WO2001087819A1

WO2001087819A1 - PROCESS FOR PRODUCING OPTICALLY ACTIVE α-AMINO ACID AND OPTICALLY ACTIVE α-AMINO ACID AMIDE

Info

Publication number: WO2001087819A1
Application number: PCT/JP2001/004191
Authority: WO
Inventors: Osamu Katoh; Toshitaka Uragaki; Tetsuji Nakamura
Original assignee: Mitsubishi Rayon Co., Ltd.
Priority date: 2000-05-18
Filing date: 2001-05-18
Publication date: 2001-11-22
Also published as: US6949658B2; EP1300392A1; US20030171597A1; EP1300392A4; EP1300392B1

Description

明細 ^: 光学活性 a —了ミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法技術分野

本発明は、光学活性 α —アミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法に関する。光学活性一アミノ酸、光学活性 α —アミノ酸アミド及びラセミ体のアミノ酸アミドは医農薬等の出発原料として利用される。背景技術

光学活性 α —アミノ酸の製造に関する報告は化学的合成法、生物学的合成法ともに数多く見られる。

例えば、生物学的合成法として、ひ —アミノ酸アミド不斉加水分解能を有する微生物等を用いたラセミ体 α —アミノ酸アミドの光学分割法が知られている。この方法は、立体選択性の高い微生物の取得により光学純度の高いひ—アミノ酸が容易に製造可能であること、原料となるラセミ体一アミノ酸アミドの製造が容易であること、天然型及び非天然型のいずれの光学活性 a —ァミノ酸製造にも応用が可能であること等の理由により、光学活性 α —アミノ酸の汎用的な製造法として有用である。

しかし、上記、ひ —アミノ酸アミド不斉加水分解能を有する微生物等を用いたラセミ体又は光学的に純粋でない — アミノ酸アミドの光学分割法においては、 '反応終了後、液中に目的とする光学活性 α —アミノ酸と光学活性 α —アミノ酸アミドが混在するため、光学活性 α —アミノ酸と光学活性一アミノ酸アミドを分離する必要がある。

分離法としては、水系溶媒にて酵素的不斉加水分解反応を行った後、反応液を濃縮し、アミノ酸の貧溶媒であるアルコール等の有機溶媒を加えて、結晶化したアミソ酸を取り出し、未反応のアミノ酸アミドはろ液として水一アルコール混合溶媒に溶解した状態で取得する方法が考えられる。さらには、より効率よく製造する方法として、ラセミ化を組み合わせた光学活性アミノ酸及びアミノ酸アミドの製造法が報告されている例えば、 α—アミノ酸アミドを溶媒抽出により除去した後、 α—アミノ酸を等電点にて回収する方法（特開昭 5 8— 2 0 9 9 8 9号、特開昭

5 7 - 1 3 0 0 0号各公報参照）、エタノールを加えアミノ酸を優先的に晶析させる方法（特開昭 6 3— 8 7 9 9 8号、特開昭 6 1 — 2 7 4 6 9

0号、特開昭 6 0— 1 8 4 3 9 2号、特開昭 5 9— 1 5 9 7 8 9号各公報参照）、イオン交換樹脂を用いて吸着分離を行う方法（特開平 1一 2 2

6 4 8 2号公報参照）、又は α—アミノ酸アミドを陽イオン交換樹脂に吸着させた後、該イオン交換樹脂に酵素を接触させて立体特異的に加水分解反応を行い、反応と分離を同時に行う光学活性アミノ酸の製造方法（特開平 8— 2 3 9 9 6号公報参照）が報告されている。

また、光学分割反応後、得られた光学活性 Q! —アミノ酸水溶液に含まれる水を減圧下除去し、熱有機溶媒にて残渣を洗浄して α—アミノ酸ァミドを選択的に除去した後、残った光学活性ひ—アミノ酸を回収する方法も報告されている（特開昭 6 1— 2 9 3 3 9 4号公報参照）。

この報告には、洗浄 · 回収した光学活性 α—アミノ酸アミドの有機溶媒溶液に強塩基性化合物を加え、加熱して a—アミノ酸アミドのラセミ化反応を行ない、得られた D _体及び L—体混合物の α—アミノ酸アミドを不斉加水分解反応に再利用する旨も記載されている。

また、ラセミ化に関しては、有機溶媒中、アルカリ存在下加熱してひ一アミノ酸アミドをラセミ化する方法は、特開昭 6 2— 2 5 2 7 5 1号公報明細書中にも記載されている。

さらに、特開昭 6 1 — 1 9 7 5 3 0号にもアル力リ条件下、有機溶媒中で、効率よくラセミ化が進行することが記載されている。

いずれの報告でも、ラセミ化反応中に副反応として起こる α—ァミノ酸アミドの加水分解反応を抑制するため、光学活性ひ一アミノ酸アミド溶液中の水分含量を低く抑えることが必須とされており、例えば特開昭

6 2 - 2 5 2 7 5 1号公報では有機溶媒中の水分含量を 1 0 %以下と規定している。

しかしながら、上記の光学活性 α —アミノ酸と α —アミノ酸アミドとの分離方法は各々欠点を有し工業的に効率の良い製造方法ではない。

ひ一アミノ酸と α —アミノ酸アミドを溶媒抽出により分離した後、ひ —アミノ酸を等電点にて回収する方法においては、抽出に多量の溶媒を必要とする。よって、装置、コスト面で不利となる。また、イオン交換樹脂を用いて吸着分離を行う方法では、吸着 · 脱離、回収と多くの行程が必要とし、設備投資の増加、回収効率の低下又は不純物混入機会の増加の可能性等の問題があり工業的に好ましくない。

一方、反応濃縮液にエタノールを加え α —アミノ酸を優先的に晶析させる方法は、他の方法に比べ、濃縮一晶析を同一槽内で行える等から、操作が簡便であり、装置上の設備投資も少ないという特徴がある。しかし、該方法では濃縮溶液の容積に対し数倍以上の量のエタノールを添加する必要あり、コスト増加の一因となる。また、この技術の報告例は、限られた天然アミノ酸しかなく、かつ取得したアミノ酸の純度について記載されているのもバリンのみであり、他のアミノ酸について高い純度のアミノ酸が収率良く得られるかどうかは全く不明である。従ってこの方法は汎用性ある技術とは言い難い。

また、該方法で、分離した光学活性 α —アミノ酸アミドをラセミ化して光学分割反応に再利用することを想定した場合、ェタノールは沸点が低く、ラセミ化反応に適当な溶媒ではないことは明白である。例えば、特開昭 6 2— 2 5 2 7 5 1号公報では、ェ夕ノール溶液を用いたラセミ化反応の例が記載されているが、反応温度を上昇させるため、反応容器を封管した後、 1 1 0〜 1 2 0 °Cに容器を加熱して反応を行っている。該方法は、工業スケールにおいては、特殊な装置を必要とする。従って、エタノールを用いた場合、装置上の設備投資なく常圧下で反応を行うのは困難である。

さらには、分離 · 回収した光学活性 Q!—アミノ酸アミド含有エタノール溶液は水分含有率が高いこと等を考慮すると、光学活性 0!—アミノ酸アミドのラセミ化反応を行うためには、さらなる溶液の脱水、溶媒置換等の操作、又は光学活性 α—アミノ酸アミド結晶の単離 · 乾燥操作が必要であり、操作工程が煩雑となる。

しかも、上記の方法では、必ずしも、アミノ酸のみが完全に結晶化できるとは限らず、アミノ酸アミド中にアミノ酸が混入する可能性がある。また、光学活性体の一方のみが必要な場合は、例えば、光学活性アミノ酸アミドをラセミ化して、不斉加水分解反応の原料として再利用できれば極めて好都合であるが、混入したアミノ酸により光学純度が低下することが危惧される。

水を除去した後、熱有機溶媒にて残渣を洗浄し、 α—アミノ酸アミドを選択的に洗浄除去する方法は、光学活性ひ —アミノ酸アミドを溶液から単離することなく、ラセミ化反応を行なえるという特徴があるが、ェ業的規模の製造において溶液から水分を完全に除去し濃縮乾固することは技術的に困難であり、操作性、装置上の設備投資等も考えると、この方法は実用的な製造方法ではない。

以上の理由から、公知の手法による光学活性 α—アミノ酸の製造方法およびラセミ化したひ —アミノ酸アミドの精製方法は、反応後の光学活性 0!—アミノ酸及び 0!—アミノ酸アミドの回収方法に効率等の面で問題があり、工業的に優位な方法となり得えなかった。

本発明は、上記問題点を解決した効率の良い光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性ひ一アミノ酸アミドの有効な製造法を提供する。発明の開示

本発明者らは、上記課題の解決のために、鋭意検討を重ねた結果、光学活性 0!—ァミノ酸及び光学活性 —アミノ酸アミド含有水溶液の溶媒を水から炭素数 3以上のアルコール溶媒へと置換し、光学活性ひ—アミノ酸をアルコール溶液から優先的に取得することで、非常に高い収率で光学活性一アミノ酸を製造し得ることを見いだした。

さらには、より効率良く光学活性 α —アミノ酸を製造するため、不斉加水分解反応、光学活性 α —アミノ酸の晶析 · 分離操作の後、分離母液として得られる光学活性 α —アミノ酸アミド含有アルコール溶液中から光学活性 £¾—アミノ酸アミドを単離する工程を経ることことなく、光学活性一アミノ酸アミドのラセミ化反応を実施することができることも見出した。また、アミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液から、ァミノ酸アミドを精製する方法について鋭意研究を重ねた結果、アミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液中に塩基性化合物を添加することで、ァミノ酸の有機溶媒に対する溶解度が向上し、該溶液中より、アミノ酸アミドを析出させることにより、アミノ酸の混入が少ないアミノ酸アミドを純度よく取得できること、さらには塩基性化合物の添加は、アミノ酸及びアミノ酸アミドの分離及びアミノ酸アミドのラセミ化に非常に有効であるを見出した。さらに、塩基性化合物添加後、共沸脱水等の水分除去操作を行うことで、塩基性化合物との反応で生じた水分を除去できるため、さらに効率良く光学活性ひ一アミノ酸アミドのラセミ化反応を行うことが可能であり、かつラセミ化反応後、回収された D—体及び L —体ひ一アミノ酸アミド混合物がひ—アミノ酸アミドの不斉加水分解反応の原料として循環利用できることを見いだした。

すなわち、本発明は、以下の（ 1 ) 〜（ 2 5 ) の事項に関する。

( 1 ) 光学活性ひ —ァミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミド含有水溶液の溶媒を、水から炭素数 3以上の直鎖、分岐又は環状アルコールからなる群から選ばれる少なくとも 1種のアルコールへと置換し、光学活性 α —アミノ酸を該アルコール溶液から析出させることを特徴とする光学活性 α —ァミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法であって、 α —アミノ酸が一般式（I )

(式中、 R l及び R 2は、同一又は異なっており、水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルケニル基、置換低級アルケニル基、シクロアルキル基、フエニル基、置換フヱニル基、複素環基及び置換複素環基を示す。）で示され、ひ一アミノ酸アミドが一般式（II)

(式中、 R 1及び R 2は、同一又は異なっており、水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルケニル基、置換低級アルケニル基、シクロアルキル基、フエニル基、置換フエニル基、複素環基及び置換複素環基を示す。）

で示される、光学活性 a—アミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

(2 ) ひ一アミノ酸及び一アミノ酸アミドが一般式（III) で表される芳香環を有するアミノ酸 '

(η== 0〜 1、 Χ =水素、ハロゲン、アルキル基、水酸基、アルコキシおよび一般式（IV) で表される芳香環を有するアミノ酸アミド、

(n = 0〜 l、 X=水素、ハロゲン、アルキル基、水酸基、アルコキシ基）

又は一般式（V) で表される脂肪族アミノ酸 .

(Rは炭素数 2〜 5の直鎖 · または分岐アルキル基）

および一般式（VI) で表される脂肪族アミノ酸アミド

(Rは炭素数 2〜 5の直鎖 · または分岐アルキル基）

である、（ 1 ) 記載の光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性一アミノ酸ァミドの製造方法。

(3) ひ一アミノ酸及び一アミノ酸アミドが一 t e r t—ロイシン及び α— t e r t一口イシンアミド、 α—フエ二ルァラニン及び α—フェニルァラニンアミド、ひ一フエニルダリシン及び一フエニルダリシンアミド、 α _ρ—フロロ一フエニルグリシン及び a— p—フロロ一フエニルグリシンアミド、 a— 0—クロローフエニルグリシン及びひ一 0—クロロ—フエニルグリシンアミド、 a— p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニン及び a _p—ヒドロキシーフエ二ルァラニンアミド、 a— 2—ァミノ一 n 一酪酸及び a _ 2—ァミノ— n—酪酸アミド、並びにひ一イソロイシン及び a—イソロイシンアミドからなる群から選択される一アミノ酸及び a—アミノ酸アミドである（ 2 ) 記載の光学活性ひ —アミノ酸及び光学活性 a—アミノ酸アミドの製造方法。

(4) アルコールが n—ブ夕ノール、イソプロパノール、イソプチルァルコール、 1—ペン夕ノールおよびシクロへキサノールよりなる群から選択される、（ 1 ) 記載の光学活性 a;—アミノ酸及び光学活性ひーァミノ酸アミドの製造方法。

( 5 ) アルコールが n—ブ夕ノール又はイソプロパノール、イソブチルアルコール、 1 一ペン夕ノールおよびシクロへキサノールよりなる群から選択される、（ 2 ) 記載の光学活性 a—アミノ酸及び光学活性 a—アミノ酸アミドの製造方法。

( 6 ) アルコールが n—ブタノ一ル又はイソプロパノール、イソプチルアルコール、 1 一ペン夕ノールおよびシクロへキサノールよりなる群から選択される、（ 3 ) 記載の光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性ひ一アミノ酸アミドの製造方法。

( 7 ) 光学活性 a;—ァミノ酸及び光学活性 a—アミノ酸アミド含有水溶液が、光学的に純粋でない a—アミノ酸アミドに不斉加水分解能を有する菌体又は該菌体処理物を接触させ、得られたものである（ 1 ) 〜（ 6 ) のいずれか記載の光学活性 a—ァミノ酸及び光学活性一アミノ酸ァミドの製造方法。

( 8 ) 光学活性 a—アミノ酸が析出した後の分離母液の水分含有率が 1 0質量％以下である（ 1 ) 〜（ 6 ) のいずれか記載の光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性 a—アミノ酸アミドの製造方法。 ( 9 ) 光学活性 α—アミノ酸が析出した後の分離母液の水分含有率が 1 0質量％以下である（ 7 ) 記載の光学活性 α—アミノ酸及び光学活性 a 一アミノ酸アミドの製造方法。

( 1 0 ) ( 1 ) 〜（ 6 ) のいずれか記載の方法により得られた、光学活性ひ一アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リゥムまたは tert— ブトキシカリウムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで a—アミノ酸ァミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする a—アミノ酸アミドの精製方法。

( 1 1 ) ( 7 ) 記載の方法により得られた、光学活性ひ —アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リゥムまたは tert—ブトキシカリゥムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで a—アミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする —アミノ酸アミドの精製方法。

( 1 2 ) ( 8 ) 記載の方法により得られた、光学活性 a—アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リウムまたは tett—ブトキシカリウムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで a—アミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする a—アミノ酸アミドの精製方法。

( 1 3 ) ( 9 ) 記載の方法により得られた、光学活性 a—アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リゥムまたは tert—ブトキシカリゥムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで a—アミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とするひ—アミノ酸アミドの精製方法。

( 1 4) 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1. 5 %以下である、（ 1 0 ) 記載のアミノ酸アミドの精製方法。

( 1 5 ) 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1. 5 %以下である、（ 1 1 ) 記載のアミノ酸アミドの精製方法。

( 1 6 ) 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1. 5 %以下である、（ 1 2 ) 記載のアミノ酸アミドの精製方法。

( 1 7 ) 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1. 5 %以下である、（ 1 3 ) 記載のアミノ酸アミドの精製方法。 ( 1 8 ) ( 1 0 ) 記載の方法により得られたひ一アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性ひーァミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

( 1 9 ) ( 1 1 ) 記載の方法により得られた α—アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α—アミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

( 2 0 ) ( 1 2 ) 記載の方法により得られた α—アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α—ァミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

( 2 1 ) ( 1 3 ) 記載の方法により得られた α—アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α—ァミノ酸及び光学活性ひ一アミノ酸アミドの製造方法。

( 2 2 ) ( 1 4 ) 記載の方法により得られた α—アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α—ァミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

( 2 3 ) ( 1 5 ) 記載の方法により得られた α—アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α—アミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

( 2 4) ( 1 6 ) 記載の方法により得られた一アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α—ァミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

( 2 5 ) ( 1 7 ) 記載の方法により得られたひ一アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

以下、本発明の一般的実施態様について説明する。

本発明に用いる α—アミノ酸の種類に制限はないが、次の一般式（I ) で示されるものが好ましい。

(式中、 1及び 2は、同一又は異なっており、水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルケニル基、置換低級アルケニル基、シクロアルキル基、フエニル基、置換フエニル基、複素環基及び置換複素環基を示す。）

一般式（I ) で示されるものとして、例えば、ァラニン、パリン、ロイシン、イソロイシン、メチォニン、トリブトファン、フエ二ルァラニン、セリン、システィン、チロシン、リジン、ヒスチジン、 2—アミノー n 一酪酸、シクロへキシルァラニン、ノルパリン、ノルロイシン、 6—ヒドロキシノルロイシン、ネオペンチルグリシン、ぺニシラミン、 t e r t 一口イシン、フエニルグリシン、 0—クロ口フエニルグリシン、 m—クロロフェニルグリシン、 p—クロ口フエニルグリシン、 p—フロロフエ二ルグリシン、 p—クロ口フエ二ルァラニン、 p—ヒドロキシフエ二ルァラニン、 o， p—ジクロロフエニルダリシン等を挙げることができる。

本発明において、一アミノ酸アミドの種類に制限はないが、次の一般式（I I ) で示されるものが好ましい。

一般式（I I) で示されるものとして、例えば、ァラニンアミド、ノリンアミド、ロイシンアミド、イソロイシンアミド、メチォニンアミド、トリブトファンアミド、フエ二ルァラニンアミド、セリンアミド、システィンアミド、チロシンアミド、リジンアミド、ヒスチジンアミド、 2 —アミノー n —酪酸アミド、シクロへキシルァラニンアミド、ノルバリンアミド、ノルロイシンアミド、 6—ヒドロキシノルロイシンアミド、ネオペンチルグリシンアミド、ぺニシラミンアミド、 t e r t —口イシンアミド、フエニルグリシンアミド、 0—クロ口フエニルダリシンアミド、 πι—クロ口フエニルダリシンアミド、 p—クロ口フエニルダリシンアミド、 p—フロロフェニルグリシンアミド、 p—クロ口フエ二ルァラニンァミド、 p—ヒドロキシフエ二ルァラニンアミド、 0, p—ジクロロフェニルグリシンアミド等を挙げることができる。

これらのうち、一般式（I I I) で表される芳香環を有するアミノ酸

( η == 0〜 1、 X =水素、ハロゲン、アルキル基、水酸基、アルコキシ基）

および一般式（IV) で表される芳香環を有するアミノ酸アミド、

又は一般式（V) で表される脂肪族アミノ酸

(Rは炭素数 2〜 5の直鎖 · または分岐アルキル基）

および一般式（VI) で表される脂肪族アミノ酸アミド

(Rは炭素数 2〜 5の直鎖 · または分岐アルキル基）が望ましい。

ひ一アミノ酸アミドの光学分割反応は、水性媒体中でラセミ体あるいは光学的に純粋でない一アミノ酸アミドに立体特異的に作用し、光学活性一アミノ酸と対応する光学特性を有するひ—アミノ酸アミドを与える微生物の作用により行うことができる。該微生物としては、上記反応を触媒するものであれば、特に制限はなく、例えば、ェンテロバクタ — ' クロアツセィ N— 7 9 0 1 (F E RM B P— 8 7 3 )、 E . c o

1 i J M 1 0 9 /p LA 2 0 5 (F E RM B P— 7 1 3 2 ) 等を挙げることができる。これら微生物は菌体をそのまま又は菌体処理物（洗浄菌体、乾燥菌体、菌体破砕物、菌体抽出物、粗又は精製酵素、及ぴこれらの固定化物）として使用される。

該光学分割反応は、水性媒体中においてひ—アミノ酸アミドを上記菌体又は菌体処理物と接触させることによって行われる。通常、 α—アミノ酸アミド濃度は 0. 1〜 6 0質量％、好ましくは 1〜 4 0質量％、菌体又は菌体処理物の濃度は、その活性量により異なるがアミノ酸アミド質量に対し 1 / 1 0 0 0 0〜 1質量、好ましくは 1 Z 1 0 0 0〜 1 1 0質量、反応液の p Hは 4〜 1 1、好ましくは 6〜 1 0、及び反応温度は 1 0〜 6 0で、好ましくは 2 0〜 5 0 °Cである。

反応終了後、反応液からの菌体又は菌体処理物の除去方法は特に限定しないが例えば、遠心分離、ろ過等の方法を用いて行うことができる。菌体又は該処理物を除去した反応液は必要に応じて減圧濃縮操作を行つてもよい。

得られた反応液又は濃縮液中の水は、炭素数 3以上、好ましくは 3〜 6、さらに好ましくは 4〜 6の直鎖、分岐、あるいは環状アルコールの中から選ばれた少なくとも 1種類の溶媒に置換される。溶媒として、プロパノール、ブタノール、ペンタノ一ル、へキサノール等が挙げられ、 n—ブタノ一ル、イソプロピルアルコールが望ましい。

溶媒の置換は共沸等の操作によつて行なわれ、ひ一アミノ酸アミドの不斉加水分解反応後得られる光学活性 a _アミノ酸及び光学活性 α—ァミノ酸アミド含有水溶液に含まれる水が、好ましくは 9 0質量％以上までアルコール溶媒へと置換されるまで操作を行なう。

アルコール溶媒へ置換した後、光学活性 α—アミノ酸を取得する方法は、特に限定されないが、例えば、析出による取得法が挙げられる。

光学活性 α—アミノ酸を析出させる際の光学活性 α—アミノ酸の濃度、温度については高い収率で光学活性 α—アミノ酸が回収できるのであれば特に限定はしないが、操作効率等を考慮して濃度は 1〜 5 0質量％、好ましくは 5〜 3 0質量％で、温度は一 2 0〜 6 0 °C、好ましくは 0〜 4 0 °Cで行なわれる。また、析出操作時より高い温度にて溶液を加温、撹拌した後、前述した温度にて光学活性一アミノ酸を析出させることで、純度の高い光学活性ひ一アミノ酸を得ることができる。さらに析出した光学活性ひ一アミノ酸の回収操作は連続及び回分のいずれの方法によっても行うことができる。上記操作により、結晶として析出した光学活性ひ一アミノ酸は、遠心分離又はろ過等の方法により回収され、その結果、光学活性 a—ァミノ酸は溶液中に溶解している光学活性 a—アミノ酸アミドと分離することができる。

分離母液中の光学活性 a—アミノ酸アミドは、必要により、光学活性一アミノ酸アミドに対して溶解度の低い溶媒への置換、あるいは溶媒を除去して固体状で回収することができる。

光学活性 a —アミノ酸アミドのラセミ化反応は、塩基性化合物を、分離母液として得られる光学活性 a —アミノ酸アミド含有アルコール溶液に加えて行う。

塩基性化合物としては、アミノ酸が有機溶媒に溶けやすい塩になるものであれば何れでも構わず、アルカリ金属、アルカリ金属水酸化物、ァルカリ金属水素化物、アルカリ金属塩、又はアルカリ金属のアルコラ一トのうち、少なくとも 1種類が選ばれる。アルカリ金属としては、例えば、金属ナトリウム、金属力リゥムが、アル力リ金属水素化物としては、例えば、水素化ナトリウム、水素化カリウムが、アルカリ金属塩としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムが、アルカリ金属水酸化物としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが、アルカリ金属のアルコラートとしてはナトリウムメチラート、ナトリウムェチラート、カリウムメチラート、カリウム一 t e r t —プチラート等が挙げられる。これらのうち、特にカリウム化合物が望ましい。

加えられるべき塩基化合物の量はアミノ酸アミドに対して 0 . 0 1〜 1 . 0モル当量、好ましくは 0 . 0 5〜 0 . 5モル当量である。 a—ァミノ酸アミド含有アルコール溶液中に —アミノ酸が混在する場合は、一アミノ酸の 1 . 0モル当量以上の塩基性化合物を前述した量に加算して加えることができる。また、塩基性化合物添加後、共沸脱水等の水分除去操作を行うことで、塩基性化合物との反応で生じた水分を除去できるため、さらに効率良く光学活性 a —アミノ酸アミドのラセミ化反応を行うことが可能である。かくしてアルコール溶液として回収された光学活性ひ —アミノ酸アミドは、アルコール溶媒中に溶解したまま複雑な工程を経ることなく、単純な操作のみでラセミ化反応を実施することができる。

光学活性 α—アミノ酸アミドのラセミ化反応の条件は、 α—アミノ酸アミド、塩基化合物の種類、濃度等の諸要因により異なり特に限定されるものではないが、一般には反応温度 8 0〜 2 0 0 °C、好ましくは 1 0 0〜 1 5 0 °Cで 1 0分〜 2 4時間行う。

アミノ酸アミドの取得は、塩基性化合物を混入したアミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液に適当な有機溶媒を加え、アミノ酸アミドを優先的に析出させることにより行う。析出の際、使用する有機溶媒は、塩基性化合物の塩となったアミノ酸塩が溶解し、アミノ酸アミドが溶解し難い溶媒であればいずれでも構わない。

アミノ酸アミドを該溶液より析出させるには、濃縮又は冷却等の操作により行うことができる。

反応後、 D—体及び L—体ひ —アミノ酸アミド混合物は、公知の方法により回収され、不斉アミノ酸アミド加水分解反応に循環利用することができる。発明を実施するための最良の形態

次に、本発明を実施例により具体的に説明する。

参考例 1 光学活性ひ —アミノ酸と光学活性 α—アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

特開昭 6 2 - 5 5 0 9 7号公報記載の方法に従い、ェンテロパクタークロアツセィ N— 7 9 0 1 (F E RM P— 8 7 3 )の培養を行った。培養液 1 Lを遠心分離し、次いで湿潤菌体を蒸留水に懸濁して菌体懸濁溶液 8 0 0 gを調製した。この懸濁液に D, L— t e r t —ロイシンァミド 2 0 0 gを溶解させた後、 4 0 °Cにて 5 2時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L一 t e r t 一口イシン及び D— t e r t 一口イシンアミドを各々 1 0質量％含む水溶液 9 7 0 gを得た。

t e r t —ロイシン及び t e r t —ロイシンアミドの濃度は高速液体クロマトグラフィー（HP L C) 分析条件 1で、各々の光学純度は、 H P L C分析条件 2で分析を行った。また、溶液の水分量はカールフイツシャ一水分測定器（三菱モイスチャーメ一夕一 CA- 60：三菱化成社製）を用いて測定した。

HP L C分析条件 1 ：

カラム：イナ一トシル OD S— 3 V ( 4. 6 φ X 2 5 0 mm) 移動層： 0. 1 % リン酸水溶液

流速： 1 m L / m i n

，検出： R I

HP L C分析条件 2 ：

カラム： S UM I CH I RAL OA— 5 0 0 0 ( 4. 6 φ X 2 5 0 mm)

水一メタノール ( 8 5 5 )

流速： 1 m L / m i n

検出： U V 2 5 4 n m

実施例 1

参考例 1で得られた L一 t e r t 一口イシンと D _ t e r t 一口イシンアミドを含む水溶液 2 0 0 gを 7 2 gまで減圧濃縮した後、溶液にィソプロピルアルコール 3 0 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、最終的に濃縮液 1 4 0 gを得た。この時の濃縮液の水分濃度は 6. 5質量 %であった。この濃縮液を 5 0 にて 1時間撹拌した後、溶液を冷却し、 1 5 °Cにてさらに 4時間撹拌した。析出した結晶を吸引濾過により回収し、乾燥質量 1 8. 4 gの L一 t e r t —ロイシンを得た（収率 9 2 % )o この時、 L一 t e r t —ロイシン結晶中に含まれる D— t e r t 一口イシンアミドの量は 0. 0 1質量％以下であった。実施例 2

参考例 1で得られた L— t e r t —ロイシンと D _ t e r t 一口イシンアミドを含む水溶液 4 0 0 gを 1 4 0 gまで減圧濃縮した後、溶液に n—ブ夕ノール 3 0 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、最終的に濃縮液 2 6 5 gを得た。この時の濃縮液の水分濃度は 0 . 9質量％であつた。濃縮液に n -ブ夕ノール 1 0 gを加えて得た溶液を 6 0でにて 1 時間撹拌した後、溶液を冷却し、 2 0 °Cにてさらに 3時間撹拌した。析出した結晶を遠心ろ過により回収し、乾燥質量 3 9 . 2 gの L — t e r t —ロイシンを得た（収率 9 8 % )。この時、 L— t e r t 一口イシン結晶中に含まれる D _ t e r t —ロイシンアミドの量は 0 . 0 5質量％でめった。

実施例 3

参考例 1で得られた L 一 t e r t —ロイシンと D— t e r t —口イシンアミドを含む水溶液 5 0 0 gを 2 5 0 gまで減圧濃縮した後、溶液に n —ブ夕ノール 2 5 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、溜出液が 2 4 0 となった時点で再度溶液に n —ブ夕ノ一ルを 2 5 0 g加えた。添加後、再び減圧濃縮を行ない、最終的に濃縮液 3 5 0 gを得た。この時の濃縮液の水分濃度は 0 . 6質量％であった。この濃縮液を 6 0 °Cにて 2時間撹拌した後、溶液を冷却し、 2 0 °Cにてさらに 2時間撹拌した。析出した結晶を遠心ろ過により回収し、乾燥質量 4 8 . 9 gの L 一 t e r t —ロイシンを得た（収率 9 8 % )。この時、 L— t e r t —ロイシン結晶中に含まれる D— t e r t —ロイシンアミドの量は 0 . 0 1質量％未満であった。

回収した分離母液 2 9 5 g中には D— t e r t 一口イシンアミド 4 9 . 0 gが含まれていた。

実施例 4

実施例 3で得られた D - t e r t 一口イシンアミドの n —ブ夕ノール溶液（分離母液） 2 9 5 gに水酸化ナトリウム 3 . 0 gを加え、 4時間加熱還流した。反応液を 8 0 gまで減圧濃縮した後、濃縮液に n—ヘプタン 1 0 0 gを加えて 5 °Cにて 1 0時間攪拌した。析出した結晶を吸引ろ過にて回収し、乾燥質量 3 8. 7 gの D—体及び L—体の混合物の t e r t —口イシンアミドを得た（分離母液からの収率 7 9 %)。このときの t e r t 一口イシンアミド結晶の D—体： L—体の存在比率は 5 0. 2 : 4 9. 8であった。

実施例 5

実施例 4で得られた D—体及び L一体の混合物の t e r t—ロイシンアミド結晶 2 0 gと参考例 1 にて調製した菌体懸濁液 8 0 gを混合し、参考例 1 と同様にして菌体反応を行った。 5 2時間後反応液中には L一 t e r t —ロイシン及び D _ t e r t —ロイシノアミドが各々 1 0質量 %存在していた。

実施例 6

実施例 3で得られた D - t e r t —ロイシンアミドの n—ブ夕ノ一ル溶液（分離母液） 2 9 5 gに水酸化カリウム 3. 0 gを加えた後、この溶液を 2 0 6 gまで減圧濃縮した。濃縮液の水分濃度は 0. 0 6質量％であった。濃縮液を 6時間加熱還流した後、反応液を 8 1 gまで減圧濃縮し、さらに濃縮液に n—ヘプタン 1 0 0 gを加えて 5 °Cにて 3時間攪拌した。析出した結晶を吸引ろ過にて回収し、乾燥質量 4 0. 2 ^の13 一体及び L一体の混合物の t e r t _ロイシンアミドを得た（分離母液からの収率 8 2 %)。このときの t e r t —ロイシンアミド結晶の D—体： L—体の存在比率は 5 0. 0 : 5 0. 0であった。

実施例 7

n—ブ夕ノールの代わりに、表 1 に示した各アルコール溶媒を用いて実施例 2 と同様の操作を行ない、参考例 1で得られた L一 t e r t —口イシンと D— t .e r t —ロイシンアミドを含む水溶液 4 0 0 gから L— t e r t 一口イシン結晶を回収した。表 1 に溶媒置換操作後の各アルコール溶液の水分含量、晶析温度、及び L一 t e r t —口イシン取得収率、を示した。

実施例 8

D— t e r t —口イシンアミド 7 0 g (光学純度 > 9 9 % e e )、 L— t e r t _ロイシン（光学純度〉 9 9 % e e ) 2 gを、水 4 8 g及びィソプロピルアルコール 8 0 gに溶解した溶液全量 2 0 0 g (水分量 2 4 %) に、 n—ブタノ一ル 1 0 0 gを加えて 6 0 °CZ 8 0 t o r rで全量 1 5 0 gになるまで濃縮した。

そこへ、水酸化カリウム 4. 9 g (アミノ酸に対して等量及びアミドに対して 2 0 %モル）及び n -ブ夕ノール 1 4 5 gを加えて室温で 1時間攪拌して水酸化力リゥムを溶解させた（全量 3 0 0 g)₀ 水分量を測定したところ 6 %であった。

さらに、 8 0でノ 8 0 t o r rで全量 1 5 0 gになるまで濃縮後、 n ーブ夕ノール 1 5 0 gを加えて全量 3 0 0 gとした（水分量 0. 1 %)。該溶液を 1 2 0 °Cで 6時間攪拌した。

結果、反応前は 2. 8 % (wXw) であったアミノ酸比が、反応後は 5. 4 % (w/w) であった。

反応後、全量 1 0 0 gになるまで濃縮し、 n—ヘプタン 1 0 0 gを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体の t e r t — ロイシンアミド 6 3 gを取得した。 t e r t —ロイシン及び t e r t - ロイシンアミドの濃度は高速液体クロマトグラフィー（HP L C) 分析条件 3で、各々の光学純度は、 H P L C分析条件 4で分析を行った。 HP L C分析条件 3 ：カラム：イナ一トシル OD S— 3 V ( 4. 6 X 2 5 0 mm) 移動層： 0. 1 % リン酸水溶液

流速： l mLZm i n

検出： R I

H P L C分析条件 4 ：

カラム： S UM I C H I R A L OA— 5 0 0 0 (4. 6 X 2 5 0 mm;

水一メタノール（ 8 5 5 )

流速： 1 m L X m i n

検出： U V 2 5 4 nm

上記条件で、 HPLCで分析したところ、採取した t e r t—ロイシンアミド中に含まれる t e r t —ロイシンは 0. 1 3 % (w/w) であつた。アミノ酸アミドの取得収率は 9 0 %、ラセミ化率は 9 9 %であった。実施例 9

D— t e r t —ロイシンアミド 7 0 g (光学純度 > 9 9 % e e ), L - t e r t 一口イシン（光学純度〉 9 9 % e e ) 5. 5 gを、水 4 4 g、及びィソプロピルアルコール 8 0 gに溶解した溶液全量 2 0 0 g (水分量 2 2 %) に、 n—ブ夕ノール 1 0 0 gを加えて 6 0 °CZ 8 0 t o r r で全量 1 5 0 gになるまで濃縮した。

そこへ、水酸化カリウム 9. 8 7 g (アミノ酸に対して等量及びアミドに対して 2 0 %モルに相当）及び n—ブ夕ノール 1 4 0 gを加えて室温で 1時間攪拌して水酸化力リゥムを溶解させた（全量 3 0 0 g)。水分量を測定したところ 4 %であった。

さらに、 8 0 °C/ 8 0 t o r rで全量 1 5 0 gになるまで濃縮した後、 n—ブ夕ノール 1 5 0 gを加えて全量 3 0 0 gとした.（水分量 0. 1 % )o 該溶液を 1 2 0 で 6時間攪拌した。

結果、反応前は 7. 3 % (w/w) であったアミノ酸比が反応後は 1 1. 9 % (w/w) であった。反応後、全量 1 0 0 gになるまで濃縮し、 n—ヘプタン 1 0 0 gを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体の t e r t — ロイシンアミド 6 3 gを取得した。

実施例 8の条件で、 HPLCで分析したところ、採取した t e r t —口イシンアミド中に含まれる t e r t —口イシンは 1. 0 7 % (w/w) であった。アミノ酸アミドの取得収率は 8 9 %、ラセミ化率は 9 9 %であった。

実施例 1 0

D - t e r t 一口イシンアミド 7 0 g (光学純度 > 9 9 % e e )、 L — t e r t —ロイシン（光学純度 > 9 9 % e e ) 5. 5 gを、水 4 4 g 及びィソプロピルアルコール 8 0 gに溶解した溶液全量 2 0 0 g (水分量 2 2 %) に、 n—ブタノール 1 0 0 gを加えて 6 0でノ 8 0 1； 0 1" で全量 1 5 0 gになるまで濃縮した後、 n―ブ夕ノール 1 5 0 gを加えて全量 3 0 0 gにした。水分量を測定したところ 4 %であった。

さらに、 8 0 °C/ 8 0 t o r rで全量 1 5 0 gになるまで濃縮した後、 n―ブタノール 1 5 0 gを加えて全量 3 0 0 gとした。水分量を測定したところ 0. 1 %であった。

そこへ、 t e r t —ブトキシカリウム 1 0. 7 4 g (アミノ酸に対して等量及びアミドに対して 1 0 %モル相当）加えて、 1 2 0 °Cで 6時間攪拌した。

結果、反応前は 7. 3 % (wZw) であったアミノ酸比が反応後は 9. 4 % (w/w) であった。

反応後、全量 1 0 0 gになるまで濃縮し、 n—ヘプタン 1 0 0 gを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、 ¾燥させて、ラセミ体の t e r t — ロイシンアミド 6 3 gを取得した。

実施例 8の条件で、 HPLCで分析したところ、採取した t e r t —口イシンアミド中に含まれる t e r t —ロイシンは 0. 8 9 % (w/w) であった。アミノ酸アミドの取得収率は 8 9 %、ラセミ化率は 9 6 %であった。

比較例 1

D - t e r t 一口イシンアミド 7 0 g (光学純度 > 9 9 % e e )、 L一 t e r t —ロイシン（光学純度 > 9 9 % e e ) 5. 5 gを、水 4 4 g及びィソプロピルアルコール 8 0 gに溶解した溶液 2 0 0 g (水分量 2 2 %) に、 n—ブ夕ノール 1 0 0 gを加えて 6 0 °C/ 8 0 t o r rで全量 1 5 0 になるまで濃縮した。

そこへ、水酸化ナトリウム 6. 0 0 g (アミノ酸に対して等量及びァミドに対して 2 0 %モルに相当）及び n—ブタノール 1 44 gを加えて室温で 1時間攪拌して水酸化ナトリゥムを溶解させた（全量 3 0 0 g)₀ 水分量を測定したところ 4 %であった。

さらに、 8 0 °C/ 8 0 t o r rで全量 1 .5 0 gになるまで濃縮後、 n 一ブタノ一ル 1 5 0 gを加えて全量 3 0 0 gとした（水分量 0. 1 % )。該溶液を 1 2 0 °Cで 6時間攪拌した。

結果、反応前は 7. 3 % (wXw) であったアミノ酸比が、反応後は 1 2. 1 % (wZw) であつた。

反応後、全量 1 0 0 gになるまで濃縮し、 n—ヘプタン 1 0 0 gを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体の t e r t — ロイシンアミド 6 5 gを採取した。

実施例 8の条件で HPLCで分析したところ、採取した t e r t —ロイシンアミド中に含まれる t e r t —ロイシンは 5. 9 6 % (wZw) であった。アミノ酸アミドの取得収率は 8 7 %、ラセミ化率は 9 8 %であつた。

参考例 2 光学活性 α—アミノ酸と光学活性一アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

特開昭 6 2 _ 5 5 0 9 7号公報記載の方法に従い、ェンテロパク夕一クロアツセィ N— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) の培養を行つた。培養液 5 0 0 mLを遠心分離し、次いで湿潤菌体を蒸留水に懸濁して菌体懸濁溶液 1 1 4 0 gを調製した。この懸濁液に D， L一フエ二ルァラニンアミド 6 0 gを溶解させた後、 4 0 °Cにて 2 4時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L一フエ二ルァラニン及び D—フエ二ルァラニンアミドを各々 2. 5質量％含む水溶液 1 1 5 0 g を得た。

フエ二ルァラニン及びフエ二ルァラニンアミドの濃度は HP L C分析条件 5で、各々の光学純度は、 H P L C分析条件 6で分析を行った。 H P L C分析条件 5 ：

カラム：イナ一トシル OD S— 3 V (4. 6 φ X 2 5 0 mm) 移動層： 0. 1 % リン酸水溶液一メタノール（ 8 0 ： 2 0 ) 流速： 1 m L /m i n

検出： UV 2 5 4 n m

H P L C分析条件 6 ：

カラム： S UM I C H I R A L OA— 5 0 0 0 ( 4. 6 X 2 5 0 mm)

移動層水一メタノール（ 7 0 3 0 )

流速： 1 m L / m i n

検出： U V 2 5 4 n m

実施例 1

参考例 2で得られた L一フエ二ルァラニンと D—フエ二ルァラニンァミドを含む水溶液 l l O O gを 3 1 0 gまで減圧濃縮した後、溶液に n ーブ夕ノール 7 7 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、最終的に濃縮液 3 3 5 gを得た。この時の濃縮液の水分濃度は 0. 2質量％であつた。濃縮液を 7 0 °Cにて 1時間撹拌した後、溶液を冷却し、 4 0 °Cにてさらに 1時間撹拌した。析出した結晶を遠心ろ過により回収し、乾燥質量 2 8. 2 gの L一フエ二ルァラニンを得た（収率 9 4 %)。この時、 L 一フエ二ルァラニン結晶中に含まれる D—フエ二ルァラニンアミドの量は 0. 0 7質量％であった。実施例 1 2

実施例 1 1の遠心ろ過操作後、 D—フエ二ルァラニンアミド 2 8 が含まれる n—ブタノ一ル溶液 3 0 0 gを得た。これに水酸化カリウム 1. 1 g、及び n—ブ夕ノール 5 0 gを加えた後、溶液を 1 8 7 gまで減圧濃縮した。濃縮液の水分濃度は 0. 0 5質量％であった。濃縮液を 1時間加熱還流した後、反応液を 5 5 gまで減圧濃縮し、さらに濃縮液にトルェン 1 0 0 gを加えて 5 °Cにて 3時間攪拌した。析出した結晶を吸引ろ過にて回収し、乾燥質量 2 3. 8 gの D—体及び L一体の混合物のフェニルァラニンアミドを得た（分離母液からの収率 8 5 %)。このときのフエ二ルァラニンアミド結晶の D—体： L—体の存在比率は 5 0. 1 ： 4 9. 9であった。

実施例 1 3

実施例 1 2で得られた D—体及び L—体の混合物のフエ二ルァラニンアミド結晶 2 0 gと参考例 2にて調製した菌体懸濁液 3 8 0 gを混合し、参考例 2と同様にして菌体反応を行った。 2 4時間後反応液中には L一フエ二ルァラニン及び D—フエ二ルァラニンアミドが各々 2. 5質量％存在していた。

参考例 3 光学活性 —アミノ酸と光学活性ひ一アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

特開昭 6 2— 5 5 0 9 7号公報記載の方法に従い、ェンテロパク夕一クロアツセィ N— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) の培養を行った。培養液 1 0 0 mLを遠心分離し、次いで湿潤菌体を蒸留水に懸濁して菌体懸濁溶液 2 7 0 gを調製した。この懸濁液に D、 L一フエ二ルグリシンアミド 3 0 gを溶解させた後、 4 O X にて 1 8時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L一フエニルダリシン及び D—フエニルダリシンアミドを各々 5. 0質量％含む水溶液 2 9 5 gを得た。

L—フエニルダリシン及び D—フエニルダリシンアミドの濃度は HP L C分析条件 7で、各々の光学純度は、 H P L C分析条件 8で分析を行つた。

H P L C分析条件 7 ：

カラム：イナ一トシル OD S— 3 V (4. 6 φ X 2 5 0 mm) 移動層： 0. 1 % リン酸水溶液一メタノール（ 9 5 ： 5 )

流速： 1 m L /m i n

検出： UV 2 2 0 n m

H P L C分析条件 8 ：

カラム： S UM I CH I RAL OA— 5 0 0 0 ( 4. 6 X 2 5 0 mm)

水一メタノール（ 8 5 1 5 )

流速： 1 m L / m i n

検出： U V 2 5 4 n m

実施例 1 4

参考例 3で得られた L一フエニルダリシン及び D―フエニルダリシンアミドを含む水溶液 2 9 5 gを 1 0 0 gまで減圧濃縮した後、溶液に n ーブ夕ノール 1 9 0 gを加えた。溶液の量が 1 1 0 gになるまで減圧濃縮し、さらに n—ブタノール 1 9 0 gを再ぴ加え最終的に濃縮液 1 2 0 gを得るまで減圧濃縮を行った。得られた濃縮液に n—ブ夕ノール 3 0 gを加えた後の溶液の水分濃度は 0. 1質量％であった。 n—ブタノ一ル溶液を 7 0 °Cにて 1時間撹拌した後、溶液を冷却し、 2 0°Cにてさらに 5時間撹拌した。析出した結晶を吸引ろ過により回収し、乾燥質量 1 3. 5 gの L—フエニルダリシンを得た（収率 9 0 %)。この時、 L—フェニルグリシン結晶中に含まれる D—フエニルダリシンアミドの量は 0 . 0 5質量％であつた。

実施例 1 5

実施例 1 4の遠心ろ過操作後、 D—フエニルダリシンアミド 1 4. 5 gが含まれる n—ブ夕ノール溶液 1 1 0 gを得た。これに水酸化力リゥム 0. 2 g、 n—ブ夕ノール 4 0 gを加えた後、溶液を 7 2 gまで減圧濃縮した。濃縮液の水分濃度は 0. 0 8質量％であった。濃縮液を 2時間加熱還流した後、反応液を 2 5 gまで減圧濃縮し、さらに濃縮液にトルェン 4 0 gを加えて 5 °Cにて 1 0時間攪拌した。析出した結晶を吸引ろ過にて回収し、乾燥質量 1 0. 9 gの D—体及び L一体の混合物のフェニルダリシンアミドを得た（分離母液からの収率 7 5 %)。このときのフエニルグリシンアミド結晶の D—体： L一体の存在比率は 5 0. 0 ： 5 0. 0であった。

実施例 1 6

実施例 1 5で得られた D—体及び L一体の混合物のフエニルダリシンアミド結晶 4 gと参考例 3にて調製した菌体懸濁液 3 6 gを混合し、参考例 3 と同様にして菌体反応を行った。 2 4時間後反応液中には L—フェニルダリシン及び D -フエニルダリシンアミドが各々 2. 5質量％存在していた。

参考例 4 光学活性ひ一アミノ酸と光学活性 α—アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

特開昭 6 2— 5 5 0 9 7号公報記載の方法に従い、ェンテロパクタークロアツセィ Ν— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) の培養を行つた。培養液 1 0 0 mLを遠心分離し、次いで湿潤菌体を蒸留水に懸濁して菌体懸濁溶液 2 2 8 gを調製した。この懸濁液に D， L -P-フロロ —フエニルダリシンアミド 1 2 gを溶解させた後、 4 0 °Cにて 2 4時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L— p—フロロ—フェニルグリシン及び D— p—フロロ—フエニルダリシンアミドを各々 2. 5質量％含む水溶液 2 3 0 gを得た。

L— p—フロロ一フエニルグリシン及び D— p—フロロ一フエ二ルグリシンアミドの濃度は H P L C分析条件 9で、各々の光学純度は、 H P L C分析条件 1 0で分析を行った。

H P L C分析条件 9 ：カラム：イナ一トシル OD S— 3 V ( 4. 6 φ X 2 5 0 mm) 移動層： 0. 1 % リン酸水溶液一メタノール（ 9 5 ： 5 )

流速： 1 m L / i n

検出： UV 2 2 0 n m

H P L C分析条件 1 0 ：

カラム： S UM I CH I RAL OA— 5 0 0 0 (4. 6 X 2 5 0 mm)

水一メタノール（ 8 5 2 0 )

速： 1 m L /m i n

検出： U V 2 5 4 n m

実施例 1 7

参考例 4で得られた L一 p—フロロ一フエニルダリシン及び D _p—フロロ—フエニルダリシンアミドを含む水溶液 2 3 0 gを 6 0 gまで減圧濃縮した後、溶液に n—ブタノール 1 7 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、最終的に濃縮液 6 0 gを得た。得られた濃縮液に n—プタノール 6 0 gを加えた後の溶液の水分濃度は 0. 0 8質量％であった。 n ーブ夕ノール溶液を 7 0 °Cにて 1時間撹拌した後、溶液を冷却し、 2 0 °Cにてさらに 5時間撹拌した。析出した結晶を遠心ろ過により回収し、乾燥質量 5 · 4 gの L -P-フロロ一フエ二ルグリシンを得た（収率 9 0 %)。この時、 L一 p—フロロ一フエニルグリシン結晶中に含まれる D— p 一フロロ—フエニルグリシンアミドの量は 0. 1質量％であった。

実施例 1 8

実施例 1 Ίの遠心ろ過操作後、 D—p—フロロ—フエニルダリシンアミド 5. 9 gが含まれる n—ブ夕ノール溶液 1 1 0 gを得た。これに水酸化カリウム 0. 2 gを加えた後、溶液を 6 0 gまで減圧濃縮した。濃縮液の水分濃度は 0. 0 2質量％であった。濃縮液を 2時間加熱還流した後、反応液を 2 0 gまで減圧濃縮し、さらに濃縮液にトルエン 2 0 gを加えて 5 °Cにて 3時間攪拌した。析出した結晶を吸引ろ過にて回収し、 i 4 - 4 gの D—体及び L—体の混合物の！)—フロロ一フエニルダリシンアミドを得た（分離母液からの収率 7 4 % )。このときの p—フロ口—フエニルグリシンアミド結晶の D—体： L—体の存在比率は 5 0. 0 : 5 0. 0であった。

実施例 1 9

実施例 1 8で得られた D—体及び L一体の混合物の p—フロロ—フエニルダリシンアミド結晶 4 gと参考例 4にて調製した菌体懸濁液 3 6 g を混合し、参考例 4と同様にして菌体反応を行った。 2 4時間後反応液中には L— p—フロロ—フエニルグリシン及び D— p—フロロ一フエニルグリシンアミドが各々 2. 5質量％存在していた。

参考例 5 光学活性 α—アミノ酸と光学活性 α—アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

参考例 4と同様にしてェンテロバクタ一クロアツセィ Ν— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) 懸濁溶液 2 2 8 に0、 L— 0—クロ口一フエニルダリシンアミド 1 2 を溶解させた後、 4 0 °Cにて 2 4時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L一 0—クロ口一フェニルダリシン及び、 D— 0—クロ口—フエニルダリシンアミドを各々 2. 5質量％含む水溶液 2 3 0 gを得た。

実施例 2 0

参考例 5で得られた L一 0—クロ口—フエニルダリシン及び D— 0—クロロ一フエニルダリシンアミドを含む水溶液 2 3 0 gを実施例 1 7 と同様の手段で処理し、乾燥質量 5 . 5 8のー0—クロロ—フエニルダリシンを得た（収率 9 1 %)。この時、 L—0—クロローフエニルダリシン結晶中に含まれる D— 0—クロ口—フエニルダリシンアミドの量は 0. 1質量％であった。

実施例 2 1

実施例 2 0の操作後、 D— 0—クロ口一フエニルダリシンアミド 5. 9 gが含まれる n—ブ夕ノ一ル溶液 1 1 0 gを得た。これに水酸化力リゥム 0. 2 gを加えた後、実施例 1 8 と同様の工程操作を行い、乾燥質量 4. 5 gの D—体及び L一体の混合物の 0—クロローフエニルグリシンァミドを得た（分離母液からの収率 7 6 %)。このときの 0—クロローフエニルダリシンアミド結晶の D—体： L—体の存在比率は 5 0. 0 ： 5 0 . 0であった。この得られた結晶を用いて実施例 1 9 と同様に菌体反応を行ったところ、 2 4時間後反応液中には L一 0—クロローフエニルダリシン及び D _o—クロ口一フエニルダリシンアミドが各々 2. 5質量％存在していた。

参考例 6 光学活性 α—アミノ酸と光学活性ひ一アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

参考例 4と同様にしてェンテロパクタークロアツセィ Ν— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) 懸濁溶液2 2 8 8に0、 L— p—ヒドロキシ—フエ二ルァラニンアミド 1 2 gを溶解させた後、 4 0°Cにて 2 4 時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L一 p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニン及び D— p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニンァミドを各々 2. 5質量％含む水溶液 2 3 0 gを得た。

実施例 2 2

参考例 6で得られた L一 p—ヒドロキシーフエ二ルァラニン及び D—p —ヒドロキシ—フエ二ルァラニンアミドを含む水溶液 2 3 0 gを実施例 1 7と同様の操作を行い、乾燥質量 5. 3 gの L— p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニンを得た（収率 8 8 %)。この時、 L— p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニン結晶中に含まれる D— p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニンアミドの量は 0. 2質量％であった。

実施例 2 3

実施例 2 2の操作後、 D— p—ヒドロキシ—フエ二ルァラニンアミド 5 - 9 gが含まれる n—ブ夕ノール溶液 1 1 0 gを得た。これに水酸化力リウム 0. 3 gを加えた後、実施例 1 8 と同様の工程操作を行い、乾燥質量 4. 2 gの D—体及び L一体の混合物の P—ヒドロキシ—フエニルァラニンアミドを得た（分離母液からの収率 7 2 %)。このときの p—ヒド口キシ一フエ二ルァラニンアミドの D—体： L—体の存在比率は 5 0. 0 : 5 0. 0であった。この得られた結晶を用いて実施例 1 9 と同様に菌体反応を行ったところ、 2 4時間後反応液中には L一 p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニン及び D— p—ヒドロキシ一フエ二ルァラニンアミドが各々 2. 5質量％存在していた。

参考例 7 光学活性ひ一アミノ酸と光学活性 α—アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

特開昭 6 2 - 5 5 0 9 7号公報記載の方法に従い、ェンテロパクタークロアツセィ Ν— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) の培養を行った。培養液 1 0 O mLを遠心分離し、次いで湿潤菌体を蒸留水に懸濁して菌体懸濁溶液 2 4 0 gを調製した。この懸濁液に D、 L— 2—ァミノー n—酪酸アミド 1 0 gを溶解させた後、 4 0 °Cにて 4 0時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L _ 2 _アミノー n— 酪酸及び D— 2—アミノー n—酪酸アミドを各々 2. 0質量％含む水溶液 2 4 0 gを得た。

実施例 2 4

参考例 7で得られた L— 2 —ァミノ— n _酪酸及び D— 2—アミノー n—酪酸アミドを含む水溶液 2 4 0 gを 5 0 gまで減圧濃縮した後、溶液に n—ブ夕ノール 1 8 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、最終的に濃縮液 5.0 gを得た。得られた濃縮液に n—ブ夕ノール 5 0 gを加えた後の溶液の水分濃度は 0. 0 7質量％であった。 n—ブタノ一ル溶液を 7 0 °Cにて 1時間撹拌した後、溶液を冷却し、 3 0 °Cにてさらに 3 時間撹拌した。析出した結晶を吸引ろ過により回収し、乾燥質量 4. 0 gの L— 2—アミノー n—酪酸を得た（収率 9 0 %)。この時、 L— 2— アミノー n—酪酸結晶中に含まれる D— 2—ァミノ _ n—酪酸アミドの量は 0. 2質量％であった。

実施例 2 5 実施例 2 4の操作後、 D— 2 —アミノー n _酪酸アミド 4. 8 gが含まれる n—ブ夕ノール溶液 8 5 gを得た。これに水酸化カリウム 0. 1 gを加えた後、溶液を 2 5 gまで減圧濃縮した。濃縮液の水分濃度は 0 . 0 9質量％であった。濃縮液を 7時間加熱還流した後、反応液を 8 g まで減圧濃縮し、さらに濃縮液にトルエン 8 gを加えて 0 °Cにて 3時間攪拌した。析出した結晶を吸引ろ過にて回収し、乾燥質量 3. 4 ^の0 一体及び L一体の混合物の 2—アミノー n—酪酸アミドを得た（分離母液からの収率 7 0 %)。このときの 2 —アミノー n—酪酸アミド結晶の D —体： L一体の存在比率は 5 0. 0 : 5 0. 0であった。

実施例 2 6

実施例 2 5で得られた D—体及び L—体の混合物の 2 _アミノー n— 酪酸アミド結晶 2 gと参考例 2にて調製した菌体懸濁液 4 8 gを混合し、参考例 7 と同様にして菌体反応を行った。 2 4時間後反応液中には L — 2—アミノー n—酪酸及び D— 2—アミノー n—酪酸アミドが各々 2 . 0質量％存在していた。

参考例 8 光学活性 0!—アミノ酸と光学活性一アミノ酸アミドを含む水溶液の調製

参考例 7 と同様にしてェンテロパクタークロアツセィ N— 7 9 0 1株（F E RM B P— 8 7 3 ) 懸濁溶液 2 4 0 gに D、イソロイシンアミド 1 0 gを溶解させた後、 4 0 °Cにて 4 0時間反応させた。反応後、遠心分離により菌体を除去し、 L一イソロイシン及び D—イソ口イシンアミドを各々 2. 0質量％含む水溶液 2 4 0 gを得た。

実施例 2 7

参考例 8で得られた L—イソロイシン及び D—イソロイシンアミドを含む水溶液 2 4 0 gを実施例 2 4と同様の手段で処理し、乾燥質量 4. 5 gの L一イソロイシンを得た（収率 8 8 %)。この時、 L—イソ口イシン結晶中に含まれる D—イソロイシンアミドの量は 0. 2質量％であつた。実施例 2 8

実施例 2 7の操作後、 D—イソロイシンアミド 4. 8 gが含まれる n —ブタノール溶液 8 5 gを得た。これに水酸化カリウム 0. 2 gを加えた後、実施例 1 8 と同様の工程操作を行い、乾燥質量 3. 6 gの D—体及び L一体の混合物のイソロイシンアミドを得た（分離母液からの収率 7 5 %)。このときのイソロイシンアミド結晶の D—体： L—体の存在比率は 5 1. 0 : 4 9. 0であった。この得られた結晶を用いて実施例 2 6 と同様に菌体反応を行ったところ、 4 0時間後反応液中には L一イソロイシン及び D—イソロイシンアミドが各々 2. 0質量％存在していた比較例 2

n—ブタノールの代わりに、エタノールを用いて実施例 3 と同様の操作を行った。参考例 1で得られた L一 t e r t 一口イシンと D— t e r t —ロイシンアミドを含む水溶液 5 0 0 gを 2 5 0 gまで減圧濃縮した後、溶液にエタノール 2 5 0 gを加えた。さらに溶液を減圧濃縮し、溜出液が 2 4 0 gとなった時点で再度溶液にェタノールを 2 5 0 g加えた < 添加後、再び減圧濃縮を行ない、最終的に濃縮液 3 5 0 gを得た。この時の濃縮液の水分濃度は 1 9. 5質量％であった。さらにエタノール 2 5 0 gを加えて再び減圧濃縮を行い、流出液が 2 4 0 gとなった時点再度エタノール 2 5 0 gを加えた。この一連の操作をもう一度行い、水分濃度が 4. 0質量％の濃縮液 3 4 0 gを得た。使用したエタノールの総量は 3 0 0 0 gである。実施例 3 と同様の操作で結晶を析出させ、遠心ろ過後乾燥質量 5 9. 6 gの白色結晶を得た。この結晶中の L— t e r t —ロイシンと D— t e r t —ロイシンアミドの存在比は 6 8. 5 ： 3 1. 5であった。

比較例 3

D _ t e r t —ロイシンアミド 2 0 gを含むェ夕ノール溶液 1 5 0 g に水酸化カリウム 1. 3 gを加え、溶液を 6時間加熱還流した。しかしながらラセミ化反応はほとんど進行せず、濃縮 · 晶析後回収された結晶中の L 一 t e r t —ロイシンアミドの存在は、極僅かであり、 9 9 %以上が D— t e r t —ロイシンアミドであった。産業上の利用可能性

水性媒体中、ラセミ体 α —アミノ酸アミドと立体特異的なーァミノ酸アミド加水分解能を有する菌体もしくは酵素を接触させた後、溶媒である水を炭素数 3以上の直鎖、又は分岐、あるいは環状アルコールの中から少なくとも 1つ以上選ばれた溶媒に置換し、さらに得られたアルコール溶液から光学活性ひ一アミノ酸を優先的に析出させることで、非常に高い収率で光学活性 α —アミノ酸を製造することができる。

また、光学活性 α —アミノ酸を分離した後に得られる光学活性 a—ァミノ酸アミド含有アルコール溶液からアミノ酸アミドを精製する際、塩基性化合物、特にカリウム化合物を用いることにより、アミノ酸の有機溶媒に対する溶解度が向上し、アミノ酸アミドを純度良く、分離することができ、容易に、ラセミ化反応工程へと供することができるので、光学活性 α —アミノ酸の製造効率を向上させることができる。本明細書に引用されたすベての刊行物は、その内容の全体を本明細書に取り込むものとする。また、添付の請求の範囲に記載される技術思想および発明の範囲を逸脱しない範囲内で本発明の種々の変形および変更が可能であることは当業者には容易に理解されるであろう。本発明はこのような変形および変更をも包含することを意図している。

Claims

請求の範囲

1 - 光学活性ーァミノ酸及び光学活性 Q! —アミノ酸アミド含有水溶液の溶媒を、水から炭素数 3以上の直鎖、分岐又は環状アルコールからなる群から選ばれる少なくとも 1種のアルコールへと置換し、光学活性 α 一アミノ酸を該アルコール溶液から析出させることを特徴とする光学活性ひーァミノ酸及び光学活性一アミノ酸アミドの製造方法であって、一アミノ酸が一般式（I )

(式中、 1^ 1及び1 2は、同一又は異なっており、水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルケニル基、置換低級アルケニル基、シクロアルキル基、フエニル基、置換フエニル基、複素環基及び置換複素環基を示す。）で示され、 —アミノ酸アミドが一般式（I I )

(式中、 R 1及び R 2は、同一又は異なっており、水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルケニル基、置換低級アルケニル基、シクロアルキル基、フヱニル基、置換フヱニル基、複素環基及び置換複素環基を示す。）

で示される、光学活性 ο;—ァミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

2 . ひ一アミノ酸及び a —アミノ酸アミドが一般式（I I I ) で表される芳香環を有するアミノ酸

(η = 0〜 1、 X=水素、ハロゲン、アルキル基、水酸基、アルコキシ基）

(η = 0〜 1、 X =水素、ハロゲン、アルキル基、水酸基、アルコキシ基）

又は一般式（V) で表される脂肪族アミノ酸

(Rは炭素数 2〜 5の直鎖 · または分岐アルキル基）

および一般式（VI) で表される脂肪族アミノ酸アミド

( Rは炭素数 2〜 5の直鎖 · または分岐アルキル基）

である、請求項 1記載の光学活性 α —ァミノ酸及び光学活性一アミノ酸アミドの製造方法。

3 . α —アミノ酸及びひ一アミノ酸アミドが α— t e r t —ロイシン及び α— t e r t 一口イシンアミド、一フエ二ルァラニン及び α —フエ二ルァラニンアミド、ひ一フエニルダリシン及びひ一フエニルグリシンアミド、一 ρ—フロロ一フエニルグリシン及びひ一 ρ—フロロ一フエ二ルグリシンアミド、 α— 0—クロ口一フエニルグリシン及び α— 0—クロ口―フエニルダリシンアミド、 α—ρ—ヒドロキシ一フエ二ルァラニン及び a— ρ—ヒドロキシ一フエ二ルァラニンアミド、 α;— 2—ァミノ一 η— 酪酸及び一 2—ァミノ— η —酪酸アミド、並びにひ—イソロイシン及びひ一イソロイシンアミドからなる群から選択されるひ一アミノ酸及びひ —アミノ酸アミドである請求項 2記載の光学活性ーァミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

4 . アルコールが η—ブ夕ノール、イソプロパノール、ィソブチルアルコール、 1 一ペンタノールおよびシクロへキサノールよりなる群から選択される、請求項 1記載の光学活性 α —アミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

5 . アルコールが η —ブタノール又はイソプロパノール、イソプチルァルコール、 1 一ペン夕ノールおよびシクロへキサノールよりなる群から選択される、請求項 2記載の光学活性ひーァミノ酸及び光学活性 α—ァミノ酸アミドの製造方法。

6 . アルコールが η —ブ夕ノール又はイソプロパノール、イソプチルァルコール、 1—ペン夕ノールおよびシクロへキサノールよりなる群から選択される、請求項 3記載の光学活性 α—ァミノ酸及び光学活性 α—ァミノ酸アミドの製造方法。

7 . 光学活性 ο;—ァミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミド含有水溶液が、光学的に純粋でないひ一アミノ酸アミドに不斉加水分解能を有する菌体又は該菌体処理物を接触させ、得られたものである請求項 1〜 6のいずれか 1項記載の光学活性一アミノ酸及び光学活性一アミノ酸ァミドの製造方法。

8 . 光学活性 α —アミノ酸が析出した後の分離母液の水分含有率が 1 0 質量％以下である請求項 1 ~ 6のいずれか 1項記載の光学活性 α —アミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

9 . 光学活性 α —アミノ酸が析出した後の分離母液の水分含有率が 1 0 質量％以下である請求項 7記載の光学活性 α —ァミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

1 0 . 請求項 1〜 6のいずれか 1項に記載の方法により得られた、光学活性一アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リウムまたは t e r t—ブトキシカリウムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで α —ァミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする α —アミノ酸アミドの精製方法。

1 1 . 請求項 7記載の方法により得られた、光学活性ひ一アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リゥムまたは t e r t—ブトキシカリゥムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで α—アミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする α —アミノ酸アミドの精製方法 -

1 2 . 請求項 8記載の方法により得られた、光学活性ひ一アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リゥムまたは t e r t—ブトキシカリゥムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで —アミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする一アミノ酸アミドの精製方法 _c

1 3 . 請求項 9記載の方法により得られた、光学活性ひ一アミノ酸が析出した後の分離母液に、水酸化力リウムまたは t e r t—ブトキシカリウムを加え、ラセミ化反応を行い、次いで α —アミノ酸アミドを該溶液中から優先的に析出させることを特徴とする α —アミノ酸アミドの精製方法。

1 4 . 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1 . 5 % 以下である、請求項 1 0記載のアミノ酸アミドの精製方法。

1 5 . 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1 5 % 以下である、請求項 1 1記載のアミノ酸アミドの精製方法。

1 6 . 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1 5 % 以下である、請求項 1 2記載のアミノ酸アミドの精製方法。

1 7 . 析出させたアミノ酸アミドの結晶中のアミノ酸含有率が 1 5 % 以下である、請求項 1 3記載のアミノ酸アミドの精製方法。

1 8 . 請求項 1 0記載の方法により得られたひ —アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α —アミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

1 9 . 請求項 1 1記載の方法により得られた α —アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性 α —アミノ酸アミドの製造方法。

2 0 . 請求項 1 2記載の方法により得られた a —アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α —アミノ酸及び光学活性 α—アミノ酸アミドの製造方法。

2 1 . 請求項 1 3記載の方法により得られた a —アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α —アミノ酸及び光学活性ひ一アミノ酸アミドの製造方法。

2 2 . 請求項 1 4記載の方法により得られた一アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α —アミノ酸及ぴ光学活性ひ —アミノ酸アミドの製造方法。

2 3 . 請求項 1 5記載の方法により得られた α —アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性ひ一アミノ酸及び光学活性ひ一アミノ酸アミドの製造方法。

2 4 . 請求項 1 6記載の方法により得られた一アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 α —アミノ酸及び光学活性一アミノ酸アミドの製造方法。

2 5 . 請求項 1 7記載の方法に'より得られた α —アミノ酸アミドを不斉加水分解の原料として循環利用することを特徴とする光学活性 Q! —アミノ酸及び光学活性ひ一アミノ酸アミドの製造方法。