UA120595C2 - Композиція та вакцина для лікування недрібноклітинного раку легень - Google Patents

Композиція та вакцина для лікування недрібноклітинного раку легень Download PDF

Info

Publication number
UA120595C2
UA120595C2 UAA201602593A UAA201602593A UA120595C2 UA 120595 C2 UA120595 C2 UA 120595C2 UA A201602593 A UAA201602593 A UA A201602593A UA A201602593 A UAA201602593 A UA A201602593A UA 120595 C2 UA120595 C2 UA 120595C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
sas
mrna
aos
oss
sos
Prior art date
Application number
UAA201602593A
Other languages
English (en)
Inventor
Карл-Йозеф КАЛЛЕН
Маріола Фотін-Млечек
Мариола ФОТИН-МЛЕЧЕК
Ульріке Гнад-Фогт
Ульрикэ Гнад-Фогт
Original Assignee
Куревак Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49003746&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA120595(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Куревак Аг filed Critical Куревак Аг
Publication of UA120595C2 publication Critical patent/UA120595C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001148—Regulators of development
    • A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
    • A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001186—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001188—NY-ESO
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4727—Mucins, e.g. human intestinal mucin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4747—Apoptosis related proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/86—Lung

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Винахід стосується композиції для лікування недрібноклітинного раку легень, яка містить шість мРНК, причому кожна мРНК кодує різний антиген, вибраний із групи, яка включає 5T4 (глікопротеїн трофобластів; TPBG), Сурвівін (бакуловірусний IAP-повтор-вмісний білок 5; BIRC5), NY-ESO-1 (нью-йоркську плоскоклітинну карциному 1 стравоходу; CTAG1B), MAGE-C1 (антиген меланоми родини C1), MAGE-C2 (антиген меланоми родини C2) та MUC1 (муцин 1), де кожна мРНК утворює комплекс з катіонною сполукою, вибраною із групи, яка включає катіонний пептид, катіонний білок, катіонний полісахарид, катіонний полімер і катіонний ліпід, і де лікування додатково включає введення хіміотерапевтичного агенту. Винахід також стосується вакцини та комбінації шести мРНК для лікування недрібноклітинного раку легень.

Description

катіонний пептид, катіонний білок, катіонний полісахарид, катіонний полімер і катіонний ліпід, і де лікування додатково включає введення хіміотерапевтичного агенту.
Винахід також стосується вакцини та комбінації шести мРНК для лікування недрібноклітинного раку легень.
Галузь винаходу
Даний винахід стосується композиції яка включає принаймні одну мРНК, яка кодує комбінацію антигенів, здатну викликати (адаптивну) імунну реакцію у ссавців, причому антигени вибирають з групи, до якої належать 514 (глікопротеїн трофобластів, ТРВОС), сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5; ВІКС5), ММ-ЕБО-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу, СТАСІВ), МАСЕ-С1 (антиген меланоми родини С1), МАСЕ-С2 (антиген меланоми родини С2) та МОС1 (муцин 1). Винахід також стосується вакцини, яка включає принаймні одну мРНК, яка кодує таку комбінацію антигенів, та застосування вищезгаданої композиції (для приготування вакцини) та/або вакцини для викликання (адаптивної) імунної реакції для лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень (МЗС С), і пов'язаних з ним хвороб або порушень. І, нарешті, винахід стосується комплектів, зокрема, комплектів з компонентів, які включають композицію та/або вакцину.
Рівень техніки
З усіх злоякісних пухлин 25 95 припадає на бронхіальну карциному (карциному легень). У світовому масштабі вона є найпоширенішою причиною пов'язаних з раком смертей серед чоловіків і другою - серед жінок. У Німеччині вона посідає третє місце серед найпоширеніших видів карциноми після карциноми передміхурової залози та карциноми товстої та прямої кишки.
Щороку вона викликає 1,3 мільйона смертей в усьому світі У Центральній Європі захворюваність становить приблизно 60 випадків на 100 000 мешканців, і кількість людей, у яких діагностується рак легень постійно зростає (у Німеччині нині цей показник становить приблизно 50000 на рік). Серед людей, у яких діагностовано рак легень, середня загальна п'ятирічна виживаність складає лише 5 відсотків. Незважаючи на це, прогнозована тривалість життя кожного окремого пацієнта повністю залежить від стадії хвороби (класифікація ТММ) та конкретного підтипу карциноми (раку легень) (див. нижче).
Головними підтипами раку легень, які класифікуються за розміром та виглядом злоякісних клітин, які визначаються під мікроскопом, є дрібноклітинний рак легень (2095) та недрібноклітинний рак легень (М5СІ С) (8095). Ця класифікація, хоч вона й грунтується на простих гістологічних критеріях, має дуже важливий вплив на клінічне лікування та
Зо прогнозування хвороби, коли дрібноклітинний рак легень зазвичай лікують за допомогою хіміотерапії а для недрібноклітинного раку легень здебільшого застосовують хірургічне втручання як першочергове лікування.
Види недрібноклітинного раку легень (М5СІ С) об'єднують, оскільки їхні прогнози та лікування є приблизно ідентичними. Існують три головні підтипи: плоскоклітинна карцинома легень, аденокарцинома та великоклітинна карцинома легень. Хірургія є основним елементом лікування; однак лише чверть пацієнтів піддаються успішному вирізанню, з показником рецидивів 5095. Терапевтичні заходи на пізній стадії хвороби після хірургії включають ад'ювантну хіміотерапію та/або ад'ювантну променеву терапію, оскільки хіміотерапія як монотерапія (терапія першої лінії) виявляється засобом з відносно поганими результатами. При порівнянні чотирьох широко застосовуваних режимів комбінованої хіміотерапії жоден не виявляє переваг над іншими. Показники відповіді на лікування коливалися від 1595 до 22905, з 1- річними показниками виживаності від 3195 до 3695 (див., наприклад, О'Майопу, О., 5. Киттаг, еї а!. (2005). "Моп-5таїЇ-сеїЇ Іипуд сапсег массіпе ІПегару: а сопсіве гемівм/." ) Сіїп Опсої 23(35): 9022 - 8). Таким чином, хоча й виявляється, що доопераційна хіміотерапія не дає подовження прогнозованої тривалості життя, ад'ювантна хіміотерапія - також при поєднанні з променевою терапією - продемонструвала значне збільшення прогнозованої тривалості життя.
Одним із застосовуваних нині хіміотерапевтичних підходів є комбінування речовин на платиновій основі, наприклад, з гемцитабіном навіть як терапії першої лінії, тоді як, наприклад, пеметрексед застосовують як терапію другої лінії.
Іншим можливим підходом, який застосовують для лікування МЗС С, є так звана "таргетна терапія", спрямована на збільшення успішності класичної цитотоксичної хіміотерапії шляхом впливу на пухлинно-специфічні цільові структури на молекулярному рівні. До застосовуваних речовин належать бевацизумаб (інгібітор ангіогенезу) або ерлотиніб, спрямований на тирозинкінази рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК).
Незважаючи на безсумнівність існування певних удосконалень у поточних терапевтичних підходах, лікування раку легень, зокрема, М5СІС, залишається нелегкою справою, яка потребує, з врахуванням високої смертності, додаткових, альтернативних або поліпшених способів лікування.
Таким чином, авторами пропонується використовувати імунну систему згідно зі способом бо лікування МЗС С. Імунна система відіграє важливу роль у лікуванні та профілактиці численних захворювань. Згідно з нині відомими даними, ссавці виробляють різні механізми захисту організму шляхом розпізнавання та знищення, наприклад, пухлинних клітин. Ці пухлинні клітини мають виявлятися й вирізнятися з-поміж нормальних клітин та тканин організму.
Імунна система хребетних, таких, як людина, складається з багатьох типів білків, клітин, органів та тканин, які взаємодіють у складній і динамічній мережі. У рамках цієї більш складної імунної реакції система хребетних з часом адаптується для ефективнішого розпізнавання конкретних патогенів або пухлинних клітин. Процес адаптації створює імунологічну пам'ять забезпечує можливість ще ефективнішого захисту у майбутніх випадках. Цей процес адаптивного або набутого імунітету створює основу для стратегій вакцинації.
Адаптивна імунна система є антиген-специфічною і вимагає розпізнавання конкретних "своїх або "чужих" антигенів під час процесу, який називається презентацією антигена.
Специфічність антигена дозволяє виробляти реакцію, пристосовану до конкретних патогенів або інфікованих патогенами клітин або пухлинних клітин. Здатність до встановлення цих пристосованих реакцій підтримується в організмі так званими "клітинами пам'яті". Якщо патоген інфікує організм більше, ніж одноразово, ці специфічні клітини пам'яті використовуються для його швидкого видалення. Таким чином, адаптивна імунна система забезпечує можливість сильнішої імунної реакції, а також імунологічної пам'яті, коли кожен патоген або пухлинна клітина "запам'ятовується" одним або кількома сигнатурними антигенами.
До головних компонентів адаптивної імунної системи у хребетних переважно належать лімфоцити на клітинному рівні та антитіла на молекулярному рівні. До лімфоцитів як клітинних компонентів адаптивної імунної системи належать В-клітини та Т-клітини, які походять від кровотворних стовбурових клітин кісткового мозку. В-клітини беруть участь у гуморальній відповіді, тоді як Т-клітини беруть участь у клітинно-опосередкованій імунній реакції. І В-клітини, і Т-клітини включають рецепторні молекули, які розпізнають конкретні мішені. Т-клітини розпізнають "чужу мішень, таку, як патогенна цільова структура, лише після процесингу та презентації антигенів (наприклад, малих фрагментів патогену) у комбінації зі "своїм" рецептором, який називається молекулою головного комплексу гістосумісності («МНО).
Натомість антиген-специфічний рецептор В-клітин є молекулою антитіла на поверхні В-клітини і розпізнає патогени як такі, коли антитіла на його поверхні зв'язуються зі специфічним чужорідним антигеном. Цей комплекс антиген / антитіло захоплюється В-клітиною й піддається процесингові шляхом протеолізу з утворенням пептидів. У цьому разі В-клітина виявляє ці антигенні пептиди на її поверхневих Молекулах МНС класу ІІ. Ця комбінація МНС та антигену притягує відповідну хелперну Т-клітину, яка вивільнює лімфокіни й активує В-клітину. Оскільки активована В-клітина після цього починає ділитися, її потомство секретує мільйони копій антитіла, яке розпізнає цей антиген. Ці антитіла циркулюють у плазмі крові та лімфі, зв'язуються з патогенами або пухлинними клітинами, які експресують антиген, і мітять їх для деструкції шляхом активації комплемента або для поглинання та деструкції фагоцитами.
Як клітинний компонент адаптивної імунної системи цитотоксичні Т-клітини (СО8) можуть викликати СТІ -реакцію. Цитотоксичні Т-клітини (СО8") можуть розпізнавати пептиди з ендогенних патогенів та аутоантигенів, які зв'язуються молекулами МНС типу І. СО8:-Т-клітини виконують свою знищувальну функцію шляхом вивільнення цитотоксичних білків у клітині.
Механізми імунної системи утворюють мішені для радикального лікування. Прийнятні способи зазвичай грунтуються на введенні ад'ювантів для викликання природної імунної реакції або на введенні антигенів або імуногенів з метою викликання адаптивної імунної реакції.
Оскільки антигени зазвичай грунтуються на специфічних компонентах патогенів (наприклад, поверхневих білків) або їх фрагментах, також передбачається введення пацієнтові нуклеїнових кислот з наступною експресією потрібних поліпептидів, білків або антигенів.
Традиційні до цього часу способи викликання імунної реакції, імунізація або вакцинація, грунтуються на застосуванні молекул ДНК з метою включення потрібної генетичної інформації у клітину. Було розроблено різні способи для включення ДНК у клітини, такі, як трансфекція фосфатом кальцію, трансфекція поріпреном, злиття протопластів, електропорація, мікроін'єкція та ліпофекція, причому ліпофекція виявилася найбільш придатним способом. ДНК-віруси так само можуть використовуватись як ДНК-носії. Завдяки їхнім інфекційним властивостям, такі віруси досягають дуже високого показника трансфекції. Застосовувані віруси є генетично модифікованими таким чином, що у трансфікованій клітині не утворюється жодних функціональних інфекційних частинок. Однак, незважаючи на ці запобіжні заходи, неможливо виключити ризик неконтрольованого поширення включеного гена та вірусних генів, наприклад, через можливі явища рекомбінації. Це також викликає ризик вставлення ДНК в інтактний ген геному клітини-хазяїна, наприклад, шляхом рекомбінації, внаслідок чого цей ген може бути 60 мутований і, таким чином, повністю або частково інактивований, або може давати викривлену інформацію. Іншими словами, синтез генного продукту, який є життєво важливим для клітини, може бути повністю пригнічений або, в альтернативному варіанті, експресується модифікований або неправильний ген. Зокрема, виникає ризик, якщо ДНК включається у ген, який бере участь у регуляції росту клітини. У цьому разі клітина-хазяїн може стати виродженою й спричиняти виникнення раку або утворення пухлини. Крім того, при включенні ДНК у клітину, яка піддається експресії, необхідно, щоб відповідна ДНК-носій містила сильний промотор, такий, як вірусний
СММУ-промотор. Включення таких промоторів у геном клітини, яка піддається обробці, може призводити до небажаних змін у регуляції експресії гена у клітині. Ще один ризик використання
ДНК як засобу викликання імунної реакції (наприклад, як вакцини) полягає у виробленні патогенних антитіл проти ДНК у пацієнта, якому було введено чужорідну ДНК, що викликає імунну реакцію (яка може бути фатальною).
Таким чином, для ефективного стимулювання імунної системи, що дозволяє лікувати рак легень при уникненні проблем неконтрольованого поширення включеного гена через композиції на основі ДНК, було розроблено композиції на основі РНК. У УУО2009/046738 представлено композицію, яка включає принаймні одну РНК, яка кодує принаймні один антиген, вибраний з групи, до якої належать МУ-Е5О-1, МАСЕ-С1 та МАСБЕ-С2, та іншу, яка кодує принаймні один антиген, вибраний з групи, до якої належать НТЕКТ, МУТ1, МАСЕ-А2, 5Т4, МАСЕ-АЗ, МОСТІ, Нег- г/пеи, МУ-ЕБО-1, СЕА, сурвівін, МАСЕ-С1 та/(або МАСЕ-С2. Навіть якщо комбінація принаймні двох антигенів у вищезгаданій композиції представляє важливий крок у напрямку активної імунотерапії проти раку легень, лікар-практик у пошуку придатного способу лікування для конкретного пацієнта все одно постає перед вибором прийнятної комбінації антигенів, яка була б ефективною і добре переносилася пацієнтом.
Таким чином, загалом, існує простір для пошуку та потреба в ефективній системі, яка могла б застосовуватися для ефективного стимулювання імунної системи, що дозволяє лікувати рак легень, зокрема недрібноклітинний рак легень (МЗС С) при уникненні проблем, які трапляються при застосуванні відомих композицій існуючого рівня техніки.
Таким чином, мета даного винаходу полягає у забезпеченні композиції, яка а) дозволяє лікувати рак легень шляхом стимулювання імунної системи з одночасним Б) уникненням вищезгаданих недоліків.
Зо Таким чином, мета даного винаходу полягає у забезпеченні вакцини або композиції від раку легень для лікування раку легень шляхом стимулювання імунної системи.
Завдання, що лежить в основі даного винаходу, розв'язується завдяки заявленому предметові винаходу.
Короткий опис винаходу
Це завдання розв'язується завдяки предметові даного винаходу, зокрема, завдяки композиції, яка включає принаймні одну мРНК, причому принаймні одна мРНК кодує такі антигени: - 5Т4 (глікопротеїн трофобластів, ТРВО); - Сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5; ВІКС5), - МЖ-Е5О-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу; СТАСІ1В), - МАСЕ-С1 (антиген меланоми родини С1); - МАСЕ-С2 (антиген меланоми родини С2) та - МОСТІ (Муцин 1), або їх фрагменти, і принаймні одна мРНК є моно-, бі- або поліцистронною.
Несподівано було виявлено, що конкретна комбінація антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів вищезгаданої групи, яка кодується принаймні однією мРНК композиції згідно з даним винаходом, може ефективно стимулювати (адаптивну) імунну систему, дозволяючи лікувати рак легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинний рак легень, і пов'язані з ним хвороби або порушення. Сприятливий вплив на лікування вищезгаданих хвороб та порушень досягається незалежно від того, чи застосовують комбінацію антигенів згідно з винаходом як єдину композицію, чи шляхом введення окремих антигенів. Відповідно, будь-яка комбінація описаних авторами антигенів, наприклад, у формі шести окремих композицій мРНК, може служити для однакових цілей та досягнення бажаного ефекту. Очікується, що кількість пацієнтів, реагуючих на таку стратегію вакцинації, має бути суттєво збільшена порівняно з застосуванням інших підходів. У цьому описі такі терміни, як "антигени", "антигенні білки" або "антигенні пептиди" можуть вживатися взаємозамінно. У контексті даного винаходу композицію згідно з винаходом також слід розуміти як композицію, здатну викликати імунну реакцію, в оптимальному варіанті - адаптивну імунну реакцію, як визначено авторами, завдяки принаймні одному з компонентів, які містяться у композиції, або, скоріше, завдяки принаймні одному з 60 антигенів, які кодуються принаймні одним компонентом композиції, тобто, принаймні одній
МРНК, яка кодує антигени, як визначено вище. Згідно з винаходом, комбінація антигенів, які вводяться окремо (наприклад, паралельно) або як єдина композиція, може викликати бажану імунну реакцію. Окреме введення може означати, що окремі мРНК вводять або по суті одночасно, наприклад, протягом 10 хвилин, або з часовими інтервалами протягом тривалого періоду часу, наприклад, понад 30 хвилин.
Далі комбінація антигенів згідно з винаходом пояснюється за допомогою опису композиції, яка включає принаймні одну мРНК, яка кодує комбінацію антигенів. Слід розуміти, що принаймні одна мРНК згідно з винаходом характеризується описаними авторами особливостями, незалежно від того, чи вводиться вона як єдина композиція, чи у формі окремих препаратів, наприклад, рецептованих як шість окремих мРНК, кожна з яких кодує один антиген, і які вводять окремо (наприклад, паралельно).
Серед великої кількості антигенів, які експресуються у клітинах раку легень, згідно з даним винаходом, було відібрано шість антигенів, як визначено авторами, тобто, 514, сурвівін, МУ-
ЕБО-1, МАСЕ-С1, МАСЕ-С2 та МОС1. Ці антигени було визначено як потенційні мішені в імунотерапії. Згідно з винаходом, один або кілька з вищезгаданих антигенів кодуються принаймні однією ОКЕ / кодуючою ділянкою / кодуючою послідовністю, яка забезпечується принаймні однією мРНК. У цьому контексті матрична РНК зазвичай являє собою одноланцюгову
РНК, яка складається з (принаймні) кількох структурних елементів, наприклад, необов'язкової 5'
ТЕ ділянки, розташованого вище сайта зв'язування рибосом, за яким розташовується кодуюча ділянка, необов'язкової 3'ШОТК ділянки, за якою може розташовуватися полі-А-хвіст (та/або полі-
С-хвіст). Згідно з винаходом, композиція включає принаймні одну мРНК, яка кодує принаймні шість визначених вище антигенів. У ній одна мРНК може кодувати один або кілька антигенів, якщо композиція як така забезпечує принаймні шість антигенів, як визначено вище. Таким чином, принаймні одна мРНК композиції може включати більше однієї ОКЕ / кодуючої ділянки / кодуючої послідовності, причому композиція в цілому включає принаймні одну кодуючу ділянку для кожного з принаймні шести антигенів, як визначено вище. В альтернативному варіанті кодуюча ділянка для кожного з принаймні шести антигенів може бути розташована на окремих
МРНК композиції. Ще кращі варіанти втілення для принаймні однієї мРНК представлено нижче.
Згідно з даним винаходом, принаймні одна мРНК композиції кодує 514. "54" є
Зо глікопротеїном трофобластів. У публікації Наггор, СоппоїПу еї аІ. (2006) повідомляється, що людський онкофетальний антиген 5714 являє собою 72 кДа багатий на лейцин мембранний глікопротеїн, який експресується на високому рівні на клітинах плаценти, а також на різноманітних клітинах карциноми людини, включаючи рак товстої та прямої кишки, шлунка, нирок та яєчника, але рідко на нормальних тканинах (див. Нагтор, В., М. СоппоПу, еї а!. (2006). /"Массіпайоп ої соЇогесіа!| сапсег раїепів м/йп тодіїйва Массіпіа АпКага аеїїмегіпуд Те їштог апіїдеп 5Т4 (ТтоМах) іпдисев іттипе гезропзев5 улпісп соїтеїЇаїеє м/йй дібзвазе сопіго!: а рпазе ІЛІ їйаї." Сіїпй
Сапсег Вез 12(11 РІ 1): 3416 - 24). Надекспресія 5Т4 є пов'язаною з негативним прогнозом для пацієнтів з карциномою товстої та прямої кишки, шлунка та яєчника. Незважаючи на такі складові чинники, 5Т4-специфічні клітинні та/або гуморальні імунні реакції викликались у більшості пацієнтів (16 із 17; 9495) після імунізації ТгтоМах, яку вважали стимулюючою порівняно з багатьма іншими випробуваннями протиракової імунотерапії. Отже, вони продемонстрували безпечність та імуногенність ТгоМах, який доставляють внутрішньом'язовим (та внутрішньошкірним шляхами введення. У публікації 7пйао апа Мапа (2007) (7пао, У. апа м.
Мапа (2007). "5714 опсоїорпобіавзі діусоргоївіп: Їапи5 тоїесшіе іп Іїе апа а помеї! роїепіаї! їагдєї адаіїйвї їштог5." Се Мої Іттипо! 4(2): 99 - 104) повідомляється, що онкоглікопротеїн трофобластів 5Т4 є трансмембранним білком, який експресується на ембріональній тканині та поверхні клітин різних злоякісних пухлин. Він відіграє ключову роль у багатьох біологічних та патологічних процесах, включаючи суттєву клітинну міграцію під час ембріогенезу, інвазію клітин, пов'язану з імплантацією, та метастази пухлин, у прогресуванні онкогенезу. Згідно з публікацією КоргезКкі, ВепКо еї аі. (2001), 5714 є глікопротеїном трофобластів, який часто надекспресується в епітеліальних злоякісних пухлинах і забезпечує потенційну мішень для протиракових терапевтичних засобів (див. Коргезкі, М. 5., Р. А. Вепко, еї аї. (2001). "Сігсціайіпу
АМА аз а а штог таїкКег: аєїесіоп ої 514 тАМА іп Бгеаві апа Ішпод сапсег раїйепі зегит." Апп М У
Асад 5сі 945: 172 - 8). Сироватку брали у 19 пацієнтів з поширеним раком молочної залози (5 пацієнтів) або недрібноклітинним раком легень (14 пацієнтів) і у 25 нормальних контрольних добровольців, які мали РНК, що піддається ампліфікації. РНК, видобуту з сироватки, піддавали ампліфікації шляхом ЗТ-ПЛР з застосуванням напівгніздових двоетапних реакцій, продукти яких виявляли шляхом гель-електрофорезу. МРНК 5тТ4 у відтворюваному режимі виявляли у 8/19 (4295) зразків сироватки ракових пацієнтів, включаючи 2/5 зразків сироватки пацієнтів з раком бо молочної залози та 6/14 зразків сироватки пацієнтів з раком легень, але лише у 3/25 (1290)
зразків нормальної контрольної сироватки (р - 0,035).
У контексті цього винаходу оптимальна послідовність принаймні однієї мРНК, яка кодує антиген 514, може містити кодуючу послідовність, як показано на Фіг. З (ЗЕО ІЮО МО: 2), у ще кращому варіанті - як показано на Фіг. 4 (ЗЕО ІО МО: 3). У ще кращому варіанті - принаймні одна мРНК містить послідовність, показану на Фігурах 1 або 2 (ЗЕО ІЮО МО: 1 або 19) або складається з неї. Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції в альтернативному варіанті може кодувати антиген 5714, вибраний з-поміж фрагмента, варіанта або епітопу 514, причому принаймні одна мРНК включає фрагмент або варіант послідовності, показаної на будь-якій з Фігур 1, 2, З або 4 (5ЕО ІЮО МО: 1, 2, З або 19).
Крім того, принаймні одна мРНК в оптимальному варіанті включає послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність, як показано на Фіг. 28 (ЗЕО ІО МО: 75), або її фрагмент, варіант або епітоп.
Крім того, принаймні одна мРНК композиції кодує сурвівін. "Сурвівін" є бакуловірусним ІАР- повтор-вмісним білком 5 (сурвівін). У публікації Сгибе, Моїй еї аї. (2007) описується сурвівін (див. огибе, М., 5. Могії, еї аїІ. (2007). "СОв- Т сеїїІ5 геасіїме (о зигміміп апідеп іп рабйепів м/йп тийіріє туєіота". Сіп Сапсег Вез 13(3): 1053 - 60). Сурвівін належить до родини інгібіторів апоптозу і надекспресується у різних типах злоякісних пухлин. Цитотоксичні Т-клітини, які розпізнають епітопи сурвівіну, можуть бути активовані іп міго і шляхом вакцинації у пацієнтів з лейкозом, раком молочної залози та меланомою. Було досліджено, чи трапляються специфічні до сурвівіну СО8- Т-клітини у пацієнтів з множинною мієломою, і Т-клітини, які розпізнають НІ А-
Аг2.1-зв'язувальний пептид сурвівіну, виявляли у 9 з 23 пацієнтів і 1 з 21 здорових добровольців.
Реагуючі з сурвівіном Т-клітини розпізнавали як остаточно диференційовані ефекторні Т-клітини (Ср8-, Ср45вАх та ССК7-). Позитивну експресію сурвівіну клітин мієломи у зразках кісткового мозку було виявлено у 7 з 11 пацієнтів. Сурвівін є високоекспресованим у більшості ракових клітин людини епітеліального та кровотворного походження, і надекспресія є пов'язаною з прогресуванням раку, несприятливим прогнозом, резистентністю та короткою тривалістю життя пацієнтів. У публікації Оийу, О'бопомап (2007) описується, що сурвівін являє собою 16,5 кДа білок, який надекспресується майже в усіх злоякісних пухлинах, але рідко виявляється у нормальних диференційованих дорослих тканинах (див. бийу, М. у., М. О'бопомап, еї аї. (2007).
Зо "Бигміміп: а рготівзіпд ТШштог ріотаїКег." Сапсег І ей 249(1): 49 - 60). Було продемонстровано, що функціонально сурвівін інгібує апоптоз, сприяє проліферації клітин і посилює ангіогенез.
Відповідно до його ролі в цих процесах, сурвівін було описано як такий, що відіграє ключову роль у прогресуванні раку. Через велику різницю в експресії між нормальною та злоякісною тканиною і його причинну роль у прогресуванні раку сурвівін нині піддається інтенсивному дослідженню як потенційний пухлинний маркер. Виявлені дані свідчать, що вимірювання сурвівіну може сприяти ранньому діагностуванню раку сечового міхура, дозволяє визначати прогноз при багатьох типах раку й прогнозувати реакцію на різні види протиракової терапії. У публікації 2еї5, 5іедеї еї аї. (2003) було продемонстровано, що людські специфічні до сурвівіну
СТІ, які виробляються РВМС шляхом стимуляції аутологічними дендритними клітинами, трансфікованими РНК сурвівіну, є цитотоксичними для низки ліній кровотворних злоякісних клітин, насамперед, пухлинних клітин, виділених з організму пацієнтів з гострим мієлоїдним лейкозом (див. 2еї5, М., 5. Зіедеї, еї аІ. (2003). "Сепегайоп ої суїїюохіс гезропзев5 іп тісе апа
Ппитап іпаїмідца!5 адаіпві пПетаїйоіодіса! таїїдпапсіє5 ибвіпд 5игміміп-АМА-ігапвіесіва депанйіс сеїїв."
У Іттипо!ї 170(11): 5391 - 7). Також було продемонстровано, що вакцинація мишей трансфікованими РНК сурвівіну дендритними клітинами забезпечує довготермінову резистентність до стимуляції експресуючою сурвівін лімфомою, що демонструє потенціал сурвівіну як антигена відторгнення пухлини.
У контексті цього винаходу оптимальна послідовність принаймні однієї мРНК, яка кодує сурвівін, може містити кодуючу послідовність, як показано на Фіг. 7 (ЗЕБЕО ІО МО: 5), у ще кращому варіанті - як показано на Фіг. 8 (ЗЕО ІО МО: 6). У ще кращому варіанті - принаймні одна мРНК містить послідовність, показану на Фігурах 5 або 6 (ЗЕО ІЮ МО: 4 або 20) або складається з неї. Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції в альтернативному варіанті може кодувати антиген сурвівін, вибраний з-поміж фрагмента, варіанта або епітопу сурвівіну, причому принаймні одна мРНК включає фрагмент або варіант послідовності, показаної на будь-якій з Фігур 5, 6, 7 або 8 (ЗЕО ІЮ МО: 4, 5, 6 або 20).
Крім того, принаймні одна мРНК в оптимальному варіанті включає послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність, як показано на Фігурах 29 або 30 (5ЕО ІЮ МО: 76 або 77) або її фрагмент, варіант або епітоп. 60 Крім того, принаймні одна мРНК композиції кодує ММ-ЕБО-1. "МУ-Е5О-1" являє собою раково-тестикулярний антиген 18. У публікації Спеп, Зсапіап еї аї. (1997) описується експресія
МРНК МУ-Е5О-1 у різних пухлинах людини за допомогою ЗТ-ПЛР, яка виявляє меланому 23/67, рак яєчника 2/8, рак молочної залози 10/33, рак щитовидної залози 2/5, рак передміхурової залози 4/16, рак сечового міхура 4/5, рак товстої кишки 0/16, лімфому Беркітта 1/2, гліому 0/15, базальноклітинну карциному 0/2, рак шлунка 0/12, лейоміосаркому 0/2, рак легень 2/12, інші саркоми 0/2, рак нирок 0/10, рак підшлункової залози 0/2, лімфому 0/10, семіному 0/1, гепатому 2/1, пухлину спинного мозку 0/1 (див. Спеп, У. Т., М. у. Зсапіап, еї аї. (1997). "А Тевіїсшаг апіїдеп аретапну ехргез5ей іп питап сапсегз деїесієд Бу ашоіодоив апіроду 5стгеепіпду." Ргос Маї! Асай
Зсі 0 5 А 94(5): 1914 - 8). У публікації дадег, Каграсі еї аї. (2006) повідомляється, що МУ-ЕБЗО-1 є раково-тестикулярним антигеном, який експресується у кількох людських злоякісних пухлинах, і що розробляється багато способів вакцинації, спрямованих проти МУ-Е5О-1 (див. дадег, Е., у).
Кагбасиі, єї а!ї. (2006). "Несотбіпапі массіпіаЛомірох МУ-Е5О-1 массіпев5 іпдисе рої питогаї апа сеїшаг МУ-ЕБО-1-вресіїіс іттипе гезропзез іп сапсег раїіепів". Ргос Маї! Асай 5сі ОО 5 А 103(39): 14453-8). У даному дослідженні безпечність та імуногенність рекомбінантної вісповакцини - МУ-
Е5О-1 та рекомбінантної віспи курей - МУ-Е5О-1 аналізували у групі з 36 пацієнтів з різними типами пухлин. Кожну послідовність спочатку випробували окремо у двох рівнях дози, а потім в умовах "прайм-буст" з рекомбінантною вісповакциною - МУ-ЕБО-1, а потім рекомбінантною віспою курей - МУ-Е5О-1. Вакцини добре переносилися, як окремо, так і разом. Реакції МУ-ЕБО- 1-специфічного антитіла та/або реакції специфічних СО8 та СО4 Т-клітин, спрямовані проти великої кількості МУ-ЕБО-1 епітопів, викликались у процесі принаймні чотирьох вакцинацій з місячними інтервалами у великої частки пацієнтів. Було виявлено, що клони СО8 Т-клітини, які було взято у п'яти вакцинованих пацієнтів, руйнують клітини-мішені меланоми, які експресують
ММУ-Е5БО-1. У кількох пацієнтів з меланомою складалося стійке враження, що вакцинація сприятливо впливає на перебіг хвороби. У публікації Юамі5, Спеп еї аї. (2004) повідомляється, що НІ А-А2-рестриктовані МУ-Е5О-1 пептиди, введені шляхом крізьшкірної ін'єкції, виявилися безпечними й імуногенними (Оамі5, І. Ю., МУ. Спеп, еї аї. (2004). "Кесотбіпапі МЖ-Е5ЗО-1 ргоївїп мії ІЗСОМАТВЇХ адіимапі іпдисез Бгоайд іпівдгаїєд апіроду апа СО4(-) апа СО8(-) Т сеї гезропзев іп питапв". Ргос Маї! Асай 5сі ОО 5 А 101(29): 10697 - 702). Хоча ці випробування було передбачено лише для визначення безпечності та імуногенності, деякі пацієнти
Зо продемонстрували регресію пухлин або стабілізацію хвороби. У публікації дадег, Сспіайіс еї аї. (2000) також розповідалося, що широка ММУ-ЕБО-1-специфічна імунна реакція, включаючи реакції антитіла та СО4 та СО8 Т-клітин, спостерігається після імунізації рекомбінантним білком
МУ-Е5БО-1 у комбінації з ад'ювантом ІЗСОМАТКІХ (С51 Ца., РагкміШе, Місіогіа, А!йзігаїйа) у пацієнтів з вирізаною МУ-ЕБО-1-експресуючою меланомою (див. дадег, Е., 5. ОСпіайс, еї аї. (2000). "Іпдисіоп ої рітагу МУ-ЕБО-1 іттипйу: СО8-- Т Іутрпосуїє апа апіїбоду гезропзез іп рерііде-улассіпаїейд раїепіб м/ййп ММ-Е5БО-1-- сапсегв". Ргос Маї! Асай 5сі ОО 5 А 97(22): 12198 - 203). Ця імунна реакція на вакцину виявилася пов'язаною з тривалою безрецидивною виживаністю. Крім того, у публікації Одипві, Оіап еї а. (2007) повідомляється, що вакцинація пептидом МУ-ЕБО-1 викликає комплексні гуморальні та Т-клітинні реакції при раку яєчника (див.
Одипві, К., РЕ. ФОіап, еї а!. (2007). "Массіпайоп м/п ап МУ-ЕБЗО-1 реріїде ої НІ А сіавв ІЛІ вресіїісйціев іпдисев іпівдгаїєд питога! апа Т сеїЇ гезропзе5 іп омагіап сапсег". Ргос МаїїЇ Асад сі О 5 А 104(31): 12837 - 42).
У контексті цього винаходу оптимальна послідовність принаймні однієї мРНК, яка кодує антиген МУ-Е5О-1, може містити кодуючу послідовність, як показано на Фіг. 11 (ЗЕО ІЮ МО: 8), у ще кращому варіанті - як показано на Фіг. 12 (5ЕБО ІЮО МО: 9). У ще кращому варіанті - принаймні одна мРНК містить послідовність, показану на Фіг. 9 або 10 (5ЕО ІО МО: 7 або 21), або складається з неї. Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції в альтернативному варіанті може кодувати антиген МУ-Е5О-1, вибраний з-поміж фрагмента, варіанта або епітопу МУ-Е5О-1, причому принаймні одна мРНК включає фрагмент
БО або варіант послідовності, показаної на будь-якій з Фігур 9, 10, 11 або 12 (ЗЕО ІЮ МО: 7, 8, 9 або 21).
Крім того, принаймні одна мРНК в оптимальному варіанті включає послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність, як показано на Фіг. 31 (5ЕО ІЮ МО: 78), або її фрагмент, варіант або епітоп.
Крім того, принаймні одна мРНК композиції кодує МАСЕ-С1. "МАСБЕ-С1" є антигеном меланоми родини С, 1. Гиса5, Ое Зтеї еї аї. (1998) нещодавно розпізнали МАСЕ-С1 шляхом виконання КОА (див. І исав, 5., С. ЮОе Зтеї, еї аї. (1998). "ІЧепійісайоп ої а пе МАСЕ депе мін їмтог-5ресіїйс ехргеззіоп Бу гергезепіайопа! аїйбегепсе апаїувіє" Сапсег Нез 58(4): 743 - 52).
МАСЕ-С1 не експресувався у панелі випробуваних нормальних тканин за винятком сім'яників. бо Серед зразків пухлин МАСЕ-С1 часто експресувався у семіномах, меланомах та карциномах сечового міхура. Він також експресувався у великій частці карцином голови та шиї, карцином молочної залози, недрібноклітинних карцином легень, аденокарцином передміхурової залози та сарком. У публікації дипурішй, Спеп еї аї. (2002) описано експресію у клітинах раку молочної залози, раку яєчника, раку печінки, раку сім'яників, раку сечового міхура, меланоми та недрібноклітинного раку легень (3995) (див. Уипурішй, А. А., М. Т. Спеп, еї аї. (2002). "СТ7 (МАСБ-СТ1) апіїдеп ехргезвіоп іп попттаї апа пеоріавіїс їіз5цев". Іпі У Сапсег 99(6): 839 - 45). Сзиге,
Спиа єї аї. (2005) аналізували пухлини 523-х пацієнтів з недрібноклітинним раком легень (МЗС С) на експресію раково-тестикулярних антигенів (див. Сиге, А. О., К. Спиа, еї аї. (2005). "Сапсе!-їевіїз депе5 аге соогаїіпаїеїу ехргеззейд апа аге тагКег!в ої роог оцісоте іп поп-5таї сеї!
Імпа сапсег!". Сііп Сапсег Вез 11(22): 8055 - 62). МАСЕ-С1 був присутній у 18,895. Зсапіап, АйогкКі еї а). (2000) також повідомляли про експресію СТ антигенів у 33 випадках недрібноклітинного раку легень: МАСЕ-С1: 3095 (див. Зсапіап, М. 9., М. К. АкогкКі, еї а. (2000). Ехргезвзіоп ої сапсег-
Тевіїз апіїдепв іп пуд сапсег: аейпйіоп ої бготодотаїп іевіів-5ресіїїс депе (ВАОТ) аз а пем СТ депе, СТУ". бапсегіІ ей 150(2): 155 - 64).
У контексті цього винаходу оптимальна послідовність принаймні однієї мРНК, яка кодує антиген МАСЕ-С1, може містити кодуючу послідовність, як показано на Фіг. 15 (5ЕО ІО МО: 11), у ще кращому варіанті - як показано на Фіг. 16 (5ЕО ІЮО МО: 12), у ще кращому варіанті - на Фіг. 17 (ЗЕО ІО МО: 25). У ще кращому варіанті - принаймні одна мРНК містить послідовність, показану на Фіг. 13 або 14 (ЗЕО ІЮ МО: 10 або 22) або складається з неї. Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції в альтернативному варіанті може кодувати антиген МАСЕ-С1, вибраний з-поміж фрагмента, варіанта або епітопу а МАСЕ-
С1, причому принаймні одна мРНК включає фрагмент або варіант послідовності, показаної на будь-якій з Фігур 13, 14, 15, 16 або 17 (ЗЕО ІЮ МО: 10, 11, 12, 22 або 25).
Крім того, принаймні одна мРНК в оптимальному варіанті включає послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність, як показано на Фіг. 32 (5ЕО ІЮ МО: 79), або її фрагмент, варіант або епітоп.
Крім того, принаймні одна мРНК композиції кодує МАСЕ-С2. "МАСЕ-С2" є антигеном меланоми родини С2. І иса5, Ое Ріаєп еї аї. (2000) нещодавно розпізнали МАСЕ-С2 шляхом виконання КОА на лінії клітин меланоми (див. І иса5, 5., Е. Ое Ріаеєп, еї аІ. (2000). "МАСЕ-В5,
Зо МАСЕ-В6, МАСЕ-С2, апа МАСЕ-СЗ: тоиг пем/ тетбегв ої Ше МАСЕ Тату м/йй їштог-5ресіїіс ехргевзвіоп". Іпї У Сапсег 87(1): 55 - 60). МАСЕ-С2 не експресувався у панелі випробуваних нормальних тканин, за винятком сім'яників. Серед зразків пухлин МАСЕ-С2 часто експресувався у семіномах, меланомах та карциномах сечового міхура. Він також експресувався у великій частці карцдином голови та шиї, карцдином молочної залози, недрібноклітинних карцином легень та сарком. Зсапіап, АйогКі еї аІ. (2000) повідомляли про експресія СТ антигенів у 33 випадках недрібноклітинного раку легень: МАСЕ-С2: 3095 (див.
Зсапіап, М. У., М. К. АІюжі, єї а. (2000). "Ехргезвіоп ої сапсе!г-їевіїв апіїдеп5 іп Їшпд сапсег: деїтіпцоп ої Бготодотаїп іезіів-5ресіїїс депе (ВАОТ) аз а пем/ СТ депе, СТУ". Сапсег І ен 150(2): 155 - 64).
У контексті цього винаходу оптимальна послідовність принаймні однієї мРНК, яка кодує антиген МАСЕ-С2, може містити кодуючу послідовність, як показано на Фіг. 20 (5ЕО ІО МО: 14), у ще кращому варіанті - як показано на Фіг. 21 (5ЕБЕО ІО МО: 15). У ще кращому варіанті - принаймні одна мРНК містить послідовність, показану на Фіг. 18 або 19 (ЗЕО ІО МО: 13 або 23) або складається з неї. Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції в альтернативному варіанті може кодувати антиген МАСЕ-С2, вибраний з-поміж фрагмента, варіанта або епітопу МАСЕ-С2, причому принаймні одна мРНК включає фрагмент або варіант послідовності, показаної на будь-якій з Фігур 18, 19, 20 або 21 (5ЕО ІО МО: 13, 14, 15 або 23).
Крім того, принаймні одна мРНК в оптимальному варіанті включає послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність, як показано на Фіг. 33 (ЗЕО ІО МО: 80) або її фрагмент, варіант або епітоп.
Ї нарешті, принаймні одна мРНК композиції кодує МОС1. "МОС1" являє собою муцин 1.
Вважається, що пов'язані з раком муцини сприяють метастазам, полегшуючи прилипання злоякісних клітин до поверхня ендотеліальних клітин. Згідно з публікацією ЮОепда-Мадаї апа
Іййтита (2000) (Оєпаа-Мадаї, К. апа т. Іітигта (2000). "МОС1 іп сагсіпота-пові іпіегасійопв"
СПусосоп)і У 17(7-9): 649 - 58), МОС-1 надекспресується у 9095 усіх аденокарцином, включаючи аденокарциноми молочної залози, легень, підшлункової залози, передміхурової залози, шлунка, товстої кишки та яєчника. Копіапі, Тадиспі еї а. (2001) виявили, що МОС-1 експресується у 6090 випадків раку легень (див. Копіапі, К., О. Тадиспі, еї аї. (2001). "Модшайоп ої МОС1 тисіп аз ап 60 езсаре тесНапібзт ої Бгеавзі сапсег сеї їот ашоіодоив суїоїохіс Т-Іутрпосуїев". Ві / Сапсег
84(9): 1258 - 64), а Копіапі, Тадиспі еї а. (2003) у дослідженні, в якому аналізували застосування імпульсних ОС з антигенами МОС1 для викликання клітинного імунітету при МОС1 -позитивних видах раку виявили, що клінічно сім з дев'яти МОС-1-позитивних пацієнтів відповідали на лікування або зниженням рівня пухлинних маркерів або зникненням злоякісного плеврального випоту (див. Копіапі, К., О. Тадиспі, еї аї. (2003). "Оепагйс сеї! массіпе іттипоїПпегару ої сапсег їагдейпу МОСТІ тисіп". Іпї У Мої Мей 12(4): 493 - 502). Троє з цих реагуючих пацієнтів мали
МОСС. Раїтег, РагКег еї а. (2001) повідомляли, що у клінічному випробуванні | фази з застосуванням пептиду МИСІ на стадії ПШИМ М5СІС було встановлено безпечність і переносимість цього агента (див. Раїтег, М., 9. Рагкег, еї аї. (2001). "Рпазе І 5щшау ої Ше ВІ Р25 (МОСТІ рерійає) Ігрозотаї массіпе гог асіїме зресіїс іттипоїпегару іп зіаде ПВ/М поп-5таїЇІ-сеїЇ
Імпуд сапсег". Сіп Гипуд Сапсег З(1): 49 - 57; аівсизвіоп 58). У п'яти з 12 пацієнтів (42905) спостерігалася імунологічна реакція, і у 4 з 12 пацієнтів (3395) досягалася стабілізація захворювання. У/егесКу, Миеїег еї аї. (2006) також розпізнали два нові 9-мерні пептиди ТАА
МИСТ, які зв'язуються з НІ А-А2 і надекспресуються на різних гематологічних і епітеліальних злоякісних пухлинах (див. УМієтесКу, уУ., М. МиеїПег, еї аї. (2006). "Оепанйіс сеї-базей сапсег іттипоїпегару їагдеїйпу МИОС-1". Сапсег Іттипо!ї Іттипоїйег 55(1): 63 - 7). Цитотоксичні Т- клітини, утворені після імпульсів ОС з цими пептидами, були здатні викликати лізис пухлинних клітин, які експресують МОС1 в антиген-специфічний і НІ А-рестриктований спосіб. У двох клінічних дослідженнях було продемонстровано, що вакцинація пацієнтів з пізньою стадією раку з застосуванням імпульсних ОС з похідними від МОСТІ пептидами добре переносилася без серйозних побічних ефектів і була здатна викликати імунологічні реакції. З 20 пацієнтів з метастатичною карциномою ниркових клітин 6 пацієнтів демонстрували регресію метастазів з З об'єктивними реакціями (1 СЕ, 2 РЕК).
У контексті цього винаходу оптимальна послідовність принаймні однієї мРНК, яка кодує антиген МОСТІ, може містити кодуючу послідовність, як показано на фігурах 24 або 36 (ЗЕО ІЮ
МО: 17 або 83), у ще кращому варіанті - як показано на фіг. 25 (ЗЕО ІО МО: 18). У ще кращому варіанті - принаймні одна мРНК містить послідовність, показану на Фігурах 22 або 23 (5ЕО ІО
МО: 16 або 24), або складається з неї. Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції в альтернативному варіанті може кодувати антиген МОСТІ,
Зо вибраний з-поміж фрагмента, варіанта або епітопу МОС1І, причому принаймні одна мРНК включає фрагмент або варіант послідовності, показаної на будь-якій з Фігур 22, 24, 25, 23 або 36 (ЗЕО ІЮО МО: 16, 17, 18, 24 або 83).
Крім того, принаймні одна мРНК в оптимальному варіанті включає послідовність, яка кодує амінокислотну послідовність, як показано на Фігурах 34 або 35 (5ЕО ІЮО МО: 81 або 82), або її фрагмент, варіант або епітоп.
Якщо у контексті даного винаходу робиться посилання на антигени або фрагменти, епітопи або варіанти, слід розуміти, що посилання стосується антигена або пептиду, який кодується однією або кількома з послідовностей мРНК, передбаченими згідно з даним винаходом. Крім того, антигени, антигенні білки або антигенні пептиди, як визначено вище, які кодуються принаймні однією мРНК композиції згідно з даним винаходом, можуть включати фрагменти або варіанти цих послідовностей. Такі фрагменти або варіанти зазвичай можуть включати послідовність, яка має гомологію послідовності 3 одним з вищезгаданих антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів або послідовностями їх кодуючих нуклеїновокислотних послідовностей принаймні на 595, 1095, 2095, 30905, 4095, 5095, 6095, в оптимальному варіанті -- принаймні 7095, у ще кращому варіанті - принаймні 8095, у ще кращому варіанті - принаймні 8595, у ще кращому варіанті - принаймні 9095, і у найкращому варіанті - принаймні 9595 або навіть 9795, з повною послідовністю дикого типу, на нуклеїновокислотному рівні або на амінокислотному рівні. "Фрагменти" антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів у контексті даного винаходу можуть включати послідовність антигена, антигенного білка або антигенного пептиду, як визначено вище, яка є, стосовно її амінокислотної послідовності (кодованої нею нуклеїновокислотної послідовності) зрізаною она М-кінці, на С-кінці та/або посередині послідовності порівняно з амінокислотною послідовністю первісного (природного) білка (або кодованою нею нуклеїновокислотною послідовністю). Таким чином, таке зрізання може відбуватися або на амінокислотному рівні, або, відповідно, на рівні нуклеїнових кислот. Отже, гомологія послідовності відносно такого фрагмента, як визначено вище, в оптимальному варіанті може стосуватися всього антигена, антигенного білка або антигенного пептиду, як визначено вище, або всієї (кодуючої) нуклеїновокислотної послідовності такого антигена, антигенного білка або антигенного пептиду. бо Крім того, фрагменти антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів у контексті даного винаходу можуть включати послідовність антигена, антигенного білка або антигенного пептиду, як визначено вище, яка має довжину від приблизно б до приблизно 20 або навіть більше амінокислот, наприклад, фрагменти, процесовані й презентовані молекулами МНС |І класу, в оптимальному варіанті має довжину від приблизно 8 до приблизно 10 амінокислот, наприклад, 8, 9 або 10 (або навіть 6, 7, 11 або 12 амінокислот), або фрагменти, процесовані й презентовані молекулами МНС класу ІЇ, в оптимальному варіанті має довжину приблизно 13 або більше амінокислот, наприклад, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або навіть більше амінокислот, причому ці фрагменти можуть бути вибрані з будь-якої частини амінокислотної послідовності. Ці фрагменти зазвичай розпізнаються Т-клітинами у формі комплексу, який складається з фрагмента пептиду та молекули МНС, тобто, фрагменти зазвичай не розпізнаються в їх природній формі.
Фрагменти антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено авторами, також можуть включати епітопи цих антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів.
Епітопи (які також називаються "антигенними детермінантами") у контексті даного винаходу зазвичай є фрагментами, розташованими на зовнішній поверхні (природних) антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено авторами, які в оптимальному варіанті мають від 5 до 15 амінокислот, у ще кращому варіанті - мають від 5 до 12 амінокислот, у ще кращому варіанті - мають від б до 9 амінокислот, які можуть розпізнаватись антитілами або рецепторами В-клітин, тобто, в їх природній формі. Крім того, такі епітопи антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів можуть бути вибрані з будь-яких згаданих авторами варіантів таких антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів. У цьому контексті, антигенні детермінанти можуть бути конформаційними або переривчастими епітопами, які складаються з сегментів антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено авторами, які є переривчастими в амінокислотних послідовностях антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено авторами, але є складеними докупи у тривимірній структурі, або безперервними або лінійними епітопами, які складаються з єдиного поліпептидного ланцюга. "Варіанти" антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено вище, можуть кодуватися принаймні однією мРНК композиції згідно з даним винаходом, причому нуклеїнові кислоти принаймні однієї мРНК, які кодують антиген, антигенний білок або антигенний пептид,
Зо як визначено вище, є заміненими. Таким чином, можуть бути утворені антиген, антигенний білок або антигенний пептид, які мають амінокислотну послідовність, яка відрізняється від первісної послідовності одній або кількома мутаціями, такими, як одна або кілька заміщених, вставлених та/або делетованих амінокислот. В оптимальному варіанті ці фрагменти та/або варіанти мають однакову біологічну функцію або специфічну активність порівняно з природним антигеном або антигенним білком повної довжини, наприклад, його конкретну антигенну властивість.
Принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом також може кодувати антиген або антигенний білок, як визначено вище, причому кодована амінокислотна послідовність включає консервативне(ї) амінокислотне(ї) заміщення порівняно з його фізіологічною послідовністю. Ці кодовані амінокислотні послідовності, а також їхні кодуючі нуклеотидні послідовності, зокрема, охоплюються терміном "варіанти", як визначено вище. Заміщення, в яких амінокислоти, що належать до одного класу, замінюються одна на одну, називаються консервативними заміщеннями. Зокрема, вони є амінокислотами, які мають аліфатичні бокові ланцюги, позитивно або негативно заряджені бокові ланцюги, ароматичні групи у бокових ланцюгах або амінокислотах, бокові ланцюги яких можуть входити у водневі містки, наприклад, бокові ланцюги, які виконують гідроксильну функцію. Це означає, що, наприклад, амінокислота, яка має полярний боковий ланцюг, замінюється на іншу амінокислоту, яка має подібний боковий ланцюг, або, наприклад, амінокислота, яка характеризується гідрофобним боковим ланцюгом, є заміненою на іншу амінокислоту, яка має подібний гідрофобний боковий ланцюг (наприклад, серин (треонін) на треонін (серин) або лейцин (ізолейцин) на ізолейцин (лейцин)). У цих позиціях послідовності, зокрема, є можливими вставки та заміщення, які не викликають модифікацій у тривимірній структурі або не впливають на ділянку зв'язування. Модифікації у тривимірній структурі через вставку(и) або делецію(ї) можуть легко визначатися, наприклад, за допомогою КдД-спектрів (спектрів кругового дихромізму) (ггу, 1985, Абзогрійоп, Сігошаг біспгоіїзт апа ОО ої Роїурерііде5, іп: Модегп РНувзіса! Меїпод5 іп Віоспетівігу, Меибегдег еї аї. (ед.),
ЕІбемівг, Ат5іегдат).
Крім того, варіанти антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено вище, які можуть кодуватися принаймні однією мРНК композиції згідно з даним винаходом, також можуть включати послідовності, в яких нуклеїнові кислоти принаймні однієї мРНК є заміненими згідно з виродженням генетичного коду, без зміни відповідної амінокислотної послідовності 60 антигена, антигенного білка або антигенного пептиду, тобто, амінокислотна послідовність або принаймні її частина можуть не відрізнятися від первісної послідовності в одній або кількох мутаціях у вищезазначеному сенсі.
Крім того, варіанти антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено вище, які можуть бути кодовані принаймні однією мРНК композиції згідно з даним винаходом, також можуть включати послідовності ДНК, які відповідають послідовності РНК, як визначено авторами, і включають додаткові послідовності РНК, які відповідають послідовностям ДНК, як визначено авторами. Спеціалістам у даній галузі є відомими способи трансляції послідовності
РНК до послідовності ДНК (або навпаки) або створення послідовності комплементарного ланцюга (тобто, шляхом заміщення М-залишків та Т-залишки і/або шляхом побудови комплементарного ланцюга відносно даної послідовності).
Для визначення відсотка ідентичності двох послідовностей (нуклеїновокислотних послідовностей, наприклад, послідовностей РНК або мРНК, як визначено авторами, або амінокислотних послідовностей, в оптимальному варіанті, їх кодуючих амінокислотних послідовностей, наприклад, амінокислотних послідовностей антигенів, антигенних білків або антигенних пептидів, як визначено вище) послідовності вирівнюють з метою подальшого порівняння одна з одною. Таким чином, у послідовність першої послідовності, наприклад, можуть бути вставлені гепи, і може порівнюватися компонент у відповідній позиції другої послідовності. Якщо позиція у першій послідовності займається таким самим компонентом, як у позиції другої послідовності, дві послідовності в цій позиції є ідентичними. Відсоток ідентичності двох послідовностей залежить від кількості ідентичних позицій, діленої на загальну кількість позицій. Відсоток ідентичності двох послідовностей може визначатися з застосуванням математичного алгоритму. Оптимальним, але не обмежувальним прикладом математичного алгоритму, який може використовуватися, є алгоритм, представлений у публікаціях Кагїіїп еї аї. (1993), РМАБ5 БА, 90:5873-5877 або Ай5спці еї а!. (1997), Мисівіс Асійа5 Вев., 25: 3389 - 3402.
Такий алгоритм включено до програми ВГА5Т. Цією програмою розпізнаються послідовності, які певною мірою є ідентичними послідовностям згідно з даним винаходом.
У контексті даного опису термін "композиція" стосується принаймні однієї мРНК та, необов'язково, допоміжних речовин. Таким чином, термін "композиція" включає будь-яку суміш
МРНК (видів мРНК), які кодують антигени, як визначено вище, незалежно від того, чи є МРНК
Зо моно, бі- чи поліцистронними. У контексті даного винаходу термін "композиція" також стосується варіанта втілення, який включає поліцистронну мРНК, яка кодує всі шість антигенів, як визначено вище. В оптимальному варіанті композиція містить принаймні шість окремих видів
МРНК, завдяки чому кожен вид мРНК кодує один із зазначених антигенів. Термін "композиція" в оптимальному варіанті стосується принаймні однієї мРНК разом з принаймні однією іншою придатною речовиною. В цілому композиція може бути фармацевтичною композицією, призначеною для застосування у медичній галузі. Відповідно, композиція зазвичай включає принаймні ще одну допоміжну речовину, яка є фармацевтично прийнятною і яка може бути вибрана, наприклад, з-поміж носіїв, наповнювачів і т. ін. "Композиція" може бути рідкою або сухою композицією. Якщо композиція є рідкою, вона в оптимальному варіанті є водними розчином або дисперсією принаймні однією мРНК. Якщо "композиція" є сухою композицією, вона зазвичай є ліофілізованою композицією принаймні однієї мРНК. Термін "композиція" у контексті цього опису стосується принаймні однієї мРНК згідно з винаходом у комбінації з іншим активним інгредієнтом. В оптимальному варіанті композиція є імуностимулюючою композицією, тобто, композицією, яка включає принаймні один компонент, здатний викликати імунну реакцію, або від якого походить компонент, здатний викликати імунну реакцію. У цьому контексті імунна реакція може бути результатом адаптивної та/або природної імунної системи.
Композиція згідно з даним винаходом включає принаймні одну мРНК, яка кодує принаймні шість антигенів, як визначено вище, оскільки було з'ясовано, що конкретна комбінація вищезгаданих антигенів може ефективно стимулювати (адаптивну) імунну систему, таким чином, забезпечуючи можливість лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень (М5СІ С).
Отже, завдання даного винаходу розв'язується шляхом забезпечення композиції, яка включає принаймні одну мРНК, яка кодує нову комбінацію антигенів, як визначено авторами.
В оптимальному варіанті втілення композиція включає шість антигенів (574 (глікопротеїн трофобластів, ТРВС), сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5; ВІКС5), ММ-ЕБЗО-1 (нью-йоркську плоскоклітинну карциному 1 стравоходу, СТАС1В), МАСЕ-С1 (антиген меланоми родини СТ), МАСЕ-С2 (антиген меланоми родини С2) та МОС1 (муцин 1)), які кодуються шістьма моноцистронними мРНК, причому кожна з цих мРНК кодує свій антиген, вибраний з визначеної групи антигенів. В альтернативному варіанті композиція може включати комбінацію бо моноцистронних, бі- апа/або поліцистронних мРНК, причому більше одного з шести антигенів кодуються бі- або поліцистронною мРНК. Згідно з винаходом, передбачається будь-яка комбінація моно-, бі- або поліцистронних мРНК, які кодують усі шість антигенів, як визначено авторами, наприклад, три біцистронні мРНК, кожна з яких кодує два з зазначених шести антигенів, або дві біцистронні та дві моноцистронні мРНК.
Згідно з оптимальним варіантом втілення, композиція включає принаймні одну мРНК, яка включає принаймні одну кодуючу послідовність, вибрану з послідовностей РНК, які є ідентичними або принаймні на 8095 ідентичними послідовності РНК ЗЕО ІЮО МО: 2, 5, 8, 11, 14 або 17. У ще кращому варіанті композиція включає шість мРНК, причому кодуюча послідовність у кожній мРНК є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною одній з послідовностей РНК згідно з ФЕО ІЮО МО: 2, 5, 8, 11, 14 та 17.
В оптимальному варіанті втілення кожен з принаймні шести антигенів композиції згідно з даним винаходом може бути кодований однією (моноцистронною) мРНК. Іншими словами, композиція згідно з даним винаходом може містити шість (моноцистронних) мРНК, причому кожна з цих шести (моноцистронних) МРНК може кодувати лише один антиген, як визначено вище.
У ще кращому варіанті втілення композиція включає шість мРНК, причому одна мРНК кодує 5тТ4 (згідно з 5ЕО ІЮ МО: 75), одна мРНК кодує сурвівін (згідно з ФЕО ІЮ МО: 76 або 77), одна
МРНК кодує МУ-ЕБО-1 (згідно з БЕО ІЮО МО: 78), одна мРНК кодує МАСБ-С1 (згідно з БЕО ІЮ
МО: 79), одна мРНК кодує МАСЕ-С2 (згідно з БЕО ІЮО МО: 80), і одна мРНК кодує МОСТІ (згідно з
ЗЕО ІЮ МО: 81 або 82, або їх фрагменти або варіанти, відповідно.
У ще кращому варіанті втілення композиція включає шість мРНК, причому одна мРНК кодує 5Т4 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮО МО: 2, одна мРНК кодує сурвівін і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮО МО: 5, одна мРНК кодує МУ-Е5О-1 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮ МО: 8, одна мРНК кодує МАСБ-С1 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну 5ЕО ІЮ МО: 11, одна мРНК кодує
МАСЕ-С2 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮ
МО: 14, і одна мРНК кодує МИСІ і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮ МО:17 (або фрагменти або варіанти кожної з цих послідовностей) та, необов'язково, інші допоміжні речовини.
У ще кращому варіанті втілення композиція включає шість мРНК, причому одна мРНК кодує 5Т4 і включає кодуючу послідовність згідно з зЕО ІЮО МО: 2, одна мРНК кодує сурвівін і включає кодуючу послідовність згідно з 5ЕО ІО МО: 5, одна мРНК кодує МУ-Е5О-1 і включає кодуючу послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 8, одна мРНК кодує МАСЕ-С1 і включає кодуючу послідовність згідно з 5ЕО ІО МО: 11, одна мРНК кодує МАСЕ-С2 і включає кодуючу послідовність згідно з 560 1Ю МО: 14, і одна мРНК кодує МОСТІ і включає кодуючу послідовність згідно з БЕО ІЮ МО:17 або їх фрагменти, відповідно.
Згідно з конкретним оптимальним варіантом втілення винаходу, принаймні одна мРНК композиції включає гістонову структуру "петля на стеблі" у 3" ОТЕ ділянці. В оптимальному варіанті композиція включає шість мРНК, причому кожна мРНК включає гістонову структуру "петля на стеблі", як визначено вище.
Згідно з ще одним конкретним оптимальним варіантом втілення, композиція згідно з даним винаходом може включати (принаймні) одну бі- або навіть поліцистронну мРНК, тобто, (принаймні) одну мРНК, яка включає кодуючі послідовності двох або більшої кількості з шести антигенів згідно з винаходом. Такі кодуючі послідовності з двох або більшої кількості антигенів (принаймні) однієї бі- або навіть поліцистронної МРНК можуть відокремлюватися принаймні однією послідовністю ІЇКЕЗ (внутрішнього сайта зв'язування рибосоми), як визначено нижче.
Таким чином, термін "кодує два або більшу кількість антигенів" може означати, крім іншого, що (принаймні) одна (бі- або навіть поліцистронна) мРНК може кодувати, наприклад, принаймні два, три, чотири, п'ять або шість (в оптимальному варіанті різних) антигенів з вищезгаданих антигенів на їх фрагментах або варіантах у межах представлених вище визначень. У ще кращому варіанті, але без обмеження ним, (принаймні) одна (бі- або навіть поліцистронна)
МРНК може кодувати, наприклад, принаймні два, три, чотири, п'ять або шість (в оптимальному варіанті різних) антигенів з вищезгаданих антигенів або їх фрагментів або варіантів у межах представлених вище визначень. У цьому контексті так звана послідовність ІКЕ5 (внутрішнього сайта зв'язування рибосоми), як визначено вище, може функціонувати як один сайт зв'язування рибосоми, але він також може служити для забезпечення бі- або навіть поліцистронної мРНК, як визначено вище, яка кодує кілька білків, які мають бути трансльовані рибосомами незалежно один від одного. Прикладами послідовностей ІКЕ5, які можуть застосовуватися згідно з бо винаходом, є послідовності з пікорнавірусів (наприклад, ЕМОМ), пестивірусів (СЕМ),
поліовірусів (РМ), вірусів енцефаломіокардиту (ЕСММУ), вірусів ящура (ЕМОМ), вірусів гепатиту С (НСМ), вірусів класичної чуми свиней (С5ЕМ), вірусу лейкоми мишей (МІУ), вірусів імунодефіциту мавп (5ІМ) або вірусів паралічу цвіркуна (СтРМ).
Згідно з ще одним варіантом втілення, якому віддають особливу перевагу, композиція згідно з даним винаходом може включати суміш принаймні однієї моноцистронної мРНК, як визначено вище, та принаймні однієї бі- або навіть поліцистронної мРНК, як визначено вище. Принаймні одна моноцистронна мРНК та/або принаймні одна бі- або навіть поліцистронна мРНК в оптимальному варіанті кодують різні антигени або їхні фрагменти або варіанти у межах представлених вище визначень. Однак принаймні одна моноцистронна мРНК та принаймні одна бі- або навіть поліцистронна мРНК в оптимальному варіанті також може кодувати (частково) ідентичні антигени, вибрані з-поміж вищезгаданих антигенів, за умови, що композиція згідно з даним винаходом в цілому забезпечує шість антигенів, як визначено вище. Через забезпечення багатьох копій одного або кількох антигенів відносна кількість білка вищезгаданих одного або кількох антигенів може бути збільшена, тобто, може модулюватися співвідношення між кількістю кожного з шести антигенів. Таке втілення також може бути вигідним, наприклад, для регульованого, наприклад, залежного від часу, введення композиції згідно з даним винаходом пацієнтові, який цього потребує. Компоненти такої композиції згідно з даним винаходом, зокрема, різні мРНК, які кодують принаймні шість антигенів, можуть міститись, наприклад, у композиції, яка є комплектом компонентів (у її різних компонентах), або може водитися, наприклад, окремо у вигляді компонентів різних композицій згідно з даним винаходом.
В оптимальному варіанті - принаймні одна мРНК композиції, яка кодує принаймні один з шести антигенів, зазвичай має довжину від приблизно 50 до приблизно 20000 або від 100 до приблизно 20000 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - від приблизно 250 до приблизно 20000 нуклеотидів, у ще кращому варіанті - від приблизно 500 до приблизно 10000, у ще кращому варіанті - від приблизно 500 до приблизно 5000.
Згідно з одним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції, яка кодує принаймні один з шести антигенів, може бути у формі модифікованої мРНК, причому будь-яка модифікація, як визначено авторами, може бути включена у принаймні одну мРНК композиції.
Модифікації, як визначено авторами, в оптимальному варіанті забезпечують стабілізацію принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом.
Згідно з одним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом, таким чином, може забезпечуватись як "стабілізована мРНК", тобто, як мРНК, яка по суті є резистентною до іп мімо деградації (наприклад, під дією екзо- або ендонуклеази). Така стабілізація може забезпечуватися, наприклад, модифікованим фосфатним остовом принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом. Модифікація остова у контексті даного винаходу є модифікацією, при якій фосфати остова нуклеотидів, які містяться в мРНК, є хімічно модифікованими. Нуклеотиди, які в оптимальному варіанті можуть застосовуватись у цьому зв'язку, містять, наприклад, модифікований тіофосфатом фосфатний остов, і в оптимальному варіанті - принаймні один з атомів кисню фосфату, який міститься у фосфатному остові, замінюється атомом сірки. Стабілізовані мРНК також можуть включати, наприклад: неїіонні аналоги фосфату, такі, як, наприклад, алкіл- та арилфосфонати, у яких заряджений кисень фосфонату є заміненим она оалкільну або арильну групу, або фосфодіестери та алкілфосфотриестери, в яких заряджений кисневий залишок є присутнім в алкілованій формі.
Такі модифікації остова зазвичай включають, крім інших, модифікації з групи, яка складається з метилфосфонатів, фосфорамідатів та фосфотіоатів (наприклад, цитидин-5'-О-(1-тіофосфату)).
Принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом у додатковому або альтернативному варіанті також може містити цукрові модифікації. Цукрові модифікації у контексті даного винаходу є хімічними модифікаціями цукру нуклеотидів принаймні однієї мРНК, і до них зазвичай належать, крім інших, цукрові модифікації, вибрані з групи, до якої належать 2'-дезокси-2"-фторо-олігорибонуклеотид (2'-фторо-2'--дезоксицитидин-5'-трифосфат, 2'-фторо-2'- дезоксіуридин-5'--трифосфат), 2-дезокси-2'-деамінолігорибонуклеотид (2'-аміно-2- дезоксицитидин-5'--рифосфат, 2'"-аміно-2'-дезоксіуридин-5'--трифосфеат), 2-0- алкілолігорибонуклеотид, 2'-дезокси-2"-С-алкілолігорибонуклеотид (2'-О-метилцитидин-5'- трифосфат, 2'-метилуридин-5'-трифосфат), 2'-С-алкілолігорибонуклеотид та їх ізомери (2- арацитидин-5'-трифосфат, 2'-арауридин-5'-трифосфат) або азидотрифосфат (2'-азидо-2'- дезоксицитидин-5'--трифосфат, 2'-азидо-2'-дезоксіуридин-5'--рифосфат).
Принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом у додатковому або альтернативному варіанті також може містити принаймні одну основну модифікацію, яка в оптимальному варіанті є придатною для посилення експресії кодованого білка порівняно з бо незміненою, тобто, природною (- нативною) послідовністю мРНК. Значним у даному разі вважається посилення експресії білка порівняно з експресією нативної послідовності мРНК принаймні на 2095, в оптимальному варіанті - принаймні на 3095, 4095, 5095 або 6095, у ще кращому варіанті - принаймні на 7095, 8095, 9095 або навіть 10095, і у найкращому варіанті - принаймні на 15095, 20095 або навіть 30095 або більше. У контексті даного винаходу нуклеотид, який має таку основну модифікацію, в оптимальному варіанті є вибраним з групи нуклеотидів з основними модифікаціями, яка складається з 2-аміно-б-хлоропуринрибозид-5'-трифосфату, 2- аміноаденозин-5'і-трифосфату, 2-тіоцитидин-5'-трифосфату, 2-тіоуридин-5'і-трифосфату, -4- тіоуридин-5'--трифосфату, 5-аміноалілцитидин-5'--рифосфату, 5-аміноалілуридин-5'- трифосфату, 5-бромоцитидин-5'-трифосфату, 5-бромоуридин-5'-трифосфату, 5-йодоцитидин-5'- трифосфату, 5-йодоуридин-5'-трифосфату, 5-метилцитидин-5'--трифосфату, 5-метилуридин-5'- трифосфату, 6-алацитидин-5'-трифосфату, 6б-азауридин-5'-трифосфату, б-хлоропуринрибозид-
Б'-трифосфату, 7-деазааденозин-5'-трифосфату, 7-деазагуанозин-5'--рифосфату, 8- азааденозин-5'-трифосфату, 8-азидоаденозин-5'--трифосфату, бензимідазол-рибозид-5'- трифосфату, М1-метиладенозин-5'--трифосфату, М1-метилгуанозин-5'--трифосфату, Мб- метиладенозин-5'--ттрифосфату, Об-метилгуанозин-5'--трифосфату, псевдоуридин-5'--рифосфату або пуроміцин-5'-трифосфату, ксантозин-5-трифосфату. Особливу перевагу віддають нуклеотидами для основних модифікацій, вибраних з групи нуклеотидів з основними модифікаціями, які складаються з 5-метилцитидин-5'-трифосфату, 7-деазагуанозин-5'- трифосфату, 5-бромоцитидин-5'--трифосфату та псевдоуридин-5'-трифосфату.
Згідно з іншим варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом подібним чином може бути модифікована (і в оптимальному варіанті стабілізована) шляхом включення інших модифікованих нуклеотидів, які містять модифікації їх рибозних або основних компонентів. В цілому принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом може містити будь-який нативний (- природний) нуклеотид, наприклад, гуанозин, урацил, аденозин та/або цитозин або його аналог. У цьому зв'язку нуклеотидні аналоги визначаються як неприродні варіанти природних нуклеотидів. Відповідно, аналоги є хімічно дериватизованими нуклеотидами з неприродними функціональними групами, які в оптимальному варіанті додають або видаляють з природного нуклеотиду, або які заміщують природні функціональні групи нуклеотиду. Відповідно, кожен компонент природного нуклеотиду може бути модифікований,
Зо тобто, основний компонент, цукровий (рибозний) компонент та/або фосфатний компонент, який утворює остов (див. вище) послідовності РНК. До аналогів гуанозину, урацилу, аденозину та цитозину належать, крім інших, будь-які природні або неприродні гуанозин, урацил, аденозин, тимідин або цитозин, які було змінено хімічним шляхом, наприклад, шляхом ацетилування, метилування, гідроксилування і т. ін., включаючи 1-метил-аденозин, 1-метил-гуанозин, 1-метил- інозин, 2,2-диметил-гуанозин, 2,6-діамінопурин, 2'-аміно-2-дезоксиаденозин, 2'-аміно-2'- дезоксицитидин, 2'-аміно-2'-дезоксигуанозин, 2'-аміно-2'-дезоксіуридин, 2-аміно-6- хлоропуринрибозид, 2-амінопурин-рибозид, 2'-арааденозин, 2'-арацитидин, 2'-арауридин, 2'- азидо-2'--дезоксиаденозин, 2'-азидо-2-дезоксицитидин, 2'-азидо-2'--дезоксигуанозин, 2'-азидо-2'- дезоксіуридин, 2-хлороаденозин, 2'-фторо-2'-дезоксиаденозин, 2'-фторо-2'-дезоксицитидин, 2'- фторо-2'-дезоксигуанозин, 2'-фторо-2'-дезоксіуридин, 2'-фторотимідин, 2-метил-аденозин, 2- метил-гуанозин, 2-метил-тіо-Мб-ізопентеніл-аденозин, 2'-О-метил-2-аміноаденозин, 2-О-метил- 2г"-дезоксиаденозин, 2'-О-метил-2'--дезоксицитидин, 2'-О-метил-2'-дезоксигуанозин, 2'-О-метил- 2г-дезоксіуридин, 2'-О-метил-5-метилуридин, 2'-О-метилінозин, 2'-О-метилпсевдоуридин, 2- тіоцитидин, 2-тіо-цитозин, З-метил-цитозин, 4-ацетил-цитозин, 4-тіоуридин, 5- (карбоксигідроксиметил)-урацил, 5,6-дигідроуридин, 5-аміноалілцитидин, 5-аміноаліл-дезокси- уридин, 5-бромоуридин, 5-карбоксиметиламінометил-2-тіо-урацил, 5-карбоксиметиламінометил- урацил, 5-хлоро-ара-цитозин, 5-фторо-уридин, 5-йодоуридин, 5-метоксикарбонілметил-уридин,
Б-метокси-уридин, 5-метил-2-тіо-уридин, б-азацитидин, б-азауридин, б-хлоро-7-деаза-гуанозин, б-хлоропуринрибозид, б-меркапто-гуанозин, б-метил-меркаптопурин-рибозид, /7-деаза-2'- дезокси-гуанозин, 7-деазааденозин, 7-метил-гуанозин, 8-азааденозин, 8-бромо-аденозин, 8- бромо-гуанозин, 8-меркапто-гуанозин, 8-оксогуанозин, бензимідазол-рибозид, бета-О-манозил- квеуозин, дигідро-урацил, інозин, М1-метиладенозин, Мб6-(6б-аміногексилікарбамоїлметил)- аденозин, Мб-ізопентеніл-аденозин, Мб-метил-аденозин, М7-метил-ксантозин, метиловий естер
М-урацил-5-оксіоцтової кислоти, пуроміцин, квеуозин, урацил-5-оксіоцтова кислота, метиловий естер урацил-5-оксіоцтової кислоти, вибутоксозин, ксантозин та ксилоаденозин. Одержання таких аналогів є відомим спеціалістам у даній галузі, наприклад, з Патентів США 4,373,071, 05 4,401,796, 005 4,415,732, 005 4,458,066, 05 4,500,707, 05 4,668,777, 005 4,973,679, 005 5,047,524,
ОЗ 5,132,418, 5 5,153,319, 05 5,262,530 та 5,700,642. У разі аналога, як описано вище, особливу перевагу згідно з винаходом віддають аналогам, які підвищують імуногенність МРНК 60 композиції згідно з винаходом і/або не перешкоджають подальшій модифікації вставленої
МРНК.
Згідно з конкретним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом може включати ліпідну модифікацію. Така ліпідно-модифікована мРНК зазвичай включає мРНК, як визначено авторами, яка кодує принаймні один з шести антигенів, як визначено вище. Така ліпідно-модифікована мРНК також зазвичай включає принаймні один лінкер, ковалентно зв'язаний з цією мРНК, та принаймні один ліпід, ковалентно зв'язаний з відповідним лінкером. В альтернативному варіанті ліпідно-модифікована мРНК включає (принаймні одну) мРНК, як визначено авторами, та принаймні один (біфункціональний) ліпід, ковалентно зв'язаний (без лінкера) з цією мРНК. Згідно з третім альтернативним варіантом, ліпідно-модифікована мРНК включає мРНК, як визначено авторами, принаймні один лінкер, ковалентно зв'язаний з цією мРНК, та принаймні один ліпід, ковалентно зв'язаний з відповідним лінкером, а також принаймні один (біфункціональний) ліпід, ковалентно зв'язаний (без лінкера) з цією мРНК.
Ліпід, який міститься у принаймні одній мРНК композиції згідно з винаходом (з утворенням комплексу або ковалентного зв'язку з нею), зазвичай є ліпідом або ліпофільним залишком, в оптимальному варіанті - сам є біологічно активним. Такі ліпіди в оптимальному варіанті включають природні речовини або сполуки, такі, як, наприклад, вітаміни, наприклад, альфа- токоферол (вітамін Е), включаючи ККК-альфа-токоферол (раніше - Ю-альфа-токоферол), І1- альфа-токоферол, рацемат О,Ї-альфа-токоферол, сукцинат вітаміну Е (МЕ5) або вітамін А та його похідні, наприклад, ретиноєва кислота, ретинол, вітамін Ю та його похідні, наприклад, вітамін 0, а також його ергостеринові прекурсори, вітамін Е та його похідні, вітамін К та його похідні, наприклад, вітамін К та відповідні хінонові або фітолові сполуки, або стероїди, такі, як жовчні кислоти, наприклад холева кислота, дезоксихолева кислота, дегідрохолева кислота, кортизон, дигоксигенін, тестостерон, холестерин або тіохолестерин. Інші ліпіди або ліпофільні залишки у межах обсягу даного винаходу включають, крім інших, поліалкіленгліколі (Обегпацйзег еї аї., Мисі. Асій5 Кев., 1992, 20, 533), аліфатичні групи, такі, як, наприклад, С1-С20-алкани, С1-
Сб20-алкени або С1-С20-алканольні сполуки і т. ін., такі, як, наприклад, додекандіол, гексадеканол або ундецильні залишки (Заізоп-ВеНнтоагаз єї а!., ЕМВО .), 1991, 10, 111; Карапом ега!., РЕВЗ Г еїї., 1990, 259, 327; Зміпагопик еї аї., Віоспітіє, 1993, 75, 49), фосфоліпіди, такі, як,
Зо наприклад, фосфатидилгліцерин, діацилфосфатидилгліцерин, фосфатидилхолін, дипальмітоїлфосфатидилхолін, дистеароїлфосфатидилхолін, фосфатидилсерин, фосфатидилетаноламін, ди-гексадецил-рац-гліцерин, сфінголіпіди, цереброзиди, гангліозиди або триетиламоній 1,2-ди-О-гексадецил-рац-гліцеро-3-Н-фосфонат (Мапойагап єї аї.,
Теїгапейгоп І ей., 1995, 36, 3651; 5пеа еї аї., Мисі. Асід5 Кев., 1990, 18, 3777), поліаміни або поліалкіленгліколі, такі, як, наприклад, поліетиленгліколь (РЕС) (Мапопйагап еї а!., Мисіеозідев5 5
Мисіеоїіде5, 1995, 14, 969), гексаетиленгліколь (НЕС), пальмітинові або пальмітилові залишки (Міга єї а!., Віоспіт. Віорпувх. Асіа, 1995, 1264, 229), октадециламіни або гексиламіно-карбоніл- оксихолестеринові залишки (СтооКе еї аї.,9У. Рпаптасої. Ехр. ТПег., 1996, 277, 923), а також воски, терпени, аліциклічні вуглеводні, насичені та моно- або поліненасичені жирнокислотні залишки і т. ін.
Принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом подібним чином може бути стабілізована з метою запобігання деградації мРНК іп мімо з застосуванням різних підходів.
Спеціалістам у даній галузі відомо, що нестійкість та (швидка) деградація мРНК або РНК іп мімо в цілому можуть являти серйозну проблему при застосуванні композицій на основі РНК. Ця нестійкість РНК зазвичай зумовлюється руйнуючими РНК ферментами, "РНКазами" (рибонуклеазами), причому забруднення такими рибонуклеазами іноді може повністю руйнувати
РНК у розчині. Відповідно, природну деградацію мРНК у цитоплазмі клітин дуже точно регулюють, і забруднюючі РНКази в цілому можуть бути видалені шляхом спеціальної обробки перед застосуванням вищезгаданих композицій, зокрема, діетилпірокарбонатом (ОЕРС). У цьому зв'язку з існуючого рівня техніки відомо багато механізмів природної деградації, які також можуть бути застосовані. Наприклад, кінцева структура зазвичай має критичне значення для
МРНК іп мімо. Наприклад, на 5' кінці природних мРНК зазвичай знаходиться так звана "кеп- структура" (модифікований нуклеотид гуанозин), а на 3' кінці зазвичай послідовність, яка включає до 200 нуклеотидів аденозину (так званий полі-А-хвіст).
Принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом, таким чином, може бути стабілізована від деградації РНКазами шляхом додавання так званої "5'-кеп-структури".
Зокрема, в цьому зв'язку як "5'-кеп-структуру" можна конкретно навести т7((5)ррр (5(А,с(5)ррр(5)А або с(535ррр(5)б. Однак таку модифікацію включають лише у разі, якщо модифікацію, наприклад, ліпідну модифікацію, ще не було включено на 5' кінці мРНК композиції 60 згідно з винаходом, або якщо модифікація не шкодить імуногенним властивостям
(немодифікованої або хімічно модифікованої) мРНК.
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом може містити полі-А-хвіст на 3'"-кінці, який зазвичай включає приблизно від 10 до 200 нуклеотидів аденозину, в оптимальному варіанті - приблизно від 10 до 100 нуклеотидів аденозину, у ще кращому варіанті - приблизно від 40 до 80 нуклеотидів аденозину, у ще кращому варіанті - приблизно від 50 до 70 нуклеотидів аденозину.
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом може містити полі-С-хвіст на 3'-кінці, який зазвичай включає приблизно від 10 до 200 нуклеотидів цитозину, в оптимальному варіанті приблизно 10 до 100 нуклеотидів цитозину, у ще кращому варіанті - приблизно від 20 до 70 нуклеотидів цитозину, у ще кращому варіанті - приблизно від 20 до 60 або навіть від 10 до 40 нуклеотидів цитозину.
Принаймні одна мРНК згідно з винаходом в оптимальному варіанті включає принаймні одну гістонову структуру "петля на стеблі". У контексті даного винаходу така гістонова структура "петля на стеблі" в цілому (незалежно від того, чи є вона гістоновою петлею на стеблі, чи ні) зазвичай походить від гістонових генів і включає внутрішньомолекулярне спарювання основ двох сусідніх повністю або частково зворотно-комплементарних послідовностей, таким чином, утворюючи петлю на стеблі. Петля на стеблі може утворюватися в одноланцюговій ДНК або, частіше, в РНК.
У контексті даної заявки послідовність гістонової структури "петля на стеблі" може бути описана за її послідовністю ДНК або за її відповідною послідовністю РНК. Таким чином, будь- яке посилання по всьому тексту даної заявки на послідовності гістонової структури "петля на стеблі", які є представленими в цій заявці послідовностями ДНК (наприклад, ЗЕО ІО МО: з 38 по 67 та 71), додатково включає відповідну послідовність РНК. Це, зокрема, стосується послідовностей гістонової структури "петля на стеблі", які включаються до принаймні однієї
МРНК згідно з винаходом. Відповідно, вказування на конкретну послідовність ДНК, яка визначає гістонову структуру "петля на стеблі", також передбачає визначення відповідної послідовності
РНК.
Структура також є відомою як шпилька або петля "шпилька" і зазвичай складається зі стебла та (кінцевої) петлі у безперервній послідовності, причому петля утворюється двома сусідніми повністю або частково зворотно-комплементарними послідовностями, розділеними короткою послідовністю як спейсером, що утворює петлю структури "петля на стеблі". Дві сусідні повністю або частково зворотно-комплементарні послідовності можуть визначатися, наприклад, як елементи структури "петля на стеблі" стебло 1 та стебло 2. Петля на стеблі утворюється тоді, коли ці дві сусідні повністю або частково зворотно-комплементарні послідовності, наприклад, елементи структури "петля на стеблі" стебло 1 та стебло 2, утворюють пари основ одна з одною, утворюючи дволанцюговий відрізок нуклеїновокислотної послідовності, який включає неспарену петлю на її кінці, утворену короткою послідовністю, розташованою між елементами структури "петля на стеблі? стебло 1 та стебло 2 на безперервній послідовності. Таким чином, неспарена петля зазвичай представляє ділянку нуклеїнової кислоти, яка є не здатною до спарювання основ з жодним з цих елементів структури "петля на стеблі" Утворена в результаті структура "льодяник на паличці" є ключовим структурним елементом багатьох вторинних структур РНК. Утворення структури "петля на стеблі", таким чином, залежить від стійкості утворених в результаті ділянок стебла та петлі, причому першою передумовою, як правило, є наявність послідовності, яка може бути кон'югована "в собі" для утворення спареного подвійного ланцюга. Стійкість спарених елементів структури "петля на стеблі" визначається довжиною, кількістю некомплементарностей або випетлювань, яке вона містить (мала кількість некомплементарностей зазвичай є допустимою, зокрема, на довгому дволанцюговому відрізку), та складом основ спареної ділянки. У контексті даного винаходу можливою є довжина петлі від З до 15 основ, хоча більшу перевагу віддають довжині петлі з З - 10 основ, у ще кращому варіанті - від З до 8, від З до 7, від З до 6, у ще кращому варіанті - від 4 до 5 основ, і у найкращому варіанті - 4 основ. Послідовність, яка утворює ділянку стебла у гістоновій структурі "петля на стеблі", зазвичай має довжину від 5 до 10 основ, у ще кращому варіанті - від 5 до 8 основ, причому в оптимальному варіанті - принаймні одна з основ представляє некомплементарність, тобто, не утворює пару основ.
У контексті даного винаходу гістонова структура "петля на стеблі" зазвичай походить від гістонових генів (наприклад, генів з родини гістонів НІ, Н2А, Н2В, НЗ, На) їі включає внутрішньомолекулярне спарювання основ з двох сусідніх повністю або частково зворотно- комплементарних послідовностей, таким чином, утворюючи петлю на стеблі. Як правило, гістонова структура "петля на стеблі" у 3" ОТЕ ділянці є елементом РНК, який бере участь у бо ядерно-цитоплазматичному транспорті мРНК гістону та регулюванні стійкості та ефективності трансляції у цитоплазмі МРНК гістонових генів багатоклітинних організмів не мають поліаденілування та полі-А-хвоста, натомість процесинг на 3' кінці відбувається у сайті між цією висококонсервативною петлею на стеблі та багатою на пурин ділянці, розташованої приблизно за 20 нуклеотидів далі (гістоновий низхідний елемент або НОЕ). Гістонова структура "петля на стеблі" зв'язується 31 кДа зв'язувальним білком "стебло-петля" (ЗІВР - також відомий як гістоновий шпильковий зв'язувальний білок або НВР). Такі гістонові структури "петля на стеблі" в оптимальному варіанті застосовують згідно з даним винаходом у комбінації з іншими елементами та структурами послідовності, які не трапляються у природі (тобто, у нетрансформованих живих організмах / клітинах) у гістонових генах, але комбінуються згідно з винаходом для забезпечення штучної, гетерологічної нуклеїнової кислоти. Відповідно, даний винахід забезпечує штучну (ненативну) комбінацію гістонової структури "петля на стеблі" з іншими елементами гетерологічної послідовності, які не трапляються у гістонових генах або гістонових генах багатоклітинних організмів і є виділеними з функціональних та/або регуляторних ділянок послідовності (які впливають на транскрипцію та/або трансляцію) генів, які кодують білки, відмінні від гістонів, і забезпечують сприятливий ефект. Відповідно, один варіант втілення винаходу забезпечує комбінацію гістонової структури "петля на стеблі" з полі(А)- послідовністю або послідовністю, яка представляє сигнал поліаденілування (на 3'-кінці від кодуючої ділянки), який не трапляється у гістонових генах багатоклітинних організмів. Згідно з іншим оптимальним аспектом винаходу, забезпечується комбінація гістонової структури "петля на стеблі" з кодуючою ділянкою, яка кодує принаймні один з антигенів згідно з винаходом, як визначено вище, який в оптимальному варіанті не трапляється у гістонових генах багатоклітинних організмів (кодуюча ділянка та гістонова послідовність "петля на стеблі" є гетерологічними).
Гістонова "петля на стеблі", таким чином, є структурою "петля на стеблі", як описано авторами, яка, якщо в оптимальному варіанті є функціонально визначеною, демонструє/зберігає властивість зв'язування з її природним партнером зі зв'язування, зв'язувальним білком "стебло-петля" (5ЗІВР - також відомий як гістоновий шпильковий зв'язувальний білок або НВР).
В оптимальному варіанті втілення гістонова послідовність "петля на стеблі" не є похідною від гістонового білка миші. Більш конкретно, гістонова послідовність "петля на стеблі" може не бути похідною від гістонового гена Н2Аб14 миші. Крім того, принаймні одна мРНК згідно з винаходом може не містити ні мишачої гістонової послідовності "петля на стеблі", ні мишачого гістонового гена Н2Аб14. До того ж, принаймні одна мРНК згідно з винаходом може не містити сигналу процесингу "петля на стеблі", більш конкретно - сигналу процесингу гістону миші, тобто, можуть не містити мишачого сигналу процесингу "петля на стеблі" Н2КАб614, навіть якщо принаймні одна мРНК містить принаймні один гістоновий ген ссавця. Однак принаймні один гістоновий ген ссавця може не бути 5ЕО. 10 МО. 7 згідно з документом УМО 01/12824.
Принаймні одна мРНК, як визначено вище, в оптимальному варіанті може включати 5' ШОТК, кодуючу ділянку, яка кодує антигени, як визначено вище, або їх фрагменти, варіанти або похідні; та/або 3' ОТК, яка в оптимальному варіанті містить принаймні одну гістонову структуру "петля на стеблі". Якщо, додатково до визначених вище антигенів, інший пептид або білок кодується принаймні однією мРНК, цей кодований пептид або білок в оптимальному варіанті не є гістоновим білком, не є репортерним білком і/або не є маркерним або селективним білком, як визначено вище. 3 ШОТК принаймні однієї мРНК в оптимальному варіанті додатково включає послідовність полі(А) та/або полі(С), як визначено в цьому описі. Окремі елементи 3' ТК можуть траплятись у будь-якому порядку від 5' до 3' уздовж послідовності принаймні однієї
МРНК. Крім того, також можуть міститися додаткові елементи, як описано авторами, такі, як стабілізуюча послідовність, як визначено в цьому описі (наприклад, похідну від ОТЕК гена глобіну), послідовності ІКЕЗ5З і т. ін. Кожен з елементів також може повторюватись у принаймні одній мРНК згідно з винаходом принаймні одноразово (зокрема, у ди- або поліцистронних конструктах), в оптимальному варіанті - двічі або більше разів. Наприклад, окремі елементи можуть бути присутні у принаймні одній мРНК у такому порядку: 5 - кодуюча ділянка - гістонова структура "петля на стеблі" - послідовність полі(А)ДС) - 3"; або 5 - кодуюча ділянка - послідовність полі(А)/(С) - гістонову структуру "петля на стеблі" - 3"; або 5 - кодуюча ділянка -- гістонова структура "петля на стеблі" - сигнал поліаденілування -- 3"; або 5 - кодуюча ділянка - сигнал поліаденілування -- гістонова структура "петля на стеблі" - 3"; (510) або
- кодуюча ділянка - гістонова структура "петля на стеблі" - гістонова структура "петля на стеблі" - послідовність полі(А)/(С) - 3"; або 5 - кодуюча ділянка - гістонова структура "петля на стеблі" - гістонова структура "петля на стеблі" - сигнал поліаденілування -- 3"; або 5 5 - кодуюча ділянка - стабілізуюча послідовність - послідовність полі(А)дс) - гістонова структура "петля на стеблі" - 3; або 5 - кодуюча ділянка - стабілізуюча послідовність - послідовність полі(А)/(С) - послідовність полі(А)ДС) - гістонова структура "петля на стеблі"- 3; іт. д.
У цьому контексті особливу перевагу віддають варіантові, в якому у разі, якщо, додатково до визначених вище антигенів, інший пептид або білок кодується принаймні однією мРНК, кодований пептид або білок в оптимальному варіанті не є гістоновим білком, не є репортерним білюом (наприклад, люциферазою, СЕР, ЕСЕР, р-галактозидазою, зокрема, ЕСЕР) і/або не є маркерним або селективним білком (наприклад, альфа-глобіном, галактокіназою та ксантином:гуанінфосфорибозилтрансферазою (СРТ)).
В оптимальному варіанті втілення мРНК згідно з винаходом не включає репортерного гена або маркерного гена. В оптимальному варіанті мРНК згідно з винаходом не кодує, наприклад, люциферазу; зелений флуоресцентний білок (СЕР) та його варіанти (такі, як еСЕР, КЕР або
ВЕР); а-глобін; гіпоксантин-гуанінфосфорибозилтрансферазу (НОРКТ); ВД-галактозидазу; галактокіназу; лужну фосфатазу; секретовану ембріональну лужну фосфатазу (ЗЕАР)) або ген резистентності (такий, як ген резистентності до неоміцину, пуроміцину, гігроміцину та зеоцину).
В оптимальному варіанті втілення мРНК згідно з винаходом не кодує люциферазу. В іншому варіанті втілення мРНК згідно з винаходом не кодує СЕР або його варіант.
В іншому оптимальному варіанті втілення мРНК згідно з винаходом не кодує білок (або фрагмент білка), який походить від вірусу, в оптимальному варіанті - від вірусу, який належить до родини Огіпйоітухомігідає. В оптимальному варіанті мРНК не кодує білок, який походить від вірусу грипу, у ще кращому варіанті - вірусу грипу А. В оптимальному варіанті мРНК згідно з винаходом не кодує вірус грипу А, вибраний з групи, до якої належать гемаглютинін (НА), нейрамінідаза (МА), нуклеопротеїн (МР), М1, М2, М51, М52 (МЕР: білок ядерного експорту), РА,
РВІ1 (полімеразний основний 1), РВ1-Е2 та РВ2. В іншому оптимальному варіанті втілення МРНК
Зо згідно з винаходом не кодує овальбумін (ОМА) або його фрагмент. В оптимальному варіанті
МРНК згідно з винаходом не кодує вірус грипу А або овальбумін.
Згідно з одним оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК згідно з винаходом включає принаймні одну послідовність гістонової структури "петля на стеблі", в оптимальному варіанті - згідно з принаймні однією з таких формул (І) або (І): формула (І) (послідовність "петля на стеблі" без обмежувальних елементів стебел):
Моз ам з Ме СИ Ма ЇМ Є Мо інн нут пе стебло | петля стебло З формула (ІІ) (послідовність "петля на стеблі" з обмежувальними елементами стебел):
Мів ЇМоо ОМ (Мо 07 Мо ЇМ ЄМосі Міо -- шин пп М- ж -5о- я т /
Обмежунальний стебло! петля стебла 2 осбмежувальннії злемені стебла | елемент стебла З де: обмежувальні елементи стебла 1 та стебла 2 М':-6є є безперервною послідовністю від 1 до 6, в оптимальному варіанті -- від 2 до 6, у ще кращому варіанті - від 2 до 5, у ще кращому варіанті - від З до 5, у найкращому варіанті -- від 4 до 5 або 5 М, причому кожен М є незалежно від інших вибраним з нуклеотидів, вибраних з-поміж А, и, Т, с та С або їх нуклеотидних аналогів; стебло 1 ІМо-(аМз-5| є зворотно-комплементарним або частково зворотно-комплементарним з елементом стебла 2 і є безперервною послідовністю від 5 до 7 нуклеотидів; причому Мо-г є безперервною послідовністю від 0 до 2, в оптимальному варіанті - від 0 до 1, у ще кращому варіанті - 1 М, причому кожен М є незалежно від інших вибраним з нуклеотидів, вибраних з-поміж А, |, Т, о та С або їх нуклеотидних аналогів;
причому Мз-5 є безперервною послідовністю від З до 5, в оптимальному варіанті -- від 4 до 5, у ще кращому варіанті - 4 М, причому кожен М є незалежно від інших вибраним з нуклеотидів, вибраних з-поміж А, у, Т, о та С або їх нуклеотидних аналогів, і
С є гуанозином або його аналогом і може необов'язково бути заміщеним цитидином або його аналогом, за умови, що його комплементарний нуклеотид цитидин у стеблі 2 є заміненим на гуанозин; послідовність петлі (Мо-4(0/Т)Мо-4| розташовується між елементами стебла 1 та стебла 2 і є безперервною послідовністю від З до 5 нуклеотидів, у ще кращому варіанті - 4 нуклеотидів; причому кожен Мо є незалежною від інших безперервною послідовністю від 0 до 4, в оптимальному варіанті - від до 3, у ще кращому варіанті - від до 2 М, причому кожен М є незалежно від інших вибраним з нуклеотидів, вибраних з-поміж А, О, Т, б та С або їх нуклеотидних аналогів; і
ОЛ представляє уридин або, необов'язково, тимідин; стебло 2 ІМаз-5СМо-г| є зворотно-комплементарним або частково зворотно-комплементарним з елементом стебла 1 і є безперервною послідовністю від 5 до 7 нуклеотидів; причому Мз-5 є безперервною послідовністю від З до 5, в оптимальному варіанті -- від 4 до 5, у ще кращому варіанті - 4 М, причому кожен М є незалежно від інших вибраним з нуклеотидів, вибраних з-поміж А, |, Т, о та С або їх нуклеотидних аналогів; причому Мо-г є безперервною послідовністю від 0 до 2, в оптимальному варіанті - від 0 до 1, у ще кращому варіанті - 1 М, причому кожен М є незалежно від інших вибраним з нуклеотидів, вибраних з-поміж А, |, Т, с або С або їх нуклеотидних аналогів; і
С є цитидином або його аналогом і може бути необов'язково заміненим гуанозином або його аналогом, за умови, що його комплементарний нуклеотид гуанозин у стеблі 1 є заміненим на цитидин; причому стебло 1 та стебло 2 є здатними до спарювання основ між ними з утворенням зворотно- комплементарної послідовності, причому спарювання основ може відбуватися між стеблом 1 та стеблом 2, наприклад, шляхом вотсон-криківського спарювання основ нуклеотидів А та О/Т або б та С або відмінного від вотсон-криківського спарювання основ наприклад, неоднозначне спарювання основ, зворотного вотсон-криківського спарювання основ, хугстенівського спарювання основ, зворотного хугстенівського спарювання основ, або є здатними до спарювання основ між ними з утворенням частково зворотно-комплементарної послідовності, причому може відбуватися неповне спарювання основ між стеблом 1 та стеблом 2 на основі того, що одна або кілька основ в одному стеблі не мають комплементарної основи у зворотно- комплементарній послідовності іншого стебла.
У наведеному вище контексті неоднозначне спарювання основ зазвичай є відмінним від вотсон-криківського спарюванням основ між двома нуклеотидами. У контексти цього опису чотирма головними неоднозначними парами основ, які можуть застосовуватися, є гуанозин- уридин, інозин-уридин, інозин-аденозин, інозин-цитидин ((-Ш/Т, І-0О/Т, І-А та І-С) та аденозин- цитидин (А-С).
Відповідно, у контексті даного винаходу неоднозначна основа є основою, яка утворює неоднозначну пару основ з іншою основою, як описано вище. Таким чином, відмінне від вотсон- криківського спарювання основ, наприклад, неоднозначне спарювання основ, може відбуватись у стеблі гістонової структури "петля на стеблі? у принаймні одній мРНК згідно з даним винаходом.
У наведеному вище контексті частково зворотно-комплементарна послідовність включає щонайбільше 2, в оптимальному варіанті - лише одну некомплементарність у структурі стебла послідовності "петля на стеблі", утвореної шляхом спарювання основ стебла 1 та стебла 2.
Іншими словами, стебло 1 та стебло 2 в оптимальному варіанті є здатними до (повного) спарювання основ одне з одним по всій послідовності стебла 1 та стебла 2 (10095 можливого правильного вотсон-криківського або відмінного від вотсон-криківського спарювання основ) з утворенням, таким чином, зворотно-комплементарної послідовності, в якій кожна основа має правильну вотсон-криківську або відмінну від вотсон-криківської основу, яка її доповнює як партнер з комплементарного зв'язування. В альтернативному варіанті стебло 1 та стебло 2 в оптимальному варіанті є здатними до часткового спарювання основ між ними по всій послідовності стебла 1 та стебла 2, причому принаймні приблизно 7095, 7595, 8095, 8595, 9090 або 9595 зі 10095 можливих правильних вотсон-криківських або відмінних від вотсон-криківських спарювань основ займають правильні вотсон-криківські або відмінні від вотсон-криківських спарювання основ, і щонайбільше приблизно 3095, 2595, 2090, 1595, 1095 або 595 з решти основ є (516) неспареними.
Згідно з оптимальним варіантом втілення, послідовність принаймні однієї гістонової структури "петля на стеблі" (з обмежувальними елементами стебел) принаймні однієї мРНК, як визначено авторами, включає довжину від приблизно 15 до приблизно 45 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - довжину від приблизно 15 до приблизно 40 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - довжину від приблизно 15 до приблизно 35 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - довжину від приблизно 15 до приблизно 30 нуклеотидів, у ще кращому варіанті - довжину від приблизно 20 до приблизно 30, і у найкращому варіанті - довжину від приблизно 24 до приблизно 28 нуклеотидів.
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, послідовність принаймні однієї гістонової структури "петля на стеблі" (без обмежувальних елементів стебел) принаймні однієї мРНК, як визначено авторами, включає довжину від приблизно 10 до приблизно 30 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - довжину від приблизно 10 до приблизно 20 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - довжину від приблизно 12 до приблизно 20 нуклеотидів, в оптимальному варіанті - довжину від приблизно 14 до приблизно 20 нуклеотидів, у ще кращому варіанті - довжину від приблизно 16 до приблизно 17, і у найкращому варіанті - довжину від приблизно 16 нуклеотидів.
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК згідно з даним винаходом може включати послідовність принаймні однієї гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з таких конкретних формул (Іа) або (Па): формула (Іа) (послідовність "петля на стеблі" без обмежувальних елементів стебел): т Уч з ТА УуЮТ КАТ
Ме М ЇМО Мо МС Мо
Мен тт нн фнннн Й бнннннннннннндертттнтнннтннннй стебло | петля стебло З формула (Іа) (послідовність "петля на стеблі" з обмежувальними елементами стебел):
Мо Мол ОМ | (Ма Мо ПМС Мо| Моя р ох А ці : ромежуватьний стебло | петля стебло З обмежувальнни елементі стебла і слемент стела 2 де. де:
М, С, а, Т та О є такими, як визначено вище.
Зо Згідно з ще одним варіантом втілення першого аспекту, якому віддають особливу перевагу, принаймні одна РНК може включати або кодувати послідовність принаймні однієї гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з таких конкретних формул (ІБ) або (ПІБ): формула (ІБ) (послідовність "петля на стеблі" без обмежувальних елементів стебел): тиж т еКІл ій жа ч ок і, дян нини и епллкккклкккккм, ан чт стебло | Нетля стебло 2 формула (ПІБ) (послідовність "петля на стеблі" з обмежувальними елементами стебел):
Ма ЇМО МИ МК ОМИ ТММ Му;
Хі Ж- щ - у нету Здгтнння ан Мн замежувальний стебло | петля стебло 2 обмежувальний елемент стебла | елемент стебла 2 де:
М, С, а, Т та |! є такими, як визначено вище.
Згідно з варіантом втілення, якому віддають ще більшу перевагу, принаймні одна мРНК згідно з даним винаходом може включати послідовність принаймні однієї гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з таких конкретних формул з (Іс) по (ІЙ) або з (Іс) по (й), в альтернативному варіанті показану в її структурі "петля на стеблі" і як лінійну послідовність, яка представляє послідовності гістонової структури "петля на стеблі": формула (Іс): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" багатоклітинних організмів та найпростіших без обмежувальних елементів стебел):
МИ с-Є
М-М (структура петля на стеблі)
МОХУММММОМММММСМ
Слинина послідовність (ЗБОЮ МО: 26) формула (Пс): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" багатоклітинних організмів та найпростіших з обмежувальними елементами стебел):
МО
М-М сп-С
Мем М-ММММ ММ іструктура "петля на стеблі)
МУМУММММО ММ ММ МИ М ММ ММС МУ ММ им (лінійна послідовність (ЗБОЇ МО: 27 формула (Ід): (без обмежувальних елементів стебел)
МИ
М-М
С-0
М-М сструктура петля на стеблі)
МОММММММИМММ ММ М
(лінійна послідовність (ЗБО ПО МОХ 28) формула (Ід): (з оомежувальними елементами стебел)
Ми
М-М
М-М с-а
ММ МММ-ММММ МАМ (структура "петля на стеблі")
МУМУММММСМММММ МИХ ММ ММ ММ ММ
Спінійна послідовність СЗБО ПО МО: 29) формула (І): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" найпростіших без обмежувальних елементів стебел)
МО
М М
МАМ
ММ
М.М
СО
СН. сервера екв на стевія рохиммимоммМММсн ліва песню ЗЕМ формула (Пе): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" найпростіших з обмежувальними елементами стебел)
Ми
М М
МАМ
О-С
Мч МАН Ме іструктура "петля на стеблі) (лінійна послідовністю СЗБО ПІ РСК З формула (І): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" багатоклітинних організмів без обмежувальних елементів стебел)
У-М
У-М
В-
М-М с-С
МЩ-М (структура петля на стейлі "
МОМВУУММІМУМОМСМ ілінійна послідовність (ЗБОЮ МО: 32) формула (ПД: (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" багатоклітинних організмів з оомежувальними елементами стебел)
МИ
У-У ч-М в-)
С-С
ММ ММММ-ММММЯМЖМ (структура "нетля на стебліЗ
МУМУММММОМВУУММОМУМОМСММММУМеМ ілінійна посліловність (5ЕО ТОЮ МО: 33 формула (Ід): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" хребетних без обмежувальних елементів стебел)
МИ рн ч-А
У-В
У-К
Н- с-С
М-М іструктура петля на стей")
МОНУ ОІМОНАВКОСМ
(ліншна послідовність ЗБ ГР МО: 343 формула (Ід): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" хребетних з обмежувальними елементами стебел)
МИ
ІД ві
УА
У-В
У-К
Н-) с-С
ММ НМММ-ММ ММ МН (структура петля на стеблі!)
МУМеЕНМММОНУУХОМОНАВВОСММММУМеН ілінійна послідовність (50 МОУ; 35 формула (Ій): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" людини (Ното заріепо5) без обмежувальних елементів стебел) ва)
В нн
ПА
С-5
У-и
Н-Е с-Є
П-Є іструктура петля на стейлі рон УсСсІОУ нАККСС (лінійна послідовність (ЗЕО І МО: 36) формула (ІВ): (консенсусна послідовність гістонової структури "петля на стеблі" людини (Ното заріеп5) з обмежувальними елементами стебел)
УС рн
ГА
С-5
У-К
АК оО0-С
РЕА АНО-СУНВЕМАеНУ іструктура "петля настеблі
МНЗТААНОСНУСТПОУОНАЗЕКССУНВЯМАНЯ
(лінійна послідовність (ЗБ ЕМО: 47 причому у кожній з вищенаведених формул з (Іс) по (ІЙ) або з (Пс) по (ПМ):
М, С, о, А, Т та |) є такими, як визначено вище; кожен / може бути замінений на Т; кожен (високо)консервативний С або С в елементах стебел 1 та 2 може бути замінений на його комплементарну нуклеотидну основу С або С, за умови, що його комплементарний нуклеотид у відповідному стеблі є паралельно заміненим на його комплементарний нуклеотид; імабо
С, А, Т, ШЮ, С, А, М, М, К, 5, МУ, Н, В, М, О та М є нуклеотидними основами, як визначено нижче у Таблиці:
В 77777 |бабоА7777777777777/0 |(Пурин////////////////////7СсС
В ///// |бабот/абос ////// |неа//////////////////////777777777СсС 07771111 |баболаботу.ї/// |нес/////////////////777711111111
У цьому контексті особливу перевагу віддають варіантові, в якому послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з наведений вище формул (І) або з (Іа) по (ІРй) або (Ії) або з (Па) по (ІІй) є вибраною з природної гістонової послідовності "петля на стеблі", у ще кращому варіанті - з послідовностей гістонової структури "петля на стеблі" найпростіших або багатоклітинних організмів, у ще кращому варіанті - з хребетних, і у найкращому варіанті - з послідовностей гістонової структури "петля на стеблі" ссавця, зокрема, з послідовностей гістонової структури "петля на стеблі" людини.
Згідно з варіантом втілення, якому віддають особливу перевагу, послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з конкретних формул (І) або з (Іа) по (ІЙ) або (І) або з (Па) по (ІЙ) згідно з даним винаходом є послідовністю гістонової структури "петля на стеблі", яка включає у кожній нуклеотидній позиції нуклеотид, який трапляється найчастіше, або нуклеотид, який трапляється найчастіше, або другий за частотою нуклеотид природної послідовностей гістонової структури "петля на стеблі" у багатоклітинних організмів або найпростіших, найпростіших, багатоклітинних організмів, хребетних та людини. У цьому контексті особливу перевагу віддають варіантові, у якому принаймні 8095, в оптимальному варіанті - принаймні 8595, або у найкращому варіанті - принаймні 9095 усіх нуклеотидів відповідають нуклеотидові природних послідовностей гістонової структури "петля на стеблі", який трапляється найчастіше.
В іншому конкретному варіанті втілення послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з наведених вище конкретних формул (І) або з (Іа) по (Іп) вибирають з таких послідовностей гістонової структури "петля на стеблі" (без обмежувальних елементів стебел):
МОУУУУННТтТНеММКСВ (5ЕО І МО: 38 згідно з формулою (Іс))
ЗСУХУТТУТМАКККОСЗ (5ЕО ІО МО: 39 згідно з формулою (Іс))
ЗОУУСТТТТМАСККОСЗ5 (5ЕО ІО МО: 40 згідно з формулою (Іс))
Коо) оОСМММВМУМТНУМММСН (ЗЕО ІО МО: 41 згідно з формулою (Іє))
КОМММУНВТНКОММСМ (5ЕО ІЮО МО: 42 згідно з формулою (Іє))
КОоМОвВУНУТНКОНМСТ (5ЕО ІЮ МО: 43 згідно з формулою (Іє))
МОУУУТУНТНАеМАКСВ (5ЕО ІО МО: 44 згідно з формулою (І)
ЗаУУСТТУТМАСЕКСЗ (ЗЕО ІЮ МО: 45 згідно з формулою (ІВ)
ЗОУУСТТТТМАСККОСЗ5 (5ЕО ІО МО: 46 згідно з формулою (І)
СОУУСТТУТНАСККСС (5ЕО ІЮ МО: 47 згідно з формулою (1д))
СОСУСТТУТМАСКОСС (5ЕО ІО МО: 48 згідно з формулою (19))
СОСТоТТТТМАСКОСС (5ЕО ІО МО: 49 згідно з формулою (19))
ООНУСТОУТНАБАКСС (5ЕО ІО МО: 50 згідно з формулою (ІЙ))
СОСУСТТТТНАСКОСС (5ЕО ІО МО: 51 згідно з формулою (ІЙ))
СОСУСТТТТМАОСКОСС (5ЕО ІО МО: 52 згідно з формулою (ІЙ))
Крім того, у цьому контексті таким послідовностям гістонової структури "петля на стеблі" (з обмежувальними елементами стебел) згідно з однією з конкретних формул (Ії) або з (Па) по (ІЙ) віддають особливу перевагу:
НН"ННУМОУУУУННТНеУМУКСВУНН"МУМ" (ЗЕО ІО МО: 53 згідно з формулою (Пс))
М"Н"МНМ5ахуУМ ГП УТМАВААСЗМСН"НУН" (ЗЕО ІО МО: 54 згідно з формулою (ПІс))
М"М'МММЗОУУСТТТТМАСККСОСЗАСН"МУН" (ЗЕО ІО МО: 55 згідно з формулою (ПІс))
МАМУ МО МУ М ВІЯММ ТНММММО НМНМУМУМ" (5ЕО ІО МО: 56 згідно з формулою (Пе))
М УННМКОМУМУнаГтнКОоММеМонн"МиМ (5ЕО ТО МО: 57 згідно з формулою (Пе))
МН"ННУКОоМОвУнУТНКОоНМОСМАННУНУН" (5ЕО ІО МО: 58 згідно з формулою (Пе))
ННМНМУСУХУГУНТНАеМККСВУМНУН"М" (5ЕО І МО: 59 згідно з формулою (ІІ)
М"М'МММОУУСТТУТМАСККСЗМСНУНУНУ (5ЕО І МО: 60 згідно з формулою (ІІ)
М"М'МММЗахуусТттМАаААСЗАСН"М'"Н" (ЗЕО ІО МО: 61 згідно з формулою (ІЙ)
НН"МАМОСУУСТТУТНАСККССМУНМ"М"М" (5ЕО ІЮО МО: 62 згідно з формулою (ПІд))
Н"Н'ААМООСУСТТУТМАОКОССМУСНУН"М" (5ЕО ІЮ МО: 63 згідно з формулою (1ІД))
М"М'ААМООСТОТТТТМАОКОСсСсСМСМУ"М"М"У (5ЕО ТО МО: 64 згідно з формулою (ПІЯ))
М"Н'ААНОСНУСТОУТНАЗБККССМУНВУМУН" (ЗЕО ІО МО: 65 згідно з формулою (ПІП))
НН ААМОСОСУСТТТТНАОКОСсССУМУ"М"М" (ЗЕО О МО: 66 згідно з формулою (ПІЙ))
Н"М'АДАСОСУСТТТТМАСКОССКМУ"НУМ" (5ЕО І МО: 67 згідно з формулою (ІІЙ))
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК включає принаймні одну послідовність гістонової структури "петля на стеблі", яка демонструє принаймні приблизно 8095, в оптимальному варіанті - принаймні приблизно 8595, у ще кращому варіанті - принаймні
Зо приблизно 9095, у ще кращому варіанті - принаймні приблизно 9595 ідентичності послідовності з не на 10095 консервативними нуклеотидами у послідовностях гістонової структури "петля на стеблі" згідно з принаймні однією з конкретних формул (І) або з (Іа) по (Ій) або (ІІ) або з (Па) по (НІЙ) або з природною послідовністю гістонової структури "петля на стеблі".
Послідовністю гістонової структури "петля на стеблі", якій віддають особливу перевагу, є послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 71 САААООСТСТТТТСсАСАСССАССА, у ще кращому варіанті - відповідна послідовність РНК нуклеїновокислотної послідовності згідно з ЗЕО ІЮ МО: 71:
СААДАСССОСООООСАСАСаССАССА (5ЕО І МО: 72).
В оптимальному варіанті втілення гістонова послідовність "петля на стеблі" не містить послідовності петлі 5'-ОШИОС-3. Більш конкретно гістонова структура "петля на стеблі" не містить послідовності стебла 1 5-(404СИ0С0-3 та/або послідовності стебла 2 5-АСАОаСО-3, відповідно. В іншому оптимальному варіанті втілення послідовність "стебло-петля" не містить послідовності петлі 5-ССЦ00С0-3 або послідовності петлі 5-ШСААДИ-3 Більш конкретно послідовність "стебло-петля" не містить послідовності стебла 1 5'-ССОСпАСС-3 або не містить послідовності стебла 1 5-АССОШООСИОССА-3 та/або послідовності стебла 2 5'-Я4СОСАСца-3 або 5-паАспАдАдО(шИи-3, відповідно. Крім того, послідовності "стебло-петля" в оптимальному варіанті не є похідними від 3'-сетрансльованої ділянки рецептора інсуліну людини. Крім того, в оптимальному варіанті принаймні одна мРНК згідно з винаходом може не містити сигналів процесингу гістонової структури "петля на стеблі", зокрема, тих, які походять від гістонового гена Н2Аб14 миші (Н2КАб14).
В оптимальному варіанті принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом не містить одного або двох або принаймні одного або всіх, крім одного, або всіх компонентів групи, до якої належать: послідовність, яка кодує рибозим (в оптимальному варіанті самосплайсуючий рибозим), вірусна нуклеїновокислотна послідовність, сигнал процесингу гістонової структури "петля на стеблі", зокрема, послідовність процесингу гістонової структури "петля на стеблі", яка походить від гістонового гена миші Н2Аб14, Мео ген, інактивована промоторна послідовність та інактивована енхансерна послідовність. У ще кращому варіанті принаймні одна мРНК згідно з винаходом не містить рибозиму, в оптимальному варіанті - самосплайсуючого рибозиму, та одного компонента з групи, до якої належать: Мео ген, інактивована промоторна послідовність, інактивована енхансерна послідовність, сигнал процесингу гістонової структури "петля на бо стеблі", зокрема, послідовність процесингу гістонової структури "петля на стеблі", яка походить від гістонового гена миші Н2Аб14. Відповідно, мРНК в оптимальному режимі може не містити ні рибозиму, в оптимальному варіанті - самосплайсуючого рибозиму, ні Мео гена, або, в альтернативному варіанті, ні рибозиму, в оптимальному варіанті - самосплайсуючого рибозиму, ні будь-якого гена резистентності (наприклад, зазвичай застосовуваного для селекції). В іншому оптимальному режимі принаймні одна мРНК згідно з винаходом може не містити ні рибозиму, в оптимальному варіанті - самосплайсуючого рибозиму, ні сигналу процесингу гістонової структури "петля на стеблі", зокрема, послідовність процесингу гістонової структури "петля на стеблі", яка походить від гістонового гена миші Н2Аб14.
В альтернативному варіанті принаймні одна мРНК композиції згідно з винаходом необов'язково включає сигнал поліаденілування, який визначається у даному описі як сигнал, який передає поліаденілування на (транскрибовану) мРНК специфічними білковими факторами (наприклад, фактором специфічності розщеплення та поліаденілування (СР5Е), фактором стимуляції розщеплення (С5іР), факторами розщеплення І та І (СЕ | та СЕ І), полі(А)- полімеразою (РАР))М. У цьому контексті перевагу віддають консенсусному сигналові поліаденілування, який включає консенсусну послідовність ММ(О/Т)АМА. В аспекті, якому віддають особливу перевагу, сигнал поліаденілування включає одну з таких послідовностей:
АА(ШШЛ)ААА або А(ШШ/Л)ХШИ/ПААА (у якій уридин зазвичай є присутнім в РНК, а тимідин зазвичай є присутнім у ДНК). У деяких варіантах втілення сигнал поліаденілування, який використовується у принаймні одній мРНК згідно з винаходом, не відповідає МРНК З, 05, сигналові процесингу поліаденілування з людського гена 5-С5Е або послідовностям сигналу поліаденілування 540. Зокрема, вищезгадані сигнали поліаденілування не комбінуються з будь-яким геном резистентності до антибіотиків (або будь-яким іншим репортерним, маркерним або селективним геном), зокрема, з пео геном резистентності (неоміцинфосфотрансферазою). будь-який з вищезазначених сигналів поліаденілування в оптимальному варіанті не комбінується з гістоновою структурою "петля на стеблі" або сигналом процесингу гістонової "петля на стеблі" з гістонового гена миші Н2Аб14 у принаймні одній мРНК згідно з винаходом.
Згідно з іншим варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом може бути модифікована і, таким чином, стабілізована шляхом модифікації /С вмісту МРНК, в оптимальному варіанті - кодуючої ділянки принаймні однієї мРНК.
У варіанті втілення даного винаходу, якому віддають особливу перевагу, С/С вміст кодуючої ділянки принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом є модифікованим, зокрема, збільшеним порівняно з (/С вмістом кодуючої ділянки її конкретної мРНК дикого типу, тобто, немодифікованої мРНК. Амінокислотна послідовність, яка кодується принаймні однією мРНК, в оптимальному варіанті не є модифікованою порівняно з амінокислотною послідовністю, яка кодується конкретною мРНК дикого типу. Ця модифікація принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом грунтується на тому, що послідовність будь-якої ділянки мРНК, яка піддається трансляції, є важливою для ефективної трансляції цієї мРНК. Таким чином, важливе значення мають склад та послідовність різних нуклеотидів. Зокрема, послідовності, які мають підвищений вміст (С (гуанозину)/С (цитозину), є стійкішими за послідовності, які мають підвищений вміст А (аденозину)/О0 (урацилу). Згідно з винаходом, кодони мРНК, таким чином, змінюються порівняно з відповідною мРНК дикого типу, водночас зберігаючи трансльовану амінокислотну послідовність, таким чином, щоб вони включали збільшену кількість нуклеотидів с/С. З врахуванням того, що кілька кодонів кодують одну амінокислоту (так зване виродження генетичного коду), можуть бути визначені найбільш сприятливі для стійкості кодони (використання так званих альтернативних кодонів). Залежно від амінокислоти, яка має кодуватися принаймні однією мРНК, існують різні можливості модифікації послідовності МРНК порівняно з її послідовністю дикого типу. У разі амінокислот, які кодуються кодонами, які містять виключно С або С нуклеотиди, немає необхідності у жодній модифікації кодону. Таким чином, кодони для Рго (ССС або ССО), Агд (СОС або Со), Аіа (ОСС або Со) та Су (бОС або соб) не вимагають модифікації, оскільки А або І є відсутніми. Натомість кодони, які містять А та/або
І нуклеотиди, можуть бути модифіковані шляхом заміщення інших кодонів, які кодують ті ж самі амінокислоти, але не містять А та/або М. Їх прикладами є такі: кодони для Рго можуть бути модифіковані від ССО або ССА до ССС або ССО; кодони для Агуд можуть бути модифіковані від
СО або СОСА або АСА або АОС до СОС або СО; кодони для Аа можуть бути модифіковані від ССО або СА до СС або Со; кодони для Сіу можуть бути модифіковані від 55 або
СОА до СОС або оо. В інших випадках, хоча А або І нуклеотиди не можуть бути видалені з кодонів, все ж існує можливість зменшення вмісту А та ЮШ шляхом використання кодонів, які мають низький вміст А та/або І нуклеотидів. Їх прикладами є такі: кодони для Рпе можуть бути модифіковані від ШОЮ до ШОС; кодони для І еи можуть бути модифіковані від ШОА, ШО, СОШ 60 або СОА до СОС або СИС; кодони для бег можуть бути модифіковані від ОСИ або ОСА або
АСИи до ОСС, СО або АОС; кодон для Туг може бути модифікований від ША до САС; кодон для Су5 може бути модифікований від ШОЮ до ОС; кодон для Ніх може бути модифікований від СА То САС; кодон для Сіп може бути модифікований від САА до САС; кодони для Іе можуть бути модифіковані від АШО або АША до АС; кодони для ТПг можуть бути модифіковані від АС або АСА їо АСС або АСО; кодон для Азп може бути модифікований від ААШ до ААС; кодон для Гух може бути модифікований від ААА до ААС; кодони для Маі можуть бути модифіковані від 7/0 або ОА до БОС або (зИо; кодон для Азр може бути модифікований від
СА до САС; кодон для Сі може бути модифікований від ЗАА до САС; стоп-кодон ШАА може бути модифікований до ПАС або СА. З іншого боку, у разі кодонів для Меї (АОС) та Тгтр (00) не існує можливості модифікації послідовності. Перелічені вище заміщення можуть застосовуватись окремо або в усіх можливих комбінаціях для збільшення вмісту 5/С принаймні однієї МРНК композиції згідно з даним винаходом порівняно з конкретною мРНК дикого типу (тобто, первісною послідовністю). Таким чином, наприклад, усі кодони для ТПг, які трапляються у послідовності дикого типу, можуть бути модифіковані до АСС (або АСО). Однак в оптимальному варіанті застосовують, наприклад, комбінації вищезазначених можливих заміщень: заміщення всіх кодонів, які кодують ТПг у первісній послідовності (МРНК дикого типу), на
АСС (або АСО) та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують бег до ОСС (або СО або АОС); заміщення всіх кодонів, які кодують Іе у первісній послідовності до АОС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують ГІ уз до ААС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Туг до ПАС; заміщення всіх кодонів, які кодують маї у первісній послідовності до ОС (або и), та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Сім до БАС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Аа до ССС (або ССС), та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Агуд до СОС (або СО); заміщення всіх кодонів, які кодують Маї у первісній послідовності до з3ОС (або и), та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Сім до САС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Аа до ССС (або ССС), та
Зо заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Су до СОС (або СОС), та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Азп до ААС; заміщення всіх кодонів, які кодують Маї у первісній послідовності до СОС (або СИ), та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Рпе до ОС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Су5 до ОСС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують І еи до СОС (або СОС), та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують іп до САС, та заміщення всіх кодонів, які первісно кодують Рго до ССС (або ССО); і т. ін. В оптимальному варіанті, вміст (3/С кодуючої ділянки принаймні однієї мРНК композиції згідно 3 даним винаходом збільшують принаймні на 795, у ще кращому варіанті - принаймні на 1595, у варіанті, якому віддають особливу перевагу - принаймні на 2095, порівняно з вмістом 5/С кодованої ділянки мРНК дикого типу, яка кодує антиген, антигенний білок або антигенний пептид, як визначено авторами, або його фрагмент або варіант. Згідно з конкретним варіантом втілення, принаймні 595, 1095, 2095, 3090, 4090, 5095, 6095, у ще кращому варіанті - принаймні 70 95, у ще кращому варіанті - принаймні 8095, і у найкращому варіанті - принаймні 9095, 9595 або навіть 10095 кодонів, які піддаються заміщенню, у ділянці, яка кодує антиген, антигенний білок або антигенний пептид, як визначено авторами, або її фрагмент або варіант або всю послідовність послідовності мРНК дикого типу, є заміщеними, таким чином, збільшуючи вміст (/С вищезгаданої послідовності. У цьому контексті особливу перевагу віддають збільшенню вмісту б/С принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом до максимуму (тобто, 100905 кодонів, які піддаються заміщенню), зокрема, у ділянці, яка кодує білок, порівняно з послідовністю дикого типу. Згідно з винаходом, інша оптимальна модифікація принаймні однієї
МРНК композиції згідно з даним винаходом грунтується на тому, що ефективність трансляції також визначається іншою частотою випадків тРНК у клітинах. Таким чином, у разі збільшення присутності так званих "рідкісних кодонів" у принаймні одній мРНК композиції згідно з даним винаходом відповідна модифікована принаймні одна послідовність мРНК транслюється значно меншою мірою, ніж у разі присутності кодонів, які кодують відносно "часті" тРНК. Згідно з винаходом, у модифікованій принаймні одній мРНК композиції згідно з даним винаходом ділянка, яка кодує один з визначених вище антигенів, є модифікованою порівняно з відповідною ділянкою мРНК дикого типу, таким чином, що принаймні один кодон послідовності дикого типу, 60 який кодує тРНК, яка відносно рідко трапляється у клітині, є заміненим на кодон, який кодує
ТРНК, яка відносно часто трапляється у клітині й містить таку саму амінокислоту, що й відносно рідкісна ТРНК. Завдяки цій модифікації, послідовність принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом модифікується таким чином, щоб вставлялися кодони, для яких є доступними
ТРНК, які часто трапляються. Іншими словами, згідно з винаходом, завдяки цій модифікації, всі кодони послідовності дикого типу, які кодують тРНК, яка відносно рідко трапляється у клітині, у кожному з випадків можуть бути замінені на кодон, який тРНК, яка відносно часто трапляється у клітині і яка у кожному разі містить таку саму амінокислоту, що й відносно рідкісна тРНК. Які
ТРНК трапляються у клітині відносно часто, а які, на відміну від них, трапляються відносно рідко, відомо спеціалістам у даній галузі; пор., наприклад, АКазпїі, Сигг. Оріп. Сепеї. Оєм. 2001, 11(6): 660 - 666. Особливу перевагу віддають кодонам, які використовують для конкретної амінокислоти тРНК, яка трапляється найчастіше, таким, як Су кодон, який використовує тРНК, яка найчастіше трапляється у (людській) клітині. Згідно з винаходом, перевагу віддають зв'язуванню наступного підвищеного, зокрема, до максимуму, вмісту з/б у модифікованій принаймні одній мРНК композиції згідно з даним винаходом, з "частими" кодонами без модифікації амінокислотної послідовності білка, який кодується кодуючою ділянкою мРНК. Цей оптимальний варіант втілення дозволяє забезпечувати особливо ефективно трансльовану й стабілізовану (модифіковану) принаймні одну мРНК композиції згідно з даним винаходом.
Визначення модифікованої принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом, як описано вище (збільшений вміст (з/С; обмін тРНК) здійснюють, застосовуючи комп'ютерну програму, яка пояснюється у патенті УМО 02/098443, зміст опису якого є включеним у повному обсязі до опису даного винаходу. З застосуванням цієї комп'ютерної програми нуклеотидна послідовність будь-якої потрібної МРНК може бути модифікована за допомогою генетичного коду або його дегенеративного характеру, таким чином, щоб в результаті забезпечувався максимальний вміст (3/С, у комбінації з застосуванням кодонів, які кодують тРНК, які трапляються у клітині якомога частіше, причому амінокислотна послідовність, яка кодується модифікованою принаймні однією мРНК, в оптимальному варіанті не модифікується порівняно з немодифікованою послідовністю. В альтернативному варіанті також існує можливість модифікації лише вмісту (5/С або лише використання кодону порівняно з первісною послідовністю. Вихідний код у Мізча! Вазіс 6.0 (середовище розробки: Місгозой Мізча! 5щаїйо
Зо Епіегргізе 6.0 з Зегмісераск 3) також описується у документі МО 02/098443. У ще одному оптимальному варіанті втілення даного винаходу вміст А/О у середовищі сайта зв'язування рибосоми принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом збільшується порівняно з вмістом АЛ) у середовищі сайта зв'язування рибосоми цієї конкретної мРНК дикого типу. Ця модифікація (збільшений вміст А/О навколо сайта зв'язування рибосоми) підвищує ефективність зв'язування рибосоми з принаймні однією мРНК. Ефективне зв'язування рибосом з сайтом зв'язування рибосоми (послідовність Козака: ОССОССАССАЦОЄОо (БО ІЮО МО: 68),
АЦОо утворює стартовий кодон), у свою чергу, має ефект ефективної трансляції принаймні однієї
МРНК. Згідно з ще одним варіантом втілення даного винаходу, принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом можуть бути модифіковані відносно потенційно дестабілізуючих елементів послідовності. Зокрема, кодуюча ділянка та/або 5' та/або 3' нетрансльована ділянка цієї принаймні однієї мРНК може бути модифікована порівняно з конкретною мРНК дикого типу, таким чином, щоб вона не містила дестабілізуючих елементів послідовності, причому кодована амінокислотна послідовність модифікованої принаймні однієї мРНК в оптимальному варіанті не є модифікованою порівняно з її конкретною мРНК дикого типу. Відомо, що, наприклад, у послідовностях еукаріотних РНК трапляються дестабілізуючі елементи послідовності (ОЗЕ), з якими зв'язуються сигнальні білки і регулюють ферментативне розщеплення РНК іп мімо. Для подальшої стабілізації модифікованої принаймні однієї мРНК необов'язково у ділянці, яка кодує антиген, антигенний білок або антигенний пептид, як визначено авторами, таким чином, можуть бути виконані одна або кілька таких модифікацій порівняно з відповідною ділянкою мРНК дикого типу, таким чином, щоб не містилося або по суті не містилося дестабілізуючих елементів послідовності. Згідно з винаходом, О5Е, присутні у нетрансльованих ділянках (3'- та/або 5'-
ТЕ), також можуть бути видалені з принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом шляхом таких модифікацій. Такими дестабілізуючими послідовностями є, наприклад, багаті на АЮ послідовності (АСКЕ5), які трапляються у 3-ТЕ сегментах численних нестійких
РНК (Сарші еї аї., Ргос. МаїЇ. Асай. Зсі. ЮБА 1986, 83: 1670 - 1674). Принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом, таким чином, в оптимальному варіанті є модифікованою порівняно з мРНК дикого типу, таким чином, щоб принаймні одна мРНК не містила таких дестабілізуючих послідовностей. Це також стосується мотивів послідовностей, які розпізнаються можливими ендонуклеазами, наприклад, послідовності ЗААСААОС, яка міститься бо у 3- ТК сегменті гена, який кодує рецептор трансферину (Віпаег єї аІ., ЕМВО 4. 1994, 13: 1969
- 1980). Ці мотиви послідовностей також в оптимальному варіанті є видаленими у принаймні одній мРНК композиції згідно з даним винаходом. Також в оптимальному варіанті згідно з винаходом принаймні одна мРНК композиції згідно з даним винаходом у модифікованій формі має принаймні один ІКЕ5, як визначено вище, та/або принаймні одну 5' та/або 3' стабілізуючу послідовність у модифікованій формі, наприклад, для посилення зв'язування рибосоми або для забезпечення можливості експресії різних кодованих антигенів, розташованих на принаймні одній (бі- або навіть поліцистронній) мРНК композиції згідно з даним винаходом.
Крім того, згідно з винаходом, принаймні одна мРНК композиції в оптимальному варіанті має принаймні одну 5' та/або 3' стабілізуючу послідовність. Ці стабілізуючі послідовності у 5' та/або 3 нетрансльованих ділянках мають ефект збільшення періоду напіввиведення принаймні однієї
МРНК у цитозолі. Ці стабілізуючі послідовності можуть мати 10095 гомологію послідовності з природними послідовностями, які трапляються у вірусах, бактеріях та еукаріотах, але також можуть бути частково або повністю синтетичними. Нетрансльовані послідовності (ОТК) Д-гена глобіну, наприклад, з Ното 5аріеп5 або Хепори5 Іаемі5, можуть бути згадані як приклад стабілізуючих послідовностей, які можуть застосовуватися згідно з даним винаходом для стабілізованої мРНК. Інший приклад стабілізуючої послідовності має загальну формулу (С/О)ДССАМХССС(ША)РУХОС(С/ЛО)СС (5ЕО І МО: 69), що міститься у З'ОТК дуже стійкої мРНК, яка кодує а-глобін, «(І)-колаген, 15-ліпоксигеназу або тирозингідроксилазу (пор. Ноїсік еї аї.,
Ргос. Май). Асад. 5сі. ОБА 1997, 94: 2410 - 2414). Такі стабілізуючі послідовності, зазвичай можуть застосовуватись окремо або у комбінації одна з одною, а також у комбінації з іншими стабілізуючими послідовностями, відомими спеціалістам у даній галузі. Принаймні одна мРНК композиції згідно 3 даним винаходом, таким чином, в оптимальному варіанті є присутньою як стабілізована ОТЕ (нетрансльованими ділянками) мРНК глобіну, зокрема, як ТЕ -стабілізована
МРНАК а-глобіну. В оптимальному варіанті принаймні одна мРНК композиції включає стабілізуючу послідовність у 3-Ю0ТЕ, яка походить від центральної, о-комплекс-зв'язувальної частини З'ОТК гена о-глобіну, такого, як людський ген о-глобіну, в оптимальному варіанті - згідно з ФЕО ІЮ Мо. 70:
Центральна, о-комплекс-зв'язувальна частина З'ЮТК гена о-глобіну (у цьому описі також називається "тиад")
Коо) ссосаАдосааСсСОССсСААдСсаваСоСОсСосоосСОоССОасСАССаИ (5ЕО І МО. 70)
Незважаючи на це, заміщення, додавання або видалення основ в оптимальному варіанті здійснюють з принаймні однією мРНК композиції згідно з даним винаходом, використовуючи матрицю ДНК для приготування принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом з застосуванням технологій добре відомого сайт-спрямованого мутагенезу або стратегії лігування олігонуклеотидів (див. наприклад, Мапіаїіх еї аїЇ., МоїІесшціаг Сіопіпд: А І арогаїюгу Мапиаї, Соїй зргіпд Нагбог І арогаїогу Ргез5, Зга ей., Соїй 5ргіпд Нагрог, МУ, 2001). У такому процесі для приготування принаймні однієї мРНК відповідна молекула ДНК може бути транскрибована іп міго. Ця матриця ДНК в оптимальному варіанті включає придатний промотор, наприклад, 17 або 5Рб промотор, для іп міго транскрипції, за яким розташовується потрібна нуклеотидна послідовність для принаймні однієї мРНК, яка має бути одержана, та сигнал термінації для іп міго транскрипції. Молекула ДНК, яка утворює матрицю принаймні однієї потрібної мРНК, може бути одержана шляхом ферментативної проліферації з наступним виділенням як частини плазміди, яка має бути реплікованою у бактеріях. Плазмідами, які можуть бути згадані як прийнятні для даного винаходу, є, наприклад, плазміди рТ7тТ5 (номер доступу СепВапк 026404;
Гаї еї аїІ., Оемеіюортепі 1995, 121: 2349 - 2360), серія РОЕМФ), наприклад, РОЕМФ-1 (номер доступу СепВапк Х65300; від Рготеда) та реРб4 (номер доступу сСепВапк хХ65327); пор. також
Мегеї апа Богів, Рипіїсайіоп ої РОСА Ргодисів, іп: Спініп апа Ситініп (ва.), РСА Тесппоіоду: Сцтепі
Іппомайіоп, СВС Ргевз5, Воса Вашюп, РІ, 2001.
Стабілізація принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом подібним чином може здійснюватися шляхом асоціації та комплексоутворення принаймні однієї мРНК з катіонною сполукою, зокрема, полікатіонною сполукою, наприклад, (полі)катіонним пептидом або білком, або зв'язування з такою сполукою. Зокрема, застосування протаміну, нуклеоліну, сперміну або спермідину як полікатіонного, зв'язуючого нуклеїнову кислоту білка до РНК є особливо ефективним. Крім того, так само є можливим застосування інших катіонних пептидів або білків, таких, як полі-І -лізин або гістони. Ця процедура стабілізації мРНК описується у патенті ЕР-А-1083232, опис якого є включеним до даного винаходу шляхом посилання у повному обсязі. Іншими оптимальними катіонними речовинами, які можуть застосовуватися для стабілізації МРНК композиції згідно з даним винаходом, є катіонні полісахариди, наприклад, хітозан, полібрен, поліетиленімін (РЕЇ) або полі-І-лізин (РІЇ) і т. ін. Асоціація або бо комплексоутворення принаймні однієї мРНК композиції згідно з винаходом з катіонними сполуками, наприклад, катіонними білками або катіонними ліпідами, наприклад, олігофектаміном як комплексоутворюючим реагентом на ліпідній основі, в оптимальному варіанті збільшує перенесення принаймні однієї мРНК, присутньої як фармацевтично активний компонент, у клітини, які піддаються лікуванню, або в організм, який піддається лікуванню.
Ідеться про розкриття в цьому описі стабілізуючого ефекту для принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом шляхом комплексоутворення, що також стосується стабілізації мРНК.
Згідно з ще одним конкретним оптимальним варіантом втілення, принаймні одна мРНК композиції у додатковому або альтернативному варіанті може кодувати секреторний сигнальний пептид. Такими сигнальними пептидами є послідовності, які зазвичай мають довжину від приблизно 15 до 30 амінокислот і в оптимальному варіанті розташовуються на М-кінці кодованого пептиду, а також інші. Сигнальні пептиди, як визначено авторами, в оптимальному варіанті забезпечують можливість перенесення антигена, антигенного білка або антигенного пептиду, які кодуються принаймні однією мРНК композиції, до визначеного клітинного компартменту, в оптимальному варіанті - до поверхні клітин, ендоплазматичного ретикулуму (ЕК) або ендосомально-лізосомального компартменту. Прикладами послідовностей секреторного сигнального пептиду, як визначено авторами, є, крім інших, сигнальні послідовності класичних або некласичних МНСО-молекул (наприклад, сигнальні послідовності молекул МН І та ІЇ, наприклад, молекули МНС класу І НГА-А"0201), сигнальні послідовності цитокінів або імуноглобулінів, як визначено авторами, сигнальні послідовності інваріантних ланцюгів імуноглобулінів або антитіл, як визначено авторами, сигнальні послідовності І атрі,
Таравзіп, Егр57, СаїгейКиїйй?, Саїіпехіп та інших мембраноасоційованих білків або білків, асоційованих з ендоплазматичним ретикулумом (ЕК) або ендосомально-лізосомальним компартментом. У варіанті, якому віддають особливу перевагу, згідно з даним винаходом, застосовують сигнальні послідовності молекул МНС класу І НГА-А"0201.
Будь-які з вищезазначених модифікацій можуть бути застосовані до принаймні однієї мРНК композиції згідно з даним винаходом, а також до будь-якої РНК, яку використовують у контексті даного винаходу, і якщо це є прийнятним або необхідним, можуть бути поєднані одна з одною у будь-якій комбінації, за умови, що ці комбінації модифікацій не перешкоджають одна одній у відповідній принаймні одній мРНК. Спеціаліст у даній галузі зможе здійснити відповідний вибір.
Згідно з оптимальним варіантом втілення, композиція включає принаймні одну мРНК, яка була модифікована, як описано авторами, і включає принаймні одну кодуючу послідовність, вибрану з послідовностей РНК, які є ідентичними або принаймні на 8095 ідентичними послідовності РНК ЗЕО ІЮ МО: 3, 6, 9, 12, 15, 18 або 25. У ще кращому варіанті композиція включає шість мРНК, причому кодуюча послідовність у кожній мРНК є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною одній з послідовностей РНК згідно з БЕО ІЮО МО: 3, 6, 9, 12, 15, 18 або 25.
В оптимальному варіанті втілення кожен з шести антигенів композиції згідно з даним винаходом може бути кодований однією (моноцистронною) мРНК. Іншими словами, композиція згідно з даним винаходом може містити шість (моноцистронних) мРНК, причому кожна з цих шести (моноцистронних) мРНК може кодувати лише один антиген, як визначено вище.
У ще кращому варіанті втілення композиція включає шість мРНК, кожна з яких є модифікованою, як описано авторами, причому одна мРНК кодує 514, одна мРНК кодує сурвівін, одна мРНК кодує МУ-Е5О-1, одна мРНК кодує МАСБЕ-С1, одна мРНК кодує МАСЕ-С2, і одна мРНК кодує МОСТІ або їх фрагменти або варіанти, відповідно.
У ще кращому варіанті втілення композиція включає шість мРНК, причому одна мРНК кодує 5Т4 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮО МО: 3, одна мРНК кодує сурвівін і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮО МО: 6, одна мРНК кодує МУ-Е5О-1 і включає кодуючу послідовність, ідентичну
БО або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮ МО: 9, одна мРНК кодує МАСБ-С1 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮ МО: 12 або 25, одна мРНК кодує МАСЕ-С2 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну
ЗЕБЕО ІЮ МО: 15, і одна мРНК кодує МОС1 і включає кодуючу послідовність, ідентичну або принаймні на 8095 ідентичну ЗЕО ІЮ МО: 18 (або фрагменти або варіанти кожної з цих послідовностей) та, необов'язково, інші допоміжні речовини.
В одному варіанті втілення композиція включає принаймні одну мРНК, яка є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною послідовності РНК 5ЕО ІЮО МО: 1, 4, 7, 10, 13 або 16. У ще кращому варіанті композиція включає шість мРНК, причому кожна мРНК є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною одній з послідовностей РНК згідно з 5ЕО ІЮ МО: 1, 4, 7, 10, 13 або бо 16. ко)
У ще кращому варіанті втілення композиція включає шість мРНК, причому одна мРНК кодує 5Т4 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 1, одна мРНК кодує сурвівін і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮ МО: 4, одна мРНК кодує МУ-Е5О-1 ї є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮ МО: 7, одна мРНК кодує МАСБ-С1 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮО МО: 10, одна мРНК кодує МАСЕ-С2 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮО МО: 13, і одна мРНК кодує МИСІ ії є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮ МО:16 (або фрагменти або варіанти кожної з цих послідовностей) та, необов'язково, інші допоміжні речовини.
Згідно з винаходом, принаймні одна мРНК описаних вище композицій включає гістонову структуру "петля на стеблі" у 3 ОТК ділянці. В оптимальному варіанті композиція включає шість
МРНК, причому кожна з мРНК включає гістонову структуру "петля на стеблі", як визначено в цьому описі.
В оптимальному варіанті втілення композиція включає шість МРНК, причому одна мРНК кодує 514 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 19, одна мРНК кодує сурвівін і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 20, одна мРНК кодує МУ-
Е5О-1 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 21, одна мРНК кодує
МАСЕЕ-С1 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 22, одна мРНК кодує
МАСЕ-С2 і є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮ МО: 23, і одна мРНК кодує
МИСТ ї є ідентичною або принаймні на 8095 ідентичною ЗЕО ІЮ МО: 24 (або фрагменти або варіанти кожної з цих послідовностей) та, необов'язково, інші допоміжні речовини.
Згідно з іншим варіантом втілення, композиція згідно з винаходом може включати ад'ювант для посилення імуностимулюючих властивостей композиції. У цьому контексті ад'ювант слід розуміти як будь-яку сполуку, яка є придатною для сприяння введенню та доставленню композиції згідно з винаходом. Крім того, такий ад'ювант може, без зв'язування з ним, започатковувати або посилювати імунну реакцію природної імунної системи, тобто, неспецифічну імунну реакцію. Іншими словами, після введення композиція згідно з винаходом зазвичай започатковує адаптивну імунну реакцію завдяки принаймні шести антигенам, які кодуються принаймні однією мРНК, яка міститься у композиції згідно з винаходом. Крім того, композиція згідно з винаходом може викликати (підтримувальну) природну імунну реакцію завдяки додаванню ад'юванта, як визначено авторами, до композиції згідно з винаходом.
Такий ад'ювант може бути вибраний з-поміж будь-яких ад'ювантів, відомих спеціалістам у даній галузі й придатних для даного випадку, тобто, сприяння викликанню імунної реакції у ссавця. В оптимальному варіанті ад'ювант може бути вибраний з групи, до якої належать, крім інших, ТОМ, МОР, мурамілдипептид, плюроніки, розчин галуну, гідроксид алюмінію,
АБОЮОМЕКТМ (поліфосфазен); гель фосфату алюмінію; глюкати з водоростей; альгамулін; гель гідроксиду алюмінію (галун); гель гідроксиду алюмінію з високим поглинанням білка; гель гідроксиду алюмінію низької в'язкості; АЕ або 5РТ (емульсія сквалану (595), Тжмееп 80 (0,295),
Рійгопіс 121 (1,2595), фосфатно-буферний розчин, рН 7,4); АМКІСІМЕТМ (пропандіамін); ВАУ вІ005ТМ (М-(2-дезокси-2-І -лейциламіно-б-ЮО-глюкопіранозил)-М-октадецил-додеканоїл-амід гідроацетат); САГСІТКІОСТМ (1-альфа,25-дигідрокси-вітамін 03); гель фосфату кальцію;
САРТМ (наночастинки фосфату кальцію); голотоксин холери, злитий білок токсину холери-А1- білка-А-0-фрагмента, субодиниця В токсину холери; СК 1005 (блок-співполімер Р1205); цитокіновмісні ліпосоми; ОрА (диметилдіоктадециламонійбромід); ОНЕА (дегідроепіандростерон); ОМРС (диміристоїлфосфатидилхолін); ОМРО (диміристоїлфосфатидилгліцерин); комплекс СОсС/галун (натрієва сіль дезоксихолевої кислоти); повний ад'ювант Фрейнда; неповний ад'ювант Фрейнда; гамма-інулін; ад'ювант Гербу (суміш: Її)
М-ацетилглюкозамініл-(Р 1-4)-М-ацетилмураміл-І| -аланіл-О-глутамін (СМОР), ії) диметилдіоктадециламонійхлорид (ОБА), їїї) комплекс цинку - солі І-проліну (ХпРго-8); СМ-
С5Е); МОР (М-ацетилглюкозамініл-(01-4)-М-ацетилмураміл-|! -аланіл-О-ізоглутамін); іміквімод (1-(2-метилпропіл)-1 Н-імідазо|4,5-с)хінолін-4-амін); ІттТВпегтм (М-ацетилглюкозамініл-М- ацетилмураміл-їі -АІа-О-ізосін-І -АІа-гліцериндипальмітат); ОКМ (імуноліпосоми, одержані в результаті дегідратації-регідратації везикул); інтерферон-гамма; інтерлейкін-1бета; інтерлейкін- 2; інтерлейкін-7; інтерлейкін-12; ІЗСОМ5ТМ; ІЗСОРКЕР 7.0.3. ТМ; ліпосоми; ГОХОКІВІМЕТМ (7- аліл-В-оксогуанозин); пероральний ад'ювант ІТ (лабільний ентеротоксин-протоксин з Е.соїЇ); мікросфери та мікрочастинки будь-якого складу; МЕ59ТМ; (емульсія сквален-вода);
МОМТАМІОЕ ІА 51ТМ (очищений неповний ад'ювант Фрейнда) МОМТАМІЮОЕ ІБА 720Т7М (метаболізований олійний ад'ювант); МРІ ТМ (3-О-дезацил-4-монофосфорил ліпід А); ліпосоми
МТР-РЕ та МТР-РЕ ((М-ацетил-ї -аланіл-О-ізоглутамініл-І -аланін-2-(1,2-дипальмітоїл-5п-гліцеро-
З-(гідроксифосфорилокси))-етиламід, мононатрієва сіль); МОКАМЕТІОЕТМ (Мас-Миги-І-АїІа-О- 60 Сіп-ОСНЗ) МОКАРАЇ МІТІМЕТМ ота 0О-МОВАРАЇГ МІТІМЕТМ /(Мас-Мик-І-Тні-О-івос1Іп-вп-
гліцериндипальмітоїл); МАСО (нейрамінідаза-галактозоксидаза); наносфери або наночастинки будь-якого складу; МІЗБМ (везикули неіоногенної поверхнево-активної речовини); Р ЕОКАМТМ (Ві -глюкан); РІ СА, РОА та РГА (гомо- та співполімери молочної кислоти та гліколевої кислоти; мікросфери/наносфери); РІГОКОМІС 1121ТМ; РММА (поліметилметакрилат); РОВОЗТМ (протеїноїдні мікросфери); похідні поліетиленкарбамату; полі-гА: полі-М (комплекс поліаденілової кислоти - поліуридилової кислоти); полісорбат 80 (Туеєеп 80); білкові кохлеати (Амапії Роїаг І іріа5, Іпс., АІабавзівг, АГ); ЗТІМОГОМТМ (05-21); Оці-А (ОпціЇ-А сапонін); 5-28463 (4-аміно-оїес-диметил-2-етоксиметил-!1 Н-імідазо|4,5 с)хінолін-1-етанол); БАБ-1ТМ «(Сад'ювантна композиція Зупіех"); протеоліпосоми Зепдаії та зЗепааїі-вмісні ліпідні матриці; Зрап-85 (сорбіттриолеат); 5ресо! (емульсія Магсо! 52, Зрап 85 та Тмееп 85); сквален або Кобапе?Ф (2,6,10,15,19,23-гексаметилтетракозан та 2,6,10,15,19,23-гексаметил-2,6,10,14,18,22- тетракозагексан); стеарилтирозин (гідрохлорид октадецилтирозину); ТПпегатійФ /(М- ацетилглюкозамініл-М-ацетилмураміл-їі -АІа-О-ізосіІШ-І -АІа-дипальмітоксипропіламід); Тпегопуї-
МОР (Теппипіаетм або (г 1|1-МОР; М-ацетилмураміл-І -треоніл-О-ізоглутамін); Ту-частинки (Ту-
МІР або вірусоподібні частинки); ліпосоми Волтера-Ріда (ліпосоми, які містять ліпід А, адсорбований на гідроксиді алюмінію) та ліпопептиди, включаючи РатЗсСух, зокрема, солі алюмінію, такі, як Аази-рпо5, АІпуагодеї, Кепуагадеї!; емульсії, включаючи СЕА, ЗАБЕ, ІРА, МЕ59, провакс, ТпегМах, монтанід, ваксфектин; співполімери, включаючи Оріїмах (СКІ 1005), І 121,
РоІоахтег4010) і т. ін; ліпосоми, включаючи 5ієайцй, кохелати, включаючи ВІОКАЇ; ад'юванти рослинного походження, включаючи 0521, Опції А, Ізсотаїйгіх, ІЗСОМ; ад'юванти, придатні для костимуляції, включаючи Топтаїйійпе, біоплолімери, включаючи РІС, РММ, інулін; ад'юванти мікробного походження, включаючи нуклеїновокислотні послідовності ромуртиду, ОЕТОХ, МРІ,
СМУ5, манози, Сро, Сро7909, ліганди людини ТІ К 1-10, ліганди миші ТІ 1-13, І55-1018, ІСЗ1, імідазохіноліни, ампліген, Кірі529, ІМоОхіпе, ІКІМ, МІ Р, токсин холери, термолабільний токсин,
РатзсСух, флагелін, ГФі-якір, ІМЕРІШШИЛ ем Х, протимікробні пептиди, ШС- 1М150, злитий білок
КЗМ, саіОМР; та ад'юванти, придатні як антагоністи, включаючи нейропептид СОКР.
Придатні ад'юванти також можуть бути вибрані з катіонних або полікатіонних сполук, причому ад'ювант в оптимальному варіанті утворюють після утворення комплексу принаймні однієї МРНК композиції згідно з винаходом з катіонною або полікатіонною сполукою. Асоціація
Зо або утворення комплексу мРНК композиції з катіонними або полікатіонними сполуками, як визначено авторами, в оптимальному варіанті надає ад'ювантних властивостей і забезпечує стабілізуючий ефект для принаймні однієї мРНК композиції. У варіанті, якому віддають особливу перевагу, такі катіонні або полікатіонні сполуки вибирають з-поміж катіонних або полікатіонних пептидів або білків, включаючи протамін, нуклеолін, спермін або спермідин, або інших катіонних пептидів або білків, таких, як полі-і -лізин (РІ), полі-аргінін, основних поліпептидів, проникаючі пептиди (СРР), включаючи ВіІЛ-зв'язувальні пептиди, Там ВІЛ-1 Таї (ВІЛ), похідні від Таї пептиди, пенетратин, похідні від МР22 або аналогічні пептиди, НОМ МР22 (простий герпес), МАР,
КАГА або домени білкової трансдукції (РТО, РрТ620, багаті на пролін пептиди, багаті на аргінін пептиди, багаті на лізин пептиди, МРО-пептид(и), Рер-1, І -олігомери, пептид(и) кальцитоніну, взяті з антеннапедія пептиди (зокрема, з антеннапедія дрозофіли), рАпір, рівбіІ, ЕСЕ, лактоферин, Тгапзрогіап, Вибогіп-2, Вас715-24, 5упВ, 5упВ(1), РУХЕС, пСтТ-похідні пептиди, ЗАР, протамін, спермін, спермідин або гістони. Іншими катіонними або полікатіонними сполуками можуть бути катіонні полісахариди, наприклад, хітозан, полібрен, катіонні полімери, наприклад, полієтиленімін (РЕЇ), катіонні ліпіди, наприклад, ООТМА: ГГ 1-(2,3-сіолеїлокси)пропіл) -М,М,М- триметиламонійхлорид, ОМА ЧЕ, д-С14-амідин, ООТІМ, 5АЇМТ, ЮС-Спої, ВатС, СТАР, РОРС, рОбБАР, ОРЕ: діолеїлфосфатидилетанол-амін. БОБРА, БОБАВ, БОІС, ОМЕРС, 0ОО5: діоктадециламідогліцилоспермін, ОІМКІ: диміристо-оксипропіл диметил гідроксіетил амоній бромід, ООТАР: діолеїлокси-3-(триметиламоніо)упропан, ЮС-6-14: О,О-дитетрадеканоїл-М-(Г- триметиламоніоацетил)діетаноламін хлорид, СІРІ: рац-/ (2,3-діоктадецилоксипропіл)(2- гідроксіетил) | І-диметиламоній хлорид, СПР: рац- 2(2,3-дигексадецилоксипропіл- оксиметилокси)етилі Ітриметиламоній, СПР: рац-О2(2,3-дигексадецилоксипропіл- оксисукцинілокси)етил/ І-триметиламоній, олігофектамін або катіонні або полікатіонні полімери, наприклад, модифіковані поліамінокислоти, такі, як полімери В-амінокислот або обернені поліаміди і т. ін., модифіковані поліетилени, такі, як РУР (полі(М-етил-4-вінілпіридинійбромід)) і т. ін., модифіковані акрилати, такі, як РОМАЕМА (полі(диметиламіноетил метилакрилат)) і т. ін., модифіковані амідоаміни, такі як рАМАМ (полі(амідоамін)) і т. ін., модифікований полібетааміноестер (РВАЕ), такий, як модифіковані у діамінокінцевому фрагменті співполімери 1,4 бутандіолдіакрилату та 5-аміно-1-пентанолу і т. ін., дендримери, такі, як дендримери проліпропіламіну або дендримери на основі рАМАМ і т. ін., поліїмін(и), такі, як РЕЇ: бо полі(етиленімін), полі(пропіленімін) і т. ін., поліаліламін, полімери на основі цукрового остова,
такі, як полімери на основі циклодекстрину, полімери на основі декстрану, хітозан і т. ін., полімери на основі силанового остова, такі, як співполімери РМОХА-РОМФ5, і т. ін., блок- полімери, які складаються з комбінації одного або кількох катіонних блоків (наприклад, наприклад, вибраних з катіонного полімеру, як згадано вище) та одного або кількох гідрофільних або гідрофобних блоків (наприклад, поліетиленгліколь); і т. ін.
Крім того, оптимальні катіонні або полікатіонні білки або пептиди, які можуть застосовуватись як ад'юванти шляхом утворення комплексу принаймні однієї мРНК композиції, можуть бути вибрані з нижчеперелічених білків або пептидів, які мають таку загальну формулу (ПО: «Аго(ув)т (Нів)п(Огп)о;(Хаа)х, де І ж т ж п жо ї- х - 8- 15 та І, т, п або о незалежно одне від одного можуть бути будь-яким числом, вибраним з-поміж 00, 1,2,3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або 15, за умови, що загальний вміст Аго, Гу, Ні5 та Огп складає принаймні 5095 усіх амінокислот олігопептиду; і Хаа може бути будь-якою амінокислотою, вибраною з-поміж нативних (- природних) або ненативних амінокислот, за винятком Аго, Гуз, Ні5 або Огп; і х може бути будь-яким числом, вибраним з-поміж 0, 1, 2, З або 4, за умови, що загальний вміст Хаа не перевищує 50 95 усіх амінокислот олігопептиду. Особливу перевагу в цьому контексті віддають таким олігоаргінінам, як, наприклад, Агд7, Аго8, Агд9, Агд7, НЗКУ, К9НЗ3, НЗК9НЗ, 5589557, (ЕКНІЯ4, УККН)2 і т. ін.
Співвідношення мРНК з катіонною або полікатіонною сполукою в ад'ювантному компоненті розраховують на основі співвідношення азоту/фосфату (М/Р) цілого комплексу мРНК, тобто, співвідношення позитивно заряджених атомів (азоту) катіонної або полікатіонної сполуки з негативно зарядженими атомами фосфату нуклеїнових кислот. Наприклад, 1 мкг РНК зазвичай містить приблизно З нмоль фосфатних залишків, якщо РНК демонструє статистичний розподіл основ. Крім того, 1 мкг пептиду зазвичай містить приблизно х нмоль азотних залишків, залежно від молекулярної маси та кількості основних амінокислот. Для прикладу, при розрахунку для (Аг9)9 (молекулярна маса 1424 г/моль, 9 атомів азоту) 1 мкг (Аг9)9 містить приблизно 700 пмоль (Аго)9, і, таким чином, 700 х 9 - 6300 пмоль основних амінокислот - 6,3 нмоль атомів азоту. Для масового співвідношення приблизно 1:1 РНК/Аго)9 може бути розраховане співвідношення М/Р приблизно 2. Для прикладу, при розрахунку для протаміну (молекулярна маса приблизно 4250 г/моль, 21 атом азоту, якщо застосовують протамін лосося) з масовим співвідношенням
Зо приблизно 2:1 з 2 мкг РНК, 6 нмоль фосфату мають бути розраховані для РНК; 1 мкг протамін містить приблизно 235 пмоль молекул протаміну і, таким чином, 235 х 21 - 4935 пмоль атомів основного азоту - 4,9 нмоль атомів азоту. Для співвідношення мас РНК/протаміну приблизно 21 може бути розраховане співвідношення М/Р приблизно 0,81. Для співвідношення мас
РНК/протаміну приблизно 8:1 може бути розраховане співвідношення М/Р приблизно 0,2. У контексті даного винаходу співвідношення М/Р в оптимальному варіанті становить приблизно 0,1-10, в оптимальному варіанті - приблизно 0,3-4, і у найкращому варіанті - у межах приблизно 0,5-2 або 0,7-2 стосовно співвідношення РНК:пептиду в комплексі, і у найкращому варіанті - у межах приблизно 0,7-1,5.
В оптимальному варіанті втілення композицію одержують у два окремі етапи з метою отримання як ефективного імуностимулюючого ефекту, так і ефективної трансляції принаймні однієї МРНК згідно з винаходом. У контексті цього опису так званий "ад'ювантний компонент" одержують шляхом утворення на першому етапі комплексу принаймні однієї мРНК ад'ювантного компонента з катіонною або полікатіонною сполукою у конкретному співвідношенні для утворення стійкого комплексу. У цьому контексті є важливим, щоб в ад'ювантному компоненті не залишалося вільної катіонної або полікатіонної сполуки або залишалася лише незначна кількість після утворення комплексу мРНК. Відповідно, співвідношення мРНК та катіонної або полікатіонної сполуки в ад'ювантному компоненті зазвичай вибирають у такому діапазоні щоб мРНК повністю утворювала комплекс, і у композиції не залишалося вільної катіонної або полікатіонної сполуки або залишалася лише незначна кількість. В оптимальному варіанті співвідношення ад'ювантного компонента, тобто, співвідношення мРНК з о катіонною або полікатіонною сполукою вибирають з-поміж співвідношення від приблизно 6:1 (маса/маса) до приблизно 0,25:1 (маса/маса), у ще кращому варіанті - від приблизно 5:1 (маса/маса) до приблизно 0,51 (маса/маса), у ще кращому варіанті - від приблизно 4:1 (маса/маса) до приблизно 1:1 (маса/маса) або від приблизно 3:1 (маса/маса) до приблизно 1:1 (маса/маса), і у найкращому варіанті - співвідношення від приблизно 3:1 (маса/маса) до приблизно 2:1 (маса/маса).
Згідно з оптимальним варіантом втілення, на другому етапі додають принаймні одну мРНК, яка кодує антигени згідно з винаходом, до зв'язаної мРНК ад'ювантного компонента з метою утворення (імуностимулюючої) композиції згідно з винаходом. При цьому принаймні одну мРНК 60 згідно з винаходом додають як вільну мРНК, тобто, мРНК, яка не зв'язується іншими сполуками.
Перед додаванням принаймні одна вільна мРНК не зв'язується і в оптимальному варіанті не піддається будь-якій помітній або значній реакції комплексоутворення після додавання ад'ювантного компонента. Це відбувається через сильне зв'язування катіонної або полікатіонної сполуки з вищеописаною принаймні однією мРНК в ад'ювантному компоненті. Іншими словами, при додаванні принаймні однієї вільної мРНК, яка кодує принаймні один з антигенів згідно з винаходом, до "ад'ювантного компонента" в оптимальному варіанті є відсутньою або по суті відсутньою вільна катіонна або полікатіонна сполука, яка може утворювати комплекс з принаймні однією мРНК. Відповідно, існує можливість ефективної трансляції принаймні однієї вільної МРНК композиції згідно з винаходом іп мімо. При цьому принаймні одна вільна мРНК може траплятись як моно-, ди- або поліцистронна мРНК, тобто, РНК яка включає кодуючі послідовності одного або кількох білків. Такі кодуючі послідовності у ди- або навіть поліцистронній мРНК можуть бути відокремлені принаймні однією послідовністю ІКЕ5, наприклад, як визначено авторами.
У варіанті втілення, якому віддають особливу перевагу, принаймні одна вільна мРНК, яка є включеною до композиції згідно з винаходом, може бути ідентичною або відмінною від принаймні однієї мРНК ад'ювантного компонента композиції згідно з винаходом, залежно від конкретних вимог терапії. У ще кращому варіанті принаймні одна вільна мРНК, включена до композиції згідно з винаходом, є ідентичною принаймні одній РНК ад'ювантного компонента композиції згідно з винаходом.
У варіанті втілення, якому віддають особливу перевагу, композиція включає принаймні одну
МРНК, причому принаймні одна мРНК кодує антигени, як визначено вище, і вищезгадана меРнНК є присутньою у композиції частково як вільна мРНК і частково як зв'язана мРНК. В оптимальному варіанті принаймні одна мРНК, яка кодує один або кілька антигенів, як визначено вище, є зв'язаною, як описано вище, і таку саму принаймні одну мРНК після цього додають як вільну РНК, причому в оптимальному варіанті сполука, яку застосовують для зв'язування мРНК, є відсутньою у вільній формі у композиції у момент додавання вільного компонента мРНК.
Співвідношення першого компонента (тобто, ад'ювантного компонента, який включає або складається з принаймні однієї мРНК, зв'язано з катіонною або полікатіонною сполукою) та другого компонента (тобто, принаймні однієї вільної МРНК) у композиції згідно з винаходом вибирають відповідно до конкретних вимог конкретної терапії. Зазвичай співвідношення мРНК в ад'ювантному компоненті та принаймні однієї вільної МРНК (мРНК в ад'ювантному компоненті : вільної РНК) композиції згідно з винаходом вибирають таким чином, щоб забезпечувалася значна стимуляція природної імунної системи через ад'ювантний компонент. Паралельно співвідношення вибирають таким чином, щоб могла забезпечуватися значна кількість принаймні однієї вільної мРНК іп мімо, що веде до ефективної трансляції та концентрації експресованого білка іп мімо, наприклад, у шести антигенах і т. д., як визначено вище. В оптимальному варіанті співвідношення мРНК в ад'ювантному компоненті : вільної мРНК у композиції згідно з винаходом вибирають з-поміж діапазону від приблизно 5:1 (маса/маса) до приблизно 1:10 (маса/маса), у ще кращому варіанті - з-поміж діапазону від приблизно 4:1 (маса/маса) до приблизно 1:8 (маса/маса), у ще кращому варіанті - з-поміж діапазону від приблизно 3:1 (маса/маса) до приблизно 1:5 (маса/маса) або 1:3 (маса/маса), і у найкращому варіанті - співвідношення мРНК в ад'ювантному компоненті : вільної мРНК у композиції згідно з винаходом вибирають з-поміж співвідношення приблизно 1:1 (маса/маса).
У додатковому або альтернативному варіанті співвідношення першого компонента (тобто, ад'ювантного компонента, який включає або складається з принаймні однієї мРНК, зв'язаної з катіонною або полікатіонною сполукою) та другого компонента (тобто, принаймні однієї вільної
МРНК) може бути розраховане на основі співвідношення азоту / фосфату (М/Р) цілого комплексу
МРНК. У контексті даного винаходу співвідношення М/Р в оптимальному варіанті становить приблизно 0,1 - 10, в оптимальному варіанті - у діапазоні приблизно 0,3 - 4, і у найкращому варіанті - у діапазоні приблизно 0,5 - 2 або 0,7 - 2 стосовно співвідношення мРНК:пептиду у комплексі, і у найкращому варіанті - у діапазоні приблизно 0,7 - 1,5.
У додатковому або альтернативному варіанті співвідношення першого компонента (тобто, ад'ювантного компонента, який включає або складається з принаймні однієї мРНК, зв'язаної з катіонною або полікатіонною сполукою) та другого компонента (тобто, принаймні однієї вільної
МРНК) у композиції згідно з винаходом також може бути вибране на основі молярного співвідношення двох мРНК одна з одною, тобто, мРНК ад'ювантного компонента, яка зв'язується з катіонною або полікатіонною сполукою, та принаймні однієї вільної МРНК другого компонента. Зазвичай молярне співвідношення мРНК ад'ювантного компонента з принаймні однією вільною мРНК другого компонента може бути вибране таким чином, щоб це молярне бо співвідношення відповідало вищезазначеним визначенням (маса/маса) та/або М/Р. У ще кращому варіанті молярне співвідношення мРНК ад'ювантного компонента з принаймні однією вільною мРНК другого компонента може бути вибране, наприклад, з-поміж молярного співвідношення приблизно 0,001:1, 0,01:1, 0,1:1, 0,2:1, 0,3:1, 0,4:1, 0,5:1, 0,6:1, 0,7:1, 0,8:1, 0,9:1, 1:1, 1:0,9, 1:0,8, 1:0,7, 1:0,6, 1:0,5, 1:0,4, 1:0,3, 1:0,2, 1:01, 1:0,01, 1:0,001 і т. ін. або з будь-якого діапазону, утвореного будь--кими двома з вищезазначених значень, наприклад, діапазону, вибраного з-поміж діапазонів приблизно від 0,001:1 до 1:0,001, включаючи діапазон приблизно від 0,01:1 до 1:0,001, від 0,1:1 до 1:0,001, від 0,2:1 до 1:0,001, від 0,3:1 до 1:0,001, від 0,4:1 до 1:0,001, від 0,5:1 до 1:0,001, від 0,6:1 до 1:0,001, від 0,7:1 до 1:0,001, від 0,8:1 до 1:0,001, від 0,9:1 до 1:0,001, від 1:1 до 1:0,001, від 1:0,9 до 1:0,001, від 1:0,8 до 1:0,001, від 1:0,7 до 1:0,001, від 1:0,6 до 1:0,001, від 1:0,5 до 1:0,001, від 1:0,4 до 1:0,001, від 1:0,3 до 1:0,001, від 1:0,2 до 1:0,001, від 1:0,1 до 1:0,001, від 1:0,01 до 1:0,001, або діапазон приблизно від 0,01:1 до 1:0,01, від 0,1:1 до 1:0,01, від 0,2:1 до 1:0,01, від 0,3:1 до 1:0,01, від 0,4:1 до 1:0,01, від 0,5:1 до 1:0,01, від 0,6:1 до 1:0,01, від 0,7:1 до 1:0,01, від 0,8:1 до 1:0,01, від 0,9:1 до 1:0,01, від 1:1 до 1:0,01, від 1:0,9 до 1:0,01, від 1:0,8 до 1:0,01, від 1:0,7 до 1:0,01, від 1:0,6 до 1:0,01, від 1:0,5 до 1:0,01, від 1:0,4 до 1:0,01, від 1:0,3 до 1:0,01, від 1:0,2 до 1:0,01, від 1:0,1 до 1:0,01, від 1:0,01 до 1:0,01, або включаючи діапазон приблизно від 0,001:1 до 1:0,01, від 0,001:1 до 1:0,1, від 0,001:1 до 1:02, від 0,001:1 до 1:0,3, від 0,001:1 до 1:0,4, від 0,001:1 до 1:0,5, від 0,001:1 до 1:0,6, від 0,001:1 до 1:0,7, від 0,001:1 до 1:0,8, від 0,001:1 до 1:0,9, від 0,001:1 до 1:1, від 0,001 до 0,9:1, від 0,001 до 0,8:1, від 0,001 до 0,7:1, від 0,001 до 0,671, від 0,001 до 0,5:1, від 0,001 до 0,4:1, від 0,001 до 0,3:1, від 0,001 до 0,2:1, від 0,001 до 0,171, або діапазон приблизно від 0,01:1 до 1:0,01, від 0,01:1 до 1:01, від 0,01:1 до 1:02, від 0,01:1 до 1:0,3, від 0,01:1 до 1:0,4, від 0,01:1 до 1:0,5, від 0,01:1 до 1:0,6, від 0,01:1 до 1:0,7, від 0,01:1 до 1:0,8, від 0,01:1 до 1:0,9, від 0,011 до 1:1, від 0,001 до 0,9:1, від 0,001 до 0,8:1, від 0,001 до 0,7:1, від 0,001 до 0,6:1, від 0,001 до 0,5:1, від 0,001 до 0,4:1, від 0,001 до 0,3:1, від 0,001 до 0,2:1, від 0,001 до 0,1:1 і т. ін.
У ще кращому варіанті молярне співвідношення мРНК ад'ювантного компонента з принаймні однією вільною мРНК другого компонента може бути вибране, наприклад, з діапазону приблизно від 0,01:1 до 1:0,01. У найкращому варіанті молярне співвідношення мРНК ад'ювантного компонента з принаймні однією вільною мРНК другого компонента може бути вибране, наприклад, з молярного співвідношення приблизно 1:1. Також можуть застосовуватися
Зо будь-які з вищезазначених значень стосовно визначень співвідношення (маса/маса) та/або М/Р.
Крім того, придатні ад'юванти можуть бути вибрані з-поміж нуклеїнових кислот, які мають формулу (ІМ): СОСІЇХтОп, де: С є гуанозином, урацилом або аналогом гуанозину або урацилу; Х є гуанозином, урацилом, аденозином, тимідином, цитозином або аналогом вищезгаданих нуклеотидів; І Є цілим числом від 1 до 40, причому якщо І - 1, З є гуанозином або його аналогом, якщо І » 1, принаймні 5095 нуклеотидів є гуанозином або його аналогом; т є цілим числом, і дорівнює принаймні 3; причому якщо т - 3, Х є урацилом або його аналогом, якщо т » 3, трапляються принаймні З послідовні урацили або аналоги урацилу; п є цілим числом від 1 до 40, причому якщо п - 1 б є гуанозином або його аналогом, якщо п » 1, принаймні 5095 нуклеотидів є гуанозином або його аналогом.
Крім того, інші прийнятні ад'юванти можуть бути вибрані з-поміж нуклеїнових кислот, які мають формулу (М): СІХтСп, де: С є цитозином, урацилом або аналогом цитозину або урацилу;
Х є гуанозином, урацилом, аденозином, тимідином, цитозином або аналогом вищезгаданих нуклеотидів; І є цілим числом від 1 до 40, причому якщо І - 1, С є цитозином або його аналогом, якщо І » 1, принаймні 5095 нуклеотидів є цитозином або його аналогом; т є цілим числом і дорівнює принаймні 3; причому якщо т - 3, Х є урацилом або його аналогом, якщо т » 3, трапляються принаймні З послідовні урацили або аналоги урацилу; п є цілим числом від 1 до 40, причому якщо п - 1, С є цитозином або його аналогом, якщо п » 1, принаймні 5095 нуклеотидів є цитозином або його аналогом.
Згідно з ще одним аспектом, даний винахід може забезпечувати вакцину на основі принаймні однієї мРНК, в оптимальному варіанті - принаймні шести різних видів мРНК, які кодують принаймні визначені вище антигени 514, сурвівін, МУ-Е5О-1, МАСЕ-С1, МАСЕ-С2 та
МИиИС-1. Відповідно, вакцина згідно з винаходом має в основі ті ж самі компоненти, що й композиція, як визначено вище. Так само можна послатися на представлений вище опис, у якому визначається композиція згідно з винаходом. Однак вакцина згідно з винаходом може забезпечуватись у фізично окремій формі і може вводитись окремими етапами. Вакцина згідно з винаходом може відповідати композиції згідно з винаходом, якщо компоненти мРНК забезпечуються єдиною композицією. Однак вакцина згідно з винаходом може забезпечуватися, наприклад, як фізично відокремлена. Наприклад, види мРНК можуть бути передбачені таким чином, щоб забезпечувалися дві окремі композиції, які можуть містити принаймні один вид бо МРНАК кожна (наприклад, три окремі види мРНК), які кодують три окремі антигени, і які необов'язково можуть комбінуватися. Крім того, вакцина згідно з винаходом може бути комбінацією з трьох окремих композицій, причому кожна композиція, яка включає принаймні одну мРНК, яка кодує два з зазначених шести антигенів. Або ж вакцина може забезпечуватись як комбінація принаймні однієї мРНК, в оптимальному варіанті - шести мРНК, кожна з яких кодує один з визначених вище антигенів. Вакцина може бути комбінованою для забезпечення єдиної композиції перед її застосуванням або може застосовуватися таким чином, щоб вимагалося більше одного введення для введення окремих видів мРНК, які кодують визначені вище шість окремих антигенів. Якщо вакцина містить принаймні одну молекулу мРНК, зазвичай принаймні дві молекули мРНК, які кодують визначені вище шість антигенів, вона може вводитися, наприклад, за один раз (як комбінація всіх видів мРНК), за два рази (наприклад, з введенням щоразу молекул мРНК, які кодують по три з вищезгаданих шести антигенів), за три чотири, п'ять або шість введень (у разі, якщо всі види мРНК кодують один з визначених вище шести антигенів і передбачаються фізично відокремленими). Відповідно, будь-яка комбінація моно-, бі- або поліцистронних мРНК, які кодують визначені вище шість антигенів (Її, необов'язково, інші антигени), які забезпечуються як окремі утворення (які містять один вид
МРНК) або як комбіноване утворення (яке містить один вид мРНК), слід розуміти як вакцину згідно з даним винаходом. Відповідно до варіанта втілення вакцини згідно з винаходом, якому віддають особливу перевагу, кожен з антигенів згідно з винаходом забезпечується як окрема (моноцистронна) мРНК, яку вводять окремо.
Як і для композиції згідно з даним винаходом, вакцини можуть бути передбачені у рідкій або у сухій (наприклад, ліофілізованій) формі. Вони можуть містити інші компоненти, зокрема, інші компоненти, які забезпечують можливість фармацевтичного застосування вакцини. Вакцина згідно з винаходом або композиція згідно з винаходом може додатково містити, наприклад, фармацевтично прийнятний носій та/або інші допоміжні речовини і домішки та/або ад'юванти.
Вакцина або композиція згідно з винаходом зазвичай включає безпечну й ефективну кількість принаймні однієї мРНК композиції як визначено вище, яка кодує антигени, як визначено вище. У контексті цього опису "безпечна й ефективна кількість" означає кількість принаймні однієї мРНК композиції або вакцини, як визначено вище, яка є достатньою для значного викликання позитивної модифікації раку легень, в оптимальному варіанті - пов'язаного
Зо з недрібноклітинним раком легень (МЗСІ С) стану, який піддається лікуванню, у ще кращому варіанті - станів, пов'язаних з трьома основними підтипами МЗС С, включаючи, крім інших, плоскоклітинну карциному легень, аденокарциному та великоклітинну карциному легень. Однак водночас "безпечна й ефективна кількість" є достатньо малою для уникнення серйозних побічних ефектів, тобто, для забезпечення розумного співвідношення між вигодою та ризиком.
Визначення цих меж зазвичай лежить у межах обгрунтованої думки лікаря. Стосовно вакцини або композиції згідно з винаходом вираз "безпечна й ефективна кількість" в оптимальному варіанті означає кількість мРНК (а отже, кодованих антигенів), яка є прийнятною для стимуляції адаптивної імунної системи таким чином, щоб не досягалися надмірні або шкідливі імунні реакції, але, в оптимальному варіанті, щоб такі імунні реакції не були нижчими за вимірний рівень. Крім того, така "Сезпечна й ефективна кількість" принаймні однієї мРНК композиції або вакцини, як визначено вище, може бути вибрана залежно від типу мРНК, наприклад, моноцистронної, бі- або навіть поліцистронної мРНК, оскільки бі- або навіть поліцистронна
МРНАНК може забезпечувати значно вищу експресію кодованого(их) антигена(ів), ніж при застосуванні такої самої кількості моноцистронної мРНК. Крім того, "Сезпечна й ефективна кількість" принаймні однієї мРНК композиції або вакцини, як визначено вище, може змінюватися залежно від конкретного стану, який піддається лікуванню, а також віку та фізичного стану пацієнта, який підлягає лікуванню, тяжкості стану, тривалості лікування, характеру супровідної терапії, конкретного застосовуваного фармацевтично прийнятного носія та подібних чинників, залежно від знань та досвіду лікаря. Вакцину або композицію згідно з винаходом застосовують згідно з винаходом для лікування людей, а також у ветеринарній медицині, як фармацевтичну композицію або як вакцину.
В оптимальному варіанті втілення принаймні одна мРНК композиції, вакцини або комплекту компонентів згідно з винаходом забезпечується у ліофілізованій формі. В оптимальному варіанті перед введенням вологовміст принаймні однієї ліофілізованої мРНК відновлюють у придатному буфері, бажано на основі водного носія, наприклад, лактатному розчині Рингера, якому віддають перевагу, розчині Рингера, фосфатному буферному розчині. В опгимальному варіанті втілення композиція, вакцина або комплект компонентів згідно з винаходом містить шість мРНК, які забезпечуються окремо у ліофілізованій формі (необов'язково разом з принаймні однією іншою домішкою), і вологовміст яких в оптимальному варіанті відновлюється у бо прийнятному буфері (такому, як лактатний розчин Рингера) перед застосуванням, таким чином,
щоб забезпечувалася можливість окремого введення кожної з шести (моноцистронних) мРНК.
Вакцина або композиція згідно з винаходом зазвичай може містити фармацевтично прийнятний носій. Вираз "фармацевтично прийнятний носій" у контексті даного опису в оптимальному варіанті охоплює рідку або нерідку основу вакцини згідно з винаходом. Якщо вакцина згідно з винаходом передбачається у рідкій формі, носієм має бути вода, зазвичай апірогенна вода; ізотонічний сольовий розчин або буферні (водні) розчини, наприклад, фосфатні, цитратні та інші буферні розчини. Зокрема, для ін'єкції вакцини згідно з винаходом можуть застосовуватися вода або, в оптимальному варіанті, буфер, у ще кращому варіанті -- водний буфер, який містить натрієву сіль, в оптимальному варіанті - принаймні 50 мМ натрієвої солі, кальцієву сіль, в оптимальному варіанті - принаймні 0,01 мМ кальцієвої солі, та, необов'язково, калієву сіль, в оптимальному варіанті - принаймні З мМ калієвої солі. Згідно з оптимальним варіантом втілення, натрієві, кальцієві та, необов'язково, калієві солі можуть існувати у формі їх галогенідів, наприклад, хлоридів, йодидів або бромідів, у формі їхніх гідроксидів, карбонатів, гідрокарбонатів або сульфатів і т. ін. Крім інших, прикладами натрієвих солей можуть бути масі, Маї, МаВг, Ма2СО3, Мансоз, Ма2504, прикладами необов'язкових калієвих солей можуть бути КСІ, КІ, КВг, К2СОЗ, КНСОЗ, К2505, і прикладами кальцієвих солей можуть бути Сасіг, Саі12, СавВі2, СасСоз, Саб5О4, Са(ОН)2. Крім того, у буфері можуть міститись органічні аніони вищезгаданих катіонів. Згідно з ще кращим варіантом втілення, буфер, придатний для ін'єкцій, як визначено вище, може містити солі, вибрані з-поміж хлориду натрію (масі), хлориду кальцію (Сасіг) та, необов'язково, хлориду калію (КС), причому можуть бути присутні й інші аніони, додатково до хлоридів. Сасі2 також може бути замінений іншою сіллю, такою, як КСІ. Зазвичай солі в ін'єкційному буфері є присутніми у концентрації принаймні 50 мМ хлориду натрію (Масі), принаймні З мМ хлориду калію (КСІ) та принаймні 0,01 мМ хлорид кальцію (Сасі2). Ін'єкційний буфер може бути гіпертонічним, ізотонічним або гіпотонічним відносно конкретного контрольного середовища, тобто, буфер може мати вищий, ідентичний або нижчий вміст солей відносно конкретного контрольного середовища, причому в оптимальному варіанті застосовують концентрацію вищезгаданих солей, яка не призводить до пошкодження клітин через осмос або інші ефекти концентрації. Контрольними середовищами є, наприклад, рідини, які використовуються в "іп мімо" способах, такі, як кров, лімфа, цитозольні
Ко) рідини або інші біологічні рідини або інші рідини, або, наприклад, рідини, які можуть використовуватись як контрольні середовища в "іп міго" способах, такі, як звичайні буфери або рідини. Такі звичайні буфери або рідини є відомими спеціалістам у даній галузі. Особливу перевагу віддають лактатному розчинові Рингера як рідкій основі.
Однак також можуть застосовуватись один або кілька сумісних твердих або рідких наповнювачів або розріджувачів або інкапсулюючих сполук, які є придатними для введення суб'єктові. Термін "сумісний" у контексті цього опису означає, що складові вакцини згідно з винаходом можуть змішуватися з принаймні однією мРНК композиції, яка кодує принаймні шість антигенів, як визначено вище, таким чином, щоб не відбувалася взаємодія, яка б суттєво знижувала фармацевтичну ефективність вакцини згідно з винаходом за типових умов використання. Звичайно, фармацевтично прийнятні носії, наповнювачі та розріджувачі повинні мати достатньо високу чистоту та достатньо низьку токсичність для того, щоб бути прийнятними для введення особі, яка піддається лікуванню. Прикладами сполук, які можуть використовуватись як фармацевтично прийнятні носії, наповнювачі або їх складові, є цукри, такі, як, наприклад, лактоза, глюкоза, трегалоза та цукроза; крохмалі, такі, як, наприклад, кукурудзяний крохмаль або картопляний крохмаль; декстроза; целюлоза та її похідні, акі, як, наприклад, натрій карбоксиметилцелюлоза, етилцелюлоза, ацетат целюлози; порошковий трагакант; солод; желатин; жир; тверді гліданти, такі, як, наприклад, стеаринова кислота, стеарат магнію; сульфат кальцію; рослинні олії, такі, як, наприклад, арахісова олія, бавовняна олія, кунжутна олія, оливкова олія, кукурудзяна олія та олія какао; поліоли, такі, як, наприклад, поліпропіленгліколь, гліцерин, сорбіт, маніт та поліетиленгліколь; альгінова кислота.
Вибір фармацевтично прийнятного носія в принципі визначається способом введення вакцини згідно з винаходом. Вакцина згідно з винаходом може вводитися, наприклад, системно або локально. До шляхів системного введення в цілому належать, наприклад, крізьшкірний, пероральний, парентеральний шляхи, включаючи підшкірні, внутрішньовенні, внутрішньом'язові, внутрішньоартеріальні, внутрішньошкірні та внутрішньочеревинні ін'єкції та/або інтраназальне введення. До шляхів локального введення в цілому належать, наприклад, шляхи місцевого введення, а також внутрішньошкірні, крізьшкірні, підшкірні або внутрішньом'язові ін'єкції або внутрішньоосередкове, внутрішньочерепні, внутрішньолегеневі, внутрішньосерцеві та під'язикові ін'єкції. У ще кращому варіанті вакцини вводять бо внутрішньошкірним, підшкірним або внутрішньом'язовим шляхом, в оптимальному варіанті -
шляхом ін'єкції яка може бути безголковою та/або голковою ін'єкцією. Таким чином, в оптимальному варіанті композиції / вакцини рецептують у рідкій або твердій формі. Прийнятну кількість вакцини згідно з винаходом, яка може бути введена, визначають шляхом звичних експериментів на тваринних моделях. До таких моделей, крім інших, належать, кролі, вівці, миші, щури та нелюдиноподібні примати. Оптимальними стандартними дозованими формами для ін'єкцій є стерильні розчини у воді, фізіологічному розчині або їх сумішах. Рівень рН таких розчинів має регулюватися до приблизно 7,4. Прийнятними носіями для ін'єкцій є гідрогелі, пристрої для регульованого або відстроченого вивільнення, полімолочна кислота та колагенові матриці. Придатними фармацевтично прийнятними носіями для місцевого введення є ті, які є прийнятними для застосування у лосьйонах, кремах, гелях і т. ін. Якщо вакцина згідно з винаходом має вводитися перорально, оптимальними стандартними дозованими формами є таблетки, капсули і т. ін. Фармацевтично прийнятні носії для приготування стандартних дозованих форм, які можуть застосовуватися для перорального введення, є відомими з існуючого рівня техніки. Їх вибір залежить від вторинних чинників, таких, як смак, вартість та придатність для зберігання, які не є критичними з точки зору даного винаходу, і може бути легко здійснений спеціалістом у даній галузі.
Вакцина або композиція згідно з винаходом додатково може містити одну або кілька допоміжних речовин для додаткового підвищення імуногенності. Таким чином, в оптимальному варіанті досягається синергетична дія принаймні однієї мРНК композиції або вакцини, як визначено вище, та допоміжної речовини, яка необов'язково може бути рецептованою разом з вакциною або композицією згідно з винаходом, як описано вище (або рецептованою окремо).
Залежно від різних типів допоміжних речовин, у цьому відношенні можуть розглядатися різні механізми. Наприклад, сполуки, які забезпечують можливість визрівання дендритних клітин (ОС), наприклад, ліполісахариди, ТМЕ-альфа або СО40-ліганд, утворюють перший клас придатних допоміжних речовин. В цілому можливим є застосування як допоміжної речовини будь-якого агента, який впливає на імунну систему на зразок "сигналу небезпеки" (ІРБ5, СРОб і т. ін) або цитокінів, таких, як ЗМ-СЕ5, які забезпечують можливість імунної реакції, яка створюється імуностимулюючим ад'ювантом згідно з винаходом і спрямовано посилюється і/або зазнає впливу. Допоміжними речовинами, яким віддають особливу перевагу, є цитокіни, такі, як монокіни, лімфокіни, інтерлейкіни або хемокіни, які, додатково до викликання адаптивної імунної реакції кодованої принаймні шістьма антигенами, сприяють природній імунній реакції, такі, як 1-1, 1-2, 1-3, 11.-4, 11. -5, 11 -6, 1-7, 1-8, 11 -9, 11-10, 1-12, 11-13, 1-14, 11-15, 1-16, 11-17, І- 18, 11-19, 11-20, 11-21, 1-22, 1-23, 1-24, 11-25, 1-26, 11-27, 1-28, 1-29, 11-30, 1-31, 11-32, І -33,
ІМЕ-альфа, ІРМ-бета, ІМЕ-гамма, 5М-С5Е, 2-С5Е, М-С5Е, І Т-бета або ТМЕ-альфа, фактори росту, такі як ОН. В оптимальному варіанті такі агенти або сполуки, які підвищують імуногенність, приготовляються окремо (рецептуються окремо від вакцини або композиції згідно з винаходом) для окремого введення.
Іншими домішками, які можуть бути включені до вакцини або композиції згідно з винаходом, є емульгатори, такі, як, наприклад, Ту'ееп; зволожувальні засоби, такі, як, наприклад, лаурилсульфат натрію; барвники; агенти, які надають смаку, фармацевтичні носії; таблетувальні агенти; стабілізатори; антиоксиданти; консерванти.
Вакцина або композиція згідно з винаходом також може додатково містити будь-яку іншу сполуку, яка є відомою як імуностимулююча завдяки її афінності зв'язування (як ліганди) з людськими ТоїЇІ- подібними рецепторами ТІК1, ТІ К2, ТІ КЗ, ТІ К4, ТІ К5, ТІ Кб, ТІ К7, ТІ Кв,
ТКУ, ТІ К10, або завдяки її афінності зв'язування (як ліганди) з мишачими ТоїІ-подібними рецепторами ТІ К1, ТІ К2, ТІ 3, ТІ К4, ТІ 5, ТІ Кб, ТІК, ТІ К8, ТІ Ке, ТІ К10, ТІ К11, ТІ К12 або ТІ К13.
Іншим класом сполук, які можуть додаватися до вакцини або композиції згідно з винаходом, у цьому контексті можуть бути нуклеїнові кислоти Сро, зокрема, Сро-РНК або Сро-ДНК. Сро-
РНК або Сро-ДНК може бути одноланцюговою Сро-ДНК (55 СрО-ДНК), дволанцюговою Сро-
ДНК (длДНК), одноланцюговою Сро-РНК (55 СроО-РНК) або дволанцюговою Сро-РНК (аз Сро-
РНК). Нуклеїнова кислота Сро в оптимальному варіанті передбачається у формі СроО-РНК, у ще кращому варіанті - у формі одноланцюгової Сро-РНК (55 Сро-РНК). Нуклеїнова кислота
Сро в оптимальному варіанті містить принаймні одну або кілька (мітогенних) динуклеотидних послідовностей цитозину / гуаніну (мотивів Сро). Згідно з першим оптимальним альтернативним варіантом, принаймні один мотив Сро, який міститься в цих послідовностях, тобто, С (цитозин) та С (гуанін) мотиву Сро, є неметилованим. Усі інші цитозини або гуаніни, які необов'язково містяться в цих послідовностях, можуть бути метилованими або неметилованими. Однак, згідно з ще одним оптимальним альтернативним варіантом, С бо (цитозин) та С (гуанін) мотиву Сро також можуть бути присутні у метилованій формі.
В оптимальному варіанті вищезгадані сполуки рецептують і вводять окремо від вищезазначеної композиції або вакцини (згідно з винаходом), яка містить принаймні одну мРНК, яка кодує принаймні визначені вище шість антигенів.
Згідно з іншим оптимальним предметом даного винаходу, композиція або вакцина згідно з винаходом може застосовуватися згідно з винаходом (для приготування медикаменту) для лікування раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень, в оптимальному варіанті - пов'язаного з недрібноклітинним раком легень (М5СІ С) стану, що піддається лікуванню, у ще кращому варіанті - станів, пов'язаних з трьома основними підтипами МЗС С, включаючи, крім інших, плоскоклітинну карциному легень, аденокарциному та великоклітинну карциному легень.
Згідно з іншим оптимальним предметом даного винаходу, вакцина або композиція згідно з винаходом, яка містить принаймні одну мРНК, яка кодує антигени, як визначено авторами, може застосовуватися для лікування раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень, в оптимальному варіанті - пов'язаного з недрібноклітинним раком легень (МЗСІ С) стану, який піддається лікуванню, у ще кращому варіанті - станів, пов'язаних з трьома основними підтипами
МОСС, включаючи, крім інших, плоскоклітинну карциному легень, аденокарциному та великоклітинну карциному легень.
У цьому контексті даний винахід додатково включає способи лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень, в оптимальному варіанті - пов'язаного з недрібноклітинним раком легень (М5СІ С) стану, який піддається лікуванню, у ще кращому варіанті - станів, пов'язаних з трьома основними підтипами М5СІС, включаючи, крім інших, плоскоклітинну карциному легень, аденокарциному та великоклітинну карциному легень, шляхом введення суб'єктові, який цього потребує, фармацевтично ефективної кількості вакцини згідно з винаходом або фармацевтично ефективної кількості композиції згідно з винаходом. Такий спосіб зазвичай включає необов'язковий перший етап приготування композиції згідно з винаходом або вакцини згідно з винаходом та другий етап, який включає введення (фармацевтично ефективної кількості) вищезгаданої композиції згідно з винаходом або вищезгаданої вакцини згідно з винаходом пацієнтові, який цього потребує. Суб'єктом, який цього потребує, зазвичай є ссавець. У контексті даного винаходу ссавець в оптимальному варіанті є вибраним з групи, до якої, крім інших,
Зо належать, наприклад, коза, велика рогата худоба, свиня, собака, кішка, осел, мавпа, людиноподібна мавпа, гризун, такий, як миша, хом'як, кріль, і, особливо, людина, причому ссавець зазвичай страждає від раку легень, зокрема, недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень, в оптимальному варіанті - пов'язаного з недрібноклітисним раком легень (М5СІ С) стану, який піддається лікуванню, у ще кращому варіанті - станів, пов'язаних з трьома основними підтипами МЗС С, включаючи, крім інших, плоскоклітинну карциному легень, аденокарциному та великоклітинну карциному легень.
Винахід також стосується застосування композиції згідно з винаходом або принаймні однієї
МРНК, яка кодує антигени, як визначено авторами (для приготування вакцини згідно з винаходом), в оптимальному варіанті - для викликання імунної реакції у ссавця, в оптимальному варіанті - для лікування раку легень, у ще кращому варіанті - для лікування пов'язаного з недрібноклітинним раком легень (МЗС С) стану, як визначено авторами.
В оптимальному варіанті суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт зі стадією 0, І (ІА та/або ІВ), І! (ПА та/або ІВ), ПІ (ША та/або ПІВ) або стадією ІМ недрібноклітинного раку легень.
У конкретному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт зі стадією ІІ або стадією ІМ недрібноклітинного раку легень.
Крім того, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, може бути пацієнт з недрібноклітинним раком легень, який отримує хіміотерапію (наприклад, хіміотерапію першої лінії або другої лінії), променеву терапію, хіміопроменеву терапію (комбінацію хіміотерапії та променевої терапії), інгібітори тирозинкінази (наприклад, інгібітори ЕСЕК- тирозинкінази), антитілотерапію та/або інгібітори шляху РОТ, або пацієнт, який досяг часткової відповіді або стабілізації захворювання після приймання одного або кількох з вищезазначених засобів лікування.
У цьому контексті інгібітор шляху РО-1 в оптимальному варіанті визначається авторами як сполука, здатна перешкоджати сигналові шляху РО-1, в оптимальному варіанті - сигнал, опосередкований рецептором РО-1. Таким чином, інгібітор шляху РО-1 може бути будь-яким інгібітором, спрямованим проти будь-якого елемента шляху РО-1, здатним антагонізувати сигнал шляху РО-1. У цьому контексті інгібітор може бути антагоністичним антитілом, націленим на будь-який елемент шляху РО-1, в оптимальному варіанті - спрямованим проти рецептора бо РО-1, РО-Ї717 або РО-І2. Це антагоністичне антитіло також може кодуватися нуклеїновою кислотою. Крім того, інгібітор шляху РО-1 може бути фрагментом рецептора РО-1 або рецептором РОТ, який блокує активність лігандів РОТ. В7-1 або його фрагменти також можуть діяти як інгібуючі РОЇ ліганди. Крім того, інгібітор шляху РО-1 може бути міРНК (малою інтерферуючою РНК) або антисмисловою РНК, спрямованою проти елемента шляху РО-1, в оптимальному варіанті - РО-1, РО-Ї1 або РО-І12. Крім того, інгібітор шляху РО-1 може бути білком, який включає (або нуклеїновою кислотою, яка кодує) амінокислотну послідовність, яка є здатною зв'язуватися з РО-1, але перешкоджає сигналові РО-1, наприклад, шляхом інгібування взаємодії РО-1 та В7-Н1І або В7-ЮІ. Крім отого, інгібітор шляху РО-1 може бути маломолекулярним інгібітором, здатним інгібувати сигнал шляху РО-1, наприклад, пептидом, який зв'язується з РО-1, або малою органічною молекулою.
Крім того, у цьому контексті інгібітор тирозинкінази в оптимальному варіанті визначається авторами як сполука, здатна перешкоджати сигналові однієї або кількох тирозинкіназ, в оптимальному варіанті - однієї або кількох тирозинкіназ фактора росту. В оптимальному варіанті інгібітор тирозинкінази у цьому контексті є інгібітором тирозинкінази рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК). В оптимальному варіанті втілення інгібітор тирозинкінази у контексті цього опису є призначеним для перорального введення інгібітором тирозинкінази ЕСЕК. В іншому оптимальному варіанті втілення інгібітор тирозинкінази є вибраним з групи, до якої належать ерлотиніб, гефітиніб або афатиніб. В іншому варіанті втілення інгібітор тирозинкінази у цьому контексті є інгібітором АГЇК, в оптимальному варіанті -- кризотинібом або церитинібом.
У контексті цього опису антитіло, яке застосовують для антитілотерапії, в оптимальному варіанті є спрямованим проти фактора росту або рецептора фактора росту, який в оптимальному варіанті є функціонально зв'язаним з тирозинкіназою. В оптимальному варіанті антитіло у цьому контексті є спрямованим проти фактор росту ендотелію судин (МЕСЕ) або проти рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК). В оптимальному варіанті втілення в антитілотерапії застосовують бевацизумаб. В іншому варіанті втілення в антитілотерапії застосовують цетуксимаб.
В оптимальному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт до або після хірургічної операції (наприклад, лобектомії), причому пацієнт
Зо в оптимальному варіанті має МЗС С на стадії І або ІІ.
В іншому оптимальному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує променеву терапію, або пацієнт, який досяг часткової відповіді (РЕ) або стабілізації захворювання (50) після променевої терапії, причому пацієнт в оптимальному варіанті має М5СІ С на стадії І або ІІ.
Згідно з варіантом втілення, якому віддають особливу перевагу, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує хіміотерапію, в оптимальному варіанті - хіміотерапію на основі препаратів платини або комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини (наприклад, цисплатину, карбоплатину, цисплатину у комбінації з вінорелбіном, цисплатину у комбінації з етопозидом, цисплатину у комбінації з гемцитабіном, цисплатину у комбінації з таксанами, цисплатину або карбоплатину у комбінації з пеметрекседом або карбоплатину у комбінації з паклітакселом), або пацієнт, який досяг часткової відповіді (РЕК) або стабілізації захворювання (50) після хіміотерапії, причому пацієнт в оптимальному варіанті має МЗС С на стадії І або ІМ.
В іншому оптимальному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує хіміотерапію, в оптимальному варіанті - хіміотерапію на основі препаратів платини або комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини (наприклад, цисплатину, карбоплатину, цисплатину у комбінації з вінорелбіном, цисплатину у комбінації з етопозидом, цисплатину у комбінації з гемцитабіном, цисплатину у комбінації з таксанами, цисплатину або карбоплатину у комбінації з пеметрекседом або карбоплатину у комбінації з паклітакселом) у комбінації з променевою терапією (хіміопроменеву терапію), або пацієнт, який досяг часткової відповіді (РЕК) або стабілізації захворювання (50) після хіміопроменевої терапії, причому пацієнт в оптимальному варіанті має МЗСІ С на стадії ПІ (в оптимальному варіанті місцевопоширений) або ІМ.
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує лише одну хіміотерапію, в оптимальному варіанті гемцитабін, таксани, пеметрексед, паклітаксел, вінорелбін або етопозид, в оптимальному варіанті - як лікування другої лінії або третьої лінії, або пацієнт, який досяг часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (50) після такого лікування другої лінії або третьої лінії. бо В оптимальному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом є пацієнт з недрібноклітисним раком легень (МЗС С) стадії ПІ або стадії ІМ після хіміотерапії першої лінії та, необов'язково, другої лінії (наприклад, хіміотерапії на основі препаратів платини або комбінованої хіміотерапії на основі препаратів платини (комбінації хіміотерапія на основі препаратів платини з принаймні ще одним хіміотерапевтичним агентом)) або хіміопроменевої терапії першої лінії та, необов'язково, другої лінії, причому пацієнт в оптимальному варіанті досяг часткової відповіді (РЕ) або стабілізація захворювання (50) після хіміотерапії першої лінії та, необов'язково, другої лінії.
Згідно з оптимальним варіантом втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з недрібноклітинним раком легень (МЗС С) стадії ІП або ІМ та неплоскоклітинною гістологією, з активуючими мутаціями рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) або без них.
Згідно з ще одним оптимальним варіантом втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з недрібноклітинним раком легень (М5СІ С) стадії ШІ або ІМ та плоскоклітинною гістологією, з активуючими мутаціями рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) або без них.
У варіанті втілення, якому віддають особливу перевагу, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з недрібноклітинним раком легень (МЗС С) стадії ПІ або ІМ та неплоскоклітинною гістологією, в оптимальному варіанті - без активуючих мутацій рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), який в оптимальному варіанті досяг часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (50) після хіміотерапії першої лінії з застосуванням хіміотерапії на основі препаратів платини або комбінованої хіміотерапії (наприклад, з застосуванням платини та пеметрекседу).
В іншому варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з МеСІС стадії Ш або ІМ та плоскоклітинною гістологією, який в оптимальному варіанті досяг часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (503) після хіміотерапії першої лінії з застосуванням хіміотерапії на основі препаратів платини або комбінованої хіміотерапії (наприклад, з застосуванням платини та пеметрекседу).
У ще кращому варіанті суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який страждає від метастатичного раку легень, в оптимальному варіанті -
Зо метастатичного недрібноклітинного раку легень.
В іншому оптимальному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з локально поширеною М5СІ С стадії ЇЇ, який в оптимальному варіанті отримує лікування з супутньою хіміопроменевою терапією (наприклад, як визначено вище), або досяг відповіді або стабілізації захворювання (без прогресування) після хіміопроменевої терапії (як визначено авторами).
В іншому оптимальному варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з МОСІ С стадії І або ІМ, незалежно від гістологічного або молекулярного підтипу, і в оптимальному варіанті отримує супутнє лікування інгібітором шляху
РО-1 або досяг відповіді або стабілізації захворювання (без прогресування) після лікування інгібітором шляху РО-1.
Крім того, згідно з конкретним варіантом втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує антитіло або комбінацію хіміотерапії та антитіла, в оптимальному варіанті - бевацизумаб або комбінацію бевацизумабу з хіміотерапією, в оптимальному варіанті - хіміотерапією на основі препаратів платини, або пацієнт, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після цього лікування.
Згідно з ще одним конкретним оптимальним варіантом втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує інгібітор тирозинкінази, в оптимальному варіанті - інгібітор тирозинкінази ЕСЕК (наприклад, ерлотиніб, гефітиніб або афатиніб), в оптимальному варіанті - як терапію другої лінії після хіміотерапії першої лінії, або пацієнт, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після терапії з застосуванням інгібітора тирозинкінази ЕСЕВ.
Згідно з ще одним конкретним оптимальним варіантом втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який має приховану активуючу мутацію
ЕСЕК і отримує інгібітор тирозинкінази, в оптимальному варіанті -- інгібітор тирозинкінази ЕСЕК (наприклад, ерлотиніб, гефітиніб або афатиніб), або пацієнт, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після терапії з застосуванням інгібітора тирозинкінази ЕСЕК.
В іншому оптимальному варіанті втілення, суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт з МеСІС стадії Ш або ІМ, в оптимальному варіанті - з неплоскоклітинною гістологією, в оптимальному варіанті - з прихованою активуючою мутацією бо ЕСЕК, який в оптимальному варіанті отримує супутнє лікування інгібітором тирозинкінази
ЕСЕК, або пацієнт, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після отримання лікування інгібітором тирозинкінази ЕСЕК (наприклад, ерлотинібом, гефітинібом або афатинібом або іншими інгібіторами ЕСЕК-тирозинкінази).
В іншому варіанті втілення суб'єктом, який отримує композицію або вакцину згідно з винаходом, є пацієнт, який отримує інгібітор тирозинкінази кризотиніб або церитиніб або інші інгібітори АГ.К.
Подібним чином винахід також стосується застосування самої вакцини згідно з винаходом або принаймні однієї мРНК, яка кодує антигени, як визначено авторами, для викликання адаптивної імунної реакції у ссавця, в оптимальному варіанті - для лікування раку легень, у ще кращому варіанті - для лікування пов'язаного з недрібноклітинним раком легень (М5СЇІ С) стану, як визначено авторами.
Профілактику або лікування раку легень у пацієнта, який цього потребує, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень, здійснюють шляхом введення композиції згідно з винаходом та/або вакцини згідно з винаходом за один раз або з інтервалами часу, наприклад, як комплекту компонентів, кожен з яких містить принаймні один, в оптимальному варіанті - відмінний від інших антиген. В оптимальному варіанті кожен з антигенів вводять окремо, тобто, кожен антиген вводять в окрему частину або ділянку тіла суб'єкта, який піддається лікуванню, в оптимальному варіанті одночасно або у межах короткого періоду часу, відповідно. В оптимальному варіанті втілення окремі мРНК вводять з розподілом по чотирьох кінцівках суб'єкта (тобто, лівій / правій руках та ногах). В оптимальному варіанті введення (усіх або принаймні однієї мРНК) відбувається протягом години, у ще кращому варіанті - протягом 30 хвилин, у ще кращому варіанті - протягом 15, 10, 5, 4, З або 2 хвилин або навіть протягом 1 хвилини.
Для введення в оптимальному варіанті застосовують будь-які шляхи введення, як визначено вище. Зокрема, застосовують шлях введення, який є придатним для лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень шляхом викликання або посилення адаптивної імунної реакції на основі антигенів, які кодуються принаймні однією мРНК композиції згідно з винаходом. Введення композиції згідно з винаходом та/або вакцини згідно з винаходом у цьому разі здійснюють до, одночасно та/або після введення іншої композиції згідно з винаходом та/або вакцини згідно з винаходом, як визначено авторами, яка додатково може містити іншу комбінацію мРНК, які кодують інші антигени, причому кожен антиген, який кодується принаймні однією мРНК композиції згідно з винаходом, в оптимальному варіанті може бути придатним для терапії раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень. У цьому контексті терапія, як визначено авторами, також може включати модулювання хвороби, пов'язаної з раком легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинним раком легень, та пов'язаними з ними хворобами або порушеннями.
Згідно з ще одним аспектом, даний винахід крім додатково включає застосування композиції згідно з винаходом або принаймні однієї мРНК, яка кодує антигени, як визначено авторами (для приготування вакцини (згідно з винаходом)) для модулювання, в оптимальному варіанті - для викликання або посилення імунної реакції у ссавця, як визначено вище, у ще кращому варіанті - для лікування та/або підтримання лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень або пов'язаних з ним хвороб або порушень. У цьому контексті підтримка лікування раку легень може являти собою будь-яку комбінацію традиційних способів лікування раку легень, таких, як хірургія, променева терапія, хіміотерапія (наприклад, хіміотерапія першої лінії або другої лінії), хіміопроменева терапія, лікування інгібіторами тирозинкінази, лікування інгібіторами шляху РО-1, антитілотерапія або певна їх комбінація, та терапію з застосуванням композиції згідно з винаходом, як визначено авторами. Підтримка лікування раку легень також може бути передбачена у будь-якому з інших варіантів втілення, як визначено авторами. Відповідно, будь-яке застосування композиції або вакцини згідно з винаходом у межах котерапії з застосуванням будь-яких з вищезазначених терапевтичних підходів, зокрема, у комбінації з хірургією, променевою терапією, хіміотерапією, хіміопроменевою терапією та/або лікуванням інгібіторами кінази або антитілами, охоплюється обсягом даного винаходу.
В оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують у лікуванні раку легень, яке додатково включає хіміотерапію (наприклад, хіміотерапію першої лінії або другої лінії), променеву терапію, хіміопроменеву терапію (комбінацію хіміотерапії та променевої терапії), лікування інгібіторами тирозинкінази (наприклад, інгібіторами ЕСЕК- тирозинкінази), антитілотерапію та/або лікування інгібіторами шляху РО1, або для пацієнта, 60 який досяг часткової відповіді або стабілізації захворювання після приймання одного або кількох з вищезазначених засобів лікування.
У цьому контексті інгібітор шляху РО-1 в оптимальному варіанті визначається авторами як сполука, здатна перешкоджати сигналові шляху РО-1, в оптимальному варіанті - сигналові, опосередкованому рецептором РО-1. Таким чином, інгібітором шляху РО-1 може бути будь-який інгібітор, спрямований проти будь-якого елемента шляху РО-1, який є здатним антагонізувати сигнал шляху РО-1. У цьому контексті інгібітор може бути антагоністичним антитілом, націленим на будь-який елемент шляху РО-1, в оптимальному варіанті - спрямованим проти рецептора
РО-1, РО-Ї1 або РО-І2. Це антагоністичне антитіло також може кодуватися нуклеїновою кислотою. Крім того, інгібітор шляху РО-1 може бути фрагментом рецептора РО-1 або рецептором РОТ, який блокує активність лігандів РОТ. В7-1 або його фрагменти також можуть діяти як інгібуючі РОЇ ліганди. Крім того, інгібітор шляху РО-1 може бути міРНК (малою інтерферуючою РНК) або антисмисловою РНК, спрямованою проти елемента шляху РО-1, в оптимальному варіанті - РО-1, РО-І1 або РО-12. Крім того, інгібітором шляху РО-1 може бути білок, який включає (або нуклеїнова кислота, яка кодує) амінокислотну послідовність, здатну зв'язуватися з РО-1, але запобігати сигналові РО-1, наприклад, шляхом інгібування взаємодії
РО-1 та В7-НІ або В7-ОЇ. Крім того, інгібітор шляху РО-1 може бути маломолекулярним інгібітором, здатним інгібувати сигнал шляху РО-1, наприклад, пептидом, який зв'язується з РО- 1, або малою органічною молекулою.
У контексті цього опису антитіло, яке застосовують в антитілотерапії, в оптимальному варіанті є спрямованим проти фактора росту або рецептора фактора росту, який в оптимальному варіанті є функціонально зв'язаним з тирозинкіназою. В оптимальному варіанті антитіло у цьому контексті є спрямованим проти фактора росту ендотелію судин (МЕСЕ) або проти рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК). В оптимальному варіанті втілення в антитілотерапії застосовують бевацизумаб. В іншому варіанті втілення в антитілотерапії застосовують цетуксимаб.
В оптимальному варіанті композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують у лікуванні раку легень, яке додатково включає променеву терапію, причому принаймні одне пухлинне пошкодження піддається променевій терапії. Згідно з оптимальним варіантом втілення, пухлинне пошкодження, яке піддається променевій терапії, є вибраним з групи, до якої
Зо належать метастази у кістки, лімфатичні вузли у параключичному, пахвовому або шийному відділах, шкірні або підшкірні метастази та торакальні пошкодження (центральна пухлина легені, лімфатичні вузли у корінні або середостінні легень). В оптимальному варіанті опромінення застосовують чотирма щоденними частинами по 5 Гр у межах одного тижня, в оптимальному варіанті - у 9 - 12 дні.
В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень, яке додатково включає введення інгібітора кінази. У контексті цього опису інгібітором кінази в оптимальному варіанті є інгібітор тирозинкінази, у ще кращому варіанті -- інгібітор тирозинкінази фактора росту, у найкращому варіанті - призначений для перорального введення інгібітор тирозинкінази ЕСЕК, такий, як, наприклад, гефітиніб, ерлотиніб або афатиніб. Крім того, у цьому контексті інгібітор тирозинкінази в оптимальному варіанті визначається як сполука, здатна перешкоджати сигналові однієї або кількох тирозинкіназ, в оптимальному варіанті - однієї або кількох тирозинкіназ фактора росту. В іншому варіанті втілення інгібітор тирозинкінази у цьому контексті є інгібітором АЇК, в оптимальному варіанті - кризотинібом або церитинібом.
В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень, яке додатково включає введення хіміотерапевтичного агента, такого, як сполука на основі препаратів платини (наприклад, карбоплатину, цисплатину), пеметрекседу, гемцитабіну, таксанів, вінорелбіну, етопозиду доцетакселу або паклітакселу. У ще кращому варіанті композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для суб'єкта, який отримує хіміотерапію, в оптимальному варіанті - комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини, в оптимальному варіанті, як визначено вище, яку в оптимальному варіанті також комбінують з променевою терапією (хіміопроменеву терапію).
В оптимальному варіанті композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують у комбінованому лікуванні раку легень, причому пацієнт має стадію 0, І (ІА та/або ІВ), ІІ (ПА та/або
ІВ), Ш (ША та/або ІВ) або стадію ІМ недрібноклітинного раку легень.
В оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта до або після хірургічної операції (наприклад, лобектомії), причому пацієнт в оптимальному варіанті має МЗС С на стадії І або ІІ.
В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом бо застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує променеву терапію, або у пацієнта, який досяг часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (50) після променевої терапії, причому пацієнт в оптимальному варіанті має МЗС С на стадії І або Ії.
Згідно з варіантом втілення, якому віддають особливу перевагу композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує хіміотерапію, в оптимальному варіанті - хіміотерапію на основі препаратів платини або комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини (наприклад, цисплатину, карбоплатину, цисплатину у комбінації з вінорелбіном, цисплатину у комбінації з етопозидом, цисплатину у комбінації з гемцитабіном, цисплатину у комбінації з таксанами, цисплатину або карбоплатину у комбінації з пеметрекседом, або карбоплатину у комбінації з паклітакселом), або у пацієнта, який досяг часткової відповіді (РЕ) або стабілізації захворювання (50) після хіміотерапії, причому пацієнт в оптимальному варіанті має МЗС С на стадії І або ІМ.
В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує хіміотерапію, в оптимальному варіанті - хіміотерапію на основі препаратів платини або комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини (наприклад, цисплатину, карбоплатину, цисплатину у комбінації з вінорелбіном, цисплатину у комбінації з етопозидом, цисплатину у комбінації з гемцитабіном, цисплатину у комбінації з таксанами, цисплатину або карбоплатину у комбінації з пеметрекседом, або карбоплатину у комбінації з паклітакселом) у комбінації з променевою терапією (хіміопроменевою терапією), або у пацієнта, який досяг часткової відповіді (РЕ) або стабілізації захворювання (50) після хіміопроменевої терапії, причому пацієнт в оптимальному варіанті має МЗС С на стадії І (в оптимальному варіанті місцевопоширений) або ІМ.
Згідно з іншим оптимальним варіантом втілення, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує лише одну хіміотерапію, в оптимальному варіанті гемцитабін, таксани, пеметрексед, паклітаксел, вінорелбін або етопозид, в оптимальному варіанті - як лікування другої лінії або третьої лінії, або у пацієнта, який досяг часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (50) після такого лікування другої лінії або третьої лінії.
В оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з недрібноклітинним раком легень (М5СІ С) стадії П або
Зо стадії ІМ після хіміотерапії першої лінії та, необов'язково, другої лінії (наприклад, хіміотерапії на основі препаратів платини або комбінованої хіміотерапії на основі препаратів платини (комбінації хіміотерапії на основі препаратів платини з принаймні одним іншим хіміотерапевтичним агентом)) або хіміопроменевої терапії першої лінії та, необов'язково, другої лінії, причому пацієнт в оптимальному варіанті досяг часткової відповіді (РЕ) або стабілізації захворювання (50) після хіміотерапії першої лінії та, необов'язково, другої лінії.
Згідно з оптимальним варіантом втілення, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з недрібноклітинним раком легень (МЗС С) стадії ШІ або ІМ та неплоскоклітинною гістологією, з активуючими мутаціями рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) або без них.
Згідно з ще одним оптимальним варіантом втілення, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з недрібноклітинним раком легень (М5СІ С) стадії Ш або ІМ та плоскоклітинною гістологією, з активуючими мутаціями рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) або без них.
У варіанті втілення, якому віддають особливу перевагу, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з недрібноклітинним раком легень (МЗС С) стадії І або ІМ та неплоскоклітинною гістологією, в оптимальному варіанті - без активуючих мутацій рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), причому пацієнт в оптимальному варіанті досяг часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (50) після хіміотерапії першої лінії з застосуванням хіміотерапії на основі препаратів платини або комбінованої хіміотерапії (наприклад, з застосуванням платини та пеметрекседу).
В іншому варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з МЗСІ С стадії І або ІМ та плоскоклітинною гістологією, причому пацієнт в оптимальному варіанті досяг часткової відповіді (РЕ) або стабілізації захворювання (50) після хіміотерапії першої лінії з застосуванням хіміотерапії на основі препаратів платини або комбінованої хіміотерапії (наприклад, з застосуванням платини та пеметрекседу).
У ще кращому варіанті композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який страждає від метастатичного раку легень, в оптимальному варіанті - метастатичного недрібноклітинного раку легень. бо В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з локально поширеною М5СІ С стадії ПІ, причому пацієнт в оптимальному варіанті отримує супутнє лікування хіміопроменевою терапією (наприклад, як визначено вище), або пацієнт досяг відповіді або стабілізації захворювання (без прогресування) після хіміопроменевої терапії (як визначено авторами).
В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з МЗСІ С стадії І або ІМ, незалежно від гістологічного або молекулярного підтипу, причому пацієнт в оптимальному варіанті отримує супутнє лікування інгібітором шляху РО-1 або досяг відповіді або стабілізації захворювання (без прогресування) після лікування інгібітором шляху РО-1.
Крім того, згідно з конкретним варіантом втілення, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує антитіло або комбінацію хіміотерапії та антитіла, в оптимальному варіанті - у пацієнта, який отримує бевацизумаб або комбінацію бевацизумабу з хіміотерапією, в оптимальному варіанті - хіміотерапією на основі препаратів платини, або у пацієнта, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після цього лікування.
Згідно з ще одним конкретним оптимальним варіантом втілення, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує інгібітор тирозинкінази, в оптимальному варіанті - інгібітор тирозинкінази ЕСЕК (наприклад, ерлотиніб, гефітиніб або афатиніб), в оптимальному варіанті - як терапію другої лінії після хіміотерапії першої лінії, або у пацієнта, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після терапії з застосуванням інгібітора тирозинкінази ЕСЕ.
Згідно з ще одним конкретним оптимальним варіантом втілення, композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який має приховану активуючу мутацію ЕСЕБЕК і отримує інгібітор тирозинкінази, в оптимальному варіанті -- інгібітор тирозинкінази ЕСЕК (наприклад, ерлотиніб, гефітиніб або афатиніб), або у пацієнта, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після терапії з застосуванням інгібітора тирозинкінази
ЕСЕВ.
В іншому оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта з МЗС С стадії І або ІМ, в оптимальному
Зо варіанті - з неплоскоклітинною гістологією, в оптимальному варіанті - з прихованою активуючою мутацією ЕСЕК, причому пацієнт в оптимальному варіанті отримує супутнє лікування інгібітором тирозинкінази ЕСЕК, або у пацієнта, який досяг відповіді або стабілізації захворювання після отримання лікування інгібітором тирозинкінази ЕСЕК (наприклад, ерлотинібом, гефітинібом або афатинібом або іншими інгібіторами ЕСЕК-тирозинкінази).
В іншому варіанті втілення композицію або вакцину згідно з винаходом застосовують для лікування раку легень у пацієнта, який отримує інгібітор тирозинкінази кризотиніб або церитиніб або інші інгібітори АГК.
Протокол імунізації для імунізації суб'єкта проти комбінації принаймні шести антигенів, як визначено авторами, зазвичай включає низку окремих доз композиції або вакцини згідно з винаходом. Окрема доза у контексті цього опису означає початкову/першу дозу, другу дозу або подальші дози, відповідно, які в оптимальному варіанті вводять з метою стимулювання імунної реакції. У цьому контексті кожна окрема доза включає введення всіх з принаймні шести антигенів згідно з винаходом, причому інтервал між двома окремими дозами може коливатися від принаймні одного дня, в оптимальному варіанті -- 2, 3, 4, 5, 6 або 7 днів, до принаймні одного тижня, в оптимальному варіанті -- 2, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 тижнів. Інтервали між окремими дозами можуть бути незмінними або можуть коливатися протягом виконання протоколу імунізації: наприклад, інтервали можуть бути коротшими на початку і довшими ближче до кінця виконання протоколу. Залежно від загальної кількості окремих доз та інтервалу між окремими дозами, протокол імунізації може тривати протягом періоду часу, який в оптимальному варіанті складає принаймні один тиждень, у ще кращому варіанті - кілька тижнів (наприклад, 2, 3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 11 або 12 тижнів), у ще кращому варіанті - кілька місяців (наприклад, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 або 24 місяці). Кожне окреме дозування включає введення всіх з принаймні шести антигенів, як визначено авторами, і таким чином, може включати принаймні одну, в оптимальному варіанті - 1, 2,3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 або 12 ін'єкцій. У разі введення композиції згідно з винаходом окрема доза зазвичай включає одну ін'єкцію. У разі, якщо вакцина включає окремі композиції мРНК, які кодують відповідні антигени згідно з винаходом, мінімальна кількість ін'єкцій, які здійснюють під час введення окремої дози, відповідає кількості окремих компонентів вакцини. У деяких варіантах втілення введення окремої дози може включати більше однієї ін'єкції для кожного компонента вакцини (наприклад, конкретної композиції мРНК, яка включає 60 МРНК, яка кодує, наприклад, один з шести антигенів згідно з винаходом). Наприклад, частини загального об'єму окремого компонента вакцини можуть вводитись у різні частини тіла, таким чином, охоплюючи більше однієї ін'єкції. У більш конкретному прикладі одне дозування вакцини, яке включає шість окремих композицій мРНК, кожну з яких вводять у дві різні частини тіла, включає дванадцять ін'єкцій. Зазвичай одне дозування включає всі ін'єкції, необхідні для введення всіх компонентів вакцини, причому окремий компонент може включати більше однієї ін'єкції як зазначено вище. У разі, якщо введення однієї дози вакцини згідно з винаходом включає більше однієї ін'єкції, ін'єкцію здійснюють по суті одночасно або паралельно, тобто, зазвичай з часовими інтервалами протягом періоду часу, який потрібен практикуючому лікареві для виконання окремих етапів ін'єкції один за одним. Таким чином, введення однієї дози в оптимальному варіанті тримає протягом періоду часу кілька хвилин, наприклад, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 30 або 60 хвилин.
Введення композиції згідно з винаходом або принаймні однієї мРНК, яка кодує антигени, як визначено авторами, або вакцини згідно з винаходом, здійснюють з часовими інтервалами.
Лікування з часовими інтервалами може передбачати, наприклад, введення композиції згідно з винаходом або принаймні однієї мРНК, яка кодує антигени, як визначено авторами, або вакцини згідно з винаходом до, одночасно та/або після традиційної терапії при лікуванні раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень, і пов'язаних з ним хвороб або порушень, наприклад, шляхом введення медикаменту згідно з винаходом або композиції або вакцини згідно з винаходом до, одночасно та/або після терапії або введення терапевтичного засобу, придатного для лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень. Таке лікування з часовими інтервалами здійснюють, застосовуючи, наприклад, комплект, в оптимальному варіанті - комплект компонентів, як визначено нижче.
Лікування з часовими інтервалами у додатковому або альтернативному варіанті також може включати введення композиції або вакцина згідно з винаходом, в оптимальному варіанті - принаймні однієї мРНК, яка кодує антигени, як визначено вище, у формі, в якій принаймні одну
МРНК, яка кодує антигени, як визначено вище, яка в оптимальному варіанті складає частину композиції або вакцина згідно з винаходом, вводять паралельно, до або після принаймні однієї
МРНК, яка кодує антигени, як визначено вище, яка в оптимальному варіанті складає частину тієї
Зо самої композиції або вакцини згідно з винаходом. В оптимальному варіанті введення (усіх з принаймні однієї МРНК) здійснюють протягом однієї години, у ще кращому варіанті - протягом хвилин, у ще кращому варіанті - протягом 15, 10, 5, 4, З або 2 хвилин або навіть протягом 1 хвилини. Таке лікування з часовими інтервалами здійснюють, застосовуючи, наприклад, комплект, в оптимальному варіанті - комплект компонентів, як визначено нижче.
В оптимальному варіанті втілення композицію або вакцину вводять багаторазово, причому кожне введення в оптимальному варіанті включає окреме введення принаймні однієї мРНК згідно з винаходом. У кожен момент часу введення принаймні одна мРНК може бути введена більше одного разу (наприклад двічі або тричі). У варіанті втілення винаходу, якому віддають особливу перевагу, шість мРНК (кожна з яких кодує один з антигенів, як визначено вище) вводять у кожен момент часу, причому кожну мРНК вводять двічі шляхом ін'єкції, що в результаті складає дванадцять ін'єкцій, розподілених по чотирьох кінцівках.
Згідно з остаточним варіантом втілення, даний винахід також передбачає комплекти, зокрема, комплекти компонентів, які включають активну (імуностимулюючу) композицію згідно з винаходом, та/або вакцину згідно з винаходом, необов'язковий рідкий носій для солюбілізації та необов'язкові технічні інструкції з інформацією щодо введення та дозування композиції згідно з винаходом та/або вакцини згідно з винаходом. Технічні інструкції можуть містити інформація про введення та дозування композиції згідно з винаходом та/або вакцини згідно з винаходом.
Такі комплекти, в оптимальному варіанті - комплекти компонентів, можуть використовуватися, наприклад, для будь-якого з вищезгаданих випадків застосування, в оптимальному варіанті - для застосування принаймні однієї композиції згідно з винаходом (для приготування медикаменту згідно з винаходом, в оптимальному варіанті - вакцини) для лікування раку легень, в оптимальному варіанті недрібноклітинного раку легень, і пов'язані з ним хвороби або порушення. Комплекти також можуть використовуватися для застосування принаймні однієї композиції згідно з винаходом (для приготування вакцини згідно з винаходом) для лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень, причому композиція згідно з винаходом та/або вакцина, завдяки кодованим принаймні шести антигенам, може бути здатною викликати або посилювати імунну реакцію у ссавця, як визначено вище. Такі комплекти також можуть використовуватися для застосування принаймні однієї композиції згідно з винаходом (для приготування медикаменту 60 згідно з винаходом, в оптимальному варіанті - вакцини) для модулювання, в оптимальному варіанті - для забезпечення, наприклад, для викликання або посилення, імунної реакції у ссавця, як визначено вище, в оптимальному варіанті - для підтримки лікування раку легень, в оптимальному варіанті - недрібноклітинного раку легень і пов'язаних з ним хвороб або порушень. Комплекти компонентів, як спеціальні форми комплектів, можуть містити один або кілька ідентичних або різних активних (імуностимулюючих) композицій згідно з винаходом та/або один або кілька ідентичних або різних вакцин згідно з винаходом у різних компонентах комплекту. Комплекти компонентів також можуть містити активну композицію (наприклад, одну) згідно з винаходом, вакцину (наприклад, одну) згідно з винаходом та/або принаймні одну мРНК, яка кодує принаймні один антиген, як визначено вище, у різних компонентах комплекту, причому, наприклад, кожен компонент містить принаймні одну мРНК, яка в оптимальному варіанті кодує окремий антиген. Крім того, можливою є комбінація двох типів комплектів компонентів. Комплекти компонентів можуть застосовуватися, наприклад, коли передбачається лікування з часовими інтервалами, наприклад, при застосуванні різних препаратів та/або збільшуваних концентрацій композиції згідно з винаходом, вакцини згідно з винаходом та/або принаймні однієї мРНК, яка кодує принаймні один антиген, як визначено вище, протягом одного сеансу лікування іп мімо. Комплекти компонентів також можуть застосовуватися тоді, коли передбачається або є необхідним окреме рецептування або введення принаймні одного з антигенів композиції згідно з винаходом (тобто, частинами) (наприклад, з технічних міркувань), але все одно має досягатися, наприклад, комбінована присутність різних антигенів іп мімо.
Зокрема, передбачаються комплекти компонентів як особлива форма комплектів, у яких кожен компонент комплекту містить принаймні один, в оптимальному варіанті відмінний від інших антиген, як визначено вище, причому всі компоненти комплекту компонентів утворюють композицію або вакцину згідно з винаходом, як визначено авторами. Такі конкретні комплекти компонентів можуть бути особливо придатними, наприклад, у випадках, коли різні антигени окремо рецептуються як різні компоненти комплектів, але потім вводяться ссавцеві, який цього потребує, за один раз разом або з інтервалами часу. В останньому разі введення всіх з-поміж різних компонентів такого комплекту зазвичай здійснюють у коротких часових межах, таким чином, щоб усі антигени були присутні в організмі ссавця приблизно одночасно після введення останнього компонента комплекту. В оптимальному варіанті втілення комплект містить принаймні два компоненти, які містять шість мРНК згідно з винаходом. В оптимальному варіанті всі шість мРНК передбачаються в окремих компонентах комплекту, причому мРНК в оптимальному варіанті є ліофілізованими. У ще кращому варіанті комплект також містить як частину основи для солюбілізації принаймні одну мРНК, причому основою в оптимальному варіанті є лактатний розчин Рингера. Для лікування може застосовуватися будь-який з вищезазначених комплектів.
Переваги даного винаходу
Даний винахід забезпечує композицію для лікування раку легень, причому композиція включає принаймні одну мРНК, яка кодує принаймні шість антигенів, здатних викликати (адаптивну) імунну реакцію у ссавця, причому антигени є вибраними з групи, до якої належать 5714 (глікопротеїн трофобластів, ТРВС), сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5;
ВІВС5), МУ-ЕБЗО-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу, СТАС1В), МАСЕ-С1 (антиген меланоми родини С1), МАСЕ-С2 (антиген меланоми родини С2) та МОСІ1 (муцин 1).
Така композиція забезпечує можливість ефективного лікування рак легень або супровідного лікування при застосуванні традиційних видів терапії. Крім того, вона дозволяє уникати проблеми неконтрольованого поширення включених послідовностей ДНК шляхом застосування
РНК у рамках способів лікування. МРНК, яку застосовують у композиції згідно з винаходом, має додаткові значні переваги над системами експресії ДНК, наприклад, в імунній реакції, імунізації або вакцинації. Такими перевагами, крім інших, є те, що РНК, введена до клітини, не є включеною у геном. Це дозволяє уникнути ризику мутації цього гена, який інакше був би повністю або частково інактивований або спричиняв би помилкову інформацію. Це також дозволяє уникати інших ризиків використання ДНК як антигена для викликання імунної реакції (наприклад, як вакцини), такої, як індукція патогенних анти-ДНК антитіл у пацієнта, якому було введено чужорідну ДНК, що викликає (можливо, летальну) імунну реакцію. При цьому антитіл проти РНК досі не виявлено.
Фігури
Представлені нижче фігури призначені для подальшого пояснення винаходу. Вони не мають на меті обмеження предмета винаходу.
Фігура 1: показує послідовність мРНК 5Т4 (5С)-тиад-Аб4-С30 (ЗЕО ІО МО: 1), яка кодує 514 (глікопротеїн трофобластів, ТРВСО). МРНК містить такі елементи послідовності: 60 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує 5Т4 згідно з ЗЕО ІЮ МО. 3, стабілізуючу послідовність "тиад' у 3'-ОТК згідно з ЗЕО ІЮ Мо.70, - 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), їх 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-С- хвіст).
Фігура 2: показує послідовність мРНК 5тТ4 (5С)-тиад-Аб4-С30-гістонзі (ЗЕО ІЮ МО: 19), яка кодує 5Т4 (глікопротеїн трофобластів, ТРВО). МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує 5Т4 згідно з ФЕО ІЮ МО. 3, стабілізуючу послідовність "тиад" у 3'-ОТК згідно з ЗЕО ІЮ Мо.70, - 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), їх 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-С- хвіст); та послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з БЕО ІЮ Мо. 72.
Фігура 3: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує 514 (глікопротеїн трофобластів, ТРВО), згідно з ФЕО ІЮО МО: 2, тобто, кодуючу послідовність (СО), яка кодує 514 (глікопротеїн трофобластів, ТРВС) без СС-оптимізованої кодуючої послідовності.
Фігура 4: показує зС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує 574 (глікопротеїн трофобластів, ТРВС) згідно з БЕО ІО МО: 3.
Фігура 5: показує послідовність мРНК сурвівіну (5С)-тиад-Аб4-С30 (ЗЕО ІО МО: 4), яка кодує сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5; ВІКС5). МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує сурвівін згідно з 5ЕО ІО Мо. 6, стабілізуючу послідовність "пиад'у 3-ОТА згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), х 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-
С-хвіст).
Фігура 6: показує послідовність МРНК сурвівіну (5С)-тиада-Аб4-С30-гістоне! (ЗЕО ІЮ МО: 20), яка кодує сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5; ВІКС5). МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує сурвівін згідно з 5ЕО ІО Мо. 6, стабілізуючу послідовність "пиад'у 3-ОТА згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), " 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-
С-хвіст); та послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з БЕО ІО Мо. 72.
Фігура 7: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує сурвівін, згідно з 5ЕО ІЮ МО:
Зо 5, тобто, кодуючу послідовність (СО5), яка кодує сурвівін без (зС-оптимізованої кодуючої послідовності.
Фігура 8: показує СС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує сурвівін згідно з ЕО ІЮ
МО: 6.
Фігура 9: показує послідовність МРНК ММ-ЕБО-1 (с0)-тиад-Аб4-С30 (ЗЕО ІЮО МО: 7), яка кодує МУ-Е5БО-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу, СТАС1В). МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МУ-ЕБО-1 згідно з ЗЕО ІО Мо. 9, стабілізуючу послідовність "тиад' у 3-ОТА згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), " 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-
С-хвіст).
Фігура 10: показує послідовність МРНК ММ-ЕБО-1 (с4С)-тиад-Аб4-С30-гістонб! (ЗЕО ІЮ МО: 21), яка кодує МУ-ЕБО-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу, СТАСІ1В).
МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МУ-ЕБО-1 згідно з ЗЕО ІО Мо. 9, стабілізуючу послідовність "тчад'у 3-ОТА8 згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), " 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-
С-хвіст); та послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з БЕО ІО Мо. 72.
Фігура 11: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує МУ-Е5О-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу, СТАСІ1В), згідно з 5ЕО ІЮ МО: 8, тобто, кодуючу
БО послідовність (СО5), яка кодує МУ-Е5О-1 без СС-оптимізованої кодуючої послідовності.
Фігура 12: показує СС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує МУ-Е5БО-1 (нью- йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу, СТАСІ1В) згідно з БЕО ІЮО МО: 9.
Фігура 13: показує послідовність МРНК МАСБ-С1 (аа 613-1142) (40С)-тиад-Аб4-С30 (5ЕО 10
МО: 10), яка кодує МАСЕ-С1, що включає амінокислотну послідовність аа 613-1142 білка дикого типу МАСЕ-С1. МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, а аС-оптимізована кодуюча послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МАСЕ-С1 (аа 613-1142) згідно з БЕО ІЮ Мо. 25, стабілізуючу послідовність "тиад" у 3'-ЮТК згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), «« 30 Ч цитозин на 3"-кінці (полі-С-хвіст). (510) Фігура 14: показує послідовність МРНК МАСЕ-С1 (аа 6133-1142) (БС)-тиад-Аб4-С30-гістонзі.
(ЗЕО ІО МО: 22), яка кодує МАСЕ-С1 (аа 613-1142). МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МАСЕ-С1 (аа 613-1142) згідно з БЕО ІЮ Мо. 25, стабілізуючу послідовність "тиад" у 3-ОТА згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), «« 30 Ч цитозин на 3'"-кінці (полі-С-хвіст); та послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з БЕО ІЮ
Мо. 72.
Фігура 15: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує білок МАСЕ-С1 повної довжини згідно з 5ЕО ІЮ МО: 11, тобто, кодуючу послідовність (СО5), яка кодує МАСЕ-С1 без
Сб-оптимізованої кодуючої послідовності.
Фігура 16: показує СС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує білок МАСЕ-С1 повної довжини згідно з БЕО ІЮО МО: 12.
Фігура 17: показує СС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує МАСЕ-С1 (аа 613- 1142) згідно з зЗЕО ІЮ МО: 25.
Фігура 18: показує послідовність МРНК МАСЕ-С2 (саС)-тиад-Аб4-С30 (ЗЕО ІЮО МО: 13), яка кодує МАСЕ-С2. МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МАСЕ-С2 згідно з ЗЕО ІЮ Мо. 15, стабілізуючу послідовність "тиад' у 3'-0О0ТА згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), " 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-
С-хвіст).
Фігура 19: показує послідовність МРНК МАСЕ-С2 (с40)-тиад-Аб4-С30-гістонзі (5ЕО ІЮ МО: 21), яка кодує МАСЕ-С2. МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МАСЕ-С2 згідно з БЕО ІО Мо. 9, стабілізуючу послідовність "пиад' у 3'-0ОТА згідно з БЕО ІО Мо.70, -«« 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), " 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-
С-хвіст); та послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з ЗЕО ІЮО Мо. 72.
Фігура 20: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує МАСЕ-С2, згідно з БЕО ІЮ
МО: 14, тобто, кодуючу послідовність (СО5), яка кодує МАСЕ-С2 без СС-оптимізованої кодуючої послідовності.
Фігура 21: показує ОС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує МАСЕ-С2 згідно з ЗЕО
Зо ІО МО: 15.
Фігура 22: показує послідовність МРНК МОС1Т 5ХУМТтК (5С)-тиад-Аб4-С30 (5ЕО ІО МО: 16), яка кодує МОС1 (Муцин 1), що включає 5 тандемних повторів. МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МОС1Т 5ХУМТЕ згідно з 5ЕО ІЮ Мо. 18, стабілізуючу послідовність "тиад" у 3'-
ТК згідно з БЕО ІЮ Мо.70, « 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-С-хвіст).
Фігура 23: показує послідовність МРНК МОС1Т 5ХхУМтТЕ (5С)-тиад-Аб4-С30-гістоної. (ЗЕО ІЮ
МО: 24), яка кодує МОС1 (муцин 1), що включає 5 тандемних повторів. МРНК містить такі елементи послідовності: 5-САР, аб-оптимізовану кодуючу послідовність для стабілізації та кращого використання кодону, який кодує МОС1Т 5ХУМТЕ згідно з 5ЕО ІЮ Мо. 18, стабілізуючу послідовність "тиад" у 3'-
ТК згідно з БЕО ІЮ Мо.70, « 64 Ч аденозин на 3'-кінці (полі-А-хвіст), 7 30 Ч цитозин на 3'-кінці (полі-С-хвіст); та послідовність гістонової структури "петля на стеблі" згідно з ЗЕО ІО Мо. 72.
Фігура 24: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує МОС1 5ХУМТЕ, згідно з БЕО
ІО МО: 17, тобто, кодуючу послідовність (СО5), яка кодує МОС1 без СС-оптимізованої кодуючої послідовності.
Фігура 25: показує СОС-оптимізовану кодуючу послідовність, яка кодує МОС1 5ХУМТЕ згідно з
ЗЕО ІЮО МО: 18.
Фігура 26: показує виявлення МОС1-специфічної клітинної імунної реакції за допомогою
ЕГІБРОТ. Мишей С57ВІ/6 піддавали вакцинації 32 мкг МОС1-КМАсіїметх (5ЕО ІЮ МО: 16) на 1, 5, 8, 12 та 15-й дні. Ех мімо аналіз ЕІ ІЗрої секреції ІЕМ-гамма у спленоцитах вакцинованих та контрольних мишей виконували на 6-й день після останньої вакцинації. Клітини стимулювали на планшеті або похідним від МОСТІ пептидом (прогнозованим епітопом МНС класу І), або контрольним пептидом. Графік показує окремі точки даних для окремих мишей.
Фігура 27: показує ефект комбінації імунотерапії з застосуванням мРНК з променевою терапією у лікуванні низькоїмуногенної і радіорезистентної карциноми легень Льюїса (І І.С).
Фігура 28: показує білкову послідовність 514 МР. 001159864.1 згідно з БЕО ІЮ МО: 75.
Фігура 29: показує білкову послідовність сурвівіну (ВІКС5) 015392 згідно з БЕО ІО МО: 76. 60 Фігура 30: показує білкову послідовність сурвівіну (ВІКС5) МР. 001159.2 згідно з БЕО ІЮ МО:
Фігура 31: показує білкову послідовність МУ-ЕБО-1 МР 001318.1 згідно з ЗЕО ІЮ МО: 78.
Фігура 32: показує білкову послідовність МАСЕ-С1 МР 005453.2 згідно з ЗЕО ІЮ МО: 79.
Фігура 33: показує білкову послідовність МАСЕ-С2 МР 0573331 згідно з БЕО ІЮО МО: 80.
Фігура 34: показує білкову послідовність МОС1 Ргоїеїп У05582.1 згідно з БЕО ІЮ МО: 81.
Фігура 35: показує білкову послідовність МОС1 Ргоїеіп 5ХММТЕ згідно з ЗЕО ІЮ МО: 82.
Фігура 36: показує кодуючу послідовність дикого типу, яка кодує МОСТІ, згідно з БЕО ІЮ МО: 83, тобто, кодуючу послідовність (СО5) повної довжини, яка кодує МОСТІ, без СС -оптимізованої кодуючої послідовності.
Приклади:
Представлені нижче приклади мають на меті подальше пояснення винаходу. Предмет винаходу не обмежується ними. 1. Приготування вакцини мРНК на основі МИОС1І та індукція антиген-специфічних цитотоксичних Т-клітин: 1.1 Приготування вакцини мРНК на основі МОС1:
Вакцина на основі МРНК складається з СС-оптимізованих мРНК, які кодують МОС1 (ЗЕО ІЮ
МО: 16). МРНК з'єднували у комплексі з протаміном шляхом додавання протаміну до мРНК у співвідношенні (1:2) (маса/маса) (ад'ювантний компонент). Після інкубації протягом 10 хв додавали таку саму кількість вільної МРНК, яку застосовували як мРНК, що забезпечувала антиген.
Одержану в результаті композицію розчиняли у 8095 (об'єм/об'єм) лактатного розчину
Рингера. 1.2 Вакцинація
Мишей С57ВІ/6 піддавали внутрішньошкірній вакцинації з застосуванням 32 мкг однієї з вакцин на основі МРАК, як описано вище у п. 1.1. Контрольні миші отримували внутрішньошкірну ін'єкцію буфера (лактату Рингера). Вакцинація включала п'ять імунізацій зі здійсненням 2-х імунізацій на тиждень. Імунну реакція аналізували через 5 або 6 днів після завершення циклу вакцинації. 1.3 ЕПІБРОТ - виявлення відповіді СТІ. (цитотоксичних Т-клітин)
Зо Для виявлення відповіді СТІ. (цитотоксичних Т-клітин) аналіз секреції ІЕМ-гамма у відповідь на специфічний подразник може бути візуалізований на рівні окремої клітини з застосуванням технології ЕГІБРОТ (імуноферментного спот-аналізу).
Спленоцити мишей, вакцинованих вакциною на основі МРНК, як описано вище у п. 1.1, та контрольних мишей виділяли через 5 або 6 днів після останньої вакцинації, а потім переносили у 96-лункові планшети для ЕІ І5РОТ з нанесеним ГП ІЕМ-гамма іммобілізованим антитілом. Потім клітини стимулювали протягом 24 годин при 37"С з застосуванням таких пептидів: й 5. й Похідний від конексину пептид (контроль)
Після періоду інкубації клітини вимивали з планшета і ІРМ-гамма, що секретується клітинами, виявляли, використовуючи біотиніловане вторинне антитіло проти мишачого ІЕМ- гамма, а потім стрептавідин-АКР. Плями візуалізували, використовуючи субстрат ВСІР/МВТ, і підраховували, застосовуючи автоматизований зчитувальний пристрій для ЕГІ5РОТ (Іттипозрої Апаїугег, СТІ. Апаїугет5 І І С).
Внутрішньошкірна вакцинація з застосуванням кодуючої МОС1 мРНК вела до активації антиген-специфічних СО8- Т-клітин, що демонструється через секрецію ІЕМ-гамма в ЕГІЗзрої. 2. Комбінація вакцинації на основі МРНК та опромінення у мишей з низькоїмуногенними (Г.С) пухлинами
У цьому дослідженні вивчали ефективність комбінації вакцинації та опромінення у мишей
С57ВІ/6 з низькоїмуногенними (Г.С) пухлинами.
У 0-й день мишей С57ВГ/6 (п - 10 на групу) підшкірно стимулювали сингенними клітинами
ЗІ (ІІ О-клітинами, які експресують пухлинні антигени ЕСЕК та конексин) у праву задню кінцівку. Лікування розпочинали, коли пухлина досягала 50 мм. Мишей вакцинували з застосуванням мРНК, які кодують ЕСЕК та конексин (двічі на тиждень), або пухлини опромінювали з застосуванням 36 Гр, які розподіляли трьома однаковими дозами протягом 3-х послідовних днів, або піддавали комбінованій терапії (з першою вакцинацією за б год до першого опромінення), як вказано на Фіг. 28. Нелікованих мишей використовували як контроль.
Ріст пухлин спостерігали шляхом вимірювання розміру пухлини у трьох вимірах за допомогою 5О0 кронциркуля.
Через відсутність експресії МНС класу І лише імунотерапія виявилася неефективною для інгібування росту пухлин, а променева терапія забезпечувала лише тимчасове стримування пухлин. З іншого боку, вакцини на основі МРНК у комбінації з променевою терапією в результаті забезпечували сильний синергетичний протипухлинний ефект. 3. Клінічне дослідження: протиракова вакцина на основі мРНК та місцеве опромінення як засіб лікування МЗСІ С
Досліджуваний медикамент:
Композицію, яка включає мРНК, яка кодує 514 (глікопротеїн трофобластів, ТРВО) згідно з
ЗЕО ІО Мо. 19, мРНК, яка кодує сурвівін (бакуловірусний ІАР-повтор-вмісний білок 5; ВІКС5) згідно з зЗЕО ІО Мо. 20, мРНК, яка кодує МУ-ЕБО-1 (нью-йоркська плоскоклітинна карцинома 1 стравоходу; СТАС1В) згідно з 5ЕО ІЮ Мо. 21, мРНК, яка кодує МАСЕ-С1 (Антиген меланоми родини СТІ) згідно з 5ЕО ІЮО Мо. 22, мРНК, яка кодує МАСЕ-С2 (антиген меланоми родини С2) згідно з БЕО ІО Мо. 23, та мРНК, яка кодує МОСТІ (муцин 1) згідно з ХЕО ІЮ Мо. 24, у комплексі з протаміном згідно з прикладом 1.1. застосовують як вакцину. Кожна мРНК, що забезпечує антиген, передбачається як ліофілізат. Відновлення вологовмісту в лактаті Рингера забезпечує розчин для внутрішньошкірної ін'єкції. Лікарський продукт, який застосовують у клінічному дослідженні, було позначено як СМУ9202. Він являє собою вакцину, яка включає шість компонентів лікарського продукту, кожен з яких включає окрему мРНК, що забезпечує антиген.
Досліджувана популяція: - Група 1: пацієнти зі стадією ІМ недрібноклітинного раку легень (М5СІС) та неплоскоклітинною гістологією, без активуючих мутацій рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), які досягли часткової відповіді (РК) або стабілізації захворювання (50) після принаймні 4 циклів хіміотерапії першої лінії на основі платини та пеметрекседу, і з показанням до підтримувальної терапії з застосуванням пеметрекседу. - Група 2: пацієнти зі стадією ЇМ М5СЇІ С та плоскоклітинною гістологією, які досягли РК або
ЗО після принаймні 4 циклів хіміотерапії першої лінії на основі препаратів платини та неплатинових сполук (комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини). - Група 3: пацієнти зі стадією ІМ М5СІ С та неплоскоклітинною гістологією, з прихованою
Зо активуючою мутацією ЕСЕК, які досягли РЕ після періоду до б місяців лікування з застосуванням інгібітора тирозинкінази ЕСЕК (ТКІ).
Досліджувана популяція: критерії включення 1. Пацієнти: вік » 18 років з гістологічно або цитологічно підтвердженою стадією ІМ МЗСІ С і з підтвердженим статусом мутації ЕСЕК у разі неплоскоклітинної гістології - Група 1: неплоскоклітинний МЗСІ С без активуючої мутації ЕСЕК - Група 2: плоскоклітинний МЗС С - Група 3: неплоскоклітинний МЗС С з прихованою активуючою мутацією ЕСЕК 2. РК або 50 згідно з КЕСІ5Т, версія 1.1 після терапії першої лінії, яка має складатися з:
Група 1: РК або 50 після лікування цисплатином або карбоплатином та пеметрекседом (принаймні 4 цикли)
Група 2: РК або 50 після лікування цисплатином або карбоплатином та неплатиновою сполукою (принаймні 4 цикли)
Група 3: РЕ після лікування гефітинібом, ерлотинібом або афатинібом протягом періоду до 6 місяців 3. Для пацієнтів у групі 1 підтримувальна терапія з застосуванням пеметрекседу має бути показана згідно з рішенням дослідника 4. Наявність принаймні одного пухлинного пошкодження, яке піддається променевій терапії з застосуванням 4 х 5 Гр, та принаймні одного додаткового вимірного пухлинного пошкодження згідно з КЕСІ5Т, версія 1.1.
Пухлинними пошкодженнями, які підлягають опроміненню, є:
Метастази у кістки
Лімфатичні вузли у параключичному, пахвовому або шийному відділах
Шкірні або підшкірні метастази
Лише для пацієнтів у групах 1 та 2: торакальні пошкодження (центральна пухлина легені, лімфатичні вузли у корінні або середостінні легень) 5. Функціональний статус: східна об'єднана онкологічна група (ЕСОС) - від 0 до 1 6. Адекватна функція органів:
Функція кісткового мозку: гематологічні показники на початку вакцинації: гемоглобін 2 95 г/л, кількість тромбоцитів 2 75000/мкл, кількість лімфоцитів 2 2000/мкл, абсолютна кількість бо нейтрофілів 2 1000/мкл, кількість лімфоцитів 2 0,8 х 109/л
Печінкова: АЇТ та А5Т « 2,5-разова ЦІМ (верхня межа норми) у пацієнтів без метастазів у печінку і х 5-разова ЦІ М у пацієнтів з метастазами у печінку
Ниркова: креатинін сироватки х 2 мг/дл і кліренс креатиніну 2 45 мл/хв згідно з формулою
Моно 7. Застосування високоефективної контрацепції у пацієнтів з дітородним потенціалом при залученні до дослідження і протягом 1 місяця після останньої імунізації 8. Письмова інформована згода перед проведенням будь-якої пов'язаної з дослідженням процедури - Тривалість лікування: для кожного пацієнта вакцину вводять до прогресування хвороби та потреби у початку наступного системного лікування другої лінії або виникнення неприйнятної токсичність, залежно від події, яка відбувається раніше. - Час відбору: відбір пацієнтів розпочинається через 2 тижні після 1-го дня останнього циклу їхньої хіміотерапії першої лінії (групи 1 та 2) або у межах 6 місяців після початку лікування з застосуванням ЕСЕЕ ТКІ (ерлотинібу або гефітинібу) (група 3).
Спосіб введення
Кожну мРНК, яка забезпечує антиген, застосовують окремо в той самий день, що й дві внутрішньошкірні ін'єкції по 200 мкл кожна, що загалом складає 12 ін'єкцій.
Перші три вакцинації здійснюють з тижневим інтервалом (дні 1, 8, 15) з наступними інтервалами у 2 або З тижні до 57-го дня, з З-тижневими інтервалами до 6-го місяця та 6- тижневими надалі, як зазначено у протоколі дослідження. Вакцинацію здійснюють до виникнення неприйнятної токсичності або прогресування пухлини, що вимагає започаткування системної терапії другої лінії.
У групах 1 та З СМ9202 вводять спочатку у 1, 8, 15, 36 та 57-й дні. Під час лікування пеметрекседом (група 1) вакцинацію здійснюють за 4-7 днів до наступної запланованої дози пеметрекседу. Цей графік вибирають для уникнення вакцинації під час найнижчого рівня нейтрофілів та взаємних перешкод х протизапальними стероїдами.
У групі 2 СМ9202 вводять спочатку у 1, 8, 15, 29, 43 та 57-й дні. Цей посилений графік вибирають через очікуване скорочення часу до прогресування хвороби у пацієнтів, оскільки вони не отримують супутнього протиракового лікування.
Зо В усіх групах пацієнти продовжують вакцинацію після 57-го дня у разі, якщо не виконуються критерії для припинення лікування. Після 57-го дня вакцинацію здійснюють кожні З тижні, доки не мине б місяців з дня першої вакцинації. Після цього б-місячного періоду вакцинацію здійснюють кожні 6 тижнів до виконання критеріїв для припинення лікування:
Критерії припинення лікування: 1. Виникнення токсичності, яка вимагає остаточного припинення лікування 2. Прогресування хвороби, яке вимагає початку наступного системного лікування
Застосування
Вакцин: у кожен окремий момент вакцинації кожен з б компонентів медикаменту вводять окремо в один день. Виконують внутрішньошкірні (1.а.) ін'єкції по 200 мкл кожного компонента, що загалом складає 12 ін'єкцій.
Опромінення: променеву терапію застосовують чотирма щоденними частинами по 5 Гр у межах одного тижня, в оптимальному варіанті - у 9-12 дні.
Вибір пухлинних пошкоджень для опромінення
Розміри пошкоджень, вибраних для опромінення, мають становити принаймні 2 см у найдовшому діаметрі, і онколог-радіолог у місці дослідження повинен підтвердити, що відповідне пошкодження піддається променевій терапії згідно з цим протоколом перед залученням пацієнта.
Нижчезазначені пошкодження є потенційно придатними і мають бути відібрані згідно з такою черговістю:
Перша черга: метастази у кістки
Друга черга: лімфатичні вузли у параключичному, пахвовому або шийному відділах
Третя черга: шкірні або підшкірні метастази
Четверта черга (для пацієнтів лише у групах 1 та 2): торакальні пошкодження (центральна пухлина легені, лімфатичні вузли у корінні або середостінні легень)
У пацієнтів групи З торакальні пошкодження не підлягають опроміненню, оскільки пацієнти піддаються високому ризикові променевого пневмоніту після торакального опромінення через супутнє лікування з застосуванням ЕСЕК ТКІ.
Опромінення більше, ніж одного пошкодження у межах одного графіка 4 х 5 Гр (наприклад, при множинних метастазах у кістки) допускається, у разі клінічного показання, доки зберігається бо вимірне пошкодження для оцінки абскопального ефекту. Опромінення більше, ніж одного пошкодження має виконуватись у межах одного часового вікна.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 Сигеуас тон «1205 Композиція та вакцина для лікування раку легень «305 сСиО1РІЯВИОЇ «18505 83 «1705 РахтепсІтп версія 3,5 «гій» ї «вії» 1467 «12» ВНК «2135 Штучна послідовність «220 «З» 54 (пС)-твад-Аба-с3О «-400»5 1 дадгозадос чивесацаясс соддсодоняс апдссоддЗасє сдассоссод чоасддскає 60 сидсуасиса сосассцює ссчцддидсас сподаЧнвза псессадесчс савадсоссясе 120 шсадсвасси ссвасиисує Садсиссоасс сесонссида ссадсосади писсосесав 180 сесссусємсс ссдассацид ссссдсссид часозацюса дсоадассос псадассдив 240 ааачасвиса ассосваєси Засодадоно ссесасєдасс усссоддссма совасоадаае зо споацисєцоаа ссоддсазасса дсисодєсдис судсссодєсо ососсцисоє всассодесе збо ссесидасся адсисоссує ссидавссоид пссоодадес десисчасов. водидеовосс 420
Ззасосднису адсассицес дисссцуєдс садсусдасс пдадосасай ссесссиддес 480 дассиснесс ссипсоєсти садсовдадс аасассуссо нозосаєссс сиссесоуєнв 540 дисдадсноа иссосаасса сацсодвоєсс сесааодасо адсодсадаа ссосадсниє 5ОЮ ззапдасацчю часа содс ссиусподсс оаосадассє пссадчаєсу зсдссчасив 6вва азвасисасєси ссааєсаєчи ссидцпассно ссссасовсо пдсисасаса дсидеедрадє 72 спасдасасс шсцпассидис саасєваасває сиддидиссс всвссчнасоє садсишесдє 780 зассиуасоє ассидоваонс ссиссассцо даодчасазсо ссспузачой дсидсасзає ва ододсасоснсу ссдадспяса ддадснодссс сасавссоду чдввсснсда саасаасосє ОО іФаависнЯсо аснаєсасви додссдасаця дпдасєснодє пдавосазає свадавадЗзиє 960 садозсвада ассассповс оцоасосоцає сссдаодаада чосодааєсо доиодсиссча 020 даосучааса здсдесоаасси содасносеязс седанссидє сссесиссси ссадассаає 108о часавоанисс усдоддайсои ссудосссца ядисодсуєса шемиссисси соуси свас 1140 сисвзассоєй зачасацсаз зазоайдддачо сасавсансс чодасоассна ссоасвдассає 1200 знададодоан ассаснассд диасддадайс засосоадасс сесоссчдає сзассицнсє 1260 адсвасносу асдиснавсс аспадциаиз воасидаєца дсссдацдод ссуссесваса І320 дудсссисєцс ссесисоциос ассуадазиа ачаавадааа завававава завававава 1380 азавазадаай ааааазааза азазавазаа ааяаазиаии сессссоссс сосссссосс 1440 сесссессссс исцадасави змодаани 1467 кві» 72 яки» 1263 «ТИЙ РНК «213» Штучна послідовність кг «Ка» 54 Ср5 дикого типу «Ох 2 асшдссицодчо доносиссся дудсоссдсс дссчдочасо даєдисноєсод дсидососоз 60 сиадсуснуа пасисспдауд сидадеасвсє зсуисинсис ссассуссис дасайссисє 120 писцссссн содсасса сспдоснисе дссдндуссо сссвассссє дсуаскадає 180 садцдссссо сосидиусда дМаснссодвза асадсосаса сависааана сВицпаассоє 240 зацсидаєсо аддидсссає ддассидесс чесчасоноє ясаассисци ссиоцпассдде 300 зассвоасчцоа ссоцчосиссс чоассоасасс нисосссясс ддссассоси посодвасид 5360 зссусуєнся ассисачсоя Садессасєсцо дасоазаднос чсоасавосає сишсвадсан 420 спВдсссадсс прдсассацдси сдассисадс сасаасссає поддссваєси садисссьше 480 дсишеснсад дсадсзацос садсучснсо дессссадис ссспиаада аспдайссив 540 зассасайод пдсесссцпода аоднавосод садаассода дсиисоваоао сападизаив БОС
Фсадссесцас цаосоассо посасносао пдчосиссоасс дсипочпаЯсо доссзасаас 6бо сасчиссиши ассцдссуса додвидвосиа дсссвасидс ссадссисво дсассуддає 720 шаадиаача анисосчоди дадссьдасєс цасдидисєси нососавассу дасасацсена 780 чааводсєнсс асспчдадоа савидсссиє вадчисснис асвацоадсає ссподсноге 840 цидйсаавоЧцсє чассссаєви падудчниниє соодзасазаса зисссцодоч сидсдасноє 00 сасацадсад асацпдивдасє сцадсосаао бдааасадауо пвадидсадод сазадаєсав 960 сисасєснуцу сазнацссода азазавоасдд азисодЧчисс всичодався саасааудсесе шо дасснозаси дирасссови псипйссссса чсссидсзав сеисочанау сниєсцодон 1050 зичпоцишива ссечцоацадо соєзанонис сиссводиви чанацшишнова ссдсазодаа наб визазавади одовидсвива сацсадзавин дссидсадод ансасанода абоддивисан 1200 часаданазцо зазисавцос одассссада чпавсозасєс усадцниснаа сисоддацоиє 260 чав. 1265 «105 З хи» 1263 «1їйз РНК жккКїЗ» Штучна послідовність ко» «ве3» 54 ср бс-оптимізована «о» 5 азасссдося ддидсвассо оддсссадсс дссдододасо дссасснасо дсисососос бо спадессида чосиссводу удидобисисс адсуссадеєс ссассцссай судссиссаде 120 шесцссадси ссдсссссци ссидоссвас осодидиссдд сосадсессо дсисесссоає 180 садидсєсся ссспдносда опосавсдаю дссасусода сезидаацид сдисваседе 240 аассидасча адчидсссас сдаєсьсссо асснасаноє давасєснаци ссудаєсдає зо зассадсисо ссуцссидсс сдссддсоаєє писасосуєс вассдсосся ассдадсис збо
Чесооссснда ассидчиссад дадссоссисє дасчадавас очоассвососє вицсояосає 42о сийседиссє чпососсадси сдассовюадс саєзасссос пдоєсдаєсм сисесосчиє 450 оссцисзосе доздсаасує сиссовуазає дусссесиссс сдспдознсда дсидайссиє з40 зассвсансо пассссссда ддасодаудєцо свовассоса дсечисозадо сацодиваис 600 зсдассснос чподссорасо досссчссва паодссносоасс ддсиддадси сассиссває 6бо сасцуссион ассидссссо содасоцосєиє чсосадсидє согосснося ясассисодає 720 сиднесазса асзассцади дисссисассє насдисадсу пссусаасси пасосвссив 780 заачсосусс ассподадцаз Сазсасссцо заддцаснос зсвасодсає ссисоассдав 85840 спродсададас пдесссасау ссудоиднис сисдасєваса ассссидоади сидсзасиде 900 сасвндассу асаподидасє суддсноаао задчассдчачо часниссвадо сазодассоє збо спдасдноасю сврцассссода даауаносяад аассоддуднає вссидчадси заасвасосє 1020 чассьисааси дсопасссояи сспдссессс псосидсада ссдзасиасояд дипссисооай 10850 зисдишссиуа сссчцддачсоду сдссаицсмис сиссиподдидс ндиаосисва ссасаавдує 1140 знсвадавом додапдсасава саиссвадає дссноссосо ассасападча збоднасєсає 1200 чассдднасо азайсаасодє здасссссдє судассаасєс ндуєсадсва сиссуасодиє 260 ца 1253 «105 4 крії» 633 «іх РНК «23» Штучна послідовність «вух «223» Сурвтвін С56)-шпоза- АбБа-С30 «00» 4 посадазадс чунассаподо сосссссаєс спессоєсва ссдоасадєс двисспєвад 50 дассассодса цпсисдаєсии саадзасноая сединссцда адддсидсоє сидсасссся 120 дласдазида ссоаддссода сичсазссас ноассссасся аозасозосс подассидасе 180 саацосниси чсидснписаз Зазасзовад дасидададс садасадсза сссозисода 240 дадсасазоа: адсасадсад соадсцасдсєс писсидацсо повадазаса здишсоадоаа 300 счпадвсасису ововоаниссИи одавудснодає садаваосочо ссвайчаєва даисосоааеа 360 чачаєсавса агавудзадаа довудинсдад дацассоєса зоазаддидсо зсддассацє 420 чаачасаасипп ссоссзпоЗа сопассасча опиаизазас пчасизоассс дападассис 480 ссаасддуєс сиссиєссси ссуидсзссо адануаанаа аазаазааза ааазаазааая 540 азававазав зазаазазаз заааавазад дадавазааа вацацисссс госссосссє 500 сеесесесеє ссссессисна засаазидов ан 5ЗУІЗ «ЩО 5 «рії 4299 «212» РНК «7183» Штучна послідовність «ех «йа3» ср сурвівтіну дикого типу «00» 5 атшщадчцессє соавсоаєс ссеспвссида садсссцнє псаваодасса ссасауєиси 60 асачисвача асвдодсссии суновазоос чососспдса ссссадаєсоя даидассдає 120 дсидоасниса пссасидссс саспеявуває дадссадаси пдаодсссвоця нипсниспос 180 чисвачозоє чебдаадосно ддаоссвдан дасдасссса нададоааса павзазасан 240 шсоцесадци дедсувисси чисиоусаао аабсадиний задазниаає сспизочаза з00 шричидаває чудасаоваз зададссвад засаваанио садедовайс сєвасааназеа 360 задзвадааи чидадодазасє цосуаабваз дчососсоцо ссансовоса дсусдсьосє 420 азчадаецнса 429
«Оз 6 «її» 429 «йІї25» РНК каїЗ» Штучна послідовність «ай «2235 СВ сурвівіну бсС-оптимізована жах 6 вичподсессс ссасссидсс дссочессидо сапссуцчсс псвадчаасса ссоуусансся бо ассцисаада асиддесоми ссидоаовоє посоасопаса соссодадсо дачодссоав 120 пфосодсниса пссасидссс сассдадавс даоссодаєс чудасссадно списцесноє 180 писаводадес чподадувзсно додадссодас дасдасссда цсовзудадса саацавосасє 240 зосадсодся дсодсснусси язасоцдаво азудсаднисо здавзоснаас дсисадовбад з00 чиссооваадс чодассдоада осоадоссазо аасадоаисо соазодаває саасаасааєд 3650 задазадади псдадодадчає судссвадаао чиасадсода ссацсозоса яспдассосе 420 зподпаснида 429 вх ах КИ «кі» 747 «2125 РНК «вї3» Штучна послідовність кг» «Рвї» МЖ-ЕБО-ї (063-МИде-Аба-СЗО бо здазозазас цвазссацоса доссдадодс сосодсассо дсдосисозе содсадасоєє 60 засоудєссо дсдасссодУ сачцсссодає уасссодосо довасосодча содсесодуує 120
Задоссадсо ссассдасоЯд осодзадсессо саддодсассо дсдссососо воасоваєсвоє 180 сесудсозао чсдссссосо доддсососає ддсоадсоаєса ссавасодеси дазсзадноє 240 поссоачася псасссасуо сссодЧачаце сосиссьдо зацнсчнасси зассацосся 300 шисясдаєсс совиддадує сдадсншдсс судсодадос пддсссадода соссссуєся 360 сипсссоус сопосопаси сспдаавдад чисасудаицоа дсоддсаасац ссидассвис 420 сддсидаєся ссосоддаєса сспоасадсєця садсндисра цсадсадсно ссиссаосаєд А8о сидадсснає позидиодаи сасссадцдє писсцодссод пачвссноде ссадссвесе 540 зосдодссадс осєсддидасс асчаоцнаца адасндасна доессоданодо ссисєсаася 650 дасосиссис сосиссуноє ассдвавица апаззааава завазавааа азазавязай 560 заайвазазазх зазадачава зазазазаай азваадацацни соссессосссє сессосссеє 7270 сссссссссс уєцчавасвач цадааци 747 «пі» 8 «ві» 543 киї?» РНК 215» Штучна послідовність крах ка?З» МЖУ-ЕбБО-Ї1 СО5 дикого типу «4005 8 зпосадессо зазассазаа сасадудави чедасоадаса апосивбацоє сссаддваде бо сенддасайцє спдацдасесє адддадсави дсидосчоєєс саддававос вадчоссасв 120 чосдасацчад чиссссавоо сосадодоса дсаадодесе соазадссадо зоадазаєсдеє 180 ссасоддадис сасацоасоо сосочсниса дпосидазно дапасчесау андсоЧчоєс 240 адчочассоо ададсесоєси ясищдадиис цпассисуєса пдсстисос васасссвив 300 павосазчзачс подсссосад пдзоссидосс сапуацаєсс сассуєннсс сдидссачоай 650 пидснисида аддаднисає пундиссодс аасачасєцда сиаиссоасм дасподснодса 420 цассассосс азсидсадеи сиссайсаде псечаисисс адсадснине ссидішезиєЯ 480 чеадацсасос адидсиниси дсссвидини чрдосисадє сисссосацд дсадавосос 540 чав 543 каїб» 8 «Кіз 543 хи1їй» РН «йї3» Штучна послідовність «вед» кид3» МЖ-Е5О-1 СО5 всС-оптимізована «Оп» 95 зосваєяссо атассосооа сассдясадс несдассудасо асоссоасЯ осссоадсаде 60 седддсачеє садасаосес дадсододаас асодасдасс содосвавоє сдоасассасе 120 часудасЗва дессосоЗаЯ сассоусусє дсосодоєда осодсесосов соус ї80 седсдовосс срсасодосяд сдссоассаде ддсєидаасо даиосидсесо диосоасасє 240 содсодоасссоо адаодссоддси ссидоаоавис пассиддєса вдассописоє дассссдаце 300 даспоссовоє поросссодсо дадссчодсс садуасуєсс сассдсндєє соидесоЧає 160
Фидсиєсида адрадцисас пдидаосодес васайссида ссаиссодси дассоссосо 420 пассассодс адсидсааси дисдаисадс адсидесисс адсадсиуад ссидсидацо 480 подансассс адидсисси дссодндцис сцоддсссадс сусссадсод ссадсоуєсод 540 чаз 543 «210» 10 «її» 1800 кг1ї2» РНК 213» Штучна послідовність «вед» хи?З» МАБЕ-СТ (аа 5133-1142) С0с)-яшад-АбА-С3О0 «АдО0О» 10
Фдозозавоє упассацоса диссссосид саодосдава адишссавао сисесудсав бо адссссвцон ссайсносао сиссадсасєс сесиссадсос исссусадад сипссссдав 120 чесадссади сесссєссда доузсссодвис сададссссс цудсасисссс дсададсесс 180 ссодадедоз чосасиссса Задсссссица садиссссосо адзососссс єваддосовза 280 часусссиса дессосудса Зайссоссад нсоссосидоа адобудавда садссисисе 300 адссидеаси усесссадиє сесуєссвдад подадаодаса дссидадесе ссоссасцйс 360 сессаднисс сасессадоао сдадодасвис садинссадеєс вдасадиюссс сдцдвасаце 420 подсцссадси ссасчайсси Ячсссцсссс сададсичос сададиєссс ссададесссо 480 сссрдадопоє сбососаднс сссоссносад сассссоцца дсисспцсуу садсцасасс 540 сиддссиссс пссбдсадад сисссасову адсссосада дсссодєсссаа дадссссдсє 6о0 садцссссає посадайсос сдиснссаде чиссесисса дсзссиссад сисссисаде бо саачссвосс ссодцдиссво синсссдцсєс адсаєснсса дсцссоснаго сазодаасисе 720 сссавуаосс ссосудсадис єЄсссдидавс адсонсисса дсиссасдад ссисисссося 78о цисадсвадо аписсадсиє соссдисчас даднасасєса дсиссаосой сасссцосив 840 дадиссраса дссисаєсда сиссовдаде сидацсдабда дсдчадессси Финсасецає 900 асосисвасо завадацооз совасндасс садниєснас ресидзадиа ссабзцобава збо садсесвиса севадоссоз дацасвовоє застєансо сесоснасає сєвдспасниє 1020 ссоддйдайси чесодзадос дсдсоаоаниє ансдадансє всишсодааи садссцосов ово дваоподасс ссдасдасис соасдднецис одпдаасасоє паоассисає сздсозодоє 1140 чассуЧчиссо асоадсачос дандачссзо аассоссидс усацсосидай ссудиссачс 1200 зисцшсачса ааоддсассна соссадсазо дадайєзвси додасочаси сиссододаце 1260 чоасоспуєдаа седоссосаа дсасєивсуєє писодададе сссодоазсу зсидасєсаав 1320 чдисидаєас аддадсасиа ссисдадває сасдводвоає ссвасадсис сссоассссов 1380 цчасдаднисс подидадассс седсосссаєс васаводнса псвадсдаза: даидвиодай 1440 иассндасєда посисвадаа сасоадчноссс ансассуцеє сдиссадсна савядасасс 1500 сидааддасо чпосадуадсо Ядсссафдєс висаисдаса ссассдасца сиссасудес 1560 ассоздадса сонссадсис сундацодадс сесзадсшни ссеадсоазно ассасцади 1620 зизацуаснда сизудсссови ддодссиссса асодасссис сисссснсси посассовоуй ї680 пиааназаза зазадавада азазааааза азазазазаа ззававазаз заааавазаа 1740 вазазаваан апуссесссос сесосссссс ссссосссссс сосисцападе аашедавии 1600 каї0» 11 «ДІ» 3429 каіїй» РНК жккКїЗ» Штучна послідовність ко» «ваЗ» МАшЕ-СІ1 СВ5 повної довжини дикого типу «п» 11 зачдчододаса адданацосс пасидснодо ачпоссдадиє дисиссадау чиссусноав 60 здиссисада дичанєсндда зододобаодає исссадисинс сисиссада пссссацзади 120 шисспоада дсдасуасає ссидчачнеси сиссададиє сисадачнсо висичазода 180 чаздасноси єдданесиси ссададаєсьи ссудадавда адоаснсєса дисиєсусиує 240 садацисссс ададцисьсс ндаздчосудяає азсасссаци сиссисцсєса заацисьсавд за адицсисєсцо адчдчаадда сцсссцаоси ссиспадада шисисадад сесиссидад 360
Чоановгодачцо пссачиснсс усидсадчаяои ссуасдадиий ссушсеисис сисидевоца 42 зидчадизнни пссадацьис сссодачачи асисазацис сишицвазод чницсеоссац 450 всиадчисносє абвачцисснои дадсоассясєс чесассисса спивацинаад чпамицуоєсав 540 заичсессєза зозоунасуса аддиссивини двододинице сєссадисноє асуссвавци 00 ссидиозосс дсиссисис сєиссаснціа зпоаоазацни чесадаонис сссцпдвааов 6бо асусададца спиичуовадо чичшшосссва пенссисисс адацчесиоди чайссесися 720 чсеснеснсса сичиавсцдда чсешцауссад ядчинсисио ададаасиса дасацасничи 280 зааддиницоа сесадисрис шсиссвадачи ссидиааясс ссиссцнсне сиссаснича 840 ччоздиєции дссадавнис сесидадава ясисадавца сишшазадоа нишиссссає 300 исиссисисє адавнеєсной дадсиссусс песуссисса сиашшаово псоившессав збо адииессссчо ададазвсиса саднасєциі даддднинис сесадиснсу неиссадацн 1020 ссианоаеси ссеисспцецє сипсчасниша чцисапцазни чссададнис чесудапваои 1050 дсисааадия сишиндацодд чичцисссовоа чсиссисисєс адависсооа дадсеосснсс 1140 чисисснеса снипасчаво шсиймиссад авмиссссиу адваоваснса садчасєниши го часдацицисє сєссадисиссо псиссадачи ссчацдаєсо сеуеспшсис сиспасница 260 пипдадчацици часачаавис пссудачаи асисаааоано сишоааод пийцесессавд 1370 псиссисусс адайиссцоа) дассиссосі шиснесиаса сипивицоааа псичоресає 1380 адниссссно азаедзасиса садчасчицио дадоадиченс сссаднснес недссадаци 144 кснонаоси ссуссцесиє сусснссаси цианидавнє цуишссачад Янесосндав 1500 ноцасисаза днасиишвца доадивиисссє сзодисиссно чссадацисе сСадзанось 1560 ссчавасцоцо зозачцассса писиссиснс садачциониє свадиснисс пбадидадав 1620 цасусссноав сиссрсасна сичиссисза адсссисснє адозазазай снсссувиси 1680 ссусаснасн чиссцсваад сесиссусва чадодадааси сссудисисе псасивецни 1740 ссисвоааасс сисадодсада ддасисссооа нсяссисасєу асчииссиса чдадсеснесси ї800 саадочевод асиссацане шесисусєлає чииесисаа чЧиссисниса подазавдазва 1860 чиссаднсии сисиссачад сесиднуаує авсидсисси ссиссасисє анссадцєи 1920 ссссапйваци мсесседабад шусчусадаци ссуссчдачо дассичисса дисиссвсиє 1380 сацвонесис ададсссисс цдауадавид саснсєссааи сиссисусса дадиссьдавй 204 адидсисстя азоаоодавда писесвеисо сецсиссзав писсисадау пссисиваао 2100 зчадзоддаси ссєчоиснис псиссаниии ссусададис сисспдадно Зддаодасисс 2160 спсисиєснс иссасичисс чсадицисси ссисаддобо аддаснисса дисиисисиє 2220 свдадиєсцо зазонацсчо суссмеснеє асмусоцвда дисийссєса дадчниссся 2280 зададиссисє ададиссвос пдадазасся асисадисис сисуссвадо ассидисаає 284о пссучсниси ссеиасасєцци вусудадисни счссазадни сссавчадад песисададн 2400 ссиссичачо ддссидссса дисиссисис сададисєсьио чнаваснссиі ссссисснсе 2460 асницсансда дисицЧцссса Язайнсиссни очпозосисси цесосчссьс сасицсвисо 2550 абиєншисса ададиисссс ндададиєси сиссададис сидидансис списассисє 2580 нпесасцйсви повасссаци садидавава чссадсадсс своапасанда аначцасавон 2640 нпоссисадаса ссвидспада даоиоанисс чвоасвоадся дсозоацссни дачаававає 2700 дадсссунон цсасуианас асидозноза авддчназаса адцидасосо дипосинесче 2760 сисаванаис задчдааваса дссизиьсаса дадосадада посидасоза почсацсаас 2820 здачасасад дсиасицос чандансцис задазадесся дидЗаднисзи ададацасин 2880 ишидодсамшши сесидадада зодиоддассси данаасисси апдисишиЗин азасаєвиша 2940 дассисасси седачувууцю псидадидаз дадсводоса чусисссвзаза ссуссцсєспа 3000 ависицацис пдадивиса) свисазвааад досаєсмаид ссисидаада заусвиснов 3060 чацвчнасида дчиосоазчао сопосациоси очозадазас азсупиоассио чопосдавсос 3120 здодвоасисс шсасуааади чидобидсаз даасаициасс падазднассо оддаодидесс 3180 засисинсис снесисоццва созачиссид пододиссаа дадсисацис абаадисацйн 3240 задводазад саднпазадни шицпддосєсачо сеаавузача седиссснан пасснинеса 3300 цсеисиваса адчайдсвнчи дазачайочно дзаздадавао сссадаєсви зацидаєсаєс 3360 асадаидачи сдасидссас вдазадидса адсиссадид псвидчоссс садснисисяи 3420 исидадной 3479 «2105 12 «211 3829 «212» ВНК «213» Штучна послідовність «Ах «223» МАбЕ-СЇ СО5 повної довжини бсС-оптимізовава «00» 12 зчаподасваса зодрасацасс сассоссода аидссдацесє посиссадцє садсиссдяо 60 зассссєдон сснодсессоз ЗзаЗсаадчає зассайиєсс сссвдсавав сссосададе 120 шсссесдада дсдасвасає ссидчассос сиссадиєсс сосададесо писсозадзоде 180 дзадасадси сєеддасссуси дсадсосссс сесаводоса зодасадеса диссесоспа 240 садансссдс ададсисссс сдауоддоадас дасасосада дсессссуєса дзаасвассав зба псевасссся адодсзада сисссидадс ссосиддада псисссадад сесссссдад збо засозодасо чосадисссс дсиссадаас ссдуссадесу ссциснчсад сиссусдасив 420 спдадсацси ссадиссвзо ссссдадисс асссадавсс ссийсовоадо дишсссссав 480 чссдисєнссє аяашсссоди дадсоссоєс иссадсадса сесидоачбиє сазиснуссао 540 адснсссосо ададсассса дисссссцис даддасинсє сссадавссс здсидсадайє вой сесдидиссє ддадсиценс садсасусис сиднссачсв пссадзосис ссоссдасоє бо асссададса ссийсдаоЗо ацисосссяд пссссуснЯє заанссссди задесесисе 72 адсадсноса сссисснова сспдниссво пссчисаєсо адсуддасаса диссассчис 780 паддосннсо сссацацсис ссиссадацє сесдндадес савесунсау сиссасссив 840 дисадсснун зссадиссво сессдадсоє асссадисса сдчисоаддд янисессссад 900 аоссссснсс здзисссоади дуссаодсиссє адсвоасисса сеспосноду ссусииссаєд 960 песядссссу зоасодассса сиссасєсциє даддоасицсє сссададеси яспосадаче ого ссесяпдаасуу ссавосцчисис садсасссує сидиссансу песвдадсчс сесооваавас 1080 асасацисся ссцусдадцяч сицсесесад звассессоснодсе аовиссссоаЯ писсссдаде 1140 циснесадса сесиссцуад ссидииссад иссадссссо адсосасдса сиєсаєстие 1290 дзадаснисс сесададйссс ссиссадачс седацавеся ссзасцисиє садсассспа 1260 спдиссацес цесадзасус сессововас дсосадиєсд ссвисовадо випсесєссав 1320 адсссссуодсє адансссоди пдиссадесцєс чисадсизвса сасидсисис ссцдчиссад 1350 зодсадсссса адсоадаєсса сиссаєсцис дадддєчисс сссадацдєся дсидсадайс 1440 сссдцдднеса дсиссадсисє садсуссаєс сиссидадєс ндинссвацс садссссоав 500 йдсасдсадчи єсасснисда ддасиннсссс садацссєдс нодсадацесс єсацисссояє 1560 сссуаочоЧеа адзасаєсса садсесосис садяисонас сосвсесидес сдадизадав 1670 часадссидци ссссосасча сцисссусао адосссосас задосчадоа садссиснусе 1680 сессасчаси шсссесадад сссоассссяд ододадчаси сесидадесс ссасваєчциє 170 «ксасадност сссадчоаасЗуа пдасавссна псеседсаси асцисссоссз дадессдссс 18500 саводоачаця асиссвпява ссесснсчаєс чиссссовт: ссссусноса дадсоводад Т86о писєвавоасин сссидусвяво ссссдидисє асносадси ссадсаєсссє сиссадесиє т920 ссодсвоавосе чесссовацс сдаоссадисєє ссссссоадЯ дсссоаднєса дадсессспо 1980 саснссссосє азачсссссс даачововия сасисссаба асссссноаса чдисссссвад 204 засоасссссо зопоасоаваца сисссусадс ссосноасада песессадинсє сесосисдад 2100 здазазваса чссусиссад ссидсаснис сессадцєссе «сосссдзана ддаодасаде 160 спавдсєссс песасниссс ссадиисссо сессапдоасо аодастисса писсвасєча 222 сависссссу идадсвисню суссауснсс асдадесидчи сссиссссса даасийсссв 2288 чадисєсссос ададсссоос совуадаєсу дсосадисєсс соспдсвасод ссссдизадє 2340 псевиснуса дсчасассси ддссисссис сидсадазся сссасчадао сесосададс 2400 ссодсесваді дссссассса диссссусиа сададесссоя пдиссадсни сессиссаде 2460 ассуссадси сссисадеса Зиссадсссс дидиссадси псссдиєсавоу сассуссаде 2520 исесидадса азадсиссес совуадсссє седсадиєсс седидачево сУчснесаде 2580 иссасдадес исиссссочи садссчаФоана пссадсиесє ссонсцдасча Зпасаєсаде 2640 нссзасдаса сссидсийда диссдасадє сисассдасєой ссдрадавесо дайсоавдаде 2700 чаассссиди цсасснасас дсисдасдво аадаиодасо засчавсссо випссчосис 2750 кидааонасє адуцдавоса Ясесачсасс авозссозда цасидассва сеисацсчес 2820 сасцчасаєся дснаснциссоє донданснис соархадасас дсдадинсви сваданесис 2880 ішсодавнса оссидсврода донадассяс даєдаснсси асоаисинсац даасасасцио 2940 цдасксисяаєса дсдадоосно ссподиссдає дадсаодсада пдадссадай ссассвросиє 3000 зиссучансс пессацсац сичсашава часасснасаЯ ссадсовзоча зпоисадснав 3060 дасавоасиси ссдоддайсоЯ сачоасоадасс додсесдсдадс асчисосснци содаодассе 2120 счададеєнас позссаацои сидадидсад Задсасцассе исзачнасся сваддцдцссяє 3180 заєводснссс сассссодиа сдадииссиЗ падодссссс дсодсссаєсай сдаддисайє 3240 азасодаато мвопоЗадии ссидосоачну сесавоваса содисссєву сасспцссса 3300 иссвоаснаса аддасоассси давудасоио дадавосодо сссадоаєсан саисєдасаєє 3360 ассдасчаси ссасддссас сдададсосо нссадсиссо чпавиовоссс садсццснос 3420 засуадноа 3429 «2105 13 «її» 1326 «ТИЙ РНК «213» Штучна послідовність кг «223» МАБЕ-С2 (603)-тчад-АБЯА-СЗО «Ой» 13 додзадазадес циассачцесс сссодидєсс дасчнсссси уеєсдозасяу одасаасоає чо адссссаєси ссоцодавчси опоаздцасиЗзо сисдасассс засасєссдас свасозодаєд 170 дпапазодача ссводсиссос ддаснссася сиснассьво пучисадссс суссаденс 180 нссассаосе севасспави ссисододвос сссддаовадя апозаднаєс сиссодоадиє 240 зисссдвасс пудасєсоавазоа санессссисс адссссссоє ададсссосє ссаддачесе 500 чсссвоаадсс сссудиссая сидсидсадс нссписадси пдиссвасни сиссдаддай 360 засуссадсс апзадаосоз Зпзсассдасє асєдпдесада дасисссада сисєсдададе 420 шссписасєсь асасссцваа садозадоино дссовгаснод пададинеси ссиссидаве 480 часоадесся зодадессяи сассбадосс дадацоснса чависяцави савопасаве 540 часчаснисс ссодпдайсси дааусусдсс сдоддадииса вададенось сийшсдассив 5 осасчозися аддисодосс сдассаєцис посдиднисо ссзасасоду додссисасс 6бо0 часдздоЗда удсдасодасда Ззоддсацдєсу дадазсиссс посидачсви сзиссвсаде 720 дисацсниса прзадодсай сидсесєсиєс дадозгодноа псьводавон дспдзасосє 780
Чдисодувави асосозоссю совосаснис дчочасовоо адссссдвоа дспдецсася 840 аздодиснойд нЗсачдасса счаєсцодад чассосодаою зоссосаєву сисосссссв 900 насцасдади иссоацобао єссссдодсє сасадсоади ссзисазуаа Зааддиссис обо заависсидо ссаадсиоаа саасаєсуна сссадсадси весссиссид диасзаддає щцаВ дсссисаачо асдисодавда дсосоцосво одссасодисо асассосода свасассаєє Т080 пичачуузєса одсдадиссєси дадсонсацо пссадсавсд чанссунсад свадодаоса 1140 сиаонианаа дасидаснао сссодацадс сиєссаасво дессуцсснсє ссуссучоса 1200 сспаданняза чазававава ададаазава ававададаа азазававай азазвазаваз 1260 зазававада зазавианис сссссссссо сесссссесо сосессссси сиадаєдани 1320 двадазяни ї5326 «во: 14 шиї» 1359 «віг» РНК «йіЗ3» штучна послідовність кидО» «2й3» МАБЕ-С? (603-шиад-АВа-СЗО-пізколеві.
«300» 14 здозозазосє низссаціасс сссодидєсс досдцєссси вссодавсою) доасзаєсдає бо зассесасси седподайси дозадаснод дисозедєсе адсасссодає єдасодаооав 120 даададевоад ссадсиссує дадсиссасу сиснассвоо вашисадесс суесааснис 180 пссассадси ссадссидац ссисоудодс сссааодадо западає сиєсододиє 240 апсссузаєс поассоаово сапссоссцсс адссосссає здодсссодєс ссадддадесе 300 нсссададес сссидиассво спдспосадс пссиисадси оддиссадсио сиссдадоає 360 адснссадсс аозадодсоа пдасассодс асдпоуссяоа додсисосода спссозавос 420 цссцисасєси асасссиода сзадаздоця дссдадсцод пвзааоуцисси ссидсвозад 480 цпасовоудесо аодадсссди сассдадасєс пзозндсися пдавсопдац сааоцасєвдад 540 дасчасунсс ссодидавсси даадсососс содддадниса пдавоснаси свисадосЧо 6ОЮ асасидаисо зодисодоасс суассаєнис посочансо ссаасасдди поассцсаєс 560 дасоачобог осоасодаєда дадсарюсєсо Задаасиссс носидансяу санссуєсадеє 770 дФисвуснисі чсвадодосаа сидсоссисє дабозодноай осивдвадои пспозасосс 780 дисодавиои асосоадоссо совзосаєнис днонасодаво адсссосодоа йспдсисасе 840 задонсидод чосаодосса сеассидуад пассосдадо носсосаєво сисесссссв з00 иасуасвади шссодчодоа сесссодосс сасадсоави ссаисавдаа бааддиссиє 960
Задчиссиоа ссвадсичва саасассацея сссадсазсн шссссиссид чдиасавочоаєс 1020 чессисазаз асдисдадцаа Зсусочосзоа ассасазисо асассосода сдасадссасє 1080
Ззнпозодаєса дседадиссси дадсозсану иссадсзасу пошесписза сдадповеса 1140 спашиашай дчасвдзсиао сссдавдоає сусєсайсод дсссиссцеос єсоссувоєса 1200 ссдвданциай пзадазавав лайзазазав вадайадааа зававадава зазазавава 1260 азаваазааа азаавнасви сссссссоссс ссосососос ссесссессс свавдасиси 1320 шисадацсє ассавувани 1539 «2105 15 «гам 1122 «фіг» РНК «213» Штучна послідовність «20 «223» МАБЕ-С? СПб дикого типу «дО» 15 апоссиссскоа чиссадосди дссайшесоЄ аасєдчиндаса асчасисссс пдассисадин 60 засисзозай асудйдоцада осасадсав сссасадавцо здоаадавда додаадссцсє 120 шесосснсци сеасивцона симадцавий псосєссисио сешесчссєве ашссусцнся 180 спаанисицо дпадиссиОа дойдоводад дносссисмо дидиданасє азашсучасє 240 дзавоасанис ссадиаавсс пссасасюди ссиссасадуо диссийцесса байшссисий збо афчесцчсу дсиссисици цисадчааде нсацисасня адазанссвза свассачава 3650 здададозиа саддсассию чсаддассиа ссздасєзоцо адьссусяио сасазачаса 420 спацапцозаз задидассяз дзчадводад пассидснос всааанаєда адсаздазаає аво сецивзасад аддсададау дсидавдаци дисайсаачи асвавоаавниа сивисевое 54 апасисаацй чадсссовода доисавдоад счисиоивио десичеассси дачадавоне 5О0
Фосесцчасс асицснацоуи дичесааасє асанадосс псассоаноа даоднадиаван 6б6о опзидадчоса чосссдадяа садссоцосто анидичавис сдадидидач сисавцаааа 720 посаасноца ссисцдаода пддисацсивзо даадносида апосадиаад чосачаноєси 780 додадодадс аснисдиєча попдддадєси адодадсисс цсасивазау пиодданосад 840 дчаєвинасс подаднацсо доадомассос сасадииснс сиссацанна правив сече 900 чоеддодчссаа озудєссачис адаавоєдис азозадааао часпадчапни пицадссааєд 960 спадасадса спописсная чписсушшеса нссядзачаса адавивсици пзазааначя 1070 даязчачадад чссадаєсасє зацидасасс дсадавдацо ссасидисац доссадундаа 1080 зассисадиа шсавронссад садсоуєнсе пишчсодади да 1122 «2105 16 «ві» 1860 киї?» РНК 215» Штучна послідовність
«ве 293» МИС1 5 МТВ (оС)1-тиад-АбЯ-С30 «4005 16
Зо3озозавоє пнассацоаає ссседуєаєс сададессди пезиссєчасу сєсидецосиє бо всадчаєной ссдвсоиває сддунссває сасассадсо єсасеососдо Заосвадаве 120 здзаасдадсо ссвсссадсо диссадсоно сесисслоєса ссорадазава: сусодисноє 180 видассапси ссацосцоао сусссасаяє сссдоадиссо дсвасиссає засссададе 240 сзоадасдида сссисусссс ядсесассдад сесоссаасо данссоссос. васоаадачос 300 саадасунса ссадсопасс сундасссуєс сесдєсснод ддаосаєсає дссдссосоєсе з6о0 сасоасднса ссиссЯсссс сдасаасаву сссдсуєсод дсадсассас сесссссусе 420 сасодудноа сенссяссєс сдасасасяд ссодесоссу асаосаєсЯє десосевосе 480 скасчдсоноа сснссасссс ддасаєссас сссдсссссо додосасоде сссдссодся 540 сасцдсоиса ссцєсодсссс спасасссда сссдсссссЯа ддадсассоє сесдсссосс 500 сасодсоцох саиссасосс соасасссоє ссддсссссо дсаосаєсяє сесссоссдсс 560 сасодадниов ссеуссусссс авдасасоасод сесоасЯсссо осадсассує сесоссодеє 720 сасдддависа сецссусосє саасавссоє сесасеснод дозасаєсує сссосссоце 780 сасзасднай ссиссдєсад содсиссосо засдовиссо ссвасасссю сєдиссасавє 84) «Фоасасднесо сссодоссає сассассссс дссадсзаци ссасосесиу сзосацсссю оо чсссассаса дсоасассос сассасссцо дсдисссаса дФсасозадасє сдасоссьсс 960 часаєссасс агсиссадсви дсссссдсуює ассадсисса ассасадсяає писсссосав 1020 сисзусасса єпдидпссни списицесод васонссаса псуєсазесу дсачиисаве 1080 адсвссєцсю аддаєсссадуд сассдасває пасєводадес насадсдада саврсьссоаа тідо апварисснасє адацсвасаа дсадоусоас пиосисдвує вавоасаасяи сазависсодє 1290 сссодадсиссу пссойоолоса дсидасєссис дссчиссоФо адодоасзач сдасодцеєсас 1260 пасочозача сссадцисза ссаднасаво ассоаолесо ссводссосуяа саассидасс 1320 звиснссдаса повдоасуцсис сасдцдєсс чисссуша дсососациє спдсоасєссодОає 1580 дидсссоддан пддддсацсдс ссидсисдис спцоддноцосо чдсвуднсає ссисассаис 1440
Чдидчассида псососндос сдидноссва чпоссодсоса здзасцасЯад дсадсьсдає 1500 аасциссссо соєдоддасає одуассаєссо анозасдади асссдасєсна ссасасєссає 1560 чпассаснаса псссссссва сиссасєсдає сочадссссь асовуаадау чиссоассачЧчая 1520 заспосодса дсисссидач суасассаає ссддсоадида ссассассцс сассавесив 1680 шщассаєчай цпаваадаси даснадсссо видадеснес савсодосос песиссссиє 1740 спидсаєсой данцавиваз аадазазава вазававаза азвоваваза адвававаза 1800 зааавезавад завазааааа аианисссесє сесссссєссє ссосососсс кесесисвавд 1860 «яв 17 гії» 1885 «ел» РНК ккіЗ» Штучна послідовність кад «23» МИС1 5 УМТЕ (о0)-тнад-АБа-СЗО-Нівтопеві. «4005 17
Чодвазаааєс ивассвицдає сессодсаєє сададссосдав всвиссуаси сецдсидсиє 6О асадчасуда сссписордас судонссоос сасоссавси ссасссесоо завосоаоаав 120 опздасодаосо ссассесадсо писсадсоно сесиссаоса ссдадавова соасоудисисс 150 звидассадсе ссойдспаво сисссасадє сесдадиссо дсадсиссає часссаадчає 240 тадоасонца сссисосссс подссассояво сссоассадод доднссоєссоє дасуицадос 300 сзадасочиса ссздсанаєс сдидасссоє сссосссцво дозасассас десусссдсе зво скасчасфіса ссиссассос суасваєдгає сссососсоа дсадсаєсоє сссбоссдєс 420 сасдочонов ссцуєсодсссс спасасосда ссоддссссся дсадсассоєс псессссосс 480 сасодсоцох ссуссассос Здасасссоє сссасссссо довосасодс сесдссодся 540 сасуасєвиса сеиссуссоє савасасссоюд сососссссо додвосассоє сссдсссасе 500 сасудосвнцй сеуиссусууєє сСаасасесоє ссеодсесєсу дсадсаєсоає сссссссуєє бо сасдаавида ссеиссдессє ддйсасоасод ссесасосесо дсаосассоє сесоссоддеє тво «евасодачиса ссиссосусс сдасавссяє сесодсесчоу доавоасаєсоє сесоасссуий 780 сасазасрида ссиссоссвоа содсиссасЯя адсодачссаЯа єсядсассси сецссасаас 840 здсаєдиссо сесдодссасє сассасессс дссадсзади ссзсдсссии садсавессв 900 исссассаса зсдасасссс сассасссцув) усднсесаса дсасдазазве сдасдсєсься 960 азсассєвсс асиссадцесаи дсссссЯсєну ассадсисса вссасадсає диссссосавд но сисвасассо чдададиссни свисивссчо адсчиссаса всьссадоси дсадвисавс то8о адсусссусу адпассссво сассдасцасє чассаддуацс чпоасадсодоа саисисєдав 140 видциссидє адаисцасва дсаддосоде писсусддос пдзасаасач саваицссоє 1200 с«ссодснсся псойдочаса псидасссис дссицссооо адоддасодзи саасоуєсає 1260 дасозодада сссадицисаа ссаднасаво ассдадоссо ссзуссоєна саассидасе 1320 заиснссдасо позосдусис сдасоднодєсс Чисесучиса єсасосадис спвдсассдає 1380 пидсссодан ододсавсоє ссидсисодцє споднодносоа пдсдочсоє ссисассачс 1440 ппочассода псососудоасєс сочочассаз чоссадсосСа адлзасєнасчяй ссаосчедає т50о0 зисишессса сесаводасає унассвсосо аидадсдади асссчасєсча ссасассосає 1560 ддссоснаса пессссссад спссассдає сададссссо асогозавон диссуссоде 1520 засудсадса дсисосидад снасассває сесдосаднво ссодссдосис сдссваєсив 16580 шщассаєчад чпацаздаси дасоадсссо аподдассься сазсддуєсс песисессиє аа сешшосассда дчацозайваа вайзазаваз азаадааааа зазаазазаа зааававаава 18500 зазазазада зазазааяава аидсависссс ссессссссс сєссссссссс сссссссавай 1860 одсиєчимис зазассасса дЗазии 1885 каиї0о» 18 «21ї» 1668 «2125 РНК «?13» Штучна послідовність «лай кий» МЧчс1-5 МТК Ср5 дикого типу «00» 16 зидасассодв дсасссвоацє пссицисцисє спосипдснодс цесисасвяау дсопасади 60 дичасадоаци сиддисачцоас задсиснасєс ссадоцодад аазадаацає чисдасчасе 120 сададавоци садидссєво сисуасндаа азозацосно шдадианодас свосадедиа 180 сисуссадсс асвуссссоЯ писаддсисс чссассаснс адодасадда пдисасисиє 280 десссодсса соддазссядс чписаданися дснодссасси допдасвода нопсассися зо
Чдисссадиса ссадйдссядс сспдоосисс яссассскос садсссасца попсассцса 360
Фссссдозса зеаадссвоє сссдоасисс ассасссссс садсссасодд поцсассцсв 420
Фесесовдаса сбадаєсдає сссудуєчес ассясессссє садсссасод пейсаєсься 480 фісссодаса ссгодессодс сесддуєнсє аєсдасссссс садсссаєдо почсаєсисе 540
Фесссочаса ссадоєсюдс сссуооснсс ассдсессос садсссасод пайсассисе 6О00 дссссодаса ссзадссчоє сесодасисє ассдсссссс сєвосссасцо поцсассися бо чесссоавдаса ссзддссдс сесодасисє ассесссосс садссесаєда вдаисассиса 720 есссуваса асадоаєссЯє симадаснсс ассдссссис сависсаєза ноцсассися ТВО дфесисвачси сидсансвяд сисадениси асиєпоудвоає асвасодсас сисидсевов в4о дсчассасай ссссадссвао сайдаусаси ссеачисисаа виссесадсоса ссасисцоає здо асчссцаєса сссицдссво ссачадсасс задасцязно ссаоцафає чсассацаде 960 исодчассис сисисаосис суссадисає здсасдисис сосаднидис. часпдадчис 020 псичисиние псейдисяци дсасацнуса аассиссади циавцшссисє шсидоаадан 1080 сссадсасєсо асуасцаєса ададсчосао ададасацни срцдааанани пнидсадани 1140 цацавасазо додоничиси ддассисуєс азизнуаво цсадоссзад знсидиаоио 1200 дпасвацида сисидодссіи ссдадазади ассансзацу чосвсдасо) доадасасає 12650 чисавиєсвон зивазасода адсадссисьи спанадивасєс пдасовисис адасчусавос 15720 впдадидацо чассаниисс пуцсисцасс єадисноооо сиподеносє адаспододе 1380 зисдєдсноє удодносодЯа сноноисцо диносЯсняЯ ссашевенсна пеосашідєє 1440 циЧчоасивиси днсвадвосса ссозавоває пасодосаде ноддасацесци песадсссов 1500 зацасєснаєс авссчацоао содаочасесс аєсчассаса сссацодасо сиацидссє 1560 «есивосавца ссовисоавад ссссизвидад аводинисид садоаиаасод побсвасаде 1620 сисисицаса сазасссаос адноосадес дсинсцдсса асчивнай тТбБЕ «210» 10 вії» 1489 каї2» РНК «213» штучна послідовність «20» «223» 514 (6С)- тиза-АБА-С30-Нізтопебі, «хх 19 додзадазадс цшиассачесс соасудочос адссоддучес сддоесоєссяд ддасодесоє чо сидеуусинся сосусспвує сснддедсис сиддадднодо чсуссадсис садссссасє 120 песадсаєси ссваєцисис садсуссаєс сссуцссиоад ссадсоєчац виссоесссавд 180 соссесоснсс седассвана сссососсесцра чосдадидса дсозоадссас содассуо 240 задносднса ассасавсси дасядадаця сесассуасє чсссудссна сопосодаає 300 сисаниссяда ссодсаасса дсисоссацеє сидсссосса дсассинсас зсасоссоасся 360 ссссичеассу засисассас ссидавесц песодазасс чесисаасдза почасаддєє 420 часдсунису адсассидес дисссидсос садсисдасс паоводссаєза сссссцддеє 480 дассиснсосс семисуссцш садсодовує васассиссо чазасасссє сисессоспа 540 дФієдадсцода цесисваєса сасозоаєсс сссдаодасд засодсвава ссадсадсниє 6вой пачдоосацоя сподисосодс ссподсцопдсс одосодоссс уссадцоєся дсдссадсив 6бО дадсисеусси ссзасєсасци ссидсвасса ссессоєдаєя пдсисососа дсидесовоє 720 спасддсасс исассудиє саасаасадс сидаиодисес неасснасоу садсицеесує 780 зассицасос асспозадиє сСсиссассцу дадвасаасєд сеспдаааов всросасаве 840 оддеєасссисо ссдадсцоса опддодсвассс сасацссодо зайиссуєда саасаасссє зо ндарисеосо асидссасаи дассдасано дчдассивос пазаовзадас счаддиодає обо сазадасаацо ассдесидає оцосоасонає сссдадааца насдадзаєсо воишдсисспв щцаВ дадснддзаса дсоссдасси сдасносдає ссдавссиде сесссиссси дсадассвоє Т080 часодчцоацнсє псдоадзаусоди ссвадсссипод ансдасоасса сивесснссу дондсночає 1140 сисавссоса зодосансава чдааднорацо сасєвасацес дФодасоссноу ссодсовесає 1200 зпповадодн ассасчассо дуасоадавс аасосодаєс сссодссноас саасевоисє 1260 засявсиссаЯ зсудисподсес асчаднияна адасчцоадсна чсссдачодо ссисссавсв 1320 дасссиссис сссуссцчос ассоазавуца аиавазааза азаааааваа азазававав ї380 зазвазазаз зазаазаваз зазаадааава аазазацаса цссссссссс сссссссосє 1440 сессесєссс сезаздосис чинисададс сассваваци 1486 «310» 20 кизі» 646 «То РНК «23» Штучна послідовність кер кк?З» сСурвівін сос)-тнад-Абі-сзо-нівкопеві. «005 20
Фовозадає циассаудуо сосссссасє судссоссдо сециддсадес дипсеицсаав 650 чассассоса исисаасечи саадаасоидо ссучиссясю завасндсЯясє видсаєссся 1290 азасддацця ссдачосєсдо сцисавссяєс пдссссассо завасчадес вчассидуєє 180 свавасниси шсидснисаа одадсвадад оуснодоавує садасвасоуа сесаацедав 2 дадсасзада аосасацсвзо сасцчосаєс Чциссндачсо удавозацєз диисоаодацч 300 сидасусися дчодадиуєси дзадсвудас сдодадсоод ссаводзасая даисосовац 360 дадассваса асзадаваза дозоднисовоа дадассусса адавуоносо содаєсаиє 420 задсвоасида седссапада сидассасна орцпачаачає пдасиваєсс дандадесис 480 ссаясудасс сиссцєссси ссцпосаєсЯ айауцазива зазазазааа адазавдава 540 зазаваазаа зазазаадаа зазазазава яваваазаза азнудсачссс сессоссссс 6500 сеКссссебссс сессссссаз звддсисвиши сададесасе адваци вій «КО 21 «ії» 760 «вт?» РНК киї3» Штучна послідовність «двох
«223» МЖ-ЕБЗО-1 (650) -туао-АвЯ-Є30О-Нізтопе 5 «400» 21 чдозудаавас ивассацодса доссодвадцас сосвддсаєсд осодсисаас содсдасосє 60 засодддєссо дсдосссодо сСацсесодає дусссодосо давасосвою созсесодує 120 дадоссоодся єсассдасуо осоадчаєссо судчоасассо дсоссвсссо. двасазасодє 186 сесоасооуе ососєссвсо оддасссоесає дусдосассо ссвосодссо даасудонає 240 пдссадчосо дсоесесасад сссодададс сдоасиссяда заниснасся доуссзцосса 300 зисосуассє сдацодаває садсидасс сддсодачес чддессавца сассссоося 360 сидсссцнає содоасопцаси ссндазоадау чписасодива дсовсвасац ссидасєвиє 420 сурсноавссяЯ ссосоодасса ссадсадсуєя сєвдснонсва псадсаосно ссиссвоасад 480 сидаосснас здацднодая сасссадивс чиссноєсдЯ чодчиссноас ссадєсоссє 540 засадссадс оссабидасс асчадчинаца айасцдасия дсссуанодо ссисссвасо 600 дасссиссис сссуссццоє ассозозиця зидавзазава азадазаваа азававяаад 5во зазвазазаз зазазаавай зазадазаза зазазанаса цссссссссс сссссссосє 720 сессесєссс сезаздодсис чонисададс сассвазаци 760 «РО» 22 «из» 1813 к12з РНК «23» Штучна послідовність кер кК?З» МАСЕ-Сі (аа 6513-1142) (б0)-тяиад-АбА-СЗО-вієтопеві. «005 22
Фовозадоє циассацддса диссссосид садцосдадо адииссадад сиссецдсав 650 адссссвиои ссавснасво сиссадсаєєс соснссадсс псссосадад сишссссдай 170 несавдссади ссесссссда дадсосуоне сададсссос пдасасчсссс дсададесссє 180 ссададвода пдсасиссса дадессссио садчсссссо завасассес соачодасвдав 240 дасисссиса дсссусчоса данссссосад псессосидо адзодовачоа садсснсисс 300 адссвдсаси псесссадиє сссодсссяво чдодаддаса дссвдвасеє ссиссаєснцс 350 сессвацнеє соасєсссводо сдадодаснцє садиссадасс пасвонсесс свидадсаиє 420 нпосиссвосе севсдадсси дусссисссє садваснисс сдовонсссс ссададсося 480 сесоаздовос содсдсвацє сесссодсва сассссднда дсчссписни садснасасе 540 сиадєсуссс чссудсвоава сисссасодай досссосада дсссосссда подсоссдсс 6500 саадиссссас часададссс списиссаде писсссисса дсассуссай сисссисадес бо садиєсадес ссдидиссад сицсссдисс аасассисса дсисссидай саададсися 770 сссоападсс сесидсадиє ссессевдаис адсвисисса дсвссасово єсусиссосе 780 цосвосяацо адиєсадсис сессоцєдас даднасаєса дсиссадсоа гасссцдснвй вай
Задиссцуаса дссисассода сиссодвдаадс сидавсодда чсзачсссси дидсассцнас 900 зсасисвасу зазасдидаа содздсвдасє соуниссноє зссвдазоца ссаздидаво 960 садсеєсачса ссзадассоа Зачосзуаєє васдисанс) сссеспасає содспаснує 1020 ссвашюацсми шседавадусє дсосааднис ансдадавсє всушсодави садссчосов во здзадчодасс ссдасєдаєснс свасзвсвис дидаасасує вадаєсисає садсуазаде 1140 пдссначессу асчачсавоуо дапдадссяд аассосєсьчє псанссндач ссидиссаце 1200 висцисанса адпдсассча сдссадсдддо дадисвиси доадасдидси. сиссудадаас 1260 посочосода ссоддссосда дсаснисоєс чисддодадс сесдодаавси дсидассвад 1320 дисщодидс аддадсаєча ссисозоцас содсдадацдс ссзасадсцє ссесдссссод 1580 часовадцнсс понодуцесс ссососссас адсоозодиса цсавосодад чоидазоевбад 1440 чзиссидосоа зодсисаацаа сасодиєссс ансассцисс сдиссадсєна саадаасясе 1500 споазоаваса подадааосоа досссадцсс апсапсуаса ссассдаєча сиссасЧасс 1560 зссозоаоса соаиссадсис сдпдаоидаде сссадсциси ссаосвааця ассасиадин 18520 апаводзсиов спадсесоа дадссуссса асоддаєссис сиссссцссн песасєсодада 1580 цизайзааай ааавазавай аазазаааяаа вававазааа аавававава аадазаваза 1740 зааавезавдац дсенссссоє сссесссесє сеесссссссє сєсоссадзадо сисивосад 1800 адссассацчца ай Т813
«РО» 23 «її» 1339 «і» РНК каїЗ» Штучна послідовність «ай «2935 МАВЕ-С2 С6с)-шиаа-АБа-сзо-нівзтопабі. «4005 23 доаадааває циассацосс сссоддцоссс ддодисссси уссддаасоуч одасвасодає бо зоссєсасси ссондовеаси дозудчасидо дисдасоссс адсасссзас соасвадоац 120
Чазовочача ссадсиссоє дадснссасо сисчнассицоу чднисаассс списсвасшше 180 песассвоси ссадссиави ссисодоаус сєседадогод аддадонаєє сиєсодадиє 240 заисссовасс сподзссовово санссссисє адссссссдс адодсссоєс ссадавоассє з00 чпсссвдаЗсс сесидиссад сидсносаде несицсавяси дднесадсни сиссовадад 360 васнесадсс зозавдоспа ддасасєсодс асоцоссадя посисссода суссоавоаадс 420 шщсцисасєси асасссидаз спадаводвид дссозаснода подадицеси ссидсидЗазе 480 часзачассу апудосссоЯи сассдадаєсє дадацоснса позисоцави сзазцасаве 540 даснаснисс сєедидацеси дайодсососс содавойнса чададснася сишсасспа БО0 фасьваися аддасвавсос соассаснис пасоидинсо ссвасасадиу додсосисаєє би часогодода псоасодасода опдосачоассо одадзласиссс часидзисау сашссиусаде 720
Зисавснися чсвадоцуєва сидсуєсисс дадуаоддида псподозоди дсизаасоуєс 780 дисоддвиси асесодоєсо совадсаснис диднасдодо адссссдада пспидсусасє в4й заддиснодо чесадоддєса счасснодад чассосоадо пдссдсаєад сиссессссв зпо извснасцади пссоднаово сссссдодос сасадсдадчи ссависадааа заадовиссис 960 ааациссуда ссаадсидаа саасасєсоцо сссадсазесо псссесчсосид диасааодає 1020
Чессисаацо асписдаоча ососоцасяд оссасдансо асвссасода соасоєсасє 80 диданозеса дсоуачисеси даасуисацо чссздсазсо чдноснисад сдзацдасса 1140 счадзианяа дасидраснає сссдаводас сисссзасцу дсссцссиєє ссиссуноуєя 1200 ссдадацнва чазазаваза аааазазава айазадаааза авазайаваа азазававах 1260 зазазазава зазазвидсац сссссссссє ссессссссосо сессесссесс свавадснси 1520 чнисвааасс ассадаани 15339 «ої» 24 кі» 1885 «1їйз РНК жккКїЗ» Штучна послідовність ко» «223» мисі 5 УМТЕ (бс)-тоад-АБа-с30-пікопеві. «0ь 24 опоазозадоас циассацоас ссссодсаєс сададсссяв усрисснасу ссиденодсис 60 зсуддносида ссучсодидас содувссадс сасддссвзоси ссасосссоад здасдадаав 120 одзаасдадсо ссасссаусо диссадсоно ссесиссадса ссоздавава сосодусисе 180 знпдассадси сседидсодад сСисссасадє сесдддиссо дсвасчссає дассеадодеє 240 свадасдида сссососссс оддссассдай сссдссядсо дассассос васоацдадає зо сзадасвиса ссадсодцосс судидасссяє сссасссвоо ддвасаосас пдососссуєє збо сасрасдиса ссиссдсссс сдаєвасвад сссасуєсую дсвосассоє сесосесусє 420 скасоууачинда ссиссосссс соасасуєцо ссодсссссо дсадсассяс десссссуєс 460 сасоддсчнуча сєсиссасссс додасасссяс сесдессоссо очаасасаде ссесуссо9дся 540 сасодсанса сспссодсссс сдасасссуд сссусссоса ддадсассає сссасесосе 600 сасодсонда сонссоасасс сдасасссдс ссудсссссо дсадсассас ссссосс9сє 6бо сясододнда ссиссасссс ддасасосаЯ сесососеса ясадсассоє сссоссодсе 720 тасоададиса ссиссоасасс спасадссос сссосссидо додвосаєсоас сесдсссочо 780 сасаасднах ссиссадссад спосиссасо засодацсся ссадсассси сдиссасаас 840 часасунссу сесдддссає сассаєсссс десадсзади ссасудсссци саздсацессе 900 исссассаса чедасасссс сассасесид усоднсссаса дсвсоаадає єдасусєсисє збо адсвсссасео асиссвоасЯи дсссссасид ассадсисса восасадсає диссоссодсад 1020 сисазодсасєсся чеасичцесни сопсишсесуу адсчиссаса псуссаассо дсасцисаас 10850 здсисссису аоддассссад сассдаєчнає чассаддадс носадсудаа саисиссдавд 1140 андцисємоас здаиснасав дсадоадсодс циссисодос позосаасау саадинесоє 1200 сесодснссо угопазодса дсидасссиє дссчиссодо адодудасови саасуцссає 1260 звсочоачача сссачицсза ссазнасало ассдацдаєсо ссвассоасна саассидаєє 1370 авсиєсдасо идадседисиє сдаєдиоєсє цисссодлиса дсосодсадис содсуєсдоє 1380 чнасесодои обадсачсос ссидсисдиє сидаиуносо засновисосє ссисуєсає ЗО дизнасснда псосуєчває сондцоасєсво чассдососа адаасчасяд осадснсдає 1500 аисцшесеся сссододасає дуассасссо аподводсодзвоє асссдаєсьа ссасаєссає 1560 ддссдснаса всссссссво сиссассодає соовассссу асововадаи диссассдоа 1620 засодсодса дсвссспово суасассавас ссудсодида ссассоссцє сдссавссоо 1680 чдассасчай чизизадаси дасивяссся ацадассусс сзасдоадсся песисесесче 1745 спицоасассоа данчзайдаа зазазазава яазаввназава азавазваваа азазвавнана ї800 зазвазазаз заазаададая зндсацессо сесссксссс сессссоссс сссссссаза 1860
Чдасисивнцис ададссасса уавии 1885 «аб» 75 «і» 1596 «КРИ» ВНК
213» Штучна послідовність кад» «В23» МАаЕ-Сі Сава 5Б13-11423 Ср5 5С-оптимізована «005 25 апасадносс сдспосадад сдлддачннє сададсиссс насададесс єдоднесацє 6О пусваснсса дсасссссиє садссцсссо сададсинес єсдадиєсяд ссеадвсссоє 120 сссодадчасс содчиссадад сссоссцосає цсоссосача дссссссодпа заодаводсає 180 исссададес сссцосадис ссессовдадс псосссдацо осовадасис ссисвасссо 240 спосавадацес сесадисссос псидодавдоає даддасадсс псиссаусси дсасцусссе 00 тадчцссссує ссдадидода одасадсосцв адсссссмос асциссссса днисссосос 360 сзпадосдадоа асписсадис садссцчосаа исссссдивда савсипдсис садсиссасо 420 зоссидисос чоєсссадая сушсесдова чссссссада дессясссоа доддссчася 480 садцессссс посадсоссє соцдадснсс чисцисадси асасссидає сисссиссЧя 540 садвоснссє асдададсос Зсададсссо сссдвддасс єсеасссадцє сесдсидсай 50 адсессдиди ссадснисоє снссадсаєє песадемиссс псадссадиє садссссав обо шесадснисс сауссадсає сиссбадсисс судаосваада дсисссесда дадсессссив га садиєссссд чависадсени сисбадсисє асєдадссьсю ссссдписад сєдасуависе 780 адсисссссй псдасдадна сассадсинсс адспасассс паспозавис сдасадеєсиє 84о зосазсиссо аозассцааи спадарсаза ссссидниса єсиасасоси свасоазаває 900 зчзнодасвзоає чадессоани ссидсвссид дадцаесада зозадсвоєс сзисаєсаав 960
Зссдадачеає чдассзасоий сансисессає часассдас) асвшессааі давсишессов 1020 аайосоєдсю адишесвисяа дайсснсвис додайсадес насадазади зддассссдає 1080 двсисснасо шсуцсдчоаа сасудсидоас сесассядсо задасядеси диссдаєцає т14о своадодЧаноа пдссадзаєсо сснодсисацс счдайссьои ссансансоч саисавоЧає 1200 ассцасосса дсозоддадучи саспоюдає дидсиспссо дависоосои. дсдддесоде 1260 содсовоусаси псосецисдо пдадсесссдо дадсносида ссавадчисно доапдсаадач 1320 стасчассися адрассосда пдпасссаає адсисссосос сссороцасда дииссионоє 1580 цдасссссдсЯ сесасадєда ддисацсава сдозадоцод пдозоцнсси досуачосис 1440 задавсаєда чсоєссацсвс сушсесудисс адсрасавада асассстваа двасозодає 1500 паасадасес ажассацєви суасассаєс часоасисса соддссвссча свасасасс 1560 засиссецох повассссва суисиссадс дадзноа. 1596 «КО» 26 «кі» 16 квідз РНК «вї3» Штучна послідовність яке» «?в3»У Послідовність згідно з формулою сте)
каоО «гії» інші особливості жайр» 513..41) «23» поє а, м, Ж, д та б, або його нуклеотидний аналог «20 «РРїз інш особливості жидоз 433..83 «га3» в''є а, ц, ї, 9 та с, або його нуклеотидний аналог ких «Реїх інші особливості «вва СНО.) «2835 в'є а, ч, ЖЕ, б та с, або його нуклеотидний аналог «ой» «1» нші особливості «багж 163.16) «223» п'є а, м, її, ч та с, або його нуклеотидний аналог «300» 26 падапвппавпило пис їб «5 77 жирі» 26 «йї25» РНЕ «йіЗ3» штучна послідовність каоО» кг28» Послідовність згідно з формулою (тс)
ке?» кки?і» інші особливості «Во» КІ... (2 жка2З» є 8, п, Ж, д та є, або його нуклеюотидний аналог: може бути присутнім або відсУтнім «20 «РРїз інш особливості жидоз 433..55) «гі» поє а, й, ї, уд та с, або його нуклеотидний аналог ких «Рвїх інші особливості «во» С8).,.513) «2835 в'є а, ч, ЖЕ, б та с, або його нуклеотидний аналог «ой» «ййї» ні особливості «йо 153. .113) «223» п'є а, м, її, ч та с, або його нуклеотидний аналог «их хрдї» інші особливості «ййй» (213..(94) хРоЗ» п'є а, ч, Ж, З та с, або його нуклеотидний аналог ки «21» інші особливості «ваз Ке51. КВ) «23» п'є а, у, Ж, д та є, аба його нуклеотидний аналог: може бути присутнім або відсутнім. «ОП У ппапплявпй. ппИацепопає ппопопй 2 «в» 28 «а» 16 ко» РНЕ «213» штучна послідовність «Др же23» Послідовність згідно з формулою (т) ких «Рвїх інші особливості «ваг» (13..51) «2835 в'є а, ч, ЖЕ, б та с, або його нуклеотидний аналог «ой» «ййї» ні особливості «веж 33..08) «223» п'є а, м, її, ч та с, або його нуклеотидний аналог «их хрдї» інші особливості «Ййй» (103..(14) хРоЗ» п'є а, ч, Ж, З та с, або його нуклеотидний аналог ки? «21» інші особливості «йде» 361..515) «йе3» поє а, мч.
Ж, 9д та с. або його нуклеотидний аналог «ОО» 278 пепоопзивий поппда 16
«10» 279 «211» 25 кеїй» РНЕ каз» Штучна послідовність «20 «Р23з поспідовність згідно з формулою (тт) кох «гаї» інші особливості «Риф )3..2 «223» п є а, ч, її, 9 та с, або його нуклеотидний аналогі може бути присутнім або відсутнім. «ой» «ййї» ні особливості «ай» 33.56) «223» п'є а, м, її, ч та с, або його нуклеотидний аналог «их хрдї» інві особливості «Ййй» С8)..013) хРоЗ» п'є а, ч, Ж, З та с, або його нуклеотидний аналог ки «21» інші особливості «ваз КІ151..515) «йе3» поє а, мч.
Ж, 9д та с. або його нуклеювтидний анапог «Рв
«Рі» інші особливості «рр» (243..4233 «23» поє а, п, її, З та с. або його нуклеотидний аналог каоКр» ка2ї» інші есобливості «Ро» «243..(26) «223» же, и, ж, о та Є, або його нуклеотидний аналог; Може бути присутнім або відсутнім «Ой» 29 подвивсвав паполипипо пивипе 26 «05 50 «11 16 «212» РНК «213» Штучна послідовність «вх «283» Послідовність згідно з формулою (те) хадОо» «Ре1» інші особливості кайй» 433:.8) «23» п'єса, чн, т, дЧ та с, або його нуклеотидний аналог «а? «ді» інш особливості «Во» 101.14) «ад3» п'є д, з, Ж, д та с, або його нуклеотидний аналог «Оп» 30 дайпопппий. ппвппсй 16 «й105 31 ке1їз 26 каії2» РНК «213» штучна послідовність «Др же23» послідовність згідно з формулою (те) «двох «Реїх інші особливості «вве» 513.,12) «2835 в'є а, ч, ЖЕ, б та с; або його нуклеотидний аналог: може бути присутнім або відсутнім «вх «281» інші особливості «вда 3... «Ро» появ, п, Ж, ч та с, або його нуклеотидний аналог «йо» крої» інші особливості «йди (83... хи?З» йоє а, з, Ж, до та є, аба його нуклеотидний аналог «ЙО» «К2і» інші особливості «йде» ї51..519) «283» Ма, цу, ж, б та с; або його нуклеотидний аналог
«ДИ» «в?» їнші особливості хади» (29)..4(23) «223» прє а, п, Ж, до та с. або його нуУклеотидний аналог као» «221» інші особливості «й? 241.6 «Ре3з тож а, ч, Ж, д та с, або його нуквеотидний аналог: може бути присутнім або відсутнім жа 51 поппопдопвпа. папипппвис.
Вивлппп 25 «2105 52 «211» 16 «212» ВНК «213» Штучна послідовність «ВХ «223» Послідовність згідно з формулою (ІТ) «йо» крої» інші особливості «йорж КО хи?З» йоє а, з, Ж, до та є, аба його нуклеотидний аналог «ЙО» «К2і» інші особливості жавдР» К33..С83 «283» Ма, цу, ж, б та с; або його нуклеотидний аналог
«ДИ» «в?» їнші особливості кий й» У)... 83 «223» прє а, п, Ж, до та с. або його нуклеотидний аналог као» «221» інші особливості «222 Т01..410 «Ре3з тож а, ч, Ж, д та с, або його нуклеотидний аналог «рейх «Рі» інші особливості «до» 521..412 «23» вжа, ци, Ж, та с, або його нуклеотидний аналог «век «2В1» інші особливості «гад 34)... «вйи3» п'є ва, М, Ж, й та с, або його нуклеотидний аналог «220 «ді» інші особливості «вай» 16)..516) кхРоЗ» п'є а, з, Ж, Я та с, або його нуклеотидний аналог «й» 32 пойрууапий зпайсе ї6 «ДО» 33 «йаі» 76 каі2» РНК 215» Штучна послідовність
«ДИ» же?З» послідовність згідно з формулою СТІТ) кедр ка2ї» інші есобливості «Род» К13..(23 «223» же, и, ж, о та Є, або його нуклеотидний аналог; Може бути присутнім або відсутнім «рейх «Рі» інші особливості «во 33..563 «23» вжа, ци, Ж, та с, або його нуклеотидний аналог «век «2В1» інші особливості «гад» 83... 83 «йи3» п оє а, м, Ж, й та с, або його нуклеотидний аналог «ВХ «ді» інші особливості «вай» 123..513) кхРоЗ» п'є а, з, Ж, Я та с, або його нуклеотидний аналог «Кр «йдіз інші особливості хр?й» (153..5153 «23» їй а, п.
Ж, 9 та с, аба його нуклевтидний аналог «вод» «айї» іншт особливості «аа» х171..ї171 «Рв3»У поєд, ч, Ж, уд та с, або його нуклеотидний аналог ке?» хаифі» інші особливості «Во?» КЩ935..519) жка2З» є 8, п.
Ж, до та є, або його нуклеютидний аналог «Дух «221» інші зсобливості «РР?» (211..423) же23» поє а, з, Ж, б та с, або його нуклеотидний аналог кох «Її» інші особливості «Риф 943..4526) «ВЗ» прє а, ч, ї, ч та с, або його нуклеотидний аналогі може бути присутнім або відсутнім «00» 33 влиппповру упрупупайс вапивби 25 к2ї10» 34 «11» 16 кат» РНК 213» Штучна послідовність ки «223» Песпідовність згідно з формулою сто каоО» жа?2І1» інші всобливості «во 53..С1
273» п'є ва, ц, Ж, з та с, або його нуклеотидний аналог «Ед «й2і» інші особливості жкарр» 83..(83 «23» поє а, м, Ж, д та б, або його нуклеотидний аналог «пох «Д21» інт особливості жидоз 361..016) «гва3» поєа, й, ї, уд та с, або його нуклеотидний аналаг «00» 34 попууудвив авгісп 16 «240» 35 «211 26 «212» РНК «2135 Штучна послідовність «вах «223» Послідовність згідно з формулою СІЯ) «Кр «йдіз інші особливості ккЕйй» К1..(23 «23» їй а, п.
Ж, 9 та с, аба його нуклеотидний аналог; може бути присутнім або відсутнім каоО» жа?2І1» інші всобливості «вих 3). .6
273» п'є ва, ц, Ж, з та с, або його нуклеотидний аналог «Ед «й2і» інші особливості кари» КІ133..(13) «23» поє а, м, Ж, д та б, або його нуклеотидний аналог «пох «Д21» інт особливості жи? 2..Ки3) «гі» поє а, й, ї, уд та с, або його нуклеотидний аналог «двох «Реїх інші особливості «рад (24) ..253 «2835 в'є а, м, Ж, б та С, або його нуклертидний аналог: може бути присутнім або відсутнім «Ох «А» інві особливості «йайж 426)..596) «223» Може бути присутнім або відсутнім кл» 35 побпаповуу. удпивабтеас: лопаий 7 жи» 3б «пі» 16 «2125 РНК «вї3» Штучна послідовність «кох «?в3»У Послідовність згідно з формулою ст)
«400» зо допусидуци азгрсє 16 ка» 37 «її» 26 «йї9 РНК «?13» Штучна послідовність «вах «Р» послідовність згідно З формулою (СІТй) «ви» «га» інші особливості «вд 1.0 «223» п'є а, й, Ж, Ч та с, або його нуклеотидний аналог; може бути присутнім або відсутнім «ВХ «ді» інші особливості «Рой» 23.58) х223» Може бути присутнім або відсутнім «Кр «йдіз інші особливості хр?й» (253..(25) «23» їй а, п.
Ж, 9 та с, аба його нуклеотидний аналог; може бути присутнім або відсутнім каоО» жа?2І1» інші всобливості «Рв Р БІ..26)
2932» Може бути присутнім або відсутнім «3005 37 піпазпаолує пЯупвазиисє суприй 26 «210» 38 «Ії» 16 «2125 ДНК -г13» Штучна послідовність кох «РаЗх Послідовність згідно з формулою (тс «490» 38
Т9УУУУНЬЕВ гУумеов 16 «10» 39 «21 16 «2312» дик «2ї3» Штучна послідовність хадОо» «23» послідовність згідно з формулою (Іс) «4005 39 «дууУксутт акггс5 ї6 «ЛО» 4й каз 16 «2175 ДНК «ВЗ» Штучна послідовність ке?» «23» поспідовність згідно з формулою ст) «005 ай «цусеттст адгеез 16 «ЛО» 41 «ії: 16 «212» ДНК «7183» Штучна послідовність «ех «23» Послідовність згідно з формулою (т8е) «ой» «ййї» ні особливості «ай С33..553 «223» п'є а, м, її, ч та с, або його нуклеотидний аналог «их хрдї» інші особливості «Ййй» (73. .С8) хо» п'є в, чу.
Ж, З та с, або його нуклеотидний аналог ки «21» інші особливості «йде» 121..114) «йе3» поє а, мч.
Ж, 9д та с. або його нуклеювтидний анапог «ВО» 41 додпопбивев мапасй 16
«10» 42 «йї1» 16 к2125 ДНЕ каз» Штучна послідовність «20 «223 поспідовність згідно з формулою (те) кох «гаї» інші особливості «Риф 3)..53 «ВУ» прє а, ч, ї, ч та с, або його нуклеотидний аналог «Ву» «221» ін особливості «вий 133..514) «бйиЗ3» п'є а, ц, Ж, п та с, або його нуклеотидний аналог «дб» 48 гайппуУВош гапрсу 16 «230» 43 «З 16 хи?» ДЕ «йї3» Штучна послідовність «оо» кйд3» Поспідовність згідно з формулою сте
«ДИ» «в?» їнші особливості кий й» 53)..533 «223» прє а, п, Ж, до та с. або його нуУклеотидний аналог кг» «Рйї» інші особливості «22? 341. .414) «Ре3з тож а, ч, Ж, д та с, або його нуклеотидний аналог «4005 43 гапабвувуєв сапису 16 «0» 44 «11 16 «212» ДНЕ «213» Штучна послідовність «вх «223» Послідовність згідно з формулою: (т) «00» 44
ЧОУУУКУВВ кукгср 16 «ДО: 845 жи» 16 «1925» ДНК «йіЗ3» штучна послідовність каоО» кг283» Послідовність згідно з формулою (ІТ)
«00» 45 задууєсттуєт адек ї6 кЕїО» 836 кгїї» 16 «Рі» ДНК «213» Штучна послідовність жи?» «раї» Послідовність згідно з формулою (ТТ) «00» 46 заУуУстттів адггсе 16 «0» 47 «211» 16 «2127» ДНК «2135 Штучна послідовність ка дОох «23» Послідовність згідно з формулою (Т9) «00» 47
Зздууєсттут адгесе 16 «10» 48 «їі» 16 «12» ДНК киї3» Штучна послідовність «ру
2932» Послідовність згідно з формулою (То) «900» 88 дасусесути адгосс 16 «210» 4 «Ії» 16 «2122 ДНЕ -г13» Штучна послідовність кох «РаЗх Послідовність згідно з формулою сто «490» 49 пасссттттш адгосе 16 «10» 50 «21 16 «2312» дик «2ї3» Штучна послідовність хадОо» «?23» послідовність згідно з формулою (ТП) «005 50 аапустауєи авггсс 16 «ЛО» 51 каз 16 «2175 ДНК «ВЗ» Штучна послідовність ке?» кК?З» поспідовність згідно з формулою СТР) «00» 5 часУусЕстс адгосс 16 «ЩО» 52 кеї1: 16 «12» ДНК «7183» Штучна послідовність «ех «23» Послідовність згідно з формулою (ТНБ) «400» 52 пдсУустектв адгосс 16 «210» 53 «кгїї» 26 кеїй» дик к2і3З» Штучна послідовність «Во «2235 послідовність згідно з формулою (Тс) «ЙО» «К2і» інші особливості жд» ЖК3..193 «283» може бути присутнім або відсутнім
«ДИ» «в?» їнші особливості «ВИ» (253..(26) «223» прє а, п, Ж, до та с. або його нуУКпеотидний аналог: може бути присутнім або відсутнім «400з 53
Нриіуувууу УавенеУУтс. БУВ 765 «105 54 жиїї 26 «212» ДНК «23» Штучна послідовність «век -2823» Послідовність згідно з фармулою (СТІїс «вх «281» інші особливості «ойй» К11..(23 «Ро» може бути присутнім або відсутнім «во» крої» інші особливості «йди К253..28) жхи?3» може бути присутнім або відсутнім «005 54 шт заууу Ксуктаєинс зиСВАЙ ав «и 55
«1» га хеїо» ДНК ккіЗ» Штучна послідовність каоКр» кв23» поспідовність згідно 3 формулою (СТІ) «Др же» інші особливості «рад» К)..2 «Тг3» може бути присутнім або відсутнім «ех «йвї» інші особливості «гою 25). 26) -223» може бути присутнім або відсутнів «ОП» 55 шттптодуує кет ттадєес. заст 26 «о» 56 «рії» 26 хай» ДНК «213» Штучна послідовність ки «223» Песпідовність згідно з формулою (їте) каоО» жа?2І1» інші всобливості «вх 53. .2
273» п'є ва, ц, Ж, з та с, або його нуклеотидний аналог; може бути присутнію або відсутнім «оо» жа?і» інші особливості кадо» 433..553 «РйЗ» поє а, п, т, д та с. або його нуклеотидний аналог «Др же» інші особливості «гей» К83.,.510) «РІ» й'є а, ц, Ж, д та є, або його нуклеотидний аналог «ех «ввї» інші особливості «во 19)..5133 «283» п'є а, ц, їх, д та с, або його нуклеотидний аналог «Ох «А» інві особливості «дайж 417)..5193 «223» й є а, м, їх, д та с, або його нуклеотидний аналог хадОо» «Ре1» інші особливості хрой» 4293)..122) «23» п'єса, чн, т, дЧ та с, або його нуклеотидний аналог «а? «ді» інш особливості «Во» 241.25) «а23» п'є д, з, Ж, д та с, або його нуклеотидний аналог може бути присутнім або відсутнім
«00» 5 тівппдадпваи бапєвбупиавес плйппвп 26 ка105 57 каїї» 25 «Рі» ДНК «213» Штучна послідовність «их «раї» Послідовність згідно з формулою (Іте) «ех «йвї» інші особливості «Рв 513..(1) «223» п'є а, ц, Ж, ду та с, або його нуклеотидний аналог: може бути присутнім або відсутнім «вх «281» інші особливості «дам ї2..3 «Ро» й оя ов, п, Ж, ч та с, або його нуклеотидний аналог; Може бути присутнім або відсутнім «Кр «йдіз інші особливості
Ей» К53..(53 «23» їй а, п. Ж, 9 та с, аба його нуклевтидний аналог «2 «айї» іншт особливості «ва» 83..5103 «Рв3»У поєд, ч, Ж, уд та с, або його нуклеотидний аналог
«а?» хаифі» інші особливості «Во» К83..19) жка2З» є 8, п.
Ж, до та є, або його нуклеютидний знавпог «ай «221» інші зсобливості «РР?» (24). .424) же23» може бути присутнім або відсутнім кох «Її» інші особливості «Риф 953..426) «ВЗ» прє а, ч, ї, ч та с, або його нуклеотидний аналогі може бути присутнім або відсутнім «00» 5 вайбировпо УдДрасапвис УарлвА 25 коеї0» 58 «11» 76 хай» ДНК 213» Штучна послідовність «оо хи?З» Поспідовність згідно з формулою (їте) «вод» «айї» іншт особливості кар» 13..013 «223» п'є а, ч, Ж, 9 та с, або його нуклеотидний аналог; може бути присутнім або відсутнім каоО «й2і» інші особливості карр» 23..123 «223» може бути присутнім або відсутнім «20 «Д21» інт особливості жидоз 83..83 «гі» поє а, й, ї, уд та с, або його нуклеотидний аналог «двох «Реїх інші особливості «во» 5193... 518) «2835 в'є а, ч, ЖЕ, б та с, або його нуклеотидний аналог «ой» «1» нші особливості «йо 24)... 26) «223» може бути присутнім або відсутнім «ЩО» 58 айбіегапав увуєагсайте успвий 26 «ДО: 595 жирі» 26 «1925» ДНК «йіЗ3» штучна послідовність каоО» кг28» Послідовність згідно з формулою (ТІ)
ке?» хаифі» інші особливості «Во» КІ... (2 «223» може бути присутнім або відсутнім «ай «221» інші зсобливості «ВР» 253.25) же23» може бути присутнім або відсутнім кох «Її» інші особливості «Риф 953..426) «ВЗ» прє а, ч, ї, ч та с, або його нуклеотидний аналогі може бути присутнім або відсутнім «400» 59
БітешУудууу суртасмеес БуУВИНА 25 коеї0» 60 «112 26 хай» ДНК 213» Штучна послідовність «оо ха?З» Поспідовність згідно з формулою (СТ) «вй0» «айї» іншт особливості аг» 513..123 «223» може бути присутнім або відсутнім ке?» кки?і» інші особливості «вар» 253... 25) «223» може бути присутнім або відсутнім «00» 60 што дуує Ссуєтависс 5МСОйЙ 765 «2105 61 жиїї 26 «212» ДНК «23» Штучна послідовність «оВух -2823» Послідовність згідно з фармулою СТІТ) «вх «281» інші особливості «ойй» К11..(23 «Ро» може бути присутнім або відсутнім «аРО» крої» інші особливості «йди К253..28) жхи?3» може бути присутнім або відсутнім «аО05 61 шен зауує КесЕпваєис заснті ав «и 62
«1» га хеїо» ДНК ккіЗ» Штучна послідовність каоКр» «23» поспідовність згідно 3 формулою Сто) «Др же» інші особливості «газ 513..23 «Тг3» може бути присутнім або відсутнім «ех «йвї» інші особливості «ово ї24)..253 «283» п'є а, ц, їх, д та с, або його нуклеотидний аналог: може бути присутнім або відсутнім «вх «281» інші особливості «дай» 5263..5263 «Ро» може бути присутнім або відсутнім «ОО» 62 приаяовуус ттутнадеке сивини аб «105 63 «иїі» 25 «12» ДНК киї3» Штучна послідовність «вх
«РиЗ» Послідовність згідно з формулою сттЯ) «в20» жа?і» інші особливості кадо» 4135..193 «223» Може бути присутнію або відсутнім «Др же» інші особливості «йог» 5253..(25) «Тг3» може бути присутнім або відсутнім «Ой» 63
Бипзанцосує ссуттавкоасє смспйй 26 «910» 64 «211» 26 «9125 днк «213» Штучна послідовність «их ха2З» Послідовність згідно з формулою (Ста) «Лех жа?ї» інш особливеасті «йййз 533..23 «пдЗ» може бути присутнім або відсутнім каоО» «Рі» інші зсобливості
«Вйй 23). «293» може бути присутнім або відсутнім «400» 64 яшазнвуосіс Кг Етачнос спсутТИ 26 «10» 63 «Кі» 26 «г125 ДНК «РТ3» Штучна послідовність ких «Раї» Послідовність згідно з фармулою СТІН) «Ву» «221» ін особливості «ий 13..0 «йїЇ» п'є а, м, їх, 4 та с, або його нуклестидний аналог; може бути присутнім або відсутнім «их хрдї» інші особливості «Ййй» (23,..(2) хроЗ» Може бути присутнім або відсутнім ки? «21» інші особливості «ййв» 241.24) «23» може бути присутнію або відсутнім кг» «22» інші особливості хейр» (25),.425) жРРЗ» п'є а, ч, Ж, Ч та с, збо його нуклеотидний аналог; може бути присутнім або відсутнім каоКр» ка2ї» інші есобливості «Род» (283..(263 «223» може бути присутнім або відсутнім «40п5 65 ппавпадвує Кауєназнкос смВрий 26 «210» 66 «211» 76 «е125 ДНЕ -213» Штучна послідовність «Ох «ИЗ» Послідовність згідно з формулою СІТА) ка хрдї» інші особливості хай 13:23 «223» Може бути присутнім або відсутнім «а? «ді» інш особливості «Во» 241.24) кйд3» може бути присутнім або відсутнім «ру
«Рі» інші особливості хррй» (253..4253 кР2З» поє а, п. т, З та с, або його нуклеотидний аналог; може бути присутнім або відсутнім кг» «Рйї» інші особливості «й? Р. . Ки «223з може бути присутнім або відсутнім «1005 66
Краатодсує СЕКТ пайносє суУТУНЯ 26 «05 67 «Тр 26 «212» ДНЕ «213» Штучна послідовність «вх «283» Послідовність зкідно з формулою ГІТН) ха» «Ре1» інші особливості кайй» 413 :.2) «223» Може бути присутнім або відсутнім «20» «вії» інт особливості «й» 241.28) кйд3» може бути присутнім або відсутнім «ОП» бу
Ниазазоасує ТЕЕтТадгос стуУЙИ за «210» 68 ке» 13 ко» РНЕ «213» штучна послідовність «20» 23» послідовність Козака кад» 68 пссдссаєса пай 13 «2105 69 «-211Т» 15 «фіг» РНК «213» Штучна послідовність «ВХ «223» загальна формула 3-МТЕ стабілізуючої послідовності «ого» «рої» інші особливості «йорж КО жха»З» п'є с аво й «во» «й2ї» одиниця повтору «йде» К85)..53 «28» М'є а, цу, ж, б; або сії може бути присутнім або відсутнім
«ДИ» «в?» їнші особливості кий й» 53..553 «223» пе а, им, ЖЕ, 9, або с као» «221» інші особливості «раз КО): «223» п є а, або «рейх кИйаї1» одиниця повтору «до 0. «23» вже або чу, може бути присутнім або відсутнім «век «2В1» інші особливості «гад» 4303..110) «223» поє с або «220 «22ї» інші особливості «вай» 133..513) х223» п'єс або ци «00» 69 пессапесспи цуспсс 15 «05 70 «йаії» 44 каі2» РНК 215» Штучна послідовність крах «223» 3 -уТЕ гена альфа-глобіну (иа) «41005 70
Зсссоанува ссечессаасоу доасесуссвє сссвссонас асса 44 «2105 71 «21» 24 же12з ДНК «РТ3» Штучна послідовність «пвх «ди3З» послідовність «стебло-петляж специфічного гістону «005 (71 тавацостстї ггІсвавоасс асса 28 «105 72 «21ї» 24 кої» РНК «213» Штучна послідовність «ей» хр?З3» Послідовність «стебло-петля» сленифічного гістону «00» 72 сававдасиси пписаЗадесє асса да ки10» УЗ «11» 59 «ТИ» РЕТ
213» Штучна послідовність каоО «223» Похідний від МІСІЇ пептид кап» 73 чес АТа Ркго Ар Ап Аго Рго Аїа Ген ї 5 кий» й «вії» 8 «212» ВВ «213» Штучна послідовність «Ву» «223» похідний від конексину пептид «-4005 74
Рпе ої біп деп Те АТа біб рРго 1 5 «230» 75 «пз 420 жиї?» РЕТ «йї3» Штучна послідовність «оо» же» 514 Білюк МР: 001159864.1 «ОП» 75
Меє Рго віу біЇу Суз 5ег Аго б6іу Рго Аїа Аза 51у дер Ту Аго 1 еи 1 5 10 15 дкга сен Аа Аго ев АТа їемн ма! ву їй) бу Тер Уа! бег бег век щІ3! 25 36 зег Рго Так о5егк бек Аїа Заг аг Рпе бег бек об5ег АТа Рго РпЄ Ген
Аїа бег Аіща Уа! бек Аїа бів Рго Рго їец бРго Азроб1в Суз Рго Аїв 6о
Сей Суб ій Суя зеє сі Аїа Аїза Аго те Уа! руб Суб маї Аа АгОо 65 7о 75 що
Азп бе тб єї Уа! рРго ТвВг о Азр оГец Рго дій туг Уаї Аго А5п Гей 85 90 55
Рйпе ен тик біу дсп бій ей Аїа Узі тен рго АТа б1у Аа Ре Аа 100 1905 110
Ака Ак Рго Рго гей Аа бій їеч АЇа АЇїа ге Ап гей Чег іх бек 115 120 125
Ага Беч Азр обід Уаї Аго Аза б1у АЇа Ре бїЇш Ніз Гей Рго чего г ви
130 135 15
Ага сіп бен дер бен Зег Ні А5а Рго їєц Аа Ар Сей о бЗег рРроа Рве 145 150 155 160
АТа РйЄ бег біу бек дп Аза б5ег Уа! б5ег АЇа Рго бек Рго Бей Уа 1655 170 175 зіц рен тів во д5а нів ті Уа! РгО РКО бій Ар сів Або сій Ази 180 185 190
Ага бег Ре сії сбіу меж маії ма! АЇз діа без ів А1а біу Аго АЇа 195 200 205 іо бій чіу сей Ака Ага Сен бід сез Аїд бег Азп Ні Ре еп туг 210 215 280
Ге Рго Ага АБроуа! ів АЇвз бій Сеу Рго чего ген Ага Ні ред А5р 225 230 235 240 їец бек Аза Ап его оїец ма)! бек їй Тк Туг Маї б5ег Ре Ага Авп 245 250 255
Іеи тйг нНіб тез біз 5ег огбецй Ніх Гей бів Ар Ап Аїа ей вух Уві 250 255 270 їеци Ні Ап бу те о їец АТа біб беб біп сіу гай рго Ніє ї1е Ага 275 280 285
Уаії Рпе їен одер Ап АБИ РКО ТироМа! Су5 Ар о сСуз нНіз Мек АТа Ар 298 295 З00 мес уа! таке тгто без Гуз зіш Таб біз Ууаї ма? 613 віх уз Ар Ага 305 з10 315 320 цен тВг Суб Афа тує Рго біц ду5 Меб Аг АЗИ Аго маї еп Бей си 325 з30 335
Гей Ап бек діа Азр обер ар Суз Ар оРГО І1е фен Рго Рро бер гей 340 345 350 бів тигобЗек тує Уа) Ре Ге бі тіе маї Гец Аїд зей ті с1у Аїа 355. 360 за5 їїе Ре єн ієц ма?ї Гей Ту гей АБО Ага іу5 сіу Те рух вух Тер 370 375 з8о0
Ме НТ Ап тіє Аго А5роА1а Суб Ага Ар ніз Ммеї 61 біу Туг Ні 385 390 395 400
ТУР Ага Тут біц ті А5п Аїд Або Рго Аку бец Тиг оА5и Бей Заг бег
305 410 415
Азп зЗег А5р Уа 420 «0» 76 «РЛЇ» 147 жеї2з РЕТ «РТ3» Штучна послідовність ких «23» Сурвівін СВІЯСО) Білок 315392 «4005 Д 76 мек б1іу Аа Рго Тс Се Рго РКО АТа тТеросійп Ро Ре рец уз дер 1 5 10 15
Ніє Ака Іі чег тпге РВЕ Гу Ай Тер о рго Ре рек біч с1іу сує Аїа 25 25 20 сує Тк вро бін до Мет Азїа іш АТа біУ Рпе їі Ні Сує вро ТЕ іч Аза бін Рго Аброіец АЗіа бій Суз Ре Ре о Су5 Не бу сім 1 ен -60 сій о1у Тгробіц Рео Ар о Авр Ар о Рго Тіє ЄЇш бів Ні Бу5 Бу Ні
65 78 75 80
Зег бек біу суз Аїа Ре іеци 5ег Уа! іїу5 губ бій РПпе бій сім Гец 85 90 95
ТЕ реп оіу бій РНе гей г у5 рен Ар оАКу біб Або АТа бух Авп ог ув о 105 110 те АтТа суз бід тик АБИ АЗп ої У5 ру5 суз біб Ре бі вій те Аїа 115 120 125
Муз уз Уа! Ак9 Ако Аіа Тіе бій 5іпогбец Аіа Аїіз Меї Ар 130 135 140 «210 77 «її» 142 «ит» РЕЖ к2і3З» Штучна послідовність «Кр «223» Сурвівін (ВІйС5) Білок МР 0011592 «4005 77 мех о1у АТа Ро Тпгогец Рго ргао Афа тер бій Рго РБе Бей туз др ї 5 10 15
Ніз Ага І1е зег Те Ра і у5 Ап о ТрРроРгГо РА ген бій соіу сСуз ДІВ 20 25 ЗО су тТВг орРго бів аку Межх Аза біб Аа сіу Рпе т1е Ніз Сує Ргра та 35 40 45 січ Ав біб Рго дер Гей Аїа бій Су РВЕ РМПе Суз Ре Гуз бій Гец 53 бо зіш с1іу Тероеїй Рго АЗзроАбр АБО Рго Т1іе сій св Ні Гбуз г у5 НіЗз 65 70 75 80
Зек 5ег а1у Су АТа бе сен зегомаї їу5 уз аїп Ре би си Гей 85 Зо 95
Тк овє) Ту «ій Ре Сей губ без Ар оАго ій Ага Аїа Суз Азп Гу 150 105 110 116 Аїа Суз бій ТВгоАБИ АЗИ гу руб Гуз бій Ре бій бій тпг Аїа 115 170 125 сій губ УВІ Ага Ага АТа те січ біп те Аа Аївз Мек д5р 130 135 іо «10» 78 «вві» 180 хрір» РЕТ «2і3» Штучна послідовність «в20» кайЗ» МУ-Е5О-1 Білак МР. 001318.1 «400» 78 мек сів Ав бів біу Аг іу тс обіУу біу бек отпг 51у А5ЗроАїа Ар 1 5 10 15 зм Рго бу біу Рго біу ті Рго Ар Сіу Рко с1у 01у А5п Аа с1у
КУ, с1іу Рго ау аіц АТа б1у Аза тпг оту с1іу Аг аїу Вго Аго бі Аїа бі Аїа АТа Аго Аїа бег о біу Ркго б1у «Ту щі1уУ АЇїа Рго Аго б1у РгО 50 ніз сіУу 5іу діа діа 5ег б1у Гей А5п сі Суз Су Аго Суб сіу АЇа 65 70 75 50
Ага бу Рго бід бек Аго їец тез бід Ре тує ге А1а Мет Рго Рпе 55 зо 95
АТа ТИР Рго Меї бів Ата зіц Гей АТа Або Аго бек Гей АТа сій Азр 100 105 11 діа рго рРго їец Рго ма! Рко б1уУ Уаі бен їей уз бім Бе твгомаї 115 120 125 вет бу деп тів бе) тВг о т16 да Бей тик Аїй Аїа д5ронНів Ака сів 1389 135 140
Геч бій сей бек тіе чего чек Суз гер біп біп гбев зек обей Бей меж 145 155 155 160
Тер Те тБг сій Суз Рпе беу Рго Ма! Рбе сей Аїа сп овБго Рго бек 165 170 175 о1у Ти АКЯ АгОо 180 «10» 79 каїї» 1142 хо1й» РЕТ «213» Штучна послідовність ки? «й23» МАспЕ-СІ1 Білок МР 005455. «400» 79 мет СТУ Ар оіУуб Ар Мет ро Тпг оАЇа сб1уУ Меї РГО бек Бей грец їй 1 5 НК; 15
Бек Бек о зЗзег біц 5ек Рго бій бБег Суб Рго бій біу біз А5р зег бів 70 25 30 чек реа во бів тів Рго дій чего бег рРго бі) бек дер Ар Тиг гей 35 40 45 тур Рго Ген біп бек Рро віп зеб Аго 5ег біз 61у бі А5р чес 5ег бо
АЮ РгОо сей біп Аг Рго Рго бій бу су А5р обег бів 5ег Рго Гей 65 70 75 й бій тів Рго сій ЗегобЗег рРго бій бу Азр Абзротаг біг обег РгОо Гей 85 90 95 ой Ап о Зег біп бЗег бег Рго бід сіу 1у5 Ар бебі бег Рго Ге 100 їо5 1 «іш ї1е бек обіюв Зег Рко Рго Ти б1у 610 а45р Маї бІй бег Бго Гей 115 120 125 чЗійп Аба Рго діа б5его5ег РБе Ре бего бак Аїа єн о їеи беб їїє Рае 159 135 140 б1п бе бе Рро бій бег тТнг обіп бек рго пе би б1у РНе рРго СТ 145 150 155 160 зак Уа! іен бій тів Рго Уаі бег Аїа Афа бек бай бе тнє Бей УВІ 155 170 175 зег ІТе Ре біп бек бЗег Рго бій бег Тиг бій 5ег о рго Ре с1й о1у 180 185 190
Ре Рко бій бег Рго Ге) бів їі Рго Уаї бек Аго зак о рРНе 5ег 5ег ї95 200 205
ТНК бен рей чет ті Ре біп бек обег Рго сій АгЯ тйкобів бер тВе 215 ий
Ре бін шіу Ре Аїд сій бег о Рко Ге бІйп сів рРко Уаї бек Рко 5ег 2925 239 235 240 бек бек бек Пр Беу Гец бег гей Ре біп 5ег Ре 5ег їй Арго Тит 245 250 255
Зіп бЗеє те о Рпе бін сбіу Рпе АТа біп бек б5ек рез біп ТТ6 Рга ув! 250 265 270 аг Рго бег Ра бек баг тб о їаи Уа! бег рез Ре бій его хеаг о рго
275 2890 285 сі Ага Тгобій бек те Ре бій біу РВе Рго біп бек Рго Бец бів 290 295 з00
ТІІе Рго Уаї 5ек бек бек бЗег баг бек Так оїец Ге) бек Гей рРпе сіп 305 зід з15 376 ч«аг зЗег рРго бій Ага тйг о Ні б5ає таг Ре бі б1у Ре вро сій бе 325 330 335 уец ген дій тів Рро Меб їйг бег бег РНе бЗег бе тТиг беи ге 5ег 340 345 350
Те РНе чЧій Зег бег рРгГо 619 бег АТа сіп о Зег тас вве бід с1у РНе 355 550 365
Рго бів чего Рго ген біп ліве Рго біу бЗег о Бко бес Ре бег бек ТпК 370 375 зво їеч бен 5ег осей Рпе бій бек бек Рго 51 Або ївгоНіз б5ег Те Ве 385 390 395 490 іч бу Ре Рго біп 5ег Бго Те біз ті Рго Меб ТБгобеє Бег рРвВе 2405 410 415 бек бек ТП ген Бец баг тів ви біп бек о Зег рго бій бег Аїз бів що 425 430 зак Афїа Ре бін біїу Ре рго бій чего рРго їеи бій хтіє Рго Уаї бе 435 440 445 тек 5ег Ре 5бг Тук ТВгоцец Без бег во Ре бій бег 5ег Рго сш 450 455 4650
Ага твг нія бек тик Ре бін 51іу РНе Рго сій 5егорго цен обіп ге 465 470 475 4380
Рго чаї бек чего зЗес баг бек о 5егобег Те ге фен бег ре) РНе СТИ 485 490 495 5ек бек Рго єсєЇїц Су5 ТВг бій бек тс Рйе ві сту Ре Рго сій бер 500 505 510
Бге вн бів їі Рго бій 5ег рко ро бій бБіу бій дей Те Ні бег 515 52о 525
Рго ен біп тіе Маї Рго его іецн Рго біз Тгр обі Ар очег рей бег 530 535 540
Рго Ніз Тук Ре Рго біп аг орго Рго б1п біу 610 А5р Бег Гей бег
545 558 555 5еб
Рго Ні тут Рпе Рго сій бе во Ргро Біп біу бТй Абр о бег рей бер 555 570 575
Рго ніє туго Ре Рро бій бек Рго біп біу бій дер 5ег Бей зЗег рРго 5380 85 590
Ні Туг РВе Рго бів зег о Рго Рго біп с1у Сі Азр бек Меб бек Рго 595 600 5о5 імен Туг РбБе Рко піп о зег рго гей б5іп сіу біз єї Ре 610 Зег о бег 610 615 БО це бій бегорго Уаї бЗег їі Суз бек бек чег ТВг о Рго 5ег бек Ген 525 630 535 оо
Рго ОЇ баг обве Рго сій беб зег бів 5екорго Рго бід 61Уу Рго Уді 645 650 555 піа бек Рго 160 нів 5ег рко сій Зег о Рго РРО б с1у Межї нНіз Бер 660 5655 67о віч бе Рго ей біп 5еговко сій сег А1а го 61 зі ій бр 5еє 675 ово 685 іїгц 5ек рго їв біп ї11є Рко бій бек вго їей сів б1у 510 АЗр вер
БЗО 65 700 іІ2ец бБег бегот1еу нів Ре Рбго бій бег о Рго Рго біз тТеРрозій Аб5ро5ег 793 718 715 ка
Гец бег Рго Гец Ні РНе Рго бій РБе Рго Рко біз б1у Бій Абр РБе те5 73 735 зЗіпй бег бег іей іп бек рго уді бег їТїе Суз бег бек бек Ті бег 749 а 750
Те бег Гей рРго сіп зак Ре Ро би 5ег рго віп бек Вго РКО 755 760 755 сіу рго Аа їй Бег Рго Гец бій Агро Рго маії ек бек РНе РЕ хег 77а 775 780
Тук Тс ценз Аїа бек осей гей бій бег зер Ні5 б)и бег о рго сій 5ег 785 790 795 500
Рго рео біз біу Ро АТа чій Зег Ргро Ген бій бак Рго Уа! бег зер 810 815
Ре Рго Зег обетг ТВг баг бер 5ег ій ер сій аб 5вг о Рго Маї 5екб 820 825 830 бек Ре Рго бек 5 ТВг о бег бЗег бек Ген Берг Бух бег бек рго ой 835 840 845 чек Рго ївеи біп 5ег о Рго мМаії тів бегб Ре бег б5ег его тиг Заг о гей 350 855 8550 чат Рго РВе баг бін бі) чек бег бег рРго Уаії Азробім тує Те бе 865 870 875 880
Зег 5ег Азр ТВг оБеч іецв бін 5ег А5р о зег Гей Тг о Азр бек Ти 5ег 885 зо 895 це УТ сій бег о біц Рго без Ре ТВготук Те рем Азробіц Був ха! 500 905 910
Азр ан сей дій Ага Ре гей гей ген су5 тує бій маії Гуз пп рго 915 920 925
Т1е тику Аа бій Меї ге пк Аза Ма! 116 5ег Аг тує Тиг оту 930 935 940 тус Ре Рго Уаї тів РБе дко Туз АЇа АБУ бій Ре ТІ 5ій їТе Ге 945 950 955 чо
Ре 5іу тіе бек ге АК бін Уаії Ар оРГО дер дер 5ег тук Уаї РНе 955 970 975 чаї Аа тг оте дер гец тве чего сів сіу Суз рез зег Абвросіц св
З8О ча 9950 зі Мет бек біп А5п АгЯ сец ей тієе бе ЇїТе ен бег їЇе т1є рРВе 395 Т1000 1095
Те уз бу тиг тує Аа 5ег о бій бін Уа! тіє Тир о Азр о уаї Кен 1010 1015 1020 зек Ту тіє 61їу мМаї Агод АтТа 1у Акад бій ніх Ре Аа вве сту 1025 1030 1035 іш Ро дк бій сей їей ТБ Суб Маії Тгромаї бій біб ніз тує 1040 1045 1050
Ге бін Туг ага бів Ма Рго Ай бег баг Рго РО Аг тує В 1055 1060 1065
Ре фен тгроаїу РКО Агу АТа нія 5екобію маї Ті ув до гу 1070 1075 1о8о уУуаї Уа! еїчЧ Рне ген діа Межї їец гу деп Тпг Ома! вро її Таг 10855 1095 095
Ре Рго бер бек туго груз дез Аа Бен вуз Адяр Уа! 613 531 дей 1100 1305 1110 діа сів АЇїа тіє тіє АзротиК те д5р дв о5ег тик о АЇа сть бі 1115 1120 1125
Зег АТа его бег бег ма! Меї бег Рро бег РНе его бер січ 1130 1135 л140 «210» 80 «211» 373 «12» ВГ «2135 Штучна послідовність кох «Ре» МАОЕ-С2 Білок МмР.057333,1 «00» 80
Меж вто Рго Маї Рео сіу Маї РКО Ре АгЯ Ачи Маї др АЗИ АБИ Зек 1 5 160 15
Рго тб обег о уаї бів іви чім Аз оТер Уві Ар Аїа бій нія РРО тир 2 25 зо
Ар сій сід сін біб йія бек о5ег дій заг заг ТВгоГеч Тук Сей уаї Ре зер рРго 5ег бег рНа бек Тиг о бек б5ег Заг бен І16є бе» 01у 5о 55 ей дім Рго 610 бів бїв бій маї рго его обіу мМаї лів Рго А5п оре тВе 7 75 Зо зіц Зег ті Рго 5агозег о рго Рго сій С1у Рко Рго біп о біу Рго бег 855 90 95
Зіп бег Рго Сец бес зер оСуз Суз баг 5ег РБе бег Тгробек бег Ре 100 195 710
Зак би сій его бес бе бій ву5 б1у Ти А5р о ТВг о б1у Те Сувз сп 115 120 125 аіїУу цен бро дер Зег сій бер бек Рпе Тк тує тагР гей А5р ай губ 135 135 140 уаї Аїа бій їв маї 61 РВе гец їсн тей гу Ту біб АТа Ти 10 145 150 155 бо
Рко ма! їйкобі1їб Аїа бій Меї Бей Мес ті маї те уз Туг ру АЗр 165 170 175
Тук Ре рго м3і ї11іе ей гує АК АТа Ася бій РНе мех би вец гец 180 185 190
Ре бі іо діа без ті6 біб ма! сбіу рРео Ар онів Ре Сух Ма! Рпе 195 2па 205
Аіа Аби те о Уді бі Ге Тпг о АбЗв о оЇш Сіу бег Азр Азр бій б1у Меє 210 215 22
Рго бій Ази бек Бей бен Ті ї11іе Ії Гей бег уаї 116 Ре їі Гу5 225 230 235 240
О1у Ап су« А1їа ек обі бін маї їіе тер обіц Уа1ї їен Ав АТа ма 245 250 255 сіу Маі тТук діа сіу дго бів ніз РНе маї Тут сі Бій РгОо Аго си 2650 255 Кв) їв фен тиг огу5 маї тТгр ма! віп сіУ Ні Тукє Гей с1о0 Тугє Або ої 275 280 285
Уві рго нів бек Зак вро Рго тТуг отує бів Ре бе Тер о аїу Рго Аго 298 295 З00
А1а ні Зак сій чек їі губ іуз5 Гуз ма! Гей ст РВЕ геч АЇв гу 305 зів 315 з
Пец Аза Аа Тк Уа! РгО бег Бек Рпе Рго бег Теротуєг гм Азр о Аїа 325 330 355 їеч вух Ар омМаї бїв б Аго Уа! біп АЇа Твг оті Аб5ротвг діа Авр 340 345 350
Ар АТа тбг ома! Мет Аза бек бін бег їец бек Уа! Меб баг бег Ап 355 350 365 чаї 5ег РБе б5екг а 370 «2310» 81 «її» 1255 «ит» РЕЖ к2і3З» Штучна послідовність «Кр «235 МИСІ Білок 305582.1 «4005 81
Мек тик оРГО біу Тпе бій беб рго Ре Ре беп бе бен Бей їец тп ї 5 10 15
Ууаї ей тйг маії Ма! тйгос1у бек сІіу Ні Аїа заг 5ек ТК РгО бІХ 2 25 30 с1у он гуз бів тВе 5ег Аза таб осіб го баг Заг о маї Ро беб Бе
Тв обЇн гуз ап о Аїа маі чер мет тВг бек бек уаії сеч чег Заг Ні 5О 55 бо
Заг Рго с01у 5ег біу его чек тпготВг сій біу їп дзр о уаї те Ге 65 79 75 80
Аіа Рго Аїа Тег обіц Бго АЗіа заго о1їу 5ег Аїа Аза Тк Тер обіу їй 85 90 95
Азр чаї ТЬтгобег о маї Рго Маї Трг о Аго Рго АТа ем біу бег о ТргоОтеРе 100 105 110
Рго Рго АЇа Ні Ар Уа! Тег о Зег АіЇа рго дер Аепоі уз Рго Аїа РгОо 115 120 125 спіу бек тк діа Рсо о РГО АТа Ні оіу Ма! Те бег А1а Ро Авроте 130 155 140
Ака Рго АТа РРО біу 5ег ТВг АТа Рго РКО Аа нії зіу Уа! Тг баб 145 150 155 160
Аіа вго др так Ак Ро Аіз рра зіу ек те АТа Рго РгОо АЇїа ні 165 ї70 175 зіж Уві тйг 5ек АЗїа РгРОо А5р ОТГ о Аго Рео Аїа Рго б1у чес Тег Аа 180 185 1950
Рго Рго діа ніб біу Уаі тик бег Аїа Рго А5р тк Ага Ро Аїа Рго 195 205 295 сіу бег тТБг АїТа Ра Рго Аїа Ніз біу Ма! Тиг бег Аїа Рго Ар Тег 210 215 22и
Ага Ро АТа Рго біу бек тк АТа Ро РКО Аїа Ні б1у Узі ТП 5ег 225 230 235 240
АЗіа рго АВ Те Ага Рго дів Рго спіу бак Так АТ Рго Ро Аа Ні 245 250 255 іу ма! тиг обзек АЇв РРО АБр опе Ага РРО АТа Рго с1у вес Тиг АТа 250 255 770
Рго рео АТа нів біу Ма! Твг о зег АЇа Рго Азр о тн Або го АТа рРгО 275 280 285 іу бек тб діа РгРо Рго лів ніз зіу Уа! Тр за? АТа Рго Абр тис 290 295 00
Ага рго Аїа Рго б1у 5ег ТВ" о АЇя Рго Рго Аїа нів сіу Уа! таг о 5еє 305 з10 315 320 діа Рго Ар оті Аед о Рго Аїа Рго бу бек Тіг оАЇа Рго Рго діа нів 325 330 335 зІм Уа! ТВгобЗекг Аза Рго Абр о ТВг о АгЯ Рго Аїа Рго біу 5ебг Те Аа 340 345 350
Рго Рго Аїа Ніз піу Маї Шк об5ег АТа Рко Ар о Тйг о Аго вго Аа Рго 355 360 365 бі 5ег Тит оАТа Рго Рго Аїа ні б1іу ма! тс бег Аїа Рго АвротТвг
З70 375 385
Ага Рго Аїда рРго сСіу 5ег ТБ АЇа Рго рго Аїа ніх біу Уді трг 5ег 385 390 395 ой дід Биб Аяр ТК Ага РРО Аїа Ро сіу бек Ти АТа Рго Рго АТа нів 405 410 415 8ІУ Уа! тб бек Аїа Ро Ар о Тпг о АКО РКО Аа РГО зіу 5ег Твг Аа 420 425 43
Рго Рго діа ніз сіу маі тВг о бБег АТа Рго дер твг Аго Рго Аїа РгО 435 440 4345 зіж Бег тйг діа Рго бро Аа ніє сіу Уа! тб бек АТа во АБЗрОТК 459 455 4655
Ага Рго Аіз Рго біу зег Тиг АТа Рго Рго Аїа Ні5 б1у уаї ТНу бег 465 479 475 ЗО
Аза Ркго др Тс Ага Рго Аїа Рго біу бек Тиг Аїа Рго Рго Аза Ні 485 390 495 оз1іу ма! Тег зЗек АТа Рго дер пк АК РКО діа Рго біу бек пиг АТа 500 505 510
Рго Рго Аїда ніз біу ма! тТНгобег АТа Рго Ар оте Аго Рго АЇя РО 515 520 525 зіу зег т Аіа Ро Ро Аіа нія біу Маї Тк бек АТа РКО АБИ ТАК 530 535 540
Ака РРО АТа Ро біу 5ег тТвг АТа Рго Рго Азча нів 61у Уа! Тіт зве 545 550 555 560
А1а Рго АЗротТаг Ака Рго Аіа Рго Ту зак тпг АТа Рго Рго АЇв нів 565 570 575 сіу Уа! тиг о5ег АЇз Рг Азр Таб о Агу Ро Аїа РРО сіу бег твг Ата 58О0 585 590
Рго Рго Аїа- нів біу ма! те о зЗег АЇа РКО Ар отаг Ага Рго діа РгО 595 6500 6505 зм Зег ТВг Аїа Рго Рго Аїда Ні бі мМаї Тиг бек Аїа Бго АбротВе 610 вБ15 52
Ага Рго Аїа Рко біу его їйк Аза Рго Рго Аіїа Ні біу Маі Тиг 5ег 625 630 535 540
Аа оРго Азротвг Ага Бго А1їа го біу бек тіг Аза Рго Рго Аїа Ніз 545 65о 555 аіїу а! тт зак дія Рго Ар ТНК о АгяЯ рго Аїа Рго біу бег тпг Аїа 5650 565 670
Рго Рего Аза нів біу ма! Те 5еб Аа вго А5р оте Абе ро АТа Ро 6575 58О 6585 с1у Бер тб оАіа Рго Ро Аа ніз біУ маї Тк бек АТа Рко д5рв о тТНг 6590 5О5 700 дга Рго Аїа рго біу 5ег ТВг о Аїз рго Рго аіа ні б1у Уа|ї тТвг обер 705 710 715 720
АЇа РРО дер тк дед Ргоа Аіа рго сбіу Бек ті АЇа Рго Рго АТа Ні 725 730 733 зі ма1ї те об5ек дів Рго Ар Тс АКо Рго Аіа РгОо б1у Заг Ту АЇїа 740 уа5 750
Рго Рго Аїд Ні сіу Уа1ї тик обег Аа Рго АзроТВг Аку Бго Аза РгОо 755 750 755 о1у 5ег ТВг діа Вико рго Аза нів оту ма! Тигозег Алла Рго Ар тнг 77 775 780
Ага рго Аа бро Сіу б5ег ТНг о АЇа Рго рго Аїя Ні біу ма! Трг бер 785 790 795 500 діа вто Ар опйк Арго РбОо Афа вка обіу зак Тк Аїа Рго рко АТа нів вО5 810 815 піу уаі! те бек Аїа вро АБр о пйг о Аго Ро Атїа Рго б1у 5ег пг АТа 820 825 830
РгоОо Рго АТа ніх сіїу Уаії тТЬг о5ег Аа РГО А5в ТИГР Ага Рго АЇв вго 835 880 845 сіу бег тік діа Рго Рго Аа ніє сіу Маі Те баг А1а Ргб Азротар 850 855 850
Ага Рго Аа Рго біу зег ТИР Аіа Рго Рго Аіа ніз біу уаі! тн 5ег 865 870 8575 880
Аїа Рго Азр о Тк Або Рго Аїа Рго бі Зег тТиг АТа Рго Бго АїТа Ніз 8585 890 895
З1іу ма| ТбБг о зег Аіа рго Ар ТК Аго Рго Аіа Бго біу бек Тг АТ 00 905 10
Рго Рго АТа ні біу мМаї Тг обег Аа Рго А5р о ТВг о Аго Рго Ав РгОо 915 920 325 аїУ бег тт діа Рго Рго Аіа Ні біУу мМаї тпгбоб5еб дія Рго А5р А5А 930 935 940
Ага Бго аїа 160 б1у 5ег Те Аа рРго рБеб УуВі Ні Ас уві Тс век за5 950 955 збо
Аіа бер біу бек Аїа 5ег чіу б5ег АЇа бек ТК ген ма! Ні деп бу 965 570 975
ТНК Бек Ааїа дга А1з тВе тВге оте вго Аїа 5еє груз 5ег ТвЕ Ро Рае 980 985 990 чер тів Рго бек нів Ніз Че АБО те РРО тТИгОотТйаб Бей Аїа беє Ні 995 1900 1095 аг ТВг о уз ТпгоАр дія бег о беб тб Ні Ніб его бег Ууді Рго 1010 1015 1025
Рго ген о Тпг о5ег о5ег дБи Ні Бек ТВг обег Рго іп бец зег Таг 1025 1030 1035 о1іу ма! 5ек Ра РНе Рбе гей о зек РНБе Ні ї16е 5ек дей гец сів 1040 1045 1050
Ра Ай бек Зег сен бій дер Рго б5ег тик дер тує о тук бій СТ 1055 Т06о 1065
Ге біб дра АЗр їі зак обі) меж Ре рез сів І16 тугіув5 бій 1070 1075 1080 піу 01у Ре гецч су ви бек Ап о тіе фу Ре Ага РгО біу 5еаг 1085 1050 1095 уУуаї Уа! Маї оп іеу тб Бей АТа яв Ага бі 61 тб Ії16 Ав 1100 1105 1150 уаї ніє Адзроуа! ой тб бій Ме дей бів туго руз тик бів АїЗ 1115 1120 1125 діа бек Ага туг дзпогецотик іє бег дяр ма! 5ек Уа! 5ег дер 1130 1135 140 маї Ркго Рпе Рго Ре бег о Аїа бій бег біу Аїа біу Маї реко СТУ 1145 1150 1155
Тегр біу їЖ1і2е Аїа еп оїецй Маї бе маї См Маії ви Уаї Аїа бен 1160 1155 1170
Аа її маї Туг сей 116 АтТа оїез АїТа Уа! Суз біп о Су5 Аго Ако ї175 іо 1185
Су Аби туго аіу бЇв Гей Абро тТіе Ре рго АЇа Аг дер оте тТуУг 1190 13195 1200
Ні Ро Мек беє бій Тук го Таб о Тук о ніз Те онНІЗ бу Ага туг 1205 1210 1215 ма! РО вро Зег бег Тс АбЗВ Ага 5еб РгОо тТук бій суб Ммаї бек 1220 1225 1230
Аіа біУу зп аіу біу зер зак зе бек тує ТК одяй рго Аза Уа! 1235 1240 1245
Аіа Аа АЇїа чег АЇа Ап овен 1250 1255 «2105 82 кру» 555 «ід» РЕК «23» Штучна послідовність «оВух «223» МОС1 Білок 5ХУМТК «Оп» 87
Мек Тпг о Рго Фіу Твгобій баг о бго Ре пе їец Бей бен Сей Бей тТг 1 й 10 15
Маї бен тТйг уві Уа! те піу ек біУу нНіз Аїа Заг бег ТЕ рРго біу
ЗО сім б туз бі) Те баг о Аїа те сій Ага 5еб бе маї Рго Зег Зак
Те б Гуз АЗИ Аїа ма! 5ег мет тнг бег бек уд! іє 5ег 5ег Ні бо век ргао в5іу бак біу 5ег бер твг о тТйР осів біу бій Ар Уа! піг Ген 70 75 80
АЗіа Рго аа тик біз РРО АТа чего сіу баг Аїа Аїз тВг отеросіу сів 8 зо 55
Азр ма1! те бек Маії рго маї ТВг о Аго Рко Аіа гер б01у хаб ТК ОТГ 100 105 мо
Рго Рго Аїд Ні АзроУаі тик обег Аа Рго АзроАзп Гуз Рго Аза Рго 115 120 125 б1у бек ті Аза Рго Рго Аіа Ні біу ма! ТБг чек Аа Рго Азротик 130 135 140
Ага Рго АТа Бго сіу 5ег твг о Аїа Рго Рго Аа Ні біу Уа! тТпг чек 145 150 155 160
Аіа рго Ар о їйг дк Рко Аа рго біу бек Тк Аїа Рго Рго Аїа Ніє 165 170 175 зі Маї Тег обек Аїв бго АбзроТВг Ага Рго Аіа Рео бу беб тиг АТа 180 185 190
Рго РгРо Аїа ніз біу ма1! те об5ег АТа Рго Ар о тВг Або РгОо Аа Рго 195 200 205 зіУу Бек Тгодіа Рго Рго Аа Ні біУу мМаї тик За АТа ко Ар отит 2та 215 га
Ага Рго Аза Рго б1іу бЗег Тиг діа Рго Рко Аїа Ні бі уаї те бе 225 230 235 240
Аїа Рго А5р А5й Ага РгГо діа ей Сіу бек ТБ Аїа Рго рго Уа! Ні 235 250 255 дяп Ма! тБЕ хек Аза 5ег обіу 5ег Аїа 5ес сім зег АЗа бек тик огей 260 265 270
Уаї ніз Ази сії Тиг об5ег Аїв Ага АЇа тиг тТвг отв Рко АТа бег сух 275. 280 785 бек Тиг вго Рпє 5ек її рго бек Ні Ніб5 5ег Ар ТР рго ТВ Твг 290 295 300 ії2гци АЇа бек Ніз 5ег тпгогГу5 ТВг о АЗр АфЇа 5ек о5ег ТБг о Ні Ні бер 305 310 315 зо
Заг ма! Рко Рго є Тйгобає баг АБ Ні бег Тнг о5Зек вго сп ген
3ззо 335
Зег так біу Маї бек Ре РНє Ріє Гец Бек Ре Ні ті бег Ап Ген 340 545 350
Ззіп Ре Абп бек бег гей бій АБВ о рго бек ТК оА5Зротук туго сій ов 355 360 З65
Сец сій Аго Азротіє 5егозін Меж РВе сен біп тІТе Тук був сій су 370 375 380 51У РНе бен сіу мен бер од їіе Гу5 РНе Агу рго с1у его маї ха 385 3950 395 00 чаї бий гейш те ген Аїа Ре Аг бій сіу Тс ті Азпомаї ніз др 405 410 415
Уаї би тйг біп Ре Абп бій Тук о су5 ТБ обіш АТа Аїа бек Агро тук 420 425 430
А5п бен Тиг о Хіе 5ег Ар Ма! бек Уа! 5ек дяр Маї Рго Рве Рго пе 435 440 445
Бег АЇїа біп бек б6іу АТа йпіу Уа! Рго біу Тгр о біу т16 Аа Гей ії ен 459 455 ле чаї ген ма! Суз ма! їеи Маї АТа бер Аза тіє Маії туг геи її Аїа 465 479 475 480 ви Аїа узі Суз віп Суб Аго Аго Суб Аа тує біу бій Бей Азротіє 485 490 495
РПЄ Рго Аа го АБротйг тує нів Ро МеєЄ бек бій тук Рко тпг тує 500 505 510
Ніз Тег ні біу го тує маі Рго Рго бек бек ТВг Ар о Аго 5ег Рго 515 520 525 тук бі ух мазі 5ек Аїа біу Ачп сту сіу ек звг сен бек Туг тТНе 5ЗО 535 зай
Ап рРго АТа Ма! АїЯ АТа Аїя бег АЇа Ап Гец 545 559 555 «10» 83 «йїї5 3768 хиїй» РЕК «йї3» Штучна послідовність «2 кид3» МИС1 СО5 дикого типу «ОП» 83
Аїа тіг о сіу АТа Ссуз АТа Суб сує с1у Є1у сіу Суз АТа Су сСує суб 1 5 10 15 діа сіу тик оСуз так Суб сСує ТР ОТйб тТиРоСув Та" ТВгосСує Су ТИР щІ3! 25 36 сім сСуз так обіу Суз тб озіу Суб ТАг Субз Суб Тиг обу Аїа Суз АТа
КБ 40 45 сі твг обіу Сує Так отигБ Ааіа Суб АТа сбіу Те о тТвг оо1у те те Аїв бо суз Аїа сту спі ТаЄ таб о Суз пиг осту біу тег Суб АТа тик обі сСуз 65 то 75 8
Аїа Аа сіу суб Тиг оСуз тТвВг о АЇа Суз Су5 су5 Су Аїа ету 1У тик 85 90 55 сіу біхУ Аїа біу АЇа Аа Аза Аїа 01у біУ Аїа біу АТтя сує ТВг ОТ 100 1905 130 су5 біУу біу уз Тиг о АТа Суз Сух Суз АіЮіа біж Аїва б1іУу Аїа АТа бі1у 115 120 125
Тео тВг оСуз діва бі тагоб1іу Суб Су Суб Аіа б1іу Суз ТВгосСує ТВ
130 135 ї4о
Аіїа сСувз Тйгобіу Аїа біу Аїа Аїа біу Аза Аїа так бу Су твг бі 145 150 155 160
Те сту Аза біу те АТа тиг о біу Аїа Су5 Суб АТа Ту сух АТа су 1655 170 175 су ау ТВ АЗіа Суз тпг су ТИг оСуз Суз Аїа 1у Суз Суб АТа су 180 185 190
Аіа сіу Суз Сує Суз суб б1у біу тНе ТЕ Су Аїа біу біу Суб Пк 195 200 205
Суз Суз ТИг Сує суб АЇа Суз суз АТа Су ТНг оСуз АТа бі сім су 210 215 220
А1з Су АТа біу бі Аїз твг обіу тик оСуз АТа Суб ТВгосСу5 ТВ с1у 225 230 235 240 піу Суб Суз Суз Суз о1у біу сує бує А1а буз с1у Є1у Аїз Аїа Суз 245 250 255 суб АЇїа біу був5в Таке о тг оСуз Аїа бі біу Те те Суз АТа сіу Суб 250 255 270 те бу су суз АТа Суз Суб тНгос1у є1у сіу Ту АТа Су Аїа у 275 280 285 зі Аїа Те обіу так оСух АТа Сує Сує Тиг о суз біу бі тег Сує сСу5 298 295 З00 сСуз АТа б1іу тк осСуз АТа суз Суб АТа б1у біу Суз бух Аїа Ту сСуз 305 з10 315 329 сСуз Суз ТВг осіу бі1у біу Суб тНг оСуз су Аїа Сув Суз АТа Суз Су 325 з30 335
Суз Сух Ту Суя Суб Аа оі1у Суб Суз Сух Аїа Су5 біу АТа ти сту 340 345 350
Тк осСуз АТа су Суз ТВгГ оСує АЇа с1у Суз суз Су Сув су 1 Аїа 355. 360 за5 сує АТа Аїа Суз АЇа А1а біу Сує Су5 АТа біу Су Су су Суб Оу 370 375 зво зі біУу Суб Пі осСсж5 Су А1а Сує Суз бі Суз Суб Су Су Суєх Суб 385 390 395 400 су Аїа б1у суз Суз Ссу5 Аїда Су5 біу б1у Тпгоб1у так осСуб АТа Суз
305 410 415
Сує так оСуз біу біу су Суб Су5 Суб біу бі Аїа Су5з АТа Су Суб 420 425 430
АТа с1у оіу Ссуз Суз Біу Бім сСуз Суз Суз Суб біу зі зіу Суз пе 435 440 345 суз Суз дів Ссуб5 Суз віу суб Суб Су5 Суз Суз Суб Суб АТа сіу суб 450 455 460 су» Суз діа сСу« біу біу їйг бЇу тег Суз АТа Сує су« тиг о Су о1У 455 470 475 4850 бу Суз суя Су Су бі б1у Аїза Суб Аїд Суя Суз Аза бі бі сСух 485 490 495
Су біу Зіу Су Суз Су5 Суб С1у 01у 6іу Суб ТВг Су Суб Аа суб 500 505 51 су зіу Суз Суз Суз суч Суз сує Сує Аїа біу су» Суз Суз Аїа сСуз 515 5ао 525 зі бу Тк обі Таке Су Аїа Су Су ТИг о Суз бі сі Су Суб Суз 5530 535 540 суз б1у в8іу АТа суз АЇїз Суз Суб АТа є1у біу Суз Ссуз 1у сіу Су 545 50 555 560
Суб Ссубз Суз біу біу біу су5х ТИг о Суз5 Суб5 Аїа Суз Су бі Суз Суз 555 57 5
Суз Суз Суз Суз Суз АТа зіу Суз Суз Ссубз Аїа Суз су віу тпг о сіу 580 585 зва
Те Суз АіКа Сує Су тиг оСуз біу біу Су Суз Суб Суб біу б1у Аїд 595 во 5О5
Суз Аїа бує суч Аїа сіу біу Суз сух сіу сіУ Суз Суз Суз Суз су 510 ві1і5 620 сі еіу Суз Тег оСу5 Суз АЇз Суб Суз 41іу Суз Сує Суб Суб Сує Су 6525 535 035 40 сує АТа о1у Суб су Су Аза сує ТУ бІУ Ше сіу Тег су Аїа сСуз 645 550 6555 су Тг осСуз бі біу су Суз Сух Суз бі бішж Аїва Су діа Сух Суз
Е91519) 565 70
АТїа с1у б1у суз Суз біу Зіу Су5 Суз Суз Суз Б1у 51у зіУу Сух ТВ
75 580 и5 сСує сув Аіа суз Суз оіу Суб Су5 Сує Суз суб Суз Суз АТа сіу Суб 5ЗО 695 700
Сух Суз Аіа суз біу біу Тиг осбіу твг Суз Аїа був сСуз ТК о сСуз бу 795 710 745 776 зі Суз субз Суб Суз біу зіу Аїа Суз АЗа суб суб АТа віу сіу су5 225 730 735
Су» б1у бїу Сує Суз суб Суз бі бу сіу Сує тТВг Ссубз Суз АЇїа Су 740 745 750
Ссуз біу суя Су Суз Суз Суз суз Суб Аїд сіу Суз Су Суз А1а сСух 755 750 765
У су тиг біу тТвг оСуз Аів Су Суз Таг Су б1у б1у Суз Сув Суб 770 775 У8о суб 6іу б1у діа Су5 АТа Су Сує АТа біу біу сув Суз 61у іу Суз5 785 790 "95 800 сує Суз Суз біж бі біу Суз ТТГ о Суз Суз Аіа буз Сух віх Суб Суз 505 810 15 буз Суб Сух суз Суз А1а біу Ссує Суб Суз Аїа суз б1у Ту тиг у 825 830 тТиг о сСує Аза Суз Суз ТВг Су піУу бі Суб5 суз Суз Суз цім сіу АТа 835 840 845 сСуз АТа Суз Суз Аза біу зіу Суз Суз 61у біу Суб бух суз Суз су 850 855 8650 51у ЄЇу су Тит Су Суб Аза Суб Суз сіу Су Суз Суз Суз Суз Су5 865 87 875 во
Суз Аїа чіу Су Суз Суб АЗа Суз Ту сіу тпгосіу тйгосСуз Аза сСуз 885 850 895 суз ТНг оСуз віу сі Суз Суб бує Суз 41іу б5іу Аїда Суз АЇа Сує Су що 905 910
Аїа зі о1у Суб сув б1у біу Сує Сує був буз б1у б1у а1у Су Те 915 320 925 суз Ссуз Аїа сСуз су5 бі Су Сує Суз Суз Суз Суб Су діа бі Суб 330 935 940 су Суз Аіча суз ім 51у пПг о біу ТВгоСуз Ада Суб Суз ТИг о Сух СУ
945 9559 555 960 сіу сувз Суз суз Суз оіу сіу Аїа Су5 Аіда суб Су5 АТа сію сіу Суб 965 9 575
Сух с1у оіу суз Суз бух суз біу біу біу Суб Тк Су Суб АТа Суб
З 985 За9а суз сіу Суз Ссуб5 Суз Суз суз Су сСу5 АЇа бу сСуз Суб Суз А1а су 995 Той 1095 сі б1у тпе осЇу твВгоСсуз діа сСуз Суз ТВг Су біу сіу Ссує Суб 1010 1015 1020
Суз Суз о о1у АТа суч АтТа суз Суз Аїд с1у б1у сСух Суз СТУ 1025 1030 1035
У Сух Суб Су Суз ві біу Ту Суб ТИгоСуз Суз Аїа Су5 Суз 1040 1045 1050 піу Суб сСує Суз Суз Суз Су5 бує АТа біу Суз Суз буз Аза Сук 1055 1060 1065 зі бу тТвВге о аїУу ТвгоСуз АТв Су Сує Так осСуз Біу біу був су 1070 1075 1080 буз Суб о б1у б1у Аїа Су5 АТа Су Суб Аа сіу б1у сСуз суз Фу 1085 1090 1095 сіу сує Суб Сує сує біу біу сіу Суб ТК оСу5 Суз АТа сСуз сув 1106 1105 11189 сім сСуз сСуз суз Суз Суз Суз Су5з Аїа 61у Суз Суз Суз Аа сСуз 1115 1120 1125 сім еїу таб обіу твеоСух Афа Суз Суз ТБг о Су« біж сбіу Суб Сує 1130 1135 1140
Суз бух бі біу АТа суч АТа Суз Су5 АТа сту б1Уу Су Су аїу 1145 1150 1155
ЯМ Суз бує Суб Суб бі соту бу Суб ТйгоСуз Суз АЇїа Суз Су5 11850 1165 1170 сіу Сує су Сує бує Суз сух бує Аа бі Сув бух бує Аа сув 1175 13850 1185
Зі біУ тНе бі ТВгоСуз АТа Су Суб ТТГ оСуз Біу бі сув су5 1190 1595 12006 сСуз Суз Ту сіу АЇїа Суз Аіїа сСуз Суз Аїза бі 5іу сСуз суз б1у
1205 1210 1215 сіу сув Су сСує Суз бі біу сіу Суз Тк оСуз сСуз Аа ув су 1270 1225 1230 сіу Суз жу5 суз Суз Суз суз Суз Аіз біу Суб Суб Суб іа суб 1235 1240 19745 «1у бу тиге б1у твг суб Аїа су сСуз тТВг обуз біу су Суб суб 1250 1255 1250 суз Суз у б1у Аа Суз АТа сСуз суз АТа с1у бі су суя бу 1255 1270 1275 бу Суз сСуз Сув Су5 сіу сі Ту Суз ТбгоСуя Суз АТа Суз сСуз 1280 1255 1250
У Сух Суб Су Суз Суз Су5 бух АТа бі Суз Суз Су Аїд Суз 1295 1300 1305 аіу бі тк обіу Таб оСуз Азїа бує бує Тйг о Суз о1у о1у Сув Сук 1310 1315 1320 сує Суз ім аіуУ Аіа Суз Аїв Су Су5 Аіа біу піу сСуз Сувз 6іу 1525 1550 1355 е1у Сує бує Суз Суб б1іу біу с1іу бує те оСув о Суз Аїа су Суз 1340 1345 15505 аіу Су5х сСує Сує Су Суб Суз Сує Аіа біу Су5 Суз сСуб5 діа су 1555 1360 1365
Фі сту те оЄ1у Твг оСуз Аіз Су5з Суз Таб оСуз бі с1у Су сСуз 1370 1375 1380 сСуз Суз 651 б1уУ АТа суч Аїа су сСуз Аїа сі біу сСує Сує б1у 1385 1390 1395 сЄ1у Суз Суб Ссуз Сує піу сіу Ту Суз тег о Суя Сув Аїа Су Сує 1400 1405 1410 с1у Сух бує су Суз Єуз бух Сук Аїв бі Суз Суз сСух5 діа Суз 1415 1420 1425 зіу оїуУ те аїу тайг суб АТа Су буз ТК оСу5 с1у бу су сСув 1430 1435 1440 су Суб 1у с1у АТа Суб Аїа Су суб Аа з1у с1у Суб Суз б1у 1445 1450 1455 е1іу Сув Суб Суз був сі сбіу б1у су5 ТИг оСуз Суз Аїа су5з Сух 1460 1465 1470 с1у суб сСує Сує суб Ссуз Суз бує АЇа біу Суз Суз Су5 Азіа су 1475 1480 14855 сіж оіу тег оаіїу тб оСув Аїа суз бує тпгоСуз яіу бі сСуз суз 1395 1500 су5з Суз ім БіуУ Аїа Суз Аїа сСуз5 Суз Аїа о1Уу бі Сув суб Ту 1505 1510 1515 с51іу Суз сСу5 Суз Суз біу біу 51у Су5 Тбг оСуя бує Аа Су Суб 1520 1525 1530 б1м Суз Сув Суб Суб Суз Суз о Суз АТа су Суз Суз Су5 Аїа Су» 1535 1540 1545 еїм ау твг осіУ тТироСуз діа бує Суб ТВг оСу5 б1Уу біу Сух Сук 1550 1555 1550
Суб суб 1у бі АТа Су АТа сСуз Ссуб5 АїТа оіу у Суб сСув б1у 1555 1570 1575 зІм Суз су5 Суз Суз біу бРу біу Сує ТийгосСуз Суз АЇа суб су 1580 1585 1590 с1у Суб Суб Ссух суз Суз суб сСу« Аа біу суз Суз сСуз АЗа суб 1595 1600 1605 зі бїу твБе осіїу таб суб АТа Сує Суб ТК су сіу біу суб суб 1510 1615 1520
Ссуз Суз Біу біу АїТа суз Аїа сСуз Ссу5 Аїа аіуУу біх сСуз Суз а1у 1625 1630 1635
ЗУ сСуз Суз Суз Суз Фіу бі біу Сух ТБг оСуз Суб АТа сСух Суб 16540 1645 1650 о1іу суз сСу5 Суз сух Су су сСуз Аїа біу Су Су сСух Аїа Суб 1655 1660 1665 е1У 1у тТвгобіу те осуз АТа Суб Суб ТК оСуз б1у бу сув5 Суз 1670 1675 1650 сув су а1у 21у АТа Суб АїТа Сує бСуз А1а с) с1у сСуз суб бу 1685 1550. 1595 піу суб Су Сух Суб біу біу сіУ Суб ТйгоСуб5 Суз фа сСуз сув 17юо 1705 1710 е1у Суз сСуз Суз Суз суб Суз уз Аіа бі Суз Суз сСу5 дія сСух 1715 1725 1725 сіу бі те б1іу тТагоСсу5 АТа бує Суб ТК осуз 1у сі1у суз сув 1730 1735 1740 суз« Суз щіу сіу АЇа Суз Аїа су Суз Аа1а оіу піу сСуз сСуз5 біу 1755 1750 1755 зім Суз уз Суз Суз сі 0іу бі Суз ТВг оСу5 Суб Афда Суб Суб 1760 1765 1770 с81іу Суз сСу5 Суз Суз Суз Су Су5 АТа а1у Суя бує сСуз Аіа Суб 1775 1780 1785 бі б1у пс обіу твгоСуз АТа бСуз Суб5 Тк оСуз б1у 1у Суз Сух 1790 1795 1850
Су« Суб бі аіу Авіа Су5 АТа Су Суб5 АТа біу б1у був сСуз5 б1у 1805 1810 1815 сім Суб сСуз Су Суб бу біу біу суб ТК оСу5 Су5 Афа суб су» 1820 1825 1830
ЗІ Су уз Суз Суб Субз Сув Су5 АЇїа оіу сСуз Суз Суб діа сув 18535 18540 18545 с1у б5іу те бу таб осуз АТа сує Сує тийг осув б1Уу о1у суз сув 1850 1855 1860
Сує сує БУ сіУ Аа субз АТа Су Суб Аїа о1у сіу сув суб біу 1865 1870 1875 зі Суз був сСуз Су5 сіу аіу біу Суз тВгосСуз Смз Ада су5 су5 18850 1985 1899
ЗУ сСуз Суз Суз Суз Суз Суз сСу5 Аїа 1у Суб Суб сСуз Аіа Суб 1895 1900 1905 о1у Ту тибо1у тТг Су АтТа сСуз Суз ТВгоСух о1у сіу сух Суб 1910 1915 1929 сух« бух б1у біх Аїа уз АТа Су Суб дія бі сіу сСуз суз сіу 1925 19305 1935 зіу сує Суб Сує суб б1у біу сбіу Суз5 Тк оСу5 Суб Аа суб сув 1940 1945 1950 піу сСубв Су Сух Суб Суб Су5 сСух АтТа біу Суб Суз сСубз діа су 1955 1960 1965 і біу твВеоб1іу тик осуз АТа суб суб ТИгоСуз бі сіу сСу5 Сух 1970 1975 1980 сує сух б1у б1уУ АЇТа Суб5 Аїа Сує Сує Аїа сіу с1у суз суз с1у 1985 1990 1995 сім сух буз су5 Суз біу біу сіу бує тигобСуз суб Аа сув5 суз 2000 005 210 зі Суз уз Суз Су5 Суб Су Су5 дія біу Су5 Сх5 Сув Аіа Суб 25015 2020 2025 с51іу БІіУу таб об1іу ТВгоСуз Аїа сСу5з Суб Тбг Суя біу Му Су Суб 2030 2035 2040
Суз Суз бі біу Аїа Суз АтТа Суз Суб АТа 01у біу сСух Суз 01У 2945 2050 2055 аїм Су Сук був Су5 бі біу б1у Суб ТВг оСу5з Суз діа Суз Сук 2050 20655 2070 сім Суб сСуз Суб Суб Суб Сув Сбуз АїТа біу Су5 сСуз Суб Аа сух 2075 2080 2085 зі ТУ тпге сту тб осСубз Атїа Суб Сує ТАБ осСуз яіу біу Суб суб
БО 2095 2100 сух Сух е1у б1уУ АТа суз АТа сує сСсує Аїа о1у б1у сСуз суз су 2105 211о 2115 зіу сСує Суб Сує Суз сіу біу сСіу суб тик осСуз Суз АЇа сСув су 120 2125 2130 зі Суз су сСуз Су5 Суз Су Су Аіїа сіу Суз Сж5 Суз Аза сСу5 2135 хо 2145 сіу бу тигобіу Тег осСуз АТа Суз бух Те оСсух віу с1у Суб сСує 2150 2155 2160 суб суз 1 1у АТа су АтТа сСуз Суз АТа Б1у б1у сух сух сту 7165 2170 2175 с1у Сух бує сує Суз бі б5іу бу Суб Тйг Су Суз Аа суз сСухз 2180 2385 2190 зіу сує Суб Сує Ссув сСубв Суз о Суз АТа біу Суб Су5 Суб Аза Су 2195 2200 2295 піу 01у те сїу тб оСуб АТа сСуз Суб Таб оСув с1і1у біу Суз суб 2210 2915 2220 уз Ссув е1у 01Уу Аїа суз АТа уз суз Аза б1у 61 Су суб СТУ 2223 2239 2235 с1у суб Су Сує суб біу біб біу Сує Таб су сСуз Аїа суб су; 2240 2245 2250 дім сСух бух Су Суз сув Суз су діа бі Суз Сж5 Суз діа су5 2255 22650 2255 зі б1іу тб обТу ТВгоСу5 Аїа Суз5 Суз ТВг обу біу бу Су5 Суб 227й 2275 2280 буз Суз бі б51у Аїа Сбуз АТа Су Су» АТа с1у біу сСуз Суз сіу 285 2230 2295 бі Суз Су Суб Суз яіу сіу Ту Суз ТВгоСуз Суб АТа Суб Суз 2390 2305 2310 аіїУ Суб сСує суб Суб Суб Су5 бує Аїа сіУ Су5з Су5 Суб Аїа су 2315 2320 723925 сім бу тТвбе обі так осСуз АТа Суз суб5 ТК Су сіу бу Сув сух 2330 2335 2340 бує Су зім с1у АТа суз Аїа Су5 суб Аїа сі біу суб суб о1у 2345 2350 2355 сіу Суб Суб Ссух суб біу біу Ту Суб так осСух Суз АВа суз сув 2360 2355 2370 зіу сСує Суб Сує Суз субз Сув Су АТа біу Суз Суз був діа суб
КЗ 23850 2385 сі бу тиг обіу тВгосуз АїТа сСуз Су5 ТВгосСуз віх сб1іу Субз Суб в 24300 су» Суз бі б1уУ Аїа сСуз АТа сСуз Сузх Аза а1у віу Сух Суб ау 405 210 2415 о1і1у суз сСу5 Суз сух сіу пту Ту сСуз Тбг Су Суб Аа сух Суб 7420 2425 2430 аі1у бух бує су Суб суз буз бує Ада бі Су Суз сСуз діа Суб 28385 2440 2445 зіу оїуУ те аїу тайг суб АТа Су буз ТК оСу5 с1у бу су сСув 2450 2455 7460 су Суб 1у сіУ АТа Суз АТа Суб Суб Аїа о1у б1у сСубз осСув о1у 2455 2470 2475 е1іу Сув Суб Суз був сі сбіу б1у су5 ТИг оСуз Суз Аїа су5з Сух 2480 2485 2490 с1у суб сСує Сує суб Ссуз Суз бує АЇа біу Суз Суз Су5 Азіа су 2495 2500 2505 сіж оіу тег оаіїу тб оСув Аїа суз бує тпгоСуз яіу бі сСуз суз 2510 515 25289 су5з Суз ім БіуУ Аїа Суз Аїа сСуз5 Суз Аїа о1Уу бі Сув суб Ту 2525 2530 2535 с51іу Суз сСу5 Суз Суз біу біу 51у Су5 Тбг оСуя бує Аа Су Суб 2540 2545 2550 б1м Суз Сув Суб Суб Суз Суз о Суз АТа су Суз Суз Су5 Аїа Су» 2555 2550 255 еїм ау твг осіУ тТироСуз діа бує Суб ТВг оСу5 б1Уу біу Сух Сук 2570 2575 2580 су Суз піу біу АТа Суз АТа Суз суб Аїа о1іу з1іу Суб су5 бу 2585 2590 2595 зІм Суз су5 Суз Суз біу бРу біу Сує ТийгосСуз Суз АЇа суб су
БО 2605 2610 сі Сув сСуз сСух суб суз був су« АТа біу сув Суз сСуз діа сух 26515 2620 2625 зі бїу твБе осїу таб осубз Аїа Сує суб Тк осуз сіу бі1іу суб су5 2530 7635 25540
Ссуз Суз Біу біу АїТа суз Аїа сСуз Ссу5 Аїа аіуУу біх сСуз Суз а1у 2645 2650 2555 о1Уу сСузх Суз Суз Суз Ф1іу сіу біу Суз ТВг Су Суз Аїа Суб Суб
БО 2665 2670 о1іу суз сСу5 Суз сух Су су сСуз Аїа біу Су Су сСух Аїа Суб 2675 2680 2585 е1У 1у тТвгобіу те осуз АТа Суб буз ТК оСуз б1у бу сСуз Су» 26590 2695 2790 сув су а1у 21у АТа Суб АїТа Сує бСуз А1а с) с1у сСуз суб бу 2705 2710 2715 піу суб Су Сух Суб біу біу сіУ Суб ТйгоСуб5 Суз фа сСуз сув 2720 т ?гуУза оіу Сух Суб Суз су5 бує Суз суз діа бі Суз сСу5 сСу5 діа су 2735 2746 2745 сіу бі те б1іу тТагоСсу5 АТа бує Суб ТК осуз 1у сі1у суз сув 2750 2у55 2760 суз« Суз щіу сіу АЇа Суз Аїа су Суз Аа1а оіу піу сСуз сСуз5 біу 2755 УЖ! 2775 зім Суз уз Суз Суз сіу біу бі Суз ТВг Суб Суз Ада Суб Су
ВО 2785 2790
З1у Суз сСуз Суз Суз Су Суз Суб Аїа а1у Сут Суб Суз АТїа Тг 27955 2800 2805 бі б1у паб обіу тТвгоСуз АТа бСуз Суб ТВгоСуз б1у Бу Суз Су» 2810 2815 2820
Су« Суб біУ аіїу Авіа Су5 АТа АТа Субз АТа сбіу б1у був сСу5з Су 2825 2830 2835 сім Суб Суб тс твбоб1іУ біу сіу суб Так оСу5 Су Аа Сув сух 2840 2845 2850 с1у Сує Суб Суб Суб Тг оСув суб Аза біу тс Суб суб Аїа суб 2855 28650 2865 діа Аа тЬе бу таб осуз АТа сує Сує тийг осув б1Уу оі1у суз сув 2870 2875 2880
Тк о Суз АТа сіу біу суб тик о сСує таб обі суз дів ТК Суб АЇїа 2885 7890 2895 зі біу суб Твг о Су5 діа бі сСуз5 те тб осСуб5 ТК Афа Суб таг 900 905 --О су» ТВг бі б1іу Тег осіу Суз Аїа Сузх Аза Аїа Суб сіу сіу суб 2915 2920 2925
А1їа суз сСуз тб осСух те оаіу сСух Суб АТа БІ1У біу сіу суя ТАК 7330 2935 2940 діа сух сСуз діз Суб діа АТа Суб Субз Суз Су дія бу сСуз сСух 2945 2950 2955
Аіїа сі сСує АТа АТа біу АТа сіу Суз Аа Суб Тео Суз су5 Ав 2950 2965 2970
Те тк о сСує тб Суб Аза АТа таб ті Суб Суз су А5а с1уУ Суб 2975 7980 2985 су Аїа Суб Суз діа суз ТК суб Тр: обі Аїда ТР о АТа Су Таг 2990 2995 3000 сує сСубє ТР оАТа суб суз АЇа бує Суб суз ТК пе о біу сув сузв 3005 з010 3015 діа оїу бсуз Су5 Аїа тк Аа сіу бує Аіз Суз сжб Аа Аа біу 3020 3025 3035
Аїа Суз ТР Об1у АТа тт ооіїу Суб Суз Аїа 01у тт Аїа сіу су 3035 3040 3045
Аіа сСуз Тиг о Суз Аїа Суз Сузх АїТа Тиг о Аїа о1іу бує ТБе о сСуз віх 3050 3055 зо6О0 бім тйпг о Аїа Суб Суб ТБгоСузо Суз ТБгоСух ТВгоСуз АТа Суз Су»
З065 3070 З075
Тег оСу5 сСує трг Суб Суз АТа Аа тб Суб діа Су Аїд су Суб 5080 3085 3090
Аїа сСуб5 Бе о твг оСуз Таб оСув буз був Суб АТа з1іу тик Тк бу 3095 3100 3105
ТВе Суб тТпг о АТа Су тк обі Ту б1у біу тб був о тТвк Суб тТвК ле 3115 3129
Те отвк о Сує таб таб отак оїве твеоСує сСуз твр обу те осуз Те 3125 3130 3135
ТвВе отак тбе осСує Аа суб АТа те тТееб отиК осСуз Аа Аа діа су5
З140 3145 3150 суз ТВг о сСув сСу5з АТа сіу тваго те от АТа Аїа таб о тВеоСуб5 су5 3155 3160 3165
ТикКоСуз тйг оСуз ТБг осіу біу Аїа АТа а1у Аїа ТИР о Сух Суб сСує 3170 3175 з180
Аїа з1у сСубз Аїа су Су піу АТа Суб тТНг о АТа бує Тс Аїа сСуз
З185 з190 3195 су Аїа лів сім Аа бі Су таб обі Суб АТЯ б1іу Аа с1у АТа 3200 3205 з24О0 еіУу Аа Суб Аїа та отйК Те Су тб об1У Аїа Аа АТа тпе о оіу 3215 3220 275
Те оте о те те таб обіу Суб АЇа біу АТа Те отак тб о АТа тек 3230 3235 3240
Аїз Аїа Аїа сСуз Аїа діа сіу Ту зі бі б1у ТР те те та за 3250 3255 су тиг о б1у б1іу оіу суз був те осує тик о Ссуз суз Аа Аїа птиг 32650 32655 3270 діа тт тВе АЇа АТа біу тик о твйе бух діа біУу пі сСуз сСуз АЇВ 3275 3280 3285
Зі сім Аа те Суб тт ооіу торг о ЄТу сіу тагобіу су тег Аїв 3290 3295 3300
Су» Аїа Аа їпг о твгосіу АТа Суз ТВгосСує ТВгобіу су Суз Сує 3305 3310 3315
ТиготТнго Сув Суб Ту АТа сту АЇТа АТа сіу б1Уу ТВго АТа Суб Суз 3320 3325 3330
А1їа тк о су Аїа АТа ТК обі їВгбобує Суб Аїа буз бБ1Уу Аза су 3335 3340 3345
Зіу тс осі бі АТа оіу АТа Суб АТа Суз АТа 1у тк оте сЄж5 3350 3355 3360
АЗїа Аїш тпг оСуз Аїа б1у твго АТа Тс о АЇз Ата Аїа Аїа суз 61у
3305 3579 3375 сіу АТа їз сіу Ссуз Аіа біу сСуз Суз Тк оСу5з Те Сувз біу АЇїВ 33850 з3855 3390
ТБ АТа тТиг о АЇТа Аа Суз суб ТВе бі Аїа Суб сіу АЇа с твк суб
З5955 задо 3405
ТИиб Суз АТа сіу АТа суз 61у ТВ оСуз А1а с1іУу Су5 бу тик су за10 3415 3420
Аі1а с1їу тпгбос1у АТа ївбгосіу те бїу Су бує діа тТБеотТве ТнНег 3425 3435 2435
Суз Суз тТйготйг твгосуєя Тбг о сСуз Те обіу Суя Суз Сух Аа сту 3440 зад5 3450
Те сСух тнгоб1іу 21іу ві біу бує Тік обі сб1у бі біУу тТвг сту 3455 3460 3465 сСуз Сує їз сіу біу Суб го бїУ біу біу оту Суз Аза Те сСух 3470 3475 з480 і Суз ім Су ТВгобіу Суб таб обіу біу Тк обіу сСуз бр біу зав85 3490 495 е1у тйг бує тк обіу так осіу отвготие Суз те б1їу б1у тье таг 53500 3505 3510 аіу Суб біу Сує ТБ обіУу біу сСує бує Афа Те Тек біб Те су 3515 з52а 3525
Те АТа те осСуз ТВгРоСуз Аїз те те б1у був Суб так тк оту 3530 3535 ЗО 51У Суз Те обу те осСуя Твго с1у те Сух Аза біу те Ту сСує 3545 3550 5555
Суз б1іу бСуз Суз СТУ АТя діа АЇа сіу АїТа АТа бСуз ТК ОАїв сСуз 3560 3565 3570 сім аїу су Суб АТа віх Сузо тк обТу біУу АТа Суз АТа ти Су 5575 3580 3585
Те онко ТбгосСує Суб А1іа біу сСує Сує Суб о1їу б1у У Аїа Тпг 3550 3595 3600
Аїа Суз бух Тг о АТа Суз Суб АЇа тб оСуб Суб Тео Аїа тк осіТу 3605 3510 зв15
АТа с1у бу5 сіу Аїа б1у Тк Аїа Суз Суз Суз Суб Ав Суз Су
3620 3625 36530
ТВг АТа Су Сує Аа Суз Аа сСуз Суз Субз Аїа Те біу сіу бу 3635 3640 36545
Сух с1у жу5 Тг Аїа тйгосіу твВе еіу Суз Суб Су5 Суб сСув Тг зЗ65о0 3655 звей
АТа сіу суб діа сту тк Аїа сСуз Суз бі АТа Так о Сув б1у ТНг 3665 3670 3675 діа бїу сСуз Суз Суб Сух тт АЇа тргобіу Аа біу АЇа АТа су зво 3685 690 б1Уу тйго таб отйг Су тагосію суз Аїа біу с1у тс о АТа Аза су 36595 3700 3705
У сіу тнгобіу 2іу суз АТа бі Суб Аїа біу Суз сСу5 ТНг Су 3710 3715 3720
ТвеоСух тТвВе отак о АТа Суб Аїа Сує АТа АТа Аїа Суз буз сСуз Аїа 3725 3730 3735 зі Суз діа аіУу Тгобіу біу Су Аіа біу Суз Суб біуУу був те 37 3745 З750
Тиг оСуз тигобіу Су Суз Аіїа Аїа Су5 ТВг отТіт обім тк Аа с1У 735 37650 3755

Claims (23)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Композиція для лікування недрібноклітинного раку легень, яка містить шість мРНК, причому кожна мРНК кодує різний антиген, вибраний із групи, яка включає: 5Т4 (глікопротеїн трофобластів; ТРВС), Сурвівін (бакуловірусний ІАР-повторвмісний білок 5; ВІКС5), ММ-Е5ЗО-1 (нью-йоркську плоскоклітинну карциному 1 стравоходу; СТАСІ1БВ), МАСЕ-С1 (антиген меланоми родини СІ), МАСЕ-С2 (антиген меланоми родини С2) та МИСТ (муцин 1), де кожна мРНК є ідентичною до іншої послідовності РНК, вибраної з послідовностей РНК згідно з ЗЕО ІЮ МО: 19, 20, 21, 22, 23 або 24, та де кожна мРНК утворює комплекс з катіонною сполукою, вибраною із групи, яка включає катіонний пептид, катіонний білок, катіонний полісахарид, катіонний полімер і катіонний ліпід, і де лікування додатково включає введення хіміотерапевтичного агенту.
2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що катіонна сполука являє собою полікатіон, переважно протамін або олігофектамін, у найкращому варіанті протамін.
3. Композиція за п. 2, яка відрізняється тим, що співвідношення М/Р принаймні однієї мРНК до одного або більше полікатіонів знаходиться у межах приблизно 0,1-10, включаючи у межах приблизно 0,3-4, приблизно 0,5-2, приблизно 0,7-2 і приблизно 0,7-1,5.
4. Композиція за п. 2 або 3, яка відрізняється тим, що додатково містить принаймні одну вільну РНК, ідентичну до РНК, яка утворює комплекс з одним або декількома полікатіонами.
5. Композиція за будь-яким одним з пп. 1-4, яка відрізняється тим, що додатково включає принаймні один ад'ювант, де принаймні один ад'ювант переважно є вибраним з групи, до якої належать: катіонні або полікатіонні сполуки, до яких належать катіонні або полікатіонні пептиди або білки, включаючи протамін, нуклеолін, спермін або спермідин, полі-І -лізин (РІ), полі-аргінін, основні поліпептиди, проникаючі в клітину пептиди (СРР), включаючи ВІЛ-зв'язувальні пептиди, Таї, ВІЛ- 1 Таї (ВІЛ), похідні від Таї пептиди, пенетратин, похідні від МР22 або аналогічні пептиди, НОМ МР22 (простий герпес), МАР, КАГА або домени білкової трансдукції (РТО), РрТб620, багаті на пролін пептиди, багаті на аргінін пептиди, багаті на лізин пептиди, МРО-пептид(и), Рер-1, 1 - олігомери, пептид(и) кальцитоніну, взяті з антенопедії пептиди (зокрема, з антенопедії дрозофіли), рАпір, різі, ЕСЕ, лактоферин, Тгапзропап, Вшиїогіп-2, Вас715-24, бупВ, 5упВ(1), РМЕС, йСтТ-похідні пептиди, БАР, протамін, спермін, спермідин або гістони, катіонні полісахариди, включаючи хітозан, полібрен, катіонні полімери, включаючи поліетиленімін (РЕЇ), катіонні ліпіди, включаючи ВОТМА: (|1-(2,3-сіолеїлокси)пропіл)|-М,М,М-триметиламонійхлорид, ОМРАІЕ, ді-С14-амідин, СОТІМ, 5АЇМТ, ОС-Спої, ВОаТС, СТАР, БОРС, РОБАР, ООРЕ: діолеїлфосфатидилетаноламін, роО5РА, рорАВ, рос, ОМЕРС, росзв: діоктадециламідогліцилопермін, СІМЕА: дімирісто-оксипропілдиметилгідроксіетиламонійбромід, роОТтАР: діолеїлокси-3-(триметиламоніо)пропан, ро-6-14: О,О-дитетрадеканоїл-М-(а- триметиламоніоацетил)діетаноламіну хлорид, СІІР1: рац-(2,3-діоктадецилоксипропіл)(2- гідроксіетил)|диметиламонійхлорид, СПР: рац-(2(2,3- дигексадецилоксипропілоксиметилоксі)етил|Ігриметиламоній, СПРО: рац-(2(2,3- дигексадецилоксипропілоксисукцинілоксі)етиліІгриметиламоній, олігофектамін або катіонні або полікатіонні полімери, включаючи модифіковані поліамінокислоти, включаючи полімери ВД- амінокислот або обернені поліаміди, модифіковані поліетилени, включаючи РУР (полі(М-етил-4- вінілпіридинійбромід)), модифіковані акрилати, включаючи РОМАЕМА (поліідиметиламіноетилметилакрилат)), модифіковані амідоаміни, включаючи рАМАМ (полі(амідоамін)), модифікований полібетааміноестер (РВАЕ), включаючи модифіковані у діамінокінцевому фрагменті співполімери 1,4 бутандіолдіакрилату та 5-аміно-1-пентанолу, дендримери, включаючи дендримери проліпропіламіну або дендримери на основі рАМАМ, поліїмінси), включаючи РЕЇ: полі(етиленімін), полі(пропіленімін), поліаліламін, полімери на основі цукрового остова, включаючи полімери на основі циклодекстрину, полімери на основі декстрану, хітозан і т. ін., полімери на основі силанового остова, такі як співполімери РМОХА- РОМ і т. ін., блок-полімери, які складаються з комбінації одного або кількох катіонних блоків, вибраних з катіонного полімеру, як згадано вище, та одного або кількох гідрофільних або гідрофобних блоків (наприклад, поліетиленгліколю); або катіонні або полікатіонні білки або пептиди, вибрані з нижчезазначених білків або пептидів, які мають таку загальну формулу (1): (Ага); (Гув)т; (Нів)а; (Огп)о; (Хаа)х, причому Інтиепжожх-8-15, і І, т, п або о незалежно одне від одного можуть бути будь-яким числом, вибраним з-поміж 0, 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або 15, за умови, що загальний вміст Аго, Г ув, Ні5 та Огп представляє принаймні 50 95 усіх амінокислот олігопептиду; і Хаа може бути будь-якою амінокислотою, вибраною з-поміж нативних («хприродних) або ненативних амінокислот, за винятком Аго, Гуз, Ні5 або Опт; і х може бути будь-яким числом, вибраним з-поміж 0, 1, 2, З або 4, за умови, що загальний вміст Хаа не перевищує 50 95 усіх амінокислот олігопептиду; або нуклеїнові кислоти, які мають формулу (І): СіХтОя, причому б є гуанозином, уридином або аналогом гуанозину або уридину; Х є гуанозином, уридином, аденозином, тимідином, цитидином або аналогом вищезгаданих нуклеотидів; І є цілим числом від 1 до 40, причому, якщо 1-1, (з є гуанозином або його аналогом, якщо І»1, принаймні 50 95 нуклеотидів є гуанозином або його аналогом; т є цілим числом і дорівнює принаймні 3; причому, якщо т-3, Х є уридином або його аналогом, якщо т»3, трапляються принаймні З послідовні уридини або аналоги уридину; п є цілим числом від 1 до 40, причому, якщо п-!1, б є гуанозином або його аналогом, якщо п»1, принаймні 50 95 нуклеотидів є гуанозином або його аналогом; або нуклеїнові кислоти, які мають формулу (ПП): СіХтСя, причому С є цитидином, уридином або аналогом цитидину або уридину; Х є гуанозином, уридином, аденозином, тимідином, цитидином або аналогом вищезгаданих нуклеотидів; І є цілим числом від 1 до 40, причому, якщо 1-1, С є цитидином або його аналогом, якщо І»1, принаймні 50 95 нуклеотидів є цитидином або його аналогом; т є цілим числом і дорівнює принаймні 3; причому, якщо т-3, Х є уридином або його аналогом, якщо т»3, трапляються принаймні З послідовні уридини або аналоги уридину; п є цілим числом від 1 до 40, причому, якщо п-1, С є цитидином або його аналогом, якщо п»1, принаймні 50 95 нуклеотидів є цитидином або його аналогом.
6. Вакцина для лікування недрібноклітинного раку легень, яка включає композицію за будь-яким одним з пп. 1-5, де вакцина переважно додатково включає фармацевтично прийнятний носій, де лікування додатково включає введення хіміотерапевтичного агенту. Зо
7. Композиція за будь-яким одним з пп. 1-5 або вакцина за пунктом 6 для лікування, при якому хіміотерапевтичний агент, що вводять одночасно, вибирають із групи, яка складається із сполуки на основі препаратів платини, пеметрекседу, гемцитабіну, таксанів, вінорелбіну, етопозиду, доцетакселу і паклітакселу.
8. Композиція за будь-яким одним з пп. 1-5 і 7 або вакцина за пунктом 6 або 7, де лікування додатково включає променеву терапію.
9. Композиція за будь-яким одним з пп. 1-5, 7 і 8 або вакцина за будь-яким одним з пп. 6-8, для лікування пацієнта, який має стадію ІІ або стадію ІМ недрібноклітинного раку легень.
10. Композиція або вакцина за пунктом 9, де недрібноклітинний рак легень характеризується неплоскоклітинною гістологією.
11. Композиція за будь-яким одним з пп. 1-5, 7-10 або вакцина за будь-яким одним з пп. 6-10, де суб'єкт являє собою пацієнта, який отримує хіміотерапію, переважно хіміотерапію на основі препаратів платини або комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини, або пацієнта, який має досягнуту часткову відповідь або стабілізацію захворювання після хіміотерапії.
12. Комбінація шести мРНК для лікування недрібноклітинного раку легень, де кожна мРНК кодує різний антиген, вибраний із групи, яка включає 514, Сурвівін, МЖ-Е5О-1, МАСЕ-С1, МАСЕ-С2 та МИС, де кожна мРНК є ідентичною до іншої послідовності РНК, вибраної з послідовностей РНК згідно з ЗЕО ІЮ МО: 19, 20, 21, 22, 23 або 24, та де кожна мРНК утворює комплекс з катіонною сполукою, вибраною із групи, яка включає катіонний пептид, катіонний білок, катіонний полісахарид, катіонний полімер і катіонний ліпід, і де лікування додатково включає введення хіміотерапевтичного агенту.
13. Комбінація за пунктом 12, яка відрізняється тим, що кожну із шести мРНК вводять окремо.
14. Комбінація за пунктом 12 або 13, яка відрізняється тим, що мРНК вводять шляхом внутрішньошкірної ін'єкції.
15. Комбінація за будь-яким одним з пп. 12-14, де лікування додатково включає променеву терапію.
16. Комбінація за будь-яким одним з пп. 12-15, для лікування пацієнта, який має стадію І або стадію ІМ недрібноклітинного раку легень.
17. Комбінація за пунктом 16, де недрібноклітинний рак легень характеризується бо неплоскоклітинною гістологією.
18. Комбінація за будь-яким одним з пп. 12-17, де суб'єкт являє собою пацієнта, який отримує хіміотерапію, переважно хіміотерапію на основі препаратів платини або комбіновану хіміотерапію на основі препаратів платини, або пацієнта, який має досягнуту часткову відповідь або стабілізацію захворювання після хіміотерапії.
19. Комплект компонентів для лікування недрібноклітинного раку легень, який містить шість МРНК, як визначено в пункті 1, та, необов'язково, розчинник.
20. Комплект за п. 19, який відрізняється тим, що кожна мРНК передбачена в окремому компоненті.
21. Комплект за п. 19 або 20, який відрізняється тим, що кожна мРНК передбачається у ліофілізованій формі.
22. Комплект за п. 19, який відрізняється тим, що містить принаймні два компоненти, що містять шість мРНК.
23. Комплект за будь-яким одним з пп. 19-22, який відрізняється тим, що розчинник являє собою лактатний розчин Рінгера.
шк. Ди ж А зі з та 8) линас-Аф -С30 з гпрнтж ун ух пні ркк кі т тя пуер но печиво ур оии ДІБ ІЧ її я шк зи ча ди и у СЕ Не ее е|нас УВА ДИ причи, КД ие у и КАМ их АК и ти ки ЛЯ ле ві т ПИЛОК АСЄКЯ М ПАСХА МК ие и Й, ї Стою ся дя мя чия коле ітя дтим т сич ру ви ли рик коню ит и рт щи роту ще пори и подути и тя : пити, чАССрПОССсАДеОпОедеГег ло х Ц осв В Го ПСО АВС СМІАСУЦЯС зл НК: са и ПОС СО СН а ЗА КОС АС і со нано а ОС ТОК - порчу пит рт щ ся пря - - чт притут . - них ув три КА с о СТЮ Ех сис М у и С ких вк я Е СЛ сІ Є спо и «куки кий УК ке кими гр іон тя ситет Ер те липи ил дик МИ ТК С СЯ же ШИ как С зима я ки ЛИ М сект, орки зяоух их джу тунік з з пт ка є пе А АЙ В ВВ га ТЕ я пу речи дме дек чдеси НА ЕОМ а А, пАССАВНСЄ МИ СИНУ ДІ СВД м МОНА с ВК злаки МИ СВ Мила АТ КК КИ и ки пт М - кити т фути сх ук ж, засво еп АВ З пане СН го ПОС ск ОС в скит КАК І ШОКУ АС АК Ка в по Ак ОА АСВ КО НО А що вртжитя - - срітя хоч уня - стриж -- зон - с пут прут вера - пора пив - ут т зад рт с І -- паща си А ТТН ет ен ут питати КУ и Сади АЮ АД В ВИ нена їн ЛИ о КАТ М ХК ТАТУ осн щит ризи я чи я. соч тя яті с асне нм г. с. варти рт риничечрриких при жу кри зрив де пе где . мно птатаю я ери пес и ие о Пх ОА СА КИ тд тт тА Ед ДЕН НЯНЯ ЩІ ве А, Се з Меп КАШУ МІ ак клини УК Ма а ОКХ, дуку З - дл х пи аа и а Ов во я Ва а ау и а НЕ о НН пе СЕН сс и а ОА а Ва Аа и ОК В В ВЕ ни ни ЗО х ол ОА и ок Ех Ос МЕНЯ Ух А Кл Кк ситет щук - А - алотот дня т итю тт т ятритя ру рт ся, зр пече ати рити я - песлесдестадиестсАдея АДАМ с ми и У ситет, ще плоти терени пс ДМА а ОА п ай ЖИ СОН о си лай Ск Мис и Как ки ки Ма КИ окис кою о Ми КИ ТЕ я пит с вурия тки перу т си и у -4 зятя ря втиснути ун жесасіспосесаслос я л. 1 що СиИ А сад ИН Ей Є пуд ДІМ І СИСМОЯ СИС іх Ве т. САС упУпАч Мт. іє пу ПОС «КМТ сект КИ КАТЮ ПМ ККМНЕ т - х ки К - - ух тиву и и тв ит и ря ту- рід ту уч рих ІСТ ЕЕ с сеадавуцеи 1: Ем В и ее ОМ ще С ой НО МАО у кн ми Ко МИ З с. ПОЛО я и Кт ПТ У НО КОМ З іх у стояти нт тот тут ня тут тт ут. Ел о ери ут т, падку тот ит тя тя іт тот зпепесдли лиття еетнтве ІДЕ пулу тини іт и тити ад Кри А и А ССО АК МОКлЛакмася КАВА АКА М КИ КЯ х СБК и ик КД и КТК | Ї. т пет яит ит т пут тт ити ти жк ут пути рт дучер асани пр їз ЕК п АИ СПАС пл Її: УСС ІК С ІЯ ше НИХ САДОСКШИТОІЄ ОКО С ши шжітряя т Удод ї ЯКА СИ ях Я КА С Си АД АК ЛО кВ Аж х хату уижиу ризи пет ил, - з золи виде и сх ву В МН ВК В ВН пзсСосюа ОО М У ни Се литкк и ТУТ АХ ХО ОН ВІ п КУ СЯ ге У. ект МА АКТІ и Мх ТД х ! поро тот щит тич тс ет укя ж пий пев ви и р, п вух ЗА млстидтА ен рве ле а я о тя зеня да вові вра в На ун з дес ще СРО Я. ее хан Мк о ОТ ям М Ге дова я Все Ек із МК Юя КЛДеК ХХ у де серии ТЕ титри - стояв п з не коню орі р тя ЧІДСА ВАКАНТНІ ОСА би дис ТА КК тА щи НДІ АТАК КО Пил ки СесИЗ Ук тип КМУ ЕХ, й Я ще т я пуд я з ц я. ем ри, не - - дит з з зежееси ее ловити Вега тах ТВ, ї а СУ а: В АК шо Є я з ее У МОХ С хх ПКС СОТ Не ет ОМА сти шуц Її ЗАД с ния МСЕ МА уки КА КИ гу зх пит ин лю х сх кр рих стою скосу ие пря кре хі ; у. - при ня тини ТИЧ тити нт у ит ту т лретят пед нич вв
Е т. Ї ті-у лез СТ Не ВІ шк МАХ КА : ЩЕ СЕ САЛО вух в ВОЗ Ока ие МН ЯНЯ х Я їй СИЛ Ото КО х нега ах КАША сяк У. пит, пит тки тих о ре ее поети отит отут тонн пет тд мери АСАД ДИ С МІ ААПАДСНОТВЛОТАСАДОСдІ ТОДІ вес пдот Я з; а ; : ех еахВн АТ КК с, СА АСАЄ ак АК с ками ил Мо Масу КТ и жк КИТА т Етики ТИ ти ких - Як - се бує АЛЕ АСАД ее ЧУ зимі ечІдмА тич МИ ки А ССС СО МОН ОО Б Кя ЗО АТО и НО І. х я пут тими тризич морю т н- пики пив те ер тими НІ пе КЕ я КЕ ГААУуея вУкНї ДС їй су АІС ТА де Чі окис ПОТ КИ, Е да ХАДСОН АСЕ АС Вас ОНА СИЯ Яе Ас НЯ, «І АЗК МКОВАМЯ Е. РАСА КИ пот дру дк доотов вс о док вовст скосу тту туту тут отв стр, КУ вдала лив А АВ м жк ТАЙ АААВлАААлАд ад АААдАдЕ де ПААдДАД АКА АВАлЛАКААААдАДА АКА кА воді Доу Буй п ек о й полку ге каня 7 ХМЛТАДИдАдАлІ луг РЕА М ЕП АСАГЗААИАД окр к ПЕо ї з з з - я шт спос Аве Ва дрлодАДВІГАЛТ ЧИНИ их ОСА СТ ВАС ААІЛІ САС . А менш Оу іо І МЕ в ни и и и и а и х ї
- Є істонаї, штлук -пОЗ ССЗ гістенаї. ЗТ Сутиав-ле са асо нь лат - спессетесдследссяо ТСН АС ВО ОО ТС ОКО ІНТЕ НС А ТКС АС ТАСИТДЕ НН НОЯ ща - СИТА А ДАО ТАСТА НТ сих хр трняих ичі ее ре ни акик а и САС ДОС АИ й Де ен ОК АСК про о і Ла НС й ПЛ ОКА ОТО пре дя СВОЮ СО пспевссДвссосша сис пос ет ен ОА СН ТС печити и рт ти у и С НТ) шл ОДА ОА НС ТНТУ пет ету ри щі ок ий що о аня ї т що вих ки КАМТо У ЕСЕ СИТА СТ вт и сСтлмульлки куки тити лих пОрсСси и ОтеАСТОСАСТОСА Сенс дорн ев СЕК Ен р сг сао Пе ПОН ААОТТЯ співу тупик три ка Ки КК си ТАЗ АД пот ї рату Дом КА СТ ко перу в их СЕМА ПНТ АТ "даси дтелАИ АВ А АС іх рити ЕМАЛЬ Ме СС Сх Й песо ре тиви ет ЗАШИТИ Ов во аа ха В НО УІПА НАЛИВУ ВМ СЕ ЕС ПОЛЕ при ит тити й ОЦТОМ оо тик В ад дани и і я виш ОС ІЗ ССО СС СО АСТМИ СИС й ССО ОА АСОМ СОООН АОКСОЮ ОСС ОК АС СЕ с шити шинку жи поси трех ак прчіко у ати ти ще ї хо хотнця МАКИ . де ДИНА ж й ЯСЛА пи ЕЕ ТИ си о Кажу . ост ил ти ОН Я ем ШОКУ ОКА ОТО СТ ее Де ТтЬня пи о ОО ТО а поясу сутки сих екрани шко мае ОА дик Трек лу рр Си МТУ АСОМ ОСС ОС Од СН Й ЗласАЕТІС уст ення АСОдНЧНдсАде ТАЄМНІ ЗАСІД ТАНЕ спот, АЛ КЛ ил Ии кине АС КТААССАСАС ООН АХ ЗИСПАОСІА СС СА АССдОСАЦОЄ зеесвиомо Италии жа АСК АЄ С НЕНІЄ Й ди, о а КЕ му КИ ТОН СМ АТ пом ТенН Т шани ее ее й оран АН ЦО ТОН тету тат т тки коти ут ККАЛ аМтУ ІДС сет ОС Пан век ан Ве ни Нео СЯ ТАТИ МОСТОМ САС УСС ПОВ СТАЄТЕ ОСТ СЯ ПДК ТСН ДО КАСА ких сер три па ак и я Зп ІДС й зелене сесисАССпАССИСсде . ОА ООН ПОСТА САС ОГО ТАВСТУАКТАСЯ пНОоСсюВСАСОСПОССУМ СІНА пит да в ях Мои ин жкт иа ви ДАЕ не з ККУ АССТТЗОАВИАСААСЗСОССТТОАЛЕЗУЄ ПАК ТАС АСИСТ САЗАН ще АОС АСЧНИ ВКЛ АСТ у де а вве СЕ Уко кН МИ ІКУЮ КИ ЛЯ ПОСТ АПА АВОССС о Це АсАТ ОСС АСАД КИ ОНАЗ ОКА А ТО ДОА САС рас т а не а Ви НИ ВВ СР ПОДАЧА дисАДО НІ м І ІА ОН ОА ДСН АСК, МОТО АТАКИ МУЗА СОН їй МЕ КАСА АСАТИН І, й тд о МО АНЯ х черви МИЛЬ сук У ку й ДР воду ОК с 7 СВ Ка АКА ОК НАСТЯ я п ЕКО НН В АКТОМ А А, ПЕКЛО АРОК В ДЕМОНИ Беата аа КИЄВУ КУКИ ДСО СОТ С АКАСАКТМО ру АТ АКА КТК, КАЛ АС ОСС ЗАСТСАС ССО що ше СЕ КАЛИТА - дру икщу па А ДЦ АНО кпк титри Це КчЯк ХІТ МК як де ее КТК Ж КК КТ зе А тиви Се а р ТА пагін Іс ла Стаса. ОС АС Тема АОС МИТ СМС, ст вирити ВАБЛІЯДСЬКАКОЮЮСЯ Й Серед АЕС АСААСАИСОС СО АСОМ СОТ ІД АПАДОШ СНІД АСАМСОМ а АВІА ААСАДОСИЮАСНО пттихих ОСА САЛО ОСАСАА пиву тити ми АТ Й ЕЕ АСК З СУ МО ПАСА АС КАС СИ АС СОСЯСТСЮ што ЗМО АКНЕ . А ПАСА ТАКСИ О пи Ас АСЮЮИЗО АСОМ вослосрсеанееє єв Й МТА АСТ НДС ЕСЕ ТС ис ТАТА ВААС СА ЛОКК, ЗДО НА ТАС ТА ТАС АОПДАСТСОСОЗАССИСПО ДОС СИЛН кАдАдАдАдядА РУКУ ОГ Млин АВ АДААКААДАВДААА корт пдаАдаА ААВАДААВАдДАДА МЕККА АПТААСААААдААд, СОСПОСОСИЕС САС! САСТА С ТО ОСС ІА - зи я ря БООСОМОСюСо перрпессртеєсесоссвесос в їв ЛВ ОВ А В СОЯ кож АЛАНА У АХА АКААХААКАЛАД ААДААДААЛААААВАЛАД ше денег г зерен р рт т тилу СоААКС ОСВОЄНІ ге АСК СТІ У й ча КВ зв г.
ВГСОВ дикого типу ЛИХ паю ною Се ОН АКТОВА ССО АТАК паза варвари сецееССАССИССТССЄ САС пс нац па сила Са МОСС СЕ КВ АСВ ОС СПЛЕСКУ ОС В СНАСТІ ОА ОВС АКСІОМ ІС САЛОН ШТ шик аа А С ІА СТАДО ОСТ ОС АТО ВСТАВ СТ ЕНОСОТО ОАССС ее ка в дод и пассссосиєпоососларессюєс тел АОСИПОПСО САВА пери вес ЛІС ЛИС Са ОС СО ОСА ВС ССАССПОССО ДАО САС ОВ, ПОСДОААСССАСИСОССОДОССПОДІ СОМИ СС СО ОСАССАДПОСОДеСОЯ СМС ССС АСЕСОИ ОО СОС ААСЄМЕАТСТ І ААССАСАЙЯ СОС ОСМЧААСАПСАСОСЧеЕСАЄ рАо слава денна и кат Ка он ОН а ема с АСОМ СОЮ Дан ПО АН т УК Іа вАЄТИ КУ АОС АССАСН ОСИ ТЛІДОССИ ОС ОССОпА ШИ СИВаОСАЛО СИС ОСИ САВОСАС ВЗА СО КАВОВА АТ ВС СИЗ ПолиО СТЛААССОАСООИССССОСААС СПАС ВСАА АСААКДОСТ ССС АЗОАСААННИССОС АОС СОМ АСАЛНИАС ОСС АЗС АОС МАСОССО АСВ АСОМ СОПЕСАСААОСДАНСССПОССС ОПОВ А СПОСО ВОАС АСАПООМИ АС ОС ОСАДОЗДААСАЛАСОЛАБИВСАОВОСАДААСССО МОСС А ОКА АДААОАСТА АОС ОКО МОЛ АСТОСААСТОИМАВАСИХ ПОВБАСПОЗ ДОС СОВА С ОСА ССС САЖА ОССИТСИ МАСИ КЛ ССИВЕ АЛ ТО ВАСОСАИ А АДИСОСИ АП ССТОЮИТ ОСТІ ИВО А ОЗ КАС СВСАДАООАОААДАДАСТНЯОЯ АС АКССАСААЙОС ТАТА АСАЦНЗ АВ ОИСАО ПАСА АПСЕДАРІИСЯ АИЗСОАССССТВ А ПП АДСОААСОСЮСТАВО ОМ ААСЦ СОВА ЗИСИСА с,
ВТС оС оптимізована випесовасвссцесвоасовсвавссввосвсососодевоссвосивсовсуєвововосисо сеепесуевулацевастовз ючтосдаеасуєєстероєсяооєсолосевслсслесисиссва СО СО ОК и Мк ПАС АСО шою с САС МАТОМ БО СЕП АНА СОДИ ОСсАЄна Соя СИ Бл с КН тал ге ВАЄ Ся САДКА СИЛ ВІН ЛЯ ССС ЧАСЮЬОЄ ПО СПАС ССКВАССТТЬМ ла АССТЮ ЕОСААКСВСКТІ с ЗО що С они Ве ее пОСисОос кл со мА МАСИ ССО Пе ТАТА ру си С ГСК САС СУС МОСС ОСИ АС САТ СА МОДА САВЕТСО М ВН КАХ ЛОЮ ООКОЮСО СВОЮ О САС ОЗ АОБСААОСВОСМО СО ЛУ осо ссставивоисбАВСПОАО СОС СААССЛО МОВИ СО СССВАВОАСБАБСЕВСАСААО ОДБ МОСТА ОН АННА ІВ КД АН СК С Сх Со г3 о С ОС с ЛИС чл НО с Сен ОСС сисеЄ ААОСАСТИССЮ 5 СЛИЗ СУ вСшАс цес ВАеНІ с С ше АОС ЗО С СОПОСОБ ДеС СОС ОМВО СОВАЮААСАВОСОСИО Ву ВН ОЮСОСАСООАОССО СДС СОВОАДО САС ОСАССТЧАЮМСССОСАСТМОИАСІВ АСВ к в) САУ СО ся Я ССААЛСЯ СИВА МЕН ША СЛАВКО ОО СОЮ ШИ ПМОСИОВАСКАСАВОС ав ее СИС САТ Ку ВАТА САМЄ о ААСМАА їз АС С АК їз и сх ІЗ ДАО шах С спадовютвоєвсвтаєтссодавдсднасовадессазуєтссувавесуввАєТОССОСОВАОС усоаосувсовессєАостососюєстоют са весАОСИАССТЬУЮОСОСОвОМОСегОСО оасосивдисововоєАОСУВССЮСО ЗО есИ ВО ВО СОСАВОСОСАВООВСАОСААОАДО ЛЮ АНССАСАДСАООССТОВАВИССИВСОССНАССАСАОСОВЛаВОВИАССАСОВССОСПАССАСАНСА ДОН АВЮКО СВ; МОВА ОО ОО ВОСМСТЬВ АСОМ г. 4
Єрвівін (С) павао А оЯЄЗО САС АВОСОПАССВИ ОСС ОСАД ОО ОТ АСС СОМ СС ПАДОВАСС ВЕК ОО ОС ОК ОСА АВАНС АБО СНО АВС ВСАА СЮ АСВ сю АСВ ОС САПОСАСИВССКСАССОВАСАЛСВАССНИАССТЯСИ ОВО ІССТОЄС Шо вАНВЕ ВС С ЛУСКОЮ СЯ КНУ СОКУ ЛО АКОТ АЮ ОСА САЛО АСВ ОСА ОО ЛДО КА ОСТ ЕАСС И САМА АВ САТ ОА АКТ АС ОСИ СОВИ АСЮ ТОЮ ПАВИСИОВАССОА ОС ОССАЛОААСААОАИСОСОААОВАСАОССДАСААСААСААСАКОАО ЛИВОСТІ ВА А АСОМ ПВКЛО СВОИ ЛОРКА ІСКОР МЛК МО ВИТ СІ АС СВІ В ПАС АЙААСАСИ ВАСКО СОЮИАО ОЦТОМ АВЕВ ОО ОСС СОЮ ОСТЛ С АССТА МАЛА ААВААЛАААЛАААААЛАААЛАКАКА КАНАЛ АВАЛАКАКААААЛАЛАКАААКАКНКАА ААДАКАПАШИОССССВ СОСОК ОО СО ООН ОМ АБАСАВЮ ЄВА
БІГ. я Єурзівін СС рпвав о ЄЗО істо, ЗОВАЧЗВАДОСИНАСОАООВО ОВО ОСАЮСС ССО ОСТ ВО САС ССО ПОСАД ЗАСЙАОСЮОАЙОСССАССО ОА ААСТЛІЗОСЮСВЬ КИТ УВА ВООЗ ОК ЛА ЗАШИТИ Ва ла ОСАД ВІСК СА СС А А АС ОО ВОК НКУ ПОСТА ДІСТАЄМО ДАВАЛО ВОЮ ЕМО АСЛЯ КОС АСОСС ДО СОАО ЗВІСАСААСААОСАСВСОСОВОСТОСПООСДОСМ ОСС ПОДООЗИСААОДАО СВО ОВО сла вВОр АЮ СОЦ ССО ВАС ПОС АСК АВСОЮЮ САД! АсАТ СО СОАА АСВ ВАСААСАВИ КАСА ЦСЕИСОВСВ АСВ СВОИ ОСИ МОСС АНС шАССАОСЮЮ БСК ВАСУ АСОСАОВ КОМА ААБАСОСАСО ЛО СЮ А ЄВ ОСОЄ ССДАОСОВ ОСС СО ОПО СОМИ САССПАОАШААПААААВАДАААААЛАКАААААВА ВАКААМААВААМАВАВААААВАЛАКААЛААВААКАААЛАКААЛААВКИИОСАНОСОС ОСС ОО ОСВОЮВАТИ ТЛО АВАВССАССАЛААНИО г. о у я. 5 ст Схрвівін СО дикого типу крити или рт рифу кими три тити те и дит Тит тет АЗОТ АСЕПТИКИ ВИЗ ОС ОААСТЗАССАКС АОС ТАСАЦТИ Уж див тт чт тиви и ТИ ТЕЗЕ ТЕ три три и у Ти и туя юн тт ут т ати у и ти тиви Тит СеАЗАВИ НС Ли ки ко СИС А А сок плеса тх рат Ву виде дув ри ел ТЕТ ет дич Нд й ОСПТАСТ КОКО ОА СТА ТА АССОСА СПАСА СО ОСС ТС СОТОК СТА А САСИ ПУСТА, пули ртйи і и ди тити ВІ Ід КЕТІ В АД дит ТІ ТЕ Тими причи третин ОН ас ОА ОВО АС КС АК КОХАВ АЛАВАКЕВНИ СИТО ТО КЬССООЮОМОТО тире уд ДІ енА Ок рУ ТД ДТ ТВ гетри Те АТ дити вид ДАХ СПО СААВАВІСАЛ ЛЗ КАВААИПТАКОСССЦ ЗО ЛЗ АКНЕ ИСДААСТ АСВ АСЗАВААЄ чо ТИ ДОВ ЖІ Де Туди пдв піт диву В УТ ВТ тд вит ти ВТ ПОРА АСАДАА ЛИСА АСОСВЛАКСААСАКТ АД ДЕ ААВАМИ САС ААСТЛИ АВ АВА узріктктене ве пу рив І Ве ки ЗЕ еКТ ТиВ ЗНАКИ КВ М ОМ ОНА ННВАНОА дек ня єї чГг.7 снів зро жи 5, Єурзівін ЄВ СС - опунмїзована: рими и ми и і и иу и и и яр пи и и я и тр тему тиме и ря чити тут тину и її АНЕТТИ ШО ОО АСК ЛВ Ся щи М мін ож вед в ке ик уче сітку Вр фо Ян вив ЕК ТЯ Км и е до я кт и тия тет кВ СААОАДОСХВ ОС ОСИ пасе СЮ ОО САС ОСА ОО А ПОН ОВ АОС УА, уче лу Ди пити у их Тир и п ТИ р и ретинол тетуе пора АН І ВСАА КОС ОСТ ОСТ ОТ ОС АСИСТ А ие ри о ЕТ и тю и и тя дія чи у ту ут п у сти рев пи вису ее рем ие ти ит п и АТ СТА М А АСК ЛТАВА АСАД АСВ ВИ ЮНІ ЛИСТ ПЛОТІ му ет плив ти дит Вуд п Ту Ти у тиву ру пу ТІ и ух соми а ПА АВІА НВ АНТ а АК ОО ОАЕ КН А СИ МАСИ ЗАВ ВС зи ту пев д плив лоти в В ДЯ под тв ду ти ТТ т в у тих и ЗАТ ВТ ТУ ССАВЕААСААЗАСОО АЛ АСАС САЛА ДАА АСАД САС САВАСССССААСАв ртєпучити чи ту Тит те ву ти и и у тити у Ти, ЗИСК НАС АСВ СМ ЗА ОА СН ВАС А жур сг. 8
МУ-ЕБО- (СС упвак-АвЯСЗО ПО ДОЕАКОС ПАСТ НСНУ ОСИ М СИС АОС СССС ОА НДО САС ши ОК ОА МО СС ВИ З СО ОВАЛ СКИТ ОД СНО СОСНА САМОК НЯ ОСАЦВ СОВІСТЮ СЕС МОВ ОС ВМ ОД ОСНО СО шИОгСн епАКОСТ СС ДСП ЗАЛА ІСТ СИС ССС ОМВО КОЗА АОС ОСС АС ПОСТАЄ КІСТА МОСК СОС З АСТМА ТО А сопла т сосоєи АОС ССвадАСВОСССсо ССО са сю АСОЦІАЛЬНИХ ПОЕМИК КМЗ САС ОН ОКО СК ПОСАД АОСАЕС ОСС ОСА ССАСОЄТ АВС ПЗАТ ЗАС АСТОТВ ОСИ ОСНО МО ОСТ СО АНТ ОС СС САН ОО АССТАСМАС ЛІВА ВАС ТЗ АСОМ АСКХКІЮССАНОСЮТЬ СОУ АСОМ ОО ОК АССОСАСАЙААОВАКАДААВ ААААААААДАААВВАКВААВКААААДААДААААДАААДАКАААВАААААВАДААААМАОСОССС СЕПОССООССсеОС ССО ССО АВАСАЛІН ОС ААЦИ го З МУ-ЕБОЛ (СС)улпаве АбЯ СЄЗО тістов ВЕ, ФА АСВ! САСВОСОПСАСЯЮЮОСОСОСОМОДОСООССОЯСО СОСДОСОоВОСВОЛОВОЯ пАОВОССС ОЦ ОПО ОСА ВАСЕОС ССС СОСО Депо Ос ОКО ОН ОО В Си КН АК ОА КО НЕ АКСТОИТИОХ Посади АОС ОСС ПОЗА ПИ СТА ССО ТАС Та ЗО АСЕАН СО ДОС КЗ СА КО ОК АС АСК СЕНТ ОК НО ВОК А АС АС ОТАСЮСИ ЛЯ СА АСИСТ АСВ ОД САТ ВО СИ ВОАС ЗАСТ СВО ОТО АСВ САСИСТ ОВС ОДА АС ат ПА ОСА ОС АССОВАОЦОСТ ОСС ТО СОС В ОН СОС ОСА ОСС АСК КН АС АТАМАС ГО АКТАМИ ВОК ПОАОСТААСТВ ВІДСТОЮ ПОСТ ОС АСОВАЗ А ААОАААААВАААААААААААААЛАКАВААА АДАМА АДААВААААААВАДААААВААААААПОСАНОССПОСССЮОСОССЮСОСЮТО МУК ПОСАДОК ОСА ТЕМА «ФІГ. 10
"5: осо Ну ке дике з МУ-Е50-1 СО де Що кун зр вит 7 НУ пе ен иа А ЕЕ у СЕМИ на С ЗАТЕ пас її ТОСЕАИ ЗАТЕ АК МТА АС НАМ й учня ДІДОМ М ОКА еепатедолнелиесде КАК МУК свовоосепесевевеое АСВ Ер АСИСТ НН і ни Ер тити ит, БАК тА САЛІ НСС шк ТИССА ОН АЛЕЛІ СТО зе оосссовиее ЛА АС ТАТО дособовосадессогоссгое кА КС тя й пепевогеє зе Але Й ССАВЦІ МОН тк тили Мина Н НЯ ТИТА: ви ет вик дуття сади -се ЛПС А сплю п АС домо Іл ОСА Ото й УЕ М ТААОГЛАМИС ТОКАИ А У притчу тих ВОЛОС МА ДО «сдосвесувеесовеве ЕНН ака ан НН ВЕ зеовипеАВИСАСВКО ея ШАШОК пе СА Щі пе АС Й ДОМОВ СО ТОМ слІСАСТВНЄ ПОКО ТО ДКН ТАМТ чекай ДСОЕИЄ Ор ПАТ У ослів лораестіст Аве МУ ССО у пет ит ит КАТ Кв щк І щк ЗАПАС ее и вен АОСОПОБСОСАЗаДеСосс САСОВОСАЛООССАОСОСИСО РКО : ЗА АССАЧ КТС ЛЕТ ка от пяти НЕ раки ни НН пір чкхю са де пелена льний п ее пасив ечулугя ЛЕО КИ. пнеусесовисвовтт МОСавОААСАЙАСИВАЮИВМИОСЮІ свсосданосиераосовиво Кал, й дрів ПОД еКТИ. й ССО З АПЕСАТТАЄ АСКОД СТО ТОСТИ АМ ее Тин ри тиви си х пЕч Ту СН ЕС ВТ ЯСНІ а що І - пли ек, вип дів Я АС СВО ЕМ сита реж
ФІГ. 11 їх 1. і з ССс-оп та мізонваня мулаєвлеве сс пртия приручити р СОС НЯ - пі ГОД ДСА ши пд МАО --- одежу дос о сли па т Керн етіитв у иа т и КМ ї пептпевссвио пасе си А НО - - зевдсвсовосвосвоосеоє АСИСТ ЛИ ЕЕ -к палет деам ис - - Що січня ЗАД КК и -В- -Щш ж серхтржнчеяох ВАСеНЗООЮЄЬЮ ВИС АСЮ ССО т жолессспацдевсеесе пеАпоссвсвососвОоосСсооовво, посососодесоссесслососо СОЦ АН в юсАПООСеЮССсою Овес вх ся - Щ дня. пси чулЕни Роли ММ я розу ко свй пара ОО СОС АССОЮТСТЯ зссописсосеведиос копа цю ою Са ЗИСК а мая А ее ее Не 2 й ве нн не еле ее дей -- тпоодОодуиНт ан вон Я он що пи ня АН іа -Ш смдстсосиеє екю папу дим підви - спекла фан СНІ Ана: лк УК Кт йо о -- пет седласоввсти пе с СА ДИМИТЬ т тт тло КВК кій ох отим и ит ор у Я Я о - шщНй ПАСЛІСОСЮЮВО ОО ЛИ ОСООВАОСОО лелсдевеце СЕН АОС АС ШТАНИ ПОСІДАТИ СТАС. в луки ЗАБОЮ ОСС ЗАСИНАЄ ОЗ ОС ТОНЯ пастви ще ТЯ и туитит ія пок лілкт т Е І шк аа о те ВИ Ве ДИСЦ АТХ прИСЕТОКОСрОСВиадеТ - у ов пон а тай м, дру ден ве пед Уют меси - Що ЗАС де ее ня У - замет ТАМ СКУ АК АОС ТАС шу юстесуасесеноооои ОКА А СЕМА ЛЕ т досто сдепес ис йо УКОЛУ КИ, ЩО - ОП АНСПОЛАСТАТОСД Пе, в АД - - -т-- дес ЗТ А - й пре АЕН ялина ! СИЛАМ ОС чия шлдялнллню - нн тету тут дир очі З подо ди и А ТА ОМ шитщо винні пи Мк ик ой й СС досі К ня
С хз в-АбІСЗ Щ б птав- «несла десе й яко зпесеисоде х аз 6135-1145) ( тедиднемеея ши «КАС га: ОА попере -: дЕПДАДТО Емо А МАХ ща МАСИ ЛСМУАМЛАУ Ди АНОВІВІН дсспадя ЕМ АНО КИ оссстявСсНе т осв серою ПОВНО Ардост Се юдасссСеес осо ОСИ ВЛА ОККО ЕМ ре т тич ОСТ ТАСОВ І: СТО АЦИ АЮ дев пАсоАеНося глосссос св РАС Іти ло ККУ. пеки у т Сеча АКТ вн сееді певевн САТ -ї тет АЕН тий кі мае - сс свпсесоютх СОСКИ БЕН СНО ПИТ тин дО ла ЧНО, й СОДА ве Алл висенпвед пос маш ИТОДОТЕ ЛОНО АХ педа пон косо сусссстх ве ен прОогеспАлдо ДОСЛ А, ОСС зе шко ее СИЛОЮ ЛАЄ ЗАС Вени» по кто подив зе влидоде хи Оовешшос Де ЕХ САТ ССС АКА ЧІТ Юне сососоося т то соосясюс пк СОС СДС чІидисе вокоссос паса МСА СПЕКА ЛИСТ ТСНТАЯ плини СН АСКДН АОС гетри М Є росія ї Сх ван ди тут ТК, ях жьІкЯ СС наро се : всов ї песдеОсесІ АДАМА САС я а А чадо АС ДОДАЄ, пд АИ лосвососс Костя сЕкжн ПАСА МВА сАОБООСОЄ чут девх вен З свт ско най щі ще пе ПКУ - я й сне: Ушкі из и ТЯ ех Он ее Ве ЗКЗСАСИ КУЄ ОС ктаедиде гвосвсос зе; АЗК МАЯ аку нти КАХ СІСТИ тА ТА НИ т: КАСИ ЧА ЄАТЯ Се вин ко мих Ед ПСО СТАВА МАС СМ ІСТ САМ пОдоИЛИ оАСсНисе ВК ООН пав вона ами АС АЄТ дет Іден хх дог ЛІЄТИЙ чена астосо ї сооАсАЄ ПЕКИ ЛІДА Се АСТАНТО мч САЛА й ДИ Іде З Й Не НЕееН МАСИ СПАС, сеппссво посАсс ДСС ЛО АСИТІ Те Не ОО Ваня аю ЕС ОСТА: ЗАЛІ ней со она х по : | х пе м ями ж кал и ов а Ина ссе АЗС ОККО СОТ ОТО ХЕ АСНС ТТ АСВ АСА ПАЗИ ВО ее ие СМ педа даспрслесадое но Ки ай их, АСИСТ т ссосс пк Ас тсся о ее ГТ - ОС АСЛТ піч Ас псстаюеве соосв ноя ИНА Мч аа золот но нок ЕЕ и САД Іде поля ие ста ее ГІ жк ги зали ий с с МА кт сети де ля зок пвсвестх ев СТО сКІдЕДОН зе кру 4 пет дк БУ кр й ил Ат ж КИ акесвся кон ДСС АГА ПДАТУ СИТА ду ж ак ОгаНЯ Ва ВЕ де АС савсМАСОЯ здо с хе : зо що ще Ба ще ладе дл очі лк ль, лит ТУ ет КА тт пи моло АНА чия дес дснЗде СС АСАИ, нет; що льссвозоса ССИЗАСАА ЗИСАОестА ОСА НМ песен пвлопссо т т косясвсс озпесвесян АСК зречівсвоеай АК ВО СНЕх, стр Моя попав - ТА ЕН еу Те зайти КИ й суити Злі нку ня -о БЕ я - дО йо цк уосо. сх | м сосою опвслде АН ХЕ ТСя наве нее тот гос пссвосяо ВСАА САС еВ ДИе Зедеосоує пд - сла пев от АКА оту КОЖ, Чет го їй й о ЯНА ДОА Ся пішдесавеин попе ді пропо СОС ЗДА ее Те пис гос кими У СМОАКНІАУ ДІАЛТЕНТИСЬ ЧАС. сусп дл пед, СО оо УА -ї УМА ТО педесоле пастою ОМА СОВА сви ай ЗСАИепАКИ дО до ИСПИСАНОГО ос ее САСОСВЛС п Те СУС АПА сососов ще зими нд ЕКС Крім гос: і. СВ А пен пдлсдое ТА поса СЯ ЗА солі есте ПІСТ ААСА ССО дДНЯ УСС СТАС Тр піст три ким тт ттух КАК я врия локони прнащий це ПАТ КЕ дес ен нео й тА ле 2 соссх влислеест не ве в КН аа КОСА зе УБАСОЄ тот ши неті: МК Не Ї сао щ послоссс; зкоспеие ЗДО ДК ТЕ СИ ти . Мн АГА ЧА Я мч жде я кут АЛІСИ ТИ пок ОСС й ДОННА СВО ТеНо Пед зе В аа ее фровнно ол, КУДИ КА ЗАЕС ро ІВНИНИИ ддидощше ги о. пинсеняе па АС ВД МО АДЕАССЯ пд зо осетсює аа ех ОСС пд ЗАСАДИ й те А сс ит: Со; пит рих Бак щі, с лет ву Мана МС своє псегволаосю ПОКИ и АК У пас Ас ТечІї САСИХ ВАВ з ДИТАСН М СИТО ДИМ ДЕС МА лен п АСООДНТ КАНА ДІА МСТ. паси Ам дер ИАСИ АС СО сенат ДСС З СТАС, екпедаееоо сло щахя Вон Я МлАЙИ ЗАДАТИ вес зомосос давен ОСАД Сг АдщО ее пасе ДА пут Тл, МСС ПОДА ее еВ аю АТО ан оно УТА Аа Не сиоо свЕмя ОАЕ ДСНС ЕС Я ОСА ее хоосисо дим ел ар й й п С АК ож в так ще сонюто ппеониоо УА и сус у КААЛАВАдА спосо: вспАСИЄСНО ТОД ИН УХОДУ МА ДАААВІ ерева,
св. о осбАст КЛАС Сон евакау падав ТІСПДИЕАСАА, ВА НЯНИ УААН ЗАСІД АдААлЛАДІ оеепспляк ПАС АК ЗАС А СО АДААААААД, зосесопой ик ОАЄ ПАПА Ада АД пересогосеє САТАНИ ВЧАСНО о я ААКАААНАНА АРАААААнм ПАСАСИТА Ач дАДААКАЛА сосогос шРСЙ ММ ЗАСАДА ПДАПАдДАлААД, певивниния ПАЛАТ ЗАСАДА окон пе шк ; це т м Я А пика ля. и ди но й й не г ; їла ПЕК НВ я дтААТІ АРРАРАХ АААДАдАг шк я ААдРАяХ : ААЛАААдАД ВАДАЛЕАЙТО мли " Й лот падд ІЛКаЗААЮ Що с «ФІГ,
О тістоної, 4-С30-гіс екв -Ай ДОННА тнав-і ЗО е- сю; С ки БІК ; зедидає ее ї3-1 УЛАС п 5-2 (аз 6131 ЗАШИЛОШОО ЛИЗАТИ проее КАЄ МОМОТ пОСМІААКІ САС МмАсЕ САС ЗО ОСС ЕМІА лети " пек иа ПрАТ СТОЯТЬ СА пт ки ит т яке тори ДИНІ ФСДолкади діди д МСЕ КОД ОСНО ДСТУ АСНЯ зутрих БОДІ А ЗАД АС ДОЕНЮТО ССС ДОСЯ ЛРС КОТА ПІ АСАТ САНИ МАСА гпрйх ЗАСЛ ДЕКО НІАИЯ я Ве ТНИХ ДСА понад, ОдеЕТЛІЄ сао ОСС АГКСИЕ ОД ПОСТА ситі дОЦОСА КСО це х ДОН НУТ ЕН МАСКА ЛА ИНА ДІД, ДАТ ие ОД ту и МС, дя ПАСТА, ЦИ ее чдадлоє АСКОЕ АОС Д; ее пунк ян й "дела "ЛА т СТА СІДСХЛИК ТА СС ПАСМО ШОСАСИЮ АЕС САС аєалОою СБС АВОЄЮ СО АЄЮЄ З ок пит ТА АІ АК СОС и ешссид дес денс СА пад Пе ее Я дише АКА СБ АО ПАШИИС СОТ ПОСІВ садове САМА н що ССП ЛОКОНИ ЗАКЛА КМЛІССС ПСШЄСАя же п жокчЕ КК Поле шити рстися КЛ, хв шику В Те пи пеки «Аж шодиміК МАЛІ ИСМ ОА СУ АС ЦСС НТ пит м НИ ОСА Кая КЛАС УЛОВУ пед Бе С ККД ОС чу ля шести я М СИС, соя ан ие мете й 7 по АБО ПІДБИВ о ев ее СОСКИ ЛІСОТЄТЬНОЮ ВК ОСОСАБОЮСХ ІССвсавесе юпосиєсАоо ПОСТ ЗОАОСИСЄВОС ААВЕССИСС г часно хро ди М До АС ди п, ВУСТ фа ВО ДИ МО ОСТАННЯ се ЗКСТВИУ СА, СИТА й ВВА ВІВ МуУСКАЛИА С шо псує ІД МК НА КОШОСЮТ АВС ОКОМ ге Оля дО ФАТА Подати СОС ОРЕ ПЕ причи СТАС ВВІЗНЕ ВІ е ЗОСОАСА МЗС ли пи нан зитяут ек зи ких тр Є їй дети т - С пон егвна кре чесне зле ПИСАТИ зем" ООН ОН СЕЛА АСК МОЮ дО ПС СМИСЛОВИМ МСС у жі. а пу лих -х Титаллу, я ие Шен ва а шк Е я-- - САко зи цкт виссдасц ДИ СЯ "АСУЛАЄСИ ОСИКА УМ пд ССП ОСИ ССУ ОСЕЛЬ ВСИАСАС мені сАцОООАда САН С жи На СЛІДИ ТА ДСС М ПдССдтя зрня чий ния ЯК НТ пи мя нят М з АС ТТ АСОССВОСО СОЗСАВИОЮ СОБуСОАССАОЯ мевАОАНСОЇ МУКАХ содСООе СЕ Па вх какая САС из у тих паги пен ОСИ нак Ме ДЕН и, ее слу ее сення дидисх дес соду Ка: МЕНІЙ ДСА Ше ЛА ОСТ ПС ОСИ СЮ ОХ ТА шо ОК ДСА ОА ЮСХЯ СН, ОМОСесс БАС пли пІСаАСОЮАсСО СОС ема дОБОСАПСЦЄ СПИС АН соди Са ДСА КМ деАДде СМС СОРТУ тех - ПАЗА ОМАН ЛА А САС САД Й НЯ ЗА АН ПАЛИВ АМС ЛАЄ пОовАаАСАМе КАСА мае АОЄ РКО пса СССАПАЮОЄ Педисоде СОС АЦССОЄШС дттех В ПОС, ОА Яд АС МДЕ ХАТИ АСЕКЛТОЮУ МАО шидесиАСН СААСАСО МО Сед юСОвОАОЄ ОК ДИСдесАд дош пе сдде зем АТ КТ Се вт ПАС ель ее ДОССИЄТ з анненняеу СІЛО таспдл пе тс сидд ТВ ЗАДОСгН «Упав Іде дегІ роех АПЄСТ СЛ ГА що СЕ ЦАВСМО Є СКЛО пулу ММ ПЯАСТІ ІДС МСА МАЄ сиза КИ прє АХ ЗаДТСсе КМСД ОКА ее аа НВ ДОС САД ТС ЗАСЛАННІ дасте пак екяи трих їде ся кими ев У У Ш: Ся СС тизих ЦП дІзсп нив КУ ОАЕ КОЗА дАСАКОСЮ СИ ЗАС ее ее ЕН я ВІКОН СИТЕТУ СОМОАДСДУ А С зу ОО а, ДЕЛІ СЛОВО ОСИ НТАу СДС х КАЛ тіртаА ли терту СИТА й Пат х Бек Ал Би та їд ДС Ми пуих МяХ ОМА педа ДОЛЯ дея ТАКТ АЕС АКТА В ЗНА пос САМ АС, СО СА МА ние вк есе МАСТІ АУ АСАД МКАС ДАЄМО лих сплави є АСИАОЛІДО ДА де Ока ОБАССАСИС АС шию педападаса.
Кона я САСТАСОСТ, АССАССАО ПЗАССАСТТА -- ОВ ОКА ее Ов СОСНА ПОЗА ХІД АНО СА АСА рана кенетаня пусте Ве вЕеня ПОДА САОССХІА САССАО ен ПЕС лАДСАЧ ЗАСЛ СИС САСНЯ МЛИНА я ие а ня зад аде ПЕНІ досоисиех сеоспесцис ААДАдАД МАСЛА Є ЗАЕС ЗЕ ПАСТ теп ВАДА пола лет Па РИО ДОКАЗ ОС ЗАВОАОЮСЮ ОКО ВАДАДААЛУ ОАЄ о Пак М ОН яАМЄ ДАНКО ААДАДАВ ЯСНО Ме ден АСЮТС Де те СОДА АСЄ ААААлААЛО ллє ЗА ДЕКА СОВИ сема ем ДАЛАКАллЛАХ ТС Сак о ПС ді АДАДлАд ОСТ Бе пхтуЕт тя чад 7 ,длАдА, НК СЛАВА МАССКАМИАЄ КАКДАДАД ВН АСЮЯ а Ми ДАДАДАДАРО Ма и ХААЄТ Ід, здАдАЛДА; мете АЛАДАЄ АДАддАд поети вик; АКААХАДдА ОСА ЛІдДдАДдА МНС ПА ЛА ОКХ КМТ МА пок - ААУ ААВЕААВИ ТІ ВАК туту БАШТУ жк 14 десодоссле «РІГ. дім
МАСА повної довжини СІВ дикого тнпу кИсоовОоек АСВ КОСМОС ЕС ОО СА ОСС В АСЦИТ ОСИСЦО В ОДАОЮОСТС ВСД ИСЮ ПОДОБСОСАСОАСОЄСЄСАСОСИССИСПСО ВОВКИ С АОВОМ ОО О ПОДА ОДОЗАСВОСО ОВО ССЦ ВОДОПОСПОАОАСО ССО СО ОА ВО ОСТ ОО ООАОССО ОС ОА ОВО КОС ПОС ОЕАСООТААСПАСПОСОДО ПООСО ОСЛО МО ВОАСИО СОСТАВІВ ВОДО ОО ОО АЖ МСС ВОД ОО ДА СНОСВАМСТАСТОЮСИ СТОЮ ССТ ТОД аАи АТО МС АСАСС ОСИ САС ОО СО САСНСИССУСОВИ ВОАВИОСИ ОС ВАТИ ЗИ ОО ОСИ ОО В АТО СД СВО ПОТОП Д ОВО ИАСИСА АВС ПИЛІАВ ОТ ПИСАВ СО ПОС АБАПИССЦОО АОС ОТО ОПО ОАС ОВ ПА ОВЮ АОС СЯ АСИОСОСП ОД ОАО НАСТАВ АС ШО ДАСВСВИООСИ АВ АСТОСТАСВОЮОЮ ОО ВОЮ ОСИТВ ПЕШОСОССАСТІЛИАОМ ЗАВ КН ПОСАКАБЦОВО СЮ ОА ІАОААОПОВ ДО ВОЮ МОДОЮ Вис Се ВОЛІ СА ДОПОМО СМОСЕ ОМС АС ТОА СИ ИОПОСАСАСМО НОСА САСАЛСМОК ВАС АС АП НІДЕ ВАЛ АСТМИ ЦС ВА СТИЛІ ВОСО СОТ ПОС ВСЛІД Я АЮ НОСА ВАІСОТИВА САВА СДЖАСИТ АСИСТ САТ КОСООКОСТІ ІД ЦССТКОСТКСТ НЄ Є АКТ ПІД ТО АОС НМ АСОМ ОО ОА ОАОААСЮ ВОВК МО С АОС НК ОСВОЮВАТИ МАО ЗАССМОС ПСО ОСНО СИССАСО ЦО АНООАОНАНННКЕОАСАСОНОСЦЮСИТСВСА БИСПОБААСИАСНО МА ООН ОМС СС АЗОСИОТЦЄ САВА ЛІСОМ СОС СПОСО СОЮ СПОСО СПО ТЛ ПОСАСАВІЛ КОС СО ПАСАВААСИСАСАСОАСТТ ЛІСАМИ ПСО ОАВОИСПОСИЄ ЮСАВАНЮЄ ПАОБАОЮТО СОС МОДОЮ ПОС АСТЬК ДАНО САОС ДОЛ АС АСВ КЛОН ОАТ АС СОС А АВО ЛІДІЯ ТЛА СОССАВІДЛОВЕ СЮ ССАВАВИСО МОВ АВС ПОС ОТ ОПО СПАСАСІН В АМИО ОАЄ ПОМ ОСАСАСНИСО ПСПОДИДОААСПОАСИВОТ ВО СВ ССО ЛЮ СО ВО СОВИ СО ВАН ОБАДСТ ОСТ ОСООСМЧОСОС СПОСАСІЛИ ЛО АВЦСТ ППО САВА БОС ССИ З АСЮИСМАСОСААВСО АСЛЛТОООАОС ОД ТОСОСАССОЮСТЄЮ МЕССІ ОСА БАС САС ОАОКАЮАОСТАНОСИЮС СТ ОСАБАВ ПОП ОСОС ВАС ОСЬ ЗАСОАСИСОСОВ ССС АСНАОТТССТОД ОДООССПОСООВОВОСВАОВАСТОСОСВАПОТОСТЮ ВСІ ВОЮ мЕВБАООСОССВОС СЛОВО БАВСАСВОССИСИСИСОСОСАСУАСИСИССуСАВВОСОСИ СВО СО ССАСАСИСОСЮВВ.
СПССПОВСПАСТИВИСЮИСА ПДОСОСТЮОСЦИАСТОССАСОДССОДОИСТ А ОСС АСТМА ОАОМОСОЄСМО САБООСОВОСААТОССВОШСТИСЧОЦ ОСА ЮА УА ОС ССО ОТАС СОВИ СА СОСИЮССОСА ВАЩИДСОВО ЗАСТ АЮАООСОЮОМОВО ВОДО СПООТАВО ССС МСС ВИ ВИСТАВИ ССО ВЕВОБСА ВОМС ОСАВИС ОСС СО ОССКОАО ВЕСТ БАСАВООС ОСС ЯА СО ОАЄ ССО ССО СИССА В МДКССАВЛШСТИСТ МЕ АС АСАОСАСЮСОТО СЕЛ АЗС М ДО ЖОТИ КТ ЛИ КОСІ Іо ОГОДВО ХХ ПООСССЕ ОО ПО АСН ЛК ДО КОЛ ССО АОС ВААС ДЕТАС ЦО СС АСАЛССМСНЮВ МА ЦСЛОС НОАК ДОЛ АС МОМ ІОАН ЕА БОЮ ВО ОТ С Сл ВО ЕДЛОАОИССССТ С ОАОАВИ ЗИООС ПОС ОТО ОО АСАСТ ОТО АОСОАВКТИ КОСА АДОЦИСОСАИСА ПАСВОСТОАКОАОВОСТЮЄИ ЗАСОООС СПОСО САС СОС ОСАСАСТЮ СПО АОСПОСІССОСВОСТОЮСАСТВ ПВАСВАВСТИ СОВА ЗАВІВ ОО СЯ ЗАВ ОСС ОО СОС ОМОСАСТАС А ОСВАВІСТТТ ОК АВСДОИСЮОСИ ЗАСВОЮЄ АОАВОЮСОВИ АНОНС ОМ ОО КАН ОДЕССА САН ААО ВО САЮЕ ПОСОЛ АВАНОВАЧАНАСААСИТИССТСАВАСАСЛ КСО ВВАОДОІ ТОСТИ ВАСКАТАЄСАОПОСТОДИАХ ВОЛОСИВОСОСИЛ АТ МОАСПИВИТ АЮ АС НУ САС СААА ЛИС НАОМІ ОО ОП СО ООСААВИАНОА В БИСААСИВОС СЮ ВИСО АСАААСИСАСАСАН ОСА САВИИ ОВ КОС ЛЕСЮ МСА ТИСИ ВСМОСДІЄТ НО АН ОАСОААДОСОСС ОМП ДОА ОАСВО ДСО ВООЗ СОС ВО АСААВИВОАОССТ ВАВ МИСІ АЛЕЮ І АВАСАЮВИНАСАСЮНСАОС ВОМ ОАО ОЗИМА ОА МОДА ОСАВО ВСЮ ВИСО АССОЮСЮСТАМИ СПАСИ САСІЛ М АОСТС АС АААОВОСАССТИВ ОСС СИ СОС ОВИСАНОСБОЛАЦШ ОСИ СА СОСЮААИАСН ООООСОЦ ОСИ СИ АССОАОСАС МОН ОСС СС АСОС ОВО ТОВ ОО ДСО АААСЦІ ПОСОЛ ААЮДДЯ АВСПАСАО АОС ОА ОТ ОСОСАВО ПО СПОСО С АК АВИМСС МИС ОСИ ОО АЛЛО САЦИСАОАА ОСВІТА ЛАСВВ АСВ АС АКА ПИЛИ АЮ ПА ТАВОВОСОИ СОВИ ВКЛ ОСА АСАД ЗБАЦЕСИЛ ОААВОАИСПОБАДОА СА АООЗАСО ОМА ОБАСАОСАСАСАО САС ВИ ОО АСАСАВАСЦ СААОСИООДЕООВСАВ ЗИССООССАОСЮНОСПО ІС САС
«ФІГ. 15 х, ; її ни СОС -оплмізована . ВІ і Дев'яс не а о МАСК-СІ повної довж пет сек внести СО ВОДО МОМ ОСА Со КОД Ве ча а аа ве - ран Ше ССО иа НК ОМА Се Вивих СОС ПВ Зал Дим для СУК - чив ех МАК ВН СА ох ; МОСС АКОСАСАЦУВСССВМОЮЮСЮЬ шОСОСДОЕСЦЄСюКСОсдеВСаА Й дали вчеве Валосижо о Вс оч пот КАСА СІ лова св ой методоло далее ово се ОСОДеОДО ВИ СА У КН «я м НН НИЙ СА ДАК С ВН ЕІ: ще А сти СОДСПОССАВДОДе ОСА п о аю я СЕОдАСАС САС ООюе клює ОодисОвАВОСОСВОСАНВЮ нн ЕМО ПА АСВ Кота рю, ЛАН пох ку пот мим пути Від гу аа я : ВССАДЄЮЄ адек ов ази мшши сти" МІШОК В АС ИЮЧОДЄ СИОМОЄЕ а ен ВАМИ ще змі пуд ЕКО АТ А В, З суетсн дарспосАВОЮюСОЮЬ З одОеСОососАв МАО АВВОЮТС поварити ВЕ ОККО не пе дин ее МОХИ плит в ОКЕАН ТАТ ОЙ ДЕПО ВИК Мпа рда ПО НО ТЕПЛО соди сяду ДІКА ХОСУМ: подо СвОСоює ЕоАя вики се КИТОК СИ ТЕКА НОЯ в а ПАНОМ, дехАСсе КОСМОС АКТ ТКС -Е полотно сон овочей ояичрх одер и ут и я Не пе КК. имя се т- си житя тую, теми Ко о о я, СЕ бу, КИЙ ; о й Спкетке ССС АС ТВ, пеерет оре КЛОН ВК ТУ пов увуатя ВО ФВ Ов еВ о; еАнесС АсАТ : с жк ни и КК вен з ни ан ПСКСАВНОЮ МОНЕ Мис КВАС КОСОЮ се ад НН АК ях ся с ДИ АК ІОАН сао НД еній АПА АВ дес виш по шк СЕМ ОКО, пн ЮшМСОлІА ЗО ПО А поканв ння ЕЛІТ АСОМ САИ САС под рок КОМ АХ ати тику пери нетАЄОте оси под АКСарКА се о вар едия в кг ух я ВА ит ях р ПЕС САВСАКОЮТО ІБАСОСОСТЮВ СВИСТ ОВО ОК НоАНхО преп пасе АСОКІНЖВМСАОС ПІ ле нон, ее ВИ Ів мні подо ШСЗ ХАЕКАС МЕТО ЕТО ВОЮ она казни МИСАК ОН нія кое титану кт ПС ДДАІ ТС Я жу те тру и АОС ОА Ід її - - вк шк нн ке ик Ба І А не и у кА ситне у тити АСК ЛАСЯ пока орд АК ДИС зфані ПІ чу певен Аве Не СОВИ ОА СЕ АСКААСТ ВЕНИ ее Й ПЕТ тен СТО А са Ст ие при лт СКАТ сЛювА вес рова ЕК - стрілу хдіниниті КЛАСАХ ие уд аАССМССТ СНО, кос ТД тери СТИ дя НН при ТИ и А кити ру тих дим «ЕТ пи Що ен в в САМО Ма ОА греч ААУ ОДНО ВАН Сари сти сечі ДОС АОЮАОСЮВООИ серій ва ев аа НН ВН в Во В Я Те КС АОС САВСВСОЮЄ пе ли яю па ои в акя ЖК Їх ЯК Кк сткжжжжютя лань ок аон С, То 5 Шут в ОА А що вк сни ; кох МО АСАСЮТЬ ЛЕО КОВК я пох ия ЕКС НОСКА АКА кл ве ан ОСС АсАНОСЯ по ие АОС МИСОК МОСК Вес СОСКА ОА дя пп ЗИМОЮ ОСА еко АОС АССЮ ПОСТ ОСН ло и с вола си ко а МО МС Пк тт ре ие вия МОСОСАТВАЮОССМЦО до СОМ ДОА и ее в е ии ев пнетет КЧЮ ОП еААПИ АЮ : СПИССАОЮН ЄНИХ АКА й пити яти КЛАПАНА я пед МЛК ОКСАНКА Не ОСС СОСКА ХЕ реа ЕЛИЄССОдАСОТ МАСАХ ОА ОК ОА НАК дІНсоет КОСТА СТАССМОСАЄ Я зодслсетесивеАСАОСВОрЮЄ в с ун ее ния ще перетин МОПОСАСАНССТТУ ГЕ вд КН ВІН пОСвеоОюсАе Екс июя як на ее СОКИ АОТОЮ Ук піни си АІС от» - ДЕС дес НлеодеА т Скрв ит тик дум ри де Тане и а На в ЗОНИ ОВК ОО ПСО ОХ кишки СИС ОоА сот спо ас веаденессАе ий пекти Ежен в тече п Ви ТИН пику пасе сте Ко пив ПС КС з ее ве он Ел саАко ОА вия СТ ОС АОАЦССМ СЮ лес ВАК поряех еВ одоу во ПАБСКУССТМО ЛАК АЮ ВСЮ СПОСО АС АСИНОЮ посвоКі СИС І ОСА АЄ СТ ин ЕД С ОА й скосяся дос я зд оссесое ВИКО Сет АТ сосСидисвм воеи ооо АЗСАСОВАЮВ С ЕОСС ВС А ВСЮ СОСАЕусс Орос соАисА ВО їй ВОСПБОСсютаСАСОВСВООЄ де - сдечеудеч і ития КАМИ МИ КАХ тату тут ЗАСВАСАССЮТО СОС лай ве Вау Оссес о кни ни ни Ех режі. сту еВ. аж Медок т мон пот тт или, тр те т Ід: ЯКОС х са хе Те СПАСА КОСА ни плеса счтя СДС АТ ДОКТ А ТО її се секр КК НК КИ 7 А ВИК ДА СК мн: мс, АСпЕШостосх с В Мей сне й й с ст пд М о ВК и ВВЕ "Ах А ос с- т. . с- ВААС СОС ОА СПЕ БрОКАШТУ С АССИСІАССАССОЮО чеЕСОООЯ СеОООсвеАе с с : песо КОД веовоьсцьх зт тд пот АВ юс тики ТА ЗИЧОСВО ОСС ю ВТАКСК ен я в сег й ово пАЮИНюЮСдювОоИю яна ЕСЕ МТА САКЕ Ді ; с : лоссстсею ОККО А М СВК ляти ОСС АВОСОЮСОСОНЕТАВЛОЮОЮСІ САсВалюво ння ЕК ли пази фени вна в ВОК івой я при ЖИВИ ПАСЄСДСОЄЄСИ о Іо ОСле СОМИ ДУ одної ЗАЛА ОК КН ОАЕ оо сс ХАОС СОЮ й и ИНА ДЕ МОГИ кун мн вв с - пики ОСС Не пад пилки СИ соди: син МОВА ОНТАЛАСЛАЕИ Є рин КСО АСКАМ НКТ док аня січе ОСА Вуха СН ОСНОВ ТАС ЮДИ тд ди ПИ ОТРИ ПЕСОСИАВОЄЮСОВОВООАО фея й МОДА І КАМ лення ва о ре ВО о: ДОПИСИ СОМ А СОС Ас ТАСКЕЕВ С АОС АВ т ожшн ит, мкА ІК (Я юка ІТ ДИ сяк МТ ся ой йод дея стати й т пе її : кисле тий, ОО КИ АСЄТТ вання тими що КЕН КОТОВ Ух СУ вй шиеех МЕМ сво ТОдОССПИТССНИС АК ЛЕ не кни і АС ВСД С ПОДК АН ОО ИС ре КАСА НОМАСКОС ОВС СВОС есе в НОЩНИ Ве ПЕС С АК зані орерорра АС ЕН, хи и М Те не не: КИ тер ЛИН ПА тикдя в нт, Со о АТ СИТА, Пуск ПОКЛАСТИ с пд СОСОССЦПО АОС Оу ов КО СК ЕИОККО супе чити КО ОТО ЗЕСОО Со ОСА ОАЕ пах АОПАВСДАОСИЮЮОЮИ АЮ ЗАД ПО в ОО А о нен кл ШО МОЯ Су ни ДСА ее лке ти и у дзт тести тю НІС ЗАСІД Я а дело л св ПоАССп ст Би кА Со АОС тич ОСЕЙ ПАСА ДОА ЗАКО ОСА СЯ Ти одини АОС АОС а до ект Кене в ТИ АМС, СТ ОСС ЕЕ ДОС БМЛЮСТАОДОССЮТОВИС В НАС ОО ПОД ДОТИ ріках ЗАСТОСО пе ее ОНА Те АС ПОКИ ралдані СД АС СИНА МІД пере песо їх КАСІ ІДС ОМ титр НТЕКх ВИС А со МЛК СА зак тт я ей - пе ан КАС А ВАМ й КО ПАМ ВИ Я АКОТ ОА Х ДА МК, рон Сети кв Тк МОМОТ Оои МУ ут дви КІС В А АКТ ОА ОВС те ню ес деяких дк - ет теж тет ВЕК АСВ ЗО скрипу птн ще і їй дани кн щася я рели кет КИ жид й ПА изрісчичутви их щу АЛІНИ АКОТ ко в каст АДСОПИСВ СОТ ен нн УМІВ доти АС АСИЩСОС САДЕН НУ йо --х ДОД лан спе Ве КАЄ СОМОМ ЗДАМ ДТ АСАД вльсііа ІА ОК дн ОК В росй лик пахвою идннннн не ЯН и она ве МА муках М КА ПАЛКИХ рос АСОМ ОАОСВ СО АОС ПИСК СПАСА СОМ ДСА нечесних ПеонсАНСАН вас АССАЛСОАИ ОКО СОЄ М ОСАСАЛСАЮ ПОП СеАСУМ НЯ ДОСКА ороои У сти тут СОНАТИ АСТМА тя сова дов се ДОСКА СИ КОСТІ о іо шок ЛАДА ОН НАС А ЕЕ А ПД ЩІ крупу: дез ПИСАТИ уоспоров ен оуєрооися ІСТ КУКИ рин Мом дих ЗП АТАМАС ВСТА ї о ппАСОДАИ т ел я поАПесювНЕ АВС нт ння Депо СТОсАЄюех СИНОВІ пера дети вн ен ин ою ЗСОМОСО САС ЮОСВЛОИ одне альо ее А ТЕЩУ дю Си А ОТТЕК они мули в я щу є САМОК КАОКОСКОАСАСАНЯ Чі ее АКА Кл кв кт посхютнос с ники; нак я я САСОИПОСОССАНОВОСС КОСИ ОСАЄСТАСІ а - Кв в но ово ь оо г ди ЕЕ г ро аа дови АХА НШВК Ин шт в ДІЯ Ан А А ЗИМОЮ НІС ІВАНЕ ТА ВВАВОВКНВХ те ав е КУМ АД пи ОКА Є го во ов ее СЕНД МОВО АКК КВ ЛОНО ЯКА СОКИ ВИ де ді ЛОБАСОАС НОСИТЬ Ед их ит ит в п А ПСАНО ЗАЙСОСЄІВВ АС ДВ АСИІНОКЯ Оки АКДП А ВАЄ ки я Вас под ЗАЙВА ОСА СЕ АОЮ КІВ АП де Со каса НОСА СО БАК - «ФІЕ. 16 чі 4; С опунхвізована : я: - Кк, о 5Е-С1 (ай 613-114) СО СС-оїт МАСЕ-СІ (аз 6 пекти Е вт зи ит ит МІ і чеше ВОСТАННЄ не ПОС у А вонай ММ ОАЕ Мая йон а СА ПОС, рондо дів житя КВ ве вве І й ях пече дит АЕС ЮЧИХ ИН а СКТЯ - силова Со АСВ ЮТЬ те иа ве В века ЗНО ШИНУ тя їх изякг В ВЕНИ олово шин Не аа о Ве Вес НК тк ння гіди Пи САС -- ще зер тв, ого вия Не ОН пед и АСАД АТО ТАС ши ОО нене сінях ша аа мою т пня - ІСААКА ОЄ юю САС ОСОСВ САС СОС АОС ООСАЄ ут евІлА яки -к печеру ву Как ей
ССС. пиши діти ча КРОНУ Кл диня епананнн ден ох і Й АСЮ и и й реч -е то п А А ноя дети пед шле - ОЖНЛОСОТДЕВ, СИЛОС ОСИ АВАНС ва ви а Не СПА сан -кк личртюу т пле СИ Ол ТЕ; ни нет СД Ве го полсоьссйной -- т дома дО ОСА ТОНЯ ши ТЕ печеня пи ВН Пн Кияк УВК - твіст яра ОМ ЗААдСНа А МКУ ЕВ - пика ЗАТ И М УТАЦІА ОСС п ІШесСасоссвіостаАОсОвоя снення ян от пути т КАСА Що Те АТ СВ оС я Ге ХОПЕДЕССОССИСАСТЛІЮСССІЯ - ЗСЖ ДОСЛ ОСИ ОХ ЛЕТ - СОМ СС ОСС АОС У МКК поки КОТИ стажі СТАС НЄ яЕЕх» шо АСИСТ ЕМ СУМ МТА -- пет ур хич т ІОВ АСОМ ОСИ тн чек опа чт; ки МАТИ ТММ пря итх Тит ит спа СА их ЛІС " - рик ЗиСОоССост ВСАА щЕ - І доле оесосодО ее ТЕХ ши ще - вва ва у в а «зош - жяж су кожи но прі ее КУМ хи пл заисссапесед АОПСОСОССАОДОСИСОВЮСОВІ ЗАБАОСССЕСАВАСССССОСОСА ЕВ ких ні тн СС ЕМ АСВ роя ть чит в я ши Ен В аНе ие МЕН Кай ния ван а ВО и НЯНЯ ШИ СЕ Ж ан и НК ПИТАННІ ЕТ А НТУ еп елсвннай ПСИ ОТИТ ТИС, ЛІС рев ЗПС дОеС есе АСК робовововво во плоту сх уже ЗИМИ ех Ки ками --- А пт ИКСКЮТЬ В САСОО ССС ОСС пов пединтея ОСС САМО али лося ДК ОПО АВАСО о ЯВИ МВ Я ЯМ жуки т - во шо Ай ЕН ВІ еВ ж пвЛюКоТ НААН ше- І ЗАЛОЗ ОА НС ОО вон заерише грі де ан В нен - - ми при ОК ОО САС ТТЄ айва ель дес де дасССМс и ТЕЛ хни Стих т Ле ДО болчвиьй миня я ПАТ ДОСТ ТТ А я- С А ТАС дня се ричуеюя ; в в ЛНВ КУА ЕЛ приз хдетитеа ОСС ХОМ СТАВ - ОО АСТИСОО СОКИ ДІД АСАД шен х чссвдедалвиесиємо ик хан ЛАТИ Я - то проиту рясту ит : ши У или побу ІВ Мей АОДССАССПОСАСЮ, Ве и АОС За ки внут Во в ВК не У ЕД ДИ Ко засос в и иит и ша о, т -х -- - - АМС ПАСТА ТАМ г полк ее КауМивАя Ап егОгЦиИ дес Ве ІЙ а МО ли АСИСТ ЕТ - те нини ЦІ АЛТАТ ДТ АСУ пак прут дл пат я - Упр детет тих СО вОовоосвАСОСОВАСАВОСО ВАС УДО САЧОСССАНИОДСТАДО АОС ОАСеСАСУЄІ - ІНАССАСОСИСВАДОСВСОСА й МО ий ПОС ПОССПИААИДССЛЕСТНО що МАК СТ С ОТ То ОО ЕИ -- три тод діа пе де АС ОН КОС меня що сте пане ес А дсне сААЛОЮИВОАСЄСИИСТЬ Ясне пес ее А НСО -- де ших СС АПА СС САС СО дЕ - ОСА ПСПОССТОСЮ дО я ні ірчечет ЛАСКА ЛАТ ПТУ -- "пАССдСИ СИ пшоя аААККСААО ровщся ДОСІ МАСКА ЧІВ ВКСаАКВАНОКА пт СОЛО ОССІД ВН КАСКИ п ее Песни де ск о ДЕС ТОНН АД ЦЕ туди ЗАСН ТАТА ТЕСТИ КК, - "плоспвливесссл доц СНИ, кА Кки МАЛЕ - - фе шана ОН АКА ХМ ЛЕ -- ЗНЕСТИ А Я ян ЖАЛЬ досодпоссИсосоиосаАс - т АН Те окон пд с, АСВ кош пит ОБОДА ВИСЛСВ СО СеВОСЮ ПОДАаСОСАССпдлОоСОСАпссдеВ ОКА НЯ пт "АПСАИСОИедиСддасОоде аа кое - о пред дІТ пий ЕтьЯ дО ІА ПОСТИ ТЕТ АГ ЗА ТСИ - нхре т етуя АПА ПІДЕМ шле я пи АСЗОСАСПИССОС ТЛ ПВА о панно ХЛ Пас с АТ у - пиКжя тити ОБО лек А За важ ---- дурня сю З ПОЕМ ТК Ах - що АТАКА АС АОС САНСЦЄЄВЬВСОМОО я ПАСМАСКИСИЗАСШ АСУ ТаАХ КОЗА - МУ А ВАС АСКТТСИ А лету ие тИх Кт, Ка их ро - й й я жа ОМОАОСАЛОВИ СЮ ПАСА пизда ДТ йо -- й Й и ОоСсиАгАОладеспеВОЄ мак оа юю тот сто Ед де й -- Щі ел тити текти лют и Кох я ко йоя - ЧДСЕдеСИеСМЄте реносаання - рови ПИССОБИОСОС АСИСТ І пис еВиепАх ПМК АЮ ВОЮ АЮ СВО КООТ ік САТ АСС СТІ ЕЕ, пи ота КН кл км ПОДАпАДОДЕСИ ЧАС розсвиая 7 ший - НАДА АД рими а А МАВ лях зе рерия в іх їх С АНТ» «Ки ит НУТУ ДИ спите гін КИСЛОТИ ОМ ЩО СОС ССАСАССАОСИАЄЮВАС РАЛюЕЛЗКТМ АТ КТЬТО С ОС САС САНОСАССА - яке - Моди сс воо От - т ІФАЛОСВВАСО СЮ АОС СА . -х ВЕ Ед ки, Івасів -ео-- ува аа ав ОМАСАХЕСАСОСОСЮ САЛІ МОСАаСИ ОС СОС АООВА Од ВКМ даси дшсеОСИ КАСИ я -жи тизер СУ Кая ІДИ ОЕМ ТАН СЯ зе син ЛІАНА из АСВ МО Ін уУСОАСОСОСАССОВО ВЕ З декю
ФІГ. 17
МАСВ-С? (Состав ава-С30 З АОДАДО С МАСОЮ ИЗД ПЗ ОО БО СОТ ПТО ХОСНВААССТТОААССАСА СЛАСЮЦОСО ЦСЄ и ОСТ ПОС С ОС АВ ОД ОККО ТО ВС ДИСКА ВНТ МА СКАН ОТО ВОАС МАСОЛ ССО ОСС АОС ТОООТ ОС ОСАСВАС ЗАОДНО ТС ПОСТАМИ ААССТАССО АЧАЛСА СОСОК СО МСАСЮВ ОСС ООН СК ПАСА СОСОСТС С САС ств еАОС ОСС ІС Ва СО ПОСАВСТМС ССО АО ВД АВСПОССАВОСАЗАлаасОАаАЄ ВОДО АСД ЛОКО ОСТ ОКЛ АКТ КАТА АК КОДАК КСО АСАСОЮМИ САС АСВ ОСИ ЗАСТ ВВ ОН АС ОТО ССТТОЛТ З ААСТШТАСОАСНОЮИ А ВОАС АСУ ИСИВ А ВАШИМ АИЗАПС ТА ГАДАЮ АСАДЕСАСОВЕ ПОСТ СОВА ССЗ Ал ССО ОА ОС ОТ ОПО СМС ВИ ТО ДСИАООООСС СОСАСТАДО ТОВСТА СОТ, ЛАВОК НО ПАСТ АЮ СОТ АВС АСВ А СОВА АОС ЗАС АСИСТ ВАСІ АС СИСАОСО САМО САДОВА ССО САНЯ ЕАМСТ ЛЯ СНАНЯ ад ад КОЛІС М ДАО ЛЕО АС САСТОО СМ СО АСКНО ВО АОС ТВА МОПАССАНА САС АСОСЮ ЧИ АОИДОСОСАОВИВ ОСА САС ПОС МАС АСВ ССО ПО СТОСОВНО АВС АБО СТАСААААЛСАКСЮТЄСЮ ПАСОК ААОСАКОСДОСТВ СОС ССС ОПИС ОСС МАСА АСКАСИЗС ОСАД СОВИ АЕН З СВ СПАСА ССАКАССТИЗ ОО АОМАССАССН АСНЯСН САБСВАСВОСОЮТВАВСОВ АЙ ОСАССААСВ ОТ ЛІСІВ СВО АССАСО ДОА СИС АСЮСОЮСАМТВОСОСТ ОК ААСОС ОСМОМИСЛА ССС АП АПА А АЛЛА АВАААДАЛАЛА ВАЛА ААААААКВАМАААААВАДАВАЛОЛААААЛААААЛААВИАМИС ПДК ОО ОС КО ДЗ АСВА СС АТО
«г. 18 як ва С гістонеї, я злі міх пижокя І (Лавина. іх сдежАєОве ХА ( як ААССИСлАСАД МАЄ шви СС КАДОСЮН ТС 7 ОКО ОСА М ет оч ака ВИ ВЕЯ звична чо НИЙ пливе с; Не й чгдли ЗНМ ук т МА СС ОХ пд вис СВК поема ттттих КОС ТАС о а ССАВЦІ кНЗАСАЛАССЧИХ оссАСПОеСаОС ЗАВОСССПОССАОС СНУ Кт я ми я пути три ТАЄ Яни ПИЛ шен СА І МОСС С КЛІАССМССТТО Мена. Сея рування БлЯя «есери ССО ОТ С люеренесев су ее ДОС джем хен г ВЕ Я Ед дих УКЛ тях СК па АС сич СОВИ ке АОВАСОКО дотассос АООССАОСЇ ЗМ НА Ка еко сАсПоДаЕНаАО сус пастпетеев млИх СОВА А АОС, гасел СдОСАЄ СИЛА - сатин ян а здгой ХВО ПІСТ СС ІОН ПОС де мая - щи САС коханих ятки т, Я ЕК ста 106 СС со п ТАТА х чшОсдасцес чи идАССОСсАСЮСЯ АТС ЗАСТОСО де вІслтеиаде песо сдОСОМО ПЛИТА лова я С ДМ ЩО СЯ НАУ ДИТ пал чюсродао РАНКИ МАО ЛО ТИ ТЕ С л т тя клі, З Й з; НЯ МОСС МАС АСОТИНАУ ЧАС ОСТ СИ ЧІАСМАСдСЯ спад т УК А АСИТАМ АСК НДО това САДЕН СОСНА ТЯ мА А ВО гр вхх «ке АХ ДАХ ТД ДСА ТД жи. г пе нта ся У СА дет а еКТК галь АКТ гли фея НЕ АСОМ КИДОК сА вх Мпа АеИ І ОХ АСС: АСПеНЯМ сеесиє КАТА НТ ВАН знпеваєесне гр УКХ кт - Ка, не меч еВ МА ЛІСАЄВ ПАЮ ЯЗАНІ КОМ іа дестлаєиее ОК еЕЕ ДОД КАЧА ппежмідвадес ще ери, чад недре зегсревое дра ля ЛСн ОДЕСИ АС ОСС ПАСТА ТНЯ ДЕКО уапАГОСТ ОВО МАСНЛАМЯ ДЕС Ас екю й з ОН пЄеруєлесидо от рр ПАК ПСП еисЗо пдиесцсдлие ДІД Не ЗАСТ СМ, САС ВИССЦО ЗАС АС Се е ВД зичу шої па ГТАЛІ в АК ЗСЕСНИХ МВ. проти кОоседосювос СОВИ СС спаде МТУ УА СА АСССУелОА, деп ВОД; Пора дистаснадесте Н Й Вечадтоо умах руту ЕКОН МО сет тик м ичртя вима С АКТА ПДК АСШаХ пнаснодиє ДЕД ня СИС УДК, ване ВАССПАЄ ОД СЛ ІН ЛАСКОЮ сх они Но ДКНС сте ПСДдАИН ТА ЕН МОВ ВІВие ПОСАШСАДО ПЧ МА рес ПДАА де еч ЕІ Поета она ви ТТ ЛюТІ; сяк сту иитя Ми шпик Ся ЗОЛИ ОСС АСОСАСИМИ ДІЛА СА - МАК КН ОСС А СІНЯХ запетис х ЗМО АК ГАСОМ АД НЄ ее АСОСБККАНІАС САДСАДОСДДАЄ усю ЧАСИ дДОССЬКО СИТА ДСА я ї их МеВ зизтрх КАТЯ при ОСИ я САСИЮВСОА АЕН АС ТОЮ ПАСА САС пери ККУ, оо тА БЕК дДЕМСЕКСНІ СизеО есе дх ВІСК НЯ, питне нею оС ЛЕЛЯ пили и ес и Кене дод У се ес дон здодосдоє ЛАЄ ЗА все тоде ль ря низи т ли "«(паддепдев ПДК ВИ дЕВИОИ жссспАся ї ПАСТ Уж сиве де ХК Ук злу срошос Це Ше СМЛІБАЛОААС, МДЕ в МЛ АВЕКНАД ПОСдДОСАИСОСАСдО педссд ЧО ДМ ЗАПОСТАСОДІ ледспидео МОСК ЗСО САС СППОСДОСлАСИОА МАСУ. В СИТА рт мив. Мт паж ВН есе Й Ії ДИКО сАЮТЮ ВТО, САС РКА М ОСИ СААрСВИНИК АКА А ОМ НТУ пОССТСААСИ АЗС ІАЕ МС емо СС ОДЕСИ не а У Я ох задешенх ще Мт Ех дея вику хижа САС АОСЯ МСА кААдавАдАА джем их и в пах: ЕВ хижий хдді ; сМОАЦОЮЄ пе АВ ААдАВАВАІ як ЛАСЛО ХУ АКАД причи пити Тая кА ма у Кк Ме . рин іх 1 ПАПАДОТДСН ТАЄ У ААДАВАДАМК АКА ОПАНАС Ада УСИСсСодАо ї гидко падав д гм пе ик Б дААвААКВЕА; че ПАДАВ ДАА вав р ЧААЦАДА Ка ан ФО, ОСА АТІААНА зесСсерОососе ПОХІД учи КОН МикоКЕ т тет тт п МАКОМ ОА ки "АДАКААМОд АДААВАдА мі длдАвАдАА ; Й САУ АВІНІ АНА ОАЄ дО; 333 к 19
А д Е Ж 5 т р ж жу й гати те
М. їх и С Ст ДНО ІЗ кана ьнКи т В ТС. "АТ яти и ТЕТ зууихт тити ии и ит ит Тих ут оті имя пос еуз сце ї Пед й ІК і С х бо я иа 3 КА о я ота Зоо ких , БІВ СНТОСя ССП Її: де ї Ту пар З ЗВ РУ ВИТ МД ЩІ с. - | й КИ АУЮЯ , чу вот, р сл по у. х КИКи но прут я тику дМасенеє Ї че ту п ТЕН ІА КТК, МС Км им Кс МОХ на й АД Землею Є НСНУ яки М дес ТОЖ х Клинок ; ПА В Ота КМ І укя и. | постіоо ши, ще у ПАСА ІС 1 ІС і ї діт С ятвтичт тртртв зт щ ут тт рт т ту аз ртертитит т АКВА Я ла т ї г п її пис Є і І із І А ІКНІ А КАСКО Ї КОХ і й САВА ТА ДАІ, - | овен й : с й й Я далее АсС ня тт пилу ря кити хатку ка тк ті при ПИТ А й и ССБАКТЯ с М з золота тя МТ ДЯ ї ; хоча тик ятки пе п І І | й й й і й - Я. | ККЗ ше ї КАСИ ЧАК ЦЯ їх МІ о КТ КИ и Ки МИ, й ОСТ ИдеН пес де ще ЧЕ НАДА с в ІЕЕ ГЕ 1 ше, з ЗМ в. 5 ВН В М ММ сек МИ КДТИІ си ни - пити жердини ще ртрдтя туя г ие у КАК і ШО Шо Й У й й і Й й шк гу пл кий СПЕ до вка се с Со Ей ЯК Сея г Ех гу їх гаї АСК окунів ї А ї ; Во о ІЗ Ся Мт. ки Ке о СА ЛЕМ хну й ПС Ой гону че и ик ТИ і шо о . | | Й Й ШЕ ж ех | | | ік - й | їх ій ГУ МБ Ко тва ео ун Ту. зі Н А АССОЛЬ РИТИ пилки Суто КЛИМ У СЯ ; ВЕт сл Ще СПАС яку Я їх. х І і лековя і ї ЗЕ) вай Как АЮ КОМ ос 2 хх зе де ї 1х і Але й ху Й їУ ММК МКК, о й ких лоз ее ДОЗА с її ре їсУд І ІС ІВ х х ол ДА МОХ укус З НЕМА зи У од г Е УМ АК ко й Я ОКА Ки МА Й М Щі Й Щ птІДО ЧИТИ пд То рт ру вті пери ДІВ ДИ ША я серии Х Ії пе ге ії т ршкя АДАП АСААВСАТИТІАУ о ав хпо коси АОССКлІ ай тА Зк їх ше В сити АТ А СІ й Са о ІДС; ПАС ПЛИТА АС ш ОА АВ М АКВА Й Що щ ся ще ЛІТ» Поу ЯКПЕ КАЧКИ слово у щих. Вежі ОХ МОТО шо ще Ст Ше ха ЕКО попи спот Сл ВВ ред І т що Ії ї Ї п іо НВ ке вкокя РАЛОДИТВУСТЬ СИ й сво у уні ї «КАК, У пу их В. т Ю Пи Її чи Пе І ї С ' и вет ек ру р срукчлві Ки я НН КОТЕЛ, щі ле їх ок я АС І, з ТД МІТ ДИТИ ХТ тих ух | пед Ш й і Що «ді сплсоидллч АВ НН АСТІВ ще и. ще КТ СД ПО Ї В ке їй пед и 2 акт Уся лі пе; Сх В. Асада кит Сука КИ т КУ ж ко ОХ Кі я Ід ІААА Ь ВА Ло т й шк й Щ Щ ПАСТА МАЄ САН ТА, і: ще ці що й і то ТА У пи ЕМ АД ЗК ния я І АСК ще КАСИ ЗАМ / ше ки и КИ У ТИ ПК ЛЕМХ неон КК і; г во ІА І ТРОС ПОМАДА ДАЕ Ку л | І : Му Ї и КИТ й Море (в. діпАМ є до дО Ї Во ах шля вне ию КМУ, У УСС ЗКЗАУКИ. ЯК ля Ка ка КК Ух і: ї і Б КОДУ М 1 ВАТА сут 4 Хе М. ПАС ТсМаХ У Ве Сай У І Що . пк МІД УКЛ й гас тІде к: де сплести У й т тлі - лЕплкі дя Ж ре АЕС ІЙ ОКЕАН КК АВ ОО ОТ ОК АКА Е У, У АД ІКТ КАНКО ї Ід х Кая Я кАшИАЙ ПОКИ Кт МЕ іч Й шо по ЩО й ще Шо тортик ик тету тд ит ит нам аня тел тт тр тити тк ит У СОТ сок ких яУ У Й сит що й Щ нд КОХ оо ин с ик МОВО ТВ РАКЕТ СИ Аа М ТИХ, ек У ЛЕ МТ : с гй НВК ХВ МАЛЯ ЕМО сяє З Бе ТЕАКТ КАН з га х Гай г У | Й і у А КАТА ОТ КЕ ок т с і Й шк з Що з й теории ел ав и дет спред ює - пад АСПМОДАЬКО МВСУ Ж КА ПАЙ ДАС ОА ОАЕ КАСИ о КА МАХ, и є ках САС Кк АС КТ щ КАК іх АСИСАОВСНОО х. ложе їч пам ит юТЕИ можу МІКС СО? дО що шен М ШО вве ЗА дисИин кОЕх | і я і Е с си) АМІАК, мими мя чі Ми 5 М а ц с є 5 МпАСЕ-С ств СС -оптламізована З Х ду жири ун ех чних кіт сема вет У, Х ВІ ЕКО СЗАК О АДОТО С САС Мо пеня ОС Те НТЕААСТСН ОКДНТДОТ МИ м ОСС ОО МО ї І ШИ ких ит ит ит и - - свиня тр тя три т Ек а т дня я ду Я о ау я ка ую я ї не ОА ЗАСН ВОК АСИТТОНСОСА ї. зар и ну са ей Км ЗАСН АСВ ОЙ ОСИ ОВС С СО СПАСИ НН ОА КИ РЕА ик ко тек спаде АСИ Степ Кл як МАО Кк рн - ех жит пори Я тут оте вх КСВСТ тет тхр Тут итих ; птертчт тт. здпсдесиссдессоАнОоСИстов мч ж, тут тини тич мапессцсесдасілинесаєсдестосдесесади ТТ Н ї 1: ма ВО Тані К ІВ, АП М С ШОСТА Кишки Що мий хх ообосвний 7 нал С хі яка. Га х анонс он ВЕ ВК т т АСОМ С воді - - пер Керує тир педа ие пи вдос ВА З АС ВВ ЦО НОТ ОТ САМО АСК АЕН АСАВСАЦТСОЮЮЮОА, ви лм ви ий З Іл до пе т І щі т ПЕ в па М Си л КК ПАК и с а х Ми ЕМКОН КИ ско ких тими или теки х чит вка КО пе МАО ОМ ДСЗ М о НААН КАС С СТИ г ж влтятя у или КИТИ зичзилу си. ї ее У ам пи КЕ я жи кох МИ КИЯ СО ар уся о ОД В Фо ле ик кс в; ; -з - АЮ -е з - зол кричи вити рити из рі Ве ВИНА Ас АСВ АМІНИ ДСУ х ! ДОСЯ їй АСИСТ АК СО СИ ТЯ с ТЕНТ АТ Молю а ОА Ук САС ЦО ВЕ ОСА як сту ря я ж м тихе рних пед сви ЄцелесОоднеСцесвНе ях й АДАМС СОСОК М СА АС АРК ЕН ЛСОЮЮМАСМСНКНМО Осн СА ТАТА СС ТАС АСАСОС КАТІ ДО " ос СО АКТ АОС АОС СТУ Як їх х. кототия стоки птн затопили ОА ДдІНТІ х ух З: т оддосисвдсн А АТО М АВ АЗАТИТІ пор ОС АС АСТВАСПОАЮЮЮ ТОК ОК В ООКОТПТАООНАВОТ МУ АУ АС СЮСТИИОЮ АВАКОВА КИ В допов як | - - потрі В дети поту рр іт кутя В сигареті шати Ід ТЕ ДАТ ТД ПСИ ПАТ ОТ З ди АН ТАТ ТА ві ЗО ААОАСАДССАСИДС ССО АНОСИ КРУТ ЕХ тк хто з ги Ал о УТІК . ; й ка хз - - ян кр тич ц т тити тия ту туя орав ее 7 ЗК ло АОС ОТП АІС ОСС шир кавова СТАС ОТО ОК АПА Пси снаоо а ДИН ЕЕ, ї ; з х ституту ТІКАТИ А Я Ед пази ВО ЕН ТИ 10 З АПСдИСХ коники о и не я отри АТ У Пледи В ІНК МА ІЧНЯ Мая АКА сажа ж інн - й ПОАССЗАСОИАОЗ ВОАС АС ДОА СУС А СТИ ЗСАСЬКИ й г МК ожлхяя мара Я ха " К я пн вав АН ро д ку шати та да ІЄТ НН КС АВС Іди, Дер УВС ВИС кл с аа, С САШИИ ЗАОДАВСЮЮ АОС СЮ а Ока лаз а МС ри Але чия на рони я У - - х пам мот жити тя жк ее чечцідест стае А деНеТИ ПМ АСВ ТОСТИ Сиа С Ма КОСА СОСАМИМИТ ПИЛОК Ї в КС «ї УСС пак Козу Ух и КК ек иукиу л - кт плей Ірь пл охо Я жук ке К - я х. досжро, ке зоре ето АСК їй й АС НІС ННЯ А я СУЯ ЛВС ЛАТ ОН ОТАК ЕТ ЛЗ ВМО ОО КО схв: ми ші ОВС АТО МАМИ ЛОЛИ Мук и МИТИ - - - - - - - зало песцеваюциссисегеддо жала ДАОЮИПОССТОСВАТИ ПОСТ АД Цен о п ДНА ПАТ З ДИТ АС есе ло ак ло З наве ре в В аа в СВ готи, ї ж - іжветнетя рому яд ве реч дет я як ре ву чсиесидсддпсливесстпосадссдосспоидео Є СЕК МК МОМОТ СИ ТАСАДО БАЛОН АДСЮТАЄ ї С АСААСАСОИЗ ОК ИТАССТАВКТ ССО ОСМОЕНТ ТАКТА; Алла КИ КИТ прерорцааня палав едикт метил ї МД АСС АС АСАСОСССНА ПЗАЮОТИ ОЗ АСМАЄЮ САВА ОСС А АСВ ОСНО САС САССО АС Ума ТК КЕ ЗК Ки нив Ук Я Ас сла СС ще "ДІ КЕ ЗАЛА дими ши У не А ул Ку и: уч сич рт терти лив ел в ООЦИ де ПеСАВСАДОВО ОСИКИ ДУ СЕС АНОПОСВО СТАДО ССС АСИА и . 21
"ТЕ СС тва Аве СІ яхуУМТК СО МИСІ пасе сшюшсуустиссивецати САЛО СИТО чеОдОпдА Са СА СМ ВОК, ДСН ЗАЛА ака и ее АСТССДАСЮЮТВ етичне АС АСТАЮСАКХУ Ки Де АСИСТ ее а ВІ ФВ ана сеухпоВ СА Ат СС ДЕ "САЛА плат АД АГ ОС или ЗАЛУ пісня Ге Етика нн Ми: ПН таня Аня АКТИ Бк пери линии здути ва Му УА УМЕТУИ ЗЕД Тии им т СА иК УСЕ ит УК три ци КАНД ОДИН коки Ва вхан вва КС А діІзучен суд ККД Кк М ТИ - СУКАКД ЗО СТАСНТИНОІДЯ пе КН пАССИСде ЗАВАСВАВСВОССВОСЯ ІЮСВАСДЕОВОСОВСМОЯ песаососолесосесое ПА - п ОВ доестиюА сич аРАХМеос уран КД Хояк я. ра цанья с: НИ, пити - ее МТ М АСК часи ЗАСН АЦН ОСС СТ, сон се потече ен дрилі КАМ ВИМ кити СИТА ех пулу де нано я МИ АКУСУ ее т и Аа Стас Ал ау мм паедеесцнсесичтя як СИЛ СНІ ЗА зисОесесвосоє пд дир СЕДАН МІДНА пи тя и ПА ОН АС статі я му - СПАС АВС ОО Спи Мел МАМАМИ па и ан СДС - МАСЕНКО СКЛА АС чих МУЛУ Ум СЕС ПОЕТА С КОС ПАНА Мелані дода ВИЛІТ Де С ЗА а Ка АКДІАКИ ВК ТТ а А сабо пе УеСУМАМЕ ВИК З ВН пе нн ие На ПОТ пдв но мики и о ко АКДП ЛКМЄ ЛО ТА ОН ЗАССдОССОЦССТЮЄ : ї -; ТІ -. сл Мих. Не хг йо кл УП ЕУК КУМ а ав вна кмин ; Ма ее ро ки сири ще адепти д Й перу МДЕ АНУ Я стяжку ЧА ПД ОС МОСС САС АСУ дес СО МИМО пОшОо ОО СА СОЮСЮТ ЛОГОС АС АС пичувитетиих - НИ ЯК. аю соти п АД В прі итерткух з ССО цеси др тю САС Є п В АС В ст и оо аю . пи КО и и Я Й САСОСЮВИЄ ОО аддоеио ЗНОС ІА САС жу си туту ти, Ми Вик и зх МІД а ОВО; Аа А ОА ОС САСИПОЛИСЮТ УЛ дЕСДИК СИ о гіда МАК тя ит ит ух, КК пак у Со, как СА КСО Кф УСЮ Уня сл АДС я пуер ЦМВ о ЕЛЕ КУ пс Аде ЗОШ И ПА дане ЗАЧ МО, ПАКИЗСКНИ ПАС МОП АСАДН ТЕ НТЕТ ВК А ВИ ОВ ще КИРИЛ ИКТ кА ОМС у КГ ОА А поассдиосо МОН АЕТЕ . Сас А Мао й сел тдсюІднно и В Фо РЕК ГК МУКА я й пла ва КАФ САБО в пОше дв еСя о, МдОСАдо Пед девесиєє ДАХ Надест че ЗАС пуск уко а БИК СЕМИ а АС дич хиби и й ДОА АДІАСТЬХ А Кочан : пуста! я дод сдеА сети и СІК СЕЛО СС, дет де УСНА зрізана Кт и На ев ну МкЕту не ки вен осв мисевтвваетАСО АПОДОССуСеСВИсОсАсне СОАСВЄСВОВИ СОЮ ке МААСАС СТАНОВ ПАДАВ пливи ПТААЄ ЛА МАО СЯ АК МАТТ ТО "АЛЛА а вала «КУКИ пити и ПИКА кХ фета и СКМ ПС ул Те Док рн зи те ОКА яв ся меми СТ АСМЛОС МНС ПТС АНА Те ПИ Я КВ ав ПОЛО АСИСТ ес оце ев се де в Сп сОеА ев А і пу утри ЩЕ. ОКА, гак ут КА АБСАСОСАМОАСЬКИ осо Шеєси допдесуассяссосод тичних до я САСОСВВОСКТНЗ ОСЬ ЗАСАДА ААСАПСДАСІ С МТА ПАДАЄ ТТАСТІ ДС КИТА АМСТАНСДАХ - Манту РУК ВИ ВХ ши тече дим ен чам ет тив А с реч ОК осцог в я УДОД кити Є ДА принтера ЯМКИ ДСС А ААУ де мин КУ полу ОКА оди А я - сот - Пд ле ЕЛАДИ У Ст СН ЗО кт ди щи ПСО САСЧАНСНАСдАОС ОН СКС З АКОТ МУ ИТААС А Про енд МАСТЬ ОК СДС АС А АТ А НАС а АС дес пок КАТ шен А до СЕНС чеки тю жо тим Зв ки сети и Не Я МОСК З АСИАСААХАСХ АС КАС ОО СЮ СОЮ УЛІСААССАСОАСАВИХ ХИМСАВОСОСЗОСАВИ СС зт кл пе т МОРЯ рії СМ ес вання й зо в Я І СІ ВАХ ЕД ПОЕТ псом га СА ТКА зе д -- хАРИАмУКИю и ПІДОлО и т ди, ее нове сАСНИПСеде етери в сет имат Ле и М шк ІДС САС СОС А АІС АСУ в Ван ВЕС АЗАдАЄЛІДСН АТКСМСКУ а в НИ ПИКА АВЄЧТІДС ситу м пн ие др А до, дссдидетсди ВНИХ З ПАН ТОНИ ДИКА АСИСТ ДС ся КК ттезртитит Али - я СИНА Б пока шику кас хас СМУГА печити ке ле тки КА АСУ АС ТА СН ЗІ ВОАС ПАСПАОСССАПОАЛОВАЕ «ал епОогастох несе анна ДОСТАКН ПДу я дики ик - АОС АСЛАСТААСЮТЯ ит тих мот СЕМА ДО ДИС дИТСМАС СЕНАТ ВКА МАСТІ АСИО : вв и и ОН КУКИ КН ОКТЕ ДНО й ЗД лет сит вих Сили чит мими КАХ КИ ї ДС КА ки со щ пити я теле А АХМІТЬ ужити ит Си ДИ ке яр ЗНЗ КНТ СТО шо ПАСМАМИ, дерен НО НТ де АКА ДОД ЗАД Мр ми М ОН дич ТА ЗЛ СТА АС пипакщц м Таки КАТЮ Пе чу ки и сх ч пад Овна АД КУ жду дедишК - ДОЛАТИ Дт пава ААПДІНОСО САС СО АСИАСОЮЮЄТЬМО ТО АДААДАДЛАААВАдАдАдАд й ААУ ПАПААСАСУСАСИДОС МААААРАЛААРАЛАААВАЛЬАХ, худе СПАСИ ТАТА АЄАЄСИ АКА АддадАдАд; жителі де ІДОЛ МАСТЬ КАТ; вл дату атм м М Зрретеине км МОБАОСАЄНИ ЛОВАНПАБААААРАРААВАВЕ Спо сосеооо САСПОАСАННСАААДІ пів анавивоменонй СА ВАДА АТАТПЛІСТИНТТТМ СИСоє АД ААдААВКАААТДИИ АЛУЖААІЮХ УГТ тьКУ ДАВ АКА, миє кожи
РІГ. 22
54-30 гістонвї, СС) тнав-йо З ее хУМІЩСС уасуеєто т, ї Е й СОС МІС 5хУ: ше СосИОос політ . - тр не тех кое СС ЕТ ПИ АНА ДЯ пад ОСС сИА - а ВАВ СОСОК путем фан мя псиодлюЮСтЄ песесуєоре Пак лечо тет ки А АКА Альо СТА НО СТАС ССАО СПАЛА АСА ДСТУ сік ка ДО ЕД СУТАКНУ Я АС И А 5 КД СОС ААЄ СЛІДОМ дл С о КАК ЧА и, ми и ве УМ сиди дО лАДСЮСТ ПІІ СОН Ва ен если ст кА тет ИМЯ МЗС Є де аа и нання тилу -я ПКС ТАС ик ами нка САЛО Я С Нд дО Нд ДОС ОН ях ПАС КД ИКУ пи и ПЕКИ Веде САТ порт, пд ІТЕУ ртуті гу ТЗ Ето де досл сесврососсо АД АСОЮЮ ее НИ и СОВА НЯ ПОД по МВЕУл Свати ее ОО ані ІССПОдДОСАСДАС чести ВВА КИ Я причал ве ан еева по О ДО АСТЧМЯСХ ОККО САС СОС АССОСОСОЮС сухе ТЕ стоку ет чит пд Мо й ах Ме ки пули хх счотевтчс пас посепсдоесос жесооласвцо мдсшсесосос СМАК У ВЕН аа я ДЕННЕ ДОА стичих уст ЗДАТИ ТААСІДАНСАТО ИНА Ех ло СА НА дня куми ОБ ЗНЖЕСНЛИКТ пк СДС А шо Щ ПИ соня ши ин ке ОХ УЕЕМОЕНИс дедгесю по МН АК НОЮ ЗАСАД ХАОС АСОВС зро пи БЕК пед кдд я КІ пулу МС т ФІН Я тин ПАЗА НАХ пес КИТ НЕК чдлпедереОщея ср мами Одес ЗАС СНСССТЯ сс АчОсдлес оосстесе На БУшчхилти ко пери В КУ я степи чуие ОХОТИ сич желе САС ТО ОЕНСНЗАЮ пи о дОоАЛ НИ сита ше СИ ит Коли пд изучи люк хи ки педняия ОКИС ЗО МЕН дін КН чдедет чия - пит ПОС ви КО он В ОСА СНІ ОКА ОС САН щи сани пидосспесосесоє ДСдОСиВСо ПОСТАХ засос дипшесоцедосу асОСаАСАЮСНІ ПОСТА ОБСТОЮЄ, где пікет пак тех ная ЕН ЗАМ своя сярятя ан ТЕЛЕ риси паж звання прита Си АТЯИ ямок» тити СА Меп АТ ПСИ ДН шодо ССС АСАД пдедесеня не аа а МОЛОТ но его, Во ах ФВ а о МОДИ НАД не НС АКТІ ОА но, ри СН Ах й Сл А САС ОН ТТ на ана че ВИЯВ С ТА пвитх куки ЛА ЕЕ ТОЛОКА АСЦІСТАС СНІ сшесее и еле ей А АСЦІСТАС ССШАСИНС пдЕцигНЦ зопесдесевс з САлЛСдАЄ ЗАСАДА сви ен содАОС ТОН чадо тен АСАСЗ АЛОЕ ЗЕМ КОП ОАЮТЮТЬТТЯ дес ТАС Аг яп мМІАх правд заледве сиессеестодеде а и о шк ща ме КУЯ ев о КТЕХ СОТ АСТДСЛАЮНІК с педАде ДЛЯ ДОА МИ АДССАСЯ СКС ЛІСТА зеслетиви ЗДО ОСчИдеив ААУ А ЗААССПССАСТИ, що пи зад ЯК пи ик роки ХОДУ Те печу і ЗАС АССАЄСА пекан ов СТА ХАВ АП ОсСоде ПОСТА ГТАСА С Зо дО ОА ПІСТ АЄСАТТ САН родео ує зер тЕ пдасиседео ридіюя Зиех ДОА Я ЛИСА сила пе дес ОДА МАС дев ОК ОТ Те ІДС В СУСТАХУТІ Й СААСАПОдАСИПІ ; палю х Сен БИКА х МиЗАСЛІДУ ІДС й яри Я їх ди АД хх - СИЛА СдДСКТАСТЄН дуети Уж Смак поА ПАКЕТИ СуСАеСВОЮВО ССОСАВОСВОСВАСИ осо насо ЗВАОВАНСВАЛЕНОСЬС ; КУ пуд ий вітав НО я пед Та гтист литя САН дасте ССО АСИСНЛА ОДЕСА не Ке СИ АСКЛНАМСТ Пен КИСТІ п са пня АК не АК тити ви СИЛОС АВНТ ВОНО аканта иа АК З, лини сл Бе У ня СИС А, ДАК КАСИ СС еп ВН ее тих ВК, Певне Зо САС педесиу єв «ге лдиє сан кодове уро кованатані ПЕ ККу чит рт АЛІ т плиту ти Си ий тт Се дит а те ПУ пс З ПОСТ - дме КК В М Си ВНУ ве ЯК ВЛ В петрих, Уби Ко ВИХ Що СС пола є ес де й УДСО ДСЗ АССТООСЮ зе по Ся КАС ша ДІДОМ СТО А У СЕТИ а ПАСИ дСИ рих М спи ДТ пу прут ах -- АПАПССАде ПОСОЛ пе КСО А АВ ААС "ДОДАНА ВЕК ПОСТ ОТАК ПАСИВИ ДОСТНТЯ ОА ВИНА кри КА ВЕСНА ТСН АСУ ВИСОТ прес мае пен ПСПеЮчидУ АОЛІВИс, нене Вика ее ефе ПдОсССдОСАИе УСИК еВ е ее В а ИН, МАС ЗдОИА ЗАСАДОЮ СН тд ее СИПАПОДИИТИОЯ ІАССАКТСЧІДІ УДО ЗАС АСАВОСЯ Зевс Іл зи пах пк ЗКУ ТУ Ж ЕТкк ит го ГаАХ НТ мере стем ки ЕТ ОЗ АСС сиди Ко туя діди Мем ля по нУсиаАсеую ЗОСОСОбАСАССОВОО совАСОовВавОС зссовососемоє мосесис х вах З АТ Их ЕЕ ки ШУ, пе СОТ ким МН СИС ЯН дис серии ким ви ан ей есе Й АМС Ме ОН а СКД ААСХУ АЛЛА А ення недетдидеслтх ЗЕ ОО де ААВАДАААдАдАД, УТА СА ду ати хи ПААААДАД я ПАК у ИН ЗАВ А дЕ АВВЛАддлАдаА; ех АД тдасошодесиео ОПАДИ АДАДААААДААВ УСТА ДА ли сту. зе дотчх дошк Ячам Киев а ле ПИ ЕМТЬАТ, три .щ СХ и нят ВАЛЮТМО АС ТІАМАлЕАС ААААААААДАА пери тееч РОЛ ЕАСНІВТА длАдАдлАлА КОКС ПОД РЕТЕАСЯ ПАдДАддлАдлА виро и як ВН Яка Мис ДОДАМ ІАДАД МСС 7 АОССОСАОААМ ХМ ВЕКССО СЕТИ А Хот Ус оту СУТ КОТУ М ДАКАКАДА ; ше дладаААд гі АКТ лоді уз Мають ДІА Я хе ААДАЛАА УДО АССАНАД ОВ Тпризл ЛЕЗО лу Кене ВН Из Г, чашних, тя
ФІГ. 23
. вки яр лук лук Мисі-вх КТ СО дикого типу - кити ПИСАВ ІВАН ЛІВ й пут ик кт ит соч лєтл єм аТасаср А АСИСТ АС ЕІ АМИСАСДОСОЦ НОСИ САСВСМОССО ЦИСТИТ ОСС ТОМИ ТО АТАС, і пдв и т яп Я сх ПОТ ДАЛА СИС ОКДАЛИ ДЕН САМ САС АОС СВД ОдААДОСдадеО со Ассдаде ОРІ МСЕ ПОСТА САМНТ КАСКО ОН ЗАСТ АСЮ яки ну те ТриА у ЗАДАТИ НА АСИ АІС ДЕН ТВ ДИМ СТ НТД ПДАА АС САС АТАКА НСС ВА В АКОТ АС МА ТС СТУС ПН САС АСТЬЗАСА ДАО ВАС ВО пкттиартЙч В ртуті ПАССАСИОАОСОДСАОСАИСУСАСНСуСОВОСОСОбСОАСОСАВО поту пд ТЕКА АСК АССТАКИ С озер се Вк Я аа ню ДОМИ а КО ОСА СПАС АОС З ії и с котатрях ри ит пад се ; тт щі ПДАА СИ ОДЕСІ ПОСТА СТАС ї аа низи се гаврія А тили зи На її ЕФ д їй 2. І АХ ще М Ат и Я о Й БРВ СА ОО ОА НАСК ТСН СЬО СНАХ ї. нирки КИ я ит пня в о р ин - оси епассрессвдАса все са ПИ ОА АВ ДСК КЗ ОТ АХА ЗНОС ВОК ОВО ТАКСИ АТО ОС ПОСТА СВО ОА ЗАСВОЮЄ х ку ит ук и и т» сти зисопевсведесвлосовассставОосо вла ден АН ОА ТАТИ ОС причи че Ви ПАМ ПОКИ ОАТАСКІДИЯ п ОА ОКОЛО СОН ОТО ТАТ : ; і итктв зум рих : педа есе дассссаторсвессосА ; о кУКоу ; С АЕН ТАСН ака я І ве Со пох ее МК КИ АК Ту гцилки т СКАСКІВ КН М ТАКИ НИ ТИР ОЛ Кене ана нав ване ока А АОССОДСДОЦЛАСОСОСПЕССОСООАСАССДО ОСИ ОО ОА А ААССНО В ОО АС Си о КО АС СА КО. ке аа еВ зд - пут ти вітки ТЕ при тиих дСсОосИисиИподест ут ОсосдОидесдозвОССе содою СТАС Са ВИ ОА Оса ОА СИТ А СБ ОС ОСС У МОСТА споитя сит ит ва А Ома СУ Ссидос СП пос Осс доведе си та ет свое АСТМОЮ ОО В АОС ООН ОС НН СА; тахиху и и ур иту тич ех пет пет утиліта кети пюшадсвсиседесестеми студе - педестеую стислу давл точи еєдееветеси тво СА г: СЕУ і нет х М В У а ЗАС АЛ я ши ЛИ я САТ КИ Кути СОС АК АСОМ МС У и ТУСТЮЯ спедосденсавл суп АСсИСОкересасАавевоСдИсИ три дтузичЕх пря ужити тити САС САС ТАС СТ ПА ОТ АСТАДВИСТОН САТ АКНСАСТ ІКОНОСТАС САС СПТАСИСЮ ; пеки ю ие т туя дя коник я «в шепесдАПЦОСТОДЕВОАССАСИЄ КИ АСКАСАРОСАЮКАСИ КІЛО САСМОССАНШТСМИСАКАМИСССАСССАССАСО СКС АССАСАТМС КВ КОСА ДАСИМа САСМСОССАЦЕТВИА чит тот учня пита тири ВКА А НН сич МАСА АОС А АКА ОСТ СИ АСМЛАСТ СТАС АТМВСИ діти ДЕКАН МОСС ОТО АС ТВ ТАН А ААСТ СО ТОСТСТВСМ ПАСМО СХ ПОШТА АСВ А ССС Т АХССТ - хи деки я певен савИсИт - - - Зара аа ан аа ВІВ ее ана ОКА ТАС С АСК ЮСТА ПТСАСАСЦСТАКЛ ПОСТ ССС ПТО ВО САС ТАС ЮК КЛ ОСА АПТАСАСТТА : АПЕПИДАТССНОСИОСПІЄСДАЄВИ Сун ДдеСВ З етери тут ЛЕСАЄСАТТ ТА АКОТ ОСТАСЕ І ААСТСТ СТ СТО АСТАО МАСА МОХИ ЕТНОС СТ САС АКТА АС СО АС ЕААКЄ Од тТІЄР Ір ТЕеИАвІВ п ря ев виткі АНІ чо МАСА САДАМИ ПИ СТАС ОА АДАМА лиття Іри им що гу ДОА Ї г 7 КЛАДИ ПОТ АКА ТАТ са АОС СОМ ВОДО ТС О і - ся кра ри тот тд АВТ ЗАТ ТЯ я столи дя зва СплвАЦ ПЕН ПАСА САС ВО ІК ЕН ТЕТ А ВІТАШТ ТВ А ВТ ОЧДЕ БА О СИ ПО АС АЛЛО, В) ДПП ЛО ОС АВОАНТИТВАСИМ ЛАВА тА пров учи т спеестев пастили х хтото в т оту ти плит та ит т тут руху дух ра» 12 дл ІЄ ОСА; МА, ССО СОС АВБААДСЮ ПАСА ААНОСИОЮАЦАСОВ АСАД САСАИЬ КОААПСВ паритет кт теку тя ти Я ТТ Ути Гек айкхя ТОДІ ее МТ СТ МТ й ПАПпдАСХ ДСА СНД ДС ДСА НА ТИ ПСАЛМИ Аа КО ОСА ЮА КАСІ АСЧАЦІ САВА ТКС АС МЗАОСТ ; ЖУК ни ДАК Юди ких Мак л Ж ЕТ їли й ние плити ие; те пити І пото пасе А ТЕ ОН пз м сн Ме По ги Са С ее СН ОА САС З ОСЕТІЇ Е па СА ПСО СС І ССС ПОХСТОТАНО САС ПО кертртя тритутит р тия ПОСАДИВ СОСДАДОВАСИТА, вягтих ПАПОК ОСТАНКИ ОСИ МОСС СТАЛИ СССАдА; САДКИ; пес САТ СЛ АМС ВАТ ОСТ ОС МОЛОТ САНИ СА песня яр ; зн ІА В АОС А В СЕКС ПОСТАТІ ЕС ДОСОИ МАПАССМТАКСТАПОССТТ АОС АСИСТ АСТ ВС СОВІСТЮ ППС ОСС А А 7 Золя песто пАсидосддотиє САПОМИНМСМАОЗОСИ САСОАСТПАССЛ АОС ТАСВОСТСМ АТЗ АСАД СО СЮТ СЛАНІ МАО ОС КО АС ВАО АКТ ОСТ АОС їх и сесиємписенесвсяаттні ЗАБОАОССІОСТИАСАСАКАССТАССАСПОССДОСОССТІСО ОСА СРО АД ПОСТАВА АТ ОС АСАСЛ КА СИМ КА СРО МАСОК САС АК ОН КТ АСАСВААСЄСЮ В; ит ІК РП ;24 є зе и кована Мисі- ох КТК СВ СС оптимі ов: я ех ситет тити три, поко вве а вв ее Я ОДА СН УС, до ПО а ТОСТИ я я я ДЕН СИ ТЕ ги НИ МИКО М - - й се ПІД СКИ ТТТТТО те ок, у кн жя вит. дише АСНХ ія ар иуя ДСА й ЛЕ ечки Милі я АНА аа НХ п пн СИВУ САД СС ТО ОО -щ- -- зу тир тот июня ки КЕ яння ВК А Не ЕТО СКУ АСЬ ТЕКИ в СКД МОСС САС яд - мА ас ОО сАЄ шо ДІ - - ВІ Ат Мои М Кия - - т- ДСТУ СТАС ДК ій ш я де АСТ СТ ще а АНА АКА ей шу прив А СУ м ПО АНА їх -Р6 ПІДЛОСТІ СВССТАЛСОДдеЕХ КМ ш---- ШО зле тди я ВТ Я У и ек рай ас ст ке є гу дат -- ПАКТ САС, он пт НАТО А Ся но -х чив и чик ВН МН «АДАМ то Уху тя тк Й дрантя хе наметах ДІ ТА пи тревутенк иия и ПАСТ суд що я Й ДИТИ ВЕ и МЕЗКЕх акта хи ки ше -- ро ПИ АКА САНТА рій - - ПНО Кап ІДС ННІ, с -н н ота сем я ІЛИК ВК Пен - ДАВ енер. ча СЕКТ, МА шко КТ Ук се ереееослас де шив А нин почав светр ет шко Кит - чи СВК ово я- щ н. що пекли коки Ся пив ва а я АННИ шеЗОСвВАВОСАЮОВО СОЮ ОСА ССО ОСС ОС О СЯ, он ння - Кз пот СДР хо ких яні оБОССеовСсеаціауадосттлеат юю пл пок КО Ов ве вн ГАКоКутельт і ми щі паж ут ит ут. пд ши -- о в си ОО ОТО ай ее ее аа в ЗО Й пе ки биті тет Мт п ее КА ввельсьо й : ЧІМ д СИМ АКА що У шд дише АСТИ ли и КА вовна пи СОДИ МАН нас секкуих ня ПО УСС, - ПКУ ВИ лу хати ККТдАОЦН шик МИ. ро -- дичини ПОСТ кодек водно т СОБАКА ОС СО пи - ДТ М ОА ло - емо ДСК КЕКВ - дійте я гарем АМКУ ро сторо кр тя, КО ЕК АТМ - -5? пилососи ша ох ке ване о ЕЕ ВаВ ев -В8Ж- Етичні они оком д- чення сАСОВОСТОАСОНОСОСОСОСВАСАСССОО ау ижрчетт в в В А в в ан врожаю тя шк -- ум гене фу СОС САС пов мс не а в вна моди я - ее я оре ето нео ян тот печене мно -- ке ен осв е Соя ре врееурве ера а те НО мойки А І ее ве ех ЗИ КМ си ть М - ЕД КЕ КОЛО ОО СВТ нен вдо ПОодесуоєвовессодовни стю прив ащини СОС СЮТВСАЄ БИТЯК СдЕСАСАВИ СВ МЕТУ МТУ задер спе лАСОСИОСТДОСЯ га В речи адое Пр ве не пог що шу ла ви люте ть ККУ, -Е ри ин ви ші ЗЕ КАСТ ЕНН ДОС шо т ПАСТА ТАТ АВСОВ ЗАСТ И КИ ХТО - ЧАСАМИ ТАС САСТАС Уго лох - няння ЗАС ІСД ТОНЯ пече пт т пис АТОВ АСОМ АССКВИ ЗД ЩІ СДС КІСТА НК А винних -о сет САН ДО А, ТКА х - Мпа А ОК АС ки - ЗАСТАВА ТСН - пня пе ну АКА ай ння пи и ви г ОЧІ оно а Он жи --- дин тижит т ЗВ ана В МО Ве -Щ «аа пеНет СОТ А НТ СВ рай решаваневоя ве Ва ван вв БИК ю ин й дише де ІА шо ш- тт НАДАЛА САСТАКАИ ММЗ п ДКОБАССВОСОПССААССАСВИСАЮЄССТЮЮСИ дух рий дз спррАюи тА де -- песдссАссунидемІАти лез ПОКИ - ПОДАСАССИОСОСОССДОСАСОЮТТАМ ще ш- тлнх, - СОС АСИИПОСДАСТдеСС шле сх НН АТ АДОСГТЧ АСИСТ що - пад есАЄСА АД СОУ щи моли й доп ря ит ПЕС ДОКТ СД ТАК . Кол етх ССБТ КС КАСКИ или - т СОПЛА ВСТА ДСН АС дане. стих сн СУТ ТИМИ око мів СЕ лк я - АСТМИ ЕНІ росі До ема о А мали ЛИ ЛЕ хоячт МАТИ КАН - -Щ -ж ре певен течух Спа АКТА рев щи ОО МЕТА ОА кими МКМ КМ - - етери екв крови шЩ- - мех дере осисесосце ее рондо ; СИТА ЖАДАН рай -ш - Й - ПІ ІСААКА -ля ня деле х АЛИЧА НН шок І ПОП АдсОСАСспАСААОАИССА, Ду - - ДСС КАС ТОН - АЛЛА ОСА САС ТЕНТИ Уколи Ту -- й А АС МАВИТАДКД ОНІАК тт ур тт туя. СОСНИ о дент АС АЕ вка шеуесадевилессипосестти пт па АСОМ АОС ОСС АСК ОСС СЮ АССАТЕИ СОДИ па ДСТУ посбос ві осв ЗДО, аими ко, дО суч вся чита я КАСКИ КУКА - пути тиху тир ги ши м М С І АСТА ДС моз чеше сн но КЕДИ КК дет - - сут пелет ОС ке аон - як ХЕ дей ресосоесьвя а в я кВА Ве ой - я З а ВИ - -- ЕЕ Нд у ПН нт нки т кою достат чн ав що - ЄССАДИВСТИССОСААСААСИА кАмлОоМак т яке пожити ВИ Ки ка и У - сорти, Сас ОО, асо я дизонейдисподисседесное МО ман щ побусоссрусвосвуєєвиєнАЮСОСАЮСОСОО ЕВ АССОСАЙСМАЄ осо ДИ дню Де п МАЧО ДСА ГАНТЯ МеЕМИк що в ик АКВА ОЮТ КАТА ССС ДО пд - запис Сова АСК ОСА --- ХАОС АС АСВ СНО Мам ел ки до тече уча вич ди и КК 5 - МТС САВОСЮСТАССЯЛОСЮМАВО 2 пече вве Кок ойнййкй -69Оті Й тру в ут САС СО АК СЯ - ласо посссассААсс КК МОЄ рах пт дОСсплАОЧ ЧК Я сит Ед - ССП АСНЛІДСАСЮДАССЯ Чл УЗ щ- НН ОО А ТАТА лит ня я- СДН ААУ НАТО пкт нн ик КМ Зх ш зітккя нем ри. 25
Секреція ІЕМ-гамма у спленоцитах мишей, вакцинованих МОСТ-ЕМАсічею ко ук Б 250 8 200- в Мусі-ВМАсбуєйв он шк х Буфер м В -Фф 450 г Е шк. 5 я 1005 ш в 050 Фо Е З КЗ Ге : ше в 5 ; ноплядідкляння х де о нн пн нн «ВК ди косо оосоросо г і; й З о а ; А З в я В БД фі ря ш Прогнозований контрольний епітоп Мис! ептоп ФНУ з з00з ; : ня т ае відсутність терапії ше я лише імунотерапія Е ії -к- лише опромінення Ки - І «в. імунотерапія ж опромінення Я х | 4 жо 2005 й 5 Е о х Е : рес і її З З - Е о 1005 З : " Ф Е а с 0 ен НО, АК сно Ккдлнку І) 5 10 15 28 25 30 35 40 45 дні піспя стимуляції пухлини вакцинація вка ака опромінення й завинив фаза росту пухлини, без лікування
ФІГ. 27
Білок ЗА МР ОПТІБОВОЧ; шродесгора аааеасісівк івіз1Рожшев шжезерішавнв гзвБартійш ахзезорріюй ссраїсссяле вакбеикснак вісеУюоЯМр вусі кіся пелазіреца ЇзсЕреіаії ввізівцяЕшкі давУрацайеь ірвікоіЗчіва вВивіс ої агвочизнУв варарітеї1їїі1 пцічроеовео зевзбедюУУу заз ізасяїч зьсхієїавий ВЕР ЮкаУі аовіснісі ізаавіснії умажкОЗ Ві евійнієстаї Борова Лера ку З екизураєметья іпазитсснік егетуукає їібсовуУурекис пгчії«ївпва З йсаріїт вістзухтїд ічівВвіїспаеавЕ Зі1уїпккеа З ЕкУТЕЬп со аскалтмесуУв усуєїпайри ікпівзивоу Білок сурвівіну (ННКС5УОНБІ9: МОДЕТІРЕАМОРЕТ КОНКІЗТЕКМИРЕБЕОСАСТРЕВМАВАСКІНСЕТЕМЕРОСАОСЕКС ЕКЕВЕОЕОЖЕРВОреТЕВНКЕнНОсО АВ УККОКВВТІОВЕБАГЦОКЕВАКНКТАКЕТНИК ККБЕЕВТАККУВКАТЕОГААМІ
РІГ. 29 Білок сурвівішу ЗНОС МР 611592: пштарсіюравю щож1кКапріз СбІКоУрютієє саестрертає езчБіПсорсва ері жех Тез есери адрівевкки ввасаріазк кабїееій че Т1КТагеєвик пкі«кейав кКакиченвє й Кеш ерсат
ФІГ. 30 Білок МУ-ЕБО-1 Ми ІВ: люекутУкоє зЕзчеавсзюоя реаїропрациї вууюєрвазає здапгоргсзаза згавурацев візчеовчозза чійческоча ксрави З івежЖ узаштізсоюм савівркаів савреіючкну зі1Зікш-жксува піша сіло аа всіма чі косо Масюк
ФІГ.
Білоє МАКС МР ПОЯВИ пкюракОаюрсво пові довше вровзоредесі сива ров збевосьує 1овроавиевис ейезарвічЕер рзокаводвюі пчірчяавряюі посевоїснну парео в ді верериза ня ву м Е ще а ть Ж я Мих т. Я реа Ез жа зеоучвзюІісв разасттвва)і Іізібсолареа баврІєесзсва УТ рувахж вза ширизнісувря вОбюЮєснккі і БУВ ЕвеКі фі таиврек евжтетає в о юУвюВ «вакіфні йо яжтшавкоцаКІ єуїзахнісї руво»авіваті Уушрбцеарвех сувстенуєеня звдетезутри вюзсіраеюв башті ЇзЕКор ввуратевиих очко зшь реп автавкії із1ідаврев зоузаїезїра вріціюевнхя ЕшукізвіКИ зеБуессвВаєй езбрузюіх рУззвазанв: БіЗітуцворе сте жейїо чввідчівоаЗор рецчепевзеі діра рема ЗніврУтра врродечеїєя риуїрозврру пчеззіхнуї Вузруденні вопутосвир сдеденеріу Бтрузріодеє бубвіврув ісевзЕраві юдетгрешатв ррацюжюеврн. паравююрдест Пенухуцод орви: дурне зів срийеішвіВЕ одер хь іврівнтретр роседковві ззрешієсвав ЄСвізікеЕр елрчнврожою досрідкоУв взЕтжуєіані іцавмейнроях ррецрадврі аренліваяз баавзівцее ФвавТвввсааВ ервібЕУуюісв КУудвівшТ1ї1Ї зкКУузековВів кващубпу:я БукоУїоОомії скаисеїівії алі теор обоуУкитиь Яісвецекеа ката ЗЕ БежЕькх дпуазнесмУйм чїзаїЧесв уюезнІаїцер сеззіккЕУхУ епутїетукеУр пезрррувкі зара кЕркЕтТУЄТІі а іКастрієтю вавуксвіках еекасті сб Босіасвнсева звалупарикх ЕК
ФІГ. 32 Білок МАСІ МР 5733 шротуроахрік пуспазрЕаху зішвсшУусакч родеєвеєва зезатіУуїУЕ воввІвсяяв іїіїасраеаве хтрастіюпіс євіршаррою рисі пассвеетвна Згдеєлялек пен юозевжиує сбекУузвокче БАС Куєаєє мткоевзенкн хікуаутту хфкКезеежие З1со1а1їе5 оранжева уча черева 13185 дисавеєуїнч взуїпаиутутв стейтуудер кеії1івКушуєч зпузївуквур пзарруувсії Умокманневі КЕКУВТІВк зве траатр веукиві іє еерусаилк саке зівУуюавуУє ще
ФІГ. 33
БУ у Білок МОСС ЛО5582: я«ерчсоевряЕЕ 1111 суївУу теоволавах родекеєває чЧеовзвераишсе КазувлєввУ Мшйепоровов зггосоаЧУі аракеорзаця ззреєніУсвВ УвУссраьче СерраваУєа зби кручі т. сет «КЕ охо лем реко дчит тю г укусу жи ши су сиру «з Здуття Зк зроаакраюаж СеррероУся вреабераров бвровняхєе врастравов о Євпруери вих вртрарця БардреуУєтя греєкрарув Євр неУЄЮЄВ аВвОБСсунрея Кармавезка дж В скутері М Єрко слав) змію в садки пе свои тре у же зо ерароє Баррапоачев вра сграрою свОюацеУЄє засо грарсв ся риапйяу М ну ни ення поко узяті чи ож опустити С повно уки лати куту уже т кв х Хо: ие траров Сів араєтонорав БароалеєУтв ЗвОКОЮтТЕя Карравачта зюоктрагюя баров врестрарця сврряабрУт влас феррдовнюритих вас сререв Серовроткс: врасеватиів свррабсуУта зюОСереотеа Євр вросграрах геаррапухв врастрарця бврравзахУєв зрасєгтразюав ЄверрейпочУута авосссракця бароаручсв взруссювщиує Перравсуєв век краеадоав барних пурусияф сроивичежив фев я спини мя сет од уедну у и учизБоєкуцутт лтизарети акисграрсоя зрозпЧУєз араскозрув свюрайиУса зраскгрврче барравцУука уки фо терцевнуя тк я, | гуфяк зх ті ЕН ода ліан ТЯ. зи тут ю Сб тат ту бе жи ша студ лют кети і туту; 31- сх. зеескравеав саерозбуУсв ву грараув ЗарравсУєв аа ераров БеарухатьяУ ся вину бек пре козос тари Ус сим скирти Гени Вс трецао СчрУурагтитУст сарк пурчює сСеррматшуУкш спос шкларичи пБарошипчУЄм СД стрій лики З сао в тощо одини мряка лаеусаурхя ве випади реіедучиію епі «кі зюссрачв гвВррабочсв вретуІврарут паеррацеаУєя ас краров рароалечее асекгравов ЕвровнеаУка ящреграюртча берозвсУєв заст рарняя Барило єв ву сутки Болю у тиф ко соду ух р. зсуву саду й кт ефек шия пуху жк взюбсгравоя гврранучУєв врабкрарца бврювіюеся варапговічв БарруВрУєа зацвавовав СіУБпцевак ассеразкаї різіоВовВі бессіваЗваї Кобза пет фспри, дич шніх с Я дя до ня ул ен нн о у як у Я вуса зЕВрЧівеЗУ зтІттіЗІвпїза підтваМівй вавсаууценоя шоб лето УукосаО лізе піЕбкраауу хвіст Бір ето буоуківавди пудібі ворие жтачріріва двосзосуреєя їв11у1усмі вівіУуіів І1зУсуєсека топі тТвас куки жуки оз вит ут, ре пісень о ний редуктори шкулриаєгуюх Супи кутую Бетсі лрує БУуБЗОзчоза і-усрриа ав.
ФІГ. 34 Кт тр уж Білок МІК УМІВ хаос ьо ух моє ах що ши 1 жом че ек хи т их их ти ІЗ У Те и М ее с В Б: Мис Сп З ЕМО М Р МР КА КК с, ЧА а с З ви ве ВК С ВИ МИ ЗВ их осо туту Фо дит тот т. т мини ник ШК т шкхх Вис еще я з пт зЗзЕШКЕТв тов УрРББВТЕКМАМВвМ ТЕМІ ЕН в Раш Віа том тоАРВвАТЕВАОВААТОО пПутУвУтТКЕВАГБвЕТТвЕрАНГОПМУТВАРОВМКЕАХ г х рот я ї то Ат "т 10 пе доти тот я є тот З ТАБВТВАНИІУ ТАРІ ТКРвА ТС ТАВВАНЯМТ шеБвБІЖрРАБЕСВЗ ТАРА НОМ ЕВА РВК А ВВЕ ", С о се: НО Я о Не) З з Хо сли м он: ПИКА НН о НЕК дос ко тот Ен УТтТБАВГрВТІВЕАРБВТА РАНА нЕдРавтІАрРРрРАНОУ ТВАРИНА ТАРрРВБУ штоком фло щщоойх оби их ок сто сюк їоскто их сьо п щі хх пок ММ тв А ВОЮВАВ ан А МН АНКА ТТ ТРАК ті нВ отв НноЕктОвА ЄВ УРЕ ТтТтЬвнНатТавОоготТоУВЕЕВЕВЕНіІВМ я те т - ож тя ди рю хх тож от кдд огиот ни шати оо и под В В НИ и НЕ В с М и р І и У З С о З В А З НВ ФАО ке Не п Ен 1 МЕКЕВРОВМУ М Ува тА косе т 7 се СД о сопло ИН НК УНН рости у ля ок тк ту лота т "БЕТОНУ КТтТВЕААВвНІнОТтТІТВСВНУВУВИУЕВЕ сввасов5влваУтснвіаУвУєсьмМАВАТУТОІА З дохо я р ти щ яким жу ст то Од їх; тоже т й ад щи ОтуУ оху ААУ снКккМооЇріІЕЕРАНКОТНИРМ ВЕУ тожи їх; ух З тот ій я тр й 5 У ли миша она Фут хо и є коли нт но кт УР ТНК Ек МВА М ву РАМА АНЕ жк зе «РІГ. 35 ву ше Шик й і: ки х 2 МОСС дикого вну: КІЛАСАСОСВООВСАОСАСТСТ ОТТО ТИТА У ТАС ответ ут дви Ед и и ев ти ку КК Ве АТ НЕ и и СТАЮ С ТИМ САН ОТ АС СОКУ ТОД ААЖЗОСАСАСТ КООСНИТАСЄ ПАЛАТ КСВ ТОК ТС ТАТАТААОСАДТОСТО ОА АВАКОВ КК А ОА АС ЛОТ ТОК СТ ОС ОСА А АСК А САН АТТОВСЕЯ ЕК АКА АС ДСОСТ ГАСОЮ ТЕО ТОК АК КАК КОМ СИН НД Т ООСТЕ СТЕСОПАСТ АСВ ОА ОО СИ АС РАКТАКАО СОС АОСОСАССАТОТ ОА ВОЛОСОК АСАВ ОВС ОСА СОС ОСС СТАС НЕ С Вело АВЕККЮСВ С ООКТ ССАСООТИОИСОВЕН С АЕНТО С С пи и ви и КУ ти КТ ери и А еТ ритуВ СКАСКІВ ОО ІС ТТ САС рми ля ет пи упр кри днини: ек м уи ов ни ки уд і вчи пт ран я ПАК АКАСИ ВУЄ УОТСОН СОСКА ОСА АСК ТО ТОСТИ кроні т рттея и Ж ТИ В и Втр тт иття пути яд й ж (тя утри В рт житт потр иих СОДА А АТО ВОДО ОС СО ДОС ОСАСАС Т СВСЕС ОСАДОВИХ ОСТ ВНОСТТС КДКА САСЮВОК САС КОЮЮНИ ПОАОО ОО ОСТ САС кул тя іт в упину вит Ву и пив ПОСОИСИЗАСАСО МОСТОМ ОСА СОС ОСА ОТ АССТТ КУТ САСЮТОЮ Ер им КИЕВ и у и ми ж уми ми КА тир яку ле, ПОСОЛ ВОВКИ УОТСОН ОАСОТСО ТО ОСНОВ СЛ В СДС В АХА ОО СОЮ ПО АКООООВКОАСТ СВСТ пОФШТОАСАСОВ КСО О ТИАОООС оВОАССТИТОВСТО міч жи и М ги и иу иарииииин у уп и ит куп НИКИ ПОКЛАВ АСС АОС ССО КА СОСКА САС ТО ТАТО БОБОВІ АОС СО СТ СОСОК ТАС ВОСЛЕСОСАЛК ОАЕ ОН КД СОСОК ВСТА СЯ три кА ЕК КИ УК кот рт ВИТ ТЕТ рухи и КТ У и Ме СИС ВОАСУ КО ОО КОТА СОС САТ ОТ СВО Ерец ул г в ки ув вч нд учи рити Ки ие ки, ІКАО АСАСИ ВІКО АКТ КИ КС ОК ААУ му ТАТО АВ САЛО КОНОТОП ПАСТОК БОСОССОСМАКАССАСВ ШО ОТО ОСТ СОС ОПОВЕСАЗНХ ТОСТВАОСТО СДС АСВ АС ОА КАТІ ТО ВССУ ІТ ОСВАОТТЯ ЕС АСАСО ЛО СКО КО СОСО ВО Е СТАСТО ОСС ОСС АОС САМ ТТ САС ВО рухи уд я ки тими у ик ри и кими я ий притч и о жири, СИЛА АСОМ НОСОВ ТА ТАК ТМ ОБОВ ОАЕ ДАК ВО ТАКО ОТ ВИК В ТТ МТК роде у ня Аж рр якю чен ду пит ов ати як ин ееч Неон Нв ЕК ПК ЕНН ВН ВК оо В ЗОН ТАК Вво НЕ ЗЕ ЗВ ОеИЯК ОО ТАН АВ ОТО КОС АСООСТ ЮК ОА І СТУД Чит КЕ в и и у р пу ПОСОИССАСАСИВОИОВОСТОВВОСПОПО ЧО СТ С ОСС АОС АС СТОТСАССТОО. ПОПОВ АЛАССАСКУСТООСНК ОО С АСК СС АОС ТО ЄТО епос САС ОСА ТС ОО САС АННИ УК ООН АКИКТ СО АСАССАСКВОКО ОЕКН В ЮСТА СКК СО І ОА у пи я ВИНИ ИН ут Вч и ли ли и тт пути, ТОД В АК АВАНС ТОПОК КТК КСО ТАС ТО СТАС ПОС ККА АКА СС ВС СОМИ КИООС СХ САТАНА СОТАСИТАОТ САС ОСОБА ООП ОСС ССС ОС АС ТАН ТТН СТ рижики и деки Ура им и и дей и яку и ит их ВССССОСАСАСТ АОС КОЮ ТКС ПО АСО ВССУ ТОТОАСТТОКЯ, ти тт ДЖ В кафе и них Я пи Ко Кия и ти ких я Ех типи кети ПОСІЛА ССО ОА ОТ САС СТАТ ТАС суч их М Кв Я и гнути Ку вия В и Кф я кет рт пе ЕКЗ АКІВК ДИ ВИО ОТ ОНОТ СТО О СТ С А СОКИ КСО ТАКИ ТО САГИ СО СХОВАТИ ОА ОК А СОСТАВІВ СИ ОПО АСОМ ОВО СОТ МАО ВИСО ТТ ССО ПЕСОССОСАСАССМ УДК ОВО САС СО ОСА САССТО ери Мр в у ин Ж ку у и и ву и опи ия ПОСТАВА ОО ОСС О СОС О СТСАССАОВ С СТАСОСТО ТАС пи и и пи рили и уж ди ие ви туя и ПОКОЛІННІ ОА МСЕ СОПОСОБ ТОН КК ОСА АТАК ЕС сту свити уч Кит дур кА ВЕ рр я ПЕК КАСИ У АКТА АКОТ ТОВ СТАС ВАСТОСА САМО ТААСАОСАСТССА РТ ТТ ВАТА СА ОАСТОТОдТ пи ет де жи ти дитя вт вчив Ве докт ки ву АСТОСТВССАСССТ ТК САС САРА ТАВИАСТОТ НОСА ОСС АТАКУ ТОООТАКСТСПУСТОВОССТТОСТОСВАТ ОВО САСТТСТСО ВЕТО СТ АСТОВОНУТИ уперта тити и ри или и в то ик и и и ко пити и и пил ТС ЕТО ТТ ТТ ТАТ САТ АВТ СТОЮ ААЙ В вн в ни ДКВС АСЦИТ САС КИТА ТТЛ татАЗАсСАВООСОСюЮ ТЕ ТУТ ТКС АТАТТААСТ САЛО АЄСАКТТИВИОТО СІАСААТТОВТ УТА КОСООКОСТІ ОРЕ ТТОААТОЛХ УА ТАКА АОС ОА ТАТА ТО ВОАС САЛО Тут А ТОоТОомоАТТ ТЕСТ ТОД КОТ оскар ОАЕ ТОК АОС ТОСТО ТОСТИ КТС ОТ ТЕО КТ СТАТ СТАТОК ТЕСТИ ГОСТИ ТОСТИ АМІААТ АС АССТООАКАТОСТ ТТ ОВС ГИ ук т Кр Ки пити м ди ри ві ри т ми ик САТАССТАЄСАТОСТАТОАОСОАОС ТАТА АССТАОСАС АС САТО НАС КАК пи жи АН В ВИ ти тп В КВ тя дви Ки па кал сот АсССВОоТасСспаАт АС ТТ СТО СВО АВК ТО ВО ПЕТ АСК АСОМ ОН КОСА ТЕЦ А сжжх
ФІ. Зо
UAA201602593A 2013-08-21 2014-08-21 Композиція та вакцина для лікування недрібноклітинного раку легень UA120595C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP2013002514 2013-08-21
PCT/EP2014/002299 WO2015024666A1 (en) 2013-08-21 2014-08-21 Composition and vaccine for treating lung cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA120595C2 true UA120595C2 (uk) 2020-01-10

Family

ID=49003746

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201602593A UA120595C2 (uk) 2013-08-21 2014-08-21 Композиція та вакцина для лікування недрібноклітинного раку легень

Country Status (23)

Country Link
US (1) US20160168227A1 (uk)
JP (1) JP6678582B2 (uk)
KR (1) KR20160042935A (uk)
CN (1) CN105530952A (uk)
AP (1) AP2016009090A0 (uk)
AU (2) AU2014310932B2 (uk)
BR (1) BR112016003400A2 (uk)
CA (1) CA2914508A1 (uk)
CL (1) CL2016000388A1 (uk)
DK (1) DK3035955T3 (uk)
EA (1) EA037217B1 (uk)
ES (1) ES2759910T3 (uk)
HK (1) HK1225987A1 (uk)
HU (1) HUE046469T2 (uk)
IL (2) IL243090B (uk)
MX (1) MX369154B (uk)
MY (1) MY174677A (uk)
PE (1) PE20160224A1 (uk)
PH (1) PH12015502718A1 (uk)
SG (2) SG10201801429VA (uk)
UA (1) UA120595C2 (uk)
WO (1) WO2015024666A1 (uk)
ZA (1) ZA201508947B (uk)

Families Citing this family (108)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8877206B2 (en) 2007-03-22 2014-11-04 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by cationic lipids
JP5971945B2 (ja) 2008-04-17 2016-08-17 ピーディーエス バイオテクノロジー コーポレイションＰｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ カチオン性脂質の鏡像異性体による免疫応答の刺激
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
EP2718269B1 (en) 2011-06-08 2018-01-31 Translate Bio, Inc. Cleavable lipids
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
WO2014047533A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Frank Bedu-Addo Improved vaccine compositions and methods of use
MX2015010880A (es) 2013-02-22 2015-12-03 Curevac Gmbh Combinacion de vacunacion e inhibicion de la trayectoria pd-1.
AU2014310931B2 (en) 2013-08-21 2019-12-19 CureVac SE Rabies vaccine
CA2915730A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Karl-Josef Kallen A combination rsv/influenza a vaccine
WO2015024667A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Curevac Gmbh Method for increasing expression of rna-encoded proteins
MX369469B (es) 2013-08-21 2019-11-08 Curevac Ag Vacuna contra el virus respiratorio sincitial.
WO2015062738A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Curevac Gmbh Modified rna with decreased immunostimulatory properties
WO2015101415A1 (en) 2013-12-30 2015-07-09 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules
SG11201604198YA (en) 2013-12-30 2016-07-28 Curevac Ag Methods for rna analysis
EP3129050A2 (en) 2014-04-01 2017-02-15 CureVac AG Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant
WO2015188933A1 (en) 2014-06-10 2015-12-17 Curevac Ag Methods and means for enhancing rna production
EP3206717B1 (en) * 2014-10-17 2020-11-25 Novartis AG Combination of ceritinib with an egfr inhibitor
ES2946969T3 (es) 2014-12-12 2023-07-28 CureVac SE Moléculas de ácido nucleico artificiales para una expresión proteica mejorada
WO2016165825A1 (en) 2015-04-13 2016-10-20 Curevac Ag Method for producing rna compositions
EP4026568A1 (en) 2015-04-17 2022-07-13 CureVac Real Estate GmbH Lyophilization of rna
ES2753259T3 (es) 2015-04-22 2020-04-07 Curevac Ag Composición que contiene ARN para el tratamiento de enfermedades tumorales
WO2016174271A1 (en) 2015-04-30 2016-11-03 Curevac Ag Immobilized poly(n)polymerase
DK3294885T3 (da) 2015-05-08 2020-08-10 Curevac Real Estate Gmbh Fremgangsmåde til at fremstille rna
US11559570B2 (en) 2015-05-15 2023-01-24 CureVac SE Prime-boost regimens involving administration of at least one mRNA construct
CN107530448A (zh) 2015-05-20 2018-01-02 库瑞瓦格股份公司 包含长链rna的干粉组合物
EP3298142B1 (en) 2015-05-20 2021-07-14 CureVac AG Dry powder composition comprising long-chain rna
EP4108769B1 (en) 2015-05-29 2023-08-30 CureVac Manufacturing GmbH A method for producing and purifying rna, comprising at least one step of tangential flow filtration
EP3303575B1 (en) 2015-05-29 2022-03-16 CureVac AG Method for adding cap structures to rna using immobilized enzymes
WO2016201377A1 (en) * 2015-06-10 2016-12-15 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
ES2861001T3 (es) * 2015-06-30 2021-10-05 Ethris Gmbh Polirribonucleótidos que codifican la familia del casete de unión a ATP y formulaciones de los mismos
WO2017009376A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Curevac Ag Method of producing rna from circular dna and corresponding template dna
SI3350157T1 (sl) 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx, Inc. Sestave za doziranje terapevtskih sredstev v celice
US11225682B2 (en) 2015-10-12 2022-01-18 Curevac Ag Automated method for isolation, selection and/or detection of microorganisms or cells comprised in a solution
DK3362461T3 (da) 2015-10-16 2022-05-09 Modernatx Inc Mrna-cap-analoger med modificeret phosphatbinding
WO2017066791A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Sugar substituted mrna cap analogs
WO2017066789A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs with modified sugar
US20190225644A1 (en) 2015-10-16 2019-07-25 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs and methods of mrna capping
WO2017066782A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Hydrophobic mrna cap analogs
US11413346B2 (en) 2015-11-09 2022-08-16 Curevac Ag Rotavirus vaccines
WO2017083820A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 Pds Biotechnology Corporation Lipids as synthetic vectors to enhance antigen processing and presentation ex-vivo in dendritic cell therapy
JP7114465B2 (ja) 2015-12-22 2022-08-08 モデルナティエックス インコーポレイテッド 薬剤の細胞内送達のための化合物および組成物
DK3319622T3 (da) 2015-12-22 2020-05-04 Curevac Ag Fremgangsmåde til fremstilling af rna-molekylesammensætninger
WO2017109161A1 (en) 2015-12-23 2017-06-29 Curevac Ag Method of rna in vitro transcription using a buffer containing a dicarboxylic acid or tricarboxylic acid or a salt thereof
BR112018016755A2 (pt) 2016-02-17 2018-12-26 Curevac Ag vacina contra o vírus da zica
US11920174B2 (en) 2016-03-03 2024-03-05 CureVac SE RNA analysis by total hydrolysis and quantification of released nucleosides
WO2017186928A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Curevac Ag Rna encoding an antibody
US11078247B2 (en) 2016-05-04 2021-08-03 Curevac Ag RNA encoding a therapeutic protein
WO2017191264A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Curevac Ag Nucleic acid molecules and uses thereof
US11478552B2 (en) 2016-06-09 2022-10-25 Curevac Ag Hybrid carriers for nucleic acid cargo
EP3468581A1 (en) 2016-06-13 2019-04-17 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
WO2017218704A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
WO2018089540A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US11279923B2 (en) 2016-11-28 2022-03-22 Curevac Ag Method for purifying RNA
JP2019535839A (ja) 2016-11-29 2019-12-12 ピュアテック ヘルス エルエルシー 治療剤の送達のためのエクソソーム
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
US11464836B2 (en) 2016-12-08 2022-10-11 Curevac Ag RNA for treatment or prophylaxis of a liver disease
WO2018115525A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Curevac Ag Lassa virus vaccine
US11141476B2 (en) 2016-12-23 2021-10-12 Curevac Ag MERS coronavirus vaccine
WO2018115507A2 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Curevac Ag Henipavirus vaccine
AU2018229278A1 (en) 2017-02-28 2019-10-17 Sanofi Therapeutic RNA
EP4186888A1 (en) 2017-03-15 2023-05-31 ModernaTX, Inc. Compound and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP7332478B2 (ja) 2017-03-15 2023-08-23 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤
JP2020514370A (ja) 2017-03-17 2020-05-21 キュアバック アーゲー 組合せ抗癌療法のためのｒｎａワクチン及び免疫チェックポイント阻害剤
SG10202110491PA (en) 2017-03-24 2021-11-29 Curevac Ag Nucleic acids encoding crispr-associated proteins and uses thereof
WO2018191657A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
US12077501B2 (en) 2017-06-14 2024-09-03 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
EP3424524A3 (en) * 2017-07-04 2019-02-27 CureVac AG Cancer rna-vaccine
PE20200613A1 (es) * 2017-07-11 2020-03-11 Pfizer Composiciones inmunogenicas
WO2019036638A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. METHODS FOR PREPARING MODIFIED RNA
US11602557B2 (en) 2017-08-22 2023-03-14 Cure Vac SE Bunyavirales vaccine
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
AU2018328209A1 (en) 2017-09-05 2020-04-23 Torque Therapeutics, Inc. Therapeutic protein compositions and methods of making and using the same
SG11202002186VA (en) 2017-10-19 2020-05-28 Curevac Ag Novel artificial nucleic acid molecules
JP2021502079A (ja) 2017-11-08 2021-01-28 キュアバック アーゲー ＲＮＡ配列の適合（Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ）
WO2019115635A1 (en) 2017-12-13 2019-06-20 Curevac Ag Flavivirus vaccine
WO2019122371A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Curevac Ag Linear double stranded dna coupled to a single support or a tag and methods for producing said linear double stranded dna
CN108440669B (zh) * 2018-02-09 2021-08-06 焦顺昌 一种融合蛋白及治疗非小细胞肺癌的重组病毒疫苗和制备方法
JP7505984B2 (ja) * 2018-02-12 2024-06-25 バイオエヌテック エスエー サイトカインをコードするｒｎａを用いた治療
EP3853202A1 (en) 2018-09-19 2021-07-28 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
US12090235B2 (en) 2018-09-20 2024-09-17 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
CN110684800B (zh) * 2018-11-02 2020-11-03 深圳益世康宁生物科技有限公司 一种携带肿瘤-睾丸抗原10基因的重组腺相关病毒载体及其应用价值
CA3128215A1 (en) 2019-01-31 2020-08-06 Modernatx, Inc. Methods of preparing lipid nanoparticles
AU2020214425A1 (en) 2019-01-31 2021-08-19 Modernatx, Inc. Vortex mixers and associated methods, systems, and apparatuses thereof
CN110448689A (zh) * 2019-08-06 2019-11-15 太仓美诺恒康生物技术有限公司 mRNA疫苗及其试剂盒、应用
CN110448695B (zh) * 2019-08-23 2021-07-27 中山大学肿瘤防治中心 一种mRNA疫苗递送载体及其制备方法
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US20240277830A1 (en) 2020-02-04 2024-08-22 CureVac SE Coronavirus vaccine
IL297084A (en) 2020-04-09 2022-12-01 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Lipid nanoparticle compounds
TW202204622A (zh) 2020-04-09 2022-02-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 針對冠狀病毒之核酸疫苗
WO2022002040A1 (en) 2020-06-30 2022-01-06 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
CN114391008B (zh) 2020-08-20 2024-05-03 苏州艾博生物科技有限公司 脂质化合物和脂质纳米颗粒组合物
CA3198708A1 (en) * 2020-11-20 2022-05-27 Frank Bedu-Addo Methods and compositions comprising cationic lipids for immunotherapy by direct tumor injection
JP2024502210A (ja) 2020-12-22 2024-01-17 キュアバック エスイー ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントに対するＲＮＡワクチン
WO2022152109A2 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
WO2022152141A2 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Polymer conjugated lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
CA3211623A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Bo YING Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
WO2023044333A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and methods of use thereof
CA3231523A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Acyclic lipids and methods of use thereof
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
EP4204391A1 (en) 2021-10-08 2023-07-05 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
TW202333802A (zh) * 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
EP4424670A1 (en) 2021-12-23 2024-09-04 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compound and lipid nanoparticle composition
WO2023122752A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Constrained lipids and methods of use thereof
WO2023196931A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents
WO2024037578A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Composition of lipid nanoparticles
KR102540330B1 (ko) * 2022-10-19 2023-06-05 엠브릭스 주식회사 인지질인 포스파티딜에탄올아민을 포함하는 나노디스크
CN116970614A (zh) * 2022-12-29 2023-10-31 达冕疫苗(广州)有限公司 编码ny-eso-1的核糖核酸疫苗的组合物和方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2373549T3 (es) * 2002-12-18 2012-02-06 Chromagenics B.V. Método para mejorar la producción de proteínas.
JP4550115B2 (ja) * 2004-08-03 2010-09-22 ジーンアート・アクチエンゲゼルシャフト ＣｐＧ含量を変化させることにより遺伝子発現を調整する方法
US8249451B2 (en) * 2007-08-16 2012-08-21 Futurewei Technologies, Inc. Methods for characterizing optical switches and multiplexers/demultiplexers
WO2009046739A1 (en) * 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009046738A1 (en) * 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
WO2010037408A1 (en) * 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
GB2484058A (en) * 2009-12-01 2012-04-04 Uni Konstanz Prostate cancer DNA vaccine
WO2012019630A1 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
WO2012089225A1 (en) * 2010-12-29 2012-07-05 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of mhc class i restricted antigen presentation
WO2012116715A1 (en) * 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012116714A1 (en) * 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients

Also Published As

Publication number Publication date
DK3035955T3 (da) 2019-12-02
ES2759910T3 (es) 2020-05-12
JP2016528264A (ja) 2016-09-15
HUE046469T2 (hu) 2020-03-30
WO2015024666A1 (en) 2015-02-26
SG11201510748PA (en) 2016-03-30
KR20160042935A (ko) 2016-04-20
AU2019226125A1 (en) 2019-09-26
PH12015502718A1 (en) 2016-03-14
CA2914508A1 (en) 2015-02-26
IL276428A (en) 2020-09-30
PE20160224A1 (es) 2016-05-14
AU2014310932B2 (en) 2019-06-06
AU2019226125B2 (en) 2021-03-25
MX369154B (es) 2019-10-30
US20160168227A1 (en) 2016-06-16
JP6678582B2 (ja) 2020-04-08
SG10201801429VA (en) 2018-03-28
BR112016003400A2 (pt) 2017-12-05
MX2016002151A (es) 2016-12-14
AU2014310932A1 (en) 2015-12-24
EA037217B1 (ru) 2021-02-20
HK1225987A1 (zh) 2017-09-22
EA201600189A1 (ru) 2016-08-31
MY174677A (en) 2020-05-06
AP2016009090A0 (en) 2016-03-31
ZA201508947B (en) 2020-05-27
CN105530952A (zh) 2016-04-27
CL2016000388A1 (es) 2016-10-14
IL243090B (en) 2020-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA120595C2 (uk) Композиція та вакцина для лікування недрібноклітинного раку легень
Iavarone et al. Mechanism of action of mRNA-based vaccines
Diken et al. mRNA: a versatile molecule for cancer vaccines
BR112021000145A2 (pt) Composições de fusossoma e usos das mesmas
CN113453707A (zh) 用于疟疾疫苗的rna
JP2021536435A (ja) 核酸とｃａｒ修飾免疫細胞とを含む治療薬およびその使用
CN106459992A (zh) 核酸分子疫苗组合物及其用途
Kato et al. RIG-I helicase-independent pathway in sendai virus-activated dendritic cells is critical for preventing lung metastasis of AT6. 3 prostate cancer
JP2023546133A (ja) 汎ＲＡＳ ｍＲＮＡがんワクチン
TW202342753A (zh) 狂犬病核酸疫苗
US20210196839A1 (en) Method For Inducing Antitumor Immunity Using Sindbis Viral Vectors And Tumor Associated Antigens
CN103037896B (zh) 癌胚抗原的n‑结构域及其组合物、方法和用途
TW201730342A (zh) 多基因組反轉錄病毒載體製劑及產生及使用其之方法及系統
TW201806970A (zh) 嵌合抗原受體、及其利用
WO2021218802A1 (zh) 可受微小rna调控的分离的重组溶瘤痘病毒及其应用
Larsen et al. Expression of tak1 and tram induces synergistic pro-inflammatory signalling and adjuvants DNA vaccines
WO2023066874A1 (en) Methods for determining mutations for increasing modified replicable rna function and related compositions and their use
CN102388139A (zh) 通过反义寡核苷酸来调制Toll样受体5表达
TW202245808A (zh) 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
CN116670172A (zh) 表达免疫检查点抑制剂的癌症特异性反式剪接核酶及其用途
Blakney et al. An update on self-amplifying mRNA vaccine development. Vaccines 2021, 9, 97
KR20220116191A (ko) 4-1bbl 아쥬반트화 재조합 변형 백시니아 바이러스 앙카라 (mva)의 의약적 용도
Jin et al. Robust anti-tumor immunity through the integration of targeted lipid nanoparticle-based mRNA nanovaccines with PD-1/PD-L1 blockade
KR20210021008A (ko) 생체내 번역후 변형을 위한 조성물 및 방법
Hersey et al. Melanoma vaccines