UA64710C2 - Aqueous solution of polymerized hemoglobin (variants), method for its manufacture (variants) and method of infusion - Google Patents
Aqueous solution of polymerized hemoglobin (variants), method for its manufacture (variants) and method of infusion Download PDFInfo
- Publication number
- UA64710C2 UA64710C2 UA98095067A UA98095067A UA64710C2 UA 64710 C2 UA64710 C2 UA 64710C2 UA 98095067 A UA98095067 A UA 98095067A UA 98095067 A UA98095067 A UA 98095067A UA 64710 C2 UA64710 C2 UA 64710C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- hemoglobin
- solution
- approximately
- pyridoxylated
- content
- Prior art date
Links
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims abstract description 213
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims abstract description 213
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 title claims description 22
- 238000001802 infusion Methods 0.000 title claims 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 205
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 43
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 43
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 20
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 20
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 20
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- 108010003320 Carboxyhemoglobin Proteins 0.000 claims description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 15
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 14
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 14
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 claims description 12
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 11
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 10
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 8
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108010064719 Oxyhemoglobins Proteins 0.000 claims description 7
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 claims description 5
- 238000007872 degassing Methods 0.000 claims description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 claims description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 4
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010076770 hemoglobin polymer Proteins 0.000 claims 12
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 claims 9
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims 3
- 230000001706 oxygenating effect Effects 0.000 claims 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 2
- 230000003635 deoxygenating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 41
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 10
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 9
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 9
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 8
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 8
- 108010001708 stroma free hemoglobin Proteins 0.000 description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 7
- INGWEZCOABYORO-UHFFFAOYSA-N 2-(furan-2-yl)-7-methyl-1h-1,8-naphthyridin-4-one Chemical compound N=1C2=NC(C)=CC=C2C(O)=CC=1C1=CC=CO1 INGWEZCOABYORO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 239000004696 Poly ether ether ketone Substances 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 108010002255 deoxyhemoglobin Proteins 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 229920002530 polyetherether ketone Polymers 0.000 description 6
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 5
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 4
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 3
- -1 for example Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 201000001505 hemoglobinuria Diseases 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010047139 Vasoconstriction Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 2
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 2
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- QXNQBFTWZZTGHQ-UHFFFAOYSA-N 12beta-O-Acetyl-coleon Z Natural products CC1CC11C(=O)C(C(OC(C)=O)C(O)C2C3(CCC(=C)C2=C)C)=C3C(=O)C1OC(C)=O QXNQBFTWZZTGHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PREOBXYMXLETCA-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-carboxyphenoxy)-4-oxobutanoyl]oxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1OC(=O)CCC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O PREOBXYMXLETCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004731 Acer pseudoplatanus Species 0.000 description 1
- 235000002754 Acer pseudoplatanus Nutrition 0.000 description 1
- 238000012371 Aseptic Filling Methods 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000002989 Euphorbia neriifolia Species 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000006485 Platanus occidentalis Nutrition 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 1
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 241000276424 Xiphophorus Species 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 229940021013 electrolyte solution Drugs 0.000 description 1
- 210000003617 erythrocyte membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002146 exchange transfusion Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000004931 filters and membranes Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 208000018875 hypoxemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000005977 kidney dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N n-(9,10-dioxoanthracen-1-yl)-4-[4-[[4-[4-[(9,10-dioxoanthracen-1-yl)carbamoyl]phenyl]phenyl]diazenyl]phenyl]benzamide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1N=NC(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC2=C1C(=O)C1=CC=CC=C1C2=O AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002926 oxygen Chemical class 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 238000012859 sterile filling Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/41—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- A61K38/42—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Surgery (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Цей винахід має відношення до способів та апаратів для одержання еритроцитарних замінних продуктів, наприклад, гемоглобінових продуктів. Додатково, він має відношення до безклітинного еритроцитарного замінника, до складу якого входить, по суті, вільний від тетрамерів, структурований, полімеризований, піридоксильований гемоглобіновий розчин, вільний від домішок, які мають відношення до строми.
Опис знаного рівня техніки
Впродовж ряду років банки крові забезпечують постачання цільної крові для поповнення крововтрати під час хірургічного втручання внаслідок травми або у інших ситуаціях. Однак, цільна кров, одержана від людей- донорів, є непридатною для цілого ряду варіантів використання. Зокрема, використання цільної крові є проблематичним внаслідок потреби у донорі з певною групою крові, проблем, пов'язаних зі стабільністю та строком придатності, а також токсичністю, спричиненою вірусами та іншими домішками. Згадані проблеми особливо загострюються за надзвичайних обставин, наприклад, у разі використання крові військовими.
Внаслідок цього, багато зусиль було присвячено розробці замінників цільної крові, одержаної від людей - донорів. Наслідки цих розробок втілились у різноманітних модифікаціях крові, одержаної з різних джерел: від людей або інших ссавців. У цій галузі техніки відомо, що гемоглобін, вільний від строми, є здатним до транспортування кисню та оборотного зв'язування кисню (або ліганду). Оскільки проблеми токсичності виключають його використання, як замінника крові, гемоглобін, вільний від строми, потребує подальшого модифікування для перетворення його на нетоксичний, придатний до застосування фармацевтичний продукт.
До цих модифікацій належать наведені далі: (1) повне або, по суті, повне позбавлення гемоглобіну від строми та домішок, які мають відношення до строми; (2) піридоксилювання; (3) полімеризація або структурування (зшивання); (4) видалення тетрамеру; та (5) модифікування монооксидом вуглецю або іншими лігандами.
Однак, незважаючи на здатність до перенесення кисню у кількостях, достатніх для підтримання життєдіяльності, згадані гемоглобінові розчини, одержані за допомогою наведених перед тим способів, мають надлишок небажаних побічних ефектів та властивостей. Наприклад, головним побічним ефектом, який викликає занепокоєння, є зниження активності нирок. Гадали, що ці зміни було обумовлено наявністю небажаних домішок, наприклад, бактеріального ендотоксину або фрагментів еритроцитарних мембран (строми).
Згадані домішки дійсно можуть викликати зміни у функціонуванні нирок, однак, з гемоглобінові розчини, по суті, позбавлені згаданих перед тим домішок, як і раніше, викликають суттєве порушення активності нирок.
Причину порушення функціонування нирок пояснювали присутністю фізіологічно неприйнятних кількостей неполімеризованого гемоглобінового тетрамеру. До інших небажаних побічних ефектів впорскування тетрамерного гемоглобіну належить звуження кровоносних судин, гемоглобінурія, уповільнення частоти серцевих скорочень, підвищення середнього артеріального тиску крові та транссудація розчину, який було впорекнуто, до очеревинної порожнини.
За практичних обставин, жоден з гемоглобінпохідних замінників крові не є повністю позбавленим проблем, пов'язаних з токсичністю. Згадані продукти, крім того, мають неприйнятно низькі напівперіоди існування після введення пацієнтам, якими є люди. Згадані напівперіоди існування потребують неодноразового поповнення об'єму крові впродовж коротких періодів часу. Цим обумовлена значна потреба у гемоглобінових продуктах, які позбавлено токсичних властивостей відносно пацієнтів та які мають значні напівперіоди існування після введення. Згадані продукти, звичайно, повинні бути здатними до оборотного транспортування кисню до тканин у спосіб, подібний до того, що забезпечується цільною кров'ю.
Суть винаходу
Цей винахід надає гемоглобінові замінники, які позбавлено токсичних властивостей відносно людини та які мають значні напівперіоди існування, які дорівнюють, як мінімум, 15 годинам у разі введення людям.
Згадані гемоглобінові продукти за цим винаходом є вільними від строми, піридоксильованими та полімеризованими, а також є вільними від вірусних та інших токсичних домішок. Згадані продукти, на додаток до цього, є, по суті, вільними від лейкоцитів (білих клітин крові) та тромбоцитів.
Цим винаходом також охоплюються способи одержання гемоглобінових замінників, які відповідають цьому винаходу. Згадані способи включають видалення лейкоцитів та тромбоцитів з крові; промивання та лізис еритроцитів; видалення домішок, які мають відношення до строми, та самої строми за допомогою фільтрування та теплової обробки; одержання деоксигемоглобіну; піридоксилювання та полімеризацію; додаткове очищення та концентрування; та деоксигенування. Одержаний гемоглобіновий продукт після цього може вводитись до складу лікарської форми, яка має рівні різних електролітів у межах нормальних фізіологічних діапазонів.
Цей винахід надає також водну лікарську форму піридоксильованого, полімеризованого гемоглобіну, до складу якої згаданий гемоглобін входить у формі глутаральдегідполімеризованого гемоглобіну, який включає тетрамерний матеріал з профілем молекулярної ваги, який наведено на Фігурі 3. Згадана лікарська форма може бути застосована для одержання безклітинного еритроцитарного замінника. У цьому аспекті, згадану лікарську форму спочатку піддають очищенню для видалення тетрамеру з наступним поєднанням з відповідними кількостями електролітів для одержання фізіологічно прийнятного безклітинного еритроцитарного замінника, який, у подальшому, може бути використано для лікування пацієнту, яким є людина та який потребує впорскування переносника кисню.
Короткий опис малюнків
Фігура 1 - схематична діаграма, на якій відображено частину згаданого способу та обладнання, які використовують для одержання деоксигенованого гемоглобінового розчину, придатного для піридоксилювання та полімеризації.
Фігура 2 - схематична діаграма, на якій відображено частину згаданого способу та апарат з започаткуванням піридоксилювання та полімеризації та одержанням деоксигенованого, очищеного, піридоксильованого, полімеризованого гемоглобінового продукту та частину згаданого способу та апарат, які використовують для одержання кінцевого гемоглобінового продукту, який має фізіологічні рівні електролітів.
Фігура З - визначення вмісту полімеризованого матеріалу засобами високоефективної рідинної хроматографії (НРІ С) після обробки гліцином перед очищенням. Полімеризований продукт вказано піками у час утримання (ВТ) 15,57, 16,08, 17,00 та 18,19. Тетрамерний матеріал вказано піками у ВТ 19,88 та 20,51.
Полімер складає 76,295 згаданого матеріалу.
Фігура 4 - визначення вмісту гемоглобінового продукту за цим винаходом. Полімеризований гемоглобін вказано піками у АТ 15,7, 16,33, 17,32 та 18,56. Тетрамер вказано піками у АТ 21,18.
Фігура 5 - схематична діаграма, на якій відображено спосіб очищення за допомогою хроматографування на колонках, який було застосовано у цьому винаході.
Фігура 6 - схематична діаграма, на якій відображено спосіб очищення за допомогою фільтрування через фільтри з пористою перегородкою, який було застосовано у цьому винаході.
Докладний опис переважного варіанту втілення
Цей винахід має відношення до безклітинного еритроцитарного замінника, до складу якого входить, по суті, вільний від тетрамерів, структурований, полімеризований, піридоксильований гемоглобін, по суті, вільний від строми, домішок, які мають відношення до строми, та інших домішок.
Термін "структурований", який використано у цьому описі, означає хімічне вміщення молекулярних "містків" на або до молекули, або між молекулами з метою змінення форми, розміру, функції або фізичних характеристик згаданої молекули. Структуровані молекули можуть бути полімеризованими або неполімеризованими, тобто структуровані молекули можуть бути тетрамерними.
Термін "тетрамер", який використано у цьому описі, означає гемоглобінові молекули, які мають молекулярну масу, приблизно, 64 кілодальтон; тобто, згаданий термін означає як нативні, так і міжмолекулярні структуровані гемоглобінові молекули.
Термін "по суті, вільний від тетрамеру", який використано у цьому описі, означає рівень чистоти відносно вмісту тетрамерних домішок, при якому зникають певні біологічні реакції на тетрамер, який введено ссавцю.
Головним критерієм є відсутність змін у функціонуванні нирок при введенні фармацевтично ефективних кількостей, тобто, при рівні чистоти, який дорівнює, приблизно, 9995 або більше (присутнім є, приблизно, менше 195 тетрамеру). До складу переважного продукту, одержаного за допомогою способу за цим винаходом, входить, приблизно, не більше 0,895 тетрамеру, виходячи з маси загального вмісту гемоглобіну (ТНЬ). Іншими словами, до складу, по суті, вільного від тетрамеру продукту за цим винаходом, входить не більше фізіологічно прийнятних кількостей неполімеризованого гемоглобінового тетрамеру. До складу особливо переважних продуктів за цим винаходом входигь, приблизно, менше ніж 0,595 тетрамеру; зокрема, до складу найбільш переважних продуктів за цим винаходом, входить, приблизно, 0,3-0,495 тетрамеру.
Встановлено, що такі кількості тетрамеру є фізіологічно прийнятними.
Термін "надочищений продукт" або "очищений продукт", який використано у цьому описі, має те ж саме значення, що і термін "по суті, вільний від тетрамеру".
Загальний відсотковий вміст гемоглобіну (ТНЬ) у цьому описі визначається у грамах гемоглобіну/100мл розчину.
Термін "полімеризований розчин", який використано у цьому описі, означає розчин, до складу якого входить "структурувальний" або полімеризувальний агент, наприклад, глутаральдегід, імідоефіри, діаспірин або інші у біохімічно придатному носії.
Термін "полімеризований", який використано у цьому описі, означає введення молекулярних містків між молекулами або тетрамерними субодиницями, завдяки чому розмір або маса одержаної полімеризовакої молекули підвищується відносно нативного або тетрамерного гемоглобіну. Полімеризований гемоглобін не є тетрамерним гемоглобіном.
Термін "розчин гемоглобіну", який використано у цьому описі, означає розчин молекул тетрамерного гемоглобіну або полімеризованого гемоглобіну, причому згадані молекули не входять до складу еритроцитів.
Такий розчин не обов'язково повинен бути вільним або, по суті, вільним від еритроцитарної строми або домішок, які мають відношення до строми. Переважні полімеризовані гемоглобінові розчини, однак, є вільними від еритроцитарної строми та домішок, які мають відношення до строми.
Термін "напівпроникна мембрана" означає мембрану, проникну для молекул деяких типів, але не для інших, тобто, це є мембрана, яка діє, як вибірковий фільтр, який виключає молекули певної молекулярної маси.
Продукт, одержаний за допомогою згаданого способу за цим винаходом, з підданого тепловій обробці, вірусно інактивованого тетрамерного гемоглобіну, тобто полімеризований, піридоксильований, гемоглобіновий розчин, по суті, вільний від тетрамерного (нативного або міжмолекулярно структурованого) гемоглобіну, домішок, які мають відношення до строми, або різних інших домішок, є фізіологічно прийнятним, а також терапевтично та клінічно придатним. Згаданий продукт має здатність до оборотного зв'язування кисню, що є необхідним для забезпечення властивостей транспортування кисню. Найбільше заслуговує на увагу те, що згаданий продукт демонструє добрі характеристики навантаження та розвантаження під час застосування, що корелює з наявністю кривої дисоціації кисень-гемоглобін (Ро), подібної до відповідної кривої цільної крові. Згаданий продукт зв'язує кисень з високою спорідненістю у капілярах через легені з наступним адекватним виділенням кисню у тканинах тіла. Згаданий продукт, крім того, не потребує визначення сумісності з реципієнтом.
Згаданий продукт, крім того, має напівперіод існування, у разі введення людині, який складає, як мінімум, приблизно, 15 годин і, більш переважно, приблизно, 24 години. Згаданий гемоглобіновий продукт може вливатись пацієнтам у кількостях, які дорівнюють, приблизно, З,0л або навіть, приблизно, 5,0л. Іншими словами, згаданий гемоглобіновий продукт за цим винаходом може бути використано для поповнення, по суті, всього об'єму крові пацієнту, яким є людина, без звуження кровоносних судин, ниркової токсичності, гемоглобінурії або інших проблем, пов'язаних з внутрішньовенним введенням синтетичних або напівсинтетичних переносників кисню та замінників крові. Таким чином, цей винахід включає спосіб вливання пацієнту, у переважному випадку, пацієнту, яким є людина, такої кількості вільного від строми, вільного від тетрамеру, полімеризованого, піридоксильованого гемоглобінового продукту, яка є нетоксичною для згаданого пацієнту, причому згадана кількість складає, як мінімум, приблизно, 5,0л. Такий спосіб включає підключення згаданого пацієнту або суб'єкту до пристрою для впорскування або іншого подібного обладнання для впорскування або переливання згаданому пацієнту.
Спосіб за цим винаходом є унікальним, оскільки він забезпечує одержання продукту, вміст тетрамеру у якому не перевищує, приблизно, 190 (мас.) і, у більш переважному випадку, не перевищує, приблизно, 0,890 (мас), виходячи з маси загального вмісту гемоглобіну у згаданому розчині. Додатковою перевагою згаданого процесу за цим винаходом є те, що він забезпечує одержання кінцевого продукту, по суті, вільного від мікробних та вірусних антигенів га патогенів. Вміст згаданих мікробних та вірусних антигенів та патогерів зменшується до рівнів, які не піддаються визначенню, тобто згаданий продукт є стерильним, відповідно до аналізу, який наведено у ХХІ! розділі Фармакопеї США«є71». До прикладів таких антигенів та патогенів належать бактеріальні, рикетсіозні, грибкові, протозойні, вірусні та інші мікроорганізми. Найважливішим є те, що згаданий спосіб надає біологічний продукт, вільний від вірусів, які викликають гепатит та синдром набутого імунодефіциту (СНІД).
Щодо фізіологічних властивостей, згаданий біологічний продукт за цим винаходом, у разі впорскування у кількостях, як мінімум, приблизно, до 5,0л, не викликає звуження кровоносних судин, ниркової токсичності, гемоглобінурії та інших проблем, пов'язаних з внутрішньовенним введенням відомих гемоглобінових розчинів, до складу яких входять фізіологічно небажані кількості тетрамерного гемоглобіну. Внутрішньовенне введення згаданого продукту, одержаного за допомогою способу, опис якого наведено, не викликає значного зменшення продукування сечі, значного зниження рівня гломерулярної фільтрації, значної транссудації до очеревинної порожнини та значної зміни кольору продукованої сечі.
Таким чином, згаданий спосіб за цим винаходом забезпечує одержання безклітинного еритроцитарного замінника, який може знайти застосування при лікуванні травм, інфаркту міокарду, "Удару", гострої анемії та розладів, пов'язаних з кисневим голодуванням, наприклад, гіпоксемії, гіпоксії та гіпоксії кінцевої стадії, викликаних порушенням або нездатністю легень до повного оксигенування крові. Згаданий продукт є придатним також при лікуванні будь-якого захворювання або медичного стану, який потребує застосування реанімаційної рідини (наприклад, травма, зокрема, геморагічний шок), заміннику внутрішньосудинного вмісту або обмінного переливання крові. На додаток до медичного лікування, згаданий продукт може бути придатним для консервування органів, призначених для трансплантування.
Згаданий спосіб за цим винаходом складається з наступних етапів: 1. аспірація та фільтрування еритроцитів 2. промивання/лізис клітин 3. теплова обробка 4. концентрування шляхом ультрафільтрації 5. знегажування 6. хімічна модифікація 7. очищення 8. концентрування за допомогою послідовно розміщених ультрафільтрів 9. деоксигенування 10. введення до складу лікарської форми
Переважним вихідним матеріалом у згаданому способі за цим винаходом є цільна людська кров з вичерпаним строком придатності або еритроцитарна маса. На додаток до цього, може також використовуватись кров з невичерпаним (дійсним) строком придатності. У переважному варіанті, у цьому способі не використовують цільну кров, у разі, якщо час її зберігання після вичерпання строку придатності, який зазначено на мішку, перевищено більше, ніж на 2 тижні. Використання цільної крові з перевищенням вичерпаного строку придатності більше, ніж на 2 тижні, є пов'язаним з додатковими труднощами під час екстрагування гемоглобіну та видалення клітинних залишків, наприклад, білків, які мають відношення до строми, та домішок.
Усі розкриті у цьому описі способи є придатними для обробки крові інших ссавців з можливими незначними модифікаціями у фахових межах цієї галузі техніки. Більша частина згаданого способу може здійснюватись при температурі, приблизно, від 27"С до, приблизно, 8"С, у переважному варіанті, при температурі, приблизно, 47с.
Під час аспірації та фільтрації еритроцитів, їх, за асептичних умов, видаляють з мішків з донорською кров'ю без попадання до неї повітря, та пропускають через ряд фільтрів з одержанням, внаслідок цього, еритроцитарної суспензії зі зменшеним вмістом лейкоцитів та тромбоцитів. Після цього одержану суспензію піддають промиванню та лізису.
Згадану суспензію у атмосфері монооксиду вуглецю промивають за допомогою, приблизно, 195 розчину
Масі з метою видалення залишкових білків плазми. Після цього промиті еритроцити піддають обробці водою для впорскувань (МУР!) для лізису клітин, і одержану суміш освітлюють за допомогою фільтрувальної установки з поперечним потоком. Після цього освітлений продукт піддають тепловій обробці з метою осадження додаткового матеріалу, який має відношення до строми і який видаляють шляхом фільтрування.
Продукт, одержаний таким чином, є гемоглобіновим розчином, вільним від строми (5ЕН), загальний вміст гемоглобіну у якому дорівнює, приблизно, 395 (у відношенні маси до об'єму).
Вільний від строми гемоглобіновий розчин, який було піддано тепловій обробці та до складу якого входить карбоксигемоглобін, концентрують та знегажують для одержання 5ЕН розчину, до складу якого входить деоксигемоглобін. Знегаження, по-перше, залучає насичення карбоксигемоглобінового розчину киснем, приблизно, впродовж 16 годин, для одержання розчину оксигенованого гемоглобіну, до складу якого входить, приблизно, 795 (мас.) карбоксигемоглобіну, виходячи з загальної маси гемоглобіну. На наступному етапі згаданий кисень відганяють з азотом, аргоном або гелієм для одержання розчину, до складу якого входить вільний гемоглобін, тобто гемоглобін без комплексних сполук, та, приблизно, 795 (мас.) оксигемоглобіну,
виходячи з загальної маси гемоглобіну. Одержаний знегажений розчин фільтрують та переносять до поємника для хімічного модифікування.
Після етапу знегажування, згаданий вільний від строми гемоглобіновий розчин піддають піридоксилюванню за допомогою піридоксаль-5і--фосфату (РБ5Р) з молярним відношенням піридоксаль-5'- фосфату до гемоглобіну, приблизно, від 1:1 до 3:1. У альтернативному варіанті, вільний від строми гемоглобін може бути піридоксильованим за допомогою 2-М- або 2-формілпіридоксаль-5'і-фосфату. До згаданої піридоксильованої суміші додають відновлювач, наприклад, ціаноборогідрид натрію або, у переважному варіанті, борогідрид натрію. Надлишкові кількості реагентів та солей видаляють діалізом проти вільної від пірогенів води або, у переважному варіанті, діафільтруванням з М/РІ. Піридоксильований гемоглобін після цього полімеризують розчином глутаральдегіду.
Вільний від строми піридоксильований гемоглобіновий розчин полімеризують за допомогою водного розчину глутаральдегіду. Тривалість полімеризації та кількість доданого глутаральдегіду залежить від об'єму гемоглобінового розчину, необхідного виходу полімерів та необхідного розподілу молекулярної маси. Взагалі, подовжений час полімеризації підвищує вихід та розподіл молекулярної маси згаданих полімерів. Впродовж, приблизно, 16-18 годин одержують вихід полімерів, який дорівнює, приблизно, 7595 (мас), виходячи з загальної маси гемоглобіну. Переважною кінцевою точкою полімеризації визначається така точка, у якій згаданий розчин вміщує, приблизно, 7595 (мас.) полімерів, виходячи з загальної маси гемоглобіну, за даними високоефективної рідинної гель-хроматографії. У альтернативному варіанті, кінцевою точкою полімеризації визначається така точка, у якій згаданий розчин вміщує, приблизно, 65905 (мас.) полімерів, виходячи з загальної маси гемоглобіну, тобто, приблизно, 2,5 години.
Згадану реакцію полімеризації зупиняють доданням холодного водного розчину гліцину. Згаданий буфер необхідно додавати з максимальною можливою швидкістю. Після цього поперечні міжмолекулярні зв'язки стабілізуються шляхом додання, знову ж таки, з максимальною можливою швидкістю, водного розчину борогідриду натрію. У подальшому, згаданий полімеризований розчин концентрують та діафільтрують у атмосфері кисню з метою оксигенування згаданого розчину. На кінцевому етапі, до згаданого розчину додають воду у кількості, при якій вміст гемоглобіну у згаданому розчині складає, приблизно, 495 (мас).
Наслідком полімеризації за цим винаходом є високий вихід полімерів, які мають вузький діапазон молекулярної маси, як показано на наведеній далі Фігурі З та у Прикладі 1.
Після цього полімеризований, піридоксильований гемоглобіновий розчин очищають шляхом хроматографування на колонках, фільтрування, наприклад, фільтрування через фільтри з пористою перегородкою, або одночасно тим і іншим, з метою видалення зі згаданого розчину залишкового неполімеризованого (тетрамерного) гемоглобіну. Після цього очищений полімеризований гемоглобіновий розчин концентрують, приблизно, до 695 за допомогою ультрафільтрувальної установки для підготовки до газообміну.
Після цього концентрований розчин піддають деоксигенуванню азотом. Згадане деоксигенування відбувається при температурі, приблизно, 10-12" доти, доки кількість оксигемоглобіну у згаданому розчині не досягає рівня, приблизно, меншого ніж 1695 (мас.) від загального вмісту гемоглобіну.
Після цього одержаний деоксигенований, очищений та полімеризований гемоглобіновий розчин концентрують шляхом ультрафільтрації у атмосфері азоту у охолоджуваному поємнику. Рівень рН доводять, приблизно, до 8,8-9,0; рівні електролітів доводять, за необхідністю, до рівнів, які відповідають рівням нормальної плазми. На додаток до цього, факультативно, можуть бути також введені традиційні антиоксиданти, наприклад, глутатіон, аскорбат або глюкоза. Після того, як згаданий розчин концентрують до необхідного рівня вмісту полімеризованого, піридоксильованого, очищеного, вільного від тетрамеру, вільного від строми гемоглобіну, який дорівнює, приблизно, 1095 (мас), згаданий розчин стерилізують шляхом фільтрування та, за допомогою пристрою для стерильного перенесення, переміщують до придатних фармацевтично прийнятних контейнерів.
Характеристики одержаного гемоглобінового розчину наведено далі: 11111110, Полімеризованийгемоглобін./ 1 Рівень вмісту у полімеризованому гемоглобіні визначено засобами спектрофотометрії. 2 Рівень вмісту у полімеризованому гемоглобіні визначено засобами осмометри.
З Рівень вмісту у полімеризованому гемоглобіні визначено за допомогою іоноспецифічного електроду
4 Рівень вмісту у полімеризованому гемоглобіні визначено засобами атомного поглинання.
Визначено засобами високоефективної рідинної гель-хроматографії. 6 Визначено пробою з лізатом амебоцитів мечохвісту, комерційно доступного від компанії Ав5осіагев ої
Саре Со; компоненті аналізу мають каталожні номери 100-5, 800-1 та 3100-5. 7 Визначено засобами високоефективної тонкошарової хроматографії.
Наведені далі приклади демонструють певні аспекти цього винаходу. Слід розуміти, однак, що згадані приклади наведено виключно з ілюстративною метою і вони не повинні розглядатись як такі, що визначають умови та обсяг цього винаходу. Усі температури наведено у градусах за Цельсієм, якщо не вказано інше. Усі відсотки, якщо не зазначено інше, наприклад, відсоток загального вмісту гемоглобіну (ТНБ), виражено у відношенні маси до об'єму. Слід розуміти також, що у разі наведення типових умов проходження реакції (наприклад, температури, часу проходження реакції), можуть бути застосованими також такі умови, які як перевищують, так і не досягають вказаних специфічних діапазонів, хоча це і не є типовим явищем.
У разі відсутності протилежних вказівок, усі поємники та судини, які використано у способі за цим винаходом, виготовлено з нержавіючої сталі 316-І, у переважному варіанті, з фармацевтичного сорту згаданої нержавіючої сталі, яку було ретельно відполіровано, завдяки чому вона легко і швидко відчищається.
Різноманітні поєднувальні трубопроводи великого та малого діаметру також виготовлено з нержавіючої сталі згаданої марки, з тефлону або силікону фармацевтичного сорту. Фільтри та мембрани, які було використано у згаданому способі, можуть бути закупленими від компанії МіПіроге Іпс., РаїІ-Рійгоп або Сипо Іпс.
Напівперіод існування одержаного продукту за цим винаходом визначають іп мімо на ссавцях, наприклад, людині. У типовому випадку, пробу крові відбирають у ссавця через деякий період часу після введення йому згаданого продукту. Після цього визначають кількість згаданого продукту шляхом видалення плазми за допомогою центрифугування згаданої проби крові, визначення рівнів гемоглобіну у плазмі засобами спектрофотометрії з наступним корелюванням кількості продукту, яка залишилась у ссавця, з напівперіодом існування згаданого продукту.
Високоефективна рідинна гель-хроматографія за цим винаходом здійснюється наступним чином:
Згадану пробу розбавляють 0,2М калійфосфатним буфером, рН 6,9, до 0,2г/дл, фільтрують через 0,2мкм фільтр та вводять до системи високоефективної рідинної хроматографії, яка складається за наступних компонентів (за картою технологічного процесу): 1. Насос моделі Рпаптасіа 2248 рухома фаза - 0,Ж2М фосфат калію, рН 6,9 швидкість потоку - 1,0мл/хвилину 2. Поліефірефіркетоновий або титановий трубопровід, 45см, внутрішній діаметр 0,010 дюйму (0,0254мм), 3. Дозатор моделі АНеодупе 7725і з поліефірефіркетоновою трубкою для введення проб (200мкл) 4. Поліефірефіркетоновий або титановий трубопровід, 18см, внутрішній діаметр 0,010 дюйму (0,0254мм) 5. Фільтр моделі Орспитгсп А431 0,5мкм 6. Поліефірефіркетоновий або титановий трубопровід, 9см, внутрішній діаметр 0,010 дюйму (0,0254мм) 7. Колонка Сцага Рпепотепех Віозер БЕС 5-3000 75х7, 8МммМ 8. Поліефірефіркетоновий або титановий трубопровід, 24см, внутрішній діаметр 0,010 дюйму (0,0254мм) 9. Аналітична колонка Рпепотепех Віозер ЗЕС 5-3000 600х7 8Ммм 10. Поліефірефіркетоновий або титановий трубопровід, 23см, внутрішній діаметр 0,010 дюйму (0,0254мм) 11. УФ-детектор Рпагтасіа Омісога 50 довжина хвилі: 280нм проточна комірка: об'єм Змкл, довжина пробігу 2,5мМмМ діапазон: 2 АШЕ5 постійна часу: 10 секунд
Максимальне поглинання при 280нм реєструється інтегратором КВ 2221, який інтегрує окремі пікові площини та вираховує загальну площину гемоглобіну для полімеру кожного типу.
Додатковим поясненням цього винаходу можуть служити наведені далі необмежувальні приклади.
Приклад 1
З посиланням на Ффіг.1, мішки 20 донорської крові з вичерпаним строком придатності (цільна кров або еритроцитарна маса) розміщують у відповідному асептичному аспіраційному апараті 22. Як приклад придатного аспіраційного апарату, може бути наведена система, яка має дві аспіраційні станції. Після вміщення мішку з донорською кров'ю до аспіраційної станції, голкою аспіраційного апарату проколюють згаданий мішок з донорською кров'ю, вводять, приблизно, 150мл 195 (у відношенні маси до об'єму) водного розчину хлориду натрію та відсмоктують згадану кров з вичерпаним строком придатності зі згаданого мішку під зниженим тиском або вакуумом. Відсмоктану кров спочатку пропускають через фільтр 24 товщиною 100мкм, потім через два послідовно розміщені фільтри 26 товщиною 5мкм. Під час проходження згаданої крові через фільтри товщиною 5мкм, з неї видаляють лейкоцити. У типовому випадку, як показано на Фіг.1, відсмоктують, фільтрують та переносять до Поємника 1, приблизно, 170 одиниць цільної крові з вичерпаним строком придатності. Після цього фільтри промивають, приблизно, 75 літрами 195 (у відношенні маси до об'єму) водного розчину хлориду натрію.
Перед внесенням згаданої крові до Поємника 1, до згаданого Поємника 1 заливають, приблизно, 70л 195 водного розчину хлориду натрію. Після того, як усі 170 одиниць цільної крові з вичерпаним строком придатності було відсмоктано, профільтровано та внесено до згаданого Поємника 1, а згадані фільтри промито, згаданий поємник вміщує, приблизно, 250 літрів розчину з 495 загальним вмістом гемоглобіну. На етапах відсмоктування та фільтрування у Поємнику 1 підтримують знижений тиск, наприклад, розрідження у 20-28" ртутного стовпчика (103,43-144,80мм ртутного стовпчика). Після внесення до Поємника 1 повного об'єму згаданої крові з вичерпаним строком придатності, вакуумний насос відключають і до поємника подають монооксид вуглецю, завдяки чому у згаданому поємнику утворюється атмосфера монооксиду вуглецю. Як показано на Ффіг.1, поємник 1 поєднано з 0,65мкм фільтром 28 з дотичним потоком. Шляхом мікрофільтрування на фільтрі з дотичним потоком, початкову 250л партію розчину з 495 загальним вмістом гемоглобіну концентрують, приблизно, до 125л розчину з 895 загальним вмістом гемоглобіну. рН гемоглобінового розчину на цьому етапі дорівнює 6-6,5. Після М концентрування до одержання розчину з 895 загальним вмістом гемоглобіну, згаданий розчин промивають шляхом додавання 195 (у відношенні маси до об'єму) розчину хлориду натрію, діафільтрування та видалення фільтрату з такою ж самою швидкістю, з якою додається розчин хлориду натрію. 125л згаданого гемоглобінового розчину, у типовому випадку, промивають, приблизно, 8 об'ємами 195 розчину хлориду натрію (приблизно, 1000л). Після завершення промивання, згаданий розчин концентрують, приблизно, до 70л, тобто, приблизно, до 1495 загального вмісту гемоглобіну, і додають "воду для впорскувань" (М/РІ) для доведення об'єму згаданого розчину, приблизно, до 180л. Під час додавання МУРІ, згадані клітини набухають та розриваються з виділеннням гемоглобіну до розчину. Загальний вміст гемоглобіну (ТНЮ) у одержаному гемоглобіновому розчині складає, приблизно, 590.
Одержаний розчин освітлюють ще під час його знаходження у Поємнику 1. Згаданий розчин спочатку концентрують, приблизно, до 50л і фільтрат переносять до Поємника 2. Під час перекачування згаданого розчину через фільтр, на ньому затримуються і за допомогою фільтру видаляються домішки еритроцитів, які мають відношення до строми та матеріал клітинних стінок. 50л згаданого розчину, які залишились у Поємнику 1, промивають (діафільтрують), приблизно, 2,5 об'ємами М/РІ. Згадані 2,5 об'єми додають до Поємника 2.
Згаданий матеріал, який залишився у Поємнику 1, після цього концентрують, приблизно, до 20л і одержаний фільтрат додають до Поємника 2. Загальний об'єм у Поємнику 2 дорівнює, приблизно, 280л розчину з загальним вмістом гемоглобіну, який складає 3,390.
Одержаний розчин вільного від строми гемоглобіну після цього піддають тепловій обробці у Поємнику 2 при температурі, приблизно, 60-627С, впродовж, приблизно, 10 годин. Впродовж згаданого періоду часу згаданий розчин піддають помірному перемішуванню. Осад починає утворюватись після того, як температура нагрівання згаданого розчину перевищить, приблизно, 5576.
Після цього одержаний 3,395 ТНЬ (у відношенні маси до об'єму) вільний від строми, підданий тепловій обробці гемоглобіновий розчин фільтрують через 0,2мкм фільтр 30, потім через 0,1мкм фільтр 32 і переносять до Поємника 3. Після цього згаданий відфільтрований гемоглобіновий розчин концентрують, приблизно, до 1895 ТНЬ з наступним промиванням да діафільтруванням за допомогою 4 об'ємів М/РІ (180л). Згадані процеси концентрування та діафільтрування здійснюють за допомогою ультрафільтру 34 (молекулярна маса 10кД).
Фільтрат збирають на стоці 35, який пов'язано з ультрафільтром 34. На цьому етапі до складу 45л розчину з 1895 загального вмісту гемоглобіну входить менше, ніж 5Онг фосфоліпідів на грам гемоглобіну, менше, ніж 2нг гліколіпідів на грам гемоглобіну, менше, ніж 195 метгемоглобіну, менше, ніж, приблизно, 0,03 ендотоксинової одиниці ендотоксину на мілілітр при рН, приблизно, від б до 6,5. Згаданим гемоглобіном у розчині є карбоксигемоглобін.
Після цього одержаний карбоксигемоглобіновий розчин переносять до Поємника 4, де згаданий карбоксигемоглобін спочатку оксигенують, після чого піддають деоксигенуванню. Поємник 4 споряджено кільцем для барботування газу, з'єднаним з трубопроводами кисню та азоту, живильним трубопроводом, який веде з донної частини згаданого поємника до дозувального розпилювального пристрою, розміщеного у верхній частині Поємника 4, та перетічним пінозбірником, з'єднаним з судиною 1 для збирання піни, завдяки чому піна, утворена у Поємнику 4, подається до Судини 36 для збирання піни, де згадана піна конденсується до стану рідини і подається назад до Поємника 4. Поємник 4 додатково обладнано комплектом кільцевих баштових насадок, які займають, приблизно, одну третину об'єму згаданого поємника. У Судині 36 для збирання піни передбачено газовипускний отвір для видалення газу. Згаданий розчин у Поємнику 4 представляє собою розчин з 1395 загальним вмістом гемоглобіну.
Під час першого етапу оксигенування, згаданий розчин барботують киснем зі швидкістю, яка є достатньою для забезпечення однорідного диспергування газу у згаданій судині. Згадану судину, об'ємом 200л, барботують газом зі швидкістю, приблизно, 25л/хвилину. Оксигенування згаданого карб оксигемоглобіну здійснюють, приблизно, впродовж 16 годин, завдяки чому до складу згаданого розчину входить менше, ніж 590 карбоксигемоглобіну, виходячи з маси загального вмісту гемоглобіну. Оксигенування здійснюють при температурі, приблизно, 10"С. Піну, яка утворюється у Поємнику 4, збирають до Судини 36 для збирання піни, і розчин, який утворюється після осадження згаданої піни, знову переміщують до Поємника 4.
Після оксигенування, згаданий розчин барботують таким же потоком азоту, приблизно, впродовж 6 годин або доти, доки у згаданому розчині не залишиться менше, ніж 1095 оксигемоглобіну, виходячи з маси загального вмісту гемоглобіну. Барботування азотом здійснюють при температурі, приблизно, 107С та рн, приблизно, від б до 6,5. У альтернативному варіанті, карбоксигемоглобін може бути перетвореним на деоксигемоглобін за допомогою мембранного теплообмінника. Слід звернути увагу на відсутність, по суті, денатурування, якого, за нормальних обставин, слід було б очікувати на етапі піноутворення. На цьому етапі одержаний деоксигенований розчин є готовим до хімічного модифікування.
З посиланням на фіг.2, згаданий деоксигемоглобіновий розчин переносять до Поємника 5 для хімічного модифікування. До Поємника 5, який вміщує розчин деоксигемоглобіну при температурі, приблизно, 42С, додають водний розчин піридоксаль-5'-фосфату (РБР) (93,75г/л) з молярним відношенням Р5БР до гемоглобіну від 1:11 до 3:1. Перевага надається молярному відношенню Р5ОР до гемоглобіну, яке дорівнює 21.
Піридоксилювання здійснюють при температурі, приблизно, 4"С. Розчин РУОР, у типовому випадку, додають, приблизно, впродовж 1 хвилини і змішують, приблизно впродовж 15 хвилин, після чого до гемоглобінового розчину додають розчин борогідриду натрію //дкого натру у молярному відношенні борогідриду натрію до гемоглобіну, яке дорівнює, приблизно, 20:11. До складу придатного водного розчину борогідриду натрію/Ідкого натру входить 0,8г їдкого натру на 2 літри та 90,вг борогідриду натрію на 2 літри. Борогідридний розчин додають з максимально можливою швидкістю, приблизно, впродовж 1 хвилини, після чого перемішують впродовж однієї години. Після цього одержані 50л розчину піридоксильованого гемоглобіну піддають діафільтруванню на ультрафільтрі 38 (10КД) з метою видалення надлишкових кількостей реагентів за допомогою 4 об'ємів М/РІ. Фільтрат з фільтру 38 збирають на стоці 40, який зв'язано з ультрафільтром 38.
Після діафільтрування 4 об'ємами, тобто 200л М/РІ, згаданий гемоглобін полімеризують. До Поємника 5, у якому знаходиться піридоксильований гемоглобін, додають МУР у кількості, достатній для одержання розчину з 4,595 загального вмісту гемоглобіну (приблизно, 175л гемоглобінового розчину). До піридоксильованого гемоглобінового розчину додають розчин глутаральдегіду з молярним відношенням глутаральдегіду до гемоглобіну, яке складає, приблизно, 24:1. Згаданий розчин глутаральдегіду, у типовому випадку, додають до згаданого розчину гемоглобіну за допомогою дозувального насосу, приблизно, впродовж 2,5 годин. Тривалість реакції полімеризації складає, приблизно, 18 годин. Цільовий розподіл молекулярної маси складає, приблизно, 7595 полімеру та 2595 тетрамеру. Молекулярні маси цільових полімерів дорівнюють, приблизно, менше, ніж 600000, причому переважна фракція молекулярних мас знаходиться у діапазоні 100000-350000.
Після того, як реакція полімеризації досягне цільового розподілу молекулярної маси (приблизно, через 18 годин), до згаданого гемоглобінового розчину додають (як засіб для різкого охолодження реакційної суміші) водкий розчин гліцину (приблизно, 166бг/л) з молярним відношенням гліцину до гемоглобіну, яке дорівнює 140:1. На фіг.3 наведено результати перевірки одержаного полімеризованого охолодженого розчином гліцину гемоглобінового продукту засобами високоефективної рідинної хроматографії. Після цього одержаний розчин перемішують, приблизно, впродовж 10 хвилин, після чого до згаданого гемоглобінового розчину додають розчин борогідриду натрію/дкого натру (концентрацію якого було вказано перед тим) з молярним відношенням борогідриду натрію до гемоглобіну, яке дорівнює 28:11. Одержану таким чином суміш перемішують, приблизно, впродовж 1 години. Після цього згаданий розчин концентрують, приблизно, до 50л (ультрафільтр 38) і промивають 4 об'ємами (200л) МУРІ. До згаданого концентрованого розчину додають додаткову аліквоту борогідриду натрію з таким же самим молярним відношенням, яке вказувалось перед тим, і знову перемішують впродовж 1 години. Одержаний розчин промивають 4 об'ємами МУРІ (200л), внаслідок чого одержують полімеризований, піридоксильований, вільний від строми гемоглобін, який було піддано тепловій обробці.
Одержаний розчин оксигенують шляхом витримування згаданого розчину у атмосфері кисню з наступним перенесенням до системи 42 очищення. Очищення може забезпечуватись за допомогою хроматографування на колонках, фільтрування, у переважному випадку, фільтрування через фільтри з пористою перегородкою (діафільтрування) або шляхом поєднання фільтрування та хроматографування на колонках.
За одним з варіантів втілення, згаданий розчин переносять до хроматографічного живильного резервуару,
Поємника 6, як показано на Фігурі 5. За цим варіантом втілення цього винаходу, одержаний розчин оксигемоглобіну розбавляють, приблизно, до 200л (495 загальний вміст гемоглобіну) у Поємнику 6 і концентрацію хлориду за допомогою розчину хлориду натрію доводять до 22мММ. У регулюванні концентрації натрію необхідності не виникає.
Після цього за допомогою Колонки 44 хроматографують п'ять 40л аліквотних проб одержаного гемоглобінового розчину. Колонка 44 вміщує гель для афінної хроматографії, яким є агарозний гель, модифікований жовтим барвником (комерційно доступним від компанії Абіпіу Спготаїодгарпу, ЦЯ під назвою
Міметик Жовтий (Мітеїіс меПому/) Мо1), який має більшу спорідненість до полімеру, аніж до тетрамеру.
Хроматографування здійснюють наступним чином. До колонки 44 вносять 40л оксигенованого, полімеризованого, піридоксильованого, вільного від строми гемоглобінового розчину. Згадану колонку промивають 15 об'ємами колонки (приблизно, 750л) ЗОММ водного Мас! буферу для видалення тетрамеру.
Після цього згадану колонку промивають, приблизно, 250л 300мМ натрійхлоридного буферу з метою вимивання полімеру. Полімерні фракції збирають до Поємника 7. Небажані фракції направляють на злив 46.
Після видалення кожної аліквоти згадану колонку відновлюють 15мМ розчином НСІ (150л), поновно урівноважують З0мМ водним розчином Мас! (250л) і до колонки вносять наступну аліквоту живильного розчину (40л). Згадану колонку знову промивають спочатку ЗОММ розчином Масі, потім З00мМ Масі. До згаданої кололки вносять 40л аліквоти гемоглобінового розчину і хроматографують їх, доки Поємник 6 не випорожниться.
Зібрані у Поємнику 7 фракції ультрафільтрують (концентрують) за допомогою фільтру 48, з'єднаного зі стоком 50, приблизно, до об'єму 40л (6956 загальний вміст гемоглобіну). Після цього концентрований гемоглобіновий розчин переносять до газообмінного Поємника 8 для деоксигенування.
У альтернативному варіанті, згаданий розчин переносять до фільтрувальної рециркуляційної судини 10, як показано на Фіг.6. Після цього згаданий гемоглобін у Поємнику 10 розбавляють, приблизно, до 495 ТНБ.
Після цього згаданий розчин з 495 загальним вмістом гемоглобіну діафільтрують з і застосуванням 10мМ масі та фільтру 52 (молекулярна маса 300000), комерційно доступного від компанії РаїІ-Рійоп. Фільтрування продовжують доти, доки через згаданий фільтр до Поємника 11 не пройде, приблизно, 9795 згаданого гемоглобінового матеріалу. (У Поємнику 10 залишиться, приблизно, 395 згаданого матеріалу, тобто полімерів високої молекулярної маси). Кількість гемоглобіну визначається засобами спектрофотометрії за допомогою кооксиметру.
Матеріал, який знаходиться у Поємнику 11, представляє собою, приблизно, 2-495 ТНБ, до складу якого входить, приблизно, 7-1095 тетрамеру, виходячи з загального вмісту гемоглобіну. Після цього згаданий 2-495
ТНЬ піддають діафільтруванню з застосуванням 10мМ Мас! та фільтру 54 (молекулярна маса 100000, комерційно доступного від компанії РаїІ-Бійгоп), зв'язаного зі зливом або уловлювачем 56. Фільтрування продовжують доти, доки рівень тетрамеру, за результатами визначення за допомогою високоефективної рідинної гель-хроматографії з застосуванням колонки Віобер 5ЕС-53000 600х7,8 мм, не досягне менше, ніж 0,895 (мас.) гемоглобінової маси. Одержаний очищений розчин гемоглобіну спочатку залишається у Поємнику 11, після чого переноситься до газообмінного Поємника 8 для деоксигенування.
Газообмінний Поємник 8 може бути таким же самим, що і Поємник 4, або, у переважному варіанті, це може бути інший поємник. Газообмінний Поємник 8 обладнується таким же чином, як і газообмінний Поємник 4 на Фіг.1, і з'єднується з судиною 58 для збирання піни таким же чином, як і Поємник 4 та судина 36 для збирання піни. Деоксигенування здійснюють впродовж 2,5 годин шляхом барботування азоту при температурі, приблизно, 10"С та рН розчину, який дорівнює, приблизно, 7,5. Барботування азотом продовжують доти, доки у згаданому розчині не залишиться менше, ніж 1695 оксигемоглобіну, виходячи з маси загального вмісту гемоглобіну. Після цього одержаний деоксигемоглобіновий розчин переносять до Поємника 9 для утворення лікарської форми.
У Поємнику 9 для утворення лікарської форми згаданий розчин спочатку концентрують, приблизно, до 790 загального вмісту гемоглобіну, та рН доводять, приблизно, до рівня 8,8-9,0 при температурі 4". рн регулюють за допомогою 0,2М Маон. Після цього до гемоглобінового розчину (рН 8,8-9,0) додають розчини електроліту. До згаданого розчину додають глюкозу та гліцин для одержання кінцевих концентрацій, які дорівнюють, приблизно, 5г/л та 1,75г/л, відповідно. До згаданого розчину додають хлорид калію для одержання концентрації калію на рівні, приблизно, 3,5-4,5мМ. Після цього додають ЗМ розчин хлориду натрію для одержання 85-110мМ концентрації хлориду. Після цього додають лактат натрію для одержання 135- 155мМ концентрації іонів натрію. І, нарешті, додають 0,45М розчин аскорбінової кислоти для підвищення концентрації аскорбінової кислоти, приблизно, до 100Омг/л. Аскорбінову кислоту додають, як консервант/антиоксидант для збереження. Одержаний гемоглобіновий розчин має кінцеву осмолярність, яка дорівнює, приблизно, 280-36О0ммоль/кг.
Після цього одержаний гемоглобіновий розчин концентрують, приблизно, до 1095 загального вмісту гемоглобіну за допомогою фільтру 60, з'єднаного з уловлювачем 62, після чого розчин з 1095 загального вмісту гемоглобіну стерилізують шляхом фільтрування на фільтрі 64 з наступним асептичним наповненням попередньо простерилізованих мішків.
Характеристики згаданого продукту, одержаного у цьому прикладі, Партія А, представлено у Таблиці 1. На додаток до цього, у Таблиці наведено характеристики Партій В та С, які було одержано відповідно до процедури, розкритої перед тим для Партії А.
Таблиця ! я 000 р к-- - 2 2 5
Гемоглобін, г/дл 10,4 10,2 10,2
Метгемоглобін (95) 4,6 6,0 5,6
Карбоксигемоглобін (90) 02 14 1,5
Ро (тор, рН7,35-7,45, рСО» 35-4Отор) 28,5 26,8 27,0
Осмолярність (ммоль/кг) 318 320 317
Натрій (ммоль/л) 142 144 142
Калій (ммоль/л) 4,0 4,0 4,0
Хлорид (ммоль/л) 98 99 94
Розчинне залізо (частин на мільйон) 0,7 12 1,0
Розподіл молекулярної маси, 9о кожної 128:16 128211 128:16 молекулярної маси (кд) 192:26 192:23 192:26 2568:58 2568:66 2568:58
Тетрамер (95) 0,4 0,3 0,4
Ендотоксин (ендотоксинові одиниці/мл -0,03 -0,03 -0,03 8 До складу матеріалу входить також незначна кількість матеріалу більш високої молекулярної маси.
У попередньому матеріалі надано докладний опис переважних варіантів втілення цього винаходу з ілюстративною метою без обмеження. Слід розуміти, що усі інші модифікації, розгалуження та еквіваленти, очевидні для досвідчених фахівців у цій галузі техніки, засновані на цьому описі, входять до обсягу цього винаходу, визначеного пунктами формули винаходу. пе Мет з зу влтря витле вчи чо ник! ник2 0, мкм
Мішки лонорської крові 100 мкм - м фільтр
Аспіраційний Фільтри . / -3 не фе опетнинм 5707 мкм потоком фільтрх чи ее лофт
ЗІ Фіг 00 Мемшмвю
Піридоксаль-5'-фосфат
Бої « Їдеоконемоглосін Борогідвни натрію з Фіг. 1 Гліцин я пит;
Вода для Полімеризований /й 2-7 впорекувань темоглобін
Поєм- . ник 5 - Н
Ультрафільтр Очишення рі (10 кд) й збору
Очищений їй полімеризований 6,2 М МаОН гемоглобін
Глюкоза
Гліцин
ГЕ |рудина Хлорид калію я о вплмідля Хлорид натрію
Посме 9 пере, Поєм- Лактат натрію рий ник Істотпіни вик 9 Аскорбінова шо Стерильпе наповпення т рі фільтрування
ФІГ. 2 МОТО . . ра ккаовтовієя ня ві Немасштабовано
КА : У : 1 їв " й т
Е " ЕТ 7 пон А а г І ій В е
Щ ЕЕ рі "А я ил « - йашйву
Е Е УНК ЯУ і й В ПВОсНя Я
В НЕЕМИЧИ У яд в УРНИ й
В й
ВИХ ЛЛИ
. Единий
Щ явора я - х ЕВ Я режи . то ВО ОБ МЛИН (о та що Бі ази в
Ні : пбеоошоб ВляНА я т Н Та в - і жо : ПО ай дачнняия во Б ЕЕ ; я пов ом 5 вк а
Дослідження полімеризованого гемоглобіну засобами високоефективної рідинної хроматографії (ВІО БЕР 5ЕС-53000) стек я - каВОкАТОАТ: не . Немасштабовано "хх й 2
З ЕН
5 Е
НЯ Тов пенаєть й а Е ХЖНЕХ
НН Б ОВ рилинною
І ВЕЯНЯ мВ ОВС ' ех
ЧЕ ЕЇ т де ВЧЯНИ жов ВИ
В ет е
ТЕО 8 пдУх у з - БО НЯИ, " : Я я ВО они» й
КУ КН т а я ї ее жо. ня в жо няня пот ж В пов КІ а --
Дослідження полімсризованого гемоглобіну засобами високосфективної рідинної хроматографії (ВІО ЗЕР ЗЕС-53000) практ ; моти,
Як
ФІГ. 4 рю тн:
Немасштабовано 30 мм масі 300 мм масі мМ НС
Полімеризований щ Й темоглобін ту
Поєм- Поєм- ник 6 ник7 - -щше- и 74
Хромато- трафічна Ї ра колонка . р Полімер у - «о як
Тетрамер Очищений и полімеризований ра темоглобін те читптух
МОДНЕ
Немасштабовано мМ масі 10 мм масі
Полімеризований А - - -- с темоглобін
Поєм- Поєм- ник 10 ник 11 їсте у інше рвали ра т й Тетрамер 777300 кілолальтон 100 кілодальтон їй кош
Очищений полімеризований темоглобін
ФІГ. 6 МОКТНИеСІ
Немасштабовано
Claims (24)
1. Водний розчин полімеризованого гемоглобіну, який містить: - гемоглобіновий полімер із молекулярною масою приблизно 128 кДа, у кількості 10-24 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну; - гемоглобіновий полімер із молекулярною масою приблизно 192 кДа, у кількості 18-30 9о (мас.) від загальної маси гемоглобіну; - гемоглобіновий полімер із молекулярною масою приблизно 256 кДа, у кількості 45-70 9о (мас.) від загальної маси гемоглобіну.
2. Водний розчин за п. 1, який відрізняється тим, що: - загальний вміст гемоглобіну становить від 9,5 г/дл до 12,0 г/дл; - загальний вміст метгемоглобіну становить менше ніж 8 95 (мас.) від загального вмісту гемоглобіну; - загальний вміст карбоксигемоглобіну становить менше ніж 5 95 (мас) від загального вмісту гемоглобіну; - натрій міститься у концентрації від 135 ммоль/л до 155 ммоль/л; - калій міститься у концентрації від 3,5 ммоль/л до 4,5 ммоль/л; - хлорид міститься у концентрації від 85 ммоль/кг до 110 ммоль/кг.
3. Водний розчин за п. 2, який відрізняється тим, що: - загальний вміст вільного заліза становить менше ніж 2,0 млн"; - загальний вміст тетрамеру становить менше ніж 0,8 95 (мас.) від загального вмісту гемоглобіну; - вміст ендотоксину становить менше ніж 0,03 ОДе/мл (одиниць ендотоксину на мілілітр).
4. Водний розчин за п. 3, який відрізняється тим, що: - вміст фосфоліпідів становить менше ніж 50 нг/г гемоглобіну; та - вміст гліколіпідів становить менше ніж 2 нг/г гемоглобіну.
5. Водний розчин за п. 2, який відрізняється тим, що його осмолярність становить 280-360 ммоль/кг.
6. Водний розчин за п. 2, який відрізняється тим, що показник дисоціації оксигемоглобіну становить 23-32 мм рт.ст. (3,0-4,3 кПа).
7. Водний розчин за п. 1, який відрізняється тим, що він має півперіод існування в організмі пацієнта-людини тривалістю приблизно 15 год.
8. Водний розчин за п. 1, який відрізняється тим, що тривалість півперіоду його існування в організмі пацієнта- людини становить приблизно 24 год.
9. Водний розчин за п. 1, який відрізняється тим, що його вливання пацієнту-людині у кількості до 5 л не спричиняє істотного зниження активності нирок.
10. Водний розчин за п. 1, який відрізняється тим, що його вливання пацієнту-людині у кількості до 5 л не спричиняє істотного зниження активності нирок, і тим, що тривалість півперіоду його існування в організмі пацієнта-людини становить приблизно 24 год.
11. Спосіб одержання розчину піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, придатного для вливання пацієнту-людині у кількості до приблизно З л, який включає: (а) видалення лейкоцитів шляхом фільтрування суміші, що містить еритроцити, за допомогою фільтра, мінімальний середній розмір пор якого є достатнім для запобігання проходженню лейкоцитів; (Б) лізис еритроцитів; (с) додання монооксиду вуглецю та нагрівання продукту стадії (р) при температурі приблизно 60-627"С впродовж приблизно 10 год. для одержання термічно обробленого розчину гемоглобіну; (4) фільтрування згаданого термічно обробленого розчину гемоглобіну для видалення строми та домішок, що містять строму, осаджених внаслідок згаданого нагрівання; (е) знегажування згаданого термічно обробленого розчину гемоглобіну шляхом барботування кисню і потім азоту через згаданий термічно оброблений розчин при температурі приблизно 10"С для утворення піни, з одержанням знегаженого термічно обробленого розчину гемоглобіну; () піридоксилювання згаданого знегаженого розчину для одержання розчину піридоксильованого гемоглобіну; (9) полімеризацію згаданого розчину піридоксильованого гемоглобіну для одержання розчину піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну; (п) оксигенування згаданого розчину; () очищення одержаного розчину з метою видалення тетрамерного гемоглобіну та збирання очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, причому вміст тетрамеру у згаданому розчині становить менше ніж 0,8 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну; () деоксигенування згаданого очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну; та (К) доведення рівнів рН та електролітів у згаданому розчині очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну до фізіологічних рівнів.
12. Спосіб за п. 11, який відрізняється тим, що згаданий знегажений розчин піридоксилюють шляхом введення згаданого знегаженого розчину в контакт із піридоксаль-5-фосфатом, причому молярне відношення піридоксаль- 5-фосфату до гемоглобіну становить приблизно від 1:1 до 3:1.
13. Спосіб за п. 11, який відрізняється тим, що згаданий знегажений розчин піридоксилюють шляхом введення згаданого знегаженого розчину в контакт із піридоксаль-5-фосфатом, причому молярне відношення піридоксаль- 5-фосфату до гемоглобіну становить приблизно 2:1.
14. Спосіб за п. 12, який відрізняється тим, що піридоксаль-5--фосфат вводять в контакт із гемоглобіном та боргідридом впродовж приблизно 1 год.
15. Спосіб за п. 9, який відрізняється тим, що гемоглобін у згаданому піридоксильованому розчині полімеризують шляхом введення піридоксильованого розчину в контакт із глутаральдегідом, причому молярне відношення глутаральдегіду до гемоглобіну становить приблизно 24:1.
16. Спосіб за п. 15, який відрізняється тим, що піридоксильований розчин вводять в контакт із глутаральдегідом впродовж приблизно 18 год., після чого здійснюють швидке охолодження.
17. Водний розчин за п. 1, де згаданим гемоглобіном є полімеризований глутаральдегідом гемоглобін.
18. Спосіб переливання пацієнту-людині, що потребує переливання, який включає введення згаданому пацієнту до 5 л піридоксильованого розчину полімеризованого гемоглобіну, в якому полімеризований гемоглобін включає приблизно 16 95 гемоглобінового полімеру з молекулярною масою приблизно 128, приблизно 26 90 гемоглобінового полімеру з молекулярною масою приблизно 192 та приблизно 58 95 гемоглобінового полімеру з молекулярною масою приблизно 256.
19. Водний розчин за п. 1, який відрізняється тим, що згаданий гемоглобін включає приблизно 16905 гемоглобінового полімеру з молекулярною масою приблизно 128, приблизно 2695 гемоглобінового полімеру з молекулярною масою приблизно 192 та приблизно 5895 гемоглобінового полімеру з молекулярною масою приблизно 256.
20. Розчин піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, придатний для вливання пацієнту-людині у кількості до приблизно З л, який одержують за допомогою способу, який включає: (а) пропускання крові з вичерпаним строком придатності або крові з невичерпаним строком придатності через відповідний аспіраційний апарат під зниженим тиском для одержання відсмоктаної крові; (5) видалення лейкоцитів із відсмоктаної крові шляхом фільтрування суміші, що містить еритроцити, через декілька фільтрів, мінімальний середній розмір пор яких є достатнім для запобігання проходженню лейкоцитів; (с) додання монооксиду вуглецю до згаданого продукту стадії (Б) для одержання розчину гемоглобіну з рн, меншим ніж 7; (4) промивання згаданого розчину стадії (с) 1 9о розчином хлориду натрію, з одержанням промитого розчину; (е) розведення згаданого промитого розчину стадії (4) водою, для одержання розчину лізованих клітин; () фільтрування згаданого розчину лізованих клітин через фільтр для одержання розчину гемоглобіну, вільного від домішок, що містять строму, та матеріалу стінок клітин; (9) нагрівання та фільтрування згаданого розчину гемоглобіну стадії () при температурі приблизно 60-62" впродовж приблизно 10 год. для одержання вільного від строми термічно обробленого розчину гемоглобіну; (п) концентрування та діафільтрування згаданого вільного від строми термічно обробленого розчину гемоглобіну для одержання розчину карбоксигемоглобіну; () знегажування згаданого розчину карбоксигемоглобіну шляхом барботування кисню і потім азоту через згаданий термічно оброблений розчин при температурі приблизно 107"С для утворення піни, з одержанням знегаженого термічно обробленого розчину гемоглобіну; () піридоксилювання згаданого знегаженого розчину за допомогою піридоксаль-5-фосфату для одержання розчину піридоксильованого гемоглобіну, причому молярне відношення піридоксаль-5-фосфату до гемоглобіну становить приблизно від 1:1 до 3:1; (ЮК полімеризацію згаданого розчину піридоксильованого гемоглобіну за допомогою водного розчину глутаральдегіду для одержання розчину піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну з таким розподілом за молекулярною масою: приблизно 65-75 905 полімеру та приблизно 25-35 95 тетрамеру; (1) оксигенування та розведення згаданого полімеризованого розчину, доки згаданий розчин не буде містити приблизно 4 95 (мас.) гемоглобіну; (т) очищення розчину стадії (1) для видалення тетрамерного гемоглобіну та збирання очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, причому вміст тетрамеру у згаданому розчині становить менше ніж 0,8 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну; (п) деоксигенування згаданого очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну азотом; (о) доведення рівнів рН та електроліту у згаданому розчині очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну до приблизно 8,8-9,0; та (р) концентрування та стерилізацію розчину стадії (0) з відрегульованим рівнем рн.
21. Спосіб одержання розчину піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, придатного для вливання пацієнту-людині у кількості до приблизно З л, який включає: (а) пропускання крові з вичерпаним строком придатності або крові з невичерпаним строком придатності через відповідний аспіраційний апарат під зниженим тиском для одержання відсмоктаної крові; (б) видалення лейкоцитів із відсмоктаної крові шляхом фільтрування суміші, що містить еритроцити, через декілька фільтрів, мінімальний середній розмір пор яких є достатнім для запобігання проходженню лейкоцитів; (с) додання монооксиду вуглецю до згаданого продукту стадії (Б) для одержання розчину гемоглобіну з рн, меншим ніж 7; (4) промивання згаданого розчину стадії (с) 1 9о розчином хлориду натрію, з одержанням промитого розчину; (е) розведення згаданого промитого розчину стадії (а) водою, для одержання розчину лізованих клітин; () фільтрування згаданого розчину лізованих клітин через фільтр для одержання розчину гемоглобіну, вільного від домішок, що містять строму, та матеріалу стінок клітин; (9) нагрівання та фільтрування згаданого розчину гемоглобіну стадії () при температурі приблизно 60-62" впродовж приблизно 10 год. для одержання вільного від строми термічно обробленого розчину гемоглобіну; (п) концентрування та діафільтрування згаданого вільного від строми розчину термічно обробленого гемоглобіну для одержання розчину карбоксигемоглобіну; () знегажування згаданого розчину карбоксигемоглобіну шляхом барботування кисню і потім азоту через згаданий термічно оброблений розчин при температурі приблизно 10"С для утворення піни, з одержанням знегаженого термічно обробленого розчину гемоглобіну; () піридоксилювання згаданого знегаженого розчину за допомогою піридоксаль-5-фосфату для одержання розчину піридоксильованого гемоглобіну, причому молярне відношення піридоксаль-5-фосфату до гемоглобіну становить приблизно від 1:1 до 3:1; (ЮК) полімеризацію згаданого розчину піридоксильованого гемоглобіну за допомогою водного розчину глутаральдегіду для одержання розчину піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну з таким розподілом за молекулярною масою: приблизно 65-75 905 полімеру та приблизно 25-35 95 тетрамеру; () оксигенування та розведення згаданого полімеризованого розчину, доки згаданий розчин не буде містити приблизно 4 95 (мас.) гемоглобіну; (т) очищення розчину стадії (І) для видалення тетрамерного гемоглобіну та збирання очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, причому вміст тетрамеру у згаданому розчині становить менше ніж 0,8 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну; (п) деоксигенування згаданого очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну азотом; (о) доведення рівнів рН та електроліту у згаданому розчині очищеного піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну до приблизно 8,8-9,0; та
(р) концентрування та стерилізацію розчину стадії (0) з відрегульованим рівнем рн.
22. Водний розчин піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, який відрізняється тим, що: - загальний вміст гемоглобіну становить від 9,5 г/дл до 12,0 г/дл; - загальний вміст метгемоглобіну становить менше ніж 8 95 (мас.) від загального вмісту гемоглобіну; - загальний вміст карбоксигемоглобіну становить менше ніж 5 95 (мас) від загального вмісту гемоглобіну; - показник дисоціації оксигемоглобіну становить 23-32 мм рт.ст. (3,0-4,3 кПа); - осмолярність становить 280-360 ммоль/кг; - натрій міститься у концентрації від 135 ммоль/л до 155 ммоль/л; - калій міститься у концентрації від 3,5 ммоль/л до 4,5 ммоль/л; - хлорид міститься у концентрації від 85 ммоль/кг до 110 ммоль/кг; - загальний вміст вільного заліза становить менше ніж 2,0 млн"; - у розподілі молекулярної маси, пік 128 кДа становить від 10 95 до 24 95; - у розподілі молекулярної маси, пік 192 кДа становить від 18 95 до 30 95; - у розподілі молекулярної маси, пік 256 кДа становить від 4595 до 70 9о; - загальний вміст тетрамеру становить менше ніж 0,8 95; - вміст ендотоксину становить менше ніж 0,03 ОДе/мл; - вміст фосфоліпідів становить менше ніж 50 нг/г гемоглобіну; та - вміст гліколіпідів становить менше ніж 2 нг/г гемоглобіну.
23. Водний розчин піридоксильованого полімеризованого гемоглобіну, який містить: - гемоглобіновий полімер із молекулярною масою приблизно 128 кДа, у кількості приблизно 16 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну; - гемоглобіновий полімер із молекулярною масою приблизно 192 кДа, у кількості приблизно 26 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну; - гемоглобіновий полімер із молекулярною масою приблизно 256 кДа, у кількості приблизно 58 95 (мас.) від загальної маси гемоглобіну.
24. Водний розчин за п. 23, який відрізняється тим, що його вливання пацієнту-людині у кількості до приблизно 1,5 л не спричиняє істотного зниження активності нирок.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US1438996P | 1996-03-28 | 1996-03-28 | |
| PCT/US1997/005088 WO1997035883A1 (en) | 1996-03-28 | 1997-03-27 | Method and apparatus for preparing an acellular red blood cell substitute |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA64710C2 true UA64710C2 (en) | 2004-03-15 |
Family
ID=21765191
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA98095067A UA64710C2 (en) | 1996-03-28 | 1997-03-27 | Aqueous solution of polymerized hemoglobin (variants), method for its manufacture (variants) and method of infusion |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US6498141B2 (uk) |
| EP (1) | EP0928294B1 (uk) |
| JP (1) | JP2000507947A (uk) |
| CN (1) | CN1129608C (uk) |
| AP (1) | AP1028A (uk) |
| AT (1) | ATE241646T1 (uk) |
| AU (1) | AU740210B2 (uk) |
| BG (1) | BG63919B1 (uk) |
| BR (1) | BR9708388A (uk) |
| CA (1) | CA2250274C (uk) |
| CZ (1) | CZ299357B6 (uk) |
| DE (1) | DE69722422T2 (uk) |
| DK (1) | DK0928294T3 (uk) |
| ES (1) | ES2200177T3 (uk) |
| IL (1) | IL126376A (uk) |
| IS (1) | IS4854A (uk) |
| NO (1) | NO324121B1 (uk) |
| NZ (2) | NZ332067A (uk) |
| OA (1) | OA10884A (uk) |
| PL (1) | PL187923B1 (uk) |
| PT (1) | PT928294E (uk) |
| RO (1) | RO121089B1 (uk) |
| RU (1) | RU2203087C2 (uk) |
| SK (1) | SK134398A3 (uk) |
| UA (1) | UA64710C2 (uk) |
| WO (1) | WO1997035883A1 (uk) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ332067A (en) * | 1996-03-28 | 2001-03-30 | Northfield Lab | Pyridoxylated, polymerized hemoglobin solution and method and apparatus for its preparation |
| AU2002254646B2 (en) | 2001-04-18 | 2008-05-15 | Northfield Laboratories, Inc. | Flexible container system for storage of stabilized hemoglobin solutions |
| DE10220992A1 (de) * | 2002-05-11 | 2003-12-04 | Sanguibiotech Ag | Verwendung eines oder mehrerer Sauerstoffträger, ausgewählt aus Hämoglobin, Myoglobin und Derivaten hiervon zur Behandlung einer Organfunktionsstörung infolge eines akuten Versorgungsmangels und zur Behandlung/Vermeidung einer Gewebeschädigung infolge einer solchen Störung |
| JP2006502231A (ja) * | 2002-10-03 | 2006-01-19 | ノースフィールド ラボラトリーズ、インコーポレイテッド | 大量失血を被っている患者の処置方法 |
| JP2006516994A (ja) * | 2003-01-29 | 2006-07-13 | ノースフィールド ラボラトリーズ、インコーポレイテッド | テトラマーの量を低下させた重合ヘモグロビン溶液及び調製するための方法 |
| SE0501462L (sv) * | 2005-06-23 | 2006-09-26 | Proliff Ab | Förfarande för framställning av blodplättslysat |
| US20090004159A1 (en) * | 2006-01-24 | 2009-01-01 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinoi | Polymerized Hemoglobin Media and Its Use in Isolation and Transplantation of Islet Cells |
| US20070196810A1 (en) * | 2006-01-24 | 2007-08-23 | Northfield Laboratories Inc. | Polymerized Hemoglobin Media and its Use in Isolation and Transplantation of Islet Cells |
| RU2340354C1 (ru) * | 2007-06-05 | 2008-12-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Геленпол" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода |
| RU2361608C1 (ru) | 2008-03-18 | 2009-07-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Производственная Компания "Медбиофарм" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) |
| WO2019018403A1 (en) | 2017-07-18 | 2019-01-24 | Virtech Bio, Llc | BLOOD SUBSTITUTES COMPRISING HEMOGLOBIN AND METHODS OF MAKING |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5464814A (en) * | 1986-06-20 | 1995-11-07 | Northfield Laboratories, Inc. | Acellular red blood cell substitute |
| US5194590A (en) * | 1986-06-20 | 1993-03-16 | Northfield Laboratories, Inc. | Acellular red blood cell substitute |
| US4826811A (en) * | 1986-06-20 | 1989-05-02 | Northfield Laboratories, Inc. | Acellular red blood cell substitute |
| IL87708A (en) * | 1988-09-08 | 1994-04-12 | Technion Inst For Research And | Hemoglobin-based blood substitute possessing a colloid oncotic pressure substantially similar to human blood and method for the preparation thereof |
| SE9001378D0 (sv) * | 1990-04-18 | 1990-04-18 | Kabivitrum Ab | A method for the preparation of pyridoxylated hemoglobin |
| TW381022B (en) * | 1993-08-16 | 2000-02-01 | Hsia Jen Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides to avoid oxygen toxicity, particularly in stabilized, polymerized, conjugated, or encapsulated hemoglobin used as a red cell substitute |
| NZ332067A (en) * | 1996-03-28 | 2001-03-30 | Northfield Lab | Pyridoxylated, polymerized hemoglobin solution and method and apparatus for its preparation |
| US5998361A (en) * | 1996-10-18 | 1999-12-07 | University Of Maryland At Baltimore | Polymerized hemoglobin |
-
1997
- 1997-03-27 NZ NZ332067A patent/NZ332067A/en unknown
- 1997-03-27 PT PT97919943T patent/PT928294E/pt unknown
- 1997-03-27 AP APAP/P/1998/001353A patent/AP1028A/en active
- 1997-03-27 RU RU98119535/14A patent/RU2203087C2/ru active
- 1997-03-27 IL IL126376A patent/IL126376A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-03-27 NZ NZ538045A patent/NZ538045A/en unknown
- 1997-03-27 DK DK97919943T patent/DK0928294T3/da active
- 1997-03-27 AT AT97919943T patent/ATE241646T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-03-27 JP JP9534650A patent/JP2000507947A/ja active Pending
- 1997-03-27 SK SK1343-98A patent/SK134398A3/sk unknown
- 1997-03-27 WO PCT/US1997/005088 patent/WO1997035883A1/en active IP Right Grant
- 1997-03-27 ES ES97919943T patent/ES2200177T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-27 BR BR9708388-7A patent/BR9708388A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-03-27 CN CN97194998A patent/CN1129608C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-03-27 UA UA98095067A patent/UA64710C2/uk unknown
- 1997-03-27 AU AU24253/97A patent/AU740210B2/en not_active Ceased
- 1997-03-27 RO RO98-01433A patent/RO121089B1/ro unknown
- 1997-03-27 EP EP97919943A patent/EP0928294B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-27 DE DE69722422T patent/DE69722422T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-03-27 CZ CZ0310098A patent/CZ299357B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-03-27 US US09/155,419 patent/US6498141B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-03-27 CA CA002250274A patent/CA2250274C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-03-27 PL PL32910897A patent/PL187923B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-09-25 OA OA9800177A patent/OA10884A/en unknown
- 1998-09-25 NO NO19984473A patent/NO324121B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 IS IS4854A patent/IS4854A/is unknown
- 1998-10-01 BG BG102810A patent/BG63919B1/bg unknown
-
2002
- 2002-10-17 US US10/274,099 patent/US20030191050A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-11-19 US US10/993,228 patent/US20050065067A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-01-10 US US11/972,322 patent/US7521417B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-04-20 US US12/426,566 patent/US20100197566A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7521417B2 (en) | Method and apparatus for preparing an acellular red blood cell substitute | |
| US7411044B2 (en) | Polymerized hemoglobin solutions having reduced amounts of tetramer and method for preparing | |
| NL194909C (nl) | Werkwijze voor de bereiding van gepolymeriseerd hemoglobine en celvrij vervangingsmiddel voor rode bloedlichaampjes op basis daarvan. | |
| US20030113707A1 (en) | Use of defibrinated blood for manufacture of a hemoglobin-based oxygen carrier | |
| KR100562762B1 (ko) | 무세포성적혈구대체물을제조하기위한방법및장치 | |
| EP1308460A2 (en) | Method and apparatus for preparing an acellular red blood cell substitute |