WO2015142098A1 - 후발효차 추출물을 포함하는 조성물 - Google Patents

후발효차 추출물을 포함하는 조성물 Download PDF

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WO2015142098A1
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post
fermented tea
extract
composition
tea extract
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PCT/KR2015/002722
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정현우
조동현
서대방
이상준
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(주)아모레퍼시픽
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    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
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    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment

Definitions

  • the present specification relates to a composition comprising a post-fermented tea extract.
  • Obesity refers to a condition in which energy intake and consumption are not balanced due to genetic or lifestyle causes, excess energy is accumulated as fat, and body fat is abnormally increased, and metabolic abnormalities are caused.
  • Obesity is a serious health problem not only in the West, where meat is a staple food, but also in Korea, and it is a major cause of not only shrinking individuals psychologically and socially, but also increasing the risk of hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, heart disease, and diabetes. About 30 to 40% of modern people are known to have obesity. In developed countries, 2 to 7% of total national medical expenses are caused by overweight and obesity. In Korea, the socioeconomic costs of obesity spent inside and outside the health care system increased to about KRW 1.17 trillion in 1998 and about KRW 1.8 trillion in 2005. It is expected to increase continuously.
  • dietary therapy meal restriction therapy, low-energy diet, ultra-low energy diet, fasting therapy
  • Exercise therapy that releases energy through exercise
  • psychotherapy behavioral therapy, cognitive behavioral therapy
  • drug therapy using energy metabolism accelerators, appetite suppressants, digestive absorption inhibitors, and ablation of organs or liposuction.
  • the inflammatory response is a defense mechanism against external pathogens and is essential for the survival of cells and individuals. Inflammatory responses do not normally occur but only temporarily when the presence of the pathogen is confirmed, and when the pathogen disappears, the inflammatory response also disappears (acute inflammatory response). However, there are cases where an inflammatory response occurs without a pathogen due to excessive fat accumulation, which is called chronic inflammation (Nature Insight Review 2006). Chronic inflammatory reactions can disrupt the insulin signaling system that regulates blood sugar and cause various metabolic diseases including obesity, type 2 diabetes, cardiovascular disease, and aging and apoptosis (Nature Insight Review 2006 ).
  • the present inventors have studied that there is no side effect as it is extracted from natural substances as a new therapeutic agent that controls the ratio of the intestinal microflora and exhibits anti-inflammatory effect and suppresses obesity.
  • the present invention provides a composition comprising the post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • compositions according to one aspect of the invention exhibit anti-obesity, anti-inflammatory, and anti-diabetic effects. Therefore, it can be used as a pharmaceutical composition for treating or preventing obesity, inflammation, or diabetes, or as a food composition for improving or preventing.
  • the composition according to an aspect of the present invention also exhibits an effect of improving obesity symptoms, specifically, such obesity symptoms may be an increase in blood inflammatory factors, a decrease in intestinal bacillus ( Bacteroidetes ), diabetes.
  • composition according to an aspect of the present invention is to inhibit the adipocyte differentiation, inhibit triglyceride accumulation, inhibit the expression of fatty acid synthesis genes, increase the expression of fatty acid oxidation-related genes, promote fatty acid oxidation in adipocytes, inhibit weight gain, improve glucose tolerance, It shows a slimming effect.
  • composition according to one aspect of the present invention exhibits the effect of controlling the flora of the intestinal flora. Specifically, the composition according to one aspect of the present invention exhibits the effect of treating, improving or preventing intestinal Bacteroidetes . Due to this effect, the composition according to one aspect of the present invention may exhibit an effect on constitution improvement.
  • the post-fermented tea of the present invention may exhibit the effect of maintaining the content of the potent ingredient uniformly by standardizing strain use and fermentation period and extraction process.
  • Figure 1 compares the catechin composition of green tea extract and post-fermented tea extract.
  • Figure 2 is a diagram showing the effect of inhibiting the differentiation of fat cells differentiation of the post-fermented tea extract compared to rosiglitazone, berberine and green tea extract
  • FIG. 3 is a graph quantifying the experimental results of FIG.
  • Figure 4 is a graph comparing the change in the expression pattern of fatty acid synthesis related genes in fat cells of post-fermented tea extract with rosiglitazone, berberine and green tea extract.
  • Figure 5 is a graph comparing the change in the expression pattern of fatty acid oxidation-related genes in adipocytes by the post-fermented tea extract compared to rosiglitazone, berberine and green tea extract.
  • Figure 6 is a graph showing the fatty acid oxidation increase in fat cells by carnitine, post-fermented tea extract and green tea extract.
  • Figure 8 is a graph showing the body weight change compared to the normal diet / distilled water administration group, high-fat diet / distilled water administration group and high-fat diet / green tea extract administration group in the post-fermented tea extract 500mg / kg administration group of the animal model.
  • FIG. 9 is a graph showing the results of oral glucose tolerance test results compared to the results of the normal diet / distilled water administration group, high-fat diet / distilled water administration group and high-fat diet / green tea extract administration group in the post-fermented tea extract 500 mg / kg administration group of the animal model .
  • 11 is a graph showing the adipose tissue weight after the end of the animal experiment.
  • Figure 12 is a graph comparing the expression of fat synthesis genes in adipose tissue by group after the end of the animal experiment.
  • Figure 13 is a graph showing the expression patterns of inflammatory response genes in adipose tissue by experimental group after the end of animal experiment.
  • Figure 14 is a graph showing the analysis of the intestinal microflora for each experimental group of the animal model.
  • 15 is a graph showing the ratio of two representative genus ( Bacteroides , Prevotella ) belonging to Bacteroidetes among the intestinal microorganisms of each experimental group of the animal model.
  • 16 is a graph showing the weight change in the fermented tea hot water and alcohol extract 400mg / kg administration group of the animal model compared with the normal diet / distilled water administration group, high-fat diet / distilled water administration group and high-fat diet / green tea spirit extract administration group .
  • Korean Patent Application No. 10-2014-0033262 filed March 21, 2014
  • Korean Patent Application No. 10-2015-0038323, filed March 19, 2015 are hereby incorporated by reference in their entirety for all purposes. Included.
  • this application claims the benefit of Korean Patent Application Nos. 10-2014-0033262 and 10-2015-0038323, which are hereby incorporated by reference in their entirety.
  • the present invention may be directed to a composition comprising a post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the post-fermented tea extract may be obtained by inoculating microorganisms on tea.
  • the microorganism may be obtained by inoculating a strain or non-pathogenic microorganism derived from enteric.
  • the composition may be an anti-obesity, anti-diabetic, or anti-inflammatory composition.
  • the present invention may be a pharmaceutical composition for treating or preventing obesity, or improving obesity symptoms, including an after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention may be a food composition for improving or preventing obesity or improving obesity symptoms, including the after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the obesity symptoms may be an increase in blood inflammatory factors, a decrease in intestinal Bacteroidetes , or diabetes.
  • the post-fermented tea extract may be a post-fermented tea hydrothermal extract or a post-fermented tea spirit (ethanol) extract.
  • the after-fermented tea hot water extract may be an extract after the fermentation tea extracted with water of 60 ⁇ 80 °C, specifically that extracted with water of 65 ⁇ 75 °C, 68 ⁇ 72 °C, or 70 °C Can be.
  • the post-fermented tea alcohol (ethanol) extract may be an extract of the after-fermented tea extracted with 30 to 70% (v / v) of ethanol, specifically 40 to 60% (v / v) , 45-55% (v / v), 48-52% (v / v), or 50% (v / v) may be extracted with ethanol.
  • the present invention relates to a method for treating, improving or preventing obesity, or a method for improving obesity, comprising administering a post-fermented tea extract to an individual in need of treatment, improvement or prevention of obesity, or improvement of obesity symptoms. It may be.
  • the present invention may relate to the use of post-fermented tea extracts for the treatment, improvement or prevention of obesity, or for the improvement of obesity symptoms.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in treating, improving or preventing obesity, or for use in improving obesity symptoms.
  • the present invention in one aspect, may be a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of diabetes comprising the post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention may be directed to a method for treating, improving, inhibiting or preventing diabetes comprising administering an after-fermented tea extract to a subject in need of treatment, improvement, inhibition or prevention of diabetes.
  • the present invention may be directed to the use of post-fermented tea extracts for the treatment, improvement or prevention of diabetes.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in the treatment, improvement or prevention of diabetes.
  • the present invention may be a pharmaceutical composition for treating or preventing inflammation, including an after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention may be directed to a method for treating, improving, inhibiting or preventing inflammation comprising administering an after-fermented tea extract to an individual in need of treatment, improvement, inhibition or prevention of inflammation.
  • the present invention may be directed to the use of an after-fermented tea extract for treating, improving or preventing inflammation.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in treating, improving or preventing inflammation.
  • the present invention may be directed to a composition for increasing intestinal bacilli ( Bacteroidetes ) comprising a post-fermented tea extract as an active ingredient, and specifically, the composition may be a pharmaceutical or food composition.
  • bacilli Bacteroidetes
  • the composition may be a pharmaceutical or food composition.
  • the present invention may be directed to a method of increasing intestinal Bacteroidetes comprising administering an after-fermented tea extract to a subject in need of an increase in intestinal hepatitis .
  • the present invention may be directed to the use of post-fermented tea extract in the intestinal mycobacteria.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in increasing intestinal bacilli.
  • the present invention may be directed to a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of intestinal bacilli ( Bacteroidetes ) reduction comprising an after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • intestinal bacilli Bacteroidetes
  • the present invention may relate to a method for treating, improving or preventing enterococci reduction, comprising administering a post-fermented tea extract to a subject in need of treatment, improvement or prevention of enterococci reduction.
  • the present invention may be directed to the treatment, improvement or prevention of post-fermented tea extracts in reducing intestinal mycobacteria.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in the treatment, improvement or prevention of intestinal hepatitis reduction.
  • the present invention may be a food composition for improving or preventing obesity, including after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention may be a food composition for improving or preventing diabetes comprising the after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention may be a food composition for improving or preventing inflammation including the post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the present invention may be a food composition for improving or preventing intestinal bacillus ( Bacteroidetes ) reduction comprising the post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • intestinal bacillus Bacteroidetes
  • the present invention may be a composition for controlling intestinal microorganisms comprising the post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the intestinal microbial control composition may be to control the intestinal microflora, and specifically, the intestinal microbial flora control composition.
  • the enteric microorganism or enteric microbial flora may be Bacteroidetes or Firmicutes .
  • intestinal microbial control may mean increasing or decreasing microorganisms distributed in the intestine, and specifically, increasing the proportion of liver microorganisms distributed in the intestine and decreasing the proportion of posterior wall bacteria. can do.
  • the present invention may be directed to a method for regulating intestinal microorganisms, including a method for administering an after-fermented tea extract to an individual in need of control of intestinal microorganisms.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in intestinal microbial control.
  • the present invention may be directed to the use of post-fermented tea extracts for the control of intestinal microorganisms.
  • the present invention may be directed to a slimming composition comprising an after-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the slimming composition may be a cosmetic composition, a pharmaceutical composition, or a food composition.
  • the present invention may be directed to a sleeving method comprising administering an after-fermented tea extract to an individual in need of slimming.
  • the present invention may be directed to a slimming use of the post-fermented tea extract.
  • the present invention may be directed to a post-fermented tea extract for use in slimming.
  • the term "slimming” may mean reducing the circumference or thickness of a body or a portion of a portion of the body or a portion of the body relative to the height or length thereof. This “slimming” can also be slimming, losing weight, or slimming the body or parts of it, and losing weight in the process.
  • the composition is 0.1% P or more, 0.5% P or more, 1% P or more, 1.5% P or more, 2% based on the ratio of the intestinal liver bacillus of the individual having a normal weight P over 2.2% P over 2.4% P over 2.6% P over 2.8% P over 3% P over 3.2% P over 3.4% P over 3.6% P over 3.8% P over 4% May be at least P, at least 4.5% P, at least 5% P, at least 7% P, at least 10% P, at least 12% P, at least 15% P, at least 20% P, or at least 30% P It may be increasing below P.
  • the composition is at least 0.1% P, at least 0.5% P, at least 1% P, at least 1.5% P, at least 2%, based on the percentage of the bacteriophage prior to ingesting or administering the composition of the present invention P over 2.2% P over 2.4% P over 2.6% P over 2.8% P over 3% P over 3.2% P over 3.4% P over 3.6% P over 3.8% P over 4%
  • At least P, at least 4.5% P, at least 5% P, at least 6% P, at least 7% P, at least 7.5% P, at least 8% P, at least 8.5% P, at least 9% P, at least 9.5% P, 10% P or more, 12% P or more, 15% P or more, 20% P or more, or 30% P or more may be increased to 40% P or less.
  • % P may be a percentage point, and may mean a unit representing an arithmetic difference in the ratio of liver bacteria. For example, if the intestinal mycobacterial rate of a normal weight individual is 50% and the intestinal mycobacterial rate of an individual who has taken the composition disclosed herein has increased by 3.5% P based on the proportion of the mycobacterium liver of an individual with normal weight, the present invention Intestinal mycobacterial rate of the individual who consumed the composition according to one aspect will be 53.5%.
  • the composition according to one aspect of the present invention has a ratio of Bacteroidetes to the total intestinal strain (40% or more, 50% or more, 51% or more, 52% or more, 53% or more) It can be adjusted to be at least 54%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, or at least 70%, below 75%, below 70%, below 65%, below 60%, below 55%, below 54%, 53 It can be adjusted to be less than or equal to 52%, less than or equal to 51%, or less than or equal to 50%.
  • the composition according to one aspect of the present invention when the ratio of the total intestinal strains of the intestinal bacteria ( Bacteroidetes ): Wally fungus ( Fimicutes ) ratio of 50:50 to 60: 40 is You can adjust it.
  • the composition according to one aspect of the present invention when the ratio of the total intestinal strains to 100 ( Bacteroidetes ): the ratio of Firmicutes 50:50 or more, 51: 49 or more, 52:48 or more, 53:47 or more, 54:46 or more, 55:45 or more, 56:44 or more, 57:43 or more, 58:42 or more, 59:41 or more, or 60:40 or more It can be adjusted to be less than 70:30.
  • the post-fermented tea extract may be one or more post-fermented tea extracts selected from the group consisting of green tea, white tea, oolong tea, black tea, black tea, black tea and persimmon leaf tea.
  • the post-fermented tea extract may be in a concentration of 1 ⁇ g / ml to 1 g / ml based on the total volume of the composition.
  • the concentration of the post-fermented tea extract is 0.1 ⁇ g / ml or more, 0.5 ⁇ g / ml or more, 1 ⁇ g / ml or more, 2 ⁇ g / ml or more, 3 ⁇ g / ml or more based on the total volume of the composition , 4 ⁇ g / ml or more, 5 ⁇ g / ml or more, 6 ⁇ g / ml or more, 7 ⁇ g / ml or more, 8 ⁇ g / ml or more, 9 ⁇ g / ml or more, 10 ⁇ g / ml or more, 20 ⁇ g / ml or more, 50 ⁇ g / ml or more, 100 ⁇ g
  • Bacteroidetes may mean a liver fungal bacterium, which bacteria are gram-negative, nonspreforming, anaerobic and rod-shaped bacteria. They are widely distributed in soils, sediments and seawater, as well as in the intestines and skin of animals.
  • the fungal bacterium includes Bacteroidia , Prevotella , Pretotella , Cytophagia , Flavobacteriia , and Sphingobacteriia , etc. There may be.
  • Firmii cutes may refer to the posterior wall fungi, which bacteria are characterized by gram-positive, endospore formation, but some of them may look like gram-positive It has features that can be.
  • posterior wall bacterium may be largely Clostridia , Bacilli , Erysipelotrichi , Negativicutes , Termolitobacter , or Thermolithobacterales .
  • the post-fermented tea extract may be prepared using a non-pathogenic microorganism or enteric strains.
  • the non-pathogenic microorganism or enteric strains are specifically edible microorganisms, for example, may be yeast or lactic acid bacteria.
  • non-pathogenic micro-organisms may be in my process to a saccharide (Sac ch aromyces sp.), Bacillus (Bacillussp.) Or the Aspergillus seusok (Aspergillussp.). Examples include, but are not limited to, Bacillus Subtilis , Saccharomyces cerevisiae , or Saccharomyce scalsbergensis .
  • the strain derived from soy sauce may be a strain derived from soybean paste, red pepper paste or soy sauce prepared using meju or a strain derived from soybeans prepared using soybean.
  • the strain or Bacillus genus derived from the genus for example, Bacillus subtilis ( Bacillus subtilis ), Bacillus licheniformis ( Bacilluslicheniformis ), Bacillus megaterium ( Bacillus megateriums ), Bacillus natto ( Bacillus natto) , a Bacillus sheet Reus (Bacilluscitreus), Bacillus Shirkuh lance (Bacilluscirculans), at least one strain selected from Bacillus methoxy Sentry carcass (Bacillusmesentricus) and Bacillus Fu mirror's group consisting of (Bacilluspumilus).
  • the enteric strains may be Bacillus subtilis also called Bacillus subtilis .
  • Bacillus subtilis is used in the production of amylases, proteases, amino acids, antibacterial compounds or surfactants. In particular, since it is not toxic in humans, animals, plants and the like, it can be widely used as a food microorganism. However, such Bacillus subtilis strains do not generally correspond to strains used for tea.
  • fermented teas such as black tea and oolong tea use enzymes inside tea leaves, and yeast is widely used in the production of microbial fermented tea.
  • Boy tea which is a representative after-fermentation tea
  • Black Kukgi is mainly used.
  • the post-fermented tea extract may be an extract of water or lower alcohol of C 1 ⁇ C 6 , specifically lower alcohol may be ethanol.
  • the composition may be one having the following properties:
  • the catechin content is 20% by weight or less based on the total weight of the post-fermented tea extract
  • a gallate content based on the total weight of the post-fermented tea extract is 0.5 ⁇ 1.5 ⁇ a wt%, wherein a is a free water between 0.01 and 0.1.
  • the gallate content in the properties of the composition (3) is 0.5 ⁇ 1.5 ⁇ a weight%, 0.6 ⁇ 1.4 ⁇ a weight%, 0.7 ⁇ 1.3 ⁇ based on the total weight of the post-fermented tea extract a weight percent, 0.8-1.2 ⁇ a weight percent, or 0.9-1.1 ⁇ a weight percent.
  • composition (3) a in the properties of the composition (3) a is a ratio greater than 0.01 or less than 0.1, specifically a may be 0.05 to 0.09.
  • the catechin content of the post-fermented tea extract is 20% by weight or less, 17% by weight or less, 15% by weight, 13% by weight or less, 10% by weight or less based on the total weight of the after-fermented tea extract 9 wt% or less, 8 wt% or less, or 7 wt% or less, and specifically 8.3 wt% or less.
  • the epicatechin content of the post-fermented tea extract is 20% by weight, 17% by weight, 15% by weight, 13% by weight, 10% by weight or less based on the total weight of the after-fermented tea extract. 9 wt% or less, 8 wt% or less, 7 wt% or less, 6 wt% or less, 5 wt% or less, or 4 wt% or less, specifically 4.9 wt% or less.
  • the "post-fermented tea” is a fermentation and ripening using microorganisms under conditions such as appropriate moisture and temperature after inactivating the enzymes inside the tea (heat) by applying heat It means tea, and it is distinguished from prefermented tea using the enzyme inside the tea leaf.
  • the post-fermented tea used herein may be included in the form of an extract, or may be included as a pulverized product of the post-fermented tea itself, or as a dry pulverized product of the post-fermented tea, but is not limited thereto.
  • post-fermented tea refers to a tea in a fermented state, and may be a concept encompassing all kinds of teas having different raw materials or different degrees of fermentation.
  • the "post-fermented tea” includes all fermented teas of various raw materials, such as tea, leaf tea, such as tea leaf tea or persimmon leaf tea, such as chrysanthemum tea or rose tea.
  • the tea is not particularly limited in its kind, and includes green tea, white tea, oolong tea, black tea, black tea, black tea, persimmon leaf tea, and various kinds of herbal teas.
  • the tea may be one or more teas selected from the group consisting of green tea, white tea, oolong tea, black tea, black tea, black tea and persimmon leaf tea, specifically, the after-fermented tea extract of the present invention is green tea, white tea It may be at least one post-fermented tea extract selected from the group consisting of oolong tea, black tea, black tea, black tea and persimmon leaf tea.
  • the tea may be green tea.
  • the tea may be tea after fermented green tea.
  • the post-fermented tea extract may be prepared by the method of preparing post-fermented tea according to one aspect of the present invention.
  • the present invention may be directed to a method for preparing a post-fermented tea comprising inoculating fermentation bacteria or fermentation broth with tea.
  • the fermentation bacteria may be a non-pathogenic microorganism.
  • the fermentation broth is cultured by putting the fermentation bacteria in the fermentation broth, the fermentation broth acts as a source of water and energy for the microorganism, for example, 2 to 5% by weight based on the total weight of the fermentation broth It may be prepared by mixing sugar or fructose and the like and adding soybean powder. In one aspect of the invention, the fermentation broth may be prepared by mixing the sugar or fructose and then autoclaving at 110 to 130 ° C., specifically at 115 to 125 ° C. for 10 minutes to 20 minutes, and cooling to 20 to 30 ° C.
  • the inoculated fermentation bacteria or fermentation broth is 10 to 80% by weight, specifically 20 to 70% by weight, more specifically 33.3 to 66.7% by weight, more specifically based on the dry weight of the tea (tea) 50 to 66.7% by weight, more specifically 55 to 66.7% by weight, more specifically 58 to 62% by weight, and more specifically 60% by weight.
  • the method may further comprise the step of stirring the mixture of fermentation bacteria or fermentation broth with tea after inoculation of the fermentation bacteria or fermentation broth. Such agitation can be performed for 15 to 25 minutes.
  • the step of fermentation of the method may be performed after the stirring of the mixture.
  • the method may further comprise the step of drying the fermentation after the fermentation step.
  • the drying may be hot air drying, but is not limited thereto.
  • the hot air drying may be performed for 4 hours to 6 hours at a temperature of 80 °C to 100 °C, specifically 85 °C to 95 °C.
  • the method may further comprise the step of extracting the fermented tea produced by the fermentation after the step of fermentation with water or an organic solvent.
  • the method may further comprise the step of filtering and extracting the extract after the extraction step.
  • the concentration may include a reduced pressure concentration, but is not limited thereto, and may be included if it is obvious to those skilled in the art as a method of concentrating the extract.
  • the reduced pressure concentration may be performed in a vacuum state.
  • the method may further comprise the step of drying the concentrate after concentration under reduced pressure.
  • the fermentation in the method may be carried out at 15 ⁇ 80 °C, specifically 20 °C or more, 25 °C or more, 30 °C or more, 35 °C or more, 40 °C or more, 45 °C or more At least 50 ° C, at least 55 ° C, at least 60 ° C, at least 65 ° C, at least 70 ° C, at least 70 ° C, at most 65 ° C, at most 60 ° C, at most 55 ° C, at most 50 ° C, at most 45 ° C, at most 40 ° C, It may be carried out at a temperature of 35 ° C or less, 30 ° C or less, 25 ° C or less, or 20 ° C or less.
  • the fermentation in the method may be performed for 24 hours to 28 days, specifically 4 to 24 days, more specifically 8 to 20 days, more specifically 12 to 16 days, more Specifically, it may be performed for 13 days to 15 days.
  • the post-fermented tea may be prepared by fermenting tea leaves, for example, at about 15 to 70 ° C. for about 24 hours to about 28 days, but is not limited thereto.
  • the post-fermented tea can be prepared by the following method, but is not limited thereto: Cultured non-pathogenic microorganisms or enteric strains are inoculated into the fermentation broth.
  • the fermentation broth acts as a source of water and energy for the microorganism, and for example, may be prepared by mixing 2 to 5 wt% of sugar or fructose and the like based on the total weight of the fermentation broth and adding soy flour.
  • the fermentation broth inoculated with the strain may be subjected to a process of culturing in an incubator. Then, the fermentation broth inoculated with green tea leaves and strains is mixed and then fermented.
  • Fermentation broth to mix may be appropriate 10 to 80% by weight based on the weight of green tea leaves, more specifically may be 33.3 to 66.7% by weight. Fermentation can be carried out in a constant temperature fermenter at 20 ⁇ 70 °C 24 hours to 28 days. If the fermentation temperature exceeds 40 °C, there is an effect that the growth of the rest of the bacteria except non-pathogenic microorganisms or enteric strains, for example Bacillus subtilis bacteria is inhibited or killed. However, if the fermentation temperature is too high, the growth of enteric strains may also be inhibited.
  • growth of microorganisms may be gradually inhibited or gradually killed while fermentation is performed, and in one aspect of the present invention, fermentation may be performed at such a temperature.
  • the temperature at which the fermentation of the present invention can be sufficiently performed may be 45 ° C. or more, 50 ° C. or more, 55 ° C. or more, 60 ° C. or more, 65 ° C. or more, or 70 ° C. or more.
  • Such fermentation process may be referred to as post-fermentation.
  • the process of drying through hot air drying after the fermentation may be more rough.
  • the post-fermented tea extract may be extracted in various ways.
  • Fermented tea extract according to another aspect of the present invention may be, for example, hot water extract or C 1 to C 5 lower alcohol extract, but is not limited thereto.
  • the fermented tea extract may be an ethanol extract.
  • extract includes all substances obtained by extracting the components of natural products, regardless of the extraction method, extraction solvent, extracted component or extract form, and extracts the substances obtained by extracting the components of natural products. It is a broad concept that includes all materials that can be obtained by processing or processing in a specific manner, and specifically, the processing or processing may be further fermentation or enzymatic treatment of the extract. It is a broad concept including a dry matter, and specifically, the extract herein may be a fermentation product.
  • post-fermented tea extract includes all materials obtained by extracting the components of the post-fermented tea regardless of the extraction method, extraction solvent, extracted component or extract form, and heat in the process of extracting the components. , Including a material obtained by an extraction method including a step of treating with an acid, a base, an enzyme, and the like, and extracting a component of a post-fermented tea, and extracting the material obtained by processing or processing by another method It is a broad concept that includes all of the materials that can be obtained. Specifically, the processing or treatment may be to further fermentation or enzymatic treatment of the post-fermented tea extract. Therefore, the post-fermented tea extract of the present specification may be a fermented product.
  • the post-fermented tea extract may be prepared by a method comprising the step of extracting the post-fermented tea prepared according to the present specification with an organic solvent.
  • the step of extracting the post-fermented tea is 1L-20L, specifically 5-20L, more specifically 10-20L, more specifically 12-18L, more Specifically, it may be immersed in 14 ⁇ 16L of water, an organic solvent or a combination thereof, and extracted at room temperature, more specifically after the fermented tea in 14 ⁇ 16L of water, an organic solvent, or a combination thereof 60 to 90 ° C, specifically 60 to 80 ° C, more specifically 65 to 75 ° C, more specifically 70 to 1 hour to 4 hours, specifically 2 to 3 hours, more specifically 3 hours After reflux for a while, the extraction may be performed at room temperature for 8 hours to 24 hours.
  • the post-fermented tea extract may be prepared by a method further comprising the step of filtration, concentration under reduced pressure, and drying the extract after extracting it with an organic solvent.
  • the water comprises distilled or purified water
  • the organic solvent is C 1 ⁇ C 5 lower alcohol, alcohol, acetone, ether, ethyl acetate, diethyl ether, ethyl methyl ketone and One or more selected from the group consisting of chloroform, but is not limited thereto.
  • the post-fermented tea extract may comprise a post-fermented tea-C 1 ⁇ C 6 alcohol extract, specifically, the alcohol may be methanol or ethanol.
  • the post-fermented tea extract may be a crude extract of a solvent selected from the group consisting of water, C 1 -C 6 alcohols, and combinations thereof.
  • the C 1 -C 6 alcohol may be specifically methanol.
  • the extraction may be used, such as hot water extraction, ethanol extraction, heat extraction, cold extraction, reflux extraction, reflux cooling extraction, or ultrasonic extraction, there is no limitation if the extraction is obvious to those skilled in the art, Extraction may be hot water extraction or ethanol extraction.
  • the extraction may be carried out at room temperature, but for more efficient extraction may be carried out under warm conditions, preferably at about 40 to 100 °C, more preferably at a temperature of about 70 °C It may be, but is not limited thereto.
  • Extraction time may be performed for about 2 to about 14 hours, specifically 8 hours to 14 hours, more specifically 11 hours to 13 hours, most specifically 12 hours, but is not limited thereto. It may vary depending on conditions such as temperature.
  • the extraction may be extracted one or more times several times in order to obtain a larger amount of the active ingredient, preferably one to five times, more preferably three times the continuous extraction can be used combined extract.
  • the post-fermented tea extract may comprise a crude extract of the post-fermented tea as described above, and include the crude extract as a soluble fraction of the organic solvent obtained by further extracting with an organic solvent having a low polarity. It may be.
  • an organic solvent may be hexane, methylene chloride, ethyl acetate, n-butanol, and the like, but is not limited thereto.
  • the extract extracted by the above method or a soluble fraction of the extract may be used as it is, but may be used in the form of an extract by concentrating after filtration, may be used as a form of dried by drying after concentration.
  • the drying may be evaporation drying, spray drying, freeze drying, and specifically, freeze drying may be performed at -50 to -70 ° C. for 3 to 4 days.
  • the pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention may be various oral or parenteral formulations.
  • diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used.
  • Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, soft or hard capsules, and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, or the like. Or lactose, gelatin, or the like is mixed.
  • lubricants such as magnesium stearate, talc and the like are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups, and various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, may be included.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • compositions of the present invention may be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts, and may be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds as well as in a suitable collection.
  • the salt is not particularly limited as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrofluoric acid, hydrobromic acid, formic acid acetic acid, tartaric acid, lactic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, methanesulfonic acid , Benzene sulfonic acid, toluene sulfonic acid, naphthalene sulfonic acid and the like can be used.
  • composition of the present invention may be administered parenterally or orally as desired, and may be administered in an amount of 0.1 to 1 g, specifically 1 to 500 mg, and more specifically 100 mg to 500 mg per kg of body weight per day. It may be administered in several divided doses.
  • the dosage for a particular patient may vary depending on the patient's weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, method of administration, rate of excretion, severity of the disease, and the like.
  • compositions according to the present invention may be prepared in the form of powders, granules, tablets, soft or hard capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, oral formulations, ointments, creams, etc. It can be formulated into any form suitable for pharmaceutical preparations, including sterile injectable solutions and the like.
  • composition according to the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans by various routes, such as parenteral, oral, and all modes of administration can be expected, for example, oral, rectal Or by intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.
  • the food composition may be a nutraceutical composition.
  • the formulation of the food composition according to one aspect of the present invention is not particularly limited, but may be, for example, formulated into a liquid such as tablets, granules, powders, drinks, caramels, gels, bars, and the like.
  • the food composition of each formulation may be suitably selected by a person skilled in the art according to the formulation or purpose of use in addition to the active ingredient, and may be synergistic when applied simultaneously with other raw materials.
  • the dosage determination of the active ingredient is within the level of those skilled in the art, the daily dosage of which is for example from 0.1 mg / kg / day to 5000 mg / kg / day, more specifically The amount may be 100 mg / kg / day to 500 mg / kg / day, but is not limited thereto and may vary depending on various factors such as age, health condition, and complications of the subject to be administered.
  • Food composition for example, chewing gum, caramel products, candy, ice cream, confectionary, various foods, such as soft drinks, mineral water, alcoholic beverages, such as beverage products, vitamins and minerals Functional foods.
  • a food composition which is an aspect of the present invention, includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and flavoring agents such as natural flavoring agents, colorants and enhancers (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, Alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like.
  • the functional food compositions of the present invention may include a natural fruit juice and a pulp for the production of fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is typically included in the range of 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • Bacillus subtilis cultured at 30 ° C. for 72 hours in a vibrating incubator were recovered and the strain and the active medium were separated in a centrifuge. After washing the isolated strain three times with 1.0% physiological saline solution, mixed fermentation broth (2.5% by weight sugar and 2.0% by weight fructose) with purified water and then heated at 120 ° C and 3 atmospheres for 15 minutes for proper microbial metabolism. Autoclave and cooled to 25 ° C. at room temperature). In order to smooth the fermentation metabolism of the damaged strain in the washing process, the strain was added to the fermentation broth and stabilized while incubating in an incubator for 24 hours.
  • Fermentation broth was prepared by adding the strain to the fermentation broth 10 3 ⁇ 10 8 CFU / mL.
  • the fermentation broth was mixed to 60% by weight, based on the weight of the green tea leaves, in the green tea dried (green tea dried leaves) prepared for each small packaging unit in the sterilized reaction tank.
  • the strain was prevented from being damaged due to rapid temperature increase, and the green tea leaves were continuously stirred even after mixing the fermentation broth solution to absorb water evenly.
  • the reaction was completed and the green tea fermentation broth mixture was dropped from the sterilized reaction tank to a constant temperature fermenter. Then, the inlet of the fermenter was blocked to prevent the inflow of outside air and the fermentation process was performed at 50 ° C. Since the growth of other strains becomes difficult at the fermentation temperature, it is expected that the effect of inhibiting the growth of other various bacteria during the ripening period.
  • the fermentation was carried out for 14 days, after the fermentation mixture was hot air dried for 5 hours at 80 °C.
  • the total microbial account in the above-fermented tea prepared above was within 10 2 CFU / g or less, and no pathogenic microorganisms were detected.
  • Example 1 1 kg of the post-fermented tea prepared in Example 1 was immersed in 15 L of hot water at 70 ° C., refluxed at 70 ° C. for 3 hours, and then extracted at room temperature for 12 hours. The extract was filtered, concentrated under reduced pressure in vacuo, and freeze-dried to prepare a post-fermented tea extract in powder form. Yield was 15-20%, and the prepared powder was stored at 4 ° C. until use.
  • the fermented tea was changed to green tea (domestic) in Example 1 (2) to carry out the same method to obtain 200g green tea extract.
  • the fermented tea was changed to green tea (Indosan) in Example 1 (2) to carry out the same method to obtain 200g green tea extract.
  • Example 1 (2) was changed to the post-fermented tea to ivory tea (China, Puer) to carry out the same method to obtain 200g green tea extract.
  • each sample was analyzed by Alliance's WATERS 2695 HPLC using ODS (C18) column.
  • ODS ODS
  • the post-fermented tea extract was confirmed that the composition ratio of catechin is different compared to the green tea extract.
  • the abbreviations described in FIG. 1 are as follows: GC: gallocatechin, EGC: epigalallocatechin, C: catechin, CAF: caffeine, EC: epicatechin, EGCG: epigallocatechin gallate, GCG: gallocatechin gallate, ECG: epicatechin gallate.
  • the active ingredients (catechin, gallate, etc.) contained in green tea show great variation depending on the cultivation environment of green tea such as soil, varieties, and climate. (Karori et al., 2007, Cheh et al., 2003, Fernandez et al., 2002, Muthumani et al., 2007). This is because even if the same amount of tea because the amount of the active ingredient is different, depending on the person, even the same person causes different physiological activity. Therefore, in order to industrially use green tea and fermented tea, a process that can be extracted by minimizing the difference in the content of the active ingredient according to the green tea source should be developed.
  • each sample was analyzed by Alliance WATERS 2695 HPLC, and analyzed using an ODS (C18) column. It was. The results of this analysis are shown in Table 1 below.
  • the unit of gallate described below is% by weight (w / w).
  • Example 1 Primary analysis 0.06 0.01 1.23 0.46 1.04 Secondary analysis 0.10 0.04 2.66 0.51 0.93 3rd analysis 0.02 0.02 0.57 0.50 1.06 Mean / deviation 0.06 ⁇ 0.04 0.02 ⁇ 0.02 1.49 ⁇ 1.07 0.49 ⁇ 0.03 1.01 ⁇ 0.07
  • the post-fermented tea extract according to an aspect of the present invention unlike green tea and fermented tea, has less variation in the gallate content in the extract, and the gallate content was higher in the spirit extract than the hot water.
  • the gallate contents of the post-fermented tea hot water extract and the alcoholic extract it can be seen that the gallate is contained in about 2 times the post-fermented tea alcohol extract.
  • the post-fermented tea extract according to one aspect of the present invention contains a smaller amount of gallate content than other extracts, and accordingly, it is possible to provide a post-fermented tea extract containing an active ingredient in a predicted range. Do.
  • Example 1 First, in the post-fermented tea manufacturing process of Example 1 to prepare a post-fermented tea to the temperature of the fermentation process 40 °C, 45 °C, 50 °C, 55 °C, 60 °C, and 65 °C and then extracted each temperature After fermented tea alcohol extract according to the obtained.
  • the fermented tea alcohol extracts obtained as described above and each sample of the green tea extract of Comparative Example 1 were analyzed in the same manner as Experimental Example 1 using the ODS (C18) column by WATERS 2695 HPLC of Alliance company. The analysis results are shown in Table 2 below. In the following table, the content of each component is% by weight (w / w).
  • Comparative Example 1 and the post-fermented tea spirit extract of the present invention can be seen that the content of the potent ingredient is significantly different.
  • the fermentation temperature is 40 °C to 50 °C it could be confirmed that the content of catechin, caffeine, and gallate are almost the same as the active ingredient. From 55 °C it can be seen that the fermentation is not performed smoothly because the content of catechin and epicatechin is gradually increased and the content of gallate is gradually reduced. However, even when the fermentation is not performed smoothly, the content of the potent component (gallate, etc.) of the post-fermented tea spirit extract was remarkably different from that of Comparative Example 1.
  • the fermentation at 40 °C to 50 °C contained about 17 times the content of Comparative Example 1, 65 °C was the least content of gallate Even when fermented at was confirmed to have a 8 times higher gallate content.
  • Adipocytes (3T3-L1) were imported from ATCC, USA, and cultured in 37 ° C., 5% CO 2 incubator using cell culture medium (Lonza) containing 10% bovine calf serum (BCS). It was.
  • cell culture medium Lico-Calculation medium
  • BCS bovine calf serum
  • FBS unborn calf serum
  • FBS unborn calf serum
  • differentiated adipocytes unlike adipocytes, have a rounded shape and have multiple lipid droplets inside the cell.
  • the degree of differentiation of adipocytes can be determined by oil-red O staining. Differentiated adipocytes were fixed with 10% formaldehyde solution, and then treated with fixed cells with oil-red o aqueous solution to neutralize specific fat red. Observing this under a microscope can determine the degree of differentiation of fat cells.
  • the oil-red OH solution can be extracted using isopropanol. By measuring absorbance at the 510 nm wavelength, the amount of accumulated fat can be quantified.
  • the post-fermented tea extract inhibits the differentiation of adipocytes and inhibits the accumulation of triglycerides, the results of which are shown in Figure 3.
  • the absorbance of the post-fermented tea extract was 26%
  • the absorbance of the green tea extract was 58%
  • the post-fermented tea extract was about 2.2 times more effective in inhibiting fat differentiation than the same amount of green tea extract.
  • Adipocyte differentiation was induced by the method described in Example 4. Adipocytes that were differentiated were treated with 100 ⁇ g / ml of the post-fermented tea alcohol extract of Example 1 for 24 hours. As in Experiment 1, the same amount of green tea extract (100 ⁇ g / ml) was treated to compare its efficacy, and rosiglitazone (1 ⁇ M) and berberine (10 ⁇ M) were used as the positive control group and the negative control group, respectively.
  • Trizol TM was synthesized as complementary DNA using;; (peomen Tasman Reverse Transcription Kit) (Trizol TM Invitrogen) was used to extract the RNA by the RNA, and a reverse transcriptase kit 5 ⁇ g. This complementary DNA was observed in real-time PCR for expression of genes involved in fatty acid synthesis (FIG. 4) and fatty acid oxidation (FIG. 5).
  • the post-fermented tea extract inhibited the expression of genes involved in fatty acid synthesis such as SREBP1c, ACC, FAS, SCD1, while increasing the expression of genes involved in fatty acid oxidation such as ACO, CPT, mCAD, etc. (FIG. 5).
  • the expression change of fat metabolism-related genes by the post-fermented tea extract was larger.
  • Example 2 After inducing fat cell differentiation as in Experimental Example 4, in order to measure fatty acid oxidation, the post-fermented tea spirit extract and green tea extract of Example 1 were each treated for 100 hours at 100 ⁇ g / ml. Carnitine 20 ⁇ M was used as a positive control.
  • the degree of fatty acid oxidation was measured and quantified using a fatty acid oxidation measurement kit (ABCAM) (FIG. 6). Similar to the results shown in Figure 5, the post-fermented tea extract promoted fatty acid oxidation in adipocytes, the degree was more than 20% superior to the green tea extract.
  • ABCAM fatty acid oxidation measurement kit
  • mice central test animals
  • the first group was the general diet group, and the remaining group (groups 2-4) were 45% high fat diet (HFD) (research diet) intake group.
  • group 3 after-fermented tea spirit extract of Example 1 was dissolved in water and orally administered for 8 weeks at a dose of 500 mg / kg / day, and in group 4, green tea extract was also dissolved in water and administered orally for 500 weeks / kg for 8 weeks.
  • groups 1 and 2 were also injected orally with the same amount of water as the amount used for the administration of the substances in groups 3 and 4.
  • mice Nine C57-BL / 6 mice were used in each group. For accurate feed intake and intestinal microbial analysis, all rats were tested in individual cages, and dietary intake and body weight were measured weekly for 8 weeks.
  • the high-fat diet group has a lower dietary intake than the normal diet group.
  • the feed intake of the post-fermented tea alcohol extract (group 3) or the green tea extract group (group 4) was not different from the high fat diet group (group 2) (Fig. 7).
  • the average diet group (group 1) showed an average weight gain of 6g, whereas the high-fat diet group (group 2) showed about twice the weight gain (average 12g increase).
  • Green tea extract (Group 4) showed less weight gain than the high-fat diet group (average of 9g), but recorded higher weight gain compared to the general feed group (Group 1), while surprisingly, the fermented tea extract (Group 3). Showed an average weight gain of 4g less than the normal feed group (Group 1).
  • the post-fermented tea extract can effectively inhibit weight gain, and the degree of inhibition can be said to be much superior to green tea extract.
  • the post-fermented tea extract is expected to help prevent and treat metabolic diseases such as obesity as well as type 2 diabetes by improving glucose tolerance.
  • mice used in Experimental Example 7 were fasted for 12 hours and then autopsied to extract epididymal fat to measure the weight of the adipose tissue (FIG. 11).
  • high-fat diets showed significant increases in adipose tissue weight in the intake group (group 2), a difference three times that of the normal diet group (group 1).
  • the fat weight of the post-fermented tea alcohol extract group (Group 3) was 630mg, which is half the level of the high-fat diet group (Group 2) .
  • the fat weight was the post-fermented tea extract.
  • the average was around 970 mg rather than the administration group (group 3). Inferring the results through the experimental results, the effect of inhibiting fat accumulation by the post-fermented tea extract seems to be superior to the green tea extract.
  • Expression patterns of fat metabolism-related genes (FIG. 12) and inflammation-related genes (FIG. 13) in adipose tissue were measured and shown in FIGS. 12 and 13.
  • the general diet group (group 1) was found to have recovered.
  • gene expression tended to be closer to that of the general diet group than the high-fat diet group, but there was no statistically significant result.
  • post-fermented tea extracts may help to treat, improve, or prevent obesity and slimming through various mechanisms.
  • the intestinal microbial changes were analyzed in the mice used in Experimental Example 7, and the intestinal microorganisms were analyzed by collecting the stools of each mouse.
  • the DNA of the microorganism was isolated using a stool sample DNA extraction kit (Qiagen), and the isolated DNA measured the distribution of the major intestinal microorganisms using primers complementary to the native DNA sequence (16S rDNA) of the intestinal microorganisms. It was.
  • the normal mice are similarly shown in the ratio of 50:50 rear wall bacteria and liver bacteria.
  • intake of high-fat diet increased the proportion of posterior wall bacteria by about 55% and the proportion of liver fungus decreased to 45% level (group 2).
  • the percentage is dominated by 54%.
  • the intestinal microbial distribution of the post-fermented tea extract administration group is close to the "dry constitution.”
  • the distribution of the bacteriophyte bacterium bacterium in the green tea extract administration group (group 4) remained at the level of the general diet group (50:50), the effect of inducing intestinal microflora on the intestinal microflora was superior to that of the green tea extract. And can be seen.
  • the general mice show a ratio of about 52:48 between bacteroides and prevotella among the liver bacilli (group 1).
  • eating high-fat diets increased the proportion of Bacteroides by about 64% and reduced the proportion of prebotella by 36% (group 2).
  • the ratio of bacteroides and prebotella returned to 56:44 similar to that of the general diet group (group 1).
  • the case was found to be 54.4: 45.5. Therefore, the ratio of Bacteroides and Prebotella in the bacillus bacterium is similar to that of both the "fermented constitution (Bacteroides and Prebotella 52.5: 47.4)" or that of the normal diet group. It was confirmed that the effect was maintained similar to the ratio.
  • the normal feed group (group 1) showed an average weight gain of 4g, while the 60% high-fat diet group (group 2) showed three times the weight gain (average 15g increase).
  • the post fermented tea extracts showed significant stagnation in body weight gain compared to the high fat diet group (group 2) (groups 3 and 4). After fermented tea extract (4 groups, average 8g increase) was higher than that.
  • the anti-obesity effect of green tea extract was the lowest among the comparative substances (Group 5, increase by 12g on average).
  • the post-fermented tea alcohol extract has a greater weight suppression effect than the post-fermented tea hydrothermal extract, and the anti-obesity effect of the post-fermented tea hydrothermal extract is superior to the green tea alcohol extract.
  • the anti-obesity effect of post-fermented tea extract is superior to that of green tea.
  • Example 1 or 2 8 mg, vitamin E 9 mg, vitamin C 9 mg, palm oil 2 mg, vegetable hardened oil 8 mg, lead beetle 4 mg and lecithin 9 mg of Example 1 or 2 are mixed and mixed according to a conventional method to prepare a soft capsule filling solution. . 400 mg per capsule is filled to prepare a soft capsule. In addition, a soft capsule sheet is prepared at a ratio of 66 parts by weight of gelatin, 24 parts by weight of glycerine, and 10 parts by weight of sorbitol solution and filled with the filler to prepare a soft capsule containing 400 mg of the composition according to the present invention.
  • Injectables were prepared by conventional methods according to the compositions set forth in Table 3 below.
  • composition ratio of the said vitamin and mineral mixture was mixed and consisted with the component suitable for a health functional food in a preferable Example, you may change arbitrarily the compounding ratio.
  • the above ingredients are mixed according to a conventional method for preparing a health beverage, then stirred and heated at 85 ° C. for about 1 hour, and then the resulting solution is filtered and sterilized.

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Abstract

본 명세서는 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다. 본 명세서에 따른 조성물은 비만, 염증, 또는 당뇨의 치료, 개선 또는 예방용 조성물 일 수 있으며, 구체적으로 이러한 조성물은 약학 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다. 본 명세서에 따른 조성물은 지방세포 분화 억제 또는 중성 지방 축적 억제 효과를 가지므로 비만 치료에 관한 분야에서 유용하게 사용될 수 있다. 또한 본 명세서에 따른 조성물은 장내 의간균의 비율을 조절하는 효과를 나타내며, 이에 따라 체질 개선에 효과를 나타낼 수 있다.

Description

후발효차 추출물을 포함하는 조성물
본 명세서는 후발효차 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
비만은 유전적 원인 또는 생활 습관상의 원인에 의하여 에너지 섭취와 소비가 균형을 이루지 못하고, 과잉된 에너지가 지방으로 축적되어 체지방이 비정상적으로 많아지며, 대사 이상이 유발되는 상태를 일컫는다. 비만은 육식을 주식으로 하는 서구에서뿐만 아니라 우리나라에서도 심각한 건강문제이며, 심리적으로나 사회적으로 개인을 위축시킬 뿐만 아니라 고혈압, 고지혈증, 동맥경화증, 심장질환, 당뇨병 등의 위험을 증가시키는 주요한 원인으로 작용한다. 현대인의 약 30~40%가 비만증을 가지고 있다고 알려져 있으며, 선진국의 경우 총 국민 의료비의 2~7%가 과체중 및 비만에 의해 발생하고 있다. 우리나라의 경우 보건 의료체계 내외부에서 지출된 비만의 사회 경제적 비용은 1998년 기준으로 약 1조 17억원, 2005년에는 약 1조 8천원으로 증가하였으며 현재의 비만 증가율이 유지될 경우 사회경제적 비용 부담이 지속적으로 증가할 것으로 예상된다.
비만을 치료하고 예방하는 방법은 여러 나라에서 활발하게 다각적인 측면에서 연구되고 있는데, 음식물의 섭취량을 억제하여 에너지소비를 줄이는 식사요법(식사제한치료, 저에너지식요법, 초저에너지식 요법, 단식요법), 운동을 통해 에너지를 발산시키는 운동요법, 정신요법(행동수정요법, 인지행동요법), 에너지 대사 촉진제, 식욕 억제제, 소화흡수 억제제 등을 사용하는 약물요법, 장기의 일부를 절제하거나 지방 흡입술과 같은 수술요법 등 이 현재 알려져 있다.
그러나, 외과적 요법이나 약물에 의한 개선 보다는 일상 생활에서 안전하고 꾸준하게 체중을 적정 수준으로 관리할 수 있는 방법의 필요성이 절실하다. 이에 체지방 감소의 효과가 뛰어나고 체중감소에도 효과가 있는 새로운 천연 소재 개발의 필요성이 대두되었다.
이러한 비만과 관련하여 최근 연구결과들에서는 비만이 체내의 염증 반응과 연관이 있으며 장내 미생물의 균총의 비율에 따라서 비만이 될 수 있다고 하였다.
구체적으로, 염증 반응은 외부 병원체에 대한 방어 기전으로서, 세포 및 개체의 생존에 필수적인 현상이다. 염증 반응은 평소에는 나타나지 않다가 병원체의 존재가 확인될 때에만 일시적으로 나타나고, 병원체가 사라지면 염증 반응 역시 사라지게 된다 (급성 염증; acute inflammatory response). 그러나 과도한 지방 축적 등의 원인에 의해 병원체 없이도 염증 반응이 나타나는 경우가 있는데, 이를 만성 염증(chronic inflammation)이라 한다 (Nature Insight Review 2006). 만성 염증 반응은 혈당을 조절하는 인슐린 신호전달체계를 교란하여 비만, 제 2형 당뇨병, 심혈관계질환을 비롯한 다양한 대사성질환의 원인이 되기도 하며, 노화 및 세포사멸의 원인이 되기도 한다 (Nature Insight Review 2006). 실제로 비만 혹은 당뇨 환자의 혈중에는 과도한 양의 염증 인자(IL-1, IL-6, CRP, TNF-α등)가 존재하며, 항염증 물질을 처리하면 대사성 질환이 개선된다는 연구 결과가 잇따라 발표되었다 (Nature 2002, JCI 2006 등 다수). 따라서 과도하거나 불필요한 염증 반응을 억제하는 것이 비만, 당뇨 등의 대사성질환 예방에 필요하다.
또한, 지구상에 존재하는 대부분의 다세포생물은 소화기관 내에 다양한 종류의 장내미생물을 가지고 있다. 이들 미생물은 소화 보조 및 면역반응 조절 등의 다양한 역할을 통하여 숙주와 공생하게 되는데, 최근 들어 비만 환자의 경우 장내미생물 중 후벽균(Firmicutes)이 많이 존재한다는 연구 결과가 발표되었고, 다이어트를 통하여 체중 감량을 유도할 경우 후벽균의 분포가 감소하는 반면 의간균(Bacteroidetes)의 양이 증가한다는 연구 결과가 발표되었다. 이러한 관찰 결과는 사람뿐 아니라 생쥐 등의 동물에서도 나타났으며, 최근까지도 다양한 연구 결과를 통하여 결과가 계속 뒷받침되고 있다 (Nature 2006, PNAS 2010 등 다수).
이에 본 발명자들은 장내 미생물 균총의 비율을 조절하고, 항염 효과를 나타내어 비만을 억제하는 효과가 있는 새로운 치료제로서 천연 물질로부터 추출되어 부작용이 없는 것을 연구하였다.
본 명세서의 목적은, 상기와 같은 비만, 그로 인한 당뇨병 및 비만 환자들에게서 과도하게 나타나는 염증 인자들을 치료, 예방 또는 개선 할 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로서 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 항비만, 항염, 및 항당뇨효과를 나타낸다. 그러므로 비만, 염증, 또는 당뇨병의 치료 또는 예방용 약학조성물, 또는 개선 또는 예방용 식품 조성물로서 사용될 수 있다. 또한 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 비만 증상을 개선시키는 효과도 나타내며, 구체적으로 이러한 비만 증상은 혈중 염증 인자 증가, 장내 의간균(Bacteroidetes)의 감소, 당뇨일 수 있다.
또한 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 지방세포 분화 억제, 중성지방 축적 억제, 지방산 합성 유전자의 발현 억제, 지방산 산화 관련 유전자의 발현 증가, 지방세포 내의 지방산 산화 촉진, 체중 증가 억제, 내당성 개선, 슬리밍(slimming)효과를 나타낸다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물은 장내 미상균의 균총 비율을 조절하는 효과를 나타낸다. 구체적으로 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 장내 의간균(Bacteroidetes) 감소를 치료, 개선 또는 예방하는 효과를 나타낸다. 이러한 효과로 인해 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 체질 개선에 효과를 나타낼 수 있다.
또한, 본 발명의 후발효차는 다른 발효차와는 달리 균주 사용 및 발효기간, 추출공정을 표준화하여 효능 성분의 함량이 균일하게 유지되는 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 녹차추출물과 후발효차 추출물의 카테킨 조성을 비교한 것이다.
도 2는 후발효차 추출물의 지방세포 분화 억제 효과를 로지글리타존, 베르베린 및 녹차추출물과 비교하여 나타내는 그림이다
도 3은 도 2의 실험결과를 정량화한 그래프이다
도 4는 후발효차 추출물의 지방세포내 지방산 합성 관련 유전자들의 발현 양상 변화를 로지글리타존, 베르베린 및 녹차추출물과 비교한 그래프이다.
도 5는 후발효차 추출물에 의한 지방세포내 지방산 산화 관련 유전자들의 발현 양상 변화를 로지글리타존, 베르베린 및 녹차추출물과 비교한 그래프이다.
도 6은 카르니틴, 후발효차 추출물 및 녹차추출물에 의한 지방세포내 지방산 산화 증가를 나타낸 그래프이다.
도 7은 동물 모델의 후발효차 추출물 500mg/kg 투여군(HFD+발효차, 이하 동일)에 있어, 식이섭취량을 일반식이/증류수 투여군((-), 이하 동일), 고지방식이/증류수 투여군(HFD, 이하 동일) 및 고지방식이/녹차추출물 투여군(HDF+녹차, 이하 동일)과 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 동물 모델의 후발효차 추출물 500mg/kg 투여군에 있어 체중 변화량을 일반식이/증류수 투여군, 고지방식이/증류수 투여군 및 고지방식이/녹차추출물 투여군과 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 9는 동물 모델의 후발효차 추출물 500mg/kg 투여군에 있어 경구내당능 부하검사 결과를 일반식이/증류수 투여군, 고지방식이/증류수 투여군 및 고지방식이/녹차추출물 투여군의 결과와 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 10은 도 9의 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 11은 동물실험 종료후 지방조직 무게를 나타낸 그래프이다.
도 12는 동물실험 종료후 군별 지방조직내 지방합성관련유전자들의 발현을 비교한 그래프이다.
도 13은 동물실험 종료후 실험군별 지방조직내 염증반응관련유전자들의 발현 양상을 나타낸 그래프이다.
도 14는 동물 모델의 각 실험군별 장내미생물 균총을 분석하여 나타낸 그래프이다.
도 15는 동물 모델의 각 실험군별 장내미생물 중 박테로이데테스(Bacteroidetes)에 속하는 대표적인 속(genus) 2가지(Bacteroides, Prevotella)의 비율을 나타낸 그래프이다.
도 16은 동물 모델의 후발효차 열수 및 주정 추출물 400mg/kg 투여군에 있어 체중 변화량을 일반식이/증류수 투여군, 고지방식이/증류수 투여군 및 고지방식이/녹차 주정 추출물 투여군과 서로 비교하여 나타낸 그래프이다.
2014년 3월 21일에 출원된 한국 특허 출원번호 10-2014-0033262호 및 2015년 3월 19일에 출원된 한국 특허 출원번호 10-2015-0038323호는 모든 목적으로서 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다. 또한, 본 출원은 그 전체가 본 명세서에서 참조로 포함되는 한국 특허 출원번호 10-2014-0033262호 및 10-2015-0038323호의 이익을 주장한다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 차(tea)에 미생물을 접종하여 얻은 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 미생물은 장류 유래 균주 또는 비병원성 미생물을 접종하여 얻은 것일 수 있다.
구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 항비만, 항당뇨, 또는 항염 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 치료 또는 예방용, 또는 비만 증상 개선용 약학 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 개선 또는 예방용, 또는 비만 증상 개선용 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비만 증상은 혈중 염증 인자 증가, 장내 의간균(Bacteroidetes)의 감소, 또는 당뇨일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 후발효차 열수 추출물 또는 후발효차 주정(에탄올) 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 후발효차 열수 추출물은 후발효차를 60~80℃의 물로 추출한 추출물일 수 있으며, 구체적으로 65~75℃, 68~72℃, 또는 70℃의 물로 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 주정(에탄올) 추출물은 후발효차를 30~70%(v/v)의 에탄올로 추출한 추출물일 수 있으며, 구체적으로 40~60%(v/v), 45~55%(v/v), 48~52%(v/v), 또는 50%(v/v)의 에탄올로 추출한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 비만의 치료, 개선 또는 예방, 또는 비만 증상의 개선이 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하는 비만 치료, 개선 또는 예방 방법, 또는 비만 증상 개선 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 비만 치료, 개선 또는 예방 용도, 또는 비만 증상의 개선 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 비만 치료, 개선 또는 예방에 사용하거나 또는 비만 증상의 개선에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 치료 또는 예방용 약학 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 당뇨병 치료, 개선, 억제 또는 예방이 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하는 당뇨병 치료, 개선, 억제 또는 예방 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 당뇨병 치료, 개선 또는 예방 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 당뇨병의 치료, 개선 또는 예방에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 치료 또는 예방용 약학 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 염증 치료, 개선, 억제 또는 예방을 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하는 염증 치료, 개선, 억제 또는 예방 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 염증 치료, 개선 또는 예방 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 염증 치료, 개선 또는 예방에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 의간균(Bacteroidetes) 증가용 조성물에 관한 것일 수 있으며, 구체적으로 상기 조성물은 약학 또는 식품 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 장내 의간균 증가가 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하는 장내 의간균(Bacteroidetes) 증가 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 장내 의간균 증가 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 장내 의간균 증가에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 의간균(Bacteroidetes) 감소의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것 일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 장내 의간균 감소의 치료, 개선 또는 예방이 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하는 장내 의간균 감소의 치료, 개선 또는 예방 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 장내 의간균 감소의 치료, 개선 또는 예방 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 장내 의간균 감소의 치료, 개선 또는 예방에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 개선 또는 예방용 식품 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 개선 또는 예방용 식품 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 개선 또는 예방용 식품 조성물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 의간균(Bacteroidetes) 감소의 개선 또는 예방용 식품 조성물 일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 미생물 조절용 조성물일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서 상기 장내 미생물 조절용 조성물은 장내 미생물의 균총을 조절하는 것일 수 있으며, 구체적으로 장내 미생물 균총 조절용 조성물 일 수 있다. 또한 본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 장내 미생물 또는 장내 미생물 균총은 의간균(Bacteroidetes) 또는 후벽균(Firmicutes)일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 장내 미생물 조절은 장내에 분포하는 미생물을 증가 또는 감소시키는 것을 의미할 수 있으며, 구체적으로 장내에 분포하는 의간균의 비율을 증가시키고 후벽균의 비율을 감소시키는 것을 의미할 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 장내 미생물 조절이 필요한 개체에 후발효차 추출물을 투여하는 방법을 포함하는 장내 미생물 조절 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 장내 미생물 조절에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 장내 미생물 조절 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 슬리밍용 조성물에 관한 것일 수 있다. 구체적으로 상기 슬리밍(slimming)용 조성물은 미용 조성물, 약학 조성물, 또는 식품 조성물 일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물을 슬리밍이 필요한 개체에 투여하는 것을 포함하는 슬리빙 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 슬리밍 용도에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 슬리밍에 사용하기 위한 후발효차 추출물에 관한 것일 수 있다.
본 명세서에서 “슬리밍(slimming)”이라 함은, 신체 또는 그 부위 중 일부분의 둘레 또는 두께를 그 신장 또는 길이에 비해 상대적으로 작게하는 것을 의미할 수 있다. 또한 이러한 “슬리밍”은 신체 또는 그 부위 중 일부분을 날씬하게 하거나, 살을 빼거나, 가느다랗게 하는 것 일 수 있으며 그 과정에서 체중이 감량 될 수도 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 장내 의간균의 비율을 정상 체중을 가지는 개체의 의간균 비율을 기준으로 0.1%P 이상, 0.5%P 이상, 1%P 이상, 1.5%P 이상, 2%P 이상, 2.2%P 이상, 2.4%P 이상, 2.6%P 이상, 2.8%P 이상, 3%P 이상, 3.2%P 이상, 3.4%P 이상, 3.6%P 이상, 3.8%P 이상, 4%P 이상, 4.5%P 이상, 5%P 이상, 7%P 이상, 10%P 이상, 12%P 이상, 15%P 이상, 20%P 이상, 또는 30%P 이상 증가시키는 것일 수 있으며 40%P이하로 증가시키는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 본 발명의 조성물을 섭취 또는 투여하기 전 개체의 의간균 비율을 기준으로 0.1%P 이상, 0.5%P 이상, 1%P 이상, 1.5%P 이상, 2%P 이상, 2.2%P 이상, 2.4%P 이상, 2.6%P 이상, 2.8%P 이상, 3%P 이상, 3.2%P 이상, 3.4%P 이상, 3.6%P 이상, 3.8%P 이상, 4%P 이상, 4.5%P 이상, 5%P 이상, 6%P 이상, 7%P 이상, 7.5%P 이상, 8%P 이상, 8.5%P 이상, 9%P 이상, 9.5%P 이상, 10%P 이상, 12%P 이상, 15%P 이상, 20%P 이상, 또는 30%P 이상 증가시키는 것일 수 있으며 40%P이하로 증가시키는 것일 수 있다.
본 명세서에서 “%P”는 퍼센트 포인트로서, 의간균 비율의 산술적인 차이를 나타내는 단위를 의미하는 것일 수 있다. 예컨대, 정상 체중 개체의 장내 의간균 비율이 50%이고 본 명세서에 개시된 조성물을 섭취한 개체의 장내 의간균의 비율이 정상 체중을 가지는 개체의 의간균 비율을 기준으로 3.5%P 증가하였다면, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물을 섭취한 개체의 장내 의간균 비율은 53.5%가 되는 것이다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 장내 총 균주에 대한 의간균(Bacteroidetes)의 비율이 40% 이상, 50% 이상, 51% 이상, 52% 이상, 53% 이상, 54% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 또는 70% 이상이 되도록 조절할 수 있으며 75%이하, 70%이하, 65%이하, 60%이하, 55%이하, 54%이하, 53%이하, 52%이하, 51%이하, 또는 50%이하가 되도록 조절할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 장내 총 균주의 비를 100으로 하였을 때 장내 의간균(Bacteroidetes) : 후벽균(Firmicutes)의 비율이 50:50 내지 60: 40가 되도록 조절할 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 장내 총 균주의 비를 100으로 하였을 때 의간균(Bacteroidetes) : 후벽균(Firmicutes)의 비율이 50:50 이상, 51: 49 이상, 52:48 이상, 53:47 이상, 54:46 이상, 55:45 이상, 56:44 이상, 57:43이상, 58:42이상, 59:41이상, 또는 60:40 이상이 되도록 조절할 수 있으며 70:30이하가 되도록 조절할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 녹차, 백차, 우롱차, 홍차, 보이차, 흑차 및 감잎차로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 후발효차 추출물인 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 조성물의 총 부피를 기준으로 1μg/ml 내지 1g/ml의 농도인 것일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 농도는 조성물의 총 부피를 기준으로 0.1μg/ml 이상, 0.5μg/ml 이상, 1μg/ml 이상, 2μg/ml 이상, 3μg/ml 이상, 4μg/ml 이상, 5μg/ml 이상, 6μg/ml 이상, 7μg/ml 이상, 8μg/ml 이상, 9μg/ml 이상, 10μg/ml 이상, 20μg/ml 이상, 50μg/ml 이상, 100μg/ml 이상, 150μg/ml 이상, 200μg/ml 이상, 250μg/ml 이상, 300μg/ml 이상, 350μg/ml 이상, 400μg/ml 이상, 450μg/ml 이상, 500μg/ml 이상, 550μg/ml 이상, 600μg/ml 이상, 650μg/ml 이상, 700μg/ml 이상, 800μg/ml 이상, 900μg/ml 이상, 1000μg/ml(1g/ml) 이상, 2g/ml 이상, 3g/ml 이상, 5g/ml 이상, 또는 10g/ml 이상일 수 있으며 15g/ml이하, 10g/ml이하, 5g/ml이하, 1g/ml이하, 900μg/ml 이하, 800μg/ml 이하, 7900μg/ml 이하, 600μg/ml 이하, 500μg/ml 이하, 400μg/ml 이하, 300μg/ml 이하, 200μg/ml 이하, 100μg/ml 이하, 50μg/ml 이하, 또는 10μg/ml 이하일 수 있다.
본 명세서에 있어서, “의간균(Bacteroidetes)”은 의간균문을 의미하는 것일 수 있으며, 그 세균은 그람-음성, 포자비형성(nonspreforming), 혐기성 및 막대 모양의 특징을 가지는 박테리아이다. 이들은 토양, 퇴적물, 해수뿐만 아니라 동물의 내장 및 피부에 널리 분포되어 있는 것이다. 상기 의간균문에 포함된 것은 박테로이데스강(Bacteroidia), 프리보텔라강(Prevotella), 키토파가강(Cytophagia), 플라보박테리움강(Flavobacteriia) 및 스핑고박테리움강(Sphingobacteriia) 등이 있을 수 있다.
또한 본 명세서에 있어서, “후벽균(Firmicutes)”은 후벽균문을 의미하는 것일 수 있으며, 이 세균은 그람-양성, 내생포자(endospore) 형성의 특징을 가지나, 일부 후벽균은 그람-양성처럼 보일 수 있는 특징을 가지고 있다. 이러한 후벽균문은 크게 클로스트리움(Clostridia), 바실러스(Bacilli), 에리시펠로트릭스강(Erysipelotrichi), 네가티비콕쿠스강(Negativicutes), 테르몰리토박테르강(Thermolithobacterales) 등이 있을 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 비병원성 미생물 또는 장류 유래 균주를 이용하여 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비병원성 미생물 또는 장류 유래 균주는 구체적으로는 식용이 가능한 미생물로서, 예를 들면 효모 또는 유산균 일 수 있다.
구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 비병원성 미생물은 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.), 바실러스속(Bacillussp.) 또는 아스퍼질러스속(Aspergillussp.)일 수 있다. 예컨대, 바실러스 서브틸리스 (Bacillus Subtilis), 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae) 또는 사카로마이세스 세칼스벌젠시스(Saccharomyce scalsbergensis) 등을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 장류 유래 균주는 메주를 이용하여 제조하는 된장, 고추장 또는 간장에서 유래한 균주이거나 콩을 이용하여 제조하는 청국장 유래 균주일 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 있어서, 상기 장류 유래 균주 또는 바실러스속은 예를 들어, 바실러스 서브틸리스(Bacillussubtilis), 바실러스 리체니포르미스(Bacilluslicheniformis), 바실러스 메가테리움(Bacillusmegateriums), 바실러스 나토(Bacillusnatto), 바실러스 시트레우스(Bacilluscitreus), 바실러스 시르쿠란스(Bacilluscirculans), 바실러스 메센트리커스(Bacillusmesentricus) 및 바실러스 푸미러스(Bacilluspumilus)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 균주를 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 장류 유래 균주는 고초균이라고도 불리는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)일 수 있다. 바실러스 서브틸리스는 아밀라제, 프로테아제, 아미노산, 항미생물 제제(antibacterial compound) 또는 계면 활성제 등의 생산에 이용된다. 특히, 이는 사람, 동물 및 식물 등에서 독성을 나타내지 않기 때문에, 식품 미생물로 널리 이용될 수 있다. 다만, 이러한 바실러스 서브틸리스 균주는 일반적으로 차에 사용되는 균주에 해당하는 것은 아니다. 일반저긍로 홍차, 우롱차 등의 발효차는 찻잎 내부의 효소를 사용하며, 미생물 발효차의 제조에는 효모가 널리 사용된다. 특히 대표적인 후발효차인 보이차(숙차)의 경우 흑국균을 주로 사용한다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 물 또는 C1~C6의 저급 알코올의 추출물일 수 있으며, 구체적으로 저급 알코올은 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 하기 특성을 가지는 것일 수 있다:
(1)후발효차 추출물의 총 중량을 기준으로 카테킨의 함량이 20중량% 이하인 특성;
(2)후발효차 추출물의 총 중량을 기준으로 에피카테킨 함량이 20중량% 이하인 특성;및
(3) 후발효차 추출물의 총중량을 기준으로 갈레이트 함량이 0.5~1.5±a 중량%이고, 상기 a는 0.01 내지 0.1 사이의 유리수인 특성.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물의 특성 중 (3)에서 갈레이트 함량은 후발효차 추출물의 총중량을 기준으로 0.5~1.5±a 중량%, 0.6~1.4±a 중량%, 0.7~1.3±a 중량%, 0.8~1.2±a 중량%, 또는 0.9~1.1±a 중량% 일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물의 특성 중 (3)에서 a는 0.01이상 0.1 이하의 유리수이고, 구체적으로 a는 0.05 내지 0.09일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 카테킨 함량은 후발효차 추출물의 총 중량을 기준으로 20중량% 이하, 17중량% 이하, 15중량% 이하, 13중량% 이하, 10중량% 이하, 9중량% 이하, 8중량% 이하, 또는 7중량% 이하 일 수 있으며, 구체적으로는 8.3중량% 이하일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물의 에피카테킨 함량은 후발효차 추출물의 총 중량을 기준으로 20중량% 이하, 17중량% 이하, 15중량% 이하, 13중량% 이하, 10중량% 이하, 9중량% 이하, 8중량% 이하, 7중량% 이하, 6중량% 이하, 5중량% 이하, 또는 4중량% 이하일 수 있으며, 구체적으로는 4.9중량%이하 일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, “후발효차(post-fermented tea)”는 열을 가하여 차(tea) 내부의 효소를 비활성화 시킨 후, 적정한 수분과 온도 등의 조건 하에서 미생물을 이용하여 발효 및 숙성시킨 차를 의미하고, 찻잎 내부 효소를 이용하는 전발효차와는 구별된다. 구체적으로 본 명세서에서 사용되는 후발효차는 추출물의 형태로 포함되거나, 후발효차 자체의 분쇄물, 또는 후발효차의 건조 분쇄물로서 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "후발효차"는 발효된 상태의 차(tea)를 의미하는 것으로, 그 원료 또는 발효 정도가 다른 다양한 차를 모두 포괄하는 개념일 수 있다. 구체적으로 상기 "후발효차"는 차나무 잎 차 또는 감잎차를 예로 들 수 있는 엽차, 국화차 또는 장미차를 예로 들 수 있는 꽃잎차 등 다양한 원료의 차를 발효한 것을 모두 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 차(tea)는 그 종류에 있어 특별히 제한되지 않으며, 녹차, 백차, 우롱차, 홍차, 보이차, 흑차, 감잎차 등과 다양한 종류의 허브차 등을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 차는 녹차, 백차, 우롱차, 홍차, 보이차, 흑차 및 감잎차로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 차일 수 있으며, 구체적으로 본 발명의 후발효차 추출물은 녹차, 백차, 우롱차, 홍차, 보이차, 흑차 및 감잎차로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 후발효차 추출물일 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 차는 녹차일 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 차는 녹차를 후 발효한 차일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 본 발명의 일 측면에 따른 후발효차 제조 방법에 의해 제조된 것일 수 있다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 차(tea)에 발효균 또는 발효균액을 접종하여 발효시키는 단계를 포함하는 후발효차 제조 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 발효균은 비병원성 미생물일 수 있다.
구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 발효균액은 발효액에 발효균을 넣고 배양한 것으로서, 발효액은 미생물에 대한 수분과 에너지 공급원으로 작용하며, 예를 들어, 발효액 총 중량을 기준으로 2 내지 5 중량%의 설탕 또는 과당 등을 혼합하고 대두 분말 등을 첨가하여 제조된 것일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 발효액은 설탕 또는 과당을 혼합한 후 110~130℃, 구체적으로 115~125℃에서 10분 내지 20분간 고온 가압 멸균하고 20~30℃까지 냉각시켜 제조될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 접종되는 발효균 또는 발효균액은 차(tea)의 건엽 중량을 기준으로 10~80중량%, 구체적으로 20~70중량%, 더 구체적으로 33.3~66.7중량%, 더 구체적으로 50~66.7중량%, 더 구체적으로 55~66.7중량%, 더 구체적으로는 58~62 중량%, 더 구체적으로는 60중량%일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법은 발효균 또는 발효균액의 접종 이후에 차와 발효균 또는 발효균액의 혼합물을 교반하는 단계를 더 포함할 수 있다. 이러한 교반은 15분 내지 25분 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법의 발효시키는 단계는 혼합물의 교반 이후에 수행되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법은 발효 단계 이후에 발효물을 건조시키는 단계를 더 포함할 수 있다. 구체적으로 상기 건조는 열풍 건조일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 열풍 건조는 80℃ 내지 100℃, 구체적으로 85℃ 내지 95℃의 온도에서 4시간 내지 6시간 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법은 발효시키는 단계 이후에 발효로 생성된 후발효차를 물 또는 유기용매로 추출하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법은 추출 단계 이후에 추출물을 여과하여 농축하는 단계를 더 포함할 수 있다. 구체적으로 상기 농축은 감압 농축을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며 추출물을 농축하는 방법으로서 통상의 기술자에게 자명한 것이라면 포함될 수 있다. 또한 구체적으로 상기 감압 농축은 진공 상태에서 수행되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법은 감압 농축 이후에 농축물을 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법에서 발효는 15~80℃에서 수행하는 것일 수 있으며, 구체적으로는 20℃ 이상, 25℃ 이상, 30℃ 이상, 35℃ 이상, 40℃ 이상, 45℃ 이상, 50℃ 이상, 55℃ 이상, 60℃ 이상, 65℃ 이상, 또는 70℃ 이상이거나 70℃ 이하, 65℃ 이하, 60℃ 이하, 55℃이하, 50℃이하, 45℃이하, 40℃이하, 35℃이하, 30℃이하, 25℃이하, 또는 20℃이하의 온도에서 수행할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 방법에서 발효는 24시간 내지 28일간 수행할 수 있으며, 구체적으로 4일 내지 24일, 더 구체적으로 8일 내지 20일, 더 구체적으로 12일 내지 16일, 더 구체적으로 13일 내지 15일간 수행할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차는 찻잎을 예를 들어 약 15~70℃에서 약 24시간 내지 약 28일 동안 발효 시켜 제조하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일측면에 있어서, 후발효차는 다음과 같은 방법으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다: 배양한 비병원성 미생물 또는 장류 유래 균주를 발효액에 접종한다. 상기 발효액은 미생물에 대한 수분과 에너지 공급원으로 작용하며, 예를 들어, 발효액 총 중량을 기준으로 2 내지 5 중량%의 설탕 또는 과당 등을 혼합하고 대두 분말 등을 첨가하여 제조할 수 있다. 이후, 접종한 균주의 원활한 발효 대사를 위하여 균주를 접종한 발효액을 배양기에서 배양하는 과정을 거칠 수 있다. 그런 다음, 녹차 잎과 균주를 접종한 발효액을 혼합한 후 발효시킨다. 혼합하는 발효액은 녹차 건엽 중량을 기준으로 10~80 중량%가 적절할 수 있으며 더 구체적으로는 33.3~66.7 중량% 일 수 있다. 발효는 20~70℃의 항온 발효조에서 24시간 내지 28일간 실시할 수 있다. 발효 온도가 40℃를 넘으면, 비병원성 미생물 또는 장류 유래 균주, 예를 들어 바실러스 서브틸리스 균을 제외한 나머지 균들의 생장이 억제 내지 사멸되는 효과가 있다. 그러나 발효 온도가 지나치게 높으면 장류 유래 균쥬의 생장 역시 저해될 수 있다. 다만, 이렇게 생장이 저해되는 온도라 하더라도 발효를 수행하면서 미생물의 생장이 서서히 저해되거나 또는 서서히 사멸할 수 있으며, 본 발명의 일 측면에 있어서 발효는 이러한 온도에서도 수행될 수 있다. 구체적으로 미생물의 생장이 서서히 저해되나 본 발명의 발효를 충분히 수행할 수 있는 온도는 45℃이상, 50℃ 이상, 55℃이상, 60℃이상, 65℃이상, 70℃이상 일 수 있다. 상기와 같은 발효 과정은 후발효라고 지칭될 수 있다. 또한 발효 완료 후 열풍 건조를 통해 건조하는 과정을 더 거칠 수 있다.
본 발명의 일측면에 있어서, 후발효차 추출물은 다양한 방법으로 추출될 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 발효차 추출물은 예를 들어, 열수 추출물 또는 C1 내지 C5의 저급 알코올 추출물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 발효차 추출물은 에탄올 추출물일 수 있다.
본 명세서에서 “추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 또한 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 추출물을 추가적으로 발효, 또는 효소처리 하는 것일 수 있다. 따라서 본 명세서에서 추출물은 발효물, 농축물, 건조물을 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 본 명세서에서 추출물은 발효물일 수 있다.
본 명세서에서 “후발효차 추출물”은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 후발효차의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 그 성분을 뽑아내는 과정에서 열, 산(acid), 염기(base), 효소 등으로 처리하는 공정을 포함하는 추출 방법을 통해 얻어진 물질을 포함하며 또한 후발효차의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다. 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 후발효차 추출물을 추가적으로 발효 또는 효소처리 등을 하는 것일 수 있다. 따라서, 본 명세서의 후발효차 추출물은 발효물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 본 명세서에 따라 제조된 후발효차를 유기용매로 추출하는 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차를 추출하는 단계는 후발효차를 1L~20L, 구체적으로는 5~20L, 더 구체적으로는 10~20L, 더 구체적으로는 12~18L, 더 구체적으로는 14~16L의 물, 유기용매 또는 이들의 조합에 침지하고, 상온에서 추출하는 것일 수 있으며, 더욱 구체적으로 후 발효차를 14~16L의 물, 유기용매, 또는 이들의 조합에 침지하여 60~90℃, 구체적으로는 60~80℃, 더 구체적으로는 65~75℃, 더 구체적으로는 70℃에서 1시간 내지 4시간, 구체적으로는 2시간 내지 3시간, 더 구체적으로는 3시간 동안 환류(reflux)한 후, 상온에서 8시간 내지 24시간 추출하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 이를 유기용매로 추출하는 단계 이후에 추출액을 여과, 감압농축, 및 건조하는 단계를 더 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 물은 증류수 또는 정제수를 포함하고, 유기 용매는 C1~C5의 저급 알코올을 예로 들 수 있는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 후발효차-C1~C6 알코올 추출물을 포함할 수 있고, 구체적으로 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 물, C1-C6 알콜, 및 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 용매의 조추출물일 수 있다. 상기 C1-C6 알콜은 구체적으로 메탄올일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차를 용매로 추출 시, 후발효차의 약 5 내지 15배 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 추출은 열수 추출, 에탄올 추출, 가열 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없으며, 구체적으로 추출은 열수추출 또는 에탄올 추출 일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 약 40 내지 100℃, 더욱 바람직하게는 약 70℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 약 2 내지 약 14시간, 구체적으로는 8시간 내지 14시간, 더욱 구체적으로는 11시간 내지 13시간, 가장 구체적으로는 12시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 후발효차 추출물은 상기와 같이 후발효차의 조추출물을 포함할 수 있고, 상기 조추출물을 극성이 낮은 유기 용매로 더욱 추출하여 얻어진 유기 용매의 가용성 분획물로서 포함할 수도 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 건조하여 건조물의 형태로서 사용할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 건조는 증발 건조, 분무 건조, 동결 건조일 수 있으며, 구체적으로 동결 건조시에는 -50 내지 -70℃ 에서 3~4일 동안 동결 건조를 수행할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1~1g, 구체적으로는 1~500 ㎎, 더욱 구체적으로는 100mg~500mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 100 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물은, 예를 들어, 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 건강기능성 식품류일 수 있다.
상기 외에 본 발명의 일 측면인 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 기능성 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
이하, 하기의 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되지 않는다.
[실시예 1] 후발효차 열수 추출물의 제조
(1) 후발효차의 제조
진동 배양기에서 72시간 동안 30℃에서 배양한 바실러스 서브틸리스 (Bacillus Subtilis)를 회수하여 1차로 원심분리기에서 균주와 활성배지를 분리하였다. 1.0%의 생리 식염수를 이용하여 분리한 균주를 3회 세척해 준 다음, 적절한 미생물 대사를 위하여 발효액(설탕 2.5 중량% 및 과당 2.0 중량%를 정제수와 혼합한 후 120℃, 3기압에서 15분간 고온가압멸균하고 상온에서 25℃까지 냉각시켜 제조)을 공급한다. 상기 세척과정에서 손상을 입은 균주의 원활한 발효 대사를 위해 발효액에 균주를 넣고 인큐베이터에서 24시간 배양하면서 안정화시켰다.
발효액에 발효균주 수가 103∼108 CFU/mL 되도록 균주를 넣은 발효균액을 제조하였다. 멸균된 반응탱크에 소포장 단위 별로 준비한 녹차건조물(녹차 건엽)에 발효균액을 녹차건엽 중량 대비 60 중량%가 되도록 혼합하였다. 또한, 급속한 온도증가로 인해 균주가 손상되는 것을 막고, 녹차엽에 수분이 골고루 흡수되도록 발효균액을 혼합한 후에도 녹차엽을 계속 교반시켰다. 교반을 20분 진행한 후 반응이 완료되고 온도가 떨어진 녹차 발효균액 혼합물을 멸균된 반응탱크에서 항온 발효조로 옮겼다. 그런 뒤 발효조의 입구를 막아 외기의 유입을 막고 50℃에서 발효 공정을 거쳤다. 상기 발효 온도에서는 다른 균주의 생장이 어려워지기 때문에 숙성 기간 중 다른 잡균의 증식을 억제하는 효과를 기대할 수 있다. 발효는 14일간 실시하였으며, 발효 후 후발효차 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 열풍건조 하였다.
상기에서 제조한 후발효차 내 총 균수(Total microbial account)는 102 CFU/g 이하로 규격범위 이내였으며, 병원성 미생물들은 전혀 검출되지 않았다.
(2) 후발효차 주정(에탄올) 추출물의 제조
상기에서 제조한 후발효차 1 kg을 50%(v/v) 에탄올 용액 15 L에 침지하여 70℃에서 3시간 동안 환류(reflux)한 후, 상온에서 12시간 추출하였다. 추출액을 여과하여 진공 상태로 감압농축하고 동결 건조하여 분말 형태의 후발효차 추출물을 제조하였다. 수율은 15~20%이었으며, 조제된 분말은 사용 전까지 4℃에서 보관하였다.
[실시예 2] 후발효차 열수 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 제조한 후발효차 1 kg을 70℃의 열수 15 L에 침지하여 70℃에서 3시간 동안 환류(reflux)한 후, 상온에서 12시간 추출하였다. 추출액을 여과하여 진공 상태로 감압농축하고 동결 건조하여 분말 형태의 후발효차 추출물을 제조하였다. 수율은 15~20%이었으며, 조제된 분말은 사용 전까지 4℃에서 보관하였다.
[비교예 1] 녹차(국산)추출물의 제조
실시예 1의 (2)에서 후발효차를 녹차(국산)로 바꾸어 상기 방법을 동일하게 수행하여 녹차추출물 200g을 수득하였다.
[비교예 2] 녹차(인도산)추출물의 제조
실시예 1의 (2)에서 후발효차를 녹차(인도산)로 바꾸어 상기 방법을 동일하게 수행하여 녹차추출물 200g을 수득하였다.
[비교예 3] 보이차 추출물의 제조
실시예 1의 (2)에서 후발효차를 보이차(중국, 푸얼시)로 바꾸어 상기 방법을 동일하게 수행하여 녹차추출물 200g을 수득하였다.
[실험예 1] 후발효차 주정 추출물과 녹차 추출물의 카테킨 조성 비교 분석
녹차추출물과 후발효차 추출물의 카테킨 조성 비교를 위하여 각 샘플을 Alliance사의 WATERS 2695 HPLC로 ODS(C18) 컬럼을 이용하여 분석하였다. 분석 항목은 카테킨 8종, 카페인 및 갈레이트 총 10종을 분석하였고, 에피카테킨 총량은 카테킨 중 에피카테킨의 함량의 총합으로 계산하였다.
도 1에서 보이는 바와 같이, 후발효차 추출물은 녹차 추출물과 비교하여 카테킨의 조성비가 상이하다는 점을 확인할 수 있었다. 도 1에 기재되어 있는 약자는 다음와 같다: GC: 갈로카테킨(gallocatechin), EGC: 에피갈로카테킨(epigallocatechin), C: 카테킨(catechin), CAF: 카페인(caffeine), EC: 에피카테킨(epicatechin), EGCG: 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate), GCG: 갈로카테킨 갈레이트(gallocatechin gallate), ECG: 에피카테킨 갈레이트(epicatehin gallate).
[실험예 2] 후발효차 추출물 등의 갈레이트 함량 및 편차의 분석
일반적으로 녹차에 함유된 효능성분 (카테킨, 갈레이트 등) 은 토양, 품종, 기후 등 녹차의 재배환경에 따라 큰 편차를 보이며, 보이차와 같은 후발효차 역시 제조에 사용되는 균주에 따라 심한 편차를 보인다 (Karori et al., 2007, Cheh et al., 2003, Fernandez et al., 2002, Muthumani et al., 2007). 이는 같은 양의 차를 마셨더라도 효능성분의 양이 다르기 때문에 사람에 따라, 심지어는 같은 사람이어도 다른 생리활성을 보이는 원인이 된다. 따라서, 녹차 및 발효차를 산업적으로 사용하려면, 녹차 소스에 따른 효능성분의 함량 차이를 최소화하여 추출할 수 있는 공정이 개발되어야 한다. 본 명세서에서는 여타 발효차의 제조와는 달리 균주 사용 및 발효기간, 추출공정을 표준화하여 후발효차에 함유된 효능 성분의 함량을 균일하게 유지하면서 이러한 후발효차 추출물을 지속적으로 생성할 수 있는 방법을 확립하였다.
실시예 1 및 2와 비교예 1 내지 3의 추출물에 함유된 효능성분과 그 함량 편차를 확인하기 위하여 각 샘플을 얼라이언스(Alliance)사의 WATERS 2695 HPLC로 분석하였으며, ODS(C18) 컬럼을 이용하여 분석하였다. 이러한 분석 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 하기 기재된 갈레이트의 단위는 중량 대비 %(w/w)이다.
표 1
갈레이트 비교예1 비교예2 비교예3 실시예2 실시예1
1차 분석 0.06 0.01 1.23 0.46 1.04
2차 분석 0.10 0.04 2.66 0.51 0.93
3차 분석 0.02 0.02 0.57 0.50 1.06
평균/편차 0.06±0.04 0.02±0.02 1.49±1.07 0.49±0.03 1.01±0.07
상기 표 1에 따르면 본 발명의 일 측면에 따른 후발효차 추출물은 녹차 및 발효차와 달리 추출물 내 갈레이트 함량 편차가 적으며, 갈레이트 함량은 열수에 비해 주정추출물에서 더 높은 것으로 나타났다. 또한, 후발효차 열수추출물 및 주정추출물의 갈레이트 함량을 비교해보면, 갈레이트는 후발효차주정추출물에 약 2배 가량 들어있는 것을 볼 수 있다.
이러한 결과로부터 본 발명의 일 측면에 따른 후발효차 추출물은 다른 추출물들에 비하여 적은 편차의 갈레이트 함량을 함유하고 있으며 이에 따라 예측되는 범위의 유효성분을 포함하는 후발효차 추출물을 제공하는 것이 가능하다.
[실험예 3] 발효 온도에 따른 카테킨 조성의 분석 및 발효 가능 여부 판단
발효 온도에 따른 카테킨 조성과 각 온도에 따라서 발효가 실질적으로 수행될 수 있는지 여부를 알아보기 위하여 효능성분의 분석을 수행하였다.
먼저, 실시예 1의 후발효차 제조 과정에 있어서 발효 과정의 온도를 40℃, 45℃, 50℃, 55℃, 60℃, 및 65℃로 하여 후발효차를 제조한 뒤 이를 추출하여 각 온도에 따른 후발효차 주정 추출물을 수득하였다. 이렇게 수득한 후발효차 주정 추출물들과 비교예 1의 녹차추출물의 각 샘플에 대하여 실험예 1과 동일하게 Alliance사의 WATERS 2695 HPLC로 ODS(C18) 컬럼을 이용하여 효능성분의 함량을 분석하였다. 이러한 분석 결과는 아래 표 2과 같다. 하기 표에서 각 성분의 함량은 중량대비 %(w/w)이다.
표 2
발효 온도 카테킨 에피카테킨 카페인 갈레이트
비교예 1(미발효 건조녹차 추출물) 21.74 21.22 3.47 0.06
40℃(후발효차 추출물) 9.13 7.46 3.72 0.98
45℃(후발효차 추출물) 8.68 6.53 3.77 1.00
50℃(후발효차 추출물) 8.27 4.78 3.70 1.01
55℃(후발효차 추출물) 9.95 9.17 3.68 0.71
60℃(후발효차 추출물) 13.12 11.22 3.74 0.64
65℃(후발효차 추출물) 16.16 14.38 3.56 0.48
상기 표 2의 결과에 따르면, 비교예 1과 본 발명의 후발효차 주정 추출물은 효능성분의 함량이 현저하게 차이가 있는 것을 확인할 수 있다. 더불어, 발효 온도가 40℃ 내지 50℃인 경우에는 효능성분으로서 카테킨, 카페인, 및 갈레이트의 함량이 거의 유사한 것을 확인할 수 있었다. 55℃ 부터는 카테킨과 에피카테킨의 함량이 점점 상승하고 갈레이트의 함량이 점점 줄어드는 것으로 보아 발효가 상대적으로 원활하게 수행되지 않음을 확인할 수 있었다. 다만, 이렇게 발효가 원활하게 수행되지 않는 경우라 하더라도 후발효차 주정 추출물의 효능성분(갈레이트 등)의 함량은 비교예 1에 비하여 현저하게 다른 것을 확인할 수 있었다.
특히, 후발효차 추출물의 지표성분인 갈레이트의 함량을 비교하면 40℃ 내지 50℃에서 발효시켰을 때에는 비교예 1에 비하여 약 17배의 함량을 포함하고 있었으며 갈레이트의 함량이 가장 적었던 65℃에서 발효시킨 경우에도 8배나 높은 갈레이트 함량을 가지는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 후발효차의 제조에 있어서 바실러스 서브틸리스로 40℃ 내지 65℃의 온도에서 발효를 수행하여도 발효되지 않은 녹차 추출물인 비교예 1과 효능성분의 함량이 전혀 상이한 후발효차 추출물을 수득할 수 있다.
[실험예 4] 지방전구세포에서 지방세포 분화 평가
후발효차 추출물이 지방세포 분화에 미치는 영향을 관찰하기 위하여, 아래와 같은 실험을 수행하였다.
지방전구세포 (3T3-L1) 는 미국 ATCC사로부터 수입하여, 송아지 세럼(BCS; Bovine Calf Serum)을 10% 함유한 세포배양 배지(론자)를 이용하여 37oC, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 세포 분화를 위하여 먼저 지방전구세포를 가득차게 배양한 후, 태어나지 않은 송아지 세럼 (FBS; Fetal Bovine Serum)을 10% 함유한 세포배양 배지에 인슐린 10μg/ml, 덱사메타손 (dexamethasone) 0.39μg/ml, 이소부틸메틸잔틴 (isobutylmethylxantine) 115μg/ml을 섞은 후 37oC, 5% CO2 배양기에서 48시간동안 배양한다. 이후 인슐린 10mg/ml이 첨가된 FBS 배지를 이틀에 한번씩 갈아주면서 2주간 배양하면 분화된 지방세포를 얻을 수 있다. 분화된 지방세포는 지방전구세포와 달리 둥근 모양을 가지며, 세포 내부에 여러개의 지방구 (lipid droplet)를 가지고 있다.
후발효차 추출물의 항비만 효능을 알아보기 위하여, 지방세포분화 초기 48시간동안 실시예 1의 후발효차 주정 추출물 100μg/ml 처리하였다. 양성 대조군으로는 분화를 촉진시키는 것으로 알려진 로지글리타존 (rosiglitazone, 1μM)을, 음성 대조군으로는 분화를 억제시키는 것으로 알려진 베르베린 (berberine, 10μM)을 사용하였다. 또한, 녹차추출물과의 효능 비교를 위하여 지방세포분화기간 동안 동량의 녹차추출물 (100μg/ml)을 처리하였다.
지방세포의 분화 정도는 오일-레드 오 (Oil-red O) 염색법을 통하여 알아낼 수 있다. 분화된 지방세포를 10% 포름알데히드 용액을 이용하여 고정한 후, 오일-레드 오 수용액을 고정된 세포에 처리하면 중성지방 특이적으로 붉게 염색이 된다. 이를 현미경으로 관찰하면 지방세포의 분화 정도를 알 수 있다. 또한, 이렇게 염색된 오일-레드 오 용액은 이소프로판올을 이용하여 추출할 수 있는데, 이렇게 추출된 용액을 510nm 파장에서 흡광도를 측정하면 축적된 지방의 양을 정량할 수 있다.
도 2에서 보이는 바와 같이, 후발효차 추출물은 지방세포의 분화를 억제하여 중성지방의 축적을 억제하며, 이를 정량한 결과는 도 3에 나타내었다. 흥미롭게도, 후발효차 추출물의 흡광도는 26%로, 녹차추출물의 흡광도는 58%로 나타났으며 후발효차 추출물은 동량의 녹차추출물에 비해 지방분화 억제효능이 대략 2.2배 정도 더 뛰어난 것으로 나타났다.
[실험예 5] 지방세포에서 지방 대사 관련 유전자들의 변화
실험예 4에 기술된 방법으로 지방세포 분화를 유도하였다. 분화가 완료된 지방세포에 실시예 1의 후발효차 주정 추출물 100μg/ml을 24시간 처리하였다. 실험예 1과 마찬가지로 동량의 녹차추출물(100μg/ml)을 처리하여 그 효능을 비교하였으며, 양성대조군과 음성대조군으로 각각 로지글리타존 (1μM)과 베르베린 (10μM)을 사용하였다.
물질 처리 후 트리졸™ (Trizol™; 인비트로젠) 을 이용하여 RNA를 추출하고, 5μg씩의 RNA를 역전사효소키트(Reverse Transcription Kit; 퍼멘타스)를 이용하여 상보DNA로 합성하였다. 이 상보DNA를 리얼타임 PCR을 통하여 지방산 합성 (도 4) 및 지방산 산화 (도 5)에 관련된 유전자들의 발현 양상을 관찰하였다.
도 4에 보이는 바와 같이, 후발효차 추출물은 SREBP1c, ACC, FAS, SCD1 등의 지방산 합성에 관련된 유전자들의 발현을 억제하는 반면, ACO, CPT, mCAD 등의 지방산 산화에 관련된 유전자들의 발현을 증가시켰다 (도 5). 또한, 동량의 녹차추출물과의 효능 비교 결과, 후발효차 추출물에 의한 지방 대사 관련 유전자들의 발현 변화가 더 크게 나타났다.
[실험예 6] 지방세포에서 지방 대사 변화
실험예 4와 마찬가지로 지방세포분화를 유도한 후, 지방산 산화를 측정하기 위하여 실시예 1의 후발효차 주정 추출물 및 녹차추출물을 각각 100μg/ml씩 24시간동안 처리하였다. 양성 대조군으로 카르니틴 20μM을 사용하였다.
지방산 산화 정도는 지방산 산화 측정 키트(ABCAM)를 이용하여 측정하고 정량하였다 (도 6). 도 5에서 보였던 결과와 유사하게, 후발효차 추출물은 지방세포내 지방산 산화를 촉진하였으며, 그 정도는 녹차추출물에 비해 20% 이상 우수한 것으로 나타났다.
[실험예 7] 후발효차 추출물을 섭취한 생쥐의 체중 변화
후발효차 추출물의 항비만 효능을 알아보기 위하여, 7주령 수컷 C57-BL/6 생쥐(중앙실험동물)을 주문하여 4개 군으로 나누었다. 제 1군은 일반 식이군으로 하고, 나머지 군(2-4군)은 45% 고지방식이사료(high fat diet, HFD)(리서치 다이어트)섭취군으로 하였다. 3군에는 실시예 1의 후발효차 주정 추출물을 물에 녹여 500mg/kg/day의 용량으로 8주간 경구투여하였고, 4군에는 녹차추출물을 역시 물에 녹여서 8주간 500mg/kg씩 경구투여하였다. 물질의 경구투여에 의한 스트레스로 인해 발생하는 차이점을 상쇄하기 위하여, 1군과 2군에는 3군/4군의 물질 투여에 사용된 양과 동일한 양의 물을 역시 경구투여로 주입하였다.
각 군별 C57-BL/6 생쥐는 9마리씩 사용하였다. 정확한 사료섭취량 측정 및 장내미생물 분석을 위하여 모든 쥐는 개별 우리에 넣어 실험을 진행하였고, 8주간의 투여기간 동안 1주일 단위로 식이섭취량 및 체중을 측정하였다.
일반적으로 고지방식이 섭취군은 일반사료 섭취군에 비해 식이섭취량이 감소한다. 이름 감안했을 때 후발효차 주정 추출물(3군) 또는 녹차추출물을 투여한 군(4군)의 사료섭취량은 고지방식이섭취군(2군)과 차이가 없었다 (도 7).
실험기간 동안의 체중 변화는 도 8에 나타내었다. 일반사료 섭취군(1군)에서 평균 6g의 체중 증가를 보인 반면, 고지방식이 섭취군(2군)은 두배 가량의 체중 증가(평균 12g 증가)를 보였다. 녹차추출물(4군)의 경우 고지방식이군보다는 적은 체중증가를 보였으나 (평균 9g 증가) 일반사료 섭취군(1군)에 비해서는 높은 체중증가를 기록한 반면, 놀랍게도 후발효차 추출물(3군)은 일반사료 섭취군(1군)보다도 적은 평균 4g의 체중 증가율을 보여주었다. 이것으로 보아, 후발효차 추출물은 효율적으로 체중 증가를 억제할 수 있으며, 억제 정도는 녹차추출물에 비해 훨씬 우수하다고 할 수 있다.
[실험예 8] 후발효차 추출물을 섭취한 생쥐의 내당성 향상
고지방식이 섭취를 계속 하는 경우, 축적된 지방에 의해 인슐린 저항성이 나타나고, 이는 내당능장애와 제 2형 당뇨병의 원인이 된다. 따라서, 2형 당뇨병을 포함하는 대사성 질환을 예방하기 위해서는 내당능을 개선시는 것이 도움이 될 수 있다.
실험예 7에서 실험한 생쥐를 대상으로 6시간 동안 공복을 유도한 후, 5% 포도당 수용액을 투여하고 내당능 테스트를 실시하였다. 포도당 수용액 투여 직전에 채혈을 해서 혈당을 체크하고 (t=0), 이후 15분, 30분, 60분, 120분이 경과된 후 다시 혈당을 측정하여 군별 평균을 내어 그래프로 나타내었다 (도 9). 또한, 내당능 테스트 그래프의 면적을 계산하여 (AUC; Area under Curve) 도 10에 나타내었다.
고지방식이에 의해 내당능장애가 나타나면 공복혈당이 높아지고, 포도당수용액 섭취에 의해 혈당이 급격히 상승하며, 정상 범위의 혈당으로 내려오기까지의 시간이 길어진다 (도 9의 2군). 반면 후발효차 주정 추출물 및 녹차추출물 섭취군(3군, 4군)에서는 정상군 (1군) 수준의 내당능을 보이는 것을 알 수 있다. 도 10의 AUC를 토대로 후발효차 추출물과 녹차추출물의 내당능 개선효과를 비교해보면, 두 물질의 내당능 개선효과는 유사할 것으로 생각된다.
실험 결과, 후발효차 추출물은 내당능을 개선시켜 비만뿐 아니라 이로 인해 발생하는 제 2형 당뇨병 등의 대사성 질환 예방 및 치료에도 도움을 줄 것으로 기대된다.
[실험예 9] 후발효차 추출물을 섭취한 생쥐의 지방무게 및 유전자 발현 변화
실험예 7에 사용된 생쥐를 12시간 동안 공복상태 유지 후 부검하여 부고환지방을 추출하여 지방조직의 무게를 측정하였다 (도 11). 체중 변화와 마찬가지로, 고지방식이 섭취군(2군)에서의 지방조직 무게 증가가 두드러지게 나타났는데, 그 차이는 일반식이군(1군)의 3배에 달했다. 반면, 후발효차 주정 추출물 투여군(3군)의 지방 무게는 고지방식이 섭취군(2군)의 절반 수준인 630mg으로 나타났으며, 녹차추출물의 경우 (4군) 지방 무게는 후발효차 추출물 투여군(3군)보다는 다소 높은 평균 970mg 정도로 나타났다. 실험 결과를 통해 결과를 추론하면, 후발효차 추출물에 의한 지방 축적 억제 효과는 녹차추출물보다 더 뛰어난 것으로 보인다.
실험예 3과 마찬가지로, 각 생쥐의 부고환지방에서 RNA를 추출하고 이를 바탕으로 cDNA를 합성하였다. 지방조직내 지방대사 관련 유전자들(도 12)과 염증 관련 유전자들(도 13)의 발현 양상을 측정하여 도 12 및 도 13에 나타내었다. 실험 결과, 고지방식이섭취군(2군)에서 지방산 합성 및 염증 반응에 관련된 유전자들의 발현이 통계적으로 유의하게 증가하였으며, 후발효차 주정 추출물을 투여한 실험군(3군)에서는 반대로 이들 유전자들의 발현이 일반식이군(1군) 수준으로 회복된 것으로 나타났다. 녹차추출물(4군)의 경우 유전자 발현 양상이 고지방식이군보다는 일반식이군에 가까운 경향을 보이나, 통계적으로 유의한 결과가 나오지는 않았다.
지방무게 감소 및 지방조직 내 지방산 합성 감소, 그리고 염증인자 발현 감소 데이터를 종합해보면, 후발효차 추출물은 다양한 기전을 통하여 비만의 치료, 개선, 또는 예방과 그로 인한 슬리밍에 도움을 줄 것으로 생각된다.
[실험예 10] 후발효차 추출물을 섭취한 생쥐의 장내미생물 변화
실험예 7에서 사용한 생쥐를 대상으로 장내미생물 변화를 분석하였으며, 각 생쥐의 변을 수집하여 장내미생물을 분석하였다. 변샘플 DNA 추출 키트(퀴아젠)을 사용하여 미생물의 DNA를 분리하고, 분리한 DNA는 장에 서식하는 미생물들의 고유 DNA 시퀀스(16S rDNA)에 상보적인 프라이머를 이용하여 주요 장내미생물의 분포를 측정하였다.
도 14에서 보이는 바와 같이, 일반 생쥐는 후벽균과 의간균 비율이 50:50 정로도 유사하게 나타나 있다. 그러나 고지방식이를 섭취하게 되면 후벽균의 비율이 55% 정도로 늘어나게 되고 의간균의 비율은 45% 수준으로 감소하게 되는데 (2군), 후발효차 주정 추출물 투여군(3군)에서는 오히려 의간균의 비율이 54%로 우점하고 있음을 보여주고 있다. 이것으로 보아, 후발효차 추출물 투여군의 장내미생물 분포는 “마른 체질”에 가까워져 있음을 알 수 있다. 또한 녹차추출물 투여군(4군)의 후벽균:의간균 분포가 일반식이군 수준(50:50)에 머물러 있다는 점을 고려하였을 때, 후발효차의 장내미생물균총 변화 유도 효능이 녹차추출물에 비해 뛰어나다고 볼 수 있다.
또한 도 15에서 보이는 바와 같이, 일반 생쥐는 의간균 중에서도 박테로이데스(Baceroides)와 프레보텔라(Prevotella)의 비율 약 52:48을 나타내고 있다(1군). 그러나 고지방식이를 섭취하게 되면 박테로이데스의 비율이 64% 정도로 증가하게 되고 프레보텔라의 비율은 36%로 감소하게 된다(2군). 반면 후발효차 주정 추출물 투여군(3군)에서는 박테로이데스와 프레보텔라의 비율이 일반식이군(1군)과 비슷하게 56:44로 되돌아 오는 것을 확인할 수 있었으며, 녹차추출물 투여군(4군)의 경우 54.4:45.5의 비율인 것을 확인하였다. 따라서 의간균 내에서 박테로이데스와 프레보텔라의 비율에 대해서는 후발효차 추출물과 녹차추출물 모두 “마른 체질(박테로이데스와 프레보텔라의 비율이 52.5:47.4)”과 비슷하거나 일반식이군의 비율과 유사하게 유지하는 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 11] 열수 추출물과 주정 추출물을 섭취한 생쥐의 체중 변화
후발효차 추출물의 갈레이트 함량에 따른 항비만 효능 차이를 알아보기 위하여 추가 실험을 수행하였다.
7주령 수컷 C57-BL/6 생쥐 (중앙실험동물)을 주문하여 5개 군(n=8)으로 나누었다. 제 1군은 일반 식이를 공급하였으며, 나머지 군(2-5군)은 60% 고지방 식이사료(리서치 다이어트)를 공급하였다. 3군에는 실시예 1의 후발효차 주정추출물을 물에 녹여 8주간 400mg/kg/day의 용량으로 경구 투여하였고, 4군에는 실시예 2의 후발효차 열수추출물을 역시 물에 녹여서 8주간 400mg/kg/day의 용량으로 경구투여하였다. 5군에는 비교예 1의 녹차주정추출물을 물에 녹여 8주간 400mg/kg/day의 용량으로 경구투여하였다.
경구투여에 의한 스트레스를 상쇄하기 위하여 1군과 2군에도 동일한 양의 물을 경구투여로 주입하였다. 실험기간 동안 매주 생쥐의 체중을 측정하였다. 이러한 체중 측정 결과를 도 16에 나타내었다.
도 16에 따르면, 일반사료 섭취군(1군)은 평균 4g 의 체중 증가를 보이는 반면, 60% 고지방식이 섭취군(2군)은 세배 가량의 체중 증가 (평균 15g 증가) 현상을 보였다. 후발효차 추출물은 모두 (3군 및 4군) 고지방식이섭취군(2군)에 비해 현저한 체중 증가 정체 효과를 보였는데, 항비만 효과는 후발효차 열수추출물 (3군, 평균 10g 증가)에 비해 후발효차 주정추출물(4군, 평균 8g 증가)에서 더 높게 나타났다. 한편, 녹차추출물의 항비만 효능은 비교물질 중 가장 낮은 것으로 나타났다 (5군, 평균 12g 증가).
이러한 결과로 미루어 보아, 후발효차 주정추출물의 체중 증가 억제 효능이 후발효차 열수추출물에 비해 더 뛰어나다고 할 수 있으며, 그럼에도 불구하고 후발효차 열수추출물의 항비만 효능이 녹차주정추출물에 비해 뛰어난 것으로 보아 기본적으로 후발효차 추출물의 항비만 효능이 녹차의 그것에 비해 더 우월한 것으로 판단된다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 연질 캡슐
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 9mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 혼합하여 연질 캡슐 충진액을 제조한다. 1 캡슐당 400㎎씩 충진하여 연질 캡슐을 제조한다. 그리고, 상기와 별도로 젤라틴 66 중량부, 글리세린 24 중량부 및 솔비톨액 10 중량부의 비율로 연질 캡슐 시트를 제조하고 상기 충진액을 충진시켜 본 발명에 따른 조성물 400mg이 함유된 연질 캡슐을 제조한다.
[제형예 2] 정제
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 갈락토올리고당 200㎎, 유당 60㎎ 및 맥아당 140㎎을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester) 6㎎을 첨가한다. 이들 조성물 500mg을 통상의 방법으로 타정하여 정제를 제조한다.
[제형예 3] 드링크제
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300㎖를 가하여 각 병에 200㎖씩 되도록 충진한다. 병에 충진한 후 130℃에서 4~5초간 살균하여 드링크제를 제조한다.
[제형예 4] 과립제
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 무수결정 포도당 250㎎ 및 전분 550㎎을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.
[제형예 5] 주사제
하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.
표 3
배합 성분 함량
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 10-50 mg
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
[제형예 6] 건강기능식품
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강기능식품을 제조하였다.
표 4
배합 성분 함량
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 20mg
비타민 A 아세테이트 70μg
비타민 E 1.0mg
비타민 B1 0.13mg
비타민 B2 0.15mg
비타민 B6 0.5mg
비타민 B12 0.2μg
비타민 C 10mg
비오틴 10μg
니코틴산아미드 1.7mg
엽산 50μg
판토텐산 칼슘 0.5mg
황산 제1철 1.75mg
산화아연 0.82mg
탄산마그네슘 25.3mg
제1인산칼륨 15mg
제2인산칼슘 55mg
구연산칼륨 90mg
탄산칼슘 100mg
염화마그네슘 24.8mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
[제형예 7] 건강 음료
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강음료를 제조하였다.
표 5
배합 성분 함량
실시예 1 또는 2의 후발효차 추출물 1000mg
구연산 1000mg
올리고당 100 g
타우린 1g
정제수 잔량
통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.

Claims (15)

  1. 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만, 당뇨병, 또는 염증 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  2. 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만, 당뇨병, 또는 염증 개선 또는 예방용 식품 조성물.
  3. 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 미생물 조절용 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,후발효차 추출물은 녹차, 백차, 우롱차, 홍차, 보이차, 흑차 및 감잎차로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 후발효차 추출물인 것인 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,후발효차 추출물은 조성물의 총 부피를 기준으로 1μg/ml 내지 1g/ml의 농도인 것인 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,후발효차 추출물은 비병원성 미생물을 이용하여 제조된 것인 조성물.
  7. 제6항에 있어서,비병원성 미생물은 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.), 바실러스속(Bacillus sp.) 또는 아스퍼질러스속(Aspergillus sp.)인 조성물.
  8. 제7항에 있어서,비병원성 미생물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)인 조성물.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,조성물은 장내 총 균주에 대한 의간균(Bacteroidetes)의 비율이 50% 내지 60%가 되도록 조절하는 것인 조성물.
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,조성물은 장내 총 균주의 비를 100으로 하였을 때 장내 의간균(Bacteroidetes) : 후벽균(Firmicutes)의 비율이 50:50 내지 60: 40가 되도록 조절하는 것인 조성물.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,후발효차 추출물은 물 또는 C1~C6의 저급 알코올의 추출물인 조성물.
  12. 제11항에 있어서,상기 후발효차 추출물은 후발효차 열수 추출물 또는 후발효차 에탄올 추출물인 조성물.
  13. 제12항에 있어서,상기 후발효차 에탄올 추출물은 후발효차의 40~60% 에탄올 추출물인 조성물.
  14. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,상기 조성물은 하기 특성 중 하나 이상을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물:(1)후발효차 추출물의 총 중량을 기준으로 카테킨의 함량이 20중량% 이하인 특성;(2)후발효차 추출물의 총 중량을 기준으로 에피카테킨 함량이 15중량% 이하인 특성; 및(3) 후발효차 추출물의 총중량을 기준으로 갈레이트 함량이 0.5~1.5±a 중량%이고, 상기 a는 0.01 내지 0.1 사이의 유리수인 특성.
  15. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,후발효차 추출물은 차(tea)에 발효균을 접종하여 발효시키는 단계;발효물인 후발효차를 물 또는 유기용매로 추출하는 단계;를 포함하는 제조 방법에 의해서 제조된 것인 조성물.
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