AT222274B - - Google Patents

Description

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  Verfahren zur Inaktivierung von   PoliomyeiHisviren   
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Inaktivierung von PoliomyelitisvirenmitFormaldehyd unter Zusatz eines Chelatbildners. 



   Es sind Verfahren   bekannt, bei denenman Poliomyelitisviren   mit Formaldehyd inaktiviert. Diese Verfahren haben auch Eingang in die industrielle Herstellung einer Vaccine gegen das Poliomyelitisvirus aller drei Typen gefunden. Es hat sich gezeigt, dass in vielen Fällen die Antigenität nach der Inaktivierung mit Formaldehyd niedrig ist. Es hat daher nicht an Versuchen gefehlt, die Inaktivierung unter ändern Bedin-   gungen auszufuhren,   sei es durch Änderung des Inaktivierungsreagenzes, sei es durch thermische oder Strahlungsenergie. So haben z. B. Haas und Mitarbeiter das Poliomyelitisvirus durch Erwärmen auf   45' >    ohne Verwendung von Formaldehyd inaktiviert und beobachtet, dass diese thermische Inaktivierung in Anwesenheit von   Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N, N'-tetraacetatverzögertwird.

   (Thomssen,   R., V. Dostal,   R. Haas   und   E. Ruschmann,   Vortrag auf dem VI. Symposium der Europäischen Vereinigung zur Bekämpfung der Kinderlähmung vom 6.-9. September 1959 in München). 



   Es wurde nun ein Verfahren zur Inaktivierung von Poliomyelitisviren mittels Formaldehyd gefunden, das überraschenderweise zu einer besseren Antigenität und einer höheren Immunisierungsfähigkeit der inaktiven Viren führt und dadurch gekennzeichnet ist, dass die Inaktivierung durch Formaldehyd unter Zusatz eines Chelatbildners, der nicht zu Fällungen Anlass gibt, ausgeführt wird. 



   Die Konzentration des Chelatbildners kann in weiten Grenzen variiert werden und liegt zwischen 2 bis 100 mg pro 100 ml der Virussuspension, und der pH-Wert der Reaktion bei   5 - 9,   vorzugsweise 7. Die Inaktivierung erfolgt vorteilhaft bei 0-600, vorzugsweise bei 370, u. zw. in einer Zeit von 3 bis 60   Tagea.   



   Als Chelatbildnerdienenz. B. das Natriumsalz der Nitrilotriessigsaure, Diaminocyclohexantetraessigsaure, Uramildiessigsäure, vorzugsweise   Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N, N'-tetraacetat,   Acetessigsäureester und Siderophilin (Transferin), ausserdem Aminosäuregemische, wie sie   z. B.   in Lactalbuminhydrolysat vorliegen. 



   Man geht erfindungsgemäss so vor, dass man eine Formaldehydlösung gleichzeitig mit einer Lösung eines Chelatbildners der Virussuspension zufügt. Die weiteren Stufen der Inaktivierung erfolgen In an sich bekannter Weise. 



   Die nach dem erfindungsgemässen Verfahren inaktivierten Viren dienen gegebenenfalls nach Adsorption an Aluminiumhydroxyd oder andere Tragerstoffe als Impfstoffe. Wie an Meerschweinchen und Hühnchen, die mit diesem Impfstoff immunisiert werden, gezeigt werden kann, vermitteln diese Impfstoffe eine erheblich bessere Antikörperbildung als solche, deren Virusanteil nur mit Formaldehyd ohne Chelatbildner inaktiviert wurde. 



   Beispiel l : Eine in der üblichen Weise hergestellte Suspension   von Poliomyelitisvirus wird wie   
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 h.wässeriger Formaldehydlösung in der üblichen Konzentration sowie ausserdem mit 20 mg Dinatrium-dihy-   drogen-äthylendiamin-N, N'-tetraacetat   pro 100 ml versetzt. Teil B erhält die gleiche Formaldehydkonzentration, jedoch kein   Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N, N'-tetraacetat.   



   Beide Suspensionen werden in gleicher Weise und gleich lang bei 370 inaktiviert. Nach Beendigung der Inaktivierung und der für beide Teile gleichartig durchgeführten Zwischenfiltration werden die Suspensionen auf ihre Wirksamkeit analog den "Vorschriften für die staatliche Prüfung von Impfstoffen gegen Kinderlähmung (Poliomyelitis)" vorgesehenen Verfahren geprüft. 

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A zeigt eineBeispiel 2 : In einem Versuchsverfahren, das dem unter Beispiel 1 entspricht, werden zwei gleich grosse Volumina aus gleichem Material inaktiviert, von denen das eine statt Dinatrium-dihydrogen-äthy-   lendiamin-N, N'-tetraacetat das Natriumsalz der Nitrilotriessigsäure (Trimethylamin-a, a', a"-tricarbon-    säure) enthält.

   Die Wirksamkeitsprüfung nach gleichartiger Behandlung der beiden inaktivierten Virussuspensionen zeigt folgendes Ergebnis : 
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  Teil B : 85   504IDso   pro ml Serum (Titer   l :   128 bei 167 1D50 pro   0, 25 ml).   



  Teil A ist also 12, 6mal wirksamer als Teil B. 



  Beispiel 3 : Um den Effekt der löslichen chelatbildenden Substanzen noch eindeutiger nachzuwei- 
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   Die   Wirksamkeitspruiung   ergibt für Teil A (mit Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N, N'-tetra-   acetat)-339 968 1D60   pro ml Serum (Titer   1 : 1024   bei 83 ID50 pro 0, 25 ml). 



   Teil B (ohne Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat) : < 5312 ID50 pro ml Serum (Titer schlechter als 1 : 16 bei 83   IDsopro 0, 25   ml). 



   Teil A ist also mehr als 64mal so wirksam wie Teil B. 



    PATENTANSPRÜCHE :    
I. Verfahren zur Inaktivierung von Poliomyelitisviren mittels Formaldehyd, dadurch gekennzeichnet, dass die Inaktivierung mittels Formaldehyd unter Zusatz eines Chelatbildners aus der Gruppe der Amino- - polycarbonsäuren, der metallbindenden Proteine und Eiweisshydrolysate oder unter Zusatz von Acetessigsäureester in einer Konzentration von   : t   bis 100 mg des Chelatbildners pro 100 ml der Virussuspension ausgeführt wird.

Claims (1)

1. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Inaktivierung einer Polio- myelitis-Virussuspension mittels Formaldehyd und Dinatrium-dihydrogen-äthylendiamin-N,N'-tetraacetat vornimmt.

   3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Inaktivierung einer Poliomyelitis-Virussusension mittels Formaldehyd und dem Natriumsalz de : Nitrilotriessigsäure vornimmt.

   4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Inaktivierung einer Poliomyelitis-Virussuspension mittels Formaldehyd und dem genannten Chelatbildner in einer Konzentration von 20 mg des genannten Chelatbildners pro 100 ml der genannten Virussuspension vornimmt.