TWI306846B - Method for the separation of intermediates which may be used for the preparation of escitalopram - Google Patents

Description

1306846 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】

用於製備依地普舍（esc i tal opr am)。 【先前技術】 本發明背景 西肽普侖（Citalopram)是一種廣知的抗抑鬱藥物，目 前已上市多年。 % 匕是一種選擇性，中央作用性的羥色胺（5_羥基色胺； 5-HT)再攝取抑制劑，因此具有抗抑鬱活性。 西跃普命首先揭示於DE2, 657, 01 3，相對應於US -4, 136’193。此專利闡明由相對應5_溴衍生物中製備西酞 · 音命的方法’其係利用在適當溶劑中與氰化亞銅反應以及 利用臭—菲索林（Phthalane)的烷基化作用。 備依地普舍（西跃普侖的S-對映體）的方法。 k兩種方法均使用具下式之外消旋二醇 US 4’943’59〇 ’ 相對應於 EP-B1-347066，述及二種製·

1306846 做為起始物質。依據第一個方法，式（1)的二醇與純異 冓14的酸衍生物反應，例如（+ )或（_)— 〇_甲氧基三氟 曱基本乙醯氣，因而形成非對映性酯的混合物，它們可使 用ΗΡ1Χ或部份結晶而分離出’由此具有正確立體化學性的 醋可對映選擇性地轉換成依地普侖。依㈣：個方法，式 (Π)的二醇利用純異構性的酸，例如⑴-二^甲苯酿酒石 酸，進行立體選擇性結晶作用而分離出對映體’由此，式 ⑴二醇的S_對映體可對映選擇性地轉換成依地普命。 依地普侖在目前已發展做為抗憂#劑。因此，對於改 良製備依地普侖的方法便有所需求。 經發現，上述式（1)二醇的3_對 ,i 听題與它的經醯化衍 生物可使用一級羧基在外消旋性醇 醇中進行選擇性酵素催 化醯化作用而得到高光學純度的5_二 、 & 畔或匕的經酿化衍生 物，更甚者，所得到的對映體可利用一 王 純化步驟而分離出。 系列的分離作用和 【發明内容】 本發明 依此，本發明係有關於一種新穎方 具有式（Π )二醇之S-或R-對映體或其鹽 、係用於製備 l^>〇6846

匈亂丞或可轉換成氰 •、、'J 1^2 R )基且其中R，和R，，A Γ - ⑽連接之㈣子㈣狀結構 互連接 成〜甲胺甲基的基團，虛線為譬/ 4可轉換 121 I線為雙或早鍵且Hal為卣素， 或式（IV )經醯化二醇之相反對映體或其鹽

(IV) 〇β、其中R，z，虛線和Hal為如同上文中所定義者，¥為 C或S ’及R3為—Y-Rl且其中Ri為Ci，—烷基，。2丨。，基或 炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次， 5些取代基係選自CHG-烷氧基，Cl_1Q_烷硫基，羥基，鹵 、胺基，硝基，氰基，c：hQ-烷胺基，二（(V1Q-烷基）胺 1306846 基，芳基，芳氧基，芳硫基和雜芳基，或R1為芳基；其中 任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或多次， 這些取代基係選自Cho-烷基，C2_1Q-烯基，C2-H —炔基， 10一烷氧基，烷硫基，羥基，鹵素，胺基’硝基，氰 基’ Cm-烷胺基和二（CHr烷基）胺基，及Y為一鍵，〇， s 或 NH， 該方法包含 a )將具式（π )的外消旋化合物

其中R’ Z’虛線和Hal為如同上文中所定義者，你m 卜式的醯化劑

(Ilia) _

(me)

X-R ^或式Rl—N=C=〇的異氰酸酯或式R1-N=OS的異硫氰酸 9進行選擇性酵素催化醯化作用 11 1306846

其中X為〇或s;w為〇或S; U為0或s，v為函素； R為Ci-iq -炫基’ 〇2_ι〇 -稀基或Cm -块基，它們全可 能視需要地經取代基取代一或多次’這些取代基係選自Cl 10烧氧基，Cho-烧硫基，經基，鹵素，胺基，硝基，氰 基，Cl-1Q -烧胺基，二（Chq -院基）胺基，芳基，芳氧基， 芳硫基和雜芳基，或RG為芳基，其中任—芳基和雜芳基可 能視需要地經取代基取代一或多次’這些取代基係選自C 烷 ΊΜ0 ι〇-烧基’ C2_1Q-烯基，C2_1Q-炔基，燒氧基， 硫基，經基，齒素，胺基，石肖基，氰基，C11「烧胺基和二 (Cl-ίο -院基）胺基； R1為如同RD的定義； R2為如同RG的定義，或R2為適當的離去基，· 或R0與R1共同形成具有3至5個碳原子的鏈； 但前提為當X為S時，w和u並非為s; 因此形成一 R-或S-形式的式f π、如 、π式C Π )起始物質以及具有式 IV )經醯化二醇之相反對映體的混合物

R，W，Ha 卜 R3， 虛線和 其中 Z為如同上文中所定義 12 1306846 4 ;或 b )將具式式（ιν )的外消旋化合物

Hal (IV) 其中R ’ Z，W，Hal，虛線和R3為如同上文中所定義者 進行選擇性酵素催化脫醯化作用而形成R-或S-形式之式 (11 )為經脫醢化合物

其中R ’ Hal，虛線和z為如同上文中所定義者，以及 呈相反對映體形式之式（jy )經醯化起始物質； 可視情況地接著依任何順序分離出式（1[)化合物的s_ 或R對映體及/或式（!V )化合物的相反對映體它們其鹽。 本發明亦有關於-種分離式（w)對映體混合物與式（π 13 1306846 )相反對映體的方法’以及有關於上述式（IV)化合物的R_ 和s_對映體。 最後，本發明係有關於一種製備依地普侖和消旋性依 地普侖的方法，其係製備自由本發明選擇性酵素催化醯化 作用或脫醯作用而得到的式（π )化合物對映體，或由本發 明選擇性酵素催化醯化作用或脫醯作用而得到的式（贝）光 學活性醯基衍生物的對映體。 【實施方式】 本發明詳細敘述 當使用相關於式和（ν)化合物時，『對映 體』，『R-對映體』，『S-對映體』，『R_形式』，『S— 形式』，『R-二醇』和『s_二醇』等詞係為與卜苯基 基團相接碳原子上的基團方向。 因此，本發明的一個具體實例係一種如上文中所述的 選擇性酵素催化醯化作用，另一個具體實例為一種如上文 中所述的選擇性酵素催化脫醯作用。 選擇性酵素催化醯化作用意為酵素催化醯化作用優先 有效地轉換式（Π )化合物的其中一種對映體，並將未轉換 的式（π )化合物另一種對映體留在反應混合物内。 選擇性酵素催化脫醯作用意為酵素催化脫醯作用主要 有效地轉換式（JY )化合物的其中一種對映體，並將未轉換 的式（IV )化合物另一種對映體留在反應混合物内。 本發明的選擇性酵素催化醯化作用因此得到一混合物 主要含有s—形式的式（n )化合物和R-形式的式（IV)化合物 14 1306846 ，或可能得到一混合物主要含有R —形 形式的式⑻化合物。 以(m化合物和 同樣地’選擇性酵素催化脫醯作用 主I人女& p F用Γ戒得到一混合物 要3有為S-形式的式（JV)化合物和R ifn . t式的式（n )化合 ，或可能得到一混合物主要含有為卩 c , 3啕马κ形式的式（IV)化合 物和S-形式的式（π )化合物。 在本發明醯化作用或脫醯作用後所得到的混合物組成 2依所使用的專-性水解酶和反應所進行的條件而定。本 發明酵素催化醯化作用/脫醯作用的特徵為相當大部份的 其中一種對映體比另一種更易被轉換。由本發明光學離析 方法所仔到的式（H )二醇及/或經醯化式（IV)化合物的光學 純度通常為至少90%ee ’較佳為至少95%ee，更佳為至少 且最佳為至少98%ee。然而，較低的光學純度值仍 然可以接受。 本發明酵素催化方法的起始物質為式（Π )的外消旋二 醇或式（IV )的外消旋醯基衍生物。 在本發明的一個較佳具體實例中，R為鹵素或氰基， 最佳為氰基。 在本發明的一個進一步較佳具體實例中，Hal為氟。

在本發明的一個進一步較佳具體實例中，式（Π )和（IV )中的虛線為單鍵。 在個具體實例中，2為二甲胺甲基或可被變換為二 甲月女曱基的基團。在一個適當的具體實例+，z為二曱胺 甲基。 15 3〇郎46 最佳者為，Hal為氟，R為氰基，虛線為單鍵，及z為 <甲胺甲基。 、本發明酵素催化醯化作用所使用的醯化劑可適當地為 式（ffia)’（mb)和（mc)化合物的其中一種。 在另一個具體實例中，本發明所使用的醯化劑為式（班 和（mb)化合物的任一種。 依據本發明的進一步具體實例，所使用的醯化劑為式（ 131 a)化合物。 依據本發明的另一個具體實例，所使用的醯化劑為式（ 111 b)化合物。 依據本發明的另一個具體實例，醢化劑為式（Π c)化合 物。 當醯化劑為式（羾a)化合物時，u適當地為〇。 當醯化劑為上述中任何一個時，w適當地為〇。 當醯化劑為上述中任何一個時，χ適當地為〇。 適當者為’在上文任一個具體實例中所定義的任何一 個式（m a) ’（m b)和（羾c)醯化劑中的取代基rq，Ri和π 為如下列者： R，R1和R2為獨立地選自Ci 6_烷基，烯基和C2 6炔基，匕們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這 些取代基係選自Ch-烷氧基’ C"-烷硫基，羥基，鹵素， 胺基硝基，氰基，Cl-6-烧胺基和二-(Ch-烧基）胺基，或 R2為適當的離去基例如琥珀醯亞胺基，H〇Bt和pf P，或R〇 和R共同形成3-5個碳原子的鏈，更適當者為RG，R1和R2 16 1306846 為獨立地選自Cl_4_烷基，C2_f烯基和C2 4—炔基，它們全 可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 Cy烷氧基，（V4-烷硫基，羥基，_素，胺基，硝基，氰 基，Ch-烷胺基和二—（Cl_4_烷基）胺基，或R2為適當的離 去基例如琥珀醯亞胺基，HOBt和pf P，或R()和R1共同形成 3-5個碳原子的鏈，更佳者為Ro, R1和R2為獨立地選自 C!-3-烷基，C2_f烯基和（：2_3_炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自广烷氧美，q 3_烧硫基’經基，齒素’胺基，萌基，氰基，炫胺基 和二-(C^-烷基）胺基，甚至更佳者為…和R1為。烷基 ，特別為非分枝的C^-烷基，及R2為經齒素_或多次取 代的Ck烷基或…為c2 3_烯基。 適當者為，在上文任一個具體實例中所定義的式（皿a) 酿化劑中的取代基R0和R1為如下列者： R0和R1為獨立地選自Cl 6_烷基，C2 6—烯基和C2_6_炔 基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取 代基係選自Cy院氧基，Ci 6_烧硫基，羥基，_素，胺基 ，硝基，氰基，（:卜6-烷胺基和二_(C1_6_烷基）胺基，更適當 者為RQ和R1為獨立地選自C]_4-烷基，Cm-烯基和c2_4-炔 基’它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取 代基係選自Ci-4—烧氧基，Ck烧硫基，經基，画素，胺基 ，硝基，氰基，（:卜4-烷胺基和二_(C1_4_烷基）胺基，較佳者 為R# R為獨立地選自烧基，烯基和qI—炔基 匕們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代 17 1306846 基係選f Cl_3-烷氧基，Cl-3-烷硫基，羥基，鹵素，胺基， 7基氰基，f烷胺基和二_(Ci_3_烷基）胺基，更佳者為 R和R獨立地為Cl-r院基，且最佳者為R。和Ri為Ci 3—院 基，特：為非分枝的Ci_3_貌基，適當者為丙基。 適田者為，在上文任一個具體實例中所定義的式（诅㈧ 醯化劑中的取代基…和R2為如下列者： R1和R2為獨立地選自C卜6-烷基，Ch-烯基和c2—炔 基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取 代基係選自C1_6_烷氧基，C1_6_烷硫基，羥基，南素，胺基 ，硝基，氰基，CH-烷胺基和二_(Ci厂烷基）胺基，或R2 為另一個離去基例如琥珀醯亞胺基，H0Bt和pfp，更適當 者為R1和R2為獨立地選自Cl_4_烷基，q 4_烯基和C2_f炔 基’它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取 代基係選自（:丨―4-烷氧基，C!—4-烷硫基，羥基，_素，胺基 ’硝基’氰基，Ch-烷胺基和二-(Ch-烷基）胺基，或R2 為另一個離去基例如琥抬醯亞胺基，HOBt和pfp，較佳者 為R1為選自Ch-烷基’（：2_3_烯基和Cm-炔基，它們全可 能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自Ci 3-烧氧基，Cu-烧硫基，經基，鹵素，胺基，硝基，氛基 ’ Cu-烧胺基和二-(Cu-烧基）胺基，和R2為經齒素一或 多次取代的-炫基，R2為C2-4 -稀基或R2為另一個離去 基例如琥珀醯亞胺基，HOBt和pfp，更佳者為Ri為Cl_3—燒 基’ C2-3_烯基或C2_3-炔基，它們全可能視需要地經取代基 取代一或多次且這些取代基係選自Ci — 3-烷氧基，Cl_3-烷硫 18 1306846 基沒基，i素，胺基，硝基，氮基，Cn烧胺基和二— (C"烧基）胺基，且R2為經_素—或多次取代的「烧 基或R為C"-烯基，更佳者為R1為Cl「烧基，及r2為 4素或夕次取代的Ci 3—院基，或r2為^厂稀基，及 最佳者為R1為C"—烧基，特別為非分枝的U基，例 如曱基，乙基或丙基’及R2為C2 —3-烯基。 R為經齒素一或多次取代的Ch-烧基意為-個適當的 離去基，户斤包括之基團例如為2, 2, 2-三氣乙基和2,2, 2-三 氟乙基，特別是2,2,2-三氟乙基。 在本發明的個特定具體實例中，上文中的式（瓜b)酿 化劑為R2為乙稀基的化合物。 依據本發明的另一個特定具體實例，式（mb)醯化劑係 為上文中R1為丙基的化合物。此特定具體實例涵蓋本發明 的較佳醯化劑’亦即丁酸乙烯酯。 依據本發明的-個進一步具體實例，醯化劑係為式（瓜 C)化合物。 適當者為，在上文任—個具體實例中所定義的式（me) 醯化劑中的取代基R1為如下列者： 為Ch烧基，C2—6-稀基和（；2_6-块基，它們全可能 視需要地經取代基取代—或多次且這些取代基係選自Cl「 烷氧基’ c"-院硫基’羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基， Cl —6~烷胺基和二-(Cl-6 —烷基）胺基，更適當者為R1為Ci 4_ 烧基’ C2_4-稀基和c2_4-炔基’它們全可能視需要地經取代 基取代-或多次且這些取代基係選自院氧基，貌 19 1306846 硫基，經基，i素，胺基，頌基，氛基，Ci 4烧胺基和二 -((Vr烷基）胺基，較佳者為R1為Ci_3—烷基，C2 3_烯基和 (：2_3-炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且 這些取代基係選自C^-烷氧基，Ci_3_烷硫基，羥基，鹵素 ’胺基，石肖基’氰基，C"-烧胺基和二—（Ci 3〜燒基）胺基， 更佳者為R1為C"-烧基’（：2—「烯基或L广块基，更加適 當者為R1為（:卜3-烷基，特別為非分枝的Ci 3烷基，例如 甲基，乙基或丙基。 V適當地為氯。 於本發明中所使用的醯化劑亦可為化學式Ri-N=c=〇的 異氰酸酯或化學式Ri-I^OS的異硫氰酸酯。 因此’在本發明的一個進一步具體實例中，醯化劑為 化予式尺丨-化0=0的異硫氰酸_ 〇 依據本發明的另一個具體實例，醯化劑為化學式Ri_ N-C=S的異氰酸g旨。 適當者為’在上文任一個具體實例中所定義的異氰酸 酉旨和異硫氰酸酯中的取代基R1為如下列者： R為Ck烧基，〇2_6-烯基或c2—6-炔基，它們全可能 視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自C16 一 燒氧基，c^-烷硫基，羥基，函素，胺基，硝基，氰基， Ci-r燒胺基和二-(Cu-烷基）胺基，更適當者為R1為Cl_4_ 貌基’ C2 — 4-烯基或（：2 — 4-炔基，它們全可能視需要地經取代 基取代一或多次且這些取代基係選自C14_烷氧基，一烷 硫基’羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，CiH-烷胺基和二 20 1306846 -(C^-烷基）胺基，較佳者為Rl為ci 3_烷基，c2 3_烯基或 C2—3-炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且 這1取代基係選自C!—3-烷氧基’ Cl_3_烷硫基，羥基’鹵素 ，胺基，硕基’氰基，Ci r烧胺基和二_(c"_烧基）胺基， 更佳者為R1為Cl—3 —燒基，C2_3-稀基或C2_3-炔基，更適當 者為R1為烧基，特別為非分枝的^ 3烧基，例如甲 基，乙基或丙基。 本發明亦涵蓋-種上文中所定義的式(ιγ )外消旋化合 物的選擇性酵素催化脫醯作用的方法。 適虽者為，所使用的式（IV)外消旋化合物為其中γ為 〇，或s的化合物。 、 ^依據本發明的進—步具體實例，所使用的式（IV)外消 旋化合物為其中γ為0的化合物。 ^依據本發明的另—個具體實例，所使用的式（IV)外消 旋化合物為其中Υ為S的化合物。 Α依據本發明的另一個具體實例，所使用的式（IV)外消 旋化合物為其中γ為一鍵的化合物。 適當者為，在上文任-個具體實例中所定義的式（IV) W旋化合物中的取代基R1為如下列者：「烧基， 二烯基或C2_『炔s，它們全可能視需要地經取代基取代 -或多次且這些取代基係選自C1『院氧基，C11「院硫基 ，，基’齒素，胺基，頌基，氰基，C11「烧胺基和二— 基）胺基，更適當者為R1為W烧基，w稀 土或W块基，它們全可能视需要地經取代基取代一或 21 1306846 多人且這些取代基係選自羥基，齒素，胺基，硝基及氰基 ’較佳者為為Cl_1Q-烧基，特別為非分枝的Ci f燒基^ 及更佳者為Rl為非分枝的C4_1Q-烷基。 依照本發明，選擇性酵素催化醢化作用係進行於為實 質抑制水解的條件下。如果水存在於反應系統令，即產生 與醯化作用為逆反應的水解。 因此，選擇性酵素催化醯化作用較佳係進行於無水的 有機心劑中或幾乎無水的有機溶劑（酵素通常需要存有一 些水來活化）。在下列的例子中即闡述水的加入如何影嚮 轉換作用。在特定反應系統中可容許的水百分率可由熟於 此藝者決定。 醯化反應所使用的有機溶劑只要是能不對所使用的酵 素去活化便不是特別重要。適當的溶劑包括烴類，例如己 院庚院本和甲本；喊類，例如乙鍵，二異丙喊，四氫 呋喃，1，4-二噁烷，第三丁基甲基醚和二曱氧乙烷；酮類 ，例如丙酮，二乙酮，丁酮，和甲基乙基酮；酯類，例如 乙酸曱酯’乙酸乙酯’丁酸乙酯，丁酸乙烯酯和苯甲酸乙 酯；經鹵化烴類，例如二氣甲烷，氯仿和丨，丨，卜三氯乙烷 ，一級和二級醇類，例如第三丁醇；含氮溶劑，例如二甲 基曱醯胺，乙醯胺，甲醯胺，乙腈和丙腈；和非質子傳遞 極！·生洛劑’例如二甲基亞楓，N甲基毗略烧酮和六甲基亞 鱗三酿胺。 在其中較佳者為煙類如己院’庚烧，笨和甲苯，醚 類如乙醚，—異丙醚，1，4-二噁烷和第三丁基曱基醚， 22 1306846 和賴類如丁酸乙烯醋。對於其 為关禾, 種酵素，最佳的溶劑可

巧方香族烴類如苯或甲苯 "jT 另—種頰取佳者為甲苯，對於 種酵素，最佳的溶劑可為醚 文的會竑、,, 女1 ’ 4-二噁烷（參見下 π貫施例）。上述之溶劑 用。 了早獨使用或二或多種溶劑併 式（D )外消旋二醇和醯化劑 溶劑中古，"满…首 劑的濃度不能過咼’因為在 用。$止 、 Γ月％ 一醇的非選擇性醯化作 適Ϊ的外消旋二醇和酿化铜、，曲痒加 牙醞化劑/辰度個別為低於1.0M，更 通虽者為低於0.5M，甚至更谪者7 、高火鲞 更通田者為低於〇_2M，或甚至更 k虽者為低於0. 1M。熟於此藝者當 化劑的最佳濃度。 旋二酵和醯 選擇性酵素催化脫醯作用較佳係進行於 溶劑的混合物中，適當地為存有续_ W興有機 古址 也為存有綾衝劑。該反應所使用的 機溶劑只要是能不對所使用的酵素去活化便不是特別重 要。適當的有機溶劑為可與水相溶混者，例如醇類， ’ _，DMS0，二倾，麵和：甘醇：甲⑽。t經驗人士 將可斷定出其他的適當溶劑。熟於此藝者將足以決定於反 應中所使用式（IV )外消旋化合物的最佳濃度。 在存有有機酸及/或有機驗進行醯化作用或脫醯作用時 ’會增加所使用酵素的立體選擇性。 依此’本發明亦有關於-種方法，其中酵素催化酿化 作用或酵素催化脫醯作用係進行於存有有機鹼或有機酸或 兩者的混合物。 在一個具體實例中，本發明係有關於一種方法，其中 23 1306846 酵素催化醯化作用或酵素催化脫醯作用係進行於存有有機 酸，適當者為有機羧酸。 在一個進一步具體實例中，酵素催化醯化作用係進行 於存有有機酸’適當者為有機叛酸。 適當者為上述的有機酸為芳香族羧酸或脂族羧酸。 當反應中所使用的疋有機酸時’會提及者為烧基跋酸 ，環烧基叛酸’環烧基烧基緩酸，視需要經取代的苯基— 烧基叛酸和視需要經取代的苯基羧酸。適當的脂族叛酸為 叛酸類的例如甲酸，乙酸，丙酸，正-丁酸，異丁酸，2 一乙 基丁酸’正-戊酸’異戊酸’新戊酸，正—己酸，異己酸， 癸酸’巴豆酸，棕櫚酸’環戊烷羧酸，環己烷羧酸，苯基 -匸卜4-烷基羧酸例如3-苯基丙酸，4-苯基丁酸，草酸，丙 二酸和酒石酸。適當的芳香族羧酸所包括的酸類例如為苯 曱酸’ P-氣苯曱酸’ p-；G肖基苯曱酸，p一曱氧基苯曱酸， 甲苯甲酸甲苯甲酸，甲苯曱酸，萘甲酸，苯二曱酸 和對苯二酸，柳酸，氫化肉桂酸。 因此，依據本發明的一個具體實施例，使用來改進酵 素立體選擇性的有機酸係選自正-丙酸，異丙酸，正-丁酸 ，異丁酸，異戊酸，2-乙基丁酸，巴豆酸，棕櫚酸，環己 烧羧酸’新戊酸，笨甲酸和p-甲苯甲酸，柳酸和3_苯基丙 酸。依據本發明的進一步具體實例，所使用的羧酸為新戊 酸。 所使用的有機酸數量並未特別地限定，但相對於基質 的莫耳比率通常為0.1至10，較佳為i.O至3.0，及更佳 24 1306846 取物，冷凍乾燥的微生物體或細胞，以丙酮乾燥的微生物 體或細胞，該種微生物體或細胞的研磨產物，或相似者） 〇 此外，該『酵素』或『水解酶』亦可藉由習知的技術 固疋化做為酵素本身或做為細胞體，因此可使用於固定化 形式。該固定作用可使用熟於此藝者所習知的方法進行， 這些方法例如包括載體鍵結，交聯，封包和相似者。 因此，在本發明的一個具體實例中，所使用的水解酶 形式為固定化酵素或交聯酵素晶體（cross_Linked Enzyme

Crystal, CLEC)酵素。 經發現，本發現的酵素催化酿化作用的進行可使用取 自念珠菌屬（Candida antartica)的諾華酶（NovoZyme)435 ，取自Thermomyces lanuginosus或脂蛋白脂肪酶假單胞 菌屬（Pseudomonas sp.)的里波酶（Lip〇Zyme)TL IM(分離自 洋蔥假單胞菌（pseud〇monas Cepacia)且係購自Fluka)， 目刖已發現特別好的結果是為使用取自念珠菌屬（Candida an tartica)的諾華酶435或脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬。 因此，依據本發明的一個具體實例，所使用的酵素為 假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶，念珠菌屬（Candida antartica) 脂肪酶 B 或 Thermomyces lanuginosus 脂肪酶。 依據本發明的另一個具體實例，所使用的酵素為假單 胞菌屬脂蛋白脂肪酶或念珠菌屬（Candida antartica)脂肪 酶B。 如上文中所述者，使用上文中所提及的其中一種本發 26 1306846 明酵素亦包含使用含有該酵素 體的培養液，經谇養的έ @、、σ產物’例如含有細胞 養履^培養的細胞體，經 以及任何岐化形式的酵素/經培養產物。 產 使用上文中特別提及的其 用上文牲丨摇 種本發明酵素亦包含使 足以進行本發明選擇性醯化作用或脫醯作 用：酵素的突變體’變異體或任何等同物。其 2 :可勿離自各種不同菌株的假單胞菌屬，念珠菌母屬 述酵素編㈣繼突變，導致酵素中胺基酸成分的 變，。適當者為上述酵素的突變體或變體為其中已移除單 一胺基酸或被其他胺基酸取代的變體和突變體，同時適當 者為變體或突變體的胺基酸序列與上述的酵素有高於^ 的相同’較佳為高於8Q%或最佳為高於9Q%的相同。 因此，依據本發明的一個具體實例，所使用的酵素為 假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶或其突變體或變體。較佳為使用 假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶。 依據本發明的另一個具體實例，所使用的酵素為念珠 菌屬（Candida an tar tica)脂肪酶B或其突變體或變體。較 佳者為，所使用的酵素為念珠菌屬（Candida antartica)脂 肪酶B。 依據本發明的一個進一步具體實例，該酵素為諾華酶 (〇v〇Zyme®)35(固定在丙烯酸樹脂上的念珠菌屬（Candida antartica)腊肪酶 b，購自 Novozymes A/S)。 依據發明的另一個具體實例，所使用的酵素為 27 1306846

Thermomyces lanugin〇Sus脂肪酶或其突變體或變體。較 佳者為，所使用的酵素為Thermo„yces Unugin〇sus脂肪 酶。 依據本發明的一個進一步具體實例，所使用的酵素為 里波酶（LipoZymeTM)TL IM，亦可購自 Novozyroes A/S 公司 酵素催化醯化作用/脫醯作用的較佳反應條件各有不同 ，且係依據所使用的特別酵素，其是否固定化，等等而定 〇 反應的適當溫度在〇-80。(3，更佳為在20-60°C之間， 或更佳為在30-50°C之間。 所使用酵素的數量並未特別地限定，但通常為相對於 基質重量比率的0.01-1.0，較佳為0.02-〇.5，且更佳為 〇. 02-0. 3。 反應可用分批方法進行’或其可用連續方法進行。酵 素可依多次分批地重複或連續使用。反應時間並未特別地 限疋，並依據所使用酵素的生產方法（分批或連續）的規模 和類型而定。 本發明亦有關於一種式（IV )化合物的S-或 其鹽

R-對映體或

1306846 依據本發明的’’虛線和Z為上文中所定義者。 物為s-對映體 具體實例’上述光學活性醯基衍生 學活性醯Λ彳、1依據本發明的另—個具时施例，上述光 酿基竹生物為㈣映體。 依據本發明％ 為-化合物，=具體實例，上述的…-對映體係 上述的R -或S -對映體 上述的R-或S-對映體 上述的R-或S-對映體 依撼太欢、R為齒素或氛基，較佳為Μ氰基。 依據本發明的進—步具體實例 係為-化合物’其中如為氟。 依據本發明的進一步具體實例 係為—化合物，其中虛線代表單鍵 在本發明的另一個且體會存丨士 係為-化合物，…' 例中，……-對映體 胺甲基的基團，⑻者二甲：甲基或為可被變換為二甲 ..,μ ^ ^ 者為Ζ為二甲胺曱基，且其他取代 基為如上文中所定義者。 ' 本發明的另-個具體實例中，上述的R—或S-對映體 係為一化合物，其中Z A -田 矣缓蚀η η 為—曱胺甲基，Hal為氟，虛線代 表早鍵，及R為氰基或函素，適當地為氰基。 得為在1:::的進—步具體實例中’上述的卜或s~對映體 合物’其中’或S，較佳者為Y是0,且盆 他取代基為如上文中敎義者。在本發明的進—步具體實 例中，上述的R_或^對映體係為一化合物，其中Υ為s且 其他取代基參如上文中所定義者。 在本發明的進-步具體實例中，上述的R-或S-對映體 29 l3〇6846 係為一化合物 中所定義者。 其中γ為一個一鍵且其他取代基為如上文 係為 義者 在本發明的進 一化合物，其 一步具體實例中，上述的R-或S_對映體 中Y為NH且其他取代基為如上文中所定 適當者為，在上述任一個具體實例中所定義的或S_ 對映體係為一务人私？ OJ. , ΤΛ 1 Λ 5 其中R為Ck院基，c2_6-烯基或 G-6炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次且 這絲代基係選自Ci_「烧氧基，Ci「烧硫基，經基，函素 ’胺基，確基，氰基’ Ci「燒胺基和二_(Ci「烧基）胺基， :適田者為R1 S CH-烷基’ C2_4-烯基和C2_4-炔基，它們 全可能視需要地經取代基取代—或多ϋ這些㈣基係選 Cl—4烧氧基’（^_4-院硫基’經基，鹵素，胺基，硝基， 齓基，Cw-烷胺基和二_(Ci 4_烷基）胺基，較佳者為R1為 c卜3~烷基，（：2_3-烯基或C2 3 —炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自Ci 3—烷氧基，Cl_ 硫基’經基’ _素’胺基，硝基，氛基，c"_烧胺基 和—烷基）胺基，及最佳者為R1為c丨_3_烷基，特別 為非分枝的C^-烷基。 依據本發明的另一個適當具體實例，在上述任一個具 體實例中所定義的或S-對映體係為一化合物，其中R1 為如下列者· Ch〇-貌基，C2_1Q-烯基或c2_1Q-炔基，它們全 可能視需要地經取代基取代—或多次且這些取代基係選自 ci-i〇-烧氧基’ C1M「烷硫基’羥基，鹵素，胺基’硝基， 30 1306846 氰基’ c^-烷胺基和二—（Ci_iG_烷基）胺基，更適當之R1為 C〗-1Q-烧基’ Cm-稀基或c2_1Q-快基’它們全可能視需要地 經取代基取代一或多次且這些取代基係選自羥基，齒素， 胺基’确基’氰基’較佳之R1為-烷基，較佳為非分 枝的Chq-烷基，及更佳為R1為非分枝的c4_1〇。 當完成醯化反應或脫醯反應之後，得到以式（JJ )代表 的二醇衍生物對映體，其為具有式（ΪΥ )化合物相反對映體 的混合物。然後此反應混合物可視需要選用地與酵素分離 0 為了得到具有高化學純度的所需式（π )及/或（W)對映 體，需要以有效的方式分別由式（H )及/或（w)相反對映體 中分離出來。然而，使用一般的習知方法並無法有效地分 離出這些對映體，因為式（IV)的醯基衍生物結構與式（1[) 的二醇結構很相似。 本案發明人經過進一步調查且由所得到結果發現，當 反應混合物在存有酸下使用含有有機溶劑和水的混合溶劑 處理時，具有酸的鹽類形式式(H)化合物對映體可有效地 分佈於水層，而具有酸的鹽類形式式（IV)化合物相反對映 體可有效地分佈於有機層。 因此，依據另一個具體實例，本發明係有關於一種由 含有式(IV)化合物和式(Π)二醇的混合物中分離和純化具 有式（IV)之醯基衍生物或其鹽 31 1306846

(IV) 其中κ為氰基或可被轉換為氰基的基團，Hal ’虛線Λ雒斗、抑^ „ η 巧國素 4雙或早鍵，及Ζ為~CH2_N(R，R，，-)基且其中R，和R，， 二Cl~6烷基，或R’和R”相互連接形成環狀結構且其中包 3與匕們相接之N-原子，或Z為可轉換成二甲胺甲基的基 團’ 為〇或S，及R3為-Y_R1且其中γ為一鍵，〇，δ ^ NH及R1為Ci-iQ —烷基，Cm-烯基或Cm。-炔基’它們全 月b視需要地經取代基取代一或多次’這些取代基係選自 CH0 —燒氧基，Cho-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基， 亂基 Chq-烧胺基’ 一（Chq -烧基）胺基，芳基，芳氧基 ，芳硫基和雜芳基，或R1為芳基，其中任一芳基和雜芳基 可能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自

Ch〇-烧基，C2_1Q-烯基’ C2-1G-快基’ Ch。-烧氧基’ Cm-炫硫基，經基，鹵素’胺基’确基’氰基’（Vh -烧胺基和 二（Ci-i0_烧基）胺基’ 及/或具式（Π )之二醇或其鹽 32 1306846

a) 在酸存在下，扃k rm. ^ 在尺和有機溶劑之混合物中處理含有 式（IV)醯基衍生物和式（ 々叭〈11 ^一醇的混合物； b) 由有機相中分雜ψ人 ^ 3有為該酸之鹽形式的式（Π)二 鮮的水相，因而得到含右盔 .^ 有為該酸之鹽形式的式（IV)醯基衍 生物的有機相； 視需要地分離出為驗或其鹽的式(π)化合物，及視需 要地分離出為鹼或其鹽的式(IV)化合物。 依據本發明的一個 個具體實例’使用於分離和純化的上 述方法中，R為齒素或氰基，較佳為氰基。 依據本發明的一個具體實例’使用於 述方法中，Hal為氟。 雕和純化的上 依據杈佳具體實例，虛線代表單鍵。 在本發明的另-個具體實例，z為二甲 轉換成二甲胺甲基的基團。適當的z為二甲胺甲：為可 依據本發明的-個較佳具體實例，H 土 吼，Z為二甲 33 1306846 胺甲基，虚線為單鍵， 在本發明的進-步具體實 述方法中，式(IV)化合物為其"為心上 # # V ^ η a ** 的化合物’ 早义住馮γ為0且其他取 明的進一步具體實例，4為如上文令所定義者。在本發 吏用於分離和純化的上述方法中， 式⑻化合物為其中Y為s的化合物。 ’使用於分離和純化的上 Y為一鍵且其他取代基為 在本發明的進一步具體實例 述方法中，式（IV)化合物為其中 如上文中所定義之化合物。 ’使用於分離和純化的上 Y為NH且其他取代基為如 在本發明的進一步具體實例 述方法中，式（IV)化合物為其中 上文中所定義之化合物。 在本發明的較佳具體實例，使用於分離和純化的上述 方法中，式（IV)化合物為其+ R1為Ci6_烧基，c26稀基 或Ο2—6-炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次 且這些取代基係選自CH-烧氧基，Ci e_烧硫基，經基，函 素，胺基，硝基，氰基，Ch —烧胺基和二一（Ci 6_烧基）胺基 ，更適當者為R1為Cy烷基，（；2_4_烯基或c2 4_炔基，它 們王可月b視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係 k自（V4-烧氧基’ Ci—4-烧硫基，經基’ _素，胺基，硝基 ’氰基，（:丨_4-烷胺基和二_(C1_4_烷基）胺基，較佳者為R1 為Cu-炫基，（：2_3-烯基或（：2_3-炔基，它們全可能視需要 地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自Cl 3_烷氧基 ’ Cy烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，Ci 3_烧 34 1306846 。卜3-烧基，特 用於分離和純 胺基和二—（C1~3~院基）胺基，最佳者為Rl為 別為非分枝的C1-3-烧基。 在本發明的另一個較佳具體實例中，使 化的上述方法中，式（IV)化合物為其中R1為如下列者：Cl 『烧基’ k。，基或c2，-炔基’它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自 w 烷氧基，

Cm-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基， 乱暴’ h-1Q-烧 胺基和二烷基）胺基，更適當者為 雨Ll-1 Q-烧基 ’ k「烯基或k「快基’它們全可能視需要地經取代基 取代一或多次且這些取代基係選自羥基，_素，胺基，硝 基氰基，較佳者為Rl為Cho-烷基，特別為非分枝的& 10烧基’及更佳者為R1為非分枝的C4_1()_貌基。 藉著這種使用於分離和純化的上述方法 <々π，具有酸的式（ Π)化合物R-或S-對映體的鹽可選擇性萃取至水層内，且 具有酸的式（IV)化合物相反對映體的鹽可選擇性分離至有 機層内，其係在存有酸下，使用有機溶劑和水處理包含式 (Π )對映體和式（IV )相反對映體的混合物，反應溶劑及= 似者，及在存有酸下。在這個情況下，可分離出式（仅）對 映體的鹽形式和式（Π)對映體的鹽形式但所需對映體會' 少許損失。 θ 依據使用於分離和純化的上述方法之一個具體實例 式（IV)化合物的S-對映體與式（Π)化合物的對映體分離 依據使用於分離和純化的上述方法之另一個具體實例 35 1306846 ^ )二醇的S_對映體與式⑻醯基魅物的R-對映體 分離。 水所使用的數1為式（)化合物與水之間比率之卜2 至l:l〇G，較佳為1:5至1:5G。除此之外，在使用水萃取 之前’反應溶劑可先蒸發掉以減少其數量，或可使用另— 種有機溶劑取代。 可於使用於分離和純化的上述方法用到之酸並未特別 地限制’可被提及者例如為無機酸如鹽酸，硫酸和鱗酸； 有機酸’特別是缓酸’所代表者有脂肪叛酸例如甲酸，乙 酸’丙酸’正-丁酸’異丁酸’正_戊酸，異戊酸，新戊酸 己酸’異己酸’環戊烧叛酸，環己烧叛酸，草酸， 丙二酸和酒石酸；或芳香族叛酸例如苯甲冑1氣苯甲酸 H肖基苯甲酸’ P'曱氧基苯甲酸，P-曱苯曱酸，〇-曱苯 甲酸’m-甲苯甲酸，萘甲酸，苯二甲酸和對苯二酸（ t:lephtaliC acid)。在它們中，較佳者為有機酸，特別 疋二I類如正-丁酸酯，異戊酸酯’冑己烷羧酸，新戊酸 笨甲奴和〇-曱苯甲酸，且特別佳者為新戊酸。不遑待言 ，上=中所提及之酸可單獨使用或二或多種併用。酸的使 用數s並未特別地限制，但式（IV )和⑴化合物總數與酸 的莫耳比率通常為1:1至1:5，及較佳為1:1至1:3。 於刀離和純化步驟中所使用的酸可與本發明醯化或脫 醯反應中所使用之有機酸相同，或也有可能不同。 做為使用於分離和純化步驟中的有機溶劑中，可提及 者例如為L類如己庚烷，苯和甲苯；醚類如乙醚，四 36 13〇6846 氫呋喃，1，4-二噁烷，第二 其 類如⑽ 7 帛-丁基甲基醚和二甲氧乙烷；鋼 碩如丙酮，二乙酮’和甲其 丫卷乙基酮，酉曰類如乙酸甲酯， 酸乙酯，丁酸乙酯，和芏 知 芽本甲酸乙酉曰，經南化烴類，例如二 氣甲烧，氯仿和1，1】_二备.. ，—氯乙烷。匕們之中，脂族烴頬如

烧和庚烧，及芳香族炉_ ‘贫4田+y_从I 矢焱頰如本和甲苯為較佳者。最佳者 為芳香族烴類，及最佳去i 者為甲本。上述之溶劑可單獨使用 或為二或多種併用。 分離和純化步驟的溫度較佳為在0 i 8(rc，及 在10至4(TC，最佳為在2〇至3〇t。 接著，依據使用於分離和純化的上述方法，在分離式（ D)和（IV)化合物的鹽形式時，在式（π)化合物鹽形式的水 層中與酸，及相似者部份混合的少量式（rv)化合物可藉由 有機溶劑的清洗水層而有效地移除。 式（Π)二醇鹽形式的使用可為該鹽的水溶液，且若有 ’、要時纟使用形式可為在另—種溶劑中的溶液，或由濃 縮：用、溶劑取代或類似操作而得到的濃縮液。此外，它 可藉由結晶作用或相類似的操作而形成結晶來使用。然而 ’通常式⑷二醇是以自由二醇的形式使用，其係藉由下 列之操作而取得：利用—般鹼，例如氫氧化納或氫氧化卸 ，處理水層並將水層的pH值控制在至少9,較佳為至少u ’因此得到含有式（π)二醇和有機溶劑及/或其濃縮液的混 合物，然後使用有機溶劑萃取式（π)二醇的自由胺形式， 接著清洗並濃縮該萃取液。藉由此—系列的分離和純化方 法所得到式（Π)二醇的化學純度通常為至少95%，較佳為 37 1306846 至少97%，更佳為至少99%且最佳為至少99 5%。 另一方面’藉由上述操作所得到之式(iv·):合物可使 用水相清洗來改良產物的化學純度。欲得到為自由胺形式 之細)化合物’可利用驗來處理由上述操作所得到之式( IV)化合物銨鹽。#由此一系列的分離和純化方法所得到 式⑺二醇的化學純度通常為至少95%，較佳為至少挪 ，更佳為至少99%且最佳為至少99. 。 由上述地分離式（Π )和（rv)對映體之後，所得到產物 的光學純度可在進-步加王之前即被改良。光學純度的改 良可藉由色層分析法而得到，如述於㈣G3/qii278者或 利用光學活性酸對非對映酉旨或鹽進行结晶作肖，如述於美 國專利號4, 943, 590者。 依據本發明的進一步具體實例，利用上述使用於分離 和純化之方法分離的式（π )化合物和式（W )化合物混合物 係由本發明的選擇性醯化作用及另一㈣體實㈣選擇性 脫醯作用製備而得。 本發明亦有關於另一種新穎方法用於分離式的R_ 或S-二醇與式（IV)醯基衍生物的其他對映體，藉此分離及 純化所需的化合物。 依據此種另外的方法’其係由含有式（IV )化合物和式（ Π )化合物的混合物中分離和純化具有式（IV )之醯基衍生物 或其鹽 38 1306846

其中R為氰基或可被轉換為氰基的基團，Ha丨為 ，虛線代表雙或單鍵，z為-CH2-N(R，R，，-)基且其中/ 素 為C〗 — 6-烷基，或R，和R”相互連接形成環狀結構且其#中=’ 含與它們相接之N-原子，或Z為可轉換成二甲胺甲基的包 團’W為0或S，及R3為-Y—R1且其中γ為一鍵，= NH，R1為Cho-烷基，C2_1Q-烯基或c2_1D-炔基，它們全^ 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選 卜 、目 10-烧氧基’ Cho-烧硫基，羥基，鹵素，胺基，墙其 ^ 基，Chq-烷胺基，二（(νΐ()-烷基）胺基，芳基，芳氧基， 芳硫基和雜芳基，或R1為芳基，其中任一芳基和雜芳基可 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自c 1 ~ 10-烧基’ c2_1Q-烯基’ C2_1()-快基，Chq-烧氧基’燒 硫基’羥基’鹵素，胺基’硝基’氰基，Cwo-烷胺基和二 (Cho-炫基）胺基， 及/或具式（Π )之二醇或其鹽 39 1306846

其中R，Hal，虛綠知7劣 # Z為如同上文中所定義者 該方法包含 a) 在水λ子有機溶劑和非極性有機溶劑混合物中處 理該含有式（IV )化合物和々r 口切和式（H )二醇的混合物； b) 由有機相中分離屮冬 出3有式（Π)二醇的水相，因而得 到含有式（IV)化合物的有機相； 視需要地分離出為鹼形式的式(Π )二醇及/或式(iv)， 及視而要地將式（n)及/或式（ly)化合物轉換成其鹽。 所分離出的任一磁L α , 種上述相（水相或有機相）可額外地

使用有機或水性溶劑分別祕、生、土 ^ L ^刀别地清洗一或多次，因此改良產物 的化學純度。 依據上述用於分離和純化作用方法的一個具體實例， 式（Π)化合㈣S-二醇可與<(IV)化合物％ R_對映體分離 方法的另一個具體實例 (Π )化合物的R-對映體 依據上述用於分離和純化作用 ’式（IV)化合物的S -對映體可與式 分離。 1306846 依據本發明的一個具體實例’使用於分離和純化的上 yL法中，R為鹵素或氰基，較佳為氰基。 依據本發明的另一個具體實例’使用於分離和純化的 上述方法甲，Hal為氟。 依據較佳具體實例，虛線代表單鍵。 可二發明的另一個具體實例中’ Z為二甲胺甲基或為 轉換成二甲胺甲基的基團。適當的Z為二甲胺甲基。 ^依據本發明的一個較佳具體實例，Hal為氟，z為二甲 胺甲基，虛線為單鍵，* R為氰基或齒素，較佳為氰基-。 在本發明的進-步具體實例，使用於分離和純化的上 :方法中’式OV)化合物為其"為〇，“的化合物， 較佳為…且其他取代基為如上文中所定義者。在本發 明的進-步具體實例，使用於分離和純化的上述方法中， 式(IV)化合物為其"為S的化合物。 在本發明的進-步具體實例，使用於分離和純化的上 二：*(IV)化合物為其中γ為-鍵且其他取代基為 如上文中所定義之化合物。 、在本發明的進-步具體實例，使用於分離和純化的上 述方法中’式（IV)化合物為其中Y為且其他取代基為如 上文中所定義之化合物。 、在本發明的較佳具體實例，使用於分離和純化的上述 1法C中-:η化合物為其中ri為ci-「烧基，。2-6-雄基 ^2_6匕們全可能視需要地經取代基取代一或多a 且這些取代基係選自氧基，Ci6—烧硫基，經基，-齒 41 1306846 素’胺基’硝基’氰基，C^-烷胺基和二-((^ — 6-烷基）胺基 ’更適當者為R1為C!—4-烧基’ 〇2_4_烯基或C2—4-块基，它 們全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係 選自[卜4-烧氣基’ C卜4_烧硫基’經基，ii素，胺基，硝其 ’氣基，Cl_4 -烧胺基和二-烧基）胺基，較佳者為Rl 為Cn烧基’（：2_3_烯基或C2_3-快基，它們全可能視需要 地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自cl 3_烧氧基 ，Cn-烷硫基’羥基，函素’胺基，硝基，氰基，Cl厂烧 胺基和二-(C】—3-烷基）胺基，及最佳者為R1為c] 烧基， 特別為非分枝的c i _ 3 -烧基。 在本發明的另一個較佳具體實例中’使用於分離和純 化的上述方法中，式（IV)化合物為其中R1為如丁列者：c l〇-烧基’ C2_1D-烯基或C2_1Q-炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且些取代基係選自「 ^ ^ A W-H-烷氧基，

Ch〇-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，羞A 紙卷，Cho-烷 胺基和二_(Cl-lQ_烧基）胺基’更適當者為Γ 两L卜1Q_烧基 ，Ch。-烯基或C2_1G-炔基’它們全可能視雲 凡南要地經取代基

取代一或多次且這些取代基係選自羥基，忐I 國言’胺基，硝 基，氰》基，較佳者為R1為Chq -烧基，特別或#

寸乃j為非分枝的（V 10-烷基，及更佳者為R1為非分枝的C4_1()~境臭。 在分離和純化步驟所使用的質子有機玄 Μ中，可被提 丙醇，1-丁醇 及者例如為醇類如甲醇，乙醇，1-丙醇， 用或為 多 ，2- 丁醇和第三丁醇。上述之溶劑可單獨使 種併用。 42 1306846 在分離和純化步 提及者例如為炉 用的非極性有機溶劑中，可被 ，第三丁美:其二、已烷，庚烷，苯和甲苯；醚類如乙醚 f烷，氯仿 氧乙烷’經齒化烴類’例如二氯 庚貌，苯和甲苯為:二氯乙::它…，烴類如… 可單獨使用或為：：’及最佳者為庚炫。上述之溶劑 人碲一或多種併用。 依據本發明的一個 ΛΑ , + 特疋具體實例，在用於分離和純化 的上述方法中所佶用& 、 r，、式（W )化合物和式（II )二醇混合物 係利用本發明的酵素催 …催化醯化作用及本發明另一個具體實 例的酵素催化脫醯_製備而得。 ㉛的式（Π)和（17)對映體分離之後所得到產物， 其光學純度可在進一舟^ 步加工之則即被改良。光學純度的改 良可藉由色層分析法而 件到，如述於W〇 03/006449者，或 利用光學活性酸針非啦& 芦十映酉曰或鹽進行結晶作用，如述於美 國專利號4, 943, 590者。 本發月亦有關於—種製備式（I)依地普侖或其藥學上 可接受鹽的方法

F

NC

(D 43 1306846 其包含利用上文中任一 選擇性酵素催化醯化作用方 文中任一個具體實例中所定 醯作用方法的一個具體實例 體或其鹽 個具體實例中所定義的本發明 法的一個具體實例，以及在上 義的本發明選擇性酵素催化脫 製備具式（Π s)二醇之s_對映

其中R為氰基或可被轉換為氰基的基團，虛線代表雙 或單鍵’Z為二甲胺甲基或可轉換成二甲胺甲基的基團， 及Ha 1為鹵素，

或具式（IV s)經醢化二醇的S-對映體或其鹽

其中R，Z，虛線和Hal為如同上文中所定義者，评為 44 1306846 0或S，及R3為-Y-Rl，其中Ri為Ci 1Q一烷基，c2〜1〇-烯基或 C2_1Q-炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次， 這些取代基係選自C】_]G-烷氧基，Chg-烷硫基，羥基，鹵 素，胺基，硝基，氰基，C1-1(T烷胺基，二（Ci —1Q-院基）胺 基，芳基’芳氧基，芳硫基和雜芳基，或Ri為芳基，其中 任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或多次， 这些取代基係選自。卜丨。-烷基，c2，-烯基’ C2_1(r炔基，c卜 10烧氧基，Cm-烧硫基，經基，鹵素，胺基，硝基，氰 基，Chg-烷胺基和二（Ci 1()_烷基）胺基，γ為—鍵，〇s 或NH， 接著可依情況地依任一順序將R基團轉換為氰基，將 以虛線代表的雙鍵還原，將z基團轉換為二甲胺甲基及/ 或將Hal基團轉換為氟基團，然後在鹼性條件下進行^ (立 s)或（IV s)S-對映體或其不穩定s|衍生物的環閉合，因而 成式（V)化合物

接著依任一順序地：如 換為氣基，如果虛線是代表雙:時將之基團轉 ^艰為早鍵，如果 45 1306846 z並非為二甲胺甲基時豸z基團轉換為二甲胺甲 Hal並非為氟時將Hal轉換 命或其藥學上可接受鹽。 接者4出依地普 =據本發明的—個具體實例，使用於製備依地普命的 述式（D s)S-對映體或式（JVs)s_對映 八a丨命a , 4 、姐你在％閉合之前 刀別與式（IV)和（n )R_對映體分離。 依據上述用於製備依地普余方法的一個具體實例，得 自於酵素催化醜化作用的式（n)化合物M s_對映體與式 (IV)化合物相反對映體之混合物已藉由上文所述用於分離 和純化的#中—種新穎方法的分離和純化步驟相互分離出 。依據另-個具體實例’該混合物已藉由上文所述用於分 離和純化之另一種新穎方法分離出。 依據上述用於製備依地普侖方法的另一個具體實例， 得自於酵素催化脫醯作用的式（Π )化合物卜或卜對映體與 式（W )化合物相反對映體混合物已藉由上文所述用於分離 和純化之其中一種新穎方法的分離和純化步驟相互分離出 。依據另一個具體實例，該混合物已藉由上文所述用於分 離和純化之另一種新穎方法分離出。 依據本發明的另一個具體實例，使用於製備依地普侖 的上述式（Π s)S-對映體或式（IV S)s-對映體在環閉合之前 並不分別與式（IV )和（π )R-對映體分離。 如上文中所提及者，R基團亦為氰基或可轉換成氰基 的任何其他基團。 了轉換成乳基的基團包括_素’例如氣，溪，破或氣 46 1306846 ，較佳為氣或溴。 可轉換成氰基的其他基團包括CF3_(CF2)n_s〇2 —〇_且其 中 η 為 0-8，-OH-，-CH0，_CMH，_Ch2NH2，_Ch2N〇2，_ CH2C1，-CH2Br，-CH3，-NHR5，—c_H，-COOR6，-C0NR6R7 ，其中R為氫或ci-6烷羰基，及R6和R7係選自氫，視需 要經取代之Cl-6烷基，芳基-Ch烷基或芳基，及具式（νπ )之基團

Ή為0或s; R8_R9分別獨立地選自氫和院基 ，或R/和R9共同形成q &亞烷基鏈而形成螺環； R1。係選自氫和Cl_6烷基，R"係選自氫，Ci 6烷基，綾 基或基前趨物基團’或R1。和R11共同形成。2 5亞院基鏈而 形成螺環。 轉換至氰基之進行 W0 00/11926 和 W0

當R為鹵素，特別是為溴或氯時， 可如同於 US 4, 136, 1 93，W0 00/1 3648， 01/02383所述者。 依據 US 4, 136, 193 的反應來進行。

將溴轉換成氰基係利用與CuCN 〇〇/13648和？請/1 1 926述及在存有或^ 劑下，藉由氰化物源的氰化作用將 酯轉換為氰基。 亨飞-氟甲基· 47 l3〇6846

與甲醯胺反應而形成醛 野應氰基街生物的其他方法包括 形成格里納（Grignard)試劑，接著 。該酸可轉換為肟或腙，其分别利 溴化 用脫水作用和氧化作用而轉換為氰基。 另外，可利用溴化合物與鎂反應而形成格里納試劑， 接著與含有之CN基係與離去基相接的化合物反應。 上述兩種步驟的詳述可見於W〇 〇1/〇2383。 R基團為-CHO的化合物轉換為R為氰基的相對應化合 物係利用述於W0 99/〇〇21〇中之相類似方法。 R基團為NHR12的化合物，其中y2為氫或烷羧基，轉 換為R為氰基的相對應化合物係利用述於W〇 98/1 9512中 之相類似方法。r為—C00R6的化合物可轉換為R為氰基的 相對應化合物，其係經由相對應之醯基氯或其酯轉換為醯 胺’接著利用醯胺的脫水作用。WO 01/68632。 另外，如同於WO 00/44738中所述者，R為-COOH的化 合物可與氯磺醯基異氰酸酯反應而形成腈，或藉由脫水劑 和胺項醯的處理。 R基團為-CONR13R14的化合物，其中R13和R14係選自氫 ’視需要經取代的烧基，芳炫基或芳基，轉換為相對應氰 基化合物係利用類似於在WO 98/00081和WO 98/1 951 1中 所述之方法。 R基團為式（w )基的化合物轉換為相對應氰基化合物 係利用類似於在WO 00/23431中所述之方法。 R 為 OH，-CH2OH，-CH2NH2，-CH2N02 ’ -CH2C1，-CH2Br 48 1306846

Cl· ’或上述之任一基團’的化合物轉換為相對應氰基 化合物係利用類似於在w〇 〇1/68632中所述之方法。 式（H )外消旋化合物的製備可使用上文所提及專利中 所述的方法，或利用述於美國專利號4，136，〗93中的烷基 化方法，或述於EP 1 71 943的雙重格里納反應，或利用相 類似的方法。式（2V )外消旋化合物可製備自式（Η )外消旋 化5物，其中係利用非選擇性醯化作用並使用如上文式（ ma)，（mb)，（mc)，Ri-N=c=〇 和 Ri_N=c=s 中所定義之酐 ，酯，碳酸酯，異氰酸酯或異硫氰酸酯。 在某些情況下，式（n )外消旋化合物可為酸加成鹽的 形j，例如硫酸鹽，且在此情況時式（]1)化合物的自由鹼 的得到可#由在混合物或水與有機I_中以豸處理該鹽， 式（π )化合物因此轉移至有機相内。

較佳者為’在式（Π)，（ns)，Ur)，（W)(IVS)(IV Γ)，和（V)化合物中的R為氰基。如果R並非為氰基，則 將R基團變為氰基的轉換可適當地在環閉合而形成式（V) 化合物後進行。 較佳者為，在式u )，（II s)，Ur)，⑻（IVS)(IV )矛（V )化合物中的Ha 1為氟。如果Ha 1並非為氟，則 將Hal基團變為氟的轉換可適當地在環閉合而形成式（v) 化合物後進行。進行此種轉換作用的步驟已述於特用化學 雜誌（Speciality Chemicals Magazine)，2〇〇3 36-38 頁。 可轉換成為二甲胺甲基的z基團可例如為_CH2_L，_ 49 1306846 CH2-N〇2 ’ -MgHal，氰基，醛，-CH2-〇-Pg，—CH2-NPg丨Pg2，-CH臭％，-CH2-NHCH3，-CH2-NH2，-C0-N(CH3)2，-CHCA^12)(A^13) » -(A1RI4)(A2R15)(A3R16) > -C00R17 > -CH2-c〇~NH2，_CH=CH-R18或_c〇nhR19，其中Pg為醇基的保護基 ，Pgi和Pg2為胺基的保護基，β12和βΐ3係獨立地選自Cu-烧基，（：2_6-烯基，C2_6-炔基，和視需要地經烷基取代之芳 基或芳烷基，或R12和β13共同形成2至4個碳原子的鏈， 母個RiiRi8係獨立地選自烷基，CH_烯基，炔 基，和視需要地經c^-烷基取代之芳基或芳基—Ci 6_烷基 ，R19為氫或甲基，及A1，A2和A3係選自〇和s ; L為離去 基，例如齒素或-〇-S〇2-A且其中A為Ci「烷基，q「烯基

〇2—6~炔基，或視需要地經（^_6-貌基取代之芳基或芳基一 Cm-烷基。 A 在本發明的一個具體實例中，式（n ) , (E s)，（n r) ，av)〇vs)(ivr)，和（v)化合物中的z為二曱胺曱基，_ CH2-L 5 -CH2-NPglPg2 , -CH2NMePgl 5 -CH2-NHCH3 > -CH2-NH2 ，-C0-N(CH3)2，醛或-C00R17。 欲將Z為，-Q—Pg的化合物轉換至相對應之z為二甲 胺甲基的化合物，如同於w〇 〇1/43525，w〇 〇ι/5ΐ478或 W0 01/68631中所述者或使用相類似的方法，丨可利用保 護基的移除而形成㈣應醇，然後將醇基轉換成適當離去 基’且將所得化合物與下列反應 a) 二甲基胺或基鹽， b) 甲基胺’接著進行甲基化作用或還原性胺化作用， 50 1306846 或 —且氮化物，接著進行還原作用而形成相對應胺再接 者進行曱基化作用或還原性胺化作用。 I L且其中L·為離去基的化合物可在相同的方 ，下，轉換為二甲胺甲基基團。 Z為CO-N(CH3)2及-C0NHR19且其中Rl9為氫或曱基的化 口勿轉換為Z為二曱胺甲基的相對應化合物時，如同於w〇 0甘1/43525或㈣G1/6_中所述者或使用相類似的方法， /、係：用醯胺的還原作用，且如果是形成—級或二級胺， 則接著進仃甲基化作用或還原性胺化作用以形成胺 基基團。 Z一 iCVNMe(Pgi)或—CH2_N(pgi)(pg2)的化合物轉換為 甲胺甲基的相對應化合物時，如同於WQ G1 /43525 或W〇 〇1/68631中所述者或使用相類似的方法，其係藉由 保護基的移除，亦即得到其中Z為-ch2，或—ch2一驗的 化合物，接著進行胺基的甲基化作用或還原性胺化作用以 形成二甲胺甲基基團。 F用以 z為-CHU】R]2)⑽】3)的化合物轉換為z為二〒胺 的相對應化合物時，如同於㈣01/43525或W0 01/68631 中所述者或使用相麵也& ^ ^ ^ 邳頸似的方法，其係藉由去保護作用而形 成酿（其中Z為會CA1H的化合物），接著以二甲基胺進行 還原性胺化作用以形成二甲胺甲基基團。 Z為韻14)(A，腑”的化合物轉換為2為二甲 胺甲基的相對應化合物時，如同於㈣⑽以中所述者 51 1306846 或使用相類似的方法，其係 i)利用水解作用以形成羧酸或其酯，然後還原以形成 醇，再之後將該醇基轉換成適當的離去基，接著如上文中 所述地以二甲基胺基取代離去基，或 11)利用與胺之NH(Me)2，NH2 Me，NH3或其等鹽反應 ，將羧酸或其酯轉換成醯胺，接著依任一順序地進行醯胺 的還原作用，及如果必要時的甲基化作用或還原性胺化作 用，因而形成二甲胺甲基基團。 Z為-C00R17的化合物轉換為如上文中所述之z為二甲 胺甲基的相對應化合物時，其係由羧酸酯起始。 Z為-CH^CONH2的化合物轉換為z為二甲胺甲基的相 對應化合物時，如同於w〇 〇1/43525或w〇 〇ι/6863ι中所 述者或使用相财m，其係藉由錢化物的處理而形 成-級胺’接著進行自由胺基的甲基化作用或還原性胺化 作用而形成二甲胺甲基基團。 z為-CH=CH-R1、化合物轉換為z為二甲胺甲基的相 對應化合物時，如同於W0 〇1鳩25或W0 〇1/68631中所 述者或使用相類似的方法，其係藉由氧化作用而靡， ”可利用還原性胺化作用而轉換成二甲胺甲基基團。 Z為氰基或-ch2-N〇2的化合物轉換4 Z為二甲胺甲基 的:目對應化合物時，如同於wo 01/68629中所述者或使用 =似的方法，其係使㈣原作帛，接著進行自由胺基的 土化作用或還原性胺化作用而形成二甲胺甲基基團。 為MgHal的化合物轉換為z為二甲胺甲基的相對應 52 1306846 化合物時，如同於wo 01/68629中所述者或使用相類似的 方法其係為與式（CH3)2NCH2〇-燒基的二甲胺曱基烧美醋反 應。 車又佳者，z為二甲胺甲基。如果z並非為二甲胺甲基 則將Z變為二曱胺甲基的轉換可適當地在環閉合後進行 0 適當者為，當虛線代表一鍵時，z為二甲胺甲基，一 CH2-L ， -CH2-NPglPg2 ， -CH2NMePgl ， _CH2_NHCH3 ， _CH2一 NH2 ，醛，-c〇-n(CH3)2 ， -C00R17 。 其中 Z 為二曱胺曱基，-CH2-NPgiPg2，一CH2NMepgi，_ CH2_NHCH3或-Cl-NH2的式（Π)4(Ιν)化合物，特別為其中 Ζ為二甲胺甲基，-Ci-NHCH3,或-cuH2的化合物，為特 別完全地適用於本發明純化分離的方法，於其中式（U )和（ IV )化合物得以分離。 在式（Π)，（ns)，（Hr)，（IV)(IVs)(IVr)，和（v) 化合物中，虛線較佳為單鍵。較佳者為虛線代表雙鍵的化 合物可轉換為其中虛線為單鍵的相對應化合物，其係利用 於W0 01/68630中所述及的方法。較佳為該還原作用是在 壞閉合之後進行。 式（IV S)或（Π S)化合物的對映選擇性環閉合而形成式（ V)化合物，其可適當地在低溫下，於惰性有機溶劑/， 例如四氫呋喃，甲苯，DMSO, DMF，第三丁基曱基醚，二曱 氧基乙烷，二甲氧基甲烷，二氧雜環己烷，乙臏或二氯甲 烷，該化合物的不穩定酯衍生物使用鹼處理，該鹼例如為 53 1306846 K〇C(CH3)3和其他醇鹽，NaH和其他氫化物，三乙胺，乙基 二異丙基胺或毗啶。此方法已述於美國專利號4, 943, 590 〇 式（Π s)化合物的環閉合可適當地以上文中所述之鹼處 理’該反應亦存有一試劑足以與該二醇的一級醇形成不穩 疋基團’例如甲基續醯氧基，p-甲苯績醯氧基，1〇_樟腦續 醯氧基，三氟乙醯氧基和三氟甲基磺醯氧基和齒素。 在某些情況下，可以有利地在進行環閉合之前，將式（ IVs)化合物中的-W-R3基團交換成更不穩定的基團。此類不 穩定基團（離去基）可典型地選自下列之族群：甲基磺醯氧 基，P-甲苯磺醯氧基，10-樟腦磺醯氧基，三氟乙醯氧基和 二氣甲基故酿乳基或齒素。 典型地，式（IVs)化合物可與鹼水溶液，例如在水或醇 類或其混合物之NaOH，KOH或LiOH，進行水解作用而形成 式（Π s )化合物，然後在存有有機驗下的有機溶劑中，與例 如甲確醯氯或甲苯磺醯氯之經活化離去基反應。 依地普命產物的光學純度可能必須在環閉合之後再以 改良。欲得到光學純度的改良可根據於W0 03/000672中所 述之方法’利用在掌性固定相的色層分析法，或利用外消 旋性西酞普侖鹼或其鹽之結晶作用。 根據本發明得到的式（Π )和（IV)化合物的r—對映體， 可根據於W0 03/000672中所述之方法，在酸性環境下進行 環閉合而製備外消旋性西肽普侖和依地普侖。用於進行酸 性環閉合的適當酸可為無機酸，羧酸，磺酸或磺酸衍生物 54 1306846 ’更適當者為h2so4或H3P04。 依此在另一個具體實例中，本發明係有關於一種製備 外消旋性西酞普侖及/或依地普侖或其藥學上可接受鹽的 方法，其包含利用上文中任一個具體實例中所定義的本發 明選擇性酵素催化醢化作用方法的一個具體實例，以及在 上文中任一個具體實例中所定義的本發明選擇性酵素催化 脫醯作用方法的一個具體實例來製備式（Er)二醇之卜對 映體或其鹽

其中R為氰基或可轉變成氰基的基團，虛線代表任意 的-鍵’纟Z為二甲胺甲基或為可轉換成二甲胺 基 團，及Hal為鹵素， 或具式（IV Ο經醯化二醇的R_對映體或其鹽 55 1306846

其中R，Z，虛線和Hal為如同上文中所定義者，w為 〇或S’及R3為_Y_R1且其中…為Ch「烷基，Ch「烯基或 Clh-炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次， 這些取代基係選自Cl_iQ_烷氧基，Ci iq_烷硫基 ，羥基，λ 生 國 素，胺基’硝基，氰基，Cl_l〇_烧胺基，二（Cii「炫基）按 基，芳基，芳氧基，芳硫基和雜芳基，或Ri為芳基，其中 任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或多次， 乂些取代基係選自Chq-烷基，c2_1Q-稀基，C2_1Q-炔基，c 10烧氧基，Chq-燒硫基，經基，鹵素，胺基，硝基，氡 基，烧胺基和二（G —1Q-烷基）胺基，及Y為一鍵，〇， S 或 NH， ’ 可依情況地接著依任一順序將R基團轉換為氰其， 土 ’將 以虛線代表的雙鍵還原成為單鍵，將Z基團轉換為一 一〒獎 曱基及/或將Hal基團轉換為氟基團，及在酸性條件下進行 式（Π r)或（IV s)R-對映體的環閉合，因而形成含有具式（v) 化合物之混合物 56 1306846

其中 Hal，Z，R 量之相對應R-對映體 和虛線為如同上文中所定義者，及少 接著依任一順序地：如 換盍备笪 如果田R並非氰基時將R基團轉 、為亂基’如果虛線是代表雙鍵時將之還原為單鍵，如果 並非為二甲胺甲基時將Z基團轉換為二甲胺甲基，及若 Μ並非為氣時將Hal轉換為氟基團，接著藉由沈殿出外 消旋性西酞普|自由鹼或其鹽並由驗物的母⑨中回收依 地普侖，因此分離出依地普侖及/或外消旋性西肽普侖或 其藥學上可接受鹽。 適當者為，上述之將R-二醇轉化為依地普侖的方法可 使用於製備依地普侖。 將R基團轉換成為氰基，將以虛線代表的雙鍵還原成 单鍵’轉換Z基團為二曱胺甲基，及轉換Hal為氣均可如 上文中所述地進行。 依據上述製備依地普侖方法的一個具體實例，得自於 酵素催化醯化作用的式（Π)化合物或S-對映體與式（XV) 化合物相反對映體的混合物’可藉由上文所述用於分離和 57 1306846 、純4匕的盆tb , ’、T 一種方法的分離和純化步驟而相互分離出。依 據另-個具體實例，該混合物已利用上文所述用於分離和 純化的另—種方法分離出。 依據上述製備依地普侖方法的另一個具體實例，得自 於酵素催化脫醯作用的式（n)化合物R-或s_對映體與式（ W )化合物相反對映體的混合物，可藉由上文所述用於分 離和純化的其中一種方法的分離和純化步驟而相互分離出 。依據另一個具體實例，該混合物已利用上文所述用於分 離和純化的另一種方法分離出。 依據本發明的另一個具體實例，使用於製備依地普侖 的上述式（Π r)S-對映體或式（!V r)s-對映體在環閉合之前 並不分別與式（IV )和（Π )R-對映體分離。 依地普侖產物的光學純度可能必須在環閉合之後再以 改良。欲得到光學純度的改良可根據於w〇 〇3/〇〇〇672中所 述之方法，利用在掌性固定相的色層分析法，或利用外消 旋性西酞普侖鹼或其鹽之結晶作用。 於本文中所使用之C1-10 -烧基一詞係為具有由—至十 個碳原子之分枝或未分枝烷基，其例如包括甲基，乙基， 兩基，卜丙基’ 2-丙基’卜丁基，2-丁基，2-甲基-2〜丙基 ，2-甲基-卜丙基，戊基，己基和庚基。π_6—烷基一詞係 為具有由一至六個碳原子之分枝或未分枝烷基，其例如包 括甲基’乙基’ 1-丙基，2-丙基，1-丁基，2-丁基，2—甲 基-2-丙基，2-甲基-卜丙基，戊基和己基。cl4烷基—詞 係為具有由一至四個碳原子之分枝或未分枝烷基，其例如 58 1306846 匕括甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，2_丁基，2一 甲基〜2-丙基和2一甲基-1-丙基。C1_3_烷基一詞係為具有 由一至三個碳原子之分枝或未分技烷基，其例如包括尹基 ，乙基，1-丙基，2-丙基。 相類似地，C2-10-稀基和C2-10 —炔基分別代表具有由 二至十個碳原子之分枝或未分枝烯基和炔基，並分別包括 一個雙鍵和一個三鍵，例如乙烯基，丙烯基，丁烯基，乙 块基，丙絲和丁炔基。c2_6_烯基和C2「快基分別代表具 有由二至六個碳原子之分枝或未分枝烯基和炔基，並分別 包括一個雙鍵和一個三鍵，例如乙烯基，丙烯基，丁烯基 ’乙炔基，丙炔基和丁炔基。c2_4_烯基和c2 4_块基分別代 表具有由二至四個碳原子之分枝或未分枝烯基和炔基，並 分別包括一個雙鍵和一個三鍵，例如乙烯基，丙烯基，丁 烯基，乙炔基，丙炔基和丁炔基。C2 3—烯基和c2 3_快基分 別代表具有由二至三個碳原子之分枝或未分枝烯基和炔基 ，並分別包括一個雙鍵和一個三鍵，例如乙烯基，丙烯基 ，乙炔基和丙炔基。

Chq-烷氧基，Cl，-烷硫基’ Ci]「烷胺基及二_((：卜1〇_ 烧基）胺基等詞所代表的基團中烧基為如上文中q『烧基 之定義。Ch-烧氧基，Ci 6—烧硫基，Ci 6 —烧胺基及二一I 6_烷基）胺基等詞所代表的基團中烷基為如上文中烷 基之定義。Ch-境氧基，Ci4_烷硫基，^ 4_烷胺基及二_ (Ch-烷基）胺基等詞所代表的基團中烷基為如上文中一 烷基之定義。Cl-广烷氧基，Ci-3-烷硫基，Ci-3-烷胺基及二 59 1306846 -(Ch-烷基)胺基等詞所代表的基團中烷基為如上 3-貌基之定義。 1 鹵素意為氟，氯，溴或蛾。 芳基一詞係為單或二環的環碳芳基，例如苯基，或兹 基，特別為苯基。 π 芳氧基’芳硫基所代表之基團中芳基為如上文中所定 義者。 雜芳基一詞意為5或6 適當者為該雜芳基含有選 R<>和R1可共同形成3至 凡的單環雜芳基或二環雜芳組 自〇，S和Ν的1-3個雜原子。 5個碳原子的鏈，因此形成酐 當Ζ為-CH2-N(R，R，，)且其中尺，和R”相互連接形成含有 它們所連接之N-原子的環狀結構時，該環結構形式的基團 例如包括m各烧（PyrrGlidin)，嗎咐基和_基 HOBt意為經基苯並三唾，及咅达τ扣 叹Pip意為五氟酚。 實驗 下列實施例中，測得轉換％釦#與^+ ώ ^ 状和光學純度並如下文所述 地計算而得： 分析條件（用於轉換率）

使用於實施例1-28的HPLC X 25cm (YMC 有 管柱：YMC-包裝 ODS-A 〇.46〇n Ij 限公司所製） 沖提液：25mM磷酸鹽緩衝液/乙腈=6〇/4〇 流動速率：1 · 0 m 1 / m i η 1306846 溫度：40°C 偵測器波長：237nm 使用於實施例29-42的HPLC分析條件（用於轉換率）： 管柱.Lichrospher RP-8 管柱，250 X 4 mm (5 微米 顆粒大小） 沖提液：緩衝之MeOH/水依下列製備：丨· 1毫升之Et3N 加至150毫升水中，加入1 〇% H3P〇4水溶液至酸鹼值為7， 加入水成為總共為200毫升。將該混合液加至18升的 MeOH 内。 溫度：35°C 流動速率：1 ml/min 壓力：16. 0 MPa 偵測器：UV 254nm 注射體積：1 〇微升 轉換率（％) = P/(S+P) X 1〇〇(Ρ :產物量，s :殘餘物 質量）。 使用於實施例1 -28的HPLC分析條件（用於光學純度）： 管柱：Chiralpak AD 0.46cm I.D. X 25cm (由 DAICEL 化學品公司所製） 沖提液：庚烷/曱醇/乙醇/二乙胺=85/7.5/7.5/0.1 流動速率：1. 0ml/miη 溫度：30°C 偵測器波長：237nm 轉換率（％) = P/(S+P) X 100(P :產物量，S :殘餘物 61 1306846 質量）。 超臨界流體色層分析法。使用於實施例29-42的分析 條件： 管柱：Daicel AD管柱且尺寸大小為250 X 4.6 mm (5 #米顆粒大小） 固定相：二氧化碳 調節劑：甲醇與二乙胺（〇. 5% )和三氟乙酸（0. 5% ) 調節梯度：1_2% 4分鐘；2-4% 4分鐘；4 -8% 4分鐘 ;8-16% 4 分鐘；16-32% 4 分鐘；32-45% 1. 62 分鐘 溫度：環境溫度 流動速率：2 ml/miη 壓力：20 mPa 偵測器：UV 230nm 及 254nm 注射體積：10微升 光學純度（ee%) = (A-B)/(A + B) X i〇〇(a和B代表相 對應的立體異構物，A> B) E-值=In((l-c/l〇〇) x ((1—Es/1〇〇))/ In((1_c/1〇〇) x (l+Es/100))(c :轉化比率，Es :殘餘物質的光學純度） 實施例1 lg)-4-[4-二甲胺基-K4’—氟苯基上二卜鞀丁基卜3_羥甲基 笨基氰 將水（200_7克）與甲苯（44〇.8克）加至（士）一4_[4_二甲 胺基卜（4’銳苯基）-卜經丁基]—3_超甲基苯基氰，1/2硫酸 鹽（100.4克’ 0.257莫耳），然後攪拌15分鐘且溫度昇高 62 1306846 至60 C °接著，在超過5分鐘期間逐滴加入3〇 % NaOH(34.5克，0.259莫耳）直至水層的酸鹼值達至114， 並且再攪拌30分鐘。完成攪拌之後，令混合物靜置5分鐘 且勿離。丟棄水層，將所得到的有機層以22〇. 〇克的水清 洗，進一步地在6ITC的減壓下濃縮以移除殘餘的水分。濃 縮液加入甲苯，藉此得到583.1克在曱苯中的4_[4一二甲 胺基-1-(4，-氟苯基）-卜羥丁基]_3—羥甲基苯基氰溶液（純 4 [4-一甲胺基-丨_(4’〜氟苯基）_卜羥丁基]一3-羥甲基苯基 氰含量：87· 6克，產率99. 7%，0. 256莫耳）。然後，將 52.5克的甲笨倒入17 5克固定化酵素（諾華酶435)，接著 加入583_1克在甲苯中# 4_[[二甲胺基_卜（4，_氟苯基）— 1羥丁基]-3~羥甲基笨基氰，並將該混合物的溫度控制在 4〇C。接著，將含有新戊酸（28 7克，〇·28ι莫耳），丁酸 乙烯醋（29.2克，〇·256莫耳）和甲苯（28.8克）的混合溶液 在超f 2〇刀鐘期間加入上述混合物内，並將混合物在4〇 :C及微量氮氣流下攪拌12小時。混合物冷卻超過2小時之 後成為20 C ’在此相同溫度下攪拌該混合物i小時， 方^止授拌。將酵素過渡出’然後以1 05 {甲苯清洗酵音 兩次並合，甲苯層。該甲苯層含有583 1克在甲苯中的^ 甲基1-(4’-氟笨基）一卜羥丁基]_3_羥甲基 一 溶液(純⑻叫二甲胺基+(4，—氣苯基)]_幾丁基; 羰甲基苯基氰含量：36 〇克，經由酵素催 之產莫耳)。 辣件到 3有上清液和清洗流體的混合溶液以水萃取三次（438 63 1306846 克，263克χ2)，所得到的1005. 4克水層以79克甲苯清洗 五次。結果，得到9 8 5 · 2克水性溶液的（S) - 4 - [ 4 -二甲胺基 -1-(4’-氟苯基）-i-羥丁基]_3_羥甲基苯基氰，新戊酸鹽{ 純（S)-4-[4-一甲胺基-氟苯基）-i-經丁基]一 3-經甲 基苯基氰含量：32.6克，產率（得自以水萃取至以曱苯清 洗的步驟）：90_6%，0.0952莫耳}。因此得到之985.2克 水性溶液的（S)-4-[4-二甲胺基_1-(4，-氟苯基）—卜羥丁基 ]-3_經曱基苯基氰，新戊酸鹽加入218 2克曱苯。後來， 混合液在搜拌下緩緩加入30% NaOH( 13.3克，0.0998莫耳 )，直至水層的酸鹼值達到1丨· 9 ,再維持混合液的攪拌3〇 分鐘。攪拌之後，令混合液靜置3〇分鐘使甲苯層分離出 ，並且殘餘的水層再以142.5克曱苯萃取。合併的甲苯層 以169.0克的水清洗兩次，在6〇t的減壓下濃縮，因此得 到64.0克在甲苯中的（s)-4-[4-二曱胺基_1-(4，_氟苯基）_ 1羥丁基]-3-羥曱基苯基氰溶液。該曱苯溶液可得到32〇 克（0.0935莫耳）之（S)-4-[H胺基+(4，_義苯基）+ & 丁基]-3-羥甲基苯基氰。總產率為％, 4%。經Ηριχ測 得之光學純度為98.7%ee，且化學純度為99 9區域％ ’ (⑻-5-氰基-2-[二曱胺基_(4，_氟苯基）_經丁基]苯甲基丁 酸酯：0. 04區域％ }。 在上述之系統中，所提及之『化學純度』以下列反應 式代表。 (化學純度）二[4-[4〜二甲脫f T胺基~1-(4，-氟苯基）-1-羥丁 基]-3-羥曱基苯基氰區域值p「r J L (所有彳貞測化合物的區域值 64 1306846 )-（甲苯區域值）-（衍生自系統之區域值）]x 100(區域％) 實施例2 在裝配有活塞的試管内加入50毫克（0.146毫莫耳）之 (±)-4 - [4-二甲胺基-1-(4’ -氣苯基）-i-經丁基]一 3-經甲基 苯基氰’ 25毫克各種不同種類的脂肪酶，33毫克（0.29毫 莫耳）丁酸乙稀酯和1毫升甲苯，在4 〇 °c下授拌16小時。 物質中若光學純度為至少50%ee，計算出£_值。結果示於 表1。 % 表1 酵素 來源 里波酶TL IM (Novozymes A/Stnj 製）lanuginosus 諾華酶 435 Candida 59.7 (Novozymes A/Sn]j 製）antarctica _^__1. 16 實施例3 轉換光學純度組態 £_值 __ (%) (%e. e.) Therraorayces 97. 8 62. 7 (^)- 96. 4 (S) 1 18 在裝配有活塞的试管内加入1〇至100毫克（〇 029至 0.29毫莫耳）象（土）-4-[4-二曱胺基-「（γ—氟笨基卜卜羥 丁基]-3-經曱基笨基氰，10至1〇〇毫克諾華酶 435(Nov〇Zymes 產品，E/S 比例=1.0)，33 至 333 毫克（1〇 當量）丁酸乙烯酯和1毫升甲苯，在3〇〇c下攪拌16小時。 結果示於表2。 表2 度 濃 換 轉 9 2 1—~ ο 2 4 3 5 5 5 6 6 度13 8 7 2 *;J9 8 8 9 純 學 光

Lils s s S ^' (((( 8 0 3 2 65 1306846 實施例4 在裝配有活塞的試管内加入1〇〇毫克（〇_292毫莫耳） 之（± )-4-[4-二曱胺基-卜（4，-氟苯基）-1-羥丁基]—3_羥曱 基苯基氰，50毫克諾華酶435(Novozymes產品），333毫克 (2_ 92毫莫耳）丁酸乙烯酯，〇. 292毫莫耳各種不同類別的 添加劑和1毫升甲笨，在40°C的溫度下攪拌16小時。結 果示於表3。 表3

2 3161111 8 值 添加劑 硫酸 乙酸 氫氣酸 笨曱酸 三乙胺 毗啶 苯甲酸/三乙胺 苯曱酸/毗啶 無_ 實施例5 在裝配有授拌器和溫度計# 2〇〇㈣四頸燒航内，將 1_5克(4.38毫莫耳)之(±)一4_[4〜二曱胺基+ (4，_氟苯基 )-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰溶解於3〇毫升甲苯，然後加 入〇_ 45克諾華酶435(N〇v〇zymes產品），〇. 347克（4.⑽毫 莫耳）ttU ’ 4.38毫莫耳不同類的酸和i，克（8 76毫莫 耳）丁酸乙烯醋，在4(rc下授拌16至215小日夺。結果 於表4。 不 66 1306846 表4

水楊酸 P-乙基苯曱酸 〇-曱苯甲酸 m-曱苯曱酸 p-曱苯曱酸 〇 -菌香酸 4-氣苯乙酸 3-苯丙酸 1-萘甲酸 苯甲酸 丁酸 異丁酸 異戊酸 新戊酸 己酸 環己烷羧酸 無 64. 9 64. 5 66. 3 55. 4 59. 3 59. 5 46.2 67.8 59. 7 53. 7 61. 8 55. 3 58. 2 60. 3 55. 2 59. 1 97 97 96 98 94 96 74 83 99 89 97 94 97 96 95 95 (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) (S) Ε-值 13 13 11 44 17 18 31 6 37 24 16 27 25 17 30 18 實施例6 在裝配有攪拌器和溫度計的200毫升四頸燒瓶内，將 3.0克（8.76毫莫耳）之（±)-4-[4-二甲胺基-卜（4’-氟笨基 )-卜羥丁基]-3-羥曱基苯基氰溶解於30毫升甲苯，然後加 入0.9克講華酶435(如¥〇2711165產品），0.693克（8.76毫 莫耳）吡啶，8.76毫莫耳不同類的酸和2.00克（17.52毫莫 耳）丁酸乙烯酯，在40X：下攪拌1 5· 5至1 6. 5小時。結果 示於表5。 表5 酸 0-曱I曱酸 P-曱笨甲酸 苯曱酸 新戊酸 環己烧缓酸

9 5 5 2 9 5 3 2 6 5 8 % Γν 換 轉

態 I Ε 4 4 (%e. e. 97. 9 29. 8 28.4 99. 6 97. 0

s s s s S κιν Γν Γν /(V /IV 114 3 0 2 4 12 2 67 1306846 實施例7 在裝配有攪拌器和溫度計的200毫升四頸燒瓶内，將 4.5克（13.1毫莫耳）之（士）_4_[4_二甲胺基—卜（4，—氟苯基 )-1-經丁基]-3-羥甲基苯基氰溶解於30毫升曱苯，然後加 入〇· 9克諾華酶435(N〇v〇Zymes產品），2. 68克（26· 2毫莫 耳）新戊酸和0.900至1.500克（1.6至1.〇當量）丁酸乙烯 酉旨’在4(TC下攪拌24小時。結果示於表6。 表6

實施例8 在裝配有攪拌器和溫度計的500毫升可分離式燒瓶内 ’將20.0克（58.4毫莫耳）之（±)-4-[4-二甲胺基-1-(4，一 氟笨基）-1-赵丁基]-3-羥甲基苯基氰溶解於144毫升曱苯 ’然後加入新戊酸（1.1至3當量），4.0克諾華酶 435(N〇v〇ZymeS產品），6· 67克（58· 4毫莫耳）丁酸乙烯酯 ，在氮流（5毫升/分）及4(rc下攪拌2〇至24小時。結果示 於表7。 表7 新戊酸當量 1. 1. 2. 3. 反應時 間（時) ΤΓ 21 20 21 24 轉換（％) 0 9 8 6 5 7 5 5 5 5 (%e. eΤΓ 98. 98. 98. 97. 態 -))))) Is s s s S 組

值 13 16 15 I -02233 E 68 1306846 實施例9 在裝配有活塞的試管内加入1〇毫克（〇. 〇29毫莫耳）之 (士）_4_[4-二甲胺基-卜（4，-氟苯基）-卜羥丁基]-3-羥曱基 笨基氰’ 10毫克諾華酶435(Novozymes產品），0.29毫莫 耳各種不同類別的醯基給體和丨毫升二異丙基醚，在3〇它 下授摔16小時。物質中若光學純度為至少30% ee，計算 出E-值。結果示於表&。 表8 醯基給體 乙酸乙烯酯 丙酸乙稀酯 丁酸乙烯酯 己酸乙稀醋 正丁酸酐 異戊酸酐 異丁酸酐 實施例10

學純度（％e. e.) IT 53. 9 98. 3 76. 7 5. 80 3. 30

(S) (S) (S) 在裝配有活塞的試管内加入毫克（0.029毫莫耳）之 (±)-4-[4-二曱胺基-卜（4,一氟苯基）_卜羥丁基]一3_羥甲基 笨基氰’ 10毫克諾華酶435(Novozymes產品），33亳克 (0. 2 9毫莫耳）丁酸乙烯酯和i毫升各種不同類別的溶劑， 在30 C下攪拌16小時。反應後，分析轉換比例和光學純 度並計算出E-值。結果示於表9。 69 1306846

溶劑 三級ϊ7基曱基醚 1，4-二•惡燒 四氫呋喃 二異丙基醚 乙 丙酮 甲基異丁基酮 11. 1 6. 19 66. 3 59. 7 11.8 33. 〇

98. 95. (S) (S) 13 17 乙醇 7.09 丁醇 6,56 乙酸乙酯 1 〇 _ 8 乙酸丁酯 117 曱苯 52.9 己烷 40_了 二氯乙烷 13.8 乙腈 25.5 二甲基甲醯胺 5.83 二甲基亞硼 8. 78 丁酸乙稀醋_ 57.0 93. 7 (S) 38 95. 〇 ⑻ 22

實施例11 在裝配有攪拌器和溫度計 入0.9至1.35克（e/s比率為0.2至0.3)之諾華酶 435(Novozymes產品）。於燒瓶内加入溶解於3〇毫升甲苯 中的4.5克（13. 1毫莫耳）之（土）_4_[ 4一二甲胺基―卜以，氟 苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰，21克（19.7毫莫耳） 之新戊酸’及U0克(13.1毫莫耳)丁酸乙浠_溶液、，在 5和八45 C下授掉21小時。反應之後，反應流體藉由傾析 出而且剩餘的酵素以3〇毫升曱苯清洗並回收 複《中所述之操作，但使用回收的 應四次。依據下列方程式計算酵素活性 反 酵素活性（U/克）=(每分鐘 …果不於表10。 ))/(酵素重量（克）） 成之產物數量（微莫耳/分鐘 70 1306846 表ίο 批次 了 2 3 4 5 酵素活性（U/g) 112^0/8=0.30) 40°C (E/S=0. 25) 45〇C (E/S=0. 20) 8.61 12. 75 10· 31 12.93 9- 75 12.50 9.39 12. 16 -11.14 17. 70 15. 48 15. 06 13. 10 實施例12 (S)-4-[4-二甲胺基^]^，—氟茉某卜羥丁某u一鞀甲 1 笨基氰新戊酸镑 在裝配有攪拌器和溫度計的四頸燒瓶内加入在曱苯中 的10.0克（0.029莫耳）（±)-4—[4-二甲胺基-1-(4，-氟苯基 )-1_羥丁基]-3-羥曱基苯基氰溶液66. 6克，並將溫度控制 於40°C。然後’於該混合液内加入2_ 27克（〇. 029莫耳）¾ 啶’ 2.98克（0.029莫耳）新戍酸，3.35克（0.029莫耳）丁 酸乙烯酯，及2. 0克固定化酵素（諾華酶435)。反應混合 液在40°C及微量氮氣流下攪拌12小時後停止。酵素使用 K i r i yama漏斗由反應混合物中過濾出，及酵素再以21. 6 克甲苯清洗。結果，得到（S)-4-[4-二甲胺基-1-(4’-氟苯 基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰（3.6克，0.011莫耳，產 率：36.0%，光學純度：98.5%ee)的新戊酸鹽。合併的曱 苯層在20°C下以水清洗三次（50毫升，30毫升，30毫升） ，因而得到一水層含有（S)-4-[4-二甲胺基-1-(4，-氟苯基 )-卜羥丁基]-3-羥曱基苯基氰（3.5克’ 0.011莫耳，萃取 率：95% )的新戊酸鹽。 71 1306846 實施例13 1^1-4-[4-二_甲胺基-i一（4’_氟笨基卜鞀丁基卜3 —羥甲某 蓋基氰新戊酸驄 在裝配有攪拌器和溫度計的四頸燒瓶内加入在甲苯中 的20.0克（〇_〇58莫耳）（±)-4-[4-二曱胺基-1-(4’-氟苯基 )-1-經丁基]-3-羥曱基苯基氰溶液66. 7克，並將溫度控制 於40°C。然後，於上述混合液内加入5.93克（0.058莫耳） 新戊酸，6. 62克（〇. 〇58莫耳）丁酸乙烯酯，及4. 1克固定 化酵素（諾華酶435)。反應混合液在40°C及微量氮氣流下 授拌18小時後停止。酵素使用κ i r i yama漏斗由反應混合 物中過濾出，及酵素再以41 _ 3克曱苯清洗。結果，得到在 曱苯溶液内之6.7克（〇〇2〇莫耳）（s)_4_[4_二甲胺基_卜 U’-氟笨基）-1-羥丁基]_3_羥甲基苯基氰的新戊酸鹽，產 率為33.5%且光學純度為99.7%ee。 實施例14 ϋ>4-[4-二甲胺基-^(4’—氟笨基）—卜韃丁基>3一鞀甲箕 苯基氰環己烷羧酴_ 在裝配有攪拌器和溫度計的四頸燒瓶内加入在甲苯中 的25_0克（0.073莫耳）（±)_4-[4-二甲胺基-1-(4，一氟苯基 )-卜經丁基]-3-羥曱基苯基氰溶液250.0克，並將溫度控 制於40°C。然後，於上述混合液内加入5.77克（0.073莫 耳）吡啶’ 8.33克（0.073莫耳）丁酸乙烯酯，9 52克 (0. 073莫耳）環己烷羧酸，及5. 〇克固定化酵素（語華酶 435)。反應混合液在4(rc及微量氮氣流下攪拌ι7. 5 72 1306846 後停止。過濾出酵素，及以54_1克曱笨清洗。結果，得到 甲笨層含有（S)-4-[ 4-二曱胺基-卜（4,〜氟苯基一羥丁 基]-3-羥甲基苯基氰（86克，0 025莫耳，產率：％ 4% ’光學純度：98. 7%ee)的環己烷羧酸鹽。 α併的甲苯層在20C下以水清洗五次（187 5毫升 5) ’因而得到一水層含有（S)_4-[4-二曱胺基-卜（4，_氟笨 基）-1-羥丁基]-3-羥曱基苯基氰（7.6克，0·〇221莫耳，萃 取率：89% )的環己烷羧酸鹽。 實施例1 5 二甲胺基-1-U’-氟苯基基卜3_麵甲 苤基氰〇-曱笨甲酸鹽 在裝配有挽摔器和溫度計的四頸燒瓶内加入在甲苯中 的25.0克（0_073莫耳）（±)-4-[4-二曱胺基—氣苯基 )-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰溶液250.0克，並將溫度控 制於4 0 °C。然後，於上述混合液内加入5. 7 7克（〇 〇 7 3莫 耳）毗啶’ 8. 33克（0.073莫耳）丁酸乙烯酯，9· 93克 (0_073莫耳）〇-曱苯甲酸，及5.0克固定化酵素（諾華酶 4 3 5)。反應混合液在4 0 °C及微量氮氣流下授拌21小時後 停止。酵素使用K i r i yama漏斗由反應混合物中過濾出，並 以54. 1克甲苯清洗。結果，得到一甲苯層含有（S)_4_[4一 二曱胺基-1-(4’-氟苯基）-卜羥丁基]-3-羥甲基笨基氰（9. 7 克，0.028莫耳，產率：38_8%，光學純度：97.8%ee)的 〇-甲苯曱酸鹽。 合併的甲苯層在60 °C下以水清洗三次（250毫升，63 1306846 毫升，63毫升），因而得到一水層含有（s) 4—[4二曱胺基 -1-(4’-氟苯基）-! 一羥丁基]—3_羥曱基苯基氰（78克， 0.0228莫耳，萃取率：8〇%)的〇_甲苯曱酸鹽。 實施例16 二（4，-氟笨卜鞀丁其卜％絲^ 笨基氰異丁酸豳 在裝配有授拌器和溫度計的四頸燒瓶内加入在甲苯中 的10. 〇克（0. 029莫耳）（±)-4-[4-二曱胺基-1-(4，-氟苯基 )-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰溶液33 3克，並將溫度控制 於40C。然後，於上述混合液内加入2 29克（〇〇29莫耳） 毗啶，2. 57克（〇. 〇29莫耳）異丁酸，3· 33克（〇 〇29莫耳） 丁酸乙烯酯，及2.0克固定化酵素（諾華酶435)。反應混 合液在40°C及微量氮氣流下攪拌24小時後停止。酵素使 用K i r i yama漏斗由反應混合物中過濾出，並以2丨· 6克甲 苯清洗。結果’得到一曱苯層含有（5)_4_[4_二甲胺基―卜 (4，-氟苯基）-1一羥丁基]_3_羥曱基苯基氰（3 8克，〇.〇11 莫耳’產率· 38.0% ’光學純度：95.9%ee)的異丁酸鹽。 實施例17 氟笨基卜羥丁基1-3-趑甲竿 笨基亂笨甲酸鹽 在裝配有攪拌器和溫度計的四頸燒瓶内加入在曱苯中 的50. 0克（0. 146莫耳）（±)一4-[4-二曱胺基-1-(4，-氟苯基 )-卜經丁基]-3-羥甲基苯基氰溶液250.〇克，並將溫度控 制於40 C。然後，於上述混合液内加入n. 5克（〇. 146莫 1306846 耳）毗咬，33.2克（0.291莫耳）丁酸乙稀酯，ι7. 8克 (0.146莫耳）苯曱酸’及1〇.〇克固定化酵素（諾華酶435) 。反應混合液在40°C及微量氮氣流下攪拌2〇小時後停止 。酵素使用Kiriyama漏斗由反應混合物中過濾出，並以 108克甲苯清洗。結果’得到一曱苯層含有（s)_4_[4_二甲 胺基-1-(4’-氟苯基）-1-經丁基]-3-經甲基苯基氣（22 〇克 ，0.064莫耳，產率：44.0%，光學純度：99〇%ee)的苯 曱酸鹽。 合併的曱苯層在60°C下以水清洗三次（5〇〇毫升χ 3) ，因而得到一水層含有（S)-4-[4-二甲胺基_卜（4，_氣苯基 )-卜羥丁基]-3-羥甲基苯基氰（21.0克，〇.〇614莫耳，萃 取率：96%)的苯甲酸鹽。 下列的實施例18至28說明由反應混合物中分離出s_ 二醇。 實施例18 在裝配有活塞的試管内加入4.3毫克（0.0126毫莫耳） 之（S) - 4-[4 -二曱胺基-1-(4’-氟苯基）-! -經丁基]_3一經曱 基苯基氰（化合物A)，6· 8毫克（0. 0165毫莫耳）之（r)_5_ 氰基_2_[4 -二曱胺基-1-(4’-氟苯基）-1-經丁基]_苯曱基丁 酸酯（化合物B)，1毫克的甲苯’ 1毫升的水，和〇·29ι亳 莫耳各種不同種類的酸（在二元酸的案例時，使用0.146毫 莫耳）’並在40°C下攪拌1小時。因此得到的混合溶劑被 分開成水層和甲苯層’然後測量在個層中的化合物人和B 濃度。分配係數Ka或Kb係依據下列方程式計算。結果示 75 1306846 於表11。

Ka二（化合物A在水層中的濃度）/(化合物A在甲苯層中的 濃度）

Kb =(化合物B在水層中的濃度）/(化合物B在甲苯層中的 濃度） 表11 酸 分配係數 Ka/Kb

Ka Kb 30. 7 0. 45 19. 5 0. 08 13. 0 0. 06 70. 8 0. 31 22. 8 0. 30 4. 98 0. 04 7. 01 0. 06 14. 4 0. 12 2. 28 0. 03 9. 11 0. 05 6. 00 0. 03 5. 97 0. 02 27. 1 0. 38 9. 23 0. 07 12. 3 0. 10 0. 87 0. 04 5. 67 0. 02 18. 4 0. 08 39. 2 0. 17 24. 4 0. 10 9. 03 0. 10 5. 04 0. 03 3. 89 0. 03 20. 8 0. 33 7. 43 0. 29 16. 8 0. 15 164 3. 61 38. 5 1. 29 1092 5. 73 24. 1 0. 44 31. 1 1. 03 0. 17 0. 08 0726723002591629945161884348060 00.23212276.1212127317212471131224.2224222492.181663.25.1145.29.1954.30. 〇-硝苯甲酸 m-硝苯曱酸 水楊酸 P-羥苯曱酸 〇-氯苯甲酸 m-氯苯曱酸 P-氯苯甲酸 P-氟苯曱酸 P-乙基苯曱酸 〇-甲苯甲酸 m-曱苯曱酸 p-曱苯甲酸 〇-甲氧基苯曱酸 m-甲氧基苯甲酸 p-曱氧基苯曱酸 4-聯苯羧酸 3-苯丙酸 苯曱酸 異丁酸 異戊酸 新戊酸 己酸 環己烷羧酸 苯二曱酸 間苯二曱酸 對苯二酸 p-曱苯磺酸 丙二酸 草酸 琥珀酸 順丁烯二酸 無 76 1306846 實施例1 9 _(S)-4 - [4-二甲胺基-1-（4’ -氟笨基）-1-海丁基]-3 -經曱基_ 茉篡新戊酸鹽 酵素由依據實施例1方法而得到的酵素反應混合物中 過濾出，使用甲苯清洗兩次。因此得到的1174. 3克曱苯溶 液含有（S)-4-[4-二甲胺基-1-(4’-氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥曱基苯基氰（44.8克，0.131莫耳）的新戊酸鹽，加入 600.3克的水萃取。進一步使用359.7克的水萃取二次， 得到1375.9克之（S)-4-[4-二曱胺基-卜（4’-氟苯基）-卜羥 丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽水性溶液。該水溶液含有 43.8 克（0.128 莫耳，產率：97.8%)之（s)-4-[4-二甲胺基 -1-(4’-氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基笨基氰。光學純度： 98.4%ee，（R)-5-氰基-2-[二曱胺基- (4，—氟笨基）_羥丁基 ]苯曱基丁酸酯：10.7區域％。 實施例20 G) 4-[4 - —甲fee基-1-(4-氟_^_^ )_卜經丁某ι_3_經甲甚 苤基氰新戊酸鹽

在依據實施例19方法而得到之12. 6克（幻_4_[4_二甲 胺基-1-(4’-氟苯基）-1-羥丁基]__3_羥曱基笨基氰新戊酸鹽 水溶液中{含有（s)_4_[4_二甲胺基_1-(4，-氟苯基卜卜羥丁 基]一3一經甲基苯基氰：〇.4克，1.168毫莫耳}，加入！ 4 克（0.018莫耳）乙酸銨。然後於其中加入i 〇克甲苯气 混合物並授拌1〇分鐘。靜置30分鐘後，將由混合溶液中X 77 1306846 分離得到的有機層丟棄，所得到之水層含有（s)_4_[4_二曱 胺基-1-(4，-氟苯基）-1-羥丁基]_3_羥曱基苯基氰（〇· 389克

’ 1.136毫莫耳’產率：97.3%)的新戊酸鹽。利用jjPLC 分析’發現化學純度為97.3區域％，且得到（r)-5-氣基― 2-[二甲胺基-(4’-氟苯基）-羥丁基]笨甲基丁酸酯：丨.5區 域％。 實施例21 1^:4-[4-二甲胺基-1-U’-氟茉某V卜羥丁某1-3 —羥甲某 !基氰新成酸_ 在依據實施例19方法而得到之12. 6克（S)-4-[4-二甲 胺基_1-(4’-氟苯基）~1-羥丁基]_3_羥甲基苯基氰新戊酸鹽 水溶液中{含有（S)-4-[4-二甲胺基-1 — (4，_氟苯基）-1-羥丁 基]-3-經曱基苯基氰：〇. 4克，68毫莫耳丨，加入1.4 克（0.013莫耳）硫酸鐘。然後於其中加入丨.〇克甲苯，該 混合物並攪拌10分鐘。靜置3〇分鐘後，將由混合溶液中 分離得到的有機層丟棄，所得到之水層含有（幻_4_[4_二甲 胺基_1-(4’-氟苯基）-1-羥丁基]_3_羥曱基苯基氰新戊酸鹽 (〇· 394克，1. 151毫莫耳，產率：98. 5% )。利用Ηριχ分 析，發現化學純度為93. 7區域％，且得到（r)-5-氰基-2-[ 二甲胺基-(4’-氟苯基）-羥丁基]苯甲基丁酸酯：5.5區域 %。 實施例22 「4-二甲胺基氟茉篡丨—麵丁基卜3_羥甲基 苯基氰新戌酸鹽 78 1306846 在依據實施例19方法而得到之12. 6克（S)-4-[4-二甲 胺基-1 _(4’-氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽 水溶液中{含有（S)-4-[4-二甲胺基-卜（4，-氟苯基）-卜羥丁 基]-3-羥甲基苯基氰：〇.4克，1.168毫莫耳}，加入1.4 克（0. 011莫耳）硫酸銨。然後於其中加入1. 〇克甲苯，該 混合物並攪拌10分鐘。靜置30分鐘後，將由混合溶液中 分離得到的有機層丟棄，所得到之水層含有（S)-4-[4-二甲 胺基-卜（4’-氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽 (〇. 397克，1. 159毫莫耳，產率：99. 3% )。利用HPLC分 析，發現化學純度為94. 7區域％，且得到（R)-5-氰基-2-[ 二甲胺基-（4’-氟苯基）-經丁基]苯甲基丁酸酯：4.5區域 %。 實施例23 二甲胺基-卜（4’ -氟笨某羥丁某1-3-羥曱基 苯基氰新戊酸鹽 在依據實施例19方法而得到之12. 6克（S)-4-[4-二甲 胺基-1-(4’-氟苯基）-1-羥丁基]_3_羥曱基苯基氰新戊酸鹽 水溶液中{含有（s)_4_[4_二甲胺基_1(4，_氟苯基）卜羥丁 基]-3-羥甲基苯基氰：〇.4克，1168毫莫耳加入14 克（0. 0 0 9 9莫耳）硫酸鈉。然後於其中加入1. 〇克甲苯，該 混合物並攪拌10分鐘。靜置3〇分鐘後，將由混合溶液中 分離得到的有機層丟棄，所得到之水層含有（s)_4_[4_二曱

胺基-卜（4，-氟苯基）-1-羥丁基]_3_羥甲基苯基氰的新戊酸 鹽（0. 391克，1. 142毫莫耳，產率：94. 5% )。利用HpLC 79 1306846 刀析，發現化學純度為94.5區域％，且得到（r)_5_氰基一 2-[二甲胺基-(4，-氟苯基）_羥丁基]苯曱基丁酸酯：4 7區 域％。 · 實施例2 4 二甲胺基-氟笨基卜鞀丁基卜a—鞀甲篡 _苯基氰新戍醅踏 在依據實施例19方法而得到之12. 6克（s)-4-[4-二曱 胺基-1-(4，-氟苯基）-卜羥丁基]_3_羥甲基苯基氰新戊酸鹽 水溶液中{含有（s)_4_[4_二甲胺基_〗一（4，_氟苯基 >卜羥丁 基]-3-羥甲基苯基氰：〇· 4克，h 168毫莫耳卜加入〇. 7 克（〇· 012莫耳）氣化鈉。然後於其中加入i 〇克曱苯，該 混合物並攪拌10分鐘。靜置3〇分鐘後’將由混合溶液中 分離得到的有機層丟棄，所得到之水層含有（s)_4_[4_二甲 胺基-1-(4’-氟苯基）-1-羥丁基卜3_羥甲基苯基氰新戊酸鹽 (0.397克，1.159毫莫耳，產率：99 3%)。利用HpLC分 析，發現化學純度為93.3區域％，且得到（R)_5_氰基_2_[ 二曱胺基_(4’-氟苯基）-羥丁基]笨甲基丁酸酯：58區域 %。 相較於實施例19，實施例20-24顯示藉由鹽類的加入 可改良分離效果。 實施例25 二甲胺基—卜羥 丁基卜 苯基氰新戍酸驗 酵素由依據實施例1方法而得到的酵素反應混合物中 1306846 過濾出，使用甲苯清洗兩次。因此得到的19. 4克甲苯溶液 含有1.0克（2.92毫莫耳）之（8)-4-[4-二曱胺基-1-(4’-氟 苯基）-卜羥丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽，將其調節成 40C並在溶液中加入13毫升的水進行萃取。進一步使用 7· 5毫升的水萃取二次，得到（s)-4-[4-二甲胺基-卜（4’-氟 苯基）-1-羥丁基]-3-羥曱基苯基氰新戊酸鹽溶液。在該水 性溶液中，含有0.886克（2. 588毫莫耳，產率：88.6%) 之（S)-4-[4-二曱胺基氟苯基卜卜羥丁基]—3—羥曱 基苯基氰。 實施例26 (S)-4-|~4-二甲脸基-卜（4，-氤茉基）-卜韃丁基1-3-羥甲篡 笨基氦新戊酸鹽 酵素由依據實施例1方法而得到的酵素反應混合物中 過;慮出’使用甲苯清洗兩次。因此得到的19. 4克甲苯溶液 含有1.〇克（2.920毫莫耳）之（5)-4-[4-二曱胺基-1-(4，-氟 苯基）-卜經丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽，將其調節成 40C並在溶液中加入11.6毫升的水進行萃取。進一步使用 5. 8毫升的水萃取三次，得到（s)_4—[4_二曱胺基-卜^、氟 苯基）-卜經丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽溶液。在該水 性溶液中’含有0.879克（2.567毫莫耳，產率：87.9%) 之（S)-4-[4-二曱胺基氟苯基）4一羥丁基]_3_羥甲 基苯基氰。 實施例27 1_8.)-4-[4-二甲胺基-1-(4’-氟苯基）-卜羥丁基1 — 3_輕<甲某 81 1306846 笨臬氱新戊酸鹽 酵素由依據實施例1方法而得到的酵素反應混合物中 過濾出，使用甲苯清洗兩次。因此得到的丨〇· 4克甲苯溶液 含有1.0克（2· 92毫莫耳二甲胺基—卜“、氟 苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基笨基氰新戊酸鹽，於其中加入 13.0毫升的水進行萃取。進一步使用75毫升的水萃取二 次，得到（S)-4-[4-二甲胺基^ — (4，—氟苯基）_卜羥丁基]_ 3-羥曱基苯基氰新戊酸鹽的水性溶液。在該水性溶液中， 含有 0.954 克（2.786 毫莫耳，產率：95.4%)之（3)_4_[4_ 一甲胺基-1-(4 -氟苯基）-i —羥丁基]羥甲基苯基氰。 實施例28 _(S)-4-「4-二甲胺羞·-卜（4’-氟—苯基鉬丁某·|_3_羥甲基 笨基氱新成酸_ 酵素由依據實施例1方法而得到的酵素反應混合物中 過濾出，使用甲苯清洗兩次。因此得到的19. 4克甲苯溶液 含有1.0克（2.90毫莫耳）之（8)-4-[4-二甲胺基-1-(4，-氟 苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰新戊酸鹽，於其中加入 〇· 43克（4· 210毫莫耳）之新戊酸且混合物以13毫升的水萃 取。進一步使用7. 5毫升的水萃取二次，得到（s)_4_[4-二 甲胺基-1-(4氟苯基）-l-羥丁基]_3_羥甲基苯基氰新戊酸 鹽水性溶液。在該水性溶液中，含有〇. g 4 7克（2 7 6 6毫莫 耳，產率：94.7%)之（s)-4-[4-二甲胺基-卜（4，_氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰。 比較實施例25，26 ’ 27和28後顯示，分離效果的改 82 1306846 良可藉由新戊酸的加入而得到，然而更多次的清洗與溫度 的調整對分離效果並無很大的影響力。 實施例29 甲胺基-ι-α^苯基）_卜羥丁某^叙甲幕 土 在無水L4 —二噁烷（2.5毫升）中的外消旋性4_u_二 曱胺基-1-（4-氟苯基）-1-羥丁基]_3_羥甲基笨基氰（〇 29 毫莫耳，100毫克）和丁酸乙烯酯（3· 9毫莫耳，〇·5毫升） 攪拌溶液中，加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（160 U，5毫 克）。將該反應加熱至37°C，接著施行HPLC。在162小時 (33^9%的轉化率）之後，濾除出酵素並以少量的14_二噁 …月先a併的有機相在真空下蒸發，接著以超臨界流體 色層分析法分析，得到（R)_ 丁酸酯為72%66及（幻—二 28% ee。 實施例30 )-1-羥丁某 γ 基氰 …、水1，4-二噁烷（3.0毫升）中的外消旋性4-[4_二 曱胺基1 —(4-氟苯基)_卜羥丁基]_3羥曱基苯基氰(ο」丨 毫莫耳二1〇0毫克)和丁酸乙烯酯(〇· 58毫莫耳，73. 6微升 )攪拌办液中，加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（160 U，4毫 九]將該反應加熱至37<t，接著施行HPLC。在194小時 之=轉化率為18.7%時，遽除出酵素並以少量的U-二喝 烷清洗。合併的有機相在真空下蒸發，接著以超臨界流體 83 1306846

色層分析法分析，得到（ί〇-丁酸酯為92% ee及（S)-二醇為 14% ee。該反應亦使用1 ’ 4和8當量之丁酸乙烯酯檢測且 示於表12。 表12 酯 二醇 次數 丁酸乙 '烯酯 時間（h) 轉化（％) %ee 組態 %ee 紐能 1 1當量 194 6.2(0.5) 79 (R)~^~ 2 2當量 194 18.7(1.0) 92 (R) Η (S) 3 4當量 194 19. 1(2. 0) 86 (R) 14 (S) 4 8當量 194 22. 6(4. 0) 86 (R) 15 (S) (於括號内的數目為無酵素時的轉化率） 實施例31 二曱胺某-1-M，-氟笨基卜羥丁篡卜t铖 工 在無水1,4-一 °惡烧（2. 925毫升）中的外消旋性4-[4- 甲胺基1 (4版本基）-卜經丁基]_3_經甲基苯基氰（0.29 毫莫耳，1〇〇毫克）和丁酸乙稀酯（0.59毫莫耳，75微升） 攪拌溶液中，加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（160 ϋ，5毫 克）。將該反應加熱至5(rc，接著施行HpLc。在】65小時 ^ =轉化率為30_ 4%時，濾除出酵素並以少量的1，4-二噁 °合併的有機相在真訂蒸發，接著以超臨界流體 «分析法分析，得到（R)_丁酸酯為98.1%“及（8)-二醇 :、、3〇.3%ee。該反應亦在25, 37和阶下檢測且示於表 84 1306846 表13 次數 溫度 時間（h) 轉化_ 〇/〇ee 、板態%ee組態 1 25〇C 238 5.8(0.5) 97.9 〇〇 5. 1 (S) 2 37〇C 238 12.5(1.4) 99. 1 (R) 8. 5 (S) 3 50°C 165 30.4(1.9) 98. 1 (R) 30.3 (S) 4 50°C 238 32. 2(3. 0) 97. 3 (R) 32. 1 (S) 5 65〇C 238 26.3(7.6) 64. 1 (R) 21. 9 (S) (於括號内的數目為無酵素時的轉化率） 實施例32 (S)-4-「4 -二甲胺某-1-(4’-氟苯基）-1-_ 丁 11-3-赖甲其 苯基氦 在無水1，4-二噁烷（2. 925毫升）中的外消旋性4_[4_ 一曱胺基-1-(4 -氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥甲基苯基氰（0.29 毫莫耳’ 100毫克）和丁酸乙烯酯（〇· 59亳莫耳，75微升， 2當量）攪拌溶液中’加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（16 〇 u ，4. 5毫克）。將該反應加熱至50°C，接著施行HPLC。在 2 0 9小時之後，遽除出酵素並以少1的1，4 _二β惡烧清洗。 合併的有機相在真空下蒸發，接著以超臨界流體色層分析 法为析’得到（R)-丁酸醋及（S)-二醇。該反應亦分別在 200毫克，500毫克和1000毫克之二醇，15〇微升，375微 升和750微升之丁酸乙烯酯，2^5毫升，2.625毫升和 2.25毫升之1，4-二噁烷下檢測且示於表14。 表14 ^濃度時間（h) 轉化（％) 1 0. 1Μ 209 30. 6(2. 6) 32. 5(4. 9) 0.2Μ 209 酯 .lee 組熊 84. 1 (R) 62,9 (R) 二醇 %ee 組態 33. 1 (S) 28.7 (S) 85 1306846 ^ °·5Μ 2〇9 50.6(29.6) 32.3 (R) 2q ] ,c、 —i_L〇L 209 69.3(66.3) 8.7 (£)^94^9 漂 實施例33 在無水1，4-二噁烷（2.925毫升）中的外消旋性4_[4_ 一甲胺基-1-(4-氟苯基）-卜羥丁基]-3_羥曱基苯基氰（〇_ 29 毫莫耳，100毫克）和丁酸乙烯酯（〇· 59毫莫耳，75微升） 攪拌溶液中，加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（16〇 u，4毫 克）。將該反應加熱至5(TC，接著施行HPLC。在473小時 之後，濾除出酵素並以少量的1，4-二噁烷清洗。合併的有 機相在真空下蒸發，接著以HPLC分析。結果示於表15。 表15 次數 加入之A%(w/w) _時間00 1 473 2 0. 1 473 3 1. 0 473 4 10 473 轉化（°/〇) "33. 9 20. 1 0. 1 實施例3 4 1^)-4-[4-二曱胺基-1-(4’-氟笨某）-〗_麵丁某1_3_翔甲基 苯基氰 在無水1，4_·一 π惡烧（14.25毫升）中的外消旋性4 - [4-二甲胺基-1-(4-氟苯基）-卜羥丁基]_3_羥甲基苯基氰（2.9 亳莫耳，1000毫克）和丁酸乙烯酯（5. 9毫莫耳，750微升） 搜拌溶液中，加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（16〇 u，20毫 克）。將該反應加熱至50°C ’接著施行HPLC。在139小時 之後’加入額外的5毫克脂肪酶。在15 5小時之後，加入 86 1306846 =外的15毫克脂肪酶。在399小時之後轉化率為π 7% 呀，收集試樣。濾除出酵素並以少量的丨，4〜二噁烷清洗。 口併的有機相在真空下蒸發’接著以超臨界流體色層分析 法刀析。所得到之e e值示於表16 〇 表16 二醇 %ee 組態 79. 5 (S) 94. 5 (S) 次數 _.m — _時間（h) 轉化（％) 酯 %ee 組態 1 399 55. 7 ' 75. 7 (R) L 560 62. 8 59. 5 (R) 實施例35

(Q —西普舍（ci. talopram)二醇類似物

在無水1，4-二噁烷（2. 925毫升）中的外消旋性西酞普 侖二醇類似物（0.29毫莫耳，100毫克）和丁酸乙烯酯（0.29 毫莫耳’ 37微升）攪拌溶液中，加入4-10毫克PspLL.。將 該反應加熱至攝氏50度，接著施行HPLC。在反應停止之 後’濾除出酵素並以少量的曱苯清洗。合併的有機相在真 空下蒸發，接著以超臨界流體色層分析法分析。結果示於 表17。 表17 II 二酵 次數 類似物 時間（h) 轉化（％) °/〇ee 组態 ％ee 組態

1 5-溴 409 56.4(8.9) 67.1 R 46.3 S

2 5-碳醯胺 456 20.5(5.0) 1 1.7 R 20.5 S

3 5-碘 143 28.0(1.9) 98.9 R 29.9 S

4 5-氣 244 30.5(4.6) 54.7 R 24.3 S

5 5-曱醯基 244 33.9(8.3) 88.5 R 13.9 S (於括號内的數目為無酵素時的轉化率） 實施例3 6 (S)-4-「4-二甲胺其-1-Γ4，-氟笨基）-卜羥丁基」__3.一經甲基 87 1306846 I基氰 在無水1，4 - 一 σ惡炫>(142.5毫升）中的外消旋性4-[4 -二曱胺基-1-(4-氟苯基）-1-羥丁基]-3-羥曱基苯基氰（29 毫莫耳，10克）和丁酸乙烯酯（58毫莫耳，7.5毫升）攪拌 溶液中，加入脂蛋白脂肪酶假單胞菌屬（16〇 U，250毫克） 。將該反應加熱至50°C，接著施行HPLC。在192小時之後 轉化率為41%時’加入額外的250毫克脂肪酶。在504小 時之後轉化率為6 3 %時停止反應。濾除出酵素並以少量的 1，4-二噁烷清洗。合併的有機相在真空下蒸發，接著以超 臨界流體色層分析法分析，得到EE值（S~二醇）=95% (S-二醇/ R-二醇= 40:1)。 實施例3 7 利用快速色層分析法__分離（S)-4-「4-二甲胺基-1-(4，-蠢草 基）-卜羥丁基卜3-羥甲某茇甚# 將372毫克具有ee-值為94.5%的S-西狀普余二醇與 628毫克具有ee-值為59.5%的R-西酞普侖二醇丁酸酯的 混合物溶解在具有4%三乙胺的最少量乙酸乙酯/庚烷4:1 中。使用快速色層分析法以具有4%三乙胺的乙酸乙酯/庚 烷4:1分離出S-西肽普侖二醇，得到120毫克之S-西酞普 侖二醇（ee-值為94. 5% )。 實施例38 利用清洗含有·ς-二醇基皙的浪合物分離（S)~4-[4-二王| 某·_1-(4’-氟笨篡）-1-經丁某-韃甲基苯基氰 在S-西駄普侖二醇與R—西缺普侖二醇丁酸酯（每別有 88 l3〇6846 .3克）的混合物中加入24毫升庚烷 r ? 笔幵水/甲醇 .)。將澄清溶液轉移至分離漏斗並收集有機相。在水相 中加入額外的10毫升庚烷並完全混合。收集有機相：: 重複萃取4次。以2。毫升的水/甲醇(2:1)萃取合併的庚烷 相，及合併水相且蒸發至一半量，再以1〇毫升乙酸乙= 萃取3次。合併的乙酸乙酯相以乾燥，過濾且在真 空下乾燥，得到〇· 15克含有2%R-西肽普侖二醇丁酸酯的 S—西肽普侖二醇。 實施例39 華酤4 3 5反應得到之（S)-西吐普俞二薛镟仲物 在無水曱苯（2. 925毫升）中的外消旋性西狀普余二醇 類似物（0.29毫莫耳，1〇〇毫克）和丁酸乙烯酯（〇. 29毫莫 耳’ 37微升）攪拌溶液中，加入〇.2毫克諾華酶435和新 戍酸（0.32毫莫耳，33毫克）。將該反應加熱至攝氏40度 ’接著施行HPLC。在反應停止之後，濾、除出酵素並以少量 的曱苯清洗。合併的有機相在真空下蒸發，接著以超臨界 流體色層分析法分析。結果示於表18。 表18 次數類似物 1 5-溴 2 5-碳醯胺 3 5-峨 4 5-氯 5 5-甲酿基 14 3 4 1 3 化 15 3 5 5 3 轉 hi (=4 6 4 4 4 間12 9 2 2 2 時 =4 19 4 1 17 8 9 7 6

SI 態 組 態 卜組 醇 7» 11 Qu no 1Λ 9 4 9 9 2 實施例40 各種不同缓酸對#用謹華酶4 3 5之酵素催化醯化作ULf多 1306846 在無水甲苯（2.925毫升）中的外消旋性4-[4 -二甲胺基 -1-(4 -氣苯基）-1-經丁基]-3 -經甲基苯基氰（0.29毫莫耳 ，100毫克）和丁酸乙烯酯（0.29毫莫耳，37微升）授掉溶 液中’加入諾華酶435(0.2毫克）和1.1當量之羧酸。將該 反應加熱至攝氏40度’接著施行HPLC。濾除出酵素並以 少量的甲苯清洗。合併的有機相在真空下蒸發，接著以超 臨界流體色層分析法分析。結果示於表19。

表19

92. 1 89. 7 88. 3 次數 2 丙酸 24 34 3 新戊酸 24 55 4 環己烷羧酸 24 55 5 苯曱酸 72 50 6 氫化肉桂酸 72 48 7 異戊酸 48 51 8 癸酸 72 53 9 異丁酸 48 53 10 巴豆酸 72 54 11 2-乙基丁酸 24 50 12 棕櫚酸 48 54

84. 5 R 99. 7 S 92. 3 R 86. 7 S 94. 1 R 84. 3 S 88. 3 R 90. 7 S 82. 9 R 86. 9 S 86. 9 R 92. 7 S 82. 9 R 95. 1 S 87. 1 R 94. 3 S 71. 3 R 93. 3 S

實施例41 丁酸丄R)-5-氰基二曱胺基-(4，_氤笨基）__ 丁某 基酯 在裝配有攪拌器和溫度計的四頸燒瓶内加入在曱笨中 的21.9克(0.064莫耳)(±)一4_[4 一二甲胺基_卜(4，_氟笨基 )+羥丁基]-3-羥甲基苯基氰溶液219丨。然後，於上述 混合液内加入14.6克（0.128毫莫耳）丁酸乙烯酯，5 〇7克 90 1306846 (〇· 128莫耳）毗啶’ 7.89克（0.064莫耳）苯甲酸，及2. 19 克Q疋化酵素（諾華酶435)。將反應混合液加熱至6〇。匚並 在微量氮氣流下攪拌15小時後停止。酵素使用Kiriyama 漏斗由反應混合物中過濾出’並以5〇克曱苯清洗。合併 的甲笨層以水清洗二次（225毫升，265毫升），濃縮以得到 14. 9克之丁酸（R) — 5-氰基-2-[二甲胺基-(4，-氟苯基）-羥丁 基]苯甲基酯的苯甲酸鹽。 在4.0克（7.48毫莫耳）丁酸（1〇_5一氰基_2_[二甲胺基 -(4’-氟苯基）-羥丁基]苯甲基酯的苯曱酸鹽，4〇毫升水和 40毫升甲苯的㈣混合物内’加人126 a 3()%氫氧化納 (9.45莫耳）’混合物保持在攪拌下3〇分鐘。在攪拌之後 ，靜置混合物且分離出甲苯層。該甲苯層以4〇毫升的水 清且在40C的減壓下濃縮，藉此得到丁酸（1^_5_氰基-2一[ 二甲胺基-U’-氟苯基）-經丁基]苯甲基酉旨。lH nmr (400MHz，CDCl3)a(Ppm):7.69 (lH，s)，7.68 — 7 56 (2H m) ’ 7.36-7.23 (2H，m)，7.02-6.90 (2H，m)，5.41 (lH，d，J = 14_6Hz)，2.59-2.42 * 2. 26(2H, dt, J = 7. 3Hz, 1. 5Hz) (2H，m)，1.67-1·46 (2H,m)， (lH，d，J = 14.9Hz)，4.99 (lH，m)，2.40-2.30 (3H，m) ，2. 18 (6H，s)，1.68-1.57 0. 93 (3H，t, J = 7. 6Hz)。 實施例4 2 依地普侖（escitalopram)， 利用掌性超臨界流體色層分析法測定，具有99%化學 純度和98.7%ee之（S)-4-(4-二甲胺氟苯基）_卜 91 1306846 窥丁基）-3-經甲基苯基5. ^ Μηη ^ 毫莫耳）溶解於甲 “ Λ 加入三乙胺（13.0毫升，93.2毫莫耳），接 者緩緩加入在甲策、 本(1〇〇毫升）中的甲苯磺醯氯(9_4克， .毫莫耳)溶液。所生成的溶液在室溫下攪拌2〇分鐘， …、後加入水（50毫升）和濃氨水（25毫升）。混合物在肌 下攪拌2分鐘，轉移至分離漏斗内。分離出相且有機相以 水（5〇毫升）清洗，u MgS〇4乾燥，過渡並在減壓力下濃縮 而知到95/產率的粗產物（14, 2克）。將粗產物溶解於乙醇 (1>7毛升），加入在乙醇（27毫升）中的草酸（3. 95克，43· 9 毫莫耳）溶液。沈澱物藉由過濾收集而得到依地普侖的草 I鹽（14. 0克），其由乙醇（85毫升）中再結晶，得到最終產 物（1 2. 2克）。純度藉由HPLC測定為99· 65%。ee值由掌

性超臨界色層分析法測定為9 8. 5 %。

92 ~~申請專利範圍： 尨年月汐曰修(更)正本丨 ¥ 1 · 一種用於盤借$女/ 、 氣備具有式（π )二醇之s-或R-對映體或波 鹽及/或具有式f w 、 （W )經醯化二醇之相反對映體或其鹽的方 vi- · »

PH

Hal (Π) CH上(:”)：R為氰基或可轉換成氰基的基團’ Z為- 、/垃 土且其中R ”為16貌基，《R> R，，相互 =成含有它們所連接之N-原子的環狀結構，或Z為可 ，、成—曱胺甲基的基團，虛線為雙或單鍵且㈤為画素

Hal (IV) AQV)中 ’r’z，虛線和 Hai A ,W Λ π -. 〇 , Hal為如同上文中所定義者 Μ Η s> mm其 『稀基或C2_『快基，它們全 為Cl-10 &基’k 一 4夕A b視而要地經取代基取代 或多次，這些取代基係選自 ι-ίο坑虱基’ Ci i()_烷硫基 93 1306846 ’羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，（:卜丨厂烷胺基，二（Cl — 10 -烷基）胺基，芳基，芳氧基，芳硫基和雜芳基’或Rl為 芳基；其中任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代 一或多次，這些取代基係選自Chf烷基，C2—1(r烯基，C2-i〇_快基，-烧氧基’ Cho-烧硫基，經基’鹵素’胺基 ，硝基’氰基’ Ch〇-烷胺基和二（Ci_ig_烷基）胺基，及Y 為一鍵，0，S或·， 該方法包含

a)將式（Π )的外消旋化合物 0H

Hal (II)

R、a J 其中R ’ z ’虛線和Hal為如 具下式的醯化劑 同上文中所定義者 ，使用

(Hla) (IHb)

(IIIc)

的異硫 V為鹵素； ’它們全可 或具式R1—N=C=〇的異氰酸酯或具式 氰酸酯進行選擇性酵素性醯化作用；

其中X為0或S;W為0或s;U R為CHQ-烷基’ C2_1D-烯基或 94 1306846 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自（:卜 10-烷氧基，烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰 基，Chq-烷胺基，二（Chq-烷基）胺基，芳基，芳氧基， 芳硫基和雜芳基，或RQ為芳基，其中任一芳基和雜芳基可 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自Cp 1 〇 -烧基’ C 2 -〗〇 -稀基’ C 2 _ !「炔基，C ! _ ! 〇 -烧氧基’ C ! _ ! Q -燒 硫基’輕基素’胺基’琐基’氣基’ Ci_i〇 -院胺基和二 (C ] - 1 〇 -炫《基）胺基；

R1為如同RQ的定義； R2為如同RQ的定義，或R2為適當的離去基； 或W與Ri共同形成具有3至5個碳原子的鏈； 但前提為當X為S時，W和U並非為S; 因此形成一R-或S-形式之式（Π )起始物質以及（rv)式 化合物之相反對映體的混合物：

b)將式（IV )的外消旋化合物 為如同上文中所定義

95 1306846

Hal (IV) -、中 R，Z ’ W，Hal，虛線和 R3 者；進行選擇性酵素性脫酿化作用而 之式（Π )經脫醯化合物 為如同上文中所定義 形成—或S-形式

Hal (Π) 虛線和Z為如同上文中所定 相反對映體形式之式（IV) 乂 、 飞uv)經醯化起始物質的混合物； 可視情況地接著依任何順序分離出式(H)化合物的, 或對映體及/或式⑻化合物的相反對映體或其鹽。、

Hal

2. 根據申請專利職第】項的方法，其中式⑷化入 物的醯化作用得到-含“-形式之式(Π)化合物及R—形 式之式（IV )化合物的混合物。 3. 根據申請專利範圍第1項的方法，其中式⑷化合 物的醯化作用得到m-形式之式(π)化合物及s—形 式之式（IV )化合物的混合物。 96 1306846 4·根據申請專利範圍第i ^ ΛΑ 0« ^ 、的方法，其中式（IV )化合 物的脫醒化作用得到一含有s — 护m μτ, 形式之式（ιν )化合物及 I式之式（π )化合物的混合物。 5.根據申請專利範圍第i 物的脫醯化作用得到_含有 的方法，#中式⑻化合 形式之式(π )化合物的混合物,式之式(IV)化合物及S' 其中Hal為氟及 6·根據申請專利範圍第1項的方法 R為iS素或氰基，較佳為！^為氰基。彳 其中虛線代表單 7.根據申請專利範圍第1項的方法 鍵。 其中Z為二甲胺 8·根據申請專利範圍第1項的方法一 曱：或可被變換為二甲胺曱基的基團，較佳、：二：;胺 甲基 9.根據申請專利範圍第1 員的方法，其中醯化劑係為 選自式（nu)，（mb)和（inc)化合物之化合物。 、1◦•根據巾請專利範圍帛9項的方法，其中醯化劑係 為一選自式（Iff a)及（IIIb)化合物之化合物。 ' 其中酸化杳,丨a 其中醯化齊彳為 其中醯化舞| ^ 11.根據申請專利範圍第1 0項的方法 式（Π a)化合物。 1 2 ·根據申請專利範圍第1 〇項的方法 式（m b)化合物。 1 3 ·根據申請專利範圍第9項的方法 式（Die)化合物。 97 1 4·根據申請專利範圍第9項的方法，其中u為〇 1306846 15. 根據申請專利範圍第9項的方法’其中W為〇。 16. 根據申請專利範圍第9項的方法，其中X為〇。 1 7.根據申請專利範圍第9項的方法，其中RQ ’ R1和 R為獨立地選自c1M-烷基，C2 4-烯基和C2_4-炔基，它們 了此視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選 自ci-4~燒氧基，Cl_4-烷硫基，羥基，鹵素，胺基’硝基’ 氣基，烷胺基和二_(Ck烷基）胺基，或R2為離去基 ’例如琥站醯亞胺基，H〇Bt和pf p，或RQ和R1共同形成 3-5個碳原子的鏈。 _ 18. 根據申請專利範圍第17項的方法，其中RQ，R1和 R2為獨立地選自Ch-烷基，c2_3-烯基和C2_3-炔基’它們— 全可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選 ： 自Ch-烷氧基’ c13—烷硫基，羥基，_素，胺基，硝基’ 氮基’ Cm-烷胺基和二_(c丨_3_烷基）胺基。 19. 根據申請專利範圍第18項的方法，其中RQ和R1 為C!—3-燒基’及R2為經！|素一或多次取代的C!-3-烧基或 R為c2-3-稀基。 鲁 20. 根據申請專利範圍第11項的方法，其中和R1 為獨立地選自（:卜广烷基，C2_4-烯基和C2_4-炔基’它們全 可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 C1-4 -烧氧基’ 〇丨_4-烧硫基，經基，_素，胺基’硝基’氰 基〇1_4-烧胺基和二-(〇1_4 -烧基）胺基。 21. 根據申請專利範圍第20項的方法，其中RQ和R1 為獨立地選自C^-烷基，C2_3-烯基或C2d-炔基，它們全 98 工3〇6846 可此視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 Cl-3~境氧基’ Cl_3-烷硫基，羥基，_素，胺基’硝基，氰 基’ C1-3〜烷胺基和二-(Cu-烷基）胺基。 22. 根據申請專利範圍第20項的方法，其中RQ和R1 為ci-4~烷基。 23. 根據申請專利範圍第22項的方法，其中和R1 為C】~3~烷基，適當者為甲基，乙基或丙基，較佳為丙基。 24. 根據申請專利範圍第12項的方法，其中R1和R2 為獨立地選自Cl_4-烷基，C2 —4-烯基和C2_4-炔基，它們全 可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 Cl-4~烷氧基，Ck烧硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰 基’ -烷胺基和二-(Ci4 —烷基）胺基’或R2為離去基， 例如琥珀醯亞胺基，HOBt和pfP。 25·根據申請專利範圍第24項的方法，其中R1為選 白C卜3-烧基’ C"-稀基或C2-3-炔基’它們全可能視需要 地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自C丨_3-烷氧基 ’ C卜3 -纟完硫基，經基，鹵素，胺基’硝基’氰基，-烧 胺基和二-(c^-烷基）胺基，和R2為經鹵素一或多次取代 的Ch-炫基，或R2為c2_4-稀基。 26.根據申請專利範圍第25項的方法，其中Ri為Cl 3-烧基’ C2-3-浠基和C2 —3-快基’它們全可能視需要地經取 代基取代一或多次且這些取代基係選自烧氧基，（^_3-烷硫基，羥基’鹵素’胺基’硝基，氰基’ Cb3-烷胺基和 二-(C卜3_烧基）胺基，且R2為經鹵素一或多次取代的Cupp ^ R2 A r ^ 马C2f烯基。 (.根據申往直4卜 3、烷基。 叫寻利範圍第25項的方法，其中Ri為C卜 2 8.根據φ ·*主奎』，

3~燒Α β專利範圍第27項的方法，其中Ri為（V 疋土 ’例如甲其，7 AA p 土 G基或丙基，及經||素一或多次取代 的Clf烷基’哎R2盔ρ A K為C2_3-烯基。 _根據申請專利範圍第28項的方法，其中Μ為乙 烯基。 基 3〇·根據申請專利範圍帛29項的方法，其中R1為 丙 31·根據申請專利範圍第13項的方法，其中R1為Ci 4-炫基’ C14-稀基和C2^_炔基，它們全可能視需要地經取 代基取代一或多次且這些取代基係選自I—厂烷氧基，Id一 烷硫基，羥基，_素，胺基，硝基，氰基，1_4-烷胺基和 二-（Ci-4_烧基）胺基。 32. 根據申請專利範圍第31項的方法，其中R1為 广烷基，Cz —s-烯基和（^_3_炔基，它們全可能視需要地經 Ch3-烷氧基’ C! — 3-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰 基，C!-3-烷胺基和二-(C^-烷基）胺基取代一或多次。 33. 根據申請專利範圍第32項的方法，其中Rlgc】 3-炫基，C2 —3-烯基或C2_3-炔基，較佳為R1為〇卜厂统基， 例如甲基’乙基或丙基，較佳為丙基。 34. 根據申請專利範圍f丨，員的方法，其中醯化劑為 式R + C = 0的異氰酸自旨或式R1_N = C = ^異硫氮酸醋。 100 1306846 35 ·根據申請專利範圍第34項的方法，其中醯化劑為 式R^kOS的異硫氰酸酿。 3 6 _根據申請專利範圍第3 4項的方法，其中醯化劑為 式R1-N = c = o的異氰酸酯。 37·根據申請專利範第34項的方法，其中R1為c, 1 - 4~院基’（：2 — 4-烯基或c24_炔基，它們全可能視需要地經取 代基取代一或多次且這些取代基係選自C1_4-烷氧基，C14_ 烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，-烷胺基和 —- -貌基）胺基。 3 8.根據申請專利範圍第37項的方法，其中R1為 1 - 3_烧基’（：2_3-烯基或c2 3_炔基，它們全可能視需要地經 c卜3-烷氧基，Cu-烷硫基，羥基，齒素，胺基，硝基，氰 基，Cl_3—烷胺基和二~(Ci_3-烷基）胺基取代一或多次。 39.根據申請專利範圍第38項的方法，其中R1為Ci 3-烷基’ C2_3-烯基或。2、「炔基。 4〇.根據申請專利範圍第39項的方法，其中Ri為甲 較佳為丙基。 42.根據申請專利範圍第

41.根據申請專利範圍第1項的方法，其中所使用的 式（IV)外消旋化合物為其中 Y為0，或S的化合物。 41項的方法’其中式（!γ )外 41項的方法，其中所使用的 Y為S的化合物。 -1項的方法，其中所使用的 101 1306846 式（W )外消旋化合物為其中γ為一鍵的化合物。 45·根據申請專利範圍第1項的方法，其中所使用的 式（IV )外消旋化合物為其中γ為νη的化合物。 46. 根據申請專利範圍第41項的方法，其中ri為Cl_ ίο —烷基’（：2_1β-烯基或c2_lir炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自烷氧基， Chg-烷硫基，羥基，鹵素’胺基，硝基，氰基，厂烷 胺基和二-(h-n-烷基）胺基。 47. 根據申請專利範圍第46項的方法，其中Ri為Cl_ ίο一纟元基’ Cho-烯基或C2_iQ —炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自羥基，_素，胺 基’硝基及氰基。 4 8.根據申請專利範圍第4 7項的方法，其中R1為c ι _ 1 〇-烧基。 49·根據申請專利範圍第丨項的方法，其中酵素性醯 化作用之施行係使用水解酶，例如脂肪酶，酯酶，醯酶或 蛋白酶。 50. 根據申請專利範圍第丨項的方法，其中酵素性脫 醯作用之施行係使用水解酶，例如脂肪酶，酯酶，醯酶或 蛋白酶。 51. 根據申請專利範圍第49項的方法，其中水解酶是 以固定化酵素或交聯酵素晶體（Cr〇ss_Linked以”㈣ Crystal，CLEC)酵素的形式使用。 52. 根據申請專利範圍第49項的方法，其中所使用的 102 1306846 酵素係選自假單胞菌屬（Pseudomonas sp.)脂蛋白脂肪酶 ，念珠菌屬（Candida antartica)脂肪酶 β 及 Therm〇myces lanuginosus脂肪酶’或這些酵素的突變體或變異體。 53.根據申請專利範圍第49項的方法，其中酵素為假 单胞菌屬脂蛋白脂肪酶或假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶的突 體或變異體。 54,根據申請專利範圍第53項的方法，其中所使用的 酵素為假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶。 、 55·根據申請專利範圍第49項的方法，其中酵素為令 珠囷屬（Candida antartica)脂肪酶b或念珠菌屬 (Candida an tart ica)脂肪酶B的突變體或變異體。 56.根據申請專利範圍第55項的方法，其中酵素為冬 珠菌屬（Candida antartica)脂肪酶B。 5 7.根據申請專利範圍第華酶（Novozyme®)435。58.根據申請專利範圍第 Thermomyces lanuginosus lanuginosus脂肪酶的突變體 56項的方法’其中酵素為諾 49項的方法，其中酵素為 脂肪酶或Thermomyces I變異體。 其中酵素為 其中酵素為里 59_根據申請專利範圍第58項的方法

Thermomyces lanuginosus 脂肪酶。 60.根據申請專利範圍第59項的方法 波酶（Lip〇ZymeTM) TL IM。 〇丄·根據申請專利範 作用或酵素嫌作用係進行於存：有 103 1306846 其等的混合物。 化作用2或根據中請專利範圍第61項的方法，其中酵素性醯 s酵素性脫醯作用係進行於存在有有機酸。 化作用3 =據中請專利範圍第62項的方法，其中酵素性醯 糸進行於存在有有機酸。 其中有機酸為 其中有機酸係 異戊酸，2 -乙 —64·根據申請專利範圍第62項的方法 方香族緩酸或脂族羧酸。 、65.根據申請專利範圍第61項的方法 選自正-^ k，異丙酸，正-丁酸，異丁酸 7、- M ώ 一 基丁酸，卢口 、， · 衣烧叛酸’新戊酸（pi val ic acid)，苯曱酸 P曱苯曱酸，水揚酸和3-苯基丙酸。 66.根據申請專利範圍第65項的方法，其中有機酸為 新戊酸。 6 7 八 ’種從含有式（IV )化合物及式（π )二醇的混合物中 離和純化具有式（汊）化合物或其鹽及/或式（π )二醇或 其鹽的方法，

式（IV )中R為氰基或可被轉換為氰基的基團，虛線代 '雙或單鍵，Hal為南*，z為-ch2-n(r，r，’)基且其中R，和 104 1306846 R”為Ci — 6-；):完基’或R’和R”相互連接形成含有它們所連接 之N-原子的環狀結構’或Z為可轉換成二曱胺曱基的基團 ’评為0或8，及尺3為_丫-尺1且其中丫為一鍵，〇，8或關 ’及R為q — 1Q -烧基，Cz_丨Q -稀基或c2-i〇_块基，它們全可 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自c i 10-院氧基’ C] —1()-炫硫基’經基，鹵素，胺基，確基，氰 基’ 〇ι-ίο -烧胺基’ 一（Ci-i〇 -烧基）胺基，芳基，芳氧基， 芳硫基和雜芳基’或R1為芳基，其中任一芳基和雜芳基可 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自c j 10-炫基，C2_1Q-烯基，C2M。-炔基，Cho-烷氧基，（:㈠「烷 硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基’氰基，Ci_iQ_烷胺基和二 (C^o -炫基）胺基，

式（Π )中R，z，Hal和虛線為如同上文中所定義者， 該方法包含 a) 在酸存在下’在水和有機溶劑之混合物中處理該含 有式（IV )化合物和式（u )二醇的混合物； b) 由有機相中分離出含有為該酸之鹽形式的式（n )二 醇的水相，因而得到含有為該酸之鹽形式的式（jy )化合物 105 1306846 的有機相；及 視需要地分雜山& ^ 刀離出為鹼或其鹽的式（π )化合物 i Μ 山达 κ σ 要地分離出為驗或其鹽的卿化合物— 队根據申請專利範圍_ 67項的方法， _ 醇的 S-對映 τ ^ ^ u 、興式（W)醯基衍生物的R-對映體分離。 69·根據申請專利範圍_ 67項的方法，其中式⑻画 土订生物的S'對映體與式(Π )二醇的R-對映體分離。 70.根據申請專利範圍帛.μ項中任一項的方法，

、，於步驟a)中所使用的式（w)醢基衍生物對由 a 、、（）醇相反對映體的混合物係依據申請專利範ϋ 第1 6 °項中任-項的方法製備。 種從έ有式（ιν)醯基衍生物和式（η )二醇的混4 一 &刀離_純化具式（汉）醯基衍生物或其鹽及/或式（η -一每的方法，

式（贝）中，R為氰基或可被轉換為氰基的基團，Hai為 鹵素，、虛線代表雙或單鍵，z為-CH2-N(RT)基且其中R， 和R為c卜烷基，或R，和R”相互連接形成含有它們所連 接之N原子的環狀結構，或z為可轉換成二甲胺甲基的基 106 1306846 團’W為〇或s，及R3為-Y-R1且其中Y為一鍵，〇，s或 NH ’及R1為-炫基’ C2_1Q-婦基或炔基，它們全 可能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自 C i -烧氡基，c丨M -烷硫基’羥基，鹵素’胺基，硝基， 亂基’-烧胺基’一烧基）胺基’芳基，芳氧基 ’ ^•硫基和雜芳基’或R1為芳基’其中任一芳基和雜芳基 可能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自 Ci-iG-烷基，C2_1Q-烯基，C2_1Q-炔基，Chq-烷氧基，q,-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，Cho-烷胺基和 一（Ci-IQ -院基）胺基，

式（Π)中’ R’ Hal ’ Z和虛線為如同上文中所定義者 5亥方法包含 a)在水， 質子有機溶劑和非極性有機溶劑混合物中處

/或式（IV )化合物轉換成 工3〇6846 為其鹽。 72. 根據申請專利範圍第71項的方法，其中式（η )二 醇的S-二醇與式（IV)醯基衍生物的R —對映體分離。 73. 根據申請專利範圍第71項的方法，中式（ιν)醯 基衍生物的S_對映體與式（π )二醇的R〜對映體分離。 74. 根據申請專利範圍第71-73項中任一項的方法， 其中於步驟a)中所使用的式（IV)化合物卜或s—對映體與

式（Π )化合物相反對映體的混合物係依據申請專利範圍第 1-60項中任一項的方法製得。 75. —種製備式（I)依地普侖（escital〇pram)或其藥學 上可接受鹽的方法， 備

其包含依據申s青專利範圍第1 - 6 〇項中任一項的方法製 具式（Us)二醇之S-對映體或其鹽：

其中R為氰基或可被轉換為氰基的基團，虛線代表雙 或單鍵’Z為二甲胺甲基或可轉換成二甲胺曱基的基團， 108 1306846 及Hal為1¾素， 或具式（IV s)經醯化二醇之s—對映體或其鹽 P R3 c

Hal (IVs) 其中R ’ z ’虛線和Hai為如同上文中所定義者，w為 0或S，及R3為—Y_R1 ’其中R1為。卜1。—烷基，c2_]「烯基或 Cm-炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多次， 這些取代基係選自 i -1 0 烧氧基’ 0卜1〇 -烧硫基，經基，鹵 素’胺基，硝基，氰基，CH。-烧胺基，二（Ch。-院基）胺 土 芳基芳氧基’芳硫基和雜芳基’或為芳基，其中 任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或多次， 这些取代基係選自Ci_i()—烷基’ C9_icr烯基，c炔基， ci-io-h氧基，C1M()-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基， 氛基’ Cho-烧胺基和二（c1MQ_烷基）胺基，及γ為一鍵，〇 ，S 或 NH ， 可依情況地接著依任一順序將R基團轉換為氰基，將 Z基團轉換為二甲胺甲基，將以虛線代表的雙鍵還原成單 鍵，及/或將Hal基團轉換為氟基團，及然後在鹼性條件 下進行式（Π s)或（IV s)S-對映體或其不穩定酯衍生物的尹 閉合’因而形成式（V)化合物. ' 109 1306846

接者依任一順序地：如果當 換為ft其^田 · w 二外氰丞日寻將R基團 換局鼠基，如果Z並非為-田E&ffi甘+

卜马—甲胺曱基時將Z基團轉換A 曱胺甲基，如罢*砼旦也* 土 S]早寻換馬 H 1 果虛線是代表雙鍵時將之還原為單鍵，及

Hal並非為氟時將Hai轉換為螽

舍或其藥學上可接受鹽 氟基團，分離出依地 76·根據申請專利範圍帛”項的方法，其中得自⑹ 素性醯化作用的式（π )化合物 、 ^匕。物R-或S_對映體與式（jv &物相反對映體之混Α物ρ彳六Μ Α Μ 4

之耽*σ物已依據申請專利範圍第67-70 J 中任一項的分離和純化方法相互分離出。 邝項的方法，其中得自於酵 R-或S-對映體與式（jy)化 利I&圍第71 - 7 4項中任一項

77.根據申請專利範圍第 素性醯化作用的式（Π )化合物 合物相反對映體已依據申請專 的分離和純化方法相互分離出 ?8. 一種製備外消旋性，普佘alQPram)及/或依 地普余或其藥學上可接受鹽的方法，纟包含依據申請專利 靶圍第卜60項中任-項的方法製備具式（ΠΟ二醇之R—對 映體或其鹽 110 1306846

Hal

Z 其中R為鼠基或 單鍵，及Z為二甲月安 ，及Ha 1為鹵素， (Ilr) 可轉變成氰基的基團 甲基或為可轉換成二 ’虛線代表雙或 甲胺曱基的基團 或具式（IV r )經釀^匕

醇之R-對映體或其 鹽

Z 其中R，Z (IVr) 上文中所定義者，W為 院基 ’ C2H。-烯基 虛線和Hal為如同

0或S，及R3為-Y-Ri且其中R1為 或C2_1(r炔基，它們全可能視需要地經取代基取代一或多 -人’坆些取代基係選自Ch。—烷氧基，烷硫基，羥基 ，_素，胺基，硝基，氰基，Ci_『院胺基，二Κι烧基 )月女基，芳基，芳氧基，芳硫基和雜芳基，或…為芳基， 其中任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或多 人這些取代基係選自cw〇-烷基，c2 —1Q_烯基，c2M「炔基 烧氧基’ Cho-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基 111 1306846 為一鍵 氰基，Chq-烷胺基和二（c1MQ_烷基）胺基，及 ’ 0 ’ s或随， 可依情況接著依任一順序將R基團轉換為氰美將以 虛線代表的雙鍵還原成為單鍵1 z基團轉換為：甲胺 =及/或請基團轉換為氣基團，及在酸性條件下進行 式或（rvs)R-對映體的環閉合，因而形成—人 (v)化合物之s_對映體及少 3 ^ ， <相對應R•'對映體之混合物

Hal (V) 韓換ί者Γ任—順序地：當如果R並非為氰基時將R基團 _ 果z亚非為二甲胺甲基時將z基團 :甲^甲基’如果虛線是代表雙鍵時將之還原為單鍵，及 時將㈣轉換為氣基團，接著分離出依地 曰.及/或夕Μ旋性西肽普命或其藥學上可接受越。 79.根據申請專利範圍第”項的方法，其中 西肽普侖之分離係藉由沈澱出 斗甘确斗丄 r 4敌性西肽普侖的自由鹼 或其鹽，並由沈殿物的母液中回收依地普侖。 •根據Η專利範圍第78項的方法，其t得自 ^ W化合物^或S—對映體與式⑻化 σ物相反對映體之混合物已依料 中任一項的分離和純化方法相互分離出。項 312 1306846 8 1.根據申請專利範圍第78項的方法，其中得自於酵 素性醯化作用的式（Π)化合物R-或S-對映體與式（IV)化 合物相反對映體已依據申請專利範圍第71-74項中任一項 的分離和純化方法相互分離出。 拾壹、圖式： 無

113

Claims (1)

1. ψ 1306846 拾、申請專利範固： 鹽的方 1. 一種用於製備具有式⑷二醇之Sn對映體或其 鹽及/或具有式（IV )經醯化二醇之相反對映體或其 、 法，

   、z (II) 式（π)中’R為氰基或可轉換成氰基的基團，— .NUT)基且其"，和R，，為Ci 6烷基，或r，和相互 連接形成含有它們所連接之N —原子的環狀結構，或Z為可 轉換成二甲胺甲基的基團，虛線為雙或單鍵且㈤為齒素 w

   Hal (IV) 式（IV)中，R，z’虛線和Hai為如同上文中所定義者 及R3為-Y-R1且其中y為C •烧基 10-烯基或（：2_1〇-炔基，它們全可能相泰 ，、杜 。 冷要地經取代基取代 一或多次，這些取代基係選自Chpp k 0 ^ ^ ^ 元氣基，Chq -院硫基 93 1306846 ，羥基’鹵素’胺基’硝基’氰基，c卜i(r烷胺基，二（CV ]0-烷基）胺基’芳基’芳氧基，芳硫基和雜芳基，或R1為 芳基；其中任一 ^基和雜芳基可能視需要地經取代基取代 一或多次，這些取代基係選自（V10-烷基，c2_1Q-烯基’ c2_ ]0-炔基，Cho-燒氧基，（νΐ(3-烷硫基，羥基，鹵素，胺基 ，硝基’氰基’ Cho-烧胺基和二（C11Q_烷基）胺基，及γ 為一鍵，〇，S或NH， 該方法包含 a)將式（Π )的外消旋化合物 0H

   ⑼ 其中R，Z，虛線和Ha 1為如同上文中所定 直下式的醯化劑'、，人。一人„ (Ilia) (Illb) 義者，使用

   V' X-(IIIc) 、 UH又卿％丹式R1〜N=C=S 氰酸S曰進仃選擇性酵素性醯化作用； 、.、瓜 其中X為〇或S ; w為0或S; U為〇或s A r v為鹵素， ' 1_1Q —烷基，C2-1(T烯基或 C2 i j 美，A 2-10狀：丞’它們全可 94 1306846 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自c ^ ! 〇 -烧氧基，C! Q -烧硫基’經基’鹵素，胺基，硝基，氰 基’ Cko-烷胺基’二（Chd-烷基）胺基，芳基，芳氧基， 芳硫基和雜芳基，或RQ為芳基，其中任一芳基和雜芳基可 能視需要地經取代基取代一或多次，這些取代基係選自c 1 10_烷基，Ch「烯基，c2—〗「炔基，Ch「烷氧基，Ci —『燒 硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，Ci_iq_烷胺基和二 (c^o-烷基）胺基；

   R1為如同RQ的定義； R2為如同RQ的定義，或R2為適當的離去基； 或RG與R1共同形成具有3至5個碳原子的鏈 但前提為當X為S時’ W和U並非為s; 因此形成一 R-或S-形式之式（π、& π μ /八、a、ϋ )起始物質以及（^ ) y 化合物之相反對映體的混合物：

   '/z

   Hal (IV) 其中R 者；或 W，Hal，R3，虛線和 為如同上文中所定義 b )將式（IV )的外消旋化合物 95 1306846

   Hal (IV) 者； 之式 ”甲κ，Z，w，Ha 1，虛線和R3為如同上文中所定義 進行選擇性酵素性脫醯化作用而形成一 R-或S-形式 (Π )經脫醯化合物 OH

   Hal (Π) /、中R，Hal，虛線和Z為如同上文中所定義者，以及 相反對映體形式之式（JV )經醯化起始物質的混合物； 可視情況地接著依任何順序分離出式（π )化合物的L 或R-對映體及/或式（IV )化合物的相反對映體或其鹽。 2.根據申請專利範圍第1項的方法，其中式（II)化合 物的醯化作用得到一含有S-形式之式（π)化合物及恥^ 式之式（rv )化合物的混合物。 3·根據申請專利範圍第i項的方法，其中式（JJ)化合 物的醯化作用得到一含有R-形式之式（π)化合物及 式之式（IV )化合物的混合物。

   96 j3〇6846 4.根據申請專利範圍第"員的方法，其中式(iv)化合 物的脫醯化作用得到—含有s—形式之式（ιν)化合物及卜 形式之式（π )化合物的混合物。 5 ·根據申請專利範圍第1項的方法，其中式（IV )化合 物的脫醯化作用得到—含有卜形式之式（IV)化合物及s_ 形式之式（Η )化合物的混合物。 6. 根據申請專利範圍第1項的方法’其中Hal為氟及 R為鹵素或氰基，較佳為r為氰基。 7. 根據申請專利範圍第1項的方法，其中虛線代表單 鍵。 8. 根據申請專利範圍第1項的方法，其中Ζ為二甲胺 甲基或可被變換為二甲胺甲基的基團，較佳為ζ為二甲胺 曱基。 9. 根據申請專利範圍第1項的方法，其中醯化劑係為 一選自式a) ’（冚b)和（皿c)化合物之化合物。 1 〇.根據申請專利範圍第9項的方法，其中醯化劑係 為一選自式（诅a)及（mb)化合物之化合物。 11. 根據申請專利範圍第1 〇項的方法，其中醯化劑為 式（m a)化合物。 12. 根據申請專利範圍第10項的方法，其中醯化„t 式（Mb)化合物。 θ ~ 1 3.根據申請專利範圍第9項的方法，其中醯化劍 式（me)化合物。 ~ 1 4·根據申請專利範圍第9項的方法，其中u為〇。 97 1306846 15·根據申請專利範圍第9項的方法，其中W為0。 1 6.根據申請專利範圍第9項的方法，其中X為〇。 1 7.根據申請專利範圍第9項的方法，其中RG，Ri和 R為獨立地選自CV4-烷基，C2—4-烯基和C2_4-炔基’它們 王可此視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選 自Cl—4~燒氧基，（V4-烷硫基，經基，鹵素，胺基，硝基， 氮基’ c卜r烷胺基和二_(Ci4_烷基）胺基，或R2為離去基 ’例如琥珀醯亞胺基，H〇Bt;和pf p，或Μ和R1共同形成 3一5個碳原子的鏈。 18，根據申請專利範圍第1 7項的方法，其中RQ ’ R1和 R為獨立地選自Cl_3-烷基，c2_3-烯基和c2_3-炔基，它們 王可成視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選 自ci-3~燒氧基’ Ci 3_烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基， 氰基Ci-3-燒胺基和二_(c13 一烧基）胺基。 1 9·根據申請專利範圍第18項的方法，其中和R1 丨-3 —燒基’及R2為經鹵素一或多次取代的Cu-烷基或 R2為C2-3-稀基。 、20.根據申請專利範圍第11項的方法，其中W和R1 為獨立地選自<^_4-烷基，c2_4-烯基和c2_4-炔基，它們全 可此視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 C Λ- 燒氧基’ Ci_4_烷硫基，羥基，鹵素，胺基’硝基’氰 土 Cl-4 —烷胺基和二_(CH —烷基）胺基。 21.根據申請專利範圍第20項的方法，其中和R1 為獨立地選自c"-烷基，c23—烯基或c2_3-炔基，它們全 98 1306846 可能視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 1-3烷氧基，（:丨―3-烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰 基，Cl-3 —烷胺基和二-（C^-烷基）胺基。 22.根據申請專利範圍第20項的方法，其中RQ和Ri 為C〗_4-院基。 23·根據申請專利範圍第22項的方法，其中R〇和R1 為烧基，適當者為曱基，乙基或丙基，較佳為丙基。 24.根據申請專利範圍第12項的方法，其中Ri和R2 為獨立地遥自Ci-广烧基，C2_4-烯基和c2_4-炔基，它們全 可旎視需要地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自 C K烷氧基，C!—4-烷硫基，羥基，齒素，胺基，硝基，氰 基Cl—4~燒胺基和二-(C1/r烧基）胺基’或R2為離去基， 例如破站醯亞胺基，和pf p。 2 5 ·根據申請專利範圍第2 4項的方法，其中r 1為選 自C!-3-烷基’ C2 — 3-烯基或C2 — 3-快基’它們全可能視需要 地經取代基取代一或多次且這些取代基係選自C丨厂院氧基 ，Cl-3~烷硫基，羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，— 3—烷 月女基和—-（Cy·院基）胺基，和R2為經鹵素一或多次取代 的C1M-烷基’或R2為c2—4_烯基。 26·根據申請專利範圍第25項的方法，其中Ri為Ci 3统基’（：2_3_烯基和炔基’它們全可能視需要地經取 代基取代一或多次且這些取代基係選自Cl_3—烷氧基，^ _ 1 ~ 3 烷硫基，羥基，_素，胺基，硝基，氰基，（^丨广烷胺基和 二~(C1-3-烷基）胺基，且R2為經鹵素一或多次取代的q 3 — 99 1306846 院基’或R2為C2_3-烯基。 27. 根據申請專利範圍第25項的方法，其中R1為 烧基。 28. 根據申請專利範圍第27項的方法，其中R1為 3烷基，例如曱基，乙基或丙基，及經_素一或多次取代 的（ν3-烷基，或R2為c^_烯基。 29. 根據申請專利範圍第28項的方法，其中R2為乙 烯基。 3〇_根據申請專利範圍第29項的方法，其中R1為丙 基。 31.根據申請專利範圍第13項的方法，其中Rl為Ci_ 4烧基C2-4 —稀基和C2_4-炔基，它們全可能視需要地經取 代基取代一或多次且這些取代基係選自ci 4_烷氧基，ci 4_ 烷硫基，煙基，_素，胺基，硝基，氰基，Ck烷胺基和 一 一（Cl-4~燒基）胺基。 32·根據申請專利範圍第31項的方法，其中r1為 3烷基# C2 — 3烯基和广炔基’它們全可能視需要地經 (^3-院氧基’ Ci_3一烧硫基，經基，鹵素，胺基，石肖基，氛 基’ c"-垸胺基和：一（Ci 3_烧基）胺基取代一或多次。 33_根據申請專利範圍帛32項的方法，其中ri為c 3-燒基’ c2_3-稀基或c K Α 1- 2-广炔基，較佳為R1為Ci厂烷基， 例如甲基’乙基或丙基，較佳為丙基。 3 4.根據申請專利範 ,n1 固弟1項的方法’其中醯化本彳^ 式R1-N = C=〇的異氰酸_ Μ為 ^式R -N = C = S的異硫氰酸g旨。 100 1306846 35.根據申請專利範圍第34項的方法，其中醯化劑為 式R1-N=c=：s的異硫氰酸酯。 36·根據申請專利範圍第34項的方法，其中醯化劑為 式R1-N=c=〇的異氰酸酯。 3 7.根據申請專利範圍第3 4項的方法，其中r 1為c 4-烷基，C2—4-烯基或C2 4_炔基，它們全可能視需要地經取 代基取代一或多次且這些取代基係選自ci 4—烷氧基， 烷硫基，羥基，_素，胺基，硝基，氰基，Ck烷胺基和 —-(C 1 - 4院基）胺基。 38·根據申請專利範圍第37項的方法，其中Ri為^ r烷基，eg—3-烯基或q—3—炔基，它們全可能視需要地經 Cl_3_烷氧基，Cl-3 —烷硫基，羥基，i素，胺基，硝基，氰 基，Cu-烷胺基和二_(Ch3_烷基）胺基取代一或多次。 39. 根據申請專利範圍第38項的方法，其中R1為Ci 3 -烧基’ C 2 _ 3 - ~基或C 2 _ 3 _块基。 40. 根據申請專利範圍第39項的方法，其中R1為甲 基，乙基或丙基，較佳為丙基。 41 ·根據申請專利範圍第1項的方法，其中所使用的 式（IV )外消旋化合物為其中γ為〇，或s的化合物。 42. 根據申請專利範圍第41項的方法，其中式（IV )外 消旋化合物為其中Y為0的化合物。 43. 根據申請專利範圍第“項的方法，其中所使用的 式Ον )外消旋化合物為其中γ為s的化合物。 44. 根據申請專利範圍第1項的方法，其中所使用的 101 1306846 式（ιν)外消旋化合物為其中γ為一鍵的化合物。 45. 根據申請專利範圍第1項的方法，其中所使用的 式（IV )外消旋化合物為其中γ為νη的化合物。 46. 根據申請專利範圍第41項的方法，其中Ri為q !「烷基，C2_1D-烯基或C2_iq —炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自Cl_1()-烷氧基， -烷硫基’羥基，鹵素，胺基，硝基，氰基，^ ^一烧 胺基和二烷基）胺基。 47. 根據申請專利範圍第46項的方法，其中Ri為Ci_丨 10-烧基，C2 —1Q-烯基或c2_1Q-炔基，它們全可能視需要地經 取代基取代一或多次且這些取代基係選自羥基，自素，胺 -基，硝基及氰基。 , 48_根據申請專利範圍第47項的方法，其中Ri為Cl_ i 院基。 49.根據申請專利範圍第1項的方法，其中酵素性醯 化作用之施行係使用水解酶，例如脂肪酶，酯酶，醯酶或 蛋白酶。 （ 5 0 ·根據申請專利範圍第1項的方法，其中酵素性脫 醯作用之施行係使用水解酶，例如脂肪酶，酯酿，醯酶或 蛋白酶。 51.根據申請專利範圍第49項的方法，其中水解酶是 以固定化酵素或交聯酵素晶體（Cross-Linked Enzyme Crystal, CLEC)酵素的形式使用。 52·根據申請專利範圍第49項的方法，其中所使用的 102 1306846 酵素係選自假單胞菌屬（pseud〇m〇nas sp.)脂蛋白脂肪酶 ，念珠菌屬（Candida antartica)脂肪酶 B 及 Therm〇myces lanuginosus脂肪酶，或這些酵素的突變體或變異體。 53_根據申請專利範圍第49項的方法，其中酵素為假 早胞菌屬脂蛋白脂肪酶或假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶的突變 體或變異體。 54. 根據申請專利範圍第53項的方法，其中所使用的 酵素為假單胞菌屬脂蛋白脂肪酶。 55. 根據申請專利範圍第49項的方法，其中酵素為念 珠菌屬（Candida antartica)脂肪酶B或念珠菌屬 (Candida ant art ica)脂肪酶B的突變體或變異體。 - 56. 根據申請專利範圍第55項的方法，其中酵素為念w 珠菌屬（Candida antartica)脂肪酶 B。 57_根據申請專利範圍第56項的方法，其中酵素為諾 華酶（Novozyme®)435。 58. 根據申請專利範圍第49項的方法，其中酵素為 Thermomyces lanuginosus 脂肪酶或 Thermomyces φ lanuginosus脂肪酶的突變體或變異體。 59. 根據申請專利範圍第58項的方法，其中酵素為 Thermomyces lanuginosus 脂肪酶。 6 0.根據申請專利範圍第59項的方法，其中酵素為里 波酶（LipoZymeTM) TL IM。 61 _根據申請專利範圍第1項的方法，其中酵素性酿化 作用或酵素性脫醯作用係進行於存在有有機驗或有機酸或 103 1306846 具寺的混合物 根據申請專利範圍第η項的方法，其中酵素性麵 乍用或酵素性脫醯作用係進行於存在有有機酸。 63.根據申請專利範圍帛62項的方法，其中酵素性辟 作用係進行於存在有有機酸。 ^ 根據申明專利範圍第6 2項的方法，其中有機酸為 方香族羧酸或脂族羧酸。

   65_根據申請專利範圍帛6"頁的方法’其中有機酸伟 選自正-丙酸，異丙酸，正-丁酸，異丁酸，異戊酸，:: 土丁酉文，％己烷羧酸，新戊酸（pivalic acid)，苯甲酸， p甲苯甲酸’水揚酸和3_苯基丙酸。 66.根據申請專利範圍第65項的方法，其中有機酸急 新戊酸。 … 八67.—種從含有式（IV )化合物及式（π )二醇的混合物中 刀離和純化具有式（w )化合物或其鹽及/或式（Η 其鹽的方法， 或

   Hal (IV) 式（IV)中R為氰基或可被轉換為氰基的基團，虛線代 表雙或單鍵，Hal為鹵素，z為-CH2-N(R，R”）基且其中R，和 104 1306846 R”為C"-院基’或Π目互連接形成含有它們所連接 之原子的環狀結構’或ζ為可轉換成二甲胺甲基的基團 ’ W為0或s，及R3為-Υ —R1且其中γ為一鍵，〇，s或随 ，及R1為1,-炫基，C2_1Q-烯基或c2 —1。—块基，它們全可 能視需要地經取代基取代一或多次’這些取代基係選自q — η—烧氧基’ ChQ-烧硫基’經基，_素’胺基，硝基，氰 基，Cho-烷胺基，二（Chq-烷基）胺基，芳基，芳氧基， ，硫基和雜芳基，或R1為芳基，其中任—芳基和雜芳^可 能視需要地經取代基取代-或多次，這些取代基係、選自 ]。-烷基，c2，—烯基’ c2，—炔基’ Ci i。—烷氧基，『烷 硫基，羥基，画素’胺基，硝基’氰基，CH〇_烷胺基和二 (C i -烧基）胺基，

   丄

   式（Π )中R， 遠方法包含 (II) Hal和虛線為如同上文中所定義者， -夂存在下’在水和有機溶劑之混合*中處理該含 有式⑻化合物和式⑴二醇的混合物； s b)由有機相中分離出含有為該酸之鹽形式的式（Π)二 S子的水相’因而得到含有為該酸之鹽形式的式(IV)化合物 105 1306846 的有機相，·及 視需要地分離屮A #^^. ”，、鹼或其鹽的式（Π )化合物，及視需 刀離出為驗或其鹽的式⑻化合物。 6 8 .根據申請暮4/f m ^ 醇的S斜AM 靶圍第67項的方法，其中式（Π )二 Θ子的S -對映體盘式广m、 、體。式（叹）酿基衍生物的R —對映體分離。 6 9.根據申請專利f m π ^ 利乾圍第67項的方法，其中式（IV)醯 基衍生物的s-對映舻伽1 / 、人式（π)二醇的R-對映體分離。 •根據申睛專利範圍笛R 7 fi Q s 靶圍第67-69項中任一項的方法， 其中於步驟a)中

   斤使用的式（IV)醯基衍生物R一或S一對映 ::)酉子相反對映體的混合物係依據申請專利範圍 弟卜60項中任—項的方法製備。 彳之3有式（汉）醯基衍生物和式（D )二醇的混合 物中分離和钟各目4 、、/、式（IV)醯基衍生物或其鹽及/或式（π) 二醇的方法，

   Hal (IV) 式（IV)中，R為氰基或可被轉換為氰基的基團，Hal為 ::，、虛線代表雙或單鍵’ z *~CH「N(R，R”)基且其中R， 二Ci-e烷基，或R’和相互連接形成含有它們所連 原子的環狀結構，或Z為可轉換成二甲胺甲基的基 106 1306846 團’W為0或S’及R3為-Y〜R1且其中γ為一鍵，〇,8或 随，及R1為Cho-炫基’（：2__1(r稀基或C2_1()-快基，它們全 了犯視需要地經取代基取代—或多次，這些取代基係選自 C1 -1。烧氧基’ C ^-烧硫基，經基，函素，胺基，確基， 氰基，C1MQ-烷胺基，二（(：,,_烷基）胺基，芳基，芳氧基 ，芳硫基和雜芳基，或R1為芳基，其中任一芳基和雜芳基 可能視需要地經取代基取代—或多次，這些取代基係選自 Chg-烷基，c2_1Q-烯基，C21「炔基，烷氧基，q,—

   烷硫基，羥基，齒素，胺基，硝基，氰基，Ch「烷胺基: —(Ci-i〇 -烧基）胺基， 0H

   和虛線為如同上文中所定義者

   該方法包含 、 谷劑和非極性有機溶劑混合物中處 理該含有式（IV)醯基衍生物 ^ 奶和式（H)二醇的混合物； b)由有機相中分離出 丨入古、 出3有式（Π )二醇的水相，因而得 到含有式（IV)醯基衍生物的有機相； 視需 )化合物， 要地由水/有機相中分離出式 及視需要地將式（Π )及/或 (Π)二醇及/或式（!V 式（IV )化合物轉換成 107 !3〇6846 為其鹽。 ^ 72·根據申請專利範圍第71項的方法，其中式（]1)二 醇的S-二醇與式（rv)酿基衍生物的對映體分離。 73·根據申請專利範圍帛71項的方法，其中式⑻酿 土何生物的S-對映體與式u)二醇的R_對映體分離。 74·根據申請專利範圍第71_73項中任一項的方法， 其中於步'驟〇中所使用的式⑻化合物R-或S-對映體组 式（m化合物相反對映體的混合物係依據申請專利範圍第 卜60項中任—項的方法製得。

   75. —種製備式（丨）依地普侖（esci “丨叩^…或其藥學 其包含依據申請專利範圍第i — 60項中任一項的方法製 備具式（Π s)二醇之s_對映體或其鹽：

   Hal (IIs) 其中R 或單鍵，Z 為氰基或可被轉換為氰基的基團，虛線代表雙 為二曱胺曱基或可轉換成二甲胺曱基的基團， ]〇8 1306846 及Ha 1為鹵素，

   (IVs) 、 - Ή A 0 或 S’ 及 R3 為- γ- Ri，立中 ri 為 f w η /、T K馮Lho烷基，C2M「烯基至 C2_1Q-炔基’它們全可能視需要地經取代基取代_或多欠 這些取代基係選自C]_u-烷氧基，Ci —烷硫基，羥基 素，《，硝基，氰基，Cl_1〇-院胺基，二（(V『燒土仏 基，芳基，芳氧基，芳硫基和雜芳基，或Rl為芳基，其1 任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或多=， 這些取代基係選自Cl，—烷基’ c2『烯基，c2丨r炔： Cho-烷氧基，Cl_1{)-烷硫基，羥基，由素，胺基，硝基， 鍵

   氰基，Chq-烷胺基和二（C]_1D_烷基）胺基，及γ為 ，S 或 ΝΗ ， 可依情況地接著依任一順序將R基團轉換為氰基，將 Z基團轉換為二甲胺甲&，將以虛線代表的雙鍵還原成單 鍵，及/或將Hal基團轉換為氟基團，及然後在鹼性條件 下進盯式（Π s)或（iv S)s-對映體或其不穩定酯衍生物的環 閉合，因而形成式（V)化合物 衣 109 1306846

   、z

   Hal (V) 接著依任—順序地：如果當 換為氰基，如果/ 時將R基團轉 甲胺甲美士 、’ M-甲胺甲基時將Z基團轉換為二 „如果虛線是代表雙鍵時將之還原為單鍵，及另

   氣時將Hal轉換為氣基團，接著分離出 TO或其樂學上可接受鹽。 75 =Γ 式(π)化合物R—或S-對映體與式⑻化 :目S映體之混合物已依據申請專利範圍第6”。項 中任一項的分離和純化方法相互分離出。 、 辛二Γ請專利範圍第75項的方法，其中得自於酵 素性醯化作用的古7 π、/u人 ^)化5物卜或S-對映體與式（IV)化

   反對映體已依據中請專利範圍f 7卜74項中任-項 的分離和純化方法相互分離出。 、 祕並八十甘裝備外，肖釭性西酞普侖（citalopram)及/或依 地普侖或其藥學上為 範圍第H0項中任―：:方方法，其包含依據申請專利 映體或其冑 方法製備具式Ur)二醇之R-對 110 1306846

   (IVr) 映體或其鹽

   7所定義者，W j -1 〇_ 院基 ’ C2M Q-稀 4

   0或s，及R3為—Y_R1且其中R1為 或Ch Q炔基匕們全可能視需要地經取代基取代一或 次’這些取代基係選自氧基，CH〇_烧硫基，經 ’ *素’胺基’璃基，氰基，Ci_i〇_炫胺基，二（Ch〇—炫 )胺基，芳基，芳氧基，芳硫基和雜芳基，《R1為芳基 其中任一芳基和雜芳基可能視需要地經取代基取代一或 -人，延些取代基係選自ChG_烷基，Cm —烯基，c2_iq_炔 ，Chq-烧氧基，Cl —iq_烷硫基，羥基，_素，胺基，硝 111 1306846 氰基’ C ! - ! Q -烧胺基和二（ς 〇 ， S 或 NH ， -10-烷基）胺基’及Y為—在建 4况接著依任一順序將R基團轉換為氰基，將r 虛線代表的雙鍵還原成為單鍵，將Ζ基團轉換為二甲胺f 基及/或W Hal基團轉換為氟基團，及在酸性條件下進十 式（Πγ)或(iv S)R—對映體的環閉合，因而形成一含有: ⑺化合物之映體及少量之相對應r_對映體之混合^

   接:依任—順序地：當如果R並非為氰基時將R基g 轉換為襄基，如果7奸非失 m 果z亚非為二甲胺甲基時將z基團轉換^

   二甲胺甲基，如果虛線是代表雙鍵時將之還原為單鍵心 =八如1亚非為氟時將Hal轉換為氟基團，接著分離出㈣ 曰、及/或外消旋性西酞普侖或其藥學上可接受鹽。 7 9 ·根據申請專利範圍 西肽普命之分m 其中外消旋# 刀離係猎由沈澱出外消旋性西肽普侖的自由驗 或其鹽’並由沈殿物的母液中回收依地普命。）自由驗 素二Γ請專利範圍第78項的方法，其中得自於酵 用的式⑴化合物…-對映體與式⑻化 合物相反對映體夕，、日人& 1 犯D已依據申請專利範圍第67-70項 中任-項的分離和純化方法相互分離出。 、 112 1306846 8 1.根據申請專利範圍第78項的方法，其中得自於酵 素性醢化作用的式（Π)化合物R-或S-對映體與式（IV)化 合物相反對映體已依據申請專利範圍第71-74項中任一項 的分離和純化方法相互分離出。 拾壹、圖式： 無

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