WO2002060457A1

WO2002060457A1 - Agents anti-stress

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Publication number: WO2002060457A1
Application number: PCT/JP2002/000411
Authority: WO
Inventors: Masahiro Murakami; Shigeo Takada; Yasukazu Nagato; Susumu Okabe
Original assignee: Amato Pharmaceutical Products,Ltd.; Tokai Education Instruments Co.,Ltd.
Priority date: 2001-01-24
Filing date: 2002-01-22
Publication date: 2002-08-08
Also published as: KR20030070137A; CN1518453A; NO20033324L; JPWO2002060457A1; CA2436000A1; EA200300828A1; US20040116520A1; EP1362594A1; NO20033324D0

Description

抗ストレス剤技術分野

本発明は、抗ストレス剤に関する。より詳細には、本発明は、ストレスによつて生じる精神的及び身体的疾患を予防または軽減するのに有効な医薬品、特定保健用食品、健康食品等として用いることができる抗ストレス剤に関する。背景技術

現代社会は、科学技術が高度化 ·複雑化し、社会情勢も激動する環境下になつており、人々は様々なタイプの物理 ·化学的、心理的、社会的ストレスに曝されている。特に、国際化された社会においては、複雑な人間関係が形成されており、精神的ストレスが起因となって引き起こされる様々な症状について報告がなされている。

精神的ストレスは、循環系、免疫系等に大きな影響を及ぼすことが知られている。ストレスの科学的概念及び定義は未だ不明確な点もあり、ストレスの評価に関しては多くの問題が残されているが、近年、医学的見地からの検討がなされている。 , , 例えば、ストレスを受けるとアンジォテンシン I I等が増加し、ナトリウム再吸収による体內ナトリゥムが過剰となり、血圧の上昇を引き起こすことが報告されている (茂原治ら：代謝， 2 8 , 2 , 3 2 3， 1 9 9 1 ) 。さらに、このような知見をもとに、高血圧治療薬として使用されているァンジォテンシン変換酵素阻害剤であるェナラブリル及ぴァラセプリルのストレスによる高血圧に対する効果が研究されてレヽる（The American Journal of Cardiology ; 68, 15, 1362 (1991) , Internal Medicine ; 32, 9, 691 (1993) )。

また、心理的ストレスが大脳で感知されると、広範な脳部位でノルアドレナリンの放出が亢進し、それが引金となって不安や緊張といった精神症状を引き起こすことが報告されている（田中正敏：代謝、 Vol. 26， pl22-131, 1989 ) 。これらのメカニズムとして、視床下部から副腎皮質刺激ホルモン放出因子（C R F ) が放出され、それに呼応して下垂体から副腎皮質刺激ホルモン（A C T H) の分泌が増加し、 A C T Hは副腎皮質のコルチコイドを分泌することにより'、生体防御機構が働くことが報告されている（Brandenberger, G. et al : Biol. Physiol. Vol. 10, p239— 252， 1980)。

—方、視床下部は自律神経の中枢でもあるから、交感神経が刺激されてノルァドレナリンが分泌される。交感神経は副腎髄質にも分布しており、その刺激により、アドレナリンが血中に放出され、これらのカテコールアミンの作用により、心拍数や血圧の上昇、顔面の紅潮などの身体的変化が出現すると考えられている (Dimsdale, JE.， Moss, J.： J. Am. Med. Assoc. Vol. 243, p340— 342， 1980) 。ストレスが強力であったり、長期間続いたりすると、全身の諸臓器に影響を及ぼし、その結果重篤な心身症、すなわち、消化性潰瘍、虚血性心疾患、脳血管障害、高血圧、抗脂血症などを引き起こすこともある。

現在ストレスにより生じる精神的 ·身体的症状の軽減及び予防剤としては、精神安定剤、抗不安剤及び睡眠薬等の化学合成薬剤が使用されている。しカゝし、これらの薬剤は、習慣性や副作用の問題があり、ストレスにより生じる精神的、身体的症状予防の目的で日常的に使用するのは好ましくない。また、軽度精神的疲労の対処療法としては、リラクゼーションゃァロマテラピーなどが知られているが、個人差が大きく長期間にかつ継続的に行う必要がある。

そのため、日常的に連用可能で、安全性の問題を含まない、ストレスにより生じる精神的 ·身体的症状の軽減及び予防効果を示す抗ストレス剤の開発が求められている。

これまでの研究により、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ L一乳酸混合物は、抗悪性腫瘍剤として有用であることが報告されている（特開平 9— 2 2 7 3 8 8号公報おょぴ特開平 1 0— 1 3 0 1 5 3号公報）。しかしながら、縮合度 3〜 2 0の環状及びノ又は鎖状のポリ乳酸混合物がストレス抑制作用を発揮するかどうかの評価については報告されていない。発明の開示

本発明は、ストレス抑制のために使用することができる新規な抗ストレス剤を提供することを解決すべき課題とした。より具体的には、本発明は、日常的に連用可能で、安全性が高く、ストレスにより生じる精神的 ·身体的症状を軽減及び予防できる抗ストレス剤を提供することを解決すべき課題とした。本発明はまた、ストレス抑制のための飲食品を提供することを解決すべき課題とした。

本発明者らは、上記課題を解決することを目的とした検討を行うために、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物をラットに投与して、水浸拘束ストレス誘起胃粘膜損傷の発生の程度を検討した。その結果、ポリ乳酸混合物の投与により胃粘膜損傷の発生は有意に抑制されることが判明した。

本発明者らはまた、寒冷ストレスに暴露した糖尿病モデルマウスの生存率に及ぼすポリ乳酸混合物の効果を調べた。その結果、ポリ乳酸混合物を投与した場合の方が糖尿病モデルマウスの生存率が高くなることが判明した。

さらに本発明者らは、ストレス下においたマウスのリンパ球数、腫瘍の形成、および嫌気的酵素活性を測定した。その結果、ポリ乳酸混合物の投与によりストレスに伴うリンパ球数の減少や嫌気的酵素活性の亢進が抑制され、抗腫瘍効果が奏されることが実証された。

本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。

即ち、本発明によれば、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む抗ストレス剤が提供される。，本発明の抗ストレス剤は、例えば、ストレスに起因する医学的症状を予防又は改善するために使用することができ、より具体的には、ストレスに起因する免疫機能の低下の予防又は改善、ストレスに起因する潰瘍又は腫褒の予防又は改善、並びに疾患患者のストレスに対する生存率の向上のため等に使用することができる。好ましくは、ポリ乳酸中における反復単位である乳酸は実質的に L一乳酸から成る。

好ましくは、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物は、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のエタノールおよぴメタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィーに付し、 p H 2〜3の 2 5〜 5 0重量⁰ /₀ のァセトニトリル水溶液で溶離後、 p H 2〜3の 9 0重量⁰/。以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分である。

好ましくは、脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及び昇温により行う。好ましくは、逆相カラムクロマトグラフィーを、 O D Sカラムクロマトグラフィ一により行う。

本発明の別の側面によれば、上記した本発明の抗ストレス剤を含む、ストレス抑制のための飲食品が提供される。

本発明のさらに別の側面によれば、抗ストレス剤又はストレス抑制のための飲食品の製造における、縮合度 3〜2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物の使用が提供される。

本発明のさらに別の側面によれば、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物の有効量をヒトなどの哺乳動物に投与することを含む、ストレスを抑制するための方法が提供される。図面の簡単な説明 .

図 1は、製造例 1で得られたポリ乳酸混合物の質量スぺクトルを示す。

図 2は、ラットにおける水浸拘束ストレス誘起胃粘'膜損傷の発達に及ぼす C P Lの影響を示すグラフである。

図 3は、寒冷ストレスに暴露した糖尿病モデルマウスの生存率に及ぼす C P L の効果を示すグラフである。

図 4は、糖尿病モデルマウスの空腹時血糖値の測定結果を示すダラフである。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明の実施態様および実施方法について詳細に説明する。

本発明の抗ストレス剤は、縮合度 3〜 2 0の環状及びノ又は鎖状のポリ乳酸混合物を有効成分として含み、ストレスにより生じる精神的 ·身体的症状を軽減及ぴ予防するために使用することができる。

本発明の抗ストレス剤の使用の対象となるストレスの原因（ストレッサー）は特に限定されない。ストレッサーとしては、例えば、物理的環境要因（温度、騷音、地震等）、社会 ·文化的状況（戦争、経済危機、政変等）、個人の環境条件

(家庭、学校、職場等）の変動（転居、転校、転勤、退職等）、人間関係の軋鑠、葛藤等の他、過労、外傷、身体病等の生物学的要因も含まれる。これらのストレッサ一は、今日見られる多くの心身症において、その直接の発症要因となっている力 \ 又はその発症に重要な作用を果たしていると考えられている。 _

ストレスとは、上記したようなストレスの原因（例えば、痛み、発熱などの疾病や障害などの身体的な刺激、社会や家庭における人間関係から生ずる緊張、不安、恐怖などの精神的刺激、さらに騒音とか気象変化などの物理的環境因子などが挙げられる）が生体に加わった際に、精神や身体に生ずるひずみと考えられている。

生体は何らかの障害を与えるような刺激に対し、その刺激に特有な反応を示すと同時に、刺激の種類に関係なく、共通の反応として交感神経一副腎髄質系と下垂体一副腎皮質系の活動が高まり、アドレナリンが分泌され、血圧が上昇し、脈拍数や呼吸数が増加する一方、副腎皮質からのコルチゾールと、うホルモンの分泌が増加し、生体が防御あるいは適応しょうとする反応を示す。この反応はストレス反応と呼ばれ、次のようなしくみによって発生することが知られている。すなわち生体に身体的あるいは精神的ストレッサーが加わると、その情報は中枢神経系に達し、視床下部に及ぶ。ここからストレス反応の指令が出るが、その伝達は大きく二つの経路を介して行われる。その一つは交感神経系を介するもので、大部分は交感神経そのもが生体内の種々の器質に達し、神経末梢かレナリンを放出して効果を発揮する。またその一部分は副腎髄質に達し、刺激によりアドレナリンを分泌せしめる。もう一つのストレス情報伝達経路は、視床下部から下垂体の A C T Hというホルモン分泌を刺激するホルモン（C R H) を放出することにより、下垂体から A C T Hが分泌され、これが血液により副腎皮質に運ばれて、副腎皮質を刺激して、コルチゾールというホルモンの分泌を促進する。

ストレス反応は、生体にとって防御反応という有用的な役割を担っているが、反応時にコルチゾールゃァドレナリンが過剰に分泌されるため、多くの器質に対し有害に作用し、生体の恒常性が維持できなくなってストレス病が引き起こされると考えられている。すなわちコルチゾールの過剰により、胃や十二指腸の粘膜が破壌されて胃 ·十二指腸潰瘍が引き起こされたり、免疫機能を抑制するので、感染抵抗が低下したり、ガンが起こり易くなる。アドレナリンの過剰は、高血圧や循環器疾患を引き起こし易くする。

本発明の抗ストレス剤を被検者に投与した場合、ストレスの負荷に応答して発生する免疫機能の低下等の生理的な指標の変化が、非投与時の場合と比べて小さくなる。従って、本発明の抗ストレス剤は、被検者-のストレスを低減する効果があると考えられ、日常生活で感じる様々なストレスに起因する医学的症状の発症を防止したり、その症状を軽減、緩和させることができる。

ストレスに起因する医学的症状としては、免疫機能の低下、潰瘍又は腫瘍の発生、疾患患者の生存率の低下などが挙げられる。

ストレスに起因するより具体的な医学的症状としては、動脈硬化症、虚血性心疾患（狭心症、心筋梗塞）、本態性高血圧、心臓神経症、不整脈などの循環器系疾患や、気管支喘息、過呼吸症候群、神経性咳嗽などの呼吸器系疾患や、消化性潰瘍、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、神経性食欲不振症、神経性嘔吐症、腹部膨満症、空気嚥下などの消化器系疾患や、肥満症、糖尿病、心因性多飲症、パセドウ病などの内分泌代謝系疾患や、偏頭痛、筋緊張性頭痛、自律神経失調症などの神経系疾患や、夜尿症、インポテンツ、過敏性膀胱などの泌尿器系疾患や、慢性関節リウマチ、全身性筋痛症、脊椎過敏症などの骨筋肉系疾患や、神経性皮膚炎、円形脱毛症、多汗症、湿疹などの皮膚系疾患や、メニエール症候群、咽喉頭部異物感症、難聴、耳鳴り、乗物酔い、失声吃音などの耳鼻咽喉科領域の疾患や、原発性緑内症、眼精疲労、眼瞼けいれん、眼ヒステリ一などの眼科領域の疾患や、月経困難症、無月経、月経異常、機能性子宮出血、更年期障害、不感症、不妊症などの産婦人科領域の疾患や、起立性調節障害、再発性臍疝痛、心因性の発熱、夜驚症などの小児科領域の疾患や、腸管癒着症、ダンピング症候群、頻回手術症 (ポリサージャリー）、形成手術後神経症などの手術前後の状態や、特発生舌痛症、ある種の口内炎、口臭症、唾液分泌異常、咬筋チェック、義歯神経症などの口腔領域の疾患や、神経症、うつ病、並びに腫瘍形成などを挙げることができる。本発明の抗ストレス剤は、ストレスを受ける前に予め摂取しておくと、ストレスを受けにくく、また、ストレスを受けても医学的症状の発症を防止しやすいという予防的作用を有する。従って、本発明の抗ストレス剤は、健康食品や医薬品として日頃から摂取しておくことも好ましい。

本発明の抗ストレス剤、及ぴストレス抑制のための飲食品においては、縮合度

3〜2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物が有効成分として用いられる。本明細書で言う「ポリ乳酸混合物」とは、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸が任意の割合で存在する混合物を意味する。即ち、「混合物」という用語は、縮合度 3〜2 0の何れかを有するポリ乳酸の混合物であることを意味すると同時に、環状および鎖状のポリ乳酸の混合物を含む概念としても用いられる。このような「ポリ乳酸混合物」は、本明細書中以下に述べるように、乳酸を脱水縮合し、適当な方法で精製することにより得ることができる。なお、本明細書では便宜上「ポリ乳酸混合物」という用語を用いたが、この中には一定の縮合度を有する環状のポリ乳酸または一定の縮合度を有する鎖状のポリ乳酸といった単一成分から成るポリ乳酸も含まれる。

縮合度とは、ポリ乳酸中における反復単位である乳酸単位の数を意味する。例えば、環状のポリ乳酸は下記の構造式を有することが推測されるが、式中の nが縮合度を表す（即ち、 n = 3〜2 0 )<

本明細書で単に「乳酸」と称する場合、この乳酸には L一乳酸、 D—乳酸またはこれらの任意の割合の混合物の全てが包含される。本発明においては好ましくは、乳酸は実質的に L—乳酸から成る。ここで言う「実質的に」とは、ポリ乳酸混合物中における L—乳酸単位の比率 [即ち、（L一乳酸単位数ノ L一乳酸単位数 + D一乳酸単位数） X 1 0 0 ] ί 例えば 7 0 %以上、好ましくは 8 0 %以上、より好ましくは 8 5 %以上、さらに好ましくは 9 0 %以上、特に好ましくは 9 5 % 以上であることを意味する。なお、ポリ乳酸混合物中における L—乳酸単位の比率は、出発物質として使用する乳酸中に存在する L一乳酸と D—乳酸の比率に依存する。

縮合度 3〜 2 0の環状及び Ζ又は鎖状のポリ乳酸混合物の製造方法は、特に限定されるものではないが、例えば、特開平 9— 2 2 7 3 8 8号公報、特開平 1 0 - 1 3 0 1 5 3号公報、または特願平 1 1— 3 9 8 9 4号明細書（これらの特許明細書に記載の内容は全て引用により本明細書の開示として含める。）などに記載の製造方法により得ることができる。

より具体的には、例えば、縮合度 3〜 2 0の環状及び Ζ又は鎖状のポリ乳酸混合物は、下記の方法 Αにより得ることができる。方法 A：

先ず、乳酸（好ましくは、実質的に L一乳酸から成る乳酸）を不活性雰囲気下で脱水縮合させる。不活性雰囲気としては、例えば、窒素ガス、アルゴンガスなどが挙げられるが、窒素ガスを用いるのが好ましい。

脱水縮合反応は、常圧〜 1 mmH g程度の減圧下、 1 1 0〜 2 1 0 °C、好ましくは 1 3 0〜 1 9 0 °Cの温度で行われるが、段階的減圧おょぴ段階的昇温によつて行うのが特に好ましい。反応時間は適宜設定できるが、例えば 1〜 2 0時間反応を行うことができる。段階的減圧おょぴ段階的昇温を用いる場合には、反応時間を 2以上から成る部分的な反応時間に分け、それぞれの部分において圧力と温度を設定して反応を行う。段階的減圧を用いる場合は、例えば、常圧→1 5 O m mH g→3 mmH gと減圧することができ、段階的昇温を用いる場合は、例えば、 1 4 5 °C→1 5 5 °C→1 8 5 °Cと昇温することができる。実際には、これらを糸且み合わせて、例えば、 1 4 5 °Cで常圧で 3時間、 1 4 5でで 1 5 0 mmH gで 3 時間、 1 5 5 °Cで 3 mmH gで 3時間そして 1 8 5 °Cで 3 mmH gで 1 . 5時間反応を行うことができる。

次いで、この脱水縮合反応により得られた反応混合物にエタノールおよびメタノールを加え、濾過して濾液を乾燥してエタノールおよぴメタノール可溶分が得られる。即ち、本明細書で言う「エタノールおよびメタノール可溶分」とはエタノールとメタノールの混合液に可溶な画分を意味する。なお、エタノールおよびメタノール可溶分を得る際には、脱水縮合反応の反応混合物をェタノールぉよぴメタノールと混合するが、その際のエタノールとメタノールの比率は適宜設定することができ、例えばエタノール：メタノール = 1 ： 9である。なお、反応混合物にエタノ一ノレとメタノールを添加する順番、方法などは限定されず、適宜選択することができ、例えば、脱水縮合反応の反応混合物に先ずエタノールを添加し、次いでメタノールを添加することができる。

上記で得られたエタノール .メタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィ一、特にォクタデシルシラン (O D S ) カラムを用いたクロマトグラフィ一に付し、まず p H 2〜3の 2 5〜5 0重量⁰ /₀のァセトニトリル水溶液で溶離する画分を除去し、次いで p H 2〜 3の 9 0重量％以上のァセトニトリノレ水溶液、好ましぐは 9 9重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離してくる画分を採取すると、縮合度 3〜 2 0の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物が得られる。

上記のようにして得られた環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物は、水酸化ナトリウムなどのアルカリ物質で中和し、減圧乾燥後、常法により下記に述べるような所望の形態に製剤化することができる。

本発明で用いる縮合度 3〜 2 0の.環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を製造するための別法としては、例えば、特願平 1 1— 2 6 5 7 1 5号明細書に記載された方法（方法 Bとする）または特願平 1 1一 2 6 5 7 3 2号明細書に記載された方法（方法 Cとする）を挙げることができる（これらの特許明細書に記載の内容は全て引用により本明細書の開示として含める。）。以下、方法 Bおよび方法 C について具体的に説明する。

方法 B ：

この方法は、ラクチドを R Y L i (式中、 Rは脂肪族基又は芳香族基を示し、 Yは酸素原子又はィォゥ原子を示す）で表されるリチウム化合物の存在下で重合させることによつて環状乳酸ォリゴマ一を製造する方法である。重合反応を実施する場合、リチウム化合物（R Y L i ) の使用割合は、ラクチド 1モル当たり、 1〜0 · 1モル、好ましくは 0 . 2〜0 . 3モルの割合である。反応温度は一 1

0 0〜0 °C、好ましくは一 7 8〜一 5 0 °Cである。反応は、一 7 8 5 0 °Cの温度で開始し、徐々に室温にまで昇温させるように実施するのが好ましい。反応は、好ましくは反応溶媒の存在下で実施される。反応溶媒としては、テトラヒド口フラン等の環状エーテルの他、ジェチルエーテル、ジメトキシェタン等を用いることができる。反応雰囲気としては、窒素ガスやアルゴン等の不活性ガス雰囲気が用いられる。反応圧力は特に制約されず、好ましくは常圧である。

なお、上記のようにして得られる乳酸オリゴマーの組成（即ち、環状乳酸オリゴマーと鎖状乳酸オリゴマーの混合比率）は、反応助剤として用いるリチウム化合物によって変動する。リチウム化合物として炭素数 1〜 3のアルキルアルコールのリチウム化合物（R O L i ) (式中、 Rは炭素数 1〜 3のアルキル基）を用いる場合には、環状乳酸オリゴマーと鎖状オリゴマーとの混合物（環状乳酸オリゴマーの割合： 80〜85重量％) が得られる。一方、リチウム化合物として t 一ブチルアルコール等の炭素数 4以上のアルキルアルコールのリチゥム化合物や、チオフヱノールイヒ合物を用いるときには、実質的に環状乳酸オリゴマーのみを選択的に得ることができる。方法 C：

この方法は、（ i ) 乳酸を 350〜 400 mmH gの圧力条件で 120〜 14 0°Cの範囲の温度に加熱し、脱水縮合反応させるとともに、ラクチドを留出させずに副生水のみを留出除去する第 1加熱工程、

( i i)該第 1加熱工程終了後、反応生成物を 150〜160°Cの温度に加熱し、該反応圧力を降圧速度 0. 5〜： LmmHgノ分で 15〜20 mmH gまで降下させるとともに、その降圧に際し、ラクチドの留出を回避させながら副生水のみを留出除去し、該反応圧力が 15〜2 OmmHgに降下後、同圧力条件及ぴ反応温度 150〜 160°Cにおいてさらに反応を継続して鎖状乳酸オリゴマーを主成分とする脱水縮合物を生成させる第 2加熱工程、

(i i i) 該第 2加熱工程終了後、 0. l〜3mmHgの圧力条件で 150〜1 60°Cで加熱して該鎖状乳酸オリゴマーを環化させ、環状オリゴマーを生成させる第 3加熱工程、

からなることを特徴とする方法である。

この方法では先ず、第 1加熱工程において、減圧下において乳酸を加熱し、脱水縮合反応させる。この場合の反応時間は 3〜 12時間、好ましくは 5〜 6時間である。この第 1加熱下での反応は、その反応を円滑に進行させるために、乳酸の脱水縮合により生成する副生水を留去させるが、この場合、乳酸 2分子の脱水縮合物であるラクチドが留去しないように実施する。このためには、反応圧力を減圧、好ましくは 300〜 500 mmH g、より好ましくは 350〜 400 mm H gに保持し、この圧力条件下において、 100〜 140 °C、好ましくは 130 〜140°Cの範囲に加熱するのがよレ、。この第 1加熱工程での反応により、主に、乳酸の 3〜 23分子の脱水縮合物を主成分とする反応生成物が生じる。

上記第 1加熱工程の終了後、第 2加熱工程において、高められた平均重合度のオリゴマーが得られるように、前記第 1加熱工程における反応温度よりも高められた温度、好ましくは 145〜180°C、より好ましくは 150〜 160 °Cの温度に加熱するとともに、反応圧力を 10〜5 OmmHg, 好ましくは 15〜20 mmHgの圧力に降下させてさらに脱水縮合反応を継続する。

この反応も、前記第 1加熱工程の反応の場合と同様に、反応を円滑に進行させるために副生水を留去させるが、ラクチドが留去しない条件で実施する。反応圧力を前記範囲の圧力にまで降下させる速度（降圧速度）は、ラクチドの; g出を回避し、且つ反応効率を高めるためには、 0. 25〜5mmHgZ分、好ましくは 0. 5〜1 mmHg Z分の範囲に保持することが通常は必要である。前記範囲より低い降圧速度では、その所定圧まで降圧させるのに必要な時間が長くなるため好ましくなく、一方、前記範囲より高い降圧速度では、ラクチドが副生水とともに留去するようになるので好ましくない。

反応圧力が所定圧力にまで降下後、この反応圧力において、さらに反応を継続する。この場合の加熱時間は、 3〜12時間、好ましくは 5〜6時間である。前記第 2加熱工程での反応により、平均重合度が 3〜30、好ましくは 3〜2 3の乳酸オリゴマーが得られるが、この場合のオリゴマ一中の環状オリゴマーの割合は、通常、 70〜80重量％程度である。

上記第 2加熱工程終了後、第 3加熱工程において、反応圧力を 0. 25〜5m mHg、好ましくは 0. 5〜： L mmHgに保持し、 145〜 180 °C、好ましくは 150〜 160 °Cの温度でさらに反応を継続する。反応時間は 3〜 12時間、好ましくは 5〜 6時間である。この場合に生じる副生水も留去させる。この場合、ラクチドの留去も回避させることが好ましいが、反応生成物にはラクチドは殆んど含まれないので、その降圧速度を格別遅くする必要はない。

前記第 3加熱工程での反応により、平均重合度 3〜30、好ましくは 3〜 23 で、かつ環状オリゴマーの割合が 9 0重量％以上、好ましくは 9 9重量％以上の乳酸オリゴマーが生成される。 '

なお、上記方法 A、 Bおよび Cは本発明で用いるポリ乳酸混合物の製造方法の具体例の一部を示したものにすぎず、本発明においては他の方法で製造されたポリ乳酸混合物を用いることもできる。

本発明の抗ストレス剤の効果は、例えば実験動物を使用し、水浸拘束ストレス誘起法により胃粘膜損傷を生じさせることにより確認することができる。具体的には、実験動物（例えば、ラットなど）をストレスケージに入れ、 1 0時間で 2 2〜2 3 °Cの水槽に劍状突起の高さまで浸し、ストレス負荷する。薬物はストレス負荷する前に投与する。次いで、実験動物をエーテル麻酔下に開腹し、胃を摘出し、噴門部結紮後 2 %ホルマリン液を十二指腸より胃内に注入し、固定する。また漿膜側からも同液中に浸すことにより固定する。その後、大弯に沿って切開し、胃粘膜損傷の長さを測定する。胃粘膜損傷の大きさが対照群よりも小さくなることにより、本発明の抗ストレス剤の効果を確認できる。

本発明の抗ストレス剤の効果は、閉所拘束ストレスを付与した実験動物におけるリンパ球数の変動を測定することによつても確認することができる。具体的には、実験動物（例えば、マウスなど）をアクリルケースに収容して飼育し、抗ストレス剤を含む固形食を摂取させる。固形食の投与開始後、毎週 1回、マウスを細い円筒の中に一定時間入れて閉所拘束ストレスを 4週間（4回）与える。拘束を終了した後、直ちにジェチルエーテル麻酔下で尾静脈から血液を採血し、光学顕微鏡下でリンパ球数を計測する。ストレスによるリンパ球数の減少が抑制されることにより、本発明の抗ストレス剤の効果を確認できる。

本発明の抗ストレス剤は、前記の必須成分に加えてさらに必要に応じ、本発明の効果を損なわない範囲内で、医薬品類、医薬部外品類などの製剤に使用される成分や添加剤を任意に選択 ·併用して製造することができる。本発明の抗ストレス剤は、単独の医薬品類として使用できる以外に、医薬品類や医薬部外品類などに配合して用いることもできる。本発明の抗ストレス.剤の形態は特に限定されず、経口投与又は非経口投与用の製剤形態の中から目的に最も適した適宜の形態のものを選択することが可能である。

経口投与に適した製剤形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、ドリンク剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤、チュアプル剤などを挙げることができ、非経口投与に適する製剤形態としては、例えば、注射剤 (皮下注射、筋肉内注射、又は静脈内注射など）、外用剤、点滴剤、吸入剤、噴霧剤などが挙げられるが、これらに限定されることはない。 .

経口投与に適当な液体製剤、例えば、溶液剤、乳剤、又はシロップ剤などは、水、ショ糖、ソルビット、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのダリコール類、ごま油、オリープ油、大豆油などの油類、 p ーヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、ストロベリーフレーパー、ぺパ一ミントなどのフレーパー類などを用いて製造することができる。また、カプセル剤、錠剤、散剤、又は顆粒剤などの固体製剤の製造には、乳糖、プドウ糖、蔗糖、マンニットなどの賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダなどの崩壊剤、. ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いることができる。

非経口投与に適当な注射用又は点滴用の製剤は、好ましくは、受容者の血液と等張な滅菌水性媒体に有効成分である上記の物質を溶解又は懸濁状態で含んでいる。例えば、注射剤の場合、塩溶液、プドウ糖溶液、又は塩水とブドウ糖溶液との混合物からなる水性媒体などを用いて溶液を調製することができる。腸内投与のための製剤は、例えば、カカオ脂、水素化脂肪、又は水素化カルボン酸などの担体を用いて調製することができ、座剤として提供される。また、嘖霧剤の製造には、有効成分である上記の物質を微細な粒子として分散させることができ、受容者の口腔おょぴ気道粘膜を刺激せず、かつ有効成分の吸収を容易ならしめる担体を用いることができる。担体としては、具体的には、乳糖又はグリセリンなどが例示される。有効成分である物質及び使用する担体の性質に応じて、エアロゾル又はドライパウダーなどの形態の製剤が調製可能である。これらの非経口投与用製剤には、グリコール類、油類、フレーパー類、防腐剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤などから選択される 1種又は 2種以上の飲食品を添加することもできる。

本発明の抗ストレス剤の投与量及び投与回数は、投与の目的、投与形態、摂取者の年齢、体重又は性別などの条件などを含む種々の要因により適宜設定することができるが、一般的には、有効成分の投与量として一日当り 1〜1 0 , 0 0 0 m g Z k g、好ましくは 1 0〜2 0 0 0 m g _ k g、より好ましくは 1 0〜 2 0 O m g / k gである。上記投与量の製剤を一日 1〜4回程度に分けて投与することが好ましい。

本発明の抗ストレス剤の投与時期は特に限定されず、ストレス負荷が予想される時、またはストレス負荷時に服用して、ストレスの予防または軽減を計る他、常用により、ストレスを予防または軽減することができる。

本発明はさらに、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物を含むストレス抑制のための飲食品にも関する。即ち、本発明で用いる縮合度 3〜2 0の環状及びノ又は鎖状のポリ季し酸混合物は、上記したような単独の製剤の形態で使用するのみならず、飲食品の中に配合して用いることができる。

本発明のストレス抑制のための飲食品は、ポリ乳酸混合物を分解させることなく配合し得るものであれば、その配合形態には特に制限はない。

本発明によるストレス抑制のための飲食品の製品の具体例としては、清涼飲料、ドリンク剤、健康食品、特定保健用食品、機能性食品、機能活生型食品、栄養捕助食品、サブレメント、飼料、飼料添加物などと一般に呼称される、飲料を含む健康食品または補助食品が挙げられる。

飲食品の具体例としては、'例えば、チューインガム、チョコレート、キャンディー、錠菓、ゼリー、クッキー、ビスケット、ヨーグルト等の菓子類、アイスクリーム、氷菓等の冷菓類、茶、清涼飲料（ジュース、コーヒ^"、ココア等を含む）、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の飲料、パン、ハム、スープ、ジャム、スパゲティー、冷凍食品など任意の飲食品を拳げることができる。あるいは、本発明で用いるポリ乳酸混合物は調味料又は拿品添加剤などに添加して用いることもできる。本発明の飲食品を摂取することによりストレス抑制効果が発揮され、実質的に有害な副作用を示さない安全な飲食品を提供することができる。

本発明のストレス抑制のための飲食品は、ポリ乳酸混合物を、食品に使われる一般的な原料に直接混合、分散したのち、公知の方法により所望の形態に加工することによって得ることができる。

本発明のストレス抑制のための飲食品はあらゆる形態の飲食品を包含するものであり、その種類は特に制限されず、上記したような各種飲食物、あるいは各種栄養組成物、例えば各種の経口又は経腸栄養剤や飲料等に、本発明の抗ストレス剤を配合して飲食品として提供することができる。このような飲食品の組成としては、縮合度 3〜 2 0の環状及び/又は鎖状のポリ乳酸混合物の他に、蛋白質、脂質、糖質、'ビタミン及ぴ Z又はミネラル類などを含めることができる。飲食品の形態は特に限定されず、摂取しやすい形態であれば、固形、粉末、液体、ゲル状、スラリー状等のいずれであってもよい。

飲食品中におけるポリ乳酸混合物の含有量は特には限定されないが、一般的には 0 . 1〜2 0重量％、より好ましくは 0 . 1〜1 0重量％程度である。

飲食品に含まれるポリ乳酸混合物の量は、本発明の目的とするストレス抑制作用を発揮できる程度に含まれることが好ましく、好ましくは摂取される飲食物 1 食中に 0 . 1 _§から1 0 _§程度、より好ましくは 0 . 5 gから 3 g程度である。なお、本出願が主張する優先権の基礎となる日本特許出願である特願 2 0 0 1 - 1 6 1 4 5号の明細書に記載の内容は全て、本明細書の開示の一部として本明細書中に引用するものとする。

以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によつていかなる点においても限定されることはない。実施例

製造例 1 ：ポリ乳酸混合物（以下、 CP Lとも称する）の製造

マントルヒーターに収めたセパラプルフラスコに L—乳酸（D—乳酸も混入しているもの） 500m lを入れた。窒素ガス 300m l Z分の流入及ぴ撹拌を行レ、、溜出水は保温した下降型接続管を経て還流冷却器付フラスコに導きながら、 145でで 3時間加熱した。更に 150 mmH gに減圧して同温度で 3時間加熱した後、 3 mmH gの減圧下 1 55でで 3時間、最後に 3 mmH gの減圧下 18 5でで 1. 5時間加熱し、反応生成物であるポリ乳酸を得た。

得られたポリ乳酸は 100°Cに保ち、エタノール 100m lに続いてメタノール 40 Om 1をそれぞれ加えた後放冷した。これをメタノール 500m l中にカロえ、よく撹拌して静置した後濾過して精製した。その濾液を減圧乾燥してァセト二トリルに溶解し、全量を 200m l (原液）とした。

この原液を、予め平衡ィヒした逆相 ODSカラム（TSK g e 1 0DS—8 OTM) にかけ、 0. 01 M塩酸を含む 30 %、 50 %および 100 %ァセトニトリル（ p H2. 0) でステップワイズに溶離し、ァセトニトリル 100%溶出画分であるポリ乳酸（縮合度 3〜20) を得た。得られた物質の質量スペクトルを図 1に示す。図 1中の規則的なフラグメントイオンピークから明らかなように、得られたポリ乳酸の混合物は、環状縮合体を主体とし、直鎖状縮合体が少量混在した状態になっている。試験例 1 ：モデルラットにおける水浸拘束ストレス誘起胃粘膜損傷に対する C P Lの効果

(材料及び方法）

実験には 6週令の雄性 Donryu系ラット（日本 SLC、実験時体重 180〜 20 0 g) を使用した。

CP Lは 40°Cに加温したグリセリンで溶解させた後、プロピレンダリコールを加えて 10 Omg/m 1に調整した。その後、蒸留水で希釈し、 50mg/k gの用量にした。薬物は体重 2 0 0 gあたり 1 m lの割合で 1日に 1回ずつ 1◦ 日間経口投与した。対照群として溶媒のみを同用量で経口投与した。

水浸拘束ストレス誘起胃粘膜損傷を以下の通り作製した。ラットは実験開始前 1 8時間は絶食し、水の摂取は実験開始 2時間前までは自由とし、以後絶水した。ラットを東大薬作型ストレスケージ（夏目製作所）に入れ、 1 0時間で2 2〜2 3 °Cの水槽に劍状突起の高さまで浸し、ストレス負荷することにより作製した。なお薬物はストレス負荷する 3 0分前に再ぴ投与した。

胃損傷面積の測定は以下の通り行なった。エーテル麻酔下に開腹し、胃を摘出した。噴門部結紮後 2 %ホルマリン液 8 m 1を十二指腸より胃内に注入し 1 0分間固定した。また漿膜側からも同液中に 1 0分間浸すことにより固定した。その後、大弯に沿って切開し、実体顕微鏡に損傷の長さ（mm) を測定した。

結果は平均値土標準誤差 (mean土 S. E. ； N = 1 0〜1 1 )で表示した。統計学的有意性の検討は Student' s t- testを用い、 Pく 0. 05を有意とした。

(結果）

測定結果を以下の表 1およぴ図 2に示す。

表 1 ：胃粘膜損傷（mm)

対照 CPL (50mg/kg)

1 20. 0 8. 0

2 22. 0 1 9. 0

3 20. 0 6. 0

4 1 9. 0 1 6. 0

5 1 5. 0 1 8. 0

Ό 丄 t>，丄 O .

7 1 2. 0 1 0. 0

o 丄乙 . U 丄 D . π U

9 1 5. 0 1 0. 0

10 28. 0 1 5. 0

1 1 1 1. 0

平均 1 7. 9 1 3. 1

標準偏差 1. 6 1. 3 表 1及び図 2に示す通り、ストレス負荷することにより誘起される損傷の総和の平均は 1 7. 9 ± 1. 6 mmであったのに対し、 C P Lの 10日間連続投与により水浸拘束ストレス誘起胃粘膜損傷の発生は有意に抑制され、損傷の総和の平均は 1 3. 1土 1. 3 mmであった。試験例 2 ：寒冷ストレスに暴露した糖尿病モデルマウスの生存率に及ぼす C P L の効果

(方法）

日本クレア株式会社に委託し、栄養素の含有率は標準固形食 CE 2と同じで、 C PLを 1%含む特別固形食（1%CPL食）を作製した。日本クレア株式会社より 6週令の I I型糖尿病発症マウス（C57- db/db) の雌を購入した。購入後直ちに標準固形食 CE 2を食べさせる CE 2群と、特別食 (1%CPL食）を食べさせる CP L群の 2群に分けた。水は水道水を自由摂取させた。床敷きは日本クレア社製の実験動物用床敷熱乾燥「クリーンチップ」を用レ、、毎日交換した。

血糖値の測定の前日の 18:00に餌を抜き、当日の 08:30〜09:30の間に採血した。採血後 0.01mlの血液に 0.12mlの 5%- TCA を加えて撹拌し、 10， OOOrpmで 5分間遠心分離して得られた上清を試料とした。グルコースを 0-トルイジン一ホウ酸法で測定することにより血糖値の測定を行なった。

熱量計として電子科学株式会社製全身熱量計 MoDynamic Calorimeter BDC-200 を用いて放出熱量の測定を行なった。マウスを 09:00に全身熱量計に入れ、翌日の 17:00に取り出した。熱量測定中も餌と水は自由に取らせた。

(結果）

寒冷ストレスに暴露した糖尿病モデルマゥスの生存率に及ぼす C P Lの効果を図 3に示す。 C E 2群は飼育開始後 92日に実施した熱量測定による 3 1時間の寒冷暴露で 6例中 4匹が死亡し、残る 2匹も、飼育開始後 181日と 254日に死亡した。 CP L群は飼育開始後 82日に実施した熱量測定による 31時間の寒冷暴露で 6例中 1匹が死亡し、飼育開始 242日に 1匹が死亡したが、 4匹が現存している。 '

空腹時血糖値の測定結果を図 4に示す。現存している C P L群の 4匹の飼育開始後 310日の平均空腹時血糖値は 21 Omg/d 1、飼育開始後 432日の平均空腹時血糖値は 1 70 m g Z d 1であった。

現存している CP L群 4個体の空腹時血糖値を表 2に示す。 .4個体中 3個体の飼育開始後 472日の空腹時血糖値は、飼育開始後 78日の空腹時血糖値よりも大幅に低下していた。特に db/db④と⑥の空腹時血糖値は正常値を示した。この 2個体は摂食後でも尿糖は検出されなかつた。表 2. 空腹時血糖値に及ぼす CPLの長期効果

動物飼育期間（日）

78 148 432 472

db/db① 371 277 209 162

db/db④ 434 340 1 76 99

db/db⑤ 362 389 221 354

db/db⑥ 202 168 84 91 また、放出熱量に及ぼす C P Lの効果を表 3に示す。飼育開始後 140日の C P L群の平均放出熱量は 32. O k j/日で、 db/—群の 77%であった。飼育開始後 480日の平均放出熱量は 41. 5 k J /日で、飼育開始後 140日の db/ 一群の値と同じであった。表 3 放出熱量（自由熱）に及ぼす CPLの効果

140日 480曰

db/-、 CE2 (n=4) 41.3±4.0

db/db _s CE2 (n=6) 22.5±7.7

db/db、 CPL (n=6) 32.0±4.8 41.5±10.2(n=4) 上記の通り、 C P Lを含まない標準食で飼育していた db/dbマウスの生存期間は短く、 6匹全てが生後約 10ヶ月で死んだ。 1 %C P L含有餌飼育群では 6匹中 4匹が生存している。生存しているマウス 4匹中 2匹の空腹時血糖値は正常範囲であり、尿糖も検出されなかった。すなわち、 I I型糖尿病が治癒していた。 4匹中 Γ匹の高血糖もほぼ正常値にまで改善され、尿糖は検出されたが、わずかであった。試験例 3 ：閉所拘束ストレスを付与したマウスにおけるリンパ球数の変動に及ぼす CP Lの効果

(方法）

4週齢の雄 CBA/JNCrマウスをアクリルケースに収容して飼育した。，マウスは、標準固形食 CE 2 (日本クレア株式会社より入手）を自由摂取させたコントロール群とし、上記標準固形食に 0.1%重量のポリ乳酸混合物（CP L)を含む標準固形食 CE 2 (日本クレア株式会社に依頼して入手）を自由摂取させた CP L群とにわけた。 CPL投与開始後、毎週 1回、マウスを細い円筒（直径 2. 7 cm, 奥行き 9. 5 cm) の中に 1 9時間（17:00〜翌朝 9:00)入れて閉所拘束ストレスを 4週間（4回）与えた。拘束を終了した後、直ちにジェチルエーテル麻酔下で尾静脈から 0.005m lの血液を採血し、光学顕微鏡下でリンパ球数を計測した。

(結果）

リンパ球数を計測した結果を表 4に示す。表 4に示すようにコント口ール群のリンパ球数は閉所拘束ストレス開始後、 3週目まで直線的に減少し、実験開始前の約 30%に低下し、 4週目でもその値に変動は認められなかった。 CPL群では、 1回目の閉所拘束ストレス実験後コントロール群と同様、リンパ球の減少が認められたが、その後閉所拘束ストレスを繰り返してもリンパ球数はほぼ同等の数を維持した。表 4 ：閉所拘束ストレスによって起こるリンパ球数の変化を CPL群とコントロー 'ル群で比較した表

リンパ球の個数（X 10 Vmm³)

実験期間開始時 1週目 2週目 3週目 4週目コント P-ル群 33.6±10.7^a) 26.5±4.3 17.7±7. l^b) 10.8±2.0^o) 12.1±4.9^d)

CPL群 29.3±8.5 22.0±4.4 23.9±6.6 25.5±5.8 24.6±4.7 a) :平均値土標準偏差

コントロール群の実験開始時の値に比べた t検定有意差 b ) p < 0. 05

c ) pく 0. 001

d ) p < 0. 01 試験例 4 ：ストレス下における C P Lによる発癌抑制効果

試験例 3で使用したマウスは、肺胞上皮過形成を自然発癌する系統のマウスである。これまでの研究から、腫瘍組織は嫌気的解糖系に依存してエネルギーを得ているが、 CPLはこの解糖系を抑制することにより上記発癌を抑制する効果を有する物質であることが認められている（第 56回日本癌学会総会記事第 605頁；日本癌治療学会誌第 32卷第 5号第 165頁；第 57回日本癌学会総会記事第 646頁；日本癌治療学会誌第 33卷第 3号第 222頁)。そこで、試験例 3と同様の条件下でマウスを飼育し、本ストレス下における発癌抑制効果を検討した。

実験群は、標準固形食 C E 2 (日本クレア株式会社より入手）を自由摂取させた群をコントロールとし（ストレス群）、上記標準固形食に 0 . 1 %重量の C P Lを含む標準固形食 C E 2 (日本クレア株式会社に依頼して入手）を自由摂取させた群（ストレス C P L群）に対して試験例 1と同様の.閉所拘束ストレスを加えた。さらに、ストレスを与えない条件下で C E 2を与えて飼育した群（C E 2群）、 G P Lを含む C E 2を与えて飼育した群（C P L群）も対照とした。

上記 4群を 3 0週目まで飼育し、 2 0週目と 3 0週目にジェチルエーテル麻酔下で安楽死させ、肺を摘出した。肺の組織切片を作成し、肺胞上皮過形成の割合を光学顕微鏡で観察した結果を表 5と表 6に示す。表 5は、投与開始後 2 0週目に肺における腫瘍範囲を比較した表である。各群 6個体（1個体当たり 5〜8ケ所）の組織病理切片中に含まれる腫瘍範囲を観察した結果を％で示す。表 6は、投与開始後 3 0週目に肺における腫瘍範囲を比較した表である。各群 6個体（1 個体当たり 5〜8ケ所）の組織病理切片中に含まれる腫瘍範囲を観察した結果を％で示す。表 5 ：投与開始後 20週目に肺における腫瘍範囲を比較した表。

肺の組織病理切片中における肺胞上皮過形成の範囲（％)

10%以下 10〜30%未満 30〜50%未満 50〜80%未満 80%以上

CE2群 36.1 25.0 33.3 2.8 2.8

CPL群 51.4 29.7 16.2 2.7 0.0

ストレス群 21.1 26.3 13.2 23.7 13.2 ストレス CPL群 44.4 30.6 .16.7 8.3 0.0 表 6 ：投与開始後 30週目に肺における腫瘍範囲を比較した表である。肺の組織病理切片中における肺胞上皮過形成の範囲（％)

10%以下 10〜30%未満 30〜50%未満 50〜80%未満 80%以上

CE2群 42.4 12.1 27.3 12.1 6.1

CPL群 69.2 15.3 11.5 3.8 0.0

ストレス群 25.7 2.9 11.4 34.3 25.7 ストレス CPL群 41.2 17.6 14.7 11.8 11.8 表 5の結果から、 CE 2を与えて飼育したマウスは、ストレス条件下では腫瘍範囲が拡大した。し力し、 C PLを与えて飼育したマウスでは、ストレスの有無による腫瘍範囲の違いは認められなかった。つまり、腫瘍範囲が 50%を超えるものの割合は、 CE 2を摂取した場合、ストレスを与えることによって 5. 4% が 36. 9%に増加したのに対し、 CP Lを摂取した場合には、ストレスを与えても 8. 3%であった。

また、表 6の結果から、 30週間 CE 2を与えて飼育したマウスにおいて、 5 0 %を超える腫瘍範囲の割合は、 20週目に比べ 3. 25倍の 18. 2 %であつた。この飼料を与えたマウスをストレス条件下で飼育すると 60%に増加したが、 C PLを投与した場合には 23. 6%であった。さらに、 30週目に安楽死させたマウスの肺をホモジェナイズした試料を遠心分離して上清を作成し、嫌気的解糖系の酵素活性、つまり、へキソキナーゼ（H K) 、ホスフォフルクトキナーゼ（PFK) 、ピルビン酸キナーゼ（PK) およぴ乳酸脱水素酵素（LDH) の活性を測定した。その結果を表 7に示す。表 7 ： 30週目の嫌気的解糖系の酵素活性

HK PFK PK LDH

CE2群（ストレスなし） 75.5土 7.7^a) 48.3±4.5 224.0士 28.5 1330±105 ストレス群 91.7±4.9^b) 64.0±4.4^C) 274.0±32.0^d) 1531±99^b) ストレス CPL群 69.4±8.7 51.6±7.6 229.0土 28.1 1364±172 a) :平均値土標準偏差

CE2群とストレス群との間の t検定有意差：

b) pく 0.01

c) p<0.001

d) pく 0.05 この結果から分かるように、閉所拘束ストレスによって肺における糖代謝の律速酵素活性が有意に上昇した。しかしながら、 CP L投与によってこれらの酵素活性はいずれも CE 2群との間に有意差はなかった。

試験例 3および試験例 4の結果から、 C PL投与によってストレスに伴うリンパ球数の減少や嫌気的酵素活性の亢進が抑制され、抗腫瘍効果が奏されることが実証された。産業上の利用の可能性

本発明の抗ストレス剤は、各種ストレスの軽減又は予防のために使用することができる。また、本発明において有効成分として用いられるポリ乳酸混合物は、生体成分に由来する乳酸の低縮合体であることから、生体適合性が高く、副作用が少ない。従って、本発明の抗ストレス剤は、安全性に優れ、使用に際して特別な制限がなく、例えばドリンク剤等としてストレスを予防および Zまたは軽減するために、日常的に用いることも可能である。 '

Claims

請求の範囲

1. 縮合度 3〜 20の環状及ぴ Z又は鎖状のポリ乳酸混合物を含む抗ストレス剤。

2. ストレスに起因する医学的症状を予防又は改善するため、請求項 1に記載の抗ストレス剤。

3. ストレスに起因する免疫機能の低下を予防又は改善するための、請求項 1 又は 2に記載の抗ストレス剤。

4. ストレスに起因する潰瘍又は腫瘍を予防又は改善するための、請求項 1又は 2に記載の抗ストレス剤。

5. 疾患患者のストレスに対する生存率を向上させるための、請求項 1又は 2 に記載の抗ストレス剤。

6. ポリ乳酸中における反復単位である乳酸が実質的に L一乳酸から成る、請求項 1から 5の何れか 1項に記載の抗ストレス剤。

7. 縮合度 3〜 20の環状及び Z又は鎖状のポリ乳酸混合物が、乳酸を不活性雰囲気下で脱水縮合し、得られた反応液のエタノールおよびメタノール可溶分を逆相カラムクロマトグラフィ一に付し、 pH2〜3の 25〜50重量⁰ /₀のァセト二トリル水溶液で溶離後、 pH2〜3の 90重量％以上のァセトニトリル水溶液で溶離した画分である、請求項 1力ら 6の何れか 1項に記載の抗ストレス剤。

8. 脱水縮合を窒素ガス雰囲気下、段階的減圧及ぴ昇温により行う、請求項 7 に記載の抗ストレス剤。

9. 逆相カラムクロマトグラフィーを、 OD Sカラムクロマトグラフィーにより行う請求項 7又は 8に記載の抗ストレス剤。

10. '請求項 1力、ら 9の何れかに記載の抗ストレス剤を含む、ストレス抑制のための飲食品。