TW593339B

TW593339B - alpha-ketoamide inhibitors of 20S proteasome

Info

Publication number: TW593339B
Application number: TW088101002A
Authority: TW
Inventors: Lisa Wang; Robert T Lum; Steven R Schow; Alison Joly; Suresh Kerwar
Original assignee: Cv Therapeutics Inc
Priority date: 1998-01-26
Filing date: 1999-01-22
Publication date: 2004-06-21
Also published as: NZ505892A; WO1999037666A1; JP3863370B2; IL137475A0; HUP0100901A2; RU2192429C2; CN1289340A; KR20010034381A; PL343269A1; EP1058689A1; KR100417888B1; AU2326799A; US6781000B1; AU747835B2; PL202504B1; NO327049B1; NO20003807L; JP2002501080A; GEP20032869B; US6075150A

Description

593339 A7 ----- 五、發明説明（1 ) 發明背景多催化性蛋白酶或蛋白酶體爲負責大部份細胞蛋白質 ATP-依存性蛋白分解作用之高度保存細胞結構（Coux. 0.，

Tanaka，K. and Goldberg，A. 1996，Ann. Rev· Biochem· 65, 801-847)。20S蛋白酶體含有複合物之機能性核芯且已自古細菌熱胞漿嗜酸菌中結晶（Lowe, J·, Stock，D·，Jap，B.，

Zwicki，P.，Bauminster，W.及 Huber，R. 1995 Science 268, 533-539)及自酵母啤酒釀母菌（Saccharomyces cerevisiae)中結晶（Groll，M.，Ditzel，L.，Lowe，J·，Stock，D·，B〇chtler，M·，

Bartunik，HD及Huber，R. 1997 Nature 386，463-471) ° 不若主要呈現似胰凝乳蛋白酶蛋白水解活性之古細菌蛋白酶 (Dahlmann, B., Kopp, F., Kuehn, L., Niedel, B., Pfeifer, G. 1989, FEBSLett. 251, 125-13 1; Seemuller, E., Lupas, A., Zuw, F.，Zwickl，P及Baumeister，W. FEBS Lett. 359，173, (1995)，該眞核狀態之蛋白酶體至少含有5種可相同之蛋白水解活性。該等活性中三種對胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶及胜肽基穀氨醯基胜肽酶之特異性類似。所述之其他兩種活性呈現偏好切斷分支鏈胺基酸（BrAAP)羧基側上之胜肽键並在短鏈中性胺基酸（SnAAP)間形成胜肽键（Orlowski, M· 1990 Biochemistry 29，10289-10297) 0 雖然20S蛋白酶體含有蛋白水解核芯，但無法在活體内降解蛋白質，除非在其結構任一端與19S帽冠（cap)複合，該帽冠本身含有複數個ATP酶活性。此較大結構稱爲26S蛋白酶體，且將藉添加複數個8.5 kDa聚胜肽，泛激素之分子而诀 -4- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項

，1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593339 A7 B7 五、發明説明（2 ) 速降解標的蛋白質（回顧於Coux，0·，Tanaka，K.及Goldberg， A. 1996 Ann. Rev. Biochem. 65, 801-847)。大量之基質衍生之官能度已使用作爲有效之絲氨酸及硫醇蛋白酶抑制劑。該等主題中有數種已描述爲蛋白酶體之抑制劑。其包含胜肽酸類（\^1^51<：丫，八.51^(：11&11(1,€，，？0\¥615,}· 及Orlowski, M. 1992 Biochemistry 31，9421-9428; Tsubuki，S.， Hiroshi，K.，Saito，Y.，Miyashita，N.，Inomata，M.，及Kawashima， S. 1993 Biochem. Biophys. Res. Commun. 196,1195-1201; Rock, K，I.，Gramm，C.，Rothstein，L·，Clark，K·，Stein，R·，Dick，L·， Hwang，D.及 Goldberg，A.L· (1994) Cell 78, 761-771)，N-乙醯基-L-白氨醯基-L-白氨醯基-L-原白氨醛（ALLN)及N-乙醯基-L-白氨酿基-1-白氨酿基-蛋氨酸（LLM)，惟此類最強力之抑制劑爲N-碳苄氧基-1-L-白氨醯基-L-白氨醯基-L-原纈氨醛（MG115)。其他報導已描述一系列在1 〇至1〇〇 nM範圍内具 IC50値之二胜肽抑制劑（Iqbal, M.，Chatterjee S.，Kauer，J.C.， Das，Μ.，Messina，P.，Freed，B.，Biazzo, W及Siman，R. 1995, Ι-Med. Chem· 38, 2276-2277)。一系歹]“-酮羰基及硼酸酯衍生之一胜肽（Iqbai，M., Chatterjee，S.，Kauer，J.C.，Mallamo, J.P.，Messina，P.A.，Reiboldt，A. &Siman，R.1996 Bioorg. Med-Chem. Lett 6，287-290)及環氧酮（Spattenstein，A.，Leban， JJ., Huang, J.J.? Reinhardt, K.R., Viveros, O.H., Sigafoos, J. 及 Grouch，R. 1996 Tet. Lett. 3 7，1434-13 46)已描述爲蛋白酶體之強力抑制劑。在抑制蛋白酶體活性中呈現特異性之不同化合物爲乳胱氨 __ _^_ 本纸張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項本頁) 訂

593339 A7 _B7 __ 五、發明説明（3 ) 酸（Lectacystin)(Fenteany，G·，Standaert，R.F·，Lane，W.S.， Choi, S·, Corey，E.J·及Schreibei*，S.L. 1995 Science 268, 726-73 1)，其爲鏈黴菌代謝物。此分子最初發現其在神經母細胞瘤細胞系中有謗發軸突外生長之能力（Omura，S·，Matsuzaki， K.，Fujimoto，T·，Kosuge，K.，Furuya，T.，Fujita，S.及 Nakagawa，八.1991了.八11七1^〇144，117-118)及隨後顯示可抑制數種細胞類型（Fenteany，G.，Standaert，R.F·，Reichard，G.A·，Corey, E.J.及 Schreiber，S.L，1994 Proc. Nat，l. Acad· Sci. USA 91， 3358-3362) 〇現已完全建立蛋白酶體爲多樣細胞功能如細胞門、抗原加工必要之蛋白水解路徑及短效性調節蛋白質如致癌基因產物、胞轉蛋白及轉錄因子之降解作用中之主要溶菌酶體外之蛋白水解系統（Ciechanover，A. (1994) Cell 79，13-21; Palombell，V.J·，Rando，O.J·，Goldberg，A.L.及 Maniatis，T. 1994 Cell 78, 773-785)。例如活性型之NF- 係由 p65 及p50 次單元所構成之異二聚物。後者係以非活性前驅物（pi05)存在於細胞溶質中。pl〇5蛋白水解加工產生p50係經由泛激素 -蛋白酶體路徑發生。此外，加工之P50及p65以結合至抑制性蛋白質I γ B之非活化複合物維持在細胞溶質中。發炎性刺激素如LPS藉起始會引起I%B降解之訊號路徑而活化NF-% B。該等訊號亦刺激pi 05加工成p50。因此由泛激素-蛋白酶體路徑負責之兩種蛋白水解結果對NF- % B之訊號謗發活化作用爲必需者。泛激素調節之蛋白酶體蛋白水解在NF- % B活化中扮演重要 -6- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項

、tT 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 593339 A7 B7 五、發明説明（4 ) 角色之觀察可藉使用導向蛋白酶體之抑制劑而臨床開發。 NF- % B之異常活化接著刺激細胞素合成已見於各種發炎及感染性疾病。NF- X B之活化對血管形成及對黏附分子（CAMs 及選擇素）之表現爲必要，因此蛋白酶體抑制劑在治療因血管系統引起之疾病亦具利用性。文獻中悉知泛激素-蛋白酶體路徑對負責自有絲分裂流出並使細胞進展成次一細胞循環相之胞轉蛋白之調節破壞具重要性（Glotzer，M·，Murray. A.W.及 Kirschner，M.W. (1991) Nature 3 49，13 2-138)。因此使用蛋白酶體抑制劑抑制胞轉蛋白降解可遏止生長。因此蛋白酶體抑制劑之另一種有效利用爲用於治療因abberrant細胞門引起之疾病。最近文獻中已報導20S蛋白酶體之數類胜肽抑制劑。該泛-酮胺已用於數種指標之蛋白酶抑制劑。詳言之，已報導一系歹]π -酮羰基及硼酸酯衍生之二胜肽（Iqbal, M.，Chatterjee， S., Kauer，J.C.，Mallamo，J.P.，Messina, P.A·，Reiboldt，A.及 Siman，R. 1996 Bioorg. Med. Chem. Lett 6，287-290)。爲 20S 蛋白酶體功能之強力抑制劑。3 -吲嗓丙酮酸之衍生物已宣稱爲治療中樞神經系統干擾之醫藥活性化合物（De Luca，等人W〇8 8/09789)，係經由腦中調節犬尿氨酸量之機制而作用。即使已發現各種組合物可抑制細胞增殖至某種程度，但仍需要可經由20S蛋白酶體抑制細胞增殖之更有效化合物。發明概述本發明一目的係提供一種於哺乳類中抑制細胞增殖之方本纸杀尺度適用中國國家標注（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項 —-- ^本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593339 A7 B7 五、發明説明（5 法，使用治療有效量之迄今未知具有細胞增殖抑制組合物。 &質之本發明又一目的係提供一種治療可受抑制蛋白響之疾病之方法。醵體功能影再者，本發明一目的係提供一種治療可藉抑制蛋白轉能所操控之增殖性疾病之方法。本發明又一目的係使用治療有效量之本文組合物抑制夫中細胞增殖障礙之用途。讀本發明另一目的係使用治療有效量之本文酶體功能之用途。一具體例中，本發明爲下式物質之組合物·· 組合物抑制體功蛋白 0 r2 0 經濟部中夾標举局員工消費合作社印製 χ2 〇 R1 其中X2爲Ar或Ar-X3，其中&爲 <二〇，或·ϋΗχ〇…及其 Ar局本基、經取代苯基、啕哚、經取代啕哚及任何其他芳基；RAR2各獨立選自已知天然^胺基酸及非天炊胺酸之侧鏈、1-1〇個碳直鏈及分支烷基、^1〇碳直鏈及分經取^烷基;芳基、經取代芳基、1-10個碳直鏈、分支取代芳基' fe氧基芳基、3_8個I環規基、雜環、缺取代環、雜芳基及經取代雜芳基；&㈣自氫氧基、單择基、二烷胺基、烷氧基、芳氧基及 -8- 本紙浪尺度適财關家，鮮（CNS ) 593339 A7 B7 克、發明説明（6

經濟部中央標準局員工消費合作社印製其中X4爲氫氧基、芳胺基、單烷胺基、或芳燒氧基；及 R3係選自已知天炊π _脸其舻 β吉蘇π ν + 基非天然胺基酸、氫、HO個基、卜10個碳直鏈及分支經取代烷基、芳 ΐ芳：8方:，10個碳直鏈及分支經取代芳基取代雜芳基。、取代冰彡衣、冰方基及邊另一具體例中，本發明作右蛋白酶因子+方，、有關一種抑制哺乳類中蛋白酶組合物。万法，包括對哺乳類投與醫藥有效量之上又另一具體例中，本發明 !項之組合物κ多種K =關f種包括申請專利範圍次夕種w樂賦形劑之醫藥組合物。現行具體例描述尽發明有關—種用以抑礙、感染性疾病及免疫舆、 /、疋人類中細胞增殖組合物：又'r'疾病之方法，係使用下列通式烷胺基、烷氧基體述 >e-Ar 弟〇只2 障之

本纸張尺度制 (請先閱讀背面之注意事項vePfk本頁) -- 項馬太訂 % 593339 A7 B7 五、發明説明（7 ) 其中：爲 Ar或 Αγ_Χ3，其中乂3爲-C=〇、_Ch2CO-，或（CH2)n，其中n = 〇- 2及其中αγ爲苯基、經取代苯基、啕嗓、經取代吲嗓及任何其他雜芳基；Ri&R2各獨立選自已知天然α -胺基酸及非天然胺基酸之側鏈、氫、丨〇個碳直鏈及分支基、1 - 1 〇碳直鏈及分支經取代烷基、芳基、經取代芳基、1 - 1 0個碳直鏈、分支經取代芳基、烷氧基芳基、3 _ 8 個碳環烷基、雜環、經取代雜環、雜芳基及經取代雜芳基。I較好爲聯芳基或聯苯基。1較好爲異丁基。Xl係選自氫氧基、單烷胺基、二烷胺基、烷氧基、芳氧基及 (請先閲讀背面之注意事項

R3 其中

4

X 訂 fe胺基、fe乳基或經濟、郅中央榡準局員工消費合作社印製 -10- X4爲氫氧基、芳胺基、單烷胺基、芳烷氧基；及較好爲-0H ; R3係選自已知天然π -胺基酸、非天然胺基酸、氫、：[_ 1 0個碳直鏈及分支烷基、1 - 1 〇個碳直鏈及分支經取代基、芳基、經取代芳基、1 - 1 〇個碳直鍵及分支經取代芳基、烷氧基芳基、3 - 8個碳環烷基、雜環、經取代雜環、雜芳基及經取代雜芳基。r3較好爲C02H、 CHsCC^H、（CH2)2C〇2H、Arg、Lys、Asn、Gin、Asp、本紙張尺度適財g國家標举 (CNS~) A4^ ( 210X 297^^1 593339 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印？各五、發明説明（8 ) Gin、Phe及Nle 〇下列對本文所用某些名詞作定義。 π鹵素π表示氣、溴、氯及礎原子。 π羥基π表示-0Η基。 "親基〃表示-SH基。 π烷基π表示1至1 〇個碳原子之環狀、分支或直鏈烷基。此名詞又舉例如甲基、乙基、正丙基.、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基（或3 -甲基丙基）、環丙基甲基、異戊基、正戊基、正己基等。 ’’經取代烷基π表示前述低複|烷基包含有一或多個下列基如羥基、巯基、烷覲基、卣素、烷氧基、胺基、醯胺基、幾基、環院基、經取代環烷基、雜環，環雜烷基、經取代環雜基、醯基、幾基、芳基、經取代芳基、芳氧基、雜芳基、經取代雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、烷基烯基、烷基炔基、烷基環烷基、烷基環雜烷基、氰基。該等基可附接至低碳數:fe基部份之任何碳原子上。芳氧基”表示-OAr基’其中Ar爲芳基、經取代芳基、雜芳基或經取代雜芳基，如下文定義。 ”胺基，，表示NRR，基，其中R及R’可獨立爲氫、低碳數烷基、經取代低碳數院基、芳基、經取代芳基、雜芳基、或經取代雜芳基（如下文定義）或醯基。土 ”醯胺基”表示-C(〇）NRR，基，其中汉及反，可 /〆 ^』躅互爲氫、/氏碳數烷基、經取代低碳數烷基、芳基、细取技# # > 、、、工取代芳基、雜芳基、經取代雜芳基，如下文定義。 (請先閱讀背面之注意事- --- 項^^!^馬士巧本百〇

_______-11 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規祐1 210X297公釐） 593339 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（9 ) π羧基”表示-C(0)0R基，其中R可獨立爲氫、低碳數烷基、經取代低碳數烷基、芳基、經取代芳基、雜芳基、經取代雜芳基等。 π芳基”或"Αι· ”表示含至少一個芳族環（如苯基或聯苯基）或其中至少一個環爲芳族之複數個縮合環（如1，2,3,4-四氫莕基、莕基、蔥基或菲基）之芳族碳環基。 "經取代芳基”表示視情況經一或多個官能基取代之芳基，如經li素、低碳數烷基、低碳數烷氧基、烷硫基、乙炔、胺基、醯胺基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環、雜芳基、經取雜芳基、硝基、氛基、筑基、續si：胺基等取代。 "雜環"表示含單環（如嗎啉基吡啶基或呋喃基）或複數個縮合環（如莕p比咬基、峻17号基、p奎p林基、嗓p井基或苯幷[b]^塞吩基）且在環中含有至少一個雜原子如N- 0或S之飽和、不飽和或芳族碳環基，其可視情況爲未取代或經例如鹵素、低碳數烷基、低碳數烷氧基、烷硫基、乙炔、胺基、醯胺基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環、雜芳基、經取代雜芳基、硝基、氰基、銃基、磺醯胺基等取代。 "雜芳基π表示其中至少一個雜環爲芳族之雜環。較佳雜芳基爲苯基、經取代苯基、吲哚及經取代吲哚。 "經取代雜芳基"表示視情況以一或多個官能基單或多取代之雜環，官能基如函素、低碳數貌基、低碳數燒氧基、烷硫基、乙炔、胺基、醯胺基、羧基、羥基、芳基、芳氧基、雜環、雜芳基、經取代雜芳基、硝基、氰基、銃基、 - 12- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2l〇X 297公釐）

593339 A7 B7 五、發明説明（10 ) 磺醯胺基等。 "環烷基"表示含3至1 5個碳原子之二價環狀或多環烷基。 "經取代環烷基”表示含一或多個取代基之環烷基，如含鹵素、低碳數烷基、經取取代低碳數烷基、烷氧基、烷硫基、乙炔、芳基、芳氧基、雜環、雜芳基、經取代雜芳基、硝基、氰基、鏡基、績Sf胺基等。可用於本發明治療方法，尤其是可作爲蛋白酶功能之抑制劑之化合物實例列於下表1 : (請先閲讀背面之注意事項

、1T

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 /Γ*. -13- 本纸張尺度適用士國國家標衾（CNS ) Λ4規格（：Μ〇Χ 297公釐） 593339 經濟部中央標擎局員工消費合作社印如衣 A7 B7 五、發明説明（12 ) 9 啕ρ朵 CH2CO Λ ν/\Λ ν 1 PhCH2N 10 啕哚 CO Λτ 1 〇Η 11 苯基 CO κί\η V 〇Η 12 苯基 CO ν/\Λ V 上 OH 13 苯基 ch2co Λ ν/ΧΛ V r〇 sr^r OH 14 口 5|口朵 CO Λ V OH 15 十朵 CH2CO Λ v/V^ V >r^r OH 16 豕基 CO Λ ^ί\Γ OH 17 CH2C0 I X OH 18 口弓j 口朵 CH2CO V OH (請先閱讀背面之注意事項本頁) 訂

-15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2lOX297公漦） 3 3 3 9 ? A7 B7 五、發明説明（13 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29

ν/\Λ V ν

16-

本纸乐尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 593339 A7 B7 五、發明説明（14 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

30 口弓1嗓 CH2CO 31 CH2CO 32 嗓 CH2CO 33 口?ί哚 CH2CO 34 口弓i哚 CH2CO 35 口弓丨口朵 CH2CO 36 啕口朵 CH2CO 37 p?| 口朵 CH2CO 38 卜朵 ch2co 39 口5丨口朵 CH2CO 40 口弓卜朵 CH2CO

-17- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐) ch3 ΟΗ ,α0Η 〇Η Ύ ΟΗ Λ ΟΗ ν ΟΗ ch3 ΟΗ ,α0Η ΟΗ Ύ ΟΗ Ύ ΟΗ Ύ ΟΗ Ύ ΟΗ J . — (請先閲讀背面之注意事項再本百〇

593339 A7 B7 、發明説明（15 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 41 朵 1 CH2CO 42 CH2CO 43 吲哚 CH2CO 44 σ?ί 口朵 CH2CO 45 叫|口朵 CH2CO 46 口朵 CH2CO 47 口弓卜朵 CH2CO 48 蚓哚 CH2CO 49 啕哚 ch2co 50 唢哚 CH2C0

X OH Y OH X OH y OH X OH X OH τ OH X OH X OH τ OH -18- 本纸張尺度適用中國國家標空（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 593339 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印f

593339 A7 B7 五、發明説明（17 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 61 口口朵 CH2CO 62 CH2CO 63 4卜朵 CH2CO 64 吲嗓 CH2CO 65 4卜果 CH2CO 66 小朵 CH2CO 67 令朵 CH2CO 68 啕哚 CH2CO 69 啕哚 ch2co 70 口弓! 口朵 CH2CO v νΑΤ

1 OH 上 OH 上 OH I OH 1 OH 上 OH ch3 yAj^ OH CH3 ν/\Λ OH ch3 OH ch3 sjxn OH -20- 本紙張尺度適用中國國家標宰（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 593339 A7 B7 五、發明説明（18 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 71 CH2CO 72 口弓丨口朵 CH2CO 73 4卜朵 CH2CO 74 W哚 CH2CO 75 4卜朵 CH2CO 76 Μ卜朵 CH2CO 77 叻1嗓 ch2co 78 口弓1 口朵 ch2co 79 ρ朵 ch2co 80 吲嗓 ch2co CH3 H02C\ s/\r

/OH

ch3 ch3

OH

OH 21 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐 ch3

ch3 M ch3 νΛΛ ch3J, ch3 ch3 ch3 ch3

OH

OH (請先閱讀背面之注意事項 %— 5再本頁) 丁 "口 r 593339 A7 B7 五、發明説明（19) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

81 4卜朵 CH2CO >j\r V ch3 Λ OH 82 叻！嗓 CH2CO 上 νΑ/' V j\r OH 83 ，哚 CH2CO -γ0Η V >r\r OH 84 4卜朵 CH2CO β-Ala ν/\Λ V ^/\r OH 85 4卜朵 CO V 1 OH 86 Μ卜朵 ch2co s/ν' V 1 OH 87 沔卜朶 CH2CO Λ \Ζ\Λ ν/\Λ V ,σ0Η OH 88 叼卜朵 CH2C0 Λ ν/\/^ n/V^ V ^cr OH 89 4卜朵 CH2C0 Η 丄 v ηοί OH 90 叫卜朵 CH2C0 β-Ala >s\r V OH (請先閲讀背面之注意事項

-22 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） 593339 A7 B7 五、發明説明（20 經濟部中央標準局員工消費合作社印別各 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101

ΌΗ sj\n

23- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公慶）

HO

HO 11111111111

OH

OH (請先閲讀背面之注意事項

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593339 A7 B7 五、發明説明（21 ) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製

102 叫丨口朵 ch2co ηοί νΛ-Λ OH 103 啕哚 CH2CO fP ^r\r V ηοί OH 104 口? 1 口朵 CH2C0 上 ν/\Λ V /) j\r OH 105 Hh朵 CH2CO β-Ala ^r\r V s/\r OH 106 蚓哚 CH2C0 X V P OH 107 口引哚 CH2CO P sj\r V >j\r OH 108 口弓丨口朵 CH2C0 -γ0Η j\r V r〇 OH 109 口弓卜朵 ch2co ch3 V P OH 110 μ卜朵 ch2co H〇2C\ vAy^ v/X/' V s/'V/' OH 111 叫h朵 CH2CO Val V P OH -24- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項 ---— ，項本頁訂 593339 A7 B7 五、發明説明（22) 經濟部中央標.準局員工消費合作社印裝

112 口引口朵 CH2CO Nva r〇 ^j\r OH 113 CH2CO ν/\Λ n/V" V >j\r OH 114 口弓卜朵 CH2CO V r〇 OH 115 沔丨口朵 CH2CO Ρ ^j\r s/\n V r〇 >j-^r OH 116 CH2CO f% >/\r V >j\r OH 117 十朵 CH2CO β V r〇 OH 118 ㈤哚 CH2CO ^j\r fP V P vTU*' OH 119 口弓卜朵 CH2CO l ^r\n V i OH 120 CH2CO β-Ala sS\r V i OH (請先閱讀背面之注意事項 —1 In 項再本頁訂 —i! 1- - - - - ....... 11--- -25- 冬紙張尺度適用中國國家標注（CNS ) A4規格（210 X 297公釐) 593339 A7 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製

593339 A7 B7 五、發明説明（24 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

130 口弓j 口采 CH2CO 131 ⑷哚 CH2CO 132 爿丨口朵 CH2CO 133 叫i 口朵 ch2co 134 口5丨口朵 ch2co 135 口弓丨哚 CH2CO 136 CH2CO 137 ⑷哚 CH2CO 138 沔1 口朵 CH2CO 139 叫卜朵 CH2CO

-27 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐）

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Η〇2〇^ Η〇2〇> Η〇2〇 Η〇2〇 Η〇2〇

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593339 A7 B7 五、發明説明（25 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 140 口?卜朵 CH2CO 141 口弓卜朵 CH2CO 142 十朵 CH2CO 143 W 口朵 CH2CO 144 沔1 口朵 CH2CO 145 ⑼哚 CH2CO 146 CH2CO 147 口弓丨口朵 CH2CO 148 吲哚 CH2CO 149 叫1 i CH2CO 150 41嗓 CH2CO H02C\ sj\r H 上 β-Ala y

4,4.·ΒΡΑ

-28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（：M0X 297公釐）

H〇2C ho2c ho2c ho2c ho2c ho2c

HO2C 1 ^/ΧΛ111 co2h C02Hv/C^

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本頁) 593339 A7 B7 五、發明説明（26 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161

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29- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） c〇2h

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OH 593339 A7 B7 五、發明説明（27 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 162 口弓卜朵 CH2CO 163 口弓卜朵 CH2CO fP 164 口?卜朵 CH2CO 165 叫j 口朵 CH2CO >/\r fP 167 叫1 口朵 CH2CO ν/\Λ 168 口弓1嗓 CH2CO 上 169 Μ卜朵 CH2CO fx 170 叫卜朵 CH2CO ν/\Λ jT|

co2h OH ^r\r V co2h OH Ύ OH ν/\Λ V Ύ OH νΛΛ V Ύ OH yj\r V Ύ OH ν/\Λ v l OH yj\r V l OH (請先閲讀背面之注意事項

本頁、tr

-30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（；M0)< 297公漦） 3 3 39 ? A7 B7 五、發明説明（28 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製

171 口弓j哚 CH2C0 1 OH 172 CH2C0 •j\r X OH 173 Hh朵 CH2C0 >j\r X OH 174 叫丨口朵 CH2C0 fP >r\r >J\T V OH 175 叫1 口朵 CH2C0 V vAy' OH 176 十朵 CH2C0 fP ^r\r V H〇2C\ OH 177 口弓1 口朵 CH2C0 *j\r >j\r V C〇2H ^r\r OH 178 口弓卜朵 CH2C0 ^\r V i OH -31 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）請先閲讀背面意事項

頁 593339 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（29 )

179 啕哚 CH2CO >/\r OH 180 口弓丨嗓 CH2C〇 <j\r H〇2C\ >jxt OH 181 十朵 ch2co C〇2H OH 182 口弓卜朵 CH2CO I ^r\r― OH Ό 183 十朵 CH2CO Η 上 Η 丄 1 OH 184 沔丨口朵 CH2CO Η v 上 OH 185 口? 1 口朵 CH2CO ,00 V h2noc. OH 186 沔h朵 CH2CO Π κί\Γ I CONH2 I OH V / Λ1 1 X (請先閲讀背面之注意事項 11- - -I · 項^ip:^本頁) 訂 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 593339 A7 B7 五、發明説明（30 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 187 CH2CO 188 CH2CO 189 钏嘴 CH2CO 190 ρ朵 CH2CO 191 口弓1 口朵 CH2CO 192 ρ弓丨嗓 CH2CO 193 口弓1 口朵 ch2co

OH OH OH OH OH OH OH 請、先I 閱 1 讀背1 面 | 5 ί

事1 項 I

33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 593339 A7 B7 五、發明説明（31 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 194 CH2CO 195 ，哚 CH2CO 1% 口弓1 口朵 CH2CO 197 ch2co 198 卜朵 CH2CO 199 口朵 CH2CO 200 口餌口朵 ch2co 201 CH2CO H〇2C\

OH H〇2C\ HN 丫 NH2 A >j\r

34- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐）

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▼項JR 、y5

593339 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（32 )

202 口弓丨口朵 CH2CO V OH 203 口引哚 CH2CO >/\r X 人 X OH 204 CH2CO ν/\Λ V OH 205 CH2CO >/\r ^\r hn^nh2 NH OH 206 叫丨哚 CH2CO sj^r l >j\r OH 207 叫h朵 CH2CO 卜丙氨酸 ρ-丙氨酸 OH (請先閲讀背面之注意事項馬本頁)

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-35- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 593339 33 、發明説明（上述化合物可用以治療礙、，如抗增殖性疾病、癌症、/炎。=調節之疾病及障以治療抗增殖性障礙及發二本發明組合物用發炎疾病。讀本發明化合物用以治療本發明化合可用以治療嚼乳類中礙。忠白酶體調節之障

本發明化合物可获iI

a人猎可對20S蛋白酶體供廊五』化合物之任何投藥方式對哺乳類預防,Hr少—種本發明用〈投藥方式非限制性實例包本 …生投藥。可經皮、直腸鼻内或任何其 =腸道、皮膚、投藥方式。一π心知足通罝醫藥组合物本發明組合物可以適宜醫藥臣一訂用投藥方式決㉟一— 土技栾。資樂劑型將大受所 -。邊藥背丨j型表示如得本抑制劑或又含—或多龍y二 L本發明寫蛋白酶體粉末等項。h I樂賦形劑之鍵劑、膠囊、液體及投藥方U ❸。賦形劑及佐劑之選擇亦大受所選用之 %f 供投與本發明纽合物。…戈者和了辟有多種配方及載劑少最终化"物所逼用〈投藥方式最終將指定醫藥劑型 ;广:广21及組合物（包含本發明之20S蛋白酶體抑制背J ) °例如本菸昍彳卜人仏 , ^匕口物以粉末、錠劑、膠囊、膏劑、飲别可口服投藥之溶液、懸浮液及亂液或丸劑、劑藥亦可周即食物中或於飲水中口服進行内部投藥。内部投 u使用包含添加劑如界面活性劑或澱粉包衣膠囊之經释出配方或使用快速釋出配方如冷康乾燥之速溶錠劑而完本紙浪尺度適用 -36- (〔奶）/\4規格（2】0乂297公着） 593339 經濟部中央標·準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（34) 成。皮膚投藥係以例如呈經皮貼敷片、噴霧或涛灌 (pouring-on)及點塗（spotting-on)方式投藥。非經皮投藥係以例如呈注射劑（肌肉内、皮下、靜脈内、腹膜内）或藉植入投藥。併有本發明20S蛋白酶體抑制劑適宜醫藥劑型包含（但不限於）溶液如注射溶液、口服溶液、稀釋後口服之濃縮液、用於皮膚上或人體穴腔中之溶液，澆灌及點塗配方、凝膠；口服或皮膚投藥及注射用之乳液及懸浮液；半固體製劑；活性成分併於乳霜基劑或水包油或油包水乳液基劑之配方；固體製劑如粉末、預混合物或濃縮物、顆粒、粒片、錠劑、丸粒、膠囊；氣溶膠及吸入劑，及含活性化合物之成型物件。溶液之醫藥劑型可藉靜脈内、肌肉内及皮下注射。注射溶液之製備係使活性化合物溶於適宜溶劑中，及若需要，添加佐劑如溶解劑、酸、鹼、緩衝鹽、抗氧化劑及保存劑。溶液經殺菌過濾並排水。或者，包含本發明組合物之溶液可口服投藥。本發明組合物之濃縮物較好僅在使濃縮物稀釋至投藥濃度後口服投藥。口服’谷液及濃縮液如上述製備注射浴液般製備。用於皮膚上之溶液係逐滴塗佈、刷塗、檫塗、濺塗或噴霧施用。該等溶液如上述製備注射溶液般製備。凝膠係塗佈至皮膚上，或導入人體腔穴中。凝膠之製備係使以上述製備注射溶射溶液所述般製備之溶液以可形成乳霜狀濃度之透明物質量之增稠劑處理，或以本技藝悉知之 ____—. _______-37- 本纸張尺度辦巾ns家縣（eNS) ‘〜祕（21GX 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項本頁) 訂

593339 A7 __—______B7 、五 '發明説明（35 ) 任何其他方式製備。兜灌及點塗配方係倒於或濺噴於皮膚有限面積上，使活性化合物穿透皮膚並全身性作用。澆灌及點塗配方之製備係將活性化合物溶解、懸浮或乳化劑皮膚可忍受之適宜溶劑或;4劑混合物中。若適宜，可添加其他佐劑如著色劑、再吸收促進劑、抗氧化劑、光安定劑及膠黏劑。乳液可以口服、皮膚或呈注射態投藥。乳液爲油包水型或水包油型。其製備係將2〇S蛋白酶體抑制劑溶解於疏水相或親水相中，並藉適宜佐劑乳化劑、著色劑、再吸收促進劑、保存劑、抗氧化劑、光色定劑及增進黏度之物質之助，使該相與另一相之溶劑均質化。竑浮液可口服、皮膚或呈注射態投藥。其可藉由將活性化合物懸浮於液體中，若需要則進一步添加佐劑如溼潤劑、著色劑、再吸收促進劑、保存劑、抗氧化劑及光安& 劑。义經濟部中央標準局員工消費合作社印製本發明醫藥組合物可包含一或多種呈醫藥可接受添如劑態之添加劑。可用之添加劑包含溶劑、溶解劑、保存劑、增稍劑、澄潤劑、著色劑、再吸收促進劑、抗氧化劑、光安定劑、膠黏劑、增進黏度物質、塡充劑、矯味劑、潤滑劑及本技藝悉知之任何其他醫藥組合物添加劑。添加劑可爲溶劑如水、醇類如乙醇、丁醇、罕醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、N -甲基-吡咯烷酮、烷醇類、甘油、芳族醇類如芊醇、苯基乙醇、苯氧乙醇、酯類如乙酸乙醋、乙酸丁酯、苯甲酸芊酯、醚類如烷二醇烷醚如二而 ____ -38- 本纸&尺度適用巾國國家標準（CNS ) A4規格（2[〇:< 297公慶）五、發明説明（36 經濟部中央標準局員工消費合作社印製二醇單甲醚、二乙二醇酉同、芳族及/或脂族烴、植二^類如丙_、甲基乙基胺、Ν-甲基吡咯烷酮、/ 5 、油、DMF、二甲基乙醯雜環己烷。，甲基氧基伸曱基-l，3-二氧下列添加劑可使用作爲本發明组合物化合物於主要溶劑中之宏、 U ·增強活性聚乙晞基吡咯烷酮、聚氧，見例馬糖醇肝醋。 …基化良麻油、聚氧乙基化山梨可用之保存劑爲例如苄醇、二及正丁醇。 —軋丁和、對-羥基苯甲酸酯可用之増稠劑包含無機増稠劑如土硬脂酸銘，有機增稠劑如纖維素衍生物、聚二= 聚物、丙烯酸酯及甲基丙烯酸酯。畔及 :用 ' 本發月商藥釗型之其他液體爲例如均質溶劑、溶劑混石物及通常爲面活性劑之溼潤劑。月可用（著色劑爲非毒性且可溶解或懸浮之所有著色劑。可用足再吸收促進劑爲DMS0、塗展油如 -、壬酸二丙二醇黯、秒油、脂嶋、三甘油:二= 醇0 可用乙抗氧化劑爲亞硫酸鹽或偏亞硫酸氫鹽如偏亞硫酸气鉀、抗壞血酸、丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、生育酚，可用之光安定劑爲novantisolic acid。可用之膠黏劑包含纖維素衍生物、澱粉衍生物、聚丙缔於醋、天然聚合物如藻朊酸鹽、明膠。 -39- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2丨0X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項

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593339 A7 B7 五、發明説明（37 可用之礼化劑包含非離子性界面活性劑如聚氧乙基化蓖麻油、氧乙缔化山梨糖醇酐單油酸酯、山梨糖醇酐單硬脂酸知、甘油單硬脂酸醋、聚氧乙基硬脂酸酯、烷基酚聚二醇醚；兩性界面活性劑如月桂基-亞胺基二丙酸二鈉或卵磷脂，·陰離子性界面活性劑如月桂基硫酸鈉、脂肪醇醚硫酸酯、單/二烷基聚二醇醚正磷酸酯之單乙醇胺鹽；陽離子界面活性劑如氯化鯨蠟基三曱基銨。可安足&療性礼液之可用之增加黏度物質包含幾甲基纖維素甲基纖維素及其他纖維素及澱粉衍生物、聚丙晞酸酯、藻朊酸鹽、明膠、阿拉伯f、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基乙烯基醚及馬來酸酐之共聚物，聚乙二醇蠟、膠體氧化矽或前述物質之混合物。爲了製備固體醫藥劑型，活性化合物與適宜添加劑混合，若需要，添加佐劑，且視需要調配該混合物。生理可接受性固體惰性添加劑實例包含氯化鈉、碳酸鹽如碳酸鈣、磷 fe氫鹽、氧化鋁、氧化矽、黏土、沈澱或膠體二氧化矽及鱗酸鹽。固體有機添加劑實例包含糖類、纖維素、食品如奶知動物粉、毅粉及粗設粉及澱粉。其他適宜添加劑包含潤滑劑及滑動劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、膨潤土；崩解劑如澱粉或交聯聚乙烯吡咯烷酮；黏合劑如澱粉、明膠或直鏈聚乙晞吡咯烷酮：及乾黏合劑如微晶纖維素。本文所述醫藥劑型中，活性化合物可呈與至少一種其他 20S蛋白酶體抑制劑之混合物態存在。或者或此外，本發明醫藥劑型除了至少一種20S蛋白酶體抑制劑以外，包含任何 40- 木纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項

1 I- ! - I 本百C 口經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593339 A7 B7 五、發明説明（ 38 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝可治療任何已知須同時投藥但不產生無法接受不利效果之疾病或障礙之醫藥化合物。治療2 0 S蛋白酶體^固y 士 —、π + 旦、一 "周即I疾病及卩早礙之方法包括投與有效里〈選用化合物或其組合物，較妤分散於醫藥劑型中。本發明可乂即使用〈醫藥劑型含有活性化合物濃度自10 ppm 至20重量％，較好自〇]至1〇重量％。投藥前予以稀釋之發月邊藥劑型較好含有活性化合物·自〇·5至9〇重量。/。，且較好自5至5一0重量％。通常，證明對投藥者每天每公斤體重投與約〇·〇1笔克至約1〇〇毫克活性化合物之量可有利地達有效結果。〇。本發明20S蛋白酶體抑制劑之醫藥劑型之投藥量及次數二可由熟悉本技藝者視投藥途徑、病患年齡及病況等因，易^決定者。該等劑量單位對急性或慢性病每日可投藥工人依據本發明投與本發明化合物時，預期不具有無法接受之藥理效果。 … 含本發明20 S蛋白酶體抑制劑之醫藥劑型係依製藥之習知技術製得，包含研磨、混合、造粒及視需要壓縮成錠劑；或研厝2混合及填充成硬明膠膠囊態。使用液體添加劑時製剡吓王糖漿、甘酏劑、乳液或水性或非水性懸浮液。此種液體配方可直接以Ρ.〇.投藥或填入款明膠膠囊中。雖然本文組合物可如上述投藥，但較好以口服投與本文化合物達成本發明方法。當選擇口服投藥途徑時，須要較大量活性劑以產生與以較小劑量非經腸道所得相同之效果。依據良好臨床實務，較好在可產生有效治療結果但不引起 (請先閱讀背面之注意事項頁)

訂

- 41 - 本纸張尺度適用巾咖家標準（CNS ) Α4規格（2iQx 297公釐 593339 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 A7 B7 五、發明説明（39 ) 任何有害副作用之濃度投與本發明方法之化合物。本發明組合物亦具非治療利用性。本發明組合物可作爲 20S蛋白酶體抑制劑分析之分析標準。實例1 可用於本發明治療方法之化合物係藉習知有機化學方法製備。描述該等化合物合成技藝之參考文獻包含Bodansk/s之 "胜肽合成實務n，Springer-Verlag，·第一版，1984 ; ”有機合成保護基"，第2版，John Wiley and Sons，紐約，1 991。所有胜肽偶合係在室溫溫和及恆定攪拌動下完成。胜肽偶合及脱保護係使用對胺之凱瑟（Kaiser)測試追蹤。Xaa表示可購得且預先附著至MBHA樹脂之任何市售胺基酸。Yaa及Zaa 表示任何市售胺基酸。本發明化合物可以在下列一般程序中以固相胜肽合成 (SPPS)製備：稱取Xaa-MBHA-樹脂並移入配置多孔濾器上之針筒中。樹脂於DMF中預膨潤，接著藉30%哌啶於DMF中處理3 0分鐘移除N -端保護基。脱保護之樹脂以DMF洗5 次，以MeOH洗5次再以DMF洗5次。接著使用Yaa於含3當量各Yaa、碳二醯亞胺偶合劑及H0BT(羥基苯幷三唑）之DMF 溶液使胺基酸Yaa偶合至該脱保護樹脂上。須依序以Yaa溶液進行偶合以達到通過凱瑟測試之偶合效率。重複N -端基脱保護及Yaa偶合步驟以偶合第3個胺基酸Zaa。最終偶合步驟在DMF中使用酮酸、碳二醯亞胺及H0BT，並重複此步驟直至通過飢瑟測試。在抽眞空下使樹脂上完成之胜肽序列乾燥至少6小時，接著以95/5三氟乙酸/水或新配製之90%三 -42- 本纸張尺度適用中國國家標这（CNS ) A4規格（2;0X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項本頁) n^n*1_= tm IK— I —gi I—......I · .I--丁、\'5 W3339 A7 —____ _ B7 五、發明説明（40 ) 氟乙酸、3%乙二硫醇、5%硫代笨甲醚及2%苯甲醚之溶液處理而斷裂。斷裂產物藉自水中柬乾或分散於乙醚中而回收。以TLC評估產物純度。選擇之胜肽樣品以lH NMR檢查以確認產物相同性。實例2 此貫例中，依據貫例1之方法製備（3，_吲哚丙酮酸）_N_聯苯基苯胺_D-Leu-Asp-OH。稱取Fmoc-N-AsP(〇t-Bu)-MBHA-樹脂（2 〇毫克）並移至配置有多孔濾器之針筒中。樹脂於1毫升DMF中預膨潤3 〇分鐘。，在DMF中以20%哌啶處理3 0分鐘移移Fm〇c(芴基甲氧羰基）保濩基。移除脱保i曼溶液。脱保護之樹脂以DMF洗5次，以 MeOH洗5次再以DMF洗5次。使用Fmoc-D-Leu-〇H(3當量）於含碳二醯亞胺（3當量）及HOBT(羥基苯并三唑）（3當量） ^#DMF溶液，將Fmoc-D-Leu-OH偶合至脱保護樹脂（1當量）上。須以Fmoc-D-Leu-OIi溶液進行第2次或第3次偶合以達成通過凱瑟測試之偶合效率。重複Fmoc脱保護及胺基酸偶合步驟以偶合Fmoc-N-(4,4-聯苯基）苯胺。最終偶合步驟使用於DMF中之巧哚丙酮酸（5當量）、二異丙基碳二醯亞胺（5 當量）及H〇BT(5當量），並重複此步驟直至偶合通過凱瑟測試。在抽眞空下使樹脂上完成之胜肽序列乾燥至少6小時，再以1宅升95/5三氟乙酸/水或新配製之90%三氟乙酸、5 % 硫代苯甲醚、3 %乙二硫醇及2 %苯甲醚之溶液處理2.5小時而斷裂。藉由自水中凍乾或自乙醚粉碎而回收斷裂產物。以T L C評估產物純度。 lH NMR(400 MHz? d6-DMSO) ： ^ 6.5-7.7(m, 14H), 4.5(m, ____-43- 本紙ft尺度適用令國( CNS ) /U規格（210 G 297公釐i (請先閱讀背面之注意事項

經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 593339 經濟部中央標擎局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（41 ) 1H)，4.1(m，2H)，3.4(m，2H)，3(m，H)，2.7(m，1H)，l.l-1.5(m， 3H)，0.5-0.9(m，6H)。實例3 此實例中，使用Chiron Mimotopes Pin技術製備（3f-口5卜朵丙 _酸）·!^-聯苯基丙氣酸-D-Leu-Asp-OH。於800微升偶合溶液（100 mM胺基酸、100 mM DIC、10 mM DMAP、1/4 DMF/CH2C12)中偶合各針（pin) 2 小時，使第一個胺基酸殘基Xaa接至4-(羥曱基）苯氧乙醯胺處理樹脂針 (5.7微莫耳/針）上。針接著以DNF洗5分鐘，以MeOH洗5分鐘2次再以空氣乾燥1 5分鐘。以800微升20%哌啶之DMF使 Fmoc基脱保護3 0分鐘。重複針洗滌（DMF 1次，MeOH 2 次，空氣乾燥1 5分鐘）。偶合第2個胺基酸殘基Yaa(100 mM Yaa，100 mM DIC，100 mM HOBT及溴酚藍指示劑，於DMF 中）直至針表面上不再附著藍色。若需要則重複偶合。再重複清洗循環及Fmoc脱保護洗滌。藉重複用以偶合Yaa之偶合及洗滌程序，若需要則重複偶合而偶合次一個胺基酸Zaa。在DMF中以1 5當量100 mM，15當量DIC、15當量HOBT及溴酚藍指示劑偶合最後一個殘基㈣哚丙酮酸。若需要則重複偶合。最後洗滌後，自擔體移除橙色針並以1.5毫升新配製之90%三氟乙酸、5 %硫代苯甲醚、3 %乙二硫醇及2 %苯甲醚溶液於個別2毫升塑膠離心管中斷裂2.5小時。自離心管移除針並使混合物在氮氣中吹至幾乎乾燥。以Et20弄碎並滴於各管中。每管重複此步驟3次。收集沈澱之胜肽、凍乾、稱重並使用。以TLC評估產物純度。同時點上初產物及實例1所得之明確樣品並檢查。 -44 - 本纸張尺度適用中國國家標李（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閣讀背面之注意事項

訂

3 3 3 9 A7 ________ B7 五、發明説明(42 )~ ^~~ - 實例4 如下測試依實例丨方法製備之本發明化合物。蛋白酶體 20S機能生次單元（亦稱爲多機能性蛋白酶複合物）依據已公佈芩方法（Wilk S·及〇rl〇wski，Μ 1983, 40 482 J. Neur〇chem) 自牛腦純化至均質。藉使基質胜肽琥珀醯基-白氨酸-白氨酸-纈氨酸-酪氨酸-7—胺基_4_甲基香豆素斷裂後增加螢光性而測量複合物之胰凝乳朊酶活性。·標準體外分析由2微克 20S蛋白酶體、〇1至1〇〇微克/毫升蛋白酶體抑制劑於2〇〇微升含0·l%十二烷基硫酸鈉之50InMHEPES(pH7.5)所構成。藉添加5 0 " M氟胜肽基質起始蛋白分解反應並在3 7°C進行1 5 分鐘。藉添加100微升1〇〇 mM乙酸鹽缓衝液（pH 4.0)終止反應。蛋白分解速率與螢光分光計（EX 370 nm，EM 43〇 nm)測得之釋出之胺甲基香豆素成正比。 20S蛋白酶體抑制劑分析結果列於表〗j。

表II (請先閲讀背面之注意事項

訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製對20S蛋白酶體抑制似胰凝乳朊酶活性之ICso 化合物# IC5〇 μ g/mL 化合物# IC50/乂 g/mL 1 10 105 >10 2 10 106 >10 3 >10 107 >10 4 10 108 >10 5 >10 109 >10 6 >10 110 >10 7 >10 111 >10 8 >10 113 >10 9 >10 1 14 10 10 >10 115 10 11 >10 1 16 10

k. -45- 本紙張尺度剌ΤΕΙϋ家縣（CNS ) A4規格（2iQx 297公錄） 593339 A7 B7 五、發明説明（43 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製化合物办 Ι(^50μ g/mL 化合物枯 105〇μ g/mL 12 >10 117 10 13 >10 118 10 14 >10 119 >10 15 10 120 >10 16 10 121 >10 17 >10 122 >10 18 >10 123 >10 19 >10 124 >10 20 >10 125 >10 21 >10 126 >10 22 >10 •127 >10 23 >10 128 >10 24 >10 129 10 25 >10 130 10 26 >10 131 10 27 >10 132 10 28 >10 1 j j 10 29 >10 - 134 >10 30 >10 135 >10 31 >10 136 >10 32 >10 137 >10 Ο 〇 J J >10 138 >10 34 >10 139 >10 35 >10 140 >10 36 >10 141 >10 37 >10 142 >10 38 >10 143 >10 39 >10 144 10 40 >10 145 10 41 >10 146 10 42 >10 147 10 43 >10 148 10 44 >10 149 10 45 >10 150 >10 46 >10 151 >10 47 >10 152 >10 48 >10 153 >10 49 >10 154 >10 50 >10 155 >10 51 >10 156 >10 52 >10 157 >10 53 >10 158 >10 54 >10 159 >10 55 >10 160 >10 (請先閲讀背面之注意事項本頁) -46- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 593339 A7 B7 五、發明説明（44 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印制八化合物# lC5〇yu g/mL 化合物為 IC5〇^ g/mL 56 >10 161 >10 57 >10 162 >10 58 >10 163 >10 59 >10 164 >10 60 >10 165 >10 61 >10 166 >10 62 >10 167 >10 63 >10 168 >10 64 >10 169 >10 65 >10 170 >10 66 >10 171 >10 67 >10 172 >10 68 >10 173 >10 69 >10 174 5 70 >10 175 >10 71 >10 176 1 72 >10 177 10 73 >10 一 178 >10 74 >10 179 >10 75 >10 180 5 76 >10 181 10 77 >10 182 >10 78 >10 183 10 79 >10 184 >10 80 >10 185 5 81 >10 186 >10 82 >10 187 >10 83 >10 188 5 84 >10 189 >10 85 >10 190 3 86 >10 191 3 87 >10 192 ο J 88 >10 193 >10 89 >10 194 >10 90 >10 195 >10 91 >10 196 >10 92 >10 197 10 93 >10 198 >10 94 >10 199 >10 95 >10 200 >10 96 >10 201 >10 97 >10 202 >10 98 >10 203 >10 99 >10 204 >10 -47- 本纸疮尺度適用士國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項^一一^舄本頁) 1¾ 、1Τ

593339 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（45 ) 合物# 丄C50/乂 g/mL 化合物# TC,〇/^g/mL 100 — >τ〇 ' 205- ——>Γ0 101 >10 206 >10 103 >10 207 10 104 >10 亦如下測試依實例丨方法製備之本發明化合物。蛋白酶體 20S機能性次單元（亦稱爲多機能性蛋白酶複合物）依據已公佈之方法（Wilk S·及〇rl〇wski，Μ 1983，40 842 J. Neurochem) 自牛腦純化至均質。藉使基質胜肽CBZ-D-Ala-Leu-Arg-(7-胺基-4-甲基香旦素斷裂後增加螢光性而測量複合物胰蛋白酶活性。標準體外分析由2微克2〇s蛋白酶體、〇 iSlOO微克 /毫升蛋白酶體抑制劑於200微立含〇.丨％十二烷基硫酸鈉之 50 mM HEPES(PH 7.5)所構成。藉添加5〇 mM氟胜肽基質起始蛋白分解反應並在37。〇進行〗5分鐘。藉添加1〇〇微升1〇〇 mM乙鹽緩衝液（pH 4. 〇)終止反應。蛋白分解速率與螢光分光計（EX 370 nm，EM 430 nm)測得之釋出之胺曱基香豆素成正比。測試化合物丨-2〇7之胰蛋白酶活性抑制作用並在 > 工〇微克/毫升具有作爲抑制劑活性ΰ 實例5 亦如下測試依實例丨方法製備之本發明化合物。蛋白酶體 20S機能性次單兀（亦稱爲多機能性蛋白酶複合物）依據已公佈心方法（Wilk S·及〇rl〇wski, Μ 1983, 40 842 J. Neurochem) 自牛腦純化至均質°藉使基質胜肽CBZ D-Ala-Leu-Arg-(7-胺基-4-甲基香豆素斷裂後增加螢光性而測量複合物胰蛋白酶活性。標準體外分析由2 〇微克2〇s蛋白酶體、〇.丨至i 〇〇微克/ 宅升蛋白酶體抑制劑於2〇〇微升含〇丨％十二烷基硫酸鈉之5〇 -_ ___-48- 本紙張尺度適财_家標準（CNS ) M規格niQX297公慶） (請先閲讀背面之注意事項本頁)

593339 A7 B7 五、發明説明（46 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 11^1^?£3(?^^.5)所構成。藉添加5〇1111^氟胜肽基質起始蛋白分解反應並在37X：進行15分鐘。藉添加1〇〇微升l〇〇mM 乙酸鹽緩衝液（pH 4.0)終止反應。蛋白分解速率與螢光分光計（EX 370 nm，EM 430 nm)測得之釋出之胺甲基香豆素成正比。測疋化合物1-207之胰蛋白酶活性抑制作用並在>1〇微克 /愛升具有作爲抑制劑活性。實例6 亦如下測試依實例i方法製備之本發明化合物。蛋白酶體 20S機旎性次單兀（亦稱爲多機能性蛋白酶複合物）依據已公佈〈万法（Wilk S.及 Odowsla，1^1983, 40 842 J· Neurochem) 自牛腦純化至均質。藉使基質胜肽CBZ_D_AU_Leu_Glu_(7_ 胺基-4-甲基香豆素）斷裂後增加螢光性而測量複合物胰蛋白 S每’舌I生。“準體外分析由2微克2〇s蛋白酶體、〇. 1至工⑼微克 /毛升蛋白酶體抑制劑於2〇〇微升含〇. 1 %十二烷基硫酸鈉之 5〇 mM HEPES(pH 7.5)所構成。藉添加5〇 mM氟胜肽基質起始蛋白分解反應並在37。(：進行15分鐘。藉添加〗毫升1〇〇 mM 乙酸鹽緩衝液（pH 4.0)終止反應。蛋白分解速率與螢光分光。十（EX 〇70 nm，EM 43 0 nm)測得之釋出之胺甲基香豆素成正比"、彳減化合物1-207在>10微克/毫升具有胜肽穀氨基活性抑制作用。化合物190在5微克/毫升具活性。

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Claims

523332—~~ $1Π01002號專利申請案中文17請專利範圍替換本(93年4月) 8 8 8 8 A B c D d

六、申請專利範圍一種下式之化合物

其中 X2為Ar-X3，其中χ3為-c=0或_CH2CO-，及其中Ar為苯基或㈣哚基；RAR2各獨立選自^Ala，Val，氫、1β4 個碳直鏈及分支烷基、丨_4個碳直鏈及分支經取代烷基’其中烷基選擇性經羥基、羧基、環己基、吡啶_ 3 _ 基、萘-2 -基、苯基或經取代苯基所取代，其中苯基選擇性經經基或苯基取代； χι係選自羥基及 ^3

X 4 其中： 1 - 4個碳直鏈及分支烷基、1 - 4個碳 Χ4為輕基；及 R3係 /3 -Ala，氫本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 593339 8 8 8-A B c D 六、申請專利範圍直鏈及分支經取代烷基或苯基，其中烷基選擇性經羥基、胺基、醯胺基、羧基、1 - Η -咪唑-4 -基、吡啶-3 -基、呱尼定基（quanidinyl)、噻唑-4 -基、苯基或經取代苯基所取代，其中苯基選擇性經輕基或苯基取代。 2 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中Ri係選自1_4個竣之分支烷基及1 - 4個碳之直鏈經取代烷基。 3 ·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中又3係-Ch2c(〇)- 及1^為異丁基。 4 ·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中a Γ為吲哚基，Ri 為異丁基’及R3為經羧基取代之烷基。 5.根據申請專利範圍第1項之化合物，其中Ar為苯基、R2 為經苯基取代之苯基，Rl為異丁基，R3為經羧基取代之烷基。 6·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中Αγ為吲哚基， X3為-CH2C(0)- ’ &為異丁烷及經羧基取代之烷基。 7· —種用於抑制2 0 S蛋白酶體活性之醫藥組合物，其包括一治療有效量之根據申請專利範圍第1項之化合物。 δ·根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其中治療有效量自約0.001至約100毫克/哺乳類公斤體重。 9· 一種用於抑制2 〇 S蛋白酶體活性之醫藥組合物，其包括根據申請專利範圍第丨項之化合物及一或多種醫藥賦形劑。 10·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係呈溶液態。 " 593339 8 8 8 8 AB c D 申請專利範圍 11.根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係呈錠劑態。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)