KR20050053618A - 에스시탈로프람의 제조에 사용할 수 있는 중간체들의 분리방법 - Google Patents

에스시탈로프람의 제조에 사용할 수 있는 중간체들의 분리방법 Download PDF

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다카히사 가토
쇼고 야마모토
다카시 요시다
도시히로 다케다
야스요시 우에다
한스 페테르센
로버트 댄서
할레 아마디안
라르스 올레 륑쇠
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Abstract

본 발명은, 선택적인 효소적 아실화 또는 탈아실화를 포함하는, 에스시탈로프람의 제조에 유용한 하기 화학식 (II)의 디올 중간체 및 하기 화학식 (IV) 의 아실화된 디올의 반대 거울상이성질체 제조에 대한 신규한 방법에 관한 것이다.

Description

에스시탈로프람의 제조에 사용할 수 있는 중간체들의 분리 방법 {METHOD FOR THE SEPARATION OF INTERMEDIATES WHICH MAY BE USED FOR THE PREPARATION OF ESCITALOPRAM}
본 발명은 선택적인 효소적 아실화 (acylation) 또는 탈아실화와 관련된 에스시탈로프람 (escitalopram) 의 제조에 유용한 광학 활성 중간체들의 신규한 제조 방법에 관한 것이다.
시탈로프람 (citalopram) 은 현재 수년간 시판되어 온 주지의 항우울 약물이다.
이는 선택적인, 중심적으로 작용하는 세로토닌 (5-히드록시트립타민; 5-HT) 재흡수 억제제로서, 따라서 항우울 활성을 갖는다.
시탈로프람은, US 4,136,193 에 대응하는 DE 2,657,013 에 처음 개시되었다. 이 특허 공보 i.a. 는 적당한 용매 중의 시안화 제1구리와의 반응 및 5-브로모-프탈레인의 알킬화에 의한 대응 5-브로모-유도체로부터의 시탈로프람 제조 방법을 개시한다.
EP-B1-347 066 에 대응하는 미국 특허 제 4,943,590 호는 에스시탈로프람 (시탈로프람의 S-거울상이성질체 (enantiomer)) 의 제조에 대한 두 가지 방법을 기술한다.
두 방법 모두 하기 식을 가지는 라세믹 디올 (racemic diol):
을 출발물질로서 사용한다. 첫 번째 방법에 따르면, 화학식 (I) 의 디올을 거울상이성질적으로 순수한 산 유도체, 예컨대 (+) 또는 (-)- -메톡시- -트리플루오로메틸-페닐아세틸 클로라이드와 반응시켜 부분입체 이성질성 (diastereomeric) 에스테르 혼합물을 생성시키고, 이를 HPLC 또는 분별 결정 (fractional crystallization) 으로 단리시키는데, 여기서 올바른 입체화학을 가진 에스테르가 거울상이성질체 선택적인(enantioselective) 에스시탈로프람으로 변환된다. 두 번째 방법에 따르면, 화학식 (II) 의 디올을, 거울상이성질적으로 순수한 산 유도체, 예컨대 (+)-디-p-톨루오일타르타르산을 이용한 입체선택적 결정화로 거울상이성질체들로 분리시키고, 이 때 상기 화학식 (A) 의 디올의 S- 거울상이성질체 가 거울상이성질체 선택적인 에스시탈로프람으로 변환된다.
에스시탈로프람은 현재 항우울제로서 개발되어 왔다. 따라서, 에스시탈로프람 제조에 있어서 개선된 방법이 요구되고 있다.
상기 화학식 (I) 의 디올의 S-거울상이성질체 및 이의 아실화된 유도체를, 그 라세믹 디올 중의 첫째의 히드록실기의 선택적인 효소적 아실화로 제조하여 광학 순도가 높은 S-디올 또는 이의 아실화된 유도체를 수득할 수 있으며, 나아가 수득한 거울상이성질체들을 일련의 단리 및 정제 작업으로 분리시킬 수 있다는 것을 현재 발견하였다.
따라서, 본 발명은 하기 식을 가지는 디올의 S- 또는 R-거울상이성질체:
[식 중, R 은 시아노 또는 시아노기로 변환될 수 있는 기이고, Z 는 -CH2-N(R'R'') 기 (식 중, R' 및 R'' 은 C1-6-알킬이거나 또는 R' 및 R'' 은 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성함) 이거나 또는 Z 는 디메틸아미노메틸기로 변환될 수 있는 기이고, 점선은 이중 또는 단일 결합을 나타내고, Hal 은 할로겐이다] 또는 그의 염, 및/또는 하기 식을 가지는 아실화된 디올의 반대 거울상이성질체
[식 중, R, Z, 점선 및 Hal 은 상기 정의한 바와 같고, W 는 O 또는 S 이고, R3 는 -Y-R1 (식 중, R1 은 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10 -알키닐이고, 이때, 이들은 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C 1-10-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있거나, 또는 R1 은 아릴이고; 식 중, 상기 아릴기 및 헤테로아릴기들 중 어느 것이나 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10 -알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있고, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이다], 또는 이의 염의 신규한 제조방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다:
a) 하기 식의 라세믹 화합물:
[식 중, R, Z, 점선 및 Hal 은 상기 정의한 바와 같다] 을 하기 식:
을 가지는 아실화제 또는 식 R1-N=C=O 을 가지는 이소시아네이트 또는 식 R1-N=C=S 를 가지는 이소티오시아네이트 [이때 X 는 O 또는 S 이고; W 는 O 또는 S 이며; U 는 O 또는 S 이고, V 는 할로겐이고,
R0 는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 이들은 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있거나, 또는 R0 는 아릴이고, 이때 상기 아릴기 및 헤테로아릴기들 중 어느 것이나 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있고;
R1 은 R0 에 대하여 정의된 바와 같고;
R2 는 R0 에 대하여 정의된 바와 같거나, 또는 R2 는 적당한 이탈기이거나;
또는 R0 은 R1 은 함께 탄소수 5 의 사슬을 형성하며;
단, X 가 S 인 경우 W 및 U 는 S 가 아니다] 를 사용하여 선택적인 효소적 아실화를 시켜, R- 또는 S-형태 둘 중 하나의 화학식 (II) 의 출발물질 및 하기 식을 가지는 상기 아실화된 디올의 반대 거울상이성질체:
[이때, R, W, Hal, R3, 점선 및 Z 는 상기 정의된 바와 같다] 의 혼합물을 형성하는 단계; 또는
b) 하기 식의 라세믹 화합물:
[식 중, R, Z, W, Hal, 점선 및 R3 는 상기 정의된 바와 같다] 을 선택적인 효소적 탈아실화를 시켜, R- 또는 S-형태 둘 중 하나인 하기 식의 탈아실화된 화합물:
[식 중, R, Hal, 점선 및 Z 는 상기 정의된 바와 같다] 및 이의 반대 거울상이성질체 형태의 화학식 (IV) 의 아실화된 출발물질의 혼합물을 형성하는 단계;
임의적으로 수반되는 바, 어느 순서로든지, 화학식 (II) 의 화합물의 S- 또는 R-거울상이성질체 및/또는 화학식 (IV) 의 화합물의 반대 거울상이성질체 또는 이들의 염의 단리.
본 발명은 또한 화학식 (II)의 반대 거울상이성질체로부터 화학식 (IV)의 거울상이성질체의 혼합물을 단리하는 방법 및 상기 화학식 (IV)의 화합물의 R- 및 S-거울상이성질체에 관한 것이다.
마지막으로, 본 발명은 본 발명에 따른 선택적인 효소적 아실화 또는 탈아실화에 의해 수득된 화학식 (II)의 화합물의 거울상이성질체, 또는 본 발명에 따른 선택적인 효소적 아실화 또는 탈아실화에 의해 수득된 화학식 (IV)의 광학 활성 아실 유도체의 거울상이성질체로부터 에스시탈로프람(escitalopram) 및 라세믹 시탈로프람(citalopram)을 제조하는 방법에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
화학식 (II), (IV) 및 (V)의 화합물에 관하여 사용되는 경우, 용어 "거울상이성질체", "R-거울상이성질체", "S-거울상이성질체", "R-형", "S-형", "R-디올", 및 "S-디올"은 4-Hal-페닐기가 부착되는 탄소 원자 주위의 기들의 배치를 언급한다.
본 발명은 따라서 하나의 구현예에서 상기와 같은 선택적인 효소적 아실화에 관한 것이고, 또다른 구현예에서 상기와 같은 선택적인 효소적 탈아실화에 관한 것이다.
선택적인 효소적 아실화는, 아실화가 바람직하게는 반응 혼합물 중 화학식 (II)의 화합물의 기타 거울상이성질체를 전환시키지 않으면서, 화학식 (II)의 화합물의 거울상이성질체 중 하나의 전환에 바람직하게 유효한 것을 의미한다.
선택적인 효소적 탈아실화는, 탈아실화가 바람직하게는 반응 혼합물 중 화학식 (IV)의 화합물의 기타 거울상이성질체를 전환시키지 않으면서, 화학식 (IV)의 화합물의 거울상이성질체 중 하나의 전환에 바람직하게 유효한 것을 의미한다.
본 발명에 따른 화합물의 선택적 아실화는 따라서 바람직하게는 S-형의 화학식 (II)의 화합물 및 R-형의 화학식 (IV)의 화합물을 함유하는 혼합물로 귀결되거나, 바람직하게는 R-형의 화학식 (II)의 화합물 및 S-형의 화학식 (IV)의 화합물을 함유하는 혼합물로 귀결된다.
마찬가지로, 선택적인 효소적 탈아실화는 바람직하게는 S-형의 화학식 (IV)의 화합물 및 R-형의 화학식 (II)의 화합물을 함유하는 혼합물로 귀결되거나, 바람직하게는 R-형의 화학식 (IV)의 화합물 및 S-형의 화학식 (II)의 화합물을 함유하는 혼합물로 귀결된다.
본 발명에 따른 아실화 또는 탈아실화 이후 수득되는 조성 혼합물은, 사용된 특정 가수분해 효소 및 반응이 수행되는 조건에 의존한다. 본 발명에 따른 효소적 아실화/탈아실화의 특성은, 다른 거울상이성질체보다 하나의 거울상이성질체의 상당히 큰 비율이 전환된다는 것이다. 본 발명의 광학 분할 방법에 의해 수득되는 화학식 (IV)의 아실화 화합물 및/또는 화학식 (II)의 디올의 광학적 순도는 보통 약 90% 이상, 바람직하게는 약 95% 이상, 더욱 바람직하게는 약 97% 이상 및 가장 바람직하게는 약 98% 이상이다. 그러나, 광학적 순도의 더 낮은 값이 허용가능하다.
본 발명의 효소적 방법을 위한 개시 물질은 화학식 (II)의 라세믹 디올 또는 화학식 (IV)의 라세믹 아실 유도체이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, R은 할로겐 또는 시아노이고, 가장 바람직하게는 시아노이다.
본 발명의 추가의 구현예에서, Hal은 플루오로이고,
본 발명의 추가의 구현예에서, 화학식 (II) 및 (IV)의 점선은 단일 결합이다.
하나의 구현예에서, Z는 디메틸아미노메틸이거나, 디메틸아미노메틸로 전환될 수 있는 기이다. 적절한 구현예에서, Z는 디메틸아미노메틸이다.
가장 바람직하게는, Hal은 플루오로이고, R은 시아노이고, 점선은 단일 결합이고, Z는 디메틸아미노메틸이다.
본 발명에 따른 효소적 아실화를 위해 사용되는 아실화제는 적절하게는 화학식 (IIIa), (IIIb), (IIIc)의 화합물 중 하나일 수 있다.
또다른 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 아실화제는 화학식 (IIIa) 및 (IIIb)의 화합물 중 임의의 것이다.
본 발명의 추가의 구현예에 따르면, 사용되는 아실화제는 화학식 (IIIa)의 화합물이다.
본 발명의 특히 또다른 추가의 구현예에 따르면, 사용되는 아실화제는 화학식 (IIIb)의 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 아실화제는 화학식 (IIIc)의 화합물이다.
아실화제가 화학식 (IIIa)의 화합물인 경우, U는 적절하게는 O이다.
아실화제가 상기 중 임의의 것인 경우, W는 적절하게는 O이다.
아실화제가 상기 중 임의의 것인 경우, X는 적절하게는 O이다.
적절하게는, 상기의 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 임의의 아실화제 (IIIa), (IIIb) 및 (IIIc) 중 치환기 R0, R1 및 R2는 하기와 같다:
R0, R1 및 R2는 독립적으로, 모두가 C1-6-알콕시, C1-6 -알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-6-알킬, C2-6-알케닐 및 C2-6 -알키닐로부터 선택되거나, R2는 적절하게는 이탈기, 예컨대 석신이미딜, HOBt 및 pfp이거나, R0 및 R1은 함께 탄소수 3 내지 5의 사슬을 형성하고, 더욱 적절하게는 R0 , R1 및 R2는 독립적으로, 모두가 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐로부터 선택되거나, R2는 적절하게는 이탈기, 예컨대 석신이미딜, HOBt 및 pfp이거나, R0 및 R1 은 함께 탄소수 3 내지 5의 사슬을 형성하고, 더욱 적절하게는 R0, R1 및 R2는 독립적으로, 모두가 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐로부터 선택되고, 더 더욱 바람직하게는 R0 및 R1은 C1-3-알킬, 특히 분지형 C1-3-알킬이고 R2는 할로겐으로 1회 이상치환되는 C1-3-알킬이거나 R2는 C2-3-알케닐이다.
적절하게는, 상기 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 화학식 (IIIa)의 아실화제 중 치환기 R0 및 R1은 하기와 같다:
RO 및 R1은 독립적으로, 모두가 C1-6-알콕시, C1-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-6-알킬, C2-6-알케닐 및 C2-6 -알키닐로부터 선택되고, 더욱 적절하게는 R0 및 R1는 독립적으로, 모두가 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐로부터 선택되고, 바람직하게는 R0 및 R1는 독립적으로, 모두가 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3 -알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐로부터 선택되고, 더욱 바람직하게는 R0 및 R1는 독립적으로 C1-4-알킬이고, 가장 바람직하게는 R0 및 R 1은 C1-3-알킬, 특히 분지형 C1-3-알킬, 적절하게는 프로필이다.
적절하게는, 상기 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 화학식 (IIIb)의 아실화제 중 치환기 R1 및 R2은 하기와 같다:
R1 및 R2은 독립적으로, 모두가 C1-6-알콕시, C1-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-6-알킬, C2-6-알케닐 및 C2-6 -알키닐로부터 선택되거나, R2는 또다른 이탈기, 예컨대 석신이미딜, HOBt 및 pfp이고, 더욱 적절하게는 R1 및 R2은 독립적으로, 모두가 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4 -알키닐로부터 선택되거나, R2는 또다른 이탈기, 예컨대 석신이미딜, HOBt 및 pfp이고, 바람직하게는 R1은 모두가 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐로부터 선택되고, R2는 할로겐으로 1회 이상치환되는 C1-4-알킬이고, R2는 C2-4-알케닐이거나, R2는 또다른 이탈기, 예컨대 석신이미딜, HOBt 및 pfp이고, 더욱 바람직하게는 R1은 모두가 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3 -알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐이고, R2는 할로겐으로 1회 이상치환되는 C1-3-알킬이거나, R2는 C2-3-알케닐이고, 더 더욱 바람직하게는 R1 은 C1-3-알킬이고, R2는 할로겐으로 1회 이상치환되는 C1-3-알킬이거나 R2는 C2-3-알케닐이고, 더욱 바람직하게는 R1은 C1-3-알킬, 특히 분지쇄 C1-3-알킬, 예컨대 메틸, 에틸 또는 프로필이고, R2는 C2-3-알케닐이다.
할로겐으로 1회 이상치환된 C1-3-알킬을 의미하는 R2는 2,2,2-트리클로로에틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸, 특히 2,2,2-트리플루오로에틸과 같은 기를 포함하는 적절한 이탈기이다.
본 발명의 특정 구현예에서, 상기와 같은 화학식 (IIIb)의 아실화제는 R2가 비닐인 화합물이다.
본 발명의 또다른 특정 구현예에 따르면, 화학식 (IIIb)의 아실화제는 R1이 프로필인 상기와 같은 화합물이다. 상기 특정 구현예는 본 발명의 바람직한 아실화제, 즉 비닐 부티레이트를 포함한다.
본 발명의 추가의 구현예에 따르면, 아실화제는 화학식 (IIIc)의 화합물이다.
적절하게는, 상기 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 화학식 (IIIc)의 화합물 중 치환기 R1은 하기와 같다:
R1은, 모두가 C1-6-알콕시, Cl-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, Cl-4-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-6-알킬, C2-6-알케닐 및 C2-6-알키닐이고, 더욱 적절하게는 R1은, 모두가 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐이고, 바람직하게는 R1은 모두가 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C 1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐이고, 더욱 바람직하게는 R1은 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐이고, 더욱 적절하게는 R1은 C1-3 -알킬, 특히 분지형 C1-3-알킬, 예컨대 메틸, 에틸 또는 프로필이다.
V는 적절하게는 클로로이다.
본 발명에 따라 사용되는 아실화제는 또한 화학식 Rl-N=C=O의 이소시아네이트이거나 화학식 Rl-N=C=S의 이소티오시아네이트일 수 있다.
따라서, 본 발명의 추가의 구현예에서, 아실화제는 화학식 Rl-N=C=O의 이소티오시아네이트이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 아실화제는 화학식 Rl-N=C=S의 이소시아네이트이다.
적절하게는, 상기의 임의의 치환기에서 정의된 바와 같은 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트 중 치환기 R1은 하기와 같다:
R1은, 모두가 C1-6-알콕시, Cl-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, Cl-4-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-6-알킬, C2-6-알케닐 또는 C2-6-알키닐이고, 더욱 적절하게는 R1은, 모두가 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 또는 C2-4-알키닐이고, 바람직하게는 R1은, 모두가 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐이고, 더욱 바람직하게는 R1은 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐이고, 더욱 적절하게는 R1 은 C1-3-알킬, 특히 분지형 C1-3-알킬, 예컨대 메틸, 에틸 또는 프로필이다.
본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (IV)의 라세믹 화합물의 선택적인 효소적 탈아실화 방법을 포함한다.
적절하게는, 사용되는 화학식 (IV)의 라세믹 화합물은, Y가 O, 또는 S인 화합물이다.
추가의 구현예에 따르면, 사용되는 화학식 (IV)의 라세믹 화합물은 Y가 O인 화합물이다.
본 발명의 특히 또다른 구현예에서, 사용되는 화학식 (IV)의 라세믹 화합물은 Y가 S인 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 사용되는 화학식 (IV)의 라세믹 화합물은 Y가 결합인 화합물이다.
적절하게는, 상기의 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 라세믹 화합물 (IV) 중 치환기 R1은 하기와 같다: 모두가 C1-10-알콕시, Cl-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, Cl-10-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C 2-10-알키닐, 더욱 적절하게는 R1은, 모두가 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이되고, 바람직하게는 R1은 C1-10-알킬, 바람직하게는 분지형 C1-10-알킬이고, 더욱 바람직하게는 R1은 분지형 C4-10-알킬이다.
본 발명에 따르면, 선택적인 효소적 아실화는 실질적으로 억제 가수분해( suppressing hydrolysis)의 조건 하에서 수행된다. 아실화 반응의 역반응인 가수분해는, 반응계 내에 물이 존재한다면 일어난다.
따라서, 선택적인 효소적 아실화는 바람직하게는 무수 유기 용매 또는 거의 무수인 유기 용매(효소는 일반적으로 활성을 띠기 위하여 약간의 물의 존재를 요구함) 내에서 수행된다. 하기의 실시예는 물의 첨가가 어떻게 전환에 효과를 미치는 지를 예시한다. 특히 반응계에서 허용되는 물의 비율은 당업자에 의해 결정될 수 있다.
아실화 반응을 위해 사용될 수 있는 유기 용매는, 이가 사용되는 효소를 불활성화시키지 않는 한 특별히 중요하지는 않다. 적절한 유기 용매는 탄화수소, 예컨대 헥산, 헵탄, 벤젠 및 톨루엔; 에테르, 예컨대 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, 테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, tert-부틸 메틸 에테르 및 디메톡시에탄; 케톤, 예컨대 아세톤, 디에틸 케톤, 부타논, 및 메틸 에틸 케톤; 에스테르, 예컨대 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 에틸 부티레이트, 비닐 부티레이트 및 에틸 벤조에이트; 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 및 1,1,1-트리클로로에탄; 2차 및 3차 알콜, 예컨대 tert-부탄올; 질소 함유 용매, 예컨대 디메틸포름아미드, 아세토아미드, 포름아미드, 아세토니트릴 및 프로피오니트릴; 및 비양성자성 극성 용매, 예컨대 디메틸설폭시드, N-메틸피롤리돈 및 헥사메틸포스포러스 트리아미드를 포함한다.
이들 중, 탄화수소, 예컨대 헥산, 헵탄, 벤젠 및 톨루엔, 에테르, 예컨대 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, 1,4-디옥산 및 tert-부틸 메틸 에테르 및 에스테르, 예컨대 비닐 부티레이트가 바람직하다. 어떤 효소에 대해서, 가장 바람직한 용매는 방향족 탄화수소, 예컨대 벤젠 또는 톨루엔 및 에테르, 가장 바람직하게는 톨루엔이며, 또다른 효소에 대해서는 가장 바람직한 용매는 에테르, 예컨대 1,4-디옥산이다(하기의 실시예 참조). 상기 용매는 단독으로 또는 둘 이상의 용매와 조합되어 사용될 수 있다.
용매 중 시약의 고농도는 라세믹 디올의 비-선택성 아실화를 초래할 수 있기 때문에, 화학식 (II)의 라세믹 디올 및 아실화제의 농도가 너무 높아서는 안된다. 라세믹 디올 및 아실화 시약의 적절한 농도는 각각 1.0 M 미만, 더욱 적절하게는 0.5 M 미만, 더 더욱 적절하게는 0.2 M 미만 또는 더 더욱 적절하게는 0.1 M 미만이다. 당업자는 라세믹 디올 및 아실화제의 최적의 농도를 결정할 수 있을 것이다.
선택적인 효소적 탈아실화는 바람직하게는 물 또는 물과 유기 용매의 혼합물 중에서, 적절하게는 완충제의 존재 하에 수행된다. 반응에서 사용될 수 있는 유기 용매는, 이가 사용되는 촉매를 불활성화시키지 않는 한 특별히 중요하지 않다. 적절한 유기 용매는 물과 친화성인 용매, 예컨대 알콜, 아세토니트릴, DMF, DMSO, 디옥산, DME 및 디글림이다. 당업자는 기타 적절한 용매를 식별할 수 있을 것이다. 당업자는 반응에서 사용되는 화학식 (IV)의 라세믹 화합물의 최적의 농도를 결정할 수 있을 것이다.
사용되는 촉매의 입체 선택성은, 유기 산 및/또는 유기 염기의 존재 하에 아실화 또는 탈아실화를 수행함에 의해 증가될 수 있다.
따라서, 본 발명은, 효소적 아실화 또는 효소적 탈아실화가 유기 염기 또는 유기 산 또는 이의 혼합물의 존재하에 수행되는 방법에 관한 것이다.
특정 구현예에서, 본 발명은 효소적 아실화 또는 효소적 탈아실화가 유기 산, 적절하게는 유기 카르복실산의 존재 하에 수행되는 방법에 관한 것이다.
추가의 구현예에서, 효소적 아실화는 유기 산, 적절하게는 유기 카르복실산의 존재 하에 수행된다.
상기 언급된 적절한 유기 산은 방향족 카르복실산 또는 지방족 카르복실산이다.
본 반응에서 사용될 수 있는 유기 산으로서, 알킬카르복실산, 시클로알킬카르복실산, 시클로알킬알킬카르복실산, 임의로 치환된 페닐-알킬카르복실산 및 임의로 치환된 페닐카르복실산이 언급될 수 있다. 적절한 지방족 카르복실산은 포름산, 아세트산, 프로피온산, n-부티르산, 이소-부티르산, 2-에틸부티르산, n-발레산, 이소-발레산, 피발린신, n-카프로산, 이소-카프로산, 데칸산, 크로톤산, 팔미트산, 시클로펜탄카르복실산, 시클로헥산카르복실산, 페닐-C1-4-알킬카르복실산, 예컨대 3-페닐프로피온산, 4-페닐부티르산, 옥살산, 말론산 및 타르타르산과 같은 카르복실산이다. 적절한 방향족 카르복실산은 예를 들어, 벤조산, p-클로로벤조산, p-니트로벤조산, p-메톡시벤조산, p-톨루익산, o-톨루익산, m-톨루익산, 나프톤산, 프탈산 및 테레프탈산, 살리실산, 히드로신남산과 같은 산을 포함한다.
따라서, 본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 효소의 입체 선택성을 개선하기 위하여 사용되는 유기 산은 n-프로피온산, 이소-프로피온산, n-부티르산, 이소-부티르산, 이소-발레산, 2-에틸부티르산, 크로톤산, 팔미트산, 시클로헥산카르복실산, 피발린산, 벤조산 및 p-톨루익산, 살리실산 및 3-페닐프로피온산으로부터 선택된다. 본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 사용되는 카르복실산은 피발린산이다.
사용되는 유기 산의 양은 특별히 제한되지는 않지만, 기질에 대한 몰비는 보통 0.1 내지 10, 바람직하게는 1.0 내지 3.0, 및 더욱 바람직하게는 1.0 내지 2.0 이다.
대안적으로, 3차 아민이, 단독으로 또는 상기 언급된 임의의 유기 산과 함께, 효소의 선택성을 개선하기 위하여 사용될 수 있다. 적절한 유기 염기로서, 트리에틸 아민, 피리딘, 4-디메틸아미노피리딘 및 피리딘이 언급될 수 있다. 유기 산 및 유기 염기의 적절한 배합물은 예를 들어 벤조산 및 피리딘이다.
사용되는 3차 아민의 양은 특별히 제한되지는 않지만, 기질에 대한 몰비는 보통 0.5 내지 3.0이고, 바람직하게는 0.5 내지 2.0이다.
본 발명에 따른 효소적 아실화 또는 탈아실화는 가수분해 효소, 예컨대 리파제, 에스테라제, 아실라제, 또는 프로테아제를 사용하여 수행된다.
따라서, 본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 효소적 아실화는 가수분해 효소, 예컨대 리파제, 에스테라제, 아실라제 또는 프로타에제에 의해 수행된다. 본 발명에 따른 유용한 효소는, 화학식 (II)의 라세믹 화합물의 1차 히드록실기의 R-선택성 아실화 또는 S-선택성 아실화를 수행할 수 있는 효소이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 효소적 탈아실화는 가수분해 효소, 예컨대 리파제, 에스테라제, 아실라제 또는 프로테아제에 의해 수행된다. 본 발명에 따라 유용한 효소는, 화학식 (IV)의 라세믹 화합물의 아실기의 R-선택성 탈아실화 또는 S-선택성 탈아실화를 수행할 수 있는 효소이다.
본 명세서에서 사용되는, 일반적이거나 특정 효소와 관련된 "가수분해 효소" 및 "효소"는 효소 자체 뿐만 아니라, 효소를 포함하는 배양 산물, 예컨대 세포체를 포함하는 배양액, 또는 배양 세포체, 및 배양 산물의 처리 산물(예를 들어, 조 추출물, 냉동 건조된 미생물 또는 세포, 아세톤 건조된 미생물 또는 세포, 상기 미생물 또는 세포의 분쇄 산물 등)을 의미한다.
부가적으로, "효소" 또는 "가수분해 효소"는 공지된 방법에 의하여 효소 자체로서 또는 세포체로서 고정될 수 있고, 고정된 형태로 사용될 수 있다. 고정은 당업자에게 공지된 방법, 예컨대 캐리어 결합(carrier bonding), 가교, 캡슐화 등을 포함하는 방법에 의하여 수행될 수 있다.
따라서, 본 발명의 하나의 구현예에서, 가수분해 효소는 고정된 효소 또는 가교된 효소 결정(Cross-Linked Enzyme Crystal, CLEC) 효소의 형태로 사용된다.
본 발명의 효소적 아실화는 캔디다 안타르티카(Candida antartica)로부터의 노보자임 435(Novozyme 435), 테모마이세스 라누기노서스(Thermomyces lanuginosus)로부터의 리포자임 TL IM(LipoZyme TL IM) 또는 지질단백질 리파제 슈도모나스 종( Lipoprotein Lipase pseudomonas sp.)를 사용하여 수행될 수 있다.
따라서, 본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 사용되는 효소는 슈도모나스 종 지질단백질 리파제(Pseudomonas sp. lipoprotein lipase), 캔디다 안타르티카 리파제 B(Candida antartica lipase B) 또는 테모마이세스 라누기노서스 리파제(Thermomyces lanuginosus lipase)이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 사용되는 효소는 슈도모나스 종 지질단백질 리파제 또는 캔디다 안타르티카 리파제 B이다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 언급된 효소 중 하나의 사용은, 효소를 포함하는 배양 산물, 예컨대 세포체를 포함하는 배양액, 또는 배양 세포체, 배양 산물의 처리된 산물 및 상기 효소/배양 산물의 임의의 고정된 형태의 사용을 포함한다.
본 발명에 따른 상기 구체적으로 언급된 효소의 사용은 또한, 본 발명에 따른 효소적 아실화 또는 탈아실화를 수행할 수 있는, 상기 구체적으로 언급된 효소의 돌연변이, 변형 또는 임의의 등가물의 사용을 포함한다. 이의 변형 또는 등가물은 슈도모나스, 캔디다 또는 테모마이세스의 각종 균주, 또는 임의의 기타 공급원으로부터 단리될 수 있거나, 이들은 효소의 아미노산 조성물의 변형을 야기하는, 상기 언급된 효소를 코딩하는 DNA의 돌연변이에 의해 제조될 수 있다. 상기 언급된 효소의 적절한 돌연변이 또는 변형은, 단일한 아미노산이 제거되거나 다른 아미노산으로 대체된 변형 및 돌연변이이고, 변형 또는 돌연변이의 적절한 아미노산 서열은 상기 언급된 효소와 60% 초과만큼 동일, 바람직하게는 80% 초과 또는 가장 바람직하게는 90% 초과만큼 동일하다.
따라서, 본 발명의 한 구현예에 따르면, 사용되는 효소는 슈도모나스 종 (Pseudomonas sp.) 리포프로틴 리파아제 또는 이의 변이체 또는 변형체 이다. 바람직하게는 슈도모나스 종 리포프로틴 리파아제가 사용된다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 사용되는 효소는 칸디다 안타르티카 (Candida antartica) 리파아제 B 또는 이의 변이체 또는 변형체이다. 바람직하게는, 사용되는 효소는 칸디다 안타르티카 리파아제 B 이다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 효소는 Novozyme435 (Novozyme A/S 사로부터 시판중인, 아크릴계 수지 상에 고정된 칸디다 안타르티카 리파아제 B) 이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 사용되는 효소는 써모마이세스 라누기노수스 (Thermomyces lanuginosus) 리파아제 또는 이의 변이체 또는 변형체이다. 바람직하게는, 사용되는 효소는 써모마이세스 라누기노수스 리파아제이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 사용되는 효소는 또한 Novozyme A/S 사로부터 시판중인 LiopozymeTM TL IM 이다.
효소적 아실화/탈아실화에 바람직한 반응 조건은, 사용되는 특정 효소에 따라 고정되는지 아닌지 등이 다르다.
반응에 적합한 온도는 0-80℃, 보다 바람직하게는 20-60℃, 더욱 바람직하게는 30-50℃ 이다.
사용되는 효소의 양은 특별히 제한되지는 않으나, 기질에 대한 중량비로서, 통상 0.01-1.0, 바람직하게는 0.02-0.5 및 보다 바람직하게는 0.02-0.3 이다.
반응은 회분식 공정으로 수행되거나 연속 공정으로 수행될 수 있다. 효소는 수회에 걸쳐 반복적으로 또는 연속적으로 사용될 수 있다. 반응 시간은 특별히 제한되지는 않으며, 사용되는 효소 및 규모 및 제조 방법 유형 (회분식 또는 연속식) 에 따라 달라질 것이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 (IV) 을 갖는 화합물의 S- 또는 R-거울상이성질체, 또는 이의 염에 관한 것이다:
[화학식 (IV)]
(식 중, R, Hal, R3, W, 점선 및 Z 는 상기 정의한 바와 같다).
본 발명의 한 구현에에 따르면, 상기 광학 활성 아실 유도체는 S-거울상이성질체이다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 광학 활성 아실 유도체는 R-거울상이성질체이다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는 R 이 할로겐 또는 시아노이고, 바람직하게는 R 이 시아노인 화합물이다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는 Hal 이 플루오로인 화합물이다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는 점선이 단일 결합을 나타내는 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는, Z 가 디메틸아미노메틸이거나 디메티아미노메틸로 전환될 수 있는 기이고, 보다 적합한 Z 는 디메틸아미노메틸이고, 다른 치환기들은 상기 정의한 바와 같은 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는, Z 가 디메틸아미노메틸이고, Hal 이 플루오로이고, 점선이 단일 결합을 나타내고, R 이 시아노 또는 할로겐이고, 적합하게는 시아노인 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는, Y 가 O 또는 S 이고, 바람직하게는 Y 가 O 이고 다른 치환기들은 상기 정의한 바와 같은 화합물이다. 본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는 Y 가 S 이고 다른 치환기들은 상기 정의한 바와 같은 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는, Y 가 결합이고 다른 치환기들은 상기 정의한 바와 같은 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 R- 또는 S-거울상이성질체는, Y 가 NH 이고 다른 치환기들은 상기 정의한 바와 같은 화합물이다.
상기 구현에 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 적합한 R- 또는 S-거울상이성질체는, R1 이 모두 임의로 C1-6-알콕시, C1-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-6-알킬, C2-6-알케닐 또는 C2-6-알키닐이고, 바람직하게는 R1 이 모두 임의로 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐이고, 가장 바람직한 R1 은 C1-3-알킬, 특히 비분지된 C1-3-알킬인 화합물이다.
본 발명의 다른 적합한 구현예에 따르면, 상기 구현에 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 적합한 R- 또는 S-거울상이성질체는 R1 이 하기와 같은 화합물이고: 모두 임의로 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 보다 바람직한 R1 은 모두 임의로 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로 및 시아노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 바람직하게는 R1 은 C1-10-알킬, 바람직하게는 비분지된 C1-10-알킬이고 보다 바람직한 R1 은 비분지된 C4-10 인 화합물이다.
아실화 반응 또는 탈아실화 반응의 완료 후, 화학식 (II) 로 나타내는 디올 유도체의 거울상이성질체는 화학식 (IV) 의 반대 거울상이성질체와의 혼합물로서 수득된다. 이어서, 이 반응 혼합물은 임의로 효소로부터 분리된다.
높은 화학적 순도를 갖는 목적한 화학식 (II) 및/또는 (IV) 의 거울상이성질체를 수득하기 위해서는, 화학식 (IV) 및 (II) 의 반대 거울상이성질체를 각각 효율적인 방식으로 분리해낼 필요가 있다. 그러나, 화학식 (IV) 의 아실 유도체의 구조는 화학식 (II) 의 디올의 구조와 매우 유사하기 때문에, 일반적으로 공지된 방법에 의해 거울상이성질체를 효율적으로 분리하기는 어렵다.
본 발명자들이 열심히 연구해온 결과, 반응 혼합물을 산의 존재 하에 유기 용매 및 물을 함유하는 혼합 용매로 처리할 경우, 산과의 염 형태인 화학식 (II) 의 화합물의 반대 거울상이성질체는 수성 층 내로 효율적으로 분류되고 산과의 염 형태인 화학식 (IV) 의 화합물의 반대 거울상이성질체는 유기 층 내로 효율적으로 분류된다는 것을 발견해냈다.
따라서, 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 화학식 (IV) 의 화합물 및 화학식 (II) 의 화합물을 함유하는 혼합물로부터, 하기 화학식을 갖는 아실 유도체:
[화학식 (IV)]
[식 중, R 은 시아노이거나 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, Hal 은 할로겐이고, 점선은 이중 또는 단일 결합이고 Z 는 기 -CH2-N(R'R'') (식 중, R' 및 R'' 은 C1-6-알킬이거나, R' 및 R'' 은 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성한다) 이거나, Z 는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이고, W 는 O 또는 S 이고 R3 은 -Y-R1 (식 중, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이고 R 1 은 모두 임의로 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이거나, R1 은 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 하나가 C1-10 -알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는 아릴이다)]
또는 이의 염 및/또는 하기 화학식의 디올 또는 이의 염:
[화학식 (II)]
(식 중, R, Hal, 점선 및 Z 는 상기 정의한 바와 같다)
을 단리 및 제조하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기를 포함한다:
a) 화학식 (IV) 의 아실 또는 화학식 (II) 의 디올을 함유하는 상기 혼합물을 산의 존재 하에서 물과 유기 용매의 혼합물 중에 처리하는 것;
b) 화학식 (II) 의 디올을 상기 산의 염으로서 함유하는 수성 상을 유기 상으로부터의 분리시켜 화학식 (IV) 의 아실 유도체를 상기 산의 염으로서 함유하는 유기 상을 수득하는 것;
임의로 염기로서 또는 이의 염으로서의 화학식 (II) 의 화합물 및 임의로 염기로서 또는 이의 염으로서의 화학식 (IV) 의 화합물을 분리해내는 것.
본 발명의 한 구현예에 따르면, R 은 할로겐 또는 시아노이고, 바람직하게는 상기 단리 및 정제 방법에서는 시아노이다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 단리 및 정제 방법에서는 Hal 은 플루오로할로겐 또는 시아노이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 점선은 단일 결합을 나타낸다.
본 발명의 다른 구현예에서, Z 는 디메틸아미노메틸이거나 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이다. 적합한 Z 는 디메틸아미노메틸이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, Hal 은 플루오로이고, Z 는 디메틸아미노메틸이고, 점선은 단일 결합이고 R 은 시아노 또는 할로겐, 바람직하게는 시아노이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV) 의 화합물은 Y 가 O, 또는 S 이고, 바람직하게는 Y 가 O 이고 다른 치환기들은 상기 정의된 바와 같은 화합물이다. 본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서 화학식 (IV) 의 화합물은 Y 가 S 인 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV) 의 화합물은 Y 가 O, 또는 S 이고, 바람직하게는 Y 가 O 이고 다른 치환기들은 상기 정의된 바와 같은 화합물이다. 본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서 화학식 (IV) 의 화합물은 Y 가 S 인 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV) 의 화합물은 Y 가 결합이고 다른 치환기들은 상기 정의된 바와 같은 화합물이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV) 의 화합물은 Y 가 NH 이고 다른 치환기들은 상기 정의된 바와 같은 화합물이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV) 의 화합물은, R1 이 모두 임의로 C1-6-알콕시, C1-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-6-알킬, C2-6-알케닐 또는 C2-6-알키닐이고, 보다 바람직한 R1 은 모두 임의로 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-4-알킬, C2-4-알케닐 또는 C2-4-알키닐이고, 바람직하게는 R1 이 모두 임의로 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐이고, 가장 바람직한 R1 은 C1-3-알킬, 특히 비분지된 C1-3-알킬인 화합물이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV) 의 화합물은, R1 이 하기와 같고: 모두 임의로 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 보다 적합한 R1 은 모두 임의로 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로 및 시아노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 바람직하게는 R1 은 C1-10-알킬, 바람직하게는 비분지된 C1-10-알킬이고 보다 바람직한 R1 은 비분지된 C4-10 인 화합물이다.
상기 단리 및 정제 방법에 의해, 산의 존재 하에서 화학식 (II) 의 거울상이성질체 및 화학식 (IV) 의 반대 거울상이성질체, 반응 용매 등을 포함하는 혼합물을 유기 용매 및 물로 처리함으로써, 화학식 (II) 을 갖는 화합물의 R- 및 S- 거울상이성질체의 염이 선택적으로 수성층으로 분리될 수 있고 화학식 (IV) 의 화합물의 거울상이성질체와 산과의 염은 선택적으로 유기층으로 분리될 수 있다. 이 경우, 화학식 (IV) 의 거울상이성질체의 염 및 화학식 (II) 의 거울상이성질체의 염은 목적한 거울상이성질체를 거의 손실하지 않고 분리될 수 있다.
상기 단리 및 정제 방법의 한 구현예에 따르면, 화학식 (IV) 의 화합물의 S-거울상이성질체는 화학식 (II) 의 화합물의 R-거울상이성질체로부터 단리된다.
상기 단리 및 정제 방법의 한 구현예에 따르면, 화학식 (II) 의 디올의 S-거울상이성질체는 화학식 (IV) 의 아실 유도체의 R-거울상이성질체로부터 단리된다.
사용되는 물의 양은 화학식 (II) 의 화합물 및 물 간의 비로서, 1:2 내지 1:100, 바람직하게는 1:5 내지 1:50 이다. 또한, 물로 추출하기 전에, 반응 용매는 증발되어 이의 양이 감소될 수 있거나 다른 유기 용매로 치환될 수 있다.
상기 단리 및 정제 방법에 사용될 수 있는 산은 특별히 제한되지는 않지만, 예를 들어, 미네랄산, 예컨대 염산, 황산 및 인산; 유기산, 특히 지방족 카르복실산, 예컨대 포름산, 아세트산, 프로피온산, n-부티르산, iso-부티르산, n-발레르산, iso-발레르산, 피발산, n-카프로산, iso-카프로산, 시클로펜탄카르복실산, 시클로헥산카르복실산, 옥살산, 말론산 및 타르타르산으로 나타내는 카르복실산; 또는 방향족 카르복실산, 예컨대 벤조산, p-클로로벤조산, p-니트로벤조산, p-메톡시벤조산, p-톨루산, o-톨루산, m-톨루산, 나프토산, 프탈산 및 테레프탈산이 언급될 수 있다. 이들 중에서, 유기산, 특히 카르복실산, 예컨대 n-부티레이트, iso-발레레이트, 시클로헥산카르복실산, 피발산, 벤조산 및 o-톨루산이 바람직하고, 피발산이 특히 바람직하다. 말할 것도 없이, 상기 산들은 단독으로 또는 두 가지 이상의 종의 조합물로 사용될 수 있다. 사용되는 산의 양은 특별히 제한되지는 않으나, 화학식 (IV) 및 (II) 의 화합물 및 산의 합의 몰비는 통상 1:1 내지 1:5, 바람직하게는 1:1 내지 1:3 이다.
본 단리 및 정제 단계에 이용되는 산은 본 발명에 따라서 아실화 또는 탈아실화 반응에 이용되는 유기산과 동일하거나 상이할 것이다.
단리 및 정제 단계에 이용될 유기 용매로서, 예를 들어 헥산, 헵탄, 벤젠 및 톨루엔과 같은 탄화수소 ; 디에틸 에테르, 테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, tert-부틸 메틸 에테르 및 디메톡시에탄과 같은 에테르 ; 아세톤, 디에틸 케톤 및 메틸 에틸 케톤과 같은 케톤 ; 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 에틸 부티레이트 및 에틸 벤조에이트와 같은 에스테르 ; 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 및 1,1,1-트리클로로에탄과 같은 할로겐화된 탄화수소가 언급될 것이다. 상기 중에서, 헥산 및 헵탄과 같은 지방족 탄화수소 및 벤젠 및 톨루엔과 같은 방향족 탄화수소가 바람직하다. 가장 바람직한 것은 방향족 탄화수소이며, 가장 바람직한 것은 톨루엔이다. 상기 용매는 단독으로 이용되거나 2 이상의 용매와 공동으로 이용될 것이다.
단리 및 정제 단계의 온도는 0 내지 80℃ 가 바람직하며, 더 바람직하게는 10 내지 40℃ 이며 가장 바람직하게는 20 내지 30℃ 이다.
하기에서, 단리 및 정제를 위한 상기 방법에 따라서 화학식 (II) 및 (IV) 의 화합물의 염의 단리, 산과 함께 화학식 (IV) 의 화합물의 염의 수성층 내에서 부분적으로 혼합되는 화학식 (II) 의 화합물의 최소량 등은 유기 용매로 수성층을 세척함으로써 충분히 제거될 수 있다.
화학식 (II) 의 디올 염은 상기 염의 수용액으로서 사용될 수 있고, 필요한 경우, 다른 용매에서의 용액 또는 농축, 용매 치환 등의 작업에서 수득되는 농축물로서 사용될 수 있다. 또한, 이는 결정화 등의 작업에 의해 수득되는 결정으로서 사용될 수 있다. 그러나, 화학식 (II) 의 디올이 하기의 조작에 의해 수득된 자유 디올 형태로서 사용되는 것이 일반적이다: 수성 층을 일반 염기, 예컨대 수산화나트륨 또는 수산화칼륨으로 처리하여 수성 층의 pH 를 9 이상, 바람직하게는 11 이상으로 조절한 후, 화학식 (II)의 디올의 자유 아민 형태를 유기 용매를 이용하여 추출한 다음, 그 추출물을 세척 및 농축시킴으로써 화학식 (II)의 디올 및 유기 용매 및/또는 이의 농축물을 함유한 혼합물을 수득한다. 일련의 단리 및 정제 방법으로 수득한 화학식 (II)의 디올의 화학적 순도는 보통 95 % 이상, 바람직하게는 97 % 이상, 더욱 바람직하게는 99 % 이상, 가장 바람직하게는 99.5 % 이상이다.
반면, 상기 작업에 의해 수득한 화학식 (IV)의 화합물은 생성물의 화학적 순도를 향상시키기 위해 수성상으로 세척할 수 있다. 화학식 (IV)의 화합물은, 상기 작업에 의해 수득한 화학식 (IV)의 화합물의 암모늄 염을 염기로 처리함으로써 자유 아민 형태로 수득할 수 있다. 일련의 단리 및 정제 방법에 의해 수득한 화학식 (IV)의 디올의 화학적 순도는 보통 95 % 이상, 바람직하게는 97 % 이상, 더욱 바람직하게는 99 % 이상, 가장 바람직하게는 99.5 % 이상이다.
상기 화학식 (II) 및 (IV) 의 거울상이성질체를 분리한 후 수득한 생성물의 광학적 순도는 추가적 공정을 거치기 전에 향상될 수 있다. 광학적 순도의 향상은 WO 03/011278 에 기재된 크로마토그래피에 의해 또는 미국 특허 제4,943,590호에 기재된 바와 같이 광학적 활성 산으로 부분입체 이성질의 에스테르 또는 염을 결정화함으로써 획득할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따라, 상기 단리 및 정제 방법에 의해 분리되는 화학식 (II)의 화합물 및 화학식 (IV)의 화합물의 혼합물을, 선택적 아실화 반응 및 다른 구현예에서 본 발명에 따른 선택적 탈아실화 반응에 의해 수득하였다.
본 발명은 또한 다른 거울상이성질체의 화학식 (IV)의 아실 유도체로부터 화학식 (II)의 R- 또는 S-디올을 분리하는 다른 신규한 방법에 관한 것으로서, 그에 의해 목적하는 화합물을 단리 및 정제할 수 있다.
상기 다른 단리 및 정제 방법에 따라, 하기 화학식 (IV)의 아실 유도체 또는 이의 염:
[식 중, R 은 시아노 또는 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, Hal 은 할로겐이고, 점선은 이중 또는 단일 결합을 나타내고, Z 은 -CH2-N(R'R")기 {이때, R' 및 R" 은 C1-6-알킬이거나, 또는 R' 및 R" 은 서로 결합하여 이들이 결합된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성함} 이거나, Z 은 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이고, W 는 O 또는 S 이며, R3 은 -Y-R1 {이때,Y 는 결합, O, S 또는 NH 이고, R1 은 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐 (모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이거나 또는 R1 은 아릴 (여기서, 임의의 아릴 및 헤테로아릴기는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이다} 이다]
및/또는 하기 화학식 (II)의 디올 또는 이의 염:
을, 화학식 (IV) 및 화학식 (II)의 화합물을 함유한 혼합물로부터 하기의 단계를 포함한 방법에 의해 분리한다:
a) 화학식 (IV) 및 화학식 (II)의 디올을 함유한 상기 혼합물을 물, 양성자성 유기 용매 및 비양성자성 유기 용매의 혼합물에 처리하는 단계;
b) 화학식 (II)의 디올을 함유한 수성상을 유기상으로부터 분리하여, 화학식 (IV)의 화합물을 함유한 유기상을 수득하는 단계;
임의로는 화학식 (II) 및/또는 (IV)의 디올을 염기로서 분리하는 단계 및 임의로는 화학식 (II) 및/또는 (IV)의 화합물을 이의 염으로 전환하는 단계.
임의의 상기 단리된 상 (수성 및 유기) 을 추가로 유기 또는 수성상으로 각각 1회 이상세척하여, 생성물의 화학적 순도를 향상시킬 수 있다.
상기 단리 및 정제 방법의 한 가지 구현예에 따라, 화학식 (II)의 화합물의 S-디올을 화학식 (IV)의 화합물의 R-거울상이성질체로부터 분리한다.
상기 단리 및 정제 방법의 다른 구현예에 따라, 화학식 (IV)의 화합물의 S-거울상이성질체를 화학식 (II)의 화합물의 R-거울상이성질체로부터 분리한다.
본 발명의 한 가지 구현예에 따르면, R 은 할로겐 또는 시아노, 바람직하게는 상기 단리 및 정제 방법에 있어서 시아노이다.
본 발명의 한 가지 구현예에 따르면, 상기 단리 및 정제 방법에 있어서 Hal 은 플루오로이다.
바람직한 구현예에 있어서, 점선은 단일 결합을 나타낸다.
본 발명의 다른 구현예에 있어서, Z 는 디메틸아미노메틸 또는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이다. 적절한 Z 는 디메틸아미노메틸이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, Hal 은 플루오로, Z 는 디메틸아미노메틸이며, 점선은 단일 결합이고, R 은 시아노 또는 할로겐, 바람직하게는 시아노이다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에 있어서 화학식 (IV)의 화합물은, Y 가 O, 또는 S, 바람직하게 Y 가 O 이고, 기타 치환기는 상기 정의한 바와 같은 것인 화합물이다. 본 발명의 다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에 있어서 화학식 (IV)의 화합물은, Y 가 S 인 화합물이다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV)의 화합물은, Y 가 결합이고 기타 치환기가 상기 정의한 바와 같은 것인 화합물이다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에서의 화학식 (IV)의 화합물은, Y 가 NH 이고 기타 치환기가 상기 정의한 바와 같은 것인 화합물이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에 있어서 화학식 (IV)의 화합물은, R1 이 C1-6-알킬, C2-6-알케닐 또는 C2-6-알키닐 (모두 C1-6-알콕시, C1-6-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노에서 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이고, 더욱 바람직한 R1 은 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 또는 C2-4-알키닐 (모두 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노에서 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이며, 바람직하게 R1 은 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐 (모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이며, 가장 바람직한 R1 은 C1-3-알킬, 특히 비분지 C1-3-알킬인 화합물이다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 상기 단리 및 정제 방법에 있어서 화학식 (IV)의 화합물은, R1 이 하기와 같은 화합물이다: C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐 (모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음), 더욱 적절한 R1 은 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐 (모두 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로 및 시아노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음), 바람직하게 R1 은 C1-10-알킬, 바람직하게는 비분지 C1-10-알킬, 더욱 바람직한 R1 은 비분지 C4-10-알킬이다.
단리 및 정제 단계에서 사용될 수 있는 양성자성 유기 용매로서, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 1-부탄올, 2-부탄올 및 tert-부탄올과 같은 알코올을 언급할 수 있다. 상기 용매는 단독으로 또는 2 이상의 종 (species) 의 조합으로 사용될 수 있다.
단리 및 정제 단계에서 사용될 수 있는 비양성자성 유기 용매로서, 예를 들어 헥산, 헵탄, 벤젠 및 톨루엔과 같은 탄화수소; 디에틸 에테르, tert-부틸 메틸 에테르 및 디메톡시에탄과 같은 에테르; 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 및 1,1,1-트리클로로에탄과 같은 할로겐화 탄화수소를 언급할 수 있다. 이 중, 바람직한 것은 헥산, 헵탄, 벤젠 및 톨루엔과 같은 탄화수소이고, 더욱 바람직한 것은 헵탄이다. 상기 용매는 단독으로 2 이상의 종의 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 특정한 구현예에 따라, 상기 단리 및 정제 방법에서 사용된 화학식 (IV)의 화합물 및 화학식 (II)의 디올의 혼합물을, 본 발명에 따른 효소에 의한 아실화 (enzymatic acylation), 다른 구현예에서 본 발명에 따른 효소에 의한 탈아실화에 의해 제조하였다.
상기한 바와 같은 화학식 (II) 및 (IV)의 거울상이성질체의 분리 이후 수득된 생성물의 광학적 순도는 추가적 처리 공정 이전에 향상될 필요가 있을 수 있다. 광학적 순도의 향상은, WO 03/006449 에 기재된 크로마토그래피에 의해 또는 미국 특허 제4,943,590호에 기재된 바와 같이 광학적 활성 산으로 부분입체 이성질의 에스테르 또는 염을 결정화함으로써 획득할 수 있다.
또한 본 발명은 하기 화학식 (I)의 에스시탈로프람 (escitalopram):
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조 방법에 관한 것으로서, 그 방법은 하기 화학식 (IIs)의 S-거울상이성질체 또는 이의 염:
[식 중, R 은 시아노 또는 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, 점선은 이중 또는 단일 결합을 나타내고, Z 는 디메틸아미노메틸기 또는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이며, Hal 은 할로겐이다]
또는 하기 화학식 (IVs)의 아실화된 디올의 S-거울상이성질체 또는 이의 염:
[식 중, R, Z, 점선 및 Hal 은 상기 정의한 바와 같고, W 는 O 또는 S 이고, R3 은 -Y-R1 {이때, R1 은 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐 (모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이거나 또는 R1 은 아릴 (여기서, 임의의 아릴 및 헤테로아릴기는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있음) 이며, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이다} 이다]
을, 한 구현예에서 상기 임의의 구현예에서 정의한 바와 같이 본 발명에 따른 선택적인 효소적 아실화 방법에 의해 및 다른 구현예에서 상기 임의의 구현예에서 정의한 바와 같이 선택적인 효소적 탈아실화 방법에 의해 제조하는 단계, 임의로 그 이후, (어느 순서로든 가능) R 기를 시아노기로 전환시키는 단계, 점선으로 나타낸 이중 결합을 환원시키는 단계, Z 기를 디메틸아미노메틸기로 전환시키는 단계 및/또는 Hal 기를 플루오로기로 전환시키는 단계 및 화학식 (IIs) 또는 (IVs)의 S-거울상이성질체 또는 이의 치환성 에스테르 유도체를 염기성 조건하에서 고리 폐쇄(ring closure)시키는 단계로 하기 화학식 (Ⅴ)의 화합물을 형성시키고:
그 이후, (어느 순서로든 가능) R 이 시아노가 아닌 경우, R 기를 시아노기로 전환시키는 단계, 점선이 이중 결합을 나타내는 경우, 이를 단일 결합으로 환원시키는 단계, Z 가 디메틸아미노메틸이 아닌 경우, Z 기를 디메틸아미노메틸기로 전환시키는 단계 및 Hal 이 플루오로가 아닌 겨우, Hal 을 플루오로기로 전환시키는 단계, 그 다음, 에스시탈로프람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 단리시키는 단계를 포함하는 방법이다.
본 발명의 한 가지 구현예에서, 에스시탈로프람의 제조를 위해 사용된 상기 화학식 (IIs)의 S-거울상이성질체 또는 화학식 (IVs)의 S-거울상이성질체를, 고리 형성 이전에 각각 화학식 (IV) 및 (II)의 R-거울상이성질체로부터 단리시킨다.
상기 에스시탈로프람의 제조 방법의 한 가지 구현예에 따라, 효소적 아실화에 의해 수득한 화학식 (II)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체 및 화학식 (IV)의 화합물의 반대 거울상이성질체의 혼합물을, 상기 신규한 단리 및 정제 방법에 따른 단리 및 정체 방법에 의해 서로 분리하였다. 다른 구현예에 따라, 상기 혼합물을 다른 상기 신규한 단리 및 정제 방법에 의해 서로 분리하였다.
상기 에스시탈로프람의 제조 방법의 한 가지 구현예에 따라, 효소적 탈아실화에 의해 수득한 화학식 (II)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체 및 화학식 (IV)의 화합물의 반대 거울상이성질체의 혼합물을, 상기 신규한 단리 및 정제 방법에 따른 단리 및 정체 방법에 의해 서로 분리하였다. 다른 구현예에 따라, 상기 혼합물을 다른 상기 신규한 단리 및 정제 방법에 의해 서로 분리하였다.
본 발명의 또다른 구현예에 따라서, 상기의 화학식 (IIs) 의 S-광학이성질체 또는 에스시탈로프람의 제조에 이용된 화학식 (IVs)의 S-광학이성질체는 폐환 전에, 각각 화학식 (IV) 및 (II) 의 R-광학이성질체로부터 분리된다.
상기에서 언급한 바와 같이, R 기는 시아노 또는 시아노기로 전환될 임의의 다른 기를 의미한다.
시아노기로 전환될 기는 염소, 브로모, 요도 또는 불소와 같은 할로겐을 포함하며, 바람직하게는 염소 또는 브로모를 포함한다.
시아노로 전환될 다른 기는 CF3-(CF2)n-SO2-O- (여기서 n 은 0 - 8 ), -OH, -CHO, -CH2OH, -CH2NH2, -CH2NO2, -CH2Cl, -CH2Br, -CH3, -NHR5, -CHNOH, -COOR6, -CONR6R7 을 포함하는데, 여기서 R5 는 수소 또는 C1-6 알킬카르보닐이며, R6 및 R7 은 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 아릴-C1-6 알킬 또는 아릴 및 하기 화학식 (Ⅶ) :
(여기서, Z 은 O 또는 S 이며; R8 - R9 은 각각 수소 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되거나 R8 및 R9 은 함께 C2-5 알킬렌 사슬을 형성하여 그로 인해 스피로 링을 형성하며 ; R10 은 수소 및 C1-6 알킬로부터 선택되며, R11 은 수소, C1-6 알킬, 카르복시기 또는 전구체기로부터 선택되거나 R10 및 R11 은 함께 C2-5 알킬렌 사슬을 형성하여 그로 인해 스피로 링을 형성함) 의 기로부터 선택된다.
R 이 할로겐, 특히 브로모 또는 염소일 때, 시아노로의 전환은 US 4,136,193, WO 00/13648, WO 00/11926 및 WO 01/02383 에 기술된 바와 같이 수행될 것이다.
US 4,136,193 에 따라서 브로모기의 시아노기로의 전환은 CuCN 과 반응함으로써 수행된다.
WO 00/13648 및 WO 00/11926 은 Pd 또는 Ni 촉매제의 존재 시 시안화물 소스와 함께 시안화에 의한 할로겐 또는 트리플레이트기의 시아노기로의 전환을 기술하고 있다.
브로모 화합물의 상응하는 시아노 유도체로의 전환을 위한 다른 방법은 브로모 화합물을 마그네슘과 반응시켜 그리냐르 시약을 형성하고, 포름아미드와 반응시켜 알데히드를 형성하는 것과 관련되어 있다. 알데히드는 탈수 및 산화에 의해 시아노기로 전환되는 옥심 및 히드라존으로 전환된다.
대체로, 브로모 화합물은 마그네슘과 반응하여 그리냐르 시약을 형성하고, 이어서 이탈기에 결합된 CN 기를 함유하는 화합물과 반응한다.
상기 두 과정의 상세한 설명은 WO 01/02383 에서 보여질 것이다.
R 기가 -CHO 인 화합물은 WO 99/00210 에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 R 이 시아노인 상응하는 화합물로 전환될 것이다.
R 기가 NHR12 (여기서, R12 는 수소 또는 알킬카르보닐임) 인 화합물은 WO 98/19512 에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 R 기가 시아노인 상응하는 화합물로 전환될 것이다.
R이 -COOR6 기인 화합물은 상응하는 산 클로라이드 또는 그것의 에스테르를 통해 아미드로 전환되고 아미드가 탈수됨으로써 R 이 시아노인 상응하는 화합물로 전환될 것이다. WO 01/68632.
대체로, R 이 -COOH 인 화합물은 클로로술포닐 이소시아네이트와 반응하여 니트릴을 형성하거나, WO 00/44738 에 기술된 것처럼 탈수제 및 술폰아미드로 처리될 것이다.
R 기가 -CONR13R14 (여기서, R13 및 R14 는 수소, 임의로 치환된 알킬, 아랄킬 또는 아릴로부터 선택됨) 인 화합물은 WO 98/00081 및 WO 98/19511 에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 상응하는 시아노 화합물로 전환될 것이다.
R 기가 화학식 (Ⅶ) 의 기인 화합물은 WO 00/23431 에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 상응하는 시아노 화합물로 전환될 것이다.
R 기가 0H, -CH2OH, -CH2NH2, -CH2NO2, -CH2 Cl, -CH2Br, -CH3 또는 상기 기의 임의의 것인 화합물은 WO 01/68632 에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 상응하는 시아노 화합물로 전환될 것이다.
화학식 (II) 의 라세믹 화합물은 상기 언급된 특허에서 기술된 방법 또는 미국 특허 번호 4.136.193 또는 EP 171 943 에 기술된 더블 그리냐르 반응 또는 유사한 방법에 의해 제조될 것이다. 화학식 (IV) 의 라세믹 화합물은 상기 화학식 (Ⅲa), (Ⅲb), (Ⅲc), R1-N=C=O 및 R1-N=C=S 에 의해 정의된 것과 같은 무수물, 에스테르, 카르보네이트, 이소시아네이트 또는 이소티오시아네이트를 이용하여 비-선택적 아실화에 의해 화학식 (II) 의 라세믹 화합물로부터 제조될 것이다.
일부 경우에서, 화학식 (II) 의 라세믹 화합물은 황산염과 같은 산첨가염의 형태로 이용가능할 것이며, 이 경우 화학식 (II) 의 자유 염기는 염을 혼합물 또는 물 및 유기 용매 내에서 염기로 처리함으로써 수득되어 화학식 (II) 를 유기상으로 이동시킬 것이다.
바람직하게는, R 은 화학식 (II), (IIs), (IIr), (IV), (IVs), (IVr) 및 (Ⅴ) 의 화합물 내의 시아노이다. R 이 시아노가 아니면, R 기의 시아노기로의 전환은 폐환 후에 적합하게 수행되어 화학식 (Ⅴ)의 화합물을 형성한다.
바람직하게는, Hal 은 화학식 (II), (IIs), (IIr), (IV), (IVs), (IVr) 및 (Ⅴ) 의 화합물 내의 불소이다. Hal 이 불소가 아니면, Hal 기의 불소로의 전환은 폐환 후에 적합하게 수행되어 화학식 (Ⅴ)의 화합물을 형성한다. 상기 전환을 수행하는 과정은 Speciality Chemicals Magazine, April 2003, 36 - 38 쪽에 기술되어 있다.
디메틸아미노메틸로 전환될 Z 기는 -CH2-L, -CH2-NO2, -MgHal, 시아노, 알데히드, -CH2-O-Pg, -CH2-NPg1Pg2, -CH2-NMePg1 , -CH2-NHCH3, -CH2-NH2, -CO-N(CH3)2 , -CH(A1R12)(A1R13), -(A1R14)(A2 R15)(A3R16), -COOR17, -CH2-CO-NH2 , -CH=CH-R18 또는 -CONHR19 (여기서, Pg 는 알콜기에 대한 보호기이며, Pg1 및 Pg2 는 아미노기에 대한 보호기이며, R12 및 R13 은 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐 및 임의로 알킬 치환된 아릴 또는 아랄킬기로부터 독립적으로 선택되거나 R12 및 R13 은 함께 탄소수 2 내지 4 의 사슬을 형성하며, R14 - R18 의 각각은 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐 및 임의로 C1-6 알킬 치환된 아릴 또는 아릴-C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되며, R 19 는 수소 또는 메틸이며, A1, A2 및 A3 는 O 및 S 로부터 선택되며 ; L 은 할로겐 또는 -O-SO2-A 와 같은 이탈기이며, 여기서, A 는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C 2-6 알키닐 또는 임의로 C1-6 알킬 치환된 아릴 또는 아릴-C1-6 알킬임) 와 같은 기이다.
본 발명의 하나의 구현예에서, Z 은 화학식 (II), (IIs), (IIr), (IV), (IVs), (IVr) 및 (Ⅴ) 의 화합물 내에 있는 디메틸아미노메틸, -CH2-L, -CH2-NPg1Pg2, -CH2-NMePg1, -CH2-NHCH3, -CH2-NH2, -CO-N(CH3)2, 알데히드 또는 -COOR17 이다.
Z 이 -CH2-O-Pg 인 화합물은 WO 01/43525, WO 01/51478 또는 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사한 방법으로, 보호기의 제거로 인해 Z 이 디메틸아미노메틸인 상응하는 화합물로 전환되어 상응하는 알콜을 형성하며 그 후 알콜기의 가능한 이탈기로의 전환 및 생성 화합물을 하기
a) 디메틸아민 또는 그것의 염
b) 메틸아민으로 메틸화 또는 환원성 아미노화, 또는
c) 아지드와 함께 환원되어 상응하는 아민을 형성하며 그 후 메틸화 또는 환원성 아미노화 반응시킬 것이다.
Z 이 -CH2-L 인 화합물 (여기서, L 은 이탈기임) 은 같은 방식으로 디메틸아미노메틸기로 전환될 것이다.
Z 이 -CO-N(CH3)2 및 -CO-NHR19 인 화합물 (여기서, R19 는 수소 또는 메틸임) 은 WO 01/43525 또는 WO 01/68631 에 기술된 바와 같이 또는 유사한 방법에 의해 아미드의 환원에 의해 Z 이 디메틸아미노메틸인 상응하는 화합물로 전환될 것이며, 1 차 또는 2 차 아민이 형성된다면, 메틸화 또는 환원성 아민화로써 디메틸아미노메틸기를 형성할 것이다.
Z 가 -CH2-NMe(Pg1) 또는 -CH2-N(Pg1)(Pg2)인 화합물은 보호기를 제거함으로써 Z 가 디메틸아미노메틸인 대응하는 화합물로 전환될 수 있고, 즉 Z 가 -CH2-NH2 또는 -CH2-NMe 를 수득할 수 있고, 이후 아미노기의 메틸화 또는 환원적 아민화하여 WO01/43525 또는 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 디메틸아미노메틸기를 형성한다.
Z 가 -CH(A1R12)(A2R13)인 화합물은 탈보호에 의해 Z 가 디메틸아미노메틸인 화합물로 전환될 수 있고 디메틸아민으로 환원적 아민화를 수반하여 알데히드 (Z 가 -CH2-CA1H)를 형성하고 WO 01/43525 또는 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 디메틸아미노메틸기를 형성한다.
Z 가 -C(A1R14)(A2R15)(A3R16)인 화합물은 하기에 의해 Z 가 디메틸아미노메틸인 화합물로 전환될 수 있다:
i) 가수분해에 의해 카르복실산 또는 이의 에스테르를 형성하고, 이후 환원에 의해 알콜을 형성하고, 이후 상기 기술된 디메틸아미노기로 이탈기를 대체하는 것을 수반하는, 알콜기의 실행가능한 이탈기(feasible leaving group)로의 전환, 또는
ii) NH(Me)2, NH2Me, NH3 의 아민 또는 이의 염과의 반응에 의해 카르복실산 또는 이의 에스테르의 아미드로의 전환, 아미드의 환원 및 필요하다면 메틸화 또는 환원적 아민화하여 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 디메틸아미노메틸기를 형성한다.
Z 가 -COOR17 인 화합물은 카르복실산 에스테르로부터 출발하여, 상기 기술된 바와 같이 Z 가 디메틸아미노메틸인 대응하는 화합물로 전환될 수 있다.
Z 가 -CH2-CONH2 인 화합물은 하이포할라이드의 처리에 의해 Z 가 디메틸아미노메틸인 대응하는 화합물로 전환되어 자유 아미노기의 메틸화에 의해 수반되는 1차 아민을 형성하고 환원적 아민화에 의해 WO01/43525 또는 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 디메틸아미노메틸기를 형성한다.
Z 가 -CH=CHR18인 화합물은 산화에 의해 Z 가 디메틸아미노메틸인 대응하는 화합물로 전환되어 알데히드를 형성하고 이는 WO01/43525 또는 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 환원적 아민화에 의해 디메틸아미노메틸로 전환될 수 있다.
Z 가 시아노 또는 -CH2-NO2 인 화합물은 자유 아미노기의 메틸화 또는 환원적 아민화에 의해 수반되는 환원에 의해 Z 가 디메틸아미노메틸인 대응하는 화합물로 전환되어 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 디메틸아미노메틸기를 형성한다.
Z 가 -MgHal인 화합물은 WO 01/68631 에 기술된 또는 유사 방법에 의한 화학식 (CH3)2NCH2O-알킬의 디메틸아미노메틸 알킬 에테르와의 반응에 의해 Z 가 디메틸아미노메틸인 대응하는 화합물로 전환될 수 있다.
바람직하게는, Z 는 디메틸아미노메틸이다. Z 가 디메틸아미노메틸이 아닌 경우, Z 의 디메틸아미노메틸기로의 전환은 고리폐쇄후 적절하게 수행된다.
적절하게는, Z 는 점선이 결합을 나타내는 경우, 디메틸아미노메틸, -CH2-L, -CH2-NPg1Pg2, -CH2-NMePgl, -CH2-NHCH3, -CH2-NH2, 알데히드, -CO-N(CH3)2, -COOR17 이다.
Z 가 디메틸아미노메틸, -CH2-NPg1Pg2, -CH2-NMePgl, -CH 2-NHCH3, 또는 -CH2-NH2인 화합물, 특히 Z 가 디메틸아미노메틸, -CH2-NHCH3, 또는 -CH2 -NH2인 화합물은 본 발명에 따른 정제 단리의 방법에 아주 특히 적당하다(여기서 화학식(II) 또는 (IV)는 분리된다).
화학식(II), (IIs), (IIr), (IV), (IVs), (IVr) 및 (V)의 화합물에서, 점선은 바람직하게는 단일 결합이다. 점선이 이중 결합을 나타내는 화합물은 WO 01/68631 에 기술된 방법에 의해 점선이 단일 결합인 대응하는 화합물로 전환될 수 있다. 바람직하게는 환원은 고리폐쇄후에 수행된다.
화학식(V)의 화합물을 형성하기 위한 화학식(IVs) 또는 (IIs)의 화합물의 거울상이성질체 선택적 고리폐쇄는 염기 예컨대 KOC(CH3)3 및 다른 알콕시드, NaH 및 다른 히드리드, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민 또는 피리딘의 화합물의 불안정한 에스테르 유도체를, 낮은 온도에서 불활성 유기 용매, 예컨대 테트라히드로푸란, 톨루엔, DMSO, DMF, t-부틸 메틸 에테르, 디메톡시에탄, 디메톡시메탄, 디옥산, 아세토니트릴 또는 디클로로메탄에서 처리함으로써 적절히 수행될 수 있다. 이 방법은 미국 특허 4,943,590에 기술된다.
화학식(IIs)의 화합물의 고리폐쇄는, 상기 기술된 바와 같은 염기를 디올의 1차 알콜, 예컨대, 메탄술포닐옥시, p-톨루엔술포닐옥시, 10-캄포르술포닐옥시, 트리플루오로아세틸옥시 및 트리플루오로메탄술포닐옥시 및 할로겐과 불안정한 기를 형성할 수 있는 제제의 존재하에서 처리함으로써 적절히 수행된다.
일부 경우에서, 화학식(IVs)의 화합물에서 -W-R3 기를 교환하는 것은, 고리폐쇄가 수행되기 전에 보다 불안정한 기를 위해 유리할 수 있다. 이러한 불안정한 기(이탈기)는 보통 메탄술포닐옥시, p-톨루엔술포닐옥시, 10-캄포르술포닐옥시, 트리플루오로아세틸옥시 및 트리플루오로메탄술포닐옥시 또는 할로겐에서 선택된 기일수 있다.
보통, 화학식(IVs)의 화합물을 수성 염기 예컨대 NaOH, KOH 또는 LiOH를 이용하여 물 또는 알콜 또는 이의 혼합물 내에서 가수분해시켜 화학식(IIs)의 호합물을 형성한 후 유기 염기의 존재하에 유기 용매 내에서 활성 이탈기, 예컨대 메실클로라이드 또는 토실클로라이드와 반응시켰다.
에스시탈로프람 생성물의 광학 순도는 고리폐쇄 후 향상될 것이다. 광학 순도의 향상은 키랄 정지상에서의 크로마토그래피에 의해 또는 WO 03/000672에 기술된 방법에 따른 라세믹 시탈로프람 염기 또는 이의 염의 결정화에 의해 수득될 수 있다.
본 발명에 따라 수득된 화학식(II) 및 (IV)의 화합물의 R-거울상이성질체는 WO 03/000672에 기술된 방법에 따른 산성 환경에서 고리폐쇄에 의해 라세믹 시탈로프람 및 에스시탈로프람을 제조하는데 사용될 수 있다. 고리폐쇄를 수행하기 위해 적절한 산은 무기산, 카르복실산, 술폰산 또는 술폰산 유도체, 보다 적절하게는 H2SO4 또는H3PO4이다.
따라서 다른 구현예에서, 본 발명은 라세믹 시탈로프람 및/또는 에스시탈로프람 또는 하기 화학식을 갖는 디올의 R-거울상이성질체 또는 하기 화학식을 갖는 아실화된 디올의 R-거울상이성질체의 제조를 포함하는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조 방법에 관한 것이다.
(식 중, R 은 시아노 또는 시아노기로 전환될 수 있는 기이며, 점선은 임의 결합이며 Z 는 디메틸아미노메틸기 또는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이며 Hal 은 할로겐, 또는 이의 염이다)
(식 중, R, Z, 점선 및 Hal은 상기 정의된 바와 같고, W 는 O 또는 S, 및 R3 는 -Y-R1이며 여기에서 R1 은 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이거나, R1 은 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 하나가 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 임의로 1 회 이상 치환될 수 있으며 Y 는 결합, O, S 또는 NH 또는 이의 염이며, 상기 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 선택적 효조 아실화 방법에 의한 하나의 구현예 및 상기 임의의 구현예에서 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 선택적 효조 아실화 방법에 의한 다른 구현예에서, 선택적으로 R 기의 시아노기로의 전환, 점선을 표시된 이중 결합의 단일 결합으로 환원, Z 기의 디메틸아미노메틸기로의 전환 및/또는 Hal기의 플루오로기로의 전환 및 하기 화학식의 호합물의 혼합물을 형성하기 위한 산성 조건하에서 화학식(IIr) 또는 (IVs)의 R-거울상이성질체의 고리폐쇄를 순서대로 수반한다)
(식 중, Hal, Z, R 및 점선은 상기 정의된 바와 같고, 대응하는 R-거울상이성질체의 최소량은 하기 순서대로 수반된다; R 이 시아노가 아닌 경우, R 기의 시아노기로의 전환, 점선이 이중 결합을 나타내는 경우, 단일 결합으로 환원, Z 가 디메틸아미노메틸이 아닌 경우, Z 기의 디메틸아미노메틸기로의 전환 및 Hal가 플루오로가 아닌 경우, Hal기의 플루오로기로의 전환, 이는 라세믹 시탈로프람 자유 염기 또는 이의 염의 침전 및 침전의 모액으로부터의 에스시탈로프람의 회수에 의한, 에스시탈로프람 및/또는 라세믹 시탈로프람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 단리에 의해 수반된다).
적절하게는, 상기 R-디올의 에스시탈로프람으로의 전환 방법은, 에스시탈로프람의 제조에 사용된다.
R 기의 시아노기로의 전환, 점선을 표시된 이중 결합의 단일 결합으로 환원, Z 기의 디메틸아미노메틸기로의 전환 및 Hal기의 플루오로기로의 전환은 상기 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
에스시탈로프람의 상기 제조 방법의 한 구현예에 따르면, 효소 아실화에 의해 수득된 화학식(II)의 화합물의 R- 및 S- 거울상이성질체 및 화학식(IV)의 반대 거울상이성질체와의 혼합물은 상기 단리 및 정제 방법 중 하나에 따른 단리 및 정제 방법에 의해 서로 분리되었다. 다른 구현예에 따르면, 상기 혼합물은 상기 다른 단리 및 정제 방법에 의해 분리되었다.
에스시탈로프람의 상기 제조 방법의 또다른 구현예에 따르면, 효소 아실화에 의해 수득된 화학식(II)의 화합물의 R- 및 S- 거울상이성질체 및 화학식(IV)의 반대 거울상이성질체와의 혼합물은 상기 단리 및 정제 방법 중 하나에 따른 단리 및 정제 방법에 의해 서로 분리되었다. 다른 구현예에 따르면, 상기 혼합물은 상기 다른 단리 및 정제 방법에 의해 분리되었다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 에스시탈로프람의 제조에 사용되는 화학식(IIr)의 S-거울상이성질체 또는 화학식(IVr)의 S-거울상이성질체는 화학식(IV) 및 (II)의 R-거울상이성질체로부터 고리폐쇄전에 각각 분리될 수 없다.
에스시탈로프람 생성물의 광학 순도는 고리폐쇄 후 향상될 것이다. 광학 순도의 향상은 키랄 정지상에서의 크로마토그래피에 의해 또는 WO 03/000672에 기술된 방법에 따른 라세믹 시탈로프람 염기 또는 이의 염의 결정화에 의해 수득될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 C1-10-알킬은 1 내지 10 개의 탄소원자를 포함하는 분지된 또는 비분지된 알킬기, 예컨대 메틸, 에틸, 1-프로필, 2- 프로필, 1-부틸, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필, 2-메틸-l-프로필, 펜틸, 헥실 및 헵틸을 가리킨다. C1-6-알킬은 1 내지 6 개의 탄소원자를 포함하는 분지된 또는 비분지된 알킬기, 예컨대 메틸, 에틸,1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필, 2-메틸-l-프로필, 펜틸 및 헥실을 가리킨다. C1-4-알킬은 1 내지 4 개의 탄소원자를 포함하는 분지된 또는 비분지된 알킬기, 예컨대 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필 및 2-메틸-l-프로필을 가리킨다. C1-3-알킬은 1 내지 3 개의 탄소원자를 포함하는 분지된 또는 비분지된 알킬기, 예컨대 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필을 가리킨다.
비슷하게, C2-10-알케닐 및 C2-10-알키닐은 각각 2 내지 10 개의 탄소원자를 포함하며, 하나의 이중 결합 및 하나의 삼중 결합을 각각 포함하는, 분지된 또는 비분지된 알케닐 및 알키닐기, 예컨대 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 에티닐, 프로피닐 및 부티닐을 나타낸다. C2-6-알케닐 및 C2-6-알키닐은 각각 2 내지 6 개의 탄소원자를 포함하며, 하나의 이중 결합 및 하나의 삼중 결합을 각각 포함하는, 분지된 또는 비분지된 알케닐 및 알키닐기, 예컨대 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 에티닐, 프로피닐 및 부티닐을 나타낸다. C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐은 각각 2 내지 4 개의 탄소원자를 포함하며, 하나의 이중 결합 및 하나의 삼중 결합을 각각 포함하는, 분지된 또는 비분지된 알케닐 및 알키닐기, 예컨대 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 에티닐, 프로피닐 및 부티닐을 나타낸다. C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐은 각각 2 내지 3 개의 탄소원자를 포함하며, 하나의 이중 결합 및 하나의 삼중 결합을 각각 포함하는, 분지된 또는 비분지된 알케닐 및 알키닐기, 예컨대 에테닐, 프로페닐, 에티닐 및 프로피닐을 나타낸다.
용어 C1-10 알콕시, C1-10 알킬티오, C1-10 알킬아미노 및 디-(C1-10 -알킬)아미노 등은 알킬기가 상기에서 정의된 C1-10 알킬인 그런 기를 명시한다. 용어 C1-6 알콕시, C1-6 알킬티오, C1-6 알킬아미노 및 디-(C1-6-알킬)아미노 등은 알킬기가 상기에서 정의된 C1-6 알킬인 그런 기를 명시한다. 용어 C1-4 알콕시, C1-4 알킬티오, C1-4 알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노 등은 알킬기가 상기에서 정의된 C1-4 알킬인 그런 기를 명시한다. 용어 C1-3 알콕시, C1-3 알킬티오, C1-3 알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노 등은 알킬기가 상기에서 정의된 C1-3 알킬인 그런 기를 명시한다.
할로겐은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.
용어 아릴은 페닐과 같은 모노 또는 비시클릭 카르보시클릭 방향족기 또는 나프틸, 특히 페닐을 의미한다.
아릴옥시, 아릴티오는 아릴이 상기에서 언급한 바인 그런 기를 의미한다.
용어 헤테로아릴은 5 또는 6 원 모노시클릭 헤테로방향족기 또는 비시클릭 헤테로방향족기를 의미한다. 적합한 헤테로아릴기는 O, S 및 N 으로부터 선택되는 1-3 헤테로원자를 함유한다.
R0 및 R1 은 탄소수 3 내지 5 의 사슬을 함께 형성하여, 무수화물을 형성할 것이다.
Z 가 -CH2-N(R'R'') 이고, 이때 R' 및 R'' 이 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성하는 경우, 이 환형 구조는 기들, 예컨대 피페리딘, 피롤리딘, 모르폴리닐 및 피페라지닐을 형성한다.
HOBt 는 히드록시벤조트리아졸을 의미하며, pfp 는 펜타플루오로페놀을 의미한다.
실험
하기 실시예에서, 전환율% 및 광학 순도는 하기 기재된 바와 같이 측정 및 계산되었다.
실시예 1 에 사용된 HPLC 분석 조건 (전환율용):
칼럼: YMC-Pack ODS-A 0.46 cm I.D. x 25 cm (YMC Co., LTD. 제조)
용출액: 25 mM 포스페이트 완충액 / 아세토니트릴 = 60 / 40
유속: 1.O ml/분
온도: 40℃
검출기 파장: 237 nm
실시예 29 에 사용된 HPLC 분석 조건 (전환율용)
칼럼: Lichrospher RP-8 칼럼, 250 x 4 mm (5 ㎛입자 크기)
용출액: 하기와 같이 제조된 완충된 MeOH/물: 1.1 ml Et3N 을 150 ml 의 물에 첨가하고, 10% H3PO4(aq) 을 pH=7 가 될 때까지 첨가하고, 물을 합계 200 ml 까지 첨가한다. 상기 혼합물을 1.8 L MeOH 에 첨가한다.
온도: 35℃
유속: 1 mL/분
압력: 16,0 MPa
검출기: UV 254 nm
주입 부피: IO microL
전환율(%) = P/(S+P) x 100, (P: 생성물의 양, S: 잔류 기질의 양).
실시예 1 에 사용된 HPLC 분석 조건 (광학 순도용)
칼럼: Chiralpak AD 0.46 cm I.D. x 25 cm (DAICEL CHEMICAL INDUSTRIES, LTD. 제조)
용출액: 헵탄 / 메탄올 / 에탄올 / 디에틸아민 = 85 / 7.5 / 7.5 / 0.1
유속: 1.O ml/분
온도: 30℃
검출기 파장: 240 nm
전환율(%): P/(S+P) x 100, (P: 생성물의 양, S: 잔류 기질의 양)
초임계 유체 크로마토그래피. 실시예 29-42 에 사용된 분석 조건 (광학 순도용)
칼럼: 크기가 250 x 4,6 mm 인 Daicel AD 칼럼 (5 ㎛ 입자 크기)
이동상: 이산화탄소
개질제: 메탄올 및 디에틸아민 (0.5%) 및 트리플루오로아세트산 (0.5%).
개질제 구배: 1-2% 에서 4 분
2-4% 에서 4 분
4-8% 에서 4 분
8-16% 에서 4 분
16-32% 에서 4 분
32-45% 에서 1.62 분
온도: 상온
유속: 2 mL/분
압력: 20 mPa
검출기: UV 230 nm 및 254 nm
주입 부피: 10 microL
광학 순도 (% ee) = (A-B) / (A+B) ×100, (A 및 B 는 상응하는 입체 이성질체를 나타낸다, A>B)
E-값 = ln ((1-c/100) ×(1-Es/100))/ln ((1-c/100) ×(1+Es/100))
(c: 전환율, Es: 잔류 기질의 광학 순도)
[실시예]
실시예 1
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴
물 (200.7 g) 및 톨루엔 (440.8 g) 을 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 1/2 황산염 (100.4 g, 0.257 mol) 에 첨가하고, 이어서 15 분 동안 교반하고, 그의 온도를 60℃ 까지 승온시켰다. 후속적으로, 30% NaOH (34.5 g, 0.259 mol) 를 5 분에 걸쳐 적가하여 수층의 pH 가 11.4 에 이르게 하고, 30 분 동안 교반했다.
교반 후, 상기 혼합물을 5 분 동안 정치시킨 후 분리했다. 수층을 제거하고, 상기 수득된 유기층을 220.0 g 의 물로 세척하고, 추가로 감압 하 60℃ 에서 농축하여 잔류 수분을 제거했다. 상기 농도를 톨루엔의 첨가로 조정함으로써, 583.1 g 의 4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액을 수득했다 (수득한 순수한 4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 양: 87.6 g, 수율: 99.7%, 0.256 mol). 이어서, 52.5 g 의 톨루엔을 17.5 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 상에 붓고, 이어서 583.1 g 의 4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액을 첨가하고, 상기 혼합물의 온도를 40℃ 로 조정했다.
후속적으로, 피발산 (28.7 g, 0.281 mol), 비닐 부티레이트 (29.2 gm 0,256 mol) 및 톨루엔 (28.8 g) 을 함유하는 혼합 용액을 상기 혼합물에 20 분에 걸쳐 첨가하고, 상기 혼합물을 40℃ 에서 12 시간 동안 약한 질소 흐름 하에서 교반했다. 상기 혼합물을 2 시간에 걸쳐 20℃ 까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 1 시간 동안 동일한 온도에서 교반하고, 교반을 중지했다. 상기 효소를 여과한 후, 상기 효소를 105 g 의 톨루엔으로 2 회 세척하고, 상기 톨루엔 층을 조합했다. 상기 톨루엔층은 4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액 583.1 g 을 함유했다(순수한 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 함량: 36.0 g, 효소 분할 공정을 통한 수율: 41.1%, 0.105 mol).
상청액 및 세척용 액체를 함유하는 혼합 용액을 물 (438 g, 263 g x 2) 로 3 회 추출하고, 1005.4 g 의 상기 수득한 수층을 79 g 의 톨루엔으로 5 회 세척했다. 그 결과, 985.2 g 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 수용액을 수득했다 {순수한 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 양: 32.6 g, 수율 (물을 사용한 추출에서 톨루엔을 사용한 세척까지의 공정을 총괄): 90.6 %, 0.0952 mol}. 상기 수득한 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 수용액 985.2 g 에 218.2 g 의 톨루엔을 첨가했다.
후속적으로, 30% NaOH (13.3 g, 0.0998 mol) 을 상기 혼합물에 교반하면서 서서히 첨가하여, 수층의 pH 가 11.9 에 이르게 하고, 상기 혼합물을 30 분간 교반을 지속했다. 교반 후, 상기 혼합물을 30 분 동안 정치시키고, 상기 톨루엔층을 분리하고, 잔류한 수층을 142.5 g 의 톨루엔으로 재추출했다. 조합된 톨루엔층을 169.0 g 의 물로 2 회 세척하고, 60℃ 에서 감압 하에 농축해 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 용액64.0 g 을 수득했다. 상기 톨루엔 용액은 32.0 g (0.0935 mol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 함유했다. 전체적인 수율은 36.4% 였다. HPLC 로 측정된 광학 순도는 98.7%ee 였으며, 화학적 순도는 99.9 면적% 였다, {(R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]벤질 부티레이트: 0.04 면적 %.
상기 계에서, 상기 "화학적 순도" 는 하기의 등식으로 나타낸다.
(화학적 순도) = [4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 면적값]/[(모든 측정된 화합물의 면적값) - (톨루엔의 면적값)-(계로부터 유도된 면적값)] ×100 (면적 %)
실시예 2
스토퍼가 장치된 시험관에 50 mg (0. 146 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 25 mg 의 각종 리파아제, 33 mg (0.29 mmol) 의 비닐 부티레이트 및 1 ml 의 톨루엔을 충전하고, 40℃ 에서 16 시간 동안 교반했다. 50% ee 이상의 광학 순도를 가진 기질에 대해서, E-값을 계산했다. 결과를 하기 표 1 에 나타냈다.
실시예 3
스토퍼가 장치된 시험관에 10 내지 100 mg (0.029 내지 0.29 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 10 내지 100 mg 의 Novozym 435 (Novozymes, 제조 E/S 비 = 1.0), 33 내지 333 mg (10 당량) 의 비닐 부티레이트 및 1 ml 의 톨루엔으로 충전하고, 30℃ 에서 16 시간 동안 교반했다. 결과를 표 2 에 나타냈다.
실시예 4
스토퍼가 장치된 시험관에 100 mg (0.292 mmol) 의 (±)4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸)-3-히드록시메틸벤조니트릴, 50 mg 의 Novozym 435 (Novozymes 제품), 333 mg (2.92 mmol) 의 비닐 부티레이트, 0.292 mmol 의 각종 첨가제 및 1 ml 의 톨루엔을 충전하고, 40℃ 의 온도에서 16 시간 동안 교반했다. 결과를 표 3 에 나타냈다.
실시예 5
교반기 및 온도계가 장치된 200-ml 4 목 플라스크에tj, 1.5 g (4.38 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 30 ml 의 톨루엔에 용해시키고, 이후 0.45 g 의 Novozym 435 (Novozymes 제품), 0.347 g (4.38 m mol) 의 피리딘, 4.38 mmol 의 각종 산 및 1.00 g (8.76 mmol) 의 비닐 부티레이트를 첨가하고, 40℃ 에서 16 내지 21.5 시간 동안 교반했다. 결과를 표 4 에 나타냈다.
실시예 6
교반기 및 온도계가 장치된 200-ml 4 목 플라스크에tj, 3.0 g (8.76 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 30 ml 의 톨루엔에 용해시킨 후, 0.9 g 의 Novozym 43 (Novozymes 제품), 0.693 g (8.76 mmol) 의 피리딘, 8.76 mmol 의 각종 산 및 2.00 g (17.52 mmol) 의 비닐 부티레이트를 첨가하고, 40℃ 에서 15.5 내지 16.5 시간 동안 교반했다. 결과를 표 5 에 나타냈다.
실시예 7
교반기 및 온도계가 장치된 200-ml 4 목 플라스크에, 4.5 g (13.1 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 30 ml 의 톨루엔에 용해시키고, 이어서 0.90 g 의 Novozym 43 (Novozymes 제품), 2.68 g (26.2 mmol) 의 피발산 및 0.900 내지 1.500 g (0.6 내지 1.0 당량) 의 비닐 부티레이트를 첨가하고, 40℃ 에서 24 시간 동안 교반했다. 결과를 표 6 에 나타냈다.
실시예 8
교반기 및 온도계가 장치된 500-ml 분리가능형 플라스크에, 20.0 g (58.4 mmol) 의 (±)-4-(4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸)-3-히드록시메틸벤조니트릴을 144 ml 의 톨루엔에 용해시키고, 이후 피발산 (1.1 내지 3 당량), 4.0 g 의 Novozym 435 (Novozymes 제조) 및 6.67 g (58.4 mmol) 의 비닐 부티레이트를 첨가하고, 40℃ 에서 20 내지 24 시간 동안 질소 흐름 (5 ml/분) 중에서 20 내지 24 시간 동안 교반했다. 결과를 표 7 에 나타냈다.
실시예 9
스토퍼가 장치된 시험관에 10 mg (0.029 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 1O mg 의 Novozym 43 (Novozymes 제품), 0.29 mmol 의 각종 아실 공여자 및 1 ml 의 디이소프로필 에테르로 충전하고, 3O℃ 에서 16 시간 동안 교반했다. 30% ee 이상의 광학 순도를 가진 기질에 대해서, E-값을 계산했다. 결과를 표 8 에 나타냈다.
실시예 10
스토퍼가 장치된 시험관에 10 mg (0.029 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 10 mg 의 Novozym 435 (Novozymes 제품), 33 mg (0.29 mmol) 의 비닐 부티레이트 및 1 ml 의 각종 용매를 충전하고, 30℃ 에서 16 시간 동안 교반했다. 반응 후, 전환율 및 광학 순도를 분석하고, E-값을 계산했다. 결과를 표 9 에 나타냈다.
실시예 11
교반기 및 온도계가 장치된 200-ml 4 목 플라스크에 0.9 내지 1.35 g (E/S 비율은 0.2 내지 0.3) 의 Novozym 435 (Novozym 제품) 를 충전했다. 4.5 g (13.1 mmol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 30 ml 의 톨루엔 중 용액, 2.01 g 의 피발산 (19.7 mmol), 및 1.50 g (13.1 mmol) 의 비닐 부티레이트를 상기 플라스크에 첨가하고, 35 내지 45℃ 의 온도에서 21 시간 동안 교반했다. 반응 후, 반응 액체는 경사지어 분리하고, 잔여 효소는 30 ml 의 톨루엔으로 세척하고 회수했다. 회수된 효소를 사용한다는 것을 제외하고 상기 기재된 것과 동일한 조작을 4 회 반복하여 회수 반응을 수행했다. 효소 활성을 하기 등식에 따라 계산했다. 결과를 표 10 에 나타냈다.
효소 활성 (U/g) (분 당 생산되는 생성물 양 (μmol/분))/(효소 중량 (g))
실시예 12
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 10.0 g (0.029 mol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액 66.6 g 을 첨가하고, 그의 온도를 40℃ 가 되도록 조절했다. 이어서, 2.27 g (0.029 mol) 의 피리딘, 2.98 g (0.029 mol) 의 피발산, 3.35 g (0.029 mol) 의 비닐 부티레이트, 및 2.0 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 40℃ 에서 15 시간 동안 약한 질소 흐름 하에서 교반한 후 교반을 정지했다.
효소를 상기 반응 혼합물로부터 키리야마 깔때기 (Kiriyama funnel) 을 사용하여 여과하고, 상기 효소를 21.6 g 의 톨루엔으로 세척했다. 그 결과, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (3.6 g, 0.011 mol, 수율: 36.0%, 광학 순도: 98.5 %ee) 을, 피발산 염으로 수득했다.
조합된 톨루엔층을 물 (50 ml, 30 ml, 30 ml) 로 20℃ 에서 3 회 세척하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (3.5 g, 0.011 mol, 추출 수율: 95%), 피발산 염을 함유하는 수층을 수득했다.
실시예 13
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 20.0 g (0.058 mol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액 66.7 g 으로 충전하고, 그의 온도가 40℃ 이 되도록 조절했다. 이어서, 5.93 g (0.058 mol) 의 피발산, 6.62 g (0.058 mol) 의 비닐 부티레이트, 및 4.1 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 40℃ 에서 18 시간 동안 약한 질소 흐름 하에 교반하고, 교반을 중지했다. 상기 효소를 상기 반응 혼합물로부터 키리야마 깔때기를 이용해 여과하고, 상기 효소를 41.3 g 의 톨루엔으로 세척했다. 그 결과, 6.7 g (0.020 mol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염을 톨루엔 용액 중에 수득했으며, 수율은 33.5% 였고, 광학 순도는 99.7 %ee 였다.
실시예 14
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 시클로헥산카르복실산염
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 250.0 g 의 25.0 g (0.073 mol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시메틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액을 충전하고, 그의 온도를 40℃ 가 되도록 조정했다. 이어서, 5.77 g (0.073 mol) 의 피리딘, 8.33 g (0.073 mol) 의 비닐 부티레이트, 9.52 g (0.073 mol) 의 시클로헥산카르복실산, 및 5.0 g 의 고정 효소 (Novozym. 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 40℃ 에서 17.5 시간 동안 약한 질소 흐름 하에 교반하고, 교반을 중지했다. 상기 효소를 여과하고, 54.1 g 의 톨루엔으로 세척했다.
그 결과, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (8.6 g, 0.025 mol, 수율: 34.4%, 광학 순도: 98.7% ee), 시클로헥산카르복실산 염을 함유하는 톨루엔층을 수득했다.
조합된 톨루엔 층을 물 (187.5 ml x 5) 로 20℃ 에서 5 회 세척하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (7.6 g, 0.0221 mol, 추출 수율: 89%), 시클로헥산카르복실산 염을 함유하는 수층을 수득했다.
실시예 15
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 o-톨루산 염
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 25.0 g (0.073 mol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액 250.0 g 을 충전하고, 그의 온도를 40℃ 가 되도록 조정했다. 이후, 5.77 g (0.073 mol) 의 피리딘, 8.33 g (0.073 mol) 의 비닐 부티레이트, 9.93 g (0.073 mol) 의 o-톨루산, 및 5.0 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 40℃ 에서 21 시간 동안 약한 질소 흐름 하에 교반하고, 이어서 교반을 중단했다. 상기 효소를 반응 혼합물로부터 키리야마 깔때기로 여과하고, 54.1 g 의 톨루엔으로 세척했다. 그 결과, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (9.7 g, 0.0 28 mol, 수율: 38.8%, 광학 순도: 97.8% ee), o-톨루산 염을 함유하는 톨루엔층을 수득했다.
조합된 톨루엔층을 물 (250 ml, 63 ml, 63 ml) 로 60℃ 에서 3 회 세척하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (7.8 g, 0.0228 mol, 추출 수율: 80%), o-톨루산 염을 함유하는 수층을 수득했다.
실시예 16
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 이소부티르산 염
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 10.0 g (0.029 mol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액 33.3 g 으로 충전하고, 그의 온도를 40℃ 가 되도록 조절했다. 이어서, 2.29 g (0.029 mol) 의 피리딘, 2.57 g (0.029 mol) 의 이소부티르산, 3.33 g (0.029 mol) 의 비닐 부티레이트, 및 2.0 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 40℃ 에서 24 시간 동안 약한 질소 흐름 하에 교반하고, 교반을 중단했다. 상기 효소를 반응 혼합물로부터 키리야마 깔때기를 이용하여 여과하고, 21.6 g 의 톨루엔으로 세척했다. 그 결과, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (3.8 g, 0.011 mol, 수율: 38.0%, 광학 순도: 95.9% ee), 이소부티르산 염을 함유하는 톨루엔층을 수득했다.
실시예 17
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 벤조산 염
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 50.0 g (0.146 mol) 의 (±)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 톨루엔 중 용액 250.0 g 을 충전하고, 그의 온도를 40℃ 가 되도록 조정했다. 이어서, 11.5 g (0.146 mol) 의 피리딘, 33.2 g (0.291 mol) 의 비닐 부티레이트, 17.8 g (0.146 mol) 의 벤조산, 및 10.0 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 40℃ 에서 20 시간 동안 약한 질소 흐름 하에서 교반하고, 교반을 중단했다. 상기 효소를 반응 혼합물로부터 키리야마 깔때기를 사용해 여과하고, 108 g 의 톨루엔을 사용해 세척했다. 그 결과, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (22.0 g, 0.064 mol, 수율: 44.0%, 광학 순도: 99.0% cc), 벤조산 염을 함유하는 톨루엔층을 수득했다.
조합된 톨루엔 층을 물 (500 ml x 3) 을 사용해 60℃ 에서 3 회 세척하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (21.0 g, 0.0614 mol, 추출 수율: 96%), 벤조산 염을 함유하는 수층을 수득했다.
하기 실시예 18 내지 28 은 상기 반응 혼합물로부터 S-디올의 분리를 설명한다.
실시예 18
스토퍼가 장치된 시험관에 4.3 mg (0.0126 mmol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (화합물 A), 6.8 mg (0.0165 mmol) 의 (R)-시아노-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-벤질 부티레이트 (화합물 B), 1 ml 의 톨루엔, 1 ml 의 물, 및 0.291 mmol 의 각종 산 (2 가 염기성 산의 경우, 0.146 mmol 이 사용된다) 을 충전하고, 40℃ 에서 1 시간 동안 교반했다. 상기 수득된 혼합 용매를 수층 및 톨루엔층으로 분리하고, 각 층에서의 화합물 A 및 B 의 농도를 각각 측정했다. 분배 계수 Ka 또는 Kb 를 하기 등식에 따라 계산했다. 결과를 표 11 에 나타냈다.
Ka = (수층에서의 화합물 A 의 농도)/(톨루엔층에서의 화합물 A 의 농도)
Kb = (수층에서의 화합물 B 의 농도)/(톨루엔층에서의 화합물 B 의 농도)
실시예 19
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
상기 효소를 실시예 1 에 따른 방법으로 수득되는 상기 효소 반응 혼합물로부터 여과하고, 톨루엔으로 2 회 세척했다. 상기 수득된 174.3 g 의 톨루엔 (S)- 4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (44.8 g, 0. 131 mol) 을 함유하는 톨루엔 용액, 피발산 염을 600.3 g 의 물에 첨가하여 추출했다. 추가로, 359.7 g 의 물을 사용한 2 회의 추출로 1375.9 g 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 수용액을 수득했다. 43.8 g (0.128 mol, 수율: 97.8%) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 함유하는 수용액을 수득했다. 광학 순도: 98.4%ee, (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]-벤질 부티레이트: 10.7 면적%.
실시예 20
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 수용액 12.6 g {(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 함량: 0.4 g, 1.168 mmol} 은, 실시예 19 의 방법에 따라 별도로 수득하여, 1.4 g (0.018 mol) 의 암모늄 아세테이트를 첨가했다. 이어서, 1.0 g 의 톨루엔을 그곳에 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 교반했다. 30 분 동안의 정치 후, 혼합물 용액을 분리함으로써 유기층을 제거하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (0.389 g, 1.136 mmol, 수율: 97.3%), 피발산 염을 함유하는 수층을 수득했다. HPLC 분석으로, 화학 순도는 97.3 면적% 이고, (R)-5--시아노-2-[디메틸아미노(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]벤질 부티레이트: 1.5 면적 % 이 함유되었음을 발견했다.
실시예 21
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시부틸벤조니트릴 피발산 염의 수용액 12.6 g {(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 함량: 0.4 g, 1.168 mmol} 은, 실시예 19 의 방법에 따라 별도로 수득되며, 1.4 g (0.013 mol) 의 리튬 설페이트에 첨가했다. 이어서, 1.0 g 의 톨루엔을 그곳에 첨가하고, 상기 혼합물을 10 분 동안 교반했다. 30 분 동안 정치 후, 상기 유기층을 상기 혼합 용액의 분리로 제거하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염 (0.394 g, 1.151 mmol, 수율: 98.5%) 을 함유하는 수용액을 수득했다. HPLC 분석으로, 화학 순도는 93.7 면적% 이며, (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-히드록시부틸]-3-벤질 부티레이트: 5.5 면적 % 이 포함되었음을 발견했다.
실시예 22
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염의 수용액 12.6 g {(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 함량: 0.4 g, 1.168 mmol} 은, 실시예 19 의 방법에 따라 별도로 수득했으며, 1.4 g (0.011 mol) 의 암모늄 설페이트를 첨가했다. 이후, 1.0 g 의 톨루엔을 그곳에 첨가하고, 상기 혼합물을 10 분 동안 교반했다. 30 분 동안의 정치 후, 유기층을 상기 혼합 용액의 분리로 제거했으며, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염을 함유하는 수용액 (0.397 g, 1.159 mmol, 수율: 99.3%) 을 수득했다. HPLC 분석으로, 화학 순도는 94.7 면적% 이며, (R)-5-시아노-3-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]-3-벤질 부티레이트: 4.5 면적% 이 포함되어 있음을 발견했다.
실시예 23
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염의 수용액 12.6 g {(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 함량: 0.4 g, 1.168 mmol} 을, 실시예 19 의 방법에 따라 별도로 수득했으며, 1.4 g (0.0099 mol) 의 나트륨 설페이트를 첨가했다. 이후, 1.0 g 의 톨루엔을 그곳에 첨가하고, 상기 혼합물을 10 분 동안 교반했다. 30 분 동안 정치 후, 혼합 용액을 분리함으로써 유기층을 제거하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 피발산 염 (0.391 g, 1.142 mmol, 수율: 97.8%) 을 함유하는 수층을 수득했다. HPLC 분석으로, 화학 순도가 94.5 면적 % 이며, (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]-3-벤질 부티레이트는: 4.7 면적 % 가 함유되어 있음을 발견했다.
실시예 24
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염의 수용액 12.6 g {(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 함량: 0.4 g, 1. 168 mmol} 은, 실시예 19 의 방법에 따라 별도로 수득했으며, 0.7 g (0.012 mol) 의 염화나트륨을 첨가했다. 이어서, 1.0 g 의 톨루엔을 그곳에 첨가하고, 상기 혼합물을 10 분 동안 교반했다. 30 분 동안의 정치 후, 상기 혼합 용액을 분리함으로써 유기층을 제거하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴의 피발산 염 (0.397 g, 1.159 mmol, 수율 99.3%) 을 함유하는 수층을 수득했다. HPLC 분석으로, 화학 순도가 93.3 면적% 이며, (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]-3-벤질 부티레이트가: 5.8 면적% 로 함유되었음을 발견했다.
실시예 19 와 비교한 실시예 20-24 는 염의 첨가에 의해 개선된 분리를 보여준다.
실시예 25
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
효소는 실시예 1 에 따른 방법으로 수득된 효소 반응 혼합물로부터 여과했고, 톨루엔으로 2 회 세척했다. 상기 수득된, 1.0 g (2.92 mmol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산을 함유하는 톨루엔 용액 19.4 g 을 40℃ 가 되도록 조절하고, 13 mL 의 물을 상기 용액에 첨가하고 추출했다. 상기 용액은 7.5 mL 의 물로 2 회 더 추출하고, (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 용액을 수득했다. 상기 수용액에서는, 0.886 g (2.588 mmol, 수율: 88.6%) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 함유했다.
실시예 26
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
상기 효소는 실시예 1 에 따른 방법으로 수득되는 효소 반응 혼합물로부터 여과하고, 톨루엔으로 2 회 세척했다. 상기 수득된, 1.0 g (2.920 mmol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산을 함유하는 톨루엔 용액 19.4 g 을 40℃ 가 되도록 조절하고, 11.6 mL 의 물을 상기 용액에 첨가하고 추출했다. 상기 용액을 5.8 mL 의 물로 3 회 더 추출하여 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 용액을 수득했다. 상기 수용액에서는, 0.879 g (2.567 mmol, 수율 87.9%) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 함유했다.
실시예 27
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
상기 효소를 실시예 1 에 따른 방법으로 수득되는 효소 반응 혼합물로부터 여과하고, 톨루엔으로 2 회 세척했다. 상기 수득된, 1.0 g (2.92 mmol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산을 함유하는 톨루엔 용액 10.4 g 에 13.0 mL 의 물을 첨가하고 추출했다. 상기 용액을 7.5 mL 의 물로 2 회 더 추출하여 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 수용액을 수득했다. 상기 수용액에서는, 0.954 g (2.786 mmol, 수율 95.4%) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 함유했다.
실시예 28
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 피발산 염
상기 효소는 실시예 1 에 따른 방법에 의해 수득된 효소 반응 혼합물로부터 여과했고, 톨루엔으로 2 회 세척했다. 상기 수득된, 1.0 g (2.90 mmol) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염을 함유하는 톨루엔 용액 19.4 g 에 0.43 g (4.210 mmol) 의 피발산을 첨가하고, 상기 혼합물을 13.0 mL 의 물로 추출했다. 상기 용액을 7.5 mL 의 물로 2 회 더 추출하여 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴, 피발산 염의 수용액을 수득했다. 상기 수용액에서는, 0.947 g (2.766 mmol, 수율: 94.7%) 의 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 함유했다.
실시예 25, 26, 27 및 28 의 비교는 피발산의 첨가로 개선된 분리가 수득되는 반면, 온도의 조절은 분리에 큰 영향을 미치지 않음을 나타낸다.
실시예 29
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
라세미 4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (3,9 mmol, 0,5 ml) 의 무수 1,4-디옥산 (2,5 ml) 중 교반 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종 (pseudomonas sp.) (160 U, 5 mg) 을 첨가했다. 상기 반응물을 37℃ 까지 가온한 후, HPLC 를 했다. 162 시간 후 (33.9% 의 변환시), 상기 효소를 여과제거하고, 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피로 분석하여, (R)-부티레이트 에스테르는 72%ee 였고, (S)-디올은 28%ee 였다.
실시예 30
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0,58 mmol, 73,6 ㎕) 의 무수 1,4-디옥산 (3.0 ml) 중 교반 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종 (pseudomonas sp.) (160 U, 4 mg) 을 첨가했다. 상기 반응물을 37℃ 까지 가온한 후, HPLC 를 했다. 194 시간 후, 18,7% 의 변환시, 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 상기 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석하여, (R)-부티레이트 에스테르는 92% ee 였고, (S)-디올은 14%ee 였다. 상기 반응을 또한 표 12 에 나타낸 1, 4 및 8 당량의 비닐부티레이트를 사용하여 모니터링했다.
실시예 31
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
라세미 4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0.59 mmol, 75 ㎕) 의 무수 1,4-디옥산 (2,925 ml) 중 교반 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종(pseudomonas sp.) (160 U, 5 mg) 을 첨가했다. 상기 반응물을 50℃ 까지 가온하고, 이후 HPLC 를 했다. 165 시간 후, 전환율 30.4 % 에서, 상기 효소를 여과 제거하고 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석하여 (R)-부티레이트 에스테르는 98.1% ee 였고, (S)-디올은 30.3% ee 였다.
상기 반응은 또한 표 13 에 나타낸 바와 같이 25, 37 및 65 ℃ 에서 모니터링했다.
실시예 32
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
라세미 4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0.59 mmol, 75 ㎕, 2 당량) 의 무수 1,4-디옥산 (2,925 ml) 의 교반 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종 (160 U, 4,5 mg) 을 첨가했다. 상기 반응물을 50℃ 까지 가온한 후, HPLC 를 했다. 209 시간 후, 상기 효소를 여과제거하고 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석하여 (R)-부티레이트 에스테르 및 (S)-디올을 수득했다. 상기 반응을 또한 표 14 에 나타낸 바와 같이 (200 mg, 500 mg 및 1000 mg 의 디올 및 각각 150 ㎕, 375 ㎕ 및 750 ㎕ 의 비닐부티레이트 및 2,85 ml, 2,625 ml 및 2,25 ml 의 1,4-디옥산을 사용하여 모니터링했다.
실시예 33
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
라세미 4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0.59 mmol, 75 ㎕) 의 무수 1,4-디옥산 (2,925 ml) 중 교반 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종 (160 U, 4 mg) 을 첨가했다. 상기 반응물을 50℃ 까지 가온시킨 후, HPLC 를 했다. 473 시간 후, 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 HPLC 를 했다. 결과를 표 15 에 나타냈다.
실시예 34
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
라세미 4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (2,9 mmol, 1000 mg) 및 비닐부티레이트 (5,9 mmol, 750 ㎕) 의 무수 1,4-디옥산 (14,25 ml) 의 교반 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종 (160 U, 20 mg) 을 첨가했다. 상기 반응물을 50℃ 까지 가온한 후, HPLC 를 했다. 139 시간 후, 추가적인 5 mg 의 리파아제를 첨가했다. 155 시간 후, 추가적인 리파아제를 첨가했다. 399 시간 후, 55.7% 의 전환율에서, 샘플을 수집했다. 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다.
조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석했다. 560 시간 후, 62.8% 의 전환율에서, 상기 반응을 중단했다. 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석했다. 상기 수득된 ee-값을 표 16 에 나타냈다.
실시예 35
(S)-시탈로프람 디올 유사체
라세미, 시탈로프람 디올 유사체 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0.29 mmol, 37 ㎕) 의 무수 1,4-디옥산 (2,925 ml) 중 교반 용액에 4-10 mg 의 PspLL 를 첨가했다. 상기 반응물을 섭씨 50 도까지 가온한 후, HPLC 을 했다. 반응을 중단시킨 후, 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 톨루엔으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석했다. 결과를 표 17 에 나타냈다.
실시예 36
(S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴
라세미 4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (29 mmol, 10 g) 및 비닐부티레이트 (58 mmol, 7,5 ml) 의 무수 1,4-디옥산 (142.5 ml) 중 용액에 리포단백질 리파아제 슈도모나스 종 (160 U, 250 mg) 을 첨가했다. 상기 반응을 50℃ 까지 가온한 후, HPLC 를 했다. 192 시간 후, 41% 의 전환율에서, 추가적인 250 mg 의 리파아제를 첨가했다. 504 시간 후, 63% 의 전환율에서 상기 반응을 중단했다. 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 1,4-디옥산으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석했다. 수득한 EE-값: ((S-디올) = 95% (S-디올/R-디올= 40: 1).
실시예 37
플래쉬 크로마토그래피에 의한 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴의 분리
372 mg 의 S-시탈로프람 디올 (ee-값: 94,5%) 및 628 mg 의 R- 시탈로프람 디올 부티레이트 에스테르 (ee-값 59.5%) 의 혼합물을 4% 에틸아민을 사용해 에틸아세테이트/헵탄 4:1 중에서 분리했다. 상기 S-시탈로프람 디올을 에틸아세테이트/헵탄 4:1 중의 4% 트리에틸아민을 사용한 플래쉬 크로마토그래피로 분리하여, 120 mg 의 S-시탈로프람 디올을 수득했다 (ee-값 94,5%).
실시예 38
S-디올 베이스를 함유하는 혼합물의 세척에 의한 (S)-4-[4-디메틸아미노-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴의 분리
S-시탈로프람 디올 및 R-시탈로프람 디올 부티레이트 에스테르 (0.3 g, 각각) 의 혼합물에 24 ml 의 헵탄 및 66 ml 의 물/메탄올 (2:1) 을 첨가했다. 맑은 용액을 분리 깔때리에 이동시키고, 유기상을 수집했다. 추가적인 10 ml 의 헵탄을 수상에 첨가하고, 완전히 혼합했다. 유기상을 수집했다. 추출을 4 회 반복했다. 조합된 헵탄상을 20 ml 물/메탄올 (2:1) 로 추출하고, 수상을 조합해 부피가 반이 되도록 증발시키고, 10 ml 에틸아세테이트로 3 회 추출했다. 조합된 에틸아세테이트상을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 진공 중에 건조시켜, 2% R-시탈로프람 디올 부티레이트 에스테르를 함유하는 0.15 g 의 S-시탈로프람 디올을 수득했다.
실시예 39
Novozymes 435 를 사용한 (S)-시탈로프람 디올 유사체
라세미 시탈로프람 디올 유사체 (0.29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0,29 mmol, 37 @d) 의 무수 톨루엔 (2.925 ml) 중 교반 용액에 0.2 mg Novozymes 435 및 (0,32 mmol, 33 mg) 피발산을 첨가했다. 상기 반응물을 섭씨 40 도까지 가온한 후, HPLC 를 했다. 반응을 중단한 후, 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 톨루엔으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석했다. 결과를 표 18 에 나타냈다.
실시예 40
Novozymes 435 을 사용한 효소성 아실화 상의 각종 카르복실산의 영향
4-[4-디메틸아미노-1-(4-플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸-벤조니트릴 (0,29 mmol, 100 mg) 및 비닐부티레이트 (0,29 mmol, 37 ㎕) 의 무수 톨루엔 (2,925 ml) 중 교반 용액에 Novozymes 435 (0,2 mg) 및 1.1 당량의 카르복실산을 첨가했다. 상기 반응물을 섭씨 40 도까지 가온시킨 후, HPLC 를 했다. 상기 효소를 여과 제거하고, 소량의 톨루엔으로 세척했다. 조합된 유기상을 진공에서 증발시키고, 후속적으로 초임계유체 크로마토그래피 상에서 분석했다. 결과를 표 19 에 나타냈다.
실시예 41
(R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸] 벤질 부티레이트
교반기 및 온도계가 장치된 4 목 플라스크에 21.9 g (0.064 mol) 의 (±) -4-[4-디메틸아미노-1-(4'플루오로페닐)-1-히드록시부틸]-3-히드록시메틸벤조니트릴을 톨루엔 중에 함유하는 용액 21.9 g 를 충전했다. 이어서, 14.6 g (0.128 mmol) 의 비닐 부티레이트, 5.07 g (0.128 mol) 의 피리딘, 7.89 g (0.064 mol) 의 벤조산 및 2.19 g 의 고정 효소 (Novozym 435) 를 상기 혼합물에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 60 ℃ 까지 가온시키고, 15 시간 동안 약한 질소 흐름 하에 교반하고 교반을 중단했다. 상기 효소를 상기 반응 혼합물로부터 키리야마 깔때기를 이용하여 여과 제거하고, 50 g 의 톨루엔으로 세척했다. 조합된 톨루엔상을 물 (255 ml, 265 ml) 로 2 회 세척하고, 농축하여 14.9 g 의 (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)히드록시부틸] 벤질 부티레이트 벤조산 염을 수득했다.
4.0 g 의 (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)히드록시부틸] 벤질 부티레이트 벤조산 염 (7.48 mmol), 40 ml 의 물 및 40 ml 의 톨루엔의 혼합물에 1.26 g 의 30% 수산화나트륨 (9.45 mol) 을 교반하면서 첨가하고, 상기 혼합물은 30 분간 교반을 지속했다. 교반 후, 상기 혼합물을 정치시키고, 톨루엔층을 분리했다. 상기 톨루엔층을 40 ml 의 물로 세척하고, 40℃ 에서 감압 하에 농축함으로써 2.7 g 의 (R)-5-시아노-2-[디메틸아미노-(4'-플루오로페닐)-히드록시부틸] 벤질 부티레이트를 수득했다.
실시예 42
에시탈로프람 옥살레이트
키랄성 초임계유체 크로마토그래피에 의해 결정된 화학적 순도 99% 및 98.7%ee 의 (S)-4-(4-디메틸아미노)-1-(4'-플루오로페닐)-1-히드록시부틸)-3-히드록시메틸벤조니트릴 (15.8 g, 46.2 mmol) 를 톨루엔 (100 mL) 에 용해시켰다. 트리에틸아민 (13.0 mL, 93.2 mmol) 을 첨가한 후, 토실 클로라이드 (9.4 g, 49.4 mmol) 의 톨루엔 (1OO mL) 중 용액을 서서히 첨가했다. 생성된 용액을 실온에서 20 분 동안 교반한 후, 물 (50 mL) 및 진한 암모니아 (25 mL) 를 첨가했다. 상기 혼합물을 45℃ 에서 2 분 동안 교반하고, 분별 깔때기로 이동시켰다. 상들을 분리시키고, 유기상을 물 (50 mL) 로 세척하고, MgSO4 로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 미정제 생성물 (14.2 g) 을 95% 의 수율로 수득했다.
상기 미정제 생성물을 에탄올 (17 mL) 에 용해시키고, 옥살산 (3.95 g, 43.9 mmol) 의 에탄올 (27 mL) 중 용액을 첨가했다. 침전을 여과로써 수집하여 에시탈로프람, 옥살레이트 (14.0 g) 를 수득하여, 에탄올 (85 mL) 로부터 재결정화하여 최종 생성물 (12.2 g) 을 수득했다. 순도는 HPLC 에 의해 99.65% 로 측정되었다. 상기의 ee 는 키랄성 초임계유체 크로마토그래피에 의해 98.5% 로 측정되었다.

Claims (98)

  1. 하기 식을 가지는 디올의 S- 또는 R-거울상이성질체:
    [식 중, R 은 시아노 또는 시아노기로 변환될 수 있는 기이고, Z 는 -CH2-N(R'R'') 기 (식 중, R' 및 R'' 은 C1-6-알킬이거나 또는 R' 및 R'' 은 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성함) 이거나 또는 Z 는 디메틸아미노메틸기로 변환될 수 있는 기이고, 점선은 이중 또는 단일 결합을 나타내고, Hal 은 할로겐이다] 또는 이의 염, 및/또는 이에 반대되는 하기 식을 가지는 아실화된 디올의 거울상이성질체
    [식 중, R, Z, 점선 및 Hal 은 상기 정의한 바와 같고, W 는 O 또는 S 이고, R3 는 -Y-R1 (식 중, R1 은 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10 -알키닐이고, 이때, 이들은 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C 1-10-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있거나, 또는 R1 은 아릴이고, 식 중, 상기 아릴기 및 헤테로아릴기들 중 어느 것이나 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10 -알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있고, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이다], 또는 이의 염의 제조방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법:
    a) 하기 식의 라세믹 화합물:
    [식 중, R, Z, 점선 및 Hal 은 상기 정의한 바와 같다] 을 하기 식:
    을 가지는 아실화제 또는 식 R1-N=C=O 을 가지는 이소시아네이트 또는 식 R1-N=C=S 를 가지는 이소티오시아네이트 [이때 X 는 O 또는 S 이고; W 는 O 또는 S 이며; U 는 O 또는 S 이고, V 는 할로겐이고,
    R0 는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 이들은 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있거나, 또는 R0 는 아릴이고, 이때 상기 아릴기 및 헤테로아릴기들 중 어느 것이나 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있고;
    R1 은 R0 에 대하여 정의된 바와 같고;
    R2 는 R0 에 대하여 정의된 바와 같거나, 또는 R2 는 적당한 이탈기이거나;
    또는 R0 및 R1 은 함께 탄소수 3 내지 5 의 사슬을 형성하며;
    단, X 가 S 인 경우 W 및 U 는 S 가 아니다] 를 사용하여 선택적인 효소적 아실화를 시켜, R- 또는 S-형태 둘 중 하나의 화학식 (II) 의 출발물질 및 하기 식을 가지는 화합물의 반대 거울상이성질체:
    [이때, R, W, Hal, R3, 점선 및 Z 는 상기 정의된 바와 같다] 의 혼합물을 형성하는 단계; 또는
    b) 하기 식의 라세믹 화합물:
    [식 중, R, Z, W, Hal, 점선 및 R3 는 상기 정의된 바와 같다] 을 선택적인 효소적 탈아실화를 시켜, R- 또는 S-형태 둘 중 하나인 하기 식의 탈아실화된 화합물:
    [식 중, R, Hal, 점선 및 Z 는 상기 정의된 바와 같다] 및 이의 반대 거울상이성질체 형태의 화학식 (IV) 의 아실화된 출발물질의 혼합물을 형성하는 단계;
    임의적으로 수반되는 바, 어느 순서로든지, 화학식 (II) 의 화합물의 S- 또는 R-거울상이성질체 및/또는 이에 반대되는 화학식 (IV) 의 화합물의 거울상이성질체 또는 이들의 염을 단리시키는 단계.
  2. 제 1 항에 있어서, a) 에 따른 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, b) 에 따른 방법.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 화학식 (II) 의 화합물의 아실화의 결과로 S-형태의 화학식 (II) 의 화합물 및 R-형태의 화학식 (IV) 의 화합물을 함유하는 혼합물이 생성되는 방법.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 화학식 (II) 의 화합물의 아실화의 결과로 R-형태의 화학식 (II) 의 화합물 및 S-형태의 화학식 (IV) 의 화합물을 함유하는 혼합물이 생성되는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (IV) 의 화합물의 탈아실화의 결과로 S-형태의 화학식 (IV) 의 화합물 및 R-형태의 화학식 (II) 의 화합물을 함유하는 혼합물이 생성되는 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (IV) 의 화합물의 탈아실화의 결과로 R-형태의 화학식 (IV) 의 화합물 및 S-형태의 화학식 (II)의 화합물을 함유하는 혼합물이 생성되는 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, Hal 이 플루오로이고 R 이 할로겐 또는 시아노이고, 바람직하게는 R 이 시아노인 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 점선이 단일 결합을 나타내는 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, Z 가 디메틸아미노메틸이거나 또는 디메틸아미노메틸기로 변환될 수 있는 기이고, 바람직하게는 Z 가 디메틸아미노메틸기인 방법.
  11. 제 1 항 내지 제 2 항, 제 4 항 내지 제 5 항 및 제 8 항 내지 제 10 항에 있어서, 아실화제가 화학식 (IIIa), (IIIb) 및 (IIIc) 의 화합물들로부터 선택되는 화합물인 방법.
  12. 제 11 항에 있어서, 아실화제가 화학식 (IIIa) 및 (IIIb) 의 화합물들로부터 선택되는 화합물인 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 아실화제가 화학식 (IIIa) 의 화합물인 방법.
  14. 제 12 항에 있어서, 아실화제가 화학식 (IIIb) 의 화합물인 방법.
  15. 제 11 항에 있어서, 아실화제가 화학식 (IIIc) 의 화합물인 방법.
  16. 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, U 가 O 인 방법.
  17. 제 11 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, W 가 O 인 방법.
  18. 제 11 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, X 가 O 인 방법.
  19. 제 11 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, R0, R1 및 R2 가 독립적으로, 모두 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐로부터 선택되거나, 또는 R2 는 이탈기, 예컨대, 숙신이미딜 (succinimidyl), HOBt 및 pfp 이거나, 또는 R0 및 R1 이 함께 탄소수 3 내지 5 의 사슬을 형성하는 방법.
  20. 제 19 항에 있어서, R0, R1 및 R2 가 독립적으로, 모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐로부터 선택되는 방법.
  21. 제 20 항에 있어서, R0 및 R1 이 C1-3-알킬이고, R2 가 할로겐 으로 1회 이상 치환된 C1-3-알킬이거나 또는 R2 가 C2-3-알케닐인 방법.
  22. 제 13 항에 있어서, R0 및 R1 이 독립적으로, 모두 C1-4-알콕시, C1-4 -알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐로부터 선택되는 방법.
  23. 제 22 항에 있어서, R0 및 R1 이 독립적으로, 모두 C1-3-알콕시, C1-3 -알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3-알키닐로부터 선택되는 방법.
  24. 제 22 항에 있어서, R0 및 R1 이 C1-4-알킬인 방법.
  25. 제 24 항에 있어서, R0 및 R1 이 C1-3-알킬, 적당한 메틸, 에틸 또는 프로필이고, 바람직하게는 프로필인 방법.
  26. 제 14 항에 있어서, R1 및 R2 가 독립적으로, 모두 C1-4-알콕시, C1-6 -알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐로부터 선택되거나, 또는 R2 가 이탈기, 예컨대, 숙신이미딜, HOBt 및 pfp 인 방법.
  27. 제 26 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3 -알키닐로부터 선택되고, R2 가 할로겐으로 1회 이상 치환된 C1-4-알킬이거나 또는 R2 가 C2-4-알케닐인 방법.
  28. 제 27 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3 -알키닐이고, R2 가 할로겐으로 1회 이상 치환된 C1-3-알킬이거나 또는 R2 가 C2-3-알케닐인 방법.
  29. 제 27 항에 있어서, R1 이 C1-3-알킬인 방법.
  30. 제 29 항에 있어서, R1 이 메틸, 에틸 또는 프로필 등의 C1-3-알킬, 및 할로겐으로 1회 이상 치환된 C1-3-알킬이거나 또는 R2 가 C2-3-알케닐인 방법.
  31. 제 30 항에 있어서, R2 가 비닐인 방법.
  32. 제 31 항에 있어서, R1 이 프로필인 방법.
  33. 제 15 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4 -알키닐인 방법.
  34. 제 33 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3 -알키닐인 방법.
  35. 제 34 항에 있어서, R1 이 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐이고, 바람직하게는 R1 이 C1-3-알킬, 예컨대 메틸, 에틸 또는 프로필이고, 바람직하게는 프로필인 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 2 항, 제 4 항 내지 제 5 항 및 제 8 항 내지 제 10 항에 있어서, 아실화제가 식 R1-N=C=O 의 이소시아네이트 또는 식 R1-N=C=S 의 이소티오시아네이트인 방법.
  37. 제 36 항에 있어서, 아실화제가 식 R1-N=C=S 의 이소티오시아네이트인 방법.
  38. 제 36 항에 있어서, 아실화제가 식 R1-N=C=O 의 이소시아네이트인 방법.
  39. 제 36 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-4-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 및 C2-4-알키닐인 방법.
  40. 제 39 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 및 C2-3 -알키닐인 방법.
  41. 제 40 항에 있어서, R1 이 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3-알키닐인 방법.
  42. 제 41 항에 있어서, R1 이 메틸, 에틸, 또는 프로필이고, 바람직하게는 프로필인 방법.
  43. 제 1 항, 제 3 항 및 제 6 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 사용되는 화학식 (IV) 의 라세믹 화합물이 Y 가 O 또는 S 인 화합물인 방법.
  44. 제 43 항에 있어서, 상기 화학식 (IV) 의 라세믹 화합물이 Y 가 O 인 화합물인 방법.
  45. 제 43 항에 있어서, 사용되는 화학식 (IV) 의 라세믹 화합물이 Y 가 S 인 화합물인 방법.
  46. 제 1 항, 제 3 항 및 제 6 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 사용되는 화학식 (IV) 의 라세믹 화합물이 Y 가 결합인 화합물인 방법.
  47. 제 1 항, 제 3 항 및 제 6 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 사용되는 화학식 (IV) 의 라세믹 화합물이 Y 가 NH 인 화합물인 방법.
  48. 제 43 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐인 방법.
  49. 제 48 항에 있어서, R1 이, 모두 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로 및 시아노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐인 방법.
  50. 제 49 항에 있어서, R1 이 C1-10-알킬인 방법.
  51. 제 1 항 내지 제 2 항, 제 4 항 내지 제 5 항 및 제 8 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서, 효소적 아실화가 가수분해 효소 (hydrolase), 예컨대 리파제 (lipase), 에스테라제 (esterase), 아실라제 (acylase), 또는 프로테아제 (protease) 를 사용하여 수행되는 방법.
  52. 제 1 항, 제 3 항, 제 6 항 내지 제 10 항 및 제 40 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서, 효소적 탈아실화가 가수분해 효소, 예컨대 리파제, 에스테라제, 아실라제, 또는 프로테아제를 사용하여 수행되는 방법.
  53. 제 51 항 또는 제 52 항에 있어서, 상기 가수분해 효소가 고정된 효소 또는 가교된 효소 결정(Cross-Linked Enzyme Crystal, CLEC) 효소의 형태로 사용되는 방법.
  54. 제 51 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서, 사용되는 효소가 슈도모나스 종 지질단백질 리파제 (Pseudomonas sp. lipoprotein lipase), 캔디다 안타르티카 리파제 B (Candida antartica lipase B) 또는 테모마이세스 라누기노서스 리파제 (Thermomyces lanuginosus lipase) 또는 이들 효소의 변이체 또는 변형체로부터 선택되는 방법.
  55. 제 51 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 효소가 슈도모나스 종 지질단백질 리파제 또는 슈도모나스 종 지질단백질 리파제의 변이체 또는 변형체인 방법.
  56. 제 55 항에 있어서, 사용되는 효소가 슈도모나스 종 지질단백질 리파제인 방법.
  57. 제 51 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 효소가 캔디다 안타르티카 리파제 B 또는 캔디다 안타르티카 리파제 B 의 변이체 또는 변형체인 방법.
  58. 제 57 항에 있어서, 상기 효소가 캔디다 안타르티카 리파제 B 인 방법.
  59. 제 58 항에 있어서, 상기 효소가 노보자임435(Novozyme435)인 방법.
  60. 제 51 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 효소가 테모마이세스 라누기노서스 리파제 또는 테모마이세스 라누기노서스 리파제의 변이체 또는 변형체인 방법.
  61. 제 60 항에 있어서, 상기 효소가 테모마이세스 라누기노서스 리파제인 방법.
  62. 제 61 항에 있어서, 상기 효소가 리포자임TM TL IM (LipozymeTM TL IM) 인 방법.
  63. 제 1 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항에 있어서, 효소적 아실화 또는 효소적 탈아실화가 유기 염기 또는 유기 산 또는 이들의 혼합물의 존재하에서 수행되는 방법.
  64. 제 63 항에 있어서, 효소적 아실화 또는 효소적 탈아실화가 유기 산의 존재하에서 수행되는 방법.
  65. 제 64 항에 있어서, 효소적 아실화가 유기 산의 존재하에서 수행되는 방법.
  66. 제 64 항 또는 제 65 항에 있어서, 상기 유기 산이 방향족 카르복실산 또는 지방족 카르복실산인 방법.
  67. 제 63 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유기 산이 n-프로피온산, 이소-프로피온산, n-부티르산, 이소-부티르산, 이소-발레산, 2-에틸부티르산, 시클로헥산카르복실산, 피발린산 (pivalic acid) , 벤조산, p-톨루익산, 살리실산 및 3-페닐프로피온산으로부터 선택되는 방법.
  68. 제 67 항에 있어서, 상기 유기 산이 피발린산인 방법.
  69. 화학식 (IV) 의 화합물의 S- 또는 R-거울상이성질체:
    [식 중, R 은 시아노이거나 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, Z 는 기 -CH2-N(R'R'') (식 중, R' 및 R'' 은 C1-6-알킬이거나, R' 및 R'' 은 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성한다) 이거나, Z 는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이고, Hal 은 할로겐이고, W 는 O 또는 S 이고, 점선은 이중 또는 단일 결합이고, R3 은 -Y-R1 (식 중, R1 은 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 이때 이들은 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 임의 치환될 수 있고, 또는 R1 은 아릴이고, 이때 상기 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 것이라도 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10 -알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있고, Y 는 결합, O, S 또는 NH 임)이다], 또는 이의 염.
  70. 제 69 항에 있어서, Hal 이 플루오로이고, R 이 할로겐 또는 시아노이고, 바람직하게는 R 이 시아노인 거울상이성질체.
  71. 제 69 항 또는 제 70 항에 있어서, 점선이 단일 결합을 나타내는 거울상이성질체.
  72. 제 70 항 또는 제 71 항에 있어서, Z 가 디메틸아미노메틸이거나 또는 디메틸아미노메틸기로 변환될 수 있는 기이고, 바람직하게는 Z 가 디메틸아미노메틸기인 거울상이성질체.
  73. 제 69 항 또는 72 항 중 어느 한 항에 있어서, Y 가 O 또는 S 인 거울상이성질체.
  74. 제 73 항에 있어서, Y 가 O 인 거울상이성질체.
  75. 제 73 항에 있어서, Y 가 S 인 거울상이성질체.
  76. 제 69 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서, Y 가 결합인 거울상이성질체.
  77. 제 69 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서, Y 가 NH 인 거울상이성질체.
  78. 제 69 항 내지 제 77 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-4-알콕시, C1-4-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-4-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-4-알킬, C2-4-알케닐 또는 C2-4-알키닐인 거울상이성질체.
  79. 제 78 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-3-알콕시, C1-3-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-3-알킬아미노 및 디-(C1-3-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-3-알킬, C2-3-알케닐 또는 C2-3 -알키닐인 거울상이성질체.
  80. 제 79 항에 있어서, R1 이 C1-3-알킬인 거울상이성질체.
  81. 제 69 항 내지 제 77 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 이, 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐인 거울상이성질체.
  82. 제 81 항에 있어서, R1 이, 모두 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로 및 시아노로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐인 거울상이성질체.
  83. 제 82 항에 있어서, R1 이 C1-10-알킬, 바람직하게는 비분지 C1-10-알킬인 거울상이성질체.
  84. 하기 식의 화합물 또는 그의 염:
    [식 중, R 은 시아노이거나 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, 점선은 이중 또는 단일 결합이고, Hal 은 할로겐이고, Z 는 기 -CH2-N(R'R'') (식 중, R' 및 R'' 은 C1-6-알킬이거나, R' 및 R'' 은 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성함) 이거나, Z 는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이고, W 는 O 또는 S 이고 R3 은 -Y-R1 (식 중, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이고 R1 은 모두 임의로 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택된 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이거나, R1 은 아릴이고, 이때 상기 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 것이라도 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택된 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있음)이다]
    및/또는 하기 화학식의 디올 또는 그의 염:
    [식 중, R, Z, Hal 및 점선은 상기 정의한 바와 같다]
    을, 화학식 (IV)의 화합물과 화학식 (II)의 디올을 함유하고 있는 혼합물로부터 단리 및 정제하는 방법으로서,
    a) 화학식 (IV) 의 화합물 및 화학식 (II) 의 디올을 함유하는 상기 혼합물을 산의 존재 하에서 물과 유기 용매의 혼합물 중에 처리하는 단계;
    b) 화학식 (II) 의 디올을 상기 산의 염으로서 함유하는 수성 상을 유기 상으로부터의 분리시켜 화학식 (IV) 의 화합물을 상기 산의 염으로서 함유하는 유기 상을 수득하는 단계; 및
    임의로, 염기로서 또는 이의 염으로서의 화학식 (II) 의 화합물을 단리시키는 단계, 및 임의로, 염기로서 또는 이의 염으로서의 화학식 (IV) 의 화합물을 단리시키는 단계를 포함하는 방법.
  85. 제 84 항에 있어서, 화학식 (II)의 디올의 S-거울상이성질체가 화학식 (IV)의 아실 유도체의 R-거울상이성질체로부터 분리되는 방법.
  86. 제 84 항에 있어서, 화학식 (IV)의 아실 유도체의 S-거울상이성질체가 화학식 (II)의 디올의 R-거울상이성질체로부터 분리되는 방법.
  87. 제 84 항 내지 제 86 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 a)에서 사용된 화학식 (IV)의 아실 유도체의 R- 또는 S-거울상이성질체와 이에 반대되는 화학식 (II)의 디올의 거울상이성질체가 제 1 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조되는 방법.
  88. 하기 식의 아실 화합물 또는 그의 염:
    [식 중, R 은 시아노이거나 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, Hal 은 할로겐이고, 점선은 이중 또는 단일 결합이고, Z 는 기 -CH2-N(R'R'') (식 중, R' 및 R'' 은 C1-6-알킬이거나, R' 및 R'' 은 서로 연결되어 이들이 부착된 N-원자를 포함하는 환형 구조를 형성함) 이거나, Z 는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이고, W 는 O 또는 S 이고, R3 은 -Y-R1 (식 중, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이고, R 1 은, 모두 임의로 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택된 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있는, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이거나, R1 은 아릴이고, 이때 상기 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 것이라도 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택된 치환기로 1 회 이상 치환될 수 있음)이다]
    및/또는 하기 화학식의 디올:
    (식 중, R, Hal, Z 및 점선은 상기 정의한 바와 같다)
    을 화학식 (IV)의 아실 유도체와 화학식 (II)의 디올을 함유하고 있는 혼합물로부터 단리 및 정제하는 방법으로서,
    a) 화학식 (Ⅳ)의 아실 유도체 및 화학식 (II)의 디올을 함유한 상기 혼합물을 물, 양성자성 유기 용매 및 비양성자성 유기 용매의 혼합물에 처리하는 단계;
    b) 화학식 (II)의 디올을 함유한 수성상을 유기상으로부터 분리하여, 화학식 (Ⅳ)의 아실 유도체를 함유한 유기상을 수득하는 단계; 및
    임의로 화학식 (II)의 디올 및/또는 화학식 (Ⅳ)의 화합물을 수성/유기 상으로부터 분리하는 단계, 및 임의로 화학식 (II) 및/또는 (Ⅳ)의 화합물을 그의 염으로 전환시키는 단계를 포함하는 방법.
  89. 제 88 항에 있어서, 화학식 (II)의 디올의 S-디올을 화학식 (IV)의 아실 유도체의 R-거울상이성질체로부터 분리하는 방법.
  90. 제 88 항에 있어서, 화학식 (IV)의 아실 유도체의 S-거울상이성질체를 화학식 (II)의 디올의 R-거울상이성질체로부터 분리시키는 방법.
  91. 제 88 항 내지 제 90 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 a)에서 사용된 화학식 (IV)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체와 이에 반대되는 화학식 (II)의 화합물의 거울상이성질체가 제 1 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조되는 방법.
  92. 하기 화학식 (I)의 에스시탈로프람 (escitalopram):
    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조 방법으로서, 하기 화학식 (IIs)의 S-거울상이성질체 또는 이의 염:
    [식 중, R 은 시아노 또는 시아노기로 전환될 수 있는 기이고, 점선은 이중 또는 단일 결합을 나타내고, Z 는 디메틸아미노메틸기 또는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이며, Hal 은 할로겐이다],
    또는 하기 화학식 (IVs)의 아실화된 디올의 S-거울상이성질체 또는 이의 염:
    [식 중, R, Z, 점선 및 Hal 은 상기 정의한 바와 같고, W 는 O 또는 S 이고, R3 은 -Y-R1 (이때, R1 은, C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이고, 이때, 이들은 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-6-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있고, 또는 R1 은 아릴이고, 이때 상기 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 것이라도 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기로 1회 이상 임의로 치환될 수 있으며, Y 는 결합, O, S 또는 NH 임) 이다] 을, 제 1 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항의 방법에 의하여 제조하는 단계, 임의적으로 그 이후, (어느 순서로든 가능) R 기를 시아노기로 전환시키는 단계, Z 기를 디메틸아미노메틸기로 전환시키는 단계, 점선으로 나타낸 이중 결합을 단일 결합으로 환원시키는 단계 및/또는 Hal 기를 플루오로기로 전환시키는 단계 및, 그 후 화학식 (IIs) 또는 (IVs)의 S-거울상이성질체 또는 이의 치환성 (labile) 에스테르 유도체를 염기성 조건하에서 고리폐쇄(ringclosure)시키는 단계로써 하기 화학식 (Ⅴ)의 화합물을 형성시키고:
    그 이후, (어느 순서로든 가능) R 이 시아노가 아닌 경우, R 기를 시아노기로 전환시키는 단계, Z 가 디메틸아미노메틸이 아닌 경우, Z 기를 디메틸아미노메틸기로 전환시키는 단계, 점선이 이중 결합을 나타내는 경우, 이를 단일 결합으로 환원시키는 단계, 및 Hal 이 플루오로가 아닌 겨우, Hal 을 플루오로기로 전환시키는 단계, 그 후, 에스시탈로프람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 단리시키는 단계를 포함하는 방법.
  93. 제 92 항에 있어서, 효소적 아실화에 의해 수득되는 화학식 (II)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체 및 이에 반대되는 화학식 (IV)의 화합물의 거울상이성질체의 혼합물을 제 84 항 내지 제 87 항 중 어느 한 항에 따른 단리 및 정제 공정에 의해 서로 분리시키는 방법.
  94. 제 92 항에 있어서, 효소적 아실화에 의해 수득되는 화학식 (II)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체 및 화학식 (IV)의 화합물의 반대 거울상이성질체의 혼합물을 제 88 항 내지 제 91 항 중 어느 한 항에 따른 단리 및 정제 공정에 의해 서로 분리시키는 방법.
  95. 라세믹 시탈로프람 및/또는 에스시탈로프람 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조 방법으로서, 하기 화학식을 갖는 디올의 R-거울상이성질체 또는 이의 염:
    (식 중, R 은 시아노이거나 또는 시아노기로 전환될 수 있는 기이며, 점선은 이중 또는 단일 결합이며, Z 는 디메틸아미노메틸기이거나 또는 디메틸아미노메틸기로 전환될 수 있는 기이고, Hal 은 할로겐이다),
    또는 하기 화학식을 갖는 아실화된 디올의 R-거울상이성질체 또는 이의 염:
    [식 중, R, Z, 점선 및 Hal은 상기 정의된 바와 같고, W 는 O 또는 S, 및 R3 는 -Y-R1 (여기서, R1 은, 모두 C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노, 디-(C1-10-알킬)아미노, 아릴, 아릴옥시, 아릴티오 및 헤테로아릴로부터 선택되는 치환기들로 1회 이상 임의 치환될 수 있는 C1-10-알킬, C2-10-알케닐 또는 C2-10-알키닐이거나, 또는 R1 은 아릴이고, 이때, 아릴 및 헤테로아릴기 중 어느 것이라도 C1-10-알킬, C2-10-알케닐, C2-10-알키닐, C1-10-알콕시, C1-10-알킬티오, 히드록시, 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, C1-10-알킬아미노 및 디-(C1-10-알킬)아미노로부터 선택되는 치환기들로 1 회 이상 임의 치환될 수 있고, Y 는 결합, O, S 또는 NH 이다} 이다] 을, 제 1 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 제조하는 단계, 임의적으로 그 이후, (어느 순서로든 가능) R 기를 시아노기로 전환시키는 단계, 점선으로 나타낸 이중 결합을 단일 결합으로 환원시키는 단계, Z 기를 디메틸아미노메틸기로 전환시키는 단계 및/또는 Hal 기를 플루오로기로 전환시키는 단계 및 화학식 (IIs) 또는 (IVs)의 R-거울상이성질체를 산성 조건하에서 고리폐쇄시키는 단계로써 하기 화학식 (Ⅴ)의 화합물
    및 소량의 이의 대응 R-거울상이성질체를 형성시키고, 그 이후, (어느 순서로든 가능) R 이 시아노가 아닌 경우, R 기를 시아노기로 전환시키는 단계, Z 가 디메틸아미노메틸이 아닌 경우, Z 기를 디메틸아미노메틸기로 전환시키는 단계, 점선이 이중 결합을 나타내는 경우, 단일 결합을 형성하도록 환원시키는 단계 및 Hal 이 플루오로가 아닌 겨우, Hal 을 플루오로기로 전환시키는 단계, 그 다음, 에스시탈로프람 및/또는 라세믹 시탈로프람 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 단리시키는 단계를 포함하는 방법.
  96. 제 95 항에 있어서, 라세믹 시탈로프람을 라세믹 시탈로프람 유리 염기 또는 이의 염의 침전에 의하여 단리시키고, 에스시탈로프람을 상기 침전물의 모액으로부터 회수하는 방법.
  97. 제 95 항에 있어서, 효소적 아실화에 의해 수득되는 화학식 (II)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체 및 이에 반대되는 화학식 (IV)의 화합물의 거울상이성질체의 혼합물을 제 84 항 내지 제 87 항 중 어느 한 항에 따른 단리 및 정제 공정에 의해 서로 분리시키는 방법.
  98. 제 95 항에 있어서, 효소적 아실화에 의해 수득되는 화학식 (II)의 화합물의 R- 또는 S-거울상이성질체 및 이에 반대되는 화학식 (IV)의 화합물의 거울상이성질체를 제 88 항 내지 제 91 항 중 어느 한 항에 따른 단리 및 정제 공정에 의해 서로 분리시키는 방법.
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