TWI597268B - 纖維母細胞受體４（ｆｇｆｒ４）抑制劑 - Google Patents

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Description

纖維母細胞受體4(FGFR4)抑制劑
纖維母細胞生長因子(FGF)為具有多種生物活性之超過20種結構上相關的蛋白質家族。其主要受體為纖維母細胞生長因子受體(FGFR1、FGFR2、FGFR3及FGFR4)，該等受體為結合FGF且參與細胞增殖及分化過程之受體酪胺酸激酶家族。FGFR信號傳導網之失調牽涉許多病理生理學病症，包括多種類型之人類癌症。
已知「纖維母細胞生長因子受體4」或「FGFR4」調控增殖及抗凋亡且在多種癌症中表現或高度表現。參見例如Dieci等人2013,Cancer Discovery,0F1-0F16。研究已展示FGFR4之表現預示癌症之更具侵襲性表型且FGFR4表現之阻斷基因表現或減少用以減少增殖及促進細胞凋亡。參見例如Wesche等人2011,Biochem J 437：199-213。
舉例而言，FGFR4表現或過度表現與以下癌症之癌症侵襲性相關：胃癌(Ye等人2011,Cancer,5304-5313)、前列腺癌(Xu等人2011,BMC Cancer,11；84)、諸如橫紋肌肉瘤(Taylor VI等人2009,J Clin Invest,119(11)：3395-3407)之肉瘤、諸如黑素瘤(Streit等人2006,British J Cancer,94：1879-1886)之皮膚癌、諸如膽管癌(Sia等人2013,Gastroenterology 144：829-840)及肝細胞癌(French等人2012,PLoS ONE 7(5)：e367313；Miura等人2012,BMC Cancer 12：56；Chiang等人2008,Cancer Res 68(16)：6779-6788；Sawey等人2011,Cancer Cell 19：347-358)之肝癌、諸如胰臟上皮瘤形成及胰臟導管腺癌(Motoda等 人2011,Int'l J Oncol 38：133-143)之胰臟癌、諸如非小細胞肺癌(Fawdar等人2013,PNAS 110(30)：12426-12431)之肺癌、結腸直腸癌(Pelaez-Garcia等人2013,PLoS ONE8(5)：e63695；Barderas等人2012,J Proteomics 75：4647-4655)及卵巢癌(Zaid等人2013,Clin Cancer Res 19：809-820)。
數種FGFR抑制劑之臨床發展已確認其作為抗腫瘤劑之效用。Dieci等人2013,Cancer Discovery,0F1-0F16。然而，需要適用於尤其靶向FGFR及FGFR4之新穎試劑。
本發明之目的為提供式I化合物：
其中：R3係選自由以下各基團組成之群：C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、NR10R11C1-6烷基、R10雜環基C1-6烷基、R10芳基C1-6烷基及R10雜芳基C1-6烷基，其中R10及R11各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫及C1-6烷基；E係選自由以下各基團組成之群：-NR13C(O)CR14=CHR15，及-NR13C(O)C≡CR14，其中R13係選自由以下各基團組成之群：氫及甲基，且R14及R15各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、甲基、氟基及氯基；R12係選自由以下各基團組成之群：氫、鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷 氧基C1-6烷基、R5R6雜環基、-C(O)雜環基R5R6、R5R6雜環基C1-6烷基、NR5R6、NR5R6C1-6烷基、-C(O)NR5R6及NR5R6C1-6烷氧基，其中R5及R6各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、胺基C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基及C1-6烷基磺醯基；及R1為苯基，其中該苯基經獨立選擇的鹵基或C1-6烷氧基取代2、3或4次，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，R3為C1-6烷基。
在一些實施例中，R3係選自由以下各基團組成之群：甲基、甲氧基乙基、4-吡啶基甲基、3-吡啶基甲基、2-吡啶基甲基、苄基、N,N-二甲胺基丙基、3-甲基異噁唑-5-基-甲基及4-甲基哌嗪-1-基-丙基。
在一些實施例中，E為-NR13C(O)CH=CHR15或-NR13C(O)CF=CH2，其中R13及R15如上文所定義。在一些實施例中，E為-NHC(O)CH=CH2。
在一些實施例中，R12係選自由以下各基團組成之群：氫、氟基、氯基、甲基、甲氧基、N,N-二甲胺基乙基、哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基-甲基、1-甲基哌啶-4-基、1-乙基哌啶-4-基、N,N-二甲胺基甲基、N,N-二甲胺基丙基、哌啶-4-基、N-嗎啉基、3,5-二甲基哌嗪-1-基、4-(甲磺醯基)哌嗪-1-基、N,N-二甲胺基乙氧基、4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基、羥基乙氧基、甲氧基乙氧基、羥基甲基、甲氧基甲基、2-甲氧基丙基、2-羥丙基、2-胺基丙基、4-甲基哌嗪-1-基-羰基、4-乙基哌嗪-1-基-羰基、4-[2-丙基]哌嗪-1-基、4-乙醯基哌嗪-1-基、N-甲基-N-羥基乙基-胺基、N,N-二甲基醯胺基及4-(2-胺基乙基)哌嗪-1-基。
在一些實施例中，R12係選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、R5R6雜環基、R5R6雜環基C1-6烷基、- C(O)NR5R6、NR5R6C1-6烷基、NR5R6C1-6烷氧基、C1-6烷氧基及C1-6烷氧基C1-6烷基，其中R5及R6各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基及C1-6烷基磺醯基。
在一些實施例中，R12為R5R6雜環基，其中R5及R6如上文所定義。
在一些實施例中，R5R6雜環基為R5R6哌嗪基，其中R5及R6如上文所定義。
在一些實施例中，R12為4-乙基哌嗪-1-基。
在一些實施例中，R12不為氫。
在一些實施例中，R1為2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基。
在一些實施例中，化合物為式I(a)化合物：
其中R3、E、R12及R1如上文所定義，或其醫藥學上可接受之鹽。
另一目的為包含如本文中所描述之化合物或鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在一些實施例中，調配組合物以便於經口或非經腸投與。
另一目的為在有需要之個體內治療肝細胞癌之方法，該方法包含向該個體投與治療有效量之如本文中所描述之化合物或鹽或組合物。在一些實施例中，肝細胞癌具有改變的FGFR4及/或FGF19狀態(例如，FGFR4及/或FGF19之表現增加)。
另一目的為在有需要之個體內治療肝細胞癌之方法，該方法包含：在含有該肝細胞癌之細胞之生物樣品中偵測改變的FGFR4及/或 FGF19狀態(例如，FGFR4及/或FGF19之表現增加)及若該肝細胞癌具有該改變的FGFR4及/或FGF19狀態，則向該個體投與治療有效量之本文中所描述之化合物或組合物。
另一目的為如本文中所描述之化合物或鹽或組合物在治療肝細胞癌之方法中之用途。
另一目的為本文中所描述之化合物或鹽在製備用於治療肝細胞癌之藥物中之用途。
圖1呈現使用HUH7細胞之肝細胞癌模型中之活體內功效測試之結果。經由腹膜內注射投與化合物108(25mg/kg或37.5mg/kg)或媒劑對照物且經15天之時程每週量測兩次腫瘤體積。
圖2呈現使用HEP3B細胞之肝細胞癌模型中之活體內功效測試之結果。經由腹膜內注射投與化合物108(12.5mg/kg、25mg/kg或37.5mg/kg)或媒劑對照物且經15天之時程每週量測兩次腫瘤體積。
圖3呈現使用JHH7細胞之肝細胞癌模型中之活體內功效測試之結果。經由腹膜內注射投與化合物108(12.5mg/kg、25mg/kg或37.5mg/kg)或媒劑對照物且經15天之時程每週量測兩次腫瘤體積。
圖4呈現使用HEP3B細胞之肝細胞癌模型中之比較活體內功效測試之結果。經由腹膜內注射每日投與兩次化合物108(25mg/kg、37.5mg/kg或50mg/kg)或每日經口投與兩次BGJ398(30mg/kg或60mg/kg)。
本文提供適用作FGFR4抑制劑之化合物。在一些實施例中，化合物為選擇性FGFR4抑制劑，因為相比於FGFR1及/或FGFR2及/或FGFR3，其具有更大的FGFR4之結合親和力及/或抑制作用(例如，大10倍、100倍或1000倍或更大)。
A.定義
根據本發明，適用作活性劑之化合物包括上文及下文大體所描述之化合物且藉由本文中所揭示之實施例、子實施例及種類進一步說明該等化合物。除非另外指明，否則如本文中所使用之以下定義應適用。
如本文中所描述，本發明化合物可視情況經一或多個諸如本文中大體說明或如藉由本發明之特定類別、亞類及種類例示之取代基取代。一般而言，術語「經取代」係指在既定結構中用指定取代基置換氫。除非另外指明，否則經取代之基團可在該基團之各可取代的位置處具有取代基，且當任何既定結構中之一個以上位置可經一個以上選自指定基團之取代基取代時，取代基在每一位置處可相同或不同。本發明所預見之取代基之組合較佳為促使形成穩定化合物之取代基之組合。如本文中所使用之「穩定」係指化學上可行的化合物為當在不存在濕氣或其他化學反應性條件下保持在40℃或更低之溫度下持續至少一週時不會實質上改變的化合物。
如熟習此項技術者將理解，如本文中所使用之「H」為氫、「C」為碳、「N」為氮、「S」為硫且「O」為氧。
如本文中所使用之「烷基」或「烷基團」意謂完全飽和的直鏈(亦即，未分支)或分支烴鏈。在一些實施例中，烷基具有1、2、3、4、5或6個碳原子。在某些實施例中，烷基團含有1至6個碳原子(C1-6烷基)。在某些實施例中，烷基團含有1至4個碳原子(C1-4烷基)。在某些實施例中，烷基團含有1至3個碳原子(C1-3烷基)。在其他實施例中，烷基團含有2至3個碳原子(C2-3烷基)，且在其他實施例中，烷基團含有1至2個碳原子(C1-2烷基)。
如本文中所使用之「烯基」或「烯基團」係指具有一或多個雙鍵之直鏈(亦即，未分支)或分支烴鏈。在一些實施例中，烯基具有 2、3、4、5或6個碳原子。在某些實施例中，烯基團含有2至8個碳原子(C2-8烷基)。在某些實施例中，烯基團含有2至6個碳原子(C2-6烷基)。在其他實施例中，烯基團含有3至4個碳原子(C3-4烷基)，且在其他實施例中，烯基團含有2至3個碳原子(C2-3烷基)。根據另一態樣，術語烯基係指具有兩個雙鍵之直鏈烴，亦稱作「二烯」。例示性烯基團之非限制性實例包括-CH=CH2、-CH2CH=CH2、-CH=CHCH3、-CH2CH2CH=CH2、-CH2CH=CHCH3、-CH=CHCH2CH3及-CH=CHCH=CH2。
如本文中所使用之「炔基」或「炔基團」係指具有一或多個參鍵之直鏈(亦即，未分支)或分支烴鏈。在一些實施例中，炔基具有2、3、4、5或6個碳原子。在某些實施例中，炔基團含有2至8個碳原子(C2-8炔基)。在某些實施例中，炔基團含有2至6個碳原子(C2-6炔基)。在其他實施例中，炔基團含有3至4個碳原子(C3-4炔基)，且在其他實施例中，炔基團含有2至3個碳原子(C2-3炔基)。
「Ar」或「芳基」係指具有一或多個閉合環之芳族碳環部分。實例包括(但不限於)苯基、萘基、蒽基、菲基、聯二苯及芘基。
「鹵基」係指氯基(Cl)、氟基(F)、溴基(Br)或碘基(I)。
「鹵烷基」係指經由烷基隨附至親本分子部分之一或多個鹵基團。實例包括(但不限於)氯甲基、氟甲基、三氟甲基等。
「雜芳基」係指具有一或多個閉合環之環狀部分，在該等環中之至少一者中具有一或多個雜原子(氧、氮或硫)，其中該等環中之至少一者為芳族，且其中該或該等環可獨立地經稠合及/或橋連。實例包括(但不限於)喹啉基、異喹啉基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、喹喏啉基、吡咯基、吲唑基、噻吩并[2,3-c]吡唑基、苯并呋喃基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、噻吩吡唑基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、噻唑基、2-苯基噻唑基及異噁唑基。
「-OR」或「氧基」係指經由氧原子隨附至親本分子部分之R基團，其中R為H、烷基、烯基、炔基及其類似基團。
如本文所定義之「烷氧基」係指經由氧(「烷氧基」)原子與主碳鏈連接之烷基團。「烷氧基」之代表性實例包括(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基、苯氧基、2-丙氧基、丁氧基、第三丁氧基、戊氧基、己氧基及其類似基團。
「羥基」係指-OH基團。
「羰基」為具有雙鍵結至氧原子之碳原子之基團(C=O)，常常以化學式形式描繪為C(O)。
「乙醯基」為基團-C(O)CH3。
「胺」或「胺基」係指基團-NH2，其中無、一個或兩個氫可藉由如本文中所描述之適合的取代基置換，該取代基諸如烷基、烯基、炔基及其類似基團。
「醯胺」或「醯胺基」係指具有鍵結至氮原子之羰基之基團，諸如-C(O)NH2，其中無、一個或兩個氫可藉由如本文中所描述之適合的取代基置換，該取代基諸如烷基、烯基、炔基及其類似基團。
「-SR」係指經由硫原子隨附至親本分子部分之R基團，其中R為烷基、烯基、炔基、芳基、環烷基、雜環基或雜芳基。「-SR」之代表性實例包括(但不限於)乙硫醇、3-甲基-1-丁硫醇、苯硫醇及其類似基團。
如本文中所使用之「環烷基」係指含有3至8個碳或更多之飽和環烴基。環烷基之代表性實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。
如本文中所使用之「環烯基」係指含有3至8個碳或更多且具有一或多個雙鍵之不飽和環烴基。
如本文中所使用之「環炔基」係指含有3至8個碳或更多且具有 一或多個參鍵之不飽和環烴基。
如本文中所使用之「親電體」係指具有較低的電子密度之基團，其通常包含直接鍵結至諸如氧、氮或鹵基之更具陰電性原子之碳原子。例示性親電體包括(但不限於)重氮甲烷、三甲基矽烷基重氮甲烷、諸如碘代甲烷、溴甲苯及其類似物之烷基鹵化物、諸如三氟甲磺酸甲酯及其類似物之三氟甲磺酸烷基酯、諸如甲苯磺酸乙酯、甲磺酸丁酯及其類似物之磺酸烷基酯、諸如乙醯氯、苯甲醯溴及其類似物之醯基鹵、諸如乙酸酐、丁二酸酐、順丁烯二酸酐及其類似物之酸酐、諸如異氰酸甲酯、異氰酸苯酯及其類似物之異氰酸酯、諸如異硫氰酸甲酯、異硫氰酸苯酯及其類似物之異硫氰酸酯、諸如氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯甲酸苄酯及其類似物之氯甲酸酯、諸如甲磺醯氯、甲磺醯氟、對甲苯磺醯氯及其類似物之磺醯鹵化物、諸如三甲基氯矽烷、第三丁基二甲基氯矽烷及其類似物之矽烷鹵化物、諸如氯磷酸二甲酯及其類似物之磷醯鹵化物、諸如2-甲基環氧乙烷之環氧化物、諸如2-甲基氮丙啶之氮丙啶、諸如1-氯-2-丙酮之α-鹵酮、諸如丙烯醛、甲基乙烯基酮、桂皮醛、N,N-二甲基丙烯醯胺及其類似物之α-β-不飽和羰基化合物及諸如(E)-6-氯己-4-烯-3-酮之γ-鹵基-α-β-不飽和羰基化合物。在一些實施例中，親電體為α-鹵酮、異硫氰酸酯、環氧化物、氮丙啶、磺醯鹵化物或α-β-不飽和羰基。
在一些實施例中，親電體為麥可受體(Michael acceptor)。如此項技術中已知，「麥可受體」為形式=-Z之烯烴或炔烴；其中Z包含拉電子基團，包括(但不限於)CHO、COR、COOR、CONRR'、CONROR'、CN、NO2、SOR、SO2R。R可為H、烷基或芳基；其中R'為烷基、烯基、烷氧基或芳基。在另一實施例中，偶氮二甲醯胺及醌類為麥可受體。參見Santos,M.M.M.及Moreira,R.,Mini-Reviews in Medicinal Chemistry,7：1040-1050,2007。
麥可反應(Michael Reaction)之實例描繪於如下流程中：
其中拉電子基團Z、Z'及Z"如上文所描述。在一些實施例中，麥可受體為α-β-不飽和羰基化合物，其包括(但不限於)α-β-不飽和醯胺、α-β-不飽和酮、α-β-不飽和酯、共軛炔基羰基及α-β-不飽和腈。
如本文中所使用之「α-β-不飽和醯胺」或「不飽和醯胺」係指包 含直接鍵結至醯胺羰基之烯烴或炔烴的醯胺且由結構表示， 其中R'為氫或烷基。
「雜原子」係指O、S或N。
如本文中所使用之「雜環」或「雜環基」意謂在環中含有至少一個雜原子之單環雜環、雙環雜環或三環雜環。
單環雜環為含有至少一個獨立地選自由O、N及S組成之群的雜原子之3員環、4員環、5員環、6員環、7員環或8員環。在一些實施例中，雜環為含有一個選自由O、N及S組成之群的雜原子之3員環或4員環。在一些實施例中，雜環為含有零個或一個雙鍵及一個、兩個或三個選自由O、N及S組成之群的雜原子之5員環。在一些實施例中，雜環為含有零個、一個或兩個雙鍵及一個、兩個或三個選自由O、N及S組成之群的雜原子之6員環、7員環或8員環。單環雜環之代表性實例包括(但不限於)氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、氮雜環丙烷基、二氮雜環庚烷基、1,3-二氧雜環己烷基、1,3-二氧戊環基、二氫哌喃基(包括3,4-二氫-2H-哌喃-6-基)、1,3-二硫基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑啶基、異噻唑啉基、異噻唑啶基、異噁唑啉基、異噁唑啶基、嗎啉基、噁二唑啉基、噁二唑啶基、噁唑啉基、噁唑啶基、哌嗪基、哌啶基、哌喃基、吡唑啉基、吡唑啶基、吡咯啉基、吡咯啶基、 四氫呋喃基、四氫哌喃基(包括四氫-2H-哌喃-4-基)、四氫噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑啶基、噻唑啉基、噻唑啶基、硫代嗎啉基、1,1-二氧硫代嗎啉基(硫代嗎啉碸)、硫代哌喃基及三噻烷基。
本發明之雙環雜環可藉由稠合至芳基之單環雜環、或稠合至單環環烷基之單環雜環、或稠合至單環環烯基之單環雜環、或稠合至單環雜環之單環雜環例示。雙環雜環之代表性實例包括(但不限於)3,4-二氫-2H-哌喃基、1,3-苯并間二氧雜環戊烯基、1,3-苯并間二硫雜環戊烯基、2,3-二氫-1,4-苯并間二氧雜環己烯基、2,3-二氫-1-苯并呋喃基、2,3-二氫-1-苯并噻吩基、2,3-二氫-1H-吲哚基、3,4-二氫喹啉-2(1H)-酮及1,2,3,4-四氫喹啉基。
三環雜環為稠合至芳基之雙環雜環、或稠合至單環環烷基之雙環雜環、或稠合至單環環烯基之雙環雜環、或稠合至單環雜環之雙環雜環。三環雜環之代表性實例包括(但不限於)2,3,4,4a,9,9a-六氫-1H-咔唑基、5a,6,7,8,9,9a-六氫二苯并[b,d]呋喃基及5a,6,7,8,9,9a-六氫二苯并[b,d]噻吩基。
在上述雜芳基及雜環中，氮或硫原子可視情況經氧化為不同氧化態。在一個特定實例中，基團S(O)0-2分別係指-S-(硫化物)、-S(O)-(亞碸)及-SO2-(碸)。為方便起見，氮(尤其但非排他地，定義為環狀芳族氮的氮)意謂包括對應的N-氧化物形式之氮。
如本文中所使用之「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明中之化合物之酸加成鹽或鹼加成鹽。醫藥學上可接受之鹽為保持母體化合物之活性且不會賦予其所投與之個體及其所投與之情形任何過度有害的或非所需的作用之任何鹽。醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)金屬錯合物及無機鹽與羧酸鹽。醫藥學上可接受之鹽亦包括金屬鹽，諸如鋁鹽、鈣鹽、鐵鹽、鎂鹽、錳鹽及複合鹽。另外，醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)酸鹽，諸如乙酸鹽、天冬胺酸鹽、烷基磺酸鹽、芳 基磺酸鹽、乙醯氧基乙酸(axetil)鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、丁酸鹽、依地酸鈣、樟腦磺酸(camsylic)鹽、碳酸鹽、氯苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、依地酸(edetic)鹽、乙二磺酸(edisylic)鹽、依託酸(estolic)鹽、乙磺醯基(esyl)鹽、乙磺酸(esylic)鹽、甲酸鹽、富馬酸(fumaric)鹽、葡庚糖酸(gluceptic)鹽、葡萄糖酸鹽、麩胺酸鹽、乙醇酸鹽、乙醇醯阿散酸(glycolylarsanilic)鹽、環己胺磺酸鹽、己基間苯二酚酸(hexylresorcinoic)鹽、海卓巴米克酸(hydrabamic)鹽、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、氫碘酸鹽、羥萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、順丁烯二酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、黏液酸鹽、黏康酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、對硝基甲磺酸鹽、帕莫酸(pamoic)鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、磷酸單氫鹽、磷酸二氫鹽、鄰苯二甲酸鹽、聚半乳糖酸鹽、丙酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、胺磺酸鹽、磺胺酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸(teoclic)鹽、甲苯磺酸鹽及其類似酸鹽。醫藥學上可接受之鹽可衍生自包括(但不限於)半胱胺酸之胺基酸。用於生產呈鹽形式之化合物之方法為熟習此項技術者所知(參見例如，Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use,Wiley-VCH；Verlag Helvetica Chimica Acta,Zurich,2002；Berge等人，J.Pharm.Sci.66：1,1977)。
除非另外指明，否則用於描述如本文中所使用之化學基團或部分之命名法遵循慣例，在自左至右讀取名稱時，與分子剩餘部分之連接點在名稱之右手側。舉例而言，基團「芳基C1-6烷基」在烷基末端處與分子之剩餘部分連接。
除非另外指明，否則當化學基團藉由其包括由「-」表明之末端鍵結部分之化學式描述時，應理解連接為自左至右讀取。舉例而言， -C(O)C1-6烷基在羰基末端處與分子之剩餘部分連接。
除非另外陳述，否則本文中所描繪之結構亦意謂包括該結構之所有對映異構、非對映異構及幾何異構(或構形異構)形式，例如，各不對稱中心之R及S組態、(Z)及(E)雙鍵異構體及(Z)及(E)構形異構體。因此，本發明化合物之單一立體化學異構體以及對映異構、非對映異構及幾何異構(或構形異構)混合物處於本發明之範疇內。除非另外陳述，否則本發明化合物之所有互變異構形式均處於本發明之範疇內。另外，除非另外陳述，否則本發明化合物之所旋轉異構形式均處於本發明之範疇內。除非另外陳述，否則本文中所描繪之結構亦意謂包括不同之處僅在於存在一或多個同位素富集原子之化合物。舉例而言，除了氫經氘或氚置換或碳經13C或14C富集碳置換之外，具有本發明結構之化合物處於本發明之範疇內。此類化合物適用作例如生物分析中之分析工具或探針。
「異構體」係指具有相同數目及種類之原子且從而具有相同的分子量，但在原子之排列或組態方面不相同之化合物。然而，應理解，一些異構體或外消旋體或異構體之其他混合物可展現與其他相比更強的活性。「立體異構體」係指不同之處僅在於原子在空間中之排列的異構體。「非對映異構體」係指彼此不為鏡像之立體異構體。「對映異構體」係指為彼此之非可重疊鏡像之立體異構體。
在一些實施例中，本文中教示之對映異構化合物可為「對映異構純」異構體，其包含實質上單個對映異構體，例如，大於或等於90%、92%、95%、98%或99%或等於100%之單個對映異構體。
在一些實施例中，本文中教示之對映異構化合物可為立體異構純。如本文中所使用之「立體異構純」意謂包含化合物之一個立體異構體且實質上不含化合物之其他立體異構體的化合物或其組合物。舉例而言，具有一個對掌性中心之化合物之立體異構純組合物將實質上 不含化合物之相反的對映異構體。具有兩個對掌性中心之化合物之立體異構純組合物將實質上不含化合物之非對映異構體且實質上不含化合物之相反的對映異構體。典型的立體異構純化合物包含大於約80重量%的化合物之一種立體異構體及小於約20重量%的化合物之其他立體異構體，更佳包含大於約90重量%的化合物之一種立體異構體及小於約10重量%的化合物之其他立體異構體，甚至更佳包含大於約95重量%的化合物之一種立體異構體及小於約5重量%的化合物之其他立體異構體，且最佳包含大於97重量%的化合物之一種立體異構體及小於約3重量%的化合物之其他立體異構體。參見例如美國專利第7,189,715號。
作為描述異構體之術語「R」及「S」為在經不對稱取代之碳原子處之立體化學組態的描述詞。如熟習此項技術者所熟知及國際純化學暨應用化學聯合會(International Union of Pure and Applied Chemistry，IUPAC)之有機化學命名法E部分立體化學(Nomenclature of Organic Chemistry.Section E,Stereochemistry)之規則中所描述，藉由應用Cahn-Ingold-Prelog優先規則將經不對稱取代之碳原子命名為「R」或「S」。
對映異構體之「對映異構體過量」(ee)為[(主要對映異構體之莫耳分數)減去(次要對映異構體之莫耳分數)]×100。
B.化合物
本文所提供之作為根據一些實施例之活性劑的為式I化合物：
其中： R3係選自由以下各基團組成之群：C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、NR10R11C1-6烷基、R10雜環基C1-6烷基、R10芳基C1-6烷基及R10雜芳基C1-6烷基，其中R10及R11各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫及C1-6烷基；E係選自由以下各基團組成之群：-NR13C(O)CR14=CHR15及-NR13C(O)C≡CR14，其中R13係選自由以下各基團組成之群：氫及甲基，且R14及R15各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、甲基、氟基及氯基；R12係選自由以下各基團組成之群：氫、鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5R6雜環基、-C(O)雜環基R5R6、R5R6雜環基C1-6烷基、NR5R6、NR5R6C1-6烷基、-C(O)NR5R6及NR5R6C1-6烷氧基，其中R5及R6各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、胺基C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基及C1-6烷基磺醯基；及R1為苯基，其中該苯基經獨立選擇的鹵基或C1-6烷氧基取代2、3或4次，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，R3為C1-6烷基。
在一些實施例中，R3係選自由以下各基團組成之群：甲基、甲氧基乙基、4-吡啶基甲基、3-吡啶基甲基、2-吡啶基甲基、苄基、N,N-二甲胺基丙基、3-甲基異噁唑-5-基-甲基及4-甲基哌嗪-1-基-丙基。
在一些實施例中，E為-NR13C(O)CH=CHR15或-NR13C(O)CF=CH2，其中R13及R15如上文所定義。在一些實施例中，E為-NHC(O)CH=CH2。
在一些實施例中，R12係選自由以下各基團組成之群：氫、氟 基、氯基、甲基、甲氧基、N,N-二甲胺基乙基、哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基-甲基、1-甲基哌啶-4-基、1-乙基哌啶-4-基、N,N-二甲胺基甲基、N,N-二甲胺基丙基、哌啶-4-基、N-嗎啉基、3,5-二甲基哌嗪-1-基、4-(甲磺醯基)哌嗪-1-基、N,N-二甲胺基乙氧基、4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基、羥基乙氧基、甲氧基乙氧基、羥基甲基、甲氧基甲基、2-甲氧基丙基、2-羥丙基、2-胺基丙基、4-甲基哌嗪-1-基-羰基、4-乙基哌嗪-1-基-羰基、4-[2-丙基]哌嗪-1-基、4-乙醯基哌嗪-1-基、N-甲基-N-羥基乙基-胺基、N,N-二甲基醯胺基及4-(2-胺基乙基)哌嗪-1-基。
在一些實施例中，R12係選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、R5R6雜環基、R5R6雜環基C1-6烷基、-C(O)NR5R6、NR5R6C1-6烷基、NR5R6C1-6烷氧基、C1-6烷氧基及C1-6烷氧基C1-6烷基，其中R5及R6各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基及C1-6烷基磺醯基。
在一些實施例中，R12為R5R6雜環基，其中R5及R6如上文所定義。
在一些實施例中，R5R6雜環基為R5R6哌嗪基，其中R5及R6如上文所定義。
在一些實施例中，R12為4-乙基哌嗪-1-基。
在一些實施例中，R12不為氫。
在一些實施例中，R1為2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基。
在一些實施例中，化合物為式I(a)化合物：
其中R3、E、R12及R1如上文所定義，或其醫藥學上可接受之鹽。
C.醫藥調配物
本發明之活性劑可與醫藥學上可接受之載劑組合以提供其醫藥調配物。載劑及調配物之特定選擇將視組合物所期望之特定投與途徑而定。
如本文中所使用之「醫藥學上可接受之載劑」係指無毒的載劑、佐劑或媒劑，其與化合物一起調配時並不破壞化合物之藥理學活性。可用於本發明組合物中之醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑包括但不限於山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、纖維素基物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙二醇及羊毛脂。
本發明組合物可適合於非經腸、經口、吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、經頰、經陰道或植入式貯器投與等。在一些實施例中，調配物包含來自天然或非天然來源之成分。在一些實施例中，調配物或載劑可以無菌形式提供。無菌載劑之非限制性實例包括無內毒素水或無熱原質水。
如本文中所使用之術語「非經腸」包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病灶內及顱內注射或輸注技術。在特定實施例中，化合物經靜脈內、經口、皮下投與或經由肌肉內投與。本發明組合物之無菌可注射形式可為水性或油性懸浮液。此等懸浮液可根據此項技術中已知之技術使用適合的分散劑或濕潤劑及懸浮劑來調配。無菌可注射製劑亦可為無毒非經腸可接受稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液。可採用之可接受媒劑及溶劑為水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液。另外，無菌 不揮發性油習知用作溶劑或懸浮介質。
出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成單甘油酯或二甘油酯。脂肪酸及其甘油酯衍生物適用於製備可注射劑，諸如橄欖油或蓖麻油之天然醫藥學上可接受之油(尤其呈其聚氧乙烯化形式)亦然。此等油溶液或懸浮液亦可含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，諸如羧甲基纖維素或常用於調配醫藥學上可接受之劑型(包括乳液及懸浮液)的類似分散劑。出於調配之目的，亦可使用其他常用表面活性劑，諸如常用於製造醫藥學上可接受之固體、液體或其他劑型之Tween、Span及其他乳化劑。
就經口投與而言，活性化合物可呈可接受的口服劑型提供，該劑型包括但不限於膠囊、錠劑、水性懸浮液或溶液。在用於經口使用之錠劑之情形下，常用載劑包括乳糖及玉米澱粉。亦可添加諸如硬脂酸鎂之潤滑劑。就膠囊形式之經口投與而言，適用的稀釋劑包括乳糖及乾燥玉米澱粉。當為了經口使用需要水性懸浮液時，活性成分可與乳化劑及懸浮劑組合。若需要，亦可添加某些甜味劑、調味劑或著色劑。另外亦可添加防腐劑。醫藥學上可接受之防腐劑之適合的實例包括但不限於多種抗細菌劑及抗真菌劑，諸如溶劑(例如乙醇、丙二醇、苄醇、氯丁醇)、四級銨鹽及對羥基苯甲酸酯(諸如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯等)。
D.個體及使用方法
本發明之活性劑可用於治療肝細胞癌。
「治療(Treatment)」、「治療(treat)」及「治療(treating)」係指逆轉、緩解、延緩(發作)、抑制(進程)或以其他方式改善如本文中所描述之疾病或病症。在一些實施例中，治療可在已出現一或多種症狀之後投與。在其他實施例中，治療可在症狀不存在時投與。舉例而言，治療可在症狀發作之前向易感個體投與(例如，根據症狀病史及/或根 據遺傳性或其他易感性因素)。亦可在症狀已消退之後繼續治療，例如以預防或延緩其復發。
如本文中所使用之「患者」或「個體」意謂動物個體，較佳為哺乳動物個體，且尤其為人類個體(包括雄性及雌性個體兩者且包括新生兒、嬰兒、青少年、青年、成年及老年個體)。出於實驗室或獸醫學目的，個體亦可包括其他哺乳動物個體(例如，狗、貓、馬、牛、綿羊、山羊、猴、鳥等)。
在一些實施例中，向患有肝細胞癌之個體提供治療，該肝細胞癌具有改變的FGFR4及/或FGF19(纖維母細胞生長因子19)狀態。
在一些實施例中，治療可包括以下步驟或與以下步驟一起進行：分析含有該肝細胞癌之細胞之生物樣品中的FGFR4及/或FGF19狀態及若該肝細胞癌展現FGFR4及/或FGF19改變，則使用治療有效量之如本文中所描述之活性劑治療個體。
參考FGFR4及/或FGF19，如本文中所使用之「改變狀態」包括相比於對應的非癌組織，由於突變等，其表現增加(例如，mRNA含量增加或蛋白質含量增加)、基因組中之複本數增加及/或編碼蛋白之活性提高。在一些實施例中，FGFR4及/或FGF19之改變狀態包括基因及/或編碼蛋白突變，其導致活性提高或以其他方式與肝細胞癌之更具侵襲性形式相關。
FGFR4及/或FGF19之「表現」意謂轉錄且較佳轉譯編碼其之基因。通常，編碼區之表現將促使經編碼多肽之產生。
FGFR4及FGF19蛋白質為已知的，且其改變狀態及/或表現可使用此項技術中之標準技術量測，例如，諸如藉由核酸擴增、定序分析及/或基於雜交之技術進行之突變或複本數偏差之基因組分析，諸如北方墨點法或qRT-PCR、西方墨點法或其他免疫墨點法或免疫分析之RNA表現分析、螢光活化細胞分選(FACS)等。
為了能更全面地理解本文中所描述之發明，闡述以下實例。應理解，此等實例僅僅出於說明之目的且並不解釋為限制性的。
實例 概要：
使用Biotage Emrys Liberator或Initiator微波爐進行微波加熱。使用Isco Rf200d進行管柱層析法。使用Büchi旋轉式蒸發器或Genevac離心式蒸發器進行溶劑移除。在酸性移動相條件下，使用Waters自動純化器及19×100mm XTerra 5微米MS C18管柱進行製備型LC/MS。使用Varian 400MHz光譜儀記錄NMR光譜。
當使用術語「惰性」來描述反應器(例如，反應容器、燒瓶、玻璃反應器及其類似物)時，其意謂反應器中之空氣已替代為基本上不含濕氣或乾燥的惰性氣體(諸如氮氣、氬氣及其類似氣體)。
用於製備本發明化合物之一般方法及實驗闡述如下。在某些情形中，藉助於實例描述特定化合物。然而，應瞭解，在各情形中，根據下文所描述之流程及實驗製備一系列本發明化合物。
用於純化目標化合物之製備型HPLC條件 層析條件：
器具：Waters 2767-SQD Mass trigger Prep系統
管柱：Waters Xbridge C18 150mm*19mm*5μm
檢測器：VWD SQD
流動速率：15mL/min
梯度時間：
代表性移動相：
1)
移動相：A：含0.1% TFA之水
移動相：B：ACN
2)
移動相：A：含0.1% NH4HCO3之水
移動相：B：ACN
3)
移動相：A：含0.1% NH4OAc之水
移動相：B：ACN
4)
移動相：A：含0.1% NH4OH之水
移動相：B：ACN
定義：以下縮寫具有所指明之含義：
ACN：乙腈
Boc2O：二碳酸二第三丁酯
Brettphos：2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯二苯
tBuONa：第三丁醇鈉
CH3I：碘甲烷
Cs2CO3：碳酸銫
DCC：N,N'-二環己基碳化二亞胺
DCM：二氯甲烷
DIEA：N,N-二異丙基乙胺
DIPEA：N,N-二異丙基乙胺
DMAP：4-(二甲胺基)吡啶
DME：二甲醚
DMF：二甲基甲醯胺
DMSO：二甲亞碸
EGTA：乙二醇四乙酸
ESI-MS：電噴霧電離-質譜分析
EtOH：乙醇
HATU：1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑[4,5-b]吡錠3-氧化物六氟磷酸鹽
H2SO4：硫酸
iPrOH：異丙醇
K2CO3：碳酸鉀
KHMDS：雙(三甲基矽烷基)胺基鉀
KOH：氫氧化鉀
LCMS：液相層析-質譜分析
MeOH：甲醇
MsCl：甲烷磺醯氯
NaBH3CN：氰基硼氫化鈉
NaBH(OAc)3：三乙醯氧基硼氫化鈉
NH4Cl：氯化銨
NH4HCO3：碳酸氫銨
NaI：碘化鈉
NaNO3：硝酸鈉
NaOAc：乙酸鈉
nBuOH：正丁醇
prep-HPLC：製備型高效液相層析
prep-TLC：製備型薄層層析
TBAF：四丁基氟化銨
TBDMS-CL：第三丁基二甲基氯矽烷
TBSCl：第三丁基二甲基矽烷氯
TBSOTf：三氟甲烷磺酸第三丁基二甲基矽烷基酯
TEA：三乙胺
TESCl：三乙基氯矽烷
TFA：三氟乙酸
THF：四氫呋喃
Ti(OiPr)4：異丙醇鈦
TLC：薄層層析
PPTS：對甲苯磺酸吡錠
PE：石油醚
PEG：聚(乙二醇)
PtO2：二氧化鉑
EtOAc：乙酸乙酯
Pd/C：碳載鈀(0)
Pd2(dba)3：參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)
Pd(dppf)2Cl2：[1,1'-雙(二苯基膦基二茂鐵]二氯鈀(II)
Ruphos：2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基聯二苯
Xantphos：4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃
物質：以下化合物為市售可得及/或可以熟習有機合成之技術者熟知之許多方法製備。更特定言之，可使用本文中所描述之反應及技術來製備所揭示之化合物。在下文所描述之合成方法之描述中，應理解除非另外指明，否則所有提出之反應條件(包括溶劑之選擇、反應氛圍、反應溫度、實驗持續時間及處理程序)均可經選定作為該反應之標準條件。熟習有機合成之技術者應理解，分子多個部分上所存在之官能基應與所提出之試劑及反應物相容。不與反應條件相容之取代 基將對於熟習此項技術者顯而易見，且因此指明替代方法。實例之起始物質為市售可得或易於藉由標準方法自已知物質製備。
合成及測試例示性化合物
藉由程序2A至2L製備表1之化合物。
程序2A：實例-100
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
a. N-(3,5-二甲氧基-苯基)-乙醯胺
在室溫下將乙酸酐(14g，0.137mmol)添加至3,5-二甲氧基-苯胺(20g，0.131mol)於甲苯(110mL)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌18小時。添加PE(55mL)，將沈澱物過濾且用PE(100mL)洗滌以獲得標題化合物(24.2g，產率：95%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 2.16(s,3H),3.77(s,6H),6.23(s,1H),6.75(s,2H),7.20(s,1H)。
b. N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-乙醯胺
在氮氣氛圍下，在0℃下將硫醯氯(6.9g，51.2mmol)添加至N-(3,5-二甲氧基-苯基)-乙醯胺(5g，25.6mmol)於ACN(75mL)中之溶液中。將所得混合物在此溫度下攪拌30分鐘且用NaHCO3飽和水溶液(40mL)淬滅。將沈澱物過濾、用水洗滌且乾燥以獲得標題化合物(2.3g，產率：34%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 2.25(s,3H),3.86(s,6H),6.54(s,1H),6.90(s,1H)。
c. 2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯胺
將N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-乙醯胺(3.6g，13.7mmol)於EtOH(130mL)及KOH(2M，75mL)中之溶液加熱回流24小時。將反應 物冷卻至0℃且在此溫度下攪拌1小時。將沈澱物過濾且乾燥以獲得標題化合物(2.3g，產率：76%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.90(s,6H),4.57(bs,2H),6.05(s,1H)。
d. 2,4-二氯-3-異氰酸酯基-1,5-二甲氧基-苯
在微波下，將2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯胺(500mg，2.25mmol)、三光氣(335mg，1.12mmol)及TEA(342mg，3.38mmol)於二噁烷(15mL)中之混合物加熱至130℃持續2小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上用DCM溶離來純化殘餘物以獲得標題化合物(450mg，產率：80%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.92(s,6H),6.42(s,1H)。
e. (6-氯-嘧啶-4-基)-甲基-胺
在室溫下將甲胺於THF中之溶液(2M，30mL，60mmol)添加至4,6-二氯-嘧啶(7.45g，50mmol)於iPrOH(50mL)中之溶液中。將所得混合物攪拌18小時。濃縮混合物且藉由急驟層析法在矽石上用DCM：EtOAc=6：1至1：1溶離來純化殘餘物以獲得呈白色固體狀之標題化合物(4.4g，產率：62%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 2.96(d,3H),5.22-5.36(bs,1H),6.35(s,1H),8.35(s,1H)；MS(ESI)：144[M+H]+。
f. N-甲基-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺
在氮氣氛圍下，將(6-氯基-嘧啶-4-基)-甲基-胺(1g，7mmol)、2-硝基-苯胺(965mg，7mmol)、Brettphos(279mg，0.35mmol)及tBuONa(2g，21mmol)於DME(50mL)中之混合物加熱至90℃持續1小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上用DCM：EtOAc=10：1至1：1溶離來純化殘餘物以獲得呈黃色固體狀之標題化合物(600mg，產率：35%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 2.94(d,3H),4.99(bs,1H),5.82(s,1H),7.04(t,1H),7.60(t,1H),8.21(d,1H),8.33(s,1H),8.75(d,1H),9.91(s,1H)；MS(ESI)：246[M+H]+。
g. 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-脲
在0℃下將NaH(60%，60mg，1.5mmol)添加至N-甲基-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺(150mg，0.61mmol)於THF(15mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在室溫下逐滴添加2,4-二氯-3-異氰酸酯基-1,5-二甲氧基-苯(180mg，0.73mmol)之溶液。將所得混合物攪拌2小時。添加水(2mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由急驟層析法在矽石上用DCM：EtOAc=6：1至1：1溶離來純化殘餘物以獲得呈黃色固體狀之標題化合物(54mg，產率：18%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.38(s,3H),3.93(s,6H),6.75(s,1H),6.91(s,1H),7.34(t,1H),7.72(t,1H),7.79(d,1H),8.01(d,1H),8.38(s,1H),9.99(s,1H),11.78(s,1H)；MS(ESI)：493[M+H]+。
h. 1-[6-(2-胺基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲
在室溫下將阮尼(Raney)-Ni(於水中之懸浮液)添加至3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-脲(50mg，0.1mmol)於THF(10mL)及MeOH(10mL)中之溶液中，將所得混合物在氫氣氛圍下攪拌2小時。將反應物過濾且濃縮以獲得標題化合物(38mg，產率：82%)，其直接用於下一步驟。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.28(s,3H),3.85(s,2H),3.94(s,6H),5.86(s,1H),6.52(s,1H),6.78-6.87(m,3H),7.16-7.20(m,2H),8.39(s,1H),12.62(s,1H)；MS(ESI)：463[M+H]+。
i. N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
在-10℃下將丙烯醯氯於THF中之溶液(20mg/ml，0.5mL，0.1mmol)添加至1-[6-(2-胺基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲(25mg，0.05mmol)於THF(10mL)中之溶液中，且將所得混合物在此溫度下攪拌1小時。添加MeOH(1mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由prep-TLC純化殘餘物以獲得標題化合物(12 mg，產率：43%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.26(s,3H),3.94(s,6H),5.74(d,1H),6.24(d,1H),6.37(s,1H),6.47-6.54(m,1H),6.90(s,2H),7.20(d,2H),7.56-7.58(m,1H),7.66-7.68(m,1H),8.38(s,1H),9.99(s,1H),9.70(s,1H),11.99(s,1H)；MS(ESI)：517[M+H]+。
以與化合物100類似的方式合成化合物102、103及105。
程序2B：實例-107
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-3-基甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
a. (6-氯基-嘧啶-4-基)-吡啶-3-基甲基-胺
在室溫下將吡啶-3-基-甲胺(745mg，6.9mmol)之溶液添加至4,6-二氯-嘧啶(1g，6.71mmol)於二噁烷(20mL)中之溶液中。將所得混合 物在室溫下攪拌隔夜。濃縮混合物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(680mg，產率：46%)。MS(ESI)：221[M+H]+。
b. N-(2-硝基-苯基)-N'-吡啶-3-基甲基-嘧啶-4,6-二胺
將(6-氯基-嘧啶-4-基)-吡啶-3-基甲基-胺(300mg，1.36mmol)、2-硝基-苯胺(188mg，1.36mmol)、Pd2(dba)3(128mg，0.14mmol)、Xantphos(161mg，0.28mmol)及Cs2CO3(913mg，2.8mmol)於甲苯(10mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱4小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(150mg，產率：34%)。MS(ESI)：323[M+H]+。
c. 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-吡啶-3-基甲基-脲
在0℃下將NaH(60%，48mg，1.2mmol)添加至N-(2-硝基-苯基)-N'-吡啶-3-基甲基-嘧啶-4,6-二胺(150mg，0.467mmol)於THF(15mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在室溫下逐滴添加2,4-二氯-3-異氰酸酯基-1,5-二甲氧基-苯之溶液(程序2A，步驟a至步驟d；180mg，0.73mmol)。將所得混合物攪拌2小時。添加水(2mL) 以淬滅反應。濃縮混合物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(85mg，產率：32%)。MS(ESI)：570[M+H]+。
d. 1-[6-(2-胺基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-3-基甲基-脲
將3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-吡啶-3-基甲基-脲(85mg，0.149mmol)與鐵(84mg，1.5mmol)於AcOH(5mL)中之混合物在50℃下加熱2小時。將反應混合物過濾且在真空中濃縮濾液以產生粗產物，其藉由矽膠管柱層析來純化以得到標題化合物(53mg，產率：66%)。MS(ESI)：540[M+H]+。
e. N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-3-基甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
在-10℃下將丙烯醯氯於THF中之溶液(20mg/ml，0.5mL，0.1mmol)添加至1-[6-(2-胺基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-3-基甲基-脲(53mg，0.1mmol)於THF(10mL)中之溶液中，且將混合物在此溫度下攪拌1小時。添加MeOH(1mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由prep-TLC純化殘餘物以獲得標題化合物(9mg，產率：15%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.84(s,6H),5.01(s, 2H),5.69(d,1H),5.75(s,1H),6.10(dd,1H),6.34(d,1H),6.47(s,1H),7.00(d,1H),7.09-7.24(m,2H),7.28(t,1H),7.32(s,1H),7.47(d,1H),7.69-7.71(m,2H),8.31-8.34(m,2H),8.40-8.42(m,1H),12.60(s,1H)；MS(ESI)：594[M+H]+。
程序2C：實例-108
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基]-丙烯醯胺
a. 4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯胺(4g，18.4mmol)、(Boc)2O(4.4g，20.24mmol)於THF(50mL)中之混合物在回流下加熱隔夜。濃縮混合物且藉由急驟層析法在矽石上用PE：EtOAc=20：1溶離來純化殘餘物以獲得標題化合物(5.4g，產率：93%)。MS(ESI)：317,319[M+H]+。
b. 4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯(5.4g，17mmol)、1-乙基哌嗪(2.91g，25.5mmol)、Pd2(dba)3(2.1g，3.4mmol)、xantphos(3.92g，6.8mmol)及Cs2CO3(11.1g，34mmol)於甲苯(85mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱4小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上用MeOH：DCM=1：50至1：20溶離來純化殘餘物以獲得標題化合物(3.3g，產率：55%)。MS(ESI)：351[M+H]+。
c. 4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺
在0℃下將TFA(20mL)添加至4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯(3.3g，9.43mmol)於DCM(50mL)中之溶液中，將所得混合物在rt下攪拌3小時。在真空中移除所有揮發物之後，將殘餘物再溶解於DCM中，用K2CO3飽和水溶液中和且用DCM萃取。濃縮經合併之萃取物以獲得標題化合物(2.1g，產率：90%)，其直接用於下一步驟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 1.02(t,3H),2.36(q,2H),2.47-2.49(m,4H)2.97-3.00(m,4H),6.97(d,1H),7.20(s,2H),7.25(s 1H),7.34(dd,1H)；MS(ESI)：251[M+H]+。
d. N 4 -(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-N 6 -甲基嘧啶-4,6-二胺
將4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺(2.1g，8.4mmol)、6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺(程序2A，步驟e；1.2g，8.4mmol)、Pd2(dba)3(1.54g，1.68mmol)、xantphos(1.94g，3.36mmol)及Cs2CO3(5.48g，16.8mmol)於甲苯(45mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱1小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上用MeOH：DCM=1：40至1：20溶離來純化殘餘物以獲得標題化合物(870mg，產率：29%)。MS(ESI)：358[M+H]+。
e. 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲
在0℃下將NaH(60%，200mg，5mmol)添加至N4-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-N6-甲基嘧啶-4,6-二胺(870mg，2.44mmol)於THF(15mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在0℃下逐滴添加2,4-二氯-3-異氰酸酯基-1,5-二甲氧基-苯(程序2A，步驟a至步驟d；908mg，3.66mmol)於THF中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。添加NH4Cl飽和水溶液(2mL)以淬滅反應。濃縮混合物且用DCM萃取。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且 濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得呈紅色油狀之標題化合物(330mg，產率：21%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.44(t,3H),3.01(t,2H),3.21(q,2H),3.41-3.49(m,5H),3.73-3.80(m,4H),3.92(s,6H),6.27(s,1H),6.55(s,1H),7.25(d,1H),7.69(s,1H),8.32(d,1H),8.52(s,1H),10.28(br s,1H),12.05(br s,1H)；MS(ESI)：605[M+H]+。
f. 1-(6-(2-胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲
在室溫下將阮尼-Ni(於水中之懸浮液)添加至3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(330mg，0.546mmol)於THF(20mL)及MeOH(20mL)中之溶液中，將所得混合物在氫氣氛圍(1atm)下攪拌3小時。將反應物過濾且濃縮。用MeOH洗滌殘餘物兩次以獲得標題化合物(280mg，純度：90%)，其直接用於下一步驟。MS(ESI)：575[M+H]+。
g. N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
在-10℃下將丙烯醯氯於THF中之溶液(20mg/ml，2mL，0.44 mmol)添加至1-(6-(2-胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(280mg，純度：90%，0.44mmol)於THF(30mL)中之溶液中，且將所得混合物在此溫度下攪拌1小時。添加MeOH(1mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由prep-HPLC及prep-TLC純化殘餘物以獲得標題化合物(20mg，產率：7%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.31(t,3H),2.65(q,2H),2.62-2.68(m,4H),3.27(s,3H),3.36-3.38(m,4H),3.91(s,6H),5.76(d,1H),5.90(s,1H),6.24(dd,1H),6.41(d,1H),6.52(s,1H),6.74(dd,1H),7.07(br s,1H),7.23(d,1H),7.72(br s,1H),7.98(br s,1H),8.37(s,1H),12.52(s,1H)；MS(ESI)：629[M+H]+。
實例-110
N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)-苯基)-2-氟基丙烯醯胺
遵循程序2A(實例100)中所概述之途徑合成化合物，將步驟(i)修改為以下程序：在0℃下將2-氟丙烯酸(50mg，0.56mmol)於三氯甲烷(50mL)中之溶液添加至1-[6-(2-胺基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲(130mg，混合有四氯苯胺)及DCC(118mg，0.56mmol)於三氯甲烷(100mL)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。添加水(1mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由逆相管柱及prep-TLC來純化殘餘物以獲得標題化合物(4mg，產率：5%)。 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 12.17(s,1H),8.45(s,1H),8.35(s,1H),7.84(d,1H),7.37(d,1H),7.29(t,1H),7.26(t,1H),6.47(s,1H),5.94(s,1H),5.78(dd,1H),5,21(dd,1H),3.85(s,6H),3.25(s,3H)；MS(ESI)：535[M+H]+。
程序2E：實例-111
N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)-5-(1-乙基哌啶-4-基)苯基)丙烯醯胺
a. 4-(4-胺基-3-硝基苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
將Pd(dppf)2Cl2(337mg，0.46mmol)添加至4-溴-2-硝基苯胺(1g，4.6mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(1.42g，4.6mmol)、磷酸三鉀三水合物(3.9g，14.64mmol)於二噁烷及水(30mL，8：1)中之脫氣混合物中。使混合物在110℃下回流3小時。過濾及濃縮得到粗產物，其藉由矽膠管柱層析純化以得到標題化合物(1.1g，產率：75%)。MS(ESI)：320[M+H]+。
b. 1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲
在0℃下將NaH(60%，193mg，4.81mmol)添加至6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺(程序2A，步驟e；460mg，3.21mmol)於DMF(15mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在室溫下逐滴添加2,4-二氯-3-異氰酸酯基-1,5-二甲氧基-苯(程序H，步驟a至步驟d；1.03g，4.17mmol)於DMF(5mL)中之溶液。將所得混合物攪拌0.5小時。添加於DMF(2mL)中之SEMCl(804mg，4.81mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。添加NH4Cl飽和水溶液以淬滅反應。用水稀釋混合物且 用EtOAc萃取。將經合併之萃取物用水及鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且過濾。在真空下蒸發濾液以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(470mg，產率：28%)。MS(ESI)：521[M+H]+。
c. (4-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基胺基)-3-硝基苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
將1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲(470mg，0.9mmol)、4-(4-胺基-3-硝基苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(320mg，1mmol)、Pd2(dba)3(92mg，0.1mmol)、xantphos(115mg，0.2mmol)及Cs2CO3(652mg，2mmol)於甲苯(10mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱5小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(400mg，產率：57%)。MS(ESI)：804[M+H]+。
d. 4-(3-胺基-4-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基胺基)苯基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
在室溫下將PtO2(38mg，10重量%)及一滴氯苯添加至4-(4-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基胺基)-3-硝基苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(380mg，0.473mmol)於MeOH(10mL)中之溶液中，且將所得混合物在氫氣氛圍(1atm)下攪拌隔夜。將反應物過濾且濃縮。藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(130mg，產率：37%)。MS(ESI)：776[M+H]+。
e. N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)-5-(哌啶-4-基)苯基)丙烯醯胺TFA鹽
在-10℃下將丙烯醯氯溶液(10mg/ml，1.7mL，0.19mmol)逐滴添加至4-(3-胺基-4-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基胺基)苯基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(130mg，0.168mmol)於THF(15mL)中之溶液中，且將所得混合物在0℃下攪拌1小時。LC-MS展示反應完成。添加MeOH(5mL)以淬滅反應且濃縮反應物。將DCM(2mL)中之殘餘物逐滴添加至DCM/TFA(2/1，v/v，3mL)之混合物中。將混合物在室溫下攪拌1小時，且隨後在真空下濃縮。殘餘物(50mg，定量)不經進一步純化即直接用於下一步驟。MS(ESI)：600[M+H]+。
f. N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)-5-(1-乙基哌啶-4-基)苯基)丙烯醯胺
將NaOAc(4mg，0.05mmol)及水性乙醛(1mL，0.9mmol，40%)添加至N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)-5-(哌啶-4-基)苯基)丙烯醯胺TFA鹽(35mg，0.049mmol)於EtOH(1mL)中之溶液中。在將混合物在室溫下攪拌1小時之後，添加NaBH3CN(12mg，0.18mmol)，且將溶液在室溫下再攪拌3小時。在真空中移除所有揮發物之後，將殘餘物分配於DCM與水之間。用三氯甲烷萃取水層兩次。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且過濾。在真空下蒸發濾液以產生粗產物，其藉由prep-HPLC純化以得到標題化合物(3mg，產率：10%)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.38(s,1H),7.68(s,1H),7.54(d,1H),7.24(dd,1H),6.83(s,1H),6.46-6.35(m,3H),5.81(d,1H),3.97(s,6H),3.74-3.70(m,2H),3.37(s,3H),3.26(q,2H),3.17-3.11(m,2H),2.99-2.96(m,1H),2.26-2.22(m,2H),2.06-1.99(m,2H),1.43(t,3H)；MS(ESI)：628[M+H]+。
實例-112
N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)- 5-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2E(實例111)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(f)中替換為甲醛以得到標題化合物(1.5mg，產率：11.6%)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.26(s,1H),7.55(s,1H),7.41(d,1H),7.11(d,1H),6.71(s,1H),6.34-6.22(m,3H),5.68(d,1H),3.84(s,6H),3.55-3.52(m,2H),3.25(s,3H),3.21-3.08(m,2H),2.90-2.83(m,4H),2.11-2.08(m,2H),1.89-1.85(m,2H)；MS(ESI)：614[M+H]+。
程序2F：實例-113
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-二甲胺基甲基-苯基)-丙烯醯胺
a. 4-氟-3-硝基-苯甲醛
在0℃下將戴斯-馬丁試劑(Dess-Martin Reagent)(3.0g，7mmol)添加至(4-氟-3-硝基-苯基)-甲醇(750mg，4.4mmol)於DCM(40mL)中之攪拌溶液中。將溶液在室溫下攪拌4小時。TLC展示起始物質消失。用10%之NaHCO3及10%之Na2S2O3水性溶液淬滅反應且用水(100mL)及鹽水(50mL)分離且洗滌DCM層。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(570mg，產率：75%)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.09(d,1H),8.36(t,1H),8.06(dd,1H),7.97(m,1H)。
b. 4-胺基-3-硝基苯甲醛
將NH4OH(5mL)添加至4-氟-3-硝基-苯甲醛(570mg，3.3mmol)於THF(20mL)中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。收集所得黃色固體且用水洗滌、在真空下乾燥以產生標題化合物(300mg，產率：53%)。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 9.76(s,1H),8.57(d,1H),8.18(br s,2H),7.80(dd,1H),7.10(d,1H)。
c. 4-二甲胺基甲基-2-硝基-苯胺
將Ti(OiPr)4(1.15g，4mmol)添加至二甲胺(4.0mL，2M，8.0mmol)於MeOH(4mL)中之攪拌溶液中且將溶液在室溫下攪拌15分鐘。隨後添加MeOH(2mL)中之4-胺基-3-硝基-苯甲醛(160mg，1.0mmol)且將溶液在室溫下攪拌隔夜。隨後添加NaBH4(78mg，2mmol)且將溶液在室溫下攪拌1小時。LCMS展示主要產物峰。用EtOAc(60 mL)稀釋溶液且用水(2×100mL)及鹽水(50mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥。將溶液蒸發至乾燥且收集130mg之粗產物，其不經進一步純化即用於下一步驟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.82(s,1H),7.35(br s,2H),7.31(dd,1H),6.97(d,1H),3.26(s,2H),2.12(s,6H)。
d. 1-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-[6-(4-二甲胺基甲基-2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-甲基-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
將4-二甲胺基甲基-2-硝基-苯胺(100mg，0.5mmol)、Cs2CO3(400mg，1.25mmol)、Pd2(dba)3(46mg，0.05mmol)、xantphos(90mg，0.15mmol)添加至1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(程序L，步驟b；260mg，0.5mmol)於甲苯(5mL)中之攪拌溶液中。將溶液在100℃下攪拌隔夜。LCMS展示主要產物峰。用矽膠蒸發溶液且藉由急驟層析法在矽石上用EtOAc(w/0.5% TEA)：MeOH(w/0.5% TEA)=10至10：0.5溶離來純化以得到所要產物(100mg，產率：30%)。MS(ESI)：680[M+H]+。
e. [6-(2-胺基-4-二甲胺基甲基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
將4滴氯苯及隨後PtO2(30mg，30重量%)添加至1-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-[6-(4-二甲胺基甲基-2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-甲基-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(100mg，0.15mmol)於MeOH(10mL)中之攪拌溶液中。在室溫下，在氫氣氛圍下將溶液攪拌隔夜。將反應物過濾且濃縮。殘餘物不經進一步純化即取出以用於下一步驟。MS(ESI)：650[M+H]+。
f. 1-[6-(2-胺基-4-二甲胺基甲基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲
在室溫下將TFA(10mL)添加至1-[6-(2-胺基-4-二甲胺基甲基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲於無水DCM(10mL)中之攪拌溶液中。將溶液在室溫下攪拌3小時。LCMS展示主要產物峰。將溶液蒸發至乾燥，用DCM(40mL)稀釋且用10%之飽和Na2CO3(10mL)洗滌。DCM層經無水Na2SO4乾燥。在真空下濃縮得到粗產物，其藉由矽膠管柱層析(具有0.5%之Et3N的10%之MeOH/DCM)純化以得到標題化合物(45mg，產率：兩個步驟中為58%)MS(ESI)：520[M+H]+。
g. N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺 基}-5-二甲胺基甲基-苯基)-丙烯醯胺
在-10℃下將THF(3mL)中之丙烯醯氯(30mg，0.33mmol)添加至1-[6-(2-胺基-4-二甲胺基甲基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲(45mg，0.11mmol)於THF(40mL)中之攪拌溶液中。將溶液在-10℃下攪拌5小時。LCMS展示主要產物峰。用MeOH(3mL)淬滅反應且蒸發。藉由prep-HPLC(於NH4HCO3條件中之水/ACN)來純化殘餘物以得到標題化合物(6mg，產率：15%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.25(s,1H),7.47(d,1H),7.44(s,1H),7.16(dd,1H),6.70(s,1H),6.33-6.20(m,3H),5.67(dd,1H),3.84(s,6H),3.43(s,2H)3.22(s,3H),2.20(s,6H)；MS(ESI)：574[M+H]+。
實例-114
N-(2-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基胺基)苯基)丙炔醯胺
遵循程序2C(實例108)中所概述之途徑合成化合物，將步驟(g)修改為以下程序：在0℃下將丙炔酸(16mg，0.22mmol)於三氯甲烷(50mL)中之溶液添加至1-[6-(2-胺基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲(50mg，0.108mmol)及DCC(46mg，0.22mmol)於三氯甲烷(50mL)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。添加水(1mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由逆相管柱及prep-TLC來純化殘餘物以獲得標題化合物(5mg，產率：9.1%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.04(s,1H),10.36(s,1H),9.03(s,1H),8.45 (s,1H),7.67(d,1H),7.59(d,1H),7.30-7.25(m,2H),6.96(s,1H),6.50(s,1H),4.42(s,1H),4.00(s,6H),3.35(s,3H)；MS(ESI)：515[M+H]+。
實例-116
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-乙基)-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-乙基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(製備展示如下)以得到標題化合物(40mg，產率：歷經五個步驟為16%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.28(s,1H),9.71(s,1H),8.85(s,1H),8.38(s,1H),7.70-7.68(m,1H),7.55-7.53(m,1H),7.20-7.18(m,2H),6.89(s,1H),6.69(s,1H),6.50(dd,1H),6.26(d,1H),5.75(d,1H),4.03(t,2H),3.94(s,6H),3.56(t,2H),3.24(s,3H)；MS(ESI)：437[M+H]+。
製備1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-乙基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲：
a. (6-氯基-嘧啶-4-基)-(2-甲氧基-乙基)-胺
在室溫下將2-甲氧基-乙胺(1.13g，15mmol)溶液添加至4,6-二氯-嘧啶(2g，14mmol)於iPrOH(70mL)及DIPEA(1.94g，15mmol)中之 溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(1.95g，產率：82%)。MS(ESI)：188[M+H]+。
b. 1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-乙基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
在0℃下將NaH(60%，96mg，2.4mmol)添加至(6-氯基-嘧啶-4-基)-(2-甲氧基-乙基)-胺(300mg，1.6mmol)於DMF(10mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌10分鐘。在0℃下逐滴添加1-異氰酸酯基-3,5-二甲氧基-苯(590mg，2.4mmol)於DMF(5mL)中之溶液。將所得混合物攪拌30分鐘。添加DMF(2mL)中之SEMCl(400mg，2.4mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1小時。添加NH4Cl飽和水溶液以淬滅反應。用水稀釋混合物且用EtOAc萃取。將經合併之萃取物用水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以得到粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(720mg，產率：78%)。MS(ESI)：565[M+H]+。
實例-120
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(3-二甲胺基-丙基)-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺三氟乙酸
遵循程序2I(實例142)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(c)中替換為2-硝基苯胺及N-(3-二甲胺基-丙基)-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺(藉由下文所概述之方法製備)以得到標題化合物(11mg，產率：歷經六個步驟為7.5六)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.30(s,1H),9.80(s,1H),9.28(m,1H),8.92(s,1H),8.42(s,1H),7.64(d,1H),7.55(d,1H),7.24-7.16(m,2H),6.90(s,1H),6.53(s,1H),6.49(dd,1H),6.25(d,1H),5.76(d,1H),3.95(s,6H),3.91-3.88(m,2H),3.11-3.05(m,2H),2.74(d,6H),1.97-1.92(m,2H)；MS(ESI)：588[M+H]+。
製備N-(3-二甲胺基-丙基)-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺
a. N'-(6-氯基-嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺
在室溫下將N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺(714mg，7mmol)添加至4,6-二氯-嘧啶(1g，6.7mmol)及DIPEA(1.03g，8mmol)於iPrOH(20mL)中之溶液中。將所得混合物攪拌2小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(1.15g，產率：80%)。MS(ESI)：215[M+H]+。
b. N-(3-二甲胺基-丙基)-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺
將N'-(6-氯基-嘧啶-4-基)-N,N-二甲基-丙烷-1,3-二胺(800mg，3.74mmol)、硝基苯胺(525mg，3.8mmol)、Pd2(dba)3(348mg，0.38mmol)、Xantphos(438mg，0.76mmol)及Cs2CO3(3.05g，9.35mmol)於甲苯(15mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱4小時。濃縮反應物且藉由逆相層析法來純化殘餘物以獲得標題化合物(530mg，產率：45%)。MS(ESI)：317[M+H]+。
實例-121
N-[2-(6-{3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-脲基}-嘧啶-4-基胺基)-苯基]-丙烯醯胺
遵循程序2I(實例142)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(e)中替換為2-硝基苯胺及N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺(製備展示如下)以得到標題化合物(8mg，產率：歷經六個步驟為1.2%)。1H NMR(300MHz,Methanol-d4)δ 8.17(s,1H),7.46(d,1H),7.32(d,1H),7.12-7.08(m,2H),6.62(s,1H),6.29-6.14(m,3H),5.58(d,1H),3.82(t,2H),3.75(s,6H),2.27-2.19(m,8H),2.06(s,3H),1.67(t,2H)；MS(ESI)：643[M+H]+。
製備N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺
a. (6-氯基-嘧啶-4-基)-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-胺
在室溫下將3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙胺(1.73g，11mmol)溶液添加至4,6-二氯-嘧啶(1.5g，10mmol)及DIPEA(1.55g，12mmol)於iPrOH(50mL)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以得到標題化合物(1.4g，51%)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。MS(ESI)：270[M+H]+。
b. N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-N'-(2-硝基-苯基)-嘧啶-4,6-二胺
將(6-氯基-嘧啶-4-基)-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-胺(600mg，2.22mmol)、硝基苯胺(317mg，2.3mmol)、Pd2(dba)3(210mg，0.23mmol)、Xantphos(265mg，0.46mmol)及Cs2CO3(1.81g，5.55mmol)於甲苯(15mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱4小時。濃縮反應物且藉由逆相層析法來純化殘餘物以獲得標題化合物(400mg，產率：48%)。MS(ESI)：372[M+H]+。
實例-122
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-哌啶-4-基-苯基)-丙烯醯胺三氟乙酸
遵循程序2E(實例111)中所概述之途徑合成化合物，用以下程序 替代步驟(e)及步驟(f)：在-10℃下將丙烯醯氯溶液(10mg/ml，0.9mL，0.1mmol)逐滴添加至4-(3-胺基-4-(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基胺基)苯基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(程序2E，實例111，65mg，0.084mmol)於THF(15mL)中之溶液中，且將所得混合物在0℃下攪拌1小時。添加MeOH(5mL)以淬滅反應且濃縮反應物。將殘餘物溶解於DCM(2mL)中且逐滴添加至DCM/TFA(2：1，3mL)之混合物中。將混合物在室溫下攪拌1小時且隨後濃縮。藉由prep-HPLC純化殘餘物以得到標題化合物(23mg，產率：47%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.92(s,1H),9.64(s,1H),8.98(s,1H),8.60(m,1H),8.36(s,1H),8.25(m,1H),7.66(s,1H),7.51(d,1H),7.05(d,1H),6.90(s,1H),6.52(dd,1H),6.41(s,1H),6.24(d,1H),5.74(d,1H),3.96(s,6H),3.49(d,2H),3.28(s,3H),3.02(q,2H),2.85(t,1H),1.96(d,2H),1.78(q,2H)；MS(ESI)：600[M+H]+。
程序2G：實例-123
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-嗎啉-4-基-苯基)-丙烯醯胺
a. 4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸二-第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯胺(10g，46mmol)、(Boc)2O(20.7g，95mmol)於THF(250mL)中之混合物在回流下加熱隔夜。濃縮混合物以得到標題化合物(19.2g，產率：定量)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。
b. (4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯基)-胺基甲酸二-第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯(1g，2.4mmol)、嗎啉(314mg，3.6mmol)、Pd2(dba)3(220mg，0.24mmol)、Xantphos(278mg，0.48mmol)及Cs2CO3(1.56g，4.8mmol)於甲苯(30mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱1小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物與單-Boc產物(744mg)之粗混合物。混合物不經進一步純化即直接用於下一步驟。MS(ESI)：324[M-Boc+H]+。
c. 4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯胺
在0℃下將TFA(10mL)添加至(4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯基)-胺基甲酸二-第三丁酯及單-Boc產物(744mg)於DCM(20mL)中之溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌3小時。在真空中移除所有揮發物之後，將殘餘物再溶解於DCM中，用NaHCO3飽和水溶液中和且用DCM萃取。濃縮經合併之萃取物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(290mg，產率：歷經兩個步驟為54%)。MS(ESI)：251[M+H]+。
d. 1-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-甲基-3-[6-(4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
將4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯胺(290mg，1.3mmol)、1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(程序2E，步驟b；624mg，1.2mmol)、Pd2(dba)3(110mg，0.12mmol)、Xantphos(139mg，0.24mmol)及Cs2CO3(782mg，2.4mmol)於甲苯(15mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱2.5小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得呈紅色固體狀之標題化合物(440mg，產率：49%)。MS(ESI)：708[M+H]+。
e. {6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-(4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯基)-胺基甲酸第三丁酯
將1-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-甲基-3-[6-(4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(200mg，0.28mmol)、(Boc)2O(93mg，0.42mmol)及催化量之DMAP於THF(10mL)中之混合物在回流下加熱1小時。濃縮混合物且殘餘物不經進一 步純化即用於下一步驟。MS(ESI)：808[M+H]+。
f. (2-胺基-4-嗎啉-4-基-苯基)-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-胺基甲酸第三丁酯
在室溫下將阮尼-Ni(於水中之懸浮液)添加至{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-(4-嗎啉-4-基-2-硝基-苯基)-胺基甲酸第三丁酯(粗產物，製備如上)於MeOH(20mL)中之溶液中，將所得混合物在氫氣氛圍(1atm)下攪拌2小時。將反應物過濾且濃縮。用MeOH洗滌兩次殘餘物以獲得標題產物(160mg，產率：70%)。MS(ESI)：778[M+H]+。
g. (2-丙烯醯基胺基-4-嗎啉-4-基-苯基)-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-胺基甲酸第三丁酯。
在0℃下將TEA溶液(10mg/ml，1.2mL，0.12mmol)及丙烯醯氯溶液(10mg/ml，1mL，0.11mmol)逐滴添加至(2-胺基-4-嗎啉-4-基-苯基)-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-胺基甲酸第三丁酯(80mg，0.103mmol) 於DCM(5mL)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌1小時。LC-MS展示反應完成。添加水(5mL)以淬滅反應，且用DCM萃取反應混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水硫酸鈉乾燥且過濾。在真空下蒸發濾液以產生粗產物，其不經進一步純化即用於下一步驟。
h. N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-嗎啉-4-基-苯基)-丙烯醯胺
在0℃下將TFA(3mL)添加至(2-丙烯醯基胺基-4-嗎啉-4-基-苯基)-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-胺基甲酸第三丁酯(粗產物，製備如上)於CH2Cl2(10mL)中之溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物且用NH3.H2O中和以產生粗化合物，其藉由Prep-HPLC純化以獲得標題化合物(10mg，產率：兩個步驟中為16%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.05(s,1H),9.60(s,1H),8.74(s,1H),8.32(s,1H),7.33-7.30(m,2H),6.89(s,1H),6.83(d,1H),6.48(dd,1H),6.25-6.21(m,2H),5.72(d,1H),3.96(s,6H),3.73(br,4H),3.44(s,3H),3.10(br,4H)；MS(ESI)：602[M+H]+。
實例-124
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-(3,5-二甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-(3,5-二甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺(製備展示如下)以得到標題化合物(26mg，產率：歷經三個步驟為30%)。1H NMR(300MHz,Methanol-d4)δ 8.32(s,1H),7.36-7.33(m,2H),6.95(d,1H),6.80(s,1H),6.43-6.37(m,2H),6.15(s,1H),5.77(d,1H),3.95(s,6H),3.70(d,2H),3.29(s,3H),3.18-3.13(m,2H),2.45(t,2H),1.24(d,6H)；MS(ESI)：629[M+H]+。
製備4-(3,5-二甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺
a. 4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸二-第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯胺(10g，46mmol)、(Boc)2O(20.7g，95mmol)於THF(250mL)中之混合物在回流下加熱隔夜。濃縮混合物以得到標題化合物(19.2g，定量)，其不經進一步純化即用於下一步驟。
b. [4-(3,5-二甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-胺基甲酸二-第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸二-第三丁酯(1g，2.4mmol)、2,6-二甲基-哌嗪(410mg，3.6mmol)、Pd2(dba)3(220mg，0.24mmol)、Xantphos(278mg，0.48mmol)及Cs2CO3(1.56g，4.8mmol)於甲苯(30mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱1小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物與單-Boc產物(600mg)之混合物。混合物不經進一步純化即直接用於下一步驟。MS(ESI)：350[M-Boc+H]+。
c. 4-(3,5-二甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺
在0℃下將TFA(10mL)添加至[4-(3,5-二甲基三哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-胺基甲酸二-第三丁酯及單-Boc產物(600mg)於DCM(20mL)中之溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌3小時。在真空中移除所有揮發物之後，將殘餘物再溶解於DCM中，用NaHCO3飽和水溶液中和且用DCM萃取。濃縮經合併之萃取物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(233mg，產率：歷經兩個步驟為39%)。MS(ESI)：251[M+H]+。
實例-125
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-(4-甲磺醯基-哌嗪-1-基)-苯基]-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-(4-甲磺醯基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺(製備展示如下)以得到標題化合物(15mg，產率：五個步驟中為9.6%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.03(s,1H),9.62(s,1H),8.76(s,1H),8.33(s,1H),7.37-7.32(m,2H),6.89-6.83(m,2H),6.46(dd,1H),6.26-6.21(m,2H),5.72(d,1H),3.93(s,6H),3.34-3.16(m,11H),2.93(s,3H)；MS(ESI)：679[M+H]+。
製備4-(4-甲磺醯基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺
a. 4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸二-第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯胺(10g，46mmol)、(Boc)2O(20.7g，95mmol)於THF(250mL)中之混合物在回流下加熱隔夜。濃縮混合物以得到標題化合物(19.2g，定量)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。
b. [4-(4-甲磺醯基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-胺基甲酸二-第三丁酯
將4-溴-2-硝基苯基胺基甲酸二-第三丁酯(1g，2.4mmol)、1-甲磺醯基-哌嗪(590mg，3.6mmol)、Pd2(dba)3(220mg，0.24mmol)、Xantphos(278mg，0.48mmol)及Cs2CO3(1.56g，4.8mmol)於甲苯(30mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱1小時。濃縮反應物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物與單-Boc產物(755mg)之混合物。混合物不經進一步純化即直接用於下一步驟。MS(ESI)：400 [M-Boc+H]+。
c. 4-(4-甲磺醯基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺
在0℃下將TFA(10mL)添加至[4-(4-甲磺醯基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯基]-胺基甲酸二-第三丁酯及單-Boc產物(755mg)於DCM(20mL)中之溶液中，將所得混合物在RT下攪拌3小時。在真空中移除所有揮發物之後，將殘餘物再溶解於DCM中，用NaHCO3飽和水溶液中和且用DCM萃取。濃縮經合併之萃取物且藉由急驟層析法在矽石上純化殘餘物以獲得標題化合物(290mg，產率：兩個步驟中為40%)。MS(ESI)：301[M+H]+。
實例-126
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-(3-二甲胺基-丙基)-苯基]-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-(3-二甲胺基-丙-1-炔基)-2-硝基-苯胺(製備展示如下)且在步驟(f)中替換為氧化鉑以得到標題化合物(4mg，產率：五個步驟中為1.4%)。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.98(s,1H),9.66(d,1H),8.88(s,1H),8.36(s,1H),7.52(d,1H),7.44(d,1H),7.04(dd,1H),6.90 (s,1H),6.48(dd,1H),6.34(s,1H),6.24(dd,1H),5.72(dd,1H),3.94(s,6H),3.25(s,3H),2.59(t,2H),2.24(t,2H),2.11(s.6H),1.71(m,2H)；MS(ESI)602[M+H]+。
製備4-(3-二甲胺基-丙-1-炔基)-2-硝基-苯胺
a. 4-(3-二甲胺基-丙-1-炔基)-2-硝基-苯胺
將Pd(PPh3)2Cl2(0.7g，1mmol)及CuI(360mg，2mmol)添加至4-溴-2-硝基-苯胺(1.08g，5mmol)及二甲基-丙-2-炔基-胺(1.0g，12mmol)於TEA(20mL)中之攪拌溶液中。在60℃下，將溶液在氮氣下攪拌3小時。用矽膠蒸發溶液且藉由急驟層析法在矽石上純化以產生標題化合物(1.1g，70%純度)。標題化合物不經進一步純化即直接取出用於下一步驟。MS(ESI)221[M+H]+。
實例-127
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-(2-二甲胺基-乙氧基)-苯基]-丙烯醯胺
遵循化合物123之程序2G中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-(2-二甲胺基-乙氧基)-2-硝基-苯胺(製備展示如下)且在步驟(f)中替換為氧化鉑以得到標題化合物(4.3mg，產率：歷經五個步驟為8%)。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.04(s,1H),9.58(s,1H), 8.81(s,1H),8.33(s,1H),7.43(d,1H),7.33(d,1H),6.89(s,1H),6.79(dd,1H),6.51(dd,1H),6.26~6.20(m,2H),5.73(dd,1H),4.04(t,2H),3.96(s,6H),3.27(s,3H),2.67(t,2H),2.24(s,6H)；MS(ESI)604[M+H]+。
製備4-(2-二甲胺基-乙氧基)-2-硝基-苯胺
a. 4-(2-二甲胺基-乙氧基)-2-硝基-苯胺
將Cs2CO3(10g，30mmol)及NaI(150mg，1mmol)添加至4-胺基-3-硝基-酚(1.54g，10mmol)及(2-氯-乙基)-二甲基-胺氯化氫(1.43g，10mmol)於丁酮(40mL)中之攪拌溶液中。將溶液緩慢加熱至80℃持續一小時。隨後將溶液在80℃下攪拌2小時。經由Celite®過濾溶液且用丙酮洗滌。用矽膠蒸發溶液且藉由急驟層析法在矽石上純化以得到呈棕色固體狀之標題化合物(1.0g，產率：45%)。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 7.38(d,1H),7.24(s,2H),7.16(dd,2H),6.99(d,1H),3.98(t,2H),2.58(t,2H),2.20(s,6H)；MS(ESI)226[M+H]+。
實例-128
丁-2-炔酸(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中 替換為2-硝基-苯胺，省略步驟(e)且如下用以下程序替代步驟(g)以得到標題化合物(7 mg，產率：歷經五個步驟為4.8%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.97(s,1H),10.07(s,1H),8.89(s,1H),8.39(s,1H),7.60(d,1H),7.53(d,1H),7.24-7.15(m,2H),6.90(s,1H),6.44(s,1H),3.93(s,6H),3.29(s,3H),2.22(s,3H)；MS(ESI)：529[M+H]+。
在0℃下將丁-2-炔酸(13mg，0.15mmol)於DCM(10mL)中之溶液添加至(2-胺基-苯基)-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基}-胺基甲酸第三丁酯(50mg，0.075mmol)及DCC(42mg，0.2mmol)於DCM(50mL)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。添加水(1mL)以淬滅反應。濃縮混合物且藉由逆相層析法來純化殘餘物以獲得標題化合物(20mg，產率：34%)。MS(ESI)：659[M+H]+。
以與化合物100類似的方式合成化合物129。
實例-130
N-(2-{6-[1-苄基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-硝基-苯胺及1-苄基-1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(製備展示如下)以得到標題化合物(26mg，產率：歷經五個步驟為20%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.27(s,1H),9.68(s,1H),8.90(s,1H),8.39(s,1H),7.69(d,1H),7.33-7.19(m,6H),6.92(s,1H),6.45(dd,1H),6.24(d,1H),6.18(s,1H),5.74(d,1H),5.07(s,2H),3.95(s,6H)；MS(ESI)：593[M+H]+。
製備1-苄基-1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
a. 苄基-(6-氯基-嘧啶-4-基)-胺
在室溫下將苯甲胺(1.28g，12mmol)之溶液添加至4,6-二氯-嘧啶(1.5g，10mmol)於iPrOH(40mL)及DIPEA(1.55g，12mmol)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌2.5小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得呈白色固體狀之標題化合物(1.5g，產率：68%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.35(br s,1H),7.20-7.38(m,5 H),6.35(s,1H),4.52(s,2H)；MS(ESI)：220[M+H]+。
b. 1-苄基-1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
在0℃下將NaH(60%，218mg，5.45mmol)添加至苄基-(6-氯基-嘧啶-4-基)-胺(800mg，3.64mmol)於DMF(15mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌10分鐘。在0℃下逐滴添加1-異氰酸酯基-3,5-二甲氧基-苯(程序2A，步驟a至步驟d；1.35g，5.45mmol)於DMF(2mL)中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。添加NH4Cl飽和水溶液(2mL)以淬滅反應。濃縮混合物且用DCM萃取。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(1.7g，產率：77%)。MS(ESI)：599[M+H]+。
實例-131
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-2-基甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-硝基-苯胺及1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-2-基甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(製備展示如下)以得到標題化合物(35mg，產率：歷經五個步驟為13%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.15(s,1H),9.65(s,1H),8.83(s,1H),8.50(s,1H),8.39(s,1H),7.80(t,1H),7.66(d,1H),7.31-7.25(m,3H),7.17(t,1H),7.09(t,1H),6.91(s,1H),6.45(dd,1H),6.39(s,1H),6.23(d, 1H),5.74(d,1H),5.17(s,2H),3.94(s,6H)；MS(ESI)：594[M+H]+。
製備1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-2-基甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
a. (6-氯基-嘧啶-4-基)-吡啶-2-基甲基-胺
在室溫下將2-吡啶基甲胺(970mg，9mmol)之溶液添加至4,6-二氯-嘧啶(1g，7mmol)於iPrOH(40mL)及DIPEA(1.16g，9mmol)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌2.5小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水硫酸鈉乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(1.2g，產率：78%)。MS(ESI)：221[M+H]+。
b. 1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-2-基甲基-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
在0℃下將NaH(60%，55mg，1.37mmol)添加至(6-氯基-嘧啶-4-基)-吡啶-2-基甲基-胺(200mg，0.91mmol)於DMF(5mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌10分鐘。在0℃下逐滴添加1-異氰酸酯基-3,5-二甲氧基-苯(程序2A，a-d；337mg，1.37mmol)於DMF(2mL)中之溶液。將所得混合物攪拌30分鐘。添加DMF(2mL)中之SEMCl(230mg，1.37mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1小時。添 加NH4Cl飽和水溶液以淬滅反應。用水稀釋混合物且用EtOAc萃取。將經合併之萃取物用水及鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且過濾。濃縮濾液以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題產物(420mg，產率：78%)。MS(ESI)：598[M+H]+。
實例-132
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-吡啶-4-基甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(e)中替換為3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-吡啶-4-基甲基-脲以得到標題化合物(14mg，產率：8.1%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.03(s,1H),9.68(s,1H),8.92(s,1H),8.49(d,2H),8.39(s,1H),7.67(d,1H),7.27-7.17(m,4H),7.10(t,1H),6.92(s,1H),6.48(dd,1H),6.24(d,1H),6.15(s,1H),5.74(d,1H),5.09(s,2H),3.94(s,6H)；MS(ESI)：594[M+H]+。
製備3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-吡啶-4-基甲基-脲
a. (6-氯基-嘧啶-4-基)-吡啶-4-基甲基-胺
在室溫下將4-吡啶基甲胺(1.2g，11mmol)添加至4,6-二氯-嘧啶(1.5g，10.5mmol)及DIPEA(1.62g，12.6mmol)於iPrOH(40mL)中之 溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(1.8g，產率：80%)。MS(ESI)：221[M+H]+。
b. N-(2-硝基-苯基)-N'-吡啶-4-基甲基-嘧啶-4,6-二胺
將(6-氯基-嘧啶-4-基)-吡啶-4-基甲基-胺(500mg，2.27mmol)、2-硝基苯胺(317mg，2.3mmol)、Pd2(dba)3(200mg，0.22mmol)、Xantphos(253mg，0.44mmol)及Cs2CO3(1.48g，9.35mmol)於甲苯(10mL)中之脫氣混合物在100℃下加熱3小時。濃縮反應物且藉由逆相層析法繼而矽石上之急驟層析法來純化殘餘物以獲得標題化合物(330mg，產率：45%)。MS(ESI)：323[M+H]+。
c. 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-[6-(2-硝基-苯胺基)-嘧啶-4-基]-1-吡啶-4-基甲基-脲
在0℃下將NaH(60%，56mg，1.4mmol)添加至N-(2-硝基-苯基)-N'-吡啶-4-基甲基-嘧啶-4,6-二胺(330mg，1.02mmol)於DMF(10mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在0℃下逐滴添加1-異氰酸酯基-3,5-二甲氧基-苯(程序2A，步驟a至步驟d；345mg，1.4mmol)於DMF(2mL)中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。 添加NH4Cl飽和水溶液(2mL)以淬滅反應。濃縮混合物且用DCM萃取。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以產生粗產物，其藉由prep-TLC純化以獲得標題化合物(190mg，產率：33%)。MS(ESI)：570[M+H]+。
實例-133
製備5-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺
1. 5-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺
將1-乙基-哌嗪(1.2mL，9.6mmol)、5-氟-2-硝基-苯胺(1g，6.4mmol)、DIPEA(1.24g，9.6mmol)於DMF(15mL)中之混合物在80℃下加熱隔夜。將反應混合物傾入至冰水中且用EtOAc萃取。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥且濃縮以獲得粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以得到標題化合物(1g，產率：63%)。ESI-MS：251[M+H]+。
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基]-丙烯醯胺三氟乙酸鹽
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(a)中替換為5-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺以得到標題化合物(20mg， 產率：39%)。1H NMR(300MHz,Methanol-d4)δ 8.37(s,1H),7.49(d,1H),7.25(s,1H),6.98(d,1H),6.82(s,1H),6.43-6.38(m,3H),5.78(d,1H),3.96-3.88(m,8H),3.68-3.64(m,2H),3.37(s,3H),3.33-3.08(m,6H),1.40(t,3H)；MS(ESI)：629[M+H]+。
實例-135
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-5-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-2-硝基-苯胺(製備展示如下)以得到標題化合物(30mg，產率：歷經五個步驟為31%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.97(s,1H),9.71(s,1H),8.95(s,1H),8.37(s,1H),7.60(s,1H),7.50(d,1H),7.12(d,1H),6.90(s,1H),6.50(dd,1H),6.39(s,1H),6.25(d,1H),5.73(d,1H),3.93(s,6H),3.48(s,2H),3.32(s,3H),2.50-2.25(m,10H),0.98(t,3H)；MS(ESI)：643[M+H]+。
製備4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-2-硝基-苯胺
a. 4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-2-硝基-苯胺.
將Ti(O i Pr)4(1.73g，6mmol)添加至1-乙基-哌嗪(1.37g，12mmol)於MeOH(30mL)中之攪拌溶液中。隨後將溶液在室溫下攪拌15min。隨後添加MeOH(10mL)中之4-胺基-3-硝基-苯甲醛(程序2F，步驟a至步驟b，1.5g，9mmol)且將溶液在室溫下攪拌隔夜。隨後添加NaBH4(380mg，10mmol)且將溶液在室溫下攪拌1小時。用EtOAc稀釋溶液且過濾。將濾液用水及鹽水洗滌、經無水Na2SO4乾燥。濃縮得到產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題化合物(800mg，產率：34%)。MS(ESI)：265[M+H]+。
實例-136
N-(2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(3-甲基-異噁唑-5-基甲基)-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-苯基)-丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(3-甲基-異噁唑-5-基甲基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲(製備展示如下)且在步驟(f)中替換為在60℃下之鐵/乙酸以得到標題化合物(26mg，產率：五個步驟中為12%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.78(s,1H),9.72(s,1H),8.97(s,1H),8.40(s,1H),7.66(d,1H),7.45(d,1H),7.21-7.15(m,2H),6.90(s,1H),6.52-6.43(m,2H),6.26(d,1H),6.09(s,1H),5.74(d,1H),5.16(s,2H),3.93(s,6H),2.18(s,3H)；MS(ESI)：598[M+H]+。
製備1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(3-甲基-異 噁唑-5-基甲基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲
a. (6-氯基-嘧啶-4-基)-(3-甲基-異噁唑-5-基甲基)-胺.
在室溫下將C-吡啶-2-基-甲胺(560mg，5mmol)之溶液添加至4,6-二氯-嘧啶(660mg，4.46mmol)於iPrOH(40mL)及DIEA(690mg，5.35mmol)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。添加水且用DCM萃取混合物。將經合併之萃取物用鹽水洗滌、經無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮以產生粗產物。藉由急驟層析法在矽石上純化粗產物以獲得標題化合物(650mg，產率：65%)。MS(ESI)：225[M+H]+。
b. 1-(6-氯-嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-(3-甲基-異噁唑-5-基甲基)-3-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基)-脲.
在0℃下將NaH(60%，80mg，2mmol)添加至(6-氯基-嘧啶-4-基)-(3-甲基-異噁唑-5-基甲基)-胺(300mg，1.34mmol)於DMF(5mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌10分鐘。在0℃下逐滴添加1-異氰酸酯基-3,5-二甲氧基-苯(程序2A，步驟a至步驟d；337mg，1.37mmol)於DMF(2mL)中之溶液。將所得混合物攪拌0.5小時。添加DMF(2mL)中之SEMCl(230mg，1.37mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。添加飽和NH4Cl水溶液以淬滅反應。用水稀釋混合物 且用EtOAc萃取。將經合併之萃取物用水及鹽水洗滌、經無水硫酸鈉乾燥且過濾。在真空下蒸發濾液以產生粗產物，其藉由急驟層析法在矽石上純化以獲得標題產物(440mg，產率：55%)。MS(ESI)：604[M+H]+。
實例-137
N-[2-{6-[3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-脲基]-嘧啶-4-基胺基}-4-(2-二甲胺基-乙基)-苯基]-丙烯醯胺TFA鹽
遵循程序2G中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為5-(2-二甲胺基-乙基)-2-硝基-苯胺(藉由下文所概述之方法製備)以得到呈TFA鹽形式之標題化合物(39mg，產率：29%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 11.86(s,1H),9.76-9.70(m,2H),9.02(s,1H),8.40(s,1H),7.86(d,1H),7.51(s,1H),7.12(d,1H),6.90(s,1H),6.57-6.48(m,2H),6.24(d,1H),5.74(d,1H),3.94(s,6H),3.35-3.28(m,5H),2.98-2.92(m,2H),2.79(s,6H)；MS(ESI)：588[M+H]+。
製備5-(2-二甲胺基-乙基)-2-硝基-苯胺
a. [2-(3-氟-4-硝基-苯基)-乙烯基]-二甲基-胺.
將2-氟-4-甲基-1-硝基-苯(3g，19.3mmol)、N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(10mL)及3mL之DMF(30mL)之混合物在125℃下加熱1小 時。冷卻混合物且在減壓下濃縮以產生紫色固體。用己烷濕磨得到純標題產物(2.5g，產率：63%)。MS(ESI)：211[M+H]+。
b. [2-(3-氟-4-硝基-苯基)-乙基]-二甲基-胺.
將NaBH3CN(770mg，12mmol)及一滴AcOH添加至[2-(3-氟-4-硝基-苯基)-乙烯基]-二甲基-胺(1.7g，8mmol)於MeOH中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌2小時且用水淬滅。在真空中移除所有揮發物之後，用10% DCM中之甲醇萃取殘餘物兩次。將經合併之萃取物用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。在真空下濃縮得到粗產物，其藉由逆相管柱純化以得到標題化合物(1.08g，產率：63%)。MS(ESI)：213[M+H]+。
c. 5-(2-二甲胺基-乙基)-2-硝基-苯胺
將氫氧化氨(5mL)添加至[2-(3-氟-4-硝基-苯基)-乙基]-二甲基-胺(800mg，3.76mmol)於MeOH(20mL)中之溶液中。在微波加熱下，將反應混合物在100℃下加熱1.5小時。收集所得黃色固體且用水洗滌、在真空下乾燥且與前述批料合併以產生純標題化合物(560mg，產率：55%)。MS(ESI)：210[M+H]+。
程序2H：實例-139
N-(2-((6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
a. 1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲
在0℃下，在氬氣氛圍下將DIPEA(3.6mL，20.895mmol)及三光氣(0.81g，2.786mmol)添加至6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺(1g，6.965mmol)於二噁烷(10mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在70℃下攪拌 1h，且隨後使其冷卻至室溫。在0℃下，在氬氣氛圍下經由套管將所得混合物添加至3,5-二甲氧基苯胺(1.2g，8.358mmol)及DIPEA(1.2mL，6.965mmol)於二噁烷(4mL)中之溶液中。使反應混合物升溫至室溫且攪拌12h。在藉由TLC(己烷：EtOAc，7：3)完成反應之後，用乙酸乙酯及NaHCO3飽和水溶液稀釋反應混合物。用乙酸乙酯(2×50mL)分離且萃取水層。將經合併之有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析(己烷：EtOAc，70：30)來純化殘餘物以得到呈白色固體狀之1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(1.1g，產率：50%)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 12.38(s,1H),8.71(s,1H),6.99(s,1H),6.79(d,2H),6.26(t,1H),3.81(s,6H),3.45(s,3H)；MS(ESI)：323.10[M+H]+。
b. 1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲
在0℃下，在氬氣氛圍下將NaH(0.124g，3.098mmol)添加至1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(0.5g，1.549mmol)於無水DMF(4mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物攪拌15min且在0℃下添加二碳酸二-第三丁酯(0.50mL，2.323mmol)。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌16h。用乙酸乙酯及過量的冷水稀釋反應混合物。用乙酸乙酯(3×25mL)分離且萃取水層。將經合併之有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析(己烷：EtOAc，80：20)來純化殘餘物以得到呈白色固體狀之標題化合物(0.45g，69%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 8.72(d,1H),8.78 (d,1H),6.43-6.37(m,3H),3.77(s,6H),3.49(s,3H),1.40(s,9H)；MS(ESI)：424.10[M+2]+。
c. 1-(3,5-二甲氧基苯基)-3-(6-((4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基-1-第三丁基碳酸酯脲
在室溫下，在氬氣氛圍下將Pd2(dba)3(0.095g，0.104mmol)及Xantphos(0.1202g，0.208mmol)放入於密封管道中之10mL乾燥甲苯中。氬氣吹掃持續額外的5min至10min。隨後添加1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-二甲基-3-第三丁基碳酸酯脲(0.43g，1.042mmol)及4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺(程序2C，步驟a至步驟c；0.317g，1.25mmol)且用氬氣吹掃所得反應混合物5min，且隨後添加Cs2CO3(0.676g，2.08mmol)。在密封反應瓶之前，氬氣吹掃持續額外的5min。隨後將反應混合物在100℃下加熱12h。在藉由TLC(DCM：MeOH，98：2)完成反應之後，將反應物質分配於EtOAc與水之間。用EtOAc(2×25mL)萃取水層且將經合併之有機層用水、鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥且在真空下蒸發。藉由管柱層析法(DCM：MeOH/97：3)在矽膠上純化粗殘餘物以得到標題化合物(0.250g，37%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 9.30(s,1H),8.58(s,1H),8.17(d,1H),7.59(d,1H),7.14(s,1H),7.08(dd,1H),6.42(d,2H),6.36(t,1H),3.75(s,6H),3.49(s,3H),3.23(t,4H),2.62(t,4H),2.49(q,2H),1.39(s,9H),1.14(t,3H)；MS(ESI)：637.4[M+H]+。
d. (6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將NaH(0.0314g，0.786mmol)添加至1-(3,5-二甲氧基苯基)-3-(6-((4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-甲基-1-第三丁基碳酸酯脲(0.25g，0.393mmol)於無水DMF(4mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物攪拌15min。隨後在0℃下添加二碳酸二-第三丁酯(0.12mL，0.589mmol)。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌18h。用乙酸乙酯及冷水稀釋反應混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)分離且萃取水層。將經合併之有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析(DCM：MeOH，97：3)純化殘餘物以得到呈棕色固體狀之標題化合物(0.280g，96%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 8.44(s,1H),8.30(s,1H),7.60(d,1H),7.14-7.03(m,2H),6.48(d,1H),6.44-6.21(m,2H),3.75(s,6H),3.49(s,3H),3.49(t,4H),2.62(t,4H),2.49(q,2H),1.38(d,18H),1.14(t,3H)；MS(ESI)：737.5[M+H]+。
e. (2-胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)(6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在室溫下，在氫氣氛圍下(球狀燒瓶)將MeOH與THF之混合物 (1：1)(10mL)中之(6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯(0.280g，0.380mmol)與阮尼鎳(0.05g)之混合物攪拌36h。經由矽藻土墊過濾反應混合物。濃縮濾液以得到標題化合物(0.14g，52%之產率)。MS(ESI)：707.7[M+H]+。
f. (2-丙烯醯胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)(6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將TEA(0.08mL，0.594mmol)添加至(2-胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)(6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.14g，0.183mmol)於無水DCM(5mL)中之攪拌溶液中。在0℃下，將所得混合物攪拌15min且緩慢添加丙烯醯氯(0.03mL，0.396mmol)。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌3h。用DCM及水稀釋反應混合物。用DCM(3×20mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(DCM：MeOH，97：3)純化殘餘物以得到呈棕色固體狀之標題化合物(0.070g，46%之產率)。MS(ESI)：761.4[M+H]+。
g. N-(2-((6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(0.35mL，5vol)緩慢添加至(2-丙烯醯胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)(6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.070g，0.124mmol)於乾燥DCM(2mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌24h。藉由LCMS監測反應進程，在反應完成之後，在減壓下移除多餘的溶劑。用DCM及NaHCO3飽和水溶液稀釋所得殘餘物。用DCM(3×10mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析(DCM/MeOH，97：3)純化殘餘物以得到45mg HPLC純度為80%之所需產物，其係藉由製備型HPLC(條件：管柱：XBRIDGE-C18(19.0×150mm，5微米)；移動相：A；含0.1% TFA之水，B；ACN)來純化以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(19mg，37%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 12.85(s,1H),8.39(s,1H),7.72(s,1H),7.55(s,1H),7.19(d,1H),6.79(s,2H),6.75(d,1H),6.64(s,1H),6.39(d,1H),6.22-6.13(m,2H),5.80-5.73(m,2H),3.78(s,6H),3.28(t,4H),3.21(s,3H),2.60(t,4H),2.47(q,2H),1.12(t,3H)；MS(ESI)：561.60[M+H]+；HPLC：96.04%,rt：6.40min。
實例-140
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2H(實例139)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(a)中替換為2,6-二氯苯胺且在步驟(b)中替換為(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(18mg，3.2%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 12.58(s,1H),8.39(s,1H),7.75(s,1H),7.61(s,1H),7.37(d,2H),7.22(d,1H),7.14(t,1H),6.77(dd,1H),6.67(s,1H),6.42(d,1H),6.25-6.16(m,1H),5.85(s,1H),5.78(d,1H),3.35-3.24(m,7H),2.62(t,4H),2.49(q,2H),1.14(t,3H)；MS(ESI)：569.10[M]+；HPLC：96.98%,rt：3.49min。
實例-141
N-(2-((6-(3-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2H(實例139)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(a)中替換為2-氯-3,5-二甲氧基苯胺(程序展示如下)以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(20mg，6.8%之產率)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)：δ 13.46(s,1H),8.43(s,1H),7.79-7.71(m,2H),7.56(s,1H),7.18(d,1H),6.74(dd,1H),6.61(s,1H),6.38(d,1H),6.26(d,1H),6.21-6.15(m,1H),5.79-5.74(m,2H),3.86(s,3H),3.81(s,3H),3.28(t,4H),3.23(s,3H),2.59(t,4H),2.47(q,2H),1.12(t,3H)；MS(ESI)：595.15[M]+；HPLC：98.14%,rt：3.49min。
製備2-氯-3,5-二甲氧基苯胺
a. N-(3,5-二甲氧基苯基)乙醯胺
在室溫下，在氬氣氛圍下將乙酸酐(6.5mL)添加緩慢至3,5-二甲氧基苯胺(10g，65.359mmol)於甲苯(50mL)中之攪拌溶液中且將所得反應混合物攪拌15h。在反應完成之後，用己烷稀釋反應物且藉由過濾來收集所得沈澱物且在真空下乾燥以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(12.5g，98%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 7.38(s,1H),6.75(d,2H),6.23(s,1H),3.76(s,6H),2.15(s,3H)；MS(ESI)：196.1[M+H]+。
b. N-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)乙醯胺
在0℃下，將32%之水性氫氯酸溶液(14mL)繼而於水(1.5mL)中之氯酸鈉(1.16g，11mmol)溶液添加至N-(3,5-二甲氧基-苯基)-乙醯胺(5g，25.64mmol)於乙酸(17mL)中之攪拌溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30min。其後，將反應混合物傾入至冰水中且用K2CO3粉末使其呈鹼性。過濾出沈澱物且用水洗滌。藉由矽膠管柱層析(Hexane/EtOAc，88：12)純化殘餘物以得到呈白色固體狀之標題化合物(1.8g，31%之產率)。1HNMR(DMSO-d 6,300MHz)：δ 9.36(s,1H),7.03(d,1H),6.53(d,1H),3.84(s,3H),3.74(s,3H),2.08(s,3H)；MS(FSI)：230.2[M+H]+。
c. 2-氯-3,5-二甲氧基苯胺
將氫氧化鉀(2.19g，39.18mmol)添加至N-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)乙醯胺(1.8g，7.837mmol)於EtOH(100mL)及水(10mL)中之溶液中且將反應混合物加熱回流12h。在減壓下移除多餘的EtOH以獲得殘餘物。隨後將殘餘物分配於水與乙醚之間。將有機層分離、經硫酸鈉乾燥、過濾且在真空下濃縮以得到呈白色固體狀之標題化合物(1.2g，82%之產率)。1HNMR(CDCl3,300MHz)：δ 5.97(s,2H),4.08(brs,2H),3.84(s,3H),3.75(s,3H)；MS(ESI)：188.1[M+H]+。
程序2I：實例-142
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丙烯醯胺
a. 4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯胺
在0℃下，在氮氣氛圍下將粉末狀且經乾燥之碳酸鉀(3.58g，0.025mol)添加至4-胺基-3-硝基苯酚(2g，0.012mol)於DMF(20mL)中之溶液中。逐滴添加1-溴-2-甲氧乙烷(1.34mL，0.014mol)至此且使 所得反應混合物回流隔夜。隨後，經由矽藻土過濾反應混合物。濃縮濾液且用乙酸乙酯及水稀釋。用乙酸乙酯(3×30mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以獲得呈固體狀之標題化合物(0.6g，產率：24%)。MS(ESI)：213.15[M+H]+。
b. N 4 -(4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯基)-N 6 -甲基嘧啶-4,6-二胺
在室溫下，在氬氣氛圍下將4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯胺(0.6g，2.830mmol)及6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺(0.404g，2.830mmol)放入於密封管道中之10mL乾燥甲苯。氬氣吹掃持續額外的5min至10min。隨後添加Cs2CO3(2.3g，7.075mmol，2.5eq)及Xantphos(0.490g，0.849mmol)且用氬氣吹掃所得反應混合物5min，繼而添加Pd2(dba)3(0.518g，0.566mmol)。在密封反應瓶之前，氬氣吹掃持續額外的5min。隨後將反應混合物在100℃下加熱7h。在藉由TLC(DCM：MeOH，98：2)完成反應之後，經由矽藻土過濾反應物質且在真空下蒸發濾液以獲得粗殘餘物。藉由管柱層析法在矽膠上純化粗殘餘物以得到標題化合物(0.93g，產率：70%)；MS(ESI)：320.3[M+H]+。
c. 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲
在0℃下，在氬氣氛圍下將於甲苯(4.4mL，9.0mmol)中之20%的光氣添加至2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯胺(500mg，2.252mmol)於二噁烷(10mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在90℃下攪拌6h，且隨後使其冷卻至室溫。移除溶劑且將殘餘物溶解於甲苯(10mL)中。將N4-(4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯基)-N6-甲基嘧啶-4,6-二胺(0.718g，8.358mmol，1.0eq)添加至此。隨後使所得反應混合物回流6h。在藉由TLC(己烷：EtOAc，7：3)完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫、在真空下濃縮以獲得粗反應混合物。將向粗反應混合物添加乙酸乙酯時所沈澱之固體過濾、用醚及戊烷洗滌以得到呈白色固體狀之標題化合物(0.285，產率：32%)。MS(ESI)：567.0[M+H]+。
d. (6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)(4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將DMAP(0.025g，0.2mmol)及二碳酸二-第三丁酯(0.438g，2.009mmol)添加至3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(0.285g，0.502mmol)於無水THF(10mL)中之攪拌溶液中。使所得混合物回流3h至4h。在藉由TLC(己烷：EtOAc，1：1)完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫、在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(0.35g，產率：88%)。MS(ESI)：767.1[M+H]+。
e. (2-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
將阮尼鎳(0.05g)添加至(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)(4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯(0.350g，0.456mmol)於THF與MeOH(10mL)之混合物中之溶液中且在室溫下將所得反應混合物在氫氣氛圍下(球狀燒瓶)攪拌14h。經由矽藻土墊過濾反應混合物。濃縮濾液以得到粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析(MeOH：DCM，5：95)純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.26g，產率：77%)。MS(ESI)：737.2[M+H]+。
f. (2-丙烯醯胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將TEA(0.09mL，0.704mmol)添加至(2-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.26g，0.352mmol)於無水DCM(6mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物攪拌15min且在0℃下緩慢添加丙烯醯氯(0.04mL，0.528mmol)。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌2h。用DCM及水稀釋反應混合物。用 DCM(3×30mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.200g，產率：72%)。MS(ESI)：791.2[M+H]+。
g. N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丙烯醯胺
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(0.38mL，5.05mmol)緩慢添加至(2-丙烯醯胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.2g，0.252mmol)於乾燥DCM(2mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌12h。藉由LCMS監測反應進程。在反應完成之後，在減壓下移除多餘的溶劑。用醚洗滌粗產物固體以得到呈白色固體狀之標題化合物(86mg，產率：58%)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)：δ12.01(s,1H),9.60(s,1H),8.85(s,1H),8.33(s,1H)；7.42(s,1H),7.34(d,1H),6.89(s,1H),6.79(d,1H),6.51(dd,1H),6.23(d,2H),5.72(d,1H),4.08(m,2H),3.93(s,6H),3.66(m,2H),3.31(s,3H),3.23(s,3H)。MS(ESI)：591.3[M+H]+；HPLC：96.04%,rt：3.72min。
實例：144
N-(2-((6-(3-(2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2I(實例142)中所概述之途徑合成標題化合物，在步驟(c)中替換為N4-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-N6-甲基嘧啶-4,6-二胺(程序2C，實例108，步驟a至步驟d)及2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺(程序展示如下)以得到呈灰白色固體狀之次末標題化合物(0.46mg，產率：歷經五個步驟為2.6%)。MS(ESI)：813.1[M+H]+。將游離胺(46mg，0.075mmol)溶解於乙酸乙酯：DCM：MeOH混合物中且經磷酸(7mg，0.075mmol)處理。在攪拌1h之後，過濾所沈澱之固體且用醚及戊烷洗滌以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(34.7mg，產率：65%)。1HNMR(DMSO-d6,300MHz)：δ 12.15(s,1H),9.60(s,1H),8.76(s,1H),8.32(s,1H),7.29(d,2H),6.9(d,2H),6.81(dd,1H),6.51-6.45(m,1H),6.25-6.20(m,2H),5.72(d,1H),3.91(s,3H),3.89(s,3H),3.23(t,4H),3.14(t,4H),2.54-2.50(m,5H),1.05(t,3H)；MS(ESI)：613.2(M-H3PO4]+；HPLC：98.6%,rt：6.13min。
製備2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺
a. 2-氟-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯
在0℃下，在氮氣氛圍下將Selectfluor(48.9g，0.15mol)於乙腈(1.1L)中之懸浮液添加至甲基-3,5-二甲氧基苯甲酸酯(20g，0.10mol)於乙腈中之溶液中。將所得反應混合物升溫至室溫且攪拌隔夜。在真空下濃縮反應混合物，用飽和碳酸鈉溶液及乙酸乙酯稀釋。用乙酸乙酯(3×200mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(30：1至4：1之己烷/醚梯度)純化殘餘物以得到標題化合物(4g，產率：16.9%)。
b. 2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯
在0℃下，在氮氣氛圍下將SO2Cl2(2.20g，0.016mol)逐滴添加至甲基-2-氟-3,5-二甲氧基苯甲酸酯(3.5g，0.016mol)於乙腈(40mL)中之溶液中。將所得反應混合物緩慢升溫至室溫且攪拌1h。用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析使用溶離劑(己烷/醚(20：1)至己烷/醚(5：1))之梯度來純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(2.7g，產率：67%)。
c. 2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯甲酸
使2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(2.7g，0.010mol)及氫氧化鈉(1.088g，0.0272)於無水乙醇(30mL)中之懸浮液回流24h。使所得反應混合物冷卻至室溫且在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。將粗殘餘物溶解於水中且用醚(3×30mL)萃取。用濃HCl酸化水層且將所沈澱之固體過濾、用冷水洗滌且在真空中乾燥以得到呈固體狀之標題化合物(1.8g，產率：71%)。
d. 2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯胺
將2-氯-6-氟-3,5-二甲氧基苯甲酸(1.8g，0.0077mol)及三乙胺(0.934g，0.0092mol)於第三丁醇(50mL)中之懸浮液攪拌5min。向所得反應混合物中添加二苯基磷醯基疊氮化物(2.53g，0.0092mol)且加 熱至82℃且保持在此溫度下隔夜。隨後在真空中濃縮反應混合物以獲得粗殘餘物。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷(20mL)中且冷卻至0℃。將TFA(4mL)添加至反應混合物中且隨後將所得反應混合物在室溫下攪拌2h。在真空下移除溶劑且用乙酸乙酯及飽和碳酸鈉溶液稀釋粗殘餘物。用乙酸乙酯(3×30mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析使用溶離劑(己烷比己烷-醚(65：35)之梯度)來純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.95g，產率：60%)。MS(ESI)：205.7[M+H]+。
程序2J-實例145
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)苯基)丙烯醯胺
a. 1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲
在0℃下，在氬氣氛圍下將DMAP(0.080g，0.655mmol)及二碳酸二-第三丁酯(2.9mL，12.6mmol)添加至1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(程序2E，步驟b；2.6g，6.632mmol)於無水THF(20mL)中之攪拌溶液中。隨後使所得混合物回流2h。在藉由TLC(EtOAc：己烷，3：7)完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫、在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(2.5g，產率：69.4%)。1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 8.73(d,1H),7.95(d,1H),6.61(s,1H),3.95(s,6H),3.63(s,3H),1.35(s,9H)。
b. 4-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯
在室溫下，將4-胺基-3-硝基苯甲酸甲酯(0.956g，0.004mol)及1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲(2g，0.004mol)放入於密封管道中之10mL乾燥甲苯中且氬氣吹掃5min至10min。隨後添加Cs2CO3(3.25g，0.01mol)及Xantphos(0.46g，0.0008mol)且用氬氣吹掃所得反應混合物5min，繼而添加Pd2(dba)3(0.36g，0.0004mol)。在密封反應瓶之前，氬氣吹掃持續額外的5min。隨後將反應混合物在100℃下加熱12h。在藉由TLC完成 反應之後，經由矽藻土過濾反應物質且在真空下蒸發濾液以獲得粗殘餘物。藉由管柱層析法在矽膠上純化粗殘餘物以得到標題化合物(2.10g，產率：79%)；1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 10.3(s,1H),9.00-8.95(m,2H),8.75(s,1H),8.22(dd,1H),7.63(s,1H),6.61(s,1H),3.95(s,6H),3.94(s,3H),3.67(s,3H),1.39(s,9H)。
c. 4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將DMAP(0.039g，0.322mmol)及二碳酸二-第三丁酯(1.48mL，6.45mmol)添加至4-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯(2.1g，3.22mmol)於無水THF(5mL)中之攪拌溶液中。使所得混合物回流12h。在藉由TLC(EtOAc：己烷，40：60)完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫、在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(2.1g，產率：87%)。MS(ESI)：751.0[M]+。
d. (6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)(4-(羥基甲基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將硼氫化鋰(0.049g，2.26mmol)添加至4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三 丁基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯(1.7g，2.26mmol)於無水THF(18mL)中之溶液中。隨後經過2.5h使所得反應混合物升溫至室溫。隨後用冰水淬滅反應混合物且用乙酸乙酯稀釋。用乙酸乙酯(3×20mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.480g，產率：29%)。MS(ESI)：723.2[M]+。
e. (4-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-2-硝基苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將咪唑(0.071g，1.051mmol)及TBDMS-CL(0.118g，0.787mmol)添加至(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)(4-(羥基甲基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯(0.380g，0.525mmol)於無水二氯甲烷(5mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將所得反應混合物攪拌4h。隨後用DCM及水稀釋反應混合物。用DCM(3×10mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.330g，產率：75%)。MS(ESI)：837.4[M]+。
f. (2-胺基-4-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)苯基)(6-(3-(2,6-二 氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
將阮尼鎳(0.06g)添加至(4-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-2-硝基苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.3g，0.358mmol)於MeOH(5mL)中之溶液中且在室溫下將所得反應混合物在氫氣氛圍(球狀燒瓶)下攪拌12h。經由矽藻土墊過濾反應混合物。濃縮濾液以得到粗殘餘物，其隨後藉由管柱層析法純化以得到呈固體狀之標題化合物(0.180g，產率：64%)。MS(ESI)：807.2[M]+。
g. (2-丙烯醯胺基-4-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將TEA(0.08mL，0.557mmol)添加至(2-胺基-4-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.180g，0.223mmol)於無水DCM(5mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物攪拌15min且在0℃下緩慢添加丙烯醯氯(0.03mL，0.334mmol)。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌4h。隨後濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之所需標題化合物(0.130g，產率：68%)。MS(ESI)：861.3[M]+。
h. N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)苯基)丙烯醯胺
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(1.0mL)緩慢添加至(2-丙烯醯胺基-4-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-第三丁基碳酸酯脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.130g，0.150mmol)於乾燥DCM(3mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌13h。藉由LCMS監測反應進程，在反應完成之後，在減壓下移除多餘的溶劑。用DCM及NaHCO3飽和水溶液稀釋所得殘餘物。用DCM(3×10mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到95mg HPLC純度為84%之所需產物，其隨後藉由製備型HPLC(條件：管柱：X bridge C18(19mm×150mm，5μm)；移動相：A；於水中之0.01% TFA，B；ACN)來純化以得到呈白色固體狀之標題化合物(16mg，產率：16%)。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 12.08(s,1H),9.70(s,1H),8.95(s,1H),8.37(s,1H),7.64(s,1H),7.49(d,1H),7.15(s,1H),6.90(s,1H),6.53-7.46(q,1H),6.32(s,1H),6.25(d,1H),5.74(d,1H),5.42(s,1H),5.35(s,1H),4.49(s,2H),3.94(s,6H),3.25(s,3H)；MS(ESI)：547.0[M+H]+；HPLC：97.4%,rt：3.83min。
實例147
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(甲氧基甲基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2I(實例142)中所概述之途徑合成標題化合物，在步驟(c)中替換為N4-(4-(甲氧基甲基)-2-硝基苯基)-N6-甲基嘧啶-4,6-二胺(程序展示如下)以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(5.0mg，產率：1.8%)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)：δ 12.30(s,1H),8.41(s,1H),7.86(s,1H),7.81(s,1H),7.52(d,1H),7.49(s,1H),7.30(d,1H),6.54(s,1H),6.46(d,1H),6.26(dd,1H),6.07(s,1H),5.83(d,1H),5.18(s,2H),3.93(s,6H),3.82(s,3H),3.34(s,3H)；MS(ESI)：561.1[M+H]+；HPLC：95.76%,rt：4.36min。
製備N 4 -(4-(甲氧基甲基)-2-硝基苯基)-N 6 -甲基嘧啶-4,6-二胺
a. 4-胺基-3-硝基苯甲酸甲酯
在0℃下將亞硫醯氯(19.4g，164.85mmol)添加至4-胺基-3-硝基苯甲酸(20g，109.89mmol)於甲醇(200mL)中之溶液中。隨後使所得混合物回流12h。使反應混合物冷卻至室溫。過濾所沈澱之黃色固體且乾燥以得到呈固體狀之標題化合物(22g，產率：100%)。1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 8.85(d,1H),7.99(dd,1H),6.83(d,1H),6.40(s,2H),3.90(s,3H)。
b. 4-((6-(甲胺基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯
在室溫下，在氬氣氛圍下將6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺3(3g，20.97mmol)及4-胺基-3-硝基苯甲酸甲酯(3.9g，20.97mmol)放入於密封管道中之甲苯(5mL)中。氬氣吹掃5min至10min。隨後添加Cs2CO3(17.0g，52.4mmol)及Xantphos(3.6g，6.29mmol)且用氬氣吹掃所得反應混合物5分鐘，繼而添加Pd2(dba)3(3.8g，4.19mmol)。在密封反應瓶之前，氬氣吹掃持續額外的5min。隨後將反應混合物在110℃下加熱16h。在藉由TLC完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫，經由矽藻土床過濾且在真空下蒸發濾液獲得粗殘餘物。藉由管柱層析法在矽膠上純化粗殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(3.2g，產率：51%)；MS(ESI)：304.2[M+H]+。
c. 4-((第三丁氧基羰基)(6-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯
在室溫下，在氬氣氛圍下將DMAP(0.497g，4.078mmol)及二碳酸二-第三丁酯(8.89g，40.78mmol)添加至中間產物-4(3.1g，10.197mmol)於無水THF(35mL)中之攪拌溶液中。使所得混合物回流2h至3h。在藉由TLC完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫、在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(1.9g，產率：37%)。MS(ESI)：504.0[M+H]+。
d. (6-((第三丁氧基羰基)(4-(羥基甲基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將硼氫化鋰(0.157g，7.14mmol)添加至4-((第三丁氧基羰基)(6-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯(1.8g，3.57mmol)於THF(20mL)中之溶液中。隨後使所得混合物升溫至rt且攪拌12h。隨後用冰水淬滅反應混合物且用乙酸乙酯稀釋。用乙酸乙酯(3×40mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之所需中間產物-6(1.2g，75%)。MS(ESI)：476.1[M+H]+。
e. (6-((第三丁氧基羰基)(4-(甲氧基甲基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將碳酸鉀(0.48g，6.97mmol)繼而硫酸二甲酯(0.87g，6.97mmol)添加至(6-((第三丁氧基羰基)(4-(羥基甲基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(1.5g，3.488mmol)於丙酮(20mL)中之溶液中。隨後使所得反應混合物回流24h，且隨後使其冷卻至rt。在真空下濃縮反應混合物以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.3g，產率：19%)。MS(ESI)：490.55[M+H]+。
f. N 4 -(4-(甲氧基甲基)-2-硝基苯基)-N 6 -甲基嘧啶-4,6-二胺
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(5mL)緩慢添加至(6-((第三丁氧基羰基)(4-(甲氧基甲基)-2-硝基苯基)胺基)嘧啶-4-基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(0.85g)於乾燥DCM(10mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌1h。在反應完成之後，在減壓下移除多餘的溶劑且用醚洗滌以得到呈固體狀之標題化合物(0.7g粗產物)。MS(ESI)：290.2[M+H]+。
程序2K-實例148
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)丙烯醯胺
a. 4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(第三丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸
在0℃下將氫氧化鋰(0.08g，2.99mmol)添加至4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(第三丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯(1.5g，1.997mmol)(程序2J，步驟c)於THF(10mL)與水(2mL)之混合物中之溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌5h。在藉由TLC(EtOAc：己烷，3：7)完成反應之後，將反應混合物在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。將粗殘餘物溶解於水中且用醚(3×30mL)萃取。用10%之檸檬酸溶液酸化水層且將所沈澱之固體過濾、用冷水洗滌且在真空中乾燥以得到呈淡棕色固體狀之標題化合物(1.3g，產率：93%)。MS(ESI)：737.2[M+H]+。
b. (2-硝基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-第三丁氧基羰基-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將DIPEA(0.3mL，1.62mmol)、HATU(0.515g，1.355mmol)及N-甲基哌嗪6(0.09mL，0.813mmol)添加至4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(第三丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯甲酸(0.4g，0.542mmol)於DMF(5mL)中之溶液中。隨後使所得反應混合物升溫至rt且攪拌18h。在藉由TLC(MeOH：DCM，1：19)完成反應之後，將水添加至反 應混合物中。將所沈澱之粗產物固體過濾、乾燥且藉由矽膠管柱層析來純化以獲得呈固體狀之標題化合物(0.27g，產率：61%)。MS(ESI)：819.1[M+H]+。
c. (2-胺基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-第三丁氧基羰基-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
將阮尼鎳(0.06g)添加至(2-硝基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-第三丁氧基羰基-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.27g，0.329mmol)於MeOH(4mL)與THF(4mL)之混合物中之溶液中且在室溫下將所得反應混合物在氫氣氛圍下攪拌20h。經由矽藻土床過濾反應混合物。濃縮濾液以得到呈固體狀之粗標題化合物(0.22g，產率：84%)。MS(ESI)：789.4[M+H]+。
d. (2-丙烯醯胺基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-第三丁氧基羰基-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯
在0℃下，在氬氣氛圍下將TEA(0.08mL，0.557mmol)添加至(2-胺基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-第三丁氧基羰基-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.22g，0.278mmol)於無水DCM(5mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物攪拌 15min且在0℃下緩慢添加丙烯醯氯(0.037g，0.417mmol)。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌2h。用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應混合物且用DCM稀釋。用DCM(3×20mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到呈固體狀之標題化合物(0.060g，產率：25%)。MS(ESI)：843.3[M+H]+。
e. N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基丙烯醯胺
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(0.2mL)緩慢添加至(2-丙烯醯胺基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-第三丁基羰基-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(0.060g，0.0711mmol)於乾燥DCM(2mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌18h。藉由LCMS監測反應進程，在反應完成之後，在減壓下移除多餘的溶劑。將所得殘餘物用DCM稀釋且用NaHCO3飽和水溶液淬滅。用DCM(3×10mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮以獲得粗殘餘物。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以得到70mg HPLC純度為35%之所需產物，其隨後藉由製備型HPLC(條件：管柱：Gemini NX C18(21.2mm×150mm粒徑5μm)；移動相：A；於水中之0.1%碳酸氫銨，B；ACN)來純化以得到所需化合物。隨後用二氯甲烷及水稀釋化合物。用DCM(3×10mL)分離且萃取水層。將有機相用鹽水洗滌、經Na2SO4 乾燥、過濾且在真空下濃縮以得到呈白色固體狀之標題化合物(0.005g，產率：11%)。1H-NMR(CD3OD,400MHz)：δ 8.41(s,1H),7.79-7.76(m,2H),7.36(dd,1H),6.82(s,1H),6.47-6.42(m,3H),5.82(d,1H),3.96(s,6H),3.81-3.55(m,8H),2.54(s,3H),2.37(s,3H),；MS(ESI)：643.1[M+H]+；HPLC：97.26%,rt：6.19min。
實例149
3-丙烯醯胺基-4-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-N,N-二甲基苯甲醯胺
遵循程序2K(實例148)中所概述之途徑合成標題化合物，在步驟(b)中替換為二甲胺以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(12.0mg，產率：6.1%)。1H-NMR(CD3OD,400MHz)：δ 8.38(s,1H),7.78-7.72(m,2H),7.34(dd,1H),6.80(s,1H),6.46-6.38(m,3H),5.80(dd,1H),3.94(s,6H),3.36(s,3H),3.10(s,6H)；MS(ESI)：587.9[M+H]+；HPLC：99.04%,rt：3.98min。
實例150
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-羰基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2K(實例148)中所概述之途徑合成標題化合物，在步驟(b)中替換為1-乙基哌嗪以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(10.0mg，產率：9.7%)。1H-NMR(CD3OD,400MHz)：δ 8.41(s,1H),7.76-7.79(m,2H),7.36(d,1H),6.82(s,1H),6.38-6.47(m,3H),5.82(d,1H),3.96(s,6H),3.72-3.82(m,2H),3.53-3.65(m,3H),3.39(s,4H),2.49-2.54(m,6H),1.15(t,3H)；MS(ESI)：657.0[M+H]+；HPLC：95.98%,rt：6.25min。
實例151
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺磷酸
遵循程序2J(實例145)中所概述之途徑合成標題化合物，在步驟(b)中替換為4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺(程序展示如下)且省略步驟(d)及(e)以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(0.1g，總產率：9.7%)之游離鹼。MS(ESI)：643.1[M+H]+。將85%之H3PO4緩慢添加至N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺(0.1g)於95%之THF-MeOH(5mL)中之溶液中。隨後使所得反應混合物在室溫下攪拌30min，蒸發溶劑且用乙醚濕磨，在真空下乾燥以得到呈灰白色固體狀之標題化合物(0.16g)。1HNMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 12.08(s,1H),9.62(s,1H),8.76(s,1H),8.32(s,1H),7.30(d,2H),6.89(d,1H),6.81(d,1H),6.46-6.49(m,1H),6.21-6.25(m,2H),5.72(d,1H),3.93(s,6H),3.35-3.41(m,1H),3.23(s,3H),3.12-3.17(m,4H),2.67-2.70(m,4H),1.05- 1.11(m,6H)；MS(ESI)：643.3(M+1)；HPLC：95.41%,rt：6.48min。
製備4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺
a. 4-異丙基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將Boc哌嗪1(10g，53.76mmol)及丙酮(4mL)放入乾燥DCM(100mL)與乙酸(3.2mL)之混合物中。在室溫下攪拌20min。添加Na(OAc)3BH(17g，80.2mmol)且在室溫下持續攪拌12hr。用水稀釋反應混合物，用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。將有機層用鹽水洗滌、經Na2SO4乾燥、過濾且在真空下濃縮以獲得粗標題化合物(13g，粗產物)。MS(ESI)：229.2[M+H]+。
b. 1-異丙基哌嗪
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(15mL)緩慢添加至4-異丙基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(13g粗產物)於乾燥DCM(20mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌18hr。在真空下濃縮反應物質且用正己烷及乙醚濕磨殘餘物。在真空下乾燥以得到標題化合物(7g，產率：97%)。MS(ESI)：129.1[M+H]+。
c. (4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯
在室溫下，在氬氣氛圍下將1-異丙基哌嗪(1.29g，5.66mmol)及(4-溴-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯(1.5g，4.71mmol)放入於密封管 道中之乾燥甲苯(15mL)與二噁烷(2mL)之混合物中。氬氣吹掃5min至10min。隨後添加Cs2CO3(3.06g，9.43mmol)及Xantphos(0.54g，0.94mmol)且用氬氣吹掃所得反應混合物5min，繼而添加Pd2(dba)3(0.43g，0.47mmol)。在密封反應瓶之前，氬氣吹掃持續額外的5min。隨後將反應混合物在100℃下加熱12hr。在藉由TLC完成反應之後，使反應混合物冷卻至室溫、經由矽藻土床過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(DCM：MeOH/97：3)純化殘餘物以得到標題化合物(1.2g，產率：70.5%)。MS(ESI)：365.5[M+H]+。
d. 4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺
在0℃下，在氬氣氛圍下將TFA(3mL)緩慢添加至(4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)胺基甲酸第三丁酯(1.2g，3.29mmol)於乾燥DCM(5mL)中之攪拌溶液中。使所得反應混合物升溫至室溫且攪拌12hr。藉由LCMS監測反應進程，在反應完成之後，在減壓下移除多餘的溶劑以得到粗殘餘物。用醚反覆洗滌粗殘餘物以獲得呈紅色固體狀之標題化合物(1g，產率：80.6%)。MS(ESI)：265.1[M+H]+。
實例-154
製備N-(5-(4-乙醯基哌嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺
在室溫下，在氮氣氛圍下將N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(哌嗪-1-基)丙烯醯胺(程序2L，實例157)(8.6mg，0.014mmol)及DIEA(7.5μl，0.043mmol)攪拌於DCM(1.0ml)中。添加乙醯氯(1.0μl，0.016mmol)於DCM(11ul)中之溶液且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。蒸發溶劑且將所得物質溶解於400ul之DMSO中。用1.0ml之MeOH稀釋DMSO溶液且藉由prep-HPLC(於甲酸中之水/ACN條件)純化以得到標題化合物(1.4mg，產率：15%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 2.16(s,3 H)3.65-3.80(m,4 H)3.94(s,6 H)5.76(dd,1 H)6.15(s,1 H)6.28-6.49(m,2 H)6.78-6.82(m,1 H)6.95(dd,2.89Hz,1 H)7.28-7.38(m,2 H)8.31(d,1 H)8.58(br.s.,1 H)；ESI-MS：643[M+H]+。
實例-155及實例-156
製備N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(1-甲氧基乙基)苯基)丙烯醯胺及N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(1-羥基乙基)苯基)
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-(1-甲氧基乙基)-2-硝基苯胺(程序展示如下)以在使用急驟層析法在矽石上用90%至100%之EtOAc/己烷溶離來純化之後得到標題化合物。非極性溶離份為N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(1-甲氧基乙基)苯基)丙烯醯胺(16mg，產率：五個步驟中為6%)1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 1.46(d,3 H) 3.29(s,3 H)3.96(s,6 H)4.12(d,1 H)4.40(q,1 H)5.78-5.82(m,1 H)6.33-6.50(m,3 H)6.82(s,1 H)7.27(dd,1 H)7.55-7.64(m,2 H)8.37(d,1 H)；ESI-MS：575[M+H]+。極性溶離份為N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(1-羥基乙基)苯基)丙烯醯胺(22mg，產率：五個步驟中為8%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 1.53(d,3 H)4.00(s,6 H)5.83(dd,1 H)6.29-6.56(m,3 H)6.86(s,1 H)7.38(dd,1 H)7.57(d,1 H)7.69(s,1 H)8.40(d,1 H)；ESI-MS：661[M+H]+。
製備4-(1-甲氧基乙基)-2-硝基苯胺
a. 1-(4-氟-3-硝基苯基)乙醇
將1-(4-氟-3-硝基苯基)乙酮(1.0g，5.46mmol)溶解於MeOH(15.0ml)中且經冰浴攪拌。分批添加NaBH4(0.62g，16.0mmol)。在完成添加時，將反應混合物在rt下攪拌10分鐘。將反應混合物傾入至EtOAc及鹽水中。將有機層分離、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用20%至70%EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(881mg，產率：87%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.53(d,4 H)4.99(dd,1 H)7.22-7.33(m,1 H)7.66(ddd,1 H)8.09(dd,1 H)。
b. 1-氟-4-(1-甲氧基乙基)-2-硝基苯
將1-(4-氟-3-硝基苯基)乙醇(870mg，4.7mmol)溶解於MeOH(10 ml)中且謹慎地添加濃縮硫酸(2.5ml，47mmol)。使用微波爐(Biotage Initiator)將反應混合物在150℃下加熱5分鐘。冷卻至室溫後，將反應混合物傾入至EtOAc/水中。將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用0%至50%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(664mg，產率：71%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.45(d,3 H)3.27(s,3 H)4.36(q,1 H)7.28-7.32(m,1 H)7.56-7.63(m,1 H)7.98-8.04(m,1 H)。
c. 4-(1-甲氧基乙基)-2-硝基苯胺
將1-氟-4-(1-甲氧基乙基)-2-硝基苯(664mg，3.33mmol)攪拌於THF(10ml)中。添加NH4OH(0.39ml，10.0mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。進一步添加780ul之NH4OH且使用微波爐(Biotage Initiator)將反應混合物在120℃下加熱10分鐘，且隨後在140℃下加熱50分鐘。冷卻至室溫後，將反應混合物傾入至EtOAc/水中。將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用0%至50%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(290mg，產率：44%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.42(d,3 H)3.22(s,3 H)4.24(q,1 H)6.05(br.s.,2 H)6.83(d,1 H)7.38(dd,2.01Hz,1 H)8.04(d,1 H)。
程序2L：實例-157
製備N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
a. 2-(4-溴-2-硝基苯基)異吲哚啉-1,3-二酮
將4-溴-1-氟-2-硝基苯(2.0g，9.1mmol)及1,3-二側氧基異吲哚啉-2-化鉀(2.0g，10.9mmol)置於微波瓶(0.5ml至2ml)中且添加NMP (12.0ml)。使用微波爐(Biotage,Initiator)將反應混合物在200℃下加熱1min。在冷卻至rt之後，將反應混合物逐滴添加至不斷攪拌的水中，其使得沈澱物形成。收集固體、用水洗滌且在氮氣流下乾燥以得到標題化合物(2.89g，產率：92%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.26(s,2 H)7.43(d,2H)7.81-7.87(m,3H)7.91(dd,,2H)7.95-8.05(m,3H)8.33(d,1H)。
b. 4-(4-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將2-(4-溴-2-硝基苯基)異吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.4mmol)、哌嗪-1-甲酸第三丁酯(402mg，2.2mmol)、Pd2(dba)3(66.0mg，.07mmol)、Xantphos(83mg，.144mmol)及Cs2CO3(939mg，2.9mmol)置於反應瓶(微波反應瓶10ml至20ml)中且用氮氣吹掃。添加甲苯(5.0ml)且氮氣鼓泡10min。將反應混合物在100℃下加熱5小時。停止加熱且冷卻至rt。經由矽藻土墊過濾反應混合物且蒸發濾液。藉由急驟層析法在矽石上用20%至70%之EtOAc/己烷溶離來純化殘餘物質以得到標題化合物(275mg，產率：42%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.51(s,6H)3.28-3.39(m,2H)3.57-3.70(m,2H)7.20-7.24(m,1H)7.35(d,1H)7.66(d,1H)7.75-7.87(m,1H)7.96(dd,1H)。
c. 4-(4-胺基-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在室溫下，將THF(1.8ml，1.8mmol)中之1.0M肼添加至4-(4-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(275.4mg，0.6mmol)於丁HF(5.0ml)中之懸浮液中。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物傾入至EtOAc/水中且將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用20%至70%EtOAc/己烷溶離來純化所得油狀物以得到標題化合物(182mg，93%產率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 1.42(s,9 H)2.89-2.99(m.4 H)3.44(d,4 H)6.98(d,1 H)7.22(s,2H)7.26-7.38(m,2 H)。
d. 4-(4-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲(175mg，0.34mmol)、4-(4-胺基-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(90mg，0.28mmol)、Pd2(dba)3(13mg，0.014mmol)、Brettphos(13mg，0.028mmol)及第三丁醇鈉(54mg，0.56mmol)置於反應瓶(2ml至5ml)中且用氮氣吹掃。添加甲苯(1.0ml)且氮氣鼓泡5min，隨後將反應混合物在100℃下加熱隔夜。停止加熱且冷卻至室溫。經由Celite®墊過濾反應混合物。蒸發濾液且藉由急驟層析法在矽石上用20%至70%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(102.4mg，產率：45%)。1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ 0.01(s,9 H)0.85-0.98(m,2 H)1.50(s,9 H)3.03(s,3 H)3.17(br.s.,4 H)3.56-3.66(m,4 H)3.75-3.97(m,8 H)5.22(s,2 H)6.50(s,1 H)6.95(s,1 H)7.65(s,1 H)8.46(s,1 H)。
e. 4-(4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在室溫下，在氮氣氛圍下將4-(4-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(16mg，00.2mmol)、二碳酸二-第三丁酯(53mg，0.24mmol)及DMAP(4.9mg，0.04mmol)於THF(2.0ml)中攪拌1小時。將反應混合物傾入至EtOAc及水中。將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用10%至70%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(148mg，產率：82%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 0.01(s,9 H)0.80-1.04(m,2 H)1.4(s,9 H)1.49(s,9 H)3.12(s,3 H)3.19-3.36(m,4 H)3.50-3.70(m,4 H)3.83-3.92(m,9 H)3.96(d,1H)5.14(d,1 H)5.42(d,1 H)6.46(s,1 H)7.05-7.19(m,2 H)7.58(d,1 H)8.03(s,1 H)8.29(s,1 H)。
f. 4-(3-胺基-4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將4-(4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(149mg，0.164mmol)攪拌於THF(1.5ml)及MeOH(1.5ml)中。添加五滴於水中之阮尼鎳懸浮液。在室溫下，在氫氣氛圍下將溶液攪拌隔夜。經由Celite®墊過濾反應物且濃縮濾液以產生粗標題化合物，其不經進一步純化即取出以用於下一步驟。ESI-MS：877[M+H]+。
g. 4-(3-丙烯醯胺基-4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將粗4-(3-胺基-4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(95mg,0.11mmol)溶解於THF(1.5ml)中且在氮氣氛圍下經冰浴攪拌。添加DIEA(57μl，0.30mmol)繼而丙烯醯氯(13μl，0.16mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1小時。將反應混合物傾入至EtOAc及鹽水中。將有機層分離、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用30%至100%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(47mg，產率：47%)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ 0.02(s,9 H)0.79-1.04(m,2 H)1.36(s,9 H)1.49(s,9 H)3.08(s,4 H)3.05(s,3 H)3.25(br.s.,4 H)3.64(br.s.,4 H)3.86(s,6 H)5.27(s,1 H)5.67-5.79(m,1 H)6.15-6.56(m,2 H)6.48(s,1 H)7.03-7.14(m,1 H)7.87-8.09(m,2 H)8.19-8.29(br.s.,1 H)8.44(s,1 H)。
h. N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
將4-(3-丙烯醯胺基-4-((第三丁氧基羰基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(59mg，0.06mmol)攪拌於DCM(2.0ml)中。添加TFA(97μl，1.3mmol)且將混合物在室溫下攪拌6小時。蒸發反應混合物。將殘餘物溶解於DCM中且用飽和NaHCO3洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。將所得物質溶解於THF(2.0ml)中且添加NH4OH(74μl，1.9mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌5分鐘。蒸發反應混合物以獲得標題化合物(34mg，產率：90%)，其不經進一步純化即取出以用於下一步驟。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 2.62(br.s.,4 H)3.08-3.27(m,7 H)3.77-4.03(m,6 H)5.72(d,1 H)6.11-6.34(m,2 H)6.40-6.62(m,1 H)6.70-6.98(m,2 H)7.22-7.37(m,2 H)8.32(s,1 H)8.70(s,1 H)9.58(br.s.,1 H)12.06(s,1 H)；ESI-MS：601[M+H]+。
實例-158
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2L(實例157)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(b)中替換為2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-N-甲基乙胺、Pd(dba)2及Ruphos且在步驟(d)中替換為Pd(dba)2、Brettphos及第三丁醇鈉以得到標題化合物(64mg，產率：七個步驟中為16%)1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.04(s,3 H)3.26(s,3 H)3.51(s,2 H)3.69-3.81(m,2 H)3.94(s,6 H)5.71-5.78(m,1 H)6.03-6.10(m,1 H)6.26-6.45(m,2 H)6.72(d,1 H)6.79(s,1 H)7.04-7.10(m,1 H)7.23(d,1 H)8.28(d,1 H)；ESI-MS：590[M+H]。
製備2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-N-甲基乙胺
a. 2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-N-甲基乙胺
在氮氣氛圍下，將2-(甲胺基)乙醇(1.0g，13.3mmol)攪拌於DCM(25.0ml)中。添加DIEA(3.23ml，18.6mmol)繼而第三丁基氯二甲基矽烷(2.0g，13.3mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。將反應混合物傾入至醚/水中。用醚萃取水層三次。將經合併之有機層經MgSO4乾燥且蒸發且在高度真空下乾燥殘餘物質以得到標題化合物(1.4g，產率：56%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 0.08(s,6 H)0.91 (s,9 H)1.93(br.s.,1 H)2.48(s,3 H)2.71(t,2 H)3.75(t,2 H)。
實例-160
N-(5-(1-胺基乙基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺TFA鹽
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為(1-(4-胺基-3-硝基苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯、Pd(dba)2、Brettphos及第三丁醇鈉以得到游離鹼，其轉化成TFA鹽。將游離鹼溶解於DCM中且添加1當量之TFA。蒸發混合物且用醚濕磨得到標題化合物(65mg，產率：五個步驟中為23%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ1.67(d,3 H)3.33-3.37(s,3 H)3.92-3.97(s,6 H)4.49(m,1 H)5.75-5.83(m,1 H)6.30-6.50(m,3 H)6.81(s,1 H)7.36(dd,,1 H)7.69(d,1 H)7.82(d,1 H)8.36-8.43(m,1 H)；ESI-MS：560[M+H]。
製備(1-(4-胺基-3-硝基苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
a. 1-(4-氟-3-硝基苯基)乙胺
將發煙HNO3(0.48ml，10.8mmol)謹慎地添加至經冰浴冷卻之濃H2SO4(3.6ml，68.2mmol)中。向混合物逐滴添加1-(4-氟苯基)乙胺(1.0g，7.2mmol)。將反應混合物攪拌冷卻50分鐘。將反應混合物傾入至冰中且用3M NaOH溶液(24ml，72.00mmol)將其鹼化至約 pH8.0。用DCM萃取鹼性溶液兩次。使經合併之有機層經Na2SO4乾燥且蒸發以得到標題化合物(1.3g，產率：96%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.41(d,6 H)4.25(q,1 H)7.21-7.26(m,1 H)7.67(ddd,1 H)8.10(dd,1 H)。
b. (1-(4-氟-3-硝基苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
將DIEA(2.4ml，13.8mmol)繼而二碳酸二-第三丁酯(1.9ml，8.3mmol)添加至1-(4-氟-3-硝基苯基)乙胺(1.3g，6.9mmol)於THF(10.0ml)中之懸浮液中。在室溫下，將反應混合物在氮氣氛圍下攪拌2小時。將反應混合物傾入至EtOAc/水中且將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用10%至70%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(1.5g，產率：75%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.37-1.50(m,12 H)4.81(br.s.,2H)7.23-7.26(m,1 H)7.59(ddd,1 H)8.01(dd,1 H)。
c. (1-(4-胺基-3-硝基苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
將(1-(4-氟-3-硝基苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(500mg，1.75mmol)攪拌於THF(2ml)中。添加NH4OH(0.978ml，7.0mmol)且使用微波爐(Biotage Initiator)將反應混合物在150℃下加熱30分鐘。添加NH4OH(0.600ml)，且隨後在180℃下加熱。冷卻至室溫後，將反應混合物傾入至EtOAc/水中。將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用0%至50%之EtOAc/己烷溶離來純化 所得物質以得到標題化合物(376mg，產率：76%)1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.43-1.48(m,12 H)4.71(br.s.,2 H)6.79(d,1 H)7.34(dd,1 H)8.05(d,1 H)。
實例-161
製備N-(5-(4-(2-胺基乙基)哌嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺2 TFA鹽
a. (2-(4-(3-丙烯醯胺基-4-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
將(2-側氧基乙基)胺基甲酸第三丁酯(13mg，0.08mmol)添加至N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸酯(程序2L，實例157)(30mg，0.042mmol)於THF(1.0ml)及MeOH(1.0ml)中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌10分鐘。添加氰基硼氫化鈉(7.0mg，0.12mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。蒸發溶劑且添加飽和NaHCO3溶液。用DCM萃取混合物三次。使經合併之有機層經Na2SO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用0%至15%之DCM中之MeOH溶離來純化殘餘物質以得到標題化合物(17mg，產率： 54%)ESI-MS：744[M+H]+。
N-(5-(4-(2-胺基乙基)哌嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺2 TFA鹽
將(2-丙烯醯胺基-4-(4-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)(6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲基)嘧啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯(17mg，0.017mmol)攪拌於DCM(1.0ml)中。添加TFA(200μl，2.6mmol)且將混合物在室溫下攪拌2小時。蒸發溶劑且用醚濕磨殘餘物質。收集所得固體，用醚洗滌且在氮氣流下乾燥以得到標題化合物(15mg，產率：96%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 2.90(br.s.,6 H)3.15-3.22(m,2 H)3.33-3.41(m,4 H)3.94(s,6 H)5.74-5.79(m,1 H)6.17(s,1 H)6.32-6.44(m,2 H)6.81(s,1 H)6.92-6.98(m,1 H)7.35(d,2 H)8.32(d,1 H)；ESI-MS：644[M+H]+。
實例-162
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-氟苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸酯
T遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-氟-6-硝基苯胺、Pd(dba)2、Brettphos及第三丁醇鈉以得到游離鹼，其轉化成TFA鹽。將游離鹼溶解於DCM中且添加1當量之TFA。蒸發混合物且用醚濕磨得到標題化合物(47mg，產率：四個步驟中為22%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.30(s,3 H)3.93(s,6 H)5.72-5.78(m,2 H)6.21-6.29(m,1 H)6.23(d,1 H)6.27(d,1 H)6.32-6.40(m,1 H)6.56(dd,1 H)6.90(s,1 H)7.10(t,1 H)7.25-7.37(m,1 H)7.76(d,1 H)8.32(s,1 H)8.89(s,1 H)9.66(s,1 H)11.96(s,1 H)；ESI-MS：535[M+H]+。
實例-163
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(2-(二甲胺基)乙基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸酯
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為4-胺基-3-硝基苯乙基氨基甲酸第三丁酯(程序展示如下)、Pd(dba)2及Brettphos以得到游離末端胺之粗產物TFA鹽，其照原樣用於以下額外步驟中：將甲醛(5.1μl，0.068mmol)添加至N-(5-(2-胺基乙基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3-(羥基甲基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸酯(9.2mg，0.014mmol)於THF(1.0ml)及MeOH(1.0ml)中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌10分鐘。添加氰基硼氫化鈉(3.4mg，0.055mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。蒸發溶劑且添加飽和NaHCO3溶液。用 DCM萃取混合物三次。使經合併之有機層經Na2SO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用10%至70%之DCM中之MeOH溶離來純化殘餘物質以得到游離鹼。將TFA(11μl，0.014mmol)添加至游離鹼於DCM中之溶液中。蒸發溶劑且在高度真空下乾燥以得到標題化合物(6.3mg，產率：66%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 2.97(s,6 H)3.10(dd,2 H)3.34(s,3 H)3.45(dd,2 H)3.94(s,6 H)4.63-4.63(m,1 H)5.76-5.81(m,1 H)6.31-6.48(m,3 H)6.81(s,1 H)7.25(dd,1 H)7.55(d,1 H)7.62-7.72(m,1 H)8.35(s,1 H)；ESI-MS：588[M+H]。
製備4-胺基-3-硝基苯乙基胺基甲酸第三丁酯
a. 4-氟-3-硝基苯乙基胺基甲酸第三丁酯
將2-(4-氟苯基)乙胺(1.0g，7.2mmol)溶解於濃H2SO4(4.0ml，75mmol)中且經冰浴冷卻。將發煙HNO3(0.48ml，10.8mmol)謹慎地逐滴添加至混合物中。將反應混合物攪拌冷卻45分鐘且傾入至冰中。用3M NaOH溶液(60ml，180mmol)鹼化混合物且用DCM萃取鹼性溶液三次。將經合併之有機層經Na2SO4乾燥且蒸發以得到粗胺。將粗物質溶解於THF(15.0ml)中。添加二碳酸二-第三丁酯(1.7g，7.9mmol)及DIEA(2.5ml，14.4mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌12小時。將反應混合物傾入至水中且用EtOAc萃取。將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用0%至20%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(569mg，產率：28%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.44(s,9 H)2.88(t,2 H)3.40(d,2 H)7.24(t,1 H)7.42-7.54(m,1 H)7.89(dd,1 H)。
b. 4-胺基-3-硝基苯乙基胺基甲酸第三丁酯
將4-氟-3-硝基苯乙基胺基甲酸第三丁酯(569mg，2.00mmol)攪拌於THF(2.64ml)中。添加NH4OH(2.50ml，17.97mmol)且使用微波爐(Biotage Initiator)將反應混合物在150℃下加熱30分鐘。添加NH4OH(0.600ml)，且隨後在180℃下加熱。冷卻至室溫後，將反應混合物傾入至EtOAc/水中。將有機層用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用0%至30%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(257mg，產率：46%)1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.44(s,9 H)2.73(t,J=7.03Hz,2 H)3.34(m,2 H)4.46-4.62(m,1 H)6.78(d,J=8.53Hz,1 H)7.24(dd,J=8.53,1.76Hz,1 H)7.94(d,J=1.76Hz,1 H)。
實例-164
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(2-(二甲胺基)乙基)苯基)丙烯醯胺2,2,2-三氟乙酸酯
遵循程序2L(實例157)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-硝基-4-(2-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)乙氧基)苯胺(製備展示如下)及第三丁醇鈉以得到標題化合物(7mg，產率：歷經四個步驟為2.7%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.28(s,3 H)3.88-3.97(m,8 H)4.06-4.14(m,2 H)5.76(dd,1 H)6.12(s,1 H)6.32-6.46(m,2 H)6.79(s,1 H)6.91(dd,1 H)7.34-7.41(m,2 H)8.31(d,1 H)；ESI-MS：577[M+H]+。
製備2-硝基-4-(2-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)乙氧基)苯胺
a. 2-硝基-4-(2-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)乙氧基)苯胺
將4-胺基-3-硝基苯酚(2.0g，12.977mmol)溶解於DMF(20ml)中且添加碳酸鉀(3.59g，25.953mmol)。將2-(2-溴乙氧基)四氫-2H-哌喃(2.55ml，16.87mmol)添加至混合物中且將反應混合物在50℃下攪拌6小時，且隨後在室溫下攪拌3天。將反應混合物傾入至EtOAc/鹽水中。用EtOAc萃取水層兩次。將經合併之有機層用鹽水洗滌三次、經MgSO4乾燥且蒸發。藉由急驟層析法在矽石上用5%至40%之EtOAc/己烷溶離來純化所得物質以得到標題化合物(1.4g，產率：38%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.51-1.68(m,4 H)1.71-1.89(m,2 H)3.46-3.61(m,1 H)3.72-3.99(m,2 H)4.03-4.24(m,3 H)4.64-4.79(m,1 H)6.78(d,1 H)7.09-7.17(m,1 H)7.60(d,1 H)。
實例-165
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-甲基苯基)丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-甲基-6-硝基苯胺、Pd(dba)2、Brettphos及第三丁醇鈉以得到標題化合物(3.0mg，產率：五個步驟中為6%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.52(m,3 H)3.95(m,6 H)5.69(dd,1 H)6.21(dd,1 H)6.46(dd,1 H)6.64(d,1 H)6.73(d,1 H)6.82(s,1 H)7.11(t,1 H)8.06(d,1 H)8.55(d,1 H)；ESI-MS：531[M+H]+。
實例-166
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-3-甲氧苯基)丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-甲氧基-6-硝基苯胺、Pd(dba)2、Brettphos及第三丁醇鈉以得到標題化合物(33.0mg，產率：五個步驟中為6.1%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.76(s,3 H)3.93(s,6 H)5.70(dd,1 H)6.23(d,1 H)6.52(d,1 H)6.88-6.95(m,2 H)7.27(t,1 H)7.44-7.56(m,1 H)8.28(s,1 H)8.57(br.s.,1 H)9.40-9.57(m,1 H)12.15(s,1 H)；ESI-MS：547[M+H]+。
實例-167
N-(3-氯-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-氯-6-硝基苯胺、Pd(dba)2、Brettphos及第三丁醇鈉以得到標題化合物(11.0mg，產率：五個步驟中之5%)。1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.29(s,3 H)3.94(s,6 H)5.71-5.75(m,1 H)6.23(dd,1 H)6.56(dd,1 H)6.90(s,1 H)7.31-7.39(m,2 H)7.94(d,1 H)8.30(s,1 H)9.01(s,1 H)9.51-9.70(m,1 H)12.04(s,1 H)；ESI-MS：551[M+H]+。
實例-168
製備N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺TFA鹽
遵循實例161中所概述之途徑合成化合物，在步驟(a)中替換為2- ((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙醛以得到標題化合物(13mg，產率：兩個步驟為42%)1H-NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 3.14-3.20(m2 H)3.35-3.37(m,2H)3.73-3.76(m,2 H)3.84-3.96(m,10 H)5.75-5.79(m,1 H)6.24(s,1 H)6.37-6.47(m,2 H)6.81(s,1 H)6.99(dd,1 H)7.37-7.46(m,2 H)8.34-8.36(m,1 H)；ESI-MS：645[M+H]+。
實例-170
(E)-3-氯-N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2A(實例100)中所概述之途徑合成標題化合物，將步驟(i)修改為以下程序：將2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物(0.023ml，0.039mmol，於溶液中之50% EtOAc)添加至1-(6-((2-胺基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(10mg，0.022mmol)、三乙胺(10.9mg，0.11mmol)及(E)-3-氯丙烯酸(2.76mg，0.026mmol)於冷卻至0℃之DCM(0.4ml，6.22mmol)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌4h且濃縮。藉由矽膠急驟層析法純化殘餘物以獲得標題化合物(7.2mg，產率：61%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.30(s,3 H)3.90(s,6 H)6.02(s,1 H)6.36(d,J=12.92Hz,1 H)6.49(s,1 H)7.21-7.33(m,2 H)7.36-7.50(m,2 H)7.75(d,J=6.53Hz,1 H)7.93(br.s.,1 H)8.41(s,1 H)12.50(s,1 H)；MS(ESI)：551.0[M+H]+。
實例-171
(Z)-3-氯-N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2A(實例100)中所概述之途徑合成標題化合物，將步驟(i)修改為以下程序：將2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物(49mg，0.78mmmol，50%之EtOAc溶液)添加至1-(6-((2-胺基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(20mg，0.043mmol)、三乙胺(21.8mg，0.22mmol)及(Z)-3-氯丙烯酸(5.5mg，0.052mmol)於冷卻至0℃之DCM(0.86ml，13.3mmol)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌2h且濃縮。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物以獲得標題化合物(15mg，產率：63%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ X；MS(ESI)：551.0[M+H]+。
實例-172
(Z)-N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丁-2-醯胺
遵循程序2A(實例100)中所概述之途徑合成標題化合物，將步驟(i)修改為以下程序：在0℃下，將2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物溶液(49.4mg，0.78mmol，50%之EtOAc溶 液)添加至1-(6-((2-胺基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(20mg，0.043mmol)、三乙胺(21.8mg，0.22mmol)及(Z)-丁-2-烯酸(4.5mg，0.052mmol)於DCM(0.86ml，13.3mmol)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌2h。濃縮混合物且藉由矽膠管柱純化殘餘物以獲得標題化合物(8.5mg，產率：37%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 2.20(dd,J=7.28,1.76Hz,3 H)3.30(s,3 H)3.92(s,6 H)5.85(dd,J=11.42,1.76Hz,1 H)5.99(s,1 H)6.29(dd,J=11.36,7.34Hz,1 H)6.52(s,1 H)7.23-7.34(m,2 H)7.46(d,J=7.40Hz,1 H)7.55(br.s.,1 H)7.78(d,J=7.53Hz,1 H)8.40(d,J=0.88Hz,1 H)12.50(s,1 H)；MS(ESI)：531.3[M+H]+。
實例-175
(S,Z)-N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)-4-羥基戊烯-2-醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為2-硝基苯胺且在步驟(g)中替換為甲基丙烯醯氯以得到標題化合物(13mg，產率：72%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)2.03(br.s.,3 H)3.31(s,3 H)3.92(s,6 H)5.49(s,1 H)5.81(s,1 H)6.00(s,1 H)6.53(s,1 H)7.29(m,3 H)7.44(d,J=7.91Hz,1 H)7.83(d,J=7.53Hz,1 H)7.92(s,1 H)8.41(s,1 H)12.34(s,1 H)。MS(ESI)：531.1[M+H]+。
實例-181
(Z)-3-氯-N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯醯胺
遵循程序2C(實例108)中所概述之途徑合成標題化合物，將步驟(g)修改為以下程序：在0℃下將2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物溶液(21.9mg，0.034mmol)添加至1-(6-((2-胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲(11mg，0.019mmol)、三乙胺(9.67mg，0.096mmol)及(Z)-3-氯丙烯酸(2.43mg，0.023mmol)於DCM(0.4ml，6.21mmol)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌30min。濃縮混合物且藉由矽膠管柱純化殘餘物以獲得標題化合物(7.5mg，產率：59%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 1.29(t,J=8.0Hz,3 H)2.90(br.s.,4 H)3.27(s,3 H)3.45(t,J=4.64Hz,4 H)3.91(s,6 H)5.90(s,1 H)6.32(d,J=8.41Hz,1 H)6.52(s,1 H)6.59(d,J=8.41Hz,1 H)6.73(dd,J=8.78,2.76Hz,1 H)7.09(br.s.,1H)7.24(s,2 H)7.83(br.s.,1 H)8.36(s,1 H)8.69(br.s.,1 H)12.52(s,1 H)；MS(ESI)：663.1[M+H]+。
實例-185
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)胺基)-6-氟苯基)丙烯醯胺
遵循程序2G(實例123)中所概述之途徑合成化合物，在步驟(d)中替換為3-氟-2-硝基苯胺，省略步驟(e)且將步驟(g)修改為以下程序：在0℃下將2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物溶液(48.1mg，0.076mmol，50%之EtOAc溶液)添加至1-(6-((2-胺基-3-甲基苯基)胺基)嘧啶-4-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)脲(31mg，0.051mmol)、二異丙基乙胺(13.1mg，0.103mmol)及丙烯酸(39.9mg，0.055mmol)於DCM(1ml，15.54mmol)中之溶液中，且將所得混合物在室溫下攪拌2h。濃縮混合物且藉由矽膠管柱純化殘餘物以獲得SEM保護標題化合物(24mg，產率：三個步驟中為71%)。遵循最終步驟(g)，分離標題化合物(12mg，產率：62%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.40(s,3 H)3.93(m,6 H)5.91(d,1 H)6.20(s,1 H)6.30-6.45(m,1 H)6.50-6.58(m,2 H)7.01(t,1 H)7.28-7.35(m,1 H)7.42-7.63(m,2 H)8.41(s,1 H)12.43(br.s.,1 H)；ESI-MS：535[M+H]+。
生物活性分析
與FGFR4結合之分析.用10μM化合物預培育經純化之重組FGFR4在4℃下隔夜或在室溫下持續1小時。預培育之後，使用SDS-PAGE分離蛋白質樣品且用SimplyBlueTM SafeStain(Life Technologies,Grand Island,New York)使凝膠染色。切出FGFR條帶且使用凝膠內胰蛋白酶分解套組(Thermo Scientific,Waltham,Massachusetts)將其分解。在Thermo Scientific Q ExactiveTM LCMS上使用逆相分離及聯合質譜分析法操作經分解之樣品以識別經修飾肽。
或者，預培育之後，在OPTI-TRAP蛋白質濃縮及脫鹽C4管柱(Optimize Technologies)上濃縮FGFR4且更換緩衝液。使蛋白質溶離於 含有0.1%甲酸之乙腈中且藉由直接注射於Thermo Scientific Q ExactiveTM LCMS上來操作以識別經修飾之完整FGFR4。
如下提供於表2中之結果藉由肽-配位體加合物之質量預期值與質量觀測值相符合來確認所測試之化合物與肽之之共價加合物形成。
激酶活性抑制之IC 50 剖析.在Reaction Biology Corporation(Malvern,Pennsylvania)使用其Kinase HotSpotSM分析法剖析化合物之FGFR抑制活性。參見，Anastassiadis等人，2011,Comprehensive assay of kinase catalytic activity reveals features of kinase inhibitor selectivity.Nat Biotechnol 29,1039-1045。
將重組FGFR1(2.5nM)、FGFR2(1nM)、FGFR3(5nM)或FGFR4(12nM)(InvitrogenTM)製備成與受質KKKSPGEYVNIEFG(SEQ ID NO：1)(20μM，FGFR1受質)及激酶反應緩衝液(20mM HEPES-HCl(pH 7.5)、10mM MgCl2、2mM MnCl2、1mM EGTA、0.02% Brij35、0.1mM Na3VO4、0.02mg/ml BSA、2mM DTT及1% DMSO)中之聚[E,Y]4：1(0.2mg/ml，FGFR2、FGFR3、FGFR4受質)]的混合物。使用聲學技術(Labcyte® Echo 550,Sunnyvale,California)將化合物添加至酶/受質混合物中(參見，Olechno等人，2006,Improving IC50results with acoustic droplet ejection.JALA 11,240-246)且將其在室溫下預培育0、15或60分鐘。在化合物預培育之後，將ATP(Sigma-Aldrich®)與33P-γ-ATP(PerkinElmer)之混合物添加至10μM之最終濃縮物中以引發激酶反應。將反應物在室溫下培育120分鐘，且隨後點樣於WhatmanTM P81離子交換濾紙上。藉由在0.75%之磷酸中充分洗滌 過濾器來移除未結合的磷酸酯。參見，Anastassiadis等人，2011,Comprehensive assay of kinase catalytic activity reveals features of kinase inhibitor selectivity.Nat Biotechnol 29,1039-1045。
緊鄰上表1中所列出之個別化合物展示FGFR4及FGFR1之結果。化合物展示FGFR4之選擇性抑制，相對於FGFR1其具有更高的IC50值。
在不希望受理論束縛之情況下，相對於FGFR1之IC50活性一般代表相對於FGFR1、FGFR2及FGFR3之活性。亦參見，Dieci等人，2013,Fibroblast Growth Factor Receptor Inhibitors as a Cancer Treatment：From a Biologic Rationale to Medical Perspectives.Cancer Discovery,F1-F16。
為了確認，亦測試一些化合物之FGFR2及FGFR3抑制。如下展示於表3中之此等結果與一般代表FGFR1、FGFR2及FGFR3之活性的FGFR1之IC50活性一致，且進一步表明此等FGFR4抑制劑之選擇性。
腫瘤模型中之活體內功效.評估化合物108之抑制攜有三種不同人類肝細胞癌腫瘤細胞株之腫瘤異種移植物之裸小鼠體內之腫瘤生長的能力。此等細胞株代表具有改變的FGFR4及/或FGF19狀態之癌症。參見Sawey等人，Cancer Cell 19(3)：347-358(2011)。
動物：裸小鼠，6至8週齡且重約19g至25g，其係購自Taconic(Taconic,Hudson,New York)。所有動物實驗均根據機構動物護理及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)所批准之方案進行。
腫瘤異種移植物及處理：將各呈100μl之總體積之7.5×106 HUH7細胞(HSRRB目錄號JCRB0403)、5×106 Hep3B(ATCC目錄號HB8064)或2.5×106 JHH7細胞(HSRRB目錄號JCRB1031)、1：1 Matrigel(Corning Inc,Corning,NY)皮下(s.c.)注射至右側腹中。當腫瘤達到150mm3至200mm3時，將小鼠隨機分成具有5至10隻動物之處理組。藉由使用化合物108以規定劑量腹膜內注射15天進行每日兩次之給藥，化合物108以所需濃度調配於5% DMSO(Alfa Aesar,Ward Hill,MA)、10% PEG300(Sigma,St.Louis,MO)、8% TWEEN® 80(Sigma,St.Louis,MO)、77% USP鹽水之媒劑中。使用公式體積=(長度*寬度2)/2每週採集兩次腫瘤體積。同樣每週採集兩次體重。根據The Guide for Care and Use of Laboratory Animals，第8版(National Academies Press,Washington D.C.)觀測且護理所有動物。
統計方法：在實驗結束時使用重複量測變異數分析(Repeated Measures Anova)進行統計比較，該分析具有使用GraphPad Prism 5之用於比較處理組之Bonferroni後測試。使用以下準則來測定疾病進展、疾病穩定、部分消退及完全消退。疾病進展定義為自最佳反應不斷增加或>120%初始腫瘤體積之三個連續量測值。疾病穩定為<120%且>50%初始腫瘤體積之三個連續量測值，而<50%初始腫瘤體積之三個連續量測值限定為部分消退。完全消退為<30mm3之三個連續量測值。使用卡方測試(Chi-squared test)比較處理組之間的反應(Microsoft Excel)。
攜有來自HUH7、HEP3B及JHH7癌細胞之腫瘤的動物之結果分別展示於圖1至圖3中且亦反映於表4中。
表4-FGF19擴增HCC異種移植物中腫瘤生長之抑制
此等資料表明化合物108在所有模型中均有效。在三個模型中，HEP3B最敏感，JHH7最不敏感且HUH7展示對化合物108之中等敏感性。雖然JHH7之劑量反應在圖3中可見，但在測試的所有劑量中均存在疾病進展。
化合物108與BGJ398之比較研究。對化合物108及已知FGFR抑制劑BJG398進行比較研究。
獲得IC 50 值之生物化學激酶分析方案：將重組FGFR1(2.5nM)或FGFR4(12nM)製備成與受質KKKSPGEYVNIEFG(SEQ ID NO：1)(20μM，FGFR1受質)、激酶反應緩衝液(20mM HEPES-HCl(pH 7.5)、10mM MgCl2、2mM MnCl2、1mM EGTA、0.02% Brij35、0.1mM Na3VO4、0.02mg/ml BSA、2mM DTT及1% DMSO)中之聚[E,Y]4：1(0.2mg/ml，FGFR2、FGFR3、FGFR4受質)]的混合物。使用聲學技術將化合物添加至酶/受質混合物中且在室溫下預培育0、15或60分鐘。在化合物預培育之後，將33P-γ-ATP添加至10μM之最終濃縮物中以引發激酶反應。將反應物在室溫下培育120分鐘。藉由如上所述之過濾分析法監測受質磷酸化。結果展示於表5中。所報導之結果展示化合物108為更強效的FGFR4抑制劑，而BGJ398為更強效的FGFR1抑制 劑。
獲得GI 50 值之細胞成活力分析方案：在37℃、5%之CO2及95%之濕度下培養細胞株。培養基係購自GIBCO®,USA。就成活力分析而言，將2000個細胞/孔接種於96孔板中，在化合物處理之前培育24h。添加化合物之後，將板在37℃及5% CO2下培育72小時，且隨後藉助於CTG分析法(CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay，目錄號：G7572,Promega)進行量測。結果展示於表6中。該表展示化合物108與BGJ398相比在作為FGF19擴增株之Hep3B細胞中更加強效。在作為其他兩個FGF19擴增株之HUH7及JHH7中之效能為在化合物108與BGJ398之間可比較的。HepG2(ATCC目錄號HB-8065)、SNU398(ATCC目錄號CRL-2233)及SNU449(ATCC目錄號CRL-2234)為用作對照組之FGF19非擴增細胞株。
GI50值為測試藥物之濃度，其中100×(T-T0)/(C-T0)=50。參見例如，Monks等人，Feasibility of a High-Flux Anticancer Drug Screen Using a Diverse Panel of Cultured Human Tumor Cell Lines,J Natl Cancer Inst(1991)83(11)：757-766；Boyd等人，Data Display and Analysis Strategies for the NCI Disease-oriented In Vitro Antitumor Drug Screen,in CYTOTOXIC ANTICANCER DRUGS：MODELS AND CONCEPTS FOR DRUG DISCOVERY AND DEVELOPMENT,Valeriote等人，編(1990)，第11至34頁。在暴露於測試藥物72h之時間之後，測試孔之發光為T，在零點時間之發光為T0且對照組發光為C。GI50值量測測試藥劑之生長抑制能力。
活體內功效比較：裸小鼠用於如上所述之此等實驗中。將總體積100μl之5.0×106 Hep3B細胞、1：1 Matrigel(Corning Inc,Corning,New York)皮下注射至右側腹中。當腫瘤達到150mm3至200mm3時，將小鼠隨機分成具有5至10隻動物之處理組。隨後使用化合物108開始處理，該化合物108以所需濃度調配於5% DMSO(Alfa Aesar,Ward Hill,MA)、10% PEG300(Sigma,St.Louis,MO)、8% TWEEN® 80(Sigma,St.Louis,MO)、77% USP鹽水之媒劑中。調配為於0.5%甲基纖維素(Sigma)/0.2% TWEEN® 80中之懸浮液之BGJ398在所需濃度下懸浮。除一個治療組以外，兩種藥物均給藥18天(參見下文)。使用公式體積=(長度*寬度2)/2每週採集兩次腫瘤體積。同樣每週採集兩次體重。根據The Guide for Care and Use of Laboratory Animals，第8版(National Academies Press,Washington D.C.)觀測且護理所有動物。此比較性活體內研究之結果展示於圖4中。
資料展示與BGJ398相比，在可耐受劑量下之化合物108更有效。雖然60mg/kg之BGJ398展示與化合物108相當的功效，但由於動物健康狀況不佳，此BGJ398 60mg/kg組之給藥在第11天時必須終止。此毒性差異並不歸因於投與途徑，因為30mg/kg之BGJ398之經口給藥之動物組未展現不佳的健康狀況。
前述內容說明本發明且不應被解釋為其限制。藉由以下申請專利範圍定義本發明，申請專利範圍之等效物包括在其中。
<110> 日商衛材R&D企管股份有限公司 雷諾,多明尼克 郝,明宏 王,約翰 普瑞札趴提,蘇迪普 佐藤,隆志 薩奧瓦拉,安南
<120> 纖維母細胞受體4(FGFR4)抑制劑
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<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> FGFR1受質
<400> 1

Claims (32)

  1. 一種式I化合物， 其中：R3係選自由以下各基團組成之群：C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、NR10R11C1-6烷基、R10雜環基C1-6烷基、R10芳基C1-6烷基及R10雜芳基C1-6烷基，其中R10及R11各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫及C1-6烷基；E係選自由以下各基團組成之群：-NR13C(O)CR14=CHR15，及-NR13C(O)C≡CR14，其中R13係選自由以下各基團組成之群：氫及甲基，且R14及R15各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、甲基、氟基及氯基；R12係選自由以下各基團組成之群：氫、鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、R5R6雜環基、-C(O)雜環基R5R6、R5R6雜環基C1-6烷基、NR5R6、NR5R6C1-6烷基、-C(O)NR5R6及NR5R6C1-6烷氧基，其中R5及R6各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、胺基C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基及C1-6烷基磺醯基；及R1為苯基，其中該苯基經獨立選擇的鹵基或C1-6烷氧基取代 2、3或4次，其中，雜芳基係指具有一或多個閉合環之環狀部分，在該等環中之至少一者中具有一或多個雜原子(氧、氮或硫)，其中該等環中之至少一者為芳族，且其中該環或該等環可獨立地經稠合及/或橋連；雜環基係指在環中含有至少一個雜原子之單環雜環、雙環雜環或三環雜環；且芳基係指具有一或多個閉合環之芳族碳環部分，或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中R3為C1-6烷基或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 如請求項1之化合物，其中R3係選自由以下各基團組成之群：甲基、甲氧基乙基、4-吡啶基甲基、3-吡啶基甲基、2-吡啶基甲基、苄基、N,N-二甲胺基丙基、3-甲基異噁唑-5-基-甲基及4-甲基哌嗪-1-基-丙基或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中E為-NR13C(O)CH=CHR15或-NR13C(O)CF=CH2，其中R13及R15如上文所定義或其醫藥學上可接受之鹽。
  5. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中E為-NHC(O)CH=CH2或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R12係選自由以下各基團組成之群：氫、氟基、氯基、甲基、甲氧基、N,N-二甲胺基乙基、哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基-甲基、1-甲基哌啶-4-基、1-乙基哌啶-4-基、N,N-二甲胺基甲基、N,N-二甲胺基丙基、哌啶-4-基、N-嗎啉基、3,5-二甲基哌嗪-1-基、4-(甲磺醯基)哌嗪-1-基、N,N-二甲胺基乙氧基、4-(2-羥基乙基)哌嗪- 1-基、羥基乙氧基、甲氧基乙氧基、羥基甲基、甲氧基甲基、2-甲氧基丙基、2-羥丙基、2-胺基丙基、4-甲基哌嗪-1-基-羰基、4-乙基哌嗪-1-基-羰基、4-[2-丙基]哌嗪-1-基、4-乙醯基哌嗪-1-基、N-甲基-N-羥基乙基-胺基、N,N-二甲基醯胺基及4-(2-胺基乙基)哌嗪-1-基或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R12係選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、R5R6雜環基、R5R6雜環基C1-6烷基、-C(O)NR5R6、NR5R6C1-6烷基、NR5R6C1-6烷氧基、C1-6烷氧基及C1-6烷氧基C1-6烷基，其中R5及R6各獨立地選自由以下各基團組成之群：氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基及C1-6烷基磺醯基或其醫藥學上可接受之鹽。
  8. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R12為R5R6雜環基，其中R5及R6如上文所定義或其醫藥學上可接受之鹽。
  9. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R5R6雜環基為R5R6哌嗪基，其中R5及R6如上文所定義或其醫藥學上可接受之鹽。
  10. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R12為4-乙基哌嗪-1-基或其醫藥學上可接受之鹽。
  11. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R12不為氫或其醫藥學上可接受之鹽。
  12. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R1為2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基或其醫藥學上可接受之鹽。
  13. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中該化合物為式I(a)化合物： I(a)其中R3、E、R12及R1如上文所定義，或其醫藥學上可接受之鹽。
  14. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群： 或其醫藥學上可接受之鹽。
  15. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群： 或其醫藥學上可接受之鹽。
  16. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群： 或其醫藥學上可接受之鹽。
  17. 如請求項1之化合物，其為： 或其醫藥學上可接受之鹽。
  18. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至3、14至17中任一項之化合物或鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  19. 如請求項18之醫藥組合物，其中該組合物經調配以便於經口、 靜脈內或皮下投與。
  20. 一種如請求項1至3、14至17中任一項之化合物或鹽之用途，其用於製備藥物。
  21. 如請求項20之用途，其中該藥物係用於治療肝細胞癌。
  22. 如請求項21之用途，其中該肝細胞癌具有改變的FGF19狀態。
  23. 如請求項22之用途，其中該改變的FGF19狀態包含FGF19之表現增加。
  24. 一種如請求項18之醫藥組合物之用途，其係用於製備治療肝細胞癌之藥物。
  25. 如請求項24之用途，其中該肝細胞癌具有改變的FGF19狀態。
  26. 如請求項25之用途，其中該改變的FGF19狀態係FGF19之表現增加。
  27. 一種如請求項18之醫藥組合物之用途，其係用於製備治療肝內膽管癌之藥物。
  28. 如請求項27之用途，其中該肝內膽管癌具有改變的FGF19狀態。
  29. 如請求項28之用途，其中該改變的FGF19狀態係FGF19之表現增加。
  30. 如請求項20之用途，其中該藥物係治療肝內膽管癌。
  31. 如請求項30之用途，其中該肝內膽管癌具有改變的FGF19狀態。
  32. 如請求項31之用途，其中該改變的FGF19狀態係FGF19之表現增加。
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