UA121973C2 - Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (gdf15), та способи лікування ним ожиріння та гіперглікемії у суб'єкта - Google Patents

Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (gdf15), та способи лікування ним ожиріння та гіперглікемії у суб'єкта Download PDF

Info

Publication number
UA121973C2
UA121973C2 UAA201702260A UAA201702260A UA121973C2 UA 121973 C2 UA121973 C2 UA 121973C2 UA A201702260 A UAA201702260 A UA A201702260A UA A201702260 A UAA201702260 A UA A201702260A UA 121973 C2 UA121973 C2 UA 121973C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
polypeptide
sequence
amino acid
rgo
shi
Prior art date
Application number
UAA201702260A
Other languages
English (en)
Inventor
Уеньян Шен
Даррін Ліндхаут
Даррин Линдхаут
Радж ХАЛДАНКАР
Хуго Матерн
Original Assignee
Нджм Біофармасьютікалз, Інк.
НДжМ БИОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нджм Біофармасьютікалз, Інк., НДжМ БИОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. filed Critical Нджм Біофармасьютікалз, Інк.
Publication of UA121973C2 publication Critical patent/UA121973C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Abstract

Винахід стосується комплексу, який містить GDF15 поліпептид. Запропоновано способи лікування індивідів із порушенням метаболізму, таким як порушення метаболізму глюкози і/або розлад маси тіла і композиції, пов'язані з ними.

Description

Включення переліків послідовностей шляхом посилання
І0001| В цій заявці представлено перелік послідовностей у вигляді текстового файлу розміром 188 кб "ШКОМВ-142 Зеадгівкїх", який створено 28 жовтня 2015 року. Зміст вказаного текстового файлу в повному обсязі включено у цей документ за шляхом посилання.
Перехресне посилання на споріднені заявки
І0002)| В даній заявці заявляється пріоритет за попередньою заявкою на видачу патенту
США з серійним номером 62/073737, яку подано 31 жовтня 2014 року, і попередньою заявкою на патент США з серійним номером 62/244604, яку подано 21 жовтня 2015 року, які включено у цей документ шляхом посилання у повному об'ємі.
Галузь техніки
ІЇ0003| Цей винахід відноситься в тому числі до поліпептидного комплексу і його композиціям, які можна застосовувати для лікування станів, які пов'язані з метаболізмом.
Введення
І0004| Причиною ожиріння найчастіше є надмірне споживання їжі в поєднанні з обмеженою витратою енергії і/або відсутністю фізичних вправ. Ожиріння збільшує ймовірність розвитку різних захворювань, наприклад, цукрового діабету, гіпертензії, атеросклерозу, захворювання коронарних артерій, синдрому апное уві сні, подагри, ревматизму і артриту. Крім того, ризик смертності безпосередньо корелює з ожирінням, так що, наприклад, індекс маси тіла понад 40 призводить до середнього зменшення очікуваної тривалості життя більш ніж на 10 років.
ІЇ0005| Сучасні методи медикаментозного лікування включають пригнічувачі апетиту, які орієнтовані на класи рецепторів (наприклад, СВІ, 5-НТ2С, і МРУ); регулятори ланцюгів апетиту в гіпоталамусі і молекулярної дії греліну; та інгібітори поглинання поживних речовин, спрямовані на ліпазу. На жаль, жоден з існуючих способів не забезпечує ефективне лікування ожиріння, не викликаючи несприятливих ефектів, деякі з яких можуть бути дуже серйозними.
Ї00О6| Високий рівень глюкози в крові стимулює секрецію інсуліну бета-клітинами підшлункової залози. Інсулін, у свою чергу, стимулює проникнення глюкози у м'язи та жирові клітини, що призводить до накопичення глікогену і тригліцеридів і синтезу білків. Активація рецепторів інсуліну на клітинах різних типів знижує рівень глюкози у кровотоці за рахунок збільшення поглинання та утилізації глюкози, а також зменшення утворення глюкози в печінці.
Зо Роз'єднання в цій регуляторній мережі може призвести до діабету і пов'язаних з ним патологічних синдромів, які спостерігаються у значного і зростаючого відсотка людської популяції.
І0007| Пацієнти з порушенням метаболізму глюкози можуть страждати від гіперглікемії, гіперінсулінемії і/або непереносимості глюкози. Прикладом розладу, який часто асоціюється з патологічним рівнем глюкози і/або інсуліну, є інсулінрезистентність при який клітини печінки, жирові і м'язові клітини втрачають здатність реагувати на рівень інсуліну в крові.
ІЇ0008| З урахуванням поширеності і тяжкості ожиріння, діабету і пов'язаних з ними метаболічних і неметаболических розладів, зберігається інтерес до способів лікування, які модулюють, наприклад, апетит, рівні глюкози і/або інсуліну і підсилюють біологічну реакцію на коливання рівня глюкози у пацієнта. (0009| СОЕ15 дикого типу, також відомий як МІС-1 (інгібіторний цитокін макрофагів-1), пов'язаний з регуляцією маси тіла (Т5аї М.МУ., еї аІ.,, РГо5 Опе 2013; 8 (2): е55174; 05 8192735).
Суть винаходу 0010 Представлено модифіковані ЗОЕ15 поліпептиди для лікування метаболічних розладів. Модифіковані ЗОЕ15 поліпептиди можуть бути представлені в комплексі. Комплекс цього опису може містити два СОЕ15 поліпептиди. 0011) В деяких випадках, комплекс згідно цього винаходу містить перший поліпептид, який містить Ес-послідовність ДО, при цьому Ес-послідовність (дО містить СНЗ послідовність, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; і другий поліпептид, який містить Ес- послідовність ДС, при цьому Ес-послідовність ДС містить СНЗ послідовність, яка містить щонайменше одну сконструйовану впадину, причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду у впадину другого поліпептиду, і, при цьому або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутеїна СОЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання. 0012) У деяких випадках, комплекс згідно цього винаходу містить перший гетеродимер і другий гетеродимер, кожен з першого і другого гетеродимерів містять перший поліпептид і другий поліпептид, перший поліпептид, який містить Ес-послідовність ДС, при цьому Ес- послідовність ЇД містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одне сконструйоване бо вип'ячування; і другий поліпептид, який містить Ес-послідовність ІдсС, при цьому Ес-
послідовність (ДО містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану впадину; причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду у впадину другого поліпептиду, і причому або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутеїна ЗОБЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт о М-зв'язаного глікозилювання, і, причому, мутеїн СОЕ15 у першому гетеродимері димерізується з мутеїном
СОБ15 у другому гетеродимері тим самим формуючи комплекс, який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер.
І0013) В ілюстративних варіантах реалізації винаходу, С-кінець першого поліпептиду може бути кон'юговано с М-кінцем мутеїна СОЕ15. В інших випадках, С-кінець другого поліпептиду може бути кон'юговано з М-кінцем мутеїна СОР15.
Ї0014| Також у цьому документі перший розглянуто поліпептид, який містить Ес- послідовність ДС, при цьому Ес-послідовність ДС містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування, причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом, який містить Ес-послідовність дО, при цьому Ес-послідовність до містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану впадину; і мутеїн СОРЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, причому С- кінець першого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутеїна СООР15. Перший поліпептид може бути представлено у комплексі, який може також містити другий поліпептид. 0015) Також в цьому документі описано перший поліпептид, який містить Есо-послідовність
Іо, при цьому Ес-послідовність дО містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану впадину, причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом, який містить Ес-послідовність ДО, при цьому Есо-послідовність дО містить СНЗ послідовність, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; і мутеїн ЗОЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, причому С-кінець першого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутеїна СОЕ15. Перший поліпептид може бути представлено у комплексі, який може також містити другий поліпептид.
ЇО0О16| У певних випадках, мутеїн СОЕ15 у комплексі може містити безперервну амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 90 95 ідентична амінокислотній послідовності
Зо дикого типу СОР15 (ЗЕО ІЮ МО:1). Наприклад, мутеїн СОЕ15 може містити щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти в 5ЕО ІЮО МО:1, яка створює консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, наприклад, заміна може бути О5Т або 055. В інших випадках, заміна може бути дм.
І0017| В ілюстративних випадках, мутетн СОБЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у БЕО ІЮ МО:1, яка створює консенсусний сайт М- зв'язаного глікозилювання: К16М і НІ8Т/5; 523М і Е25Т/5; 124М і 026Т/5; 550М і Е52Т/55; Е52М і
АБ54Т/5; О51М і К53Т/55 К5ЗМ і А55Т/5; З64М і НббТ/5; 1 65М і К67Т/5; 582М і М84Т/5; КОМ і розт/5; 093М і 595Т/5; Т94М і М96Т/5; М9БбМ і І 98/55; 597М і 099Т/5; і АТО6М і 01087/5.
І0018| В ілюстративних випадках, мутетн СОБЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у БЕО ІЮ МО:1, яка створює консенсусний сайт М- зв'язаного глікозилювання: К16М і НІ18Т; 523М і Е25Т; 124М і 0261; 550М їі Е52Т; Е52М ї АБАТ;
О51М і К53Т; К5ЗМ і А55Т; 564М і НЄБТ; І 65М і К67Т; 582М і М84т; КОМ і 093тТ; 093М і 957;
Т94М і М96Т; М9БбМ і 1981; 597М і 099; і АТО6М і 01087Т. 0019) У деяких випадках, мутеїн ЗОЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у ЗЕО ІЮ МО:1, яка створює консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання: К16М і НІ85; 523М і Е255; 124М і 0265; 550М і Е525; Е52М і А545; ОБІМ і
К535; К5ЗМ і А555; 564М і НббБ5; 165М і 675; 582М і М845; КО1М і 093575 093М і 5955; Т94М і
М965; М96М і 1985; 597М і 2995; і АТО6М і 01085.
І0020) В деяких варіантах реалізації винаходу, мутеїн СОБЕ15 може містити щонайменше
БО одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у 5ЕО ІЮ МО:1: 523М і Е25Т/5; К5ЗМ і
АББТ/5; З64М і НббЄТ/5; КОТМ і 0937Т/5; Б93М і 595Т/5; 597М і 0991/5; і АТОбМ і 108775.
І0021) В деяких варіантах реалізації винаходу, мутеїн СОБЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у хЕО ІЮ МО:1: 523М і Е25Т; К5ЗМ ії А55Т;
Зб6АМ і НТ; КОМ і 093Т; 093М і 595; 597М і 0997; ії АТО6М і 01085. (0022) В деяких варіантах реалізації винаходу, мутеїн СОЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у хЕО ІЮ МО:1: 523М і Е255; К5ЗМ і А555;
ЗбАМ і Нбб5; КОТМ і 093575 093М і 5955; 597М і 20995; і АТО6М і 01085.
І0023) В деяких варіантах реалізації винаходу, мутеїн ЗОБЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у 5ЕО ІЮ МО:1: 564М і НбебТ/5; КОМ і 60 Мрозт/5; 093М і 5951/5; і 597М і 2099Т/5. Наприклад, мутеїн СОЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у БЕО ІЮ МО:1: 564М і НебТ; К9О1ТМ і 0937; розм і 5957Т; і 597М і 999Т; або 564М і Нбб5; К91ТМ і 0935; 093М і 5955; і 597М і 0995. (0024) В інших варіантах реалізації винаходу, мутеїн СОЕ15 може містити щонайменше одну з наступних пар замін відповідних амінокислот у ЗЕО ІЮ МО:1: КО1ТМ ії 093Т або ре35; і 093М і
О95тТ або 5955. 0025) В інших варіантах реалізації винаходу, мутеїн ЗОБЕ15 у комплексі може містити безперервну амінокислотну послідовність яка може бути щонайменше 98 амінокислот довжиною і може бути щонайменше на 90 95 ідентична амінокислотній послідовності 560 ІЮ
МО:1, де С-кінцева амінокислота мутеїна СОЕ15 відповідає ізолейцину в положенні 112 в ЗЕ
ІО МО.
І0026)| В інших варіантах реалізації винаходу, безперервна амінокислотна послідовність може бути довжиною щонайменше 98 амінокислот і може бути щонайменше на 95 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІО МО: 1, де С-кінцева амінокислота мутеїна С0ОЕ15 відповідає ізолейцину в положенні 112 в 5ЕО ІЮ МО:1.
І0027| Ілюстративний мутеїн СОРЕ15 представлено в комплексі, який описано в цьому документі, містить безперервну амінокислотну послідовність, довжина якої становить щонайменше 98 амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну амінокислотній послідовності
ЗЕО ІО МО, і містить делецію амінокислот порівняно з ЗЕО ІЮ МО:1, наприклад, поліпептиди можуть бути вкорочені з М-кінця порівняно з ЗЕО ІО МО:1. Вкорочення з М-кінця може бути на 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або більше амінокислот порівняно з 5ЕО ІЮ МО:1, наприклад, на 1-14 амінокислот, 2-14 амінокислот, 3-14 амінокислот, 2-3 амінокислот, 3-5 амінокислот або 4-6 амінокислот. 0028) Ілюстративні комплекси, які описано в цьому документі, містять мутеїн СОЕ15, який містить безперервну амінокислотну послідовність щонайменше 98 амінокислот довжиною і щонайменше на 95 95 ідентичну амінокислотній послідовності БЕО ІЮ МО:1, причому С-кінцева амінокислота поліпептиду відповідає ізолейцину в положенні 112 в ЗЕО ІЮ МО:1.
І0029| У деяких випадках, довжина безперервної амінокислотної послідовності у мутеїна
СОГЕ15 становить щонайменше 98 амінокислот і не містить першу амінокислоту, яка відповідає першій амінокислоті, яка присутня на М-кінці «ЕО ІЮ МО, причому С-кінцева амінокислота
Ко) відповідає ізолейцину в положенні 112 в 5ЕО ІЮ МО:1. 0030) У деяких випадках, довжина безперервної амінокислотної послідовності у мутеїна
СОБ15 становить щонайменше 98 амінокислот і не містить перші дві амінокислоти, які відповідають першим двом амінокислотам, які присутні на М-кінці «ЕО ІЮО МО:1, причому С- кінцева амінокислота відповідає ізолейцину в положенні 112 в ЗЕО І МО:1. 0031) У деяких випадках, довжина безперервної амінокислотної послідовності становить щонайменше 98 амінокислот і не містить перші три амінокислоти, які відповідають першим трьом амінокислотам, які присутні на М-кінці БЕ ІЮО МО:1, причому С-кінцева амінокислота відповідає ізолейцину в положенні 112 в 5ЕО ІЮ МО:1. 0032) У деяких випадках, довжина безперервної амінокислотної послідовності становить щонайменше 98 амінокислот і не містить перші шість амінокислот, які відповідають першим шести амінокислотам, які присутні на М-кінці «ЕО ІЮ МО:1, причому С-кінцева амінокислота відповідає ізолейцину в положенні 112 в 5ЕО ІЮ МО:1. 0033) У деяких випадках, довжина безперервної амінокислотної послідовності становить щонайменше 98 амінокислот і не містить перші чотирнадцять амінокислот, які відповідають першим чотирнадцяти амінокислотам, які присутні на М-кінці БЕО ІЮ МО:1. 0034) У деяких випадках, С-кінець або першого поліпептиду (наприклад, Есо-виступ), або другого поліпептиду (наприклад, Ес-западина) кон'юговано с М-кінцем мутеїна ЗОЕ15 через лінкер. Ілюстративні лінкери містять послідовність (545)и, при цьому п може дорівнювати від 1 до 10, наприклад, 1-5 або 2-5, для Прикладів 2, 3, 4 або 5.
ЇОО35| У певних випадках, Ес ІдсС містить безперервну амінокислотну послідовність щонайменше на 90 95 ідентичну амінокислотній послідовності «ЕО ІЮ МО:2 (Ес-послідовність 3991 людини). Сконструйоване вип'ячування може включати в себе щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти у Ес-послідовності (9051 людини, причому заміна відбувається в положенні, яке обрано з групи, яка складається з амінокислотних залишків 347, 366 і 394, у відповідності з нумерацією ЄС. Наприклад, щонайменше одна заміна є обраною з групи, яка складається з О347УМ/у, 366 і Т394Уу/У у відповідності з нумерацією ЄС.
ЇО0О36| У певних випадках, сконструйована западина містить щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти у Ес-послідовності (9051 людини, причому заміна відбувається в положенні, яке обрано з групи, яка складається з амінокислотних залишків 366, 368, 394, 405 і бо 407, у відповідності з нумерацією ЄС. Наприклад, щонайменше одна заміна є обраною з групи,
яка складається з 73665, І З368А, 13945, Е405ТЛ/ЛА і у407ТЛ/А у відповідності з нумерацією ЄС.
І0037| У певних випадках, вип'ячування може містити заміну Т36бУМУ/У і западина може містити заміни 73665, І З68А і х407Т//А, у відповідності з нумерацією ЄС. 0038) Наприклад, вип'ячування може містити заміну Т366УМ// і западина може містити заміну У407Т///А у відповідності з нумерацією ЄС. В інших випадках, вип'ячування може містити заміну 7366 і западина може містити заміну 7407 у відповідності з нумерацією ЄС. В інших прикладах, вип'ячування може містити заміну Т366УУ і западина може містити заміну
У407А у відповідності з нумерацією ЄС. У подальших прикладах, вип'ячування може містити заміну Т394У і западина може містити заміну 407 у відповідності з нумерацією ЄС.
ІЇ0039| У певних варіантах реалізації винаходу, Ес-послідовності (305 першого та другого поліпептидів можуть кожний містити шарнірну ділянку, яка формує щонайменше один дисульфідний зв'язок між першим і другим поліпептгидами. У певних варіантах реалізації винаходу, Ес-послідовності (С першого та другого поліпептидів можуть кожний містити шарнірну ділянку, СН2 ділянку і СНЗ ділянку, де шарнірна ділянка формує щонайменше один дисульфідний зв'язок між першим і другим поліпептидами. 0040) Також в цьому документі описано молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує описані вище перший та другий поліпептиди. Молекула нуклеїнової кислоти може бути функціонально пов'язана з елементом, який контролює експресію, який забезпечує експресію молекули нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептиди іп міїго або іп мімо. Крім того, розглядається вектор, який містить молекулу нуклеїнової кислоти. Вектор може бути вірусним вектором. У певних випадках представлено першу нуклеїнову кислоту, яка кодує перший поліпептид, і другу нуклеїнову кислоту, яка кодує другий поліпептид. Кожна нуклеїнова кислота функціонально пов'язана з елементом, який контролює експресію, який забезпечує експресію першого та другого поліпептидів із першої і другої нуклеїнових кислот відповідно. Також описано перший вектор, який містить першу нуклеїнову кислоту і другий вектор, який містить другу нуклеїнову кислоту. Як вже зазначалося тут, вектор може бути вірусним вектором.
І0041) Деякі варіанти реалізації включають трансформовані клітини-хазяї, які експресують один або більше з вищезазначених поліпептидів. Наприклад, представлено клітину-хазяїна, яка містить першу і другу нуклеїнові кислоти. Клітина-хазяїн експресує перший поліпептид і другий поліпептид. (0042) В конкретних варіантах реалізації цього опису, один або більше з вищезазначених комплексів розроблено для отримання фармацевтичної композиції, причому композиція також містить один або більше з фармацевтично прийнятних розріджувачів, носіїв або допоміжних речовин. У деяких варіантах реалізації Фармацевтична композиція також містить щонайменше один додатковий профілактичний або терапевтичний агент. 0043) Також розкрито композицію (наприклад, фармацевтична композиція) з одного або більше вищезазначених комплексів для лікування або профілактики розладу маси тіла у суб'єкту; для лікування або профілактики порушення метаболізму глюкози у суб'єкту.
Композиція може містити кількість комплексу, яка є ефективною для лікування або профілактики розладу маси тіла у суб'єкта. Композиція може містити кількість комплексу, яка є ефективною для лікування або профілактики порушення метаболізму глюкози у суб'єкту.
І0044| Подальші варіанти реалізації цього винаходу містять антитіло, яке специфічно зв'язується з одним із вищезазначених першим або другим поліпептидами.
І0045| Крім того, у цьому описі розглядаються фармацевтичні композиції, які містять антитіло, яке описано вище, у складі з щонайменше однією фармацевтично прийнятною допоміжною речовиною, носієм або розріджувачем. Такі фармацевтичні композиції також можуть містити щонайменше один додатковий профілактичний або терапевтичний агент. (0046) Деякі варіанти реалізації цього винаходу передбачають стерильний контейнер, який містить одну із зазначених вище фармацевтичних композицій і не обов'язково один або кілька додаткових компонентів. В якості прикладу, але не обмежуючись ним, стерильний контейнер може представляти собою шприц. У подальших варіантах реалізації стерильний контейнер є одним із компонентів набору; набір також може містити, наприклад, другий стерильний контейнер, який містить щонайменше один профілактичний або терапевтичний агент.
І0047| Крім того, у цьому документі описано спосіб виготовлення вищезазначених поліпептидів і комплексів. Спосіб може включати культивування клітини-хазяїна, яка експресує поліпептиди; і виділення комплексу, який містить експресовані поліпептиди. 0048) У цьому винаході також розглядається спосіб лікування або профілактики порушення метаболізму глюкози у суб'єкта (наприклад, людини) шляхом введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості вищезгаданого комплексу. У деяких способах лікування або профілактика бо призводить до зменшення рівня глюкози в плазмі суб'єкта, зменшення рівня інсуліну в плазмі суб'єкта, зменшення маси тіла і/або споживання їжі або підвищенню переносності глюкози у суб'єкта. У конкретних варіантах реалізації порушення метаболізму глюкози являє собою цукровий діабет. 00491 Крім того, описано спосіб лікування або профілактики розладу маси тіла у суб'єкта.
Спосіб може включати введення суб'єкту комплексу згідно цього опису, причому комплекс вводять у кількості, ефективній для лікування або профілактики розладу маси тіла у суб'єкту. У деяких способах лікування або профілактика призводить до зменшення маси тіла і/або споживання їжі у суб'єкта.
ЇОО5О| В деяких варіантах реалізації суб'єкт страждає ожирінням і/або розладом маси тіла.
ІЇ0051| Хоча цей винахід не обмежується яким-небудь конкретним шляхом введення або схемою прийому, у деяких варіантах реалізації введення здійснюють шляхом парентеральної (наприклад, підшкірної) ін'єкції.
Короткий опис графічних матеріалів
І0052| На Фіг. 1 продемонстровано схематичний малюнок гомодимерного комплексу гетеродимерів молекул (Ес/Ес)-СОРЕ15, де Ес/Ес поліпептиди мають виступ-у-западину Ес пари (А-Р) і включення М-зв'язаних гліканів в молекулу СОЕ15 (Е, Е) для посилення експресії та збирання гомодимерного комплексу гетеродимерів.
І0053| На Фіг. 2А продемонстровано відновлення з Ехрі 293Е транзієнтної експресії сконструйованих (Ес/Ес)-СОЕ15 комплексів. Відновлення відбувається наступним чином: (0 - агрегати/без експресії, « 25 мг/л, 25 мг/л - 49,9 мг/л, 50 мг/л - 74,9мг/л, 75 мг/л - 99,0 мг/л, » 100 мг/л). Додавання М-зв'язаних гліканів в послідовність СОРЕ15 в (Ес/Ес)-С0ОЕ15 забезпечує значне підвищення загального відновлення після очищення. На Фіг. 28 продемонстровано відновлення із Ехрі 293Е транзієнтної експресії дикого типу ЗОБЕ15 і БОРЕ15- глікозильованих мутантів (глікомутеїнів), які не кон'юговано з Ес.
І0054| На Фіг. З продемонстровано зменшення маси тіла в мишачій моделі з ожирінням, індукованим дієтою (ІС), при підшкірній доставці 0,4 нмоль/кг (Ес/Ес)-ЗОРЕ15 комплексів один раз на тиждень протягом 4 тижнів, а потім 14-денного періоду відновлення. В1За/В13Б варіант має значно покращену ефективність порівняно з ВЗа/ВОБ і В11та/В115 варіантами.
І0О55| На Фіг. 4 продемонстровано відсоток зменшення маси тіла в мишачій моделі БІО при
Зо підшкірній доставці 0,4 нмоль/кг (Ес/Ес)-5ОЕ15 комплекса один раз на тиждень протягом 4 тижнів, а потім 14-денного періоду відновлення. В1За/В13Б варіант має 95 зміни маси тіла без урахування середовища-носія більш ніж на 20 95 після 14 днів відновлення після дозування.
І0056| На Фіг. 5 продемонстровано зменшення маси тіла в мишачій моделі БІО при підшкірній доставці 4,0 нмоль/кг (Ес/Ес)-Я40Е15 комплексів один раз на тиждень протягом 4 тижнів, а потім 14-денного періоду відновлення.
І0057| На Фіг. 6 продемонстровано відсоток зменшення маси тіла в мишачій моделі БІО при підшкірній доставці 4,0 нмоль/кг (Ес/Ес)-ЗОЕ15 комплексів один раз на тиждень протягом 4 тижнів, а потім 14-денного періоду відновлення. 0058) На Фіг. 7 і 8 узагальнено зменшення маси тіла (включаючи 5ЕМ і р-значення), яке спостерігається, для кожної групи БІО мишей (п-б) для 0,4 нмоль/кг і 4,0 нмоль/кг груп доз, які зображено на фіг. З і 5. Для всіхгруп, с р«005, работ р « 0,001) за допомогою непараметричного і-тесту.
І00О59| На Фіг. 9 узагальнено відсоток зменшення маси тіла (включаючи 5ЕМ і р-значення) для кожної групи БІО мишей (п-б) для 0,4 нмоль/кг і 4,0 нмоль/кг груп доз, які зображено на Фіг. 4 16. Для всіхгруп, б р«0,05, рак ОтТі и и р « 0,001) за допомогою непараметричного 1- тесту.
Детальний опис суті винаходу 0060) Перед подальшим описом способів і композицій згідно цього винаходу слід розуміти, що цей винахід не обмежуються конкретними варіантами реалізації описаними в цьому документі, а також слід розуміти, що термінологія, використовувана в цьому документі, наведена виключно з метою опису конкретних варіантів реалізації і не призначена для обмеження.
І0061) Якщо представлено діапазон величин, слід розуміти, що кожне проміжне значення до десятої частини одиниці нижньої межі діапазону, якщо з контексту явно не слідує інше, між верхньою та нижньою межею цього інтервалу і будь-яке інше задане або проміжне значення в цьому заданому інтервалі знаходяться в рамках винаходу. Верхня та нижня межа цих менших інтервалів може незалежно бути включена в менші інтервали і також знаходитися в рамках винаходу, крім будь-якої спеціально виключеної межі в заданому інтервалі. Якщо заданий інтервал включає одну або обидві межі, то інтервали без однієї або обох меж також включено у бо винахід. Якщо не вказано інше, всі технічні і наукові терміни, які використовуються в цьому документі, мають те ж значення, яке зазвичай розуміється фахівцем у цій галузі техніки, до якої належить цей винахід.
І0062| Слід зазначити, що при використанні в цьому документі та формулі винаходу, яка додається, форми однини включають посилання на множину, якщо з контексту, вочевидь, не слідує інше. Так, наприклад, згадування "комплекса" включає згадування одного або більше комплексів, і так далі. Додатково слід зазначити, що може бути складений план формули винаходу, який виключає будь-який необов'язковий елемент. У зв'язку з цим передбачається, що це твердження слугує в якості попередньої основи для таких виключних термінів, як "виключно", "тільки" і тому подібних у зв'язку з перерахуванням елементів формули винаходу, або для використання "негативних" обмежень. 0063) Публікації, які обговорюються в цій заявці, наведені виключно для їх опису до дати подання цієї заявки. Ніяку інформацію в цій заявці не слід тлумачити як визнання того, що цей винахід не має права датувати подібну публікацію більш раннім числом через дію попереднього винаходу. Більш того, дані наданих публікацій можуть відрізнятися від фактично опублікованих даних, що може потребувати незалежного підтвердження.
Визначення
І0064| Терміни "поліпептид", "пептид" і "білок", які використовуються в цьому документі взаємозаміно, належать до полімерної формі амінокислот будь-якої довжини, яка може включати в себе амінокислоти, які генетично кодуються та не генетично кодуються, хімічно або біохімічно модифіковані або похідні амінокислот і поліпептидів, які мають модифіковану первинну структуру білка. Терміни включають гібридні білки, включаючи, але не обмежуючись ними, гібридні білки з гетерологічною амінокислотною послідовністю, гібридні білки з гетерологічними та гомологічними лідерними послідовностями, з М-кінцевими залишками метіоніну або без них; білки мічені імунологічної; тощо. У конкретних варіантах реалізації винаходу, терміни відносяться до амінокислотної полімерної форми будь-якої довжини, яка містить генетично кодуємі амінокислоти. У конкретних варіантах реалізації винаходу, терміни відносяться до амінокислотної полімерної форми будь-якої довжини, яка містить амінокислоти, які генетично кодуються, злиті з гетерологічною амінокислотною послідовністю. У конкретних варіантах реалізації винаходу, терміни відносяться до амінокислоти довжиною 98-112
Зо амінокислот, яку необов'язково злито з гетерологічною послідовністю. У конкретних варіантах реалізації винаходу, по мірі необхідності при згадуванні білків і молекул, які описано в цьому документі, терміни "поліпептид", "пептид" і "білок" відносяться до поліпептидів, як визначено в цьому документі.
І0065| Термін "комплекс", який використовується в цьому документі, відноситься до білкового комплексу, який містить щонайменше два поліпептиди, кожен з поліпептидів містить
М-кінець та С-кінець. Щонайменше два поліпептиди можуть бути пов'язані один з одним через одну або обидві ковалентні та нековалентні взаємодії (наприклад, електростатичну, п-ефекти,
Ван-дер-ваальсові сили і гідрофобні ефекти). Щонайменше два поліпептиди можуть бути однаковими, тобто мають ідентичну амінокислотну послідовність, або можуть бути різними, тобто не мають ідентичних амінокислотних послідовностей. Комплекс, який має два поліпептиди при тому, що обидва поліпептиди ідентичні, називають гомодимер. Комплекс, який має два поліпептиди, при тому, що поліпептиди відрізняються, називають гетеродимер.
Комплекс, який має три поліпептиди, при тому, що три поліпептиди ідентичні, називають гомотример. Комплекс, який має три поліпептиди, при тому, що щонайменше один з трьох поліпептидів відрізняється від іншого поліпептиду(ів), називають гетеротример. Комплекс, який має чотири поліпептиди, де чотири поліпептиди ідентичні, називають гомотетрамер. Комплекс, який має чотири поліпептиди, при тому, що щонайменше один з чотирьох поліпептидів відрізняється від іншого поліпептиду(ів), називають гетеротетрамер. Ілюстративний комплекс з чотирьох поліпептидів - двох молекул першого поліпептиду і двох молекул другого поліпептиду, де перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом формуючи гетеродимер, і де два таких гетеродимера димерізуються формуючи комплекс який називають гомодимерний комплекс з двох гетеродимерів. (0066) Цей опис передбачає комплекси як визначено вище, включаючи, але не обмежуючись зазначеним далі, гетеродимер, який має перший поліпептид, зв'язаний з другим поліпептидом, де перший поліпептид являє собою "виступ" Ес і другий поліпептид являє собою "западину" Ес, і де, або перший поліпептид, або другий поліпептид злиті з амінокислотною послідовністю СОЕ15 (або мутеїном СОРЕ15, таким як, мутеїн СОЕ15, який описано в цьому документі). Перший і другий поліпептиди можуть бути фізично пов'язані один з одним за допомогою нековалентних взаємодій (наприклад, гідрофобних ефектів, таких як, гідрофобні взаємодії між ділянками 60 виступу і западини Ес), ковалентного зв'язку (наприклад, дисульфідного зв'язку, такий як, один або два дисульфідні зв'язки між ділянкою шарніра Ес в першому і другому поліпептиді), або і того й іншого.
І0067| Цей опис передбачає комплекс, який містить два гетеродимера, пов'язаних один з одним, кожен гетеродимер, який має перший поліпептид і другий поліпептид, де перший поліпептид являє собою "виступ" Ес і другий поліпептид являє собою "западину" Ес, і де, або перший поліпептид, або другий поліпептид злито з амінокислотною послідовністю ЗОРЕ15 (або мутеїном СОР15). Всередині комплексу, два гетеродимера можуть бути фізично пов'язані за допомогою нековалентних взаємодій (наприклад, гідрофобних ефектів), ковалентного зв'язку (наприклад, дисульфідного зв'язку), або і того й іншого. Перший і другий поліпептиди в кожному з гетеродимерів у комплексі можуть бути фізично пов'язані один з одним за допомогою нековалентних взаємодій (наприклад, гідрофобних ефектів), ковалентного зв'язку (наприклад, дисульфідного зв'язку), або і того й іншого. (0068) Цей опис передбачає комплекс, який містить два гетеродимера, пов'язаних один з одним, кожен гетеродимер, кий має перший поліпептид і другий поліпептид, де перший поліпептид являє собою "виступ" Ес і другий поліпептид являє собою "западину" Ес, і де, або перший поліпептид, або другий поліпептид злито з амінокислотною послідовністю ЗОЕ15 (або мутеїном СОР15). Всередині комплексу, два гетеродимера можуть бути фізично пов'язані за допомогою нековалентних взаємодій (наприклад, гідрофобних ефектів) або ковалентних взаємодій (наприклад, дисульфідного зв'язку(ів)) між ЗОРЕ15 поліпептидами і перший і другий поліпептиди в кожному з гетеродимерів можуть бути фізично пов'язані один з одним за допомогою нековалентних взаємодій (наприклад, виступ-у-западину), ковалентного зв'язку (наприклад, дисульфідного зв'язку), або і того й іншого.
І0069| Терміни "пацієнт" або "суб'єкт" використовуються як взаємозамінні для позначення людини або тварини, яка не є людиною (наприклад, ссавця).
І0070| Терміни "лікувати", "лікування" і т. п. відносяться до порядку дій (наприклад, введенню агента, наприклад, поліпептиду, комплексу, або фармацевтичної композиції, яка містить поліпептид, комплекс), який починають після діагностики, виявлення і т.п. захворювання, розладу або стану або їх симптомів з метою усунення, зменшення, пригнічення або полегшення, тимчасового або постійного, щонайменше однієї з основних причин
Ко) захворювання, розладу або стану, від якого страждає суб'єкт, або щонайменше одного з симптомів асоційованих із захворюванням, розладом або станом, від якого страждає суб'єкт.
Таким чином, лікування включає пригнічення (тобто припинення розвитку або подальшого розвитку захворювання, розладу або стану або клінічних симптомів, асоційованих з ними) активного захворювання (наприклад, з метою зменшення рівня інсуліну і/або глюкози в кровотоці, підвищення сприйнятливість глюкози з метою мінімізації коливань рівня глюкози і/або захисту від захворювань, які викликані роз'єднанням гомеостазу глюкози, зменшенням маси тіла, затримкою збільшення маси тіла). 00711 Термін "потребує лікування", який використовується в цьому контексті, відноситься до рішення, яке зробив лікар або інша особа, яка доглядає за пацієнтом, про те, що пацієнт має потребу в лікуванні або таке лікування піде йому на користь. Це рішення приймається на основі цілого ряду факторів, які знаходяться у сфері компетенції лікаря або особи, яка доглядає за пацієнтом. 00721 Терміни "запобігати", "запобігання", "профілактика" і т. п. відносяться до порядку дій (такого як введення агента, наприклад, поліпептиду, комплексу, або фармацевтичної композиції, яка містить поліпептид, комплекс), який починають таким чином (наприклад, до прояву захворювання, розладу або стану або їх симптому) з метою запобігання, пригнічення, інгібування або зменшення, тимчасового або постійного, ризику розвитку захворювання, розладу або стану і т. п. (наприклад, на основі відсутності клінічних симптомів) у суб'єкта або затримки їх прояву, головним чином у суб'єкта, схильного до конкретного захворювання, розладу або стану. У деяких випадках терміни також відносяться до уповільнення прогресування захворювання, розлади або стану або інгібування прогресування шкідливого або іншого небажаного стану. 0073) Термін "потребує запобігання", який використовується в цьому контексті, відноситься до рішення, зробленого лікарем або іншою особою, яка доглядає за пацієнтом, про те, що пацієнт має необхідність у профілактичному догляді або такий профілактичний догляд піде йому на користь. Це рішення приймається на основі цілого ряду факторів, які знаходяться у сфері компетенції лікаря або особи, яка доглядає за пацієнтом.
І0074| Фраза "терапевтично ефективна кількість" відноситься до введення агента суб'єкту окремо або в складі фармацевтичної композиції, одноразово або в рамках серії доз, у кількості, 60 здатній чинити позитивний вплив, який можна виявити, на будь-який симптом, аспект або характеристики захворювання, розладу або стан при введенні пацієнту. Терапевтично ефективну кількість можна встановити шляхом вимірювання відповідних фізіологічних ефектів.
Наприклад, у разі гіперглікемічного стану, зниження або зменшення рівня глюкози в крові або поліпшення тесту сприйнятливість глюкози можна використовувати для визначення ефективності лікування гіперглікемічного стану за рахунок вказаної кількості агента. Наприклад, терапевтично ефективна кількість являє собою кількість, достатню для зниження або зменшення рівня (наприклад, початкового рівня) глюкози в плазмі натще (ЕРС), причому, наприклад, зазначена кількість є достатньою для зменшення рівня ЕРО з більше ніж 200 мг/дл до менше ніж 200 мг/дл, причому зазначена кількість є достатньою для зменшення рівня ЕРО з 175-200 мг/дл до менше ніж початковий рівень, причому зазначена кількість є достатньою для зменшення рівня ЕРО з 150-175 мг/дл до менше ніж початковий рівень, причому зазначена кількість є достатньою для зменшення рівня ЕРО з 125-150 мг/дл до менше ніж початковий рівень і т.д. (наприклад, зменшення рівня ЕРС до менше ніж 125 мг/дл, менше ніж 120 мг/дл, менше 115 ніж мг/дл, менше 110 ніж мг/дл і т.д.). У разі рівня НБАТс ефективна кількість являє собою кількість, достатню для зниження або зменшення рівня на більш ніж близько 10 95 до 9 95, на більш ніж близько 9 95 до 8 95, на більш ніж близько 8 95 до 7 95, більш ніж близько 7 95 до 6 95, на більш ніж близько 6 95 до 5 95 і т. д. Зокрема, зниження або зменшення рівнів НЬАТс на близько 0,1 зо, 025 то, 0,4 то, 0,5 то, 0,6 то, 0,7 то, 0,8 то, 0,9 то, 1 то, 1,5 то, 2 то, З то, 4 Зо, 2 о, 1096, 2095, З0 96, ЗЗ 0, 3595, 40 95, 4595, 5095 або більше розглядається в цьому описі.
Терапевтично ефективна кількість може бути скорегована в залежності від схеми введення, діагностичного аналізу стану суб'єкта і т. п. 0075) Фраза "в кількості, достатній, щоб викликати зміну" означає, що існує різниця, яку детектують, між рівнем показника, виміряного перед (наприклад, базовий рівень) і після прийому певної терапії. Показники включають будь-який об'єктивний параметр (наприклад, рівень глюкози або інсуліну, або споживання їжі, або маси тіла) або суб'єктивний параметр (наприклад, гарне самопочуття або апетит суб'єкта).
І0076| Фраза "сприйнятливість глюкози", яка використовується в цьому документі, відноситься до здатності суб'єкта контролювати рівень глюкози в плазмі і/або інсуліну в плазмі при коливаннях споживання глюкози. Наприклад, сприйнятливість глюкози охоплює здатність
Зо знижувати протягом близько 120 хвилин рівень глюкози в плазмі у суб'єкту назад до рівня, визначеного до споживання глюкози.
І0077| Терміни "діабет" і "діабетичний" відносяться до прогресуючого захворювання, пов'язаного з метаболізмом вуглеводів, яке включає недостатню продукцію або утилізацію інсуліну, яке часто характеризується гіперглікемією і глюкозурією. Терміни "переддіабет" і "переддіабетичний" відносяться до стану, при якому у суб'єкта немає характерних ознак, симптомів і т. п., які зазвичай спостерігаються при діабеті, але є характерні ознаки, симптоми і т. п., які при відсутності лікування можуть прогресувати до діабету. Наявність цих станів можна визначити з допомогою, наприклад, аналізу глюкози в плазмі натще (ЕРОС) або тесту на пероральну сприйнятливість глюкози (ОСТ). Обидва ці аналізу вимагають, щоб суб'єкт не приймав їжу протягом щонайменше 8 годин до початку аналізу. При аналізі РРО рівень глюкози в крові суб'єкту вимірюють після голодування; як правило, суб'єкт не приймає їжу протягом ночі, а глюкозу в крові вимірюють вранці, до того як суб'єкт поїсть. У здорового суб'єкту, як правило, концентрація ЕРО становить від близько 90 до близько 100 мг/дл, у суб'єкту з "переддіабетом", як правило, концентрація ЕРС становить від близько 100 до близько 125 мг/дл, і у суб'єкта з "діабетом", як правило, рівень ЕРО перевищує близько 126 мг/дл. При ОСТТ глюкозу в крові суб'єкта вимірюють після голодування і повторно через дві години після прийому напою, збагаченого глюкозою. Через дві години після прийому напою, збагаченого глюкозою, концентрація глюкози в крові здорового суб'єкту, як правило, становить менш ніж близько 140 мг/дл, концентрація глюкози в крові суб'єкта з переддіабетом, як правило, становить від близько 140 до близько 199 мг/дл, а концентрація глюкози в крові суб'єкту з діабетом, як правило, становить близько 200 мг/дл або більше. У той час як вищезгадані значення глікемії відносяться до суб'єктам-людям, у суб'єктів-мишей нормоглікемію, помірну гіперглісемію та виражену гіперглікемію визначають по-іншому. У здорового суб'єкту- миші після чотиригодинного голодування, як правило, концентрація ЕРС становить від близько 100 до близько 150 мг/дл, у суб'єкту-миші з "переддіабетом", як правило, концентрація ЕРС становить від близько 175 до близько 250 мг/дл, і у суб'єкту-миші з "діабетом", як правило, концентрація ЕРО вище близько 250 мг/дл. 0078) Термін "Інсулінрезистентність", який використовується в цьому документі, відноситься до стану, коли нормальна кількість інсуліну не може призвести до нормальної фізіологічної або бо молекулярної реакції. У деяких випадках гіперфізіологічна кількість інсуліну, яка ендогенно продукується або екзогенно введена, може повністю або частково подолати інсулінрезистентність і запустити біологічну відповідь.
І0079| Термін "метаболічний синдром" відноситься до взаємопов'язаного кластеру ознак, який включає, але не обмежується ними, гіперінсулінемію, аномальну толерантність до глюкози, ожиріння, перерозподіл жиру в черевну порожнину або верхню частину тіла, гіпертензію, дисфібриноліз та дисліпідемію, яка характеризується високим рівнем тригліцеридів, низький рівень ліпопротеїнів високої щільності (ЛІПВЩ)-холестерину і високим рівнем часток ліпопротеїнів низької щільності (ЛЛНЩ). Суб'єкти з метаболічним синдромом схильні до ризику розвитку діабету 2 типу і/або інших розладів (наприклад, атеросклерозу).
ІЇ0О80| Фраза "порушення метаболізму глюкози" охоплює будь-який розлад, який характеризується клінічним симптомом або комбінацією клінічних симптомів, пов'язаними з підвищеним рівнем глюкози і/або підвищеним рівнем інсуліну у суб'єкту порівняно зі здоровим індивідом. Підвищені рівні глюкози і/або інсуліну можуть проявлятися при наступних захворюваннях, розладах і станах: гіперглікемії, цукровому діабеті ІІ типу, гестаційному діабеті, цукровому діабеті ! типу, інсулінрезистентності, порушенні сприйнятливість глюкози, гіперінсулінемії, порушення метаболізму глюкози, переддіабеті, інших метаболічних розладах (наприклад, метаболічному синдромі, який називають також синдромом Х) і ожирінні зокрема.
Комплекси згідно цього опису і їх композиції можна застосовувати, наприклад, для досягнення і/або підтримання гомеостазу глюкози, наприклад, для зменшення рівня глюкози в кровотоці іабо зменшення рівня інсуліну до діапазону, характерного для здорового суб'єкта.
І0081) Термін "тіперглікемія", як використовується в цьому документі, відноситься до стану, при якому в плазмі крові суб'єкта циркулює підвищена кількість глюкози порівняно зі здоровим індивідом. Гіперглікемію можна діагностувати, використовуючи способи, відомі в цій галузі техніки, включаючи вимірювання рівнів глюкози в крові натще, як описано в цьому документі. (0082) Термін "тіперінсулінемія", як використовується в цьому документі, відноситься до стану, при якому підвищені рівні циркулюючого інсуліну при супутніх підвищених або нормальних рівнів глюкози в крові. Гіперінсулінемія може бути викликана інсулінрезистентністю, яка асоційована з дисліпідемією, такою як високий рівень тригліцеридів, високий рівень холестерину, високий рівень ліпопротеїнів низької щільності (ЛОНЩ) і низький рівень
Зо ліпопротеїнів високої щільності (ЛПВЩ); високі рівні сечової кислоти; синдромом полікістозних яєчників; діабет ІІ типу ії ожиріння. Гіперінсулінемію можна діагностувати як рівень інсуліну плазми вищій ніж близько 2 мкЕд/мл. 0083) Як використовується в цьому документі, фраза "розлад маси тіла" відноситься до станів, асоційованих з надлишковою масою тіла і/або підвищеним апетитом. Для визначення наявності у суб'єкта надлишкової маси тіла у порівнянні з еталонним здоровим індивідом використовують різні параметри, у тому числі вік, зріст, стать і стан здоров'я суб'єкта.
Наприклад, можна вважати, що у суб'єкта надмірна вага або ожиріння за оцінкою індексу маси тіла (ІМТ) суб'єкта, який розраховують шляхом ділення маси тіла суб'єкта в кілограмах на квадрат росту суб'єкту в метрах. Вважається, що у дорослого з ІМТ в діапазоні від «18,5 до -24,9 кг/м нормальна вага; у дорослого з ІМТ між 25 і -29,9 кг/м" надмірна вага (передожиріння); і можна вважати, що дорослий з ІМТ «30 кг/м? або вище страждає ожирінням.
Підвищений апетит часто сприяє надмірній вазі. Існує кілька станів, асоційованих з підвищеним апетитом, в тому числі, наприклад, синдром нічного харчування, який характеризується ранковою анорексією та вечірньою поліфагією, яка часто асоціюється з безсонням, яка може бути пов'язана з травмою гіпоталамусу. 0084) Термін "активатори" відноситься до агентів, які, наприклад, стимулюють, підвищують, активують, полегшують, посилюють активацію, сенсибілізують або індукують функцію або активність одного або більше агентів, наприклад, поліпептидів або комплексу, які використовуються для лікування або профілактики метаболічного розладу. Крім того, активатори включають агенти, які діють за тим же механізмом дії, як і поліпептиди цього винаходу (т. е. агенти, які модулюють той же сигнальний шлях, що і поліпептиди, за способом, аналогічним зазначеним поліпептидам) і здатні викликати біологічну відповідь, порівнювану з (або перевищуючий) такою поліпептидів. Приклади активаторів включають агоністи, такі як низькомолекулярні сполуки.
І0085| Термін "Модулятори" спільно відноситься до поліпептидів цього винаходу і
Активаторам. (0086) Терміни "модулювати", "модуляція" і т. п. відносяться до здатності агенту (наприклад, активатора) прямо або побічно підсилювати функцію або активність одного або більше з поліпептидів (або молекул нуклеїнових кислот, які кодують їх); або здатності агента викликати 60 ефект, порівнюваний з ефектом одного або більше поліпептидів.
І0087| Слід брати до уваги, що на всьому протязі цього опису посилання надається на амінокислоти у відповідності з однолітерним або трилітерним кодом. Для зручності читача, однолітерні та трилітерні коди амінокислот наведено нижче: 176 | гліцин. | 2у | | Р | Пролн | Ро
А ф|Аланн/ (Аа | ЇМ |Вално (Ма: 21111111 фЛейцин/ (бе | 01 ізолейцин Ше
МО |Метіснно (Ме | ЇС 7 |Цистено// |Сув/:/ 111111 |Фенілаланн о |Рпе//// | ЇМ |Тирозин7 Ту
ММ |Триптофан.о |Про | |н///////// |(бстидин/ (Нв
КО ф|Лівин///// 0(0у8//////// | |в (Аргінно (А 01111111 |Глутамно (Сп | ЇМО ф(Аспарагно (АБп//:З
СИНИ ав СНИ НО СЛНННННННЯ Рано С: УНН кислота кислота 77 Ї|Серин// |бЗеге//// | ЇТ 7 |Треоснн/ 5
І0088| Як використовується в цьому документі, термін "варіант" охоплює варіанти природного походження (наприклад, гомологи та алельні варіанти) і варіанти не природного походження (наприклад, рекомбінантно-модифіковані). Варіанти природного походження включають гомологи, тобто, нуклеїнові кислоти і поліпептиди, які відрізняються по нуклеотидній або амінокислотній послідовності, відповідно, від одного виду до іншого. Варіанти природного походження включають алельні варіанти, тобто, нуклеїнові кислоти і поліпептиди, які відрізняються по нуклеотидній або амінокислотній послідовності, відповідно, від одного індивідуума до іншого в межах одного виду. Варіанти не природного походження містять нуклеїнові кислоти і поліпептиди, які містять зміни в нуклеотидній або амінокислотній послідовності, відповідно, де зміну в послідовності внесено штучно, наприклад, зміну отримано в лабораторії або іншому закладі за рахунок людського втручання ("людськими руками").
І0089| Термін "нативний" або "дикого типу" по відношенню до СОРЕ15 відноситься до біологічно активного природного СОР 15, в тому числі, біологічно активним природним варіантам
СОНЕ15. Цей термін включає послідовність зрілеого СОЕ15 людини довжиною 112 амінокислот (ЗЕО ІО МО).
ІЇ0090| Термін "мутеїни", як використовується в цьому документі, в широкому сенсі відноситься до рекомбінантних білків, тобто поліпептиду, який містить штучно введену зміну в амінокислотній послідовності, наприклад, зміну в амінокислотній послідовності, отриману в лабораторії або іншому закладі за рахунок людського втручання ("людськими руками"). Ці поліпептиди зазвичай несуть одну або кілька амінокислотних замін або делецій і часто отримані від клонованих генів, які були піддані сайт-спрямованому або випадковому мутагенезу, або з повністю синтетичних генів. "Мутеїни СОЕ15" цього опису, таким чином, охоплюють, наприклад, амінокислотні заміни і/або амінокислотні делеції (наприклад, укорочення з М-кінця на 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 або 14 або більше амінокислот) у порівнянні з еталонним поліпептидом, наприклад, у порівнянні з природним/диким типом зрілого ЗОЕ15 людини (5ЕО
ІО МО-1). 0091) Як використовується в цьому документі терміни "модифікований", "модифікація" і т. д. по відношенню до нативного ЗОБЕ15 людини або мутеїну СОЕ15 відносяться до однієї або більше змін, які змінюють властивості ЗОЕ15 людини, варіанту СООЕ15 природного походження або мутеїна ЗОРЕ15, де зміни не змінюють саму первинну амінокислотну послідовність поліпептиду СОР15 (нативного або мутеїна). Така властивість включає, наприклад, розчинність, період напівжиття в кровотоці, стабільність, кліренс, імуногенність або алергенність і технологічність (наприклад, вартість та ефективність). "Модифікація" включає ковалентну хімічну модифікацію, яка не впливає на саму первинну амінокислотну послідовність поліпептиду
СОЕ15 (нативного або мутеїна). Зміни СОР15 людини, варіанта ООЕ15 природного походження або мутеїна СОЕ15, які можуть бути виконані, включають, але не обмежуючись зазначеним далі, пегілювання (ковалентне приєднання однієї або більше молекул поліетиленгліколю (ПЕГ) або їх похідних); глікозилювання (наприклад, М-глікозилювання), полісіалювання та приєднання
ГЕК; злиття з мальтозо-зв'язуючим білком; злиття з альбуміном (наприклад, злиття з ЛСА); зв'язування з альбуміном через, наприклад, кон'югований ланцюг жирної кислоти (ацилювання);
Ес-злиття; і злиття з міметиком ПЕГ. Деякі конкретні варіанти реалізації винаходу призводять до модифікацій, які включають в себе злиття з Ес, а інші конкретні модифікації приводять до модифікацій, які включають в себе глікозилювання або їх комбінації.
(0092) Терміни "ДНК", "нуклеїнова кислота", "молекула нуклеїнової кислоти", "полінуклеотид" і т. п. використовуються в цьому документі взаємозамінно по відношенню до полімерної форми нуклеотидів будь-якої довжини, або дезоксирибонуклеотидів або рибонуклеотидів, або їх аналогів. Не обмежують приклади включають лінійні та циклічні нуклеїнові кислоти, матричну
РНК (мРНК), комплементарну ДНК (кКДНК), рекомбінантні полінуклеотиди, вектори, зонди, праймери і тому подібне.
І0093| Термін "зонд" відноситься до фрагмента ДНК або РНК, який відповідає гену або послідовності, яка цікавить, причому фрагмент позначено радіоактивною міткою (наприклад, шляхом включення ЗР або 355) або деякою іншою молекулою, яку можна виявити, такою як біотин, дигоксигенін або флуоресцеїн. Оскільки ділянки ДНК або РНК з комплементарними послідовностями повинні гібридизуватися, зонд можна застосовувати, наприклад, для мічення вірусних бляшок, бактеріальних колоній або смуг на гелі, який містить ген, що цікавить. Зонд може представляти собою клоновану ДНК або синтетичний ланцюг ДНК; останній варіант можна використовувати для отримання кДНК або геномного клону з виділеного білка, наприклад, виконавши мікросеквенування частини білка, отримавши нуклеотидну послідовність, яка кодує білок, синтезувавши олігонуклеотид, який несе цю послідовність, позначивши послідовність радіоактивною міткою і використовуючи Її в якості зонда для скринінгу бібліотеки
КДНК або геномної бібліотеки.
І0094| Термін "гетерологічний" відноситься до двох компонентів, які визначаються структурами, отриманими з різних джерел. Наприклад, в контексті поліпептиду, "гетерологічний" поліпептид може містити функціонально пов'язані амінокислотні послідовності, отримані від різних поліпептидів (наприклад, перший компонент, який містить рекомбінантний поліпептид, і другий компонент, отриманий від нативного поліпептиду СЗОЕ15). Аналогічним чином, в контексті полінуклеотида, який кодує химерний поліпептид, "гетерологічний" полінуклеотид може містити функціонально пов'язані нуклеотидні послідовності, отримані від різних генів (наприклад, перший компонент з нуклеїнової кислоти, яка кодує рекомбінантний поліпептид згідно варіанту реалізації винаходу, який описано в цьому документі, і другий компонент з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид-носій). Інші типові "гетерологічні" нуклеїнові кислоти включають конструкти, які експресують, в яких нуклеїнова кислота, яка містить кодуючу
Зо послідовність, функціонально пов'язану з регуляторним елементом (наприклад, промотором), генетичне походження якого відрізняється від походження кодуючої послідовності (наприклад, з метою забезпечити експресію в досліджуваній клітині-хазяїні, генетичне походження якої може відрізнятися від походження промотора, кодуючої послідовності, або як промотора, так і кодуючої послідовності). Наприклад, промотор Т7, функціонально пов'язаний з полінуклеотидом, який кодує поліпептид ЗОЕ15 або його домен, називають гетерологічною нуклеїновою кислотою. В контексті рекомбінантних клітин термін "гетерологічний" може відноситися до наявності нуклеїнової кислоти (або продукту гена, наприклад, поліпептиду), генетичне походження якої відрізняється від клітини-хазяїна, в якій вона присутня.
І0095| Термін "функціонально пов'язаний" відноситься до зв'язку між молекулами, що забезпечує бажану функцію. Наприклад, "функціонально пов'язані" в контексті нуклеїнових кислот відноситься до функціонального зв'язку між нуклеотидними послідовностями.
Наприклад, послідовність, яка контролює експресію нуклеїнової кислоти (наприклад, промотор, сигнальна послідовність або сукупність сайтів зв'язування факторів транскрипції), може бути функціонально пов'язана з другим полінуклеотидом, причому зазначена послідовність, яка контролює експресію, впливає на транскрипцію і/або трансляцію другого полінуклеотида. В контексті поліпептиду термін "функціонально пов'язані" відноситься до функціонального зв'язку між амінокислотними послідовностями (наприклад, різними доменами), що забезпечує описану активність поліпептиду. 0096) Як використовується в цьому документі, в контексті структури поліпептиду, "М-кінець" (або "аміно-кінець") і "С-кінець" (або "карбоксильний кінець") відносяться до крайніх аміно- та карбоксильним кінцям поліпептиду, відповідно, у той час як терміни "М-кінцевий" та "С-кінцевий" відносяться до відносних положень в амінокислотній послідовності поліпептида у напрямку до М - та С-кінця, відповідно, і можуть містити залишки на М - та С-кінці, відповідно. "Безпосередньо
М-кінцевий" або "безпосередньо С-кінцевий" відноситься до положення першого амінокислотного залишку відносно до другого амінокислотного залишку, де перший і другий амінокислотні залишки ковалентно пов'язані для забезпечення безперервної амінокислотної послідовності.
Ї0097| Термін "яка походить від' в контексті амінокислотної послідовності або полінуклеотидної послідовності (наприклад, амінокислотна послідовність, "яка походить від" 60 поліпептиду СОЕ15), призначений для позначення того, що поліпептид або нуклеїнова кислота містять послідовність, основану на послідовності еталонного поліпептиду або нуклеїнової кислоти (наприклад, поліпептидна СОЕ15 природного походження або нуклеїнової кислоти, яка кодує СОЕ15), і не призначений для обмеження джерела або способу, за допомогою якого отримано білок або нуклеїнова кислота. Наприклад, термін "яка походить від" включає гомологи або варіанти еталонних амінокислотних послідовностей або послідовностей ДНК.
І0098| В контексті поліпептиду термін "виділений" відноситься до поліпептиду, який представляє інтерес, який, якщо він зустрічається в природі, знаходиться в середовищі, яке відрізняється від середовища, в якому він може зустрічатися в природних умовах. "Виділений" передбачає поліпептиді, які знаходяться в зразках, суттєво збагачених для поліпептидом, який представляє інтерес, і/або в яких поліпептид, який цікавить, є частково або значно очищеним.
Якщо поліпептид не зустрічається в природних умовах, "виділений" означає, що поліпептид відокремили від середовища, в якому він був отриманий, з використанням синтетичних або рекомбінантних способів.
І0099| "Збагачений" значить, що зразок піддавали штучним маніпуляціям (наприклад, в лабораторії, наприклад, вчений або клініцист), так що досліджуваний поліпептид присутній у а) підвищеній концентрації (наприклад, щонайменше в З рази перевищує, щонайменше в 4 рази перевищує, щонайменше в 8 раз перевищує, щонайменше в 64 рази перевищує або більше) порівняно з концентрацією поліпептиду в початковому зразку, наприклад, біологічному зразку (наприклад, зразку, в якому поліпептид зустрічається в природних умовах або в якому він присутній після введення), або р) концентрації, якщо перевищує концентрацію в середовищі, в якому вказаний поліпептид був отриманий (наприклад, у бактеріальній клітині).
ІЇ00100| "В основному чистий" значить, що компонент (наприклад, поліпептид, димер, тетрамер, комплекс) складає більш ніж близько 50 95 від загального вмісту композиції, Її, як правило, більш ніж близько 60 95 від загального вмісту поліпептиду. Більш типово, "в основному чистий" відноситься до композицій, в яких щонайменше 75 956, щонайменше 85 9565, щонайменше 90 95 або більше від загальної композиції становить компонент, який представляє інтерес. У деяких випадках, компонент буде становити більше ніж близько 90 95, або більш ніж близько 95 95 від загального вмісту композиції. 001011) Терміни "антитіла" (Ат) та "імуноглобуліни" (Ід) відносяться до глікопротеїнів, які
Зо мають однакові структурні характеристики. У той час як антитіла демонструють специфічність зв'язування з конкретними антигенами, імуноглобуліни включають як антитіла, так і інші антитілоподібні молекули, які не мають специфічності до антигену. Антитіла докладно описані далі в цьому документі.
І00102| Термін "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, яке отримано з популяції практично однорідних антитіл, тобто окремі антитіла, які складають популяцію, є ідентичними, за винятком можливих природних мутацій, які можуть бути присутні в незначних кількостях.
Моноклональні антитіла є високоспецифічними і спрямовані проти єдиного антигенного сайту.
На відміну від препаратів поліклональних антитіл, які можуть містити різні антитіла проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло спрямоване проти єдиної детермінанти антигену. 00103) У контексті антитіла термін "виділене" відноситься до антитіла, відокремленого і/або очищеного від забруднюючих компонентів природного середовища; такі забруднюючі компоненти включають матеріали, які можуть заважати діагностичному або терапевтичному застосуванню антитіла, і можуть включати ферменти, гормони і інші, білкові або небілкові розчинені речовини. (00104) Фраза "консервативна амінокислотна заміна" відноситься до заміни амінокислотних залишків у наступних групах: 1), І, М, М, Е; 2) К,К; ЗЕ, М, Н, ММ, 4), А, Т, 555350, М; 16) О,
Е. Консервативні амінокислотні заміни можуть зберігати активність білка шляхом заміни амінокислоти (амінокислот) у білку на амінокислоту з бічним ланцюгом аналогічної кислотності, основності, заряду, полярності або розміру бічного ланцюга. Керівництво з заміни, інсерції або делеції може бути засноване на вирівнюванні амінокислотних послідовностей різних варіантів білків або білків з різних видів.
Фактор диференціації росту 15 (ЗОРЕ 15)
І00105| СОР15, також відомий як МІС-1 (інгібіторний цитокін макрофагів-1), РОЕ (фактор диференціації передміхурової залози), РІ АВ (плацентарний кістковий морфогенетичний білок),
МАС-1 (ген, який активується нестероїдними протизапальними препаратами (НПЗП)), ТФР-РІ і
РТОБЕВ, є членом надродини трансформуючого фактора росту В (ТФР-В) СОЕ15, який синтезується у вигляді внутрішньоклітинного білка- попередника вагою 62 кДа, який потім розщеплюється фурин-подібною протеазою, секретується у вигляді дисульфід-зв'язаного білка бо вагою 25 кДа. (Див., наприклад, Раїпіє еї аї., У. ГеиКос. ВіоІ. 65:2-5 (1999)). мРНК СсОг15 зустрічається в декількох тканинах, включаючи печінку, нирки, підшлункову залозу, товсту кишку і плаценту, і експресія СОЕ15 в печінці може в значній мірі посилюватися при пошкодженні таких органів, як печінка, нирки, серце та легені. 00106) Попередником Ог15 Є 308-амінокислотний поліпептид (МОВІ
КеїЗед.МР 004855.2), який містить 29-амінокислотний сигнальний пептид, 167-амінокислотний продомен та зрілий домен довжиною 112 амінокислот, який вирізають з продомену фурин- подібними протеазами. 308-амінокислотний поліпептид ЗОЕ15 називають "повнорозмірним" поліпептидом ЗОЕ15; 112-амінокислотний поліпептид ЗОБЕ15 (амінокислоти 197-308 "повнорозмірного" зОРЕ15) являє собою "зрілий" поліпептид ЗОЕ15 (5ЕО ІЮО МО:1). Якщо не зазначено інше, термін "ЗОЕ15" відноситься до зрілої послідовності людини довжиною 112 амінокислот. Крім того, чисельні згадки конкретних залишків ЗОЕ15 відносяться до зрілої послідовності довжиною 112 амінокислот (тобто залишок 1 являє собою Аа (А), а залишок 112 являє собою Іе (І); див. зЗЕО ІЮ МО:1). Слід зазначити, що хоча амінокислотна послідовність попередника ЗОБЕ15 дозволяє передбачити три сайти вирізування, що призводить до трьох гіпотетичних форм "зрілого" ЗОРБ15 людини (тобто, 110, 112 і 115 амінокислот), 112- амінокислотна зріла послідовність прийнята за правильний варіант.
І00107| Обсяг цього опису включає ортологи ЗОРЕ15 і їх модифіковані форми, отримані з інших видів ссавців, включаючи мишу (МР 035949), шимпанзе (ХР 524157), орангутанга (ХР 002828972), макаку-резус (ЕНН2О815), гігантську панду (ХР 002912774), гібона (ХР 003275874), морську свинку (ХР 003465238), тхора (АЕК9У8997), корову (МР 001193227), свиню (МР. 001167527), собаку (ХР. 541938) і качкодзьоба (Огпіпогпупсвпив5 апайіпи5; АЕМ61279).
Зріла форма ЗОГ15 людини має близько 67 95 ідентичності амінокислотній послідовності з ортологом миші.
І00108| Заради зручності, модифіковані молекули СЗОБЕ15 людини, варіанти СОЕ15 (наприклад, мутеїни) і модифіковані СОЕ15 мутеїни, які описано в подальшому, спільно згадуються далі як "поліпептид(и)». Слід зазначити, що будь-яке згадування "людини" у зв'язку з поліпептидами і молекулами нуклеїнових кислот згідно цього винаходу не означає обмеження щодо способу або джерела отримання зазначеного поліпептиду або нуклеїнової кислоти, а лише відноситься до послідовності, оскільки вона може відповідати послідовності природного
Зо поліпептиду або молекули нуклеїнової кислоти людини. В конкретних варіантах реалізації винаходу, молекули модифікованого ЗОЕ15 людини являють собою М-глікозильовані димери.
Крім поліпептидів людини і молекул нуклеїнових кислот, які кодують їх, в цьому описі розглядаються ЗОЕ15-споріднені поліпептиди і відповідні молекули нуклеїнових кислот з інших видів.
А. Поліпептиди з бажаними фізичними властивостями 00109) Цей опис, зокрема, передбачає поліпептиди, які містять безперервну амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 80 95, 85 Ус, 90 о, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності зЕО ІЮ МО:1 (зрілий СООЕ15 людини довжиною 112 амінокислот). Поліпептиди можуть містити одну або більше амінокислотних замін і/або делецій порівняно з амінокислотною послідовністю 5ЕС ІЮ МО:1. У певних варіантах реалізації винаходу, крім амінокислотних замін, поліпептиди цього опису можуть також містити делеції амінокислот порівняно з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:1. У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептиди цього опису можуть містити делеції амінокислот порівняно з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:1.
ІЇО0110| Для зручності та зрозумілості, амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮ МО:1 використовують у якості еталонної послідовності для поліпептидів, представлених у цьому документі. Таким чином, положення амінокислот у цьому документі пронумеровані по відношенню до ЗЕО ІЮ МО:1. Послідовність 5ЕО ІЮ МО:1 представлено нижче: (00111)
АВМарнНсРІ аРОВССВІ НТУВАБІ ЕП СМ АМУМІ БРВЕМОМТМСІСАСРЗОГВААММНАОІКТОІ
НАГКРОТМРАРССУРАБУМРМУПІЮОКТОТОамМ5І ОТМООІ ГГ АКОСНОСЇІ 00112) У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептиди цього опису можуть включати одну, дві, три або більше амінокислотних замін, додавання або делеції, які вводять один або більше консенсусний(их) сайт(ів) М-зв'язаного глікозилювання в області, де такий сайт відсутній в ЗЕО ІЮО МО:1. Консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання містить послідовність МХ5/Т, де
М являє собою Авп; Х являє собою амінокислоту, відмінну від проліну, після якої знаходиться зег (5) або Тпг (7). 00113) Приклади поліпептидів цього опису включають поліпептиди, які мають один, два, три, чотири або більше консенсусних сайтів глікозилювання (наприклад, консенсусних сайтів М- 60 зв'язаного глікозилювання) в амінокислотному положенні, де такий сайт відсутній в амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО. 00114) У певних варіантах реалізації поліпептид може містити амінокислотну заміну у порівнянні з БЕО ІЮ МО:1, яка забезпечує утворення одного консенсусного сайту М-зв'язаного глікозилювання в положенні заміщення (наприклад, послідовність МОЮО в 5ЕО ІЮ МО:1 можна замінити на МОТ/5 шляхом однієї заміни; положення заміщення підкреслено). В інших випадках поліпептид може містити дві амінокислотні заміни у порівнянні з ЗЕО ІО МО:1, які забезпечують один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання в положенні заміщення (наприклад, послідовність КТО в 5ЕО ІЮ МО:1 можна замінити на МТТ/5 шляхом двох замін; положення заміщення підкреслено). У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити три амінокислотні заміни у порівнянні з «ЕО ІЮ МО:1 які забезпечують один консенсусний сайт М- зв'язаного глікозилювання в положенні заміщення (наприклад, послідовність СРС в 5ЕО ІЮ
МО:1 можна замінити на МТТ/5 шляхом трьох замін; положення заміщення підкреслено). 00115) У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити одну або більше амінокислотну делецію порівняно з 5ЕО ІО МО: 1, яка забезпечує утворення одного консенсусного сайту М-зв'язаного глікозилювання в положенні делеції. Наприклад, послідовність
МарнНсРІГЯРОВССВІНТ (ЗЕО ІО МО:119) в 5ЕО ІЮ МО:1 можна змінити шляхом делеції амінокислот О через Н (підкреслені)), тим самим забезпечуючи консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання: МОТ. 00116) У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити додавання однієї або більше амінокислоти в порівнянні з ЗЕО ІЮ МО 1, які забезпечують утворення одного консенсусного сайту М-зв'язаного глікозилювання в положенні(ях) додавання(нь). Приклад впровадження консенсусного сайту М-зв'язаного глікозилювання шляхом додавання однієї амінокислоти включає додавання М до послідовності І НТ в ЗЕО ІЮ МО:1, тим самим створюючи послідовність І МНТ, де МНТ являє собою консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання.
І00117| Як зазначено вище, поліпептид може містити одну або більше амінокислотну заміну у порівнянні з ЗЕО ІЮ МО:1, і заміни можуть бути пронумеровані, як положення відповідної амінокислоти в ЗЕО ІЮ МО:1.
ІЇО0118| У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити безперервну амінокислотну послідовність, щонайменше на 80 9о, 85 95, 90 95, 95 95, 96 9Уо, 97 90, 98 95, 99 90
Ко) або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:1, де безперервна амінокислотна послідовність містить заміну О5Т/5 або К21М.
ІЇ00119| У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити безперервну амінокислотну послідовність, щонайменше на 80 9о, 85 95, 90 95, 95 95, 96 9Уо, 97 90, 98 95, 99 90 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:1, де безперервна амінокислотна послідовність містить щонайменше одну з наступних пар замін у порівнянні з відповідними амінокислотами в 5ЕО ІЮ МО:1: і. К1ТЄМ і НІ8Т або КІ16М і НІ185; її. 523М і Е25Т або 523М і Е255; ії. /24М і 0267 або 124М і 0265; їм. ЗБОМ і Е52Т або 550М і Е525; м. Е52М і АЗ54Т або Е52М і А545; мі. 951М і К53Т або О51М і К535; мії. Е5ЗМ і А55Т або К5ЗМ і А555; мії. 564М і НбЄТ або 564М і Нбб5З; їх. 65М і Е67Т або І 65М і К675; х. 582М і М84Т або 582М і М845; хі. КО1ТМ і 093Т або Ке1ТМ і 0935; хі. 093М і 5951 або Б93М і 5955; хії. Т9АМ і М96ЄТ або Т94М і М965; хім. М9БМ і 1987 або У9БбМ і І 985; ху. 597М і 0991 або 597М і 20995; і хмі. АТО6М і 01087 або АТОБЄМ і 01085 00120) Наприклад, заміни, які представлено вище в Її), означають, що поліпептид містить треонін (Т) або серин (5) в амінокислотному положенні, яке відповідає амінокислотному положенню 18 в 5ЕО ІО МО:1, причому в ЗЕО ІЮ МО/:1 гістидин (Н) присутній в амінокислотному положенні 18. Аналогічним чином, заміну О в положенні 5 на Т або 5 можна позначити як О5Т/5.
Положення відповідної амінокислоти в поліпептиді порівняно з 5ЕО ІЮ МО:1 можна визначити шляхом вирівнювання амінокислотних послідовностей. 00121) У певних варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити дві амінокислотні бо заміни (пару замін), які забезпечують одну консенсусну послідовність М-глікозилювання в положенні, де консенсусна послідовність М-глікозилювання відсутня в ЗЕО ІЮ МО:1. Приклади таких замін включають К16М і НІ18Т/5; КУ1ТМ і 093Т7/5; Т9АМ і М96Т/5; та інші, які перераховано вище. К16М ії Н18Т/5 означає, що поліпептид містить М у положенні, яке відповідає положенню 16 в ЗЕО ІО МО:1, де в 5ЕО ІЮ МО: 1 присутній К і поліпептид містить або Т або 5 у положенні, яке відповідає положенню 18 в 5ЕО ІЮ МО:1, де присутній Н. Оскільки послідовність ЕХН (у положеннях 16-18) в БЕО ІО МО:1 не містить залишків консенсусної послідовності М-зв'язаного глікозилювання, пара замін призводить до впровадження консенсусної послідовності М- зв'язаного глікозилювання.
І00122)| В альтернативних варіантах реалізації винаходу, окремої амінокислотної заміни може бути достатньо для забезпечення консенсусної послідовності /М-зв'язаного глікозилювання, наприклад, оскільки послідовність МОЮ (в положенні 3-5) присутня в ЗЕО ІЮ
МО:1, єдина заміна Ю на Т або 5 призводить до утворення послідовності МОТ або МО5, відповідно, які представляють собою консенсусні послідовності М-глікозилювання.
Ї00123| У деяких випадках у С0ОЕ15 дикого типу можна впровадити більше однієї консенсусної послідовності М-глікозилювання. Наприклад, амінокислотну послідовність СОЕ15 дикого типу можна модифікувати шляхом заміни і/або делеції, отримуючи одну, дві, три, чотири або більше консенсусних послідовностей М-глікозилювання. У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити 112-амінокислотну безперервну послідовність, яка має щонайменше 90 95 ідентичність 112 амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:1, де 112 суміжних амінокислот містять одну, дві, три, чотири або більше консенсусних послідовностей М- глікозилювання, таких як, 1-12, 1-10, 1-8, 1-6, 1-4, 1-3 або 1-2 консенсусні послідовності М- глікозилювання. 00124) У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид може містити 112-амінокислотну безперервну послідовність, яка має щонайменше 9095 ідентичність 112 амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:1, де 112 суміжних амінокислот містять одну, дві, три, чотири або більше з пар замін, які викладено в цьому документі. 00125) Цей опис також передбачає поліпептиди, які являють собою активні фрагменти (наприклад, підпослідовності) поліпептидів, які описано вище. Довжина активних фрагментів або підпослідовностей може становити від 40 до 111 амінокислот, наприклад, 40, 45, 50, 55, 60,
Ко) 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 106, 109 або до 111 амінокислот. 00126) Поліпептиди володіють певною ідентичністю послідовності у порівнянні з еталонною послідовністю на певній довжині суміжних амінокислот (наприклад, "вікно порівняння"). Способи вирівнювання послідовностей для порівняння добре відомі в цій галузі техніки. Оптимальне вирівнювання послідовностей для порівняння може бути проведено, наприклад, за допомогою алгоритму локальної гомології Сміта-Ватермана (Зтпйп 5 Умаїептап), Адм. Аррі. Майї. 2:482 (1981), за допомогою алгоритму вирівнювання гомології Нідлмана-Вунша (Меедіетап 8
Уусп5сй), У. Мої. Віо!. 48:443 (1970), за допомогою методу пошуку подібності Пірсона-Ліпмана (Реагзоп 4 ІГіртап), Ргос. Маг. Асай. сі. ОБА 85:2444 (1988), за допомогою комп'ютерних реалізацій цих алгоритмів (ЗАР, ВЕЗТРЇТ, РАЗТА і ТЕА5ЗТА в програмному пакеті М/і5сопвіп
Сепеїіс5, Мадізоп, УМі5.), або вирівнюванням вручну з візуальним оглядом (див., наприклад,
Ситепі Ргоїосої5 іп МоіІесшіаг Віоіоду (А!,зибеї еї аї., ед5.1995, додаток)).
І00127| Наприклад, поліпептид, який підходить, може містити амінокислотну послідовність, яка має щонайменше близько 75 95, щонайменше близько 80 95, щонайменше близько 85 95, щонайменше близько 909565, щонайменше близько 9595, щонайменше близько 98 95, або щонайменше близько 99 95 ідентичності амінокислотній послідовності безперервної ділянки з 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 або до 112 амінокислот 5ЕО ІЮ МО:1. (00128) Ілюстративні фрагменти поліпептидів, які описано в цьому документі, включають поліпептиди, які мають амінокислотні делеції порівняно з ЗЕО ІЮО МО:1. Наприклад, поліпептиди можуть мати укорочення з М-кінця і/або укорочення з С-кінця порівняно з 5ЕО ІЮ МО:1.
БО Укорочення можуть бути на 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або більше амінокислот у порівнянні з еталонним поліпептидом, наприклад, ЗЕО ІЮ МО:1. У деяких варіантах реалізації винаходу, поліпептид, який становить інтерес, може містити одну або більше замін, які дозволяють впровадити консенсусну послідовність М-зв'язаного глікозилювання, таку як та, яку описано в цьому документі, і укорочення з М-кінця і/або укорочення з С-кінця порівняно з 5ЕО ІЮ
МО-1.
І00129| У певних варіантах реалізації винаходу, довжина поліпептиду може становити щонайменше 98 амінокислот, і може мати амінокислотну послідовність ідентичну щонайменше на 90 95, 92 Фо, 95 У, 96 90, 97 У», 98 95, 99 95 або 100 95 відповідній ділянці з 98 амінокислот в
ЗБО ІЮ МО:1. Поліпептид може не містити від перших двох до перших чотирнадцяти 60 амінокислот (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 або 14 амінокислот) присутніх на М-
кінці ЗЕО ІЮ МО:1, при збереженні амінокислот, присутніх на С-кінці ЗЕО ІЮ МО:1. Іншими словами, видаленайї) амінокислота(и) відповідає М-кінцевим амінокислотам 5ЕО ІЮ МО:1.
Ї00130| У певних варіантах реалізації винаходу, мутеїн СОЕТ15 може бути довжиною щонайменше 106 амінокислот і мати амінокислотну послідовність ідентичну щонайменше на 90 Фо, 92 95, 95 Фо, 96 о, 97 Фо, 98 о, 99 95 або 100 95 відповідній ділянці з 106 амінокислот в ЗЕО
ІО МО:1. Мутеїн СОЕ15 може не містити перших шести амінокислот, які присутні на М-кінці «»ЕО
ІО МО.
І00131| У певних варіантах реалізації винаходу, довжина поліпептиду може становити щонайменше 109 амінокислот, і має амінокислотну послідовність ідентичну щонайменше на 90 Фо, 92 95, 95 Фо, 96 о, 97 Фо, 98 о, 99 95 або 100 95 відповідній ділянці з 109 амінокислот в БЗЕО
ІО МО:1. Мутеїн СООЕ15 може не містити перших трьох амінокислот, які присутні на М-кінці Ф»ЕО
ІО МО. 00132) Ілюстративні поліпептиди цього опису можуть містити делецію двох М-кінцевих амінокислот (АМ2) по відношенню до ДТ ПСО 15 і можуть бути злиті з Ес-послідовністю на М- кінці. Однак при згадуванні положення амінокислотних замін, зазначений номер залишку являє собою залишок, який відповідає положенню в зрілому ПНООЕ15 ДТ (ДТ; 5ЕО ІЮ МО:1). Таким чином, амінокислота М на М-кінці поліпептиду, яка втрачає перші дві амінокислоти на М-кінці, може згадуватися як залишок 3, хоча це перша амінокислота в амінокислотній послідовності поліпептиду мутеїна СОРЕ15 і передує гетерологічній амінокислотній послідовності (наприклад,
Ес). 00133) Як зазначалося вище, фрагменти поліпептидів можуть містити одну або більше з амінокислотних замін, які впроваджують консенсусну послідовність М-глікозилювання порівняно з послідовністю 5ЕО ІЮ МО:1, наприклад, одну, дві або більше амінокислотних замін, які описано в цьому документі.
ІЇ00134| Як зазначено вище і докладно описано нижче, поліпептиди цього опису можна модифікувати за допомогою, наприклад, пегілювання (ковалентного приєднання однієї або більше молекул поліетиленглікюлю (ПЕГ) або їх похідних); глікозилювання (наприклад, М- глікозилювання), полісіалювання; утворення гібридних молекул з альбуміном, які містять сироватковий альбумін (наприклад, людський сироватковий альбумін (ЛСА), сироватковий альбумін яванського макака або бичачий сироватковий альбумін (БСА)); зв'язування з альбуміном через, наприклад, кон'юЮгований ланцюг жирної кислоти (ацилювання); Ес-злиття; і злиття з міметиком ПЕГ. У деяких варіантах реалізації винаходу, модифікації вводять сайт- специфічним чином. В інших варіантах реалізації винаходу, модифікації включають лінкер.
Лінкер може кон'юговати модифікуючу групу з поліпептидом. 00135) В конкретних варіантах реалізації винаходу, цей опис передбачає модифікацію зрілого СОЕ15 людини і мутеїнів СОРЕ15 (таких як поліпептиди, які описано вище) шляхом кон'югації з альбуміном. В інших варіантах реалізації винаходу, цей опис передбачає модифікацію поліпептидів за допомогою М-глікозилювання або О-глікозилювання.
Характеристики кон'югатів альбумінів і поліпептиду (наприклад, злитих білків) і глікозильованих поліпептидів описано далі.
Ес-СОН15 злиті поліпептиди та їх комплекси (00136) В ілюстративних варіантах реалізації винаходу, поліпептиди СОЕ15, які описано в цьому документі, можуть бути присутніми як злитий поліпептид, який містить Ес-поліпептид або його фрагмент, злитий з амінокислотною послідовністю одного або більше з поліпептидів, які описано в цьому документі (наприклад, молекулою СОЕ15 людини, модифікованими молекулами ЗОЕ15 людини, мутеїнами СЗОЕ15 і модифікованими мутеїнами СОЕ15). Як передбачено в цьому документі, поліпептид СОЕ15 може бути поліпептидом дикого типу або мутеїном, наприклад, глікозильованим мутеїном. Як використовується в цьому документі, "глікозильований мутеин" або "глікомутеїн" або "глікозильований варіант" або "гліковаріант" в контексті поліпептиду, наприклад, поліпептиду СОЕ15, відноситься до поліпептиду, який містить один або більше сайт глікозилювання консенсусу в положенні амінокислотної послідовності, в цьому положенні зазначений поліпептид (дикий тип) не містить сайт глікозилювання консенсусу.
У деяких випадках, злитий поліпептид може містити Ес-послідовність, злиту з М-кінцем глікомутеїна СОЕ15, яку описано в цьому документі.
І00137| Будь-яка послідовність Ес-поліпептиду, яку описано в цьому документі або відома в цій галузі техніки, може бути одним з компонентів гібридних білків цього опису. Компоненти гібридних білків можна при необхідності ковалентно зв'язати за допомогою лінкера, наприклад, лінкерів, які описано в цьому документі. У деяких варіантах реалізації цього опису, гібридні білки містять послідовність Ес-поліпептиду у вигляді М-кінцевої частини і поліпептиди, які описано в бо цьому документі, у вигляді С-кінцевої частини.
00138) У деяких випадках, Ес-партнер Ес-СОЕ15 злитих поліпептидів, які описано в цьому документі, може бути Ес, який має Ес послідовність (3 людини (наприклад, Ід, Ідс2, ОЗ або Ідс4) або її варіант. Амінокислотну послідовність Ес ЇдДс1 людини представлено як 5ЕО ІЮ
МО:2: 00139)
ЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕН СОаРОМЕГЕРРКРКОТМІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУрСИ М
ЕМНМАКТКРАЕЄОММЗ ГУВУММІ ТМ НОМ МакКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИаОРВЕРОМУУ
ТЕРРОВВЕСТКМОМБ5І ТС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМСООРЕММУКТТРРМ ОБравЗЕРЇ ЗК ТУЮКоА
МмОдаммМЕ5СЗУМНЕАСНМНУТОКОБІ 5І Рак (ЗЕО ІЮ МО 2) 00140) Шарнірну ділянку виділено курсивом, домен СН2 підкреслено і домен СНЗ виділено подвійним підкресленням. Нумерація положень в амінокислотній послідовності Ес відповідає системі нумерації, яку прийнято в ЄС (ЕдеІтап С. М. еї аї., Ргос. Май. Асад. О5А, 63, 78-85 (1969)). Таким чином, залишок глутамінової кислоти "Е" в положенні Її в 5ЕБО ІЮ МО:2 нумерується як 216; домен СН2 починається з аланіну (А), який має номер 231; домен СНЗ починається з гліцину (0), який має номер 341, у відповідності з нумерацією ЄС. 00141) Рс-партнер Ес-СОЕ15 злитих поліпептидів, які описано в цьому документі, може бути
Ес, яке має безперервну амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 90 95 ідентична ЗЕО
ІО МО:2, наприклад, на щонайменше 93 95, щонайменше 95 95, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95 або більше ідентична 5ЕО ІО МО:2. У певних варіантах реалізації винаходу, Ес-партнер може бути фрагментом Ес, який містить домен СНЗ або безперервну амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 90 95, 9295, 95 95, 9695, 97 У, 9895, 9995 або 100 95 ідентична домену СНЗ в 5ЕО ІО МО:2. У певних варіантах реалізації винаходу, Ес-партнер може бути фрагментом Ес, який містить домен СН2 і домен СНЗ або безперервну амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 90 95, 9295, 95 95, 9695, 97 У, 9895, 9995 або 100 95 ідентична доменам СН2 і СНЗ в 5ЕО ІО МО:2. У певних варіантах реалізації винаходу, Ес- партнер може бути фрагментом Ес, який містить часткову ділянку шарніра, домен СНІ і домен
СНЗ або безперервну амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 90 95, 92 9, 95 9», 96 95, 97 Уо, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична ділянці шарніра, домену СН2 і домену СНЗ в 5ЕО ІЮ
МО:2. У деяких варіантах реалізації винаходу, Ес-партнер може мати амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 Фв, 95 9, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності, викладеній в ЗЕО ІЮ МО:2.
І00142| У деяких випадках, Ес-партнер Ес-ЗОРЕ15 злитих поліпептидів може містити сконструйоване вип'ячування, це вип'ячування може пов'язати інший Ес-поліпептид, який містить сконструйовану впадину. В інших випадках, Ес-партнер Ес-СОРЕ15 злитих поліпептидів може містить сконструйовану впадину, ця западина може пов'язати інший Ес-поліпептид, який містить сконструйоване вип'ячування. Ілюстративні Ес-послідовності зі сконструйованим вип'ячуванням і/або западиною описані в патенті США 8216805. У певних випадках, вип'ячування і западина можуть бути сконструйовані в домені СНЗ Ес-поліпептиду. У певних випадках, Ес-партнер, який пов'язаний із Ес-СЗОЕ15 злитими поліпептидами цього опису, не є кон'югованим із поліпептидом СОРЕ15. Відповідно, Ес-партнер димерізується з Ес-СОРЕ15 злитим поліпептидом формуючи гетеродимер з одною ЗОЕ15 молекулою на гетеродимер.
І00143| "Вип'ячування" або "виступи" можуть бути сконструйовані за допомогою заміни невеликих амінокислотних бічних ланцюгів в домені СНЗ першого поліпептиду на амінокислоти з більш великими бічними ланцюгами (наприклад, тирозину або триптофану). Компенсаційні "западини" або "дірки" ідентичного або схожого до вип'ячування розміру можуть бути створені за бажанням в домені СНЗ другого поліпептиду за допомогою заміни великих амінокислотних бічних ланцюгів меншими (наприклад, аланіном або треоніном).
І00144| "Першим поліпептидом" може бути будь-який поліпептид, який повинен бути пов'язаний з другим поліпептидом. Перший і другий поліпептид зустрічаються в "поверхні контакту" (визначено нижче). На додаток до поверхні контакту, перший поліпептид може містити один або більше додаткових доменів, таких як домен СН2 або ділянка шарніра. У певних випадках, перший поліпептид містить домен СНЗ, який може формувати поверхню контакту з першим поліпептидом.
І00145| "Другий поліпептид" може бути будь-яким поліпептидом, який повинен бути пов'язаний із першим поліпептидом через "поверхню контакту" На додаток до поверхні контакту, другий поліпептид може містити один або більше додаткових доменів, таких як домен
СН? або ділянка шарніра. У певних випадках, другий поліпептид містить домен СНЗ, який може формувати поверхню контакту з другим поліпептидом.
І00146| "Поверхня контакту" містить ті "контактні" амінокислотні залишки (або інші не бо амінокислотні групи, такі як вуглеводні групи, НАДН, біотин, ФАД або гем-групу) у першому поліпептиді, які взаємодіють з одним або більше "контактними" амінокислотними залишками (або іншими не амінокислотними групами) на поверхні контакту другого поліпептиду. У певних випадках, поверхня контакту може бути доменом імуноглобуліну, таким як константний домен (або його фрагменти). У певних випадках, поверхня контакту містить домен СНЗ імуноглобуліну, який є похідним від до антитіл, наприклад, антитіла Ідс1, Ідса2, ІдоЗ або Ідс4 людини.
І00147| "Вип'ячування" відноситься до щонайменше одного бічного ланцюга амінокислоти, яка виступає з поверхні контакту першого поліпептиду і, отже, позиціонується в компенсаційну западину в суміжній поверхні контакту (тобто, поверхня контакту другого поліпептиду) з тим, щоб стабілізувати гетеродимер, і тим самим сприяють кращому утворенню гетеродимеру, а не гомодимеру. Наприклад, западина може існувати у вихідній поверхні контакту або може бути введена штучно (наприклад, шляхом зміни нуклеїнових кислот, які кодують поверхню контакту).
Вип'ячування може бути введено штучно (наприклад, шляхом зміни нуклеїнових кислот, які кодують поверхню контакту) наприклад, рекомбінантними способами. (00148) "Западина" відноситься до щонайменше одного бічного ланцюга амінокислоти, яка заглиблена у поверхню контакту другого поліпептиду і, отже, вміщує відповідне вип'ячування на сусідній поверхні контакту першого поліпептиду. Западина може існувати у вихідній поверхні контакту або може бути введена штучно (наприклад, шляхом зміни нуклеїнових кислот, які кодують поверхню контакту). Наприклад, нуклеїнова кислота, що кодує поверхню контакту другого поліпептиду змінюється для кодування западини.
ІЇ00149| Вип'ячування також згадується як "виступ" і западина також згадується як "западина". Ілюстративні вип'ячування і порожнини представлені в патенті США 8216805 і містять заміни наступних амінокислотних положень: 347, 366, 368, 394, 405 і 407. Нумерація положень амінокислоти відповідає системі нумерації, прийнятої в ЄС. Сконструйоване вип'ячування може включати в себе щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти в Ес- послідовності (331 людини, причому заміна відбувається в положенні, яке обрано з групи, яка складається з амінокислотних залишків 347, 366 і 394. Наприклад, щонайменше одна заміна є обраною з групи, яка складається з 0347М//у, Т366УМ/їУ і Т394МУуУ/у. У певних випадках, сконструйована западина містить щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти в Ес- послідовності ЇД1 людини, причому заміна відбувається в положенні, яке обрано з групи, яка складається з амінокислотних залишків 366, 368, 394, 405 і 407. Наприклад, щонайменше одна заміна є обраною з групи, яка складається з 73665, І 368А, 13945, Е405Т/М/А і х407ТЛЛА. 00150) У певних випадках, вип'ячування може містити заміну Т36бУМ/у і западина може містити заміни 73665, І З68А і М407ТЛ//А. 00151) Наприклад, вип'ячування може містити заміну Т366М/у і западина може містити заміну Х407Т/Л//А. В інших випадках, вип'ячування може містити заміну Т366У і западина може містити заміну У407Т. В інших прикладах, вип'ячування може містити заміну ТЗ366УМУ і западина може містити заміну У407А. У подальших прикладах, вип'ячування може містити заміну Т394У і западина може містити заміну У407Т. 00152) У певних варіантах реалізації винаходу, Ес-партнер поліпептиду СООРЕ15 в злитому поліпептиді може містити додаткові мутації, які покращують якість злиття поліпептиду. Як такі,
Ес-послідовності в першому і другому поліпептидах, які описано в цьому документі, можуть містити додаткові мутації. Наприклад, послідовність Ес-партнера може містити мутацію(її), яка скасовує ефекторну функцію (наприклад, зменшує або усуває) Ід, яка в іншому випадку може бути ознакою Ес-партнера. У певних випадках, послідовність Ес-партнера може містити мутацію(іїї), яка скасовує ефекторні функції, такі як комплемент-залежну цитотоксичність (КЗЦ), антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АЗКЦ) і антитіло-залежний фагоцитоз клітин (АОСР).
ІЇ00153| Чотири ізотипи дб людини зв'язують рецептори активації Есу (ЕсСуКІ, ЕсукПа,
ЕсукШа), інгібуючий рецептор ЕсукіІІЬ, і перший компонент комплементу (С14) з різною спорідненістю, отримуючи дуже різні ефекторні функції. Таким чином, мутації в рамках ділянок зв'язування можуть мати істотний вплив на ефекторну функцію.
І00154| Зв'язування дос з Есук5 або С14д залежить від залишків, розташованих в ділянці шарніра і домену СН2. Дві ділянки домену СН2 мають вирішальне значення для Есукз і С14 зв'язування, і мають унікальні послідовності в доз і Ідся4. Було продемонстровано, що заміни в
ІДО1 людини на залишки Ід2 в положеннях 233-236 та залишки ІдД04 в положеннях 327, 330 і 331 значно знижують активність АЗКЦ ії КЗЦ (Аптоиг К.Г. еї аї,, 1999. Еиг. У. Іттипої. 29 (8):2613-24; Півд» В. Ї. єї а!., 2001, 9. Вісі. Снет. 276 (9):6591-604). Крім того, Ідизодіє та ін. продемонстрували, що заміна аланіну в різних положеннях, включаючи КЗ322, значно знижує активацію комплементу (Ідизодіє Е. Е. єї а!., 2000. У. Іттипої. 164 (8):4178-84). Аналогічно, було показано, що мутації в домені СН2 мишачого ІдДс2А зменшують зв'язування з ЕсукКіІ і С14 60 (бієшгег МУ. єї аї!., 1995. У. Іттипої. 155 (3):1165-74). У деяких варіантах реалізації винаходу, Ес-
поліпептид містити мутацію в домені СНО, який скасовує ефекторну функціюйії) до.
Ілюстративні мутації в ділянках СН2 включають: АРЕГ ССР (5ЕО ІО МО:96) ( АРАГІ саР (5ЕО
ІО МО:98); АРЕ СССР (5ЕО І МО:96) ( АРЕГАСОР (5ЕО ІЮ МО:99); і АРЕГП.сСР (5ЕО 1ІЮ
МО:96) ( АРАГАСИР (5ЕО 10 МО:97). 00155) У деяких варіантах реалізації винаходу, Ес-поліпептид кон'юговано з глікомутеїнами
СОБГ15, які містять частину або всі послідовності шарніру дикого типу (зазвичай на його М-кінці).
У деяких варіантах реалізації винаходу, Ес-поліпептид не містить функціональної послідовності або послідовності шарніру дикого типу. У певних випадках, Ес-послідовність може містити одну з наступних шарнірних послідовностей: ЕРК5СОКТНТІСРРСР (5БО ОО /МО:100);
КЗСОКТНТОСРРОР (5ЕО ІС МО:101); «ХСОКТНТСРРОР (5ЕО І МО:102); СОКТНТСРРСОР (5ЕО
ІО МО 103); ОКТНТОСРРСР (5ЕО ІЮ МО:104); КТНТСРРСР (5ЕО ІЮ МО:105); ТНТСРРСР (5ЕО І
МО:106); або СРРСР (5ЕО ІО МО:107); або варіант, який має одну або більше замін (наприклад, 1-6 замін, наприклад, 1-5, 1-4, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 замін). У певних випадках, Есо-послідовність може містити ділянку шарніра, який формує ковалентний зв'язок (наприклад, одну або більше дисульфідних зв'язків) з ділянкою шарніра іншого Ес. Таким чином, у певних варіантах реалізації винаходу, перший і другий поліпептиди в комплексі, який описано в цьому документі, може бути зв'язаний через ковалентні взаємодії між ділянками шарніра першого і другого поліпептидів. Ковалентна взаємодія може включати в себе одну або дві міжмолекулярні дисульфідні зв'язки. 00156) Як детально описано в цьому документі, передбачається перший поліпептид, який містить послідовність Ес виступу або западини, кон'юЮговано з глікомутеїном ЗОРЕ15. Такий поліпептид може бути в комплексі з другим Ес-поліпептидом, з яким перший поліпептид може фізично зв'язатися через розміщення виступу-в-западину на Ес-послідовності.
І00157| У певних випадках, описано комплекс першого Ес-поліпептиду і другого Ес- поліпептиду. Одним з першого або другого поліпептиду може бути злитий поліпептид з Ес і
СОБЕ15. Як зазначається в цьому документі, ЗОЕ15 поліпептид може містити мутаціюхії) глікозилювання, яка призводить до глікозилювання СОЕ15 поліпептиду. Глікозильований СОЕ15 поліпептид може також згадуватися як СОЕ15-глікан або СОРЕ15-глікомутеїн. СОРЕ15-глікан або
СОБ15-глікомутеїн можуть бути такими, як описано в цьому документі. У певних випадках,
Ко) СОЕ15-глікан або СОЕ15-глікомутеїн, які злито з Ес-виступом або Ес-западиною поліпептиду, який представлено в цьому документі, можуть бути поліпептидом, який містить безперервну амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 80 95, 85 95, 90 95, 9595, 96 95, 97 90, 98 90, 9995 або 10095 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІО МО:1, де безперервна амінокислотна послідовність має заміну Ю5Т; 055; або К21М порівняно з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:1. У певних варіантах реалізації винаходу, ЗОР15-глікан або СООЕ15- глікомутеїн, які злито з Ес-виступом або Есо-западиною поліпептиду, можуть бути поліпептидом, який має амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 80 95, 85 95, 90 95, 95 Уо, 96 Фо, 97 9о, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:1, де амінокислотна послідовність містить одну або більше з наступних пар замін, порівняно з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:1: хмії. К16М і НІ8Т або К16М і Н185; хмії. 523М і Е25Т або 523М і Е255; хіх. ЗБ5ОМ і Е52Т або 550М і Е525; хх. Е52М і АБ4Т або Е52М і А545; ххі. К5ЗМ і АБ55Т або К5ЗМ і А555; ххії. 564М і НбЄТ або 564М і НббеБЗ; ххії. КОТМ і 093Т або К91ТМ і 0935; ххім. 093М і 6951 або Б93М і 5955; хх. Т94АМ і М96Т або Т94М і 965; ххмі. М9БМ і І 987 або У9бМ і 1 985; ххмії. 597М і 9997 або 597М і 0995; і ххмії. АТОЄМ ії 01087 або АТОЄМ і 01085 00158) У певних випадках, комплекс може містити перший і другий поліпептиди. Перший поліпептид може містити Ес-послідовність (90, при цьому Ес-послідовність |ІД може містити
СНЗ послідовність, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; і другий поліпептид, який містить Ес-послідовність ДС, при цьому Ес-послідовність (ДО містить СНЗ3 послідовність, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину, причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду в западину другого поліпептиду, і причому або С-кінець першого бо поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутеїна СОРЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання. Відповідно, комплекс містить гетеродимер з першого поліпептиду і другого поліпептиду. Оскільки або перший, або другий поліпептид злито з мутеїнами СОРЕ15, які описано в цьому документі, присутня одна СОЕ15 молекула на гетеродимер. У певних випадках, мутеїн СОЕ15 може бути мутеїном СОРЕ15, який описано в цьому документі.
Ї00159| Як обговорюється в цьому документі, перший і другий поліпептиди можуть взаємодіяти для формування гетеродимеру за допомогою ковалентних і/або нековалентних взаємодій, таких як, гідрофобні взаємодії, дисульфідні зв'язки, або і те і інше. 00160) У певних варіантах реалізації винаходу описано комплекс, який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер. Кожен із першого і другого гетеродимерів може містити перший поліпептид і другий поліпептид, причому перший поліпептид може містити Ес- послідовність дО, при цьому Ес-послідовність до може містити послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; другий поліпептид може містити Ес- послідовність дО, при цьому Ес-послідовність (до може містити послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину; причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду в западину другого поліпептиду, причому або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутетна СЮОЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, причому мутеїн СОБЕ15 в першому гетеродимері димерізується з мутеїном СОЕ15 у другому гетеродимері тим самим формуючи комплекс, який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер. В обсязі цього опису комплекс містить перший гетеродимер фізично зв'язаний з другим гетеродимером, присутні дві молекули СОРЕ15 на комплекс гетеродимер-гетеродимер. 00161) Як зазначається в цьому документі, гетеродимер за допомогою ковалентних і/або нековалентних взаємодій, таких як, гідрофобні взаємодії, дисульфідні зв'язки, або і те і інше, і перший і другий гетеродимери димерів можуть взаємодіяти для формування димер-димерного комплексу за допомогою ковалентних і/або нековалентних взаємодій, таких як, гідрофобні взаємодії, дисульфідні зв'язки, або і те і інше.
І00162| У деяких випадках, мутеїни ЗОЕ15, які присутні в кожному з гетеродимерів, які
Зо описано в цьому документі, наприклад, у комплексі з двох гетеродимерів, можуть бути ідентичними за послідовності або різними. У певних випадках, мутеїн ЗОРЕ15 у комплексі з двох гетеродимерів, може бути ідентичний по послідовності. 00163) В цьому документі описано ілюстративні Ес-послідовності для злиття з мутеїнами
СОГ15 і як партнери зв'язування з Ес-СОЕ15 злитими білками. У певних варіантах реалізації винаходу, Ес-послідовності, які присутні в комплексах згідно цього опису, можуть бути подібні або ідентичні по послідовності, яка відмінна від сконструйованих послідовностей "виступу і "западини".
ІЇ00164| У деяких випадках перший і другий поліпептиди, які можуть взаємодіяти для формування комплексів, описаних в цьому документі, можуть бути зазначені нижче як Пара І по
МІ. У послідовностях, які викладено нижче, Есо-послідовність імуноглобуліну 1 (пПІдС1) людини слідує за послідовністю лінкера (підкреслено), яка слідує за послідовністю мутеїна СОЕ15 (жирний шрифт).
Пара І:
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(АА)(Т366УМ)-(с45)2-АМ2-СОЕ15 (М3-1112) (051) 00165)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУНІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМИ МУВИМЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРЗ
ВЕЕМТКМОМУБІ СІ УКИЕМРБЗОІАМЕМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраОаЗЕНРІ УЗКІ ТМОКЗАМООС
ММЕЗСЗММНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І ЗРОКСССОСЗзСС,ССаЗМатНеРІОРаВССВІ-НТУВАБ5І ЕП ОаМ/
АРММІ З5ХРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАОІКТОІ НВГЕКРОТУРАРССУРАЗБУМРМУІЮКТОТа
МБІОТУООІ ГАКОСНЕСІ (5ЕО ІЮ МОЗ)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 00166)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРЗ
ВЕЕМТКМОМУБІ ЗСАУКИаЕМРЗВІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ О5ООЗЕРІ МЗКІ ТМОКЗАМ ОС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:4)
Пара ІІ:
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(ААХТ 366 )-(Сіа5)5-АМ2-СОЕ15 (М3-1112) (05т) (00167
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МАКЕМКСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИаОРАЕРОМУМТІ РР
ВЕЕМТКМОМ5І МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИБЕРІ КІ ТОК ООС
ММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОК5бІ 5 ЗРОКОСОСССсЗасесавазассасасьасосазаава5МаТтНеРІ СРО
ССВІ-НТУВАЗІ ГЕО СМ ДОМУ 5РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄВААММНАОІКТОІНВСКРОТУРАРСС
МРАЗУМРММІОКТОТСОСУБІ ОТО ГАКОСНОЇІ (5ЕО 10 МО:5)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 00168)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МАКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРО
ВЕЕМТКМОМ5І БСАУКИаЕМУРОБОІАМЕМ ЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОС5ЕРІ МЗ5КІ ТМОКЗАМ ОСС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:6)
Пара І:
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(ААХТ 366 )-(Са5)5-АМ3-СОЕ15 (с4-І112)ХН21М) 00169)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МАКЕМКСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИаОРАЕРОМУМТІ РР
ВЕЕМТКМОМ5І МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИБЕРІ КІ ТОК ООС
ММЕЗСОЗММНЕАЇ НМНУТОК5бІ 5 ЗРОКОС,ааЗасасьс,!сса5асявазаса,ас5арнНсСРІ СРО ВС
СВЕНТУМАБЗІЕОГ ОМ АОМ/МІ5РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄНААММНАОІКТОСНВІ.КРОТУРАРССУ
РАЗБУМРММІОКТОТСОМУ5І ОТМООІ ГАКОСНОСЇІ (5ЕО І МО:7)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 00170
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МАКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРО
ВЕЕМТКМОМ5І БСАУКИаЕМУРОБОІАМЕМ ЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОС5ЕРІ МЗ5КІ ТМОКЗАМ ОСС
Ко) МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:8)
Пара М.
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(ААХТ 366 )-(Сі25)5-АМ3-СОБ15 (Сс14-1112)(523М/Е25Т) 001711
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МІАКЕМКСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИаОРАЕРОМУМТІ РР
ВЕЕМТКМОМ5І МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИБЕРІ КІ ТОК ООС
ММЕЗСОЗММНЕАЇ НМНУТОК5бІ 5 ЗРОКОС,ааЗасасьс,!сса5асявазаса,ас5арнНсСРІ СРО ВС
СВЕНТУВАМІТО ОМ АОМ/МІ5РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄНААММНАОІКТОСНВІ.КРОТУРАРССУ
РАЗБУМРММІОКТОТСОМУ5І ОТМООІ ГГ АКОСНОСЇІ (5ЕО І МО:9)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 001721
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МАКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРО
ВЕЕМТКМОМ5І БСАУКИаЕМУРОБОІАМЕМ ЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОС5ЕРІ МЗ5КІ ТМОКЗАМ ОСС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:10)
Пара У:
Перший поліпептид: пПІдс1-Ес(ААХТ 366 )-(Сі25)5-АМ3-СОБ15 (С14-І112)(Е52М/АБАТ) 00173
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
БО КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МІАКЕМКСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИаОРАЕРОМУМТІ РР
ВЕЕМТКМОМ5І МС УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5рИБЕРІ КІ ТОК ООС
ММЕЗСОЗММНЕАЇ НМНУТОК5бІ 5 ЗРОКОС,ааЗасасьс,!сса5асявазаса,ас5арнНсСРІ СРО ВС
СВЕНТУВАБЗІ ЕОМ АОМ/МІ5РВЕМОУТМСІСАСРЗОМАТАММНАОІКТОСНВІ.КРОТУРАРССУ
РАЗБУМРММІОЮОКТОТСОИМУ5І ОТО ГГ АКОСНОСЇ (5ЕО І МО:11)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 00174
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АДОИаРЗУБГІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЄЕОУМЗТУВММ5МІ ТМ НОМ МАКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРО
ВЕЕМТКМОМ5І БСАУКИаЕМУРОБОІАМЕМ ЕЗБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОС5ЕРІ МЗ5КІ ТМОКЗАМ ОСС 60 МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО 12)
Пара МІ:
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(АА)(Т366МУМ)-(с145)5-АМ3-СОЕ15 (Ссх4-1112)(853М/А55Т) 00175)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОММТІ РРБ
ВЕЕМТКМОМУБІ СІ УКИЕМРБЗОІАМЕМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраОаЗЕНРІ УЗКІ ТМОКЗАМООС
ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І ЗРаОКССССИОЗза,СЯЗОСССа,ОЗаскчаазассазарнсрісравс
СВІ НТУНАБЗІ ЕВ СМ АОММІ 5РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄЕМАТММНАОІКТ5І ННІ КРОТУРАРССУ
РАЗБУМРММІОЮОКТОТСОИМУ5І ОТО ГГ АКОСНОСЇ (5ЕО ІЮ МО:13)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 00176)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРЗ
ВЕЕМТКМОМУБІ ЗСАУКИаЕМРЗВІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ О5ООЗЕРІ МЗКІ ТМОКЗАМ ОС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:14)
Пара МІ!:
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(АА)(Т366МУ)-(с145)5-АМ3-СОЕ15 (Ссх4-1112) (КО1М/0931) 00177
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОММТІ РРБ
ВЕЕМТКМОМУБІ СІ УКИЕМРБЗОІАМЕМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраОаЗЕНРІ УЗКІ ТМОКЗАМООС
ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І ЗРаОКССССИОЗза,СЯЗОСССа,ОЗаскчаазассазарнсрісравс
СВІ НТУНАБЗІ ЕВ СМ АОММІ 5РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄЕНААММНАОІКТ5ОІ НВІ КРОТУРАРССУ
РАБУМРММЦЮМТТТОаУ'ОТМОО І АКОСНОСЇІ (ЗЕО І МО 15)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 001781
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРЗ
ВЕЕМТКМОМУБІ ЗСАУКИаЕМРЗВІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ О5ООЗЕРІ МЗКІ ТМОКЗАМ ОС
Зо МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:16)
Пара МІ:
Перший поліпептид: пІдс1-Ес(АА)(Т366ММ)- (Сса5)5-АМ3-аБЕ15 (с-1112Х093М/295Т) 001791
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОММТІ РРБ
ВЕЕМТКМОМУБІ СІ УКИЕМРБЗОІАМЕМ ЕБЄМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраОаЗЕНРІ УЗКІ ТМОКЗАМООС
ММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І ЗРаОКССССИОЗза,СЯЗОСССа,ОЗаскчаазассазарнсрісравс
СВІ НТУНАБЗІ ЕВ СМ АОММІ 5РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄЕНААММНАОІКТ5ОІ НВІ КРОТУРАРССУ
РАЗБУМРММІОКТМТТУБІ ОТМОБІ І АКОСНОЇІ (5ЕО ІЮ МО:17)
Другий поліпептид: пПІдс1-Ес(АА)(Т3665)(І З36ВА)(У407М) 00180)
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АФОаРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРЗ
ВЕЕМТКМОМУБІ ЗСАУКИаЕМРЗВІАМЕМЕЗМИСОРЕММУКТТРРМІ О5ООЗЕРІ МЗКІ ТМОКЗАМ ОС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:18)
ІЇ00181| У деяких випадках перший і другий поліпептиди, які можуть взаємодіяти для формування комплексів, які описано в цьому документі, можуть мати амінокислотну послідовність щонайменше на 80 95 ідентичну амінокислотній послідовності першого і другого поліпептидів, відповідно, як описано вище в Парах з І по МІ. Наприклад, ідентичність послідовності може бути щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 95 95, щонайменше 97 95, щонайменше 99 95 або більше. 00182) У деяких варіантах реалізації винаходу, комплекс може містити перший поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 95, 96 о, 97 Уо, 98 95, 99 90 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності ЖЕО ІЮ МО:3; і другий поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 905, 99 96 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності БЕО ІЮ МО:4, де перший і другий поліпептиди ковалентно з'єднані через щонайменше один міжмолекулярний дисульфідний зв'язок. Також в цьому документі представлено комплекси, які містять перший гетеродимер і другий гетеродимер, кожен з першого гетеродимера і другого гетеродимера містити перший 60 поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 Фо, 96 Ор,
97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності «ЕЕ ІЮ МО:3; і другий поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 Фо, 96 Ор, 97 9», 98 9», 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності ЗЕО 10 МО 4. 00183) У деяких варіантах реалізації винаходу, комплекс може містити перший поліпептид,
Б який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 обо, 92 о, 95 9, 96 Фо, 97 Фо, 98 Уо, 99 Уо або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності ЖЕО ІЮ МО:5; і другий поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 905, 99 96 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності БЕО ІЮ МО:б6, де перший і другий поліпептиди ковалентно з'єднані через щонайменше один міжмолекулярний дисульфідний зв'язок. Також в цьому документі представлено комплекси, які містять перший гетеродимер і другий гетеродимер, кожен з першого гетеродимера і другого гетеродимера містить перший поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 Фо, 96 Ор, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності «ЕЕ ІЮ МО:5; і другий поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 Фо, 96 Ор, 97 9», 98 9», 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО:6. 00184) У деяких варіантах реалізації винаходу, комплекс може містити перший поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 95, 96 о, 97 Уо, 98 95, 99 90 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності 560 ІЮ МО:7; і другий поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 905, 99 96 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності БЕО ІЮ МО:8, де перший і другий поліпептиди ковалентно з'єднані через щонайменше один міжмолекулярний дисульфідний зв'язок. Також в цьому документі представлено комплекси, які містять перший гетеродимер і другий гетеродимер, кожен з першого гетеродимера і другого гетеродимера містить перший поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 Фо, 96 Ор, 97 95, 98 95, 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності «ЕЕ ІЮ МО:7; і другий поліпептид, який має амінокислотну послідовність на щонайменше 90 95, 92 95, 95 Фо, 96 Ор, 97 9», 98 9», 99 95 або 100 95 ідентичну амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:8.
І00185| У конкретних варіантах реалізації винаходу, комплекси, які описано в цьому документі, можуть містити два гетеродимера, кожен гетеродимер містить:
Зо 001861 (а) пІда1-Ес поліпептид, який містить виступ (Ес-виступ) і має послідовність: (00187
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АСОРБОМУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕМКЕМУ УМ РОМЕМНМА
КТКРАЕЕОУМОТУАММУБМІ ТМ НОБУУІ МЕСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ РРБ
ВЕЕМТКМОМ5БІ СІ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСБЕРІ КІ ТМОКОАМОСИ
ММЕЗСО5УМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І 5РаИк (ЗЕО І МО:127); и 00188) (Б) пІідс1-Ес поліпептид, який містить западину (Ес-западину) і має послідовність: 001891
ОКТНТСРРСОРАРАЇ АСОРБОМУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММОУМЗНЕОРЕМКЕМУ УМ РОМЕМНМА
КТКРАЕЕОУМОТУАММУБМІ ТМ НОБУУІ МЕСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ РРБ
ВЕЕМТКМОМ5І БСАУКОаЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5ВОИБЕРІ М5КІ ТМОКЗАМООС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 РОК (5ЕО І МО:4),
ІЇ00190| де будь-який Ео-виступ (а), або Ео-западина (Б) злиті на С-кінці з М-кінцем глікомутеїна СООРЕ15. Послідовність глікомутеїна СООЕ15 може бути наступною: 001911)
АВМатТНеоРІ ЧаРЕИАССВІ НТУВАБІ ЕІ СУМАМУМІ БРАВЕМОМТМСІСАСРБООЄВААММНАОІКТОІ Н
ВГЕКРОТУРАРССУРАЗБУМРММУПІОКТОТОИМУБІ ОТО ГГ АКОСНОСЇ (5ЕО 10 МО: 128; СОБЕ15 (А1- 112) О5Т); або 00192
МатНоРІ аРЕИВССВІ НТУВАБІ ЕП СУАОМ/МІ БРВЕМОМТМСІСАСРООГНААММНАОСІКТОІ НВ.
КРОТМРАРССУРАЗУМРММ ОКТОТОМ5І ОТО АКОСНСІ (ЗЕО ІЮ МО:129; АМ2-СОЕ15 (М3- 112) О5Т); або 00193)
СТНОРІ ОРОАССВІ НТУВАБІ ЕОЇ СММАОМУМІ БРВЕМОМТМСІСАСРБООРГНААММНАСІКТОІ НА К
РОТМРАРССУРАБУМРММОКТОТОМІ ОТО ГАКОСНСЇІ (ЗЕО ІЮ МО:130; АМ3-СОЕ15 ((4- 112) О5Т); або 00194
СОНСРІ аРОВССВІ НТУМАБІ ЕІ СУ АВМУУМІ БРАЕМОМТМСІСАСРОЗОЄВААММНАСІКТОІ ННІ К
РОТМРАРССУРАБУМРММОКТОТОМІ ОТО ГАКОСНСЇІ (ЗЕО ІЮО МО:131; АМ3-СОЕ15 ((4- 112) К21М); або 60
00195) сСОнНСРІ аРОВССВІ НТУВАМІ ТОЇ СМ АОМУМІ БРАЕМОМТМСІСАСРОЗОЕВААММНАОІКТБІ НА К
РОТУРАРССУРАБУМРММУПІОКТОТИаУБГОТМООІ ГАКОСНСЇІ (ЗЕО ІЮ МО:132; АМ3-С0ОЕ15 (с4- 112) (523М/Е25Т)); або (00196) сСОНнСРІ аРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ ЯМ АОМУМІ БРАЕМОМТМСІСАСРОЗОМА ТАММНАОІКТОІ НАІ К
РОТМРАРССУРАБУМРММОКТОТОМІ ОТО ГАКОСНСЇІ (ЗЕО ІЮ МО:133; АМ3-СОЕ15 ((4-
І112ХЕ52М/А54Т)); або 00197
СОнНСРІ аРОВССВІ НТУВАБІ ЕВ ЯМ АОМУМІ БРАЕМОМТМСІСАСРОЗОЕЄМАТММНАОІКТОІ НА К
РОТМРАРССУРАБУМРММОКТОТОМІ ОТО ГАКОСНСЇІ (ЗЕО ІЮ МО:134; АМ3-С0ОЕ15 ((4-
ІМ112ХК53М/А55Т)); або 00198)
СОнНСРІ аРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ ЯМ АОМУМІ БРАЕМОМТМСІСАСРОЗОЕВААММНАОІКТОІ НАІ К
РОТУРАРССУРАБУМРМУПІЮОМТТ Там ОТО ГГ АКОСНСЇІ (5ЕО ІЮ МО:135; АМ3-С0ОЕ15 (с4- 112) (КОТМ/093Т)); або 00199)
СОнНСРІ аРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ ЯМ АОМУМІ БРАЕМОМТМСІСАСРОЗОЕВААММНАОІКТОІ НАІ К
РОТМРАРССУРАБУМРММОКТМТТУЗІ ОТО ГАКОСНСЇІ (5ЕО ІО МО:136; АМ3-СОЕ15 ((4- 112Х093М/95Т)).
ІЇ00200| У деяких прикладах, амінокислотна послідовність Ес-виступу може бути на щонайменше 8595, 9095, 9295, 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або більше ідентична амінокислотній послідовності ЗЕ ІЮ МО:127. У деяких прикладах, амінокислотна послідовність
Ес-виступу може бути на щонайменше 85 95, 90 95, 92 95, 95 95, 96 95, 97 У, 98 95, 99 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ОО МО:4. У деяких прикладах, амінокислотна послідовність мутетїна ЗОРЕ15 може бути на щонайменше 85 95, 90 9», 92 Ор, 95 95, 96 9, 97 У, 98 90, 99 9ь або більше ідентична амінокислотній послідовності будь-якої з 5ЕО ІЮ
МО:128-136.
І0020О1| Ес-виступ або Ес-западина можуть бути з'єднані з глікомутезном СОРЕ15 через послідовність лінкера (545)п, де п може дорівнювати від 1 до 10, наприклад, 2, 3, 4 або 5.
І00202| У деяких прикладах, комплекси цього опису можуть мати відновлення від щонайменше 50 мг/л, наприклад, щонайменше більш ніж 55 мг/л, 60 мг/л, 65 мг/л, 70 мг/л, 75 мг/л, 80 мг/л, 85 мг/л, 90 мг/л, 95 мг/л, 100 мг/л, 110 мг/л, 120 мг/л, 130 мг/л, 140 мг/л, 150 мг/л, 160 мг/л, 170 мг/л, 180 мг/л, 190 мг/л, 200 мг/л або більше. У деяких випадках комплекси цього опису можуть мати відновлення від щонайменше 50 мг/л-300 мг/л, наприклад 60 мг/л-300 мг/л, 75 мг/л-300 мг/л, 75 мг/л-250 мг/л, 75 мг/л-200 мг/л, 75 мг/л-175 мг/л, 75 мг/л-150 мг/л, 100 мг/л- 300 мг/л, 100 мг/л-250 мг/л, 100 мг/л-200 мг/л, 100 мг/л-150 мг/л, 100 мг/л-125 мг/л, 110 мг/л-300 мг/л або 150 мг/л-300 мг/л. Відновлення комплексу відноситься до кількості повністю зібраного димер-димерного комплексу, отриманого з культурального середовища, в якому культивують клітину-хазяїна, яка експресує перший і другий поліпептиди, які формують два димери, які присутні в кожному повністю зібраному комплексі. (00203) В цьому описі також розглядаються партнери злиття Есо-поліпептиду і злиті білки, які містять такі молекули, де партнер злиття Ес-поліпептиду модифіковано, щоб бути одним з партнерів зарядженої пари Ес. "Партнер зарядженої пари Ес" відноситься до (Її) "негативно зарядженої" Ес-послідовності (з необов'язково відсутньою шарнірною ділянкою), яка містить мутацію зарядової пари або (ії) "позитивно зарядженої" Есо-послідовності (з необов'язково відсутньою шарнірною ділянкою), яка містить мутацію зарядової пари. "Позитивно заряджений" і "негативно заряджений" використовуються в цьому документі для зручності опису природи мутації зарядової пари в Ес-послідовностях, а не для вказівки, що послідовність або конструкт в цілому обов'язково має позитивний або негативний заряд. Амінокислотні послідовності зарядженого Ес, придатні для використання у конструктах поліпептиду (наприклад, глікомутеїн
СОНЕ15, модифіковані глікомутеїни СОРЕ15), які використовуються цьому описі в, наприклад, УМО 2013/113008.
І00204| Приклади позитивно зарядженого Ес ("Ес(-)") включають Ес, який містить мутацію заміни аспарагінової кислоти на лізин (ЕЗ56К) і мутацію заміни глутамінової кислоти на лізин (0399К) Ес-послідовності з відсутньою шарнірною ділянкою. Приклади негативно зарядженого
Ес ("Ес(-)) включають Ес, який містить дві мутації заміни лізину на аспартат (К3920, К4090)) в
Ес-послідовності з відсутньою шарнірною ділянкою. С-кінцевий лізин (К477) також можна видалити за необхідності. Коли злитий білок на основі Ес(к)поліпептиду (наприклад, злитий 60 білок мутеїна Ес(я)СО15) і злитий білок на основі Ес(-)поліпептиду (наприклад, злитий біло мутеїна Ес(-)0О15) інкубують спільно, залишки аспартату асоціюють із залишками лізину за допомогою електростатичних сил, полегшуючи утворення Ес-гетеродимерів між Ес(ж) і Ес(-) послідовностями злитих білків на основі ЗОЕ15 поліпептиду. (00205) Цей опис також передбачає конструкти, які називають конструктами "темі" або "гемі-
Ес", які містять дві Ес-послідовності, з'єднані тандемом за допомогою лінкера, який з'єднує М- кінець першої Есо-послідовності з С-кінцем другої Ес-послідовності. У деяких варіантах реалізації винаходу, мономер містить послідовність поліпептиду (наприклад, зрілого модифікованого
СОБГ15 або глікомутетна С0ОЕ15), яка зв'язана з першою Ес-послідовністю за допомогою першого лінкера, який з'єднує М-кінець послідовності СЗОЕ15 з С-кінцем першої Ес- послідовності, причому перша Ес-послідовність з'єднана з другою Ес-послідовністю за допомогою другого лінкера, який з'єднує М-кінець першої Ес-послідовності з С-кінцем другої Ес- послідовності. Перша і друга Ес-послідовності також пов'язані за допомогою шарнірних ділянок
Ес. Два таких мономера асоціюють для формування димеру, в якому мономери зв'язані за допомогою міжланцюгового дисульфідного зв'язку між двома послідовностями поліпептиду.
Приклади гемі-Ес-поліпептидів, придатних для використання з мутеїнами СОРЕ15 відповідно до цього опису, див. у МО 2013/113008. (00206) Цей опис також передбачає гібридні білки, які мають мультимер Ес-поліпептидів або їх фрагменти, включаючи партнер зарядженої Ес-пари (наприклад, Ес- мультимер).
І00207| Комплекси згідно цього опису мають поліпшені властивості, такі як збільшену розчинність, зменшену агрегацію, і/або збільшений період напівжиття в сироватці крові. У певних випадках, розчинність комплексів в цілому була поліпшена в порівнянні з некон'югованим рекомбінантним СОБЕ15 людини і Ес (виступ або западина) кон'югованого
СОБЕ15 дикого типа. У певних варіантах реалізації винаходу, комплекс має розчинність щонайменше 1 мг/мл у фосфатно-сольовому буфері (РВ5) при рН 7,0. В інших варіантах реалізації винаходу, комплекс має розчинність щонайменше 2 мг/мл, щонайменше З мг/мл, щонайменше 4 мг/мл, або щонайменше 5 мг/мл. В інших варіантах реалізації винаходу, комплекс має розчинність щонайменше б мг/мл у фосфатно-сольовому буфері (РВ5) при рн 7,0, щонайменше 7 мг/мл, щонайменше 8 мг/мл, щонайменше 9 мг/мл або щонайменше 10 мг/мл. У конкретних варіантах реалізації винаходу, комплекс має розчинність більше ніж 10
Зо мг/мл. 00208) Глікозилювання: Для цілей цього опису мається на увазі, що "глікозилювання" в широкому сенсі відноситься до ферментативного процесу приєднання гліканів до білків, ліпідів або інших органічних молекул. Використання терміну "глікозилювання" у поєднанні з цим описом, як правило, означає додавання або видалення однієї або більше з вуглеводних груп (або шляхом переміщення основного сайту глікозилювання, або шляхом видалення глікозилювання за допомогою хімічних і/або ферментативних способів), і/(або додавання одного або більше сайтів глікозилювання, які можуть або не можуть бути присутніми в нативній послідовності. Крім того, ця фраза включає якісні зміни глікозилювання нативних білків, пов'язані зі зміною природи і пропорції різних наявних вуглеводних залишків. 00209) Глікозилювання може істотно впливати на фізичні властивості білків і може мати важливе значення для стабільності, секреції та субклітинної локалізації білка. Фактично, глікозилювання мутеїнових поліпептидів (ЗОЕ15, які описано в цьому документі, вигідно покращує їх фізичні властивості. В якості прикладу, але не обмежуючись ним, розчинність мутеїнів ЗОБЕ15 можна поліпшити шляхом глікозилювання, і таке поліпшення може бути значним (див. Приклади). Поліпшення розчинності, яке демонструється такими модифікованими мутеїнами СОЕ15, може, наприклад, включати створення составів, які більш підходять для фармацевтичного введення, ніж неглікозильовані ЗОЕ15/мутетни СОР15. Глікозильовані
СОГ15/мутеїнові поліпептиди СОЕ15 також можуть демонструвати підвищену стабільність. Крім того, поліпептиди можуть поліпшити одне або декілька з фармакокінетичних властивостей, таких як, період напівжиття.
І00210| Додавання сайтів глікозилювання можна здійснити шляхом зміни амінокислотної послідовності, як описано вище. Зміну поліпептиду можна здійснити, наприклад, шляхом додавання або заміни одного або більше із залишків серину або треоніну (для сайтів О- зв'язаного глікозилювання) або аспарагіну (для сайтів М-зв'язаного глікозилювання). Структури
М-зв'язаних і О-зв'язаних олігосахаридів і залишків цукру, які виявляються при кожному типі, можуть відрізнятися. Один із цукрів, зазвичай присутній в обох варіантах, являє собою М- ацетилнейрамінову кислоту (яку далі називають сіаловою кислотою). Сіалова кислота зазвичай є кінцевим залишком як М-зв'язаних, так і О-зв'язаних олігосахаридів і, за рахунок свого негативного заряду може надавати глікопротеїну кислі властивості. Конкретний варіант бо реалізації цього опису включає одержання та застосування варіантів М-глікозилювання, які описано вище. (00211) Іншим способом збільшення кількості вуглеводних залишків у поліпептиді є хімічне або ферментативне приєднання глікозидів до поліпептиду.
І00212| Клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), дефіцитні за дигідрофолатредуктазі (ОНЕК), являють собою клітини-хазяї, які зазвичай використовуються для отримання рекомбінантних глікопротеїнів. Ці клітини не експресують фермент бета-галактозид-альфа-2,6- сіалілтрансферазу і тому не приєднують сіалову кислоту за допомогою альфа-2,6 зв'язку до М- зв'язаних олігосахаридів глікопротеїнів, які продукуються в цих клітинах. 002131 У конкретних варіантах реалізації винаходу, мутеїни СОНРЕ15, які містять щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, є глікозильованими. Таким чином, в конкретних варіантах реалізації винаходу, мутеїни СОРЕ15 в комплексах, які описано в цьому документі, можуть бути глікозильованими на консенсусному сайті М-зв'язаного глікозилювання, який введено в мутеїн ЗОЕ15. У певних випадках, коли комплекс, який описано в цьому документі, може включати в себе глікозильований СОРЕ15, такий як, глікозильований СОРЕ15, вироблений під час експресії з клітинної лінії комплекс може бути оброблений після виробництва для видалення вуглеводного фрагменту. Видалення після виробництва вуглеводного фрагменту може призвести до видалення практично всіх груп вуглеводів, прикріплених до мутеїну СОЕ15 (і Ес-послідовності) під час експресії у еукаріотичній клітині- хазяїні. (00214) Таким чином, цей опис передбачає кон'югування одного або більше додаткових компонентів або молекул по М- і/або С-кінцю поліпептидної послідовності, наприклад, ще одного білка (наприклад, білка, який містить амінокислотну послідовність, гетерологічну по відношенню до білка суб'єкту) або молекули-носія. Таким чином, ілюстративна поліпептидна послідовність може бути представлена у вигляді кон'югату з іншим компонентом або молекулою.
І00215| Поліпептид можна також кон'югувати з великими, макромолекулами, які повільно метаболізуються, наприклад, білками; полісахаридами, наприклад, сефарозою, агарозою, целюлозою, гранулами целюлози; полімерними амінокислотами, наприклад, поліглутаміновою кислотою, полілізином; сополімерами амінокислот; інактивованими вірусними частками; інактивованими бактеріальними токсинами, наприклад, анатоксинами дифтерії, правця, холери, молекулами лейкотоксинів; інактивованими бактеріями; і дендритними клітинами. Такі кон'юговані форми при бажанні можна використовувати для отримання антитіл проти поліпептиду відповідно до цього опису. У певних випадках, СООЕ15 у комплексах, які описано в цьому документі, може бути поліпептидом, який кон'юговано з великими молекулами, які повільно метаболізуються. (00216) Додаткові кандидати-компоненти і молекули для кон'югування включають молекули, які підходять для виділення та очищення. Конкретні не обмежуючі Приклади включають зв'язувальні молекули, наприклад, біотин (специфічно зв'язуюча пара біотин-авідін), антитіло, рецептор, ліганд, лектин або молекули, які містять твердий носій, в тому числі, наприклад, пластикові або полістиролові гранули, планшети або гранули, магнітні гранули, тест-смужки і мембрани.
І00217| Для розподілу кон'югатів відповідно до різниці заряду можна використовувати такі способи очищення, як катіонообмінну хроматографію, яка ефективно розподіляє кон'югати різної молекулярної маси. Наприклад, можна завантажити катіонообмінну колонку, промити її "- 20 мМ ацетатом натрію, рН -- 4, а потім елюювати лінійним (0-0,5 М) градієнтом масі, який забуферено при рН від З до 5,5, наприклад, при рН - 4,5. Вміст фракцій, отриманої за допомогою катіонообмінної хроматографії, можна ідентифікувати по молекулярній масі з використанням звичайних способів, наприклад, мас-спектроскопії, електрофорезу в ДСН-ПААГ або інших відомих способів розподілення молекулярних структур по молекулярній масі. (00218) Лінкери: Будь-який із вищевказаних компонентів і молекул, які використовуються для зміни поліпептидних послідовностей згідно цього опису, при необхідності можна кон'югувати за допомогою лінкера. Підходящі лінкери включають "гнучкі лінкери", які, як правило, володіють достатньою довжиною, яка забезпечує деякий рух модифікованих поліпептидних послідовностей і зв'язаних компонентів і молекул. Довжина лінкерних молекул може становити близько 6-50 атомів. Лінкерні молекули можуть також являти собою, наприклад, арілацетилен, олігомери етиленгліколю, які містять 2-10 мономерних одиниць, діаміни, дикислоти, амінокислоти або їх комбінації. Підходящі лінкери можуть бути легко обрані та вони можуть бути будь-якої довжини, такої як 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 10-20, 20-30, 30-50 амінокислот. 00219) Ілюстративні гнучкі лінксери включають полімери гліцину (С)п, полімери гліцин- аланіну, полімери аланін-серину, полімери гліцин-серину (наприклад, (Стбо)п, (4502105 (5ЕО (516) ІО МО:120), (СтеоСіт)п, (СтОЗоСітбостт)п (ЗЕО ІО МО:121), (азайют)п (ЗЕО ІО МО 22),
(а5С5ті)п (ЗЕО ІЮ МО 123) ї (бот) (ЗЕО ІЮ МО:124), і їх комбінації, де т, п, і о кожен незалежно обрано з цілого числа від щонайменше 1 до 20, наприклад, 1-18, 2-16, 3-14, 4-12, 5- 10,1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9 або 10), та інші гнучкі лінкери. Полімери гліцину і гліцин-серину є відносно неструктурованими, і, отже, можуть слугувати в якості нейтрального троса між компонентами. Ілюстративні гнучкі лінксери включають, але не обмежуються зазначеним далі, ссва (5ЕО Ір МО21), са5ИаС) (5ЕО І МО:22), аБИаБИа (5ЕБО І МОс23), аБОСИ (5ЕО І
МО:24), ОСО5О (ЗЕО ІЮ МО:25) і 55550 (5ЕО ІЮО МО:26).
І00220| Додаткові гнучкі лінкери включають полімери гліцину (С)л або полімери гліцин- серину (наприклад, (55), (452(21045)п (ЗЕО І МО: 120), (Сс03025)п (ЗЕО ІЮ МО:125) і (56005) п (ЗЕО ІЮО МО:126), де п може дорівнювати від 1 до 50, наприклад, 1,2, 3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 10-20, 20-30, 30-50). Ілюстративні гнучкі лінкери включають, але не обмежуються зазначеним далі, сс (5ЕБО І МОол9), асацйе (5ЕБО І МО20), асо (5ЕО І МОс21), ааБас. (5ЕО І
МО:22), аБава (БО ІЮО МО:23), О5БОСО (5ЕО ІЮ МО:24), ССО5О (5ЕБО ІЮО МО:25), і 55550 (ЗЕО ІЮ МО:26). Мультимер (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 10-20, 20-30 або 30-50) цих лінкерних послідовностей може бути пов'язаний разом із метою забезпечення гнучких лінкерів, які можуть бути використані для кон'югування гетерологічної амінокислотної послідовності з поліпептидами, які описано в цьому документі. Як описано в цьому документі, гетерологічна амінокислотна послідовність може представляти собою сигнальну послідовність і/або партнер злиття, наприклад, альбумін, Ес-послідовність і т. п.
І00221| Приклади лінкерів включають, наприклад, (500055) (ЗБО ІЮО МО:126), де п представляє собою ціле число від 1 до близько 10 (наприклад, п-1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9 або 10); савазасиавІєсВА (5ЕО ІЮ МО:48); СОВИ (ЗЕО ІЮ МО:27); ЕС (5ЕО ІЮ МО:28).
І00222| У деяких випадках лінкер може являти собою лінкер, який розщеплюється, наприклад, лінкер, який розщеплюється ферментативно. В інших випадках лінкер може являти собою лінкер, який не розщеплюється, наприклад, лінкер, який не піддається ферментативному розщепленню при нормальних фізіологічних умовах іп мімо.
І00223| Наприклад, лінкер, який розщеплюється протеолітично, може містити сайт розщеплення металопротеїнази матриксу (ММР), наприклад, сайт розщеплення ММР, який обрано з колагенази-1, -2 і -3 (ММР-1, -8 і -13), желатінази А і В (ММР-2 і 9), стромелізину 1,2 і З
Зо (ММР-3, -10 ї -11), матрилізину (ММР-7) і мембранних металопротеїназ (МТ1-ММР і МТ2-ММР).
Розщеплення послідовності МІМР-9 являє собою Рго-Х-Х-Ну (де Х являє собою довільний залишок; Ну - гідрофобний залишок) (5ЕО ІЮ МО:29), наприклад, Рго-Х-Х-Ну-(Зег/ТНг) (ЗЕО Ір
МО:30), наприклад, Рго-І еш/Сс1Іп-Стіу-Меї-ТНі-Зег (ЗЕО ІЮ МО:31) або Рго-І еш/СсІп-Стіу-Меї-ТНг (ЗЕО ІО МО:32). Ще один приклад сайту розщеплення протеази являє собою сайт розщеплення активатору плазміногену, наприклад, шРА або сайт розщеплення тканинного активатору плазміногену (РА). Конкретні Приклади розщеплення послідовностей РА і ЇРА включають послідовності, які містять МаІ-Сіу-Агд. Ще одним прикладом є сайт розщеплення тромбіну, наприклад, СОЇ МРАОБОР (5ЕБЕО ІЮ МО:33). Додаткові відповідні лінкери, які містять сайти розщеплення протеаз, включають лінкери, містять одну або більше з наступних амінокислотних послідовностей: 1) ЗІ К5ЕММУРМЕМ (5ЕО ІЮ МО:34) або БІ АКЕМРМЕМ (ЗЕО ІЮ МО:35), які розщеплюються катепсіном В; ЗК МОАЗАЗСУМ (5ЕО ІЮО МО:36) або 55УІЇ КАЗБАРОМ (ЗЕО І
МО:37), які розщеплюються протеазою вірусу Епштейна-Барр; ЕРКРООРЕСІЇ ММ (ЗЕО ІО
МО:38), яка розщеплюється ММР-З(стромелізином); ЗІ КЕРІ АГМУКЗЕМ (ЗЕБО ІЮ МО:39), яка розщеплюється ММР-7 (матрилізином); ЗРОСІДАСОРБМЕМ (ЗЕО ІЮО МО:40), яка розщеплюється
ММР-9; ОМОЕКОМУКОЕАЗРЕЇ. (5ЕО ІО МО:41), яка розщеплюється термолізин- подібною ММР;
ЗГРГОГММАРМЕМ (ЗЕО ІЮО МО:42), яка розщеплюється металопротеїназою матриксу 2 (ММР-2);
ЗІ ШЕКБУМАМЕМ (ЗЕО ІО МО:43), яка розщеплюється катепсіном Г; ЗОУМІАТМІМІТ (ЗЕО ІЮ
МО:44), яка розщеплюється катепсіном 0; БІ ОРОСІМУСОРМ (5БО ОО МО:45), яка розщеплюється металопротеїназою матриксу 1 (ММР-1); ККІФЕБРИВУМИаС5М (ЗЕО ІЮ МО:46), яка розщеплюється активатором плазміногену урокіназного типу; РОСІЇ І ЗАРОСІЇ о (ЗЕО ІЮ МО:47), яка розщеплюється металопротеїназою матриксу 1 мембранного типу (МТ-ММР);
НОРЕСІКМОРУЕБЗОММОКОНАКІМНМЕЕРНТ (5БО 10 МО:94), яка розщеплюється стромелізином З (або ММР-11), термолізином, колагеназою фібробластів і стромелізином-1;
СРОСІГАСОКОСІМ (5БО ІЮ МО:49), яка розщеплюється металопротеїназою матриксу 13 (колагеназою-3); СО5СОКОККАГЕ (5БО 10 МО:50) яка розщеплюється активатором плазміногену тканинного типу (РА); ЗІ ЗАГ І ЗБОЇРЕМ (5ЕБО ІЮ МО:51), яка розщеплюється простатоспецифічним антигеном людини; ЗІ РКЕКІИОСЕМ (5ЕО ІО МО:52), яка розщеплюється каллікреїном (КЗ); БІГ СІАМРОМЕМ (5БО 10 МО:53), яка розщеплюється еластазою нейтрофілів; і РЕКМІМТРКТРР (5ЕБО ІО МО:54), яка розщеплюється калпаїном (кальцій- бо активованою нейтральною протеазою).
І00224| На додаток до специфічних амінокислотних і нуклеотидних послідовностей, які представлено в цьому документі, опис також передбачає поліпептиди і нуклеїнові кислоти, які мають послідовності, які на щонайменше на 80 95, щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95 або щонайменше на 95 95 ідентичні послідовності амінокислоти та нуклеїнових кислот. Терміни "ідентичний" або відсоток "ідентичності" в контексті двох або більше полінуклеотидних послідовностей, або двох чи більше амінокислотних послідовностей відносяться до двох або більше послідовностей або підпослідовностей, які є однаковими або мають певний відсоток амінокислотних залишків або нуклеотидів, які є однаковими (наприклад, щонайменше на 80 95, щонайменше на 85 95, щонайменше на 9095 або щонайменше на 95 95 ідентичні в межах заданої ділянки) при порівнянні і вирівнюванні з урахуванням максимальної відповідності на заданій ділянці. Розкриття спеціально передбачає перший і другий поліпептид, присутній у комплексі, перший поліпептид і другий поліпептид, які мають амінокислотну послідовність, яка є на щонайменше 80 95, щонайменше 85 9565, щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 965, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, або щонайменше 99 95 ідентичною послідовності амінокислотній послідовності першого і другого поліпептиду, відповідно, пар першого і другого поліпептиду, які представлено в цьому документі.
Способи отримання поліпептидів (00225) Поліпептид згідно цього опису можна отримати будь-яким відповідним способом, у тому числі з використанням рекомбінантних і нерекомбінантних способів (наприклад, хімічного синтезу).
А. Хімічний синтез (00226) Якщо поліпептид є хімічно синтезованим, синтез може йти в рідкій або твердій фазі.
Твердофазний синтез пептидів (ТФСП) дозволяє включати не природні амінокислоти і/або модифікації каркасу пептиду/білка. Для синтезу поліпептидів згідно цього опису доступні різні форми ТФСП, наприклад, Етос і Вос. Подробиці хімічного синтезу відомі в цій галузі техніки (наприклад, Сапезап А. 2006 Міпі Кем. Мед. Спет. 6:3-10; і Сатагего .). А. еї аі!., 2005 Ргоїеїіп
Рері Гей. 12:723-8).
В. Рекомбінантна продукція
І00227| Коли поліпептид виробляють з використанням рекомбінантних методик, поліпептид
Зо може бути отримано у вигляді внутрішньоклітинного білка або у вигляді білка, який секретується, з використанням будь-якої зручної конструкції і будь-якої підходящої клітини- хазяїна, яка може бути прокаріотичною або еукаріотичною клітиною, такою як бактеріальна (наприклад, Е. сої) або дріжджова клітина-хазяїн, відповідно. Інші приклади еукаріотичних клітин, які можна використовувати в якості клітин-хазяїв, включають клітини комах, клітини ссавців і/або клітини рослин. У разі, коли використовуються клітини ссавців, вони також можуть включати в себе людські клітини (наприклад, клітини НеГа, 293, НО їі дигка); мишачі клітини (наприклад, МІНЗТЗ, Г. клітини, і клітини С127); клітини приматів (наприклад, Со5 1, Со5 7 і СМ1) і клітин китайського хом'ячка (наприклад, клітини яєчників китайського хом'яка (СНО). У конкретних варіантах реалізації винаходу, поліпептид і комплекси, які містять поліпептид, продукують у клітинах СНО. В інших варіантах реалізації винаходу, поліпептид і комплекси, які містять поліпептид, продукують у клітинах дріжджів, і в конкретних варіантах реалізації винаходу за допомогою генної інженерії можна отримати клітини дріжджів, які продукують глікопротеїни з М-гліканами, аналогічними М-гліканам ссавців.
І00228| Різні системи хазяїн-вектор, які придатні для експресії поліпептиду, можна використовувати відповідно зі стандартними процедурами, відомими в цій галузі техніки. Див., наприклад, Затьгоок та ін., 1989 Ситепі Ргоїосої5 іп МоїІесціаг Віоїоду Сода 5ргіпд Нагбог Ргев5,
Мем ЖогКк; і А!йзибеї! та ін., 1995 Сигпгепі РгоїосоЇ5 іп Моїесшіаг Віоіоду, Еадз.М/йеу апа 5о0п5.
Способи введення генетичного матеріалу в клітині-хазяїні включають, наприклад, трансформацію, електропорацію, кон'югацію, способи з використанням фосфату кальцію та інші. Можна обрати спосіб переносу, який забезпечує стабільну експресію введеної нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид. Нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, можна представити у вигляді успадкованого епісомального елементу (наприклад, плазміди), або можна інтегрувати в геном. Доступні для придбання різні вектори, які є придатними для використання при продукції досліджуваного поліпептиду.
І00229| Вектори можуть існувати екстрахромосомно в клітині-хазяїні або інтегруватися в геном клітини-хазяїна. Експресуючий вектор містить регуляторні послідовності транскрипції і трансляції, і може забезпечити індуцибельну або конститутивну експресію, де кодуючу ділянку функціонально зв'язано і вона знаходиться під транскрипційним контролем ділянки ініціації транскрипції, і ділянки термінації транскрипції і трансляції. В цілому, регуляторні послідовності бо транскрипції і трансляції можуть включати, але не обмежуючись зазначеним далі, послідовності промоторів, сайти зв'язування рибосом, послідовності ініціації та припинення транскрипції, послідовності ініціації та припинення трансляції і послідовності енхансерів або активаторів.
Промотори можуть бути або конститутивними, або індуцибельними, а також можуть бути сильними конститутивними промоторами (наприклад, 17).
І00230| Експресуючі конструкти зазвичай містять зручні сайти рестрикції, розташовані поблизу послідовності промотору для забезпечення вбудовування нуклеотидних послідовностей, які кодують досліджувані білки. Селективний маркер, який працює в хазяїні, який експресує, може бути присутнім для полегшення селекції клітин, які містять вектор. Крім того, експресуючий конструкт може містити додаткові елементи. Наприклад, експресуючий вектор може містити одну або дві системи реплікації, що дозволяє йому здійснювати експресію в організмах, наприклад, у клітинах ссавців та комах і клонування та ампліфікацію в прокаріотичному хазяїні. Крім того, експресуючий конструкт може містити селективний маркерний ген, що забезпечує селекцію трансформованих клітин-хазяїв. Селективні гени добре відомі в цій галузі техніки і залежать від використовуваних клітин-хазяїв.
І00231| Виділення та очищення білка можна виконати у відповідності зі способами, відомими в цій галузі техніки. Наприклад, білок можна виділити з лізату клітин, які генетично модифіковані для конститутивної і/або індуцибельної експресії білка; з культурального середовища, в якому клітину-хазяїна було вирощено; або із синтетичної реакційної суміші, за допомогою афінної очистки, яка може включати в себе контактування зразка (лізату клітин, культурального середовища або реакційної суміші) з міткою, яка специфічно зв'язується з білком, з наступним промиванням для видалення неспецифічно зв'язаного матеріалу, і елююванням специфічно зв'язаного білка. Виділений білок можна додатково очистити з допомогою діалізу та інших способів, зазвичай використовуваних способах очищення білка. В одному варіанті реалізації винаходу білок можна виділити з використанням способів металохелатної хроматографії. Білки можуть містити модифікації, які полегшують виділення. У певних варіантах реалізації винаходу, комплекси згідно цього опису можуть бути розділені в залежності від розміру. 00232) У певних варіантах реалізації винаходу, комплекс, який містить перший поліпептид і другий поліпептид, перший поліпептид, який містить Ес-послідовність ДС, при цьому Ес- послідовність ЇДО містить СНЗ послідовність, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; другий поліпептид, який містить Ес-послідовність дО, при цьому Ес-послідовність
ІЧ містить СНЗ послідовність, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину; де перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду в западину другого поліпептиду, де або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юЮговано з М-кінцем мутеїна СОРЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, може бути виділений з середовища, в якому культивується клітина-хазяїн, яка експресує перший і другий поліпептиди. 00233) У певних варіантах реалізації винаходу, комплекс, який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер, кожен з першого і другого гетеродимерів, містять перший поліпептид і другий поліпептид, перший поліпептид, який містить Ес-послідовність ДС, при цьому Ес- послідовність ЇДО містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; другий поліпептид, який містить Ес-послідовність дО, при цьому Ес-послідовність
ІЧ містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину; де перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду в западину другого поліпептиду, де або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юЮговано з М-кінцем мутеїна СОРЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, де мутеїн ЗОЕ15 в першому гетеродимері димерізується з мутевїном СЗОЕ15 у другому гетеродимері тим самим формуючи комплекс, який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер, може бути виділений з середовища, в якому культивується клітина-хазяїн, яка експресує перший і другий поліпептиди. (00234) Як зазначається в цьому документі, перша і друга нуклеїнові кислоти можуть бути присутніми в одному векторі або окремих векторах в одній клітині-хазяїні або двох різних клітинах-хазяїнах. У певних випадках, перший і другий поліпептиди цього опису можуть бути кодовані за допомогою першої та другої нуклеїнових кислот, відповідно, які можуть бути експресовані в одній і тій же клітині. У варіантах реалізації винаходу, де перша та друга нуклеїнові кислоти присутні в різних клітинах, клітини можуть бути злиті в якийсь момент часу в процесі виробництва.
І00235| Комплекси можна отримати практично у чистому вигляді або у виділеній формі бо (наприклад, яка не містить інших поліпептидів). Комплекси можуть бути присутніми в композиції,
збагаченої комплексами по відношенню до інших компонентів, які можуть бути присутніми в ній (наприклад, інших поліпептидів або інших комплексів (наприклад, гомодимерів, гомотетрамерів) або інших компонентів клітини-хазяїна). Наприклад, очищений комплекс (наприклад, гетеродимер-гетеродимерний комплекс) можна отримати таким чином, що комплекс присутній в композиції, яка практично не містить інших експресованих білків, наприклад, менше ніж 90 95, менше ніж 60 95, менше ніж 50 95, менше ніж 40 95, менше ніж 30 95, менше ніж 20 95, менше ніж 95, менше ніж 5 95 або менше ніж 1 95 композиції складається з інших експресованих білків.
Антитіла
І00236| В цьому описі запропоновано антитіла, в тому числі виділені антитіла, які 10 специфічно зв'язують поліпептид або злитий білок відповідно до цього опису. Термін "антитіло" охоплює інтактні моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, поліспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла), які утворені з щонайменше двох інтактних антитіл, і які зв'язують фрагменти антитіл, включаючи Раб і Е(авуг, за умови, що вони проявляють бажану біологічну активність. Найпростіша структурна одиниця цілого антитіла містить тетрамер, і кожен тетрамер складається з двох ідентичних пар поліпептидних ланцюгів, кожна пара має один "легкий" ланцюг (близько 25 кДа) і один "важкий" ланцюг (близько 50-70 кДа). Аміно- кінцева область кожного ланцюга містить варіабельну ділянку від близько 100 до 110 або більше амінокислот, головним чином відповідальну за розпізнавання антигену. Навпаки, карбокси-кінцнева частина кожного ланцюга визначає константну ділянку, головним чином відповідальну за ефекторну функцію. Легкі ланцюги людини поділяються на каппа і лямбда, в той час як важкі ланцюги людини поділяються на мю, дельта, гама, альфа або епсілон і визначають ізотип антитіла як дос, ЗМ, ІдЧА, дО ї ІЗЕ, відповідно. Фрагменти, які зв'язують, отримують за допомогою методик рекомбінантних ДНК, або шляхом ферментативного або хімічного розщеплення інтактних антитіл. Фрагменти, які зв'язують, включають Раб, Раб", Е(ав)»,
Ем і одноланцюгові антитіла.
І00237| На одному кінці кожного важкого ланцюга знаходиться варіабельний домен (УН), а потім - ряд константних доменів. На одному кінці кожного легкого ланцюга знаходиться варіабельний домен (У), а на іншому кінці - константний домен; константний домен легкого ланцюга вирівняно з першим константним доменом важкого ланцюга, а варіабельний домен
Зо легкого ланцюга вирівняно з варіабельним доменом важкого ланцюга. В межах легкого і важкого ланцюга варіабельні та константні ділянки з'єднуються за допомогою "9" ділянки із близько 12 або більше амінокислот, з важким ланцюгом, який також містить "ОО" ділянку із близько 10 або більше амінокислот. Всі ланцюги антитіла володіють аналогічною загальною структурою щодо консервативних каркасних ділянок (ЕК), які сполучено трьома гіперваріабельними ділянками, також званими "ділянками, які визначають комплементарність", або "СОМ". СОК із двох ланцюгів кожної пари вирівняно за допомогою каркасних ділянок, що дозволяє зв'язуватися зі специфічним епітопом. Від М-кінця до С-кінця як важкі, так і легкі ланцюги містять домени ЕКТ, СОК1, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ і ЕКА4. (00238) Інтактне антитіло має два сайти зв'язування і, за винятком біфункціональних або біспецифічних антитіл, зазначені два сайти зв'язування є ідентичними. Біспецифічне або біфункціональне антитіло є штучним гібридним антитілом, яке містить дві пари різних важких/легких ланцюгів і два різних сайти зв'язування. Біспецифічні антитіла можна отримувати різними способами, в тому числі шляхом злиття гібридом або зв'язування фрагментів Раб.
І00239| Як зазначено вище, фрагменти, які зв'язують, можна отримати шляхом ферментативного або хімічного розщеплення інтактних антитіл. Розщеплення антитіл ферментом папаїном призводить до отримання двох ідентичних антиген-зв'язуючих фрагментів, також відомих як "Бар"'-фрагменти, і "Ес"-фрагмента, який не володіє антигензв'язуючою активністю. Розщеплення антитіл ферментом пепсином призводить до отримання Е(аб)» фрагмента, в якому обидва плеча молекули антитіла залишаються пов'язаними і містять два антигензв'язуючих сайти. Е(аб)2 фрагмент має здатність перехресно зв'язувати антиген. (002401 Термін "Бар", який використовується в цьому документі, відноситься к фрагменту антитіла, яке містить МН- і Мі -ділянки, а також константний домен легкого ланцюга і СНІ1І-домен важкого ланцюга. (00241) Термін "Ру", який використовується в цьому документі, відноситься до мінімального фрагменту антитіла, яке зберігає як антигенрозпізнаючий, так і антигензв'язуючий сайти. У дволанцюгових різновидах Ем ця ділянка містить димер одного варіабельного домену важкого ланцюга і одного варіабельного домену легкого ланцюга, які з'єднано нековалентним зв'язком. У одноланцюгових різновидах Ем один варіабельний домен важкого ланцюга і один варіабельний домен легкого ланцюга можуть бути ковалентно зв'язані гнучким пептидним лінкером таким бо чином, що легкий та важкий ланцюги можуть утворювати "димерну" структуру, аналогічну
Зо структурі дволанцюгових різновидів Ем. Саме в цій конфігурації три СОК кожного варіабельного домену взаємодіють з утворенням антигензв'язуючого сайту на поверхні димера УН-МІ. Хоча шість СОК спільно надають антитілу антигензв'язуючу специфічність, навіть один варіабельний домен (або половина Гм, яка містить тільки три СОК, специфічних по відношенню до антигену) має здатність розпізнавати і зв'язувати антиген.
І00242| Термін "ділянки, які визначають комплементарність" або "СОР", який використовується в цьому документі, відноситься до частин імунологічних рецепторів, які контактують зі специфічним лігандом і визначають його специфічність.
І00243| Термін "гіперваріабельна ділянка" відноситься до амінокислотним залишкам антитіла, які відповідають за зв'язування антигену. Гіперваріабельна ділянка зазвичай містить амінокислотні залишки з СОК і/або залишки з "гіперваріабельної петлі". (00244) Термін "епітоп", який використовується в цьому документі, відноситься до антитіло- зв'язуючих сайтів білкових антигенів. Епітопні детермінанти зазвичай містять хімічно активні поверхневі групи молекул, наприклад, амінокислоти або вуглеводні бічні ланцюги, а також володіють специфічними тривимірними структурними і зарядовими характеристиками. Кажуть, що антитіло зв'язується з антигеном, якщо константа дисоціації становить «1 мкМ, х 100 нМ або х 10 нМ. Більша константа рівноваги ("Ко") значить меншу спорідненість між епітопом і антитілом, в той час як менша константа рівноваги значить більшу спорідненість між епітопом і антитілом. Антитіло з Ко "не більше" певного значення означає, що антитіло повинно зв'язуватися з епітопом із заданою Ко або сильніше. Тоді як Ко описує характеристики зв'язування епітопу і антитіла, "специфічна активність" характеризує ефективність самого антитіла по відношенню до функції антитіла. Кореляція між константою рівноваги і специфічною активністю не є обов'язковою; так, наприклад, відносно низька Ко не обов'язково передбачає високу специфічну активність.
І00245| Термін "селективно зв'язується" по відношенню до антитіла ще не означає, що антитіло зв'язується тільки з однією речовиною, а те, що Ко антитіла по відношенню до першої речовини менше, ніж Ко антитіла по відношенню до другої речовини. Антитіло, виключно зв'язується з епітопом, зв'язується тільки з єдиним епітопом. (00246) При введенні в організм людини антитіла, які містять варіабельні і/або константні
Зо області, характерні для гризунів (тобто миші або щурів), іноді асоціюються з, наприклад, швидким виведенням з організму або формуванням імунної відповіді організму проти антитіла.
Для того щоб уникнути використання антитіл, що походять від гризунів, можна отримати цілком людські антитіла шляхом введення функції людського антитіла в організм гризуна таким чином, щоб гризун продукував повністю людські антитіла. Якщо це спеціально не зазначено в цьому документі, антитіла "людини" і "повністю людські" антитіла можна використовувати як взаємозамінні. Термін "повністю людське" можна використовувати при визначені антитіл, які є лише частково людськими, на відміну від повністю людських антитіл. Досвідченому фахівцю відомо про різні способи отримання повністю людських антитіл.
І00247| Для того щоб не допустити можливої відповіді організму людини на антитіла миші, можна використовувати химерні або іншим чином гуманізовані антитіла. Химерні антитіла містять константну ділянку, характерну для людини, і варіабельну ділянку, характерну для миші, і тому у деяких пацієнтів може спостерігатися відповідь на химерні антитіла людини. Таким чином, доцільно отримати повністю людські антитіла проти мультимерних ферментів, щоб уникнути можливої відповіді організму людини на антитіла миші або химерні антитіла.
І00248| Повністю людські моноклональні антитіла можна отримати, наприклад, шляхом утворення ліній гібридом них клітин за допомогою способів, відомих фахівцю у цій галузі техніки.
Інші способи отримання припускають використання послідовностей, які кодують специфічні антитіла для трансформації відповідної клітини-хазяїна ссавця, наприклад, клітини СНО.
Трансформацію можна здійснити будь-яким відомим способом введення полінуклеотидів у клітину-хазяїна, включаючи, наприклад, упаковку полінуклеотиду у вірус (або вірусний вектор) і трансдукції клітини-хазяїна з вірусом (або вектором), або за допомогою процедур трансфекції, відомих у цій галузі техніки. Способи введення гетерологічних полінуклеотидів у клітини ссавців добре відомі в цій галузі техніки і включають декстран-опосередковану трансфекцію, преципітацію з фосфатом кальцію, полібрен-опосередковану трансфекцію, злиття протопластів, електропорацію, інкапсуляцію полінуклеотидай(ів) у ліпосоми і пряму мікроін'єкцію ДНК в ядра.
Лінії клітин ссавців, доступні в якості хазяїв для експресії, добре відомі в цій галузі техніки і включають, але не обмежуються зазначеним далі, клітини СНО, клітини Неїа і клітини гепатоцелюлярної карциноми людини. (00249) Антитіла можуть бути використані для виявлення поліпептиду відповідно до цього бо опису. Наприклад, антитіла можна використовувати в якості діагностичного засобу через виявлення рівня одного або більше з поліпептидів згідно цього опису у суб'єкта, і порівняння виявленого рівня зі стандартним контрольним рівнем або з вихідним рівнем в організмі суб'єкта, який було визначено раніше (наприклад, до захворювання).
Терапевтичне і профілактичне застосування
І00250| Цей винахід забезпечує способи лікування або профілактики метаболічних та асоційованих з метаболізмом захворювань, наприклад, ожиріння та інших розладів маси тіла, гіперглікемії, гіперінсулінемії порушення сприйнятливість глюкози, а також порушень метаболізму глюкози, шляхом введення комплексу цього опису або його композицій, які описано в цьому документі. Такі способи також можуть надавати сприятливий вплив на один або більше симптомів, які асоційовано із захворюванням, розладом або станом, наприклад, знижуючи тяжкість або частоту прояву симптому.
І00251| Щоб визначити, чи є суб'єкт кандидатом для лікування або профілактики розладу маси тіла (наприклад, ожиріння) за допомогою способів, які представлено в цьому документі, слід виконати оцінку таких параметрів, як, але не обмежуючись зазначеним далі, етіологія і ступінь стану суб'єкта (наприклад, наскільки надлишкова маса тіла суб'єкта порівняно зі здоровим індивідом). Наприклад, можна вважати, що дорослий суб'єкт з ІМТ між - 25 і 29,9 кг/м страждає надмірною вагою (передожирінням), в той час як дорослий суб'єкт з ІМТ - 30 кг/м або вище страждає ожирінням. Як обговорювалося в цьому документі, комплекс згідно цього винаходу може пригнічувати апетит, наприклад, знижувати апетит, приводячи до зменшення маси тіла.
І00252| Щоб визначити, чи є суб'єкт кандидатом для лікування або профілактики гіперглікемії, гіперінсулінемії, порушення сприйнятливість глюкози і/або порушень метаболізму глюкози з допомогою запропонованих у цьому документі способів, можна використовувати різні діагностичні способи, відомі в цій галузі техніки. Такі способи включають способи, які описано в інших розділах цього документу (наприклад, оцінку рівня глюкози в плазмі натще (ЕРС) та пероральний тест сприйнятливість глюкози (017)). 00253) Комплекси, передбачені в цьому документі, при введенні суб'єкту для лікування або профілактики метаболічних та асоційованих з метаболізмом захворювань, наприклад, ожиріння та інших розладів маси тіла, гіперглікемії, гіперінсулінемії, порушення сприйнятливість глюкози,
Зо порушень метаболізму глюкози можуть призвести до зменшення рівня глюкози в крові, зменшення маси тіла і/або зменшення споживання їжі.
І00254| У певних варіантах реалізації винаходу, комплекси, які розглядаються в цьому документі, можуть знижувати рівень глюкози в крові, масу тіла і/або споживання їжі щонайменше на 5 95 порівняно з зазначеними показниками у відсутності введення комплексів.
Наприклад, комплекси, які розглядаються в цьому документі, можуть знижувати рівень глюкози в крові, масу тіла і/або споживання їжі щонайменше на 10 95, 20 Фо, 30 У, 50 Фо, 60 Фо, 70 95, 80 9о або 90 95 порівняно зі станом до початку лікування або профілактики.
І00255| У певних варіантах реалізації винаходу, комплекс згідно цього винаходу, який використовують для лікування метаболічного порушення, може бути комплексом, який містить дві молекули гетеродимеру на комплекс, де кожен гетеродимер є однаковим, і містить перший поліпептид і другий поліпептид, де перший поліпептид містить Ес-послідовність до, при цьому
Ес-послідовність ІдбсС може містити послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування; другий поліпептид, який містить Ес-послідовність до, при цьому
Ес-послідовність ДО містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину; причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду у западину другого поліпептиду формуючи гетеродимер, причому або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду в кожному гетеродимері кон'юговано з М-кінцем мутеїна СОЕ15, який містить щонайменше один консенсусний сайт М-зв'язаного глікозилювання, причому мутеїн СООЕ15 в гетеродимері димерізується з мутеїном СОР15 у другому гетеродимері тим самим формуючи комплекс, який містить, два гетеродимера.
І00256| В інших варіантах реалізації винаходу, комплекс згідно цього винаходу, який використовують для лікування метаболічного порушення, може бути комплексом, який містить дві молекули гетеродимера (гетеродимер, зв'язаний з гетеродимером) на комплекс, де кожен гетеродимер є однаковим, і кожен гетеродимер містить перший поліпептид, який має Ес- послідовність дО, при цьому Ес-послідовність (до може містити послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одне сконструйоване вип'ячування, де С-кінець першого поліпептиду злито з М- кінцем глікомутеїну СОЕ15; і другий поліпептид, який має Ес-послідовність до, при цьому Ес- послідовність (ДО містить послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану бо западину; причому перший поліпептид димерізується з другим поліпептидом за допомогою позиціонування вип'ячування першого поліпептиду у западину другого поліпептиду формуючи гетеродимер, причому мутеїн СОЕ15 в гетеродимері димерізується з мутеїном СОЕ15 у другому гетеродимері тим самим формуючи комплекс, який містить два гетеродимера.
Фармацевтичні композиції
І00257| Комплекси по цьому опису можуть перебувати у вигляді композицій, придатних для введення суб'єкту. В цілому, такі композиції являють собою "фармацевтичні композиції", які містять один або більше з комплексів і один або більше з фармацевтично прийнятних або фізіологічно прийнятних розріджувачів, носіїв або допоміжних речовин. У певних варіантах реалізації винаходу, комплекси присутні в терапевтично ефективній кількості у фармацевтичній композиції. Фармацевтичні композиції можна використовувати в способах відповідно до даного опису; так, наприклад, фармацевтичні композиції можна вводити ех мімо або іп мімо суб'єкту з метою здійснення терапевтичних і профілактичних способів і способів, які описано в цьому документі. Як зазначено в цьому документі, комплекси можуть бути або можуть не бути глікозильовані. Наприклад, комплекси можуть бути глікозильовані, в процесі продукування у еукаріотичній клітині-хазяїні, і можуть бути піддані процесу видалення вуглеводного фрагменту до внесення у фармацевтичну композицію. Видалення вуглеводних фрагментів може призвести до значного зменшення глікозилювання поліпептидів в комплексах або повної відсутності глікозилювання поліпептидів в комплексах. (00258) У конкретних варіантах реалізації винаходу, цей опис забезпечує способи лікування порушення метаболізму глюкози або маси тіла шляхом введення комплексів, М-глікозильованих комплексів або їх композицій. У конкретному варіанті реалізації винаходу, цей опис забезпечує способи зменшення споживання їжі або зменшення маси тіла шляхом введення комплексів, М- глікозильованих комплексів або їх композицій. Цей опис додатково забезпечує використання вищевказаних послідовностей, комплексів, М-глікозильованих комплексів або їх композицій при виробництві лікарського засобу для застосування в лікуванні стану, обраного з метаболічних і асоційованих з метаболізмом захворювань, наприклад, ожиріння та інших розладів маси тіла, гіперглікемії, гіперінсулінемії порушення сприйнятливість глюкози, а також порушень метаболізму глюкози. Цей опис додатково забезпечує використання вищевказаних послідовностей, комплексів, М-глікозильованих комплексів або їх композицій при виробництві
Зо лікарського засобу для застосування в лікуванні порушень метаболізму глюкози та маси тіла.
Цей опис додатково забезпечує використання вищевказаних послідовностей, комплексів, М- глікозильованих комплексів або їх композицій при виробництві лікарського засобу, який використовується для зменшення споживання їжі або маси тіла.
ІЇ00259| Також в цьому документі представлено композиції, наприклад, фармацевтичні композиції послідовностей, комплексів і М-глікозильованих комплексів, які описано в цьому документі, для лікування або запобігання станів, пов'язаних з деякими з метаболічними та асоційованими з порушенням метаболізму захворювань, наприклад, ожиріння та інших розладів маси тіла, гіперглікемії, гіперінсулінемії порушення сприйнятливість глюкози і порушення метаболізму глюкози. Цей опис додатково забезпечує композицію (наприклад, фармацевтичну композицію) з вищевказаних послідовностей, комплексів, М-глікозильованих комплексів для лікування порушень метаболізму глюкози та маси тіла. Цей опис додатково забезпечує композицію (наприклад, фармацевтичну композицію) 3 вищевказаних послідовностей, комплексів, М-глікозильованих комплексів для зменшення споживання їжі або маси тіла. (00260) Фармацевтичні композиції згідно цьому опису можуть бути складені з урахуванням сумісності з передбачуваним способом або шляхом введення; типові шляхи введення викладено в цьому документі. Крім того, фармацевтичні композиції можна використовувати в комбінації з іншими терапевтично активними агентами або сполуками (наприклад, агентами, які знижують рівень глюкози), які описано в цьому документі, з метою лікування або профілактики захворювань, розладів і станів, що розглядаються в цьому описі.
І00261| Фармацевтичні композиції зазвичай містять терапевтично ефективну кількість принаймні одного з комплексів, розглянутих у цьому винаході, і один або більше з фармацевтично і фізіологічно прийнятних агентів для отримання складу. Відповідні фармацевтично або фізіологічно прийнятні розріджувачі, носії або наповнювачі включають, але не обмежуються зазначеним далі, антиоксиданти (наприклад, аскорбінову кислоту і бісульфіт натрію), консерванти (наприклад, бензиловий спирт, метилпарабени, етил аболи п-пропіл, р- гідроксибензоат), емульгуючі агенти, суспендуючі агенти, диспергуючі агенти, розчинники, наповнювачі, об'ємоутворюючі агенти, детергенти, буфери, несучі середовища, розріджувачі і/або допоміжні речовини. Наприклад, відповідний носій може представляти собою фізіологічний сольовий розчин або цитрат-сольовий буфер, можливо, з додаванням інших матеріалів, які 60 часто зустрічаються у фармацевтичних композиціях для парентерального введення.
Нейтральний сольовий буферний розчин або фізіологічний розчин, змішані з сироватковим альбуміном, являють собою додаткові типові носії. Фахівці в цій галузі техніки можуть легко розпізнавати різні буфери, які можна використовувати у фармацевтичних композиціях і лікарських формах. Типові буфери включають, але не обмежуються зазначеним далі, фармацевтично прийнятні слабкі кислоти, слабкі основи або їх суміші. Наприклад, компоненти буфера можуть являти собою водорозчинні матеріали, наприклад, фосфорну кислоту, винну кислоту, молочну кислоту, бурштинову кислоту, лимонну кислоту, оцтову кислоту, аскорбінову кислоту, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту та їх солі. Прийнятні буферні агенти включають, наприклад, буфер Трис, М-(2-гідроксіетил)піперазин-М'-(2-етансульфонову кислоту) (НЕРЕЗ), 2-(М-морфоліно)етансульфонову кислоту (МЕЗ5), натрієву сіль 2-(М- морфоліно)етансульфонової кислоти (МЕ5), 3-(М-морфоліно) пропансульфонову кислоту (МОРФЗБ) і М-трис(гідроксиметил|метил-3-амінопропансульфонову кислоту (СТА).
І00262| Після складання фармацевтичної композиції її можна зберігати в стерильних флаконах у вигляді розчину, суспензії, гелю, емульсії, твердого тіла або зневодненого або ліофілізованого порошку. Такі суміші можна зберігати у вигляді готової до використання форми, ліофілізованої форми, яка потребує відновлення перед використанням, рідкої форми, яка потребує розведення перед використанням, або іншої прийнятної форми. У деяких варіантах реалізації винаходу запропоновано фармацевтичну композицію у одноразовому контейнері (наприклад, одноразовому флаконі, ампулі, шприці або автоматичному інжекторі (наприклад,
ЕріРепФ))), в той час як в інших варіантах реалізації винаходу запропоновано багаторазовий контейнер (наприклад, багаторазовий флакон). Для доставки комплексів можна використовувати будь-який апарат для доставки ліків, у тому числі імплантати (наприклад, імплантовані насоси) і катетерні системи, які добре відомі фахівцям. Ін'єкції речовин уповільненого всмоктування, які зазвичай вводять підшкірно або внутрішньом'язово, можна також використовувати для вивільнення комплексів, які описано в цьому документі, протягом певного часу. Ін'єкції речовин уповільненого всмоктування, як правило, складені на твердій або масляній основі і в загальному випадку містять щонайменше один з компонентів складу, викладених у цьому документі. Фахівець в цій галузі техніки повинен бути знайомий з можливими складами і варіантами застосування ін'єкцій речовин уповільненого всмоктування.
Зо І00263| Фармацевтичні композиції можуть перебувати у формі стерильної водної або масляної суспензії для ін'єкцій. Цю суспензію можна скласти у відповідності зі способами, відомими в цій галузі техніки, використовуючи відповідні диспергуючі агенти або зволожувачі і суспендуючі агенти, згадані в цьому документі. Стерильний препарат для ін'єкцій також може являти собою стерильний розчин або суспензію для ін'єкцій у нетоксичному прийнятному для парентерального застосування розчиннику або розчиннику, наприклад, як розчин у 1,3- бутандіолі. Прийнятні розріджувачі, розчинники та диспергуючі середовища, які можна використовувати, включають воду, розчин Рінгера, ізотонічний розчин хлориду натрію,
Стгеторпог ЕЇ м (ВАБЕ, Парсіпанні, штат Нью-Джерсі, США) або фосфатний буферний сольовий розчин (РВ5), етанол, поліол (наприклад, гліцерин, пропіленгліколь і рідкий поліетиленгліколь) та їх відповідні суміші. Крім того, стерильні нелеткі олії традиційно застосовують в якості розчинника або середовища для суспендування. З цією метою можна використовувати будь-яке м'яке нелетке масло, в тому числі синтетичні моно - або дигліцериди.
Крім того, при отриманні розчинів для ін'єкцій знаходять застосування жирні кислоти, наприклад, олеїнова кислота. Пролонговане всмоктування конкретних ін'єкційних композицій можна забезпечити шляхом включення агента, який уповільнює всмоктування (наприклад, моностеарату алюмінію або желатину).
І00264| Фармацевтичні композиції, які містять активний інгредієнт (наприклад, комплекси згідно цього опису), можуть перебувати у формі, придатній для перорального застосування, наприклад, таблеток, капсул, пастилок, льодяників, водних або масляних суспензій, діспергуємих порошків або гранул, емульсій, твердих або м'яких капсул або сиропів, розчинів, мікрогранул або еліксирів. Фармацевтичні композиції для перорального застосування отримують відповідно до будь-якого способу, відомого в цій галузі техніки для отримання фармацевтичних композицій, і такі композиції можуть містити один або більше з таких агентів, як підсолоджувачі, ароматизатори, барвники і консерванти, з метою отримання фармацевтично вишуканих і приємних на смак препаратів. Таблетки, капсули і т. п. містять активний інгредієнт в суміші з нетоксичними фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, придатними для виготовлення таблеток. Такі допоміжні речовини можуть являти собою, наприклад, розчинники, наприклад, карбонат кальцію, карбонат натрію, лактозу, фосфат кальцію або фосфат натрію; гранулюючі агенти і розпушувачі, наприклад, кукурудзяний крохмаль або альгінову кислоту; 60 зв'язувальні агенти, наприклад, крохмаль, желатин або гуміарабік; і ковзаючі агенти, наприклад магнію стеарат, стеаринову кислоту або тальк. (00265) Таблетки, капсули і т. п., придатні для перорального введення, можуть не містити покриття або покриті відомими способами для уповільнення розпаду та всмоктування в шлунково-кишковому тракті, тим самим забезпечуючи пролонговану дію. Наприклад, можна застосовувати матеріал з відстроченим вивільненням, наприклад, гліцерілмоностеарат або гліцерілдистеарат. На них також можна нанести покриття згідно з методиками, відомим в цій галузі техніки, з метою формування осмотичних терапевтичних таблеток з контрольованим вивільненням. Додаткові агенти включають біорозкладані або біосумісні частинки або полімерні речовини, наприклад, поліефіри, поліамінокислоти, гідрогель, полівінілпіролідон, поліангідриди, полігликолеву кислоту, етиленвінілацетат, метилцелюлозу, карбоксиметилцелюлозу, сульфат протаміну або лактид/гліколидні сополімери, полілактид/гліколидні сополімери або сополімери етиленвінілацетату, для контролю доставки введеної композиції. Наприклад, агент для перорального застосування можна включити в мікрокапсули, отримані за допомогою методик коацервації або міжфазної полімеризації, з використанням гідроксиметилцелюлозних або желатинових мікрокапсул або мікрокапсул полі(метилметакрилату), відповідно, або в колоїдну систему доставки лікарських засобів. Колоїдні дисперсійні системи включають макромолекулярні комплекси, нанокапсули, мікросфери, мікрогранули і системи на основі ліпідів, в тому числі емульсії типу "масло у воді", міцели, змішані міцели і ліпосоми. Способи одержання ліпосом описані, наприклад, в патенті США Мо 4235871, 4501728 і 4837028. Способи отримання вищезазначених складів зрозумілі для фахівців в цій галузі техніки. (00266) Склади для перорального застосування можуть бути представлені у вигляді твердих желатинових капсул, де активний інгредієнт змішано з інертним твердим розчинником, наприклад, карбонатом кальцію, фосфатом кальцію або каоліном або мікрокристалічною целюлозою, або у вигляді м'яких желатинових капсул, де активний інгредієнт змішано з водним або масляним середовищем, наприклад, арахісовим маслом, рідким парафіном або оливковою олією.
І00267| Водні суспензії містять активні матеріали в суміші з допоміжними речовинами, придатними для їх виробництва. Такі допоміжні речовини можуть являти собою суспендуючі агенти, наприклад, карбоксиметилцелюлозу натрію, метилцелюлозу,
Зо гідроксипропілметилцелюлозу, альгінат натрію, полівінілпіролідон, трагакантову камедь і гуміарабік; диспергуючі агенти або зволожувачі, наприклад, природні фосфатиди (наприклад, лецитин), або продукти конденсації алкіленоксиду з жирними кислотами (наприклад, поліоксіегиленстеарат), або продукти конденсації етиленоксиду 3 довголанцюговими аліфатичними спиртами (наприклад, гептадекаєтиленоксицетанол), або продукти конденсації етиленоксиду з неповними ефірами - похідними жирних кислот і гекситу (наприклад, поліоксіетиленсорбітмоноолєат) або продукти конденсації етиленоксиду з неповними ефірами - похідними жирних кислот і ангідридів гекситу (наприклад, поліетиленсорбітанмоноолєат). Водні суспензії можуть також містити один або більше з консервантів. (00268) Масляні суспензії можна скласти шляхом суспендування активного інгредієнта в рослинному маслі, наприклад, арахісовій олії, оливковій олії, кунжутній олії або кокосовому маслі, або в мінеральному маслі, наприклад, рідкому парафіні. Масляні суспензії можуть містити загусник, наприклад, бджолиний віск твердий парафін або цетиловий спирт.
Підсолоджувачі, наприклад, які представлено вище, і ароматизатори можна додавати для отримання приємного на смак препарату для перорального застосування.
І00269| Диспергуємі порошки і гранули для отримання водної суспензії шляхом додавання води містять активний інгредієнт в суміші з диспергуючим агентом або зволожувачем, суспендуючим агентом і одним або більше з консервантів. Підходящі диспергуючі агенти або зволожувачі і суспендуючі агенти наведені в цьому документі.
І00270| Фармацевтичні композиції згідно цього опису можуть також перебувати у вигляді емульсій "масло у воді". Масляна фаза може являти собою рослинну олію, наприклад, оливкову олію або арахісову олію, або мінеральне масло, наприклад, рідкий парафін або їх суміші.
Підходящі емульгатори можуть являти собою природні камеді, наприклад, гуміарабік або трагакантову камідь; природні фосфатиди, наприклад, фосфатиди сої, лецитин та ефіри або неповні ефіри - похідні жирних кислот; ангідриди гекситу, наприклад, сорбітанмоноолебат; і продукти конденсації неповних ефірів З етиленоксидом, наприклад, полиіїоксіетиленсорбітанмоноолеєат. 00271) Суміші також можуть містити носії для захисту композиції від швидкого розкладання або виведення з організму, наприклад, суміші з контрольованим вивільненням, у тому числі імплантати, ліпосоми, гідрогелі, проліки або мікрокапсульовані системи доставки. Наприклад, бо можна застосовувати матеріал з відстроченим вивільненням, наприклад, гліцерілмоностеарат або гліцерілстеарат окремо або в комбінації з воском. (00272) Цей опис передбачає введення комплексів у вигляді супозиторіїв для ректального введення лікарської речовини. Супозиторії можна отримати шляхом змішування лікарської речовини з відповідним не дратуючою допоміжною речовиною, твердою при звичайних температурах, але рідкою при ректальній температурі, яке, таким чином, буде плавитися в прямій кишці, вивільняючи лікарську речовину. Такі матеріали включають, але не обмежуються ними, масло какао і поліетиленгліколі. 00273) Комплекси, які розглядаються в цьому описі, можуть перебувати у формі будь-якої іншої відповідної фармацевтичної композиції (наприклад, спреїв для назального або інгаляційного застосування), відомої в даний час або розробленої в майбутньому. (00274) Концентрація комплексу поліпептидів в суміші може варіюватися в широких межах (наприклад, від менш ніж приблизно 0,1 масс. 95, як правило, 2 масс. 95 або щонайменше приблизно 2 масо. 95 до 20-50 масс. 95 або більше) і зазвичай вибирається головним чином з урахуванням об'єму рідини, в'язкості і факторів, що залежать від суб'єкту, відповідно до, наприклад, конкретного обраного способу введення.
І00275| В цьому документі розглядається застосування технології доставки речовин з уповільненим всмоктуванням компанії Мапо Ргесізіоп Меаіса! (Мапо Ргесізіоп Медіса!; Емервілл, штат Каліфорнія, США). Ця технологія використовує мембрани на основі нанотрубок з діоксиду титану, що забезпечують швидкості вивільнення нульового порядку для макромолекул, наприклад, білкових та пептидних терапевтичних засобів. Біосумісну мембрану розташовують у невеликому підшкірному імплантаті, що забезпечує довгострокову (наприклад, до одного року) доставку терапевтичних макромолекул з постійною швидкістю. В цей час проходить оцінку технологія доставки агоністів СІ Р-1 для лікування діабету ІІ типу. У певних варіантах реалізації винаходу, комплекс(и), який описано в цьому документі, може являти собою суміш з мембраною. Наприклад, можна просочити мембрану комплексом або оточити мембраною.
Мембрана може мати форму диска, трубки або кулі. У певних варіантах реалізації винаходу, трубка може являти собою нанотрубку, або куля може являти собою наносферу.
Шляхи введення (00276) В цьому описі розглядається введення описаних комплексів та їх композицій будь- яким підходящим способом. Відповідні шляхи введення включають парентеральний (наприклад, внутрішньом'язовий, внутрішньовенний, підшкірний (наприклад, впорскування або використання імплантату), внутрішньочеревний, інтрацистернальний, внутрішньосуглобовий, внутрішньочеревний, внутрішньоцеребральний (інтрапаренхіматозний та інтрацеребровентрикулярний), оральний, назальний, вагінальний, сублінгвальний, внутрішньоочний, ректальний, місцевий (наприклад, трансдермальний), сублінгвальний і інгаляційний.
І00277| Ін'єкції речовин уповільненого всмоктування, які зазвичай вводять підшкірно або внутрішньом'язово, можна також використовувати для вивільнення комплексів, які описано в цьому документі, протягом певного часу. Ін'єкції речовин уповільненого всмоктування, як правило, складені на твердій або масляній основі і в загальному випадку містять щонайменше один з компонентів складу, які викладено у цьому документі. Фахівець в цій галузі техніки повинен бути знайомий з можливими складами і варіантами застосування ін'єкцій речовин уповільненого всмоктування.
І(00278| Що стосується антитіл, у типовому варіанті реалізації антитіло або фрагмент антитіла відповідно до цього опису зберігали при концентрації 10 мг/мл у стерильному ізотонічному водному розчині хлориду натрію для ін'єкцій при 4 "С ії розводили 100 мл або 200 мл 0,995 хлориду натрію для ін'єкцій до введення пацієнту. Антитіло вводили шляхом внутрішньовенного вливання протягом 1 години в дозі від 0,2 до 10 мг/кг. В інших варіантах реалізації винаходу, антитіло вводять шляхом внутрішньовенного вливання протягом від 15 хвилин до 2 годин. В інших варіантах реалізації винаходу, процедуру введення здійснюють шляхом підшкірної болюсної ін'єкції.
І00279| Цей опис передбачає способи, в яких комплекси по цьому опису вводять суб'єкту щонайменше два рази на день, щонайменше раз на день, принаймні один раз кожні 48 годин, принаймні один раз кожні 72 години, щонайменше раз на тиждень, щонайменше раз у 2 тижні або щонайменше раз на місяць.
Комбінована терапія (00280) Цей опис передбачає використання комплексу, який наданого в цьому документі, в комбінації з одним або більше з активних терапевтичних агентів або іншими профілактичними або терапевтичними процедурами. При такій комбінованій терапії різні активні агенти часто 60 володіють різними механізмами дії. Така комбінована терапія може бути особливо вигідною за рахунок зменшення дози одного або більше з агентів, за рахунок чого послаблюються або усуваються небажані ефекти, асоційовані з одним або більше з агентів; крім того, така комбінована терапія може надавати синергетичну терапевтичну або профілактичну дію на основне захворювання, розлад або стан.
І00281| Як використовується в цьому документі, термін "комбінація" передбачає включення терапевтичних засобів, які можна вводити окремо, наприклад, в різних складах для роздільного введення (наприклад, вони можуть бути представлені в комплекті) і терапевтичних засобів, які можна вводити разом в одному складі (наприклад, "спільному складі").
І00282| У певних варіантах реалізації винаходу, комплекс вводять або застосовують послідовно, наприклад, коли один агент вводять до одного або більше інших агентів. В інших варіантах реалізації винаходу, комплекс вводять одночасно, наприклад, коли два або більше з агентів вводять в один або приблизно один і той же час; вказані два або більше з агентів можуть перебувати у двох або більше окремих складах або бути об'єднані в одному складі (наприклад, спільному складі). Незалежно від послідовного чи одночасного введення двох або більше агентів, вважається, що їх вводять в комбінації для цілей цього опису. 00283) Комплекси відповідно до цього опису можна застосовувати в комбінації з іншими агентами, корисними для лікування, профілактики, пригнічення або полегшення захворювань, розладів або станів, викладених у цьому документі, включаючи речовини, які зазвичай вводять суб'єктам, які страждають від ожиріння, розладів харчової поведінки, гіперглікемії, гіперінсулінемії, непереносимості глюкози та інших порушень метаболізму глюкози. (00284) Цей опис передбачає комбіновану терапію з численними агентами (їі їх класами), включаючи 1) інсулін, міметики інсуліну та агенти, які тягнуть за собою стимуляцію секреції інсуліну, включаючи сульфонілсечовини (наприклад, хлорпропамід, толазамід, ацетогексамід, толбутамід, глібурид, глімепірид, гліпізид) і меглітиніди (наприклад, репаглінід (ПРАНДИН) і натеглінід (СТАРЛІКС)); 2) наприклад, метформін (ГЛЮКОФАЖ)) і його фармацевтично прийнятні солі, зокрема, гідрохлорид метформіну і його препарати з тривалим вивільненням, такі як СІштеїга мМ, Богпатеї м і біисорпадехк "М, та інші агенти, які діють шляхом стимулювання утилізації глюкози, скорочуючи виробництво глюкози в печінці і/або зменшуючи вироблення глюкози в кишечнику; 3) інгібітори альфа-глюкозидази (наприклад, акарбоза, воглібоза і
Зо міглітол) і інші агенти, які уповільнюють травлення вуглеводів і, отже, всмоктування з кишечнику і зменшують постпрандіальну гіперглікемію; 4) тіазолідиндіони (наприклад, росіглітазон (АВАНДІЯ), троглітазон (РЕЗУЛІН), піоглітазон (АКТОС), гліпізид, балаглітазон, рівоглітазон, нетоглітазон, АМО 131, МВХ2044, мітоглітазон, лобеглітазон, ІЮК-105, троглітазон, енглітазон, циглітазон, адаглітазон, дарглітазон, які посилюють дію інсуліну (наприклад, шляхом сенсибілізації інсуліну), включаючи інсулін і міметики інсуліну (наприклад, інсулін деглюдек, інсулін гларгін, інсулін лізпро, інсулін детемир, інсулін глулізин та інгаляційні склади кожного), тим самим сприяючи утилізації глюкози в периферичних тканинах; 5) глюкагон-подібні пептиди, включаючи інгібітори ОРР-ЇМ (наприклад, алогліптин, омарігліптин, лінагліптин, вілдагліптин (ГАЛВУС) і сітагліптгин (ЯНУВІЯ)) і Глюкагон-подібний пептид-і (СІ Р-1) і СІ Р-1 агоністи і аналоги (наприклад, ексенатид (БАЄТА і ІТСА 650 (осмотичний насос, який вставляють підшкірно, яка постачає аналог екзенатиду протягом 12-місячного періоду; Іпіагсіа, Бостон,
Масачусетс)) і агоністи рецептора СІ Р-1 (наприклад, дулаглутид, семаглутид, албіглутид, ексенатид, ліраглутид, ліксісенатид, таспоглутид, СуУС-1131 і ВІМ-51077, включаючи їх інтраназальні, трансдермальні і застосовувані раз на тиждень склади); б) і ОРР-ЇІМ-стійкі аналоги (міметики інкретину), РРАЕ гама-агоністи, РРАК альфа агоністи, такі як похідні фенофібринової кислоти (наприклад, гемфіброзил, клофібрат, ципрофібрат, фенофібрат, безафібрат), агоністи
РРАК подвійної дії (наприклад, 2УН2, 2УНІ, СЕТ505, чиглітазар, мураглітазар, алеглітазар, соделглітазар і навеглітазар), рап-діючі агоністи РРАК, інгібітори РТР1В (наприклад, І5І5- 113715 і ТТРЗ814), інгібітори ЗОЇ Т (наприклад, АБР1941, 501 Т-3, емпагліфлозін, дапагліфозін, канагліфозін, ВІ-10773, РЕ-04971729, ремогліфлозін, 715-071, тофогліфлозін, іпрагліфлозін і ГХ- 4211), стимулятори секреції інсуліну, інгібітори ангіотензинперетворюючого ферменту (наприклад, алацеприл, беназеприл, каптоприл, церонаприл, цилазаприл, делаприл, еналаприл, еналаприлат, фосіноприл, імідаприл, лізиноприл, мовелтіприл, периндоприл, квінаприл, раміприл, спіраприл, темокаприл або трандолаприл), ангіотензин ЇЇ антагоністів рецепторів (наприклад, лосартан, тобто КОЗААРГ, валсартан, кандесартан, олмесартан, телмесартан і будь-який 3 цих препаратів, який використовується в комбінації з гідрохлоротіазидом, таким як ГІЗААРГ) або інші антигіпертензивні препарати, такі як Ї.С2 696, агоністи ЕХРЕ, інгібітори глікоген-синтази кінази-3, імуномодулятори, симпатолітики, бета- адреноблокуючі препарати (наприклад, пропранолол, атенолол, бісопролол, карведилол, бо метопролол або метопролол тартат), альфа-адреноблокуючі препарати (наприклад,
доксазоцин, празоцин або альфа метилдопа) центральні альфа-адренергічні агоністи, периферичні вазодилататори (наприклад, гідралазин); бета-З-агоністи адренергічних рецепторів, інгібітори 11бета-Н5ОТ, інгібітори нейтральної ендопептидази (наприклад, тіорфан і фосфорамідон), антагоністи альдостерону, інгібітори синтази альдостерону, інгібітори реніну (наприклад, похідні сечовини із ди- і три-пептидів (див. патент США Мо 5116835), амінокислоти і похідні (патенти США Мо 5095119 і 5104869), амінокислотні ланцюги, зв'язані за допомогою непептидних зв'язків (патент США Мо 5114937), похідні ди- і три-пептидів (патент США Мо 5106835), пептидил-аміно-діоли (патенти США Мо 5063208 і 4845079) і пептидил бета-аміноацил амінодіол карбамати (патент США Мо 5089471); а також безліч інших пептидних аналогів, як описано в наступних патентах США Мо 5071837; 5064965; 5063207; 5036054; 5036053; 5034512 і 4894437, і малі молекули інгібіторів реніну (включаючи діол-сульфаніламіди і сульфініли (патент
США Мо 5098924), М-морфоліно похідні (патент США Мо 5055466), М-гетероциклічні спирти (патент США Мо 4885292) і піролімідазолони (патент США Мо 5075451); також, похідні пепстатину (патент США Мо 4980283) і фтор- і хлор-похідні статон-містячих пептидів (патент
США Мо 5066643), еналкрєїн, КО 42-5892, А 65317, СР 80794, ЕБ 1005, Е5 8891, 50 34017, аліскірен (2(5),4(5),5(5),7(5)-М-(2-карбамоїл-2-метилпропіл)-5-аміно-4-гідрокси-2,7-діїзопропіл-8-
І4-метокси-3-(З-метоксипропокси)-феніл|-октанамід геміфумарат) 5РРбОО, 5РРбЗО і 5РРБбЗ5), антагоністи рецепторів ендотеліну, інгібітори фосфодіестерази-5 (наприклад, силденафіл, тадалфіл і варденафіл), вазодилататори, блокатори кальцієвих каналів (наприклад, амлодипін, ніфедипін, верапаміл, дилтіазем, галлопаміл, нілудипін, німодипіни, нікардипін), активатори калієвих каналів (наприклад, нікорандил, пінацидил, кромакалим, міноксидил, априлкалим, лопразолам), гіполіпідемічні агенти, наприклад, інгібітори ГМГ-КоА-редуктази, такі як сімвастатин і ловастатин, які продаються як ЗОКОРФ і МЕВАКОРФ у формі лактон про-ліків, і які функціонують як інгібітори після введення, і їх фармацевтично прийнятні солі дигідрокси відкритого кільця кислотних інгібіторів ГМГ-КоА-редуктази, такі як аторвастатин (зокрема, солі кальцію, реалізовані в ЛІПІТОРФ), розувастатин (зокрема, солі кальцію, реалізовані в
КРЕСТОРФ)), правастатин (зокрема, солі натрію, реалізовані в ПРАВАХОЛФ)), церивастатин і флувастатин (зокрема, солі натрію, реалізовані в ЛЕСКОЛФ)); інгібітор абсорбції холестерину, такий як езетиміб (ЗЕТІАФ) і езетиміб у комбінації з будь-якими іншими гіполіпідемічними
Зо агентами, такими як інгібітори ГМГ-КоА-редуктази, зазначені вище, і особливо із застосуванням симвастатину (ВІТОРІНФ) або аторвастатину кальцію; ЛВЩ-підвищуючі препарати (наприклад, агоністи рецепторів ніацину і нікотинової кислоти, та їх варіанти з розширеним терміном вивільнення або контрольованим вивільненням, і/або з інгібітором ГМГ-КоА редуктази; агоністи рецепторів ніанцину, такі як аципімокс і ацифран, а також часткові агоністи рецепторів ніанцину; антагоністи рецептору глюкагона (наприклад, МК-3577, МК-0893, І У-2409021 і КТб6-971); агенти, які зв'язують жовчні кислоти (наприклад, колестилан, колестимід, колесевалам гідрохлорид, колестипол, колестирамін і діалкіламіноалкіл похідні зшитого декстрану), інгібітори ацил-
КоАсхолестерин ацетилтрансферази (наприклад, авасиміб); агенти, призначені для використання при запальних станах, таких як аспірин, нестероїдні протизапальні препарати або
НІИЗ3, глюкокортикоїди і селективні інгібітори циклооксигенази-2 або ЦОгГ-2; активатори глюкокінази (ОКА) (наприклад, А2Об6370); інгібітори 11р-гідроксистероїддегідрогеназт 1 типу (наприклад, такі як ті, які описані в патенті США Мо 6730690 ї І У-2523199); інгібітори СЕТР (наприклад, анацетрапіб, евацетрапіб і торцетрапіб); інгібітори фруктозо-1,6-бісфосфатази (наприклад, такі як ті, що описані в патентах США Мо 6054587; 6110903; 6284748; 6399782; і 6489476); інгібітори ацетил-КоА карбоксилази-і1 або 2 (АСС1І або АСС2); інгібітори РОЗКОУ; часткові агоністи СРК-40; модулятори 5С0; інгібітори синтази жирних кислот; амілін і аналоги аміліну (наприклад, прамлінтид); включаючи фармацевтично прийнятні форми солі вищезазначених активних агентів, де це хімічно можливо. (002851 Крім того, в цьому описі розглядається комбінована терапія з використанням агентів і способів для стимуляції втрати ваги, наприклад, і/або схем фізичного навантаження, яки сприяють втраті ваги. (00286) Комплекси відповідно до цього опису можна використовувати в комбінації з одним або більше з інших агентів будь-яким чином, який відповідає обставинам. В одному варіанті реалізації винаходу, лікування з використанням щонайменше одного активного агенту і щонайменше одного комплексу відповідно до цього опису підтримують протягом певного часу.
В іншому варіанті реалізації винаходу, лікування з використанням щонайменше одного активного агенту знижують або припиняють (наприклад, при стабільному стані суб'єкта), в той час як лікування з використанням комплексу відповідно до цього опису підтримують без зміни схеми прийому. В додатковому варіанті реалізації винаходу, лікування із використанням 60 щонайменше одного активного агенту зменшують або припиняють (наприклад, при стабільному стані суб'єкта), в той час як лікування з використанням комплексу(ів) відповідно до цього опису зменшують (наприклад, знижуючи дозу, частоту прийому або тривалість схеми прийому). В ще одному варіанті реалізації винаходу, лікування з використанням щонайменше одного активного агенту зменшують або припиняють (наприклад, при стабільному стані суб'єкта), а лікування з використанням комплексу відповідно до цього опису підсилюють (наприклад, підвищуючи дозу, частоту прийому або тривалість схеми прийому). У ще одному варіанті реалізації винаходу, лікування із використанням щонайменше одного активного агенту підтримують, а з використанням комплексу відповідно до цього опису зменшують або припиняють (наприклад, знижуючи дозу, частоту прийому або тривалість схеми прийому). У ще одному варіанті реалізації винаходу, лікування з використанням щонайменше одного активного агенту і лікування з використанням комплексу згідно цього винаходу зменшують або припиняють (наприклад, знижуючи дозу, частоту прийому або тривалість схеми прийому).
Дозування
І00287| Комплекси відповідно до цього опису можна вводити суб'єкту в кількості, яка залежить, наприклад, від мети введення (наприклад, бажаного ступеня нормалізації стану); віку, ваги, статі, стану здоров'я та фізичного стану суб'єкта, що підлягає лікуванню; природи поліпептиду, який вводиться, і/або складу; шляху введення; і характеру захворювання, розладу, стану або їх симптомів (наприклад, тяжкості порушення регуляції глюкози/інсуліну і стадії розладу). Схему прийому можна також розробляти з урахуванням наявності, характеру та ступеня небажаних ефектів, пов'язаних з агентом(ами), які вводяться. Ефективні дози та схеми прийому легко визначити, наприклад, на підставі досліджень безпеки і досліджень зі збільшенням дози, досліджень іп мімо (наприклад, на тваринних моделях) і інших способів, відомих фахівцю в цій галузі техніки.
І00288| У загальному випадку, параметри дозування визначають, що доза в кількісному відношенні повинна бути менше кількості, яка може бути необоротно токсичною для суб'єкту (тобто максимально переносимої дози, МПД) і не менше кількості, необхідної для вимірюваного впливу на суб'єкт. Такі кількості визначаються, наприклад, фармакокінетичними та фармакодинамічними параметрами, пов'язаними з поглинанням, розподілом, метаболізмом і виведенням (АЮМЕ"), з урахуванням шляху введення та інших факторів.
Зо І00289| Ефективна доза (ЕД) є дозою або кількістю препарату, яка дає терапевтичну відповідь або бажаний ефект у деякої частки пацієнтів, що приймають його. "Медіанна ефективна доза" або ЕД5БО агенту являє собою дозу або кількість агенту, яка дозволяє отримати терапевтичну відповідь або бажаний ефект у 50 95 популяції, якій вводять цей агент. Хоча ЕД5БО зазвичай використовують в якості показника обгрунтованої ймовірності ефекту агента, вона не обов'язково являє собою дозу, яку клініцист може вважати доцільною з урахуванням усіх відповідних факторів. Таким чином, у деяких ситуаціях ефективна кількість перевищує розрахункове значення ЕД5бБО, в інших ситуаціях ефективна кількість становить менше розрахункового значення ЕД5БО, а в інших ситуаціях ефективна кількість аналогічна розрахунковим значенням ЕД5БО.
І00290| Крім того, ефективна доза комплексу(ів) відповідно до цього опису може являти собою кількість, яка при введенні суб'єкту у вигляді однієї або декількох доз дозволяє отримати бажаний результат у порівнянні зі здоровим суб'єктом. Наприклад, ефективна доза може бути однією з тих, які при введенні суб'єкту з підвищеним рівнем глюкози і/або інсуліну в плазмі дозволяє досягти бажаного зменшення порівняно з рівнем у здорового суб'єкту на щонайменше близько 10 95, щонайменше близько 20 95, щонайменше близько 25 9565, щонайменше близько 30956, щонайменше близько 40 95, щонайменше близько 50 9565, щонайменше близько 60 95, щонайменше близько 70 95, щонайменше близько 80 95 або більш ніж на 80 95. 002911) Відповідний рівень дозування зазвичай буде становити від близько 0,001 до 100 мг/кг маси тіла пацієнта на день, які можна вводити у вигляді однієї або декількох доз. У деяких варіантах реалізації винаходу, рівень дозування буде становити від близько 0,01 до близько 25 мг/кг на день, а в інших варіантах реалізації винаходу - від близько 0,05 до близько 10 мг/кг на день. Відповідний рівень дозування може становити від близько 0,01 до 25 мг/кг на день, від близько 0,05 до 10 мг/кг на день, або від близько 0,1 до 5 мг/кг на день. В межах цього діапазону дозування може становити від 0,005 до 0,05, від 0,05 до 0,5 або від 0,5 до 5,0 мг/кг на день.
І00292| Для перорального введення агента композицію можна представити у формі таблеток, капсул і т. п., які містять від 1,0 до 1000 мг активного інгредієнта, зокрема, 1,0, 3,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 ї 1000,0 міліграм активного інгредієнта. Комплекс(и) можна вводити по схемі, наприклад, від 1 до 4 раз на день, і, часто, один або два рази на день. (510)
І00293| Дозування комплексу(ів) відповідно до цього опису можна повторювати з відповідною частотою, яка може перебувати в межах від одного разу на день до одного разу кожен місяць, в залежності від фармакокінетики комплексу (наприклад, часу напівжиття) та фармакодинамічної відповіді (наприклад, тривалості терапевтичного ефекту комплексу). У деяких варіантах реалізації винаходу, прийом часто повторюють від одного разу на тиждень, одного разу на два тижні, одного разу кожен місяць. В інших варіантах реалізації комплекс вводять приблизно один раз на місяць.
І00294| У деяких варіантах реалізації винаходу доза описаного комплексу міститься в "одиничній лікарській формі". Фраза "одинична лікарська форма" відноситься до фізично дискретним одиниць, причому кожна одиниця містить задану кількість комплексу за цим описом, або окремо, або в комбінації з одним або більше додатковими агентами, достатніми для отримання бажаного ефекту. Слід брати до уваги, що параметри дозованої лікарської форми залежать від конкретного агента і планованого ефекту.
Набори 00295) У цьому описі також розглядаються набори, які містять описаний(і) комплекси) та їх фармацевтичні композиції. Набори, як правило, представлено у вигляді фізичної структури, в якій розміщені різні компоненти, які описано нижче, яку можна використовувати, наприклад, при практичній реалізації способів, які описано вище (наприклад, введення комплексу суб'єкту, який потребує зменшення маси тіла). 00296) Набір може містити один або більше з комплексу(ів), який описано в цьому документі (наприклад, у стерильному контейнері), який може бути присутнім у формі фармацевтичної композиції, придатної для введення суб'єкту. Комплекс(и) можуть бути надані у формі, готової до застосування, або у формі, яка вимагає, наприклад, відновлення або розведення перед введенням. Якщо комплекс(и) знаходяться у формі, яка вимагає відновлення користувачем, набір може містити буфери, фармацевтично прийнятні допоміжні речовини і т. п., упаковані з комплексом(ами) або окремо. Якщо розглядається комбінована терапія, набір може містити кілька агентів окремо, або вони вже можуть бути об'єднані в складі набору. Кожен компонент набору можна помістити в окремий контейнер, і всі контейнери можуть перебувати в одній упаковці. Набір відповідно до цього опису може передбачати умови, необхідні для належного
Зо підтримання компонентів, розміщених у ньому (наприклад, охолодження або заморожування).
І00297| Набір може містити етикетку або вкладиш в упаковці, яка містять ідентифікаційну інформацію про компоненти, що входять до його складу, а також інструкції щодо їх застосування (наприклад, параметри прийому, клінічну фармакологію активного(их) інгредієнта(ів), в тому числі механізм дії, фармакокінетику та фармакодинаміку, побічні ефекти, протипоказання і т. д.). Етикетки або вкладиші можуть містити інформацію про виробника, наприклад, номери партій і дати закінчення терміну придатності. Етикетку або вкладиш в упаковці можна, наприклад, інтегрувати у фізичну структуру, в якій розміщені компоненти, окремо помістити в зазначену фізичну структуру, або прикріпити до компонента набору (наприклад, ампулі, пробірці або флакону). Типові інструкції включають інструкції щодо зменшення або зниження рівня глюкози в крові, лікування гіперглікемії, лікування цукрового діабету і т. д. із застосуванням описаних модуляторів і фармацевтичних композицій на їх основі
І00298| Етикетки або вкладиші можуть додатково включати в себе, або бути приєднані до машиночитаємого носія, такого як диск (наприклад, жорсткий диск, карта, карта пам'яті), оптичний диск, такий як СО - або ОМО-КОМ/КАМ, ЮМО, МРЗ, магнітна стрічка, або електричні носії, такі як КАМ і КОМ або їх гібриди, такі як магнітні/оптичні носії інформації, рлеш-носії або карти пам'яті. У деяких варіантах реалізації винаходу, інструкції фактично відсутні в наборі, проте надані засоби для отримання інструкцій з віддаленого джерела, наприклад, мережі
Інтернет.
Експериментальна частина
І00299| Наступні приклади наведено з метою забезпечити фахівців в цій галузі техніки повним описом способів реалізації і застосування цього винаходу, і не призначені для обмеження рамок того, що автори винаходу вважають своїм винаходом; крім того, автори винаходу не мають наміру сказати, що експерименти, які описано нижче, представляють собою всі виконані експерименти або єдині виконані експерименти. Були зроблені зусилля для забезпечення точності використовуваних числових значень (наприклад, кількостей, температури і т. д.), однак слід враховувати можливість деяких експериментальних помилок і відхилень. 00300) Якщо не вказано інше, частки є масовими долями, молекулярна маса є середньою молекулярною масою, температуру наведено в градусах Цельсія (С), а тиск дорівнює або бо близько до атмосферного. Використано стандартні скорочення, в тому числі наступні: п.о. - пар основ; т.п.о. - тисяч пар основ; пл - піколітр(и); с або сек - секунда(и); хв - хвилина(и); г - годинаси); АК - амінокислотаци); т.п.о. - тисяч пар основ; нт - нуклеотид(и); нг - нанограм; мкг - мікрограм; мг - міліграм; г - грам; кг - кілограм; дл - децилітр; мкл - мікролітр; мл - мілілітр; л - літр; мкМ - мікромолярний; мМ - мілімолярний; М - молярний; кДа - кілодальтон; в/м- внутрішньом'язово(ий); в/б6- внутрішньочеревно(ий); п/к- підшкірно(ий); 2 р/день- два рази на день; ВЕРХ - високоефективна рідинна хроматографія; МТ - маса тіла; Од - одиниця; нз - не є статистично значущим; РО - рівень глюкози в плазмі натще; ЕРІ - рівень інсуліну в плазмі натще; ІТТ - тест сприйнятливості інсуліну; РТТ - тест сприйнятливості пірувату; ОСТ - пероральний тест сприйнятливості глюкози; 5515 - секреція інсуліну під дією глюкози; РВ5 - фізіологічний розчин з фосфатним буфером; ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція; МНЗАМ- гідроксисукцинімід; ОМЕМ - середовище Ігла, модифіковане по Дульбекко; С - копія геному;
ЕДТА - етилендіамінтетраоцтова кислота.
Матеріали і способи
І00301| Наступні способи і матеріали були використані у прикладах, наведених нижче.
І00302| Тварини. Самців мишей С57ВІ//652) з аліментарним ожирінням (Те Часкзоп
Іабогагогу, Бар-Харбор, штат Мен) утримували на кормі з високим вмістом жирів (012492,
Кезеагсі Оіеї5, Іпс., Нью-Брансуик, штат Нью-Джерсі, США), який містить 60 ккалоюо жиру, 20 ккалуо білка і 20 ккалоо вуглеводів протягом 12-20 тижнів. Всі дослідження на тваринах були схвалені комітетом з догляду за тваринами та їх використанням МОМ. Миші БІО С57ВІ /6) являють собою модель ожиріння, подібну до ожиріння у людини, де ожиріння грунтується на надмірному споживанні калорій. Миші С57ВІ /6.) схильні до ожиріння, при якому спостерігається виражене збільшення маси тіла, а також гіперінсулінемія і іноді гіперглікемія. Лінія являє собою найбільш часто використовувану лінію мишей для моделювання аліментарного ожиріння. (Міївзоп С. еї а!., Асіа Рпнаптасоіодіса 5іпіса (2012) 337173-181).
І00303| Послідовності нуклеїнової кислоти і амінокислоти. Згадувана КкДНК ОРС з номером доступу СепВапквС000529.2, яка кодує варіанти СОЕ15 людини, і згадувана амінокислотна послідовність з номером доступу СепВапкМР 004855.2, яка кодується за допомогою кДНК.
КДНК для партнера Бс-злиття було придбано в Іпмімобеп (рЕеОЗзЕ-СНІЯ-НС,
СепВапк"АУб23427.1, білок ІЮ-ААТ49050) і модифіковано як зазначено. Амінокислотна
Зо послідовність партнеру Ес-злиття, яка кодується за допомогою вектору РЕОЗЕ-СНІЯ-пО1, являє собою:
І0ОЗО4
ОКТНТСРРСОРАРЕЇ І ФаРБЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОУМЗТУВМУМУМІ ТМІ НОБУУІ МЕКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОМУТІ РРЗ
ВЕЕМТКМОМУБІ ТОЇ УК ЕМРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ООЗЕРІ КІ ТМОКЗАМОСОС
МУМЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО:55) (00305) Конструювання експресійних конструктів. Експресійний вектор ртТТ5 ссавців (Майбопаї
Кезеагсп Сошпсії Сапада) було модифіковано шляхом вставки елементу Козак і послідовності
ІдДК-сигнального пептиду людини: (САССАтТасАСАТОАДОССЯССТоССоСсСЯстоАаастостассастостастастотавастосавааатас
САСАТОТ) (ЗЕО ІЮО МО:56) між сайтами Ріпеї! і ЕсоКіІ. У той час як обидва зазначених сайти рестрикції були видалені, для подальшого клонування в рамці зчитування створили сайт Адеї.
Для одиночної вставки фрагменту (наприклад, Ес-частини 901 людини) було використано технологію Іп-Ривіоп (Сіопіесп). Для вставки двох і більше ПЛР-фрагментів, які генеруються (тобто підсС1-Рс-ООЕ15), ми використовували сСіббзоп Авзептбріу Мабхіег Міх (МЕВ) згідно з протоколами виробника. Всі ПЛР фрагменти було ампліфіковано за допомогою ПЛР суміші
Заррпїге і очищено на гелі з використанням набору Оіадеп сеї! Ехігасіоп. Електро-компетентні клітини ТОР10 (Сіїе Тесппоїодієз), трансформовані в реакціях клонування, висівали на чашки з
В-агаром, який містить карбеніциллін, і інкубували протягом ночі при 37 "С. Окремі колонії були зібрані та проаналізовані за допомогою секвенування. ДНК позитивних колоній ампліфікували (ДНК-Махі-ргер, Сіадеп) підтверджували за допомогою повного секвенування («Іі використовували для трансфекції клітин ссавців для експресії рекомбінантного білка.
І00306| Для створення специфічних мутеїнів виконували сайт-специфічний мутагенез з використанням або набору ОцікСпапде Гідйіпіпуд або з набором ОцікСпапде Гідпіпіпд Мийні 5йе-
Рігесієа Мшадепевів (АдіїепО і відповідних праймерів, слідуючи протоколами виробника.
І00307| (Ес/Ес)-СОЕ15 злиті молекули, СООЕ15 дикого типу та експресія ООЕ15-глікомутетїну.
Всі молекули були добуті з трансфектованих в клітинах Ехрі 293 (Іпмігодеп Согрогаїйоп,
Карлсбад, Каліфорнія). Клітини в робочому порядку пересівали на середовище для експресії
Ехрі (Іпмігодеп) та підтримували у вигляді суспензійних культур в колбах різного розміру. Як бо правило, клітини пересівали при щільності клітин 5е5 життєздатних клітин/мл і вирощували протягом 3-х днів до пересіву. Колби тримали в СО?» інкубаторі зі зволоженням (37 "С і 5 95 СО») на шейкерних платформах Мем ВгипзуліскК (Мем/ ВгипбзулокК Зсіепійс Сотрапу, Едісон, Нью-
Джерсі) при швидкості перемішування 110 об/хв. (00308) Трансфекцію виконували при досягненні щільності клітин у культурі, яка дорівнює 2,5еб життєздатних клітин/"мл при більш ніж 95 95 життєздатності. Як правило, для 50 мл трансфекції інокулювали 2,5еб6 клітин/"мл Х 50 мл у 250 мл колбу, яку струшують, в об'ємі культури 42,5 мл. П'ятдесят мікрограм (50 мкг) плазмідної ДНК, яка складається з експресуючого вектору, який містить досліджуваний ген, спочатку розводили 2,5 мл відновленого сироваткового середовища ОРТІ-МЕМ (Іпмйгодеп). Одночасно, реагент для трансфекції експіфектамін (Іпмйгодеп) у 2,67-кратному об'ємі (кількості плазмідної ДНК) також розводили у 2,5 мл відновленого сироваткового середовища ОРТІ-МЕМ. Після 5 хв інкубування при кімнатній температурі розбавлений реагент для трансфекції повільно додавали до розведеної плазмідної ДНК для утворення трансфекційних компетентних комплексів. Ще через 20 хв інкубаційного періоду при кімнатній температурі, 5 мл трансфекційних комплексів додавали до 42,5 мл клітинної культури. Потім трансфектовані клітини поміщали в СО»2 інкубатор зі зволоженням на орбітальний шейкер зі швидкістю перемішування 110 об/хв. Через двадцять чотири години після трансфекції в трансфектовану культуру вносили 250 мкл енхансерного розчину 1 (Іпмігодеп) і 2,5 мл енхансерного розчину 2 (Іпмігодеп). Потім культуру знову поміщають у СО?» інкубатор зі зволоженням на орбітальний шейкер. Через шість-сім днів після трансфекції культури збирали центрифугуванням при 3000 об/хв протягом 30 хв, а потім фільтрували через 0,2 мкм фільтр (МаЇІдепе). Потім зразки аналізували на предмет експресії в гелі з фарбуванням кумасі.
І00309| Очищення рекомбінантного білка. (Ес/Рс)-СОГ15 молекули, які були експресовані в кондиційованих середовищах (СМ), оцінювалися для відновлення і активності після очищення.
СМ пропускали через мАт ЗеІесіз5иКе колонку (СЕ) при навантажувальній здатності не більше ніж 20 мг/мл смоли. Об'єми СМ коливалася від 50 мл-1000 мл для оцінки відновлення. Після завантаження мАт ЗеіесізиКе СМ, колонку промивали 5-10 об'ємами колонки ТХРВ5 (Согппіпд
Сеїїдго) з наступною стадією елюювання буфером гліцину з низьким рН (Роїузсієпсез Іпс). Після елюювання, нейтралізували рН пулу (Ес/Ес)-СОРЕ15 з 1М Трис рН 8,0 (ТеКпома), а потім вводили
Зо в колонку Зирегаех200 (ЗЕ) попередньо врівноважену в 1ТХРВ5 (Согпіпд Сеїдго). Фракції інтактних (Ес/Ес)-СОБЕ15, повністю зібраних молекул були об'єднані та проаналізовані на чистоту і кількісно оцінені за допомогою А280 способів з використанням відповідного коефіцієнта ослаблення і молекулярної ваги для визначення відновлення в залежності від початкових об'ємів СМ. Повністю зібрані молекули були димер-димерним комплексом з двох гетеродимерів. Кожен гетеродимер, який має Ес, зв'язаний з ЕБо-С0ОЕ15 глікомутеїном за допомогою взаємодії виступу і западини, і двох гетеродимерів, які зв'язано через СОЕ15 -
СОР15 взаємодію. 00310 Очищення СОБЕ15 ДТ і СОЕ15 глікомутеїнів. ЗОБЕ15 дикого типу і СБОЕ15 глікомутеїни, які не кон'юговано з Ес, було очищено від культурального середовища з використанням іонообмінного захоплення. ЗОБЕ15 ДТ і БОР15 глікомутеїни елюювали з використанням градієнту відповідної солі/рН, який підходить для оптимального елюювання і відокремлення від домішок білка клітини-хазяїна. Всі молекули СОЕ15 додатково очищували за допомогою СЕ НіТгтар Рпепу! НР при рН 8,0 з використанням лінійного градієнта сульфату амонію, який понижувався. Фракції оцінювали і об'єднували на підставі чистоти і параметрів глікозилювання за допомогою зсуву гелю при електрофорезі в ДСН-ПААГ у невідновлюючих умовах. Аналогічно (Ес/Ес)-5ОЕ15 молекулам, СООЕ15 дикого типу і СОЕ15 глікомутеїни були експресовані за допомогою сигнального пептиду ІДк.
Приклад 1: Конструкція гетеродимерних виступ-в-западину (Ес/Ес)-ЗОЕ15 злитих молекул 00311) Конструкції Ес-СОЕ15, які представлено на фіг. 1 і первинні послідовності зображені нижче (конструкти Віа/6-В19а/5). Для досягнення продуктивного складання молекул Ес-СОРЕ15, було розроблено ефективну систему для забезпечення димерізації Ес/Рс, допускаючи при цьому димерізацію ЗОЕ15/50ОЕ15. Для того, щоб уникнути неправильного згортання і агрегації потенційного одноланцюгового Ес-СОРЕ15, було сконструйовано гетеродимерний партнер злиття для Ес/Ес взаємодії для забезпечення високої точності ЗОР15/50Е15 гомодимерізації. Ес/Бс гетеродимери виступ-в-западину було сконструйовано для адресного БОРЕ15 складання і секреції із Ехрі 293Е транзієнтних систем. Ес/Ес гетеродимерні виступ-в-западину системи оцінювалися за допомогою (7366 (виступ) // 407 (западина)| або (ТЗ366МУ (виступ) // Т3665-
І 368А-у407У (западина)| системи, у поєднанні з (545)п лінкером (п-2, 3, 4 або 5) і ЗОЕ15. Слід зазначити, що нумерація положень в амінокислоті в СНЗ домені Ес основана на системі бо нумерації ЄС (Едеїтап, с.М. еї аїЇ., Ргос. Май. Асай. ОА, 63, 78-85 (1969)). У всіх випадках,
партнер Ес-злиття (виступ/западина) було приєднано до М-кінця зрілого ЗОЕ15, що містить амінокислотні залишки А1-І112, В2-І112, М3-І112, с4-І112, 05-І112, Нб-І112 або С7-1112.
Усікання на М-кінці ООЄ15 (А1-2-1112, д2-М3-1112, д3-04-1112, д4-05-1112, д5-Нб-1112 або дв-сС7-1112), які були включені для підвищення стійкості як послідовність на М-кінці (АЕМООН,
ЗЕО ІЮ МО:95), раніше були продемонстровані, як сайт протеолітичної сприйнятливості, і. М- кінцеві усікання забезпечують чудову стабільність у порівнянні з ЗОЕ15, який не містить ці М- кінцеві усікання.
І003121| На Фіг1А-10 продемонстровано розташування виступу по відношенню до западини у Ес-СОЕ15 (ланцюг А), у поєднанні з відповідною западиною по відношенню до виступу у гетеродимерному Ес-партнері (ланцюг В), у поєднанні або з шарніром дО дикого типу, який містить два міжмолекулярні дисульфідні зв'язки, або доменом без шарніра (Ашарнір). Для Ес- гетродимерних виступу або западини А/В ланцюгів мутацію АА (АРЕП.СаР (5ЕО ІЮ МО:96)-»
АРАЇ АССР (ЗЕО ІЮ МО:97)) було внесено для видалення функціональності ефектора Ідс1.
Гетеродимерні виступ-в-западину (Ес/Ес)-СОРЕ15 конструкції були експресійно профільовані для складання і представлено на Фіг. 2А. У всіх випадках, транзієнтна експресія виступ-в-западину (Ес/Рс)-СОЕ15 призводить до відновлення після очищення між 0 мг/л та 74,9 мг/л правильно зібраного продукту (0 - агрегати/без експресії, « 25 мг/л, 25 мг/л - 49,9 мг/л, 50 мг/л - 74,9 мг/л, 75 мг/л - 99,0 мг/л, » 100 мг/л). У всіх випадках, складання та секреція виступ-в-западину гетеродимерних Ес/Бс-С50ОЕ15 молекул супроводжувалися різними забруднюючими рівнями неправильно згорнутих гетеродимерних видів таких як Ес(западина): Ес(западина),
Ес(виступ):Ес(виступ), Ес(виступ)-сОЕ15:Ес(виступ)-СОЕ15 і Ес(западина)-СОЕ15:Ес(западина)-
СОЕ15. Грунтуючись на визначенні профілю експресії, Т366УМ (виступ) розташовано на Ес-
СОГ15 ланцюзі, в поєднанні з 73665-І 368А-7407М (западина) на ланцюзі гетеродимерного Ес партнера (Фіг. 10), було знайдено для виробництва продукту з максимальною стабільністю і мінімізованим неправильним спарюванням Ес/Ес-гомодимерних продуктів (Фіг. 2А - варіант
В5а/ВвВ5Б). Ця конструкція була в центрі подальшого конструювання експресії і оптимізації.
І00313| Варіант В5а/В5р, який було відновлено з трансфектованих джерел Ехрі 293БЕ, представляв відновлення в діапазоні від 0,0 мг/л до 24,9 мг/л. Щоб посилити експресію, збирання і відновлення, сайти М-глікозилювання були введені в зрілу послідовність ЗОЕ15 (фіг.
Зо 1є). В сконструйованих конструктах, наявність одного консенсусного сайту М-зв'язаного глікану на С0ОЕ15 значно покращувало експресію, збирання і відновлення повністю зрілих (Ес/Ес)-
СОРЕ15 виступ-в-западину гетеродимерів В5а/В5Ь (Фіг. 2А - варіанти В9да/В96 до В19а/В19Б).
Було встановлено за допомогою іп міїго аналізу, що довжина лінкера оптимальна, коли п--5 для (545)п для зв'язування та активності рецептору. Наявність глікану в положенні О5Т повністю видаляє первинний сайт дезамідування в положенні МЗ зрілого ЗОРЕ15 і з'являється для подальшого підвищення стабільності молекули як було продемонстровано в Прикладі 2.
ІЇ00314| Передбачається, що наявність М-зв'язаних гліканів в послідовності ЗОГ15 допомагає експресії і мінімізує неправильне згортання продуктів накопичення за рахунок збільшення часу перебування в ендоплазматичному ретикулумі та апараті Гольджі в ході секреторного процесу. Передбачається, що цей додатковий час перебування має позитивний ефект на кінетику згортання і дозволяє значно поліпшити гетеро-димерне (Ес/Ес) виступ-в- западину сполучення та вилучення з культури тканин ссавців. 00315) Послідовності варіантів (В'а/6-В19а/ю) представлено нижче. В послідовностях, які зображено нижче, сигнальний пептид ДК людини знаходиться в нижньому регістрі, який слідує за Ес-послідовністю. У послідовностях, які також містять лінкер і ЗОЕ15 послідовність, Ес- послідовність слідує за послідовністю лінкера (підкреслено), яка слідує за СООР15 послідовністю (жирний шрифт). Нумерація положень амінокислотних замін в Ес- послідовності заснована на нумерації ЄС, заміни з посиланням на амінокислоту представлено у відповідному положенні
ІДС1Бс людини (5ЕБО І МО:2). Нумерація М-кінцевої делеції в послідовності СОРЕ15 і амінокислотних заміни) з посиланням на зрілий ООЕ15 дикого типу людини (ЗЕО ІЮ МО:1).
Вта:підк-нпІда1-Ес(АА)(Т366Х)-(Сс45)5-АМ3-СОЕ15 (Сс14-І112) 00316) татгурадіаШмтгдагсоОКтТНТСоСРРОРАРАЇ АФОРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМЗНЕО РЕМ
КЕМУМУрамЕУНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВАУУЗМІ ТМ НОУУІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРЗАВЕЕМТКМОМ5І МСІЇ УКИЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОраЗЕРІ.
УБкІтУркЗАМмООаМУЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5і З РаОКССОСОЗСССоБОССССОСЗСОСвавБас сае5арнсРІСРОНССВІ НТУВАБІ ЕОМ АОМ/МІ ЗРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАОІКТО
ІНВГКРОТУРАРССУРАЗУМРММІОЮКТОТСОУБІ ОТМОБІ ГАКОСНОСЇІ (5ЕО І МО:57)
ВІБ:пІДК-НІдДС1-ЕсС(ААХУ 407) (003171 татгурадіїдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК в / СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗІ ТСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОЗООЗЕБІ Т
ЗКІ ТУОКЗВМ/ООСМУЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 5І 9РОК (9ЕО 10 МО:58) воа:підк-нпІДС1-Ес(ААХУ407Т)- (С45)5-АМ3-СОЄ15 (С4-І112) (00318) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕУНМАКТКРВЕЄЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗІ ТСІ УКОЕУРЗОТАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЗОО5ЕБІ Т
ЗКІ ТМОКЗВМ/ООСМУЕ5С5УМНЕАІ НМНУТОКЗІ І ЗРОКОССОЗСОСООЗОСОО5СССООЗОСС
С5СБОНСРІ ОРСНССВІ НТУВАБІ ЕІ СМ'АОМ/МІ ЗРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕНААММНАОІКТІ.
НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРММПОКТОТСУбІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:59) вор:пІДК-пІДС1-Ес(ААХТЗ366У) (00319) татгурадіїдПмдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЖСІ УКОЕУРЗОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О50С9ЕРКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУООСМУЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКЗІ 8І РОК (5ЕО 10 МО:60)
ВЗа:підк-пІдС1-Ес(Ашарнір, ААХТ366Х)-(055)5-АМ3-СОБ15 (С4-І112) (00320) татгурадідмгдагАР А АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ
ЕУНМАКТКРВЕЄОУМ5ТУВМУММІ ТМІ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІРРОВЕЕМТКМОМУВІ СІ УКОЕУРЗОТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50С5ЕРІ УЗКІ ТУОКОВ
МООСМУЕ5СВУМНЕАІ НМНУТОКЗІ І ЗРОКОСОСЗООССОЗСОСО5ОбСО5ОССС5СОНСРІ.
СРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ СМ/АОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄНААММНАОІКТВІ НВІ КРОТМУР
АРССУРАЗУМРМУПОКТОТСУВІ ОТУООІ І АКОСНСІ (5ЕО І МО:61) вЗБ:пІдК-пІдСІ1-Ес(лшарнір, АА)(У 407)
Зо (003211 татгурадідмгдагАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ
ЕУНМАКТКРВЕЄОУМ5ТУВМУММІ ТМІ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІ РРЗВЕЕМТКМОМЗІ ТСІ УКОЕУРЗОТАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОЗ0О5ЕНІ Т5КІ ТУОКОА
МООСММЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 5І 5РОК (5ЕО ІЮ МО:62)
Вла:підк-пІдС1-Ес(Ашарнір, ААУ 407Т)-(055)5-АМ3-СОБЕ15 (С4-І112) (00322) татгурадідмгдагАР А АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ
ЕУНМАКТКРВЕЄОУМ5ТУВМУММІ ТМІ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІ РРЗВЕЕМТКМОМЗІ ТСІ УКОЕУРЗОТАМЕУЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О50СО5ЕБІ ТКІ ТУОКОА
МООСМУЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКОІ ВІ ЗХРОКОбсСОЗССООЗСсООСО5ОС0СС5СССОЗСОНСРІ.
СРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ СМ/АОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄНААММНАОІКТВІ НВІ КРОТМУР
АРССУРАЗУМРМУПОКТОТСУВІ ОТУООІ І АКОСНСІ (5ЕО І МО:63) вАБ:пІдК-підС1-Ес(Ашарнір, ААХТ366У) (00323) татгурадіїдмігдагсАРАЇ АСОРУЗМУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕМУ УУОСМ
ЕУНМАКТКРВЕЄОУМ5ТУВМУММІ ТМІ НОВУ МСОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІРРЗВЕЕМТКМОМЗІ СІ УКОЕУРЗОТАМЕМ/ЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50О5ЕРНІ УЗКІ ТМОКОВ
МООСММЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 5І 5РОК (ЗЕО ІЮ МО:64)
ВБа:підк- пІДС1-Ес(ААХТ366М)-(С45)5-АМ3-СО15 (С4-1112)
БО (00324) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМУВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50С5ЕРНІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКВІ І ЗРОКОСОСЗСООВССЗСсСОСЗСсОоСсС5сС 5Б СО5О0ОНСРІ ОРОВССВІ НТУВАВІ ЕІ СМ ДОМ/МІ ХРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕНААММНАОІКТО
І НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРММІ ОКТОТОМВІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:65)
В5Б:пІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ-368АХУ 407) (00325) татгурадідПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ 60 КЕММУУМОСУЄУНМАКТКРВЕЄОУ МТУ ВУ МІ ТМІ НОМУ МОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:66)
Вба:підк- пІДС1-Ес(АА) (Т3665Х1І-368АХУ407У)-(Сб45)5-АМ6-СОБ15 (С7-І112) (00326) в татгурадідмгдасоктнтсРРСРАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ8І ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ О5ОО5ЕКІ.
МЗКІ ТУОКЗВМООСММЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКВІ І ЗХРОКОСОСЗСООбСЗСсСсос5ссос5Ос
СО5СРІ ОРОВССВІ НТУВАВІ ЕІ СМ'АОМ/МІ ЗРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕНААММНАОІКТОІ ННІ.
КРОТУРАРССУРАЗУМРМУПОКТОТСУВІ ОТУООГІ АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:67) вбр:підК- підС1-Ес(ДАХТ366М) (003271 татгурадідмтдасоктнтСРРСРАРАЇ АСОРОЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУУТІ РРОВЕЕМТКМОУВІ М/СІ УКОЕУРЗОТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:68) в7агпідк-підС1-Ес(лшарнір, ААХТ366М/)-(С45)5-АМ3-СОЕ15 (С4-1112) (00328) татгурадідмгдагАР А АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ / ЕМНМАКТКРАЕЕОУМОТУВМУМУ МІ ТМІ НОМ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІ РРЗВЕЕМТКМОМВІМ/СІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОЗ0ОЗЕНІ УЗКІ ТМОКЗА
МООСМУЕ5СВУМНЕАІ НМНУТОКЗІ І ЗРОКОСОСЗСОССОЗСОСО5ОСССЗОССС5СОНСРІ.
СРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ СМ/АОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЄНААММНАОІКТВІ НВІ КРОТМУР
АРССУРАЗУМРМУПОКТОТСУВІ ОТУООІ І АКОСНСІ (5ЕО І МО:69)
В7Б:пІДК-пІдС1-Ес(Лшарнір АДАХТ3665)І-368АХУ407У) (00329) татгурадіїдгдагАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ
ЕУНМАКТКРВЕЕОУМУТУВУМУМІ ТМІ НОБУМІ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІ РРЗВЕЕМТКМОМ5І ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСООРЕММУКТТРРМІ ОЗОС5ЕРІ МЗКІ ТУОКЗА
М ООСМУЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКЗІ 8І РОК (ЗЕО І МО:70) вва:підкК-пІдДС1-ЕС(АВ, АА) (Т3665Х(І-368АХУ407М)-(С45)5-АМ6-СОБ15 (С7-1112) (00330) татгурадідмгдагАР А АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ
ЕУНМАКТКРВЕЕОУМУТУВУМУМІ ТМІ НОБУМІ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІРРОВЕЕМТКМОМУВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О5ЕР! УЗКІ ТУОКЗА
МООСМУЕ5СВУМНЕАІ НМНУТОКЗІ І ЗРСКОсООбСЗОсСсСОЗСССО5ОСО5000С5СРІ СРО
ВССВІНТУВАБІ ЕІ СМ/ДОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЕНААММНАСІКТОІ НВІ КРОТУРАРС
СМРАЗУМРММПОКТОТСУ5І ОТУОО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:71) ввб:підК-підСІ-Ес(Ав, ДАХ Т366М) (00331) татгурадіїдгдагАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММ УМОВУ
ЕУНМАКТКРВЕЕОУМУТУВУМУМІ ТМІ НОБУМІ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУ
ТІ РРЗВЕЕМТКМОМВІ М/СІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОЗОО5ЕНІ УЗКІ ТМОКОВ
МООСММЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 5І 5РОК (5ЕО ІЮ МО:72) воа:пак- пІДСІ-Ес(ААХТЗ366М/)-(С45)5-СОЕ15 (А1-1112) (057) (00332) татгурадідПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМВІ СІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМООРЕММУКТТРРМІ О50С9ЕРКІ. 5БО / УЗКІ ТМОКЗВМ/ООСМУЄЗС5УМНЕАІ НМНУТОКЗВІ І ЗРОКОСОО50ССО50СО5АВМСТНСР
І ОСРОВССВІ НТУВАВІ ЕОЇ СМ'ДОМ/МІ ХРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕНААММНАОІКТОІ НВІ КРОТУ
РАРССУРАЗУМРМУПОКТОТСМ5І ОТУООІ І АКОСНСІ (5ЕО ІЮ МО:73) воБ:пІдК-пІДС1-Ес(ААХТ3665Х1-368АХУ 407) (00333)
ББ / татгурадідмідасоктНтсРРСРАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:74)
в1ба:підк- піІДС1-Ес(ААХТЗ6ОМ)-(С25)-СОБ15 (А1-112) (057) (00334) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК в / СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗІ МСІ МКОЕУРЗОІАМЕМ'ЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50СО5ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСММУЕ5СУУМНЕАІ НМНУТОКЗВІ ЗІ ЗРОКОСОСЗСООО5ССОО5бССО5АВ
МОТНСРІ СРОВССВІ НТУВАБІ ЕОЇ ОМ/АОМ/МІ З6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЕНААММНАОІКТІ НА
І КРОТУРАРССУРАЗУМРМУПОКТОТСУВІ ОТУООІ І АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:75) вВ10Б:пІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ З368АХУ 407) (00335) татгурадідмтдагсоктНтоРРСРАРАГ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВМУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУХООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 8І РОК (ЗЕО 10 МО:76) вВ1тахпідк- підС1-Ес(ААХТЗ66М)-(С45)5-С0Е15 (А1-І112) (057) (00336) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМУВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О5ЕНІ.
УЗКІ ТМОКЗВУМООСМУЄЗС5УМНЕАІ НМНУТОКОІ ЗІ ЗРОКОССОЗССОСЗОСООЗОССО5ОС
СО5АВМОСТНСРІ СРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ СМ/АОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАСІ
КТЗІНВІ КРОТУРАРССУРАЗУМРМУПОКТОТОМ5І ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:77)
В11р:пІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ 368АХУ 407) (003371 татгурадіїдмідасоктНтсРРСРАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 5І РОК (5ЕО І МО:76) вВіга:підк- підС1-Ес(ААХТЗ66М)-(С45)-АМ2-СОБ15 (М3-1112) (057)
Зо (00338) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50СО5ЕНІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСМУЕ5СУУМНЕАІ НМНУТОКЗВІ 5І ЗРОКОСОС5ССОО5МОТНСРІ СРСОВСС
ВІНТУВАБЗІЕОЇ СМ'ДОМ/МІ ЗРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАОІКТОІ НВІ КРОТУРАРССУР
АЗУМРММИПОКТОТСУВІ ОТУООГІ АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:78)
В12р:пІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ З368АХУ 407) (00339) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕУНМАКТКРВЕЄОУ МТУ ВУ ЗМІ ТМІ НОМУ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО І МО:79)
ВіЗахгіак- підс1-Ес(ААХт366М)-(С45)5-АМ2-СОЕ15 (М3-І112) (057) (00340) татгурадіідмігдасоктНтоРРСРАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50СО5ЕНІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСММЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКВІ І ЗРОКОСОСЗСОВССЗССсОСЗСсОСсСс5сС
СО5МОТНСРІ СРОВССВІ НТУВАБІ ЕТ ОМ/АОМ/МІ ЗРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАСІКТ
Бо ЗІНВІКРОТУРАРССУРАЗУМРМУПОКТОТОУВІ ОТО АКОСНСІ (ЗЕО 10 МО:80)
ВІЗБ:пІдК-пІдДС1-Ес(ААХТ3665ХІ1 368АХУ 407) (00341) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК 5в / СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗІ ЗСАУКСЕУРЗОІАМЕМ ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОЗ0О5ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:81)
Віда:підк- підС1-ЕсС(ААХТ366М)-(С45)5-АМ3-СОЄ15 (С4-І112)(821М) (00342) татгурадідПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ 60 КЕММУУМОСУЄУНМАКТКРВЕЄОУ МТУ ВУ МІ ТМІ НОМУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О5ЕНІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСММЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКВІ І ЗРОКОСОСЗСОВССЗССсОСЗСсОСсСс5сС
СО5СБОНСРІ ОРСОВССВІ НТУМАБІ ЕОЇ СМ'АОМ/МІ 6ХРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАОІКТО
І НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРММІ ОКТОТОМВІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:82)
В14Б:піІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ 368АХУ 407) (00343) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
МУКІ ТМОКЗВУООСМУЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКЗІ 8І РОК (ЗЕО 10 МО:83)
Ві5ахпак- підс1-Ес(дАХТЗ66М)-(С25)5-АМ3-СОЄ15 (С4-11123(523М/Е25Т) (00344) татгурадідПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУУТІ РРОВЕЕМТКМОУВІ М/СІ УКОЕУРЗОТАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСММЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКОВІ І ЗРОКОСОСЗСООВССЗСсСсОСсЗСсоСсС5сСс
СО5СБОНСРІ ОРСОВССВІ НТУВАМІ ТОЇ СМ/АОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЕЄВААММНАОІКТО
І НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРММІ ОКТОТСМІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:84)
ВІ15Б:пІДК-ПІдДС1-Ес(ААХТ3665Х1-368АХУ 407) (00345) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:85)
Віба:пак- підс1-Ес(ДАХТЗ66М)-(С45)5-АМ3-СОБ15 (С4-І1112Е52М/АБАТ) (00346) татгурадідПмтдагсоктНтоРРСРАРАЇ АСОРОУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМУВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50С5ЕРНІ.
УЗКІ ТМОКЗВУМООСМУЄЗС5УМНЕАІ НМНУТОКОІ ЗІ ЗРОКОССОЗССОСЗОСОСОЗОССО5ОС
СО5СБОНСРІ ОРСОВССВІ НТУВАБІ ЕОЇ СМ'АОМ/МІ 6ХРВЕМОУТМСІСАСРЗОМАТАММНАСІКТО
І НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРММІ ОКТОТОМІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:86) вВ16Б:пІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ З368АХУ 407) (003471 татгурадіїдмідасоктНтоРРСРАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:87) в17а:пак- підС1-Ес(дАХТЗ366М)-(С25)5-АМ3-СОЄЕ15 (С4-І112)/853М/АБ5Т) (00348) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМУВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50С5ЕРНІ.
УЗКІ ТУОКЗВМООСММЕЗС5УМНЕАІ НМНУТОКВІ І ЗРОКОСОСЗСОВССЗССсОСЗСсОСсСс5сС СО500ОНСРІ ОРОВССВІ НТУВАБІ ЕІ СМ'АОММІ ХРВЕМОУТМСІСАСРЗОЄМАТММНАОІКТО
І НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРММІ ОКТОТОМІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10 МО:88)
В17Б:пІдК-пІдС1-Ес(ААХТ3665ХІ З368АХУ 407) (00349) татгурадіюдПмтдасоктНтоРРСОРАРАЇ АСОРОЗУЕІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕМ
БО / КЕММ/УУОСМЕУНМАКТКРВЕЄОУМОТУВУУ ЗМІ ТМ НОБУЛІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМУЗВІ ЗСАУКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50О8ЕКІ.
УЗКІ ТУОКЗВУУООСММУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІ 9І РОК (5ЕО 10 МО:89)
Вівахіак- підс1-Ес(ААХТ366М)-(С25)5-АМ3-СОЄ15 (С4-1І112) (КОТ М/093Т) 00350)
ББ / татгурадідмідасоктНтсРРСРАРАЇ АСОРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОМЗНЕОРЕМ
КЕММ/УУОСМЕМНМАКТКРВЕЕОУМОТУВУМУ МІ ТМІ НОВУ МОКЕУКСКМУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМВІ МСІ УКОЕУРЗОТАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРРМІ О50СО5ЕНІ.
УЗКІ ТУОКЗВУМООСМУЕ5СУУМНЕАІ НМНУТОКЗВІ ЗІ ЗРОКОСООСЗСОООЗССОСЗСсССсОоО5со
СО5СБОНСРІ ОРСОВССВІ НТУВАБІ ЕОЇ СМ'АОМ/МІ 6РВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАОІКТО 60 1НВІКРОТУРАРССУРАЗУМРМУІОМТТТОУВІ ОТУООП АКОСНСІ (ЗЕО 10 МО:90)
в18р:піак-пІда1-Ес(ААХТ3665Х(1-368АХУ 407)
І0ОЗ51 татгурадіаШмтгдагсоОКтТНТСоСРРОРАРАЇ АФОРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМЗНЕОРЕМ
КЕМУМУрамЕУНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВАУУЗМІ ТМ НОУУІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК аОРВБВЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУ5І ЗБСАУКОаЕУРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБраЗЕНІ
УК ТУОКЗАМООаММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 51 РОК (5ЕО 10 МО:91)
В19а:ніак- піда1-Гс(АА)(Т366М/)- (Сса5)5-АМ3-а0Е15 (й4-І112)(093М/2957) (0ОоЗ52і татгурадіаШмтгдагсоОКтТНТСоСРРОРАРАЇ АФОРБЗУН ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМЗНЕО РЕМ
КЕММ/УМраТмЕМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУАМУМУБМІ ТМІ НОМУ МЕОКЕМКОСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРЗАВЕЕМТКМОУМБІ МС УКаЕМРЗОІАМЕМЕЗМИОРЕММУКТТРРМІ ОБООЗЕРІ.
УузКктМоКБАМОССММУЕЗС5УМНЕАІНМНУТОКБІ 5 ЗРОаОКСССОСЗСЯСО,ЗССа,осБаааавас сае5арнсРІСРОНССВІ НТУВАБІ ЕОМ АОМ/МІ ЗРВЕМОУТМСІСАСРЗОЕВААММНАОІКТО
ІНВ КРОТУРАРССУРАЗУМРММІОКТМТТУБГ ОТМОО І АКОСНОСЇ (5ЕО І МО:92) в19р:пІак-пІдс1-Ес(ААХТ3665Х(1-368АХУ 407)
І0ОЗ53) татгурадіаШмтгдагсоОКтТНТСоСРРОРАРАЇ АФОРБЗМУНБ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУМЗНЕОРЕМ
КЕМУМУрамЕУНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВАУУЗМІ ТМ НОУУІ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАК
СОРВЕРОМУТІ РРЗАВЕЕМТКМОМУ5І ЗСАУКИОЕМРЗБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОраБЗЕНІ.
МК ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО І МО:93)
Ї00354| Послідовності зрілого ЗОБ15 дикого типу людини (ЗЕО ІЮ МО) і глікомутеїни
СОРГ15, перераховані на Фіг. 28, які представлено наступним чином: 00355) ІдАК-дикого типу зрілого ООЕР15 людини
І0ОЗ56) татгтурадідшУлдатАвВМарнсРІ аРЕВССВІ НТУВАБІ ЕП! СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАБУМРМУІЮОКТОТОамМ5І ОТО АКОСНСІ (5ЕО 10
МО:108)
І00357| І4Кк-СОГ15-глікомутеїн К21М
І0ОЗ58) 0 татгурадідшУлдасАвВМарнсРІ аРЕВССВІ НТУМАБІ ЕП! СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАБУМРМУІЮОКТОТОаУБІ ОТМОБІ ГГ АКОСНСІ (5ЕО 1
МО:109) 00359) Із)Кк-СОЕ15-глікомутеїн КУЗМ/А55Т
І0ОЗ60О) татгурадідшУлдасАвВМарнсРІ аРЕВССВІ НТУВАБІ ЕП! СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІСАСРБО
ЕМАТММНАОІКТ5І НВ КРОТУРАРССУРАБУМРМУ ІОКТОТаМІ ОТО АКОСНСІ (5ЕО І
МО:110)
І00361| І4Кк-СОг15-глікомутеїн 564М/Н66Т (0оз62і татгтурадіашУЛлдатАВМарнНесРІ аРЕВССВІ НТУВАБІ ЕОЇ СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАСІКТМТВІ КРОТУРАРССУРАБУМРМУ ІОКТОТаМ5І ОТО АКОСНСІ (5ЕО І
МО:111) 00363) Із4к-СОЕ15-глікомутеїн Р7ОМ (0ОоЗ641 татгтурадідшУлдатАВМарнсРІ аРЕВССВІ НТУВАБІ ЕП! СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІВАСРБО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КМОТУРАРССУРАБУМРМУПІОКТОТОаУБІ ОТО ГАКОСНОСЇ (5ЕО 1
МО:112) 00365) Із4к-СОЕ15-глікомутеїн 090М
І0ОЗ66) татгурадідшУлдатсАвВМарнсРІ аРОЕВССВІ НТУВАБІ ЕП! СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАБУМРММУИІМКТОТамМ5І ОТО АКОСНОСЇ (5ЕО І
МО:113)
І00367| І4Кк-СОГЕ15-глікомутеїн КУ1М/9937Т
І0ОЗ68) татгурадідШшУлдатсАвВМарнсРІ аРОЕВССВІ НТУВАБІ ЕП! СУАОМ/МІ БРАЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАЗБУМРМУПІЮОМТ Там ОТО АКОСНСІ (5ЕО І
МО:114)
І00369| Із4к-СОЕ15-глікомутеїн 9093М/5957Т (00370 60 00 татгурадіднньмидасАвМарНсСРІ аРЕАВССВІ НТУВАБІ ЕП СМ АОМУМІ БРЕЕМОМТМСІСАСРБЗО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАЗУМРМУПІОКТМТТУБІ ОТМОРІ ГГ АКОСНОСЇ (5ЕО 1
МО:115)
І00371| Із4Кк-сОг15-глікомутеїн 595М 003721 татгурадіаШмгдагсАвВМарнНсРІ аРСАВССВІ НТУВАБІ ЕВ СУУАОМУМІ БРЕЕМОМТМСІСАСРБЗО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАБУМРМУПІОКТОТМУІ ОТМОБІГАКОСНСІ (5ЕО І
МО:116) 00373) І4Кк-СОгЕ15-глікомутеїн 597 М/2997Т 00374 татгурадіаШмгдагсАвВМарнНсРІ аРСЕАВССВІ НТУВАБІ ЕВ СУМАРМУМІ БРВЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАОІКТ5ОІ НВ КРОТУРАРССУРАБУМРМУОКТОТамумМІ ттМОрІГАКОСНОСІЇ (5ЕО І
МО:117) 00375) Із4Кк-СОЕ15-глікомутеїн І 98М 00376) татгурадіаШмгдагсАвВМарнНсРІ аРСЕАВССВІ НТУВАБІ ЕВ СУМАРМУМІ БРВЕМОМТМСІСАСРБО
ЕВААММНАОІКТОІ НВ КРОТУРАРССУРАЗУМРМУ ІЮОКТОТаУЗМОТМОБИ АКОСНОСІ (5ЕО І
МО:118)
Ї00377| Молекули СОЕ15 були експресовані з використанням сигнального пептиду ДК, який відплювався від секретованого поліпептиду сигнальною пептидазою, яка експресується 293 клітинами. Відновлення зрілого ЇзОЕ15 дикого типу людини (5ЕО ІЮО МО:1) і глікомутеїни ООЕ15 перераховані на Фіг. 28.
ЇО0О378| Ілюстративні глікомутеїни (ЗОЕ15, які можуть бути експресовані як Ес-
Ес(виступ/западина)СОРЕ15 глікомутеїни , описані в О55М14/811578, яку подано 28 липня 2015 року.
Приклад 2: Вплив (Ес/Рс)-С0ОР15 злитих молекул на масу тіла і прийом їжі у мишачої СІЮ моделі
Ї00379| Вплив підшкірного введення гібридної молекули, яка містить рекомбінантний Ес- гетеродимер, злитий з рекомбінантим СОБЕ15 людини (тобто , комплекс з двох гетеродимерів, кожен гетеродимер, який має Ес-поліпептид, який димерізовано з поліпептидом Есо-СОЕ15
Зо глікомутеїну), на масу тіла було оцінено протягом 35-денного періоду. Коротко, злиті молекули
В9а/веБ, В1тТа/В1тЬ і ВІЗза/В136 вводили щотижня протягом 21 доби в дозах від 0,4 нмоль/кг і 4 нмоль/кг у вигляді одноразової підшкірної болюсної ін'єкції (10 мл/кг) БІО мишам масою приблизно 35-40 г. Після введення контрольного наповнювача або злитих молекул, зменшення маси тіла спостерігалося в різних часових точках протягом 35-денного періоду, який містив 21- денну схему прийому білка з наступною 14-дненним промиванням (після введення дози) для моніторингу ефективності.
І00З80)| Як показано на Фіг. 3-6, введення Ес-злитих молекул (гетеродимер-гетеродимерний комплекс) у дозі від 0,4 нмоль/кг і 4 нмоль/кг призвело до значного зменшення маси тіла. У кожній групі мишей, п - 6 і р-значення (", р«0,05; 7, р«0,015 и, р«е0, 001, нз - не значимо) визначали за допомогою непараметричного Т-критерію Ст'юдента при порівнянні контрольної групи, яка одержувала носій, у кожний зазначений момент часу. Як зображено на Фіг. 7, загальну вагу тіла з аналізом 5ЕМ показано в кожен момент часу взяття проб для всіх груп. Як зображено на Фіг. 8, зміни в масі тіла (г) з аналізом 5ЕМ і р-значеннями показані в кожен момент часу взяття проб для всіх груп. Як зображено на Фіг. 9, відсоток зміни маси тіла (95) з аналізом ЗЕМ і р-значеннями показано в кожен момент часу взяття проб для всіх груп.
І00ОЗ81| Як зображено на фіг. З і 5, спостерігається збільшення ефективності зменшення ваги тіла для ВіЗа/В13р у порівнянні з В9да/ВО9Б ї В1т1а/В11Б6 в 0,4 нмоль/кг досліджуваної дози.
Підвищена ефективність /л мімо для ВіЗа/В135 пояснюється підвищеною стабільністю за рахунок скорочення 2 М-кінцевих залишків СОР15 (ДАВ). 00382) У цьому документі описано конкретні варіанти реалізації цього винаходу, включаючи найкращі способи його здійснення, відомі авторам. При читанні вищенаведеного опису для осіб, які працюють в цій галузі техніки, можуть стати очевидні зміни описаних варіантів реалізації, і очікується, що досвідчені фахівці можуть при необхідності використовувати такі зміни.
Відповідно, передбачається, що на практиці винахід буде використано інакше, ніж це описано в цьому документі, і що даний винахід включає всі модифікації та еквіваленти предмета винаходу, які викладено у формулі винаходу, яка додається до цього документу у відповідності з діючим законодавством. Крім того, будь-яка комбінація вищеописаних елементів у всіх можливих варіантах охоплюється винаходом, якщо інше не зазначено в цьому документі, або іншим чином явно не суперечить контексту.
00383) Всі публікації, патентні заявки, облікові номери та інші джерела, згадані в цьому описі, включено в цей документ шляхом посилань для всіх цілей, як якщо б кожна окрема публікація, патент або патентна заявка були спеціально та окремо включені шляхом посилання.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 МОМ ВІОРНАЕМАСЕОТІСАТ5, Іпс.
ЗзПеп, Шепуап тіпапоце, Баггіп А.
На1ідаапКат, Ва)
МасСекп, Нидо «1205 КОМПОЗИЦІЇ І СПОСОБИ ЛІКУВАННЯ МЕТАБОЛІЧНИХ РОЗЛАДІВ «1305 МоМв-142у0 «1505 0562/073737 «1515 2014-10-31 «1505 05 462/244604 «1515 2015-10-21 «1605 136 «1705 РагепсІпПп версії 3.5 «2105 1 «2115 112 «2125 ПРТ
Зо «2135» Ното зарієпз «4005 1
А1ї1а Агуд Азп б1у Авр Нів Сув Рго їец біу Рго СсС1у Агкд Сув Сув Агд
З5 1 5 19 15
Пец Ніз ТПг Уаї Агд Аїа бет їеец Сі Авр їєц С1іу Тгр Аїа Азр Тгр 20 25 30 40 уаї Гей бек Рго Акд сіц Уаії Сіп Уаі ТПх Меєс Сув Іїе С1у Аїа Сув 45
Рго бек біп Рбе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа сбіп І1їе Ппув ТНг бек бо 50 їец Нів Акд тей пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго А1їа Рго Сув Сув Уа1 Ркго 65 70 75 80
А1а бБет Тут Авп Ркго Меє Уаї еп І1е біп ув ТПтІ Авр ТПтІ с1у Уаї 55 85 30 95 бек гец біп ТПІ Тук Авр Авр їец Гец Аїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 100 105 110
«2105 2 «2115 232 «2125 ПРТ «2135» Ното зарієпз «4005 2 сі Рко пув Бек Сув Авр Туз ТПтІ Нів ТПтї Сув Рго Рго Сув Рго А1а 1 5 10 15
Рто біп гей ге біу біу Рго бек Маі1ї Рпе Гецп РпПе Рго Рго Гув Рго
Туз Авр ТПІ Ггецп Ме Іїе бек Агуд ТПх Рго біц Уаі1і ТПтї Сув Уа1ї Уаї 20 уа1ї1 Авр Уаї бек Нів Сі Авр Рго сі Уа1і! Гув Ріре Авп Тгр Туг Уаї1ї бо 25
Авр сіу Уаї біцш уа1ї Ніз Авп Аїа Гпув ТПг туз Рго Агд сб1ц Сі б1п 65 70 75 80
Зо Тут Авп обех ТПтІ Тук Агуд Уа1! Уа1ї Бек Уаі1і ПГец ТПкг Уаї Ієц Нівз СсІіп 85 Зо 95
Авр Ттр Гец Авп сіу пув сіц Тут Гпузв Сув гув Уаії бБет Авп Гув А1а
З5 1600 105 110
Теп Рго Аїа Ркго І1е бі пув ТПхКх Іїе Бех їув Аїа Гув с1у сіп Рго 115 120 125 40
Атд бі Рго сіп Уаії Тут ТПтї Гец Рго Рго бБет Агд Авр біц Тец ТПг 130 135 140 45
Тув Авп сіп Уаї бек Гей ТПх Сув Ге Уа1і! Гув о1у РПпе Тук Ркго бек 145 150 155 160 50 Авр чІї1е Аїа Уаї Сіц Тгр сбіц бек Авп сіу біп Рго бій Авп Авп Туг 165 170 175
Туз ТПжї ТПт Рко Рго Уаії Ггецп Авр бек Авр сіу бБет РПпе РПе Гей Тук 55 180 185 190
Ззек Ггпув Гей ТПх Уаі1і Авр пув бБегхт Атуд Ттр сбіп сбіп с1у Авп Уа1 РБПе
195 200 205 бек Сув бБет Уа! Меє Нів сіц АТїа Гец Ніз Авп Ніз Тугк ТПг с1іп Гув 210 215 220
Зек Гец бек Ггецп бек Рго б1Уу Гуз 225 230 «2105 З «2115 347 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 З
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
Зо І1е Бех Акуд ТПт Ркго Сіц Уа! ТПт Сув Уа1 Уа1ї Уаї Авр Уа1! бек Нів біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 35 50 зо бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80 40
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95 45
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 сі пузв ТП Іїе бБег Гув Аї1а Пув с1у сіп Рго Акуд бі Рго сіп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц
145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго сСі1у ув біу сбіу с1у сіу Бек біу сіу сбіу сіу бБет Авп б1у ТіПг 225 230 235 240
Ніз Сув Рго Гец С1у Рго б1у Агд Сув Сув Агд їец Ніз Трх Уаї Агд 245 250 255
А1їа бБет Гец сбіц Авр Гец сіу Тгтр Аї1а Авр Тгр Уаії їец бБет Ркго Агд 260 265 270
Зо сі Маї сбіп Маії ТПтІ Меє Сув І1е сС1у Аїа Сув Рго бБет біп Рпе Агд 275 280 285
З5
А1ї1а Аза Азп Меє Ні АТа СсСіп І1е Ппуз ТПг бетг їец Нів Агд Іец Гуз 290 295 300
Рго Авр ТПт УМаі1і Рго Аїа Рго Сув Сув Маі Рго Аїа бБет Тут Авп Рго 305 310 315 320
Меє Уаї Ггецп Іїе сіп пув ТПтІ Авр ТПї біу УМаії Бек Гец сіп ТПтг Туг 325 330 335
Авр Авр їец Тїецш Аїа Гуз Авр Суз Нів Сув І1е 340 345 «2105 4 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
«4005 4
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 19 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Нів Авп о Атїа Ггув ТПкг Гуз Рго Агд сі сі сб1п Тук Авп бек Тіт Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Тед Азп с01У 85 30 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110
Зо біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго сіп Уаї 115 120 125
З5
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Тец бек Сув Аїа Уаї Гуз с1у Рпе Тут Рго бБег Авр І1ї1е Аза Уаї сі1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РіПе Гей Уаії бек пув Гецп ТПт Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тук ТПт біп пув бет Пец бек Гец 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 -5 «2115 362 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 (5
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 сС1у Рго Бек Ма1 Рпе Гец Рпе Рго Рго Пув Рго ПЦув Авр ТПт Гец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї бо
Зо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
З5
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95 40 пув сі Тук гпув Сув КГув Уа1ї бБег Авп ув Аїа Гей Рго Аїа Рго Іїе 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 45 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140 50 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160 55
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Нів сСіц АтТа те Нів Авп о Нів Тут ТПг сСіп Пув бекг Іец бек Іец бег 210 215 220
Рго сб1у пув б1у біу бі1у сб1у Бех с1у сіу сіу сі1у бек с1у с1у ЗУ 225 230 235 240 сСіу бек с1у сС1у сбі1у сС1у бек біу с1у сС1у б1у бек Авп бі1у ТПркЕ Нівз 245 250 255
Сув Рго Гец біу Рго Сс1у Агд Суз Сув Агд їеєц Нів ТПтІ Уаї Агд Аї1а 260 265 270
Ззек гей бі Авр Ге біу Тгтр Аїа Авр ТІр Уаі еп бек Рго Аг бі1ц 275 280 285
Зо Ууаї сбіп Уа1ї ТПг Месє Сув Іїе б1у Аза Сув Рго Бек сбіп Рпе Агуд Аїа 290 295 300
А1ї1а Авп Меє Нів Аїа сСіп Іїе Гуз ТПї бег Тед Нів Агд Тец Гув Рго 305 310 315 320
Авр ТПІ УМаії Рго Аїа Рко Сув Сув Уаі Рго Аза бет Тут Авп Рго Меє 325 330 335 уаї гецш Іїе сіп Гпув ТПтІ Авр ТПтІ Сіу Уаії бБет ге сіп ТПт Тут Авр 340 345 350
Авр їец їец АТїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 355 360 «2105 6 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 6
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
І1е Бех Акуд ТПт Ркго Сіц Уа! ТПт Сув Уа1 Уа1ї Уаї Авр Уа1! бек Нів 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110
Зо сі пузв ТП Іїе бБег Гув Аї1а Пув с1у сіп Рго Акуд бі Рго сіп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 б1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет Ппув Гецп ТПт Уаї 180 185 190
Авр гув Бек Агд Ттр біп сбіп б1у Авп Уаі РПпе бек Сув Бек Уа! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПкг біп Гув бет Гєц бек Гец 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг
«2105 7 «2115 361 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 17
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сіц Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 25 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї бо
Зо Нів Авп о Атїа Ггув ТПкг Гуз Рго Агд сі сі сб1п Тук Авп бек Тіт Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ
З5 85 30 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 40 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125 45
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140 50 Теп Тер Сув Ггец Уаї Гуз с1у Рпе Тут Рго бБег Авр І1е Аїа Уа1ї сі1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 55 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї
180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго сб1у пув б1у біу бі1у сб1у Бех с1у сіу сіу сі1у бек с1у с1у ЗУ 225 230 235 240 сСіу бек с1у сС1у сбі1у сС1у бек біу с1у сС1у б1у бек С1у Авр Нів Сув 245 250 255
Рго їец с1у Рко с1у Акд Сув Сув Агд їец Нів ТПт Уаї Авп А1їа 5ег 260 265 270 теп січ Авр Гец сі1у Тгр Аїа Авр Тгтр Уаі1ї Гец бБет Рго Акд сі Уаї1ї 275 280 285
Сбіп Ма1і ТПІ Мес Сув І1ї1е с1у Аїа Сув Рго бБет біп Рпбе Агуд Аїа А1а 290 295 300
Зо
Авп Меє Ніз АТїа сіп І1ї1е Пув ТПт бек їец Нів Агд їец Гув Рго Авр 305 310 315 320
З5
ТПкх Уаії Рко А1їа Рго Сув Сув Уаі1 Рго Аїа бБет Тут Авп Рко Меїс Уаї1ї 325 330 335
Тїеш Іїе сіп пув ТПтІ Авр ТПг сіу Уаії бек Гей сіп ТПтї Тут Авр Авр 340 345 350 печ їец АТїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 355 360 «2105 8 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 8
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу
1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атуд Уа1 Уа1ї Бек Уа1і! Іец ТПг Уаї їец Нів Сіп Авр Тер Іец Авп сС1Уу 85 90 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 1600 195 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Зо
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
З5
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
ТЕр сій бБег Авп о сбіу сбіп Рго сій Авп Авп Тут Гув ТПтІ ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225
«2105 139 «2115 361 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 19
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Ієц Аїа с1Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 І1е Бех Акуд ТПт Ркго Сіц Уа! ТПх Сув Уаї Уа1ї Уаї Авр Уа1ї! бек Нів біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 25 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ пув Рго Агд Сі бі Сіп Тут Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Зо
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
З5
Туз січ Тут Гпув Сув гув Уаії бек Авп Гув Аїа Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 40 сі пузв ТП Іїе бБег Гув Аї1а Пув с1у сіп Рго Акуд бі Рго сіп Уаї 115 120 125
Тук ТПх Гец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 45 130 135 140 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго с1у ув сіу сбі1у сіу сіу Бек сіу сб1у сіу сіу Бех с1у с1у о1Уу 225 230 235 240 сСіу бек с1у сС1у сбі1у сС1у бек біу с1у сС1у б1у бек С1у Авр Нів Сув 245 250 255
Рго гец біу Рго СсС1у Агд Суз Сув Агд Тїец Нів ТПтІ Уаї Агд Аїа Азп 260 265 270
Те ТПтІ Авр Гец сі1у Тгр Аїа Авр Тгтр Уаі1ї Гец бБет Рго Акд сі Уаї1ї 275 280 285
Сбіп Ма1і ТПІ Мес Сув І1ї1е с1у Аїа Сув Рго бБет біп Рпбе Агуд Аїа А1а 290 295 300
Зо Авп Меє Ніз Аїа сСіп І1е пув ТПтї бек Іец Нів Агд їец Гув Рго Авр 305 310 315 320
ТПкх Уаії Рко А1їа Рго Сув Сув Уаі1 Рго Аїа бБет Тут Авп Рко Меїс Уаї1ї
З5 325 330 335 теп І1ї1е сіп пув ТПї Авр ТПх біу Уа1 бек їец біп ТПтї Тук Авр Авр 340 345 350 печ їец АТїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 355 360 «2105 10 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 10
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 бі Авр Рго сіц Уаї Гпув Рпе Авп Тгтр Тук Уаі Авр с1у Ма1 сіц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Зо Тут ТПг Гей Рго Рго Бех Агд сій біц Меє ТПг Гув Авп біп Уаї 5ег 130 135 140
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Нів сСіц АтТа те Нів Авп о Нів Тут ТПг сСіп Пув бекг Іец бек Іец бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 11
«2115 361 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 111
Авр Пув ТПтІ Нів ТПг Сув Рго Рго Сув Рго А1їа Рго А1їа теп А1ї1а С1У 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уаї бБег Ніз 20 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї бо 25
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі Сіп Тут Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Зо Атуд Уа1 Уа1ї Бек Уа1і! Іец ТПг Уаї їец Нів Сіп Авр Тер Іец Авп сС1Уу 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і Бек Авп Гув Аїа Гей Рго Аза Рго Пе
З5 1600 195 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125 40
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Атд біц біц Меє ТПт Гув Авп сіп Уаї1ї бек 130 135 140 45 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160 50 ТЕр сі бБег Авп о сбіу сбіп Ркго сіц Авп Авп Тут Гув ТПт ТПхг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 55 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгтр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє
195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго сб1у пув б1у біу бі1у сб1у Бех с1у сіу сіу сі1у бек с1у с1у ЗУ 225 230 235 240 сСіу бек с1у сС1у сбі1у сС1у бек біу с1у сС1у б1у бек С1у Авр Нів Сув 245 250 255
Рго гец біу Рго СсС1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТПтІ Уаї Агд Аїа бек 260 265 270 теп сбі1цп Авр гец сіу Тгр Аїа Авр Тгр Уаі! Гей бБег Рго Акд бі Уаї 275 280 285
Сбіп Ма1і ТПІ Мес Сув Ії1е с1у Аїа Сув Рго бБет біп Авп Агуд ТПт А1а 290 295 300
Авп Меє Ніз АТїа сіп І1ї1е Пув ТПт бек їец Нів Агд їец Гув Рго Авр 305 310 315 320
Зо
ТПкх Уаії Рко А1їа Рго Сув Сув Уаі1 Рго Аїа бБет Тут Авп Рко Меїс Уаї1ї 325 330 335
З5 теп І1ї1е сіп пув ТПї Авр ТПх біу Уа1 бек їец біп ТПтї Тук Авр Авр 340 345 350 їец Ггец Атїа Гув Авр Сув Нів Сув І1е 355 360 «2105 12 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 12
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа с1Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє
20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сіц Уа1! ТБк Сув Уа1ї Уаї Уаї Авр Уа1! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Ггув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95 пув сі Тук гпув Сув КГув Уа1ї бБег Авп ув Аїа Гей Рго Аїа Рго Іїе 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Зо
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
З5
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175
Ууаї Гей Авр бБег Авр біу бек РПпе РПпе Гей Уаії бек Гпув Гец ТПт Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 13 «2115 361 «2125 ПРТ
«213» Штучна послідовність «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 13
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 бі Авр Рго сіц Уаї Гпув Рпе Авп Тгтр Тук Уаі Авр с1у Ма1 сіц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Зо
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза їецй Рго Аза Рго Пе 100 105 110
З5 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Тут ТПг Гей Рго Рго Бех Агд сій біц Меє ТПг ув Авп о біп Уаї 5ег 130 135 140 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп о Авп Тут Гпув ТПтї Ток Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув Бех Агд Тгр сіп сіп с1у Авп Уа1ї РпПе бБег Сув бБет Уа! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго сб1у пув б1у біу біу сбі1у Бех сбі1у сі1у сС1у с1у бек с1у сб1у ЗУ 225 230 235 240 сСі1у Бек сі1у с1у сС1у с1у бек сі1у сС1у с1у сС1у бек С1у Авр Нів Сув 245 250 255
Рго гец бі1іу Рго СсС1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТПтІ Уаї Агд Аїа бек 260 265 270 теп січ Авр Гец сі1у Тгр Аїа Авр Тгтр Уаі1ї Гец бБет Рго Акд сі Уаї1ї 275 280 285
Сбіп Ма1і ТПІ Мес Сув І1ї1е с1у Аїа Сув Рго бБет біп Рпбе Авп Аїа ТПг 290 295 300
Авп Меє Ніз АТїа сіп І1ї1е Пув ТПт бек їец Нів Агд їец Гув Рго Авр 305 310 315 320
Зо ТПг Маії Ркго Аза Рго Сув Сув Уаії Ркго Аїа бБет Тут Авп Рко Меє Уаї 325 330 335 теп І1ї1е сіп пув ТПї Авр ТПх біу Уа1 бек їец біп ТПтї Тук Авр Авр 340 345 350 печ їец АТїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 355 360 «2105 14 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 14
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Ієц Аїа с1Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТІ Сув Уа1ї Уаї Уаї Авр Уаї бБег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Нів Авп о Атїа Ггув ТПк Гуз Рго Агуд бі сі С1іп Тук Авп бек ТПтг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув гув Уаії бБет Авп ув Аїа Гей Рго Аза Рго Ше 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бБет Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Зо Тец бек Сув Аїа Уаї Гуз с1у Рпе Тут Рго бБег Авр І1е Аїа Уа1ї сі1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго
З5 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Ркго с1Уу Гув 225 «2105 15 «2115 361 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 15
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 сС1у Рго Бек Ма1 Рпе Гец Рпе Рго Рго Пув Рго ПЦув Авр ТПт Гец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Зо пув сі Тук гпув Сув КГув Уа1ї бБег Авп ув Аїа Гей Рго Аїа Рго Іїе 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140 теп Ткр Сув Гец Уа1ії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТБбкг Рго Рго 165 170 175
Ууаї Гей Авр бБег Авр біу бек РПпе РПпе Гей Тут бек Ппув Гец ТПт Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бБег Сув бБет Уа! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег
210 215 220
Рго с1у пув б1у бі1у бі1у с1у Бех со1у сі1у сС1у б1у бек б1у С1у У 225 230 235 240 сСіу бек с1у сС1у сбі1у сС1у бек біу с1у сС1у б1у бек С1у Авр Нів Сув 245 250 255
Рго гец біу Рго СсС1у Агд Суз Сув Агд їец Нівз ТртІ Уаї Агд Аїа бек 260 265 270 теп січ Авр Гец сі1у Тгр Аїа Авр Тгтр Уаі1ї Гец бБет Рго Акд сі Уаї1ї 275 280 285
Сіп Маї ТПпПк Мес Сув Іїе с1у Аїа Сув Рго Бех біп Рпе Агд Аїа Аїа 290 295 300
Авп Меє Ніз АТїа сіп І1ї1е Пув ТПт бек їец Нів Агд їец Гув Рго Авр 305 310 315 320
ТПкх Уаії Рко Аїа Рго Сув Сув Уа1 Рго Аїа бБет Тут Авп Рко Меїс Уаї1ї 325 330 335
Зо теп І1ї1е сіп Азп ТПтї ТБПхїх ТБПх біу Уа1 бек їец біп ТПтї Тук Авр Авр 340 345 350
З5 печ їец АТїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 355 360 «2105 16 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 16
Авр Пув ТПтІ Нів ТПг Сув Рго Рго Сув Рго А1їа Рго А1їа їец А1їа СсС1Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уаї бБег Ніз
35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Тут Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аїа Гей Рго Аза Рго Пе 100 105 110 сі пузв ТП Іїе бБег Гув Аї1а Пув с1у сіп Рго Акуд бі Рго сіп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд біц біц Меє ТПт Гпув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
Зо
ТЕр сіц бБет Авп с1у біп Рго біц Авп Авп Тут Гув Тіт ТБбк Рго Рго 165 170 175
З5 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр гув Бек Агд Ттр біп сбіп б1у Авп Уаі РПпе бек Сув Бек Уа! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 17 «2115 361 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
«4005 17
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 19 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Нів Авп о Атїа Ггув ТПкг Гуз Рго Агд сі сі сб1п Тук Авп бек Тіт Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Азр Тер Те Азп 01уУ 85 30 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110
Зо біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
З5
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп сіп Уа1ї бек 130 135 140
Теп Тер Сув Ггец Уаї Гуз с1у Рпе Тут Рго бБег Авр І1е Аїа Уа1ї сі1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рго с1у пув б1у бі1у бі1у сб1у Бех с1у сіу сіу сі1у бек с1у С1у У 225 230 235 240 сСіу бек с1у сС1у сбі1у сС1у бек біу с1у сС1у б1у бек С1у Авр Нів Сув 245 250 255
Рго їец с1у Рко с1у Акд Сув Сув Агд їец Нів ТПт Уаї Агуд А1а 5ег 260 265 270 теп січ Авр Гец сі1у Тгр Аїа Авр Тгтр Уаі1ї Гец бБет Рго Акд сі Уаї1ї 275 280 285
Сбіп Ма1і ТПІ Мес Сув І1ї1е с1у Аїа Сув Рго Бех біп Рпе Агд Аїа А1а 290 295 300
Авп Меє Ніз АТїа сіп І1ї1е Пув ТПт бек їец Нів Агд їец Гув Рго Авр 305 310 315 320
ТПкх Уаії Рко А1їа Рго Сув Сув Уаії Рго Аїа бет Тут Авп Рго Меїс Уаї1ї 325 330 335
Зо Те Іїе сіп пув ТПтї Авп о ТПг ТпПг Уаії бБет Гей сіп ТПтІ Тут Авр Авр 340 345 350 печ теп АТїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е
З5 355 360 «2105 18 «2115 227 40 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду 45 «4005 18
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 50 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30 55
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атуд Уа1 Уа1ї Бек Уа1і! Іец ТПг Уаї їец Нів Сіп Авр Тер Іец Авп сС1Уу 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза їецй Рго Аїа Рго Пе 1600 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд бі бі Меєсє ТПтІ Гув Авп біп Уа1ї бек 130 135 140
Те бБет Сув Аї1а Уаі Гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
Зо ТЕр сій бБег Авп о сбіу сбіп Рго сій Авп Авп Тут Гув ТПтї ТК Рго Рго 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Уаії бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авп Уа1ї РпПе бБег Сув бБет Уа! Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 19 «2115 14 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 19 сіу с1у о1у 5бБег «2105 20 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 20 сіу б1у с1у о1у 5бБег 1 5 «2105 21 «2115 4 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 21
Зо сі1іу сб1у Бех щ1У 1 «2105 22 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 щД 22 сіу б1у бек б1у Щ1У 1 5 «2105 23 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 23 сіу бек б1у Бех щЩ1У
1 5 «2105 24 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 24 сіу бек б1у с1у -щЩ1У 1 5 «2105 25 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
«4005 25 сіу б1у сС1у Бех щЩ1У 1 5
«2105 26 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 26 сіу бек бек бБех 1У 1 5
«2105 27 «2115. 5 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність
«2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 27 сіу с1у сС1у с1у щЩ1У 1 5
«2105 28 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 28 сбіц с1у с1у о1у 5бБег 1 5 «2105 29 «2115 4 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215 МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (2)..(3) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-яку амінокислоту
Зо «2205 «2215 МІ5С РГЕАТОВЕ «222» (4)..(8) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-яку гідрофобну амінокислоту «4005 29
Рго Хаа Хаа Хаа 1 «2105 30 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215 МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (2)..(3) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-яку амінокислоту «2205 «2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«2225 (4)..(84) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-яку гідрофобну амінокислоту «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (5)..(5) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-який бег або ТПг «4005 30
Рго Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 «2105 31 «2115 6 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (2)..(2) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-який Іецй або с1іп «4005 31
Рхто Хаа Сіу Ме ТПкК бек 1 5 «2105 32 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (2)..(2) «223» амінокислота в цьому положенні може являти собою будь-який Іецй або с1іп «4005 32
Рто Хаа Сіу Меє ТіК 1 5 «2105 33
«2115 10 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 33
Сув с1у Гей Уаі Рго Аїа с1у Бек с1у Рго 1 5 10 «2105 384 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 384
Ззек Гей Ггецп гув бек Акуд Мес Уаї Рго Авп Ропе Авп 1 5 10 «2105 35 «2115 12 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 35 зек гей ге Іїе Аїа Агуд Агуд Мес Рго Авп Ропе Авп 1 5 10 «2105 36 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 36 зек Гуз Ггецп Уаі1 біп Аїа бБег Аїа Бех сіу Уа1і Авп 1 5 10 «2105 37 «2115 12 «2125» ПРТ
«213» Штучна послідовність «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 37
Зек бек Тут Ггец гув Аїа бБег Авр Аїа Рго Авр Авп 1 5 10 «2105 38 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 38
Атуд Ргто Пув Рго сіп сіп Рпе Рпе с1і1у Ге Меє Авп 1 5 10 «2105 39 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 39
Ззек Гей Агд Рго Ге Аїа Тей Ттр Агд Бет Рпе Авп 1 5 10 «2105 40 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 40 ек Ркго біп сіу Іїе Аїа сіу Сбіп Агд Авп Рпе Авп 1 5 10 «2105 41 «2115 14 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 41
Авр уаі Авр сб1іц Агкуд Авр Уаі Акд б1іу Рбе Аїа бет РПе Іец 1 5 10 «2105 542 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 42 зект Гей Рго Пец сіу Гецп Тгр Аїа Рго Авп Рпе Авп 1 5 10 «2105 43 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 43
Ззек Гей Ггецп Іїе Рпе Агуд бБег Ттр Аїа Авп Ропе Авп 1 5 10 «2105 54 «2115 12 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 444
Ззек бі1у Уаії Уа1 Іїе Аїа ТПтІ Уаї Іїе Уаі Іїе ТПк 1 5 10 «2105 45 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
«4005 45
Ззек Гей б1у Рго біп б1у Іїе Тгтр с1у сіп Рпе Авп 1 5 10 «2105 46 «2115 12 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 46
Туз Кпув бБет Ркго с1у Агд Уа1 Уа1 сіу с1у бБет Уаї 1 5 10 «2105 47 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 47
Рго біп б1у ге еп С1у Аїа Рго с1у Іїе Ге 1Уу 1 5 10 «2105 48 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 48 сіу сб1у сб1у Бех сіу сіу сіу бБехт Іїе бій с1у Агд 1 5 10 «2105 49 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 49 сіу Рго біп с1у Гец Аїа сіу сіп Акд Сс1у Іїе Уаї 1 5 10 «2105 50 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 50 сіу сб1у бек о1у сбіп Акд сіу Акд пув Аїа ей бі1ц 1 5 10 «2105 51 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 51
Зо зет Гей б5Бет Аїа Тецп Гец бег бБетг Авр Іїе РпПпе Авп 1 5 10 «2105 52 «2115 12 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 щЩ 52
Ззек Гей Рго Агуд Рпе пув Іїе Іїе с1у с1у Рпе Авп 1 5 10 «2105 53 «2115 12 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 53
Ззек гей ге б1у Іїе Аїа Уаї Рго б1у Авп Ропе Авп
1 5 10 «2105. 54 «2115 12 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 54
Рпе Рпе Гуз Авп Іїіе Уа1 ТПг Рго Агуд ТПтг Рго Ркго 1 5 10 «2105. Кю55 «2115 227 «2125 ПРТ «2135» Ното зарієпз «4005. з55
Авр Пув ТПтІ Нів ТПг Сув Рго Рго Сув Рго А1їа Рго СсС1іц Іец Ієц С1У 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє
Зо 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз
З5 біЧ Авр Рго біц Маії Гпув Рпе Авзп Тктр Тут Уа1 Авр сі1у Уаї біц Уаї бо 40
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80 45 Атуд Уа1 Уа1ї Бек Уа1і! Іец ТПг Уаї їец Нів Сіп Авр Тер Іец Авп сС1Уу 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза їецй Рго Аза Рго Пе 50 1600 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБег Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Акд бій Рго біп Уаї 115 120 125 55
Тук ТПт Ггец Рко Рго бек Агд біш біцш Меє ТПт ув Авп біп Уа1ї бек 130 135 140 теп ТПт Сув Гец Уаії гуз б1у Рбе Тук Рго бБет Авр Іїе Аїа Уа1 с1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп о Авп Тут Гпув ТПтї Ток Рго Рго 165 170 175 уаї Гей Авр бБет Авр сіу бБет РПе РПе Гей Тут бет пув Тїецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр гув Бек Агд Ттр біп сіп б1у Авп Уаі! Рпе бек Сув Бек Уаї Меє 195 200 205
Ніз с1п АТїа Пец Нівз Авзп Нів Тут ТПг біп Гуз бет Пец бек Ієц 5бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 (56 «2115 9569 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
З5 «4005 56 ассасддаса єдадддіссс сдсісадсеіс сгЕдддасЕСсССсС гЕдстасестд дсеЕссдаддве бо чдссачаєсде 69 «2105 -1357 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 57
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
Ууаї Авр с1у Уа1 сіц Уа1! Нів Авп А1ї1а їГув ТПг Гуз Рго Агд Сі Сс1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 1600 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Зо
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гецп Туг Сув Гец Маї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РіПе Ієц 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Туг Тірт Ссіп 225 230 235 240 пув бек Гей бБет Гец бек Рго сіу Гув біу сіу сб1і1у сі1у бек б1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у с1у Бек сі1у сі1у «(1У 260 265 270 сСі1у бек с1у Авр Нів Сув Рго Іїец С1у Рго С1у Агд Сув Сув Акд Іец 275 280 285
Ніз ТрпхїІ Уаї Агд Аї1а бек їец С1ц Авр Гец С1у Тгр Аза Авзр Тгр Уаї1 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаі Сіп Уа1 ТПх Меєсє Сув І1їе с1у Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Рпбе Агд Аїа Аїа Авзп Месє Ніз Аїа сСіп І1їе Гуз ТіПг бБетг Іеєц 325 330 335
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 ет Тут Авп Рго Меєс Уаії Гец Іїе Сіп Пув ТПг Авр ТПт С1у Уаї1ї 5ег 355 360 365
Пец б1іп ТБкг Тут Авр Авзвр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е
Зо 370 375 380 «2105 58 «2115 2459
З5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду 40 «4005 58
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 45 їпец Агд сС1у Аза Агд Сув Авр Гув ТПт Ніз Тбк Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30 50
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 55 Рго Гув Авр ТПтї Те Мес І1ї1е бБег Агу ТПтї Рго сіц Уа1і ТПк Сузв Уаї бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
Ууаї Авр с1у Уа1 сіц Уа1! Нів Авп А1ї1а їГув ТПг Гуз Рго Агд Сі Сс1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 1600 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гецп ТПг Сув Гец Маї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп
Зо 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
З5
ТПх бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпув бек Гей бБет Пец бек Рго сіу Гув 245 «2105 59 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 59
Ме Авр Мес Агд Уаі Рго Аїа сіп Гей Гей с1у гецп Гец Гец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аза Акд Сув Авр Гуз ТБг Нів ТБтг Сув Рго Рго Сув Ркго 20 25 30
Аза РгІо Аїа Гец Аїа сіу с1іу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБет Уа1і! Іїец ТПг Уаї1ї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз
Зо 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
З5
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп ТПкх Сув Гей Уаії пув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
ТПх бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270
Сіу бек С1у Авр Нів Сув Рго їец сС1у Рго бі1у Агд Сув Суз Агд Іец 275 280 285
Нів ТрПт Уаї Агуд Аїа бег їец Сіц Авр Іїец СсС1у Тгр А1ї1а Авр Тгр Уаї1ї 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаі Сіп Уа1 ТПх Меєсє Сув І1їе с1у Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Рпбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Ніз Аїа Сіп І1е Гуз ТіПг бетг Іеєц 325 330 335
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350
Зо бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе сіп Гпув ТПІ Авр ТПт сіу Уаі1ї бек 355 360 365 їец Сіп ТБк Тут Авр Авр їец теп Аїа Гуз Авр Сув Нів Сув І1е 370 375 380 «2105 60 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 60
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 19 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рбе Гец Рпе Рго Ркго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уа1ї пув Рібе Азп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБегт Уа1і! Іец ТПг Уаї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго Ії1е сіц Гпув ТПтг Іїе бБегт Гув Аїа пув с1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
Зо
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек гей Тук Сув Гец Уаї Ппув с1у Робе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПтІ ТПтІ Ркго Ргто Уаії Ггец Авр бБет Авр б1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Меє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 61 «2115 373 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 61
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї 20 25 30
Рпе Гей РпПе Рго Рго Пув Рго Гув Авр ТПтї Їїецй Меєсє І1е бБег Агд ТІПг 35 40 45
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз Сі Авр Рго Сс1ц 50 зо бо уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! с1іц Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз 65 70 75 80
ТПк Гпув Ркго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Акд Уаі1ї Уаі1ї бек 85 Зо 95
Зо уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 100 105 110
Сув пув Уаії бБет Авп Гуз Аїа їей Рго Аза Рго Ії1е Сі Гуз ТПкК І1е 115 120 125
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Тук ТПкК Гец Рго 130 135 140
Ркго Бек Агд бі біцш Меє ТПт Гпув Авп сіп Уа1ї бек Ггецп Тук Сув Гей 145 150 155 160 маї пув с1у РПе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уаії біц Тгр біц бБет Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тухк пув ТПхг ТбПтг Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр сіу Бек РПпе РПпе їец Тут Бек Гпув Гей ТПт Уаі1! Авр Гув бБетг Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1ї Рібе бехт Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Нів Авп оНів Тут ТПк сСіп пув бет КГец бет Гец бек Рго СсС1у Гув С1У 225 230 235 240 сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сіу бБехт сіу сбі1у б1у біу Бех б1у 1У 245 250 255 сСіу б1у бек сі1у бі1у с1і1у СсС1у бБег с1у Авр Ніз Сув Рго їец О1у Рго 260 265 270 с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек їец біц Авр Ієц 275 280 285 сіу ТЕр Аїа Авр ТтІр Уаі Ггец бет Рго Агкд біц Уаі біп Уаі ТпПт Меє 290 295 300
Сув І1е с1у Аїа Сув Рго Бек СсСіп Рбе Агуд Аї1а А1їа Авп Меє Ніз А1а 305 310 315 320
Сіп чІ1е пуз ТПг бетг Гец Нів Агд Тїец Гпув Рго Авр ТПт Уа1ї Рго Аїа
Зо 325 330 335
Рко Сув Сув Уаі1і Рго Аїа бек Тут Авп Рго Меє Уаії Гецп І1е сіп Гуз 340 345 350
З5
ТПЕ Авр ТПт сі1у Уаї бек Гей біп ТПх Тухк Авр Авр Тец Тед Аїа Гуз 355 360 365
Авр Сув Ніз Сув І1е 370 «2105 62 «2115 239 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 62
Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Пец Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї 20 25 30
Рпе Гей РпПе Рго Рго Пув Рго Гув Авр ТПтї ЇТецй Меєсє І1е бБег Агд ТІПг 35 40 45
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз сб1ц Авр Рго с1ц 50 зо бо уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! сіц Уаї Нів Авп Аїа Гуз 65 70 75 80
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Агтд Уаі1і Уаї1ї бек 85 Зо 95 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Ссіп Авр Тгр гецш Авп сС1у Пув С1іц Тук Гуз 100 105 110
Сув пув Уаії бБет Авп Гуз Аїа їей Рго Аза Рго Іїе сі Гуз ТПк Іїе 115 120 125
Ззек Гуз Аїа гув С1у біп Рго Акд бід Рко сіп Уа1і Тук ТіК Гец Рго
Зо 130 135 140
Рко Бек Агд бі бі Меєсє ТПг Гув Авп о сіп Уа1ї бек Гецп ТПг Сув Гей 145 150 155 160
З5 маї пув с1у РПпе Тук Рго бек Авр Іїе Аї1а Уаії Сбіцш Тгр біц бБет Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр сіу Бек РПпе Рпе Гей ТПтї бек Гпув Гей ТПт Уаі1! Авр Гув бБетг Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Ніз Авп Нів Тут ТПтІ Сіп Пув бег КГец бетг Гєц бег Рго с1уУу Гув 225 230 235 «2105 63 «2115 373
«2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 63
Ме Авр Ме Агуд Уаі! Рго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї 20 25 30
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік 35 40 45
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз сб1ц Авр Рго с1ц 50 55 бо
Ууаї Ппув Рпе Авп Тгр Тухг Уа1 Авр сС1у Уаї Сі Уа1 Нів Авп А1їа Гув 65 70 75 80
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Агтд Уаі1і Уаї1ї бек
Зо 85 30 95 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 100 105 110
З5
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза Гей Рго Аїа Рго Іїе сій Гуз ТПк Ше 115 120 125
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Тук ТПкК Гец Рго 130 135 140
Рго бБет Агуд бі бі Меєс ТПг пув Авп о сбіп Уаії бБет Гей ТПг Сув Гец 145 150 155 160 маї пув с1у РПе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уаії біц Тгр біц бБет Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр сб1у Бек РПе Рпе Гец ТПт бет Гуз Гей ТПтІ Уаї Авр Гуз бБет Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Ніз Авп Нів Тут ТПт сСіп Гуз бег Тїец бБет Гєц бБет Рго С1у Гуз О01У 225 230 235 240 сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сіу бБехт сіу сбі1у б1у біу Бех б1у 1У 245 250 255 сі1іу сб1у бек с1у сС1у с1у сС1у Бек С1у Авр Нів Сув Рго Іец С1у Рго 260 265 270 с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек їец біц Авр Ієц 275 280 285 сіу ТЕр Аїа Авр ТтІр Уаі Ггец бет Рго Агкд біц Уаі біп Уаі ТпПт Меє 290 295 300
Сузв І1е сС1у Аїа Сув Рго бБег Сіп Ррбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Ніз Аї1а 305 310 315 320
Зо
Сіп чІ1е пуз ТПг бетг Гец Нів Агд Тїец Гпув Рго Авр ТПт Уа1ї Рго Аїа 325 330 335
Рго Сув Сув Маі1і Рго Аїа бег Тут Авп Рго Меєс Уаії еп І1е сіп Гуз 340 345 350
ТПЕ Авр ТПт сі1у Уаї бек Гей біп ТПх Тухк Авр Авр Тец Тед Аїа Гуз 355 360 365
Авр Сув Ніз Сув І1е 370 «2105 564 «2115 239 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 64
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї 20 25 30
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік 35 40 45
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз сб1ц Авр Рго с1ц 50 55 бо
Ууаї Ппув Рпе Авп Тгр Тухг Уа1 Авр сС1у Уаї Сі Уа1 Нів Авп А1їа Гув 65 70 75 80
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Агтд Уаі1і Уаї1ї бек 85 30 95 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 100 105 110
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза Гей Рго Аїа Рго Іїе сій Гуз ТПк Ше 115 120 125
Зо
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Тук ТПкК Гец Рго 130 135 140
Рго бБет Агуд бі бі Меєс ТПг пув Авп о сбіп Уаії бБет Гей Тук Сув Гец 145 150 155 160 маї пув с1у РПе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уаії біц Тгр біц бБет Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр сб1у Бек РПе Рпе Гец Тут бет Кгув Гей ТПтІ Уаії Авр Гуз бБет Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Нів Авп о Нів Тут ТПк Сіп пув бБет КГец бет Гей бех Ркго СсС1у Гув 225 230 235
«2105 ючХм65 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 КхЛМ65
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аза Акд Сув Авр Гуз ТБг Нів ТБтг Сув Рго Рго Сув Ркго
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 20 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо 25
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
Зо уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБет Уа1і! Іїец ТПг Уаї1ї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув сіу сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у Робе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр бБег Авр сіу бБет РПе РіПе Ієц 195 200 205
Тут Бек Кпув Ггец ТПтї УМа1і Авр Гпув бБет Агу Тгр сіп сіп с1у Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі АТїа Гец Нів Авп Нів Тут ТПтг Сс1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бек сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у сб1у Щ1У 260 265 270
Сіу бек С1у Авр Нів Сув Рго їец сС1у Рго бі1у Агд Сув Суз Агд Іец 275 280 285
Нів ТрПт Уаї Агуд Аїа бек Гец сСіц Авр їец Сіу ТЕр А1ї1а Авр Тгр Уаї1ї 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаі Сіп Уа1 ТПх Меєсє Сув І1їе с1у Аїа Сув Рго
Зо 305 310 315 320 бек біп Рпбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нів Аїа Сіп І1е Гуз ТіПг бетг Іеєц 325 330 335
З5
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе сіп Гпув ТПІ Авр ТПт сіу Уаі1ї бек 355 360 365 їец Сіп ТБк Тут Авр Авр їец теп АїТа Гуз Авр Сув Нів Сув І1е 370 375 380 «2105 66 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 66
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аза Акд Сув Авр Гуз ТБг Нів ТБтг Сув Рго Рго Сув Ркго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБет Уа1і! Іїец ТПг Уаї1ї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз
Зо 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
З5
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз «2105 67 «2115 380 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 67
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Пец Рпе Рго Рго Гуз
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї
Зо 50 зо бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
З5 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 40
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 45 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаї Меє Нів сС1ц Аїа їец Нів Авп Нів Тут ТПЕ с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270 сСіу бБег Сув Рго Гїец С1у Рго б1у Агд Сув Суз Агд Гц Ніз Трк Уаї 275 280 285
Зо
Атуд Аїа бБет Гец сіц Авр Гец сС1у Тгр Аїа Авр Тгр Уаії Іец бетг Ркго 290 295 300
Акуд бі Уаї сіп Уаії ТПтї Меє Сув Іїе сС1у Аїа Сув Ркго Бек біп Рре 305 310 315 320
Ат Аза АТїа Авзп Меє Ніз Аїа сіп І1ї1е Пув Тртї бБег їец Нів Агд Іеєц 325 330 335
Туз Рго Авр ТПтІ Уаі Рго Азїа Рго Сув Сув Уаії Рго А1їа бБет Тук Авп 340 345 350
Ркто Меє Уаї геп Іїе біп пув ТПг Авр ТПтІ с1і1у Уаі Бек Гей сіп ТЕПк 355 360 365
Тут Авр Авр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е 370 375 380 «2105 568 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 568
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Пец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 зо бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95
Зо
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уа1і! їєц ТіПгт Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Ркго Ії1е сіц Гпув ТПї І1їе бБегт Гув Аїа Гув сіу сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп Тгр Сув Гец Уаї Гпув с1у Робе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тут Гув ТПг ТПт Рго Рго Уаії Гец Авр бек Авр сіу бБет РПе РПпе Гей 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уа1 Мес Ніз сій А1ї1а Гей Нів Авп Нів Тут ТПЕ с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 69 «2115 373 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 69
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї 20 25 30
Зо
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік 35 Рго сі Уа1і ТПк Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Нів СсС1ц Авр Рго Сс1ц бо уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! с1іц Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз 40 65 70 75 80
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Акд Уаі1ї Уаї1ї бек 85 Зо 95 45 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 100 105 110 50
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Азїа їеп Рго Аїа Ркго І1е сі гуз ТПк Ше 115 120 125 55 зект гув Аї1а пузвз с1іу сбіп Рго Акд бі Рго сбіп Уаії Тут ТПкг Гец Рго 130 135 140
Рко Бек Агд бі бі Меєсє ТПг Гув Авп сіп Уа1ї бек Гецп Тгр Сув Іец 145 150 155 160
Ууаї пув с1у Рпе Тут Рго бБегт Авр Ії1е Аїа Уаі бі Тгр сіц б5Бетг Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тухк пув ТПхг ТПг Рго Рго Уаії Гец Авр 5ег 180 185 190
Авр сб1у Бек РПе Рпе Гец Тут бет Кгув Гей ТПтІ Уаії Авр Гуз бБет Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1ії Ріре бег Сув Бех Уа! Меє Нізв СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Ніз Авп Нів Тут ТПт сСіп Гуз бег Тїец бБет Гєц бБет Рго С1у Гуз О01У 225 230 235 240 сі1у сбіу сб1у Бек сіу біу сіу сбіу Бек сіу сС1у сб1у с1у Бек с1у щу 245 250 255 сСіу б1у бек сі1у бі1у с1і1у СсС1у бБег с1у Авр Ніз Сув Рго їец О1у Рго
Зо 260 265 270 с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек їец біц Авр Ієц 275 280 285
З5 сіу ТЕр Аїа Авр ТтІр Уаі Ггец бет Рго Агкд біц Уаі біп Уаі ТпПт Меє 290 295 300
Сузв І1е сС1у Аїа Сув Рго бБег Сіп Ррбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Ніз Аї1а 305 310 315 320 сСіп І1е Ппув ТБг бет Іец Нів Агд Тец їув Рго Авр ТПг Уа1! Рго А1а 325 330 335
Рко Сув Сув Уаі1і Рго Аїа бек Тут Авп Рго Меє Уаії Гецп І1е сіп Гуз 340 345 350
ТПЕ Авр ТПт сі1у Уаї бек Гей біп ТПх Тухк Авр Авр Тец Тед Аїа Гуз 355 360 365
Авр Сув Ніз Сув І1е 370
«2105 170 «2115 239 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 70
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї 20
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ теп Меє І1ї1е 5ехт Агд Тік 25 Рго сі Уа1і ТПк Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бек Нів СсС1ц Авр Рго с1ц бо уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! с1іц Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз
Зо 65 70 75 80
ТПк Гпув Рго Акд бі бі біп Тук Авп обет ТПтІ Тут Агтд Уаі1і Уаї1ї бек 85 Зо 95
З5 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Ге Авп сС1у Пув С1іц Тук Гуз 100 105 110 40
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза Гей Рго Аїа Рго Іїе сій Гуз ТПк Ше 115 120 125 45 зект гув Аї1а пузв с1іу сбіп Рго Акд бій Рго сіп Уаі Тут ТПг Гец Рго 130 135 140
Рхто Бех Агд бі бі Меє ТПг пув Авп обіп Уаі1ї бБет Гецп бек Сув Аїа 50 145 150 155 160 маї пув с1у РПпе Тут Рко бек Авр Іїе Аїа Уаії сі Тгр біц бБет Авп 165 170 175 55 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр б1у Бек РПпе Рпе Гецп Уаі1і бек Гпув Гей ТПтІ Уаї Авр Гуз бБет Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Ніз Авп Нів Тут ТПтї Сіп Пув бег КГец бетг Гєц бег Рго с1уУу Гув 225 230 235 «2105 71 «2115 370 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 71
Мес Авр Меєс Агуд Уаі Рго Аїа сіп Гец Гец сіу Пец Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їей Аїа с1у с1іу Рко бек Уаї1ї
Зо 20 25 30
Рпе Гей РіПе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік
З5
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бег Ніз сб1ц Авр Рго с1ц бо 40 уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! с1іц Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз 65 70 75 80 45 ТПг Ггув Рго Акд бі бій сбіп Туг Авп о бБет ТПІ Тут Агуд Уаі1і Уаї1ї 5ег 85 Зо 95 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 50 1600 105 110
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза Гей Рго Аїа Рго Іїе сій Гуз ТПк Ше 115 120 125 55
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Тук ТПкК Гец Рго 130 135 140
Рхто Бех Агд бі бі Меє ТПг пув Авп обіп Уаі1ї бБет Гецп бек Сув Аїа 145 150 155 160 маї пув с1у РПе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уаії біц Тгр біц бБет Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр сіу Бек РПпе РпПе їец Маії бек Гпув Гей ТПт Уаі1ї! Авр Гув бБетг Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Ніз Авп Нів Тут ТПт сСіп Гуз бег Тїец бБет Гєц бБет Рго С1у Гуз О01У 225 230 235 240 сіу б1у сб1у Бек сіу сіу сіу сіу бБехт сіу сбі1у б1у біу Бех б1у 1У 245 250 255
Зо сіу сб1у бек с1у с1у сіу сіу бБет Сув Рко Гец Сб1у Рго б1у Аг9д Сув 260 265 270
Сув Агд їец Нів ТПк Уаї Акд А1ї1а бек Іїец сі Авр Іец С1у Тгр А1а 275 280 285
Авр Ттр Уаії Гец бБет Рго Акд сіц Уаі Сіп Уаї ТПг Меєсє Суз І1е 01Уу 290 295 300
А1ї1а Сув Рго бек біп Рбе Агд Аї1а Аїа Азп Меє Нів Аїа сіп І1е Гуз 305 310 315 320
ТЕ бек Гец Нів Агд Гец Пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Сув 325 330 335 уаї Рго Аїа бБет Тут Авп Рко Меє Уаії еп Іїе біп пув ТПтї Авр ТЕГ 340 345 350 сСі1іу Ма1 бек Гец СсСіп ТБг Тут Авр Авр тей їец Аїа Гув Авр Сув Нів 355 360 365
Сув І1е «2105 172 «2115 239 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 72
Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 теп Акд с1у Аї1а Агуд Сув Аза Рго Аїа їец Аїа сСіу сСі1у Рго бек Уаї1ї 20 25 30
Рпе Гей Рібе Рго Рго пув Рго Пув Авр ТПтІ Гецп Меє І1ї1е бек Акд Тік 35 40 45
Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї бБег Ніз сб1п Авр Рго Сс1ц 50 55 бо
Зо уаї пув Рпе Авзвп Тгр Тут Уаі! Авр сС1у Уаї! с1іц Уа1ї Нів Авп Аїа Гуз 65 70 75 80
ТПг Ггув Рго Акд бі бій сб1іп Тут Авп бек ТПІ Тут Агуд Уаі1ї Уаї1ї 5ег 85 Зо 95 уаї Гец Трпхї Уаї Гецшц Ніз Сіп Авр Тгр Гец Авп сС1у пув біц Тук Гув 1600 105 110
Сузв пув Уаї бБет Авп гув Аза Гей Рго Аїа Рго Іїе сій Гуз ТПк Ше 115 120 125
Ззек Гуз Аїа гув Сб1у біп Рго Агуд бій Рго сбіп Уаі Тук ТПкК Гец Рго 130 135 140
Рко Бек Агд бі бі Меєсє ТПг Гув Авп о сіп Уаі1ї бек Ггецп Ткгр Сув Гей 145 150 155 160
Ууаї пув с1у Рпе Тут Рго бБегт Авр Ії1е Аїа Уаі бі Тгр сіц б5Бетг Авп 165 170 175 сіу біп Рго біц Авп Авп Тут пув ТПтї ТБПї Рго Рго Уаії їец Авр 5ег 180 185 190
Авр сіу Бек РПпе РПпе їец Тут Бек Гпув Гей ТПт Уаі1! Авр Гув бБетг Агд 195 200 205
Тегр с1п сбіп сб1у Азп Уа1 Рібе бехг Сув бБет Уа1 Меє Нів СсС1іп АїТа Іец 210 215 220
Ніз Авп Нів Тут ТПтІ Сіп Пув бег КГец бетг Гєц бег Рго с1уУу Гув 225 230 235 «2105 73 «2115 376 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 73
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Зо пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Пец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Акд бі Рго сбіп Уа! Тук ТПт Пец Ркго Рго бБехт Агд бі бій Меє 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаї Меє Нів сС1ц Аїа їец Нів Авп Нів Тут ТПЕ с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу
Зо 245 250 255 сСіу б1у бек сі1у бі1у с1і1у сС1у бБег Аза Агд Авп с1у ТПт Ніз Сув Рго 260 265 270
З5
Пец с1у Рго с1у Агд Сув Сув Атд їец Нівз ТПт Уа1ї Агд Аїа бет Іеєц 275 280 285 січ Авр Гец с1у Тгтр Аїа Авр Ткр Уаії Ггец бегт Рго Агд сіц Уаї сіп 290 295 300
Ууаї ТПпЕ Меєс Сув Іїе с1у Аїа Сув Рго бБег біп Рпе Агд Аїа Аїа Авп 305 310 315 320
Меє Нів АТа сСіп І1е Гпув ТПбг бБет Гец Нів Агд їец Гуз Рго Авр ТіПг 325 330 335 уаї Рго Аїа Рго Сув Сув Уаії Ркго Аїа бек Тут Авп Рго Меє Уаї Іец 340 345 350
І1їе сбіп Гпув ТПтІ Авр ТПт сіу Уаі бек Гей сбіп ТПтг Тут Авр Авр Іец 355 360 365
Пец АТїа гув Авр Суз Нів Сув Ії1е 370 375 «2105 174 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 774
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Пец Рпе Рго Рго Гуз
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї
Зо 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
З5 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 40
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 45 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Мес 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Рго бій Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Ттр сіп сіп с1у Авзп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаї Меє Нів сС1ц Аїа їец Нів Авп Нів Тут ТПЕ с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 175 «2115 381 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
Зо «4005 75
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
З5 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30 40
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 45 Рго пув Авр ТПтї ТЇІецп Мес І1їе бБег Агу ТПтї Рго сіц Уа1і ТПк Сув Уаї бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 50 65 7о 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 55
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гецп Тгр Сув Гец Ма1ї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр бБегхт Авр сіу бБет РПе РіПе Ієц 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Зо
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа Гец Нів Авп Нів Тут ТПтг Ссі1іп 225 230 235 240 пув бек Гей бБет Гец бек Рго сіу Гув біу сіу сб1і1у сі1у бек б1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сіу сіу сіу бек сіу сі1у с1у о1у бБет Аза Агд Авп 260 265 270
СсСіу ТПг Ніз Сув Рго їец С1у Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 275 280 285 уаї Акту Аїа бБет Гей сі Авр Ге сСіу Тгтр Аїа Авр Тгр Уаї Іец 5ег 290 295 300
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 305 310 315 320
Рпе Агуд Аї1а А1їа Авп Мес Нів АТїа сСіп І1їе Гуз ТПтг бек їец Нів Агд 325 330 335
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 340 345 350
Авп оРго Меєс Уаї Гецп І1їе сіп Гуз ТПг Авр ТПт сіу Маії Бек Гец сСіп 355 360 365
ТПк Тут Авр Авр їец їец Аїа Гуз Авзр Сув Нів Сув І1е 370 375 380 «2105 776 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 76
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 їпец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гув ТПт Ніз Тбк Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Зо
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 Рго Гув Авр ТПтї Те Мес І1е бБег Агу ТПтї Рго сіц Уа1і ТПк Сузв Уаї бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 40 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 45
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 50 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125 55 Аїа теп Рго Аїа Рко І1ї1е сіцп Пув ТПг Іїе Бек Пув Аїа Гув с1у Сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гец бег Сув Аза Ма1ї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпув бек Гей бБет Пец бек Рго сіу Гув 245 «2105 177
Зо «2115 386 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 ЛТ177
Ме Авр Мес Агд Уаі Рго Аїа сіп Гей Гей с1у гецп Гец Гец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза РгтІо Аїа Гец Аїа сіу с1у Рко бек Уаі1і Рбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
УуУаї Ма1 Авр Уа1 бек Нів с1ц Авр Рго Ссіцш Уа1! Гуз Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБет Уа1і! Іїец ТПг Уаї1ї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец
Зо 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
З5
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сі1у біу Бек сіу сіу бі1у сіу Бек сі1у сіу с1у сб1у Бех б01у с1у щу 260 265 270
Сіу бБехг Аїа Агд Авп СсС1у ТП Нів Сувз Рго їец С1у Рго б1у Агд Сув 275 280 285
Суз Агд їец Нів ТртІ Уаї Агд Аїа бек Гей б1п Азр їец С1у Тгр Аї1а 290 295 300
Авр Ттр Уаії Гец бБет Рго Акд сіц Уаі Сіп Уаї ТПг Меєсє Суз І1е 01Уу 305 310 315 320
А1ї1а Сув Рго бек біп Рбе Агд Аї1а Аїа Азп Меє Нів Аїа сіп І1е Гуз 325 330 335
ТЕ бек Гец Нів Агд Гец Пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Сув 340 345 350 уаї Рго Аїа бБет Тут Авп Рко Меє Уаії еп Іїе біп пув ТПтї Авр ТЕГ 355 360 365 сСі1іу Ма1 бек Гец СсСіп ТБг Тут Авр Авр тей їец Аїа Гув Авр Сув Нів 370 375 380
Сув І1е 385 «2105 78 «2115 3659 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
Зо «4005 7Л78
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей с1у Гецп Гец Гец Гец Тгр 1 5 10 15
З5 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30 40
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рго Бек Уаії Рпе Гец Рпе Ркго Ркго Гуз 45 Рго пув Авр ТПтї ТЇІецп Мес І1їе бБег Агу ТПтї Рго сіц Уа1і ТПк Сув Уаї бо
Ууаї уаї Авзр Уа! Бек Нів біц Азр Рго біц Уаї пув Рібе Азп Тгр Туг 50 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 55
Сіп Тут Авп бек ТПтІ Тугт Агд Уаї Уаї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гецп Тгр Сув Гец Маї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Зо
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240 пув бек Гей бБет Гец бек Рго сіу Гув біу сіу сб1і1у сі1у бек б1у щу 245 250 255 сСіу б1у бБег Авп біу ТПтІ Нів Сув Рго Гец біу Рго С1у Агд Сув Сув 260 265 270
Атд теп Ніз ТПг Уа1ї Агуд Аїа бБет Іїец бі Авр Ієц Сіу Тгр А1ї1а Авр 275 280 285
ТЕр Уаії Ггец бет Рго Агд бі Уаі1і сіп Уа! ТПпПтІ Меє Суз Ії1е с1у Аїа 290 295 300
Сув Рго бек біп Рбе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа сбіп І1е Гпув ТПг 305 310 315 320 бек Тец Нів Акд їец пув Рго Авр ТПт Уаї Рго Аїа Рго Сув Сув Уаї1 325 330 335
Рго А1ї1а бек Тук Авп Рго Меєс Уаї Гец Іїе сіп Гуз ТПт Авр ТПг щЩ1Уу 340 345 350
УуУаї Бек теп сіп ТПг Тут Авр Авр Тец Іїецш А1їа Гуз Авр Сув Нів Сув 355 360 365
І1е «2105 179 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 79
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Зо
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 Рго пув Авр ТПтї ТЇІецп Мес І1їе бБег Агу ТПтї Рго сіц Уа1і ТПк Сув Уаї бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 40 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув ТПт Кпув Рго Агд бі с1ц 85 Зо 95 45
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 50 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув Кпув Уаї бБет Авп Гув 115 120 125 55 Аїа теп Рго Аїа Рко І1ї1е сіцп Пув ТПг Іїе Бек Пув Аїа Гув с1у Сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тук ТПтї Ге Рго Рго Бех Агкд бі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гец бег Сув Аза Ма1ї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сіц Ткр бі1ц Бех Авп б1у сіп Рго бій Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гей ТПт Уаі1і Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпув бБет Гей бБет Пец бек Рго сіу Гув 245 «2105 80
Зо «2115 384 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 80
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рбе Гец Рпе Рго Ркго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
УуУаї Ма1 Авр Уа1 бек Нів с1ц Авр Рго Ссіцш Уа1! Ггув Робе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБегт Уа1і! Іец ТПг Уаї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго Ії1е сіц Гпув ТПтг Іїе бБегт Гув Аїа пув с1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек гей Тгр Сув Гец Уаї Ппув с1у Робе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПтІ ТПтІ Ркго Ргто Уаії Ггец Авр бБет Авр б1у бБет РПпе РПе ГІеєец
Зо 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
З5
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Меє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сі1у біу Бек сіу сіу бі1у сіу Бек сі1у сіу с1у сб1у Бех б01у с1у щу 260 265 270
Сіу бБет Авп с1іу ТПт Ніз Сув Рго їец С1у Рго с1у Агд Суз Сув Агд 275 280 285
Пец Ніз ТПг Уаї Агд Аїа бет їеец Сі Авр їєц С1іу Тгр Аїа Азр Тгр 290 295 300 уаї Гей бек Рго Акд сіц Уаії Сіп Уаі ТПх Меєс Сув Іїе С1у Аїа Сув 305 310 315 320
Рго бек біп Рбе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа сбіп І1їе Ппув ТНг бек 325 330 335
Пец Ніз Агд Гей Кпуз Рго Авр ТПт Уа1ї Рго Аїа Рго Суз Сув Уа1ї Рго 340 345 350
А1а бБет Тут Авп Ркго Меє Уаї еп І1е біп ув ТПтІ Авр ТПтІ с1у Уаї 355 360 365 бек їец Сіп ТПк Тут Авр Авр їец Гец АТїа Гуз Авр Сув Нів Сув Ії1е 370 375 380 «2105 81 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 81
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр
Зо 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
З5
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 40
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї бо 45 УуУаї Ма1 Авр Уа1 бек Нів с1ц Авр Рго Ссіцш Уа1! Гуз Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 50 85 30 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 55 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПе РіПе Ієц 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їец Нів Авп Нів Туг Тірт Ссіп 225 230 235 240
Зо
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245
З5 «2105 82 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність 40 «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 82 45 Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 50 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 55
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175
Зо зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго бій Авп Авп 180 185 190
Тут Гув ТПг ТПт Рго Рго Уаі Гей Авр 5ет Авр сіу бБет РПпе РпПе Гец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Ттр біп сбіп сб1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув біу сіу с1у с1у Бех С1у У 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270 сСі1у бек с1у Авр Нів Сув Рго їец СсС1у Рго с1у Агд Сув Сув Агд Іец 275 280 285
Ніз Трптї Уаї Авп Аїа бек їец С1ц Авзр їецш С1у Тгр А1їа Авр Тгр Уаї 290 295 300
Тец Бек Рго Акуд біц Маії сіп Уаії ТПпї Меєс Сув чІ1е сі1іу Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Рпбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Ніз Аїа Сіп І1е Гуз ТіПг бетг Іеєц 325 330 335
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе сіп Гпув ТПІ Авр ТПт сіу Уаі1ї бек 355 360 365
Пец б1іп ТБкг Тут Авр Авзвр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е 370 375 380 «2105 83 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
Зо «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 83
Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї бо 50
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 55 Ууаї Авр с1у Уа1 сіц Уа1! Нів Авп А1ї1а їГув ТПг Гуз Рго Агд Сі Сс1ц 85 Зо 35
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тут Гув ТПг ТПт Рго Рго Уаі Гей Авр 5ет Авр сіу бБет РПпе РпПе Гец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї
Зо 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
З5
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 84 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 84
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 їецш Агуд с1у Аї1а Акд Сув Авр Гуз ТБкг Нів ТБтг Сув Рго Рго Сув Ркго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рго пув Авр ТПтї ТЇІецп Мес І1їе бБег Агу ТПтї Рго сіц Уа1і ТПк Сув Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
Аїа теп Рго Аїа Рко І1ї1е сіцп Пув ТПг Іїе Бек Пув Аїа Гув с1у Сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс
Зо 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175
З5 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тут Бек Кпув Ггец ТПтї УМа1і Авр Гпув бБет Агу Тгр сіп сіп с1у Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270
Сіу бек С1у Авр Нів Сув Рго їец сС1у Рго бі1у Агд Сув Суз Агд Іец 275 280 285
Ніз Трпхї Уаї Агд Аїа Авзп Гїец ТПІ Авзр Гц С1у Тгр А1їа Авр Тгр Уаї 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаі Сіп Уа1 ТПх Меєсє Сув І1їе с1у Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Рпе Агуд Аза А1їа Авп Меє Нів АТїа СсСіп І1е Гуз ТПг бек Ієц 325 330 335
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе сіп Гпув ТПІ Авр ТПт сСіу Уа1ї бек 355 360 365
Пец б1іп ТБкг Тут Авр Авзвр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е 370 375 380
Зо «2105 85 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
З5 «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 85
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аза Акд Сув Авр Гуз ТБкг Нів ТБтг Сув Рго Ркго Сув Ркго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБегт Агуд ТПтІ Рго бі Уа1ї ТПкх Сув Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа Гуз ТПх пув Рго Агд бі с1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сі Тук Гпув Сув Кпув Уаї бБет Авп Гув 115 120 125
Аїа теп Рго Аїа Рко І1ї1е сіцп Пув ТПг Іїе Бек Пув Аїа Гув с1у Сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уаі Тут ТПтї Гецп Рго Рго Бех Агд бі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сСіц Тгр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Зо
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Ууаї Бек Ппув Гей ТПг Уаії Авр Гуз бБег Агд Тгр біп сбіп с1у Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 86 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 86
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец Гец Гец Гец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпе Гец Рпе Ркго Ркго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
УуУаї Ма1 Авр Уа1 бек Нів с1ц Авр Рго Ссіц Уа1! пув Робе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 30 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уа1! Уа1ї бБегт Уа1! Гец ТіПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
Зо
А1їа тей Рго Аїа Рго Іїе сі пув ТПт Іїе бБегт гув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Акд бі Рго сбіп Уа! Тук ТПт Пец Ркго Рго бБехт Агд бі бій Меє 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бБет гей Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаї Меє Нів сС1ц Аїа їец Нів Авп Нів Тут ТПЕ с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сі1у біу Бек сіу сіу бі1у сіу Бек сі1у сіу с1у сб1у Бех б01у с1у щу 260 265 270
Сіу бек С1у Авр Нів Сув Рго їец сС1у Рго бі1у Агд Сув Суз Агд Іец 275 280 285
Ніз ТрпхїІ Уаї Агд Аї1а бек їец С1ц Авзр їецш С1у Тгр А1їа Авр Тгр Уаї 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаі Сіп Уа1 ТПх Меєсє Сув І1їе с1у Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Авп Агд ТБт АТїа Авп Меє Нів АТїа Сіп І1е Гуз ТіПг бетг Іеєц 325 330 335
Нів Агд їец Гув Рго Авр ТПг Уа1і Рго А1їа Рго Сув Сув Уа1! Рго А1а 340 345 350 бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе сіп Гпув ТПІ Авр ТПт сіу Уаі1ї бек
Зо 355 З6о0 365
Пец б1іп ТБкг Тут Авр Авзвр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е 370 375 380
З5 «2105 87 «2115 2459 «2125 ПРТ 40 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду 45 «4005 87
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 50 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30 55 Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Пец Рпе Рго Рго Гуз
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
УуУаї Ма1 Авр Уа1 бек Нів с1ц Авр Рго Ссіцш Уа1! Гуз Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 30 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Акд бі Рго сбіп Уа! Тук ТПт Пец Ркго Рго бБехт Агд бі бій Меє 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго
Зо 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
З5
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПе РіПе Ієц 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаії Меє Нів сі Аїа їец Нів Авп Нів Туг ТПк с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 88 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 88
Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
Ууаї Авр с1у Уа1 сіц Уа1! Нів Авп А1ї1а їГув ТПг Гуз Рго Агд Сі Сс1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз
Зо 1600 195 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
З5
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гецп Тгр Сув Гец Маї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго бій Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Ттр сіп сбіп сб1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув біу сіу с1у с1у Бех С1у У 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270 сСі1у бек с1у Авр Нівз Сув Рго їец СсС1у Рго с1у Агд Сув Сув Агд Іец 275 280 285
Ніз ТрпхїІ Уаї Агд Аї1а бек їец С1ц Авзр їецш С1у Тгр А1їа Авр Тгр Уаї 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаії Сіп Уа! ТПтІ Меє Сув І1е с1у Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Рбе Авп Аїа ТБт Авп Меє Нів АТїа Сіп І1е Гуз ТіПг бетг Іеєц 325 330 335
Зо
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 ет Тут Авп Рго Меєс Уаії Гей Ії1е Сіп Пув ТПгІ Авр ТПтІ С1у Уаї1ї 5ег 355 360 365
Пец б1іп ТБкг Тут Авр Авзвр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е 370 375 380 «2105 89 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 89
Меє Авр Мес Агуд Уаі Рго Аїа СсСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
Ууаї Авр с1у Уа1 сіц Уа1! Нів Авп А1ї1а їГув ТПг Гуз Рго Агд Сі Сс1ц 85 Зо 95
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 1600 195 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Зо
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТПг Ггув Авп обіп Уаї бек Гец бег Сув Аза Ма1ї Ппув сіу Рпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпув бек Гей бБет Пец бек Рго сіу Гув 245
«2105 190 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 90
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аза Акд Сув Авр Гуз ТБг Нів ТБтг Сув Рго Рго Сув Ркго
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 20 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 55 бо 25
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80
Зо уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБет Уа1і! Іїец ТПг Уаї1ї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гпув сіц Тут пув Сув гув Уаї бБет Авп Гуз 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бек Ггецп Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1е Аїа Уаі1і сій Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тут Бек Кпув Ггец ТПтї УМа1і Авр Гпув бБет Агу Тгр сіп сіп с1у Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270
Сіу бек С1у Авр Нів Сув Рго їец сС1у Рго бі1у Агд Сув Суз Агд Іец 275 280 285
Нів ТрПт Уаї Агуд Аїа бег їец Сіц Авр Іїец СсС1у Тгр А1ї1а Авр Тгр Уаї1ї 290 295 300
Те бБет Ркго Акд сі Уаі Сіп Уа1 ТПх Меєсє Сув І1їе с1у Аїа Сув Рго
Зо 305 310 315 320 бек біп Рпбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Ніз Аїа Сіп І1е Гуз ТіПг бБетг Ієц 325 330 335
З5
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе Ссбіп Авп ТПтІ ТПтї ТПхїх сбіу Уа1ї бек 355 360 365 їец Сіп ТБк Тут Авр Авр їец теп АїТа Гуз Авр Сув Нів Сув І1е 370 375 380 «2105 11 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 191
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аза Акд Сув Авр Гуз ТБкг Нів ТБтг Сув Рго Ркго Сув Ркго 20 25 30
Аза Ргто Аїа Гец Аїа сіу сіу Рко бек Уаі1і Рпбе їец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБегт Агуд ТПтІ Рго бі Уа1ї ТПкх Сув Уаї 50 55 бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа Гуз ТПх пув Рго Агд Сі с1ц 85 Зо 95 сСіп Тук Авп бек ТПтІ Тут Агуд Уа1 Уаї бБет Уа1і! Іїец ТПг Уаї1ї Ієц Нів 100 105 110 біп Авр Ттр Гей Авп о сіу Гуз сі Тук Гпув Сув Кпув Уаї бБет Авп Гув
Зо 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
З5
Рго Агд бі Рго біп Уаі Тут ТПтї Гецп Рго Рго Бех Агд бі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 ет Авр І1ї1е Аїа Уаї1ї сіц Ткр біц бБег Авп с1у сіп Рго біц Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бБет Уа1ї Месє Ніз Сі Аїа їеец Нів Авп Нів Тут ТПг с1п 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз «2105 Б192 «2115 383 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 92
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец Гец Гец Гец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Гецп Рпе Рго Рго Гув
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї
Зо 50 зо бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів біцш Авр Рго біц Уаї Пув Рібе Азп Тгр Туг 65 70 75 80
З5 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95 40
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уа1! Уа1ї бБегт Уа1! Гец ТіПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 45 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго Іїе сі пув ТПт Іїе бБегт гув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаії бБет гей Тгр Сув Гей Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тук Ггув ТПжІ ТПтІ Ркго Рго Уаі Ггецп Авр Бех Авр с1у бБет РПпе РПе ГІеєец 195 200 205
Тук бБет пув Гецп ТПї Уа1і Авр пув бек Агд Тгтр біп сіп с1у Авп Уаї1ї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаї Меє Нів сС1ц Аїа їец Нів Авп Нів Тут ТПЕ с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Ггец бет Гецй бек Рго біу пув бі1у сіу с1у с1у Бех с1у щу 245 250 255 сіу сб1у бек с1у сі1у сіу сіу бБехт сіу сі1у сі1у сС1у бек бі1у б1у 1У 260 265 270
Сіу бек С1у Авр Нів Сув Рго їец сС1у Рго бі1у Агд Сув Суз Агд Іец 275 280 285
Зо
Ніз ТрпхїІ Уаї Агд Аї1а бек їец С1ц Авзр їецш С1у Тгр А1їа Авр Тгр Уаї 290 295 300
Тец Бек Рго Акуд біц Маії сіп Уаії ТПт Меє Сув І1е с1у Аїа Сув Рго 305 310 315 320 бек біп Рпбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Ніз Аїа Сіп І1е Гуз ТіПг бетг Іеєц 325 330 335
Ніз Агд їец пув Рго Авр ТПт Уа1! Рго Аїа Рго Сув Суз Уаі1ї! Рго Аї1а 340 345 350 бек Тут Авп Рго Меєс Уа1і їецп Іїе сбіп Гпув ТПтІ Авп ТПт ТПх Уаї1ї бек 355 360 365
Пец б1іп ТБкг Тут Авр Авзвр Гей їец Аїа Гуз Авр Сув Ніз Сув І1е 370 375 380 «2105 1393 «2115 2459 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 1л3
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 пец Агуд сС1у Аза Агд Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБг Сув Рго Рго Сув Рго 20 25 30
Аза Рго Аїа Гей Аїа сСіу сіу Рго бек Уаі Рпе Пец Рпе Рго Рго Гуз 35 40 45
Рко Гуз Авр ТПх Ге Меєс Іїе бБег Агуд ТПтІ Рго сі Уа1і ТПкх Суз Уаї 50 зо бо
Ууаї уаї Авзр Уа1! Бек Нів бі Авр Рго біцш Уаї пув Рібе Авп Тгр Туг 65 70 75 80 уаї Авр с1у Уа1! сіц Уаї Нів Авп Аїа їув Трт Кгув Рго Агд сі б1ц 85 Зо 95
Зо
Сіп Тут Авп бек ТПт Тут Агд Уаї Уа1ї бек Уаі1і! їєц ТПг Уаї Ієц Нівз 100 105 110 біп Авр Ткгр Гецп Авп о сбіу пув бій Тук Гпув Сув гув Уа1ї! бБегт Авп Гув 115 120 125
А1їа тей Рго Аїа Рго І1е сіц Гпув ТПї І1ї1е бБегт ув Аїа пув С1у сіп 130 135 140
Рго Агд бі Рго біп Уа1! Тугк ТПт Гец Рго Ркго Бех Акд сі бій Меєс 145 150 155 160
ТпЕ гув Авп о біп Уаї бек Ггецп бек Сув Аїа Уаї Ппув с1у РПпе Тук Рго 165 170 175 зехт Авр Іїе Аїа Уа1 сбіш Тгтр бій бБег Авп с1іу сіп Ркго б1й Авп Авп 180 185 190
Тут Гув ТПг ТПт Рго Рго Уаі Гей Авр 5ет Авр сіу бБет РПе РПе Гей 195 200 205 уаї бек пув Гец ТПт Уаії Авр Гуз бБехт Агд Тгр біп сбіп сб1іу Авп Уаї 210 215 220
Рпе бек Сув бек Уаії Меє Нів сі Аїа їец Нів Авп Нів Туг ТПк с1іп 225 230 235 240
Кпузв бБет Гец бет Гец бек Рго б1УуУу Гуз 245 «2105 1948 «2115 31 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 984
Ніз с1у Рго біц сС1у їец Агуд Уа1 с1і1у Робе Тут біц Бех Азр Уа1! Меє 1 5 10 15 сС1у Агд сС1у Нів Аїа Агд їец Уаї Ніз Уаї сб1ц с1ц Рго Ніз Трг 20 25 30 «2105 95 «2115 6 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 95
А1ї1а Агд Авп о с1у Авр Ніз 1 5 «2105 196 «2115 8 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 96
А1а Рго бій Гей ей С1у С1у Рго 1 5
«2105 97 «2115 8 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 97
Аза Рго Аїа їец Аїа сіу с1у Рко 1 5 «2105 198 «2115 8 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 98
А1а Рго Аїа Гей Іїецй С1у С1у Рго 1 5 «2105 399 «2115 8 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 99
Аза Рго біц Гец Аїа сіу с1у Рко 1 5 «2105 100 «2115 15 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 100
Сіц Рго Ппуз бек Сув Авр Гув ТПт Ніз ТПк Суз Рго Рго Суз Рго 1 5 10 15 «2105 101 «2115 13
«2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 101 пуз бек Сув Авр Гуз ТПк Нів ТБртІ Сув Рго Рго Сув Рго 1 5 10 «2105 102 «2115 12 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 102 бек Сув Авр Гуз ТПк Нів ТртІ Сув Рго Рго Сув Рго 1 5 10 «2105 103 «2115 11 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 103
Сув Авр Гув ТПт Ніз ТПк Сув Рго Рго Сув Рго 1 5 10 «2105 104 «2115 10 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 104
Авр Гув ТПх Нів Трт Сув Рго Рго Сув Рго 1 5 10 «2105 105 «2115 «2125» ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 105 пуз ТПх Нів ТБт Сув Рго Рго Сувз Рго 1 5 «2105 106 «2115 8 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 106
ТПЕ Нів ТПкг Сув Рго Рго Сув Рго 1 5 «2105 107 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 107
Сув Ркго Рко Сув Рго 1 5 «2105 108 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 108
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей Сіу Гецп Гец Гец Гец Тгр 1 5 10 15 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 20 25 30
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТПт Уаї Агд Аїа бек Гей с1ц Азр 35 до 45 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК 50 55 бо
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго Бех Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авзп Меє Нівз 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95
Аза Рго Сув Сув Уаії Рго Аїа бБег Тут Авп Рго Мес Уаї Гец І1е сСіп 100 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаії бек Ггеп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130 «2105 109 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
З5 «4005 109
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 40 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 20 25 30 45 Рго С1у Агд Сув Сув Акд їец Нів ТПт Уаї Авп Аїа б5ехг їец Сс1ц Авр теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК 50 зо бо
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе сіп 100 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаії бек Ггеп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130 «2105 110 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 110
Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У
Зо 20 25 30
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр
З5 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК бо 40
Месє Сув І1е с1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Авп Аїа ТПт Авп Меє Нівз 65 70 75 80 45 А1а сіп І1е пув ТПї бек Тец Нів Агд тей Пув Рго Авр ТПт Уа1ї Рго 85 Зо 95
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе сіп 50 1600 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаії бек Ггеп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа 115 120 125 55 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130
«2105 111 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 111
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 еп Агуд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Ієц С01У 20
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 25 Тецш с1у Тер Аїа Авр Тгр Уа1і! Гей бек Рго Агд Сіц Уаі Сіп Уаї ТПг бо
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз
Зо 65 70 75 80
Аїа біп чІї1е Гпув ТПт Авп о Гец ТПтІ Агд Гей Гув Рго Авр ТПт Уаї Ркго 85 Зо 95
З5
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе сіп 100 105 110 40
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаії бек ге біп ТПт Тут Авр Авр Гецпп Гец Аїа 115 120 125 45 пув Авр Сув Нів Сув І1е 130 «2105 112 50 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 55 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 112
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аї1а Акд Сув Аїа Агуд Авп сС1у Авр Нів Сув Рго Ієц С1У 20 25 30
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 35 40 45 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК 50 55 бо
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Азп Авр ТПтх Уаї Рго 85 90 95
Аза Рго Сув Сув Уаії Рго Аїа Бек Тут Авп Рго Мес Уаї їец І1е сСіп 100 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаії бек Ггеп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа
Зо 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130
З5 «2105 113 «2115 134 «2125 ПРТ 40 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду 45 «4005 113
Ме Авр Мес Агд Уаі Ркго Аїа сіп Гей Гей с1у гецп Гец Гец Тец Тгр 1 5 10 15 50 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 20 25 30 55 Рго С1у Агд Сув Сув Агд теп Нів ТПт Уаї Агу Аїа б5ехг тей Сс1ц Авр теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК 50 55 бо
Меє Сув І1е с1у А1ї1а Сув Рго Бех Сбіп Рпе Агд Аї1а Аїа Авп Меє Нів 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе Авп 100 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаії бек Ггеп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130 «2105 114 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
Зо «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 114
Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 20 25 30
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 35 40 45 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК бо 50
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз 65 70 75 80 55 А1а сіп І1е пув ТПї бек Тец Нів Агд тей Пув Рго Авр ТПт Уа1ї Рго 85 Зо 95
А1їа Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Меєс Уаї Гец І1е сіп 100 105 110
Авп оТпт ТпПг о ТпПг о сСіу Уаії бек Гей сіп ТПг Тут Авр Авр Гец Гїец Аїа 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130 «2105 115 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 115
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 20 25 30
Зо
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 35 Тецш с1у Тер Аїа Авр Тгр Уа1і! Гей бек Рго Агд сбіц Уаі Сіп Уаї ТПг бо
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз 40 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95 45
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе сіп 100 105 110 50
Туз ТПт Авп ТПтІ ТБПтї Уаії бек Ггеп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа 115 120 125 55 пув Авр Сув Нів Сув І1е 130
«2105 116 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 116
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15
Тїецш Агуд сб1у Аї1а Акд Сув Аїа Агуд Авп о сСіу Авр Нів Сув Рго Іец С1УуУ
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 20 35 40 45 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уаії Гец бБет Рго Акд бід Уаі сіп Уа1ї ТЕПкК 50 55 бо 25
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз 65 70 75 80
Зо
А1їа сіп І1е Пув ТПтї бБег Гец Нів Агд їец КГув Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95
Аза Рго Сув Сув Уаії Рго Аїа Бек Тут Авп Рго Мес Уаї їец І1е сСіп 100 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПІ Авзп Уаї бек Ггецп біп ТПг Тут Авр Авр Гецп Те Аїа 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130 «2105 117 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 117
Меє Авр Мес Агуд Уаі! Ркго Аїа сСіп Гей Гей біу Ггец їец їец Іец Тгр 1 5 10 15 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 20 25 30
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 35 40 45 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК 50 55 бо
Меє Сув І1е с1у А1ї1а Сув Рго Бех Сбіп Рпе Агд Аї1а Аїа Авп Меє Нів 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе сіп 100 105 110
Туз ТПтІ Авр ТПтІ сСіу Уаі Авп Гецп ТПх ТПт Тут Авр Авр Гецпп Іец Аїа 115 120 125
Зо уз Авр Сув Нів Суз І1е 130
З5 «2105 118 «2115 134 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність 40 «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 118 45 Мес Авр Меєс Агуд Уаії Рго Аїа сіп Гей Гей С1у Гецп Гей Гец Гец Тгр 1 5 10 15 еп Агд сС1у Аза Агд Сув Аза Агд Авп о с1іу Авзр Ніз Сув Рго Іец 01У 50 20 25 30
Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТіПт Уаї Агд Аїа бек Гей б1ц Азвзр 55 теп сі1у Ткр Аї1а Авзр Тгр Уа1і Ггецп бек Рго Атд бід Уаі сіп Уа1 ТЕПкК бо
Месє Сув І1е сС1у А1їа Сув Рго бБег Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авп Меє Нівз 65 70 75 80
А1їа сіп І1е Пув ТПт бек їец Ні Агд їец Гуз Рго Авр ТПтх Уаї Рго 85 Зо 95
Аза Рхто Сув Сув Уаі Рко Аїа бет Тут Авп Рго Мес Уаї їец Іїе сіп 100 105 110
Тпув ТПг Авр ТПт сіу Ма1ї Бек Авп біп ТПт Туг Авр Авр Іец Іец Аїа 115 120 125 уз Авр Сув Нів Суз І1е 130 «2105 119 «2115 17 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду
Зо «4005 119
Авп обі1у Авр Нів Сув Рго їец біу Рго С1у Агд Сув Сув Агд Ієц Нівз 1 5 10 15
З5 шов «2105 120 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «221» МІБ5БС ЕБАТОКЕ «222» (1)..(5) «223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 50 разів «4005 120 сіу бек б1у о1у 5бБег 1 5
«2105 121
«2115 5
«2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«2205
«223» синтетична послідовність поліпептиду
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (1)..11)
«223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (1)..(5)
«223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 20 разів
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (2)..(2)
«223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (3)..(3)
«223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (4)..(4)
«223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (5)..(5)
«223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів
«4005 121 сіу бек б1у Бех щЩ1У
1 5
«2105 122
«2115 5
«2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«2205
«223» синтетична послідовність поліпептиду
«2205
«2215 МІ5С РГЕАТОВЕ
«222» (1)..(5)
«223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 20 разів
«2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (5)..(5) «223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів «4005 122 с1у бек сіу о1у 5ег 1 5 «2105 123 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (1)..(5) «223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 20 разів «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (2)..(2) «223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів «4005 123 с1у бек о1у Бех С1У 1 5 «2105 124 «2115 4 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (1)..(4) «223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 20 разів «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «2225 (4)..(84) «223» ця амінокислота може повторюватись до 20 разів «4005 124 сіу с1у о1у 5бБег «2105 125 «2115 4 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «222» (1)..(84) «223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 50 разів «4005 125 сіу с1у о1у 5бБег 1 «2105 126 «2115 5 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «2205 «2215» МІ5С РГЕАТОВЕ «222» (1)..(5) «223» ця ділянка амінокислот може повторюватись до 50 разів «4005 126 сіу б1у с1у о1у 5бБег 1 5 «2105 127 «2115 227 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 127
Авр Гув ТПх Нів ТПт Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Аїа Тед Аїа С01Уу 1 5 10 15 с1іу Рго бБет МУМаії РПпе Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго гув Авр ТПт Іец Меє 20 25 30
ІТ1е бБег Агд ТПт Рго Сі Уаї ТрІ Сув Уаї Уа1 Уаї Авр Уа1ї! бег Ніз 35 40 45 бі Авр Рго сіц Уаї Гпув Рпе Авп Тгтр Тук Уаі Авр с1у Уа1! сіц Уаї 50 55 бо
Ніз Авп Аїа пув ТПтІ Кпув Рго Агд Сі бі б1іп Туг Авп бек ТПг Туг 65 70 75 80
Атд Уаї Уаї бек Уаі1ії їец ТПг Уаї їец Нів сіп Авр Тгр Іец Авп с01У 85 Зо 95
Туз січ Тут пув Сув Гуз Уа1і бек Авп Гув Аза Тецй Рго Аїа Рго Ше 100 105 110 біц пув ТПІ Іїе бБегт Гув Аїа Гпув сіу сіп Рго Агкд бій Рго біп Уаї 115 120 125
Зо Тут ТПг Гей Рго Рго Бех Агд сій біц Меє ТПг Гув Авп біп Уаї 5ег 130 135 140 теп Тер Сув Гец Уаїії гуз біу РПпе Тут Рко бБет Авр І1е Аїа Уа1 б1ц 145 150 155 160
ТЕр сіц бБет Авп сбі1у біп Рго бі Авп Авп Тут Пув ТПтї ТПкг Рго Рго 165 170 175 уаї гейш Авр бБет Авр сіу бек РпПе РпПе Гей Тут бБет пув Гецп ТПтІ Уаї 180 185 190
Авр Гув бБет Агд Тгр сіп сіп с1у Авзп Уа1і Рібе бет Сув бБет Уаії! Меє 195 200 205
Нів сСіц АтТа Гей Нів Авп Нів Тут ТПг сСіп Пув бекг Іец бек Іец бег 210 215 220
Рко с1У Гувг 225 «2105 128
«2115 112 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 128
А1а Агд Авп о с1у ТБПг Нів Сув Рго їец СсС1у Рго Сс1у Акд Сув Сув Агд 1 5 10 15
Пец Ніз ТПг Уаї Агд Аїа бет їеец Сі Авр їєц С1іу Тгр Аїа Азр Тгр уаї Гей бек Рго Акд сіц Уаії Сіп Уаі ТПх Меєс Сув Іїе С1у Аїа Сув 20
Рго бек біп Рбе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа сбіп І1їе Ппув ТНг бек бо 25
Пец Ніз Агд Гей Кпуз Рго Авр ТПт Уа1ї Рго Аїа Рго Суз Сув Уа1ї Рго 65 70 75 80
Зо Аза бек Тут Авп Рко Меє Уаї Гецп Іїе сСіп гуз ТПг Авр ТПт сіу Уаї 85 90 95 бек гец біп ТПІ Тук Авр Авр їец Гецш Аїа Гуз Авр Сув Нів Суз І1е 35 1600 105 110 «2105 129 «2115 110 40 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду 45 «4005 129
Авп обіу ТПпхї Нів Сув Рго їец біу Рго С1у Агд Сув Сув Агд Ієц Нівз 1 5 10 15 50
ТПх Уаі Акуд Аїа бет Гей бі Авр Ге сб1і1у Тгтр Аїа Авр Тгр Уаї1ї Гец 20 25 30 55 бек Рго Агд бі Уа1і біп Уа1 ТПт Меєс Сув І1їе с1у Аїа Сув Рко бек 35 40 45
Сіп Рбе Агд Аїа Аїа Авзп Меє Ні Аїа СсСіп І1е Гуз Тіт бетг Ієц Нівз 50 55 бо
Ат9д Гецш Гув Рго Авр ТПтІ Уаії Рго Аїа Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа 5ег 65 70 75 80
Тут Авп Ркго Меє Уаї їеп Іїе сіп пув ТПтІ Авр ТПтІ сіу Уаі1ї бек Гец 85 Зо 95
Сіп ТБтг Тут Авр Авр їец їец Аїа Гуз Авзр Суз Нів Сув І1е 100 105 110 «2105 130 «2115 109 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 130
СсСіу ТПг Ніз Сув Рго їец С1у Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 1 5 10 15
Зо уаї Акту Аїа бБет Гец сіц Авр Гец сіу Тгр Аїа Авр Тгр Уаї Іец 5ег 20 25 30
З5
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 40 Рпе Агуд Аїа А1їа Авп Меє Нів АтТа сСіп І1їе Гуз ТПтг бек їец Нів Агд бо
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 45 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп пув ТПтІ Авр ТПтІ біу Уаі1ї бБет Іец сіп 85 Зо 95 50
ТПк Тут Авр Авр їец їец Аїа Гуз Авзр Сув Нів Сув І1е 100 105 55 «2105 131 «2115 109 «2125 ПРТ
«213» Штучна послідовність «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 131 сС1у Авр Ніз Сув Рго їец С1іу Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 1 5 10 15 уаї Авп Аїа бБет Гец сіц Авр Гец сіу Тгр Аїа Авр Тгр Уаї Іец 5ег 20 25 30
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 35 40 45
Рпе Агуд Аїа А1їа Авп Меє Нів АтТа сСіп І1їе Гуз ТПтг бек їец Нів Агд 50 55 бо
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп пув ТПтІ Авр ТПтІ біу Уаі1ї бБет Іец сіп 85 Зо 95
Зо
ТПк Тут Авр Авр їец їец Аїа Гуз Авзр Сув Нів Сув І1е 100 105
З5 «2105 132 «2115 109 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 132 сС1у Авр Ніз Сув Рго їец С1іу Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 1 5 10 15 уа1ї Агуд Аза Авп Гец ТПтІ Авр Гецп сі1у Тгтр Аїа Авр Тгр Уаії Гец 5ег 20 25 30
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 35 40 45
Рпе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа Сіп І1їе Ппув ТБПІ бек Ієц Ніз Агд
50 55 бо
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп пув ТПтІ Авр ТПтІ біу Уаі1ї бБет Іец сіп 85 Зо 95
ТПк Тут Авр Авр їец їец Аїа Гуз Авзр Сув Нів Сув І1е 100 105 «2105 133 «2115 109 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 133 сС1у Авр Ніз Сув Рго їец С1іу Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 1 5 10 15
Зо Ууа1ї Агуд Аїа бБег гейш біц Авр Гецп сі1у Тгтр Аїа Авр Тгр Уаії Гец 5ег 20 25 30
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 35 40 45
Авп Агуд ТБПт АТа Авп о Меє Нів Аїа сСіп І1їе Гуз ТіПгІ бет Ієц Нів Агд 50 55 бо
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп пув ТПтІ Авр ТПтІ біу Уаі1ї бБет Іец сіп 85 Зо 95
ТБІ Тут Авр Авр їец Іїец Аїа Гуз Авр Сув Нів Сув І1е 100 105 «2105 134 «2115 109 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність
«223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 134 сС1у Авр Ніз Сув Рго їец С1іу Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 1 5 10 15
Ууа1ї Агуд Аїа бБег гейш біц Авр Гецп сі1у Тгтр Аїа Авр Тгр Уаії Гец 5ег 20 25 30
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 35 40 45
Рпе Азп Аїа ТрІ Авзп Месє Ніз АТїа Сбіп І1їе Ппув ТБПІ бек Гєц Ніз Агд 50 55 бо
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп пув ТПтІ Авр ТПтІ біу Уаі1ї бБет Іец сіп 85 Зо 95
Зо ТБІ Тут Авр Авр їец Іїец Аїа Гуз Авр Сув Нів Сув І1е 100 105 «2105 135
З5 «2115 109 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 40 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 135 сС1у Авр Ніз Сув Рго їец С1іу Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 45 1 5 10 15 уаї Акту Аїа бБет Гец сіц Авр Гец сіу Тгр Аїа Авр Тгр Уаї Іец 5ег 20 25 30 50
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп 55
Рпе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа Сіп І1їе Ппув ТБПІ бек Гєц Ніз Агд бо
Тецп Гпув Ркго Авр ТПї Уаі Рго Аза Рго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Тук 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп Азп ТПї ТПї ТБПт біу Уаі1ї Бек Іец сіп 85 Зо 95
ТБІ Тут Авр Авр їец Іїец Аїа Гуз Авр Сув Нів Сув І1е 100 105 «2105 136 «2115 109 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична послідовність поліпептиду «4005 136 сС1у Авр Ніз Сув Рго їец С1іу Рго с1у Агд Суз Сув Агд їец Нів ТЕГ 1 5 10 15 уаї Акту Аїа бБет Гец сіц Авр Гец сіу Тгр Аїа Авр Тгр Уаї Іец 5ег 20 25 30
Зо
Рго Акд бі Уаі1 біп Уа1! ТПг Мес Сув І1е с1у Аїа Сув Ркго бБет біп
З5
Рпе Агд Аї1а Аїа Азп Мес Ніз Аїа Сіп І1їе Ппув ТБПІ бек Кеш Ніз Агд бо 40 Течш Гпув Рго Авр ТПт УМаі1ї Рго Аїа Ркго Сув Сув Уаі Рго Аїа бек Туг 65 70 75 80
Авп о Рго Мес Уаії Гец І1е сіп пув ТПї Авп ТБПтІ ТПт Уаї бБет Іец сіп 45 85 Зо 95
ТПк Тут Авр Авр їец їец Аїа Гуз Авзр Сув Нів Сув І1е

Claims (5)

100 105 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (ЗОЕ15), який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер, при цьому кожен з них містить: () перший поліпептид, який містить, від М-кінця до С-кінця: Ес-послідовність (ЇД людини, яка містить шарнірну ділянку і послідовність СНЗ, яка містить щонайменше один сконструйований виступ, який містить щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти в Ес-послідовності (ДО1 людини, причому заміна є вибраною з групи, яка складається з О347УМ/у, 366 і Т394Уу/У відповідно до нумерації ЕМ; і (ії) другий поліпептид, який містить, від М-кінця до С-кінця: Ес-послідовність (303 людини, яка містить шарнірну ділянку і послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину, яка містить щонайменше одну заміну відповідної амінокислоти в Ес-послідовності ДС! людини, причому заміна є вибраною з групи, яка складається з 73665, І З368А, 713945, Е405Т/ЛЛА і х407ТЛ//А відповідно до нумерації БО; причому перший поліпептид димеризовано з другим поліпептидом через позиціонування виступу першого поліпептиду в западину другого поліпептиду, причому або С-кінець першого поліпептиду, або С-кінець другого поліпептиду кон'юговано з М-кінцем мутеїну СОЕ15 через лінкер, при цьому мутеїн СОРЕ15 містить безперервну амінокислотну послідовність довжиною щонайменше 98 амінокислот і щонайменше на 95 95 ідентичну амінокислотній послідовності ЗБО І МО: 1, причому С-кінцева амінокислота мутеїну СОЕ15 відповідає ізолейцину в положенні 112 в 5ЕО ІЮ МО'-1, і ця безперервна амінокислотна послідовність не містить перші дві амінокислоти, які присутні на М-кінці ХЕО ІО МО:1, і при цьому мутеїн СОРЕ15 містить заміну р5т у порівнянні з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО, і причому мутеїн ЗОЕ15 в першому гетеродимері димерізовано з мутеїном ЗОЕ15 у другому гетеродимері, тим самим формуючи комплекс, який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер.
2. Комплекс за п. 1, який відрізняється тим, що: згаданий перший поліпептид містить, від М-кінця до С-кінця: згадану Ес-послідовність ЇдДо людини, яка містить шарнірну ділянку і згадану послідовність СНЗ, яка містить щонайменше один сконструйований виступ; згаданий лінкер, і згаданий мутеїн СОЕ15; і згаданий другий поліпептид містить, від М-кінця до С-кінця: згадану Ес-послідовність |Д людини, яка містить шарнірну ділянку і згадану послідовність СНЗ, яка містить щонайменше одну сконструйовану западину.
3. Комплекс за п. 1 або п. 2, який відрізняється тим, що Ес Ід згаданого першого поліпептиду Зо являє собою Ес ІдО1.
4. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що Ес Ідс згаданого другого поліпептиду являє собою Ес Ідс1.
5. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий перший поліпептид містить заміну Т36бУУ.
6. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий другий поліпептид містить заміни 73665, І З3684А і 407.
7. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий перший поліпептид додатково містить послідовність СН2.
8. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий другий поліпептид додатково містить послідовність СН2.
9. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий мутеїн СОГ15 містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:129.
10. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий мутеїн СОЕ15 складається з амінокислотної послідовності 5ХЕО ІЮ МО:129.
11. Комплекс за будь-яким із пп. 1-10, який відрізняється тим, що лінкер містить послідовність гліцин-гліцин-гліцин-гліцин-серин (45)п, при цьому п-2-5.
12. Комплекс за будь-яким із пп. 1-10, який відрізняється тим, що лінкер містить послідовність (С45)з або (0545) 5.
13. Комплекс за будь-яким із пп. 1-12, який відрізняється тим, що перший поліпептид містить БО амінокислотну послідовність, визначену 5ЕО ІЮО МО:3.
14. Комплекс за п. 13, який відрізняється тим, що другий поліпептид містить амінокислотну послідовність, визначену 5ЕО ІЮ МО:4.
15. Комплекс за будь-яким із пп. 1-12, який відрізняється тим, що перший поліпептид містить амінокислотну послідовність, визначену 5ЕО ІЮ МО:5.
16. Комплекс за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що згаданий мутеїн СОЕ15 є М-глікозилованим.
17. Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (СОЕ15), який містить перший гетеродимер і другий гетеродимер, при цьому кожен з них містить: перший поліпептид, який містить амінокислотну послідовність, визначену ЗЕО ІО МО:5, і другий поліпептид, який містить бо амінокислотну послідовність, визначену БЕО ІО МО:6, при цьому згаданий перший поліпептид є
М-глікозилованим, і при цьому згаданий перший поліпептид димеризовано зі згаданим другим поліпептидом.
18. Нуклеїнова кислота, яка кодує перший поліпептид, охарактеризований у будь-якому із попередніх пунктів.
19. Нуклеїнова кислота за п. 18, яка функціонально зв'язана з елементом, який контролює експресію, що забезпечує експресію першого поліпептиду з нуклеїнової кислоти.
20. Нуклеїнова кислота, яка кодує другий поліпептид, охарактеризований у будь-якому із пп. 1-
17.
21. Нуклеїнова кислота за п. 20, яка функціонально зв'язана з елементом, який контролює експресію, що забезпечує експресію другого поліпептиду з нуклеїнової кислоти.
22. Експресуючий вектор, який містить нуклеїнову кислоту за будь-яким із пп. 18-21.
23. Експресуючий вектор, який містить нуклеїнову кислоту за п. 18 або п. 19 та нуклеїнову кислоту за п. 20 або п. 21.
24. Вектор за п. 22 або п. 23, який являє собою вірусний вектор.
25. Клітина-хазяїн, яка містить нуклеїнову кислоту за п. 18 або п. 19 та нуклеїнову кислоту за п. або п. 21.
26. Клітина-хазяїн, яка містить вектор за п. 22, який містить нуклеїнову кислоту за будь-яким з пп. 18 або 19, і вектор за п. 22, який містить нуклеїнову кислоту за будь-яким з пп. 20 або 21.
27. Фармацевтична композиція, що має активність СОЕ15, яка містить комплекс за будь-яким із 20 пп. 1-17 і фармацевтично прийнятний розчинник, носій або допоміжну речовину.
28. Спосіб лікування ожиріння у суб'єкта, який включає введення суб'єкту комплексу за будь- яким із пп. 1-17, причому комплекс вводять у кількості, яка є ефективною для лікування або профілактики ожиріння у суб'єкта.
29. Спосіб лікування або профілактики гіперглікемії у суб'єкта, який включає введення суб'єкту комплексу за будь-яким із пп. 1-17, причому комплекс вводять у кількості, яка є ефективною для лікування або профілактики гіперглікемії у суб'єкта.
30. Спосіб за п. 29, який відрізняється тим, що суб'єкт має цукровий діабет.
31. Спосіб за будь-яким із пп. 28-30, який відрізняється тим, що суб'єктом є людина.
32. Спосіб за будь-яким із пп. 28-31, який відрізняється тим, що суб'єкт страждає на ожиріння.
33. Спосіб за будь-яким із пп. 28-32, який відрізняється тим, що введення здійснюють за допомогою парентеральної ін'єкції.
34. Спосіб за п. 33, який відрізняється тим, що парентеральна ін'єкція є підшкірною.
35. Спосіб за будь-яким із пп. 28-34, який відрізняється тим, що введення включає введення комплексу щодня, два рази на тиждень, один раз на тиждень, один раз на 2 тижні або один раз на місяць.
диких ке сотка мх ОКА ККЖує Х Коиохвує мокру, купах ках МК ТЕКИ ХХ МЕ УК З ЕУ Я Е; дервт ту х д ТЕ її Кк : дху у з : ї вер г ЕЕ Еш: г: ї ї 1 її їх ї ії : ї Й дхету ум ї її: 1 35133 її: Н ІЗ і НЕ З: тт пт рі ЕЕ ШЕ 1. ай В з ї : її : 1 Кі і м: Га і : її т ше о їй Р: їх Тл 1 її 35 5 їх 3 : ММ Х 3 в ен НЕК тд КО, рони ЕЕ: БОР ї А Х де ї у 3 ї ДНУ її ї її 11. ОМ пк 1 її 31 а ТОРІ а ОБЖ 1: роті Ті ЗЕ: ГЕ: ЕЯ Я ЕЕ ДЕ: ї ї ІЗ 3 ї з 1: ї ї їх г ї ГКУ ї ї З ї ЕХ ї ї її ї ГК ї їх 33 ї КУН КЗ ї ї 5: ВІ ЕЕ ЗЕ А 1 15 і : 51 її ї 15. Е.І дей Коней їі Е : ШЕ Мн ей МАЯ Я Ме Му їх ї НЕ Менш М т ї і І 1 її: ї І ККУ Ї ї х ї Х фе у, їх 11 ї Хллних ї Тов жуУхх ще Й у ії паху ЗМ ря ІЗ сих ах ЕН СЕМА не з ца і ї що ноші ТАМИ ОМВК У иа какая 7 7 х, дин. тихі їі у їх а х р не Ме ще ЗУ зок ге ен Ед а УТ ї «А. Са М ча г: КО я й є - у вче ан чу х а й са х З ЧЕЯ о КУЩ Я Ки сля се ве: М тя ух КеЄ Я КЕ -- з мнхкд. ча г Же де у М ка ЕЖУ оман Мини ї Кк ї ї ве Її ее денна Гашек г со: М : Ві МЕЗННННУ сечу, а З Се : З я ї ї ї тт ТОБІ їі БОРТ і Рі ЕЕ хе ї Її хх ї ІЗ їх: ї ї 1 ї ї 1 ї ІЗ КУ ї Її ї ї ї хх І ї їх ї ї у ї ї 11 ї 3 5 Ї ШЕ Я їх 551 І 1 315 1: їх 4 і: ї хх ї х їх: ї 1 її ї ї ТК ї Ху ї ї тю ї ОНЕУ У БЕЗ і, її З Тих ї С ЕЕ ШЕ РО ші р, ро ті о Ро ее НИМ ШЕ хи ї т ря ї У ї ща ї 5 ї ї її ї Ко х у хи Я К, її І ї ї ї 5-0 Бі ЕЕ ГТ І і ї ї х ГНЕ ї х ї І ї ї 1: їх ї т: ї їх 311 х 3 У ї ї ї ї і її їх ї З ї ї т: із її 35: ІЗ її ЕМ ї 1 51: хі: Ме М 1 345 : ї ї їх хі ї ї ГЗК М.Х Же хо їх 343 Її І; ГУ ї іх Меню с і Е Е їх Кі х КУ їх 13 5 їх 1: х ї 15 ї ЩЕ ї ї ії ї 13 ї 3 їх .АЇ Ме ХО Хжллний дохо : і пав х І Ми М Мн Медех ур т пай Же Му ї й ї ї ух дяху КК що ї 3 ХХХ ї і се дух З ЗК х З ї Її вах ау 3 фо й ак ТУ лах ТК КІ УКХ щї я СО УКУНК г р Е те Ме х я ії М я сх й с х Е Й а ща ше че бо в Е- каш Ак Ж - іс Ме з х зу ах и жЕЯ Бе ї х. х У СЯ є -е в ж Ко - х ії ча Ох х ще св Ящ ча с ЗК: с У Її; Ким о жу М бю РУ ск ДЕ іу Мал а г 1
Фіг. поь уд УА КУ -- ХУККи Ку МНК КИМ МК ттлилттдтют тя т тянттнтляяту КИХК КК УМИХ МИСУ УТ ККУ З ; пеня т пдотктвтенн Н і їд--х5 ЗК СКК ТКУ ККУ МНС, паланнтатттттіннтяннтдн ПН КН еуКА ЗА Мдкоюмовща с пе дутлнннннтатттттттиееяіннттттт Тонадух З КАВУ і Нощовнвї вм пшдлллятяжеяячянитатититидия ще : гаком і промова о ї пиття жк 1: хо КК. Ту 1 вином і ІКЦ Не х пеаччанитттидідитнаттттттттиііщн І дюни р еп І шику мЕВХОНаХВю НЕ Я Н нини о аа ІОЖБМВХ ск Дію ги г г: : ок и т ї НЕК нення ще т Ме : : Кн Хниннннжнжичижиюни тини тт ГЕ тв ЩЕ ОН : ня ІЩЕ АВИТИ оон БО з КУ пове. : ПІК ВВККНИ УМ КЕ Б о о я Кронос дечнннннн ні трннн : п ІМЕН ВР М хщиМ ЖУК істин, ви ЩЕ І и я др нн ВО : он в в ї І ЕК Ку о он ТОК Кн ШЕ п щ : ж : ВЕ ТИ ВІКІ ВКМ и я НА МЖК ддннннчннн дині Елен аа ПИШМОМ и тя іще ес оон ВДВ ев чі: 3 пах : Ноя ЗДАВ в В ой КК КМ Ку ЗИМИ КМ у :ОВИЖМУ ВІН Ї СХ он САУ М ІЗ оо НН ОВНА ЗКУ Ду и М НИ оон нин нн ин с. : ІЕМ МОи ААЖУН МУК кино на на ТК АДИМ ПЕВ вен в : п ї - : ВУХОМ Ми ОХ АЛІ М ККД І ник анна РОСБИМАХМИ 1 ЗО оо ПЕР ЗНА ожини їв кни хи фі тнннлилиннннт і ООН: КОЗЛА и не пух ЛКК Петя плато МЕ Ше : фот ення тн НЕТ ПУ ВКІ ЗШ ОК М АК Аж у: 1 ЛО Її я ода Туди дики МІД ТЕ у ин В ПЕДА ТАМИ 1 ЛОТ се 3 те и Но ДЛ що ЗНИК КЕ ЗЕМ СО їх Н М : МИЛА дні ЗОН НЯ Воно ві Кан ем ІОВ ОЇ па нн ван ІМДОТ Кум АКТИВАМИ ок о УМ ТК кла ВХ ВОК ож и Кс Зм мн У З СІ Н ниж аа аа ЕМ МІ ЕІ З КУ ска 1 ОВЕЖЕЖВ с: 35 ень КУ, п Вау нн о в дн ЕК ШЕ М НИКИ понят тютюну на й ІК вен ев се аа ІД ВК КАК а а в БУ Її На: РИТА МКУ КК п ЛКК МЕМ ВК ТЕНТ х ТЕ Та : Зх Це НЕ у и ПІНОЮ не ІОВА І: зимі МУ у деки М я Н ЖД тах, : Гвінет ЕК ІК АН ВХ Поні них т ЛК Н КИ : Не ПУТ КК ой корова БПК ЕМ І. ові: ТЕ. Т.А нин Деу ПДК ІІ І ТЕТ чення ит ет РОБІКЄТІВ.Ї ї пиляти кнннннк : Несе о я ІН» КцАВКУ ни кн я кош щу Е ТЕХ і Мийте Пи У нн М я ІБН ни ни пі ВАК ОМ ооо В Где тових ЕЕ нн вв ї пе Н ІДОЛ А ЕТЬ ПАХУ ХУМТ Ен ввтт ман МІМЕ ЕХ КАША УКХ плини чадо У р м і ВЕ ОН нн я Под МІК :ОВІВКНИМ: І зе иф нини ЕКЗ КО КІ и коном ння Троя КОСАМИ ВАК КН вин ня Хо Пд ВИК ПАК ут танк ХІМІЮ ї Дня их нях Толя ої УК «Кін мні МІУ КМТ М І КМ Пн пгт пот ДУЖОК ВО ТИХІ Кеннтнн ниття ї ті Н ТІМ КИ ОК ІК Кт ПЕН ит вм і ДЕБАТІВ, ее они я ши же Її тЕа : Іл Ірена, ЗДА МО. ї ІІтІІІЯ ІІІ Мотя сти Ач : ІМ ОЇ ТУЖЕ фол тмтннняї ТИН ЧЕМ А ВІ КЕН ДЕК и І УМ ТОЖ п Кідннниттннннннї зо ї : По о в НУ вевео но сн в ї У і НЕЇ нн СЕП КК нн и І тові БАН НН НО они нн НЕ СИ ААМ МНН ВК ЮКХ нин ен и : ХЕ Н о ТІНИ пеня я рода ТАК ї СУМ БІК МОХ КАК СМАК МЛК ВЕК МКК пет рент ет титт с А Іі БІТаКАІІ пф них 1 ІРО У АК пу т ОК и НК нин ше о ї ЧЕМ Ми ОЗИМІ КИ АКТ и АН Ем, РОЖІШМНОХ Її пенні стиск ТІ ня ОТ КІ МВ МІ БУМ ГУД няння Хо Ан Кг ОК ЖУКИ КВ А ї пр ї ВКМ ЖАТЬ оон пек ГНЕ ке Тл ення м ЖЕ їжа х ЖЕТІнт тил тт КК ЖК и ем Вл ооо Му їобіюцІВОЇ Те Н ЗЕ шим лтнт ОН У пеененю ЕТ теми т ин ПОЖІНКВІЗМ в Н КЕДИ ВМ ВІКІ що ІОНИ. гітвввеешшкт тях ММК К ТяТ У І лом І МКОЗХОКО АТАК ення нка ть ин 1 КК КеСААК КК ММА дн МИ ш ТЕ ЕД К ИН м п 00 А ВА Фіг 2 д КожеАтуу ун яимнни .
че ОТЖ ЖІ ока ую. ек ку ІЕЕ курва я: НДнокаєННя пожоуевне КІЗ Е Хана : Фора З і АК -ї МАО НЕ ї І ОЖОУК КИ У А. ен ї ож Ух ОМ вен. кою ; ДЕооК юкю юю пилинки юю ююююююй ї кре 1 пе вх ЕХ ї : кА ! Ба В ї лох МЕ. : К че ї ; ЗІ АЗАХ ї а ТО і о КН п о х БУК у У ІК ї по пк тки ї ! ВОВНУ і іБ- т по ї ій й що ї І РУ і УЗ ! мн нн п Е ще і ЕЕ ; М в ї зе Ку. дкозх ж укк Ж ! Кри ія : ї ки Ку, да кох и ї : МУ МУВАХ в. нн ноу Х о я К: 5 сю й х А в НК 1 жу иа су мя ї г. У Е ІК ї Же : нн а но п о х У УК ї Уж їх ! Мем ' Я нн а
Фіг. 26 ХВЕУВА Я: ЗКВеНМОУОх ВАН ТЯЖА Ж лк же а АНУ зач дення СУЯ вона ке може ЕЕ СОЯ Ж о ! ее ВВ КК каОННО Ку ЯКА «аж Віа ВІВ За ниольне зва. зофе МЕНІ ВА ОХ НЕОЛЕУКЕ Ж ке З дя й й ща і. я КН їх ТО 5 5 Ж Ж х 5 5 Ь с и; НЯ І ни -б6 вве 5 шк що а | ен ї І і г: хх же Є роко ИН КВ. ВК: си ж СБ Ши йо ае е и х р У МО Бо ; ще г онааа Ж да ж! іш НЕО ! а ро МУ о КВ Фо - ж Ма що ши Ух ї зрчв в я ! ; ї ї я Ки ЕЕ х Е Е і тк ще
Фіг. З
ВОЩМИ; - ДВК КНЕ ВІЗУ УКВ ЗІ З: ВаНКВНЧНХ моде: СК ливе пох канав В мае зем Ме вад ВЕЖ ско ЕІ. ВЕНИ КЕ з ї я З . У ик Ж и мк Мого ке З ен ВІК КН. ВЕ ВК в сей ЕЕ я а хи ж Я щх хе Б хе й й хх ї ш с хіх мк. Кн р Бас Ще скккм Я З я Я « саа мой «Же ж Бу ї а ро ЗЕ ще Б ко х г ж У ЖЕ Бе Же Де ї й часідне
Фіг. 4 Яка Я » Зв вазо ТУ З вання мне ТЯ пів овен Й мае: межу Ка зечякн» Неві «В в ера З З низ БЖ - БОШ З НОВ за Е мой Я ВІРІ ков т ІЗ БК ОМ уко АК вх пк я х «ей і Зав Я нльІМЕ ї БО в ин Бе 5 -х х ЗУМЖЕ В. З ЩщкЯ й | моні й хек Коза Ес : у ххех хх ку У "я Я Е ї ч- і 5 ж КЕ о їх чо с. 5 СЯ: Жк ЕК Я З ЕЕ: : сх -е ЗБ я Зо КІ 5 докт З їх 3 що м З вх, сойддниоое ії 5 ї Знані фр в в
«ОО. іішени ПН і ноу од осо па я кА х з ії А я З ї ско КК фени ннкннннннучхх ее нан Пон з зон і 7 її Кея ЖЕ в щі ї ї й г Засн
Фіг. 5
ЗОВ ях я Крус ЗНОВ ЗАМКИ КОХ ж ЗВАНІ моде С тро ек нниВ Й ваз межу ОК ЧКІХ ту щу т х Біфхох же Я фо ВЕЖУ і с речи Я 2 як КЕКВ шен у. дош ки сукні у і зош БІО КЕ. Я наве Н І « х по В ее СОКУ ї вк ши в Ин К зва с Оті же ЖКх ї факоооою о нн що ; ГИ тис У АОС жлклни кн слАлАля ях У з Ма хи: 1 й «хр в М ще Н ЖЕ зх Ме КЯ ще: БУ Н 5 нку ті Мох с осі 5 й СН сь ий, ві «КЗ й я одно з ОХ ше і. ще Десь Й УА М 7 однин У фон ов її і т т УМасідни!
іг. 6
Фіг.
Ех вон К с Км ХМ х. су 5 т СХ курю а оду г й: х х х ЖОХІЖМИ х х. їз УХА СХ ж Е З ек Я ДІВО МИ КМ т: Зх. Ж 5 у Я а У зв х х с хх. зе В Я МОУ Ж : соя еВ чар Я дк Хо зх МОННХ ТОВ У сх В З Я ЩЕ а БЕ ТЗ КЗ УК 3 ВК ЖЕ Як Ж ЗЕ ЗВ ЧА У сх В З ві ВК В ТЕ Яр» КМ хх аж Ж з х. ту Є ТЕ Х Щ що КУ НУ ї М же Ж З х З Я СК КУ хК КОЖ КУ шкякя В ще КЗ їх У З М х й во з НК ся КУ х о и в а Е ЯМ й ій й інн сні сних ОКХ учи Я Я т МЕ к Кк З й : ; ї М Е х т чн кхЕкх з шо ' З й х й . ех о - щй с що са і; дхющюююююх оуккккжкккккк у че : і : са щ- : їз Е Дежуутюююхя а ше Е | | кжкжжнкю Ка ау Ми р щи но ша ї дум Кк днк хх - жк т щкк КУ ж - й Дню кт куту ІЗ що 4. й х скхх кекс З і З ї СЯНУ Бо с Бкхя Б ІЗ стро ДК юки й ри те
Ь . ї й ХМЯ еконо Ме ЯМ т оре Уя ї х ке дк І Є : ому а ї З Н ХО ї ї як ї Ж ї їх сек юю нт ни Ще щі я у сек юю " : ни й В | Її їм млх й й оч Шк я г й ж ї : Сі дай З хи о за рок жо хще се ї ї Хкккумтстсжуююю хх ек УКкюююююююююю Е хх а вії «8 133 4 я: і КУ УхУ У ! У ! й ; Ух ; і пи ух ник з о оно хек кю 7 На З ко Кос; Ме ИН и р | ; ех ща ке ення ; КОЖ юю кю юю юю хор Її ев Її лю Ху З І ша ї ї "я Й оку Й ї ї З ще ОКУ ВИК ШИК : ї ї ї КЕУККАІКЖМ АК МИ я сх о ре фузну усю ех ШК Дчмутжмую юю ; х І Бк що й КЕ: о ке ща нн ХУ - я а Бу З. ие ; КК п порою, сс Ах КК хі З У фен сте У си Я т пох ЖІ й ї о я Її дек ї зі за ї СКК СК хх й ся : : ще т о ці ко їх -о З : - що І х ІЗ У і Сак й щ й Е: ї 5 димі Во ск ЗУ ОО Ома ї екю ююф а пк ох ОНе МЕ ШН СВУ х ї ХЕ ЕН Я, де З ЩІ щі лю їй ї ККУ кюкккюку її ле гак зе ОА КО му - . Я дО М кої ї орки ї " х " ще ї щк опа ками з ДЕС ЯЕ я са кн У ще " І ой їх в ; і КВН; вл жея : ї ї сежфеююєюю о у ОК око СУ ЩЕ ОЕООВ п ОМ ФО АЛУ Її ХУ ї ІЗ пежжжеиютююия ї Її Ж шу Ко 1 зр Ж В х х х я 2Я ся що І шк лоуху соєю юю : те те й | я ОО, ств дя УЖЕ їх 5; ї вот ов ої ж В у а З МОН ї АЖ КАК Е ще вия З ї ЗОЗ з 5 ї г Я УЖ КУ. Е 1 М чи й р и КСВ М ї 1 фкжжжежкжк кю Я о ше 35 І хе У КАК зу Е ї духу ую : У а ше й ші І РОМЕО МКК ї Духу ж Ох ї Зх ча о Од х Мт, ши І я ї Ж Даля у я у ях Дитя ї ї Її жух 5 Ох ху Ух; і: Й кінютннн жави із ЕНН поко. я МОХ УНН з І і їжа Ач п їЕосух ОА ОЇ ОБЖ ОС до фо лк ї Я оюккккекккктфоккюююююскк ї й хи. ОО, ее 3 соди лек і н 3 : : ке ОВО їде тА ї 3 сееееедююююєюєюєюєв июня т й і м що п МІ а ЖК ї із ї І Фокєюютютк Кия - й що ної : ЖАХ ХМ Ж Я ї Дюк У х Хе ще ЗЕ їй : ї мож ; ї МІЖ І педикюю " в в : нк : І епититиин и ти де - - й | т сиєжиєюєюиюкиюиюиююю ї ти тет ще й «жтигюююююттю В " - ни : зт ря ЕТ ення нн, нн нн нн и нн кн нн пи ЗІ М медик За Я МЕНЕ КВН У ї й Моланннн кн : уж Й КЕКВ. М В Я а 53 д с ї х з ї 3 Кн ОК ах Зх МК же ке; З КУ ЖК КМ Кх і яз Ох Є Ух З ЕХЯННСЯ осн ее ГУ ї ї й КЯ ж ; : ск З у: Е З. ЗІ | ій 3 Х с що Х КК динк пу : шо ша ї я ій пхтянжни пжжжккюккюк ши ше ще ще чек ;; - енд ккд В : й в ме ве: й ха й пеня щи : 3 пит ї кишще її ча ЮК оз і Ул зи зу у Дууууккик р ї ХА ТУ ху Е РІ фо ху с т ї :. па вва ї ше шк ув Не чне и ї М я -е дан шин, К ик Її ТК, ї ї ни шк З ЕН : Ще ї їв КЕН : ХУ 3 Кого Пн пики ІЗ п КК паш З РОБ ОБ ї їз ТА Е й х м хи гі І хх долю ю ух А З Ах й: юОї ЖК Ох ї пекнжжюююжнютнник ШО : с. У Ух 5 Б КО І ХЕ хх вн, вень ця вх Ку Е КО лов хх 3 яки Я Кк пи жи жк жк ї доки. в ; "х МОЖ ОКІЖИ дих з Но оккюднжю ння оз її а їі що ї Я : : с. 3 Джин и Кк КАК КАХАКЯ хх щи й шк ї Жити Івах і; ї : ї З Ки -е зн й з й їй КЕ ох ОКХ : о У кн ЩОБ Оовтх М ди З А ОА сте се т не | їх Е х У нку Її пух їх з їх о Згу Ве КМ ЖАХ дО ї ї. у нн 1 ш Є ЗШ, х ж не ї ЖК КК ККУ ї ї зх КУ хуй охОх ху з у 3 пк й В: Щ | жхххжююююку і се ; 3. й й й 3 не і 3. : пуху яю ююю ххкухуху ї " дея Кк Ол ре ОКХ о ДМнкжюююкккхкккккк в м ЗУ к я НН і ї : я " що " о : : . : : г; о н : - - ух і х і т. | па Її ФР її мих І ка р х. Зх х ЗВ ОК пОЖКА ОЇ СІК ї Е дижнлялию " що І й ке х. со х. я ї Її ж Що м Х Н МЕ а З пеюіюєююююююююююююююю юю Е КЕ дк, МУКУ З: й хом рок | м а оо ле кв і ою і ех с же ХУ х х ї щ З з ї і Що ї | вкя се юєютю кю укр куюххх ; й ші : 1 Ук НМ - УЖ ж Е нн я їз її вд АН Н ХІТ НУ В ВМІВ о ї у Сфогтюєєєкетк Кут щи но : . їх щ шК Ж Е ї поети " і С : т КД і: ой й х ці | Її сеюююю і Я и хої ож тя ї КК: 1 ї | їх ІЕМ я квот се | о ВН по ЗИ А МІЖ. зи моні знав поииєи хї ЗУ. Її й ху 354 МУ ВОК ї шк ен й же 4. тиж оф 3. дифе Я " ї. не ; ЯКУ ЖюМЕ Ох ї ї З полити у " де ! ЩІ неЯ , х пк ОО іди шої фіи ї ЕЕ ОБ і ТОНЕ КЕКВ й т й Я пф 3 соту КУ ОА І МОМОТ Мт ККУ ї : пи ї Її ї хх У ок БЮ МІ Це ї : МОЖЕ ск пи кю ой дак : й во М ІЗ ї ї ї ї і ї ВО у фл дя Я : я |: : КК ; Е шах : КО Я щих х Н оо нн в я хх Е х ся : ОС ї сфе : ; і тя
Не . г дух т. От ох г сек АК АКА пе й ще м цх і и 5 ша і й що Дижтниниих КАК ККД т у с же ОХ: З ВЕН рейх Я ПБОЖКХ КД БАКИ Ом й - | В : - і хх ї ше ще що ; хх й ПОЯВУ чої рН М У БОЇ ОА Хто а ї Союкюххкуєюю юю х ні Ма з г ок; Ех РОБАНОЮОУНОЮ ї сккккккюккккюкккккккикя пллАААКННКИ КК с ах КД ПЛ їх 1 ї ї одоюююююююююююювююю х | с й що х і З мий З Й КУК Жук жк юкьккк кю ккккккккююю ЕІ Я: ху В м я Е -х ї сх БІ що ля : : лхдкккккккккккх деюкююююююю Її ша сехюку кю кю юю кю кю кююююютю ххх жккя й лчхккююкюююююююююкюккккуккккккки я
КЗ хе сна КУ й. дню «аа М екея 3 є М ї паж ЗК ЖИ КУ У Х с х и КІКХ ОКОМ СХ у Зоя КВ ЗІ ЖК Х В зву ІНК КІВ : КУ 3. ВНУ На КУКИ с Ве КА ТЕЗ Я КУ ЕК МК ККЗ я Х еВ КД КО шк ; йо : г Хе М В сх ЖЕК че --е ие А в МІУ фея АЖ сек ро ки ХМ З гг: й ке Ко КЕ АКНЕ Щ й з і й їх ЕХ З І важке ЕХ х с ТК ж т й ши , І х хе Фо ах ЗК « ІЗ Я ПУХ я - МОСК КІЗ в. С. ЖК А НВ У шкх ЗИ дум ЖХ маша : наз жи і Я м БЗ Мт ше : ЗЕМАН свою у Я ке 7 й с же х ще Б; какая ї т ще х. їж ам тк пн нн т ми щи і и с не ПЕ її ви | ЩЕ 11 дих ї земне Ж Я та нн нн ії в в шо ї думки ї ї У 5 плхккк кун і: ОВО оОопою РоОЕ 1 кофта ! ши п ї КОВО 1 доннлнм о 1 Я Ех в ще і ї ВХ Но . і ї не ї ОО : ши Н Я РУЯКЯ ї реони ї з. пух х ї с Ж. Її хи Ж к ки Кз о ї Ж ке Ж ї кю ї Н но я ро і ов оце ї » Дт нжкнжкі Н БУНИНяЯ : ї орних уккккккнннн КБ овкої оо ї тя денна : Ж Он У і й С ! З коле ми З секти Од У А ЗО КН ІЗ : Ї и ЕОМ ї нині 1 Й : ЩО : ск і ! нн шк ПН: Я 1 жк її дохкккк кВ ї ї з; НАУ ї І г» м и і їди З кі ої егтвокккккк : ши ши щі Ї лдккютттю нн ї і Мої ех ї ї пк фони ши м ше і ОВЕН Я Я РК ощвеоОї ок то 1 офоленкюк Ко ІЗ Н УМ ЗНИК : софдннккнкккнкй щеня Мав А ОР о-вЕ ВО ї ск ях з ; і ши І ще | їі Е ї- - - | | шо ши і ї кох ї У СУ ї пюХ ї ІЗ Теж кккккккккя ї й ІЗ ке ї 1 Ярлкх, сек КУ і «ої А осях о и х : Що | с Н Я Веде ех НН : я о еЕ | ; зе Н ММК Коко кн Е Ого ов Її Ь : сте секфккнкккккк кн Ї ш ші дк ; : Ей : ОО. Ко і ї ен ї Не ї ї щей Мекки у Я : ОО ї ен І х мот о -Щлї ї порти кокс М щої КОХ ї деєеюююдетюююююют жень ї ше яв | я Н КЛИМ РОК ен ян іі Її ха УЮ ОЕ укл фоллллтия з ! ши З я і доєфюєютюютю кни ї 4 з Її да то у пднкккюкванькня Її І щи ще Уж У пив ї й Ки о ВИХ й ї лучче т Й І у КО З Верн Ї 1 да її дк Кох Ї мік кА ї Ши ше рес паї Ех КО т : них ї ОСЕНІ з ї Кінний уко а Па х ххх НЕ х хх СЯ х. коту ї зв. 1 ЗХ. К ні ї ї шк і Ох ТЕБЕ пе гас ШХ : " и у ! ци миши ЕЕ -й шк Ше Щи Н : Моїх і ко ж й її ж с. | ш ший ї ОК ор а м Ше дупи нос ї са їж КОС і пен ши ш : ССКНН НИЄ То : й : пуф 1 ЗАЖННУ очі : : ОВ ї ВО ху ї клали Н З НИ ох : ясен ОВУ ох хе МО ї Хілл т - ДОК ї ї жждюююкккх ще МІРІ Я ОН ШИЯ Н і їх Для, : се м ши | в І ОКЕАНІВ М І і ння ї пе ка о м | ; і ї Я й ї Кін Адннонтнннкх в Н ШОК ої й 3 вени знан і в ще я ше ї а ОЇ СУК. жжккфеююня і і сх ЛЕ кож Н ВМОЗММКХ зехефрекккккин 3 З НК : Н гесеєюреююююююююююкхй 7 ще ее 3 ен Жук Тл Її ся і нн ! в ше зо КІ гл КМ сх зх Кх У х і ххх ї З Ше З х 1 Хоежжятяя их їх БІЖИ ХХ ТО БЕ ї х сикдяяяжжння ? о м Ще й | | ІЕ З ЗОН ху Б ї ан нон ї шк Ода БУК : ша Н Щ йо і нудних х ї ЕЕ М СН НУ обоє яляля ї ге. ие пед ІЗ Ка сг їі мя х ХУ Н х кит Н МІ У уннетькафиисх і її ащо ЯКО КО Н ни ОН КВ х І ОО їх ах 1 кю кни Метр ЗІ ЕОР ОА КО НИМ МИ їх Кк що ї. ни че З МУ ме ї о | Щ Й Що шо х х Ж щ пр ОХ Я Зк ї КЕМИНЖК ек й Й Й ЩО | й у Я х ЗЕ Я 23 ЕК Бе ен че худ ік К дмчкукнижжкня : : що 3 М хх Є ен сни ше КЕ м ра жи Й зовн ннннни с 1 аео п М я ах хе котру : ща цих ци їй їх не й ши З кої оф М 1 но ; я а : ї : І ї МОХ СК тить тичичютютит у ЗК ЖЕ Щі меш тини НН: шої : ймення . с КІ х ро ик ї ї Кч хх : М Бони 1 ї тет ютю юю реж нюють ї Й : Й за Бо У пкт ЖАМУМ ї ЗІ КОМ: М ком м ше як х жк ї Ж шах 5 їх : дикюжеєєєєю ен ї петря о щи плолндкнннну ї З дух ЩІК Р ОВД ї Клин ї в ше не у і Ще ОВО ОВа ОО 1 Дегеенннковх З НН ЕЕ ТМ 3 Держ с. ! | т щ - : ТЕТ ї м КО Її ке я опали нин ї ї -х ОЗ З ї ке си ї : шо ще Ще | з | ї ї о ик» с, х. имя ї ї І. х С їж шк ї ЖАЖЖУК ККУ Км і : Що ! І Кен їх иуутту їн 1 ОО :ООЖЖЕ Кубннтт тних Н З адх і ЦБ Кк АЖ укл Кк її МО, «для се СКУ я х іа І ОО ОО ОМА ї х нн ин ї в ЖЕ ої Оплю її Н ї Б ож ї ко ЛИХ зжкжкнх боже Її пк М їх У ОК ЗК М.О і Дежклиняжянж Н Н о па ! Па денне В ЯЩО ї ху ї Дежхккнккккккк кни т Її дж ММ х йХ і: ШИ. І ТУ Му МАК ОКО : Хуженнннняжікжх Її ши шо ; | які І сх Не Я Н пдекх кн ТТ ш-. 1 ВМ 4 Ту ї пегтетн тенту Е Ши і. ! перев ЕЗ то: ОА: ОВО ї Н ве нених ї ЕІ я ЗИ НН ЗУ Н НМ пе ен ї ду ї пт В пд ї ї пуф юю ші ни щи і й Ів. Из ох у ї усно І ЗЕ 1 ВО: й ї ї ххх Де Бе БР ОЖЕООо н Далее ї да ік ОО ї З дужче меннмх Е ІЗ МОЗ МОЮ : то ж Х Е й ша но | т і МЕЖАХ ЗАМ 1 піки дня із З «ої пий МЖК у ї нн вну ї в 3 соки ї ак о х їди ОЇ В й З. ххх юю і: шк ше 1 ХМК нехкфнннткчня ї хо З хх Іова фо : ххх клккифннм З ЩЕ и ше ї фе пехх а інн г. Й х те У МиКХ рос я в ьо й В Щи Е й Бе З У їх і ЩО ОМ і М. .улужююєєювяяяяя ше ре я фу ЗМК ї З дж ТУ ї Дижкєєююкткккоїх ї . ЖЕ 1 311 І є ї Дітетннчтнй КО БИЖВИ ВЕ Що ї Меюююююнюнкю хх ї шо ши на ци в, Е т МЕЖ З | оххлумння і ОР Ії У З мнднкннкнккнкнний В м ши ІЗ самку. Ї феннннннкжкнчк жк З ОХ домо З БАК т пенею ї ек о ЗДО їх ї ТЕ ше і м ОБОВ їх : КАК фік Т дех гої ОБ ОО М З ХАУС що т ХУ плжккждккююю КК З фам І ум : пееєн, ех МІК Ж док ОО ї 3 кАМумхкняжкау шк З Я 1 і ї сід ччиюьх х Кр х їх ї одіж; УМ ЮК ї ул а : Я ЗОН ї ії пефхууутй ї ї МУКУ КМ АК | Ва у нку Н шикді Ши м - в. : Ба Но І Даля їв МОРІ х зни ши щі ї ! я ШИ ї х. ії пж ЖЕ : кю тую ї «ех Її дах КОХА х 1 хх МОЖУ уд ввів ї й ї СОЯ їх їх їх Ї МОМ і Ще х кжтжожт жк фею Яч ІЗ НО Е В - | вк У ТУ оно муж. ї ЗК пх ї о жчючжюю Н " ! Но ! сх | І екв шашки к фен пе Її ї ї с фе ДАМ ї пд С НЯ ї Мегеєеетеєтойт ї ще КОоБЕЖ ї О їх ї А. Її РУ пк Ко» КАМ а х я речечюжтюи Межі ху Н тя й щи | | п і МІУ ЕЕ Я З джютееееях ї Кох хро ії вх ще ї ши Й но ав Ї З ще ї ви ут І ек ння їх ЕЕ ЗЕ ї ї шЕ І ВМО: понині Н ОКО В др В : р пе й : пюХ Ж пи їх їх ч «титютж ючи г. пе м но 5 дегеееккдт пох. фея ІМК ОІВ Н Без і Ї длелнлто лення ши ї ЖЖ ХЕ МАО Ми Шо 3 БЖ й У ї ї ек чт ШИ і сп ві, ї ї гесесееій есе шо І я Зодчих й ї І КО х У дети чт ШИ х мох й Досеемтюня Що Меея Що - -Х хх ких Й я І Й о ку фо КК Щ ще ух Бах МОЖ с ЩО щх ї ї ж кх Що ШУ х БУ дЕ СЯ ШК но щ х соді зх й хі ТА ї СЯ х ї ва . пААААААААК : Я НК Ж у; пло : й -к їх Я А М 5 ви Її ! с З З Ж їх КАК Ану : З У ЩО Е жежжкккуккккюккккк ї ! | ш ід їх З кжжннжккку З Е - - | | Й | і Е декиееючк яд Е се. Я С СЯ Х -ї пен : т! СХ х У ек Ку і ? ! ! | І В Я ех ї : ї 1 Дін ї т п рижики і : Н ї ххх Е ї у ВХ лико у ї у ІЗ х дфеухкююююкккх й ї " : М ! | І зо ! у ї нн З НЕ Я ї ї Ї не нн с. хх М Її ОХ ак Мо Е І покою : ї ких Н ! ї пеефужююх х ї хх З х : ї ї сдоВінлнля В ши Ву зі : їх Мекки : ПИШЕ УНН: ї Н пн ння ши ще я ши І Н кож ї І 1 птн і в їж 3 : ТЯ Ї ко З кої ї 1 Мееюхчхчичм ї якої оожеж Її 3 : 1 нання Н їх і Я ї Кк в ши У МКК дк і оо і : пофетюкіну Її жк Її жк : : х нн нн я Х і ї і флилиууучуми 1 ОЇ ож І і Мсюююєкя З х З ІОН КА і 3 ї 1 пкклиейнчя 5 : шк ше | | ї х Ух МКМ зі 1 3 м си ї Ю вх ї тя 1 ших пили ї Й Н й : ї хх сю 1 Длитиииифуюих ї ко їжа Ох 3 Ї днк кн ви ща ї ПВХ дили т як: Ох ї дл ї щи ше ІЗ ЗЕМ соми ї й ї ск 17 ї ї 3. ох У й В й : Е УКК АВТ і З сук Її 1 7 В сн я ІЗ о ех : я у Я шк де Бе і з : ї днк й й | І ЕЗ ток | | | з і рем У ї хе З же її : Дудолалллклянатня ї схо 1 ; | . я ще Я їх 3 ж ї и я ї й ї хх і : по і : а (З Її хх КО ІЗ Н плилидниння с Ше : і зкка і ккд Ше ше | м т : ХОВІВКЯ пккфннякнкннкн ї дк З Ж І ї З КАК лууУ я рови ши | | ! М : ї у, х у»; У ї їх ожжкккккюкк ІЗ меж з. М ї У Со пи ша. В Н їж : 3 ї Дкллиннюююннк То еко ї 1 КОН ї ве МІ Я і ї : Н пн ан шви й : | я ЗУБ ЕМ В. і Н пекдннтнютнктиккв жах фо: і ї онко ляіччччню ВШ : УЗ хх : днлнитили АК Алл у сеї ожкк ЇЇ жх ї : Хдхкнкнкккфннн ? ние НВ Ге І ЧК дет ния Ку жа З жк їж ї ї а я т що ІЗ М усні їй ї не їх : ї ї Міхедренрния ї ми Ше ще ЕЕ ІЗ ! їж х клю 1 нк хм ї Донччччнчя феееерр ЩО її Н : Н 3 сок Кн коня 7 : не . | т ї ШКТ : ї Н пккк нн ї ЗЕ ШЕ : : посилити ши І хі оо Н і пф Рожко їж ої і : ниж ВЕ ШИ
В. ти нн нн ши ще ! т й ї Оу ня ДОК Ки х а їх хе х х х чоти чичя чити тю чит " В йо ! ! 3 я МОВ ТЕ 1 е ож і : х неси Н миші | | 7 шо - | | ; Ж т 1 «ко їх : Н їх секюдоююєєєюнння Шечдух Ор ї 3 1 ї я поле Зх меш М Ж ІЗ х х МІМАЖАЛ У й ї 1 ї х Х озна Кк хх 1 УЖХ 1 : і МИ - | х | | щ- | не шо і ї де жнуужюю : ах ді 3 щи З В їх : й ІЗ КК ї кла чн Із ії Соя ї ї Н ЕД ше її. ше ШЕ ко ож і: - : х дедяеююююююююєююкюх ши ук, і 1 океех : і : зу ккжучююхчя Й й де і Е ож юю т Км ВУ ТУГУ х і і | Ш . : Н 3 се Ж З юю : я і Ж секти чютн чн чючюя і М ся Коен ть. с ЖЖ хх ще с подккю ВЖК: ЕК. х. хх пкткю ох ой опо В шк У ЕК Маму ту шкоок КищкуУ ка му В в хе ї ї зхахуую мк суки «хе Сбумкх З З х Якачева Я. КМузенУук зменккиеня МеВ а М я КМ вени в оз ТОНЯ яю дже сеї земних З Я ох скочкщ папи УЖ хж пвх о зав ни В УК Вчене може Це Кен х ТЕ: БУЯ КУ Уже я хх рез якя БУК жах У її т У Мо КУ я хз Я яд? дв яв яв й ЯЗ де ям Я ХВ і ї В В Н ї Я ї ї Ї : ї Я ; ї 3 тт ес а У нн Я Фо. Ж оєж МО Су жо їм Зої жмут хо 1 Кк ш М З туш КОХ Н КУ БК Ка В щХ ЮА БУ І Б 1 ЩЕ яМа Би Би КА: ЕІ МЕЖ Ї 3 : Н ї ї ї Н ї І ІЗ ї : ІЗ : нн нн НН МКК ЧА Я їх. ІЗ ї с р зе у о їх ї з із : В НЕ ія Костик ї дк Тут Хуг ! Я і ї Н В : ІВ Ба Ж ЕК ОАЕ В НВ ЕМ АВ В БК КІ А Р ЕЕ ї КИ З ї і В ї ї ї : Н ї : Н і но ик г Н ВИШ і нн в а Ман пи пн мон мон ся воно ї ЖЕЩОКІ КИ 1 ї Н ї ї І ї х ї ї В ї Н ї М і дач її вх ї хом гало ско ще хх ТКУ : гу «Жде ї и НО : я ої І: - шо ЕДЕМ г одух С КОХ Ме КАШ ОК ОТ КУ ТК ЖК МЕМ ЖНАЕУ ЕС А 13 1 МЕМ | ГЕ Н ї Н і ЩО і ї ЕЙ о ї ї МУКУ ух в и неон вн нн ни нні нан : Кіа ї ї І ї х Н ї Н ї ї їх : МІФІ Хек о нн НН НН М шої зл ок ху м В зак км шк Ходи ЧИНИ Кн не и ВОН НН В п Б В С Е В С ї МА ЖИМ : 3 ше ї Н ї ї ї : ї ї нн нн ни и и м ння нео зам нн х жи СЯ їх ї ї ЇЯ я І» У ВІКІВ ІЗ 1. : Ї ї ї Н ї їх ї ї хіх х ї ї МКК АКАМ КЕмхащ і чани ж зм т жі м і аа мо зак г хх км Кам якшо що ож І КК мо хх У зок М де ЕР ВК КО ЕВ ВОК ЗТ БК ГУК БРАВ СН ВК В ХВ РА ЖІ ї. ВЕБ аВК | і Я ї ї Ї ї і ї й Я : Н нн о менй ххх п Знак св ом он ун оо в пав вв св во ов т ТО КІ ІМ : ї ї т сі ї ї Я ІЗ ї Я ІЗ ї У ПІ КІЕ Тк Їде хх шНН і сш уд мМ зії да ки хх : ЕК гкфж і ОО ВІАЖКІІУ дае Тож шк Її ж дж іш жк і ха з ог ах мо ккал ен їх мо їдких НЕСНСЯ ВХ ЗР А ВЕК І І І ВА ДАК ЗТ КО І ПК М 1 ЩЕ: ї пап и ї Ж і: 1 Я ІЗ ї : : ї А КОН : ЩО х : ї Н х. ї : : І : нн они ин мини нн о нн вна нн ни закон нн Мн ї ТЕО ї т ї ? ї ї ї ї 1 МІЗКІВ ї ї ї Ку ї ї Я ї ї ї ї ї : ї ММК іа Хвощ зей и лк в да ди ко і о до! и о В Ви м до пи ший жк що кої у В г ЕВ І А КЕ У ОК НВ І В ВВ Б ЕВ КА КІ В НО БК МОЖ МоВКК ї : ї х 5 х ї ї : ї ї І ї о її Ук Ж Ужя ск Я їх З БУ щох хожх Я ож я У ді У ща З ща 5 Да Ку КЗ ЕІ ЖЖ ях ВІКУ нн КК нн Кн п нн НК в КН п п НК а ї ІЗ ї х ї ї ї Ма ї Ге І х ї щі ІЗ ї м г; птн, ик г кх и. зпижо ої пси, С УШея ко зи чо У ІЗ сист, і и о ше кож т. СЯ : СЯ очко шк ди і о жінк о г ткж и маки во ішов о ко вч ої ї ЖакщЕ КМ ЗЕЯ МАК ЖЕ БК М БК ІД Ж РЕБЕР Е АВ У ГКУ ТІ Я ХЕ І ТК ЖЕ х ІЗ ї їх ї т ї ї (у 3 ї х 1 ї :
5. їх 3 я. х т т. х К. А АННА сеМогестт ї ше ещ ВИС ЗШ З БезВня, ин вафн МОБ ВИН нн на: комин зни пон ї УК ї І ї . Е ї ї ї ї 5 ї х : пох дикої ї МУЛУ я В а и «хощ о кож шк КО п ж и ок І Ва М КС ЕВ, ОО ОО 1 М В КЕ КО їв ти ОБУ ККЗ Ж Ка и НК В ВН я ВУ НЕ МІ ВО ЕК т 1 Ме КН 1. ї ї ї х ї ї й ІЗ їх ї ї ї ї інн нн м кн п нн нм зм нн знан х ІД і. їх : І ІЗ ї ї ї ї Е ї ІЗ КОЖ. змжж при м п по м ою ж у дО 3 КМ Б Кл мо с Укшк ще СК КО КО М Вухо щу Її В ОТ а щи З я пащі ПС КОХ Кн в В НН НН З КОНЯ Ве МК ТО У ПТ Ж ї ХМК Е і ї ї Н ї ї ї 5. ї х ї пер фо нн в и в п в в ВО і: ОКХ х ї 1 : ї ї : ї ї і ї Е Ї МКК За Боже сш о З коми с тм ж вх жо ба ж ж дк В ке як іжа ки З хх сх а кої відео Ї дю НОАЖЕ ВУ ГІ ЖІ ЕВ ЗБ ЕВ ВОЗІ БО КК БВ В БВ ДИКО 1 ЗОВ КВ ВО СЕК АК З ОМ і 1 ї ї Н : ї ї Е Н І: я нн нн вн нн мн а вн нн ї Же ЕЕ х ї їх. ІЗ ї т Н С їх т а ВІКИ їх. ї ах м ж 5 ще с В, У я ї Ж ж. - З я, ї що м ще щ т Її жи к ї МІД АХКАХ р ен о ен ВН и ОН сок ще Вк що щи М жі а І З дм Н пн м КК НН я ОК Кн о СА КК В Ж КЕ ВЕ В то КАН ї 3 ї З ї : ІЗ : ї Я Н ї М в нн нн нн м в вн нку Ко о ї ї В ? ї і Я ї з МИ Кдодо в шу Води шо ди Пн дек сю. СУ пон НЕ А НУ мама. Кк хо іі о В о М ту хм вх Му із до ли и гуд Кі ско В пров М жд о пс кВ ди ОО То одо ки ЖІ ВІЖ КЕН ТИХ ЛІ БУК ІК МК Ту ЖЕІЛУИ Е ХМ Міо ЗВ Ку І МА Р Я 1 Ва кон і і г ї ї 1 З : ї Її ї : ї ї юн и А А НК НН НН Ї ОІВ Е нн З ї ири Е В ї їх В і: ї : МІВ Жде ї Я НІ ї Ще ще я - Я Н Я хх ще. - ї ї ХУКОАКУМХ ОМ тік глас і дж З очок х ка ди із З ук ог жк БЖ ОО око і жк о ка Ж жк кої і й В МЖК я Вк БІДЕ І Б ІІ БІ ЦО І ОН І В КЕ Б В ХО І М КХ : З КМИН 5 ї 1 : Н ї Я |: 1 3 ї ї ї дує ек Кути ююжкккк Кк куки еккиюккк Кк ккккккккк кВ Кк КК КВУ У Ук утекти юю ОМ ОО ОХ мжжх й г ; ; сх ї Ех ККУ п му її щх Ех, їх тром: Уж їх х ще щі (3 ЗЕ ж ян а Б ОБ якЯ ЖЖ Ж Я нн ен нн пн нн ння м в нн нн зн мн вони нн Зм ї ї ї 1 3 ї ї 1 У Я Н Е х : г З і З : З ї Н ЗУ ї Е Я ї 1 Ї 3 : Я Н : х ї і ко Ї ї ї х І : З І ї Н Я Її ї 3 ї ї З : ї ї Н З Н ї ї ІЗ фоеекехреоро реа ккх Мххжххжлккн вже мим нн и ж : ик З 1 Я ї ї Н ! З В ї ї З ВО ї жо їжа Жеж Її оожко роко хх жо боже В жк Її жк х ї Ко й : х : х : їжа ; роко: Її у ен НН ї ї 1 З ї Ї З ї ї ї їх АКВА ї Ї Ї ї ї 1 1 Н В ї ї п нн НН вн ІЗ ХВ ІЗ ї І 1 їх ї ї ї Е х ї : КИ 5 ї - І ї І: ї - шк - : шиї си ї : МІЖ МУ ї ЖЖ 1 ЖЕ аж р Же її жжжЖ ої же Її Ех ЖЖ ОО ЖЖ Р ожжк Її Б Її ЖЖ: : КН 5 ї І 3 І: ї ї їх Е ї ї Н ЗМО 3 ї у 5 5 ї ї ї Е ї ІЗ і и я Кк фр ю оре юю ююкююфеююки КК юки : БИ: В : 3 В ї : ї ! В ї : МІЗКІВ ІЗ ко ож фожеж ї ожшеж о) ЖЖ її жжЕ о ЖЖ ЖЖ 1 ожеж о хЖоО г х ї ж Е : : : 3 : РОС : ї Н : ї ї. фа хан З Н 1 Н 3 : ї Ї ї ї ї ї ща ОК Кя 3 ї ї ІЗ ї ї ї 1 ї ї ї х х он вин анна знання ни а зам а знан нн нан ї ЖК ТВ Н ї ї ї у ї 1 і 1 ї З 1 ГО ЕиМХ Тож Бо хже Ро жжж о фожжа Ро хжж Во ожжюо ї жке «ско г ожжж о же ЇЇ ххх З же ї : ; А ї і: ї і ї З ї А : Е ї ї оду В : Я ї ї м ї 3 ї 1 ї їх ї ї ЖОМУ Н Я ї 5 1 ї 1 І; Й 3 Н Ку 1 нн ванн сн аа ння ан со я а ооо нн о али аа мама ї МІ МщІ Е І ї 3 ї 3 ї І ! ї ї Ку 3 ї МОЖУ М І х 1 -Е і ж хЕ зх жЖжЖ фо жк сі хх жо шЖЖ 5 ЖЖ ої ЖЖЖх ж ше ї баки : ї ї ї 1 ї Н Е: ї ї ї х ІЗ ї ДЕ МНС Е І ї ї І 1 ї ї З 1 3 ї ї ї нн нн нн нн нн ї МЕМ ї У ї ї І З Е: 1 з ї КІ І ї ї ї ЕКІЛУЖХМОМЕ ї у че ії жуих З ско їсожжж Ж жа Її хжк Ж о жан! ххх їж її жжж її дж ї и р ЖЕО ож ї хкЖ її о В жжх хз и Ноя ї ен ЖЖ о жо ЖЖ ї 1 ї пккокк фк. ї ї І ї 1 : Е: х ї к ї ї ї ЖИ Ї ї і ї 1 Н ї Ї З ї ї ї вв в в нив т-
Фіг. З -ННЬИНнНЬН- ет ЬЯєяЯя 6565 565 6 :..-5.---2-: 9: 8: 8-53. -- 2-5 ::2-3(-о.95«Ж (ФФФФФ6Ф Ф56--
UAA201702260A 2014-10-31 2015-10-29 Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (gdf15), та способи лікування ним ожиріння та гіперглікемії у суб'єкта UA121973C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462073737P 2014-10-31 2014-10-31
US201562244604P 2015-10-21 2015-10-21
PCT/US2015/058111 WO2016069921A1 (en) 2014-10-31 2015-10-29 Compositions and methods of use for treating metabolic disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA121973C2 true UA121973C2 (uk) 2020-08-25

Family

ID=55851475

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201702260A UA121973C2 (uk) 2014-10-31 2015-10-29 Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (gdf15), та способи лікування ним ожиріння та гіперглікемії у суб'єкта

Country Status (31)

Country Link
US (4) US9920118B2 (uk)
EP (2) EP3212226B1 (uk)
JP (1) JP6722175B2 (uk)
KR (1) KR20170074852A (uk)
CN (2) CN106687128B (uk)
AP (1) AP2017009828A0 (uk)
AU (1) AU2015339130C1 (uk)
CA (1) CA2961587A1 (uk)
CL (1) CL2017000864A1 (uk)
CO (1) CO2017003487A2 (uk)
DK (1) DK3212226T3 (uk)
DO (1) DOP2017000097A (uk)
EA (1) EA036985B1 (uk)
EC (1) ECSP17021754A (uk)
ES (1) ES2799503T3 (uk)
GT (1) GT201700072A (uk)
IL (1) IL251066B (uk)
MD (1) MD20170035A2 (uk)
MX (1) MX357994B (uk)
MY (1) MY186702A (uk)
NI (1) NI201700042A (uk)
PE (1) PE20171058A1 (uk)
PH (1) PH12017500680A1 (uk)
PL (1) PL3212226T3 (uk)
PT (1) PT3212226T (uk)
SG (1) SG11201702580PA (uk)
SV (1) SV2017005420A (uk)
TN (1) TN2017000113A1 (uk)
TW (1) TWI703161B (uk)
UA (1) UA121973C2 (uk)
WO (1) WO2016069921A1 (uk)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9714276B2 (en) 2012-01-26 2017-07-25 Amgen Inc. Growth differentiation factor 15 (GDF-15) polypeptides
WO2013148117A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
US9161966B2 (en) 2013-01-30 2015-10-20 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. GDF15 mutein polypeptides
EP2950807B1 (en) 2013-01-30 2018-03-28 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use in treating metabolic disorders
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
KR20170065026A (ko) 2014-07-30 2017-06-12 엔지엠 바이오파마슈티컬스, 아이엔씨. 대사 장애 치료용으로 이용되는 조성물 및 방법
CA2961587A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-06 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
CU24613B1 (es) 2016-02-06 2022-07-08 Epimab Biotherapeutics Inc Proteínas de unión a inmunoglobulinas fabs en tandem (fit-ig) biespecíficas que se unen a cmet y egfr
TWI815793B (zh) 2016-03-31 2023-09-21 美商恩格姆生物製藥公司 結合蛋白質及其使用方法
WO2018016881A1 (ko) * 2016-07-19 2018-01-25 (주)아이벤트러스 이중 특이성 단백질 및 이의 제조 방법
EP3500301B1 (en) * 2016-08-16 2023-08-30 Epimab Biotherapeutics Inc. Monovalent asymmetric tandem fab bispecific antibodies
EP3538124A4 (en) * 2016-11-13 2020-07-22 Imagine Pharma COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DIABETES, HIGH BLOOD PRESSURE AND HYPERCHOLESTERINEMIA
JP7134960B2 (ja) * 2016-12-06 2022-09-12 セントビンセンツ ホスピタル シドニー リミテッド 肥満及び摂食障害の治療
WO2019048660A1 (en) 2017-09-10 2019-03-14 Novo Nordisk A/S MIC-1 AND GLP-1 FOR USE IN THE TREATMENT OF OBESITY
WO2019156565A1 (en) 2018-02-12 2019-08-15 Fast Forward Pharmaceuticals B.V. Improved antagonistic anti-human cd40 monoclonal antibodies
TWI724392B (zh) * 2018-04-06 2021-04-11 美商美國禮來大藥廠 生長分化因子15促效劑化合物及其使用方法
CR20200510A (es) 2018-04-09 2020-11-26 Amgen Inc Protreínas de fusión del factor de diferenciación de crecimiento 15
CN112543869A (zh) 2018-08-10 2021-03-23 诺华股份有限公司 Gfral细胞外结构域和使用方法
US11524029B2 (en) 2018-08-13 2022-12-13 Viscera Labs, Inc. Therapeutic composition and methods
US11590161B2 (en) 2018-08-13 2023-02-28 Viscera Labs, Inc. Therapeutic composition and methods
WO2020102454A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Regents Of The University Of Minnesota Cd40 targeted peptides and uses thereof
EP3934679A1 (en) * 2019-03-08 2022-01-12 Amgen Inc. Growth differentiation factor 15 combination therapy
SG11202111570TA (en) * 2019-04-23 2021-11-29 Lg Chemical Ltd Fusion polypeptide comprising fc region of immunoglobulin and gdf15
TW202116808A (zh) * 2019-07-19 2021-05-01 大陸商上海藥明生物技術有限公司 用於偶聯的多肽複合物及其應用
EP4041281A1 (en) 2019-10-04 2022-08-17 Amgen Inc. Use of gdf15 for treating cardiometabolic syndrome and other conditions
BR112022010227A2 (pt) * 2019-11-26 2022-09-13 Yuhan Corp Proteína de fusão gdf15 de ação prolongada e composição farmacêutica compreendendo a mesma
CA3159979A1 (en) * 2019-12-11 2021-06-17 Yeonchul Kim Fusion polypeptide comprising gdf15 and polypeptide region capable of o-glycosylation
CN111499764B (zh) * 2020-04-02 2022-02-08 北京翼方生物科技有限责任公司 一种具有促红细胞生成素活性的长效融合蛋白
CN111887828B (zh) * 2020-07-08 2021-05-07 中南大学湘雅医院 围术期患者非接触式生理信息监测装置、计算机设备和存储介质
DE102020122214A1 (de) 2020-08-25 2022-03-03 Kulzer Gmbh Verfahren und Vorrichtung zum Kürzen von Prothesenzähnen für Dentalprothesen
WO2023122213A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Byomass Inc. Targeting gdf15-gfral pathway cross-reference to related applications
WO2023154953A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Gdf15 polypeptides for treating and preventing autoimmune diseases

Family Cites Families (135)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4845079A (en) 1985-01-23 1989-07-04 Luly Jay R Peptidylaminodiols
US5066643A (en) 1985-02-19 1991-11-19 Sandoz Ltd. Fluorine and chlorine statine or statone containing peptides and method of use
US4894437A (en) 1985-11-15 1990-01-16 The Upjohn Company Novel renin inhibiting polypeptide analogs containing S-aryl-D- or L- or DL-cysteinyl, 3-(arylthio)lactic acid or 3-(arylthio)alkyl moieties
US4885292A (en) 1986-02-03 1989-12-05 E. R. Squibb & Sons, Inc. N-heterocyclic alcohol renin inhibitors
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5089471A (en) 1987-10-01 1992-02-18 G. D. Searle & Co. Peptidyl beta-aminoacyl aminodiol carbamates as anti-hypertensive agents
US4980283A (en) 1987-10-01 1990-12-25 Merck & Co., Inc. Renin-inhibitory pepstatin phenyl derivatives
US5034512A (en) 1987-10-22 1991-07-23 Warner-Lambert Company Branched backbone renin inhibitors
US5063207A (en) 1987-10-26 1991-11-05 Warner-Lambert Company Renin inhibitors, method for using them, and compositions containing them
US5055466A (en) 1987-11-23 1991-10-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. N-morpholino derivatives and their use as anti-hypertensive agents
US5036054A (en) 1988-02-11 1991-07-30 Warner-Lambert Company Renin inhibitors containing alpha-heteroatom amino acids
US5036053A (en) 1988-05-27 1991-07-30 Warner-Lambert Company Diol-containing renin inhibitors
DE3841520A1 (de) 1988-12-09 1990-06-13 Hoechst Ag Enzymhemmende harnstoffderivate von dipeptiden, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und ihre verwendung
US5106835A (en) 1988-12-27 1992-04-21 American Cyanamid Company Renin inhibitors
US5063208A (en) 1989-07-26 1991-11-05 Abbott Laboratories Peptidyl aminodiol renin inhibitors
US5194596A (en) 1989-07-27 1993-03-16 California Biotechnology Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
US5098924A (en) 1989-09-15 1992-03-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Diol sulfonamide and sulfinyl renin inhibitors
US5104869A (en) 1989-10-11 1992-04-14 American Cyanamid Company Renin inhibitors
US5350836A (en) 1989-10-12 1994-09-27 Ohio University Growth hormone antagonists
US5114937A (en) 1989-11-28 1992-05-19 Warner-Lambert Company Renin inhibiting nonpeptides
US5064965A (en) 1990-03-08 1991-11-12 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5095119A (en) 1990-03-08 1992-03-10 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5075451A (en) 1990-03-08 1991-12-24 American Home Products Corporation Pyrrolimidazolones useful as renin inhibitors
US5071837A (en) 1990-11-28 1991-12-10 Warner-Lambert Company Novel renin inhibiting peptides
US5288931A (en) * 1991-12-06 1994-02-22 Genentech, Inc. Method for refolding insoluble, misfolded insulin-like growth factor-I into an active conformation
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US6180602B1 (en) 1992-08-04 2001-01-30 Sagami Chemical Research Center Human novel cDNA, TGF-beta superfamily protein encoded thereby and the use of immunosuppressive agent
WO1994003599A1 (en) 1992-08-04 1994-02-17 Sagami Chemical Research Center HUMAN cDNA AND PROTEIN WHICH SAID cDNA CODES FOR
JPH07250688A (ja) 1994-01-28 1995-10-03 Sagami Chem Res Center ＴＧＦ−βスーパーファミリー蛋白質をコードするヒト新規ｃＤＮＡ
JPH07258293A (ja) 1994-03-23 1995-10-09 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規な蛋白質ならびにその製造方法
US6521227B1 (en) 1999-11-18 2003-02-18 Peter L. Hudson Polynucleotides encoding prostatic growth factor and process for producing prostatic growth factor polypeptides
US5994102A (en) 1994-12-15 1999-11-30 Human Genome Sciences, Inc. Polynucleotides encoding prostatic growth factor and process for producing prostatic growth factor polypeptides
WO1996018730A1 (en) 1994-12-15 1996-06-20 Human Genome Sciences, Inc. Prostatic growth factor
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
DE69637844D1 (de) 1995-06-22 2009-04-09 St Vincent S Hospital Sidney L Neues tgf-beta-ahnliches cytokin
US6524802B1 (en) 1996-03-29 2003-02-25 The Johns Hopkins University School Of Medicine Methods of detecting growth differentiation factor-14
NZ334592A (en) 1996-09-11 2000-10-27 Ortho Mcneil Pharm Inc Protein growth factor related to TNF-beta and coupled with a toxic moiety for use in treating prostate cancer
JP2001515482A (ja) 1997-03-07 2001-09-18 メタバシス・セラピューティクス・インコーポレイテッド フルクトース−１，６−ビスホスファターゼの新規なベンズイミダゾールインヒビター
AU6452098A (en) 1997-03-07 1998-09-22 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel purine inhibitors of fructose-1,6-bisphosphatase
WO1998039342A1 (en) 1997-03-07 1998-09-11 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel indole and azaindole inhibitors of fructose-1,6-bisphosphatase
AU8591198A (en) 1997-07-31 1999-02-22 Johns Hopkins University School Of Medicine, The Growth differentiation factor-15
EP1100822A1 (en) 1998-07-23 2001-05-23 Smithkline Beecham Corporation Secreted cysteine rich protein-6 (scrp-6)
EP1112275B9 (en) 1998-09-09 2004-03-10 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel heteroaromatic inhibitors of fructose 1,6-bisphosphatase
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6465181B2 (en) 1999-03-25 2002-10-15 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
US6974684B2 (en) 2001-08-08 2005-12-13 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
CA2372119A1 (en) 1999-05-17 2000-11-23 Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Und Zum Vertrie B Von Pharmaka Mbh Neuroprotective properties of gdf-15, a novel member of the tgf-.beta. superfamily
GB9912350D0 (en) * 1999-05-26 1999-07-28 European Molecular Biology Lab Embl Modified cytokine
US7572619B2 (en) 2000-03-22 2009-08-11 Octagene Gmbh Recombinant blood clotting factors
EP1276849A4 (en) 2000-04-12 2004-06-09 Human Genome Sciences Inc ALBUMIN FUSION PROTEINS
ES2300325T3 (es) 2000-04-20 2008-06-16 St Vincent's Hospital Sydney Limited Ensayo diagnostico que implica la citoquina 1 inhibitoria de macrofagos (mc1).
WO2002020759A2 (en) 2000-09-08 2002-03-14 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services A non-steroidal anti-inflammatory drug activated gene with anti-tumorigenic properties
JP2005500815A (ja) 2000-12-29 2005-01-13 キュラジェン コーポレイション タンパク質およびそれをコードする核酸
TWI329129B (en) 2001-02-08 2010-08-21 Wyeth Corp Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof
EP1395605B8 (en) 2001-03-09 2014-12-17 Iterative Therapeutics, Inc. Polymeric immunoglobulin fusion proteins that target low-affinity fcgamma receptors
ES2527471T3 (es) 2001-05-11 2015-01-26 Amgen Inc. Péptidos y moléculas relacionadas que se unen a TALL-1
FI117667B (fi) * 2001-07-05 2007-01-15 Univ Zuerich Farmaseuttinen koostumus, joka soveltuu käytettäväksi ortopediassa ja hammaslääketieteessä
US20030053431A1 (en) 2001-09-10 2003-03-20 Lila Madour Method for performing handoff in a radio telecommunications network
EP2277889B1 (en) 2001-12-21 2014-07-09 Human Genome Sciences, Inc. Fusion proteins of albumin and interferon beta
US20060253913A1 (en) 2001-12-21 2006-11-09 Yue-Jin Huang Production of hSA-linked butyrylcholinesterases in transgenic mammals
AR040241A1 (es) 2002-06-10 2005-03-23 Merck & Co Inc Inhibidores de la 11-beta-hidroxiesteroide deshidrogrenasa 1 para el tratamiento de la diabetes obesidad y dislipidemia
US7919084B2 (en) 2002-06-17 2011-04-05 St. Vincent's Hospital Sydney Limited Methods of diagnosis, prognosis and treatment of cardiovascular disease
US7157235B2 (en) 2002-06-17 2007-01-02 St. Vincent's Hospital Sydney Limited Methods of diagnosis, prognosis and treatment of cardiovascular disease
CN1241946C (zh) 2002-07-01 2006-02-15 美国福源集团 对多种细胞具刺激增生作用的人血清白蛋白重组融合蛋白
WO2004043385A2 (en) 2002-11-08 2004-05-27 Barnes-Jewish Hospital Methods and compositions for prostate epithelial cell differentiation
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP2774620A1 (en) 2004-04-13 2014-09-10 St Vincent's Hospital Sydney Limited Method for modulating weight loss
WO2005113585A2 (en) 2004-05-20 2005-12-01 Acceleron Pharma Inc. Modified tgf-beta superfamily polypeptides
US7670595B2 (en) 2004-06-28 2010-03-02 Merck Patent Gmbh Fc-interferon-beta fusion proteins
CN101724071A (zh) 2004-10-08 2010-06-09 杜门蒂斯有限公司 抗肿瘤坏死因子受体1的单域抗体及其使用方法
DK1844337T3 (da) 2005-01-24 2013-09-30 Pepscan Systems Bv Bindingsforbindelser, immunogene forbindelser og peptidmimetika
JP2007258293A (ja) 2006-03-22 2007-10-04 Fuji Electric Holdings Co Ltd はんだ濡れ性評価装置およびはんだ濡れ性評価方法
SI2004683T1 (sl) 2006-03-24 2016-09-30 Biogen Hemophilia Inc. Pc5 kot encim za obdelavo propeptida faktorja ix
US8974748B2 (en) 2007-04-05 2015-03-10 Corning Incorporated Dual inlet microchannel device and method for using same
US7754689B2 (en) 2006-06-02 2010-07-13 Wyeth Llc Finger-1 peptide analogs of the TGF-β superfamily
CN101511859A (zh) 2006-06-02 2009-08-19 惠氏公司 TGF-β超家族的蛋白质和肽用于纯化和治疗方法的用途
NZ574423A (en) 2006-07-26 2012-04-27 Pepscan Systems Bv Immunogenic compounds and protein mimics
BRPI0715126B8 (pt) 2006-08-04 2021-07-27 Medizinische Hochschule Hannover métodos para avaliação do risco de intervenções cardíacas e usos à base de gdf-15
SI2144639T1 (sl) 2007-04-25 2013-03-29 Stem Cells Spin S.A. Nova linija izvorne celice in uporaba le-te
BRPI0814465B1 (pt) 2007-07-26 2021-11-23 Novagen Holding Corporation Proteína de fusão, dímero, método para produzir uma proteína de fusão, linhagem de célula, usos de uma proteína de fusão e de uma composição farmacêutica e composição farmacêutica
DE08786222T1 (de) 2007-07-31 2010-11-25 Affibody Ab Neue albuminbindende zusammensetzungen, verfahren und anwendungen
CN101854947A (zh) 2007-08-16 2010-10-06 圣文森特医院悉尼有限公司 用于调节巨噬细胞抑制因子(mic-1)活性的药剂和方法
EP2209486A1 (en) 2007-10-09 2010-07-28 St Vincent's Hospital Sydney Limited A method of treating cachexia with the removal or inactivation of macrophage inhibitory cytokine-1
CA2701945A1 (en) 2007-10-22 2009-04-30 Samuel Norbert Breit Methods of prognosis of overall survival using mic-1
JP2011501958A (ja) 2007-10-29 2011-01-20 バージニア テック インテレクチュアル プロパティーズ インコーポレーテッド ブタＤＣ−ＳＩＧＮ、ＩＣＡＭ−３およびＬＳＥＣｔｉｎならびにそれらの使用
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
JP2011509403A (ja) 2008-01-08 2011-03-24 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー Ｇｄｆ−１５に基づいて救急室を受診する患者のリスクを評価するための手段及び方法
JP5647899B2 (ja) 2008-01-08 2015-01-07 ラツィオファルム ゲーエムベーハーｒａｔｉｏｐｈａｒｍ ＧｍｂＨ オリゴサッカリルトランスフェラーゼを使用するポリペプチドの複合糖質化
AU2009231439A1 (en) 2008-03-31 2009-10-08 Glaxo Group Limited Drug fusions and conjugates
EP2279419A1 (en) 2008-05-20 2011-02-02 Roche Diagnostics GmbH Gdf-15 as biomarker in type 1 diabetes
WO2010007041A1 (en) 2008-07-14 2010-01-21 Roche Diagnostics Gmbh Multimarker panel for diagnosing, monitoring and selecting the therapy for patients with heart failure
WO2010019263A2 (en) 2008-08-15 2010-02-18 Genzyme Corporation Soluble flt constructs for treating cancers
EP2350265B1 (en) 2008-10-31 2019-04-17 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells to the pancreatic endocrine lineage
WO2010048670A1 (en) 2008-10-31 2010-05-06 St Vincent's Hospital Sydney Limited Method of prognosis in chronic kidney disease
EP2211182A1 (en) 2009-01-16 2010-07-28 Roche Diagnostics GmbH Method for the assessment of severity of liver cirrhosis
EP2209003A1 (en) 2009-01-16 2010-07-21 F. Hoffmann-Roche AG Means and methods for differentiating between fibrosis and cirrhosis
CA2752157A1 (en) 2009-02-12 2010-08-19 Stryker Corporation Peripheral administration of proteins including tgf-.beta. superfamily members for systemic treatment of disorders and disease
GB0902737D0 (en) 2009-02-19 2009-04-01 Univ Gent GDF15 as a differential marker for spondyloarthropathy
CA2752647A1 (en) 2009-02-24 2010-09-02 The Salk Institute For Biological Studies Designer ligands of tgf-beta superfamily
HRP20240135T1 (hr) 2009-05-05 2024-04-12 Amgen Inc. Fgf21 mutanti i njihove upotrebe
WO2011005621A1 (en) 2009-07-08 2011-01-13 Amgen Inc. Design of stable and aggregation free antibody fc molecules through ch3 domain interface engineering
US20130323835A1 (en) 2009-07-15 2013-12-05 Zirus, Inc. Mammalian Genes Involved in Infection
US20120309697A1 (en) 2009-10-28 2012-12-06 Samuel Norbert Breit Methods of diagnosing and prognosing colonic polyps
RU2585488C2 (ru) 2009-11-05 2016-05-27 Дженентек, Инк. Способы и композиция для секреции гетерологичных полипептидов
WO2011066501A1 (en) 2009-11-30 2011-06-03 Centocor Ortho Biotech Inc. Antibody fc mutants with ablated effector functions
WO2011064758A2 (en) 2009-11-30 2011-06-03 Pfizer Limited Fusion protein
US9212221B2 (en) 2010-03-03 2015-12-15 Detroit R & D, Inc. Form-specific antibodies for NAG-1 (MIC-1, GDF-15), H6D and other TGF-β subfamily and heart disease and cancer diagnoses
JP5791335B2 (ja) 2010-04-07 2015-10-07 花王株式会社 オルガノポリシロキサン化合物の製造方法
WO2011127458A2 (en) 2010-04-09 2011-10-13 University Of Southern California Systems and methods of cell activated, controlled release delivery of growth factors for tissue repair and regeneration
EP2383571A1 (en) 2010-05-02 2011-11-02 Prof. Hess Medical Consulting GmbH Growth differntioation factor 15 (GDF 15) for risk prediction of diabetic foot ulcer
EP2796874B1 (en) 2010-08-26 2017-03-08 Roche Diagnostics GmbH Use of biomarkers in monitoring a medication in a subject suffering from heart failure
EP2439535A1 (en) 2010-10-07 2012-04-11 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnosis of diabetes related heart disease and GDF-15 and Troponin as predictors for the development of type 2 diabetes mellitus
WO2012106615A1 (en) * 2011-02-03 2012-08-09 Xoma Technology Ltd. Methods and materials for enhancing functional protein expression in bacteria
CN103533951B (zh) * 2011-04-08 2017-04-19 安姆根有限公司 使用生长分化因子15(gdf‑15)治疗或改善代谢障碍的方法
HUE033008T2 (hu) 2011-04-13 2017-11-28 Bristol Myers Squibb Co FC fúziós proteinek, amelyek tartalmaznak új linkereket
WO2013003680A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Genentech, Inc. Anti-c-met antibody formulations
BR112013032630B1 (pt) 2011-06-30 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polipeptídeo heterodimerizado compreendendo região fc de igg
US9714276B2 (en) * 2012-01-26 2017-07-25 Amgen Inc. Growth differentiation factor 15 (GDF-15) polypeptides
WO2013148117A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
ES2784223T3 (es) 2012-06-20 2020-09-23 Univ Virginia Patent Foundation Composiciones y procedimientos para regular la homeostasis de glucosa y la acción de insulina
WO2014000042A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Prince Henry's Institute Of Medical Research COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODIFYING TGF-β FAMILY LIGANDS
BR112015002085A2 (pt) 2012-08-08 2017-12-19 Roche Glycart Ag proteína, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método para produzir a proteína, composição farmacêutica, uso da proteína, método de tratamento e invenção
DK2934584T3 (da) 2012-12-21 2020-05-18 Aveo Pharmaceuticals Inc Anti-gdf15-antistoffer
EP2950807B1 (en) 2013-01-30 2018-03-28 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use in treating metabolic disorders
US9161966B2 (en) * 2013-01-30 2015-10-20 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. GDF15 mutein polypeptides
TR201809571T4 (tr) 2013-03-15 2018-07-23 Hoffmann La Roche Ll-22 polipeptidleri ile ıl-22 fc füzyon proteinleri ve kullanım yöntemleri.
CN203123206U (zh) 2013-04-01 2013-08-14 宋艳丽 一种简易式一次性防污染无菌注射器
EA202092386A1 (ru) 2013-07-31 2021-04-30 Эмджен Инк. Конструкции на основе фактора дифференцировки и роста 15 (gdf15)
CN105658664A (zh) * 2013-07-31 2016-06-08 美国安进公司 含有Fc的多肽的稳定化
KR20170065026A (ko) 2014-07-30 2017-06-12 엔지엠 바이오파마슈티컬스, 아이엔씨. 대사 장애 치료용으로 이용되는 조성물 및 방법
CA2961587A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
US20190000923A1 (en) 2015-12-22 2019-01-03 Novartis Ag Methods of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (gdf-15)

Also Published As

Publication number Publication date
PH12017500680A1 (en) 2017-10-09
PT3212226T (pt) 2020-06-22
US11530260B2 (en) 2022-12-20
US20180237514A1 (en) 2018-08-23
AU2015339130B2 (en) 2020-06-25
IL251066B (en) 2021-06-30
US20200140536A1 (en) 2020-05-07
JP6722175B2 (ja) 2020-07-15
CN106687128B (zh) 2022-05-10
MX357994B (es) 2018-08-01
NI201700042A (es) 2017-05-04
US20230312696A1 (en) 2023-10-05
AP2017009828A0 (en) 2017-03-31
SV2017005420A (es) 2017-10-17
PE20171058A1 (es) 2017-07-21
EP3701969A1 (en) 2020-09-02
ECSP17021754A (es) 2017-05-31
MD20170035A2 (ro) 2017-09-30
PL3212226T3 (pl) 2020-11-02
MX2017005237A (es) 2017-06-30
US10562965B2 (en) 2020-02-18
CL2017000864A1 (es) 2018-05-11
SG11201702580PA (en) 2017-05-30
EA201790405A1 (ru) 2017-09-29
EP3212226A4 (en) 2018-04-11
US20160120999A1 (en) 2016-05-05
DOP2017000097A (es) 2017-05-15
TWI703161B (zh) 2020-09-01
DK3212226T3 (da) 2020-06-15
CN106687128A (zh) 2017-05-17
AU2015339130C1 (en) 2021-03-18
TW201625698A (zh) 2016-07-16
AU2015339130A1 (en) 2017-04-06
CA2961587A1 (en) 2016-05-06
GT201700072A (es) 2018-11-27
EP3212226B1 (en) 2020-03-18
TN2017000113A1 (en) 2018-07-04
CN115043945A (zh) 2022-09-13
EP3212226A1 (en) 2017-09-06
KR20170074852A (ko) 2017-06-30
CO2017003487A2 (es) 2017-09-11
IL251066A0 (en) 2017-04-30
JP2017538395A (ja) 2017-12-28
US9920118B2 (en) 2018-03-20
BR112017005986A2 (pt) 2017-12-19
WO2016069921A1 (en) 2016-05-06
ES2799503T3 (es) 2020-12-18
NZ730054A (en) 2023-11-24
EA036985B1 (ru) 2021-01-25
MY186702A (en) 2021-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA121973C2 (uk) Комплекс, що має активність фактора диференціації росту 15 (gdf15), та способи лікування ним ожиріння та гіперглікемії у суб'єкта
US11358995B2 (en) Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
CN105601748B (zh) 用于代谢病症和疾病治疗的组合物、应用和方法
CN103920139B (zh) 活化素‑actriia拮抗剂及在治疗或预防乳腺癌中的用途
UA121914C2 (uk) Молекула, що зв'язує pd1 і lag3
BR112020026386A2 (pt) Composições e métodos para modulação de fenótipos inflamatórios com monócitos e macrófagos e usos de imunoterapia dos mesmos
EA018037B1 (ru) Способ повышения уровней эритроцитов
UA118749C2 (uk) Конструкція антитіла до cdh19 і cd3
US11400088B2 (en) Uses of compound in preparation of drugs for treating brain glioma
US9675693B2 (en) Methods and drugs targeting Eva1 or Ceacam1 gene expression for treatment and diagnosing of glioma
JP7066157B2 (ja) ファブリー病治療用医薬の組合せ物及びその利用
BR112017005986B1 (pt) Complexo que compreende um primeiro heterodímero e um segundo heterodímero, composição farmacêutica e uso do complexo
KR20230121575A (ko) Cd40l에 특이적으로 결합하는 스테핀 a 단백질 변이체 및 이의 용도