JPH10502656A

JPH10502656A - ヒトｓ−ｃｄ２３の阻害剤の使用

Info

Publication number: JPH10502656A
Application number: JP8504670A
Authority: JP
Inventors: クリスティー，ゲイリー; ウエストン，ビバリー・ジェイン
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1994-07-13
Filing date: 1995-07-07
Publication date: 1998-03-10
Also published as: EP0769939A1; GB9414157D0; WO1996002240A3; WO1996002240A2

Abstract

(57)【要約】マトリックス金属プロテアーゼの阻害剤、例えばコラゲナーゼはヒト可溶性ＣＤ２３の放出の阻害能を有し、したがって過剰量のｓ−ＣＤ２３が関係している症状、例えばアレルギーおよび自己免疫疾患の治療および予防にて有用である。

Description

【発明の詳細な説明】ヒトＳ−ＣＤ２３の阻害剤の使用本発明は、自己免疫疾患およびアレルギーのような、可溶性ＣＤ２３（ｓ−ＣＤ２３）の過剰産生に伴う症状を治療するための医薬使用、特に可溶性ヒトＣＤ２３形成の阻害剤の使用に関する。コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゲラチナーゼ等のマトリックス金属プロテアーゼは、結合組織の破壊に関連していることが知られている。公知の種類のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は、ヒドロキサム酸、ホスホネートおよびチオールの誘導体を包含する。国際特許出願（公開番号ＷＯ９３／２００４７）は、マトリックス金属プロテアーゼ、特にヒドロキサム酸の誘導体が、かかる組織破壊に関連する症状、例えばリウマチ様関節炎、変形性関節炎、骨粗鬆症のようなオステオペニア、歯周炎、歯肉炎、角膜表皮または胃の潰瘍形成、および腫瘍性転移または侵入の治療または予防に有用である可能性があると開示している。ＷＯ９３／２００４７は、以下の特許公報に由来の誘導体を包含する種々のヒドロキサム酸誘導体を開示する：米国特許第４５９９３６１号、ＥＰ−Ａ−０２３６８７２、ＥＰ−Ａ−０２７４４５３、ＷＯ９０／０５７１６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９１／０２７１６、ＥＰ−Ａ−０４８９５７７、ＥＰ−Ａ−０４８９５７９、ＥＰ−Ａ−０４９７１９２およびＷＯ９２／１３８３１。ＣＤ２３（低親和性ＩgＥレセプターＦｃεＲII、Blast２）は、ＢおよびＴリンパ球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、ランゲルハンス細胞、単球および血小板を包含する種々の成熟細胞の表面にて発現する４５ｋＤａのII型内在性蛋白質である（Delespesseら、Adv Immunol,49［1991］149-191）。好酸球ではＣＤ２３様分子もある（Grangetteら、J Immunol,143［1989］3580-3588）。ＣＤ２３は免疫応答の制御に関与している（Delespesseら、Immunol Rev,125［1 992］77-97）。ヒトＣＤ２３は、細胞内Ｎ−末端のアミノ酸においてのみ異なる２種の特異的に制御されたイソ型、ａおよびｂで存在する（Yokotaら、Cell,55 ［1988］611-618）。ヒトでは、ａイソ型がＢ−リンパ球においてのみ見られるのに対して、ｂ型はＣＤ２３発現能を有する他のすべての細胞にて認められる。しかしながら、Ｂ−リンパ球でのｂイソ型の発現はＩＬ４で誘発可能である。無傷の、細胞結合のＣＤ２３（ｉ−ＣＤ２３）は、その機構は未だあまり解っていないが、複雑な一連の蛋白質分解事象の結果として産生される、多数のはっきりと限定されている可溶性フラグメント（ｓ−ＣＤ２３）の形成をもたらす細胞表面からの切断を受けることが知られている（Bourgetら、J Biol Chem,269［1994 ］6927-6930）。未だ明らかにされていないが、そのすべてがｉ−ＣＤ２３に共通のＣ−末端レクチン領域を保持している、主可溶性フラグメント（分子量３７、３３、２９および２５ｋＤａ）の蛋白質分解事象が、３７ｋＤａフラグメントの初期形成を介して連続的に起こると仮定されている（Letellierら、J Exp Med ,172［1990］693-700）。別の細胞内切断経路は、ｉ−ＣＤ２３由来のＣ−末端ドメインと異なる安定な１６ｋＤａフラグメントをもたらす（Grenier-Brosette ら、Eur J Immunol,22［1992］1573-1577）。活性のいくつかはヒトにおける膜結合のｉ−ＣＤ２３に起因し、そのすべてがＩgＥ調節にて役割を果たしていることがわかっている。特定の活性として、ａ）抗原提示、ｂ）ＩgＥ介在好酸球細胞毒性、ｃ）Ｂ細胞がリンパ節および脾臓の生殖中心に帰巣すること、およびｄ）ＩgＥ合成のダウンレギュレーションが挙げられる（Delespesseら、Adv Immunol,49，［1991］149-191）。３種の高分子量可溶性ＣＤ２３フラグメント（分子量３７、３３および２９ｋＤａ）は、Ｉ gＥ産生にて主たる役割を果たすと思われる多機能サイトカイン特性を有する。かくして、ｓ−ＣＤ２３の過剰形成は、ＩgＥの過剰産生、外因性喘息、鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アトピー性皮膚炎およびアナフィラキシーのようなアレルギー疾患の顕著な特徴に関係している（SuttonおよびGould、Nature,366, ［1993］421-428）。ｓ−ＣＤ２３が関与する他の生物学的活性として、Ｂ細胞増殖の刺激および単球からのメディエーターの放出の誘起が挙げられる。したがって、高レベルのｓ−ＣＤ２３は、Ｂ-慢性リンパ性白血病の患者の血清（Sarfa ti ら、Blood,71［1988］94-98）およびリウマチ様関節炎の患者の滑液（Chomarat ら、Arthritis and Rheumatism,36［1993］234-242）中にて観察される。ＣＤ２３はこれらの種々の特性を有するため、ｓ−ＣＤ２３の形成を阻害する化合物は、ａ）Ｂ細胞表面にあるｉ−ＣＤ２３のレベルを維持することによるＩ gＥ合成の負のフィードバック阻害の強化、およびｂ）ｓ−ＣＤ２３の高分子量可溶性フラグメント（分子量３７、３３および２９ｋＤａ）の免疫刺激サイトカイン活性の阻害という２つの面の作用を有する。この度、意外にも、マトリックス金属プロテアーゼ（例えば、コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゲラチナーゼ）の作用を阻害する化合物が、哺乳動物細胞の培養系にトランスフェクションされたヒト可溶性ＣＤ２３の放出の効果的な阻害剤であることが見いだされた。また、かかる化合物がＩＬ４に対する応答にてヒト末梢血管の単核細胞によるＩgＥの形成およびＣＤ４０に対する抗体での刺激を阻害することも示唆されている。したがって、マトリックス金属プロテアーゼの阻害剤は、ｓ−ＣＤ２３の過剰産生が関与しているアレルギーおよび自己免疫疾患のような障害の治療または予防に対して有用である。公知の種類のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は、ヒドロキサム酸、ホスホン酸およびチオールの誘導体を包含し、そのすべてがＣＤ２３蛋白質分解を阻害することがわかっている。したがって、本発明は、ｓ−ＣＤ２３の過剰産生が関与するアレルギーおよび自己免疫疾患のような障害を治療または予防するための医薬の製造におけるマトリックス金属プロテアーゼの阻害剤のような、ヒト可溶性ＣＤ２３形成の阻害剤の使用を提供する。さらなる態様において、本発明は、ｓ−ＣＤ２３の過剰産生が関与するアレルギーおよび自己免疫疾患のような障害の治療または予防法であって、マトリックス金属プロテアーゼの阻害剤のような可溶性ヒトＣＤ２３形成の阻害剤を、その治療または予防を必要とするヒトまたはヒト以外の哺乳動物に投与することからなる方法を提供する。本発明はまた、ｓ−ＣＤ２３の過剰産生が関与するアレルギーおよび自己免疫疾患のような障害の治療または予防用の医薬組成物であって、マトリックス金属プロテアーゼの阻害剤のような可溶性ヒトＣＤ２３形成の阻害剤と、所望によりそのための医薬上許容される担体とからなっていてもよい医薬組成物を提供する。適当なマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤が表に列挙されており、ＷＯ９０／０５７１６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９１／０２７１６、ＷＯ９２／１３８３１，ＷＯ９３／２００４７、ＥＰ−Ａ−０２３６８７２、ＥＰ−Ａ−０２７４４５３、ＥＰ−Ａ−０４８９５７７、ＥＰ−Ａ−０４８９５７９、ＥＰ−Ａ− ０４９７１９２および米国特許第４５９９３６１号に開示されているヒドロキサム酸誘導体を包含する。適当なマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤はまた、ＥＰ２７３６８９およびＥＰ３２０１１８に開示されているチオールおよびホスホン酸を包含する。ＷＯ９０／０５７１６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９１／０２７１６、ＷＯ９２／１３８３１，ＷＯ９３／２００４７、ＥＰ−Ａ−０２３６８７２、ＥＰ− Ａ−０２７４４５３、ＥＰ−Ａ−０４８９５７７、ＥＰ−Ａ−０４８９５７９、ＥＰ−Ａ−０４９７１９２、米国特許第４５９９３６１号、ＥＰ２７３６８９およびＥＰ３２０１１８および表に列挙する他の特許公報の内容は、これらの特許公報に開示されている特定の実施例を含め、出典明示により本明細書の一部とする。個々のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は、操作セクションに後記されている化合物を包含する。好ましいマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は、ＷＯ９０／０５７１９の実施例２およびＥＰ０４９７１９２の実施例１を包含する。前記したマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤の医薬上許容される塩、溶媒和物および他の医薬上許容される誘導体もまた本発明に含まれることは理解されるであろう。本明細書に記載のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は、立体異性体の形態を含め、数種の異なる異性体の形態にて存在してもよい。個々の化合物に関して、本明細書中にて特に断らない限り、立体異性体およびラセミ体混合物のような異性体の混合物を含め、すべての異性体は本発明に含められる。本発明のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は、いずれか適当な常法にしたがって調製することができ、例えば、特許公報：ＷＯ９０／０５７１６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９１／０２７１６、ＷＯ９２／１３８３１，ＷＯ９３／２００４７、ＥＰ−Ａ−０２３６８７２、ＥＰ−Ａ−０２７４４５３、ＥＰ−Ａ− ０４８９５７７、ＥＰ−Ａ−０４８９５７９、ＥＰ−Ａ−０４９７１９２、米国特許第４５９９３６１号、ＥＰ２７３６８９およびＥＰ３２０１１８に開示のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は本明細書に開示の方法により調製することができる。本発明のマトリックス金属プロテアーゼ阻害剤の、立体異性体を含め、異性体は、そのような異性体の混合物として、または個々の異性体として調製できる。個々の異性体は、いずれか適当な方法により調製され、例えば、個々の立体異性体は、キラル基質より出発する立体特異的化学合成によるか、または公知方法を用いてエナンチオマー混合物を分離することにより調製できる。マトリックス金属プロテアーゼ阻害剤は実質的に純粋な形態にて単離されることが好ましい。本明細書にて用いる場合、「マトリックス金属プロテアーゼ阻害剤」なる語および等価な用語は、結合組織マトリックスの成分を分解する能力を有する一連の亜鉛およびカルシウム依存性エンドペプチダーゼ（マトリックス金属プロテアーゼ）のいずれの構成員をも阻害するあらゆる化合物を意味する。マトリックス金属プロテアーゼおよびその阻害は、とりわけ、Hooper、FEBS Letters 1994,354, 1-6；Gordonら、Clinical and Experimental Rheumatology 1993,11（Suppl.8） ,S91-S94；Woessner、FASEB 1991,5,2145-2154；およびBirkedal-Hansen、Criti cal Reviews in Oral Biology and Medicine 1993,4（2），197-250で検討されている。コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゲラチナーゼの阻害に関する検定は、各々、ＷＯ９０／０５７１９（６７頁）、ＷＯ９０／０５７１９（６８頁）およびＥＰ−Ａ−０４８９５７７（２５−２６頁）に開示されている。本発明は、これらの検定のいずれか１つでにて活性であると思われる化合物の使用、ならびに表に列挙した特定の化合物を包含する。本明細書に記載する場合、マトリックス金属プロテアーゼ阻害剤のような可溶性ヒトＣＤ２３形成の阻害剤は有用な医薬特性を有する。好ましくは、活性化合物を医薬上許容される組成物として投与する。組成物は、好ましくは、経口投与用に適合させる。しかしながら、該組成物は他の投与法に、例えば、気道障害を治療するためのスプレー、エアロゾルもしくは吸入用の他の常套手段の形態にて；または心不全を患っている患者に対する非経口投与の形態にて適合させてもよい。もう一つ別の投与法は舌下または経皮投与を包含する。組成物は、錠剤、カプセル、散剤、顆粒、ロゼンジ、坐剤、復元可能な散剤、または液体調製物、例えば、経口または滅菌非経口溶液または懸濁液の形態であってもよい。投与のコンシステンシーを得るために、本発明の組成物は単位用量の形態であることが好ましい。経口投与用の単位用量投与形は錠剤およびカプセルであってもよく、結合剤、例えば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、またはポリビニルピロリドン：充填剤、例えば、ラクトース、シュガー、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；崩壊剤、例えば、澱粉、ポリビニルピロリドン、澱粉グリコール酸ナトリウムまたは微結晶セルロース；または医薬上許容される湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムのような通常の賦形剤を含有してもよい。固体経口組成物は、混合、充填または打錠の通常の操作により調製される。繰り返し混合操作を用いて活性剤を多量の充填剤を用いるこれらの組成物の全体に分散させてもよい。かかる操作はもちろん当該分野において慣用的である。錠剤は、特に腸溶性コーティング剤を用いる、通常の製薬慣習にてよく知られた方法に従って被覆してもよい。経口用液体調製物は、例えば、エマルジョン、シロップ、またはエレキシルの形態であってもよく、または使用前に水または他の適当なビヒクルで復元される乾燥生成物として投与してもよい。このような液体調製物は、沈殿防止剤、例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、硬化食用脂；乳化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油が含まれていてもよい）、例えば、アーモンド油、分別ココヤシ油、グリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコールのような油状エステル；保存剤、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルまたはソルビン酸；および所望により、通常のフレーバー剤または着色剤のような通常の添加剤を含有してもよい。非経口投与の場合、流体単位投与形は、化合物および滅菌ビヒクルを用い、用いる濃度に応じて調製され、ビヒクルに懸濁させるか、または溶解させることができる。溶液の調製では、化合物を注射用水に溶かし、適当なビヒクルまたはアンプルに充填する前に濾過滅菌し、密封することができる。有利には、局所麻酔剤、保存剤および緩衝剤のようなアジュバントをビヒクルに溶かすことができる。組成物をバイアルに充填した後に凍結させ、水を真空下で除去することで、安定性を向上させることができる。非経口用坐剤は、化合物をビヒクルに溶かす代わりに懸濁させ、滅菌処理を濾過により行うことができないことを除いて、実質的に同じ方法にて調製される。化合物は滅菌ビヒクルに懸濁させる前に酸化エチレンに暴露することにより滅菌させることができる。界面活性剤または湿潤剤を組成物中に配合し、化合物の均一な分散を促進するのが有利である。本発明の組成物はまた、適当には、嗅剤または噴霧器でのエアロゾルもしくは溶液として、または吸入器での微細粉末として、単独でまたはラクトースのような不活性担体と組み合わせて気道に投与してもよい。かかる場合において、活性化合物の粒子は、適当には、５０ミクロンより小さいな、好ましくは１０ミクロンより小さいな直径、例えば、１〜５０ミクロン、１〜１０ミクロンまたは１〜５ミクロンの範囲の直径を有する。適当ならば、少量の他の抗喘息薬および気管支拡張剤、例えば、イソプレナリン、イソエタリン、サルブタモール、フェニルエフリンおよびエフェドリンのような交感神経作用性アミン；テオフィリンおよびアミノフィリンのようなキサンチン誘導体およびプレドニソロンのようなコルチコステロイドおよびＡＣＴＨのような副腎刺激薬が含まれていてもよい。組成物は、投与方法に応じて、０.１重量％〜９９重量％、好ましくは１０〜６０重量％の活性物質を含有してもよい。吸入投与の場合の好ましい用量は１０〜９９％、特に６０〜９９％、例えば９０、９５または９９％である。微細粉末処方は、適当には、計量された用量としてのエアロゾルにて、または適当な肺活性化装置により投与される。適当な計量エアロゾル処方は、通常の噴射剤、エタノールのような共溶媒、オレイルアルコールのような界面活性剤、オレイルアルコールのような滑沢剤、硫酸カルシウムのような乾燥剤および塩化ナトリウムのような濃度調節剤からなっていもよい。噴霧器に適する溶液は、標準的な噴霧装置で用いる場合、２０ｍｇ／ｍｌまでの、より一般には０.１〜１０ｍｇ／ｍｌの化合物を含有する、所望により、例えばpＨ４〜７の間で緩衝化されていてもよい等張滅菌溶液である。有効量は、本発明の化合物の相対的効能、治療される障害の重篤度および患者の体重に依存するであろう。適当には、本発明の組成物の単位投与形は、０.１〜１０００ｍｇの本発明の化合物（吸入の場合、０.００１〜１０ｍｇ）、より一般的には１〜５００ｍｇ、例えば１〜２５または５〜５００ｍｇを含有してもよい。かかる組成物を、日用量が７０ｋｇの成人で１ｍｇないし１ｇ、さらに言えば５ないし５００ｍｇであるように、一日に１〜６回、より一般的には一日に２〜４回投与してもよい。この量は、約１.４ｘ１０^-2ｍｇ／ｋｇ／日ないし１４ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあり、さらに言えば約７ｘ１０^-2ｍｇ／ｋｇ／日ないし７ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にある。以下に実施例を用いて本発明を説明するが、何ら本発明を限定するものではない。調製例：調製例１：［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２−（Ｒ）−イソブチル−３−（Ｓ）−（２−チオフェンチオメチル）スクシニル］−（Ｓ）−フェニルアラニン −Ｎ−メチルアミド・ナトリウム塩この化合物はＷＯ９０／０５７１９に開示の操作により調製される（実施例１１を参照のこと、遊離酸は実施例２にて調製）。調製例２：（Ｒ）−［ヒドロキシカルバモイルメチル］−４−メチルバレリル］ −Ｎ¹,３−ジメチル−（Ｓ）−バリンアミドこの化合物はＥＰ０４９７１９２に開示の操作により調製される（実施例１を参照のこと）。調製例３：Ｎ−［３−（Ｎ’−ヒドロキシカルボキシアミド）−２−（２−メチルプロピル）−プロパノイル−（Ｓ）−Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン−Ｎ−メチルアミドこの化合物はＵＳＰ４５９９３６１に開示の操作により調製される（実施例１を参照のこと）。調製例４：３−（Ｓ）−メルカプト−６−メチル−４−（Ｓ）−［［［１（Ｓ） −［（メチルアミノ）カルボニル］−２−（３−インドリル）エチル］アミノ］カルボニル］ヘプタン酸メチルこの化合物はＥＰ２７３６８９およびＪ.Ｍedicinal Ｃhemistry １９９３，３６，４０３０−４０に開示の操作により調製される（実施例５６を参照のこと）。調製例５：３−（Ｓ）−メルカプト−６−メチル−４−（Ｓ）−［［［１（Ｓ） −［（メチルアミノ）カルボニル］−２−（３−インドリル）エチル］アミノ］カルボニル］ヘプタン酸イソプロピルこの化合物はＥＰ２７３６８９に開示の操作により調製される。調製例６：３−（Ｓ）−メルカプト−Ｎ¹−［１−（Ｓ）−［（メチルアミノ）カルボニル］−２−（４−メトキシフェニル）エチル］−２−（Ｓ）−（２−メチルプロピル）ペンタンジアミドこの化合物はＪ.Ｍedicinal Ｃhemistry 同書に開示の操作により調製される（実施例４７ａを参照のこと）。調製例７：Ｎ−［Ｎ−（（Ｓ）−１−ホスホノプロピル）−（Ｓ）−ロイシル］ −Ｏ−メチル−（Ｓ）−チロシンＮ−メチルアミドこの化合物はＥＰ３２０１１８およびＪ.Ｍedicinal Ｃhemistry １９９４，３７，１５８−１６９に開示の操作により調製される（実施例１２を参照のこと）。調製例８：Ｎ−［３−（ヒドロキシカルボキシアミド）−２Ｒ−（２−メチルプロピル）プロパノイル−（Ｓ）−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミドこの化合物は、ベンズヒドロキサメート先駆体、ＷＯ９０／０５７１９の実施例１ｇに記載の方法に類似する方法を用いて類似カルボン酸およびＯ−ベンジルヒドロキシルアミンより調製した化合物を水素添加分解（Ｐd／ＢaＳＯ₄を触媒として用いる）に付すことで得られる。調製例９：Ｎ−［３−（ヒドロキシカルボキシアミド）−２Ｒ−（２−メチルプロピル）プロパノイル−（Ｓ）−フェニルアラニン−Ｎ−ベンジルアミドこの化合物は、カップリング剤として水溶性カルボジイミドの代わりにブロモートリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸を用いる以外、ＷＯ９０／０５７１９実施例１ｇに記載の方法に類似する方法を用い、カルボン酸先駆体とＯ−トリメチルシリルヒドロキシルアミンより調製される。生物学的試験方法操作１：可溶性ＣＤ２３の放出を阻害する試験化合物の能力を以下の操作を用いて調査した。 α形態のＣＤ２３でトランスフェクションした付着チャイニーズ・ハムスター卵巣細胞をマイクロタイタープレートにて増殖させた。細胞を１０％ウシ胎児血清、８００μｇ／ｍｌのＧ４１８含有の２ｍＭグルタミンを有するα−ＭＥＭ培地中にて集密に達するまで増殖させた。培地を除去し、細胞を滅菌リン酸緩衝液で洗浄した。試験化合物を２０Ｍｍのストック濃度でジメチルスルホキシドに溶かし、８００μｇ／ｍｌのＧ４１８含有のα−ＭＥＭ（ウシ胎児血清不含）で２００分の１に希釈した。１００ｍｌの希釈化合物を三重反復試験のウェルの付着細胞に加えた。適当な対照培養物を三重反復試験に付した。プレートを、加湿インキュベーター中、３７℃、９５％空気／５％ＣＯ₂で６時間インキュベートし、ついで２００ｘｇで３分間遠心分離に付した。The Binding Site Limited,Ins titute of Research and Development（英国、バーミンガム）より入手したＣＤ２３を特異的ＥＬＩＳＡに付し、培養物の上澄のＣＤ２３濃度を測定した。対照培養物に対して５０％まで可溶性ＣＤ２３の放出を阻害する試験化合物の平均濃度（ＩＣ₅₀）を測定した。結果試験化合物ＩＣ₅₀（μＭ）番号Ｐ１０.０５Ｐ２０.０５Ｐ３３.３５Ｐ４２.２Ｐ５６０Ｐ６６０Ｐ７３０操作２： in vitroにおけるヒトＩgＥの形成を阻害する試験化合物の能力を以下の操作を用いて調査した：ヒト末梢血液の単核細胞をFicoll-Paque（Pharmacia）で遠心分離に付して分離した。細胞を１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、５０μＭ２−メルカプトエタノールおよび５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン（ＴＣＭ）含有のＲＰＭＩ１６４０培地に１.２５ｘ１０⁶細胞／ｍｌの濃度で懸濁させた。８００μｌの細胞懸濁液を４８ウェルプレートのウェルにアリコートした。１００μｌのＴＣＭまたはＩＬ４を５００ｎｇ／ｍｌで適当なウェルに四重反復試験にて加え、つづいて１００μｌのＴＣＭまたは１０ｘ最終濃度の試験化合物を加えた。試験化合物をＴＣＭ中１００分の１に希釈した１０^-2Ｍのストック希釈でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かし、前記と同様にする。９５％空気／５％ＣＯ₂の加湿インキュベーター中、３７℃で１２日間、プレートをインキュベートする。培養期の終わりに、ウェルでの上澄を取り出し、遠心分離（２００ｘｇで１０分間）に付し、非付着細胞を除去した。トリパンブルー色素排除試験による評価では、毒性はなかった。上澄中のＩgＥ濃度をＥＬＩＳＡで測定した。結果操作３： in vitroにおけるヒトＩgＥの形成を阻害する試験化合物の能力を以下の操作を用いて調査した：ヒト扁桃Ｂリンパ球を１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、５０μＭ２ −メルカプトエタノールおよび５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン（ＴＣＭ）含有のＲＰＭＩ１６４０培地に１.２５ｘ１０⁶細胞／ｍｌの濃度で懸濁させた。８００μｌの細胞懸濁液を４８ウェルプレートのウェルにアリコートした。１００μ ｌのＴＣＭまたはＩＬ４を５００ｎｇ／ｍｌで、およびＣＤ４０に対する抗体を１０μｇ／ｍｌで適当なウェルに四重反復試験にて加え、つづいて１００μｌのＴＣＭまたは１０ｘ最終濃度の試験化合物を加えた。試験化合物をＴＣＭ中１００分の１に希釈した１０^-2Ｍのストック希釈でジメチルスルホキシドに溶かし、前記と同様にする。９５％空気／５％ＣＯ₂の加湿インキュベーター中、３７℃ で１１日間、プレートをインキュベートする。培養期の終わりに、上澄をウェルより取り出し、遠心分離（２００ｘｇで１０分間）に付し、非付着細胞を除去した。トリパン色素排除試験による評価では、毒性はなかった。上澄中のＩgＥ濃度をＥＬＩＳＡで測定した。結果

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/66 9551−4ＣＡ６１Ｋ 31/66 (72)発明者ウエストン，ビバリー・ジェインイギリス、アールエイチ３・７エイジェイ、サリー、ベッチワース、ブロッカム・パーク（番地の表示なし）スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒト可溶性ＣＤ２３（ｓ−ＣＤ２３）の過剰産生が関連する障害の治療または予防にて用いるための医薬の製造におけるｓ−ＣＤ２３形成の阻害剤の使用。２．ｓ−ＣＤ２３形成の阻害剤がマトリックス金属プロテアーゼの阻害剤である請求項１記載の使用。３．アレルギーまたは自己免疫疾患の治療または予防にて用いるための医薬の製造における請求項１または２記載の使用。４．ｓ−ＣＤ２３の過剰産生が関係する障害の治療または予防方法であって、有効量のヒト可溶性ＣＤ２３形成の阻害剤をその治療または予防を必要とするヒトまたはヒト以外の哺乳動物に投与することを特徴とする方法。５．ｓ−ＣＤ２３の過剰産生が関係する障害を治療または予防するための医薬組成物であって、ヒト可溶性ＣＤ２３形成の阻害剤からなる医薬組成物。６．さらに、医薬上許容される担体からなる請求項５記載の医薬組成物。７．アレルギーまたは自己免疫疾患の治療または予防にて用いるための請求項５または６記載の医薬組成物。８．ｓ−ＣＤ２３形成の阻害剤がマトリックス金属プロテアーゼの阻害剤である請求項５ないし７のいずれか１つに記載の医薬組成物。９．実質的に表に関して前記されている、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の使用、請求項４に記載の方法、または請求項６ないし８のいずれか１つに記載の医薬組成物。 10．実質的に調製例１〜９に前記されている、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の使用、請求項４に記載の方法、または請求項６ないし８のいずれか１つに記載の医薬組成物。