WO2013100700A1 - 혈액 분리 및 ｐｒｐ 농축을 위한 일체형 키트 및 이를 이용한 ｐｒｐ 추출방법 - Google Patents

혈액 분리 및 ｐｒｐ 농축을 위한 일체형 키트 및 이를 이용한 ｐｒｐ 추출방법 Download PDF

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platelet
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허재욱
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Definitions

  • the present invention relates to an integrated kit for blood separation and PRP enrichment and a PRP extraction method using the same. More specifically, the separation and blood concentration of platelet rich plasma (PRP) using one kit is performed in one step. It relates to an integrated kit and a PRP extraction method using the same.
  • PRP platelet rich plasma
  • Platelet Rich Plasma refers to the centrifugation of blood after special treatment, which refers to the plasma components that make platelets richer than normal blood.
  • platelets contain several growth factors, which play an important role in wound healing and skin regeneration.
  • PRP has been used in various fields such as pain treatment such as low back pain, hair loss treatment, skin disease such as skin regeneration or burn treatment.
  • the method of forming PRP has been proposed in terms of physical and chemical methods, and the conventional method is a physical method, which is performed by centrifuging the collected blood to form blood cell components and platelet deficient plasma layers (PPP, Platelet Poor Plasma). A method of separating and extracting only PRP with a filter is used.
  • Conventional PRP extraction methods use two tubular test tubes, (1) inject blood collected from a human body into a tubular test tube, and use the centrifuge with the injected test tube. Centrifugation, (2) extracting only the plasma located above the erythrocytes by inserting a syringe needle with the separated test tube fixed so as not to shake, and (3) extracting the extracted plasma to obtain a highly concentrated PRP. And plasma centrifuge on the upper layer of the second centrifuged tubular test tube with a syringe and recover the remaining PRP.
  • tubular test tubes can be inhaled with plasma when red blood cells and plasma are separated and extracted, and the buffy coat layer rich in platelets and growth factors is usually 0.1% of blood. , But very small amount, but because it is generated on the red blood cells, there is a problem that can not be extracted properly, and after the first centrifugation, the plasma is extracted using a syringe and transferred to a new tube-type test tube, which may expose the plasma to the atmosphere. There is a problem.
  • the present inventors have made efforts to solve the above problems, as a result of the first centrifugal separation of blood to separate the erythrocyte layer and the plasma layer, the red blood cell layer in the lower storage, the plasma control layer is located in the upper storage.
  • PRP platelet-rich plasma layer
  • PRP platelet-rich plasma layer
  • the present invention (a) a main body consisting of an upper reservoir, a lower reservoir and a passage portion connecting the upper reservoir and the lower reservoir; (b) an upper cover coupled to the upper end of the upper storage part; (c) an inner stopper inserted into a lower end of the lower reservoir to seal the lower reservoir; (d) a closing adjustment screw capable of moving up and down while penetrating a hole formed in the inner stopper and sealing the passage part; And (e) blood separation and platelet-rich plasma comprising a lower cover coupled to the outer bottom of the lower reservoir and the inner stopper to prevent the closing adjustment screw coupled to the inner stopper during centrifugation
  • An integrated kit is provided for layer (PRP) concentration.
  • the present invention also comprises the steps of: (a) injecting the collected blood into the body through the upper cover; (b) placing the integrated kit for blood separation and concentration of platelet-rich plasma layer (PRP) into which blood is injected into a centrifuge and separating the erythrocyte layer and plasma layer by centrifugation; (c) moving the closing adjustment screw to position the red blood cell layer in the lower reservoir and the plasma layer in the upper reservoir; (d) combining the lower cover with the lower outer storage lower end and the inner stopper outside to fix the position of the closing adjustment screw; (e) Centrifuge the integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) enrichment and centrifugation to separate the plasma layer located in the upper reservoir into the platelet rich plasma layer (PRP) and platelet deficient plasma layer (PPP).
  • PRP platelet-rich plasma layer
  • FIG. 1 is a cross-sectional view of the integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration of the present invention (A: before closing the passage with a closing adjustment screw, B: after closing the passage with a closing adjustment screw).
  • PRP platelet rich plasma layer
  • Figure 2 is a plan view of the top cover constituting an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • Figure 3 is a cross-sectional view of the inner plug constituting an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • Figure 4 is a front view of the closing adjustment screw constituting an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the present invention provides a consistent point of view, comprising: (a) a main body comprising an upper reservoir, a lower reservoir, and a passage portion connecting the upper reservoir and the lower reservoir; (b) an upper cover coupled to the upper end of the upper storage part; (c) an inner stopper inserted into a lower end of the lower reservoir to seal the lower reservoir; (d) a closing adjustment screw capable of moving up and down while penetrating a hole formed in the inner stopper and sealing the passage part; And (e) blood separation and platelet-rich plasma comprising a lower cover coupled to the outer bottom of the lower reservoir and the inner stopper to prevent the closing adjustment screw coupled to the inner stopper during centrifugation
  • a one-piece kit for layer (PRP) concentration comprising: (a) a main body comprising an upper reservoir, a lower reservoir, and a passage portion connecting the upper reservoir and the lower reservoir; (b) an upper cover coupled to the upper end of the upper storage part; (c) an inner stopper inserted into a lower end of the lower reservoir
  • FIG. 1 is a cross-sectional view of an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration of the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration is composed of a main body consisting of an upper reservoir, a lower reservoir and a passage connecting the upper reservoir and the lower reservoir 10; An upper cover 20 coupled to an upper end of the upper storage part; An inner stopper 30 inserted into a lower end of the lower reservoir to seal the lower reservoir; A closing adjustment screw 40 capable of moving up and down while penetrating a hole formed in the inner stopper and sealing the passage part; And a lower cover 50 which is coupled to the outer bottom of the lower reservoir and the outer end of the inner stopper to prevent the adjustment screw for closing which is coupled to the inner stopper from being separated during centrifugation.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the main body 10 is to separate the injected blood into the erythrocyte layer and the plasma layer, and to separate the separated plasma layer back into the platelet-rich plasma layer (PRP) and the platelet deficient plasma layer (PPP). 12, a lower reservoir 16, and a passage 14 connecting the upper reservoir 12 and the lower reservoir 16.
  • PRP platelet-rich plasma layer
  • PPP platelet deficient plasma layer
  • the upper reservoir 12 is conical narrowing in the downward direction
  • the lower reservoir 16 is inverted conical narrowing in the upward direction
  • the passage portion 14 is the upper reservoir 12
  • the bottom of the bottom and the upper portion of the lower reservoir 16 is connected in a hollow structure.
  • the upper storage portion 12 is preferably made of a conical structure narrowing in the downward direction from the overall perspective, but more preferably a structure in which the two conical narrowing in the downward direction is continuously coupled.
  • the upper storage unit 12 may be divided into a first upper storage unit 12a and a second upper storage unit 12b, and a plasma layer is positioned in the upper storage unit 12 through primary centrifugation.
  • Platelet rich plasma layer (PPP) is located in the first upper reservoir 12a
  • platelet rich plasma layer (PRP) is located in the second upper reservoir 12b.
  • the layer (PRP) can be separated.
  • Figure 2 is a plan view of the top cover constituting an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the upper cover 20 is coupled to the upper end of the upper reservoir (12).
  • the coupling may be a screw coupling.
  • the upper cover 20 is formed with a hole covered with a primary silicon stopper 23 in the center and a hole covered with a secondary silicon stopper 25 in the lower portion thereof.
  • the outer circumferential surface of the hole is characterized in that the fine gap 26 is formed so that the air inside the main body when the blood is injected.
  • the minute gap 26 is inserted into the holes formed in the outer and inner center of the upper cover 20, respectively, the first and second silicon plugs, the outside air is hardly introduced into the main body 10.
  • the air inside the corresponding main body is formed to be discharged to the outside.
  • the primary silicone stopper 23 is detachable, but the secondary silicone stopper 25 is fixed.
  • Figure 3 is a cross-sectional view of the inner plug constituting an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the inner stopper 30 is inserted into the lower bottom of the lower storage part in order to seal the lower storage part 16, and includes a silicon cover 32 and an inner stopper body 34. That is, the upper end of the inner stopper body 34 is coupled to the silicone cover 32 by fitting, the outer diameter of the silicone cover 32 and the inner stopper body 34 is the inner diameter of the bottom of the lower reservoir 16 Is the same as or similar to
  • the silicone cover 32 and the inner stopper body 34 are circular having a hole formed at the center thereof so that the closing adjustment screw 40 can pass therethrough, and the spiral 36 is formed inside the inner stopper body 34. Is formed, it can be combined with the spiral portion 44 formed in the closing adjustment screw (40).
  • fitting protrusion 38 is formed on the outside of the inner stopper body 34 to be coupled to the lower cover 50.
  • the silicone cover 32 is inserted into the lower storage part 16, and a part of the inner plug body 34 is located inside the lower storage part 16 and is fitted with the lower cover part 38. ) Portion is located outside the lower reservoir (16).
  • Figure 4 is a front view of the closing adjustment screw constituting an integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the closing adjustment screw 40 adjusts the position of the interface between the separated red blood cells and the plasma layer after the first centrifugal separation, and seals the passage part 14 so that the separated red blood cells and the plasma layer are not mixed with each other. As it is, it is possible to move up and down while passing through the hole formed in the inner stopper 30 is inserted into the lower end of the lower reservoir (16).
  • the closing adjustment screw 40 is composed of a closing rod 42, a spiral portion 44 and a handle portion 46 for coupling with the inner stopper body 34, the end of the closing rod 42 ( 48) has a silicone cap attached.
  • the shape of the silicone cap is not particularly limited, but is preferably cylindrical or conical in order to seal the passage and to facilitate recovery of the buffy coat layer.
  • the buffy coat layer refers to a pale yellow thin white blood cell layer formed on the erythrocyte layer when blood is centrifuged.
  • the red blood cell layer is located at the bottom, the buffy coat layer is located above, the platelet rich plasma layer (PRP) is located above, and the platelet deficient plasma layer (PPP) is located above.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • PPP platelet deficient plasma layer
  • the lower cover 50 is for preventing the closing adjustment screw 40 coupled to the inner stopper 30 during the centrifugal separation from being detached.
  • the lower outer cover 16 has a lower outer portion and the inner stopper body. The spirals are formed to be combined with the fitting projections 38 of the respective.
  • PRP platelet-rich plasma layer
  • the anticoagulant is put into a syringe, and blood is collected by the syringe.
  • the amount of the anticoagulant is preferably about 10% of the blood to be collected.
  • the collected blood is injected into the body 10 through the upper cover 20.
  • the primary silicone stopper 23 and the secondary silicone stopper 25 cover the hole in the inner bottom of the upper cover, the primary silicone stopper 23 and the secondary with a syringe needle. Pass the silicone stopper 25 and inject blood.
  • the fine gap 26 is formed in the upper cover 20, the outside of the air in the state in which the silicone plugs 23 and 25 are inserted into holes formed in the center and outside of the upper cover 20, respectively.
  • the air inside the corresponding main body is discharged to the outside. Therefore, when injecting blood, as in a conventional blood separation vessel, there is no need to open the exposure hole for the internal air discharge, it is possible to minimize secondary pollution in the air.
  • the integrated kit for blood separation and platelet-rich plasma layer (PRP) concentration injected with blood is placed in a centrifuge and centrifuged to separate the erythrocyte layer and the plasma layer.
  • PRP platelet-rich plasma layer
  • the integrated kit for centrifugation of the blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration is first centrifuged, the erythrocyte layer is located in the lower reservoir, and the plasma layer is located on the erythrocyte layer.
  • PRP platelet rich plasma layer
  • the closing adjustment screw 40 is moved up or down so that the red blood cell layer is located in the lower storage part and the plasma layer is located in the upper storage part, so that the position of the boundary line between the red blood cell layer and the plasma layer is lower or lower than the passage part 14.
  • the upper reservoir 16 is adjusted to close the passage portion 14 is closed with a silicon cap coupled to the end 48 of the closing rod 42 of the closing adjustment screw 40.
  • the lower cover 50 is coupled to the fitting protrusion 38 of the lower reservoir 16 lower outer and the inner stopper body 34, and then the integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration again. Placed in a centrifuge and centrifuged to separate the plasma layer located in the upper reservoir into a platelet rich plasma layer (PRP) and a platelet deficient plasma layer (PPP).
  • PRP platelet rich plasma layer
  • PPP platelet deficient plasma layer
  • the integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration in a centrifuge, and centrifuged at 3000 rpm for 3 minutes.
  • the integrated kit for blood separation and platelet rich plasma layer (PRP) concentration according to the present invention, the plated-rich plasma from blood in one step without transferring the separated plasma layer after centrifugation into a separate blood concentration vessel
  • the layer (PRP) can be extracted, thus minimizing secondary infection in the air.

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Abstract

본 발명은 혈액 분리 및 PRP 농축을 위한 일체형 키트 및 이를 이용한 PRP 추출방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 1개의 키트를 이용하여 혈액 분리 및 PRP(Platelet Rich Plasma) 농축을 원스텝(one step)으로 수행할 수 있는 일체형 키트 및 이를 이용한 PRP 추출방법에 관한 것이다. 상기 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트는 (a) 상부 저장부, 하부 저장부 및 상기 상부 저장부와 하부 저장부를 연결하는 통로부로 구성된 본체; (b) 상기 상부 저장부 상단에 결합되는 상부덮개; (c) 상기 하부 저장부 하단 내부에 삽입되어 하부 저장부를 밀폐시키는 내부 마개; (d) 상기 내부마개에 형성되어 있는 홀을 관통하면서 상하로 이동이 가능하며, 상기 통로부를 밀폐시키는 폐쇄용 조절나사; 및 (e) 원심분리시 상기 내부마개에 결합되어 있는 폐쇄용 조절나사가 이탈되는 것을 방지하기 위하여 상기 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합되는 하부덮개를 포함한다. 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 이용하면 원심분리 후 분리된 혈장층을 별도의 혈액농축용기에 옮겨담지 않고 원스텝(one step)으로 혈액으로부터 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출할 수 있으므로, 공기중 2차 감염을 최소화 할 수 있다.

Description

혈액 분리 및 ＰＲＰ 농축을 위한 일체형 키트 및 이를 이용한 ＰＲＰ 추출방법
본 발명은 혈액 분리 및 PRP 농축을 위한 일체형 키트 및 이를 이용한 PRP 추출방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 1개의 키트를 이용하여 혈액 분리 및 PRP(Platelet Rich Plasma) 농축을 원스텝(one step)으로 수행할 수 있는 일체형 키트 및 이를 이용한 PRP 추출방법에 관한 것이다.
혈소판 풍부 혈장층(PRP, Platelet Rich Plasma)은 혈액을 특수 처리 후 원심 분리한 것을 말하는데, 일반 혈액보다 혈소판이 풍부하게 응축되게 만든 혈장 성분을 의미한다. 원래 혈소판은 여러 성장인자들을 함유하고 있어서 상처 치유와 피부 재생에 중요한 역할을 한다. 또한 PRP 내에는 이러한 혈소판들이 고농도로 함유되어 다양한 성장 인자들이 주변 세포들의 증식을 촉진하고 콜라겐 등의 성분들을 풍부히 합성하도록 자극해 주는 효과가 있다고 보고되고 있다. 이에 따라 최근 요통과 같은 통증치료분야, 탈모치료, 피부재생이나 화상치료와 같은 피부질환분야 등 다양한 분야에서 PRP가 사용되고 있다.
이러한 PRP를 형성하는 방법은 물리적인 방법과 화학적인 방법이 각각 제안되어 왔고, 통상적인 방법은 물리적인 방법으로서 채혈된 혈액을 원심분리하여 혈구성분과 혈소판 결핍 혈장층(PPP, Platelet Poor Plasma)을 분리하고, 이를 필터로 PRP만을 적출하는 방법이 사용된다.
한국공개특허 2010-0105282 및 2011-0009651을 비롯한 종래의 PRP 추출방법은 2개의 튜브형 시험관을 사용하는 방식으로써 (1) 인체로부터 채취된 혈액을 튜브형 시험관에 주입하고, 주입된 시험관을 원심분리기를 사용하여 원심분리하는 단계, (2) 분리된 시험관을 흔들리지 않도록 고정한 상태에서 주사기 니들을 삽입하여 적혈구의 위쪽에 위치한 혈장만을 추출하는 단계, (3) 고농축의 PRP를 얻기 위해 추출해낸 혈장을 다른 튜브형 시험관에 넣고, 다시 원심분리하는 단계, (4) 2차 원심분리시킨 튜브형 시험관의 상층에 있는 혈장을 주사기로 추출하고, 남아있는 PRP를 회수하는 단계를 거쳐야 한다.
그러나, 이러한 튜브형 시험관은 적혈구와 혈장을 분리 추출시 적혈구가 혈장과 함께 흡입될 수 있으며, 혈소판(platelet)과 성장인자(growth factor)가 풍부한 버피 코트(buffy coat)층은 보통 혈액의 0.1%로서, 매우 소량이지만, 적혈구 위에 생성되므로, 제대로 추출할 수 없는 문제점이 있으며, 1차 원심분리 후 주사기를 이용해 혈장을 추출한 뒤 새로운 튜브형 시험관에 옮겨 담는 과정을 거치게 되므로, 이때 혈장이 대기에 노출될 수 있다는 문제점이 있다.
한편 화학적인 방법으로서 국제공개특허 WO2004/012750에서는 혈액에 폴리-L-글루타민산나트륨를 첨가하여 적혈구를 선택 촉진적으로 응집 침강시키는 방법을 제안하였다. 그러나 화학적 방법 역시 PRP만을 분리하기 위해 종래 물리적인 방법과 동일한 외부노출과 같은 문제점이 공존한다는 점에서는 바람직한 수단이 될 수 없다.
이에, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 혈액을 1차 원심분리하여 적혈구층과 혈장층을 분리하고, 하부 저장부에는 적혈구층, 상부 저장부에는 혈장층이 위치하도록 폐쇄용 조절나사를 조절함과 동시에 통로부를 밀폐시킨 다음 2차 원심분리를 수행할 경우, 2개의 혈액분리용기 및 혈액농축용기를 이용하지 않고도 1개의 용기에서 원스텝(one step)으로 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 농축하고, 추출할 수 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 원심분리 후 분리된 혈장층을 별도의 혈액농축용기에 옮겨담지 않고, 1개의 용기에서 원스텝(one step)으로 혈액으로부터 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 분리, 농축 및 추출할 수 있는 키트와 이를 이용한 혈소판 풍부 혈장층(PRP)의 추출방법을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 상부 저장부, 하부 저장부 및 상기 상부 저장부와 하부 저장부를 연결하는 통로부로 구성된 본체; (b) 상기 상부 저장부 상단에 결합되는 상부덮개; (c) 상기 하부 저장부 하단 내부에 삽입되어 하부 저장부를 밀폐시키는 내부 마개; (d) 상기 내부마개에 형성되어 있는 홀을 관통하면서 상하로 이동이 가능하며, 상기 통로부를 밀폐시키는 폐쇄용 조절나사; 및 (e) 원심분리시 상기 내부마개에 결합되어 있는 폐쇄용 조절나사가 이탈되는 것을 방지하기 위하여 상기 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합되는 하부덮개를 포함하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 제공한다.
본 발명은 또한, (a) 채취된 혈액을 상부덮개를 통하여 본체에 주입하는 단계; (b) 혈액이 주입된 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 적혈구층과 혈장층을 분리시키는 단계; (c) 하부 저장부에는 적혈구층, 상부 저장부에는 혈장층이 위치하도록 폐쇄용 조절나사를 이동시키는 단계; (d) 하부덮개를 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합시켜, 상기 폐쇄용 조절나사의 위치를 고정시키는 단계; (e) 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 다시 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 상부 저장부에 위치한 혈장층을 혈소판 풍부 혈장층(PRP)과 혈소판 결핍 혈장층(PPP)으로 분리하는 단계; 및 (f) 주사기 바늘을 삽입하여 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출하는 단계를 포함하는, 상기 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 이용하여 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출하는 방법을 제공한다.
도 1은 본 발명의 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트의 단면도이다(A: 폐쇄용 조절나사로 통로부 폐쇄 전, B: 폐쇄용 조절나사로 통로부 폐쇄 후).
도 2는 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 구성하는 상부덮개의 평면도이다.
도 3은 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 구성하는 내부마개의 단면도이다.
도 4는 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 구성하는 폐쇄용 조절나사의 정면도이다.
발명의 상세한 설명 및 바람직한 구현예
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 일관점에서, (a) 상부 저장부, 하부 저장부 및 상기 상부 저장부와 하부 저장부를 연결하는 통로부로 구성된 본체; (b) 상기 상부 저장부 상단에 결합되는 상부덮개; (c) 상기 하부 저장부 하단 내부에 삽입되어 하부 저장부를 밀폐시키는 내부 마개; (d) 상기 내부마개에 형성되어 있는 홀을 관통하면서 상하로 이동이 가능하며, 상기 통로부를 밀폐시키는 폐쇄용 조절나사; 및 (e) 원심분리시 상기 내부마개에 결합되어 있는 폐쇄용 조절나사가 이탈되는 것을 방지하기 위하여 상기 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합되는 하부덮개를 포함하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트에 관한 것이다.
이하에서는, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트에 대하여 자세히 설명한다.
도 1은 본 발명의 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트의 단면도이다.
도 1에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트는 상부 저장부, 하부 저장부 및 상기 상부 저장부와 하부 저장부를 연결하는 통로부로 구성된 본체(10); 상기 상부 저장부 상단에 결합되는 상부덮개(20); 상기 하부 저장부 하단 내부에 삽입되어 하부 저장부를 밀폐시키는 내부 마개(30); 상기 내부마개에 형성되어 있는 홀을 관통하면서 상하로 이동이 가능하며, 상기 통로부를 밀폐시키는 폐쇄용 조절나사(40); 및 원심분리시 상기 내부마개에 결합되어 있는 폐쇄용 조절나사가 이탈되는 것을 방지하기 위하여 상기 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합되는 하부덮개(50)를 포함한다.
상기 본체(10)는 주입된 혈액을 적혈구층과 혈장층으로 분리하고, 분리된 혈장층을 다시 혈소판 풍부 혈장층(PRP)과 혈소판 결핍 혈장층(PPP)으로 분리시키기 위한 것으로서, 상부 저장부(12), 하부 저장부(16) 및 상기 상부 저장부(12)와 하부 저장부(16)를 연결하는 통로부(14)를 포함한다.
상기 상부 저장부(12)는 아랫방향으로 폭이 좁아지는 원추형이고, 상기 하부 저장부(16)는 윗방향으로 폭이 좁아지는 역원추형이며, 상기 통로부(14)는 상기 상부 저장부(12)의 하단과 상기 하부 저장부(16)의 상단 부분이 중공 구조로 연결되어 있는 형태로 되어 있다.
상기 상부 저장부(12)는 전체적인 관점에서 아랫방향으로 폭이 좁아지는 원추형 구조로 이루어진 것이 바람직하나 아랫방향으로 폭이 좁아지는 원추형 2개가 연속적으로 결합되어 있는 구조인 것이 더욱 바람직하다.
즉 상기 상부 저장부(12)는 제1 상부 저장부(12a) 및 제2 상부 저장부(12b)로 구분될 수 있으며, 1차 원심분리를 통하여 상부 저장부(12)에 혈장층이 위치한 상태에서 제2 원심분리 수행시, 제1 상부 저장부(12a)에는 혈소판 결핍 혈장층(PPP)이 제2 상부 저장부(12b)에는 혈소판 풍부 혈장층(PRP)이 위치하여, 보다 쉽게 혈소판 풍부 혈장층(PRP)를 분리할 수 있다.
도 2는 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 구성하는 상부덮개의 평면도이다.
도 1 및 2에 도시된 바와 같이, 상기 상부 저장부(12) 상단에는 상부덮개(20)가 결합된다. 상기 결합으로는 나사 결합을 예시할 수 있다.
상기 상부덮개(20)에는 중앙에 1차 실리콘 마개(23)로 덮여 있는 구멍과 그 내측 하부에 2차 실리콘 마개(25)로 덮여 있는 구멍이 형성되어 있다.
상기 구멍의 외주면에는 혈액 주입시 상기 본체 내부에 있는 공기가 배출될 수 있도록 미세한 틈(26)이 형성되어 있는 것을 특징으로 한다. 상기 미세한 틈(26)은 상기 1차 및 2차 실리콘 마개를 상기 상부덮개(20)의 중앙 외부 및 내부에 형성되어 있는 구멍에 각각 끼운 상태에서, 외부의 공기가 본체(10)로는 거의 유입되지 않지만, 바늘을 이용하여 혈액을 본체(10)로 주입시, 그에 상응하는 본체 내부의 공기가 외부로 배출될 수 있도록 형성된 것이다.
상기 1차 실리콘 마개(23)는 탈부착이 가능하지만, 2차 실리콘 마개(25)는 고정되어 있다.
도 3은 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 구성하는 내부마개의 단면도이다.
상기 내부마개(30)는 하부 저장부(16)를 밀폐시키기 위하여, 하부 저장부 하단 내부에 삽입되며, 실리콘 커버(32)와 내부마개 본체(34)로 이루어져 있다. 즉 상기 내부마개 본체(34)의 상단에는 실리콘 커버(32)가 끼움결합으로 결합되어 있으며, 상기 실리콘 커버(32) 및 내부마개 본체(34)의 외경은 상기 하부 저장부(16) 하단의 내경과 동일하거나 유사하다.
상기 실리콘 커버(32) 및 내부마개 본체(34)는 폐쇄용 조절나사(40)가 통과할 수 있도록 중앙에 홀이 형성되어 있는 원형이며, 상기 내부마개 본체(34)의 내부에는 나선(36)이 형성되어 있어, 폐쇄용 조절나사(40)에 형성되어 있는 나선부(44)와 결합될 수 있다.
그리고, 상기 내부마개 본체(34)의 외부에는 하부덮개(50)와 결합될 수 있도록 끼움 돌기(38)가 형성되어 있다.
상기 실리콘 커버(32)는 하부 저장부(16) 내부에 삽입되어 있고, 상기 내부마개 본체(34)의 일부는 하부 저장부(16)의 내부에 위치하며 상기 하부덮개와 결합되는 끼움 돌기(38) 부분은 하부 저장부(16)의 외부에 위치한다.
도 4는 본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 구성하는 폐쇄용 조절나사의 정면도이다.
상기 폐쇄용 조절나사(40)는 1차 원심분리 후, 분리된 적혈구층과 혈장층의 경계면 위치를 조절하고, 분리된 적혈구층과 혈장층이 서로 섞이지 않도록 상기 통로부(14)를 밀폐시키기 위한 것으로서, 상기 하부 저장부(16)의 하단 내부에 삽입되어 있는 내부마개(30)에 형성되어 있는 홀을 관통하면서 상하로 이동이 가능하다.
상기 폐쇄용 조절나사(40)는 폐쇄봉(42), 내부마개 본체(34)와의 결합을 위한 나선부(44) 및 손잡이부(46)로 구성되어 있으며, 상기 폐쇄봉(42)의 끝단(48)에는 실리콘 캡이 결합되어 있다. 상기 실리콘 캡의 형태는 크게 제한되지 않으나, 통로부를 밀폐시키고, 버피코트 층의 회수를 보다 용이하게 하기 위하여 원기둥이나 원뿔형인 것이 바람직하다.
버피코트 층이란, 혈액을 원심분리 하였을 때에 적혈구 층 위에 생기는 담황색의 얇은 백혈구층을 의미한다. 혈액을 원심분리 하였을 때에 가장 아래에 적혈구층이 위치하고, 그 위로 버피코트 층이 위치하며, 그 위로 혈소판 풍부 혈장층(PRP)이 위치하고, 그 위로 혈소판 결핍 혈장층(PPP)이 위치한다.
상기 하부덮개(50)는 원심분리시 상기 내부마개(30)에 결합되어 있는 폐쇄용 조절나사(40)가 이탈되는 것을 방지하기 위한 것으로서, 상기 하부 저장부(16) 하단 외부 및 상기 내부마개 본체의 끼움 돌기(38)와 결합될 수 있도록 각각 나선이 형성되어 있다.
본 발명은 다른 관점에서, (a) 채취된 혈액을 상부덮개를 통하여 본체에 주입하는 단계; (b) 혈액이 주입된 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 적혈구층과 혈장층을 분리시키는 단계; (c) 하부 저장부에는 적혈구층, 상부 저장부에는 혈장층이 위치하도록 폐쇄용 조절나사를 이동시키는 단계; (d) 하부덮개를 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합시켜, 상기 폐쇄용 조절나사의 위치를 고정시키는 단계; (e) 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 다시 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 상부 저장부에 위치한 혈장층을 혈소판 풍부 혈장층(PRP)과 혈소판 결핍 혈장층(PPP)으로 분리하는 단계; 및 (f) 주사기 바늘을 삽입하여 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출하는 단계를 포함하는, 상기 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 이용하여 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출하는 방법에 관한 것이다.
먼저, 항응고제를 주사기에 넣고, 주사기로 혈액을 채취한다. 상기 항응고제의 사용량은 채취할 혈액의 약 10%인 것이 바람직하다. 다음으로, 상기 채취된 혈액을 상부덮개(20)를 통하여 본체(10)에 주입한다. 앞서 설명한 바와 같이, 상기 상부덮개의 중앙에는 1차 실리콘 마개(23) 및 그 내측 하부에 2차 실리콘 마개(25)가 구멍을 덮고 있으므로, 주사기 바늘로 상기 1차 실리콘 마개(23) 및 2차 실리콘 마개(25)를 통과시키고, 혈액을 주입한다.
상기 상부 덮개(20)에는 미세한 틈(26)이 형성되어 있으므로, 실리콘 마개(23, 25)를 상기 상부덮개(20)의 중앙 외부 및 내부에 형성되어 있는 구멍에 각각 끼운 상태에서, 외부의 공기는 본체(10)로는 거의 유입되지 않지만, 바늘을 이용하여 혈액을 본체(10)로 주입시, 그에 상응하는 본체 내부의 공기가 외부로 배출된다. 따라서, 통상의 혈액분리용기처럼 혈액 주입시, 내부 공기 배출을 위한 노출공을 개방시킬 필요가 없으므로, 공기중 2차 오염을 최소화 시킬 수 있다.
다음으로, 혈액이 주입된 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 적혈구층과 혈장층을 분리시킨다.
상기 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 1차 원심분리시키면, 하부 저장부에 적혈구층이 위치하고, 적혈구층 위에 혈장층이 위치한다.
따라서, 하부 저장부에는 적혈구층, 상부 저장부에는 혈장층이 위치하도록 폐쇄용 조절나사(40)를 위 또는 아래로 이동시켜, 적혈구층과 혈장층의 경계선의 위치를 통로부(14) 하부 또는 하부 저장부(16) 상부로 조절함과 동시에 통로부(14)를 폐쇄용 조절나사(40)의 폐쇄봉(42)의 끝단(48)에 결합되어 있는 실리콘 캡으로 폐쇄시킨다.
통로부(14) 및 상부 저장부(12)에 위치하는 혈장층을 더욱 혈소판 풍부 혈장층(PRP)과 혈소판 결핍 혈장층(PPP)으로 분리하기 위하여, 2차 원심분리를 수행하여야 한다. 이때, 원심분리시 폐쇄용 조절나사(40)의 위치가 뒤로 밀리는 것을 방지하기 위하여, 하부덮개(50)를 하부 저장부(16) 하단 외부 및 상기 내부마개 외부인 내부마개 본체(34)의 끼움 돌기(38)에 결합시킨다.
하부덮개(50)를 하부 저장부(16) 하단 외부 및 상기 내부마개 본체(34)의 끼움 돌기(38)에 결합시킨 다음, 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 다시 원심분리기에 넣고, 원심분리를 수행하여 상부 저장부에 위치한 혈장층을 혈소판 풍부 혈장층(PRP)과 혈소판 결핍 혈장층(PPP)으로 분리시킨다.
끝으로, 상기 상부덮개(20)의 1차 실리콘 마개(23)를 제거하고, 2차 실리콘 마개(25)로 주사기 바늘로 통과시켜 혈소판 결핍 혈장층(PPP)을 추출하고, 남아있는 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 혈액으로부터 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 추출
항응고제 2cc가 들어있는 주사기에 혈액 18cc를 채혈한 다음, 본 발명의 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트의 1차 실리콘 마개및 2차 실리콘 마개에 주사기 바늘을 통과시켜 혈액을 본체로 주입하였다.
다음으로, 원심분리기에 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 넣고, 3000rpm으로 3분간 원심분리 시켰다.
원심분리기에서 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 꺼낸 다음, 폐쇄용 조절나사를 위 또는 아래로 이동시켜, 적혈구층과 혈장층의 경계선의 위치를 하부 저장부 상부로 조절시키면서, 통로부를 폐쇄용 조절나사의 폐쇄봉의 끝단에 결합되어 있는 실리콘 캡으로 밀착시켜 폐쇄시켰다. 그리고, 하부덮개를 돌려서, 하부 저장부 하단 외부 및 내부마개 본체의 끼움 돌기와 결합시킨 다음, 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 다시 원심분리기에 넣고, 3000rpm으로 4분간 원심분리 시켰다.
원심분리된 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 꺼낸 다음, 상부덮개의 1차 실리콘 마개를 제거하고, 2차 실리콘 마개로 주사기 바늘를 통과시켜 혈소판 결핍 혈장층(PPP)을 추출하고, 남아있는 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 4cc를 다시 추출하였다.
부호의 설명
10: 본체
12: 상부 저장부
14: 통로부
16: 하부 저장부
20: 상부덮개
23: 1차 실리콘 마개
25: 2차 실리콘 마개
26: 틈
30: 내부마개
32: 실리콘 커버
34: 내부마개 본체
38: 끼움 돌기
40: 폐쇄용 조절나사
42: 폐쇄봉
44: 나선부
46: 손잡이부
50: 하부덮개
본 발명에 따른 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 이용하면 원심분리 후 분리된 혈장층을 별도의 혈액농축용기에 옮겨담지 않고 원스텝(one step)으로 혈액으로부터 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출할 수 있으므로, 공기중 2차 감염을 최소화 할 수 있다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

  1. (a) 상부 저장부, 하부 저장부 및 상기 상부 저장부와 하부 저장부를 연결하는 통로부로 구성된 본체;
    (b) 상기 상부 저장부 상단에 결합되는 상부덮개;
    (c) 상기 하부 저장부 하단 내부에 삽입되어 하부 저장부를 밀폐시키는 내부 마개;
    (d) 상기 내부마개에 형성되어 있는 홀을 관통하면서 상하로 이동이 가능하며, 상기 통로부를 밀폐시키는 폐쇄용 조절나사; 및
    (e) 원심분리시 상기 내부마개에 결합되어 있는 폐쇄용 조절나사가 이탈되는 것을 방지하기 위하여 상기 하부 저장부 하단 외부 및 상기 내부마개 외부와 결합되는 하부덮개를 포함하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트.
  2. 제1항에 있어서, 상기 상부 저장부는 아랫방향으로 폭이 좁아지는 원추형이고, 상기 하부 저장부는 윗방향으로 폭이 좁아지는 역원추형이며, 상기 통로부는 상기 상부 저장부의 하단과 상기 하부 저장부의 상단 부분이 중공 구조로 연결되는 부분인 것을 특징으로 하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트.
  3. 제2항에 있어서, 상기 상부 저장부는 아랫방향으로 폭이 좁아지는 원추형 2개가 연속적으로 결합되어 있는 형태인 것을 특징으로 하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트.
  4. 제1항에 있어서, 상기 상부덮개는 중앙에 1차 실리콘 마개로 덮여 있는 구멍과 그 내측 하부에 2차 실리콘 마개로 덮여 있는 구멍이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트.
  5. 제4항에 있어서, 상기 1차 및 2차 실리콘 마개로 덮여 있는 구멍의 외주면에는 혈액 주입시 상기 본체 내부에 있는 공기가 배출될 수 있도록 미세한 틈이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트.
  6. 제1항에 있어서, 상기 내부마개는 상기 하부 저장부의 밀폐를 위하여 실리콘 캡이 씌어져 있으며, 내부에 형성된 나선을 통하여 상기 폐쇄용 조절나사와 결합되는 것을 특징으로 하는 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트.
  7. 다음 단계를 포함하는, 제1항의 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 이용하여 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출하는 방법:
    (a) 채취된 혈액을 상부덮개를 통하여 본체에 주입하는 단계;
    (b) 혈액이 주입된 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 적혈구층과 혈장층을 분리시키는 단계;
    (c) 하부 저장부에는 적혈구층, 상부 저장부에는 혈장층이 위치하도록 폐쇄용 조절나사를 이동시키는 단계;
    (d) 하부덮개를 하부 저장부 하단 외부 및 내부마개 외부와 결합시켜, 상기 폐쇄용 조절나사의 위치를 고정시키는 단계;
    (e) 혈액 분리 및 혈소판 풍부 혈장층(PRP) 농축을 위한 일체형 키트를 다시 원심분리기에 넣고, 원심분리하여 상부 저장부에 위치한 혈장층을 혈소판 풍부 혈장층(PRP)과 혈소판 결핍 혈장층(PPP)으로 분리하는 단계; 및
    (f) 주사기 바늘을 삽입하여 혈소판 풍부 혈장층(PRP)을 추출하는 단계.
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