TWI286137B - Process for the isolation and purification of epothilones - Google Patents

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/ 1286137 A7 _____-_ B7 . — 一 _ 五、發明説明（彳） ( 本發明係關於阿波錫隆（特別係阿波錫隆A及/或阿波錫 隆B)自樹脂之一種新顆去吸附方法及包含該去吸附方法之 用於阿波錫隆之新穎製造，逐漸獲得或純化方法或製造方 法，以及某些溶劑用於阿波錫隆自樹脂之去吸附，之用途。 t明背景： . 阿波.錫隆A及B代表下列式之一種新穎種類之微管-安定 化之細胞毒素活性成分（見Gerth，K.等人，J. Antibiot· ii， 560-3 (1966)):

其中R表示氫（阿波錫隆A)或甲基（阿波錫隆B)。 自從此等阿波錫隆之敘遠（見世界智慧財產權組織專利 (W〇）93/10121)之後，已揭示用於阿波錫隆及主要地多種 阿波錫隆衍生物（於後文中共同地稱為“阿波錫隆”）之合成 及製造之若干方法，例如於世界智慧財產權組織專利 99/03 848，世界智慧財產權組織專利00/49020、母界智慧財… 產權組織專利00/4902卜世界智慧財產權組織專利〇〇/47584 、世界智慧財產權組織專利00/00485、世界智慧財產權組織 專利00/23452、世界智慧財產權組織專利99/〇3848.、.世界智慧 財產權組織專利00/49019、世界智慧財產權組織專利99/〇7692 、世界智慧財產權組織專利98/22461、世界智慧財產權組 -4- 本纸張尺度適用中国國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) I2«6137 A7 B7 五、發明説明（2 ) 織專利99/65913、世界智慧財產權組織專利98/38 192、世界 智慧財產權組織專利00/50423、世界智慧財產權組織專利 00/22139、世界智慧財產權組織專利99/58534、世界智慧財 產權組織專利97/19086、世界智慧財產權組織專利98/25929 、世界智慧財產權組織專利99/67252、世界智慧財產權組 織專利99/67253、世界智慧財產權組織專利〇〇/3丨247、世界 智慧財產權組織專利99/42602、世界智慧財產權組織專利 99/2 83 24、世界智慧財產權組織專利〇〇/5〇423、世界智慧財 產權組織專利00/39276、世界智慧財產權組織專利99/27890 、世界智慧財產權組織專利99/543 1 9、世界智慧財產權組 織專利99/543 1 8、世界智慧財產權組織專利99/025 14、世界 智慧財產權組織專利99/59985、世界智慧財產權組織專利 00/3 7473、世界智慧財產權組織專利98/08849、美國專利 6,04 3,372、美國專利5,969，145、世界智慧財產權組織專利 99/40047、世界智慧財產權組織專利99/01 124及世界智慧財 產權組織專利99/43653中揭示者。除了阿波錫隆a及阿波錫 隆B以外，特別地於世界智慧財產權組織專利97/1 9〇86及世 界智慧財產·權組織專利98/22461敘述之阿波錫隆D及E、及 於世界智慧財產權組織專利99/2246 1中敘述之阿波錫隆E 及F，以及於世界智慧財產權組織專利99/025 14中敘述之阿 波錫隆顯示令人發生興趣之性質。 作為治療用途之一種實例，國際專利申請案世界智慧財 產權組織專利99/43320敘述阿波錫隆作為對抗增生性疾病 (特別係腫瘤疾病）之藥劑之施藥之多種方法，其，由於彼 -5-

1286137 A7 -----------B7 五、發明説明（3 ) 等之相似之機構，因此以與紫杉醇（Taxol®)(—種熟知並且 市售足抗癌藥劑）可比較之方式作用。世界智慧財產權組織 專利99/3 9694揭示阿波錫隆（特別係阿波錫隆a&b)之某些 特定之配製物。 一 於與確疋之治療比較中，阿波錫隆（特別係阿波錫隆A及 最佳係阿波錫隆B)提供多種之利益，特別地亦於其中腫瘤 對於用糸杉醇之治療已變成無效之案例中。因此，為了滿 足預期足需求，用於以大數量合成彼等之方法係緊急需要 的0 攻今為止最有效率之製造方法至少包含某些生物合成步 驟及阿波錫隆自培養介質或其類似物之分離。 最子刀，藉由黏液細菌之天然物f，特別係來自細胞株纖 維堆囊黏細菌索斯90(S〇rangium CeUul〇sum s〇ce9〇)(於德 國微生物收集之第6773號下保存，見世界智慧產權組織專 利93/10 121)之阿波錫隆之萃取係於文獻中敘述。為了獲得 天然物貝（特別係阿波錫隆）之令人滿意之濃度，《前時常 將-種以聚苯乙埽為主之被吸附質樹脂加入培養介質中以 吸收於該介質’例如阿姆伯萊特（Amberlite)XAD-1180 (Rohm & Haas，Frankfurt，Germany)。 ；： 匕種方去之缺點係，於大規模時，其導致許多問 題。關係經由樹脂之小球體（glQbules)而損傷、管線可堵塞 裝置可由於機械之摩擦而遭受較多之磨耗。樹脂之 小球體係多孔的及因此具有大之内表面積(約825平方米/ 克樹脂）。由於封閉於樹脂中之空氣未受到加熱加壓滅菌，

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-6- 1286137 A7 B7 五、發明説明（4 ) 因此滅菌變成問題。因此，該方法不能於產生阿波錫隆之 微生物之培養之期間以大規模使用樹脂添加而實際地進行。 因此，用於阿波錫隆，特別係阿波錫隆A及B，之製造之 先進方法係被發現及敘述於世界智慧財產權組織專利 99/42602中。該方法包含來自產生阿波錫隆之微生物之培 養介質之阿波錫隆之複合化（complexing)(該介質包含環糊 精或其他形成複合物之劑）、不含細胞之培養介質（例如該 培養介質之濾液或離心分離物）與一種合成樹脂（例如以苯 乙烯/二乙烯基苯共聚物為主作為基質之一種樹脂，諸如阿 姆伯萊特 XAD-16 (Rohm & Haas Germany GmbH, Frankfurt，Germany)或戴安恩（Diaion) HP-20 (Resindion S.R.L·，Mitsubishi Chemical CO.，Milan，Italy))之混合俾能 吸收該阿波錫隆及去吸附，特別係用一種醇，最佳係異丙 醇。此接著係水之添加至醇相，溶劑相之移除（較佳係經由 蒸發），生成之殘渣於一種酯（特別係乙酸乙酯或乙酸異丙 酯）之存在下之相分離，通常乾燥之酯相之分子過濾（凝膠 層析術），生成之阿波錫隆混合物經由反相（reverse phase) 高效能層析術（HPLC)之分離（較佳係經由用一種腈/水（例 如乙腈/水）混合物之溶析），及視需要經由於一種水/醚混合 物之存在下之相分離而進一步之純化，較佳地其後於矽凝 膠上之吸附層析術俾能達成雜質之進一步之移除，及結晶/ 再結晶。 雖然有用之進展及對於工業規模製造係適合的，但是此 方法仍然遭遇某些缺點之問題。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1286137 A7 B7 五、發明説明（5 例如’為了獲得足夠之純度，使用分子過濾步驟或♦凝 膠吸附層析術步驟或兩者，係適當的。更困難者係來自於 一種醋（諸如乙酸乙酯）之存在下之相分離，其（特別地由於 在大之工業規模中用於水/酯相之相分離之長時間）係很耗 費時間的’以及其後之蒸發，其附加地對於起泡及噴丨賤係 難以處理的。 因此儘可能多數地避免以上之困難及尋找於阿波錫隆之 吸附於樹脂之後用於阿波錫隆（特別係阿波錫隆八及B)之分 離之新並且有利方法係由本發明解決之一項問題。 發明之一般說明 很令人驚訝地，頃已發現經由用某些其他溶劑（即弱極性 或無極性溶劑，如以下描述）簡單地取代作為去吸附溶劑使 用之醇’提供可達成之實質之成功，俾能獲得對於以上提 及之問通之解答’導致附加之利益諸如改良之去吸附及較 南之最後產率。於附加之利益中係⑴去吸附之較高之選擇 性；（Π)經去吸附之阿波錫隆之較高數量，表示較完全之去 吸附’（iii)不需要具有很成問題之水/酯相分離及其後之醚 蒸發之用醋（例如乙酸乙酯）之再萃取；（iv)不需要分子過濾 及通常不需要吸附層析術；（v)用於去吸附所需要之時間係 可觀地降低；（vi)較少之方法步驟；（vii)降低之污染危險（ 對於很毒性之阿波錫隆係重要的）；及/或（viii)較佳並且較 安全之處理（視使用於去吸附（=萃取）之溶劑而定）；及（ix) 亦視落劑而定’於反相層析術之後需要移除之未預期之更 較少數量之具有相似於阿波錫隆（特別係阿波錫隆B)之極 -8 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公爱）

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性之副產物或雜質。此等及另外之利益可係自於其後之發 明之詳細說明中提供之細節推論： ^ fiiL之詳細說明 本發明之一項態樣係關於以一種弱極性或無極性溶劑將 阿波锡隆（特別係阿波錫隆A及/或B，特定言之阿波锡隆b) 自一種樹脂（特別係一種合成樹脂）去吸附之一種方法。 另一項態樣係關於逐漸獲得（或純化）阿波錫隆（特別係於 彼等之於用於化學合成之一種標準介質或較佳地包含微生 物（特別係黏液細菌，特定言之纖維堆囊黏細菌，其對於產 生阿波錫隆，特別係阿波錫隆A及/或B，係適合的）、及一 種形成複合物之成分之培養介質中之製造之後）之一種方 法，該方法包含用於該阿波錫隆自一種樹脂之去吸附之一 種弱極性或無極性溶劑之使用。 本I明之弟二項怨樣係關於一種弱極性或無極性溶劑對 於阿波錫隆（特別係阿波錫隆A及/或B，特定言之阿波錫隆 B)自一種樹脂（特別係一種合成樹脂）之去吸附之用途。 於m文中及於後文中使用之一般術語較佳地具有於後文 中提供之意義： 術語“阿波錫隆’’較佳係關於在專利申請案世界智慧財產 權組織專利99/03848、世界智慧財產權組織專利〇〇/49〇2〇 、世界智慧財產權組織專利00/4902 1、世界智慧財產權組 織專利00/47584、世界智慧財產權組織專利〇〇/〇〇485、世界 智慧財產權組織專利00/23452、世界智慧財產權組織專利 99/03848、世界智慧財產權組織專利00/49019、世界智慧財 • 9 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)

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線 1286137 A7 B7 五、發明説明（7 ) 產權組織專利99/07692、世界智慧財產權組織專利98/2246 1 、世界智慧財產權組織專利99/65913、世界智慧財產權組 織專利98/3 8 192、世界智慧財產權組織專利00/50423、世界 智慧財產權組織專利00/22 139、世界智慧財產權組織專利 99/5 85 34、世界智慧財產權組織專利97/19086、世界智慧財 產權組織專利98/25929、世界智慧財產權組織專利99/67252 、世界智慧財產權組織專利99/67253、世界智慧財產權組 織專利00/3 1247、世界智慧財產權組織專利99/42602、世界 智慧財產權組織專利99/28324、世界智慧財產權組織專利 00/5 0423、世界智慧財產權組織專利00/39276、世界智慧財 產權組織專利99/27890、世界智慧財產權組織專利99/543 19 、世界智慧財產權組織專利99/543 1 8、世界智慧財產權組 織專利99/025 14、世界智慧財產權組織專利99/59985、世界 智慧財產權組織專利00/37473、世界智慧財產權組織專利 98/0 8849、美國專利6,043,372、美國專利5,969，145、世界 智慧財產權組織專利99/40047、世界智慧財產權組織專利 99/01 124、及/或世界智慧財產權組織專利99/43653中提及 之任何阿波錫隆或阿波鍚隆衍生物，更佳係關於阿波錫隆 A及特別係阿波錫隆B，但於本發明之較寬廣之態樣中亦係 關於在世界智慧財產權組織專利97/19086及世界智慧財產 權組織專利98/22461中敘述之阿波錫隆D及E，於世界智慧 財產權組織專利98/22461中敘述之阿波錫隆E及F、或於世 界智慧財產權組織專利99/025 14中敘述之阿波錫隆。所有 之此等文件，特別係關於其中提及之阿波錫隆衍生物及較 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐） 1286137 A7 B7 五 、發明説明（8 佳之阿波錫隆衍生物，係以提及之方式藉此包括。 弱極性或無極性溶劑較佳地具有下列之特性： 較佳者係，於根據Snyder等人，J_ Chromatogr· Sci. U， 223 (1978)，測定之洗脫行列（eluotropic row)中，顯示下列 诗性之〉谷劑（其中Xe係質子受體參數（形成氫鍵如氫受體之 傾向之指示參數）、1係質子予體參數（形成氫鍵如氫予體 之傾向之指示參數）及Xn係偶極參數（顯示偶極特性），附有 Xe+Xd+Xn= 1之條件），或此等溶劑之混合物：

Xe = 〇,20-〇,40; Xd=〇，i5-〇,36;及 Xn = 0,38-0,60;較佳地 Xe = 〇,22-〇,32; Xd = 〇，l7-0,34;及 Xn = 0,39-0,54。 於弱極性或無極性溶劑中很較佳者係低碳烷基-低碳燒 基酮或％狀酮，諸如丙酮、甲基乙基酮、乙_戊酮、甲基異 丁基酮或環己酮，更佳係醚，特別係環狀醚，更特別係四 氫呋喃或二吟烷；再更佳者係酯族齒素化合物，特別係低 碳鹵2物，特別係二氯甲烷（=亞甲基二氣）或丨，2-二氯乙烷 ;或最特別係芳族溶劑，特別係萘或（較佳地）苯或經由一 個或多個（較佳係一個至三個）由低碳烷基（特別係甲美、 基或異丙基）、低碳燒氧基（特別係甲氧基或乙氧基）、土函素（ 特別係氟基、氯基、溴基或琪基）、硝基及低魏氧基·低 碳院基（特別係乙氧基甲基）組成之群中選出之分子内一部 .分而取代之莕或（較佳地）苯；特別係甲苯、乙苯、二 特別係鄰-、間-或對二甲苯）、菜、三甲苯、半菜1 丙苯、異丙基甲苯、苯以化物(特別係氟苯、氣苯未溴苯 或破苯）、低魏氧基苯（特別係乙氧基苯或甲氧基苯）'或 -11 本纸張尺度適用中國國豕標準(CNS) A4規格(21〇 X297公爱） 1286137 五 、發明説明（9 A7 B7

低故烷氧基-低碳烷基苯（特別係乙氧基或甲基苯（芊醚”或 兩種或兩種以上（例如2至4種之此等溶劑）之任何混合物； 最佳者係低碳烷基-苯，特別係乙苯、二甲苯（特別係鄰·、 間-或對二甲苯）、菜、1，2,4-三甲苯、半菜、異丙苯、異丙 基甲苯，及最特別係曱苯。 術語”弱極性或無極性溶劑，，亦包括兩種或兩種以上之於

前文及於後文中敘述之溶劑，例如2至4種此等溶劑，之混 合物。 裝 一字首”低碳，，經常表示，較佳地包含至多7個碳原子（特定 言之至多4個碳原子）之最大值、及係分枝的或未分枝之對 應地命名之自由基。低碳烷基可係例如未分枝的或一個或 多個分枝的，及係例如甲基、乙基、丙基（諸如異丙基或正 丙基）、丁基（諸如異丁基、第二丁基、第三丁基或正丁 ·基） 、或亦戊基諸如戊基或正戊基。 訂

幽素較佳係碘基、溴基、氯基或氟基。 烴較佳係具有4至32個，更佳係4至2〇個，再更佳係6至^ 6 個碳原子’之有機化合物及可係脂族者(例如線型、分枝或 環狀之飽和烷烴’例如環己烷）、具有一個或多個雙鍵及/ 或參鍵之線型、分枝或環狀（非芳族）有機化合物、或芳族 烴，後者係未經取代者或經由一個或多個（例如至多3個）由 低竣垸基（特別係甲基、乙基或異丙基）、低碳㈣基（特別 係曱氧基或乙氧基）、南素（特別係敦基、氯基、溴基或攀 基）、硝基及低碳烷氧基-低碳烷基（特別係乙氧基甲基）组成 之群中選出之取代基而取代者；較佳係經由一個至3個低碳 -12- 1286137 10 五、發明說明（ 烷；分子内-部分而取代者。 丙佳係幾基m烴，特㈣甲醇、乙醇或正-或異 ::特別係合成樹脂，較佳係以苯乙缔與二乙婦基苯共 樹脂’更佳係阿姆伯萊特編-4或較佳係阿姆 .^ ^ AD^6 (Rohm & Haas Germany GmbH, Frankfurt) 二 ^恩抑·20 (Resindion s.r.l·，難― an)。不待言，根據本發明自其去吸附一種或多種 阿ί"錫隆之樹脂具有與其非共價地接觸之阿波錫隆（例如 :，也恥〜於其或吸附於其）。換言之，於使用術語，，樹脂，， 希王以思表”具有與其接觸，特別係可逆地聯結於其 或吸附於其’《一種或多種阿波錫隆之樹脂”。 於本發明之—項較佳態樣中，本發明係關於包含以一種 肺性或無極性溶劑（如以上或以下敘述）自樹脂去吸附之 一種方法包含良好或需要之任何進一步純化步驟以於純 粹足形式獲得個別之阿波錫隆，特別係阿波錫隆A及最特 別係阿波錫隆B ,較佳係於本發明中如較佳者敘述者。 阿波錫隆之逐漸獲得之前係導致包含將逐漸獲得之阿波 錫隆之反應產物之反應或方法，此等阿波錫隆係（i)於溶解 於一種適合之極性水性介質中之後自化學反應混合物分離 ，或（Π)更佳地，經由將培養物分離成為液相（例如離二分 離物或濾液）及固相（細胞），特別係經由過濾或離心（管狀離 心機或分離器）而自具有產生阿波錫隆之微生物之培養介 13· 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公憂） 1286137 發明説明（ 質之上清液（例如包4 99/42602中敘述者，^世界智慧財產權组織專利 然後此種預處理較佳地糊精者）分離。 乙晞基苯共聚物作為基質;^V 以苯乙埽與二 稱為聚苯乙埽樹脂），,貝二7樹脂(於後文中亦簡單地 ίίΡ-20,混合（較佳係於 〇 次戴女心 離心分離物：樹脂體積之比例）。於較佳地小時（特 別係0.8至22小時）之接觸時間之後，將樹脂分離，例如經 由過滤、沉降或離心。倘若需要，則於吸附之後用一種強 極性溶劑，較佳係用水，洗滌該樹脂。 然後開始根據本發明之逐漸獲得之較佳方法：阿波錫隆 之去吸附（其本身形成本發明之一項很較佳之態樣）係以一 種弱極性或無極性溶劑實現，特定言之以低魏基函化物 ’特別係二氯甲烷或1，2-二氯乙烷，或更佳係芳族溶劑， 特別係莕或（較佳地）苯，或由一個或多個（較佳係一個至三 個）由低碳烷基（特別係甲基、乙基或異丙基）、低碳烷氧基（ 特別係甲氧基或乙氧基）、鹵素（特別係氟基、氣基、溴基 或績基）、硝基及低碳烷氧基-低碳烷基（特別係乙氧基甲基） 組成之群中選出之分子内一部分而取代之莕或（較佳地）苯 ;最佳係甲苯。可重複萃取之步驟一次或多次，較佳係〇 至三次，特別係一次，俾能於需要或合適時獲得較完全之 去吸附。 如此可獲得之經去吸附之阿波錫隆之溶液（於重複之萃 -14 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 裝 訂 線 1286137 A7

取之案例中係組合之溶液）之 於土 η 、漸獲得較佳地接續著使用 於去吸附之溶劑經由蒸發f芪餉、工^ 佳 . &、、、Λ (為餾）而自生成之溶液移除，較 佳係經由於反應器中及其後 ^ 、曼於旋轉4發器中於真空下之濃 其後，使用下列之步驟以發生 用種如〉容析之反相層析術之純 之步驟係選用的。 進一步之處理，其中經由 化步驟係必要的，而其他 種或多種阿波錫隆於去吸附之後之結晶；特別 用於阿波錫隆Β之結晶，將_種醇與—種烴（特別係_種 碳燒醇與具有3至Π)個環原子之—種環狀脂族烴，最佳係 醇與環己垸）之;昆合物（較佳係於1:1〇至1〇:1之體積/體積 ’特別係1:3至3:1)加入。水之添加導致快速之相分離，' 將醇相洛發至乾燥’例如經由於旋轉蒸發器中於真空下 生成之萃取物（其包含阿波錫隆Β)其後係自適合之溶劑‘ ^物結晶’特別係自醇/環狀脂族烴混合物，最佳係異丙ί /%己：i元，較佳係於1:1〇至1〇:1之體積/體積比，更佳係1 至6:1，最佳係1:6至1:4 ; 一（必要者）阿波錫隆於一種適合之溶劑中之溶解之後經 由反相層析術之分離，該溶劑特別係一種腈與水（較佳係乙 月月/水）之w合物，於1:1〇至1〇:1之較佳之體積/體積比，特 別係1.3至1 ·· 1，及用腈與水之混合物之溶析，較佳地其特徵 為茲層析術係於一種反相物質之管柱上進行，其係用烴鏈（ 諸如包含18個碳原子之烴鏈，特別係一種Rp_18物質）充填 ’及使用包含一種腈（特別係一種低碳烷基腈，特定言之乙 -15- G張尺度適用中國國家標準格(21〇χ297公釐)

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線 1286137 A7 五、發明説明 腈）之溶析液，特定言之使用腈/水之混合物，特別係乙腈/ 水之混合物，較佳係於約1:99至㈧：丨之腈比水之比例，主要 係於1:9與9:1之間’例如於以與7:3之間，例如3:7或4:6; 及自收集之包含阿波錫隆（特別係阿波錫隆A及最特別係阿 波錫隆B)之部分經由蒸發(蒸餾)而移除該月青；倘若合適， 則然後剩餘之水連同阿波錫隆係用一㈣萃耳又，特別係一 種低岐垅酸低妷烷基酯，較佳係乙酸異丙酯，具有隨後之 包含阿波锡隆之酉旨相之蒸發（較佳係首先於反應器中，然後 於旋轉蒸發器中於真空下）至乾燥；（倘若需要，則可將開 如之阿波錫隆落液分割及於超過一個之反相分離操作中分 離）； 一僅倘若需要（例如作為於去吸附後之結晶之替代），吸 附層析術，特疋言之經由加入至矽凝膠之管柱中及用一種 適合之溶劑或溶劑混合物溶析，特別係醋/烴之混合物，例 如烷酸低碳烷基醋/C4-Cl〇-烷烴，特別係乙酸乙醋或乙酸異 丙酯/正己烷，其中於酯與烴之間之比例較佳係於99:1至 1:99之範圍内，較佳係1〇:1至1:1〇，例如; -及最後再結晶，例如自適合之溶劑或溶劑混合物，例 如由醋類、醋/烴混合物或醇類組成之溶劑或溶劑混合物， 特別係乙酸乙_乙酸異丙g旨；甲苯係1:1()至1():1者，較佳 係2:3(阿波錫隆A)或者甲醇或乙酸乙酯（阿波錫隆b); 於其方法中，倘右需要及/或合適，則於使用之每種步驟 之間將生成之溶液或懸浮液濃縮、及/或將液體及固體成分 自彼此分離，特定言之經由溶液/懸浮液之沉降、過濾或離 -16-

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心。於以上及以下提及之較精確之定義較佳地可係使用於 以上之個別步驟中。 本發明足一項較佳態樣亦係關於吸附於合成樹脂之阿波 錫隆，、特別係阿波錫隆A或最特別係阿波錫隆b，之分離之 種心去’其方法包含 0) 4阿波錫隆以一種弱極性或無極性溶劑自該合成 樹脂之去吸附，特定言之以低碳烷基齒化物，特別 係一氯曱元或1，2-二氯乙烷，或更佳係芳族溶劑， 特別係萘或（較佳地）苯，或由一個或多個（較佳係一 個至三個）由低碳烷基（特別係甲基、乙基或異丙基） 低妷烷氧基（特別係甲氧基或乙氧基）、鹵素（特別 係氟基、氯基、溴基或碘基）、硝基及低碳烷氧基_ 低蚊燒基（特別係乙氧基甲基）組成之群中選出之分 子内一部分而取代之莕或（較佳地）苯；最佳係甲苯 ;或於本發明之一項較寬廣之態樣中，兩種或兩種 以上此等溶劑之混合物；及 阿波錫隆於一種適合之溶劑中之溶解之後經由 反相層析術之分離’該溶劑特別係一種腈與水（較佳 係乙腈/水）之混合物，於1:10至10:1之較佳之體積/ 體積比，特別係1:3至1:1，及用腈與水之混合物之 溶析，較佳地其特徵為該層析術係於一種反相物質 (特別係一種RP-18物質）之管柱上進行，其係用烴鏈 (諸如包含1 8個碳原子之烴鏈）充填，及使用包含一 種腈（特別係一種低碳烷基腈，特定言之乙腈）之溶 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）

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析液，特定^'之使用腈/水之混合物，特別係乙腈/ 水混合物，較佳係於約1:99至99:1之腈比水之比例 ，主要係於1:9與9:1之間，例如於2:8與7:3之間，例 如 3:7或 4:6。 •於本發明之一項另外之較佳態樣中，於上一段中以步驟 (1)開始及包含步驟（ii)之方法進一步包含對於以純粹之形 式達成個別之阿波錫隆（特別係阿波錫隆A及最特別係阿波 錫隆B)係優良的或需要之任何另外之純化步驟，較佳係於 本發明中如較佳者敘述者。 對於逐漸獲得之製備較佳係如下進行：阿波錫隆，特別係 來自化學反應混合物或更佳係來自微生物之培養物之上之 清液，之吸附可係如於世界智慧財產權組織專利99/426〇2 中敘述或以相似於其者而達成；簡要地，阿波錫隆係於離 心分離物中找到，然後該離心分離物係與一種合成樹脂直 接混合，特別係一種苯乙烯/二乙婦基苯共聚物樹脂，諸如 阿姆伯萊特XAD-16或戴安恩HP-20(較佳係於約1〇:1至 100··1之離心分離物：樹脂體積之比例，較佳係約5〇:1)及於 一攪拌機中攪摔。於此步驟中，該阿波錫隆係轉移至樹脂 。於對於吸附係足夠之期間之後，例如約〇.2至1〇小時之接 觸之期間之後’該樹脂係經由離心或過濾而分離。阿波錫 隆於树爿曰上之吸附亦可係於一層析術管柱中，經由將樹脂 置於管柱中及將離心分離物流過該樹脂而達成。於吸附之 後，樹脂係用水洗條。 然後開始及進行根據本發明之較佳方法如下：阿波鍚隆 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐）

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線 1286137 五 、發明説明（ 16 自該樹脂之去吸附較佳係以根 中1造落解於-種醇/烴混合物中，特別係於甲醇/環己燒 兮醇：:圭係於以上敘述之比例，於相對地低之體積中。： :別：：：二佳係至乾燥，然後將醇萃取物自-種醇( 於以:敘、=二種烴(特別係環己燒)之混合物(較佳係 …晶。然後將生成之固體結晶之物質 ::於-種腈/水滿合物(較佳係如以上敘述，特別係2 :二積二腈物)中’及將生成之進科溶液，倘若 而/以g過一次操作之分割之後，傾倒於一種製備之 反相官柱上。接著’用腈/水溶析’特別係如剛提及者。包 含阿波錫隆(特別係阿波錫隆八及最特別係阿波錫隆B)之生 二之邵分中之(乙)腈係經由蒸發(蒸餾)而移除，及生成之水 =用-㈣（特別係乙酸異丙§旨）萃取。然後制萃取物 洛發’較佳係至乾燥，及其後將生成之物質再結晶，例如 ’阿波錫隆A邵分係直接自—種酯/烴混合物(例如乙酸乙酯 L2:3)結晶，及阿波錫隆B部分係直接自一種醋（特別係 乙鉍乙酯）或較佳地自一種醇（特別係甲醇）結晶。 特別係以甲苯，已發現一種很選擇性之溶析液（去吸附劑 )，其容許以對於在世界智慧財產權組織專利99/426〇2中使 用之異丙醇所需要之去吸附時間之一半達成約i 〇〇%產率 々人騖"牙地，當與異丙醇去吸附比較時，於用甲苯去吸 -19- 本紙張尺度朗中國國家標準(CNS) A4规格(21GX297公爱)— 1286137

附之後經去吸财士 π 。(雖然自理$波錫隆之數量係增加，例如至130%) 其適當地顯：：’此無爭論餘地呈現不可能的，但是 樹脂之檢定相：：： —項主要利益:結果係與經負載之 須採取不完全之去：檢定使用異丙醇以去吸附’因此必 之檢定值，並二V附裎序作為基礎，其原有地導致較低 /、 ^呈現係虛偽的）。該阿波錫隆混合物可係 (不-有或具有先前之結晶)直接地應用於 溶劑數量、擔挫、Φ去、 、、、 關於 择速率及溫度，該方法變成很不敏感的 (robust)雖然對於醇類⑼如乙醇或異丙醇），於攪摔下可 二丁又相去吸附，其中第一數量之含阿波錫隆之物質係於 第寺間翊間中去吸附（可能地經由於聚苯乙埽xAD-丨6 , 、八有兩個、，’田孔大小分布之最大值，中找到之細孔大小分 :而I解釋）、第二數量於另外之時間期間之後去吸附，對 方、甲苯或亦一氯甲烷未發現此種不受歡迎之行為，其中所 有《物質係已於第-時間期間中去吸附。於可比較之條件 下，於異丙醇用於阿波錫隆A及B之案例中於一實例中已發 現洛發殘渣係40克，用二氯甲燒係3·3克，於甲苯之案例中 僅〇·9克，於自苯乙烯/二乙烯基苯共聚物樹脂將來自如於世 界智慧財產權組織專利99/42602中敘述之包含環糊精之培 養物上清液獲得者去吸附後具有例如〗7_丨8克％之阿波錫隆 B，表示很較高之純度。雖然甲苯具有最重大之利益，但是 由於一氯甲烷之低沸點，因此二氯甲烷具有移除之容易之 利益。 阿波錫隆A與B之分離亦可係經由進行於本文中揭示之 20 本紙乐尺度適用中國國家標準((^^) A4規格(210X297公釐）

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層析術以其之模擬移動床(SMB)方法而達成。麵她 係廣泛地使用於二元混合物之分離，例如，外消旋物於手 性固定相上之分離’例％ ’於石油化學工業中之索爾培克 斯（SORBEX)方法，如派雷克斯（pai：ex)或莫萊克斯⑽㈣ ，或於糖工業中之莎雷克斯（SAREX)方法。與批式層析術 比較，SMB-層析術提供連續逆流單元操作之利益，其導致 &问之生產力及降低之移動相消耗。用於SMB_層析術之方 法發展’數種系統之程序對於熟諳此技藝者係已知的。此 等程序係敘述，例如，由 R.-M. Nicoud，M. Bailly，J. Kinkel， R.M· Devant，T.R.E· Hampe及 Ε· Kiisters於 Proceedings of the 1 European Meeting on Simulated Moving Bed Chromatography, (1993), ISBN 2-905-267-21-6,第 65-88 頁 中；Ε· Kiisters，G· Gerber及 F.D. Antia，Chromato-graphia， 40 (1995) 387; T· Pr611 及 E. Ktisters，J. Chromatogr. A，800 (1998) 135;或 C. Heuer，E· Ktisters，T· Planner 及 A.

Seidel-Morgenstern，J· Chromatogr· A，827 (1998) 175 ° 用於阿波錫隆A或B以SMB層析術之分離之基本參數可 係自習用之液體層析術（LC)分離直接地採用。較佳地，採 用反相矽凝膠（RP 1 8)作為固定相及水/乙腈-混合物作為移 動相。流率之最後組合（分別地用於個別之SMB區及轉換時 間）可係自如由 E· Kttsters 等人於 Chromato-graphia，40 (1995) 3 87中發展之簡單之流動方案或於如於厂

Chfomatogr· A，800 (1998) 135 及 J. Chromatogr· A，827 (1998) 175中敘述之吸附等溫線之謹慎之估計之後採取。萃 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱) 1286137 A7 _____ B7 五、發明説明（19 )

取物及萃餘物流之逐漸獲得再次地可係如對於習用之液體 層析術分離所敘述者進行。 S 本發明最佳係關於在其後之實例中敘述之程序及方法。 實例： ' 下列之實例充當舉例說明本發明而不限制其之範圍之 用。 运意當處理阿波錫隆時，由於彼等之高毒性，因此於必 要之處必須採取適當之保護措施。 、 童例1:用於阿波錫隆B之逐_星！程序 591.7公斤之負載之樹脂（用來自培養介質之阿波錫隆a 及B負載之苯乙晞/二乙烯基苯共聚物樹脂χΑΕ)·16)之去吸 附係經由以兩邵分，每部分以四次與72〇升之甲苯，攪拌樹 脂，時約8小時而達成。甲苯相與樹脂之分離係使用抽吸過 濾器而發生。將混合之甲苯相以兩部分，每部分用升之 水，洗滌。於相分離之後，於1〇〇〇升反應器中將甲苯萃取 物濃縮至約20-40升及其後於旋轉蒸發器中於真空下濃縮 至乾燥。結果係4.095公斤之包含2〇9克阿波錫隆甲苯萃 取物。將該甲苯萃取物溶解於16·5升之甲醇及^^升之環己 垸中。於將0·8升之水加人之後，立即發生相分離。將甲醇 邵分於旋轉蒸發器中於真空下蒸發至乾燥，產生1()25公斤 包含194克阿波錫隆B之蒸發殘逢。其後將甲醇萃取物於袖 2·〇5升異丙醇與10·25升環己烷組成之溶劑混合物中結晶， 產生0.4公斤包含184克阿波錫隆Β之結晶物質。將該晶體溶 解於3.2升乙腈/7R(2/3體積/體積）中及將生成之進料溶液以 -22- 1286137 A7 B7 五 、發明説明（2〇 ) 三次分離操作轉移至一製備之反相管拄（25公斤RP-18球形 石夕凝膠 ’ YMC-Gel ODS-A 120; 5-15 微米；Waters Corp.， Milford，Massachusetts，US A)上。溶析係用具有2.3升 /分鐘 之流率之乙腈/水（2/3體積/體積）作為移動相而達成；阿波 錫隆A之滯留時間=77-96分鐘，阿波錫隆b之滯留時間 = 96-1 19分鐘。分餾係用一紫外線偵檢器於25〇奈米監測。 將混合之阿波錫隆B餾份（屬於三個操作）之乙腈蒸餾出及 將剩餘之水相用504升之乙酸異丙酯萃取。於630升反應器 中將乙酸異丙酯萃取物濃縮至約20-40升及其後於旋轉蒸 發器中於真空下濃縮至乾燥。阿波錫隆B餾份之蒸發殘渣之 重里係1 7 0克及根據南效能液體層析術（η P L C)(外部授 '平) 其具有98.4 %之含量。生成之物質最後係於2.89升之甲醇中 於〇-5 °C結晶，產生150克之阿波錫隆Β之純粹微曰曰 (crystallisate)。 熔點：124-125°C ; 阿波錫隆B之1H-NMR數據（500 MHz-NMR，溶劑·二甲亞 石風（DMSO-d6。以ppm表示相對於丁MS之化學位移占。w 譜線，d =雙譜線，m=多重譜線）·· 5 (多重線） 整數（H之數目） 7.34(s) 1 6.50(s) 1 5.28(d) 5.08(d) 4.46(d) -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)

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1286137 A7

4.08(m) l 3.47(m) j 3.11(m) j 2.83(dd) 1 2.64(5) 3 2_36(m) 2 2.〇9(s) 3 2.04(m) 2 1.83(m) 1 1 1.61(m) j 1.47-1.24(m) 4 1.18(s) 6 1.13(m) 2 1.06(d) 3 〇.89(d + s，重疊的） 6 Σ =41 宜阿波氣废之去吸附方法之比-將360毫升每種之以來自#液細菌之肖養物《阿波錫隆 A及B經由於世界智慧財產權組織專利99/426〇2中敘述之方 法而負載足笨乙烯/二乙埽基苯共聚物樹脂XAD_丨6之水性 懸浮液（等於194克濕阿姆伯萊特又八^6)以溶劑及於在以 下之表中挺及之條件下於底部具有一燒結之熔塊（sintered fnt)足·一種攪拌（一般實驗室錨式攪摔器）玻璃反應器（自製 之固相批式反應器，内徑10厘米χ2〇厘米長度，於後文中 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公爱） 1286137 A7 B7 五、發明説明（22 ) 稱為”攪拌器/熔塊”）中萃取。 表1:用於阿波錫隆B之製造之去吸附方法之比較 開始樹脂（具有吸附之阿波錫隆之樹脂）： —#1001理論負載70毫克每360毫升樹脂懸浮液（等於70 毫克每194克之濕XAD-16) 一 #1003理論負載1 14毫克每360毫升樹脂懸浮液（等於 114毫克每194克之濕XAD-16) -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1286137

A

7 B 五 明一 I 説i 明 發 3 -2 時i(％) 溉緦溜礙(Μ) 溉緦(/>眾) ίΙΙΟφ髅(zhBs 1 辦總(/」ώ4Η) 113¾ 滿某($ι®φ龋) 嬅_(_半) ll-MNMlliv鄴懇 74 005. 1.26 5004 一 ΓΟ 24 1.1 P7 2 8 8ΧΡ2= 1·6 250 360 #1001 1/藝 (RT) • &H V 二n 59C54) 1.75 3.3r 0.5 3 ΧΡ36 Η 1·1 250 360 #1001 1細1 2 SCO4) 3.31 rj 15 2·2 1.15 01ΧΡ72 - = 3·6 2010 360 #1003 碧龅養(RT) S057) 3.7 2.68 3 ΧΡ72 = = 2ro 250 hm-ffl筘 360 #1003

Mi (3 -101 (89) 3.1 3·24 1 x2ro 250 360 #10s ol 3.3 s(s) 1·70 15 1·? 1x1b 250 娜31職 180

SOS 回敦(42-450C) -26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1286137

7 7 A B 五、發明説明（ Μ 時>(％) · 溉鄉溜蹢(础) 猓緦(/hBs ^Φ_(/.Η3

榭—__I 溉鄕(/h4H) 姙洚聋48涵(令通) 00s 滿苹(sa^K) li^ suspension^ si P5 22(69) £8 1 X95 = P5 ·ο up^0 · 100 #1003 153(134) Ρ88 Ρ1 Ρ5 3 X 0·72 =ν)·2 640 -ffl谢 360 S003

ErL/mag· st、pf某鎪磙遴JJT) 7 00 裝· 2.69 62011(113 2·32 15 1.1 0.2 6 1 X 1.8 = 100 250 娜21聩 180 #1003 :回_; (42,450c) 17.6 132(116) 〇.75

PI 95 ί 0.36 = 1.44 250 -ffl谢 360 #1003 ΙΪ1 10 •17.1 150(132) 0.800 P1 Ρ5 私 XP36 == 1·44 640 -ffl谢 360 #1003

Ss0^d 11 1500· 150 (Is P-95 0.1 P5 &Η. Mlt 、二 / 私 XΡ36 = 1.44 25〇 -¾谢.， 360 #1003 si莽鈮—矣43。5 12 27 本紙痕尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1286137 A7 ______B7 五 明説明（25—)— ^ ^- a 未最適化；於二次萃取之案例中，損失約5%產率。 b用水之三次逆萃取（3-fold back-extracti〇n)未移除極性 成分 c 第一次之三相分離持續過夜 d 該物質，當與乙酸乙酯-蒸發殘渣比較時，可係於碎凝 膠上很較佳地層析 e等於約2 5至3 0克之蒸發殘渣 f 乾燥烘箱（高真空）經過週末 g 可能係，與使用之時間相關，充份之第一次相分離之結果 h 回收：第一次萃取=7〇〇毫升；第二次萃取=66〇毫升；第三 次萃取=680毫升 1回收：第一次萃取=670毫升；第二次萃取=7 10毫升；第三 次萃取=720毫升 j 尚未彡正貫水添加之必要性 k簡化原來存在之水之移除（當使用時XAD-16係由水覆 蓋） 1 由於不同之試驗8、11及12之結果及對於用甲苯之所有 實驗之溶析曲線，因此不能排除較少數量之樹脂之使用 ErL/mag· St.”代表於錐形燒瓶中之磁性攪摔 “Methylenchloride”（“Methylenchl·”）係二氯甲烷 “Stir./Frit”代表攪拌器/溶塊 “RT”代表室溫 自此等貫驗及進一步之數據可推論，於與異丙醇之比較 中一氯甲fe萃取提供較佳之選擇性、較短暫之萃取時間（ _— -28^ 本紙張尺度適財S S家標準(CNS) M規格(灿χ挪公爱) 1286137 發明説明（26

裝

約以因數）、較快速之溶劑蒸餾（二氯曱烷之沸點係約4〇 t，異丙醇之沸點係81_83。〇、不再需要耗費時間⑴ mtensive)並且很成問題之乙酸乙酯/水相分離、不再需要第 二次溶劑蒸餾，致使可使用較少數目之方法步驟，造成較 低之污染危險，較佳並且較安全之處理；於一半之體積（ 例如，以1000升反應器取代2000升反應器）中之逐漸獲得係 可能的，產物阿波錫隆B具有較佳之純度分布（較少之具有 與阿波錫隆B可比較之極性之副產物），及蒸發殘渣不噴濺 及起泡，如於以乙酸乙酯萃取之案例中。對於用甲苯之去 吸附，與異丙醇萃取比較獲得較高之產率（約1〇〇而非約 80%) ’可觀祭到較佳之選擇性（以異丙醇，去吸附約1 〇倍數 量之副產物），萃取時間係可觀地縮短（以約3之因數），簡化 於以異丙醇去吸附之後之困難之過濾（以大規模進行異丙 醇萃取係困難的），不再需要第二次溶劑蒸餾，於較小之反 應器中之逐漸獲得係可能的（再次地，例如，使用丨〇〇〇升取 代2 0 0 0升反應器係可能的），放棄碎凝膠層析術係可能的（ 於去吸附之後之蒸發殘}查已包含約40%之阿波錫隆a/b混 合物），及於去吸附之後之蒸發殘渣不顯示對於來自乙酸乙 酯萃取之殘渣所觀察到之起泡及噴濺。 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

Claims (1)

1. Α8 Β8 C8 D8

   12861|石0129838號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(96年3月） 六、申請專利範圍 1 · 一種使阿波錫隆（ep〇thU〇nes)A、B、D、Ε及/或F自樹脂 去吸附之方法，該方法使用選自低碳烷基_化物及芳族溶 劑或二或多種此等溶劑之混合物所組成之群組之弱極性 或無極性溶劑；其中該字首r低碳」意指該基團包含至 多7個碳原子。 ° 2·根據申請專利範圍第丨項之方法，其中該欲去吸附之阿波 錫隆係阿波錫隆A或阿波錫隆B。 3·根據申請專利範圍第丨或2項之方法，其中該樹脂係合成樹 4·根據申請專利範圍第3項之方法，其中該樹脂係以苯乙烯/ 二乙稀基苯共聚物為主之合成樹脂。 5·根據申請專利範圍第丨或2項之方法，其係使用選自下列所 組成之群組之芳族溶劑：莕，苯，或經由一或多個選自低 碳烷基、低碳烷氧基、函素、硝基及低碳烷氧基_低碳烷 基所組成之群組之基團所取代之萘或苯。 6. —種將吸附於合成樹脂之阿波錫隆a、B、D、E及 分離之方法，該方法包含 (i)以選自低碳烷基函化物及芳族溶劑或二或多種此等 溶劑之混合物所組成之群組之弱極性或無極性溶劑 使Θ阿波錫隆自~該合成樹脂去吸附作用；其中該字 首「低碳」意指該基團包含至多7個碳原子；及 (ii)待該阿波錫隆於溶解於適當溶劑中及以腈與水之混 合物溶析之後，經由反相層析術進行之阿波錫隆之 分離作用。

   1286137

   :種自反應混合物逐漸獲得（WQJ：king_up)阿波錫隆A、B D、E及/或F之方法，該方法包含 以選自低㈣基ί化物及芳族溶劑或二或多種此等溶劑 《混合物所組成之群組之弱極性或無極性溶劑去吸附 該阿波錫隆，其中可重複該去吸附步驟以達成較完全 之去吸附； -經由蒸發而自所得溶液移除該用於去吸附之溶劑； •以反相層析術分離該阿波錫㉟，使來自先前步驟之殘 質溶解於適當溶劑中，並以腈與水之混合物溶析之， 及自該收集的含阿波錫隆部分經由蒸發而移除該腈， 其中該字首「低碳」意指該基團包含至多7個碳原子。 9·,據申請專利範圍第8項之方法，其中該阿波錫隆自該 樹脂之去吸附係以選自低碳烷基自化物或芳族溶劑或 二或多種此等溶劑之混合物所組成之群組之弱極性或 »極性溶劑而進行，該溶劑接著係經移除至所需程度； 其中遺4*首「低碳」意指該基團包含至多7個碳原子。 10·根據申請專利範圍第6、8或9項之方法，其中該阿波錫 隆八與6之分離係經由模擬移動床（SMB)層析術而達成。 1 1 ·根據申請專利範圍第1、ό、8或9項之方法，其中該弱 極性或無極性溶劑係選自低碳烷基函化物及芳族溶劑 ’或二或多種此等溶劑之混合物所組成之群組；其中該 74960-960313.doc

   A BCD 1286137 、申請專利範圍 字首「低碳」意指該基團含高達7個之碳原子；或者， 此等溶劑之混合物於根據Snyder等人測定之洗脫行列 (eluotropic row)中顯示下列特性： Xe—0,22-0,3，Xd = 0，17-0,34 ;及 Xn = 0,39-〇,54 其中Xe係質子受體參數；Xd係質子予體參數；及χ 係偶極參數；其限制條件為Xe + Xd + Xn=l。 12·根據申請專利範圍第8項之方法，進一步包含於去吸附 之後結晶該阿波錫隆。 1 3 ·根據申請專利範圍第12項之方法，其中，為進行阿波踢 隆B之結晶，該方法進一步包含添加一種醇與烴之混合 物，蒸發該醇相至乾燥，及自一適當溶劑混合物中結晶 該阿波錫隆B。 14·根據申請專利範圍第8項之方法，其中，於移除腈之後 ，該剩餘之水連同阿波錫隆接著以酯萃取，及進行該含 阿波錫隆之酯相之後續蒸發至乾燥為止。 15. 根據申請專利範圍第8項之方法，其進一步包含經由吸 附層析術而進一步純化，及，最後自適當溶劑或溶劑混 &物中再結晶該經純化之阿波錫隆。 16. 根據申請專利範圍第8項之方法，其中於所使用的各步 驟又間，所得之溶液-或懸浮液係經濃縮，及/或液態及 固態成份係彼此分離。 17. 根據申請專利範圍第9項之方法’丨中該溶劑係經移除 直到獲得乾燥之殘餘物為止。 18·根據中請專利範圍第17項之方法，其中該殘餘物係溶解 74960-960313.doc 家鮮(CNS) A^(210X2^i¥T 駛 訂 η 線

   相當低用量的醇/柄、、曰人Μ 士 、、& ν 醇萃取m“ 料相係經蒸發，該 =取物接者係自醇與烴之混合物中結晶，然後，將該 之浐广二Γ曰曰物質溶解於如申請專利範園第8項所述 相該生成之進料溶液係傾倒於製備之反 二ί1:Λ著以腈/水溶析之;然後接著該包含阿波錫 成心（腈係經由蒸發而㈣，及該生成之水相 、、 種酗萃取，然後將該酯萃取物蒸發及其後將該生 成之物質再結晶。 μ 19々據申請專利範圍第18項之方法，其中該醇相係經塞發 直到乾燥為止。 | 20·根據申請專利範圍第18項之方法，其中該生成之固體社 晶物質係溶解於2:3(體積/體積）乙腈/水混合物中。° 21.根據申請專利範圍第18項之方法，其中該生成之進料溶 現係於以超過一次操作之分割（splitting)之後，傾倒於製 備之反相管柱中。 22· —種選自低碳燒基_化物及芳族溶劑、或二或多種此等 溶劑之混合物所組成之群組之弱極性或無極性溶劑於 使阿波錫隆A、B、D、E及/或F自樹脂去吸附之用途， 其中該字首「低碳」意指該基團含高達7個之碳原子。 23 ·根據申請專利範圍第22項之用途，其中該弱極性或無極 性溶劑係選自莕，苯，或經由一或多個選自低碳烷基、 低碳燒氧基、自素、硝基及低碳烷氧基_低碳烷基所組成 之群組之基團所取代之茶或苯所組成之群組；該樹脂係 合成樹脂，其中該字首r低碳」意指該基團含至多7個 碳原子。 74960-960313.doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）