BR112013030701A2 - composição de estévia - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÃO DE ESTÉVIA Composições de estévia são preparadas a partir de glicosídeos de esteviol de Stevia rehaudiana Bertoni. As composições são capazes de fornecer um perfil de sabor superior e podem ser usadas como intensificadores de doçura, intensificadores de sabor e como adoçantes em alimentos, bebidas, cosméticos e produtos farmacêuticos.

Description

“COMPOSIÇÃO DE ESTÉVIA”

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo Da Invenção A invenção refere-se a um processo para produzir um ingrediente alimentício alta- mente purificado a partir do extrato de planta Stevia rebaudiana Bertoni e seu uso em vários produtos alimentícios e bebidas. Descrição da Técnica Relacionada Alternativas de açúcar estão recebendo uma crescente atenção devido à consciên- cia de muitas doenças associadas ao consumo de alimentos e bebidas com alto teor de açúcar. Entretanto, muitos adoçantes artificiais, tais como dulcina, ciclamato de sódio e sa- carina, foram proibidos ou restringidos em alguns países devido a preocupações acerca de sua segurança. Como resultado, adoçantes não calóricos de origem natural estão ficando crescentemente populares. A erva doce Stevia rebaudiana Bertoni produz vários glicosídeos diterpênicos que caracterizam doçura de alta intensidade e propriedades sensoriais superio- res àquelas de muitos outros adoçantes de alta potência. Os glicosídeos doces supracitados têm uma aglicona comum, esteviol, e diferem pelo número e tipo de resíduos de carboidrato nas posições C13 e C19. As folhas de Stevia podem acumular até 10-20% (com base no peso seco) de glicosídeos de esteviol. Os glico- sídeos principais encontrados em folhas de Stevia são rebaudiosídeo A (2-10%), esteviosí- deo (2-10%), e rebaudiosídeo C (1-2%). Outros glicosídeos, tais como rebaudiosídeo B, D, E e F, esteviolbiosídeo e rubusosídeo são encontrados em níveis muitos mais baixos (apro- ximadamente 0-0,2%). Dois glicosídeos principais - esteviosídeo e rebaudiosídeo A (reb A) - foram estuda- dos extensivamente e caracterizados em termos de sua adequação como adoçantes comer- ciais de alta intensidade. Estudos de estabilidade com bebidas carbonatadas confirmaram sua estabilidade ao calor e pH (Chang S.S., Cook, J.M. (1983) Stability studies of stevioside and rebaudioside A in carbonated beverges. J. Agric. Food Chem. 31: 409-412). Glicosídeos de esteviol diferem-se dos outros não só pelas estruturas moleculares, mas também por suas propriedades de sabor. Normalmente, o esteviosídeo é considerado como sendo de 110-270 vezes mais doce do que a sacarose, rebaudiosídeo A entre 150 e 320 vezes mais doce do que a sacarose e rebaudiosídeo C entre 40-60 vezes mais doce do que a sacarose. Dulcosídeo A é 30 vezes mais doce do que a sacarose. Rebaudiosídeo A tem o gosto residual menos adstringente, menos amargo e menos persistente, desse modo, possui os atributos sensoriais mais favoráveis dos principais glicosídeos de esteviol (Tanaka O. (1987) Improvement of taste of natural sweetners. Pure Appl. Chem. 69:675-683; Phillips K.C. (1989) Stevia: steps in developing a new sweetener. In: Grenby T.H. ed. Developments in sweeteners, vol. 3. Elsevier Applied Science, London. 1-43). A estrutura química do re-

baudiosídeo A é mostrada na Fig. 1. Métodos para a extração e purificação de glicosídeos doces da planta Stevia re- baudiana usando água ou solventes orgânicos são descritos em, por exemplo, Patente U.S.

Nº 4.361.697; 4.082.858; 4.892.938; 5.972.120; 5.962.678; 7.838.044 e 7.862.845. Entretanto, até mesmo em um estado altamente purificado, os glicosídeos de este- viol ainda apresentam atributos de sabor indesejáveis, tais como amargor, gosto residual doce, sabor de alcaçuz, etc.

Um dos principais obstáculos da comercialização bem sucedida de adoçantes de estévia são esses atributos de sabor indesejável.

Foi mostrado que esses tons de sabor ficam mais proeminentes quando a concentração de glicosídeos de esteviol aumenta (Prakash I., DuBois G.E., Clos J.F., Wilkens K.L., Fosdick L.E. (2008) Development of rebiana, a natural, non-caloric sweetener.

Food Chem.

Toxicol., 46, S75-S82). Rebaudiosídeo B (CAS No: 58543-17-2), ou reb B, da mesma forma conhecido co- mo esteviosídeo A4 (Kennelly E.J. (2002) Constituents o f Stevia rebaudiana In Stevia: The genus Stevia, Kinghorn A.D. (Ed), Taylor & Francis, London, p.71), é um dos glicosídeos doces encontrados em Stevia rebaudiana.

Avaliações sensoriais mostram que reb B é apro- ximadamente 300-350 vezes mais doce que a sacarose, enquanto que para reb A este valor foi aproximadamente de 350-450 vezes (Crammer, B. e Ikan, R. (1986) Sweet glycosides from the Stevia plant.

Chemistry in Britain 22, 915-916, e 918). A estrutura química do re- baudiosídeo B é mostrada na Fig. 2. Acredita-se que reb B forma-se a partir da hidrólise parcial de rebaudiosídeo A du- rante o processo de extração (Kobayashi, M., Horikawa, S., Degrandi, I.H., Ueno, J. e Mitsu- hashi, H. (1977) Dulcosides A and B, new diterpene glycosides from Stevia rebaudiana.

Phytochemistry 16, 1405 - 1408). Entretanto, outra pesquisa mostrou que reb B ocorre natu- ralmente nas folhas de Stevia rebaudiana e é atualmente um dos nove glicosídeos de este- viol reconhecidos por FAO/JECFA (United Nations' Food and Agriculture Organization/Joint Expert Committee on Food Additives) in calculating total steviol glycosides' content in com- mercial steviol glycoside preparations (FAO JECFA (2010) Steviol Glycosides, Compendium of Food Additive Specifications, FAO JECFA Monographs 10, 17-21). Apenas alguns métodos são descritos na literatura para preparar reb B.

Kohda et al., (1976) preparou reb B por hidrólise de reb A com hesperidinase.

Reb B foi da mesma forma preparado por saponificação alcalina de reb A.

A referida saponifica- ção foi conduzida em 10% de hidróxido de potássio-etanol.

A solução foi acidificada com ácido acético e extraída com n-butanol.

A camada de butanol foi lavada com água e concen- trada em baixa temperatura à vácuo.

O resíduo foi cristalizado a partir de metanol para pro- duzir reb B. (Kohda, H., Kasai, R., Yamasaki, K., Murakami, K. e Tanaka, O. (1976) New sweet diterpene glucosides from Stevia rebaudiana.

Phytochemistry 15, 981- 983). Os pro- cessos descritos podem ser adequados para preparação em escala de laboratório de reb B,

porém, não são adequados para qualquer preparação de reb B em grande escala ou em escala comercial. Ahmed et al. usou hidrólise alcalina moderada de reb A para preparar reb B. De acordo com o procedimento descrito, reb A foi hidrolisado a reb B refluxando-se com KOH aquoso 10% a 100°C durante 1 hora. Após a neutralização com ácido acético glacial, a substância precipitada foi recristalizada duas vezes a partir de metanol (Ahmed M.S., Do- bberstein R.H., e Farnsworth N.R. (1980) Stevia rebaudiana: I. Use of p-bromophenacyl bromide to enhance ultraviolet detection of water-soluble organic acids (steviolbioside and rebaudioside B) in high-performance liquid chromatographic analysis, J. Chromatogr., 192, 387-393). O uso de metanol como meio de recristalização como descrito na literatura requere- rá sua remoção subsequente do produto. Nota-se que o manuseio das substâncias tóxicas, tal como metanol, requer instalações industriais especializadas e, quando aplicadas ao pro- cesso alimentício, medidas de segurança alimentar sofisticadas. É da mesma forma notado que nenhum trabalho significante foi conduzido para de- terminar o potencial de reb B como um adoçante ou ingrediente alimentício. Além disso, reb B é visto frequentemente como artefato de processo e impureza desnecessária em prepara- ções comerciais de glicosídeos de esteviol. Nenhuma avaliação significante da influência de reb B no perfil de sabor total das preparações de glicosídeo de esteviol foi conduzida. A solubilidade em água de reb B é relatada como sendo de cerca de 0,1% (Kin- ghorn D.C. (2002) Constituents of Stevia rebaudiana In Stevia: The genus Stevia, Kinghorn A.D. (Ed), Taylor & Francis, London, p.8). Em muitos processos alimentícios onde ingredien- tes altamente concentrados são usados, uma forma altamente solúvel de reb B será neces- sária. Considerando os fatos mencionados acima, há uma necessidade em avaliar reb B como um adoçante e ingrediente alimentício e desenvolver um processo simples e eficiente para preparações de reb B de grau alimentício adequadas para alimentos e outras aplica- ções. É também notado que, tendo um grupo carboxila na molécula, torna-se possível pa- ra reb B existir nas formas de vários sais de carboxilato. Antes desta invenção, não se acre- ditava que uma forma de sal de carboxilato diferente de reb B tinha sido preparada ou avali- ada quanto ao seu impacto sobre os perfis de sabor. Dentro da descrição desta invenção mostraremos que, quando aplicados de manei- ra específica, sais de carboxilato de reb B podem impactar o perfil de sabor e oferecer van- tagens significantes para o uso de adoçantes de estévia em várias aplicações.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção tem como objetivo superar as desvantagens dos adoçantes de

Stevia existentes. A invenção descreve um processo para produzir um ingrediente alimentí- cio de alta pureza a partir do extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni e uso do mesmo em vários produtos alimentícios e bebidas como um modificador de doçura e sabor. A invenção, em parte, pertence a um ingrediente que compreende glicosídeos de esteviol da planta Stevia rebaudiana Bertoni. Os glicosídeos de esteviol são selecionados a partir do grupo que consiste em esteviosídeo, rebaudiosídeo A (FIG. 1), rebaudiosídeo B (FIG. 2), rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, dulcosídeo A, esteviolbiosídeo, rubusosídeo, bem como outros glicosídeos de esteviol encontrados na planta Stevia rebaudiana Bertoni e misturas dos mesmos. A invenção, em parte, pertence a um processo para produzir um ingrediente que contém rebaudiosídeo B, e esteviosídeo, rebaudiosídeo A, rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, dulcosídeo A, esteviolbiosídeo, rubusosídeo, bem co- mo outros glicosídeos de esteviol encontrados na planta Stevia rebaudiana Bertoni e mistu- ras dos mesmos. Na invenção, rebaudiosídeo A comercializado por PureCircle Sdn. Bhd. (Malaysia) contendo rebaudiosídeo A (cerca de 95-100%), esteviosídeo (cerca de 0-1%), rebaudiosídeo C (cerca de 0-1%), rebaudiosídeo F (cerca de 0-1%), rebaudiosídeo B (cerca de 0,1-0,8%), rebaudiosídeo D (cerca de 0-1%) e outros glicosídeos que chegam ao teor de glicosídeos de esteviol total de pelo menos 95%, pode ser usado como um material de partida. Alternativa- mente, extratos de estévia com relações diferentes de glicosídeos de esteviol podem ser usados como materiais de partida. Em uma modalidade, o material de partida é submetido à conversão parcial ou total em reb B usando um processo de conversão alcalina. O reb B obtido é transformado em seguida em uma forma de sal de carboxilato que interage com a respectiva base. Estas for- mas de sal são utilizadas de maneira similar como reb B "original" com um grupo carboxila. O reb B obtido ou suas formas de sal de carboxilato e misturas dos mesmos podem ser submetidos a tratamento térmico adicional para aumentar a solubilidade. Os produtos obtidos foram aplicados em vários alimentos e bebidas como adoçan- tes, intensificadores de adoçante e modificadores de sabor, incluindo refrigerantes, sorvete, biscoitos, pão, sucos de fruta, produtos de leite, mercadorias assadas e produtos de confei- taria. Deve ser entendido que tanto a descrição geral precedente quanto a descrição de- talhada seguinte são exemplares e explicativas e pretendem fornecer outra explicação da invenção conforme reivindicada.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Os desenhos acompanhantes são incluídos para fornecer um entendimento adicio- nal da invenção. Os desenhos ilustram modalidades da invenção e, juntamente com a des-

crição, servem para explicar os princípios das modalidades da invenção. A FIG. 1 mostra a estrutura química do rebaudiosídeo A. A FIG. 2 mostra a estrutura química do rebaudiosídeo B. A FIG. 3 mostra uma cromatografia de HPLC de uma composição de estévia que compreende rebaudiosídeo A e rebaudiosídeo B.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Vantagens da presente invenção ficarão mais evidentes a partir da descrição deta- lhada produzida em seguida. Entretanto, deve ser entendido que a descrição detalhada e exemplos específicos, enquanto indicando as modalidades preferidas da invenção, são da- dos apenas por meio de ilustração, visto que várias alterações e modificações dentro do espírito e escopo da invenção ficarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir desta descrição detalhada. Rebaudiosídeo A comercializado por PureCircle Sdn. Bhd. (Malaysia) contendo re- baudiosídeo A (cerca de 95-100%), esteviosídeo (cerca de 0-1%), rebaudiosídeo C (cerca de 0-1%), rebaudiosídeo D (cerca de 0-1%), rebaudiosídeo F (cerca de 0-1%), rebaudiosí- deo B (cerca de 0,1-0,8%) e outros glicosídeos que chegam ao teor de glicosídeos de este- viol total de 95%, podem ser usados como um material de partida. Alternativamente, extra- tos de estévia com relações diferentes de glicosídeos de esteviol podem ser usados como materiais de partida. A análise de HPLC das matérias-primas e produtos pode ser realizada em uma cromatógrafo líquido Agilent Technologies 1200 Series (USA), equipado com Phenomenex Prodigy ODS3, coluna de 5 µm (4,6X250mm) a 40°C. A fase móvel era composta de 32:68 de acetonitrila e 10 mmol/L de tampão de fosfato de sódio (cerca pH 2,6) em 1 mL/min. Um detector de arranjo de diodo em 210 nm pode ser usado como o detector. Um exemplo de cromatografia de HPLC assim obtida é mostrado na FIG. 3. Conforme aqui usado, a menos que também especificado, "reb B" e “composição de reb B" serão usadas alternadamente para referir-se ao rebaudiosídeo B purificado ou rebaudiosídeo B em combinação com qualquer outra entidade química. Preparação de Reb B

1. Conversão Alcalina Uma maneira de obter reb B partindo de reb A é descrita como segue. Reb A é dis- perso em solução alcalina aquosa. A concentração de reb A é de cerca de 0-50% (p/v) pre- ferivelmente cerca de 10-25%. Os agentes alcalinos preferidos incluem hidróxido de potás- sio e hidróxido de sódio, entretanto, outros agentes capazes de aumentar o pH dos meios acima para cerca de pH 7 podem ser usados igualmente ou alternativamente. A concentra- ção de agentes alcalinos é de cerca de 0,05-2,0M, preferivelmente cerca de 0,1-1,0M. A mistura é incubada a cerca de 10-150°C, preferivelmente cerca de 30-100°C, durante um período de cerca de 0,5-48 horas, preferivelmente cerca de 1-24 horas. Como resultado, reb A é hidrolisado em reb B. O rendimento molar da conversão de reb B é de cerca de 5-100%, preferivelmente cerca de 10-90%. Depois da reação, o agente alcalino é neutralizado por um ácido, preferivelmente por ácido sulfúrico ou ácido orto-fosfórico, até um pH de cerca de 3,0-5,0 ser alcançado, preferivelmente até um pH de cerca de 3,0-4,0 ser alcançado. Na neutralização, um precipi- tado é formado. O precipitado é separado por qualquer método conhecido na técnica, tal como filtração ou centrifugação, e lavado com água até que a água alcance um pH de cerca de 4,0-5,0. O material cristalino obtido é seco sob vácuo a cerca de 60-105°C para produzir uma mistura de reb A e reb B que tem uma relação de cerca de 5%:95% a cerca de 95%:5% (p/p), preferivelmente de cerca de 50%:50% a cerca de 90%:10% (p/p).

2. Purificação Pós-Conversão Opcional Para obter o reb B purificado, em uma modalidade, o precipitado separado descrito acima é suspenso em água e a mistura é submetida à agitação contínua durante cerca de 0,5-24 horas, preferivelmente cerca de 1-3 horas, a cerca de 50-100°C, preferivelmente cer- ca de 60-80°C. A relação de precipitado para água (p/v) é de cerca de 1:5 a cerca de 1:20, preferivelmente cerca de 1:10 a cerca de 1:15. Os cristais lavados são separados e secos sob vácuo a cerca de 60-105°C para produzir reb B com cerca de 99% de pureza.

3. Intensificação de Solubilidade Pós-Conversão Opcional O seguinte procedimento pode ser usado para aumentar a solubilidade em água de reb B ou qualquer composição de reb B. As composições obtidas geralmente têm uma solu- bilidade em água menor que cerca de 0,2% (p/v). Para aumentar a solubilidade destas com- posições, a composição de reb B é combinada com água em uma relação de cerca de 1:1 (p/p) e a mistura obtida é submetida a um tratamento térmico de gradiente que resulta em uma solução de alta estabilidade e alta concentração. O gradiente de cerca de 1°C por mi- nuto é usado para aquecer a mistura. A mistura é aquecida à temperatura de cerca de 110- 140°C, preferivelmente cerca de 118-125°C, e é mantida em temperatura máxima durante cerca de 0-120 min, preferivelmente cerca de 50-70 min. Depois do tratamento com calor, a solução é resfriada em temperatura ambiente em gradiente de cerca de 1°C por minuto. A solução é seca por pulverização por um spray drier de laboratório que opera em temperatu- ras de entrada de cerca de 175°C e de saída de cerca de 100°C. Uma forma amorfa da composição é obtida com solubilidade maior que 20% em água em temperatura ambiente. Preparação de Sal de Reb B Reb B obtido usando os processos descritos acima, ou qualquer outro processo, pode ser completamente ou parcialmente convertido em uma forma de sal de carboxilato. Reb B, ou uma composição contendo reb B, preferivelmente reb B com uma pureza maior que 90% (p/p), é disperso na água para preparar uma dispersão aquosa com 5-50% (p/v),

preferivelmente 5-15% do teor de sólidos.

A base em excesso é adicionada para alcançar um nível de pH de 6,5-14,0, preferivelmente 8,5-11,0. A mistura obtida é incubada durante 0,1-24 horas, preferivelmente 1-3 horas.

Em seguida, os sólidos suspensos são separados através de filtração e lavados com água até ser obtido pH neutro da água de lavagem.

Alter- nativamente, outras reações capazes de converter reb B em uma forma de sal de carboxila- to podem ser usadas.

Os cátions preferidos são K+ e Na+, e as respectivas bases - KOH e NaOH - são usadas.

Entretanto, outros sais de carboxilato de reb B podem ser preparados de uma maneira similar usando a base que corresponde ao sal de carboxilato desejado.

O sal de carboxilato de reb B obtido pode também ser purificado e sua solubilidade intensificada, conforme descrito acima.

Enquanto não é pretendido estar ligado por teoria, acredita-se que qualquer glicosí- deo de esteviol tendo um grupo carboxila pode ser convertido em sua forma de sal de car- boxilato para melhorar o perfil de sabor e/ou doçura da molécula.

Outro exemplo de um gli- cosídeo de esteviol contendo um grupo carboxila é esteviolbiosídeo.

Uso de Sal de Carboxilato de Reb B O sal de carboxilato de reb B descrito acima pode ser usado como um intensificador de doçura, um intensificador de sabor e/ou adoçante em vários produtos de bebida e alimen- tícios.

Exemplos não limitantes de produtos de bebida e alimentícios incluem refrigerantes carbonatados, bebidas prontas para beber, bebidas energéticas, bebidas isotônicas, bebidas de baixa caloria, bebidas de zero caloria, bebidas para esporte, chás, sucos de frutas e de vegetais, bebidas com suco, bebidas lácteas, bebidas de iogurte, bebidas alcoólicas, bebi- das em pó, produtos de padaria, bolinhos, biscoitos, misturas de cozimento, cereais, confei- tos, doces, balas de leite, chiclete, produtos de derivados de leite, leite flavorizado, iogurtes, iogurtes flavorizados, leite fermentado, molho de soja e outros produtos à base de soja, mo- lhos de salada, maionese, vinagre, sobremesas congeladas, produtos de carne, produtos de carne de peixe, alimentos engarrafados e enlatados, adoçantes de mesa, frutas e legumes.

Adicionalmente, as composições de sal de carboxilato de reb B podem ser usadas em preparações de fármacos ou farmacêuticas e cosméticas, incluindo, porém não limitadas a: pastas de dente, antissépticos bucais, xarope para tosse, pastilhas mastigáveis, pastilhas, preparações de vitamina e similares.

As composições podem ser usadas "no estado em que se encontram" ou em com- binação com outros adoçantes, sabores e ingredientes alimentícios.

Exemplos não limitantes de adoçantes incluem glicosídeos de esteviol, esteviosí- deo, rebaudiosídeo A, rebaudiosídeo B, rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, dulcosídeo A, esteviolbiosídeo, rubusosídeo, bem como outros glicosí- deos de esteviol encontrados na planta Stevia rebaudiana Bertoni e misturas dos mesmos, extrato de estévia, extrato de Luo Han Guo, mogrosídeos, xarope de milho com alto teor de frutose, xarope de milho, açúcar invertido, fruto-oligossacarídeos, inulina, inulo- oligossacarídeos, açúcar de acoplamento, malto-oligossacarídeos, maltodextinas, sólidos de xarope de milho, glicose, maltose, sacarose, lactose, aspartame, sacarina, sucralose, álco- ois de açúcar.

Exemplos não limitantes de sabores incluem sabores de limão, laranja, fruta, bana- na, uva, pera, abacaxi, amêndoa amarga, cola, canela, açúcar, algodão doce, baunilha.

Exemplos não limitantes de outros ingredientes alimentícios incluem sabores, aci- dulantes, ácidos orgânicos e aminoácidos, agentes corantes, agentes de volume, amidos modificados, gomas, texturizantes, conservantes, antioxidantes, emulsificantes, estabilizan- tes, espessantes, agentes de gelificação.

Os seguintes exemplos ilustram várias modalidades da invenção.

Será entendido que a invenção não está limitada aos materiais, proporções, condições e procedimentos mencionados nos exemplos, que são apenas ilustrativos.

EXEMPLO 1 Preparação de composição de estévia 100 g de rebaudiosídeo A produzido por PureCircle Sdn.

Bhd. (Malaysia) contendo 98,1% de rebaudiosídeo A, 0,3% de esteviosídeo, 0,2 % de rebaudiosídeo C, 0,2% de re- baudiosídeo F, 0,4% de rebaudiosídeo B e 0,6% de rebaudiosídeo D foram dispersos em 1000 mL de KOH aquoso (1M) e incubados a 50°C durante 2 horas.

A temperatura da mistu- ra foi diminuída para 20°C e o pH foi ajustado em pH 4,0 com ácido sulfúrico.

A solução foi mantida sob condições de agitação moderada durante 4 horas e um precipitado foi formado.

O precipitado foi filtrado e lavado no filtro com 2000 mL de água.

Os cristais lavados foram secos sob vácuo para produzir 86g do material contendo cerca de 84% de reb A e 16% de reb B.

A solubilidade em água (a 25°C) do material obtido foi de cerca de 0,2% (p/v). EXEMPLO 2 Preparação de composição de estévia 100 g de rebaudiosídeo A produzido por PureCircle Sdn.

Bhd. (Malaysia) contendo 98,1% de rebaudiosídeo A, 0,3% de esteviosídeo, 0,2 % de rebaudiosídeo C, 0,2% de re- baudiosídeo F, 0,4% de rebaudiosídeo B e 0,6% de rebaudiosídeo D foram dispersos em 1000 mL de KOH aquoso (1M) e incubados a 80°C durante 5 horas.

A temperatura da mistu- ra foi diminuída para 20°C e o pH foi ajustado a cerca de pH 4,0 com ácido sulfúrico.

A solu- ção foi mantida sob condições de agitação moderada durante 4 horas e um precipitado foi formado.

O precipitado foi filtrado e lavado no filtro com 2000 mL de água.

Os cristais lava- dos foram secos sob vácuo para produzir cerca de 75g de material contendo cerca de 9% de reb A e cerca de 91% de reb B.

A solubilidade em água (a 25°C) do material obtido foi de cerca de 0,1% (p/v). EXEMPLO 3 Preparação de composição de estévia 100 g de rebaudiosídeo A produzido por PureCircle Sdn.

Bhd. (Malaysia) contendo 98,1% de rebaudiosídeo A, 0,3% de esteviosídeo, 0,2 % de rebaudiosídeo C, 0,2% de re-

baudiosídeo F, 0,4% de rebaudiosídeo B e 0,6% de rebaudiosídeo D foram dispersos em 1000 mL de KOH aquoso (1M) e incubados a 80°C durante 7 horas.

A temperatura da mistu- ra foi diminuída para 20°C e o pH foi ajustado a cerca de pH 4,0 com ácido sulfúrico.

A solu- ção foi mantida sob condições de agitação moderada durante 3-4 horas e um precipitado foi formado.

O precipitado foi filtrado e lavado no filtro com 2000 mL de água.

Os cristais lava- dos foram secos sob vácuo para produzir cerca de 71g de material contendo cerca de 99,1% de reb B.

A solubilidade em água (a 25°C) do material obtido foi de cerca de 0,1% (p/v). EXEMPLO 4 Preparação de reb B 75g de material preparados de acordo com o EXEMPLO 2 foram suspensos em 1000 mL de água.

A temperatura da mistura foi aumentada para 70°C.

A suspensão foi mantida sob condições de agitação moderada durante 4 horas.

Os cristais foram filtrados e secos sob vácuo para produzir cerca de 65g de material contendo cerca de 99,0% de reb B.

A solubilidade em água (a 25°C) do material obtido foi de cerca de 0,1% (p/v). EXEMPLO 5 Preparação de sal de carboxilato de reb B 100 g de reb B preparados de acordo com o EXEMPLO 4 foram suspensos em 1000 mL de água.

A suspensão foi mantida sob condições de agitação moderada em tem- peratura ambiente durante 1 hora.

O pH da mistura foi ajustado em pH 11,0 com solução de KOH a 1M.

A mistura obtida foi agitada durante 3 horas.

Os cristais foram filtrados e lavados com água no filtro até que a água de lavagem alcançasse um pH neutro.

O material cristali- no obtido foi seco sob vácuo para produzir cerca de 95g do material.

A solubilidade em água (a 25°C) do material obtido foi de cerca de 0,1% (p/v). EXEMPLO 6 Preparação de composição de estévia solúvel 50 g do material preparado de acordo com o EXEMPLO 1 foram misturados com 50g de água e incubados em banho de óleo com termostato.

A temperatura foi aumentada a 1°C por minuto para 121°C.

A mistura foi mantida a 121 °C durante 1 hora e em seguida a temperatura foi diminuída à temperatura ambiente (25°C) a 1°C por minuto.

A solução foi seca usando o spray drier de laboratório YC-015 (Shanghai Pilotech Instrument & Equi- pment Co.

Ltd., China) operando em temperatura de entrada de 175°C e de saída de 100°C.

Cerca de 47g de um pó amorfo foram obtidos com cerca de 25% (p/v) de solubilidade em água (a 25°C). EXEMPLO 7 Preparação de composição de estévia solúvel 42 g de reb A produzido por PureCircle Sdn.

Bhd. (Malaysia) com pureza de 99,2% (base seca) e 8 g de reb B preparado de acordo com o EXEMPLO 4 foram misturados com 50g de água e incubados em banho de óleo com termostato.

A temperatura foi aumentada a 1 °C por minuto para 121 °C.

A mistura foi mantida a 121°C durante 1 hora e em seguida a temperatura foi diminuída à temperatura ambiente (25 °C) a 1°C por minuto.

A solução foi seca usando o spray drier de laboratório YC-015 (Shanghai Pilotech Instrument & Equi- pment Co.

Ltd., China) operando em temperatura de entrada de 175°C e de saída de 100°C.

Cerca de 48g de um pó amorfo foram obtidos com cerca de 1,5% (p/v) de solubilidade em água (a 25°C). EXEMPLO 8 Preparação de composição de estévia solúvel 42 g de reb A produzido por PureCircle Sdn.

Bhd. (Malaysia) com pureza de 99,2% (base seca) e 8 g de sal de potássio de reb B preparado de acordo com o EXEMPLO 5 fo- ram misturados com 50g de água e incubados em banho de óleo com termostato.

A tempe- ratura foi aumentada a 1°C por minuto para 121°C.

A mistura foi mantida a 121 °C durante 1 hora e em seguida a temperatura foi diminuída à temperatura ambiente (25°C) a 1°C por minuto.

A solução foi seca usando o spray drier de laboratório YC-015 (Shanghai Pilotech Instrument & Equipment Co.

Ltd., China) operando em temperatura de entrada de 175°C e de saída de 100°C.

Cerca de 49g de um pó amorfo foram obtidos com cerca de 2,5% (p/v) de solubilidade em água (a 25°C). EXEMPLO 9 Bebida de suco de laranja de baixa caloria Concentrado de laranja (35%), ácido cítrico (0,35%), ácido ascórbico (0,05%), cor vermelho alaranjado (0,01%), sabor laranja (0,20%) e 0,05% de composição de estévia, fo- ram misturados e dissolvidos completamente em água (até 100%) e pasteurizados.

A com- posição de estévia foi selecionada de um extrato de estévia comercial (contendo 26% de esteviosídeo, 55% de rebaudiosídeo A e 16% de outros glicosídeos), um rebaudiosídeo A comercial (contendo 98,2% de reb A) ou material obtido de acordo com o EXEMPLO 7 e EXEMPLO 8. As avaliações sensoriais das amostras são resumidas na Tabela 1. Os dados mos- tram que os melhores resultados podem ser obtidos usando a composição obtida de acordo com o EXEMPLO 8. Particularmente, as bebidas preparadas com a referida composição exibiram uma sensação bucal e perfil de sabor perfeito e completo.

Tabela 1 Avaliação das amostras da bebida de suco de laranja Amostra Comentários Sabor Gosto residual Paladar Extrato de Estévia Notas de alcaçuz, doce Amargor e gosto resi- Não aceitável dual Reb A Notas de alcaçuz leves, Amargor e gosto resi- Não aceitável doce dual leves EXEMPLO 7 Doçura de alta qualidade, Limpo, quase nenhum Completo sabor agradável quase si- amargor e gosto resi- milar à sacarose, sabor dual leve equilibrado e completo deli- cado EXEMPLO 8 Doçura de alta qualidade, Limpo, nenhum amar- Completo sabor agradável similar à gor e nenhum gosto sacarose, sabor equilibrado residual e completo

O mesmo método pode ser usado para preparar sucos e bebidas de suco a partir de outras frutas, tais como maçãs, limões, damascos, cerejas, abacaxis, mangas, etc.

EXEMPLO 10 Bebida carbonatada de zero caloria Bebidas carbonatadas feitas de acordo com as fórmulas apresentadas na Tabela 2 foram preparadas.

Tabela 2 Fórmulas de Bebida Carbonatada Ingredientes Quantidade, % Extrato de Es- Reb A Exemplo 7 Exemplo 8 tévia Sabor de cola 0,340 0,340 0,340 0,340 Ácido orto- 0,100 0,100 0,100 0,100 fosfórico Citrato de sódio 0,310 0,310 0,310 0,310 Benzoato de 0,018 0,018 0,018 0,018 sódio Ácido cítrico 0,018 0,018 0,018 0,018 Composição de 0,050 0,050 0,050 0,050 estévia Água carbona- Para 100 Para 100 Para 100 Para 100 tada

As propriedades sensoriais foram avaliadas por 20 integrantes.

Os resultados são resumidos na Tabela 3. Tabela 3 Avaliação de amostras de bebida carbonatada de zero caloria Atributo do sabor Número de integrantes detectados no atributo Extrato de Esté- Reb A EXEMPLO 7 EXEMPLO 8 via Sabor amargo 15 10 2 0

Sabor adstrin- 16 9 1 0 gente Sabor residual 14 12 2 0 Comentários Qualidade do Sabor residual Sabor residual Limpo (17 de 20) Limpo (20 de 20) sabor doce amargo (15 de amargo (10 de 20) 20) Avaliação total Satisfatório (1 de Satisfatório (5 Satisfatório (16 Satisfatório (20 20) de 20) de 20) de 20)

Os resultados acima mostram que as bebidas preparadas usando a composição obtida de acordo com o EXEMPLO 8 possuem as melhores características organolépticas.

EXEMPLO 11 Biscoitos diet Farinha (50,0%), margarina (30,0%), frutose (10,0%), maltitol (8,0%), leite integral (1,0%), sal (0,2%), fermento (0,15%), baunilha (0,1%) e composições de estévia diferentes (0,03%) foram bem misturados em máquina de mistura de massa.

A massa obtida foi mol- dada e assada em forno a 200°C durante 15 minutos.

As composições de estévia foram se- lecionadas a partir de um extrato de estévia comercial (contendo 26% de esteviosídeo, 55% de rebaudiosídeo A e 16% de outros glicosídeos), um rebaudiosídeo A comercial (contendo 98,2% de reb A) e material obtido de acordo com o EXEMPLO 7 e EXEMPLO 8. As propriedades sensoriais foram avaliadas por 20 integrantes.

Os melhores resul- tados foram obtidos em amostras contendo a composição obtida de acordo com o EXEMPLO 8. Os integrantes notaram uma sensação bucal e perfil de sabor perfeito e com- pleto.

EXEMPLO 12 Iogurte Composições de estévia diferentes (0,03%) e sacarose (4%) foram dissolvidas em leite com baixo teor de gordura.

As composições de estévia foram selecionadas a partir de um extrato de estévia comercial (contendo 26% de esteviosídeo, 55% de rebaudiosídeo A e 16% de outros glicosídeos), um rebaudiosídeo comercial A (contendo 98,2% de reb A) e o material obtido de acordo com o EXEMPLO 7 e EXEMPLO 8. Depois de pasteurizar a 82°C durante 20 minutos, o leite foi resfriado a 37°C.

Uma cultura iniciadora (3%) foi adicionada e a mistura foi em seguida incubada a 37°C durante 6 horas e então a 5°C durante 12 horas.

As propriedades sensoriais foram avaliadas por 20 integrantes.

Os melhores resul- tados foram obtidos em amostras contendo a composição obtida de acordo com o EXEMPLO 8. Os integrantes notaram uma sensação bucal e perfil de sabor perfeito e com- pleto.

Deve ser entendido que as descrições e modalidades específicas precedentes mos-

tradas aqui são meramente ilustrativas do melhor modo da invenção e dos princípios da mesma, e que modificações e adições podem ser facilmente feitas por aqueles versados na técnica sem afastarem-se do espírito e escopo da invenção que é, portanto, entendido como sendo limitado apenas pelo escopo das reivindicações anexas.

Claims (12)

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para produzir uma composição de estévia compreendendo rebaudiosí- deo B, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende as etapas de: fornecer um adoçante de estévia; fornecer uma solução aquosa alcalina; dispersar o adoçante de estévia na solução alcalina e incubar durante cerca de 12 a 48 horas a cerca de 55 a 75°C para formar uma mistura; resfriar a mistura a cerca de 10 a 30°C e ajustar o pH com ácido a cerca de pH 3,0 a 4,0; incubar a mistura em baixa temperatura para obter um precipitado; separar o precipitado e lavá-lo com água; e secar o precipitado lavado para obter a composição de estévia.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que também compreende as etapas de: suspender a composição de estévia em água e incubar em uma temperatura eleva- da durante cerca de 1 a 3 horas; separar a composição de estévia da água e secar a composição de estévia para obter uma composição de estévia purificada; em que a composição de estévia purificada compreende rebaudiosídeo B com mais do que cerca de 99% de pureza.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que também compreende as etapas de: suspender a composição de estévia em água para formar uma suspensão; aumentar a temperatura da suspensão por um método de aquecimento de gradien- te; conservar a suspensão em uma temperatura elevada; diminuir a temperatura da suspensão por um método de resfriamento de gradiente para obter uma solução de composição de estévia de alta estabilidade e alta concentração; e secar por pulverização a solução de composição de estévia de alta estabilidade e alta concentração para fornecer uma composição de estévia altamente solúvel.

4. Processo, de acordo com reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que também compreende as etapas de: dispersar a composição de estévia em água para formar uma mistura; adicionar uma base na mistura; incubar a mistura para facilitar pelo menos a conversão parcial de grupos carboxila do rebaudiosídeo B em um sal de carboxilato para preparar um sal de carboxilato de rebau-

diosídeo B; e separar e secar a composição de estévia compreendendo o sal de carboxilato de rebaudiosídeo B.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o adoçante de estévia compreende rebaudiosídeo A.

6. Composição de estévia feita pelo processo conforme definido pela reivindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma mistura de rebaudiosídeo A e re- baudiosídeo B pelo menos parcialmente convertida em um sal de caboxilato de rebaudiosí- deo B, em uma relação que varia de cerca de 5%:95% a cerca de 95%:5% (p/p).

7. Composição de estévia feita pelo processo conforme definido pela reivindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma mistura de rebaudiosídeo D e re- baudiosídeo B pelo menos parcialmente convertida em um sal de caboxilato de rebaudiosí- deo B, em uma relação que varia de cerca de 5%:95% a cerca de 95%:5% (p/p).

8. Composição de estévia CARACTERIZADA pelo fato de que compreende rebau- diosídeo A e um ou mais selecionado a partir do grupo que consiste em rebaudiosídeo B, sal de carboxilato de rebaudiosídeo B e uma mistura dos mesmos, em uma relação que varia de cerca de 5%:95% a cerca de 95%:5% (p/p).

9. Composição, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADA pelo fato de que também compreende um agente adoçante adicional selecionado a partir do grupo que consiste em: extrato de estévia, glicosídeos de esteviol, esteviosídeo, rebaudiosídeo C, re- baudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, dulcosídeo A, esteviolbiosídeo, rubusosí- deo, outros glicosídeos de esteviol encontrados na planta Stevia rebaudiana Bertoni e mistu- ras dos mesmos, extrato de Luo Han Guo, mogrosídeos, xarope de milho com alto teor de frutose, xarope de milho, açúcar invertido, fruto-oligossacarídeos, inulina, inulo- oligossacarídeos, açúcar de acoplamento, malto-oligossacarídeos, maltodextrinas, sólidos de xarope de milho, glicose, maltose, sacarose, lactose, aspartame, sacarina, sucralose, álcoois de açúcar e uma combinação dos mesmos.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que também compreende um agente flavorizante selecionado a partir do grupo que consiste em: limão, laranja, fruta, banana, uva, pera, abacaxi, manga, amêndoa amarga, cola, cane- la, açúcar, algodão doce, baunilha e uma combinação dos mesmos.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADA pelo fato de que ainda compreende um ingrediente alimentício selecionado a partir do grupo que consis- te em: acidulantes, ácidos orgânicos e aminoácidos, agentes corantes, agentes de volume, amidos modificados, gomas, texturizantes, conservantes, antioxidantes, emulsificantes, es- tabilizantes, espessantes, agentes de gelificação e uma combinação dos mesmos.

12. Composição alimentícia, de bebida, farmacêutica ou cosmética,

CARACTERIZADA pelo fato de que compreende a composição de estévia conforme defini- da na reivindicação 8.