JPS59159789A - Ｌ−α−アミノ酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＬ−α−アミノ酸の製造方法に関す（たＫし式
中Ｒ１およびＲ２はそれぞれ同一または異なって、水素
原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フェニル
基、置換フェニル基、水酸基、カルボキシル基、カルポ
クサミド基およびメルカプト基を示す）で示されるり。

Ｌ−αアミノ酸アミドにシゾサツカロミセス属、ロドス
ポリジウム属、キャンディダ属、クリプトコツカス属、
ピチロスポラム属、−ドトルラ属、トルロプシス属、ト
リコスホルン属またはトレメラ属に属し、Ｌ−α−アミ
ノ酸アミド加水分解活性を有する微生物の培養液、生菌
体あるいは菌体処理物を作用させ、対応するし一アミノ
酸を生成することを特徴とするし一α−アミノ酸の製造
方法に関する発明である。

Ｌ−α−アミノ酸は、医薬品、食品添加物、飼料添加物
および各種工業薬品の中間体として重要なものである。

従来、Ｃ−アミノ酸を有機合成的方法により製造する場
合、得られるα−アミノ酸がり、Ｌ一体であることから
、いかにして工業的に有利に光学分割を行うかが大きな
課題であった。

Ｄ、Ｌ−α−アミノ酸の光学分割を行う方法としては、
物理化学的方法、生化学的方法等があり、これらの中で
後者に関しては例えば次の方法が実用化されている。

１）Ｄ、Ｌ−α−アミノ酸のＮ−アシル体に微生物の有
するアシラーゼを作用させる方法２）Ｄ、Ｌ−α−アミ
ノ酸のヒダントイン誘導体に微生物の有するヒダントイ
ナーゼを作用させる方法 しかしながら、これらの方法は高価な原料を必要とし、
且フ反応系も複雑であることがら経済的な不利は避けが
たい、といった欠点を有している。

本発明者等は、Ｌ−α−アミノ酸を工業的に有利に製造
する方法の開発を目的に検討を進め、先に光学分割を行
う原料としてのり、Ｌ−α−アミノ酸アミドを工業的に
有利に製造する技術を見出した（特開昭５７−１５８７
４３）。

そして・その後さらに研究を進めた結果、シゾサツカロ
ミセス属、ロドスポリジウム属、キャンディダ属、クリ
プトコツカス属、ビチロＲボラム属、ロドトルラ属、ト
ルロプシス属、トリコスポロン属、およびトレメラ属の
微生物がり、Ｌ−α−７ミ／酸アミドの不斉加水分解に
対し、特に強い活性を有することを見出し本発明を完成
するに至った。

従来、本発明の一般式で表されるり、Ｌ−α−アミノ酸
アミドを微生物が有する酵素を利用して不斉加水分解す
る方法に関しては、マツシュルームより得られる酵素ア
ミダーゼを几いる方法（Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、　　２６９２〜１９５０）、バチ
ルス属、バタテリジウム属、ミクロコツカス属、および
ブレビバクテリウム属の微生物が有する酵素アミダーゼ
を用いる方法（公表昭５６−５００３１９）、等につい
て報告があるのみである。

本発明において、低級アルキル基は特に制限はないが例
えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル
、イソブチルおよび５ｅｃ−ブチルなどのＣ１〜Ｃ４の
直鎖または分枝した低級アルキル基が好適であり、また
置換低級アルギル基および置換フェニル基のそれぞれに
含まれる置換基はたとえばヒドロキシ、メトキシメルカ
プト、メチルメルカプト、アミーノ、カルボキシル、カ
ルポクサミド、フェニル、ヒドロキシフェニルおよびグ
アニルなどである。

本発明の一般式で示されるり、Ｌ−α−アミノ酸アミド
の代表例として、１−メチル−アミノアセトアミド、１
−エチル−アミノアセトアミド、１−プロピル−アミノ
アセトアミド、１−イソプロピル７ミノアセトアミド、
１−ブチル−アミノアセトアミド、１−インブチルアミ
ノアセトアミド、１−８ｅｃ−ブチル−アミノアセトア
ミド、１−ベンジルアミノアセトアミド、１−カルボキ
シメチル−アミノアセトアミド、１−７ミノメチルーア
ミノアセト７ミド、１−メトキシメチル−アミノアセト
アミド、１−メルカプトメチル−アミノアセトアミド、
１−ヒドロキシメチル−アミノ７セトアミド、ｉ−（β
−カルボキシエチル）−アミノアセトアミド、１−（β
−メチルチオエチル）−７ミノ７セトアミド、ｉ−（α
−ヒドロキシエチル）−７ミノアセトアミド、１−（β
−７ミノエチル）−アミノアセトアミド、１−（ｙ−カ
ルボキシプロビル）−アミノアセトアミド、ｉ　−（ｔ
ｎ−グアニジノプロビル）−アミノアセトアミド、１−
（ω−７ミノプチル）−アミノアセトアミド、１−（ｒ
−ヒトｐキシーＷ−アミノブチル）−アミ／アセトアミ
ドおよび１−（４’−ヒドロキシベンジル）−アミノア
セトアミドなどがある。

又、本発明におけるり、Ｌ−α−アミノ酸アミドの製造
方法は特に限定ざねるものではないが、Ｄ、Ｌ−α−ア
ミノ酸アミドへの分解率および選択率がともに実質的に
１００％であることから、少量の強塩基物質を使用し、
ケトン類の共存下で、反応液を１４を越えるｐＨに保ち
つつり、Ｌ−α−アミノニトリルを加水分解して得られ
たり、Ｌ−α−アミノ酸アミドおよびり。

Ｌ−α−アミノ酸アミドを含有する反応生成液をそれぞ
れ使用することが実用上好ましい。

本発明に使用される微生物は、下記の属に属するもので
ある。なお以下に各局の代表的な徒名も併記するが、本
発明の微生物はこれらに限定されるものではない。

（１）　　シゾサツカロミセス属 シゾサツカロミセス・ジャポニカス （Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｓ　）ＡＴＣＣ１０６６０ シゾサツカロミセス・ボンベ （Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂ
ｅ　）ＡＴＣＣ１６９７や （２）　　ロドスポリジウム属 ロドスボリジウム・トルロイトス （Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｔｏｒｕｌｏｉｄｅ
ｓ　）ＩＦｏ　０８７１ ０ドスポリジウム・ジオポバタム （Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｄｉｏｂｏｖａｔｕ
ｍ）ＩＦ０１８２Ｂ （３〕　　キャンデイダ属 キャンデイダ・フミコラ （Ｃａｎｄｉｄａ　ｈｕｍｉｃｏｌａ　）　　　ＡＴＣ
Ｃ１４４３Ｂキヤンデイダ・アルビカンス （Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　）　　　ＡＴＣ
Ｃ１０２５９（４）　　クリプトコツカス属 クリプトコツカス・ラウレンテイ （Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　１ａｕｒｅｎｔｉｉ）
ＡＴＣＣ１８８０３ クリプトコツカス・ネオホルマンス （Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　
）ＡＴＣＣ３２０４５ （５）　　ビチｐスボラム属 ピチロスボラムーバチデルマチス ａ）ｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ　ｐａｃｈｙｄｅｒｍａｔ
ｉｓ）ＩＦＯ０９９５ ビチｐスボラムーオバル （Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ　ｏｖａｌｅ）　　　　　
ＩＦＯ０６５６（６）　　ロドトルラ属 ｔｚ）’）ルう・グルチニス （Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　　ｇｌｕｔｉｎｉｓ）　　
　ＩＦＯ０３８９−ドトルラ・ルブラ （Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｒｕｂｌａ）　　　　　Ｉ
ＦＯ０９１４（７）トルロプシス属 トルロプシス・キャンデイダ （ｒｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｃａｎｄｉｄａ）　　　　　
ＩＦｏ　　０５８０トルロプシス・マグノリア Ｃｒｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｍａｇｎｏｌｉａｅ）　　　
ＩＦＯ０７０５（８）トリコスポロン属 トリコスポロン・クタネウム （Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃｕｔａｎｅｕｍ）　　
Ａ’Ｉ’ＣＣ２８５９２トリコスポロン俸フエルメンタ
ンス （ｒｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　　ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ
）ＡＴＣＣ１０６７５（９）トレメラ属 トレメラ＋７シホルミス （Ｔｒｅｍｅｌｌａ　　ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）　　　
　　ＩＦＯｉ１６トレメラ・オーランティア （Ｔｒｅｍｅｌｌａ　ａｕｒａｎｔｉａ）　　　　　Ｉ
ＦＯ９２８８上記例示の微生物はいずれも公知のもので
あり、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　
Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（米国）、財団法人
発酵研究所（ＩＦＯ）等の保存機関を通じて容易に入手
することができる。

これらの微生物の培養は、通常資化し得る炭素源、窒素
源、各微生物に必須の無機塩、栄養等を含有させた培地
を用いて行われるが、高い酵素活性を得るために培地へ
り、Ｌ−α−アミノ酸アミドを添加することも効果的で
ある。この際添加するり、Ｌ−α−アミノ酸アミドは本
発明の一般式で示されるり、Ｌ−α−アミノ酸アミドで
あればいずれでもよいが、目白りとするし一α−アミノ
酸に対応するり、Ｌ−α−アミノ酸アミドを用いること
が、なお効果的である。

培養時のｐＨは４〜１０の範囲であり、温度は２０〜５
０℃である。培養は１日〜１週間好気的に行われる。

このようにして培養した微生物は、培養ブロス、分離菌
体、菌体破砕物、さらには精製した酵素として反応に使
用される。勿論、常法に従って菌体又は酵素を固定化し
て使用することもできる。

加水分解反応の条件は、Ｄ、Ｌ−α−アミノ酸アミド濃
度１〜４０ｗｔ９６、Ｄ、Ｌ−α−アミノ酸アミドに対
する微生物の使用量は乾燥菌体として重量比ｏ、ｏｏｓ
〜３、反応温度２０〜７０℃、ｐＨ５〜１３の範囲であ
る。

加水分解反応で生成するし一α−アミノ酸は、公知の方
法、例えば反応終了液から遠心分離により微生物を除き
、減圧濃縮後エタノールを加え析出するし一α−アミノ
酸をｆ取する、といった方法により容易に分離すること
ができる。

Ｌ−α−アミノ酸分離後のＰ液に含まれるＤ−α−アミ
ノ酸アミドは、公知の方法、例えば酸あるいはアルカリ
で加水分解することにより対応するＤ−α−アミノ酸を
得ることができる。

又、Ｄ−α−アミノ酸アミドをラセミ化した後反応系へ
循環することにより、Ｄ、Ｌ−α−アミノ酸アミドを全
ＭＬ　Ｌ−α−アミノ酸とすることもできる。

本発明方法によって具体的には例えばアラニン、バリン
、ｐイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、シス
ティン、シスチン、メチオニン、アスパラギン酸、グル
タミン酸、アルギニン、フェニールアラニン、またはチ
ロシン等ノアミン酸を製造することが可能である。

以下実施例により本発明を説明するが、本発明はこれの
みに限定されるものではない。

実施例　１ 次の組成よりなる培地を調製し、この培地１００ｍ／を
５００ａ＋を三角フラスコに入れ、滅菌後第１表に示し
た微生物を接種し、３０°Ｃで４８時間振とう培養を行
った。

グルコース　　　　１０１ ペプトン　　　　　１０Ｌｔ 醇母エキス　　　　１０ノ 水　　　　　　　　　　　　　１．１３次いで、Ｉ）、
Ｌ−１−イソプロピル−アミノアセトアミド　５ｚを加
え３０℃で５時間振とうした。反応後遠心して除菌し、
上亀を約１０ａｒｔになるまで濃縮した後、エタノール
５０縮を加え析出する結晶をｆ取した。

結果を第１表に示す。

実施例　２ 培地を次の組成にした以外は実施例１と同様にして行っ
た。

グルコース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
０　　ｐペプトン　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　５ノ肉−キス　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　２１酵母エキス　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　５１ＫＨ２ＰＯ４１ｆｆ ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，４７ ＦｅＳＯ４−７Ｈ２，ＯＯ，０１Ｗ ＭｎＣ−ｇ２・４Ｈ２０ｏ、ｏＩＷ− Ｄ、Ｌ−１−インプロピル・アミノアセトアミド　５　
Ｚ水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
　石ｐＨ７ 結果を第２表に示す。

実施例　３ 実施例２と同様にして菌の培養を行い、得られた培養液
から遠心分離により生菌体を得た。

次いで、この生菌体に、各種り、Ｌ−α−アミノ酸アミ
ドの溶液（濃度５　ｗｔ％、ｐＨ９）を各々ＩＱＱａ＋
ｒ加え、６０℃で５時間振とうした。

反応後遠心して除菌し、上澄を約１ＯＮになるまで濃縮
した後、エタノール　５０ｍ１を加え析出する結晶をｒ
取した。

結果を第３表に示す。

実施例　４ 培地に添加したり、Ｌ−１−インプロピル−アミノアセ
トアミドを、反応原料のり、Ｌ−α−アミノ酸アミドに
変えた以外は、実施例３と同様にして行った。

結果を第４表に示す。

手続補正書 昭和５８年８月１０日 特許庁長官　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第３３４８４号 ２、発明の名称 Ｌ−α−アミノ酸の製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所（〒１００）東京都千代田区丸の内二丁目５番２号
名称（４４６）三菱瓦斯化学株式会社 ５、補正の内容 （１）第１３ページの下から６行目〜同じく５行目の「
次いで〜３０℃で」を「次いで、培養液から遠心分離に
より生菌体を得、これにり、　　Ｌ〜イソプロビールア
ミノ了セ１−アミド５ｗｔ％ｆ６１ＰＬ１００ｇを加え
手続補正書 昭和５８年８月２５日 特許庁長官　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第３３４８４号 ２、発明の名称 Ｌ−α−アミノ酸の製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所（〒１００）東京都千代田区丸の内二丁目５番２号
明細書「特許請求の範囲」及び「発明の詳細な説明」５
、補正の内容 （１）特許請求の範囲 別紙 （２）発明の詳細な説明 第２ページ下から４行目の「Ｌ−ア」をｒＬ−別紙 特許請求の範囲 ＮＨユ ／ Ｒ９ ＲおよびＲ９はそれぞれ同一または異なって、水素原子
、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フェニル基、
置換フェニル基、水酸基、カルボキシル基、カルポクサ
ミド基、およびメルカプト基を示す）で示されるＤ−Ｌ
−α−アミノ酸アミドにシゾサツカロミセス属。

ロドスポリジウム属、キャンデイダ属、クリプトコツカ
ス属、ピチロスポラム属、ロドトルラ属、トルロプシス
属、トリコスポロン属またはトレメラ属に属し、Ｌ−α
−アミノ酸アミド加水分解活性を有する微生物の培養液
。

生菌体あるいは菌体処理物を作用させ、対応するし一α
−アミノ酸を生成することを特徴とするＬ−α−アミノ
酸の製造方法。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｒ１およびＲ２はそれぞれ同一または異って、水素原子
   、低級アルキル基、置換低級アルキル基、フェニル基、
   置換フェニル基、水酸基、カルボキシル基、カルポクサ
   ミド基およびメルカプト基を示す）で示されるり、Ｌ−
   α−アミノ酸アミドにシゾサツカロミセス属、ロドスポ
   リジウム属、キャンデイダ属、クリプトコツカス属、ピ
   チロスポラム属、−ドトルラ属、トルロプシス属、トリ
   コスポロン属またはトレメラ属に属し、Ｌ−α−アミノ
   酸アミド加水分解活性を有する微生物の培養液、生菌体
   あるいは菌体処理物を作用させ、対応するし一アミノ酸
   を生成することを特徴さするＬ−α−アミノ酸の製造方
   法。