UA71559C2 - a-KETOAMIDES BEING 20S PROTEASOME INHIBITORS - Google Patents

Description

Опис винаходу

Мультикаталітична протеїназа, або протеасома, є високо стійкою клітинною структурою, яка відповідає за 2 залежний від АТР протеоліз більшості клітинних протеїнів (див. роботу Ку, Танака та Гольдберга - Соих, 0,.,

Тапака, К., апа Соідрего, А., 1996 Апп. Кеу. Віоспет. 65, 801-847). Протеасома 205 містить каталітичне ядро комплексу і кристалізована з архебактерій виду Тпегторіазта асідорпішт (див. роботу Лове та ін. - І оме, .).,

ЗіосК, О., дар, В., 2міг2кі, Р., Вайтіпвіег, МУ., апа Нибрег, К., 1995 Зсіепсе 268, 533-539) і з дріжджів

Засспаготісез сегемізвіае (див. роботу Гроля та ін. - Огоїї, М., Ой2еї, |, Іоме, 9., ЗіосК., О., ВоспйНег, 70 М., Вапипік, Н.О. апа Нибег, К., 1997 Майшге 386, 463-471). На відміну від архебактеріальної протеасоми, яка виявляє головним чином протеолітичну активність відносно хімотрипсину (див. роботи Дальмана та ін. -

Банпітапп, В., Корр, Р., Киепп, І., Міедеї!ї, В., РТейег, б., 1989 РЕВ5 І ей. 251, 125-131; і Зеемюллера та ін. - ЗеетшПег, Е., І ирав5, А., 2им, Р., 2міскі, Р. апа Вайтеїівієг, МУ., РЕВ5 Іей. 359, 173, 1995), еукаріотна протеасома виявляє щонайменше п'ять видів протеолітичної активності, які піддаються ідентифікації. Три з цих видів активності за специфічністю подібні до активностей хімотрипсин-, трипсин- і пептидилглутаміл-пептидази.

Два інших описаних види активності спрямовані переважно на розщеплення пептидних зв'язків з боку карбоксильної групи амінокислот розгалуженої будови (ВгААР) та пептидних зв'язків між нейтральними амінокислотами з короткими ланцюгами (ЗпААР) (див. роботу Орловського - ОгпіомузКі, М., 1990 Віоспетівігу 29, 10289-10297).

Хоча протеасома 205 містить протеолітичне ядро, вона неспроможна викликати деструкцію протеїнів іп мімо, якщо вона не знаходиться в комплексі з угрупованням 195, приєднаним до якого-небудь кінця її структури; це угруповання в свою чергу виявляє кілька видів аденозинтрифосфатазної активності. Така структура більшого розміру відома під назвою протеасоми 265 і швидко розкладає протеїни, які підготовлені до розкладу приєднанням кількох молекул поліпептиду з молекулярною масою 8,5кДа, так званого убіквітину (огляд цих с 29 питань наведено в роботі Ку, Танака та Гольдберга - Соих, О., Тапака, К., апа Соідрего, А., 1996 Апп. Кеу. Ге)

Віоспет. 65, 801-847).

Багато видів функціональних груп, приєднаних до субстратів, використовуються як потенціальні інгібітори серин- і тіол-протеаз. Деякі з таких груп описані як інгібітори протеасоми. До них належать альдегіди пептидів (див. роботи Виницького та ін. - МіпіївКу, А., Міспаца, С, Ромегв, у. апа ОпіомузКкі, М, 1992 Ме.

Віоспетівігу 31, 9421-9428; Цубукі та ін. - Твирикі, З., Нігозпі, К., Зайо, МУ., Міуазпйа, М., Іпотайа М апа ю

Камжазпіта, 5., 1993 Віоспет. Віорпуз. Кев. Соттип. 196, 1195-1201; Рока та ін. - КоскК, КіІ., Сгатт, С,

Коїйвівіпй, |, Са, К., з їіеіїп, К., Оіск, Її, Нуапо, О. апа Соідрегд, А.Ї., 1994 Сей 78, 761-771) о

М-ацетил-і! -лейциніл-І -лейциніл-| --орлейциналь (АГІ/М) і М-ацетил-і! -лейциніл-І -лейциніл-І -метіональ (Г/М); "пе найбільш потужним інгібітором цього типу є М-карбобензоксил-1-І -лейциніл-І -лейциніл-І -н-орваліналь (МО115). 32 В інших повідомленнях описано ряд дипептидних інгібіторів, які мають значення ІС со в діапазоні від ЛОНМ до - 10О0нМ (див. роботу Ікбала та ін.- ІдраІї, М., Спацегієєе, 5., Кацег, 9У.С., ОЮОаз, М., Меззіпа, Р., Егеей, В.,

Віаг2о, МУ. апа Зітап, К., 1995 І-Мед. Спет. 38, 2276-2277). Описано також ряд А-кетокарбонільних похідних дипептидів та складних ефірів борної кислоти і дипептидів (Ідраії, М., Спацегієє, 5., Кацег, 9У.С., МаїІато, «

У.Р., Мезвзіпа, Р.А., КеїроЇді, А. апа бітап, К., 1996 Віоогд. Меа.-Спет. Гей. 6, 287-290) та епоксикетонів З (ЗрацЦепвівїпй, А., Іерап, 4.9)., Ниапа, -.3)., Кеїпрагаї К.МК., Мімего5, О.Н., Зідагоов5, У. апа Стоиси, К., с 1996, Теї. І ей. 37, 1434-1346), які є потужними інгібіторами протеасоми.

Із» Іншою сполукою, яка виявляє специфічність в інгібуванні діяльності протеасоми, є лактацистін (див. роботу

Фентяні та ін. - Репіеапу, О., Зіапааегп, К.Р., апе, МУ.5., Свої, 5., Согеу, Е.). апа ЗсНгеїрег, 5.Ї., 1995

Зсіепсе 268, 726-731), що є метаболітом організмів типу Зігеріотусев. Ця речовина спочатку була описана у зв'язку з її здатністю індукувати розростання нейритів у культурі клітин нейробластоми (див. роботу Омури та це. ін. - Отига, З., Маївилгакі, К., ЕРціітоїю, Т., Козиде, К., Ригоуа, Т., Еційа, 5. апа Макадажа, А., 1991 /, - Апііїріої. АА, 117-118); пізніше було показано, що вона інгібує проліферацію кількох типів клітин (Репігапу, б., Зіапааегі, К., Кеїіснага, О.А., Согеу, Е. у). апа ЗсНгеїірег, 5.І.., 1994 Ргос. Маг! Асад. зе ОА 91, 3358-3362). і-й Нині встановлено, що протеасома є головною екстраліпосомною протеолітичною системою, яка бере участь с 50 у процесах протеолізу, що мають велике значення для різних функцій клітини, наприклад, для поділу клітини, перетворення антигенів і розкладу короткоїснуючих регулювальних протеїнів, наприклад, продуктів онкогену, с циклінів і факторів транскрипції (див. роботу Цихановера - Сіеспапомег, А., 1994, СеїІ 79, 13-21; Паломбел та ін. -РаїотрбеїЇ, М.)., Кападо, О.)., Соідрегд, А.Ї. апа Мапіайів, Т., 1994, Се 78, 773-785). Наприклад, активною формою МЕ-КВ є гетеродимер, який складається з блоків рб5 та рб5О. Останній присутній у цитозолі у 99 вигляді неактивного попередника (р105). Протеолітичне перетворення р 105 з утворенням робо протікає за

ГФ) участю убіквітину та протеасоми. Крім того, утворений р5бо та рб5 утримуються в цитозолі у вигляді неактивного т комплексу, приєднаного до інгібіторного протеїну ІКВ. Стимулятори запальних процесів, наприклад, І РБ, активують МЕ-КВ шляхом ініціації сигнального механізму, який спричиняє розклад ІкВ. Ці сигнали стимулюють також перетворення р105 у рбБО. Таким чином, для індукованої сигналом активації МЕ-КВ потрібні два 60 протеолітичних акти, які обидва регулюються за участю убіквітину та протеасоми.

Той факт, що протеоліз, який протікає під дією протеасоми за посередництвом убіквітину, відіграє вирішальну роль в активації МЕ-КВ, можна застосувати в клінічній практиці шляхом використання інгібіторів, дія яких спрямована на протеасому. Аномальна активація МЕ-КВ з наступною стимуляцією синтезу цитокіну, спостерігається при різноманітних запальних та інфекційних захворюваннях. Активація МЕ-КВ має також суттєве бо значення для ангіогенезу і для проявлення активності адгезивних молекул (САМ і селектів), таким чином,

інгібітори протеасоми можуть бути корисними також для лікування захворювань, пов'язаних з судинною системою.

Надійно встановлено, що убіквітин-протеасомний механізм має вирішальне значення для регульованої деструкції циклінів, які спричиняють вихід з мітозу і забезпечують можливість переходу клітин у наступну фазу клітинного циклу (див. Глотцер та ін. - Сіоїгег, М., Митау, А. МУ. апа Кігесппег, М.МУ., 1991 Маїшге 349, 132-138). Отже, інгібування розкладу циклінів шляхом використання інгібіторів протеасоми спричиняє припинення росту. Таким чином, іншою потенційно корисною областю застосування інгібіторів протеасоми є їх використання при лікуванні захворювань, які є наслідками ненормального поділу клітин. 70 У сучасній літературі описано кілька класів інгібіторів опротеасоми 205. А-кетоамідна група використовується в інгібіторах протеази в багатьох випадках. Зокрема, сповіщається, що ряд А-кетокарбонільних похідних дипептидів та складних ефірів борної кислоти і дипептидів є ефективними інгібіторами функцій протеасоми 205 (ІдраІї, М., СпацЦегієе, 5., Кацег, У.С., МаПато, 9.Р., Мезвіпа, Р.А., КеїроїЇді, А. апа 5ітап,

К., Віоогд. Мед.-Спет. Гей. 6, 287-290). Похідні З-індолпіровиноградної кислоти описані як фармацевтично /5 активні речовини для лікування розладів центральної нервової системи (публікація міжнародної заявки УМО 88/09789 Де Лука та ін. - ЮОе І иса еї аІ.) з використанням механізму, який модулює рівень кінуренової кислоти у мозку.

Незважаючи на те, що відомі різноманітні сполуки, які певною мірою інгібують проліферацію клітин, існує постійна потреба у більш ефективних сполуках, які інгібують проліферацію клітин через посередництво 20 протеасоми 205.

Короткий опис винаходу

Метою цього винаходу є запропонувати спосіб інгібування проліферації клітин у ссавців з використанням терапевтично ефективної кількості сполуки, здатність якої інгібувати розростання клітин до цього часу була невідома. сч 25 Метою цього винаходу є також запропонувати спосіб лікування захворювань, на які можна вплинути шляхом інгібування функцій протеасоми. і)

Крім того, метою цього винаходу є запропонувати спосіб лікування проліфераційних захворювань, оснований на інгібуванні функцій протеасоми.

Іншою метою цього винаходу є використання терапевтично ефективної кількості сполук, описаних у цьому ду

Зо документі, для інгібування розладів проліферації клітин у людей.

Ще одною метою цього винаходу є використання терапевтично ефективної кількості сполук, описаних у юю цьому документі, для інгібування функцій протеасоми. ю

Згідно з одним із варіантів здійснення цей винахід стосується сполуки, що має формулу (в) Во о «- 35 ХХ Ки» т

Хо Й Х. (в В, в якій Х» є Аг або Аг-Хз, де Хз є -С-О або -СНЬСО:- і де Аг є феніл, заміщений феніл, індол, заміщені індоли « дю і будь-які інші гетероарили; кожний з замісників Кі Ме окремо вибраний з групи, що включає бокові ланцюги з відомих природних А-амінокислот і амінокислот, які не зустрічаються в природі, водень, лінійний та с розгалужений алкіл з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, лінійний та розгалужений заміщений алкіл з числом :з» вуглецевих атомів від 1 до 10, арил, заміщений арил, арил, заміщений лінійною або розгалуженою групою з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, алкоксиарил, циклоалкіл з числом вуглецевих атомів від З до 8, гетероцикл, заміщений гетероцикл, гетероарил та заміщений гетероарил; Хі вибраний з групи, що включає -1 Підроксил, моноалкіламіногрупу, діалкіламіногрупу, алкоксид, арилалкоксид і групу - і, х, 2 й с б в якій Ху є гідроксил, ариламіногрупа, моноалкіламіногрупа, діалкіламіногрупа, алкоксид або арилалкоксид; і ср Кз вибраний з групи, що включає відомі природні А-амінокислоти, амінокислоти, які не зустрічаються в природі, водень, лінійний та розгалужений алкіл з числом вуглецевих атомів від 71 до 10, лінійний та розгалужений заміщений алкіл з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, арил, заміщений арил, арил, заміщений 29 лінійною або розгалуженою групою з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, алкоксиарил, циклоалкіл з числом

ГФ) вуглецевих атомів від З до 8, гетероцикл, заміщений гетероцикл, гетероарил та заміщений гетероарил.

Згідно з іншим варіантом здійснення, цей винахід стосується способу інгібування протеасомного протеазного де фактора у ссавців, який включає введення в організм ссавця терапевтично ефективної кількості сполуки, розкритої вище. 6о Згідно зі ще одним варіантом здійснення, цей винахід стосується фармацевтичної композиції, яка містить сполуку згідно з п. 1 формули винаходу та одну або кілька фармацевтичних добавок.

Опис варіанту здійснення винаходу, якому віддається перевага

Цей винахід стосується способу інгібування розладів проліферації клітин, інфекційних захворювань та імунологічних розладів у ссавців, зокрема у людини, з використанням сполук, які мають таку загальну формулу: б5

(о) Во о

АХА

Ха о мк 2 І (в) Ві у якій:

Хо є Аг або Аг-Хз, де Хз є -С-О, -СНЬСО- або (СНо)р;, де п-0-2 і де Аг є феніл, заміщений феніл, індол, заміщені індоли і будь-які інші гетероарили; кожний з замісників К/ і Ко окремо вибраний з групи, що включає бокові ланцюги відомих природних А-амінокислот і амінокислот, які не зустрічаються в природі, водень, 70 лінійний та розгалужений алкіл з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, лінійний та розгалужений заміщений алкіл з числом вуглецевих атомів від 71 до 10, арил, заміщений арил, арил, заміщений лінійною або розгалуженою групою з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, алкоксиарил, циклоалкіл з числом вуглецевих атомів від З до 8, гетероцикл, заміщений гетероцикл або гетероарил та заміщений гетероарил; перевага віддається варіантам, в яких К» є діарил або біфеніл, Ку є ізобутил;

Хі вибраний з групи, що включає гідроксил, моноалкіламіногрупу, діалкіламіногрупу, алкоксид, арилалкоксид і групу й

Аз ву ї н (9) в якій Ху. є гідроксил, ариламіногрупа, моноалкіламіногрупа, діалкіламіногрупа, алкоксид або арилалкоксид; перевага віддається варіантам, в яких Ху - гідроксил;

Кз вибраний з групи, що включає бокові ланцюги відомих природних ос-амінокислот та амінокислот, які не сч 29 зустрічаються в природі, водень, лінійний та розгалужений алкіл з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, Ге) лінійний та розгалужений заміщений алкіл з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, арил, заміщений арил, арил, заміщений лінійною або розгалуженою групою з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, алкоксиарил, циклоалкіл з числом вуглецевих атомів від З до 8, гетероцикл, заміщений гетероцикл або гетероарил та заміщений гетероарил; Ф перевага віддається варіантам, в яких К з є СОН, СНЬСОЬН, (СН»)»СО»Н, Ага, Гуз, Авп, СіІп, Авзр, СІ), Рпе У та Мів.

Нижче подано визначення деяких термінів, уживаних у цьому описі. й

Термін "галоген" стосується атомів фтору, брому, хлору та йоду. --

Термін "гідроксил" стосується групи -ОН.

Термін "тіол" або "меркапто(група)" стосується групи -ЗН. -

Термін "алкіл" стосується аліфатичної групи циклічної, розгалуженої або лінійної будови з числом вуглецевих атомів від 1 до 10. Прикладами груп, що їх охоплює цей термін, є метил, етил, п-пропіл, ізопропіл, п-бутил, трет-бутил, ізобутил (або З-метилпропіл), циклопропілметил, ізоаміл, п-аміл, п-гексил та ін. « дю Термін "заміщений алкіл" стосується нижчих алкілів, описаних вище, які несуть один або кілька замісників, з наприклад, гідроксил, тіол, алкілтіол, галоген, алкоксигрупу, аміногрупу, амідогрупу, карбоксил, циклоалкіл, с заміщений циклоалкіл, гетероцикл, циклогетероалкіл, заміщений циклогетероалкіл, ацил, арил, заміщений арил, :з» арилоксигрупу, гетарил, заміщений гетарил, аралкіл, гетероаралкіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетеросалкіл, ціан. Ці групи можуть бути приєднані до будь-якого вуглецевого атома нижчого алкілу. - 15 Термін "арилокси(група)" означає групу -ОАг, де Аг є арил, заміщений арил, гетероарил або заміщений гетероарил згідно з визначеннями, поданими нижче. - Термін "аміно(група)" означає групу МКК де замісники К і К' незалежно один від одного можуть являти сл собою водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетарил або заміщений гетарил згідно з визначеннями, поданими нижче, або ацил. 1 20 Термін "амідо(група)" означає групу -(О)МКК. де замісники К і К' незалежно один від одного можуть являти с собою водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетарил або заміщений гетарил згідно з визначеннями, поданими нижче.

Термін "карбоксил" означає групу -С(О)ОК, де замісник К може являти собою водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетарил або заміщений гетарил тощо, згідно з відповідними 59 визначеннями.

ГФ) Термін "арил" або "Аг" стосується ароматичної карбоциклічної групи, що містить, принаймні, одне 7 ароматичне кільце (наприклад, феніл або біфеніл) або кілька конденсованих кілець, з яких щонайменше одне є ароматичним (наприклад, 1,2,3,4-тетрагідронафтил, нафтил, антрил або фенантрил).

Термін "заміщений арил" стосується арилу, який необов'язково несе як замісники одну або кілька бо функціональних груп, наприклад, галоген, нижчий алкіл, нижчу алкоксигрупу, алкілтіогрупу, ацетилен, аміногрупу, амідогрупу, карбоксил, гідроксил, арил, арилоксигрупу, гетероцикл, гетарил, заміщений гетарил, нітрогрупу, ціан, тіол, сульфамідну групу тощо.

Термін "гетероцикл" стосується насиченої, ненасиченої або ароматичної карбоциклічної групи, що містить одне кільце (наприклад, морфолін, піридил або фурил) або кілька конденсованих кілець (наприклад, бо нафтопіридил, хіноксаліл, хінолініл, індолізиніл або бензо|р|тієніл) і має в кільці, принаймні, один гетероатом, наприклад, М, О або 5, причому ця група може бути незаміщеною або нести необов'язковий замісник, наприклад, галоген, нижчий алкіл, нижчу алкоксигрупу, алкілтіогрупу, ацетилен, аміногрупу, амідогрупу, карбоксил, гідроксил, арил, арилоксигрупу, гетероцикл, гетарил, заміщений гетарил, нітрогрупу, ціан, тіол, сульфамідну групу тощо.

Термін "гетероарил" або "гетарил" стосується гетероциклу, в якому, принаймні, одне гетероциклічне кільце є ароматичним. Гетероарилами, яким віддається перевага, є феніл, заміщений феніл, індол і заміщені індоли.

Термін "заміщений гетероарил" стосується гетероцикла, необов'язково моно- або полізаміщеного одною або кількома функціональними групами, до яких належать, наприклад, галоген, нижчий алкіл, нижча алкоксигрупа, /о алкілтіогрупа, ацетилен, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, гідроксил, арил, арилоксигрупа, гетероцикл, гетарил, заміщений гетарил, нітрогрупа, ціан, тіол, сульфамідна група тощо.

Термін "циклоалкіл" стосується двовалентного циклічного або поліциклічного алкілу, що містить від З вуглецевих атомів до 15 вуглецевих атомів.

Термін "заміщений циклоалкіл" стосується циклоалкільної групи, яка несе один або кілька замісників, /5 наприклад, галоген, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкоксигрупу, алкілтіогрупу, ацетилен, арил, арилоксигрупу, гетероцикл, гетарил, заміщений гетарил, нітрогрупу, ціан, тіол, сульфамідну групу тощо.

Приклади сполук, які можуть бути корисними в способах терапії згідно з цим винаходом і, зокрема, корисні як інгібітори функцій протеасоми, наведені в Таблиці І, поданій нижче.

Таблепя І

Сполуки, застосовувані для інгібування протеасоми 205

Написи в таблиці І: репу! -- феніл, іпдо|е «х- індол, Д-аіїапіпе - р-аланін. 77 6)

ІА ЮТ 5 1 ГИ 750 31 1 раєпу! | СНЖО он ! чи

У (о) кл ю 2 їлдо |СНЖО Ж он Іс) лк че 3 Ілаоіє |СНЖО ХХ це РснМІ -

Е

«и « | їдою |со Й он 40 ЛА т с ц - а -» 5 | пас |снЖо її он ! ат ши - 6 | рнепя | сСнЖО Х її он ва ке - чі с и о 7 | рнеплу |снЖо її тнсном жк 3е) ати 18 | їмаок | со - ме ї РіИСНОМ жк чих - іме) 60 б5 жі Ах К В х. Г Кк їх 9 пасм |снЖо м й РИСНОМ жо дод 9 ' ке | іласіє СО Ж м он 10 11 рієпу! СО ри он чі і и

Где 12 | рнепут і со у. он ас чих 13 | рневу сно а он чи ке 14 | шаою |со Як це З он че яке с 15 | їлййою їснжо ак м ра. он о чих й --е 16 репу! / СО он

ЛА и Й ня ю 17 | інасю |сСнЖО он юю з «- чи , чт м 18 | іласіє |снжо 0» чи У он щ 4 чих - чи - с з -І шк 1 ся 0 (Че) (Ф) ко 6о 65

Ах | В Пк їх Її в їх 19 іїпасіє / СНО Як ме ще он г ли 20 | їлдоїв СНО вач їз он шо А

Где ди 70121 | шасі сно оно Іон чи я о жд 7-3 Іпбоїє |СНЖО ХХ 7» он і м чих чи 23 | їлаою |сНжО ри он : Е чих чих 24 | їламе їСснНжО АХ ща он : с да! чи 4125 ілаою |снЖо сно он

АХ це А о

ЕЗ чи 26 Ілдоїє |СНнжО ри і ду он р 1 .

І А є ою 27 Гіядою |сСНнЖО 7 ва он ю

Я лк -

Гл ді 28 філаою |СНЖжО 7 п ХХ он М. чих в чі 29 | ласо |снЖо Х що он « 79 ат ва 7 с чі :з» -І шк 1 са 0 (Че) (Ф) ко 6о 65 ж Аг мі Во Кк ЇХ, |і В і Х 7 7 ї т , | ілаою |снЖО те сн) он ; А, ; 1. Я и 31 Іласіє |сНЖО Як м ди он ій ваш 70132 | їявою |снЖО ри п в он чи 33 | їпаою | СНЖО ри "т он 18 ва чих Га 34 | ійвом |снхо АХ п он : а

Год ді де ді 200135 1 ласі | сно ХХ п Га он х и і ва ча 36 | їлаов |СНЖО А м-й ду он сч ре : а

А лк о 37 іхдоїє |снжо| М он ше щ- х

Ге) 30 38 Ілавіє |ІСНО І В-Аа . он ю ї- Я ю 39 | їйаов ГснНЖО ма ва он «- ча не - чу | їлась |снХхО ва он ле «

Баш . 40 - с :з» -І шк 1 ся 0 (Че) (Ф) ко 6о 65 ж А хх м ; І 41 Ілаоії |СНЖО в'я в он чих чи сн 42 Іпдоє | СНО А ва он чи нос 70. |43 | тпадю Гсно | ГУ: Її ва он ча чих 44 | їнаою сно ва ва он ке яких 45 | ілаою |снжо мі ва оно чі чі 146 Гілвою Існюо он ва он чі міч 47 | ласі | снжо м ва ок с ле (о) чт 48 | їласю |снЖо ХХ ва он сх чн (є)

49 | їласіє | СНнЖО я | ва он ю . за М ма о ад «- 50 | ідасіє сно ле ви он ик і - мч « що с :з»

-І шк 1 ся 0 (Че)

(Ф) ко 6о 65 х пн п ча и ж Щ чн МН ДЛ 6 нн и а ж ж жа ча та нити чт лишити

ІБ Аг хз В КЕ «Хі В. ЇХ 51 Іпдсіє (сно чу я он дві міх 52 | їласю | сно А Улре н он аг 53 їдою | СНО | В. ліа ї- " он и 54 філаою |сСнЖОо й ї- " он и де 55 | їла | сно яд н он ла чіт 56 | тасе |снЖО ва й он ше да сч 57 | ласк |сно!| Ст яти н | (о)

Я ще і он чт нос з З8 | ілаов |СНЖО з м он Ф

Я . чих ю

ІС о) 59 | шласе |снЖо в п он лк дев! че во -

Ілдож | СНЖО г ме | он

ГА ді ати « - с з -І шк 1 с (32) (Ф) ко 60 65

М. Аг хх Ко вк 1х ох ві Іпадсїв (СНО ХХ ї . он . | жи 2 чих 62 | їлаою їснЖО щи ї- Й он й г де ді 63 Іласв 1СНЖО МО жом н он и ї Ко 4 | тво | сно ре ік й он гм я чі 65 Ілаоїє СНО ду і ї он

Где л 66 Ігкісіє СНО ду ік ії он чи

ЩА с (о) 62 | іїпєою снжої М (- Ге он я чи й Ге) 168 | їлаов | сно | В-Аїа мо | й он ою ю 69 | паою |СНЖО ее г он «- чих . С. 7 ши 70 Гіпдов | снжо сна он и « чів - с ;» -І шк 1 ся 0 (Че) (Ф) ко 6о 65

М Аг М я ВХ | В хо

НН 7 7 ї ї й 7 | наск існсо з (5 сн он дод си 72 | ілвою |снсо| ТЗ сн, он . чи г дед тю 73 | іїлдов |сно Шок у сно он ле и чих 74 | їлваою | сно ви ли сн, он 75 Іпдсівє |І|сНУО їз он чи чі 20. 76 |ідою |існжо он сно он чи ми 77 | іїддою існжо г Ге й он сч чи і) 78 ївон |СНЖжЖО ро чи Гак он чт ек Ге) 7 9 їмоїв ОСНО ре: І | Ге он ою

М ча

А Іо) 80 ілаов |снжо ле Ге он «- чи » т с же . - с з -І шк 1 с 20 (Че)

Ф) ко бо б5

Мм'А х ГІ петду тут -- - - . і ж 20 х К. а ЗВ Ав хо

Іпдоє |сНЖО те се.

ОХ міх ; а чі 82 ідею | сно ї чл сн он о ло 1, чі 83 | іддою сно в'я оно Іон жк - ілвоїв СНО ВА С і он он 85 - іласів СО (7 С. Й он чі 8 чи

Ілйсів | СНО ак ї Й сн чт чіл с |87 | таою Існюо Як о 7 он Іон Го) чих чи 88 іляов |снюо ХХ ни сно Іон ФУ

ЩІ ще и | яв ю 89 7- м

Іпасіє СНО» Ї ко І он чи ме з їй 90 | дао СНО В-Аа ная Ше он - чі « - с з -І шк 1 сло (Че) (Ф. ко 60 65

М Аг Ха В. В их, 1 ВЕ Х 91 Іпдоїє | СНО Ше он леді веде 92 | надою | сно ро ок ще он дод

Х що 0 |з он

Іпдоів |СНЖО ве м Шк он лк и мл 54 ідо |снюо| з Ше он т 7 где 95 Гілдою |снюо шк пе Шк он

Где и чі» 96 | аск |снюо в ще он чи п 97 | таою |снхо Ш он с як о и 98 іпдоїє СНО он Ще он да я (є) 30199 | лав |снхо З і . Ше ок ю й іс) леді 100 | ілаоів сно Шк он - пу - дя 101 дао |снжо ре: ще ок зим делі є « - с ;» -І -їь о сло і3е) іФ) іме) бо б5

ТП А ОМ Ю в их 1 5 хр 102 | іддою І сно 8 п ем он ; 8 Ко У чі 105 | дасю |снЖо І лу Шк он 8 Ко щі 70 ле

ММ | ласі |снсої м ре он чи і и Її 105 | іласію |СНЖО | В-Атх іє ре он ча 20. | | плас сно ро (- ла он ми іх 107 | іласю і снжо ОО й а он сч

КЯ й о 108 он

Іпйоїє СНО он х ме 8 - Ге) 109 сні

Ілвоє сно ! » пу м А о як ІФ) 110 | ас |снжо Ше он - чих дл -

М рід сно | ма! і ре он н « - с ;» -І шк 1 сл 20 (Че) (Ф. ко 60 65 жа 5 кт К 112 Іпдоїє |СНЖО| Мука Фф он чі 13 Ілаоіє |СНЖО у С до он -ке 70 чи 114 | ідаою | снЖо що -е ре он чих б чи 15. |115 | дао сно ро ре ок

А ке Х 116 | ідасію | снхо он м ік а нан чи 117 | ласі снко м ре он ке се 7 118 т о іласіє | сно Фф і м що о г й - Я ою пз н їміоюв |СНЖО ли он ю «- чи 120 Іпаої | СНО | В-дія ме л он - ча « - с з -І шк 1 са 0 (Че) (Ф. ко 6о 65

(Ав Ах 0 й ЕХ. І о У 171 | здо снжо он й мані жк 12 дою сно м мат он г ви Й я 133 | ідо | сно в'я он чих и 75 1124 | асю |Існжо Га (- рЙ он чи веде 125 | їдаок |снюо тк он чи чи 126 | іддев |снхо Я он чі сем що А о 127 | ідаок снжо є чук он

К чі 30128 1 док |Існюо он : он ю й їй я 159 чи -

Іласіє | СНО ма он чи и Я їм чі з « - с з -І шк 1 сло (Че)

Ф) ко 60 65

Ж Ах Кк Хм і1ю Глас 1СНКО ро ялох он ж . и 131 Іпдоїє СНО я он хм чу и 132 | здав | сно ду це й он я чі 135 | ідасіє | сно ї- Л он мк чі 134 | іласю |снюо| шк он 7- делі 135 | ідаоїе сно | В.А Шк он сч 136 | ідавю Існжо шк он чі ФУ рай - ю 137 | ілаою |снжо пах ак он

Я я о

ЩІ - 138 | дао |сСнЖО в'я а ною он и у ї- ек чи 139 | іпдою (снЖжо А шок он « жа з с з -І шк 1 сло (Че)

Ф) ко 60 65 пд о я т о ню ою 50 0 0 0260 02 02 6 о

Ме АГ Х Во ВХ В Х 140 ідею |снжо Шк Шк он лоді чит 145 іддок снжо ви м Шк он и о ля ую 17 | іпаою сно я (- Шк он

Где ді чи 143 іпавбів |сНЖжЖО ЖК п он

Мч 7 144 І ідяє сно з ме шк он тат лі чів о 145 | аж снжо ро ї- Шк он где чі 146 | іпаов сно ; Шк он три М и с 7- 147 | здасе снжо гу С Шк он (о) чіт 148 що їй зо Іласю | СНО З-ВРА ме | Шк он ю чі

ІС

149 Ілдов |СНЮО н богн он «- чі г - 150 та мих ов ІСНЖО | ВД-А1я ме ВИ он и дт ді ч

З с :з» -І шк 1 сло (Че)

Ф) ко 60 65

М Аг ХХ Во В. Х Ва Хе. 155 | глас |снжо м Сем он ве г кл Ук 152 Івдоїв | СНО ро а сон ок

Є наши то 153 | ідаоє | сно з ок сон он и 154 | ілаее |снюо З р сон он

Где и г чи 155 | щас | сно шк а сон он 20. | 156 7- індоїє |сСнЖО че сон он х Си Й ча 157 і ійдою І снЖо Й лу сом он сч о С дод и і) 158 | їдаою |снхо ро і- сон он

Х їє Ф 301159 | іддою |снхо ща я сен ок ю б г їй чих и 160 р ідо | снЖо чук сен он - и г М. ча и 161 | іяжев |снхо ре. і сот он й с : «

Гл щі чи - с з -І шк 1 сл 20 (Че) (Ф) ко во 65

Мо Аг Ху! Во ВХ В. ХХ 162 | ідвою |снЖо сон он 2 Є де дл 163 І уддої снюо Ф м ВИ он

Й 8 їй г леві 154 дою |снюо ле Я он о жи чех 165

Іпдоїє | СснЖжО ок ду і Я

Х

167 | іпдоїв |снжо ва он т се чих 158 | дав | сСНЖжО о чу ва он (о) чі

Х г 169 М дао снжо ре, С ч он Ф зо с-м . же

АЛ І в) 170 Ілдсіє СНО ув, м ії он ю

Где «-

А - « - с з -І шк 1 сло (Че) (Ф. ко 60 65 о АХ Во В ХВ х 17 | я пасе то Ф КИ он

А

Гасві 172 дао |снхо м ва он 70 и А

Гі 173 їпасіє | СНО ра чи ва он

Го т гад! 174 | ідаою Гснжо що В он лк ат 20. |175 | аск |снюо С МО он чі с 175 Іпасіє (СНЖО що шок он 5) 8 - 7 | Ф 177 | іядою |снЖо ду? С Я он Іо)

І чи чи чи ча 178 | іддою |снхо ду І 7 он

Кл «

Й Гай - с з -І шк 1 с (Че) (Ф. ко 60 65

Мо Ах, І ВХ, в хх 179 | дасю |снжо Ф С ОО он

С ек чі 1850 іласю сно 8 я Шк он 8 Ки - чі 181 Ілдою |СНЖО ме ВИ он чі и 152 | ідасю |снсо ри т он : лі чи 20. 83 | тядою |снсо| М н н он чі І м іх 184 | іддов |снжо Ії н он ча чих с |185 | іддою сно Ф я носу ок о

Фф и чи т Ге) ; 186 І ідаою |снжО сомн; он т) с о жк ч- аа че « - с з -І шк 1 са 0 (Че) (Ф) ко 6о 65 я в ши ши пив ШИ з У 187 Гіядою 1снЖо он чел чи 183 | іддою |снжо Фу м В-Атасале он ! От чі їв | даю |снко С с он ї о дя чех 199 | іласе | снЖо К он с чи че 151 |їдаом |снко ф ле ннауне Їон сч » ОМ р о як чі 192 | ідасіе сно : - он б» ре. ю дея

Ж Іо) «- 193 Іпдою | СНО нн, он 7 - мк чі « н- с з -І шк 1 сло (Че)

Ф) ко 60 65

ЇМ Аг ХХ Во КІ Хі В; Ха

Міда | сно є о он

Ф як а 195 | іпасів | сСНнЖО є Шок он 70 Фе ле

Га 196 | їддою |снжо п К он ве ноз ля аа 197 і ійдою |снЖо нкарчне он

Мн рі

Е чі чу 158 5

Іпдев |сСНЖО ме он с 7 А о чи 199 | дою |снЖо Й п . а он Ф зо ва ння же о 200 | іддою їснЖо шк ва он ю чи и - |291 | їядою | снжо ви он чн и я І - 56 6 Ж ьж -2 « тА Я 6 5 « Є А. РЛ Я Я Є - А. ЯеолХ Х 5 6 .45- й:4 4.35...

Її М Аг х І В х Е Хе і « 29 он Її іо | СНО Х ви он шщ с кл ч вд и? 203 | їдаов | СНО ва Х и он де мк 450 | | їла |снжо В он

Ш- «

М

- ча зічіх 1 205 | ласк снио нн «т Мне он с МН с Я У чи 206

Іпдоїє ЇСНЖО " он м чі

Ф) й 209 | ласі | СНІСО | В-діалі ; з е В Аіаліпе ВА1аліпе он во Сполуки, описані вище, корисні при лікуванні захворювань та розладів, у яких протеасома 205 є медіатором, наприклад, антипроліфераційних захворювань, раку, запальних процесів. Перевага віддається використанню сполук згідно з цим винаходом для лікування антипроліфераційних розладів та запальних захворювань.

Найбільша перевага віддається використанню сполук згідно з цим винаходом для лікування запальних захворювань. 65 Сполуки згідно з цим винаходом корисні для лікування ссавців, що страждають на розлади, в яких протеасома 205 є медіатором.

Сполуки згідно з цим винаходом можна вводити в організм ссавців як з профілактичною, так і з терапевтичною метою будь-яким способом, що здатний забезпечити взаємодію, принаймні, одної сполуки згідно з цим винаходом з протеасомою 205. Необмежувальними прикладами корисних способів введення є пероральний, парентеральний, нашкірний, черезшкірний, ректальний, назальний або будь-який інший спосіб вживання відповідної фармацевтичної композиції, відомий обізнаним фахівцям.

Сполуки згідно з цим винаходом можна вживати у вигляді придатних для цієї мети дозованих лікарських форм. Конкретні лікарські форми значною мірою залежать від використовуваного способу вживання. Термін "лікарська форма" охоплює вироби, наприклад, таблетки, капсули, рідини та порошки, які містять інгібітори 7/0 протеасоми 20 З згідно з цим винаходом у чистому вигляді або у присутності одної або кількох фармацевтичних добавок. Добір цих добавок, наприклад, наповнювачів та допоміжних речовин, значною мірою залежить від вибраного способу вживання. Обізнаним фахівцям-фармацевтам відомі численні різноманітні рецептури та носії для вживання сполук згідно з цим винаходом.

Спосіб вживання, вибраний для використання сполук згідно з цим винаходом, визначає, в кінцевому підсумку, /5 Вигляд та склад лікарських форм, які містять інгібітори протеасоми 205 згідно з цим винаходом. Наприклад, внутрішнє вживання сполук згідно з цим винаходом може здійснюватися перорально у вигляді порошків, таблеток, капсул, паст, напоїв, гранул або розчинів, суспензій та емульсій або драже, які можна приймати через рот, у лікувальній їжі або з питною водою. Внутрішнє вживання можна здійснювати також з використанням композицій з затриманим виділенням лікарського засобу, що містять відповідні добавки, наприклад, 2о поверхнево-активні речовини, або капсул з крохмальною оболонкою, чи з використанням композицій зі швидким виділенням, наприклад, швидкорозчинних таблеток, виготовлених способом сублімаційного сушіння. Нашкірне вживання виконується, наприклад, з використанням лікувальних пластирів, обприскування, наливання або місцевого нанесення на шкіру. Парентеральне вживання здійснюється, наприклад, у вигляді ін'єкцій (внутрішньом'язових, підшкірних, внутрішньовенних, внутрішньоочеревинних) або імплантатів. сч

Перелік придатних для використання лікарських форм, які містять інгібітори протеасоми 205 згідно з цим винаходом, включає такі форми (але не вичерпується ними), як розчини, наприклад, розчини для ін'єкцій, і) розчини для перорального вживання, концентрати для перорального вживання після розрідження, розчини для нашкірного вживання або введення у порожнини тіла, композиції для нанесення на шкіру, гелі; емульсії та суспензії для перорального й нашкірного вживання та для ін'єкцій; напівтверді препарати; композиції, в яких Ге! зо активна сполука введена в основу, якою може бути мазь або емульсія типу "масло в воді" чи "вода в маслі"; тверді препарати, наприклад, порошки, премікси або концентрати, гранули, пілюлі, таблетки, драже, капсули; юю аерозолі та композиції для інгаляції; і різноманітні вироби, які містять активну сполуку. ю

Лікарські форми у вигляді розчинів можна використовувати шляхом внутрішньовенних, внутрішньом'язових та підшкірних ін'єкцій. Розчини для ін'єкцій готують шляхом розчинення активної сполуки у відповідному -- зв розчиннику з додаванням в разі необхідності допоміжних речовин, наприклад, солюбілізаторів, кислот, основ, ї- буферних солей, антиоксидантів та консервантів. Розчини фільтрують у стерильних умовах і дозують за допомогою шприців.

Іншим способом вживання розчинів, що містять сполуки згідно з цим винаходом, є пероральний. Концентрати сполук згідно з цим винаходом переважно вживають перорально тільки після розрідження концентрату до «

Концентрації вживання. Розчини для перорального вживання та концентрати готують, як описано вище для в с ін'єкційних розчинів. Розчини для нашкірного вживання наносять по краплях, за допомогою щіток, втирають, наливають або набризкують. Такі розчини готують, як описано вище для ін'єкційних розчинів. ;» Гелі наносять на шкіру або вводять у порожнини тіла. Гелі готують шляхом додавання до розчинів, приготованих, як описано вище для ін'єкційних розчинів, загусника в кількості, достатній для утворення прозорої речовини пастоподібної консистенції, або будь-яким іншим способом відомим обізнаним фахівцям. -І Композиції для наливання та місцевого нанесення наливають або набризкують на обмежені ділянки шкіри, при цьому активна сполука проникає через шкіру й діє системно. Композиції для наливання та місцевого - нанесення готують шляхом розчинення, суспендування або емульгування активної сполуки у відповідному с розчиннику або суміші розчинників, які не викликають небажаних реакцій шкіри. В разі потреби додають 5ор допоміжні речовини, наприклад, барвники, прискорювачі резорбції, антиоксиданти, фотостабілізатори та 1 адгезійні речовини.

Ге) Емульсії можуть вживатися перорально, нашкірно або шляхом ін'єкцій. Емульсії можуть бути типу "вода в маслі" або "масло в воді". їх готують шляхом розчинення інгібіторів протеасоми 205 або в гідрофобній, або в гідрофільній фазі та гомогенізації цієї фази в розчиннику протилежної фази за допомогою відповідних ов допоміжних речовин, наприклад, емульгаторів, барвників, прискорювачів резорбції, консервантів, антиоксидантів, фотостабілізаторів та добавок, які підвищують в'язкість.

Ф) Суспензії можуть вживатися перорально, нашкірно або шляхом ін'єкцій. їх готують шляхом суспендування ка активної сполуки в рідині з додаванням в разі потреби допоміжних речовин, наприклад, змочувальних агентів, барвників, прискорювачів резорбції, консервантів, антиоксидантів та фотостабілізаторів. во Фармацевтичні композиції згідно з цим винаходом можуть містити одну або кілька добавок у вигляді фармацевтично прийнятних добавок. До корисних добавок належать розчинники, солюбілізатори, консерванти, загусники, змочувальні агенти, барвники, прискорювачі резорбції, антиоксиданти, фотостабілізатори, адгезійні агенти, добавки, що підвищують в'язкість, наповнювачі, смакові добавки, змащувальні агенти і будь-які інші добавки до фармацевтичних композицій, відомі обізнаним фахівцям. 65 Добавкою може бути розчинник, наприклад, вода, спирти, наприклад, етанол, бутанол, бензиловий спирт, гліцерин, пропіленгліколь, поліетиленгліколі, М-метилпіролідон, алканоли, ароматичні спирти, наприклад,

бензиловий спирт фенілетанол, феноксиетанол; складні ефіри, наприклад, етилацетат, бутилацетат, бензилбензоат; прості ефіри, наприклад, алкілові ефіри алкіленгліколівд, наприклад, монометиловий ефір дипропіленгліколю, монобутиловий ефір діетиленгліколю; кетони, наприклад, ацетон, метилетилкетон; ароматичні та/або аліфатичні вуглеводні, рослинні або синтетичні олії, диметилформамід, диметилацетамід, 2,2-диметил-4-оксиметилен-1,3-діоксолан.

Як солюбілізатори в композиціях згідно з цим винаходом можуть бути корисними розчинники, які підвищують розчинність активної сполуки в основному розчиннику або запобігають її осадженню. Прикладами таких солюбілізаторів є полівінілпіролідон, поліоксиетилована рицинова олія, поліоксиетиловані складні ефіри сорбіту. 70 Корисними консервантами є, наприклад, бензиловий спирт, трихлорбутанол, ефіри р-гідроксибензойної кислоти і п-бутанол.

До корисних загусників належать неорганічні загусники, наприклад, бентоніт, колоїдний діоксид кремнію, моностеарат алюмінію, та органічні загусники, наприклад, похідні целюлози, полівінілові спирти та їх співполімери, акрилати й метакрилати.

У складі лікарських форм згідно з цим винаходом можуть бути використані також інші рідини, наприклад, однорідні розчинники, суміші розчинників і змочувальні агенти, які, як правило, є поверхнево-активними речовинами.

Корисними барвниками є всі барвники, які не є токсичними і можуть бути розчинені або суспендовані.

Корисними прискорювачами резорбції є диметилсульфоксид, олії з високою просочувальною здатністю, 2о наприклад, ізопропілміристат, дипропіленгліколь-пеларгонат, силіконові масла, складні ефіри жирних кислот, тригліцериди, жирні спирти.

Корисними антиоксидантами є сульфіти або метабісульфіти, наприклад, метабісульфіт натрію, аскорбінова кислота, бутил гідрокситолуол, бутилгідроксианізол, токоферол.

Корисним фотостабілізатором є новантизолова кислота. сч

Корисними адгезійними агентами є похідні целюлози, похідні крохмалю, поліакрилати, природні полімери, о наприклад, альгінати, желатин.

До корисних емульгаторів належать неіоногенні поверхнево-активні речовини, наприклад, поліоксиетилована рицинова олія, поліоксиетилований моноолеат сорбіту, моностеарат сорбіту, моностеарат гліцерину, поліоксиетилстеарат, алкілфенольні ефіри полігліколів; амфолітні поверхнево-активні речовини, наприклад, (33 зо динатрієвий М-лаурил-бета-імінодипропіонат або лецитин; аніонні поверхнево-активні речовини, наприклад, лаурилсульфат натрію, сульфати простих ефірів жирних спиртів, сіль моноетаноламіну зі складним ефіром о ортофосфорної кислоти і простого ефіру моно/діалкілполігліколю; катіонні поверхнево-активні речовини, му наприклад, хлорид цетилтриметиламонію.

До корисних агентів, що підвищують в'язкість та стабілізують лікарські емульсії, належать -- карбоксиметилцелюлоза, метилцелюлоза та інші похідні целюлози й крохмалю, поліакрилати, альгінати, ча желатин, гуміарабік, полівінілпіролідон, полівініловий спирт, співполімери метилвінілового ефіру з малеїновим ангідридом, поліетиленгліколі, воски, колоїдний діоксид кремнію та суміші вищезгаданих речовин.

Для приготування твердих дозованих лікарських форм активну сполуку змішують з відповідними добавками, додаючи в разі потреби допоміжні речовини, і одержану суміш фасують згідно з потребою. Прикладами « фізіологічно прийнятних твердих інертних добавок є хлористий натрій, карбонати, наприклад, карбонат кальцію, пт») с гідрокарбонати, різновиди оксиду алюмінію та діоксиду кремнію, глини, осаджений або колоїдний діоксид

Й кремнію та фосфати. Прикладами твердих органічних добавок є цукри, целюлоза, харчові продукти, наприклад, а молочний порошок, кісткове борошно, зернове борошно, в тому числі грубого помелу, і різновиди крохмалю. До інших придатних добавок належать змащувальні агенти та агенти сковзання, наприклад, стеарат магнію, стеаринова кислота, тальк, бентоніти; дезінтегратори, наприклад, крохмаль або зшитий полівінілпіролідон; -І в'яжучі агенти, наприклад, крохмаль, желатин або лінійний полівінілпіролідон; і сухі в'яжучі агенти, наприклад, мікрокристалічна целюлоза. - Активні сполуки можуть бути присутні в лікарських формах, описаних у цьому документі, у вигляді суміші, с яка містить, принаймні, один інший інгібітор протеасоми 205. Альтернативно або додатково лікарські форми 5ор Згідно з цим винаходом можуть містити, окрім, принаймні, одного інгібітора протеасоми 205, будь-яку іншу о фармацевтичну сполуку, придатну для лікування будь-якого відомого захворювання або розладу, за умови, що

Ге сумісне вживання обох активних сполук не викликає небажаних негативних ефектів.

Спосіб лікування захворювань та розладів, у яких протеасома 205 є медіатором, включає введення в організм пацієнта ефективної кількості вибраної сполуки або комбінації сполук; перевага віддається введенню в дв диспергованому вигляді у складі лікарської форми. Готові лікарські форми згідно з цим винаходом містять активну сполуку в концентраціях від 10 частин на мільйон до 2095(мас), перевага віддається вмісту від 0,195 до (Ф, 1090(мас). В разі використання лікарських форм згідно з цим винаходом, які розріджують перед вживанням, ка перевага віддається вмісту активної сполуки від 0,595 до 9О09о(мас), краще від 5906 до 5095(мас). Як правило, для досягнення ефективних результатів доцільно вживати добові кількості активної сполуки від приблизно 0,01мг до во приблизно 10Омг/кг маси тіла.

Обізнаному фахівцеві легко визначити дози лікарських форм, які містять інгібітори протеасоми 205 згідно з цим винаходом, та періодичність їх вживання залежно від низки факторів, в тому числі від способу вживання, віку та стану пацієнта. Ці одиниці дозування можна вживати при гострих або хронічних захворюваннях від одного разу до 10 разів на добу. В разі вживання сполук згідно з цим винаходом відповідно до вказівок, наведених в 65 опису винаходу, будь-які неприйнятні токсикологічні наслідки не очікуються.

Лікарські форми, які містять інгібітори протеасоми 205 згідно з цим винаходом, виготовляють за відомими способами фармацевтичної технології, які включають подрібнення, змішування, гранулювання і в разі потреби пресування в таблетки; або подрібнення, змішування та заповнення твердих желатинових капсул. В разі використання рідких добавок препарат може мати форму сиропу, еліксиру, емульсії або водної чи неводної суспензії. Такі рідкі композиції можна безпосередньо вживати перорально або ж заповнювати ними м'які желатинові капсули.

Хоча описані в цьому документі сполуки можна вживати, як описано вище, перевага віддається здійсненню способу згідно з цим винаходом шляхом перорального вживання описаних сполук. Якщо вибрано пероральний спосіб вживання, то для досягнення однакового ефекту необхідна більша кількість активної сполуки у 70 порівнянні, наприклад, з парентеральним введенням. Відповідно до правил клінічної практики, перевага віддається вживанню сполук згідно з цим способом на рівні концентрації, який забезпечує ефективні терапевтичні результати і не викликає в той же час негативних побічних ефектів.

Сполуки згідно з цим винаходом можуть мати також нетерапевтичне застосування. Вони можуть використовуватися як аналітичні стандарти при випробуваннях інгібіторів протеасоми 205.

Приклад 1

Сполуки, корисні для способу терапії згідно з цим винаходом, одержують звичайними методами органічної хімії. До літературних джерел, в яких наведено описи способів синтезу цих сполук, належать монографії

Боданського (ВодапезКу) "Практика синтезу пептидів" (Те Ргасіїсе ої Рерііде Зупіпевів, Зргіпдег-Мегіад, 15 Едіоп, 1984) та "Групи захисту в органічному синтезі" (Ргоїесіїме Сгоире іп Огдапіс Зупіпевів, 279 доп, чойп МУйеу 5 Зоп5, Мем МогкК, 1991). Усі пептидні сполучення виконують при кімнатній температурі при постійному обережному перемішуванні. Хід реакцій пептидного сполучення та відщеплення груп захисту контролюють з застосуванням тесту Кайзера на аміни. Абревіатурою "Хаа" позначено будь-яку з товарних амінокислот, які можна придбати у вигляді продуктів приєднання до смоли МВНА. Абревіатурами "Уаа" та "7аа" позначено будь-яку з товарних амінокислот. с

Сполуки згідно з цим винаходом можна одержати шляхом твердофазного пептидного синтезу (ТФПС, англ.

ЗРРБ) за загальною методикою, описаною нижче: Смолу МВНА з приєднаною амінокислотою Хаа (далі смола о

МВНА-Хаа) відважують і переносять у шприц, обладнаний фільтром з пористого скла. Смолу піддають попередньому набуханню в диметилформаміді, а потім відщеплюють групу захисту при кінцевому атомі азоту (М-термінальну групу захисту) шляхом реакції з З09о-ним розчином піперидину в диметилформаміді протягом ЗО Од) хвилин. Видаляють розчин, використаний для відщеплення групи захисту. Смолу після відщеплення групи захисту промивають п'ять разів диметилформамідом, п'ять разів метанолом і знову п'ять разів о диметилформамідом. Потім до смоли з відщдщепленою групою захисту можна приєднати амінокислоту Уаа; для ю цього використовують розчин аа в диметилформаміді, який містить по З еквіваленти Уаа, карбодіїмідного агента сполучення та гідроксибензотриазолу (ГОБТ, англ. НОВТ). Для досягнення коефіцієнту сполучення, -- достатнього для позитивного результату тесту Кайзера, можуть виявитися необхідними кілька послідовних ча стадій сполучення з розчинами Уаа. Стадії відщеплення М-термінальної групи захисту та сполучення з Уаа можна повторити для приєднання третьої амінокислоти 7аа. На кінцевій стадії сполучення застосовують розчин кетокислоти, карбодіїміду та гідроксибензотриазолу в диметилформаміді і повторюють цю стадію до позитивного « результату тесту Кайзера. Одержаний продукт, що містить завершену пептидну послідовність на смолі, сушать у вакуумі протягом не менше 6 годин, а потім розщеплюють шляхом оброблення на протязі 2,5 годин або сумішшю Ж) с трифтороцтової кислоти з водою (95/5), або свіжоприготованим розчином 9095 трифтороцтової кислоти, 390 ц етандитіолу, 595 тіоанізолу і 2956 анізолу. Відщеплений продукт виділяють або ліофілізацією з води, або "» розтиранням з діетиловим ефіром. Чистоту продукту визначають способом тонкошарової хроматографії (ТІ С).

Для підтвердження складу й будови продукту зразки пептидів аналізують методом протонного ядерного магнітного резонансу ("Н ММЕ). -| Приклад 2 - У цьому прикладі за методикою, описаною в Прикладі 1, одержували сполуку (3 -індолпіровиноградна кислота)-М-біфенілаланін-О-І ен-Азр-ОН. 1 Смолу Етос-М-Азр-(0--8щ)-МВНА (20мг) відважували і переносили в шприц з фільтром з пористого скла. сл 50 Смолу витримували для попереднього набухання в їмл диметилформаміду протягом 30 хвилин. Захисну групу

Етос (флуоренілметоксикарбоніл) відщеплювали шляхом оброблення 2095-ним розчином піперидину в іЧе) диметилформаміді протягом 30 хвилин. Видаляли розчин, використаний для відщеплення групи захисту. Смолу після відщеплення групи захисту промивали п'ять разів диметилформамідом, п'ять разів метанолом і знову п'ять разів диметилформамідом. До смоли з відщепленою групою захисту (1 еквівалент) приєднували Етос-О-І еш-ОнН, використовуючи розчин Етос-О-І е0-ЮОН (3 еквіваленти) в їмл диметилформаміду, який містив карбодіїмід (З еквіваленти) і гідроксибензотриазол (З еквіваленти). Для досягнення коефіцієнту сполучення, достатнього для о позитивного результату тесту Кайзера, може виявитися необхідною друга або третя стадія сполучення з іме) розчинами Етос-О-І ен-ОН. Повторювали стадії відщеплення групи ЕРтос та сполучення з амінокислотою для приєднання / Етос-М-(4,4-біфеніл)аланіну. На кінцевій стадії сполучення застосовували розчин 60 індолпіровиноградної кислоти (5 еквівалентів), діізопропілкарбодіїміду (5 еквівалентів) та гідроксибензотриазолу (5 еквівалентів) в диметилформаміді і повторювали цю стадію до досягнення позитивного результату тесту Кайзера. Одержаний продукт, що містив завершену пептидну послідовність на смолі, сушили у вакуумі протягом не менше 6 годин, а потім розщеплювали шляхом оброблення протягом 2,5 годин або мл суміші трифтороцтової кислоти з водою (95/5), або такою ж кількістю свіжоприготованого розчину 9095 б5 трифтороцтової кислоти, 5905 тіоанізолу, З9о етандитіолу, і 295 анізолу. Відщеплений продукт виділяли або ліофілізацією з води, або розтиранням з діетиловим ефіром. Чистоту продукту визначали способом тонкошарової хроматографії. "ЯН яЯМР (400Мгц, 46-0М50): 5 6,5-7,7)т, 14Н), 4,5 (т, 1Н), 4,1 (т, 2Н), 3,4 (т, 2Н), З (т,Н), 2,7 (т, 1НУ, 1,1-1,5 (т, ЗН), 0,5-0,9 (т, 6Н).

Приклад З

У цьому прикладі сполуку (3'-індолпіровиноградна кислота)-М-біфенілаланін-О- ен-Азр-ОН одержували за методикою, відомою як Спігоп Мітоїорез Ріп Тесппоіоду.

Залишок першої амінокислоти Хаа приєднували до блоків смоли з прищепленими 4-(гідроксиметил)феноксиацетамідогрупами (5,7мкмоль/блок). (тут блок - частинка смоли певного розміру, 70 форми й маси). Для цього кожний блок витримували протягом 2 годин у 800мкл розчину для сполучення (100ММ амінокислоти, 100мММ ІС (діїзопропілкарбодіїміду), ї0мМ ОМАР в суміші диметилформаміду з хлористим метиленом, 1:4). Потім блоки промивали протягом 5 хвилин диметилформамідом, двічі по 5 хвилин метанолом і сушили на повітрі протягом 15 хвилин. Відщеплення групи захисту Етос виконували шляхом оброблення 800мкл 2090-ного розчину піперидину в диметилформаміді протягом ЗО хвилин. Повторно промивали блоки (1 раз 75 диметилформамідом, двічі метанолом) і сушили їх на повітрі (15 хвилин). Приєднували залишок другої амінокислоти Маа шляхом оброблення розчином 100мММ МУаа, 7100мМ діїзопропілкарбодіїміду, 100ММ гідроксибензотриазолу та індикатора бромфенолового синього в диметилформаміді до зникнення синього забарвлення поверхні блока. В разі необхідності стадію приєднання повторювали. Потім повторювали цикл промивання та відщеплення групи захисту Етос. Приєднували наступну амінокислоту 7аа шляхом повторення стадій сполучення та промивання, описаних стосовно до Маа; в разі необхідності стадію приєднання повторювали. Останній залишок індолпіровиноградної кислоти приєднували, застосовуючи розчин (100мММ) 15 еквівалентів кислоти, 15 еквівалентів діїзопропілкарбодіміду і 15 еквівалентів гідроксибензотриазолу в диметилформаміді з додаванням індикатора бромфенолового синього. В разі необхідності стадію приєднання повторювали. Після остаточного промивання блоки оранжевого кольору виймали з тримачів і для розщеплення Ге обробляли кожний блок окремо у пластикових пробірках для центрифуг місткістю 2мл свіжоприготованим о розчином 9095 трифтороцтової кислоти, 59о тіоанізолу З39о етандитіолу, і 2965 анізолу (1,5мл) протягом 2,5 годин.

Виймали блоки з пробірок і випаровували суміш майже насухо в потоці азоту. Розтирали залишок з діетиловим ефіром і центрифугували кожну пробірку. Цю операцію повторювали з кожною пробіркою тричі. Осаджені пептиди збирали, ліофілізували, зважували і використовували в подальших процедурах. Чистоту продукту (Ф) оцінювали за даними ТШХ. Вихідні продукти випробовували шляхом сумісного хроматографування з автентичними зразками, одержаними згідно з Прикладом 1. о

Приклад 4 юю

Сполуки згідно з цим винаходом, одержані за методикою, даною в Прикладі 1, випробовували, як описано нижче. Каталітичний блок 205 протеасоми (відомої також як мультикаталітичний комплекс протеїназ) виділяли з - мозку крупної рогатої худоби і очищали до однорідності відомим способом (описаним у роботі Уїлка та

Орловського - М/ЇК 5 апа ОгіомвКкі М., 1983 /. Мешгоспет. 40, 842). Активність комплексу відносно хімотрипсину вимірювали по посиленню флуоресценції після розщеплення субстрату пептиду сукциніл-лейцин-лейцин-валін-тирозін-7-аміно-4-метилкумарину. Стандарт для проби іп мйго містив 2мкг « протеасоми 205, 0,1-100мкг/мл інгібітора протеасоми в 200мкл 50-ММ розчину НЕРЕБ5 з добавкою 0,190 470 додецилсульфату натрію, рН 7,5. Протеолітичну реакцію ініцювали додаванням 5ОмкМ флуорогенного - с субстрату пептиду і витримували суміш протягом 15 хвилин при 37"С Припиняли реакцію додаванням 10Омкл ц 100-мММ оацетатного буфера, рН 4,0. Швидкість протеолізу прямо пропорційна кількості вивільненого ,» амінометилкумарину, яку вимірювали способом флуоресцентної спектроскопії (довжина хвилі збудження 37Онм, випромінювання 4ЗОнм).

Результати випробувань інгібіторів протеасоми 205 подано в Таблиці ІІ. -І я г 205 відносно хімотрипсину с 50 с з нин и ниЕст Нх ен СТ о т в 1мо | з 1 нини нести Нх ЕНН во б5 16 10 121 »10 о і сч 2 о

Ф з ю ю - з й « б з є г» в - юн щ с ще

Фо в 1611 в 10110 зв 156115 о ю о 65 мо-32- ве 82 210 187 210 в шити с ПЕ СУ ПОЛЕ нити нести НЕ СТ о і нин І нИЕстИ НЕ: НЕСТНН пинг ІН нИЕстИ Е ВИНИ НЕСТНН нин нести НН СТ ля Дю 1

Сполуки згідно з цим винаходом, одержані за методикою, даною в Прикладі 1, випробували такожякописано СМ нижче. Каталітичний блок 205 протеасоми (відомої також як мультикаталітичний комплекс протеїназ) виділяли з (5) мозку крупної рогатої худоби і очищали до однорідності відомим способом (описаним у роботі Уїлка та

Орловського - МУїкК 5. апа ОгпіомузКкі М., 1983 /. Мепгоспет. 40, 842). Активність комплексу відносно трипсину вимірювали по посиленню флуоресценції після розщеплення субстрату пептиду сві7-0-Аїа-І ец-Аго-(7-аміно-4-метилкумарину). Стандарт для проби іп мйго містив 2мкг протеасоми 205, (о) 0,1-100мкг/мл інгібітора протеасоми в 200мкл 50-ММ розчину НЕРЕЗ з добавкою 0,195 додецилсульфату натрію, ю рН 7,5. Протеолітичну реакцію ініцювали додаванням 5О0ММ флуорогенного субстрату пептиду і витримували суміш протягом 15 хвилин при 37"С. Припиняли реакцію додаванням 100мл 100-мМ ацетатного буфера, рН 4,0. ІФ)

Швидкість протеолізу прямо пропорційна кількості вивільненого амінометилкумарину, яку вимірювали способом - флуоресцентної спектроскопії (довжина хвилі збудження З37Онм, випромінювання 43Онм). Сполуки 1-207 при випробуваннях на інгібування активності відносно трипсину виявили ефект інгібування при - концентраціях »1Омкг/мл.

Приклад 5

Сполуки згідно з цим винаходом, одержані за методикою, даною в Прикладі 1, випробували також, як описано « нижче. Каталітичний блок 205 протеасоми (відомої також як мультикаталітичний комплекс протеїназ) виділяли з мозку крупної рогатої худоби і очищали до однорідності відомим способом (описаним у роботі Уїлка та - с Орловського - МУїкК 5. апа ОгпіомузКкі М., 1983 /. Мепгоспет. 40, 842). Активність комплексу відносно трипсину и вимірювали по посиленню флуоресценції після розщеплення субстрату пептиду є» св2-0-Аїа-І еп-Аго-(7-аміно-4-метилкумарину). Стандарт для проби іп мійго містив 2Омкг протеасоми 205, 0,1-100мкг/мл інгібітора протеасоми в 200мкл 50-ММ розчину НЕРЕЗ з добавкою 0,195 додецилсульфату натрію, рН 7,5. Протеолітичну реакцію ініціювали додаванням 50ММ флуорогенного субстрату пептиду і витримували -і суміш протягом 15 хвилин при 37"С. Припиняли реакцію додаванням 100мкл 100-мМ ацетатного буфера, рН 4,0. - Швидкість протеолізу прямо пропорційна кількості вивільненого амінометилкумарину, яку вимірювали способом флуоресцентної спектроскопії (довжина хвилі збудження З37Онм, випромінювання 43Онм). Сполуки 1-207 при 1 випробуваннях на інгібування активності відносно трипсину виявили ефект інгібування при концентраціях »1Омкг/мл. 1

Приклад 6 3е) Сполуки згідно з цим винаходом, одержані за методикою, даною в Прикладі 1, випробували також як описано нижче. Каталітичний блок 205 протеасоми (відомої також як мультикаталітичний комплекс протеїназ) виділяли з мозку крупної рогатої худоби і очищали до однорідності відомим способом (описаним у роботі Уїлка та

Орловського - МУйкК 5. апа ОпомуеКі М., 1983 /. Мецйгоспет. 40, 842). Активність комплексу посиленню о флуоресценції після розщеплення субстрату пептиду СВ2-О-АїІа-І еи-СіІш-(7-аміно-4-метилкумарину). Стандарт для проби іп мійго містив 2мкг протеасоми 205, 0,1-100мкг/мл інгібітора протеасоми в 200мл 50-ММ розчину ко НЕРЕЗ з добавкою 0,195 додецилсульфату натрію, рН 7,5. Протеолітичну реакцію ініціювали додаванням 50ММ флуорогенного субстрату пептиду і витримували суміш протягом 15 хвилин при 37"С. Припиняли реакцію бо додаванням ... мкл 100-мМ ацетатного буфера, рН 4,0. Швидкість протеолізу прямо пропорційна кількості вивільненого амінометилкумарину, яку вимірювали способом флуоресцентної спектроскопії (довжина хвилі збудження 37Онм, випромінювання 43Онм). Сполуки 1-207 при випробуваннях на інгібування активності відносно пептидилглутамілу виявили ефект інгібування при концентраціях »1Омкг/мл. Сполука 190 була активною при концентраціях »5мкг/мл. б5

Claims (11)

Формула винаходу

1. Сполуки формули о Во о 70 ХХ ра Хо Її Х. т о В, де Х» - Аг-Хз, де Хз є -(О) або -СНЬС(О)- і Аг - феніл або індоліл; кожний з замісників К/ і Ко окремо вибраний з групи, що включає й -АІа, МаЇ, водень, лінійний та розгалужений алкіл з 1-4 вуглецевими атомами, лінійний та розгалужений заміщений алкіл з 1-4 вуглецевими атомами, причому згадана алкільна група може бути заміщена гідроксилом, карбоксилом, циклогексилом, піридин-3З-ілом, нафта-2-ілом, фенілом або заміщеним фенілом, а феніл може бути заміщений гідроксилом або фенілом; Ху вибраний з групи, що включає гідроксил і групу Аз ; с щі 6) - Кс х, й М Ф н ю ІС) о, «- де Ху - гідроксил; та Зо Кз - д -Аіа, водень, лінійний та розгалужений алкіл з 1-4 вуглецевими атомами, лінійний та розгалужений - заміщений алкіл з 1-4 вуглецевими атомами або феніл, причому згадана алкільна група може бути заміщена гідроксилом, аміно-, амідогрупою, карбоксилом, 1-Н-імідазол-4-ілом, піридин-3-ілом, хінідинілом, тіазол-4-ілом, фенілом або заміщеним фенілом, а феніл може бути заміщений гідроксилом або фенілом. « 20

2. Сполуки за п. 1, де Кі вибраний з групи, що включає розгалужений алкіл з 1-4 вуглецевими атомами та -о с лінійний заміщений алкіл з 1-4 вуглецевими атомами.

3. Сполуки за п. 1, де Хз є -СНЬС(О)- і РК. - ізобутил. :з»

4. Сполуки за п. 1, де Аг - індоліл, Ку - ізобутил і Куз - алкіл, заміщений карбоксилом.

5. Сполуки за п. 1, де Аг - феніл, Ко - феніл, заміщений фенільною групою, К. - ізобутил і Кз - алкіл, заміщений карбоксилом. -1

6. Сполуки за п. 1, де Аг - індоліл, Хз є -СНЬС(О)-, Ку - ізобутил і Кз - алкіл, заміщений карбоксилом.

7. Фармацевтична композиція для інгібування активності протеасоми 205 у ссавця, яка містить терапевтично -й ефективну кількість сполуки за п. 1. сл

8. Фармацевтична композиція за п. 7, яка відрізняється тим, що терапевтично ефективна кількість становить від приблизно 0,001 мг/кг до приблизно 100 мг/кг маси тіла ссавця.

о

9. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за п. 1 та одну або кілька фармацевтичних допоміжних с речовин.

10. Фармацевтична композиція за п. 9, яка має форму розчину.

11. Фармацевтична композиція за п. 9, яка має форму таблетки. 29 тріїгя я " : " " : : пов Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних (Ф) мікросхем", 2004, М 12, 15.12.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і г науки України. 60 б5