WO2010131910A2 - 발효차를 함유하는 혈액 순환 개선용 조성물 및 이를 포함하는 약제학적 및 건강 식품 조성물 - Google Patents

발효차를 함유하는 혈액 순환 개선용 조성물 및 이를 포함하는 약제학적 및 건강 식품 조성물 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a composition for improving blood circulation containing a fermented tea extract, and a pharmaceutical and health food composition comprising the same.
  • Green tea includes vitamins, caffeine, tannins, flavonoids, and essential oils (Yongju et al., Pharmacology, Dongmyung. 189-190, 1981). Green tea has traditionally been known to exhibit diabetes, obesity, antioxidant, antihypertensive, antibacterial, cholesterol lowering and anti-ulcer effect and is commonly used as a commercial vehicle.
  • Such green tea is largely divided into non-fermented teas and fermented teas, and fermented teas may be classified into weakly fermented teas, semi-fermented teas, and post-fermented teas according to the degree of fermentation.
  • Boi Tea A representative example of post-fermented tea is Boi Tea, which is derived from Boi County in China.
  • Boi tea is a post-fermented tea obtained from a broad-leaved tea tree, which destroys the enzymes of green tea leaves and then deposits green tea leaves to induce the growth of microorganisms in the air, causing fermentation to occur again.
  • tea teas are known to lower blood pressure, reduce fat, and prevent atherosclerosis.
  • the tea is not easy to ingest because it is inconvenient to separate the leaves from the circular mass, because it is fermented by the falling bacteria in the air because of the smell of fungus or bacteria, and may contain the pathogenic microorganisms.
  • the first taste has a strong astringent taste and bitter taste, so the preference is low.
  • an object of the present invention is to provide a composition for improving blood circulation, including a fermented tea extract that is easy to ingest, has excellent taste, and facilitates blood circulation.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising the fermented tea extract as described above.
  • Still another object of the present invention is to provide a health food composition comprising the fermented tea extract as described above.
  • the present invention provides a composition for improving blood circulation containing the fermented tea extract obtained by inoculating yeast with green tea as a fermentation strain as an active ingredient.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition comprising the fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention also provides a health food composition comprising the fermented tea extract as an active ingredient.
  • the composition for improving blood circulation including the fermented tea according to the present invention, a pharmaceutical composition and a health food composition comprising the same, while having excellent palatability using yeast as a fermentation strain, reduce serum and liver cholesterol and triglycerides, It is useful for improving blood circulation by inhibiting vasoconstriction, and it can be used as a health food or medicine that is effective for diseases such as stroke, myocardial infarction, hypertension, hyperlipidemia, diabetes or obesity. have.
  • Figure 1 is a graph showing the relative free radical content for the control group does not contain the green tea, boy tea, post-fermented tea and vitamin C treated.
  • the composition according to an embodiment of the present invention contains a fermented tea extract obtained after inoculating yeast with green tea and fermenting for a predetermined time.
  • Saccharomyces Carsbergensis Saccharomyces Sake , Saccharomyces Ellipsoideus , Saccharomyces Correaus , Saccharomyces v Coreanus And Saccharomyces Cerevisiae ( Saccharomyces Cerevisiae ) and the like
  • the composition according to an embodiment of the present invention may include a fermented tea extract using at least one of the yeast exemplified as described above as a fermentation strain. .
  • Such fermented tea may for example be post fermentation.
  • Fermentation using yeast as a fermentation strain is carried out for 24 hours to 28 days at a temperature of 15 ⁇ 30 °C. Then, fermented tea extract is obtained by reflux extraction for 12 hours using 70% ethanol from the green tea fermented by the above method.
  • the composition of the present invention contains the fermented tea extract obtained by the above method in an amount of 0.1 to 50% by weight based on the total weight of the composition. If the content of the fermented tea extract is less than 0.1% by weight it is difficult to show the effect of improving blood circulation, if it exceeds 50% by weight because there is no apparent increase in effect as the content increases.
  • Fermented tea extract as described above has excellent blood circulation improving efficacy
  • the composition comprising such fermented tea extract is a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of stroke, myocardial infarction, hypertension, hyperlipidemia, diabetes or obesity through improving blood circulation Can be used as.
  • the composition can be used in the form of pills, capsules, tablets, granules, drinks, and the like.
  • Formulation may be carried out using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants and the like commonly used.
  • starch, calcium carbonate, sucrose, lactose or gelatin may be used as the excipient
  • a lubricant such as magnesium stearate talc may be used in addition to the simple excipient.
  • Dosage units of the pharmaceutical composition may, for example, contain 1, 2, 3 or 4 times, or 1/2, 1/3 or 1/4 times the individual dosage.
  • Individual dosages contain amounts in which the effective drug is administered at one time, which typically corresponds to, but is not limited to, all, 1/2, 1/3 or 1/4 times the daily dosage.
  • the human dose of the fermented tea extract is appropriately selected according to the absorption rate, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, the age, sex, condition, degree of disease, etc. of patients, 10 ⁇ 300mg / kg in adults , Preferably it is 20 ⁇ 100mg / kg, it may be administered in divided into 1 to 6 times a day, but is not limited thereto.
  • composition according to an embodiment of the present invention is used as a health food composition by formulating a pill, capsules, tablets, granules, drinks, etc. as a use for the prevention and improvement of stroke, myocardial infarction, hypertension, hyperlipidemia, diabetes or obesity Can be.
  • the fermented tea extract may be added to health foods, and when used as a food additive, it may be added as it is, or used with other foods or food ingredients, may be appropriately used according to conventional methods, and mixed amounts of active ingredients may be used. It may be appropriately determined depending on the purpose (prevention, health or therapeutic treatment). Generally, the fermented tea extract is preferably contained in an amount of 0.1 to 50% by weight with respect to the raw material in the manufacture of food or beverage, but when it is ingested for a long time for the purpose of health and prevention or for health control, The amount of tea extract may be less than the above range, even if used in an amount above the above range there is no problem in terms of stability.
  • the kind of the health food composition There is no particular limitation on the kind of the health food composition.
  • the food to which the substance may be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, noodles, gum, ice cream, various soups, beverages, teas, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes. And the like, but not limited to all of the health foods in the conventional sense.
  • composition according to an embodiment of the present invention contains the fermented tea extract as an active ingredient to reduce blood and liver lipids, and by inhibiting the contraction of blood vessels to induce vascular relaxation, the composition provides an effect of improving blood circulation .
  • Saccharomyces Cerevisiae a strain cultured at 20-40 ° C. for 72 hours using a vibrating incubator, was recovered, and the strain and the active medium were separated in a centrifuge. The strain was washed 2-4 times with 0.8 ⁇ 1.0% saline solution, and then fermented broth, a mixture of water and energy source, was supplied in addition to green tea for proper microbial metabolism.
  • the fermentation broth is prepared by mixing 0.05-10.0 wt% of sugar and 0.005-10.0 wt% of fructose to the total weight of fermentation broth, and autoclaving at 120 ° C. for 15 minutes at a pressure of 27 psi (pounds per square inch). After cooling to 25 °C at room temperature it was prepared by mixing soybean powder powder 0.005 ⁇ 1.0% by weight.
  • the strain was mixed with 100 ⁇ 500ml of the fermentation broth before adding soybean powder powder 2-4 times with saline and stabilized by culturing in the incubator for 24 hours to stabilize the strain To stabilize the process was carried out.
  • the fermentation broth was prepared by mixing the strain stabilized in the fermentation broth except soybean powder and the fermentation broth mixed with the soybean powder protein.
  • a bacterium, the fermentation broth mixed bacterial solution in green tea primary substrate prepared by a sterile reaction tank, the small packaging units juneunde by mixing, in the note number zymogen mixed fermentation broth was prepared so that 10 3 ⁇ 10 8 CFU / ml .
  • the ratio of fermentation broth to the weight of green tea leaves was mixed to be 30 to 60 wt%, and the tea leaves were continuously stirred after mixing the fermentation broth so that the strain would not be damaged due to rapid temperature increase. . After 5-30 minutes, the reaction was completed and the temperature-falling green tea fermentation broth mixture blocked the inlet and prevented the inflow of outside air.
  • the mixture was fermented in a constant temperature fermenter with a temperature of 20 ⁇ 70 °C.
  • the fermentation temperature exceeds 40 °C it is difficult to grow other strains except Bacillus (Bacillus spp) can be expected to inhibit the growth of other bacteria during the ripening period.
  • the fermentation time was carried out for a minimum of 24 hours up to 28 days and hot air dried at 80 ⁇ 120 °C for 5 hours.
  • the total microbial account in the final product can be obtained in the product range of the specification of 10 2 ⁇ 10 8 CFU / g or less, pathogenic microorganisms were not detected.
  • Example 2 After 1 kg of the fermented tea prepared in Example 1 was immersed in 5 L of 70% ethanol solution and refluxed at 80 ° C. for 3 hours, and extracted at room temperature for 12 hours. The extract was filtered, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to prepare a powder sample. The yield was 15-20%, and the prepared powder was stored at low temperature until use.
  • a radical solution was prepared by dissolving DPPH (Diphenyl Picryl Hydrazile) at 100 M concentration in its own radical form in 99% ethanol.
  • the fermented tea which is a test substance prepared in Example 2, was dissolved in distilled water for each concentration to prepare a reaction solution containing a radical solution and a test substance.
  • the same process was performed using the reaction solution containing no test sample as a control.
  • the absorbance was measured at 515 nm to measure the disappearance of radicals.
  • Green tea extract and ivory tea extract were used as a comparison group, and vitamin C was used as a positive control, and the results are shown in FIG.
  • the after-fermented tea extract of the present invention was free of radicals in a concentration-dependent manner, and had a similar effect to that of vitamin C, a positive control group, having about 10% better efficacy than the green tea extract of the comparison group. Rather than 20 to 40% showed excellent efficacy. This means that the post-fermented tea extract according to one embodiment of the present invention exhibits an excellent antioxidant effect.
  • Sprague-Dawley rats weighing 250-300 g were supplied from Biolink (Seoul, Korea) to maintain a room temperature of 22 ⁇ 2 ° C and a humidity of 45-55%, 7 am and 7 pm Based on the standard, the night and day cycles were 12 hours each. Feed (purina Korea, Seoul, Korea) and water were supplied without restriction and used in the experiment after being adapted to the environment for a week.
  • the rats were blunted and then thoracic opened, and the thoracic aorta was quickly removed and immediately KR buffer (composition (mM); NaCl 115.5, KCl 4.6 saturated with a mixed gas of 95% O 2 /5% CO 2 ). , KH 2 PO 4 1.2, MgSO 4 1.2, CaCl 2 2.5, NaHCO 3 25.0, disodium.Ca 2+ EDTA 0.026 mM, glucose 11.1, pH 7.4). Blood in the blood vessels and surrounding fat and connective tissue were removed, and a blood vessel ring of 3-4 mm in length was made.
  • KR buffer composition (mM); NaCl 115.5, KCl 4.6 saturated with a mixed gas of 95% O 2 /5% CO 2 ).
  • the contraction in the bath was exchanged with KR (Krebs Ringer) buffer containing 90 mM KCl saturated with a mixture of 95% O 2 /5% CO 2 to induce blood vessel contraction, which was taken as the maximum contraction.
  • KR Kerbs Ringer
  • the contraction-induced phenylephrine was gradually added to the tank to observe a dose-shrinkage response curve.
  • Vascular contractility was compared with the vascular contraction induced by 90 mM KCl as 100%, which is shown in Table 2 below.
  • the post-fermented tea extract according to one embodiment of the present invention has a very excellent anti-vascular contraction effect.
  • the experiment was divided into four groups: normal group, control group, positive control group and administration group.
  • the normal group provided only normal diet, and the control group induced hyperlipidemia by adding 1% cholesterol and 0.5% choline acid to the normal diet, and the fenofibric acid (200 mg / kg) used as a hyperlipidemia treatment for the positive control group.
  • Fenofibric acid was suspended orally in 1% methyl cellulose (MC).
  • the administration group orally administered the postfermented tea extract and green tea extract daily with a hyperlipidemia-induced diet, and fermented tea and green tea extract (200mg / kg) were provided once a day by oral administration for 4 weeks.
  • Each group of rats was fasted for 12 hours and then blood samples were taken from the orbital vein, which was centrifuged at 10000 rcf for 10 minutes and the serum thus obtained was used to assess the levels of total cholesterol, LDL cholesterol, and HDL-cholesterol in the blood. Liver was collected to evaluate liver cholesterol and triglyceride levels. The analysis was performed using a blood autoanalyzer and Roche diagnostic kit, and the results obtained are shown in Table 4 (serum lipid) and Table 5 (liver lipid).
  • the total cholesterol level of the rats fed the high cholesterol diet for 4 weeks was about 2 times higher in the control group and about 4.4 times higher in the LDL-cholesterol level than in the normal group, but the HDL-cholesterol level was decreased. From this result, it can be confirmed that the hyperlipidemia induced by the hyperlipidemia induced diet was well performed. In the co-administration group of the post-fermented tea with the hyperlipidemic diet, the total cholesterol level was 136.25mg / dl, which is about 38% lower than the control group and LDL-cholesterol level was decreased by 36%. It can be seen that the numbers do not increase significantly.
  • the total liver cholesterol and triglyceride levels of the rats in the control group is significantly higher than that of the normal group, it can be confirmed that the hyperlipidemia induced diet in the form of fatty liver.
  • the total cholesterol and triglyceride levels decreased by 27% and 17%, respectively, and in the tea tea extract treatment group, the total cholesterol and triglyceride levels decreased by 22% and 19%, respectively.
  • the post fermented tea extract treatment group 33% and 22% were decreased, respectively, and in the case of liver lipid improvement, it can be confirmed that the best result can be obtained when the post fermented tea extract is treated.
  • the post-fermented tea extract-containing composition according to the present invention is applicable to various formulations as follows, but is not limited thereto.
  • Post-fermented tea extract 100mg, soybean extract 50mg, soybean oil 180mg, red ginseng extract 50mg, palm oil 2mg, palm hardened oil 8mg, beeswax 4mg and lecithin 6mg were mixed and filled with 400mg per capsule according to a conventional method to prepare a soft capsule. .
  • soybean extract 50mg, glucose 100mg, red ginseng extract 50mg and starch 600mg were mixed and granules were formed by adding 100mg of 30% ethanol, and dried at 60 °C to form granules and then filled into sachets.
  • the final weight of the content was 1 g.
  • soybean extract 50mg, glucose 10g, red ginseng extract 50mg, citric acid 2g and purified water 187.8g was mixed and filled with a bottle.
  • the final dose of the contents was 200 ml.

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Abstract

본 발명은 효모를 발효 균주로 하여 녹차에 접종하고 일정 시간 발효시킨 후 얻어낸 후발효차 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 우수한 기호성을 가지면서도, 혈청 및 간의 콜레스테롤 및 중성지방을 감소키고, 혈관 수축을 억제하여 우수한 혈관 이완능을 가져 혈액 순환 개선에 유용하며, 이러한 혈액 순환 개선 기능을 통해 뇌졸증, 심근경색, 고혈압, 고지혈증, 당뇨 또는 비만과 같은 질환에 효과적인 건강식품, 의약품 등으로 사용할 수 있다.

Description

발효차를 함유하는 혈액 순환 개선용 조성물 및 이를 포함하는 약제학적 및 건강 식품 조성물
본 발명은 발효차 추출물을 함유하는 혈액 순환 개선용 조성물, 및 이를 포함하는 약제학 및 건강 식품 조성물에 관한 것이다.
녹차에 함유된 성분으로는 성분으로는 비타민을 비롯하여 카페인, 탄닌, 플라보노이드 및 정유 등이 있다(이용주 등, 생약학, 동명사. 189-190, 1981). 녹차는 전통적으로 당뇨, 비만, 항산화, 항고혈압, 항균, 콜레스테롤 강하 및 항궤양작용 등을 나타내는 것으로 알려져 있어 상용차로서 일상적으로 음용되고 있다.
이러한 녹차는 크게 비발효차와 발효차로 나뉘며, 발효차는 발효 정도에 따라서 약발효차, 반발효차, 후발효차 등으로 구별될 수 있다.
후발효차의 대표적인 예로 중국의 보이현에서 유래된 보이차를 들 수 있다. 보이차는 대엽종 차나무에서 얻어진 후발효차로 녹차잎의 효소를 파괴시킨 뒤 녹차잎을 퇴적하여 공기중에 있는 미생물의 번식을 유도해 다시 발효가 일어나게 만든 차를 말한다.
이러한 보이차는 혈압을 내리고 지방을 감소시키며, 동맥경화를 막는다고 알려져 있다. 그러나 보이차는 원형 덩어리로부터 잎을 분리해야 되는 불편함으로 섭취가 용이하지 않고, 공기 중 낙하균에 의해 발효되기 때문에 곰팡이 냄새 또는 잡균 냄새가 나며, 병원성 미생물이 포함되어 있는 경우가 의심될 수도 있다. 또한, 첫 맛이 떫은 맛이 강하고 쓴 맛도 있어서 기호도가 떨어진다.
이에 본 발명의 목적은 섭취가 용이하고, 기호도가 우수하며 혈액 순환을 원할하게 하는 발효차 추출물을 포함하는 혈액 순환 개선용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 다른 목적은 상기한 바와 같은 발효차 추출물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 상기한 바와 같은 발효차 추출물을 포함하는 건강 식품 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 녹차에 효모를 발효 균주로 접종하여 얻은 발효차 추출물을 유효 성분으로 함유하는 혈액 순환 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 발효차 추출물을 유효 성분으로 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 발효차 추출물을 유효 성분으로 포함하는 건강 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 발효차를 포함하는 혈액 순환 개선용 조성물, 이를 포함하는 약제학적 조성물 및 건강 식품 조성물은 효모를 발효 균주로 이용하여 우수한 기호성을 가지면서도, 혈청 및 간의 콜레스테롤 및 중성지방을 감소키고, 혈관 수축을 억제하여 우수한 혈관 이완능을 가져 혈액 순환 개선에 유용하며, 이러한 혈액 순환 개선 기능을 통해 뇌졸증, 심근경색, 고혈압, 고지혈증, 당뇨 또는 비만과 같은 질환에 효과적인 건강식품, 의약품 등으로 사용할 수 있다.
도 1은 녹차, 보이차, 후발효차 및 비타민C를 처리한 경우 실험시료가 포함되지 않은 대조군에 대한 상대적 자유라디칼 함량을 나타낸 그래프이다.
본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 효모(yeast)를 녹차에 접종하여 일정 시간 발효시킨 후 얻어낸 발효차 추출물을 함유한다. 이러한 효모의 종류로는 사카로마이세스 칼스버겐시스(Saccharomyces Carsbergensis), 사카로마이세스 사케(Saccharomyces Sake), 사카로마이에스 엘립소이데우스(Saccharomyces Ellipsoideus), 사카로마이세스 코레아누스(Saccharomycesv Coreanus), 및 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae) 등이 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물에서는 상술한 바와 같이 예시한 효모들 중에 적어도 하나를 발효 균주로서 사용한 발효차 추출물을 포함할 수 있다. 이러한 발효차는 예를 들어 후발효일 수 있다.
효모를 발효 균주로서 이용한 발효는 15 ~ 30 ℃의 온도에서 24시간 ~ 28일 동안 실시한다. 그 후 상기의 방법으로 발효시킨 녹차에서 70% 에탄올을 이용하여 12시간 역류 추출하는 방법으로 발효차 추출물을 얻는다.
본 발명의 조성물은 상기한 방법으로 얻은 발효차 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1~50중량%의 양으로 함유한다. 발효차 추출물의 함량이 0.1 중량% 미만인 경우에는 혈액 순환 개선의 효과를 나타내기 어렵고, 50중량%를 초과할 경우는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않기 때문이다.
상술한 바와 같은 발효차 추출물은 우수한 혈액 순환 개선 효능을 가지며, 이러한 발효차 추출물을 포함하는 조성물은 혈액 순환 개선을 통해 뇌졸증, 심근경색, 고혈압, 고지혈증, 당뇨 또는 비만의 예방 및 치료을 위한 약제학적 조성물로서 사용될 수 있다. 이때 상기 조성물은 환제, 캅셀제, 정제, 과립제, 드링크제 등으로 제형화하여 사용할 수 있다. 제형화시 일반적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다. 이 때 부형제로서 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 또는 젤라틴 등을 사용할 수 있으며, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 탈크 등의 윤활제도 사용할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 투약 단위는, 예를 들어 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배로 함유할 수 있다. 개별 투약량은 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당하지만, 이에 한정되지는 않는다.
상기 발효차 추출물의 인체 투여량은 체내에서의 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별, 상태, 질병의 정도 등에 따라 적절히 선택되며, 성인의 경우 10~300mg/kg이고, 바람직하게는 20~100mg/kg이며, 하루 1 내지 6회에 나누어 투여될 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 뇌졸증, 심근경색, 고혈압, 고지혈증, 당뇨 또는 비만의 예방 및 개선의 용도로서 환제, 캅셀제, 정제, 과립제, 드링크제 등으로 제형화하여 건강 식품 조성물로 사용할 수 있다.
상기 발효차 추출물은 건강 식품에 첨가될 수 있으며, 식품 첨가물로 사용할 경우 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있으며, 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로 식품 또는 음료의 제조시 원료에 대하여 상기 발효차 추출물을 0.1~50중량%의 양으로 함유함이 바람직하지만, 건강 및 예방을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하여 장기간 섭취하는 경우에는 발효차 추출물의 양이 상기 범위 이하일 수 있으며, 상기 범위 이상의 양으로 사용하더라도 안정성 면에서는 문제가 없다.
상기 건강 식품 조성물의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함하고 이에 한정되지는 않는다.
본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 상기 발효차 추출물을 유효성분으로 함유하여 혈액과 간의 지질을 감소시키고, 혈관의 수축을 억제하여 혈관 이완을 유도함으로써, 상기 조성물은 혈액 순환 개선 효과를 제공한다.
이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 후발효차의 제조
진동 배양기를 이용하여 20~40℃에서 72시간 배양된 균주인 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)를 회수하여 1차로 원심분리기에서 균주와 활성배지를 분리하였다. 0.8~1.0%의 생리 식염수를 이용하여 균주를 2~4회 세척해 준 다음, 적절한 미생물의 대사를 위해 녹차 외에 수분과 에너지 공급원의 혼합물인 발효액을 공급해주었다. 상기 발효액은 발효액 총 중량에 대하여 설탕 0.05~10.0중량%, 과당 0.005~10.0중량%를 혼합하여 제조하여 27 psi(pounds per square inch)의 압력에서 120℃에서 15분간 고온가압멸균시키고 멸균이 완료된 다음 상온에서 25℃까지 냉각시킨 후 대두 분말 파우더 0.005~1.0중량%를 혼합하여 제조하였다.
또한 상기 세척과정에서 손상을 입은 균주의 완활한 발효대사를 위해 대두 분말 파우더를 넣기 전의 발효액 100~500ml에 식염수로 2~4회 세척한 균주를 혼합하고 배양기에서 24시간 배양하면서 안정화시켜 발효액에 균주를 안정화시키는 과정을 실시하였다.
대두 분말 파우더가 제외된 발효액에 안정화시킨 균주와 대두 분말 단백질이 혼합된 발효액을 혼합하여 발효 균액을 제조하였다. 멸균된 반응탱크, 소포장 단위별로 준비된 녹차 주 기질에 세균, 발효액 혼합 균액을 혼합하여 주는데, 혼합 발효 균액안에 발효균주의 수가 103~108 CFU/ml가 되도록 제조하였다. 녹차건엽 중량대비, 발효액의 비율은 30~60중량%가 되도록 혼합하여 주고, 급속한 온도증가로 인해 균주가 손상을 받지 않도록 발효 균액을 혼합한 후에도 차잎을 계속 교반시켜 차 내부온도가 급속히 올라가지 않도록 하였다. 5~30분 후 반응이 완료되고 온도가 떨어진 녹차 발효 균액 혼합물은 입구를 막아 외기의 유입을 막고 온도 20~70℃의 항온 발효조에서 발효공정을 거쳤다. 발효온도가 40℃를 넘어가게 되면 바실러스(Bacillus spp)를 제외한 다른 균주의 생장이 어려워지기 때문에 숙성기간 중의 다른 잡균의 증식억제 효과를 기대할 수 있다. 발효 시간은 최소 24시간에서 최장 28일간 실시하였으며 80~120℃에서 5시간 열풍건조 하였다.
상기의 방법으로 제조된 후발효차는 최종제품 내 총균수(Total microbial account)가 102~108 CFU/g 이하인 규격범위의 제품을 얻을 수 있으며, 병원성 미생물들은 불검출 되었다.
[실시예 2] 후발효차 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 제조한 후발효차 1kg을 70% 에탄올용액 5L에 침지하여 80℃에서 3시간동안 역류(reflux)한 후, 상온에서 12시간 추출하였다. 추출액은 여과하여 감압농축하고 동결 건조하여 분말시료를 제조하였다. 수율은 15 ~ 20%이었으며, 조제된 분말은 사용 전까지 저온에서 보관하였다.
[시험예 1] 후발효차의 관능평가
녹차와 보이차, 후발효차 각각을 2g씩 75℃(±1℃)의 온수 100ml에 넣고 2분간 우려낸 후, 10인의 전문패널에게 관능검사를 실시하였다. 수색(색도, 탁도), 향기(풀냄새, 구수한 향, 묵은취), 향미(탄내, 떫은 맛, 쓴 맛, 감칠 맛)를 포함한 전체적인 기호도를 9점 척도로 표기하게 하였으며, 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
표 1
녹차 보이차 후발효차
수색(색도, 탁도) 6.4 + 0.52 2.1 + 0.32 5.4 + 0.27
향기(풀냄새, 구수한 향, 묵은취) 5.8 + 0.68 5.3 + 0.71 7.1 + 0.53
향미(탄내, 떫은 맛, 쓴 맛, 감칠 맛) 5.0 + 0.42 3.4 + 0.12 6.8 + 0.87
전체 기호도 6.0 + 0.45 4.8 + 0.45 7.6 + 0.60
(매우좋음:9, 좋음:7, 보통:5, 나쁨:3, 매우나쁨:1)
상기 표 1에서 확인할 수 있듯이, 맛(향미), 향취(향기)에서 녹차나 보이차보다 월등히 높은 점수를 받았으며, 전체적인 기호도 역시 녹차보다 1.6점, 보이차보다 2.8점 높게 나타났다. 따라서 본 발명의 일 실시예에 따른 후발효차는 맛과 향취 면에서 기존이 녹차보다 우수하게 개선되었으며, 현재 후발효차로 상용되고 있는 보이차보다 우수함을 알 수 있다.
[시험예 2] 후발효차의 자유라디칼 소거능 측정
자체적으로 라디칼 형태를 띠고 있는 100M 농도의 DPPH(Diphenyl Picryl Hydrazile)를 99% 에탄올에 녹여서 라디칼 용액을 준비하였다. 상기 실시예 2에서 제조한 실험물질인 발효차를 농도별로 증류수에 녹여서 라디칼 용액과 실험 물질을 넣은 반응액을 만들었다. 이때, 실험시료가 포함되지 않은 반응액을 대조군으로 하여 동일한 과정을 실행하였다. 37℃에서 30분간 충분히 반응시킨 후, 라디칼의 소실을 측정하게 위해 515 nm에서 흡광도를 측정하였다. 비교군으로는 녹차 추출물 및 보이차 추출물을, 양성 대조군으로는 비타민C를 사용하였으며, 그 결과는 대조군을 100으로 하여 비교치를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이 본 발명의 후발효차 추출물은 농도 의존적으로 자유 라디칼을 소거했는데, 양성대조군인 비타민C와 유사한 정도의 효과였으며, 비교군인 녹차 추출물보다는 약 10% 정도 우수한 효능을, 보이차보다는 20~40% 우수한 효능을 보였다. 이는 본 발명의 일 실시예에 따른 후발효차 추출물이 뛰어난 항산화 효과를 나타낸다는 것을 의미한다.
[시험예 3] 혈관링을 이용한 혈관 수축 억제 효능 관찰
체중 250-300g의 실험용 웅성 흰쥐(Sprague-Dawley rat)를 대한 바이오링크 (Seoul, Korea)로부터 공급받아, 사육실 온도 22±2℃, 습도 45-55%를 유지하고, 오전 7시와 오후 7시를 기준으로 밤과 낮의 주기가 각각 12시간이 되도록 하였다. 사료(퓨리나코리아, Seoul, Korea)와 물은 제한없이 공급하여 일주일간 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다.
흰쥐를 실혈 치사시킨 후 개흉하여 신속하게 흉부 대동맥(thoracic aorta)을 적출한 다음, 즉시 95% O2/5% CO2의 혼합 가스로 포화된 KR 완충액(조성 (mM); NaCl 115.5, KCl 4.6, KH2PO4 1.2, MgSO4 1.2, CaCl2 2.5, NaHCO3 25.0, disodium. Ca2+ EDTA 0.026mM, 글루코스 11.1, pH 7.4)으로 옮겼다. 혈관 내의 혈액과 주변의 지방 및 결합 조직 등을 제거하고, 길이 3-4 mm의 혈관링을 만들었다. 혈관링은 초기 30분간 점진적으로 장력을 주어 평형 상태에 도달하도록 한 뒤, 페닐에프린(phenylephrine) 10-6M으로 수축시킨 후, 아세틸콜린(acetylcholine) 10-6M 을 가하여 이완시켰을 때 이완율이 80% 이상인 것을 사용하였다. 95% O2/5% CO2의 혼합가스로 포화시킨 90mM KCl을 함유한 KR(Krebs Ringer) 완충액으로 수조(bath)내의 완충액을 교환하여 혈관의 수축을 유도하여 이것을 최대 수축으로 삼았다. 혈관에 실험 물질을 30분 동안 전처리 한 다음, 수조상에서 수축 유발 페닐에프린을 점차적으로 높은 농도로 가하여 이에 대한 용량-수축 반응 곡선을 관찰하였다. 혈관 수축력은 90mM KCl에 의해 유발된 혈관 수축을 100%으로 했을때 비교값으로 하였고, 이는 하기 표 2에 나타내었다.
표 2
페닐에프린 농도(μM) 대조군(수축율 %) 녹차 추출물(수축율 %) 보이차 추출물(수축율 %) 후발효차 추출물(수축율 %)
0.1 22.36 ± 4.76 10.75 ± 3.2 15.32 ± 6.5 0.45 ± 1.1
1 61.95 ± 0.21 35.97 ± 5.52 32.48 ± 2.67 9.36 ± 2.82
10 90.20 ± 4.32 62.45 ± 9.04 58.73 ± 5.69 36.88 ± 5.13
100 98.79 ± 8.64 78.86 ± 1.68 87.69 ± 3.44 54.50 ± 13.67
상기 표 2에서 볼 수 있듯이, 수축 유발제인 페닐에프린의 처리 농도가 높아질수록 혈관 수축율이 증가하는 것을 알 수 있으며, 후발효차 추출물의 경우 대조군인 녹차 추출물보다 페닐에프린 농도에 따라 1.5배 ~ 20배 이상 더 높은 혈관 수축 억제 효능을 보였다. 따라서 본 발명의 일 실시예에 따른 후발효차 추출물은 매우 뛰어난 혈관 수축 억제 효능이 있다는 것을 관찰할 수 있었다.
[시험예 4] 동물모델에서의 혈청 및 간 지질 수치 저하
체중 250~300g의 8 주령의 암컷 쥐를 우리 당 8마리씩, 22±2℃의 항온 및 55±15%의 상대 습도가 유지되고 12시간의 명암 주기가 제공되는 폴리카보네이트 우리에 수용하였으며, 정상식이 및 고콜레스테롤 식이를 공급하고 식수를 자유롭게 음용토록 하였다. 고지혈증을 유발시키는 고콜레스테롤 식이의 조성은 하기 표 3에 나타내었다.
표 3
성분 함량 (%)
설탕 65.0
비타민 비함유 카제인 15.0
AIN-76 무기물 혼합물 3.5
AIN-76 비타민 혼합물 1.0
옥수수유 2.0
라아드 8.0
콜레스테롤 1.0
콜린산 0.5
알파셀 4.0
총합 100.0
실험은 정상군, 대조군, 양성대조군 및 투여군 4개 그룹으로 나누어 수행하였다. 정상군은 일반 사료만을 제공하였고, 대조군은 정상식이에 1% 콜레스테롤 및 0.5% 콜린산을 첨가하여 고지혈증을 유발하게 하였고, 양성 대조군에는 고지혈증 치료제로 사용되는 페노피브린산(200mg/kg)을 사용하였으며, 페노피브린산은 1% 메틸셀룰로즈(MC)에 현탁하여 경구투여 하였다. 또한 투여군은 고지혈증 유발식이와 함께 매일 후발효차 추출물 및 녹차 추출물을 경구 투여시켰으며, 발효차 및 녹차 추물물(200mg/kg)은 1일 1회 경구투여에 의해 4주간 제공하였다. 각 그룹의 쥐는 12시간 절식 시킨 뒤에 안와 정맥으로부터 혈액 샘플을 취하였으며, 이는 10000rcf에서 10분간 원심 분리하고 이렇게 수득된 혈청을 사용하여 혈중 총 콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤의 수준을 평가하였고, 쥐의 간을 채집하여 간 콜레스테롤 및 중성지방 수치를 평가하였다. 상기의 분석은 혈액자동분석기와 로슈 진단키트를 사용하여 수행하였으며, 얻어진 결과를 하기의 표 4(혈청 지질) 및 표 5(간 지질)에 나타내었다.
표 4 혈청 지질
구분(mg/dl) 정상군 대조군 양성대조군 투여군
녹차 보이차 후발효차
총콜레스테롤 114.25 ±2.41 218.57 ± 20.44 112.42 ± 13.33 132.49 ±7.l5 141.04 ± 10.32 136.25 ± 15.88
HDL-콜레스테롤 84.85 ± 0.35 55.72 ± 3.56 87.89 ± 6.84 58.84 ± 10.01 57.24 ± 6.31 59.43 ± 8.70
LDL-콜레스테롤 30.5 ± 6.42 134.75 ± 9.41 75.34 ± 2.80 80.44 ± 8.43 87.32 ± 8.76 86.75 ± 2.51
상기 표 4에서 볼 수 있듯이, 4주간 고콜레스테롤 사료를 섭취한 쥐에서 혈청 총콜레스테롤 수치는 정상군보다 대조군이 약 2배, LDL-콜레스테롤 수치는 약 4.4배 증가하였으나 HDL-콜레스테롤 수치는 감소하였으며, 이 결과로부터 고지혈증 유발 식이에 의한 고지혈증 유발이 잘 수행되었다는 것을 확인할 수 있다. 후발효차를 고지혈증 유발 식이와 동시 투여한 투여군을 보면 총콜레스테롤 수치는 136.25mg/dl로 대조군보다 약 38% 감소효과를, LDL-콜레스테롤 수치는 약 36% 감소효과를 얻을 수 있지만, HDL-콜레스테롤 수치는 크게 증가시키지 못함을 알 수 있다. 한편 녹차 추출물의 총콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 감소 수치는 각각 39%, 41%로서 후발효차 추출물과 비교하여 약간 높은 콜레스테롤 감소 효과를 제공하지만, 보이차 추출물의 경우는 총콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 감소 수치가 각각 36%, 35%로 나타난 시험 물질 중에서 가장 저조한 감소 효능을 보였다.
표 5 간 지질
구분(㎍/mg) 정상군 대조군 양성 대조군 처리군
녹차 보이차 후발효차
총콜레스테롤 5.81 ± 0.85 27.96 ± 2.46 15.43 ± 0.52 20.46 ± 8.21 21.85 ± 0.94 18.77 ± 4.01
중성지방 199.91 ± 24.33 230.35 ± 10.53 185.39 ± 23.84 190.46 ± 5.69 186.72 ± 9.18 180.43 ± 16.73
상기 표 5를 보면, 대조군에서 쥐의 간 총콜레스테롤 및 중성지방 수치가 정상군보다 현저하게 높아 고지혈증 유발 식이에 의해서 지방간 형태로 유도되었음을 확인할 수 있다. 녹차 추출물 처리군의 경우에는 총콜레스테롤 및 중성지방의 수치가 각각 27% 및 17% 감소되었고, 보이차 추출물 처리군의 경우에는 총콜레스테롤 및 중성지방의 수치가 각각 22% 및 19%가 감소되었으며, 후발효차 추출물 처리군의 경우에는 각각 33% 및 22%가 감소되어 간 지질 개선의 경우에는 후발효차 추출물을 처리한 경우에 가장 우수한 결과를 얻을 수 있음을 확인할 수 있다.
본 발명에 의한 후발효차 추출물 함유 조성물은 하기와 같이 여러 가지 제형으로 응용가능하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
[제조예 1] 연질캅셀제
후발효차 추출물 100mg, 대두추출물 50mg, 대두유 180mg, 홍삼추출물 50mg, 팜유 2mg, 팜경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 6mg을 혼합하고 통상의 방법에 따라 1캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.
[제조예 2] 정제
후발효차 추출물 100mg, 대두추출물 50mg, 포도당 100mg, 홍삼추출물 50mg, 전분 96mg 및 마그네슘 스테아레이트 4mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.
[제조예 3] 과립제
후발효차 추출물 100mg, 대두추출물 50mg, 포도당 100mg, 홍삼추출물 50mg 및 전분 600mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1g으로 하였다.
[제조예 4] 드링크제
후발효차 추출물 100mg, 대두추출물 50mg, 포도당 10g, 홍삼추출물 50mg, 구연산 2g 및 정제수 187.8g을 혼합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 용량은 200ml로 하였다.

Claims (12)

  1. 차엽에 발효 균주로서 효모를 접종하여 발효시켜 얻은 발효차 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈액 순환 개선용 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 발효 균주는 사카로마이세스 칼스버겐시스(Saccharomyces Carsbergensis), 사카로마이세스 사케(Saccharomyces Sake), 사카로마이에스 엘립소이데우스(Saccharomyces Ellipsoideus), 사카로마이세스 코레아누스(Saccharomycesv Coreanus), 및 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인 혈액 순환 개선용 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 발효 균주는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)인 혈액 순환 개선용 조성물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    상기 발효차 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 50 중량%의 양으로 함유되는 혈액 순환 개선용 조성물.
  5. 차엽에 발효 균주로서 효모를 접종하여 발효시켜 얻은 발효차 추출물을 유효성분으로 함유하는 뇌졸증, 심근경색, 고혈압, 고지혈증, 당뇨 또는 비만의 예방 및 치료하는 약제학적 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 발효 균주는 사카로마이세스 칼스버겐시스(Saccharomyces Carsbergensis), 사카로마이세스 사케(Saccharomyces Sake), 사카로마이에스 엘립소이데우스(Saccharomyces Ellipsoideus), 사카로마이세스 코레아누스(Saccharomycesv Coreanus), 및 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인 약제학적 조성물.
  7. 제 5 항에 있어서,
    상기 발효 균주는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)인 약제학적 조성물.
  8. 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    상기 발효차 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 50 중량%의 양으로 함유되는 약제학적 조성물.
  9. 차엽에 발효 균주로서 효모를 접종하여 발효시켜 얻은 발효차 추출물을 유효성분으로 함유하는 뇌졸증, 심근경색, 고혈압, 고지혈증, 당뇨 또는 비만의 예방 및 개선하는 건강 식품 조성물.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 발효 균주는 사카로마이세스 칼스버겐시스(Saccharomyces Carsbergensis), 사카로마이세스 사케(Saccharomyces Sake), 사카로마이에스 엘립소이데우스(Saccharomyces Ellipsoideus), 사카로마이세스 코레아누스(Saccharomycesv Coreanus), 및 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인 건강 식품 조성물.
  11. 제 9 항에 있어서,
    상기 발효 균주는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces Cerevisiae)인 건강 식품 조성물.
  12. 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    상기 발효차 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 50 중량%의 양으로 함유되는 건강 식품 조성물.
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