JP6002222B2

JP6002222B2 - がん治療用予測因子

Info

Publication number: JP6002222B2
Application number: JP2014525107A
Authority: JP
Inventors: リッチ，デボラ; リ，ウェイミン; ヘニツ，エリン，デヴァイ
Original assignee: ヤンセンファーマシューティカエヌ．ベー．
Priority date: 2011-08-11
Filing date: 2012-08-08
Publication date: 2016-10-05
Anticipated expiration: 2032-08-08
Also published as: SMT201600235B; JP2014524571A; CN103930785A; RU2014108986A; AU2012294493B2; HUE029295T2; DK2742356T3; HK1199097A1; HRP20160851T1; ES2586328T3; MX2014001619A; RU2600026C2; CY1117838T1; CA2844825A1; PL2742356T3; HK1199094A1; SI2742356T1; EP2742356B1; CN103930785B; US9322066B2

Description

（関連出願の相互参照）
本開示は、米国仮出願特許第６１／５２２，５９６号（２０１１年８月１１日出願）及び米国仮出願特許第６１／５６０，５５５号（２０１１年１１月１６日出願）に対する優先権を主張するものであり、これらの特許文献のいずれもが参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。

（発明の分野）
本発明はがん患者の処置に関する。

成功率の高いがん治療法の開発により、治療効果が示されるようになってきているものの、特定の治療に対し応答を示す患者はほんの一部に限定されている。多くの有効ながん治療は治療指数が狭く、毒性を有することから、このような応答性の差異により、患者が、不必要であり、無効であり、かつ更には危険性を伴う治療レジメンにより処置を受ける可能性がある。

各患者を処置するための治療法を最適化する１つの方法としては、治療応答における特定の結果と関連付けられる、１つ以上の予測因子を患者が有するか評価するというものが挙げられる。例えば、国際公開第２００４／０５３０６６号、同第２００６／１３３４２０号、同第２００８／０２１１８３号、及び同第２００９／１４８５２８号を参照されたい。薬物応答は、標的細胞に固有の特性、及び投与を受ける患者の代謝特性の両方を反映するため、患者の薬物感度を予測することは、特に困難である。

特定のがん治療を行った場合に望ましい結果を示すものと予測される特定のがん患者を特定するための、更なる予測マーカーを同定することが求められている。

本発明は、がん治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高い患者であるか特定するための方法であって、患者における１つ以上の予測因子の存在、非存在、又は量を測定する工程を含み、予測因子の存在、非存在、又は量が、少なくとも１つの望ましい結果と相関する、方法を提供する。

予測因子の存在は、この患者から生体試料を得ることにより判定され得る。がん治療には、ボルテゾミブ等のプロテアソーム阻害剤の投与を含み得る。予測因子は、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）、ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）、Ｐ６５、最後のがん治療から経過した時間、既に一次治療を受けていること、低ＦＬＩＰＩスコア、年齢（６５歳又はそれ以下）、及び低腫瘍量のうちの１つ以上であり得る。

がん治療に対する応答において、陽性の結果が得られる可能性のある患者を特定するための診断キットも提供される。

本発明は、患者における１つ以上の予測因子の存在、非存在、又は量を判定し、患者が治療に対し応答する可能性が高いか否かにより処置法を選択することで、がん患者を処置するための方法も提供する。

がん治療のためのプロテアソーム阻害剤の使用法も提供され、患者は、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）、ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）、Ｐ６５、最後のがん治療から経過した時間、既に一次治療を受けていること、低ＦＬＩＰＩスコア、年齢、及び低腫瘍量のうちの１つ以上により特徴づけられる。

特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。特定の患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いかを判定するための決定木を示す。「選択された」は、患者が、治療に対する応答において望ましい結果を示す可能性が高いことを意味する。

本発明は、診断及びがん治療を計画するための有用なツールとして提供される、予測因子を記載する。予測因子は、例えば、プロテアソーム阻害剤による治療などの、特定の治療法に対する応答において、望ましい結果が得られるか予想するものである。

限定するものではないが、本発明は、（ａ）１つ以上の予測因子の存在又は量を測定することにより、がん患者において治療に対する応答を予測するための方法、（ｂ）１つ以上の予測因子の存在又は量の判定に有用なキット、（ｃ）１つ以上の予測因子の存在又は量に基づき患者を選択することによりがんを治療するための方法、並びに（ｄ）１つ以上の予測因子を有する患者においてがんを治療する工程、を提供する。

特定の実施形態では、がん患者において、がん治療（例えば、ボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤による治療）に対する応答を予測するための方法であって、患者、又は患者由来の生体試料において、予測因子の存在又は量を測定する工程を含み、予測因子の存在又は量が、少なくとも１つの陽性の結果と相関する、方法が提供される。特定の実施形態は、患者、又は患者由来の生体試料中の第２の予測因子の存在又は量を測定する工程を含み、第２の予測因子の存在又は量は少なくとも１つの陽性の結果と相関する。

本発明は、がん治療に望ましく応答する可能性が高いことに相関する、本明細書において「変異体」、「マーカー」、「バイオマーカー」及び／又は「因子」としても参照される予測因子の同定を包含する。がん治療に対する患者の応答と、これらの予測因子との関連性により、特定の治療に関し安全性及び／又は有効性における信頼度をより高くすることができる。予測因子は、遺伝子、タンパク質、患者特性、又は患者病歴の状況、であってよい。

少なくとも１つの望ましい結果と相関する本発明に従う予測因子としては、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型、ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型、Ｐ６５、年齢（６５歳未満）、既に一次治療を受けていること、低濾胞性リンパ腫国際予後因子（ＦＬＩＰＩ）スコア、最後の抗がん治療から経過した時間、及び低腫瘍量が挙げられる。好ましくは、患者は低ＣＤ６８又はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）を有し、かつ少なくとも１つの他の予測因子が存在する。一実施形態では、患者は、低ＣＤ６８及びＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型を有する。少なくとも１つの望ましい結果と相関する、本発明に従う予測因子対としては、表６及び７に示すものが挙げられる。

「低ＣＤ６８」により、平均的な患者、又は同様の疾患を有する平均的な患者由来の生体試料と比較して、対象者、又は患者由来の生体試料においてＣＤ６８量が少ないことが示されることを意味する。特定の実施形態では、低ＣＤ６８は、生体試料中の細胞のうち２５％以下の細胞がＣＤ６８を発現すること；生体試料中の細胞のうち５０％以下の細胞がＣＤ６８を発現すること；生体試料中の濾胞細胞のうち２５％以下の細胞がＣＤ６８を発現すること；生体試料中の濾胞細胞のうち５０％以下の細胞がＣＤ６８を発現すること；生体試料中の毛胞細胞のうち２５％以下の細胞がＣＤ６８を発現すること；又は生体試料中の毛胞細胞のうち５０％以下がＣＤ６８を発現すること、を意味する。

「低ＦＬＩＰＩ」スコアは、濾胞性リンパ腫国際予後因子（ＦＬＩＰＩスコア）におけるスコアが、０又は１点であることを意味する。ＦＬＩＰＩスコアを判定する際、次の項目に各１点を割り当てる：年齢が６０歳超である、疾患の第３段階又は第４段階である、４節以上のリンパ節が巻き込まれている、血清ヘモグロビンが１２ｇ／ｄＬ未満である、及び血清ＬＤＨが上昇している。

本明細書で使用するとき、「含む」、「含有する」、「有する」及び「包含する」は、これらのオープンで非限定的な意味で用いられる。

「量（Quantity）」は、値、強度、濃度、量（amount）、程度又は発現レベルを意味する。例えば、遺伝子の量とは、遺伝子又はそれらの一部が、対象者のゲノム中に、又は対象者の細胞中に存在する時間数であり得る。量は、生体試料中でマーカーを発現している細胞の数、あるいは生体試料中のマーカーの全体的な発現レベル又は強度も意味する。量は、患者がそれまでに処置を受けた治療の種類又は系統数についても指すことができる。量は、健常者由来の参照サンプルとの比較、健常者由来の平均数との比較、又は類似する疾患を有する患者由来の平均数との比較において、絶対数で比較してもよい。

がん治療には、単一の薬剤又は治療法による処置、あるいは１つ以上の薬剤又は治療法による処置を含む併用療法を含んでよい。がん治療は、化学療法、放射線療法、又は免疫療法による処置であってよく、あるいはがん治療は骨髄移植であってもよい。

特定の実施形態では、がん治療は、プロテアソーム阻害剤を患者に投与することを含む。プロテアソーム阻害剤は、生体外又は生体内で、２０Ｓ又は２６Ｓプロテアソームの酵素活性を阻害する任意の物質である。一部の実施形態では、プロテアソーム阻害剤は、ペプチジルボロン酸である。ペプチジルボロン酸としては、ボルテゾミブが挙げられる。プロテアソーム阻害剤としては、米国特許第５，７５６，７６４号；同第５，６９３，６１７号；同第６，８３１，０９９号；同第６，０９６，７７８号；同第６，０７５，１５０号；同第６，０１８，０２０号；同第７，１１９，０８０号；同第６，７４７，１５０号；同第６，６１７，３１７号；同第６，５４８，６６８号；同第６，４６５，４３３号；同第６，２９７，２１７号；同第６，０８３，９０３号；同第６，０６６，７３０号；同第５，７８０，４５４号；同第７，４２２，８３０号；同第７，１０９，３２３号；同第６，９５８，３１９号；同第６，７１３，４４６号；同第及び６，６９９，８３５に開示される化合物が挙げられる。プロテアソーム阻害剤はボルテゾミブでありうる。

特定の実施形態では、がん治療には、限定するものではないが、アセマンナン、アクラルビシン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンセスチム、アスパラギナーゼ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブロクスウリジン、カペシタビン、セルモロイキン、セトロレリクス、セツキシマブ、クラドリビン、クロファラビン、クロトリマゾール、ダクリズマブ、デクスラゾキサン、ジラゼプ、ドコサノール、ドキシフルリジン、ブロモクリプチン、カルムスチン、シクロホスファミド、シタラビン、ジクロフェナク、エデルフォシン（edelfosine）、エドレコロマブ、エフロルニチン、エミテフール、エキセメスタン、エクシスリンド、ファドロゾール、フィルグラスチム、フィナステリド、リン酸フルダラビン、ホルメスタン、フォテムスチン、硝酸ガリウム、ゲムシタビン、グリコピン（glycopine）、ヘプタプラチン（heptaplatin）、ヒドロキシ尿素、イバンドロン酸（ibandronic acid）、イミキモド、イオベングアン（iobenguane）、イリノテカン、イルソグラジン、ランレオチド、レフルノミド、レノグラスチム、レンチナンスルファート（lentinan sulfate）、レトロゾール、リアロゾール、ロバプラチン、ロニダミン、マソプロコール、メラルソプロール、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトクロプラミド、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトキサントロン、モルグラモスチム、ナファレリン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ニルタミド、ノスカピン、オプレルベキン、オサテロン（osaterone）、オキサリプラチン、パミドロン酸、ペグアスパラガーゼ、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ピシバニール、ピラルビシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニゾン、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、ロムルチド、サルグラモスチム、シゾフラン（sizofuran）、ソブゾキサン、ソネルミン（sonermin）、ステロイド、スラミン、タソネルミン、タザロテン、テガフール、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、サリドマイド、チマルファシン（thymalfasin）、チロトロピンα、トポテカン、トレミフェン、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トリロスタン、トリメトレキサート、ウベニメクス、バルルビシン、ベルテポルフィン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビンなどの抗がん剤による治療を含む好ましい実施形態では、がん治療はリツキシマブを含む。他の好ましい実施形態では、がん治療は、メルファリン又はプレドニゾン、あるいはメルファリン及びプレドニゾンの組み合わせを含む。

特定の実施形態では、がん治療は併用療法である。併用療法は、プロテアソーム阻害剤による治療と、他のがん治療又は抗がん剤とを含み得る。特定の実施形態では、他の抗がん剤はモノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）である。他の実施形態では、他の抗がん剤は、メルファリン、プレドニゾン、あるいはメルファリン及びプレドニゾンの組み合わせを含む。

望ましい結果は、奏効率、全生存率、客観的全奏効率、応答持続時間、次回の治療までの期間延長、無治療期間、治療に対する陽性応答、腫瘍増殖停止時間の延長、生存期間の延長及び／又は無増悪生存期間の延長などであってよい。望ましい結果は、用量依存性のものであっても、用量非依存性のものであってもよい。望ましい結果は、無治療の場合と比較して望ましいものであってよく、あるいは別のがん治療又はがん治療（単数又は複数）と比較して望ましいものであってもよい。

「がん」又は「腫瘍」には、原発腫瘍及び何らかの腫瘍転移などといった、患者における何らかの腫瘍増殖を含むことを意図する。がんは、血液系の腫瘍であっても、あるいは固形腫瘍であってもよい。血液がんとしては、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、白血病（例えば、ワルデンストレーム症候群、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、顆粒球性白血病、単球性白血病、リンパ球性白血病）、及びリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、悪性リンパ腫、形質細胞腫、細網肉腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫又は濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫）などが挙げられる。固形腫瘍は、臓器において生じ、脳、肌、肺、乳房、前立腺、卵巣、大腸、腎臓、及び肝臓などのがんを含む。がんは、原発がん、転移がん、難治がん（例えば、１つ以上の治療薬に対し難治性である）及び／又は再発性がんであってよい。特定の実施形態では、がんは、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫である。

予測因子が患者の体内に存在するとき、予測因子の存在、非存在又は量は、患者由来の生体試料を得て、この生体試料が予測因子を含有しているかどうかを、あるいは生体試料が予測因子をどの程度の量で含有しているかを判定することにより、評価することができる。本明細書で使用するとき、「生体試料」は、対象者から単離された組織、細胞、体液、及びそれらの単離物、並びに、対象者内に存在する組織、細胞及び流体を含有する、又はこれらから構成されるサンプルを指す。生体試料の例としては、例えば、痰、血液、血球（例えば、白血球）、羊水、血漿、血清、精液、唾液、骨髄、組織又は細針生検試料、尿、腹水、胸水及び細胞培養物（cell cultures）が挙げられる。生体試料はまた、組織学的目的のために採取された凍結切片などの、組織の切片を含んでもよい。特定の実施形態では、生体試料は、腫瘍細胞であっても、又は腫瘍細胞を含んでいてもよい。血液腫瘍由来の生体試料としては、骨髄及び／又は末梢血が挙げられる。

生体試料中の予測因子の検出は、予測因子の種類を決定する際の任意の従来法、例えば、直接測定、免疫組織化学的検査、免疫ブロット、免疫蛍光染色、免疫細胞の吸光度測定、免疫沈降、プロテインアレイ、蛍光インサイツハイブリダイゼーション、ＦＡＣＳ解析、ハイブリッド形成、インサイツハイブリダイゼーション、ノザンブロット、サザンブロット、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射免疫測定、遺伝子アレイ／チップ、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、又は細胞遺伝学的分析により実施することができる。

予測因子が特定の遺伝型又は多型に基づくものである場合、生体試料は遺伝子型解析により解析することができる。「遺伝子型」という用語は、被験体又は患者からのＤＮＡ中に存在する対立遺伝子を指し、ここで対立遺伝子は、特定の部位における核酸配列中に存在する特定のヌクレオチドにより定義することができる。遺伝子型は、ヒトの個体群において変動することが知られている一塩基多型として存在するヌクレオチドであることが多い。「遺伝子型解析」とは、生物学的アッセイの使用により個体の遺伝子型を決定するプロセスを指す。これを行う現在の方法としては、ＰＣＲ、ＤＮＡシークエンシング、アンチセンスオリゴヌクレオチドプローブ、及びＤＮＡマイクロアレイ若しくはビーズへのハイブリダイゼーションが挙げられる。

「一塩基多型」（ＳＮＰ、スニップと発音される）は、ゲノム（又は他の共有配列）中の一塩基Ａ、Ｔ、Ｃ、又はＧが、ある種のメンバー間で（又は個体の染色体対間で）異なるときに生じるＤＮＡ配列変異である。例えば、異なる個体の２つの配列決定されたＤＮＡ断片であるＡＡＧＣＣＴＡとＡＡＧＣＴＴＡでは、一塩基が異なっている。この場合、２つの対立遺伝子Ｃ及びＴが存在していると言われる。殆ど全ての一般的なＳＮＰは、２つの対立遺伝子のみを有する。

少なくとも１つの遺伝型分散の有無の検出には、本明細書において同定される遺伝子のうちの１つに対応する核酸配列又はそのような遺伝子産物とプローブとを接触させることを包含する。プローブは、例えば、異なる結合又はハイブリダイゼーションによって、遺伝子若しくは遺伝子産物の特定の形態、又は存在、又は特定の分散を区別することができる。

予測因子が、特定の遺伝子又はタンパク質の存在又は量（発現レベルなど）である場合、存在又は量（発現レベルなど）は、生体試料の免疫組織化学的検査により判定することができる。

特定の実施形態では、がん治療の候補者となる患者を特定するためのキットであって、生体試料中の本発明の予測因子のうちの１つの存在又は量を検出するための第１の試薬、及び生体試料中の本発明の第２の予測因子の存在又は量を検出するための第２の試薬、並びに治療の候補者となる患者を特定するために予測因子を選択する際の説明書、を含む、キットが提供される。特定の実施形態では、第１の試薬は、ＣＤ６８量を検出し、第２の試薬はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型又はＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型を検出する。この試薬は抗体（例えば、ＣＤ６８を試験する場合）であってよく、又はプローブ若しくはプローブのアレイであってもよい（例えば、遺伝子多型を検出する場合）。

特定の実施形態では、患者のがんを治療するための方法は、患者、又はこの患者由来の生体試料における第１の予測因子の存在又は量を測定する工程；並びにこの患者、又はこの患者由来の生体試料における第２の予測因子の存在又は量を測定する工程；並びに、この患者が、この治療法に応答する可能性があるかどうかに基づき治療法を選択する工程；を含む。

本発明は、患者においてがんを治療する際のプロテアソーム阻害剤の使用法も提供し、患者は、プロテアソーム阻害剤に対する応答における少なくとも１つの陽性の結果と相関する少なくとも１つの予測因子の存在、非存在、又は量により特徴づけられる。

本明細書で引用する全ての刊行物は、参照することにより組み入れられるものとする。特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

（実施例１）．
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）には、臨床的挙動、形態学的外観、免疫性、及び分子表現型において異なる数種類の特有の悪性リンパ性疾病が包含される。最も一般的な低悪性度ＮＨＬである濾胞性リンパ腫（ＦＬ）では、一部の患者は非常に緩徐な疾患経過を示すのに対し、それ以外の患者は５年以内に進行及び死亡するという類型するばらつきを示す（Ｄａｖｅ２００４）。再発性又は難治性、リツキシマブ非感受性又は感受性濾胞性Ｂ細胞ＮＨＬを有する対象者において、ボルテゾミブ及びリツキシマブ（Ｖｃ−Ｒ）の併用、及びリツキシマブ単剤に関する有効性及び安全性について非盲検、実薬対照、多国籍、多施設無作為前向き臨床試験を実施した。

次の層別因子を考慮に入れ、対象者は、中枢施設により１：１比で無作為に処理群Ａ（Ｖｃ−Ｒ）又はＢ（リツキシマブ）に割りつけた：
・濾胞性リンパ腫国際予後因子（ＦＬＩＰＩ）スコア（低［０又は１点］、中［２点］、高［３点以上］）；
・既にリツキシマブによる治療を受けているか（はい、いいえ）；
・抗リンパ腫治療を最後に受けてから経過した時間（１年以内、１年超）；
・地域（米国／カナダ、欧州連合、これら以外の地域）。

ＤＮＡ及びタンパク質解析用の腫瘍サンプル、並びにＤＮＡ解析用の血液サンプルを採取した。

タンパク質候補としては、ＮＦ−κＢ（ＲＥＬＡ／ｐ６５）、ＰＳＭＡ５、ｐ２７及びＣＤ６８を選択した。これらのタンパク質は、ボルテゾミブ治療（ＮＦ−κＢ（ＲＥＬＡ／ｐ６５）；ＰＳＭＡ５、ｐ２７）により減弱され、ユビキチンプロテアソーム経路（ｐ２７）により制御され、あるいはリンパ腫における予後の悪さ（ＣＤ６８）と相関する。ＮＦ−κＢ（ＲＥＬＡ／ｐ６５）の発現レベルの増大は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、及び多発性骨髄腫における腫瘍増殖停止時間（ＴＴＰ）の延長と相関する（Ｇｏｙ（２０１０年）、Ｍｕｌｌｉｇａｎ（２００７年）、及びＫｅａｔｓ（２００７年））。ＰＳＭＡ５の低レベル発現はＭＣＬにおけるＴＴＰの延長と相関する（Ｇｏｙ（２０１０年））。ＭＣＬ試験における生存率分析により、高レベルのｐ２７は、より良好な全生存（ＯＳ）と相関することも示されている（Ｇｏｙ（２０１０年））。ＣＤ６８もこれまでに特定されており、最近では、リンパ腫における予後の悪さに関係する予後マーカーとなることが報告されており、ＣＤ６８はリツキシマブに対する応答性にも相関する。体細胞変異の解析には、Ｂｃｌ−２及びＮｏｔｃｈ−１を候補遺伝子として選択した。他の候補も検討したものの、リンパ腫の設定において、既知の変異の頻度が１０％未満であったことから含めなかった。更に、採取したサンプルから回収されたＤＮＡが少量であったため、分析対象はこれらの２つの候補に限定された。Ｂｃｌ−２は、Ｂ細胞リンパ腫においては２３％、及び濾胞性リンパ腫においては５０％の変異頻度を有し（Ａｒｉｆ２００９）、かつＮｏｔｃｈ−１は２４％の変異頻度を有する。Ｂｃｌ−２は、高悪性度リンパ腫においてしばしば過剰発現が示される重要な抗アポトーシスタンパク質であり、これまでに、ボルテゾミブによりＢｃｌ−２介在性防御が克服されることを示唆する方向がなされている（Ｆｉｓｃｈｅｒ（２００５年）、Ｙｉｎ（２００５年）、Ｙｅｕｎｇ（２００６年）、Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ（２００２年）及びＷｏｊｃｉｋ（２００２年））。Ｎｏｔｃｈ−１は、これまでに、ＮＦ−κＢ（ＲＥＬＡ／ｐ６５）の核中滞留時間を増加させることが示されている（Ｓｈｉｎ（２００６年））。プロテアソームによるＩ−κ−Ｂタンパク質の分解を阻害し、ＮＦ−κＢの核への到達を妨害し、ＮＦ−κＢを細胞質に保持するよう機能する、ボルテゾミブによる作用と正反対に作用する。Ｎｏｔｃｈ１により介在される、ＮＦ−κＢの核中滞留時間の延長により、細胞周期制御因子、例えば免疫及び炎症過程に関与する遺伝子の発現増加に関与し得るサイクリンＤ１及びＤ２の転写が活性化される（Ｋａｒｉｎ（２００２年））。これらの２つの遺伝子の機能性配列に変異が見られた場合に、ボルテゾミブによる治療に対する個人間の応答差が生じるものと仮説されていた。

候補遺伝子を標的とする薬剤には、ボルテゾミブ（ＰＳＭＢ１、２、５、６、８、９）、及びリツキシマブ（ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ３Ａ）の両方が包含された。ボルテゾミブの化学構造はＰＳＭＢサブユニット１、２、及び５と相互作用し、これらのサブユニット、並びにＰＳＭＢ６、７、及び８において多型に関係するエビデンスが報告されている。サブユニットの多型は、薬剤が効率的に結合する能力に影響を与え、すなわちプロテアソームの程度にばらつきをもたらし及び／又は各患者においてボルテゾミブに対し応答するプロ配列の、自己触媒によるプロセシングを予防する。リツキシマブに関しては、ＦＣＧＲ３Ａの第１５８番目のアミノ酸におけるバリン（Ｖ）又はフェニルアラニン（Ｆ）、並びにＦＣＧ２Ａの第１３１番目のアミノ酸におけるヒスチジン（Ｈ）又はアルギン（Ａ）の表現型発現に相当する一塩基多型（ＳＮＰ）の存在が、Ｆｃγ受容体に対するＩｇＧの親和性に非常に影響する（Ｂｉｎｓｔａｄｔ（２００３年）、Ｗｕ（１９９７年））。第１５８番目の高親和性Ｖ対立遺伝子では、ＦＣＧ３ＡのＩｇＧ１及びＩｇＧ３に対する結合がより緊密になるのに対し、低親和性Ｆ対立遺伝子は、ＦＣＧ３ＡのＩｇＧに対する結合性の低下と関連付けられる。同様にして、第１３１番目の高親和性Ｈ対立遺伝子では、ＩｇＧ２に対するＦＣＧＲ２Ａの親和性が増大するのに対し、低親和性Ａアレイでは結合性の低下と相関する。これらの低親和性多型の相関は、ＮＨＬの試験においてリツキシマブにより治療した後の臨床応答の悪さ及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）に関連付けられている（Ｃａｒｔｒｏｎ２００２年）。したがって、我々は、これらの多型を有する対象者が、治療選択肢の制限された患者のための代替治療法となり得るＶｃ−Ｒによる治療に応答性であるか評価した。

本試験は、次の工程により、程度の差こそあれＶｃ−Ｒ又はリツキシマブ単剤に対し応答する可能性のある患者集団を特定することを探索課題した：
−ＣＤ６８、ＮＦ−κＢ（ＲＥＬＡ／ｐ６５）、ＰＳＭＡ５及びｐ２７タンパク質の発現レベルと、選択された臨床試験のエンドポイントとの相関性解析を実施する工程；
−Ｎｏｔｃｈ−１及びＢｃｌ−２体細胞変異（単独及び組み合わせ）と、選択された臨床試験のエンドポイントとの相関性解析を実施する工程；
−ＦＣＧＲ２Ａ及びＦＣＧＲ３Ａ多型（ＳＮＰ）と、選択された臨床試験のエンドポイントとの相関性解析を実施する工程；
−ＰＳＭＢ１、ＰＳＭＢ２、ＰＳＭＢ５、ＰＳＭＢ６、ＰＳＭＢ８、及びＰＳＭＢ９多型（ＳＮＰ）と、選択された臨床試験のエンドポイント；
−バイオマーカーと、選択された臨床試験のエンドポイントとの組み合わせを実施する工程。

対比較のため疑陽性率（ＦＤＲ）による手法を用い、複数のバイオマーカーの組み合わせを比較する際には前向き選別を行い、相関を複数試験した。実用語「ＦＤＲ」は、擬陽性の見込まれる割合を意味し、例えば、１０００の観測が異なるものと予測され、かつこれらの観察に関するＦＤＲが０．１０である場合、これらの観察のうち１００は擬陽性であるものとみなされる。過剰適合は解析内の交差検定及び独立した検証により調節される。

十分な変動を有する遺伝子としては：
ＦＣＧＲ２Ａ（Ｈ１６６Ｒ、Ｑ６２Ｒ、Ｑ６２Ｘ）
ＦＣＧＲ３Ａ（Ｖ２１２Ｆ）
ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）
ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）
ＰＳＭＢ８（Ｇ８Ｒ）
ＰＳＭＢ９（Ｒ６０Ｈ、Ｖ３２Ｉ）
ＰＳＭＡ（核及び細胞質染色に陽性）
ＣＤ６８（全体的に陽性、濾胞が陽性、濾胞周辺が陽性）
Ｐ２７（核で陽性、強度スコア）
ＲＥＬＡ／ｐ６５（核及び細胞質染色に陽性、強度スコア）。

治療企図（ＩＴＴ）集団は、すべて無作為化した対象者として定義した。この集団中の対象者は、無作為化した治療法に従って解析した。臨床試験のエンドポイントでバイオマーカーデータが生成された場合には、この集団に対しバイオマーカーによる評価を実施した。

免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）により、タンパク質マーカーの発現レベル（ＣＤ６８、ＮＦ−κＢ（Ｐ６５）、ＰＳＭＡ５、Ｐ２７）を測定した。単独マーカーの解析に関し、発現レベルのカットオフ値は次のとおりにした：
ＣＤ６８：
濾胞陽性率（０〜２５％、２６〜５０％、５１〜７５％、７５％超）、
濾胞周辺陽性率（０〜２５％、２６〜５０％、５１〜７５％、７５％超）、
全体的な陽性率（０〜２５％、２６〜５０％、５１〜７５％、７５％超）。
ＮＦ−κＢ（ｐ６５）：
細胞質シグナル陽性率（９０％超、９１％未満カットオフ）、
核シグナル陽性率（０％、５％超、５％未満）
核染色強度（１＋超、２＋未満）
ＰＳＭＡ５：
細胞質シグナル陽性率（０〜２０％、３０〜５０％、６０〜７０％、８０〜９０％）
核シグナル陽性率（０〜２０％、３０〜５０％、６０〜７０％、８０〜９０％）
細胞質染色強度（２＋未満、３＋）
核陽性対その他
Ｐ２７：
核染色陽性率（０〜２０％、３０〜５０％、６０〜７０％、８０〜１００％）
核シグナル強度（１＋未満、２＋超）

対比較用のカットオフ値の選択は、実施する比較の総数を減じるために選択した。選択したカットオフ値を表１に示す：

一般的なポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）により、生殖細胞系列のＰＳＭＢサブユニット並びにＦＣＧＲ２Ａ及びＦＣＧＲ３Ａ遺伝子に関するＳＮＰデータを生成した。これらの解析により検出された対立遺伝子を表２に示す：

以降の臨床エンドポイントは各処置群の解析において包含されるものであり、全体的な比較は、バイオマーカーに関連するエンドポイント：無作為化した日付と、進行性疾患（ＰＤ）に関係する日付又は死亡日との間隔として定義される無増悪生存期間（いずれも最初はＩＴＴ集団で記録される）；全生存；奏効率（完全奏功［ＣＲ］＋ＣＲ未確定［ＣＲｕ］＋部分応答［ＰＲ］）；全ＣＲ率（ＣＲ＋ＣＲｕ）；応答持続時間；次回の抗リンパ腫治療までの時間；並びに無治療期間；により行った。

次の基準をすべて満たす対象者を解析に包含させた；ＩＴＴ集団中の対象者；ＩＨＣ又はＰＣＲ系の手法により測定された評価可能なバイオマーカーデータを有する対象者；並びに上記の臨床エンドポイントのうちの少なくとも１つに関し臨床データを有する対象者。

最初のバイオマーカー解析は、臨床試験エンドポイントと関連付けられたタンパク質、変異、又は遺伝系のうち、発現が異なっているものを特定することを目的とした。解析には次の共変数を包含させた：ＦＬＩＰＩスコア（低［０又は１点］、中［２点］、高［３点以上］）；既にリツキシマブによる治療を受けているか（はい、いいえ）；最後に抗リンパ腫治療を受けてから経過した時間（１年以内、１年超）；地域（米国／カナダ、欧州連合、これら以外の地域）、年齢、性別、人種、アン・アーバー・ステージ（Ann Arbor stage）（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、それまでに選択された治療数（１及び２以上）、並びに高腫瘍量（はい、いいえ）。

単一のマーカーの関連性解析及び対比較の際、処置群間のＰＦＳ、ＴＴＰ、及びＯＳの評価には、ログランク検定及びＣｏｘ比例ハザードモデルを利用した。カプラン・マイヤー曲線を利用して、時間対イベント解析において、処置群間の分布の違いを評価した。処置群間の応答率の比較は、フィッシャー直接検定を利用し実施した。単一マーカーの関連性解析は、共変数により層別化した。

対比較解析の際には、２つのマーカーを組み合わせてバイオマーカー対を形成した。ログランク検定を利用して、バイオマーカー対により定義された分集団中の処置群間のＰＦＳ、ＴＴＰ、及びＯＳを評価した。カプラン・マイヤー曲線を利用して、時間対イベント解析において、処置群間の分布の違いを評価した。処置群間の応答率の比較は、フィッシャー直接検定を利用し実施した。複数のバイオマーカーを比較するモデルのための解析法は、第４．６節にみいだすことができる。

各解析に関し、個体群統計学的及びベースライン特性的変動は、次の通りにバイオマーカー集団に関し要約した。記述統計（中央値、標準偏差、正中及び範囲）により、個体群統計学的データ（年齢（年）、年齢分類（６５歳超及び６５歳以下）、性別（男性、女性）、人種（白人、アジア人／太平洋諸島、及び黒人／その他）、ＦＬＩＰＩスコア（低［０又は１点］、中［２点］、高［３点以上］）；既にリツキシマブによる治療を受けているか（はい、いいえ）；最後の抗リンパ腫治療から経過した時間（１年以内、１年超）；アン・アーバー・ステージ（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、それまでに選択された治療数（１及び２以上）、高腫瘍量（はい、いいえ）、及び地域（米国／カナダ、欧州連合、これら以外の地域）など）のベースラインを算出し、臨床試験データセットからから得た要約統計量を比較した。

処置群間のＰＦＳの評価には、層別化したログランク検定及びＣｏｘ比例ハザードモデルを利用した。カプラン・マイヤー法を使用してバイオマーカー集団中の各処置群、及び全体の全ＰＦＳの分布を評価し、発現レベル、ＳＮＰ、又は変異（又は上記の通りの共変量群）により層別化した。ハザード比及び９５％信頼区間は、治療について層別化したＣｏｘ集団ハザードモデルを説明変数として、これに基づくものであった。集団全体に対し及び処置群毎に解析を実施し、十分な大きさのサンプルが存在する場合には、これらの各解析では次の因子による層別化も行った：
ＦＬＩＰＩスコア（低［０又は１点］、中［２点］、高［３点以上］）
既にリツキシマブによる治療を受けているか（はい、いいえ）
抗リンパ腫治療を最後に受けてから経過した時間（１年以内、１年超）
地域（米国／カナダ、欧州連合（ベルギー、チェコ共和国、フィンランド、フランス、ドイツ、英国、ギリシャ、ハンガリー、イタリア、ポーランド、ポルトガル、スロバキア、スペイン及びスウェーデン）、これら以外の地域（アルゼンチン、オーストラリア、ブラジル、インド、イスラエル、メキシコ、中国、韓国、ルーマニア、ロシア、南アフリカ、タイ及びウクライナ））
年齢（６５歳超、６５歳未満）
性別
人種
アン・アーバー・ステージ（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）
それまでに選択された治療数（１又は２以上）
高腫瘍量（はい、いいえ）

対象者の死亡日について無作為化したデータをもとに全生存率を測定した。対象者が生存しているか、生命状態が不明な場合、対象者の生存が最後に確認された日付で打ち切った。ＰＦＳ及びＴＴＰと同様、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを使用して、バイオマーカーのエンドポイント及びＯＳ間の相関を評価した。カプラン・マイヤー生存曲線を示した。集団全体に対し及び処置群毎に解析を実施し、ＰＦＳに使用した共変数によりこれらの各解析を層別化した。

処置群間の応答率の比較は、フィッシャー直接検定を利用し実施した。応答の持続時間、応答までの時間、並びに臨床的再発までの時間を記述的に解析した。解析では、処置群毎に及び全体で、適切な、及びバイオマーカーサブセットを、全臨床コホートに対して比較した（適切な場合、初期解析毎に評価する）。各処置群における応答率の探索的見積もりは、両側９５％信頼区間により表した。各応答分類に当てはまる対象者数及び割合を表に記載する。

集団全体に対し及び処置群毎に解析を実施した。これらの各解析は、ＰＦＳ評価に用いたものと同様の共変数により層別化した。

ＦＤＲ補正を行う前の時点で対比較数が優位だったこと、並びにこれらの対が、ＰＦＳが長くかつ生存期間が長い傾向のある特有の対象者を選別したものであったことから、更なる解析を計画した。これらの解析は、集団において高頻度でＰＦＳ効果及びＯＳ効果が大きくなる（又はその傾向を示す）よう選別された単一のバイオマーカーを特定する分類指標を特定するものと考えられる。データセットは、同じ集団の定義内の発見及び確認試験セットで利用した。試験は次の通りに実施した：

バイオマーカー値が損なわれていない対象者（ｎ＝３５４）を、単純無作為化により７：３比で発見群及び確認群に割りつけた。これまでに記載した個体群統計学的因子と臨床共変数との調整は、ｔ検定又はマンホイットニー検定のいずれかを使用して確認した。ＰＦＳと有意に関連付けられるバイオマーカーの特定にはマーカーが発見された対象者群、すなわち発見群（６７％）を使用し、バイオマーカーデータの抜けのない対象者を含めた。確認群（３３％）を独立した検証に使用した。データに抜けのある対象者は、発見フェイズで特定された優位なバイオマーカーが利用可能な場合に限り、確認データセットに含めた。加えて、中国からの評価可能なサンプルも確認群に加えた。

最初の解析と同様、すべての対象者が特定のバイオマーカーに対し同様のタンパク質発現レベルを示す場合、バイオマーカーは解析から外した。すべての対象者が同様の変異を有する場合、変異を有さない場合、又は１つの変異レベルがサンプルの９０％以上を示す場合、この変異又は遺伝子のいずれかを解析から外した。

バイオマーカーの組み合わせ解析の発見フェイズにおいて、第２節で明記されるいずれかのバイオマーカーに関し欠測値を有する対象者は全て除外した。確認群においてデータを示さないサンプルは、示されないデータが、関連するデータセットの一部でない場合に限りふくめた。バイオマーカーデータを示さないサンプルは「評価不能」であるものとみなし、確認群から除外し、発見群に使用されなかった他のすべてのサンプルは確認群に含めた。

外れ値のバイオマーカーは解析から除外しなかった。

ｔ検定又はマンホイットニー検定を用いて個体群統計並びにベースライン共変数を比較し、発見群及び確認群間に有意な差がないことを確認した。発見群及び確認群、並びに全体について、個体群統計並びにベースライン特性を要約した。最終的な解析から除外した対象者は、データの比較時に評価しなかった。個体群統計学的ベースラインデータ並びに個体群統計学的及び試験セット間の比較のため、記述統計学（平均値、標準偏差、中央値、及び範囲）を算出し、これらの間に有意な差がないことを確認した。

解析には次の共変数を包含させた：ＦＬＩＰＩスコア（低［０又は１点］、中［２点］、高［３点以上］）；既にリツキシマブによる治療を受けているか（はい、いいえ）；最後に抗リンパ腫治療を受けてから経過した時間（１年以内、１年超）、年齢、アン・アーバー・ステージ（Ann Arbor stage）（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、それまでに選択された治療数（１及び２以上）、高腫瘍量（はい、いいえ）、地域（米国／カナダ、欧州連合、これら以外の地域）、性別、及び人種。

すべてのマーカー及び共変数は、解析においてカテゴリー変数として処理した。タンパク質バイオマーカーは二分した。タンパク質マーカーのカットオフ値は、応答群の豊富さ対非応答群の豊富さ、並びに応答性の母集団サイズに基づき最適化した。具体的には、各バイオマーカー、応答者数及び非応答者数（全応答の基づく）並びに、評価することのできる集団におけるそれらの対象者の割合を、表３に掲載する各潜在的なカットオフ値を使用して求めた。潜在的なカットオフ値を有する要約表、応答者数、非応答者数、並びにそれらの対象者の割合を、各バイオマーカーに関し生成した。

すべての遺伝子型は解析において別個に考慮した（例えば、Ｃ／Ｃ、Ｃ／Ｔ、Ｔ／Ｔ）：
ＦＣＧＲ２Ａ（Ｈ１６６Ｒ、Ｑ６２Ｒ、Ｑ６２Ｘ）
ＦＣＧＲ３Ａ（Ｖ２１２Ｆ）
ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）
ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）
ＰＳＭＢ８（Ｇ８Ｒ）
ＰＳＭＢ９（Ｒ６０Ｈ，Ｖ３２Ｉ）。

ＰＦＳ（発見群）と関係する単独マーカーの評価及び等級付け
以降の多重比較解析で使用することになったマーカーの選別及び等級付けを解析の第一工程とした。すべてのタンパク質、遺伝型に１０％超のばらつきを有するＳＮＰ、並びに記載の臨床共変数をカテゴリー変数として含めた。評価には次の工程を包含した：
事前の単一マーカー関連性解析（ｐ＜０．２）によりＰＦＳの改善が示されたバイオマーカー（臨床共変数を含む）を記録した。ＩＲＣによる審査のなされた解析結果のみ使用した。

各バイオマーカー及び臨床共変数をＣｏｘ回帰により評価し、ＰＦＳの観点からバイオマーカーの重要性を判断した。ＣｏｘモデルにおけるすべてのマーカーのＰ値及び荷重配分比／オッズ比を記録した。

バイオマーカー間の相関関係を評価するため、スピアマンの順位相関係法を使用し、対比較マトリックスを作成した。高い相関（ｐ＜０．０５かつ相関係数＞０．７）を示すバイオマーカーをハイライトした。高い相関を有するマーカーを、それらの相互作用についてＣｏｘ回帰モデルにより再解析した。

多重比較解析に使用したマーカーの選別について、この解析の中間総括を生成した。選別したマーカーは次の基準に基づくものであった：
ＰＦＳに対するマーカーの影響に関してのＣｏｘ回帰においてＰ値が比較的低い。

Ｃｏｘ回帰又は単一マーカーのログランク検定における治療による相互作用に基づき、Ｖｃ−Ｒ集団におけるＰＦＳ効果をＲ集団と比較した。

複数のマーカーの相関性が高く、Ｃｏｘ回帰をもとに高いランクを有する場合には、相互作用の観点によりＣｏｘ回帰をもとに最も高いランクを有する代表的なマーカーを使用した。Ｒ集団と比較して、Ｖｃ−Ｒ集団で大きなＰＦＳ効果を示すサンプルの分集団を、バイオマーカーの「ＡＮＤ」の組み合わせの総当りにより特定した。具体的には、患者の分集団を、第４．６．１節に選別される何れかの２つ又は３つのバイオマーカーの「ＡＮＤ」の組み合せにより形成した。マーカーにより定義される患者サブセットのＰＦＳの違いを、応答変数としてＰＦＳを用い、かつ下記の通りの５分割相互検証を用い、ログランク検定を行い、評価した。

各サブセットに２０％の対象者が含まれるよう発見群を無作為に５つのサブセットに分割した。５つのサブセットのうち４つを組み合わせることにより８０％サブセットを形成した。この８０％サブセットを使用して、バイオマーカーの「ＡＮＤ」の組み合わせから患者の分集団を形成した。Ｖｃ−Ｒ又はＲのいずれかにおいて、分集団のサンプルの数（Ｎ）が＜５である場合、その分集団は除外した。両集団においてがＮ≧５である分集団に関しては、２つのマーカーにより定義される患者分集団のＰＦＳにおける差は、ログランク検定を使用し評価した。本解析が探索を目的としたものであることから、より弱いＰ値カットオフを適用した。続いて、残りの２０％のサブセットに対しＰＦＳ効果を試験した。

残りの４つの交差検定セットを同様に試験した（サンプルサイズが小さかったため、Ｐ値のカットオフは適用しなかった）。具体的には、上記の異なる２０％サブセットと、残りの対象者により形成された新しい８０％サブセットを用い、全５つの２０％サブセットが試験されるまでログランク検定を繰り返した。９０％サブセット及び１０％サブセットの両方で、大きいＰＦＳ効果を有する反復の割合が記録された。

バイオマーカーの組み合わせを統合し、ＰＦＳ効果並びに統計的有意性について、再度交差検定により評価した。マーカーの組み合わせを統合することで形成された分集団については、分集団の大きさが発見群の１０％以下である場合には、統計試験は実施しなかった。網羅的にマーカー対を統合し、ＰＦＳ効果の評価を実施した。計算時間を節約するため、優位であったマーカーの組み合わせ、又はマーカーの組み合わせを統合したもののみを記録した。各反復後に結果を保存した。

分類及び回帰木を使用して、最も成績の良かったマーカーの組み合わせに関し、選別された患者分集団を定義するための決定規則を規定した。選別された患者分集団と他の臨床エンドポイントとの関連性も評価した。定義した決定規則を用い、発見群において特定されたバイオマーカーの関連性を試験することにより、確認群においてＰＦＳ及びＯＳの性能を評価した。確認群において、バイオマーカー陽性及び陰性分集団の両方のＰＦＳを、試験の両端に関し記録した。サイズが小さかったため、Ｐ値カットオフは適用しなかったものの、記録は行った。

独立した確認群に含めるサンプルは、ＰＦＳとの関連が見出されていないバイオマーカーについて欠測値を有するものであってよいが、しかしながら、選別されたバイオマーカーの欠測値により分類することのできない対象者は「測定不能」とみなし、除外する。

最初の解析では、共変数より送別した単一マーカーの関連性に焦点を合わせた。ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）、Ｐ６５及びＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）を含む単一マーカー関連性解析において、有意な関連性が見出された。続く対解析により、優位に延長されたＰＦＳを有し、ＯＳ効果の傾向を有するバイオマーカー対を特定した。この発見の独自に確認するために利用可能なデータセットがなかったことから、データセットを上記の発見群及び確認群に分割した。解析の一部として、複数のバイオマーカーの組み合わせを比較し、他の優位な組み合わせを特定した。すべての解析を元に、関連性が臨床的に最も適切であると見なされたのは、ＰＳＭＢＰ１１Ａヘテロ接合体とＣＤ６８低（０〜５０％）発現との組み合わせである。臨床的に対象とする分集団では、対象者は高腫瘍量であり、既にリツキシマブによる治療を受けており、かつ一次治療又は二次治療を受けている者とした。

Ｖｃ−Ｒ及びリツキシマブのみの処置群間でＰＦＳの差異を求めるため、可能性のある各対に対し層別ログランク検定を使用し、マーカーの対比較用の組み合わせを行った。１０２のバイオマーカー対はログランクｐ＜０．０５を有した。これらのうち、９７対は＞１％集団頻度を有した。１４対はＰＦＳの６ヶ月以上の改善も示した。この解析において、１，１４０対の組み合わせを行った（共変数を各個別のマーカーとついにし、解析を補完した）。ＦＤＲ補正後、１対が有意であった（ＦＤＲ＝０．０５１）。このバイオマーカー対は、リツキシマブ単独で処置した場合と比較してＶｃ−Ｒによる処置した場合に、ＰＦＳにおいて７．５ヶ月の利益を有しかつＯＳが良好になる傾向を有した、バイオマーカーにより評価可能な集団のうち３３％で特定された（表４）（ｐ＝０．０５５，ＨＲ：０．４２６［０．１７４，１．０４６］）。この対は、ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａ（Ｃ／Ｇヘテロ接合体）、及び陽性染色細胞が０〜５０として定義されたＣＤ６８低発現から構成される。以降、この対をバイオマーカー陽性分集団として参照する。バイオマーカー陰性分集団は、このバイオマーカー対を有さず、かつ異なるＰＳＭＢ１遺伝型及びＣＤ６８発現レベルを有する。

「バイオマーカー陽性」はＰＳＭＢＰ１１Ａヘテロ接合体であり、かつＣＤ６８「低」バイオマーカー対であることを意味し、「バイオマーカー陰性」はこの対を除く全ての対象者を意味し、「Ｖｃ−Ｒ」はボルテゾミブ＋リツキシマブを意味し、「ＰＦＳ」は無憎悪生存期間を意味し、「ＯＳ」は全生存期間を意味し、「ＣＩ」は信頼区間を意味し、「ＨＲ」はハザード比を意味する。

重要な事に、バイオマーカー陽性分集団（ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａヘテロ接合体及びＣＤ６８低発現）も、Ｒ単独（ｐ＝０．００７７）により処置した場合（４７．５％）と比較して、Ｖｃ−Ｒで処置した場合（７３．７％）に、有意に良好な全体応答率、並びに次回の治療までの期間延長（ｐ＝０．００１３）、並びに無治療期間の持続（ｐ＝０．００１７）を有した。

バイオマーカー陽性集団及びバイオマーカー陰性集団において類似するＡＥプロファイルが観察された。バイオマーカー陽性集団及びバイオマーカー陰性集団におて類似する処置への暴露が観察された。バイオマーカー陽性集団においてリツキシマブにより処置した対象者は、平均投与量が２９４１ｍｇ／ｍ²であったのに対し、バイオマーカー陰性集団では２９４０ｍｇ／ｍ²であった。バイオマーカー陽性集団におて、Ｖｃ−Ｒにより処置した対象者は、平均投与量が３１．１ｍｇ／ｍ²であったのに対し、バイオマーカー陰性集団では３０ｍｇ／ｍ²であった。合計投与数、曝露の持続時間、投与強度、相対投与強度、及び投与を受けた最大サイクル数も非常に類似した差異を示した。

バイオマーカーが陽性である場合、ボルテゾミブ＋リツキシマブにより処置した対象者はＰＦＳの延長を維持した。この対象者を、任意のＦＬＩＰＩスコア、腫瘍量、アン・アーバースコア、年齢、地域、性別、及び人種により層別化した。リスクが高く予後の悪い患者、例えば、高腫瘍量、中又は高ＦＬＩＰＩ、６５歳以上、又は既にリツキシマブによる治療を受けている患者では、バイオマーカー陰性と比較した場合に、バイオマーカー陽性の患者においてＰＦＳの大きな改善が観察された。ＰＦＳの延長は、最後の処置からの期間、あるいは既にリツキシマブによる治療を受けているか又はリツキシマブによる治療を２回以内で受けたことがあるかによるそれまでの処置回数とは無関係に維持された。

バイオマーカーが陽性である場合、ボルテゾミブ＋リツキシマブにより処置した対象者は全生存期間の延長を維持した。この対象者を、ＦＬＩＰＩスコア、腫瘍量、アン・アーバースコア、年齢、地域、性別、及び人種により層別化した。ＣＤ６８低（０〜５０）に陽性である場合、ベルケイド＋リツキシマブにより処置した対象者はＰＦＳの延長を維持した。この対象者を、任意のＦＬＩＰＩスコア、腫瘍量、アン・アーバースコア、年齢、地域、性別、及び人種により層別化した。ＣＤ６８が高い場合、リツキシマブ単剤に対し、見込まれるよりも良好な反応を示した。ＰＳＭＢＰ１１Ａヘテロ接合体に関し陽性である場合、ベルケイド＋リツキシマブにより処置した対象者はＰＦＳの延長を維持した。この対象者を、任意のＦＬＩＰＩスコア、腫瘍量、アン・アーバースコア、年齢、地域、性別、及び人種により層別化した。ＣＤ６８が高い場合、リツキシマブ単剤に対し、見込まれるよりも良好な反応を示した。

バイオマーカー陽性の対象者ではＯＳが延長される傾向が見出された（ｐ＝０．０５５、ＨＲ０．４２６）。バイオマーカーの貢献度を個別に評価した場合、この傾向は識別しづらくなる。ＰＳＭＢ１Ｐ１１ＡＣ／Ｇヘテロ接合体の対象者に関しては、優位性はｐ＝０．２５２５でありかつＨＲ＝０．６７３であったのに対し、ＣＤ６８陽性（０〜５０）の対象者では、優位性はｐ＝０．０７１４かつＨＲ＝０．６１５であった。

ＣＤ６８低（０〜５０）に陽性である場合、ベルケイド＋リツキシマブにより処置した対象者はＯＳが良好になる傾向を有した。この対象者を、任意のＦＬＩＰＩスコア、腫瘍量、アン・アーバースコア、年齢、地域、性別、及び人種により層別化した。ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａヘテロ接合体に陽性である場合、ベルケイド＋リツキシマブにより処置した対象者はＯＳが良好になる傾向を有した。この対象者を、任意のＦＬＩＰＩスコア、腫瘍量、アン・アーバースコア、年齢、地域、性別、及び人種により層別化した。

交差検定後、これまでに記載した対（ＣＤ６８低かつＰＳＭＢＰ１１Ａ）が、より小さな発見コホートにおいて有用であることが見出された（ｐ＝０．０００３にて、Ｖｃ−Ｒでは１４．２ヶ月なのに対し、Ｒでは８．５ヶ月であった。ＨＲ＝０．４（０．２４，０．６７））。バイオマーカー陽性集団ではなおもＯＳが延長される傾向があった（ｐ＝０．１２９１）、ＨＲ＝０．４７（０．１７，１．２７）。確認コホート中の対象者の数は少なかったものの、ＦＰＳ及びＯＳの両方の陽性の傾向が維持されていることが判明した。確認コホート１（ｎ＝１０６）では、Ｖｃ−Ｒにより処置した対象者は約１８．２ヶ月のＰＦＳを有したのに対し、Ｒ単独で処置した対象者は９．５ヶ月のＰＦＳを有した（ｐ＝０．０８１７，ＨＲ＝０．４４）。確認コホート２（ｎ＝４２６）では、Ｖｃ−Ｒにより処置した対象者は平均約１３．９ヶ月のＰＦＳを有したのに対し、Ｒ単独で処置した対象者は平均９．５ヶ月のＰＦＳを有した（ｐ＝０．０８７８，ＨＲ＝０．４９）。ＯＳにおける傾向も維持された。

バイオマーカーを有する患者において見られるＰＦＳ効果に対する、各バイオマーカー（ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａヘテロ接合体及び低ＣＤ６８）の個別の関与を評価することを目的とした。バイオマーカー陽性集団では、ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａ（Ｃ／Ｇ）を有する対象者は、Ｒ単独で処置した場合には平均９．５ヶ月のＰＦＳを有したのに対し、Ｖｃ−Ｒで処置した場合には平均１６．６ヶ月のＰＦＳを有し、すなわち組み合わせて使用した場合には７．１ヶ月のＰＦＳ利益が示された。この効果は、Ｖｃ−Ｒで処置したバイオマーカー陰性対象者では見られなかった。ＣＤ６８及びリツキサンに対するこれまでの発表と一致して、本試験はＣＤ６８発現が高い患者（平均ＰＦＳ１６．２ヶ月）ほど、ＣＤ６８発現が低い患者（平均ＰＦＳ９．３ヶ月）と比較してリツキシマブ単剤に対し良好に応答したことを示す。しかしながら、低ＣＤ６８（０〜５０）を有するこれらの対象者は、Ｒ単剤（平均９．３ヶ月）で処置した同様の患者と比較して、組み合わせにより処置した場合に有意に長いＰＦＳ（平均１４ヶ月）を有した。これはすなわち４．７ヶ月分のＰＦＳ利益があることを意味する（ＨＲ＝０．６４（９５％ＣＩ：０．４７５〜０．８６４）。

これらの結果は、Ｒ単剤で処置した場合と比較して、Ｖｃ−Ｒを組み合わせて処置した場合に有意に長いＰＦＳを有し、かつ良好なＯＳを示す傾向のある、患者分集団を治療前に検出できることを示唆する。複数比較補正後に優位性を維持する（ＦＤＲ＝０．０５１）１つのバイオマーカー対には、プロテアソームサブユニットＳＮＰ［ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａヘテロ接合体］及びＣＤ６８低（０〜５０）が含まれる。本試験では３５６名の対象者がこれらの両方のバイオマーカーに関し評価可能であった。加えて、このマーカー対は、これらのバイオマーカーを両方有する評価可能な対象者のうちの約１／３ほどの高い集団頻度を有した。このバイオマーカー対を有する対象者は、Ｖｃ−Ｒ（１６．６ヶ月）で処理した場合に、リツキシマブ単剤で処理した場合（９．１ヶ月）と比較してより長いＰＦＳ間隔を有し、組み合わせにより約７．５ヶ月のＰＦＳ効果が示された。この群では、Ｖｃ−Ｒの場合にＯＳ効果を有していることも明らかであったことから、明らかに有意であり（ＨＲ：０．４２６（０．１７４〜１．０４６）Ｐ＝０．０５５０）、高ＯＲＲであり（７３．７％（Ｖｃ−Ｒ）対４７．５％（リツキシマブ単剤）、ｐ＝０．００７７）、次回の治療までの期間が長く（３３．１ヶ月（Ｖｃ−Ｒ）対１４．８ヶ月（リツキシマブ単剤）、ｐ＝０．００１３）並び無治療期間間隔が長い（２７．８ヶ月対１０．１ヶ月、ｐ＝０．００１７）という傾向がある。

重要な事にＣＤ６８／ＰＳＭＢＰ１１Ａバイオマーカー陽性コホートは、個体群統計及び臨床的特徴という観点から全体的な試行集団を表した。注目すべきことに、このコホートのおよそ半分は疾患リスクが高くかつ予後のよくない対象者が占めた。高腫瘍量（約５４％）、中又は高ＦＬＩＰＩ（約７６％）、高齢（＞６５）（約２５％）、既にリツキシマブによる治療を受けている（約４６％）、又は二次治療（約２６％）若しくは三次治療以上（約３０％）の治療を受けている、す患者において、ＣＤ６８／ＰＳＭＢＰ１１Ａバイオマーカー陽性コホートのＰＦＳ効果は明らかに維持されている。これらの患者は、一般的に、治療選択肢が制限されていることから「高リスク」として見なされ、これらの事前所見により、高リスクの特徴を有するバイオマーカー陽性の対象者はＶｃ−Ｒにより恩恵を受ける可能性があることが示唆される。

ＰＳＭＢ１及びＰＳＭＢ５における多型は、シングルマーカーとして臨床エンドポイントと有意に関連性を有することが判明した。ＰＳＭＢ１［Ｐ１１Ａ］とＣＤ６８の組み合わせは、相乗的なものであり、試験コホートで高比率で示される。ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａは、プロテアソームＰＳＭＢ１遺伝子のリーダー配列において見られる多型である（Ｃｈｅｎ１９９６）。リーダー配列は、サブユニットの適切な組み立てに関与するものであり、アミノ酸の電荷を変えるとサブユニットの組み立ての有効性が減少することが報告されている（Ｓｃｈｍｉｄｔ１９９９）。一度組み立てられれば、自己触媒作用によりリーダー配列が除去される。この対における第２のバイオマーカーは、ＣＤ６８を発現している腫瘍浸潤マクロファージである。これまでの報告では、高濃度のＣＤ６８は、リツキシマブに対する要項な応答性と関連することが示されている（Ｔａｓｋｉｎｅｎ２００７）。

重要な事に、本試験はＣＤ６８を対発現している対象者が、特に上述のようにＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａヘテロ接合体が存在する場合により長いＰＦＳを有し、かつＲ単剤の場合と比較してＶｃ−Ｒに対し良好な奏効率を有することを示した。交差検定後、これまでに記載した対（ＣＤ６８低かつＰＳＭＢＰ１１Ａ）が、より小さな発見コホートにおいて有用であることが見出された（Ｖｃ−Ｒではｐ＝０．０００３、１４．２ヶ月なのに対し、リツキシマブ単剤では８．５ヶ月であった。ＨＲ＝０．４（０．２４，０．６７））。バイオマーカー陽性集団ではなおもＯＳが延長される傾向があった（ｐ＝０．１２９１）、ＨＲ＝０．４７（０．１７，１．２７）。確認コホート中の対象者の数は少なかったものの、ＦＰＳ及びＯＳの両方の陽性の傾向が維持されていることが判明した。確認コホート１（中国からの対象者は除外する；ｎ＝１０６）では、Ｖｃ−Ｒにより処置した対象者は約１８．２ヶ月のＰＦＳを有したのに対し、Ｒ単独で処置した対象者は９．５ヶ月のＰＦＳを有した（ｐ＝０．０８１７，ＨＲ＝０．４４）。確認コホート２（中国の対象者及び欠測データを有する対象者を含む；ｎ＝１２６）では、Ｖｃ−Ｒで処置した対象者は平均１３．９ヶ月のＰＦＳを有するのに対し、Ｒで処置した対象者は平均９．５ヶ月のＰＦＳを有した（ｐ＝０．０８７８，ＨＲ＝０．４９）。ＯＳにおける傾向も維持された。

（実施例２）．
陽性の応答と相関した単一の予測因子を表５に示す。

（実施例３）．
陽性の応答と相関のある予測因子対を表６及び７に示す。

ＡｒｉｆＡ（２００９），ＪａｍａｌＳ，ＭｕｓｈｔａｑＳ，ＡｈｍｅｄＳ，ＭｕｂａｒｉｋＡ．Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｂｃｌ−２ｇｅｎｅｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｉｎＢ−ＣｅｌｌＮｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａ．ＡｓｉａｎＰａｃｉｆｉｃＪＣａｎｃｅｒＰｒｅｖ２００９；１０（２）：２３７〜２４０。

ＢｉｎｓｔａｄｔＢＡ（２００３），ＧｅｈａＲＳ，ＢｏｎｉｌｌａＦＡ．ＩｇＧＦｃｒｅｃｅｐｔｏｒｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｔｈｅｒａｐｙ．ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ２００３；１１１（４）：６９７〜７０３。

ＣａｒｔｒｏｎＧ（２００２），ＤａｃｈｅｕｘＬ，ＳａｌｌｅｓＧ，Ｓｏｌａｌ−ＣｅｌｉｇｎｙＰ，ＢａｒｄｏｓＰ，ＣｏｌｏｍｂａｔＰ，ＷａｔｉｅｒＨ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈｕｍａｎｉｚｅｄａｎｔｉ−ＣＤ２０ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＩｇＧＦｃｒｅｃｅｐｔｏｒＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩａｇｅｎｅ．Ｂｌｏｏｄ２００２；９９（３）：７５４〜７５８。

ＣｈｅｎＰ（１９９６），ＨｏｃｈｓｔｒａｓｓｅｒＭ．Ａｕｔｏｃａｔａｌｙｔｉｃｓｕｂｕｎｉｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｃｏｕｐｌｅｓａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ２０Ｓｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｔｏｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎｏｆａｓｓｅｍｂｌｙ．Ｃｅｌｌ１９９６；８６：９６１〜９７２。

ＣｈｅｎＳ（２０１０），ＢｌａｎｋＪＬ，ＰｅｔｅｒｓＴ，ＬｉｕＸＪ，ＲａｐｐｏｌｉＤＭ，ＰｉｃｋａｒｄＭＤ，ＭｅｎｏｎＳ，ＤｒｉｓｃｏｌｌＤＬ，ＬｉｎｇａｒａｊＴ，ＢｕｒｋｈａｒｄｔＡＬ，ＣｈｅｎＷ，ＧａｒｃｉａＫ，ＳａｐｐａｌＤＳ，ＧｒａｙＪ，ＨａｌｅｓＰ，ＬｅｒｏｙＰＪ，ＲｉｎｇｅｌｉｎｇＪ，ＲａｂｉｎｏＣ，ＳｐｅｌｍａｎＪＪ，ＭｏｒｇａｎｓｔｅｒｎＪＰ，ＬｉｇｈｔｃａｐＥＳ．Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅｓｉＲＮＡｓｃｒｅｅｎｆｏｒｍｏｄｕｌａｔｏｒｓｏｆｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｄｕｃｅｄｂｙｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０；７０（１１）：４３１８〜４３２６。

ＣｌｉｎｉｃａｌＳｔｕｄｙＰｒｏｔｏｃｏｌ２６８６６１３８−ＬＹＭ３００１．Ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｓｔｕｄｙｏｆＶＥＬＣＡＤＥｗｉｔｈｒｉｔｕｘｉｍａｂｏｒｒｉｔｕｘｉｍａｂａｌｏｎｅｉｎｓｕｂｊｅｃｔｓｗｉｔｈｒｅｌａｐｓｅｄｏｒｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ，ｒｉｔｕｘｉｍａｂｎａｉｖｅｏｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｆｏｌｌｉｃｕｌａｒＢ−ｃｅｌｌｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａ．ＤｏｃｕｍｅｎｔＮｏ．ＥＤＭＳ−ＰＳＤＢ−４６４９０８２：４．０；Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（１９Ｍａｙ２００６）。

ＣｌｉｎｉｃａｌＳｔｕｄｙＲｅｐｏｒｔ２６８６６１３８−ＬＹＭ３００１．Ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｓｔｕｄｙｏｆＶＥＬＣＡＤＥｗｉｔｈｒｉｔｕｘｉｍａｂｏｒｒｉｔｕｘｉｍａｂａｌｏｎｅｉｎｓｕｂｊｅｃｔｓｗｉｔｈｒｅｌａｐｓｅｄｏｒｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ，ｒｉｔｕｘｉｍａｂｎａｉｖｅｏｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｆｏｌｌｉｃｕｌａｒＢ−ｃｅｌｌｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａ．ＤｏｃｕｍｅｎｔＮｏ．ＥＤＭＳ−ＥＲＩ−１６２２５３３５：１．０；Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（０９Ｆｅｂ２０１１）。

ＤａｖｅＳＳ（２００４），ＷｒｉｇｈｔＧ，ＴａｎＢ，ＲｏｓｅｎｗａｌｄＡ，ＧａｓｃｏｙｎｅＲＤ，ＣｈａｎＷＣ，ＦｉｓｈｅｒＲＩ，ＢｒａｚｉｅｌＲＭ，ＲｉｍｓｚａＬＭ，ＧｒｏｇａｎＴＭ，ＭｉｌｌｅｒＴＰ，ＬｅｂｌａｎｃＭ，ＧｒｅｉｎｅｒＴＣ，ＷｅｉｓｅｎｂｕｒｇｅｒＤＤ，ＬｙｎｃｈＪＣ，ＶｏｓｅＪ，ＡｒｍｉｔａｇｅＪＯ，ＳｍｅｌａｎｄＥＢ，ＫｖａｌｏｙＳ，ＨｏｌｔｅＨ，ＤｅｌａｂｉｅＪ，ＣｏｎｎｏｒｓＪＭ，ＬａｎｓｄｏｒｐＰＭ，ＯｕｙａｎｇＱ，ＬｉｓｔｅｒＴＡ，ＤａｖｉｅｓＡＪ，ＮｏｒｔｏｎＡＪ，Ｍｕｌｌｅｒ−ＨｅｒｍｅｌｉｎｋＨＫ，ＯｔｔＧ，ＣａｍｐｏＥ，ＭｏｎｔｓｅｒｒａｔＥ，ＷｉｌｓｏｎＷＨ，ＪａｆｆｅＥＳ，ＳｉｍｏｎＲ，ＹａｎｇＬ，ＰｏｗｅｌｌＪ，ＺｈａｏＨ，ＧｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔＮ，ＣｈｉｏｒａｚｚｉＭ，ＳｔａｕｄｔＬＭ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｌｙｍｐｈｏｍａｂａｓｅｄｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｅａｔｕｒｅｓｏｆｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓ．ＮＥＪＭ２００４；３５１（２１）：２１５９〜２１６９。

ＦｉｓｃｈｅｒＵ（２００５），Ｓｃｈｕｌｚｅ−ＯｓｔｈｏｆｆＫ．Ｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｅｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔａｒｇｅｔｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｉｓｅａｓｅ．ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ２００５；５７（２）：１８７〜２１５。

ＧｏｙＡ（２０１０），ＢｅｒｎｓｔｅｉｎＳ，ＭｃＤｏｎａｌｄＡ，ＰｉｃｋａｒｄＭ，ＳｈｉＨ，ＦｌｅｍｉｎｇＭ，ＢｒｙａｎｔＢ，ＴｒｅｐｉｃｃｈｉｏＷ，ＦｉｓｈｅｒＲ，ＢｏｒａｌＡ，ＭｕｌｌｉｇａｎＧ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｍａｎｔｌｅｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａｆｒｏｍｔｈｅｐｈａｓｅ２ＰＩＮＮＡＣＬＥｔｒｉａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ＆Ｌｙｍｐｈｏｍａ２０１０；５１（７）：１２６９〜１２７７。

ＫａｒｉｎＭ（２００２），ＣａｏＹ，ＦｌｏｒｉａｎＧＲ，ＬｉＺＷ．ＮＦ−ｋＢｉｎｃａｎｃｅｒ：Ｆｒｏｍｉｎｎｏｃｅｎｔｂｙｓｔａｎｄｅｒｔｏｍａｊｏｒｃｕｌｐｒｉｔ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖＣａｎｃｅｒ２００２；２（４）：３０１〜３１０。

ＫｅａｔｓＪＪ（２００７），ＦｏｎｓｅｃａＲ，ＣｈｅｓｉＭ，ＳｃｈｏｐＲ，ＢａｋｅｒＡ，ＣｈｎｇＷｊ，ＶａｎＷｉｅｒＳ，ＴｉｅｄｅｍａｎｎＲ，ＳｈｉＣＸ，ＳｅｂａｇＭ，ＢｒａｇｇｉｏＥ，ＨｅｎｒｙＴ，ＺｈｕＹＸ，ＦｏｇｌｅＨ，Ｐｒｉｃｅ−ＴｒｏｓｋａＴ，ＡｈｍａｎｎＧ，ＭａｎｃｉｎｉＣ，ＢｒｅｎｔｓＬＡ，ＫｕｍａｒＳ，ＧｒｅｉｐｐＰ，ＤｉｓｐｅｎｚｉｅｒｉＡ，ＢｒｙａｎｔＢ，ＭｕｌｌｉｇａｎＧ，ＢｒｕｈｎＬ，ＢａｒｒｅｔｔＭ，ＶａｌｄｅｚＲ，ＴｒｅｎｔＪ，ＳｔｅｗａｒｔＡＫ，ＣａｒｐｔｅｎＪ，ＢｅｒｇｓａｇｅｌＰＬ．ＰｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓｍｕｔａｔｉｏｎｓａｃｔｉｖａｔｅｔｈｅｎｏｎｃａｎｏｎｉｃａｌＮＦ−κＢｐａｔｈｗａｙｉｎｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ．ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ２００７；１２（２）：１３１〜１４４。

ＭｉｔｓｉａｄｅｓＮ（２００２），ＭｉｔｓｉａｄｅｓＣＳ，ＰｏｕｌａｋｉＶ，ＣｈａｕｈａｎＤ，ＦａｎｏｕｒａｋｉｓＧ，ＧｕＸ，ＢａｉｌｅｙＣ，ＪｏｓｅｐｈＭ，ＬｉｂｅｒｍａｎｎＴＡ，ＴｒｅｏｎＳＰ，ＭｕｎｓｈｉＮＣ，ＲｉｃｈａｒｄｓｏｎＰＧ，ＨｉｄｅｓｈｉｍａＴ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＫＣ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｅｑｕｅｌａｅｏｆｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａｃｅｌｌｓ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ２００２；９９（２２）：１４３７４〜１４３７９。

ＭｕｌｌｉｇａｎＧ（２００７），ＭｉｔｓｉａｄｅｓＣ，ＢｒｙａｎｔＢ，ＺｈａｎＦ，ＣｈｎｇＷＪ，ＲｏｅｌｓＳ，ＫｏｅｎｉｇＥ，ＦｅｒｇｕｓＡ，ＨｕａｎｇＹ，ＲｉｃｈａｒｄｓｏｎＰ，ＴｒｅｐｉｃｃｈｉｏＷＬ，ＢｒｏｙｌＡ，ＳｏｎｎｖｅｌｄＰ，ＳｈａｇｈｎｅｓｓｙＪＤ，ＢｅｒｇｓａｇｅｌＰＬ，ＳｃｈｅｎｋｅｉｎＤ，ＥｓｓｅｌｔｉｎｅＤＬ，ＢｏｒａｌＡ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＫＣ．Ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌｏｕｔｃｏｍｅｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ．Ｂｌｏｏｄ２００７；１０９（８）：３１７７〜３１８８。

ＳｃｈｍｉｄｔＭ（１９９９），ＺａｎｔｏｐｆＤ，ＫｒａｆｔＲ，ＫｏｓｔｋａＳ，ＰｒｅｉｓｓｎｅｒＲ，ＫｌｏｅｔｚｅｌＰＭ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｐｒｏｔｅａｓｏｍａｌｐｒｏｓｅｑｕｅｎｃｅｓｍｅｄｉａｔｅｓｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆ β−ｓｕｂｕｎｉｔｓｉｎｔｏｔｈｅ２０Ｓｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｃｏｍｐｌｅｘ．ＪＭｏｌＢｉｏｌ１９９９；２８８（１）：１１７〜１２８。

ＳｈｉｎＨＭ（２００６），ＭｉｎｔｅｒＬＭ，ＣｈｏＯＨ，ＧｏｔｔｉｐａｔｉＳ，ＦａｕｑＡＨ，ＧｏｌｄｅＴＥ，ＳｏｎｅｎｓｈｅｉｎＧＥ，ＯｓｂｏｒｎｅＢＡ．Ｎｏｔｃｈ１ａｕｇｍｅｎｔｓＮＦ−κＢａｃｔｉｖｉｔｙｂｙｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇｉｔｓｎｕｃｌｅａｒｒｅｔｅｎｔｉｏｎ．ＥＭＢＯ２００６；２５（１）：１２９〜１３８。

ＴａｓｋｉｎｅｎＭ（２００７），Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ−ＬｉｎｄｓｂｅｒｇＭＬ，ＮｙｍａｎＨ，ＥｅｒｏｌａＬＭ，ＬｅｐｐａＳ．Ａｈｉｇｈｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｎｔｅｎｔｐｒｅｄｉｃｔｓｆａｖｏｒａｂｌｅｏｕｔｃｏｍｅｉｎｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｌｙｍｐｈｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｒｉｔｕｘｉｍａｂａｎｄｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ−ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ−ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ−ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００７；１３（１９）：５７８４〜５７８９。

ＷｏｊｃｉｋＣ（２００２）．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙｔｈｅｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｎｄｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｐａｔｈｗａｙ．ＪＣｅｌｌＭｏｌＭｅｄ２００２；６（１）：２５〜４８。

ＷｕＪ（１９９７），ＥｄｂｅｒｇＪＣ，ＲｅｄｅｃｈａＰＢ，ＢａｎｓａｌＶ，ＧｕｙｒｅＰＭ，ＣｏｌｅｍａｎＫ，ＳａｌｍｏｎＪＥ，ＫｉｍｂｅｒｌｙＲＰ．ＡｎｏｖｅｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）ａｌｔｅｒｓｒｅｃｅｐｔｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓｔｏａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１９９７；１００（５）：１０５９〜１０７０。

ＹｅｕｎｇＢＨ（２００６），ＨｕａｎｇＤＣ，ＳｉｎｉｃｒｏｐｅＦＡ．ＰＳ−３４１（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）ｉｎｄｕｃｅｓｌｙｓｏｓｏｍａｌｃａｔｈｅｐｓｉｎｂｒｅｌｅａｓｅａｎｄａｃａｓｐａｓｅ−２ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２００６；２８１（１７）：１１９２３〜１１９３２。

ＹｉｎＤ（２００５），ＺｈｏｕＨ，ＫｕｍａｇａｉＴ，ＬｉｕＧ，ＯｎｇＪＭ，ＢｌａｃｋＫＬ，ＫｏｅｆｆｌｅｒＨＰ．ＰｒｏｔｅａｓｏｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒＰＳ−３４１ｃａｕｓｅｓｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｒｒｅｓｔａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ（ＧＢＭ）．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２００５；２４（３）：３４４〜３５４。

（実施例４）．
付録２は、ＰＦＳ以外の臨床エンドポイントと関連する単独マーカーの全体的な要約を表し、これまでの実施例から臨床共変数により層別化した。

付録３は、これまでの実施例からすべての有意な対比較についてデータを要約する。注：選別＝バイオマーカー陽性、非選別＝バイオマーカー陰性。

（実施例５）
ＶＩＳＴＡ試験は、それまでに多発性骨髄腫の処置を受けたことのない対象者における、ベルケイド／メルファラン／プレドニゾン対メルファラン／プレドニゾンの非盲検、無作為化試験であった。ＳａｎＭｉｇｕｅｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００８Ａｕｇ２８；３５９（９）：９０６〜１７。ベルケイド（注入用ボルテゾミブ）を一般的なメルファラン／プレドニゾン（ＭＰ）治療に加える事で、それまでに多発性骨髄腫の処置を受けたことのない対象者において疾患進行（ＴＴＰ）時間が改善されるかを判定することを本試験の主要有効性の課題とした。

ＶＩＳＴＡ試験からのバイオマーカー解析における予備的な課題は、ベルケイド／メルファラン／プレドニゾン対メルファラン／プレドニゾン単剤に対しより応答を示す又は示さない可能性のある患者集団を、次の工程により特定するというものであった。
・ＰＦＳ及びＯＳを有するＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａ及びＰＳＭＢ５Ｒ２４Ｃに単一のマーカーが関連するという所見（リンパ腫試験による）を確認する工程。
・他の臨床エンドポイント：腫瘍増殖停止時間（ＴＴＰ）、完全奏効（ＣＲ）、奏効率、応答までの時間、並びに応答の持続性；と関連付ける工程。

バイオマーカー陽性集団及び陰性集団の処置群間にログランク検定を使用して、ＰＳＭＢ１Ｐ１１Ａ及びＰＳＭＢ５Ｒ２４Ｃの個別での又はＴＴＰ、ＰＦＳ、及びＯＳとの組み合わせでの関連性を評価した。処置によると全体的なバイオマーカー集団は類似する相関を有した。ＴＴＰ、ＰＦＳ、及びＯＳの中央値、処置群間のＴＴＰ、ＰＦＳ、及びＯＳの中央値の差異、ログランクＰ値、ハザード比及びその９５％信頼区間、並びにイベント頻度を記録した。各バイオマーカーに関しカプラン・マイヤープロットを示した。ＴＴＰ、ＯＳ、又はＰＦＳに陽性の関連性が見出された場合、同様の方法及びアウトプットにより他の臨床エンドポイントを試験した。ＯＲＲに関しては、フィッシャーの直接確率検定を使用した。各応答分類に当てはまる対象者数及び割合を表に記載する。

付録３マーカーの対比較の組み合わせ
以降の表は、すべての有意な対比較の組み合わせを要約するものである。
注：選別＝バイオマーカー陽性、非選別＝バイオマーカー陰性

以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］がん患者におけるがん治療に対する応答を予測するための方法であって、前記患者由来の生体試料中の第１の予測因子のレベル又は量を測定する工程であって、前記第１の予測因子がＣＤ６８又はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型である工程；並びに前記患者中の第２の予測因子の存在又は量を測定する工程であって、低ＣＤ６８又はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型の存在が少なくとも１つの陽性の結果と相関し、並びに前記第２の予測因子の存在、非存在、又は量が少なくとも１つの陽性の結果と相関する工程、を含む方法。
［２］前記第１の予測因子が低ＣＤ６８である、［１］に記載の方法。
［３］低ＣＤ６８が、免疫組織化学的検査により測定した場合にＣＤ６８陽性細胞が５０％以下であることを意味する、［２］に記載の方法。
［４］前記第１の予測因子がＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型である、［１］に記載の方法。
［５］前記第２の予測因子が、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型、ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型、６５歳未満の年齢であること、既に一次治療を受けていること、低濾胞性リンパ腫国際予後因子（ＦＬＩＰＩ）スコア、及び低腫瘍量からなる群から選択される、［１］に記載の方法。
［６］前記がんが血液がんである、［１］に記載の方法。
［７］前記血液がんが、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫である、［６］に記載の方法。
［８］前記治療が、プロテアソーム阻害剤による治療を含む、［１］に記載の方法。
［９］前記プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブである、［９］に記載の方法。
［１０］前記治療が併用療法である、［１］に記載の方法。
［１１］前記併用療法がプロテアソーム阻害剤を含む、［１０］に記載の方法。
［１２］前記プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブである、［１１］に記載の方法。
［１３］前記併用療法が更にリツキシマブを含む、［１１］に記載の方法。
［１４］特定のがん治療に対する候補者となる患者を特定するための診断キット又は相当物であって、生体試料中の第１の予測因子の量又は存在を検出するための試薬；生体試料中の第２の予測因子の量又は存在を検出するための試薬；並びに前記治療の候補者となる患者を特定するための前記予測因子を選択するための説明書；を含み、前記第１の予測因子がＣＤ６８及びＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型からなる群から選択される、診断キット又は相当物。
［１５］前記第２の予測因子が、ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型、及びＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型からなる群から選択される、［１４］に記載のキット。
［１６］患者のがんを治療するための方法であって、前記患者由来の生体試料中の第１の予測因子の量又は存在を判定する工程であって、前記第１のバイオマーカーが、ＣＤ６８及びＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）からなる群から選択されるものである工程；前記患者中の第２の予測因子の存在又は量を測定する工程；並びに前記患者が前記治療に対し応答する可能性があるかどうかに基づき治療法を選択する工程、を含む、前記方法。
［１７］患者においてがんを治療する際のプロテアソーム阻害剤の使用であって、前記患者が、低ＣＤ６８量又はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型の存在により特徴づけられる、使用。
［１８］前記患者が、免疫組織化学的検査により測定した場合にＣＤ６８陽性濾胞性細胞が０〜５０％であることにより特徴づけられる、［１７］に記載の使用。
［１９］前記患者が、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型；ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型；既に一次治療を受けていること；低濾胞性リンパ腫国際予後因子（ＦＬＩＰＩ）スコア；６５歳未満であること；及び低腫瘍量；からなる群から選択される１つ以上の予測因子により更に特徴づけられる、［１７］に記載の使用。
［２０］前記がんが血液がんである、［１７］に記載の使用。
［２１］前記血液がんが、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫又は多発性骨髄腫である、[２０]に記載の方法。
［２２］前記プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブである、［１７］に記載の使用。
［２３］前記プロテアソーム阻害剤を第２の治療剤と併用する、［１７］に記載の使用。
［２４］前記第２の治療剤がリツキシマブ、メルファラン又はプレドニゾンである、［２３］に記載の使用。
［２５］低ＣＤ６８又はＰＳＭＢ１多型により特徴づけられる患者においてがんを治療するための方法であって、前記患者にプロテアソーム阻害剤を投与する工程を含む、方法。
［２６］前記患者が、免疫組織化学的検査により測定した場合にＣＤ６８陽性濾胞性細胞が０〜５０％であることにより特徴づけられる、［２５］に記載の方法。
［２７］前記患者が、低ＣＤ６８；ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型；ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型；既に一次治療を受けていること；低濾胞性リンパ腫国際予後因子（ＦＬＩＰＩ）スコア；６５歳未満の年齢であること；及び低腫瘍量；からなる群から選択される１つ以上の予測因子によりさらに特徴づけられる、［２５］に記載の方法。
［２８］前記がんが血液がんである、［２５］に記載の方法。
［２９］前記血液がんが濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫である、［２８］に記載の方法。
［３０］前記プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブである、［２５］に記載の方法。
［３１］前記プロテアソーム阻害剤を第２の治療剤と併用する、［２５］に記載の方法。
［３２］前記第２の治療剤がリツキシマブ、メルファラン又はプレドニゾンである、［３１］に記載の方法。

Claims

非ホジキンリンパ腫がん患者におけるボルテゾミブおよびリツキシマブを含むがん治療
に対する応答を予測するための方法であって、
前記患者由来の生体試料中の第１の予測因子のレベル又は量を測定する工程であって、
前記第１の予測因子が低ＣＤ６８又はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型である工程；並びに
前記患者中の第２の予測因子の存在又は量を測定する工程であって、前記第２の予測因
子が、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型、ＰＳＭＢ５（Ｒ２４Ｃ）多型、６５歳
未満の年齢であること、既に一次治療を受けていること、低濾胞性リンパ腫国際予後因子
（ＦＬＩＰＩ）スコア、及び低腫瘍量からなる群から選択され、前記第１の予測因子と前
記第２の予測因子とは異なり、前記第１の予測因子および前記第２の予測因子を含むバイ
オマーカー対が少なくとも１つの陽性の結果と相関する工程、を含む方法。
前記第１の予測因子が低ＣＤ６８である、請求項１に記載の方法。
低ＣＤ６８が、免疫組織化学的検査により測定した場合にＣＤ６８陽性細胞が５０％以
下であることを意味する、請求項２に記載の方法。
前記第１の予測因子がＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型である、請求項１に記載の方法。
前記非ホジキンリンパ腫がんが、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫である、請求項１に
記載の方法。
ボルテゾミブおよびリツキシマブを含む特定のがん治療に対する候補者となる非ホジキ
ンリンパ腫患者を特定するための診断キット又は相当物であって、
生体試料中の第１の予測因子の量又は存在を検出するための試薬；
生体試料中の第２の予測因子の量又は存在を検出するための試薬；並びに
前記治療の候補者となる患者を特定するための前記予測因子を選択するための説明書；
を含み、
前記第１の予測因子がＣＤ６８及びＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型からなる群から選択さ
れる、前記第２の予測因子が、低ＣＤ６８、ＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型、及びＰＳＭＢ
５（Ｒ２４Ｃ）多型からなる群から選択され、前記第１の予測因子と前記第２の予測因子
とは異なる、診断キット又は相当物。
前記患者が、低ＣＤ６８量又はＰＳＭＢ１（Ｐ１１Ａ）多型の存在により特徴づけられ
る、請求項６に記載の診断キット又は相当物。
前記患者が、免疫組織化学的検査により測定した場合にＣＤ６８陽性濾胞性細胞が０〜
５０％であることにより特徴づけられる、請求項６に記載の診断キット又は相当物。
前記非ホジキンリンパ腫が、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫である、請求項６に記載
の診断キット又は相当物。