVRGP084-00VP、Ad35-RSV-FA2、Ad26-RSV-FA2及RSV融合醣蛋白次單元疫苗。
具有抗間質肺炎病毒感染活性的其他活性治療劑之非限制性實例包括唾液酸酶調節劑，諸如DAS-181；RNA聚合酶抑制劑，諸如ALS-8112；及用於治療間質肺炎病毒感染之抗體，諸如EV-046113。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防間質肺炎病毒感染之疫苗，包括(但不限於) mRNA-1653及rHMPV-Pa疫苗。 用於治療小核糖核酸病毒科之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療小核糖核酸病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗小核糖核酸病毒科病毒感染，尤其腸病毒(Enterovirus)感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為衣殼結合抑制劑，諸如普來可那立(pleconaril)、BTA-798 (伐彭達韋(vapendavir))以及Wu等人(US 7,078,403)及Watson (US 7,166,604)所揭示之其他化合物；融合唾液酸酶蛋白，諸如DAS-181；衣殼蛋白VP1抑制劑，諸如VVX-003及AZN-001；病毒蛋白酶抑制劑，諸如CW-33；磷脂酸肌醇4激酶β抑制劑，諸如GSK-480及GSK-533；抗EV71抗體。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防小核糖核酸病毒科病毒感染之疫苗，包括(但不限於) EV71疫苗、TAK-021及基於EV-D68腺病毒載體之疫苗。 用於呼吸道感染之組合療法
許多肺病毒科及小核糖核酸病毒科病毒感染為呼吸道感染。因此，用於治療呼吸道症狀及感染後遺症之額外活性治療劑可與本文所提供之化合物組合使用。該等額外藥劑較佳經口投與或藉由直接吸入投與。舉例而言，與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染的其他較佳額外治療劑包括(但不限於)支氣管擴張劑及皮質類固醇。 糖皮質素
在1950年作為哮喘療法首次引入(Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950)的糖皮質素對於此疾病而言一直為最強效且始終有效的療法，但其作用機制尚不完全清楚(Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985)。令人遺憾的係，口服糖皮質素療法引起深遠的非所需副作用，諸如軀幹性肥胖、高血壓、青光眼、葡萄糖不耐、白內障形成加速、骨礦流失及心理影響，其皆限制口服糖皮質素療法用作長期治療劑(Goodman及Gilman, 第10版, 2001)。針對全身性副作用之解決方案係將類固醇藥物直接遞送至炎症部位。已研發出吸入型皮質類固醇(ICS)來減輕口服類固醇之嚴重不良作用。可與本文所提供之化合物組合使用的皮質類固醇之非限制性實例為地塞米松(dexamethasone)、地塞米松磷酸鈉、氟米龍(fluorometholone)、乙酸氟米龍、氯替潑諾(loteprednol)、依碳氯替潑諾(loteprednol etabonate)、氫化可的松(hydrocortisone)、潑尼松龍(prednisolone)、氟氫可的松(fludrocortisone)、曲安西龍(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、倍他米松(betamethasone)、丙酸倍氯米松(beclomethasone diproprionate)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、氟輕松(fluocinolone)、乙酸氟輕松(fluocinolone acetonide)、氟尼縮松(flunisolide)、氟可丁-21-丁酯(fluocortin-21-butylate)、氟米松(flumethasone)、特戊酸氟米松(flumetasone pivalate)、布地奈德(budesonide)、丙酸鹵倍他松(halobetasol propionate)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、氟替卡松(fluticasone)、AZD-7594、環索奈德(ciclesonide)；或其醫藥學上可接受之鹽。 抗發炎劑
經由抗發炎級聯機制起作用的其他抗發炎劑亦適用作與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染的額外治療劑。應用「抗發炎信號轉導調節劑」(在本文中稱為AISTM)，如磷酸二酯酶抑制劑(例如，PDE-4、PDE-5或PDE-7特異性抑制劑)、轉錄因子抑制劑(例如，經由IKK抑制阻斷NFκB)或激酶抑制劑(例如，阻斷P38 MAP、JNK、PI3K、EGFR或Syk)，係一種切斷炎症的邏輯方法，因為此等小分子靶向有限數目個共同細胞內路徑(作為抗發炎治療性干預之關鍵點的彼等信號轉導路徑) (綜述參見P.J. Barnes, 2006)。此等非限制性額外治療劑包括：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-異丁基-1H-吲唑-6-甲酸(2-二甲基胺基-乙基)-醯胺(P38 Map激酶抑制劑ARRY-797)；3-環丙基甲氧基-N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-二氟甲氧基-苯甲醯胺(PDE-4抑制劑羅氟司特(Roflumilast))；4-[2-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-乙基]-吡啶(PDE-4抑制劑CDP-840)；N-(3,5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)-8-[(甲基磺醯基)胺基]-1-二苯并呋喃甲醯胺(PDE-4抑制劑奧利司特(Oglemilast))；N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苯甲基)-5-羥基-1H-吲哚-3-基]-2-側氧基-乙醯胺(PDE-4抑制劑AWD 12-281)；8-甲氧基-2-三氟甲基-喹啉-5-甲酸(3,5-二氯-1-氧基-吡啶-4-基)-醯胺(PDE-4抑制劑Sch 351591)；4-[5-(4-氟苯基)-2-(4-甲亞磺醯基-苯基)-1H-咪唑-4-基]-吡啶(P38抑制劑SB-203850)；4-[4-(4-氟-苯基)-1-(3-苯基-丙基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基]-丁-3-炔-1-醇(P38抑制劑RWJ-67657)；4-氰基-4-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-環己烷甲酸2-二乙基胺基-乙酯(西洛司特(Cilomilast)之2-二乙基-乙酯前藥，PDE-4抑制劑)；(3-氯-4-氟苯基)-[7-甲氧基-6-(3-嗎啉-4-基-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺(吉非替尼(Gefitinib)，EGFR抑制劑)；及4-(4-甲基-哌𠯤-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基胺基)-苯基]-苯甲醯胺(伊馬替尼(Imatinib)，EGFR抑制劑)。 β2- 腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑
包含吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑(諸如福莫特羅(formoterol)、沙丁胺醇(albuterol)或沙美特羅(salmeterol))與本文所提供化合物之組合亦為適用於治療呼吸道病毒感染之適合(但非限制性)組合。
吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑(諸如福莫特羅或沙美特羅)與ICS之組合亦用於治療支氣管收縮及發炎(分別為Symbicort®及Advair®)。包含此等ICS及β2-腎上腺素受體促效劑組合以及本文所提供化合物之組合亦為適用於治療呼吸道病毒感染之適合(但非限制性)組合。
β2腎上腺素受體促效劑之其他實例為貝多拉君(bedoradrine)、維蘭特羅(vilanterol)、茚達特羅(indacaterol)、奧達特羅(olodaterol)、妥洛特羅(tulobuterol)、福莫特羅、阿貝特羅(abediterol)、沙丁胺醇、阿福特羅(arformoterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、非諾特羅(fenoterol)及TD-5471。 抗膽鹼劑
對於治療或預防肺部支氣管收縮，抗膽鹼劑具有潛在效用，且因此適用作與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染之額外治療劑。此等抗膽鹼劑包括(但不限於)蕈毒鹼受體(尤其M3亞型)之拮抗劑，其在人類中展現出控制COPD之膽鹼能基調(cholinergic tone)的治療功效(Witek, 1999)；1-{4-羥基-1-[3,3,3-參-(4-氟-苯基)-丙醯基]-吡咯啶-2-羰基}-吡咯啶-2-甲酸(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-醯胺；3-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-8-異丙基-8-甲基-8-氮鎓-雙環[3.2.1]辛烷(異丙托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Ipratropium-N,N-diethylglycinate))；1-環己基-3,4-二氫-1H-異喹啉-2-甲酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯(索利那新(Solifenacin))；2-羥甲基-4-甲亞磺醯基-2-苯基-丁酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯(瑞伐托酯(Revatropate))；2-{1-[2-(2,3-二氫-苯并呋喃-5-基)-乙基]-吡咯啶-3-基}-2,2-二苯基-乙醯胺(達非那新(Darifenacin))；4-氮雜環庚烷-1-基-2,2-二苯基-丁醯胺(甲碘布卓(Buzepide))；7-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-9-乙基-9-甲基-3-氧雜-9-氮鎓-三環[3.3.1.02,4]壬烷(氧托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Oxitropium-N,N-diethylglycinate))；7-[2-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-9,9-二甲基-3-氧雜-9-氮鎓-三環[3.3.1.02,4]壬烷(噻托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Tiotropium-N,N-dimethylglycinate))；二甲基胺基-乙酸2-(3-二異丙基胺基-1-苯基-丙基)-4-甲基-苯酯(托特羅定-N,N-二甲基甘胺酸酯(Tolterodine-N,N-dimethylglycinate))；3-[4,4-雙-(4-氟-苯基)-2-側氧基-咪唑啶-1-基]-1-甲基-1-(2-側氧基-2-吡啶-2-基-乙基)-吡咯啶鎓；1-[1-(3-氟-苯甲基)-哌啶-4-基]-4,4-雙-(4-氟-苯基)-咪唑啶-2-酮；1-環辛基-3-(3-甲氧基-1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基)-1-苯基-丙-2-炔-1-醇；3-[2-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-1-(3-苯氧基-丙基)-1-氮鎓-雙環[2.2.2]辛烷(阿地溴銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Aclidinium-N,N-diethylglycinate))；或(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-二-噻吩-2-基-乙酸1-甲基-1-(2-苯氧基-乙基)-哌啶-4-基酯；瑞芬那新(revefenacin)、格隆溴銨(glycopyrronium bromide)、蕪地溴銨(umeclidinium bromide)、噻托溴銨(tiotropium bromide)、阿地溴銨(aclidinium bromide)、苯環喹溴銨(bencycloquidium bromide)。 黏液溶解劑
本文所提供之化合物及本文所提供之組合物亦可與黏液溶解劑組合以治療呼吸道感染之感染及症狀兩者。黏液溶解劑之非限制性實例為胺溴素(ambroxol)。類似地，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物可與祛痰劑組合以治療呼吸道感染之感染及症狀兩者。除痰劑之非限制性實例為愈創甘油醚(guaifenesin)。
霧化的高滲鹽水用於改善患有肺病之患者體內小氣道之即時及長期清理(Kuzik, J. Pediatrics2007, 266)。因此，尤其當肺病毒科病毒感染併發有細支氣管炎時，本文所提供之化合物亦可與霧化的高滲鹽水組合。式(I)或式(II)之化合物與高滲鹽水之組合亦可包含上文所論述之額外藥劑中之任一者。在一個實施例中，使用霧化的約3%高滲鹽水。 用於治療 COPD 之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療COPD之呼吸道惡化，其他活性治療劑包括具有抗COPD活性的其他活性治療劑。此等其他活性治療劑之非限制性實例包括抗IL5抗體，諸如苯拉組單抗(benralizumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)；二肽基肽酶I (DPP1)抑制劑，諸如AZD-7986 (INS-1007)；DNA回旋酶抑制劑/拓樸異構酶IV抑制劑，諸如鹽酸環丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride)；MDR相關蛋白4/磷酸二酯酶(PDE) 3及4抑制劑，諸如RPL-554；CFTR刺激劑，諸如艾伐卡托(ivacaftor)、QBW-251；MMP-9/MMP-12抑制劑，諸如RBx-10017609；腺苷A1受體拮抗劑，諸如PBF-680；GATA 3轉錄因子抑制劑，諸如SB-010；蕈毒鹼受體調節劑/菸鹼性乙醯膽鹼受體促效劑，諸如ASM-024；MARCKS蛋白抑制劑，諸如BIO-11006；kit酪胺酸激酶/PDGF抑制劑，諸如馬賽替尼(masitinib)；磷酸二酯酶(PDE) 4抑制劑，諸如羅氟司特(roflumilast)、CHF-6001；磷酸肌醇-3激酶δ抑制劑，諸如奈米利塞(nemiralisib)；5-脂肪加氧酶抑制劑，諸如TA-270；蕈毒鹼受體拮抗劑/β 2腎上腺素受體促效劑，諸如琥珀酸巴芬特羅(batefenterol succinate)、AZD-887、異丙托溴銨(ipratropium bromide)；TRN-157；彈性蛋白酶抑制劑，諸如厄多司坦(erdosteine)；金屬蛋白酶-12抑制劑，諸如FP-025；介白素18配體抑制劑，諸如他德介白素α (tadekinig alfa)；骨骼肌肌鈣蛋白活化劑，諸如CK-2127107；p38 MAP激酶抑制劑，諸如阿庫馬莫德(acumapimod)；IL-17受體調節劑，諸如CNTO-6785；CXCR2趨化激素拮抗劑，諸如達尼立辛(danirixin)；白血球彈性蛋白酶抑制劑，諸如POL-6014；環氧化物水解酶抑制劑，諸如GSK-2256294；HNE抑制劑，諸如CHF-6333；VIP促效劑，諸如阿肽地爾(aviptadil)；磷酸肌醇-3激酶δ/γ抑制劑，諸如RV-1729；補體C3抑制劑，諸如APL-1；及G蛋白偶聯受體-44拮抗劑，諸如AM-211。
活性治療劑之其他非限制性實例亦包括布地奈德、阿地普塞(adipocell)、一氧化氮、PUR-1800、YLP-001、LT-4001、阿奇黴素(azithromycin)、伽木奈克(gamunex)、QBKPN、丙酮酸鈉、MUL-1867、甘露糖醇、MV-130、MEDI-3506、BI-443651、VR-096、OPK-0018、TEV-48107、多索茶鹼(doxofylline)、TEV-46017、OligoG-COPD-5/20、Stempeucel®、ZP-051、離胺酸乙醯水楊酸。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為具有抗COPD活性的疫苗，包括(但不限於) MV-130及GSK-2838497A。 用於治療登革熱之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療黃病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗黃病毒科病毒感染，尤其登革熱感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為宿主細胞因子調節劑，諸如GBV-006；芬維A胺(fenretinide) ABX-220、BRM-211；α-葡萄糖苷酶1抑制劑，諸如西戈斯韋(celgosivir)；血小板活化因子受體(PAFR)拮抗劑，諸如莫地帕泛(modipafant)；鈣黏蛋白-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；NS4B抑制劑，諸如JNJ-8359；病毒RNA剪接調節劑，諸如ABX-202；NS5聚合酶抑制劑；NS3蛋白酶抑制劑；及TLR調節劑。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防登革熱之疫苗，包括(但不限於) TetraVax-DV、Dengvaxia ®、DPIV-001、TAK-003、減毒活登革熱疫苗、四價登革熱疫苗、四價DNA疫苗、rDEN2δ30-7169及DENV-1 PIV。 用於治療伊波拉之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療絲狀病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗絲狀病毒科病毒感染，尤其馬堡病毒(Marburg virus)、伊波拉病毒及奎瓦病毒(Cueva virus)感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為：利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗、RSV-IGIV (RespiGam ®)、MEDI-557、A-60444、MDT-637、BMS-433771、胺碘酮(amiodarone)、屈奈達隆(dronedarone)、維拉帕米(verapamil)、伊波拉康復者血漿(Ebola Convalescent Plasma；ECP)、TKM-100201、BCX4430 ((2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥甲基)吡咯啶-3,4-二醇)、TKM-Ebola、T-705單磷酸酯、T-705二磷酸酯、T-705三磷酸酯、FGI-106 (1-N,7-N-雙[3-(二甲基胺基)丙基]-3,9-二甲基喹啉并[8,7-h]喹啉酮-1,7-二胺)、rNAPc2、OS-2966、布林西多福韋(brincidofovir)、瑞德西韋(remdesivir)；RNA聚合酶抑制劑，諸如加利司韋(galidesivir)、法維拉韋(favipiravir) (亦被稱作T-705或Avigan)、JK-05；宿主細胞因子調節劑，諸如GMV-006；鈣黏蛋白-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；及用於治療伊波拉之抗體，諸如REGN-3470-3471-3479及ZMapp。
具有抗伊波拉活性的其他非限制性活性治療劑包括α-葡萄糖苷酶1抑制劑、組織蛋白酶B抑制劑、CD29拮抗劑、樹突狀ICAM-3撰取非整合素1抑制劑、雌激素受體拮抗劑、因子VII拮抗劑HLA II類抗原調節劑、宿主細胞因子調節劑、干擾素α配體、中性α葡萄糖苷酶AB抑制劑、尼曼-匹克C1蛋白(niemann-Pick C1 protein)抑制劑、核蛋白抑制劑、聚合酶輔因子VP35抑制劑、絲胺酸蛋白酶抑制劑、組織因子抑制劑、TLR-3促效劑、病毒套膜醣蛋白抑制劑及伊波拉病毒進入抑制劑(NPC1抑制劑)。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防伊波拉之疫苗，包括(但不限於) VRC-EBOADC076-00-VP、基於腺病毒之伊波拉疫苗、rVSV-EBOV、rVSVN4CT1-EBOVGP、MVA-BN Filo + Ad26-ZEBOV方案、INO-4212、VRC-EBODNA023-00-VP、VRC-EBOADC069-00-VP、GamEvac-combi疫苗、SRC VB載體、HPIV3/EboGP疫苗、MVA-EBOZ、伊波拉重組醣蛋白疫苗、基於Vaxart腺病毒載體5之伊波拉疫苗、FiloVax疫苗、GOVX-E301及GOVX-E302。
本文所提供之化合物及組合物亦可與胺基磷酸酯嗎啉代寡聚物(PMO)組合使用，該等胺基磷酸酯嗎啉代寡聚物係經設計以藉由與特定RNA序列形成鹼基對雙螺旋體而干擾轉譯過程的合成反義寡核苷酸類似物。PMO之實例包括(但不限於) AVI-7287、AVI-7288、AVI-7537、AVI-7539、AVI-6002及AVI-6003。
本文所提供之化合物及組合物亦意欲與向患有絲狀病毒科病毒感染之患者提供之一般護理一起使用，包括非經腸流體(包括右旋糖鹽水及林格氏乳酸鹽)及營養物、抗生素(包括甲硝噠唑(metronidazole)及頭孢菌素抗生素，諸如頭孢曲松(ceftriaxone)及頭孢呋辛(cefuroxime))及/或抗真菌預防物、發熱及止痛藥、抗嘔劑(諸如甲氧氯普胺(metoclopramide))及/或止瀉劑、維生素及礦物質補充劑(包括維生素K及硫酸鋅)、抗發炎劑(諸如布洛芬(ibuprofen))、疼痛藥物及用於患者群體中之其他常見疾病的藥物，諸如抗瘧疾劑(包括蒿甲醚及青蒿琥酯-苯芴醇組合療法)、傷寒(包括喹啉酮抗生素(諸如環丙沙星)、巨環內酯抗生素(諸如阿奇黴素)、頭孢菌素抗生素(諸如頭孢曲松)或胺基青黴素(諸如胺苄西林(ampicillin)))或志賀桿菌病(shigellosis)。 VII. 治療病毒感染之方法
本發明提供使用式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物來治療多種疾病，諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、伊波拉、茲卡、西尼羅、登革熱及HCV之方法。 副黏液病毒科 ( Paramyxoviridae)
在一些實施例中，本發明提供用於治療副黏液病毒科感染之方法，其包含向感染副黏液病毒科病毒之個體(例如人類)投與治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。副黏液病毒科病毒包括(但不限於)呼吸道融合性病毒(RSV)。 肺病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之肺病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。肺病毒科病毒包括(但不限於)呼吸道融合性病毒及人類間質肺炎病毒。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之肺病毒科病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在某些實施例中，本發明提供用於治療RSV感染之方法，其包含向感染呼吸道融合性病毒之個體(例如人類)投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。通常，個體患有慢性呼吸道融合性病毒感染，但治療急性感染RSV之人係在本發明之範疇內。
在某些實施例中，提供一種抑制RSV複製之方法，其包含向個體(例如人類)投與本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，本發明提供一種降低與RSV感染相關之病毒負荷的方法，其中該方法包含向感染RSV之個體(例如人類)投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該治療有效量足以降低個體中之RSV病毒負荷。
如本文更充分描述，本發明化合物可與一或多種額外治療劑一起向感染RSV之個體(例如人類)投與。額外治療劑可與本發明化合物同時或在投與本發明化合物之前或之後向經感染個體(例如人類)投與。
在某些實施例中，提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防RSV感染。在某些實施例中，提供一種本發明化合物(例如，式(I)化合物)或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製造供治療或預防RSV感染所用的藥劑。
如本文更充分描述，本發明化合物可與一或多種額外治療劑一起向感染RSV之個體(例如人類)投與。此外，在某些實施例中，當用於治療或預防RSV時，本發明化合物可與一或多種(例如一種、兩種、三種、四種或多於四種)選自由以下組成之群的額外治療劑一起投與：RSV組合藥物、RSV疫苗、RSV DNA聚合酶抑制劑、免疫調節劑、鐸樣受體(TLR)調節劑、干擾素α受體配體、玻尿酸酶抑制劑、呼吸道融合性表面抗原抑制劑、細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4 (ipi4)抑制劑、親環蛋白抑制劑、RSV病毒進入抑制劑、靶向病毒mRNA之反義寡核苷酸、短干擾RNA (siRNA)及ddRNAi、核酸內切酶調節劑、核糖核苷酸還原酶抑制劑、RSV E抗原抑制劑、共價閉合環狀DNA (cccDNA)抑制劑、法尼醇X受體(farnesoid X receptor)促效劑、RSV抗體、CCR2趨化激素拮抗劑、胸腺素促效劑、細胞介素、核蛋白調節劑、視黃酸誘導性基因1刺激劑、NOD2刺激劑、磷脂酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)路徑抑制劑、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、重組胸腺素α-1、布魯頓氏酪胺酸激酶(bruton's tyrosine kinase；BTK)抑制劑、KDM抑制劑、RSV複製抑制劑、精胺酸酶抑制劑及其他RSV藥物。 小核糖核酸病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。小核糖核酸病毒科病毒為引起異質感染群之腸病毒，該等感染包括疱疹性咽峽炎、無菌性腦膜炎、普通感冒樣症候群(人類鼻病毒感染)、無麻痹性脊髓灰白質炎樣症候群、流行性肋肌痛(一般在流行病中出現的急性、發熱性、感染性疾病)、手足口症候群、兒童及成人胰臟炎及嚴重心肌炎。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。 黃病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之黃病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。代表性黃病毒科病毒包括(但不限於)登革熱病毒、黃熱病病毒、西尼羅病毒、茲卡病毒、日本腦炎病毒及C型肝炎病毒(HCV)。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為日本腦炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。 絲狀病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。代表性絲狀病毒科病毒包括(但不限於)伊波拉病毒及馬堡病毒。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。 VIII. 治療或預防由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法
式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)之化合物亦可用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化。
在一些實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。 IX. 實例
縮寫 .使用某些縮寫及頭字語描述實驗細節。儘管大部分縮寫及頭字語為熟習此項技術者理解，但表2含有許多此等縮寫及頭字語之清單。 表 2. 縮寫及頭字語之清單 .
縮寫 含義
Ac 乙酸鹽
ACN 乙腈
AIBN 偶氮二異丁腈
Bn 苯甲基
Bu 丁基
Bz 苯甲醯基
BzCl 苯甲醯氯
CDI 1,1'-羰基二咪唑
DAST 三氟化二乙基胺基硫
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二異丙基乙胺
DMAP 4-二甲基胺基吡啶
DMDO 二甲基二氧環丙烷
DMSO 二甲亞碸
DMF 二甲基甲醯胺
DMTrCl 4,4'-二甲氧基三苯甲基氯
DMTr 4,4'-二甲氧基三苯甲基
EDCI N-(3-二甲基胺基丙基)- N′-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
Et 乙基
Imid 咪唑
KOtBu 三級丁醇鉀
LC 液相層析法
MCPBA 間氯過苯甲酸
Me 甲基
m/z 質荷比
MS或ms 質譜
NIS N-碘丁二醯亞胺
NMP N-甲基-2-吡咯啶酮
Ph 苯基
Ph 3P 三苯膦
PMB 對甲氧基苯甲基
PMBCl 對甲氧基苯甲基氯
PhOC(S)Cl 氯硫代甲酸苯酯
(PhO) 3PMeI 碘化甲基三苯氧基鏻
Pyr 吡啶
RT 室溫
SFC 超臨界流體層析法
TBAF 氟化四丁銨
TBS 三級丁基二甲基矽基
TBSCl 氯化三級丁基二甲基矽烷
TMSN 3 疊氮化三甲基矽烷
TEA 三乙胺
TES 三乙基矽烷
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
TMS 三甲基矽基
TMSCl 氯化三甲基矽烷
Ts 4-甲苯磺醯基
TsOH 對甲苯磺酸
δ 參考殘餘非氘化溶劑峰之百萬分率
化合物可經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，含0.1% TFA之30-70%乙腈/水梯度)。一些化合物在此製備型HPLC製程之後以TFA鹽獲得。 A. 中間物 中間物 1. (2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-3,4- 二羥基 -2-( 羥甲基 ) 四氫呋喃 -2- 甲腈
Figure 02_image259
產物可根據WO2015/069939製備。舉例而言，WO2015/069939之第43至54頁提供用於製備化合物(在WO2015/069939中標識為化合物1)之方法。 中間物 2. (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6- 氰基 -6-( 羥甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -4- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
Figure 02_image261
使含WO2015/069939之化合物14j (21.79 g，39.93 mmol)之THF (400 mL)在冰浴中冷卻。一次性添加含1.0 M TBAF之THF (50.0 mL，50.0 mmol)。使混合物達到環境溫度且攪拌約30 min。藉由LCMS判定反應完成。反應混合物用水淬滅且減壓移除有機物。將粗產物分配於EtOAc與水之間。分離各層且用EtOAc洗滌水層。合併有機相，且經硫酸鈉乾燥。濾出固體且減壓移除溶劑。粗產物藉由矽膠層析(330 g管柱，30-100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。MS m/z= 431.74 [M+1]。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.03 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.77 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.27 (dd, J = 6.7, 4.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 6.1, 2.4 Hz, 2H), 1.62 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.33 (s, 3H)。 中間物 3. (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4-((( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -4- 甲腈
Figure 02_image263
產物可根據WO2015/069939製備。舉例而言，WO2015/069939之第127至138頁提供用於製備化合物(在WO2015/069939中標識為化合物14k)之方法。 中間物 4. (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4-( 羥甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -4- 甲腈
Figure 02_image265
將中間物3 (8.41 g，18.87 mmol)溶解於THF (100 mL)中。在環境溫度下一次性添加含1.0 M TBAF之THF (28.31 mL，28.31 mmol)。在環境溫度下攪拌10 min。藉由LCMS判定反應完成。反應混合物用水淬滅且減壓移除有機物。將粗產物分配於EtOAc與水之間。分離各層且用EtOAc洗滌水層。合併有機相，且經硫酸鈉乾燥。濾出固體且減壓移除溶劑。粗產物藉由矽膠層析(120 g管柱，0-10% CH 3OH/CH 2Cl 2)純化，得到產物。LC/MS：t R= 0.76 min，MS m/z= 332.14 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% CAN，2.4 min-2.80 min 100% CAN，2.8 min-2.85 min 100%-2% CAN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.87-7.80 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.5Hz, 1H), 5.74 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 5.52 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.24 (dd, J= 6.8, 4.2 Hz, 1H), 4.92 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 3.65 (dd, J= 6.1, 1.7 Hz, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.33 (s, 3H)。 中間物 5. (2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 甲腈
Figure 02_image267
將中間物1 (2 g，6.18 mmol)溶解於50 mL DMF中，向該溶液中添加三級丁基氯二甲基矽烷(1 g，7 mmol)及咪唑(1.26 g，19 mmol)。在RT下攪拌所得混合物2 h，且反應物用EtOAc稀釋，用NH 4Cl溶液洗滌，蒸發有機溶劑，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% EtOAc/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 406.36 [M+1]，t R= 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.25 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 中間物 6. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image269
將中間物5 (1.8 g，4.44 mmol)溶解於15 mL THF中，向該溶液中添加異丁酸酐(1.54 g，9.8 mmol)及DMAP (179 mg，1.45 mmol)。在RT下攪拌所得混合物5 min，且反應物用MeOH淬滅且接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經Na 2SO 4乾燥且真空蒸發。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% EtOAc/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 546.16 [M+1]，t R= 1.92 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 中間物 7. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -2-( 羥甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二酯
Figure 02_image271
在100 mL塑膠瓶中將中間物6 (3.2 g，5.86 mmol)溶解於25 mL THF中，向該溶液中添加HF-吡啶(10 g，0.35 mmol)。在RT下攪拌所得混合物3 h，且反應物用NaHCO 3淬滅且接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經Na 2SO 4乾燥且真空蒸發。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% EtOAc/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 6.83 - 6.74 (m, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.84 - 5.74 (m, 2H), 5.62 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 3.94 (dd, J = 12.2, 5.0 Hz, 1H), 3.87 (dd, J = 12.2, 8.4 Hz, 1H), 2.70 (hept, J = 7.0 Hz, 1H), 2.56 (hept, J = 7.0 Hz, 1H), 1.28 - 1.17 (m, 6H), 1.12 (dd, J = 15.1, 7.0 Hz, 6H)。LCMS：MS m/z= 432.24 [M+1]，t R= 1.47 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.74 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 中間物 8. L- 丙胺酸環戊酯 HCl 鹽
Figure 02_image273
向(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(3.95 g，20.9 mmol)、環戊醇(1.5 g，17.4 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (3.5 g，22.6 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，3.2 g，26.1 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，且接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物，將其溶解於10 mL DCM中，向該溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(3 mL)。在RT下攪拌反應混合物30 min，接著蒸發溶劑，且殘餘物經高真空乾燥，得到粗產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.75 - 8.42 (m, 2H), 5.20 (tt, J = 5.6, 2.5 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 1H), 1.87 - 1.58 (m, 8H), 1.54 (dd, J = 12.6, 7.2 Hz, 3H)。 中間物 9. L- 丙胺酸環丙酯 HCl 鹽
Figure 02_image275
向(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(5.86 g，31 mmol)、環丙醇(1.5 g，25.8 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (5.2 g，33.6 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，4.7 g，38.7 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，且接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物，將其溶解於10 mL DCM中，向該溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(3 mL)。在RT下攪拌反應混合物30 min，接著蒸發溶劑，且殘餘物經高真空乾燥，得到粗產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.68 (s, 2H), 4.22 (tt, J = 6.3, 3.2 Hz, 1H), 1.68 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 1.42 (s, 1H), 0.86 - 0.69 (m, 2H), 0.70 (dd, J = 7.1, 3.6 Hz, 2H)。 中間物 10. 甲縮醛 (formacetal) 1 及 2 ： 1,1- 二甲氧基 - N, N- 二甲基甲胺及 1-( 二甲氧基甲基 )-4- 甲基哌 𠯤
Figure 02_image277
將 N-甲基哌𠯤(1.5 mL，15.93 mmol)及DMF-二甲基縮醛(1 mL，7.50 mmol)之混合物在密封管中在100℃下加熱3天，在60℃下高真空濃縮以移除過量的 N-甲基哌𠯤，且接著用於下一反應中。基於下一反應之產物組成，產物為約1:2比率的甲縮醛1及甲縮醛2混合物。 中間物 11. 2- 胺基丙酸 (S)- 環己酯鹽酸鹽
Figure 02_image279
向L-丙胺酸(5 g，56.12 mmol)及環己醇(56 g，561 mmol)之混合物中添加TMSCl (20 mL)。所得混合物在約70℃下攪拌約15 h，且在約80℃下真空濃縮，與甲苯共蒸發，溶解於己烷中，且在約室溫下攪拌，在此期間沈澱出固體。藉由過濾收集固體，且濾餅用含5% EtOAc之己烷洗滌若干次，且高真空乾燥約15 h，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.76 (s, 3H), 4.85 (tt, J= 8.7, 3.8 Hz, 1H), 4.17 (p, J= 6.5 Hz, 1H), 1.84 (dd, J = 9.9, 5.5 Hz, 2H), 1.70 (d, J= 7.3 Hz, 5H), 1.57 - 1.42 (m, 3H), 1.32 (ddddd, J= 20.3, 12.8, 9.9, 6.4, 3.1 Hz, 3H)。 中間物 12. 2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊酸 (S)-2- 乙基丁酯
Figure 02_image281
將(S)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酸(1.09 g，4.71 mmol)溶解於乙腈(10 mL)中，且添加2-乙基-1-丁醇(2.88 mL，23.56 mmol)，接著一次性添加EDCI (878 mg，5.66 mmol)及DMAP (863 mg，7.07 mmol)。在室溫下攪拌隔夜。濃縮且用CH 2Cl 2稀釋。藉由矽膠層析(0-40% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.00-3.84 (m, 3H), 1.67-1.22 (m, 17H), 0.91-0.80 (m, 12H)。 中間物 13. 2- 胺基 -4- 甲基戊酸 (S)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽
Figure 02_image283
將2-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酸(S)-2-乙基丁酯溶解於CH 2Cl 2(10 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(10 mL，40 mmol)中。在環境溫度下攪拌1 h。減壓濃縮且與己烷共蒸發。在高真空下放置1 h，且產物不經純化按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.43 (s, 3H), 4.08 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.92 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.61 (m, 2H), 1.47 (m, 1H), 1.34 (m, 4H), 0.83 (m, 12H)。 中間物 14. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯
Figure 02_image285
向Boc-L-丙胺酸(1.26 g，6.66 mmol)、2-苯甲氧基-2-甲基丙醇(1.0 g，5.55 mmol)及EDCI (1.12 g，7.21 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.04 g，8.32 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到Boc-L-丙胺酸丙酯，將其溶解於DCM (10 mL)中，且在室溫下添加含4 N HCl之二㗁烷(5.5 mL，22.19 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，真空濃縮，再溶解於ACN (10 mL)中，凍乾隔夜，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.82 (s, 3H), 7.42 - 7.07 (m, 5H), 4.44 (s, 2H), 4.24 (m, 2H), 4.08 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 1.70 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d, J= 2.4 Hz, 6H)。LCMS m/z= 251.97 (游離鹼M +H)，t R= 0.85 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image287
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 .在-78℃下向L-丙胺酸2-(苯甲氧基)-2-甲基丙酯HCl鹽(832 mg，2.89 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.43 mL，2.89 mmol)，且在-78℃下經5 min逐滴添加三乙胺(0.80 mL，5.76 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃，並且在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(402 mg，2.89 mmol)且經5 min添加三乙胺(0.40 mL，2.89 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物50 min，接著用DCM稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 - 8.13 (m, 2H), 7.41 - 7.27 (m, 3H), 7.28 - 7.14 (m, 4H), 4.45 (m, 2H), 4.27 - 4.15 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.41 (m, 3H), 1.27 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.10, -3.18。LCMS m/z= 528.78 (M+H)，t R= 1.70 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物 15. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環丁基甲酯
Figure 02_image289
將L-丙胺酸環丁基甲酯-HCl (1.2 g，7.16 mmol)懸浮於亞甲基氯(10 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(1.07 mL，7.16 mmol)。在-78℃下經60 min添加三乙胺(2.0 mL，14.32 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物3 h。將反應混合物冷卻至0℃，且一次性添加4-硝基苯酚(996 mg，7.16 mmol)。接著經60 min添加三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物3 h，過濾，將濾液濃縮至三分之一體積，且再次過濾。濃縮濾液，且殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至35% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.28 - 8.16 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.23 - 4.01 (m, 3H), 3.95 - 3.83 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.98 - 1.80 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.42 (d, J= 3.2 Hz, 1.5H), 1.40 (d, J= 3.3 Hz, 1.5H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.06, -3.11。 中間物 16. (( 苯甲氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image291
在氬氣氛圍下在0℃下，將二氯磷酸4-硝基苯酯(2.00 g，7.81 mmol)及三乙胺(2.18 mL，15.6 mmol)依序添加至L-丙胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(1.091 g，18.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加苯甲醇(0.810 mL，7.81 mmol)及三乙胺(1.09 mL，7.81 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 8.30 - 8.07 (m, 2H), 7.42 - 7.28 (m, 7H), 5.18 - 5.09 (m, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.68 (q, J= 9.4 Hz, 1H), 1.55 - 1.18 (m, 8H), 0.87 (t, J= 7.4 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 2.32 (s), 2.28 (s)。LCMS：MS m/z= 463.00 [M-1]，t R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。 中間物 17. ((S)-(4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 )( 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯
Figure 02_image293
如WO 2016/069825中所描述來製備。 中間物 18. ((S)-(4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸異丙酯
Figure 02_image295
如Cho等人, J. Med. Chem. 2014, 57, 1812-1825中所描述來製備。 中間物 19. ((S)-(4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯
Figure 02_image297
如US20120009147A1中所描述來製備。 中間物 20. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環丙基甲酯
Figure 02_image299
將L-丙胺酸環丙基甲酯-HCl (1.0 g，5.57 mmol)懸浮於亞甲基氯(10 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.83 mL，5.57 mmol)。在-78℃下經30 min添加含三乙胺(1.54 mL，11.13 mmol)之DCM (1.5 mL)，且攪拌30 min。在-78℃下一次性添加4-硝基苯酚(774 mg，5.57 mmol)。接著經30 min添加含三乙胺(0.77 mL，7.16 mmol)之DCM (2 mL)。接著將混合物在相同溫度下攪拌30 min，用水、飽和Na 2CO 3溶液及鹽水洗滌，且經硫酸鈉乾燥，並且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至20% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (m, 2H), 7.58 - 7.29 (m, 4H), 7.32 - 7.14 (m, 3H), 4.25 - 4.07 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 1.44 (d, J = 2.9 Hz, 1.5H), 1.42 (d, J = 2.9 Hz, 1.5H), 1.26 - 1.01 (m, 1H), 0.66 - 0.49 (m, 2H), 0.42 - 0.15 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.07, -3.11。MS m/z= 420.97。 中間物 21. 特戊酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯
Figure 02_image301
特戊酸 2- 胺基乙酯鹽酸鹽 .在RT下將特戊醯氯(3.82 mL，31.0 mmol)添加至(2-羥乙基)胺基甲酸三級丁酯(4.8 mL，31.0 mmol)及二異丙基乙胺(5.4 mL，31.0 mmoL)於二氯甲烷(150 mL)中之溶液中。4 h後，所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(150 mL)及鹽水(150 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將粗無色油狀物溶解於含鹽酸之二㗁烷溶液(4 M，50 mL)中，且在RT下攪拌，並且自溶液緩慢沈澱出白色固體。3 h後，藉由真空過濾收集固體，得到產物。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 4.32 - 4.25 (m, 2H), 3.26 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.23 (s, 9H)。
Figure 02_image303
特戊酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向特戊酸2-胺基乙酯鹽酸鹽(0.861 g，4.74 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.705 mL，4.74 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.2 mL，9.4 mmol)。使所得混合物升溫至RT且攪拌1.5 h。接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.23 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.18 - 4.06 (m, 2H), 3.45 - 3.31 (m, 2H), 1.17 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d 6) δ -1.48 (s)。MS m/z= 422.95 [M+1]。 中間物 22. 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯
Figure 02_image305
2- 胺基丙酸 (S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯鹽酸鹽 .向L-丙胺酸(500 mg，5.61 mmol)及四氫-2H-哌喃-4-醇(5 g，49.0 mmol)之混合物中添加TMSCl (2 mL)。在70℃下攪拌所得混合物15 h並真空濃縮，且所得固體用含5% EtOAc之己烷濕磨，過濾，且用含5% EtOAc之己烷洗滌若干次，並且高真空乾燥15 h，得到產物，其不經任何表徵即用於下一反應中。
Figure 02_image307
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯 .將2-胺基丙酸(S)-四氫-2H-哌喃-4-基酯鹽酸鹽(1.33 g，6.34 mmol)溶解於亞甲基氯(15 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(1.137 mL，7.61 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(2.2 mL，15.2 mmol)，且在-78℃下攪拌所得混合物30 min。接著在-78℃下一次性添加4-硝基苯酚(882 mg，6.34 mmol)且經30 min添加三乙胺(1.1 mL，7.61 mmol)。在-78℃下攪拌混合物30 min，用水洗滌兩次並用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至70% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.06 (m, 7H), 4.95 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.64 m, 2H), 1.42 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.09, -3.13。MS m/z= 451 (M+H) +。 中間物 23. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯
Figure 02_image309
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將Boc-L-丙胺酸(2.1 g，11 mmol)及(R)-3-羥基-1-甲基吡咯啶(1.1 mL，10 mmol)溶解於無水THF (20 mL)中。一次性添加三苯膦(3.4 g，13 mmol)。逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(2.4 mL，12 mmol)。攪拌反應物2小時。逐滴添加更多偶氮二甲酸二異丙酯(240 μL，1.2 mmol)，且攪拌反應物16小時。反應物用EtOAc (10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌。接著用5%檸檬酸水溶液(30 mL)萃取有機物。用EtOAc (2×5 mL)洗滌檸檬酸萃取物。檸檬酸部分用1 N NaOH水溶液鹼化，得到pH值9，且用EtOAc (2×10 mL)萃取。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.24 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 2H), 2.64 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (m, 1H), 1.96 - 1.80 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image311
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(S)-1-甲基吡咯啶-3-基酯(545 mg，2 mmol)與10 mL含4 N HCl之二㗁烷混合，並攪拌1小時。減壓濃縮反應物，得到泡沫狀物，接著將其與20 mL無水DCM混合，並且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(298 μL，2 mmol)一次性添加至反應物中。攪拌反應物15 min。將三乙胺(837 μL，6 mmol)逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(279 μL，2 mmol)逐滴添加至反應物中，且接著攪拌30 min。一次性添加對硝基苯酚(250 mg，1.8 mmol)。攪拌反應混合物16小時。反應物用DCM (20 mL)稀釋且用水(5 × 20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.28 - 8.15 (m, 2H), 7.46 - 7.28 (m, 4H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 5.17 (m, 1H), 4.21 - 4.04 (m, 1H), 4.01 - 3.85 (m, 1H), 2.81 (m, 1H), 2.70 - 2.55 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 2H), 1.84 - 1.70 (m, 1H), 1.39 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.16, -3.21。LCMS：MS m/z= 450.3 [M+1]；448.1 [M-1]，t R= 1.15 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.61 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物 24. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯
Figure 02_image313
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將Boc-L-丙胺酸(5.2 g，27.5 mmol)及(R)-3-羥基-1-甲基吡咯啶(2.74 mL，25 mmol)溶解於無水THF (25 mL)中。逐滴添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(4.67 mL，30 mmol)。攪拌反應物2小時。逐滴添加更多N,N'-二異丙基碳化二亞胺(467 μL，3 mmol)，且攪拌反應物2小時。逐滴添加更多N,N'-二異丙基碳化二亞胺(467 μL，3 mmol)，且攪拌反應物16小時。
將反應物用EtOAc (25 mL)稀釋並攪拌10 min。濾出固體且用少量EtOAc洗滌。用飽和碳酸氫鈉水溶液(3×10 mL)洗滌濾液。接著用5%檸檬酸水溶液(50 mL)萃取有機物。用EtOAc (5 mL)洗滌檸檬酸萃取物。檸檬酸部分用1 N NaOH水溶液鹼化，得到pH值9，且接著用EtOAc (3×15 mL)萃取。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.28 - 5.18 (m, 1H), 5.02 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 2.84 - 2.75 (m, 1H), 2.69 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.34 - 2.22 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image315
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(R)-1-甲基吡咯啶-3-基酯(3.9 g，14.3 mmol)與30 mL含4 N HCl之二㗁烷混合，並攪拌3小時。減壓濃縮反應物，得到泡沫狀物，接著將其與30 mL無水DCM混合，並且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(2.34 mL，15.75 mmol)一次性添加至反應物中。攪拌反應物15 min。將三乙胺(4.4 mL，31.5 mmol)與無水DCM (5 mL)混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(2.2 mL，15.75 mmol)與無水DCM (3 mL)混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物15 min。一次性添加對硝基苯酚(1.8 g，12.87 mmol)。攪拌反應混合物2小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋，且用碳酸氫鈉水溶液(3×20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 5.20 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.37 (m, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 2H), 1.86 - 1.73 (m, 1H), 1.40 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.12, -3.14。LCMS：MS m/z= 450.3 [M+1]；448.1 [M-1]，t R= 1.24 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.63 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物25. 2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環己酯
Figure 02_image317
將中間物11 (3.4 g，16.37 mmol)溶解於亞甲基氯(45 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(2.45 mL，16.37 mmol)。在-78℃下經60 min添加三乙胺(4.54 mL，32.74 mmol)，且接著一次性添加4-硝基苯酚(2277 mg，16.37 mmol)。在-78℃下經60 min添加三乙胺(2.27 mL，16.37 mmol)。在-78℃下攪拌所得混合物2 h，用亞甲基氯(100 mL)稀釋，用水洗滌兩次並用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至20% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 4H), 7.29 - 7.09 (m, 3H), 4.76 (m, 1H), 4.20 - 4.02 (m, 1H), 3.92 (m, 1H), 1.87 - 1.64 (m, 4H), 1.54 (m, 2H), 1.46 - 1.18 (m, 7H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -2.94, -3.00。MS m/z= 449 (M+H) +。 中間物26. 4-(((2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙醯基)氧基)哌啶-1-甲酸三級丁酯
Figure 02_image319
4-((L- 丙胺醯基 ) 氧基 ) 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯 .向((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(1.26 g，5.65 mmol)、4-羥基哌啶-1-甲酸三級丁酯(5.68 g，28.22 mmol)及EDCI (1.05 g，6.77 mmol)於乙腈(15 mL)中之混合物中添加DMAP (1.03 g，8.47 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到Cbz-L-丙胺酸哌啶基酯，將其溶解於THF (10 mL)中，且添加20%氫氧化鈀(400 mg)/碳。在H 2氣體下攪拌所得混合物2 h，過濾，且真空濃縮濾液。高真空乾燥所獲得殘餘物，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.95 (tt, J= 7.9, 3.8 Hz, 1H), 3.79 - 3.62 (m, 2H), 3.56 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 3.25 (ddd, J= 13.6, 8.5, 3.7 Hz, 2H), 1.85 (ddd, J= 13.4, 6.4, 3.4 Hz, 2H), 1.73 (s, 2H), 1.62 (ddq, J= 12.7, 8.7, 4.3, 3.9 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.34 (d, J= 7.0 Hz, 3H)。MS m/z= 273 [M+H]。
Figure 02_image321
4-(((2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 氧基 ) 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯 .將4-((L-丙胺醯基)氧基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(0.9 g，3.31 mmol)溶解於亞甲基氯(10 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.49 mL，3.31 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.46 mL，3.31 mmol)，且一次性添加4-硝基苯酚(460 mg，3.31 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.49 mL，3.31 mmol)。在-78℃下攪拌所得混合物2 h，用亞甲基氯稀釋，用水洗滌兩次並用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至70% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 (m, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 4.93 (m, 1H), 4.26 - 4.03 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.75 - 3.56 (m, 2H), 3.21 (m, 2H), 1.91 - 1.75 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.38 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.07, -3.13。MS m/z= 550 (M+H) +。 中間物27. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
Figure 02_image323
L- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-l-丙胺酸(900 mg，4.03 mmol)及反式-4-(三氟甲基)環己-1-醇(1.02 g，6.05 mmol)製備產物。MS m/z= 240 [M+H]。
Figure 02_image325
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯(974 mg，4.07 mmol)製備呈異構混合物之產物(840 mg)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 - 8.19 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 4.68 (m, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 2.02 (m, 4H), 1.50 - 1.27 (m, 8H)。 19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -73.91 (d, J= 7.7 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.08, -3.12。MS m/z= 517 [M+H]。
產物藉由Chiralpak SFC (Chiralpak IF 20×250 mm管柱，30%異丙醇)分離，得到中間物28及中間物29：
Figure 02_image327
中間物28. ((R)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯. 中間物27之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.69 (tt, J= 10.7, 4.2 Hz, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.90 (dd, J= 11.9, 9.5 Hz, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 5H), 1.52 - 1.21 (m, 7H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -73.90 (d, J= 7.7 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.07。 中間物29. ((S)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式4-(三氟甲基)環己酯. 中間物27之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.21 (d, J= 9.08 Hz, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 4.67 (tt, J= 10.8, 4.2 Hz, 1H), 4.11 (ddt, J= 15.8, 8.9, 7.1 Hz, 1H), 3.97 (dd, J= 12.0, 9.4 Hz, 1H), 2.07 - 1.91 (m, 5H), 1.51 - 1.19 (m, 7H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿- d) δ -73.90 (d, J= 7.9 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.08。 中間物30. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-甲基哌啶-4-基酯
Figure 02_image329
L- 丙胺酸 1- 甲基哌啶 -4- 基 酯 .向N-Cbz-L-丙胺酸(1.047 g，4.688 mmol)、4-羥基-N-甲基哌啶(450 mg，3.907 mmol)及EDCI (788 mg，5.079 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (716 mg，5.861 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至10% MeOH/DCM)純化，得到Cbz-L-丙胺酸4-哌啶基酯，將其溶解於THF (10 mL)中，且在室溫下添加20% Pd(OH) 2( 300 mg，0.427 mmol)。在室溫下在H 2氣體下攪拌所得混合物2 h，過濾，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，且高真空乾燥隔夜，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.81 (td, J= 8.3, 7.7, 3.8 Hz, 1H), 3.52 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 2.63 (s, 2H), 2.29 (s, 5H), 2.14 - 1.86 (m, 4H), 1.73 (ddt, J= 12.9, 8.8, 4.5 Hz, 2H), 1.32 (d, J= 7.0 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 187.09 [M+1]；t R= 0.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image331
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 1- 甲基哌啶 -4- 基 酯 .在-78℃下向L-丙胺酸1-甲基哌啶-4-基酯(360 mg，1.706 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.255 mL，1.706 mmol)，且接著在-78℃下經30 min添加含三乙胺(0.24 mL，1.706 mmol)之DCM (2.76 mL)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且接著將其再冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(0.237 g，1.706 mmol)且經30 min添加三乙胺(0.237 mL，1.706 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至10% MeOH/DCM)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.28 - 8.15 (m, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.80 (s, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 2.64 (s, 2H), 2.31 (m, 5H), 1.90 (m, 2H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.47 - 1.33 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.04, -3.07。LCMS：MS m/z= 464.32 [M+1]；t R= 0.74 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物31. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(四氫-2H-哌喃-4-基)甲酯
Figure 02_image333
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ( 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 ) 甲酯 .將Cbz-L-Ala (446 mg，2 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。一次性添加EDCI (422 mg，2.2 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加四氫哌喃-4-甲醇(279 μL，2.4 mmol)。接著一次性添加DMAP (269 mg，2.2 mmol)。攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且最後用鹽水(10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.28 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.39 (t, J= 7.4 Hz, 1H), 4.07 - 3.84 (m, 4H), 3.38 (t, J= 11.7 Hz, 2H), 1.92 (s, 1H), 1.68 - 1.50 (m, 3H), 1.39 (m, 4H)。
Figure 02_image335
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ( 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 ) 甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(四氫-2H-哌喃-4-基)甲酯(530 mg，1.65 mmol)溶解於無水THF (12 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌反應混合物2小時。過濾催化劑，且濾液不經純化即使用。
將二氯磷酸苯酯(294 μL，1.98 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述THF溶液逐滴添加至反應物中，且接著攪拌10 min。逐滴添加三乙胺(300 μL，2.15 mmol)，且接著攪拌30 min。添加對硝基苯酚(207 mg，1.49 mmol)及三乙胺(300 μL，2.15 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物14小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用0.2 M碳酸鈉溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 3.97 (m, 4H), 3.85 (t, J = 10.5 Hz, 1H), 3.35 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 1.99 - 1.79 (m, 1H), 1.56 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 1.48 - 1.29 (m, 4H )。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.13(s), -3.16 (s)。MS m/z= 464.9 [M+1]；463.1 [M-1]。 中間物32. ((S)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
Figure 02_image337
L- 丙胺酸反式 -4-( 三級丁基 ) 環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-l-丙胺酸(960 mg，4.03 mmol)及反式-4-(三級丁基)環己醇(1.0 g，6.45 mmol)製備產物(845 mg)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.65 (tt, J= 11.2, 4.5 Hz, 1H), 3.51 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 2.07 - 1.93 (m, 2H), 1.87 - 1.73 (m, 4H), 1.40 - 1.23 (m, 4H), 1.19 - 0.94 (m, 4H), 0.85 (d, J= 2.6 Hz, 9H)。MS m/z= 228 [M+H]。
Figure 02_image339
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -4-( 三級丁基 ) 環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯(420 mg，1.85 mmol)製備呈異構混合物之產物(520 mg)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 - 8.19 (m, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.28 - 7.16 (m, 3H), 4.62 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.39 (m, 3H), 1.35 - 1.22 (m, 2H), 1.15 - 0.92 (m, 3H), 0.85 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.98, -3.04。MS m/z= 505 [M+H]。 中間物33. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸((1r,4S)-4-(三氟甲基)環己基)甲酯
Figure 02_image341
((1s,4s)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲醇 .在30 min內向(1s,4s)-4-(三氟甲基)環己烷甲酸(3 g，15.29 mmol)於無水四氫呋喃(40 mL)中之冰冷溶液中分批添加氫化鋰鋁(0.871 g，22.94 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3 h。冷卻至0℃，且用水(0.8 mL)、5 N氫氧化鈉水溶液(0.8 mL)、接著水(2.4 mL)淬滅。過濾分離之固體，且濾液用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋。分離有機層，用鹽水洗滌，且經硫酸鈉乾燥。過濾乙酸乙酯且減壓濃縮，得到產物。將所獲得殘餘物高真空乾燥1 h，且按原樣用於後續反應中。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.47 (dd, J = 6.3, 1.9 Hz, 2H), 2.08 - 1.77 (m, 5H), 1.62 - 1.18 (m, 4H), 0.99 (qd, J = 13.0, 3.2 Hz, 2H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -74.33 (d, J = 8.2 Hz)。
Figure 02_image343
( 三級丁氧基羰基 )- L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲酯 .以與針對中間物12所描述類似的方式來製備產物(1.48 g)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.00 (s, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.04 - 3.89 (m, 2H), 2.08 - 1.79 (m, 5H), 1.74 - 1.57 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.30 (m, 2H), 1.12 - 0.93 (m, 2H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -74.38 (d, J = 7.8 Hz)。
Figure 02_image345
氯化 (S)-1- 側氧基 -1-(((1r,4S)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲氧基 ) 丙 -2- 銨 .以與針對中間物13所描述類似的方式來製備產物(1.184 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.55 (s, 3H), 4.17 - 3.88 (m, 3H), 2.21 (dtd, J = 12.2, 8.8, 3.3 Hz, 1H), 1.83 (ddd, J = 29.5, 13.4, 3.4 Hz, 4H), 1.63 (tdd, J = 11.9, 6.0, 3.3 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32 - 0.93 (m, 4H)。 19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ -72.84 (d, J= 8.8 Hz)。
Figure 02_image347
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備產物(1.4 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 - 8.22 (m, 2H), 7.56 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.14 (m, 2H), 6.72 (ddd, J = 13.7, 10.1, 8.6 Hz, 1H), 4.10 - 3.91 (m, 1H), 3.88 - 3.75 (m, 2H), 2.20 - 1.99 (m, 1H), 1.86 - 1.63 (m, 4H), 1.54 - 1.41 (m, 1H), 1.29 - 1.06 (m, 5H), 0.98 (td, J = 12.7, 3.2 Hz, 2H)。MS m/z= 531.02 [M+1]。 中間物34. ((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸乙酯
Figure 02_image349
在-78℃下向L-丙胺酸乙酯-HCl (631 mg，2.465 mmol)於DCM (15 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.368 mL，2.465 mmol)，且在-78℃下經5 min逐滴添加三乙胺(0.68 mL，4.93 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且接著將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加五氟苯酚(454 mg，2.465 mmol)且經5 min添加三乙胺(0.34 mL，2.465 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物1 h，接著用DCM稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到非對映異構混合物，向其中添加二異丙基醚(4 mL)。對懸浮液進行超音波處理且過濾。濾餅之 1H NMR顯示其為3:1比率之混合物。將二異丙基醚(5 mL)添加至濾餅中，且將懸浮液在70℃下加熱至澄清溶液。在移除加熱浴之後，開始形成針狀晶體，且在10 min之後，過濾混合物，且濾餅經高真空乾燥30 min，得到Sp異構體。
非對映異構混合物 ： 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.32 - 7.17 (m, 3H), 4.29 - 4.11 (m, 3H), 3.94 (m, 1H), 1.52 - 1.42 (m, 3H), 1.28 (q, J= 7.0 Hz, 3H)。
S p 異構體 ： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.50 - 7.36 (m, 2H), 7.32 - 7.21 (m, 3H), 4.75 (t, J= 11.5 Hz, 1H), 4.17 - 3.98 (m, 3H), 1.37 (dd, J= 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.22 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ -0.51。 19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -155.48 - -155.76 (m), -162.73 (td, J= 21.3, 3.7 Hz), -165.02 - -165.84 (m)。LCMS m/z= 440.5 (M-乙基+H)，t R= 1.57 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物35. 2-環己基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酸(2S)-2-乙基丁酯
Figure 02_image351
2- 胺基 -2- 環己基乙酸 (S)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .將L-環己基甘胺酸(0.90 g，5.75 mmol)溶解於2-乙基-1-丁醇(20 mL)中，且一次性添加氯三甲基矽烷(1.31 mL，10.30 mmol)。將其在預加熱之60℃油浴中放置16 h。濃縮，且在60℃旋轉蒸發器浴液中與甲苯共蒸發5次。在高真空下放置隔夜，得到產物。該物質按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.38 (s, 3H), 4.17 - 3.96 (m, 2H), 3.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 1.90 - 1.40 (m, 5H), 1.41 - 0.88 (m, 11H), 0.83 (t, J= 7.3 Hz, 6H)。
Figure 02_image353
2- 環己基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基-2-環己基乙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(1.50 g，5.39 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.803 mL，5.39 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.56 mL，11.16 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(713 mg，5.13 mmol)及三乙胺(0.81 mL，5.63 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。減壓濃縮粗產物，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，接著藉由不含改質劑之逆相HPLC (20-100% ACN/水)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (br d, J= 9.3 Hz, 2H), 7.55 - 7.28 (m, 4H), 7.28 - 7.01 (m, 3H), 6.61 - 6.52 (m, 1H), 3.85 (d, J = 4.0 Hz, 2H) 3.75 - 3.53 (m, 1H), 1.67 - 1.31 (m, 7H), 1.25 (m, 6H), 1.16 - 0.67 (m, 9H)。LC/MS：t R= 1.48 min，MS m/z= 519.03 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 中間物36. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯
Figure 02_image355
( 三級丁氧基羰基 ) 丙胺酸 (1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲酯 .以與針對中間物12所描述類似的方式來製備產物(3.8 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.25 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.08 - 3.72 (m, 3H), 3.10 (q, J = 10.3 Hz, 2H), 2.88 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 2.37 - 2.18 (m, 2H), 1.66 - 1.47 (m, 3H), 1.36 (s, 9H), 1.21 (d, J = 7.5 Hz, 5H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6 ) δ -68.52 (t, J = 10.3 Hz)。
Figure 02_image357
丙胺酸 (1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲酯二鹽酸鹽 .以與針對中間物13所描述類似的方式來製備產物(3.52 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.67 (s, 3H), 4.44 - 3.75 (m, 5H), 3.49 - 2.81 (m, 4H), 2.00 - 1.61 (m, 5H), 1.43 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6 ) δ -63.30 (d, J = 443.2 Hz)。
Figure 02_image359
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 (1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備產物(4.25 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.53 - 7.40 (m, 2H), 7.39 (ddd, J= 8.1, 6.8, 3.1 Hz, 2H), 7.24 (ddd, J= 17.4, 6.5, 1.6 Hz, 3H), 6.69 (ddd, J= 13.7, 10.0, 8.4 Hz, 1H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.88 - 3.77 (m, 2H), 3.08 (qd, J= 10.3, 1.6 Hz, 2H), 2.87 - 2.79 (m, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.56 - 1.39 (m, 3H), 1.26 - 1.08 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6 ) δ -1.26, -1.49。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6 ) δ -68.45 (td, J = 10.2, 2.4 Hz)。LCMS：MS m/z= 546.27 [M+1]；t R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物37. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯
Figure 02_image361
4-(((( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺醯基 ) 氧基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯 .向 N-Cbz-L-丙胺酸(2.0 g，8.96 mmol)、3,3-二氟-4-羥基哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.12 g，8.96 mmol)及EDCI (1.67 g，10.75 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (1.64 g，13.44 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(50至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -114.32 (m), -117.73 - -121.11 (m)。LCMS：MS m/z= 343.14 [M+1-Boc], 386.82 (M+1- t-Bu)；t R= 1.23 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image363
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .在室溫下向4-((((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺醯基)氧基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸三級丁酯(330 mg，0.746 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物中緩慢添加含4 M HCL之二㗁烷(0.9 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，且高真空乾燥15 h，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.33 (m, 5H), 5.59 (m, 1H), 5.27 - 5.01 (m, 3H), 4.53 - 4.25 (m, 1H), 3.12 (m, 1H), 3.03 - 2.76 (m, 2H), 2.73 (s, 1H), 1.94 (s, 1H), 1.80 (s, 1H), 1.41 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿- d) δ -114.66 (dd, J= 245.9, 61.8 Hz), -119.63。
Figure 02_image365
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸3,3-二氟哌啶-4-基酯(450 mg，1.190 mmol)、乙醛(0.194 mL，2.629 mmol)及乙酸(0.15 mL，2.629 mmol)於DCM (9 mL)中之混合物在室溫下攪拌20 min，且添加氰基硼氫化鈉(330 mg，5.258 mmol)。攪拌所得混合物1 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，20-80%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d3) δ 10.18 (bs, 2H), 7.38 (m, 5H), 6.19 (m, 1H), 5.47 - 5.26 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 3.82 - 2.98 (m, 6H), 2.30 (s, 1H), 2.16 (s, 1H), 1.42 (m, 3H), 1.31 (td, J= 7.3, 1.5 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 371.27 [M+1]；t R= 0.66 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image367
L- 丙胺酸 1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯(450 mg，0.929 mmol)及20% Pd(OH) 2/C於THF (10 mL)中之混合物在H 2氣體下在室溫下攪拌1 h，過濾，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，且高真空乾燥1 h，得到產物。LCMS：MS m/z= 237.09 [M+1]；t R= 0.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm，溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image369
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .將亞甲基氯(10 mL)添加至L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯(480 mg，1.37 mmol)之糊漿中，且添加TEA (0.190 mL，0.370 mmol)，得到溶液，將其冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.205 mL，1.370 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.190 mL，1.37 mmol)。在相同溫度下攪拌所得混合物30 min，且一次性添加4-硝基苯酚(191 mg，1.370 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.190 mL，1.370 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。接著殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.44 - 7.28 (m, 4H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 5.03 (m, 1H), 4.34 - 4.14 (m, 1H), 3.94 - 3.75 (m, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.63-2.49 (m, 4H), 2.39 (m, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.93 - 1.77 (m, 1H), 1.44 (m, 3H), 1.09 (td, J = 7.2, 1.0 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.21, -3.26, -3.32, -3.46。 19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -110.50 (d, J= 244.0 Hz), -116.76 (m)。LCMS：MS m/z= 514.29 [M+1]；t R= 0.80 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物38. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-乙酯
Figure 02_image371
向L-丙胺酸乙酯HCl鹽(1.8 g，11.72 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5 g，5.86 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(2.37 g，23.44 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且攪拌隔夜。接著將反應混合物用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 417.93 [M+1]，t R= 1.23 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.02 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 中間物39. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸苯甲酯
Figure 02_image373
將二氯磷酸苯酯(1.49 mL，10 mmol)溶解於20 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將L-丙胺酸苯甲酯HCl (2.2 g，10 mmol)一次性添加至反應溶液中，並攪拌10 min。將三乙胺(3 mL，22 mmol)溶解於5 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物2 h。一次性添加對硝基苯酚(1.25 g，9 mmol)。將三乙胺(1.5 mL，11 mmol)溶解於3 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物1 h，且用二氯甲烷(10 mL)稀釋，並且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.24 - 8.10 (m, 2H), 7.40 - 7.10 (m, 12H), 5.14 (m, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 1.47 - 1.36 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.15, -3.29。LCMS：MS m/z= 457.1 [M+1]；455.1 [M-1]，t R= 1.45 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.03 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物40. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-甲酯
Figure 02_image375
在氬氣氛圍下在0℃下，將三乙胺(3.68 mL，26.4 mmol)添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(1.63 g，12.0 mmol)及二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5 g，5.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中。3 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) 8.25 - 8.16 (m, 2H), 7.38 (dd, J =9.3, 1.0 Hz, 2H), 4.17 - 3.95 (m, 2H), 3.73 (br s, 6H), 3.61 (br t, J =10.0 Hz, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.40 (s, 1H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 7.82 (s)。LCMS：MS m/z= 389.98 [M+1]，t R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.81 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。 中間物41. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image377
在0℃下，將二氯磷酸苯酯(2.81 mL，18.9 mmol)及三乙胺(5.38 mL，37.9 mmol)依序添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(2.64 g，18.9 mmol)於二氯甲烷(100 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(2.64 g，18.9 mmol)及三乙胺(2.64 mL，18.9 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2.5 h之後，反應混合物用二氯甲烷(100 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 8.25 - 8.18 (m, 2H), 7.43 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 4.24 - 4.07 (m, 1H), 3.97 (br q, J =9.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 1.45 - 1.35 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ -3.12 (s), -3.17 (s)。LCMS：MS m/z= 380.98 [M+1]，t R= 1.59 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.49 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。 中間物42. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image379
在氬氣氛圍下在0℃下，將二氯磷酸4-硝基苯酯(2.00 g，7.81 mmol)及三乙胺(2.18 mL，15.6 mmol)依序添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(1.091 g，18.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加苯甲醇(0.810 mL，7.81 mmol)及三乙胺(1.09 mL，7.81 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 8.32 - 8.09 (m, 2H), 8.32 - 8.09 (m, 7H), 5.15 (app t, J= 8.4 Hz, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 1H), 3.73 - 3.65 (m, 3H), 1.42 - 1.31 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 2.23 (s), 2.15 (s)。LCMS：MS m/z= 394.9[M+1]，t R= 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。 中間物43. ((4-(二甲基胺甲醯基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image381
在-78℃下經30 min向二氯磷酸4-硝基苯酯(620 mg，2.422 mmol)及異丙基L-丙胺酸-HCl (406 mg，2.422 mmol)於DCM-THF (10:3 mL)中之溶液中添加含TEA (0.68 mL，4.844 mmol)之DCM (3.32 mL)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃，並且在-78℃下一次性添加 N,N-二甲基-4-羥基苯甲醯胺(400 mg，2.422 mmol)且經30 min添加含TEA (0.34 mL，2.422 mmol)之DCM (3.66 mL)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物1 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 3H), 7.27 (m, 2H), 6.76 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.17 - 3.94 (m, 2H), 3.19 - 2.84 (m, 6H), 1.39 (m, 3H), 1.27 - 1.16 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.13, -3.21。MS m/z= 480 (M+H)。LCMS：MS m/z= 480.26 [M+1]；t R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物44. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯
Figure 02_image383
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 .向((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(1.8 g，8.1 mmol)、3-羥基氧雜環丁烷(0.5 g，6.75 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (1.68 g，8.77 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，1.24 g，10.12 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.47 (p, J = 5.9 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.88 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 4.62 (ddd, J = 17.5, 7.7, 5.3 Hz, 2H), 4.41 (p, J = 7.3 Hz, 1H), 1.44 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 280.04 [M+1]，t R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.82 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Figure 02_image385
L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(0.1 g，0.36 mmol)溶解於DCM (5 mL)中，向該溶液中添加15 mg Pd-C (10%，濕潤)，將反應燒瓶脫氣且接著向其中裝入H 2氣球，在RT下攪拌2 h，接著過濾反應混合物，真空蒸發溶劑，高真空乾燥殘餘物5 min，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.42 (p, J = 5.7 Hz, 1H), 4.87 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 4.65 - 4.54 (m, 2H), 3.58 (qd, J = 7.0, 2.1 Hz, 1H), 1.49 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.34 (dd, J = 7.2, 2.1 Hz, 3H)。
Figure 02_image387
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 .向L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(120 mg，0.83 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(175 mg，0.83 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(252 mg，2.49 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加對硝基苯酚(115 mg，0.83 mmol)且逐滴添加三乙胺(252 mg，2.49 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 423.06 [M+1]，t R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.15 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 中間物45. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丙酯
Figure 02_image389
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸丙酯 .在RT下將N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(6.08 g，31.71 mmol)添加至Boc-Ala-OH (5 g，26.43 mmol)及正丙醇(6.02 mL，80.6 mmol)於乙腈(125 mL)中之溶液中。15 min之後，添加4-(二甲基胺基)吡啶(3.23 g，26.43 mmol)。16 h後，將反應混合物濃縮至一半體積，且用乙酸乙酯(250 mL)稀釋混合物，並且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20% EtOAc/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 5.57 (s, 1H), 4.19 - 3.92 (m, 3H), 1.63 (h, J= 7.1 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.30 (d, J= 7.3 Hz, 3H), 0.93 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 231.60 [M+1]，t R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image391
L- 丙胺酸丙酯鹽酸鹽 .在RT下將含4 M鹽酸溶液之二㗁烷(16.91 mL)添加至含(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸丙酯(3.91 g，16.91 mmol)之二氯甲烷(10 mL)中。16 h後，將反應混合物減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 8.45 (s, 3H), 4.22 - 4.11 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 1.68 (dtd, J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.60 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 0.95 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 131.94 [M+1]，t R= 0.32 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image393
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸丙酯 .在0℃下經15分鐘將含二氯磷酸苯酯(0.89 mL，5.97 mmol)之二氯甲烷(12 mL)逐滴添加至L-丙胺酸丙酯鹽酸鹽(1.0 g，5.97 mmol)於二氯甲烷(12 mL)中之溶液中。在添加完成之後，經5分鐘添加含三乙胺(2.0 mL，14.32 mmol)之二氯甲烷(2.5 mL)。3.5 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.83 g，5.97 mmol)及三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2 h之後，將反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用水(2 × 100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 8.28 - 8.20 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.31 - 7.19 (m, 3H), 4.72 - 4.56 (m, 1H), 4.14 - 4.02 (m, 1H), 3.99 (td, J= 6.6, 2.5 Hz, 2H), 1.58 (dtdd, J= 13.9, 7.4, 6.5, 0.9 Hz, 2H), 1.31 (ddd, J= 7.1, 4.2, 1.1 Hz, 3H), 0.88 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ -2.12, -2.22。LCMS：MS m/z= 409.12 [M+1]，t R= 1.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.73 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物46. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
Figure 02_image395
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基甲酯 .向((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(6.08 g，27.24 mmol)、氧雜環丁烷-3-基甲醇(2 g，22.7 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (5.66 g，29.51 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，4.16 g，34.05 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 280.04 [M+1]，t R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Figure 02_image397
L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯(2.2 g，8 mmol)溶解於DCM (25 mL)中，向該溶液中添加500 mg Pd-C (10%，濕潤)，將反應燒瓶脫氣且接著向其中裝入H 2氣球，在RT下攪拌2 h，接著過濾反應混合物，真空蒸發溶劑，高真空乾燥殘餘物5 min，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.77 (dd, J = 7.9, 6.3 Hz, 2H), 4.44 (td, J = 6.1, 2.5 Hz, 2H), 4.38 - 4.23 (m, 2H), 3.55 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.34 - 3.19 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。
Figure 02_image399
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基甲酯 .向L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯(1.19 g，7.11 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(1.5 g，7.11 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(1.44 g，14.22 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加對硝基苯酚(0.99 g，7.1 mmol)且逐滴添加三乙胺(1.44 g，14.22 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 437.14 [M+1]，t R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.36 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 中間物47. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環丁酯
Figure 02_image401
在冰浴中在氮氣氛圍下，向L-丙胺酸環丁酯(1.8 g，10 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(2.1 g，10 mmol)。接著逐滴添加三乙胺(1.11 g，11 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物2 h，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加對硝基苯酚(2.5 g，18 mmol)且逐滴添加三乙胺(1.11 g，11 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物2 h，用EtOAc稀釋，用5%檸檬酸水溶液洗滌兩次，接著用鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。MS m/z= 422.0 (M+H) +。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%，IPA 30%)純化，形成中間物48及中間物49：
Figure 02_image403
中間物48. 中間物47之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.33-8.23 (m, 2H), 7.52 -7.33 (m, 4H), 7.33-7.17 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.32 (ddd, J= 7.2, 5.3, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 1.36。LCMS：MS m/z= 421.05 [M+1]，t R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 8.07 min；HPLC系統：Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，5微米，CN=IC00CD-QC005，1 CV=2.49 mL，CV#1，管柱閥：位置3，15 mL/15 min，1 mL/min。Pmax=300巴；溶劑閥：D：庚烷70%，#6：IPA 30%。 中間物49. 中間物47之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.33-8.23 (m, 2H), 7.52 -7.33 (m, 4H), 7.33-7.17 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.32 (ddd, J = 7.2, 5.3, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 1.59。LCMS：MS m/z= 420.90 [M+1]，t R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 11.50 min；HPLC系統：Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，5微米，CN=IC00CD-QC005，1 CV=2.49 mL，CV#1，管柱閥：位置3，15 mL/15 min，1 mL/min。Pmax=300巴；溶劑閥：D：庚烷70%，#6：IPA 30%。 中間物50. ((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image405
將L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(14 g，100 mmol)與50 mL無水DCM混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(16.4 mL，110 mmol)逐滴添加至反應物中，且攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(29.4 mL，210 mmol)與20 mL無水DCM混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。一次性添加五氟苯酚(18.4 g，100 mmol)。將三乙胺(14.7 mL，105 mmol)與30 mL無水DCM混合且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16小時。
反應物用DCM (50 mL)稀釋且用水(5×10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到固體。將異丙基醚(130 mL)添加至固體中。將大塊固體分解，且接著用超音波處理20 min，之後攪拌混合物24小時。
收集固體且用少量異丙基醚(30 mL)洗滌。高真空乾燥固體，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 3H), 4.20 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.47 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.62。 19F NMR (376 MHz, 氯仿- d) δ -153.82 (dd, J= 18.5, 2.7 Hz), -159.99 (td, J= 21.8, 3.8 Hz), -162.65 (dd, J= 22.2, 17.6 Hz)。LCMS：MS m/z= 425.9 [M+1]，423.9 [M-1]，t R= 1.68 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.76 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物51. ((4-(2-甲氧基乙氧基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image407
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(503 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(329 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘之後，在0℃下依序添加4-(2-甲氧基-乙氧基)苯酚(331 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.51 - 7.39 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 6.97 - 6.90 (m, 2H), 4.94 (heptd, J= 6.2, 3.2 Hz, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d, J= 0.5 Hz, 3H), 1.32 (td, J= 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.19 (dt, J= 6.3, 2.0 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -0.86, -1.06。LCMS：MS m/z= 483.06 [M+1]，t R= 1.39 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.58 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物52. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丁酯
Figure 02_image409
在0℃下經15分鐘將含二氯磷酸苯酯(0.89 mL，5.97 mmol)之二氯甲烷(12 mL)逐滴添加至L-丙胺酸丁酯鹽酸鹽(CAS號81305-85-3，1.0 g，5.97 mmol)於二氯甲烷(12 mL)中之溶液中。在添加完成之後，經5分鐘添加含三乙胺(2.0 mL，14.32 mmol)之二氯甲烷(2.5 mL)。3.5 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.83 g，5.97 mmol)及三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2 h之後，將反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用水(2 × 100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.31 - 8.23 (m, 1H), 7.52 - 7.34 (m, 2H), 7.32 - 7.18 (m, 2H), 4.04 (td, J= 6.6, 2.7 Hz, 2H), 1.60 - 1.48 (m, 1H), 1.40 - 1.26 (m, 3H), 0.89 (t, J= 7.4 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -1.36, -1.59。LCMS：MS m/z= 423.13 [M+1]，t R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物53. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-甲氧基丙酯
Figure 02_image411
L- 丙胺酸 3- 甲氧基丙酯 .向Cbz-L-丙胺酸(2.80 g，12.54 mmol)、3-甲氧基丙醇(1.00 mL，10.45 mmol)及EDCI (2.11 g，13.59 mmol)於乙腈(40 mL)中之混合物中添加DMAP (1.92 g，15.68 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至50% EtOAc/己烷，35 min運行)純化，得到Cbz-L-丙胺酸酯(2.78 g)，將其溶解於THF (20 mL)中，且在室溫下添加20% Pd(OH) 2(800 mg，1.14 mmol)。在氫氣氛圍下在室溫下攪拌所得混合物4 h，過濾，真空濃縮，且高真空乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.28 - 4.14 (m, 2H), 3.55 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 3.43 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H), 1.98 - 1.85 (m, 4H), 1.33 (d, J= 7.0 Hz, 3H)。LCMS m/z= 161.98 (M+H)，t R= 0.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image413
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3- 甲氧基丙酯 .在-78℃下向L-丙胺酸3-甲氧基丙酯(1.32 g，8.20 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中快速一次性添加二氯磷酸苯酯(1.23 mL，8.20 mmol)。接著在-78℃下經5 min添加三乙胺(1.14 mL，8.20 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(1.14 g，8.20 mmol)且經5 min添加三乙胺(1.14 mL，8.20 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物2 h。在用DCM稀釋之後，將混合物用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.26 - 8.19 (m, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 4.20 (m, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 1H), 3.91 (m, 1H), 3.40 (m, 2H), 3.30 (m, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.40 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.07, -3.10。LCMS： m/z= 439.11 (M+H)。t R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min 中間物54. (2S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-(((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)苯基)丙酸甲酯
Figure 02_image415
在0℃下，經10分鐘將含L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(275 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至二氯磷酸4-硝基苯酯(504 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。60分鐘之後，在0℃下依序添加 N-苯甲氧羰基-L-酪胺酸甲酯(649 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。3小時後，反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.34 - 8.17 (m, 2H), 7.53 - 7.37 (m, 2H), 7.37 - 7.09 (m, 9H), 5.02 (s, 2H), 4.43 (dd, J= 9.4, 5.2 Hz, 1H), 4.19 - 3.97 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.62 (d, J= 4.4 Hz, 3H), 3.16 (dd, J= 14.0, 5.4 Hz, 1H), 2.93 (dd, J= 14.1, 9.8 Hz, 1H), 1.32 (td, J= 7.3, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -1.30, -1.51。LCMS：MS m/z= 616.03 [M+1]，t R= 1.63 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.81 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物55. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image417
(S)- 四氫呋喃 -3- 基 -L- 丙胺酸酯 .向 N-Cbz-L-丙胺酸(3.31 g，14.83 mmol)、(S)-THF-3-醇(1.0 mL，12.34 mmol)及EDCI (2.49 g，16.04 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.26 g，18.51 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至80% EtOAc/己烷)純化，得到Cbz-L-丙胺酸4-THF酯，將其溶解於THF (20 mL)中，且在室溫下添加20%氫氧化鈀(433 mg，0.617 mmol)。在H 2氣體下在室溫下攪拌所得混合物2 h，過濾，且真空濃縮，與DCM共蒸發多次，並且高真空乾燥15 h，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.37 - 5.29 (m, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 4H), 3.61 - 3.52 (m, 1H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 2.02 (dt, J= 12.8, 5.6 Hz, 1H), 1.76 (s, 2H), 1.34 (dd, J= 7.1, 1.5 Hz, 3H)。LCMS m/z= 159.94 (M+H)，t R= 0.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image419
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)- 四氫呋喃 -3- 基 酯 .在-78℃下向(S)-四氫呋喃-3-基-L-丙胺酸酯(1.45 g，9.10 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中快速一次性添加二氯磷酸苯酯(1.37 mL，9.10 mmol)。接著在-78℃下經5 min添加三乙胺(1.27 mL，9.10 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(1.27 g，9.10 mmol)且經5 min添加三乙胺(1.27 mL，9.10 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物2 h。在用DCM稀釋之後，將混合物用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.12 (m, 3H), 5.29 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.00 - 3.79 (m, 4H), 3.82 - 3.60 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.40 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.18, -3.20。LCMS： m/z= 437.05 (M+H)，t R= 1.41 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物56. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-(N-嗎啉基)丙酯
Figure 02_image421
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(503 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸3-(N-嗎啉基)丙酯鹽酸鹽(496 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘後，在0℃下依序添加苯酚(185 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，將反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.51 - 7.39 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 6.97 - 6.90 (m, 2H), 4.94 (m, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d, J= 0.5 Hz, 3H), 1.32 (td, J= 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.19 (dt, J= 6.3, 2.0 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ -2.12, -2.22。LCMS：MS m/z= 494.35 [M+1]，t R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物57. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(R)-四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image423
(R)- 四氫呋喃 -3- 基 -L- 丙胺酸酯 .向 N-Cbz-L-丙胺酸(3.31，14.83 mmol)、(R)-THF-3-醇(1.0 mL，12.34 mmol)及EDCI (2.49 g，16.04 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.26 g，18.51 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至50% EtOAc/己烷，運行35 min)純化，得到Cbz-L-丙胺酸酯(2.78 g)，將其溶解於THF (20 mL)中，且在室溫下添加20% Pd(OH) 2(433 mg，0.617 mmol)。在氫氣氛圍下在室溫下攪拌所得混合物4.5 h，過濾，真空濃縮，且高真空乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.32 (ddt, J= 6.5, 4.3, 1.9 Hz, 1H), 3.98 - 3.78 (m, 4H), 3.56 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 2.19 (dtd, J= 13.7, 8.4, 6.4 Hz, 1H), 2.05 - 1.92 (m, 1H), 1.79 (s, 2H), 1.34 (d, J= 7.0 Hz, 3H)。LCMS： m/z= 159.92 (M+H)，t R= 0.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image425
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)- 四氫呋喃 -3- 基 酯 .在-78℃下向(R)-四氫呋喃-3-基-L-丙胺酸酯(1.66 g，10.44 mmol)於DCM (40 mL)中之溶液中快速一次性添加二氯磷酸苯酯(1.56 mL，10.44 mmol)。接著在-78℃下經5 min添加三乙胺(1.45 mL，10.44 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(1.45 g，10.44 mmol)且經5 min添加三乙胺(1.45 mL，10.44 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物2 h。在用DCM稀釋之後，將混合物用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 5.29 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 4H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.97 - 1.85 (m, 1H), 1.44 - 1.37 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.24, -3.26。LCMS： m/z= 437.02 (M+H)，t R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 中間物58. (氯(苯氧基)硫代磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image427
在氬氣氛圍下在-78℃下，將硫代磷醯氯(5.08 mL，50.0 mmol)及三乙胺(6.97 mL，50.0 mmol)依序添加至苯酚(4.70 mg，50.0 mmol)於TBME (72 mL)中之溶液中。接著使反應混合物升溫至RT。1 h後，過濾所得混合物，且減壓濃縮濾液。將殘餘物溶解於二氯甲烷(72 mL)中，並添加L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(6.97 mg，50.0 mmol)。將所得懸浮液冷卻至-78℃，且逐滴添加三乙胺(13.9 mL，100 mmol)。接著使反應混合物升溫至RT。16 h後，減壓濃縮反應混合物，且將TBME (100 mL)添加至殘餘物中。藉由真空過濾移除所產生的白色固體，且減壓濃縮濾液，得到產物，其直接用於下一步驟中。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 7.45 - 7.12 (m, 5H), 4.67 - 4.44 (m, 1H), 4.44 - 4.24 (m, 1H), 3.81 (s, 1.5H), 3.78 (s, 1.5H), 1.53 (app t, J= 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 64.78 (s), 64.63 (s)。 中間物59. ((((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯及((((S)-1-環己氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image429
向氯化(S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-銨中間物11 (680 mg，3.27 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(838 mg，3.27 mmol)。使所得混合物在冰浴中冷卻，且經30 min添加含三乙胺(1.0 mL，6.54 mmol)之THF (2 mL)。在冰浴下攪拌所得混合物1.5 h，並且在冰浴下一次性添加氯化(S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-銨(687 mg，3.27 mmol)且經30 min添加含三乙胺(1.0 mL，6.54 mmol)之THF (2 mL)。在冰浴下攪拌所得混合物1.5 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.20 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.15 - 3.91 (m, 4H), 3.60 (m, 2H), 1.91 - 1.77 (m, 2H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.45 - 1.23 (m, 15H), 0.88 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ 8.04。LCMS：MS m/z= 528.10 [M+1]。 中間物60. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-環己酯
Figure 02_image431
2- 胺基丙酸 (S)- 環己酯鹽酸鹽 .將L-丙胺酸(891 mg，10 mmol)與環己醇(10 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(12.7 mL，100 mmol)，並攪拌20 min。將反應混合物加熱至60℃並攪拌16小時。將反應物減壓濃縮，且與甲苯共沸(5×)，得到油狀物。添加己烷(100 mL)並攪拌15小時，得到固體，收集該固體，用己烷(100 mL)洗滌，且高真空乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.45 (s, 3H), 4.77 (tt, J= 8.4, 3.7 Hz, 1H), 4.02 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 1.71 (m, 4H), 1.53 - 1.17 (m, 9H)。
Figure 02_image433
L- 丙胺酸二胺基磷酸 4- 硝基苯基 -N,N'- 環己酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加2-胺基丙酸(S)-環己酯鹽酸鹽(415 mg，2 mmol)。逐滴添加三乙胺(698 μL，5 mmol)並攪拌2小時。反應物用二氯甲烷(15 mL)稀釋，且用2%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.30 - 8.13 (m, 2H), 7.49 - 7.27 (m, 2H), 5.50 (m, 2H), 4.62 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 1.67 (m, 8H), 1.51 - 1.18 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 9.50。MS m/z= 526.0 [M+1], 524.1 [M-1]。 中間物61. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-異丙酯
Figure 02_image435
向L-丙胺酸異丙酯HCl鹽(1.97 g，11.72 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5 g，5.86 mmol)。將所得混合物冷卻至約0℃，且逐滴添加三乙胺(2.37 g，23.44 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物約30 min，且攪拌隔夜。反應混合物接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 445.96 [M+1]。 中間物62. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-環丁基甲酯
Figure 02_image437
向L-丙胺酸環丁基甲酯HCl鹽(1.51 g，7.8 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1 g，3.9 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(1.58 g，15.6 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且攪拌隔夜。反應混合物接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 497.98 [M+1]。 中間物63. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己酯
Figure 02_image439
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己酯 .在RT下將4-二甲基胺基吡啶(2.84 g，23 mmol)添加至((1r,4r)-4-羥基環己基)胺基甲酸三級丁酯(4.00 g，19.0 mmol)及((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(4.98 g，22.0 mmol)以及EDCI (3.13 g，20.0 mmol)於乙腈(100 mL)中之溶液中。4 h後，反應混合物用二氯甲烷(200 mL)稀釋，用鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-50%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.29 (br d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.78 - 4.60 (m, 1H), 4.47 - 4.19 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 2.08 - 1.89 (m, 4H), 1.54 - 1.34 (m, 14H), 1.28 - 1.16 (m, 2H)。LCMS：MS m/z= 420.99 [M+1]。
Figure 02_image441
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己酯 .在氬氣氛圍下在RT下將氫氣氣球連接至燒瓶，該燒瓶含有((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己酯(1.96 g，4.66 mmol)及鈀/碳(10%重量，2.0 g)於四氫呋喃(50 mL)中之溶液。將容器抽成真空並用氫氣氛圍重新填充(3 ×)，且劇烈攪拌反應混合物。1.5 h後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，且減壓濃縮濾液，得到粗產物Cbz脫除保護基物質。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷(23 mL)中，且使所得混合物冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(0.70 mL，4.7 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h後，接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.77 - 4.58 (m, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.18 - 3.99 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.44 (br s, 1H), 2.07 - 1.87 (m, 4H), 1.52 - 1.36 (m, 14H), 1.30 - 1.16 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ -3.15 (s)。LCMS：MS m/z= 563.88 [M+1]。 中間物64. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯 方法1.
Figure 02_image443
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將Cbz-L-丙胺酸(223 mg，1.00 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將反式-1-(Boc-胺基)-4-(羥甲基)環己烷(229 mg，1.00 mmol)及EDCI (230 mg，1.2 mmol)添加至反應物中，接著攪拌25 min。一次性添加DMAP (122 mg，1 mmol)，且攪拌反應物4 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 5 mL)洗滌，接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.29 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.47 - 4.24 (m, 2H), 3.96 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 3.37 (bs, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.58 (m, 2H), 1.44 (m, 12H), 1.10 (m, 4H)。
Figure 02_image445
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(348 mg，0.800 mmol)溶解於12 mL無水四氫呋喃中。將Degussa型10%鈀/碳(25 mg)添加至反應物中，且接著在氫氣氛圍下攪拌3 h。濾出鈀/碳，且濾液不經進一步純化即用於下一反應中。將二氯磷酸苯酯(119 µL，0.800 mmol)溶解於15 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。接著將上述濾液逐滴添加至反應溶液中，且接著攪拌30 min。逐滴添加三乙胺(120 µL，0.88 mmol)並攪拌1 h。一次性添加對硝基苯酚(100 mg，0.72 mmol)。逐滴添加三乙胺(123 µL，0.88 mol)，且在RT下攪拌反應混合物2 h。反應混合物接著用二氯甲烷(10 mL)稀釋且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 4.35 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (m, 2H), 3.85 (t, J= 10.6 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.48 - 1.36 (m, 12H), 1.15 - 0.98 (m, 4H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 3.12, 3.13。LCMS：MS m/z= 478.2 [M+1]。 方法2.
Figure 02_image447
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .在RT下向Z-Ala-OH (489 g，2.18 mmol)於乙腈(22 mL)中之溶液中添加反式-1-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-(羥甲基)環己烷(510 mg，2.18 mmol)，接著添加 N-(3-二甲基胺基丙基)- N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(509 g，2.62 mmol)。30 min後，添加4-(二甲基胺基)吡啶(267 mg，2.18 mmol)。18 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應物，且用10%檸檬酸水溶液(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-50%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.29 (m, 5H), 5.28 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.46 - 4.27 (m, 2H), 3.96 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 3.37 (s, 1H), 2.03 (s, 2H), 1.78 (s, 2H), 1.56 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.42 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.08 (t, J= 9.7 Hz, 4H)。LCMS：MS m/z= 434.87 [M+1]，t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.96 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Figure 02_image449
L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將鈀/碳(198 mg，10 wt%)添加至經氬氣吹掃的((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(719 g，1.65 mmol)於四氫呋喃(24 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下攪拌。1 h後，經由矽藻土過濾混合物，用四氫呋喃沖洗過濾器，且減壓移除揮發物，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 4.38 (s, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 2H), 3.55 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 3.38 (s, 1H), 2.04 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 1.83 - 1.73 (m, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.44 (s, 10H), 1.34 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.09 (t, J= 10.0 Hz, 4H)。LCMS：MS m/z= 300.93 [M+1]，t R= 0.65 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image451
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .在0℃下經15 min向含L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(553 mg，1.65 mmol)之四氫呋喃(24 mL)中緩慢添加二氯磷酸苯酯(247 μL，1.65 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之溶液。在添加完成之後，逐滴添加三乙胺(0.26 mL，1.82 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(240 mg，1.65 mmol)及三乙胺(0.26 mL，1.82 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。1 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，且用水(3 × 75 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.23 (ddd, J= 9.3, 1.3, 0.6 Hz, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 4.36 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.96 - 3.90 (m, 2H), 3.84 (t, J= 10.6 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.02 (s, 2H), 1.83 - 1.68 (m, 2H), 1.57 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (dd, J= 7.1, 3.2 Hz, 3H), 1.06 (t, J= 9.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.13 (d, J= 2.9 Hz)。LCMS：MS m/z= 577.8 [M+1]，t R= 1.28 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 6.35 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物65. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-丁酯
Figure 02_image453
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸丁酯 .將Boc-L-丙胺酸(380 mg，2.0 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將1-丁醇(920 µL，10.0 mmol)及EDCI (460 mg，2.4 mmol)添加至反應物中，接著攪拌15 min。一次性添加DMAP (240 mg，2.0 mmol)，且攪拌反應物14 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.04 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 - 4.07 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (m, 5H), 0.93 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image455
L- 丙胺酸二胺基磷酸 4- 硝基苯基 -N,N'- 丁 酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸丁酯(291 mg，1.18 mmol)溶解於7 mL含4 M HCl之二㗁烷中，並攪拌1 h。將反應混合物減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(152 mg，0.59 mmol)，且攪拌反應物10 min。將三乙胺(270 µL，1.95 mmol)溶解於1 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應溶液中。攪拌反應混合物1 h。將三乙胺(270 µL，1.95 mmol)用700 µL無水二氯甲烷溶解，且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋，且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 2H), 4.19 - 3.98 (m, 5H), 3.80 - 3.61 (m, 1H), 3.58 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 4H), 1.45 - 1.30 (m, 10H), 0.93 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 7.93。LCMS：MS m/z= 474.0 [M+1]。 中間物66. (2S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-(((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)苯基)丙酸甲酯
Figure 02_image457
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(504 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(330 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。60分鐘後，在0℃下依序添加 N-苯甲氧羰基-L-酪胺酸甲酯(649 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，將反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.32 - 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 7.35 - 7.13 (m, 9H), 5.02 (s, 2H), 4.93 (pd, J= 6.3, 1.1 Hz, 1H), 4.43 (dd, J= 9.4, 5.2 Hz, 1H), 4.00 (dtd, J= 10.1, 7.7, 6.5 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.15 (dd, J= 14.0, 5.4 Hz, 1H), 2.93 (dd, J= 13.9, 9.6 Hz, 1H), 1.32 (td, J= 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.20 - 1.16 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -1.26, -1.49。LCMS：MS m/z= 644.11 [M+1]，t R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 6.21 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物67. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(N-嗎啉基)乙酯
Figure 02_image459
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(505 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸2-(N-嗎啉基)乙酯鹽酸鹽(496 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘後，在0℃下依序添加苯酚(185 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，將反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.28 - 8.14 (m, 2H), 7.41 - 7.29 (m, 4H), 7.24 - 7.16 (m, 4H), 6.87 - 6.81 (m, 1H), 4.14-4.04 (bs, 2H), 2.61-2.57 (bs, 4H), 2.45 - 3.40 (bs, 4H), 1.42 (dt, J= 6.3, 2.0 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ -2.70。LCMS：MS m/z= 480.27 [M+1]，t R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.23 min; HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Kinetx 2.6μ 100A C18，100 mm × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。 中間物68. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯
Figure 02_image461
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 2-( 二異丙基胺基 ) 乙酯 .在RT下將 N-(3-二甲基胺基丙基)- N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.06 g，10.8 mmol)添加至Z-Ala-OH (2.00 g，8.96 mmol)及2-(二異丙基胺基)乙醇(3.2 mL，17.9 mmol)於乙腈(125 mL)中之溶液中。10 min後，添加4-(二甲基胺基)吡啶(1.09 g，8.96 mmol)。2天後，將反應混合物濃縮至一半體積，且用乙酸乙酯(100 mL)稀釋混合物，並且用飽和碳酸鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 7.48 - 7.23 (m, 5H), 5.96 (s, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.30 - 4.00 (m, 3H), 2.28 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 2.14 (s, 6H), 1.73 (p, J= 6.9 Hz, 2H), 1.34 (d, J= 7.3 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 351.26 [M+1]，t R= 1.05 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.10 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Figure 02_image463
L- 丙胺酸 2-( 二異丙基胺基 ) 乙酯 .將鈀/碳(587 mg，10 wt%)添加至經氬氣吹掃的((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯(1.93 g，5.52 mmol)於乙醇(50 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下攪拌。18小時後，經由矽藻土過濾混合物，用乙酸乙酯沖洗過濾器，且減壓移除揮發物，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 4.06 - 3.90 (m, 2H), 3.43 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.01 (hept, J = 6.5 Hz, 2H), 2.65 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.22 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.6 Hz, 12H)。LCMS：MS m/z= 217.01 [M+1]，t R= 0.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image465
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 二異丙基胺基 ) 乙酯 .在0℃下，經15分鐘將含L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯(511 mg，2.43 mmol)之四氫呋喃(7 mL)逐滴添加至二氯磷酸苯酯(0.36 mL，2.43 mmol)於四氫呋喃(25 mL)中之溶液中。在添加完成之後，逐滴添加三乙胺(0.36 mL，2.43 mmol)。90 min後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(337 mg，2.43 mmol)及三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。17 h後，反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用水(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 8.29 - 8.18 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.30 - 7.21 (m, 3H), 4.71 - 4.52 (m, 1H), 4.12 - 3.99 (m, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 3H), 3.06 - 2.86 (m, 2H), 2.56 (td, J= 7.0, 3.8 Hz, 2H), 1.31 (ddd, J= 7.1, 4.7, 1.1 Hz, 4H), 0.94 (d, J= 6.5 Hz, 13H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ -2.15, -2.30。LCMS：MS m/z= 494.25 [M+1]，t R= 1.27 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.97 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物69. (2S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-(((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)苯基)丙酸異丙酯
Figure 02_image467
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 酪胺酸異丙酯 .將氯甲酸苯甲酯(0.94 mL，6.58 mmol)逐滴添加至L-酪胺酸異丙酯(1.0 g，4.48 mmol)於丙酮(4.5 mL)及7 wt%碳酸鈉水溶液(4.5 mL)中之混合物中。2小時後，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應混合物，且用水(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.39 - 7.20 (m, 5H), 7.06 - 6.97 (m, 2H), 6.74 - 6.62 (m, 2H), 5.05 (d, J= 2.6 Hz, 2H), 4.94 (p, J= 6.3 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 8.6, 6.1 Hz, 1H), 2.99 (dd, J= 13.9, 6.1 Hz, 1H), 2.84 (dd, J= 13.9, 8.6 Hz, 1H), 1.22 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 1.14 (d, J= 6.3 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 357.87 [M+1]，t R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.19 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Figure 02_image469
(2S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3-(4-(((((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 苯基 ) 丙酸異丙酯 .在0℃下將含L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(97.2 mg，0.70 mmol)之二氯甲烷(8.0 mL)添加至二氯磷酸4-硝基苯酯(179.7 mg，0.70 mmol)於二氯甲烷(7.5 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.22 mL，1.57 mmol)。60分鐘後，在0℃下依序添加含((苯甲氧基)羰基)-L-酪胺酸異丙酯(250.9 mg，0.70 mmol)之二氯甲烷(8.0 mL)及三乙胺(0.11 mL，0.78 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。20分鐘後，反應混合物用水(2 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.43 (ddd, J= 16.0, 9.2, 1.1 Hz, 2H), 7.36 - 7.09 (m, 9H), 5.03 (s, 2H), 4.97 (p, J= 6.2 Hz, 1H), 4.35 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.14 - 3.95 (m, 1H), 3.62 (d, J= 4.5 Hz, 3H), 3.12 (dt, J= 12.6, 5.9 Hz, 1H), 2.92 (t, J= 11.6 Hz, 1H), 1.35 - 1.30 (m, 3H), 1.22 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.16 (d, J= 6.2 Hz, 4H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -1.31, -1.52。LCMS：MS m/z= 644.07 [M+1]，t R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 6.17 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 中間物70. ((2-(甲硫基)乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image471
將二氯磷酸4-硝基苯酯(512 mg，2 mmol)與10 mL無水二氯甲烷混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(335 mg，2 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(927 µL，6.6 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1 mL)中，且逐滴添加至反應物中，並且攪拌反應物60 min。一次性添加2-(甲硫基)乙醇(74 µL，2 mmol)，且攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 2H), 5.02 (m, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.07 - 3.94 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 2H), 2.14 (m, 3H), 1.40 (m, 3H), 1.29 - 1.19 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.08, 2.20。LCMS：MS m/z= 834.5 [2M+Na]；405.1 [M-1]，t R= 1.33 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.60 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物71. ((2-甲氧基乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image473
將二氯磷酸4-硝基苯酯(512 mg，2 mmol)與10 mL無水二氯甲烷混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(335 mg，2 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(927 µL，6.6 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1 mL)中，且逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應混合物60 min。一次性添加2-甲氧基乙醇(158 µL，2 mmol)，且攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.25 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 2H), 4.06 - 3.82 (m, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 2H), 3.37 (m, 3H), 1.41 - 1.34 (m, 3H), 1.27 - 1.18 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.52, 2.69。LCMS：MS m/z= 391.0 [M+1]；389.1 [M-1]，t R= 1.24 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.29 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物72. ((2-(甲基磺醯基)乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image475
將氧氯化磷(280 µL，3 mmol)溶解於無水四氫呋喃(10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將2-(甲基磺醯基)乙醇(280 µL，3 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1 h。一次性添加L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(503 mg，3 mmol)，且攪拌反應混合物1 h。將三乙胺(1.38 mL，9.9 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物90 min。一次性添加對硝基苯酚(417 mg，3 mmol)。添加三乙胺(460 µL，3.3 mmol)。攪拌反應混合物16 h。
反應混合物接著用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用水(5 × 15 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.28 - 8.16 (m, 2H), 7.44 - 7.32 (m, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.71 - 4.51 (m, 2H), 4.06 - 3.85 (m, 2H), 3.51 - 3.33 (m, 2H), 2.96 (m, 3H), 1.40 - 1.35 (m, 3H), 1.27 - 1.20 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.06, 2.29。LCMS：MS m/z= 439.0 [M+1]；t R= 1.18 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.08 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。 中間物73. ((全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯單一異構體
Figure 02_image477
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(12.41 g，66 mmol)及2-(2-乙氧基乙氧基)乙-1-醇(8.00 g，60 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之經攪拌溶液中添加 N-甲基嗎啉(19.67 mL，179 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.15 g，1.2 mmol)及三丙基膦酸環酐(42.6 mL，72 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用水(50 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(2 × 40 mL)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 40 mL)洗滌兩次，且用鹽水(50 mL)洗滌一次，經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用另外的二氯甲烷洗滌該矽膠層。合併之有機物經減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.27 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.64 - 3.56 (m, 2H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.23 (d, J= 7.4 Hz, 3H), 1.09 (t, J= 7.0 Hz, 3H)。
Figure 02_image479
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯單一異構體 .將中間物(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯(18.3 g，59.93 mmol)溶解於50 mL含4 M HCl之1,4-二㗁烷中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮，並與甲苯共蒸餾，得到固體，高真空乾燥該固體1小時。將固體懸浮於二氯甲烷(100 mL)中，且在-78℃下依序添加二氯磷酸苯酯(9.81 mL，65.92 mmol)及三乙胺(18.28 mL，131.84 mmol)，並且在室溫下攪拌所得混合物2小時。將反應混合物冷卻至0℃，且接著依序添加五氟苯酚(11.03 g，59.93 mmol)及三乙胺(10.80 mL，78.05 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。3小時後，將反應混合物冷卻至0℃並濾出固體，用飽和氯化銨水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌濾液。有機物經硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠層過濾，用1:1乙酸乙酯及二氯甲烷混合物(100 mL)洗滌該矽膠層。合併之有機物經減壓濃縮，得到21.7 g粗產物(基於NMR，呈關於磷之兩種異構體之混合物)。將固體溶解於最少量的沸騰二異丙基醚中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。濾出固體產物，且用冷的二異丙基醚(2 × 20 mL)及己烷(3 × 40 mL)洗滌，得到產物(基於NMR，關於磷之單一異構體)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 6.92 (dd, J= 14.2, 9.9 Hz, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 1.29 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t, J= 7.0 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6) δ -154.24 (d, J= 21.5 Hz, 2F), -160.86 (t, J= 23.1 Hz, 1F), -163.68 (t, J= 21.7 Hz, 2F)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 0.40。LCMS：MS m/z= 528.06 [M+1]，t R= 1.64 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。 中間物74. ((S)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image481
將中間物25 (1.3 g，2.90 mmol)懸浮於二異丙基醚(3 mL)中，且在RT下添加對硝基苯酚(14 mg，0.1 mmol)及DBU (0.05 mL，0.335 mmol)。攪拌所得混合物4 h，且添加1 N鹽酸水溶液及乙酸乙酯。分離有機層，且經無水硫酸鈉乾燥，並且減壓濃縮。將所得殘餘物溶解於二異丙基醚(2 mL)中，且用超音波處理以使固體分散。藉由真空過濾收集固體，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.27 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 4.68 (dt, J = 8.9, 4.6 Hz, 1H), 4.02 (dq, J = 9.9, 7.2 Hz, 1H), 1.80 - 1.64 (m, 5H), 1.52 (s, 1H), 1.57 - 1.46 (m, 1H), 1.44 - 1.22 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -1.32。MS m/z= 449 (M+H) +。 B . 化合物實例1. 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(S)-異丙酯
Figure 02_image483
將中間物1 (50 mg，0.172 mmol)及中間物18 (84 mg，0.206 mmol)混合於無水N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。一次性添加氯化鎂(36 mg，0.378 mmol)。將反應混合物在50℃下加熱。添加N,N-二異丙基乙胺(75 μL，0.43 mmol)，且在50℃下攪拌反應物4.5小時。使反應混合物冷卻，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-2-5%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.91 - 4.84 (m, 1H), 4.62 (dd, J= 5.6, 5.0 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.85 (dq, J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 1.25 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.15 (t, J= 6.4 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.31。MS m/z= 561.0 [M+1], 559.0 [M-1]。 實例2. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環丁基甲酯
Figure 02_image485
將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及中間物15 (60 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至60℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在60℃下攪拌反應物17 h。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(330 μL)且攪拌20 h。反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加1 N氫氧化鈉溶液，得到pH值10。收集有機層，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (dd, J= 4.5, 2.3 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 4.5, 2.4 Hz, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.62 (q, J= 5.5 Hz, 1H), 4.54 - 4.28 (m, 3H), 4.10 - 3.80 (m, 3H), 2.65 - 2.45 (m, 1H), 2.08 - 1.62 (m, 6H), 1.26 (d, J= 7.2Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.25, 3.24。MS m/z= 587.2 [M+1], 585.2 [M-1]。 實例3. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-苯基丙酸(2S)-乙酯
Figure 02_image487
在RT下向中間物4 (52.0 mg，0.121 mmol)、中間物19 (68.0 mg，0.145 mmol)及氯化鎂(17.2 mg，0.181 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.052 mL，0.301 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物30 min。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.200 mL，2.4 mmol)。1 h後，使反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.27 min，MS m/z= 623.00 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.88 (m, 3H), 7.37 - 6.84 (m, 12H), 6.71 (t, J= 4.2 Hz, 2H), 6.22 (ddd, J= 23.7, 12.9, 10.5 Hz, 1H), 5.36 (dd, J= 9.2, 6.1 Hz, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.16 (dd, J= 16.2, 5.3 Hz, 1H), 4.09 - 3.83 (m, 5H), 2.93 (dt, J= 14.3, 7.3 Hz, 1H), 2.78 (m, 1H), 1.01 (t, 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.85 (s), 2.86 (s)。 實例4. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環己酯
Figure 02_image489
在室溫下向中間物4 (99 mg，0.30 mmol)、中間物25 (201 mg，0.45 mmol)及MgCl 2(43 mg，0.45 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.75 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到中間物，將其溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.1 mL)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-80%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.5H), 7.78 (s, 0.5H), 7.42 - 7.05 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.64 (m, 2H), 4.57 - 4.25 (m, 3H), 3.86 (m, 1H), 1.91 - 1.61 (m, 4H), 1.61 - 1.09 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.3。MS m/z= 601 (M+H) +。
非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%乙醇30%)純化。 實例5. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image491
實例4之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.69 (td, J= 8.8, 4.2 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.53 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.86 (dq, J= 9.4, 7.1 Hz, 1H), 1.85 - 1.62 (m, 4H), 1.58 - 1.20 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.31。 實例6. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image493
實例4之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.71 - 4.56 (m, 2H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.87 (dq, J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 1.80 - 1.61 (m, 4H), 1.55 - 1.21 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.31。 實例7.
Figure 02_image495
將中間物2 (60 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2 mL)中。一次性添加氧氯化磷(25 μL，0.278 mmol)並攪拌30 min。添加更多氧氯化磷(100 μL)並攪拌30 min。添加2-胺基丙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(87 mg，0.417 mmol)及三乙胺(116 μL，0.834 mmol)，並攪拌30 min。添加更多2-胺基丙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(500 mg)。添加三乙胺，得到pH值9。攪拌反應物16小時，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×20 mL)、5%檸檬酸水溶液(20 mL)、接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，添加12 M鹽酸(400 μL)，且攪拌混合物4小時。反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 1H), 4.49 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 11.1, 7.1 Hz, 1H), 4.21 (dd, J= 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 4H), 3.94 - 3.84 (m, 2H), 1.58 - 1.29 (m, 10H), 0.98 - 0.82 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 13.61。MS m/z= 682.1 [M+1], 680.1 [M-1]。 實例8. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環丙基甲酯
Figure 02_image497
在室溫下向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物20 (133 mg，0.32 mmol)及MgCl 2(30 mg，0.32 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.092 mL，0.53 mmol)。在60℃下攪拌所得混合物15 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.3 mL)。在室溫下攪拌混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.10 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m , 1H), 4.58 - 4.24 (m, 3H), 4.00 - 3.69 (m, 3H), 1.27 (m, 3H), 1.17 - 0.95 (m, 1H), 0.49 (m, 2H), 0.29 - 0.15 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.29, 3.22。MS m/z573 (M+H) +。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image499
實例9. 實例8之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd, J= 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.22 - 7.06 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 3H), 1.26 (dd, J= 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.15 - 1.04 (m, 1H), 0.58 - 0.45 (m, 2H), 0.32 - 0.18 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.30。 實例10. 實例8之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.29 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.42 (dd, J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.98 - 3.82 (m, 2H), 3.78 (dd, J= 11.4, 7.3 Hz, 1H), 1.27 (dd, J= 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.11 - 0.98 (m, 1H), 0.52 - 0.45 (m, 2H), 0.25 - 0.14 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。 實例11. 特戊酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image501
在RT下向中間物4 (22.0 mg，0.066 mmol)、中間物21 (28.1 mg，0.066 mmol)及氯化鎂(6.3 mg，0.166 mmol)之混合物中添加乙腈(0.50 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.03 mL，0.066 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.077 mL，0.93 mmol)。1 h後，反應混合物用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。MS m/z= 575.00 [M+H]。
(S)及(R)非對映異構體之分離. 產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image503
實例12. 實例11之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 2H), 3.96 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.14 (dt, J = 11.8, 5.7 Hz, 2H), 1.12 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 5.24 (s)。MS m/z= 575.00 [M+H]。 實例13. 實例11之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.77 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 10.9, 6.1 Hz, 1H), 4.33 (dd, J = 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.15 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 5.05 (br s)。MS m/z= 575.00 [M+H]。 實例14.
Figure 02_image505
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物60 (95 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在冰浴中攪拌60 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值16。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.70 (m, 2H), 4.61 (dd, J= 5.7, 4.9 Hz, 1H), 4.49 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 1.88 - 1.63 (m, 8H), 1.58 - 1.25 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 13.64。MS m/z= 678.1 [M+1], 676.2 [M-1]。 實例15. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-1-甲基吡咯啶-3-基酯
Figure 02_image507
將中間物4 (99 mg，0.3 mmol)及中間物23 (162 mg，0.36 mmol)混合且溶解於2 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.9 mmol)。添加DIPEA (131 μL，0.75 mmol)，且在50℃下攪拌反應物5小時。
將反應物用EtOAc (15 mL)稀釋，且用水(4×15 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (7 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(500 μL)。在冰浴中攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用EtOAc (2×10 mL)萃取水性部分。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.18 - 4.98 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 3.89 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.69 - 2.54 (m, 2H), 2.32 (m, 4H), 2.23 - 2.08 (m, 1H), 1.78 (m, 1H), 1.27 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.28, 3.14。LCMS：MS m/z= 602.2 [M+1], 600.2 [M-1]，t R= 0.99 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 1.84 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.868 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例16. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
Figure 02_image509
以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物27 (129 mg，0.25 mmol)及中間物4 (55 mg，0.25 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 ( m, 1H), 5.50 (dd, J= 5.1, 1.9 Hz, 1H), 4.69 - 4.49 (m, 2H), 4.49 - 4.32 (m, 3H), 3.93 - 3.75 (m, 1H), 2.23 - 1.71 (m, 5H), 1.44 - 1.20 (m, 7H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.28, 3.22。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.31 -75.40 (m)。MS m/z= 669 [M+H]。
產物藉由使用30%乙醇之SFC (AD-H4.6X100m管柱)分離。 實例17. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯.
Figure 02_image511
實例16之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (t, J= 7.9 Hz, 2H), 7.21 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (q, J= 5.2 Hz, 2H), 4.52 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 3.83 (dq, J= 9.1, 7.1 Hz, 1H), 2.10 (m, 1H), 1.96 (m, 4H), 1.38 (m, 4H), 1.23 (dd, J= 7.1, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.29。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.41 (d, J= 8.6 Hz)。 實例18. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
Figure 02_image513
實例16之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.58 (m, 2H), 4.43 (m, 2H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.86 (dq, J= 9.9, 7.4 Hz, 1H), 2.14 - 1.81 (m, 5H), 1.32 (m, 4H), 1.24 (dd, J= 7.1, 1.0 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.33 (d, J= 8.5 Hz)。
以與針對實例3所描述類似的方式，亦由中間物29 (701 mg，1.36 mmol)及中間物4 (300 mg，0.91 mmol)獲得產物。 實例19. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-甲基哌啶-4-基酯
Figure 02_image515
在室溫下向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物30 (293 mg，0.317 mmol)及MgCl 2(30 mg，0.317 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.09 mL，0.528 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於乙腈(3 mL)中，且添加濃HCl (0.5 mL)。攪拌所得混合物2 h，真空濃縮且凍乾，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.85 (m, 1H), 7.41 - 7.12 (m, 5H), 6.97 (m, 1H), 6.79 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.31 (m, 3H), 3.98 (m, 1H), 3.66(m, 5H), 2.82 (m, 2H), 2.10 (m, 4H), 1.30 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32, 3.10。LCMS：MS m/z= 616.24 [M+1-HCl]；t R= 0.54 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 實例20. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(四氫-2H-哌喃-4-基)甲酯
Figure 02_image517
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物31 (84 mg，0.18 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (158 μL，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物2小時，添加更多氯化鎂(50 mg)，且在50℃下攪拌16小時。
將反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.41 - 7.07 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.57 - 5.40 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 3.87 (m, 5H), 3.31 (m, 2H), 1.94 - 1.72 (m, 1H), 1.63 - 1.46 (m, 2H), 1.34 - 1.16 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.23 (s), 3.19 (s)。MS m/z= 617.1 [M+1]；615.0 [M-1]。 實例21. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
Figure 02_image519
以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物32 (116 mg，0.23 mmol)及中間物4 (51 mg，0.15 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.18 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 - 6.69 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.47 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.93 - 3.76 (m, 1H), 1.93 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.24 (m, 5H), 1.13 - 0.89 (m, 3H), 0.84 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.35, 3.28。MS m/z= 657 [M+H]。
混合物藉由Chiralpak SFC (Chiralpak ID 21×250 mm管柱，30%甲醇)分離。 實例22. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
Figure 02_image521
實例21之第一溶離非對映異構體。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.59 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.51 (tt, J= 11.3, 4.5 Hz, 1H), 4.46 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.6 Hz, 1H), 3.89 - 3.81 (m, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 2H), 1.75 (t, J= 12.0 Hz, 2H), 1.31 - 1.18 (m, 5H), 1.12 - 0.89 (m, 3H), 0.83 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。 實例23. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
Figure 02_image523
實例21之第二溶離非對映異構體。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.18 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.59 - 4.43 (m, 3H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.82 (q, J= 7.9 Hz, 1H), 1.94 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.36 - 1.20 (m, 5H), 1.13 - 0.94 (m, 3H), 0.85 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32。 實例24. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image525
在RT下將乙腈(2.5 mL)添加至中間物4 (200 mg，0.604 mmol)、中間物16 (280 mg，0.604 mmol)及氯化鎂(57 mg，0.60 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持5 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.263 mL，0.604 mmol)。22 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.5 mL)。1 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.78 (s, 0.6H), 7.75 (s, 0.4H), 7.40 - 7.26 (m, 5H), 6.85 - 6.80 (m, 1H), 6.75 - 6.69 (m, 1H), 5.54 - 5.48 (m, 2H), 5.06 (d, J= 7.5 Hz, 1.2H), 4.99 (d, J= 7.3 Hz, 0.8H), 4.64 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.20 (m, 2H), 4.07 - 3.77 (m, 2H), 1.54 - 1.21 (m, 8H), 0.95 - 0.77 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.90 (s), 7.82 (s)。LCMS：MS m/z= 617.14 [M+1]，t R= 1.26 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.057 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。 實例25. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image527
在室溫下向中間物4 (700 mg，2.113 mmol)、中間物17 (998 mg，2.218 mmol)及氯化鎂(302 mg，3.169 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(8.5 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.92 mL，5.282 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 14%甲醇/二氯甲烷作為溶離劑)純化。將所獲得的純物質溶解於無水乙腈(10 mL)中，且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(4 mL，48 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用水稀釋。用3 N氫氧化鈉中和溶液，且用二氯甲烷萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 3H), 4.04 - 3.82 (m, 3H), 1.43 (dq, J = 12.5, 6.1 Hz, 1H), 1.37 - 1.23 (m, 7H), 0.84 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.73。MS m/z= 603 [M+1]。 實例26. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸((1r,4S)-4-(三氟甲基)環己基)甲酯
Figure 02_image529
在室溫下向中間物4 (0.06 g，0.181 mmol)、中間物33 (0.115 g，0.217 mmol)及氯化鎂(0.028 g，0.29 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.079 mL，0.453 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 14%甲醇/二氯甲烷作為溶離劑)純化。將所獲得的純物質溶解於無水乙腈(2 mL)中，且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.1 mL，1.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉溶液(1 mL)稀釋。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.82 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 5H), 6.81 - 6.67 (m, 2H), 6.54 (s, 2H), 5.50 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.72 - 4.26 (m, 6H), 4.05 - 3.69 (m, 3H), 2.17 - 1.93 (m, 1H), 1.88 (dt, J = 13.3, 3.6 Hz, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.55 (dtq, J = 12.0, 5.8, 3.0 Hz, 1H), 1.33 - 1.14 (m, 5H), 1.10 - 0.86 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.77, - 2.68。 19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.72 (d, J = 8.7 Hz)。MS m/z= 683.20 [M+1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (AD-H 5μm 21 × 250mm，庚烷70%，乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image531
實例 27.實例26之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (s, 1H), 7.35 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.79 - 6.71 (m, 2H), 6.23 (s, 2H), 5.48 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.66 - 4.55 (m, 1H), 4.50 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.1, 6.5 Hz, 1H), 4.37 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 3.83 (m, 4H), 1.93 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 1.81 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 1.62 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 1.40 - 1.20 (m, 6H), 1.03 (q, J = 12.9 Hz, 2H)。 19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.83 (d, J = 8.8 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.59。MS m/z= 683.20 [M+1]。 實例 28.實例26之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.37 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.31 - 7.14 (m, 3H), 6.75 (s, 2H), 6.24 (s, 2H), 5.47 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.58 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.43 - 4.20 (m, 4H), 4.05 - 3.73 (m, 4H), 1.91 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 1.78 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.65 - 1.47 (m, 1H), 1.39 - 1.19 (m, 6H), 1.01 (t, J = 13.0 Hz, 2H)。 19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.83 (d, J = 8.8 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.67。MS m/z= 683.20 [M+1]。 實例29. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸乙酯
Figure 02_image533
向中間物4 (150 mg，0.45 mmol)、中間物34 (298 mg，0.68 mmol)及MgCl 2(65 mg，0.68 mmol)於THF (6 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.20 mL，1.13 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，用EtOAc (150 mL)稀釋，用鹽水(50 mL ×2)洗滌，乾燥，真空濃縮，再溶解於乙腈(6 mL)中，且在冰浴中添加濃HCl (0.3 mL)。將所得混合物在冰浴中攪拌1 h且在室溫下攪拌1 h，用飽和NaHCO 3(2 mL)處理，藉由HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，5-70%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.31 (d, J= 7.7 Hz, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.40 (dd, J= 10.9, 6.2 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 4.11 - 3.98 (m, 2H), 3.87 (dd, J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 1.25 (dd, J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.16 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.26。LCMS：MS m/z= 547.12 [M+1]；t R= 0.76 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.03 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例30. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image535
向中間物4 (65 mg，0.196 mmol)、中間物59 (124 mg，0.235 mmol)及MgCl 2(40 mg，0.42 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.085 mL，0.490 mmol)。在約50℃下攪拌所得混合物約2 h，冷卻，藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於乙腈(2 mL)中，且在冰浴下添加濃HCl (0.1 mL)。接著在冰浴下攪拌所得混合物約2 h，且緩慢添加飽和NaHCO 3(2 mL)。所得混合物接著藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-80%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 (s, 1H), 6.81 - 6.67 (m, 2H), 6.48 (s, 2H), 5.53 - 5.44 (m, 2H), 4.71 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.13 - 3.69 (m, 7H), 1.72 (m, 4H), 1.58 - 1.19 (m, 17H), 0.88 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.68, 12.66。LCMS：MS m/z= 680.31 [M+1]。 實例31. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯
Figure 02_image537
向中間物4 (0.5 g，1.509 mmol)、中間物36 (0.905 g，1.66 mmol)及氯化鎂(0.206 g，2.264 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(7 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.657 mL，3.773 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用乙腈(11 mL)稀釋，且冷卻至0℃。添加濃鹽酸(1 mL，12 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物2 h。2 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用5 N氫氧化鈉水溶液中和。所得混合物用乙酸乙酯萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.38 - 7.12 (m, 5H), 6.85 (dd, J = 4.5, 1.8 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 4.5, 3.2 Hz, 1H), 5.49 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.63 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 4.55 - 4.30 (m, 3H), 3.98 - 3.86 (m, 3H), 3.91 - 3.76 (m, 2H), 3.07 - 2.86 (m, 4H), 2.32 - 2.17 (m, 2H), 1.61 (t, J = 12.5 Hz, 4H), 1.26 (ddd, J = 7.1, 3.5, 1.1 Hz, 4H)。 19F NMR (377 MHz, 甲醇- d 4 ) δ -71.22 (td, J = 9.8, 4.6 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.23, 3.18。LCMS：MS m/z= 349.86 [M+1]；t R= 0.70 min (次要異構體) - 0.72 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.525 min (次要異構體), 3.56 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例32. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯
Figure 02_image539
向中間物4 (50 mg，0.151 mmol)、中間物37 (116 mg，0.226 mmol)及MgCl 2(22 mg，0.226 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.574 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於ACN (2 mL)中，且添加濃HCl (0.1 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，20-65%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度)純化。濃縮後，將殘餘物溶解於EtOAc中，且用飽和NaHCO 3溶液洗滌，真空濃縮，再溶解於DCM中，且添加一滴濃HCl，產生白色沈澱。濃縮後，將殘餘物溶解於水-乙腈中且凍乾，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.91 (m, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 6H), 6.86 (m, 1H), 5.55 - 5.47 (m, 1H), 5.30 (m , 1H), 4.57 (m, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 3H), 4.06 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.32 - 3.09 (m, 2H), 2.19 (s, 2H), 1.40 - 1.23 (m, 8H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.19, 3.01, 2.97, 2.96。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -77.5。LCMS：MS m/z= 666.23 [M+1]，呈中性形式；t R= 0.68 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.35, 3.37, 3.38, 3.41 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例33. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-胺基環己酯
Figure 02_image541
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己酯 .在RT下將乙腈(4.5 mL)添加至中間物4 (300 mg，0.91 mmol)、中間物63 (510 mg，0.91 mmol)及氯化鎂(86 mg，0.91 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持20 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.39 mL，2.26 mmol)。3.5 h後，使反應混合物冷卻至RT，且用乙酸乙酯(200 mL)稀釋反應混合物，並且用飽和碳酸鈉水溶液(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-10%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 7.92 (s, 0.25H), 7.91 (s, 0.75H), 7.35 - 7.08 (m, 5H), 6.71 - 6.68 (m, 1H), 6.66 - 6.62 (m, 1H), 5.92 (br s, 2H), 5.65 - 5.60 (m, 1H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 5.10 (d, J= 6.7 Hz, 0.25H), 5.00 (d, J= 6.6 Hz, 0.75H), 4.69 - 4.57 (m, 1H), 4.51 - 4.27 (m, 3H), 4.06 - 3.92 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.41 (br s, 1H), 2.03 - 1.84 (m, 4H), 1.76 (br s, 3H), 1.44 (br s, 9H), 1.41 - 1.29 (m, 8H), 1.24 - 1.12 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ -3.15 (s)。LCMS：MS m/z= 756.11 [M+1]。
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4- 胺基環己酯 .在RT下將濃鹽酸溶液(12 M，0.47 mL)添加至((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己酯(470 mg，0.62 mmol)於乙腈(4.7 mL)中之溶液中。1 h後，將反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用飽和碳酸鈉水溶液中和至pH=7。減壓濃縮所得混合物，且將甲醇(4 mL)添加至殘餘物中。接著添加乙酸乙酯(2 mL)，且藉由過濾移除所產生固體。減壓濃縮濾液，且粗殘餘物藉由製備型HPLC (Gemini 5μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度0.1% TFA)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 8.03 (s, 0.75H), 7.99 (s, 0.25H), 7.42 - 7.12 (m, 6H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 5.57 - 5.51 (m, 1H), 4.74 - 4.60 (m, 1H), 4.56 - 4.49 (m, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 3H), 3.96 - 3.84 (m, 1H), 3.18 - 3.04 (m, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 4H), 1.57 - 1.42 (m, 4H), 1.33 - 1.28 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.36 (s), 3.24 (s)。LCMS：MS m/z= 616.07 [M+1]。 實例34.
Figure 02_image543
向中間物61 (161 mg，0.36 mmol)、中間物4 (100 mg，0.3 mmol)及MgCl 2(43 mg，0.45 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(98 mg，0.76 mmol)。在約50℃下攪拌所得混合物約2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在約室溫下攪拌約2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 1H), 4.91 - 4.85 (m, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.35 - 4.12 (m, 2H), 3.91 - 3.72 (m, 2H), 1.34 - 1.13 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.61。LCMS：MS m/z= 598.05 [M+1]。 實例35. 雙L-丙胺酸乙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯
Figure 02_image545
向中間物38 (100 mg，0.3 mmol)、中間物4 (151 mg，0.36 mmol)及MgCl 2(43 mg，0.45 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(98 mg，0.76 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 7.0 Hz, 1H), 4.23 - 3.99 (m, 5H), 3.86 (ddq, J = 19.6, 9.4, 7.1 Hz, 2H), 1.35 - 1.13 (m, 12H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.61。LCMS：MS m/z= 570.10 [M+1]，t R= 0.99 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.19 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例36. 雙L-丙胺酸環丁基甲酯磷酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯
Figure 02_image547
向中間物62 (132 mg，0.27 mmol)、中間物4 (80 mg，0.24 mmol)及MgCl 2(34 mg，0.36 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(78 mg，0.6 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 7.1 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.14 - 3.98 (m, 3H), 3.98 - 3.80 (m, 3H), 2.60 (dp, J = 22.0, 7.4 Hz, 2H), 2.10 - 1.95 (m, 4H), 1.94 - 1.64 (m, 8H), 1.39 - 1.17 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.54。LCMS：MS m/z= 650.12 [M+1]。 實例37. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸苯甲酯
Figure 02_image549
將中間物4 (83 mg，0.25 mmol)與中間物39 (126 mg，0.275 mmol)混合且溶解於2 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(71 mg，0.75 mmol)。接著添加DIPEA (87 μL，0.5 mmol)，且在60℃下攪拌反應物16 h。
添加更多中間物39 (30 mg)及DIPEA (52 µL)。在60℃下攪拌反應混合物6 h。接著將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)、接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (300 µL)，且在冰浴中攪拌反應物2 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，並且接著用鹽水洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.77 (m, 1H), 7.35 - 7.08 (m, 10H), 6.83 (m, 1H), 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.48 (m, 1H), 5.14 - 4.93 (m, 2H), 4.61 (m, 1H), 4.53 - 4.27 (m, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 1H), 1.26 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.22, 3.19。LCMS：MS m/z= 609.1 [M+1]；607.4 [M-1]，t R= 1.19 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.78 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.626 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例38.
Figure 02_image551
在RT下將乙腈(1 mL)添加至中間物4 (150 mg，0.453 mmol)、中間物40 (176 mg，0.453 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.453 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.197 mL，1.13 mmol)。2 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.25 mL)。1 h後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J =4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J =4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J =4.9 Hz, 1H), 4.64 (dd, J =5.6, 5.0 Hz, 1H), 4.51 (d, J =5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J =11.1, 6.9 Hz, 1H), 4.19 (dd, J =11.1, 5.6 Hz, 1H), 3.86 (ddd, J =14.7, 9.4, 7.2 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 1.30 (dd, J =7.2, 1.0 Hz, 3H), 1.25 (dd, J =7.2, 0.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 13.58 (s)。LCMS：MS m/z= 542.08 [M+1]，t R= 0.88 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 1.87 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 3.052 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例39. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image553
在RT下將乙腈(5 mL)添加至中間物4 (348 mg，1.05 mmol)、中間物41 (399 mg，1.05 mmol)及氯化鎂(100 mg，1.05 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.475 mL，2.63 mmol)。2.5 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.5 mL)。1 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.80 (s, 0.65H), 7.78 (s, 0.35H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.47 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 3H), 3.95 - 3.80 (m, 1H), 3.64 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 1.27 - 1.22 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.24 (s)。LCMS：MS m/z= 533.13 [M+1]，t R= 1.02 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.28 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 3.712 min (次要異構體), 3.775 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例40. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2-(甲硫基)乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image555
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物70 (67 mg，0.165 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.75 mmol)，且在RT下攪拌反應物36 h。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(300 µL)。在冰浴中攪拌反應混合物2 h。用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.92 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.40 - 4.21 (m, 2H), 4.17 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.85 - 3.72 (m, 1H), 2.72 (m, 2H), 2.09 (m, 3H), 1.29 (m, 3H), 1.25 - 1.21 (m, 3H), 1.17 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.74, 7.82。LCMS：MS m/z= 559.0 [M+1]；557.2 [M-1]，t R= 1.04 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.36 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.976, 4.022 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例41. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2-甲氧基乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image557
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物71 (64 mg，0.165 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.375 mmol)，且在RT下攪拌反應物20 h。
反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(300 µL)。在冰浴中攪拌反應混合物2 h。用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液。攪拌混合物10 min。有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.89 - 6.83 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.01 - 4.84 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 2H), 3.77 (m, 1H), 3.63 - 3.51 (m, 2H), 3.35 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.17 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.98, 8.04。LCMS：MS m/z= 543.1 [M+1]；541.2 [M-1]，t R= 0.96 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.18 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.599, 3.619 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例42. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2-(甲基磺醯基)乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image559
將中間物4 (66 mg，0.2 mmol)及中間物72 (100 mg，0.22 mmol)混合且溶解於2 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(57 mg，0.6 mmol)。添加DIPEA (87 µL，0.5 mmol)，且在35℃下攪拌反應物16 h。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100% B/己烷(B = 含3% MeOH之乙酸乙酯))純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。
將所得物質溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(250 µL)。在冰浴中攪拌反應物2 h。用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)。攪拌混合物10 min。有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.82 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.03 - 4.85 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.54 - 4.44 (m, 2H), 4.43 - 4.21 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.57 - 3.36 (m, 2H), 2.97 (m, 3H), 1.30 (m, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79, 7.92。LCMS：MS m/z= 591.1 [M+1]，t R= 0.92 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.07 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.435 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例43. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(二甲基胺甲醯基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image561
在室溫下向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物43 (160 mg，0.317 mmol)及MgCl 2(30 mg，0.317 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.528 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於乙腈(2 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。攪拌混合物2 h，在冰浴下添加NaHCO 3水溶液(2 mL)，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.23 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.00 - 4.81 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.54 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 3.07 (d, J= 3.4 Hz, 3H), 2.95 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.22 - 1.12 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.18。LCMS：MS m/z= 632.32 [M+1]；t R= 0.67 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.84 min (18%), 3.85 (81%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min 實例44. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯
Figure 02_image563
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯. 向中間物44 (133 mg，0.31 mmol)、中間物4 (130 mg，0.39 mmol)及MgCl 2(45 mg，0.47 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(127 mg，0.98 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 615.18 [M+1]，t R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.40 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Figure 02_image565
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯. 將((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(500 mg，0.81 mmol)溶解於10 mL ACN中，將20 mL TFA與10 mL水混合，接著將該TFA溶液添加至上述反應混合物中，在RT下攪拌30 min，用NaHCO 3水溶液淬滅，用EtOAc萃取，蒸發有機溶劑，藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.38 - 7.11 (m, 5H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 5.6, 4.5 Hz, 1H), 5.50 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 5.32 (dtt, J = 23.9, 6.3, 5.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 2H), 4.63 (td, J = 5.3, 4.1 Hz, 1H), 4.60 - 4.44 (m, 4H), 4.44 - 4.26 (m, 2H), 4.01 - 3.85 (m, 1H), 1.29 (dt, J = 7.2, 1.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.3, 3.29。LCMS：MS m/z= 575.11 [M+1]，t R= 0.98 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.63及3.70 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例45. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丙酯
Figure 02_image567
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.33 mL，1.89 mmol)及氯化鎂(107.8 mg，1.13 mmol)添加至中間物4 (250.0 mg，0.76 mmol)及中間物45 (462.16 mg，1.13 mmol)於四氫呋喃(7.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.53 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(7.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(75 mL)及鹽水(75 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd, J= 4.5, 2.9 Hz, 1H), 6.74 (dd, J= 4.6, 2.1 Hz, 1H), 5.50 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.31 (m, 3H), 4.07 - 3.82 (m, 3H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 1.31 - 1.26 (m, 3H), 0.90 (dt, J= 9.9, 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.27。LCMS：MS m/z= 561.20 [M+1]，t R= 0.78 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.70 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性SFC (Chiralpak AD-H，5μm，21 × 250 mm，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image569
實例 46.實例45之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.33 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.53 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.88 (dq, J= 9.4, 7.1 Hz, 1H), 1.62 (h, J= 7.3 Hz, 2H), 1.26 (dd, J= 7.1, 1.3 Hz, 3H), 0.91 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.26。LCMS：MS m/z= 561.21 [M+1]，t R= 0.76 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.63 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例 47.實例45之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (dd, J= 5.6, 5.1 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.42 (dd, J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 3H), 1.58 (dtd, J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.27 (dd, J= 7.2, 1.1 Hz, 3H), 0.88 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.27。LCMS：MS m/z= 561.26 [M+1]，t R= 0.77 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.74 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例48. ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
Figure 02_image571
向中間物46 (350 mg，1.06 mmol)、中間物4 (507 mg，1.16 mmol)及MgCl 2(130 mg，1.37 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(341 mg，2.64 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。LCMS：MS m/z= 629.10 [M+1]，t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例49. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
Figure 02_image573
將實例48 (385 mg，0.61 mmol)溶解於12 mL ACN中，將17 mL TFA與12 mL水混合，接著將該TFA溶液添加至上述反應混合物中，在RT下攪拌30 min，用NaHCO 3水溶液淬滅，用EtOAc萃取，蒸發有機溶劑，藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.31 (dt, J = 16.0, 7.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.86 (dd, J = 4.6, 2.8 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 5.49 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 4.72 (dddd, J = 11.0, 7.9, 6.3, 3.6 Hz, 2H), 4.67 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 5H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.24 - 4.09 (m, 1H), 3.91 (m, 1H), 3.28 - 3.10 (m, 1H), 1.27 (ddd, J = 7.2, 2.7, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22, 3.15。LCMS：MS m/z= 589.15 [M+1]，t R= 1.01 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.66及3.72 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例50. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環丁酯單一非對映異構體
Figure 02_image575
向中間物48 (330 mg，0.79 mmol)、中間物4 (260 mg，0.79 mmol)及MgCl 2(97 mg，1.02 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(254 mg，1.96 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到縮丙酮化物中間物，接著將其溶解於乙腈(10 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且將殘餘物溶解於DCM中，並且藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.22 (dt, J = 8.6, 1.3 Hz, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 1H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.51 (dt, J = 5.0, 1.4 Hz, 1H), 4.82-4.80 (m, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.53 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (ddd, J = 10.3, 5.0, 1.4 Hz, 1H), 3.86 (dq, J = 9.7, 7.1 Hz, 1H), 2.32 - 2.09 (m, 2H), 2.04 - 1.89 (m, 2H), 1.79 - 1.64 (m, 1H), 1.64 - 1.46 (m, 1H), 1.29 - 1.18 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。LCMS：MS m/z= 573.11 [M+1]，t R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 4.395 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例51. (((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環丁酯單一非對映異構體
Figure 02_image577
向中間物49 (355 mg，0.85 mmol)、中間物4 (280 mg，0.85 mmol)及MgCl 2(105 mg，1.1 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(273 mg，2.1 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到縮丙酮化物中間物，接著將其溶解於乙腈(10 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且將殘餘物溶解於DCM中，並且藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (dd, J = 8.8, 7.0 Hz, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.97 - 4.86 (m, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J = 10.9, 5.9 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.1 Hz, 1H), 3.84 (dq, J = 9.2, 7.1 Hz, 1H), 2.34 - 2.19 (m, 2H), 2.13 - 1.91 (m, 2H), 1.84 - 1.69 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.2, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.21。LCMS：MS m/z= 573.10 [M+1]，t R= 1.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 4.364 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例52. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image579
方法 1.在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.12 mL，0.68 mmol)及氯化鎂(38.8 mg，0.41 mmol)添加至中間物4 (100.0 mg，0.30 mmol)及中間物50 (141.2 mg，0.33 mmol)於四氫呋喃(3 mL)中之混合物中。將混合物加熱至50℃。1 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.2 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(3 mL)中。使混合物升溫至RT。3 h後，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 7.87 (s, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.73 (s, 2H), 6.20 (s, 2H), 5.46 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.35 (dd, J= 11.1, 6.6 Hz, 2H), 4.28 (dd, J= 11.1, 6.4 Hz, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ 2.64。LCMS：MS m/z= 533.15 [M+1]，t R= 0.65 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.03 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
方法 2.將中間物4 (150 mg，0.5 mmol)及中間物50 (234 mg，0.55 mmol)混合且溶解於4 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(143 mg，1.5 mmol)。添加DIPEA (218 μL，1.25 mmol)，且在50℃下攪拌反應物4小時。
將反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5×15 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (10 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(500 μL)。在冰浴中攪拌反應物4小時。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.83 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.48 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.90 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 1.25 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.24。LCMS：MS m/z= 533.0 [M+1], 531.0 [M-1]，t R= 1.31 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.29 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.791 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例53. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image581
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.06 mL，0.33 mmol)及氯化鎂(12.0 mg，0.13 mmol)添加至中間物4 (41.8 mg，0.13 mmol)及中間物51 (60.9 mg，0.13 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。5 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用水(5 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.06 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(1.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 9.0, 1.4 Hz, 1H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.90 - 6.80 (m, 3H), 6.73 (dd, J= 4.8, 1.0 Hz, 1H), 5.50 (dd, J= 7.8, 5.0 Hz, 1H), 4.99 - 4.86 (m, 1H), 4.62 (q, J= 5.1 Hz, 1H), 4.53 - 4.29 (m, 3H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.77 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d, J= 2.1 Hz, 3H), 1.26 (ddd, J= 7.1, 3.7, 1.1 Hz, 3H), 1.23 - 1.13 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.71。LCMS：MS m/z= 635.19 [M+1]，t R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.68 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例54. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丁酯
Figure 02_image583
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.76 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)添加至中間物4 (100.0 mg，0.30 mmol)及中間物52 (191 mg，0.45 mmol)於四氫呋喃(7.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.53 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(7.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(75 mL)及鹽水(75 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 4H), 6.84 (dd, J= 4.5, 2.8 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 4.5, 2.0 Hz, 1H), 5.49 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.62 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 4.15 - 3.80 (m, 3H), 1.68 - 1.46 (m, 2H), 1.46 - 1.22 (m, 5H), 0.99 - 0.83 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.25。LCMS：MS m/z= 575.14 [M+1]，t R= 0.83 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 6.50 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-19.0 min 2-95% ACN，19.0 min-20.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例55. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸四氫-2H-哌喃-4-基酯
Figure 02_image585
向中間物22 (1.7 g，3.77 mmol)、中間物4 (1 g，3 mmol)及MgCl 2(359 mg，3.77 mmol)於乙腈(40 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(0.98 g，8 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.97 - 3.80 (m, 3H), 3.56 - 3.44 (m, 2H), 1.89 - 1.81 (m, 2H), 1.60 (dtd, J = 12.9, 8.6, 3.9 Hz, 2H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.3 Hz, 4H), 1.14 (d, J = 6.1 Hz, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。LCMS：MS m/z= 603.14 [M+1]，t R= 1.20 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.87 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例56. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸四氫-2H-哌喃-4-基酯之單一非對映異構體
Figure 02_image587
實例55之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd, J= 8.7, 7.0 Hz, 2H), 7.16 (ddd, J= 7.1, 2.1, 1.1 Hz, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.88 (m, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.86 (m, 3H), 3.50 (dtd, J= 11.3, 5.4, 2.7 Hz, 2H), 1.94 - 1.76 (m, 2H), 1.60 (dtd, J= 12.9, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 1.27 (dd, J= 7.1, 1.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。MS m/z= 603 (M+H) +。 實例57. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸四氫-2H-哌喃-4-基酯之單一非對映異構體
Figure 02_image589
實例55之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.90 (dq, J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 3.85 - 3.75 (m, 2H), 3.46 (dddd, J= 11.8, 8.9, 6.0, 3.2 Hz, 2H), 1.81 (tdd, J= 9.6, 4.6, 2.5 Hz, 2H), 1.57 (dtd, J= 12.7, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 1.27 (dd, J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。MS m/z= 603 (M+H) +。 實例58. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-甲氧基丙酯
Figure 02_image591
在室溫下向中間物4 (127 mg，0.38 mmol)、中間物53 (252 mg，0.58 mmol)及MgCl 2(55 mg，0.58 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.17 mL，0.97 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化。將所獲得殘餘物溶解於ACN (8 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，在冰浴下冷卻，且緩慢添加NaHCO 3水溶液(4 mL)。將混合物濃縮至一半體積，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.64H), 7.78 (s, 0.36H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m,1H), 4.53 - 4.38 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 2H), 3.93 - 3.83 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 3.27 (m, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.26 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。LCMS： m/z= 591.18 (M+H)，t R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.96 min (35%)及4.02 min (64%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物藉由IA SFC 5 μm 21×250 mm (30% 2-丙醇)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image593
實例 59.實例58之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.52 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 4.12 (td, J= 6.5, 2.1 Hz, 2H), 3.89 (ddd, J= 14.4, 10.8, 6.6 Hz, 1H), 3.39 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H), 1.83 (m, 2H), 1.25 (dd, J= 7.1, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。HPLC：t R= 3.96 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例60. 實例58之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.32 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.22 (dt, J= 8.6, 1.3 Hz, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 1H), 6.83 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.07 (qt, J= 10.9, 6.4 Hz, 2H), 3.90 (dq, J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 3.37 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.26 (dd, J= 7.2, 1.0 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。HPLC：t R= 4.02 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 61. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基酯
Figure 02_image595
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物24 (81 mg，0.18 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物用EtOAc (15 mL)稀釋，且用水(6×10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(300 μL)。在冰浴中攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用EtOAc (2×10 mL)萃取水性部分。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.80 (m, 1H), 7.41 - 7.09 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.33 - 5.15 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 4.00 - 3.86 (m, 1H), 3.28 - 3.07 (m, 3H), 3.03 - 2.83 (m, 1H), 2.69 (m, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.28 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.39, 3.05。LCMS：MS m/z= 602.2 [M+1], 599.9 [M-1]，t R= 1.00 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 1.85 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.142, 3.190 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例62. (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯
Figure 02_image597
(2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 苯基 )-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯 .在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.11 mL，0.604 mmol)及氯化鎂(23 mg，0.24 mmol)添加至中間物4 (80 mg，0.24 mmol)及中間物54 (178 mg，0.29 mmol)於四氫呋喃(3.8 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用水(5 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.11 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(3.8 mL)中。使混合物升溫至RT。3.5 h後，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.38 - 7.25 (m, 5H), 7.19 - 7.09 (m, 3H), 7.06 (dd, J= 8.7, 1.2 Hz, 1H), 6.84 (dd, J= 4.5, 1.3 Hz, 1H), 6.72 (dd, J= 7.2, 4.5 Hz, 1H), 5.56 - 5.46 (m, 1H), 5.03 (d, J= 2.9 Hz, 2H), 4.63 (td, J= 5.3, 4.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 4H), 3.87 (ddq, J= 16.7, 9.4, 7.1 Hz, 1H), 3.69 (d, J= 3.0 Hz, 3H), 3.61 (d, J= 15.9 Hz, 4H), 3.20 - 3.06 (m, 1H), 2.91 (dt, J= 14.0, 8.4 Hz, 1H), 1.24 (td, J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.27 (d, J= 2.1 Hz)。LCMS：MS m/z= 768.49 [M+1]，t R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.95 min, 4.02 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Figure 02_image599
(2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 苯基 )-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯 .將鈀/碳(10.3 mg，10 wt%)添加至經氬氣吹掃的(2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(30.6 mg，0.04 mmol)於乙醇(5 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物，且在RT下攪拌。18小時後，經由矽藻土過濾混合物，用乙醇沖洗過濾器，且減壓移除揮發物。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4μm Polar-RP 80Å 150 × 21.2 mm管柱，含0.1% TFA之10-60%乙腈/水梯度)，得到呈TFA鹽之產物。 實例 62.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.95 (s, 1H), 7.29 - 7.16 (m, 5H), 6.93 (s, 1H), 5.53 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.59 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.52 - 4.43 (m, 2H), 4.37 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 4.30 (dd, J= 7.6, 6.1 Hz, 1H), 4.03 - 3.87 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.25 (dd, J= 14.5, 6.1 Hz, 1H), 3.13 (dd, J= 14.6, 7.4 Hz, 1H), 1.34 (dd, J= 7.4, 1.2 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -77.68。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.54。LCMS：MS m/z= 634.18 [M+1]，t R= 0.77 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 2.30 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例 63.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.94 (s, 1H), 7.32 - 7.22 (m, 4H), 7.14 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.52 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.58 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.40 (dd, J= 12.5, 5.8 Hz, 2H), 4.37 - 4.28 (m, 2H), 3.92 (dd, J= 10.0, 7.3 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.27 - 3.08 (m, 2H), 1.31 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -77.65。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.48。LCMS：MS m/z= 634.24 [M+1]，t R= 0.80 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 2.43 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例64. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image601
在室溫下向中間物4 (132 mg，0.40 mmol)、中間物55 (234 mg，0.54 mmol)及MgCl 2(46 mg，0.48 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.10 mL，0.60 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化。將所獲得殘餘物溶解於ACN (4 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，在冰浴下冷卻，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (s, 0.67H), 7.78 (s, 0.33H), 7.37 - 7.13 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.25 - 5.20 (m, 0.33H), 5.18 - 5.10 (m, 0.67H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.30 (m, 3H), 3.93 - 3.63 (m, 5H), 2.20 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.25 (m, 3H)。LCMS： m/z= 589.02 (M+H)，t R= 1.06 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.75 min (29%), 3.81 min (68%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .混合物藉由Chiralpak AD-H 150 × 4.6 mm 5 μm (100% EtOH)分離。 實例65. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯之單一非對映異構體
Figure 02_image603
實例64之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (m, 2H), 7.16 (dt, J= 8.1, 1.3 Hz, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 5.23 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.51 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 10.9, 5.9 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.92 - 3.68 (m, 5H), 2.23 - 2.06 (m, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 1H), 1.25 (dd, J= 7.1, 1.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。LCMS： m/z= 589.02 (M+H)，t R= 1.06 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.75 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例66. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯之單一非對映異構體
Figure 02_image605
實例64之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.25 - 7.21 (m, 2H), 7.20 - 7.15 (m, 1H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 5.14 (dd, J= 6.0, 4.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 10.9, 6.4 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.65 (m, 5H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 1H), 1.25 (dd, J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.19。LCMS： m/z= 589.02 (M+H)，t R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.82 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例67. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-(N-嗎啉基)丙酯
Figure 02_image607
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.11 mL，0.62 mmol)及氯化鎂(23.8 mg，0.25 mmol)添加至中間物4 (82.7 mg，0.25 mmol)及中間物56 (133 mg，0.27 mmol)於四氫呋喃(2.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。4.5 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用水(2 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將濃鹽酸水溶液(0.12 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。4.5 h後，減壓濃縮反應混合物。所得粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，含0.1% TFA之30-70%乙腈/水梯度)，接著經歷矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 7.94 (s, 1H), 7.43 - 7.19 (m, 6H),5.51 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.55 - 4.43 (m, 3H), 4.43 - 4.33 (m, 2H), 4.09 (dt, J = 9.4, 4.9 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 13.1 Hz, 3H), 3.77 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.13 (q, J = 8.7, 7.9 Hz, 2H), 2.08 - 1.99 (m, 2H), 1.30 (t, J = 8.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 2.70, 2.40。LCMS：MS m/z= 646.35 [M+1]，t R= 1.05 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.23 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Kinetx 2.6μ 100A C18，100 mm × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。 實例68. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(R)-四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image609
在室溫下向中間物4 (130 mg，0.40 mmol)、中間物57 (256 mg，0.59 mmol)及MgCl 2(46 mg，0.48 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.10 mL，0.60 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化。將所獲得殘餘物溶解於ACN (4 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，在冰浴下冷卻，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.71H), 7.78 (s, 0.29H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.23 (s, 0.29H), 5.20 - 5.14 (m, 0.71H), 4.66 - 4.59 (m, 1H), 4.53 - 4.30 (m, 3H), 3.95 - 3.69 (m, 5H), 2.22 - 2.05 (m, 1H), 1.99 - 1.85 (m, 1H), 1.25 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22, 3.17。LCMS： m/z= 589.03 (M+H)，t R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.77 min (25%), 3.82 min (75%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .混合物藉由Chiralpak IA (150×4.6 mm，5微米，100% EtOH)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image611
實例 69.實例68之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 7.19 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 5.26 - 5.20 (m, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 11.0, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.94 - 3.69 (m, 5H), 2.15 (td, J= 14.5, 8.3 Hz, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 1H), 1.25 (dd, J= 7.2, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。LCMS： m/z= 589.09 (M+H)，t R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.76 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min 實例 70.實例68之第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.40 - 7.25 (m, 3H), 7.28 - 7.12 (m, 2H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 5.17 (td, J= 4.1, 2.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 10.9, 6.4 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.98 - 3.68 (m, 5H), 2.18 - 2.03 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.25 (dd, J= 7.2, 1.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.17。LCMS： m/z= 589.10 (M+H)，t R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.81 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例71. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)硫代磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image613
在RT下將三乙胺(170 µl，1.2 mmol)添加至中間物4 (0.40 g，1.2 mmol)及中間物58 (0.35 g，1.2 mmol)於乙腈(6 mL)中之溶液中。使反應混合物升溫至65℃。3 h後，使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(300 μL)。1 h後，緩慢添加飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)，且用二氯甲烷(3 × 5 mL)萃取所得混合物。合併之有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.95 (br s, 1H), 7.40 - 7.02 (m, 5H), 6.90 - 6.72 (m, 2H), 5.52 - 5.45 (m, 1H), 4.58 - 4.49 (m, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 2H), 3.71 - 3.54 (m, 3H), 1.38 - 1.29 (m, 3H)。LCMS：MS m/z= 549.27 [M+1]，t R= 1.23 min (次要異構體), 1.25 (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.21 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 5.124 min (次要異構體), 5.221 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例72. (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯
Figure 02_image615
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.06 mL，0.33 mmol)及氯化鎂(12.3 mg，0.13 mmol)添加至中間物4 (42.7 mg，0.13 mmol)及中間物66 (82.9 mg，0.13 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。4 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用水(5 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.06 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(1.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J= 11.2, 6.2, 3.3 Hz, 5H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 7.06 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.87 - 6.80 (m, 1H), 6.72 (dd, J= 5.5, 4.7 Hz, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 1H), 5.03 (d, J= 3.6 Hz, 2H), 4.91 (ddd, J= 24.9, 12.6, 6.3 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 11.8, 5.5 Hz, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 3H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.69 (d, J= 3.5 Hz, 3H), 3.16 - 3.05 (m, 1H), 2.91 (dt, J= 14.0, 8.8 Hz, 1H), 1.25 (dt, J= 7.2, 1.4 Hz, 3H), 1.20 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 1.16 (t, J= 6.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.36, 3.33。LCMS：MS m/z= 796.45 [M+1]，t R= 1.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.44 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例73. (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸異丙酯
Figure 02_image617
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.11 mL，0.62 mmol)及氯化鎂(23.8 mg，0.25 mmol)添加至中間物4 (82.7 mg，0.25 mmol)及中間物69 (176.6 mg，0.27 mmol)於四氫呋喃(2.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。4.5 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用水(2 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將濃鹽酸水溶液(0.12 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。4.5 h後，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 7.36 - 7.21 (m, 5H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.84 (dd, J= 4.5, 1.0 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 7.4, 4.5 Hz, 1H), 5.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 2.2 Hz, 2H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 4H), 3.87 (ddd, J= 16.3, 9.6, 7.1 Hz, 1H), 3.61 (d, J= 16.9 Hz, 3H), 3.09 (dt, J= 14.2, 5.8 Hz, 1H), 2.91 (dt, J= 15.3, 8.2 Hz, 1H), 1.24 (m, 6H), 1.16 (dd, J= 6.3, 3.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.27。LCMS：MS m/z= 796.51 [M+1]，t R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.331 min, 4.395 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例74. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯
Figure 02_image619
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.20 mL，1.17 mmol)及氯化鎂(44.7 mg，0.47 mmol)添加至中間物4 (155.6 mg，0.47 mmol)及中間物68 (231.8 mg，0.47 mmol)於四氫呋喃(5.47 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.40 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。使混合物升溫至RT。20 h後，減壓移除揮發物。將水溶液凍乾，得到產物，其不經進一步純化即使用。LCMS：MS m/z= 635.19 [M+1]，t R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。 實例75. ((((2 R,3 S,4 R,5 S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1- f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯單一異構體
Figure 02_image621
在室溫下將四氫呋喃(1.4 mL)添加至中間物4 (202 mg，0.610 mmol)、中間物73 (418 mg，0.793 mmol)及氯化鎂(87 mg，0.914 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.265 mL，1.524 mmol)。在40℃下攪拌2小時之後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(40 mL)中，且用水(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(10 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.508 mL)。在0℃下4小時之後，用0℃之乙酸乙酯(50 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.86 (s, 1H), 7.77 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.25 - 6.07 (m, 2H), 5.50 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 5.38 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.22 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.95 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 1H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.36 (m, 4H), 1.20 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t, J= 7.0 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.24。LCMS：MS m/z= 635.07 [M+1]，t R= 1.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：t R= 2.45 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 4.09 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例76. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯.
Figure 02_image623
在RT下將乙腈(2.5 mL)添加至中間物4 (150 mg，0.453 mmol)、中間物42 (179 mg，0.453 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.453 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持5 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.197 mL，0.453 mmol)。22 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.5 mL)。1 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.78 (s, 0.7H), 7.73 (s, 0.3H), 7.41 - 7.22 (m, 5H), 6.88 - 6.79 (m, 1H), 6.76 - 6.67 (m, 1H), 5.56 - 5.43 (m, 1H), 5.09 - 4.93 (m, 2H), 4.69 - 4.18 (m, 4H), 3.92 - 3.72 (m, 1H), 3.61 (s, 0.9H), 3.60 (s, 2.1H), 1.31 - 1.22 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.88 (s), 7.81 (s)。LCMS：MS m/z= 547.06 [M+1]，t R= 1.04 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.381 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。 實例77. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image625
將中間物1 (0.149 g，0.512 mmol)溶解於無水THF中並濃縮。將所得殘餘物在高真空下放置1.5小時。接著將殘餘物溶解於NMP (4 mL)中，且接著添加THF (1 mL)。將此溶液在冰浴中冷卻，且添加 t-BuMgCl於THF中之1 M溶液(0.767 mL，0.767 mmol)，使得形成白色沈澱。5分鐘後，移除冷浴，對混合物進行超音波處理以使沈澱固體分散，且在室溫下攪拌反應物10分鐘。添加中間物((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯(0.251 g，0.614 mmol；WO2011123668)於THF (0.9 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測進程。1小時45分鐘後，將反應物在冰浴中冷卻，且藉由添加冰AcOH (0.25 mL)淬滅。移除冰浴，且在室溫下繼續攪拌5分鐘。藉由蒸發移除揮發物，且藉由HPLC自殘餘物分離產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4, 帶有星號(*)之化學位移表示存在的第二異構體上的相關質子之位移) δ 7.81 (s, 0.41H), 7.79* (s, 0.59H), 7.36 - 7.12 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.97 - 4.85 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.54 - 4.32 (m, 3H), 3.85 (m, 1H), 1.25 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 1.20* (d, J= 6.3 Hz, 4H), 1.16 (t, J= 6.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.30 (s)。MS m/z= 561.03 [M+1]。
S p 及 R p 非對映異構體之解析. 產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，庚烷70%乙醇30%)純化。
第二溶離非對映異構體：實例1. 實例78. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯.
Figure 02_image627
實例之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.38 - 7.24 (m, 2H), 7.22 - 7.12 (m, 3H), 6.87 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.96 (七重峰, J= 6.3 Hz, 1H), 4.65 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.56 - 4.46 (m, 2H), 4.38 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.92 - 3.80 (m, 1H), 1.27 (br d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.22 (d, J= 6.3 Hz, 6H)。LCMS：MS m/z= 560.96 [M+1]，t R= 1.48 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.54 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 4.95 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例79. N2-((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-N6-((苯甲氧基)羰基)-L-離胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image629
(S)-6-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-2-( 氯 -l5- 氮烷基 ) 己酸 2- 乙基丁酯 .將4 N鹽酸(5 mL)添加至N6-((苯甲氧基)羰基)-L-離胺酸(1 g，4 mmol)於2-乙基-丁醇(10 mL)中之溶液中，且將所得混合物加熱至70℃。3 h後，在70℃下減壓濃縮反應混合物。將粗固體殘餘物溶解於己烷(150 mL)中，並攪拌4 h。藉由真空過濾收集所得固體，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.38 - 7.25 (m, 5H), 5.06 (s, 2H), 4.26 - 4.12 (m, 2H), 4.03 (t, J =6.3 Hz, 1H), 3.13 (t, J =6.7 Hz, 2H), 2.01 - 1.80 (m, 2H), 1.62 - 1.32 (m, 8H), 0.92 (t, J =7.5 Hz, 6H)。
Figure 02_image631
N6-(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-N2-((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 離胺酸 2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向(S)-6-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-2-(氯-l5-氮烷基)己酸2-乙基丁酯(1.3 g，3.57 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.753 mL，3.57 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.422 mL，7.14 mmol)。將所得混合物升溫至RT，並攪拌1.5 h。接著添加4-硝基苯酚(496 mg，3.57 mmol)及三乙胺(0.5 mL，3.57 mmol)。1 h後，用二氯甲烷(50 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物(約1:0.8之非對映異構混合物)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d 1 ) δ 8.27 - 8.13 (m, 2H), 7.44 - 7.12 (m, 12H), 5.08 (br s, 2H), 4.72 (br s, 1H), 4.09 - 3.97 (m, 3H), 3.92 - 3.72 (m, 1H), 3.18 - 2.99 (m, 2H), 1.82 - 1.19 (m, 11H), 0.86 (br t, J =7.4 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d 1 ) δ -2.49 (s), -2.76 (s)。MS m/z= 641.97 [M+1]。
Figure 02_image633
在RT下向中間物4 (43 mg，0.130 mmol)、N6-((苯甲氧基)羰基)-N2-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-離胺酸2-乙基丁酯(83.3 mg，0.130 mmol)及氯化鎂(12.4 mg，0.106 mmol)之混合物中添加乙腈(1 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.057 mL，0.324 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.151 mL)。1 h後，反應混合物用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.80 (s, 0.4H), 7.77 (s, 0.6H), 7.35 - 7.09 (m, 10H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.75 (d, J =4.6 Hz, 0.4H), 6.71 (d, J =4.5 Hz, 0.6H), 5.53 - 5.48 (m, 1H), 5.04 (br s, 2H), 4.65 - 4.53 (m, 1H), 4.51 - 4.28 (m, 3H), 4.07 - 3.76 (m, 3H), 3.08 - 2.94 (m, 2H), 1.74 - 1.13 (m, 11H), 0.89 - 0.78 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.66 (s), 3.27 (s)。MS m/z= 794.51 [M+1]。 實例80. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-苯基丙酸(2S)-異丙酯
Figure 02_image635
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 )-3- 苯基丙酸 (2S)- 異丙酯 .將二氯磷酸苯酯(718 μL，4.8 mmol)溶解於無水二氯甲烷(20 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加苯丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(1 g，4.1 mmol)。逐滴添加三乙胺(736 μL，5.3 mmol)並攪拌30 min。逐滴添加更多三乙胺(736 μL，5.3 mmol)並攪拌30 min。逐滴添加額外三乙胺(736 μL，5.3 mmol)並攪拌15 min。添加對硝基苯酚(600 mg，4.32 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應混合物2 h。添加更多對硝基苯酚(50 mg)及三乙胺(736 μL，5.3 mmol)並攪拌1 h。將反應混合物減壓濃縮，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌兩次，接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-15%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.17 (t, J= 9.0 Hz, 2H), 7.38 - 7.13 (m, 10H), 7.13 - 7.02 (m, 2H), 4.95 (pd, J= 6.3, 3.9 Hz, 1H), 4.31 (ddq, J= 10.6, 9.2, 6.2 Hz, 1H), 3.69 (td, J= 10.9, 4.6 Hz, 1H), 3.02 (dd, J= 6.1, 1.8 Hz, 2H), 1.21 - 1.08 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -2.97, -2.98。MS m/z= 485.0 [M+1], 483.2 [M-1]。
Figure 02_image637
將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-苯基丙酸(2S)-異丙酯(67 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至50℃，且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在50℃下攪拌反應物3 h。在60℃下加熱並攪拌反應物17 h。將反應混合物冷卻至室溫。將含4 N鹽酸之1,4-二㗁烷(5 mL)以及甲醇(500 μL)添加至反應混合物中，攪拌2 h。添加水(1 mL)並攪拌1 h。混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。緩慢添加1 N氫氧化鈉水溶液，得到pH值10。收集有機層，且用5%碳酸鈉水溶液(20 mL)洗滌兩次，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，0-100%乙腈/水，含0.1%三氟乙酸作為改質劑)純化。合併含有產物之溶離份，且用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，並且用飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.66 (s, 1H), 7.28 - 7.01 (m, 10H), 6.53 (dd, J= 11.3, 5.1 Hz, 2H), 5.55 - 5.38 (m, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.43 (m, 2H), 4.34 - 4.01 (m, 3H), 3.10 - 2.81 (m, 2H), 1.12 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.90, 2.73。MS m/z= 637.1 [M+1], 635.0 [M-1]。 實例81. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-苯基丙酸(2S)-2-乙基丁酯
Figure 02_image639
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 )-3- 苯基丙酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .將二氯磷酸苯酯(354 μL，2.38 mmol)溶解於無水二氯甲烷(24 mL)中，且在冰浴中在氬氣氛圍下攪拌。一次性添加L-苯丙胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(680 mg，2.38 mmol)。逐滴添加三乙胺(730 μL，5.24 mmol)。攪拌反應混合物2 h。逐滴添加更多三乙胺(365 μL，2.62 mmol)並攪拌60 min。添加對硝基苯酚(265 mg，1.9 mmol)。將反應混合物攪拌2 h，且用二氯甲烷(30 mL)稀釋，並且用5%碳酸鈉水溶液(20 mL)洗滌兩次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.23 - 8.14 (m, 2H), 7.33 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.28 - 7.10 (m, 7H), 7.07 (m, 2H), 6.85 (m, 1H), 4.15 - 3.97 (m, 1H), 3.90 - 3.75 (m, 2H), 2.97 (m, 1H), 2.79 (m, 1H), 1.39 - 1.25 (m, 1H), 1.17 (dtd, J= 8.8, 7.2, 3.6 Hz, 4H), 0.73 (tt, J= 7.6, 1.7 Hz, 6H)。
Figure 02_image641
將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-苯基丙酸(2S)-2-乙基丁酯(73 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至50℃，且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在50℃下攪拌反應物3 h。在60℃下加熱並攪拌反應物17 h。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，添加三氟乙酸水溶液(v/v 1:1，2 mL)，並攪拌20 h。將反應混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加氫氧化鉀水溶液，得到pH值10。收集有機層，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (m, 1H), 7.33 - 6.97 (m, 10H), 6.84 (dd, J= 4.5, 2.9 Hz, 1H), 6.70 (dd, J= 4.5, 3.0 Hz, 1H), 5.54 - 5.44 (m, 1H), 4.59 - 4.50 (m, 1H), 4.37 (m, 1H), 4.26 - 4.02 (m, 3H), 4.02 - 3.80 (m, 3H), 2.99 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 1.42 - 1.29 (m, 1H), 1.29 - 1.13 (m, 4H), 0.80 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.21, 2.70。MS m/z= 679.1 [M+1], 677.1 [M-1]。 實例82. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2R)-2-乙基丁酯
Figure 02_image643
2- 胺基丙酸 (R)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .將D-丙胺酸(891 mg，10 mmol)與2-乙基-1丁醇(20 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(3.8 mL，30 mmol)，且攪拌30 min。逐滴添加更多氯化三甲基矽烷(3.8 mL，30 mmol)。將反應混合物加熱至50℃並攪拌2 h。逐滴添加更多氯化三甲基矽烷(3.8 mL，30 mmol)。將反應混合物加熱至75℃並攪拌18 h。在80℃下減壓濃縮反應混合物。將殘餘物在冰浴中冷卻。添加己烷(100 mL)並攪拌1 h。收集固體，且用己烷(100 mL)洗滌，並且高真空乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.42 (s, 3H), 4.18 - 3.96 (m, 3H), 1.58 - 1.43 (m, 1H), 1.39 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.31 (ddq, J= 10.2, 7.3, 3.7 Hz, 4H), 0.85 (t, J= 7.4 Hz, 6H)。
Figure 02_image645
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2R)-2- 乙基丁酯 .將二氯磷酸苯酯(354 μL，2.38 mmol)溶解於無水二氯甲烷(24 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加D-丙胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(500 mg，2.38 mmol)。逐滴添加三乙胺(730 μL，5.24 mmol)並攪拌2 h。逐滴添加更多三乙胺(365 μL，2.62 mmol)並攪拌30 min。添加對硝基苯酚(265 mg，1.9 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物2小時。反應混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(2 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-15%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.32 - 8.22 (m, 2H), 7.53 - 7.32 (m, 4H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.75 - 6.60 (m, 1H), 4.08 - 3.93 (m, 1H), 3.93 - 3.82 (m, 2H), 1.38 (m, 1H), 1.31 - 1.17 (m, 7H), 0.78 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -1.26, -1.48。MS m/z= 451.0 [M+1], 449.1 [M-1]。
Figure 02_image647
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2R)-2- 乙基丁酯 .將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2R)-2-乙基丁酯(63 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至50℃，且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在50℃下攪拌反應物3 h。在60℃下加熱並攪拌反應物17 h。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，添加三氟乙酸水溶液(v/v 1:1，2 mL)，並攪拌20 h。將反應混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加氫氧化鉀水溶液，得到pH值10。收集有機層，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (dd, J= 5.5, 4.5 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 15.4, 4.5 Hz, 1H), 5.55 - 5.46 (m, 1H), 4.61 (dt, J= 20.1, 5.3 Hz, 1H), 4.53 - 4.25 (m, 3H), 4.14 - 3.83 (m, 3H), 1.50 - 1.38 (m, 1H), 1.37 - 1.17 (m, 7H), 0.85 (tdd, J= 7.5, 3.9, 1.6 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.37, 3.06。MS m/z= 603.1 [M+1], 601.1 [M-1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image649
實例 83.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.49 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.48 - 4.33 (m, 2H), 4.05 - 3.88 (m, 3H), 1.50 - 1.40 (m, 1H), 1.37 - 1.24 (m, 7H), 0.95 - 0.80 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.39。 實例 84.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.58 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.44 (m, 2H), 4.31 (m, 1H), 4.04 (m, 1H), 3.97 - 3.85 (m, 2H), 1.44 (dt, J= 12.4, 6.2 Hz, 1H), 1.36 - 1.24 (m, 7H), 0.86 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.06 實例85. 6-乙醯胺基-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)己酸(2S)-乙酯
Figure 02_image651
6- 乙醯胺基 -2- 胺基己酸 (S)- 乙酯鹽酸鹽 .將(S)-6-乙醯胺基-2-胺基己酸(1.88 g，10 mmol)與乙醇(25 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(6.3 mL，50 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物加熱至80℃，且攪拌20 h。減壓濃縮反應混合物，得到油狀物，將其與己烷(100 mL)混合並攪拌30 min。傾析出溶劑。添加更多己烷(100 mL)並攪拌30 min。傾析出溶劑，且將所得油狀物高真空乾燥，得到標題化合物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.59 (bs, 3H), 7.94 (s, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.92 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 2.98 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 1.77 (m, 5H), 1.45 - 1.30 (m, 2H), 1.21 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。
Figure 02_image653
6- 乙醯胺基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 己酸 (2S)- 乙酯 .將二氯磷酸苯酯(354 μL，2.38 mmol)溶解於無水二氯甲烷(24 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加6-乙醯胺基-2-胺基己酸(S)-乙酯鹽酸鹽(601 mg，2.38 mmol)。逐滴添加三乙胺(730 μL，5.3 mmol)並攪拌2 h。逐滴添加更多三乙胺(365 μL，2.62 mmol)並攪拌60 min。添加對硝基苯酚(265 mg，1.9 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物2 h。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(2 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.33 - 8.22 (m, 2H), 7.70 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 7.53 - 7.33 (m, 4H), 7.29 - 7.14 (m, 3H), 6.63 (dt, J= 13.4, 10.6 Hz, 1H), 3.99 (qd, J= 7.1, 2.1 Hz, 2H), 3.78 (qt, J= 9.7, 5.4 Hz, 1H), 2.87 (qd, J= 6.8, 3.4 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.51 (m, 2H), 1.34 - 1.00 (m, 7H)。MS m/z= 494.1 [M+1], 492.2 [M-1]。
Figure 02_image655
6- 乙醯胺基 -2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 己酸 (2S)- 乙酯 .將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及6-乙醯胺基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)己酸(2S)-乙酯(69 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至50℃，且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在50℃下攪拌反應物3 h。在60℃下加熱並攪拌反應物17 h。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，添加三氟乙酸水溶液(v/v 1:1，2 mL)，並攪拌20 h。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且在冰浴中冷卻。逐滴添加氫氧化鉀水溶液，得到pH值10。收集有機層，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (dd, J= 4.5, 3.3 Hz, 1H), 6.74 (dd, J= 4.5, 3.0 Hz, 1H), 5.54 - 5.45 (m, 1H), 4.63 (td, J= 5.4, 4.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.27 (m, 3H), 4.08 - 3.93 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.05 (tq, J= 6.0, 1.8 Hz, 2H), 1.90 (m, 3H), 1.74 - 1.62 (m, 1H), 1.62 - 1.48 (m, 1H), 1.47 - 1.25 (m, 4H), 1.16 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.54, 3.44。MS m/z= 646.1 [M+1], 644.1 [M-1]。 實例86. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2R)-異丙酯
Figure 02_image657
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-D- 丙胺酸異丙酯 .將D-丙胺酸異丙酯-HCl (1.21 g，7.22 mmol)懸浮於亞甲基氯(15 mL)中，且將所得混合物冷卻至-78℃。添加二氯磷酸苯酯(1.08 mL，7.22 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(2.0 mL，14.44 mmol)。接著一次性添加4-硝基苯酚(1004 mg，7.22 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(1.0 mL，7.22 mmol)。在-78℃下攪拌所得混合物30 min，且接著將其升溫至RT，並且用水(2×)及飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.32 - 8.14 (m, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 4H), 7.31 - 7.15 (m, 3H), 5.01 (pd, J = 6.3, 1.0 Hz, 1H), 4.22 - 3.99 (m, 1H), 3.89 (dd, J = 12.2, 9.1 Hz, 1H), 1.48 - 1.32 (m, 3H), 1.33 - 1.11 (m, 6H)； 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.00 , -3.03；MS m/z 409 (M+1)+。
Figure 02_image659
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2R)- 異丙酯 .將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-D-丙胺酸異丙酯(57 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至60℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在60℃下攪拌反應物17 h。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(330 μL)且攪拌20 h。反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加1 N氫氧化鈉溶液，得到pH值10。收集有機層，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.30 (m, 2H), 7.23 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (t, J= 4.7 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 13.9, 4.5 Hz, 1H), 5.53 - 5.46 (m, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.52 - 4.41 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.93 - 3.78 (m, 1H), 1.26 - 1.14 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.41, 3.13。MS m/z= 561.2 [M+1], 559.2 [M-1]。 實例87. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-異丙酯
Figure 02_image661
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 異丙酯 .藉由使用用於實例88之相同步驟，將(2S)-異丙基-2-胺基丁酸酯鹽酸鹽(1.28 g，7.05 mmol，1:1.6異構混合物)轉化成中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.33 - 8.23 (m, 2H), 7.55 - 7.34 (m, 4H), 7.34 - 7.17 (m, 3H), 5.00 - 4.87 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 1.86 - 1.49 (m, 2H), 1.18 (m, 6H), 0.87 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ -0.91, -1.10。MS m/z= 423 (M+H) +。
Figure 02_image663
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 異丙酯 .使用用於實例88之相同步驟，由中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-異丙酯(80 mg，0.19 mmol)及中間物4 (117 mg，0.28 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.7H), 7.79 (s, 0.3H), 7.39 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 4.98 - 4.82 (m, 1H), 4.62 (m,1H), 4.45 (m, 2H), 4.34 (m 1H), 3.72 (m, 1H), 1.77 - 1.47 (m, 2H), 1.21 - 1.12 (m, 6H), 0.83 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.68, 3.65。MS m/z= 575 (M+H) +。 實例 88. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)-2- 乙基丁酯
Figure 02_image665
2- 胺基丁酸 (S)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .向(S)-2-胺基丁酸(2.5 g，24.24 mmol)及2-乙基-丁-1-醇(25 mL)之混合物中添加TMSCl (8.64 mL)。在70℃下攪拌所得混合物15 h，且在80℃下在旋轉蒸發器中濃縮，與甲苯共蒸發若干次，高真空乾燥，得到中間物，且用於下一反應中。
Figure 02_image667
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .將化合物2-胺基丁酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(660 mg，2.95 mmol)懸浮於亞甲基氯(6 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.44 mL，2.95 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.82 mL，5.90 mmol)，且一次性添加4-硝基苯酚(410 mg，2.95 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.41 mL，2.95 mmol)。將所得混合物在-78℃下攪拌30 min，用水洗滌兩次且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至30% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.34 - 8.22 (m, 2H), 7.52 - 7.32 (m, 4H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 3.99 (m, 1.1 Hz, 2H), 3.89 (m, 1H), 1.76 (m, 1H), 1.65 (m, 1H), 1.50 - 1.38 (m, 1H), 1.38 - 1.25 (m, 4H), 0.97 - 0.79 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ -0.94, -1.20。MS m/z465 (M+H) +。
Figure 02_image669
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在室溫下向中間物4 (89 mg，0.21 mmol)、中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-2-乙基丁酯(130 mg，0.28 mmol)及MgCl 2(30 mg，0.31 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物中逐滴 N,N-二異丙基乙胺(0.09 mL，0.52 mmol)。將所得混合物在50℃下攪拌4 h，接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所獲得殘餘物溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.5 mL)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 0.63H), 7.78 (s, 0.37H), 7.25 (m, 5H), 6.97 - 6.58 (m, 2H), 5.49 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.45 (m , 2H), 4.34 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.83 - 3.73 (m, 1H), 1.77 - 1.65 (m, 1H), 1.59 (m, 1H), 1.43 (m, 1H), 1.38 - 1.21 (m, 4H), 0.85 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.62, 3.59。MS m/z617 (M+H) +。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image671
實例 89.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (m, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.47 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 4.06 - 3.93 (m, 2H), 3.78 (m, 1H), 1.80 - 1.66 (m, 1H), 1.60 (m, 1H), 1.53 - 1.42 (m, 1H), 1.39 - 1.22 (m, 4H), 0.94 - 0.79 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.59。 實例 90.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.64 - 4.58 (m, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 2H), 4.01 - 3.83 (m, 2H), 3.82 - 3.73 (m, 1H), 1.77 - 1.65 (m, 1H), 1.59 (m, 1H), 1.42 (m, 1H), 1.30 (m, 4H), 0.84 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.62。 實例91. 6-胺基-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)己酸(2S)-2-乙基丁酯
Figure 02_image673
N6-(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 離胺酸 2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .將4 N鹽酸(5 mL)添加至N6-((苯甲氧基)羰基)-L-離胺酸(1 g，4 mmol)於2-乙基-丁醇(10 mL)中之溶液中，且將所得混合物加熱至70℃。3 h後，在70℃下減壓濃縮反應混合物。將粗固體殘餘物溶解於己烷(150 mL)中，並攪拌4 h。藉由真空過濾收集所得白色結晶固體，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.38 - 7.25 (m, 5H), 5.06 (s, 2H), 4.26 - 4.12 (m, 2H), 4.03 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 3.13 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 2.01 - 1.80 (m, 2H), 1.62 - 1.32 (m, 8H), 0.92 (t, J = 7.5 Hz, 6H)。
Figure 02_image675
N6-(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-N2-((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 離胺酸 2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向N6-((苯甲氧基)羰基)-L-離胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(1.3 g，3.57 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.753 mL，3.57 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.422 mL，7.14 mmol)。將所得混合物升溫至RT，並攪拌1.5 h。接著添加4-硝基苯酚(496 mg，3.57 mmol)及三乙胺(0.5 mL，3.57 mmol)。1 h後，用二氯甲烷(50 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。MS m/z= 641.97 [M+1]。
Figure 02_image677
6- 胺基 -2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 己酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在RT下向中間物4 (43 mg，0.130 mmol)、中間物N6-((苯甲氧基)羰基)-N2-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-離胺酸2-乙基丁酯(83.3 mg，0.130 mmol)及氯化鎂(12.4 mg，0.106 mmol)之混合物中添加乙腈(1 mL)。將所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.057 mL，0.324 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著將反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.151 mL)。1 h後，用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到Cbz受保護中間物，將其溶解於TFA (1 mL)中，且將所得混合物加熱至50℃。2 h後，粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Luna 5μ C18(2) 100Å 100 × 30 mm管柱，5-100%乙腈/水梯度)純化，得到呈TFA鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) *表示主要非對映異構體 δ 8.05 (s, 1H), 8.00 (s, 1H*), 7.40 - 7.12 (m, 5H, 5H*), 6.98 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 4.8 Hz, 1H*), 5.55 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.0 Hz, 1H*), 4.57 - 4.50 (m, 1H, 1H*), 4.50 - 4.33 (m, 3H, 3H*), 4.08 - 3.96 (m, 2H, 2H*), 3.92 - 3.84 (m, 1H, 1H*), 2.87 (t, J= 7.8 Hz, 2H*), 2.83 - 2.75 (m, 2H), 1.87 - 1.73 (m, 2H, 2H*), 1.73 - 1.24 (m, 10H, 10H*), 0.94 - 0.81 (m, 6H, 6H*)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) *表示主要非對映異構體 δ 3.76 (s) 3.49* (s)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇-d4) δ -77.99。MS m/z= 660.31 [M+1]。 實例92. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-新戊酯
Figure 02_image679
2- 胺基丙酸 (S)- 新戊酯鹽酸鹽 .將Boc-L-丙胺酸(3.8 g，20 mmol)及新戊醇(2.1 g，24 mmol)溶解於無水二氯甲烷(20 mL)中。將反應混合物在冰浴中冷卻，且在氮氣氛圍下攪拌。分3批添加N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(5.8 g，30 mmol)。一次性添加4-(二甲基胺基)吡啶(244 mg，2 mmol)。攪拌反應物30 min，且接著移除冰浴。在室溫下攪拌反應物5 h。添加更多新戊醇(210 mg，2.4 mmol)及N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(500 mg)。攪拌反應物16 h。反應混合物用二氯甲烷(30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(15 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。將所得產物溶解於含4 N鹽酸之1,4-二㗁烷(10 mL)中，並攪拌30 min。添加無水醚(50 mL)並攪拌30 min。收集所得固體，用無水醚(100 mL)洗滌，且接著真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.51 (s, 3H), 4.10 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 3.92 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 3.79 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 1.42 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 0.91 (s, 9H)。
Figure 02_image681
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 新戊酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加2-胺基丙酸(S)-新戊酯鹽酸鹽(489 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1 h。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物2 h。反應混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.33 - 8.22 (m, 2H), 7.55 - 7.32 (m, 4H), 7.31 - 7.14 (m, 3H), 6.71 (m, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 1H), 3.80 - 3.60 (m, 2H), 1.24 (m, 3H), 0.84 (d, J= 1.6 Hz, 9H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -1.21, -1.40。MS m/z= 436.9 [M+1], 435.1 [M-1]。
Figure 02_image683
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 新戊酯 .將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-新戊酯(61 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至60℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在60℃下攪拌反應物20 h。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(400 μL)，且在室溫下攪拌4小時。反應混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值10。收集有機層，且用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.08 (m, 5H), 6.84 (dd, J= 4.5, 1.8 Hz, 1H), 6.73 (dd, J= 4.6, 1.7 Hz, 1H), 5.49 (m, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 3H), 3.94 (dq, J= 9.8, 7.1 Hz, 1H), 3.86 - 3.60 (m, 2H), 1.30 (m, 3H), 0.89 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.28。MS m/z= 589.0 [M+1], 586.9 [M-1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image685
實例 93.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (dd, J= 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.48 (m, 2H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.94 (dq, J= 9.5, 7.2 Hz, 1H), 3.86 - 3.70 (m, 2H), 1.36 - 1.24 (m, 3H), 0.91 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.26。 實例 94.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.60 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.44 - 4.31 (m, 2H), 3.94 (dq, J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 3.82 - 3.62 (m, 2H), 1.33 - 1.25 (m, 3H), 0.88 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.27。 實例95. 1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷甲酸異丙酯
Figure 02_image687
1- 胺基環丁烷甲酸異丙酯鹽酸鹽 .將1-胺基環丁烷甲酸鹽酸鹽(1.52 g，10 mmol)與異丙醇(30 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(12.7 mL，100 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物加熱至80℃且攪拌20 h，得到澄清溶液。減壓濃縮反應物。添加無水醚(50 mL)並攪拌30 min。收集所得固體，用己烷(50 mL)洗滌且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.73 (s, 3H), 5.00 (p, J= 6.2 Hz, 1H), 2.46 - 2.32 (m, 4H), 2.02 (m, 2H), 1.26 (d, J= 6.2 Hz, 6H)。
Figure 02_image689
1-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸異丙酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加1-胺基環丁烷甲酸異丙酯鹽酸鹽(484 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)，且移除冰浴。接著攪拌反應物2 h。
反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用1%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌，接著用5%碳酸鈉水溶液(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.49 - 7.43 (m, 2H), 7.43 - 7.35 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.92 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 4.85 (p, J= 6.2 Hz, 1H), 2.46 - 2.36 (m, 2H), 2.25 - 2.11 (m, 2H), 1.86 - 1.68 (m, 2H), 1.10 (d, J= 6.2 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -3.04。MS m/z= 434.9 [M+1], 433.1 [M-1]。
Figure 02_image691
1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸異丙酯 .將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷甲酸異丙酯(60 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(22 mg，0.232 mmol)。使反應物升溫至60℃，且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在60℃下攪拌反應物17小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(400 μL)，且在室溫下攪拌4小時。
反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值10。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (m, 1H), 7.36 - 7.09 (m, 5H), 6.83 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.55 - 4.31 (m, 3H), 2.56 - 2.34 (m, 2H), 2.34 - 2.13 (m, 2H), 1.94 - 1.75 (m, 2H), 1.26 - 1.17 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 2.03, 1.91。MS m/z= 587.0 [M+1], 585.0 [M-1]。 實例96. 磷酸氫((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯((R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙基)酯
Figure 02_image693
(R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙基 (2- 氯苯基 ) 磷酸三乙銨 .將二氯磷酸2-氯苯酯(0.371 mL，2.3 mmol)溶解於ACN (9.2 mL)中，所得溶液在冰浴中冷卻，且添加1,2,4-三唑(0.342 g，4.95 mmol)，接著添加Et 3N (0.689 mL，4.95 mmol)。移除冷浴，且45 min後添加(S)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙-1-醇(1 g，2.3 mmol)於吡啶(9.2 mL)中之溶液。在室溫下攪拌1小時25分鐘後，將Et 3N (0.810 mL)及水(0.23 mL)添加至反應物中。攪拌反應物10 min。添加飽和NaHCO 3水溶液，且再攪拌混合物10 min。混合物用DCM (3×)萃取，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥，藉由過濾移除Na 2SO 4。濃縮濾液且放置在高真空下，得到中間物。此物質按原樣直接用於後續反應中。 1H NMR (400 MHz, ACN-d 3) δ 7.61 (dt, J= 8.2, 1.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.24 (m, 6H), 7.17 (ddd, J= 8.5, 7.4, 1.7 Hz, 1H), 6.99 (td, J= 7.7, 1.5 Hz, 1H), 4.6 (m, 2H), 4.04 - 3.91 (m, 2H), 3.70 (pent, J= 5.1 Hz, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 2H), 3.36 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.96 (m, 6H), 1.49 (m, 2H), 1.27 (m, 30H), 1.19 (t, J= 7.3 Hz, 9H), 0.88 (t, J= 4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, ACN-d 3) δ -6.007 (s)。MS m/z= 624.97 [M+1]。
Figure 02_image695
(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((((R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 )(2- 氯苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-6- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -4- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯 .將中間物(R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(2-氯苯基)磷酸三乙銨(0.337 g，0.464 mmol)溶解於吡啶(4 mL)中。向此溶液中添加MSNT (0.275 g，0.927 mmol)，接著添加中間物2 (0.1 g，0.232 mmol)。向此溶液中添加N-甲基咪唑(NMI) (0.046 mL，0.579 mmol)，且在室溫下攪拌反應物，藉由LC/MS監測中間物2之消失。反應物在冰浴中冷卻，且藉由緩慢添加飽和NaHCO 3水溶液而淬滅。用水、飽和NaHCO 3水溶液及鹽水之1:1:1混合物稀釋水層。用DCM (3×)萃取水層，且合併之有機物經Na 2SO 4乾燥，藉由過濾移除Na 2SO 4。濃縮濾液，且中間物藉由矽膠管柱層析(25 g裝載濾筒，40 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100%己烷變化為60% EtOAc/己烷)分離。 1H NMR (400 MHz, ACN-d 3) δ 8.44 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.47 - 7.39 (m, 1H), 7.36 - 7.32 (m, 1H), 7.31 - 7.21 (m, 5H), 7.20 - 7.06 (m, 3H), 6.91 (s, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.25 (ddd, J= 12.9, 6.6, 3.2 Hz, 1H), 5.04 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 4.60 - 4.13 (m, 6H), 3.72 (p, J= 5.0 Hz, 1H), 3.43 (dd, J= 7.8, 5.3 Hz, 2H), 3.35 (m, 2H), 1.71 - 1.67 (m, 3H), 1.59 - 1.50 (m, 9H), 1.47 (m, 2H), 1.35 (s, 3H), 1.32 -1.20 (m, 30H), 0.87 (t, J= 4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, ACN-d 3) δ -7.31 (s), -7.41 (s)。MS m/z= 1038.33 [M+1]。
Figure 02_image697
(R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙基 (((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲基 ) 磷酸四丁銨 .將中間物(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((((R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(2-氯苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-4-基)胺基甲酸三級丁酯(0.532 g，0.512 mmol)溶解於THF (5.7 mL)中，且添加吡啶(0.7 mL)及水(0.7 mL)。向所得澄清均質溶液中添加TBAF於THF中之1 M溶液(1.537 mL，1.537 mmol)。在室溫下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測反應進程。完成後，將反應物在冰浴中冷卻，且用2移液管之飽和NaHCO 3水溶液淬滅。此溶液進一步用2移液管之水稀釋，且用DCM (4×)萃取所得混合物。用2 N HCl使水相成酸性(pH值約3)，且接著用額外DCM (3×)萃取。合併之有機相用鹽水(其pH值用飽和NaHCO 3水溶液調整為8)萃取，經Na 2SO 4乾燥，藉由過濾移除Na 2SO 4。濃縮濾液，且中間物藉由矽膠管柱層析(12 g裝載濾筒，80 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100% DCM變化為20% MeOH/DCM)分離。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.18 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.36 - 7.09 (m, 6H), 6.86 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.12 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 5.02 (dd, J= 6.6, 3.9 Hz, 1H), 4.64 (dd, J= 18, 12 Hz, 2H), 4.13 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 3.94 (m, 2H), 3.77 (s, 1H), 3.58 (dd, J= 10.4, 2.4 Hz, 1H), 3.48 (dd, J= 10.6, 6.5 Hz, 1H), 3.35 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.32 - 3.22 (m, N +(C H 2CH 2CH 2CH 3) 4, 8H), 1.70 (s, 3H), 1.66 - 1.56 (m, N +(CH 2C H 2CH 2CH 3) 4, 8H), 1.54 (s, 9H), 1.52 - 1.47 (m, 2H), 1.36 - 1.45 (m, N +(CH 2CH 2C H 2CH 3) 4, 8H), 1.32 (s, 3H), 1.30 - 1.18 (m, 30H), 1.00 - 0.93 (m, N +(CH 2CH 2CH 2C H 3) 4, 12H), 0.86 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d 6) δ -0.875 (s)。MS m/z= 928.18 [M+1]。
Figure 02_image699
磷酸氫 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯 ((R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙基 ) 酯 .將中間物(R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲基)磷酸四丁銨(0.518 g，0.558 mmol)溶解於THF (15 mL)中。在室溫下向此溶液中添加12 M HCl水溶液(3.837 mL，46 mmol)。在室溫下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測反應進程。完成後，濃縮反應物，且殘餘物與THF (2×)及DCM (2×)共蒸發。將所得殘餘物溶解於DCM中，且產物藉由矽膠管柱層析(12 g裝載濾筒，40 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100% DCM變化為20% MeOH/DCM)分離。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.33 - 7.17 (m, 5H), 6.83 (dd, J= 11.6, 4.4 Hz, 2H), 5.55 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.65 - 4.49 (m, 4H), 4.20 - 4.08 (m, 2H), 3.95 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 3.71 (pent., J= 5 Hz, 1H), 3.52 (dd, J= 10.6, 3.8 Hz, 1H), 3.44 (dd, J= 10.7, 6.0 Hz, 1H), 3.37 (td, J= 6.6, 2.9 Hz, 2H), 1.50 (pent., J= 6.7 Hz, 2H), 1.36 - 1.21 (m, 30H), 0.90 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -0.410。MS m/z= 788.16 [M+1]。 實例97. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-乙酯
Figure 02_image701
2- 胺基丁酸 (S)- 乙酯鹽酸鹽 .向(S)-乙基2-胺基丁酸(5 g，48.5 mmol)及乙醇(28 mL)之混合物中添加TMSCl (17 mL)。在70℃下攪拌所得混合物15 h，且真空濃縮。將所得固體用5% EtOAc/己烷濕磨，過濾，且用5% EtOAc/己烷洗滌若干次，且高真空乾燥15 h，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.83 (s, 3H), 4.27 (p, J= 7.0 Hz, 2H), 4.06 (q, J= 5.6 Hz, 1H), 2.28 - 2.01 (m, 2H), 1.31 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 1.12 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 乙酯 .藉由用於實例88之相同步驟，將中間物2-胺基丁酸(S)-乙酯鹽酸鹽(1.20 g，7.16 mmol)轉化成中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.34 - 8.09 (m, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 4.15 (m, 2H), 4.09 - 3.97 (m, 1H), 3.90 - 3.74 (m, 1H), 1.88 - 1.62 (m, 2H), 1.24 (m, 3H), 0.86 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.68, -2.73。MS m/z409 (M+H) +。
Figure 02_image703
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 乙酯 .藉由用於實例88之相同步驟，由中間物4 (50 mg，0.12 mmol)及中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-乙酯(71 mg，0.18 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 0.56H), 7.78 (s, 0.44H), 7.39 - 7.06 (m, 5H), 6.93 - 6.80 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.56 - 4.26 (m, 3H), 4.19 - 3.94 (m, 2H), 3.84 - 3.65 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.18 (m, 3H), 0.82 (m 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.61, 3.60。MS m/z= 561 (M+H) +。 實例 98. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 纈胺酸環己酯
Figure 02_image705
L- 纈胺酸環己酯鹽酸鹽 .將4 N鹽酸(50 mL)添加至L-纈胺酸(5 g，43 mmol)於環己醇(45 g)中之溶液中，且將所得混合物加熱至70℃。20 h後，在70℃下減壓濃縮反應混合物。將粗固體殘餘物溶解於己烷(250 mL)中，且攪拌24 h。藉由真空過濾收集所得白色結晶固體，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 4.99 - 4.88 (m, 1H), 3.89 (d, J =4.5 Hz, 1H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 2H), 1.83 - 1.70 (m, 1H), 1.66 - 1.28 (m, 7H), 1.12 - 1.02 (m, 6H)。
Figure 02_image707
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 纈胺酸環己酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物L-纈胺酸環己酯鹽酸鹽(0.945 g，4.74 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.705 mL，4.74 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.2 mL，9.4 mmol)。將所得混合物升溫至RT，並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h後，用二氯甲烷(50 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 8.31 - 8.24 (m, 2H), 7.49 - 7.18 (m, 7H), 4.72 - 4.62 (m, 1H), 3.74 - 3.66 (m, 1H), 2.09 - 1.95 (m, 1H), 1.79 - 1.64 (m, 2H), 1.57 - 1.47 (m, 1H), 1.44 - 1.25 (m, 7H), 0.92 - 0.84 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ -0.28 (s), -0.59 (s)。MS m/z= 476.85 [M+1]。
Figure 02_image709
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 纈胺酸環己酯 .在RT下向中間物4 (20.0 mg，0.060 mmol)、中間物((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-纈胺酸環己酯(28.8 mg，0.060 mmol)及氯化鎂(5.7 mg，0.060 mmol)之混合物中添加乙腈(0.50 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.026 mL，0.151 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.025 mL)。1 h後，反應混合物用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (s, 0.55H), 7.78 (s, 0.45H), 7.34 - 7.10 (m, 5H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.47 (m, 1H), 4.76 - 4.58 (m, 2H), 4.51 - 4.41 (m, 2H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 3.67 - 3.59 (m, 1H), 2.05 - 1.91 (m, 1H), 1.83 - 1.61 (m, 1H), 1.56 - 1.26 (m, 9H), 0.90 - 0.80 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 4.15 (s), 4.09 (s)。LCMS：MS m/z= 629.32 [M+1]，t R= 1.68 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.12 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 5.92 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例99. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-乙酯
Figure 02_image711
3- 胺基丁酸 (S)- 異丙酯鹽酸鹽 .將(S)-3-胺基丁酸(1 g，10 mmol)與異丙醇(30 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(12.7 mL，100 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物加熱至80℃，且攪拌20小時。逐滴添加更多氯化三甲基矽烷(6 mL)。在80℃下攪拌反應物20小時，得到澄清溶液。減壓濃縮反應物，得到糊狀物，將其與無水醚(100 mL)混合並攪拌5 min。收集固體，用無水醚(50 mL)洗滌，且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.20 (s, 3H), 4.91 (p, J= 6.3 Hz, 1H), 3.49 - 3.38 (m, 1H), 2.73 (dd, J= 16.3, 5.5 Hz, 1H), 2.57 - 2.49 (m, 1H), 1.19 (m, 9H)。
Figure 02_image713
3-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (3S)- 異丙酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加3-胺基丁酸(S)-異丙酯鹽酸鹽(454 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌40 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)，且移除冰浴。接著攪拌反應物2小時。添加更多對硝基苯酚(50 mg)並攪拌1小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用1%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌，接著用5%碳酸鈉水溶液(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.33 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.34 (m, 4H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.18 (ddd, J= 13.4, 9.8, 1.8 Hz, 1H), 4.79 (pd, J= 6.3, 4.4 Hz, 1H), 3.78 - 3.57 (m, 1H), 2.43 - 2.22 (m, 2H), 1.10 (m, 6H), 1.05 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.90, -0.98。MS m/z= 422.9 [M+1], 421.1 [M-1]。
Figure 02_image715
3-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (3S)- 異丙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及3-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(3S)-異丙酯(76 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(29 mg，0.3 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物15小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(400 μL)，且在室溫下攪拌4小時。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值10。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (M, 1H), 7.37 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.53 - 5.46 (m, 1H), 4.97 - 4.89 (m, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.48 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.45 - 4.26 (m, 2H), 3.75 - 3.61 (m, 1H), 2.47 - 2.23 (m, 2H), 1.17 (m, 6H), 1.11 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.83, 3.74。MS m/z= 575.0 [M+1], 573.0 [M-1]。 實例100. 1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷甲酸2-乙基丁酯
Figure 02_image717
1- 胺基環丁烷甲酸 2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .將1-胺基環丁烷甲酸鹽酸鹽(1.52 g，10 mmol)與無水四氫呋喃(20 mL)混合。添加2-乙基-1-丁醇(1.5 mL，12 mmol)。逐滴添加氯化三甲基矽烷(12.7 mL，100 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物加熱至80℃，且攪拌20小時。添加更多2-乙基-1-丁醇(3 mL)，且在80℃下攪拌2天。減壓濃縮反應物。添加2-乙基-1-丁醇(15 mL)。逐滴添加氯化三甲基矽烷(10 mL)。將反應混合物加熱至80℃，且攪拌20小時。減壓濃縮反應物，得到中間物，將其高真空乾燥，且不經進一步純化即使用。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.85 (s, 3H), 4.12 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 2.55 - 2.36 (m, 4H), 2.11 - 1.93 (m, 2H), 1.63 - 1.45 (m, 1H), 1.35 (p, J= 7.3 Hz, 4H), 0.87 (t, J= 7.4 Hz, 6H)。
Figure 02_image719
1-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸 2- 乙基丁酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加1-胺基環丁烷甲酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(590 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)，且移除冰浴。接著攪拌反應物1小時。添加更多對硝基苯酚(55 mg)並攪拌1小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.34 - 8.23 (m, 2H), 7.50 - 7.33 (m, 4H), 7.21 (m, 3H), 6.95 (m, 1H), 3.90 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 2.42 (m, 2H), 2.29 - 2.11 (m, 2H), 1.88 - 1.68 (m, 2H), 1.38 (m, 1H), 1.25 (m, 4H), 0.77 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -3.13。MS m/z= 477.0 [M+1], 475.2 [M-1]。
Figure 02_image721
1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸 2- 乙基丁酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷甲酸2-乙基丁酯(76 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(29 mg，0.3 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物15小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在室溫下攪拌80 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值10。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (m, 1H), 7.37 - 7.09 (m, 5H), 6.83 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.51 - 5.49 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.32 (m, 3H), 4.07 - 3.99 (m, 2H), 2.57 - 2.36 (m, 2H), 2.36 - 2.18 (m, 2H), 1.96 - 1.76 (m, 2H), 1.58 - 1.43 (m, 1H), 1.43 - 1.29 (m, 4H), 0.94 - 0.80 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 1.95, 1.83。MS m/z= 629.1 [M+1], 627.0 [M-1]。 實例101. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-戊-3-基酯
Figure 02_image723
2- 胺基丙酸 (S)- 戊 -3- 基 酯鹽酸鹽 .向L-丙胺酸酯(5 g，56.12 mmol)及3-羥基戊烷(50 mL)之混合物中添加TMSCl (20 mL)。在70℃下攪拌所得混合物15 h，且在80℃下在旋轉蒸發器中濃縮。將所得固體用含5% EtOAc之己烷濕磨，過濾，且用含5% EtOAc之己烷洗滌若干次，並且高真空乾燥隔夜，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.79 (s, 3H), 4.83 (p, J= 6.2 Hz, 1H), 4.19 (p, J= 6.5 Hz, 1H), 1.72 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.67 - 1.52 (m, 4H), 0.88 (td, J= 7.5, 1.7 Hz, 6H)。
Figure 02_image725
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 戊 -3- 基 酯 .將中間物2-胺基丙酸(S)-戊-3-基酯鹽酸鹽(1.00 g，5.11 mmol)懸浮於亞甲基氯(15 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.76 mL，5.11 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(1.42 mL，10.22 mmol)，且在-78℃下攪拌所得混合物30 min。接著在-78℃下一次性添加4-硝基苯酚(711 mg，5.11 mmol)且經30 min添加三乙胺(0.71 mL，5.11 mmol)。在-78℃下攪拌混合物30 min，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至20% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 4H), 7.31 - 7.14 (m, 3H), 4.78 (m, 1H), 4.27 - 4.04 (m, 1H), 3.98 - 3.77 (m, 1H), 1.72 - 1.45 (m, 4H), 1.42 (m, 3H), 0.84 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.99 , -3.06。MS m/z= 437 (M+H) +。
Figure 02_image727
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 戊 -3- 基酯 .在室溫下向中間物4 (66 mg，0.30 mmol)、中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-戊-3-基酯(170 mg，0.39 mmol)及MgCl 2(28 mg，0.30 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.087 mL，0.50 mmol)。在60℃下攪拌所得混合物15 h，且藉由HPLC (0至100% ACN/水)純化，得到中間物，將其溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.1 mL)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，5-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m , 1H), 7.36 - 7.07 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.76 - 4.59 (m, 2H), 4.54 - 4.40 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.63 - 1.42 (m, 4H), 1.27 (m, 3H), 0.91 - 0.75 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.37, 3.29。MS m/z= 589 (M+H) +。 實例102. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2R)-新戊酯
Figure 02_image729
2- 胺基丙酸 (R)- 新戊酯鹽酸鹽 .藉由使用用於實例97之相同步驟，由中間物(R)-2-胺基丙酸(500 mg，5.61 mmol)及中間物新戊醇(5.0 g，56.7 mmol)獲得中間物。
Figure 02_image731
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2R)- 新戊酯 .藉由用於實例88之相同步驟，將中間物2-胺基丙酸(R)-新戊酯鹽酸鹽(1.0 g，5.11 mmol)轉化成中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 4H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 4.25 - 4.13 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 1H), 3.86 (dd, J= 10.6, 1.2 Hz, 1H), 3.78 (dd, J= 10.5, 3.4 Hz, 1H), 1.43 (m, 3H), 0.92 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.01, -3.06。MS 437 (M+H) +。
Figure 02_image733
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2R)- 新戊酯 .藉由用於實例88之相同步驟，由中間物4 (80 mg，0.19 mmol)及中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2R)-新戊酯(198 mg，0.45 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.5H), 7.78 (s, 0.5H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.08 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.52 - 4.41 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.96 (m , 1H), 3.83 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 1.31 (dd, J= 7.2, 1.0 Hz, 1.5H), 1.24 (dd, J= 7.2, 1.2 Hz, 1.5H), 0.89 (d, J= 1.7 Hz, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.39, 3.08。MS m/z= 589 (M+H) +。 實例103. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-環己酯
Figure 02_image735
2- 胺基丁酸 (S)- 環己酯鹽酸鹽 .將4 N鹽酸(12 mL)添加至(S)-2-胺基丁酸(1 g，10 mmol)於環己醇(5 mL)中之溶液中，且將所得混合物加熱至70℃。20 h後，在70℃下減壓濃縮反應混合物。將粗固體殘餘物溶解於己烷(150 mL)中，且攪拌4 h。藉由真空過濾收集所得白色結晶固體，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 4.96 - 4.86 (m, 1H), 3.96 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 2.02 - 1.85 (m, 4H), 1.82 - 1.70 (m, 2H), 1.63 - 1.26 (m, 6H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。
Figure 02_image737
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 環己酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基丁酸(S)-環己酯鹽酸鹽(0.878 g，4.74 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.705 mL，4.74 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.2 mL，9.4 mmol)。將所得混合物升溫至RT，並攪拌1.5 h。接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h後，用二氯甲烷(50 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.28 (br d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.52 - 7.33 (m, 4H), 7.29 - 7.17 (m, 3H), 6.61 (td, J = 12.8, 10.2 Hz, 1H), 4.65 - 4.55 (m, 1H), 3.74 (tdd, J = 10.1, 7.8, 5.6 Hz, 1H), 1.75 - 1.37 (m, 6H), 1.36 - 1.13 (m, 5H), 0.76 (dd, J = 7.4, 6.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d 6) δ -0.79 (s), -1.03 (s)。MS m/z= 462.93 [M+1]。
Figure 02_image739
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 環己酯 .在RT下向中間物4 (35.0 mg，0.106 mmol)、中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-環己酯(49.0 mg，0.106 mmol)及氯化鎂(10.1 mg，0.106 mmol)之混合物中添加乙腈(0.50 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.05 mL，0.246 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.123 mL，1.5 mmol)。1 h後，反應混合物用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。MS m/z= 615.16 [M+H]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image741
實例 104.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.82 (s, 1H), 7.39 - 7.17 (m, 5H), 6.87 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.61 (m, 2H), 4.53 - 4.32 (m, 3H), 3.95 (p, J = 6.2 Hz, 1H), 3.78 (dt, J = 9.5, 6.6 Hz, 1H), 1.84 - 1.22 (m, 11H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 3.69 (s)。MS m/z= 615.16 [M+H] 實例 105.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.81 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.24 - 7.14 (m, 3H), 6.88 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.54 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.78 - 4.69 (m, 1H), 4.65 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 2H), 4.39 (dd, J = 10.9, 5.3 Hz, 1H), 3.95 (p, J = 6.2 Hz, 1H), 3.77 (td, J = 7.9, 5.4 Hz, 1H), 1.87 - 1.25 (m, 11H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 3.68 (br s)。MS m/z= 615.16 [M+H] 實例106. 1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丙烷甲酸乙酯
Figure 02_image743
1-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丙烷甲酸乙酯 .藉由用於實例88之相同步驟，將1-胺基環丙烷-1-甲酸乙酯鹽酸鹽(1.0 g，6.04 mmol)轉化成中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.21 (m, 2H), 7.41 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.14 (m, 3H), 4.05 (m, 3H), 1.68 - 1.44 (m, 4H), 1.16 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.16。MS m/z= 407 (M+H) +。
Figure 02_image745
1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丙烷甲酸乙酯 .在室溫下向中間物4 (100 mg，0.30 mmol)、中間物1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丙烷甲酸乙酯(147 mg，0.36 mmol)及MgCl 2(43 mg，0.45 mmol)於THF (4 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.76 mmol)。將所得混合物在60℃下攪拌15 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.5 mL)。在室溫下攪拌混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，且接著藉由矽膠管柱層析(0至15% MeOH/亞甲基氯)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.5H), 7.77 (s, 0.5H), 7.38 - 7.23 (m, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.54 (m, 0.5H), 4.52 - 4.40 (m, 2H), 4.37 (m, 0.5H), 4.13 - 4.01 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.17 (m, 3H), 1.07 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.7, 3.61。MS m/z= 559 (M+H) +。 實例107. 1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丙烷甲酸乙酯
Figure 02_image747
1- 胺基環丁烷甲酸環己酯鹽酸鹽 .將1-胺基環丁烷甲酸鹽酸鹽(758 mg，5 mmol)與環己醇(5 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(6.4 mL，50 mmol)，且在RT下攪拌30 min。將反應混合物加熱至80℃，且攪拌20小時。添加更多環己醇(5 mL)及氯化三甲基矽烷(6 mL)。在80℃下攪拌反應物，且攪拌20小時。減壓濃縮反應物。殘餘物與甲苯(5×)共沸，得到凝膠/固體。添加己烷(100 mL)並攪拌15 min，得到固體，收集該固體，用己烷(50 mL)洗滌且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.77 (s, 3H), 4.84 (tt, J= 7.8, 3.6 Hz, 1H), 2.47 - 2.35 (m, 4H), 2.10 - 1.95 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.67 (m, 2H), 1.59 - 1.24 (m, 6H)。
Figure 02_image749
1-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸環己酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加1-胺基環丁烷甲酸環己酯(584 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物14小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.34 - 8.23 (m, 2H), 7.50 - 7.43 (m, 2H), 7.43 - 7.35 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.90 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 4.64 (m, 1H), 2.43 (m, 2H), 2.28 - 2.14 (m, 2H), 1.88 - 1.72 (m, 2H), 1.72 - 1.52 (m, 4H), 1.42 (dd, J= 11.7, 6.4 Hz, 1H), 1.36 - 1.16 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -3.06。MS m/z= 474.9 [M+1], 473.2 [M-1]。
Figure 02_image751
1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸環己酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷甲酸環己酯(85 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物14小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在室溫下攪拌60 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值10。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (m, 1H), 7.37 - 7.09 (m, 5H), 6.87 - 6.81 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.52 - 5.47 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.67 - 4.59 (m, 1H), 4.54 - 4.32 (m, 3H), 2.47 (m, 2H), 2.34 - 2.17 (m, 2H), 1.97 - 1.59 (m, 7H), 1.58 - 1.24 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 2.00, 1.88。MS m/z= 627.1 [M+1], 625.0 [M-1]。 實例108. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環戊酯
Figure 02_image753
2- 胺基丙酸 (S)- 環戊酯鹽酸鹽 .藉由用於中間物11之相同步驟，由L-丙胺酸酯(3 g，33.67 mmol)及環戊醇(31 mL)製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.73 (d, J= 5.8 Hz, 3H), 5.26 (tt, J= 5.7, 2.4 Hz, 1H), 4.14 (q, J= 6.5 Hz, 1H), 1.99 - 1.41 (m, 11H)。
Figure 02_image755
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 環戊酯 .藉由用於中間物25之相同步驟，將2-胺基丙酸(S)-環戊酯鹽酸鹽(1.0 g，5.16 mmol)轉化成中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.45 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.11 (m, 3H), 5.17 (m, 1H), 4.18 - 3.97 (m, 1H), 3.93 - 3.75 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 1.76 - 1.51 (m, 6H), 1.38 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.99, -3.03。MS m/z= 435 (M+H) +。
Figure 02_image757
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 環戊酯 .在室溫下向中間物4 (79 mg，0.24 mmol)、中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環戊酯(155 mg，0.326 mmol)及MgCl 2(34 mg，0.36 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.104 mL，0.60 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物15 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.3 mL)。攪拌混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (m, 1H), 7.41 - 7.08 (m, 5H), 6.87 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.13 - 5.06 (m, 0.31H), 5.03 (td, J= 6.0, 3.1 Hz, 0.69H), 4.69 - 4.55 (m, 1H), 4.55 - 4.21 (m, 3H), 3.84 (m, 1H), 1.93 - 1.43 (m, 8H), 1.24 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32, 2.75。MS m/z= 587 (M+H) +。 實例109. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-環戊酯
Figure 02_image759
2- 胺基丁酸 (S)- 環戊酯鹽酸鹽 .將(S)-2-胺基丁酸(515 mg，5 mmol)與環戊醇(10 mL)混合。逐滴添加亞硫醯氯(1.1 mL，15 mmol)。將反應混合物加熱至60℃並攪拌20小時。減壓濃縮反應物，得到固體。添加己烷(100 mL)並攪拌15 min。收集固體，用己烷(100 mL)洗滌，且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.48 (s, 3H), 5.17 (ddt, J= 5.9, 4.0, 2.1 Hz, 1H), 3.88 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 1.81 (m, 4H), 1.73 - 1.50 (m, 6H), 0.90 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。
Figure 02_image761
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 環戊酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加2-胺基丁酸(S)-環戊酯鹽酸鹽(519 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物14小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(20 mL)洗滌，接著用2%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.34 - 8.22 (m, 2H), 7.53 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.15 (m, 3H), 6.60 (dt, J= 13.4, 10.4 Hz, 1H), 4.98 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 1.82 - 1.67 (m, 2H), 1.67 - 1.40 (m, 8H), 0.75 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.82, -1.02。MS m/z= 448.9 [M+1], 447.1 [M-1]。
Figure 02_image763
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 環戊酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-環戊酯(81 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物14小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在室溫下攪拌60 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值9。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.36 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.53 - 5.47 (m, 1H), 5.19 - 4.93 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 1.90 - 1.43 (m, 10H), 0.82 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.66, 3.59。MS m/z= 601.1 [M+1], 699.0 [M-1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image765
實例 110.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 5.02 (tt, J= 5.6, 2.4 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 2H), 4.32 (dd, J= 10.9, 5.3 Hz, 1H), 3.71 (ddd, J= 9.6, 7.4, 5.7 Hz, 1H), 1.85 - 1.46 (m, 10H), 0.83 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.67。 實例 111.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.23 (m, 2H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 5.09 (tt, J= 5.6, 2.5 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.41 (m, 2H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.3 Hz, 1H), 3.77 - 3.65 (m, 1H), 1.91 - 1.48 (m, 10H), 0.82 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.61。 實例112. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酸環戊酯
Figure 02_image767
2- 胺基乙酸環戊酯鹽酸鹽 .將甘胺酸(750 mg，10 mmol)與環戊醇(10 mL)混合。逐滴添加亞硫醯氯(2.6 mL)並攪拌30 min。將反應混合物加熱至60℃且攪拌20小時。減壓濃縮反應物且高真空乾燥。添加己烷(100 mL)並攪拌15 min，得到固體。收集固體，用己烷(100 mL)洗滌，且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.38 (s, 3H), 5.17 (tt, J= 6.3, 2.5 Hz, 1H), 3.71 (s, 2H), 1.94 - 1.73 (m, 2H), 1.73 - 1.47 (m, 6H)。
Figure 02_image769
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酸環戊酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加2-胺基乙酸環戊酯鹽酸鹽(449 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物3小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(10 mL)洗滌，接著用2%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.34 - 8.21 (m, 2H), 7.53 - 7.43 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 2H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.53 (dt, J= 14.3, 7.1 Hz, 1H), 5.04 (m, 1H), 3.71 (dd, J= 14.9, 7.1 Hz, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.54 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.11。MS m/z= 420.9 [M+1], 419.1 [M-1]。
Figure 02_image771
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酸環戊酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酸環戊酯(76 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物8小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在室溫下攪拌60 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值9。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.12 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.32 (m, 3H), 3.67 - 3.58 (m, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.74 - 1.48 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 4.52, 4.36。MS m/z= 573.1 [M+1], 571.0 [M-1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image773
實例 113.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.09 (tt, J= 5.6, 2.5 Hz, 1H), 4.68 - 4.58 (m, 1H), 4.44 (m, 3H), 3.66 - 3.58 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.74 - 1.48 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 4.54。 實例 114.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 5.15 (ddt, J= 8.1, 5.4, 2.4 Hz, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.51 (m, 2H), 4.36 (dd, J= 10.8, 5.1 Hz, 1H), 3.67 - 3.55 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.75 - 1.50 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 4.39。 實例115. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-戊-3-基酯
Figure 02_image775
2- 胺基丁酸 (S)- 戊 -3- 基 酯鹽酸鹽 .將L-2-胺基丁酸(515 mg，5 mmol)與3-戊醇(10 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(6.4 mL，50 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物加熱至60℃且攪拌20小時。減壓濃縮反應物。添加己烷(100 mL)並攪拌15 min，得到固體。收集固體，用己烷(100 mL)洗滌，且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.50 (s, 3H), 4.76 (tt, J= 7.2, 5.1 Hz, 1H), 3.97 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 1.84 (m, 2H), 1.67 - 1.43 (m, 4H), 0.93 (t, J= 7.5 Hz, 3H), 0.84 (td, J= 7.4, 2.8 Hz, 6H)。
Figure 02_image777
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 戊 -3- 基 酯 .將二氯磷酸苯酯(374 μL，2.5 mmol)溶解於無水二氯甲烷(25 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加2-胺基丁酸(S)-戊-3-基酯(524 mg，2.5 mmol)。逐滴添加三乙胺(768 μL，5.5 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(384 μL，2.75 mmol)並攪拌20 min。添加對硝基苯酚(278 mg，2 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物14小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(10 mL)洗滌，接著用2%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.31 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.33 (m, 4H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 6.62 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 3.85 - 3.71 (m, 1H), 1.74 - 1.31 (m, 6H), 0.84 - 0.67 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.77, -1.00。MS m/z= 451.0 [M+1], 449.1 [M-1]。
Figure 02_image779
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸 (2S)- 戊 -3- 基酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸(2S)-戊-3-基酯(81 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在冰浴中攪拌60 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值9。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.36 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.76 - 4.56 (m, 2H), 4.54 - 4.40 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 3.78 (m, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.66 - 1.44 (m, 5H), 0.90 - 0.75 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.72, 3.63。MS m/z= 603.1 [M+1], 601.0 [M-1]。 實例116. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-2-環己基乙酸(2S)-2-乙基丁酯.
Figure 02_image781
在RT下向中間物4 (40.0 mg，0.093 mmol)、中間物35 (57.69 mg，0.111 mmol)及氯化鎂(13.24 mg，0.139 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.040 mL，0.232 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物30 min。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.200 mL，2.4 mmol)。1 h後，使反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.36 min，MS m/z= 671.34 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.75 (br s,2 H), 7.39 - 7.20 (m, 3H), 7.23 - 7.04 (m, 2H), 6.84 (d, J= 4.5, 1H), 6.70 (d, J= 4.5, 1H), 6.09 (m, 1H), 5.96 (m, 1H), 5.47 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 5.37 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.39 - 4.22 (m, 2H), 3.99 - 3.81 (m, 2H), 3.77 (m, 1H), 3.62 - 3.44 (m, 1H), 1.67 - 0.65 (m, 22H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 4.06 (s), 3.90 (s)。 實例117. 1-((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)吡咯啶-2-甲酸(2R)-乙酯
Figure 02_image783
吡咯啶 -1,2- 二甲酸 (S)-1- 三級丁 酯 2- 乙酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-脯胺酸(10 g，0.046 mol)溶解於CH 2Cl 2(200 mL)中。向此溶液中添加EDCI (8.66 g，0.056 mol)、DMAP (1.70 g，0.014 mol)及DIPEA (8.9 mL，0.051 mol)。接著添加EtOH (13.56 mL，0.232 mL)，且在室溫下攪拌反應物。2小時後，將反應物在冰浴中冷卻，且經由逐移液管添加飽和NaHCO 3水溶液而淬滅。將混合物升溫至室溫，且進一步用CH 2Cl 2及飽和NaHCO 3水溶液稀釋。分離各層，且用水洗滌有機層。有機相接著用pH 3之水(將水添加至分液漏斗且藉由添加0.5 N HCl調整pH值)、半飽和鹽水洗滌，且經Na 2SO 4乾燥。藉由過濾移除乾燥劑。濃縮濾液，且中間物藉由矽膠管柱層析(25 g裝載濾筒，220 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100%己烷變化為35% EtOAc/己烷)分離。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 4.17 - 4.00 (m, 3H), 3.40 - 3.26 (m, 2H), 2.26 - 2.12 (m, 1H), 1.88 - 1.75 (m, 3H), 1.39 (s, Boc旋轉異構體#1, 4H), 1.33 (s, Boc旋轉異構體#2, 5H), 1.22 -1.15 (m, 3H)。
Figure 02_image785
吡咯啶 -2- 甲酸 (S)- 乙 酯 鹽酸鹽 .將中間物吡咯啶-1,2-二甲酸(S)-1-三級丁酯2-乙酯(6.94 g，0.029 mol)溶解於CH 2Cl 2(20 mL)中。向此溶液中添加HCl於二㗁烷中之4 N溶液(35.66 mL，0.143 mol)。在室溫下攪拌所得溶液，且藉由TLC監測反應進程。1小時5分鐘後，將反應物濃縮成油狀物，且接著與CH 2Cl 2共蒸發兩次。將所得殘餘物在高真空下放置隔夜，且按原樣用於後續反應中。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.34 (brs, 1H), 9.03 (brs, 1H), 4.33 (t, J= 9.1 Hz, 1H), 4.21 (四重峰, J= 7.2 Hz, 2H), 3.28 -3.13 (m, 2H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.04 - 1.84 (m, 3H), 1.24 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image787
1-((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 吡咯啶 -2- 甲酸 (2S)- 乙 酯 .將中間物吡咯啶-2-甲酸(S)-乙酯鹽酸鹽(1.725 g，9.602 mmol)溶解於CH 2Cl 2(50 mL)中。將此溶液在冰浴中冷卻，且添加二氯磷酸苯酯(1.242 mL，8.35 mmol)，接著添加Et 3N (2.58 mL，18.37 mmol)。反應物變成非均質白色混合物。移除冷浴，且在室溫下攪拌反應物1小時30分鐘。接著添加4-硝基苯酚(1.1 g，7.932 mmol)，接著添加額外Et 3N (1.17 mL，8.35 mmol)。藉由LC/M監測反應進程，且40分鐘後，添加NMI (0.632 mL，7.932 mmol)。再攪拌反應物30分鐘，且接著用Et 2O稀釋。藉由過濾移除所得固體。濃縮濾液，且中間物藉由矽膠管柱層析(25 g裝載濾筒，120 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100%己烷變化為50% EtOAc/己烷)分離。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.35 - 8.25 (m, 2H), 7.56 - 7.39 (m, 4H), 7.33 - 7.21 (m, 3H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 2.18 - 2.06 (m, 1H), 1.96 - 1.74 (m, 3H), 1.11 (td, J= 7.1, 2.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -3.589 (s), -3.688 (s)。MS m/z= 421.2 [M+1]。
Figure 02_image789
1-((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 吡咯啶 -2- 甲酸 (2R)- 乙酯 .將中間物4 (0.05 g，0.151 mmol)溶解於NMP (0.5 mL)中，且接著添加THF (0.5 mL)。將此溶液在冰浴中冷卻，且添加 t-BuMgCl於THF中之1 M溶液(0.181 mL，0.181 mmol)，形成白色沈澱。移除冷浴，且在室溫下攪拌反應物10分鐘。添加中間物1-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)吡咯啶-2-甲酸(2S)-乙酯(0.089 g，0.211 mmol)於THF (0.5 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測進程。5小時後，將反應物在冰浴中冷卻，且藉由添加冰AcOH (0.026 mL，0.453 mmol)淬滅。移除冰浴，且在室溫下繼續攪拌10分鐘。藉由蒸發移除揮發物，且藉由HPLC自殘餘物分離產物(0.065 g，70%)。
將來自前一反應之產物(0.065 g，0.106 mmol)溶解於THF (2 mL)中，且逐滴添加12 M HCl水溶液。在室溫下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測進程。2小時10分鐘後，將反應物在冰浴中冷卻，且藉由添加飽和NaHCO 3水溶液(約3 mL)來淬滅反應物，接著逐份添加固體NaHCO 3，直至反應物之pH不再呈酸性。藉由旋轉蒸發移除所得混合物之揮發性組分，且將殘餘物分配在最少量水與CH 2Cl 2之間。接著進一步用CH 2Cl 2萃取水相，且濃縮合併之有機物，並且藉由HPLC自殘餘物分離產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.82 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.63 (dd, J= 5.7, 4.7 Hz, 1H), 4.45 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.37 - 4.34 (m, 2H), 4.12 (dt, J= 8.6, 3.8 Hz, 1H), 4.02 (四重峰, J= 7.1 Hz, 2H), 3.42 - 3.34 (m, 1H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 2.02 - 1.94 (m, 1H), 1.86 - 1.67 (m, 3H), 1.15 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 1.605 (s), 1.354 (s)。MS m/z= 572.99 [M+1]。 實例118. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環丁酯
Figure 02_image791
在室溫下向中間物4 (79 mg，0.24 mmol)、中間物47 (150 mg，0.36 mmol)及MgCl 2(34 mg，0.36 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.104 mL，0.60 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物15 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.5 mL)。攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.70 (m, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 7.17 - 7.01 (m, 3H), 6.75 (m, 1H), 6.64 (m, 1H), 5.40 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.60 - 4.47 (m, 1H), 4.47 - 4.13 (m, 3H), 3.85 - 3.65 (m, 1H), 2.26 - 2.03 (m, 2H), 1.99 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.37 (m, 2H), 1.16 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.27。MS m/z= 573 (M+H) +。 實例119. 實例2非對映異構體之分離
實例2藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image793
第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.18 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.42 (m, 2H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 4.03 (qd, J= 10.9, 6.7 Hz, 2H), 3.88 (dq, J= 9.5, 7.1 Hz, 1H), 2.59 (p, J= 7.3 Hz, 1H), 2.07 - 1.94 (m, 2H), 1.94 - 1.66 (m, 4H), 1.26 (dd, J= 7.2, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.26。 實例 120.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.09 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.00 (dd, J= 10.9, 6.8 Hz, 1H), 3.96 - 3.83 (m, 2H), 2.54 (p, J= 7.4 Hz, 1H), 2.04 - 1.93 (m, 2H), 1.93 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.61 (m, 2H), 1.26 (dd, J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。 實例121. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-2-環己基乙酸(2S)-環丙基甲酯
Figure 02_image795
2- 胺基 -2- 環己基乙酸 (S)- 環丙基甲酯鹽酸鹽 .將L-環己基甘胺酸(0.80 g，5.75 mmol)溶解於環丙基甲醇(10 mL)中，且一次性添加氯三甲基矽烷(1.16 mL，9.16 mmol)。將其在預加熱之60℃油浴中放置16 h。濃縮，且在60℃旋轉蒸發器浴液中與甲苯共蒸發5次。在高真空下放置隔夜，得到中間物。該物質按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.44 (br s, 2H), 4.40 (br s, 1H), 4.12 - 3.91 (m, 1H), 3.86 (dd, J= 18.9, 6.2 Hz, 2H), 1.88 - 1.51 (m, 2H), 1.39 - 0.71 (m, 5H), 0.65 - -0.07 (m, 8H)。
Figure 02_image797
2- 環己基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酸 (2S)- 環丙基甲酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基-2-環己基乙酸(S)-環丙基甲酯鹽酸鹽(0.96 g，4.53 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.68 mL，4.53 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.40 mL，9.92 mmol)。使所得混合物升溫至RT且攪拌1 h。4-接著添加硝基苯酚(599 mg，4.31 mmol)及三乙胺(0.69 mL，4.97 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到不純的中間物。部分純物質接著藉由不含改質劑之逆相HPLC (20-100% ACN/水)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (m, 2H), 7.53 - 7.33 (m, 3H), 7.33 - 7.05 (m, 3H), 6.57 (dt, J= 12.8, 10.5 Hz, 1H), 3.84 - 3.73 (m, 2H), 3.64 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.37 - 0.67 (m, 8H), 0.44 (m, 2H), 0.19 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.40 (s), -0.62 (s)。LC/MS：t R= 2.05 min，MS m/z= 489.01 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
Figure 02_image799
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 )-2- 環己基乙酸 (2S)- 環丙基甲酯 .在RT下向中間物4 (43.0 mg，0.10 mmol)、中間物2-環己基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酸(2S)-環丙基甲酯(58.42 mg，0.120 mmol)及氯化鎂(14.23 mg，0.149 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.043 mL，0.249 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。添加氯化鎂(20 mg，0.20 mmol)，且在50℃下攪拌3 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.300 mL，3.6 mmol)。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.42 min，MS m/z= 641.07 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s,1H), 7.74 (br s, 2H), 7.31 (td, J= 8.6, 7.1 Hz, 2H), 7.21 - 7.03 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.09 (d, J= 8.31 Hz, 1H), 5.96 (m, 1H), 5.47 (m, 1H), 5.37 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 1H), 4.37 - 4.22 (m, 2H), 4.14 (m, 1H), 3.94 - 3.64 (m, 2H), 3.53 (td, J= 10.2, 6.5 Hz, 1H), 1.71 - 1.31 (m, 6H), 1.21 - 0.81 (m, 6H), 0.55 - 0.31 (m, 2H), 0.19 (dd, J= 12.1, 5.3 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.96 (s), 3.93 (s)。 實例122. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-(S)-吡咯啶-3-基酯
Figure 02_image801
3-(((S)-2- 胺基丙醯基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸 (S)- 三級丁酯 .將Cbz-L-丙胺酸(446 mg，2 mmol)與(S)-Boc-3-吡咯啶醇(374 mg，2 mmol)混合，且溶解於無水N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中。一次性添加HATU (789 mg，2.1 mmol)並攪拌15 min。一次性添加三乙胺(588 μL，4 mmol)。攪拌反應物16小時。反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2×15 mL)洗滌，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)洗滌，且最後用鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於四氫呋喃(15 mL)中。添加Degussa 10%鈀/碳(50 mg)，且在氫氣氛圍下攪拌反應混合物2小時。濾出催化劑，且減壓濃縮濾液，得到中間物。該物質不經純化即用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.30 (s, 1H), 3.64 - 3.28 (m, 5H), 2.17 - 1.93 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.33 (dd, J= 7.0, 2.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image803
3-(((2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸 (3S)- 三級丁酯 .將二氯磷酸苯酯(161 μL，1.08 mmol)溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加3-(((S)-2-胺基丙醯基)氧基)吡咯啶-1-甲酸(S)-三級丁酯(280 mg，1.08 mmol)。逐滴添加三乙胺(332 μL，2.4 mmol)並攪拌1小時。添加對硝基苯酚(120 mg，0.86 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物14小時。將反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(10 mL)洗滌，接著用2%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (m, 2H), 7.53 - 7.32 (m, 4H), 7.30 - 7.15 (m, 3H), 6.69 (m, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.01 - 3.92 (m, 1H), 3.52 - 3.30 (m, 2H), 3.17 (t, J= 9.6 Hz, 2H), 2.02 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.35 (m, 9H), 1.21 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -1.36, -1.45。MS m/z= 558.1 [M+Na], 534.2 [M-1]。
Figure 02_image805
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-(S)- 吡咯啶 -3- 基酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及3-(((2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙醯基)氧基)吡咯啶-1-甲酸(3S)-三級丁酯(88 mg，0.165 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在冰浴中攪拌100 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值9。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，0-100%乙腈/水，含0.1%三氟乙酸作為改質劑)純化。合併具有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.05 - 7.96 (m, 1H), 7.43 - 7.09 (m, 6H), 6.98 - 6.90 (m, 1H), 5.58 - 5.50 (m, 1H), 5.47 - 5.34 (m, 1H), 4.59 - 4.51 (m, 1H), 4.51 - 4.31 (m, 3H), 3.97 (m, 1H), 3.56 - 3.32 (m, 4H), 2.36 - 2.09 (m, 2H), 1.41 - 1.29 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.55, 3.43。MS m/z= 588.1 [M+1], 586.0 [M-1]。 實例123. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-2-環戊基乙酸(2S)-環丙基甲酯
Figure 02_image807
2- 胺基 -2- 環戊基乙酸 (S)- 環丙基甲酯鹽酸鹽 .將L-環己基甘胺酸(0.80 g，5.75 mmol)溶解於環丙基甲醇(10 mL)中，且一次性添加氯三甲基矽烷(1.16 mL，9.16 mmol)。將其在預加熱之60℃油浴中放置16 h。濃縮，且在60℃旋轉蒸發器浴液中與甲苯共蒸發5次。在高真空下放置隔夜，得到中間物。該物質按原樣用於下一步驟。LC/MS：t R= 0.61 min，MS m/z= 197.95 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
Figure 02_image809
2- 環戊基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酸 (2S)- 環丙基甲酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基-2-環己基乙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(1.19 g，4.80 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.72 mL，4.80 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.40 mL，9.92 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(635 mg，4.56 mmol)及三乙胺(0.69 mL，4.97 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到不純的中間物。部分純物質接著藉由不含改質劑之逆相HPLC (20-100% ACN/水)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.58 - 7.28 (m, 3H), 7.31 - 7.08 (m, 3H), 6.70 (dt, J= 13.0, 10.7 Hz, 1H), 3.87 - 3.71 (m, 2H), 3.63 (qd, J= 9.5, 5.7 Hz, 1H), 2.09 (dt, J= 13.7, 6.8 Hz, 1H), 1.64 - 0.68 (m, 10H), 0.53 - 0.35 (m, 2H), 0.19 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.71 (s), -0.97 (s)。LC/MS：t R= 1.94 min，MS m/z= 475.02 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
Figure 02_image811
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 )-2- 環戊基乙酸 (2S)- 環丙基甲酯 .在RT下向中間物4 (43.0 mg，0.10 mmol)、中間物2-環戊基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酸(2S)-環丙基甲酯(64.0 mg，0.135 mmol)及氯化鎂(14.23 mg，0.149 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.043 mL，0.249 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。添加氯化鎂(20 mg，0.20 mmol)，且在50℃下攪拌3 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.300 mL，3.6 mmol)。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.37 min，MS m/z= 627.07 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.05 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.22 - 5.95 (m, 2H), 5.47 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 5.36 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.94 - 3.61 (m, 2H), 3.62 - 3.40 (m, 1H), 1.71 - 0.88 (m, 10H), 0.43 (m, 2H), 0.31 - 0.08 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.74 (s), 3.64 (s)。 實例124. 1-((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)吡咯啶-2-甲酸(2R)-丁酯
Figure 02_image813
吡咯啶 -1,2- 二甲酸 (S)-1- 三級丁 酯 2- 丁酯 .以與針對實例117所描述類似的方式製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 4.18 - 3.96 (m, 3H), 3.40 - 3.26 (m, 2H), 2.26 - 2.13 (m, 1H), 1.87 - 1.75 (m, 3H), 1.60 - 1.48 (m, 2H), 1.39 (s, Boc旋轉異構體#1, 3H), 1.33 (s, Boc旋轉異構體#2, 6H), 1.36 - 1.28 (m, 2H), 0.88 (td, J= 7.4, 2.8 Hz, 3H)。
Figure 02_image815
吡咯啶 -2- 甲酸 (S)- 丁 酯 鹽酸鹽 .以與針對實例117所描述類似的方式製備中間物。
Figure 02_image817
1-((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 吡咯啶 -2- 甲酸 (2S)- 丁 酯 .以與針對實例117所描述類似的方式製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.30 (m, 2H), 7.55 - 7.50 (m, 2H), 7.49 - 7.21 (m, 5H), 4.36 - 4.28 (m, 1H), 4.05 - 3.90 (m, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 2.18 - 2.06 (m, 1H), 1.95 - 1.74 (m, 3H), 1.50 - 1.40 (m, 2H), 1.30 - 1.20 (m, 2H), 0.82 (q, J= 7.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6 ) δ -3.596(s), -3.726 (s)。MS m/z= 449.03 [M+1]。
Figure 02_image819
1-((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 吡咯啶 -2- 甲酸 (2R)- 丁 酯 .以與針對實例117所描述類似的方式製備產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.37 - 7.14 (m, 5H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.62 (dd, J= 5.6, 4.8 Hz, 1H), 4.44 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.35 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 4.16 - 4.10 (m, 1H), 4.03 - 3.93 (m, 2H), 3.43 - 3.35 (m, 1H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 2.04 - 1.91 (m, 1H), 1.87 - 1.69 (m, 3H), 1.56 - 1.46 (m, 2H), 1.36 - 1.24 (m, 2H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 1.575 (s), 1.347 (s)。MS m/z= 601.13 [M+1]。 實例125. 1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷-1-甲酸(5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲酯
Figure 02_image821
1-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸 (5- 甲基 -2- 側氧基 -1,3- 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯 .以與針對實例117所描述類似的方式製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.73 (s, 旋轉異構體#1, 0.80H), 7.41 (s, 旋轉異構體#2, 0.2H), 5.00 (s, 旋轉異構體#2, 0.5H), 4.96 (s, 旋轉異構體#1, 1.5H), 2.48 - 2.39 (2H), 2.20 - 2.05 (5H), 1.95 - 1.76 (2H), 1.34 (s, 旋轉異構體#1, 6.75H), 1.26 (s, 旋轉異構體#2, 2.25H)。
Figure 02_image823
1- 胺基環丁烷甲酸 (5- 甲基 -2- 側氧基 -1,3- 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯鹽酸鹽 .以與針對實例117所描述類似的方式製備中間物。
Figure 02_image825
1-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷甲酸 (5- 甲基 -2- 側氧基 -1,3- 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯 .以與針對實例117所描述類似的方式製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.32 - 8.27 (m, 2H), 7.47 - 7.37 (m, 4H), 7.25 - 7.19 (m, 3H), 7.04 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 2.48 - 2.42 (m, 2H), 2.29 - 2.16 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.88 - 1.73 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -3.216 (s)。MS m/z= 504.93 [M+1], 1008.74 [2M+1]。
Figure 02_image827
1-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 環丁烷 -1- 甲酸 (5- 甲基 -2- 側氧基 -1,3- 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯 .將中間物4 (0.054 g，0.163 mmol)、中間物1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)環丁烷甲酸(5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲酯(0.099 g，0.196 mmol)及MgCl 2(0.023 g，0.244 mmol)溶解於THF (2.5 mL)中。將所得混合物在50℃浴液中放置10分鐘，且接著添加DIPEA (0.071 mL，0.407 mmol)。在50℃下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測反應進程。2小時40分鐘後，將反應物冷卻至室溫，且逐滴添加12 M HCl (水溶液) (0.3 mL)。在室溫下攪拌反應物，且藉由LC/MS監測反應進程。35分鐘後，添加額外12 M HCl (水溶液) (0.15 mL)。再攪拌反應物35分鐘。將反應物在冰浴中冷卻，且藉由添加飽和NaHCO 3溶液而淬滅。用CH 2Cl 2(3×)萃取所得混合物。濃縮合併之有機萃取物，且藉由HPLC以磷處異構體之混合物形式自殘餘物分離產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4, 帶有星號(*)之化學位移表示存在的第二異構體上的相關質子之位移) δ 7.80 (s, 0.6H), 7.77* (s, 0.4H), 7.36 - 7.12 (m, 5H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 Hz, 0.6H), 6.71* (d, J = 4.6 Hz, 0.4H), 5.52 - 5.48 (m, 1H), 4.94 (d, J = 2.2 Hz, 0.8H), 4.89* (d, J = 2.2 Hz, 1.2H), 4.65 (t, J = 5.6 Hz, 0.6H), 4.62* (t, J = 5.6 Hz, 0.4H), 4.49 (四重峰, J = 5.5 Hz, 1H), 4.46 - 4.33 (m, 2H), 2.57 - 2.42 (m , 2H), 2.31 - 2.15 (m, 2H), 2.13 (s, 1.2H), 2.10 (s, 1.8H), 1.94 - 1.80 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 1.841 (s), 1.735 (s)。MS m/z= 657.01 [M+1]。 實例126. 3-羥基-2,2-二甲基丙酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image829
2,2- 二甲基 -3-(( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙酸甲酯 .將2,2-二甲基-3-羥基丙酸甲酯(1.3 g，10 mmol)溶解於無水二氯甲烷(12 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。一次性添加單水合對甲苯磺酸(190 mg，1 mmol)。逐滴添加3,4-二氫-2H-哌喃(1.1 mL，12 mmol)。使反應物緩慢升溫至室溫，且攪拌12小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用碳酸氫鈉水溶液(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 4.59 (t, J= 3.3 Hz, 1H), 3.80 (ddd, J= 11.6, 8.9, 2.9 Hz, 1H), 3.73 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.50 (ddt, J= 9.2, 5.6, 2.6 Hz, 1H), 3.37 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 1.78 (m, 1H), 1.70 - 1.44 (m, 5H), 1.22 (s, 3H), 1.20 (s, 3H)。
Figure 02_image831
2,2- 二甲基 -3-(( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙酸 2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 乙酯 .將2,2-二甲基-3-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)丙酸甲酯(1.5 g，6.9 mmol)溶解於無水四氫呋喃(15 mL)中。將氫氧化鈉(276 mg，6.9 mmol)溶解於水(10 mL)中且添加至反應物中，並攪拌16小時。添加甲醇(10 mL)。攪拌反應物16小時。反應物用己烷(100 mL)洗滌，且接著用5%檸檬酸水溶液酸化至pH 4，並且用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取。合併乙酸乙酯萃取物，並且經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於無水N,N-二甲基甲醯胺(7 mL)中，且在室溫下攪拌。一次性添加N-Cbz-胺基乙醇(1.35 g，6.9 mmol)。添加HATU (2.88 g，7.6 mmol)並攪拌5 min。添加三乙胺(1.9 mL，13.8 mmol)並攪拌10 min。接著添加4-(二甲基胺基)吡啶(84 mg，0.69 mmol)。攪拌反應物1小時。添加更多4-(二甲基胺基)吡啶(340 mg)並攪拌2小時。添加更多4-(二甲基胺基)吡啶(310 mg)並攪拌16小時。反應物用乙酸乙酯(35 mL)稀釋，且用水(2×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.78 (bs, 1H), 5.21 - 4.98 (m, 2H), 4.43 (m, 1H), 4.40 - 4.28 (m, 1H), 4.03 (ddd, J= 11.0, 7.1, 3.4 Hz, 1H), 3.91 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 3.81 (m, 1H), 3.55 - 3.33 (m, 3H), 3.27 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 1.66 (m, 2H), 1.41 (m, 4H), 1.19 (d, J= 9.8 Hz, 6H)。
Figure 02_image833
2,2- 二甲基 -3-(( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 氧基 ) 丙酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將2,2-二甲基-3-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)丙酸2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙酯(1.3 g，3.4 mmol)溶解於四氫呋喃(20 mL)中。添加Degussa型10%鈀/碳(50 mg)，且在氫氣氛圍下攪拌反應物20小時。濾出催化劑，且減壓濃縮濾液，並且所得粗產物不經純化即用於下一反應。將二氯磷酸苯酯(510 μL，3.4 mmol)溶解於無水二氯甲烷(15 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之粗產物溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中且逐滴添加。逐滴添加三乙胺(1.4 mL，7.5 mmol)並攪拌1小時。添加對硝基苯酚(378 mg，2.72 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物2小時。添加更多對硝基苯酚(40 mg)並攪拌1小時。將反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用1%檸檬酸水溶液(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.23 (d, J= 9.0, 2H), 7.48 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.14 (m, 3H), 4.59 - 4.27 (m, 3H), 3.95 (m, 3H), 3.46 (m, 1H), 3.41 - 3.29 (m, 2H), 3.26 (dd, J= 8.7, 4.2 Hz, 1H), 1.85 - 1.34 (m, 6H), 1.24 (s, 3H), 1.16 (s, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -0.42, -0.56。MS m/z= 521.1 [M-1]。
Figure 02_image835
3- 羥基 -2,2- 二甲基丙酸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2,2-二甲基-3-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)丙酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯(94 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物20小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用2%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(200 μL)，且在冰浴中攪拌2小時。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值9。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.82 (m, 1H), 7.28 (m, 5H), 6.88 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.54 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.52 (t, J= 5.1 Hz, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 2H), 4.05 (m, 2H), 3.53 (d, J= 10.0 Hz, 2H), 3.18 (dt, J= 11.7, 5.6 Hz, 2H), 1.15 (s, 3H), 1.13 (s, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 5.31, 5.14。MS m/z= 591.0 [M+1], 589.1 [M-1]。 實例127. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-4-甲基戊酸(2S)-2-乙基丁酯
Figure 02_image837
4- 甲基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 戊酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物13 (0.76 g，3.02 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.45 mL，3.02 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.87 mL，6.23 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(399 mg，2.87 mmol)及三乙胺(0.44 mL，3.11 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。LC/MS：t R= 2.19 min，MS m/z= 493.00 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (m, 2H), 7.52 - 7.29 (m, 3H), 7.28 - 7.09 (m, 2H), 6.66 (m, 1H), 3.93 - 3.70 (m, 2H), 1.58 - 1.31 (m, 6H), 1.31 - 1.13 (m, 5H), 0.86 - 0.60 (m, 12H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.87 (s), -1.24 (s)。
Figure 02_image839
在RT下向中間物4 (38.0 mg，0.09 mmol)、4-甲基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)戊酸(2S)-2-乙基丁酯(52.0 mg，0.106 mmol)及氯化鎂(12.58 mg，0.132 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.038 mL，0.220 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。添加氯化鎂(20 mg，0.20 mmol)，且在50℃下攪拌3 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.300 mL，3.6 mmol)。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.53 min，MS m/z= 645.10 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.74 (s, 2H), 7.39 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.06 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.19 - 5.92 (m, 2H), 5.48 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 5.37 (t, J= 6.7 Hz, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.36 - 4.14 (m, 2H), 3.94 - 3.59 (m, 3H), 1.52 - 1.30 (m, 4H), 1.30 - 1.13 (m, 5H), 0.89 - 0.65 (m, 12H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.61 (s), 3.48 (s)。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image841
實例 128.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (dd, J= 8.6, 7.1 Hz, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.7 Hz, 2H), 4.61 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 11.3, 5.6 Hz, 2H), 4.36 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.00 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 3.93 - 3.82 (m, 1H), 1.63 - 1.42 (m, 3H), 1.41 - 1.08 (m, 10H), 1.00 - 0.68 (m, 11H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 3.52 (s)。 實例 129.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.32 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.27 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.60 - 5.37 (m, 2H), 4.60 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.43 (dd, J= 16.8, 5.9 Hz, 2H), 4.31 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 4.05 - 3.76 (m, 3H), 1.67 (dp, J= 13.4, 6.7 Hz, 3H), 1.56 - 1.15 (m, 10H), 0.93 - 0.70 (m, 11H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 3.38 (s)。 實例130. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-4-甲基戊酸(2S)-環丙基甲酯
Figure 02_image843
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊酸 (S)- 環丙基甲酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-白胺酸環丙基甲酯(1.85 g，7.99 mmol)溶解於乙腈(20 mL)中，且添加環丙基甲醇(3.16 mL， 39.99 mmol)，接著一次性添加EDCI (1.49 g，9.60 mmol)及DMAP (1.47 g，12.0 mmol)。在室溫下攪拌隔夜。濃縮且用CH 2Cl 2稀釋。藉由矽膠層析(0-40% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 6.93 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.74-3.58 (m, 3H), 1.44-1.09 (m, 12H), 0.83 (m, 1H), 0.64 (m, 6H), 0.25 (m, 2H), 0.06 (m, 2H)。
Figure 02_image845
2- 胺基 -4- 甲基戊酸 (S)- 環丙基甲酯鹽酸鹽 .將2-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酸(S)-環丙基甲酯溶解於CH 2Cl 2(15 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(15 mL，40 mmol)中。在環境溫度下攪拌1 h。減壓濃縮，且與二乙醚共蒸發。在高真空下放置1 h，且中間物不經純化按原樣用於下一步驟。
Figure 02_image847
4- 甲基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 戊酸 (2S)- 環丙基甲酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基-4-甲基戊酸(S)-環丙基甲酯鹽酸鹽(1.29 g，5.82 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.87 mL，5.82 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.68 mL，12.03 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(769 mg，5.53 mmol)及三乙胺(0.44 mL，6.01 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (m, 2H), 7.59 - 7.31 (m, 5H), 7.33 - 7.09 (m, 2H), 6.67 (m, 1H), 3.80 (m, 2H), 1.69 - 1.29 (m, 3H), 0.99 (m, 1H), 0.86 - 0.62 (m, 6H), 0.44 (ddt, J= 7.0, 5.7, 4.1 Hz, 2H), 0.19 (dq, J= 6.7, 4.5, 3.5 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -0.85 (s), -1.15 (s)。LC/MS：t R= 1.97 min，MS m/z= 463.01 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
Figure 02_image849
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 )-4- 甲基戊酸 (2S)- 環丙基甲酯 .在RT下向中間物4 (52.0 mg，0.12 mmol)、中間物4-甲基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)戊酸(2S)-環丙基甲酯(67 mg，0.145 mmol)及氯化鎂(17.21 mg，0.18 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.052 mL，0.220 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。添加氯化鎂(20 mg，0.20 mmol)，且在50℃下攪拌3 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.300 mL，3.6 mmol)。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.37 min，MS m/z= 615.07 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 7.41 - 7.23 (m, 2H), 7.24 - 7.03 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.31 - 5.93 (m, 2H), 5.47 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 5.37 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.36 - 4.16 (m, 2H), 3.96 - 3.60 (m, 3H), 1.56 - 1.31 (m, 2H), 1.08 - 0.87 (m, 2H), 0.93 - 0.54 (m, 6H), 0.43 (m, 2H), 0.33 - 0.03 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.71 (s), 3.43 (s)。 實例131. 2-胺基-3-甲基丁酸(2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image851
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基 丁酸 (S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 乙酯 .將Boc-L-纈胺酸(435 mg，2 mmol)及Cbz-胺基乙醇(390 mg，2 mmol)混合且溶解於無水二氯甲烷(15 mL)中。添加N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(422 mg，2.2 mmol)。添加三乙胺(420 μL，3 mmol)及4-(二甲基胺基)吡啶(244 mg，0.2 mmol)，且攪拌反應物16小時。將反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用2%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.39 (m, 5H), 5.17 (m, 2H), 5.00 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.41 - 4.08 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 2.25 - 2.09 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.00 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.93 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
Figure 02_image853
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁酸 (2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙酯(378 mg，0.958 mmol)溶解於四氫呋喃(20 mL)中。添加Degussa型10%鈀/碳(50 mg)，且在氫氣氛圍下攪拌反應物20小時。濾出催化劑，且減壓濃縮濾液，並且所得產物不經純化即用於下一反應。將二氯磷酸苯酯(143 μL，0.958 mmol)溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之油狀物溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中且逐滴添加。逐滴添加三乙胺(300 μL，2.1 mmol)並攪拌1小時。添加對硝基苯酚(107 mg，0.766 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物2小時。反應物用二氯甲烷(10 mL)稀釋，且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.50 - 7.33 (m, 4H), 7.25 (m, 3H), 4.98 (m, 1H), 4.41 - 4.24 (m, 1H), 4.14 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 3.43 (m, 2H), 2.08 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 0.99 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.94 (d, J= 6.9 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.02, -1.06。MS m/z= 560.0 [M+Na], 536.0 [M-1]。
Figure 02_image855
2- 胺基 -3- 甲基丁酸 (2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯(97 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物20小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(1.5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(250 μL)，且在冰浴中攪拌75 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值9。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.09 (m, 5H), 6.88 - 6.80 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.51 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.63 (q, J= 5.0 Hz, 1H), 4.49 (dd, J= 7.1, 5.6 Hz, 1H), 4.46 - 4.27 (m, 2H), 4.06 (m, 2H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 1.98 (m, 1H), 0.89 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 5.21, 5.06。MS m/z= 590.1 [M+1], 588.0 [M-1]。 實例132. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-環丙基丙酸(2S)-2-乙基丁酯
Figure 02_image857
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 環丙基丙酸 (S)-2- 乙基丁酯 .將2-乙基丁醇(1.04 g，4.54 mmol)溶解於乙腈(10 mL)中，且添加2-乙基-1-丁醇(2.78 mL，22.68 mmol)，接著一次性添加EDCI (845 mg，5.44 mmol)及DMAP (831 mg，6.80 mmol)。在室溫下攪拌隔夜。濃縮且用CH 2Cl 2稀釋。藉由矽膠層析(0-40% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.99-3.87 (m, 3H), 1.64-1.23 (m, 16H), 0.87-0.76 (m, 7H), 0.41 (m, 2H), 0.15 (m, 1H), 0.01 (m, 1H)。
Figure 02_image859
2- 胺基 -3- 環丙基丙酸 (S)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .將2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-環丙基丙酸(S)-2-乙基丁酯(1.03 g，3.29 mmol)溶解於CH 2Cl 2(15 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(15 mL，40 mmol)中。在環境溫度下攪拌1 h。減壓濃縮，且與二乙醚共蒸發。在高真空下放置1 h，且中間物不經純化按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.57 (s, 3H), 4.14 - 3.98 (m, 3H), 1.79 (dt, J= 14.4, 6.5 Hz, 1H), 1.70 - 1.45 (m, 1H), 1.40 - 1.28 (m, 2H), 1.31 - 1.20 (m, 1H), 1.23 (s, 1H), 0.85 (t, J= 7.5 Hz, 6H), 0.84 - 0.70 (m, 1H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.14 - 0.06 (m, 2H)。
Figure 02_image861
3- 環丙基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基-3-環丙基丙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(0.87 g，3.48 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.52 mL，3.49 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.0 mL，7.20 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(460 mg，3.30 mmol)及三乙胺(0.52 mL，3.60 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.28 (m, 2H), 7.60 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.08 (m, 3H), 6.82 - 6.52 (m, 1H), 3.87 (m, 3H), 1.65 - 1.30 (m, 3H), 1.30 - 1.18 (m, 4H), 0.97 - 0.70 (m, 6H), 0.63 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 0.27 (m, 2H), -0.07 (q, J= 3.8 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -1.09 (s), -1.35 (s)。LC/MS：t R= 2.13 min，MS m/z= 490.99 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
Figure 02_image863
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 )-3- 環丙基丙酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在RT下向中間物4 (52.0 mg，0.12 mmol)、中間物3-環丙基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-2-乙基丁酯(71 mg，0.145 mmol)及氯化鎂(17.21 mg，0.18 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.052 mL，0.220 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。添加氯化鎂(20 mg，0.20 mmol)，且在50℃下攪拌3 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.300 mL，3.6 mmol)。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.48 min，MS m/z= 643.09 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.74 (s, 2H), 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.04 (m, 3H), 6.83 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.27 - 5.97 (m, 2H), 5.48 (m, 1H), 5.37 (m, 1H), 4.44 (m, 1H), 4.37 - 4.01 (m, 3H), 3.95 - 3.65 (m, 3H), 1.64 - 1.30 (m, 3H), 1.24 (m, 4H), 0.90 - 0.69 (m, 6H), 0.69 - 0.55 (m, 1H), 0.28 (m, 2H) -0.04 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.51 (s), 3.35 (s)。 實例133. L-丙胺酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image865
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸 (S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 乙酯 .將Boc-L-丙胺酸(567 mg，3 mmol)溶解於無水乙腈(15 mL)中。添加N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(633 mg，3.3 mmol)並攪拌20 min。一次性添加Cbz-胺基乙醇(586 mg，3 mmol)。添加4-(二甲基胺基)吡啶(403 mg，3.3 mmol)，且攪拌反應物16小時。將反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌，接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.35 (m, 5H), 5.10 (m, 3H), 4.96 (s, 1H), 4.23 (m, 3H), 3.48 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.36 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image867
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將2-((三級丁氧基羰基)胺基)丙酸(S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙酯(818 mg，2.23 mmol)溶解於四氫呋喃(50 mL)中。添加Degussa型10%鈀/碳(100 mg)，且在氫氣氛圍下攪拌反應物4小時。濾出催化劑，且減壓濃縮濾液，得到油狀物，其不經純化即用於下一反應。將二氯磷酸苯酯(332 μL，2.23 mmol)溶解於無水二氯甲烷(15 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將所得產物溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中且逐滴添加。逐滴添加三乙胺(684 μL，4.9 mmol)並攪拌1小時。添加對硝基苯酚(248 mg，1.78 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物14小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(3×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.28 - 8.17 (m, 2H), 7.47 - 7.30 (m, 4H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 4.92 (m, 1H), 4.33 - 4.08 (m, 2H), 3.84 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.36 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.07。MS m/z= 532.0 [M+Na], 508.0 [M-1]。
Figure 02_image869
L- 丙胺酸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2-((三級丁氧基羰基)胺基)丙酸(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯(92 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(1.6 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(160 μL)，且在冰浴中攪拌90 min。反應物用甲醇(500 μL)稀釋，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，5-95%乙腈/水，不含酸改質劑)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，5-70%乙腈/水，不含酸改質劑)再次純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.01 (m, 1H), 7.41 - 7.26 (m, 3H), 7.26 - 7.11 (m, 3H), 6.94 (m, 1H), 5.55 (m, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.49 - 4.31 (m, 3H), 4.22 (m, 2H), 4.11 - 3.95 (m, 1H), 3.30 - 3.19 (m, 2H), 1.56 - 1.42 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 5.24, 5.18。MS m/z= 562.1 [M+1], 559.9 [M-1]。 實例134. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環庚酯
Figure 02_image871
2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸 (S)- 環庚酯 .將Cbz-L-丙胺酸酯(1.04 g，5.49 mmol)溶解於乙腈(10 mL)中，且添加環庚醇(2.17 mL，27.48 mmol)，接著一次性添加EDCI (1.02 g，6.59 mmol)及DMAP (1.01 g，8.25 mmol)。在室溫下攪拌隔夜。濃縮且用CH 2Cl 2稀釋。藉由矽膠層析(0-40% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.20 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 4.81 (tt, J= 8.0, 4.2 Hz, 1H), 3.90 (p, J= 7.4 Hz, 1H), 1.78 (dt, J= 15.0, 10.6 Hz, 2H), 1.67 - 1.27 (m, 19H), 1.19 (d, J= 7.3 Hz, 3H)。
Figure 02_image873
2- 胺基丙酸 (S)- 環庚酯鹽酸鹽 .將2-((三級丁氧基羰基)胺基)丙酸(S)-環庚酯(1.00 g，3.50 mmol)溶解於CH 2Cl 2(10 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(10 mL，40 mmol)中。在環境溫度下攪拌1 h。減壓濃縮，且與己烷共蒸發。在高真空下放置1 h，且中間物不經純化按原樣用於下一步驟。
Figure 02_image875
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 環庚酯 。在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基丙酸(S)-環庚酯鹽酸鹽(0.77 g，3.50 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.52 mL，3.50 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.0 mL，7.02 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(463 mg，3.32 mmol)及三乙胺(0.53 mL，3.51 mmol)。2 h後，用Et 2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.40 - 8.16 (m, 2H), 7.60 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.13 (m, 3H), 6.64 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 3.92 (m, 1H), 1.83 - 1.65 (m, 2H), 1.65 - 1.42 (m, 8H), 1.34 (m, 2H), 1.26 - 1.07 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ -1.22 (s), -1.46 (s)。LC/MS：t R= 2.03 min，MS m/z= 462.81 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
Figure 02_image877
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 環庚酯 .在RT下向中間物4 (50.0 mg，0.12 mmol)、中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環庚酯(64.3 mg，0.140 mmol)及氯化鎂(16.55 mg，0.174 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.05 mL，0.29 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。添加氯化鎂(20 mg，0.20 mmol)，且在50℃下攪拌3 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.300 mL，3.6 mmol)。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t R= 1.39 min，MS m/z= 615.02 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.84 (s, 1H), 7.74 (s, 2H), 7.44 - 7.25 (m, 3H), 7.25 - 7.08 (m, 2H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 6.20 - 5.90 (m, 2H), 5.48 (m, 1H), 5.38 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.16 (m, 1H), 1.74 (m, 3H), 1.51 (m, 7H), 1.31 (m, 2H), 1.23 - 1.03 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.32 (s), 3.29 (s)。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，庚烷70% IPA 30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image879
實例 135.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.84 (s, 1H), 7.74 (br s, 2H), 7.34 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.25 - 7.07 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.17 (s, 1H), 6.06 (dd, J= 13.3, 10.0 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 5.37 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.73 (tt, J= 8.3, 4.4 Hz, 1H), 4.45 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.13 (dd, J= 10.9, 4.9 Hz, 1H), 3.76 (dtd, J= 10.2, 7.1, 2.7 Hz, 1H), 1.84 - 1.62 (m, 2H), 1.62 - 1.38 (m, 8H), 1.38 - 1.23 (m, 2H), 1.17 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.02 (d, J= 6.1 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.32 (s)。 實例 136.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.83 (s, 1H), 7.74 ( brs, 2H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.05 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.16 - 5.98 (m, 2H), 5.48 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 5.38 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 4.45 (q, J= 5.8 Hz, 1H), 4.39 - 4.23 (m, 2H), 4.18 (dd, J= 10.9, 4.9 Hz, 1H), 1.86 - 1.66 (m, 2H), 1.64 - 1.40 (m, 8H), 1.34 (s, 2H), 1.17 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.02 (d, J= 6.1 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.29 (s)。 實例137. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環庚酯
Figure 02_image881
3-(((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸 (R)- 三級丁酯 .將Cbz-L-丙胺酸(446 mg，2 mmol)溶解於無水乙腈(15 mL)中。添加N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(422 mg，2.2 mmol)並攪拌15 min。一次性添加(R)-Boc-3-吡咯啶醇(374 mg，2 mmol)。添加4-(二甲基胺基)吡啶(269 mg，2.2 mmol)，且攪拌反應物16小時。反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(20 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)、且最後用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.28 (m, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.45 - 4.26 (m, 1H), 3.66 - 3.25 (m, 4H), 2.04 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.41 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image883
3-(((2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸 (3R)- 三級丁酯 .將3-(((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙醯基)氧基)吡咯啶-1-甲酸(R)-三級丁酯(693 mg，1.76 mmol)溶解於四氫呋喃(40 mL)中。添加Degussa型10%鈀/碳(100 mg)，且在氫氣氛圍下攪拌反應物4小時。濾出催化劑，且減壓濃縮濾液，並且所得產物不經純化即用於下一反應。將二氯磷酸苯酯(263 μL，1.76 mmol)溶解於無水二氯甲烷(15 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之油狀物溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中且逐滴添加。逐滴添加三乙胺(544 μL，4 mmol)並攪拌1小時。添加對硝基苯酚(197 mg，1.42 mmol)且移除冰浴。接著攪拌反應物14小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(3×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.29 - 8.16 (m, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 5.28 (s, 1H), 4.13 (m, 2H), 3.83 (t, J= 10.6 Hz, 1H), 3.65 - 3.23 (m, 4H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.41 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.21, -3.26。MS m/z= 558.0 [M+Na], 534.1 [M-1]。
Figure 02_image885
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-(R)- 吡咯啶 -3- 基酯 .將中間物4 (73 mg，0.22 mmol)及3-(((2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙醯基)氧基)吡咯啶-1-甲酸(3R)-三級丁酯(130 mg，0.242 mmol)溶解於無水乙腈(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(32 mg，0.33 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用2%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(1.6 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(200 μL)，且在冰浴中攪拌9小時。反應物用甲醇(500 μL)稀釋，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，5-95%乙腈/水，不含酸改質劑)純化。合併具有所需產物之溶離份且冷凍乾燥。殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，5-70%乙腈/水，不含酸改質劑)再次純化。合併具有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.84 (m, 1H), 7.41 - 7.10 (m, 5H), 6.96 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 5.50 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.43 - 5.27 (m, 1H), 4.63 (q, J= 5.4 Hz, 1H), 4.56 - 4.29 (m, 3H), 3.94 (m, 1H), 3.52 - 3.32 (m, 4H), 2.34 - 2.06 (m, 2H), 1.30 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.41, 3.06。MS m/z= 588.1 [M+1], 586.1 [M-1]。 實例138. ((S)-1-(環己基胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯苯酯
Figure 02_image887
(1-( 環己基胺基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基甲酸 (S)- 三級丁酯 .將Boc-L-丙胺酸(378 mg，2 mmol)溶解於無水四氫呋喃(10 mL)中。添加N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(422 mg，2.2 mmol)並攪拌20 min。一次性添加環己胺(252 μL，2.2 mmol)。添加三乙胺(419 μL，3 mmol)，且攪拌反應物20小時。反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2×20 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，得到中間物，其不經進一步純化即用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 4.00 (m 1H), 3.62 (m, 1H), 1.94 - 1.68 (m, 4H), 1.61 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.40 - 1.29 (m, 2H), 1.26 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.21 (m, 3H)。
Figure 02_image889
((S)-1-( 環己基胺基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基磷酸 4- 硝基苯 酯苯酯 .將(1-(環己基胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸(S)-三級丁酯(232 mg，0.859 mmol)溶解於含4 N鹽酸之1,4-二㗁烷(5 mL)中，且攪拌30 min。減壓濃縮反應物，且所得產物不經純化即使用。將上述產物與無水二氯甲烷(12 mL)混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加二氯磷酸苯酯(128 μL，0.859 mmol)。逐滴添加三乙胺(264 μL，1.89 mmol)並攪拌1小時。逐滴添加更多三乙胺(132 μL，0.945 mmol)並攪拌30 min。添加對硝基苯酚(97 mg，0.687 mmol)。移除冰浴，且攪拌反應混合物14小時。反應物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用水(2×20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。MS m/z= 448.1 [M+1], 446.1 [M-1]。
Figure 02_image891
((S)-1-( 環己基胺基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基磷酸 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯苯酯 .將中間物4 (15 mg，0.044 mmol)及((S)-1-(環己基胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基磷酸4-硝基苯酯苯酯(20 mg，0.044 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(6.5 mg，0.068 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(20 μL，0.113 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(1.6 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在冰浴中攪拌2小時。以小份添加碳酸氫鈉(360 mg)。粗產物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini C 18管柱，5-100%乙腈/水，不含酸改質劑)純化。合併具有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.99 (m, 1H), 7.52 (m, 1H), 7.42 - 7.09 (m, 5H), 6.95 (m, 1H), 5.54 (m, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.47 - 4.29 (m, 3H), 3.78 (m, 1H), 3.62 - 3.43 (m, 1H), 1.84 - 1.51 (m, 5H), 1.26 - 1.00 (m, 8H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.68, 3.31。MS m/z= 600.1 [M+1], 598.1 [M-1]。 實例139. 2-((三級丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酸(2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image893
自實例131之反應物分離產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.80 (m, 1H), 7.41 - 7.06 (m, 5H), 6.87 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.51 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.69 - 4.57 (m, 1H), 4.57 - 4.28 (m, 3H), 4.14 - 3.91 (m, 3H), 3.26 (m, 1H), 3.16 (m, 2H), 2.18 - 1.96 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 0.88 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 5.15, 4.99。MS m/z= 689.9 [M+1], 688.1 [M-1]。 實例140. 3-(((2R)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙醯基)氧基)吡咯啶-1-甲酸(3R)-三級丁酯
Figure 02_image895
亦自實例137之反應物分離產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.91 (m, 1H), 7.41 - 7.05 (m, 6H), 6.86 (m, 1H), 5.52 (m, 1H), 5.22 (m, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.52 - 4.28 (m, 3H), 3.91 (m, 1H), 3.60 - 3.31 (m, 4H), 2.01 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.29 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.25, 3.22。MS m/z= 688.0 [M+1], 686.1 [M-1]。 實例141. 1-甲基環丙烷-1-甲酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image897
1- 甲基環丙烷 -1- 甲酸 2- 胺基乙 酯 鹽酸鹽 .將(2-羥乙基)胺基甲酸三級丁酯(1.53 mL，9.0 mmol)及1-甲基環丙烷-1-甲酸(0.92 mL，9.0 mmol)溶解於乙腈(150 mL)中。接著添加EDCI (1.54 g，10.0 mmol)及DMAP (1.21 g，10.0 mmol)，且在RT下攪拌反應混合物。20 h後，將混合物用乙酸乙酯(300 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(300 mL)及鹽水(300 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗油狀物溶解於二㗁烷(5 mL)中，且添加含4 M HCl之二㗁烷(20 mL)。2 h後，藉由真空過濾收集所得固體，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 4.10 (t, J =5.3 Hz, 2H), 3.38 (q, J =5.5 Hz, 2H), 1.29 (s, 3H), 1.22 (q, J =3.9 Hz, 2H), 0.68 (q, J =3.9 Hz, 2H)。
Figure 02_image899
1- 甲基環丙烷 -1- 甲酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向中間物1-甲基環丙烷-1-甲酸2-胺基乙酯鹽酸鹽(0.426 g，2.37 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.500 mL，2.37 mmol)於二氯甲烷(11 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.66 mL，4.74 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(330 mg，2.37 mmol)及三乙胺(0.33 mL，2.37 mmol)。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.24 (dd, J =9.2, 2.1 Hz, 2H), 7.44 - 7.32 (m, 4H), 7.28 - 7.18 (m, 3H), 4.17 - 4.09 (m, 2H), 3.41 - 3.32 (m, 2H), 1.25 (d, J =1.6 Hz, 3H), 1.21 - 1.15 (m, 2H), 0.70 - 0.65 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ -1.50 (s)。MS m/z= 421.04 [M+1]。
Figure 02_image901
1- 甲基環丙烷 -1- 甲酸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .在RT下向中間物4 (34.0 mg，0.102 mmol)、中間物1-甲基環丙烷-1-甲酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯(43.0 mg，0.102 mmol)及氯化鎂(9.7 mg，0.102 mmol)之混合物中添加乙腈(0.50 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.045 mL，0.256 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著將反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.119 mL)。1.5 h後，用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由製備型HPLC (Phenominex Luna 5μ C18(2) 100Å 100 × 30 mm管柱，5-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.81 - 7.76 (m, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.87 - 6.81 (m, 1H), 6.75 - 6.70 (m, 1H), 5.54 - 5.47 (m, 1H), 4.67 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.27 (m, 3H), 4.02 - 3.90 (m, 2H), 3.19 - 3.07 (m, 2H), 1.24 - 1.19 (m, 3H), 1.18 - 1.11 (m, 2H), 0.68 - 0.61 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 5.24 (s), 5.06 (s)。LCMS：MS m/z= 573.31 [M+1]，t R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.56 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 4.93 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例142. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-(1r,4S)-4-甲基環己酯
Figure 02_image903
2- 胺基丙酸 (S)-(1R,4S)-4- 甲基環己酯 .向Cbz-L-丙胺酸酯(1.0 g，4.48 mmol)、反式-4-甲基環己醇(1.62 g，14.21 mmol)及EDCI (0.83 g，5.38 mmol)於乙腈(10 mL)中之混合物中一次性添加DMAP (0.82 g，6.72 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15 h，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至50% EtOAc/己烷)純化，得到Cbz-L-丙胺酸-反式-4-甲基環己酯，將其溶解於THF (10 mL)中，且添加20%氫氧化鈀/碳(250 mg)。將所得混合物在氫氣氣球下攪拌2 h，經由矽藻土墊過濾。真空濃縮濾液且高真空乾燥，得到中間物，將其用於下一反應中。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.66 (tt, J= 11.1, 4.4 Hz, 1H), 3.49 (qd, J= 7.0, 0.9 Hz, 1H), 1.93 (ddt, J= 12.8, 6.0, 2.8 Hz, 2H), 1.83 (d, J= 1.9 Hz, 2H), 1.77 - 1.66 (m, 2H), 1.43 - 1.22 (m, 6H), 1.10 - 0.93 (m, 2H), 0.88 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。MS m/z= 186 (M+H) +。
Figure 02_image905
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-(1r,4S)-4- 甲基環己酯 .藉由用於中間物25之相同步驟，將2-胺基丙酸(S)-(1R,4S)-4-甲基環己酯(470 mg，2.54 mmol)轉化成此中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 4.65 (m, 1H), 4.18 - 4.01 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 1.96 - 1.81 (m, 2H), 1.80 - 1.60 (m, 2H), 1.45 - 1.22 (m, 6H), 1.11 - 0.95 (m, 2H), 0.89 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.00, -3.06。MS m/z= 463 (M+H) +。
Figure 02_image907
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-(1r,4S)-4- 甲基環己酯 .在室溫下向中間物4 (50 mg，0.15 mmol)、中間物2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-(1r,4S)-4-甲基環己酯(116 mg，0.23 mmol)及MgCl 2(22 mg，0.23 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.066 mL，0.38 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物4 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (2 mL)中且添加濃HCl (0.2 mL)。攪拌混合物2 h，且以製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.37 - 7.08 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.70 - 4.47 (m, 2H), 4.47 - 4.29 (m, 3H), 3.85 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 2H), 1.73 - 1.61 (m, 2H), 1.38 - 1.20 (m, 6H), 1.05 - 0.82 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.30, 3.26。MS m/z= 615 (M+H) +。
產物藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%/異丙醇30%)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image909
實例 143.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.60 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.53 (tt, J= 11.0, 4.3 Hz, 1H), 4.45 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.43 - 4.39 (m, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.6 Hz, 1H), 3.85 (dq, J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 1.93 - 1.76 (m, 2H), 1.66 (ddt, J= 13.5, 10.1, 3.2 Hz, 2H), 1.35 - 1.21 (m, 6H), 1.04 - 0.88 (m, 2H), 0.86 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.26。 實例 144.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.21 (m, 2H), 7.22 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.65 - 4.53 (m, 2H), 4.51 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.92 - 3.75 (m, 1H), 1.87 (d, J= 12.1 Hz, 2H), 1.70 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 1.40 - 1.26 (m, 3H), 1.24 (dd, J= 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.00 (q, J= 12.8 Hz, 2H), 0.88 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.30。 實例145. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-哌啶-4-基酯
Figure 02_image911
在室溫下向中間物4 (52 mg，0.16 mmol)、中間物26 (144 mg，0.24 mmol)及MgCl 2(23 mg，0.24 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.069 mL，0.43 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (2 mL)中且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ 250 × 21 mm管柱，0-60% 1% TFA乙腈/水梯度)純化，得到呈三氟乙酸鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.02 (m, 1H), 7.47 - 7.11 (m, 6H), 6.95 (m, 1H), 5.54 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.54 (m, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 3H), 3.99 (m, 1H), 3.28 (m, 2H), 3.17 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.97 - 1.86 (m, 2H), 1.35 (dt, J= 7.2, 1.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32, 3.17。 19F NMR (376 MHz, 甲醇-d4) δ -77.95。MS m/z= 602 (M+H )+。 實例146. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-(R)-1-乙醯基吡咯啶-3-基酯
Figure 02_image913
將乙酸(4.8 μL，0.084 mmol)溶解於無水二氯甲烷(300 μL)中。N-一次性添加乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(16 mg，0.084 mmol)並攪拌30 min。添加三乙胺(12 μL，0.084 mmol)並攪拌30 min。將實例137 (15 mg，0.0255 mmol)溶解於無水N,N-二甲基甲醯胺(300 μL)及吡啶(150 μL)中。將上文所製備之混合物分2批添加至反應物中，接著攪拌反應物14小時。反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.41 - 7.07 (m, 5H), 6.89 - 6.79 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.55 - 5.48 (m, 1H), 5.35 - 5.15 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.58 - 4.28 (m, 3H), 3.90 (m, 1H), 3.69 - 3.44 (m, 4H), 2.09 (m, 2H), 1.96 (m, 3H), 1.26 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.14, 3.11。MS m/z= 630.4 [M+1], 628.6 [M-1]。 實例147. 磷酸((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲酯(2-氯苯基)酯(2-(十八烷氧基)乙基)酯
Figure 02_image915
在RT下向1,2,4-三唑(27.83 mg，0.4 mmol)及三乙胺(0.06 mL，0.4 mmol)於THF (0.50 mL)中之溶液中添加2-氯苯基二氯磷酸酯(0.03 mL，0.2 mmol)。1 h後，過濾反應混合物以移除固體。接著添加中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及1-甲基咪唑(0.02 mL，0.2 mmol)。1.5 h後，添加乙二醇單十八醚(47.47 mg，0.15 mmol)。20 h後，將反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用水(10 mL)洗滌。分離有機層，並且經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d 6) δ -7.76 (s)。MS m/z= 818.34 [M+1]。 實例148. 磷酸氫((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯(2-(十八烷氧基)乙基)酯
Figure 02_image917
在RT下將氟化四丁銨(1 M於THF中，0.22 mL，0.22 mmol)添加至實例147 (57.0 mg，0.07 mmol)於吡啶(0.3 mL)、水(0.3 mL)及THF (2 mL)中之溶液中。4 h後，用二氯甲烷(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。用1 N鹽酸水溶液將水層酸化至pH=3。分離各相，且用二氯甲烷(2 × 2 mL)萃取水層。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於THF (2 mL)中，且添加濃鹽酸溶液(12 M，100 μL)。6 h後，用2 N NaOH鹼化至pH=4。減壓濃縮所得混合物。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.81 (s, 1H), 6.88 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.53 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.14 (qd, J = 10.8, 4.8 Hz, 2H), 3.94 (q, J = 5.5 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.38 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.19 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 1.35 - 1.19 (m, 32H), 0.89 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ -0.58 (s)。MS m/z= 668.20 [M+H] 實例149. 磷酸氫((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯(3-(十六烷氧基)丙基)酯
Figure 02_image919
3-( 十六烷氧基 ) 丙 -1- 醇 .將氫化鈉於礦物油中之60%分散液(840 mg，21 mmol)與無水四氫呋喃(20 mL)混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。逐滴添加1,3-丙二醇(1.44 mL，20 mmol)並攪拌30 min。一次性添加1-溴十六烷(6.11 mL，20 mmol)。移除冰浴且攪拌1小時。將反應物加熱至80℃且攪拌4小時。添加無水N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)，且在80℃下攪拌14小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(40 mL)稀釋，且用10%碳酸鈉水溶液(20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 3.78 (t, J= 5.5 Hz, 2H), 3.61 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 3.42 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 1.83 (p, J= 5.6 Hz, 2H), 1.56 (p, J= 6.8 Hz, 2H), 1.25 (s, 26H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。
Figure 02_image921
磷酸 3-( 十六烷氧基 ) 丙酯雙 (4- 硝基苯基 ) 酯 .將二氯磷酸對硝基苯酯(256 mg，1 mmol)溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將3-(十六烷氧基)丙-1-醇(300 mg，1 mmol)溶解於無水二氯甲烷(2 mL)中，且逐滴添加至反應物中。逐滴添加三乙胺(153 μL，1.1 mmol)並攪拌1小時。移除冰浴且攪拌4小時。添加對硝基苯酚(111 mg，0.8 mmol)以及三乙胺(153 μL，1.1 mmol)。攪拌反應混合物14小時。反應物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋且用水(2×20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.32 - 8.18 (m, 2H), 7.39 (m, 2H), 4.45 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 4.29 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 3.48 (dd, J= 6.7, 5.4 Hz, 2H), 3.36 (td, J= 6.7, 3.0 Hz, 2H), 1.98 (dt, J= 16.4, 6.2 Hz, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.25 (m, 26H), 0.87 (t, J= 6.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -13.35。
Figure 02_image923
磷酸氫 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯 (3-( 十六烷氧基 ) 丙基 ) 酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及磷酸3-(十六烷氧基)丙酯雙(4-硝基苯基)酯(112 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(71 mg，0.75 mmol)。使反應物升溫至50℃且攪拌15 min。添加N,N-二異丙基乙胺(130 μL，0.75 mmol)，且在50℃下攪拌反應物2小時。將反應物冷卻至室溫且用乙酸乙酯(50 mL)稀釋。過濾混合物且減壓濃縮濾液。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將該物質溶解於1,4-二㗁烷(2 mL)中，且在冰浴中攪拌。添加0.1 N氫氧化鈉水溶液(1 mL)，且攪拌反應物3小時。用1 N鹽酸中和反應物，得到pH 7，且接著用乙酸乙酯(30 mL)萃取。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到白色固體(29 mg)。將物質溶解於乙腈(2 mL)中。逐滴添加12 N鹽酸(300 μL)，且接著攪拌1小時。減壓濃縮反應物，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.08 (s, 1H), 7.46 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.56 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.52 (t, J= 5.1 Hz, 1H), 4.40 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.29 (qd, J= 11.0, 5.5 Hz, 2H), 4.11 (q, J= 6.5 Hz, 2H), 3.49 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.39 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 1.89 (p, J= 6.2 Hz, 2H), 1.52 (q, J= 6.7 Hz, 2H), 1.27 (s, 26H), 0.89 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -1.56。 實例150. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-哌啶-4-基酯
Figure 02_image925
2- 胺基丙酸 (S)-1- 甲基哌啶 -4- 基 酯 .將Cbz-L-丙胺酸酯(2.33 g，10.42 mmol)、N-甲基-4-羥基-哌啶(1.00 g，7.99 mmol)及HATU (3.47 g，9.12 mmol)溶解於DMF (10 mL)中，且在室溫下攪拌所得混合物15 min。接著立即添加三乙胺(2.41 mL，17.37 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15 h，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至20% MeOH/亞甲基氯)純化，將其溶解於THF (15 mL)中，且添加20%氫氧化鈀/碳(250 mg)。在室溫下攪拌所得混合物4 h，過濾，真空濃縮，與甲苯共蒸發若干次，且高真空乾燥15 h，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 5.01 - 4.87 (m, 1H), 3.83 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 2.92 (m, 2H), 2.71 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.01 (m, 2H), 1.94 - 1.76 (m, 2H), 1.43 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。
Figure 02_image927
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)-1- 甲基哌啶 -4- 基酯 .將2-胺基丙酸(S)-1-甲基哌啶-4-基酯(400 mg，2.15 mmol)溶解於亞甲基氯(5 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.32 mL，2.15 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.30 mL，2.15 mmol)，且一次性添加4-硝基苯酚(299 mg，2.15 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.30 mL，2.15 mmol)。將混合物在-78℃下攪拌2 h且在室溫下攪拌15 h，用亞甲基氯稀釋，用水洗滌兩次且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至10% MeOH/亞甲基氯)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.21 - 8.00 (m, 2H), 7.50 - 7.04 (m, 7H), 4.90 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 2.96 (m, 4H), 2.55 (m, 3H), 2.08 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.35 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.48, -2.79。MS m/z- 464 (M+H) +。
Figure 02_image929
2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 哌啶 -4- 基酯 .在室溫下向中間物4 (52 mg，0.16 mmol)、2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-1-甲基哌啶-4-基酯(135 mg，0.246 mmol)及MgCl 2(23 mg，0.24 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.069 mL，0.43 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物15 h，藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到呈白色固體狀之縮丙酮化物中間物(60 mg，58%)。將20 mg縮丙酮化物溶解於ACN (1 mL)中，且添加濃HCl (0.1 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ 250 × 21 mm管柱，0-60% 1% TFA乙腈/水梯度)純化，得到呈TFA鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.99 (m, 1H), 7.46 - 7.08 (m, 6H), 6.92 m, 1H), 5.53 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 5.06 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.12 - 3.89 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 3.34 (s, 1H), 3.24 - 3.09 (m, 2H), 2.84 (m, 3H), 2.23 (m 1H), 2.04 (m, 2H), 1.83 (s, 1H), 1.42 - 1.24 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.36, 3.18。 19F NMR (376 MHz, 甲醇-d4) δ -77.67。MS m/z= 616 (M+H) +。 實例151. 二棕櫚酸3-(((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(羥基)磷醯基)氧基)丙烷-1,2-二基酯
Figure 02_image931
3-(( 雙 (4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 丙烷 -1,2- 二基 - 二棕櫚酸酯 .在-30℃下向1,2-二棕櫚醯基-外消旋-丙三醇(562 mg，0.988 mmol)及POCl 3(167 mg，1.087 mmol)於CH 2Cl 2(5 mL)中之溶液中添加TEA (0.14 mL，1.0 mmol)。在-30℃下攪拌反應混合物10分鐘，接著使其緩慢升溫至RT且攪拌0.5 h。在0℃下逐滴添加4-硝基苯酚(261 mg，1.877 mmol)及TEA (0.286 mL，2.06 mmol)於CH 2Cl 2(1.5 mL)中之溶液。將所得反應混合物在0℃下攪拌0.5 h，接著在RT下攪拌0.5 h。用己烷(15 mL)稀釋反應混合物，且過濾。將濾液裝載至矽膠管柱(約25 mL)上，用20-33% CH 3CO 2Et-己烷溶離，且合併含有產物之溶離份並減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)：δ 8.28 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 7.40 (2d, J= 9.2 Hz, 4H), 5.25-5.35 (m, 1H), 4.38-4.52 (m, 2H), 4.31 (dd, J = 12, 4.4 Hz, 1H), 4.17 (d, J= 12, 5.2 Hz, 1H), 2.20-2.32 (m, 4H), 1.50-1.70 (m, 8H), 1.25 (brs, 44 H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3)：δ -13.24。
Figure 02_image933
二棕櫚酸 3-(((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 丙烷 -1,2- 二基酯 .向中間物4 (124 mg，0.374 mmol)及磷酸3-((雙(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)丙烷-1,2-二基-二棕櫚酸酯(335 mg，0.376 mmol)於THF中之溶液中添加MgCl 2(60 mg，0.63 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10分鐘，接著添加N,N-二異丙基乙胺(150 mg，1.16 mmol)。在RT下攪拌反應混合物16 h。TLC顯示反應完成。將反應混合物用己烷-CH 3CO 2Et (1:1，5 mL)稀釋，用H 2O洗滌，經MgSO 4乾燥，藉由矽膠管柱純化(用30-70% CH 3CO 2Et-己烷溶離)，得到所需產物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3)：δ 8.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.30 ( d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.4, 1H), 6.68-6.75 (m, 2H), 5.61 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 5.15-5.27 (m, 2H), 5.03-5.05 (m, 1H), 4.4-4.58 (m, 2H), 4.2-4.4 (m, 2H), 4.05-4.18 (m, 2H), 2.2-2.3 (m, 4H), 2.1 (brs, 4H), 1.76 (d, J = 32. Hz, 3H), 1.58 (brs, 4H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.25 (brs, 44 H), 0.87 (t, J= 6.4 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3)：δ -7.47, -8.21。
Figure 02_image935
向二棕櫚酸3-(((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)丙烷-1,2-二基酯(122 mg，0.113 mmol)於CH 3CO 2Et (2 mL)及CH 3CN (2 mL)中之溶液中添加H 2O (0.5 mL)及三乙胺(0.5 mL)。在RT下攪拌反應混合物36 h。濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於CH 3CO 2Et (5 mL)中，添加AcOH (20 μL)，攪拌10分鐘，接著用H 2O洗滌，且經MgSO 4乾燥。粗物質藉由矽膠管柱純化，用5-25% MeOH-CH 2Cl 2溶離，得到所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + 20% CDCl 3)：δ 7.9 (brs, 2H), 7.84 (s, 1H), 6.88 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.56 ( d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.2-5.24 (m, 1H), 5.05-5.1 (m, 1H), 5.02 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.24 (dd, J = 12, 2.8 Hz, 1H), 3.9-4.1 (m, 3H), 3.8-3.9 (m, 2H), 2.16-2.22 (m, 4H), 1.62 (s, 3H), 1.4-1.5 (m, 4H), 1.32 (s, 3H), 1.19 (brs, 48 H), 0.82 (t, J= 7 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6 + 20% CDCl 3)：δ -1.99。 實例152. 二棕櫚酸3-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(羥基)磷醯基)氧基)丙烷-1,2-二基酯
Figure 02_image937
向實例151 (40 mg，0.042 mmol)於THF (1 mL)及H 2O (0.2 mL)中之溶液中添加HCl (37%，0.2 mL)。在RT下攪拌反應混合物1 h。濃縮反應混合物，且與THF-H 2O (2:1)共蒸發兩次。將殘餘物溶解於CH 2Cl 2中且裝載至矽膠管柱，用10-40% MeOH-CH 2Cl 2溶離。合併含有產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於CH 2Cl 2中且過濾。濃縮濾液且用MeCN-H 2O (1:1)處理，過濾，乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + 20% CDCl 3)：δ 8.2 (brs, 2H), 7.91 (s, 1H), 6.97 (d, J= 4 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 4 Hz, 1H), 5.37 ( d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.05-5.15 (m, 1H), 4.41 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.2-4.3 (m, 2H), 3.8-4.3 (m, 5H), 2.15-2.3 (m, 4H), 1.4-1.5 (m, 4H), 1.19 (brs, 48 H), 0.83 (t, J= 6.4 Hz, 6H)。 31P NMR (400 MHz, CDCl 3)：δ -2.4。 實例153. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(S)-2-側氧基吡咯啶-3-基酯
Figure 02_image939
( 三級丁氧基羰基 ) 丙胺酸(S)-2- 側氧基吡咯啶-3-基 酯. 以與針對實例117所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.57 (s, 0.26H), 7.48 (s, 0.74H), 5.33 - 5.20 (m, 1H), 5.15 (brs, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 1H), 3.39 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 2.61 - 2.46 (m, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 1H), 1.37 (m, 12H)。
Figure 02_image941
丙胺酸 (S)-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基 酯鹽酸鹽 .以與針對中間物13所描述類似的方式來製備中間物。
Figure 02_image943
((4- 硝基苯氧基)( 苯氧基) 磷醯基) 丙胺酸 (S)-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基 酯. 以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.34 - 8.24 (m, 2H), 8.14 - 8.03 (m, 1H), 7.57 - 7.36 (m, 3H), 7.33 - 7.19 (m, 2H), 6.84 - 6.69 (m, 1H), 5.25 - 5.09 (m, 1H), 4.14 - 3.97 (m, 1H), 3.25 - 3.11 (m, 2H), 2.45 - 2.30 (m, 1H), 1.87 - 1.72 (m, 1H), 1.32 - 1.21 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6 ) δ -1.247 (s), -1.520 (s), -1.581 (s)。MS m/z= 898.62 [M+1]。
Figure 02_image945
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 (S)-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基酯. 將中間物4 (54 mg，0.163 mmol)、中間物((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(S)-2-側氧基吡咯啶-3-基酯(88 mg，0.196 mmol)及MgCl 2(62 mg，0.652 mmol)溶解於THF (3 mL)中。5分鐘後，將所得混合物放置在50℃浴液中。攪拌10分鐘後，以逐滴方式添加DIPEA (0.071 mL，0.407 mmol)。反應進行直至中間物消耗為止，如藉由LC/MS所測定。將反應物冷卻至室溫，且經由添加飽和NaHCO 3水溶液而淬滅。分離各層且用DCM (3×)洗滌水層。合併之有機層用鹽水洗滌且經Na 2SO 4乾燥。藉由真空過濾移除乾燥劑後，濃縮濾液，且藉由HPLC分離中間物縮丙酮化物受保護產物(48 mg)。將中間物縮丙酮化物受保護產物溶解於THF (2.5 mL)中，將所得溶液在冰浴中冷卻，且逐滴添加HCl於水中之12 N溶液(0.3 mL)。藉由LC/MS監測反應進程。反應完成後，濃縮反應物，將殘餘物與來自另一按完全相同比例進行之反應之殘餘物合併，且藉由逆相HPLC自合併之殘餘物分離產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4, 帶有星號(*)之化學位移表示另一異構體上的相關質子之位移) δ 7.81 (s, 0.6H), 7.80 (s, 0.4H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.87 - 6.83 (m, 1H), 6.78 - 6.72 (m, 1H), 5.54 - 5.48 (m, 1H), 5.33 - 5.20 (m, 1H), 4.67 - 4.59 (m, 1H), 4.54 - 4.30 (m, 3H), 4.07 - 3.88 (m, 1H), 3.40 - 3.24 (m, 2H), 2.58 - 2.37 (m, 1H), 2.03 - 1.88 (m, 1H), 1.31 (d, J= 7.2 Hz, 2.13H), 1.26 (d, J= 7.1 Hz, 0.87H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.233 (s), 3.099 (s), 2.896 (s)。MS m/z= 602.08 [M+1]。 實例154. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3,3-二甲基環己酯
Figure 02_image947
L- 丙胺酸 3,3- 二甲基環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-L-丙胺酸酯(1.2 g，5.38 mmol)及3,3-二甲基環己醇(2.1 g，16.13 mmol，外消旋混合物)製備中間物。MS m/z= 200 [M+H]。
Figure 02_image949
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二甲基環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸3,3-二甲基環己酯(1.0 g，5.02 mmol)製備呈異構混合物(1:1:1:1)之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.40 - 7.31 (m, 4H), 7.27 - 7.21 (m, 3H), 4.93 - 4.80 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.91 (m, 1H), 1.78-1.41 (m, 3H), 1.39 (m, 3H), 1.36 - 1.04 (m, 5H), 0.96 - 0.90 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.00, -3.03, -3.06, -3.08。MS m/z= 477 [M+H]。
Figure 02_image951
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二甲基環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物4 (60 mg，0.18 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3,3-二甲基環己酯(129 mg，0.27 mmol)製備產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.55 - 5.44 (m, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.54 - 4.30 (m, 3H), 3.95 - 3.74 (m, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.65 - 1.35 (m, 3H), 1.34 - 0.98 (m, 7H), 0.97 - 0.82 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.30, 3.27。MS m/z= 629 [M+H]。 實例155. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-2-甲基環己酯
Figure 02_image953
L- 丙胺酸反式 -2- 甲基環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-L-丙胺酸酯(1.0 g，4.48 mmol)及反式-2-甲基環己醇(2.2 g，17.9 mmol，外消旋混合物)製備中間物。MS m/z= 186 [M+H]。
Figure 02_image955
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -2- 甲基環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸反式-2-甲基環己酯(590 mg，2.66 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 4H), 7.30 - 7.15 (m, 3H), 4.43 (m, 1H), 4.28 - 4.03 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.69 - 1.47 (m, 2H), 1.41 (m, 3H), 1.38 - 1.13 (m, 3H), 1.12 - 0.98 (m, 1H), 0.84 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.99, -3.00, -3.05, -3.08。MS m/z= 463 [M+H]。
Figure 02_image957
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -2- 甲基環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物4 (83 mg，0.25 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-2-甲基環己酯(174 mg，0.38 mmol)製備產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.19 m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.73 m, 1H), 5.56 - 5.46 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 2H), 4.38 - 4.25 (m, 2H), 3.96 - 3.78 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.79 - 1.38 (m, 4H), 1.36 - 1.11 (m, 6H), 1.12 - 0.90 (m, 1H), 0.89 - 0.70 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32, 3.29, 3.28, 3.27。MS m/z= 615 [M+H]。 實例156. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸2,2-二甲基四氫-2 H-哌喃-4-基酯
Figure 02_image959
丙胺酸 2,2- 二甲基四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-L-丙胺酸酯(1.8 g，8.06 mmol)及2,2-二甲基-4-羥基四氫-2H-哌喃(1.36 mL，9.68 mmol，外消旋混合物)製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.08 (m, 1H), 3.90 - 3.76 (m, 1H), 3.69 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 2.10 - 1.74 (m, 4H), 1.67 - 1.39 (m, 2H), 1.34 (dd, J= 7.0, 0.9 Hz, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.24 (s, 3H)。MS m/z= 202 [M+H]。
Figure 02_image961
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 2,2- 二甲基四氫 -2 H- 哌喃 -4- 基 酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由丙胺酸2,2-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基酯(1.10 g，5.47 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.28 - 8.14 (m, 2H), 7.44 - 7.27 (m, 3H), 7.27 - 7.10 (m, 4H), 5.10 - 4.97 (m, 1H), 4.18 - 4.02 (m, 1H), 3.91 - 3.73 (m, 2H), 3.71 - 3.59 (m, 1H), 1.89 - 1.74 (m, 2H), 1.75 - 1.46 (m, 2H), 1.40 (m, 3H), 1.23 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.15, -3.13。MS m/z= 479 [M+H]。
Figure 02_image963
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 2,2- 二甲基四氫 -2 H- 哌喃 -4- 基酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物4 (55 mg，x 0.17 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸2,2-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基酯(119 mg，0.25 mmol)製備產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.85 - 7.72 (m, 1H), 7.36 - 7.07 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.80 - 6.65 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 5.06 - 4.92 (m, 1H), 4.68 - 4.54 (m, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 3H), 3.97 - 3.80 (m, 1H), 3.77 - 3.54 (m, 2H), 1.88 - 1.72 (m, 2H), 1.41 (m, 2H), 1.29 - 1.13 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.37, 3.21, 3.19, 2.97。MS m/z=631 [M+H]。 實例157. (2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸新戊酯
Figure 02_image965
(S)-2- 胺基丁酸新戊酯鹽酸鹽 .將氯三甲基矽烷(1.23 mL，10.0 mmol)添加至(S)-2-胺基丁酸(1 g，10 mmol)於新戊醇(8.54 g)中之溶液中，且將所得混合物加熱至80℃。21 h後，在70℃下減壓濃縮反應混合物。將粗固體殘餘物溶解於己烷(150 mL)中且攪拌4 h。藉由真空過濾收集所得固體，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 4.05 (t, J =6.1 Hz, 1H), 3.96 (qd, J =10.5, 0.9 Hz, 2H), 2.08 - 1.88 (m, 2H), 1.07 (td, J =7.6, 0.9 Hz, 3H), 0.99 (s, 9H)。
Figure 02_image967
(2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸新戊酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向(S)-2-胺基丁酸新戊酯鹽酸鹽(0.994 g，4.74 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.705 mL，4.74 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.2 mL，9.4 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1.5 h。接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.22 (d, J =8.3 Hz, 2H), 7.47 - 7.29 (m, 4H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 4.18 - 4.03 (m, 1H), 3.94 - 3.72 (m, 3H), 1.90 - 1.69 (m, 2H), 0.97 - 0.82 (m, 12H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ -2.64 (s), -2.70 (s)。MS m/z= 450.96 [M+1]。
Figure 02_image969
(2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丁酸新戊酯 .在RT下向中間物4 (34.0 mg，0.102 mmol)、(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丁酸新戊酯(46.1 mg，0.102 mmol)及氯化鎂(9.7 mg，0.102 mmol)之混合物中添加乙腈(0.50 mL)。使所得混合物升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.045 mL，0.256 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著將反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.119 mL，1.43 mmol)。1 h後，用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Luna 5μ C18(2) 100Å 100 × 30 mm管柱，5-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (s, 0.6H), 7.78 (s, 0.4H), 7.35 - 7.10 (m, 5H), 6.86 - 6.82 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 5.53 - 5.47 (m, 1H), 4.65 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.30 (m, 3H), 3.87 - 3.63 (m, 3H), 1.80 - 1.54 (m, 2H), 0.93 - 0.81 (m, 12H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.61 (s) 3.57 (s)。LCMS：MS m/z= 603.30 [M+1]，t R= 1.59 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 5.66 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型SFC (SFC ID 5μm 4.6 × 150 mm管柱，SFC 30% IPA)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image971
實例 158.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 2H), 7.19 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J =4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J =4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J =5.1 Hz, 1H), 4.61 (t, J =5.3 Hz, 1H), 4.52 - 4.43 (m, 2H), 4.36 (dd, J =10.8, 5.3 Hz, 1H), 3.86 - 3.70 (m, 3H), 1.82 - 1.69 (m, 1H), 1.69 - 1.54 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.85 (t, J =7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.58 (s)。LCMS：MS m/z= 603.30 [M+1]，t R= 1.57 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 5.66 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 159.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.38 - 7.27 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.93 (d, J =4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J =4.6 Hz, 1H), 5.49 (d, J =5.0 Hz, 1H), 4.59 (t, J =5.3 Hz, 1H), 4.48 - 4.38 (m, 2H), 4.34 (dd, J =10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 3.76 (d, J =10.5 Hz, 1H), 3.66 (d, J =10.5 Hz, 1H), 1.80 - 1.56 (m, 2H), 0.90 - 0.82 (m, 12H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.62 (s)。LCMS：MS m/z= 603.30 [M+1]，t R= 1.59 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 5.66 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例160. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-1-胺基-1-側氧基丙-2-基酯
Figure 02_image973
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 胺基 -1- 側氧基丙 -2- 基 酯 .將Cbz-L-Ala (446 mg，2 mmol)溶解於無水乙腈(15 mL)中。一次性添加EDCI (460 mg，2.4 mmol)，且攪拌反應物15 min。一次性添加(S)-乳醯胺(178 mg，2 mmol)，且接著添加DMAP (269 mg，2.2 mmol)。攪拌反應物6小時。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(15 mL)洗滌，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(15 mL)洗滌，且最後用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，得到中間物，其不經純化即用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.35 (m, 5H), 6.55 (s, 1H), 5.38 - 4.93 (m, 5H), 4.34 (p, J= 7.2 Hz, 1H), 1.47 (m, 6H)。
Figure 02_image975
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 胺基 -1- 側氧基丙 -2- 基 酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(S)-1-胺基-1-側氧基丙-2-基酯(479 mg，1.63 mmol)溶解於無水THF (25 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌混合物3小時。濾出催化劑，且用無水THF (5 mL)洗滌。減壓濃縮濾液，且所得物質不經純化即使用。將二氯磷酸苯酯(242 μL，1.63 mmol)溶解於無水DCM (15 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之物質與無水THF (5 mL)混合，且經15 min分成若干批添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(250 μL，1.79 mmol)逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應物1小時。將更多三乙胺(250 μL，1.79 mmol)逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應物45 min。將對硝基苯酚(181 mg，1.3 mmol)一次性添加至反應物中。移除冰浴，且攪拌反應混合物14小時。反應物用DCM (20 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.47 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.14 (m, 3H), 6.52 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.17 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.07 - 3.96 (m, 1H), 1.53 - 1.40 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -2.53 (s), -2.79 (s)。MS m/z= 438.0 [M+1]；436.0 [M-1]。
Figure 02_image977
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 胺基 -1- 側氧基丙 -2- 基酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-1-胺基-1-側氧基丙-2-基酯(79 mg，0.18 mmol)混合於無水THF (3 mL)中。一次性添加氯化鎂(36 mg，0.375 mmol)。在50℃下攪拌反應物30 min。添加DIPEA (65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物14小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (15 mL)稀釋，且用2%碳酸鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得油狀物溶解於MeCN (2 mL)中，且在冰浴中攪拌。將12 M HCl (水溶液) (300 μL)逐滴添加至反應物中，且接著攪拌1小時。用EtOAc (10 mL)稀釋反應物。添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值8。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.08 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 5.04 - 4.93 (m, 1H), 4.67 - 4.58 (m, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 3H), 3.97 (m, 1H), 1.46 - 1.25 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.52 (s), 3.39 (s)。MS m/z= 590.1 [M+1]；588.0 [M-1]。 實例161. (4aR,6S,7S,7aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-(環戊氧基)-7-羥基二氫-4H-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧雜次膦-4a(6H)-甲腈2-氧化物
Figure 02_image979
磷酸環戊酯雙 (4- 硝基苯基 ) 酯 .在氬氣氛圍下在-78℃下，向環戊醇(0.87 g，10.1 mmol)及氧氯化磷(1.56 g，10.17 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.4 mL，10.1 mmol)。使所得混合物升溫至0℃並攪拌0.5 h。接著添加4-硝基苯酚(2.65 g，19.05 mmol)及三乙胺(2.8 mL，20.2 mmol)。1 h後，用己烷(15 mL)稀釋反應混合物，且過濾所得混合物。濾液藉由矽膠管柱純化，用20-33%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.26 (d, J = 9.6 Hz, 4H), 7.39 (d, J = 9.6 Hz, 4H), 5.15 - 5.25 (m, 1H), 1.60 - 2.0 (m, 8H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ -14.2 (s)。
Figure 02_image981
磷酸 ((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲酯環戊酯 (4- 硝基苯基 ) 酯 .向中間物4 (105 mg，0.317 mmol)、磷酸環戊酯雙(4-硝基苯基)酯(140 mg，0.343 mmol)及氯化鎂(54 mg，0.567 mmol)於THF (2.0 mL)中之混合物中添加 N,N-二異丙基乙胺(115 μL，0.66 mmol)。在RT下攪拌所得混合物16 h。反應混合物用乙酸乙酯(5 mL)稀釋，用水洗滌，經MgSO 4乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠管柱純化，用30-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.3 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.2 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.65 - 6.71 (m, 1H), 6.55 - 6.59 (m, 1H), 5.8 (brs, 2H), 5.58 -5.63 (m, 1H), 5.2 - 5.3 (m, 1H), 5.0 - 5.15 (m, 2H), 4.38 - 4.52 ( m, 2H), 1.5 - 2.0 (m, 11H), 1.35 -1.37 (2s, 3H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ -8.84 (s), -9.13 (s)。MS m/z= 601.0 [M+H]。
Figure 02_image983
磷酸 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯環戊酯 (4- 硝基苯基 ) 酯 .在0℃下，向磷酸((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲酯環戊酯(4-硝基苯基)酯(120 mg，0.20 mmol)於乙腈(1.2 mL)及水(0.2 mL)中之溶液中添加HCl (0.2 mL，37%)。在RT下攪拌反應混合物3 h。用NaHCO 3(210 mg)淬滅反應混合物，攪拌1 h且濃縮。殘餘物用CH 3CO 2Et處理，用水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3+ 5% CD 3OD) δ 8.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.55 - 6.7 (m, 2H), 4.95 - 5.1 (m, 1H), 4.3 -4.55 (m, 4H), 1.45 - 1.95 (m, 8H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3+ 5% CD 3OD) δ -8.88 (s), -9.06 (s)。MS m/z= 561.0 [M+H]。
Figure 02_image985
(4aR,6S,7S,7aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-( 環戊氧基 )-7- 羥基二氫 -4H- 呋喃并 [3,2-d][1,3,2] 二氧雜次膦 -4a(6H)- 甲腈 2- 氧化物 .將磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯環戊酯(4-硝基苯基)酯(55 mg，0.098 mmol)及DMAP (110 mg，0.9 mmol)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在85℃下攪拌36 h。減壓濃縮反應混合物。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CD 3CN) δ 7.86 (s, 1H), 6.78 -6.81 (m, 2H), 6.43 (brs, 2H), 5.63 (brs, 1H), 5.26 - 5.29 (m, 1H), 5.0 - 5.1 (m, 2H), 4.84 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.68 - 4.77 (m, 1H), 4.44 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.25 (brs, 1H), 1.6 - 2.0 (m, 8H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3CN) δ -8.3 (s)。MS m/z= 422.3 [M+H]。 實例162. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(二甲基胺基)乙酯
Figure 02_image987
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 2-( 二甲基胺基 ) 乙酯 .將Cbz-L-Ala (446 mg，2 mmol)溶解於無水DMF (10 mL)中。一次性添加三乙胺(698 μL，5 mmol)。添加2-氯-N,N-二甲基乙胺鹽酸鹽(317 mg，2.2 mmol)。攪拌反應物2小時。添加DMAP (24 mg，0.2 mmol)，且攪拌反應物2小時。使反應物升溫至50℃且攪拌2小時。添加更多三乙胺(700 μL)及2-氯-N,N-二甲基乙胺鹽酸鹽(317 mg)。在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (30 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 15 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.37 (m, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.50 - 4.33 (m, 1H), 4.26 (m, 2H), 2.59 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.42 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image989
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 二甲基胺基 ) 乙酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸2-(二甲基胺基)乙酯(310 mg，1.05 mmol)溶解於無水THF (15 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌混合物3小時。濾出催化劑，且用無水THF (5 mL)洗滌。減壓濃縮濾液，且所得物質不經純化即使用。將二氯磷酸苯酯(157 μL，1.05 mmol)溶解於無水THF (10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之物質用無水THF (3 mL)溶解，且經5 min逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(322 μL，2.32 mmol)逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應物1小時。將對硝基苯酚(117 mg，0.84 mmol)一次性添加至反應物中。移除冰浴，且攪拌反應混合物14小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋且用水(2 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-7%甲醇/DCM)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.14 (m, 3H), 4.33 - 4.02 (m, 4H), 2.58 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.42 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.04 (s)。MS m/z= 438.1 [M+1]；436.1 [M-1]。
Figure 02_image991
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 二甲基胺基 ) 乙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(二甲基胺基)乙酯(79 mg，0.18 mmol)混合於無水THF (3 mL)中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。攪拌反應物10 min。添加DIPEA (52 μL，0.3 mmol)，且攪拌反應物4小時。添加更多氯化鎂(90 mg，0.9 mmol)，且攪拌反應物16小時。反應物用EtOAc (15 mL)稀釋，且用2%碳酸鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得油狀物溶解於MeCN (2 mL)中，且在冰浴中攪拌。將12 M HCl (水溶液) (300 μL)逐滴添加至反應物中，且接著攪拌2小時。用EtOAc (10 mL)稀釋反應物。添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值8。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，並且接著將所得化合物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d3, 水- d2) δ 7.89 - 7.78 (m, 1H), 7.45 - 7.29 (m, 2H), 7.29 - 7.04 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.79 - 6.71 (m, 1H), 5.50 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.66 - 4.54 (m, 1H), 4.54 - 4.27 (m, 5H), 3.97 (m, 1H), 3.40 - 3.24 (m, 2H), 2.88 - 2.71 (m, 6H), 1.29 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d3, 水- d2) δ 0.93 (s), 0.80 (s)。MS m/z= 590.2 [M+1]；588.1 [M-1]。 實例163. (4aR,6S,7S,7aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-7-羥基-2-異丙氧基二氫-4H-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧雜次膦-4a(6H)-甲腈2-氧化物
Figure 02_image993
磷酸異丙酯雙 (4- 硝基苯基 ) 酯 .在-78℃下向異丙醇(0.780 mL，10.2 mmol)及POCl 3(0.945 mL，10.2 mmol)於二氯甲烷中之溶液中添加三乙胺(1.42 mL，10.2 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物10分鐘，且接著使其緩慢升溫至0℃並攪拌30 min。接著緩慢添加4-硝基苯酚(2.83 g，20.4 mmol)及三乙胺(2.84 mL，20.4 mmol)於二氯甲烷中之溶液。在0℃下攪拌所得混合物30 min，且接著使其升溫至RT。30 min後，用己烷(15 mL)稀釋反應混合物，且藉由真空過濾移除固體。濾液經由SiO 2管柱層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.27 (d, J =9.1 Hz, 4H), 7.40 (d, J =9.3 Hz, 2H), 4.97 (h, J =6.3 Hz, 1H), 1.42 (d, J =6.2 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ -14.22 (s)。
Figure 02_image995
磷酸 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯異丙酯 (4- 硝基苯基 ) 酯 .在RT下向中間物4 (167 mg，0.438 mmol)、中間物磷酸異丙酯雙(4-硝基苯基)酯(145 mg，0.438 mmol)及氯化鎂(41.7 mg，0.438 mmol)之混合物中添加乙腈(2.00 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.076 mL，0.438 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著將反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.511 mL)。1 h後，用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Gemini 5μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度0.1% TFA)純化。合併具有所需產物之溶離份，且將其濃縮至約5 mL體積，並且添加飽和碳酸氫鈉水溶液以中和至pH=7。所得混合物水溶液用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取，且有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。
Figure 02_image997
(4aR,6S,7S,7aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-7- 羥基 -2- 異丙氧基二氫 -4H- 呋喃并 [3,2-d][1,3,2] 二氧雜次膦 -4a(6H)- 甲腈 2- 氧化物 .將磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯異丙酯(4-硝基苯基)酯(167 mg，0.438 mmol)溶解於乙酸乙酯(2 mL)中，且添加DMAP (428 mg)，並且將所得混合物加熱至80℃。24 h後，減壓濃縮所得混合物。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Gemini 5μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度0.1% TFA)純化，並且合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於水/乙腈混合物中，且用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，並且經由製備型HPLC (Gemini 5μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。1:0.15異構體混合物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 6.86 (d, J =4.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J =4.5 Hz, 1H), 5.59 (d, J =1.5 Hz, 1H), 5.41 (dd, J =5.4, 2.8 Hz, 1H), 4.84 - 4.77 (m, 1H), 4.51 (d, J =10.0 Hz, 1H), 1.47 (dd, J =6.2, 3.2 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ -7.61 (s)。MS m/z= 396.18 [M+H]。LCMS：MS m/z= 396.18 [M+1]，t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.12 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。 實例164. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-甲氧基-2-甲基丙酯
Figure 02_image999
L- 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯鹽酸鹽 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(1.82 mL，10.0 mmol)及2-甲氧基-2-甲基丙-1-醇(1.00 g，10.0 mmol)溶解於乙腈(150 mL)中。接著添加EDCI (1.49 g，10.0 mmol)及DMAP (1.17 g，10.0 mmol)，且在RT下攪拌反應混合物。2 h後，減壓濃縮混合物。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(25 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有受Boc保護之中間物之溶離份且減壓濃縮。將含4 M HCl之二㗁烷(20 mL)添加至濃縮物中，且4 h後，藉由真空過濾收集所得固體，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 4.33 - 4.20 (m, 1H), 4.17 (d, J =11.3 Hz, 1H) 4.07 (d, J =11.4 Hz, 1H), 3.28 - 3.18 (m, 3H), 1.75 (d, J =7.1 Hz, 3H), 1.21 (br s, 6H)。
Figure 02_image1001
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向L-丙胺酸2-甲氧基-2-甲基丙酯(0.120 g，0.57 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.084 mL，0.57 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.160 mL，1.13 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(0.080 mg，0.57 mmol)及三乙胺(0.08 mL，0.57 mmol)。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (dd, J =9.3, 2.7 Hz, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 4H), 7.27 - 7.18 (m, 3H), 4.28 - 4.12 (m, 1H), 4.08 (d, J =11.4 Hz, 1H), 4.01 (dd, J =11.3, 5.1 Hz, 1H), 3.87 (t, J =10.8 Hz, 1H), 3.20 (d, J =1.3 Hz, 3H), 1.44 (dd, J =7.1, 3.1 Hz, 3H), 1.17 (s, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.15 (s), -3.21 (s)。MS m/z= 453.06 [M+1]。
Figure 02_image1003
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 甲氧基 -2- 甲基丙酯 。在RT下向中間物4 (81.3 mg，0.245 mmol)、中間物((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-甲氧基-2-甲基丙酯(111 mg，0.245 mmol)及氯化鎂(23.4 mg，0.245 mmol)之混合物中添加乙腈(1.20 mL)。使所得混合物升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.107 mL，0.613 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著將反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.286 mL)。1.5 h後，用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由製備型HPLC (Gemini 5μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱，50-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.80 (s, 0.7H), 7.78 (s, 0.3H), 7.36 - 7.12 (m, 5H), 6.86 - 6.82 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.46 (m, 1H), 4.65 - 4.30 (m, 4H), 4.07 - 3.82 (m, 3H), 3.19 (s, 0.9H), 3.16 (s, 2.1H), 1.29 (d, J =7.2 Hz, 3H), 1.16 (s, 1.8H), 1.12 (s, 4.2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.25 (s), 3.16 (s)。LCMS：MS m/z= 605.50 [M+1]，t R= 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.54 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 4.82 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例165. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸4-甲氧基環己酯
Figure 02_image1005
4- 甲氧基環己 -1- 醇 .以與針對實例204所描述類似的方式，由4-甲氧基環己酮(1000 mg，7.80 mmol)獲得中間物。
Figure 02_image1007
丙胺酸 4- 甲氧基環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由4-甲氧基環己醇(700 mg，5.38 mmol)及cbz-l-丙胺酸(1000 mg，4.48 mmol)製備產物。
Figure 02_image1009
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 4- 甲氧基環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由丙胺酸4-甲氧基環己酯(540 mg，2.68 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.26 - 8.19 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.26 - 7.17 (m, 3H), 4.92 - 4.69 (m, 1H), 4.21 - 4.01 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 3.32 (m, 3H), 3.31 - 3.18 (m, 1H), 1.92 (m, 2H), 1.83 - 1.53 (m, 4H), 1.41 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.03, -3.12。MS m/z= 479 [M+H]。
Figure 02_image1011
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 4- 甲氧基環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸4-甲氧基環己酯(141 mg，0.29 mmol)及中間物4 (65 mg，0.20 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.85 - 7.71 (m, 1H), 7.36 - 7.12 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.52 (m, 1H), 4.81 - 4.55 (m, 2H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 3.89 (m, 1H), 3.29 (m, 4H), 1.97 - 1.78 (m, 2H), 1.81 - 1.47 (m, 4H), 1.49 - 1.12 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.45, 3.40, 3.29, 3.28, 3.25, 3.08, 3.04。MS m/z= 631 [M+H]。 實例166. 環己烷甲酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image1013
環己烷甲酸 2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 乙酯 .將環己烷甲酸(256 mg，2 mmol)溶解於無水乙腈(6 mL)中。一次性添加EDCI (422 mg，2.2 mmol)，且攪拌反應物15 min。一次性添加N-Cbz-胺基乙醇(390 mg，2 mmol)，且接著添加DMAP (269 mg，2.2 mmol)。攪拌反應物16小時。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(15 mL)洗滌，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(15 mL)洗滌，且最後用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.42 - 7.28 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.96 (s, 1H), 4.15 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.47 (q, J= 5.6 Hz, 2H), 2.29 (m, 1H), 1.88 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.42 (m, 2H), 1.25 (m, 3H)。
Figure 02_image1015
環己烷甲酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將環己烷甲酸2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙酯(372 mg，1.22 mmol)溶解於無水THF (20 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌混合物3小時。濾出催化劑，且用無水THF (5 mL)洗滌。減壓濃縮濾液，且所得物質不經純化即使用。將二氯磷酸苯酯(181 μL，1.22 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之物質用無水DCM (2 mL)溶解，且經5 min逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(374 μL，2.68 mmol)逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應物1小時。將對硝基苯酚(136 mg，0.976 mmol)一次性添加至反應物中。移除冰浴，且攪拌反應混合物16小時。反應物用DCM (15 mL)稀釋且用水(2 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.29 - 8.17 (m, 2H), 7.46 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 4.19 - 4.06 (m, 2H), 3.39 (m, 2H), 2.24 (m, 1H), 2.00 - 1.54 (m, 5H), 1.54 - 1.11 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.51 (s)。MS m/z= 449.0 [M+1]；447.2 [M-1]。
Figure 02_image1017
環己烷甲酸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及環己烷甲酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯(81 mg，0.18 mmol)混合於無水THF (3 mL)中。一次性添加氯化鎂(57 mg，0.6 mmol)。攪拌反應物20 min。添加DIPEA (52 μL，0.3 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至RT，用EtOAc (15 mL)稀釋，且用2%碳酸鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得油狀物溶解於MeCN (2 mL)中，且在冰浴中攪拌。將12 M HCl (水溶液) (300 μL)逐滴添加至反應物中，且接著攪拌1小時。用EtOAc (10 mL)稀釋反應物。添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值8。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.48 (m, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 2H), 3.98 (m, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.24 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.74 - 1.49 (m, 3H), 1.45 - 1.10 (m, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 5.20 (s), 5.03 (s)。MS m/z= 601.1 [M+1]；599.1 [M-1]。 實例167. 磷酸氫(R)-2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)酯
Figure 02_image1019
(R)-1-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙 -2- 醇 .將1-O-十八基- sn-丙三醇(3 g，8.706 mmol)溶解於吡啶(23 mL)、DMF (5 mL)及DCM (5 mL)中。添加咪唑，且反應燒瓶在冰浴中冷卻。經由加料漏斗以逐滴方式添加TBSCl (1.443 g，0.01 mol)於吡啶(23 mL)中之溶液。完成添加之後，使反應燒瓶在冰浴中繼續靜置。1小時25分鐘後，移除冰浴，且在室溫下繼續攪拌2小時50分鐘。將反應物在冰浴中冷卻，且用水與飽和NaHCO 3水溶液之1:1混合物淬滅。混合物進一步用水與飽和NaHCO 3水溶液之1:4混合物稀釋，且所得混合物用己烷萃取。合併之有機洗液用鹽水洗滌且經Na 2SO 4乾燥。藉由過濾移除乾燥劑後，濃縮濾液，且中間物藉由矽膠管柱層析(24 g裝載濾筒，120 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100%己烷變化為30% EtOAc/己烷)分離。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 3.79 (p, J= 5.4 Hz, 1H), 3.67 - 3.57 (m, 2H), 3.48 - 3.37 (m, 4H), 1.60 - 1.49 (m, 2H), 1.34 - 1.19 (m, 30H), 0.90 - 0.83 (m, 12H), 0.05 (s, 6H)。
Figure 02_image1021
(R)-(2-( 烯丙氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 )( 三級丁基 ) 二甲基矽烷 .將NaH於礦物油中之60% w/w分散液(0.439 g，0.011 mol)懸浮於THF (30 mL)中。將反應燒瓶放置在冰浴中，且經由加料漏斗以逐滴方式將(R)-1-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-3-(十八烷氧基)丙-2-醇(3.36 g，7.323 mmol)於THF (15 mL)中之溶液添加至反應物中。移除冷浴，且30分鐘後藉由加料漏斗以逐滴方式添加烯丙基溴(1.267 mL，0.015 mol)於THF (4 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應物24小時。將反應物在冰浴中冷卻，且經由添加飽和NH 4Cl水溶液而淬滅。所得混合物用水及己烷稀釋，且分離各層。用己烷萃取水層，且合併之有機物用鹽水洗滌且經Na 2SO 4乾燥。藉由過濾移除乾燥劑且濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析(12 g裝載濾筒，120 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100%己烷變化為15% EtOAc/己烷)自殘餘物分離中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.90 (ddt, J= 17.3, 10.4, 5.6 Hz, 1H), 5.25 (dq, J= 17.2, 1.7 Hz, 1H), 5.13 (dq, J= 10.4, 1.4 Hz, 1H), 4.13 (dt, J= 5.8, 1.5 Hz, 2H), 3.70 - 3.58 (m, 2H), 3.57 - 3.48 (m, 2H), 3.47 - 3.36 (m, 3H), 1.58 - 1.49 (m, 2H), 1.34 - 1.19 (s, 30H), 0.90 - 0.83 (s, 12H), 0.04 (s, 6H)。
Figure 02_image1023
(S)-2-( 烯丙氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙 -1- 醇 .將(R)-(2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(三級丁基)二甲基矽烷(1.74 g，3.49 mmol)溶解於THF (20 mL)中。在室溫下添加TBAF於THF中之1 M溶液(10.46 mL，10.46 mmol)，且在室溫下攪拌反應物直至起始物質耗盡，如藉由TLC所測定。將反應物在冰浴中冷卻，且經由添加飽和NH 4Cl水溶液而淬滅。混合物用DCM及水稀釋，且分離各層。用DCM (3×)萃取水相，且合併之有機物用鹽水洗滌且經Na 2SO 4乾燥。藉由真空過濾移除乾燥劑且濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析(12 g裝載濾筒，80 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100%己烷變化為30% EtOAc/己烷)自殘餘物分離中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.91 (ddt, J= 17.3, 10.4, 5.7 Hz, 1H), 5.27 (dq, J= 17.2, 1.6 Hz, 1H), 5.17 (dq, J= 10.4, 1.4 Hz, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 2H), 3.76 - 3.35 (m, 7H), 1.54 (p, J= 6.7 Hz, 2H), 1.23 (brs, 30H), 0.86 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。
Figure 02_image1025
(R)-2-( 烯丙氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙基 (2- 氯苯基 ) 磷酸三乙銨 .以與針對實例96所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, ACN- d 3 ) δ 7.63 (dt, J= 8.2, 1.2 Hz, 1H), 7.39 (dt, J= 8.0, 1.3 Hz, 1H), 7.26 - 7.21 (m, 1H), 7.02 (td, J= 7.7, 1.5 Hz, 1H), 5.90 (ddt, J= 17.3, 10.7, 5.5 Hz, 1H), 5.25 (dq, J= 17.3, 1.8 Hz, 1H), 5.11 (dq, J= 10.5, 1.5 Hz, 1H), 4.07 (dt, J= 5.5, 1.5 Hz, 2H), 4.01 - 3.86 (m, 2H), 3.62 (p, J= 5.1 Hz, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 2H), 3.40 - 3.35 (m, 2H), 3.00 (qd, J= 7.3, 4.5 Hz, 6H), 1.50 (p, J= 6.8 Hz, 2H), 1.29 (s, 30H), 1.23 (t, J= 7.3 Hz, 9H), 0.94 - 0.86 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, ACN- d 3 ) δ -6.00。MS m/z= 575.42 [M+1]。
Figure 02_image1027
(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((((R)-2-( 烯丙氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 )(2- 氯苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-6- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -4- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯 .以與針對實例96所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, ACN- d 3 ) δ 8.38 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.28 - 7.15 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.93 - 5.79 (m, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.34 - 5.19 (m, 2H), 5.11 (dt, J= 6.6, 3.0 Hz, 2H), 4.57 - 4.45 (m, 2H), 4.34 - 4.13 (m, 2H), 4.04 (ddt, J= 12.7, 5.5, 1.5 Hz, 2H), 3.65 (q, J= 5.1 Hz, 1H), 3.45 - 3.33 (m, 4H), 1.72 (s, 3H), 1.55 (s, 9H), 1.50 - 1.48 (m, 2H), 1.38 (s, 3H), 1.34 - 1.24 (m, 30H), 0.94 - 0.86 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, ACN- d 3 ) δ -7.345 (s), -7.414 (s)。MS m/z= 989.06 [M+1]。
Figure 02_image1029
(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((((R)-2-( 烯丙氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 )( 羥基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-6- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -4- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯 .將(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-(((((R)-2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(2-氯苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-4-基)胺基甲酸三級丁酯(0.1 g，0.101 mmol)溶解於THF (1.2 mL)中。將所得溶液在冰浴中冷卻，且以逐滴方式添加NaOH於水中之1 N溶液(0.121 mL，0.003 mol)。在室溫下攪拌反應物55分鐘，且接著將其放置在預加熱之45℃油浴中。1小時55分鐘後，添加額外THF (0.5 mL)，接著添加更多NaOH於水中之1 N溶液(0.2 mL，0.006 mol)。2小時後，將反應物冷卻至室溫，且在5℃冷凍機中儲存隔夜。將反應物放回預加熱之45℃油浴中。1小時後，將反應物在冰浴中冷卻，且經由添加HCl於水中之2 N溶液(0.2 mL)而淬滅。用水(10 mL)及DCM (10 mL)稀釋所得混合物。分離各層且用DCM (3×)萃取水層。合併之有機物用鹽水萃取且經Na 2SO 4乾燥。藉由過濾移除乾燥劑且濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析(12 g裝載濾筒，25 g Combiflash HP Gold管柱，溶離劑自100% DCM變化為20% MeOH/DCM，在10% MeOH/DCM暫停變化)自殘餘物分離中間物。MS m/z= 878.43 [M+1]
Figure 02_image1031
磷酸氫 (R)-2-( 烯丙氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙酯 (((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲基 ) 酯. 以與針對實例96所描述類似的方式來製備產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.01 (s, 1H), 7.35 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 7.05 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.90 (ddt, J= 17.3, 10.8, 5.6 Hz, 1H), 5.56 (d, J= 4.1 Hz, 1H), 5.27 (dq, J= 17.3, 1.7 Hz, 1H), 5.11 (dq, J= 10.5, 1.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.47 (m, 2H), 4.21 (ddd, J= 29.1, 11.0, 5.6 Hz, 2H), 4.12 (dq, J= 5.4, 1.7 Hz, 2H), 3.95 (dq, J= 13.6, 5.4 Hz, 2H), 3.69 (p, J= 5.1 Hz, 1H), 3.58 - 3.40 (m, 4H), 1.54 (p, J= 6.8 Hz, 2H), 1.38 - 1.23 (m, 30H), 0.94 - 0.86 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -0.417 (s)。MS m/z= 738.43 [M+1]。 實例168. ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2-側氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1033
將實例6 (10 mg，0.0167 mmol)溶解於無水DMF (1 mL)中。將N,N'-羰基二咪唑(13.5 mg，0.084 mmol)添加至反應物中。添加DMAP (2 mg，0.0167 mmol)，且攪拌反應物16小時。
添加更多N,N'-羰基二咪唑(7.5 mg，0.045 mmol)，且攪拌反應物3小時。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.88 (s, 1H), 7.35 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.28 - 7.14 (m, 3H), 6.75 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.64 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.65 (m, 2H), 5.49 (dt, J= 6.7, 1.9 Hz, 1H), 4.76 (td, J= 8.9, 4.3 Hz, 1H), 4.48 - 4.33 (m, 2H), 4.18 - 3.94 (m, 2H), 2.02 - 1.61 (m, 5H), 1.58 - 1.27 (m, 8H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.63 (s)。MS m/z= 627.0 [M+1]；625.2 [M-1]。 實例169. ((4aR,6S,7S,7aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4a-氰基-7-羥基-2-氧橋四氫-4H-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧雜次膦-2-基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1035
( 雙 (4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在-40℃下，向4-硝基苯酚(0.52 g，3.74 mmol)及二氯磷酸4-硝基苯酯(1.06 g，4.14 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.61 mL，4.38 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌0.5 h。接著添加L-丙胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(0.85 g，4.05 mmol)及三乙胺(1.22 mL，8.77 mmol)。1 h後，用己烷(15 mL)稀釋反應混合物，且過濾所得混合物。濾液藉由矽膠管柱純化，用20-33%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.25 (d, J = 9.2 Hz, 4H), 7.2 -7.4 (m, 4H), 4.0 - 4.2 (m, 3H), 1.48 - 1.58 (m, 1H), 1.43 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.3 -1.4 (m, 4H), 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ -3.47 (s)。
Figure 02_image1037
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .向中間物4 (155 mg，0.468 mmol)、(雙(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯(255 mg，0.515 mmol)及氯化鎂(85 mg，0.893 mmol)於THF (2.0 mL)中之混合物中添加 N,N-二異丙基乙胺(200 μL，0.115 mmol)。在RT下攪拌所得混合物16 h。反應混合物用乙酸乙酯(5 mL)稀釋，用水洗滌，經MgSO 4乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠管柱純化，用30-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.9 -8.19 (m, 3H), 7.2 -7.4 (m, 2H), 6.66-6.73 (m, 2H), 5.62 (brs, 1H), 5.24 - 5.3 (m, 1H), 5.0 - 5.1 (m, 1H), 4.3 -4.55 (m, 2H). 3.7 - 4.2 (m, 3H), 2.0-2.1 (2s, 3H), 1.75 -1.78 (2s, 3H), 1.2 - 1.55 (m, 8H), 0.87 (t J = 7.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3) δ 1.92 (s), 1.66 (s)。MS m/z= 688.2 [M+H]。
Figure 02_image1039
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .在0℃下，向((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯(105 mg，0.153 mmol)於乙腈(1.2 mL)及水(0.2 mL)中之溶液中添加HCl (0.15 mL，37%)。在RT下攪拌反應混合物3 h。用固體NaHCO 3(210 mg)淬滅反應混合物，攪拌1 h且濃縮。殘餘物用乙酸乙酯處理，用水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且高真空乾燥，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3+ 5% CD 3OD) δ 8.04 -8.18 (m, 2H), 7.74 - 7.76 (m, 1H), 7.02 - 7.32 (m, 2H), 6.60 - 6.65 (m, 2H), 5.48 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.3 -4.6 (m, 3H), 3.8 - 4.1 (m, 3H), 1.2 -1.5 (m, 8H), 0.7 - 0.9 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CDCl 3+ 5% CD 3OD) δ 2.39 (s), 2.33 (s)。MS m/z= 648.1 [M+H]。
Figure 02_image1041
((4aR,6S,7S,7aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4a- 氰基 -7- 羥基 -2- 氧橋四氫 -4H- 呋喃并 [3,2-d][1,3,2] 二氧雜次膦 -2- 基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .將((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯(82 mg，0.127 mmol)及DMAP (164 mg，1.342 mmol)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在55℃下攪拌16 h。減壓濃縮反應混合物。粗殘餘物藉由矽膠管柱純化，用50-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.75 (s, 1H), 6.76 (d, J = 4.8 Hz, 1H) 6.66 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.52 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 4.8, 3.2 Hz, 1H), 4.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.48 - 4.59 (m, 2H), 4.05 - 4.11 (m, 1H), 4.0 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.4 - 1.47 (m, 1H), 1.28 - 1.37 (m, 7H), 0.83 (t, J = 7.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3OD) δ 6.9 (s)。MS m/z= 509.1 [M+H]。 實例170. ((4aR,6S,7S,7aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4a-氰基-7-羥基-2-氧橋四氫-4H-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧雜次膦-2-基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1043
(R)-1-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙 -2- 醇 .將1-O-十八基-2-O-苯甲基-sn-丙三醇(869 mg，2 mmol)溶解於THF (50 mL)中。將Degussa型10%鈀/活性碳(50 mg)添加至反應溶液中，接著在氫氣氛圍下攪拌2小時。經由矽藻土濾出催化劑。減壓濃縮濾液。將所得固體溶解於無水THF (20 mL)中，且在RT下攪拌。將咪唑(207 mg，3 mmol)及氯化三級丁基二甲基矽烷(275 mg，1.8 mmol)添加至反應物中，接著攪拌4小時。添加更多咪唑(207 mg，3 mmol)及TBS-Cl (275 mg，1.8 mmol)，且攪拌反應物16小時。添加更多咪唑(207 mg，3 mmol)及TBS-Cl (140 mg，0.9 mmol)，且攪拌反應物3小時。
反應物用EtOAc (40 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 3.80 (p, J= 5.4 Hz, 1H), 3.70 - 3.58 (m, 2H), 3.50 - 3.38 (m, 4H), 1.56 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 1.25 (m, 30H), 0.94 - 0.81 (m, 12H), 0.07 (s, 6H)。
Figure 02_image1045
(R)- 三級丁基 (2- 甲氧基 -3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 ) 二甲基矽烷 .將氫化鈉(60%於油中) (57 mg，1.43 mmol)懸浮於無水THF (5 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將(R)-1-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-3-(十八烷氧基)丙-2-醇(437 mg，0.95 mmol)溶解於無水THF (5 mL)中，且逐滴添加至懸浮液中。攪拌所得反應混合物30 min。逐滴添加碘甲烷(89 μL，1.43 mmol)。移除冰浴，且攪拌反應物2小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且緩慢添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)。收集有機層，用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 3.72 - 3.60 (m, 2H), 3.53 (m, 1H), 3.49 - 3.31 (m, 7H), 1.56 (m, 2H),1.25 (m, 30H), 0.94 - 0.80 (m, 12H), 0.06 (s, 6H)。
Figure 02_image1047
(S)-2- 甲氧基 -3-( 十八烷氧基 ) 丙 -1- 醇 .將(R)-三級丁基(2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙氧基)二甲基矽烷(381 mg，0.806 mmol)溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加三水合TBAF (381 mg，1.21 mmol)。攪拌反應物3小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉溶液(10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 3.76 - 3.65 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.49 - 3.38 (m, 6H), 1.57 (m, 2H), 1.25 (m, 30H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。
Figure 02_image1049
磷酸氫 2- 氯苯酯 ((R)-2- 甲氧基 -3-( 十八烷氧基 ) 丙基 ) 酯 .將二氯磷酸2-氯苯酯(145 μL，0.897 mmol)溶解於無水乙腈(4 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。一次性添加1,2,4三唑(103 mg，1.494 mmol)。一次性添加三乙胺(208 μL，1.494 mmol)。將(S)-2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙-1-醇(268 mg，0.747 mmol)溶解於吡啶(4 mL)中，且逐滴添加至反應混合物中。移除冰浴，且攪拌反應物4小時。添加更多1,2,4三唑(50 mg，0.75 mmol)及三乙胺(50 μL，0.37 mmol)，且攪拌反應物2小時。
將水(500 μL)及三乙胺(1 mL)添加至反應物中，且接著攪拌20 min。反應物接著用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.68 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.11 - 7.01 (m, 1H), 6.87 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 3.98 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 3.29 (m, 6H), 3.20 (m, 2H), 3.04 (qd, J= 7.3, 4.5 Hz, 1H), 1.42 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 1.24 (m, 30H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.91 (s)。
Figure 02_image1051
(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-((((2- 氯苯氧基 )((R)-2- 甲氧基 -3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-6- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -4- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯 .將磷酸氫2-氯苯酯((R)-2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙基)酯(290 mg，0.528 mmol)溶解於無水吡啶(5 mL)中。一次性添加1-(均三甲苯-2-磺醯基)-3-硝基-1,2,4-三唑(284 mg，0.96 mmol)。一次性添加中間物2 (206 mg，0.48 mmol)並攪拌30 min。一次性添加1-甲基-咪唑(77 μL，0.96 mmol)，且攪拌反應混合物2小時。添加更多1-(均三甲苯-2-磺醯基)-3-硝基-1,2,4-三唑(284 mg，0.96 mmol)並攪拌20 min。添加1-甲基-咪唑(100 μL)，且攪拌反應物48小時。
反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉溶液(3 × 10 mL)、5%檸檬酸水溶液(2 × 10 mL)且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.01 (m, 1H), 7.48 - 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.03 (m, 3H), 6.92 - 6.76 (m, 2H), 5.70 (m, 1H), 5.21 (m, 1H), 5.16 - 5.00 (m, 1H), 4.60 - 4.17 (m, 4H), 3.63 - 3.30 (m, 7H), 1.76 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 1.57 (m, 12H), 1.37 (m, 3H), 1.25 (m, 30H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -7.42 (s), -7.45 (s)。
Figure 02_image1053
磷酸氫 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯 ((R)-2- 甲氧基 -3-( 十八烷氧基 ) 丙基 ) 酯 .將(7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-((((2-氯苯氧基)((R)-2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-4-基)胺基甲酸三級丁酯(360 mg，0.274 mmol)溶解於乙腈(5 mL)中。添加1 N NaOH (水溶液) (500 μL)，且攪拌反應物18小時。添加1 N NaOH (水溶液) (500 μL)，且在30℃下攪拌反應物6小時。添加更多1 N NaOH (水溶液) (500 μL)，並且將反應物在30℃下攪拌3小時且接著在RT下攪拌16小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉溶液(3 × 10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，並且接著將所得產物溶解於7 mL含70% TFA之水中，且在RT下攪拌。用HPLC及LC-MS監測反應。5小時後，將反應物在冰浴中冷卻。緩慢添加1 N NaOH (水溶液)，得到pH值4。形成沈澱且藉由過濾收集。將固體溶解於1 M碳酸氫三乙銨溶液及乙腈中。粗殘餘物經由C18管柱(20-100% MeCN，緩衝液A為0.1 M碳酸氫三乙銨)純化。合併具有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到呈三乙銨鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.87 (s, 1H), 7.02 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 3.97 - 3.82 (m, 2H), 3.54 - 3.46 (m, 2H), 3.46 - 3.36 (m, 6H), 3.20 (q, J= 7.3 Hz, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.36 - 1.20 (m, 36H), 0.89 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ -0.38 (s)。MS m/z= 712.2 [M+1]；710.5 [M-1]。 實例171. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環辛酯
Figure 02_image1055
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸環辛酯 .將Cbz-L-Ala (446 mg，2 mmol)溶解於無水MeCN (15 mL)中。一次性添加EDCI (422 mg，2.2 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加環辛醇(291 μL，2.2 mmol)。接著一次性添加DMAP (269 mg，2.2 mmol)。攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且最後用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.31 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.97 (td, J= 8.3, 4.2 Hz, 1H), 4.32 (t, J= 7.4 Hz, 1H), 1.88 - 1.43 (m, 14H), 1.39 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。
Figure 02_image1057
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環辛酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸環辛酯(440 mg，1.34 mmol)溶解於無水THF (15 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌反應混合物5小時。過濾催化劑，且濾液不經純化即使用。
將二氯磷酸苯酯(219 μL，1.47 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述THF溶液逐滴添加至反應物中，且接著攪拌20 min。逐滴添加三乙胺(448 μL，3.2 mmol)，且接著攪拌30 min。添加對硝基苯酚(168 mg，1.21 mmol)及三乙胺(224 μL，1.61 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物14小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用0.2 M碳酸鈉溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 4.94 (m, 1H), 4.17 - 4.01 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.83 - 1.42 (m, 14H), 1.38 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -2.97 (s), -3.04 (s)。MS m/z= 476.7 [M+1]；475.1 [M-1]。
Figure 02_image1059
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環辛酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環辛酯(86 mg，0.18 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (158 μL，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物2小時。添加更多氯化鎂(50 mg)且攪拌2小時。在35℃下攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸溶液(10 mL)、0.2 M碳酸鈉水溶液(2 × 10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，並且接著將所得產物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 2H), 4.88 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 3H), 3.92 - 3.76 (m, 1H), 1.80 - 1.35 (m, 14H), 1.24 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.29 (s)。MS m/z= 629.0 [M+1]；627.0 [M-1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，SFC-30%乙醇等度)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1061
實例 172.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.37 - 7.22 (m, 2H), 7.20 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.57 - 5.44 (m, 1H), 4.62 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.41 (m, 2H), 4.36 (m, 1H), 3.83 (m, 1H), 1.81 - 1.39 (m, 14H), 1.24 (d, J= 7.1, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.30 (s)。 實例 173.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (m, 2H), 7.27 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.49 - 4.26 (m, 3H), 3.85 (dq, J= 9.7, 7.0 Hz, 1H), 1.77 - 1.36 (m, 14H), 1.24 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.29 (s)。 實例174. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸4,4-二氟環己酯
Figure 02_image1063
L- 丙胺酸 4,4- 二氟環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-L-丙胺酸(1.1 g，4.93 mmol)及4,4-二氟環己醇(1.01 g，7.39 mmol)製備中間物。MS m/z= 208 [M+H]。
Figure 02_image1065
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 4,4- 二氟環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸4,4-二氟環己酯(673 mg，3.25 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.32 - 8.19 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.12 (m, 3H), 4.95 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 4.23 - 4.07 (m, 1H), 3.94 - 3.77 (m, 1H), 2.15 - 1.69 (m, 8H), 1.41 (ddd, J= 7.1, 3.4, 0.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.08, -3.16。 19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -95.69 (d, J= 239.1 Hz), -101.23 (d, J= 236.5 Hz)。MS m/z= 485 [M+H]。
Figure 02_image1067
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 4,4- 二氟環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸4,4-二氟環己酯(158 mg，0.33 mmol)及中間物4 (72 mg，0.22 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.11 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 4.93-4.80 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.54 - 4.30 (m, 3H), 4.00 - 3.81 (m, 1H), 2.15 - 1.63 (m, 8H), 1.27 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.26, 3.24。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -96.36 (d, J= 233.1 Hz), -102.62 (d, J= 236.8 Hz)。MS m/z= 637 [M+H]。
混合物藉由SFC (AD-H 21×250 mm管柱，30%乙醇)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image1069
實例 175.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.87 (m, 1H, 由溶劑峰隱藏), 4.54 - 4.43 (m, 2H), 4.36 (dd, J = 10.9, 5.3 Hz, 1H), 3.97 - 3.84 (m, 1H), 2.10 - 1.68 (m, 8H), 1.28 (dd, J= 7.1, 1.3 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。 19F NMR (376 MHz, 甲醇-d4) δ -96.61 (d, J= 235.4 Hz), -102.50 (d, J= 235.6 Hz)。 實例 176.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.42 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.42 (dd, J= 10.9, 6.5 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.91 (dq, J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 2.15 - 1.69 (m, 8H), 1.27 (dd, J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。 19F NMR (376 MHz, 甲醇-d4) δ -96.36 (d, J= 236.3 Hz), -102.62 (d, J= 237.6 Hz)。 實例177. 碳酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯異丁酯
Figure 02_image1071
(2-(( 異丁氧基羰基 ) 氧基 ) 乙基 ) 胺基甲酸苯甲酯 .將N-Cbz-胺基乙醇(390 mg，2 mmol)溶解於無水THF (10 mL)中，且在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加吡啶(425 μL，5 mmol)。逐滴添加氯甲酸異丁酯(285 μL，2.2 mmol)。攪拌反應物15 min。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用水(2 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.11 (m, 3H), 4.22 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.92 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 3.50 (q, J= 5.5 Hz, 2H), 1.97 (dp, J= 13.4, 6.7 Hz, 1H), 0.95 (d, J= 6.8 Hz, 6H)。
Figure 02_image1073
碳酸異丁酯 (2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙基 ) 酯 .將(2-((異丁氧基羰基)氧基)乙基)胺基甲酸苯甲酯(570 mg，1.93 mmol)溶解於無水THF (12 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌反應混合物3小時。過濾催化劑，且濾液不經純化即使用。
將二氯磷酸苯酯(344 μL，2.32 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述THF溶液逐滴添加至反應物中，且接著攪拌50 min。逐滴添加三乙胺(350 μL，2.51 mmol)，且接著攪拌30 min。添加對硝基苯酚(242 mg，1.74 mmol)及三乙胺(350 μL，2.51 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物14小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用水(2 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 4.22 - 4.15 (m, 2H), 3.90 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 3.51 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 1.95 (m, 1H), 0.94 (d, J= 6.7 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.51 (s)。MS m/z= 438.9 [M+1]；437.0 [M-1]。
Figure 02_image1075
碳酸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯異丁酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及碳酸異丁酯(2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙基)酯(73 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (158 μL，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物3小時。添加更多氯化鎂(100 mg)，且在50℃下攪拌16小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (6 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，並且接著將所得產物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.09 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.54 - 4.26 (m, 3H), 4.04 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.18 (m, 2H), 1.88 (m, 1H), 0.96 - 0.80 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 5.22 (s), 5.06 (s)。MS m/z= 591.0 [M+1]；588.9 [M-1]。 實例178. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸順式-4-(三氟甲基)環己酯
Figure 02_image1077
L- 丙胺酸順式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .向cbz-L-丙胺酸(1.80 g，8.06 mmol)、反式-4-三氟甲基環己醇(0.9 g，5.35 mmol)及Ph 3P (3.17 g，12.10 mmol)於THF (50 mL)中之混合物中添加DIAD (2.38 mL，12.10 mmol)。在室溫下攪拌混合物15 h且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至30% EtOAc/己烷)純化，得到Cbz-L-丙胺酸環己酯，將其溶解於THF (10 mL)中，且添加20%氫氧化鈀/碳(250 mg)。在H 2下攪拌所得混合物2 h且過濾。濾液經真空濃縮，高真空乾燥，且用於下一反應(747 mg，39%)。MS m/z= 240 [M+H]。
Figure 02_image1079
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸順式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸順式-4-(三氟甲基)環己酯(747 mg，3.13 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 5.05 (m, 1H), 4.27 - 4.08 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 2.05 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.56 (m, 4H), 1.43 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.10。 19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -74.36 (dd, J= 8.5, 4.8 Hz)。MS m/z= 517 [M+H]。
Figure 02_image1081
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸順式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸順式-4-(三氟甲基)環己酯(117 mg，0.23 mmol)及中間物4 (50 mg，0.15 mmol)獲得產物。
產物藉由SFC使用30%乙醇(AD-H 4.6×100m管柱)分離，得到第一溶離非對映異構體及第二溶離非對映異構體。
Figure 02_image1083
實例 179.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd, J= 8.8, 7.1 Hz, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.49 (dd, J= 12.5, 5.7 Hz, 2H), 4.36 (dd, J= 11.0, 5.3 Hz, 1H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.92 (m, 2H), 1.71 (m, 2H), 1.58 (m, 4H), 1.31 (d, J= 7.2, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.31。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.89 (d, J= 8.6 Hz)。MS m/z= 669 [M+1]。 實例 180.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.28 - 7.09 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.89 (m, 1H, 由溶劑峰隱藏), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.42 (dd, J= 10.9, 6.4 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.94 (dq, J= 9.8, 7.1 Hz, 1H), 2.26 - 2.03 (m, 1H), 1.96 - 1.79 (m, 2H), 1.68 (d, J= 10.0 Hz, 2H), 1.62 - 1.41 (m, 4H), 1.29 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.30。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.87 (d, J= 8.6 Hz)。MS m/z= 669 [M+1]。 實例181. 十二酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
Figure 02_image1085
十二酸 2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 乙酯 .將月桂酸(481 mg，2.4 mmol)與無水乙腈(10 mL)混合。一次性添加EDCI (460 mg，2.4 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加N-Cbz-胺基乙醇(390 mg，2 mmol)。接著添加DMAP (293 mg，2.4 mmol)，且攪拌反應物16小時。
將反應物用EtOAc (40 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 ×10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.36 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.99 (s, 1H), 4.15 (t, J= 5.3 Hz, 2H), 3.47 (q, J= 5.6 Hz, 2H), 2.32 (m, 2H), 1.72 - 1.52 (m, 2H), 1.40 - 1.16 (m, 16H), 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 3H)。MS m/z= 377.8 [M+1]。
Figure 02_image1087
十二酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將十二酸2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙酯(439 mg，1.16 mmol)溶解於無水THF (12 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌反應混合物2小時。過濾催化劑，且濾液不經純化即使用。
將二氯磷酸苯酯(190 μL，1.28 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述THF溶液逐滴添加至反應物中，且接著攪拌30 min。逐滴添加三乙胺(194 μL，1.39 mmol)，且接著攪拌30 min。添加對硝基苯酚(145 mg，1.04 mmol)及三乙胺(194 μL，1.39 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物16小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用水(4 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.28 - 8.19 (m, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 4.15 (dt, J= 10.1, 4.8 Hz, 2H), 3.52 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.38 (dt, J= 10.6, 4.9 Hz, 2H), 2.29 (m, 2H), 1.59 (m, 2H), 1.27 (m, 16H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.51 (s)。MS m/z= 520.9 [M+1]；519.2 [M-1]。
Figure 02_image1089
十二酸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及十二酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯(86 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (158 μL，0.906 mmol)，且在45℃下攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (3 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物3小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.38 - 7.09 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.51 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.48 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 2H), 3.99 (m, 2H), 3.22 - 3.07 (m, 2H), 2.24 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.26 (m, 16H), 0.89 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 5.22 (s), 5.06 (s)。MS m/z= 673.1 [M+1]；671.0 [M-1]。 實例182.
Figure 02_image1091
將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加L-丙胺酸新戊酯鹽酸鹽(391 mg，2 mmol)。逐滴添加三乙胺(698 μL，5 mmol)，且攪拌反應物16小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋，且用2%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.21 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.38 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 4.21 - 4.00 (m, 2H), 3.88 (dd, J= 10.5, 1.7 Hz, 2H), 3.77 (dd, J= 10.5, 3.3 Hz, 2H), 3.59 (t, J= 10.0 Hz, 2H), 1.44 (m, 6H), 0.93 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 7.98 (s)。MS m/z= 500.0 [M-1]。
Figure 02_image1093
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及上述中間物(83 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且在RT下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (66 μL，0.378 mmol)，且在RT下攪拌反應物20小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.32 (dd, J= 11.1, 7.1 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.03 - 3.88 (m, 2H), 3.88 - 3.63 (m, 4H), 1.35 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.29 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.90 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 13.57 (s)。MS m/z= 654.0 [M+1]；652.1 [M-1]。 實例183. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸4,4-二甲基環己酯
Figure 02_image1095
L- 丙胺酸 4,4- 二甲基環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-l-丙胺酸(1000 mg，4.48 mmol)及4,4-二甲基環己醇(690 mg，5.38 mmol)製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.76 (dt, J= 8.9, 4.6 Hz, 1H), 3.53 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.58 (m, 2H), 1.42 (m, 2H), 1.38 - 1.17 (m, 5H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H)。
Figure 02_image1097
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 4,4- 二甲基環己酯 .藉由用於中間物35之相同方法，由L-丙胺酸4,4-二甲基環己酯(186 mg，0.93 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 4.74 (m, 1H), 4.21 - 4.01 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 1.80 - 1.62 (m, 2H), 1.62 - 1.49 (m, 2H), 1.46 - 1.34 (m, 5H), 1.24 (m, 2H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.96, -3.02。MS m/z= 477 [M+1]。
Figure 02_image1099
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 4,4- 二甲基環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸4,4-二甲基環己酯(108 mg，0.23 mmol)及中間物4 (50 mg，0.15 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.38 - 7.09 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.51 ( m, 1H), 4.62 (m, 2H), 4.53 - 4.29 (m, 3H), 3.96 - 3.78 (m, 1H), 1.77 - 1.57 (m, 2H), 1.58 - 1.43 (m, 2H), 1.44 - 1.29 (m, 2H), 1.29 - 1.08 (m, 5H), 0.88 ( m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.29, 3.27。MS m/z= 629 [M+H]。 實例184. ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸1-乙醯基哌啶-4-基酯
Figure 02_image1101
( 三級丁氧基羰基 ) 丙胺酸 1- 乙醯基哌啶 -4- 基 酯 .以與針對實例117所描述類似的方式來製備此中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.26 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 4.90 (tt, J= 7.6, 3.8 Hz, 1H), 4.03 - 3.97 (m, 1H), 3.67 - 3.50 (m, 3H), 3.41 - 3.31 (m, 3H), 2.02 - 1.96 (m, 4H), 1.77 (d, J= 39.0 Hz, 2H), 1.61 - 1.40 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.24 (d, J= 7.3 Hz, 4H)。
Figure 02_image1103
丙胺酸 1- 乙醯基哌啶 -4- 基 酯鹽酸鹽 .以與針對中間物13所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (s, 3H), 5.00 (dt, J= 7.2, 3.6 Hz, 1H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 3.55 (m, 2H), 3.38 (dtd, J= 13.7, 8.7, 7.3, 3.6 Hz, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.90 - 1.70 (m, 2H), 1.65 - 1.45 (m, 2H), 1.41 (d, J= 7.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image1105
1- 乙醯基哌啶 -4- 基 -((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 - 8.21 (m, 2H), 7.54 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.11 (m, 3H), 6.69 (ddd, J= 13.6, 10.0, 5.6 Hz, 1H), 4.83 (dd, J= 8.0, 4.0 Hz, 1H), 4.07 - 3.87 (m, 1H), 3.69 - 3.37 (m, 2H), 3.29 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.70 (d, J= 36.7 Hz, 2H), 1.40 (d, J= 31.8 Hz, 2H), 1.27 - 1.19 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ -1.28, -1.42。MS m/z= 492.08 [M+1]。
Figure 02_image1107
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 1- 乙醯基哌啶 -4- 基酯 。在室溫下向中間物4 (50.0 mg，0.151 mmol)、1-乙醯基哌啶-4-基-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸酯(164 mg，0.332 mmol)及氯化鎂(144 mg，1.51 mmol)之混合物中添加乙腈(8 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.26 mL，1.51 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物4 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 14%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (d, J= 16.8 Hz, 3H), 7.32 (dt, J= 12.1, 7.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.04 (m, 3H), 6.89 - 6.72 (m, 2H), 6.24 - 6.06 (m, 1H), 5.61 (dd, J= 5.4, 3.6 Hz, 1H), 5.27 (dd, J= 6.6, 3.8 Hz, 1H), 5.06 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.37 - 4.17 (m, 1H), 3.82 (q, J= 9.4 Hz, 1H), 3.67 - 3.38 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 1.95 (d, J= 2.6 Hz, 3H), 1.63 (d, J= 3.1 Hz, 5H), 1.33 (d, J= 3.5 Hz, 4H), 1.22 (dt, J= 18.3, 6.8 Hz, 5H)。MS m/z= 684.18 [M+1]。 實例185. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸1-乙醯基哌啶-4-基酯
Figure 02_image1109
在0℃下向實例184 (0.09 g，0.132 mmol)於乙腈(2 mL)中之混合物中添加濃鹽酸(0.1 mL，2.743 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉溶液(1 mL)稀釋。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，5%-60%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 - 7.66 (m, 3H), 7.45 - 7.02 (m, 5H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 - 6.66 (m, 1H), 6.22 - 5.99 (m, 2H), 5.56 - 5.44 (m, 1H), 5.38 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.94 - 4.72 (m, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 1H), 4.40 - 4.08 (m, 3H), 3.94 - 3.73 (m, 1H), 3.70 - 3.39 (m, 2H), 1.95 (q, J = 2.9, 2.4 Hz, 3H), 1.70 (d, J = 32.9 Hz, 2H), 1.55 - 1.31 (m, 2H), 1.27 - 1.06 (m, 3H)。MS m/z= 644.15 [M+1]。 實例186. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-苯基環己酯
Figure 02_image1111
L- 丙胺酸 (1R,4S)-4- 苯基環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-l-丙胺酸(1000 mg，4.48 mmol)及反式-4-苯基環己醇(950 mg，5.38 mmol)製備中間物。MS m/z= 248 [M+H]。
Figure 02_image1113
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -4- 苯基環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸(1R,4S)-4-苯基環己酯(488 mg，1.97 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 (m, 2H), 7.45 - 7.16 (m, 12H), 4.87 - 4.71 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.95 - 3.82 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 2.05 (m, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.68 - 1.46 (m, 4H), 1.42 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.03, -3.06。MS m/z525 = [M+H]。
Figure 02_image1115
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -4- 苯基環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-苯基環己酯(131 mg，0.25 mmol)及中間物4 (55 mg，0.17 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.06 (m, 10H), 6.85 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.52 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.76 - 4.51 (m, 2H), 4.51 - 4.33 (m, 3H), 3.97 - 3.80 (m, 1H), 2.57 - 2.38 (m, 1H), 2.05 - 1.92 (m, 2H), 1.91 - 1.74 (m, 2H), 1.67 - 1.37 (m, 4H), 1.27 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32, 3.25。MS m/z= 677 [M+1]。 實例187. (3-(十六烷氧基)丙基)胺基磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯苯酯
Figure 02_image1117
3-( 十六烷氧基 ) 丙 -1- 胺 .將3-(十六烷氧基)丙-1-醇(300 mg，1 mmol)溶解於無水DMF (5 mL)中，且在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加疊氮磷酸二苯酯(259 μL，1.2 mmol)。添加DBU (179 μL，1.2 mmol)，且攪拌反應物16小時。
使反應物升溫至90℃且攪拌2小時。將反應物冷卻至RT，用EtOAc (25 mL)稀釋，且用鹽水(2 × 10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮至油狀物，接著將其溶解於THF (5 mL)中。添加三苯膦(220 mg，0.833 mmol)且攪拌20 min。將水(1 mL)及THF (1 mL)添加至反應物中，攪拌反應物24小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/DCM含0.1% TEA)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 3.48 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.39 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 2.79 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 1.71 (p, J= 6.5 Hz, 2H), 1.55 (p, J= 6.8 Hz, 2H), 1.25 (m, 26H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。
Figure 02_image1119
(3-( 十六烷氧基 ) 丙基 ) 胺基磷酸 4- 硝基苯 酯苯酯 .將二氯磷酸苯酯(104 μL，0.698 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將3-(十六烷氧基)丙-1-胺(190 mg，0.634 mmol)溶解於無水DCM (4 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物10 min。逐滴添加三乙胺(106 μL，0.761 mmol)，且接著攪拌1小時。添加對硝基苯酚(113 mg，0.571 mmol)及三乙胺(106 μL，0.761 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物2小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.17 (m, 2H), 7.41 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.35 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 3.73 (m, 1H), 3.48 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.35 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.24 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.59 - 1.46 (m, 2H), 1.25 (m, 26H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -1.12 (s)。MS m/z= 577.1 [M+1]；575.5 [M-1]。
Figure 02_image1121
(3-( 十六烷氧基 ) 丙基 ) 胺基磷酸 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯苯酯 .將中間物4 (75 mg，0.226 mmol)及(3-(十六烷氧基)丙基)胺基磷酸4-硝基苯酯苯酯(131 mg，0.226 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(108 mg，1.13 mmol)，且攪拌反應物10 min。添加DIPEA (98 μL，0.565 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。一次性添加更多氯化鎂(108 mg，1.13 mmol)，且在50℃下攪拌反應物7小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.18 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.49 (m, 1H),4.45 - 4.26 (m, 2H), 3.56 - 3.42 (m, 1H), 3.40 - 3.23 (m, 4H), 3.07 - 2.90 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.48 (m, 2H), 1.40 - 1.18 (m, 26H), 0.89 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 5.48 (s), 5.31 (s)。MS m/z= 729.1 [M+1]；726.8 [M-1]。 實例188. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸辛酯
Figure 02_image1123
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸辛酯 .將Boc-L-Ala (567 mg，3 mmol)溶解於無水乙腈(15 mL)中。添加1-辛醇(569 μL，3.6 mmol)。一次性添加EDCI (690 mg，3.6 mmol)，且攪拌反應物15 min。接著添加DMAP (403 mg，3.3 mmol)，且攪拌反應物2小時。添加更多1-辛醇(120 μL)及EDCI (140 mg)，且攪拌反應物2小時。將反應物用EtOAc (40 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 ×10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.04 (bs, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.13 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.39 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.27 (m, 10H), 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。
Figure 02_image1125
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸辛酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸辛酯(674 mg，2.24 mmol)溶解於無水的含4 M HCl之二㗁烷(15 mL)中。攪拌反應物2小時。減壓濃縮反應物。將所得固體溶解於DCM (20 mL)中且減壓濃縮。
將二氯磷酸苯酯(366 μL，2.46 mmol)溶解於無水DCM (15 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述脫除Boc物質溶解於無水DCM (10 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物30 min。逐滴添加三乙胺(750 μL，5.4 mmol)，且接著攪拌60 min。添加對硝基苯酚(280 mg，2.02 mmol)及三乙胺(375 μL，2.69 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物16小時。
反應物用EtOAc (40 mL)稀釋，且用水(3 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (m, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.12 (m, 3H), 4.22 - 4.02 (m, 3H), 3.94 - 3.79 (m, 1H), 1.60 (m, 2H), 1.41 (m, 3H), 1.35 - 1.16 (m, 10H), 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.07 (s), -3.11 (s)。MS m/z= 479.0 [M+1]；477.2 [M-1]。
Figure 02_image1127
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸辛酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸辛酯(79 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (66 μL，0.378 mmol)，且在50℃下攪拌反應物3小時。添加更多氯化鎂(80 mg)及DIPEA (66 μL，0.378 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.38 - 7.07 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 3H), 4.13 - 3.82 (m, 3H), 1.54 (m, 2H), 1.35 - 1.15 (m, 13H), 0.87 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.25 (s)。MS m/z= 631.1 [M+1]；629.1 [M-1]。 實例189. ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯
Figure 02_image1129
( 三級丁氧基羰基 ) 丙胺酸 (R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙酯 .以與針對實例117所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 - 7.17 (m, 5H), 4.65 - 4.49 (m, 2H), 4.23 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 4.02 (ddd, J = 11.2, 8.8, 4.9 Hz, 2H), 3.77 - 3.61 (m, 1H), 3.45 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.45 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.35 (s, 7H), 1.21 (s, 27H), 0.92 - 0.70 (m, 2H)。
Figure 02_image1131
氯化 1-((R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (s, 3H), 7.44 - 7.15 (m, 5H), 4.59 (s, 2H), 4.37 (dd, J = 11.6, 3.8 Hz, 1H), 4.21 - 3.97 (m, 2H), 3.76 (dd, J = 5.6, 3.8 Hz, 1H), 3.48 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.37 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.42 (dd, J = 25.5, 7.0 Hz, 5H), 1.21 (s, 28H), 0.83 (t, J = 6.7 Hz, 3H)。
Figure 02_image1133
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 (R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.35 - 8.14 (m, 2H), 7.50 - 7.31 (m, 4H), 7.31 - 7.12 (m, 8H), 6.71 (dt, J = 13.6, 10.2 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 4.18 (dt, J = 11.6, 4.3 Hz, 1H), 4.10 - 3.95 (m, 2H), 3.66 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 1.42 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.20 (d, J = 3.6 Hz, 36H), 0.92 - 0.75 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ -1.28, -1.56。
Figure 02_image1135
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 (R)-2-( 苯甲氧基 )-3-( 十八烷氧基 ) 丙酯 .在室溫下向中間物4 (50.0 mg，0.151 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯(177 mg，0.226 mmol)及氯化鎂(100 mg，1.056 mmol)之混合物中添加乙腈(8 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.184 mL，1.056 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.47 - 7.06 (m, 8H), 6.85 - 6.67 (m, 2H), 6.26 (s, 2H), 5.66 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.27 (dt, J = 6.4, 3.1 Hz, 1H), 5.08 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.60 (dd, J = 6.7, 2.0 Hz, 2H), 4.49 - 4.16 (m, 3H), 4.15 - 3.87 (m, 1H), 3.72 (dd, J = 10.3, 5.1 Hz, 1H), 3.49 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.45 - 3.32 (m, 2H), 1.71 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 1.52 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.38 (d, J = 3.7 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 2.1 Hz, 33H), 1.02 - 0.79 (m, 3H)。MS m/z= 976.31 [M+1]。 實例190. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(R)-2-(苯甲氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯
Figure 02_image1137
在0℃下向實例189 (0.1 g，0.226 mmol)於乙腈(2 mL)中之混合物中添加濃鹽酸(0.1 mL，2.743 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用水稀釋。溶液用2 N氫氧化鈉中和，且用乙酸乙酯萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 8%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (m, 3H), 7.44 - 7.04 (m, 10H), 6.86 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 4.5, 2.9 Hz, 1H), 6.27 - 6.01 (m, 2H), 5.60 - 5.20 (m, 2H), 4.54 (dd, J = 7.6, 2.6 Hz, 2H), 4.45 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.07 (m, 4H), 4.07 - 3.77 (m, 1H), 3.74 - 3.61 (m, 1H), 3.52 - 3.19 (m, 4H), 1.53 - 1.36 (m, 2H), 1.20 (d, J = 3.3 Hz, 33H), 0.94 - 0.75 (m, 3H)。MS m/z= 936.08 [M+1]。 實例191. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸十二酯
Figure 02_image1139
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸十二酯 .將Boc-L-Ala (567 mg，3 mmol)溶解於無水乙腈(15 mL)中。添加1-十二醇(818 μL，3.6 mmol)。一次性添加EDCI (690 mg，3.6 mmol)，且攪拌反應物15 min。接著添加DMAP (403 mg，3.3 mmol)，且攪拌反應物2小時。將反應物用EtOAc (40 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 ×10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(24 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.04 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.26 (m, 18H), 0.88 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。
Figure 02_image1141
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸十二酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸十二酯(600 mg，1.67 mmol)溶解於無水的含4 M HCl之二㗁烷(10 mL)中。攪拌反應物1小時。減壓濃縮反應物。
將二氯磷酸苯酯(275 μL，1.85 mmol)溶解於無水DCM (15 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述脫除Boc物質溶解於無水DCM (5 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物30 min。逐滴添加三乙胺(560 μL，4 mmol)，且接著攪拌60 min。添加對硝基苯酚(210 mg，1.51 mmol)及三乙胺(281 μL，2.01 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物2小時。
反應物用DCM (40 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (m, 2H), 7.45 - 7.29 (m, 4H), 7.28 - 7.15 (m, 3H), 4.20 - 4.02 (m, 3H), 3.88 (m, 1H), 1.60 (m, 2H), 1.41 (m, 3H), 1.25 (m, 18H), 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.06 (s), -3.11 (s)。
Figure 02_image1143
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸十二酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸十二酯(89 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物20 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (250 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-3-5%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，並且接著將所得產物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.80 (m, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 5H), 6.86 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.52 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.58 - 4.30 (m, 3H), 4.15 - 3.82 (m, 3H), 1.57 (m, 2H), 1.28 (m, 21H), 0.90 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.26 (s)。MS m/z= 687.1 [M+1]；685.3 [M-1]。 實例192. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸己酯
Figure 02_image1145
L- 丙胺酸己酯鹽酸鹽 .將L-丙胺酸(4.45 g，50 mmol)與1-己醇(30 mL)混合。逐滴添加TMS-Cl (19.1 mL，150 mmol)，且在RT下攪拌反應物16小時。
添加更多1-己醇(10 mL)及TMS-Cl (5 mL)。將反應混合物加熱至80℃且攪拌20小時。
減壓濃縮反應物，高真空乾燥，得到呈鹽酸鹽之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.77 (s, 3H), 4.20 (m, 3H), 1.71 (m, 5H), 1.47 - 1.19 (m, 6H), 1.01 - 0.78 (m, 3H)。
Figure 02_image1147
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯 .將二氯磷酸苯酯(3.7 mL，25 mmol)溶解於無水DCM (50 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。一次性添加L-丙胺酸己酯鹽酸鹽(5.2 g，25 mmol)。攪拌反應物30 min。逐滴添加三乙胺(8.4 mL，60 mmol)，且接著攪拌60 min。添加對硝基苯酚(3.1 g，22.5 mmol)及三乙胺(4.2 mL，30 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物16小時。反應物用DCM (100 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.25 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 7.51 - 7.32 (m, 4H), 7.32 - 7.15 (m, 3H), 4.14 (m, 3H), 3.93 (m, 1H), 1.62 (m, 2H), 1.44 (m, 3H), 1.39 - 1.20 (m, 6H), 0.99 - 0.82 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.03 (s), -3.08 (s)。
Figure 02_image1149
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸己酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸己酯(75 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物5 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物36小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (250 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-4-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.80 (m, 1H), 7.42 - 7.09 (m, 5H), 6.86 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.57 - 5.44 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.58 - 4.28 (m, 3H), 4.17 - 3.81 (m, 3H), 1.64 - 1.48 (m, 2H), 1.38 - 1.19 (m, 9H), 0.94 - 0.82 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.27 (s)。MS m/z= 603.0 [M+1]；600.8 [M-1]。 實例193. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸十八酯
Figure 02_image1151
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸十八酯 .將Boc-L-Ala (5.67 g，30 mmol)溶解於無水乙腈(50 mL)中。一次性添加EDCI (6.9 g，36 mmol)，且攪拌反應物20 min。添加1-十八醇(9.74 g，36 mmol)。接著添加DMAP (4 g，33 mmol)，且攪拌反應物2小時。添加更多無水乙腈(30 mL)，且攪拌反應物20小時。添加無水DMF (25 mL)，且攪拌反應物2小時。將反應物用EtOAc (100 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 ×20 mL)、接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.04 (m, 1H), 4.39 - 4.21 (m, 1H), 4.12 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.25 (s, 30H), 0.87 (t, J= 6.8 Hz, 3H)。
Figure 02_image1153
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸十八酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸十八酯(663 mg，1.5 mmol)溶解於無水的含4 M HCl之二㗁烷(15 mL)中。攪拌反應物2小時。減壓濃縮反應物，得到固體，將其與無水DCM (25 mL)混合，並且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將二氯磷酸苯酯(223 μL，1.5 mmol)一次性添加至反應物中。攪拌反應物15 min。逐滴添加三乙胺(500 μL，3.6 mmol)，且接著攪拌2小時。添加對硝基苯酚(188 mg，1.35 mmol)及三乙胺(251 μL，1.8 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物3小時。反應物用DCM (50 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.23 (m, 2H), 7.49 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.12 (m, 3H), 4.23 - 3.98 (m, 3H), 3.88 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 2H), 1.41 (m, 3H), 1.25 (s, 30H), 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.05 (s), -3.09 (s)。
Figure 02_image1155
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸十八酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸十八酯(103 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (3 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物10 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物6小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(3 × 20 mL)吸毒，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (250 μL)。攪拌反應物1.5小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-4%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.85 - 7.72 (m, 1H), 7.40 - 7.08 (m, 5H), 6.88 - 6.79 (m, 1H), 6.79 - 6.66 (m, 1H), 5.55 - 5.43 (m, 2H), 4.61 (m, 1H), 4.55 - 4.26 (m, 3H), 4.14 - 3.79 (m, 3H), 1.55 (m, 2H), 1.27 (m, 33H), 0.89 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.28 (s)。MS m/z= 771.0 [M+1]；768.5 [M-1]。 實例194. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-D-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
Figure 02_image1157
D- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .藉由用於中間物26之相同方法，由Cbz-D-丙胺酸(990 mg，4.03 mmol)及反式-4-(三氟甲基)環己醇(1.0 g，5.95 mmol)製備中間物。MS m/z240 = [M+H]。
Figure 02_image1159
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-D- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由D-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯(0.95 g，3.97 mmol)製備呈異構混合物之中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.21 (m, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 4H), 7.22 (m, 3H), 4.67 (m, 1H), 4.06 (m, 2H), 2.01 (m, 5H), 1.52 - 1.20 (m, 7H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.01, -3.06。 19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -73.89 (d, J= 7.9 Hz)。MS m/z= 517 [M+H]。
Figure 02_image1161
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-D- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對實例3所描述類似的方式，由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-D-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯(117 mg，0.23 mmol)及中間物4 (50 mg，0.15 mmol)獲得產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 0.58H), 7.78 (s, 0.42H), 7.31 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.88 - 6.83 (m, 1H), 6.76 (d, J= 4.5 Hz, 0.58H), 6.72 (d, J= 4.5 Hz, 0.42H), 5.50 (m, 1H), 4.70 - 4.54 (m, 2H), 4.52 - 4.42 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 1.99 (m, 5H), 1.50 - 1.27 (m, 4H), 1.24 (d, J= 7.1 Hz, 1.26 H), 1.20 (d, J= 7.0 Hz, 1.74H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.48, 3.00。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.39 (m)。MS m/z= 669 [M+1]。
產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%異丙醇30%)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image1163
實例 195.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.62 (m, 2H), 4.49 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 (dd, J= 10.9, 5.6 Hz, 1H), 4.38 (dd, J= 10.8, 5.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 1H), 2.18 - 1.82 (m, 6H), 1.46 - 1.24 (m, 3H), 1.20 (dd, J= 7.2, 1.2 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.48。 19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.42 (d, J= 8.5 Hz)。 實例 196.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.30 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.22 - 7.11 (m, 3H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.60 (dt, J= 10.8, 5.7 Hz, 2H), 4.49 - 4.41 (m, 2H), 4.31 (dd, J= 10.8, 5.1 Hz, 1H), 3.90 - 3.79 (m, 1H), 2.00 (td, J= 34.4, 32.8, 9.9 Hz, 5H), 1.50 - 1.16 (m, 7H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.97。 19F NMR (376 MHz, 甲醇-d4) δ -75.42 (d, J= 8.4 Hz)。 實例197. ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸3-(十六烷氧基)丙酯
Figure 02_image1165
( 三級丁氧基羰基 )- L- 丙胺酸 3-( 十六烷氧基 ) 丙酯 .在0℃下向3-(十六烷氧基)丙-1-醇(1.85 g，6.156 mmol)、(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(1.864 g，9.85 mmol)及三苯膦(3.714 g，14.16 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之混合物中添加偶氮二甲酸二異丙酯(2.67 mL，2.74 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2 h且減壓濃縮。粗殘餘物藉由SiO 2管柱層析(120 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷作為溶離劑)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.04 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.39 - 4.10 (m, 3H), 3.46 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.90 (p, J = 6.3 Hz, 2H), 1.60 - 1.49 (m, 2H), 1.37 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.25 (s, 35H), 0.92 - 0.83 (m, 3H)。
Figure 02_image1167
氯化 (S)-1-(3-( 十六烷氧基 ) 丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.45 (s, 3H), 4.32 - 3.85 (m, 3H), 3.40 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 1.81 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 1.53 - 1.32 (m, 5H), 1.22 (s, 26H), 0.83 (t, J = 6.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image1169
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 3-( 十六烷氧基 ) 丙酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.26 (dd, J = 9.2, 2.0 Hz, 2H), 7.52 - 7.34 (m, 4H), 7.34 - 7.20 (m, 3H), 4.76 - 4.57 (m, 1H), 4.19 - 4.00 (m, 3H), 3.38 (dt, J = 28.0, 6.4 Hz, 4H), 1.79 (td, J = 6.3, 1.2 Hz, 2H), 1.50 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.38 - 1.23 (m, 27H), 0.95 - 0.81 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ -2.16, -2.27。MS m/z= 649.05 [M+1]。
Figure 02_image1171
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 3-( 十六烷氧基 ) 丙酯 .在室溫下向中間物4 (50.0 mg，0.151 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-(十六烷氧基)丙酯(187 mg，0.288 mmol)及氯化鎂(71.84 mg，0.755 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(2 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.131 mL，0.755 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，30%乙酸乙酯/己烷-100%乙酸乙酯作為溶離劑)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.42 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.11 (m, 3H), 6.77 (ddd, J = 14.5, 4.5, 2.8 Hz, 2H), 6.28 (s, 2H), 5.67 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 5.29 (dd, J = 6.6, 3.4 Hz, 1H), 5.09 (dd, J = 6.6, 3.9 Hz, 1H), 4.48 - 4.20 (m, 3H), 4.18 - 4.02 (m, 2H), 3.93 (td, J = 9.6, 7.0 Hz, 1H), 3.37 (dt, J = 21.0, 6.3 Hz, 4H), 1.80 (dt, J = 10.5, 6.3 Hz, 2H), 1.71 (d, J = 2.9 Hz, 3H), 1.50 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.38 (d, J = 4.2 Hz, 3H), 1.28 (s, 26H), 0.90 (t, J = 6.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.4, -2.38。MS m/z= 842.07 [M+1]。 實例198. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸3-(十六烷氧基)丙酯
Figure 02_image1173
在0℃下向實例197 (0.09 g，0.107 mmol)於乙腈(2 mL)中之混合物中添加濃鹽酸(0.1 mL，2.743 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用水稀釋。溶液用2 N氫氧化鈉中和，且用二氯甲烷萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (m, 3H), 7.31 (dt, J = 13.4, 7.9 Hz, 2H), 7.23 - 7.08 (m, 3H), 6.89 (dd, J = 4.5, 1.9 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 4.5, 2.2 Hz, 1H), 6.11 (ddd, J = 13.3, 9.9, 3.5 Hz, 1H), 5.37 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.45 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.27 (td, J = 11.4, 5.6 Hz, 2H), 4.15 (ddd, J = 19.3, 10.9, 4.9 Hz, 1H), 4.09 - 3.91 (m, 2H), 3.86 - 3.72 (m, 1H), 3.39 - 3.18 (m, 4H), 1.70 (dq, J = 12.7, 6.3 Hz, 2H), 1.41 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.28 - 1.10 (m, 26H), 0.90 - 0.69 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ 3.30, -3.24。MS m/z= 801.78 [M+1]。 實例199. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸十六酯
Figure 02_image1175
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸十六酯 .將Boc-L-Ala (1.89 g，10 mmol)溶解於無水THF (50 mL)中。添加1-十六醇(3.6 g，15 mmol)及三苯膦(5.8 g，22 mmol)。逐滴添加DIAD (3.9 mL，20 mmol)。攪拌反應物20小時。
反應物用EtOAc (50 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.11 - 4.83 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 4.19 - 4.03 (m, 2H), 1.68 - 1.48 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.36 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.23 (m, 26H), 0.86 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。
Figure 02_image1177
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸十六酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸十六酯(3 g，7.25 mmol)溶解於無水的含4 M HCl之二㗁烷(40 mL)中。攪拌反應物16小時。減壓濃縮反應物，得到固體，將其與無水DCM (40 mL)混合，並且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將二氯磷酸苯酯(1.08 mL，7.25 mmol)一次性添加至反應物中。攪拌反應物15 min。逐滴添加三乙胺(2.4 mL，17.4 mmol)，且接著攪拌2小時。添加對硝基苯酚(908 mg，6.53 mmol)及三乙胺(1.21 mL，8.7 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物3小時。反應物用DCM (60 mL)稀釋且用水(5 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.22 (m, 2H), 7.47 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.09 (m, 3H), 4.11 (m, 3H), 3.87 (m, 1H), 1.60 (m, 2H), 1.41 (m, 3H), 1.25 (m, 26H), 0.87 (t, J= 6.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.07 (s), -3.11 (s)。
Figure 02_image1179
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸十六酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸十六酯(98 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物20 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物6小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.38 - 7.08 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.72 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 4.14 - 3.81 (m, 3H), 1.55 (m, 2H), 1.26 (m, 26H), 0.95 - 0.81 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.25 (s)。MS m/z= 743.2 [M+1]；741.0 [M-1]。 實例200. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-(新戊氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1181
((((S)-1-( 新戊氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)溶解於無水THF (20 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加L-丙胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(210 mg，1 mmol)。逐滴添加三乙胺(293 μL，2.1 mmol)，且攪拌反應物1小時。一次性添加L-丙胺酸新戊酯鹽酸鹽(196 mg，1 mmol)。逐滴添加三乙胺(293 μL，2.1 mmol)，且在RT下攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.21 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.38 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.05 (m, 4H), 3.93 - 3.72 (m, 2H), 3.60 (m, 2H), 1.52 (m, 1H), 1.47 - 1.27 (m, 10H), 0.99 - 0.80 (m, 15H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 7.98 (s)。
Figure 02_image1183
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(((S)-1-( 新戊氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((((S)-1-(新戊氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯(86 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物10 min。添加DIPEA (66 μL，0.378 mmol)，且在RT下攪拌反應物20小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (250 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 8.07 (s, 1H), 7.39 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.54 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.43 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.36 - 4.18 (m, 2H), 4.14 - 3.62 (m, 6H), 1.50 (m, 1H), 1.35 (m, 10H), 1.00 - 0.83 (m, 15H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 13.57 (s)。MS m/z= 668.0 [M+1]；665.9 [M-1]。 實例201. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2,2,2-三氟乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1185
((4- 硝基苯氧基 )(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)與無水DCM (10 mL)混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加L-丙胺酸環己酯鹽酸鹽(208 mg，1 mmol)，且攪拌反應物15 min。逐滴添加三乙胺(334 μL，2.4 mmol)，且攪拌反應物1小時。一次性添加2,2,2-三氟乙醇(72 μL，1 mmol)。逐滴添加三乙胺(167 μL，1.2 mmol)，且在RT下攪拌反應物3小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋且用水(2 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.30 - 8.19 (m, 2H), 7.45 - 7.33 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.52 - 4.27 (m, 2H), 4.08 - 3.94 (m, 1H), 3.88 - 3.71 (m, 1H), 1.91 - 1.64 (m, 4H), 1.55 - 1.22 (m, 9H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿- d) δ -75.56 (t, J = 8.3 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.11 (s), 2.03 (s)。MS m/z= 454.7 [M+1]；453.1 [M-1]。
Figure 02_image1187
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(2,2,2- 三氟乙氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((4-硝基苯氧基)(2,2,2-三氟乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯(75 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，並且接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.80 (m, 1H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.76 - 4.59 (m, 2H), 4.54 - 4.25 (m, 5H), 3.80 (m, 1H), 1.86 - 1.62 (m, 4H), 1.57 - 1.26 (m, 9H)。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d4) δ -77.28 (t, J = 8.3 Hz), -77.25 (t, J = 8.3 Hz)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 7.87 (s), 7.77 (s)。MS m/z= 607.0 [M+1]；605.0 [M-1]。 實例202. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(羥基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1189
( 雙 (4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)與無水DCM (10 mL)混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加L-丙胺酸環己酯鹽酸鹽(208 mg，1 mmol)，且攪拌反應物15 min。逐滴添加三乙胺(334 μL，2.4 mmol)，且攪拌反應物2小時。一次性添加對硝基苯酚(125 mg，0.9 mmol)。逐滴添加三乙胺(167 μL，1.2 mmol)，且在RT下攪拌反應物3小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋且用水(4 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.30 - 8.19 (m, 4H), 7.46 - 7.35 (m, 4H), 4.76 (m, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 1.86 - 1.62 (m, 4H), 1.54 (m, 2H), 1.47 - 1.29 (m, 7H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -3.40 (s)。
Figure 02_image1191
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 羥基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及(雙(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯(82 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在RT下攪拌反應物5小時。
反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN (3 mL)中，且在冰浴中攪拌。添加1 M碳酸氫三乙銨溶液(3 mL)且在RT下攪拌反應物3小時。反應物用水(10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 10 mL)洗滌。水溶液用1 N HCl (水溶液)中和，得到pH值5至6。接著將物質冷凍乾燥，得到白色粉末。粗殘餘物經由製備型HPLC C18管柱(Phenominex Gemini 4μ 80Å 150 × 30 mm管柱，5-100%乙腈/水梯度，含TEAB作為改質劑)純化，得到呈三乙銨鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 7.81 (s, 1H), 6.88 - 6.80 (m, 2H), 5.52 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.69 (td, J= 8.8, 4.2 Hz, 1H), 4.57 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.48 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.12 - 3.98 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.06 (m, 6H), 1.84 - 1.74 (m, 2H), 1.74 - 1.63 (m, 2H), 1.55 - 1.19 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 5.42 (s)。MS m/z= 525.1 [M+1]；523.3 [M-1]。 實例203. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(萘-1-基氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1193
(( 萘 -1- 基氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)與無水DCM (10 mL)混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加L-丙胺酸環己酯鹽酸鹽(208 mg，1 mmol)，且攪拌反應物20 min。逐滴添加三乙胺(334 μL，2.4 mmol)，且攪拌反應物1小時。一次性添加1-萘酚(72 mg，0.9 mmol)。逐滴添加三乙胺(167 μL，1.2 mmol)，且在RT下攪拌反應物3小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋且用水(2 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.15 (m, 2H), 8.08 - 7.96 (m, 1H), 7.92 - 7.80 (m, 1H), 7.73 - 7.64 (m, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.47 - 7.33 (m, 3H), 4.81 - 4.64 (m, 1H), 4.27 - 4.11 (m, 1H), 4.06 - 3.88 (m, 1H), 1.84 - 1.61 (m, 4H), 1.54 (m, 2H), 1.44 - 1.18 (m, 7H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -2.77 (s), -2.81 (s)。
Figure 02_image1195
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 萘 -1- 基氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環己酯 .將中間物4 (50 mg，0.151 mmol)及((萘-1-基氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯(83 mg，0.166 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(72 mg，0.755 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加DIPEA (131 μL，0.755 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物冷卻至RT，用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-4%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 8.19 - 8.09 (m, 1H), 7.91 - 7.82 (m, 1H), 7.75 (m, 1H), 7.72 - 7.64 (m, 1H), 7.56 - 7.41 (m, 3H), 7.35 (m, 1H), 6.80 (m, 1H), 6.68 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.68 - 4.36 (m, 5H), 4.00 - 3.85 (m, 1H), 1.79 - 1.56 (m, 4H), 1.48 - 1.17 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d4) δ 3.75 (s), 3.62 (s)。MS m/z= 651.1 [M+1]；649.0 [M-1]。 實例204. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮雜環庚烷-4-基酯
Figure 02_image1197
8-(2,2,2- 三氟乙基 )1,4- 二氧雜 -8- 氮雜螺 [4.6] 十一烷 .向1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.6]十一烷(4.73 g，0.03 mol)、二異丙胺(6.25 mL，0.036 mol)於無水二氯甲烷(15 mL)中之冰冷溶液中添加三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(4.74 mL，0.033 mL)。在室溫下攪拌所得反應混合物隔夜，接著經由矽膠管柱層析(80 g管柱，100%己烷至40%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.90 (s, 4H), 3.12 (q, J = 9.6 Hz, 2H), 2.88 (dt, J = 25.5, 5.5 Hz, 4H), 1.95 - 1.81 (m, 4H), 1.69 (p, J = 5.9 Hz, 2H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -70.86 (t, J = 9.7 Hz)。
Figure 02_image1199
1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 氮雜環庚烷 -4- 酮 .向8-(2,2,2-三氟乙基)1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.6]十一烷(5.197 g，0.022 mol)於四氫呋喃(21 mL)中之溶液中添加3 N鹽酸(25 mL)，且在室溫下攪拌反應混合物隔夜。反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，用水(10 mL)稀釋，且用3 N氫氧化鈉水溶液中和。用乙酸乙酯進行萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。所獲得殘餘物經由矽膠管柱層析(80 g管柱，100%己烷至70%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.16 (q, J = 9.4 Hz, 2H), 3.00 (dt, J = 13.6, 5.5 Hz, 4H), 2.66 - 2.50 (m, 4H), 1.87 - 1.75 (m, 2H)。 19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -70.46 (t, J = 9.3 Hz)。
Figure 02_image1201
1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 氮雜環庚烷 -4- 醇 .向1-(2,2,2-三氟乙基)氮雜環庚烷-4-酮(3.8 g，0.195 mol)於異丙醇(40 mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(0.737 g，0.155 mol)，且在室溫下攪拌反應混合物3 h。用水(20 mL)稀釋反應混合物且攪拌5 min。用乙酸乙酯進行萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。所獲得殘餘物經由矽膠管柱層析(80 g管柱，100%己烷至100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.39 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 3.65 (tq, J = 8.1, 4.0 Hz, 1H), 3.24 (qd, J = 10.1, 1.0 Hz, 2H), 2.86 - 2.73 (m, 3H), 2.65 (ddd, J = 13.8, 9.0, 2.9 Hz, 1H), 1.81 - 1.58 (m, 3H), 1.56 - 1.33 (m, 3H)。 19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ -70.01 (t, J = 10.2 Hz)。
Figure 02_image1203
( 三級丁氧基羰基 )- L- 丙胺酸 1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 氮雜環庚烷 -4- 基 酯 .以與針對中間物12所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.21 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.85 (tt, J = 7.9, 4.0 Hz, 1H), 3.91 (p, J = 7.3 Hz, 1H), 3.36 - 3.17 (m, 2H), 2.94 - 2.63 (m, 4H), 1.92 - 1.58 (m, 5H), 1.57 - 1.40 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.19 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -70.06 (td, J = 10.0, 3.5 Hz)。
Figure 02_image1205
L - 丙胺酸 1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 氮雜環庚烷 -4- 基 酯二鹽酸鹽 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 5.23 (s, 1H), 4.16 (dt, J = 15.0, 8.1 Hz, 2H), 3.76 - 3.36 (m, 4H), 2.42 - 1.77 (m, 6H), 1.55 (dd, J = 7.2, 1.2 Hz, 3H)。
Figure 02_image1207
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 氮雜環庚烷 -4- 基 酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.30 - 8.16 (m, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.98 (dt, J = 8.1, 4.0 Hz, 1H), 4.22 - 4.03 (m, 1H), 3.91 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.14 (q, J = 9.4 Hz, 2H), 3.00 - 2.71 (m, 4H), 2.05 - 1.67 (m, 6H), 1.39 (dt, J = 7.2, 1.8 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.05。MS m/z= 546.12 [M+1]。
Figure 02_image1209
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 氮雜環庚烷 -4- 基酯 .在室溫下向中間物4 (0.06 g，0.181 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮雜環庚烷-4-基酯(0.119 g，0.217 mmol)及氯化鎂(0.028 g，0.29 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.079 mL，0.453 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化。將所獲得純物質溶解於無水乙腈(2 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.1 mL，1.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉溶液(1 mL)稀釋。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.36 (q, J = 8.5 Hz, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.75 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 6.26 (s, 2H), 5.48 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 4.98 - 4.78 (m, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.53 - 4.18 (m, 6H), 3.90 (dd, J = 16.8, 9.5 Hz, 2H), 3.20 (qd, J = 9.8, 5.6 Hz, 2H), 2.98 - 2.64 (m, 2H), 1.92 - 1.62 (m, 3H), 1.53 (s, 1H), 1.26 (t, J = 7.7 Hz, 3H)。 19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -72.20 (td, J = 10.0, 2.2 Hz)。MS m/z= 697.89 [M+1]。 實例205. 異丁酸(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-5-氰基-5-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1211
將中間物實例6 (100 mg，0.167 mmol)、異丁酸(0.031 mL，0.333 mmol)及 N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.052 mL，0.333 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物在室溫下攪拌20 min，且添加DMAP (20.34 mg，0.167 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到呈糊漿之區位異構體混合物(39 mg，35%，1:3.69區位異構混合物)，接著藉由SFC (30%乙醇，管柱AD-H 4.6×100 mm)分離。
第一溶離區位異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.92 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.66 - 5.56 (m, 2H), 4.78 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.63 (dt, J= 8.7, 4.6 Hz, 1H), 4.45 (dd, J= 11.1, 6.7 Hz, 1H), 4.37 (dd, J= 11.1, 5.7 Hz, 1H), 3.85 (dq, J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 2.68 (p, J= 7.0 Hz, 1H), 1.79 - 1.59 (m, 4H), 1.56 - 1.42 (m, 1H), 1.42 - 1.17 (m, 14H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。LCMS：MS m/z= 671.18 [M+1]；t R= 1.05 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：t R= 5.48 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例206. 異丁酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1213
實例205之第二溶離區位異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.84 (s, 1H), 7.33 (t, J= 7.9 Hz, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.89 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.52 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 4.91 - 4.85 (m, 1H), 4.68 (dq, J= 8.8, 4.2 Hz, 1H), 4.40 (qd, J= 10.9, 5.9 Hz, 2H), 3.94 - 3.82 (m, 1H), 2.76 (p, J= 7.0 Hz, 1H), 1.72 (dd, J= 31.4, 10.5 Hz, 4H), 1.56 - 1.46 (m, 1H), 1.46 - 1.17 (m, 14H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.16。LCMS：MS m/z= 671.18 [M+1]；t R= 1.05 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。HPLC：t R= 5.61 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例207. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1215
來自WO 2015/069939之實例34之 Sp及 Rp非對映異構體之解析. 產物經由對掌性製備型SFC (Chiralpak AD-H，30%乙醇等度)純化，得到非對映異構體： 來自WO 2015/069939之實例34之第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.43 (m, 2H), 4.36 (m, 1H), 4.07 - 3.84 (m, 3H), 1.53 - 1.42 (m, 1H), 1.38 - 1.24 (m, 7H), 0.86 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.26 (s)。HPLC：t R= 5.068 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 第二溶離非對映異構體：實例25。HPLC：t R= 5.080 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例208.
Figure 02_image1217
雙 (2,2- 二甲基丙酸 )(((4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 乙 -2,1- 二基 ) 酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，將三乙胺(2.28 mL，16.4 mmol)添加至特戊酸2-(氯-λ5-氮烷基)乙酯(1.5 g，7.8 mmol)及二氯磷酸4-硝基苯酯(1.0 g，3.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中。3.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0­100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。LCMS：MS m/z= 474.09 [M+1]，t R= 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.799 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
Figure 02_image1219
在RT下將乙腈(1 mL)添加至中間物4 (70.0 mg，0.211 mmol)、雙(2,2-二甲基丙酸)(((4-硝基苯氧基)磷醯基)雙(氮烷二基))雙(乙-2,1-二基)酯(100 mg，0.211 mmol)及氯化鎂(20.0 mg，0.211 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持5 min，且添加 N,N-二異丙基乙胺(0.092 mL，0.53 mmol)。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.25 mL)。30 min後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，0-100%乙腈/水梯度，0.01% TFA)純化，得到實例，得到呈TFA鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 8.04 (s, 1H), 7.35 (d, J =4.7 Hz, 1H), 7.00 (d, J =4.7 Hz, 1H), 5.54 (d, J =5.3 Hz, 1H), 4.54 (t, J =5.4 Hz, 1H), 4.39 (d, J =5.5 Hz, 1H), 4.28 - 4.16 (m, 2H), 4.10 - 4.04 (m, 2H), 4.03 - 3.94 (m, 2H), 3.19 - 3.04 (m, 4H), 1.20 (s, 9H), 1.16 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 17.21 (s)。LCMS：MS m/z= 626.14 [M+1]，t R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.73 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t R= 4.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例209. 雙-2-乙基苯甲酸酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯
Figure 02_image1221
雙 ( 乙基 -2- 苯甲酸酯 )-4- 硝基苯基磷酸酯 .向2-羥基苯甲酸乙酯(3.9 g，23 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(3 g，11.7 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(3 g，29 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且攪拌隔夜。接著將反應混合物用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。LCMS：MS m/z= 515.41 [M+1]，t R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 4.25 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Figure 02_image1223
雙 -2- 乙基苯甲酸酯磷酸 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯 .向雙(乙基-2-苯甲酸酯)-4-硝基苯基磷酸酯(467 mg，0.9 mmol)、中間物4 (200 mg，0.6 mmol)及MgCl 2(92 mg，0.97 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(195 mg，2 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(8 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且將殘餘物溶解於DCM中，並且藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 - 7.77 (m, 3H), 7.51 - 7.35 (m, 4H), 7.33 - 7.22 (m, 2H), 6.70 (q, J = 4.5 Hz, 2H), 6.40 (s, 1H), 5.48 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.56 (m, 3H), 4.33 - 4.18 (m, 4H), 1.32 - 1.20 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.67, 2.60。LCMS：MS m/z= 668.08 [M+1]，t R= 1.19 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例210. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-胺基環己基)甲酯
Figure 02_image1225
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將Cbz-L-丙胺酸(223 mg，1.00 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將反式-1-(Boc-胺基)-4-(羥甲基)環己烷(229 mg，1.00 mmol)及EDCI (230 mg，1.2 mmol)添加至反應物中，接著攪拌25 min。一次性添加DMAP (122 mg，1 mmol)，且攪拌反應物4 h。將反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 5 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.29 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.47 - 4.24 (m, 2H), 3.96 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 3.37 (bs, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.58 (m, 2H), 1.44 (m, 12H), 1.10 (m, 4H)。
Figure 02_image1227
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(348 mg，0.800 mmol)溶解於12 mL無水四氫呋喃中。將Degussa型10%鈀/碳(25 mg)添加至反應物中，且接著在氫氣氛圍下攪拌3 h。濾出鈀/碳，且濾液不經進一步純化即用於下一反應中。將二氯磷酸苯酯(119 µL，0.800 mmol)溶解於15 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。接著將上文之濾液逐滴添加至反應溶液中，且接著攪拌30 min。逐滴添加三乙胺(120 µL，0.88 mmol)且攪拌1 h。一次性添加對硝基苯酚(100 mg，0.72 mmol)。逐滴添加三乙胺(123 µL，0.88 mol)，且在RT下攪拌反應混合物2 h。反應混合物接著用二氯甲烷(10 mL)稀釋，且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 4.35 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (m, 2H), 3.85 (t, J= 10.6 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.48 - 1.36 (m, 12H), 1.15 - 0.98 (m, 4H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 3.12, 3.13。LCMS：MS m/z= 478.2 [M+1]；476.4 [M-1]，t R= 1.50 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.20 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image1229
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4- 胺基環己基 ) 甲酯 .將中間物4 (83 mg，0.25 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(159 mg，0.275 mmol)溶解於4 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(71 mg，0.75 mmol)。添加DIPEA (87 μL，0.5 mmol)，且在50℃下攪拌反應物5 h。反應混合物接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(12 N，300 µL)，且在冰浴中攪拌反應混合物3 h。反應混合物接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。用MeOH/乙酸乙酯溶液(1:1，5 × 5 mL)反萃取水層。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物藉由製備型HPLC在中性條件下(5-100% MeCN/水)純化。合併溶離份且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.78 - 6.70 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.68 - 4.28 (m, 5H), 4.00 - 3.81 (m, 3H), 2.97 (m, 1H), 2.08 - 1.94 (m, 2H), 1.90 - 1.75 (m, 2H), 1.60 (m, 1H), 1.42 - 1.21 (m, 5H), 1.19 - 1.00 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.16, 3.29。LCMS：MS m/z= 630.2 [M+1]；628.2 [M-1]，t R= 0.86 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.02 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.357, 3.383 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例211. ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1231
向中間物4 (50 mg，0.151 mmol)、中間物74 (101.5 mg，0.226 mmol)及MgCl 2(22 mg，0.226 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.574 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.36 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.77 (q, J= 4.5 Hz, 2H), 6.43 (s, 2H), 5.66 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 6.6, 3.4 Hz, 1H), 5.10 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.67 (dq, J= 8.5, 3.9 Hz, 1H), 4.45 (dd, J= 12.3, 10.0 Hz, 1H), 4.39 (dd, J= 10.7, 6.6 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 10.7, 5.6 Hz, 1H), 3.90 (tq, J= 9.7, 7.1 Hz, 1H), 1.81 - 1.60 (m, 7H), 1.55 - 1.45 (m, 1H), 1.43 - 1.19 (m, 11H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.61。LCMS：MS m/z= 641.29 [M+1]；t R= 1.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µl/min。 實例212. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-氰基-3,4-二羥基-5-(4-辛醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1233
向實例211 (39 mg，0.061 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中依序添加吡啶(0.049 mL，0.609 mmol)及辛醯氯(0.016 mL，0.091 mmol)。攪拌所得混合物3 h且藉由添加甲醇(0.1 mL)淬滅，用EtOAc稀釋，用水洗滌，且經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，並且與甲苯共蒸發若干次。將所獲得殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且添加濃HCl (0.1 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.83 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.36 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.23 (dq, J= 7.5, 3.5, 2.4 Hz, 3H), 7.16 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.56 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.66 (dt, J= 8.7, 4.4 Hz, 1H), 4.58 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.47 (s, 1H), 4.44 - 4.23 (m, 4H), 4.03 (s, 1H), 3.90 (ddt, J= 16.7, 9.5, 7.1 Hz, 1H), 2.68 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.70 (p, J= 7.5 Hz, 2H), 1.49 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 1.45 - 1.21 (m, 20H), 0.95 - 0.86 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.79。LCMS：MS m/z= 727.37 [M+1]；t R= 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 6.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例213. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸
Figure 111149986-A0304-1
啶-4-基甲酯
Figure 02_image1235
2,2,2- 三氟乙酸 ((((( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺醯基 ) 氧基 ) 甲基 )
Figure 111149986-A0304-1
 啶 -1- 鎓 .向
Figure 111149986-A0304-1
啶-4-甲醇(250 mg，1.770 mmol)、 N-Cbz-L-丙胺酸(474 mg，2.123 mmol)及EDCI (357 mg，2,300 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物中添加DMAP (324 mg，2.652 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，用水稀釋，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，5-95%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度，30 min運行)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.58 (s, 1H), 7.77 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.41 - 7.25 (m, 5H), 5.02 (s, 2H), 4.10 (p, J= 7.3 Hz, 1H), 3.88 (p, J= 12.3, 11.7 Hz, 2H), 3.23 (t, J= 8.1 Hz, 6H), 1.70 - 1.61 (m, 5H), 1.59 (s, 1H), 1.28 (d, J= 7.3 Hz, 3H)。LCMS：MS m/z= 347.28 [M+1-TFA]；t R= 0.63 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1237
2,2,2- 三氟乙酸 4-(((L- 丙胺醯基 ) 氧基 ) 甲基 )
Figure 111149986-A0304-1
 啶 -1- 鎓 .在室溫下向2,2,2-三氟乙酸(((((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺醯基)氧基)甲基)
Figure 111149986-A0304-1
啶-1-鎓(545 mg，1.57 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加Pd(OH) 2(700 mg，0.997 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，過濾且真空濃縮。所獲得殘餘物與DCM共蒸發若干次，且所得中間物經高真空乾燥隔夜，並且用於下一反應中。LCMS：MS m/z= 213.14 [M+1-TFA]；t R= 0.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1239
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸
Figure 111149986-A0304-1
 啶 -4- 基甲酯 .將DCM (100 mL)添加至2,2,2-三氟乙酸4-(((L-丙胺醯基)氧基)甲基)
Figure 111149986-A0304-1
啶-1-鎓(399 mg，1.223 mmol)之混合物中，且添加三乙胺(0.169 mL，1.223 mmol)，獲得溶液，將其冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.183 mL，1.223 mmol)。在-78℃下經30 min添加含三乙胺(0.169 mL，1.223 mmol)之DCM (2 mL)。在相同溫度下攪拌所得混合物30 min。接著一次性添加4-硝基苯酚(170 mg，1.223 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加含三乙胺(0.169 mL，1.223 mmol)之DCM (2 mL)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至10% 含2% TEA之甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之經分離溶離份且真空濃縮，得到粗中間物，其不經進一步純化即用於下一反應中。LCMS：MS m/z= 490.40 [M+1]；t R= 0.86 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1241
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸
Figure 111149986-A0304-1
 啶 -4- 基甲酯 .向中間物4 (50 mg，0.151 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸
Figure 111149986-A0304-1
啶-4-基甲酯(111 mg，0.226 mmol，粗產物)及MgCl 2(22 mg，0.226 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.574 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物(50 mg，49%)，將其溶解於乙腈(1 mL)中且添加濃HCl (0.05 mL，0.51 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物2 h，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，20-65%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度，30 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.94 (m, 1H), 7.40 - 7.12 (m, 6H), 6.88 (m, 1H), 5.52 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.49 - 4.32 (m, 3H), 4.06 - 3.90 (m, 3H), 3.41 - 3.29 (m, 6H), 1.81 (m, 6H), 1.33 (d, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.33, 3.08。LCMS：MS m/z= 642.34 [M+1-TFA]；t R= 0.64 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 3.28 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例214. 雙L-丙胺酸環丙基甲酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯
Figure 02_image1243
L- 丙胺酸二胺基磷酸 4- 硝基苯基 -N,N'- 環丙基甲酯 .向L-丙胺酸環丙基甲酯HCl鹽(146 mg，0.6 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(77 mg，0.3 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(121 mg，1.2 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且攪拌隔夜。接著將反應混合物用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物。LCMS：MS m/z= 470.03 [M+1]，t R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.01 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
Figure 02_image1245
雙 L- 丙胺酸環丙基甲酯磷酸 ((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯 .向L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-環丙基甲酯(55 mg，0.12 mmol)、中間物4 (35 mg，0.11 mmol)及MgCl 2(15 mg，0.16 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(34 mg，0.26 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO 3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 11.1, 7.0 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.01 - 3.73 (m, 6H), 1.37 - 1.22 (m, 6H), 1.18 - 0.99 (m, 2H), 0.61 - 0.44 (m, 4H), 0.32 - 0.16 (m, 4H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.55。LCMS：MS m/z= 622.12 [M+1]，t R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.58 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例215. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-天冬胺酸二戊酯
Figure 02_image1247
氯化 (S)-1,4- 二側氧基 -1,4- 雙 ( 戊氧基 ) 丁 -2- 銨 .在室溫下向L-天冬胺酸(5 g，37.56 mmol)及正戊醇(40 mL，430.18 mmol)之混合物中添加TMSCl (12.81 mL，116.45 mmol)。在80℃下攪拌所得混合物15 h，將其冷卻至室溫，在60℃下真空濃縮。質子NMR指示存在少量單酯。將殘餘物懸浮於EtOAc (400 mL)中，且添加飽和NaHCO 3(100 mL)。攪拌混合物5 min且分離各相。用EtOAc萃取水層。將合併之有機層真空濃縮，且溶解於DCM (200 mL)中，並且在冰浴下添加含4 N HCl之二㗁烷(10 mL)。將混合物真空濃縮，在己烷(100 mL)中濕磨，且將藉由過濾獲得之固體高真空乾燥15 h，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.86 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 4.53 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 2H), 4.11 (td, J= 6.9, 1.4 Hz, 2H), 3.32 (dd, J= 17.9, 5.0 Hz, 1H), 3.19 (dd, J= 17.9, 5.1 Hz, 1H), 1.63 (h, J = 7.2 Hz, 4H), 1.30 (dtt, J= 5.1, 3.4, 1.9 Hz, 8H), 0.89 (td, J= 7.0, 1.5 Hz, 6H)。LCMS：MS m/z= 274.11 [M+1-HCl]；t R= 0.81 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1249
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 天冬胺酸二戊酯 .將氯化(S)-1,4-二側氧基-1,4-雙(戊氧基)丁-2-銨(1.0 g，3.288 mmol)溶解於DCM (20 mL)中，且冷卻至-78℃。一次性添加二氯磷酸苯酯(0.48 mL，3.228 mmol)。接著經30 min添加含三乙胺(1.1 mL，7.22 mmol)之DCM (2 mL)，且攪拌直至內部溫度達到0℃。一次性添加對硝基苯酚(449 mg，3.228 mmol)，且在-78℃下經30 min添加含三乙胺(0.508 mL，3.228 mmol)之DCM (2 mL)。在完成三乙胺之添加之後，在室溫下攪拌混合物15 h，用DCM稀釋，用飽和NaHCO 3溶液及水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 4H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 4.11 (m, 2H), 4.02 (m, 2H), 2.97 (m, 1H), 2.78 - 2.63 (m, 1H), 1.57 (m, 4H), 1.29 (m, 8H), 0.98 - 0.79 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.60, -2.88。LCMS：MS m/z= 551.21 [M+1]；t R= 1.44 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1251
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 天冬胺酸二戊酯 .向中間物4 (50 mg，0.151 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-天冬胺酸二戊酯(195 mg，0.354 mmol)及MgCl 2(22 mg，0.226 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.574 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，用DCM稀釋，用水及鹽水洗滌，且用DCM萃取水層。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所獲得殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，且用濃HCl (0.1 mL)處理，在室溫下攪拌1 h，並且在冰浴下添加NaHCO 3水溶液(2 mL)。混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-76%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.38 - 7.06 (m, 5H), 6.90 - 6.77 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 2H), 4.24 (m, 1H), 4.14 - 3.88 (m, 4H), 2.84 - 2.57 (m, 2H), 1.64 - 1.46 (m, 4H), 1.38 - 1.08 (m, 8H), 0.87 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22, 3.13。LCMS：MS m/z= 703.28 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.76 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .非對映異構體藉由SFC (AD-H，5μ，21×250 mm，30%乙醇，55 mL/min)分離，得到第一溶離異構體及第二溶離異構體：
Figure 02_image1253
實例 216.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (dd, J= 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.21 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.62 ( t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.58 - 4.48 (m, 2H), 4.38 (dd, J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.23 (dd, J= 11.5, 5.8 Hz, 1H), 4.15 - 4.02 (m, 2H), 3.99 (td, J= 6.7, 2.3 Hz, 2H), 2.70 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 1.58 (dp, J= 9.3, 6.9 Hz, 4H), 1.29 (dq, J= 7.2, 3.9, 3.3 Hz, 8H), 0.88 (dt, J= 8.5, 6.9 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.18。LCMS：MS m/z= 703.28 [M+1]；t R= 1.23 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.77 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 217.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.32 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.83 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.61 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.45 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.38 (qd, J= 10.9, 5.8 Hz, 2H), 4.25 (dt, J= 12.0, 6.1 Hz, 1H), 4.04-3.94 (m, 4H), 2.72 (qd, J= 16.4, 6.1 Hz, 2H), 1.54 (pd, J= 6.8, 3.4 Hz, 4H), 1.26 (pd, J= 7.7, 6.4, 2.3 Hz, 8H), 0.86 (td, J= 6.8, 4.7 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.10。LCMS：MS m/z= 703.35 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.75 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例218.
Figure 02_image1255
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸丁酯 .將Boc-L-丙胺酸(380 mg，2.0 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將1-丁醇(920 µL，10.0 mmol)及EDCI (460 mg，2.4 mmol)添加至反應物中，接著攪拌15 min。一次性添加DMAP (240 mg，2.0 mmol)，且攪拌反應物14 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到所需產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.04 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 - 4.07 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (m, 5H), 0.93 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image1257
2,2'-(((4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 雙 ( 氮烷二基 ))(2S,2'S)- 二丙酸二丁酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸丁酯(291 mg，1.18 mmol)溶解於7 mL含4 M HCl之二㗁烷中，且攪拌1 h。減壓濃縮反應混合物，得到油狀物，接著將其溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(152 mg，0.59 mmol)，且攪拌反應物10 min。將三乙胺(270 µL，1.95 mmol)溶解於1 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應溶液中。攪拌反應混合物1 h。將三乙胺(270 µL，1.95 mmol)用700 µL無水二氯甲烷溶解，且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋，且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.27 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 2H), 4.19 - 3.98 (m, 5H), 3.80 - 3.61 (m, 1H), 3.58 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 4H), 1.45 - 1.30 (m, 10H), 0.93 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 7.93。LCMS：MS m/z= 474.0 [M+1]；472.1 [M-1]，t R= 1.46 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.02 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image1259
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷醯基)雙(氮烷二基))(2S,2'S)-二丙酸二丁酯(71 mg，0.15 mmol)合併且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(73 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (52 μL，0.3 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16 h。
添加更多氯化鎂(73 mg)及DIPEA (52 μL)，且在50℃下攪拌反應物6 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (12 N水溶液，300 µL)，且接著在冰浴中攪拌1 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.62 (dd, J= 5.7, 4.9 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 11.1, 7.0 Hz, 1H), 4.20 (dd, J= 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.16 - 3.95 (m, 4H), 3.88 (m, 2H), 1.66 - 1.52 (m, 4H), 1.44 - 1.29 (m, 7H), 1.26 (m, 3H), 0.92 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 13.59。LCMS：MS m/z= 626.2 [M+1]；624.3 [M-1]，t R= 1.20 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.85 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.752 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例219.
Figure 02_image1261
2,2'-(((4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 雙 ( 氮烷二基 ))(2S,2'S)- 二丙酸二苯甲酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(1.28 g，5 mmol)與10 mL無水二氯甲烷混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。添加L-丙胺酸苯甲酯鹽酸鹽(2.16 g，10 mmol)於無水二氯甲烷(10 mL)中之溶液，接著添加三乙胺(1.74 mL，12.5 mmol)。將所得混合物逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應混合物10 min。將三乙胺(1.5 mL)溶解於10 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應溶液中。攪拌反應混合物3 h，且用二氯甲烷(15 mL)稀釋，並且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.20 - 8.05 (m, 2H), 7.41 - 7.19 (m, 12H), 5.14 (s, 4H), 4.18 - 4.00 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 1.39 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 7.69。LCMS：MS m/z= 542.0 [M+1]；540.0 [M-1]，t R= 1.44 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.00 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image1263
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷醯基)雙(氮烷二基))(2S,2'S)-二丙酸二苯甲酯(97 mg，0.18 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (52 μL，0.30 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16 h。
添加更多DIPEA (52 μL)，且在60℃下攪拌反應物6 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (200 µL)，且接著在冰浴中攪拌3 h。反應物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.21 (m, 10H), 6.83 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 5.15 - 4.96 (m, 4H), 4.61 (dd, J= 5.7, 4.9 Hz, 1H), 4.48 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.29 (dd, J= 11.1, 7.1 Hz, 1H), 4.17 (dd, J= 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.00 - 3.84 (m, 2H), 1.28 (m, 3H), 1.24 - 1.20 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 13.47。LCMS：MS m/z= 694.4 [M+1]；692.2 [M-1]，t R= 1.22 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.90 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.824 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例220.
Figure 02_image1265
2,2'-(((4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 雙 ( 氮烷二基 ))(2S,2'S)- 二丁酸雙 (2- 乙基丁基 ) 酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(572 mg，2.23 mmol)與10 mL無水二氯甲烷混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將(S)-2-胺基丁酸2-乙基丁酯(837 mg，4.47 mmol)溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物10 min。將三乙胺(778 µL，5.58 mmol)用3 mL無水二氯甲烷溶解，且逐滴添加至反應溶液中。攪拌反應混合物3 h。反應混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋且用水(2 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.23 - 8.16 (m, 2H), 7.42 - 7.34 (m, 2H), 4.09 - 3.89 (m, 6H), 3.52 (t, J= 10.1 Hz, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.71 (m, 2H), 1.56 - 1.45 (m, 2H), 1.40 - 1.28 (m, 8H), 0.97 - 0.82 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 8.75。LCMS：MS m/z= 558.1 [M+1]；556.1 [M-1]，t R= 1.69 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.85 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image1267
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷醯基)雙(氮烷二基))(2S,2'S)-二丁酸雙(2-乙基丁基)酯(109 mg，0.195 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (131 µL，0.75 mmol)，且在60℃下攪拌反應物4 h。
反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用碳酸鈉水溶液(3 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (200 µL)，且在冰浴中攪拌反應混合物3 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.62 (dd, J= 5.7, 4.7 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 11.1, 7.0 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 11.1, 6.1 Hz, 1H), 4.12 - 3.97 (m, 3H), 3.92 (m, 1H), 3.78 (m, 2H), 3.30 (m, 1H), 1.83 - 1.41 (m, 6H), 1.41 - 1.27 (m, 8H), 0.95 - 0.79 (m, 18H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 14.07。LCMS：MS m/z= 710.3 [M+1]；708.4 [M-1]，t R= 1.46 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.51 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 5.980 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例221. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1269
((((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .在RT下向二氯磷酸4-硝基苯酯(1.467 g，5.732 mmol)於DCM (30 mL)中之溶液中一次性添加L-丙胺酸甲酯(800 mg，5.732 mmol)。經3 min向所得混合物中逐滴添加三乙胺(1.6 mL，11.464 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且一次性添加氯化(S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-銨(1.202 g，5.732 mmol)，且接著經3 min添加三乙胺(1.6 mL，11.464 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷保持45 min，且接著100% EtOAc保持15 min)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.21 (m, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 4.17 - 3.97 (m, 4H), 3.72(s, 3H), 3.58 (m, 2H), 1.57 - 1.46 (m, 1H), 1.41 (m 6H), 1.34 (m, 4H), 0.88 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ 7.88。LCMS m/z = 460.06 (M +H)，t R= 1.19 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1271
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 .向中間物4 (63 mg，0.190 mmol)、((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯(210 mg，0.456 mmol)及MgCl 2(27 mg，0.285 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.126 mL，0.723 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1 h，冷卻，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，用乙腈(4 mL)溶解，且添加濃HCl (0.4 mL)。在室溫下攪拌所得混合物30 min，且在冰浴下添加NaHCO 3(3 mL)。混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-76%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.67 - 4.60 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.31 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.11 - 3.80 (m, 4H), 3.68 (s, 1.27H), 3.63 (s, 1.73H), 1.48 (m, 1H), 1.41 - 1.21 (m, 10H), 0.87 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.58。LCMS：MS m/z= 612.29 [M+1]；t R= 0.90 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.49 min (35%), 4.52 min (64%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物藉由SFC (IA，5μ，21×250 mm，20%乙醇)分離，得到非對映異構體：
Figure 02_image1273
實例 222.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.63 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J= 11.1, 6.9 Hz, 1H), 4.20 (dd, J= 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.07 (dd, J= 10.9, 5.8 Hz, 1H), 3.98 (dd, J= 10.9, 5.7 Hz, 1H), 3.88 (ddq, J= 23.9, 9.5, 7.1 Hz, 2H), 3.63 (s, 3H), 1.50 (h, J= 6.1 Hz, 1H), 1.42 - 1.29 (m, 7H), 1.28 - 1.23 (m, 3H), 0.89 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.57。LCMS：MS m/z= 612.25 [M+1]；t R= 0.88 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.46 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 223.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 4.68 - 4.58 (m, 1H), 4.50 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 11.1, 7.0 Hz, 1H), 4.20 (dd, J= 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.03 (dd, J= 10.9, 5.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 3H), 3.68 (s, 3H), 1.55 - 1.39 (m, J= 6.3 Hz, 1H), 1.38 - 1.28 (m, 7H), 1.26 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 0.87 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.58。LCMS：MS m/z= 612.29 [M+1]；t R= 0.89 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.45 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例224. 2-(((4aR,6S,7S,7aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4a-氰基-7-羥基-2-氧橋四氫-4H-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧雜次膦-2-基)氧基)苯甲酸乙酯
Figure 02_image1275
向實例209 (10 mg，0.015 mmol)於THF (1 mL)中之溶液中逐滴添加DBU (6 mg，0.037 mmol)。在RT下攪拌所得混合物2 h，反應混合物接著用EtOAc稀釋，用NH 4Cl及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物接著藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.06 - 7.93 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.69 - 7.54 (m, 2H), 7.38 (td, J = 8.2, 7.7, 1.7 Hz, 1H), 6.85 (q, J = 4.6 Hz, 2H), 5.74 (s, 1H), 5.68 (dd, J = 5.2, 2.5 Hz, 1H), 5.00 - 4.89 (m, 1H), 4.78 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.43 - 4.29 (m, 2H), 1.38 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ -13.44。LCMS：MS m/z= 502.08 [M+1]，t R= 1.14 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.66 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例225. ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2-乙氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1277
將實例6 (31 mg，0.052 mmol)溶解於DMF (3 mL)中，在RT下在氬氣下添加對甲苯磺酸(18 mg，0.1 mmol)及原酸酯(384 mg，2.6 mmol)。攪拌溶液40 min，用AcOEt (50 mL)稀釋，用鹽水(4× 20 mL)、飽和NaHCO 3水溶液(20 mL)洗滌，且真空蒸發溶劑。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.83 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 7.2, 5.2 Hz, 1H), 5.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.70 (dt, J = 8.9, 4.7 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 10.4, 6.4 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 10.4, 5.3 Hz, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 2H), 3.80 - 3.67 (m, 1H), 1.77 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 1.69 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 1.55 - 1.38 (m, 3H), 1.38 - 1.25 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.66。LCMS：MS m/z= 6.57.11 [M+1]，t R= 1.41 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.33 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例226. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)((2-(2-乙基丁氧基)-2-側氧基乙基)胺基)磷醯基)甘胺酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1279
氯化 2-(2- 乙基丁氧基 )-2- 側氧基乙 -1- 銨 .在室溫下向甘胺酸(4.2 g，55.95 mmol)及2-乙基丁醇(60 mL，489.15 mmol)之混合物中添加TMSCl (19.08 mL，173.45 mmol)。將所得混合物在70℃下攪拌15 h，在60℃下真空濃縮，且與甲苯共蒸發若干次(33 mL × 3)。將所得糊漿懸浮於己烷(70 mL)中，在室溫下攪拌15 h，且藉由過濾收集所沈澱之固體。將固體在30℃下高真空乾燥2天，得到中間物且用於下一反應中。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.59 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 4.09 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 3.99 (q, J= 5.8 Hz, 2H), 1.51 (h, J= 6.2 Hz, 1H), 1.33 (p, J= 7.3 Hz, 4H), 0.86 (t, J= 7.4 Hz, 6H)。LCMS：MS m/z= 159.87 [M+1-HCl]；t R= 0.61 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1281
(((2-(2- 乙基丁氧基 )-2- 側氧基乙基 ) 胺基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 甘胺酸 2- 乙基丁酯 .向二氯磷酸4-硝基苯酯(1.700 g，6.641 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加氯化2-(2-乙基丁氧基)-2-側氧基乙-1-銨(2.60 g，13.28 mmol)。在室溫下經3 min向所得混合物中逐滴添加三甲胺(2.76 mL，19.92 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌30 min，用DCM稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.21 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.39 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 4.08 (d, J= 5.9 Hz, 4H), 3.82 (dd, J = 11.0, 6.0 Hz, 4H), 3.56 (s, 2H), 1.52 (p, J= 6.2 Hz, 2H), 1.41 - 1.26 (m, 8H), 0.88 (t, J= 7.4 Hz, 12H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ 10.05。LCMS：MS m/z= 502.16 [M+1]；t R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1283
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )((2-(2- 乙基丁氧基 )-2- 側氧基乙基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 甘胺酸 2- 乙基丁酯 .向中間物4 (63 mg，0.190 mmol)、(((2-(2-乙基丁氧基)-2-側氧基乙基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)甘胺酸2-乙基丁酯(229 mg，0.456 mmol)及MgCl 2(27 mg，0.285 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加 N,N-二異丙基乙胺(0.126 mL，0723 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化。將所獲得中間物溶解於乙腈(2 mL)中且添加濃HCl (0.1 mL)。在室溫下攪拌所得混合物30 min，且在冰浴下添加NaHCO 3水溶液(3 mL)。混合物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，0%-76%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 11.0, 6.6 Hz, 1H), 4.25 (dd, J= 11.0, 6.0 Hz, 1H), 4.05 - 3.99 (m, 4H), 3.72 - 3.62 (m, 4H), 1.47 (ddt, J= 16.1, 12.2, 6.2 Hz, 2H), 1.39 - 1.25 (m, 8H), 0.87 (td, J= 7.4, 5.8 Hz, 12H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 16.10。LCMS：MS m/z= 654.50 [M+1]；t R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.29 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min 實例227. 實例30之 Sp及 Rp非對映異構體之解析
Figure 02_image1285
實例30 (14.34 mg，0.021 mmol)藉由Chiralpack (IF，50μ，150×4.6 mm，庚烷70%，異丙醇30%)分離，得到非對映異構體。 實例 227.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 6.82 - 6.66 (m, 2H), 6.12 (s, 2H), 5.48 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 4.70 (td, J= 8.7, 4.0 Hz, 1H), 4.58 (t, J= 5.1 Hz, 1H), 4.49 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.26 (dd, J= 11.3, 8.0 Hz, 1H), 4.15 (dd, J= 11.4, 7.9 Hz, 1H), 4.08 (dd, J= 10.9, 5.7 Hz, 1H), 3.99 (dd, J= 10.9, 5.6 Hz, 1H), 3.89 (s, 1H), 3.78 (s, 4H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.75 - 1.65 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.37 (m , 6H), 1.28 (m , 9H), 0.90 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.54。LCMS：MS m/z= 680.40 [M+1]；t R= 0.99 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.40 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 228.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 6.83 - 6.71 (m, 2H), 6.25 (s, 2H), 5.48 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.58 (t, J= 5.1 Hz, 1H), 4.49 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.26 (dd, J= 11.3, 8.0 Hz, 1H), 4.15 (dd, J= 11.3, 7.7 Hz, 1H), 4.08 - 4.03 (m, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.90 - 3.65 (m, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.59 - 1.22 (m, 17H), 0.88 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.52。LCMS：MS m/z= 680.39 [M+1]；t R= 0.97 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.38 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例229. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-麩胺酸5-丁酯1-環己酯
Figure 02_image1287
( 三級丁氧基羰基 )-L- 麩胺酸 5- 丁酯 1- 環己酯 .將Boc-L-麩胺酸α環己酯(494 mg，1.5 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將1-丁醇(1.37 mL，15 mmol)及EDCI (345 mg，1.8 mmol)添加至反應物中，接著攪拌45 min。一次性添加DMAP (183 mg，1.5 mmol)，且攪拌反應物14 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.10 (m, 1H), 4.86 - 4.76 (m, 1H), 4.36 - 4.21 (m, 1H), 4.08 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 2.48 - 2.29 (m, 2H), 2.16 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 2H), 1.78 - 1.66 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 4H), 1.48 - 1.30 (m, 15H), 0.93 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。
Figure 02_image1289
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 麩胺酸 5- 丁酯 1- 環己酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-麩胺酸5-丁酯1-環己酯(420 mg，1.09 mmol)溶解於10 mL含4 M HCl之二㗁烷中，且攪拌2 h。減壓濃縮反應混合物，且粗殘餘物直接用於下一步驟中。將二氯磷酸苯酯(162 µL，1.09 mmol)溶解於5 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將上文所製備之粗殘餘物溶解於無水二氯甲烷(3 mL)中，且逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應混合物10 min，且將三乙胺(334 µL，2.4 mmol)溶解於3 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應混合物2 h。一次性添加對硝基苯酚(136 mg，0.981 mmol)。將三乙胺(167 µL，1.2 mmol)溶解於3 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物16 h，且將反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.26 - 8.16 (m, 2H), 7.44 - 7.29 (m, 4H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.19 - 4.08 (m, 1H), 4.03 (m, 2H), 3.96 - 3.86 (m, 1H), 2.46 - 2.22 (m, 2H), 2.18 - 2.06 (m, 1H), 2.02 - 1.90 (m, 1H), 1.85 - 1.64 (m, 2H), 1.64 - 1.47 (m, 3H), 1.46 - 1.28 (m, 4H), 0.91 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -2.68, -2.79。LCMS：MS m/z= 563.1 [M+1]；561.3 [M-1]，t R= 1.62 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.58 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image1291
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 麩胺酸 5- 丁酯 1- 環己酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-麩胺酸5-丁酯1-環己酯(110 mg，0.195 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (131 µL，0.75 mmol)，且在60℃下攪拌反應物16 h。
添加更多((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-麩胺酸5-丁酯1-環己酯(30 mg)及DIPEA (52 µL)。在60℃下攪拌反應混合物6 h，且反應物接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (300 µL)，且接著在冰浴中攪拌2 h。反應物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。所得物質藉由不含酸改質劑之製備型HPLC (5-100% MeCN/水)再次純化。合併含有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.79 (m, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.76 - 4.55 (m, 2H), 4.52 - 4.30 (m, 3H), 4.07 - 3.81 (m, 3H), 2.45 - 2.20 (m, 2H), 2.03 (m, 1H), 1.88 - 1.62 (m, 5H), 1.62 - 1.18 (m, 10H), 0.90 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.44, 3.47。LCMS：MS m/z= 715.2 [M+1]；713.2 [M-1]，t R= 1.35 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.28 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 5.528 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例230. 2-(((4aR,6S,7S,7aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4a-氰基-7-乙氧基-2-氧橋四氫-4H-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧雜次膦-2-基)氧基)苯甲酸乙酯
Figure 02_image1293
將實例224 (13 mg，0.026 mmol)溶解於1 mL THF中，向溶液中添加丙酸(12 mg，0.16 mmol)及DIC (13 mg，0.1 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (9 mg，0.07 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.02 (dt, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.66 (ddd, J = 8.9, 7.3, 1.8 Hz, 1H), 7.59 (dt, J = 8.3, 1.2 Hz, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 1H), 7.07 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.95 (dd, J = 5.7, 2.6 Hz, 1H), 5.92 - 5.85 (m, 2H), 5.01 - 4.86 (m, 2H), 4.38 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.52 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.39 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.6 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ -14.26。LCMS：MS m/z= 558.0 4 [M+1]，t R= 1.29 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.97 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例231. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-丁醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1295
向實例211 (44 mg，0.069 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中依序添加吡啶(0.055 mL，0.609 mmol)及丁醯氯(0.014 mL，0.137 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物2 h且藉由添加甲醇(0.1 mL)淬滅，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，且經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，並且與甲苯共蒸發若干次。將所得殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且添加濃HCl (0.1 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且在冰浴下添加NaHCO 3水溶液(2 mL)。混合物接著藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，5%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.91 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.35 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 7.15 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.56 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.65 (td, J = 8.5, 3.9 Hz, 1H), 4.57 (t, J= 4.9 Hz, 1H), 4.48 (d, J= 6.2 Hz, 2H), 4.44 - 4.29 (m, 3H), 4.13 (s, 1H), 3.90 (tq, J= 9.7, 7.1 Hz, 1H), 2.66 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.70 (qd, J= 13.0, 11.3, 7.4 Hz, 6H), 1.54 - 1.45 (m, 1H), 1.44 - 1.18 (m, 8H), 1.00 (t, J= 7.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.81。LCMS：MS m/z= 671.32 [M+1]；t R= 1.09 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.48 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例232. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-氰基-5-(4-十二醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1297
向實例211 (66 mg，0.103 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中依序添加吡啶(0.2 mL，2.483 mmol)及月桂醯氯(0.036 mL，0.155 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物3 h且藉由添加甲醇(0.1 mL)淬滅，用EtOAc稀釋，用水洗滌，且經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，溶解於ACN (2 mL)中，並且添加濃HCl (0.1 mL)。在室溫下攪拌所得混合物2 h，且在冰浴下添加NaHCO 3水溶液(2 mL)。反應混合物接著藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110 oA 250 × 30 mm管柱，5%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.88 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.35 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 3H), 7.15 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.55 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.66 (dt, J= 8.7, 4.5 Hz, 1H), 4.57 (t, J= 5.1 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 11.2, 6.9 Hz, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.90 (tq, J= 9.7, 7.1 Hz, 1H), 2.67 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.83 - 1.60 (m, 6H), 1.54 - 1.44 (m, 1H), 1.45 - 1.21 (m, 24H), 0.95 - 0.83 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.80。LCMS：MS m/z= 783.46 [M+1]；t R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 7.56 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例233. ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2-乙氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸乙酯
Figure 02_image1299
將實例29 (34 mg，0.063 mmol)溶解於DMF (3 mL)中，且在RT下在氬氣下添加對甲苯磺酸(21 mg，0.12 mmol)及原酸酯(461 mg，3.1 mmol)。攪拌溶液40 min，用AcOEt (50 mL)稀釋，用鹽水(4 × 20 mL)、飽和NaHCO 3水溶液(20 mL)洗滌，且真空蒸發溶劑。殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.83 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 7.2, 5.2 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 10.4, 6.1 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 10.4, 5.3 Hz, 1H), 4.10 (qt, J = 7.0, 3.6 Hz, 3H), 3.96 - 3.84 (m, 2H), 3.73 (dq, J = 9.3, 7.0 Hz, 1H), 1.29 (td, J = 6.5, 5.0 Hz, 6H), 1.24 - 1.11 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.18。LCMS：MS m/z= 603.00 [M+1]，t R= 1.27 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.951 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例234. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-氰基-3,4-二羥基-5-(4-異丁醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image1301
將中間物4 (100 mg，0.3 mmol)及((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯(根據WO2011123672製備，150 mg，0.33 mmol)混合且溶解於3 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(114 mg，1.2 mmol)。添加DIPEA (130 μL，0.75 mmol)，且在50℃下攪拌反應物6 h。添加更多((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯(50 mg)，且在50℃下攪拌反應物16 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用碳酸鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得中間物(60 mg，0.1 mmol)溶解於2 mL無水四氫呋喃中。添加異丁酸(14 µL，0.15 mmol)及 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(23 µL，0.15 mmol)，且攪拌反應混合物30 min。添加DMAP (12 mg，0.1 mmol)，且攪拌混合物2 h。接著將反應混合物加熱至50℃且攪拌3 h。添加更多異丁酸(14 µL)、 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(23 µL)及DMAP (12 mg)。接著在50℃下攪拌反應混合物18 h。接著添加甲醇(2 mL)，且攪拌所得混合物40 min。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(2 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-60%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (300 µL)，且在冰浴中攪拌3 h。反應混合物接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 8.18 (s, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.11 (m, 4H), 6.96 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.59 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.93 - 4.84 (m, 1H), 4.61 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 - 4.31 (m, 3H), 3.92 - 3.71 (m, 2H), 2.96 (p, J= 6.8 Hz, 1H), 1.30 - 1.20 (m, 12H), 1.09 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.32。LCMS：MS m/z= 631.2 [M+1]；629.4 [M-1]，t R= 1.24 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.01 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.900 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例235. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-2-氰基-3,4-二羥基-5-(4-異丁醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1303
將中間物4 (100 mg，0.3 mmol)及中間物74 (161 mg，0.36 mmol)混合且溶解於3 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(114 mg，1.2 mmol)。添加DIPEA (130 μL，0.75 mmol)，且在50℃下攪拌反應物18 h。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(2 × 20 mL)、碳酸鈉水溶液(2 × 20 mL)且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得中間物(55 mg，0.086 mmol)溶解於1 mL無水四氫呋喃中。添加異丁酸(24 µL，0.258 mmol)及 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(40 µL，0.258 mmol)，且攪拌反應混合物30 min。添加DIPEA (45 μL，0.258 mmol)，且在50℃下攪拌反應混合物72 h。添加甲醇(2 mL)且攪拌40 min。所得混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(2 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-70%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，且接著將其溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。接著逐滴添加濃HCl (水溶液) (300 µL)，且在冰浴中攪拌反應混合物3 h。反應混合物接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 8.18 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.11 (m, 4H), 6.96 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.59 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.70 - 4.57 (m, 2H), 4.47 - 4.31 (m, 3H), 3.93 - 3.71 (m, 2H), 2.96 (p, J= 6.8 Hz, 1H), 1.82 - 1.56 (m, 2H), 1.55 - 1.44 (m, 1H), 1.43 - 1.18 (m, 10H), 1.09 (d, J= 6.5 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.31。LCMS：MS m/z= 671.3 [M+1]；669.4 [M-1]，t R= 1.34 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.34 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 5.465 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例236. ((S)-(((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2-側氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image1305
將實例1 (55 mg，0.1 mmol)溶解於3 mL無水四氫呋喃中。一次性添加1,1'-羰基-二咪唑(24 mg，0.15 mmol)。添加DMAP (2.4 mg，0.02 mmol)，且攪拌反應混合物20 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且用鹽水(2 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.83 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 6.69 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.68 - 5.57 (m, 2H), 5.53 - 5.44 (m, 1H), 4.99 (p, J= 6.3 Hz, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 3H), 4.07 - 3.91 (m, 1H), 1.36 (d, J= 7.1Hz, 3H), 1.24 - 1.19 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ 2.67。LCMS：MS m/z= 587.1 [M+1]；585.3 [M-1]，t R= 1.26 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 2.99 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.971 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例237. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
Figure 02_image1307
將實例6 (100 mg，0.166 mmol)溶解於5 mL無水四氫呋喃中。添加三乙胺(24 µL，0.5 mmol)及TMSCl (63 µL，0.5 mmol)，且攪拌反應混合物1 h。添加更多三乙胺(70 µL)及TMSCl (60 µL)，且攪拌反應混合物16 h。減壓濃縮反應物，且將所得物質與無水四氫呋喃(3 mL)混合，並且在RT下攪拌。
將Boc-L-纈胺酸(54 mg，0.249 mmol)及 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(39 µL，0.249 mmol)混合且溶解於1 mL無水四氫呋喃中，且攪拌25 min。接著將此混合物添加至上述反應物中。添加三乙胺(70 µL)，且在RT下攪拌反應物2 h。將Boc-L-纈胺酸(54 mg，0.249 mmol)及 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(39 µL，0.249 mmol)混合且溶解於1 mL無水四氫呋喃中，且攪拌25 min。將所得混合物添加至反應物中。添加三乙胺(70 µL)，且在RT下攪拌反應物2 h。添加DMAP (40 mg)，且在RT下攪拌16 h。
將甲醇(2 mL)添加至反應物中且攪拌60 min。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(2 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (300 µL)。在冰浴中攪拌反應混合物2 h。逐滴添加更多濃HCl (水溶液) (200 µL)，且在冰浴中攪拌反應物2 h。添加飽和碳酸氫鹽水溶液，得到pH值8至9，且攪拌15 min。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。所得物質藉由使用0.1% TFA作為改質劑之製備型HPLC (5-98% MeCN/水)純化。合併含有所需產物之溶離份，用飽和碳酸氫鈉溶液中和，且用乙酸乙酯(15 mL)萃取。有機萃取物用鹽水(5 mL)洗滌，經無水硫酸鹽乾燥，且減壓濃縮。殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.87 (s, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.96 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 5.53 - 5.49 (m, 1H), 4.69 - 4.57 (m, 3H), 4.50 - 4.38 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.82 - 1.59 (m, 4H), 1.53 - 1.43 (m, 1H), 1.43 - 1.17 (m, 8H), 1.04 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 3.29, 3.30。LCMS：MS m/z= 700.2 [M+1]；698.4 [M-1]，t R= 1.28 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.31 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 5.282, 5.332 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例238. 特戊酸(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-5-氰基-4-羥基-5-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1309
在RT下將 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.11 mL，0.71 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(89.4 mg，0.73 mmol)添加至實例1 (41.3 mg，0.07 mmol)及特戊酸(76.5 mL，0.75 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。在60℃下20 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-70%乙腈/水梯度含0.1% TFA)，得到呈TFA鹽之產物。
第一溶離實例： 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 7.91 (s, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 4H), 6.88 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.61 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 5.53 (dd, J= 5.9, 3.4 Hz, 1H), 4.88 (p, J= 6.2 Hz, 1H), 4.75 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.43 (dd, J= 11.4, 7.3 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 11.4, 7.0 Hz, 1H), 4.25 (t, J= 11.0 Hz, 1H), 3.94 - 3.74 (m, 1H), 1.27 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.24 (s, 9H), 1.16 (dd, J= 6.3, 4.3 Hz, 6H)。 19F NMR (376 MHz, 乙腈- d 3) δ -77.08。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ 2.88。LCMS：MS m/z= 645.41 [M+1]，t R= 0.98 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.54 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例239. 特戊酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-4-羥基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1311
實例238之第二溶離實例： 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 7.95 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 4H), 6.91 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 5.49 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 5.40 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.90 (p, J= 6.3 Hz, 1H), 4.75 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 4.46 - 4.30 (m, 2H), 4.24 (t, J= 11.0 Hz, 1H), 3.94 - 3.78 (m, 1H), 1.29 (s, 9H), 1.27 (d, J= 7.0 Hz, 4H), 1.17 (dd, J= 6.3, 1.4 Hz, 7H)。 19F NMR (376 MHz, 乙腈- d 3) δ -77.06。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ 2.55。LCMS：MS m/z= 645.38 [M+1]，t R= 0.98 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.62 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例240. 異丁酸(2 S,3 R,4 S,5 R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-5-氰基-4-羥基-5-(((( S)-((( S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1313
在RT下將 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.037 mL，0.27 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(33 mg，0.27 mmol)添加至實例1 (150 mg，0.07 mmol)及異丁酸(24 mg，0.27 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。在RT下20 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-70%乙腈/水梯度含0.1% TFA)，得到呈TFA鹽之產物。
第一溶離實例： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.03 - 7.96 (m, 1H), 7.38 - 7.12 (m, 5H), 6.92 (q, J= 4.5 Hz, 1H), 5.66 (q, J= 4.0 Hz, 1H), 5.55 (p, J= 5.2 Hz, 1H), 4.83 (s, 11H), 4.72 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 2H), 3.83 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 2.69 (p, J= 7.2 Hz, 1H), 1.31 - 1.12 (m, 13H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.28。LCMS：MS m/z= 631.29 [M+1]，t R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.02；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6µ C18 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5.0 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。 實例241. 異丁酸(2 R,3 S,4 S,5 S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-4-羥基-2-(((( S)-((( S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1315
實例240之第二溶離實例： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.03 (s, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 3H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.96 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.50 (dd, J= 14.2, 6.3 Hz, 2H), 4.92 (dq, J= 12.8, 6.4 Hz, 2H), 4.78 (dd, J= 6.9, 5.7 Hz, 2H), 4.40 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 3.86 (dq, J= 10.1, 7.1 Hz, 1H), 2.75 (h, J= 7.0 Hz, 1H), 1.33 - 1.21 (m, 8H), 1.19 (dd, J= 6.2, 0.9 Hz, 5H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.20。LCMS：MS m/z= 631.29 [M+1]，t R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.13；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6µ C18 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5.0 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。 實例242. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3-羥基-4-(丙醯氧基)四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image1317
在RT下將 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.025 mL，0.178 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(22 mg，0.178 mmol)添加至實例1 (100 mg，0.178 mmol)及丙酸(13 mg，0.178 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。在RT下20 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-70%乙腈/水梯度含0.1% TFA)，得到呈TFA鹽之產物。
第一溶離實例： 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.92 (s, 1H), 7.32 (dd, J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.16 (dd, J= 16.6, 7.9 Hz, 3H), 6.93 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.08 (dd, J= 13.4, 10.1 Hz, 1H), 5.60 - 5.48 (m, 2H), 4.74 (p, J= 6.1 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.37 (dd, J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.18 (dd, J= 11.1, 4.5 Hz, 1H), 2.36 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 2.05 (s, 1H), 1.15 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.11 - 0.99 (m, 8H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6) δ -74.33。 31P NMR (162 MHz, DMSO- d 6) δ 3.29。LCMS：MS m/z= 617.31 [M+1]，t R= 0.89 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 7.14 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-19.0 min 2-95% ACN，19.0 min-20.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例243. ((S)-(((2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-4-羥基-3-(丙醯氧基)四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
Figure 02_image1319
實例242之第二溶離實例： 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 7.93 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.37 (dd, J= 8.6, 7.1 Hz, 3H), 7.27 - 7.17 (m, 5H), 7.10 - 7.01 (m, 2H), 6.90 - 6.82 (m, 2H), 5.49 (dd, J= 14.5, 5.9 Hz, 3H), 4.91 (p, J= 6.3 Hz, 2H), 4.75 (q, J= 6.5, 5.9 Hz, 2H), 4.47 - 4.22 (m, 6H), 2.54 (q, J= 7.5 Hz, 11H), 1.28 (dt, J= 7.4, 1.7 Hz, 5H), 1.23 - 1.09 (m, 15H), 1.02 (s, 1H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ 2.56。LCMS：MS m/z= 617.31 [M+1]，t R= 0.89 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 7.31 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-19.0 min 2-95% ACN，19.0 min-20.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例244. (2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)氧基)丙酸2-乙基丁酯
Figure 02_image1321
(S)-2- 羥基丙酸 2- 乙基丁酯 .將2-乙基丁醇(1.8 mL，15 mmol)溶解於12 mL苯中。一次性添加單水合對甲苯磺酸(190 mg，1.0 mmol)。將反應混合物在回流下攪拌30 min。一次性添加L-乳酸(900 mg，10 mmol)，且在回流下攪拌反應混合物16 h。接著將反應混合物冷卻，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)洗滌，接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-10%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 4.27 (q, J= 7.5 Hz, 1H), 4.19 - 4.03 (m, 2H), 2.82 (bs, 1H), 1.55 (m, 1H), 1.41 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.39 - 1.31 (m, 4H), 0.90 (t, J= 7.5 Hz, 6H)。
Figure 02_image1323
(2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 丙酸 2- 乙基丁酯 .將二氯磷酸苯酯(446 µL，3 mmol)溶解於10 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。2-將(S)-2-羥基丙酸乙基丁酯(532 mg，3 mmol)溶解於3 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應溶液中。攪拌反應混合物1 h。將三乙胺(920 µL，6.6 mmol)溶解於1 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16 h。將更多三乙胺(460 µL，3.3 mmol)添加至反應物中，且繼續攪拌3 h。一次性添加對硝基苯酚(376 mg，2.7 mmol)，且攪拌反應混合物4 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(12 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-15%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.31 - 8.18 (m, 2H), 7.50 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.11 (m, 3H), 5.18 - 5.04 (m, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 2H), 1.65 - 1.45 (m, 4H), 1.40 - 1.28 (m, 4H), 0.93 - 0.82 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 氯仿- d) δ -13.26, -13.67。LCMS：MS m/z= 452.0 [M+1]，t R= 1.60 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 4.50 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
Figure 02_image1325
(2S)-2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 丙酸 2- 乙基丁酯 .將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)氧基)丙酸2-乙基丁酯(81 mg，0.18 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.375 mmol)，且在35℃下攪拌反應物36 h。
反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(250 µL)。在冰浴中攪拌反應混合物2 h。接著用乙酸乙酯(10 mL)稀釋反應混合物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)。攪拌混合物10 min。有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(4 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ) δ 7.78 (m, 1H), 7.35 - 7.11 (m, 5H), 6.83 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.94 (m, 1H), 4.68 - 4.44 (m, 4H), 4.15 - 3.92 (m, 2H), 1.53 - 1.40 (m, 4H), 1.38 - 1.24 (m, 4H), 0.90 - 0.80 (m, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4 ) δ -8.40, -8.36。LCMS：MS m/z= 604.2 [M+1], 602.5 [M-1]，t R= 1.30 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t R= 3.12 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t R= 5.267, 5.299 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例245. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-羥基-2-(羥甲基)丙酯
Figure 02_image1327
將實例48 (100 mg，0.16 mmol)溶解於3 mL ACN中，將8 mL TFA與1 mL水混合，接著將該TFA溶液添加至上述反應混合物中，在RT下攪拌30 min，用NaHCO 3水溶液淬滅，用EtOAc萃取，蒸發有機溶劑，藉由製備型HPLC純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 13.8, 8.5, 7.0 Hz, 2H), 7.25 - 7.07 (m, 3H), 6.89 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 4.6, 0.9 Hz, 1H), 5.50 (dd, J = 5.1, 2.8 Hz, 1H), 4.62 (dt, J = 6.9, 5.3 Hz, 1H), 4.56 - 4.29 (m, 3H), 4.22 - 4.04 (m, 2H), 3.90 (dp, J = 9.2, 7.1 Hz, 1H), 3.65 - 3.49 (m, 4H), 1.96 (dp, J = 8.1, 5.9 Hz, 1H), 1.27 (dt, J = 7.3, 1.4 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.33, 3.31。LCMS：MS m/z= 607.10 [M+1]，t R= 0.93 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 3.30及3.34 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例246. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸環己基甲酯
Figure 02_image1329
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸環己基甲酯 .將(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(7.954 g，0.042 mol)溶解於乙腈(90 mL)中，且添加環己基甲醇(4.0 g，0.035 mol)，接著一次性添加EDCI (7.069 g，0.046 mol)及DMAP (6.419 g，0.053 mol)。在室溫下攪拌4 h。用二氯甲烷及水稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.01 - 3.83 (m, 2H), 3.77 (dd, J = 10.7, 6.3 Hz, 1H), 1.69 - 1.59 (m, 5H), 1.35 (s, 9H), 1.18 (dd, J = 24.2, 8.9 Hz, 7H), 0.92 (q, J = 11.5 Hz, 2H)。
Figure 02_image1331
氯化 (S)-1-( 環己基甲氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸環己基甲酯(6.5 g，0.023 mol)溶解於無水二氯甲烷(50 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(17.08 mL，0.068 mol)中。在環境溫度下攪拌4 h。減壓濃縮且與二氯甲烷共蒸發。在高真空下放置隔夜，且中間物不經純化按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.55 (s, 3H), 4.10 - 3.88 (m, 3H), 1.71 - 1.53 (m, 5H), 1.40 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.27 - 1.07 (m, 4H), 0.95 (q, J= 11.9 Hz, 2H)。
Figure 02_image1333
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸環己基甲酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向氯化(S)-1-(環己基甲氧基)-1-側氧基丙-2-銨(2.0 g，9.02 mmol)及二氯磷酸苯酯(1.342 mL，9.02 mmol)於無水二氯甲烷(35 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.8 mL，2.78 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物2 h。接著添加4-硝基苯酚(1.255 g，9.02 mmol)及三乙胺(1.4 mL，1.39 mmol)。在0℃下攪拌2 h後，用Et 2O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到中間物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 - 8.25 (m, 2H), 7.53 - 7.34 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 6.68 (dt, J = 13.7, 9.8 Hz, 1H), 4.06 - 3.91 (m, 1H), 3.78 (dd, J = 6.5, 3.1 Hz, 2H), 1.59 (d, J = 11.0 Hz, 5H), 1.25 - 0.97 (m, 7H), 0.87 (t, J = 11.3 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ -1.25, -1.50。LCMS：MS m/z= 463.10 [M+1]；t R= 1.68 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1335
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸環己基甲酯 .在室溫下向中間物4 (0.05 g，0.151 mmol)、中間物((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己基甲酯(0.077 g，0.166 mmol)及氯化鎂(0.022 g，0.226 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.049 mL，0.377 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(2 mL)中，並且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.1 mL，1.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2 h。2 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.37 - 7.17 (m, 3H), 7.16 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.84 (dd, J = 4.5, 2.0 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 4.5, 1.9 Hz, 1H), 5.49 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 3H), 3.95 - 3.70 (m, 3H), 1.65 (q, J = 11.2, 10.5 Hz, 5H), 1.30 - 1.13 (m, 7H), 0.97 - 0.85 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25, 3.23。LCMS：MS m/z= 615.19 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.135 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (AD-H 5μm 21 × 250mm，庚烷70%，乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1337
實例 247.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.38 - 7.22 (m, 2H), 7.20 - 7.09 (m, 3H), 6.91 - 6.79 (m, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 Hz, 1H), 4.00 - 3.76 (m, 3H), 1.68 (d, J = 12.1 Hz, 5H), 1.41 - 1.03 (m, 7H), 0.93 (q, J = 10.1, 8.6 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。LCMS：MS m/z= 615.20 [M+1]；t R= 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.13 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 248.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.5, 7.1 Hz, 2H), 7.26 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 - 4.24 (m, 3H), 4.02 - 3.58 (m, 3H), 1.79 - 1.44 (m, 5H), 1.33 - 1.04 (m, 7H), 0.89 (q, J = 12.1 Hz, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。LCMS：MS m/z= 615.20 [M+1]；t R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.144 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例249. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(吡啶-3-基氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
Figure 02_image1339
((4- 硝基苯氧基 )( 吡啶 -3- 基氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸甲酯 .在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(503 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(273 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘之後，在0℃下依序添加3-吡啶酚(188 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.53 (m, 1H), 8.43 (dq, J= 4.8, 1.3 Hz, 1H), 8.39 -8.07 (m, 2H), 7.79- 7.32 (m, 4H), 4.17 - 3.95 (m, 1H), 3.72 - 3.57 (m, 3H), 1.41 - 1.26 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ -0.86, -0.96。LCMS：MS m/z= 382.15 [M+1]，t R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1341
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 吡啶 -3- 基氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸甲酯 .在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.76 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)添加至中間物4 (100.0 mg，0.30 mmol)及((4-硝基苯氧基)(吡啶-3-基氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯(171 mg，0.45 mmol)於四氫呋喃(7.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.53 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(7.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(75 mL)及鹽水(75 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 乙腈- d 3) δ 8.60 (s, 1H), 8.39 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 8.24 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 2H), 7.81 (dd, J= 8.8, 5.6 Hz, 2H), 7.26 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 5.50 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.56 - 4.35 (m, 4H), 4.10 (q, J= 7.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.63 (s, 1H), 1.53-1.30 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 乙腈- d 3) δ 3.90。LCMS：MS m/z= 534.15 [M+1]，t R= 0.81 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 2.82 min，HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。 實例250. 異丁酸(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-5-氰基-4-羥基-5-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯
Figure 02_image1343
將實例39 (54 mg，0.1 mmol)溶解於2 mL無水四氫呋喃中。添加異丁酸(37 µL，0.4 mmol)及 N,N'-二異丙基碳化二亞胺(62 µL，0.4 mmol)，且攪拌反應混合物30 min。添加DMAP (12 mg，0.1 mmol)，且攪拌反應混合物16 h。添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌反應混合物20 min。反應混合物藉由不含酸改質劑之製備型HPLC (5-100% MeCN/水)純化。合併含有所需產物之溶離份且用乙酸乙酯(15 mL)萃取。有機萃取物用鹽水(2 × 10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到單異丁酸酯及雙異丁酸酯之混合物。
單異丁酸酯產物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-70%乙腈/水梯度含0.1% TFA)，得到呈三氟乙酸鹽之產物。 1H NMR (400 MHz, CD 3CN) δ 7.93 (s, 1H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 4H), 6.89 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 5.57 (dd, J = 5.8, 3.8 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.49 - 4.26 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.68 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 1.30 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.20 (dd, J = 8.3, 7.0 Hz, 6H)。 31P NMR (162 MHz, CD 3CN) δ 2.72 ppm。LCMS：MS m/z= 603.21 [M+1]，t R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 4.61；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6µ C18 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5.0 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。 實例251. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸3,3-二甲基丁酯
Figure 02_image1345
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯 .將(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(22.38 g，0.118 mol)溶解於乙腈(100 mL)中，且添加3,3-二甲基丁-1-醇(10.07 g，0.099 mol)，接著一次性添加EDCI (19.89 g，0.128 mol)及DMAP (18.06 g，0.148 mol)。在室溫下攪拌4 h。用二氯甲烷及水稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-25%乙酸乙酯/己烷)純化，得到化合物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.22 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.13 - 3.82 (m, 3H), 1.47 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.19 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.88 (s, 9H)。
Figure 02_image1347
氯化 (S)-1-(3,3- 二甲基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸3,3-二甲基丁酯(20.9 g，0.076 mol)溶解於無水二氯甲烷(200 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(95.57 mL，0.382 mol)中。在環境溫度下攪拌4 h。減壓濃縮且與二氯甲烷共蒸發。在高真空下放置隔夜，且化合物不經純化按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (s, 3H), 4.32 - 4.07 (m, 2H), 3.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.52 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.39 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (s, 9H)。
Figure 02_image1349
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向氯化(S)-1-(3,3-二甲基丁氧基)-1-側氧基丙-2-銨(15.93 g，75.96 mmol)及二氯磷酸苯酯(11.3 mL，75.96 mmol)於無水二氯甲烷(300 mL)中之溶液中添加三乙胺(23.5 mL，167.1 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(10.57 g，75.96 mmol)及三乙胺(11.74 mL，83.56 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et 2O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，之後0-35%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.53 - 7.34 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 6.66 (td, J = 13.2, 10.0 Hz, 1H), 4.06 - 3.88 (m, 3H), 1.40 - 1.29 (m, 2H), 1.24 - 1.11 (m, 3H), 0.83 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ -1.26, -1.57。LCMS：MS m/z= 450.96 [M+1]；t R= 1.71 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1351
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 3,3- 二甲基丁酯 .在室溫下向中間物4 (0.05 g，0.151 mmol)、中間物((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3,3-二甲基丁酯(0.078 g，0.174 mmol)及氯化鎂(0.029 g，0.302 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(0.75 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.066 mL，0.377 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO 2管柱層析(40 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷 - 14%甲醇/二氯甲烷)純化。收集所獲得之純溶離份且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(2 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.3 mL，3.6 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用3 N氫氧化鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.12 (m, 5H), 6.84 (dd, J = 4.5, 2.8 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 4.5, 2.0 Hz, 1H), 5.50 (t, J = 4.7 Hz, 1H), 4.62 (q, J = 5.6 Hz, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 3H), 4.11 (s, 1H), 4.15 - 3.99 (m, 1H), 3.93 - 3.81 (m, 1H), 1.49 (dt, J = 12.0, 7.5 Hz, 2H), 1.29 - 1.21 (m, 3H), 0.89 (d, J = 7.9 Hz, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.25。LCMS：MS m/z= 603.08 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.02 min (次要異構體), 5.039 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .實例251經由對掌性製備型HPLC (AD-H 5μm 21 × 250mm，庚烷70%，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1353
實例 252.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.19 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.43 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 Hz, 1H), 4.16 - 4.06 (m, 2H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 1.55 - 1.46 (m, 2H), 1.34 - 1.22 (m, 3H), 0.90 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。LCMS：MS m/z= 603.06 [M+1]；t R= 1.20 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.024 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 253.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.4, 7.3 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.48 - 4.30 (m, 3H), 4.15 - 3.97 (m, 2H), 3.88 (dd, J = 9.9, 7.1 Hz, 1H), 1.47 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.0 Hz, 3H), 0.88 (s, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。LCMS：MS m/z= 603.09 [M+1]；t R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.045 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例254. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸2,2-二甲基丁酯
Figure 02_image1355
( 三級丁氧基羰基 )- L- 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯 .將(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(11.11 g，0.059 mol)溶解於乙腈(60 mL)中，且添加2,2-二甲基丁-1-醇(5.0 g，0.049 mol)，接著一次性添加EDCI (9.876 g，0.064 mol)及DMAP (8.967 g，0.073 mol)。在室溫下攪拌4 h。用二氯甲烷及水稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析(0-20%乙酸乙酯/己烷)純化，得到化合物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.26 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.99 (p, J = 7.4 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 3.66 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.29 (d, J = 18.5 Hz, 3H), 0.84 - 0.72 (m, 11H).
Figure 02_image1357
氯化 (S)-1-(2,2- 二甲基丁氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 銨 .T將(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸2,2-二甲基丁酯(10.34 g，0.038 mol)溶解於無水二氯甲烷(100 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(47.28 mL，0.189 mol)中。在環境溫度下攪拌4 h。減壓濃縮，且與二氯甲烷共蒸發。在高真空下放置隔夜，且化合物不經純化按原樣用於下一步驟。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (s, 3H), 4.05 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.42 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.26 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 0.87 - 0.73 (m, 9H)。
Figure 02_image1359
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向氯化(S)-1-(2,2-二甲基丁氧基)-1-側氧基丙-2-銨(7.9 g，37.67 mmol)及二氯磷酸苯酯(5.605 mL，37.67 mmol)於無水二氯甲烷(150 mL)中之溶液中添加三乙胺(11.64 mL，82.87 mmol)。在0℃下攪拌所得混合物1 h。接著添加4-硝基苯酚(5.24 g，37.67 mmol)及三乙胺(5.82 mL，41.43 mmol)。在0℃下攪拌1 h後，用Et 2O稀釋反應混合物，且濾出固體。將粗產物減壓濃縮，且藉由矽膠層析(80 g SiO 2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷，之後0-35%乙酸乙酯/己烷)純化，得到化合物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.52 - 7.34 (m, 4H), 7.31 - 7.18 (m, 3H), 4.15 - 4.02 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 2H), 1.39 - 1.28 (m, 3H), 1.32 - 1.19 (m, 2H), 0.89 - 0.76 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ -1.35, -1.57。LCMS：MS m/z= 450.94 [M+1]；t R= 1.71 min ；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Figure 02_image1361
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 2,2- 二甲基丁酯 .在室溫下向中間物4 (0.05 g，0.151 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸2,2-二甲基丁酯(0.078 g，0.174 mmol)及氯化鎂(0.029 g，0.302 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(0.75 mL)，接著添加 N,N-二異丙基乙胺(0.066 mL，0.377 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物1.5 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及乙酸乙酯稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。將所獲得殘餘物溶解於無水乙腈(1 mL)中且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.1 mL，1.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.40 - 7.08 (m, 5H), 6.87 - 6.80 (m, 1H), 6.75 - 6.70 (m, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.61 (dt, J = 7.7, 5.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.26 (m, 3H), 3.98 - 3.73 (m, 2H), 3.66 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 1.33 - 1.17 (m, 5H), 0.92 - 0.72 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.26。LCMS：MS m/z= 603.10 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.026 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .實例254經由對掌性製備型HPLC (IE SFC 5μm 21×250mm，庚烷70%，乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1363
實例 255.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.60 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 3H), 3.93 (dd, J = 10.0, 7.1 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 3.66 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 1.32 - 1.20 (m, 5H), 0.82 (s, 6H), 0.85 - 0.74 (m, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.27。LCMS：MS m/z= 603.06 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.013 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 256.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 15.3, 5.6 Hz, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.99 - 3.87 (m, 1H), 3.84 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 3.77 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 1.34 - 1.23 (m, 5H), 0.89 - 0.77 (m, 9H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.26。LCMS：MS m/z= 603.06 [M+1]；t R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t R= 5.007 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例257. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1-甲基環丙基)甲酯
Figure 02_image1365
( 三級丁氧基羰基 )- L- 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯 .在氬氣氛圍下將1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.22 g，6.36 mmol)添加至(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(1.00 g，5.29 mmol)於10 mL乙腈中之溶液中。15分鐘後，添加4-(二甲基胺基)-吡啶(0.71 g，5.81 mmol)，接著添加(1-甲基環丙基)甲醇(0.51 mL，5.29 mmol)。在室溫下攪拌反應物2 h。反應物用乙酸乙酯稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 10 mL)洗滌。有機物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)、水(5 mL)、接著鹽水(10 mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。殘餘物藉由矽膠層析(0-10%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 5.06 (s, 1H), 4.49 - 4.28 (m, 1H), 4.05 - 3.83 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.40 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.12 (s, 3H), 0.53 - 0.43 (m, 2H), 0.41 - 0.32 (m, 2H)。
Figure 02_image1367
L - 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯鹽酸鹽 .在0℃下將鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，3.7 mL，14.80 mmol)添加至(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(1-甲基環丙基)甲酯(1.85 g，7.19 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中。1 h後，濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(10 mL)中並濃縮(2×)。產物不經進一步純化即用於下一反應。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.81 (s, 3H), 4.31 - 4.17 (m, 1H), 4.06 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 3.94 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 1.75 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 1.13 (s, 3H), 0.53 - 0.46 (m, 2H), 0.45 - 0.36 (m, 2H)。
Figure 02_image1369
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯 .在0℃下，將二氯磷酸苯酯(0.82 mL，5.45 mmol)及三乙胺(1.58 mL，11.36 mmol)依序添加至 L-丙胺酸(1-甲基環丙基)甲酯鹽酸鹽(880 mg，4.54 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.63 g，4.54 mmol)及三乙胺(0.79 mL，5.8 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。2.5 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ 8.34 - 8.27 (m, 2H), 7.55 - 7.37 (m, 4H), 7.31 - 7.17 (m, 3H), 6.78 - 6.65 (m, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 2H), 1.31 - 1.21 (m, 3H), 1.02 (d, J= 1.5 Hz, 3H), 0.49 - 0.37 (m, 2H), 0.35 - 0.23 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ -1.25, -1.44。LCMS：MS m/z= 433.02 [M-1]，t R= 1.75 min (次要), 1.77 (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image1371
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1- 甲基環丙基 ) 甲酯 .在RT下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸(1-甲基環丙基)甲酯(68.17 mg，0.16 mmol)及氯化鎂(17.24 mg，0.18 mmol)之混合物中。在RT下攪拌混合物20 min。添加 N,N-二異丙基乙胺(0.053 mL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h，將反應混合物冷卻至RT，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。在0℃下將鹽酸水溶液(0.1 mL)逐滴添加至殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物。LCMS：MS m/z= 586.93 [M+1]，t R= 1.39 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 ×4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H 5 μm，250 × 21 mm，水70%，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1373
實例 258.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.95 (s, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 3H), 7.21 - 7.13 (m, 3H), 6.91 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.61 - 4.54 (m, 1H), 4.51 - 4.44 (m, 2H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 4.01 - 3.85 (m, 3H), 1.37 - 1.30 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.52 - 0.45 (m, 2H), 0.38 - 0.32 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.32。LCMS：MS m/z= 586.93 [M+1]，t R= 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.75 min; Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 259.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.01 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 3H), 7.27 - 7.16 (m, 3H), 6.93 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.56 - 4.52 (m, 1H), 4.45 - 4.34 (m, 3H), 4.00 - 3.88 (m, 2H), 3.79 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 1.37 - 1.30 (m, 3H), 1.08 (s, 3H), 0.45 (t, J= 2.8 Hz, 2H), 0.36 - 0.27 (m, 2H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.27。LCMS：MS m/z= 586.93 [M+1]，t R= 1.39 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.77 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例260. ((((2 R,3 S,4 R,5 S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1- f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯
Figure 02_image1375
( 三級丁氧基羰基 )- L- 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯 .在氬氣氛圍下將1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.43 g，12.69 mmol)添加至(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸(2.00 g，10.57 mmol)於10 mL乙腈中之溶液中。15 min後，添加4-(二甲基胺基)-吡啶(1.42 g，11.62 mmol)，接著添加3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙-1-醇(1.69 mL，10.55 mmol)。在RT下攪拌反應物2 h。反應物用乙酸乙酯稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 10 mL)洗滌。有機物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)、水(5 mL)、接著鹽水(10 mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由矽膠層析(0-10%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ 7.32 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 4.15 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.25 (d, J= 7.3 Hz, 3H), 1.13 - 1.09 (m, 6H)。
Figure 02_image1377
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯 .將含4 M鹽酸之1,4-二㗁烷(10 mL，40.00 mmol)添加至(三級丁氧基羰基)- L-丙胺酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯(1.88 g，6.00 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中。1 h後，濃縮反應物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(15 mL)中且冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(1.07 mL，7.21 mmol)及三乙胺(1.83 mL，13.22 mmol)。1 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.836 g，6.00 mmol)及三乙胺(0.92 mL，7.00 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2.5 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。 1H NMR (400 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ 8.30 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.56 - 7.36 (m, 4H), 7.35 - 7.16 (m, 3H), 6.85 - 6.64 (m, 1H), 4.18 - 3.94 (m, 3H), 1.30 - 1.23 (m, 3H), 1.10 (s, 6H)。 31P NMR (162 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ -1.29, -1.46。 19F NMR (376 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ -76.19, -76.19。
Figure 02_image1379
((((2 R,3 S,4 R,5 S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1- f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸 3,3,3- 三氟 -2,2- 二甲基丙酯 .在室溫下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (59 mg，0.18 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯(113.52 mg，0.23 mmol)及氯化鎂(25.43 mg，0.27 mmol)之混合物中。攪拌混合物20 min。添加 N,N-二異丙基乙胺(77.54 µL，0.44 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h，將反應混合物冷卻至室溫，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。在0℃下將鹽酸水溶液(0.1 mL，12 M)逐滴添加至殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物。LCMS：MS m/z= 642.97 [M+1]，t R= 1.46 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC IA 5 µm，250 × 21 mm，水70%，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1381
實例 261.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.98 (s, 1H), 7.39 - 7.24 (m, 3H), 7.20 - 7.14 (m, 3H), 6.94 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.54 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.58 - 4.53 (m, 1H), 4.50 - 4.43 (m, 2H), 4.43 - 4.36 (m, 1H), 4.16 (d, J= 11.5 Hz, 1H), 4.06 (d, J= 11.5 Hz, 1H), 4.03 - 3.91 (m, 1H), 1.38 - 1.33 (m, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.15 (s, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.24。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -78.75。LCMS：MS m/z= 642.97 [M+1]，t R= 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.92 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 262.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 8.02 (s, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 3H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.95 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.55 - 4.50 (m, 1H), 4.43 - 4.33 (m, 3H), 4.13 (d, J= 11.5 Hz, 1H), 4.00 - 3.92 (m, 2H), 1.33 (d, J= 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.11 (s, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.19。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -78.79。LCMS：MS m/z= 642.97 [M+1]，t R= 1.40 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.91 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例263. ((((2 R,3 S,4 R,5 S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1- f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(三級丁基)苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸乙酯
Figure 02_image1383
((4-( 三級丁基 ) 苯氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸乙酯 .在氬氣氛圍下在-78℃下，向氯氧化磷(V) (0.61 mL，6.52 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加 L-丙胺酸乙酯(1.00 g，6.52 mmol)。緩慢逐滴添加三乙胺(2.00 mL，14.35 mmol)。15 min後，將反應物升溫至0℃。30分鐘後，將反應物冷卻至-78℃，且添加4-三級丁基苯酚(0.98 g，6.52 mmol)。添加三乙胺(0.91 mL，6.52 mmol)。使反應物升溫至室溫且攪拌3 h。將反應物冷卻至0℃。添加4-硝基苯酚(0.91 g，6.52 mmol)，接著逐滴添加三乙胺(0.91 mL，6.52 mmol)。使反應物升溫至RT且攪拌2 h。反應物用乙酸乙酯稀釋，且用氯化銨、水、鹽水洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。產物藉由矽膠層析(0-50%乙酸乙酯/己烷)分離。 1H NMR (400 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ 8.31 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.57 - 7.36 (m, 4H), 7.24 - 7.09 (m, 2H), 6.76 - 6.57 (m, 1H), 4.12 - 3.77 (m, 3H), 1.30 - 1.21 (m, 12H), 1.11 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 二甲亞碸- d 6) δ -1.16, -1.24。LCMS：MS m/z= 451.00 [M+1]，t R= 1.84 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
Figure 02_image1385
((((2 R,3 S,4 R,5 S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1- f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(4-( 三級丁基 ) 苯氧基 ) 磷醯基 )- L- 丙胺酸乙酯 .在RT下將四氫呋喃(0.5 mL)添加至中間物4 (40 mg，0.12 mmol)、((4-(三級丁基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)- L-丙胺酸乙酯(70.69 mg，0.16 mmol)及氯化鎂(17.24 mg，0.18 mmol)之混合物中。在RT下攪拌混合物20 min。添加 N,N-二異丙基乙胺(52.57 µL，0.30 mmol)。將反應物加熱至50℃後保持2 h，將反應混合物冷卻至RT，且用乙酸乙酯(2 mL)稀釋。有機物用水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。在0℃下將鹽酸水溶液(0.1 mL，12 M)逐滴添加至殘餘物於乙腈(2 mL)中之溶液中。1 h後，用乙酸乙酯(5 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。殘餘物藉由HPLC層析(Phenomenex Gemini 5 µm C18 110 Å，100 × 30 mm，5-100%乙腈/水)純化，得到產物。LCMS：MS m/z= 602.97 [M+1]，t R= 1.44 min (次要), 1.46 min (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H 5 µm，250 × 21 mm，水70%，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
Figure 02_image1387
實例 264.第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.95 (s, 1H), 7.39 - 7.36 (m,2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.89 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.53 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.57 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 4.46 - 4.32 (m, 3H), 4.12 - 4.01 (m, 2H), 3.93 - 3.84 (m, 1H), 1.33 - 1.26 (m, 12H), 1.19 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.47。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -77.75。LCMS：MS m/z= 602.97 [M+1]，t R= 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.98 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 實例 265.第二溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d4) δ 8.00 (s, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 3H), 7.13 - 7.05 (m, 2H), 6.94 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 5.55 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.60 - 4.53 (m, 1H), 4.50 - 4.43 (m, 2H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 4.12 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 3.94 - 3.82 (m, 1H), 1.34 - 1.26 (m, 12H), 1.22 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 31P NMR (162 MHz, 甲醇- d 4) δ 3.47。 19F NMR (376 MHz, 甲醇- d 4) δ -77.64。LCMS：MS m/z= 602.97 [M+1]，t R= 1.40 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t R= 2.94 min；Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。 C. 生物學實例 實例 266. DENV Pol IC50
在DENV2-NS5聚合酶分析中，具有序列5'-(UCAG)20(UCCAAG)14(UCAG)20 (SEQ ID NO: 1) -3'之244個核苷酸二級無結構雜聚RNA (sshRNA)用作具有5'-CUG-3'引子之模板。將自200 nM開始的六種化合物兩倍稀釋液及無抑制劑對照物接種於96孔盤中。在室溫下將100 nM DENV2 NS5在含有40 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM NaCl、3 mM DTT、0.2單位/微升RNasin加RNase抑制劑、200 ng/µL sshRNA、20 μM CUG及2 mM MgCl 2之反應混合物中預培育5分鐘。將酶混合物添加至化合物稀釋液中，且藉由添加含有20 µM三種天然NTP加上2 μM含有1:100 α-33P-NTP之類似物:鹼基配對競爭性天然NTP的混合物來起始反應。在30℃下90分鐘之後，將5 µL反應混合物點樣於DE81陰離子交換紙上。過濾紙用Na 2HPO 4(125 mM，pH 9)洗滌三次，持續5分鐘，用水及乙醇沖洗，隨後風乾且暴露於磷光成像儀。合成RNA使用Typhoon Trio成像儀及Image Quant TL軟體定量，且使用GraphPad Prism 5.0藉由線性回歸計算反應速率。使用劑量-反應(可變斜率)方程式(四參數對數方程式)，藉由非線性回歸分析在Prism中計算IC50值：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC 50-X)*HillSlope))。 實例 267. RSV RNP 製備
根據自Mason等人(1)修改之方法製備RSV核糖核蛋白(RNP)複合物。以7.1 × 10 4個細胞/平方公分之密度將HEp-2細胞接種於MEM + 10%胎牛血清(FBS)中，且使其在37℃ (5% CO 2)下附著隔夜。在附著之後，在35 mL MEM + 2% FBS中用RSV A2 (MOI=5)感染細胞。感染後20小時，用補充有2 μg/mL放線菌素D之MEM + 2% FBS更換培養基，且返回37℃持續一小時。細胞隨後用PBS洗滌一次且用35 mL PBS + 250 μg/mL溶血卵磷脂處理一分鐘，其後抽吸所有液體。藉由將細胞刮削至1.2 mL緩衝液A [50 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、100 mM乙酸鉀、1 mM DTT及2 μg/mL放線菌素D]中收集細胞，且藉由重複通過18號針頭(10次)使其溶解。將細胞溶解物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。移除上清液(S1)，且藉由重複通過18號針頭(10次)使沈澱物(pellet) (P1)在600 μL補充有1% Triton X-100之緩衝液B [10 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、10 mM乙酸鉀及1.5 mM MgCl 2]中破碎。將再懸浮的沈澱物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。移除上清液(S2)，且使沈澱物(P2)在600 μL補充有0.5%去氧膽酸鹽及0.1% Tween 40之緩衝液B中破碎。將再懸浮的沈澱物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。收集含有富集的RSV RNP複合物之上清液(S3)溶離份，且藉由280 nm下之UV吸光度測定蛋白質濃度。將等分的RSV RNP S3溶離份儲存在-80℃下。 實例 268. RSV RNP 分析
轉錄反應含有含25 μg粗RSV RNP複合物之30 μL反應緩衝液[50 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、120 mM乙酸鉀、5%丙三醇、4.5 mM MgCl 2、3 mM DTT、2 mM乙二醇-雙(乙醚)-四乙酸(EGTA)、50 μg/mL BSA、2.5 U RNasin (Promega)、ATP、GTP、UTP、CTP及1.5 uCi [α-32P] NTP (3000 Ci/mmol)]。選擇在轉錄分析中使用之放射性標記核苷酸以匹配針對RSV RNP轉錄之抑制進行評估的核苷酸類似物。冷的競爭性NTP以二分之一其Km之最終濃度添加(ATP = 20 μM、GTP = 12.5 μM、UTP = 6 μM且CTP = 2 μM)。三種其餘核苷酸以100 μM之最終濃度添加。
為了判定核苷酸類似物是否抑制RSV RNP轉錄，使用6步連續稀釋以5倍增量添加化合物。在30℃下培育90分鐘之後，用350 μL Qiagen RLT溶解緩衝液停止RNP反應，且使用Qiagen RNeasy 96套組純化RNA。純化後的RNA在RNA樣品加樣緩衝液(Sigma)中在65℃下變性10分鐘，且在含有2 M甲醛之1.2%瓊脂糖/MOPS凝膠上進行。將瓊脂糖凝膠乾燥並暴露於Storm磷光成像儀螢幕，且使用Storm磷光成像儀(GE Healthcare)顯影。藉由兩次重複實驗之非線性回歸分析計算將總放射性標記轉錄物減少50%之化合物濃度(IC 50)。 實例 269. DENV-2 moDC EC50
人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)係衍生自在含有GM-CSF及IL-4之人類Mo-DC分化培養基(Miltenyi Biotec)中培養的CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破碎收集moDC，洗滌，且將其懸浮於無血清RPMI中。在37℃下在輕緩攪拌下，moDC在無血清RPMI中用Vero衍生之登革熱2型新幾內亞病毒株(New Guinea strain；NGC)以MOI = 0.1感染兩小時。洗滌細胞，且將其再懸浮於含10%血清之RPMI (Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素)中。一式三份地將10^5個細胞接種於96孔盤中，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。在48小時時，將細胞用1× PBS洗滌且移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)提取總RNA，且使用總RNA使用XLT cDNA 5×超混合液(QuantaBio)產生第一股cDNA。cDNA用作對DENV2病毒及GAPDH基因表現具有特異性之Taqman qPCR雙螺旋反應中之模板。使用Prism Graphpad軟體測定EC 50值，相對於陽性對照及無化合物陰性對照孔正規化。 實例 270. moDC CC50
人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)係衍生自在含有GM-CSF及IL-4之人類Mo-DC分化培養基(Miltenyi Biotec)中培養的CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破碎收集moDC，洗滌，且一式三份地在96孔盤中以1×10^5至5×10^4個細胞/孔進行培養，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。48小時後，添加CellTiter Glo (Promega)且在室溫下培育10分鐘，隨後在光度計上讀數。針對無化合物及無細胞對照孔計算活力%曲線。使用Prism Graphpad軟體測定CC 50值。 實例 271. DENV-2 Huh-7 EC50
Huh7 (人類肝癌7)細胞維持於含有10% FCS之DMEM完全培養基中。在分析當天，將細胞胰蛋白酶化(0.1% 胰蛋白酶-EDTA)，洗滌，且在37℃下在輕緩攪拌下，在無血清DMEM中用登革熱血清型2新幾內亞C (NGC)病毒株以MOI = 0.1感染2小時。2小時後，將細胞用無血清培養基洗滌，且懸浮於含有10% FCS之DMEM (Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素)中。一式三份地將10^5個細胞接種於96孔盤中，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。在48小時時，將細胞用1× PBS洗滌且移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)提取總RNA，且使用總RNA使用XLT cDNA 5×超混合液(QuantaBio)產生第一股cDNA。cDNA用作對DENV2病毒及GAPDH基因表現具有特異性之Taqman qPCR雙螺旋反應中之模板。使用Prism Graphpad軟體測定EC 50值，相對於陽性對照及無化合物陰性對照孔正規化。 實例 272. Huh-7 CC50
人類肝癌7 (Huh7)細胞維持於含有10% FCS之完全DMEM中。^在分析當天，將細胞用0.1%胰蛋白酶-EDTA胰蛋白酶化，洗滌，且一式三份地在96孔盤中以1-2×104個細胞/孔進行培養，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。48小時後，添加CellTiter Glo (Promega)且在室溫下培育10分鐘，隨後在光度計上讀數。針對無化合物及無細胞對照孔計算活力%曲線。使用Prism Graphpad軟體測定CC 50值。 實例 273. RSV HEp-2 EC50
在HEp-2細胞中使用感染性細胞病變細胞保護分析來測定針對RSV之抗病毒活性。在此分析中，抑制病毒感染及/或複製之化合物產生對抗病毒誘導之細胞殺滅的細胞保護作用，其可使用細胞活力試劑定量。此處使用之技術為公開文獻(Chapman等人, Antimicrob Agents Chemother. 2007, 51(9):3346-53)中所描述方法之新穎修改。
HEp-2細胞獲自ATCC (Manassas，VI)，且維持於補充有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之MEM培養基中。細胞一週傳代兩次，且保持在近匯合階段。在化合物測試之前滴定RSV病毒株A2 (Advanced Biotechnologies，Columbia，MD)之市售儲備液，以測定在HEp-2細胞中產生所需細胞病變效應的病毒儲備液之適當稀釋。
對於抗病毒測試，HEp-2細胞在大細胞培養燒瓶中生長至接近匯合，但並未完全匯合。以8或40樣品/盤標準化劑量反應形式，在384孔化合物稀釋盤中將待測試化合物預稀釋於DMSO中。在盤中製備各測試化合物之3倍連續遞增稀釋液，且經由聲學轉移設備(Echo，Labcyte)以每孔100 nL將測試樣品轉移至細胞培養物分析384孔盤中。將各化合物稀釋液以單一或一式四份樣品之形式轉移至乾分析盤中，其經儲存直至準備好進行分析。陽性及陰性對照相對地置放在盤之豎直區塊(1行)之末端上。
隨後，使用先前藉由用50,000/ml密度之細胞滴定所測定的病毒儲備液之適當稀釋液製備感染性混合物，且經由自動化(uFlow，Biotek)以20微升/孔添加至具有化合物之測試盤中。各盤包括陰性及陽性對照(各16個複本)以分別產生0%及100%病毒抑制標準。在感染RSV之後，將測試盤在37℃細胞培養培育箱中培育4天。在培育之後，將細胞活力試劑Cell TiterGlo (Promega，Madison，WI)添加至簡單培育之分析盤中，且量測(Envision，Perkin Elmer)所有分析盤中之發光讀數。根據剩餘細胞活力之水準測定RSV誘導之細胞病變效應(抑制百分比)。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算此等數值，且藉由非線性回歸測定各化合物之EC 50值作為抑制RSV誘導之細胞病變效應達50%之濃度。各種強效抗RSV工具化合物用作抗病毒活性之陽性對照。 實例 274 . HEp-2 CC50
以與先前針對其他細胞類型所描述類似的方式，使用細胞活力試劑與抗病毒活性並行地在未感染之HEp-2細胞中測定所測試化合物之細胞毒性(Cihlar等人, Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65.)。使用與抗病毒活性之測定相同的方案來量測化合物細胞毒性，不同之處為細胞不感染RSV。替代地，將相同密度的未感染細胞混合物以20微升/孔添加至含有預稀釋化合物之盤中，該等化合物亦為100 nL/樣品。隨後將分析盤培育4天，接著使用相同CellTiter Glo試劑添加進行細胞活力測試且量測發光讀數。未處理細胞及以2 μM嘌呤黴素(Sigma，St. Louis，MO)處理之細胞分別充當100%及0%細胞活力對照。針對各所測試化合物濃度，相對於0%及100%對照計算細胞活力百分比，且藉由非線性回歸測定CC 50值作為降低細胞活力達50%之化合物濃度。 實例 275. RSV NHBE EC50
正常人類支氣管上皮(NHBE)細胞購自Lonza (Walkersville，MD，目錄號CC-2540)，且在支氣管上皮生長培養基(BEGM) (Lonza，Walkersville，MD，目錄號CC-3170)中培養。使細胞每週傳代1至2次以維持＜80%匯合。在培養物中6次傳代之後丟棄NHBE細胞。
為了進行RSV A2抗病毒分析，將BEGM中之NHBE細胞以7,500個細胞/孔之密度接種於96孔盤中，且使其在37℃下附著隔夜。附著之後，移除100 μL細胞培養基，且使用Hewlett-Packard D300數位分配器添加3倍連續稀釋之化合物。將最終DMSO濃度正規化至0.05%。在添加化合物之後，在BEGM中藉由添加100 μL效價為每毫升1 × 10 4.5個組織培養感染劑量之RSV A2來感染NHBE細胞，且隨後在37℃下培育4天。隨後使NHBE細胞平衡至25℃，且藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。 實例 276. RSV HAE EC 50
HAE細胞在空氣-液體界面處培養，且具有暴露於空氣之頂側以及與培養基接觸之底側。在實驗之前，將HAE自其基於瓊脂之裝運包裝中移出，且在1 ml HAE分析培養基(AIR-100-MM，Mattek Corp)中適應37℃/5% CO 2隔夜。藉由用400 μL PBS洗滌頂表面兩次(利用直接移液方法或使各跨孔通過含有PBS之槽)以移除黏液層來準備HAE用於感染。將頂部腔室排出PBS且輕緩地輕拍至吸收材料上以儘可能移除PBS。洗滌之後，將細胞轉移至含有4倍連續稀釋之化合物的新鮮HAE維持培養基，遞送至細胞單層之底側，且在37℃下在5% CO 2中，在HAE分析培養基中用100 μL RSV A病毒株A2 1000×儲備液(ABI，Columbia，MD，目錄號10-124-000)之1:600稀釋液在頂側感染3小時。移除病毒接種物且使用先前所描述之任一方法用PBS洗滌細胞之頂表面3次。隨後在37℃下在化合物存在下培養細胞3天。在培育之後，使用MagMAX-96病毒RNA分離套組(Applied Biosystems，Foster City，CA，目錄號AM1836)自HAE細胞提取總RNA，且藉由即時PCR定量細胞內RSV RNA。將大約25 ng純化RNA添加至PCR反應混合物中，該PCR反應混合物含有0.9 μM RSV N正向及RSV N反向引子、0.2 μM RSV N探針及1× Taqman RNA至Ct 1步套組(Applied Biosystems，Foster City，CA，目錄號4392938)。使用Taqman GAPDH對照引子組(Applied Biosystems，Foster City，CA，目錄號402869)正規化RNA含量。用於RSV A2 HAE抗病毒分析中之即時PCR引子及探針：RSV N正向CATCCAGCAAATACACCATCCA (SEQ ID NO: 2)、RSV N反向TTCTGCACATCATAATTAGGAGTATCAA (SEQ ID NO: 3)、RSV N探針FAM-CGGAGCACAGGAGAT-BHQ (SEQ ID NO: 4)。 實例 277. HRV16 HELA EC 50
在給與化合物及感染前一天，將在含有10%熱滅活FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全DMEM培養基中培養的H1-HeLa細胞以3000個細胞/孔接種於96孔盤中。重複三次量測各化合物之抗病毒活性。在即將感染前使用HP300數位分配器(Hewlett Packard，Palo Alto，CA)將化合物之3倍連續稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，且將預先藉由滴定法測定且在細胞培養基中製備的病毒儲備液之適當稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋化合物之測試盤中。各盤包括6個受感染未處理細胞孔及6個未感染細胞孔，其分別充當0%及100%病毒抑制對照。在感染之後，在設置為33℃/5% CO 2之組織培養培育箱中培育測試盤96 h。培育後，將H1-HeLa細胞自培育中移除，且使其平衡至25℃。藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在震盪器上在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算病毒感染抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC 50值作為化合物抑制細胞病變效應達50%之有效濃度。 實例 278. HRV1A HELA EC 50
在給與化合物及感染前一天，將在含有10%熱滅活FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全RPMI 1640培養基中培養的H1-HeLa細胞以5000個細胞/孔接種於96孔盤中。重複三次量測各化合物之抗病毒活性。在即將感染前使用HP300數位分配器(Hewlett Packard，Palo Alto，CA)將化合物之3倍連續稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，且將100 μL HRV1a病毒儲備液之1/4000稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋化合物之各孔中。各盤包括6個受感染未處理細胞孔及6個含有5 μM蘆平曲韋(Rupintrivir)之細胞孔，其分別充當0%及100%病毒抑制對照。在感染之後，在設置為37℃/5% CO 2之組織培養培育箱中培育測試盤96 h。培育後，將H1-HeLa細胞自培育中移除，且使其平衡至25℃。藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在震盪器上在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算病毒感染抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC 50值作為化合物抑制細胞病變效應達50%之有效濃度。 實例 279. HRV14 HELA EC 50
在給與化合物及感染前一天，將在含有10%熱滅活FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全RPMI 1640培養基中培養的H1-HeLa細胞以5000個細胞/孔接種於96孔盤中。重複三次量測各化合物之抗病毒活性。在即將感染前使用HP300數位分配器(Hewlett Packard，Palo Alto，CA)將化合物之3倍連續稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，且將100 μL HRV14病毒儲備液之1/4000稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋化合物之各孔中。各盤包括6個受感染未處理細胞孔及6個含有5 μM蘆平曲韋之細胞孔，其分別充當0%及100%病毒抑制對照。在感染之後，在設置為37℃/5% CO 2之組織培養培育箱中培育測試盤96 h。培育後，將H1-HeLa細胞自培育中移除，且使其平衡至25℃。藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在震盪器上在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算病毒感染抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC 50值作為化合物抑制細胞病變效應達50%之有效濃度。 實例 280. HRVc15 及 HRVc25 EC 50
首先，製備HRV複製子RNA。在37℃下，在最終體積25 µL之NEB緩衝液-3中用2 µL MluI酶使5 µg DNA模板(HRVc15或HRVc25)線性化3小時。培育後，線性化之DNA經由PCR純化管柱純化，且使用以下條件進行後續活體外轉錄：10 µL RiboMAX Express T7 2×緩衝液、1-8 µL直鏈DNA模板(1 µg)、0-7 µL無核酸酶之水、2 µL酶混合物T7 express。20 µL之最終體積經混合且在37℃下培育30 min。培育後，添加1 µL RQ1無RNase之DNase，且將混合物在37℃下培育15 min。所得RNA隨後用MegaClear套組(Gibco Life Technologies目錄號11835-030)純化，且在95℃下用50 µL溶離緩衝液溶離兩次。在轉染前一天，將在含有10%熱滅活FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全RPMI 1640培養基中培養的H1-HeLa細胞以2E6個細胞/燒瓶之濃度接種至T-225燒瓶中，且在37℃/5% CO 2下培育隔夜。在轉染當天，根據標準細胞培養方案使細胞胰蛋白酶化，且用PBS洗滌兩次。洗滌後，使細胞以1E7個細胞/毫升之濃度再懸浮於PBS中，且將懸浮液儲存於濕冰上。使用電穿孔將複製子RNA引入至H1-HeLa細胞中。將分別含有10 µg複製子c15或1 µg c25複製子RNA之10 µL最終體積吸移至4 mm電穿孔杯中。藉由輕輕旋轉來混合H1-HeLa細胞儲備液，且將0.5 mL預先製備的細胞儲備液轉移至含有複製子RNA之電穿孔杯中。搖動合併之溶液以混合。混合後，立即使用以下設置對細胞進行電穿孔：900 V、25 μF、無窮大電阻、1脈衝。將電穿孔杯在冰上放置10 min。培育10 min後，每電穿孔添加19 mL環境溫度的含有10%熱滅活FBS之無酚紅且無抗生素之RPMI 1640。每孔150 µL經電穿孔細胞懸浮液(4E4個細胞)接種至96孔透明底部白色細胞培養盤中，且在25℃下培育30 min。使用HP300數位分配器(Hewlett Packard，Palo Alto，CA)將化合物之3倍連續稀釋液直接添加至細胞培養物中，且重複三次測試。添加化合物之後，將盤在33℃下培育48小時。隨後藉由Renilla-Glo螢光素酶分析系統來量測複製子活性。在信號定量之前，將盤自培育箱移除，且在自各孔移除50 μL之後使其平衡至25℃。根據製造商之方案，製備Renilla-Glo基質緩衝液之1:100稀釋液，且將100 μL Renill-Glo螢光素酶混合物添加至各孔。隨後將盤在輕緩攪拌下在25℃下培育20 min，且使用EnVision螢光素酶定量讀取器用0.1秒偵測設置測定螢光素酶信號。針對各測試濃度，相對於實驗中所包括之0%及100%抑制對照計算複製子抑制之抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC 50值作為化合物抑制螢光素酶信號達50%之有效濃度。 實例 281. DENV-2 Huh-7 Rep EC 50
以8化合物劑量反應形式(4次重複實驗)或40化合物劑量反應形式(3次重複實驗)，將化合物以每孔200 nl聲學轉移在384孔盤(Greiner，目錄號781091)中。對於所有測試盤，除0%抑制的僅DMSO陰性對照孔外，亦包括巴拉匹韋(Balapiravir)、GS-5734及NITD008作為陽性抑制對照。添加化合物之後，根據標準細胞培養程序收集含有DENV2複製子構築體之Huh-7細胞，並且在由cDMEM構成且不含慶大黴素(genticin)的細胞培養基中調整至1.25E5個細胞/毫升之濃度。隨後將40 μL細胞儲備液添加至各孔，達到5,000個細胞/孔之最終細胞密度。細胞及化合物混合物在37℃/5% CO 2下培育48小時。在收集細胞之前，EnduRen活細胞基質(Promega，目錄號E6481)藉由將3.4 mg懸浮於100 μL DMSO中以產生60 mM儲備溶液來進行準備。隨後將儲備溶液1:200稀釋於預溫熱之cDMEM中，且將10 μL此稀釋溶液添加至384孔盤之各孔中。盤隨後以500 rpm短暫離心，且在盤震盪器上放置2 min。混合後，將盤在7℃/5% CO 2下培育1.5小時，之後在Envision光度計上量測發光。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算複製子信號之抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC 50值作為化合物抑制複製子信號達50%之有效濃度。 實例 282. HCV Rep 1B 及 2A EC 50
在384孔盤中以十個步驟之1:3稀釋連續稀釋化合物。所有連續稀釋均在同一384孔盤內每化合物重複四次地進行。添加100 μM之HCV蛋白酶抑制劑ITMN-191作為100% HCV複製抑制之對照，同時包括10 mM之嘌呤黴素作為100%細胞毒性之對照。利用Biotek μFlow工作站向黑色聚苯乙烯384孔盤(Greiner Bio-one，Monroe，NC)之各孔中添加90 μL含有2000個懸浮HCV複製子細胞之細胞培養基(不含遺傳黴素(Geneticin))。對於化合物轉移至細胞培養盤中，將0.4 μL來自化合物連續稀釋盤之化合物溶液轉移至Biomek FX工作站上之細胞培養盤中。最終分析孔中之DMSO濃度為0.44%。將盤在37℃以及5% CO 2及85%濕度下培育3天。HCV複製子分析為多重分析，能夠評估來自同一孔之細胞毒性及抗複製子活性兩者。首先進行CC 50分析。抽吸384孔細胞培養盤中之培養基，且使用Biotek ELX405盤洗滌器各用100 μL PBS洗滌孔四次。利用Biotek μFlow工作站將50 μL體積的於1 × PBS中的含有400 nM鈣黃綠素AM (Anaspec，Fremont，CA)之溶液添加至盤之各孔中。將盤在室溫下培育30 min，之後用Perkin-Elmer Envision盤讀取器量測螢光信號(激發490 nm，發射520 nm)。在與CC 50分析相同的孔中進行EC 50分析。用Biotek ELX405盤洗滌器抽吸384孔細胞培養盤中之鈣黃綠素-PBS溶液。利用Biotek μFlow工作站將20 μL體積的Dual-Glo螢光素酶緩衝液(Promega，Madison，WI)添加至盤之各孔中。將盤在室溫下培育10 min。利用Biotek μFlow工作站將20 μL體積的含有Dual-Glo Stop & Glo基質(Promega，Madison，WI)與Dual-Glo Stop & Glo緩衝液(Promega，Madison，WI)之1:100混合物的溶液添加至盤之各孔中。隨後將盤在室溫下培育10 min，之後用Perkin-Elmer Envision盤讀取器量測發光信號。 實例 283. HEp-2 及 MT4 CC 50
以與先前針對其他細胞類型所描述類似的方式，使用細胞活力試劑在未感染細胞中測定化合物之細胞毒性(Cihlar等人, Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65.)。將HEp-2 (1.5 × 103個細胞/孔)及MT-4 (2 × 103個細胞/孔)細胞接種於384孔盤中，且與含有介於15 nM至100,000 nM範圍內之3倍連續稀釋化合物的適當培養基一起培育。細胞在37℃下培養4至5天。培育之後，使細胞平衡至25℃，且藉由添加Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物培育10 min，且使用Envision盤讀取器定量發光信號。未處理細胞及以2 μM嘌呤黴素(Sigma，St. Louis，MO)處理之細胞分別充當100%及0%細胞活力對照。針對各所測試化合物濃度，相對於0%及100%對照計算細胞活力百分比，且藉由非線性回歸測定CC 50值作為降低細胞活力達50%之化合物濃度。 表3. 活性
實例編號 RSV HEp-2 EC 50 (nM) RSV NHBE EC 50 (nM) RSV HAE EC 50 (nM) HRV16 HELA EC 50 (nM)
1 342 879    966
2 56 122    353
3 4094 1688    8956
4 96 76    510
5 2735 630    654
6 88 124 20 227
7 1862 265    5938
8 182 351    472
9 1006 97    324
10 191 421    583
11 269 54    1202
12 244 29    1926
13 93 30      
14 3646 1270    12449
15 4329 3255    11443
16 1292 104    1307
17 308 88    489
18 114 91 27 212
20 877 2233    4875
21 79 27    230
22 103 36 19 200
23 207 34      
25 26 127 152 135
26 334 25    669
27 1303 18    3155
28 238 53    590
29 91 932    678
30 844 44      
31 334 258    2496
32 3438 ＞3124.    9946
33 1914 2682    26973
34 14004 2838    ＞50000
35 4066 1308    29560
36 1439 312    10715
37 136 129    329
38 3507 3978    20895
39 166 569    1082
40 21481 5000    ＞50000
41 ＞50000 5000    ＞50000
42 25389 5000    ＞50000
43 55345 5000      
44 998 1799    4260
45 55 248    375
46 82 393    487
47 51 162    560
49 1076 2429    8720
50 44 498    464
51 90 ＞1244    357
52 94 252    1254
53 2359 5000    15534
54    105    378
55 570 4295    6908
56 4174 2241    7957
57 1485 ＞4183    5476
58    917      
59    111      
60 583 361      
61 2286 5000    23164
62 4525 ＞5000    8569
63 4073 ＞5000      
64 350 3502      
65            
66            
67            
68 247       4719
69          7325
70          5232
71 3142 ＞5000      
75 1262         
75            
77 464 1150    1419
78 2045 1766    2262
79 ＞50000 ＞5000    ＞34792
80 3827 4700    8962
81 3566 2646    3374
82 2509 3000    9270
83 5300 953      
84 8067 1133    19943
85 ＞46697 ＞5000    ＞50000
86 22607 ＞5000    ＞50000
87 1343 1697    6707
88 336 36    1059
89 9551 713      
90 516 208    1047
91 12110 ＞5000    ＞50000
92 64 73    225
93 2839 85      
94 100 118    209
95 15167 ＞5000    ＞42218
96 254 441 22361 9354
97 537 1368    4425
98 ＞50000 ＞5000    ＞50000
99 ＞50000 ＞5000    ＞50000
100 ＞5600 3599    17955
101 1744 1239    3129
102 9945 ＞5000    16724
103 938 548    2438
104 790 368    1799
105 3443 2018    16937
106 ＞42532 ＞5000    ＞100000
107 ＞14223 ＞2889    ＞35721
108 147 239    289
109 1074 452    2493
110 281 339      
111 3967 ＞1482    25305
112 1406 464    3685
113 611 352    2637
114 974 255    4696
115 8663 1553    10295
116 ＞100000 ＞5000    ＞31940
117 ＞100000 ＞5000    ＞100000
118 214 316    424
119 539 120    247
120 101 104    295
121 ＞100000 ＞5000    ＞100000
122 4036 ＞5000    29320
123 ＞100000 ＞5000    ＞100000
124 ＞100000 ＞5000    ＞86429
125 3304 3647    7646
126 6557 1787    27922
127 1728 434      
128 1871 164      
129 42911 ＞5000    41611
130 3588 438    7305
131 315 636    1806
132 1993 523    22356
133 4720 ＞5000    16529
134 334 52    247
135 233 66      
136 2774 95    577
137 3693 ＞5000    26953
138 38498 ＞5000      
139 6434 103    28269
140 8888 ＞5000    23277
141 2012 67    14924
142 251 61    164
143 142 53 157   
144 614 65      
145 2895 ＞5000    46167
146 9716 ＞5000    ＞50000
148 2670 320    36915
149 925 ＞891 188 ＞50000
150 4158 ＞5000    49889
152 ＞5000 1780    ＞5000
153 7141 ＞5000    12469
154 2702 311    1950
155 4319 1578    4199
156 8937 1368    25872
157 972 163      
158 969 1269    13012
159 220 489    1277
160 7298 ＞5000    29145
161 6476 1493    13781
162 6055 ＞5000    12850
163 13258 9213    ＞50000
164 1223 724    3995
165 1944 1608    11329
166 83 624    336
167 647 359    11953
168 53 103    160
169 524 965      
170 164 524    17526
171 220 375    582
172 1450 ＞516      
173 156 282 22   
174 257 1387    748
175 801 539      
176 161 1637    547
177 104 1559    1158
178            
179 591 ＞4805      
180 142 833    851
181 8 43 212 35
182 1166 2087    8563
183 80 1202    173
185 7935 ＞5000    ＞80205
186 2774 70    4748
187 1485 ＞5000    20563
188 186 38    429
190 136 2063    2637
191 2385 35 11 3403
192 194 21    342
193 244 469    750
194            
195 2590 678    2547
196 4134 1322    7537
198 618 37    548
199 1118 33    738
200 1404 125    5680
201 2518 3096    10295
202 7046 ＞2948      
203 31 18    72
204 463 628    1377
205 101 27    417
206 85 62      
207 124 91    183
208 ＞32800 ＞4216    ＞50000
209 1463 ＞5000    16695
210 1775 3018    27943
212 133 ＞5000    670
213 3841 ＞5000      
214 2936 551    25823
215 1103 ＞3002    3390
216 4233 ＞4393    32750
217 1009 ＞3513    4656
218 1156 280    11320
219 1762 178    6044
220 4264 340    10564
221 1177 ＞1053    8492
222 4452 1624      
223    321      
224    2834      
225            
226 1912 2549      
227 614 126    4936
228    2042    4715
229 ＞13322 ＞5000    ＞40184
230 1649 ＞5000    11512
231 152 190    1199
232 61 98    479
233 1746 ＞4640    3346
234 696 2410    6868
235 114 510    1104
236 189 949    741
237 ＞38425 ＞10772    ＞50000
238 91 41    731
239 148 54    1123
240 166 190    1308
241 293 190      
242            
243            
244 4946 ＞5000    33561
245 3790 ＞5000    28981
246 35 41      
247 44 510    317
248 26 2619    174
249    5000      
250 69 51    1175
251 8         
252 26 31      
253 20 70      
254 17 46      
255 18 43      
256 54 430      
257 29         
258            
259            
260 66         
261 34         
262            
263 35         
264 41         
265 215         
表4. 活性
實例編號 HRV1A HELA EC 50 (nM) HRV10 HELA EC 50 (nM) HRV14 HELA EC 50 (nM) HRV99 EC 50 (nM) HRVc15 EC 50 (nM) HRVc25 EC 50 (nM)
2 106 114 340 708      
4 190 144 445 1090      
6             9 7
8 211 179 615 1337      
77 736 636 1807 4944      
82 2777 2682 9194 19322      
88 581 608 1694 4545      
92 97 81 242 639      
96 1584 2324 12013 63935      
101 1626 1311 3432 7341      
103 1017 916 2554 4739      
表5. 活性
實例編號 DENV-2 Huh-7 Rep EC 50 (nM) DENV-2 moDC EC 50 (nM) DENV-2 Huh-7 EC 50 (nM)
1 ＞50000      
3 ＞100000      
6 2937 ＞6194 1633
7 32888 ＞25000   
8 37271      
9 ＞50000    1460
10 17933    2787
11 ＞50000    3500
12 ＞50000      
14 ＞100000      
15 ＞50000      
16 70770      
17 53718      
18 12266      
20 ＞50000      
21 11023      
22 5754    665
25 2858 524 840
26 44291      
27 82185    5679
28 29633    2155
29 36056 ＞5000 1885
30 60736      
31 96002      
32 ＞100000      
33 ＞50000      
34 ＞50000      
35 ＞50000      
36 ＞50000      
37 6700    1509
38 ＞50000      
39 ＞50000      
41 ＞50000      
42 39238      
43 ＞100000      
45 9660      
46 ＞20795      
47 9188      
49 ＞50000      
50 6923      
51 9211      
52 ＞46953    5483
53 ＞50000      
54 7398 804 2590
55 ＞50000      
56 ＞50000      
57 ＞50000      
59 56512    4652
60 41344    6819
66 ＞100000      
69 ＞100000      
70 ＞100000      
77 49829      
78 ＞50000      
79 40170      
80 ＞50000      
81 38939      
82 ＞50000      
84 ＞50000      
85 ＞50000      
86 ＞50000      
87 ＞100000      
88 62001    ＞25000
90 44488      
91 ＞50000      
94 2336 398 451
95 ＞50000      
96 ＞100000 ＞25000   
97 ＞100000      
98 ＞50000      
99 ＞50000      
100 ＞50000      
101 ＞100000      
102 ＞100000      
103 ＞50000      
104 ＞50000      
105 ＞50000      
106 ＞100000      
107 ＞50000      
108 40807      
109 ＞50000      
111 ＞50000      
112 ＞50000      
113 42739      
114 ＞50000      
115 ＞50000      
116 11740      
117 ＞100000      
118 26976      
119 31105    4278
120 7458    798
121 56701      
122 ＞50000      
123 48460      
124 ＞100000      
125 ＞100000      
126 ＞50000      
129 26708      
130 ＞100000      
131 ＞50000      
132 44565      
133 ＞50000      
134 24708      
135    1391
136 51079      
137 ＞50000      
139 ＞50000      
140 ＞50000      
141 ＞50000      
142 12250      
145 ＞100000      
146 ＞50000      
148 ＞50000      
149 ＞50000      
150 ＞100000      
153 ＞100000      
154 50735      
155 84391      
156 ＞100000      
158 ＞50000      
159 ＞50000      
160 ＞50000      
161 ＞50000      
162 13758      
163 ＞50000      
164 ＞50000      
165 ＞100000      
166 22097      
167 ＞100000      
168 4673      
170 ＞50000      
171 31472      
172 31390      
173    1207
174 33772      
175 ＞100000      
176 28585      
177 ＞50000      
180 6615      
181 5247    795
182 ＞50000      
183 17271      
185 ＞100000      
186 60308      
187 9353      
188 21383    3021
190 ＞100000      
191 61310 1073 13274
192 15851 534 2764
193 ＞50000      
195 ＞100000      
198 39122      
199 37789      
200 ＞50000      
201 ＞50000      
203 4460 599 1732
204 27503      
205 6103      
207 4836      
208 ＞50000      
209 ＞50000      
210 ＞50000      
212 9768      
213 ＞100000      
214 ＞50000      
215 44254      
216 32998      
217 37974      
218 ＞50000      
219 ＞50000      
220 28980      
221 ＞100000      
222 ＞100000      
227 39381      
229 31400      
230 ＞50000      
231 14738      
232 5324 1091   
233 35840      
234 36390      
235 3958      
236 17930      
237 ＞50000      
238 9708      
239 25378      
240 10557      
241 15455      
244 36716      
245 ＞50000      
246 5114      
247 12000    1278
248 4725    756
249 ＞50000      
251 3533 116 529
252 6996 284 697
253 2775 429 489
254 12958 90 797
255 4945 86 824
256 ＞100000 103 ＞18091
257 5482    2208
260 9951    682
263 8030    569
265    390
表6. 活性
實例編號 HCV Rep 1B EC 50 (nM) HCV Rep 2A EC 50 (nM)
4 52675 9197
6 793 1268
18 1106 1485
25 443 448
52 3957 7457
60 6084 10805
66 14852 21812
69 25321 50301
70 9433 32661
88 23664 27667
92 16545 2905
94 278 493
96 30706 47256
149 31069 ＞44444
181 861 1678
191 19748 34104
203 332 671
227 10188 4759
247 665 1680
248 503 1180
251 595 1108
252 624 1649
253 452 887
254 368 787
表7. 活性
實例編號 MT4 CC 50 (nM) HEp-2 CC 50 (nM) HELA CC 50 (nM)
205 20240 58553 59215
206 16637 55177   
230 ＞50000 ＞50000 ＞50000
233 26355 ＞50000 ＞50000
238 45010 ＞50000 ＞50000
239 ＞50000 ＞50000 ＞50000
240 ＞50000 ＞50000 ＞50000
241 ＞50000 ＞50000   
250 20516 ＞50000 ＞50000
儘管出於清楚地理解之目的已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述發明，但熟習此項技術者應瞭解，可在所附申請專利範圍之範疇內實踐某些改變及修改。此外，本文中所提供之各參考文獻係以全文引用的方式併入本文中，其併入程度如同各參考文獻單獨地以引用的方式併入之程度相同。當本申請案與本文所提供之參考文獻之間存在衝突時，應以本申請案為準。
 
<![CDATA[<110> 美商基利科學股份有限公司(GILEAD SCIENCES, INC.)]]>
          <![CDATA[<120> 抗病毒化合物]]>
          <![CDATA[<130> TW 110104869]]>
          <![CDATA[<150> US 62/978,192]]>
          <![CDATA[<151> 2020-02-18]]>
          <![CDATA[<160> 4     ]]>
          <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 244]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述: 合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag       60
          ucagucaguc agucagucag uccaagucca aguccaaguc caaguccaag uccaagucca      120
          aguccaaguc caaguccaag uccaagucca aguccaaguc caagucaguc agucagucag      180
          ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag      240
          ucag                                                                   244
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 22]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述: 合成引子]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          catccagcaa atacaccatc ca                                                22
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述: 合成引子]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          ttctgcacat cataattagg agtatcaa                                          28
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述: 合成探針]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          cggagcacag gagat                                                        15
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 111149986-A0101-11-0001-1

Claims (58)

  1. 一種式(Ia)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，
    Figure 03_image001
    式(Ia)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基，其中R 1及R 2中之至少一者為H； 或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-，其中各R 2A及R 2B獨立地為H、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基； R 3為-N(H)(R 3A)； R 3A為H或-C(O)R 3A1，其中R 3A1為視情況經-NH 2取代之C 1-18烷基； R 4A為O或S；且 R 4B及R 4C各自獨立地為： (A) -OH； (B) -OR 4B1，其中 R 4B1為視情況經1至3個R 4B2基團取代之C 1-6烷基；C 1-6鹵烷基；C 3-8環烷基；C 6-12芳基；或具有1至3個各自獨立地選自N、O或S之雜原子的5員至6員雜芳基，其中 各R 4B2基團獨立地為C 1-6烷氧基、-S-R 4B3或-S(O) 2-R 4B3，且 各R 4B3基團獨立地為C 1-6烷基； (C)
    Figure 03_image1390
    ，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基；視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基；-C(O)OR 4D3；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3， 各R 4D2獨立地為C 1-3烷氧基，且 各R 4D3獨立地為C 1-3烷基； (D)
    Figure 03_image1392
    ，其中 X 1及X 2各自獨立地為-O-或-N(R 4H)-； R 4E1及R 4E2各自獨立地為H；視情況經1至3個R 4E3基團取代之C 1-6烷基；或C 3-6環烷基，其中 各R 4E3基團獨立地為-C(O)OR 4E4、-NH 2、-NHC(O)R 4E4、-NHC(O)O-C 1-6伸烷基-C 6-12芳基、C 3-6環烷基或C 6-12芳基，且 各R 4E4基團獨立地為C 1-6烷基； 或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
    Figure 03_image1394
    ； 各R 4G1獨立地為-OH；C 1-6烷基；C 1-3烷氧基；-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3；C 1-3鹵烷基；-N(R 4G8) 2；-C(O)N(R 4G8) 2；視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或C 6-12芳基； 各R 4G2獨立地為C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 1-3鹵烷基、-OH、-NH 2或C 6-12芳基； 各R 4G3獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基、側氧基、-C(O)R 4G5或-C(O)OR 4G5； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-8環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)OR 4G5取代，且其中該環烷基視情況經C 1-6烷基取代； 各R 4G5獨立地為C 1-6烷基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G8獨立地為H或C 1-6烷基； 各R 4G9獨立地為C 1-6烷基、鹵素、C 1-3鹵烷基或-NH 2； 各R 4G10獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或側氧基； 各R 4G11獨立地為C 10-18烷基或苯甲基； R 4H為H； 或R 4E1及R 4H與其所連接之原子組合形成具有1至2個選自N、O及S之額外雜原子的5員至6員雜環基；且 下標n為0或1；或 (E)  -(OP(O)(OH)) 1-2-OH；或 (F)
    Figure 03_image1396
    ，其中 R 4J1及R 4J2各自獨立地為H、-OR 4J3或-OC(O)R 4J3，其中 R 4J1及R 4J2中之至少一者為-OR 4J3或-OC(O)R 4J3， 各R 4J3獨立地為C 1-18烷基、C 2-6烯基或苯甲基，且 至少一個R 4J3為C 10-18烷基； 替代地，R 2及R 4C與其所連接之原子組合形成六員環，且R 1為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為C 1-6烷基， 其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式：
    Figure 03_image1398
    ， 且R 4G為乙基或2-乙基丁基時，R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-， 其限制條件為該式(Ia)化合物不具有以下結構：
    Figure 03_image1400
    ， 及其限制條件為當該式(Ia)化合物具有下式時：
    Figure 03_image1402
    ， R 1及R 2中之一者為-C(O)R 1A，或R 1及R 2組合形成-C(O)-或-C(R 2A)(R 2B)-。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基，其中R 1及R 2中之至少一者為H； 或R 1及R 2組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-。
  3. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為乙基、異丙基或三級丁基，其中R 1及R 2中之至少一者為H； 或R 1及R 2組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 3為NH 2。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4A為O。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 1及R 2各自獨立地為H或-C(O)R 1A，其中R 1A為乙基、異丙基或三級丁基，其中R 1及R 2中之至少一者為H； 或R 1及R 2組合形成-C(O)-、-C(Me) 2-或-CH(OEt)-； R 3為NH 2；且 R 4A為O。
  7. 如請求項1至6中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4B及R 4C各自獨立地為： (C)
    Figure 03_image1404
    ，其中 下標m為0、1、2、3、4或5；且 各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-6烷基；視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基；-C(O)OR 4D3；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OMe， 各R 4D2為甲氧基，且 各R 4D3獨立地為甲基或乙基；或 (D)
    Figure 03_image1406
    ，其中 X 1及X 2各自獨立地為-O-或-NH-； R 4E1為視情況經1個R 4E3基團取代之C 1-6烷基；或C 3-6環烷基，其中 各R 4E3基團獨立地為-C(O)Me、-C(O)O-正丁基、-C(O)O-戊基、-NH 2、-NHC(O)Me、-NHC(O)O-苯甲基、C 3-6環烷基或苯基； R 4E2為H； 或R 4E1及R 4E2與其所連接之原子組合形成C 3-6環烷基； R 4F1及R 4F2各自為H或組合一起為側氧基； R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-6烷基；C 7-18烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-8環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；-C(O)R 4G4；-C(O)OR 4G5；或
    Figure 03_image1408
    ； 各R 4G1獨立地為-OH；羥甲基；甲氧基；-(CH 2OCH 2) 2-CH 3；-CF 3；-N(Me) 2；-C(O)NH 2；視情況經1至2個R 4G9取代之C 3-8環烷基；視情況經1至2個R 4G10取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或苯基； 各R 4G2獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、甲氧基、F、Cl、Br、CF 3、-NH 2或苯基； 各R 4G3獨立地為甲基、乙基、F、Cl、CF 3、CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基； 各R 4G4獨立地為C 1-6烷基、C 7-18烷基或C 3-7環烷基，其中該C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代，且其中該環烷基視情況經甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基取代； 各R 4G5獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基； R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11； 各R 4G9獨立地為甲基、CF 3或-NH 2； 各R 4G10獨立地為甲基、CF 3、CH 2CF 3或側氧基；且 各R 4G11獨立地為十六烷、十八烷或苯甲基。
  8. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Ib)：
    Figure 03_image1410
    。
  9. 如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Ic)：
    Figure 03_image1412
    。
  10. 如請求項1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4B為：
    Figure 03_image1414
    ，其中 下標m為1；且 R 4D獨立地為甲基、乙基、正丙基或三級丁基，其各自視情況經1至3個R 4D1基團取代，其中各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OMe，或 R 4D為甲氧基、乙氧基或丙氧基，其各自視情況經甲氧基取代，或 R 4D為-C(O)OMe、-C(O)OEt或-C(O)N(Me) 2；且 R 4C為：
    Figure 03_image1416
    ，其中 R 4E1為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊烷、新戊烷或正己烷，其各自視情況經1個R 4E3基團取代，其中各R 4E3基團獨立地為-C(O)Me、-C(O)O-正丁基、-C(O)O-戊基、-NH 2、-NHC(O)Me或-NHC(O)O-苯甲基，或 R 4E1為環丙基、環丙基甲基、環丁基、環丁基甲基、環戊基、環戊基甲基、環己基或環己基甲基，或 R 4E1為苯甲基。
  11. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Id)：
    Figure 03_image1418
    。
  12. 如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Ie)：
    Figure 03_image1420
    。
  13. 如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(If)：
    Figure 03_image1422
    。
  14. 如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Ig)：
    Figure 03_image1424
    。
  15. 如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Ih)：
    Figure 03_image1426
    。
  16. 如請求項1至12及15中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有式(Ii)：
    Figure 03_image1428
    。
  17. 如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中R 4C為：
    Figure 03_image1430
    。
  18. 如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中R 4C為：
    Figure 03_image1432
    。
  19. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊烷、新戊烷、正己烷、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十五烷、十六烷或十八烷，其各自視情況經1至2個R 4G1取代，其中各R 4G1獨立地為-OH、羥甲基、甲氧基、-(CH 2OCH 2) 2-CH 3、-CF 3、-N(Me) 2或-C(O)NH 2。
  20. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基或環辛基，其各自視情況經1至2個R 4G2取代，其中各R 4G2獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、OMe、F、CF 3、-NH 2或苯基。
  21. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基、環庚基甲基或環辛基甲基，其各自視情況經1至2個R 4G2取代，其中各R 4G2獨立地為甲基、CF 3或-NH 2。
  22. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為吡咯啶、哌啶、氮雜環庚烷、
    Figure 111149986-A0304-1
    啶、氧雜環丁烷、四氫呋喃、四氫哌喃、嗎啉或1,3-二氧雜環戊烯，其各自視情況經1至2個R 4G3取代，其中各R 4G3獨立地為甲基、乙基、F、CH 2CF 3、側氧基、-C(O)Me或-C(O)O-三級丁基。
  23. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為哌啶甲基、
    Figure 111149986-A0304-1
    啶甲基、氧雜環丁烷甲基、四氫呋喃甲基、四氫哌喃甲基、嗎啉甲基、2-嗎啉-乙基、3-嗎啉-丙基或1,3-二氧雜環戊烯甲基，其各自視情況經1至2個R 4G10取代，其中各R 4G10獨立地為甲基、CH 2CF 3或側氧基。
  24. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為苯甲基。
  25. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為-C(O)R 4G4，其中 R 4G4為 C 1-6烷基，選自由以下組成之群：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊烷、新戊烷、正己烷、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基及2-乙基-丁基， C 7-18烷基，選自由以下組成之群：庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十五烷、十六烷及十八烷，或 C 3-8環烷基，選自由以下組成之群：環丙基、環丁基、環戊基或環己基， 其中各C 1-6烷基視情況經OH、NH 2或-NHC(O)O-三級丁基取代，且 其中各C 3-8環烷基視情況經甲基取代。
  26. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為-C(O)OR 4G5，其中R 4G5為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基或三級丁基。
  27. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中 R 4G為
    Figure 03_image1434
    ，其中 R 4G6及R 4G7各自獨立地為H或-OR 4G11，其中 R 4G6及R 4G7中之至少一者為-OR 4G11，且 各R 4G11獨立地為十六烷、十八烷或苯甲基。
  28. 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、辛基、十二基、十六基、十八基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、
    Figure 03_image1436
    Figure 03_image1438
    Figure 03_image1440
    。
  29. 一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物係選自1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H、表1I或表1J。
  30. 一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有以下結構：
    Figure 03_image1442
    Figure 03_image1444
    Figure 03_image1446
    。
  31. 一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該化合物具有以下結構：
    Figure 03_image1448
    Figure 03_image1450
    Figure 03_image1452
    。
  32. 一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
  33. 一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科( Pneumoviridae)病毒感染的醫藥品之方法，其中係使用如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物。
  34. 如請求項33之方法，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
  35. 如請求項33之方法，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
  36. 一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科( Picornaviridae)病毒感染的醫藥品之方法，其中係使用如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物。
  37. 如請求項36之方法，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
  38. 一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科( Flaviviridae)病毒感染的醫藥品之方法，其中係使用如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物。
  39. 如請求項38之方法，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒(dengue virus)感染。
  40. 一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科( Filoviridae)病毒感染的醫藥品之方法，其中係使用如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物。
  41. 如請求項40之方法，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒(ebola virus)感染。
  42. 一種如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物之用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染之醫藥品。
  43. 如請求項42之用途，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
  44. 如請求項42之用途，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
  45. 一種如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物之用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染之醫藥品。
  46. 如請求項45之用途，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
  47. 一種如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物之用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染之醫藥品。
  48. 如請求項47之用途，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。
  49. 如請求項47之用途，其中該黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒(Yellow fever virus)感染。
  50. 如請求項47之用途，其中該黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒(West Nile virus)感染。
  51. 如請求項47之用途，其中該黃病毒科病毒感染為茲卡病毒(Zika virus)感染。
  52. 如請求項47之用途，其中該黃病毒科病毒感染為HCV感染。
  53. 一種如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物之用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染之醫藥品。
  54. 如請求項53之用途，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
  55. 一種用於製造供治療或預防有需要人類因病毒感染所引起的呼吸道病況之惡化的醫藥品之方法，其中係使用如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
  56. 如請求項55之方法，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
  57. 一種如請求項1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、水合物、酯或異構物之用途，其用於製造供治療或預防人類因病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的醫藥品，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
  58. 如請求項57之用途，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
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