WO2011040535A1 - C型肝炎ウイルスワクチン組成物 - Google Patents
C型肝炎ウイルスワクチン組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2011040535A1 WO2011040535A1 PCT/JP2010/067096 JP2010067096W WO2011040535A1 WO 2011040535 A1 WO2011040535 A1 WO 2011040535A1 JP 2010067096 W JP2010067096 W JP 2010067096W WO 2011040535 A1 WO2011040535 A1 WO 2011040535A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- protein
- virus
- hcv
- hepatitis
- vaccine composition
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5258—Virus-like particles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24223—Virus like particles [VLP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24261—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2770/24263—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
Definitions
- muramyl dipeptide as non-particulate adjuvant, muramyl dipeptide (adjuvant active ingredient of peptidoglycan extracted from mycobacteria), nonionic block copolymer, saponin (complex mixture of triterpenoids extracted from bark of Quillaja saponaria tree) ), Lipid A (glycosamine disaccharides with 5 or 6 fatty acid chains and C2 to C16 lengths in general and 2 phosphate groups), cytokines, nucleic acids, carbohydrate polymers, derivatized polysaccharides and Bacterial toxins such as cholera toxin and E. coli heat labile toxin can be exemplified and are often used in combination with a particulate adjuvant.
- dsRNA includes polyriboinosinic acid-polyribocytidylic acid (hereinafter referred to as “polyI: C”) in which polyriboinosinic acid (polyI) and polyribocytidylic acid (polyC) are hybridized, and , PolyICLC (non-patent document 10), which is a complex of polyI: C, polyL lysine and carboxymethylcellulose, and polyI: PolyC12U in which the C part of polyI: C is replaced with 1 U in 12 It is known as dsRNA (Non-patent Document 11).
- polyI: C is an inducer of type I interferon and has been shown to be a ligand for TLR3.
- HCV particles can also be purified by density gradient centrifugation after concentration of HCV particles with a ultrafiltration membrane. Furthermore, in the case of purifying by combining density gradient centrifugation and column chromatography, they may be combined in any order, but preferably a combination using density gradient centrifugation after purification by multiple column chromatography, more preferably Is a combination of purifying fractions containing HCV particles obtained using affinity chromatography following an anion exchange column using density gradient centrifugation, most preferably using a column using Q-Sepharose (registered trademark). The obtained fraction containing HCV particles is further purified using a column using cellulofine sulfate, and the obtained fraction containing HCV particles is purified by density gradient centrifugation. In addition, by using dialysis or ultrafiltration during the steps of column chromatography and density gradient centrifugation, solute substitution and / or concentration of HCV particles can be performed.
- the vaccine composition according to the present invention comprises an inactivated hepatitis C virus particle produced by the above-described method and the like, an adjuvant, in particular, unmethylated as described in SEQ ID NO: 5 in the Sequence Listing.
- a hepatitis C virus vaccine composition can be produced by mixing the CpG-containing oligonucleotide and aluminum hydroxide by a conventional method.
- the vaccine composition according to the present invention may contain 0.001 to 99.999% by weight of inactivated HCV particles as an antigen.
- hepatitis C virus particles were serially diluted in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) at 50, 250, 1250, 6250, 31250, 156250, and 781250.
- DMEM Dulbecco's modified Eagle medium
- CMV-13-J6E2 was digested with SacI and BamHI, and the generated DNA fragments encoding the signal peptide sequence and the antigen E2 protein were separated by agarose gel electrophoresis and purified by GeneElute (Sigma).
- E2 protein derived from J6CF strain was prepared as follows. J6CF full-length protein sequence (continuous protein sequence encoded by J6CF strain genomic sequence) using genotype 2a genomic cDNA derived from J6CF strain genomic gene (GenBank accession number AF177036); amino acid sequence described in GenBank accession number AF177036 The gene coding for the E2 protein that does not include the transmembrane region and corresponds to the amino acid residues from position 384 to position 720 when the N-terminal starting methionine is the first is the Advantage GC2 PCR kit (Takara Bio Inc.).
- COS1 cells were cultured in Dulbecco MEM (D-MEM: Invitrogen) containing 10% fetal bovine serum (Invitrogen), 100 U / mL penicillin, and 100 ⁇ g / mL streptomycin sulfate. COS1 cells were seeded in a 150 cm 2 culture flask (Corning Coaster) at a dilution ratio of 2 times the day before gene introduction, and cultured overnight in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
本発明に係るHCVワクチン組成物の抗原に用いることができる感染性HCV粒子を生成するのに利用できるHCVゲノムの例は、具体的には、遺伝子型2aのJFH1株のウイルスゲノムRNAであって、5’側から3’側に順番に、5’非翻訳領域、coreタンパク質コード領域、E1タンパク質コード領域、E2タンパク質コード領域、p7タンパク質コード領域、NS2タンパク質コード領域、NS3タンパク質コード領域、NS4Aタンパク質コード領域、NS4Bタンパク質コード領域、NS5Aタンパク質コード領域、NS5Bタンパク質コード領域及び3’非翻訳領域の塩基配列からなるRNAである。あるいは、そのHCVゲノムは、2種類以上のHCV株のウイルスゲノムRNAからなるキメラRNAであってもよい。例えば、5’側から3’側に順番に、JFH1株以外のHCV株の5’非翻訳領域、coreタンパク質コード領域、E1タンパク質コード領域、E2タンパク質コード領域、及びp7タンパク質コード領域、JFH1株以外のHCV株又はJFH1株のNS2タンパク質コード領域、並びにJFH1株のNS3タンパク質コード領域、NS4Aタンパク質コード領域、NS4Bタンパク質コード領域、NS5Aタンパク質コード領域、NS5Bタンパク質コード領域及び3’非翻訳領域の塩基配列からなるキメラRNAが挙げられる。あるいはそのHCVゲノムはまた、5’側から3’側に順番に、JFH1株以外のHCV株の5’非翻訳領域、coreタンパク質コード領域、E1タンパク質コード領域、E2タンパク質コード領域、及びp7タンパク質コード領域並びに、一以上のHCV株由来のキメラNS2タンパク質コード領域、NS3タンパク質コード領域、NS4Aタンパク質コード領域、NS4Bタンパク質コード領域、NS5Aタンパク質コード領域、NS5Bタンパク質コード領域及び3’非翻訳領域の塩基配列からなるキメラRNAであってもよい。
上記(1)で得られたHCV粒子を含むウイルス液は、遠心及び/又はフィルター等を用いて細胞及び細胞の残渣が除去される。残渣が除去された溶液は、分画分子量100,000から500,000の限外濾過膜を用いて10~100倍程度に濃縮することもできる。残渣が除去されたHCV粒子を含んだ溶液は、以下に記載するクロマトグラフィ及び密度勾配遠心を任意の順番に組み合わせて、あるいは単独で精製することができる。以下に代表的なクロマトグラフィや密度勾配遠心の方法について記載するが、それに限られるものではない。
本発明のワクチンは、不活化HCV粒子を抗原とする。本発明ワクチンに関しては、当該HCV粒子の感染性の有無は、HCVが齧歯類に感染性を示さないため、齧歯類を用いた評価では問題とならないが、ヒトに接種する場合は不活化されたHCV粒子を使用する必要がある。HCV粒子を不活化する方法としては、ホルマリン,β-プロピオラクトン,グルタルジアルデヒド等の不活化剤を、例えば、ウイルス浮遊液に添加混合し、ウイルスと反応させることにより達成することができる(Appaiahgari et al., Vaccine, 22:3669-3675, 2004)。また、HCV粒子を紫外線で照射することによりウイルスの感染性を失わせ、迅速に不活化する方法が挙げられる。紫外線照射は、ウイルスを構成するタンパク質等への影響が少なく、ウイルスの不活化を行うことができるので好ましい。不活化するための紫外線の線源としては一般に市販されている殺菌灯、特に15W 殺菌灯を用いて行うことができるが、それに限るものではない。また、本発明においては、HCV粒子は上記に記載した方法により精製したものを用いているが、本不活化方法は、精製・未精製等の状態により限られるものではない。好ましくは感染性HCV粒子を含む溶液を20 mW/cm2の紫外線で室温にて5分以上照射することにより、感染性HCV粒子を不活化することができる。
アジュバントは、既にワクチン用アジュバントとして使用が認可されている水酸化アルミニウム(Alum)、臨床試験が行われている2本鎖RNA(dsRNA)、非メチル化CpG含有オリゴヌクレオチド(CpG-ODN)を使用することができる。
本発明に係るワクチン組成物は、上記方法等で製造された、不活化C型肝炎ウイルス粒子と、アジュバント、特に、配列表の配列番号5記載の非メチル化CpG含有オリゴヌクレオチド及び水酸化アルミニウムとを、常法により混合することにより、C型肝炎ウイルスワクチン組成物を製造することができる。本発明に係るワクチン組成物には、抗原としての不活化HCV粒子を0.001~99.999重量%含有されていればよい。
本発明に係るワクチン組成物の効果を評価するためには、HCVのタンパク質を担体に固定(固相化)し、次に血清を加え、血清中の抗体と固相化した抗原とが複合体を形成するのに十分な時間及び条件下で反応させればよい。次いで、生成した複合体をシグナルとなる酵素、色素もしくはラジオアイソトープを結合させた血清中の抗体を認識する抗体(2次抗体)と接触させ、第2の混合物を生成させる。第2の混合物を抗体/抗原複合体を形成するのに十分な時間及び条件下で反応させる。HCVタンパク質を認識する抗体の存在を酵素、色素もしくはラジオアイソトープのシグナルで検出することにより検出する。
ワクチン組成物投与後の動物血清サンプルがHCVの感染阻害活性を有するか否かを測定するため、感染性HCV様粒子(HCVpp)又は感染性HCV粒子(HCVcc)を使用することができる。
J6/JFH1-HCV粒子の作製
劇症肝炎の患者から分離したC型肝炎ウイルス(HCV)JFH1株(遺伝子型2a)のゲノムRNA全領域を逆転写して得たcDNA(ゲノムcDNA)をpUC19プラスミドのT7 RNAプロモーター配列の下流にクローニングして得られたプラスミドDNAであるpJFH1(Wakita, T. et al., Nat. Med., 11 (2005) p.791-796及び国際公開WO 2004/104198)をEcoRIで消化後、さらにBclIで部分消化し、EcoRI部位から最初のBclI部位までの断片(約2840 bp)を切除したプラスミドDNA断片を調製し、それを精製した。
J6/JFH1-HCV粒子の精製
実施例1で産生させたJ6/JFH1-HCV粒子は、以下の3段階の工程を用いて精製した。
中空糸カートリッジHollow Fiber Cartridge(GE Healthcare社:500kDaカットオフ モデル番号UFP-500-C-8A、以下「Hollow Fiber」と呼ぶ)を利用して、上記実施例1で得たHCV粒子を含む培養上清を60倍に濃縮した。
Ultra-clear 25×89mm遠心管(ベックマンコールター社:カタログ番号344058)に、冷却した60%ショ糖を含むTNE緩衝液(10mM Tris-HCl(pH 7.4)、150mM NaCl、1mM EDTA)を3 mL加え、20%ショ糖を含むTNE緩衝液を7mL重層した。さらに、20%ショ糖を含むTNE緩衝液の上に、サンプルを25mL重層した。SW-28(ベックマンコールター社)を用いて、28,000回転で4時間、4℃で超遠心を行った。
溶出画分をAmicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units(排除分子量100kDa、ミリポア社)及びTNE 緩衝液を用いてバッファー置換を行うとともに濃縮を行った。こうして得た濃縮液を、後述の免疫工程において感染性HCV粒子を含むウイルス液として使用した。
HCV粒子の不活化
実施例2の工程1)~3)で得た濃縮C型肝炎ウイルスを、紫外線照射にて不活化した。紫外線の線源としては東芝社製GL-15を使用した。具体的には、精製した、感染力価1×106 ffu/mLのC型肝炎ウイルス粒子(JFH1株)含有溶液をシリコンコーティングされたポリエチレン製エッペンチューブ(アシスト社製)に入れ、紫外線の照射強度が20mW/cm2となるような距離に置き、5分間UV-Cを照射した。
J6E1Fcタンパク質及びJ6E2Fcタンパク質の作製
J6E1Fcタンパク質及びJ6E2Fcタンパク質は、以下に示す方法で作製した。
HCV2aのJ6CF株のゲノムRNAのcDNA(GenBankアクセッション番号AF177036)を鋳型として、J6CF株の前駆体タンパク質のN末端の開始メチオニンを1番目とした場合における第192位~第353位のE1タンパク質をコードする遺伝子をAdvantage GC2 PCRキット(タカラバイオ社)にて、J6E1F-s(配列番号9:CACAAGCTTGCCGAAGTGAAGAACATCAGT)及びJ6E1F-as(配列番号10:TCGGGATCCCAATGAGCCCCGCTAATGATGTC)をプライマーに用いてPCR法で増幅した。
(2)HCV2aのJ6CF株由来のE2タンパク質にヒトIgGのFcタンパク質を付加した融合タンパク質を発現させるためのベクターの構築
まず、HCV2aのJ6CF株のゲノムRNAのcDNA(GenBankアクセッション番号:AF177036)を鋳型として、J6CF株の前駆体タンパク質のN末端の開始メチオニンを1番目とした場合における第384位~第720位のアミノ酸残基までに相当する領域からなるタンパク質をコードする遺伝子を、Advantage GC2 PCRキット(タカラバイオ社)で、J6E2Fc-s(配列番号6:CACAAGCTTCGCACCCATACTGTTGGGG)及びJ6E2Fc-as(配列番号7:ACAGGATCCCATCGGACGATGTATTTTGTG)をプライマーに用いてPCR法で増幅した。
CDM-J6E1Fc又はCDM-J6E2Fcを以下のようにしてサル腎臓由来COS1細胞に導入して各融合タンパク質を発現させた。
CDM-J6E1Fc又はCDM-J6E2Fcを導入したCOS1細胞の培養上清をProtein-Aを結合させた担体であるProsep-A(ミリポア社)を用いて以下のように精製した。
抗原とアジュバントを含むワクチン組成物の調製
ワクチン組成物は、以下のようにしてエマルジョンとして調製した。
ワクチン組成物の免疫応答誘導能の評価
1.ワクチン組成物の投与
1)J6E2Fcキメラタンパク質の投与
Balb/cマウス(5週齢、雌)に、実施例5で調製したJ6E2Fcタンパク質(5μg又は20μg)を含むエマルジョンを腹腔内投与することにより免疫した。2週間後、同様に調製したJ6E2Fcタンパク質を含んだエマルジョンを同様に腹腔内投与してさらに免疫した。血清サンプルは、最終免疫10日後に採取した血液から調製した。
Balb/cマウス(5週齢、雌)に、実施例5で調製した不活化J6/JFH1-HCV粒子(HCV core 2pmol相当量)を含むエマルジョンを腹腔内投与することにより免疫した。2週間後、同様に調製した不活化J6/JFH1-HCV粒子を含んだエマルジョンを同様に腹腔内投与してさらに免疫した。さらに4週間後及び6週間後に、同様に腹腔内投与して免疫した。血清サンプルは、最終免疫の1週間後(初回免疫の7週間後)に採取した血液から調製した。
上記「1.ワクチン組成物の投与」でそれぞれのワクチン組成物を投与したマウスの血清中のE1タンパク質及びE2タンパク質に対する抗体価を測定した。抗体価の測定は、E1タンパク質又はE2タンパク質をプレートに固定し、ワクチン接種マウス血清中の抗体が、そのプレートに固定したE1タンパク質又はE2タンパク質に結合するかどうかをEIAにて評価することによって行った。
J6CF株のE2タンパク質は以下に示すようにして調製した。遺伝子型2aのJ6CF株由来ゲノムcDNA(GenBankアクセッション番号AF177036)を鋳型として、J6CF全長タンパク質配列(J6CF株ゲノム配列にコードされる一つながりのタンパク質配列;GenBankアクセッション番号AF177036にも記載のアミノ酸配列)のN末端の開始メチオニンを1番目とした場合に384位から720位のアミノ酸残基までに相当する、膜貫通領域を含まないE2タンパク質をコードする遺伝子を、Advantage GC2 PCRキット(タカラバイオ社)、並びにJ6E2Fc-s(配列番号6:CACAAGCTTCGCACCCATACTGTTGGGG)及びJ6E2dTM-as(配列番号8:GCTCTAGATTACCATCGGACGATGTATTTTGT)を用いてPCR法で増幅した。増幅したDNA断片をpCR-TOPO(インビトロジェン)中にクローニングし、3つのクローンについて塩基配列の解析を行った。正しい塩基配列のインサートを有するクローンをpTOPO-J6E2dTMと名付けた。
上記「1.ワクチン組成物の投与」でそれぞれのワクチン組成物を投与したマウスから採血して得られた血清について、以下に示す方法によりJ6CF株のE1タンパク質及びE2タンパク質に対する抗体価を測定した。J6CF株由来のE1タンパク質に対する抗体価についてはJ6E1Fcタンパク質を、J6CF株由来のE2タンパク質に対する抗体価についてはJ6E2Fcタンパク質又はJ6E2dTMタンパク質を抗原として用いた。抗原をPBSで1μg/mLに希釈した後に、50μL/ウェルずつイムノプレート(Nunc社:カタログ番号439454)に添加し、室温で2時間あるいは4℃で一晩インキュベートすることによって固相化させた。抗原溶液を捨て、MilliQ水で5倍希釈したブロッキング・ワン(ナカライテスク社:カタログ番号03953-95)を200μL/ウェルずつ添加し、室温で1時間あるいは4℃で一晩インキュベートしてブロッキングを行った。ブロッキング終了後、0.05%Tween20/PBS 150μL/ウェルで2回洗浄し、0.05%Tween20/PBSで1000~10000倍に希釈した血清を50μL/ウェルずつ添加し、室温で1.5時間反応させた。反応終了後、0.05% Tween20/PBS 150μL/ウェルで3回洗浄し、0.05% Tween20/PBSで5000倍に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体化抗マウスIgG(GE Healthcare社)を50μL/ウェルずつ添加し、室温で1時間反応させた。反応終了後、0.05% Tween20/PBSで4回洗浄し、ペルオキシダーゼ発色キット(住友ベークライト社:カタログ番号ML-1120T)の発色液(1/100量の基質液を含む)を50μL/ウェルずつ添加し、室温で5分~15分間インキュベートした。停止液を50μL/ウェルずつ添加することによって反応を止め、Benchmark Plus(Bio-Rad社)を用いて450nmの吸光度を測定した。
ワクチン効果は、上記1.でそれぞれのワクチン組成物を投与したマウスから採血して得られた血清サンプル中の抗体が、HCVpp感染又はHCVcc感染を阻害することができるかどうかを評価することによって行った。
HCVppの作製は、Bartoschらの方法に準じて行った(文献:Bartosch, B. et al.(2003) J. Exp. Med., 197, 633-642)。これは、レトロウイルスのGag-polを発現するベクター、HCVのエンベロープタンパク質を発現するベクター、レポーター遺伝子を発現するレトロウイルスパッケージングベクターの3種類のベクターを動物細胞で発現させることにより、レポーター遺伝子がパッケージングされ、HCVエンベロープタンパク質をそのウイルスの表面に発現するシュードウイルスを作製する方法である。
上記「1.ワクチン組成物の投与」でそれぞれのワクチン組成物を投与して免疫したマウスから、採血した血清について、以下に示す方法によりHCV感染阻害活性を測定した。
Huh7.5.1細胞を96ウェルプレート(poly-D-lysinコート)に1×104細胞/ウェルで播種し、一晩培養した。上記1)の工程で得たJ6CF HCVppウイルス液(培養上清)にマウス血清を等量で混合し、室温で30分インキュベーションした。マウス血清はDMEM培地(10% FCS(invitrogen社)、1% MEM 非必須アミノ酸溶液(invitrogen社)、10 mM HEPES-Tris(pH 7.3)、1mM ピルビン酸ナトリウムを含むDMEM)にて50倍希釈して用いた(マウス血清最終希釈倍率100倍)。細胞の培地を捨てた後、マウス血清を加えてインキュベーションしたウイルス液を50μL/ウェルで加えて、37℃で3時間インキュベーションした。ウイルス液を捨てた後、PBS 100μL/ウェルで1回洗浄し、200μL/ウェルのDMEM培地を加えて37℃で72時間インキュベーションした。培地を捨てた後、25μL/ウェルのDMEM培地と25μL/ウェルのSteady-Glo(Promega社:カタログ番号E2520)を加えて添付の説明書に従い細胞を溶解した。細胞の溶解液40μL/ウェルを白色の96ウェルプレート(住友ベークライト社:カタログ番号MS-8496W)へ移し、ARVO X4(PerkinElmer社)を用いて発光強度を測定した。
Huh7.5.1細胞を96ウェルプレート(poly-D-lysinコート)に1×104細胞/ウェルで播種し、一晩培養した。HCVccウイルス液として、上記実施例2の1)の工程で得たJ6/JFH1-HCV粒子液(HCV粒子を含む培養上清の濃縮液)(以下、「J6/JFH1 HCVcc」と記載する)を用い、これにマウス血清を等量で混合し、室温で30分インキュベーションした。マウス血清はDMEM培地(10% FCS(invitrogen社)、1% MEM 非必須アミノ酸溶液(invitrogen社)、10mM HEPES-Tris(pH 7.3)、1mM ピルビン酸ナトリウムを含むDMEM)にて50倍希釈して用いた(マウス血清最終希釈倍率100倍)。細胞の培地を捨てた後、マウス血清を加えてインキュベーションしたウイルス液を50μL/ウェルで加えて、37℃で3時間インキュベーションした。ウイルス液を捨てた後、PBS 100μL/ウェルで1回洗浄し、200μL/ウェルのDMEM培地を加えて37℃で72時間インキュベーションした。培養上清を取り除いた後に、氷冷したメタノール中にプレートを浸し、細胞を固定した。その後、メタノールを風乾により除去し、0.3% Triton(登録商標)-X100(GEヘルスケア社)を含んだブロックエース(登録商標)(大日本製薬社)を100μL/ウェル加え4℃一晩ブロッキング処置をした。PBS 150μL/ウェルで2回洗浄し、100倍希釈したHRP標識抗HCV-core抗体(オーソ社)を50μL/ウェルで加えて1時間反応させた後に、PBS 150μL/ウェルで4回洗浄し、QuantaBlu(登録商標)(PIERCE社)反応液を50μL/ウェルで加えて室温で30分静置し、QuantaBlu停止液を50μL/ウェルで加え反応を停止した。20μL/ウェルを黒色の384ウェルプレート(Corning社:カタログ番号3676)へ移し、ARVO X4(PerkinElmer社)を用いて蛍光強度を測定した。
1)J6E2Fcタンパク質を抗原として含むワクチン組成物の免疫応答誘導能
上記「1.ワクチン組成物の投与」の1)でJ6E2Fcタンパク質を含むワクチン組成物を投与したマウスについてのE2タンパク質に対する抗体価測定(上記「2.E1タンパク質及びE2タンパク質に対する抗体価測定」)の結果を図1に示す。図中のコントロールは無投与正常マウス血清、5μg及び20μgは投与したJ6E2Fcタンパク質の量、×1000、×3000、×10000はマウス血清希釈倍率を示す。図1に示すように、Alum、Mod87s単独よりもAlum+Mod87sに、E2タンパク質に対する抗体を誘導する強い活性が認められた。
上記「1.ワクチン組成物の投与」の2)で不活化J6/JFH1-HCVを含むワクチン組成物を投与したマウスについてのE1タンパク質又はE2タンパク質に対する抗体価測定(上記「2.E1タンパク質及びE2タンパク質に対する抗体価測定」)の結果をそれぞれ図3と図4に示す。図3に示すように、Alum単独及びMod87s単独に比べ、polyI:C単独、Alum+Mod87s、Alum+poly I:C及びMod87s+poly I:Cを含むワクチン組成物のほうが、E1タンパク質に対する抗体価が増加する事が示された。また、図4に示すように、Alum単独及びMod87s単独に比べ、polyI:C単独、Alum+Mod87s、Alum+poly I:C、Mod87s+poly I:Cを含むワクチン組成物のほうが、E2タンパク質に対する抗体価が増加する事が示された。
配列番号2:合成DNA J6/JFH1
配列番号3:合成DNA TH/JFH1
配列番号4:合成オリゴヌクレオチドMod87
配列番号5:合成オリゴヌクレオチドMod87s。1~7及び20番目の塩基はホスホロチオエート化されたグアニンである。
配列番号7:プライマーJ6E2Fc-as
配列番号8:プライマーJ6E2dTM-as
Claims (6)
- C型肝炎ウイルスのJFH1株由来のNS3タンパク質、NS4Aタンパク質、NS4Bタンパク質、NS5Aタンパク質及びNS5Bタンパク質をコードする配列を含むC型肝炎ウイルスゲノムから作製される感染性C型肝炎ウイルス粒子を不活化して得られる不活化ウイルス粒子、
配列表の配列番号5記載の非メチル化CpG含有オリゴヌクレオチド、及び
水酸化アルミニウム
を含む、C型肝炎ウイルスワクチン組成物。 - 前記C型肝炎ウイルスゲノムは、C型肝炎ウイルスのJ6CF株由来のcoreタンパク質、E1タンパク質、E2タンパク質及びp7タンパク質をコードする配列を含む、請求項1記載のC型肝炎ウイルスワクチン組成物。
- 前記C型肝炎ウイルスゲノムは、
C型肝炎ウイルスのJ6CF株由来のNS2タンパク質のN末端のアミノ酸残基から第16番目のアミノ酸残基までをコードする配列、及び
C型肝炎ウイルスのJFH1株由来のNS2タンパク質のN末端から第17番目のアミノ酸残基からC末端のアミノ酸残基までをコードする配列
を含む、請求項1又は2記載のC型肝炎ウイルスワクチン組成物。 - C型肝炎ウイルスのJFH1株由来のNS3タンパク質、NS4Aタンパク質、NS4Bタンパク質、NS5Aタンパク質及びNS5Bタンパク質を含む、感染性C型肝炎ウイルス粒子を不活化して得られる不活化ウイルス粒子、
配列表の配列番号5記載の非メチル化CpG含有オリゴヌクレオチド、及び
水酸化アルミニウム
を含む、C型肝炎ウイルスワクチン組成物。 - 前記感染性C型肝炎ウイルスは、C型肝炎ウイルスのJ6CF株由来のcoreタンパク質、E1タンパク質、E2タンパク質及びp7タンパク質を含む、請求項3記載のC型肝炎ウイルスワクチン組成物。
- 前記感染性C型肝炎ウイルスは、NS2タンパク質がキメラタンパク質であり、前記NS2タンパク質のN末端のアミノ酸残基から第16番目のアミノ酸残基までがJ6CF株由来で、前記NS2タンパク質のN末端から第17番目のアミノ酸残基からC末端のアミノ酸残基までがJFH1株由来である、請求項4又は5記載のC型肝炎ウイルスワクチン組成物。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CA2776195A CA2776195A1 (en) | 2009-09-30 | 2010-09-30 | Hepatitis c virus vaccine composition |
US13/499,009 US20120251572A1 (en) | 2009-09-30 | 2010-09-30 | Hepatitis c virus vaccine composition |
CN2010800451345A CN102596244A (zh) | 2009-09-30 | 2010-09-30 | 丙型肝炎病毒疫苗组合物 |
JP2011534312A JPWO2011040535A1 (ja) | 2009-09-30 | 2010-09-30 | C型肝炎ウイルスワクチン組成物 |
EP10820650.9A EP2484378A4 (en) | 2009-09-30 | 2010-09-30 | VACCINE COMPOSITION AGAINST HEPATITIS C VIRUS |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009228145 | 2009-09-30 | ||
JP2009-228145 | 2009-09-30 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2011040535A1 true WO2011040535A1 (ja) | 2011-04-07 |
Family
ID=43826347
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2010/067096 WO2011040535A1 (ja) | 2009-09-30 | 2010-09-30 | C型肝炎ウイルスワクチン組成物 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20120251572A1 (ja) |
EP (1) | EP2484378A4 (ja) |
JP (1) | JPWO2011040535A1 (ja) |
CN (1) | CN102596244A (ja) |
CA (1) | CA2776195A1 (ja) |
WO (1) | WO2011040535A1 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2014051111A1 (ja) * | 2012-09-28 | 2016-08-25 | 国立大学法人神戸大学 | C型肝炎ウイルス粒子形成促進剤及びc型肝炎ウイルス粒子の産生方法 |
JP2017524682A (ja) * | 2014-06-26 | 2017-08-31 | チャンチュン ファープ バイオテクノロジー カンパニー リミテッド | CpGオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物 |
US9775894B2 (en) | 2013-07-09 | 2017-10-03 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Methods and compositions for activation of innate immune responses through RIG-I like receptor signaling |
JP2020090445A (ja) * | 2018-12-04 | 2020-06-11 | 国立大学法人大阪大学 | 免疫賦活剤 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3000313A1 (en) * | 2015-10-08 | 2017-04-13 | The Governors Of The University Of Alberta | Hepatitis c virus e1/e2 heterodimers and methods of producing same |
CN107652366A (zh) * | 2016-07-26 | 2018-02-02 | 中国科学院上海巴斯德研究所 | 一种展示丙型肝炎病毒包膜蛋白e2的纳米颗粒的制备及应用 |
CN108148121B (zh) * | 2018-03-06 | 2021-07-09 | 中美赛尔生物科技(广东)有限公司 | 丙型肝炎病毒抗原多肽组合物以及丙型肝炎病毒疫苗 |
AU2021229710A1 (en) * | 2020-03-01 | 2022-10-06 | Dynavax Technologies Corporation | CPG-adjuvanted SARS-CoV-2 virus vaccine |
WO2022013139A1 (en) * | 2020-07-17 | 2022-01-20 | Hvidovre Hospital | Method of purifying whole virus particles |
CN117379542A (zh) * | 2023-09-27 | 2024-01-12 | 广州佰芮慷生物科技有限公司 | 一种用于预防多基因型丙型肝炎病毒的腺病毒载体疫苗 |
Citations (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63276490A (ja) | 1987-05-08 | 1988-11-14 | Toray Ind Inc | 組換え体dnaおよび形質転換体 |
JPH0580575A (ja) | 1991-09-24 | 1993-04-02 | Oki Electric Ind Co Ltd | 磁気記録媒体 |
JPH0622422A (ja) | 1992-06-30 | 1994-01-28 | Toshiba Corp | 配電線自動化システムの子局等価検定方式 |
JP2001504337A (ja) | 1996-11-08 | 2001-04-03 | ザ ガヴァメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ、レプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サーヴィスィズ | C型肝炎ウイルス様粒子の合成および精製 |
JP2004000179A (ja) | 2002-03-29 | 2004-01-08 | Toray Ind Inc | C型慢性肝炎、肝硬変、肝癌病態を呈するモデル動物及びその作製方法 |
WO2004104198A1 (ja) | 2003-05-26 | 2004-12-02 | Toray Industries, Inc. | 遺伝子型2aのC型肝炎ウイルス(HCV)ゲノム由来の核酸を含む核酸構築物、及び該核酸構築物を導入した細胞 |
JP2005502611A (ja) | 2001-06-29 | 2005-01-27 | カイロン コーポレイション | Hcve1e2ワクチン組成物 |
WO2005080575A1 (ja) * | 2004-02-20 | 2005-09-01 | Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research | ヒトc型肝炎ウイルスの全長ゲノムを含む核酸構築物及び該核酸構築物を導入した組換え全長ウイルスゲノム複製細胞、並びにc型肝炎ウイルス粒子の作製方法 |
WO2006022422A1 (ja) | 2004-08-24 | 2006-03-02 | Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research | 自律複製能を有する改変されたヒトc型肝炎ウイルスゲノムrna |
JP2007193413A (ja) | 2006-01-17 | 2007-08-02 | Nec Personal Products Co Ltd | データ記憶装置および暗号鍵保存方法 |
WO2007139190A1 (ja) | 2006-05-31 | 2007-12-06 | Toray Industries, Inc. | 免疫刺激オリゴヌクレオチド及びその医薬用途 |
JP2008254338A (ja) | 2007-04-05 | 2008-10-23 | Bridgestone Corp | タイヤの製造方法およびその装置 |
JP2009513542A (ja) | 2003-07-11 | 2009-04-02 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | Hcvワクチン |
JP4286138B2 (ja) | 2001-10-03 | 2009-06-24 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス,インコーポレーテッド | アジュバント組成物 |
JP2009183295A (ja) | 2001-10-11 | 2009-08-20 | Merck & Co Inc | C型肝炎ウイルスワクチン |
JP2009228145A (ja) | 2008-03-19 | 2009-10-08 | Uni Charm Corp | 伸縮性シートの製造方法 |
WO2009131203A1 (ja) | 2008-04-25 | 2009-10-29 | 東レ株式会社 | C型肝炎ウイルス由来のキメラ遺伝子を含む核酸 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6219584B1 (en) * | 1999-07-09 | 2001-04-17 | Therakos, Inc. | Method and system for determining an effective amount of light energy to delivery to fluids having targets for the light energy |
-
2010
- 2010-09-30 CA CA2776195A patent/CA2776195A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-30 JP JP2011534312A patent/JPWO2011040535A1/ja not_active Withdrawn
- 2010-09-30 US US13/499,009 patent/US20120251572A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-30 WO PCT/JP2010/067096 patent/WO2011040535A1/ja active Application Filing
- 2010-09-30 CN CN2010800451345A patent/CN102596244A/zh active Pending
- 2010-09-30 EP EP10820650.9A patent/EP2484378A4/en not_active Withdrawn
Patent Citations (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63276490A (ja) | 1987-05-08 | 1988-11-14 | Toray Ind Inc | 組換え体dnaおよび形質転換体 |
JPH0580575A (ja) | 1991-09-24 | 1993-04-02 | Oki Electric Ind Co Ltd | 磁気記録媒体 |
JPH0622422A (ja) | 1992-06-30 | 1994-01-28 | Toshiba Corp | 配電線自動化システムの子局等価検定方式 |
JP2001504337A (ja) | 1996-11-08 | 2001-04-03 | ザ ガヴァメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ、レプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サーヴィスィズ | C型肝炎ウイルス様粒子の合成および精製 |
JP2005502611A (ja) | 2001-06-29 | 2005-01-27 | カイロン コーポレイション | Hcve1e2ワクチン組成物 |
JP4286138B2 (ja) | 2001-10-03 | 2009-06-24 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス,インコーポレーテッド | アジュバント組成物 |
JP2009183295A (ja) | 2001-10-11 | 2009-08-20 | Merck & Co Inc | C型肝炎ウイルスワクチン |
JP2004000179A (ja) | 2002-03-29 | 2004-01-08 | Toray Ind Inc | C型慢性肝炎、肝硬変、肝癌病態を呈するモデル動物及びその作製方法 |
WO2004104198A1 (ja) | 2003-05-26 | 2004-12-02 | Toray Industries, Inc. | 遺伝子型2aのC型肝炎ウイルス(HCV)ゲノム由来の核酸を含む核酸構築物、及び該核酸構築物を導入した細胞 |
JP2009513542A (ja) | 2003-07-11 | 2009-04-02 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | Hcvワクチン |
WO2005080575A1 (ja) * | 2004-02-20 | 2005-09-01 | Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research | ヒトc型肝炎ウイルスの全長ゲノムを含む核酸構築物及び該核酸構築物を導入した組換え全長ウイルスゲノム複製細胞、並びにc型肝炎ウイルス粒子の作製方法 |
WO2006022422A1 (ja) | 2004-08-24 | 2006-03-02 | Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research | 自律複製能を有する改変されたヒトc型肝炎ウイルスゲノムrna |
JP2007193413A (ja) | 2006-01-17 | 2007-08-02 | Nec Personal Products Co Ltd | データ記憶装置および暗号鍵保存方法 |
WO2007139190A1 (ja) | 2006-05-31 | 2007-12-06 | Toray Industries, Inc. | 免疫刺激オリゴヌクレオチド及びその医薬用途 |
JP2008254338A (ja) | 2007-04-05 | 2008-10-23 | Bridgestone Corp | タイヤの製造方法およびその装置 |
JP2009228145A (ja) | 2008-03-19 | 2009-10-08 | Uni Charm Corp | 伸縮性シートの製造方法 |
WO2009131203A1 (ja) | 2008-04-25 | 2009-10-29 | 東レ株式会社 | C型肝炎ウイルス由来のキメラ遺伝子を含む核酸 |
Non-Patent Citations (29)
Title |
---|
APPAIAHGARI ET AL., VACCINE, vol. 22, 2004, pages 3669 - 3675 |
BARTOSCH, B. ET AL., J. EXP. MED., vol. 197, 2003, pages 633 - 642 |
CHOO ET AL., SCIENCE, vol. 244, 1989, pages 359 - 362 |
COCQUEREL, L. ET AL., J. VIROL., vol. 74, 2000, pages 3623 - 3633 |
ED HARLOW ET AL.: "Antibodies: A Laboratory Manual", 1988, COLD SPRING HARBOR LABORATORY |
FRIED ET AL., N. ENGL. J. MED., vol. 347, 2002, pages 975 - 982 |
HIDENORI MOCHIZUKI: "Baiyo Saibo de Kansen Fukusei Oyobi Ryushi Keisei ga Kano na C-gata Kan'en Virus Kabu o Riyo shita Vaccine Kaihatsu Heisei", NENDO SOKATSU.BUNTAN KENKYU HOKOKUSHO, 2008, pages 31 - 34, XP008155791 * |
HIDENORI MOCHIZUKI: "Baiyo Saibo de Kansen Fukusei Oyobi Ryushi Keisei ga Kano na C-gata Kan'en Virus Kabu o Riyo shita Vaccine Kaihatsu Heisei", NENDO SOKATSU-BUNTAN KENKYU HOKOKUSHO, 2008, pages 61 - 65, XP008155789 * |
KOJI ISHII: "Baiyo Saibo de Kansen Fukusei Oyobi Ryushi Keisei ga Kano na C-gata Kan'en Virus Kabu o Riyo shita Vaccine Kaihatsu Heisei", NENDO SOKATSU-BUNTAN KENKYU HOKOKUSHO, 2008, pages 1 - 14, XP008155790 * |
LAURENCE ET AL., J. CLIN. INVEST., vol. 80, 1987, pages 1631 - 1639 |
LUSIDA ET AL., J. CLIN. MICROBIOL., vol. 39, 2001, pages 3858 - 3864 |
MORADPOUR, D. ET AL., BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 246, 1998, pages 920 - 924 |
MORI ET AL., BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 183, 1992, pages 334 - 342 |
MURAKAMI ET AL., HEPATOLOGY, vol. 30, 1999, pages 1045 - 1053 |
NAKAMURA ET AL., J. INTERFERON RES., vol. 2, 1982, pages 1 - 4 |
OKAMOTO ET AL., J. GEN. VIROL., vol. 73, 1992, pages 73 - 679 |
PIETSCHMANN, T. ET AL.: "Construction and characterization of infectious intragenotypic and intergenotypic hepatitis C virus chimeras", PROC NATL ACAD SCI, vol. 103, no. 19, 2006, pages 7408 - 7413, XP008154962 * |
SAMBROOK ET AL.: "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", vol. 3, 2001, COLD SPRING HARBOR LABORATORY |
See also references of EP2484378A4 |
SIMMONDS ET AL., HEPATOLOGY, vol. 10, 1994, pages 1321 - 1324 |
SUDO ET AL., PROC NATL. ACAD SCI U.S.A., vol. 90, 1993, pages 9125 - 9129 |
TAKAJI WAKITA ET AL.: "Baiyo Saibo de Kansen Fukusei Oyobi Ryushi Keisei ga Kano na C-gata Kan'en Virus Kabu o Riyo shita Vaccine Kaihatsu Heisei", NENDO SOKATSU.BUNTAN KENKYU HOKOKUSHO, 2008, pages 1 - 27, XP008155792 * |
VAJDY ET AL., J. GEN. VIROL., vol. 87, 2006, pages 2253 - 2262 |
VAJDY, M. ET AL.: "Hepatitis C virus polyprotein vaccine formulations capable of inducing broad antibody and cellular immune responses", J GEN VIROL, vol. 87, 2006, pages 2253 - 62, XP008154961 * |
WAKITA, T. ET AL., J. BIOL. CHEM., vol. 269, 1994, pages 14205 - 14210 |
WAKITA, T. ET AL., NAT. MED., vol. 11, 2005, pages 791 - 796 |
YAMAMOTO ET AL., J. IMMUNOL., vol. 148, 1992, pages 4072 - 4076 |
YAMAMOTO ET AL., JPN, J. CANCER RES., vol. 79, 1988, pages 866 - 873 |
YANAGI, M. ET AL., VIROLOGY, vol. 262, 1999, pages 250 - 263 |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2014051111A1 (ja) * | 2012-09-28 | 2016-08-25 | 国立大学法人神戸大学 | C型肝炎ウイルス粒子形成促進剤及びc型肝炎ウイルス粒子の産生方法 |
US9775894B2 (en) | 2013-07-09 | 2017-10-03 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Methods and compositions for activation of innate immune responses through RIG-I like receptor signaling |
US10434164B2 (en) | 2013-07-09 | 2019-10-08 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Methods and compositions for activation of innate immune responses through RIG-I like receptor signaling |
US11324817B2 (en) | 2013-07-09 | 2022-05-10 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Methods and compositions for activation of innate immune responses through RIG-I like receptor signaling |
JP2017524682A (ja) * | 2014-06-26 | 2017-08-31 | チャンチュン ファープ バイオテクノロジー カンパニー リミテッド | CpGオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物 |
JP2020090445A (ja) * | 2018-12-04 | 2020-06-11 | 国立大学法人大阪大学 | 免疫賦活剤 |
JP7385206B2 (ja) | 2018-12-04 | 2023-11-22 | 国立大学法人大阪大学 | 免疫賦活剤 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2011040535A1 (ja) | 2013-02-28 |
CN102596244A (zh) | 2012-07-18 |
EP2484378A4 (en) | 2013-05-22 |
US20120251572A1 (en) | 2012-10-04 |
EP2484378A1 (en) | 2012-08-08 |
CA2776195A1 (en) | 2011-04-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2011040535A1 (ja) | C型肝炎ウイルスワクチン組成物 | |
Himmelsbach et al. | Life cycle and morphogenesis of the hepatitis E virus | |
JP2021078505A (ja) | インフルエンザウイルスワクチン及びその使用 | |
JP5657251B2 (ja) | エピトープタグ化c型肝炎ウイルス粒子の作製と利用 | |
Siler et al. | Live and killed rhabdovirus-based vectors as potential hepatitis C vaccines | |
JP5642672B2 (ja) | 弱毒化ペスチウイルス | |
US8604179B2 (en) | Nucleic acid comprising chimeric gene derived from hepatitis C virus | |
JP2017515508A (ja) | 慢性b型肝炎ウイルス(hbv)感染症を予防または処置するためのウイルス様ベシクル(vlv)ベースのワクチン | |
JP6942309B2 (ja) | フラビウイルスウイルス様粒子 | |
CN107002079A (zh) | 作为免疫调节剂和疫苗组分的病毒rna区段 | |
Majid et al. | Evaluating replication-defective vesicular stomatitis virus as a vaccine vehicle | |
WO2020136683A1 (en) | Adaptation of enterovirus to vero cells and vaccine formulations thereof | |
Wei et al. | Neutralization effects of antibody elicited by chimeric HBV S antigen viral-like particles presenting HCV neutralization epitopes | |
US20110150911A1 (en) | Methods and reagents for treating, preventing and diagnosing bunyavirus infection | |
JP5188400B2 (ja) | C型肝炎ウイルスの非構造融合タンパク質 | |
US9884109B2 (en) | Compositions and methods | |
JP2020500837A (ja) | アセンブルした糖タンパク質 | |
Li et al. | Co-expression of the C-terminal domain of Yersinia enterocolitica invasin enhances the efficacy of classical swine-fever-vectored vaccine based on human adenovirus | |
Qiu et al. | Hepatitis C virus-specific cellular and humoral immune responses following immunization with a multi-epitope fusion protein | |
Ju et al. | Hepatitis E Virus Life Cycle | |
WO2024003368A1 (en) | HIGH-YIELD GENOTYPE 1a, 2a AND 3a HCV | |
KR0120928B1 (ko) | 한국에서 분리한 신규한 c형 바이러스 유전자 | |
EP1398371A1 (en) | Infectious HCV pseudo-particles containing functional E1, E2 envelope proteins | |
Owen | Immunomodulatory effects of the hepatitis C virus (HCV) core protein | |
Kunkel | Structural characterization of the hepatitis C virus core protein in its assembly pathway |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 201080045134.5 Country of ref document: CN |
|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 10820650 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2011534312 Country of ref document: JP |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 13499009 Country of ref document: US Ref document number: 2776195 Country of ref document: CA |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2010820650 Country of ref document: EP |