CN115581302B

CN115581302B - 一种减脂组合物、减脂产品及其用途

Info

Publication number: CN115581302B
Application number: CN202211328356.9A
Authority: CN
Inventors: 赵玥明; 刘清菁; 刘学聪; 吴桐; 侯艳梅; 肖罗; 欧阳琰桦
Original assignee: Jinqiao Biotechnology Co ltd; Hyproca Nutrition Co ltd
Current assignee: Jinqiao Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-10-27
Filing date: 2022-10-27
Publication date: 2023-12-22
Anticipated expiration: 2042-10-27
Also published as: CN115581302A

Abstract

本发明公开了一种减脂组合物、减脂产品及其用途，所述减脂组合物由嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物组成。本发明的嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株发酵物与白芸豆提取物复配，可以发挥协同增效，低剂量下具有较好的减肥、促排便和排油效果，为后生元的应用提供了新的方向。相比现有技术，本发明减脂产品的成分明确，安全性高，减脂减肥效果更好。

Description

一种减脂组合物、减脂产品及其用途

技术领域

本发明属于益生菌技术领域，具体为一种减脂组合物、产品及其用途。

背景技术

肥胖不仅是单一的疾病，会引起各种严重的健康问题，它可通过机体代谢的作用，引起全身多个系统的异常，如循环系统、消化系统、呼吸系统等，严重的危害了人类的身体健康和生命，如糖尿病、高血压、血脂紊乱、高尿酸血症，以及冠心病的危险较非肥胖者至少增加2倍，增加了发生率，成为多种疾病的“罪魁祸首”。

CN109924506A公开了一种具有减肥功能的益生菌组合物及其制备方法和应用，所述组合物以副干酪乳杆菌菌粉体以及副干酪乳杆菌代谢物粉体为活性成分。所述副干酪乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCCNO：M2018302。该组合物减肥效果明显，降血脂效果好，同时具有增强免疫力的作用。

CN113855712A公开了一种可促进排便的组合物及其用途，其可促进排便的组合物，包括：乳酸菌发酵粉末，包含乳酸菌发酵物，乳酸菌发酵物为将至少乳酸菌菌株培养于包含牛奶、奶粉、酪蛋白、大豆、豆类制品、或乳清的培养基而取得的，乳酸菌菌株包含唾液乳酸杆菌AP-32菌株、植物乳酸杆菌LPL28菌株、嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株、长双歧杆菌婴儿亚种BLI-02菌株或其组合。

后生元，是指益生菌在发酵过程中产生的对健康有益的生物活性化合物(包括益生菌代谢物、细胞组分或它们的混合物)，如短链脂肪酸（short chain fatty acids,SCFA)、色氨酸、多肽、磷壁酸、酶、低聚糖、多糖、有机酸和脂质等。目前，对后生元及其生物活性的研究越来越多，如何深入的挖掘现有后生元的功效，使其发挥更好的降脂减肥效果具有重要的意义。

白芸豆具有温和下气、利肠胃、止呃逆、健脾壮肾等功效，是一种滋补食品。白芸豆提取物中的有效成分菜豆素(又名芸豆蛋白 Phaseolin)是一种天然的α-淀粉酶抑制剂，其化学本质是一种糖蛋白，分子量为24kD和45KD(也有35KD的)，可有效抑制淀粉的分解，使之经胃肠道排出体外。另外，由于分子量较大，芸豆α-淀粉酶抑制剂不进入血液循环系统，不作用于大脑中枢，减肥的同时不抑制食欲，使用剂量很高时也无副作用，具有较好的安全性。

经检索，目前尚未发现芸豆提取物与嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物复配进行减脂的相关研究。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种减脂组合物、减脂产品及其用途，其通过嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株发酵物与白芸豆提取物复配，可以发挥协同增效作用，具有较好的降脂减肥效果。

本发明一方面提供了一种减脂组合物，由嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物组成。

本发明中所述嗜酸乳酸杆菌为嗜酸乳酸杆菌TYCA06，菌株保藏于北京-中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO：15210。

本发明中所述嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物为嗜酸乳酸杆菌TYCA06以大豆分离蛋白、生乳和葡萄糖为发酵底物进行发酵，离心，取上清液干燥得到的产物。

本发明中所述白芸豆提取物为符合GB/T29602标准的常规市售产品。

优选地，所述嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物的质量比为1：3-5。

进一步优选地，所述嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物的质量比为1：3.2-3.8。

本发明另一方面还提供了上述减脂组合物在减脂减肥食品、制药、健康保健或天然产品生产中的用途。

优选地，所述减脂组合物每日应用起效剂量为0.033mg/kg。

本发明另一方面提供了一种减脂产品，所述减脂产品，包含上述减脂组合物和医学生上可接受的载体。

优选地，所述减脂产品为口服液、颗粒剂、粉剂、胶囊或片剂。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株发酵物与白芸豆提取物复配，可以发挥协同增效，低剂量下具有较好的减肥、促排便和排油效果，为后生元的应用提供了新的方向。同时，相比现有技术，本发明减脂产品的成分明确，安全性高，减脂减肥效果更好。

附图说明

图1为白芸豆提取物和后生元在不同浓度下的3T3-L1脂滴生成量，其中，A为白芸豆提取物降脂结果；B为后生元降脂结果。

图2为白芸豆提取物和后生元复配作用下的3T3-L1脂滴生成量（白:后=5-2:1），其中，与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

图3为白芸豆提取物和后生元复配作用下的3T3-L1脂滴生成量（白:后=3.2-3.8:1），其中，与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，与白:后=5:1组相比，#P＜0.05。

图4为小鼠体重情况，其中，N组为正常组，DM组为模型组，C组阳性对照组，H组为高剂量组，L组为低剂量组，不同字母a、b和c代表不同组间的显著性差异，P＜0.05。

图5为小鼠粪便质量及排便情况，其中，N组为正常组，DM组为模型组，C组阳性对照组，H组为高剂量组，L组为低剂量组。

图6对小鼠小肠长度的影响，其中，N组为正常组，DM组为模型组，C组阳性对照组，H组为高剂量组，L组为低剂量组，不同字母a、b和c代表不同组间的显著性差异，P＜0.05。

图7对小鼠粪便脂质含量的影响，其中，N组为正常组，DM组为模型组，C组阳性对照组，H组为高剂量组，L组为低剂量组，不同字母a、b和c代表不同组间的显著性差异，P＜0.05。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

本发明对所采用原料的来源不作限定，如无特殊说明，本发明所采用的原料均为本技术领域普通市售品。本实施例中的后生元为嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株发酵物，如无特殊说明，本发明中的溶剂均为去离子水。

本实施例中嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物的制备方法为：

在无菌条件下，将嗜酸乳杆菌菌粉用事先灭菌的蒸馏水充分溶解，静置，吸取1 mL菌溶液到装有99 mL MRS培养基于250 mL三角瓶中，加盖密封，置于电热恒温振荡培养箱中于37℃下培养24 h。复壮两代后，通过平板计数法进行细菌计数，比较该菌正常活菌数(30亿/g)，来决定复壮次数。

取活化后的的菌种用接种环转接到装有100 mL MRS液体培养基的250 mL三角瓶中，密封，置于电热恒温振荡培养箱中37℃下培养24h，备用。

将活化后的嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株接种，发酵底物由大豆分离蛋白、生乳、葡萄糖混合灭菌制得，接种比例2.5~3%；在42±1℃条件下发酵20h，将菌株的发酵液离心，离心参数：≤4℃，6000 rpm，12 min，取上清液液喷雾干燥，喷雾干燥条件为：入风温度120 ℃，出风温度65℃。

本发明中所述白芸豆提取物，购自南京泽郎生物科技有限公司，批次号为ZLZT2021122802。

实施例1 白芸豆提取物和后生元分别降脂效果

试验方法：3T3-L1细胞（小鼠前脂肪细胞）胰岛素抵抗模型建立及利用油红O染色判断3T3-L1前脂肪内脂滴生成的程度，具体为：

使用完全培养基（DMEM，10% FBS）将3T3-Ll细胞以10⁵个/mL ，每孔1mL的细胞密度接种于12孔板，细胞融合48h后，更换诱导分化培养基1（DMEM，10% NBCS，0.5mmol/L IBMX，1μmol/mL地塞米松，10μg/mL胰岛素）刺激分化，并同时分组加药。48h后更换诱导分化培养基2（DMEM，10% FBS，10μg/mL胰岛素），相同方法加药培养48h，之后隔天更换完全培养基，以上培养基均含有100IU/mL的青霉素和100mg/mL的链霉素。2天后将诱导分化成熟的3T3-L1细胞用PBS清洗2次，后用4%的多聚甲醛固定30min。去除固定液后，使用PBS洗2次，利用油红O染色试剂盒对细胞进行染色，拍照后使用异丙醇将染色后的油红O溶解出，在490 nm 波长检测吸光度，检测3T3-L1前脂肪细胞内脂质生成量。

结果如图1所述，如图1中的A可知，相比空白对照组，白芸豆提取物添加浓度在60、100、200μg/mL 浓度下，脂滴生成量有所下降，但无显著差异。

如图1中B可知，相比空白对照组，后生元添加浓度在20和40μg/mL浓度下，脂滴生成量有所下降，但无显著性差异；后生元添加浓度在60μg/mL浓度下，可显著降低脂滴生成量（P<0.05）。

实施例2 白芸豆提取物和后生元复配后降脂效果

采用实施例1所示的试验方法，考察不同白芸豆提取物和后生元配比下3T3-L1脂滴生产量，其中，白芸豆提取物和后生元的复配比例如表1所示，结果如图2和3所示。

表1 白芸豆提取物和后生元的复配比例

组别	空白	白:后=5:1	白:后=4:1	白:后=3:1	白:后=2:1	白:后=3.2:1	白:后=3.4:1	白:后=3.6:1	白:后=3.8:1
										白芸豆提取物μg/mL	——	166	160	150	135	152	155	157	158
后生元μg/mL	——	34	40	50	65	48	45	43	42

由图2可知，当白芸豆提取物与后生元比例为5:1时，与空白组相比，3T3-L1脂滴生成量无显著差异，当白芸豆提取物与后生元比例为4:1和3:1时，与空白组相比，3T3-L1脂滴生成量有显著降低（P<0.05），当白芸豆提取物与后生元比例为2:1时，与空白组相比，3T3-L1脂滴生成量无显著差异，表明，此时白芸豆提取物与后生元产生了拮抗作用，不利于降脂功效的发挥。

根据图3可知，与空白组相比，当白芸豆提取物与后生元浓度比例为3.1-3.8:1时，3T3-L1脂滴生成量均有极显著性差异（P＜0.01），可发挥有效的降脂效果。

同时，当白芸豆提取物与后生元浓度比例为3.1-3.8:1时，与白芸豆提取物和后生元比例为5:1的组间相比，3T3-L1脂滴生成量均有显著性差异（P＜0.05）。表明，白芸豆提取物与后生元浓度比例为3.1-3.8:1时具有更佳的降脂效果。

实施例3 减脂组合物的降脂功效试验

1、试验方法

以C57BL / 6J雄性小鼠为研究对象，通过对小鼠灌胃不同剂量降脂组合物，并通过灌胃药物进行阳性对照，检测小鼠的排便规律以及油脂吸收能力（小鼠排便情况、体重变化、小肠长度、粪便质量、粪便中脂质含量），确定本发明降脂组合物对小鼠排便规律以及油脂吸收能力及差异性。

具体试验分组方案如表2。

表2 试验分组方案

2、指标测定方法

（1）小鼠体重及粪便质量变化

每隔三日测量小鼠体重及其粪便质量，抽取10-15只小鼠观察其排便次数、排便粒数、排便状态；每只小鼠需拍照记录精神状态及毛色状态。

（2）小鼠小肠长度变化

小鼠断颈处死后，取其小肠于-80℃保存备用，并测量不同分组小鼠小肠长度。

（3）小鼠粪便脂质含量测定

不同天数不同组分别选取9g小鼠粪便，做三个平行，加入5倍体积的提取试剂（三氯甲烷:甲醇:水=2: 2: 1），震荡混合3min，离心，得到下层氯仿层。为了提取充分，完成第一次提取后的，移取上层水相至另一玻璃试管中，加入0.2mol/L的HCl调节至pH1.5以下，酸化后重复脂质提取步骤，合并第一和第二次氯仿层，氮气吹干，测定质量。

计算公式：粪便脂质含量=粪便中脂质质量/粪便质量×100％。

3、数据处理及结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

排便规律以及油脂吸收能力结果判定方法如下：

排便规律判定：观察小鼠排便次数、排便粒数、排便状态及粪便质量，可判定排便规律。

油脂吸收能力：比较各组小鼠中粪便脂质含量，可判定油脂吸收能力。

4、实验结果

4.1对小鼠体重的影响

从建模期到喂养结束，对各组小鼠体质量进行记录并分析，结果见图4，首先，5组小鼠的初始体重值均为17-19g，各组间无显著差异（P>0.05）。喂养19天后，正常组（N组）小鼠体重增加到20.15±0.23g，而模型组（DM组）小鼠体重与N组相比增加更明显，为25.05±0.18g，且这2组小鼠体重之间有显著性差异（P<0.05）。

经本发明减脂组合物（白芸豆提取物与后生元浓度比例为3.8:1，以下简称Q样品）干预15天后，高剂量组（H组）和低剂量组（L组）小鼠最终体重值较DM组显著降低（P<0.05），且服用低剂量Q样品对于小鼠减肥效果更好，同时，相比H组，L组小鼠体重具有显著性差异。因此判定低剂量Q样品对小鼠体重有显著影响且具有减肥作用。

4.2对小鼠粪便质量及排便情况的影响

由表3可知，各分组从建模期到喂养结束排便情况正常。同时如图5所示，与N组相比，灌胃不同剂量Q样品会促进小鼠排便，其中，灌胃低剂量的Q样本比高剂量更能促进小鼠排便，说明灌胃本发明低剂量的减脂组合物可以促进小鼠排便。

表3小鼠排便规律

4.3 对小鼠小肠长度的影响

收集小肠组织样本后，对每只小鼠的小肠长度进行测量并拍照。如图6可知，L组小鼠结肠长度最长，与其他组相比具有显著性差异（P<0.05），灌胃低、高剂量Q样品的小鼠小肠长度分别为32.5±0.30 cm（P<0.05）、28.23±0.25cm（P<0.005），说明灌胃不同剂量Q样品可以影响小肠长度，低剂量Q样品对小鼠小肠长度有显著性影响。

4.4 对小鼠粪便脂质含量的影响

由图7可知，灌胃药物的C组，其小鼠粪便中脂质含量趋于稳定且在3％-5％之间，DM组粪便中脂质含量始终高于N组，与DM相比，H和L组小鼠粪便中脂质含量显著多于DM组（P＜0.05），灌胃Q样品6-15天，L组比H组小鼠粪便中脂质含量多，具有显著性差异（P＜0.05），且长期服用低剂量Q样品的小鼠粪便脂质含量随时间增加而增加。表明：长期服用低剂量Q样品可以促进小鼠体内排油，其油脂吸收能力好。

综上可知，本发明低剂量的减脂组合物具有较好的减肥、促排便和排油效果，依据人体剂量与小鼠剂量换算关系，其对于减肥降脂的起效量为0.033mg/kg/d。

实施例4 减脂组合物的安全性评价

3T3-L1细胞毒性实验

将3T3-L1细胞以5ｘ10⁴／mL，每孔100μL的细胞密度接种到96孔板，培养48h；将96孔板培养基吸出，加入100μL减脂组合物溶液，同时设置对照孔及调零孔，培养24h；每孔添加10μL CCK-8染色液，37℃培养箱培养1.5h；酶标仪450 nm波长检测吸光值，测定细胞生长情况。

viability（%）=(（样品组-调零组）)/(（空白组-调零组）)×100%。

结果表明，本发明的减脂组合物，3T3-L1细胞的存活率与空白组比较无显著差异，表明，本发明的减脂组合物具有较好的安全性。

上是结合具体实施例对本发明进一步的描述，但这些实施例仅仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

Claims

1.一种减脂组合物，其特征在于，由嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物组成；所述嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物的质量比为1：3-4；

所述嗜酸乳酸杆菌为嗜酸乳酸杆菌TYCA06，菌株保藏于北京-中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO：15210；

所述嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物的制备方法为：将活化后的嗜酸乳酸杆菌TYCA06菌株接种，发酵底物由大豆分离蛋白、生乳、葡萄糖混合灭菌制得，接种比例2.5~3%；在42±1℃条件下发酵20h，将菌株的发酵液离心，离心参数：≤4℃，6000 rpm，12 min，取上清液喷雾干燥，喷雾干燥条件为：入风温度120 ℃，出风温度65℃；

所述白芸豆提取物为符合GB/T29602标准的常规市售产品。

2.根据权利要求1所述的减脂组合物，其特征在于，所述嗜酸乳酸杆菌菌株发酵物与白芸豆提取物的质量比为1：3.2-3.8。

3.权利要求1-2任一项所述减脂组合物在制备药品和健康保健品中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述减脂组合物，每日应用的起效剂量为0.033mg/kg以上。

5.一种减脂产品，其特征在于，包含权利要求1-2任一项所述的减脂组合物和医学上可接受的载体。

6.根据权利要求5所述的减脂产品，其特征在于，所述减脂产品为口服液、颗粒剂、粉剂、胶囊或片剂。