WO2016021683A1 - カチオン性脂質 - Google Patents

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保孝 帆足
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    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Definitions

  • the present invention relates to a cationic lipid that makes it possible to introduce an active ingredient, in particular a nucleic acid, into various types of cells, tissues or organs.
  • the present invention further relates to a lipid particle containing the cationic lipid, or an active ingredient and a composition containing the cationic lipid.
  • nucleic acid medicines containing nucleic acids as active ingredients have been actively conducted.
  • nucleic acid pharmaceuticals that have a target mRNA degradation action and / or a function suppression action, including nucleic acids such as siRNA, miRNA, miRNA mimic or antisense nucleic acid.
  • nucleic acid drugs for expressing a target protein in a cell including mRNA encoding the target protein, has been conducted.
  • a technique for introducing nucleic acids into cells, tissues or organs with high efficiency has been developed as a drug delivery system (DDS) technique.
  • DDS drug delivery system
  • lipids used for forming the complex are cationic lipids, hydrophilic polymer lipids, helper lipids and the like.
  • cationic lipid compounds described in Patent Documents 1 to 5 are known.
  • Cationic lipids that enable nucleic acids to be introduced into cells with high efficiency contribute to the creation of nucleic acid drugs with excellent therapeutic effects and superior efficacy and safety (low toxicity). There is expected. Cationic lipids that enable introduction of nucleic acids into various cells are expected to enable the creation of nucleic acid drugs for various diseases that occur in various tissues. However, at present, no one that can sufficiently satisfy these conditions has been found.
  • An object of the present invention is to provide a technique capable of introducing an active ingredient, particularly a nucleic acid, into a cell with excellent efficiency, and a cationic lipid used in the technique.
  • an object of the present invention is to provide a technique capable of introducing an active ingredient, particularly a nucleic acid, into various cells, a compound used in the technique, and the like.
  • the present invention relates to at least the following inventions:
  • R 1 and R 2 each independently represents a C 1-4 alkyl group or a hydrogen atom
  • R 3 , R 4 and R 5 each independently represents a C 1-4 alkyl group
  • Z ⁇ represents an anion
  • X represents an optionally substituted C 1-6 alkylene group
  • Y A , Y B and Y C each independently represents an optionally substituted methine group
  • L A , L B and L C each independently represents an optionally substituted methylene group or bond
  • R A1 , R A2 , R B1 , R B2 , R C1 and R C2 each independently represent an optionally substituted C 4-10 alkyl group.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are methyl groups; Z ⁇ is a halide ion; X is an ethylene group, a trimethylene group or a tetramethylene group; Y A , Y B and Y C are methine groups; L A , L B and L C are each independently a bond or a methylene group; The compound or a salt thereof according to the above [1], wherein R A1 , R A2 , R B1 , R B2 , R C1 and R C2 are each independently a butyl group, a pentyl group or a hexyl group.
  • a lipid particle comprising the compound or salt thereof according to any one of [1] to [5] above.
  • a composition comprising an active ingredient and the compound or salt thereof according to any one of [1] to [5] above.
  • the composition according to [7] above, wherein the active ingredient is a nucleic acid.
  • the composition of the above-mentioned [8], wherein the nucleic acid is siRNA or mRNA.
  • the present invention makes it possible to introduce an active ingredient, particularly a nucleic acid, into cells, tissues or organs with excellent efficiency.
  • the present invention makes it possible to introduce active ingredients (particularly nucleic acids) into many types of cells, tissues or organs (for example, liver, cancer, fat, bone marrow, blood cells).
  • the present invention makes it possible to obtain a pharmaceutical or research reagent for introducing an active ingredient (especially a nucleic acid) into various types of cells, tissues or organs.
  • the expression efficiency of the activity (for example, medicinal effect) of the active ingredient is high.
  • each substituent has the following definition.
  • examples of the “halogen atom” include fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • examples of the “C 1-6 alkyl group” include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, hexyl.
  • Specific examples include methyl, chloromethyl, difluoromethyl, trichloromethyl, trifluoromethyl, ethyl, 2-bromoethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, tetrafluoroethyl, pentafluoroethyl, propyl, 2,2- Difluoropropyl, 3,3,3-trifluoropropyl, isopropyl, butyl, 4,4,4-trifluorobutyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, 5,5,5-tri Examples include fluoropentyl, hexyl, and 6,6,6-trifluorohexyl.
  • examples of the “C 2-6 alkenyl group” include ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 3- Examples include methyl-2-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4-pentenyl, 4-methyl-3-pentenyl, 1-hexenyl, 3-hexenyl and 5-hexenyl.
  • examples of the “C 2-6 alkynyl group” include ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 3-butynyl, 1-pentynyl, 2-pentynyl, 3- Examples include pentynyl, 4-pentynyl, 1-hexynyl, 2-hexynyl, 3-hexynyl, 4-hexynyl, 5-hexynyl, 4-methyl-2-pentynyl.
  • examples of the “C 3-10 cycloalkyl group” include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, bicyclo [2.2.1] heptyl, bicyclo [2.2. 2] Octyl, bicyclo [3.2.1] octyl, and adamantyl.
  • the "optionally halogenated C 3-10 also be cycloalkyl group", for example, 1 to 7, preferably which may have 1 to 5 halogen atoms C 3- A 10 cycloalkyl group.
  • examples include cyclopropyl, 2,2-difluorocyclopropyl, 2,3-difluorocyclopropyl, cyclobutyl, difluorocyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, and cyclooctyl.
  • examples of the “C 3-10 cycloalkenyl group” include cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl, and cyclooctenyl.
  • examples of the “C 6-14 aryl group” include phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl, 1-anthryl, 2-anthryl, and 9-anthryl.
  • examples of the “C 7-16 aralkyl group” include benzyl, phenethyl, naphthylmethyl, and phenylpropyl.
  • examples of the “C 1-6 alkoxy group” include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy and hexyloxy.
  • the "optionally halogenated C 1-6 alkoxy group” for example, 1 to 7, preferably which may have 1 to 5 halogen atoms C 1-6 An alkoxy group is mentioned.
  • Examples include methoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, ethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, 4,4,4-trifluorobutoxy, isobutoxy, sec-butoxy, pentyl.
  • Examples include oxy and hexyloxy.
  • examples of the “C 3-10 cycloalkyloxy group” include cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy, cycloheptyloxy, and cyclooctyloxy.
  • examples of the “C 1-6 alkylthio group” include methylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, sec-butylthio, tert-butylthio, pentylthio and hexylthio.
  • the "optionally halogenated C 1-6 alkylthio group optionally" for example, 1 to 7, preferably which may have 1 to 5 halogen atoms C 1-6 An alkylthio group is mentioned.
  • examples include methylthio, difluoromethylthio, trifluoromethylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, 4,4,4-trifluorobutylthio, pentylthio, hexylthio.
  • examples of the “C 1-6 alkyl-carbonyl group” include acetyl, propanoyl, butanoyl, 2-methylpropanoyl, pentanoyl, 3-methylbutanoyl, 2-methylbutanoyl, 2,2- Examples include dimethylpropanoyl, hexanoyl, and heptanoyl.
  • examples of the “ optionally halogenated C 1-6 alkyl-carbonyl group” include C 1 optionally having 1 to 7, preferably 1 to 5 halogen atoms.
  • a -6 alkyl-carbonyl group is mentioned. Specific examples include acetyl, chloroacetyl, trifluoroacetyl, trichloroacetyl, propanoyl, butanoyl, pentanoyl and hexanoyl.
  • examples of the “C 1-6 alkoxy-carbonyl group” include methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl, butoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl, sec-butoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, Examples include pentyloxycarbonyl and hexyloxycarbonyl.
  • examples of the “C 6-14 aryl-carbonyl group” include benzoyl, 1-naphthoyl and 2-naphthoyl.
  • examples of the “C 7-16 aralkyl-carbonyl group” include phenylacetyl and phenylpropionyl.
  • examples of the “5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbonyl group” include nicotinoyl, isonicotinoyl, thenoyl and furoyl.
  • examples of the “3- to 14-membered non-aromatic heterocyclic carbonyl group” include morpholinylcarbonyl, piperidinylcarbonyl, and pyrrolidinylcarbonyl.
  • examples of the “mono- or di-C 1-6 alkyl-carbamoyl group” include methylcarbamoyl, ethylcarbamoyl, dimethylcarbamoyl, diethylcarbamoyl, N-ethyl-N-methylcarbamoyl.
  • examples of the “mono- or di-C 7-16 aralkyl-carbamoyl group” include benzylcarbamoyl and phenethylcarbamoyl.
  • examples of the “C 1-6 alkylsulfonyl group” include methylsulfonyl, ethylsulfonyl, propylsulfonyl, isopropylsulfonyl, butylsulfonyl, sec-butylsulfonyl and tert-butylsulfonyl.
  • the "optionally halogenated C 1-6 alkyl sulfonyl group” for example, 1 to 7, preferably which may have 1 to 5 halogen atoms C 1- 6 alkylsulfonyl group is mentioned.
  • examples include methylsulfonyl, difluoromethylsulfonyl, trifluoromethylsulfonyl, ethylsulfonyl, propylsulfonyl, isopropylsulfonyl, butylsulfonyl, 4,4,4-trifluorobutylsulfonyl, pentylsulfonyl, hexylsulfonyl.
  • examples of the “C 6-14 arylsulfonyl group” include phenylsulfonyl, 1-naphthylsulfonyl and 2-naphthylsulfonyl.
  • examples of the “substituent” include a halogen atom, a cyano group, a nitro group, an optionally substituted hydrocarbon group, an optionally substituted heterocyclic group, an acyl group, and a substituted group.
  • An optionally substituted amino group an optionally substituted carbamoyl group, an optionally substituted thiocarbamoyl group, an optionally substituted sulfamoyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted sulfanyl ( SH) group and optionally substituted silyl group.
  • examples of the “hydrocarbon group” include, for example, a C 1-6 alkyl group, a C 2-6 alkenyl group, Examples thereof include a C 2-6 alkynyl group, a C 3-10 cycloalkyl group, a C 3-10 cycloalkenyl group, a C 6-14 aryl group, and a C 7-16 aralkyl group.
  • examples of the “optionally substituted hydrocarbon group” include a hydrocarbon group which may have a substituent selected from the following substituent group A.
  • substituent group A (1) a halogen atom, (2) Nitro group, (3) a cyano group, (4) an oxo group, (5) a hydroxy group, (6) an optionally halogenated C 1-6 alkoxy group, (7) C 6-14 aryloxy group (eg, phenoxy, naphthoxy), (8) C 7-16 aralkyloxy group (eg, benzyloxy), (9) 5- to 14-membered aromatic heterocyclic oxy group (eg, pyridyloxy), (10) 3 to 14-membered non-aromatic heterocyclic oxy group (eg, morpholinyloxy, piperidinyloxy), (11) C 1-6 alkyl-carbonyloxy group (eg, acetoxy, propanoyloxy), (12) C 6-14 aryl-carbony
  • the number of the substituents in the “optionally substituted hydrocarbon group” is, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3. When the number of substituents is 2 or more, each substituent may be the same or different.
  • examples of the “heterocyclic group” include, for example, a nitrogen atom, a sulfur atom and a ring atom other than a carbon atom.
  • an aromatic heterocyclic group (ii) a non-aromatic heterocyclic group, and (iii) a 7 to 10-membered heterocyclic bridge group each containing 1 to 4 heteroatoms selected from oxygen atoms .
  • the “aromatic heterocyclic group” (including the “5- to 14-membered aromatic heterocyclic group”) is, for example, selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring-constituting atom.
  • 5- to 14-membered (preferably 5- to 10-membered) aromatic heterocyclic group containing 1 to 4 heteroatoms is, for example, selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring-constituting atom.
  • 5- to 14-membered (preferably 5- to 10-membered) aromatic heterocyclic group containing 1 to 4 heteroatoms is, for example, selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring-constituting atom.
  • Suitable examples of the “aromatic heterocyclic group” include thienyl, furyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, 1,2,4-oxadiazolyl, 1 5-, 6-membered monocyclic aromatic heterocyclic groups such as 1,3,4-oxadiazolyl, 1,2,4-thiadiazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, triazinyl; Benzothiophenyl, benzofuranyl, benzoimidazolyl, benzoxazolyl, benzisoxazolyl, benzothiazolyl, benzisothiazolyl, benzotriazolyl, imidazopyridinyl, thienopyri
  • non-aromatic heterocyclic group examples include, for example, a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring-constituting atom.
  • non-aromatic heterocyclic group containing 1 to 4 heteroatoms selected from Suitable examples of the “non-aromatic heterocyclic group” include aziridinyl, oxiranyl, thiylyl, azetidinyl, oxetanyl, thietanyl, tetrahydrothienyl, tetrahydrofuranyl, pyrrolinyl, pyrrolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, oxazolinyl, oxazolidinyl, pyrazolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolinyl Thiazolinyl, thiazolidinyl, tetrahydroisothiazolyl, tetrahydrooxazolyl, tetrahydroisoxazolyl, piperidinyl, piperazinyl, t
  • preferable examples of the “7 to 10-membered heterocyclic bridged ring group” include quinuclidinyl and 7-azabicyclo [2.2.1] heptanyl.
  • examples of the “nitrogen-containing heterocyclic group” include those containing at least one nitrogen atom as a ring-constituting atom among the “heterocyclic groups”.
  • examples of the “optionally substituted heterocyclic group” include a heterocyclic group which may have a substituent selected from the substituent group A described above.
  • the number of substituents in the “optionally substituted heterocyclic group” is, for example, 1 to 3. When the number of substituents is 2 or more, each substituent may be the same or different.
  • acyl group is, for example, “1 selected from a halogen atom, an optionally halogenated C 1-6 alkoxy group, a hydroxy group, a nitro group, a cyano group, an amino group, and a carbamoyl group.
  • the “acyl group” also includes a hydrocarbon-sulfonyl group, a heterocyclic-sulfonyl group, a hydrocarbon-sulfinyl group, and a heterocyclic-sulfinyl group.
  • the hydrocarbon-sulfonyl group is a sulfonyl group to which a hydrocarbon group is bonded
  • the heterocyclic-sulfonyl group is a sulfonyl group to which a heterocyclic group is bonded
  • the hydrocarbon-sulfinyl group is a hydrocarbon group.
  • a sulfinyl group to which is bonded and a heterocyclic-sulfinyl group mean a sulfinyl group to which a heterocyclic group is bonded.
  • the “acyl group” a formyl group, a carboxy group, a C 1-6 alkyl-carbonyl group, a C 2-6 alkenyl-carbonyl group (eg, crotonoyl), a C 3-10 cycloalkyl-carbonyl group ( Examples, cyclobutanecarbonyl, cyclopentanecarbonyl, cyclohexanecarbonyl, cycloheptanecarbonyl), C 3-10 cycloalkenyl-carbonyl group (eg, 2-cyclohexenecarbonyl), C 6-14 aryl-carbonyl group, C 7-16 aralkyl- Carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbonyl group, 3- to 14-membered
  • Diallylcarbamoyl mono- or di-C 3-10 cycloalkyl-carbamoyl group (eg, cyclopropylcarbamoyl), mono- or di-C 6-14 aryl-carbamoyl group (eg, phenylcarbamoyl), mono- or Di-C 7-16 aralkyl-carbamoyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbamoyl group (eg, pyridylcarbamoyl), thiocarbamoyl group, mono- or di-C 1-6 alkyl-thiocarbamoyl group (eg, methylthio) Carbamoyl, N-ethyl-N-methyl Okarubamoiru), mono - or di -C 2-6 alkenyl - thiocarbamoyl group (e.g., diallyl thio carbamoyl), mono - or di cycl
  • examples of the “optionally substituted amino group” include, for example, a C 1-6 alkyl group each having 1 to 3 substituents selected from the substituent group A, C 2-6 alkenyl group, C 3-10 cycloalkyl group, C 6-14 aryl group, C 7-16 aralkyl group, C 1-6 alkyl-carbonyl group, C 6-14 aryl-carbonyl group, C 7- 16- aralkyl-carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbonyl group, 3- to 14-membered non-aromatic heterocyclic carbonyl group, C 1-6 alkoxy-carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic group, carbamoyl group Mono- or di-C 1-6 alkyl-carbamoyl group, mono- or di-C 7-16 aralkyl-carbamoyl group, C 1-6 alkylsulfonyl group and C 6-1 And an amino group optional
  • Suitable examples of the optionally substituted amino group include an amino group, a mono- or di- (optionally halogenated C 1-6 alkyl) amino group (eg, methylamino, trifluoromethylamino, Dimethylamino, ethylamino, diethylamino, propylamino, dibutylamino), mono- or di-C 2-6 alkenylamino groups (eg, diallylamino), mono- or di-C 3-10 cycloalkylamino groups (eg, Cyclopropylamino, cyclohexylamino), mono- or di-C 6-14 arylamino group (eg, phenylamino), mono- or di-C 7-16 aralkylamino group (eg, benzylamino, dibenzylamino), mono - or di - (optionally halogenated C 1-6 alkyl) - carbonyl amino group (e.g., a Chiru
  • examples of the “optionally substituted carbamoyl group” include, for example, a “C 1-6 alkyl group optionally having 1 to 3 substituents selected from the substituent group A” C 2-6 alkenyl group, C 3-10 cycloalkyl group, C 6-14 aryl group, C 7-16 aralkyl group, C 1-6 alkyl-carbonyl group, C 6-14 aryl-carbonyl group, C 7 -16 aralkyl-carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbonyl group, 3- to 14-membered non-aromatic heterocyclic carbonyl group, C 1-6 alkoxy-carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic group, carbamoyl group, mono - or di -C 1-6 alkyl - carbamoyl group and mono- - or di -C 7-16 aralkyl - 1 or 2 substituents selected from a carbamoyl group
  • Suitable examples of the optionally substituted carbamoyl group include a carbamoyl group, a mono- or di-C 1-6 alkyl-carbamoyl group, a mono- or di-C 2-6 alkenyl-carbamoyl group (eg, diallylcarbamoyl group).
  • Mono- or di-C 3-10 cycloalkyl-carbamoyl groups eg cyclopropylcarbamoyl, cyclohexylcarbamoyl
  • mono- or di-C 6-14 aryl-carbamoyl groups eg phenylcarbamoyl
  • mono- or Di-C 7-16 aralkyl-carbamoyl group mono- or di-C 1-6 alkyl-carbonyl-carbamoyl group (eg acetylcarbamoyl, propionylcarbamoyl), mono- or di-C 6-14 aryl-carbonyl-carbamoyl Groups (eg, benzoylcarbamoyl)
  • a 5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbamoyl group eg, pyridylcarbamoyl
  • pyridylcarbamoyl pyridylcarb
  • examples of the “optionally substituted thiocarbamoyl group” include, for example, “C 1-6 alkyl each optionally having 1 to 3 substituents selected from Substituent Group A” Group, C 2-6 alkenyl group, C 3-10 cycloalkyl group, C 6-14 aryl group, C 7-16 aralkyl group, C 1-6 alkyl-carbonyl group, C 6-14 aryl-carbonyl group, C 7-16 aralkyl-carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic carbonyl group, 3- to 14-membered non-aromatic heterocyclic carbonyl group, C 1-6 alkoxy-carbonyl group, 5- to 14-membered aromatic heterocyclic group, carbamoyl group, mono - or di -C 1-6 alkyl - carbamoyl group and mono- - or di -C 7-16 aralkyl - one or two location selected from a carbamoyl
  • thiocarbamoyl group which may be substituted include a thiocarbamoyl group, a mono- or di-C 1-6 alkyl-thiocarbamoyl group (eg, methylthiocarbamoyl, ethylthiocarbamoyl, dimethylthiocarbamoyl, diethylthio).
  • examples of the “optionally substituted sulfamoyl group” include a “C 1-6 alkyl group each optionally having 1 to 3 substituents selected from the substituent group A”.
  • the optionally substituted sulfamoyl group include sulfamoyl group, mono- or di-C 1-6 alkyl-sulfamoyl group (eg, methylsulfamoyl, ethylsulfamoyl, dimethylsulfamoyl, diethyl).
  • examples of the “optionally substituted hydroxy group” include a “C 1-6 alkyl group each optionally having 1 to 3 substituents selected from the substituent group A”.
  • Suitable examples of the optionally substituted hydroxy group include a hydroxy group, a C 1-6 alkoxy group, a C 2-6 alkenyloxy group (eg, allyloxy, 2-butenyloxy, 2-pentenyloxy, 3-hexenyloxy).
  • C 3-10 cycloalkyloxy group eg, cyclohexyloxy
  • C 6-14 aryloxy group eg, phenoxy, naphthyloxy
  • C 7-16 aralkyloxy group eg, benzyloxy, phenethyloxy
  • C 1-6 alkyl-carbonyloxy group eg, acetyloxy, propionyloxy, butyryloxy, isobutyryloxy, pivaloyloxy
  • C 6-14 aryl-carbonyloxy group eg, benzoyloxy
  • C 7-16 aralkyl- A carbonyloxy group eg benzylcarbonyloxy)
  • 5 to 14-membered aromatic heterocyclic carbonyloxy group e.g., nicotinoyl oxy
  • 3 to 14-membered non-aromatic heterocyclic carbonyloxy group e.g., piperidinylcarbonyl oxy
  • examples of the “optionally substituted sulfanyl group” include a “C 1-6 alkyl group optionally having 1 to 3 substituents selected from the substituent group A”.
  • C 2-6 alkenyl group, C 3-10 cycloalkyl group, C 6-14 aryl group, C 7-16 aralkyl group, C 1-6 alkyl-carbonyl group, C 6-14 aryl-carbonyl group and 5 to Examples thereof include a sulfanyl group optionally having a substituent selected from a 14-membered aromatic heterocyclic group and a halogenated sulfanyl group.
  • the optionally substituted sulfanyl group include a sulfanyl (—SH) group, a C 1-6 alkylthio group, a C 2-6 alkenylthio group (eg, allylthio, 2-butenylthio, 2-pentenylthio, 3-hexenylthio), C 3-10 cycloalkylthio group (eg, cyclohexylthio), C 6-14 arylthio group (eg, phenylthio, naphthylthio), C 7-16 aralkylthio group (eg, benzylthio, phenethylthio), C 1-6 alkyl-carbonylthio group (eg, acetylthio, propionylthio, butyrylthio, isobutyrylthio, pivaloylthio), C 6-14 aryl-carbonylthio group (eg, benzoylthio), 5-
  • examples of the “optionally substituted silyl group” include a “C 1-6 alkyl group each optionally having 1 to 3 substituents selected from the substituent group A”
  • a silyl group optionally having 1 to 3 substituents selected from a C 2-6 alkenyl group, a C 3-10 cycloalkyl group, a C 6-14 aryl group and a C 7-16 aralkyl group ” Can be mentioned.
  • Preferable examples of the optionally substituted silyl group include a tri-C 1-6 alkylsilyl group (eg, trimethylsilyl, tert-butyl (dimethyl) silyl).
  • examples of the “C 1-6 alkylene group” include —CH 2 —, — (CH 2 ) 2 —, — (CH 2 ) 3 —, — (CH 2 ) 4 —, — (CH 2 ) 5 —, — (CH 2 ) 6 —, —CH (CH 3 ) —, —C (CH 3 ) 2 —, —CH (C 2 H 5 ) —, —CH (C 3 H 7 ) —, —CH (CH (CH 3 ) 2 ) —, — (CH (CH 3 )) 2 —, —CH 2 —CH (CH 3 ) —, —CH (CH 3 ) —CH 2 —, —CH 2 —CH 2 -C (CH 3) 2 - , - C (CH 3) 2 -CH 2 -CH 2 -, - CH 2 -CH 2 -CH 2 -C (CH 3) 2 -, - C (CH 3) 2
  • examples of the “C 2-6 alkenylene group” include —CH ⁇ CH—, —CH 2 —CH ⁇ CH—, —CH ⁇ CH—CH 2 —, —C (CH 3 ) 2 —.
  • examples of the “C 2-6 alkynylene group” include —C ⁇ C—, —CH 2 —C ⁇ C—, —C ⁇ C—CH 2 —, —C (CH 3 ) 2 —.
  • examples of the “hydrocarbon ring” include a C 6-14 aromatic hydrocarbon ring, a C 3-10 cycloalkane, and a C 3-10 cycloalkene.
  • examples of the “C 6-14 aromatic hydrocarbon ring” include benzene and naphthalene.
  • examples of “C 3-10 cycloalkane” include cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane, cycloheptane, and cyclooctane.
  • examples of “C 3-10 cycloalkene” include cyclopropene, cyclobutene, cyclopentene, cyclohexene, cycloheptene, and cyclooctene.
  • examples of the “heterocycle” include aromatic heterocycles each containing 1 to 4 heteroatoms selected from a nitrogen atom, a sulfur atom, and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring-constituting atom. Non-aromatic heterocycles may be mentioned.
  • the “aromatic heterocycle” is, for example, a 5- to 14-membered member containing 1 to 4 heteroatoms selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring constituent atom ( Preferred is a 5- to 10-membered aromatic heterocyclic ring.
  • Suitable examples of the “aromatic heterocycle” include thiophene, furan, pyrrole, imidazole, pyrazole, thiazole, isothiazole, oxazole, isoxazole, pyridine, pyrazine, pyrimidine, pyridazine, 1,2,4-oxadi 5- to 6-membered monocyclic aromatic heterocycle such as azole, 1,3,4-oxadiazole, 1,2,4-thiadiazole, 1,3,4-thiadiazole, triazole, tetrazole, triazine; Benzothiophene, benzofuran, benzimidazole, benzoxazole, benzoisoxazole, benzothiazole, benzoisothiazole, benzotriazole, imidazopyridine, thienopyridine, furopyridine, pyrrolopyridine, pyrazolopyridine, oxazolopyridine, thiazol
  • non-aromatic heterocycle includes, for example, a 3 to 14 member containing 1 to 4 heteroatoms selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom in addition to a carbon atom as a ring constituent atom. (Preferably 4 to 10 membered) non-aromatic heterocycle.
  • non-aromatic heterocycle examples include aziridine, oxirane, thiirane, azetidine, oxetane, thietane, tetrahydrothiophene, tetrahydrofuran, pyrroline, pyrrolidine, imidazoline, imidazolidine, oxazoline, oxazolidine, pyrazoline, pyrazolidine, thiazoline.
  • examples of the “C 1-4 alkyl group” include those having 1 to 4 carbon atoms among those exemplified for the C 1-6 alkyl group.
  • examples of the “C 4-10 alkyl group” include those exemplified above for the C 1-6 alkyl group having 4 or more carbon atoms, heptyl, octyl, nonyl, decyl Is mentioned.
  • examples of the “C 1-6 alkylene group” include —CH 2 —, — (CH 2 ) 2 —, — (CH 2 ) 3 —, — (CH 2 ) 4 —, — (CH 2 ) 5 —, — (CH 2 ) 6 —, —CH (CH 3 ) —, —C (CH 3 ) 2 —, —CH (C 2 H 5 ) —, —CH (C 3 H 7 ) —, —CH (CH (CH 3 ) 2 ) —, — (CH (CH 3 )) 2 —, —CH 2 —CH (CH 3 ) —, —CH (CH 3 ) —CH 2 —, —CH 2 —CH 2 -C (CH 3) 2 - , - C (CH 3) 2 -CH 2 -CH 2 -, - CH 2 -CH 2 -CH 2 -C (CH 3) 2 -, - C (CH 3) 2
  • examples of the “ optionally substituted C 4-10 alkyl group” include a C 4-10 alkyl group which may have a substituent selected from the substituent group A.
  • examples of the “optionly substituted C 1-6 alkylene group” include a C 1-6 alkylene group which may have a substituent selected from the substituent group A.
  • examples of the “optionally substituted methine group” include a methine group which may have a substituent selected from the substituent group A.
  • examples of the “optionally substituted methylene group” include a methylene group which may have a substituent selected from the substituent group A.
  • R 1 is preferably a C 1-4 alkyl group, and more preferably a methyl group.
  • R 2 is preferably a C 1-4 alkyl group, and more preferably a methyl group.
  • R 3 is preferably a methyl group.
  • R 4 is preferably a methyl group.
  • R 5 is preferably a methyl group.
  • Z ⁇ is preferably a pharmacologically acceptable anion, and preferred examples thereof include halide ions (fluoride ions, chloride ions, bromide ions and iodide ions); nitrate ions, sulfate ions, Anion of inorganic acid selected from the group consisting of phosphate ions; formate ion, acetate ion, trifluoroacetate ion, phthalate ion, fumarate ion, oxalate ion, tartaric acid ion, maleate ion, citrate ion, succinate Anion of organic acid selected from the group consisting of acid ion, malate ion, methanesulfonate ion, benzenesulfonate ion, p-toluenesulfonate ion; or acidic amino acid selected from the group consisting of aspartate ion and glutamate ion Anions.
  • Z - is even more preferably a halide ion (especially an iodide ion).
  • X is preferably a C 1-6 alkylene group, more preferably an ethylene group, a trimethylene group or a tetramethylene group.
  • Y A is preferably a methine group.
  • Y B is preferably a methine group.
  • Y C is preferably a methine group.
  • L A is preferably a bond or a methylene group.
  • L B is preferably a bond or a methylene group.
  • L C is preferably a bond or a methylene group.
  • R A1 is preferably a C 4-10 alkyl group, more preferably a butyl group, a pentyl group, or a hexyl group.
  • R A2 is preferably a C 4-10 alkyl group, more preferably a butyl group, a pentyl group, or a hexyl group.
  • R B1 is preferably a C 4-10 alkyl group, and more preferably a butyl group, a pentyl group, or a hexyl group.
  • R B2 is preferably a C 4-10 alkyl group, more preferably a butyl group, a pentyl group, or a hexyl group.
  • R C1 is preferably a C 4-10 alkyl group, more preferably a butyl group, a pentyl group, or a hexyl group.
  • R C2 is preferably a C 4-10 alkyl group, and more preferably a butyl group, a pentyl group, or a hexyl group.
  • compound (I) include the following: Compound (A): R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are methyl groups; Z ⁇ is a halide ion (particularly an iodide ion); X is an ethylene group, a trimethylene group or a tetramethylene group; Y A , Y B and Y C are methine groups; L A , L B and L C are each independently a bond or a methylene group; Compound (I), wherein R A1 , R A2 , R B1 , R B2 , R C1 and R C2 are each independently a butyl group, a pentyl group or a hexyl group.
  • Compound (B) A compound (A) wherein W is of the formula —NR 1 R 2 .
  • W is of the formula —N + R 3 R 4 R 5 (Z ⁇ ); Z- is an iodide ion; X is a tetramethylene group; Compound (A), wherein R A1 , R A2 , R B1 , R B2 , R C1 and R C2 are pentyl groups.
  • the salt in the compound (I) is preferably a pharmacologically acceptable salt.
  • a salt with an inorganic base a salt with an organic base, a salt with an inorganic acid, a salt with an organic acid, basic or acidic
  • examples include salts with amino acids.
  • the salt with an inorganic base include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt; aluminum salt and ammonium salt.
  • the salt with an organic base include trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, tromethamine [tris (hydroxymethyl) methylamine], tert-butylamine, cyclohexylamine, benzylamine, And salts with dicyclohexylamine and N, N-dibenzylethylenediamine.
  • the salt with inorganic acid include salts with hydrofluoric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitric acid, sulfuric acid and phosphoric acid.
  • salts with organic acids include formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, phthalic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, and benzenesulfonic acid And salts with p-toluenesulfonic acid.
  • salt with basic amino acid include salts with arginine, lysine and ornithine.
  • salt with acidic amino acid include salts with aspartic acid and glutamic acid.
  • the “active ingredient” used in the present invention refers to a substance having biological or pharmacological activity, particularly a substance useful for pharmaceutical use or research purpose use.
  • the active ingredient include nucleic acids.
  • nucleic acid may be any molecule in which nucleotides and molecules having functions equivalent to the nucleotides are polymerized.
  • RNA that is a polymer of ribonucleotides
  • DNA that is a polymer of deoxyribonucleotides
  • ribonucleic acid examples thereof include a polymer in which nucleotides and deoxyribonucleotides are mixed, and a nucleotide polymer containing nucleotide analogs, and may be a nucleotide polymer containing nucleic acid derivatives.
  • the nucleic acid may be a single-stranded nucleic acid or a double-stranded nucleic acid.
  • the double-stranded nucleic acid also includes a double-stranded nucleic acid in which one strand is hybridized under stringent conditions to the other strand.
  • Nucleotide analogs include ribonucleic acid to increase or stabilize nuclease resistance, to increase affinity with complementary strand nucleic acids, to increase cell permeability, or to be visualized compared to RNA or DNA. Any molecule may be used as long as it is a modification of nucleotide, deoxyribonucleotide, RNA or DNA.
  • the nucleotide analog may be a naturally occurring molecule or a non-natural molecule, and examples thereof include a sugar moiety-modified nucleotide analog and a phosphodiester bond-modified nucleotide analog.
  • the sugar moiety-modified nucleotide analog may be any one obtained by adding or substituting any chemical structural substance to a part or all of the chemical structure of the sugar of the nucleotide.
  • Specific examples thereof include 2 ′ Nucleotide analogues substituted with -O-methylribose, nucleotide analogues substituted with 2'-O-propylribose, nucleotide analogues substituted with 2'-methoxyethoxyribose, 2'-O-methoxyethylribose Nucleotide analogues substituted with 2'-O- [2- (guanidinium) ethyl] ribose nucleotide analogues, nucleotide analogues substituted with 2'-O-fluororibose, cross-linked structures in the sugar moiety Bridged Nucleic Acid (BNA), more specifically, having two circular structures by introducing Locked Nucleic Acid (
  • the phosphodiester bond-modified nucleotide analog may be any one obtained by adding or substituting any chemical substance to a part or all of the chemical structure of the phosphodiester bond of the nucleotide. May include nucleotide analogs substituted with phosphorothioate linkages, nucleotide analogues substituted with N3′-P5 ′ phosphoramidate linkages, etc. [Cell Engineering, 16 , 1463-1473 (1997) ] [RNAi method and antisense method, Kodansha (2005)].
  • nucleic acid derivative in order to improve nuclease resistance, to stabilize, to increase affinity with a complementary strand nucleic acid, to increase cell permeability or to be visualized as compared with a nucleic acid, a different chemical is used. Any molecule may be used as long as it is a molecule to which a substance is added. Specific examples thereof include 5′-polyamine addition derivatives, cholesterol addition derivatives, steroid addition derivatives, bile acid addition derivatives, vitamin addition derivatives, Cy5 addition derivatives, Cy3 addition derivatives. , 6-FAM addition derivatives, biotin addition derivatives, and the like.
  • the active ingredient is preferably a nucleic acid, and specific examples of the nucleic acid include siRNA, miRNA, miRNA mimic, antisense nucleic acid, ribozyme, mRNA, decoy nucleic acid, and aptamer.
  • siRNA or mRNA is preferable as a nucleic acid.
  • siRNA means a double-stranded RNA having 10 to 30 bases, preferably 15 to 25 bases, or an analog thereof, which includes a complementary sequence.
  • the siRNA preferably has a protruding base of 1 to 3 bases, more preferably 2 bases at the 3 'end.
  • the complementary sequence portion may be completely complementary or may contain non-complementary bases, but is preferably completely complementary.
  • mRNA means RNA containing a base sequence that can be translated into a protein.
  • compound (I) can be used as a cationic lipid.
  • Cationic lipids can form complexes with multiple molecules in a solvent or dispersion medium.
  • the complex may contain other components in addition to the compound (I).
  • the other components include other lipids (structured lipids (eg, cholesterol and phosphatidylcholine (eg, dipalmitoylphosphatidylcholine and distearoylphosphatidylcholine)), polyethylene glycol lipids (eg, GM-020 (NOF CORPORATION), GS- 020 (NOF CORPORATION) etc.)) and active ingredients.
  • the “lipid particle” means a complex containing no active ingredient among the above complexes.
  • composition of the present invention is composed of a composition (in the present specification, together with (2) an active ingredient and (3) the above-mentioned other lipids as required. , which may be abbreviated as the composition of the present invention).
  • the composition of the present invention can be produced by a method known per se in the field of pharmaceutical technology using a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a pharmaceutical dosage form for example, a preparation for parenteral administration (for example, a liquid preparation such as an injection) containing conventional auxiliaries such as a buffer and / or a stabilizer, and an ointment containing a conventional pharmaceutical carrier And topical preparations such as creams, solutions or salves.
  • compositions of the present invention can be used to introduce active ingredients into many types of cells, tissues or organs.
  • these cells, tissues, or organs include spleen cells, nerve cells, glial cells, pancreatic ⁇ cells, bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fiber cells, Muscle cells, adipocytes, immune cells (eg, macrophages, T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes, megakaryocytes), synoviocytes, cartilage Cells, bone cells, osteoblasts, osteoclasts, breast cells, hepatocytes or stromal cells, or precursor cells of these cells, stem cells, blood cells, or any tissue or organ in which these cells are present, for example , Brain, brain parts (eg, olfactory bulb, cephalic nucleus, basal sphere,
  • compositions of the present invention are particularly excellent in the efficiency of introducing an active ingredient into liver, cancer cells, adipocytes, blood cells, and bone marrow cells.
  • the compound of the present invention and the composition of the present invention can be safely used with stable and low toxicity.
  • the composition of the present invention may be administered so that an effective amount of the active ingredient is administered to an administration subject (for example, a mammal such as a human).
  • the raw materials and reagents used in each step in the following production method and the obtained compound may each form a salt.
  • Examples of such salts include those similar to the salts in the aforementioned compound of the present invention.
  • the compound obtained in each step is a free compound, it can be converted into a target salt by a method known per se.
  • the compound obtained in each step is a salt, it can be converted into a free form or other types of desired salts by a method known per se.
  • the compound obtained in each step remains in the reaction solution or is obtained as a crude product and can be used in the next reaction.
  • the compound obtained in each step is concentrated from the reaction mixture according to a conventional method. , Crystallization, recrystallization, distillation, solvent extraction, fractional distillation, chromatography and the like, and can be isolated and / or purified.
  • the reaction time may vary depending on the reagent and solvent to be used, but unless otherwise specified, is usually 1 minute to 48 hours, preferably 10 minutes to 8 hours.
  • the reaction temperature may vary depending on the reagent and solvent to be used, but is usually ⁇ 78 ° C. to 300 ° C., preferably ⁇ 78 ° C. to 150 ° C. unless otherwise specified.
  • the pressure may vary depending on the reagent and solvent used, but unless otherwise specified, is usually 1 to 20 atmospheres, preferably 1 to 3 atmospheres.
  • a Microwave synthesizer such as an initiator manufactured by Biotage may be used.
  • the reaction temperature may vary depending on the reagent and solvent to be used, but unless otherwise specified, is usually room temperature to 300 ° C., preferably 50 ° C. to 250 ° C.
  • the reaction time may vary depending on the reagent and solvent to be used, but unless otherwise specified, is usually 1 minute to 48 hours, preferably 1 minute to 8 hours.
  • the reagent is used in an amount of 0.5 equivalent to 20 equivalents, preferably 0.8 equivalent to 5 equivalents, relative to the substrate.
  • the reagent is used in an amount of 0.001 equivalent to 1 equivalent, preferably 0.01 equivalent to 0.2 equivalent, relative to the substrate.
  • the reagent also serves as a reaction solvent, the amount of solvent is used as the reagent.
  • these reactions are performed without solvent or dissolved or suspended in a suitable solvent.
  • the solvent include the solvents described in the examples or the following.
  • Alcohols methanol, ethanol, tert-butyl alcohol, 2-methoxyethanol, etc .
  • Ethers diethyl ether, diphenyl ether, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethane, etc .
  • Aromatic hydrocarbons chlorobenzene, toluene, xylene, etc .
  • Saturated hydrocarbons cyclohexane, hexane, etc .
  • Amides N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, etc .
  • Halogenated hydrocarbons dichloromethane, carbon tetrachloride, etc .
  • Nitriles acetonitrile, etc.
  • Sulfoxides dimethyl sulfoxide and the like; Aromatic organic bases: pyridine, etc .; Acid anhydrides: acetic anhydride, etc .; Organic acids: formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, etc .; Inorganic acids: hydrochloric acid, sulfuric acid, etc .; Esters: ethyl acetate and the like; Ketones: acetone, methyl ethyl ketone, etc .; water. Two or more of the above solvents may be mixed and used at an appropriate ratio.
  • Inorganic bases sodium hydroxide, magnesium hydroxide, etc .
  • Basic salts sodium carbonate, calcium carbonate, sodium bicarbonate, etc .
  • Organic bases triethylamine, diethylamine, pyridine, 4-dimethylaminopyridine, N, N-dimethylaniline, 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane, 1,8-diazabicyclo [5.4.0]- 7-undecene, imidazole, piperidine and the like
  • Metal alkoxides sodium ethoxide, potassium tert-butoxide and the like
  • Alkali metal hydrides sodium hydride, etc .
  • Metal amides sodium amide, lithium diisopropylamide, lithium hexamethyldisilazide, etc .
  • Organic lithiums n-butyllithium and the
  • an acid or an acidic catalyst is used in the reaction in each step, for example, the following acids and acidic catalysts, or acids and acidic catalysts described in the examples are used.
  • Inorganic acids hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, etc .
  • Organic acids acetic acid, trifluoroacetic acid, citric acid, p-toluenesulfonic acid, 10-camphorsulfonic acid, etc .
  • Lewis acid boron trifluoride diethyl ether complex, zinc iodide, anhydrous aluminum chloride, anhydrous zinc chloride, anhydrous iron chloride and the like.
  • reaction in each step is a method known per se, for example, the 5th edition Experimental Chemistry Course, Volumes 13 to 19 (Edited by The Chemical Society of Japan); New Experimental Chemistry Course, Volumes 14 to 15 (Japan) Chemistry Association); Fine Organic Chemistry Revised 2nd Edition (L.F.Tietze, Th.Eicher, Nanedo); Revised Organic Name Reaction, its mechanism and points (by Hideo Togo, Kodansha); ORGANIC SYNTHES Collective Volume I-VII ( John Wiley & Sons Inc); Modern Organic Synthesis in the Laboratory A Collection of Standard Exploratory Procedures (Jie Jack Li, UFFOR by JJFORD) VERSITY publication); Comprehensive Heterocyclic Chemistry III, Vol. 1 to Vol.
  • the protection or deprotection reaction of the functional group is carried out by a method known per se, for example, “Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed.” Published by Wiley-Interscience, Theodora W. Greene, Peter G. M.
  • protecting groups for hydroxyl groups such as alcohol and phenolic hydroxyl groups include ether-type protecting groups such as methoxymethyl ether, benzyl ether, t-butyldimethylsilyl ether, and tetrahydropyranyl ether; carboxylate-type protecting groups such as acetate Sulfonic acid ester type protecting groups such as methanesulfonic acid ester; and carbonic acid ester type protecting groups such as t-butyl carbonate.
  • ether-type protecting groups such as methoxymethyl ether, benzyl ether, t-butyldimethylsilyl ether, and tetrahydropyranyl ether
  • carboxylate-type protecting groups such as acetate Sulfonic acid ester type protecting groups such as methanesulfonic acid ester
  • carbonic acid ester type protecting groups such as t-butyl carbonate.
  • Examples of the protecting group for the carbonyl group of the aldehyde include an acetal-type protecting group such as dimethylacetal; and a cyclic acetal-type protecting group such as cyclic 1,3-dioxane.
  • Examples of the protecting group for the carbonyl group of the ketone include a ketal-type protecting group such as dimethyl ketal; a cyclic ketal-type protecting group such as cyclic 1,3-dioxane; an oxime-type protecting group such as O-methyloxime; N, N— And hydrazone-type protecting groups such as dimethylhydrazone.
  • Examples of the protecting group for carboxyl group include ester-type protecting groups such as methyl ester; amide-type protecting groups such as N, N-dimethylamide.
  • Examples of the thiol-protecting group include ether-type protecting groups such as benzylthioether; ester-type protecting groups such as thioacetate ester, thiocarbonate, and thiocarbamate.
  • the protecting group can be removed by a method known per se, for example, acid, base, ultraviolet light, hydrazine, phenylhydrazine, sodium N-methyldithiocarbamate, tetrabutylammonium fluoride, palladium acetate, trialkylsilyl halide (for example, trimethylsilyl iodide). And trimethylsilyl bromide) or a reduction method.
  • a method known per se for example, acid, base, ultraviolet light, hydrazine, phenylhydrazine, sodium N-methyldithiocarbamate, tetrabutylammonium fluoride, palladium acetate, trialkylsilyl halide (for example, trimethylsilyl iodide). And trimethylsilyl bromide) or a reduction method.
  • the reducing agent used is lithium aluminum hydride, sodium triacetoxyborohydride, sodium cyanoborohydride, diisobutylaluminum hydride (DIBAL-H), sodium borohydride
  • Metal hydrides such as hydrogenated triacetoxy boron tetramethylammonium; boranes such as borane tetrahydrofuran complex; Raney nickel; Raney cobalt; hydrogen; formic acid and the like.
  • a catalyst such as palladium-carbon or a Lindlar catalyst.
  • the oxidizing agent used includes peracids such as m-chloroperbenzoic acid (MCPBA), hydrogen peroxide and t-butyl hydroperoxide; tetrabutylammonium perchlorate, etc.
  • Perchlorates such as sodium chlorate; Chlorites such as sodium chlorite; Periodic acids such as sodium periodate; High-valent iodine reagents such as iodosylbenzene; Manganese dioxide; Reagents having manganese such as potassium manganate; Leads such as lead tetraacetate; Reagents having chromium such as pyridinium chlorochromate (PCC), pyridinium dichromate (PDC), Jones reagent; N-bromosuccinimide (NBS) Halogen compounds such as oxygen; ozone; sulfur trioxide / pyridine complex; male tetroxide Um; dioxide Zeren; 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ) and the like.
  • PCC pyridinium chlorochromate
  • PDC pyridinium dichromate
  • NBS N-bromosuccinimide
  • the radical initiator used is an azo compound such as azobisisobutyronitrile (AIBN); 4-4′-azobis-4-cyanopentanoic acid (ACPA) Water-soluble radical initiators such as triethylboron in the presence of air or oxygen, and benzoyl peroxide.
  • AIBN azobisisobutyronitrile
  • ACPA 4-4′-azobis-4-cyanopentanoic acid
  • Water-soluble radical initiators such as triethylboron in the presence of air or oxygen, and benzoyl peroxide.
  • the radical reaction reagent used include tributylstannane, tristrimethylsilylsilane, 1,1,2,2-tetraphenyldisilane, diphenylsilane, and samarium iodide.
  • Examples of Wittig reagents used include alkylidene phosphoranes.
  • the alkylidene phosphoranes can be prepared by a method known per se, for example, by reacting a phosphonium salt with a strong base.
  • the reagents used include phosphonoacetate esters such as methyl dimethylphosphonoacetate and ethyl ethyl diethylphosphonoacetate; bases such as alkali metal hydrides and organolithiums Can be mentioned.
  • examples of the reagent used include Lewis acid and acid chloride or an alkylating agent (eg, alkyl halides, alcohols, olefins, etc.).
  • an organic acid or an inorganic acid can be used in place of the Lewis acid, and an acid anhydride such as acetic anhydride can be used in place of the acid chloride.
  • a nucleophile eg, amines, imidazole, etc.
  • a base eg, basic salts, organic bases, etc.
  • a nucleophilic addition reaction with a carbanion In each step, a nucleophilic addition reaction with a carbanion, a nucleophilic 1,4-addition reaction with a carbanion (Michael addition reaction), or a nucleophilic substitution reaction with a carbanion, a base used to generate a carbanion Examples thereof include organic lithiums, metal alkoxides, inorganic bases, and organic bases.
  • examples of the Grignard reagent include arylmagnesium halides such as phenylmagnesium bromide; alkylmagnesium halides such as methylmagnesium bromide.
  • the Grignard reagent can be prepared by a method known per se, for example, by reacting alkyl halide or aryl halide with metal magnesium using ether or tetrahydrofuran as a solvent.
  • reagents include an active methylene compound (eg, malonic acid, diethyl malonate, malononitrile, etc.) sandwiched between two electron-withdrawing groups and a base (eg, organic bases, Metal alkoxides and inorganic bases) are used.
  • active methylene compound eg, malonic acid, diethyl malonate, malononitrile, etc.
  • a base eg, organic bases, Metal alkoxides and inorganic bases
  • phosphoryl chloride and an amide derivative eg, N, N-dimethylformamide, etc.
  • examples of the azidation agent used include diphenylphosphoryl azide (DPPA), trimethylsilyl azide, and sodium azide.
  • DPPA diphenylphosphoryl azide
  • DBU 1,8-diazabicyclo [5,4,0] undec-7-ene
  • examples of the reducing agent used include sodium triacetoxyborohydride, sodium cyanoborohydride, hydrogen, formic acid and the like.
  • examples of the carbonyl compound used include paraformaldehyde, aldehydes such as acetaldehyde, and ketones such as cyclohexanone.
  • examples of amines used include primary amines such as ammonia and methylamine; secondary amines such as dimethylamine and the like.
  • azodicarboxylic acid esters eg, diethyl azodicarboxylate (DEAD), diisopropyl azodicarboxylate (DIAD), etc.
  • triphenylphosphine eg, triphenylphosphine
  • the reagents used include acyl halides such as acid chloride and acid bromide; acid anhydrides, active ester compounds, and sulfate ester compounds. And activated carboxylic acids.
  • carboxylic acid activators include carbodiimide condensing agents such as 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (WSCD); 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5- Triazine condensing agents such as triazin-2-yl) -4-methylmorpholinium chloride-n-hydrate (DMT-MM); carbonate condensing agents such as 1,1-carbonyldiimidazole (CDI); diphenyl Azide phosphate (DPPA); benzotriazol-1-yloxy-trisdimethylaminophosphonium salt (BOP reagent); 2-chloro-1-methyl-pyridinium iodide (Mukayama reagent); thionyl chloride; haloformates such as ethyl chloroformate Lower alkyl; O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N
  • additives such as 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), N-hydroxysuccinimide (HOSu), dimethylaminopyridine (DMAP) may be further added to the reaction.
  • HOBt 1-hydroxybenzotriazole
  • HOSu N-hydroxysuccinimide
  • DMAP dimethylaminopyridine
  • the metal catalyst used is palladium acetate (II), tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0), dichlorobis (triphenylphosphine) palladium (II), dichlorobis (triethyl).
  • Palladium compounds such as phosphine) palladium (II), tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0), 1,1′-bis (diphenylphosphino) ferrocenepalladium (II) chloride, palladium (II) acetate; tetrakis (tri Nickel compounds such as phenylphosphine) nickel (0); rhodium compounds such as tris (triphenylphosphine) rhodium (III) chloride; cobalt compounds; copper compounds such as copper oxide and copper iodide (I); platinum compounds and the like It is done. Furthermore, a base may be added to the reaction, and examples of such a base include inorganic bases and basic salts.
  • diphosphorus pentasulfide is typically used as the thiocarbonylating agent.
  • 2,4-bis (4-methoxyphenyl) is used.
  • a reagent having a 1,3,2,4-dithiadiphosphetane-2,4-disulfide structure such as -1,3,2,4-dithiadiphosphetane-2,4-disulfide (Lowesson reagent) It may be used.
  • halogenating agents used include N-iodosuccinimide, N-bromosuccinimide (NBS), N-chlorosuccinimide (NCS), bromine, sulfuryl chloride, etc. Is mentioned.
  • the reaction can be accelerated by adding a radical initiator such as heat, light, benzoyl peroxide, or azobisisobutyronitrile to the reaction.
  • the halogenating agent used is an acid halide of hydrohalic acid and an inorganic acid.
  • bromination such as phosphorus chloride include 48% hydrobromic acid.
  • a method of obtaining an alkyl halide from alcohol by the action of triphenylphosphine and carbon tetrachloride or carbon tetrabromide may be used.
  • a method of synthesizing an alkyl halide through a two-step reaction in which an alcohol is converted into a sulfonate ester and then reacted with lithium bromide, lithium chloride, or sodium iodide may be used.
  • examples of the reagent used include alkyl halides such as ethyl bromoacetate; phosphites such as triethyl phosphite and tri (isopropyl) phosphite.
  • examples of the sulfonating agent used include methanesulfonyl chloride, p-toluenesulfonyl chloride, methanesulfonic anhydride, p-toluenesulfonic anhydride, and the like.
  • each step when a hydrolysis reaction is performed, an acid or a base is used as a reagent.
  • acid hydrolysis reaction of t-butyl ester is performed, formic acid or triethylsilane may be added in order to reductively trap the t-butyl cation produced as a by-product.
  • examples of the dehydrating agent used include sulfuric acid, diphosphorus pentoxide, phosphorus oxychloride, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, alumina, and polyphosphoric acid.
  • Compound (I) can be produced, for example, by the following production method A.
  • protecting group represented by P 4 the above-described protecting group for a hydroxyl group is used.
  • Compound (16) can be produced by removing the protecting group from compound (18).
  • tetra-n-butylammonium fluoride and an acid may be used in combination.
  • Compound (I) can also be produced by a nucleophilic substitution reaction of the amino group of compound (20).
  • the reagent used for the nucleophilic substitution reaction include alkyl halides.
  • the compound (4A) used in the production method A can be produced from the compound (1) or the compound (7) by the following production method B, for example.
  • Compound (4A) and Compound (10) can also be produced by decarboxylation reaction of Compound (9). While the reaction temperature may vary depending on the reagent and solvent to be used, it is generally room temperature to 300 ° C., preferably 50 ° C. to 250 ° C. An acid can also be used for the decarboxylation reaction.
  • Compound (5) can be produced by a nucleophilic substitution reaction of compound (3) with a carbanion.
  • reagents used in the nucleophilic substitution reaction include alkyl halides and fluorinating agents (eg, N-fluorobenzenesulfonimide, 3,3- dimethyl-1- (trifluoromethyl) -1,2-benzo Iodoxol).
  • Compound (6) can be produced by Michael addition reaction of compound (2) with a carbanion.
  • the reagent used for the addition reaction include organic copper (which can be prepared by reacting a Grignard reagent or an organic lithium reagent with copper halide). Moreover, what combined the acid or the trimethylsilyl chloride with the organic copper reagent as said reagent can be used.
  • Compound (8) can be produced by a nucleophilic substitution reaction of compound (7) with a carbanion.
  • the reagent used for the nucleophilic substitution reaction include alkyl halides.
  • Compound (12) can be produced by a nucleophilic substitution reaction of compound (11) with a carbanion.
  • the reagent used for the nucleophilic substitution reaction include alkyl halides.
  • Lipid particles are prepared as a lipid particle dispersion by mixing the compound of the present invention with other lipid components, if necessary, dissolved in an organic solvent, and mixing the resulting organic solvent solution with water or a buffer solution. can do.
  • the above mixing can be performed using a microfluidic mixing system (for example, Asia microfluidic system (Syrris)).
  • the resulting lipid particles may be subjected to dialysis and sterile filtration.
  • the “other lipid components” include structural lipids (cholesterol and phosphatidylcholine (eg, dipalmitoylphosphatidylcholine, distearoylphosphatidylcholine)) and polyethylene glycol lipids (eg, GM-020 (NOF CORRORTIONION), GS-020 ( NOF CORPORATION)).
  • the “other lipid component” is used, for example, in an amount of 0.25 to 4 mol with respect to 1 mol of the compound of the present invention.
  • the compound of the present invention is preferably used by mixing with other lipid components (particularly cholesterol, phosphatidylcholine and polyethylene glycol lipid).
  • Preferred embodiments when the compound of the present invention and other lipid components are used in combination are: 1 to 4 mol of the compound of the present invention, 0 to 3 mol of cholesterol, 0 to 2 mol of phosphatidylcholine, and 0 to 2 of polyethylene glycol lipid. 1 molar mixture.
  • the concentration of the compound of the present invention or the mixture of the compound of the present invention and other lipid components in the organic solvent solution is preferably 0.5 to 100 mg / mL.
  • organic solvent examples include methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, tert-butanol, acetone, acetonitrile, N, N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, or a mixture thereof.
  • the organic solvent may contain 0-20% water or buffer.
  • buffer examples include acidic buffers (for example, acetate buffer, citrate buffer), neutral buffers (for example, 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES) buffer, Tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris) buffer, phosphate buffer, phosphate buffered saline (PBS)).
  • acidic buffers for example, acetate buffer, citrate buffer
  • neutral buffers for example, 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES) buffer
  • Tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris) buffer Tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris) buffer
  • phosphate buffer phosphate buffered saline (PBS)
  • the flow rate of the mixed solution is preferably 0.1 to 10 mL / min, and the temperature is preferably 15 to 45 ° C.
  • the composition of the present invention can be produced as a dispersion containing the composition by adding an active ingredient (preferably a nucleic acid) to water or a buffer solution when producing lipid particles or lipid particle dispersions. it can.
  • the active ingredient is preferably added so that the concentration of the active ingredient in water or buffer is 0.05 to 2.0 mg / mL.
  • the composition of the present invention can also be produced as a dispersion containing the composition by mixing lipid particles or a lipid particle dispersion and an active ingredient by a method known per se.
  • the content of the compound of the present invention in the composition of the present invention is preferably 20-80% by weight.
  • the content of the active ingredient in the composition of the present invention is preferably 1-20% by weight.
  • the dispersion medium of the lipid particle dispersion or dispersion containing the composition can be replaced with water or a buffer by dialysis.
  • the dialysis is performed at 4 ° C. to room temperature using an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut off of 10 to 20K. Repeated dialysis may be performed. For dialysis, tangential flow filtration may be used.
  • the particle diameter of the lipid particles or the composition can be calculated as the Z average particle diameter by cumulant analysis of an autocorrelation function using Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments).
  • the particle diameter (average particle diameter) of the lipid particles or the composition is preferably 10-200 nm.
  • the concentration and encapsulation rate of the active ingredient (especially nucleic acid) in the composition of the present invention can be measured using Quant-iT TM RiboGreen (registered trademark) (Invitrogen).
  • concentration is calculated using a standard curve of active ingredients (for example, nucleic acids (particularly siRNA, mRNA)), and the encapsulation rate is calculated based on the difference in fluorescence intensity depending on whether or not Triton-X100 is added. Can do.
  • room temperature usually indicates about 10 ° C. to about 35 ° C.
  • the ratio shown in the mixed solvent is a volume ratio unless otherwise specified. Unless otherwise indicated, “%” indicates “% by weight”.
  • silica gel column chromatography when described as NH, aminopropylsilane-bonded silica gel was used, and when described as Diol, 3- (2,3-dihydroxypropoxy) propylsilane-bonded silica gel was used.
  • the ratio of elution solvent indicates a volume ratio unless otherwise specified.
  • MS mass spectrum M: molar concentration N: prescribed CDCl 3: deuterated chloroform 1 H NMR: proton nuclear magnetic resonance
  • MALDI Matrix-assisted laser desorption / ionization, matrix-assisted laser desorption / ionization
  • TOFMS Time-of-flight mass spectrometry, CHCA: ⁇ -cyano-4-hydroxycinnamic acid , ⁇ -Cyano-4-hydroxycinnamic acid
  • DMAP N, N-dimethyl-4-aminopyridine
  • THF Tetrahydrofuran
  • DMF N, N-dimethylformamide
  • DPPC Dipalmitoylphosphatidylcholine
  • a peak from which H 2 O is eliminated may be observed as a fragment ion.
  • a salt a free molecular ion peak, a cationic species, an anionic species, or a fragment ion peak is usually observed.
  • Example 1 3-((5- (Dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2,2-bis (((2-pentylheptanoyl) oxy) methyl) propyl 2-pentylheptanoate
  • DMF 10 mL
  • 2-pentylheptanoic acid sodium hydride 0.5 g, containing 40% mineral oil
  • dimethyl malonate 0.569 ml
  • Example 7 3-((5- (Dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2,2-bis (((3-pentyloctanoyl) oxy) methyl) propyl 3-pentyloctanoate A) A suspension of 3-pentyloctanoic acid sodium hydride (1.12 g, containing 40% mineral oil) in THF (40 mL) was stirred under ice-cooling, and ethyl 2- (diethoxyphosphoryl) acetate (6.01 ml) was added. After 10 minutes, the mixture was warmed to room temperature and undecan-6-one (4.10 mL) was added. After stirring at 50 ° C. for 24 hours, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure.
  • 3-pentyloctanoic acid sodium hydride (1.12 g, containing 40% mineral oil) in THF (40 mL) was stirred under ice-cooling, and ethyl 2- (diethoxyphosphoryl) acetate (6
  • the residue was diluted with ethyl acetate, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
  • the residue was purified by silica gel column chromatography (ethyl acetate / hexane). A mixture of the obtained compound, 10% palladium-carbon (100 mg) and ethanol (100 mL) was stirred at room temperature for 18 hours under a hydrogen atmosphere. The reaction mixture was filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure. To the residue were added 8N aqueous sodium hydroxide solution (10.6 mL) and ethanol (40 mL), and the mixture was stirred at 60 ° C. for 1 hr.
  • Example 8 N, N, N-trimethyl-5-oxo-5- (3-((3-pentyloctanoyl) oxy) -2,2-bis (((3-pentyloctanoyl) oxy) methyl) propoxy) pentane- 1-Aminium iodide 3-((5- (dimethylamino) pentanoyl) oxy) -2,2-bis (((3-pentyloctanoyl) oxy) methyl) propyl 3-pentyloctanoate (50.0 mg) acetic acid To an ethyl (0.6 mL) solution, methyl iodide (7.34 ⁇ L) was added at room temperature.
  • Luciferase (luc) siRNA and Factor VII (FVII) siRNA see Table 2 were mixed in equal amounts and dissolved in 25 mM acetate buffer pH 4.0 to obtain a 0.15 mg / ml nucleic acid solution.
  • the obtained lipid solution and nucleic acid solution were mixed at a flow rate ratio of 1 ml / min: 5 ml / min by an Asia microfluidic system (Syrris) at room temperature to obtain a dispersion containing the composition.
  • the obtained dispersion was dialyzed against water at room temperature for 1 hour and against PBS for 18 hours at room temperature using Slyde-A-Lyzer (20K molecular weight cut off, Thermo scientific). Then, it filtered using 0.2 micrometer syringe filter (Iwaki), and preserve
  • the results of the analysis are shown in Table 3.
  • HPRT Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase
  • the obtained lipid solution and nucleic acid solution were mixed at a flow rate ratio of 1 ml / min: 3 ml / min by an Asia microfluidic system at room temperature to obtain a dispersion containing the composition.
  • the resulting dispersion was dialyzed against water at room temperature for 1 hour and against PBS for 18 hours at room temperature using Slyde-A-Lyzer (20K molecular weight cut off). Furthermore, it dialyzed at 4 degreeC with PBS under nitrogen gas filling pressurization, and the solution was concentrated. Subsequently, filtration was performed using a 0.2 ⁇ m or 0.45 ⁇ m syringe filter, and the mixture was stored at 4 ° C. The results of the analysis are shown in Table 5.
  • the obtained lipid solution and nucleic acid solution were mixed at a flow rate ratio of 1 ml / min: 3 ml / min by an Asia microfluidic system at room temperature to obtain a dispersion containing the composition.
  • the resulting dispersion was dialyzed against water at room temperature for 1 hour and against PBS for 18 hours at room temperature using Slyde-A-Lyzer (20K molecular weight cut off). Subsequently, filtration was performed using a 0.2 ⁇ m syringe filter, and stored at 4 ° C.
  • Table 6 The results of the analysis are shown in Table 6.
  • Test Example 1 In vivo knockdown test in liver FVII is an important coagulation factor in the extrinsic blood coagulation reaction, and is produced in liver parenchymal cells and secreted into the blood.
  • FVII concentration in plasma can be measured by simple colorimetric analysis using a plate
  • FVII is a typical useful model for measuring knockdown (KD) in hepatocytes by siRNA.
  • PBS Disperse phosphate buffered saline
  • Example 11 0.25 mg / kg as FVII siRNA
  • the blood was immediately mixed with EDTA (final concentration 0.1%) and centrifuged at 5000 g for 10 minutes.
  • the FVII concentration of the supernatant was measured using BIOPHEN FACTOR 7 CHROMOGENIC ASSAY (HYPHEN BioMed).
  • the residual rate was calculated with the FVII concentration of the PBS administration group as 100%.
  • the FVII concentration in the group administered with Example 11 was 6.9%. From these results, it was revealed that siRNA can be introduced into the liver by using the compound of the present invention.
  • Test Example 2 In vivo knockdown test in cancer tissue HCT116 cells (human colon cancer cell line, American Type Culture) in the right flank of nude mice (BALB / c-nu / nu, 6 weeks old, female, Nippon Charles River) Collection (ATCC), 1x10 6 cells / mouse) was co-transplanted with Matrigel (Becton Dickinson and Company, 356237, 50% by volume), and grouped 15 days later based on tumor volume (1 group 4 mice, group Average tumor volume 521-544mm 3 ).
  • the subcutaneous tumor was removed and frozen on dry ice immediately after weighing.
  • the frozen subcutaneous tumor mass was homogenized with TRIzol Reagent (Invitrogen), chloroform was added and centrifuged, and the aqueous phase containing RNA was separated and recovered. This was extracted and purified using RNeasy mini Kit (QIAGEN) to obtain total RNA.
  • Reverse transcription reaction was performed using SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen), and the amount of human HPRT (hHPRT) mRNA was measured by qPCR method.
  • Probes and primers for hHPRT were obtained from Applied Biosystems Inc. (ABI) (Probe: FAM-TAMRA, 5'-CCATCACATTGTAGCCCTCTGTGTGCTC-3 '(SEQ ID NO: 7); Forward primer: 5'-CGTCTTGCTCGAGATGTGATG-3' (SEQ ID NO: 7) 8); Reverse primer: 5'-CCAGCAGGTCAGCAAAGAATT-3 '(SEQ ID NO: 9)).
  • Human actin beta (hACTB) was used as a standardized gene, and the amount of hHPRT mRNA was calculated with the value of the PBS administration group as 100%.
  • hACTB probes and primers were obtained from ABI (Probe: FAM-TAMRA, 5'-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-3 '(SEQ ID NO: 10); Forward primer: 5'-CCTGGCACCCAGCACAAT-3' (SEQ ID NO: 11); Reverse primer: 5′-GCCGATCCACACGGAGTACT-3 ′ (SEQ ID NO: 12)).
  • ABI Probe: FAM-TAMRA, 5'-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-3 '(SEQ ID NO: 10); Forward primer: 5'-CCTGGCACCCAGCACAAT-3' (SEQ ID NO: 11); Reverse primer: 5′-GCCGATCCACACGGAGTACT-3 ′ (SEQ ID NO: 12)).
  • ABI Probe: FAM-TAMRA, 5'-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-3 '(SEQ ID NO: 10); Forward primer: 5'-CCTGGCACCCAGCACAAT-3'
  • Test Example 3 In vivo knockdown test in adipose tissue HT29-Luc cells (human colon cancer purchased from ATCC) subcutaneously in the right flank of nude mice (BALB / c-nu / nu, 7 weeks old, female, Japanese Charles River) A cell line in which Luciferase was forcibly expressed in cell line HT29 (5 ⁇ 10 6 cells / mouse) was transplanted, and 16 days later, the cells were divided into groups based on the tumor volume (4 mice per group, group average tumor volume 271 to 288 mm 3 ).
  • PBS or a dispersion obtained by the same method as in Example 12 (5 mg / kg as HPRT siRNA) was administered from the tail vein, 48 hours after administration, euthanized by cervical dislocation under 2.5% isoflurane anesthesia
  • Perigenital fat was removed from each mouse, and immediately after weighing, it was frozen with dry ice.
  • the frozen adipose tissue was homogenized with TRIzol Reagent (Invitrogen), and chloroform was added and centrifuged to separate and recover the aqueous phase containing RNA. This was extracted and purified using RNeasy mini Kit (QIAGEN) to obtain total RNA.
  • mHPRT mouse HPRT
  • mHPRT probes and primers purchased from ABI (Mm01545399_m1).
  • Mouse actin beta (mACTB) was used as the standardized gene, and the amount of mHPRT mRNA was calculated with the value of the PBS administration group as 100%.
  • mACTB probes and primers were purchased from ABI (4352341E).
  • the amount of mHPRT remaining in the dispersion-administered group obtained by the same method as in Example 12 was 44% with respect to the PBS-administered group (Table 11). From these results, it was revealed that siRNA can be introduced into fat by using the compound of the present invention.
  • Test Example 4 In vivo knockdown test in bone marrow HT29-Luc cells (human colon cancer cell line purchased from ATCC) subcutaneously in the right flank of nude mice (BALB / c-nu / nu, 6 weeks old, female, CLEA Japan) A cell line in which Luciferase was forcibly expressed in HT29, 5 ⁇ 10 6 cells / mouse) was transplanted, and 17 days later, the cells were divided into groups based on the tumor volume (4 mice per group, group average tumor volume of 321 to 329 mm 3 ).
  • Example 12 PBS or a dispersion obtained by the same method as in Example 12 (5 mg / kg as HPRT siRNA) was administered from the tail vein, 48 hours after administration, euthanized by cervical dislocation under 2.5% isoflurane anesthesia Bone marrow cells were collected from left and right femurs of isolated mice and extracted and purified using RNeasy mini Kit (QIAGEN) to obtain total RNA. Reverse transcription reaction was performed using SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen), and the mRNA amount of mouse HPRT (mHPRT) was measured by qPCR method. mHPRT probes and primers were purchased from ABI (Mm01545399_m1).
  • Mouse actin beta (mACTB) was used as the standardized gene, and the amount of mHPRT mRNA was calculated with the value of the PBS administration group as 100%.
  • mACTB probes and primers were purchased from ABI (4352341E).
  • the amount of mHPRT remaining in the dispersion-administered group obtained by the same method as in Example 12 was 56% with respect to the PBS-administered group (Table 12). From this result, it was revealed that siRNA can be introduced into the bone marrow by using the compound of the present invention.
  • RNAiMAX was 109% (Table 13). From this result, it was revealed that siRNA can be introduced into blood cells by using the compound of the present invention.
  • IVIS in vivo imaging system
  • the compound, lipid particle or composition of the present invention makes it possible to efficiently introduce nucleic acid into various cells, tissues or organs. Therefore, the compound, lipid particle or composition of the present invention can be used as a DDS technique in nucleic acid medicine. The compound, lipid particle or composition of the present invention can also be used as a nucleic acid introduction reagent for research.

Abstract

　本発明は、活性成分（例えば、核酸）を、多種類の細胞に対して優れた効率で導入することを可能にする技術およびこれに用いられる化合物を提供する。 本発明は、式 （１）［式中、各記号は本明細書中で定義した通りである。］で表される化合物またはその塩を提供する。

Description

カチオン性脂質
　本発明は、活性成分、特に核酸を、多種類の細胞、組織または臓器に導入することを可能にする、カチオン性脂質に関する。さらに本発明は、該カチオン性脂質を含有してなる脂質粒子、あるいは、活性成分および該カチオン性脂質を含有してなる組成物に関する。
［発明の背景］
　近年、活性成分として核酸を含有する核酸医薬の研究開発が盛んに行われている。例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃまたはアンチセンス核酸などの核酸を含む、標的ｍＲＮＡの分解作用や機能抑制作用を有する核酸医薬の研究が多数行われている。また、目的タンパク質をコードするｍＲＮＡ等を含む、目的タンパク質を細胞内で発現させるための核酸医薬の研究も行われている。これらの研究開発に関連して、核酸を高効率で細胞、組織または臓器に導入するための技術が、薬物送達系（ＤＤＳ）技術として開発されている。
　上記ＤＤＳ技術としては、核酸と脂質とを混合し、複合体を形成したあと、上記複合体を介して核酸を細胞に取り込ませる技術が従来から知られている。上記複合体形成に使用される脂質としては、カチオン性脂質、親水性ポリマー脂質、ヘルパー脂質等が従来から知られている。上記カチオン性脂質としては、特許文献１～５に記載された化合物等が知られている。
国際公開ＷＯ０３／１０２１５０号パンフレット 国際公開ＷＯ２０１１／１５３４９３号パンフレット 国際公開ＷＯ２０１３／１２６８０３号パンフレット 国際公開ＷＯ２０１２／０５４３６５号パンフレット 国際公開ＷＯ２０１０／０５４４０１号パンフレット
　核酸を高い効率で細胞に導入することを可能とするカチオン性脂質は、薬効発現、安全性（低毒性）などの面で優れた、治療上優れた効果を有する核酸医薬の創出に貢献することが期待される。また、核酸を種々の細胞に導入することを可能とするカチオン性脂質は、種々の組織で生じる各種疾患に対する核酸医薬の創出を可能とすることが期待される。しかしながら、現状では、これらを十分に満足できるものは見出されていない。
　本発明の目的は、活性成分、特に核酸を、優れた効率で細胞に導入することを可能にする技術およびこれに用いられるカチオン性脂質等を提供することにある。また、別の観点では、本発明の目的は、活性成分、特に核酸を、種々の細胞に導入することを可能にする技術およびこれに用いられる化合物等を提供することにある。
　本発明者らが上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、下記の式で示される化合物またはその塩を用いることにより上記課題を解決可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は少なくとも以下の発明に関する：
　［１］　式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
［式中、
　Ｗは、式－ＮＲ１Ｒ２または式－Ｎ＋Ｒ３Ｒ４Ｒ５（Ｚ－）を、
　Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基または水素原子を、
　Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基を、
　Ｚ－は、陰イオンを、
　Ｘは、置換されていてもよいＣ１－６アルキレン基を、
　ＹＡ、ＹＢおよびＹＣは、それぞれ独立して、置換されていてもよいメチン基を、
　ＬＡ、ＬＢおよびＬＣは、それぞれ独立して、置換されていてもよいメチレン基または結合手を、
　ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ４－１０アルキル基を示す。］
で表される化合物またはその塩（本明細書において、「化合物（Ｉ）」または「本発明の化合物」と略記する場合がある）。
　［２］　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、メチル基であり；
　Ｚ－が、ハロゲン化物イオンであり；
　Ｘが、エチレン基、トリメチレン基またはテトラメチレン基であり；
　ＹＡ、ＹＢおよびＹＣが、メチン基であり；
　ＬＡ、ＬＢおよびＬＣが、それぞれ独立して、結合手またはメチレン基であり；
　ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２が、それぞれ独立して、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である、上記［１］記載の化合物またはその塩。
　［３］　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((2-ペンチルヘプタノイル)オキシ)メチル)プロピル 2-ペンチルヘプタノアート、またはその塩。
　［４］　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロピル 3-ペンチルオクタノアート、またはその塩。
　［５］　N,N,N-トリメチル-5-オキソ-5-(3-((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロポキシ)ペンタン-1-アミニウムと陰イオンとの塩。
　［６］　上記［１］ないし［５］のいずれかに記載の化合物またはその塩を含有してなる脂質粒子。
　［７］　活性成分および上記［１］ないし［５］のいずれかに記載の化合物またはその塩を含有してなる組成物。
　［８］　活性成分が、核酸である、上記［７］記載の組成物。
　［９］　核酸が、ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡである、上記［８］記載の組成物。
　本発明により、活性成分、特に核酸を、細胞、組織または臓器に対して優れた効率で導入することが可能となる。また、本発明により、活性成分（特に、核酸）を、多種類の細胞、組織または臓器（例えば、肝臓、癌、脂肪、骨髄、血球系細胞）に導入することが可能となる。本発明により、活性成分(特に、核酸)を多種類の細胞、組織または臓器に導入する医薬または研究用試薬を得ることが可能となる。さらに、本発明により、活性成分を細胞、組織または臓器に導入する場合、該活性成分が有する活性（例えば、薬効）の発現効率が高い。
（発明の詳細な説明）
　以下、本発明の化合物、これらの製造方法および用途について詳細に説明する。
　以下、本明細書中で用いられる各置換基の定義について詳述する。特記しない限り各置換基は以下の定義を有する。
　本明細書中、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１－エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、２－エチルブチルが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキル基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ１－６アルキル基が挙げられる。具体例としては、メチル、クロロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、エチル、２－ブロモエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、テトラフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、プロピル、２，２―ジフルオロプロピル、３，３，３－トリフルオロプロピル、イソプロピル、ブチル、４，４，４－トリフルオロブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、５，５，５－トリフルオロペンチル、ヘキシル、６，６，６－トリフルオロヘキシルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ２－６アルケニル基」としては、例えば、エテニル、１－プロペニル、２－プロペニル、２－メチル－１－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、３－ブテニル、３－メチル－２－ブテニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－ペンテニル、４－ペンテニル、４－メチル－３－ペンテニル、１－ヘキセニル、３－ヘキセニル、５－ヘキセニルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ２－６アルキニル基」としては、例えば、エチニル、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、３－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、４－ペンチニル、１－ヘキシニル、２－ヘキシニル、３－ヘキシニル、４－ヘキシニル、５－ヘキシニル、４－メチル－２－ペンチニルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ３－１０シクロアルキル基」としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、アダマンチルが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン化されていてもよいＣ３－１０シクロアルキル基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ３－１０シクロアルキル基が挙げられる。具体例としては、シクロプロピル、２，２－ジフルオロシクロプロピル、２，３－ジフルオロシクロプロピル、シクロブチル、ジフルオロシクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ３－１０シクロアルケニル基」としては、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ６－１４アリール基」としては、例えば、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、１－アントリル、２－アントリル、９－アントリルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ７－１６アラルキル基」としては、例えば、ベンジル、フェネチル、ナフチルメチル、フェニルプロピルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルコキシ基」としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルコキシ基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ１－６アルコキシ基が挙げられる。具体例としては、メトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、エトキシ、２，２，２－トリフルオロエトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、４，４，４－トリフルオロブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ３－１０シクロアルキルオキシ基」としては、例えば、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロヘプチルオキシ、シクロオクチルオキシが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルキルチオ基」としては、例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、ｓｅｃ－ブチルチオ、ｔｅｒｔ－ブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキルチオ基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ１－６アルキルチオ基が挙げられる。具体例としては、メチルチオ、ジフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、４，４，４－トリフルオロブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルキル－カルボニル基」としては、例えば、アセチル、プロパノイル、ブタノイル、２－メチルプロパノイル、ペンタノイル、３－メチルブタノイル、２－メチルブタノイル、２，２－ジメチルプロパノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイルが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキル－カルボニル基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ１－６アルキル－カルボニル基が挙げられる。具体例としては、アセチル、クロロアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、プロパノイル、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基」としては、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｓｅｃ－ブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、ペンチルオキシカルボニル、ヘキシルオキシカルボニルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ６－１４アリール－カルボニル基」としては、例えば、ベンゾイル、１－ナフトイル、２－ナフトイルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基」としては、例えば、フェニルアセチル、フェニルプロピオニルが挙げられる。
　本明細書中、「５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基」としては、例えば、ニコチノイル、イソニコチノイル、テノイル、フロイルが挙げられる。
　本明細書中、「３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基」としては、例えば、モルホリニルカルボニル、ピペリジニルカルボニル、ピロリジニルカルボニルが挙げられる。
　本明細書中、「モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基」としては、例えば、メチルカルバモイル、エチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、ジエチルカルバモイル、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルカルバモイルが挙げられる。
　本明細書中、「モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基」としては、例えば、ベンジルカルバモイル、フェネチルカルバモイルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルキルスルホニル基」としては、例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ブチルスルホニル、ｓｅｃ－ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ－ブチルスルホニルが挙げられる。
　本明細書中、「ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基」としては、例えば、１ないし７個、好ましくは１ないし５個のハロゲン原子を有していてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基が挙げられる。具体例としては、メチルスルホニル、ジフルオロメチルスルホニル、トリフルオロメチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ブチルスルホニル、４，４，４－トリフルオロブチルスルホニル、ペンチルスルホニル、ヘキシルスルホニルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ６－１４アリールスルホニル基」としては、例えば、フェニルスルホニル、１－ナフチルスルホニル、２－ナフチルスルホニルが挙げられる。
　本明細書中、「置換基」としては、例えば、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、置換されていてもよい炭化水素基、置換されていてもよい複素環基、アシル基、置換されていてもよいアミノ基、置換されていてもよいカルバモイル基、置換されていてもよいチオカルバモイル基、置換されていてもよいスルファモイル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいスルファニル（ＳＨ）基、置換されていてもよいシリル基が挙げられる。
　本明細書中、「炭化水素基」（「置換されていてもよい炭化水素基」における「炭化水素基」を含む）としては、例えば、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ３－１０シクロアルケニル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよい炭化水素基」としては、例えば、下記の置換基群Ａから選ばれる置換基を有していてもよい炭化水素基が挙げられる。
［置換基群Ａ］
（１）ハロゲン原子、
（２）ニトロ基、
（３）シアノ基、
（４）オキソ基、
（５）ヒドロキシ基、
（６）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルコキシ基、
（７）Ｃ６－１４アリールオキシ基（例、フェノキシ、ナフトキシ）、
（８）Ｃ７－１６アラルキルオキシ基（例、ベンジルオキシ）、
（９）５ないし１４員芳香族複素環オキシ基（例、ピリジルオキシ）、
（１０）３ないし１４員非芳香族複素環オキシ基（例、モルホリニルオキシ、ピペリジニルオキシ）、
（１１）Ｃ１－６アルキル－カルボニルオキシ基（例、アセトキシ、プロパノイルオキシ）、
（１２）Ｃ６－１４アリール－カルボニルオキシ基（例、ベンゾイルオキシ、１－ナフトイルオキシ、２－ナフトイルオキシ）、
（１３）Ｃ１－６アルコキシ－カルボニルオキシ基（例、メトキシカルボニルオキシ、エトキシカルボニルオキシ、プロポキシカルボニルオキシ、ブトキシカルボニルオキシ）、
（１４）モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイルオキシ基（例、メチルカルバモイルオキシ、エチルカルバモイルオキシ、ジメチルカルバモイルオキシ、ジエチルカルバモイルオキシ）、
（１５）Ｃ６－１４アリール－カルバモイルオキシ基（例、フェニルカルバモイルオキシ、ナフチルカルバモイルオキシ）、
（１６）５ないし１４員芳香族複素環カルボニルオキシ基（例、ニコチノイルオキシ）、
（１７）３ないし１４員非芳香族複素環カルボニルオキシ基（例、モルホリニルカルボニルオキシ、ピペリジニルカルボニルオキシ）、
（１８）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニルオキシ基（例、メチルスルホニルオキシ、トリフルオロメチルスルホニルオキシ）、
（１９）Ｃ１－６アルキル基で置換されていてもよいＣ６－１４アリールスルホニルオキシ基（例、フェニルスルホニルオキシ、トルエンスルホニルオキシ）、
（２０）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキルチオ基、
（２１）５ないし１４員芳香族複素環基　、
（２２）３ないし１４員非芳香族複素環基　、
（２３）ホルミル基、
（２４）カルボキシ基、
（２５）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキル－カルボニル基、
（２６）Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、
（２７）５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、
（２８）３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、
（２９）Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、
（３０）Ｃ６－１４アリールオキシ－カルボニル基（例、フェニルオキシカルボニル、１－ナフチルオキシカルボニル、２－ナフチルオキシカルボニル）、
（３１）Ｃ７－１６アラルキルオキシ－カルボニル基（例、ベンジルオキシカルボニル、フェネチルオキシカルボニル）、
（３２）カルバモイル基、
（３３）チオカルバモイル基、
（３４）モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基、
（３５）Ｃ６－１４アリール－カルバモイル基（例、フェニルカルバモイル）、
（３６）５ないし１４員芳香族複素環カルバモイル基（例、ピリジルカルバモイル、チエニルカルバモイル）、
（３７）３ないし１４員非芳香族複素環カルバモイル基（例、モルホリニルカルバモイル、ピペリジニルカルバモイル）、
（３８）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基、
（３９）Ｃ６－１４アリールスルホニル基、
（４０）５ないし１４員芳香族複素環スルホニル基（例、ピリジルスルホニル、チエニルスルホニル）、
（４１）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキルスルフィニル基、
（４２）Ｃ６－１４アリールスルフィニル基（例、フェニルスルフィニル、１－ナフチルスルフィニル、２－ナフチルスルフィニル）、
（４３）５ないし１４員芳香族複素環スルフィニル基（例、ピリジルスルフィニル、チエニルスルフィニル）、
（４４）アミノ基、
（４５）モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキルアミノ基（例、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチルアミノ、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアミノ）、
（４６）モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリールアミノ基（例、フェニルアミノ）、
（４７）５ないし１４員芳香族複素環アミノ基（例、ピリジルアミノ）、
（４８）Ｃ７－１６アラルキルアミノ基（例、ベンジルアミノ）、
（４９）ホルミルアミノ基、
（５０）Ｃ１－６アルキル－カルボニルアミノ基（例、アセチルアミノ、プロパノイルアミノ、ブタノイルアミノ）、
（５１）（Ｃ１－６アルキル）（Ｃ１－６アルキル－カルボニル）アミノ基（例、Ｎ－アセチル－Ｎ－メチルアミノ）、
（５２）Ｃ６－１４アリール－カルボニルアミノ基（例、フェニルカルボニルアミノ、ナフチルカルボニルアミノ）、
（５３）Ｃ１－６アルコキシ－カルボニルアミノ基（例、メトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニルアミノ、プロポキシカルボニルアミノ、ブトキシカルボニルアミノ、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）、
（５４）Ｃ７－１６アラルキルオキシ－カルボニルアミノ基（例、ベンジルオキシカルボニルアミノ）、
（５５）Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ基（例、メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ）、
（５６）Ｃ１－６アルキル基で置換されていてもよいＣ６－１４アリールスルホニルアミノ基（例、フェニルスルホニルアミノ、トルエンスルホニルアミノ）、
（５７）ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキル基、
（５８）Ｃ２－６アルケニル基、
（５９）Ｃ２－６アルキニル基、
（６０）Ｃ３－１０シクロアルキル基、
（６１）Ｃ３－１０シクロアルケニル基、及び
（６２）Ｃ６－１４アリール基。
　「置換されていてもよい炭化水素基」における上記置換基の数は、例えば、１ないし５個、好ましくは１ないし３個である。置換基数が２個以上の場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
　本明細書中、「複素環基」（「置換されていてもよい複素環基」における「複素環基」を含む）としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１ないし４個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、(i)芳香族複素環基、(ii)非芳香族複素環基および(iii)７ないし１０員複素架橋環基が挙げられる。
　本明細書中、「芳香族複素環基」（「５ないし１４員芳香族複素環基」を含む）としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１ないし４個のヘテロ原子を含有する５ないし１４員（好ましくは５ないし１０員）の芳香族複素環基が挙げられる。
　該「芳香族複素環基」の好適な例としては、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニルなどの５ないし６員単環式芳香族複素環基；
ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、イミダゾピリジニル、チエノピリジニル、フロピリジニル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、オキサゾロピリジニル、チアゾロピリジニル、イミダゾピラジニル、イミダゾピリミジニル、チエノピリミジニル、フロピリミジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリミジニル、オキサゾロピリミジニル、チアゾロピリミジニル、ピラゾロトリアジニル、ナフト［２，３－ｂ］チエニル、フェノキサチイニル、インドリル、イソインドリル、１Ｈ－インダゾリル、プリニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、カルバゾリル、β－カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニルなどの８ないし１４員縮合多環式（好ましくは２または３環式）芳香族複素環基が挙げられる。
　本明細書中、「非芳香族複素環基」（「３ないし１４員非芳香族複素環基」を含む）としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１ないし４個のヘテロ原子を含有する３ないし１４員（好ましくは４ないし１０員）の非芳香族複素環基が挙げられる。
　該「非芳香族複素環基」の好適な例としては、アジリジニル、オキシラニル、チイラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロフラニル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロイソチアゾリル、テトラヒドロオキサゾリル、テトラヒドロイソオキサゾリル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピリジニル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロピリダジニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、アゼパニル、ジアゼパニル、アゼピニル、オキセパニル、アゾカニル、ジアゾカニルなどの３ないし８員単環式非芳香族複素環基；
ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロベンゾチアゾリル、ジヒドロベンゾイソチアゾリル、ジヒドロナフト［２，３－ｂ］チエニル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロキノリル、４Ｈ－キノリジニル、インドリニル、イソインドリニル、テトラヒドロチエノ［２，３－ｃ］ピリジニル、テトラヒドロベンゾアゼピニル、テトラヒドロキノキサリニル、テトラヒドロフェナントリジニル、ヘキサヒドロフェノチアジニル、ヘキサヒドロフェノキサジニル、テトラヒドロフタラジニル、テトラヒドロナフチリジニル、テトラヒドロキナゾリニル、テトラヒドロシンノリニル、テトラヒドロカルバゾリル、テトラヒドロ－β－カルボリニル、テトラヒドロアクリジニル、テトラヒドロフェナジニル、テトラヒドロチオキサンテニル、オクタヒドロイソキノリルなどの９ないし１４員縮合多環式（好ましくは２または３環式）非芳香族複素環基が挙げられる。
　本明細書中、「７ないし１０員複素架橋環基」の好適な例としては、キヌクリジニル、７－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタニルが挙げられる。
　本明細書中、「含窒素複素環基」としては、「複素環基」のうち、環構成原子として少なくとも１個以上の窒素原子を含有するものが挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよい複素環基」としては、例えば、前記した置換基群Ａから選ばれる置換基を有していてもよい複素環基が挙げられる。
　「置換されていてもよい複素環基」における置換基の数は、例えば、１ないし３個である。置換基数が２個以上の場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
　本明細書中、「アシル基」としては、例えば、「ハロゲン原子、ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルコキシ基、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、アミノ基およびカルバモイル基から選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ３－１０シクロアルケニル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、５ないし１４員芳香族複素環基および３ないし１４員非芳香族複素環基から選ばれる１または２個の置換基」をそれぞれ有していてもよい、ホルミル基、カルボキシ基、カルバモイル基、チオカルバモイル基、スルフィノ基、スルホ基、スルファモイル基、ホスホノ基が挙げられる。
　また、「アシル基」としては、炭化水素－スルホニル基、複素環－スルホニル基、炭化水素－スルフィニル基、複素環－スルフィニル基も挙げられる。
　ここで、炭化水素－スルホニル基とは、炭化水素基が結合したスルホニル基を、複素環－スルホニル基とは、複素環基が結合したスルホニル基を、炭化水素－スルフィニル基とは、炭化水素基が結合したスルフィニル基を、複素環－スルフィニル基とは、複素環基が結合したスルフィニル基を、それぞれ意味する。
　「アシル基」の好適な例としては、ホルミル基、カルボキシ基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ２－６アルケニル－カルボニル基（例、クロトノイル）、Ｃ３－１０シクロアルキル－カルボニル基（例、シクロブタンカルボニル、シクロペンタンカルボニル、シクロヘキサンカルボニル、シクロヘプタンカルボニル）、Ｃ３－１０シクロアルケニル－カルボニル基（例、２－シクロヘキセンカルボニル）、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、Ｃ６－１４アリールオキシ－カルボニル基（例、フェニルオキシカルボニル、ナフチルオキシカルボニル）、Ｃ７－１６アラルキルオキシ－カルボニル基（例、ベンジルオキシカルボニル、フェネチルオキシカルボニル）、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ２－６アルケニル－カルバモイル基（例、ジアリルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ３－１０シクロアルキル－カルバモイル基（例、シクロプロピルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－カルバモイル基（例、フェニルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基、５ないし１４員芳香族複素環カルバモイル基（例、ピリジルカルバモイル）、チオカルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－チオカルバモイル基（例、メチルチオカルバモイル、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ２－６アルケニル－チオカルバモイル基（例、ジアリルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ３－１０シクロアルキル－チオカルバモイル基（例、シクロプロピルチオカルバモイル、シクロヘキシルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－チオカルバモイル基（例、フェニルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－チオカルバモイル基（例、ベンジルチオカルバモイル、フェネチルチオカルバモイル）、５ないし１４員芳香族複素環チオカルバモイル基（例、ピリジルチオカルバモイル）、スルフィノ基、Ｃ１－６アルキルスルフィニル基（例、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル）、スルホ基、Ｃ１－６アルキルスルホニル基、Ｃ６－１４アリールスルホニル基、ホスホノ基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキルホスホノ基（例、ジメチルホスホノ、ジエチルホスホノ、ジイソプロピルホスホノ、ジブチルホスホノ）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいアミノ基」としては、例えば、置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環基、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基、Ｃ１－６アルキルスルホニル基およびＣ６－１４アリールスルホニル基から選ばれる１または２個の置換基」を有していてもよいアミノ基が挙げられる。
　置換されていてもよいアミノ基の好適な例としては、アミノ基、モノ－またはジ－（ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキル）アミノ基（例、メチルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、プロピルアミノ、ジブチルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ２－６アルケニルアミノ基（例、ジアリルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ３－１０シクロアルキルアミノ基（例、シクロプロピルアミノ、シクロヘキシルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリールアミノ基（例、フェニルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキルアミノ基（例、ベンジルアミノ、ジベンジルアミノ）、モノ－またはジ－（ハロゲン化されていてもよいＣ１－６アルキル）－カルボニルアミノ基（例、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－カルボニルアミノ基（例、ベンゾイルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルボニルアミノ基（例、ベンジルカルボニルアミノ）、モノ－またはジ－５ないし１４員芳香族複素環カルボニルアミノ基（例、ニコチノイルアミノ、イソニコチノイルアミノ）、モノ－またはジ－３ないし１４員非芳香族複素環カルボニルアミノ基（例、ピペリジニルカルボニルアミノ）、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルコキシ－カルボニルアミノ基（例、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）、５ないし１４員芳香族複素環アミノ基（例、ピリジルアミノ）、カルバモイルアミノ基、（モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル）アミノ基（例、メチルカルバモイルアミノ）、（モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル）アミノ基（例、ベンジルカルバモイルアミノ）、Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ基（例、メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ）、Ｃ６－１４アリールスルホニルアミノ基（例、フェニルスルホニルアミノ）、（Ｃ１－６アルキル）（Ｃ１－６アルキル－カルボニル）アミノ基（例、Ｎ－アセチル－Ｎ－メチルアミノ）、（Ｃ１－６アルキル）（Ｃ６－１４アリール－カルボニル）アミノ基（例、Ｎ－ベンゾイル－Ｎ－メチルアミノ）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいカルバモイル基」としては、例えば、「置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環基、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基およびモノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基から選ばれる１または２個の置換基」を有していてもよいカルバモイル基が挙げられる。
　置換されていてもよいカルバモイル基の好適な例としては、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ２－６アルケニル－カルバモイル基（例、ジアリルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ３－１０シクロアルキル－カルバモイル基（例、シクロプロピルカルバモイル、シクロヘキシルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－カルバモイル基（例、フェニルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルボニル－カルバモイル基（例、アセチルカルバモイル、プロピオニルカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－カルボニル－カルバモイル基（例、ベンゾイルカルバモイル）、５ないし１４員芳香族複素環カルバモイル基（例、ピリジルカルバモイル）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいチオカルバモイル基」としては、例えば、「置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環基、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基およびモノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基から選ばれる１または２個の置換基」を有していてもよいチオカルバモイル基が挙げられる。
　置換されていてもよいチオカルバモイル基の好適な例としては、チオカルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－チオカルバモイル基（例、メチルチオカルバモイル、エチルチオカルバモイル、ジメチルチオカルバモイル、ジエチルチオカルバモイル、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ２－６アルケニル－チオカルバモイル基（例、ジアリルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ３－１０シクロアルキル－チオカルバモイル基（例、シクロプロピルチオカルバモイル、シクロヘキシルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－チオカルバモイル基（例、フェニルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－チオカルバモイル基（例、ベンジルチオカルバモイル、フェネチルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルボニル－チオカルバモイル基（例、アセチルチオカルバモイル、プロピオニルチオカルバモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－カルボニル－チオカルバモイル基（例、ベンゾイルチオカルバモイル）、５ないし１４員芳香族複素環チオカルバモイル基（例、ピリジルチオカルバモイル）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいスルファモイル基」としては、例えば、「置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環基、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基およびモノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基から選ばれる１または２個の置換基」を有していてもよいスルファモイル基が挙げられる。
　置換されていてもよいスルファモイル基の好適な例としては、スルファモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－スルファモイル基（例、メチルスルファモイル、エチルスルファモイル、ジメチルスルファモイル、ジエチルスルファモイル、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルスルファモイル）、モノ－またはジ－Ｃ２－６アルケニル－スルファモイル基（例、ジアリルスルファモイル）、モノ－またはジ－Ｃ３－１０シクロアルキル－スルファモイル基（例、シクロプロピルスルファモイル、シクロヘキシルスルファモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－スルファモイル基（例、フェニルスルファモイル）、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－スルファモイル基（例、ベンジルスルファモイル、フェネチルスルファモイル）、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルボニル－スルファモイル基（例、アセチルスルファモイル、プロピオニルスルファモイル）、モノ－またはジ－Ｃ６－１４アリール－カルボニル－スルファモイル基（例、ベンゾイルスルファモイル）、５ないし１４員芳香族複素環スルファモイル基（例、ピリジルスルファモイル）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいヒドロキシ基」としては、例えば、「置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環カルボニル基、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニル基、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニル基、５ないし１４員芳香族複素環基、カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ１－６アルキル－カルバモイル基、モノ－またはジ－Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイル基、Ｃ１－６アルキルスルホニル基およびＣ６－１４アリールスルホニル基から選ばれる置換基」を有していてもよいヒドロキシ基が挙げられる。
　置換されていてもよいヒドロキシ基の好適な例としては、ヒドロキシ基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ２－６アルケニルオキシ基（例、アリルオキシ、２－ブテニルオキシ、２－ペンテニルオキシ、３－ヘキセニルオキシ）、Ｃ３－１０シクロアルキルオキシ基（例、シクロヘキシルオキシ）、Ｃ６－１４アリールオキシ基（例、フェノキシ、ナフチルオキシ）、Ｃ７－１６アラルキルオキシ基（例、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ）、Ｃ１－６アルキル－カルボニルオキシ基（例、アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリルオキシ、ピバロイルオキシ）、Ｃ６－１４アリール－カルボニルオキシ基（例、ベンゾイルオキシ）、Ｃ７－１６アラルキル－カルボニルオキシ基（例、ベンジルカルボニルオキシ）、５ないし１４員芳香族複素環カルボニルオキシ基（例、ニコチノイルオキシ）、３ないし１４員非芳香族複素環カルボニルオキシ基（例、ピペリジニルカルボニルオキシ）、Ｃ１－６アルコキシ－カルボニルオキシ基（例、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルオキシ）、５ないし１４員芳香族複素環オキシ基（例、ピリジルオキシ）、カルバモイルオキシ基、Ｃ１－６アルキル－カルバモイルオキシ基（例、メチルカルバモイルオキシ）、Ｃ７－１６アラルキル－カルバモイルオキシ基（例、ベンジルカルバモイルオキシ）、Ｃ１－６アルキルスルホニルオキシ基（例、メチルスルホニルオキシ、エチルスルホニルオキシ）、Ｃ６－１４アリールスルホニルオキシ基（例、フェニルスルホニルオキシ）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいスルファニル基」としては、例えば、「置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ１－６アルキル－カルボニル基、Ｃ６－１４アリール－カルボニル基および５ないし１４員芳香族複素環基から選ばれる置換基」を有していてもよいスルファニル基、ハロゲン化されたスルファニル基が挙げられる。
　置換されていてもよいスルファニル基の好適な例としては、スルファニル（－ＳＨ）基、Ｃ１－６アルキルチオ基、Ｃ２－６アルケニルチオ基（例、アリルチオ、２－ブテニルチオ、２－ペンテニルチオ、３－ヘキセニルチオ）、Ｃ３－１０シクロアルキルチオ基（例、シクロヘキシルチオ）、Ｃ６－１４アリールチオ基（例、フェニルチオ、ナフチルチオ）、Ｃ７－１６アラルキルチオ基（例、ベンジルチオ、フェネチルチオ）、Ｃ１－６アルキル－カルボニルチオ基（例、アセチルチオ、プロピオニルチオ、ブチリルチオ、イソブチリルチオ、ピバロイルチオ）、Ｃ６－１４アリール－カルボニルチオ基（例、ベンゾイルチオ）、５ないし１４員芳香族複素環チオ基（例、ピリジルチオ）、ハロゲン化チオ基（例、ペンタフルオロチオ）が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいシリル基」としては、例えば、「置換基群Ａから選ばれる１ないし３個の置換基をそれぞれ有していてもよい、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－１０シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基およびＣ７－１６アラルキル基から選ばれる１ないし３個の置換基」を有していてもよいシリル基が挙げられる。
　置換されていてもよいシリル基の好適な例としては、トリ－Ｃ１－６アルキルシリル基（例、トリメチルシリル、tert-ブチル（ジメチル）シリル）が挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルキレン基」としては、例えば、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）３－、－（ＣＨ２）４－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、－ＣＨ（ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）２－、－ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）－、－ＣＨ（Ｃ３Ｈ７）－、－ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）－、－（ＣＨ（ＣＨ３））２－、－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－、－ＣＨ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－が挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ２－６アルケニレン基」としては、例えば、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｃ（ＣＨ３）２－、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－が挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ２－６アルキニレン基」としては、例えば、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＨ２－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ≡Ｃ－Ｃ（ＣＨ３）２－、－ＣＨ２－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｃ≡Ｃ－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ≡Ｃ－が挙げられる。
　本明細書中、「炭化水素環」としては、例えば、Ｃ６－１４芳香族炭化水素環、Ｃ３－１０シクロアルカン、Ｃ３－１０シクロアルケンが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ６－１４芳香族炭化水素環」としては、例えば、ベンゼン、ナフタレンが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ３－１０シクロアルカン」としては、例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタンが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ３－１０シクロアルケン」としては、例えば、シクロプロペン、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテンが挙げられる。
　本明細書中、「複素環」としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１ないし４個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、芳香族複素環および非芳香族複素環が挙げられる。
　本明細書中、「芳香族複素環」としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１ないし４個のヘテロ原子を含有する５ないし１４員（好ましくは５ないし１０員）の芳香族複素環が挙げられる。該「芳香族複素環」の好適な例としては、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、１，２，４－オキサジアゾール、１，３，４－オキサジアゾール、１，２，４－チアジアゾール、１，３，４－チアジアゾール、トリアゾール、テトラゾール、トリアジンなどの５ないし６員単環式芳香族複素環；
ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイソチアゾール、ベンゾトリアゾール、イミダゾピリジン、チエノピリジン、フロピリジン、ピロロピリジン、ピラゾロピリジン、オキサゾロピリジン、チアゾロピリジン、イミダゾピラジン、イミダゾピリミジン、チエノピリミジン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ピラゾロピリミジン、オキサゾロピリミジン、チアゾロピリミジン、ピラゾロピリミジン、ピラゾロトリアジン、ナフト［２，３－ｂ］チオフェン、フェノキサチイン、インド－ル、イソインドール、１Ｈ－インダゾール、プリン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、カルバゾール、β－カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナジン、フェノチアジン、フェノキサジンなどの８ないし１４員縮合多環式（好ましくは２または３環式）芳香族複素環が挙げられる。
　本明細書中、「非芳香族複素環」としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１ないし４個のヘテロ原子を含有する３ないし１４員（好ましくは４ないし１０員）の非芳香族複素環が挙げられる。該「非芳香族複素環」の好適な例としては、アジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、ピロリン、ピロリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、ピラゾリン、ピラゾリジン、チアゾリン、チアゾリジン、テトラヒドロイソチアゾール、テトラヒドロオキサゾール、テトラヒドロイソオキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロピリジン、ジヒドロピリジン、ジヒドロチオピラン、テトラヒドロピリミジン、テトラヒドロピリダジン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピラン、モルホリン、チオモルホリン、アゼパニン、ジアゼパン、アゼピン、アゾカン、ジアゾカン、オキセパンなどの３ないし８員単環式非芳香族複素環；
ジヒドロベンゾフラン、ジヒドロベンゾイミダゾール、ジヒドロベンゾオキサゾール、ジヒドロベンゾチアゾール、ジヒドロベンゾイソチアゾール、ジヒドロナフト［２，３－ｂ］チオフェン、テトラヒドロイソキノリン、テトラヒドロキノリン、４Ｈ－キノリジン、インドリン、イソインドリン、テトラヒドロチエノ［２，３－ｃ］ピリジン、テトラヒドロベンゾアゼピン、テトラヒドロキノキサリン、テトラヒドロフェナントリジン、ヘキサヒドロフェノチアジン、ヘキサヒドロフェノキサジン、テトラヒドロフタラジン、テトラヒドロナフチリジン、テトラヒドロキナゾリン、テトラヒドロシンノリン、テトラヒドロカルバゾール、テトラヒドロ－β－カルボリン、テトラヒドロアクリジン、テトラヒドロフェナジン、テトラヒドロチオキサンテン、オクタヒドロイソキノリンなどの９ないし１４員縮合多環式（好ましくは２または３環式）非芳香族複素環が挙げられる。
　本明細書中、「含窒素複素環」としては、「複素環」のうち、環構成原子として少なくとも１個以上の窒素原子を含有するものが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－４アルキル基」としては、例えば、前記Ｃ１－６アルキル基で例示されたもののうち炭素原子数が１ないし４個のものが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ４－１０アルキル基」としては、例えば、前記Ｃ１－６アルキル基で例示されたもののうち炭素原子数が４個以上のもの、および、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルが挙げられる。
　本明細書中、「Ｃ１－６アルキレン基」としては、例えば、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）３－、－（ＣＨ２）４－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、－ＣＨ（ＣＨ３）－、－Ｃ（ＣＨ３）２－、－ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）－、－ＣＨ（Ｃ３Ｈ７）－、－ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）－、－（ＣＨ（ＣＨ３））２－、－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－、－ＣＨ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいＣ４－１０アルキル基」としては、前記置換基群Ａから選ばれる置換基を有していてもよいＣ４－１０アルキル基が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいＣ１－６アルキレン基」としては、前記置換基群Ａから選ばれる置換基を有していてもよいＣ１－６アルキレン基が挙げられる。
　本明細書中、「置換されていてもよいメチン基」としては、前記置換基群Ａから選ばれる置換基を有していてもよいメチン基が挙げられる。
本明細書中、「置換されていてもよいメチレン基」としては、前記置換基群Ａから選ばれる置換基を有していてもよいメチレン基が挙げられる。
　前記一般式で示される化合物におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｚ－、Ｘ、ＹＡ、ＹＢ、ＹＣ、ＬＡ、ＬＢ、ＬＣ、ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２の好ましい例を以下に示す。
　Ｒ１は、好ましくは、Ｃ１－４アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
　Ｒ２は、好ましくは、Ｃ１－４アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
　Ｒ３は、好ましくは、メチル基である。
　Ｒ４は、好ましくは、メチル基である。
　Ｒ５は、好ましくは、メチル基である。
　Ｚ－としては、薬理学的に許容される陰イオンが好ましく、その好適な例としては、ハロゲン化物イオン（フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオンおよびヨウ化物イオン）；硝酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオンからなる群から選ばれる無機酸の陰イオン；ギ酸イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、フタル酸イオン、フマル酸イオン、シュウ酸イオン、酒石酸イオン、マレイン酸イオン、クエン酸イオン、コハク酸イオン、リンゴ酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ－トルエンスルホン酸イオンからなる群から選ばれる有機酸の陰イオン；またはアスパラギン酸イオンおよびグルタミン酸イオンからなる群から選ばれる酸性アミノ酸の陰イオンが挙げられる。Ｚ－は、さらにより好ましくは、ハロゲン化物イオン（特に、ヨウ化物イオン）である。
　Ｘは、好ましくは、Ｃ１－６アルキレン基であり、より好ましくは、エチレン基、トリメチレン基またはテトラメチレン基である。
　ＹＡは、好ましくは、メチン基である。
　ＹＢは、好ましくは、メチン基である。
　ＹＣは、好ましくは、メチン基である。
　ＬＡは、好ましくは、結合手またはメチレン基である。
　ＬＢは、好ましくは、結合手またはメチレン基である。
　ＬＣは、好ましくは、結合手またはメチレン基である。
　ＲＡ１は、好ましくは、Ｃ４－１０アルキル基であり、より好ましくは、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である。
　ＲＡ２は、好ましくは、Ｃ４－１０アルキル基であり、より好ましくは、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である。
　ＲＢ１は、好ましくは、Ｃ４－１０アルキル基であり、より好ましくは、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である。
　ＲＢ２は、好ましくは、Ｃ４－１０アルキル基であり、より好ましくは、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である。
　ＲＣ１は、好ましくは、Ｃ４－１０アルキル基であり、より好ましくは、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である。
　ＲＣ２は、好ましくは、Ｃ４－１０アルキル基であり、より好ましくは、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である。
　化合物（Ｉ）の好適な具体例としては、以下が挙げられる：
　化合物（Ａ）：
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、メチル基であり；
　Ｚ－が、ハロゲン化物イオン（特に、ヨウ化物イオン）であり；
　Ｘが、エチレン基、トリメチレン基またはテトラメチレン基であり；
　ＹＡ、ＹＢおよびＹＣが、メチン基であり；
　ＬＡ、ＬＢおよびＬＣが、それぞれ独立して、結合手またはメチレン基であり；
　ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２が、それぞれ独立して、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である、化合物（Ｉ）。
　化合物（Ｂ）：
　Ｗが、式－ＮＲ１Ｒ２である化合物（Ａ）。
　化合物（Ｃ）：
　Ｗが、式－Ｎ＋Ｒ３Ｒ４Ｒ５（Ｚ－）であり；
　Ｚ－が、ヨウ化物イオンであり；
　Ｘが、テトラメチレン基であり；
　ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２が、ペンチル基である、化合物（Ａ）。
　化合物（Ｉ）における塩としては、薬理学的に許容される塩が好ましく、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩が挙げられる。
　無機塩基との塩の好適な例としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、アンモニウム塩が挙げられる。
　有機塩基との塩の好適な例としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン］、ｔｅｒｔ－ブチルアミン、シクロヘキシルアミン、ベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチレンジアミンとの塩が挙げられる。
　無機酸との塩の好適な例としては、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸との塩が挙げられる。
　有機酸との塩の好適な例としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸との塩が挙げられる。
　塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、アルギニン、リジン、オルニチンとの塩が挙げられる。
　酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、アスパラギン酸、グルタミン酸との塩が挙げられる。
　本発明において使用される「活性成分」とは、生物学的または薬理学的活性を有する物質を指し、特に医薬的用途または研究目的用途に有用な物質を指す。活性成分としては、例えば核酸が挙げられる。
　「核酸」とは、ヌクレオチドおよび該ヌクレオチドと同等の機能を有する分子が重合した分子であればいかなるものでもよく、例えば、リボヌクレオチドの重合体であるＲＮＡ、デオキシリボヌクレオチドの重合体であるＤＮＡ、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドが混合した重合体、および、ヌクレオチド類似体を含むヌクレオチド重合体を挙げることができ、さらに、核酸誘導体を含むヌクレオチド重合体であってもよい。また、核酸は、一本鎖核酸または二本鎖核酸であってもよい。また二本鎖核酸には、一方の鎖に対し、他方の鎖がストリンジェントな条件でハイブリダイズする二本鎖核酸も含まれる。
　ヌクレオチド類似体としては、ＲＮＡまたはＤＮＡと比較して、ヌクレアーゼ耐性の向上または、安定化させるため、相補鎖核酸とのアフィニティーを上げるため、あるいは細胞透過性を上げるため、あるいは可視化させるために、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、ＲＮＡまたはＤＮＡに修飾を施した分子であればいかなる分子でもよい。ヌクレオチド類似体としては、天然に存在する分子でも非天然の分子でもよく、例えば、糖部修飾ヌクレオチド類似体やリン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチド類似体等が挙げられる。
　糖部修飾ヌクレオチド類似体としては、ヌクレオチドの糖の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の化学構造物質を付加あるいは置換したものであればいかなるものでもよく、その具体例としては、２’－Ｏ－メチルリボースで置換されたヌクレオチド類似体、２’－Ｏ－プロピルリボースで置換されたヌクレオチド類似体、２’－メトキシエトキシリボースで置換されたヌクレオチド類似体、２’－Ｏ－メトキシエチルリボースで置換されたヌクレオチド類似体、２’－Ｏ－［２－（グアニジウム）エチル］リボースで置換されたヌクレオチド類似体、２’－Ｏ－フルオロリボースで置換されたヌクレオチド類似体、糖部に架橋構造を導入することにより２つの環状構造を有する架橋構造型人工核酸（Bridged Nucleic Acid）(ＢＮＡ)、より具体的には、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子がメチレンを介して架橋したロックド人工核酸（Locked Nucleic Acid）（ＬＮＡ）、およびエチレン架橋構造型人工核酸（Ethylene bridged nucleic acid）（ＥＮＡ）［Nucleic Acid Research, 32, e175(2004)］が挙げられ、さらにペプチド核酸（ＰＮＡ）[Acc. Chem. Res., 32, 624 (1999)]、オキシペプチド核酸（ＯＰＮＡ）[J. Am. Chem. Soc., 123, 4653 (2001)]、およびペプチドリボ核酸（ＰＲＮＡ）[J. Am. Chem. Soc., 122, 6900 (2000)]等を挙げることができる。
　リン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチド類似体としては、ヌクレオチドのリン酸ジエステル結合の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の化学物質を付加あるいは置換したものであればいかなるものでもよく、その具体例としては、ホスフォロチオエート結合に置換されたヌクレオチド類似体、Ｎ３’－Ｐ５’ホスフォアミデート結合に置換されたヌクレオチド類似体等を挙げることができる［細胞工学, 16, 1463-1473 (1997)］［RNAi法とアンチセンス法、講談社(2005)］。
　核酸誘導体としては、核酸に比べ、ヌクレアーゼ耐性を向上させるため、安定化させるため、相補鎖核酸とのアフィニティーを上げるため、細胞透過性を上げるため、あるいは可視化させるために、該核酸に別の化学物質を付加した分子であればいかなる分子でもよく、その具体例としては、５’－ポリアミン付加誘導体、コレステロール付加誘導体、ステロイド付加誘導体、胆汁酸付加誘導体、ビタミン付加誘導体、Ｃｙ５付加誘導体、Ｃｙ３付加誘導体、６－ＦＡＭ付加誘導体、およびビオチン付加誘導体等を挙げることができる。
　活性成分は、好ましくは核酸であり、核酸の具体例としては、例えばｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ、アンチセンス核酸、リボザイム、ｍＲＮＡ、デコイ核酸、アプタマーが挙げられる。核酸としては、ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡが好ましい。
　本発明において、「ｓｉＲＮＡ」とは、１０～３０塩基、好ましくは１５～２５塩基の二本鎖ＲＮＡまたはその類縁体であって、相補的配列を含むものを意味する。ｓｉＲＮＡは、好ましくは、３’末端に１～３塩基、より好ましくは２塩基の突出塩基を有する。相補的配列部分は、完全に相補的であっても良く、または相補的でない塩基を含んでいてもよいが、好ましくは完全に相補的である。
　本発明において、「ｍＲＮＡ」とは、タンパク質に翻訳可能な塩基配列を含むＲＮＡを意味する。
　本発明において、化合物（Ｉ）はカチオン性脂質として使用することができる。カチオン性脂質は、溶媒または分散媒中において、複数の分子と共に複合体を形成しうる。上記複合体には化合物（Ｉ）に加えて、他の成分が含まれていてもよい。上記他の成分の例としては、その他の脂質（構造脂質（例えば、コレステロールおよびホスファチジルコリン（例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリンやジステアロイルホスファチジルコリン））、ポリエチレングリコール脂質（例えば、ＧＭ－０２０（ＮＯＦ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ）、ＧＳ－０２０（ＮＯＦ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ）など））および活性成分が挙げられる。
　本発明において、「脂質粒子」とは、上記複合体のうち、活性成分を含まない複合体を意味する。
　(1)(i)本発明の化合物あるいは(ii)当該化合物を含有してなる脂質粒子は、(2)活性成分および(3)必要に応じて上記その他の脂質とともに組成物（本明細書中、本発明の組成物と略記することがある）とすることにより、医薬または試薬として用いることができる。本発明の組成物は、薬学的に許容される担体を用いて、製剤技術分野において自体公知の方法により製造することができる。上記医薬の剤型として、例えば、緩衝剤および／または安定剤等の慣用の助剤を配合した非経口投与用製剤（例えば、注射剤などの液剤）、慣用の医薬用担体が配合された軟膏、クリーム、液剤または膏薬等の局所用製剤を挙げることができる。
　本発明の組成物は、多数の種類の細胞、組織または臓器に活性成分を導入するために使用することができる。これらの細胞、組織または臓器としては、例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球、巨核球）、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞などや血球系細胞、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織もしくは臓器、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、延髄、小脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳染、黒質）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、末梢血球、前立腺、睾丸、精巣、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節及び骨格筋が挙げられる。これら細胞、組織または臓器は、癌化した癌細胞や癌組織等であってもよい。
　本発明の組成物は、特に、肝臓、癌細胞、脂肪細胞、血球系細胞、骨髄細胞に活性成分を導入する効率に優れる。
　本発明の化合物および本発明の組成物は、安定かつ低毒性で安全に使用することができる。本発明の組成物を医薬として用いる場合、投与対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に対して、活性成分の有効量が投与されるように、該組成物を投与すればよい。
　本発明の化合物の製造方法について以下に説明する。
　以下の製造方法における各工程で用いられた原料や試薬、ならびに得られた化合物は、それぞれ塩を形成していてもよい。このような塩としては、例えば、前述の本発明の化合物における塩と同様のものが挙げられる。
　各工程で得られた化合物が遊離化合物である場合には、自体公知の方法により、目的とする塩に変換することができる。逆に各工程で得られた化合物が塩である場合には、自体公知の方法により、遊離体または目的とする他の種類の塩に変換することができる。
　各工程で得られた化合物は反応液のままか、または粗生成物として得た後に、次反応に用いることもできる、あるいは、各工程で得られた化合物を、常法に従って、反応混合物から濃縮、晶出、再結晶、蒸留、溶媒抽出、分溜、クロマトグラフィーなどの分離手段により単離および／または精製することができる。
　各工程の原料や試薬の化合物が市販されている場合には、市販品をそのまま用いることができる。
　各工程の反応において、反応時間は、用いる試薬や溶媒により異なり得るが、特に記載の無い場合、通常１分～４８時間、好ましくは１０分～８時間である。
　各工程の反応において、反応温度は、用いる試薬や溶媒により異なり得るが、特に記載が無い場合、通常－７８℃～３００℃、好ましくは－７８℃～１５０℃である。
　各工程の反応において、圧力は、用いる試薬や溶媒により異なり得るが、特に記載が無い場合、通常１気圧～２０気圧、好ましくは１気圧～３気圧である。
　各工程の反応において、例えば、Ｂｉｏｔａｇｅ社製ＩｎｉｔｉａｔｏｒなどのＭｉｃｒｏｗａｖｅ合成装置を用いることがある。反応温度は、用いる試薬や溶媒により異なり得るが、特に記載がない場合、通常室温～３００℃、好ましくは５０℃～２５０℃である。反応時間は、用いる試薬や溶媒により異なり得るが、特に記載の無い場合、通常１分～４８時間、好ましくは１分～８時間である。
　各工程の反応において、試薬は、特に記載が無い場合、基質に対して０．５当量～２０当量、好ましくは０．８当量～５当量が用いられる。試薬を触媒として使用する場合、試薬は基質に対して０．００１当量～１当量、好ましくは０．０１当量～０．２当量が用いられる。試薬が反応溶媒を兼ねる場合、試薬は溶媒量が用いられる。
　各工程の反応において、特に記載が無い場合、これらの反応は、無溶媒、あるいは適当な溶媒に溶解または懸濁して行われる。溶媒の具体例としては、実施例に記載されている溶媒、あるいは以下が挙げられる。
　アルコール類：メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ－ブチルアルコール、２－メトキシエタノールなど；
　エーテル類：ジエチルエーテル、ジフェニルエーテル、テトラヒドロフラン、１，２－ジメトキシエタンなど；
　芳香族炭化水素類：クロロベンゼン、トルエン、キシレンなど；
　飽和炭化水素類：シクロヘキサン、ヘキサンなど   ；
　アミド類：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－メチルピロリドンなど；
　ハロゲン化炭化水素類：ジクロロメタン、四塩化炭素など；
　ニトリル類：アセトニトリルなど；
　スルホキシド類：ジメチルスルホキシドなど；
　芳香族有機塩基類：ピリジンなど；
　酸無水物類：無水酢酸など；
　有機酸類：ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸など；
　無機酸類：塩酸、硫酸など；
　エステル類：酢酸エチルなど；
　ケトン類：アセトン、メチルエチルケトンなど；
　水。
　上記溶媒は、二種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
　各工程の反応において塩基を用いる場合、例えば、以下に示す塩基、あるいは実施例に記載されている塩基が用いられる。
無機塩基類：水酸化ナトリウム、水酸化マグネシウムなど；
塩基性塩類：炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウムなど；
有機塩基類：トリエチルアミン、ジエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン、イミダゾール、ピペリジンなど；
金属アルコキシド類：ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドなど；
アルカリ金属水素化物類：水素化ナトリウムなど；
金属アミド類：ナトリウムアミド、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラジドなど；
有機リチウム類：ｎ－ブチルリチウムなど。
　各工程の反応において酸または酸性触媒を用いる場合、例えば、以下に示す酸や酸性触媒、あるいは実施例に記載されている酸や酸性触媒が用いられる。
無機酸類：塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸など；
有機酸類：酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、１０－カンファースルホン酸など；
ルイス酸：三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体、ヨウ化亜鉛、無水塩化アルミニウム、無水塩化亜鉛、無水塩化鉄など。
　各工程の反応は、特に記載の無い限り、自体公知の方法、例えば、第５版実験化学講座、１３巻～１９巻（日本化学会編）；新実験化学講座、１４巻～１５巻（日本化学会編）；精密有機化学　改定第２版（Ｌ．　Ｆ．　Ｔｉｅｔｚｅ，Ｔｈ．　Ｅｉｃｈｅｒ、南江堂）；改訂　有機人名反応　そのしくみとポイント（東郷秀雄著、講談社）；ＯＲＧＡＮＩＣ　ＳＹＮＴＨＥＳＥＳ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ　Ｖｏｌｕｍｅ　Ｉ～ＶＩＩ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　ＳｏｎｓＩｎｃ）；Ｍｏｄｅｒｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ｊｉｅ　Ｊａｃｋ　Ｌｉ著、ＯＸＦＯＲＤ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ出版）；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ＩＩＩ、Ｖｏｌ．１～Ｖｏｌ．１４（エルゼビア・ジャパン株式会社）；人名反応に学ぶ有機合成戦略（富岡清監訳、化学同人発行）；コンプリヘンシブ・オーガニック・トランスフォーメーションズ（ＶＣＨ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ｉｎｃ．）１９８９年刊などに記載された方法、あるいは実施例に記載された方法に準じて行われる。
　各工程において、官能基の保護または脱保護反応は、自体公知の方法、例えば、Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社２００７年刊「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，　４ｔｈＥｄ．」（Ｔｈｅｏｄｏｒａ　Ｗ．　Ｇｒｅｅｎｅ，　Ｐｅｔｅｒ　Ｇ．　Ｍ．　Ｗｕｔｓ著）；Ｔｈｉｅｍｅ社２００４年刊「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　３ｒｄＥｄ．」（Ｐ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ著）などに記載された方法、あるいは実施例に記載された方法に準じて行われる。
　アルコールなどの水酸基やフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、メトキシメチルエーテル、ベンジルエーテル、ｔ－ブチルジメチルシリルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテルなどのエーテル型保護基；酢酸エステルなどのカルボン酸エステル型保護基；メタンスルホン酸エステルなどのスルホン酸エステル型保護基；ｔ－ブチルカルボネートなどの炭酸エステル型保護基などが挙げられる。
　アルデヒドのカルボニル基の保護基としては、例えば、ジメチルアセタールなどのアセタール型保護基；環状１，３－ジオキサンなどの環状アセタール型保護基などが挙げられる。
　ケトンのカルボニル基の保護基としては、例えば、ジメチルケタールなどのケタール型保護基；環状１，３－ジオキサンなどの環状ケタール型保護基；Ｏ－メチルオキシムなどのオキシム型保護基；Ｎ，Ｎ－ジメチルヒドラゾンなどのヒドラゾン型保護基などが挙げられる。
　カルボキシル基の保護基としては、例えば、メチルエステルなどのエステル型保護基；Ｎ，Ｎ－ジメチルアミドなどのアミド型保護基などが挙げられる。
　チオールの保護基としては、例えば、ベンジルチオエーテルなどのエーテル型保護基；チオ酢酸エステル、チオカルボネート、チオカルバメートなどのエステル型保護基などが挙げられる。
　アミノ基や、イミダゾール、ピロール、インドールなどの芳香族ヘテロ環の保護基としては、例えば、ベンジルカルバメートなどのカルバメート型保護基；アセトアミドなどのアミド型保護基；Ｎ－トリフェニルメチルアミンなどのアルキルアミン型保護基、メタンスルホンアミドなどのスルホンアミド型保護基などが挙げられる。
　保護基の除去は、自体公知の方法、例えば、酸、塩基、紫外光、ヒドラジン、フェニルヒドラジン、Ｎ－メチルジチオカルバミン酸ナトリウム、テトラブチルアンモニウムフルオリド、酢酸パラジウム、トリアルキルシリルハライド（例えば、トリメチルシリルヨージド、トリメチルシリルブロミド）を使用する方法や還元法などを用いて行うことができる。
　各工程において、還元反応を行う場合、使用される還元剤としては、水素化アルミニウムリチウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、水素化シアノホウ素ナトリウム、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ－Ｈ）、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素テトラメチルアンモニウムなどの金属水素化物類；ボランテトラヒドロフラン錯体などのボラン類；ラネーニッケル；ラネーコバルト；水素；ギ酸などが挙げられる。炭素－炭素二重結合あるいは三重結合を還元する場合は、パラジウム－カーボンやＬｉｎｄｌａｒ触媒などの触媒を用いる方法がある。
　各工程において、酸化反応を行う場合、使用される酸化剤としては、ｍ－クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、過酸化水素、ｔ－ブチルヒドロペルオキシドなどの過酸類；過塩素酸テトラブチルアンモニウムなどの過塩素酸塩類；塩素酸ナトリウムなどの塩素酸塩類；亜塩素酸ナトリウムなどの亜塩素酸塩類；過ヨウ素酸ナトリウムなどの過ヨウ素酸類；ヨードシルベンゼンなどの高原子価ヨウ素試薬；二酸化マンガン、過マンガン酸カリウムなどのマンガンを有する試薬；四酢酸鉛などの鉛類；クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）、二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）、ジョーンズ試薬などのクロムを有する試薬；Ｎ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）などのハロゲン化合物類；酸素；オゾン；三酸化硫黄・ピリジン錯体；四酸化オスミウム；二酸化ゼレン；２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）などが挙げられる。
　各工程において、ラジカル環化反応を行う場合、使用されるラジカル開始剤としては、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）などのアゾ化合物；４－４’－アゾビス－４－シアノペンタン酸（ＡＣＰＡ）などの水溶性ラジカル開始剤；空気あるいは酸素存在下でのトリエチルホウ素；過酸化ベンゾイルなどが挙げられる。また、使用されるラジカル反応試剤としては、トリブチルスタナン、トリストリメチルシリルシラン、１，１，２，２－テトラフェニルジシラン、ジフェニルシラン、ヨウ化サマリウムなどが挙げられる。
　各工程において、Ｗｉｔｔｉｇ反応を行う場合、使用されるＷｉｔｔｉｇ試薬としては、アルキリデンホスホラン類などが挙げられる。アルキリデンホスホラン類は、自体公知の方法、例えば、ホスホニウム塩と強塩基を反応させることで調製することができる。
　各工程において、Ｈｏｒｎｅｒ－Ｅｍｍｏｎｓ反応を行う場合、使用される試薬としては、ジメチルホスホノ酢酸メチル、ジエチルホスホノ酢酸エチルなどのホスホノ酢酸エステル類；アルカリ金属水素化物類、有機リチウム類などの塩基が挙げられる。
　各工程において、Ｆｒｉｅｄｅｌ－Ｃｒａｆｔｓ反応を行う場合、使用される試薬としては、ルイス酸と、酸クロリドあるいはアルキル化剤（例、ハロゲン化アルキル類、アルコール、オレフィン類など）が挙げられる。あるいは、ルイス酸の代わりに、有機酸や無機酸を用いることもでき、酸クロリドの代わりに、無水酢酸などの酸無水物を用いることもできる。
　各工程において、芳香族求核置換反応を行う場合、試薬としては、求核剤（例、アミン類、イミダゾールなど）と塩基（例、塩基性塩類、有機塩基類など）が用いられる。
　各工程において、カルボアニオンによる求核付加反応、カルボアニオンによる求核１，４－付加反応（Ｍｉｃｈａｅｌ付加反応）、あるいはカルボアニオンによる求核置換反応を行う場合、カルボアニオンを発生するために用いる塩基としては、有機リチウム類、金属アルコキシド類、無機塩基類、有機塩基類などが挙げられる。
　各工程において、Ｇｒｉｇｎａｒｄ反応を行う場合、Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬としては、フェニルマグネシウムブロミドなどのアリールマグネシウムハライド類；メチルマグネシウムブロミドなどのアルキルマグネシウムハライド類が挙げられる。Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬は、自体公知の方法、例えばエーテルあるいはテトラヒドロフランを溶媒として、ハロゲン化アルキルまたはハロゲン化アリールと、金属マグネシウムとを反応させることにより調製することができる。
　各工程において、Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ縮合反応を行う場合、試薬としては、二つの電子求引基に挟まれた活性メチレン化合物（例、マロン酸、マロン酸ジエチル、マロノニトリルなど）および塩基（例、有機塩基類、金属アルコキシド類、無機塩基類）が用いられる。
　各工程において、Ｖｉｌｓｍｅｉｅｒ－Ｈａａｃｋ反応を行う場合、試薬としては、塩化ホスホリルとアミド誘導体（例、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドなど）が用いられる。
　各工程において、アルコール類、アルキルハライド類、スルホン酸エステル類のアジド化反応を行う場合、使用されるアジド化剤としては、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、トリメチルシリルアジド、アジ化ナトリウムなどが挙げられる。例えば、アルコール類をアジド化する場合、ジフェニルホスホリルアジドと１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）を用いる方法やトリメチルシリルアジドとルイス酸を用いる方法などがある。
　各工程において、還元的アミノ化反応を行う場合、使用される還元剤としては、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、水素化シアノホウ素ナトリウム、水素、ギ酸などが挙げられる。基質がアミン化合物の場合は、使用されるカルボニル化合物としては、パラホルムアルデヒドの他、アセトアルデヒドなどのアルデヒド類、シクロヘキサノンなどのケトン類が挙げられる。基質がカルボニル化合物の場合は、使用されるアミン類としては、アンモニア、メチルアミンなどの１級アミン；ジメチルアミンなどの２級アミンなどが挙げられる。
　各工程において、光延反応を行う場合、試薬としては、アゾジカルボン酸エステル類（例、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ）など）およびトリフェニルホスフィンが用いられる。
　各工程において、エステル化反応、アミド化反応、あるいはウレア化反応を行う場合、使用される試薬としては、酸クロリド、酸ブロミドなどのハロゲン化アシル体；酸無水物、活性エステル体、硫酸エステル体など活性化されたカルボン酸類が挙げられる。カルボン酸の活性化剤としては、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣＤ）などのカルボジイミド系縮合剤；４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロライド－ｎ－ハイドレート（ＤＭＴ－ＭＭ）などのトリアジン系縮合剤；１，１－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）などの炭酸エステル系縮合剤；ジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）；ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ－トリスジメチルアミノホスホニウム塩（ＢＯＰ試薬）；ヨウ化２－クロロ－１－メチル－ピリジニウム（向山試薬）；塩化チオニル；クロロギ酸エチルなどのハロギ酸低級アルキル；Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）；硫酸；あるいはこれらの組み合わせなどが挙げられる。カルボジイミド系縮合剤を用いる場合、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの添加剤をさらに反応に加えてもよい。
　各工程において、カップリング反応を行う場合、使用される金属触媒としては、酢酸パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリエチルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、塩化１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）などのパラジウム化合物；テトラキス（トリフェニルホスフィン）ニッケル（０）などのニッケル化合物；塩化トリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（ＩＩＩ）などのロジウム化合物；コバルト化合物；酸化銅、ヨウ化銅（Ｉ）などの銅化合物；白金化合物などが挙げられる。さらに反応に塩基を加えてもよく、このような塩基としては、無機塩基類、塩基性塩類などが挙げられる。
　各工程において、チオカルボニル化反応を行う場合、チオカルボニル化剤としては、代表的には五硫化二リンが用いられるが、五硫化二リンの他に、２，４－ビス（４－メトキシフェニル－１，３，２，４－ジチアジホスフェタン－２，４－ジスルフィド（Ｌｏｗｅｓｓｏｎ試薬）などの１，３，２，４－ジチアジホスフェタン－２，４－ジスルフィド構造を持つ試薬を用いてもよい。
　各工程において、Ｗｏｈｌ－Ｚｉｅｇｌｅｒ反応を行う場合、使用されるハロゲン化剤としては、Ｎ－ヨードコハク酸イミド、Ｎ－ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）、Ｎ－クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ）、臭素、塩化スルフリルなどが挙げられる。さらに、熱、光、過酸化ベンゾイル、アゾビスイソブチロニトリルなどのラジカル開始剤を反応に加えることで、反応を加速させることができる。
　各工程において、ヒドロキシ基のハロゲン化反応を行う場合、使用されるハロゲン化剤としては、ハロゲン化水素酸と無機酸の酸ハロゲン化物、具体的には、塩素化では、塩酸、塩化チオニル、オキシ塩化リンなど、臭素化では、４８％臭化水素酸などが挙げられる。また、トリフェニルホスフィンと四塩化炭素または四臭化炭素などとの作用により、アルコールからハロゲン化アルキル体を得る方法を用いてもよい。あるいは、アルコールをスルホン酸エステルに変換の後、臭化リチウム、塩化リチウムまたはヨウ化ナトリウムと反応させるような２段階の反応を経てハロゲン化アルキル体を合成する方法を用いてもよい。
　各工程において、Ａｒｂｕｚｏｖ反応を行う場合、使用される試薬としては、ブロモ酢酸エチルなどのハロゲン化アルキル類；トリエチルフォスファイトやトリ（イソプロピル）ホスファイトなどのホスファイト類が挙げられる。
　各工程において、スルホンエステル化反応を行う場合、使用されるスルホン化剤としては、メタンスルホニルクロリド、ｐ－トルエンスルホニルクロリド、メタンスルホン酸無水物、ｐ－トルエンスルホン酸無水物などが挙げられる。
　各工程において、加水分解反応を行う場合、試薬としては、酸または塩基が用いられる。また、ｔ－ブチルエステルの酸加水分解反応を行う場合、副生するｔ－ブチルカチオンを還元的にトラップするためにギ酸やトリエチルシランなどを加えることがある。
　各工程において、脱水反応を行う場合、使用される脱水剤としては、硫酸、五酸化二リン、オキシ塩化リン、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド、アルミナ、ポリリン酸などが挙げられる。
　化合物（Ｉ）は、例えば、以下の製法Ａによって製造することができる。
（製法Ａ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　Ｐ４で示される保護基としては、前記した水酸基の保護基が用いられる。
　化合物（１６）は、化合物（１８）から保護基を除去することにより製造することができる。保護基の除去には、フッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウムと酸を組み合わせて用いることもできる。
　化合物（Ｉ）は、化合物（２０）のアミノ基の求核置換反応により製造することもできる。上記求核置換反応に用いられる試薬の例としては、ハロゲン化アルキル類が挙げられる。
　前記製法Ａで使用される化合物（４Ａ）は、化合物（１）もしくは化合物（７）より、例えば以下の製法Ｂによって製造することができる。
（製法Ｂ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
[式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ３は、それぞれ独立して、保護基を示し、その他の各記号は前記と同意義を示す。]
　Ｐ１、Ｐ２およびＰ３で示される保護基としては、前記したカルボキシル基の保護基が用いられる。
　化合物（４Ａ）および化合物（１０）は、化合物（９）の脱炭酸反応により製造することもできる。反応温度は、用いる試薬や溶媒により異なり得るが、通常室温～３００℃、好ましくは５０℃～２５０℃である。脱炭酸反応には酸を用いることもできる。
　化合物（５）は、化合物（３）のカルボアニオンによる求核置換反応により製造することができる。求核置換反応に用いられる試薬の例としては、ハロゲン化アルキル類およびフッ素化剤（例、Ｎ－フルオロベンゼンスルホンイミド、３，３－ ジメチル－１－（トリフルオロメチル）－１，２－ベンゾヨードキソール）が挙げられる。
　化合物（６）は、化合物（２）のカルボアニオンによるＭｉｃｈａｅｌ付加反応により製造することができる。上記付加反応に用いられる試薬の例としては、有機銅（Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬や有機リチウム試薬とハロゲン化銅を反応させることにより調製することができる）が挙げられる。また、上記試薬として、有機銅試薬に、酸またはトリメチルシリルクロリドを組み合わせたものを用いることができる。
　化合物（８）は、化合物（７）のカルボアニオンによる求核置換反応により製造することができる。上記求核置換反応に用いられる試薬の例としては、ハロゲン化アルキル類が挙げられる。
　化合物（１２）は、化合物（１１）のカルボアニオンによる求核置換反応により製造することができる。上記求核置換反応に用いられる試薬の例としては、ハロゲン化アルキル類が挙げられる。
　前記製法Ａで用いられる化合物（４Ｂ）および（４Ｃ）も、化合物（４Ａ）と同様の方法で製造することができる。
　本発明の化合物を含有してなる脂質粒子および組成物の製造方法について以下に説明する。
　脂質粒子は、本発明の化合物を、必要により、他の脂質成分と混合した後、有機溶媒に溶解し、得られる有機溶媒溶液を水もしくは緩衝液と混合することにより、脂質粒子分散液として製造することができる。上記混合は、微小流体混合システム（例えば、Ａｓｉａ　ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ　ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｙｒｒｉｓ））を用いて行うことができる。得られた脂質粒子は、透析および滅菌ろ過に付してもよい。
　前記した「他の脂質成分」としては、例えば、構造脂質（コレステロールおよびホスファチジルコリン（例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン））およびポリエチレングリコール脂質（例えば、ＧＭ－０２０（ＮＯＦ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ）、ＧＳ－０２０（ＮＯＦ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ））が挙げられる。「他の脂質成分」は、例えば、本発明の化合物１モルに対して、０．２５～４モル用いられる。本発明の化合物は、他の脂質成分（特に、コレステロール、フォスファチジルコリンおよびポリエチレングリコール脂質）と混合して用いることが好ましい。本発明の化合物と他の脂質成分とを混合して用いる場合の好ましい態様は、本発明の化合物１～４モル、コレステロール０～３モル、フォスファチジルコリン０～２モルおよびポリエチレングリコール脂質０～１モルの混合物である。
　前記した有機溶媒溶液中の本発明の化合物、あるいは本発明化合物と他の脂質成分との混合物の濃度は、好ましくは０．５～１００ｍｇ／ｍＬである。
　有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、1-プロパノール、2-プロパノール、1-ブタノール、tert－ブタノール、アセトン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、またはこれらの混合物が挙げられる。有機溶媒は、０～２０％の水もしくは緩衝液を含有してもよい。
　緩衝液としては、酸性緩衝液（例えば、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液）や、中性緩衝液（例えば、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)）が挙げられる。
　微小流体混合システムを用いて混合を行う場合、有機溶媒溶液１容積部に対して水もしくは緩衝液１～５容積部を混合することが好ましい。また、該システムにおいて、混合液（有機溶媒溶液と水もしくは緩衝液との混合液）流速は、好ましくは０．１～１０ｍＬ／ｍｉｎであり、温度は、好ましくは１５～４５℃である。
　本発明の組成物は、脂質粒子あるいは脂質粒子分散液を製造する際、水もしくは緩衝液に活性成分（好ましくは核酸）を添加しておくことにより、組成物を含む分散液として製造することができる。活性成分は、水もしくは緩衝液における活性成分の濃度が０．０５～２．０ｍｇ／ｍＬとなるように添加することが好ましい。
　また、本発明の組成物は、脂質粒子あるいは脂質粒子分散液と活性成分を自体公知の方法で混和することにより、組成物を含む分散液として製造することもできる。
　本発明の組成物における本発明の化合物の含量は、好ましくは、２０-８０重量％である。
　本発明の組成物における活性成分の含量は、好ましくは、１-２０重量％である。
　脂質粒子分散液または組成物を含む分散液の分散媒は、透析することで水または緩衝液に置換することができる。透析には、分画分子量１０～２０Ｋの限外ろ過膜を用い、４℃～室温にて実施する。繰り返し透析を行ってもよい。透析には、タンジェンシャルフロー・フィルトレーションを使用してもよい。
　本発明の脂質粒子または組成物の分析方法について以下に説明する。
　脂質粒子または組成物の粒子径は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ　Ｎａｎｏ　ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用い、自己相関関数のキュムラント解析によりＺ平均粒子径として算出することができる。脂質粒子または組成物の粒子径（平均粒子径）は、好ましくは１０－２００ｎｍである。
　本発明の組成物における活性成分（特に、核酸）の濃度および内封率は、Ｑｕａｎｔ－ｉＴＴＭ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて測定することができる。上記濃度は、活性成分（例えば、核酸（特に、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ））の標準曲線を用いて算出し、内封率は、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００の添加の有無による蛍光強度の違いを元に算出することができる。
　本発明は、更に以下の実施例および試験例によって詳しく説明されるが、これらは本発明を限定するものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。
　以下の実施例中の「室温」は通常約 10 ℃ないし約 35 ℃を示す。混合溶媒において示した比は、特に断らない限り容量比を示す。％は、特に断らない限り重量％を示す。
　シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいて、NHと記載した場合は、アミノプロピルシラン結合シリカゲル、Diolと記載した場合は、3-（2,3-ジヒドロキシプロポキシ）プロピルシラン結合シリカゲルを用いた。溶出溶媒の比は、特に断らない限り容量比を示す。
　下記の実施例においては以下の略号を使用する。
　MS :マススペクトル
　M：モル濃度
　N :　規定
　CDCl3：重クロロホルム
　1H NMR：プロトン核磁気共鳴
　MALDI : Matrix-assisted laser desorption/ionization、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法
　TOFMS : Time-of-flight mass spectrometry、飛行時間型質量分析
　CHCA : α-cyano-４-hydroxycinnamic acid、α-シアノ-４-ヒドロキシケイ皮酸
　DMAP ：N,N-ジメチル-4-アミノピリジン
　THF ：テトラヒドロフラン
　DMF ：N,N-ジメチルホルムアミド
　DPPC ：ジパルミトイルフォスファチジルコリン
　1H NMRはフーリエ変換型NMRで測定した。解析にはACD/SpecManager (商品名) などを用いた。水酸基やアミノ基などのプロトンが非常に緩やかなピークについては記載していない。
　MSは、MALDI/TOFMSにより測定した。マトリックスとしてはCHCAを用いた。データは、実測値 (found)を記載した。通常、分子イオンピークが観測されるが、tert-ブトキシカルボニル基を有する化合物の場合、フラグメントイオンとして、tert-ブトキシカルボニル基あるいはtert-ブチル基が脱離したピークが観測されることもある。また、水酸基を有する化合物の場合、フラグメントイオンとして、H2Oが脱離したピークが観測されることもある。塩の場合は、通常、フリー体の分子イオンピーク、カチオン種、アニオン種もしくはフラグメントイオンピークが観測される。
［化合物の合成例］
実施例1
　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((2-ペンチルヘプタノイル)オキシ)メチル)プロピル 2-ペンチルヘプタノアート
A) 2-ペンチルヘプタン酸
　水素化ナトリウム(0.5 g、ミネラルオイルを40%含有)のDMF(10 mL)懸濁液を氷冷下撹拌し、マロン酸ジメチル (0.569 ml)を加えた。10分後、混合物を室温に昇温し、1-ヨードペンタン(1.95 mL)を加えた。18時間後、反応混合物に酢酸(1 mL)を加え、酢酸エチルで希釈後、水で2回、飽和食塩水で1回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製した。得られた化合物、8 N 水酸化ナトリウム水溶液(3.75 mL)およびエタノール(10 mL)の混合物を60 ℃で20時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、1 N 塩酸(35 mL)で希釈後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣を160℃で1.5時間加熱し、室温に冷却後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (786 mg) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.77-0.97 (6H, m), 1.16-1.38 (12H, m), 1.39-1.53 (2H, m), 1.54-1.72 (2H, m), 2.26-2.42 (1H, m).
B) 2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール
　2,2-ビス(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(5.45 g)、1H-イミダゾール(2.72 g)およびDMF(190 mL)の混合物に、tert-ブチルクロロジメチルシラン(3.01 g)のDMF(10 mL)溶液を室温で加えた。24時間撹拌後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、水で3回、飽和食塩水で1回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (2.25 g) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.08 (6H, s), 0.90 (9H, s), 2.53 (3H, t, J = 5.5 Hz), 3.66 (2H, s), 3.73 (6H, d, J = 5.5 Hz).
C) 2-(ヒドロキシメチル)-2-(((2-ペンチルヘプタノイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(2-ペンチルヘプタノアート)
　2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(75.0 mg)、DMAP(37.0 mg)および2-ペンチルヘプタン酸(198 mg)のDMF(0.75 mL)溶液に、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(230 mg)を室温で加えた。18時間撹拌後、反応混合物に酢酸エチルを加え、水で2回、飽和食塩水で1回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製した。得られた化合物をTHF(0.6 mL)に溶解し、フッ化テトラ-n-ブチルアンモニウムのTHF溶液(1 M、0.66 mL) および 酢酸(0.218 mL)の混合物を室温で加えた。4日間撹拌後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (189 mg) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ0.79-0.95 (18H, m), 1.14-1.36 (36H, m), 1.38-1.65 (12H, m), 2.29-2.43 (3H, m), 2.69 (1H, t, J = 7.2 Hz), 3.47 (2H, d, J = 7.2 Hz), 4.11 (6H, s).
D) 3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((2-ペンチルヘプタノイル)オキシ)メチル)プロピル 2-ペンチルヘプタノアート
　2-(ヒドロキシメチル)-2-(((2-ペンチルヘプタノイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(2-ペンチルヘプタノアート)(189 mg)、DMAP(16.9 mg)、5-(ジメチルアミノ)ペンタン酸 ヒドロクロリド(60.3 mg)およびDMF(0.8 mL)の混合物に、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(69.0 mg)を室温で加えた。18時間撹拌後、反応混合物に酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で1回、水で2回、飽和食塩水で1回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (diol、酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (149 mg) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ0.80-0.92 (18H, m), 1.15-1.35 (36H, m), 1.37-1.66 (16H, m), 2.20 (6H, s), 2.22-2.42 (7H, m), 4.10 (8H, s).
実施例7
　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロピル 3-ペンチルオクタノアート
A) 3-ペンチルオクタン酸
　水素化ナトリウム(1.12 g、ミネラルオイルを40%含有)のTHF(40 mL)懸濁液を氷冷下撹拌し、エチル 2-(ジエトキシホスホリル)アセタート(6.01 ml)を加えた。10分後、混合物を室温に昇温し、ウンデカン-6-オン(4.10 mL)を加えた。50℃で24時間撹拌後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製した。得られた化合物、10%パラジウム－炭素(100 mg)およびエタノール(100 mL)の混合物を水素雰囲気下室温で18時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。残渣に、8 N水酸化ナトリウム水溶液(10.6 mL)およびエタノール(40 mL)を加え、60℃で1時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、6 N塩酸(14.6 mL
を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (3.47 g) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.81-0.95 (6H, m), 1.15-1.43 (16H, m), 1.74-1.96 (1H, m), 2.28 (2H, d, J = 6.8 Hz).
B) 2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-2-(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(3-ペンチルオクタノアート) 
　2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(751 mg)、DMAP(367 mg)および3-ペンチルオクタン酸(2.12 g)のDMF(10 mL)溶液に、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(2.07 g)を室温で加えた。18時間撹拌後、反応混合物に酢酸エチルを加え、水で2回、飽和食塩水で1回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (NH、酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (2.50 g) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ0.03 (6H, s), 0.76-0.96 (27H, m), 1.11-1.39 (48H, m), 1.75-1.92 (3H, m), 2.23 (6H, d, J = 6.8 Hz), 3.58 (2H, s), 4.07 (6H, s).
C) 2-(ヒドロキシメチル)-2-(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(3-ペンチルオクタノアート)
　2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-2-(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(3-ペンチルオクタノアート)(2.50 g)をTHF(6.0 mL)に溶解し、フッ化テトラ-n-ブチルアンモニウムのTHF溶液(1 M、6.55 mL) および 酢酸(2.17 mL)の混合物を室温で加えた。4日間撹拌後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン) で精製して標題化合物 (2.05 g) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) 0.81-0.96 (18H, m), 1.13-1.40 (48H, m), 1.73-1.92 (3H, m), 2.26 (6H, d, J = 6.8 Hz), 2.56 (1H, t, J = 7.0 Hz), 3.48 (2H, d, J = 7.0 Hz), 4.10 (6H, s).
D) 3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロピル 3-ペンチルオクタノアート
　2-(ヒドロキシメチル)-2-(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(3-ペンチルオクタノアート) (2.05 g)、DMAP(173 mg)、5-(ジメチルアミノ)ペンタン酸 ヒドロクロリド(822 mg)およびDMF(8.0 mL)の混合物に、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(976 mg)を室温で加えた。18時間撹拌後、反応混合物に酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で1回、水で2回、飽和食塩水で1回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル/ヘキサン、酢酸エチル/メタノール) で精製して標題化合物 (2.24 g) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ0.81-0.92 (18H, m), 1.15-1.37 (48H, m), 1.42-1.53 (2H, m), 1.59-1.69 (2H, m), 1.73-1.90 (3H, m), 2.18-2.38 (16H, m), 4.10 (8H, s).
　実施例8
N,N,N-トリメチル-5-オキソ-5-(3-((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロポキシ)ペンタン-1-アミニウム　ヨージド
　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロピル 3-ペンチルオクタノアート(50.0 mg)の酢酸エチル(0.6 mL)溶液に、ヨウ化メチル(7.34 μL)を室温で加えた。2時間撹拌後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(NH、酢酸エチル/メタノール) で精製して標題化合物 (46.8 mg) を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ0.79-0.97 (18H, m), 1.13-1.40 (48H, m), 1.68-1.92 (7H, m), 2.25 (6H, d, J = 7.2 Hz), 2.46 (2H, t, J = 6.4 Hz), 3.46 (9H, s), 3.61-3.75 (2H, m), 4.10 (8H, s).
　上記の各実施例に示した方法、またはそれらに準じた方法のいずれかに従って、以下の表中の実施例2～6及び9～10の化合物が製造された。これらの実施例について、実施例１、７及び８とともに、化合物の名称、構造式および製造時に実測された質量数（表中、ＭＳで示す）を表１に示す。「塩」の欄には、化合物を構成する陰イオンを示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
［本発明の組成物の製造例］
実施例11
　脂質混合物（実施例7で得られた化合物:DPPC:Cholesterol:GS-020 = 60:10.6:28:1.4, モル比）を、90% EtOH、10% 25 mM酢酸緩衝液pH 4.0に溶解して、7.4 mg/mlの脂質溶液を得た。Luciferase (luc) siRNAおよびFactor VII (FVII) siRNA（表2参照）を等量混合し、25 mM酢酸緩衝液pH4.0に溶解して0.15 mg/mlの核酸溶液を得た。得られた脂質溶液および核酸溶液を、室温で、Asia microfluidic system (Syrris)によって、流速比 1 ml/min : 5 ml/minで混合し、組成物を含む分散液を得た。得られた分散液は、Slyde-A-Lyzer(20Kの分画分子量、Thermo scientific)を用いて水に対して室温で1時間、PBSに対して室温で18時間透析を行った。続いて、0.2 μmのsyringe filter (Iwaki)を用いてろ過を行い、4℃に保存した。分析の結果を表3に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
N(M):2'-OMe RNA, N(F): 2'-デオキシ-2'-フロオロRNA, t: 2'-デオキシチミジン, s: ホスホロチオエート結合
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
実施例12
　脂質混合物（実施例7で得られた化合物:DPPC:Cholesterol:GS-020 = 60:10.6:28:1.4, モル比）を、90% EtOH、10% 25 mM酢酸緩衝液pH 4.0に溶解して、8.9 mg/mlの脂質溶液を得た。hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HPRT) siRNA（表4参照）を、25 mM酢酸緩衝液pH4.0に溶解して0.25 mg/mlの核酸溶液を得た。得られた脂質溶液および核酸溶液を、室温で、Asia microfluidic systemによって流速比 1 ml/min : 3 ml/minで混合し、組成物を含む分散液を得た。得られた分散液を、Slyde-A-Lyzer(20Kの分画分子量)を用いて水に対して室温で1時間、PBSに対して室温で18時間透析を行った。さらに、窒素ガス充填加圧下、PBSに対して4℃で透析し、溶液の濃縮を行った。続いて、0.2 μmあるいは0.45 μmのsyringe filterを用いてろ過を行い、4℃に保存した。分析の結果を表5に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
N(M):2'-OMe RNA, N(F): 2'-デオキシ-2'-フロオロRNA, t: 2'-デオキシチミジン, s: ホスホロチオエート結合
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
実施例13
　脂質混合物（実施例7で得られた化合物:実施例8で得られた化合物:DPPC:Cholesterol:GM-020 = 59.1:0.9:10.6:28:1.4, モル比）を、90% EtOH、10% 25 mM酢酸緩衝液pH 4.0に溶解して、7.6 mg/mlの脂質溶液を得た。HPRT siRNA（表4参照）を、25 mM酢酸緩衝液pH4.0に溶解して0.21 mg/mlの核酸溶液を得た。得られた脂質溶液および核酸溶液を、室温で、Asia microfluidic system によって流速比 1 ml/min : 3 ml/minで混合し、組成物を含む分散液を得た。得られた分散液は、Slyde-A-Lyzer(20Kの分画分子量)を用いて水に対して室温で1時間、PBSに対して室温で18時間透析を行った。続いて、0.2 μm syringe filterを用いてろ過を行い、4℃に保存した。分析の結果を表6に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
実施例14
　脂質混合物（実施例1で得られた化合物:DPPC:Cholesterol:GM-020 = 60:10.6:28:1.4, モル比）を、90% EtOH、10%RNaseフリー水に溶解して、8.4 mg/mlの脂質溶液を得た。Fluc mRNA（TriLink BioTechnologies）を、10 mMクエン酸緩衝液pH3.0に溶解して0.125 mg/mlの核酸溶液を得た。得られた脂質溶液および核酸溶液を、室温で、Asia microfluidic systemによって流速比 1 ml/min : 3 ml/minで混合し、組成物を含む分散液を得た。得られた分散液は、Slyde-A-Lyzer(20Kの分画分子量)を用いて水に対して4℃で1時間、PBSに対して4℃で18時間透析を行った。続いて、0.2 μm syringe filterを用いてろ過を行い、4℃に保存した。分析の結果を表7に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
実施例15
　脂質混合物（実施例7で得られた化合物:DPPC:Cholesterol:GM-020 = 60:10.6:28:1.4, モル比）を、90% EtOH、10%RNaseフリー水に溶解して、8.7 mg/mlの脂質溶液を得た。Fluc mRNA（TriLink BioTechnologies）を、10 mMクエン酸緩衝液pH3.0に溶解して0.125 mg/mlの核酸溶液を得た。得られた脂質溶液および核酸溶液を、室温で、Asia microfluidic systemによって流速比 1 ml/min : 3 ml/minで混合し、組成物を含む分散液を得た。得られた分散液は、Slyde-A-Lyzer(20Kの分画分子量)を用いて水に対して4℃で1時間、PBSに対して4℃で18時間透析を行った。続いて、0.2 μm syringe filterを用いてろ過を行い、4℃に保存した。分析の結果を表8に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
［試験例］
試験例1:肝臓におけるin vivo ノックダウン試験
　FVIIは外因系血液凝固反応における重要な凝固因子であり、肝実質細胞で産生されて血中に分泌される。また、血漿中FVII濃度はプレートを用いる簡便な比色分析で測定できることから、FVIIはsiRNAによる肝実質細胞でのノックダウン（KD）を測定する有用なモデルの典型である。リン酸緩衝生理食塩水(PBS)もしくは実施例11で透析を行った後の分散液(FVII siRNAとして0.25mg/kg）をBALB/cA マウス(9週齢、雌、日本クレア株式会社)に尾静脈より投与し、投与24時間後に血液を採取した（N=3）。血液は直ちにEDTA（最終濃度0.1%）と混合し5000gで10分遠心した。上清のFVII濃度をBIOPHEN FACTOR 7 CHROMOGENIC ASSAY（HYPHEN BioMed）を用いて測定した。残存率は、PBS投与群のFVII濃度を100%として算出した。表９に示すように、実施例11投与群のFVII濃度は6.9%であった。この結果より、本発明の化合物を用いることにより、siRNAを肝臓に導入できることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
試験例2:癌組織におけるin vivo ノックダウン試験
　ヌードマウス(BALB/c-nu/nu、6週齢、雌、日本チャールスリバー)の右わき腹皮下にHCT116細胞(ヒト大腸癌細胞株、American Type Culture Collection(ATCC)、1x106cells/mouse)をマトリゲル(Becton Dickinson and Company、356237、液量で50%)と共移植し、15日後腫瘍体積をもとに群分けした(1群4匹、群平均腫瘍体積521～544mm3)。PBSもしくは実施例12で透析を行った後の分散液(HPRT siRNAとして10 mg/kg）を尾静脈より投与し、投与48時間後、2.5%イソフルラン麻酔下に頚椎脱臼にて安楽死させたマウスの皮下腫瘍を摘出、重量測定後速やかにドライアイスで凍結させた。凍結皮下腫瘍塊はTRIzol Reagent (Invitrogen)を加えホモジナイズ後クロロホルムを加えて遠心しRNAを含む水相を分離回収した。これをRNeasy mini Kit (QIAGEN)を用いて抽出精製しtotalRNAを得た。SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen)を用いて逆転写反応を行い、qPCR法によりhuman HPRT (hHPRT)のmRNA量を測定した。hHPRTのプローブおよびプライマーは、Applied Biosystems Inc. (ABI)より入手した(Probe: FAM-TAMRA, 5'-CCATCACATTGTAGCCCTCTGTGTGCTC-3'（配列番号７）; Forward primer: 5'-CGTCTTGCTCGAGATGTGATG-3'（配列番号８）; Reverse primer: 5'-CCAGCAGGTCAGCAAAGAATT-3'（配列番号９）)。標準化遺伝子にはhuman actin beta (hACTB)を用い、PBS投与群の値を100%としhHPRTのmRNA量を算定した。hACTBのプローブおよびプライマーは、ABIより入手した(Probe: FAM-TAMRA, 5'-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-3'（配列番号１０）; Forward primer: 5'-CCTGGCACCCAGCACAAT-3'（配列番号１１）;  Reverse primer: 5'-GCCGATCCACACGGAGTACT-3'（配列番号１２）)。その結果、表９に示すように、PBS投与群に対して、実施例12で透析を行った後の分散液を投与した群のhHPRT残存量は48%であった。この結果より、本発明の化合物を用いることにより、siRNAを癌に導入できることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
試験例3:脂肪組織におけるin vivo ノックダウン試験
　ヌードマウス(BALB/c-nu/nu、7週齢、雌、日本チャールスリバー)の右わき腹皮下にHT29-Luc細胞(ATCCより購入したヒト大腸癌細胞株HT29にLuciferaseを強制発現させた細胞株、5x106cells/mouse)を移植し、16日後腫瘍体積をもとに群分けした(1群4匹、群平均腫瘍体積271～288mm3)。PBSもしくは実施例12と同様の方法にて得られた分散液(HPRT siRNAとして5 mg/kg）を尾静脈より投与し、投与48時間後、2.5%イソフルラン麻酔下に頚椎脱臼にて安楽死させたマウスの生殖器周囲脂肪を摘出、重量測定後速やかにドライアイスで凍結させた。凍結脂肪組織はTRIzol Reagent (Invitrogen)を加えホモジナイズ後クロロホルムを加えて遠心しRNAを含む水相を分離回収した。これをRNeasy mini Kit (QIAGEN)を用いて抽出精製しtotalRNAを得た。SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen)を用いて逆転写反応を行い、qPCR法によりmouse HPRT (mHPRT)のmRNA量を測定した。mHPRTのプローブおよびプライマーは、ABIより購入した(Mm01545399_m1)。標準化遺伝子にはmouse actin beta (mACTB)を用い、PBS投与群の値を100%としmHPRTのmRNA量を算定した。mACTBのプローブおよびプライマーは、ABIより購入した(4352341E)。その結果、PBS投与群に対して、実施例12と同様の方法にて得られた分散液投与群のmHPRT残存量は44%であった（表１１）。この結果より、本発明の化合物を用いることにより、siRNAを脂肪に導入できることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
試験例4:骨髄におけるin vivo ノックダウン試験
　ヌードマウス(BALB/c-nu/nu、6週齢、雌、日本クレア)の右わき腹皮下にHT29-Luc細胞(ATCCより購入したヒト大腸癌細胞株HT29にLuciferaseを強制発現させた細胞株、5x106cells/mouse)を移植し、17日後腫瘍体積をもとに群分けした(1群4匹、群平均腫瘍体積321～329mm3)。PBSもしくは実施例12と同様の方法にて得られた分散液(HPRT siRNAとして5 mg/kg）を尾静脈より投与し、投与48時間後、2.5%イソフルラン麻酔下に頚椎脱臼にて安楽死させたマウスの左右大腿骨から骨髄細胞を回収し、RNeasy mini Kit (QIAGEN)を用いて抽出精製しtotalRNAを得た。SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen)を用いて逆転写反応を行い、qPCR法によりmouse HPRT (mHPRT)のmRNA量を測定した。mHPRTのプローブおよびプライマーは、ABIより購入した(Mm01545399_m1)。標準化遺伝子にはmouse actin beta (mACTB)を用い、PBS投与群の値を100%としmHPRTのmRNA量を算定した。mACTBのプローブおよびプライマーは、ABIより購入した(4352341E)。その結果、PBS投与群に対して、実施例12と同様の方法にて得られた分散液投与群のmHPRT残存量は56%であった（表１２）。この結果より、本発明の化合物を用いることにより、siRNAを骨髄に導入できることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
試験例5:浮遊血球系細胞Ramosにおけるin vitro ノックダウン試験
　Ramos細胞（ヒトB細胞リンパ腫由来細胞株）を96-Well plateに1×104 cells/wellの密度で播種した（RPMI1640 basic, 10% FBS, penicillin-streptomycin）。PBS、HPRT siRNAとLipofectamine（登録商標）RNAiMAX（Life technologies）の混合物（プロトコールに従って混合）、または実施例13で透析を行った後の分散液を添加し(N=3、HPRT siRNAの最終濃度は100 nM)、48時間後に細胞を回収した。これを、RNeasy Midi Kit (Qiagen)を用いて抽出精製し、total RNAを得た。SuperScript VILO cDNA Synthesis Kitを用いて逆転写反応を行い、qPCR法によりhHPRTのmRNA量を測定した。hHPRTのプローブおよびプライマーは、試験例2と同じものである。標準化遺伝子にはhACTBを用い、PBS投与群の値を100%としhHPRTのmRNA量を算定した。hACTBのプローブおよびプライマーは、試験例2と同じものである。その結果、PBS投与群に対して、実施例13投与群のhHPRT残存量は17%であった。一方、RNAiMAXは109%であった（表１３）。この結果より、本発明の化合物を用いることにより、siRNAを血球系細胞に導入できることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
試験例6:Luciferaseのin vivo発現試験
　動物は日本クレア株式会社から購入した雌のBALB/cマウスを使用した。6週齢で納入した後に通常飼育で約3週間馴化させ、実施例14または実施例15で透析を行った後の分散液（Fluc mRNAとして0.25 mg/kg）を尾静脈投与した(N=2)。6時間後に、Isoflurane麻酔下でD-luciferin (15 mg/ml)を 200 μl 腹腔内投与し、D-luciferin 投与10分後にin vivo imaging system (IVIS、Caliper)を用いて全身の発光を観測し、発光量の平均値を算出した。結果を表１４に示す。この結果より、本発明の化合物を用いることにより、mRNAを、in vivoにおいて導入できることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
　本発明の化合物、脂質粒子または組成物は、種々の細胞、組織または臓器に対し効率的に核酸を導入することを可能にする。したがって、本発明の化合物、脂質粒子または組成物は、核酸医薬におけるＤＤＳ技術として利用可能である。また、本発明の化合物、脂質粒子または組成物は、研究用核酸導入試薬としても利用可能である。
　本出願は、日本で出願された特願２０１４－１６１７１８を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含される。

Claims (9)

  1. 　式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    ［式中、
    　Ｗは、式－ＮＲ１Ｒ２または式－Ｎ＋Ｒ３Ｒ４Ｒ５（Ｚ－）を、
    　Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基または水素原子を、
    　Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基を、
    　Ｚ－は、陰イオンを、
    　Ｘは、置換されていてもよいＣ１－６アルキレン基を、
    　ＹＡ、ＹＢおよびＹＣは、それぞれ独立して、置換されていてもよいメチン基を、
    　ＬＡ、ＬＢおよびＬＣは、それぞれ独立して、置換されていてもよいメチレン基または結合手を、
    　ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ４－１０アルキル基を示す。］
    で表される化合物またはその塩。
  2. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、メチル基であり；
    　Ｚ－が、ハロゲン化物イオンであり；
    　Ｘが、エチレン基、トリメチレン基またはテトラメチレン基であり；
    　ＹＡ、ＹＢおよびＹＣが、メチン基であり；
    　ＬＡ、ＬＢおよびＬＣが、それぞれ独立して、結合手またはメチレン基であり；
    　ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＣ１およびＲＣ２が、それぞれ独立して、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基である、請求項１記載の化合物またはその塩。
  3. 　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((2-ペンチルヘプタノイル)オキシ)メチル)プロピル 2-ペンチルヘプタノアート、またはその塩。
  4. 　3-((5-(ジメチルアミノ)ペンタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロピル 3-ペンチルオクタノアート、またはその塩。
  5. 　N,N,N-トリメチル-5-オキソ-5-(3-((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)-2,2-ビス(((3-ペンチルオクタノイル)オキシ)メチル)プロポキシ)ペンタン-1-アミニウムと陰イオンとの塩。
  6. 　請求項１記載の化合物またはその塩を含有してなる脂質粒子。
  7. 　活性成分および請求項１記載の化合物またはその塩を含有してなる組成物。
  8. 　活性成分が、核酸である、請求項７記載の組成物。
  9. 　核酸が、ｓｉＲＮＡまたはｍＲＮＡである、請求項８記載の組成物。
     
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