CN102421299A - 含有发酵茶的血液循环改善用组合物以及含有该组合物的药物组合物和保健食品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种组合物，该组合物含有作为活性成分的后发酵茶提取物，所述后发酵茶提取物是通过将酵母作为发酵菌株接种到绿茶并将接种后的绿茶发酵一定的时间而得到的。该组合物不仅具有良好的偏好性，并且能够降低血清和肝脏的胆固醇和中性脂肪水平，能够通过抑制血管收缩而具有极佳的松弛血管的能力，从而改善血液循。通过这种改善血液循环的功能，这些组合物可以用作有效抵抗中风、心肌梗塞、高血压、高血脂、糖尿病或肥胖症等疾病的保健食品、药品等。

Description

含有发酵茶的血液循环改善用组合物以及含有该组合物的药物组合物和保健食品组合物
技术领域
本发明涉及一种含有发酵茶的血液循环改善用组合物以及含有该组合物的药物组合物和保健食品组合物。
背景技术
绿茶中含有多种维生素、咖啡因、单宁、黄酮类、精油以及类似物(李英珠等人，生药学，东明公司出版，189-190，1981)。通常已知绿茶具有抗糖尿病、抗肥胖、抗氧化、抗高血压、抗菌、降血脂和抗溃疡作用，因此常用作饮用茶。
这些绿茶主要分为未发酵茶和发酵茶，而且发酵茶根据发酵的程度细分为轻微发酵茶、半发酵茶、后发酵茶等。
后发酵茶的典型实例包括以中国普洱地区命名的普洱茶。普洱茶是从阔叶茶树得到的后发酵茶，是破坏绿茶叶中的酶之后，渥堆茶叶而诱导空气中微生物繁殖，从而再次发生发酵而制作的茶。
已知这样的普洱茶降低血压，减少脂质水平和防止动脉硬化。然而，由于需要从圆块分离茶叶，因此不方便取用。同时，由于其通过空气中的细菌发酵，因此闻起来会有霉味或异味，还可能含有病原微生物。此外，初尝可能会有很强的苦涩味，因此降低人们对它的偏好性。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种便于取用、偏好性佳且使血液循环顺畅的含有发酵茶提取物的血液循环改善用组合物。
本发明的另一个目的是提供一种含有上述发酵茶提取物的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供一种含有上述发酵茶提取物的保健食品组合物。
为了达到上述目的，本发明提供一种血液循环改善用组合物，该组合物含有通过将酵母作为发酵菌株接种到绿茶而得到的发酵茶提取物作为活性成分。
本发明还提供了一种含有上述发酵茶提取物作为活性成分的药物组合物。
本发明还提供了一种含有上述发酵茶提取物作为活性成分的保健食品组合物。
根据本发明的含有发酵茶提取物的血液循环改善用组合物以及含有该组合物的药物组合物和保健食品组合物，使用酵母作为发酵菌株而制备，因此这些组合物具有良好的偏好性，还能够降低血清和肝脏的胆固醇和中性脂肪水平，抑制血管收缩而具有极佳的血管松弛功能，从而改善血液循环。通过上述血液循环改善功能，这些组合物可以用作有效抵抗中风、心肌梗塞、高血压、高血脂、糖尿病或肥胖症等疾病的保健食品、药物等。
附图说明
图1是用绿茶、普洱茶、后发酵茶和维生素C进行处理时，相对于不含实验样品的对照组的自由基含量的图表。
具体实施方式
根据本发明的一个实施方式的组合物，该组合物含有通过向绿茶中接种酵母并且将接种后的绿茶发酵预定的时间得到发酵茶提取物。用于本发明的酵母的例子包括卡尔斯伯酵母(Saccharomyces Carsbergensis)、清酒酵母(Saccharomyces Sake)、葡萄酒酵母(Saccharomyces Ellipsoideus)、朝鲜糖酵母(Saccharomyces Coreanus)和啤酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae)。根据本发明的一个实施方式的组合物可含有使用至少一种上述酵母作为发酵菌株得到的发酵茶提取物。这种发酵茶例如可以为后发酵茶。
使用酵母作为发酵菌株的发酵工艺在15-30℃的温度下进行24小时至28天。然后，用70％的乙醇将上述方法发酵的绿茶回流提取12小时，从而得到发酵茶提取物。
以组合物的总重量为基准，本发明的组合物含有0.1-50重量％的通过上述方法制得的发酵茶提取物。如果组合物中发酵茶提取物的含量小于0.1重量％，将不能显示出改善血液循环的效果；如果组合物中发酵茶提取物的含量大于50重量％，含量的增加并不能导致它的效果进一步增加。
上面描述的发酵茶提取物具有极佳的改善血液循环的效果，并且含有这种发酵茶提取物的组合物可以通过改善血液循环而用作预防或治疗中风、心肌梗塞、高血压、高血脂、糖尿病或肥胖症的药物组合物。可以将本发明的组合物配制成丸剂、胶囊、片剂、颗粒、饮剂
Figure BDA0000107570470000031
)等。配制剂型时可以使用使用稀释剂或赋形剂如填充剂、增补剂、粘结剂、湿润剂、崩解剂或表面活性剂。所述赋形剂可以使用淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖或明胶，并且除简单的赋形剂之外，所述制剂中还可以含有如硬脂酸镁或滑石粉等的润滑剂。
药物组合物的配药单位
Figure BDA0000107570470000032
可能包括一倍、两倍、三倍、四倍个人剂量
Figure BDA0000107570470000033
的量，或者1/2、1/3或1/4倍个人剂量的量。优选，个人剂量含有一次给药的活性药物的量，并且通常相当于一天给药的总量，或者1/2、1/3或1/4倍的量，但是没有限制。
发酵茶提取物的人的剂量根据活性成分的体内吸收率、失活率和排泄速度、病人的年龄、性别和状态，以及疾病的严重程度可以适当的选择。成年人的剂量可以为10-300mg/kg，优选20-100mg/kg，并且可以一天给药1-6次，但是没有限制。
根据本发明的一个实施方式的组合物，也可能配制成丸剂、胶囊、片剂、颗粒或饮剂等剂型，用作预防或改善中风、心肌梗塞、高血压、高血脂、糖尿病或肥胖症的保健食品组合物。
可以将本发明的发酵茶提取物添加到保健食品中。如果将本发明的发酵茶提取物用作食品添加剂，它可以单独添加，或可以与其他食品或食品添加剂联合使用，或根据其他传统方法可以适当的使用。活性成分的量可以根据使用目的(预防、保健或治疗处理)适当地决定。通常，制造为混合有发酵茶提取物的食品或饮料时，优选，基于食品或饮料的总重量，发酵茶提取物含量为0.1-50重量％。然而，当用于保健和预防为目的或调节健康为目的而长期摄取时，发酵茶提取物的量可以小于上述范围的下限。此外，即使发酵茶提取物的用量大于上述范围的上限，也不会引起安全方面的问题。
对于所述保健食品组合物的种类没有特别的限制。能够添加所述发酵茶提取物的食品的例子包括乳制品、各种汤类、饮料、茶、饮品、酒精饮料和多种维生素制剂，例如肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、零食、饼干、面条、口香糖、冰激凌。可以包括传统意义上的所有保健食品，并不限制于此。
根据本发明的一个实施方式的组合物含有上述发酵茶提取物作为活性成分，所述发酵茶提取物能够降低血液和肝脏中的脂质水平，并且抑制血管收缩以诱导血管松弛，从而改善血液循环。
以下将结合实施例对本发明进一步详细描述。然而，这些实施例仅用于说明目的，并不用于限制本发明的范围。
实施例1后发酵茶的制备
收集在摇床培养器中，在20-40℃下，培养72小时的啤酒酵母菌株，用离心机分离菌株和活性培养基
Figure BDA0000107570470000051
菌株用0.8-1.0％生理盐水洗涤2-4次，然后除了绿茶之外，为了微生物的适当的新陈代谢，还提供由水和能量源的混合物组成的发酵培养基。基于发酵培养基的总重量，通过混合0.05-10.0重量％的蔗糖和0.005-10.0重量％的果糖，将混合物在27psi(磅/平方英寸)的压力和120℃的温度下，进行高温加压灭菌15分钟，冷却到室温(大约25℃)，然后加入0.005-1.0重量％的黄豆粉，来制备出所述发酵培养基。
并且，为了在洗涤过程中受损的菌株能够顺利进行新陈代谢，在添加黄豆粉之前的发酵培养基100-500ml中混合用盐水洗涤2-4次的菌株，并在细菌培养器中培养24小时，从而在发酵培养基中稳定菌株。
将在不含黄豆粉的发酵培养基中稳定的菌株与含有黄豆粉蛋白质的发酵培养基混合，以制备发酵菌液。在已消毒的反应槽中，将细菌、发酵培养基混合物加入到以单独小包装单位制成的绿茶基质中，使混合物中的发酵菌株的数量为103-108CFU/ml。以干燥的绿茶叶重量为基准，混合30-60重量％的发酵培养基，并且即便在混合发酵菌液之后也继续搅拌茶叶，以防止茶叶内部的温度急剧上升，从而防止温度快速增加而损害菌株。5-30分钟后，反应完成，将温度下降的绿茶/发酵菌液，在关闭槽的入口以防止室外空气流入的状态下，在20-70℃温度的恒温槽中进行发酵。如果发酵温度高于40℃，除了杆菌之外的菌株的生长将很困难，因此能抑制其他各种细菌在发酵期间的增殖。发酵进行最短24小时至最长28天，在80-120℃下，将发酵产物热风干燥5小时。
通过上述方法制备的后发酵茶中，总菌数为102-108CFU/g或更少，在标准范围内，并且没有检测到病原微生物。
实施例2后发酵茶提取物的制备
实施例1中制备的1kg的后发酵茶浸泡在5升70％乙醇溶液中，在80℃回流3小时后，在常温下提取12小时。提取物过滤、减压浓缩并冷冻干燥，从而制备粉末样品。粉末样品的收率为15-20％，将所制得的粉末在低温下储藏，直至使用。
试验例1后发酵茶的感官评价
取绿茶、普洱茶和后发酵茶各2g，在100毫升75℃(±1℃)的热水中提取2分钟，通过10人的专家小组进行感官评价。将包括水的颜色(色度、浊度)、香味(草香、可口的香味、腐臭)以及口感(烧焦味、涩味、苦味、甘味)的总体的偏好程度以9分为标准进行评价，评价的结果如下表1所示。
表1
Figure BDA0000107570470000061
(非常好：9，好：7，普通：5，差：3，非常差：1)
从上面表1可以看出，后发酵茶的味道(香味)和气味(香气)的分数明显高于绿茶或普洱茶的分数。并且总体偏好程度比绿茶高1.6分，比普洱茶高2.8分。这表明根据本发明的一个实施方式的后发酵茶的味道和气味与那些传统绿茶相比得到显著的改善，并且优于目前普遍用作后发酵茶的普洱茶。
试验例2后发酵茶的自由基消除能力的测定
将本身具有自由基形态的100M的DPPH(二苯基苦基苯肼，DiphenylPicryl Hydrazile)溶解在99％乙醇中，以制备自由基溶液。将实施例2中制备的试样发酵茶按不同浓度溶解在蒸馏水中，以制备含有自由基溶液和试样的反应溶液。
作为空白组，使用不含试样的反应溶液，进行同样的实验过程。反应溶液在37℃下，充分反应30分钟，然后在515nm测量吸光度，从而测定自由基的消除。使用绿茶提取物和普洱茶提取物作为对照组，并且使用维生素C作为阳性对照组。以空白组为100，结果如图1所示。
从图1可以看出，本发明的后发酵茶提取物按照浓度依赖方式消除自由基。本发明的后发酵茶提取物消除自由基的效果与阳性对照组维生素C相似，且相比对照组绿茶提取物高大约10％，相比对照组普洱茶提取物高20-40％。这表明根据本发明的一个实施方式的后发酵茶提取物具有极好的抗氧化效果。
试验例3使用血管环观察抑制血管收缩作用
从Biolink(韩国首尔)提供的250-300g的实验雄性白鼠(SD鼠，Sprague-Dawley rats)，在饲养室保持22±2℃的温度和45-55％的湿度，以上午7点和下午7点为基准，使昼夜周期分别为12小时。用于实验之前，饲料(韩国普瑞纳，韩国首尔)和水不限量供给，让动物适应环境一个星期。
使白鼠失血致死后，打开胸部，迅速取出胸主动脉并立即转移到用95％O2/5％ CO2混合气体饱和的KR缓冲液(组成(mM)；NaCl 115.5，KCl 4.6，KH2PO4 1.2，MgSO4 1.2，CaCl2 2.5，NaHCO3 25.0，乙底酸钙二钠(disodium.Ca2+EDTA)0.026mM，葡萄糖11.1，pH 7.4)。去除血管中的血和周围的脂肪以及结缔组织，从而制作3-4mm长的血管环。初始30分钟逐步向血管环施加张力并达到平衡状态，之后用10-6M的苯肾上腺素收缩，然后通过添加10-6M的乙酰胆碱使其松弛时，选用松弛率达到80％以上的血管环。水浴中的缓冲剂用由95％ O2/5％ CO2的混合气体饱和的90mM的含KCl的KR(Krebs Ringer)缓冲液替代，以诱导血管收缩，将其作为最大收缩。用试验材料预先处理血管30分钟，然后在水浴中逐渐增加高浓度的诱导收缩的苯肾上腺素，观察剂量-收缩反应曲线的结果。血管收缩性以通过90mM KCl诱导的血管收缩为100％，结果如下表2所示。
表2
Figure BDA0000107570470000081
从上面表2可以看出，随着收缩诱导剂苯肾上腺素的处理浓度的增加，血管的收缩性增加。后发酵茶提取物相比对照组绿茶提取物，根据苯肾上腺素的浓度显示出高出1.5-2倍的血管收缩抑制效果。因此，可以观察到根据本发明的一个实施方式的后发酵茶提取物，在血管收缩抑制上具有非常出色的效果。
试验例4动物模型中血清和肝脏中脂质水平的下降
将250-300g的8周大的雌鼠，按每笼8只，封装在聚碳酸酯笼中，维持22±2℃恒温和55±15％相对湿度，循环12小时光/12小时暗。供给正常饲料和高胆固醇饲料，并自由饮水。诱发高血脂的高胆固醇饲料具有如下表3所示的成份。
表3
  成份   含量(％)
  蔗糖   65.0
  不含维生素的酪蛋白   15.0
  AIN-76无机混合物   3.5
  AIN-76维生素混合物   1.0
  玉米油   2.0
  猪油   8.0
  胆固醇   1.0
  胆酸   0.5
  α细胞(Alpha cell)   4.0
  总计   100.0
将测试动物分成四组：正常组、空白组、阳性对照组和给药组。正常组仅供给普通饲料，空白组在正常饲料中添加1％胆固醇和0.5％胆酸以诱发高血脂，给阳性对照组服用用作高血脂症治疗剂的的非诺贝酸(fenofibric acid)(200mg/kg)，其中，非诺贝酸用1％甲基纤维素(MC)混悬并口服给药。此外，给药组每天连同诱导高血脂的饲料，口服给药后发酵茶提取物和绿茶提取物，其中，后发酵茶提取物和绿茶提取物(200mg/kg)一天一次连续四周给药。每组的鼠禁食12小时后，从眼眶的血管取得血样，并在10000离心力(rcf)离心分离10分钟。用所得血清评价血液中总胆固醇、LDL胆固醇和HDL-胆固醇水平。收集鼠的肝脏用于评价肝脏胆固醇和中性脂肪水平。使用自动血液分析器和瑞士罗氏(Roche)诊断试剂盒进行上述分析，分析结果如下表4(血清脂质)和表5(肝脏脂质)所示。
表4
血清脂质
Figure BDA0000107570470000101
从上面表4可以看出，摄取高胆固醇饲料4周的鼠中，空白组相比正常组，血清总胆固醇增加约2倍，LDL-胆固醇水平增加约4.4倍，而HDL-胆固醇水平减少。这些结果表明通过诱导高血脂饲料顺利地诱发了高血脂症。给药组同时服用后发酵茶和诱导高血脂饲料之后，总胆固醇水平为136.25mg/dl，比对照组减少了约38％，LDL-胆固醇水平减少了约36％，而HDL-胆固醇水平没有显著增加。与此同时，绿茶提取物组的总胆固醇水平和LDL-胆固醇水平分别减少39％和41％，这比发酵茶提取物得到的效果稍高，但，普洱提取物组的总胆固醇水平和LDL-胆固醇水平分别减少36％和35％，在试验材料中是最低的。
表5
肝脏脂质
Figure BDA0000107570470000102
从上面表5可以看出，空白组的老鼠的肝脏总胆固醇和中性脂肪水平显著高于正常组，表明利用诱导高血脂饲料成功诱发了脂肪肝。用绿茶提取物处理的组，总胆固醇和中性脂肪水平分别降低27％和17％；用普洱茶提取物处理的组中，总胆固醇和中性脂肪水平分别降低22％和19％；并且在后发酵茶处理的组中，总胆固醇和中性脂肪水平分别降低33％和22％。这些结果表明用后发酵茶提取物处理在降低肝脏脂质水平上具有最佳的效果。
根据本发明含有后发酵茶提取物的组合物能应用于下面描述的各种制剂，但并不限于其中。
制备实施例1软胶囊剂
将100mg后发酵茶提取物、50mg黄豆提取物、180mg黄豆油、50mg红参提取物、2mg棕榈油、8mg加氢棕榈油、4mg黄蜂蜡和6mg卵磷脂互相混合，根据常规方法每个胶囊填充400mg混合物，从而制备软胶囊。
制备实施例2片剂
将100mg后发酵茶提取物、50mg黄豆提取物、100mg葡萄糖、50mg红参提取物、96mg淀粉和4mg硬脂酸镁互相混合，又加入40mg的30％的乙醇形成颗粒，并在60℃干燥，用压片机制成片剂。
制备实施例3颗粒剂
将100mg后发酵茶提取物、50mg黄豆提取物、100mg葡萄糖、50mg红参提取物和600mg淀粉互相混合，又加入100mg的30％的乙醇形成颗粒，并在60℃干燥、成粒后，填充到小袋。使内容物的最终重量为1g。
制备实施例4饮剂
将100mg后发酵茶提取物、50mg黄豆提取物、10g葡萄糖、50mg红参提取物、2g柠檬酸和187.8g净化水互相混合并填充到瓶中。内容物的最终体积为200ml。

Claims (12)

1.一种血液循环改善用组合物，其特征在于，该组合物含有通过向茶叶中接种酵母作为发酵菌株并将接种后的茶叶进行发酵而得到的发酵茶提取物作为活性成分。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述发酵菌株选自由卡尔斯伯酵母(Saccharomyces Carsbergensis)、清酒酵母(Saccharomyces Sake)、葡萄酒酵母(Saccharomyces Ellipsoideus)、朝鲜糖酵母(SaccharomycesCoreanus)和啤酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae)组成的组中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述发酵菌株为啤酒酵母。
4.根据权利要求1-3中的任意一项所述的组合物，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述发酵茶提取物的含量为0.1-50重量％。
5.一种预防或治疗中风、心肌梗塞、高血压、高血脂、糖尿病或肥胖症的药物组合物，其特征在于，该组合物含有通过向茶叶中接种酵母作为发酵菌株并将接种后的茶叶进行发酵而得到的发酵茶提取物作为活性成分。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述发酵菌株选自由卡尔斯伯酵母、清酒酵母、葡萄酒酵母、朝鲜糖酵母和啤酒酵母组成的组中的一种或多种。
7.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述发酵菌株为啤酒酵母。
8.根据权利要求5-7中的任意一项所述的药物组合物，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述发酵茶提取物的含量为0.1-50重量％。
9.一种预防或改善中风、心肌梗塞、高血压、高血脂、糖尿病或肥胖症的保健食品组合物，其特征在于，该组合物含有通过向茶叶中接种酵母作为发酵菌株并将接种后的茶叶进行发酵而得到的发酵茶提取物作为活性成分。
10.根据权利要求9所述的保健食品组合物，其中，所述发酵菌株选自由卡尔斯伯酵母、清酒酵母、葡萄酒酵母、朝鲜糖酵母和啤酒酵母组成的组中的一种或多种。
11.根据权利要求9所述的保健食品组合物，其中，所述发酵菌株为啤酒酵母。
12.根据权利要求9-11中的任意一项所述的保健食品组合物，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述发酵茶提取物的含量为0.1-50重量％。
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