TW561141B

TW561141B - Compounds for the treatment or prophylaxis of disorders mediated by s-CD23, the preparation and the pharmaceutical composition thereof

Info

Publication number: TW561141B
Application number: TW089122497A
Authority: TW
Inventors: Andrew Faller; John Gerard Ward
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 1999-10-27
Filing date: 2000-10-26
Publication date: 2003-11-11
Also published as: DK1224164T3; HK1049146A1; ES2233474T3; EP1224164A1; AU1389501A; PL356524A1; HUP0203270A3; NO20021965L; BR0015082A; KR20020044578A; CZ20021424A3; GB9925470D0; ATE284382T1; AR026244A1; HUP0203270A2; CA2389319A1; IL149364A0; CN1182107C; DE60016622D1; NZ518566A

Description

561141 A7 B7 五、發明說明（/ ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明係關於一種形成可溶性人類CD23之新穎抑制劑及其在治療與過量產生可溶性CD23 (S-CD23)相關的情形例如自發免疫性病症、發炎及過敏之用途，CD23(低親合性UgE受體FceRII，Blast 2)是表現在多種成熟細胞包括B 及T淋巴細胞、巨噬細胞、天然殺手細胞、Langerhans細胞、單核細胞及血小板的表面上之一種45 kDaII型整合蛋白(Oelespesse et al，Adv Immunol，49 [1991] 149-191)，在嗜伊紅白血球上也有一種類似CD23的分子(Grangette ei ^ J [1989] 3580-3588)，CD23與調節免疫回應相關(Delespesse a/, /mmw⑽/\25 [1992] 77-97)，人類 CD23存在兩種不同調節的異構物a及b，其只在細胞内N-末端之胺基酸不同(Yokotaeia/，Ce//，公[1988] 611-618)，在人類中，只有在B-淋巴細胞上發現組成a異構物，而經由IL4引發的b型則在可表現CD23之全部細胞上發現。完整且連接至細胞的CD23 (i-CD23)已知進行從細胞表面解離，導致形成許多充分定義之可溶性碎片（s(D23) ，其係經由複雜系列的蛋白水解事件而產生，其機制尚不明白(Bourget β α/, «/及》/ C/2em，269 [1994] 6927-6930)，雖然尚未證實，其係假設這些蛋白水解事件之主要可溶性碎片（Mr 37, 33, 29及25 kDa)，其全都保留與i-CD23相同之c_ 末端卵磷脂部份，是經由最初形成37 kDa碎片而依序發生 (Letellier et al} JExp Med, 172 [1990] 693-700)，另一種細胞内分解途徑導致安定的i6 kDa碎片其c_末端部份與^ CD23 不同(Grenier-Brosette βα/,五wr 这[1992] 〜3- 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

561141 A7 B7 五、發明說明（>) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1573-1577)。人類的數種活性經歸於與膜結合之i-CD23,其全都顯示在IgE調節上扮演重要的角色，特別的活動包括：a)抗原遞呈，b)IgE居間影響的嗜伊紅白血球細胞毒性，c)B細胞回到淋巴結及脾臟的胚芽，及φ向下調節IgE合成 (Delespesse β a/, y^v/wmwo/，坚，[1991] 149-191)，三種較高分子量之可溶性CD23碎片（Mr 37, 33及29 kDa)具有多功能的細胞活素性質，其顯示在IgE製造中扮演重要的角色，據此，過度形成S-CD23經牵涉過度生產igE，過敏性病症之標記例如外源性氣喘、鼻炎、過敏性結膜炎、濕疹、異位性皮膚义及過敏症(Sutton and Gould，TVaiwre，366， [1993] 421-428)，歸於S-CD23的其他生物活性包括刺激B 細胞生長及引發從單核細胞釋出介體，據此，在患有B—慢性淋巴細胞白血症的病人血清(Sarfati et al，Blood，71 [1988] 94-98)及患有類風濕性關節炎的病人滑液(chomarat ei α/， Arthritis and Rheumatism, 36 [1993] 234-242)1^^^8-0023 的量增加，多個來源建議CD23與發炎有關，首先SCD23 經報導結合至細胞内受體，當其經活化後，與細胞居間影響的發炎事件相關，據此，SCD23經報導直接活化單核細胞TNF、IL-1 及IL-6釋放(Armant et al，vol 180, J· Exp. Med·， l〇〇5-1011 (1994))，CD23經報導與單核細胞/巨噬細胞上的B2-整聯蛋白黏附分子、CD1 lb及CD1 lc作用(S. Lecoanet-Henchoz et al5 Immunity, vol 3; 119-125 (1995)), 其引起N02·、過氧化氫及細胞活素(iL-1、IL-6及TNF)釋〜4 一本紙張尺度適財S國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) '"〜 ----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - i. 561141 A7 _ B7 五、發明說明（> ) 放，最後，IL-4或IFN引發釋出CD23且其經由人類單核細胞釋放sCD23，連接結合膜的CD23受體與igE/抗-IgE免疫複合物或抗CD23 mAb活化cAMP及IL-6生產及前列凝素 B2形成，證明CD23在發炎中具有居間影響受體的角色。因為CD23之這些不同性質，抑制形成S-CD23之化合物必須有兩倍作用之a)在B細胞表面上經由維持i_CD23的量而促進負反饋抑制IgE合成，及b)抑制S-CD23之較高分子量可溶性碎片（Mr 37, 33及29 kDa)之免疫刺激性細胞活素活性，此外，抑制CD23分解應可減輕S-CD23引發的單核細胞活化作用及介體形成，因而降低發炎性回應。國際專利申請案WO 96/02240 (Smithkline Beecham pic)揭示抑制基質金屬蛋白酶(例如膠原酶、司特梅林素 (stromelysin)及明膠酶)是釋出人類可溶性CD23轉染至哺乳動物細胞培養系統之有效抑制劑。國際專利申請案WO 97/02239 (British Biotech Phamiaceuticals Limited)揭示具有基質金屬蛋白酶活性之部份式(A)化合物： __ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^!? 1111111-

HON

0Me 〇 /\ Rs A 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製國際專利申請案WO 99/67201 (Smithkline Beecham pic)揭示部份式(I)化合物其係釋出人類可溶性CD23轉染至〜5〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 561141 A7 B7 五、發明說明（夺）哺孔動物細胞培#_之有效抑制劑： R1

HONF ,Μ，〇 !c，^ *NH(°)nR3 ι

OR (I) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製生物=異地發現部份式(1)化合物具有未經預期的良★ 〇是〇據此，本發明提供上述式⑴化合物，其中·· ♦ R是異丙基； Rl是萘甲基； R2是第三丁基；且 R3是甲基。 “根據另-個方面，本發明提供本發明化合物用於生產樂劑供治療或預防其中過量產生S-CD23居間影響的病症例如過敏、發炎病症及自發性免疫病症之用途。旦在又另一個方面，本發明提供用於治療或預防其中過 $產生S-CD23居間影響的病症例如過敏、發炎病症及自务丨生免疫病症之方法，該方法包括將本發明化合物用藥至對其有需要之人類或不是人類之哺乳動物。本發明也提供用於治療或預防其中過量產生^匸〇23 居間影響的病症例如過敏、發炎病症及自發性免疫病症之醫藥組成物，其中含本發明化合物及視需要選用的藥學上

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —訂--------- 561141 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（，）可接受之載劑。特定的發炎病症包括CNS病症例如阿爾茲海默氏症、多發性硬化及多梗塞性癡呆，以及發炎居間影響的中風及頭部創傷之後遺症。 #本發明化合物之藥學上可接受的鹽類、溶劑化物及其他藥學上可接受的衍生物，當然也包括在本發明内。式(I)化合物之鹽類包括例如衍生自無機或有機酸之酸加成鹽類，例如鹽酸鹽、溴酸鹽、碘酸鹽、對甲苯磺酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、三氟醋酸鹽、丙酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽及苯甲酸鹽。也可與鹼形成鹽類，這種鹽類包括衍生自無機或有機鹼之鹽類，例如鹼金屬鹽類例如鈉或鉀鹽，及有機胺鹽例如嗎咁、六氫吡啶、二甲胺或二乙胺鹽。訝異地發現本發明化合物經由口服途徑後顯現有利的活體内吸收性質以及是CD23處理之有用且選擇性的抑制劑。本發明化合物可經由選用適當的傳統方法製備，例如類似於專利申請案wo 97/02239 (British Biotech Pharmaceuticals Limited)揭示之方法。

據此，本發明的另一個方面是提供上述定義的本發明化合物之製法，此方法包括： X ⑻去除保護式(II)化合物：〜7〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------訂.！！费. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 561141 A7 五、發明說明（/ )

NHMe 其中X是保護基例如竿基或三甲石夕烧基，或 (b)使式(III)化合物：一… 丨辉.明 HO 〇 Η V 1 II 〇： (III) NHMe 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中羥基經視需要保護，與羥基胺或其鹽類反應。式(II)及(III)化合物是新穎的化合物且形成本發明之另一個方面。式(Π)化合物可從式(III)化合物與經保護的羥基胺反應而製備，含一個經保護的羥基之式(III)化合物可經由水轉化成未經保護的式(III)化合物。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁}

561141 五、發明說明（7) 用於氧月亏酸之合適的保護基熟知於此項技藝中且包括苄基、三甲矽烷基、第三丁基及第三丁基二甲基矽烷基。用於魏酸之合適的保護基熟知於此項技藝中且包括第三丁基、+基及曱基。製備式(III)化合物可經由使式(IV)或(IVa)化合物··

：.',Ν 'i~b ; ·♦ :i .，丨

其中Y是羧基之保護基，與式(v)化合物反應經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 NH2

NHMe (V) 本紙張尺度適《 +關家標準（CNS)A4規格（210 X 297公麥7 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

561141 A7 B7 五、發明說明（孑）如果使用(IVa),隨後需要將羥基進行烷基化。製備式(IV)化合物可經由保護相對應之化合物其中γ 是氫，其依序可由下列方法製備： ⑻使式(VI)化合物：

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中R1相同於上述之定義且Z是羧基之保護基，與烷基化劑反應；且 & (b)去除保護基。製備其中Z是氫之式(VI)化合物可經由使2_經基琥珀酸二酿(例如m乙s旨)與式Rix，化合物在強驗例如二異丙基胺基化鋰存在下反應，其中R1是萘曱基，χ，是釋離基例如溴或碘，且隨後水解所得的化合物以去除酯基。本發明化合物之異構物，包括立體異構物，可製備為此異構物之混合物或個別的異構物，製備個別的異構物可 =由任何適當的方法例如經由立體特異性化學合成法從對掌性作用物製備個別的異構物或經由使用已知的方法分離非對掌異構物之混合物，在—個健财面，本發明式(ΙΑ)化合物：本紙張尺度適用中國(cns)A4^^2ig χ撕 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

561141 A7 B7 〇五、發明說明（^ )

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2了#_藥之一致性，本發明組成物較宜是單位劑夏形式。 ί、口服㈣之單位劑量代表形式是㈣及膠囊劑且可 ^賦形劑例如轉劑，例如糖聚、阿拉伯膠、明膠撼山梨糖醇、西黃f膠絲乙職財酮；填充劑例如乳说、糖、玉米殿粉、碟酸約、山梨糖醇或甘油；片劑的潤月K例如硬脂g蝴；分解_如澱粉、聚⑽基吼略綱、 4l· I X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

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殿粉甘醇_或微㉟纖維素；或藥學上可接叙溼化劑例如硫酸月桂g旨納。，固體口服組成物可經由混合、填充或壓片之慣用方法製備，可能需要重複的混合操作使活性劑分佈在使用大量填充劑之組成物内，這些操作當然是慣用於此項技藝中，根據熟知於正常製藥實務的方法，可將㈣包衣，尤其用腸包衣。口服液體製劑的形式可為例如乳液、漿劑、或_，或呈現為賴產品供制_水或其他合適的_再組成，此種液體製劑可含慣用的添加劑例如懸浮劑，例如山梨糖醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、錄乙基纖維素、緩基甲基纖維素、硬脂酸鋁膠、氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水性媒劑（其可包括食用油)，例如杏仁油、分鶴椰子油、油性醋類例如甘油、丙一醇或乙醇之s旨類；防腐劑例如對經基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸；且如果需要時選用之慣用$味劑或染劑。 Θ 對於不經腸道用藥，使用化合物及無菌媒劑製備液體單位劑量形式，且決定於使用的濃度，可懸浮或溶解在媒劑中，在製備溶液時，化合物可溶解在用於注射之水中、且無菌過濾後填入適當的瓶子或瓿内且密封，較宜將輔劑例如局部麻醉劑、防腐及緩衝劑溶解在媒劑中，為了強化女疋性，組成物填入瓶子後可以冷束並在真空下:除水不經腸道之懸浮液可在實質上相同的方式下製備，二7了化〜12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 _----B7 五、發明說明（"）合物是懸浮而不是溶解在媒劑中，且殺菌無法經由過濾達成，此化合物可在懸浮於無菌媒劑前先暴露於環氧乙烷而殺菌，在組成物中較宜含表面活性劑或溼化劑以促進化合物之均勻分佈。本發明組成物也可單獨或結合惰性載劑例如乳糖呈現為在務化器内之鼻粉或氣溶膠或溶液、或以用於吸入之微粒粉劑供呼吸這用藥，在此情形下，活性化合物粒子之直徑適宜小於50微米，較宜小於1〇微米，例如直徑範圍在^ 50微米、1-10微米或丨_5微米，當合適時，可包含少量的其他抗氣喘劑及支氣管擴張劑，例如擬交感神經胺例如治喘靈、乙基異丙腎上腺素、羥甲叔丁腎上腺素、苯腎上腺素及麻黃素；黃嘌呤衍生物例如茶鹼及胺茶鹼及腎上腺皮貝類固醇例如潑尾松龍及腎上腺刺激劑例如Acth。此組成物可含從〇·1%至99%重量，較宜從1〇-儀重量之活性物質，由用藥方法決定，吸入用藥之較佳範圍是 10-99%，尤其是60-99%，例如90、95或99%。微細粉劑調製物合適以氣溶膠經由計量給藥或藉由合適的吸氣活化裝置用藥。合適的計量給藥氣溶膠調製物含慣用的拋射劑、輔助溶劑例如乙醇、表面活性劑例如油醇、潤滑劑例如油醇、乾燥劑例如硫酸躬及密度改良劑例如氣化納。、用於霧化器之合適溶液是等滲性無菌溶液，視需要經緩衝化，例如介於pH 4_7,含至多2〇毫克/毫升化合物，氮更常0.1至10毫克/毫升，供標準的霧化裝置使用。〜13

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 —------------ 五、發明說明（/1) 有效量將根據本發明化合物之相對功效、被治療病症之嚴餘度及患者之體重❿蚊，單位計飾式之本發明組成物可含從0·1至1000毫克的本發明化合物(〇〇〇1至^毫克經由吸入)且更常從1至500毫克例如丨至25或5至5〇〇毫克，此組成物每天可用藥從1至6次，更常每天從2至4次，每曰劑i疋從1宅克至1克對於7〇公斤成人且更特別是從5至 500毫克，也就是說範圍是約丨如⑴-2毫克/公斤/天至14毫克/公斤/天且更特別的範圍是約％1〇·2毫克/公斤/天至7毫克/公斤/天。下列貝例5兒明本發明，但是不能以任何方式對並作限制。 ’、生物測試法步驟1 ·經由使用下列步驟研究測試化合物抑制釋出可溶性CD23之能力。 RPMI8866細胞膜CD23釋出活性測試法：使用水性卒取法純化從RPMI 8866細胞之細胞膜，其系一種釋出局量CD23之人類Epstein-Barr病毒轉化的B-細胞系(Sarfatietal·，Immunology 60 [1987] 539-547)，再度懸浮在均勻緩衝液(20毫莫耳濃度hepes pH 7.4、150毫濃度NaCl、1.5毫莫耳濃度MgCl2、丨毫莫耳濃度〇11〇内的細胞在Parr高壓彈中經由N2s洞形成而破裂並將細胞膜部份與經由在l〇,〇〇〇Xg離心回收的其他部份混合，輕丸粒再度懸浮在0·2莫耳濃度磷酸鉀，pH 7.2，每1-3克濕細胞使用2毫升且將核丸粒丟棄，在〇·25莫耳濃度蔗糖總共16克〜14〜 ------tx---------0. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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五、發明說明（/$) 的母10-15¾克膜蛋白質，經由分佈在Dextran 5〇〇 (6·4%重量/重量)及聚乙二醇(PEG) 5000 (6.4%重量/重量）（ref)，將膜進一步分離[Morre and Morre，BioTechniques 7, 946-957 (1989)]，在l〇〇〇Xg短暫離心將各相分離並收集pEG (上層）相，用20毫莫耳濃度磷酸鉀緩衝液pH 7.4稀釋3-5倍，並在100,000Xg離心在該相中回收膜，將丸粒再度懸浮在磷酸鹽緩衝化的鹽水並含3-4倍加濃的細胞膜以及部份部份其他細胞膜(例如溶酶體，Golgi)，將膜等分並儲存在-8〇°c ，在6.6%Dextran/PEG部份得到加濃10倍之細胞膜。將分離的膜在37°C下培養至多4小時以產生CD23碎片，用5微莫耳濃度從P 30994之製備1使反應停止後，在〇.2 微米Durapore過濾盤(Millipore)過濾將其從膜分離，利用 MHM6 抗_0〇23 111八1)[11〇\¥6 61&1”1111:.】.€&1^1*，29,373-382 (1982)]或其他抗-CD23 mAb在三明治EIA中作為捕集抗體，使用從Ehe Binding Site (Birmingham，UK)之EIA套件或類似者測定從膜釋出的sCD23，經由EIA測量0.5微克膜蛋白質在總體積50微升磷酸鹽緩衝化的鹽水中產生的可溶性CD23量，並與在不同濃度的抑制劑存在下產生的量比較，抑制劑是存在於水或二甲亞砜(DMSO)之溶液中且最終DMSO濃度不超過2%，當觀察到50%抑制產生SCD23 相對於無抑制劑的對照組培養的SCD23差異時，經由曲線吻合測定IC50。結果： Ν’-[4-(Ν-經基胺基)_38_異丙氧基_2R_(2-萘甲基)琥珀醯基]_ 〜15〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 五、發明說明（ S-第三亮胺酸甲醯胺在上述測試中的1(：5〇是6〇毫微莫耳濃步驟2 :使用下列步驟研究測試化合物抑制膠原酶之能力膠原酶抑制測試：經由 Cawston and Barrett之方法(Anal. Biochem· 99， 340 345, 1979)測疋化合物作為膠原酶抑制劑之能力，其併於本文供參考，其中經測試、的抑制劑之1毫莫耳濃度溶液或其稀懸，在37°C娜原及從驗纖軸織母細^複製、釋出並從E· Coli純化(用150毫莫耳濃度Tris，pH 7 6緩衝化’ 3 15宅莫耳濃度氯化辦、ο,。;％ Brij 35、200毫莫耳濃度氯化鈉及0.02%疊氮化鈉)之人類再重組的膠原酶一起培養18小時，膠原是經由Cawst〇n and施啦^之方法(在 Enzymology迎，7；[丨，i 98丨之方法)製備的乙醯基化泔〗型牛膠原，將樣品離心使未經消化的膠原沈澱並取出等份的放射活性上清液用於測試，在閃爍計數器上作為水解測試，在1*莫耳濃度抑制劑或其稀釋液存在下的膠原酶活性，與在無抑制劑的對照組活性比較，且結果以引起的膠原酶之濃度(IC5G)表示。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製步驟3 ·使用下列步驟研究測試化合物抑制彻p釋出之能力。膝原酶抑制測試：抑制經由脂多糖(LPS)内毒素刺激從人類單核細胞釋出 TNFa之測試法〜16〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 _________ B7 五、發明說明（/jT) 在補充10%牛犢血清的RPMI 1640介質中培養的人類單核細胞在1 OOOXg離心5分鐘後，在2χ 1 〇6個細胞/毫升下再度懸浮在介質中，將細胞懸浮液等份放入24槽培養亚上，每槽1毫升，將測試化合物溶解在純二甲亞砜(DMS〇)並加入培養皿内，最終DMS0濃度是〇1%，將化合物再三重複槽下加入槽内，在最終濃度是2〇〇毫微克/毫升下將Lps 添加至細胞以刺激釋出TNFa，適當的對照培養也在三重複下建立，將培養皿在37°C及5% C〇2下培養18_20小時，然後在lOOOXg離心5分鐘，使用供人類之特定 ELISA (SmithKline Beecham)測量在無細胞的培養上清液中的TNF量。結果： N’-[4-(賴基胺基K3S·異丙氧基.2R•㈣甲基)琥鋪基]_ S-第二據酸甲雜在1〇微莫耳濃度下對雙釋出顯示無效應。 … 步驟4 :使用下列生物等量研究，研究測試化合物之生物利用率。在雄性Sprague Dawley大鼠中估計靜脈注射藥物動力學參數及口服生物利用率之研究。此研究疋使用父叉設計在四個不同研究日進行三隹大鼠接受手術植入股靜脈導管供在開始研究至少三天^ 注測試分子，在此研究中的全部劑量是使用結晶的測試化合物製備。在第-天的研究中，將動物在4〇微莫耳/公斤(4〇毫〜17〜 f紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4 ㈣X 297公釐）—------— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------#· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 —---------- 五、發明說明（//〇升/公斤)之標的劑量下經由30分鐘靜脈灌注(俊食)接受測试化合物，劑ϊ溶液是在20%水性Encapsin® (pH 8.0)中製備且含 1% DMSO，Encapsin® (Cerestar USA Inc.，

Hammond，IN)是羥基丙基環糊精，一種用於增加化合物溶解度之環狀寡糖類，否則需要使用非水性溶劑調製。在第二天的研究中，將動物在8微莫耳/公斤之標的劑量下經由口服餵管灌食法(禁食)接受測試化合物溶液，劑量溶液是在5%水性琥珀酸化的豬明膠（ρΗ 7·5)中製備且含 l%DMSO。從側尾靜脈收集血液樣品，將25微升等份之各全血樣。口添加至25微升水中並使其放在冰上約$分鐘以促進完全溶血，然後將樣品冷凍儲存直到分析，測試化合物之血液 /辰度疋經由LC/MS/MS定量(LLQ= 1 〇.〇毫微克/毫升)，使用 WinNonlin在這些數據上進行非區域及區域藥物動力學分析以回收適當的靜脈注射藥物動力學參數，使用不同的區域模式及權重範例；根據標準模式選擇規範(也就是

Akaike’s Information Criterion，Schwartz Criterion，及平方殘值的和)，從中間區域一級消去且反覆最小平方權重的重 $之1/¥2之二-區域模式與觀察的數據最吻合，使用最適化區域模式計算藥物動力學參數；需要使用Auc值之全

部計异(包括生物利用率)是使用從非區域分析回收之AUC 進行。在雜小獵犬狗中估計靜脈注射藥物動力學參數及口服生物利用率之研究。〜18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公爱）_----- (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁)

561141 A7 ~^----~—— 五、發明說明（/7) 此研九疋使用父叉设计在分隔七日之兩個不同研究日進行，在此研究中使用三隻雄性小獵犬狗，在各研究曰中，將導管暫時性放入頭靜脈供血液取樣；只有在第一天的研究中，也將導管暫時性放入隱靜脈供靜脈注射灌注。在第一天的研究中，各動物在丨小時靜脈灌注(4〇毫升/公斤)下接受測試化合物，劑量溶液是在2〇%水性 Encapsin® (PH 8.0)中製備且含1% DMS〇,沅哪如⑧ (Cerestar USA Inc.，Hammond，IN)是羥基丙基-々 _環糊精，一種在製備劑量溶液時用於增加溶解度之環狀寡糖類(7個葡萄糖單元)，否則需要使用非水性溶劑調製。在第二天的研究中，各動物在經由口服俊管灌食法 (8.0毫升/公斤)接受測試化合物(6.〇微莫耳/公斤標的劑量），劑量溶液是在5%水性琥珀酸化的豬明膠（ρΗ7·5)中製備且含 1%DMS0。測試化合物之血漿濃度是經由LC/MS/MS定量 (LLQ=l〇毫微克/毫升)，使用非區域法分析相對於時間數據之血漿濃度。在雄性Cynomolgus狼子中估計靜脈注射藥物動力學參數及口服生物利用率之研究。此研究是使用交叉設計在分隔七日之兩個不同研究日進行，在此研究中使用三隻雄性Cynomolgus猴子，在兩個研究日中，將導管放入隱靜脈供血液取樣，在第一天的研究中，也將導管暫時性放入對側的隱靜脈供靜脈注射灌注。〜19〜尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨 ·丨丨丨丨！ —訂 i""!! — -事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 五、發明說明（/^ ) 在第一天的研究中，各動物(禁食)在1小時靜脈灌注 (=·〇宅升»斤)下接受測試化合物(2〇微莫耳/公斤標的劑量)，劑量溶液是在20%水性Encapsin® (pH8 〇)中=人 1% DMSO, Encapsin® (Cerestar USA Inc.5 Hammond IN) ^ 羥基丙f心環糊精，—種在製備劑量溶液時用於增加解度之環狀寡糖類(7個葡萄糖單元)，否則需要使用曰太性溶劑調製。、在第f天的研究中，各動物(禁食)在經由口服餵管灌食法(8.0毫升/公斤)接受測試化合物(6〇微莫耳/公斤標的劑量)，劑量溶液是在5%水性琥珀酸化的豬明膠❻h 7 製備且含1%DMS0。血液樣品是得自股靜脈導管；經由離心分離血漿，測試化合物之血漿濃度是經由LC/MS/MS定量(LLQ=l〇毫微克/毫升)，使用非區域法分析相對於時間數據之血漿濃度結果： N KN-經基胺基)_3s_異丙氧基分茶甲基滅拍醯基> S-第二壳胺酸甲醯胺之結果與N’-[4-(N-經基胺基)-3S-丙基-2R-(2-萘甲基)琥珀醯基]_s_第三亮胺酸甲氧基醯胺(揭示在WO 99/67201 (SmithKlineBeecham))之結果比較。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —訂--------- 本紙張尺度適用宁國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚） 561141 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明“^) 結構 IC50 (Parent MW) [cLogP] HOHN 人N 丫^ NHMe γ 〇 0.04 (457.57) [2.596] 。肩 HOHN N NHOH ；广大1 r , 6 (473.57) [4.659] 匕 (區域分析）一 ι 研究大鼠狗猴子 —^-1 Cmax (毫微克/毫升） 1335 ±296 腹膜注射劑量= 2.0毫克/公斤 1414 ±465 腹膜注射劑量= 0.96毫克/公斤 1011± 175 腹膜注射劑量= 0.92毫克/公斤 1359士464 | 真腹膜注射劑量= | 0.99毫克/公斤 Ϊ τ1/2 (分鐘） (MRT) 广Τ 10.8 ± 5.3(a) 234 土 139 (β) (128 ±77) 252,259,49b (64.4 ± 39.7) 691, 85.1, 208b (311,59.5, 68.1b) 5.32 ± 1.14(a) 311 ± 106 (β) (115 ±62) V^Ll (毫升/分鐘/公斤） V/I 26·4 ± 8.5 10.6 ±4.5 14·7±3·6 10.4 ±3.7 Vdss (L/kg) 3.25 ± 1.70 0.563 ± 0.204 4.09, l.ll,0.827b 1.16 ± 0.57 口服Fa (%) 50.6 ± 10.6 (3.7毫克/公斤 sc溶液） 29.0 ±3.7 口服劑量= 2·7毫克/公斤 21.1,6.0, 22.5b (2.8毫克/公斤 1 溶液、 1.4,6.0, 1.如口服劑量= r--·-· 2.8毫克/公斤㈣縮舄· Cmax-靜脈注射灌注後所得的最大丨期；MRT-測試分子之平均駐留時間；CL_ 除；Vdss-分佈之穩定狀態體積；F•生物禾 a生物利畔之計算是經由將縣化的劑邊從口服部份可觀察到測試化合物濃度(在^ 2在:服或十二指腸腿研究中可測量的荜子研九)之最後點)除以靜脈注射部份標^ 〜21〜本紙張尺度iit國國家標丄· —----- ;辰度，T1/2-半农 Tc .全身性企漿清 1用率％ ; 、〜〜」 tAUCQ_t (其中t是 ^鼠研究情形下）劑濃度(狗及猴 ί匕的劑量AUC" ------ --------訂--------- 561141 A7 ______ B7 _五、發明說明（W) 並乘以100。 5由於大的變異性而列出各值，動物都是在相同順序下列出。 ' 製備： a) 3 S-第三丁酯基-2R-(萘甲基)丙内酉旨

(請先閱讀背面之注音5事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製將在THF (16〇毫升)中的(第三丁基-(3R)-緩基冰(2·蒸基)丁酸酯(10克，31.9¾莫耳)在_7〇。(3之氬氣壓下授拌並逐滴加入雙(二甲石夕烧基)胺基化鐘(63.7毫升1莫耳濃度在 THF之浴液，63.7¾莫耳)，將混合物在介於-⑼。〔及jyot 授拌1小時後冷卻至-80°C並經由導管加入在τηρ (2〇毫升) 之N-碘化。琥珀醯亞胺(7.17克，31·9毫莫耳)，使混合物溫熱至〜-30 C經1小時後用飽和的氯化銨溶液停止反應，加入醋酸乙酯並將2-相混合物在室溫下快速攪拌丨·5小時，將液層分離並將水層用醋酸乙酯(2χ)萃取，合併的有機層用5%硫代硫酸鈉溶液及鹽水清洗後乾燥(Ν%§〇4)及蒸發，在矽膠上層析(用在己烷中的10%醋酸乙酯流洗)並用己烷碾製回收的產物後得到5.70克白色固體(63%)。〜22〜本紙張尺度 t _冢標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公髮） -1------^---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 ____B7____ 五、發明說明（V) MS (Ap+ve) M+Na=335 iHNMRCCDC^): 1.31 (9H，s)，3.29(lH，dd，J=8.5, 14·6Ηζ)， 3·38 (1H，dd，J=6.1，14.6 Hz)，4.06 (1H，m)，4·45 (1H，d，J=4.4 Hz)，7·34 (1H，dd，J=1.7, 8·5 Hz)，7·48 (2H，m)，7.68 (1H，s)， 7·82 (3H，m)。實例： Ν’-丨4-(N-羥基胺基)-3S-異丙氧基-2R-(2-蓁甲基)琥珀醯基1- S-第三亮胺酸甲醯胺 a) N’-[4-(第三丁氧基)-3S-經基-2R-(2-萘甲基)破抬醯基]-S-

第三亮胺酸午酉I

將第三亮胺酸苄酯TFA鹽(6.49克)與無水碳酸钟(2.89 克)在THF (100毫升)中攪拌20分鐘，加入HOAT (2.24克)及 3S-第三丁醋基-2R-(萘甲基)丙内自旨(4.66克，14.94毫莫耳）並將混合物再攪拌72小時(48小時後再加入HOAT (1.02克)) ，將固體過濾，並用THF充分清洗，將合併的過濾液蒸發成海綿體後將其溶解在EtOAc並用0.5莫耳濃度HC1、飽和的NaHC〇3水溶液(2x)、水及鹽水清洗，乾燥(MgS04)並蒸發成膠體，使其從己烷/Et20結晶後得到產物之白色固體 6.35克(80%)。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

561141 五、發明說明

A7 B7 1HNMR(DMSO-d6)：〇.88 (9H? s)? 1.40 (9H, s)5 2.88 (1H, dd? J=13.5, 6 Hz)，3.00 (1H，dd，J=13.5, 8.5 Hz)，3.19 (1H，m)， 3·92 (1H，t，J〜6.5 Hz)，4.18 (1H，d，J=8.5 Hz)，4.77 (1H，d， J=12.5 Hz)，4·84 (1H，d，J=12.5 Hz)，5.53 (1H，d，J=7.5 Hz)， 7.24 (2H，m)，7.30-7.37 (4H，m)，7·45 (2H，m)，7.65 (1H，s)， 7.77-7.87 (3H，m)，8.09 (1H，d，J〜9 Hz)。 b) N’-[4-(第三丁氧基>3S_異丙氧基曱基)琥珀醯基]-S-第三亮胺酸苄酯一- % 在N’-[4-(第三丁氧基)_3S-經基_m♦萘曱基)琥珀醯基]-S-第三亮胺酸苄酯(3·〇克，5.62毫莫耳)於1，2-二乙氧基乙烷(75毫升)的溶液中加入NaH (60%在石蠟中的懸浮液；〇·27克)，攪拌2_3分鐘後，加入TrOTf在戊烧中的溶液 (〜30%重量/重量；6毫升)，將混合物在室溫下攪拌25分鐘並再加入NaH (0.054克)及iprOTf溶液(3毫升)，再攪拌25分鐘後，再加入NaH(0.054克)及iprOTf溶液(3毫升)，再攪拌 20分鐘後，加入0.5莫耳濃度HC1，並將混合物用办0&萃取(2x)，將合併的萃取液用飽和的NaHC〇3水溶液、水及鹽水清洗，乾燥(MgS04)並蒸發成膠體，在矽膠上經由層析法純化(己烧/Et^O)，得到產物之幾乎無色膠體，1克〜24〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁}

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561141 A7 B7 五、發明說明（w) (41〇/〇)。 MS (ES+ve) M+H=576, M+Na=598. 'HNMRCCDCyiO.S? (9H5 s), 1.09 (3H, d, J=6.0 Hz), 1.21 (3H，d，>6·0 Hz)，1.49 (9H，s)，2.87-3.00 (2H，m)，3.10-3.22 (1H，m)，3·69 (1H，7-tet，J=6.0 Hz)，4·00 (1H，d，JM6.5 Hz)， 4.36 (1H，t，J=9 Hz)，4·57 (1H，d，apparent J=12.5 Hz)，4.63 (1H，d，apparent J=12.5 Hz) (two halves of Abq)，6.50 (1H，d， J=9 Hz)，7.15-7.19 (2H，m)，7.27-7.40 (4H，m)，7.40-7.45 (2H， m)，7.60 (1H，s)，7.72-7.80 (3H，m)。 c) N’-[4-(第三丁氧基)-3S-異丙氧基-2R-(2-萘曱基)琥珀醯基]-S-第三亮胺酸「_.

將N’-[4-(第三丁氧基)-队異丙氧基-2R-(2·萘曱基)琥 ί白醯基]-S-第三亮胺酸旨(ι·33克，2.31毫莫耳)在大氣壓力下在MeOH (38毫升)中用Pd-BaS04觸媒(〇.67克)氫化i小時，將觸媒過濾並用MeOH充分清洗，將合併的過濾液蒸發後得到產物之泡綿體1.09克(97°/〇)。 MS (ES+ve) M+EM86, M+Na=508. 'HNMRCDMSO-d^: 0.92 (9H5 s), 1.02 (3H5 d? J=6.0 Hz), 1·〇8 (3H，d，J=6.0 Hz)，1.42 (9H，s)，2.75 (1H，dd，J=14, 4 Hz)，〜25〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

561141 A7 B7 五、發明說明（w) 3.00 (1H，dd，J=14, 9.5 Hz)，3.21 (1H，m)，3.57 (1H，7-tet， J=6.0 Hz)，3.93 (1H，d，J=8.5 Hz)，4.10 (1H，d，J=9 Hz)，7.29 (1H，m)，7.44 (2H，m)，7·62 (1H，s)，7.74-7.84 (3H，m)，7.90 (1H，d，J〜9 Hz)，12.35 (1H，n，br.)。 d) N’-[4-(第三丁氧基)-3S-異丙氧基-2R-(2_萘甲基)琥珀醯

將N’-[4-(第三丁氧基)-3S-異丙氧基_沈_(2_萘甲基)琥珀醯基]第三亮胺酸(1.09克，2.24毫莫耳)溶解在dmF (29毫升)並加入HOAT (0.61克)及DEC (0.86克)，將混合物在室溫下攪拌20分鐘，然後加入甲胺鹽酸鹽(〇·61克)及N-曱基嗎福咁(0.74毫升)，將混合物再攪拌2小時後在真空下濃縮，將殘留物溶解在EtOAc並依序用〇·5莫耳濃度HC1、飽和的NaHC03水溶液、水及鹽水清洗，乾燥(MgS04)並蒸發成膠體，在矽膠上經由層析法純化(己烧/EtOAc),得到產物之膠體0.77克(69%)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) MS (ES+ve) M+H=499? M+Na=521. !H NMR (DMSO-d6): 0.84 (9H5 s)5 1.02 (3H, d? J=6.0 Hz)? 1.09 (3H，d，J=6.0 Hz)，1.45 (9H，s)，2·16 (3H，d，J=4.5 Hz)， 2.74 (1H，dd，J=13.5, 4.5 Hz)，2.93 (1H，dd，J=13.5, 10 Hz), 〜26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 561141 A7 五、發明說明（>彡） 3.17 (1H5 m), 3.56 (1H? 7-tet, J=6 Hz), 3.94 (1H, d, 1=8.5 Hz)? 4·06 (1H，d，J=9.5 Hz)，7·25 (1H，br. m)，7.28 (1H，dd，1.5 Hz)，7·44 (2H，m)，7·59 (1H，m)，7.67 (1H，d，J=8.5 Hz)， 7.74-7.86 (3H，m)。 e) N，-[4-經基-3S-異丙氧基-2R-(2-萘曱基)琥珀醯基]-S-第三亮胺酸甲醯胺

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製將N’-[4-(第三丁氧基)-3S-異丙氧基_2R-(2-萘甲基)琥 ί白醯基]-S-第三亮胺酸甲醯胺(0.77克，1·544毫莫耳)溶解在TFA (11毫升)及DCM (22毫升)並在室溫下攪拌2.5小時，將溶液在真空下蒸發並用甲苯再度蒸發，用乙_/己燒碾製殘留物後得到產物之灰色固體0.67克(98%)。 MS (ES+ve) M+H=4435 M+Na=465. ]H NMR (DMSO-d6): 0.85 (9H, s)? 1.02 (3H, d? J=6.〇 Hz)5 1·09 (3H，d，J=6.0 Hz)，2·16 (3H，d，J=4.5 Hz)，2.78 (1H，dd， J=14, 5 Hz)，2·95 (1H，dd，J=14, 10.5 Hz)，3·18 (1H，m)，3.58 (1H，7-tet，J=6 Hz)，4.00 (1H，d，J=8.5 Hz)，4.05 (1H，d，J=9.5 Hz)，7.20 (1H，q，J=4.5 Hz)，7·29 (1H，dd，J=8.5, 1.5 Hz)， 7.42-7.46(2H，m)，7.59(lH，d，J=9Hz)，7.60(lH，s)，7.74-7.84 (3H，m)，12.87 (lH，br.s)。〜2 7〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） --------訂--------- f) n’-[4-(n-羥基胺基)-3s-異丙氧基_m-(2-萘曱基)玻珀醯基]-s-第三亮胺酸甲醯胺

561141 A7 B7 五、發明說明（w) 辱i 將N’-[4_經基-3S-異丙氧基-2R-(2-萘曱基)琥珀醯基]_ S-第三亮胺酸甲醯胺(〇·67克，1.514毫莫耳)溶解在pMF (20毫升)並加入ΗΟΑΤ (0.41克)及DEC (0.58克)，將溶液在室溫下授拌5分鐘，然後加入經基胺鹽酸鹽(〇·32克)及N-曱基嗎福咐(〇·5毫升)，將混合物在室溫下授拌2小時後在真空下濃縮，將殘留物分佈在EtOAc及飽和的NaHC03水溶液(2x)、水(2x)及鹽水，乾燥(MgS04)並蒸發成固體，用乙醚碾製後得到產物之白色固體0.51克(74%)。 MS (ES+ve) M+H=458, M+Na=480. 啦 NMR (DMSOd6)·· 0.84 (9H，s)，1 ·00 (3H，d，J=6.0 Hz)， 1.04 (3H，d，J=6.0 Hz)，2.02 (3H，d，J=5 Hz)，2.65 (1H，dd, J=14, 4 Hz)，2.83 (1H，dd，J=14, 11.5 Hz)，3.18 (1H，m)，3.52 (1H，74et，J=6.0 Hz)，3.90 (1H，d，J=9 Hz)，4.01 (1H，d，J=9 Hz)，6·93 (1H，q，J=5 Hz)，7·25 (1H，dd，J=8.5, 1.5 Hz)，7.44 (2H，m)，7·53 (1H，d，J=9 Hz)，7.57 (1H，s)，7.75-7.85 (3H，m)， 9_08(1H，s)，10.89 (lH，br.s)。〜2 8〜本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製申請曰期 .· r, ' » ; 1 案號類別 αηα Ά/α 2.37/zv AM Κ ΑέΙΡί7Ατϋ (以上各欄由本局填註）專利申請案第89122497號 ROC Patent Appln. No.89122497 % A 之中文說明書修正頁-附件(一） Amgnded Pages of the Chinese Specification - Enel. I (民國92争8月「曰送呈） August 厂，2003) 1修㈤.Λ ]C4 561141 薪墨專利説明書發明新型名稱發明創作人中文英文姓名國籍住、居所姓名 (名稱）用於治療或預防經S-CD23傳介的病症之化合物，其製法及醫藥組成物

Compounds for the treatment or prophylaxis of disorders mediated by S-CD23, the preparation and the pharmaceutical composition thereof 1.法拉爾（Andrew FALLER) 2·瓦約翰（John Gerard WARD) 1.-2.皆為英國 1.-2.皆為英國艾赛克斯城哈洛市第三大道新福朗特科學園區南 New Frontiers Science Park South, Third Avenue, Harlow, Essex CM19 5AW，United Kingdom 英商史密斯克萊美占有限公司 SmithKline Beecham p.l.c. 裝訂經濟部皙慈时4^7s:工消費合作社印製線三、申請人國籍住、居所 (事務所）代表人姓名英國央國米德塞白福德城新水平院 New Horizons Court, Brentford, Middlesex TW8 9EP, England 羅大為（DavidRoberts) 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS〉M祕（21〇><297公釐）

Claims

561141 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 92.. 8,-^ 專利申請案第89122497號 ROC Patent Appln. No.89122497 修正之申請專利範圍中文本-附件(三) Amended Claims in Chinese - Enel. Ill (民國92年8月~~J~〇WK) (Submitted on August f，2003) 1. 一種式(I)之化合物 10 OR O

HONH^ 〜丫 \NH(〇)nR3 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中： 15 R是異丙基； n是0 ; R1是萘甲基； R2是第三丁基；且 R3是甲基。 20 2.根據申請專利範圍第1項之化合物，其係式(IA)之化合物： 25

HMe (ΙΑ) • 29 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 89551B·接 561141 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3·根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其係用於生產藥劑供治療或預防其中涉及S-CD23過量產生的病症其如過敏、發炎病症及自發性免疫病症。 _ 4. 一種係用於治療或預防其中涉及S-CD23過量產生的病症其如過敏、發炎病症及自發性免疫病症之醫藥組成物，其包含申請專利範圍第1或2項之化合物及視需要選用的藥學上可接受之載劑。 5·—種用於製備根據申請專利範圍第1或2項化合物之方法，該方法包括：

NHMe 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 其中X是保護基其如苄基或三甲矽烷基，或 (b)使式(III)化合物：

NHMe -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 561141 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其中羥基經視需要保護，與羥基胺或其鹽類反應 6.—種如下式(II)化合物：

NHMe 10 其中X是保護基如苄基或三甲矽烷基 7·—種如下式(III)化合物： 15

NHMe 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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