JPH05310581A

JPH05310581A - 人を含む動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤

Info

Publication number: JPH05310581A
Application number: JP14792092A
Authority: JP
Inventors: Haruki Kato; 陽樹加藤; Youichirou Naganushi; 陽一郎長主
Original assignee: Koken Co Ltd
Current assignee: Koken Co Ltd
Priority date: 1992-05-15
Filing date: 1992-05-15
Publication date: 1993-11-22
Anticipated expiration: 2018-07-14
Also published as: JP3425968B2

Abstract

(57)【要約】【目的】副作用が少なく、薬理効果に優れた人を含む
動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤を提供する。【構成】Ｌ−乳酸を常圧または減圧下で窒素ガス等の
不活性ガスの雰囲気中で加熱し、得られた反応液をメタ
ノール又はエタノールに熱時溶解放冷後、濾過し、濾液
を減圧乾燥後アセトニトリルに溶かすか、または直接ア
セトニトリルに溶かした溶液を予めＰＨ２．０〜３．０
の２５％アセトニトリル水溶液で平衡化しておいて、逆
相系ＯＤＳ又はＤＳカラムでカラムクロマトグラフィー
を行い、ＰＨ２〜３の３０〜５０％アセトニトリル水溶
液で溶離後、ＰＨ２〜３の７０％以上のアセトニトリル
濃度の水溶液で溶離した画分であって、縮合度が５〜２
３の直鎖状縮合物と縮合度が２〜１５の環状縮合物との
混合物からなる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、人を含む動物の悪性腫
瘍細胞増殖抑制剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】これまで、各種の人を含む動物の悪性腫
瘍細胞増殖抑制剤及びその製造方法が提案されいるが、
それらの多くは化学的合成法や生態系を利用する製造法
で製造されたものであり、その多くは副作用が強かった
り、あるいは生産性が低く実用できなかったりし、満足
の行く人を含む動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤が提案さ
れていないのが現状である。

【０００３】例えば、人を含む動物の悪性腫瘍抑制剤及
びその製造方法が、特開昭５９−３３２２３号，特開昭
６０−２８９３０号として提案されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】こうした事情に鑑み、
本発明者は副作用が少なく、薬理効果の優れた人を含む
動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤について鋭意研究を重ね
た結果、Ｌ−乳酸の低縮合物に人を含む動物の悪性腫瘍
細胞増殖抑制剤作用があることを発見した。

【０００５】この発見に基き、本発明は、副作用の少な
い薬理効果の優れた人をも含む動物の悪性腫瘍細胞増殖
抑制剤を提供することをその目的とするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成する本発
明は、Ｌ−乳酸を常圧または減圧下で窒素ガス等の不活
性ガスの雰囲気中で加熱し、得られた反応液をメタノー
ル又はエタノールに熱時溶解放冷後濾過し、濾液を減圧
乾燥後アセトニトリルに溶かすか、又は、直接アセトニ
トリルに溶かして溶液をＰＨ２．０〜３．０の２５％ア
セトニトリル水溶液で平衡化しておいた逆相系ＯＤＳ又
はＤＳカラムでカラムクロマトグラフィを行い、ＰＨ２
〜３の３０〜５０％アセトニトリル水溶液で溶離後、Ｐ
Ｈ２〜３の７０％以上のアセトニトリル濃度の水溶液で
溶離した画分であって、縮合度ｎが５〜２３のＬ−乳酸
直鎖状縮合物と、縮合度ｎが２〜１５のＬ−乳酸環状縮
合物との混合物よりなることを特徴とする人を含む動物
の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤である。

【０００７】加熱は、１２０℃以上２００℃以下の任意
の温度で行うか、または温度を一定にして、反応系の圧
力を順次減圧して反応液としてＬ−乳酸低縮合物を得、
次いでこのＬ−乳酸低縮合物をメタノールに溶解懸濁
し、一定温度の雰囲気で平衡化して放冷する。

【０００８】逆相系ＯＤＳまたＤＳカラムではアセトニ
トリル濃度を順次上げてステップワイズ溶出を行う。

【０００９】前記製造法において、乳酸低縮合物は、常
圧下、水が溜出し、Ｌ−乳酸モノマーの蒸気圧の低い温
度例えば１４５℃で加熱し、共存水分を除いた後、１５
０〜２００ｍｍＨｇに減圧し、更に１５０〜１６０℃，
１０〜２０ｍｍＨｇに保ち最後に１８０〜２００℃，３
〜５ｍｍＨｇで２時間以内加熱し残存モノマーその他低
沸点物質を除く方法とか、１６０〜１７０℃，１００〜
２００ｍｍＨｇの条件下に加熱するとかして製造したも
ので、メタノールによる上限カットで残存モノマーの少
ない２，３，４，５，６，……１８，１９，２０，２
１，２２，２３と連続した縮合度の低縮合物となる。

【００１０】このようにして得られた本発明のＬ−乳酸
縮合物の分画物の質量分析結果を図１，２又縮合度ｎ＝
１３分取物の分析結果を図３に示す。同図から明らかな
ように乳酸低縮合物は直鎖状縮合物と環状低縮合物とが
混在した状態になっている。

【００１１】なお、図中、Δは乳酸の環状縮合物、その
他の数値は乳酸の直鎖状縮合物を示す。

【００１２】上記製造に当たり、Ｌ−乳酸の低縮合物の
縮合度は、縮合反応時に共存する水分量及び反応温度を
適宜調整することにより容易に制御できる。

【００１３】一般に、Ｌ−乳酸（α−ヒドロキシプロピ
オン酸）は室温では液体で、通常２分子が水素結合した
状態で存在し、その濃厚溶液中には１ａｃｔｉｃａｎｈ
ｙｄｒｉｄｅ（２分子縮合したもの）が１０〜１５％含
まれ、加熱により容易に脱水縮合し、低縮合物に転化
し、さらに、容易に高分子化し固化するといわれてい
る。

【００１４】上記本発明の人を含む動物の悪性腫瘍細胞
増殖抑制剤（以下抑制剤と言う）は、乳酸の前記性質を
利用して製造したもので、乳酸を低縮合物に、転化し、
それをカラムクロマトグラフィーにより分画し、人を含
む動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制作用を有する活性画分を
採取することにより得られた剤である。

【００１５】本発明の剤は質量分析によれば直鎖状低縮
合物と環状低縮合物との混合物であるが、ラットによる
動物実験の結果によれば、縮合度５〜２３のものが最適
である。そして、その抑制剤の静脈投与後、５日前後で
薬効が出現する。前記縮合物の直鎖状低縮合物と環状低
縮合物は、現在のところ完全に相互分離することは不可
能である。分析上は凡そ縮合度ｎが４以上の環状縮合物
と（ラクチド）と直鎖状縮合物とは大まかに分けること
ができるが、縮合度ｎが２、３のラクチドは直鎖状縮合
物と挙動を共にするところから分離することができな
い。このことは親和力が強いばかりでなく、閉じ込めら
れた系内で一種の可逆平衡関係が成立しているものと推
定できる。

【００１６】上記乳酸低縮合物は粘着性が強く、凝集し
易い。一見透明に見える溶液であっても単分離したもの
とはいえない挙動を示す。この低縮合物は低濃度で界面
活性作用を有しており水溶液中で乳酸低縮合物のミセル
あるいは逆ミセルが形成される。これが抑制剤をして悪
性腫瘍細胞の第１バリヤー層である細胞膜の通過を容易
ならしめ、薬理効果を上げるものと推定できる。

【００１７】

【実施例１】製造例１Ｌ−乳酸５００ｍｌを常圧で下降形接続管及び窒素ガス
導入管を備えたセパラブルフラスコに入れ、マントルヒ
ーターで１４５℃て３時間保った後、１５０ｍｍＨｇに
減圧して２時間加熱し、更に、１５５℃，１０ｍｍＨｇ
で２時間加熱後、１８５℃で１．５時間加熱して目的の
低縮合物を得た。

【００１８】この低縮合物をまだ流動性がある内に２倍
量のメタノールに分散し、それを濾過して得た濾液を減
圧乾燥し、上限カットしたＬ−乳酸低縮合混合物とし
た。この混合物をアセトニトリルに溶解し、予めアセト
ニトリル２５％塩酸酸性溶液（ＰＨ＝２．０）で平衡化
しておいた逆相ＯＤＳカラム（ケムコＬＣ−ｓｏｒｂＳ
Ｐ−Ｃ−ＯＤＳカラム）にかけ、ＰＨ２．０のアセトニ
トリル２５％，５０％，１００％の塩酸酸性溶液で順に
ステップワイズ溶出を行い、その溶出画分を中和し、数
回エタノール置換した後、減圧乾燥しプロピレングリコ
ールニ溶解し、夫々抑制剤１，２および３を得た。

【００１９】

【実施例２】製造例２Ｌ−乳酸を１６０℃，２００ｍｍＨｇ，窒素ガス雰囲気
中の下降形接続管２００〜３００ｍｌ／ｍｉｎで導入し
ながら、５時間撹拌した。得られた低縮合物をメタノー
ルに溶解し、その濾液を減圧乾燥した後、アセトニトリ
ルに溶解した。これを２５％アセトニトリル塩酸酸性溶
液（ＰＨ＝２．０）で平衡化しておいた逆相ＯＤＳカラ
ムにかけ、アセトニトリル２５％，４０％，８０％の塩
酸酸性溶液で３段階のステップワイズ溶出を行い、実験
１と同様にその溶出画分を順に抑制剤１´，２´，３´
とした。

【００２０】

【実施例３】急性毒性試験１雄マウスに製造例１で得られた抑制剤２を静脈注射し、
１週間体重変化を観察した。その結果を表１に示す。

【００２１】

【表１】

【００２２】

【実施例４】急性毒性試験２（ｉｉ）ウサギの動脈に抑制剤３を投与し、１，４，７
日目の体重を秤量した結果を表２に示す。比較例として
アドレアマイシンを投与した結果も示す。

【００２３】

【表２】

【００２４】

【実施例５】急性毒性実験３ (１) マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ（８週令）１０匹の尾部
の血管に抑制剤２を１日１回連続１０回投与した。その
後、１０日経過を見た結果、外観的に変化はなく死亡率
０であった。投与量：５０ｍｇ／ｍｌ溶液０．２ｍｌ（４００ｍ
ｇ／ｋｇ） (２) ヌードマウス雌４週令１０匹の背側部皮下に抑制
剤２を１日１回投与した。その後１０日経過を見た結
果、死亡率は０であった。投与量：５０ｍｇ／０．５ｍｌＨ₂Ｏ（約２．５ｇ
／ｋｇ相当） (３) ビーグル犬雌６ケ月令体重７ｋｇに抑制剤３
を１日１回連続静脈注射し１０日間観察した結果、外貌
に特別の異常反応は認められなかった。（臨床的変化な
し）。投与量：０．７ｇ（１００ｍｇ／ｋｇ）

【００２５】

【実施例６】悪性腫瘍細胞増殖抑制試験１ヌードマウスＩＣＲＮＵ／ＮＵ雌４週令の背側部皮
下に、人の悪性腫瘍細胞（株細胞）としてＨｅｌａＣ
ｅｌｌ（人子宮頸部癌株細胞）及びＫＢ（人鼻咽頭癌
株細胞）を移殖し、移植後３日目より、実験群には抑制
剤１を１日１回計１１回連続投与し、対照群には生理的
食塩水を同様に投与した。その後投与を停止し、移植後
７週目に腫瘍を取り出し秤量した。但し、抑制率は次式
で与えられる。抑制率＝（１−実験群の腫瘍重量ｇ／対照群腫瘍重量
ｇ）×１００％表３乃至４にその結果を示す。

【００２６】（１）ＨｅｌａＣｅｌｌ（人子宮頸部癌
株細胞）移植数：１×１０⁷ 投与方法：皮下投与（ｓｃ）投与量：３０ｍｇ０．３ｍｌ（３日目より）結果：対照群と実験群ともに５例の腫瘍重量を
以下に示す。

【００２７】

【表３】（１）ＫＢ（人口腔底癌株化細胞）移植数：１×１０⁷ 投与量：２０ｍｇ／０．２ｍｌ結果：対照群と実験群ともに５例の腫瘍重量を
以下に示す。

【００２８】

【表４】

【００２９】

【実施例７】悪性腫瘍細胞増殖抑制試験２マウス肺癌細胞マウスＣ５７Ｂｌａｃ雄（８週令）にＬＬＣ（マウス
肺癌細胞）１．０×１０⁶個を移殖（ＳＣ）し、実施例
５と同一方法で移殖翌日から１１回投与した。その結果
を表５に示す。

【００３０】

【表５】

【００３１】

【実施例８】悪性腫瘍細胞抑制試験３吉田肉腫ラットに吉田肉腫を移殖し腫瘤の形成後抑制剤２．２ｍ
ｇ／ｋｇ，１０ｍｍｇ／ｋｇを７日静脈連続投与し、７
日間腫瘍サイズ（ｍｍ）を測定した結果を表６に示す。
対照群に生理食塩水を同量投与した。また、陽性対照薬
としてアドリアマイシンを用いた結果をも示す。

【００３２】

【表６】

【００３３】

【実施例９】悪性腫瘍細胞抑制試験４ウサギ肝癌由来株化細胞ＶＸ２ウサギ肝癌由来株化細胞ＶＸ２をウサギ肝臓に移殖し、
２週間後１０×１０ｍｍ〜２０×２０ｍｍの腫瘍のもの
を選び、抑制剤２、３、及び比較対象にアドレアマイシ
ンを動脈投与し７日後、腫瘍を取り出し観察した結果を
表７に示す。

【００３４】

【表７】上記のとおり、癌のサイズ＝癌の長径×短径はマウスで
は有意差がやっと出る程度であるが、ラット、ウサギと
大きな動物になるにしたがって顕著な薬理効果が現れ
た。

【００３５】

【実施例１０】臨床例方法：抑制剤３の１００ｍｇをプロピレングリコール１
ｍｌに溶かした溶液（以下抑制剤３溶液という）を作成
し、体重１Ｋｇ当たり抑制剤３０ｍｇ（抑制剤約０．３
ｍｌ換算量）をビタミン剤、ブドウ糖等の点滴液に加え
て混合し、点滴静注した。投与は１日１回５回投与後３
日中止し、９日目よりまた連日５回投与し、以後患者の
状態を時間の経過と共に観察した。

【００３６】例１：胃癌鶏卵大の腫瘍をもち、出血している患者（６０才男）に
抑制剤３液１５ｍｌをブドウ糖点滴液５００ｍｌに混合
し、前記方法で投与したところ、５日目で薬効が現れ、
出血が停止し、食欲が出て体調が回復してきた。更に、
レントゲン検査で薬効を追跡し、腫瘍の縮小化が認めら
れた。これは、胃カメラによっても確認された。

【００３７】例２：甲状腺癌肥大した浸潤性腫瘍をもち、血液が浸潤し、リンパ節移
転した患者（５０才男）に抑制剤３液１５ｍｌをブドウ
糖点滴液５００ｍｌに混合し、同様に点滴静注した。投
与後６日目より血液等の湿潤が止まり、日時の経過とと
もに肥大化した腫瘍およびリンパ節が縮小してきた。同
時に体力も回復し薬効に対する充分な有意さを示した。

【００３８】例３：肺癌やはり大きくなった気管支癌の患者（５５才男）に抑制
剤３液１５ｍｌをブドウ糖点滴液５００ｍｌに混合し、
同様な方法で投与した。投与後５日目には効果が現れ、
喀痰中の血液は消失し、癌細胞は著しく減少し、全身状
態の改善が見られるようになった。２ヶ月後のＸ線検査
では腫瘤は縮小し、同時に体力の著しい回復が見られ
た。

【００３９】例４：子宮癌出血を伴う子宮頸癌患者に抑制剤３液１２ｍｌをブドウ
糖点滴液５００ｍｌに混合し同様な方法で投与した。投
与後４〜５日で出血がとまり、症状の改善が見られ、１
ヶ月経っても出血していない。２ヶ月後ＣＴスキャンに
より腫瘤の縮小化が確認した。２ヶ月後のＸ線検査では
腫瘍は縮小し、同時に体力の著しい回復が見られた。

【００４０】

【発明の効果】本発明は、実施例１で明らかなように投
与後数日で抑制効果が現れ初め、１０回投与後は中止し
てもその後の悪性腫瘍細胞の増殖が認められず、長期間
有効性を示す。本発明の抑制剤は人子宮頸部癌、人口腔
底癌、マウス肺癌、吉田肉腫、ウサギ肝癌、人の胃癌，
甲状腺癌，肺癌，子宮癌等に対して効果があるが、特に
ウサギ肝癌由来株化細胞ＶＸ２癌に対する作用は顕著で
肝臓に前記癌細胞を移殖したウサギの動脈に７日間投与
したところ、ウサギ肝癌由来化細胞ＶＸ２の浸潤や増殖
は抑制され、殆どの癌細胞は死滅した。また、吉田肉腫
に対する作用も表６に示すように、陽性対照薬であるア
ドレアマイシン程の薬理効果が見られないものの癌抑制
作用が充分に窺える。さらに、本発明の抑制剤が生体に
存在するＬ−乳酸のオリゴマーであり、かつ実施例３及
び実施例４に見られるように生体に対する副作用がない
ことが窺える。これらをも含めた総合的評価から見れ
ば、前記アドリアマイシンより高い評価を得ることがで
きるものと思慮する。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例の抑制剤２の質量スペクトル線
図。

【図２】本発明の実施例の他の抑制剤３の質量スペクト
ル線図。

【図３】ＯＤＳカラムクロマトグラフィーで濃度勾配溶
出で分取した縮合度ｎ＝１３の質量スペクトル線図（直
鎖状縮合物の縮合度ｎ＝１３に対し環状縮合物の縮合度
ｎ＝１１まで存在している。）。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｌ−乳酸を常圧又は減圧下で窒素ガス等
の不活性ガスの雰囲気中で加熱し、得られた反応液をメ
タノール又はエタノールに熱時溶解放冷後、濾過し、濾
液を減圧乾燥後アセトニトリルに溶かすか又は、直接ア
セトニトリルに溶かした溶液を予めＰＨ２．０〜３．０
の２５％アセトニトリル水溶液で平衡化しておいた逆相
系ＯＤＳ又はＤＳカラムでカラムクロマトグラフイを行
い、ＰＨ２〜３の３０〜５０％アセトニトリル水溶液で
溶離後、ＰＨ２〜３の７０％以上のアセトニトリル濃度
の水溶液で溶離した画分であって縮合度が５〜２３のＬ
−乳酸直鎖状縮合物と縮合度が２〜１５のＬ−乳酸環状
縮合物との混合物よりなる人を含む動物の悪性腫瘍細胞
増殖抑制剤。