JPS60184392A - Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＤ−α−アミノ酸の製造方法に関する。さらに
詳しくはＤ−α−アミノ酸アミドな生化学的に加水分解
して対応するＤ−α−アミノ酸を製造する方法に関する
。

Ｄ−α−アミノ酸は抗生物質の原料、殺菌剤の原料およ
び各種工業薬品の中間体として重要な物質である。

従来、Ｄ−α−アミノ酸を製造する方法としては、１ｌ
ｌＤ、Ｌ−α−アミノ酸のＮ−アシル体に微生物の有す
るアシラーゼを作用させてＬ−α−アミノ酸を光学分割
し、得られたＤ−α−アミノ酸のＮ−アシル体を強酸を
用いて加水分解する方法（特公昭４１−２２３８０号公
報）および（２１５−置換ヒダントイン類に微生物の有
するヒダントイナーゼを作用させる方法（特開昭５５−
１０４８９０号公報）などが知られている。しかしなが
ら、これらの方法は高価な原料を必要とし、かつ反応系
も複線であることから工業生産の方法として不利は避け
がたいなどの欠点を有している。

本発明者等は光学的に活性なα−アミノ酸を工業的に有
利に製造する方法の開発を目的に検肘を進め、先に光学
分割を行なう原料としてのり、Ｌ−α−アミノ酸アミド
な工業的に有利に製造する方法（特開昭５７−１５８７
４３号公報）および成る種の微生物がり、Ｌ−α−アミ
ノ酸アミドの不斉加水分解に対し高いし立体特異性を有
すること（特願昭５８−５３４８４号明細書および特願
昭５８−１４５２２６号明細書）を見出した。

そして、その後、さらに研究を進めた結果、アクロモバ
クタ−属、アルカリ土類金属、クルチア属のそれぞれに
属する微生物がＤ−α−アミノ酸アミドの選択的加水分
解に対し強い活性を有することを見出し、本発明を完成
するに至った。

従来、Ｄ−α−アミノ酸アミドな微生物が有する酵素を
利用して加水分解しＤ−α−アミノ酸を製造する方法に
関し−（は、バチルス属、バクテリジウム属、ミクロコ
ツカス属およびブレビバクテリウム属の微生物が有する
酵素アミダーゼを用いる方法（特公表昭５６−５００３
１９号公報）が知られているのみである。

（ただし、式中Ｒは低級アルキル基、置換低級アルキル
基、フェニル基−［９フエニル基、フリル基、ピリジル
基、チアゾリル基、イミダゾリル基またはインドリル基
を示す）で表わされるＤ−α−アミノ酸アミドに、アク
ロモバクタ−属、アルカリ土類金属またはクルチア属に
属しＤ−α−アミノ酸アミド加水分解活性を有する微生
物の培養液、生菌体もしくは菌体処理物を作用させて対
応するＤ−α−アミノ酸に変化せしめることを％徴とす
るＤ−α−アミノ酸の製造法である。

本発明のＤ−α−アミノ酸アミドの一般式におけるＲの
低級アルキル基には特に制限はないが１例えばメチル、
エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、インブチル
および５ｅｅ−ブチルなどのＣ１〜Ｃ４の直鎖ならびに
分枝した低級アルキル基が好適である。また、置換低級
アルキル基、置換フェニル基のそれぞれに含まれる置換
基は、例えばヒドロキシ、メトキシ、メルカプト、メチ
ルメルカプト、アミノ、カルボキシル、カルボフサミド
、ハロゲン、フェニル−ヒトａｑジフェニルおよびグア
ニルなどである。

本発明の一般式で示されるＤ−α−アミノ酸アミドの代
表例として、１−メチル−アミノアセトアミド、１−エ
チル−アミノアセトアミド、１−プロピル−アミノアセ
トアミド、１−イソプロピル−アミノアセトアミド、１
−ブチルアミノアセトアミド、１−インブチル−アミノ
アセトアミド、１−ｓｅｅ−ブチル−アミノアセトアミ
ド、１−ヒドロキシメチル−アミノアセトアミド、１−
メトキシメチル−アミノアセトアミド、１−メルカプト
メチル−アミノアセトアミド、１−アミノメチル−アミ
ノアセトアミド、１−カルボキシメチル−アミノアセト
アミド、１−（α−ヒドロキシエチル）−アミノアセト
アミ）ｊ、１−（β−メチルチオエチル）−アミノアセ
トアミド、１−（β−７ミノエチル）−アミノアセ１ア
ミド、１−（β−カルポキシエ５− チル）−アミノアセトアミド、１−（β−カルポクサミ
ドエチル）−アミノアセトアミド、１−クールメチル−
７ミノアセトアミド、１−（γ−カルボキシプロピル）
−アミノアセトアミド、１−（ｔＡ）−グアニジラブル
ビル）−７ミノテセトアミド、１（ｒｎ−７ミノプチル
）−アミノアセトアミド、’１−（γ−ヒドロキシーｔ
ｎ−７ミノプチル）−アミノアセトアミド、１−フェニ
ル−アミノアセトアミド、１−ベンジル−アミノアセト
アミド−１−（４’−ヒドロキシベンジル）−アミノア
セトアミドおよび１−インドリルメチル−アミノアセト
アミドなどがある。

本発明に使用される微生物はアクロモバクター属、アル
カリ土類金属およびクルチア属のそれぞれの属に属する
ものである。なお、以下に各属に属する代表的な菌株を
例示する。

（１）　アクロモバクタ−属 ７クロモバクター　シクμクラステス （Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔａｒ　Ｃｙｃｌｏｅｌａｓｔ
ｅａ　）６− ＩＡＭ　１０１３ （２）　アルカリ土類金属 アルカリゲネス　フエー力リス （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａ目１　）ＩＡＭ
　１４２０ （３）　クルチア属 クルチア　ゾフイ　（Ｋｕｒｔｈｉａ　ｚｏｐｈｉｉ　
）ＩＦＯ１２０８３ 上記例示の菌株はいずれも公知のものであり、東京大学
応用微生物研究所（ＩＡＭ）、財団法人発酵研究所（Ｉ
ＦＯ）などの保存機関から容易に入手することができる
。

これらの微生物の培養は、常法の如く通常資化し得る炭
素源、窒素源、各微生物に必須の無機塩、栄養などを含
有させた培地を用いて行なわれるが、高い酵素活性を得
るためにＤ−α−アミノ酸アミドな添加することも効果
的である。

この際Ｋ、添加されるＤ−α−アミノ酸アミドは本発明
の一般式で示されるＤ−α−アミノ酸アミドであればい
ずれでもよいが、目的とするＤ−α−アミノ酸に対応す
るＤ−α−アミノ酸アミドな用いることが好ましい。培
養時の培養液のＰＨは４〜１０の範囲であり一培養温度
は２０〜５０℃である。培養は１日〜１週間好気的に行
なわれる。このようＫして培養した微生物は一培養プｐ
ス、分離菌体菌体処理物−例えば菌体破砕物および精製
した酵素−としてそれぞれ反応に使用される。勿論、常
法に従って菌体又は酵素を固定化して使用することもで
きる。

加水分解反応の条件は、微生物の加水分解活のＤ−α−
アミノ酸アミド濃度１〜４０ｗｔ％、Ｄ−α−アミノ酸
アミドに対する微生物の使用量は乾燥菌体として重量比
０．００５〜１０、反応温度２０〜７０℃、ＰＨ５〜１
６の範囲である。

加水分解反応で生成したＤ−α−アミノ酸はそれ自体公
知の方法、例えば反応終了液から遠心分離により微生物
を除き、減圧濃縮で析出させたＤ−α−アミノ酸を戸数
する、といった方法により容易に高純度結晶として得る
ことが出来る。

本発明方法によって比較的安価なり一α−アミノ酸アミ
ドから例えばアラニン、バリン、ロイシン、インロイシ
ン、セリン、スレオニ／、システィン、シスチン、メチ
オニ／、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミ／酸
、グルタミン、アルギニ／、フェニルグリシ／、フェニ
ルアラニン、チロシンおよびトリプト７アノなどのＤ−
α−アミノ酸を容易にかつ効率よく製造することが可能
となった。

以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれ
のみに限定されるものではない。

実施例　１ 次の組成よりなる培地を調製し、この培地１００Ｉｌ／
を５００　ｍｌ三角フラスコに入れ、滅菌後、各種微生
物を接種し、６０℃で４８時間振と５培養を行なった。

９− グルコース　１０　．９ イー／＋：ｙ　５　＆ 酵母エキス　５ｇ ＫＨ２ＰＯ４１Ｆ ＭｇＳＯ，ｉ・７Ｈ２０１１，４＃ ＦｅＳＯ４・７に２０　０．０１．！／ＭｎｃＡ！２・
４Ｈ２０ｏ、ｏｉｙ Ｄ−１−インプルピル−アミノアセトアミド　５ｙ水　
１１ ＰＨ７ 次いで培養液から遠心分離により生菌体を得、これに５
　ｗｔ％Ｄ−１−インプロピル−アミノアセトアミド水
溶液（ＰＨ９）　１００−を加え（乾燥菌／原料アミド
（重量）＝０．２）、４０℃で４時間振とうして加水分
解反応を行なった。反応後、遠心分離して除菌し、上澄
を約１０１になるまで濃縮した後、エタノール　５０ｄ
を加え析出する結晶なＦ取した。

結果を第１表に示す。

１０− 第１表 ＊反応生成液を液体クロマトグラフィにかけて確認した
。

実施例　２ 培地に添加したＤ−１−インプロピル−アミノアセトア
ミドを反応原料の各［Ｄ−α−アミノ酸アミドに変えた
以外は、実施例１と同様にして各種微生物を培養した。

次いで、培養液を遠心分離後常法により凍結乾燥菌体を
得た。

４４）　２　、５　ｗｔ％の各種り一α−アミノ酸アミ
ド水溶液（ＰＨ８）　１０ｍ／にこの凍結乾燥菌体　１
００１１＋９をそれぞれ加え、４０℃で４時間振とうし
て加水分解反応を行なった後、反応生成液中の生成り一
α−アミノ酸含量を液体クロマトグラフィーで分析した
。

結果を第２表に示す。

特許出願人 【１ワ 三菱瓦斯化学株式会社 代表者長野和書 −１３〜１４− 第１頁の続き ［相］Ｉｎｔ、ＣＩ、’　識別記号　庁内整理番号（Ｃ
１２Ｐ　１３１０４ Ｃ１２Ｒ１：０１）　６７６０−４Ｂ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 低級アルキル基、置換低級アルキル基、フェニル基、置
   換フェニル基、フリル基、ピリジル基、チアゾリル基、
   イミダゾリル基またはインドリル基を示す。）で表わさ
   れるＤ−α−アミノ酸アミドに、アクロモバクタ−属、
   アルカリ土類金属またはクルチア属に属しＤ−α−アミ
   ノ酸アミド加水分解活性を有する微生物の培養液、生菌
   体もしくは菌体処理物を作用させて、対応するＤ−α−
   アミノ酸に変化せしめることを特徴とするＤ−α−アミ
   ノ酸の製造方法