CN103842001B - 用于血液分离及prp浓缩的一体型试剂盒及提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒以及利用该试剂盒的富血小板血浆层提取方法，更详细的涉及可利用一个试剂盒来一步执行血液分离及富血小板血浆层浓缩的一体型试剂盒以及利用该试剂盒的富血小板血浆层提取方法。用于上述血液分离及富血小板血浆层浓缩的一体型试剂盒包括：（a）本体，由上部储存部、下部储存部及通道部构成，上述通道部用于连接上部储存部与下部储存部；（b）上部盖，与上述上部储存部的上端相结合；（c）内部塞，插入于上述下部储存部的下端内部，用于密闭下部储存部；（d）封闭用调节螺钉，能够贯通形成于内部塞的孔的同时上下移动，用于密闭上述通道部；以及（e）下部盖，与上述下部储存部的下端外部及上述内部塞的外部相结合，当离心分离时，以防止与上述内部塞相结合的封闭用调节螺钉脱离。若利用本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，则能够在离心分离后，无需将分离的血浆层另行装入血液浓缩容器，而一步从血液提取富血小板血浆层，因此能够将空气中第二次污染最小化。

Description

用于血液分离及PRP浓缩的一体型试剂盒及提取方法
技术领域
本发明涉及用于血液分离及PRP浓缩的一体型试剂盒以及利用该试剂盒的PRP提取方法，更详细地涉及可利用一个试剂盒来一步（one step）执行血液分离及PRP（PlateletRich Plasma）浓缩的一体型试剂盒以及利用该试剂盒的PRP提取方法。
背景技术
富血小板血浆层（PRP，Platelet Rich Plasma）是指将血液特殊处理后离心分离的，意味着相比于普通血液，以使血小板丰富地冷凝的方式制成的血浆成分。由于原来的血小板含有多个生长因子，因而在伤口愈合和皮肤再生方面起到重要的作用。并且，据报告，由于在PRP内含有高浓度的这种血小板，因而具有使多种生长因子促进周边细胞的增殖，并以将胶原蛋白等成分丰富地合成的方式刺激的效果。由此，最近，PRP用于腰痛等痛症治疗领域、脱发治疗、皮肤再生或烧伤治疗等皮肤疾病领域等多种领域。
作为形成这种PRP的方法，分别提出了物理方法和化学方法，常规方法为物理方法，使用将采集的血液离心分离，来分离血球成分和贫血小板血浆层（PPP，Platelet PoorPlasma），并对这些用过滤器仅取出PRP的方法。
包括韩国公开专利2010-0105282及2011-0009651在内的以往的PRP提取方法作为使用2个管型试管的方式需要经过以下步骤：步骤（1），将从人体采集的血液注入管型试管，并使用离心分离机来将注入的试管离心分离；步骤（2），在以使分离的试管不摇晃的方式固定的状态下，插入注射针来仅提取位于红细胞的上侧的血浆；步骤（3），将为了获得高浓缩的PRP而提取的血浆放入其他管型试管，再次进行离心分离；步骤（4），用注射器提取位于第二次离心分离的管型试管的上层的血浆，并回收残留的PRP。
但是，就这种管型试管而言，当分离并提取红细胞和血浆时，红细胞会与血浆一起被吸入，富含血小板（platelet）和生长因子（growth factor）的血块黄层（buffy coat）作为普通血液的0.1％非常少量，但生成在红细胞上，因而存在不能正常地提取的问题，会经过在第一次离心分离后，利用注射器来提取血浆，再装入新的管型试管的过程，因而此时存在血浆有可能露出在大气中的问题。
另一方面，作为化学方法，在国际公开专利WO2004/012750中提出了在血液添加聚-L-谷氨酸钠来使红细胞选择促进性地凝集沉降的方法。但是，化学方法也为了仅分离PRP而共存与以往物理方法相同的外部露出等问题，从这点来看，不能成为优选的方式。
对此，本发明人为了解决上述问题而锐意努力，其结果，将血液第一次离心分离来分离红细胞层和血浆层，并以使红细胞层位于下部储存部、血浆层位于上部储存部的方式调节封闭用调节螺钉的同时密闭通道部，再执行第二次离心分离的情况下，确认如下：即使不利用2个血液分离容器及血液浓缩容器，也可以在1个容器中一步浓缩并提取富血小板血浆层，从而完成了本发明。
发明内容
本发明的目的在于，提供在离心分离后，无需将分离的血浆层另行装入血液浓缩容器，而在1个容器中能够一步从血液分离、浓缩和提取富血小板血浆层的试剂盒和利用该试剂盒的富血小板血浆层的提取方法。
为了达成上述目的，本发明提供用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，上述试剂盒包括：（a）本体，由上部储存部、下部储存部及通道部构成，上述通道部用于连接上述上部储存部和下部储存部；（b）上部盖，与上述上部储存部的上端相结合；（c）内部塞，插入于上述下部储存部的下端内部，用于密闭下部储存部；（d）封闭用调节螺钉，贯通形成于上述内部塞的孔的同时能够上下移动，用于密闭上述通道部；以及（e）下部盖，与上述下部储存部的下端外部及上述内部塞的外部相结合，当离心分离时，以防止与上述内部塞相结合的封闭用调节螺钉脱离。
并且，本发明提供利用上述用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒来提取富血小板血浆层的方法，上述方法包括：步骤（a），通过上部盖将采集的血液注入本体；步骤（b），将注入有血液的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒放入离心分离机，进行离心分离来分离红细胞层和血浆层；步骤（c），以使红细胞层位于下部储存部、血浆层位于上部储存部的方式移动封闭用调节螺钉；步骤（d），将下部盖与下部储存部的下端外部及上述内部塞的外部相结合，来固定上述封闭用调节螺钉的位置；步骤（e），将用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒再次放入离心分离机，进行离心分离来将位于上部储存部的血浆层分离为富血小板血浆层和乏血小板血浆层；以及步骤（f），插入注射针来提取富血小板血浆层。
附图说明
图1为本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的剖视图（（A）部分：用封闭用调节螺钉来封闭通道部之前，（B）部分：用封闭用调节螺钉来封闭通道部之后）。
图2为本发明的构成用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的上部盖的俯视图。
图3为本发明的构成用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的内部塞的剖视图。
图4为本发明的构成用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的封闭用调节螺钉的主视图。
具体实施方式
只要不以其他方式定义，那么本说明书中所使用的所有技术及科学术语就具有与由本发明所属技术领域的普通技术人员通常所理解的相同的意义。通常，在本说明书中所使用的命名法为本技术领域中熟知且通常使用的方法。
根据一观点，本发明涉及用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，上述试剂盒包括：（a）本体，由上部储存部、下部储存部及通道部构成，上述通道部用于连接上述上部储存部和下部储存部；（b）上部盖，与上述上部储存部的上端相结合；（c）内部塞，插入于上述下部储存部的下端内部，用于密闭下部储存部；（d）封闭用调节螺钉，贯通形成于上述内部塞的孔的同时能够上下移动，用于密闭上述通道部；以及（e）下部盖，与上述下部储存部的下端外部及上述内部塞的外部相结合，当离心分离时，以防止与上述内部塞相结合的封闭用调节螺钉脱离。
以下，参照附图，对本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒进行详细说明。
图1为本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的剖视图。
如图1所示，本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒包括：本体10，由上部储存部、下部储存部及通道部构成，上述通道部用于连接上述上部储存部与下部储存部；上部盖20，与上述上部储存部的上端相结合；内部塞30，插入于上述下部储存部的下端内部，用于密闭下部储存部；封闭用调节螺钉40，贯通形成于上述内部塞的孔的同时能够上下移动，用于密闭上述通道部；以及下部盖50，与上述下部储存部的下端外部及上述内部塞的外部相结合，当离心分离时，以防止与上述内部塞相结合的封闭用调节螺钉脱离。
上述本体10用于将注入的血液分离为红细胞层和血浆层，再次将分离的血浆层分离为富血小板血浆层和乏血小板血浆层，上述本体10包括上部储存部12、下部储存部16及通道部14，上述通道部14用于连接上述上部储存部12与下部储存部16。
上述上部储存部12呈宽度沿着向下方向变窄的圆锥形，上述下部储存部16呈宽度沿着向上方向变窄的倒锥形，上述通道部14呈上述上部储存部12的下端和上述下部储存部16的上端部分由中空结构相连接的形态。
从整个观点来看，优选地，上述上部储存部12由宽度沿着向下方向变窄的圆锥形结构构成，但更优选为宽度沿着向下方向变窄的2个圆锥形连续结合的结构。
即，上述上部储存部12可区分为第一上部储存部12a及第二上部储存部12b，在血浆层通过第一次离心分离位于上部储存部12的状态下执行第二离心分离时，乏血小板血浆层位于第一上部储存部12a，富血小板血浆层位于第二上部储存部12b，从而可以更加容易地分离富血小板血浆层。
图2为本发明的构成用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的上部盖的俯视图。
如图1及图2所示，上述上部储存部12的上端结合有上部盖20。作为上述结合，可例示螺旋结合。
在上述上部盖20的中央形成有由第一硅胶塞23覆盖的孔，在上述上部盖20的内侧下部形成有由第二硅胶塞25覆盖的孔。
本发明的特征在于，在上述孔的外周面形成有微细的缝隙26，当注入血液时，能够使得上述本体的内部的空气排出。上述微细的缝隙26形成为，在将上述第一硅胶塞及第二硅胶塞分别插入于形成在上述上部盖20的中央外部及内部的孔的状态下，外部的空气几乎不流入本体10，但当利用针来将血液注入本体10时，与其相应的本体内部的空气可向外部排出。
上述第一硅胶塞23可装拆，但第二硅胶塞25被固定。
图3为本发明的构成用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的内部塞的剖视图。
上述内部塞30插入于下部储存部的下端内部，用于密闭下部储存部16，上述内部塞30由硅胶套32和内部塞本体34构成。即，在上述内部塞本体34的上端以插入的方式结合有硅胶套32，上述硅胶套32及内部塞本体34的外径与上述下部储存部16的下端的内径相同或类似。
上述硅胶套32及内部塞本体34呈中央形成有孔的圆形，能够使得封闭用调节螺钉40通过，在上述内部塞本体34的内部形成有螺纹36，从而可与形成于封闭用调节螺钉40的螺旋部44相结合。
并且，在上述内部塞本体34的外部形成有插入突起38，可与下部盖50相结合。
上述硅胶套32插入于下部储存部16的内部，上述内部塞本体34的一部分位于下部储存部16的内部，与上述下部盖相结合的插入突起38部分位于下部储存部16的外部。
图4为本发明的构成用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的封闭用调节螺钉的主视图。
上述封闭用调节螺钉40在第一次离心分离后，用于调节分离的红细胞层与血浆层的界面位置，并以使分离的红细胞层不与血浆层混合的方式密闭上述通道部14，上述封闭用调节螺钉40可以贯通形成于插入在上述下部储存部16的下端内部的内部塞30的孔的同时上下移动。
上述封闭用调节螺钉40由封闭棒42、用于与内部塞本体34的结合的螺旋部44及把手部46构成，在上述封闭棒42的末端48结合有硅胶帽。上述硅胶帽的形态并不怎么受限，但为了密闭通道部，并更加容易地回收血块黄层，优选为圆柱形或圆锥形。
血块黄层是指, 将血液离心分离时，在红细胞层上生成的淡黄色的薄的白细胞层。当将血液离心分离时，最下侧有红细胞层，在红细胞层上有血块黄层，在血块黄层上有富血小板血浆层，在富血小板血浆层上有乏血小板血浆层。
当离心分离时，上述下部盖50用于防止与上述内部塞30相结合的封闭用调节螺钉40脱离，在上述下部盖50分别形成有螺纹，使得能够与上述下部储存部16的下端外部及上述内部塞本体的插入突起38相结合。
在另一个观点来看，本发明涉及利用上述用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒来提取富血小板血浆层的方法，上述方法包括：步骤（a），通过上部盖将采集的血液注入本体；步骤（b），将注入有血液的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒放入离心分离机，进行离心分离来分离红细胞层和血浆层；步骤（c），以使红细胞层位于下部储存部、血浆层位于上部储存部的方式移动封闭用调节螺钉；步骤（d），将下部盖与下部储存部的下端外部及上述内部塞的外部相结合，来固定上述封闭用调节螺钉的位置；步骤（e），将用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒再次放入离心分离机，进行离心分离来将位于上部储存部的血浆层分离为富血小板血浆层和乏血小板血浆层；以及步骤（f），插入注射针来提取富血小板血浆层。
首先，将抗凝剂放入注射器，并用注射器采集血液。上述抗凝剂的使用量优选为要采集的血液的约10％。接着，通过上部盖20将上述采集的注入血液本体10。如上所述，在上述上部盖的中央由第一硅胶塞23覆盖孔，在上述上部盖的内侧下部由第二硅胶塞25覆盖孔，因而使注射针通过上述第一硅胶塞23及第二硅胶塞25，并注入血液。
在上述上部盖20形成有微细的缝隙26，因而在将硅胶塞23、25分别插入于形成在上述上部盖20的中央外部及内部的孔的状态下，外部的空气几乎不流入本体10，但当利用针来将血液注入本体10时，与其相应的本体的内部的空气向外部排出。因此，无需像常规的血液分离容器一样注入血液时，将用于排出内部空气的露出孔开放，因而能够将空气中第二次污染最小化。
接着，将注入有血液的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒放入离心分离机，进行离心分离来分离红细胞层和血浆层。
若将上述用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒第一次离心分离，则红细胞层位于下部储存部，血浆层位于红细胞层。
因此，以使红细胞层位于下部储存部、血浆层位于上部储存部的方式向上或向下移动封闭用调节螺钉40，来向通道部14的下部或下部储存部16的上部调节红细胞层与血浆层的界线的位置的同时，用与封闭用调节螺钉40的封闭棒42的末端48相结合的硅胶帽来封闭通道部14。
为了将位于通道部14及上部储存部12的血浆层进一步分离为富血小板血浆层和乏血小板血浆层，需要执行第二次离心分离。此时，将下部盖50与作为下部储存部16的下端外部及上述内部塞的外部的内部塞本体34的插入突起38相结合，当离心分离时，以防止封闭用调节螺钉40的位置被向后推动。
在将下部盖50与下部储存部16的下端外部及上述内部塞本体34的插入突起38相结合之后，将用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒再次放入离心分离机，进行离心分离来将位于上部储存部的血浆层分离为富血小板血浆层和乏血小板血浆层。
最后，去除上述上部盖20的第一硅胶塞23，并使注射针贯通第二硅胶塞25，来提取乏血小板血浆层，并提取残留的富血小板血浆层。
下面，通过实施例来对本发明进行更为详细的说明。这些实施例仅用于例示本发明，不解释为本发明的范围受这些实施例的限制，这对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。
实施例1：从血液提取富血小板血浆层。
在含有2cc的抗凝剂的注射器采集18cc的血液之后，使注射针贯通本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒的第一硅胶塞及第二硅胶塞，来将血液注入本体。
接着，在离心分离机放入用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，并以3000rpm（每分钟转速）的速度离心分离3分钟。
从离心分离机取出用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒之后，向上或向下移动封闭用调节螺钉，来向下部储存部的上部调节红细胞层和血浆层的界线的位置的同时，用与封闭用调节螺钉的封闭棒的末端相结合的硅胶帽来以紧贴的方式封闭通道部。并且，转动下部盖，来与下部储存部的下端外部及内部塞本体的插入突起相结合之后，将用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒再次放入离心分离机，并以3000rpm的速度离心分离4分钟。
取出离心分离的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒之后，去除上部盖的第一硅胶塞，并使注射针贯通第二硅胶塞，来提取乏血小板血浆层，再次提取了残留的富血小板血浆层4cc。
附图标记的说明
10：本体
12：上部储存部
14：通道部
16：下部储存部
20：上部盖
23：第一硅胶塞
25：第二硅胶塞
26：缝隙
30：内部塞
32：硅胶套
34：内部塞本体
38：插入突起
40：封闭用调节螺钉
42：封闭棒
44：螺旋部
46：把手部
50：下部盖。
产业上的可利用性。
若利用本发明的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，则可在离心分离后，无需将分离的血浆层另行装入血液浓缩容器，而一步从血液提取富血小板血浆层，因而能够将空气中第二次污染最小化。
以上，详细记述了本发明内容的特定的部分，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，明确的是，这些具体记述仅为优选的实施方式，本发明的范围并不局限于此。因此，本发明的实质范围由所附的发明要求保护范围和与其等同的技术方案定义。

Claims (7)

1.一种用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，其特征在于，包括：
（a）本体，由上部储存部、下部储存部及通道部构成，上述通道部用于连接上述上部储存部与下部储存部；
（b）上部盖，与上述上部储存部的上端相结合；
（c）内部塞，具有插入于上述下部储存部的下端内部以密闭下部储存部的内部塞本体，上述内部塞本体的外部形成有插入突起；
（d）封闭用调节螺钉，螺旋结合于能够贯通形成于上述内部塞的孔的同时上下移动，用于密闭上述通道部；以及
（e）下部盖，与上述下部储存部的下端外部及形成于上述内部塞的插入突起相结合，当离心分离时，以防止与上述内部塞相结合的封闭用调节螺钉脱离。
2.根据权利要求1所述的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，其特征在于，上述上部储存部呈宽度沿着向下方向变窄的圆锥形，上述下部储存部呈宽度沿着向上方向变窄的倒锥形，上述通道部为上述上部储存部的下端和上述下部储存部的上端部分由中空结构相连接的部分。
3.根据权利要求2所述的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，其特征在于，上述上部储存部呈宽度沿着向下方向变窄的2个圆锥形连续结合的形态。
4.根据权利要求1所述的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，其特征在于，在上述上部盖的中央形成有由第一硅胶塞覆盖的孔，在上述上部盖的内侧下部形成有由第二硅胶塞覆盖的孔。
5.根据权利要求4所述的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，其特征在于，在由上述第一硅胶塞及第二硅胶塞覆盖的孔的外周面形成有微细的缝隙，当注入血液时，能够使得上述本体的内部的空气排出。
6.根据权利要求1所述的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒，其特征在于，上述内部塞由硅胶帽覆盖，以密闭上述下部储存部，通过形成于上述内部塞的内部的螺纹与上述封闭用调节螺钉相结合。
7.一种利用权利要求1的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒来提取富血小板血浆层的方法，其特征在于，包括：
步骤（a），通过上部盖将采集的血液注入本体；
步骤（b），将注入有血液的用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒放入离心分离机，进行离心分离来分离红细胞层和血浆层；
步骤（c），以使红细胞层位于下部储存部、血浆层位于上部储存部的方式移动封闭用调节螺钉；
步骤（d），将下部盖与下部储存部的下端外部及内部塞的外部相结合，来固定上述封闭用调节螺钉的位置；
步骤（e），将用于分离血液及浓缩富血小板血浆层的一体型试剂盒再次放入离心分离机，进行离心分离来将位于上部储存部的血浆层分离为富血小板血浆层和乏血小板血浆层；以及
步骤（f），插入注射针来提取富血小板血浆层。
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