CN115490670A - Fgfr4选择性抑制剂的盐及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式(I)化合物的甲磺酸盐或乙磺酸盐及其制备方法、包含所述盐的药物组合物和所述盐的用途。

Description

FGFR4选择性抑制剂的盐及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及一种FGFR₄选择性抑制剂的盐及其制备方法与用途，具体地，本发明涉及N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯酰胺的盐及其制备方法与含有它们的药物组合物及它们的用途。

技术背景

专利申请(PCT/CN2017/085135)报道了一类新的嘧啶类衍生物，这类化合物是FGFR₄途径抑制剂。大量的证据表明，肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌和胆管癌等中有FGFR₄的基因扩增突变。FGFR₄选择性抑制剂，相对于其他FGFR抑制剂具有毒性小的优势(Brow,APet al(2005),Toxocol.Pathol.,449-455)。考虑到目前可用药物的安全性和有效性缺陷，尤其是考虑到FGFR₄选择性抑制剂的应用潜力，目前对于FGFR₄选择性抑制剂在抗肝癌等方面的研究是远远不够的，有必要研究和开发新的FGFR₄抑制剂。

PCT/CN2017/085135报道的化学名称为N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯酰胺的式(I)游离碱化合物，其结构如下所示：

体外细胞活性检测发现，式(I)化合物对肝癌细胞Hep3B具有良好的抑制活性，IC₅₀值为0.019μM，具有良好的开发前景。但是在式(I)化合物的成药性研究过程中，本发明的发明人发现，式(I)化合物的常见可药用盐在理化性质和成药性方面均不能令人满意，包括在生物利用度、水溶性、引湿性等方面。因此，有必要深入研究找到适合药用的N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯酰胺的新形式，以满足药物开发的需要。

发明内容

本发明人在研究中意外发现，下述式(I)化合物的甲磺酸盐或乙磺酸盐具有令人满意的成药性能，包括优异的水溶性和生物利用度，而且令人惊讶的是，所述甲磺酸盐和乙磺酸盐在体内抗肿瘤测试中表现出显著优于其他盐的效果：

基于上述发现，在第一个方面，本发明提供了所述式(I)化合物的甲磺酸盐或乙磺酸盐形式。

特别优选的甲磺酸盐和乙磺酸盐分别是如下式(I-1)和式(I-2)所示的甲磺酸盐和乙磺酸盐：

在本发明的另一方面，提供了制备所述式(I)化合物的甲磺酸盐或乙磺酸盐的方法，所述方法包括使式(I)的游离碱化合物与甲磺酸或乙磺酸在溶剂中进行反应的步骤。在一些优选的实施方案中，式(I)化合物与甲磺酸或乙磺酸反应的溶剂选自醇、酮、甲基叔丁基醚或它们的混合物；在进一步优选的实施方案中，式(I)化合物与甲磺酸或乙磺酸反应的溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、甲基叔丁基醚或它们的混合物；在更进一步优选的实施方案中，式(I)化合物与甲磺酸或乙磺酸反应的溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、甲基叔丁基醚或它们的混合物。

在一些具体的实施方案中，式(I)化合物与甲磺酸或乙磺酸在溶剂丙酮和甲基叔丁基醚中按比例在室温下反应5h即得。

在一些具体的实施方案中，制备所述式(I)化合物的甲磺酸盐或乙磺酸盐的方法，包括从包含式(I)所示游离碱与甲磺酸或乙磺酸的丙酮：水＝(40～10)：1的混合溶液中成盐的步骤。

在第三方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有式(I)化合物的乙磺酸盐或甲磺酸盐，以及药学上可接受的载体。

在第四方面，本发明提供了式(I)化合物的乙磺酸盐或甲磺酸盐或包含所述甲磺酸盐或乙磺酸盐的药物组合物在制备用作FGFR4抑制剂的药物中的用途。

本发明进一步提供了式(I)化合物的乙磺酸盐或甲磺酸盐或包含所述甲磺酸盐或乙磺酸盐的药物组合物在制备治疗FGFR4过度表达的疾病的药物中的用途。

本发明进一步提供了式(I)化合物的乙磺酸盐或甲磺酸盐或包含所述甲磺酸盐或乙磺酸盐的药物组合物在制备治疗FGFR4扩增所致疾病的药物中的用途。

本发明进一步提供了式(I)化合物的乙磺酸盐或甲磺酸盐或包含所述甲磺酸盐或乙磺酸盐的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途；其中所述的癌症优选自非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌和胆管癌，更优选自肝癌和胆管癌。

附图说明

图1是表明在Hep3B模型中各组小鼠肿瘤体积的生长曲线；

图2是表明在Hep3B模型中各组小鼠体重变化曲线。

具体实施方式

以下结合实施例更详细的解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的范围。

式(I)化合物的制备参见PCT/CN2017/085135实施例5，该专利公开文件以其全文并入本文中。

式(I-1)化合物的制备：

取式(I)游离碱化合物(2000mg,3.0mmol)投入反应瓶，加入50ml丙酮和2.5ml水，搅拌均匀，加入甲磺酸(0.63g，6.6mmol)搅拌溶解，室温下搅拌溶解，反应液浓缩去丙酮，过滤，干燥，得无定型固体2.2g，收率85％。

MS m/z(ESI)：655.2321[M-2CH₄O₃S+H]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.25(s,1H)，9.73(s,1H),9.47(s,1H),9.33(s,1H),8.45(s,1H),7.39(s,1H),7.34(d,J＝8.8Hz,1H),6.91(s,1H),6.91-6.88(m,1H),6.54-6.47(m,2H),6.25(d,J＝17Hz,1H),5.75(d,J＝10.4Hz,1H),3.94(s,6H),3.70-3.66(m,1H),3.62-3.55(m,4H),3.39-3.34(m,5H),3.12-3.09(m,1H),2.41(s,6H),1.28-1.25(m,5H),1.06-0.98(m,2H)

式(I-2)化合物的制备：

取式(I)游离碱化合物(1000mg,1.5mmol)投入反应瓶，加入25ml丙酮和1.25ml水，搅拌均匀，加入乙磺酸(0.39g，3.3mmol)，室温下搅拌溶解，反应液浓缩去丙酮，过滤，干燥，得无定型固体1.2g，收率90％。

MS m/z(ESI)：655.2322[M-2C₂H₆O₃S+H]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.88(brs,1H)，9.83(s,1H),9.67(s,2H),8.54(s,1H),7.44(s,1H),7.31(d,J＝8.7Hz,1H),6.91-6.88(m,2H),6.67(s,1H),6.51(dd,J₁＝10.4Hz,1H,J₂＝16.9Hz,1H),6.22(d,J＝17.1Hz,1H),5.73(d,J＝10.5Hz,1H),3.93(s,6H),3.71-3.69(m,1H),3.61-3.54(m,4H),3.40(s,3H),3.37-3.35(m,2H),3.11(d,J＝13.4Hz,1H),2.58-2.52(m,4H),1.36-1.34(m,2H),1.28(t,J＝6.9Hz,3H),1.11(t,J＝7.4Hz,6H),1.05-0.98(m,2H)

实验例1不同盐型的药物代谢动力学研究(SD大鼠)

给药制剂配制

SD大鼠灌胃给药制剂配制：分别准确称量供试品式(I)游离碱化合物以及其甲磺酸盐、乙磺酸盐、盐酸盐、马来酸盐，加入适量体积的0.5％CMC-Na水溶液，涡旋振荡后超声，如有必要可进行剪切乳化至混合均匀，也可通过研磨的方式，得浓度为2mg·mL^-1的给药制剂。

实验动物

实验动物来源及数量见表1。实验动物饲养在动物房内。动物房通风良好，装备空调，温度保持在20～25℃，湿度保持在40％～70％，明暗照明各12小时，实验动物能自由进食和饮水。正常喂养约5天后，经兽医检验，体征状况良好的大鼠可入选本实验。每只大鼠均用尾标号标记。

表1.实验动物来源及数量

实验方案

动物实验给药方案详见表2。实验前一天，所有SD大鼠禁食过夜(12h以上)。实验当天，称量体重后，按以下公式计算每只大鼠的理论给药体积。给药制剂应实验当天现配现用，配制与给药间隔不得超过2小时。每只大鼠的实际给药量和血浆样品的采集时间需详细记录在相应表格中。SD大鼠给药4h后可恢复进食，实验过程中可自由饮水。

表2.动物给药方案表

实验当天，A组SD大鼠单次灌胃给予20mg·kg-1的游离碱给药制剂，B组SD大鼠单次灌胃给予20mg·kg^-1的乙磺酸盐给药制剂，C组SD大鼠单次灌胃给予20mg·kg^-1的甲磺酸盐给药制剂，D组SD大鼠单次灌胃给予20mg·kg^-1的马来酸盐给药制剂，E组SD大鼠单次灌胃给予20mg·kg^-1的盐酸盐给药制剂，于给药前及给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24h，由颈静脉采血0.15mL，置于含EDTA-K2的抗凝管中。

所有全血样品离心(5500转/分)10min后分离血浆，保存在-30～-10℃的冰箱。

药代动力学参数

采用Pharsight Phoenix 7.0中的非房室模型计算相应的药代动力学参数，结果见下表3。

表3各化合物的药代动力学参数

由上述结果可见，各种盐型均具有显著优于游离碱的药代动力学性质，主要体现在AUC_0-t和C_max等参数上；而且，令人惊讶的是，甲磺酸盐和乙磺酸盐的药代动力学性质要显著优于其他盐形式。

实验例2不同盐型的药物代谢动力学研究(ICR小鼠)

给药制剂配制

ICR小鼠灌胃给药制剂配制：分别准确称量供试品甲磺酸盐、乙磺酸盐、磷酸盐和盐酸盐，加入适量体积的生理盐水，涡旋振荡后超声，如有必要可进行剪切乳化至混合均匀，也可通过研磨的方式，得浓度为7.5mg·mL^-1的给药制剂。

实验动物

实验动物来源及数量见表1。实验动物饲养在动物房内。动物房通风良好，装备空调，温度保持在20～25℃，湿度保持在40％～70％，明暗照明各12小时，实验动物能自由进食和饮水。正常喂养约5天后，经兽医检验，体征状况良好的小鼠可入选本实验。每只小鼠均用尾标号标记。

表4.实验动物来源及数量

实验方案

ICR小鼠实验给药方案详见表5。实验前一天，所有ICR小鼠禁食过夜(12h以上)。实验当天，称量体重后，按以下公式计算每只小鼠的理论给药体积。给药制剂应实验当天现配现用，配制与给药间隔不得超过2小时。每只小鼠的实际给药量和血浆样品的采集时间需详细记录在相应表格中。ICR小鼠给药4h后可恢复进食，实验过程中可自由饮水。

表5动物给药方案表

实验当天，A组ICR小鼠单次灌胃给予75mg·kg^-1的磷酸盐给药制剂，B组ICR小鼠单次灌胃给予75mg·kg^-1的乙磺酸盐给药制剂，C组ICR小鼠单次灌胃给予75mg·kg^-1的甲磺酸盐给药制剂，D组ICR小鼠单次灌胃给予75mg·kg^-1的盐酸盐给药制剂，于给药前及给药后0.25、0.5、1、2、4、8、10、12和24h，由眼底静脉丛采血0.15mL，置于含EDTA-K2的抗凝管中。

所有全血样品离心(5500转/分)10min后分离血浆，保存在-30～-10℃的冰箱。

药代动力学参数

采用Pharsight Phoenix 7.0中的非房室模型计算相应的药代动力学参数，结果见下表6。

表6各化合物的药代动力学参数

由上述结果可见，甲磺酸盐、乙磺酸盐具有显著优于其他盐形式的药代动力学性质，体现在例如C_max和AUC_0-t等参数上。

实验例3式(I)化合物和其盐型化合物在Hep3B人肝癌皮下移植模型中的药效学评价

给药制剂配制

灌胃给药制剂配制：分别准确称量索拉非尼、式(I)游离碱化合物以及其马来酸盐、磷酸盐、盐酸盐、甲磺酸盐和乙磺酸盐，加入适量体积的生理盐水，涡旋振荡至混合均匀，给药制剂现配现用。

实验动物

BALB/c nude小鼠，雌性，购自江苏集萃药康生物科技有限公司。许可证号：SCXK(苏)2019-0009，动物合格证编号：202102418。

动物到达后在实验环境饲养7天后方能开始实验。实验动物均饲养于恒温恒湿的智能型独立通气笼(IVC)。温度保持在20-26℃，湿度保持在40-70％，昼夜明暗交替时间10h/14h，实验动物能自由进食和饮水。实验动物采用耳标法进行标记。

实验方案

Hep3B细胞皮下肿瘤模型建立：将0.2mL的含有3.5×10⁶个Hep3B细胞的细胞悬液接种到6周龄以上的雌性BALB/c裸小鼠的背部右侧皮下，来建立移植瘤。用游标卡尺测量肿瘤直径，并用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝0.5×a×b²，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。当平均肿瘤体积达到200-250mm³时，将荷瘤小鼠随机分为9组并根据实验设计给药。各治疗组及溶媒对照组口服灌胃给药10天。小鼠的肿瘤体积一周测量两次，体重每天称量。根据相对肿瘤抑制率TGI(％)进行疗效评价，根据动物体重变化和死亡情况进行安全性评价。

相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C)和相对肿瘤抑制率(TGI)计算公式如下：

(1)RTV(relative tumor volume)＝V_t/V₀，其中V₀为分组给药时(即d0)所测得的肿瘤体积，V_t为每一次测量时的肿瘤体积；

(2)T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％，其中T_RTV为治疗组的RTV，C_RTV为对照组的RTV；

(3)TGI(％)＝(1-T/C)×100％；其中，T和C分别为治疗组和对照组某一特定时间点的相对肿瘤体积。

动物给药方案表见下表7。

表7动物给药方案表

备注：①溶媒对照组给予盐水

②^*以式(I)化合物计

实验结果

溶媒对照组小鼠在给药后第11天平均肿瘤体积为2073mm³。索拉非尼治疗组在给药后第11天平均肿瘤体积为1238mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p＝0.006)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为42.9％。式(I)化合物马来酸盐治疗组给药后第11天平均肿瘤体积为202mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p<0.001)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为90.7％。式(I)化合物盐酸盐治疗组在给药后第11天平均肿瘤体积为210mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p<0.001)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为89.9％。式(I)化合物磷酸盐治疗组在给药后第11天平均肿瘤体积为169mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p<0.001)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为92.1％。式(I)化合物甲磺酸盐治疗组在给药后第11天平均肿瘤体积为93mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p<0.001)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为95.5％。式(I)化合物治疗组在给药后第11天平均肿瘤体积为314mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p<0.001)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为84.8％。式(I)化合物乙磺酸盐治疗组在给药后第11天平均肿瘤体积为121mm³，相较对照组统计学上有显著性差异(p<0.001)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为94.0％。

由于该模型属于恶病质模型，对照组体重明显下降。其它各治疗组实验动物在实验过程中均无动物死亡，给药剂量下动物耐受良好。

实验结果表明，本实验中测试药式(I)化合物及其马来酸盐、盐酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐和乙磺酸盐均表现出显著的抗肿瘤活性，且药效优于索拉非尼，其中式(I)化合物的甲磺酸盐和乙磺酸盐抗肿瘤活性明显优于式(I)化合物，且优于其他盐，这一结果尤其是预料之外的。

总之，出乎意料的是，与其他形式(游离碱化合物、马来酸盐、盐酸盐、磷酸盐)相比，甲磺酸盐和乙磺酸盐具有明显更好的抗肿瘤效果。如下表所示，相比于游离碱化合物组，甲磺酸盐和乙磺酸盐组均有显著性差异，马来酸盐、盐酸盐和磷酸盐组均无显著性差异(游离碱和其他盐形式在肿瘤体积和相对肿瘤体积方面均不如甲磺酸盐组或乙磺酸盐组)。

表8在Hep3B细胞皮下移植瘤模型中各组药效分析表

Claims (9)

1.一种式(I)所示游离碱的盐，其中所述盐选自甲磺酸盐和乙磺酸盐：

2.根据权利要求1所述的盐，其为乙磺酸盐。

3.一种制备权利要求1或2所述的盐的方法，包括从包含式(I)所示游离碱与甲磺酸或乙磺酸的丙酮：水＝(40～10)：1的混合溶液中成盐的步骤。

4.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-2中任一项所述的盐，以及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的盐或根据权利要求4所述的药物组合物在制备用作FGFR4抑制剂的药物中的用途。

6.根据权利要求1-2中任一项所述的盐或根据权利要求4所述的药物组合物在制备治疗FGFR4过度表达的疾病的药物中的用途。

7.根据权利要求1-2中任一项所述的盐或根据权利要求4所述的药物组合物在制备治疗FGFR4扩增所致疾病的药物中的用途。

8.根据权利要求1-2中任一项所述的盐或根据权利要求4所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述的癌症选自非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌和胆管癌，优选选自肝癌和胆管癌。

Images