EA029712B1 - ПИРРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ - Google Patents

ПИРРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ Download PDF

Info

Publication number
EA029712B1
EA029712B1 EA201690978A EA201690978A EA029712B1 EA 029712 B1 EA029712 B1 EA 029712B1 EA 201690978 A EA201690978 A EA 201690978A EA 201690978 A EA201690978 A EA 201690978A EA 029712 B1 EA029712 B1 EA 029712B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mmol
added
solution
column
water
Prior art date
Application number
EA201690978A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690978A1 (ru
Inventor
Майкл О'Нил Хенрехен Кларк
Эдвард Доуэрффлер
Ричард Л. Макман
Дастин Сиджел
Original Assignee
Гайлид Сайэнсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52003049&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA029712(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Гайлид Сайэнсиз, Инк. filed Critical Гайлид Сайэнсиз, Инк.
Publication of EA201690978A1 publication Critical patent/EA201690978A1/ru
Publication of EA029712B1 publication Critical patent/EA029712B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
    • C07H7/06—Heterocyclic radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

В изобретении предложены композиции, способы применения и соединения замещенных тетрагидрофуранил-пирроло[1.2-f][1.2.4]триазин-4-аминов формулы (I) для лечения инфекции вирусом Pneumovirinaes, включая респираторно-синцитиальные вирусные инфекции, а также способы и промежуточные соединения для синтеза соединений тетрагидрофуранил-пирроло[1.2-f][1.2.4]триазин-4-амина.

Description

Область изобретения
В изобретении предложены замещенные соединения тетрагидрофуранил-пирроло[1.2£][1.2.4]триазин-4-амина, способы и фармацевтические композиции для лечения инфекции вирусом Рпеитоу1Г1пае§, в частности включая респираторно-синцитиальные вирусные инфекции, а также способы и промежуточные соединения, используемые для получения соединения.
Предпосылки изобретения
Рпеитоу1Г1пае вирусы представляют собой вирусы, содержащие одноцепочечную молекулу РНК отрицательной полярности, которые являются ответственными за многие распространенные заболевания у человека и животных. Подсемейство вирусов РпеитоНгтае является частью семейства РагатухоНпбае и включает респираторно-синцитиальный вирус человека (НК8У). Почти у всех детей первых двух лет жизни имеется инфекция НК8У. НК8У является основной причиной инфекции нижних дыхательных путей в младенчестве и детстве, и в случаях от 0,5 до 2% от общего числа инфицированных требуется госпитализация. Пожилые люди и взрослые с хроническими заболеваниями сердца, болезнью легких или те, у которых ослаблен иммунитет, также обладают высоким риском развития тяжелых заболеваний НК8У (Ь!!р://\\\.сбс.доу/г§у/тбех.Ь!т1). В настоящее время не доступна ни одна вакцина, предотвращающая инфекцию НК8У. Для иммунопрофилактики доступно моноклональное антитело РаЬУ/итаЪ, но его использование у младенцев ограничено из-за высокого риска, например, у недоношенных детей или у детей с врожденным пороком сердца или с болезнью легких, и его стоимость для широкого использования часто непомерно высока. Кроме того, в качестве единственного противовирусного средства для лечения инфекции НК8У был утвержден аналог нуклеозида рибавирин, но он имеет ограниченную эффективность. Таким образом, существует потребность в анти-РпеитоУгтае лекарственных средствах.
Примеры пирроло[2,3-б]пиримидиновых соединений, используемых для лечения вирусных инфекций, описаны в И8 2012/0009147 А1 (СЬо е! а1.), И8 2012/0020921 А1 (СЬо е! а1.), УО 2008/089105 А2 (ВаЪи е! а1.), УО 2008/141079 А1 (ВаЪи е! а1.), УО 2009/132135 А1 (Ви!1ег е! а1.), УО 2010/002877 А2 (Ргапсот), УО 2011/035231 А1 (СЬо е! а1.), УО 2011/035250 А1 (Ви!1ег е! а1.), УО 2011/150288 А1 (СЬо е! а1.), УО 2012/012465 (СЬо е! а1.), УО 2012/012776 А1 (Масктап е! а1.), УО 2012/037038 (С1агке е! а1.), УО 2012/087596 А1 (Ое1апеу е! а1.) и УО 2012/142075 А1 (СхгуауаЬаЪЬап е! а1.).
Сохраняется потребность в новых эффективных и обладающих приемлемыми профилями токсичности противовирусных средствах, которые могут использоваться при лечении вирусных инфекций Рагатухоутбае, включая вирусные инфекции РпеитоУгтае, такие как инфекции НК8У.
Сущность изобретения
Предложены соединения, способы и фармацевтические составы для лечения инфекций, вызванных семейством вируса РпеитоУгтае, включая лечение инфекций, вызванных респираторно-синцитиальным вирусом у человека.
Предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:
где К1 представляет собой Н;
К2 представляет собой Н или Р;
К3 представляет собой ОН;
К4 представляет собой СИ;
К6 представляет собой ОН;
К5 выбран из группы, включающей Н и
- 1 029712
где η' выбран из 1, 2, 3 и 4;
К8 выбран из С1-С8-алкила, -О-С-1С8-алкила, бензила, -О-бензила, -СН2-С3-С6-циклоалкила, -О-СН2-С3-С6-циклоалкила и СР3;
К9 выбран из фенила;
К10 выбран из Н и СН3;
К11 выбран из Н или С1-С6-алкила;
12
К12 выбран из Н, С1-С8-алкила, бензила, С3-С6-циклоалкила и -СН2-С3-С6-циклоалкила.
Подробное описание изобретения
Один вариант осуществления настоящего изобретения включает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, где К1 представляет собой Н и все другие переменные, включая К2, К3, К4, К5, К6, К7, К8, К9, К10, К11, К12 и η', имеют значения, определенные выше для формулы (I).
Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, где К2 представляет собой Н и все другие переменные, включая К1, К3, К4, К5, К6, К7, К8, К9, К10, К11, К12 и η', имеют значения, определенные выше для формулы (I).
Следующий вариант осуществления настоящего изобретения включает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, где оба, К1 и К2, представляют собой Н и все другие переменные, включая К3, К4, К5, К6, К7, К8, К9, К10, К11, К12 и η', имеют значения, определенные выше для формулы (I).
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения включает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, где оба, К1, К2, и К5 представляют собой Н и все другие переменные, включая К3, К4, К6, К7, К8, К9, К10, К11, К12 и η', имеют значения, определенные выше для формулы (I).
Другой самостоятельный вариант осуществления настоящего изобретения включает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, где оба К1 и К2, представляют собой Н, К3 представляет собой ОН и все другие переменные, включая К4, К5, К6, К7, К8, К9, К10, К11, К12 и η', имеют значения, определенные выше для формулы (I).
Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль:
где К3 представляет собой ОН;
К4 представляет собой СХ
К5 выбран из группы, включающей Н и
- 2 029712
где η' выбран из 1, 2, 3 и 4;
К8 выбран из С1-С8-алкила, -О-С1-С8-алкила, бензила, -О-бензила, -СН2-С3-С6-циклоалкила, -О-СН2-С3-С6-циклоалкила и СТ3;
К9 представляет собой фенил;
К10 выбран из Н и СН3;
К11 выбран из Н или С1-С6-алкила;
К12 выбран из Н, С1-С8-алкила, бензила, С3-С6-циклоалкила и -СН2-С3-С6-циклоалкила.
Также предложен вариант осуществления изобретения, включающий соединение формулы (II) или
его фармацевтически приемлемую соль, как описано выше, где К5 представляет собой Н.
В каждом из описанных выше вариантов осуществления изобретения, включающим соединение
формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль, где К5 может быть иным, чем Н, имеется еще вариант, где все остальные переменные имеют значения, определенные выше для данного варианта осу-
К12 выбран из С1-С8-алкила, бензила, С3-С6-циклоалкила и -СН2-С3-С6-циклоалкила.
Определения
Термины гало и галоген относятся к атомам галогена, выбранным из Т, С1, Вг и I.
Термин "(С1-п) алкил", как он используется в настоящем документе, где η обозначает целое число, либо отдельно, либо в комбинации с другим радикалом, предназначен для обозначения ациклических алкильных радикалов с прямой или разветвленной цепью, содержащих от 1 до η атомов углерода. "(С1-4)алкил" включает, но этим не ограничивается, метил, этил, пропил (н-пропил), бутил (н-бутил), 1-метилэтил (изопропил), 1-метилпропил (втор-бутил), 2-метилпропил (изобутил) и 1,1-диметилэтил (трет-бутил или т-бутил). Сокращение Ме означает метильную группу; ΕΙ означает этильную группу, Рг означает пропильную группу, ϊΡγ означает 1-метилэтильную группу, Ви означает бутильную группу, и 1Ви означает 1,1-диметилэтильную группу.
Термин "алкил" относится к углеводороду, содержащему нормальный, вторичный или третичные атомы. Например, алкильная группа может содержать от 1 до 4 атомов углерода (т.е. (С1-С4)алкил), от 1 до 3 атомов углерода (т.е. (С1-С3)алкил), или 1 или 2 атома углерода (т.е. (С1-С2)алкил). Примеры подходящих алкильных групп включают, но этим не ограничиваются, метил (Ме, -СН3), этил (ΕΙ, -СН2СН3), 1пропил (н-Рг, н-пропил, -СН2СН2СН3), 2-пропил (изо-Рг, изопропил, -СН(СН3)2), 1-бутил (н-Ви, н-бутил, СН2СН2СН2СН3), 2-метил-1-пропил (изо-Ви, изобутил, -СН2СН(СН3)2), 2-бутил (втор-Ви, втор-бутил, -СН(СН3)СН2СН3) и 2-метил-2-пропил (трет-Ви, трет-бутил, -С(СН3)3) и тому подобное. Термин "алкил" относится также к насыщенному углеводородному радикалу с разветвленной или прямой цепью, содержащему в радикале два моновалентных центра, образованных путем удаления двух атомов водорода от одного и того же или от двух разных атомов углерода исходного алкана. Типичные алкильные радикалы
- 3 029712
включают, но этим не ограничиваются, метилен (-СН2-), 1,1-этил (-СН(СН3)-), 1,2-этил (-СН2СН2-), 1,1-пропил (-СН(СН2СН3)-), 1,2-пропил (-СН2СН(СН3)-), 1,3-пропил (-СН2СН2СН2-), 1,4-бутил (-СН2СН2СН2СН2-) и т.п.
Термин "циклоалкил" относится к циклической алифатической группе. Циклоалкильные группы в данном документе могут быть снабжены указаниями числа атомов углерода в своем кольце, например "С3-С4-циклоалкил", относящий к циклоалкильному кольцу с 3 или 4 кольцевыми атомами углерода, или "С3-С6-циклоалкил", обозначающий циклоалкильное кольцо с 3, 4, 5 или 6 кольцевыми атомами углерода, т.е. циклопропильное, циклобутильное, циклопентильное или циклогексильное кольцо.
Фармацевтические композиции.
В данном документе предложена также фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество. Также предложены отдельные фармацевтические композиции, каждая, содержащая фармацевтически эффективное количество соединения формулы (II) или одно из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество.
Соединения по изобретению в процессе получения лекарственной формы объединяют с обычными носителями и вспомогательными веществами, которые выбирают в соответствии с обычной практикой. Таблетки будут содержать вспомогательные вещества, смазывающие вещества, наполнители, связующие вещества и тому подобное. Водные композиции готовят в стерильном виде, и, когда они предназначены для доставки иным образом, чем пероральное введение, обычно являются изотоническими.
Все композиции необязательно содержат вспомогательные вещества, такие как представленные в обзоре "НаийЬоок οί Ркагтасеийса1 ΕχοίρίοηΙδ" (1986). Вспомогательные вещества включают аскорбиновую кислоту и другие антиоксиданты, хелатирующие агенты, такие как ΕΌΤΆ, углеводы, такие как декстран, гидроксиалкилцеллюлоза, гидроксиалкилметилцеллюлоза, стеариновую кислоту и тому подобное. рН составов находится в диапазоне от примерно 3 до примерно 11, однако обычно составляет от примерно 7 до 10.
Хотя возможно, чтобы активные ингредиенты вводились отдельно, может быть предпочтительным представить их в виде фармацевтических композиций. Композиции как для ветеринарии, так и для использования человеком содержат по меньшей мере один активный ингредиент, определенный выше, вместе с одним или несколькими приемлемыми носителями и, необязательно, с другими терапевтическими ингредиентами, в частности, с такими дополнительными терапевтическими ингредиентам, которые рассматриваются в настоящем документе. Носитель(и) должен быть "приемлемым" в смысле совместимости с другими ингредиентами состава и физиологически безвредным для реципиента.
Композиции включают композиции, пригодные для вышеуказанных путей введения. Композиции могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармации. Описание способов и составов, главным образом, можно найти в Кетт§1ои'8 РЬагтасеийса1 8с1еисе8 (Маск РиЬНкЫид Со., ЕаДоп. РА). Такие способы включают стадию приведения в ассоциацию активного ингредиента с носителем, который состоит из одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. Обычно композиции получают путем однородного и тщательного смешивания активного ингредиента с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями или ими обоими, а затем, при необходимости, приданием формы продукту.
Композиции, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, каше или таблетки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранулы; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости; или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле. Активный ингредиент также может вводиться в виде болюса, лекарственной кашки или пасты.
Таблетки изготовляют путем прессования или формования, необязательно, с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в соответствующем аппарате активного ингредиента в свободной текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно, смешанного со связующим, лубрикантом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в соответствующем аппарате смеси порошкообразного активного ингредиента, смоченного инертным жидким разбавителем. Таблетки, необязательно, могут быть покрыты или на них могут быть нанесены зарубки и, необязательно, разработаны таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение из них активного ингредиента.
В случае инфекций глаза или других внешних тканей, например рта и кожи, композиции, предпочтительно, наносят в виде наружных мази или крема, содержащих активный(ые) ингредиент(ы) в количестве, например, от 0,075 до 20% мас./мас. (включая активный(ые) ингредиент(ы) в интервале между 0,1 и 20% с увеличением на 0,1% мас./мас., например 0,6% мас./мас., 0,7% мас./мас. и т.д.), предпочтительно от 0,2 до 15% мас./мас. и, наиболее предпочтительно, от 0,5 до 10% мас./мас. При изготовлении в виде мази активные ингредиенты могут быть использованы либо с парафиновой, либо со смешиваемой с во- 4 029712
дой мазевой основой. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть в составе крема с кремовой основой типа масло-в-воде.
Если желательно, водная фаза кремовой основы может включать, например, по меньшей мере 30% мас./мас. многоатомного спирта, т.е. спирта, содержащего две или более гидроксильных групп, такого как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (включая РЕО 400) и их смеси. Местные составы могут, если желательно, включать соединение, которое усиливает абсорбцию или проникновение активного ингредиента через кожу или другие пораженные участки. Примеры таких усилителей дермального проникновения включают диметилсульфоксид и родственные аналоги.
Масляная фаза эмульсий может быть составлена из известных ингредиентов известным способом. Хотя фаза может содержать только эмульгатор (иначе известный как эмульгент), желательно, чтобы она содержала смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом, или их обоих, и с жиром, и с маслом. Предпочтительно, чтобы гидрофильный эмульгатор был включен вместе с липофильным эмульгатором, который действует в качестве стабилизатора. Также предпочтительно включать как масло, так и жир. Вместе эмульгатор(ы) со стабилизатором(ами) или без него(них) образуют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и жиром образует так называемую эмульгирующую мазевую основу, которая образует масляную дисперсную фазу кремовых составов.
Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, пригодные для использования в составе, включают Т\уссп® 60, §раи® 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.
Выбор подходящих масел или жиров для состава базируется на цели достижения желательных косметических свойств. Крем, предпочтительно, должен быть нежирным, не оставляющим пятен и смываемым продуктом с подходящей консистенцией, чтобы избежать вытекания из тюбиков или других контейнеров. Могут быть использованы моно- или двухосновные алкиловые сложные эфиры с прямой или разветвленной цепью, такие как диизоадипат, изоцетил стеарат, диэфир жирных кислот кокосового масла и пропиленгликоля, изопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2-этилгексил пальмитат или смесь сложных эфиров с разветвленной цепью, известные как Стобато1 САР, три последние являются предпочтительными сложными эфирами. Они могут использоваться по отдельности или в комбинации в зависимости от требуемых свойств. В качестве альтернативы используются липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин или другие минеральные масла.
Фармацевтические композиции по данному изобретению содержат комбинацию с одним или нескольким фармацевтически приемлемыми носителями или вспомогательными веществами и, необязательно, другими терапевтическими агентами. Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут быть в виде какой-либо формы, подходящей для предназначенного способа введения. При использовании для перорального применения могут быть изготовлены, например, таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, дисперсные порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, растворы, сиропы или эликсиры. Композиции, предназначенные для перорального применения, могут быть получены в соответствии с любым способом, известным в данной области для производства фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько агентов, в том числе подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, для того чтобы разработать препарат с привлекательным запахом и вкусом. Приемлемыми являются таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым наполнителем, которые подходят для изготовления таблеток. Этими наполнителями могут быть, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия; гранулирующие и разрыхляющие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как крахмал, желатин или аравийская камедь; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми, или они могут быть покрыты известными способами, включая микроинкапсуляцию для задержки дезинтеграции и адсорбции в желудочно-кишечном тракте, и тем самым обеспечивая пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, может быть использован такой материал для удерживания, как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, сам по себе или вместе с воском.
Композиции для перорального применения могут быть также представлены в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, такой как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.
Водные суспензии содержат активные вещества в смеси с наполнителями, подходящими для изготовления водных суспензий. Такие наполнители включают суспендирующий агент, такой как натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и смола аравийской камеди, и диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природные фосфатиды (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации этиленоксида с алифатиче- 5 029712
ским спиртом с длинной цепью (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с частичным сложным эфиром, производным жирной кислоты и ангидрида гексита (например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат). Водная суспензия может также содержать один или несколько консервантов, такие как этил- или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подслащивающих агентов, таких как сахароза или сахарин.
Масляные суспензии могут быть изготовлены посредством суспендирования активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Для придания вкуса в пероральный препарат могут быть добавлены подслащивающие агенты, такие как упомянуты выше, и ароматические вещества. Эти композиции могут быть стабилизированы путем добавления антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.
Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для получения водной суспензии путем добавления воды, дают активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты представлены теми, которые описаны выше. Также могут присутствовать дополнительные наполнители, например, подсластители, ароматические вещества и красители.
Фармацевтические композиции могут быть также в форме эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, минеральное масло, такое как жидкий парафин, или их смеси. Подходящие эмульгаторы включают природные камеди, такие как аравийская камедь и трагакантовая камедь, природные фосфатиды, такие как соевый лецитин, сложные эфиры или неполные сложные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, такие как моноолеат сорбита, и продукты конденсации этих частичных сложных эфиров с этиленоксидом, такие как моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Эмульсия может также содержать подсластители и вкусовые добавки. Сиропы и эликсиры могут быть приготовлены с использованием подсластителей, таких как глицерин, сорбит или сахароза. Такие препараты могут также содержать успокоительное средство, консервант, ароматизатор или краситель.
Фармацевтические композиции могут быть в виде стерильных инъекционных или внутривенных препаратов, таких как стерильная инъекционная водная или масляная суспензия. Эта суспензия может быть приготовлена в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, которые упоминались выше. Стерильный инъекционный или внутривенный препарат может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или таком растворителе, как раствор в 1,3-бутан-диоле, или изготовлен в виде лиофилизированного порошка. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые могут быть использованы, можно указать воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно могут быть использованы стерильные нелетучие масла. С этой целью может быть использовано любое нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, при приготовлении инъецируемых препаратов также могут быть использованы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с материалом носителя для изготовления стандартной лекарственной формы, будет меняться в зависимости от проводимого лечения и конкретного пути введения. Например, состав с замедленным высвобождением, предназначенный для перорального введения людям, может содержать приблизительно от 1 до 1000 мг активного вещества, смешанного с соответствующим и удобным количеством материала-носителя, которое может меняться от примерно 5 до примерно 95% от общего количества композиции (масса:масса). Фармацевтическая композиция может быть получена таким образом, чтобы обеспечить легко измеримые количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенной инфузии, может содержать приблизительно от 3 до 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора для того, чтобы можно было осуществлять вливание подходящего объема со скоростью около 30 мл/ч.
Композиции, подходящие для местного применения для глаз, включают также глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, особенно в водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент, предпочтительно, присутствует в таких составах в концентрации от 0,5 до 20%, преимущественно от 0,5 до 10% и, в частности, примерно 1,5% мас./мас.
Композиции, подходящие для местного применения в полость рта, включают лепешки, содержащие активный ингредиент на ароматизированной основе, обычно сахарозе и аравийской камеди или трагаканта; пастилки, содержащие активный ингредиент на инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и гуммиарабик; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в соответствующем жидком носителе.
- 6 029712
Композиции для ректального введения могут быть представлены в виде суппозиториев на подходящей основе, содержащей, например, масло какао или салицилат.
Композиции, подходящие для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, например, в диапазоне от 0,1 до 500 мкм, например 0,5, 1, 30, 35 и т.д., которые вводятся путем быстрого вдоха через носовой проход или путем ингаляции через рот таким образом, чтобы достигать альвеолярных мешочков. Подходящие композиции включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Лекарственные формы, пригодные для введения аэрозолем или сухим порошком, могут быть получены в соответствии с обычными способами и могут быть доставлены вместе с другими терапевтическими агентами, такими как соединения, используемые ранее для лечения или профилактики инфекций Рпеитоутпае, как описано ниже.
Другие варианты осуществления изобретения относятся к новой, эффективной, безопасной, нераздражающей и физиологически совместимой ингаляционной композиции, содержащей соединение формулы (I) или формулы (II) или их фармацевтически приемлемую соль, пригодные для лечения инфекций Рпеитоутпае, и возможно связанного с ними бронхиолита. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются соли неорганических кислот, включая гидрохлоридную, гидробромидную, сульфатную или фосфатную соли, поскольку они могут вызвать меньшее легочное раздражение. Предпочтительно, ингаляционный препарат поступает в эндобронхиальным пространство в виде аэрозоля, содержащего частицы с масс-медианным аэродинамическим диаметром (ММАД) в интервале от примерно 1 до примерно 5 мкм. Предпочтительно, соединение формулы (I) или формулы (II) вводят в состав для доставки при помощи аэрозоля с использованием небулайзера, компрессорного дозирующего ингалятора (рМИД или ингалятора сухого порошка (ИСП).
Неограничивающие примеры небулайзеров включают распылительные, струйные, ультразвуковые, компрессорные, с вибрирующей пористой пластиной или эквивалентные небулайзеры, включая такие небулайзеры, в которых используется адаптивное устройство доставки аэрозоля (Иепует, 1. Лето8о1 тексте Ри1топагу Игид ИеНуету 2010, 23 8ирр. 1, 81-810). В струйном небулайзере используется давление воздуха, чтобы разбить жидкий раствор на капельки аэрозоля. Ультразвуковой небулайзер работает с помощью пьезоэлектрического кристалла, который дробит жидкость на мелкие капельки аэрозоля. В компрессорной системе небулайзера раствор под давлением проходит через мелкие поры для образования капель аэрозоля. В устройстве с вибрирующей пористой пластиной используется быстрая вибрация для дробления потока жидкости до соответствующих размеров капель.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения композиция для ингаляции доставляется в эндобронхиальным пространство в виде аэрозоля, содержащего частицы с ММАД, преимущественно, размером в интервале между примерно 1 и примерно 5 мкм с использованием небулайзера, способного преобразовывать состав с соединением формулы (I) или формулы (II) в аэрозоль с частицами необходимого ММАД. Для того чтобы быть оптимально терапевтически эффективными и избегать верхних дыхательных путей и системных побочных эффектов, большинство из аэрозольных частиц не должно иметь ММАД больше, чем примерно 5 мкм. Если аэрозоль содержит большое количество частиц с ММАД размером более 5 мкм, частицы оседают в верхних дыхательных путях, что уменьшает количество лекарственного средства, доставляемого к месту воспаления и бронхоспазма в нижних отделах дыхательных путей. Если ММАД аэрозоля меньше чем примерно 1 мкм, то частицы имеют тенденцию оставаться во взвешенном состоянии во вдыхаемом воздухе и впоследствии выдыхаются в процессе выдоха.
При изготовлении и доставке лекарственной формы в соответствии со способом, описанным в настоящем изобретении, аэрозольную композицию для ингаляции обеспечивает терапевтически эффективную дозу соединения формулы (I) или формулы (II) к участку инфекции Рпеитоутпае, достаточную для лечения инфекции Рпеитоутпае. Количество вводимого лекарственного средства должно быть скорректировано с учетом эффективности доставки терапевтически эффективной дозы соединения формулы (I) или формулы (II). В предпочтительном варианте осуществления изобретения комбинация водной аэрозольной композиции с распылительным, струйным, компрессорные, с вибрирующей пористой пластиной или ультразвуковым небулайзером позволяет обеспечить доставку в дыхательные пути, в зависимости от небулайзера, приблизительно по меньшей мере 20 до приблизительно 90%, как правило, около 70% вводимой дозы соединения формулы (I) или формулы (II). В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере, доставляется приблизительно от 30 до приблизительно 50% активного соединения. Более предпочтительно, доставляется от около 70 до около 90% активного соединения.
В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или формулы (II) или их фармацевтически приемлемая соль доставляются в виде сухого порошка для ингаляции. Соединения вводят эндобронхиально в виде препарата сухого порошка для успешной доставки мелких частиц соединения в эндобронхиальное пространство с использованием сухого порошка или дозирующего ингалятора. Для доставки с помощью ИСП соединение формулы (I) или формулы (II) перерабатывают в частицы, преимущественно, с ММАД в интервале между примерно 1 и примерно 5 мкм путем размола распылительной сушкой, обработкой в критической жидкости или осаждением из раствора. Устройства и способы размола в среде, с помощью струйной мельницы и сушки распылением, которые могут позволить достичь размеров частиц с ММАД от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм, хорошо известны в
- 7 029712
данной области техники. В одном варианте осуществления изобретения перед обработкой до частиц требуемых размеров к соединению формулы (I) или формулы (II) добавляют вспомогательные вещества. В другом варианте осуществления изобретения вспомогательные вещества смешивают с частицами требуемого размера для способствования диспергирования частиц лекарственного средства, например, используя в качестве вспомогательного вещества лактозу.
Определение размера частиц осуществляют с использованием устройств, хорошо известных в данной области техники. Например, многоступенчатый каскадный сепаратор Андерсона или иной подходящий способ, которые конкретно указаны в Фармакопее США, глава 601, в качестве характерных устройств для аэрозолей в дозированных ингаляторах и ингаляторах сухого порошка.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или формулы (II) доставляется в виде сухого порошка с использованием такого устройства, как ингалятор сухого порошка или иные устройства для рассеивания сухого порошка. Неограничивающие примеры ингаляторов сухого порошка и устройств включает такие, которые описаны в υδ 5458135; υδ 5740794; И8 5775320; υδ 5785049; υδ 3906950; υδ 4013075; υδ 4069819; υδ 4995385; υδ 5522385; υδ 4668218; υδ 4667668; υδ 4805811 и υδ 5388572. Существуют две основные конструкции ингаляторов сухого порошка. Одна конструкция представляет собой дозирующее устройство, в котором резервуар для лекарственного средства помещен внутри устройства, и пациент добавляет дозу лекарственного средства в ингаляционную камеру. Вторая конструкция представляет собой заводское дозированное устройство, в котором каждая индивидуальная доза помещена в отдельный контейнер. Обе системы зависят от состава препарата из мелких частиц с ММАД от 1 и 5 мкм и часто включают приготовление лекарств вместе с более крупными частицами вспомогательных веществ, таких как, но не ограничиваясь ими, лактоза. Порошок лекарственного средства помещают в ингаляционную камеру (либо дозирующим устройством, либо отделением отмеренной заводской дозы), и вдох пациента ускоряет выход порошка из устройства в ротовую полость. Характеристики неламинарного потока пути порошка вызывают разрушение агрегатов вспомогательного вещества - лекарственного средства, и масса крупных частиц вспомогательных веществ приводит к их удержанию на задней части глотки, в то время как более мелкие частицы лекарственного средства оседают глубоко в легких. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или формулы (II), или их фармацевтически приемлемая соль доставляются в виде сухого порошка с использованием ингалятора сухого порошка любого типа, как описано в настоящем документе, когда ММДЦ сухого порошка, исключая какие-либо вспомогательные вещества, составляет преимущественно от 1 до около 5 мкм.
В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или формулы (II) доставляется в виде сухого порошка с использованием дозирующего ингалятора. Неограничивающие примеры дозирующих ингаляторов и устройств включают такие, которые описаны в υδ 5261538; υδ 5544647; υδ 5622163; υδ 4955371; υδ 3565070; υδ 3361306 и υ δ6116234. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или формулы (II) или их фармацевтически приемлемая соль доставляются в виде сухого порошка с использованием дозирующего ингалятора, когда ММАД сухого порошка, исключая какие-либо вспомогательные вещества, составляет преимущественно примерно 1-5 мкм.
Композиции, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде вагинальных суппозиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спреев, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые известны в данной области как подходящие для этих целей.
Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические агенты и растворенные вещества, которые делают препарат изотоническим относительно крови предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители.
Композиции представлены в разовых или в многодозовых контейнерах, например в запаянных ампулах и флаконах, и могут храниться в высушенном замораживанием (лиофилизированном) состоянии, что требует только добавление стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед использованием. Импровизированные растворы и суспензии для инъекций получают из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного типа. Предпочтительными являются такие стандартные дозированные составы, которые содержат дневную дозу или единичную часть дневной дозы, как описано выше, или соответствующую ее часть, активного ингредиента.
Следует учитывать, что помимо ингредиентов, в частности упомянутых выше, композиции могут включать другие агенты, обычно используемые в данной области с учетом вида рассматриваемого состава, например, составы, пригодные для перорального введения, могут включать вкусовые агенты.
Кроме того, предложены ветеринарные композиции, содержащие по меньшей мере один активный ингредиент, как определено выше, вместе с ветеринарно приемлемым носителем.
Ветеринарно приемлемыми носителями являются вещества, используемые для введения композиции, и они могут быть твердыми, жидкими или газообразными материалами, которые, с другой стороны, являются инертным или приемлемым в ветеринарии и совместимы с активным ингредиентом. Эти вете- 8 029712
ринарные композиции могут быть введены перорально, парентерально или любым другим желательным путем.
Соединения, упомянутые в настоящем документе, используются для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, содержащего в качестве активного ингредиента одно или несколько соединений ("составы с контролируемым высвобождением"), в которых высвобождение активного ингредиента является контролируемым и регулируемым, что позволяет уменьшить частоту приема или улучшить фармакокинетику или профиль токсичности данного активного ингредиента.
Эффективная доза активного ингредиента зависит, по крайней мере, от природы заболевания, подлежащего лечению, токсичности, от того, используется ли данное соединение для профилактики (более низкие дозы) или против активной вирусной инфекции, способа доставки, а также фармацевтического состава, и будет определяется лечащим врачом с использованием обычных исследований с эскалацией дозы. Можно ожидать, что она будет составлять от примерно 0,0001 до примерно 100 мг/кг массы тела в сутки; как правило, от примерно 0,01 до примерно 10 мг/кг массы тела в сутки; более типично, от около 0,01 до около 5 мг/кг массы тела в сутки; наиболее типично, от примерно 0,05 до примерно 0,5 мг/кг массы тела в сутки. Например, предполагаемая суточная доза для взрослого человека с массой тела около 70 кг находится в пределах от 1 до 1000 мг, предпочтительно от 5 до 500 мг, и может быть в виде единичной или нескольких доз.
Пути введения.
Одно или несколько соединений (называемых здесь как активные ингредиенты) вводятся любым путем, соответствующим состоянию, подлежащего лечению. Подходящие способы включают пероральный, ректальный, назальный, легочный, местный (в том числе трансбуккальный и подъязычный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный) и тому подобное. Следует принять во внимание, что предпочтительный путь может меняться в зависимости, например, от состояния реципиента. Преимуществом рассматриваемых в данном документе соединений является то, что они являются перорально биологически доступными и могут быть введены перорально.
Комбинационная терапия.
Композиции используются также в комбинации с другими активными ингредиентами. Для лечения инфекций вирусом Риеитоушпаек, предпочтительно, другой активный терапевтический агент активен против инфекции вируса Рпеитоутпаек, в частности респираторно-синцитиальной вирусной инфекции.
Неограничивающими примерами таких других активных терапевтических агентов являются рибавирин, паливизумаб, мотавизумаб, К§У-Ю1У (КекрЮат®), ΜΕΌΙ-557, А-60444 (известный также как К8У604), ΜΌΤ-637, ΒΜδ-433771, АЬЫ-КЬУО, АЬХ-0171 и их смеси.
Многие инфекции вирусами Рпеитоутпае являются респираторными инфекциями. Таким образом, дополнительные активные терапевтические средства, используемые для лечения респираторных симптомов и осложнений от инфекции, могут быть использованы в комбинации с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ). Дополнительные агенты предпочтительно вводят перорально или путем прямой ингаляции. Например, другие предпочтительные дополнительные терапевтические агенты в комбинации с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ) для лечения вирусных инфекций дыхательных путей включают, но не ограничиваются только ими, бронхолитики и кортикостероиды.
Глюкокортикоиды, которые впервые были использованы в качестве терапевтических средств при астме в 1950 (Саггуег, 1оитпа1 о£ А11етду, 21, 282-287, 1950), по-прежнему остаются самой мощной и стабильно эффективной терапией этого заболевания, хотя механизм их действия еще до конца не изучен (Моптк, 1. А11етду С1иг 1ттипо1., 75 (1 Р1) 1-13, 1985). К сожалению, пероральные глюкокортикоидные терапевтические средства ассоциируются со значительными нежелательными побочными эффектами, такими как ожирение тела, гипертония, глаукома, нарушение толерантности к глюкозе, ускорение образования катаракты, потеря костной ткани, а также психологические эффекты, все они ограничивают их использование в качестве долгосрочных терапевтических агентов (Оообтаи и СПтап, 101Н ебйюп, 2001). Решением для системных побочных эффектов является доставка стероидных препаратов непосредственно к месту воспаления. Ингаляционные кортикостероиды (ИКС) были разработаны, чтобы смягчить тяжелые побочные эффекты пероральных стероидов. Неограничивающими примерами кортикостероидов, которые могут быть использованы в комбинации с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ), являются дексаметазон, дексаметазона натрия фосфат, фторметолон, фторметолон ацетат, лотепреднол, лотепреднол этабонат, гидрокортизон, преднизолон, флудрокортизоны, триамцинолон, триамцинолона ацетонид, бетаметазон, беклометазона дипропионат, метилпреднизолон, флуоцинолон, флуоцинолона ацетонид, флунизолид, флюокортин-21-бутилат, флуметазон, флуметазон пивалат, будесонид, галобетазола пропионат, мометазона фуроат, флутиказона пропионат, циклесонид; или их фармацевтически приемлемые соли.
Другие противовоспалительные агенты, работающие посредством противовоспалительных каскадных механизмов, также могут быть использованы в качестве дополнительных терапевтических агентов в комбинации с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ) для лечения вирусных инфекций дыхательных путей. Применение "противовоспалительных модуляторов передачи сигнала" (далее указываемые в
- 9 029712
тексте как ΑΙ3ΤΜ), таких как ингибиторы фосфодиэстеразы (например, ΡΌΕ-4, ΡΌΕ-5 или ΡΌΕ-7 специфические), ингибиторы фактора транскрипции (например, блокирующие ΝΡκΒ посредством ингибирования ΙΚΚ) или ингибиторы киназ (например, блокирующие Р38 ΜΑΡ, 1ΝΚ. ΡΙ3Κ, ΕΟΡΚ или Зук), является логическим подходом к снятию воспаления, поскольку эти малые молекулы нацелены на ограниченное число общих внутриклеточных путей - тех путей сигнальной трансдукции, которые являются критическими точками для противовоспалительного терапевтического вмешательства (см обзор Ρ.Ε Вагпек, 2006). Эти неограничивающие дополнительные терапевтические агенты включают
5-(2,4-дифторфенокси)-1-изобутил-1Н-индазол-6-карбоновую кислоту (2-диметиламиноэтил)амид (Р38 ингибитор киназы Аггу-797);
3- циклопропилметокси-^(3,5-дихлорпиридин-4-ил)-4-дифторметоксибензамид (ΡΌΕ-4 ингибитор РоЛитПаЛ);
4- [2-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэтил]амид (ΡΌΕ-4 ингибитор ΟΌΡ-840);
^(3,5-дихлор-4-пиридинил)-4-(дифторметокси)-8-[(метилсульфонил)амино]-1дибензофуранкарбоксамид (ΡΌΕ-4 ингибитор Од1етйа81);
^(3,5-дихлорпиридин-4-ил)-2-[1-(4-фторбензил)-5-гидрокси-1Н-индол-3-ил]-2-оксоацетамид (ΡΌΕ4 ингибитор Α\νΌ 12-281);
(3,5-дихлор-1-оксипиридин-4-ил)амид 8-метокси-2-трифторметилхинолин-5-карбоновой кислоты (ΡΌΕ-4 ингибитор Зсй 351591);
4-[5-(4-фторфенил)-2-(4-метансульфинилфенил)-1Н-имидазол-4-ил]пиридин (Р38 ингибитор ЗВ-203850);
4-[4-(4-фторфенил)-1 -(3 -фенилпропил)-5-пиридин-4-ил-1Н-имидазол-2-ил]бут-3 -ин-1 -ол (Р38 ингибитор ΚνΤ-67657);
2-диэтиламиноэтиловый эфир 4-циано-4-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)циклогексанкарбоновой кислоты (2-диэтилэтиловый эфирное пролекарство циломиласт,
ΡΌΕ-4 ингибитор); (3-хлор-4-фторфенил)-[7-метокси-6-(3-морфолин-4-илпропокси)хиназолин-4ил]амин (ОеййшЬ, ингибитор ΕΟΡΚ); а также
4-(4 -метилпиперазин-1 -илметил)-Ν-|4-\ 1етил-3-(4 -пиридин-3 -илпиримидин-2 иламино)фенил]бензамид (иматиниб, ингибитор ΕΟΡΚ).
Комбинации, содержащие ингалируемые бронходилататоры агонисты в2-адренорецепторов, такие как формотерол, сальметерол или сальбутамол, с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ) также являются подходящими, но не ограничивающими, комбинациями, которые могут использоваться для лечения респираторных вирусных инфекций.
Комбинации ингалируемых бронходилататоров агонистов в2-адренорецепторов, таких как формотерол или сальметерол, с ИКС также используются для лечения как бронхоспазма, так и воспаления (ЗутЫсой® и Абуаи® соответственно). Комбинации, содержащие эти ИКС и комбинации агонистов β2адренорецепторов вместе с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ), также являются подходящими, но не ограничивающими объем настоящего изобретения, комбинациями, которые могут использоваться для лечения респираторных вирусных инфекций.
Для лечения или профилактики легочного бронхостеноза возможное применение имеют антихолинергические средства и, следовательно, они могут быть использованы в качестве дополнительных терапевтических агентов в комбинации с соединениями формулы (Ι) или формулы (ΙΙ) для лечения вирусных инфекций дыхательных путей. Эти антихолинергические средства включают, но этим не ограничиваются, антагонисты мускариновых рецепторов (в частности, подтипа М3), которые показали терапевтическую эффективность на человеке для подавления холинергического тонуса при ХОБЛ (Айек, 1999); 1{4-гидрокси-1-[3,3,3-трис-(4-фторфенил)пропионил]пирролидин-2-карбонил}пирролидин-2-карбоновая кислота (1 -метилпиперидин-4-илметил)амид; 3-[3 -(2-диэтиламиноацетокси)-2-фенилпропионилокси] -8изопропил-8-метил-8-азониабицикло[3,2,1]октан (ипратропиум-^^диэтилглицинат); 1-азабицикло[2,2,2]окт-3-иловый эфир 1-циклогексил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты (ЗоБГеиаст); 1-аза-бицикло[2,2,2]окт-3-иловый эфир 2-гидроксиметил-4-метансульфинил-2-фенилбутановой кислоты (реватропат); 2-{1-[2-(2,3-дигидробензофуран-5-ил)этил]-д-3-ил}-2,2дифенилацетамид (дарифенацин); 4-азепан-1-ил-2,2-дифенилбутирамид (бузепид); 7-[3-(2диэтиламиноацетокси)-2-фенилпропионилокси]-9-этил-9-метил-3-окса-9-азониатрицикло[3,3,1,02,4]нонан (окситропий-^^диэтилглицинат); 7-[2-(2-диэтиламиноацетокси)-2,2-ди-тиофен-2-илацетокси]-9,9диметил-3 -окса-9 -азониатрицикло [3,3,1,02,4] нонан (тиотропий-Ν,Ν-диэтилглицинат); 2-(3 диизопропиламино-1-фенилпропил)-4-метилфениловый эфир диметиламино-уксусной кислоты (толтеродин-^^диметилглицинат); 3-[4, 4-бис-(4-фторфенил)-2-оксоимидазолидин-1 -ил] -1 -метил-1-(2-оксо-2пиридин-2-илэтил)пирролидиний; 1-[1-(3 -фторбензил)пиперидин-4-ил] -4,4-бис-(4-фторфенил)имидазолидин-2-он; 1-циклооктил-3-(3-метокси-1-аза-бицикло[2,2,2]окт-3-ил)-1-фенилпроп-2-ин-1-ол; 3-[2-(2диэтиламиноацетокси)-2,2-ди-тиофен-2-илацетокси]-1-(3-феноксипропил)-1-азониабицикло[2,2,2]октан (аклидиний-^^диэтилглицинат); или 1-метил-1-(2-феноксиэтил)пиперидин-4-иловый эфир (2диэтиламиноацетокси)-ди-тиофен-2-ил уксусной кислоты.
- 10 029712
Соединения формулы (I) или формулы (II) также могут быть объединены с муколитиками для лечения как инфекции, так и симптомов респираторной инфекции. Неограничивающим примером муколитического агента является амброксол. Подобным образом, соединения формулы (I) или формулы (II) могут быть объединены с отхаркивающими средствами для лечения как инфекции, так и симптомов респираторной инфекции. Неограничивающим примером отхаркивающего средства является гвайфенезин.
Гипертонический солевой раствор для небулайзерной терапии используется в целях наилучшего использования сразу и надолго просвета мелких дыхательных путей у пациентов с заболеваниями легких (ΚιιζίΚ. I. РсФа1г1С5 2007, 266). Соединения формулы (I) или формулы (II) также могут быть объединены с распыленным гипертоническим раствором, особенно, когда инфекция вирусом Рпеишоутпае осложнена бронхиолитом. Сочетание соединений формулы (I) или формулы (II) с гипертоническим раствором также может включать любое из дополнительных средств, которые обсуждались выше. В одном варианте осуществления используется распыление около 3% гипертонического раствора.
Кроме того, можно комбинировать любое соединение с одним или несколькими дополнительными активными терапевтическими агентами в стандартной лекарственной форме для одновременного или последовательного введения пациенту. Комбинированный терапевтический препарат может быть введен в режиме одновременного или последовательного введения. При последовательном введении комбинацию можно вводить в виде двух или более введений.
Совместное введение соединения по настоящему документу с одним или несколькими другими активными терапевтическими агентами, как правило, относится к одновременному или последовательному введению соединения и одного или нескольких других активных терапевтических агентов таким образом, чтобы в организме пациента находились терапевтически эффективные количества как соединения, так и одного или нескольких других активных терапевтических агентов.
Совместное введение включает введение стандартных доз соединений перед или после введения стандартных доз одного или нескольких других активных терапевтических агентов, например введение соединений в течение нескольких секунд, минут или часов после введения одного или нескольких других активных терапевтических агентов. Например, сначала может быть введена стандартная доза соединения, затем, спустя несколько секунд или минут, введена стандартная доза одного или нескольких других активных терапевтических агентов. Альтернативно, сначала может быть введена стандартная доза одного или нескольких других терапевтических агентов, затем в течение нескольких секунд или минут введена стандартная доза соединения. В некоторых случаях может быть желательным введение сначала стандартной дозы соединения, затем введение, спустя несколько часов (например, 1-12 ч), стандартной дозы одного или нескольких других активных терапевтических агентов. В других случаях может быть желательным введение сначала стандартной дозы одного или нескольких других активных терапевтических агентов, затем введение, спустя несколько часов (например, 1-12 ч), стандартной дозы соединения по настоящему документу.
Комбинированная терапия может обеспечить "синергизм" и "синергический эффект", т.е. эффект, который достигается при использовании активных ингредиентов вместе и является большим, чем сумма эффектов, проявляющихся при использовании соединений по отдельности. Синергетический эффект может быть достигнут, когда активные ингредиенты: (1) входят в один состав и вводятся или доставляются одновременно в комбинированном препарате; (2) доставляются чередованием или параллельно в виде отдельных композиций; или (3) вводятся каким-либо другим режимом. При доставке путем чередующейся терапии синергический эффект может быть достигнут, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например, в виде отдельных таблеток, драже или капсул, или с помощью различных инъекций в отдельных шприцах. Обычно во время чередующейся терапии эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, т.е. поочередно, в то время как в комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводятся вместе. Синергетический антивирусный эффект означает противовирусное действие, которое больше, чем предсказанное чисто добавочных эффектов отдельных соединений в комбинации.
В еще одном варианте осуществления изобретения по настоящей заявке предложен способ лечения инфекции вирусом Рпеишоутпае у человека, где способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира. Также предложены некоторые способы лечения инфекции вирусом Рпеишоутпае у человека, каждый из которых включает введение человеку терапевтически эффективного фармацевтически эффективного количества соединения формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и фармацевтически приемлемого носителя и вспомогательного вещества.
В другом варианте осуществления изобретения предложен способ лечения инфекции Рпеишоушпае у человека путем ведения человеку терапевтически эффективного количества рацемата, энантиомера, диастереомера, таутомера, полиморфа, псевдополиморфа, аморфной формы, гидрата или сольвата соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира.
Кроме того, предложены некоторые способы лечения инфекции Рпеишоутпае у человека, при необходимости этого, где каждый способ включает введение человеку терапевтически эффективного коли- 11 029712
чество рацемата, энантиомера, диастереомера, таутомера, полиморфа, псевдополиморфа, аморфной формы, гидрата или сольвата соединения формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенных в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира.
В еще одном варианте осуществления изобретения в настоящей заявке предложен способ лечения инфекции респираторно-синцитиального вируса человека у человека, где способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира.
В еще одном варианте осуществления изобретения в настоящей заявке предложен способ лечения инфекции респираторно-синцитиального вируса человека у человека, где способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и по меньшей мере одного дополнительного активного терапевтического агента.
Кроме того, предложены некоторые способы лечения инфекции респираторно-синцитиального вируса человека у человека, при необходимости этого, где каждый способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира.
Также предложены некоторые способы лечения инфекции респираторно-синцитиального вируса человека у человека, при необходимости этого, где каждый способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и по меньшей мере одного дополнительного активного терапевтического агента.
Также предложены некоторые способы лечения инфекции респираторно-синцитиального вируса человека у человека, при необходимости этого, когда человек, кроме того, страдает бронхиолитом, где каждый способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира.
Также предложены некоторые способы лечения инфекции респираторно-синцитиального вируса человека у человека при необходимости этого, когда человек, кроме того, страдает пневмонией, где каждый способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира.
Также предложены некоторые способы улучшения симптомов респираторных заболеваний у человека, страдающего инфекцией респираторно-синцитиального вируса человека, где каждый способ включает введение человеку терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира.
Респираторные симптомы у человека, страдающего респираторно-синцитиальной вирусной инфекцией, могут включать заложенный нос или насморк, кашель, затрудненное дыхание, чихание, быстрое дыхание или затрудненное дыхание, одышку, бронхиолит и пневмонию.
Также предложен вариант осуществления изобретения, включающий применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира при изготовлении лекарственного средства для лечения инфекции вирусом Рпеитоутпае или респираторносинцитиальной вирусной инфекции.
Также предложен вариант осуществления изобретения, включающий применение соединения формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира при изготовлении лекарственного средства для лечения инфекции вирусом Рпеитоутпае или респираторно-синцитиальной вирусной инфекции.
Также предложен фармацевтический состав, содержащий фармацевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество. Кроме того, предложен фармацевтический состав, содержащий фармацевтически эффективное количество соединения формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество.
Также предложен фармацевтический состав, содержащий фармацевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество и фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного дополнительного активного терапевтического агента. Кроме того, предложен фармацевтический состав, содержащий фармацевтически эффективное количество соедине- 12 029712
ния формулы (II) или одного из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата и/или сложного эфира и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество и фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного дополнительного активного терапевтического агента.
Также предложены некоторые варианты осуществления изобретения, включающие соединение формулы (I), формулы (II) или одно из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир для применения при лечении инфекции вирусом Рпеитоушпае или респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у человека.
Также предложены некоторые варианты осуществления изобретения, включающие соединение формулы (I), формулы (II) или одно из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир для использования в качестве лекарственного средства.
Также предложены некоторые варианты осуществления изобретения, включающие способ изготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения инфекции вирусом Рпеитоушпае или респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у человека, характеризующийся тем, что используется соединение формулы (I), формулы (II) или одно из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемая соль, сольват и/или сложный эфир.
Также предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, сольват и/или сложный эфир для лечения инфекции вирусом Рпеитоушпае или респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у человека.
Также предложены некоторые варианты осуществления изобретения, включающие соединение формулы (II) или одно из конкретных соединений по примерам, приведенным в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир для лечения инфекции вирусом Рпеитоушпае или респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у человека.
Кроме того, предложено соединение, описанное в настоящем описании. Также предложена фармацевтическая композиция, описанная в настоящем описании. Также предложен способ применения соединения формулы (I), описанный в настоящем описании. Кроме того, предложен способ получения соединения формулы (I), описанный в настоящем описании.
Метаболиты соединений.
Кроме того, в рамки настоящего документа подпадают щ У1уо метаболические продукты соединений, описанных в настоящем документе, в той мере, в какой такие продукты являются новыми и неочевидными относительно известного уровня техники. Такие продукты могут быть результатом, например, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, этерификации и т.п. вводимого соединения, главным образом, вследствие ферментативных процессов. Соответственно, охватываются новые и неочевидные соединения, образованные способом, включающим контактирование соединения с организмом млекопитающего в течение периода времени, достаточного для образования метаболического продукта этого соединения. Такие продукты, как правило, идентифицируются получения меченного радиоактивным изотопом (например, 14С или 3Н) соединения, введения его парентерально в обнаруживаемой дозе (например, выше чем примерно 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна или человек, предоставляя достаточно времени для протекания метаболизма (обычно примерно от 30 с до 30 ч) и выделяя продукты их преобразования из мочи, крови или других биологических образцов. Эти продукты можно легко выделить, поскольку они мечены (другие выделяют путем использования антител, способных связывать эпитопы, сохраняющиеся в метаболите). Структуры метаболитов определяются обычным образом, например, с помощью Μδ или ЯМР-анализа. Обычно анализ метаболитов осуществляют таким же образом, как и обычные исследования метаболизма лекарственных средств, хорошо известные специалистам в этой области техники. Продукты конверсии, при условии, что они в ином случае не обнаруживаются ш У1уо, могут быть использованы в диагностических анализах для терапевтического дозирования соединений, даже если они сами по себе не обладают Ηδν противовирусной активностью.
Средства и способы определения стабильности соединений в заместительных желудочно-кишечных секрециях известны. Соединения определяются в настоящем документе как стабильные в желудочнокишечном тракте, когда в случае для менее чем примерно 50 мол.% защищенных групп удаляется защита в заместительном желудочного соке или соке кишечника при инкубировании в течение 1 ч при 37°С. Просто стабильность соединений в желудочно-кишечном тракте, не означает, что они не могут быть гидролизованы ш У1уо. Пролекарства обычно стабильны в пищеварительной системе, но могут быть в значительной степени гидролизованы до исходного препарата в пищеварительном канале, печени, легких или других органах метаболизма, или, главным образом, в клетках. Как используется в данном описании, под пролекарством понимается соединение, которое химически предназначено для эффективного высвобождения исходного лекарственного средства после того, как как оно преодолеет биологические барьеры при пероральной доставке.
Сокращения.
При описании экспериментальных подробностей используются некоторые сокращения и аббревиа- 13 029712
туры. Хотя большинство из них понятно специалисту в этой области техники, в таблице приведен список многих из этих сокращений и аббревиатур.
Перечень сокращений и аббревиатур
Сокращения Значение
Ас ацетат
АСЫ ацетонитрил
ΑΙΒΝ азобисизобутиронитрил
Вп бензил
Ви бутил
Βζ бензоил
ΒζΟΙ бензоил хлорид
СО1 1,1'-карбонилдиимидазол
ΏΑ5Τ трифторид диэтиламиносеры
ОСЕ 1,2-дихлорэтан
ОСМ дихлорметан
ОМАР 4-диметиламинопиридин
ϋΜΌΟ Диметилдиоксиран
ДМСО диметилсульфоксид
ДМФ диметилформамид
ОМТгС1 4,4'-диметокситритилхлорид
ОМТг 4,4'-диметокситритил
ΕϋΟΙ Ν- (3-иметиламинопропил)-Ν'-этилкарбодиимид гидрохлорид
ЕД этил
Ιπιίά имидазол
КОДВи трет-бутоксид калия
ЖХ жидкостная хроматография
МСРВА мета-хлорпербензойная кислота
Ме метил
ш/ ζ отношение массы к заряду
МС или мс Масс спектр
N15 Ν-йодсукцинимид
ΝΜΡ А?-метил-2-пирролидон
РЬ фенил
РЬ3Р трифенилфосфин
РМВ пара-метоксибензил
РМВС1 пара-метоксибензил хлорид
РЬОС(5)С1 фенилхлортионоформиат
(РЬО)3РМе1 йодид метилтрифеноксифосфония
Руг пиридин
НТ комнатная температура
ТВАЕ Фторид тетрабутиламмония
ТВ5 трет-бутилдиме тилсилил
ТВ5С1 трет-бутилдиметилсилил хлорид
- 14 029712
Общие схемы.
ΤΜ5Ν3 триметилсилил азид
ТЕА триэтиламин
ТЕЗ триэтилсилан
ТФУ трифторуксусная кислота
ТГФ тетрагидрофуран
ТМЗ триметилсилил
ТМЗС1 триметилсилил хлорид
Тз 4-толуолсульфонил
ТзОН п-толуолсульфоновая кислота
δ миллионные доли, указываемые относительно остаточного пика недейтерированного растворителя
На схеме 1 показан общий путь синтеза промежуточных соединений, начиная с реакции йодирования (например, ΝΊ3) с целью получения нуклеинового основания 31Ь.
На схеме 2 показан общий путь синтеза промежуточных соединений, начиная с реакции фторирования (например, НВТ4, ΝΝΟ2) способом, подобным тому, который описан в АО 2012/037038 А1, с получением промежуточного соединения 32Ь. Промежуточное соединение 32Ь затем может быть йодировано (например, №3) с целью получения нуклеинового основания 32с.
взаимодействие н-ВиЫ, [-СН231Ме2С1]2) с соответствующим нуклеиновым основанием 33Ь, затем добавление к лактону 33а. Восстановление боковой 1'-гидроксильной группы в среде кислоты Льюиса (например, βΡ3·Εί2Ο, Εί33ΐΗ) дает промежуточное соединение 33с. Промежуточное соединение 33с сначала
- 15 029712
может быть защищено (например, Βζϋί, Руг; ΝΗ4ΟΗ) по азотной функциональной группе, и бензильные группы затем могут быть удалены в условиях восстановления (например, НСО2Н, Рб/С, ВС13, ВВг3) с получением промежуточного соединения З3б. Последовательность, включающая сначала селективную защиту 5'-гидроксила (например, ЭМТгС1), затем защиту 2'- и З'-гидроксила (например, ТВ8С1), затем селективное удаление 5'-гидроксильной защитной группы в кислотных условиях (например, ТзОН) приводит к получению промежуточного соединения ЗЗе. 5'-гидроксильная группа затем может быть преобразована в соответствующий йодид (например, (РЬО)3РМе1), который затем подвергается воздействию основных условий (т.е. КО1Ви) для осуществления реакции элиминирования, давая промежуточное соединение З3£ Окисление олефина З3£ (например, ΌΜΌΟ) с последующей обработкой соответствующим нуклеофилом (например, ТМЗСА) в среде кислоты Льюиса (например, 1пВг3) и удаление гидроксильных защитных групп (например, СзР) дают промежуточное соединение З3д. Удаление защитной группы азота (например, ИН2Ме) приводит к получению конечного соединения типа З3Ь.
Схема 4
На схеме 4 показан общий путь синтеза соединений, начиная с окисления олефина З3£ (например, РМРО) с последующей обработкой соответствующим нуклеофилом (например, ТМЗУ) в среде кислоты Льюиса (например, 1пВг3) способом, подобным тому, который описан в 1. Меб. СЬет. 2007, 50, 54635470. Удаление гидроксильных защитных групп (например, СзР) дает далее промежуточное соединение З4а. Удаление защитной группы азота (например, ИН2Ме) приводит к получению конечного соединения типа З4Ь.
Схема 5
На схеме 5 показан общий путь синтеза соединений, начиная с окисления олефина З3£ (например, РМРО) в присутствии соответствующего спирта НОКа с последующим удалением гидроксильных защитных групп (например, СзР) и получением промежуточного соединения З5а. Удаление защитной группы азота (например, ИН2Ме) приводит к получению конечного соединения типа З5Ь.
Схема 6
На схеме 6 показан общий путь синтеза соединений, начиная с окисления олефина З3£ (например, РМРО) с последующей обработкой соответствующим нуклеофилом (например, (НС=С)3А1) способом, подобным тому, который описан в М1с1еозк1ез, Мкск'онбез, апб ΝεΕίε Ас1бз 2005, 24, 343-347. Удаление гидроксильных защитных групп (например, СзР) дает далее промежуточное соединение З6а. Удаление защитной группы азота (например, ИН2Ме) приводит к получению конечного соединения типа З6Ь. Обработка конечного соединения в условиях гидрирования (например, Н2, Рб/С или катализатор Линдлара) может привести к селективному получению конечного соединения типа З6с и З6б соответственно. Преобразование конечного соединения З6б посредством образования циклопропанового кольца (например, СН^2) может привести к получению конечных соединений типа З6е.
- 16 029712
Схема 7
На схеме 7 показан общий путь синтеза соединений, начиная с синтетической последовательности по защите азота (например, ТМ8С1, Руг; Βζϋΐ, Руг; ΝΗ4ΟΗ) у промежуточного соединения 87а, синтезированного таким же образом, как описано в ΥΟ 2012037038 А1. Селективная защита 5'-гидроксильной группы (например, 1)МТгС1) дает затем промежуточное соединение 87Ъ. Защита 2'-гидроксильной группы (например, ТВ8С1), затем удаление 5'-гидроксильной группы в кислотных условиях (например, ΤδΟΗ) дает промежуточное соединение 87е. Преобразование 5'-гидроксильной группы в альдегид в условиях окисления (например, ЕЭС1-НС1, Руг, ТФУ, ДМСО), затем конденсация соответствующего енолята с формальдегидом и восстановление (например, ΝαΒΗ4) дают промежуточное соединение 87£. Последующая селективная защита гидроксильных групп ортогональными защитными группами (например, [)МТгС1 и ТВ8С1), затем удаление большей части подвижных защитных групп в кислотных условиях (например, ТАЛ Р) дает далее промежуточное соединение 87д. Преобразование гидроксильной группы в альдегид в условиях окисления (например, ΕΏΟ-ΗΟ, Руг, ТФУ, ДМСО) дает промежуточное соединение 87й. Преобразование альдегида 87й в галоген олефиновое промежуточное соединение 87Ϊ может быть осуществлено в условиях олефинизации Виттига (например, | РН3РС112Βΐ'|'Βΐ'-, ΚΟίΒπ). Реакция элиминирования в щелочных условиях (например, ΚΟίΒπ) дает алкин, и удаление гидроксильных защитных групп (например, ΤΒАΡ) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводит к получению конечного соединения типа 87).
На схеме 8 показан общий путь синтеза соединений, начиная с образования оксима (например, ΝΗ2ΟΗ·ΗΟ) с последующим преобразованием оксима в нитрильную группу (например, СО1). Удаление защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) и гидроксильных защитных групп (например, I ПЛАт) приводит затем к получению конечного соединения типа 88а.
Схема 9
- 17 029712
На схеме 9 показан общий путь синтеза соединений, начиная с преобразования альдегида 871ι в олефин в условиях олефинизации Виттига (например, [Рй3РСН3] Вг-, ΚΟίΒιι). Удаление гидроксильных защитных групп (например, ТВАР) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводит к получению конечного соединения типа 89а. Реакция восстановления (например, Н2, Рб/С) может затем давать конечные соединения типа 89Ь, и реакция образования циклопропанового цикла (например, СН^2) может давать конечные соединения типа 89с.
Схема 10
На схеме 10 показан общий путь синтеза соединений, начиная с реакции Аппеля (например, Ρ1ι3Ρ. СС14) для преобразования гидроксильной группы в хлорид. Удаление гидроксильных защитных групп (например, ТВАР) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводит к получению конечного соединения типа 810а.
Схема 11
На схеме 11 показан общий путь синтеза соединений, начиная с защиты свободной гидроксильной группы промежуточного соединения 87д подвижной защитной группой (например, РМВС1, К2СО3). Селективное удаление 2' и 5' силилокси защитных групп (например, ТВАР), затем повторная защита устойчивыми защитными группами (например, ВпВг, Ν;·ιΗ) и удаление подвижных гидроксильных защитных групп в кислотных условиях (например, АсОН) дает промежуточное соединение 811а. Преобразование гидроксильной группы во фтор (например, ΟΛ8Τ), затем удаление гидроксильных защитных групп (например, ВВг3) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводит к получению конечного соединения типа 811Ь.
На схеме 12 показан общий путь синтеза соединений, начиная с преобразования 5'-гидроксильной группы в соответствующий йодид (например, (Ρ1ιΟ)3ΡΜχΊ), который затем обрабатывают в щелочных условиях (т.е. КСЙВи) для осуществления реакции элиминирования, получая промежуточное соединение 812а. Окисление олефина 812а (например, ΟΜΟΟ) с последующей обработкой соответствующим нуклеофилом (например, ΤΜ8Ν3) в среде кислоты Льюиса (например, 8пС14) способом, подобным тому, который описан в I. Меб. Сйет. 2007, 50, 5463-5470, и удаление гидроксильных защитных групп (например, С§Р) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводит к получению конечного соединения типа 812Ь.
- 18 029712
На схеме 13 показан общий путь синтеза соединений, начиная с окисления олефина δ12α (например, ОМОО) в присутствии соответствующего спирта НОКа и удаления гидроксильных защитных групп (например, С§Р). Удаление защитной группы азота (например, N РМе) приводит к получению конечного соединения типа δ13α.
Схема 14
На схеме 14 показан общий путь синтеза соединений, начиная с образования ксантата (например, РЬОС(8)С1, ΏΜΑΡ) с последующей реакцией деоксигенирования по Бартон-МакКомби (например, (ΤΜδ)3δΐΗ, ΑΣΒΝ) с целью получения промежуточного соединения δ14α. Удаление гидроксильных защитных групп (например, ΤΒΑΡ) и защитной группы азота (например, N11.|О11) приводит к получению конечного соединения типа δ14Ε
На схеме 15 показан общий путь синтеза соединений, начиная с промежуточного соединения δ15α, полученного способом, подобным тому, который описан в Βΐοδοΐ. Вю!есЕ. ВюсЕеш. 1993, 57, 1433-1438. Удаление ацетатных защитных групп в условиях гидролиза (например, К2СО3, МеОН), затем хемоселективное окисление (например, ΝΣδ, Ви4№) и защита 2'-гидроксильной группы (например, ВпВг, Ад2О) дают промежуточное соединение δ15Β. Обмен литий-галоген (например, н-Ви1а. [-СН^1Ме2С1]2) с соответствующим нуклеиновым основанием δ3Β и добавление к лактону δ15Β, затем восстановление 1'гидроксильной группы в среде кислоты Льюиса (например, ВР3-Е12О, 123δίΙ I) и удаление защитных групп (например, Н2, Ρά чернь) приводит к получению конечного соединения типа δ15^
На схеме 16 показан общий путь синтеза соединений, начиная с преобразования 5'-гидроксильной группы в альдегид в условиях окисления (например, ЕПСЕНС1, Руг, ТФУ, ДМСО), затем конденсация соответствующего енолята с формальдегидом и восстановление (например, №ВНд) приводят к получению промежуточного соединения δ16α. Последующая селективная защита гидроксильных групп ортогональными защитными группами (например, ОМТгС1 и ΤΒδС1), затем удаление более подвижной защитной группы в кислотных условиях (например, Т§ОН) дают далее промежуточное соединение δ16Ε Реакцией Аппеля (например, РЕ3Р, СС14) можно затем преобразовать гидроксильную группу в хлорид, и уда- 19 029712
ление гидроксильных защитных групп (например, ТВАР) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводит к получению конечного соединения типа 816с.
На схеме 17 показан общий путь синтеза соединений, начиная с защиты свободной гидроксильной группы промежуточного соединения 8166 подвижной защитной группой (например, РМВС1, К2СО3). Селективное удаление 2', 3', и 5' силилокси защитных групп (например, ТВАР), затем повторная защита устойчивыми защитными группами (например, ВпВг, ΝαΗ) и удаление подвижных гидроксильных защитных групп в кислотных условиях (например, АсОН) дают промежуточное соединение 817а. Преобразование гидроксильной группы во фтор (например, ЭА8Т), затем удаление гидроксильных защитных групп (например, ВВг3) и защитной группы азота (например, ΝΗ4ΟΗ) приводят к получению конечного соединения типа 8176.
На схеме 18 показан общий путь синтеза соединений с помощью соответствующих реакций электрофильного галогенирования промежуточного соединения 818а с получением целевых соединений типа 8186 (например, ^8), 818с (например, N18) и 8186 (например, 8е1ес1£1иог).
Схема 19
На схеме 19 показан общий путь синтеза соединений, начиная с реакции поперечного связывания (например, /п(С\’К Р6(Р1Ви)3) с получением целевых соединений типа 819а. Соединение 819а затем может быть синтезировано с помощью реакции гидролиза нитрила (например, Н2О2, ΝΗ4ΟΗ, Η2Ο) с получением соединения типа 8196.
Схема 20
На схеме 20 показан общий путь синтеза соединений, начиная с реакции Соногаширы (например, Си1, Р6С12(РРЬ3)2) с получением целевых соединений типа 820а.
- 20 029712
Схема 21
На схеме 21 показан общий путь синтеза соединений, начиная с реакции поперечного связывания (например, Рй(йрр1)С12, Сз2СО3) с получением целевых соединений типа 321а.
Схема 22
На схеме 22 показан общий путь синтеза соединений, включающий синтез фосфорилированных аналогов типа 322Ь.
Схема 23
На схеме 23 показан общий путь синтеза соединений, включающий синтез фосфорилированных аналогов типа 323Ь.
Схема 24
На схеме 24 показан общий путь синтеза соединений, включающий синтез фосфорилированных аналогов типа 324Ь.
Промежуточное соединение 1Ь.
В раствор промежуточного соединения 1а (50 мг, 373 ммоль) в ДМФ (1 мл) при комнатной температуре помещали Ν-йодсукцинимид (84 мг, 373 ммоль) в виде твердого вещества. Через 1,5 ч реакционную смесь разбавляли 1 М раствором ΝαΟΗ (10 мл) и полученную взвесь перемешивали при комнатной температуре. Через 1 ч твердые продукты собирали путем вакуумного фильтрования и сушили при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 1Ь.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 7,89 (с, 1Н), 7,78 (шир. с, 1Н), 6,98 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,82 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 3,30 (шир. с, 1Н).
ГХ/МС: 1К=1,21 мин, М3 ο/ζ=261,02 [М+1]; система ЖХ: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте!ех 2,6 мкм ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% ΑΠΝ, 2,0-3,05 мин 100% АСЧ 3,05-3,2 мин 100-2% АСЧ 3,2-3,5 мин 2% АСЫ" при
- 21 029712
2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ΐΓ=1,536 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: СетЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение Ы. (28,3К,4К,5К)-2-(4-Аминопирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-7-ил)-3,4бис-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)тетрагидрофуран-2-ол.
К суспензии 7-йодпирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-амина 1Ь (6,84 г, 26,3 ммоль) и 1,2-бис-(хлордиметилсилил)этана (5,66 г, 26,3 ммоль) в ТГФ (200 мл) при температуре -78°С в атмосфере аргона быстро добавляли н-бутиллитий (2,5М в гексане, 34,4 мл, 86,0 ммоль). В процессе добавления внутреннюю температуру реакционной смеси повышали до -40,5°С, и реакционная смесь становилась прозрачным раствором коричневого цвета. Через 15 мин через канюлю быстро добавляли раствор (3К,4К,5К)-3,4-бис-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)дигидрофуран-2(3Н)-она (1с, приобретено у фирмы СагЬозупШ, 10 г, 23,9 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл), предварительно охлажденном до температуры -78°С. Через 1 ч реакционную смесь гасили уксусной кислотой (15 мл) и полученной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляли этилацетатом (800 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (500 мл) и насыщенным солевым раствором (500 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с δΐθ2 (колонка 220 г δΐθ2 СотЫйазй НР СоШ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 1ά.
ГХ/МС: 1К=1,50 мин, М8 тУ=553,34 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСЫ, 1,5-2,2 мин 100% АСЫ, 2,2-2,4 мин 100-2% АСЫ, 2,4-2,5 мин 2% АСЫ.
ВЭЖХ: 1г=3,442 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: СетЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: этилацетат, Κί=0,5 (УФ)
Промежуточное соединение 1е. 7-((28,38,4К,5К)-3,4-бис-(Бензилокси)-5(бензилоксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-амин.
В раствор промежуточного соединения Ы (4,74 г, 8,58 ммоль) и триэтилсилана (3,56 мл, 22,3 ммоль) в ЭСМ (43 мл) медленно с помощью шприца при температуре 0°С в атмосфере аргона добавляли комплекс трифторида бора с диэтиловым эфиром (эфират трифторида бора) (1,59 мл, 12,9 ммоль). Спустя 2 ч реакционную смесь медленно разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (2x150 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с δΐθ2 (24 г δΐθ2 СотЬШазй НР СоШ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 1е.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 7,88 (с, 1Н), 7,37-7,22 (м, 15Н), 6,73 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,71 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,66 (д, 1=4,2 Гц, 1Н), 4,71 (с, 2Н), 4,60 (д, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,54 (с, 2Н), 4,45 (д, 1=11,9 Гц, 1Н), 4,39 (дт, 1=7,1, 3,6 Гц, 1Н), 4,25 (т, 1=4,6 Гц, 1Н), 4,14-4,10 (м, 1Н), 3,78 (дд, 1=10,7, 3,4 Гц, 1Н), 3,65 (дд, 1=10,7, 4,0 Гц, 1Н).
ГХ/МС: 1к=2,01 мин, М8 тУ=537,41 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСЫ, 1,5-2,2 мин 100% АСЫ, 2,2-2,4 мин 100-2% АСЫ, 2,4-2,5 мин 2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1к=3,596 мин; система ВЭЖХ: серии А§йеп1 1100; колонка: СетЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ,
- 22 029712
5,0-6,0 мин 98% АСИ при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: этилацетат, 17=0,3 (УФ)
Промежуточное соединение 1£. И-(7-((28,38,4К,5К)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 1е (3,94 г, 7,34 ммоль) в пиридине (36,7 мл) медленно при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли бензоил хлорид (1,69 мл, 14,68 ммоль). Через 1 ч медленно добавляли дополнительное количество бензоил хлорида (1,69 мл, 14,68 ммоль). Спустя 19 ч медленно добавляли воду (20 мл) и реакционная смесь становилась слегка мутной. Затем медленно добавляли гидроксид аммония (~10 мл) до тех пор, пока реакционная смесь не становилась щелочной с рН 10. Через 1 ч с помощью капельной воронки добавляли по каплям воду (150 мл) и по мере добавления из реакционной смеси начинало медленно выпадать в осадок твердое вещество белого цвета. Полученную смесь перемешивали в течение 24 ч и твердое вещество белого цвета собирали путем вакуумного фильтрования и сушили азеотропной отгонкой из толуола с получением промежуточного соединения 1 £.
1Н ЯМР (400 МГц, СБС13): δ 8,23 (шир. с, 1Н), 7,62 (т, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,53 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,38-7,21 (м, 18Н), 7,17 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,69 (д, 1=4,1 Гц, 1Н), 4,71 (с, 2Н), 4,63-4,44 (м, 4Н), 4,43-4,39 (м, 1Н), 4,22 (т, 1=4,5 Гц, 1Н), 4,15-4,10 (м, 1Н), 3,79 (дд, 1=10,8, 3,2 Гц, 1Н), 3,65 (дд, 1=10,7, 3,7 Гц, 1Н).
ГХ/МС: !К=1,91 мин, М8 ш//=641,18 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТЬегто БСр Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСИ, 1,5-2,2 мин 100% АСИ, 2,2-2,4 мин 100-2% АСИ, 2,4-2,5 мин 2% АСИ при 2 мкл/мин.
ТСХ: элюент: 50% этилацетат в гексане, Кг=0,6 (УФ)
Промежуточное соединение 1§. И-(7-((28,3К,48,5К)-3,4-Дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К смеси промежуточного соединения 1£ (4,39 г, 6,85 ммоль) и палладия на углероде (10 мас.%, 2,2 г) при комнатной температуре в атмосфере аргона последовательно добавляли этанол (68,5 мл) и муравьиную кислоту (51,7 мл, 1,37 моль). Спустя 3 д реакционную смесь фильтровали через слой из целита и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток азеотропно отгоняли с толуолом (3x20 мл) с получением промежуточного соединения 1д, которое напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1Н ЯМР (400 МГц, СБ3ОП): δ 8,15 (с, 1Н), 7,67-7,40 (м, 5Н), 7,23 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 7,00 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 5,40 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,44 (т, 1=5,7 Гц, 1Н), 4,17 (т, 1=5, 1 Гц, 1Н), 4,03 (ς, 1=4,3 Гц, 1Н), 3,81 (дд, 1=12,1, 3,5 Гц, 1Н), 3,71 (дд, 1=12,0, 4,5 Гц, 1Н).
ГХ/МС: !К=1,04 мин, М8 ш//=371,15 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТЬегто БСр Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСИ, 1,5-2,2 мин 100% АСИ, 2,2-2,4 мин 100-2% АСИ, 2,4-2,5 мин 2% АСИ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: !К=2,055 мин; система ВЭЖХ: серии АдЬеп! 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСИ, 5,0-6,0 мин 98% АСИ при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 1Ь. И-(7-((28,3К,48,5К)-5-((бис-(4-Метоксифенил)(фенил)метокси)ме- 23 029712
тил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 1д (2,44 г, 6,59 ммоль) в пиридине (32,5 мл) при комнатной температуре одной порцией в виде твердого вещества добавляли 4,4'-диметокситритил хлорид (2,23 г, 6,59 ммоль). Спустя 5,5 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (300 мл) и полученную смесь промывали насыщенным солевым раствором (3x200 мл). Органический слой концентрировали при пониженном давлении и сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с δΐθ2 (80 г δΐθ2 СотЪШазй НР ОоШ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 11т
ГХ/МС: 1к=1,68 мин, М8 тА=673,22 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬСО Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 м.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСЫ, 1,5-2,2 мин 100% Асы, 2,2-2,4 мин 100-2% АСЫ, 2,4-2,5 мин 2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1к=4,270 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: Сетни С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 50% этилацетат в гексане, Щ=0,15 (УФ)
Промежуточное соединение 1ΐ. Ы-(7-((28,38,4К,5К)-5-((бис-(4-Метоксифенил)(фенил)метокси)метил)-3,4-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 1й (1,84 г, 2,74 ммоль) и имидазола (2,23 г, 32,8 ммоль) в Ы,Ы-диметилформамиде (28,2 мл) при комнатной температуре добавляли трет-бутилдиметилсилил хлорид (2,47 г, 16,4 ммоль). Спустя 17 ч в реакционную смесь медленно добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (500 мл). Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (500 мл) и органический слой промывали насыщенным солевым раствором (2x400 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с δΐθ2 (80 г δΐθ2 СотЪШазй НР ОоШ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 1ΐ.
ГХ/МС: 1к=3,43 мин, М8 тА=901,37 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬСО Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,55 мин 100% АСЫ, 3,55-4,2 мин 100-2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1К=5,724 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: ОетЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин.
2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 50% этилацетат в гексане, Кг=0,75 (УФ)
Промежуточное соединение 1]. Ы-(7-((28,38,4К,5К)-3,4-бис-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1] [ 1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 1ΐ (2,41 г, 2,67 ммоль) в дихлорметане (22,3 мл) при температуре 0°С медленно добавляли раствор моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты (509 мг, 2,67 ммоль) в метаноле (3,7 мл). Через 1,5 ч реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната (100 мл) и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (2x100 мл). Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с δΐθ2 (120 г δΐθ2 СотЪШазй НР ОоШ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 1].
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 8,72 (шир. с, 1Н), 8,16 (шир-т, 1=7,1 Гц, 2Н), 8,07 (шир-т, 1=7,7 Гц, 3Н), 7,49-7,43 (м, 1Н), 5,75 (д, 1=8,2 Гц, 1н), 5,28 (дд, 1=8,1, 4,7 Гц, 1Н), 4,81 (д, 1=5,0 Гц, 1Н), 4,70-4,63 (м,
- 24 029712
1Н), 4,44 (д, 1=12,3 Гц, 1Н), 4,24 (д, 1=12,4 Гц, 1Н), 1,48 (с, 9Н), 1,30 (с, 9Н), 0,65 (с, 3Н), 0,64 (с, 3Н), 0,41 (с, 3Н), 0,00 (с, 3Н).
ГХ/МС: ίκ=2,66 мин, М3 т//=599,19 [М+1]; система ЖХ: ТГегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТКегто ГСр Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,05 мин 100% АСЫ, 3,05-3,2 мин 100-2% АСЫ, 3,2-3,5 мин 2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ίκ=5,622 мин; система ВЭЖХ: серии А§Пеп1 1100; колонка: Оетпн С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 50% этилацетат в гексане, Кд=0,55 (УФ)
Промежуточное соединение 1к. Ы-(7-((23,33,4К,53)-3,4-бис-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5(йодметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-Ц[1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору метилтрифеноксифосфония йодида (0,99 г, 2,19 ммоль) в ДМФ (9,9 мл) при комнатной температуре добавляли промежуточное соединение 1] (1,19 г, 1,99 ммоль). Через 3 ч добавляли дополнительное количество йодида метилтрифеноксифосфония (0,99 г, 2,19 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (200 мл) и промывали насыщенным солевым раствором (3x100 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 3ιΟ2 (колонка 80 г 3ιΟ2 СотЪШазГ НР ОоЮ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 1к.
1Н ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 8,21 (шир. с, 1Н), 7,61 (шир. т, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,53 (шир. т, 1=7,5 Гц, 3Н), 7,05 (шир. с, 1Н), 5,44 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 4,52 (т, 1=4,3 Гц, 1Н), 4,08-3,99 (м, 2Н), 3,55 (дд, 1=10,7, 5,2 Гц, 1Н), 3,38 (дд, 1=10,7, 5,0 Гц, 1Н), 0,93 (с, 9Н), 0,85 (с, 9Н), 0,16 (с, 3Н), 0,11 (с, 3Н),-0,01 (с, 3Н), -0,11 (с, 1Н).
ГХ/МС: 1К 3,06 мин, М3 т//=709,16 [М+1]; система ЖХ: ТГегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТКегто ГСр Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,05 мин 100% АСЫ, 3,05-3,2 мин 100-2% АСЫ, 3,2-3,5 мин 2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ίκ=5,837 мин; система ВЭЖХ: серии А§Пеп1 1100; колонка: Оетпн С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 20% этилацетат в гексане, Кд=0,45 (УФ)
Промежуточное соединение 11. Ы-(7-((23,33,43)-3,4-бис-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5метилентетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-Ц[1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 1к (1,77 г, 2,5 ммоль) в пиридине (25 мл) при комнатной температуре добавляли трет-бутоксид калия (700 мг, 6,24 ммоль). Спустя 2 ч реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (25 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл). Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (300 мл). Органический слой затем промывали насыщенным солевым раствором (200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 3ιΟ2 (40 г 3ιΟ2 СотЪШазГ НР ОоМ Со1итп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 11.
ГХ/МС: ίκ=2,87 мин, М3 т^=581,37 [М+1]; система ЖХ: ТКегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТКегто ГСр Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты.
Градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,05 мин 100% АСЫ, 3,05-3,2 мин 100-2% АСЫ, 3,2-3,5 мин
- 25 029712
2% АСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ΐκ=5,750 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: Оетш1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% АСН при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 50% этилацетат в гексане, ^£=0,20 (УФ).
Промежуточное соединение 1т. Н-(7-((2З,3З,4З)-3,4-бис-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 11 (560 мг, 0,964 ммоль) в ацетоне (4,82 мл) при температуре 0°С добавляли ЭМЭО (0,07 М раствор в ацетоне, 13,8 мл, 0,964 ммоль). Через 10 мин реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сушили азеотропной отгонкой с толуолом (2x1 мл) с получением 1т, который сразу же использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ГХ/МС: N=2,57 мин, МЗ т^=615, 14 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТЬегто БСр Р1ее1; колонка: Кпе1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты.
Градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСН 2,0-3,05 мин 100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСН 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин.
Промежуточное соединение 1п. Н-(7-((2З,3З,4З)-3,4-бис-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5-циано-5((триметилсилилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору сырого промежуточного соединения 1т (~592 мг, ~ 0,964 ммоль) и триметилсилил цианида (640 мкл, 4,80 ммоль) в дихлорметане (19,2 мл) при температуре 0°С в атмосфере аргона добавляли бромид индия (III) (681 мг, 1,92 ммоль). Через 4,5 ч реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (6 мл) и давали нагреться до комнатной температуры. Полученную смесь распределяли между дихлорметаном (20 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл). Фазы разделяли и водный слой экстрагировали дихлорметаном (20 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 1п (смесь диастереомеров 1:1) (710 мг), который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ГХ/МС: первый элюирующийся изомер ΐΓ=2,91 мин, МЗ т^=696,28 [М+1], второй элюирующийся изомер N=3,02 мин, МЗ т^=696,19 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТЬегто БСр Р1ее1; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСН 2,0-3,05 мин 100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСН 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин
Промежуточное соединение 1о. Н-(7-((2З,3К,4З)-5-Циано-3,4-дигидрокси-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору сырого промежуточного соединения 1п (668,23 мг, 0,96 ммоль) в ДМФ (9,6 мл) при комнатной температуре добавляли фторид цезия (729 мг, 4,8 ммоль). Спустя 5 ч реакционную смесь разбавляли насыщенным солевым раствором (100 мл) и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (3x100 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентриро- 26 029712
вали при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 1о (смесь диастереомеров 1:1), который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ГХ/МС: первый элюирующийся изомер ΐκ=1,31 мин, М8 тА=396,19 [М+1], второй элюирующийся изомер 1к=1,32 мин, М8 тА=396,19 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент:
0-2,0 мин 2-100% ΑΟΝ, 2,0-3,05 мин 100% ΑΟΝ, 3,05-3,2 мин 100-2% ΑΟΝ, 3,2-3,5 мин 2% ΑΟΝ при 2 мкл/мин
Пример 1. (2К,38,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[1.2-Г][1.2.4]триазин-7-ил)-3,4-дигидрокси-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил.
К раствору сырого промежуточного соединения 1о в метаноле (1 мл) при комнатной температуре добавляли метиламин (40% в воде, 0,3 мл). Спустя 2,5 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сразу очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (Рйепоттех Ьипа, 5 мкм, С18 100 А, колонка 100x30 мм, градиент 5-15% ацетонитрил/вода, 25 мин). Фракции, содержащие желаемый продукт и 4' аномер объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Затем 4' аномеры разделяли с помощью препаративной с помощью препаративной ВЭЖХ (Рйепоттех Ьипа, 5 мкм, С18 100 А, колонка 100x30 мм, градиент 5-15% ацетонитрил/вода, 25 мин). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и лиофилизовали с получением соединения по примеру 1.
'Н ЯМР (400 МГц, ΟΌ3ΘΌ): δ 7,79 (с, 1Н), 6,85 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,76 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,45 (д, 1=5,9 Гц, 1Н), 4,59 (т, 1=5,7 Гц, 1Н), 4,40 (д, 1=5,6 Гц, 1Н), 3,88 (д, 1=12,0 Гц, 1Н), 3, 80 (д, 1=12,0 Гц, 1н).
ГХ/МС: 1К=0,29 мин, М8 тА=292,16 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% ΑΟΝ, 1,5-2,2 мин 100% ΑΟΝ, 2,2-2,4 мин 100-2% ΑΟΝ, 2,4-2,5 мин 2% ΑΟΝ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1к=0,377 мин; система ВЭЖХ: серии Αд^1епί 1100; колонка: Сетпи С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% ΑСN, 5,0-6,0 мин 98% ΑСN при 2 мл/мин; ВЭЖХ: 1к=6,643 мин; система ВЭЖХ: серии Αд^1епί 1100; колонка: Ьипа 5 мкм С18(2) 110 А, 250x4,6 мм; растворители: ацетонитрил, вода; градиент: 5-15% ΑСN в течение 10 мин при 2 мл/мин
Промежуточное соединение 2Ь. №(7-((28,3К,4К,5К)-3-Фтор-4-гидрокси-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В продутую Ν2 колбу добавляли промежуточное соединение 2а, (2К,3К,4К,58)-5-(4аминопирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (полученный в соответствии с ΥΘ 2012037038 Α1, 1,20 г, 4,01 ммоль) (сушили путем совместного упаривания с пиридином 3 раза), затем растворяли в пиридине (18 мл). При температуре 0°С одной порцией добавляли хлортриметилсилан (1,54 мл, 13,13 ммоль) и полученную смесь перемешивали в атмосфере Ν2 в течение 1 ч. Добавляли по каплям бензоил хлорид (675 мкл, 5,82 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Для расходования оставшегося исходного вещества добавляли дополнительное количество бензоил хлорида (100 мкл). Наблюдалась смесь моно- и бис-Βζ защищенных продуктов. Реакционную смесь гасили Н2О (5 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 5 мин. Затем одной порцией добавляли концентрированный Ν^ΟΗ^^.) (8 мл) и оставляли перемешиваться в течение 15 мин, в это время бис-Βζ продукт преобразовывался в желаемый продукт. Растворители удаляли при пониженном давлении и затем остаток упаривали вместе с СН3ОН. Промежуточное соединение 2Ь выделяли после очистки выделяли после очистки с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 50-100% ΕЮΑс в гексане.
'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ 8,26-7,91 (м, 2Н), 7,88-7,79 (м, 1Н), 7,61 (т, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,56-7,36 (м, 2Н), 7,37-7,24 (м, 1Н), 7,10 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 7,01 (с, 1Н), 5,53 (д, 1=23,4 Гц, 1Н), 5,45 (д, 1=6,5 Гц, 1Н),
- 27 029712
5,16-4,91 (м, 1Н), 4,86 (т, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,21-4,04 (м, 1Н), 3,82 (дд, 1=8,0, 3,9 Гц, 1Н), 3,71 (ддд, 1=12,3, 5,6, 2,6 Гц, 1Н), 3,52 (ддд, 1=12,2, 5,7, 4,5 Гц, 1Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСЮ-ф) δ-196,33 (дт, 1=55,1, 22,5 Гц).
ГХ/МС: 1к=0,77 мин, М3 т//=373,14 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬСр Е1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСК, 1,4-1,80 мин 100% АСК, 1,8-1,85 мин 100-2% АСК, 1,85-2 мин
2% АСК.
Промежуточное соединение 2с. К-(7-((23,3К,4К,5К)-5-((бис-(4-Метоксифенил)(фенил)метокси)метил)-3-фтор-4-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
Промежуточное соединение 2Ь (1,3 г, 3,49 ммоль) сушили путем совместного упаривания с пиридином. Высушенное вещество затем растворяли в пиридине (15 мл) в атмосфере К2. При комнатной температуре одной порцией добавляли 4,4'-диметокситритил хлорид (1,71 г, 5,0 ммоль) и оставляли перемешиваться в течение 2 ч. Добавляли этанол (2 мл) и полученный раствор перемешивали в течение 5 мин. Растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 0-100% ЕЮАс в гексане с получением промежуточного соединения 2с.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ 8,28-8,02 (м, 2Н), 7,61 (т, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,51 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,36 (ддт, 1=6,0, 4,7, 2,0 Гц, 2Н), 7,31-7,04 (м, 7Н), 6,90-6,73 (м, 4Н), 5,62 (д, 1=24,4 Гц, 1Н), 5,49 (д, 1=7,0 Гц, 1Н), 5,27-5,01 (м, 1Н), 4,32-4,13 (м, 1Н), 4,06-3,95 (м, 1Н), 3,69 (с, 4Н), 3,28 (с, 3Н), 3,12 (дд, 1=10,4, 5,2 Гц, 1Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-06) δ-195,58 (дт, 1=52,1, 24,7 Гц).
ГХ/МС: 1к=1,37 мин, М3 т^=675,29 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬСр Е1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСК, 1,4-1,80 мин 100% АСК, 1,8-1,85 мин 100-2% АСК, 1,85-2 мин 2% АСК.
Промежуточное соединение 2б. К-(7-((23,33,4К,5К)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-3-фтор-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 2с (1,47 г, 2,18 ммоль) в ДМФ (8 мл), приготовленного в атмосфере К2, добавляли имидазол (251 мг, 3,70 ммоль), затем трет-бутилхлордиметилсилан (492 мг, 3,27 ммоль). Раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 ч. Раствор разбавляли Н2О (5 мл) и затем растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток распределяли между ЕЮАс и Н2О. Слои разделяли и затем органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором. Органические продукты сушили над Ка23О4, который удаляли путем фильтрования и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырое вещество использовали на следующей стадии как таковое.
Сырое вещество растворяли в СНС13 (15 мл) и охлаждали до температуры 0°С. К смеси добавляли по каплям гидрат п-толуолсульфоновую кислоту (414 мг, 2,18 ммоль), растворенную в СН3ОН (6 мл) и оставляли перемешиваться в течение 15 мин. Реакционную смесь гасили насыщ. КаНСО3(водн.). Органические продукты промывали насыщенным солевым раствором и сушили над Ка23О4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 0-50% ЕЮАс в гексане, с получением промежуточного соединения 2б.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ 8,21-7,98 (м, 2Н), 7,51 (дт, 1=39,9, 7,5 Гц, 3Н), 7,12-6,86 (м, 2Н), 5,48 (д, 1=21,9 Гц, 1Н), 5,07 (дт, 1=54,6, 3,8 Гц, 1Н), 4,86 (т, 1=5,5 Гц, 1Н), 4,28 (ддд, 1=17,8, 7,1, 4,4 Гц, 1Н), 3,83-3,72 (м, 1Н), 3,63 (ддд, 1=12,1, 5,2, 3,0 Гц, 1Н), 3,43 (ддд, 1=12,1, 6,0, 4,2 Гц, 1Н), 0,80 (с, 9Н), 0,01 (с, 3Н), 0,00 (с, 3Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-б6) δ-198,05 (дт, 1=54,2, 19,8 Гц).
- 28 029712
ГХ/МС: ίκ=1,35 мин, Μδ тА=487,24 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬСр Р1ее1; колонка: Кше1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0 -1,4 мин 2-100% АСЛ 1,4 -1,80 мин 100% АСЛ 1,8-1,85 мин 100-2% АСЛ 1,85-2 мин
2% АСК
Промежуточное соединение 2е. Х-(7-(^^,4К)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-3-фтор-5,5-бис(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-Г][Р2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору промежуточного соединения 2ά (856 мг, 1,75 ммоль) в толуоле (4 мл) и ДМСО (6 мл), приготовленному в атмосфере Ν2, добавляли гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (ΗΙ)ί.Ί) (504 мг, 2,63 ммоль). К этой смеси добавляли пиридин (150 мкл) и ТФУ (70 мкл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляли дополнительное количество ΗΙΧ'Ί (100 мг) и пиридин (100 мкл) и смесь перемешивали еще 45 мин. Реакционную смесь гасили Н2О (10 мл) и СН2С12 (10 мл). Органические продукты промывали насыщенным солевым раствором и сушили над Να2δΟ4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением сырого альдегида, который использовали как таковой на следующей стадии.
Сырой альдегид растворяли в диоксане (5 мл) и добавляли 37% формальдегид(водн.) (925 мкл), затем 2н. КаОН(водн.) (925 мкл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 3 ч реакционную смесь гасили АсОН, разбавляли ЕЮАс и промывали Н2О. Органические продукты сушили над Να2δΟ4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением сырого альдольного продукта, который использовали как таковой на следующей стадии.
В атмосфере Ν2 сырой альдольный продукт растворяли в ЕЮН (9 мл) и охлаждали до температуры 0°С. Одной порцией добавляли ΝαΒΗ4 (80 мг, 2,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин. Реакционную смесь гасили АсОН, разбавляли СН2С12 и промывали раствором 1:1 воды и насыщ. ^НСОз^^.) Органическую фазу сушили над Να2δΟ4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюирования от 0 до 100% ЕЮАс в гексане, с получением промежуточного соединения 2е.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ 8,20-7,99 (м, 2Н), 7,51 (дт, 1=39,5, 7,5 Гц, 3Н), 7,15-6,93 (м, 2Н), 5,50 (д, 1=14,1 Гц, 1Н), 5,24 (дт, 1=54,2, 5,4 Гц, 1Н), 4,78 (т, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,48 (дд, 1=10,7, 4,8 Гц, 1Н), 4,34 (дд, 1=6,7, 4,9 Гц, 1Н), 3,62 (дд, 1=11,9, 4,9 Гц, 1Н), 3,55-3,35 (м, 3Н), 0,82 (с, 9Н), 0,07 (с, 3Н),-0,09 (с, 3Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-бб) δ-200,37 (д, 1=51,1 Гц).
ГХ/МС: ίκ=1,25 мин, Μδ тА=517,21 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬСО Р1ее1; колонка: Кше1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АС^ 1,4-1,80 мин 100% АС^ 1,8-1,85 мин 100-2% АС^ 1,85-2 мин 2% АС№
Промежуточное соединение 2Е N-(7-((2δ,3δ,4Κ,5Κ)-5-((бис-(4-Метоксифенил)(фенил)метокси)метил)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-5-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтортетрагидрофуран2-ил)пирроло[1.2-ί][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
Промежуточное соединение 2е (370 мг, 0,717 ммоль) в атмосфере Ν2 растворяли в СН2С12 (10 мл) и ТЕА (200 мкл) и затем охлаждали до температуры 0°С. Одной порцией добавляли 4,4'-диметокситритил хлорид (0,364 г, 1,07 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Добавляли СН3ОН (2 мл) и раствор разбавляли СН2С12 и насыщ. NаΗСΟ3(ΒΟДΗ.). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Να2δΟ4, фильтровали и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 5-100% ЕЮАс в гексане, с получением сырого продукта в виде смеси бис-ОМТг и 4'β продуктов. Эту смесь использовали дальше без дополнительной очистки.
В атмосфере Ν2 к сырому продукту (574 мг, смесь) в ДМФ (3 мл) добавляли имидазол (143 мг, 2,10 ммоль), затем трет-бутилхлордиметилсилан (158 мг, 1,05 ммоль). Раствор оставляли перемешиваться при
- 29 029712
комнатной температуре в течение 2 ч. Раствор разбавляли СН3ОН (1 мл) и ЕЮАс. Органические продукты промывали Н2О и затем насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над Ν28Ο4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 0-50% ЕЮАс в гексане, с получением промежуточного соединения 21'. которое содержит немного бис-ОМТг продукта.
ГХ/МС: 4=2,25 мин, М8 шЧ=933,52 [М+1]; система ЖХ: ТРегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТРегшо ЬСР Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСН 1,5-2,8 мин 100% АСН 2,8-2,85 мин 100-2% АСН 2,85-3 мин 2%
АСК
Промежуточное соединение 2д. №(7-((28,38,4К,5К)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтор-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2ί] [ 1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
Промежуточное соединение 2ί растворяли в 0ΗΟ3 (5 мл) и охлаждали до температуры 0°С. К смеси добавляли по каплям гидрат п-толуолсульфоновой кислоты (90 мг, 0,474 ммоль), растворенный в СН3ОН (4 мл), и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 5 мин. Реакционную смесь гасили насыщ. NаΗСΟ3(ΒΟДΗ.). Органические продукты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Ν28Ο4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 0-40% ЕЮАс в гексане, с получением промежуточного соединения 2д.
1Η ЯМР (400 МГц, СБС13): δ 8,09-7,88 (м, 2Н), 7,48 (дт, 1=35,4, 7,4 Гц, 3Η), 7,30 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,88 (с, 1Н), 5,69 (дд, 1=18,8, 4,2 Гц, 1Н), 5,05 (дт, 1=54,6, 4,7 Гц, 1н), 4,62 (дд, 1=14,9, 5,1 Гц, 1Н), 3,913,64 (м, 3Η), 0,92-0,70 (м, 18Н), 0,13-0,04 (м, 6Н), 0,01 (м, 6Н).
19Р ЯМР (376 МГц, СБС13): δ -196 (м).
ГХ/МС: 4=2,61 мин, М8 μ/ζ=631,43 [М+1]; система ЖХ: ТРегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТРегшо РСР Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% ΛΟΝ, 1,5-2,8 мин 100% ΛΟΝ, 2,8-2,85 мин 100-2% ΆΟΝ, 2,85-3 мин 2%
АСК
Промежуточное соединение 2Р. №(7-((28,38,4К,5К)-5-((Е)-2-Бромвинил)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-5-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2ί] [ 1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору промежуточного соединения 2д (228 мг, 0,361 ммоль) в толуоле (0,75 мл) и ДМСО (0,15 мл) в атмосфере Ν2 добавляли гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (ЕБС1) (208 мг, 1,08 ммоль). К этой смеси добавляли пиридин (30 мкл) и ТФУ (15 мкл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс и промывали Н2О, затем насыщенным солевым раствором. Органические продукты сушили над №28Ο4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением сырого альдегида. Этот продукт использовали как таковой без дополнительной очистки.
К суспензии бромида бромметилтрифенилфосфония (314 мг, 0,72 ммоль) в ТГФ (4 мл) при температуре -40°С добавляли КСХВи (1,0М в ТГФ, 1,08 мл, 1,08 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч в атмосфере Ν2. Сырой альдегид растворяли в ТГФ (4 мл) и добавляли по каплям. Реакционную смесь убирали с холодной бани и давали нагреться до температуры 10°С в течение 1 ч. Реакционную смесь опять охлаждали до температуры -40°С и реакционную смесь гасили насыщ. ΝΗ^Γ^.). Слои разделяли и органические продукты сушили над Ν28Ο4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием элюента из 0-50% ЕЮАс в гексане с получением промежуточного соединения 2И.
1Η ЯМР (400 МГц, СБС13): δ 8,08-7,85 (м, 2Н), 7,62-7,36 (м, 2Н), 7,34-7,01 (м, 3Η), 6,92 (с, 1Н), 6,60- 30 029712
6,45 (м, 1Н), 6,35 (д, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,61 (д, 1=25,1 Гц, 1Н), 4,82 (дд, 1=56,3, 4,9 Гц, 1Н), 4,69-4,46 (м, 1Н), 3,97 (д, 1=11,4 Гц, 1Н), 3,53 (д, 1=11,4 Гц, 1Н), 0,84 (д, 1=3,9 Гц, 18Н), 0,13-0,10 (м, 12Н).
19Г ЯМР (376 МГц, СЭС13): δ -190,60 (м).
ГХ/МС: 1к=2,10 мин, МЗ ш//=705,54/707,29 [М+1]; система ЖХ: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСЫ, 1,5-2,8 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3 мин 2%
АСЫ.
Промежуточное соединение 2ι. Ы-(7-((2З,3З,4К,5К)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутилдиметилсилилокси)метил)-5 -этинил-3 -фтортетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1] [ 1.2.4]триазин-4ил)бензамид.
Промежуточное соединение 2К (2 04 мг, 0,289 ммоль) в атмосфере Ν2 растворяли в ТГФ (8 мл) и охлаждали до температуры -40°С. Медленно добавляли КО1Ви (1,0 М в ТГФ, 1,08 мл, 1,08 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 20 мин и гасили насыщ. ЫН4С1(водн.). Раствор разбавляли ЕЮАс и промывали насыщенным солевым раствором. Органические продукты сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 0-50% ЕЮАс в гексане, с получением промежуточного соединения 2ι.
1Н ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 8,12-7,88 (м, 2Н), 7,51 (дт, 1=36,5, 7,5 Гц, 2Н), 7,32 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,88 (с, 1Н), 5,79 (д, 1=22,1 Гц, 1Н), 5,02 (ддд, 1=55,3, 5,1, 3,2 Гц, 1Н), 4,56 (дд, 1=18,1, 5,1 Гц, 1Н), 3,91 (д, 1=11,3 Гц, 1Н), 3,83-3,62 (м, 1Н), 2,55 (м, 1Н), 0,90 (дд, 1=25,3, 1,6 Гц, 18Н), 0,20-0,08 (м, 12Н).
19Г ЯМР (376 МГц, СЭС13) δ-193,10 (шир. с).
ГХ/МС: 1к=1,88 мин, МЗ ш// 625,24 [М+1]; система ЖХ: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСЫ, 1,5-2,8 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3 мин 2%
АСЫ.
Промежуточное соединение 2]. Ы-(7-((2З,3К,4К,5К)-5-Этинил-3-фтор-4-гидрокси-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 2ΐ (152 мг, 0,243 ммоль) в ТГФ (3,5 мл) при комнатной температуре в атмосфере Ы2 добавляли ТВАГ (1,0М в ТГФ, 700 мкл, 0,700 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 40-100% ЕЮАс в гексане, с получением промежуточного соединения 2].
ГХ/МС: 1К 0,88 мин, МЗ шА=397,16 [М+1]; система ЖХ: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСЫ, 1,5-2,8 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3 мин 2%
АСЫ.
Пример 2. (2К,3К,4К,5З)-5-(4-Аминопирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-7-ил)-2-этинил-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.
В раствор промежуточного соединения 2] (71 мг, 0,179 ммоль) в СН3ОН (2 мл) добавляли конц.
- 31 029712
N114ΟΙ 1(вод,и (0,7 мл) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя градиент элюентов 0-20% СН3ОН в СН2С12, затем с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ, используя градиент элюентов 0-20% ΑСN в Н2О, с получением соединения по примеру 2.
1Н ЯМР (400 МГц, СВ3ОЭ): δ 7,77 (с, 1Н), 6,90-6,70 (м, 2Н), 5,62 (дд, 1=25,5, 2,6 Гц, 1Н), 5,18 (ддд, 1=56,0, 5,4, 2,7 Гц, 1Н), 4,57 (дд, 1=20,5, 5,4 Гц, 1Н), 3,93-3,59 (м, 2Н), 3,02 (д, 1=0,7 Гц, 1Н).
19Р ЯМР (376 МГц, СВ3ОО) δ-193,76 (ддд, 1=56,0, 25,5, 20,4 Гц).
ГХ/МС: ΐκ=0,45 мин, Μδ тА=2 93,13 [М+1]; система ЖХ: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Р1ее1; колонка: КтеГех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСН 1,4-1,80 мин 100% АСН 1,8-1,85 мин 100-2% АСН 1,85-2 мин
2% АСН
ВЭЖХ: ΐκ=3,112 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100.
Со1итп: Рйепотепех Кте!ех С18, 2,6 мкм, 10 А, 4,6x100 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ.
Градиент: 0-8,0 мин 2-98% АСА при 1,5 мл/мин.
Промежуточное соединение 3а. Н-(7-((28,38,4К,5К)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтор-5-формил.тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-Г][1.2.4]триазин-4ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 2д (1,13 г, 1,79 ммоль) в ДМСО (1 мл) и толуоле (10 мл), приготовленному в атмосфере Ν2, добавляли ЕОСТНС1 (1,02 г, 5,36 ммоль) и пиридин (149 мкл, 1,92 ммоль). Добавляли по каплям ТФУ (74 мкл, 0,97 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь проверяли с помощью ГХ/МС. Наблюдался один пик со временем удерживания аналогичным исходным веществам, но с М+1 пиком, равным ожидаемому для продукта. Добавляли еще 50 мкл пиридина и реакционную смесь перемешивали дополнительно 15 мин. Никаких изменений по данным ГХ/МС. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс и гасили смесью 1:1 насыщ. НаНСО3(водн.) и Н2О. Смесь распределяли между ЕЮАс и еще Н2О. Органический слой отделяли и промывали Н2О, насыщенным солевым раствором и затем сушили над Να2δΟ4. Осушитель удаляли путем вакуумного фильтрования и фильтрат концентрировали. Остаток обрабатывали СН2С12, концентрировали и полученное вещество помещали в высокий вакуум на 1 ч. Продукт, промежуточное соединение 3а, использовали как таковой на следующей стадии.
ГХ/МС: ΐκ=1,90 мин, Μδ тА=629,46 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Р1ее1; колонка: КтеГех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% ΆΟΝ, 1,5-2,8 мин 100% ΆΟΝ, 2,8-2,85 мин 100-2% ΆΟΝ, 2,85-3 мин 2%
ΆΟΝ.
Промежуточное соединение 3Ь. N-(7-((2δ,3δ,4Κ,5Κ)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтор-5-((Е)-(гидроксиимино)метил)тетрагидрофуран-2ил)пирроло[1.2-Г][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 3а (сырой продукт с предыдущей стадии, предположительно 1,79 ммоль) в пиридине (11 мл), приготовленного в атмосфере Ν2, одной порцией при комнатной температуре добавляли НОНН2-НС1. Реакционную смесь 5 мин спустя контролировали с помощью ГХ/МС; исходное вещество было израсходовано. Реакционную смесь опять проверяли 25 мин спустя. Никаких изменений по сравнению с первоначальным моментом не было. Реакционную смесь концентрировали и остаток распределяли между ЕЮАс и Н2О. Органический слой отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над На^О4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали, помещали в СН2С12, опять концентрировали и остаток помещали в высокий вакуум. Продукт, промежуточное соединение 3Ь, использовали как таковой на следующей стадии.
ГХ/МС: ΐκ=1,83 мин, Μδ тА=644,55 [М+1]; система ЖХ: ТБегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТБегто ^С^ Р1ее1; колонка: КтеГех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
- 32 029712
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСН 1,5-2,8 мин 100% АСН 2,8-2,85 мин 100-2% АСН 2,85-3 мин 2%
АСН
Промежуточное соединение 3с. №(7-((28,38,4К,5К)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутнлднметнлснлнлокси)метнл)-5-цнано-3-фтортетрагндрофуран-2-нл)пнрроло[1.2-Г][1.2.4]трназнн-4ил)бензамид.
В раствор промежуточного соединения 3Ь (сырой продукт с предыдущей стадии, предположительно 1,79 ммоль) в АСN (16 мл) одной порцией добавляли СП (436 мг, 2,69 ммоль). Реакцию проводили в атмосфере Ν2. Через 20 мин реакционную смесь контролировали с помощью ГХ/МС. Пики с массой исходного материала и продукт были едва разделены по времени. Реакционную смесь проверяли 1,5 ч спустя. УФ-пик, соответствующий исходному материалу, почти пропадал, а интенсивность массового пика была уменьшена. Реакционную смесь разбавляли С112С1: и гасили смесью 1:1 насыщ. Ν3Η€Ο3(βο№) и Н2О. Слои разделяли, водный слой опять экстрагировали ΟΗ2Ο12 и объединенные органический слои экстрагировали смесью 1:1 насыщенного солевого раствора и Н2О, сушили над №:8Ο.ι и фильтровали. Фильтрат концентрировали и промежуточное соединение 3с выделяли с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с использованием следующего градиента элюентов: 0% ЕЮАс в гексане, повышая к 20% ЕЮАс в гексане, пауза при 20% ЕЮАс в гексане и затем повышая к 40% ЕЮАс в гексане.
1Η ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 8,31 (с, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 7,65 (т, 1=8 Гц, 1Н), 7,54 (т, 1=8 Гц, 1Н),
7,15 (д, 4 Гц, 1Н), 7,02 (с, 1Н), 5,82 (д, 1=24 Гц, 1Н), 5,51 (ддд, 1=52, 4,8, 2,8 Гц, 1н), 4,70 (дд, 1=18,4, 4,4 Гц, 1Н), 3,94 (дд, 1=53,2, 11,2 Гц, 2Н), 0,93 (с, 9Н), 0,84 (с, 9Н), 0,17 (с, 3Η), 0,16 (с, 3Η), 0, 05 (с, 3Η), 0,01 (с, 3Η).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-б6) δ-194,658 (дт, 1=53, 21,4 Гц).
ГХ/МС: 4=1,84 мин, М8 тЧ=626,60 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,5 мин 2-100% ΛΟΝ, 1,5-2,8 мин 100% ΛΟΝ, 2,8-2,85 мин 100-2% ΛΟΝ, 2,85-3 мин 2%
АСН
Промежуточное соединение 3ά. (2К,3К,48,58)-5-(4-Амннопнрроло[1.2-Г][1.2.4]трназнн-7-нл)-3(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-((трет-бутилдиметилсилилокси)метил)-4-фтортетрагидрофуран-2карбонитрил.
В раствор промежуточного соединения 3с (770 мг, 1,23 ммоль) в МеОН (11,2 мл), охлажденного на бане с ледяной водой, добавляли концентрированный ΝΗ4ΟΗ(Β0№.) (3,74 мл). Охлаждающую баню удаляли и образовавшийся гетерогенный раствор перемешивали в течение ночи. На следующий день реакция завершалась не полностью, как определялось данными ГХ/МС. Добавляли дополнительное количество концентрированного ΝΗ4ΟΗ(Β0№.) (4 мл) и 2-МеТГФ (12 мл). Реакционная смесь становилась гомогенной, но через 20 мин не наблюдалось дальнейшего прогресса реакции. Реакционную смесь концентрировали и остаток растворяли в ТГФ (15 мл). К этой смеси добавляли концентрированный ΝΗ4ΟΗ(Β0№.) (5 мл) и достаточное количество МеОН (1,9 мл), чтобы сделать раствор гомогенным и монофазным. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Реакция почти завершалась (оставалось примерно 5% исходного вещества). Реакционную смесь разбавляли С^СБ и Н2О. Слои разделяли и водный слой разбавляли насыщенным раствором Ν^εΟ^) и экстрагировали С^С^. Водный слой нейтрализовали с помощью 2н. ΗΟ и затем экстрагировали С^СЦ Объединенные органические слои сушили над №28Ο4, который удаляли путем фильтрования. Фильтрат концентрировали и промежуточное соединение 3ά выделяли из остатка с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с использованием следующего градиента элюентов: 0% ЕЮАс в гексане, повышая к 50% ЕЮАс в гексане, пауза при 50% ЕЮАс в гексане и затем повышая к 100% ЕЮАс в гексане.
ГХ/МС: 4=1,59 мин, М8 тЧ=522,47 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЧ 1,4-1,8 мин 100% АСЧ 1,8-1,85 мин 100-2% АСЧ 1,85-2 мин 2%
АСН
- 33 029712
Пример 3. (2К, 3 К,4К, 5 8)-5-(4-Аминопирроло [1.2-ί][1.2.4]триазин-7-ил)-4 -фтор-3 -гидрокси-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил.
В раствор промежуточного соединения 30 (100 мг, 0,191 ммоль) в ТГФ (2 мл) в полипропиленовой пробирке в атмосфере Ν2 при температуре 0°С добавляли 70% НТ-пиридин в пиридине (60 мкл, 0,478 ммоль). Через 20 мин проверяли реакционную смесь; реакция не протекала, поэтому добавляли дополнительное количество 70% НТ-пиридина в пиридине (150 мкл) и охлаждающую баню удаляли. Через 1 ч и 50 мин добавляли дополнительное количество 70% НТ-пиридин в пиридине (150 мкл). Спустя еще 2 ч добавляли дополнительное количество 70% НТ-пиридина в пиридине (300 мкл). Спустя еще 2 ч и 15 мин добавляли дополнительное количество 70% НТ-пиридина в пиридине (1 мл). Реакционная смесь становилась прозрачной и гомогенной при последнем добавлении 70% НТ-пиридина в пиридине. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакция завершалась на следующий день. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили Н2О и небольшим количеством насыщенного раствора ЖНСО3(водн.). Смесь концентрировали и остаток помещали в ДМСО. Оставшееся нерастворимое вещество удаляли путем фильтрования и фильтрат частично очищали с помощью ВЭЖХ. Выделенное вещество растворяли в ДМФ и очищали с помощью ВЭЖХ. Соединение по примеру 3 выделяли с 0,5% в виде соли с ТФУ.
‘Н ЯМР (400 МГц, ДМФ-ф): δ 7,92 (с, 1Н), 6,99 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,89 (д, .1=4,9 Гц, 1Н), 6,64 (д, 1=6 Гц, 1Н), 5,92 (т, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,83 (дд, 1=25,2, 2 Гц, 1Н), 5,40 (ддд, 1=54,8, 4,8, 2,4 Гц, 1Н), 4,75 (дт, 1=22, 5,2 Гц, 1Н), 4,02 (дд, 1=12, 6,4Гц, 1Н), 3,87 (дд, 1=12, 6,4 Гц, 1Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМФ-Л) δ-74,92 (с), -193,726 (дт, 1=54,5, 23,3 Гц).
ГХ/МС: 1К 0,56 мин, М8 ш / 2 94,10 [М+1]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТЬегшо ЬС'(.) Т1ее1; колонка: Кше1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСН 1,4-1,8 мин 100% АСН 1,8-1,85 мин 100-2% АСН 1,85-2 мин 2%
АСК
ВЭЖХ: ίκ=3,220 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100; колонка: РЬепошепех КшеТех С18, 2,6 мкм, 100 А, 4,6x100 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ.
Градиент: 0-8,0 мин 2-98% АСN при 1,5 мл/мин.
4а 4Ь
Промежуточное соединение 4Ь. (3аК,5К,6а8)-5-((К)-2,2-Диметил-1,3-диоксолан-4-ил)-2,2диметилдигидрофуро [3,2-ά] [ 1,3]диоксол-6(3 аН)-он.
В 10-литровую 4-горлую круглодонную колбу помещали раствор промежуточного соединения 4а, (3аК,58,68,6аК)-5-((К)-2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,2-б] [1,3]диоксол6-ола, (500 г, 1,90 моль) в смеси дихлорметан/вода (2,7 л/2,3 л) при комнатной температуре. К нему добавляли карбонат натрия (290 г, 3,42 моль). Затем добавляли карбонат калия (451 г, 3,24 моль). Затем добавляли 2,2,6,6-тетраметилпиперидиноокси (ТЕМРО, 15,2 г, 96,31 ммоль). К смеси добавляли бромид тетрабутиламмония (31 г, 95,20 ммоль). К ней порциями при температуре 35°С добавляли Ν-бромсукцинимид (514 г, 2,86 моль). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученный раствор экстрагировали 2x1 л дихлорметана и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали 1x1,5 л воды. Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Это давало (сырое) промежуточное соединение 4Ь.
Промежуточное соединение 4с. (3аК,58,6К,6аК)-5-((К)-2,2-Диметил-1,3-диоксолан-4-ил)-2,2диметилтетрагидрофуро[3,2-б] [ 1,3]диоксол-6-ол.
В 2-литровую 4-горлую круглодонную колбу помещали раствор промежуточного соединения 4Ь (370 г, 1,29 моль) в метаноле (1300 мл). К нему порциями при комнатной температуре добавляли боргидрид натрия (26,4 г, 706,38 ммоль). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Реакцию
- 34 029712
затем гасили путем добавления 1000 мл 5%-ного водного раствора хлорида аммония. Полученный раствор экстрагировали 3x500 мл дихлорметана и органические слои объединяли. Полученный раствор промывали 2x300 мл воды. Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали перекристаллизацией из петролейного эфира. Это дает промежуточное соединение 4с.
Промежуточное соединение 46.
В 5000-мл 4-горлую круглодонную колбу помещали раствор промежуточного соединения 4с (350 г, 1,34 моль) в дихлорметане (700 мл). К нему добавляли бромид тетрабутиламмония (476,8 г, 1,48 моль). К смеси добавляли 50% гидроксид натрия/вода (700 г). К ней несколькими партиями добавляли 2-(бромметил) нафталин (340 г, 1,54 моль). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакцию затем гасили путем добавления 1800 мл смеси дихлорметан/вода (1:1). Полученный раствор экстрагировали 2x1 л дихлорметана и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали 1x1000 мл воды. Остаток растворяли в смеси 1000/1000 мл петролейный эфир/вода. Сырой продукт очищали перекристаллизацией из петролейного эфира. Это давало промежуточное соединение 46.
Промежуточное соединение 4е. (К)-1-((3аК,5К,6К,6аК)-2,2-Диметил-6-(нафталин-2илметокси)тетрагидрофуро[3,2-6][1,3]диоксол-5-ил)этан-1,2-диол.
В 5-литровую 4-горлую круглодонную колбу помещали промежуточное соединение 46 (500 г, 1,25 моль). К нему добавляли уксусную кислоту (1,8 л). К смеси добавляли воду (600 мл). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Твердые продукты отфильтровывали. Полученный раствор экстрагировали 3x1 л петролейного эфира и водные слои объединяли. Полученный раствор разбавляли 2 л этилацетата. Полученную смесь промывали 2x2 л хлорида натрия(водн.). Значение рН раствора устанавливали равным 8 с помощью карбоната натрия (50%). Полученный раствор экстрагировали 2x1 л этилацетата и органические слои объединяли и концентрировали в вакууме. Это давало промежуточное соединение 4е.
Промежуточное соединение 4£. (3аК,58,6К,6аК)-2,2-Диметил-6-(нафталин-2илметокси)тетрагидрофуро[3,2-6][1,3]диоксол-5-карбальдегид.
В 10-литровую 4-горлую круглодонную колбу при комнатной температуре помещали раствор промежуточного соединения 4е (300 г, 833,33 ммоль) в 1,4-диоксане (2100 мл). Его обрабатывали путем добавления раствора перйодата натрия (250 г) в воде (4000 мл) при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Твердые продукты отфильтровывали. Полученный раствор экстрагировали 3x1000 мл этилацетата и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали 2x1000 мл раствора хлорида натрия(водн.). Полученную смесь концентрировали в вакууме. Это давало промежуточное соединение 4£.
Промежуточное соединение 4д. ((3аК,68,6аК)-2,2-Диметил-6-(нафталин-2илметокси)тетрагидрофуро[3,2-6][1,3]диоксол-5,5-диил)диметанол.
- 35 029712
В 10-литровую 4-горлую круглодонную колбу помещали раствор промежуточного соединения 4Г (250 г, 761,36 ммоль) в смеси вода/тетрагидрофуран (1250/1250 мл) при комнатной температуре. К нему по каплям при перемешивании при температуре 0-15°С добавляли 2н. гидроксид натрия(водн.) (1500 мл). К смеси добавляли формальдегид (62 0 мл). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Полученный раствор экстрагировали 2x2000 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 2x2000 мл раствора хлорида натрия (водн.). Органические слои объединяли и сушили над безводным сульфатом натрия. Остаток наносили на колонку с силикагелем с петролейным эфиром:этилацетатом (2/1). Сырой продукт перекристаллизовывали из смеси этилацетат:этанол при соотношении 1г/(1 мл:1 мл). Это давало промежуточное соединение 4д.
Промежуточное соединение 4й. ((3аК,5К,63,6аК)-5-((трет-Бутилдифенилсилилокси)метил)-2,2диметил-6-(нафталин-2-илметокси)тетрагидрофуро[3,2-б][1,3]диоксол-5-ил)метанол.
В 5-литровую 4-горлую круглодонную колбу, продутую и выдерживаемую в инертной атмосфере азота, помещали раствор промежуточного соединения 4д (125 г, 346,84 ммоль) в дихлорметане (2500 мл) при комнатной температуре. К смеси при комнатной температуре добавляли триэтиламин (157,5 мл). К нему по каплям при перемешивании при температуре 0-10°С добавляли трет-бутилдифенилсилил хлорид (157,5 мл). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию затем гасили путем добавления 37,5 мл метанола. Полученную смесь промывали 2x500 мл 5% хлорида водорода(водн.) и 2x500 мл раствора бикарбоната натрия(водн.). Полученную смесь промывали 2x500 мл 1н. гидроксида натрия(водн.). Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали перекристаллизацией из смеси дихлорметан/гексан. Это давало промежуточное соединение 4й.
Промежуточное соединение 4ΐ. трет-бутил(((3аК,5К,63,6аК)-5-(Йодметил)-2,2-диметил-6(нафталин-2-илметокси)тетрагидрофуро[3,2-б][1,3]диоксол-5-ил)метокси)дифенилсилан.
В 1000-мл 3-горлую круглодонную колбу, продутую и выдерживаемую в инертной атмосфере азота, помещали раствор промежуточного соединения 4й (20 г, 31,73 ммоль) в толуоле (320 мл), трифенилфосфин (35 г, 132,11 ммоль), имидазол (8,96 г, 132,26 ммоль). Затем несколькими партиями при температуре 60°С добавляли йод (16,95 г, 66,8 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при температуре 80°С на масляной бане. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры на бане вода/лед. Полученный раствор разбавляли 1000 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 2x300 мл тиосульфата натрия(водн.). Полученную смесь промывали 1 x300 мл раствора хлорида натрия(водн.). Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1:10). Это давало промежуточное соединение 4ΐ.
Промежуточное соединение 4). трет-Бутилдифенил(((3аК,5К,63,6аК)-2,2,5-триметил-6-(нафталин-2илметокси)тетрагидрофуро[3,2-б][1,3]диоксол-5-ил)метокси)силан.
В 2000-мл круглодонную колбу, продутую и выдерживаемую в инертной атмосфере азота, помещали раствор промежуточного соединения 4ΐ (66 г, 88,47 ммоль) в смеси этанол/этилацетат (600/600 мл), триэтиламин (20,7 г, 202,52 ммоль), палладий на углероде (10 мас.%, 24,8 г, 23,30 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при температуре 40°С. Твердые продукты отфильтровывали. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Полученный раствор разбавляли 1500 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 1x500 мл раствора хлорида натрия(водн.). Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Это давало промежуточное соединение 4).
- 36 029712
Промежуточное соединение 4к. (3аК,5К,68,6аК)-5-((трет-Бутилдифенилсилилокси)метил)-2,2,5триметилтетрагидрофуро [3,2-й] [ 1,3]диоксол-6-ол.
В 500-мл круглодонную колбу помещали раствор промежуточного соединения 4] (1,0 г, 1,63 ммоль) в дихлорметане (15 мл), воду (1,25 мл) и 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинон (^^^, 780 мг, 3,40 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученный раствор разбавляли 50 мл дихлорметана. Полученную смесь промывали 1x30 мл воды и 2x30 мл раствора бикарбоната натрия(водн.). Полученную смесь промывали 1x30 мл раствора хлорида натрия(водн.). Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1:20~1:10). Это давало промежуточное соединение 4к.
Промежуточное соединение 41. (3аК,5К,68,6аК)-5-(Гидроксиметил)-2,2,5-триметилтетрагидрофуро[3,2-й][1,3]диоксол-6-ол.
В 50-мл круглодонную колбу помещали раствор промежуточного соединения 4к (520 мг,
1,12 ммоль) в тетрагидрофуране (9 мл), фторид тетрабутиламмония (369 мг, 1,40 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с помощью смеси дихлорметан/метанол (100:1). Это давало промежуточное соединение 41.
Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО-й6): δ 5,64 (д, 1=3,9 Гц, 1Н), 4,96 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 4,67 (м, 1Н), 4,55 (м, 1Н), 4,05 (м, 1Н), 3,24-3,30 (м, 1Н), 3,11-3,18 (м, 1Н), 1,50 (с, 3Н), 1,27 (с, 3Н), 1, 16 (с, 1Н).
Промежуточное соединение 4т. (3аК,5К,68,6аК)-6-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-2,2,5триметилтетрагидрофуро[3,2-й][1,3]диоксол.
В 50-мл 3-горлую круглодонную колбу, продутую и выдерживаемую в инертной атмосфере азота, помещали раствор промежуточного соединения 41 (180 мг, 0,84 ммоль) в тетрагидрофуране (4 мл). Затем при температуре 0°С добавляли порциями гидрид натрия (60 мас.%, 140 мг, 3,50 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин при температуре 0°С. Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение дополнительных 30 мин при комнатной температуре. К этому раствору по каплям при перемешивании при температуре 0°С добавляли бензил бромид (452 мг, 2,62 ммоль). Полученный раствор оставляли взаимодействовать при перемешивании в течение дополнительных 3 ч при комнатной температуре. Реакцию затем гасили путем добавления 30 мл хлорида аммония(водн.). Полученный раствор экстрагировали 50 мл дихлорметана и органические слои объединяли и сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1:30-1:20). Это давало промежуточное соединение 4т.
Промежуточное соединение 4п. (2К,3К,48,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-5метилтетрагидрофуран-2,3-диил диацетат.
В 1000-мл круглодонную колбу помещали промежуточное соединение 4т (также полученное в соответствии с Βίοδεί. Вю1есй. Вюсйет. 1993, 57, 1433-1438, 45 г, 111,19 ммоль), уксусную кислоту (270 мл), уксусный ангидрид (90 мл), серную кислоту (45 й). Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакцию затем гасили путем добавления 1000 мл смеси вода/лед. Полученный раствор разбавляли 3000 мл этилацетата. Полученную смесь промывали 2x1000 мл воды и 4x1000 мл раствора бикарбоната натрия(водн.). Полученную смесь промывали 2x1000 мл раствора
- 37 029712
хлорида натрия(водн.). Смесь сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток наносили на колонку с силикагелем с помощью смеси этилацетат/петролейный эфир (1:30-1:20). Это давало промежуточное соединение 4η.
'Н ЯМР (300 МГц, СОС13): δ 7,28-7,38 (м, 10Н), 6,13 (с, 1Н), 5,37 (д, 1=4,8Гц, 1Н), 4,44-4,68 (м, 4Н), 4,33 (д, 1=5,1Гц, 1Н), 3,33-3,45 (м, 2Н), 2,15 (с, 3Н), 1,88 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н).
Μδ т·/ 451 [Μ+Να].
ВпО"
,ОАс
ΒηΟ"
1) К2СО3, МеОН
2) ΝΙ5, Βυ4ΝΙ, ϋΟΜ
ВпО ОН 4ο
(3К,48,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-гидрокси-5ΒηΟ ОАс
4η
Промежуточное соединение 4о метилдигидрофуран-2(3Н)-он.
Промежуточное соединение 4η (1,3 г, 3 ммоль) растворяли в безводном МеОН (15 мл). Добавляли порошок карбоната калия (456 мг, 3,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении. Добавляли ацетонитрил и перемешивали в течение 5 мин. Нерастворимые вещества отфильтровали и промывали ацетонитрилом. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученное вещество растворяли в безводном Π0Μ (20 мл). Добавляли тетрабутиламмоний йодид (1,66 г, 4,5 ммоль) и Ν-йод-сукцинимид (ΝΣ8, 1,69 г, 2,5 ммоль). В течение 16 ч реакционную смесь перемешивали в темноте. Добавляли еще ΝΣ8 (0,85 г, 1,25 ммоль) и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли еще ΝΣδ (0,85 г, 1,25 ммоль) и перемешивали в течение 2 дней в темноте. Разбавляли реакционную смесь ЕЮАс и два раза промывали водным раствором тиосульфата натрия и затем насыщенным водным раствором хлорида натрия. Органическую часть сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке с силикагелем (0-30% ЕЮАс в гексане) с получением промежуточного соединения 4о.
'Н ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 7,35-7,22 (м, 10Н), 4,82 (шир., 1Н), 4,75-4,66 (м, 2Н), 4,55-4,44 (м, 2Н),
4,13 (д, 1=8Гц, 1Н), 3,70-3,45 (м, 2Н), 1,38 (с, 3Н).
ГХ/МС: 1К=2,58 мин, Μδ ш//=342,9 [Μ+1], 360,0 [М+Н2О]; ГХ/МС система: Тйегто ^С^ АйуаШаде; Рйе^те^х Оеттц С18, 5 мкм, 110 А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
ВЭЖХ: ГК=3,78 мин; система ВЭЖХ: Α§ί^ηΐ 1100; Рйе^те^х Оеттц С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле; 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 4р. (3К,4δ,5К)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-5метилдигидрофуран-2(3Н)-он.
Промежуточное соединение 4о (955 мг, 2,79 ммоль) растворяли в ЕЮΑс (10 мл). Добавляли бензил бромид (400 мкл, 3,35 ммоль) и оксид серебра (I) (712 мг, 3,07 ммоль). Перемешивали при температуре 60°С в атмосфере Ν2 (газ) в темноте в течение 3 ч. Добавляли еще бензил бромид (400 мкл, 3,35 ммоль) и перемешивали при температуре 60°С в атмосфере Ν2 (газ) в темноте в течение 16 ч. Добавляли еще оксид серебраД) (350 мг, 1,5 ммоль) и перемешивали при температуре 60°С в атмосфере Ν2 (газ) в темноте в течение 8 ч. Охлаждали до комнатной температуры. Твердые продукты отфильтровали и промывали ЕЮΑс. Концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением масла. Добавляли гексан и перемешивали в течение 2 ч с получением твердого вещества. Собирали твердое вещество и промывали гексаном. Сушили твердое вещество в высоком вакууме с получением промежуточного соединения 4р.
'Н ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 7,35-7,16 (м, 15Н), 5,03 (д, 1=12 Гц, 1Н), 4,79-4,71 (м, 2Н), 4,52-4,40 (м, 4Н), 4,06 (д, 1=6 Гц, 1Н), 3,49-3,39 (м, 2Н), 1,38 (с, 3Н).
ГХ/МС: 1К=2,91 мин, Μδ т//=433,1 [Μ+1], 450,1 [М+Н2О]; ГХ/МС система: Тйегто ^С^ Αάνаηίаде; Рйе^те^х Оеттц С18, 5 мкм, 110А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
ВЭЖХ: 1К=4,54 мин; система ВЭЖХ: Α§ί^ηΐ 1100; Рйе^те^х Оеттц С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
- 38 029712
Промежуточное соединение 4ς. (3К,4З,5Р)-2-(4-Аминопирроло[1.2-Г][1.2.4]триазин-7-ил)-3,4-бис(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-5-метилтетрагидрофуран-2-ол.
Промежуточное соединение 1Ь (148 мг, 0,570 ммоль) и 1,2-бис-(хлордиметилсилил)этан (123 мг, 0,570 ммоль) растворяли в безводном ТГФ (20 мл) и перемешивали в атмосфере Аг (газ) при температуре -70°С. В реакционную смесь по каплям добавляли н-бутиллитий (2,5М раствор в гексане, 684 мкл, 1,71 ммоль), поддерживая при этом температуру ниже -65°С. Реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры -40°С и выдерживали в течение 15 мин. Затем в реакционную смесь в атмосфере Аг (газ) добавляли раствор промежуточного соединения 4р (224 мг, 0,518 ммоль) в ТГФ (10 мл), предварительно охлажденный до температуры -70°С. Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при температуре -40°С. Реакционную смесь затем выливали в перемешиваемую смесь БЮАс и лимонной кислоты(водн.). Перемешивали в течение 5 мин. Объединяли органический слой и промывали насыщенным раствором №С1(водн.). Сушили органический слой над безводным №2ЗО4 и концентрировали при пониженном давлении. Очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением промежуточного соединения 4ς.
ГХ/МС: 1Р=2,60 мин, МЗ тА=567,3 [Μ+1], 565,1 [М-1]; ГХ/МС система: ТЬегто ^С^ АТуап1а§е; ГЬепотепех ОетЫ, С18, 5 мкм, 110 А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
ВЭЖХ: 1Р=3,22 мин; система ВЭЖХ: А§Пеп1 1100; ГЬепотепех Сеттк С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле; 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 4г. 7-((2З,3З,4З,5Р)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-5метилтетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-Г][1.2.4]триазин-4-амин.
Промежуточное соединение 4ς (81 мг, 0,143 ммоль) растворяли в безводном 1)СМ (15 мл) и перемешивали в атмосфере Ν2 (газ) на ледяной бане. Одной порцией добавляли триэтилсилан (114 мкл, 0,715 ммоль). Добавляли по каплям трифторид бора-диэтил эфират (27 мкл, 0,215 ммоль). Перемешивали в течение 15 мин и затем ледяную баню отставляли. Перемешивали в течение 60 мин. Добавляли триэтиламин (100 мкл, 0,715 ммоль) и концентрировали при пониженном давлении. Растворяли в БЮАс и промывали насыщенным раствором №НСО3(водн.) (2х) и затем насыщенным раствором №С1(водн.). Органические фракции сушили над безводным №2ЗО4 и концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке с силикагелем (0-80% БΐОΑс в гексане) с получением промежуточного соединения 4г.
1Н ЯМР (400 МГц, СИСЩ: δ 7,71 (с, 1Н), 7,35-7,10 (м, 16Н), 6,82-6,78 (м, 1Н), 5,57 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 4,70-4,45 (м, 6Н), 4,25-4,15 (м, 2Н), 3,55-3,40 (м, 2Н), 1,42 (с, 3Н).
ГХ/МС: 1р=2,75 мин, МЗ тА=551,4 [М+1]; ГХ/МС система: ТЬегто ^С^ АТуап1а§е ГЬепотепех ОетЫ, С18, 5 мкм, 110 А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
ВЭЖХ: 1Р=3,57 мин; система ВЭЖХ: А§Пеп1 1100; ГЬепотепех Сеттк С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле; 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
- 39 029712
Пример 4. (2К,33,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[1.2-Ц[1.2.4]триазин-7-ил)-2-(гидроксиметил)-2метилтетрагидрофуран-3,4-диол.
Промежуточное соединение 4г (23 мг, 0,042 ммоль) растворяли в растворе муравьиная кислота/МеОН (1:9, 10 мл). Добавляли палладиевую чернь и перемешивали при температуре 60°С в течение 90 мин. Охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Концентрировали при пониженном давлении. Растворяли в ЫаНСО3(водн.) и очищали с помощью ВЭЖХ в нейтральных условиях с получением соединения по примеру 4.
Система препаративной ВЭЖХ: Οΐίδοη 215 Мдшб НапШег; Рйепошепех Сештц С18, 4 мкм, 100x30,0 мм.
Буфер А: 0,1% ТФУ в воде; буфер В: 0,1% ТФУ в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 13 мин при 20 мл/мин.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 8,01 (с, 1Н), 7,41 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 7,02 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 5,33 (д, 1=8 Гц, 1Н), 4,53-4,49 (м, 1Н), 4,15 (д, 1=5,6 Гц, 1Н), 3,50 (м, 2Н), 1,27 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=0,30 мин, Μδ ш / 2 81,3 [М+1], 279,0 [М-1]; ГХ/МС система: Тйегшо ЬСр Άάναηΐα^; Рйепошепех Сештц С18, 5 мкм, 110 А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
ВЭЖХ: ΐκ=0,42 мин; система ВЭЖХ: Адйеп! 1100; Рйепошепех Сештц С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле; 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 5а. Х-(7-((28,38,48,5К)-5-Азидо-3,4-бис-(третбутилдиметилсилилокси)-5-((триметилсилилокси)метил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2ί][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору сырого промежуточного соединения 1ш, Х-(7-((28,38,48)-3,4-бис-(третбутилдиметилсилилокси)-5 -гидрокси-5 -(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло [1.21][1.2.4]триазин-4-ил)бензамида, (~110 мг, ~0,18 ммоль) и азидотриметилсилана (242 мкл, 1,84 ммоль) в дихлорметане (1,5 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли бромид индия(Ш) (130 мг, 0,369 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (1 мл). Полученную смесь распределяли между дихлорметаном (20 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл). Фазы разделяли и водный слой экстрагировали дихлорметаном (20 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 5а, которое напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ГХ/МС: ΐκ=3,52 мин, Μδ ш//=712,16 [М+1]; система ЖХ: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 02,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,55 мин 100% АСЫ, 3,55-4,2 мин 100-2% АСЫ при 2 мкл/мин.
Промежуточное соединение 5Ь. Ы-(7-(^,3К^,5К)-5-Азидо-3,4-дигидрокси-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-Ц[1.2.4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору сырого промежуточного соединения 5а (~120 мг, ~0,168 ммоль) в ДМФ (5 мл) при комнатной температуре добавляли фторид цезия (256 мг, 1,68 ммоль). Через 25 ч реакционную смесь разбавляли насыщенным солевым раствором (100 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 5Ь, которое напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ГХ/МС: ΐκ=1,40 мин, Μδ ш//=412,17 [М+1]; ЖХ система: Тйегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
- 40 029712
Система МС: ТЬегто ^С^ Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСИ, 2,0-3,05 мин 100% АСИ, 3,05-3,2 мин 100-2% АСИ, 3,2-3,5 мин 2% АСИ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: !К=2,46 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСИ, 5,0-6,0 мин 98% АСИ при 2 мл/мин.
Пример 5. (2К,38,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-7-ил)-2-азидо-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диол.
К раствору сырого промежуточного соединения 5Ъ в метаноле (1 мл) при комнатной температуре добавляли концентрированный гидроксид аммония (1 мл). Через 2 дня реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сразу очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (РЬепоттех 8упег§1 4 мк Нубго-КК 80А, колонка 150x30 мм, градиент 5-100% ацетонитрил/вода). Фракции, содержащие желаемые продукты, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток вновь очищали посредством хроматографии на колонке с 8Ю2 (4 г 8Ю2 СотЫйазЬ НР Оо1б Со1итп, 0-20% метанол/дихлорметан) с получением соединения по примеру 5.
'Н ЯМР (400 МГц, СИзОИ): δ 7,79 (с, 1Н), 6,86 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,77 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,51 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,63 (т, 1=5,8 Гц, 1Н), 4,37 (д, 1=5,7 Гц, 1Н), 3,69 (д, 1=12,0 Гц, 1Н), 3,59 (д, 1=12,0 Гц, 1Н).
ГХ/МС: !К=0,76 мин, М8 т//=308,08 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТЬегто ^С^ Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСИ, 1,5-2,2 мин 100% АСИ, 2,2-2,4 мин 100-2% АСИ, 2,4-2,5 мин 2% АСИ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: !К=1,287 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСИ, 5,0-6,0 мин 98% АСИ при 2 мл/мин;
ТСХ: элюент: 20% метанол в дихлорметане, 17=0.4 (УФ).
Пример 6 (также указываемый как ТР-1). ((2К,3К,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-7ил)-2-циано-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 3 (15,0 мг, 0,05 ммоль) сушили в колбе в вакууме в течение ночи. В колбу добавляли триметилфосфат (0,5 мл) и 1,8-бис-(диметиламино)нафталин (25 мг, 0,12 ммоль) и раствор оставляли перемешиваться в атмосфере И2, охлаждая на бане лед/вода. Добавляли дистиллированный оксихлорид фосфора (10 мкл, 0,11 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 4 ч при охлаждении. Добавляли трибутиламин (0,1 мл, 0,42 ммоль) и пирофосфат трибутиламмония (0,8 мл 0,5М раствора в ДМФ, 0,4 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение еще 45 мин при охлаждении. Реакционную смесь гасили бикарбонатом триэтиламмония (0,5М, 5 мл). Растворители удаляли путем упаривания на роторе и оставшуюся сырую смесь растворяли в 2 мл воды. Продукт очищали с использованием колонки 8ерЬабех ПЕЛЕ А-25 с линейным градиентом 0-1 М бикарбоната триэтиламмония. Продукт, содержащий фракции, объединяли и концентрировали с получением соединения по примеру 6 (ТР1), затем растворяли в 1 мл воды с получением 10 мМ раствора.
М8 т//=532,0 [М-1].
Ионообменная ВЭЖХ, время удерживания: 12,015 мин; колонка: ИИАРас РА-100 4x250 мм 8И.
Растворитель А: вода тИПС); растворитель В: 0,5М тетраэтиламмония бромид; программа градиента растворителя: уравновешивание с использованием 100% А в течение 10 мин, затем градиент 0-80% В в течение 14 мин; поток: 1 мл/мин.
- 41 029712
Пример 7 (также ТР2). ((2К,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-7-ил)-2-этинил-4фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 2 (16,0 мг, 0,055 ммоль) сушили в колбе в вакууме в течение ночи. В колбу добавляли триметилфосфат (0,5 мл) и 1,8-бис-(диметиламино)нафталин (28 мг, 0,13 ммоль) и раствор оставляли перемешиваться в атмосфере Ы2, охлаждая на бане лед/вода. Добавляли дистиллированный оксихлорид фосфора (11 мкл, 0,12 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 4 ч при охлаждении. Добавляли трибутиламин (0,11 мл, 0,42 ммоль) и трибутиламмония пирофосфат (0,9 мл 0,5М раствора в ДМФ, 0,45 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение еще 45 мин при охлаждении. Реакционную смесь гасили бикарбонатом триэтиламмония (0,5 М, 5 мл). Растворители удаляли путем упаривания на роторе и оставшуюся сырую смесь растворяли в 2 мл воды. Продукт очищали с использованием колонки Зерйайех ΌΕΆΕ А-25 с линейным градиентом 0-1 М бикарбоната триэтиламмония. Продукт, содержащий фракции, объединяли и концентрировали с получением соединения по примеру 7 (ТР2), затем растворяли в 1,4 мл воды с получением 10 Мм раствора.
М3 т/г=531,0 [М-1].
Ионообменная ВЭЖХ, время удерживания: 19,829 мин; колонка: ИЫАРас РА-100 4x250 мм 3Ы.
Растворитель А: тП^ вода; растворитель В: 0,5 М бромид тетраэтиламмония; программа градиента растворителя: уравновешивание с использованием 100% А в течение 10 мин, затем градиент 0-80% В в течение 14 мин; поток: 1 мл/мин.
Пример 8 (ТР3). ((2К,33,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-7-ил)-2-циано-3,4дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
К раствору соединения по примеру 1 (5,0 мг, 0,017 ммоль) в РО(ОМе)3 (0,6 мл) при температуре 0°С добавляли РОС13 (45 мг, 0,29 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 10 ч, в этот момент ионообменная ВЭЖХ показывала приблизительно 50% конверсии. Добавляли раствор солей пирофосфата трибутиламина (250 мг) в АСЫ (0,6 мл), затем трибутиламин (110 мг, 0,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 0,5 ч и ионообменная ВЭЖХ показывала, что реакция завершалась. Реакционную смесь гасили буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, затем концентрировали и дважды упаривали совместно с водой. Остаток растворяли в Н2О (5 мл) и помещали на ионообменную колонку, элюировали Н2О, затем 5-35% буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М)-Н2О. Фракции, содержащие продукт, объединяли, концентрировали и упаривали совместно
с Н2О. Остаток опять очищали с помощью ионообменной колонки с получением сырого продукта. 31
Р ЯМР показывал, что данный продукт содержал примеси, поэтому продукт вновь очищали с помощью колонки С-18, элюировали 0-15% АСЫ-Н2О, содержащими 0,05% ТЕА и фракции, содержащий продукт, объединяли и концентрировали с получением 3,6 мг продукта, который содержал только 1,5 экв. ТЕА, как было показано с помощью 1Н ЯМР анализа. Продукт растворяли в Н2О (1 мл) и добавляли буфер с бикарбонатом триэтиламмония (1 М, 0,1 мл). Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и два раза упаривали совместно с Н2О при пониженном давлении с получением соединения по примеру 8 (ТР3), в виде соли с тетра-ТЕА.
1Н ЯМР (400 МГц, Ό2Ο): δ 7,78 (с, 1Н), 6,85 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 6,82 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 5,51 (д, 1=3,0 Гц, 1Н), 4,65-4,55 (м, 2Н), 4,20-4,08 (м, 2Н), 3,15-3,00 (м, 24Н), 1,18-1,08 (м, 36Н).
31Р ЯМР (162 МГц, Ό2Ο): δ -6,25 (д, 1=52 Гц), -12,21 (д, 1=52 Гц), -22,32 (т, 1=52 Гц).
М3 тУ=530,2 [М-1], 532,1 [М+1]
- 42 029712
Пример 9 (ТР4). ((2К,3З,4К,5З)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-3,4дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
К раствору соединения по примеру 5 (6,0 мг, 0,019 ммоль) в РО(ОМе)3 (0,6 мл) при температуре 0°С добавляли РОС13 (45 мг, 0,29 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 10 ч, в этот момент ионообменная ВЭЖХ показывала приблизительно 50% конверсии. Добавляли раствор солей пирофосфата трибутиламина (250 мг) в АСН (0,6 мл), затем трибутиламин (110 мг, 0,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 6 ч. Реакционную смесь гасили буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, затем концентрировали и два раза упаривали совместно с водой. Остаток растворяли в Н2О (5 мл) и помещали на ионообменную колонку, элюировали Н2О, затем 5-35% буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М)-Н2О. Фракции, содержащие продукт, объединяли, концентрировали и упаривали совместно с Н2О. Остаток опять очищали с помощью ионообменной колонки с получением сырого продукта. 31Р ЯМР показывал, что данный продукт содержал примеси, поэтому продукт повторно очищали с помощью ионообменной колонки опять с получением сырого продукта. Продукт обрабатывали НаНСО3 (10 мг) и смесь концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток растворяли в 0,5 мл Н2О и добавляли 40 мкл НаОН (1н.). Полученную смесь очищали на колонке С-18, элюировали Н2О и фракции, содержащий продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения по примеру 9 (ТР4) в виде тетранатриевой соли.
‘Н ЯМР (400 МГц, 1).О)· δ 7,76 (с, 1Н), 6,88 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 6,81 (д, 4=4,6 Гц, 1Н), 5,59 (д, Э=5,5 Гц, 1Н), 4,60 (т, 4=5,6 Гц, 1Н), 4,55 (д, 1=5,8 Гц, 1Н), 3,99 (квд, 1=11,2, 5,5 Гц, 3Н).
3‘Р ЯМР (162 МГц, Б2О): δ -8,13 (д, .1=19,8 Гц), -14,04 (д, 1=18,9 Гц), -24,00 (т, 4=19,3 Гц).
МЗ ηι/ζ=546,1 [М-1], 547,9 [М+1].
Промежуточное соединение Р1)1а. З-2-Гидроксиэтил 2,2-диметилпропантиоат.
К раствору 2-тиоэтанола (3,50 мл, 50,0 ммоль) и триэтиламина (7,02 мл, 50,0 ммоль) в СН2С12, который охлаждали до температуры -78°С, добавляли по каплям пивалил хлорид (6,15 мл, 50,0 ммоль) в течение 30 мин. Реакционной смеси позволяли медленно нагреться до комнатной температуры и протекание реакции отслеживали с помощью ТСХ. Через 30 мин определяли, что реакция завершалась и гасили водой. Слои разделяли и водный слой промывали СН2С12. Органические продукты объединяли и сушили над сульфатом натрия. Твердые продукты фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле 0-50% ЕЮАс/гексан с получением промежуточного соединения Р1)1а.
‘Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ 4,89 (т, 1=5,5 Гц, 1Н), 3,49-3,36 (м, 2Н), 2,86 (т, 4 6,7 Гц, 2Н), 1,14 (с, 9Н).
Оксихлорид фосфора (281 мкл, 3,08 ммоль) помещали в СН2С12 (5 мл) и охлаждали раствор до -78°С. Тиоэфир РО1а (1,00 г, 6,17 ммоль) помещали в СН2С12 (5 мл) и медленно добавляли в раствор с РОС13. Затем добавляли по каплям ТЕА (891 мкл, 6,16 ммоль) и оставляли перемешиваться холодным в течение 30 мин, затем нагревали до комнатной температуры и оставляли перемешиваться в течение 2 ч. Одной порцией добавляли п-нитрофенол (428 мг, 3,08 ммоль), затем медленно добавляли ТЕА (449 мкл, 3,08 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. ТСХ (70:30 гексан/ЕЮАС) показывала только одно пятно, но по данным ГХ/МС было два пика (продукт и бис-п-нитрофенолат). Раствор разбавляли эфиром и твердые продукты удаляли путем фильтрования и отбрасывали. Маточный раствор концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением смеси продукта и бис-п-нитрофенолата. Смесь затем вновь очищали с помощью ВЭЖХ с получением промежуточного соединения РО1Ь, З,З'-2,2'-((4-нитрофенокси)фосфорил)-бис-(окси)-бис-(этан-2,1-диил) бис-(2,2- 43 029712
диметилпропантиоат).
1Η ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 8,29-8,21 (м, 2Н), 7,46-7,36 (м, 2Н), 4,23 (шир. кв, 1=7,7 Гц, 4Н), 3,16 (шир. т, 1=6,7 Гц, 4Н), 1,23 (с, 18Н).
Пример 10 (также указываемый как РО1). 8,8'-2,2'-((((2К,38,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[1.2Д[1.2.4]триазин-7-ил)-2-циано-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)фосфорил)-бис-(окси)-бис(этан-2,1 -диил)-бис-(2,2-диметилпропантиоат).
Соединение по примеру 1 (6,0 мг, 0,02 ммоль) растворяли в NМР (0,1 мл) и добавляли ТГФ (0,2 мл). Затем при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли трет-бутил магний хлорид (1,0 М раствор в ТГФ, 0,031 мл, 0,031 ммоль). Через 10 мин добавляли раствор промежуточного соединения РО1Ъ (15,7 мг, 0,031 ммоль) в ТГФ (0,1 мл) и полученную смесь нагревали до температуры 50°С. Через 5 ч образовавшийся остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (РГепоттех 8упегщ 4 мк Ηυ6γω-ΗΗ 80А, колонка 150x30 мм, 40-100% градиент ацетонитрил/вода). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и лиофилизовали с получением соединения по примеру 10 (РО1).
1Η ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 7,82 (с, 1Н), 6,69 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6, 64 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,56 (д, 1=3,4 Гц, 1Н), 4,61 (шир. с, 2Н), 4,45-4,32 (м, 2Н), 4,22-4,06 (м, 4Н), 3,13 (дт, 1=11,7, 6,7 Гц, 4н), 1,23 (с, 9Н), 1,21 (с, 9Н).
31Р ЯМР (162 МГц, СЭС13): δ -2,34 (с).
ГХ/МС: ίκ=1,70 мин, М8 ιηζ 660,02 [М+1]; система ЖХ: ТГегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТГегто £С(9 Г1ееЦ колонка: КтсГех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АС^ 2,0-3,05 мин 100% ΑΟΝ, 3,05-3,2 мин 100-2% ΑΟΝ, 3,2-3,5 мин 2% АСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ίκ=3,204 мин; система ВЭЖХ: серии АцПет 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ.
Градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% ΑСN при 2 мл/мин.
Пример 11 (РЭ2). 8,8'-2,2'-((((2К,3К,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-7-ил)-2-циано4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)фосфорил)-бис-(окси)-бис-(этан-2,1-диил)-бис-(2,2диметилпропантиоат).
Соединение по примеру 3 (10,5 мг, 0,036 ммоль) растворяли в NМР (0,1 мл) и добавляли ТГФ (0,1 мл). Затем при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли трет-бутил магний хлорид (1,0 М раствор в ТГФ, 0,054 мл, 0,054 ммоль). Через 10 мин добавляли раствор промежуточного соединения РО1Ъ (27,3 мг, 0,054 ммоль) в ТГФ (0,1 мл) и полученную смесь нагревали до температуры 50°С. Через 24 ч образовавшийся остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (РГепоттех 8упегщ 4 мкм 11у6го-КК 80 А, колонка 150x30 мм, 40-100% градиент ацетонитрил/вода). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и лиофилизовали с получением соединения по примеру 11 (РЭ2).
1Η ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 7,94 (с, 1Н), 6,75 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,67 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,77 (дд, 1=27,8, 1,4 Гц, 1Н), 5,43 (ддд, 1=55,2, 4,9, 1,3 Гц, 1Н), 4,93 (дд, 1=21,2, 4,9 Гц, 1Н), 4,49 (дд, 1=11,3, 7,8 Гц, 1Н), 4,40 (дд, 1=11,3, 7,8 Гц, 1Н), 4,10 (ддт, 1=15,9, 8,0, 6,7 Гц, 4Н), 3,16-3,04 (м, 4Н), 1,23 (с, 9Н), 1,21 (с, 9Н).
31Р ЯМР (162 МГц, СЭС13): δ -2,10 (с).
19Г ЯМР (376 МГц, СЭС13): δ -191,64 (ддд, 1=55,0, 27,8, 21,3 Гц).
ГХ/МС: ίκ=1,85 мин, М8 тА=662,03 [М+1]; система ЖХ: ТГегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТГегто £С(9 Г1ееЦ колонка: КтсГех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСИ 2,0-3,05 мин 100% АСИ 3,05-3,2 мин 100-2% АСИ 3,2-3,5 мин 2% ΑСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ίκ=3,385 мин; система ВЭЖХ: серии .Лщ1еп1 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АС^
- 44 029712
5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение Р1)3с. (28)-2-Этилбутил 2-((4нитрофенокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноат.
Фенил дихлорфосфат Р)О3а (1,5 мл, 10 ммоль) растворяли в 30 мл безводного ОСМ и перемешивали в атмосфере Ы2 (газ) на ледяной бане. Добавляли одной порцией НС1 соль амино сложного эфира РЭ3Ъ, гидрохлорид (8)-2-этилбутил 2-аминопропаноата, (полученного в соответствии с Еиг. 1. Мей. Сйет. 2009,44, 3765-3770, 2,1 г, 10 ммоль). Добавляли по каплям ТЕА (3 мл, 22 ммоль). Перемешивали в течение 1 ч при температуре 0°С. Добавляли одной порцией п-нитрофенол (1,4 г, 10 ммоль) и ТЕА (1,5 мл, 11 ммоль). Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Разбавляли ОСМ и промывали насыщенным раствором ЫаНСОз(водн.). Органические фракции сушили над безводным Ыа28О4 и концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке с силикагелем (015% ЕЮАс в гексане) с получением промежуточного соединения Р)03с.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 8,23 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,41-7,30 (м, 4Н), 7,25-7,19 (м, 3Н), 4,10-4,00 (м, 3Н), 3,90-3,83 (м, 1Н), 1,55-1,45 (м, 1Н), 1,42-1,31 (м, 7Н), 0,87 (т, 1=7,2 Гц, 6Н).
31Р ЯМР (162 МГц, СЭС13): δ -3,04 (с), -3,10 (с).
ГХ/МС: ίκ=2,87 мин, М8 т//=451,1 [М+1], 449,0 [М-1]; система ГХ/МС: Тйегто ЬСР АймаШаде; Рйепотепех Оеттд С18, 5 мкм, 110 А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
ВЭЖХ: ίκ=4,40 мин; система ВЭЖХ: Адйеп! 1100; Рйепотепех Оеттд С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле; 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
Пример 12 (РО3). (28)-2-Этилбутил 2-((((2К,3К,4К,55)-5-(4-аминопирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-7ил)-2-циано-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноат.
Соединение по примеру 3 (15 мг, 0,051 ммоль) растворяли в безводном ДМФ (1 мл) и перемешивали в атмосфере Ы2 (газ). п-Нитрофенилфосфоамидат РО3с (35 мг, 0,077 ммоль) растворяли в безводном ДМФ (0,5 мл) и добавляли в реакционную смесь одной порцией. Добавляли по каплям 1ВиМдС1 в ТГФ (1 М в ТГФ, 77 мкл, 0,077 ммоль). Перемешивали в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество п-нитрофенилфосфоамидата (35 мг в 0,5 мл безводного ДМФ) и дополнительное количество 1ВиМдС1 (1 М в ТГФ, 50 мкл, 0,050 ммоль). Перемешивали в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество пнитрофенилфосфоамидата (35 мг в 0,5 мл безводного ДМФ) и дополнительное количество раствора 1ВиМдС1 (1 М в ТГФ, 50 мкл, 0,050 ммоль). Перемешивали в течение 16 ч. Разбавляли ЕЮАс и промывали насыщенным раствором ЫаНСО3(водн.) (3ж). Промывали насыщенным раствором ЫаС1(водн.) и органические фракции сушили над безводным Ыа28О4. Концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке с силикагелем (0-5% МеОН в ОСМ). Объединяли фракции и концентрировали при пониженном давлении. Очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с ТФУ в качестве модификатора с получением соединения по примеру 12 (Р)О3).
Система препаративной ВЭЖХ: Ойзоп 215 Ρίίμιίίΐ Напй1ег; Рйепотепех Оеттд С18 4 мкм, 100x30,0 мм.
Буфер А: 0,1% ТФУ в воде; буфер В: 0,1% ТФУ в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 13 мин при 20 мл/мин.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 7,89 (с, 1Н), 7,31-7,13 (м, 6Н), 6,80-6,75 (м, 1Н), 5,80-5,70 (м, 1Н), 5,355,20 (м, 1Н), 4,80-4,62 (м, 1н), 4,60-4,45 (м, 2Н), 4,35-4,10 (м, 1Н), 4,06-3,96 (м, 3Н), 1,49-1,28 (м, 8Н), 0,90-0,82 (м, 6Н).
31Р ЯМР (162 МГц, СЭСР): δ 2,36 (с), 2,22 (с).
ВЭЖХ: ΐρ=3,00 мин; система ВЭЖХ: Адйеп! 1100; Рйепотепех Оеттд С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; буфер А: 0,05% ТФУ в воде; буфер В: 0,05% ТФУ в ацетонитриле; 2-98% буфер В за 5 мин при 2 мл/мин.
ГХ/МС: ίκ=2,39 мин, М8 тА=605, 1 [М+1], 603,0 [М-1]; система ГХ/МС: Тйегто ЬСР АймаШаде;
- 45 029712
РЬепотепех Оеттц С18, 5 мкм, 110 А, 30x4,6 мм; буфер А: 0,1% уксусная кислота в воде; буфер В: 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле; 5-100% буфер В за 2,5 мин, затем 100% в течение 0,9 мин при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 6а. ^(7-((28,38,4К,5К)-4-(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтор-5-винилтетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2-1][1.2.4]триазин-4ил)бензамид.
Промежуточное соединение 2д, ^(7-((28,38,4К,5К)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-5-((третбутилдиметилсилилокси)метил)-3-фтор-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[1.2£][1.2.4]триазин-4-ил)бензамид, (220 мг, 0,35 ммоль) растворяли в 5 мл безводного ДМСО и перемешивали в атмосфере Ν2 (газ). Добавляли ЕЭС1 (100 мг, 0,52 ммоль) и затем ТФУ-пиридин (34 мг, 0,18 ммоль). Перемешивали в течение 1 ч. Добавляли еще ЕОС1 (100 мг, 0,52 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч. Отслеживание с помощью ГХ/МС показывало, что оставался исходный спиртовой продукт. Добавляли еще ЕОС1 (100 мг, 0,52 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч. Отслеживание с помощью ГХ/МС показывало, что реакция достигает полной конверсии. Разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным раствором №НСО3(водн.) ^) и затем насыщенным раствором №С1(водн.). Органический слой сушили над безводным Ν28Ο4 и концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке с силикагелем (020% ЕЮАс в гексане). Объединяли фракции и концентрировали при пониженном давлении с получением альдегид в виде твердого вещества. Метил трифенилфосфония бромид (500 мг, 1,40 ммоль) суспендировали в 10 мл безводного ТГФ и перемешивали при температуре -78°С в атмосфере Аг (газ). Добавляли по каплям 2,5М раствор н-бутиллития в гексане (560 мкл, 1,40 ммоль). Перемешивали реакционную смесь на ледяной бане в течение 1 ч с получением смеси желтого цвета. Полученный выше альдегид разбавляли в 5 мл безводного ТГФ и добавляли по каплям в реакционную смесь. Ледяную баню отставляли и давали реакционной смеси нагреться до комнатной температуры. Перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляли насыщенный водный раствор ΝΠ^Ι и экстрагировали этилацетатом. Органический экстракт промывали насыщенным раствором №11СО3(вод,и и затем насыщенным раствором №С1(водн.). Органические фракции сушили над безводным №28О4 и концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке с силикагелем (0-20% ЕЮАс в гексане) с получением промежуточного соединения 6а.
Υ ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 8,22 (шир. с, 1Н), 8,03 (шир. с, 2Н), 7,58 (дт, 1=40,4, 7,4 Гц, 3Н), 7,12 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 6,97 (с, 1Н), 6,01 (дд, 1=17,5, 10,9 Гц, 1Н), 5,58 (д, 1=22,8 Гц, 1Н), 5,46 (дд, 1=17,5, 2,1 Гц, 1Н), 5,25 (дд, 1=11,0, 2,0 Гц, 1Н), 5,14 (ддд, 1=55,4, 4,9, 2,7 Гц, 1Н), 4,61 (дд, 1=20,8, 4,8 Гц, 1Н), 3,63-3,40 (м, 2Н), 0,89 (с, 9Н), 0,84 (с, 9Н), 0,09 (д, 1=8,4 Гц, 6Н), 0,00 (д, 1=14,1 Гц, 6Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-й6): δ -191,86 (д, 1=56, 8 Гц).
М8 т//=627,3 [М+1].
Пример 13. (2К,3К,4К,5 8)-5-(4-Аминопирроло [ 1.2-ί] [ 1.2.4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)2-винилтетрагидрофуран-3-ол.
Промежуточное соединение 6а (146 мг, 0,23 ммоль) растворяли в ТГФ (10 мл) и полученный раствор перемешивали на ледяной бане. Добавляли 1 М раствор ТВАР в ТГФ (700 мкл, 0,70 ммоль) и перемешивали в течение 2 ч. Разбавляли ЕЮАс и промывали насыщенным раствором №С1(водн.) ^). Органический слой сушили над безводным Ν28Ο4 и концентрировали при пониженном давлении. Растворяли в 7 М растворе аммиака в МеОН (7 мл) и перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Очищали на колонке С18 препаративной ВЭЖХ с ТФУ в качестве модификатора. Объединяли фракции и концентрировали при пониженном давлении. Растворяли в №НСО3(водн.) и вновь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ в нейтральных условиях. Объединяли фракции и сушили вымораживанием с получением соединения по примеру 13.
1Н ЯМР (400 МГц, П2О): δ 7,54 (с, 1Н), 6,62-6,49 (м, 2Н), 5,98-5,79 (м, 1Н), 5,55-5,36 (м, 2Н), 5,31 (д, 1=11,1 Гц, 1Н), 5,11 (ддд, 1=54,8, 5,2, 2,9 Гц, 1Н), 4,42 (дд, 1=20,6, 4,8 Гц, 1Н), 3,62-3,43 (м, 2Н).
- 46 029712
19Г ЯМР (376 МГц, ϋ2Ο): δ -193,23 (дд, 1=54,7, 44,2 Гц). М3 тА=295,2 [М+1].
Пример 14. (2К,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[1.2-£][1.2.4]триазин-7-ил)-2-этил-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.
Соединение по примеру 13 (5 мг, 0,017 ммоль) растворяли в метаноле (2 мл). Затем добавляли катализатор Эедизза 10% Ρά/С (2 мг) и полученную смесь перемешивали в атмосфере газообразного водорода. Через 40 мин полученную смесь фильтровали для удаления Ρά/С и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде и сушили вымораживанием с получением соединения по примеру 14.
1Н ЯМР (400 МГц, ϋ2Ο): δ 7,67 (с, 1Н), 6,79-6,55 (м, 2Н), 5,54-5,12 (м, 2Н), 4,46 (дд, 1=15,1, 5,5 Гц, 1Н), 3,65-3,44 (м, 2Н), 1,89-1,44 (м, 2Н), 0,84 (т, 1=1, 6 Гц, 3Н).
19Г ЯМР (376 МГц, ϋ2Ο): δ -197,62 (ддд, 1=54,5, 20,6, 15,0 Гц).
М3 тА=297,3 [М+1].
Пример 15 (РЭ4). 3,3'-2,2'-((((2К,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[1.2-Т][1.2.4]триазин-7-ил)-4-фтор-3гидрокси-2-винилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)фосфорил)-бис-(окси)-бис-(этан-2,1-диил)-бис-(2,2диметилпропантиоат).
Соединение по примеру 13 (5 мг, 0,017 ммоль) растворяли в безводном ДМФ (0,5 мл). Добавляли одной порцией п-нитрофенонат (13 мг, 0,026 ммоль). Добавляли по каплям 1 М раствор третбутилмагний хлорида в ТГФ (25 мкл, 0,026 ммоль). Перемешивали в течение 1 ч. Нагревали до температуры 50°С и перемешивали в течение 2 ч. Добавляли еще п-нитрофенонат (13 мг, 0,026 ммоль) и перемешивали в течение 2 ч. Добавляли еще 1 М раствор трет-бутилмагний хлорида в ТГФ (25 мкл, 0,026 ммоль) и перемешивали в течение 16 ч при температуре 50°С. Охлаждали до комнатной температуры. Полученную смесь очищали напрямую на колонке препаративной ВЭЖХ и элюировали с линейным градиентом 0-100% ΑСN в воде с получением соединения по примеру 15 (РЭ4).
1Н ЯМР (400 МГц, С^зΟ^): δ 7,84 (с, 1Н), 6,92 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,80 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,10 (дд, 1=17,4, 10,9 Гц, 1Н), 5,67 (дд, 1=5,8, 1,9 Гц, 1Н), 5,61 (с, 1Н), 5,45-5,35 (м, 1Н), 5,15 (ддд, 1=55,6, 5,0, 2,2 Гц, 1Н), 4,65 (дд, 1=22,5, 5,1 Гц, 1Н), 4,13 (дд, 1=11,1, 5,2 Гц, 1Н), 4,08-3,95 (м, 5Н), 3,06 (дд, 1=7,0, 6,1 Гц, 4Н), 1,21 (с, 9Н), 1,18 (с, 9Н).
19Г ЯМР (376 МГц, С^зΟ^): δ 192,99 (тд, 1=55,7, 23,6 Гц).
М3 тА=663,0 [М+1].
5 Ρϋ3ο РО5
Пример 16 (РЭ5). (23)-2-Этилбутил 2-(((((2К,33,4К,53)-5-(4-аминопирроло[2,1-Т][1,2,4]триазин-7ил)-2-азидо-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат.
Соединение по примеру 5 (5 мг, 0,016 ммоль) растворяли в безводном ^метил-2-пирролидоне (0,2 мл) и в атмосфере аргона добавляли ТГФ (0,1 мл). Затем при комнатной температуре добавляли трет-бутил магний хлорид (1 М в ТГФ, 24 мкл, 0,024 ммоль) и в осадок выпадало твердое вещество белого цвета. Через 5 мин в реакционную смесь одной порцией добавляли раствор п-нитрофенилфосфоамидата РЭ3с (15 мг, 0,032 ммоль) в ТГФ (0,1 мл) и полученную смесь нагревали при температуре 50°С. Через 3,5 ч реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Затем добавляли п-нитрофенилфосфоамидат РЭ3с (50 мг, 0,111 ммоль) и трет-бутил магний хлорид (1 М в ТГФ, 24 мкл, 0,024 ммоль) и реакционную смесь перемешивали еще 5 дней. Образовавшийся остаток затем очищали напрямую с помощью препаративной ВЭЖХ (Рйепоттех 3упег§1 4 мкм Нудго-КК 80 А, колонка 150x30 мм, градиент 40-100% ацетонитрил/вода).
- 47 029712
Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и лиофилизовали с получением соединения по примеру 16 (РЭ5) (смесь диастереомеров 2:1).
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 7,88 (шир. с, 1Н), 7,33-7,22 (шир. м, 2Н), 7,22-7,10 (шир. м, 3Н), 6,69 (шир. д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6, 61 (шир. д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,64-5,56 (м, 1Н), 4,54 (д, 1=6,3 Гц, 1н), 4,50-4,20 (м, 3Н), 4,11-3,94 (м, 3Н), 3,90-3,76 (м, 1Н), 1,49 (с, 1=6,2 Гц, 1Н), 1,40-1,24 (м, 7Н), 0,86 (т, 1=7,4 Гц, 6Н).
31Р ЯМР (162 МГц, СЭС13): δ 2,68 (с), 2,56 (с).
ГХ/МС: 1к=1,70 мин, М3 т//=619,09 [М+1]; система ЖХ: ТКегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТКегто ЬСО Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,05 мин 100% АСЫ, 3,05-3,2 мин 100-2% АСЫ, 3,2-3,5 мин 2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1И=3,010 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: ОетЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСЫ, 5,0-6,0 мин 98% АСЫ при 2 мл/мин.
Пример 17 (ТР5). ((2К,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокси2-винилтетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
К раствору соединения по примеру 13 (6,0 мг, 0,020 ммоль) в РО(ОМе)3 (0,6 мл) при температуре 0°С добавляли РΟС13 (50 мг, 0,32 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 6 ч, в этот момент ионообменная ВЭЖХ показывала приблизительно 90% конверсии. Добавляли раствор солей пирофосфата трибутиламина (250 мг) в АСЫ (0,6 мл), затем трибутиламин (110 мг, 0,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, затем концентрировали и два раза упаривали совместно с водой. Остаток растворяли в Н2О (5 мл) и помещали на ионообменную колонку, элюировали Н2О, затем 5-35% буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М)-Н2О. Фракции, содержащие продукт, объединяли, концентрировали и упаривали совместно с Н2О. Твердый остаток растворяли в 3 мл Н2О и добавляли 100 мкл ЫаΟН (1н.). Полученную смесь очищали на колонке С-18, элюировали Н2О и фракции, содержащий продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения по примеру 17 (ТР5) в виде тетранатриевой соли.
'Н ЯМР (400 МГц, ϋ2Ο): δ 7,74 (с, 1Н), 6,89 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,81 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,00 (дд, 1=17,4, 11,1 Гц, 1Н), 5,72 (д, 1=23,3 Гц, 1Н), 5,49 (д, 1=16,9 Гц, 1Н), 5,32 (д, 1=11,1 Гц, 1Н), 5,14 (дд, 1=54,0, 4,6 Гц, 1Н), 4,72 (дд, 1=23,7, 4,5 Гц, 1Н), 4,09 (дд, 1=11,3, 5,8 Гц, 1Н), 3,79 (дд, 1=11,6, 3,8 Гц, 1Н).
31Р ЯМР (162 МГц, ϋ2Ο): δ -8,38 (д, 1=20,5 Гц), -13,67 (д, 1=19,3 Гц), -24,20 (т, 1=19,9 Гц).
19Г ЯМР (376 МГц, СЭС13): δ -194,58 (дт, 1=55,0, 23,8 Гц).
М3 тА=533,0 [М-1], 535,0 [М+1].
Пример 18 (ТР6). ((2К,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2-этил-4-фтор-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
К раствору соединения по примеру 14 (5,0 мг, 0,017 ммоль) в РО(ОМе)3 (0,6 мл) при температуре 0°С добавляли РΟС13 (45 мг, 0,30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 6 ч, в этот момент ионообменная ВЭЖХ показывала приблизительно 90% конверсии. Добавляли раствор солей пирофосфата трибутиламина (250 мг) в АСЫ (0,6 мл), затем трибутиламин (110 мг, 0,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, затем концентрировали и два раза упаривали совместно с водой. Остаток растворяли в Н2О (5 мл) и помещали на ионообменную колонку, элюировали Н2О, затем 5-35% буфером с бикарбонатом триэтиламмония (1 М)-Н2О. Фракции, содержащие продукт, объединяли, кон- 48 029712
центрировали и упаривали совместно с Н2О. Твердый остаток растворяли в 3 мл Н2О и добавляли 100 мкл ЫаОН (1н.). Полученную смесь очищали на колонке С-18, элюировали Н2О и фракции, содержащий продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением 18 (ТР6) в виде тетранатриевой соли.
1Н ЯМР (400 МГц, Э2О): δ 7,73 (с, 1Н), 6,86 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,80 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,60 (дд, 1=21,9, 3,5 Гц, 1Н), 5,23 (дт, 1=55,2, 4,2 Гц, 1Н), 4,65 (дд, 1=20,6, 5,3 Гц, 1Н), 4,08-3,84 (м, 3Н), 1,83 (дкв, 1=14,4, 7,4, 6,9 Гц, 1Н), 1,62 (дкв, 1=15,0, 7,5 Гц, 1Н), 0,87 (т, 1=7,5 Гц, 3Н).
31Р ЯМР (162 МГц, Ι(Όι: -5,72 (д, 1=20,2 Гц), -10,81 (д, 1=19,3 Гц), -21,60 (т, 1=19,8 Гц).
19Г ЯМР (376 МГц, СПСЬ: δ -194,77 (дт, 1=55,2, 21,2 Гц). МЗ μ/ζ=535,1 [М-1], 536,9,0 [М+1].
Промежуточное соединение 8а. Ы-(7-((2З,3К,4К,5З)-3-Фтор-4-гидрокси-5(йодметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[2,1 -1][1,2,4]триазин-4-ил)бензамид.
В колбу, продутую аргоном, добавляли 2Ь (68 мг, 0,183 ммоль) в ДМФ (2 мл), затем йодид метилтрифеноксифосфония (124 мг, 0,274 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 5 мин, при этом с помощью ЖХМС наблюдалась полная конверсия в продукт. Реакционную смесь гасили метанолом и растворители удаляли при пониженном давлении. Сырое вещество распределяли между ЕЮАс и Н2О. Органические продукты разделяли и промывали насыщенным солевым раствором. Полученное вещество сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Сырое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (20-100% ЕЮАс/гексан) с получением промежуточного соединения 8а.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 8,17 (м, 3Н), 7,63 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,53 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,17-6,96 (м, 2Н), 5,74 (с, 1Н), 5,60 (д, 1=24,9 Гц, 1Н), 5,19 (ддд, 1=54,6, 4,5, 2,1 Гц, 1Н), 4,09-3,92 (м, 1Н), 3,72 (т, 1=6,4 Гц, 1Н), 3,63 (дд, 1=11,0, 3,4 Гц, 1Н), 3,44 (дд, 1=11,0, 5,9 Гц, 1Н).
19Г ЯМР (376 МГц, ДМСО-Й6): δ -194,23 (м).
ГХ/МС: ΐκ=1,13 мин, МЗ шА=483,23 [М+1].
ГС система: ТГегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТГегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЫ, 1,4-1,80 мин 100% АСЫ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЫ, 1,85-2 мин 2% АСЫ.
Промежуточное соединение 8Ь. (3К,4К,5З)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2метилентетрагидрофуран-3-ол.
Промежуточное соединение 8а (80 мг, 0,166 ммоль) растворяли в ТГФ. Одной порцией добавляли ΌΒϋ (0,074 мл, 0,498 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при температуре 60°С на масляной бане в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. Сырое вещество очищали путем хроматографии на силикагеле (0-70% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 8Ь.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 8,34-8,05 (м, 3Н), 7,63 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,53 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,13 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 6,85 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 5,97-5,82 (м, 2Н), 5,39-5,13 (м, 1Н), 4,89-4,69 (м, 1Н), 4,38 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 4,16 (т, 1=1,8 Гц, 1Н).
19Г ЯМР (376 МГц, ДМСО-а6): δ -198,14 (ддд, 1=53,9, 24,7, 20,9 Гц).
ГХ/МС: ΐκ=1,05 мин, МЗ шА=355,15 [М+1].
ГС система: ТГегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТГегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЫ, 1,4-1,80 мин 100% АСЫ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЫ, 1,85-2 мин 2% АСЫ.
- 49 029712
Промежуточное соединение 8с. (23,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-7-ил)-2азидо-4-фтор-2-(йодметил)тетрагидрофуран-3-ол.
Хлорид бензилтриметиламмония (55 мг, 0,296 ммоль) и азид натрия (19,3 мг, 0,296 ммоль) растворяли в АСК (1 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем фильтровали и с помощью шприца добавляли в раствор промежуточного соединения 8Ь (50 мг, 0,141 ммоль) в ТГФ (1 мл). Затем добавляли К-метилморфолин (0,078 мл, 0,706 ммоль), затем по каплям добавляли раствор йода (65 мг, 0,25 ммоль) в ТГФ (1 мл). Через 15 мин добавляли К-ацетил цистеин до тех пор, пока больше не наблюдалось выделение газа. Затем добавляли насыщенный водный раствор тиосульфата натрия до тех пор, пока раствор не становился светло-желтым. Сырую смесь распределяли между ЕЮАс и Н2О. Фазы разделяли и органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-60% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 8с.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 8,31-8,05 (м, 3Н), 7,63 (т, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,53 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,14 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 7,04 (с, 1Н), 6,34 (д, 1=6,9 Гц, 1Н), 5,80 (д, 1=23,7 Гц, 1Н), 5,55-5,31 (м, 1Н), 4,62 (дт, 1=21,9, 5,9 Гц, 1Н), 3,78-3,56 (м, 2Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-б6): δ -194,44 (дт, 1=54,7, 22,8 Гц).
ГХ/МС: 4=1,19 мин, М3 тЧ=524,09 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬС9 Р1еер колонка: Кте1;ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСК, 1,4-1,80 мин 100% АСК, 1,8-1,85 мин 100-2% АСК, 1,85-2 мин 2% АСК.
Промежуточное соединение 8б. (23,3К,43,53)-5-(4-Аминопирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-7-ил)-2азидо-4-фтор-2-(йодметил)тетрагидрофуран-3-ил ацетат.
В раствор промежуточного соединения 8с (40 мг, 0,076 ммоль) в ТГФ (1 мл при комнатной температуре) добавляли уксусный ангидрид (0,009 мл, 0,092 ммоль), затем Г)МАР (10 мг, 0,082 ммоль). Через 15 мин реакционную смесь гасили метанолом и полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 8б.
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 8,15-8,02 (м, 3Н), 7,62 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 7,53 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,44 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 7,00 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,95-5,80 (м, 1Н), 5,70-5,43 (м, 2Н), 3,71 (д, 1=11,3 Гц, 1Н), 3,60 (д, 1=11,3 Гц, 1Н), 2,25 (с, 3Н).
19Р ЯМР (376 МГц, СЭС13): δ -192,78 (ддд, 1=55,7, 24,6, 18,5 Гц).
ГХ/МС: 4=1,35 мин, М3 тЧ=566, 14 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегто ЬС9 Р1еер колонка: Кте1;ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСК, 1,4-1,80 мин 100%.
АСК, 1,8-1,85 мин 100-2% АСК, 1,85-2 мин 2% АСК.
Промежуточное соединение 8е. ((2К,3К,43,53)-3-Ацетокси-2-азидо-5-(4-бензамидопирроло[2,1ί] [ 1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтортетрагидрофуран-2-ил)метил бензоат.
В раствор промежуточного соединения 8б (30 мг, 0,053 ммоль) в ДМФ (2 мл) при комнатной температуре добавляли 15-краун-5 (0,105 мл, 0,531 ммоль) и бензоат натрия (77 мг, 0,531 ммоль). Реакцион- 50 029712
ную смесь затем нагревали при температуре 105°С. Через 30 ч температуре реакционной смеси давали дойти до комнатной и смесь распределяли между 5% раствором ЫС1(водн.) и ЕЮАс. Фазы разделяли и водную фазу промывали ЕЮАс (^). Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-60% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 8е.
1Н ЯМР (400 МГц, С1)СЬ): δ 8,25-7,97 (м, 4Н), 7,69-7,40 (м, 6Н), 7,36 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 6,95-6,80 (м, 1Н), 5,90 (д, 1=25,0 Гц, 1Н), 5,65 (д, 1=1,9 Гц, 1Н), 5,62-5,48 (м, 1Н), 4,69 (дд, 1=79,3, 12,0 Гц, 2Н), 2,20 (с, 3Н).
19Р ЯМР (376 МГц, СЭС13): δ -192,57 (ддд, 1=53,9, 25,1, 22,0 Гц).
ГХ/МС: ΐκ=1,45 мин, М3 тУ=560,14 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТИегто ЬСР Е1ее1; колонка: КтеШх, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЫ, 1,4-1,80 мин 100% АСЫ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЫ, 1,85-2 мин 2% АСЫ.
Пример 19. (2К,3К,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.
К промежуточному соединению 8е (24 мг, 0,043 ммоль) добавляли 7н. раствор ЫН3 в СН3ОН (2 мл) при комнатной температуре. Через 16 ч полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ без кислотного модификатора с получением соединения по примеру 19.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-04): δ 7,81 (с, 1Н), 6,85 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,80 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,80 (дд, 1=24,7, 1,9 Гц, 1Н), 5,22 (ддд, 1=55,6, 5,1, 1,9 Гц, 1Н), 4,63 (дд, 1=22,9, 5,1 Гц, 1Н), 3,81 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 3,70 (д, 1=12,2 Гц, 1Н).
Е19 ЯМР (376 МГц, метанол-04): δ -195,30 (ддд, 1=55,5, 24,6, 22,9 Гц).
ГХ/МС: ΐκ=0,61 мин, М3 тУ=310,02 [М+1]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТИегто ЬСР Е1ее1; колонка: КтеШх, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм.
Растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты.
Градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЫ, 1,4-1,80 мин 100% АСЫ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЫ, 1,85-2 мин 2% АСЫ.
Промежуточное соединение 9Ь. ((3аК,5К,63,6аК)-6-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-2,2диметилтетрагидрофуро[2,3-й][1,3]диоксол-5-ил)метанол.
К раствору гидрида натрия (60 мас.%, 1,55 г, 38,7 ммоль) в ТГФ (100 мл) при температуре 0°С в атмосфере аргона добавляли ((3аК,63,6аК)-6-(бензилокси)-2,2-диметилтетрагидрофуро[2,3-й][1,3]диоксол5,5-диил)диметанол (9а, приобретено у фирмы СагЬозупШ, 10,0 г, 32,2 ммоль). Через 10 мин добавляли бензил бромид (4,54 мл, 38,6 ммоль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Спустя 2 ч реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (500 мл). Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (500 мл). Органическую фазу затем промывали насыщенным солевым раствором (400 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного масла. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 3Ю2 (колонка 220 г 3Ю2 СотЬШазй НР СоЫ, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 9а (9,49 г, 73%) в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 7,38-7,19 (м, 10Н), 5,68 (почти т, 1=3,6 Гц, 1Н), 4,73 (кв, 1=4,4 Гц, 1Н), 4,63 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 4,49-4,36 (м, 3Н), 4,24 (шир. с, 1Н), 4,20-4,13 (м, 1Н), 3,81 (д, 1=11,9 Гц, 1Н), 3,56 (д, 1=11,9 Гц, 1Н), 3,46 (кв, 1=10,3 Гц, 2Н), 1,47 (с, 3Н), 1,25 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=1,88 мин, М3 тУ=423,31 [М+Ыа]; система ЖХ: ТИегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТИегто ЬСР Е1ее1; колонка: КтеЫх, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСЫ, 2,0-3,05 мин 100% АСЫ, 3,05-3,2 мин 100-2% АСЫ, 3,2-3,5 мин 2% АСЫ при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: ΐκ=3,79 мин; система ВЭЖХ: серии Адйеп! 1100; колонка: Сетт1 С18, 5 мкм, 110 А,
- 51 029712
50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АС^ 5,0-6,0 мин 98% АίN при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 40% этилацетат в гексане, Κί=0,4 (УФ).
Промежуточное соединение 9с. (3аК,5К^,6аК)-6-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-2,2диметилтетрагидрофуро[2,3-6][1,3]диоксол-5-карбальдегид.
В раствор промежуточного соединения 9Ь (1,95 г, 4,87 ммоль) в дихлорметане (24,5 мл) при комнатной температуре добавляли перйодинан Десс-Мартина (3,1 г, 7,3 ммоль). Через 1,5 ч реакционную смесь очищали посредством хроматографии на колонке с διΟ2 (колонка 80 г διΟ2 СотЬШазй НР Со16, 0100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 9с (1,94 г, 100%) в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, СРС13): δ 9,91 (с, 1Н), 7,36-7,11 (м, 10Н), 5,84 (д, 1=3,4 Гц, 1Н), 4,71 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 4,59 (д, 1=12,2 Гц, 1Н), 4,59-4,58 (м, 1Н), 4,52 (д, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,46 (д, 1=12,0 Гц, 1Н), 4,37 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 3,68 (д, 1=11,0 Гц, 1Н), 3,61 (д, 1=11,0 Гц, 1Н), 1,60 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н).
ГХ/МС: 1к=1,99 мин, Μδ т//=421,25 [Μ+Να]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегто ^ί^ Е1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АС^ 2,0-3,05 мин 100% АСЧ 3,05-3,2 мин 100-2% АСЧ 3,2-3,5 мин 2% АίN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1к=4,09 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100; колонка: Сетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АС^ 5,0-6,0 мин 98% АίN при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 40% этилацетат в гексане, К{=0,6 (УФ).
Промежуточное соединение 96. (3аК,5К^,6аК)-6-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-2,2диметил-5-винилтетрагидрофуро[2,3-6][1,3]диоксол.
К раствору метилтрифенилфосфония бромида (5,38 г, 15,1 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл) при температуре -7 8°С добавляли 2,5М раствор н-бутиллития (6,02 мл). Реакционной смеси давали нагреться до температуры 0°С и с помощью шприца медленно добавляли раствор промежуточного соединения 9с (2,00 г, 5,02 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь затем гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (10 мл) и распределяли между водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл). Слои разделяли и органический слой промывали насыщенным солевым раствором (200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с διΟ2 (колонка 120 г διΟ2 СотЬШазй НР Со16, 0-50% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 96 (1,01 г, 51%) в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, СРС13): δ 7,42-7,17 (м, 10Н), 6,19 (дд, 1=17,6, 11,0 Гц, 1Н), 5,76 (д, 1=3,9 Гц, 1Н), 5,52 (дд, 1=17,5, 1,9 Гц, 1Н), 5,25 (дд, 1=11,1, 1,8 Гц, 1Н), 4,76 (д, 1=12,3 Гц, 1Н), 4,62-4,55 (м, 2Н), 4,52 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 4,41 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 4,25 (д, 1=4,9 Гц, 1Н), 3,32 (д, 1=1,5 Гц, 2Н), 1,52 (с, 3Н), 1,29 (с, 3Н).
ГХ/МС: 1к=2,13 мин, Μδ т^=419,24 [Μ+№]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегто ^ί^ Е1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АС^ 2,0-3,05 мин 100% АСЧ 3,05-3,2 мин 100-2% АСЧ 3,2-3,5 мин 2% АίN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 1к=4,37 мин; система ВЭЖХ: серии Адбеп! 1100; колонка: Сетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АС^ 5,0-6,0 мин 98% АίN при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 50% этилацетат в гексане, Κί=0,55 (УФ).
- 52 029712
Промежуточное соединение 9е. (3К,48,5К)-4-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-2-метокси-5винилтетрагидрофуран-3 -ол.
□ раствор промежуточного соединения 9ά (1,01 г, 2,55 ммоль) в метаноле (12,5 мл) при комнатной температуре добавляли 4 М раствор НС1 в диоксане (320 мкл). Через 1,25 ч реакционную смесь распределяли между этилацетатом (100 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл). Фазы разделяли и органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого промежуточного соединения 9е (1,05 г, смесь 1' аномеров ~2,5:1) в виде бесцветного масла.
ГХ/МС: основной аномер ΐκ =2,00 мин, М8 шА=393,22 [М+№], побочный аномер ΐκ =1,98 мин, М8 шА=393,22 [М+Ш|; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегшо ЬСР Т1ее{; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСН 2,0-3,05 мин 100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСН 3,2-3,5 мин 2% АСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: основной аномер ΐκ =4,01 мин, побочный аномер ΐκ =3,955 мин; система ВЭЖХ: серии АдЬеп! 1100; колонка: ОешЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% АСN при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 25% этилацетат в гексане, основной аномер Кф=0,30 (УФ), побочный аномер Κί=0,25 (УФ).
Промежуточное соединение 9ί. (2К,38,4К)-3,4-бис-(Бензилокси)-2-((бензилокси)метил)-5-метокси2-винилтетрагидрофуран.
В раствор промежуточного соединения 9е (1,0 г, 2,7 ммоль) в ТГФ (13,5 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли №11 (60 мас.%, 130 мг, 3,2 ммоль) в виде твердого вещества. Через 15 мин добавляли бензил бромид (0,38 мл, 3,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (5 мл) и распределяли между этилацетатом (100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Фазы разделяли и органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого промежуточного соединения 9Г (1,57 г, смесь 1' аномеров ~2:1) в виде бесцветного масла.
ГХ/МС: основной аномер ΐκ =1,88 мин, М8 шА=483,36 [М+№], побочный аномер ΐκ =1,83 мин, М8 шА=483,36 [М+№]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегшо ЬСР Т1ее{; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСН 1,5-2,2 мин 100% АСН 2,2-2,4 мин 100-2% АСН 2,4-2,5 мин 2% АСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: основной аномер ΐκ=4,83 мин, побочный аномер ΐκ=4,62 мин; система ВЭЖХ: серии АдЬеп! 1100; колонка: ОешЫ С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% АСN при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 9§. (3К,48,5К)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-5винилтетрагидрофуран-2-ол.
К промежуточному соединению 9Г (1,5 г, 3,2 ммоль) при температуре 0°С добавляли раствор ТФУ (16 мл) и воду (1,6 мл) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Через 9 ч добавляли воду (1 мл) и реакционную смесь оставляли перемешиваться еще 10 ч. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток растворяли в этилацетате (200 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2x150 мл) и насыщенным солевым раствором (150 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 8ιΟ2 (колонка 24 г 8Ю2 СошЬШазЬ НР ОоШ, 0-100% этилацетат/гексан). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли с получением промежуточного соединения 9§ (580 мг) в виде бесцветного масла, которое было смесью с другими примесями. Смесь использовали на следующей стадии напрямую.
ГХ/МС: ΐκ=3,13 мин, М8 шА=463,88 [М+ОН]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегшо ЬСР Т1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСН 2,0-3,05 мин
- 53 029712
100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСН 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 4=4,34 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100; колонка: Оеш1ш С18, 5 мкм, 110 А,
50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% АСН при 2 мл/мин.
Промежуточное соединение 9Ь. (3Е,48,5Е)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-5винилдигидрофуран-2(3Η)-он.
В раствор промежуточного соединения 9д (580 мг, 1,30 ммоль) и 4А М8 (100 мг) в БСМ (6,45 мл) при комнатной температуре добавляли тетрапропиламмония перрутенат (45,7 мг, 130 мкмоль) и 4-метилморфолин Ν-оксид (457 мг, 3,89 ммоль). Через 1 ч в реакционную смесь добавляли силикагель (~500 мг) и полученную взвесь фильтровали через слой из силикагеля (~1 г). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 8ΐΟ2 (колонка 12 г 8ΐΟ2 СошЪШазй 11Р ОоШ, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 91ι (254 мг, 18% за две стадии) в виде бесцветного масла.
1Η ЯМР (400 МГц, СБС13): δ 7,38-7,23 (м, 13Н), 7,20-7,13 (м, 2Н), 5,91 (дд, 1=17,5, 11,2 Гц, 1Н), 5,49 (дд, 1=17,5, 0,9 Гц, 1Н), 5,33 (дд, 1=11,2, 0,9 Гц, 1Н), 4,96 (д, 1=12,0 Гц, 1Н). 4,74-4,68 (м, 2Н), 4,55-4,47 (м, 3Η), 4,39 (д, 1=11,9 Гц, 1Н), 4,20 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 3,55 (д, 1=10,8 Гц, 1Н), 3,46 (д, 1=10,8 Гц, 1Н).
ГХ/МС: 4=2,19 мин, М8 т ζ 444,78 [М+Η]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегшо ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4 ,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСН 2,0-3,05 мин 100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСН 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 4=4,53 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100; колонка: Оеш1ш С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% АСН при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: 25% этилацетат в гексане, Εί=0,45 (УФ).
Промежуточное соединение 9ί. (3Е,48,5К)-2-(4-Аминопирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-7-ил)-3,4-бис(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-5-винилтетрагидрофуран-2-ол.
К суспензии промежуточного соединения 1Ъ (0,21 г, 0,81 ммоль) и 1,2-бис(хлордиметилсилил)этана (0,17 г, 0,81 ммоль) в ТГФ (4 мл) при температуре -78°С в атмосфере аргона быстро добавляли н-бутиллитий (2,5М в гексане, 1,0 мл, 2,5 ммоль). Полученную смесь затем переносили через канюлю в раствор 91ι (0,18 г, 0,41 ммоль) в ТГФ (1 мл) при температуре -78°С в атмосфере аргона. Через 20 мин реакционной смеси давали нагреться до температуры 0°С и перемешивали в течение 15 мин. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (1 мл). Полученную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл) и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 8ΐΟ2 (колонка 12 г 8ΐΟ2 СошЪШазй НР ОоШ Со1ишп, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 9ΐ (11,1 мг, 5%, смесь изомеров) в виде бесцветного масла.
ГХ/МС: 4=1,97 мин, М8 шА=579,27 [М+Η]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегшо ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4 ,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСН, 2,0-3,05 мин 100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСН 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 4=3,37 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! 1100; колонка: Оешт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН, 5,0-6,0 мин 98% АСН при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: этилацетат, Εί=0,3 (УФ).
- 54 029712
Промежуточное соединение 9). 7-((28,38,48,5К)-3,4-бис-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-5винилтетрагидрофуран-2-ил)пирроло[2,1-Ц[1,2,4]триазин-4-амин.
В раствор промежуточного соединения 9ΐ (11,0 мг, 19,0 мкмоль) и триэтилсилана (0,5 мл) в БСМ (1 мл) медленно при температуре 0°С в атмосфере аргона добавляли трифторид бора-диэтил эфират (0,1 мл). Через 1 ч реакционную смесь медленно разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и полученную смесь экстрагировали этилацетатом (2x10 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали посредством хроматографии на колонке с 8ΐΟ2 (колонка 4 г 8ΐΟ2 СотЬШазН ΗΡ Оо1б, 0-100% этилацетат/гексан) с получением промежуточного соединения 9) (7,7 мг, 72%) в виде бесцветной пленки.
1Η ЯМР (400 МГц, СБС13): δ 7,87 (с, 1Н), 7,37-7,17 (м, 15Н), 6,73 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,51 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,23 (дд, 1=17,5, 10,9 Гц, 1Н), 5,70 (д, 1=3,9 Гц, 1н), 5,59 (дд, 1=17,5, 1,8 Гц, 1Н), 5,32 (дд, 1=10,9, 1,7 Гц, 1Н), 4,72-4,56 (м, 4Н), 4,49 (д, 1=11,9 Гц, 2Н), 4,43 (д, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,25 (дд, 1=5,6, 4,0 Гц, 1Н), 3,56 (с, 2Н).
ГХ/МС: 4=2,32 мин, М8 т//=563,33 [М+Η]; система ЖХ: ТИегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТИегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-100% АСИ 2,0-3,05 мин 100% АСН 3,05-3,2 мин 100-2% АСИ 3,2-3,5 мин 2% ΛСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 4=3,51 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп1 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% ΛСN при 2 мл/мин.
ТСХ: элюент: этилацетат, Κί=0,40 (УФ).
Пример 20. (2К,38,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[2,1-Щ1,2,4]триазин-7-ил)-2-(гидроксиметил)-2винилтетрагидрофуран-3,4-диол.
В раствор промежуточного соединения 9) (7,7 мг, 13,7 мкмоль) в дихлорметане (1 мл) при температуре -78°С в атмосфере аргона добавляли по каплям трибромид бора (1 М, 0,06 мл, 60 мкмоль). Через 1 ч реакционной смеси давали нагреться до температуры 0°С и перемешивали дополнительное количество 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры -78°С и гасили раствором смеси 2:1 метанол/пиридин (1,5 мл). Полученной смеси давали нагреться до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (РНепоттех 8упегд1 4 мк Ηуά^о-ΗΚ 80А, колонка 150x30 мм, 0-100% градиент ацетонитрил/вода) с получением соединения по примеру 20 (0,5 мг, 13%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Η ЯМР (400 МГц, С^зΟ^): δ 7,78 (с, 1Н), 6,88 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,76 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,02 (дд, 1=17,4, 11,0 Гц, 1Н), 5,47 (дд, 1=17,4, 2,0 Гц, 1Н), 5,23 (дд, 1=10,9, 2,1 Гц, 1Н), 5,15 (д, 1=8,3 Гц, 1Н), 4,72 (дд, 1=8,2, 5,7 Гц, 1Н), 4,34 (д, 1=5,7 Гц, 1Н), 3,60 (д, 1=11,8 Гц, 1Н), 3,49 (д, 1=11,8 Гц, 1Н).
ГХ/МС: 4=0,84 мин, М8 т//=293,19 [М+Η]; система ЖХ: ТИегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТИегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,1% уксусной кислоты; градиент: 0-1,5 мин 2-100% АСИ 1,5-2,2 мин 100% АСИ 2,2-2,4 мин 100-2% АСХ, 2,4-2,5 мин 2% ΛСN при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: 4=2,181 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп1 1100; колонка: Оетт1 С18, 5 мкм, 110 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН 5,0-6,0 мин 98% АСN при 2 мл/мин.
- 55 029712
Пример 21. (2Κ,3Κ,4Κ,5δ)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.
Соединение по примеру 19 (237 мг, 0,766 ммоль) и зе1ес1йиог (407 мг, 1,15 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (5 мл) и добавляли АсОН (0,2 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нейтрализовали раствором бикарбоната натрия и фильтровали для удаления твердых веществ. После концентрирования в вакууме остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ацетонитрил от 0 до 30% в воде) с получением соединения по примеру 21 (27 мг, 11%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, С1);ОП): δ 7,73 (с, 1Н), 6,63 (с, 1Н), 5,80 (дд, 1=23,9, 1,7 Гц, 1Н), 5,16 (ддд, 1=55,3, 5,0, 1,7 Гц, 1Н), 4,56 (дд, 1=23,5, 5,0 Гц, 1Н), 3,94-3,60 (м, 2Н).
19Е ЯМР (376 МГц, С1),( )Ι)>: δ -161,76 (с), -195,42 (д, 1=55,4 Гц).
Μδ т ζ 328 [М+Н]. Система МС: ТЬегто ЬСф Е1ее1.
Промежуточное соединение 11Ь. 2-Фторпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амин.
Промежуточное соединение 11а (2,0 г, 13,4 ммоль) помещали в сосуд ро1уТиЬе. Реакционный сосуд затем помещали на ледяную баню и последовательно добавляли 70% НЕ/Руг (18 мл) и пиридин (9 мл). Затем сразу после добавления пиридина в течение 20 мин медленно добавляли 1ВиНО2 (2,07 мл, 17,43 ммоль). Раствор из желтовато-коричневого цвета становился темным с выделением тепла и образованием газа. Реакционную смесь затем перемешивали в течение еще 20 мин и реакционную смесь затем разбавляли водой и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток распределяли между этилацетатом и водой. Органические продукты разделяли и водный слой промывали этилацетатом три раза. Органические продукты объединяли и промывали насыщенным солевым раствором. Сырой продукт сушили над Νίΐ2δ()4. фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (50-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 11Ь (1,68 г, 82%) в виде твердого вещества желтовато-коричневого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 8,49-8,09 (м, 2Н), 7,58 (т, 1=2,0 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=4,5, 1Н), 6,59 (д, 1=4,5, 1Н).
19Е ЯМР (376 МГц, ДМСО-Й6): δ -73,42 (с).
ГХ/МС: 1К=1,03 мин, Μδ т//=153,08 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСр Е1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСН 1,41,80 мин 100% АСН 1,8-1,85 мин 100-2% АСН 1,85-2 мин 2% АСН при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11с. 7-Бром-2-фторпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-амин.
Раствор 11Ь (3,36 г, 22,1 ммоль) в ДМФ (50 мл) на ледяной бане охлаждали до температуры 0°С. С
помощью капельной воронки в течение 40 мин добавляли по каплям раствор 1,3-дибром-5,5диметилгидантоина (3,16 г, 11,0 ммоль) в ДМФ (50 мл). Через 1 ч реакционную смесь гасили насыщ. раствором На^2О3(водн.) и сырой продукт распределяли между ЕЮАс и 5% раствором ЫС1(водн.). Органические продукты экстрагировали 5% раствором Е1С1(водн.) ^), затем насыщенным солевым раствором. Органические продукты сушили над №2δ()4, твердые продукты удаляли путем фильтрования и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток диспергировали с помощью ультразвука в СН2С12 и твердые продукты собирали путем фильтрования и сушили в высоком вакууме с получением промежуточного соединения 11с (3,93 г, 77%) в виде твердого вещества желтого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Щ): δ 8,49-8,44 (м, 2Н), 7,08 (д, .1-1-6 Гц, 1Н), 6,76 (д, .1-1-6 Гц, 1Н).
- 56 029712
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-66): δ -71,45 (с).
ГХ/МС: ίκ=1,22 мин, М5 тА=232,98 [М+Н]; система ЖХ: ТРегто Αссе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТРегто БС9 Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% ΑСN,
1,4-1,80 мин 100% ΑСN, 1,8-1,85 мин 100-2% ΑСN, 1,85-2 мин 2% ΑСN при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11е. (3К,4К,5К)-2-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-Р][1,2,4]триазин-7-ил)4-(бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ол.
К раствору 11с (2,09 г, 9,08 ммоль) в ТГФ (30 мл) одной порцией добавляли 1,2-бис(хлордиметилсилил)этан (δТΑΒΑδΕ, 1,96 г, 9,08 ммоль) и полученной смеси давали перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до температуры 78°С с использованием бани с сухим льдом в метаноле. Добавляли пВиБ1 (2,5 М в гексане, 10,9 мл, 27,2 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру -65°С. Затем в реакционную смесь в течение 1 мин добавляли раствор промежуточного соединения 116 (полученный в соответствии с ΥΟ 2012/012776, 2,5 г, 7,5 ммоль) в ТГФ (25 мл). Спустя 5 мин реакционную смесь гасили уксусной кислотой и давали вернуться до температуры окружающей среды. Растворители удаляли при пониженном давлении и остаток обрабатывали этилацетатом. Органические продукты промывали водой, затем насыщенным солевым раствором. Слои разделяли и органические продукты сушили над ΝίκδΟ.), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением сырого Не в виде смеси изомеров, которую использовали как таковой на следующей стадии.
ГХ/МС: ίκ=1,32 и 1,40 мин, Мδ тА=483,15 [М+Н]; система ЖХ: ТРегто Α^1η 1250 СВЭЖХ; система МС: ТРегто БС9 Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% ΑСN,
1,4-1,80 мин 100% ΑСN, 1,8-1,85 мин 100-2% ΑСN, 1,85-2 мин 2% ΑСN при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11Е 7-((2δ,3δ,4Κ,5Κ)-4-(Бензилокси)-5-((бензилокси)метил)-3фтортетрагидрофуран-2-ил)-2-фторпирроло[2,1 -ί] [ 1,2,4]триазин-4-амин.
Промежуточное соединение 11е (1,99 г, 3,72 ммоль) растворяли в СН2С12 (80 мл) и к смеси добавляли ТΕδ (4,75 мл, 29,7 ммоль). Реакционную смесь охлаждали до температуры 0°С и медленно добавляли ΒΡ3·Εΐ2Ο (1,07 мл, 4,09 ммоль). Через 15 мин реакционную смесь гасили насыщ. раствором №НСО3(водн.) и слои разделяли. Водный слой промывали СН2С12. Органические слои объединяли и промывали насыщ. раствором №НСО3(водн.). Органические продукты сушили над Ν2δΟ4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-60% ΕΐΟΑс/Ηеx) с получением промежуточного соединения 11ί (1,12 г, 64%, смесь 1' аномеров 2:1).
ГХ/МС: ίκ=1,55 мин, Мδ тА=467,47 [М+Н]; система ЖХ: ТРегто Α^1η 1250 СВЭЖХ; система МС: ТРегто БС9 Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% ΑСN,
1,4-1,80 мин 100% ΑСN, 1,8-1,85 мин 100-2% ΑСN, 1,85-2 мин 2% ΑСN при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11д. (2К,3К,4К^)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-Р][1,2,4]триазин-7ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.
Промежуточное соединение 11ί (0,82 г, 1,76 ммоль) растворяли в уксусной кислоте (25 мл). Реакционный сосуд продували аргоном и добавляли 10% Р6/С (468 мг, 0,439 ммоль). Сосуд откачивали и заполняли Н2(газ) ^). Через 1 ч реакционный сосуд продували азотом. Полученную смесь фильтровали через
- 57 029712
слой из целита и слой на фильтре промывали СН3ОН. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем упаривали вместе с этилацетатом, затем гексаном с получением промежуточного соединения 11д (503 мг, 98%, смесь 1' аномеров 2:1).
Гх/мС: !к=0,81 мин, М8 т//=286,97 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСр Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСИ,
1,4-1,80 мин 100% АСИ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСИ, 1,85-2 мин 2% АСИ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11Ь. (28,3К,4К,58)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7ил)-4-фтор-2-(йодметил)тетрагидрофуран-3-ол.
В колбу, продутую аргоном, добавляли раствор 11д (283 мг, 0,989 ммоль) в ДМФ (10 мл), затем раствор метил трифеноксифосфония йодида (0,536 г, 1,19 ммоль) в 4 мл ДМФ. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре 0°С в течение 10 мин и затем нагревали до температуры окружающей среды. Через 30 мин, реакционную смесь гасили насыщ. раствором Иа282О3(водн.). Сырое вещество распределяли между Е!ОАс и 5% раствором ПС1(водн.). Органические продукты разделяли и промывали насыщенным солевым раствором. Органические продукты сушили над Иа28О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток обрабатывали АСИ и очищали с помощью ВЭЖХ без кислотного модификатора с получением промежуточного соединения 11Ь (201 мг, 52%, смесь 1' аномеров 2:1) в виде твердого вещества белого цвета.
ГХ/МС: !К=1,08 мин, М8 т//=397,12 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСр Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСИ,
1,4-1,80 мин.
100% АСИ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСИ, 1,85-2 мин 2% АСИ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11Р (3К,4К,58)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7-ил)-4фтор-2-метилентетрагидрофуран-3-ол.
К раствору 11Ь (356 мг, 0,899 ммоль) в ТГФ (8 мл) добавляли ЭВИ (0,403 мл, 2,70 ммоль) и полученную смесь нагревали при температуре 60°С. Через 3 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (40-100% Е!ОАс/Нех) с получением промежуточного соединения 11Ϊ (201 мг, 83%, 2:1 смесь 1' аномеров) в виде твердого вещества белого цвета.
ГХ/МС: !К=1,04 мин, М8 т//=269,14 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСр Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСИ,
1,4-1,80 мин 100% АСИ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСИ, 1,85-2 мин 2% АСИ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 11д. (28,3К,4К,58)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7ил)-2-азидо-4-фтор-2-(йодметил)тетрагидрофуран-3-ол.
Бензилтриметиламмония хлорид (292 мг, 1,57 ммоль) и азид натрия (102 мг, 1,57 ммоль) растворяли в АСИ (4 мл) и полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 4 ч. Смесь фильтровали и фильтрат добавляли к раствору 11Ϊ (0,201 г, 0,749 ммоль) в ТГФ (4 мл). Добавляли ИММ (0,412 мл, 3,75 ммоль), затем по каплям добавляли раствор йода (0,342 г, 1,35 ммоль) в ТГФ (4 мл). Через 15 мин порциями добавляли И-ацетил цистеин до тех пор, пока на наблюдалось выделение газа.
- 58 029712
Добавляли насыщ. раствор На2З2О3(водн.), пока раствор не становился светло-желтым. Полученную смесь распределяли между водой и этилацетатом. Слои разделяли и органический слой сушили над На2ЗО4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (20-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения (‘83 мг, 56%) в виде единственного изомера.
‘Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 8,44 (д, 1=28,6 Гц, 2Н), 6,98 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,79 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,32 (д, 1=6,9 Гц, 1Н), 5,60 (дд, 1=23,8, 2,5 Гц, 1Н), 5,36 (ддд, 1=54,9, 5,0, 2,6 Гц, 1Н), 4,60 (ддд, 1=21,5, 6,9, 5,0 Гц, 1Н), 3,63 (АВц, Δδ=0,09 м.д., 1=8 Гц, 2Н).
‘9Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-б6): δ -71,74 (с), -‘94,57 (ддд, 1=54,9, 24,0, 21,7 Гц).
ГХ/МС: N=‘,71 мин, МЗ тА=437,93 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а ‘250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСО Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С‘8, ‘00 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,‘% муравьиной кислоты, вода с 0,‘% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-‘00% АСН, 2,42,80 мин ‘00% АСН, 2,8-2,85 мин ‘00-2% АСН, 2,85-3,0 мин 2% АСН при ‘,8 мл/мин.
Промежуточное соединение ‘‘к. (2З,3К,4З,5З)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,‘-£][‘,2,4]триазин-7ил)-2-азидо-4-фтор-2-(йодметил)тетрагидрофуран-3-ил изобутират.
К раствору ‘‘ (0,‘83 г, 0,4‘9 ммоль) в ТГФ (‘0 мл) добавляли ангидрид изобутановой кислоты (0,083 мл, 0,502 ммоль), ТЕА (0,‘‘8 мл, 0,837 ммоль) и ОМАР (‘0 мг, 0,084 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 15 мин и реакционную смесь гасили СН3ОН. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения ‘ ‘к (0,‘98 г, 93%) в виде твердого вещества белого цвета.
‘Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 8,48 (д, 1=30,7 Гц, 2Н), 6,99 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,84 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,77-5,47 (м, 3Н), 3,69 (АВц, Δδ=0,05 м.д., 1=12 Гц, 2Н), 2,70 (р, 1=7,0 Гц, 1Н), 1,24-1,05 (д, 1=7,0 Гц, 6Н).
‘9Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-б6): δ -71,58 (с), -‘94,89 (ддд, 1=55,0, 24,3, ‘6,8 Гц).
ГХ/МС: N=1,56 мин, МЗ тА=508,‘3 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а ‘250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСО Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С‘8, ‘00А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,‘% муравьиной кислоты, вода с 0,‘% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-‘00% АСН,
2,4-2,80 мин ‘00% АСН, 2,8-2,85 мин ‘00-2% АСН, 2,85-3,0 мин 2% АСН при ‘,8 мл/мин.
Промежуточное соединение ‘‘1. ((2К,3К,4З,5З)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,‘-£][‘,2,4]триазин-7ил)-2-азидо-4-фтор-3-(изобутирилокси)тетрагидрофуран-2-ил)метил 3-хлорбензоат.
Промежуточное соединение 11к (0,153 г, 0,302 ммоль) растворяли в СН2С12 (10 мл) и Н2О (6 мл). Последовательно добавляли двухосновный фосфат калия (0,138 г, 0,603 ммоль), бисульфат тетрабутиламмония (0,210 г, 0,618 ммоль) и 3-хлорбензойную кислоту (0,097 г, 0,618 ммоль). Полученную смесь охлаждали до температуры 0°С и добавляли МСРВА (0,203 г, 0,905 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь затем гасили насыщ. раствором На2З2О3(водн.) и концентрировали при пониженном давлении. Сырой водный остаток разбавляли АСН и очищали с помощью с помощью препаративной ВЭЖХ без кислотного модификатора с получением промежуточного соединения ‘‘1 (20 мг, ‘3%) в виде твердого вещества белого цвета.
‘Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 8,46 (д, 1=26,4 Гц, 2Н), 7,96-7,81 (м, 2Н), 7,81-7,66 (м, 1Н), 7,62-7,46 (м, 1Н), 6,94 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,80 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,73 (с, 3Н), 4,60 (АВц, Δδ=0,08 м.д., 1=12 Гц, 2Н), 2,66 (р, 1=7,0 Гц, 1Н), 1,20-1,01 (м, 6Н).
‘9Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-б6) δ -71,45 (с), -193,41 (ддд, 1=54,4, 25,4, 21,2 Гц).
ГХ/МС: N=2,22 мин, МЗ тА=536,‘7 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а ‘250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСО Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С‘8, ‘00А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,‘% муравьиной кислоты, вода с 0,‘% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-‘00% АСН,
- 59 029712
2,4-2,80 мин 100% АСН 2,8-2,85 мин 100-2% АСН, 2,85-3,0 мин 2% АСН при 1,8 мл/мин.
Пример 22. (2Р,3Р,4Р,5З)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол.
В раствор промежуточного соединения 111 (22 мг, 0,041 ммоль) в СН3ОН (1 мл) при комнатной температуре добавляли конц. НН4ОН (1 мл). Через 30 мин реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток разбавляли минимальным количеством Н2О и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ без модификатора с получением соединения по примеру 22 (10 мг, 77%) в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-ф,): δ 8,40 (д, .1=30,9 Гц, 2Н), 6,95 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,78 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,89 (д, 1=7,5 Гц, 1Н), 5,61 (дд, 1=23,8, 2,1 Гц, 1Н), 5,44 (т, 1=6,1 Гц, 1Н), 5,18 (ддд, 1=55,3, 5,1, 2,2 Гц, 1Н), 4,44 (ддд, 1=23,7, 7,5, 5,0 Гц, 1Н), 3,59 (ддд, 1=48,5, 12,0, 6,1 Гц, 2Н).
19Р ЯМР (376 МГц, ДМСО-2,,): δ -71,18 (с), -193,48 (дт, 1=55,3, 23,8 Гц).
ГХ/МС: 1к=1,13 мин, МЗ 111 / 32X86 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ЬСр Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСН 2,42,80 мин 100% АСН 2,8-2,85 мин 100-2% АСН 2,85-3,0 мин 2% АСН при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 12а. (2Р,3Р,4З,5З)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-7ил)-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-4-фтортетрагидрофуран-2-карбонитрил.
В раствор промежуточного соединения 3ά (57 мг, 0,109 ммоль) в АСН (3 мл) одной порцией добавляли Зе1есШиог II (52 мг, 0,164 ммоль). Через 1,5 ч реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного раствора ЖНСО3(водн.). Добавляли этилацетат (4 мл) и двухфазную смесь энергично перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь затем разбавляли ИЮАс и насыщенным раствором №НСО3(водн.). Слои разделяли и органическую фазу экстрагировали водой и затем насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над №2ЗО4. Осушитель удаляли путем вакуумного фильтрования и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Промежуточное соединение 12а (11 мг, 18,7 %) выделяли из концентрированного сырого вещества с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с использованием следующего градиента элюентов: 0% ИЮАс в гексане, повышая к 70% ИЮАс в гексане, быстро, повышая к 100% НЮАс после того, как исходный продут был элюирован из колонки.
1Н ЯМР (400 МГц, СП3ОЭ): δ 7,72 (с, 1Н), 7,55 (с, 1Н), 5,65 (дд, 1=24,8, 2,4 Гц, 1Н), 5,38 (дкв, 1=54,4, 2 Гц, 1Н), 4,88 (дд, 1=19,2, 4,4 Гц, 1Н), 3,96 (АВц, ΔδΑΒ=0,141 м.д., 1=11 Гц, 2Н), 0,99 (с, 9Н), 0,86 (с, 9Н), 0,21 (с, 6Н), 0,07 (с, 3Н), -0,02 (с, 3Н).
19Ρ ЯМР (376 МГц, СП3ОП): δ -161,795 (с), -194,806 (ддд, 1=54,5, 19,2, 18, 8 Гц).
ГХ/МС: РТ=2,06 мин, МЗ иг/ 540,64 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; МЗ: ТЬегто БСР Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСН, 2,4-2,8 мин 100% АСН 2,8-2,85 мин 100-2% АСН 2,85-3 мин 2% АСН
Пример 23. (2Р,3Р,4Р,5З)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-Г][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокси2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил.
В раствор промежуточного соединения 12а (29 мг, 0,054 ммоль) в ТГФ (2 мл) в полипропиленовой пробирке добавляли 70% НР-пиридин в пиридине (51 мкл, 1,97 ммоль) при температуре 0°С в атмосфере Н. Через 1,5 ч реакционную смесь удаляли с ледяной бани. Дополнительное количество 70%
- 60 029712
НГ-пиридин в пиридине добавляли через 3 ч (150 мкл), 5 ч 45 мин (200 мкл) и 21 ч 15 мин (0,7 мл). Реакционную смесь затем перемешивали в течение еще 24 ч при температуре, в этот момент реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и затем гасили водой и насыщенным раствором №НСО3(водн.). Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток помещали в ДМФ. Полученный раствор/суспензию фильтровали через шприцевый фильтр γΐιαίηιαη). Фильтрат инъектировали на колонку ВЭЖХ и наполовину очищенный продукт далее очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с использованием следующего градиента элюентов: 0% МеОН в ^СΜ, повышая к 20% МеОН в ^СΜ. Продукт, содержащий фракции, концентрировали и остаток лиофилизовали с получением соединения по примеру 23 (5 мг, 30%) в виде порошка белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМФ-07): δ 7,74 (с, 1Н), 6,61 (с, 1Н), 5,75 (дд, 1=25,2, 1,6 Гц, 1Н), 5,23 (ддд, 1=54,8, 4,8, 1,6 Гц, 1Н), 4,64 (дд, 1=22, 4,4 Гц, 1Н), 3,90 ^ц, ΔδΑв=0,151 м.д., 1=12 Гц, 2Н).
19Г ЯМР (376 МГц, ДМФ-07): δ -161,727 (с), -193,726 (ддд, 1=54, 5, 22,9, 21,8 Гц).
ГХ/МС: КТ=0,81 мин, Μδ т/г=312,13 [Μ+1]; ЬС: Тйегто Α^1α 1250 СВЭЖХ; Μδ: Тйегто ^С^
Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% ΑСN, 2,4-2,8 мин 100% ΑСN, 2,82,85 мин 100-2% ΑСN, 2,85-3 мин 2% ΑСN.
Промежуточное соединение 13а. ^^-(^^ДКАК^-^трет-Бутилдиметилсилил^кси^А^третбутилдиметилсилил)окси)метил)-3 -фтор-5-(йодметил)тетрагидрофуран-2-ил)пирроло[2,1 Г][1,2,4]триазин-4-ил)бензамид.
К раствору трифенилфосфина (973 мг, 3,71 ммоль) и имидазола (252 мг, 3,71 ммоль) в ТГФ (5 мл) при комнатной температуре добавляли йод (253 мг, 1,86 ммоль). После завершения растворения йода по каплям медленно добавляли раствор соединение 2д (650 мг, 0,93 ммоль) в ТГФ (5 мл). Полученную смесь перемешивали при температуре 80°С в течение 3 дней и затем концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (от 0 до 50% ЕίΟΑс в гексане) с получением промежуточного соединения 13а (230 мг, 33%) в виде масла.
Μδ т//=742 [Μ+Н]. Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ееГ
Промежуточное соединение 13Ь. ^^-(^^ДКАК^-^трет-Бутилдиметилсилил^кси^-ЙСгретбутилдиметилсилил)окси)метил)-3 -фтор-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)пирроло[2,1 -1][1,2,4]триазин-4ил)бензамид.
Промежуточное соединение 13а (200 мг, 0,243 ммоль) растворяли в метаноле (10 мл) и в атмосфере азота добавляли 10% Рб/С (100 мг, 0,094 ммоль) и ΤЕΑ (0,035 мл, 0,243 ммоль). Полученную смесь затем перемешивали в атмосфере Н2 (баллон) при комнатной температуре в течение 40 мин. Полученную смесь фильтровали и концентрировали в вакууме и остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (от 0 до 40% ЕίΟΑс в гексане) с получением промежуточного соединения 13Ь (145 мг, 72%) в виде твердого вещества белого цвета с 75%-ной чистотой.
Μδ т//=616 [Μ+Н]. Система МС: Тйегто ^С^ Г1ееГ
Пример 24. рКАКАК^^-Д-АминопирролоРД-^ДРА^риазин^-ил^-фтор^Агидроксиметил)2-метилтетрагидрофуран-3 -ол.
Промежуточное соединение 13Ь (145 мг, 75%-ная чистота, 0,177 ммоль) растворяли в ТГФ (10 мл) и добавляли ТВЛГ (1 М в ТГФ, 0,53 мл, 0,531 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем добавляли метанольный аммиак (7н., 10 мл). Полученную смесь пере- 61 029712
мешивали в течение 24 ч и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (от 0 до 35% ацетонитрил в воде, в течение 20 мин) с получением соединения по примеру 24 (30 мг, 60%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭзОЭ): δ 7,78 (с, 1Н), 6,84 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,76 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,53 (дд, 1=21,5, 4,0 Гц, 1Н), 5,25 (ддд, 1=55,5, 5,3, 4,1 Гц, 1Н), 4,44 (дд, 1=17,2, 5,2 Гц, 1Н), 3,65-3,43 (м, 2Н), 1,27 (с, 3Н).
19Г ЯМР (376 МГц, СВ3ОВ): δ -197,08 (ддд, 1=55,4, 21,5, 17,1 Гц).
Μδ ш//=282 [М+Н]. Система МС: ТНегшо ЬСр Г1ее1.
Промежуточное соединение 14а. ^,3К^,5К)-2-(4-Аминопирроло[2,1-Т][1,2,4]триазин-7-ил)-5(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диол.
Промежуточное соединение 1е (2,64 г, 4,91 ммоль) растворяли в уксусной кислоте (50 мл). Колбу продували аргоном и добавляли 10% Рб/С (1,05 г, 0,982 ммоль). Колбу откачивали и три раза заполняли Н2(газ). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2(газ). Через 1 ч колбу продували азотом и реакционную смесь фильтровали через слой из целита, промывая СН3ОН. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем упаривали вместе с ЕЮАс, затем с гексаном. Остаток помещали в высокий вакуум с получением промежуточного соединения 14а (1,31 г, 99%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 7,80 (с, 1Н), 7,66 (с, 2Н), 6,82 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,66 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 5,09 (д, 1=6,5 Гц, 1Н), 5,06-4,56 (м, 3Н), 4,21 (т, 1=5,9 Гц, 1Н), 3,93 (т, 1=4,9 Гц, 1Н), 3,77 (кв, 1=4,5 Гц, 1Н), 3,48 (ддд, 1=38,9, 11,8, 4,4 Гц, 2Н).
ГХ/МС: ΐκ=0,47 мин, Μδ ш// 267,13 [Μ+Н]; система ЖХ: ТНегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТНегшо ЬСр Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2100% АСЫ, 2,4-2,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3,0 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14Ь. ((3аΚ,4Κ,6δ,6аδ)-6-(4-Аминопирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-7-ил)2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-б][1,3]диоксол-4-ил)метанол.
Промежуточное соединение 14а (3,13 г, 11,7 ммоль) растворяли в ацетоне (80 мл) и добавляли ТЮН (6,00 г, 31,5 ммоль). В течение 10 мин медленно добавляли триэтилортоформиат (6,0 мл, 36,1 ммоль). Полученной смеси давали перемешиваться при температуре окружающей среды в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия до рН 8 реакционной смеси. Твердые продукты удаляли путем фильтрования и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток распределяли между ЕЮАс и насыщенным солевым раствором. Фазы разделяли и органические продукты сушили над Ыа^О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (60-100% ЕЮАс/Нех-20% ΜеОН/ЕЮАс) с получением промежуточного соединения 14Ь (2,55 г, 71%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ 7,83 (с, 1Н), 7,71 (с, 2Н), 6,83 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,73 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,21 (д, 1=4,9 Гц, 1Н), 5,01 (дд, 1=6,6, 4,9 Гц, 1Н), 4,84 (т, 1=5,7 Гц, 1Н), 4,71 (дд, 1=6,7, 3,7 Гц, 1Н), 3,99-3,85 (м, 1Н), 3,46 (т, 1=5,5 Гц, 2Н), 1,48 (с, 3Н), 1,29 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=0,87 мин, Μδ ш//=307,21 [Μ+Н]; система ЖХ: ТНегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТНегшо ЬСр Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЫ, 1,41,80 мин 100% АСЫ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЫ, 1,85-2 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
- 62 029712
Промежуточное соединение 14с. 7-((3а3,43,6К,6аК)-6-(((трет-Бутилдиметилсилил)окси)метил)-2,2диметилтетрагидрофуро [3,4-ά] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло [2,1-ί][1,2,4]триазин-4-амин.
Промежуточное соединение 14Ь (2,55 г, 8,32 ммоль) растворяли в 1)СМ (50 мл) и смесь охлаждали до температуры 0°С. Добавляли имидазол (1,70 г, 24,9 ммоль), затем ТВ3С1 (1,88 г, 12,5 ммоль). Через 16 ч реакционную смесь гасили метанолом. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и сырой остаток распределяли между водой и ЕЮАс. Органические продукты сушили над Νη23Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (50-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14с (2,60 г, 74%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-д6): δ 7,83 (с, 1Н), 7,74 (с, 2Н), 6,82 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,68 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 5,26 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 5,00 (дд, 1=6,5, 4,5 Гц, 1Н), 4,71 (дд, 1=6,5, 3,7 Гц, 1Н), 3,97 (тд, 1=5,1, 3,6 Гц, 1Н), 3,64 (д, 1=5,2 Гц, 2Н), 1,48 (с, 3Н), 1,28 (с, 3Н), 0,83 (с, 9Н), -0,02 (с, 6Н).
ГХ/МС: 1К=1,91 мин, М3 т^=421,60 [М+Н]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТИегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0 мин-2,4 мин 2-100% АС^ 2,4-2,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСК, 2,85-3,0 мин 2% ΑСN при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14ά. трет-Бутил (7-((3а3,43,6К,6аК)-6-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-2,2-диметилтетрагидрофуро [3,4-ά] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло [2,1-ί][1,2,4]триазин-4ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14с (2,59 г, 6,16 ммоль) растворяли в ТГФ (60 мл) и полученный раствор охлаждали до температуры 0°С. Затем добавляли Вос2О (2,69 г, 12,3 ммоль) и ОМАР (0,3 г, 2,46 ммоль). Медленно добавляли ТЕА (2,56 мл, 18,3 ммоль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до температуры 0°С и добавляли МеОН (10 мл), затем конц. NΗ4ΟΗ(воДн.) (50 мл). Полученной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и сырой остаток распределяли между ЕЮАс и воду. Слои разделяли и органический слой сушили над Νη23Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14ά
(2,82 г, 88%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-д6): δ 10,46 (с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 7,19 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 6,90 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,33 (д, 1=4,2 Гц, 1Н), 5,02 (дд, 1=6,5, 4,3 Гц, 1Н), 4,72 (дд, 1=6,5, 3,6 Гц, 1Н), 4,01 (кв, 1=5,0 Гц, 1Н), 3,64 (д, 1=5,1 Гц, 2Н), 1,49 (с, 9Н), 1,32 (д, 1=22,7 Гц, 6Н), 0,82 (с, 9Н), -0,03 (с, 6Н).
ГХ/МС: 1К=1,89 мин, М3 т^=521,27 [М+Н]; система ЖХ: ТИегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТИегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСН 2,42,80 мин 100% АС^ 2,8-2,85 мин 100-2% АСЧ 2,85-3,0 мин 2% ΑСN при 1,8 мл/мин.
- 63 029712
Промежуточное соединение 14е. трет-Бутил (7-((3а3,43,6К,6аК)-6-(гидроксиметил)-2,2диметилтетрагидрофуро[3,4-б] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14ά (2,8 г, 5,4 ммоль) растворяли в ТГФ (50 мл) и добавляли ТВАГ (1,0 М в ТГФ, 5,92 мл, 5,92 ммоль). Через 30 мин добавляли дополнительное количество ТВАГ (1,0 М в ТГФ, 5,92 мл, 5,92 ммоль). Спустя еще 30 мин реакционную смесь гасили водой и полученную смесь экстрагировали ЕЮАс (^). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над №23Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (10-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14е (2,19 г, 86%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ 10,46 (с, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,20 (с, 1Н), 6,95 (с, 1Н), 5,29 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,03 (дд, 1=6,6, 4,7 Гц, 1Н), 4,85 (т, 1=5,7 Гц, 1Н), 4,72 (дд, 1=6,6, 3,6 Гц, 1Н), 4,05-3,90 (м, 1Н), 3,46 (т, 1=5, 6 Гц, 2Н), 1,50 (с, 12Н), 1,29 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=1,52 мин, М3 т//=407,05 [М+Н]; система ЖХ: ТКегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТКегто ЬСр Г1еер колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСЫ, 2,42,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3,0 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14Г. трет-Бутил (7-((3а3,43,6а3)-6,6-бис-(гидроксиметил)-2,2диметилтетрагидрофуро[3,4-б] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14е (1,78 г, 4,38 ммоль) растворяли в ДМСО (20 мл) и толуоле (15 мл). Добавляли пиридин (0,35 мл, 4,38 ммоль) и ЕБС! (1,26 г, 6,56 ммоль), затем ТФУ (0,178 мл, 2,39 ммоль). Через 90 мин добавляли дополнительное количество пиридина (0,35 мл, 4,38 ммоль) и ΗΙΧΊ (1,26 г, 6,56 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Реакционную смесь гасили водой и полученную смесь экстрагировали СН2С12. Водный слой опять экстрагировали СН2С12. Органические слои объединяли и промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Ыа23Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт помещали в высокий вакуум в течение 15 мин, затем использовали как таковой на следующей стадии.
Сырой остаток растворяли в диоксане (15 мл) и последовательно добавляли формальдегид (37% в воде, 5,0 мл, 37,2 ммоль) и 2н. ЫаΟН (5,34 мл, 10,7 ммоль). Через 10 мин реакционную смесь гасили ΛοΟΙΙ и полученную смесь распределяли между насыщ. ЫаНСΟ3(воДн.) и СН2С12. Водный слой опять экстрагировали СН2С12. Органические слои объединяли и промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Ыа23Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой продукт помещали в высокий вакуум на 15 мин, затем напрямую использовали на следующей реакции.
Сырой остаток растворяли в ЕЮН (50 мл) и небольшими порциями добавляли ЫаВН4 (0,324 г, 8,76 ммоль). Через 20 мин реакционную смесь гасили Ас()Н и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток распределяли между ЕЮАс и насыщ. ЫаНСΟ3(воДн.). Органический слой отделяли, сушили над Ыа23Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (50-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14Г (1,91 г, 68%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6): δ 10,45 (с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 7,19 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 6,95 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 5,35 (д, 1=5,2 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=5,7 Гц, 1Н), 4,79-4,74 (м, 2Н), 4,45 (т, 1=5,8 Гц, 1Н), 3,73-3,46 (м, 3Н), 3,40-3,30 (м, 1Н), 1,50 (с, 12Н), 1,27 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=1,45 мин, М3 пг/ 437,09 [М+Н]; система ЖХ: ТКегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТКегто ЬСр Г1еер колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСЫ, 2,42,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3,0 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
- 64 029712
Промежуточное соединение 14д. трет-Бутил (7-((3а3,43,63,6а3)-6-((бис-(4метоксифенил)(фенил)метокси)метил)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро [3,4-б] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло [2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14ί (1,15 г, 2,63 ммоль) растворяли в СН2С12 (50 мл) и добавляли ТЕА (0,73 мл, 5,27 ммоль). Полученный раствор охлаждали до температуры 0°С и добавляли ЭМТгС1 (1,35 г, 3,95 ммоль). Через 10 мин реакционную смесь гасили СН3ОН и затем разбавляли СН2С12. Полученную смесь промывали насыщ. КаНСО3(водн.) и насыщенным солевым раствором. Органический слой сушили над Ка23О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% ЕЮАс/Нех) с получением 14д (1,95 г, 79%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 10,46 (с, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 7,56-7,07 (м, 10Н), 7,07-6,70 (м, 5Н), 5,24 (д, 1=5,2 Гц, 1Н), 5,04 (т, 1=5,9 Гц, 1Н), 4,93-4,71 (м, 2Н), 3,80-3,59 (м, 7Н), 3,52 (дд, 1=10,9, 4,8 Гц, 1Н), 3,25 (д, 1=9, 9 Гц, 1Н), 3,09 (д, 1=9,9 Гц, 1Н), 1,50 (с, 9Н), 1,25 (с, 3Н), 1,21 (с, 3Н).
ГХ/МС: 4=2,54 мин, М3 т^=739,28 [М+Н]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: ТИегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСК, 2,4-2,80 мин 100% АСК, 2,8-2,85 мин 100-2% АСК, 2,85-3,0 мин 2% АСК при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 144 трет-Бутил (7-((3а3,43,6К,6а3)-6-((бис-(4метоксифенил)(фенил)метокси)метил)-6-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-2,2диметилтетрагидрофуро [3,4-б] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло [2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14д (1,53 г, 2,08 ммоль) растворяли в ДМФ (10 мл) и добавляли имидазол (0,42 г, 6,23 ммоль), затем ТВ3С1 (0,47 г, 3,11 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь гасили метанолом и распределяли между ЕЮАс и 5% раствором ПС1(водн.) Фазы разделяли и органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Ка23О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% ЕЮАс/Нех) с получением 14И (1,77 г, 78%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 10,47 (с, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 7,56-6,66 (м, 15Н), 5,31 (д, 1=4,9 Гц, 1Н),
5,14 (дд, 1=6,5, 4,9 Гц, 1Н), 4,73 (д, 1=6,5 Гц, 1Н), 3,87 (д, 3=9,7 Гц, 1Н), 3,72 (с, 6Н), 3,53 (д, 3=9,7 Гц, 1Н), 3,31 (м, 1Н), 3,08 (д, 3=9,8 Гц, 1Н), 1,50 (с, 9Н), 1,25 (с, 3Н), 1,22 (с, 3Н), 0,75 (с, 9Н), -0,04 (с, 3Н), -0,08 (с, 3Н).
ГХ/МС: 4=2,34 мин, М3 т//=853,50 [М+Н]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТИегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,0 мин 2-100% АСК,1,02,80 мин 100% АСК, 2,8-2,85 мин 100-2% АСК, 2,85-3,0 мин 2% АСК при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14ι. трет-Бутил (7-((3а3,43,6К,6а3)-6-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-б][1,3]диоксол-4ил)пирроло [2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14И (1,38 г, 1,62 ммоль) растворяли в хлороформе (20 мл) и полученный раствор охлаждали до температуры 0°С. Затем медленно добавляли раствор ТзОН (0,34 г, 1,78 ммоль) в СН3ОН (16 мл). Через 30 мин реакционную смесь гасили насыщ. раствором КаНСО3(водн.) и полученную смесь распределяли между ЕЮАс и насыщенным солевым раствором. Слои разделяли и органический слой сушили над Ка23О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14ι (0,84 г, 94%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 10,42 (с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 7,19 (с, 1Н), 6,89 (с, 1Н), 5,37 (д, 3=4,8 Гц, 1Н), 5,05 (дд, 3=6,2, 4,8 Гц, 1Н), 4,71 (д, 3=6,2 Гц, 1Н), 4,51 (т, 3=5,5 Гц, 1Н), 3,70 (д, 3=10,2 Гц, 1Н), 3,59
- 65 029712
(д, 1=5,5 Гц, 2Н), 3,49 (д, 1=10,2 Гц, 1Н), 1,49 (с, 12Н), 1,28 (с, 3Н), 0,82 (с, 9Н), -0,01 (с, 3Н), -0,02 (с, 3Н). ГХ/МС: 1к=1,88 мин, МЗ шА=551,25 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ.
Система МС: Тйегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,0 мин 2-100% АСЫ,1,0-2,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3,0 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14]. трет-Бутил (7-((3аЗ,4З,6К,6аЗ)-6-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-6-циано-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-й][1,3]диоксол-4-ил)пирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14Ϊ (0,838 г, 1,52 ммоль) растворяли в ДМСО (5 мл) и толуоле (3 мл). Добавляли пиридин (0,14 мл, 1,67 ммоль) и ЕБС1 (0,438 г, 2,28 ммоль), затем ТФУ(0,057 мл, 0,761 ммоль). Через 30 мин добавляли дополнительное количество пиридина (0,14 мл, 1,67 ммоль) и ЕБС1 (0,438 г, 2,28 ммоль). Через 1 ч добавляли дополнительное количество пиридина (0,14 мл, 1,67 ммоль) и ЕБС1 (0,438 г, 2,28 ммоль). Спустя 2 ч реакционную смесь гасили 1/2 насыщ. ЫаНСО3(водн.) и распределяли между ЕЮАс и 1/2 насыщ. ЫаНСО3(водн.). Слои разделяли и органический слой сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в СН2С12, концентрировали в высоком вакууме в течение 1 ч с получением остатка, который использовали на следующей стадии напрямую.
Остаток растворяли в пиридине (8 мл) и одной порцией добавляли гидроксиламин гидрохлорид (0,159 г, 2,28 ммоль). Через 15 мин реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и распределяли между ЕЮАс и водой. Органический слой сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток помещали в высокий вакуум в течение 30 мин и использовали на третьей стадии как таковой.
Сырой остаток растворяли в АСЫ (8 мл). Одной порцией добавляли С1)1 (0,37 г, 2,28 ммоль). Через 45 мин добавляли дополнительное количество С1)1 (0,37 г, 2,28 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь гасили 1/2 насыщ. ЫаНСО3(водн.). Сырой продукт распределяли между ЕЮАс и 1/2 насыщ. ЫаНСО3(водн.). Слои разделяли и органический слой сушили над Ыа2ЗО4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14] (0,72 г, 87%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 10,53 (с, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,21 (с, 1Н), 7,00 (д, 1=4,6 Гц, 1Н), 5,62 (д, 1=3,6 Гц, 1Н), 5,28 (дд, 1=6,6, 3,7 Гц, 1Н), 4,93 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 3,83 (с, 2Н), 1,62 (с, 3Н), 1,50 (с, 9Н), 1,33 (с, 3Н), 0,83 (с, 9Н), 0, 00 (с, 6Н).
ГХ/МС: ΐκ=2,50 мин, МЗ ш//=546,15 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегшо ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСЫ, 2,42,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3,0 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14к. (3аЗ,4К,6З,6аЗ)-6-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-й][1,3]диоксол-4-карбонитрил.
Промежуточное соединение 14] (0,688 г, 1,26 ммоль) растворяли в СН2С12 (15 мл). Одной порцией добавляли бромид цинка (0,567 г, 2,52 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 3 ч реакционную смесь помещали на силикагелевый картридж и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (40-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14к (0,56 г, 99%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Й6): δ 7,86 (с, 1Н), 7,80 (с, 2Н), 6,85 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 6,79 (д, 1=4,5 Гц, 1Н), 5,55 (д, 1=3,7 Гц, 1Н), 5,25 (дд, 1=6,6, 3,8 Гц, 1Н), 4,92 (д, 1=6, 6 Гц, 1Н), 3,82 (с, 2Н), 1,61 (с, 3Н), 1,33 (с, 3Н), 0,83 (с, 9Н), -0,13 (с, 6Н).
ГХ/МС: 1к=2,27 мин, МЗ шА=446,68 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегшо Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система
- 66 029712
МС: ТЬегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСЯ, 2,42,80 мин 100% АСЯ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЯ, 2,85-3,0 мин 2% АСЯ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 141. Я-(7-((3а8,48,6К,6а8)-6-(((трет-Бутилдиметилсилил)окси)метил)-6циано-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-й] [ 1,3]диоксол-4-ил)пирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)ацетамид.
Промежуточное соединение 14к (0,20 г, 0,449 ммоль) растворяли в пиридине (2 мл), затем добавляли уксусный ангидрид (0,21 мл, 2,24 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 30 мин реакционную смесь гасили метанолом и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток напрямую очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 141 (0,185 г, 85%) в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): δ 10,87 (с, 1Н), 8,31 (с, 1Н), 7,24 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 7,05 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 5,65 (д, 1=3,6 Гц, 1Н), 5,29 (дд, 1=6,6, 3,6 Гц, 1Н), 4,93 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 3,84 (с, 2Н), 2,36 (с, 3Н), 1,62 (с, 3Н), 1,33 (с, 3Н), 0,83 (с, 9Н), 0,00 (с, 3Н), -0,01 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=1,14 мин, М8 т//=488,38 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЯ, 1,4-1,80 мин 100% АСЯ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЯ, 1,85-2 мин 2% АСЯ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14т. Я-(5-Бром-7-((3а8,48,6К,6а8)-6-(((третбутилдиметилсилил)окси)метил)-6-циано-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-й][1,3]диоксол-4ил)пирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-4-ил)ацетамид.
Промежуточное соединение 141 (80 мг, 0,164 ммоль) растворяли в ДМФ (2 мл) и одной порцией добавляли ΝΒ8 (29 мг, 0,164 ммоль). Через 45 мин реакционную смесь разбавляли метанолом. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% ЕЮАс/Нех) с получением промежуточного соединения 14т (50 мг, 54%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): δ 10,13 (с, 1Н), 8,42 (с, 1Н), 7,29 (с, 1Н), 5,65 (д, 1=3,2 Гц, 1Н), 5,29 (дд, 1=6,6, 3,2 Гц, 1Н), 4,91 (д, 1=6,5 Гц, 1Н), 3,84 (д, 1=1,6 Гц, 2Н), 2,27 (с, 3Н), 1,62 (с, 3Н), 1,33 (с, 3Н), 0,83 (с, 9Н), 0,02 (с, 3Н), 0, 00 (с, 3Н).
ГХ/МС: ΐκ=1,79 мин, М8 т//=566,40 [М+1]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ^С^ Р1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЯ, 1,41,80 мин 100% АСЯ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЯ, 1,85-2 мин 2% АСЯ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 14п. Я-(7-((3а8,48,6К,6а8)-6-(((трет-Бутилдиметилсилил)окси)метил)6-циано-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-й][1,3]диоксол-4-ил)-5-фторпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-4ил)ацетамид.
- 67 029712
Промежуточное соединение 14т (50 мг, 0,088 ммоль) растворяли в ТГФ (2 мл) и раствор охлаждали до температуры -78°С. Добавляли пВиЬ1 (2,5М в гексане, 0,071 мл, 0,18 ммоль). Через 5 мин добавляли Ы-фторбензолсульфонимид (Ы8П, 33,4 мг, 0,106 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь затем гасили АсОН. Растворители удаляли при пониженном давлении. Сырой остаток очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением промежуточного соединения 14п (10 мг, 22%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-Й4): δ 8,13 (с, 1Н), 6,80 (с, 1Н), 5,65 (д, 1=3,5 Гц, 1Н), 5,23 (дд, 1=6,7, 3,6 Гц, 1Н), 4,97 (д, 1=6,7 Гц, 1Н), 3,92 (д, 1=1,7 Гц, 2Н), 2,37 (с, 3Н), 1,70 (с, 3Н), 1,38 (с, 3Н), 0,90 (с, 9Н), 0,08 (с, 6Н).
19Г ЯМР (376 МГц, метанол-й4): δ -156,43 (с).
ГХ/МС: ΐκ=1,65 мин, М8 т ζ 506,18 [М+Н]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-2,4 мин 2-100% АСЫ, 2,42,80 мин 100% АСЫ, 2,8-2,85 мин 100-2% АСЫ, 2,85-3,0 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
Пример 25. (2К,38,4К,58)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-ί][1,2,4]триазин-7-ил)-3,4-дигидрокси-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил.
Промежуточное соединение 14п (11 мг, 0,022 ммоль) помещали в раствор 50% ТФУ в воде при температуре окружающей среды. Спустя 2 ч реакционную смесь гасили твердым Ыа2СО3 до достижения рН 8. Растворитель удаляли при пониженном давлении и сырой остаток очищали с помощью обращеннофазовой ВЭЖХ. Фракции, содержащие соединение по примеру 25, объединяли и отставляли и фракции, содержащие Ы6-Асу1, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток Ы6-Асу1 промежуточного соединения обрабатывали конц. ЫН4ОН(водн.) (1 мл) и смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды. Через 30 мин полученную смесь концентрировали при пониженном давлении и сырой остаток очищали с помощью ВЭЖХ. Фракции, содержащие соединение по примеру 25, объединяли с ранее отставленными фракциями, содержащими соединение по примеру 25, с получением соединения по примеру 25 (4 мг, 58%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й6): δ 7,71 (с, 1Н), 6,56 (с, 1Н), 5,44 (д, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,48 (т, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,36 (д, 1=5,5 Гц, 1Н), 3,83 ((АВц, Δδ=0,05 м.д., 1=12 Гц, 2Н).
19Г ЯМР (376 МГц, метанол-Й4): δ -161,81 (с).
ГХ/МС: ΐκ=0,47 мин, М8 ο/ζ=310,13 [М+Н]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегто ^С^ Г1ее1; колонка: Кте1ех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x3,00 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты, вода с 0,1% муравьиной кислоты; градиент: 0-1,4 мин 2-100% АСЫ, 1,41,80 мин 100% АСЫ, 1,8-1,85 мин 100-2% АСЫ, 1,85-2 мин 2% АСЫ при 1,8 мл/мин.
Промежуточное соединение 15а. трет-Бутил (7-((3а8,48,6К,6а8)-6-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-6-(хлорметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-й][1,3]диоксол-4-ил)пирроло[2,1 1][1,2,4]триазин-4-ил)карбамат.
Промежуточное соединение 14ΐ (100 мг, 0,18 ммоль) растворяли в безводном пиридине (5 мл). Одной порцией добавляли трифторметансульфонил хлорид (23 мкл, 0,22 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 45 мин при комнатной температуре. Затем добавляли дополнительное количество трифторметансульфонил хлорида (100 мкл). Через 30 мин добавляли дополнительное количество трифторметансульфонил хлорида (100 мкл). Спустя еще 30 мин добавляли дополнительное количество трифторметансульфонил хлорида (100 мкл) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, в этот момент реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток растворяли в безводном ДМФ (5 мл) и одной порцией затем добавляли хлорид лития (153 мг, 3,6 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли этил- 68 029712
ацетатом (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (3x20 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток очищали хроматографией на силикагель (0-20% этилацетат в гексане) с получением промежуточного соединения 15 а.
М8 т^=569,0 [М+Η]. Система МС: ТИегто ^С^ А6уапнде.
Пример 26. (2К,38,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2-(хлорметил)-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диол.
Промежуточное соединение 15а растворяли в растворе ТФУ и воде (1:1, 5 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь затем концентрировали при пониженном давлении. Сырой остаток растворяли в водном растворе бикарбоната натрия и ацетонитриле и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением соединения по примеру 26 (19 мг, 34%) в виде порошка белого цвета.
'Η ЯМР (400 МГц, ϋ2Ο): δ 7,61 (с, 1Н), 6,72-6,64 (м, 2Н), 5,19 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 4,73-4,66 (м, 1Н), 4,28 (д, 1=5,2 Гц, 1Н), 3,78 (с, 2Н), 3,72-3,57 (м, 2Н).
М8 т^=315,3 [М+Η]. Система МС: ТИегто ^С^ А6уапнде.
Пример 27 (также ТР7). ((2К,3К,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-4фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 27 получали в виде тетранатриевой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР4, исходя из соединения по примеру 19.
'Η ЯМР (400 МГц, ϋ2Ο): δ 7,76 (с, 1Н), 6,83 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 6,80 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 5,94 (д, 1=25,2 Гц, 1Н), 5,24 (дд, 1=55,2, 5,2 Гц, 1Н), 4,78 (дд, 1=26,8, 5,2 Гц, 1Н), 4,08-4,18 (м, 2Н).
19Р ЯМР (376 МГц, Ι).·Ο): δ -193,74-194,02 (м).
31Р ЯМР (162 МГц, Ι).·Ο): δ -4,60 (д, 1=53,2 Гц, 1Р), -10,25 (д, 1=48,4 Гц, 1Р), -20,28 (т, 1=48,4 Гц, 1Р).
Пример 28. ((2К,3К,4К,58)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-4-фтор-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 28 получали в виде тетранатриевой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР4, исходя из соединения по примеру 21.
'Η ЯМР (400 МГц, I ).-Ο): δ 7,64 (с, 1Н), 6,60 (с, 1Н), 5,90 (д, 1=24,4 Гц, 1Н), 5,20 (дд, 1=54,8, 4,8 Гц, 1Н), 4,72 (дд, 1=27,2, 4,8 Гц, 1Н), 4,05-4,18 (м, 2Н).
|9Р ЯМР (376 МГц, Ι).·Ο): δ -161,00 (с), -196,39-196,69 (м).
31Р ЯМР (162 МГц, Ι).·Ο): δ -8,24 (д, 1=50,4 Гц), -14,20 (д, 1=46,0 Гц), -24,08 (т, 1=48,4 Гц).
М8 ηι/ζ=567,87 [М+1]. Система МС: ТИегто ^С^ А6уаШ;а£е.
- 69 029712
Пример 29. ((2К,3К,4К,58)-5-(4-Амино-2-фторпирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7-ил)-2-азидо-4-фтор-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 29 получали в виде тетранатриевой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР4, исходя из соединения по примеру 22.
‘и ЯМР (400 МГц, 1)1)): δ 6,81 (д, .1 4,4 Гц, 1Н), 6,75 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 5,81 (д, 1=24,4 Гц, 1Н), 5,16 (дд, 1=54,4, 4,8 Гц, 1Н), 4,70 (дд, 1=26,8, 4,4 Гц, 1Н), 4,02-4,12 (м, 2Н).
19Р ЯМР (376 МГц, I ).>О): δ -75,95 (с), -196,51-196,80 (м).
31Р ЯМР (162 МГц, I ).>О): δ -8,29 (д, 1=53,2 Гц), -14,22 (д, 1=48,4 Гц), -24,09 (т, 1=48,4 Гц).
М8 т/7=567,59 [М+1]. Система МС: ТЬегто ^С^ Абуап1а§е.
Пример 30. ((2К,3К,4К,58)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7-ил)-2-циано-4-фтор-3гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 30 получали в виде тетранатриевой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР4, исходя из соединения по примеру 23.
‘Н ЯМР (400 МГц, И2О): δ 7,64 (с, 1Н), 6,57 (с, 1Н), 5,87 (д, 1=24,8 Гц, 1Н), 5,26 (дд, 1=53,6, 4,0 Гц, 1Н), 4,82 (дд, 1=25,2, 4,4 Гц, 1Н), 4,26-4,35 (м, 2Н).
19Р ЯМР (376 МГц, И2О): δ -161,05 (с), -194,92-195,19 (м).
31Р ЯМР (162 МГц, И2О): δ -8,22 (д, 1=50,8 Гц), -14,48 (д, 1=48,4 Гц), -24,01 (т, 1=48,4 Гц).
М8 т/7=551,91 [М+1]. Система МС: ТЬегто ^С^ Абуап1а§е.
НО Р НО' V
24 ТР11
Пример 31 (также ТР11). ((2К,3К,4К,58)-5-(4-Аминопирроло[2,1-£][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-3гидрокси-2-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 31 получали в виде тетранатриевой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР4, исходя из соединения по примеру 24.
‘Н ЯМР (400 МГц, И2О): δ 7,66 (с, 1Н), 6,78 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 6,72 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 5,58 (дд, 1=23,6, 2,4 Гц, 1Н), 5,16 (ддд, 1=55,2, 5,2, 2,8 Гц, 1Н), 4,51 (дд, 1=23,2, 5,2 Гц, 1Н), 3,88 (дд, 1=11,6, 6,0 Гц, 1Н), 3,78 (дд, 1=10,8, 4,0 Гц, 1Н), 1,2 (с, 3Н).
19Р ЯМР (376 МГц, И2О): δ -195,74-196,01 (м).
31Р ЯМР (162 МГц, И2О): δ -8,24 (д, 1=50,4 Гц), -13,54 (д, 1=45,6 Гц), -24,11 (т, 1=48,0 Гц).
- 70 029712
Пример 32 (также ТР12). ((2К,33,4К,53)-5-(4-Амино-5-фторпирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2циано-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 32 получали в виде тетранатриевой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР4, исходя из соединения по примеру 25.
'Н ЯМР (400 МГц, ϋ2Ο): δ 7,59 (с, 1Н), 6,57 (с, 1Н), 5,44 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 4,56 (д, 1=5,2 Гц, 1Н), 4,48 (дд, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,16 (дд, 1=11,6, 6,0 Гц, 1Н), 4,08 (дд, .1=11,2, 5,2 Гц, 1Н).
19Р ЯМР (376 МГц, Ό2Ο): δ -161,25 (с).
31Р ЯМР (162 МГц, Ό2Ο): δ -8,29 (д, 1=48,4 Гц), -14,49 (д, .1=53,2 Гц), -24,15 (т, .1-18,1 Гц).
М3 тУ=549,90 [М+1]. Система МС: Тйегто ^С^ АйуапЩде.
26 ТР13
Пример 33 (также ТР13). ((2К,33,4К,53)-5-(4-Аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-2(хлорметил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат.
Соединение по примеру 33 получали в виде тетра-триэтиламиновой соли способом, аналогичным описанному в примере ТР3, исходя из соединения по примеру 26.
1Н ЯМР (400 МГц, Ι).-Οι: δ 7,76 (с, 1Н), 6,92 (шир. с, 1Н), 6,85 (шир. с, 1Н), 5,32 (д, .1=9,6 Гц, 1Н), 4,78 (дд, 1=8,64 Гц, 1Н), 4,53 (д, 1=5,6 Гц, 1Н), 4,08 (дд, 1=10,0, 4,0 Гц, 1Н), 3,83-3,95 (м, 3Н), 3,07 (кв, .1=7,6 Гц, 24 Н), 1,16 (т, 1=7,6 Гц, 36 Н).
31Р ЯМР (162 МГц, Ό2Ο): δ -9,44 (д, 1=45,6 Гц), -11,51 (д, .1-48,8 Гц), -22,95 (т, .1=48,4 Гц).
М3 тУ=555,06 [М+1]. Система МС: Тйегто ^С^ Айуап1а§е.
Пример 34 (также РЭ6). (23)-2-Этилбутил 2-(((((2К,3К,4К,53)-5-(4-аминопирроло[2,11][1,2,4]триазин-7-ил)-2-циано-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат.
Соединение по примеру 1 (3,8 мг, 0,013 ммоль) растворяли в безводном Ы-метил-2-пирролидоне (0,2 мл) и в атмосфере аргона добавляли ТГФ (0,1 мл). Затем при комнатной температуре добавляли трет-бутил магний хлорид (1 М в ТГФ, 20 мкл, 0,024 ммоль) и в осадок выпадало твердое вещество белого цвета. Через 5 мин в реакционную смесь одной порцией добавляли раствор п-нитрофенилфосфорамидата РЭ3с (12 мг, 0,026 ммоль) в ТГФ (0,1 мл) и полученную смесь нагревали при температуре 50°С. Через 20 ч реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и затем напрямую очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (Рйепоттех 3упегц1 4 мкм Нуйго-КК 80 А, колонка 150x30 мм, градиент 40-100% ацетонитрил/вода). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и лиофилизовали с получением соединения по примеру 34 (2,9 мг, 37%, 3:2 смесь диастереомеров) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (400 МГц, С^зΟ^): δ 7,80 (с, 0,3Н), 7,78 (с, 0,6Н), 7,38-7,10 (м, 5Н), 6,85 (шир. дд, 1=4,7, 2,2 Гц, 1Н), 6,75-6,71 (м, 1Н), 5,54-5,46 (м, 1Н), 4,65-4,58 (м, 1Н), 4,53-4,31 (м, 3Н), 4,07-3,84 (м, 3Н), 1,541,39 (м, 1Н), 1,38-1,19 (м, 7Н), 0,92-0,81 (м, 6Н) 29Н.
31Р ЯМР (162 МГц, С^зΟ^): δ 3,25 (шир. с).
ГХ/МС: 1К=1,55 мин, М3 тУ=603,19 [М+Н]; система ЖХ: Тйегто Ассе1а 1250 СВЭЖХ; система МС: Тйегто ^С^ Е1ее1; колонка: КтеЛех, 2,6 мкм, ХВ-С18, 100 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил
- 71 029712
с 0,‘% уксусной кислоты, вода с 0,‘% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-‘00% АСН, 2,0-3,05 мин ‘00% АСН, 3,05-3,2 мин ‘00-2% АСН, 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: N=2,98 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! ‘‘00; колонка: Оетт1 С‘8, 5 мкм, ‘‘0 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,‘% ТФУ, вода с 0,‘% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН, 5,0-6,0 мин 98% АСН при 2 мл/мин.
Пример 35 (также РЭ7). (2З)-Этил 2-(((((2К,3З,4К,5З)-5-(4-аминопирроло[2,‘-£][‘,2,4]триазин-7-ил)2-циано-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат.
Соединение по примеру ‘ (‘9 мг, 65,3 мкмоль) растворяли в НМР (0,2 мл). При комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли ТГФ (0,‘ мл), затем трет-бутил магний хлорид (‘,0 М раствор в тетрагидрофуране, 0,098 мл). Через 5 мин добавляли раствор промежуточного соединения РЭ7а (полученный в соответствии с ИЗ 20120009147 А‘, 5‘,4 мг, ‘30 мкмоль) в ТГФ (0,‘ мл) и полученную смесь нагревали до температуры 50°С. Через ‘ ч реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и напрямую очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (РЬепоттех Зупег§1 4 мкм Нубго-КК 80 А, колонка ‘50x30 мм, 5-100% градиент ацетонитрил/вода). Фракции, содержащий продукт, объединяли и концентрировали и образовавшийся остаток вновь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (РЬепоттех Ьипа, 5 мкм, колонка С‘8, ‘00x30 мм, градиент 5-‘00% ацетонитрил/вода) с получением соединения по примеру 35 (‘2 мг, 34%, 3:2 смесь диастереомеров) в виде твердого вещества белого цвета.
‘Н ЯМР (400 МГц, СО3ОО): δ 7,80 (д, 1=2,3 Гц, 0,4Н), 7,78 (д, 1=2,3 Гц, 0,6Н), 7,36-7,12 (м, 5Н), 6,88-6,81 (м, 1Н), 6,76-6,70 (м, 1Н), 5,53-5,46 (м, 1Н), 4,66-4,60 (м, 1Н), 4,55-4,30 (м, 3Н), 4,15-3,98 (м, 2Н), 3,93-3,79 (м, 1Н), 1,30-1,12 (м, 6Н).
31Р ЯМР (‘62 МГц, СО3Оо): δ 3,27 (шир. с).
ГХ/МС: основной диастереомер N=‘,28 мин, МЗ тА=547,‘4 [М+Н], побочный диастереомер N=‘,30 мин, МЗ тА=547,04 [М+Н]; система ЖХ: ТЬегто Ассе1а ‘250 СВЭЖХ; система МС: ТЬегто ^С^ Р1ее!; колонка: Кте!ех, 2,6 мкм, ХВ-С‘8, ‘00 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% уксусной кислоты, вода с 0,‘% уксусной кислоты; градиент: 0-2,0 мин 2-‘00% АСН, 2,0-3,05 мин ‘00% АСН, 3,053,2 мин ‘00-2% АСН, 3,2-3,5 мин 2% АСН при 2 мкл/мин.
ВЭЖХ: основной диастереомер N=2,44 мин, побочный диастереомер N=2,46 мин; система ВЭЖХ: серии АдПеп! ‘‘00; колонка: Оетт1 С‘8, 5 мкм, ‘‘0 А, 50x4,6 мм; растворители: ацетонитрил с 0,1% ТФУ, вода с 0,1% ТФУ; градиент: 0-5,0 мин 2-98% АСН, 5,0-6,0 мин 98% АСН при 2 мл/мин.
Предложены также отдельные варианты осуществления, включающие соответственно соединения формулы (А), формулы (В), формулы (С), формулы (Ώ) и формулы (Е):
аминозащитную группу.
Используемые кислородные защитные группы включают силильную эфирную защитную группу или защитную группу бензильного типа, включая метоксибензильные группы.
Используемые силильные эфирные защитные группы включают триметилсилил (ТМЗ), триэтилсилил (ТЕЗ), диметилизопропилсилил (1РОМЗ), диэтилизопропилсилил (ОЕ1РЗ), диметилгексилсилил (ТОЗ), трет-бутилдиметилсилил (ТВЗ или ТВОМЗ), трет-бутилдифенилсилил (ТВОРЗ), трибензилсилил, три-п-ксилилсилил, триизопропилсилил (Т1РЗ), дифенилметилсилил (ОРМЗ), ди-трет-бутилметилсилил (ОТВМЗ), трифенилсилил (ТРЗ), метилдифенилсилил (МОРЗ), трет-бутилметоксифенилсилил, трис- 72 029712
(триметилсилил)силил (818у1), (2-гидроксистирил)диметилсилил (Η8^М8), (2-гидроксистирил)диизопропилсилил (Η8ΌΙ8). трет-бутилметоксифенилсилил (ТВМР8) и трет-бутоксидифенилсилил (^РТВΟ8) защитные группы.
Используемые защитные группы бензильного типа включают бензил, галогенированный бензил, п-метоксибензил, бензилоксиметил, 2,4-диметоксибензил, 3,4-диметоксибензил, 2,6-диметоксибензил, п-СР3-бензил, п-метилбензил, п-метоксибензил, 3,5-диметилбензил, п-трет-бутилбензил, о-нитробензил, п-нитробензил, п-галогенбензил, включая п-Вг-бензил, 2,6-дихлорбензил, п-цианобензил, п-фенилбензил, 2,6-дифторбензил, п-ациламинобензил (РАВ), п-азидобензил (АЪ), 4-азидо-3хлорбензил, 2-трифторметилбензил, п-(метилсульфинил)бензил, 2-пиколил, 4-пиколил, 3-метил-2пиколил Н-оксидо, 2-хинолинилметил, дифенилметил (ИРМ), п,п'-динитробензгидрил, трифенилметил, альфа-нафтилдифенилметил, п-метоксифенилдифенилметил, ди(п-метоксифенил)фенилметил, три(пметоксифенил)метил, 4,4',4"-трис(бензоилоксифенил)метил и 2-нафтилметил защитные группы.
Используемые аминозащитные группы включают п-метоксибензил карбонил (Моζ или МеΟΖ), ацетил (Ас), бензоил (Έζ), п-метоксибензил (РМВ), 3,4-диметоксибензил (ИМРМ), п-метоксифенил (РМР), тозил (Тк или Ток), трифторацетамид и тритил защитные группы. Используемые аминозащитные группы также включают карбаматные и амидные защитные группы. Примеры карбаматных защитных групп включают метил и этил карбаматы, такие как 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМΟС), 9-(2-сульфо)флуоренилметил, 9-(2,7-дибром)флуоренилметил, 17-тетрабензо [а,с,дд] флуоренилметил (ТЪГшос), 2-хлор-3-инденилметил (СРшос), бенз[Г]инден-3-илметил (Вппос), 2,7-ди-трет-бутил[9-(10,10диоксо-10,10,10,10-тетрагидротиоксанил)]метил (ИВП-Тшос), [2-(1,3-дитианил)метил (Ишос) и 1,1-диоксобензо[Ъ]тиофен-2-илметил (Вкшос) карбаматы.
Примеры используемых замещенных этил карбаматов включают 1,1-диметил-2-цианоэтил, 2-фосфониоэтил (Реос), 2-метилтиоэтил, 2-(п-толуолсульфонил)этил, 2,2,2-трихлорэтил (Тгос), 2-(триметилсилил)этил (Теос), 2-фенилэтил (ΗΖ), 1-(1-адамантил)-1-метилэтил (А6рос), 1,1-диметил-2бромэтил, 1,1-диметил-2-хлорэтил, 1,1-диметил-2,2-дибромэтил (^В-ΐ-ВΟС), 1,1-диметил-2,2,2трихлорэтил (ТСВОС), 1-метил-1-(4-бифенилил)этил (Врос), 1-(3,5-ди-трет-бутилфенил)-1-метилэтил (ΐ-Вишеос), 2-(2'-пиридил)этил, 2-(4'-пиридил)этил, 2,2-бис-(4'-нитрофенил)этил (Впреос), Н-(2-пивалоиламино)-1,1 -диметилэтил, 2-[(2-нитрофенил)дитио]-1-фенилэтил (Нр88Реос),
2-(Н,Н-дициклогексилкарбоксамидо)этил, трет-бутил (Вос или ВОС), 1-адамантил (1-А6ос), 2-адамантил (2-А6ос), винил (Уос), аллил (А1ос или а11ос), 1-изопропилаллил (1раос), циннамил (Сос), 4-нитроциннамил (Нос), 3-(3'-пиридил)проп-2-енил (Ра1ос), 8-хинолил и Н-гидроксипиперидинил, карбаматы, а также алкилдитио карбаматы, включая метилдитио, этилдитио, изопропилдитио, третбутилдитио и фенилдитио карбаматы.
Также используемыми являются арилсодержащие и замещенные арилсодержащие карбаматы, такие как бензил, п-метоксибензил, п-нитробензил, п-бромбензил, п-хлорбензил, 2,4-дихлорбензил, 4-метилсульфинилбензил (М^), 9-антрилметил, 4-метилтиофенил (М1рс), 1-метил-1-(трифенилфосфонио)этил (2-трифенилфосфониоизопропил) (Ррос), 2-дансилэтил (Ипкеос), 2-(4-нитрофенил)этил (Нреос), 4-фенилацетоксибензил (ΓΗΛ^Ζ), 4-азидобензил (АСВΖ), 4-азидометоксибензил, м-хлор-п-ацилоксибензил, п-(дигидроксиборил)бензил, карбобензилокси (06ζ)„ 4-бензизоксазолилметил (Вю), 2-(трифторметил)-6-хромонилметил (Тсгос), фенил и дифенилметил карбаматы. Дополнительные карбаматы включают бутинил, циклопентил, циклогексил, циклопропилметил, 1-метилциклобутил, 1-метилциклогексил, 1,1-диметилпропинил и 1-метил-1-циклопропилметил карбаматы.
Используемые амидные защитные группы для аминов включают Н-формил, Н-ацетил, Н-хлорацетил, Н-трихлорацетил, Н-трифторацетил (ТФУ), Н-фенилацетил, Н-3-фенилпропионил, Н-4-пентоил, Н-пиколиноил, Н-3-пиридилкарбоксамидо, Н-бензоилфенилаланил, Н-бензоил и Н-п-фенилбензоил амиды.
Противовирусная активность.
Другой вариант осуществления изобретения относится к способам ингибирования вирусных инфекций, включающий стадию обработки образца или субъекта, полагаемого в необходимости такого ингибирования, композицией по настоящему документу.
Рассматриваемые в настоящем документе образцы, предположительно содержащие вирус, включают природные или искусственные материалы, такие как живые организмы; ткани или культуры клеток; биологические образцы, такие как образцы биологического материала (кровь, сыворотка, моча, спинномозговая жидкость, слезы, мокрота, слюна, образцы тканей и т.п.); лабораторные образцы; продукты питания, образцы воды или воздуха; образцы биопрепаратов, такие как экстракты клеток, особенно рекомбинантных клеток, синтезирующих желаемый гликопротеин; и т.п. Как правило, образец предположительно содержит организм, который вызывает вирусную инфекцию, часто патогенный организм, такой как вирус опухоли. Образцы могут содержаться в любой среде, включая воду и смеси органических растворителей/воды. Образцы включают живые организмы, такие как люди и искусственные материалы, такие как клеточные культуры.
При желании, антивирусную активность соединения после применения композиции можно исследовать любым методом, в том числе прямыми и косвенными методами обнаружения такой активности.
- 73 029712
Предусмотрены все, количественные, качественные и полуколичественные, методы определения такой активности. Обычно применяется один из способов скрининга, описанных выше, однако, любой другой метод, такой как наблюдение за физиологическими свойствами живого организма, также применим.
Противовирусная активность соединения может быть определена с использованием стандартных протоколов скрининга, которые являются известными. Например, противовирусная активность соединения может быть оценена с использованием следующих общих протоколов.
Анализ противовирусной активности в отношении респираторно-синцитиального вируса (Κδν) и анализ цитотоксичности.
Анти-Κδν активность.
Противовирусную активность в отношении Κδν определяли с использованием анализа защиты против инфекции цитопатическими клетками на клетках клеточной линии НЕр-2. В этом анализе соединения, ингибирующие вирусную инфекцию и/или репликацию, производят цитопротективное действие против индуцированного вирусом уничтожения клеток, что может быть определено количественно с использованием реагента показателя жизнеспособности клеток. Методы, используемые в данном документе, представляют собой новые адаптации способов, описанных в опубликованной литературе (СЬартап е! а1., АпйткгоЬ Лдейз СЬетоШег. 2007, 51(9):3346-53).
Клетки Нер-2 получали от фирмы АТСС (Мапаккак, VI) и выдерживали в среде МЕМ с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и пенициллина/стрептомицина. Клетки пересевали два раза в неделю и держали на субконфлюэнтной стадии. Коммерческий материал Κδν штамма А2 (Абуапсеб Вю1есЬпо1ощек. Со1итЫа, МО) титровали перед тем, как исследовали соединение для определения соответствующего разведения вирусного материала, который генерировал желаемый цитопатический эффект в клетках Нер-2.
В противовирусных исследованиях клетки Нер-2 выращивали в больших колбах для культивирования клеток почти до слияния, но не до конца. Исследуемые соединения предварительно разводили в ДМСО в 384-луночных планшетах для разведения соединения в формате "стандартизированная дозаответ" либо в количестве 8, либо в количестве 40 образцов на планшет. Проводили 3-кратное серийное разведение каждого исследуемого соединения на планшетах и исследуемые образцы переносили посредством аппарата акустической передачи (ЕсЬо, ЬаЬсу1е) при 100 нл/лунку на 384-луночные планшеты для анализа культуры клеток. Каждое разведение соединения переносили в виде одного или четырехкратно повторяющихся образцов на сухие планшеты для анализа, которые хранились до тех пор, пока анализ не был готов для проведения. Положительные и отрицательные контроли размещали на противоположных сторонах планшета в вертикальных участках (1 колонка).
После этого готовили инфекционную смесь с использованием соответствующего разведения вирусного материала, предварительно определенного титрованием с клетками при плотности 50000/мл и добавляли 20 мкл/лунка планшеты для исследования и/соединения посредством автоматики (иЕ1ои, Вю1ек). Каждая пластина включала положительный и отрицательный контроли (16 повторений каждый), чтобы создать 0 и 100% стандарты ингибирования вируса соответственно. После инфицирования в испытательные планшеты добавляли реагент для контроля жизнеспособности клеток, Се11 ТйегО1о (Рготеда, Мабщоп, N1) и инкубировали в течение 4 дней при температуре 37°С в инкубаторе клеточных культур. После инкубирования в аналитические планшеты добавляли реагент для контроля жизнеспособности клеток, Се11 ТйегС1о (Рготеда, Маб1коп, N1), быстро инкубировали и на всех аналитических планшетах определяли регистрируемую величину люминесценции (Епикюп, Регкш Е1тег). Индуцированное Κδν цитопатическое действие, процент ингибирования, определяли по степени жизнеспособности оставшихся клеток. Эти количественные показатели рассчитывали для каждой исследуемой концентрации относительно к 0 и 100% контролям ингибирования и определяли значение ЕС50 для каждого соединения с помощью нелинейной регрессии в виде концентрации, ингибирующей индуцированное Κδν цитопатическое действие на 50%. В качестве положительных контролей на противовирусную активность использовали различные эффективные анти-Κδν экспериментальные соединения.
Анализ цитотоксичности на клетках НЕр-2.
Цитотоксичность исследуемых соединений определяли на неинфицированных клетках НЕр-2 параллельно с исследованием противовирусной активности, используя реагент для контроля жизнеспособности клеток таким же образом, как описано выше для других видов клеток (С1Ь1аг е! а1., Лηι^т^с^оЬ Адеп!к СЬето!Ьег. 2008, 52(2):655-65). Для определения цитотоксичности соединения использовали тот же протокол, что и для определения противовирусной активности, за исключением того, что клетки не были инфицированы Κδν. Наоборот, неинфицированную смесь клеток при той же плотности добавляли по 20 мкл/лунка на планшеты, содержащие предварительно разведенные соединения, также при 100 нл/образец. Планшеты затем инкубировали в течение 4 дней с последующим испытанием на жизнеспособность клеток, используя такое же добавление реагента Се11Тйег С1о и определение регистрируемой величины люминесценции. Неочищенные клетки и клетки, обработанные 2 мкМ пуромицина Адта, δ!. Ьошк, МО), служили в качестве 100 и 0% контроля жизнеспособности клеток соответственно. Процент жизнеспособности клеток рассчитывали для каждой концентрации исследуемого соединения по сравнению с контролем 0 и 100% и величину СС50 определяли с помощью нелинейной регрессии в виде
- 74 029712
концентрации соединения, восстанавливающей жизнеспособность клеток на 50%.
Анализ цитотоксичности на клетках МТ-4.
Линию клеток МТ-4 получали от фирмы №Н ΑΠΟδ КезеагсР апб КеГегепсе Кеадеп! Ргодгаш (Оегтап1о\уп, МО) и культивировали в среде КРМЕ1640 Цгуте δс^епί^йс, δапίа Αιιτ ΟΑ, Са! # 9160), дополненной 10% ΡΒδ, 100 единиц/мл пенициллина, 100 единиц/мл стрептомицина и 2 мМ Ь-глутамина. Клетки МТ-4 пересевали два раза в неделю для поддержания плотности клеток ниже 0^106 клеток/мл. Полную среду КРМI-1640, содержащую 100x концентрацию 3-кратно серийно разведенного соединения, в пределах от 26 нМ до 530 мкМ, штамповали в четырех повторностях в черные 384-луночные планшеты. После добавления соединения в каждую лунку с помощью дозатора жидкости МюгоР1о ЩюТек, АтосМл, УТ) добавляли 2x103 МТ-4 клеток и клетки культивировали в течение 5 дней при температуре 37°С в инкубаторе с 5% СО2. После инкубирования клетки уравновешивали до 25°С и жизнеспособность клеток определяли путем добавления 25 мкл реагента для контроля жизнеспособности клеток Се11-ТРег О1о. Смесь инкубировали в течение 10 мин при 25°С и сигнал люминесценции количественно оценивали на планшетном ридере люминесценции У1с!ог. Значение СС50 определяется как концентрацию соединения, которая уменьшает жизнеспособность клеток на 50%, как определено с помощью сигнала Се11-ТРег О1о. Данные анализировали с использованием программного обеспечения для сбора и анализа данных Р1ре1те РЛо! Р1а!е Оа1а Α^^ΐώδ Со11ес!юп (версия 7.0, Αссе1^уδ, δап Эхедо, СΑ). Значения СС50 вычисляли проведением нелинейного регрессионного анализа с использованием 4-параметрического уравнения сигмовидной кривой доза-эффект
Υ=Βоίίош+(Тор-Βоίίош)/(1+10Λ[(^одСС5ο-X)·Η^11δ1оре])
(пер. У=низ+(верх-низ)/( 1+10л[(ЬодСС50-Х)-коэффициентХилла])), где верх (Тор) и низ ЩоРот) фиксировались на уровне 100 и 0% жизнеспособности клеток соответственно. Значения СС50 были вычислены как среднее значение ± стандартное отклонение в трех независимых экспериментах.____
Пример ЕС50/мкм НЕп-2 СС50/мкм МТ-4 СС50/мкм
1 7,3 >50 >53
2 9, 6 >100 >106
3 2,0 >100 >106
4 30 >50 >53
5 2,1 >50 >53
10 (ΡΌ1) 1,0 39 7,3
11 (ΡΌ2) 1,2 42 19, 7
12 (ΡΌ3) 3, 0 >50 27
13 10,5 >100 >106
14 40 >100 >106
15 (ΡΌ4) 1, б 35 7,9
16 (ΡΌ5) 0,3 18 25
19 0,40 >44 16
20 >50 >50
21 50 36 15
22 0,57 >100 32
23 23,5 72 21
24 1,0 >100 11
25 9,2 >100 >93
26 >50 42 >57
34 (ΡΌ6) 0,21 >50 >50
35 (ΡΏ7) 0,34 >50 47
Еще один положительный эффект связан с тем преимуществом, которое обеспечивают соединения, которые имеют замещение К4, по сравнению с соединениями, не имеют замещения К4 (т.е. такие, в которых К4=Н) в отношении МТ-4 цитотоксичности. Например, соединение (2δ,3Κ,4δ,5Κ)-2-(4аминопирроло [1.2-ί][1.2.4]триазин-7-ил)-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3,4-диол (Рай1 δ.Λ.;
ΟΡόγ Κ.Α.; К1ет Κ.δ. Те!гаРе6гоп ЬеР. 1994, 35, 5339-5342), имеющее структуру
- 75 029712
демонстрирует МТ-4 СС50=0,007 мкм; тогда как соединения по примерам 1, 4, 5, 20 и 26, все демонстрируют МТ-4 СС50>53 мкм. Далее, соединение (2К,3К,4К^)-5-(4-аминопирроло [1.2-Г][1.2.4]триазин7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (№Ο 2012/037038 А1), имеющее структуру
демонстрирует МТ-4 СС50=30 мкм; тогда как соединения по примерам 2, 3, 13 и 14, все демонстрируют МТ-4 СС50>106 мкм.
Другой положительный эффект связан с тем преимуществом, которое обеспечивают соединения с Κ3=Ρ, которые имеют замещение К4 по сравнению с соединениями, не имеющими замещения К4 (т.е. те, в которых К4=Н) в отношении НЕр-2 анти-Κδν активности. Например, соединение (2К,3К,4К^)-5-(4-аминопирроло[1.2-Г][Е2.4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран3-ол (№Ο 2012/037038 А1) имеющее структуру, указанную выше, имеет НЕр-2 ЕС50=>100 мкм; тогда как соединения по примерам 2, 3, 13, 14, 19, 21, 22, 23 и 24, все демонстрируют ЕС50=<100 мкМ.
Получение Κδν К№.
Κδν К№ подготовка.
Κδν рибонуклеопротеиновые (ΚΝΓ) комплексы получали способом, модифицированным Μаδоη е! а1. (1). Клетки Нер-2 высевали при плотности клеток 7,^104 клеток/см2 в ΜЕΜ + 10% фетальной бычьей сыворотки (ΡΒδ) и позволяли закрепляться в течение ночи при температуре 37°С (5% СО2). После прикрепления клетки инфицировали Κδν А2 (ΜΟΣ = 5) в 35 мл ΜЕΜ + 2% ΡΒδ. Через 20 ч после инфицирования среду заменяли на ΜЕΜ + 2% ΡΒδ, дополненную 2 мкг/мл актиномицином Ώ и возвращали к температуре 37°С в течение одного часа. Клетки затем промывали один раз с помощью РΒδ и обрабатывали 35 мл РΒδ + 250 мкг/мл лизолецитина в течение одной минуты, после чего всю жидкость аспирировали. Клетки собирали соскребанием их в 1,2 мл буфера А [50 мМ Трис ацетат (рН 8,0), 100 мМ ацетата калия, 1 мМ ЭТТ и 2 мкг/мл актиномицина Ώ] и лизировали путем многократного пропускания через шприц с иглой 18 калибра (10 раз). Клеточный лизат помещали на лед на 10 мин и затем центрифугировали при 2400д в течение 10 мин при температуре 4°С. Супернатант (δ1) удаляли и осадок (Р1) восстанавливали в 600 мкл буфера В [10 мм ТРИС ацетат (рН 8,0), 10 мМ ацетата калия и 1,5 мМ Μ§Ε12] с добавлением 1% Тритон Х-100 при повторном пропускании через иглу 18 калибра (10 раз). Ресуспендированный осадок помещали на лед на 10 мин и затем центрифугировали при 2400д в течение 10 мин при температуре 4°С. Супернатант (δ2) удаляли и осадок (Р2) восстанавливали в 600 мкл буфера В с добавлением 0,5% деоксихолата и 0,1% Тмееп 40. Ресуспендированный осадок помещали на лед на 10 мин и затем центрифугировали при 2400д в течение 10 мин при температуре 4°С. Супернатант (83), фракцию, содержащую обогащенные Κδν КИР комплексы, собирали и концентрацию белка определяли по УФ-поглощению при 280 нм. Аликвоты Κδν К№ фракции δ3 хранили при температуре -80°С.
Анализ Κδν КИР.
Реакционная смесь для транскрипции содержала 25 мкг сырых комплексов Κδν ΚΝΓ в 30 мкл реакционного буфера [50 мМ ТРИС-ацетата (рН 8,0), 120 мМ ацетата калия, 5% глицерина, 4,5 мМ Μ§Ε12, 3 мМ ЭТТ, 2 мМ этиленгликоль-бис (2-аминоэтиловый эфир)-тетрауксусная кислота (ЕОТА), 50 мкг/мл ΒδА, 2,5 Ед. РНазина (Рготеда), АТР, ОТР, ИТР, СТР и 1,5 мкКи [а-32Р] ОТР (3000 Ки/ммоль)]. Радиомеченый нуклеотид, используемый в анализе транскрипции, выбрали в соответствии с нуклеотидным аналогом, оцениваемым на ингибирование транскрипции Κδν-ΚΝΓ. Холодный конкурентный NТР добавляли при конечной концентрации наполовину его Кт (АТР=20 мкМ, ОТР=12,5 мкМ, ИТР=6 мкМ и СТР=2 мкМ). Остальные три нуклеотида добавляли при конечной концентрации 100 мкМ.
Для определения того, ингибируют ли аналоги нуклеотидов Κδν ΚΝΓ транскрипцию, добавляли соединения с использованием 6 стадийного серийного разбавления с 5-кратным увеличением объема.
- 76 029712
Чрез 90 мин инкубирования при температуре 30°С, реакции ΗΝΡ останавливали с помощью 350 мкл лизисного буфера О1адеп КЕТ и ΚNА очищали с использованием набора О1адеп К№а§у 96. Очищенную ΕΝΛ денатурировали в загрузочном буфере для образцов ΙΚΝΛ (81дша) при температуре 65°С в течение 10 мин и прогоняли на геле 1,2% агароза/МОР8, содержащем 2М формальдегид. Агарозный гель сушили и экспонировали на люминофорный экран 81огш и анализировали с использованием рЬозрЬопшадег 81огш (ОЕ НеаИЬсаге).
Концентрацию соединения, которая уменьшает общие радиомеченые транскрипты на 50% (1С50), рассчитывали с помощью нелинейного регрессионного анализа в двух повторностях.
Ссылка.
Мазоп, 5., ЬамеГг, С., СаиЛеООе, Υ., ϋο, Г., ЗсоиОеп, Е., Ьадасе, Ь., 51топеаи, В. апЛ Ыиггг, М. (2004) Ро1уаЛепу1аЫоп-ЛерепЛеп£ зсгееп1пд аззау £ог гезрз-гаЬогу зупсу£1а1 νίπΐβ ΚΝΑ £гапзсг1р£азе асЬ/стз-Ьу апЛ 1Леп-Ы£1са-Ыоп о£ ап апЫЫЬог. Ыис1е0с АсгЛз КезеагсЬ, 32, 4758-4767.
Еще одно рассмотрение относится к тому преимуществу, что соединения, показанные в примерах, демонстрируют сильное ингибирование транскрипции К8У ΚΝΓ по сравнению с соединениями с замещением 2'СМе. Например, ((2К,3К,4К,58)-5-(4-аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-3,4-дигидрокси4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат (АО 2008/089105 А2 и АО 2010/002877 А2), имеющий структуру
демонстрирует 1С50=8,5 мкм; тогда как соединение по примеру ТР3 демонстрирует 1С50=0,025 мкм. Более того, соединение ((2К,3К,4К,58)-5-(4-аминопирроло[2,1-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-3гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил тетрагидротрифосфат (АО 2011/035231 А1), имеющее структуру
демонстрирует 1С50=>100 мкм; тогда как соединение по примеру ТР1 демонстрирует 1С50=0,086 мкм и соединение по примеру ТР2 демонстрирует 1С50=1 мкм.
- 77 029712

Claims (9)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
    где К1 представляет собой Н;
    К2 представляет собой Н или Р;
    К3 представляет собой ОН;
    К4 представляет собой С^
    К6 представляет собой ОН;
    К5 выбран из группы, включающей Н и
    где п' выбран из 1, 2, 3 и 4;
    К8 выбран из С1-С8-алкила, -О-С1-С8-алкила, бензила, -Ο-бензила, -СН2-С3-С6-циклоалкила, -О-С^С3-С6-циклоалкила и СР3;
    К9 выбран из фенила;
    К10 выбран из Н и ΠΗ3;
    К11 выбран из Н или С1-С6-алкила;
    12
    К выбран из Н, С1-С8-алкила, бензила, С3-С6-циклоалкила и -СН2-С3-С6-циклоалкила.
  2. 2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль формулы (II)
  3. 3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей
    из
    - 78 029712
  4. 4. Соединение по п.3 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой
  5. 5. Соединение по п.3 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой
  6. 6. Соединение по п.3 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой
  7. 7. Соединение по п.3 или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой
  8. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель и вспомогательное вещество.
  9. 9. Применение соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения инфекции вирусом Ρηеишον^^^ηае или респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у человека.
EA201690978A 2013-11-11 2014-11-06 ПИРРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ EA029712B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361902544P 2013-11-11 2013-11-11
PCT/US2014/064412 WO2015069939A1 (en) 2013-11-11 2014-11-06 Pyrrolo [1,2,f] [1,2,4] triazines useful for treating respiratory syncitial virus infections

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690978A1 EA201690978A1 (ru) 2016-09-30
EA029712B1 true EA029712B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=52003049

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690978A EA029712B1 (ru) 2013-11-11 2014-11-06 ПИРРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
EA201792639A EA039734B1 (ru) 2013-11-11 2014-11-06 Пирроло[1.2-f][1.2.4]триазины, используемые для лечения респираторно-синцитиальных вирусных инфекций

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792639A EA039734B1 (ru) 2013-11-11 2014-11-06 Пирроло[1.2-f][1.2.4]триазины, используемые для лечения респираторно-синцитиальных вирусных инфекций

Country Status (36)

Country Link
US (4) US9388208B2 (ru)
EP (3) EP3505173B1 (ru)
JP (7) JP6234571B2 (ru)
KR (4) KR102243724B1 (ru)
CN (3) CN114085243B (ru)
AP (1) AP2016009186A0 (ru)
AU (5) AU2014346665A1 (ru)
BR (1) BR112016010261B1 (ru)
CA (1) CA2928674C (ru)
CL (1) CL2016001120A1 (ru)
CR (1) CR20160220A (ru)
CU (1) CU20160065A7 (ru)
CY (1) CY1121948T1 (ru)
DK (2) DK3068405T3 (ru)
DO (1) DOP2016000107A (ru)
EA (2) EA029712B1 (ru)
ES (2) ES2743619T3 (ru)
GT (1) GT201600086A (ru)
HR (2) HRP20220920T1 (ru)
HU (2) HUE044960T2 (ru)
IL (1) IL245324B (ru)
LT (2) LT3068405T (ru)
MD (1) MD4596C1 (ru)
MX (2) MX2016006066A (ru)
MY (2) MY182986A (ru)
NZ (1) NZ719592A (ru)
PE (1) PE20160670A1 (ru)
PH (1) PH12016500867A1 (ru)
PL (2) PL3505173T3 (ru)
PT (2) PT3068405T (ru)
SG (1) SG11201603427XA (ru)
SI (2) SI3068405T1 (ru)
TR (1) TR201910961T4 (ru)
UA (1) UA119050C2 (ru)
WO (1) WO2015069939A1 (ru)
ZA (1) ZA201603123B (ru)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10023600B2 (en) 2009-09-21 2018-07-17 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1′-substituted carba-nucleoside analogs
SG186830A1 (en) 2010-07-22 2013-02-28 Gilead Sciences Inc Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections
UA119050C2 (uk) * 2013-11-11 2019-04-25 Ґілеад Саєнсиз, Інк. ПІРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНИ, ЯКІ ВИКОРИСТОВУЮТЬСЯ ДЛЯ ЛІКУВАННЯ РЕСПІРАТОРНО-СИНЦИТІАЛЬНИХ ВІРУСНИХ ІНФЕКЦІЙ
WO2015143712A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-01 Merck Sharp & Dohme Corp. 4'-substituted nucleoside reverse transcriptase inhibitors
TWI678369B (zh) * 2014-07-28 2019-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療呼吸道合胞病毒感染之噻吩並［３,２-ｄ］嘧啶、呋喃並［３,２-ｄ］嘧啶及吡咯並［３,２-ｄ］嘧啶化合物類
EP3197457B1 (en) 2014-09-26 2022-11-09 Riboscience LLC 4'-vinyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of respiratory syncytial virus rna replication
TWI698444B (zh) * 2014-10-29 2020-07-11 美商基利科學股份有限公司 製備核糖苷的方法
HRP20211456T1 (hr) 2014-12-26 2021-12-24 Emory University Protuvirusni derivati n4-hidroksicitidina
BR112018005048B8 (pt) 2015-09-16 2021-03-23 Gilead Sciences Inc uso de um composto antiviral ou sal do mesmo para o tratamento de uma infecção por coronaviridae
MX2018003212A (es) * 2015-09-23 2018-07-06 Merck Sharp & Dohme Inhibidores de transcriptasa inversa de nucleosido 4'-substituido y preparaciones de los mismos.
EP3426642A4 (en) 2016-03-09 2019-10-09 Janssen BioPharma, Inc. ACYCLIC ANTIVIRALS
AU2018235754B2 (en) 2017-03-14 2021-04-08 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating feline coronavirus infections
ES2938859T3 (es) * 2017-05-01 2023-04-17 Gilead Sciences Inc Una forma cristalina de (S)-2-etilbutilo 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato
CN111093627B (zh) 2017-07-11 2024-03-08 吉利德科学公司 用于治疗病毒感染的包含rna聚合酶抑制剂和环糊精的组合物
CA3075950A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
CN109748921B (zh) * 2017-11-03 2022-03-22 中国科学院上海药物研究所 N-叔丁氧羰基保护的杂环类化合物、其制备方法及其用于制备c-核苷类似物的方法
KR102248165B1 (ko) 2017-12-07 2021-05-06 에모리 유니버시티 N4-하이드록시사이티딘 및 유도체 및 이와 관련된 항-바이러스 용도
US11040975B2 (en) 2017-12-08 2021-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Carbocyclic nucleoside reverse transcriptase inhibitors
CN108787177B (zh) * 2018-08-07 2024-03-15 中南大学 淤浆法制备黄原酸盐的方法及系统
WO2020232194A1 (en) * 2019-05-14 2020-11-19 The Regents Of The University Of Michigan Methods for glycosylation
CN118766947A (zh) 2020-01-27 2024-10-15 吉利德科学公司 用于治疗SARS CoV-2感染的方法
CN118598916A (zh) 2020-02-18 2024-09-06 吉利德科学公司 抗病毒化合物
TWI791193B (zh) * 2020-02-18 2023-02-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
TW202245800A (zh) * 2020-02-18 2022-12-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
TWI794742B (zh) 2020-02-18 2023-03-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
CN111187269A (zh) * 2020-02-27 2020-05-22 江苏阿尔法药业有限公司 一种瑞德西韦中间体的合成方法
CN113336758B (zh) * 2020-03-03 2022-08-19 北京桦冠医药科技有限公司 化合物7-碘吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-4-胺的一种新合成方法
CN111233870A (zh) * 2020-03-11 2020-06-05 中国科学技术大学 用于快速制备瑞德西韦药物中间体的方法
WO2021183750A2 (en) 2020-03-12 2021-09-16 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
KR20220164784A (ko) 2020-04-06 2022-12-13 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 1'-시아노 치환된 카르바뉴클레오시드 유사체의 흡입 제형
CN112778310A (zh) 2020-04-20 2021-05-11 中国科学院上海药物研究所 核苷类似物或含有核苷类似物的组合制剂在抗病毒中的应用
CN113527303B (zh) * 2020-04-21 2022-06-10 浙江工业大学 一种瑞德西韦母核中间体的制备工艺
CN111440176B (zh) * 2020-04-28 2022-04-26 江苏大学 金属配合物促进的瑞德西韦中间体的合成方法
CN115666570A (zh) 2020-05-29 2023-01-31 吉利德科学公司 瑞德西韦治疗方法
CN111620903A (zh) * 2020-06-17 2020-09-04 安徽贝克联合制药有限公司 C-核苷类似物以及用于合成瑞德西韦合成的含腈c-核苷类化合物的制备方法及其应用
EP4172160A2 (en) 2020-06-24 2023-05-03 Gilead Sciences, Inc. 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
CN111732618A (zh) * 2020-07-03 2020-10-02 镇江巨杰新材料技术研发中心(有限合伙) 瑞德西韦关键片段的合成方法
CN111793101B (zh) * 2020-07-17 2022-09-30 四川大学 C-核苷化合物的合成方法
CA3185450A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Istvan Borza Remdesivir intermediates
CA3190702A1 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Elaine Bunyan Compounds and methods for treatment of viral infections
CN113880846B (zh) * 2020-12-31 2022-10-14 山东诚汇双达药业有限公司 一种7-碘吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺的制备方法
US11697666B2 (en) 2021-04-16 2023-07-11 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing carbanucleosides using amides
CA3228162A1 (en) 2021-08-18 2023-02-23 Gilead Sciences, Inc. Phospholipid compounds and methods of making and using the same
IL310854A (en) 2021-08-20 2024-04-01 Shionogi & Co Nucleoside compounds and their drug derivatives possessing viral growth inhibitory activity
TW202400185A (zh) 2022-03-02 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染的化合物及方法
WO2023168254A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds and methods of making and using the same
IL314961A (en) 2022-03-03 2024-10-01 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds and methods for their production and use
WO2024173458A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Gilead Sciences, Inc. Phospholipid compounds and methods of making and using the same

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032920A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset Limited Modified nucleosides for treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
WO2012012776A1 (en) * 2010-07-22 2012-01-26 Gilead Sciences, Inc. Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections
WO2012037038A1 (en) * 2010-09-13 2012-03-22 Gilead Sciences, Inc. 2' -fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
WO2013138236A1 (en) * 2012-03-13 2013-09-19 Gilead Sciences , Inc. 2'- substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3361306A (en) 1966-03-31 1968-01-02 Merck & Co Inc Aerosol unit dispensing uniform amounts of a medically active ingredient
US3565070A (en) 1969-02-28 1971-02-23 Riker Laboratories Inc Inhalation actuable aerosol dispenser
FR2224175B1 (ru) 1973-04-04 1978-04-14 Isf Spa
US4069819A (en) 1973-04-13 1978-01-24 Societa Farmaceutici S.P.A. Inhalation device
IT1017153B (it) 1974-07-15 1977-07-20 Isf Spa Apparecchio per inalazioni
SE438261B (sv) 1981-07-08 1985-04-15 Draco Ab Anvendning i dosinhalator av ett perforerat membran
US4805811A (en) 1985-03-29 1989-02-21 Aktiebolaget Draco Dosage device
SE448277B (sv) 1985-04-12 1987-02-09 Draco Ab Indikeringsanordning vid en doseringsanordning for lekemedel
IT1228459B (it) 1989-02-23 1991-06-19 Phidea S R L Inalatore con svuotamento regolare e completo della capsula.
US4955371A (en) 1989-05-08 1990-09-11 Transtech Scientific, Inc. Disposable inhalation activated, aerosol device for pulmonary medicine
JP3230056B2 (ja) 1991-07-02 2001-11-19 インヘイル・インコーポレーテッド 薬剤のエーロゾル化服用量を形成する装置
US5261538A (en) 1992-04-21 1993-11-16 Glaxo Inc. Aerosol testing method
US5785049A (en) 1994-09-21 1998-07-28 Inhale Therapeutic Systems Method and apparatus for dispersion of dry powder medicaments
US5388572A (en) 1993-10-26 1995-02-14 Tenax Corporation (A Connecticut Corp.) Dry powder medicament inhalator having an inhalation-activated piston to aerosolize dose and deliver same
US5522385A (en) 1994-09-27 1996-06-04 Aradigm Corporation Dynamic particle size control for aerosolized drug delivery
US5622163A (en) 1994-11-29 1997-04-22 Iep Group, Inc. Counter for fluid dispensers
US5544647A (en) 1994-11-29 1996-08-13 Iep Group, Inc. Metered dose inhalator
US6116234A (en) 1999-02-01 2000-09-12 Iep Pharmaceutical Devices Inc. Metered dose inhaler agitator
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
WO2003026589A2 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating hepatitis c virus using 4'-modified nucleosides
WO2005020885A2 (en) 2003-05-21 2005-03-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of severe acute respiratory syndrome (sars)
AR046959A1 (es) * 2003-12-18 2006-01-04 Tibotec Pharm Ltd Morfolinilo que contiene bencimidazoles como inhibidores de la replicacion del virus sincitial respiratorio
NZ598927A (en) 2007-01-12 2013-09-27 Biocryst Pharm Inc Antiviral nucleoside analogs
ES2393038T3 (es) 2007-05-10 2012-12-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Compuestos de tretrahidrofuro[3,4-D]dioxolano para su utlilización en el tratamiento de las infecciones víricas y del cáncer
ATE515861T1 (de) 2007-07-25 2011-07-15 Nokia Siemens Networks Oy Verfahren zur adressierung von ethernetströmen mit strukturierter gpon-gem-port-id
SI2937350T1 (en) * 2008-04-23 2018-05-31 Gilead Sciences, Inc. 1'-SUBSTITUTED CARBON-NUCLEOUS ANALOGS FOR ANTIVIRUSAL TREATMENT
EP2313102A2 (en) 2008-07-03 2011-04-27 Biota Scientific Management Bycyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
RS55699B1 (sr) 2009-09-21 2017-07-31 Gilead Sciences 2' -fluoro supstituisani karba-nukleozidni analozi zaantiviralno lečenje
US8455451B2 (en) 2009-09-21 2013-06-04 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US10023600B2 (en) * 2009-09-21 2018-07-17 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1′-substituted carba-nucleoside analogs
TW201201815A (en) 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
EP2805960A1 (en) 2010-07-19 2014-11-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for the preparation of diasteromerically pure phosphoramidate prodrugs
CA2807496C (en) * 2010-09-20 2019-01-22 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
NZ613370A (en) 2010-12-20 2015-05-29 Gilead Sciences Inc Combinations for treating hcv
WO2012142075A1 (en) * 2011-04-13 2012-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
US20130143835A1 (en) * 2011-12-05 2013-06-06 Medivir Ab HCV Polymerase Inhibitors
US9073960B2 (en) * 2011-12-22 2015-07-07 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
MX353422B (es) 2012-10-08 2018-01-12 Idenix Pharmaceuticals Llc Análogos de 2'-cloronucleósido para infección por vhc.
AR094537A1 (es) 2013-11-07 2015-08-12 Bristol Myers Squibb Co COMPUESTOS DE PIRIDILO SUSTITUIDOS CON ALQUILAMIDA ÚTILES COMO MODULADORES DE LAS RESPUESTAS DE IL-12, IL-23 Y/O IFNa
UA119050C2 (uk) * 2013-11-11 2019-04-25 Ґілеад Саєнсиз, Інк. ПІРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНИ, ЯКІ ВИКОРИСТОВУЮТЬСЯ ДЛЯ ЛІКУВАННЯ РЕСПІРАТОРНО-СИНЦИТІАЛЬНИХ ВІРУСНИХ ІНФЕКЦІЙ

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032920A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset Limited Modified nucleosides for treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
WO2012012776A1 (en) * 2010-07-22 2012-01-26 Gilead Sciences, Inc. Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections
WO2012037038A1 (en) * 2010-09-13 2012-03-22 Gilead Sciences, Inc. 2' -fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
WO2013138236A1 (en) * 2012-03-13 2013-09-19 Gilead Sciences , Inc. 2'- substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment

Also Published As

Publication number Publication date
EP3505173A1 (en) 2019-07-03
HUE059683T2 (hu) 2022-12-28
JP6393380B2 (ja) 2018-09-19
AU2023202506A1 (en) 2023-05-11
CN114085243A (zh) 2022-02-25
CA2928674C (en) 2018-10-02
AU2019204381A1 (en) 2019-07-11
HRP20220920T1 (hr) 2022-10-28
MX2020010628A (es) 2020-10-22
JP7247155B2 (ja) 2023-03-28
US9388208B2 (en) 2016-07-12
AU2021201554A1 (en) 2021-04-01
EA039734B1 (ru) 2022-03-04
IL245324A0 (en) 2016-06-30
AP2016009186A0 (en) 2016-04-30
EP4122932A1 (en) 2023-01-25
TR201910961T4 (tr) 2019-08-21
DK3068405T3 (da) 2019-07-29
KR20180059958A (ko) 2018-06-05
CN105899216A (zh) 2016-08-24
GT201600086A (es) 2018-01-17
KR20200057103A (ko) 2020-05-25
PE20160670A1 (es) 2016-07-10
EA201690978A1 (ru) 2016-09-30
JP2018070658A (ja) 2018-05-10
JP2021046413A (ja) 2021-03-25
JP2018021051A (ja) 2018-02-08
MY197933A (en) 2023-07-25
CA2928674A1 (en) 2015-05-14
KR102243724B1 (ko) 2021-04-23
CN110003215B (zh) 2021-12-17
CU20160065A7 (es) 2016-09-30
EP3068405B1 (en) 2019-05-01
KR101864973B1 (ko) 2018-06-05
US20190055253A1 (en) 2019-02-21
KR20210046833A (ko) 2021-04-28
CY1121948T1 (el) 2020-10-14
AU2017232039A1 (en) 2017-10-12
BR112016010261B1 (pt) 2022-02-08
JP2020055855A (ja) 2020-04-09
NZ719592A (en) 2017-12-22
CL2016001120A1 (es) 2017-05-05
US10377761B2 (en) 2019-08-13
IL245324B (en) 2018-08-30
UA119050C2 (uk) 2019-04-25
LT3068405T (lt) 2019-08-12
KR102355881B1 (ko) 2022-01-25
US20150133395A1 (en) 2015-05-14
AU2019204381B2 (en) 2021-04-01
JP6234571B2 (ja) 2017-11-22
SI3068405T1 (sl) 2019-08-30
CN114085243B (zh) 2024-04-26
AU2014346665A1 (en) 2016-05-19
SI3505173T1 (sl) 2022-09-30
US9701682B2 (en) 2017-07-11
CN105899216B (zh) 2019-03-05
JP2024041986A (ja) 2024-03-27
US10059716B2 (en) 2018-08-28
AU2017232039B2 (en) 2019-03-28
US20170008897A1 (en) 2017-01-12
HRP20191303T1 (hr) 2019-10-18
PL3505173T3 (pl) 2022-10-17
ES2743619T3 (es) 2020-02-20
PH12016500867A1 (en) 2016-06-20
LT3505173T (lt) 2022-10-10
JP7054394B2 (ja) 2022-04-13
DOP2016000107A (es) 2016-06-15
PL3068405T3 (pl) 2019-10-31
CN110003215A (zh) 2019-07-12
EP3505173B1 (en) 2022-07-06
PT3068405T (pt) 2019-08-05
EP3068405A1 (en) 2016-09-21
BR112016010261A2 (ru) 2017-08-08
ZA201603123B (en) 2019-08-28
MD4596B1 (ru) 2018-10-31
MY182986A (en) 2021-02-05
AU2017232039C1 (en) 2019-07-25
JP2022088661A (ja) 2022-06-14
HUE044960T2 (hu) 2019-12-30
MD20160063A2 (ru) 2016-11-30
MX2016006066A (es) 2016-08-12
US20180016280A1 (en) 2018-01-18
MD4596C1 (ru) 2019-05-31
PT3505173T (pt) 2022-11-18
ES2926155T3 (es) 2022-10-24
EA201792639A1 (ru) 2018-09-28
SG11201603427XA (en) 2016-05-30
JP2017502925A (ja) 2017-01-26
DK3505173T3 (da) 2022-08-22
KR102113705B1 (ko) 2020-05-21
CR20160220A (es) 2016-07-22
AU2021201554B2 (en) 2023-02-02
WO2015069939A1 (en) 2015-05-14
KR20160074011A (ko) 2016-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029712B1 (ru) ПИРРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
EA032490B1 (ru) ТИЕНО[3,2-d]ПИРИМИДИНЫ, ПОДХОДЯЩИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫМ ВИРУСОМ
EA045066B1 (ru) ПИРРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Legal Events

Date Code Title Description
TK4A Corrections in published eurasian patents