TW202228692A - 癌症治療用醫藥 - Google Patents

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高橋恒太
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Abstract

本發明係提供相較於既存的FGFR4選擇性酪胺酸激酶阻礙劑而言可發揮更強力且持續的抗腫瘤效果之癌症的治療藥或治療方法等。本發明為一種用於治療癌症之組合醫藥，其特徵為包含阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及在活體內( in vivo)具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。

Description

癌症治療用醫藥
本發明係關於癌症治療用醫藥及方法等。
在各種癌症之中，肝癌為全世界中之癌症相關死亡原因的第2位，在世界上，一年之間約75萬人因肝癌而亡故。一年之間新患者數約78萬人的約80%係集中於包含日本及中國在內之亞洲地區。肝細胞癌佔肝癌整體的85~90%，在日本國內，肝細胞癌的患者數經報導約4萬2千人，一年之間死亡數經報導約2萬6千人。無法切除之肝細胞癌係治療方法受限，其係預後極差，未被滿足的醫療需求(unmet medical needs)較高的疾患。 作為針對於無法切除之進行性肝細胞癌之治療藥，係使用針對於複數種受體酪胺酸激酶之多重激酶阻礙劑。具體而言，作為第1選擇藥，係使用索拉非尼(Sorafenib)或樂伐替尼(Lenvatinib)，作為第2選擇藥，係使用瑞格非尼(Regorafenib)或卡博替尼(Cabozantinib)，但效果有限。
在肝癌中，在約30%的患者中，已報導有纖維母細胞增殖因子(FGF)-19的過量表現(非專利文獻1及非專利文獻2)，已報導從肝癌細胞過量地分泌之FGF-19自泌性地作用於屬於其受體之纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)，由於過量地活化肝癌細胞的FGFR4，而使肝癌細胞的增殖發生亢進，使肝癌惡化。屬於針對於FGF之酪胺酸激酶受體之纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)係參與多樣的細胞過程，包含細胞增殖、分化、遊走、代謝及膽汁酸生合成的調節，FGFR4的高度活化係與其作用為促進癌症的發生及進行之癌症基因之許多種類的實體腫瘤及血液惡性腫瘤中之其特異性配體FGF19的增幅強烈相關。此外，就已惡性化之癌症而言，起因於屬於配體之FGF19的過量表現而發生在癌細胞中進行表現之FGFR4的過量活化之結果，使癌細胞的細胞增殖、分化、遊走、代謝等多樣的細胞過程發生亢進，例如肝癌的患者中之30%為此狀態。目前，對於肝細胞癌，以FGFR4作為標的分子之5種阻礙劑係處於臨床開發階段(非專利文獻2)。5種之中，3種(FGF401、H3B-6527、BLU-554)為低分子的TKI(酪胺酸激酶阻礙劑)，皆屬特異性結合至在FGFR4特異性ATP結合區域之Cys552而阻礙激酶活性之作用機制。該等FGFR4選擇性低分子酪胺酸激酶阻礙劑係已進行以FGF-19過量表現或表現出FGFR4之進行性肝細胞癌的患者為對象之臨床試驗。針對所有FGFR4阻礙劑，由於屬I期或I/II期的開發階段，因而針對藥效之情報受限，但上述各阻礙劑就單獨療法而言之治療效果皆有限。 [先前技術文獻]
非專利文獻1：Diseases 2015, 3, 294-305 非專利文獻2：Cells. 2019, 8, 536
在此種狀況下，期望開發出對於各種癌症，特定而言，以肝細胞癌為首之FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症，相較於既存的FGFR4選擇性酪胺酸激酶阻礙劑而言可發揮更強力且持續的抗腫瘤效果之癌症的治療藥或治療方法等。
本發明係考慮到上述狀況而完成，其提供以下所示之癌症治療用組合醫藥等。 (1)一種用於治療癌症之組合醫藥，其包含 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內( in vivo)具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。 (2)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段， 前述醫藥組成物係與阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物組合使用。
(3)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物， 前述醫藥組成物係與在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段組合使用。 (4)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段， 前述治療包含投予阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物。
(5)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物， 前述治療包含投予在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。 (6)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質為H3B-6527、FGF-401(羅匹替尼(Roblitinib))或BLU-554(非索替尼(Fisogatinib))。
(7)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，前述癌症及/或前述腫瘤為FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症。 (8)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，前述癌症及/或前述腫瘤為選自由肝細胞癌、肺癌、子宮體癌、膽管癌、肝內膽管癌、食道癌、鼻咽癌、卵巢癌、乳癌、腎細胞癌、胰臟癌、結腸癌及膠質母細胞瘤以及包含橫紋肌肉瘤在內之肉瘤所組成之群組之至少1種。 (9)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，前述抗體為嵌合抗體或人類化抗體。
(10)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，前述抗體為選自由下列者所組成之群組之至少1種： (a)H鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：3~5所示之胺基酸序列，且L鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：6~8所示之胺基酸序列之抗體， (b)H鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：9~11所示之胺基酸序列，且L鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：12~14所示之胺基酸序列之抗體， (c)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：16所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：18所示之胺基酸序列所構成之抗體， (d)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：20所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：22所示之胺基酸序列所構成之抗體， (e)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：24或26所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：28所示之胺基酸序列所構成之抗體， (f)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：30、32、34或36所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：46所示之胺基酸序列所構成之抗體， (g)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：38、40、42或44所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：46所示之胺基酸序列所構成之抗體， (h)由寄存編號為FERM BP-10899之融合瘤所產生之抗體， (i)由寄存編號為FERM BP-10707之融合瘤所產生之抗體， (j)由寄存編號為FERM BP-10900之融合瘤所產生之抗體，及 (k)由寄存編號為FERM BP-11337之融合瘤所產生之抗體。
(11)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，前述抗體或抗體片段係呈與具有抗腫瘤活性及/或殺細胞活性之化合物之複合體的形態。 (12)如上述(1)所記載之組合醫藥或上述(2)~(5)中任一項所記載之醫藥組成物，其中，即便在前述組合醫藥或醫藥組成物的投藥結束後，亦可抑制癌細胞的增殖或者使腫瘤縮小或消失。 (13)一種下述者在製備癌症治療用藥劑的用途： 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
(14)一種癌症的治療方法，其特徵為將下列者投予至被驗對象： 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。 (15)一種用於治療癌症之套組，其包含 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。 (16)如上述(13)所記載之用途、上述(14)所記載之方法或上述(15)所記載之套組，其中，前述癌症及/或前述腫瘤為FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症。 [發明效果]
根據本發明，可提供關於癌症的治療，特定而言，FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症的治療，相較於既存的酪胺酸激酶阻礙劑而言可發揮更強力且持續的抗腫瘤效果之治療藥及治療方法等。本發明之治療藥及治療方法等在例如即便對迄今為止無法期待治療效果之患者亦可發揮效果之方面而言係極為有用。
以下，對本發明詳細地進行說明。本發明的範圍不拘於此等說明，針對以下例示以外者，亦可在無損本發明的意旨之範圍中適宜變更並實施。另外，本說明書含括成為本案優先權主張的基礎之日本專利特願2020-168522號說明書(2020年10月5日申請)整體。此外，本說明書中所引用之所有刊物，例如先前技術文獻及公開公報、專利公報、其他專利文獻皆併入本說明書中作為參照。
1.本發明的概要 如前述，目前，對於屬於FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症之一例之肝細胞癌，以FGFR4作為標的分子之5種阻礙劑係處於臨床開發階段，其中之3種(FGF-401、H3B-6527、BLU-554)為低分子的TKI(酪胺酸激酶阻礙劑)，皆屬特異性結合至在FGFR4特異性ATP結合區域之Cys552而阻礙激酶活性之作用機制。針對此等低分子酪胺酸激酶阻礙劑，已進行以FGF-19過量表現或表現出FGFR4之進行性肝細胞癌的患者為對象之臨床試驗，由於其皆屬I期或I/II期的開發階段，因而針對藥效之情報受限，但上述各阻礙劑就單獨療法而言之治療效果皆有限。 本發明者為了開發出相較於上述之既存的酪胺酸激酶阻礙劑而言可發揮更強力且持續的抗腫瘤效果之治療藥，係施行經由使用源自人類肝細胞癌之Hep3B細胞株之異種移植治療模型之實驗及檢討。其結果，得知藉由併用投予如上述之FGFR4選擇性酪胺酸激酶阻礙劑及對抗人類DLK-1(delta-like 1 homolog(Drosophila)；以下，有時稱為「hDLK-1」)之抗體，相比於各自單獨投予所引發之情況而言，係發揮持續且明顯較強的腫瘤縮小效果。另外，在針對於纖維母細胞增殖因子受體1、2、3(FGFR1、2、3)之低分子阻礙劑及抗hDLK-1抗體的併用投予下，並未觀察到併用所引發之抗腫瘤效果的增強。
在此處，已知hDLK-1為由383個殘基的胺基酸所構成之1次跨膜型I型膜蛋白質，其在肝細胞癌、小細胞癌、胰臟癌、乳癌等成人癌症，神經母細胞瘤、肝母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、病毒瘤等小兒癌症中表現。在另一方面，在正常的組織、臟器中，DLK-1的表現僅限於腎上腺、腦下垂體等，在大部分的臟器中並未表現，因而適合作為癌症的治療標的分子。迄今為止，已創製顯示出包含優異的腫瘤縮小效果在內之腫瘤細胞增殖阻礙及腫瘤細胞死亡誘導作用之抗hDLK-1單株抗體，在使用包含人類肝癌細胞株在內之複數種人類癌細胞株之異種移植治療模型中，顯示出同一抗體的單獨投予所引發之抗腫瘤活性。 根據本發明者所發現之FGFR4選擇性酪胺酸激酶阻礙劑及抗hDLK-1抗體的併用醫藥/併用療法，即便對僅藉由前述既存的酪胺酸激酶阻礙劑的單獨投予係無法期待充分的治療效果(或不應答)之癌症的患者，亦可期待充分的治療效果。本發明係依此而完成。
2.癌症治療用組合醫藥 本發明之用於治療癌症之組合醫藥(以下，有時稱為「本發明之組合醫藥」)係如前述，其特徵為包含下列者作為有效成分： ・阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質(以下，有時稱為「FGFR4阻礙劑」)或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物(以下，有時稱為「FGFR4阻礙劑等」)，以及 ・在活體內具有抗腫瘤活性之抗hDLK-1抗體或源自於該抗體之抗體片段(以下，有時稱為「抗hDLK-1抗體等」)。
在本發明中，成為治療對象之癌症並無限定，較佳係可列舉FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症。具體而言，較佳係可列舉肝細胞癌、肺癌、子宮體癌、膽管癌、肝內膽管癌、食道癌、鼻咽癌，及卵巢癌、乳癌、腎細胞癌、胰臟癌、結腸癌，及膠質母細胞瘤，以及包含橫紋肌肉瘤在內之肉瘤等。此外，針對抗hDLK-1抗體的抗腫瘤活性中之「腫瘤」，亦無限定，可適用與上述成為治療對象之癌症同樣的說明。
另外，本發明亦包含(i)癌症的治療方法，其包含使用FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等，具體而言，例如將FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等的有效量投予至被驗對象(癌症的患者或有該疑慮(發病風險)之患者，或者該種非人類哺乳動物)；(ii)FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等的用途，其係用於製造癌症治療用藥劑；(iii)FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等的用途，其係用於治療癌症；以及(iv)癌症治療用FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等。 在本發明中，作為癌症的治療，亦包含例如抑制癌症的進行、改善預後及/或防止復發等。
(1)FGFR4阻礙劑等 屬於本發明之組合醫藥的有效成分之FGFR4阻礙劑等只要是具有可阻礙或抑制FGFR4的酪胺酸激酶活性之機能之物質即可，並無限定。作為FGFR4阻礙劑，較佳係可列舉例如H3B-6527、FGF-401(羅匹替尼)及BLU-554(非索替尼)等FGFR4選擇性酪胺酸激酶阻礙劑。此種FGFR4阻礙劑等可使用獨自地合成、萃取及精製等而得者，亦可使用市售者。在獨自地合成等之情況，若為H3B-6527，可參照例如WO2015/057938(compound 108，pages 42-45)的記載等，若為FGF-401，可參照例如WO2015/059668(Example 83)的記載等，若為BLU-554，可參照例如WO2015/061572 A1的記載等。
在此處，H3B-6527係正式名稱(IUPAC名)為N-{2-[(6-{[(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)胺甲醯基](甲基)胺基}-4-嘧啶基)胺基]-5-(4-乙基-1-哌
Figure 110136899-001
基)苯基}丙烯醯胺(N-{2-[(6-{[(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)carbamoyl] (methyl)amino}-4-pyrimidinyl)amino]-5-(4-ethyl-1-piperazinyl) phenyl}acrylamide)，其係以下述結構式表示。
Figure 02_image001
此外，FGF-401(羅匹替尼)係正式名稱(IUPAC名)為N-[5-氰基-4-[(2-甲氧基乙基)胺基]-2-吡啶基]-7-甲醯基-3,4-二氫-6-[(4-甲基-2-側氧基-1-哌
Figure 110136899-001
基)甲基]-1,8-㖠啶-1(2H)-羧醯胺(N-[5-cyano-4-[(2-methoxyethyl) amino]-2-pyridinyl]-7-formyl-3,4-dihydro-6-[(4-methyl-2-oxo-1-piperazinyl)methyl]-1,8-naphthyridine-1(2H)-carboxamide)，其係以下述結構式表示。
Figure 02_image003
此外，BLU-554(非索替尼)係正式名稱(IUPAC名)為N-[(3S,4S)-3-[[6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)喹唑啉-2-基]胺基]氧雜環己-4-基]丙-2-烯醯胺(N-[(3S,4S)-3-[[6-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)quinazolin-2-yl]amino]oxan-4-yl]prop-2-enamide)，其係以下述結構式表示。
Figure 02_image005
作為本發明之組合醫藥的有效成分，亦可與FGFR4阻礙劑共同地使用FGFR4阻礙劑的衍生物，或者使用FGFR4阻礙劑的衍生物來代替FGFR4阻礙劑。作為該衍生物，只要是具有源自FGFR4阻礙劑之化學結構等基於熟習該項技術者的技術常識被認為是FGFR4阻礙劑的衍生物者即可，並無限定，較佳為FGFR4的酪胺酸激酶活性的阻礙或抑制活性係與FGFR4阻礙劑同程度者。在本發明中，在僅稱為FGFR4阻礙劑之情況，亦視為含括FGFR4阻礙劑的衍生物之含意。
作為用於本發明之FGFR4阻礙劑，亦含括例如在生物體內經受氧化、還原、水解或抱合等代謝者，除此以外，亦包含在生物體內經受氧化還原或水解等代謝而生成FGFR4阻礙劑之化合物(所謂的前藥)。在本發明中，所謂前藥，係指藥理學上可容許且以通常在前藥中所使用之基對母化合物進行修飾而得之化合物，例如，係指經賦予安定性或持續性的改善等特性，可期待在腸道內等轉換成母化合物而表現出效果之化合物。例如，FGFR4阻礙劑的前藥可藉由使用對應的鹵化物等前藥化試劑，依常法在從該化合物中之能夠進行前藥化之基(例如羥基、胺基、其他基)中所選出之1個以上任意的基中，依照常法適宜導入構成前藥之基後，視需要進行單離精製而予以製造。在此處，作為上述構成前藥之基，並無限定，較佳係可列舉例如低級烷基-CO-、低級烷基-O-低級伸烷基-CO-、低級烷基-OCO-低級伸烷基-CO-、低級烷基-OCO-及低級烷基-O-低級伸烷基-OCO-等。
作為本發明之組合醫藥的有效成分，亦可與FGFR4阻礙劑或其前藥共同地使用該等的藥理學上可容許的鹽，或者使用該等的藥理學上可容許的鹽來代替FGFR4阻礙劑或其前藥。 作為該藥理學上可容許的鹽，並無限定，較佳係可列舉例如有機磺酸鹽(例如甲烷磺酸鹽(亦稱為甲磺酸鹽)、三氟甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽及樟腦磺酸鹽等)、有機羧酸鹽(例如醋酸鹽、三氟醋酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽及檸檬酸鹽等)、胺基酸鹽(例如天冬胺酸鹽及麩胺酸鹽等)、四級胺鹽、鹼金屬鹽(例如鈉鹽及鉀鹽等)、無機酸鹽(例如硫酸鹽、硝酸鹽、過氯酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽及重碳酸鹽等)、氫鹵酸鹽(例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽及氫碘酸鹽等)、鹼土族金屬鹽(例如鎂鹽及鈣鹽等)等。
用於本發明之FGFR4阻礙劑亦含括在化合物的結構上可產生之所有異構物(例如幾何異構物、基於不對稱碳之光學異構物、旋轉異構物、立體異構物及互變異構物等)及此等異構物中之2種以上之混合物，並不限定於便宜上之結構式的記載等。此外，FGFR4阻礙劑可為S-體，R-體或RS-體中之任何者，並無限定。再者，FGFR4阻礙劑視其種類亦有以水合物或溶媒合物的形式存在之情況，在本發明中，該水合物及溶媒合物亦視為包含在FGFR4阻礙劑中，可用作本發明之組合醫藥的有效成分。作為該溶媒合物，並無限定，可列舉例如與乙醇之溶媒合物等。 在本發明之組合醫藥中，作為有效成分之FGFR4阻礙劑等的含有比例並無限定，可適宜設定，例如，相對於組合醫藥整體而言，可設為0.01~99.99重量%的範圍內，亦可設為較佳係0.01~30重量%，更佳係0.05~20重量%，再佳係0.1~10重量%的範圍內。藉由使有效成分的含有比例為上述範圍內，本發明之組合醫藥可充分地發揮癌症的治療效果。
本發明之組合醫藥係除了FGFR4阻礙劑等以外，在不會明顯損及本發明的效果之範圍中，亦可包含任意的其他多重激酶阻礙劑等。
(2)抗hDLK-1抗體等 屬於本發明之組合醫藥的有效成分之抗hDLK-1抗體(在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體)可基於以下說明記載予以製作。
(i)抗原的調製 hDLK-1的胺基酸序列(SEQ ID NO：2)的情報係以「Accession number：NP 003827」之形式公佈於例如NCBI(GenBank)的網站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。另外，編碼出hDLK-1的胺基酸序列之鹼基序列(SEQ ID NO：1)的情報係以「Accession number：NM 003836」之形式公佈於同網站。 作為抗原，可使用包含hDLK-1的胺基酸序列的至少一部分(全部或一部分)之多肽或胜肽(亦僅稱為胜肽)，較佳係可使用包含hDLK-1的細胞外區域(FA-1)的胺基酸序列的至少一部分(全部或一部分)之胜肽。hDLK-1的細胞外區域如前述般係指包含6個EGF樣模體(EGF-1~EGF-6)之區域，其係指包含SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列中之第24個~第244個胺基酸之區域，較佳為由SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列中之「第24個」至「第248~285個」胺基酸所構成之區域(大約225~262個胺基酸殘基)。
在此處，針對用於抗原之胜肽，所謂上述「胺基酸序列的至少一部分」，長度並無特別限定，較佳為例如包含6個EGF樣模體中之1個或2個以上之區域。更佳為例如包含EGF-1及EGF-2之區域(即，由SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列中之第24個~第91個胺基酸所構成之區域)、包含EGF-3及EGF-4之區域(即，由SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列中之第92個~第167個胺基酸所構成之區域)以及包含EGF-4、EGF-5及EGF-6之區域(即，由SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列中之第131個~第244個胺基酸所構成之區域)。 作為抗原之胜肽的製作方法可為化學合成，亦可為經由使用大腸菌等之基因工學手法之合成，可使用熟習該項技術者所週知的方法。 在施行胜肽的化學合成之情況，可藉由胜肽合成的週知方法進行合成。此外，該合成亦可應用固相合成法及液相合成法中之任何者。亦可使用市售的胜肽合成裝置(例如島津製作所製：PSSM-8等)。
在基因工學性地合成胜肽之情況，首先，設計編碼出該胜肽之DNA並加以合成。該設計及合成可例如以包含全長hDLK-1基因之載體等作為模板，使用以可合成所期望的DNA區域之方式所設計出之引子，藉由PCR法來施行。又，藉由將上述DNA連結至適當的載體而獲得蛋白質表現用重組載體，藉由將此重組載體以可表現出目標基因之方式導入至宿主中而獲得轉形體(Molecular cloning 4th Ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2012))。 使用可在宿主微生物中自主性地增殖之噬菌體或質體當作載體。再者，亦可使用動物病毒、昆蟲病毒載體。重組載體的製作只要以適當的限制酵素切斷經精製之DNA，插入至適當的載體DNA的限制酵素部位等中並連結至載體即可。作為使用於轉形之宿主，只要是可表現出目標基因者，即無特別限定。可列舉例如細菌(大腸菌、枯草菌等)、酵母、動物細胞(COS細胞、CHO細胞等)、昆蟲細胞或昆蟲。亦能夠使用山羊等哺乳動物作為宿主。將重組載體導入至宿主中之方法屬公知。
又，將前述轉形體進行培養，從該培養物中採取使用作為抗原之胜肽。所謂「培養物」，係意味培養上清液、培養細胞或培養菌體或者其破碎物中之任何者。 培養後，在於菌體內或細胞內生產目標胜肽之情況，係藉由將菌體或細胞進行破碎而萃取出胜肽。此外，在於菌體外或細胞外生產目標胜肽之情況，係依原樣使用培養液，或者藉由離心分離等去除菌體或細胞。然後，可藉由單獨或適宜組合使用胜肽的單離精製中所使用之一般的生化學方法，例如硫酸銨沉澱、凝膠過濾、離子更換層析、親和層析等，而將目標胜肽進行單離精製。 在本發明中，亦可藉由使用無細胞合成系統之活體外(in vitro)轉譯而獲得作為抗原之胜肽。在此情況，可使用2種方法：將RNA當作模板之方法及將DNA當作模板之方法(轉錄/轉譯)。作為無細胞合成系統，可使用市售的系統，例如Expressway TM系統(Invitrogen公司)、PURESYSTEM(註冊商標；Post Genome研究所)、TNT系統(註冊商標；Promega公司)等。
如上述所獲得之胜肽亦能夠結合至適當的攜載蛋白質，例如牛血清白蛋白(BSA)、鑰孔帽貝血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、人類甲狀腺球蛋白、雞γ-球蛋白等。 此外，抗原亦可為由在hDLK-1的胺基酸序列(SEQ ID NO：2)或前述之其部分序列中，1或複數個胺基酸發生缺失、取代或附加而得之胺基酸序列所構成之胜肽。例如，亦可使用由hDLK-1的胺基酸序列或其部分序列中之1或複數個(較佳為1個或數個(例如1個~10個，更佳為1個~5個))胺基酸發生缺失，1或複數個(較佳為1個或數個(例如1個~10個，更佳為1個~5個))胺基酸被其他胺基酸所取代，或者1或複數個(較佳為1個或數個(例如1個~10個，更佳為1個~5個))其他胺基酸進行附加而得之胺基酸序列所構成之胜肽。 在本發明中，作為用於導入至細胞等中之基因，可列舉編碼出hDLK-1蛋白質或其部分片段或者該等的變異型蛋白質或片段之基因。作為該種基因，可使用例如具有SEQ ID NO：1所示之鹼基序列或其部分序列者。
此外，作為用於導入至細胞等中之基因，亦能夠使用與互補於SEQ ID NO：1所示之鹼基序列之序列在嚴苛的條件下進行雜合且編碼出具有hDLK-1活性之蛋白質之鹼基序列或其部分序列。 所謂「嚴苛的條件」，係指雜合後之洗淨時之條件，其係緩衝液的鹽(鈉)濃度為10~500mM，溫度為42℃~72℃，較佳係上述鹽濃度為50~300mM，溫度為55~68℃之條件。 在將變異導入至基因中時，可藉由Kunkel法或Gapped duplex法等公知手法，使用例如利用部位特異性突變誘發法之變異導入用套組，例如GeneTailorTM Site-Directed Mutagenesis System(Invitrogen公司製)、TaKaRa Site-Directed Mutagenesis System(Prime STAR(註冊商標) Mutagenesis Basal kit、Mutan(註冊商標)-Super Express Km等：Takara Bio公司製)來施行。
(ii)多株抗體的製作 將所調製而得之抗原投予至用於免疫之哺乳動物。哺乳動物並無特別限定，可列舉例如大鼠、小鼠及兔等，其中，較佳為小鼠。 每一隻動物之抗原投予量可依佐劑的有無而適宜設定。作為佐劑，可列舉弗氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant，FCA)、弗氏不完全佐劑(Freund’s incomplete adjuvant，FIA)、氫氧化鋁佐劑等。免疫主要可藉由注入至靜脈內、足底、皮下、腹腔內等而施行。此外，針對免疫的間隔，並無特別限定，以數日至數週間隔，較佳為1週間隔，施行1~10次，較佳為2~3次免疫。又，可在最終的免疫日起3~7日後，以酵素免疫測定法(ELISA或EIA)或放射性免疫測定法(RIA)等測定抗體價，在顯示出所期望的抗體價之日進行採血，而獲得抗血清。在上述抗體的採取方法中，在需要進行抗體的精製之情況，可藉由適宜選擇硫酸銨鹽析法、離子更換層析、凝膠過濾層析、親和層析等公知的方法，或者將此等進行組合而進行精製。然後，以ELISA法等測定抗血清中之多株抗體的反應性。
(iii)單株抗體的製作 ・產生抗體之細胞的採取 本發明之抗hDLK-1抗體並無限定，較佳為單株抗體。 將所調製而得之抗原投予至用於免疫之哺乳動物，例如大鼠、小鼠及兔等。每一隻動物之抗原投予量可依佐劑的有無而適宜設定。作為佐劑，係與上述相同。免疫手法亦與前述相同。又，在最終的免疫日起1~60日後，較佳為1~14日後，採取產生抗體之細胞。作為產生抗體之細胞，可列舉脾臟細胞、淋巴節細胞及末梢血細胞等，其中，較佳為淋巴節細胞及脾臟細胞。
・細胞融合 為了獲得融合瘤(產生抗體之細胞株)，而施行產生抗體之細胞及骨髓瘤細胞之細胞融合。作為與產生抗體之細胞進行融合之骨髓瘤細胞，可使用小鼠等動物的一般能夠取得之株化細胞。作為所使用之細胞株，較佳為具有藥劑選擇性，且具有在未融合的狀態下在HAT選擇培養基(包含次黃嘌呤、胺基喋呤及胸苷)中無法生存，僅在與產生抗體之細胞進行融合之狀態下可生存之性質者。 作為骨髓瘤細胞，可列舉例如P3-X63-Ag8.653、P3-X63-Ag8(X63)、P3-X63-Ag8.U1(P3U1)、P3/NS I/1-Ag4-1(NS1)及Sp2/0-Ag14(Sp2/0)等小鼠骨髓瘤細胞株。骨髓瘤細胞的選擇可適宜考慮與產生抗體之細胞之適合性而施行。
接著，使骨髓瘤細胞及產生抗體之細胞進行細胞融合。細胞融合係在不含血清之DMEM及RPMI-1640培養基等動物細胞用培養基中，將1×10 6~1×10 7個/mL的產生抗體之細胞及2×10 5~2×10 6個/mL的骨髓瘤細胞進行混合。產生抗體之細胞與骨髓瘤細胞之細胞比(產生抗體之細胞：骨髓瘤細胞)並無限定，通常較佳係設為1：1~10：1，更佳為3：1。其次，在細胞融合促進劑的存在下施行融合反應。作為細胞融合促進劑，可使用例如平均分子量1,000~6,000道耳吞(D)的聚乙二醇等。此外，亦可使用利用電刺激(例如電穿孔)之市售的細胞融合裝置，使產生抗體之細胞及骨髓瘤細胞進行融合。
・融合瘤的挑選及選殖 從細胞融合處理後之細胞中挑選出目標融合瘤。作為其方法，係將細胞懸浮液適當地稀釋於例如含有胎牛血清之RPMI-1640培養基等中後，接種於微量滴定盤上，在各孔中加入選擇培養基，以後適當地更換選擇培養基而施行培養。其結果，可獲得以選擇培養基開始進行培養後，14日前後起所生長出之細胞作為融合瘤。 其次，在逐漸增殖之融合瘤的培養上清液中，篩選出是否存在對hDLK-1進行反應之抗體。融合瘤的篩選只要依照通常的方法即可，並無特別限定。例如，可採取已生長為融合瘤之孔中所包含之培養上清液的一部分，藉由ELISA、EIA及RIA等進行篩選。 融合細胞的選殖可藉由有限稀釋法等施行。藉由流式細胞儀等判定出對hDLK-1顯示出較強的反應性之抗體，選擇產生此抗體之融合瘤，建立為選殖株。
・單株抗體的採取 作為將所建立之融合瘤進行培養並從所獲得之培養物中採取單株抗體之方法，可採用通常的細胞培養法或腹水形成法等。所謂「培養」，係意味使融合瘤在培養皿或培養瓶中生長，或者使融合瘤如下述般在動物的腹腔內增殖。 在細胞培養法中，可將融合瘤在含有10%胎牛血清之RPMI-1640培養基、MEM培養基或無血清培養基等動物細胞培養培養基中，在通常的培養條件(例如37℃，5%CO 2濃度)下培養7~14日，從其培養上清液中取得抗體。 在腹水形成法之情況，係將約1×10 7個融合瘤投予至與骨髓瘤細胞來源之哺乳動物同種系動物的腹腔內，使融合瘤大量地增殖。又，較佳係在2~3週後採取腹水。 在上述抗體的採取方法中，在需要進行抗體的精製之情況，可藉由適宜選擇硫酸銨鹽析法、離子交換層析、凝膠過濾、親和層析等公知的方法，或者將此等進行組合而進行精製。
・具有抗腫瘤活性之選殖株的挑選 用於本發明之抗hDLK-1抗體為在活體內具有抗腫瘤活性之抗體。 在此處，所謂「抗腫瘤活性」，係意味使腫瘤細胞(癌細胞)死滅之活性或阻礙腫瘤成長之活性。在本發明中，作為抗腫瘤活性，較佳係可列舉例如腫瘤血管新生阻礙活性。作為本發明之抗hDLK-1抗體可發揮抗腫瘤活性之人類腫瘤(腫瘤細胞)的種類，可列舉已確認hDLK-1的表現之人類腫瘤。 在活體內之抗腫瘤活性的確認可藉由例如使用將所期望的腫瘤細胞移植至小鼠的皮下而得之荷癌小鼠，將如前述所獲得之抗體投予至此小鼠而施行。在此情況，抗體的投予可在腫瘤細胞的移植後立即施行(Prevention模型)，亦可在移植下確認腫瘤成為預定的體積之後施行(Treatment模型)。投予方法並無任何限定，例如，亦可設為每3日1次，20mg/kg體重，腹腔內投予。在Prevention模型之情況，可藉由腫瘤形成頻率及腫瘤體積來評估抗腫瘤活性的有無及水平。在Treatment模型之情況，可藉由腫瘤體積及腫瘤重量來評估抗腫瘤活性的有無及水平。
在本發明中，作為在活體內具有抗腫瘤活性之抗hDLK-1抗體，並無特別限定，可使用例如WO2008/056833、WO2009/116670、WO2014/054820各公報所揭示之抗hDLK-1。 更具體而言，可列舉例如以下(a)~(k)之抗hDLK-1抗體，可使用該等中之至少1種。 (a)H鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：3~5所示之胺基酸序列，且L鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：6~8所示之胺基酸序列之抗體。 (b)H鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：9~11所示之胺基酸序列，且L鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：12~14所示之胺基酸序列之抗體。
(c)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：16所示之胺基酸序列(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：15)所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：18(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：17)所示之胺基酸序列所構成之抗體。另外，該抗體的H鏈V區域及L鏈V區域中之各CDR序列係與上述(a)之抗體相同。 (d)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：20所示之胺基酸序列(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：19)所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：22(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：21)所示之胺基酸序列所構成之抗體。另外，該抗體的H鏈V區域及L鏈V區域中之各CDR序列係與上述(b)之抗體相同。
(e)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：24或26所示之胺基酸序列(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：23或25)所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：28(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：27)所示之胺基酸序列所構成之抗體(人類化抗體)。另外，該抗體的H鏈V區域及L鏈V區域中之各CDR序列係與上述(a)之抗體相同。 (f)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：30、32、34或36所示之胺基酸序列(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：29、31、33或35)所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：46(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：45)所示之胺基酸序列所構成之抗體(人類化抗體)。另外，該抗體的H鏈V區域及L鏈V區域中之各CDR序列係與上述(b)之抗體相同。
(g)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：38、40、42或44所示之胺基酸序列(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：37、39、41或43)所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：46(對應的鹼基序列為SEQ ID NO：45)所示之胺基酸序列所構成之抗體(人類化抗體)。另外，該抗體的H鏈V區域及L鏈V區域中之各CDR序列係與上述(b)之抗體相同。 (h)由寄存編號為FERM BP-10899之融合瘤所產生之抗體。 (i)由寄存編號為FERM BP-10707之融合瘤所產生之抗體。 (j)由寄存編號為FERM BP-10900之融合瘤所產生之抗體。 (k)由寄存編號為FERM BP-11337之融合瘤所產生之抗體。
在此處，關於上述(f)之抗體，SEQ ID NO：32所示之胺基酸序列為SEQ ID NO：30所示之胺基酸序列的第24個丙胺酸(A)被取代成甘胺酸(G)而得者， SEQ ID NO：34所示之胺基酸序列為SEQ ID NO：30所示之胺基酸序列的第74個蘇胺酸(T)被取代成離胺酸(K)而得者， SEQ ID NO：36所示之胺基酸序列為SEQ ID NO：30所示之胺基酸序列的第24個丙胺酸(A)被取代成甘胺酸(G)，且第74個蘇胺酸(T)被取代成離胺酸(K)而得者。 同樣地，關於上述(g)之抗體，SEQ ID NO：40所示之胺基酸序列為SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列的第24個丙胺酸(A)被取代成甘胺酸(G)而得者， SEQ ID NO：42所示之胺基酸序列為SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列的第74個蘇胺酸(T)被取代成離胺酸(K)而得者， SEQ ID NO：44所示之胺基酸序列為SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列的第24個丙胺酸(A)被取代成甘胺酸(G)，且第74個蘇胺酸(T)被取代成離胺酸(K)而得者。
此種上述(f)及(g)之抗體(人類化抗體)中之經胺基酸取代而得之改良抗體為結合性(avidity；抗原結合活性)進一步更高的抗體，例如，其能夠保持與在細胞表面之抗原的表現量較少的癌細胞之結合活性。此外，該改良抗體在液劑配方中以及猴或人類的血中(血漿中)等可保持長期安定的抗原結合活性。 此外，關於上述(h)~(k)之抗體，寄存編號為FERM BP-11337之融合瘤係稱為「Mouse-Mouse hybridoma BA-1-3D」，於2011年2月1日寄存，寄存編號為FERM BP-10707之融合瘤係稱為「Mouse-Mouse hybridoma: M3-1」，於2006年10月18日寄存，寄存編號為FERM BP-10899之融合瘤係稱為「Mouse-Mouse hybridoma DI-2-14」，於2007年8月21寄存，寄存編號為FERM BP-10900之融合瘤係稱為「Mouse-Mouse hybridoma DI-6」，於2007年8月21日寄存。 作為可用於本發明之抗hDLK-1抗體，較佳係亦可列舉例如結合至上述之多種抗hDLK-1抗體所結合(識別)之部位(例如抗原決定位)之抗hDLK-1抗體等可與上述之多種抗hDLK-1抗體進行競爭之抗體。
・抗hDLK-1抗體的抗原決定位 抗hDLK-1抗體的抗原決定位(抗原決定基)只要是屬於抗原之hDLK-1的至少一部分即可，並無限定，較佳為例如SEQ ID NO：2所示之hDLK-1的胺基酸序列中之由第24個~第91個胺基酸所構成之區域(包含hDLK-1的EGF-1~EGF-2之區域)、由第92個~第167個胺基酸所構成之區域(包含hDLK-1的EGF-3~EGF-4之區域)或由第131個~第244個胺基酸所構成之區域(包含hDLK-1的EGF-4~EGF-6之區域)的至少一部分。該等之中，更佳為包含hDLK-1的EGF-1~EGF-2之區域。識別該區域(與該區域進行結合)之抗hDLK-1抗體係例如向腫瘤細胞內之內化活性較高，在後述之免疫共軛物等用途上極為有用。
(iv)基因重組抗體及抗體片段 ・基因重組抗體 作為抗hDLK-1抗體之較佳態樣之一，可列舉基因重組抗體。作為基因重組抗體，並無限定，可列舉例如嵌合抗體及人類化抗體等。 嵌合抗體(即人類型嵌合抗體)為將源自小鼠之抗體的可變區連結(接合)至源自人類之恆定區而得之抗體(參照Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 6851-6855, (1984)等)，在製作嵌合體之情況，可藉由基因重組技術輕易地構築，以便獲得如此連結之抗體。
在製作人類化抗體之情況，係從小鼠抗體的可變區將互補性決定區(CDR)移植至人類可變區，而製作框架區(FR)源自人類者且CDR源自小鼠者所構成之經再構成之可變區(所謂的CDR移植(CDR grafting))。其次，將此等經人類化之再構成人類可變區連結至人類恆定區。人類化抗體的製作法可參照例如Nature, 321, 522-525 (1986)；J. Mol. Biol., 196, 901-917 (1987)；Queen C et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 10029-10033 (1989)；日本專利特表平4-502408號公報(日本專利第2828340號公報；Queen等人)等。再者，在本發明中，亦含括將上述人類化抗體的H鏈或L鏈的V區域的一部分(CDR序列除外)的胺基酸(較佳為1~數個，更佳為1~2個胺基酸)進行其他胺基酸取代而得之改良型胺基酸。作為改良人類化抗hDLK-1抗體，亦可當作結合性(avidity；抗原結合活性)進一步更高的人類化抗體，例如，其能夠保持與在細胞表面之抗原的表現量較少的癌細胞之結合活性。此外，改良人類化抗hDLK-1抗體亦可視為在液劑配方中以及猴或人類的血中(血漿中)等可保持長期安定的抗原結合活性者。 上述嵌合抗體及人類化抗體較佳係例如抗體Fc區中之N-糖苷鍵複合型糖鏈為岩藻糖並未鍵結至該糖鏈的還原末端的N-乙醯基葡萄糖胺之糖鏈，詳細而言，可列舉在抗體分子的Fc區具有該岩藻糖的1位並未α鍵結至N-糖苷鍵複合型糖鏈還原末端的N-乙醯基葡萄糖胺的6位之糖鏈之基因重組抗體分子所構成之抗體。若為此種抗體，便可飛躍性地提升ADCC活性。另外，此方面(抗體Fc區中之N-糖苷鍵複合型糖鏈的特徵)針對前述之多株抗體及單株抗體而言亦同樣地較佳。
・抗體片段 在本發明中，亦可與本發明之抗hDLK-1抗體共同地使用抗hDLK-1抗體的片段，或者使用抗hDLK-1抗體的片段來代替本發明之抗hDLK-1抗體。在此處，該抗體片段係與本發明之抗hDLK-1抗體(包含小鼠抗體以外之人類化抗體等)同樣地，具有對hDLK-1之結合活性，且在活體內具有抗腫瘤活性。 作為該抗體片段，係意味抗hDLK-1多株抗體或抗hDLK-1單株抗體的一部分的區域(即，源自於本發明之抗hDLK-1抗體之抗體片段)，可列舉例如Fab、Fab’、F(ab’) 2、Fv(variable fragment of antibody)、單鏈抗體(H鏈、L鏈、H鏈V區域及L鏈V區域等)、scFv、diabody(scFv二聚體)、dsFv(二硫化物安定化V區域)以及在至少一部分包含互補性決定區(complementarity determining region：CDR)之胜肽等。 Fab為將抗體分子以蛋白質分解酵素木瓜蛋白酶進行處理所獲得之片段中，H鏈的N末端側約一半及L鏈整體以二硫鍵進行鍵結而得之分子量約5萬的具有抗原結合活性之抗體片段。此外，亦可藉由將編碼出抗體的Fab之DNA插入至原核生物用表現載體或真核生物用表現載體中，並將該載體導入至原核生物或真核生物中而使其進行表現，製造Fab。
F(ab’) 2為將抗體分子以蛋白質分解酵素胃蛋白酶進行處理所獲得之片段中，稍大於Fab經由鉸鏈區的二硫鍵進行鍵結而得者之分子量約10萬的具有抗原結合活性之抗體片段。此外，亦可使後述之Fab進行硫醚鍵結或二硫鍵結而予以製作。 Fab’為將上述F(ab’) 2的鉸鏈區的二硫鍵加以切斷而得之分子量約5萬的具有抗原結合活性之抗體片段。此外，亦可藉由將編碼出抗體的Fab’片段之DNA插入至原核生物用表現載體或真核生物用表現載體中，並將該載體導入至原核生物或真核生物中而使其進行表現，製造Fab’。 scFv為將1條H鏈V區域(VH)及1條L鏈V區域(VL)使用適當的胜肽連結子(P)進行連結而得之VH-P-VL或VL-P-VH多肽，其係具有抗原結合活性之抗體片段。可藉由取得編碼出抗體的VH及VL之cDNA，構築編碼出scFv之DNA，將該DNA插入至原核生物用表現載體或真核生物用表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中而使其進行表現，製造scFv。
diabody為scFv進行二聚體化而得之抗體片段，其係具有二價的抗原結合活性之抗體片段。二價的抗原結合活性可相同，亦可將其中一者設為不同的抗原結合活性。可藉由取得編碼出抗體的VH及VL之cDNA，以P的胺基酸序列的長度成為8個殘基以下之方式構築編碼出scFv之DNA，將該DNA插入至原核生物用表現載體或真核生物用表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中而使其進行表現，製造diabody。 dsFv係指使將VH及VL中之各1個胺基酸殘基取代成半胱胺酸殘基而得之多肽經由該半胱胺酸殘基間之二硫鍵進行鍵結而得之物。取代成半胱胺酸殘基之胺基酸殘基可依照由Reiter等人所示之方法(Protein Engineering, 7, 697-704, 1994)，基於抗體的立體結構預測而進行選擇。可藉由取得編碼出抗體的VH及VL之cDNA，構築編碼出dsFv之DNA，將該DNA插入至原核生物用表現載體或真核生物用表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中而使其進行表現，製造dsFv。
包含CDR之胜肽係包含VH或VL的CDR(CDR1~3)中之至少1個區域以上而構成。複數個包含CDR之胜肽可直接地或經由適當的胜肽連結子進行結合。可藉由構築編碼出抗體的VH及VL之CDR之DNA，將該DNA插入至原核生物用表現載體或真核生物用表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中而使其進行表現，製造包含CDR之胜肽。此外，包含CDR之胜肽亦可藉由Fmoc法(茀基甲基氧基羰基法)及tBoc法(第三丁基氧基羰基法)等化學合成法予以製造。 作為用於本發明之抗體片段，可為以原有的形狀包含N-糖苷鍵複合型糖鏈為岩藻糖並未鍵結至該糖鏈的還原末端的N-乙醯基葡萄糖胺之糖鏈之抗體Fc區的一部分或全部之抗體片段，此外，亦可為上述之抗體片段與N-糖苷鍵複合型糖鏈為岩藻糖並未鍵結至該糖鏈的還原末端的N-乙醯基葡萄糖胺之糖鏈之抗體Fc區的一部分或全部之融合蛋白質。若為此種抗體片段，便可飛躍性地提升ADCC活性，因而較佳。 作為用於本發明之抗體片段之具體例，並無限定，可列舉例如前述之各種抗hDLK-1抗體中，包含H鏈V區域的CDR1~3及L鏈V區域的CDR1~3者，或包含H鏈V區域整體及L鏈V區域整體者等。
(v)抗體-藥劑複合體 用於本發明之抗hDLK-抗體及抗體片段亦可呈與具有抗腫瘤活性及/或殺細胞活性之化合物形成複合體之形態。另外，預先分別調製抗體分子或抗體片段分子以及具有抗腫瘤活性及/或殺細胞活性之化合物之後，使此等進行複合化所獲得之物一般係稱為免疫共軛物。此外，使用基因重組技術，使作為具有抗腫瘤活性及/或殺細胞活性之化合物之蛋白質毒素在基因上與抗體或抗體片段的基因進行連結，使其作為1個蛋白質(融合蛋白質)進行表現所獲得之物一般係稱為免疫毒素。 作為具有抗腫瘤活性之化合物，可列舉例如阿黴素(Doxorubicin)、卡奇黴素(Calicheamicin)、絲裂黴素(Mitomycin C)、澳瑞他汀E(Aristatin E)等。作為具有殺細胞活性之化合物，可列舉例如皂草素、蓖麻毒素、綠膿菌外毒素、白喉毒素等，其中，較佳係使用皂草素及綠膿菌外毒素。
作為該複合體的製作方法，並無限定，可列舉例如藉由二硫鍵或腙鍵將抗體及藥劑進行偶合之方法等。 用於本發明之抗hDLK-抗體在向表現hDLK-之標的腫瘤細胞內之內化活性上係優異。因此，可藉由預先使具有抗腫瘤活性及/或殺細胞活性之化合物進行複合化，而使此等化合物直接且高選擇性地作用於腫瘤細胞。該複合體在向標的腫瘤細胞送達藥劑之能力上係極為優異。 另外，向細胞內之內化活性可藉由將抗體以羅丹明(Rhodamine)等進行螢光標識，針對移行至細胞內之行為及抗體的局部性使用螢光顯微鏡等進行觀察而予以評估。 在本發明之組合醫藥中，作為有效成分之抗hDLK-1抗體的含有比例並無限定，可適宜設定，例如，相對於組合醫藥整體而言，可設為0.01~99.99重量%的範圍內，較佳係亦可設為0.01~30重量%，更佳為0.05~20重量%，再佳為0.1~10重量%的範圍內。藉由使有效成分的含有比例為上述範圍內，本發明之組合醫藥可充分地發揮癌症的治療效果。
(3)組合醫藥 本發明之組合醫藥各自包含FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等作為有效成分，亦可進一步包含對癌症或腫瘤使用之其他藥劑(例如抗癌劑)。 本發明之組合醫藥可對作為被驗對象之人類或非人類哺乳動物(例如小鼠、大鼠、兔、羊、豬、牛、貓、犬、猴等)，以多種投予途徑，具體而言，經口或非經口(例如靜脈內注射(靜脈注射)、肌肉內注射、腹腔內注射、皮下注射、直腸投予、經皮投予)進行投予。 從而，本發明之組合醫藥亦能夠單獨使用，可因應投予途徑，藉由慣用的方法，使用藥學上可容許的擔體而製劑化成適當的劑型來使用。此外，在本發明之組合醫藥中，亦包含將阻礙或抑制酪胺酸激酶活性之物質結合至抗DLK-1抗體而得之抗體-藥劑複合體的形態。
作為劑型，就經口劑而言，可列舉例如錠劑、散劑、細粒劑、顆粒劑、被覆錠劑、膠囊劑、內用水劑、懸浮劑、乳劑、糖漿劑及口含錠劑等，就非經口劑而言，可列舉例如注射劑(包含點滴劑)、吸入劑、軟膏劑、點鼻劑及脂質體劑等。 作為可用於此等製劑的製劑化之擔體，可列舉例如通常所使用之賦形劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑及矯味矯臭劑，除此以外，視需要地，安定化劑、乳化劑、吸收促進劑、界面活性劑、pH調整劑、防腐劑、抗氧化劑、增量劑、濕潤化劑、表面活化劑、分散劑、緩衝劑、保存劑、溶解輔助劑及無痛化劑等，能夠摻合可用作醫藥品製劑的原料之公知的成分並依常法進行製劑化。
作為能夠使用作為該成分之無毒性的物質，可列舉例如大豆油、牛脂及合成甘油酯等動植物油；流動石蠟、角鯊烷及固態石蠟等烴；肉豆蔻酸辛基十二烷酯及肉豆蔻酸異丙酯等酯油；鯨蠟硬脂醇及山萮醇等高級醇；矽樹脂；矽油；聚氧乙烯脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯硬化蓖麻油及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物等界面活性劑；羥基乙基纖維素、聚丙烯酸、羧基乙烯基聚合物、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯啶酮及甲基纖維素等水溶性高分子；乙醇及異丙醇等低級醇；甘油、丙二醇、二丙二醇、山梨糖醇及聚乙二醇等多元醇(多元醇)；葡萄糖及蔗糖等醣；矽酸酐、矽酸鋁鎂及矽酸鋁等無機粉體；氯化鈉、磷酸鈉等無機鹽；精製水等，皆亦可為其鹽或其水合物。
各自而言，作為賦形劑，較佳係可列舉例如乳糖、果糖、玉米澱粉、白糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇、結晶纖維素及二氧化矽等，作為黏合劑，較佳係可列舉例如聚乙烯醇、聚乙烯醚、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、蟲膠、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、聚乙烯基吡咯啶酮、聚丙二醇/聚氧乙烯嵌段聚合物及葡甲胺等，作為崩解劑，較佳係可列舉例如澱粉、瓊脂、明膠末、結晶纖維素、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸檬酸鈣、糊精、果膠及羧基甲基纖維素/鈣等，作為潤滑劑，較佳係可列舉例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、氧化矽及硬化植物油等，作為著色劑，較佳係可列舉容許添加至醫藥品中者，作為矯味矯臭劑，較佳係可列舉例如可可末、薄荷腦、芳香散、薄荷油、龍腦及桂皮末等，皆亦可為其鹽或該等的水合物。
本發明之組合醫藥的投予量一般而言可在考慮到製劑中之有效成分的摻合比例之後，斟酌投予對象(患者)的年齡、體重、疾病的種類/進行狀況，或投予途徑、投予次數(/1日)、投予期等，適宜地在廣範圍中進行設定。此外，本發明之組合醫藥可實質上同時地投予屬於有效成分之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等，亦可依序先投予任一者，隨後投予另一者，並無限定。此外，此等投予可一次性地投予組合醫藥中所包含之量，亦可連續地進行投予，並無限定。 針對將本發明之組合醫藥用作非經口劑或經口劑之情況，在以下進行說明。 在用作非經口劑之情況，一般而言，其形態並無限定，在各種注射劑之情況，可例如以單位投予量安瓿或多投予量容器的狀態，或使用時使其再溶解成溶解液之凍結乾燥粉末的狀態提供。在該非經口劑中，除了成為有效成分之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等以外，尚可因應各種形態，在無損上述有效成分的效果之範圍中含有公知的各種賦形材或添加劑。例如，在各種注射劑之情況，可列舉水、甘油、丙二醇或聚乙二醇等脂肪族多元醇等。
非經口劑的投予量(每1日)並無限定，例如若為各種注射劑，一般而言，可設為應用對象(被驗者、患者等)的體重每1kg，可服用0.01~1000mg、0.05~500mg或0.1~50mg成為有效成分之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等之量，或者亦可設為可服用0.5~20mg之量或可服用1~10mg之量。 在用作經口劑之情況，一般而言，其形態並無限定，可為前述之劑型中之任何者，亦可為使用時使其進行再溶解之乾燥生成物。在該經口劑中，除了成為有效成分之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等以外，尚可因應各種形態，在無損上述有效成分的效果之範圍中含有公知的各種賦形材或添加劑。可列舉例如黏合劑(糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠、聚乙烯基吡咯啶酮等)、填充材(乳糖、糖、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、磷酸鈣、山梨糖醇、甘胺酸等)、潤滑劑(硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、氧化矽等)、崩解劑(各種澱粉等)及濕潤劑(月桂基硫酸鈉等)等。 經口劑的投予量(每1日)一般而言可設為應用對象(被驗者、患者等)的體重每1kg，可服用0.05~5000mg、0.1~1000mg或0.1~100mg成為有效成分之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等之量，或者亦可設為可服用0.5~50mg之量或可服用1~10mg之量。此外，經口劑中之有效成分的摻合比例並無限定，可考慮到每1日之投予次數等而適宜設定。
本發明之組合醫藥係關於各種癌症，特定而言，以肝細胞癌為首之FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症的治療，相較於既存的FGFR4選擇性酪胺酸激酶阻礙劑而言可發揮更強力且持續的抗腫瘤效果，例如，即便在該醫藥的投藥結束後，亦可抑制癌細胞的增殖，或者可使腫瘤縮小或消失。在即便對迄今為止僅藉由前述既存的酪胺酸激酶阻礙劑的單獨投予係無法期待治療效果(或不應答)之癌症的患者，亦可發揮充分的治療效果之方面而言，本發明之組合醫藥係極為有用。此外，本發明之組合醫藥亦可具有使與疾患(上述癌症)相關之至少1種臨床症狀的發生延遲、停止或減少之效果，亦可緩和或改善或者安定化與疾患(上述癌症)相關之至少1種身體參數(例如體重減少等)，亦包含無法被患者所識別者。
3.醫藥組成物 在本發明中，除了上述第2項所說明之癌症治療用組合醫藥以外，亦含括涉及下述(i)~(iv)之醫藥組成物之發明。 (i)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段， 前述醫藥組成物係與阻礙或抑制FGFR4的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物組合使用。 (ii)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含阻礙或抑制FGFR4的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物， 前述醫藥組成物係與在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段組合使用。
(iii)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段， 前述治療包含投予阻礙或抑制FGFR4的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物。 (iv)一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含阻礙或抑制FGFR4的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物， 前述治療包含投予在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
在此處，針對上述(i)~(iv)之各醫藥組成物中之FGFR4阻礙劑等或抗hDLK-1抗體等的具體說明，或含有比例或用法/用量或投予對象等，再者，成為治療對象之癌症，或抗hDLK-1抗體等的抗腫瘤活性中之「腫瘤」的詳情等，可適宜採用涉及上述第2項所說明之癌症治療用組合醫藥之記載。
4.套組 本發明亦可提供包含FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等作為構成要素之癌症治療用套組的形態。針對成為治療對象之癌症的詳情等，可適宜採用涉及上述第2項所說明之癌症治療用組合醫藥之記載。 該套組中之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等係考慮到安定性(保存性)及使用容易性等，亦可例如以經溶解之狀態準備。 該套組係除了FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等以外，亦可適宜包含其他構成要素。可包含例如抗體的標識物質，或者將抗體或其標識物進行固定而得之固相化試劑等。所謂抗體的標識物質，係意味經酵素、放射性同位素、螢光化合物及化學發光化合物等所標識者。此外，亦可包含各種緩衝液、滅菌水、各種細胞培養容器、各種反應容器(Eppendorf管等)、阻斷劑(牛血清白蛋白(BSA)、脫脂乳、山羊血清等血清成分)、洗淨劑、界面活性劑、各種板件、疊氮化鈉等防腐劑及實驗操作手冊(說明書)等。 該套組只要是至少具備前述之FGFR4阻礙劑等及抗hDLK-1抗體等作為構成要素即可。從而，可在套組中共同地具備癌症的治療所需之所有構成要素，亦可個別分開地具備，並無限定。
以下，列舉實施例來更具體地說明本發明，但本發明並不限定於此等。 [實施例1]
將Hep3B細胞(1×10 6個細胞)移植至NOD-SCID小鼠的右側腹皮下，在腫瘤體積達到250~350mm 3之階段，各組6隻，施行分組成下述8組，同日施行投予。 ・Vehicle組 ・HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組 ・H3B-6527(50mg/kg)投予組 ・FGF-401(10mg/kg)投予組 ・BLU-554(30mg/kg)投予組 ・HuBA-1-3D(1mg/kg)+H3B-6527(50mg/kg)併用投予組 ・HuBA-1-3D(1mg/kg)+FGF-401(10mg/kg)併用投予組 ・HuBA-1-3D(1mg/kg)+BLU-554(30mg/kg)併用投予組 HuBA-1-3D係施行腹腔內投予，FGFR4阻礙劑(H3B-6527、FGF-401、BLU-554)係施行經口投予。在投予起48小時後，各組各自犧牲3隻，摘出腫瘤，以10%福馬林將腫瘤進行固定之後，製成石蠟包埋切片，以用於免疫染色。此外，調製組織萃取液，以用於西方墨點法。
以Ki-67或cleaved caspase-3的表現當作指標，對投予48小時後之Hep3B腫瘤中之癌細胞的增殖及細胞凋亡實施免疫染色。將其結果示於圖1~3。 在圖1中，示出Vehicle投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、H3B-6527(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)+ H3B-6527(50mg/kg)併用投予組中之Ki-67染色影像(上排)及cleaved caspase-3染色影像(下排)。就Vehicle投予組的Hep3B異種移植腫瘤而言，遍及腫瘤整體可觀察到癌細胞的核經Ki-67所染色之增殖之癌細胞。在HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、H3B-6527(50mg/kg)投予組中，與Vehicle投予組相比較，經Ki-67所染色之癌細胞的比例並未見到變化。相對於此，在組合併用投予HuBA-1-3D(1mg/kg)及H3B-6527(50mg/kg)之情況，Hep3B異種移植腫瘤中之經Ki-67所染色之癌細胞明顯減少。針對癌細胞的細胞凋亡，就Vehicle投予組及H3B-6527(50mg/kg)投予組而言，並未檢測出經cleaved caspase-3所染色之細胞凋亡細胞，相對於此，就HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組而言，在腫瘤的廣大範圍中檢測出癌細胞的細胞凋亡。在HuBA-1-3D(1mg/kg)+H3B-6527(50mg/kg)併用投予組中之腫瘤中，亦在腫瘤的廣大範圍中檢測出癌細胞的細胞凋亡。
同樣地，在圖2中，示出FGF-401(10mg/kg)及HuBA-1-3D(1mg/kg)的併用投予之情況之結果，在圖3中，示出BLU-554(30mg/kg)及HuBA-1-3D(1mg/kg)的併用投予之情況之結果。圖2及圖3中之Vehicle投予組及HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組的照片係使用與圖1相同的照片。 在FGF-401(10mg/kg)單獨投予組及BLU-554(30mg/kg)單獨投予組中，與Vehicle投予組相比較，經Ki-67所染色之癌細胞的比例皆未見到變化。相對於此，在與HuBA-1-3D(1mg/kg)之併用投予組中，經Ki-67所染色之癌細胞皆明顯減少。此外，針對癌細胞的細胞凋亡，在FGF-401(10mg/kg)單獨投予組及BLU-554(30mg/kg)單獨投予組中，亦未檢測出經cleaved caspase-3所染色之細胞凋亡細胞，相對於此，就與HuBA-1-3D(1mg/kg)之併用投予組而言，在腫瘤的廣大範圍中檢測出癌細胞的細胞凋亡。
由以上結果，針對使用作為FGFR4選擇性阻礙劑之3種劑(H3B-6527、FGF-401、BLU-554)，在與HuBA-1-3D(1mg/kg)組合併用投予之情況，針對Hep3B異種移植腫瘤中之癌細胞的增殖阻礙皆顯示出相乘的效果，再者，在併用投予組中，顯示出在腫瘤的廣大範圍中誘導癌細胞的細胞凋亡。 [實施例2]
其次，針對各藥劑的投予所引發之Hep3B異種移植腫瘤中之細胞凋亡(cleaved-caspase-3及cleaved PARP)及癌細胞增殖(細胞週期蛋白B1)，藉由西方墨點法施行解析。將其結果示於圖4。 在投予48小時後之Hep3B腫瘤中，在HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組中，在3個體中之1個體中強烈誘導細胞凋亡標記(cleaved caspase-3及cleaved PARP)的表現，顯示出由於投予HuBA-1-3D而誘導Hep3B腫瘤的細胞死亡。另一方面，就FGFR4阻礙劑(H3B-6527、FGF-401、BLU-554)的投予組而言，無論是在(a)H3B-6527、(b)FGF-401、(c)BLU-554中之任何投予組中，還是在經投予之3個體中之任何者各者中，皆未誘導細胞凋亡標記(cleaved caspase-3及cleaved PARP)。在HuBA-1-3D及FGFR4阻礙劑的併用投予組中，在各併用投予組中，在3個體中皆誘導細胞凋亡。
若觀看屬於細胞增殖標記之細胞週期蛋白B1的表現，則就HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組而言，在誘導細胞凋亡之1個體中可觀察到細胞週期蛋白B1的表現降低，在其餘2個體中則與Vehicle投予組中之細胞週期蛋白B1的表現水平同等。就FGFR4阻礙劑3種劑的單獨投予組而言，在H3B-6527、FGF-401、BLU-554中之任何者中，細胞週期蛋白B1的表現水平與Vehicle投予組並未見到差異。相對於此，在HuBA-1-3D(1mg/kg)及FGFR4阻礙劑的併用投予組中，在各併用投予組中，在3個體中細胞週期蛋白B1的表現水平皆降低。 由以上結果，針對使用作為FGFR4選擇性阻礙劑之3種劑(H3B-6527、FGF-401、BLU-554)，在與HuBA-1-3D(1mg/kg)組合併用投予之情況，針對Hep3B異種移植腫瘤中之癌細胞的增殖阻礙皆顯示出相乘的效果，再者，在併用投予組中，顯示出誘導癌細胞的細胞凋亡。 [實施例3]
＜人類肝癌細胞株Hep3B異種移植治療模型中之HuBA-1-3D抗體及FGFR4低分子阻礙劑(H3B-6527)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的檢討＞ 以使用人類肝癌細胞株Hep3B之異種移植治療模型檢討HuBA-1-3D抗體及屬於針對於FGFR4之低分子阻礙劑之H3B-6527(Cancer Res. 2017 Dec 15; 77(24):6999-7013)的併用投予所引發之抗腫瘤效果。
(1)將Hep3B細胞移植至NOD-scid小鼠的右側腹皮下(Day 0)，在平均腫瘤體積達到100mm 3左右之階段(Day 14)，施行分組成下述6組，同日起11日，HuBA-1-3D係以每週2次的頻率(Day 14、18、22、25)，H3B-6527係以1日2次(BID)，每週投予5日、停藥2日的週期，施行投藥(Day 14、15、16、17、18、21、22、23、24、25)。 ・Vehicle投予組(N=8) ・H3B-6527(50mg/kg體重，1日2次)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(0.3mg/kg體重)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(1mg/kg體重)投予組(N=8) ・H3B-6527(50mg/kg體重)及HuBA-1-3D(0.3mg/kg體重)的併用投予組(N=8) ・H3B-6527(50mg/kg體重)及HuBA-1-3D(1mg/kg體重)的併用投予組(N=8)
以每週2次的頻率施行腫瘤體積的計測，達到1,500mm 3之個體係視為觀察結束。 在癌細胞移植起32日後(Day 32，投藥結束後7日)之腫瘤體積，Vehicle投予組為1377.0±239.1mm 3(N=8)，相對於此，H3B-6527(50mg/kg)投予組成為647.8±146.2mm 3(N=8，T/C=47%， *P＜0.05)，HuBA-1-3D(0.3mg/kg)抗體投予組成為1478.4±333.5mm 3(N=7)，HuBA-1-3D(1mg/kg)抗體投予組成為204.5±173.0mm 3(N=8，T/C=14.9%， *P＜0.05)，H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用投予組成為473.7±81.6mm 3(N=8，T/C=34.4%， *P＜0.05)，H3B-6527+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組成為17.0±24.3mm 3(N=8，T/C=1.2%， *P＜0.05)，與Vehicle投予組的腫瘤體積相比較，在H3B-6527(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(0.3mg/kg)+H3B-6527(50mg/kg)併用投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)+H3B-6527(50mg/kg)併用投予組中，可觀察到統計上顯著的抗腫瘤效果。
將H3B-6527+HuBA-1-3D的併用投予組、各自單獨投予組的腫瘤體積進行比較，結果就H3B-6527+HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組而言，與H3B-6527投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組各者相比較，腫瘤體積顯著地較小( **P＜0.05 by Tukey test)。就H3B-6527+HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組而言，投予結束日(Day 25)起，腫瘤消退亦進一步進展，在Day 32的時點，在8個體中之5個體中可觀察到腫瘤的消失。 將H3B-6527(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組3組間之腫瘤體積進行比較，結果就H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組而言，與各自單獨投予組相比較，顯示出顯著的抗腫瘤效果( **P＜0.05，Tukey法)。此外，就併用投予組而言，在8個體中之所有個體中，相比於Day 14的腫瘤體積值而言，可觀察到腫瘤的縮小，在其中之5個體中腫瘤消失，可觀察到併用投予所引發之強力的抗腫瘤效果。 將以上結果示於圖5Ａ。
(2)再者，直至Day 38(最終投予日(Day 25)起13日後)為止，觀察H3B-6527投予組、HuBA-1-3D (1mg/kg)投予組、H3B-6527+HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組的腫瘤體積的推移，結果腫瘤體積係H3B-6527投予組為1222.0±326.5mm 3(N=8)，HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組為361.4±320.4mm 3(N=8)，相對於此，H3B-6527+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組為22.1±31.9mm 3(N=8)，就併用組而言，與各自單獨投予組相比較，腫瘤體積顯著地較小( *P＜0.05 by Tukey)。 將以上結果示於圖5Ｂ。
(3)在Day 38(最終投予日(Day 25)起13日後)，犧牲H3B-6527(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D (1mg/kg)投予組、H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組的小鼠，摘出腫瘤。就H3B-6527(50mg/kg)投予組及HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組而言，在各8個體中之所有個體中可確認到腫瘤，就H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組而言，在8個體中之5個體中腫瘤消失。腫瘤重量係H3B-6527(50mg/kg)投予組為1.010± 0.260g(N=8)，HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組為0.262±0.338g (N=8)，H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組為0.003±0.005g(N=8)，就併用投予組而言，與各自單獨投予組相比較，腫瘤重量亦顯著地較小( *P＜0.05 by Tukey)，可確認到HuBA-1-3D及H3B-6527的併用所引發之抗腫瘤效果的增強。 將以上結果示於圖5C。 [實施例4]
＜人類肝癌細胞株Hep3B異種移植治療模型中之HuBA-1-3D抗體及FGFR4低分子阻礙劑(FGF-401)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的檢討＞ 其次，在進一步驗證HuBA-1-3D抗體及FGFR4阻礙劑(FGF-401)的併用投予所引發之抗腫瘤活性的增強效果之目的下，與H3B-6527同樣地，以使用人類肝癌細胞株Hep3B之異種移植治療模型檢討藉由特異性結合至存在於FGFR4的胺基酸編號第545至562個的區域之ATP結合區域的胺基酸編號第552個的半胱胺酸而阻礙FGFR4特異性酪胺酸激酶活性之FGF-401(Mol. Cancer Ther. 2019 Dec; 18(12):2194-2206)及HuBA-1-3D的併用投予所引發之抗腫瘤效果。
將Hep3B細胞(1×10 6個細胞)移植至NOD-SCID小鼠的右側腹皮下(Day 0)，在平均的腫瘤體積超過100mm 3之Day 14的階段，分組成下述6組，同日起開始進行投予。 ・Vehicle投予組(N=8) ・FGF-401(10mg/kg體重，1日2次)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(0.3mg/kg體重)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(1mg/kg體重)投予組(N=8) ・FGF-401(10mg/kg體重)及HuBA-1-3D(0.3mg/kg體重)的併用投予組(N=8) ・FGF-401(10mg/kg體重)及HuBA-1-3D(1mg/kg體重)的併用投予組(N=8)
HuBA-1-3D係施行Day 14、17、21、24合計4次，1日1次的腹腔內投予，FGF-401係施行1日2次的經口投予，Day 14、15、16、17、18、21、22、23、24、25合計10次。HuBA-1-3D及FGF-401的併用投予係施行Day 14、17、21、24合計4次。各組的各小鼠的腫瘤體積超過1,500mm 3之小鼠係在該時點予以犧牲。 在癌細胞的移植(Day 0)起28日後(Day 28，最終投予日(Day 25)起3日後)，與Vehicle投予組(N=8)的腫瘤體積相比較，在所有投予組中可觀察到顯著的抗腫瘤效果( *P＜0.05 by Dunnett)。Vehicle組的腫瘤體積為684.7±265.7mm 3，相對於此，FGF-401(10mg/kg)投予組為388.9±94.8mm 3(T/C=56.8%， *P＜0.05)，HuBA-1-3D(0.3mg/kg)投予組為456.3±232.9mm 3(T/C=66.6%， *P＜0.05)，HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組為53.5±57.5mm 3(T/C=7.8%， *P＜0.05)，FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用投予組為180.8±109.0mm 3(T/C=26.4%， *P＜0.05)，FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組為14.1±21.4mm 3(T/C=2.1%， *P＜0.05)。
藉由Tukey多重檢定，以投予組所有組合進行檢定，結果與FGF-401(10mg/kg)投予組相比較，就FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用組、FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用組而言，各自可觀察到顯著的抗腫瘤效果(P＜0.05)，與HuBA-1-3D(0.3mg/kg)投予組相比較，就FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D (0.3mg/kg)併用組而言，亦可觀察到顯著的抗腫瘤效果(P＜0.05)。與FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用組相比較，就FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用組而言，抗腫瘤效果進一步增強(P＜0.05)，可觀察到HuBA-1-3D及FGF-401的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強。 再者，在Day 35(最終投予日(Day 25)起10日後)，與Vehicle投予組(N=8)的腫瘤體積相比較，在FGF-401(10mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用投予組及FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組中可觀察到顯著的抗腫瘤效果(P＜0.05 by Dunnett)。 將以上結果示於圖6。
藉由Tukey多重檢定，以投予組所有組合進行檢定，結果與FGF-401(10mg/kg)投予組相比較，就FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用組及FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用組而言，各自可觀察到顯著的抗腫瘤效果(P＜0.05 by tukey)。與HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用投予組相比較，就FGF-401(10mg/kg) +HuBA-1-3D(0.3mg/kg)併用組而言，亦為顯著的抗腫瘤效果(P＜0.05 by tukey)，可觀察到FGF-401及HuBA-1-3D的併用所引發之抗腫瘤效果的增強。特定而言，FGF-401(10mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予所引發之抗腫瘤效果顯著，在8個體中之7個體中腫瘤消失，在1個體中僅確認到86.2mm 3的腫瘤。 [實施例5]
＜人類肝癌細胞株Hep3B異種移植治療模型中之HuBA-1-3D抗體及FGFR4低分子阻礙劑(BLU-554)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的檢討＞ 與前述實施例同樣地，在進一步驗證HuBA-1-3D抗體及FGFR4阻礙劑的併用投予所引發之抗腫瘤活性的增強效果之目的下，與H3B-6527及FGF-401同樣地，以使用人類肝癌細胞株Hep3B之異種移植治療模型檢討藉由特異性結合至存在於FGFR4的胺基酸編號第545至562個的區域之ATP結合區域的胺基酸編號第552個的半胱胺酸而阻礙FGFR4特異性酪胺酸激酶活性之BLU-554(Cancer Discov. 2019 Dec; 9(12):1696-1707)及HuBA-1-3D的併用投予所引發之抗腫瘤效果。
移植1×10 6個Hep3B細胞(Day 0)，在平均的腫瘤體積超過100mm 3之時點(Day 14)，分組成下述4組，同日起開始進行投予。 ・Vehicle投予組(N=8) ・BLU-554(30mg/kg體重，1日2次)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(1mg/kg體重)投予組(N=8) ・BLU-554(30mg/kg體重)及HuBA-1-3D(1mg/kg體重)的併用投予組(N=8)
HuBA-1-3D係施行Day 14、17、21、24合計4次，1日1次的腹腔內投予，BLU-554係施行1日2次的經口投予，Day 14、15、16、17、18、21、22、23、24、25合計10次。HuBA-1-3D及BLU-554的併用投予係施行Day 14、17、21、24合計4次。各組的各小鼠的腫瘤體積超過1,500mm 3之小鼠係在該時點予以犧牲。 在Day 38(最終投予日(Day 25)起第13日)，Vehicle投予組(N=7)的平均腫瘤體積為1082.1±296.7mm 3，相對於此，BLU-554(30mg/kg)投予組(N=8)為688.8±562.4mm 3(T/C=63.7%)，HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組(N=8)為127.9± 95.0mm 3(T/C=11.8%， *P＜0.05 by Dunnett)，HuBA-1-3D (1mg/kg)+BLU-554(30mg/kg)併用投予組(N=7)為56.0± 114.5mm 3(T/C=5.2%， *P＜0.05 by Dunnett)，在HuBA-1-3D(1mg/kg)+BLU-554(30mg/kg)併用投予組中可觀察到最強的抗腫瘤效果。
再者，直至Day 52(最終投予日(Day 25)起第27日)為止，觀察HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組及HuBA-1-3D(1mg/kg)+BLU-554(30mg/kg)併用投予組的腫瘤生長，結果HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組(N=7)的腫瘤體積達到499.4±449.4mm 3，相對於此，就HuBA-1-3D(1mg/kg) +BLU-554(30mg/kg)併用投予組(N=7)而言，在1個體中可觀察到腫瘤的生長，在6個體中就腫瘤生長而言，腫瘤生長持續地受到抑制，Day 52的平均的腫瘤體積為198.4±388.5mm 3，可觀察到併用投予HuBA-1-3D(1mg/kg)及BLU-554(30mg/kg)之情況之抗腫瘤效果的增強。 將以上結果示於圖7。
目前，在肝細胞癌中，以FGFR4作為標的分子之5種阻礙劑係處於臨床開發階段(Cells. 2019, 8,536)。5種之中，3種(FGF-401、H3B-6527、BLU-554)為低分子的TKI(酪胺酸激酶阻礙劑)，1種為抗FGFR4抗體(U3-1784)，1種為FGFR4反義寡核苷酸。3種FGFR4低分子TKI皆屬特異性結合至在FGFR4特異性ATP結合區域之Cys552而阻礙激酶活性之作用機制。此次，針對該等3種FGFR4選擇性低分子酪胺酸激酶阻礙劑，使用Hep3B異種移植治療模型，針對與HuBA-1-3D抗體之併用投予所引發之抗腫瘤效果進行檢討，結果可確認在所有3種FGFR4選擇性阻礙劑中，在與HuBA-1-3D抗體併用投予之情況，皆可發揮顯著的抗腫瘤效果，特定而言，腫瘤消退效果。 [實施例6]
＜人類肝癌細胞株Hep3B異種移植治療模型中之HuBA-1-3D抗體及FGFR1/FGFR2/FGFR3選擇性低分子阻礙劑(CH518324/Debio1347)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的檢討＞ 其次，在調查HuBA-1-3D抗體及FGFR4阻礙劑的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強作用是否特異於與FGFR4阻礙劑之併用之目的下，檢討屬於針對於FGFR1/ FGFR2/FGFR3之選擇性低分子酪胺酸激酶阻礙劑之CH518324/Debio1347(Mol Cancer Ther (2014); 13(11); 2547-58)及HuBA-1-3D抗體的併用效果。已報導CH518324/Debio1347為FGFR選擇性之能夠經口投予之酪胺酸激酶阻礙劑，針對於4種FGFR(FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4)之酪胺酸激酶阻礙活性(IC 50)分別為9.3nM、7.6nM、22nM及290nM(Mol Cancer Ther (2014); 13(11); 2547-58)。
移植1×10 6個Hep3B細胞(Day 0)，在平均的腫瘤體積超過100mm 3之時點(Day 14)，分組成下述6組，同日起開始進行投予。 ・Vehicle投予組(N=8) ・CH518324/Debio1347(50mg/kg體重，1日1次)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(0.3mg/kg體重)投予組(N=8) ・HuBA-1-3D(1mg/kg體重)投予組(N=8) ・CH518324/Debio1347(50mg/kg體重)及HuBA-1-3D (0.3mg/kg體重)的併用投予組(N=8) ・CH518324/Debio1347(50mg/kg體重)及HuBA-1-3D (1mg/kg體重)的併用投予組(N=8)
HuBA-1-3D係施行Day 14、18、21、24合計4次，1日1次的腹腔內投予，CH518324/Debio1347係施行1日1次的經口投予，Day 14、15、16、17、18、21、22、23、24、25合計10次。HuBA-1-3D及CH518324/Debio1347的併用投予係施行Day 14、18、21、24合計4次。各組的各小鼠的腫瘤體積超過1,500mm 3之小鼠係在該時點予以犧牲。
在Day 31(最終投予日(Day 25)起6日後)之所有組中之所有小鼠未達到終點之時點，Vehicle投予組(N=8)的平均腫瘤體積為1198.2±285.6mm 3，相對於此，CH518324/Debio1347(50mg/kg)投予組(N=8)為673.8± 271.8mm 3(T/C=56.2%， *P＜0.05)，HuBA-1-3D(0.3mg/kg)投予組(N=8)為1256.1±465.7mm 3(T/C=104.8%，not significance)，HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組(N=8)為66.7 ±40.5mm 3(T/C=5.6%， *P＜0.05)，HuBA-1-3D (0.3mg/kg) +CH518324/Debio1347(50mg/kg)併用投予組(N=8)為714.2 ±296.4mm 3(T/C=59.6%， *P＜0.05)，HuBA-1-3D(1mg/kg) +CH518324/Debio1347(50mg/kg)併用投予組(N=8)為66.7±88.4mm 3(T/C=5.6%， *P＜0.01)，與Vehicle投予組相比較，在CH518324/Debio1347(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(0.3、1mg/kg)+CH518324 /Debio1347(50mg/kg)併用投予組中可觀察到統計上顯著且較強的抗腫瘤活性。 另一方面，針對併用效果，在HuBA-1-3D(0.3mg/kg或1mg/kg)及CH518324/Debio1347(50mg/kg)的併用投予組中，在所有併用的組合中，將HuBA-1-3D及CH518324/ Debio1347的併用投予組與各自單獨投予組進行比較，亦未觀察到抗腫瘤效果的增強。 將以上結果示於圖8。
CH518324/Debio1347(50mg/kg)投予組(□)及HuBA-1-3D(0.3mg/kg)+CH518324/Debio1347(50mg/kg)併用投予組(▲)係day 35為止之腫瘤形成在兩組中幾乎完全重疊，HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組(◇)及HuBA-1-3D(1mg/kg)+CH518324/Debio1347(50mg/kg)併用投予組(●)係day 38(試驗結束日)為止之腫瘤形成在兩組中幾乎完全重疊，並未看出HuBA-1-3D抗體及屬於針對於FGFR1/FGFR2/FGFR3之選擇性酪胺酸激酶阻礙劑之CH518324/Debio1347的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強作用。 [產業上之可利用性] 根據本發明，可提供關於癌症的治療，特定而言，FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症的治療，相較於既存的酪胺酸激酶阻礙劑而言可發揮更強力且持續的抗腫瘤效果之治療藥及治療方法等，因而本發明之治療藥及治療方法等在例如即便對迄今為止無法期待治療效果之患者亦可發揮效果之方面而言係極為有用。 [序列表非關鍵詞文字]
SEQ ID NO：23：重組DNA SEQ ID NO：24：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：25：重組DNA SEQ ID NO：26：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：27：重組DNA SEQ ID NO：28：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：29：重組DNA SEQ ID NO：30：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：31：重組DNA SEQ ID NO：32：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：33：重組DNA SEQ ID NO：34：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：35：重組DNA SEQ ID NO：36：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：37：重組DNA SEQ ID NO：38：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：39：重組DNA SEQ ID NO：40：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：41：重組DNA SEQ ID NO：42：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：43：重組DNA SEQ ID NO：44：合成構築體(重組蛋白質) SEQ ID NO：45：重組DNA SEQ ID NO：46：合成構築體(重組蛋白質) [生物材料寄存]
國外寄存資訊 1.日本 ; NITE-IPOD ; 2006/10/18 ; FERM BP-10707 2.日本 ; NITE-IPOD ; 2007/08/21 ; FERM BP-10899 3.日本 ; NITE-IPOD ; 2007/08/21 ; FERM BP-10900 4.日本 ; NITE-IPOD ; 2011/02/01 ; FERM BP-11337
[圖1]：Hep3B異種移植模型中，媒劑(Vehicle)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、H3B-6527(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)+H3B-6527(50mg/kg)併用投予組中，投予48小時後之細胞增殖(Ki-67)及細胞凋亡(經切割之凋亡蛋白酶-3(cleaved caspase-3))的免疫染色下所顯示之照片。經茶褐色所染色之部分表示進行增殖(Ki-67陽性)或細胞凋亡(cleaved caspase-3陽性)之細胞。 [圖2]：Hep3B異種移植模型中，Vehicle投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、FGF-401(10mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)+FGF-401(10mg/kg)併用投予組中，投予48小時後之細胞增殖(Ki-67)及細胞凋亡(cleaved caspase-3)的免疫染色下所顯示之照片。經茶褐色所染色之部分表示進行增殖(Ki-67陽性)或細胞凋亡(cleaved caspase-3陽性)之細胞。 [圖3]：Hep3B異種移植模型中，Vehicle投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、BLU-554(30mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)+BLU-554(30mg/kg)併用投予組中，投予48小時後之細胞增殖(Ki-67)及細胞凋亡(cleaved caspase-3)的免疫染色下所顯示之照片。經茶褐色所染色之部分表示進行增殖(Ki-67陽性)或細胞凋亡(cleaved caspase-3陽性)之細胞。 [圖4]：將Hep3B異種移植模型中，投予Vehicle、HuBA-1-3D(1mg/kg)、FGFR4選擇性阻礙劑(H3B-6527(50mg/kg)、FGF-401(10mg/kg)、BLU-554(30mg/kg))、併用投予HuBA-1-3D(1mg/kg)及各FGFR4阻礙劑，在48小時後之腫瘤中之細胞凋亡(cleaved caspase-3、經切割之PARP(cleaved PARP))及細胞增殖標記(細胞週期蛋白B1)的表現進行西方墨點法(Western blot)解析所得之圖。(a)H3B-6527，(b)FGF-401，(c)BLU-554。N=3。 [圖5A]：示出HuBA-1-3D抗體及FGFR4選擇性阻礙劑(H3B-6527)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強之圖。 具體而言，其係示出Hep3B異種移植模型中，Vehicle投予組(〇)、HuBA-1-3D單獨投予(△、◇)、H3B-6527單獨投予(□)、HuBA-1-3D及H3B-6527的併用投予(▲、●)所引發之移植起Day 32(投予結束起7日後)為止之腫瘤生長之圖。 [圖5B]：示出HuBA-1-3D抗體及FGFR4選擇性阻礙劑(H3B-6527)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強之圖。 具體而言，其係對Day 38(最終投予日(Day 25)起13日後)為止，H3B-6527(50mg/kg)投予組(□)、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組(◇)、H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組(●)的腫瘤體積的推移進行觀察而得之圖。 [圖5C]：示出HuBA-1-3D抗體及FGFR4選擇性阻礙劑(H3B-6527)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強之圖。 具體而言，其係在Day 38(最終投予日(Day 25)起13日後)，H3B-6527(50mg/kg)投予組、HuBA-1-3D(1mg/kg)投予組、H3B-6527(50mg/kg)+HuBA-1-3D(1mg/kg)併用投予組的所摘出之腫瘤的(a)外觀的照片及(b)腫瘤重量的圖表。 [圖6]：示出HuBA-1-3D抗體及FGFR4選擇性阻礙劑(FGF-401)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強之圖。 具體而言，其係示出Hep3B異種移植模型中，Vehicle投予組(〇)、HuBA-1-3D單獨投予組(△、◇)、FGF-401單獨投予組(□)、HuBA-1-3D及FGF-401的併用投予組(▲、●)所引發之腫瘤生長之圖。從腫瘤體積達到1,500mm 3之個體進行犧牲。圖表係以圖表顯示至在所有投予組中，留有全部個體(各組N=8)之時點為止。 [圖7]：示出HuBA-1-3D抗體及FGFR4選擇性阻礙劑(BLU-554)的併用投予所引發之抗腫瘤效果的增強之圖。 具體而言，(A)為示出Hep3B異種移植模型中，Vehicle投予組(〇)、HuBA-1-3D單獨投予組(◇)、BLU-554單獨投予組(□)、HuBA-1-3D及BLU-554的併用投予組(●)中之平均的腫瘤生長之圖。從腫瘤體積達到1,500mm 3之個體進行犧牲。圖表係顯示至在各投予組(分組時N=8)中，留有至少7個體之時點為止。 *P＜0.05(vs Vehicle組，Dunnett)。(B)為示出Vehicle投予組、HuBA-1-3D單獨投予、BLU-554單獨投予、HuBA-1-3D及BLU-554的併用投予組各組的每個體之腫瘤生長之圖。 [圖8]：示出在與針對於FGFR1/FGFR2/FGFR3之阻礙劑(CH518324/Debio1347)之併用投予下，抗腫瘤效果的增強之圖。 具體而言，其係示出Hep3B異種移植模型中，Vehicle投予組(〇)、HuBA-1-3D單獨投予(△、◇)、CH518324/Debio1347單獨投予(□)、HuBA-1-3D及CH518324/Debio1347的併用投予(▲、●)中之腫瘤生長之圖。從腫瘤體積達到1,500mm 3之個體進行犧牲。圖表係以圖表顯示至在所有投予組中，留有全部個體(各組N=8)之時點為止。 
<![CDATA[<110>  日商凱依歐姆 生物科學股份有限公司（Chiome Bioscience Inc.）]]>
          <![CDATA[<120>  癌症治療用醫藥]]>
          <![CDATA[<130>  G2716WO]]>
          <![CDATA[<150>  JP 2020-168522]]>
          <![CDATA[<151>  2020-10-05]]>
          <![CDATA[<160>  46    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  1532]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人（Homo sapiens）]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (154)..(1305)]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          gagagcgcag cgcgcagccc ggtgcagccc tggctttccc ctcgctgcgc gcccgcgccc       60
          cctttcgcgt ccgcaaccag aagcccagtg cggcgccagg agccggaccc gcgcccgcac      120
          cgctcccggg accgcgaccc cggccgccca gag atg acc gcg acc gaa gcc ctc       174
                                               Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu          
                                               1               5                    
          ctg cgc gtc ctc ttg ctc ctg ctg gct ttc ggc cac agc acc tat ggg        222
          Leu Arg Val Leu Leu Leu Leu Leu Ala Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly           
                  10                  15                  20                        
          gct gaa tgc ttc ccg gcc tgc aac ccc caa aat gga ttc tgc gag gat        270
          Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro Gln Asn Gly Phe Cys Glu Asp           
              25                  30                  35                            
          gac aat gtt tgc agg tgc cag cct ggc tgg cag ggt ccc ctt tgt gac        318
          Asp Asn Val Cys Arg Cys Gln Pro Gly Trp Gln Gly Pro Leu Cys Asp           
          40                  45                  50                  55            
          cag tgc gtg acc tct ccc ggc tgc ctt cac gga ctc tgt gga gaa ccc        366
          Gln Cys Val Thr Ser Pro Gly Cys Leu His Gly Leu Cys Gly Glu Pro           
                          60                  65                  70                
          ggg cag tgc att tgc acc gac ggc tgg gac ggg gag ctc tgt gat aga        414
          Gly Gln Cys Ile Cys Thr Asp Gly Trp Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg           
                      75                  80                  85                    
          gat gtt cgg gcc tgc tcc tcg gcc ccc tgt gcc aac aac agg acc tgc        462
          Asp Val Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro Cys Ala Asn Asn Arg Thr Cys           
                  90                  95                  100                       
          gtg agc ctg gac gat ggc ctc tat gaa tgc tcc tgt gcc ccc ggg tac        510
          Val Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr Glu Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr           
              105                 110                 115                           
          tcg gga aag gac tgc cag aaa aag gac ggg ccc tgt gtg atc aac ggc        558
          Ser Gly Lys Asp Cys Gln Lys Lys Asp Gly Pro Cys Val Ile Asn Gly           
          120                 125                 130                 135           
          tcc ccc tgc cag cac gga ggc acc tgc gtg gat gat gag ggc cgg gcc        606
          Ser Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys Val Asp Asp Glu Gly Arg Ala           
                          140                 145                 150               
          tcc cat gcc tcc tgc ctg tgc ccc cct ggc ttc tca ggc aat ttc tgc        654
          Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys           
                      155                 160                 165                   
          gag atc gtg gcc aac agc tgc acc ccc aac cca tgc gag aac gac ggc        702
          Glu Ile Val Ala Asn Ser Cys Thr Pro Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly           
                  170                 175                 180                       
          gtc tgc act gac att ggg ggc gac ttc cgc tgc cgg tgc cca gcc ggc        750
          Val Cys Thr Asp Ile Gly Gly Asp Phe Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly           
              185                 190                 195                           
          ttc atc gac aag acc tgc agc cgc ccg gtg acc aac tgc gcc agc agc        798
          Phe Ile Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro Val Thr Asn Cys Ala Ser Ser           
          200                 205                 210                 215           
          ccg tgc cag aac ggg ggc acc tgc ctg cag cac acc cag gtg agc tac        846
          Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Leu Gln His Thr Gln Val Ser Tyr           
                          220                 225                 230               
          gag tgt ctg tgc aag ccc gag ttc aca ggt ctc acc tgt gtc aag aag        894
          Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr Gly Leu Thr Cys Val Lys Lys           
                      235                 240                 245                   
          cgc gcg ctg agc ccc cag cag gtc acc cgt ctg ccc agc ggc tat ggg        942
          Arg Ala Leu Ser Pro Gln Gln Val Thr Arg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly           
                  250                 255                 260                       
          ctg gcc tac cgc ctg acc cct ggg gtg cac gag ctg ccg gtg cag cag        990
          Leu Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Val His Glu Leu Pro Val Gln Gln           
              265                 270                 275                           
          ccg gag cac cgc atc ctg aag gtg tcc atg aaa gag ctc aac aag aaa       1038
          Pro Glu His Arg Ile Leu Lys Val Ser Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys           
          280                 285                 290                 295           
          acc cct ctc ctc acc gag ggc cag gcc atc tgc ttc acc atc ctg ggc       1086
          Thr Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gln Ala Ile Cys Phe Thr Ile Leu Gly           
                          300                 305                 310               
          gtg ctc acc agc ctg gtg gtg ctg ggc act gtg ggt atc gtc ttc ctc       1134
          Val Leu Thr Ser Leu Val Val Leu Gly Thr Val Gly Ile Val Phe Leu           
                      315                 320                 325                   
          aac aag tgc gag acc tgg gtg tcc aac ctg cgc tac aac cac atg ctg       1182
          Asn Lys Cys Glu Thr Trp Val Ser Asn Leu Arg Tyr Asn His Met Leu           
                  330                 335                 340                       
          cgg aag aag aag aac ctg ctg ctt cag tac aac agc ggg gag gac ctg       1230
          Arg Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu           
              345                 350                 355                           
          gcc gtc aac atc atc ttc ccc gag aag atc gac atg acc acc ttc agc       1278
          Ala Val Asn Ile Ile Phe Pro Glu Lys Ile Asp Met Thr Thr Phe Ser           
          360                 365                 370                 375           
          aag gag gcc ggc gac gag gag atc taa gcagcgttcc cacagccccc             1325
          Lys Glu Ala Gly Asp Glu Glu Ile                                           
                          380                                                       
          tctagattct tggagttccg cagagcttac tatacgcggt ctgtcctaat ctttgtggtg     1385
          ttcgctatct cttgtgtcaa atctggtgaa cgctacgctt acatatattg tctttgtgct     1445
          gctgtgtgac aaacgcaatg caaaaacaat cctctttctc tctcttaatg catgatacag     1505
          aataataata agaatttcat ctttaaa                                         1532
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  383]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人（Homo sapiens）]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Val Leu Leu Leu Leu Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro 
                      20                  25                  30          
          Gln Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Val Cys Arg Cys Gln Pro Gly 
                  35                  40                  45              
          Trp Gln Gly Pro Leu Cys Asp Gln Cys Val Thr Ser Pro Gly Cys Leu 
              50                  55                  60                  
          His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gln Cys Ile Cys Thr Asp Gly Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Val Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Asn Asn Arg Thr Cys Val Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr Glu 
                      100                 105                 110         
          Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gln Lys Lys Asp 
                  115                 120                 125             
          Gly Pro Cys Val Ile Asn Gly Ser Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu Ile Val Ala Asn Ser Cys Thr Pro 
                          165                 170                 175     
          Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Val Cys Thr Asp Ile Gly Gly Asp Phe 
                      180                 185                 190         
          Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly Phe Ile Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Asn Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Leu 
              210                 215                 220                 
          Gln His Thr Gln Val Ser Tyr Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Leu Thr Cys Val Lys Lys Arg Ala Leu Ser Pro Gln Gln Val Thr 
                          245                 250                 255     
          Arg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly Leu Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Val 
                      260                 265                 270         
          His Glu Leu Pro Val Gln Gln Pro Glu His Arg Ile Leu Lys Val Ser 
                  275                 280                 285             
          Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys Thr Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gln Ala 
              290                 295                 300                 
          Ile Cys Phe Thr Ile Leu Gly Val Leu Thr Ser Leu Val Val Leu Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Val Gly Ile Val Phe Leu Asn Lys Cys Glu Thr Trp Val Ser Asn 
                          325                 330                 335     
          Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gln 
                      340                 345                 350         
          Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu Ala Val Asn Ile Ile Phe Pro Glu Lys 
                  355                 360                 365             
          Ile Asp Met Thr Thr Phe Ser Lys Glu Ala Gly Asp Glu Glu Ile 
              370                 375                 380             
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Thr Tyr Ile His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Met Gln His Val Glu Tyr Pro Phe Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Asp Tyr Ala Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ala 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 
          1               5                  
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(354)]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          gag gtt cag ctg cag cag tct ggg gca gag ctt gtg aag cca ggg gcc         48
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tca gtc aag ttg tcc tgc aca gct tct ggc ttc aac att aga gac acc         96
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Thr           
                      20                  25                  30                    
          tat ata cac tgg gtg aag cag agg cct gag cag ggc ctg gag tgg att        144
          Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga agg att gat cct ccg aat ggt aat ctt aaa tat gac ccg aag ttc        192
          Gly Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          cag ggc aag gcc act ata aca gca gac aca tcc tcc aac aca gcc tac        240
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          ctg cag ttc agc agc ctg aca tct gag gac act gcc gtc tat tac tgt        288
          Leu Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca agg tct gat ggt tac tcc ttt gct tac tgg ggc caa ggg act ctg        336
          Ala Arg Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu           
                      100                 105                 110                   
          gtc act gtc tct gca gcc                                                354
          Val Thr Val Ser Ala Ala                                                   
                  115                                                               
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ala Ala 
                  115             
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  336]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(336)]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          gat att gtg atg act cag gct gca ccc tct gta cct gtc act cct gga         48
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly           
          1               5                   10                  15                
          gag tca gta tcc atc tcc tgc agg tct agt aag agt ctc ctg cat agt         96
          Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser           
                      20                  25                  30                    
          aat ggc aac act tac ttg tat tgg ttc ctg cag agg cca ggc cag tct        144
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser           
                  35                  40                  45                        
          cct cag ctc ctg ata tat cgg atg tcc aac ctt gcc tca gga gtc cca        192
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro           
              50                  55                  60                            
          gac agg ttc agt ggc agt ggg tca gga act gct ttc aca ctg aga atc        240
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile           
          65                  70                  75                  80            
          agt aga gtg gag gct gag gat gtg ggt gtt tat tac tgt atg caa cat        288
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His           
                          85                  90                  95                
          gta gaa tat cca ttc acg ttc ggc tcg ggg aca aag ttg gaa ata aaa        336
          Val Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys           
                      100                 105                 110                   
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  363]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
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          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(363)]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          cag gtc cag ctg cag cag tct ggg cct gag ctg gtg agg cct ggg gtc         48
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val           
          1               5                   10                  15                
          tca gtg aag att tcc tgc aag ggt tcc ggc tac aca ttc act gat tat         96
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr           
                      20                  25                  30                    
          gct atg cac tgg gtg aag cag agt cat gca aag agt cta gag tgg att        144
          Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga gtt att agt act tac tat ggt aat aca aac tac aac cag aag ttt        192
          Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag ggc aag gcc aca atg act gta gac aaa tcc tcc agc aca gcc tat        240
          Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctt gcc aga ttg aca tct gag gat tct gcc atc tat tac tgt        288
          Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca aga gga gga tta cga gag tat tac tat gct atg gac tac tgg ggt        336
          Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly           
                      100                 105                 110                   
          caa gga acc tca gtc acc gtc tcc tca                                    363
          Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser                                       
                  115                 120                                           
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  339]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(339)]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          gac att gtg atg aca cag tct cca tcc tcc ctg gct atg tca gta gga         48
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly           
          1               5                   10                  15                
          cag aag gtc act atg agc tgc aag tcc agt cag agc ctt tta aat agt         96
          Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser           
                      20                  25                  30                    
          agc aat caa aag aac tat ttg gcc tgg tac cag cag aaa cca gga cag        144
          Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln           
                  35                  40                  45                        
          tct cct aaa ctt ctg gta tac ttt gca tcc act agg gaa tct ggg gtc        192
          Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val           
              50                  55                  60                            
          cct gat cgc ttc ata ggc agt gga tct ggg aca gat ttc act ctt acc        240
          Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr           
          65                  70                  75                  80            
          atc agc agt gtg cag gct gaa gac ctg gca gat tac ttc tgt cag caa        288
          Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln           
                          85                  90                  95                
          cat tat agc act cct ccc acg ttc ggt gct ggg acc aag ctg gag ctg        336
          His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu           
                      100                 105                 110                   
          aaa                                                                    339
          Lys                                                                       
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家鼷鼠（Mus musculus）]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln 
                          85                  90                  95      
          His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 
                      100                 105                 110         
          Lys 
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  351]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
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          <![CDATA[<400>  23]]>
          cag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gca gag gtg aag aag cca ggg tcc         48
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser           
          1               5                   10                  15                
          tca gtc aag gtc tcc tgc aag gct tct ggc ttc aac att aga gac acc         96
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Thr           
                      20                  25                  30                    
          tat ata cac tgg gtg cgg cag gcc cct gga cag ggc ctg gag tgg att        144
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga agg att gat cct ccg aat ggt aat ctt aaa tat gac ccg aag ttc        192
          Gly Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          cag ggc aag gcc act ata aca gca gac aca tcc acg agc aca gcc tac        240
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gag ttc agc agc ctg aga tct gag gac act gcc gtc tat tac tgt        288
          Met Glu Phe Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca agg tct gat ggt tac tcc ttt gct tac tgg ggc caa ggg act ctg        336
          Ala Arg Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu           
                      100                 105                 110                   
          gtc act gtc tct tca                                                    351
          Val Thr Val Ser Ser                                                       
                  115                                                               
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  24]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Phe Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  351]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重組DNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(351)]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          cag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gca gag gtg aag aag cca ggg tcc         48
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser           
          1               5                   10                  15                
          tca gtc aag gtc tcc tgc aag gct tct ggc ttc aac att aga gac acc         96
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Thr           
                      20                  25                  30                    
          tat ata cac tgg gtg cgg cag gcc cct gga cag ggc ctg gag tgg att        144
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga agg att gat cct ccg aat ggt aat ctt aaa tat gac ccg aag ttc        192
          Gly Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          cag ggc aag gcc act ata aca gca gac aca tcc acg agc aca gcc tac        240
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gag ctg agc agc ctg aga tct gag gac act gcc gtc tat tac tgt        288
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca agg tct gat ggt tac tcc ttt gct tac tgg ggc caa gga act ctg        336
          Ala Arg Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu           
                      100                 105                 110                   
          gtc act gtc tct tca                                                    351
          Val Thr Val Ser Ser                                                       
                  115                                                               
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  26]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Arg Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Arg Ile Asp Pro Pro Asn Gly Asn Leu Lys Tyr Asp Pro Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Asp Gly Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重組DNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(336)]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          gat att gtg atg act cag tct cca ctc tct ctg cct gtc act cct gga         48
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly           
          1               5                   10                  15                
          gag ccg gcc tcc atc tcc tgc agg tct agc aag agt ctc ctg cat agt         96
          Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser           
                      20                  25                  30                    
          aat ggc aac act tac ttg tat tgg ttc ctg cag aag cca ggc cag tct        144
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser           
                  35                  40                  45                        
          cct cag ctc ctg ata tat cgg atg tcc aac ctt gcc tca gga gtc cca        192
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro           
              50                  55                  60                            
          gac agg ttc agt ggc agt ggg tca gga act gct ttc aca ctg aaa atc        240
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile           
          65                  70                  75                  80            
          agt aga gtg gag gct gag gat gtg ggt gtt tat tac tgt atg caa cat        288
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His           
                          85                  90                  95                
          gta gaa tat cca ttc acg ttc ggc caa ggg aca aag gtg gaa atc aaa        336
          Val Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys           
                      100                 105                 110                   
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
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          <![CDATA[<400>  28]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 
                          85                  90                  95      
          Val Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400>  29]]>
          caa gtc cag ctg gtg cag tct ggg gct gaa gtg aag aag cct ggg gcc         48
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala           
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          gct atg cac tgg gtg cga cag gcc cct gga caa ggc ctg gag tgg att        144
          Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga gtt att agt act tac tat ggt aat aca aac tac aac cag aag ttt        192
          Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag ggc cga gcc aca atg act gtc gac aaa tcc acc agc aca gcc tat        240
          Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctt agg agc ttg aga tct gac gat act gcc gtg tat tac tgt        288
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca aga gga gga ttg cga gag tat tac tat gct atg gac tac tgg ggt        336
          Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly           
                      100                 105                 110                   
          caa gga acc atg gtc acc gtc tcc tca                                    363
          Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser                                       
                  115                 120                                           
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體（重組蛋白質）]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  363]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重組DNA]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(363)]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          caa gtc cag ctg gtg cag tct ggg gct gaa gtg aag aag cct ggg gcc         48
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala           
          1               5                   10                  15                
          tca gtg aaa gtc tcc tgc aag ggt tcc ggc tac aca ttc act gat tat         96
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr           
                      20                  25                  30                    
          gct atg cac tgg gtg cga cag gcc cct gga caa ggc ctg gag tgg att        144
          Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile           
                  35                  40                  45                        
          gga gtt att agt act tac tat ggt aat aca aac tac aac cag aag ttt        192
          Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe           
              50                  55                  60                            
          aag ggc cga gcc aca atg act gtc gac aaa tcc acc agc aca gcc tat        240
          Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr           
          65                  70                  75                  80            
          atg gaa ctt agg agc ttg aga tct gac gat act gcc gtg tat tac tgt        288
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys           
                          85                  90                  95                
          gca aga gga gga ttg cga gag tat tac tat gct atg gac tac tgg ggt        336
          Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly           
                      100                 105                 110                   
          caa gga acc atg gtc acc gtc tcc tca                                    363
          Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser                                       
                  115                 120                                           
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體（重組蛋白質）]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  CDS]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(339)]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          gac att gtc atg aca cag tct cca gac tcc ctg gct gtg tca ctg gga         48
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly           
          1               5                   10                  15                
          gag agg gcc act atc aac tgc aag tcc agt cag agc ctt ctg aat agt         96
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser           
                      20                  25                  30                    
          agc aat caa aag aac tat ttg gcc tgg tac cag cag aaa cca gga cag        144
          Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln           
                  35                  40                  45                        
          cct cct aaa ctt ctg gtc tac ttt gca tcc act agg gaa tct ggg gtc        192
          Pro Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val           
              50                  55                  60                            
          cct gat cgc ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc act ctt acc        240
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr           
          65                  70                  75                  80            
          atc agc agt ctg cag gct gaa gat gtg gca gtt tac tac tgt cag caa        288
          Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln           
                          85                  90                  95                
          cat tat agc act cct ccc aca ttc ggt cag ggg acc aag ctg gag atc        336
          His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile           
                      100                 105                 110                   
          aaa                                                                    339
          Lys                                                                       
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
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          <![CDATA[<213>  人工]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成構築體（重組蛋白質）]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 
                          85                  90                  95      
          His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Lys
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036

Claims (16)

  1. 一種用於治療癌症之組合醫藥，其包含 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內( in vivo)具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
  2. 一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段， 前述醫藥組成物係與阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物組合使用。
  3. 一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物， 前述醫藥組成物係與在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段組合使用。
  4. 一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段， 前述治療包含投予阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物。
  5. 一種用於治療癌症之醫藥組成物，其包含阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物， 前述治療包含投予在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
  6. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質為H3B-6527、FGF-401(羅匹替尼(Roblitinib))或BLU-554(非索替尼(Fisogatinib))。
  7. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，前述癌症及/或前述腫瘤為FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症。
  8. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，前述癌症及/或前述腫瘤為選自由肝細胞癌、肺癌、子宮體癌、膽管癌、肝內膽管癌、食道癌、鼻咽癌、卵巢癌、乳癌、腎細胞癌、胰臟癌、結腸癌及膠質母細胞瘤以及包含橫紋肌肉瘤在內之肉瘤所組成之群組之至少1種。
  9. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，前述抗體為嵌合抗體或人類化抗體。
  10. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，前述抗體為選自由下列者所組成之群組之至少1種： (a)H鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：3~5所示之胺基酸序列，且L鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：6~8所示之胺基酸序列之抗體， (b)H鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：9~11所示之胺基酸序列，且L鏈V區域的CDR1~3的胺基酸序列分別依序為SEQ ID NO：12~14所示之胺基酸序列之抗體， (c)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：16所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：18所示之胺基酸序列所構成之抗體， (d)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：20所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：22所示之胺基酸序列所構成之抗體， (e)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：24或26所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：28所示之胺基酸序列所構成之抗體， (f)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：30、32、34或36所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：46所示之胺基酸序列所構成之抗體， (g)H鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：38、40、42或44所示之胺基酸序列所構成，且L鏈V區域的胺基酸序列係由SEQ ID NO：46所示之胺基酸序列所構成之抗體， (h)由寄存編號為FERM BP-10899之融合瘤所產生之抗體， (i)由寄存編號為FERM BP-10707之融合瘤所產生之抗體， (j)由寄存編號為FERM BP-10900之融合瘤所產生之抗體，及 (k)由寄存編號為FERM BP-11337之融合瘤所產生之抗體。
  11. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，前述抗體或抗體片段係呈與具有抗腫瘤活性及/或殺細胞活性之化合物之複合體的形態。
  12. 如請求項1之組合醫藥或請求項2至5中任一項之醫藥組成物，其中，即便在前述組合醫藥或醫藥組成物的投藥結束後，亦可抑制癌細胞的增殖或者使腫瘤縮小或消失。
  13. 一種下述者在製備癌症治療用藥劑的用途： 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
  14. 一種癌症的治療方法，其特徵為將下列者投予至被驗對象： 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
  15. 一種用於治療癌症之套組，其包含 阻礙或抑制纖維母細胞增殖因子受體4(FGFR4)的酪胺酸激酶活性之物質或其前藥，或該等的藥理學上可容許的鹽，或者該等的水合物或溶媒合物，以及 在活體內具有抗腫瘤活性之對抗人類DLK-1之抗體或源自於該抗體之抗體片段。
  16. 如請求項13之用途、請求項14之方法或請求項15之套組，其中，前述癌症及/或前述腫瘤為FGFR4會進行表現及/或觀察到FGFR4的酪胺酸激酶活性之癌症。
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