RU2192429C2 - α-КЕТОАМИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ 20S ПРОТЕАСОМЫ - Google Patents

α-КЕТОАМИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ 20S ПРОТЕАСОМЫ Download PDF

Info

Publication number
RU2192429C2
RU2192429C2 RU2000122474/04A RU2000122474A RU2192429C2 RU 2192429 C2 RU2192429 C2 RU 2192429C2 RU 2000122474/04 A RU2000122474/04 A RU 2000122474/04A RU 2000122474 A RU2000122474 A RU 2000122474A RU 2192429 C2 RU2192429 C2 RU 2192429C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
substituted
compound
phenyl
proteasome
group
Prior art date
Application number
RU2000122474/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2000122474A (ru
Inventor
Лайза ВАНГ
Роберт Т. ЛАМ
Стивен Р. Скоу
Элисон ДЖОУЛИ
Суреш КЕРВАР
Майкл М. Вик
Original Assignee
Си Ви Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Си Ви Терапьютикс, Инк. filed Critical Си Ви Терапьютикс, Инк.
Publication of RU2000122474A publication Critical patent/RU2000122474A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2192429C2 publication Critical patent/RU2192429C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0207—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)4-C(=0), e.g. 'isosters', replacing two amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06043—Leu-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Описываются новые соединения общей формулы I
Figure 00000001

где Х2 - Ar или Ar - Х3, где Х3 представляет собой -С=О или -СН2СО- и Ar представляет собой фенил или индол; R1 и R2 каждый независимо выбран из водорода или боковых цепей природных α-аминокислот, представленных линейным или разветвленным (С1-С10)алкилом, который может быть замещен гидрокси, карбокси, амино, циклогексилом, фенилом или гидроксизамещенным фенилом, бифенилом, нафтилом или пиридилом; Х1 выбран из -ОН или группы
Figure 00000002

где Х4 представляет собой -ОН; R3 выбран из водорода или боковых цепей природных α-аминокислот, представленных линейным или разветвленным (С1-С10)алкилом, который может быть замещен гидрокси, фенилом или гидроксизамещенным фенилом. Кроме того, описана фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать химотрипсиноподобное действие 20S протеасомы, включающая соединение I и один или несколько фармацевтических эксципиентов, представленная в виде раствора или таблетки. 2 с. и 13 з.п.ф-лы, 2 табл.

Description

Предпосылки изобретения
Мультикаталитическая протеиназа, или протеасома, представляет собой высококонсервативную клеточную структуру, которая ответственна за АТФ-зависимый протеолиз большинства клеточных белков (Соuх, О., Tanaka, К. and Goldberg, A. 1996 Ann. Rev. Biochem. 65, 801-847). 20S протеасома содержит каталитическое ядро комплекса и была выкристаллизована из архебактерии Thennoplasma acidophilum (Lowe, J., Stock, D., Jap, В., Zwicki, P., Bauminster, W. and Huber, R. 1995 Science 268, 533-539) и из дрожжей Saccharomyces cerevisiae (Groll, M., Ditzel, L., Lowe, J., Stock, D., Bochtler, M., Bartunik, HD and Huber, R. 1997 Nature 386, 463-471). В отличие от архебактериальной протеасомы, которая прежде всего показывает химотрипсинподобную протеолитическую активность (Dahhnann, В., Корр, F., Kuehn, L., Niedel. В., Pfeifer, G. 1989 FEBS Lett. 251, 125-131; Seemuller, E., Lupas, A., Zuw, F., Zwicki, P and Baumeister, W. FEBS Lett. 359, 173, (1995), эукариотическая протеасома осуществляет, по крайней мере, пять идентифицируемых протеолитических активностей. Три из этих активностей подобны по специфичности химотрипсину, трипсину и пептидилглютамилпептидазе. Остальные две описанные активности проявляют предпочтение к расщеплению пептидных связей на карбоксильном конце аминокислот с разветвленной цепью (ВrААР) и по отношению к пептидным связям между нейтральными аминокислотами с короткой цепью (SnAAP) (Orlowski, M. 1990 Biochemistry 29, 10289-10297).
Хотя 20S протеасома содержит протеолитическое ядро, оно не разрушает белки in vivo, если не находится в виде комплекса с 19S "кэпом" с обоих концов ее структуры, который сам проявляет многочисленные АТФ-азные активности. Данная более крупная структура известна как 26S протеасома, и она быстро разрушает белки, подлежащие разрушению, при добавлении множества молекул полипептидов массой 8,5 кДа, убиквитина (представлено в Соuх, О., Tanaka, К. and Goldberg, A. 1996 Ann. Rev. Biochem. 65, 801-847).
Большое количество функциональных групп субстрат использовалось в качестве возможных ингибиторов сериновых и тиоловых протеаз. Несколько из указанных мотивов были описаны в качестве ингибиторов протеасомы. Они включают альдегиды пептидов (Vinitsky, A., Michaud, С, Powers, J. and Orlowski, M. 1992 Biochemistry 31, 9421-9428; Tsubuki, 3., Hiroshi, К., Saito, Y. Miyashita, N., Inomata, M. and Kawashima, S. 1993 Biochem. Biophys. Res. Commun. 196, 1195-1201; Rock, К, I., Gramm, C., Rothstein, L., Clark, K., Stein, R., Dick, L.,Hwang, D. and Goldberg, A.L. (1994) Cell 78, 761-771)), N-ацетил-L-лейцинил-L-лейцинил-L-норлейциналь (ALLN) и N-ацетил-L-лейцинил-1-лейцинилметиональ (LLM), причем наиболее мощным ингибитором данного типа является N-карбобензоксил-1-L-лейцинил-L-лейцинил-L-норвалиналь (MG115). В других сообщениях описан ряд дипептидных ингибиторов, которые имеют значения IC50 в интервале от 10 до 100 нм (Iqbal, M., Chatterjee S., Kauer, J.C., Das, M., Messina, P. , Freed, В. , Biazzo, W. and Siman, R. 1995 I-Med. Chem. 38, 2276-2277). В качестве сильных ингибиторов протеасомы также был описан ряд α-кетокарбонильных и борноэфирных производных дипептидов (Iqbai, M., Chatterjee, S., Kauer, J.C., Mallamo, J.P., Messina, P.A., Reiboldt, A. and Siman, R. 1996 Bloorg. Med-Chem. Lett 6, 287-290) и эпоксикетонов (Spattenstein, A. , Leban, J.J., Huang, J.J., Reinhardt, K.R., Viveros, O.H., Sigafoos, J. and Crouch, R. 1996 Tet. Lett. 37, 1434-1346).
Другим соединением, которое проявляет специфичность при ингибировании протеасомной активности, является лактацистин (Fenteany, G., Standaert, R.F. , Lane, W. S., Choi, S., Corey, E.J. and Schreiber, S.L. 1995 Science 268, 726-731), который представляет собой метаболит Streptomyces. Эта молекула была первоначально обнаружена по ее способности стимулировать рост аксонов в клеточной линии нейробластомы (Omura, S., Matsuzaki, К., Fujimoto, Т., Kosuge, К., Furuya, Т., Fujita, S. and Nakagawa, A. 1991 J. Antibiot. 44, 117-118), а позже было продемонстрировано, что она для ингибирует пролиферацию некоторых клеточных типов (Fentcany, G., Standaert, R.F., Reichard, G.A., Corcy, E.J. and Schrcibcr, S.L. 1994 Proc. Nat'1. Acad. Sci. USA 91, 3358-3362).
Сейчас ясно установлено, что протеасома является главной экстрализосомальной протеолитической системой, включенной в протеолитические каскады, необходимые для разнообразных клеточных функций, таких как клеточное деление, процессинг антигенов и деградацию короткоживущих регуляторных белков, таких как продукты онкогенов, циклины и факторы транскрипции (Ciechanover, А. (1994) Cell 79, 13-21; Palombell, V.J., Rando, O.J., Goldberg, A.L. and Maniaus. T. 1994 Cell 78, 773-785). Например, активная форма NF-kВ представляет собой гетеродимер, содержащий субъединицы р65 и р50. Последний представлен в цитозоле в виде неактивного предшественника (р105). Протеолитический процессинг р105 с образованием р50 протекает по убиквитин-протеосомальному пути. Дополнительно, процессированные р50 и р65 содержатся в цитозоле в виде неактивного комплекса, связанного с ингибиторным белком IкВ. Воспалительные стимулы, такие как LPS, активируют NF-кВ путем инициирования сигнального пути, который ведет к разрушению IкВ. Данные сигналы также стимулируют процессинг р105 в р50. Таким образом, два протеолитических процесса, оба управляемые убиквитин-протеасомальным путем, необходимы для индуцируемой сигналом активации NF-кВ.
Наблюдение, что убиквитин-опосредованный протеасомальный протеолиз играет решающую роль в активации NF-кВ, могло бы быть использовано в клинике путем использования ингибиторов, направленных на протеасому. Аномальная активация NF-кВ, сопровождаемая стимуляцией синтеза цитокинов, наблюдалась при различных воспалительных и инфекционных заболеваниях. Активация NF-кВ также необходима для ангиогенеза и для экспрессии молекул адгезии (САМ и селектиков), таким образом, ингибиторы протеасом могут также быть полезны при лечении заболеваний, связанных с сосудистой системой.
Достоверно подтверждено, что убиквитин-протеасомальный путь является решающим для регулируемого разрушения циклинов, что обуславливает выход из митоза и позволяет клеткам входить в следующую фазу клеточного цикла (Glotzer, М. , Murray, A.W. and Kirschncr, M.W. (1991) Nature 349, 132-138). Таким образом, ингибирование разрушения циклинов путем применения протеасомных ингибиторов вызывает остановку роста. Поэтому другим возможным применением ингибиторов протеасом является их использование в лечении заболеваний, вызванных аномальным клеточным делением.
Несколько классов пептидных ингибиторов 20S протеазы были описаны в современной литературе. α-Кетоамидная группа использовалась в протеазных ингибиторах по многим причинам. В особенности, ряд α-кетокарбонильных и борноэфирных производных дипептидов (Iqbal, M., Chatterjee, S., Kauer, J.C., Mallamo, J. P. , Messina, P.A., Reiboldt, A. and Siman, R. 1996 Bioorg. Med. Chem. Lett 6, 287-290) были описаны как мощные ингибиторы 20S протеасомальной функции. Производные 3-индолпировиноградной кислоты были заявлены как фармацевтически активные соединения для лечения расстройств центральной нервной системы (De Luca, et al, WO 88/09789) посредством механизма, который регулирует содержание кинуреновой кислоты в головном мозге.
Несмотря на то, что описаны различные композиции, которые в некоторой степени ингибируют пролиферацию клеток, сохраняется потребность в более эффективных соединениях, которые ингибируют пролиферацию клеток через 20S протеасому.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Объектом данного изобретения является способ ингибирования клеточной пролиферации у млекопитающих, в котором используется терапевтически эффективное количество композиции, неизвестной ранее для ингибирования этих клеточных пролиферативных свойств.
Также объектом данного изобретения является способ лечения заболеваний, на которые можно воздействовать ингибированием протеасомальной функции.
Далее, объектом данного изобретения является способ лечения пролиферативных заболеваний, которые вызваны ингибированием протеасомальной функции.
Другим объектом данного изобретения является применение терапевтически эффективного количества композиций, описанных здесь, для подавления нарушений клеточной пролиферации у людей.
Еще одним объектом данного изобретения является применение терапевтически эффективного количества композиций, описанных здесь, для ингибирования протеасомальной функции.
В одном воплощении, данное изобретение относится к соединению, имеющему формулу
Figure 00000005

где X2 представляет собой Аr или Аr-Х3, где Х3 является -С= O или -СН2СО-, и где Аr представляет собой фенил, замещенный фенил, индол, замещенные индолы и любые другие гетероарилы; R1 и R2 каждый независимо выбран из боковых цепей известных природных α-аминокислот и не природных аминокислот, водорода, 1-10 углеродного линейного и разветвленного алкила, 1-10 углеродного линейного и разветвленного замещенного алкила, арила, замещенного арила, 1-10 углеродного линейного, разветвленного замещенного арила, алкоксиарила, 3-8 углеродного циклоалкила, гетероцикла, замещенного гетероцикла, гетероарила и замещенного гетероарила; X1 выбран из гидроксида, моноалкиламино, диалкиламино, алкоксида, арилалкоксида и
Figure 00000006

где Х4 представляет собой гидроксид, ариламино, моноалкиламино, диалкиламино, алкоксид или арилалкоксид и
R3 выбран из известных природных α-аминокислот, не природных аминокислот, водорода, 1-10 углеродного линейного и разветвленного алкила, 1-10 углеродного линейного и разветвленного замещенного алкила, арила, замещенного арила, 1-10 углеродного линейного и разветвленного замещенного арила, алкоксиарила, 3-8 углеродного циклоалкила, гетероцикла, замещенного гетероцикла, гетероарила и замещенного гетероарила.
В другом воплощении данное изобретение относится к способу ингибирования протеасомального протеазного фактора у людей, включающему введение терапевтически эффективного количества композиции, описанной выше, человеку.
В еще одном воплощении данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, описанное выше, и один или несколько фармацевтических эксципиентов.
ОПИСАНИЕ ПРОВЕДЕНИЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Изобретение относится к способу подавления нарушений клеточной пролиферации, инфекционных заболеваний и иммунологических заболеваний у млекопитающих, в особенности у людей, путем использования соединений следующей общей формулы:
Figure 00000007

где Х2 представляет собой Аr или Аr-Х3, где Х3 включает в себя -С=О, -СН2СО- или (СН2)n, где n=0-2, и где Аr представляет собой фенил, замещенный фенил, индол, замещенные индолы и любой другой гетероарил;
R1 и R2 независимо выбраны из боковых цепей известных природных α-аминокислот и не природных аминокислот, водорода, 1-10 углеродного линейного и разветвленного алкила, 1-10 углеродного линейного и разветвленного замещенного алкила, арила и замещенного арила, 1-10 углеродного линейного и разветвленного замещенного арила, алкоксиарила, 3-8 углеродного циклоалкила, гетероцикла и замещенного гетероцикла, или гетероарила и замещенного гетероарила. R2 представляет собой предпочтительно биарил или бифенил. R1 представляет собой предпочтительно изобутил. X1 выбран из -ОН, моно- или диалкиламино, алкоксида, арилалкоксида и
Figure 00000008

где Х4 представляет собой -ОН, ариламино, моно или диалкиламино, алкоксид или арилалкоксид, предпочтительно -ОН;
R3 выбран из боковых цепей известных природных α-аминокислот и не природных аминокислот, водорода, 1-10 углеродных линейных алкильных и разветвленных алкильных заместителей, 1-10 углеродного линейного и разветвленного замещенного алкила, арила и замещенного арила, 1-10 углеродного линейного, разветвленного замещенного арила, алкоксиарила, 3-8 углеродного циклоалкила, гетероцикла и замещенного гетероцикла, или гетероарила и замещенного гетероарила;
R3 предпочтительно является СО2Н, CH2CO2H, (CH2)2CО2H, Аrg, Lys, Asn, Gln, Asp, Glu, Phe и Nle.
Нижеследующие перечисления представляют определения для некоторых терминов, используемых здесь.
"Галоген" относится к атомам фтора, брома, хлора и йода.
"Гидроксил" относится к группе -ОН.
"Тиол" или "меркапто" относятся к группе -SH.
"Алкил" относится к циклической, разветвленной или прямой цепи алкильной группы с углеродными атомами от одного до десяти. Этот термин в дальнейшем иллюстрируется такими группами как метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, изо-бутил (или 3-метилпропил), циклопропилметил, изо-амил, н-амил, н-гексил и тому подобное.
"Замещенный алкил" относится к низшим алкилам, таким как только что были описаны, включая одну или несколько групп, таких как гидроксил, тиол, алкилтиол, галоген, алкокси, амино, амидо, карбоксил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, гетероцикл, циклогетероалкил, замещенный циклогетероалкил, ацил, карбоксил, арил, замещенный арил, арилокси, гетарил, замещенный гетарил, аралкил, гетероаралкил, алкилалкенил, алкилалкинил, алкилциклоалкил, алкилциклогетероалкил, циано. Эти группы могут быть присоединены к любому углеродному атому низшей алкильной группы.
"Арилокси" обозначает группы -ОАr, где Аr представляет собой арил, замещенный арил, гетероарил или замещенную гетероарильную группу, как определено ниже.
"Амино" обозначает группу NRR', где R и R' могут независимо быть водородом, низшим алкилом, замещенным низшим алкилом, арилом, замещенный арилом, гетарилом или замещенным гетарилом, как определено ниже, или арилом.
"Амидо" обозначает группу -C(O)NRR', где R и R' могут независимо быть водородом, низшим алкилом, замещенным низшим алкилом, арилом, замещенным арилом, гетарилом, замещенным гетарилом, как определено ниже.
"Карбоксил" обозначает группу -С(О)OR, где R может независимо быть водородом, низшим алкилом, замещенным низшим алкилом, арилом, замещенным арилом, гетарилом, замещенным гетарилом и тому подобное, как определено.
"Арил" или "Аr" относят к ароматической карбоциклической группе, имеющей, по крайней мере, одно ароматическое кольцо (например, фенил или бифенил) или множественные конденсированные кольца, в которых, по крайней мере, одно кольцо является ароматическим (например, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, нафтил, антрил или фенантрил).
"Замещенный арил" относится к арилу, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, например галогеном, низшим алкилом, низшим алкокси, алкилтио, ацетиленом, амино, амидо, карбоксилом, гидроксилом, арилом, арилокси, гетероциклом, гетарилом, замещенным гетарилом, нитро, циано, тиолом, сульфамидо и тому подобное.
"Гетероцикл" относят к насыщенной, ненасыщенной или ароматической карбоциклической группе, имеющей единственное кольцо (например, морфолино, пиридил или фурил) или множественные конденсированные кольца (например, нафтпиридил, хиноксалил, хинолинил, индолизинил или бензо[b]тиенил) и имеющие в кольце, по крайней мере, один гетероатом, такой как N, О или S, который может быть независимо незамещенным или замещенным, например, галогеном, низшим алкилом, низшим алкокси, алкилтио, ацетиленом, амино, амидо, карбоксилом, гидроксилом, арилом, арилокси, гетероциклом, гетарилом, замещенным гетарилом, нитро, циано, тиолом, сульфамидо и тому подобное.
"Гетероарил" или "гетар" относится к гетероциклу, в котором, по крайней мере, одно гетероциклическое ядро является ароматическим. Предпочтительными гетероарилами являются фенил, замещенный фенил, индол и замещенные индолы.
"Замещенный гетероарил" относится к гетероциклу, необязательно моно- или полизамещенному одним или несколькими функциональными группами, например галогеном, низшим алкилом, низшим алкокси, алкилтио, ацетиленом, амино, амидо, карбоксилом, гидроксилом, арилом, арилокси, гетероциклом, гетарилом, замещенным гетарилом, нитро, циано, тиолом, сульфамидо и тому подобное.
"Циклоалкил" относится к дивалентной циклической или полициклической алкильной группе, содержащей от 3 до 15 атомов углерода.
"Замещенный циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, включающей один или несколько заместителей, например галоген, низший алкил, замещенный низший алкил, алкокси, алкилтио, ацетилен, арил, арилокси, гетероцикл, гетарил, замещенный гетарил, нитро, циано, тиол, сульфамидо и тому подобное.
Примеры соединений, которые могут быть использованы в терапевтических методах по данному изобретению, в частности в качестве ингибиторов протеасомальной функции, представлены в таблице 1.
Соединения, описанные выше, могут использоваться для лечения заболеваний и расстройств, опосредованных 20S протеасомой, таких как антипролиферативные заболевания, рак, воспаление. Предпочтительно композиции по данному изобретению могут использоваться для лечения антипролиферативных заболеваний и воспаления. Более предпочтительно соединения по данному изобретению используются для лечения воспалительных заболеваний.
Соединения по настоящему изобретению могут использоваться для лечения заболеваний, опосредованных 20S протеасомой у млекопитающих.
Соединения по данному изобретению могут вводиться млекопитающим как для и профилактики, так и для лечения, любым способом введения, который может доставить к 20S протеасоме, по крайней мере, одно соединение по данному изобретению. Неограничивающие примеры применяемых способов введения включают пероральный, парентеральный, кожный, чрезкожный, ректальный, назальный или любой другой, подходящий для введения фармацевтической композиции способ, который известен специалистам в данной области.
Композиции по данному изобретению могут вводиться в виде подходящих фармацевтических дозированных форм. Фармацевтическая дозированная форма в значительной степени зависит от используемого способа введения. Термин фармацевтическая дозированная форма относится к объектам, таким как таблетки, капсулы, жидкости и порошки, включающие в себя ингибиторы 20S протеасомы данного изобретения, сами по себе или в присутствии одного или нескольких фармацевтических наполнителей. Выбор добавок, таких как эксципиенты и адъюванты, также в значительной степени будет зависеть от выбранного способа введения. Специалистам в фармацевтической области известно широкое разнообразие препаратов и носителей для введения композиций по данному изобретению.
Способ введения, выбранный для соединений по данному изобретению, определяется конечной формой и композицией фармацевтической дозированной формы, содержащей ингибиторы 20S протеасомы по данному изобретению. Например, внутреннее введение соединений по данному изобретению осуществляется перорально в виде порошков, таблеток, капсул, паст, напитков, гранул или растворов, суспензий и эмульсий, которые могут быть введены перорально или в виде болюса, в содержащем лекарственное вещество пищевом продукте или в питьевой воде. Внутреннее введение может также быть выполнено, используя препарат с задерживаемым высвобождением, содержащий добавки, такие как поверхностно-активные вещества или покрытые крахмалом капсулы, или используя составы быстрого высвобождения, такие как высушенные замораживанием быстро растворяемые таблетки. Кожное введение осуществляется, например, в виде трансдермальных пластырей, распылением или "орошением" или "опрыскиванием". Парентеральное введение осуществляют, например, в виде инъекции (внутримышечно, подкожно, внутривенно, внутрибрюшинно) или путем имплантации.
Подходящие фармацевтические дозированные формы, содержащие ингибиторы 20S протеасомы по данному изобретению, включают, но не ограничиваются, растворы, такие как растворы для инъекций, пероральные растворы, концентраты для перорального приема после разведения, растворы для использования на коже или в полостях тела, препараты для "орошения" или "опрыскивания", гели; эмульсии и суспензии для перорального или кожного введения и для инъекций; полутвердые препараты; препараты, в которых активное соединение входит в основу для крема или в основу эмульсия масло-в-воде или вода-в-масле; твердые препараты, такие как порошки, предварительно приготовленные смеси или концентраты, гранулы, пилюли, таблетки, болюсы, капсулы; аэрозоли и препараты для ингаляций, и изделие, имеющее определенную форму, содержащее активное вещество.
Фармацевтические дозированные формы, которые представляют собой растворы, могут быть введены путем внутривенной, внутримышечной и подкожной инъекции. Растворы для инъекции получают путем растворения активного соединения в подходящем растворителе и, если приемлемо, путем добавления адъювантов, таких как солюбилизаторы, кислоты, основания, буферные соли, антиоксиданты и консерванты. Растворы стерильно отфильтрованы и дегазированы.
Альтернативно растворы, включающие композиции по данному изобретению, могут вводиться перорально. Концентраты композиций по данному изобретению предпочтительно вводят перорально только после разбавления концентрата до применяемой концентрации. Пероральные растворы и концентраты получают, как описано выше для случая растворов для инъекции. Растворы для использования на коже наносят по каплям, втирают, натирают, разбрызгивают или распыляют. Эти растворы получают, как описано выше для случая растворов для инъекции.
Гели наносят на кожу или вводят в полости тела. Гели получают путем обработки растворов, которые были получены, как описано для случая растворов для инъекции, с таким количеством загустителя, чтобы образовывалось прозрачное вещество сметаноподобной консистенции, или путем любых других методов, известных специалистам в данной области.
Растворы для "орошения" и "опрыскивания" выливают или разбрызгивают на ограниченные области кожи, при этом активное соединение проникает через кожу и действует системно. Растворы для "орошения" и "опрыскивания" получают путем растворения, суспендирования или эмульгирования активного соединения в подходящих растворителях или смесях растворителей, которые являются толерантными к коже. Если приемлемо, добавляют другие добавки, такие как красители, ускорители резорбции, антиоксиданты, стабилизаторы против действия света и вещества, повышающие клейкость.
Эмульсии могут вводиться перорально, чрезкожно или в виде инъекций. Эмульсии могут быть либо типа вода в масле, либо типа масло в воде. Их получают путем растворения ингибиторов 20S протеасомы либо в гидрофобной, либо в гидрофильной фазе и гомогенизируя фазу с растворителем противоположной фазы при помощи подходящих адъювантов, таких как эмульгаторы, красители, ускорители резорбции, консерванты, антиоксиданты, стабилизаторы против действия света и вещества, увеличивающие вязкость.
Суспензии могут вводиться перорально, чрезкожно или в виде инъекций. Их получают путем суспендирования активного соединения в жидкости, если приемлемо, с добавлением дополнительных адъювантов, таких как увлажняющие агенты, красители, ускорители резорбции, консерванты, антиоксиданты и стабилизаторы против действия света.
Фармацевтические композиции по данному изобретению могут включать одну или несколько добавок в виде фармацевтически приемлемых добавок. Применяемые добавки включают растворители, солюбилизаторы, консерванты, вещества, увеличивающие вязкость, увлажняющие агенты, красители, ускорители резорбции, антиоксиданты, стабилизаторы против действия света, вещества, повышающие клейкость, вязкость, наполнители, вкусовые агенты, смазывающие агенты и любые другие добавки для фармацевтической композиции, известные специалистам в данной области.
Добавка может быть растворителем, таким как вода, спирты, такие как этанол, бутанол, бензиловый спирт, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, N-метилпирролидон, алканолы, глицерин, ароматические спирты, такие как бензиловый спирт, фенилэтанол, феноксиэтанол, сложные эфиры, такие как этилацетат, бутилацетат, бензилбензоат, простые эфиры, такие как алкиловые эфиры алкиленгликоля, такие как монометиловый эфир дипропиленгликоля, монобутиловый эфир диэтиленгликоля, кетоны, такие как ацетон, метилэтилкетон, ароматические и/или алифатические углеводороды, растительные или синтетические масла, ДМФ, диметилацетамид, N-метилпирролидон, 2,2-диметил-4-оксиметил-1,3-диоксолан.
Следующие добавки могут быть использованы в качестве солюбилизаторов композиций по данному изобретению: растворители, которые улучшают растворимость активного соединения в основном растворителе или которые предотвращают его осаждение. Примерами являются поливинилпирролидон, полиоксиэтилированное касторовое масло, полиоксиэтилированные сорбитановые эфиры.
Применяемыми консервантами являются, например, бензиловый спирт, трихлорбутанол, п-оксибензойные эфиры и н-бутанол.
Применяемые загустители включают неорганические загустители, такие как бентонит, коллоидный силикагель, моностеарат алюминия, органические сгустители, такие как производные целлюлозы, поливиниловые спирты и их сополимеры, акрилаты и метакрилаты.
Другие жидкости, которые могут быть использованы в фармацевтических дозированных формах по данному изобретению, представляют собой, например, гомогенные растворители, смеси растворителей и увлажняющие агенты, которые являются обычно поверхностно-активными веществами.
Применяемые красители представляют собой все красители, которые являются нетоксичными и которые могут быть растворены или суспендированы.
Применяемые ускорители резорбции представляют собой ДМСО, текучие масла, такие как изопропилмиристат, пеларгонат дипропиленгликоля, силиконовые масла, эфиры жирных кислот, триглицериды, жирные спирты.
Применяемые антиоксиданты представляют собой сульфиты или метабисульфиты, такие как метабисульфит калия, аскорбиновую кислоту, бутилгидрокситолуол, бутилгидроксианизол, токоферол.
Применяемым стабилизатором против действия света является новантисоловая кислота.
Применяемые вещества, повышающие клейкость, включают производные целлюлозы, производные крахмала, полиакрилаты, природные полимеры, такие как альгинаты, желатин.
Применяемые эмульгаторы включают неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиоксиэтилированное касторовое масло, полиоксиэтилированный сорбитан моноолеат, сорбитан моностеарат, моностеарат глицерина, полиоксиэтилстеарат, алкилфенольные эфиры полигликоля; амфолитические поверхностно-активные вещества, такие как Di-Na N-лаурил-бета-иминодипропионат или лецитин; анионные поверхностно-активные вещества, такие как Na-лаурилсульфат, сульфаты эфиров жирных спиртов, моноэтаноламиновая соль простого эфира моно/диалкилполигликоля сложных ортофосфорных эфиров; катионные поверхностно-активные вещества, такие как цетилтриметиламмонийхлорид.
Применяемые вещества, увеличивающие вязкость, и вещества, которые стабилизируют терапевтическую эмульсию, включают карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу и другую целлюлозу, производные крахмала, полиакрилаты, альгинаты, желатин, аравийскую камедь, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, сополимеры метилвинилового эфира и малеинового ангидрида, полиэтиленгликоли, воски, коллоидный силикагель или смеси упомянутых веществ.
Для получения твердых фармацевтических дозированных форм активное соединение смешивают с подходящими добавками, если целесообразно, с добавлением адъювантов и смесь составляют, как желательно. Примеры физиологически приемлемых твердых инертных добавок включают хлористый натрий, карбонаты, такие как карбонат кальция, гидрокарбонаты, оксиды алюминия, силикагели, глины, осажденный или коллоидный диоксид кремния и фосфаты. Примеры твердых органических добавок включают сахар, целлюлозу, пищевые продукты, такие как сухое молоко, животную муку, зерновую муку и грубую зерновую муку и крахмал. Другие подходящие добавки включают смазочные агенты и придающие свойство скольжения агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота, тальк, бентониты; разрыхлители, такие как крахмал или поперечносвязанный поливинилпирролидон; связующие агенты, такие как крахмал, желатин или линейный поливинилпирролидон; сухие связующие агенты, такие как микрокристаллическая целлюлоза.
В фармацевтических дозированных формах, описанных здесь, активные соединения могут присутствовать в виде смеси, по крайней мере, с одним другим ингибитором 20S протеасомы. Альтернативно или кроме того, фармацевтические дозированные формы по изобретению, в дополнение к, по крайней мере, одному ингибитору 20S протеасомы, могут включать любое фармацевтическое соединение, которое способно лечить любое известное заболевание или расстройство, в тех случаях, когда введение их вместе не создает никаких недопустимых неблагоприятных эффектов.
Методы лечения заболеваний и расстройств, вызванных 20S протеасомой, включают введение эффективного количества выбранного соединения или его сочетаний, предпочтительно сосредоточенного в фармацевтической дозированной форме. Готовые к использованию фармацевтические дозированные формы по данному изобретению содержат активное соединение в концентрациях от 10 м.д. до 20 процентов по массе и предпочтительно от 0,1 до 10 процентов по массе. Фармацевтические дозированные формы по данному изобретению, которые разбавляют перед введением, предпочтительно содержат активное соединение в концентрациях от 0,5 до 90 процентов по массе и предпочтительно от 5 до 50 процентов по массе. Обычно, доказано, что для достижения эффективных результатов благоприятно вводить количества от приблизительно 0,01 мг до приблизительно 100 мг активного вещества на 1 кг веса тела в сутки.
Количество и частота введения фармацевтической дозированной формы, включающей ингибиторы 20S протеасомы по данному изобретению, будут без труда определены любым специалистом в данной области в зависимости от, среди других факторов, пути введения, возраста и состояния пациента. Эти дозированные единицы могут вводиться один или десять раз ежедневно при остром или хроническом заболевании. Никакие недопустимые токсикологические эффекты не ожидаются, когда соединения по изобретению вводятся в соответствии с существующим изобретением.
Фармацевтическую дозированную форму, содержащую ингибиторы 20S протеасомы по данному изобретению, получают в соответствии с обычными методами фармацевтики, включающими измельчение, смешивание, гранулирование и прессование при необходимости в случае таблетированных форм или измельчение, смешивание и наполнение в случае твердых желатиновых капсульных форм. Когда используется жидкая добавка, лекарственное средство будет в виде сиропа, эликсира, эмульсии или водной или неводной суспензии. Такой жидкий лекарственный препарат может вводиться непосредственно р.о. или заключен в мягкую желатиновую капсулу.
Несмотря на то, что композиции, описанные здесь, могут вводиться как описано выше, предпочтительно, чтобы способ по данному изобретению осуществлялся путем введения соединения, описанного здесь, перорально. Когда выбирается пероральный путь введения, то необходимо ввести большее количество реагирующих агентов для того же эффекта, которое достигается меньшим количеством, введенным, например, парентерально. В соответствии с широкой клинической практикой предпочтительно введение соединения по данному методу в той концентрации, которая дала бы эффективные терапевтические результаты без проявления любых вредных побочных эффектов.
Композиции по данному изобретения также имеют нетерапевтическое использование. Композиции по данному изобретению могут использоваться в качестве аналитических стандартов для исследования ингибитора 20S протеасомы.
Пример 1.
Соединения, используемые в терапевтическом методе по данному изобретению, получают обычными методами органической химии. Ссылки, к которым можно обратиться за справкой при описании синтеза этих соединений в данной области, включают Bodansky's "The Practice of Peptide Synthesis," Springer-Verlag, First Edition, 1984; "Protective Groups in Organic Synthesis", Second Edition, John Wiley and Sons, New York, 1991. Все реакции присоединения пептидов выполняются при комнатной температуре при слабом и постоянном перемешивании. Реакции сочетания пептидов и удаления защиты контролируют, используя тест Kaiser для аминов. Хаа относится к любой из коммерчески доступных аминокислот, которая может быть использована в виде предварительно присоединенной к МВНА полимеру. Yaa и Zaa относятся к любой из коммерчески доступных аминокислот.
Соединения по данному изобретению могут быть получены путем твердофазного пептидного синтеза (SPPS) обычным способом, который заключается в следующем: взвешивают Хаа-МВНА-полимер и помещают в шприц, оборудованный фриттовым фильтром. Полимеру дают предварительно набухнуть в ДМФ и затем удаляют N-концевую защитную группу путем обработки 30% пиперидином в ДМФ в течение 30 минут. Раствор со снятой защитной группой удаляют. Полимер с удаленной защитой промывают пять раз ДМФ, пять раз МеОН и затем пять раз ДМФ. Аминокислота Yaa может затем быть присоединена к полимеру с удаленной защитой, используя Yaa в ДМФ, содержащем Yaa, карбодиимидный связывающий реагент и НОВТ (гидроксибензотриазол), по 3 эквивалента каждого. Успешное связывание с растворами Yaa может быть необходимым для достижения эффективности сочетания, которое проходит тест Kaiser. Удаление N-концевой защитной группы и Yaa связывание могут быть повторены, чтобы присоединить третью аминокислоту Zaa. На последней стадии сочетания используют кетокислоту, карбодиимид и НОВТ в ДМФ и эту стадию повторяют до тех пор, пока реакция присоединения не пройдет тест Kaiser. Завершенную пептидную последовательность на полимере сушат в вакууме, по крайней мере, шесть часов и затем отщепляют обработкой в течение 2,5 часов либо 95/5 трифторуксусной кислотой/водой, либо свежеприготовленным раствором 90% трифторуксусной кислоты, 3% этандитиола, 5% тиоанизола и 2% анизола. Продукты отщепления выделяют либо лиофиллизацией из воды, либо растиранием с диэтиловым эфиром. Чистоту продуктов оценивают с помощью тонкослойной хроматографии. Выбранные пептидные образцы анализируют с помощью 1H ЯМР для подтверждения идентичности продукта.
Пример 2.
В этом примере (3'-индолпировиноградную кислоту)-N-бифенилаланин-D-Leu-Asp-OH получают согласно методу примера 1.
Fmoc-N-Asp(Ot-Bu)-МВНА-полимер (20 мг) взвешивают и помещают в шприц, оборудованный фриттовым фильтром. Полимеру дают предварительно набухнуть в 1 мл ДМФ в течение 30 минут. Удаляют Fmoc (фторенилметилоксикарбонил)защитную группу обработкой 20% пиперидином в ДМФ в течение 30 минут. Раствор с удаленной защитной группой удаляют. Полимер с удаленной защитой промывают пять раз ДМФ, пять раз МеОН и затем пять раз ДМФ. Fmoc-D-Leu-OH присоединяют к полимеру с удаленной защитой (1 экв), используя раствор Fmoc-D-Leu-OH (3 экв) в 1 мл ДМФ, содержащем карбодиимид (3 экв) и НОВТ (гидроксибензотриазол) (3 экв). Второе или третье связывание с растворами Fmoc-D-Leu-OH может быть необходимо для достижения эффективности сочетания, которое проходит тест Kaiser. Удаление защитной группы с Fmoc и стадию сочетания с аминокислотой повторяют для присоединения Fmoc-N-(4,4-бифенил)аланина. На последней стадии присоединения используют индолпировиноградную кислоту (5 экв), диизопропилкарбодиимид (5 экв) и НОВТ (5 экв) в ДМФ и эту стадию повторяют до тех пор, пока реакция сочетания не пройдет тест Kaiser. Завершенную пептидную последовательность на полимере сушат в вакууме, по крайней мере, шесть часов и затем отщепляют обработкой в течение 2,5 часов либо 95/5 трифторуксусной кислотой/водой, либо свежеприготовленным раствором 90% трифторуксусной кислоты, 3% этандитиола, 5% тиоанизола и 2% анизола. Отщепленные продукты выделяют либо лиофиллизацией из воды, либо обработкой диэтиловым эфиром. Чистоту продуктов оценивают с помощью тонкослойной хроматографии.
1H ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО): δ 6,5-7,7 (м, 14Н), 4,5 (м, 1Н), 4,1 (м, 2Н), 3,4 (м, 2Н), 3 (м, Н), 2,7 (м, 1Н), 1,1-1,5 (м, 3Н), 0,5-0,9 (м, 6Н).
Пример 3.
В этом примере получают (3'-индолпировиноградную кислоту)-N-бифенилаланин-D-Leu-Asp-OH, используя Chiron Mimotopes Pin Technology.
Первый аминокислотный остаток Хаа присоединяют к 4-(гидроксиметил)феноксиацетамидо-маркер)полимерным иглам (5,7 ммоль/иглу) путем связывания каждой иглы в 800 мкл связывающем растворе (100 мМ аминокислоты, 100 мМ DIC, 10 мм DMAP, 1/4 ДМФ/СН2С12) в течение двух часов. Иглы затем ополаскивают 5 минут ДМФ промывкой, два раза по 5 мин МеОН промывками и 15 минут сушат на воздухе. Группы Fmoc со снятой защитой обрабатывают в течение 30 минут 800 мкл 20% пиперидина в ДМФ. Повторяют промывку игл (1 ДМФ промывка, 2 МЕОН промывки, 15 минут сушка на воздухе). Второй остаток аминокислоты Yaa связывают (100 мМ Yaa, 100 мМ DIC, 100 мМ НОВТ и индикатор бромфенол синий в ДМФ) до тех пор, пока синий цвет больше не остается на поверхности иглы. Связывание при необходимости повторяют. Цикл промывки и удаления защиты с Fmoc также повторяют. Следующую аминокислоту Zaa присоединяют путем повторения связывания и процедур промывки как в случае Yaa, повторяя реакцию присоединения в случае необходимости. Последний остаток присоединяют с индолпировиноградной кислотой 15 экв 100 мМ, 15 экв DIC, 15 экв НОВТ и индикатором бромфенолом синим в ДМФ. Реакцию присоединения при необходимости повторяют. После последней промывки оранжевые иглы удаляют с их подложек и отщепляют в отдельной 2 мл пластиковой центрифужной пробирке с 1,5 мл свежеприготовленного раствора 90% трифторуксусной кислоты, 5% тиоанизола, 3% этандитиола и 2% анизола в течение 2,5 часов. Иглы удаляют из пробирок и смесь продувают практически досуха струей азота. Растирают с Et2O и центрифугируют каждую пробирку. Эту стадию повторяют три раза для каждой пробирки. Осажденные пептиды собрирают, лиофилизируют, взвешивают и используют. Чистоту продукта оценивают тонкослойной хроматографией. Исходные вещества собирают и анализируют относительно достоверных образцов, полученных в примере 1.
Пример 4.
Соединения по данному изобретению, полученные в соответствии со способом примера 1, анализировали следующим образом. 20S каталитическую субъединицу протеасомы (также известную как мультикаталитический протеиназный комплекс) очищают до гомогенности из бычьего мозга согласно опубликованным методам (Wilk S. and Orlowski M. 1983, 40 842 J. Neurochem). Химотрипсическую активность комплекса измеряют путем увеличения флюоресценции после отщепления субстрата пептида сукцинил-лейцин-лейцин-валин-тирозин-7-амино-4-метилкумарин. Стандарт in vitro исследования состоит из 2 мкг 20S протеасомы, 0,1-100 мкг/мл ингибитора протеасомы в 200 мкл 50 мМ HEPES, содержащего додецилсульфат натрия 0,1%, рН 7,5. Протеолитическую реакцию инициировали добавлением 50 мкМ флуорогенного пептидного субстрата и оставляли развиваться в течение 15 минут при 37oС. Реакцию завершают добавлением 100 мкл 100 мМ ацетатного буфера, рН 4,0. Скорость протеолиза прямо пропорциональна количеству высвободившегося аминометилкумарина, который измеряют с помощью флуоресцентной спектроскопии (Ех 370 нм, ЕМ 430 нм).
Результаты исследования ингибитора 20S протеасомы представлены в таблице 2.
Соединения по данному изобретению, полученные в соответствии со способом по примеру 1, были также исследованы следующим образом. 20S каталитическую субъединицу протеасомы (также известную, как мультикаталитический протеиназный комплекс) очищали до гомогенности из бычьего мозга согласно опубликованным методам (Wilk S. and Orlowski M. 1983, 40 842 J. Neurochem). Триптическую активность комплекса измеряют по увеличению флюоресценции после отщепления субстрата пептида CBZ-D-Leu-Arg-(7-амино-4-метилкумарин). Стандарт in vitro исследования состоит из 2 мкг 203 протеасомы, 0,1-100 мкг/мл ингибитора протеасомы в 200 мкл 50 мМ HEPES, содержащего додецилсульфат натрия 0,1%, рН 7,5. Протеолитическую реакцию инициировали добавлением 50 мкМ флуорогенного пептидного субстрата и оставляли развиваться в течение 15 минут при 37oС. Реакцию завершали добавлением 100 мкл 100 мМ ацетатного буфера, рН 4,0. Скорость протеолиза прямо пропорциональна количеству высвободившегося аминометилкумарина, который измеряли с помощью флуоресцентной спектроскопии (ЕХ 370 нм, ЕМ 430 нм). Соединения 1-207 были исследованы на ингибирование триптической активности и активность в качестве ингибиторов в > 10 мкг/мл.
Пример 5.
Соединения по данному изобретению, полученные в соответствии с методом по примеру 1, были также исследованы следующим образом. 20S каталитическую субъединицу протеасомы (также известную как мультикаталитический протеиназный комплекс) очищают до гомогенности из бычьего мозга согласно опубликованным методам (Wilk S. and Orlowski M. 1983, 40 842 J. Neurochem). Триптическую активность комплекса измеряли по увеличению флюоресценции после отщепления субстрата пептида CBZ D-Ala-Leu-Arg-(7-амино-4-метилкумарин). Стандарт in vitro исследования состоит из 2 мкг 20S протеасомы, 0,1-100 мкг/мл ингибитора протеасомы в 200 мкл 50 мМ HEPES, содержащего додецилсульфат натрия 0,1%, рН 7,5. Протеолитическую реакцию инициировали добавлением 50 мкМ флуорогенного пептидного субстрата и оставляли развиваться в течение 15 минут при 37oС. Реакцию завершают добавлением 100 мкл 100 мМ ацетатного буфера, рН 4,0. Скорость протеолиза прямо пропорциональна количеству высвободившегося аминометилкумарина, который измеряли с помощью флуоресцентной спектроскопии (ЕХ 370 нм, ЕМ 430 нм). Соединения 1-207 были исследованы на ингибирование триптической активности и активность как ингибиторов в > 10 мкг/мл.
Пример 6.
Соединения по данному изобретению, полученные в соответствии с методом по примеру 1, были также исследованы следующим образом. 20S каталитическую субъединицу протеасомы (также известную как мультикаталитический протеиназный комплекс) очищают до гомогенности из бычьего мозга согласно опубликованным методам (Wilk S. and Orlowski M. 1983, 40 842 J. Neurochem). Триптическую активность комплекса измеряют по увеличению флюоресценции после отщепления субстрата пептида CBZ D-Ala-Leu-Glu-(7-амино-4-метилкумарин). Стандарт in vitro состоит из 2 мкг 20S протеасомы, 0,1-100 мкг/мл ингибитора протеасомы в 200 мкл 50 мМ HEPES, содержащего додецилсульфат натрия 0,1%, рН 7,5. Протеолитическую реакция инициировали добавлением 50 мкМ флуорогенного пептидного субстрата и оставляли развиваться 15 минут при 37oС. Реакцию завершают добавлением 100 мкл 100 мМ ацетатного буфера, рН 4,0. Скорость протеолиза прямо пропорциональна количеству высвободившегося аминометилкумарина, который измеряли с помощью флуоресцентной спектроскопии (ЕХ 370 нм, ЕМ 430 нм). Соединения 1-207 были исследованы на ингибирование пептидилглютамиловой активности при > 10 мкг/мл. Соединение 190 было активно при 5 мкг/мл.

Claims (15)

1. Соединение формулы
Figure 00000009

где Х2 представляет собой Аr или Аr-Х3, где Х3 представляет собой С= О или -СН2СО- и Аr представляет собой фенил или индол;
R1 и R2 каждый независимо выбраны из водорода или боковых цепей природных α-аминокислот, представленных линейным или разветвленным (С1-С10) алкилом, который может быть замещен гидрокси, карбокси, амино, циклогексилом, фенилом или гидроксизамещенным фенилом, бифенилом, нафтилом или пиридилом;
Х1 выбран из -ОН, или группы
Figure 00000010

где Х4 представляет собой -ОН;
R3 выбран из водорода или боковых цепей природных α-аминокислот, представленных линейным или разветвленным (С1-С10 алкилом, который может быть замещен гидрокси, фенилом или гидроксизамещенным фенилом.
2. Соединение по п. 1, где Х1 представляет собой
Figure 00000011

где Х4 и R3 указаны в п. 1.
3. Соединение по п. 2, где Х4 представляет собой -ОН.
4. Соединение по п. 3, где R1 выбран из линейного или разветвленного (С1-С10) алкила.
5. Соединение по п. 1, где Х4 представляет собой -ОН и R1 и R2 независимо представляют собой линейный или разветвленный (С1-С10) алкил.
6. Соединение по п. 5, где Аr представляет собой индол.
7. Соединение по п. 5, где Аr представляет собой фенил.
8. Соединение по п. 7, где Х1 представляет собой
Figure 00000012

где Х4 представляет собой -ОН и R3 представляет собой Н.
9. Соединение по п. 8, где Аr представляет собой 3-индол, R1 представляет собой изобутил и Х4 представляет собой -ОН.
10. Соединение по п. 1, где Аr представляет собой индол, R3 представляет собой бифенил, R1 представляет собой изобутил, R2 представляет собой СН2СО2Н и Х4 представляет собой -ОН.
11. Соединение по п. 1, где Аr представляет собой фенил, R2 представляет собой бифенил, R1 представляет собой изобутил, R3 представляет собой СН2СО2Н и Х4 представляет собой -ОН.
12. Соединение по п. 1, где Аr представляет собой индол, Х3 представляет собой СН2СО, R2 представляет собой 4,4'-бифенил, R1 представляет собой изобутил, R3 представляет собой СН2СО2Н и Х4 представляет собой -ОН.
13. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать химотрипсиноподобное действие 20S протеасомы, включающая соединение по п. 1 и один или несколько фармацевтических эксципиентов.
14. Фармацевтическая композиция по п. 13, где фармацевтическая композиция представлена в виде раствора.
15. Фармацевтическая композиция по п. 13, где фармацевтическая композиция представлена в виде таблетки.
RU2000122474/04A 1998-01-26 1999-01-19 α-КЕТОАМИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ 20S ПРОТЕАСОМЫ RU2192429C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/013,365 US6075150A (en) 1998-01-26 1998-01-26 α-ketoamide inhibitors of 20S proteasome
US09/013,365 1998-01-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2000122474A RU2000122474A (ru) 2002-07-10
RU2192429C2 true RU2192429C2 (ru) 2002-11-10

Family

ID=21759598

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2000122474/04A RU2192429C2 (ru) 1998-01-26 1999-01-19 α-КЕТОАМИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ 20S ПРОТЕАСОМЫ

Country Status (20)

Country Link
US (2) US6075150A (ru)
EP (1) EP1058689A1 (ru)
JP (1) JP3863370B2 (ru)
KR (1) KR100417888B1 (ru)
CN (1) CN1289340A (ru)
AR (1) AR012781A1 (ru)
AU (1) AU747835B2 (ru)
BR (1) BR9907256A (ru)
CA (1) CA2319150C (ru)
GE (1) GEP20032869B (ru)
HU (1) HUP0100901A3 (ru)
IL (2) IL137475A0 (ru)
NO (1) NO327049B1 (ru)
NZ (1) NZ505892A (ru)
PL (1) PL202504B1 (ru)
RU (1) RU2192429C2 (ru)
TW (1) TW593339B (ru)
UA (1) UA71559C2 (ru)
WO (1) WO1999037666A1 (ru)
ZA (1) ZA99161B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2453556C2 (ru) * 2005-11-09 2012-06-20 Протеоликс, Инк. Соединения для ингибирования фермента

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030220258A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Robbert Benner Treatment of ischemic events
US8680059B2 (en) * 1998-05-20 2014-03-25 Biotempt B.V. Oligopeptide acetate and formulations thereof
US6921751B1 (en) * 1998-05-20 2005-07-26 Erasmus Universiteit Rotterdam Immunoregulator
US6844315B2 (en) 1998-05-20 2005-01-18 Erasmus Universiteit Rotterdam Immunoregulator
US20050227925A1 (en) * 2004-04-08 2005-10-13 Robbert Benner Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration
US20040202645A1 (en) * 2003-04-08 2004-10-14 Khan Nisar Ahmed Administration of gene-regulatory peptides
US6902721B1 (en) * 1998-07-10 2005-06-07 Osteoscreen, Inc. Inhibitors of proteasomal activity for stimulating bone growth
US7358330B2 (en) 2001-03-29 2008-04-15 Biotempt B.V. Immunoregulatory compositions
EP1300418A1 (en) * 2001-10-04 2003-04-09 Erasmus Universiteit Rotterdam Gene regulation by oligopeptides
WO2002070467A1 (en) * 2001-02-26 2002-09-12 4Sc Ag Derivatives of diphenylurea, diphenyloxalic acid diamide and diphenylsulfuric acid diamide and their use as medicaments
US20040013661A1 (en) * 2001-12-21 2004-01-22 Gert Wensvoort Stratification
US7786084B2 (en) * 2001-12-21 2010-08-31 Biotempt B.V. Treatment of burns
US20080242837A1 (en) * 2001-12-21 2008-10-02 Khan Nisar A Peptide compositions
US7560433B2 (en) 2001-12-21 2009-07-14 Biotempt B.V. Treatment of multiple sclerosis (MS)
US20030220257A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Robbert Benner Treatment of trauma
US20030220260A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Khan Nisar Ahmed Peptide compositions
US20030220261A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Khan Nisar Ahmed Treatment of iatrogenic disease
US7501391B2 (en) * 2001-12-21 2009-03-10 Biotempt B.V. Treatment of transplant survival
US20080318871A1 (en) * 2001-12-21 2008-12-25 Khan Nisar A Treatment of neurological disorders
WO2003062192A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Smithkline Beecham Corporation Cycloalkyl ketoamides derivatives useful as cathepsin k inhibitors
PL373399A1 (en) 2002-04-11 2005-08-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US7223745B2 (en) * 2003-08-14 2007-05-29 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
US7576206B2 (en) 2003-08-14 2009-08-18 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
MY148123A (en) 2003-09-05 2013-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US20090227505A1 (en) * 2004-01-07 2009-09-10 Biotempt B.V. Methods and uses for protein breakdown products
EP1637529A1 (en) * 2004-09-20 2006-03-22 4Sc Ag Novel piperidin-4-yl-thiazole-carboxamide analogues as inhibitors of T-cell proliferation and uses thereof
US7468383B2 (en) * 2005-02-11 2008-12-23 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
WO2006124494A1 (en) * 2005-05-13 2006-11-23 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. TRANSITION-STATE INHIBITORS OF PIN1, α-KETOAMIDE-CONTAINING PEPTIDOMIMETICS, AND SYNTHESES THEREOF
JP4846799B2 (ja) * 2005-07-05 2011-12-28 バイオテンプト ベー．フェー． 腫瘍の治療
PL1913015T3 (pl) 2005-07-29 2014-04-30 Janssen R&D Ireland Makrocykliczne inhibitory wirusa zapalenia wątroby typu C
TW200745061A (en) 2005-07-29 2007-12-16 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis C virus
US8594771B2 (en) * 2005-12-28 2013-11-26 General Electric Company Devices and methods for self-administered ECG examinations
EP1864692A1 (en) * 2006-06-07 2007-12-12 Biotempt B.V. Use of peptides for the control of radiation injury
DK2041158T3 (da) 2006-06-19 2013-06-24 Onyx Therapeutics Inc Peptid-epoxidketoner til proteasom inhibering
AU2008215193B2 (en) * 2007-02-12 2014-01-16 Biotempt B.V. Treatment of trauma hemorrhage with short oligopeptides
US8859021B2 (en) * 2007-05-14 2014-10-14 Sytheon Skin appearance through gene manipulation
US7442830B1 (en) 2007-08-06 2008-10-28 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Proteasome inhibitors
KR20150131405A (ko) 2007-10-04 2015-11-24 오닉스 세라퓨틱스, 인크. 결정형 펩티드 에폭시 케톤 프로테아제 저해제 및 아미노산 케토-에폭시드의 합성
KR101690571B1 (ko) 2008-06-17 2016-12-28 밀레니엄 파머슈티컬스 인코퍼레이티드 보로네이트 에스테르 화합물 및 이의 제약학적 조성물
EP2349313A4 (en) 2008-10-21 2012-08-29 Onyx Therapeutics Inc COMBINATION THERAPY WITH EPOXYCLETON PEPTIDES
US20120190565A1 (en) 2009-02-20 2012-07-26 Pangea Biosciences, Inc. Method Of Diagnosis Or Prognosis Of A Neoplasm Comprising Determining The Level Of Expression Of A Protein In Stromal Cells Adjacent To The Neoplasm
AR075899A1 (es) 2009-03-20 2011-05-04 Onyx Therapeutics Inc Tripeptidos epoxicetonas cristalinos inhibidores de proteasa
US8853147B2 (en) 2009-11-13 2014-10-07 Onyx Therapeutics, Inc. Use of peptide epoxyketones for metastasis suppression
AU2010341530B2 (en) 2009-12-22 2016-03-10 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and processes for their preparation, purification and use
MX2012010017A (es) 2010-03-01 2012-10-01 Onyx Therapeutics Inc Compuestos de para la inhibicion de inmunoproteasomas.
CN102946729B (zh) 2010-04-07 2014-11-05 欧尼斯治疗公司 结晶肽环氧酮免疫蛋白酶体抑制剂
JP6002222B2 (ja) 2011-08-11 2016-10-05 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． がん治療用予測因子
CN104302180B (zh) 2011-10-28 2017-05-17 米伦纽姆医药公司 对nedd8活化酶(nae)抑制剂的反应的生物标记
WO2013071163A2 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Millennium Pharamaceuticals, Inc. Biomarkers of response to proteasome inhibitors
CA2862492A1 (en) 2012-01-24 2013-08-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods of treatment of cancer
US10085987B2 (en) 2012-01-27 2018-10-02 Thomas Jefferson University MCT protein inhibitor-related prognostic and therapeutic methods
US20140105921A1 (en) 2012-07-09 2014-04-17 Onyx Therapeutics, Inc. Prodrugs of Peptide Epoxy Ketone Protease Inhibitors
CN104822844B (zh) 2012-10-01 2019-05-07 米伦纽姆医药公司 预测对抑制剂的反应的生物标记物和方法以及其用途
KR20150065885A (ko) * 2012-10-11 2015-06-15 에프. 호프만-라 로슈 아게 케토아마이드 이뮤노프로테아좀 억제제
US10022372B2 (en) 2013-04-19 2018-07-17 Thomas Jefferson University Caveolin-1 related methods for treating glioblastoma with temozolomide
KR102481856B1 (ko) 2014-05-20 2022-12-26 밀레니엄 파머슈티컬스 인코퍼레이티드 일차 암 치료법 후 사용하기 위한 붕소-함유 프로테아좀 저해제
JP6859559B2 (ja) * 2017-03-16 2021-04-14 二村　芳弘 抗アレルギー作用を呈するフェニルペプチド誘導体
US11667945B2 (en) 2017-08-28 2023-06-06 Shizuoka Prefecture Public University Corporation Detection method and detection probe for colibactin and colibactin-producing bacteria

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1206078B (it) * 1987-06-03 1989-04-14 Polifarma Spa Procedimento per la produzione di acido 3-indolpiruvico e suoi derivati loro uso farmaceutico
JPH04211648A (ja) * 1990-07-27 1992-08-03 Nippon Kayaku Co Ltd ケト酸アミド誘導体
US5430022A (en) * 1990-05-14 1995-07-04 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide compound and its preparation
US5693617A (en) * 1994-03-15 1997-12-02 Proscript, Inc. Inhibitors of the 26s proteolytic complex and the 20s proteasome contained therein
US6660268B1 (en) * 1994-03-18 2003-12-09 The President And Fellows Of Harvard College Proteasome regulation of NF-KB activity
US6083903A (en) * 1994-10-28 2000-07-04 Leukosite, Inc. Boronic ester and acid compounds, synthesis and uses
US5834487A (en) * 1996-09-24 1998-11-10 Cv Therapeutics Inhibition of 26S and 20S proteasome by indanones

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DA SETTIMO А. et. al.: Synthesis and beuzodiazepine receptor affinity of N-(indol - 3 - ylglyoxylye) - dipeptide derivatives. Structural requirements for inverse agonist / antagonist receptor interactions" DRUG. DES. DISCOVERY 1993, v.10(3), р. 199-211. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2453556C2 (ru) * 2005-11-09 2012-06-20 Протеоликс, Инк. Соединения для ингибирования фермента

Also Published As

Publication number Publication date
JP3863370B2 (ja) 2006-12-27
US6781000B1 (en) 2004-08-24
IL137475A (en) 2006-10-05
BR9907256A (pt) 2001-10-09
US6075150A (en) 2000-06-13
HUP0100901A2 (hu) 2001-08-28
ZA99161B (en) 1999-07-28
IL137475A0 (en) 2001-07-24
PL202504B1 (pl) 2009-06-30
NO327049B1 (no) 2009-04-14
AU2326799A (en) 1999-08-09
CA2319150A1 (en) 1999-07-29
KR100417888B1 (ko) 2004-02-11
AR012781A1 (es) 2000-11-08
AU747835B2 (en) 2002-05-23
GEP20032869B (en) 2003-01-27
NO20003807D0 (no) 2000-07-25
WO1999037666A1 (en) 1999-07-29
JP2002501080A (ja) 2002-01-15
NZ505892A (en) 2002-10-25
NO20003807L (no) 2000-09-25
UA71559C2 (en) 2004-12-15
TW593339B (en) 2004-06-21
CA2319150C (en) 2004-08-31
PL343269A1 (en) 2001-08-13
EP1058689A1 (en) 2000-12-13
HUP0100901A3 (en) 2001-11-28
CN1289340A (zh) 2001-03-28
KR20010034381A (ko) 2001-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2192429C2 (ru) α-КЕТОАМИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ 20S ПРОТЕАСОМЫ
US5693617A (en) Inhibitors of the 26s proteolytic complex and the 20s proteasome contained therein
RU2355700C2 (ru) Новые пептиды как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита с
EP0276436B1 (en) Phosphinic acid derivatives
RU2191193C2 (ru) Ингибиторы серинпротеазы
KR100363067B1 (ko) 인다논으로 26ｓ 및 20ｓ 프로테아좀을 억제하는 방법
US7504382B2 (en) Protease inhibitors for coronaviruses and SARS-CoV and the use thereof
JP2003531199A (ja) アルキルおよびアリールアラニンｐ２部分を含むｃ型肝炎ウイルスに対する大員環ｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤
CN102617705A (zh) 抑制丙肝病毒复制的大环类化合物
KR19990087416A (ko) 세린 프로테아제 억제제
KR19990087415A (ko) 세린 프로테아제 억제제
WO2007041775A1 (en) Cysteine protease inhibitors incorporating azide groups
MXPA04011502A (es) Compuestos capaces de bloquear la respueta a sustancias quimicas o estimulos termicos o mediadores de la inflamacion de los nociceptores, un metodo para su obtencion y composiciones que los contienen.
CA2419870A1 (en) Sh2 domain binding inhibitors
MXPA00007217A (en) &agr;-KETOAMIDE INHIBITORS OF 20S PROTEASOME
US6649593B1 (en) Modulators of SREBP processing
DK1794182T3 (en) RELATIONS modulates TRH-EFFECTS AND INHIBITS TRH DECOMPOSITION ENZYME
CZ20002721A3 (cs) : Alfa-ketoamidové inhibitory 20S proteasomu
Chatterjee Recent advances in the development of calpain I inhibitors
NO305085B1 (no) HIV-proteaseinhibitorer, farmas°ytiske preparater som omfatter slike, samt fremgangsmÕte for in vitro inhibering av HIV-virusreplikasjon

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20100120