TW455575B - Novel 7-aryl-6(Z)-heptatrienoic acid retinamides - Google Patents

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4555 7 5 Λ； ___ D7 五、發明說明（1 ) (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 視黃酸（RA)於試管内及活體内調控正常細胞與惡性細胞 之生長與分化，且已深入研究其作爲多種惡性病之醫療劑 與預防劑之潛在用途。全反式RA及1 3-順式R A係透過細胞 核視黃酸受體（RAR) α，/9與Γ發揮功能，已知會在試管 内造成某些腫瘤細胞分化。9 -順式R A及其類似物係結合 一群已知爲視黃酸X(RXR) α、/?與广受體及rar α、/?與 r受體，會造成腫瘤消退。已知全反式R Α及1 3 -順式R A 誘發細胞凋亡之能力很有限’但全反式RA(4-HPR)之4 -經 基醯胺已顯示可經由細胞凋亡而抑制腫瘤形成及腫瘤生長 [JBC 271，2241 (1996) A. N 方卓（Fanjul)等人；BBRC 224,837(1996) Α·狄有唐柬尼歐（Dipietrantonio)等人： Cancer Res· 55, 853 (1995) M.彭索尼（ροηζοη〇等人]。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 細胞凋亡’或稱漸進式細胞死亡爲眞核生物細胞死亡最 常見的一種形式’其特徵爲喪失與相鄰細胞之接觸、染色 質縮合，膜起水痕，細胞質縮合’及内因性内核酸酶活化 而產生特有之DNA片段（細胞凋亡標記之一），及最後產生 細胞洞亡體，由其他細胞吞噬。細胞凋亡爲一種正常過程 且涉及生命發展與過程期間組織之建造、衍化及維持。細 胞凋亡亦爲對抗病毒感染及癌症發生之重要防衛機轉。癌 症之發展似乎同時涉及細胞過度增殖及抗拒正常細胞调亡 剌 <放°有4多腫瘤促進劑已顯示可誘發抗拒細胞；周亡 [FASEB Journal 8, 864 (1994) S.C_ 萊特（Wright)等人]。 雖然已發現視黃酸可有效治療癌瘤，但許多種視黃酸及 其他視黃醯胺化合物極具毒性，會產生有害之不氣效應 -4 - 本紙張&度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2】〇 X 297公笼） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45557 5 Λ? 157 五、發明說明（2) 如：維生素A過多症，而限制了其於預防及治療癌症上之 用途。在治療乳癌時，更因癌細胞會改變其對治療所採用 化合物之敏感性而變得複雜。最初對雌激素呈陽性（ER+) 之細胞在接受抗吨激素療法後，轉而對雌激素受體呈陰性 (ER-)。視黃酸及視黃月矣如同大多數化療劑，僅對ER+乳 癌瘤細胞具有活性，而對雌激素受體陰性E H -之乳癌瘤細 胞則無活性。[Can Res 50，1997 (1990) J.A.方唐納（Fontana) 等人；Mol Cell Endocrinol 91，149 (1993) B_凡德柏格（van der Burg)等人]。因此對ER-及ER+二種乳癌瘤細胞均展現 活性之化合物對治療乳癌非常重要。 1 可能之抗腫瘤/抗癌醫療活性之初步測定法爲在固定化 之癌瘤細胞中誘發細胞；周亡，或漸進式細胞死亡。有許多 現有之化療劑（例如：5FU，亞德里亞黴素（Adriamycin)、紅 豆杉醇（Taxol))及放射療法可於試管内誘發人體癌瘤細胞 凋亡（Cancer 79，12 (1997) K. Sugamura,等人；Cancer Lett-93, 147 (1995, S. M， 杜 （Tu) 等人； Ann. NY Acad. Sci. 784, 5 50 (1996)，R.M.甘奇米（Gangemi)等人]。另一種測定抗腫 瘤或抗癌活性之方法爲抑制細胞生長’或遏止細胞循環， 防止細胞分裂’但不一定殺死細胞。已知專一性視黃酸g鱼 胺（全反式4 -羥苯基視黃醯胺（4-HPR))可對ER+及ER-二種 乳癌瘤細胞抑制細胞生長及誘發細胞凋亡[(Cancer Lett. 107, 65 (1996)，T.T.Y.王（Wang)等人]。 亦己知此化合物在許多其他腫瘤細胞型態中（包括肺癌 瘤細胞及造血惡性病）抑制細胞生長及誘發細胞凋亡。4· -5- 本紙張尺度適用中00家標準（CNS)A.丨規格（210 X 297公发） -----------------^-------訂--------·" (請先閱讀背面之江意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45557 5 A7 B7 五、發明說明（3 ) HPR對會抗拒視黃醯胺（其有效活化RARs)之細胞誘發細胞 凋亡[Carcinogenesis 16，2477 (1995)，M.S.謝凱（Sheikh)等 人；Cancer Res. 53, 6036 (1993)，D.狄里亞（Delia)等人]，4-HPR可於活體内消退腫瘤[Clin，Cancer Res. 4，1345 (1998) C.P.卓（Zou)等人；Otolaryngol Head Neck Surg 118，464 (1998) R.L·雪兒（Scher)等人；Cancer Lett 47，187 (1989) K 多拉沙希（Dowlatshahi)等人]，並作爲對抗多種惡性病之強 效化學預防劑[Cancer Res. 39，1339 (1979) R.C.慕恩（Moon) 人；Cancer Res., 54，2032S( 1994) Α·柯斯塔（Costa)等人； Anticancer Res_，17, 499 (1997) L.N.張（Chan)等人]。在試管 内’ 4-HPR似乎可誘發細胞凋亡並同時抑制er +與ER-乳癌 瘤細胞株之細胞生長^ 4-HPR臨床上出現之主要毒性爲夜 晚視力受損。 已有報告指出’芳香系6 -順式三蹄酸可誘發癌瘤細胞之 細胞凋亡，且據稱毒性低（WO 96/2〇913)。然而，已測得 其中一種化合物由於無法誘發細胞凋亡而沒有活性對抗 ER-與ER +癌瘤細胞[(2E，4E，6Z)_7_(3,5-雙（三氟甲基）苯基）_ 3,—甲基-2,4,6 -庚三蹄酸]。因此，這類化合物較不受注 意。 令人驚对地’本發明7 _芳基_ 6 •順式庚三缔酸視黃酿胺可 於試管内有效對抗ER+及ER-二種乳癌瘤細胞，於NMU老 鼠腫瘤模式中減少腫瘤數目，且不出現視黃醯胺常見之毒 性或不良效應。 本發明一方面包括式【化合物 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1ΙΙ^ΙΙι[]ΙΙΙΪ 裝·------Γ I 訂— — — — —--·" (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 45 55 7 5 Λ7 137 五、發明說明（4 R3

經濟部智慧財產局員工消費合作社印5拆 式I 其中R1與R2分別爲氫 '鹵素、烷基、烷氣基戈 基；R3爲氫或烷基；且尺4爲氫，但當爲烷基時\ 爲烷基；R5，R6及…與!^分別爲齒素、氫、羥基、 坑氧基；且R7爲氫或烷基；其中不含6 _反式異構物 此等62(例如：7_芳基-6_順式）庚三晞酸視黃醯 物可有效誘發惡性尊期及惡性細胞之細胞凋亡。哼 物抑制衍生自癌性固體腫瘤（尤指非小細胞肺癌^ 癌瘤、及乳癌瘤）之細胞之增殖，因此適用於治療 <固體腫瘤，尤指非小細胞肺癌瘤、結腸直腸癌瘤 瘤。 * 本文説明之化合物對誘發乳癌瘤細胞及er+細 亡特別有效。此外本發明6 _順式視黃醯胺化合物可 發曾爲ER+但轉爲ER-之癌瘤細胞之凋亡。最後， 合物之有效劑量低到足以避免有害或有毒之副作用 雖然R7爲氫較佳，但本發’明任何化合物中，R7可 如：甲基。同樣地’雖然較佳化合物爲下式I丨中， 中由R5、R6及R8與RV斤佔據之位置均爲氫之化合物 三鹵甲 則R4可 坡基或 〇 胺化合 等化合 、直腸 形成癌 及乳癌 胞之凋 有效誘 此等化 0 爲烷基 在式I ，但本 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> I --- 訂--------- 本紙張&料國國家標準（CNS)A4規格（210 X 2&公爱） 455575 Λ7 五、發明說明（5 B7 發明任何化合物中’此等取代基中任一個或多個可爲南素 或經基或烷基或既氧基之任何組合。 特別値得注意之化合物爲式化合物 R3

^^1 ^^1 ^^1 ^^1 ^ * 1 «I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

式I I 其中R1，R2，R3與R4如上述。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其他値得注意之化合物包括式I化合物中，R3爲虎基 如：甲基，且R4爲氧，或R3與R4爲烷基如：甲基，或尺3與 R4爲氫。亦値得注意之化合物爲式I中，R1與R2分別爲 氫’闺素如：溴，烷基如：甲基，烷氧基如：甲氧基，或 二鹵甲基，尤指三氟甲基。本發明之一部份亦爲式丨〗化合 物’式中R3爲烷基如：甲基，且R4爲氫，或…與尺4爲设基 如：曱基’或R3與R4爲氫，及式II化合物，式中^與V八 別爲氫’鹵素如：溴，烷基如：甲基，烷氧基如， w 基，或三鹵甲基，尤指三氟甲基。 氧 本發明任何組合物中，R1與R2可相同或相異。 Μ此下述 任何化合物中（式I化合物：’i，ii或iii及式I I化合物... / . 1 ， li或 iii) ’ 與R2相同較佳，但亦可相異。因此式-中民|與V爲商 素之化合物中，可爲相同或相異鹵素。同樣地，Rl與^可 -8- 本紙張尺度適用中國园家標準（CNS)A4規格（2〗0 X 297公釐） 455575 Λ7 Π7_____ 五、發明說明（6) 爲相同或相異烷基或烷氧基D此外’ R1與R2可爲不同族群 之基團’亦即N可爲鹵素，而R2爲烷基’或Ri可爲烷基， .而R2爲鹵素，等等。 値得注意之式I化合物中，丨）R3爲烷基如：甲基，且R4 爲氫；或ii) R3與R4爲氫：或iii) R3與R4均爲烷基如：甲 基。特足S之’此等値得注意之j，j j或i i丨化合物中，R ί與 R爲二氟甲基。其他i，i丨或iii化合物中，與r2亦可爲鹵 素如：溴，烷基如：曱基，烷氧基如：甲氧基，或氫。更 佳化合物中，R3爲烷基如：甲基，且R4爲氫。因此例如： 式中R3爲規基且R4爲，且R1與R2爲三氟曱基，或其中R3與 R4均爲氫且R1與R2爲（I素，或R3與R4爲氫且RI*R2爲甲氧 基（化合物，及其他具有本段第1小節所述特性之其他化 合物（例如：代表上述i或i j或j j i化合物，其中R I與R2爲鹵 素、ί元基、抗氧基或氫，等等）亦爲本發明之一部份。 此外’値得注意之式丨丨化合物中，i) R3爲烷基如：曱 基’且R4爲氫；或ii) R3與R4爲氫：或iii) R3與R4均爲烷 基’如：甲基。特定言之，此等値得注意之i，丨丨或川化合 物中’ R1與R2爲三氟甲基。其他i，丨丨或ni化合物中，…與 R2亦可爲齒素如：溴，烷基如：甲基，烷氧基如：甲氧 基’或氫。更佳化合物中，R3爲烷基如：甲基，且R4爲 氣°因此例如：式中R3與R4爲氫且R1與R2爲溴，或R3與R4 馬坑基且以與112爲鹵素，或R3爲烷基且R·1爲氫，且R1與R2 爲甲氧基 < 化合物’及其他具有本段第1小節所述特性之 其他化合物（例如：代表上述i或i i或iii化合物，其中R1與 -9- 本纸狀度適用中國國眺⑽X .297¾} ---Η---------裝--------- 訂---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^55575 Λ7 B7_ 五、發明說明（7 ) R2爲鹵素 '烷基、烷氧基或氫，等等）亦爲本發明之一部 份0 因此例如：本發明化合物包括式I I中，R3爲甲基且R4爲 氫之化合物。一種此等化合物中，R1與R2爲三氟甲基。此 等化合物之一項實例爲N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙 (三氟甲基）苯基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺，此爲特別 佳化合物。另一種化合物中，R 1與R2爲溴。此等化合物之 一項實例爲 N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-(3,5-二溴苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺。另一種此等化合物，R1與R2爲 甲基。此等化合物之一項實例爲N-(4-羥苯基）-(2E，4E,6Z)-7-(3,5 -二甲苯基）-3}7-二甲基-2,4,6 -庚三晞Si胺。另一種化 合物中’ R1與R2爲甲氧基。此等化合物之一項實例爲N-(4-羥苯基）-(2E，4E,6Z)-7-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三綿' Sit胺。另一種此等化合物中，R1與R2爲氫。此等化 合物之一項實例爲Ν-(4-羥苯基）-(2Ε，4Ε，6Ζ)-7-笨基-3,7-二 甲基-2,4,6-庚三烯醯胺。 本發明亦包括式11化合物，式中R3與R4爲氫。一種此等 化合物中，R1與R2爲三氟曱基。此等化合物之一項實例爲 Ν-(4-羥苯基）-(2Ε,4Ε,6Ζ)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3-甲基 -2,4,6-庚三#醯胺。另一種化合物中，R1與R2爲溴。另一 種此等化合物中，R!與R2爲甲基，另一種此等化合物中， R1與R2爲甲氧基。另一種此等化合物中，R1與R2爲氫。 本發明亦包括式11化合物，式中R3與R4爲甲基。一種此 等化合物中，R!與R2爲三氟曱基。此等化合物之一項實例 -10 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210>< 297公复） ·,·'Γ I . - I 1 "" I ‘^ (請先閱讀f之汰意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 455575 Λ7 U7 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 五、發明說明（8

3,6’7-二甲基-2S4,6-庚三烯醯胺。另一種此等化合物中，R 與R2爲溴。另—種此等化合物中，R1與R2爲甲基。另一種 此等化合物中，Ri與R2爲甲氧基。另一種此等化合物中， R1與R2爲氫。 本文私用之”烷基"一詞意指含至多7個碳原子之飽和煙 基。&氧基"一詞同樣意指含至多7個碳原子且利用氧連 接之化5物心基與fe氧基可爲直鏈或分支，如：甲基、 乙基、正丙基、異丙基、正丁基與第三丁基，《甲氧基、 乙il基、正丙乳基、異丙氧基、正丁氧基與第三丁氧基。 三"基t經三個齒素取代之"，該等自素最好相同， ^亦相、—鹵甲基實例爲三氣甲基。d M —詞意指 氟 '氣、溴或辨，"鹵夸，，一叫 广 ， 囚京 Η亦指軋、氣、溴或碘。 此等化合物可有效抽制七 .^ Ε 制或防止惡性前期腫瘤及惡性細胞 胞之生長，並適用於痕 也㈤。療形成固體腫瘤之癌㉟，尤指結 % '攝護腺、或子宮餌、. '、非小知胞肺癌瘤、小細胞肺癌 瘤、頭與頭郅癌瘤及乳房 .的可山” 可山艰，不論細胞是否涉及ER-或 ERt均可。此寺化合物特 ,,n. ^ <州於礼居、結腸直腸 '及非 小細胞肺癌溜。本發明化合 士容時成恭® Γ用於治療此等腫瘤’延滯 此寺腫瘤發展’及防止腫瘤數目增加。 本發明化合物之抗癌醫療 板味机胡 ρ 、 .、^舌性可利用多種標準試管内分 析法澄明。此等説明於下 ^ W , ^ 4 . 叹貫例中之分析法已知可指示 抗€活陡，並分析癌症療 嫌,Β Θ本發明化合物如式I所示結 構，且依任何標準分析法測 疋乂癌；舌性，尤指細胞凋亡之 ---Η---------'裝-------1-I 訂---------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

i、發明說明（9 ) 經濟部智慧9ί產局員工消費合作社印製 分析法。該等化合物對誘發癌瘤細胞凋亡’使細胞死亡之 效果特別有效。因此當細胞接觸到此化合物時，若此化合 物可致癌瘤細胞死亡時，表示此化合物具有所需活性。待 分析之癌瘤細胞（例如：乳房、肺、結腸直腸，等等）很容 易自細胞寄存處取得，如：美國菌種培養物收集處（ATCC)， 或可由相關技藝專豕自癌症患者取得。由分析法中採用之 細胞型態決定該化合物對抗活性最強之癌症型態。例如： 影響ER-乳癌瘤細胞之化合物則適用於治療乳癌瘤，尤指 反轉ER+細胞。 生長在培養物中之癌瘤細胞可與專一性化合物培養，且 利用例如：可選擇性染色死細胞之染料或測定光密度 (O.D.)來決定細胞活力之變化。若死亡之細胞數超過丨〇0/〇 時’則該化合物有誘發凋亡之活性。化合物可能不直接殺 叱細胞（細胞毒性），但可能調控某些造成細胞凋亡之細胞 内或細胞外過程。本發明化合物之抗癌活性亦可由分析化 合物對細胞生長及分化之影響程度來決定。測定細胞生長 抑制作用之方法爲添加試驗化合物至與染料或放射活性前 培養之癌瘤細胞中，利用顯微鏡細胞計數法、閃爍計數 法、或0 . D .測定法測定細胞是否在這段培養期間增加數 目°若細胞數未增加時，則生長受抑制，視該化合物具有 醫療活性。同樣地，可利用已知方法測定添加試驗化合物 後進行分化之細胞比例（亦即利用Nbt測定HL-60細胞中釋 氧量’此係分化指標）。若丨〇%或以上之細胞已分化時’ 則視该化合物具有醫療活性。明確分析法實例示於實例 -12- 本纸張以制中標準(CNS)A'i規格(210 X 297公釐) 1 ^裝-------^—訂 h--------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4555 75 A7 ____B7___ ~ --- 五、發明說明（10) IIA。 活體内分析法亦適用於證明抗癌活性。本發明化合物對 已诱發腫瘤生長之實驗室動物（如：小白鼠）有減小腫瘤體 積及/數目活性。腫瘤型態表示該活性主要對抗之癌症型 態。由致癌物干擾特定組織，或注射特定型態之癌瘤細胞 即可誘發特定腫瘤。這種分析法示於實例H b ^當分析本 發明化合物對抗NMU誘發老鼠之乳房腫瘤時，展現顯著之 預防及醫療活性。有效之劑量及療程驚人地未出現顯著毒 性。該化合物在與毒性無關之劑量及療程之實驗過程（亦 即化學預防法）中亦展現減少腫瘤數量之效力。此外， 該化合物具醫療活性，亦即可使已形成之初生腫瘤消退。 化合物亦具預防性，亦即可顯著預防新腫瘤形成。具有此 等醫療及預防活性之視黃醯胺過去並未出現在這種實驗動 物模式中。 因此，本發明化合物具有醫療活性，使固體腫瘤消退或 舒緩’尤指彼等與癌瘤如：乳房（ER+及尤指ER_)、肺及結 腸直腸有關之腫瘤。 根據本發明，癌症治療法爲對患者全身性投與治療癌症 有效量之本發明化合物。特定言之，本發明包括治療乳癌 之方法’其係對乳癌患者投與抑制癌症或癌瘤細胞生長有 效量之化合物。抑制癌（癌瘤）細胞生長係指阻止細胞生 長’引起細胞凋亡，或造成分化，或改變細胞性質使之變 成無菩。該等化合物亦可預防性投藥，例如：投與有罹患 癌症危險者’或曾接受通常低於治療劑量進行有效治療 -13- 本紙尺度適用中國國家標準（CNS)/\_1規t各（2j0 X 297公餐〉 ί讀先閱讀背面之;i意事項再填寫本頁) 裝------->1訂---------^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Λ7 B7 455575 五、發明說明（”） 者。化合物用量依癌症型態、腫瘤數量與大小及患者之需 求而定。通常，每曰劑量约L毫克/公斤至約5〇〇毫克/公斤 體重（以約20毫克/公斤至约丨〇〇毫克/公斤較佳）即爲有助 值之基本範圍，有經驗的操作者可根據患者之特性與需求 及其病症來變化。該治療典型地進行約3個月，但依患者 之病症及操作者之判斷決定。預防性投藥中，投藥時間長 短仍依患者之病症及操作者之計劃而定，但通常持續三個 月以上的時間。爲了進行上述治纟，本發明化合物係呈含 本發明化合物及可與該化合物相容之醫藥上可接受載體i 組合物全身性投藥。製備此等组合物時，任何常見之醫藥 上可接受之載體均可使用。通常，較佳單位劑型爲錠劑或 膠囊，依患者之體重及體型而定，可每天分一次或分二次 投藥。本發明化合物可呈單獨治療，或併用其他化學：： 化治療，或併用放射法或手術法。 根據本發明化合物可呈醫藥上可接受之可水解酷或前藥 形式投藥。任何醫藥上可接受之可水解醋均可用於本發明 組合物及方法中。此等醋類爲芳香酿如：苯甲酿酷，例 如：其中R7馬C(O)苯基，或烷醯酯，例如： 炫基’其中坡基可爲甲*、乙基、正丙基丄中基：丁) 基，等等。 本發明醫藥組合物可製成任何常見形式，包括：⑷固體 形式’供口服或呈塞劑投藥’如：錠劑、膠囊、丸劑 '散 劑、粒劑，等等：⑻無菌，典型呈水性溶液或懸浮液形 式’供靜脈内或非經腸式投藥及(c)局部投藥用製劑如：溶 -14- d氏張尺度適用中國國家標準（Ci\rS)/U規格（2J0 X 297公釐） ---Ί 11-------------11 *--------4& {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印®ί 455575 v B7 五、發明說明（12) 液、皤浮液、軟膏、乳霜、凝膠、微粉化粉末、氣溶膠， 等等。醫藥組合物可經除菌及/或邛包含輔劑如：防腐 劑、女定劑、濕化劑' 乳化劑 '改變滲透壓之鹽類，及/ 或緩衝劑。

本發月化合物特別適用於醫藥上可接受之口服劑型。此 等醫藥組合物可包含一種或多種本發明化合物或其醫藥上 可接爻之鹽’及其醫藥上可接受之可水解酯類，及可相容 I醫藥上可接受之載體材料。任何常用之載體材料均可使 用。載體材料可爲適合口服之有機或無機惰性載體材料。 合逍載體包括水、明膠 '阿拉伯膠、乳糖、澱粉、硬脂酸 鎂、滑石、植物油、聚烷二醇、凡士林，等等。此外，醫 藥I劑可包含其他醫藥活性劑，以具有RAR α活性之視黃 醯胺較佳。亦可根據醫藥調配上可接受之操作法添加其他 添加物如：調味劑、防腐劑、安定劑、乳化劑 '緩衝劑， 等等。 W 醫藥製劑可製成任何習知之口服劑型，包括口服用固體 劑型，如：錠劑 '膠囊 '丸劑、散劑、粒劑，等等。較佳 口服劑型包括鍵劑、硬式或軟式明膠囊，甲基纖維素或其 他谷易於4化道;谷~之合適材料。根據本發明涵括之口服 劑型將隨個別患者之需求，由參與之醫師決定。 相關技藝專家可依下圖及實例1之原則，採用標準起始 材料、試劑及方法’製備不含6 -反式異構物之本發明化合 物。 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)人1規格（210 X 297公;i ) ---^--------- 裝-------— 訂，-- ·-·請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 455575 A7 B7 ___<.***·一 '.. "" $、發明說明（13 ) 圖1

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 由鹵化苯基衍生物（以溴化或碘化較佳）（其中R1與R2如 式（1)(1)與乙炔（如：三甲矽烷基乙块（a))，採用偶合反應 之標準條件（例如：碘化銅、PPh3 ' Pd(PPh3)2Cl2，於二異 丙胺中）反應，最好在0 °C至室溫下進行，由乙炔置換溴 (2)。以強驗（如：氫氧化鉀）及溶劑混合物（以醚、乙酿或 四氫咬喃與合適水性溶劑如：低碳數燒醇（以甲醇較佳）及 水較佳）（b)，水解矽烷基。所得乙炔（3)與強鹼（如：雙（三 甲矽烷基）胺化鋰）及C〇2 (c)反應，得到羧酸（4)。此酸經標 準酯化劑（d)(例如：可使用重氮甲烷）酯化，得到甲醋 (5)。然後於此等還原反應之標準條件下還原參鍵成順式雙 鍵’例如：使用H2 ’經林德勒觸媒（Linldar's cata丨ySt)(e)還 原，得到（Z )或順式化合物（'6 )。 -16- 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS)AJ規格（2】0^ 297公芨） 裝------^--訂，---------^ 4 5 55 75 a? __B7 五、發明說明（14) 圖2

圖2 ’依圖1所示進行步驟㈤與（b)。所得乙炔（3)與強鹼 (如：正丁基鋰）及氣甲酸甲酯，於非質子性溶劑中（如： 四氫呋喃）（c)反應’得到酯（4)。經三取代之順式雙鍵之製 法係由（4)與二甲基銅鋰，於非質子性溶劑（如：四氫咬喃 與乙酸乙酯）中，最好在約-70°C(d)下反應，得到（Z)或順式 化合物（5)。 圖3 ^1 ^1 · n n I — n n ^^1 It n —1 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消费合作杜印製

由式中R1與R2如式I之苯申醛衍生物（1)與亞磷羧基乙酸 醋（如：2 -破-亞騰複基乙酸三乙輯），採用霍尼反應 (Horner reaction)之標準條件，使用鹼如：氫化鈉，於二甲 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A.l規格（210 X 297公S ) 455575 Λ7 B7 五、發明說明（15) 氧乙烷中，最好-78至〇°C下反應。反應產物再與雙（三甲珍 说基）胺化麵於四氫呋喃（a)中反應’使中間物乙缔碘完全 轉化成乙炔（2)。由（2)與二甲基銅鋁，於四氫呋喃中，最 好在,約-70°C (b)下反應產生三取代之順式雙鍵，得到（幻或 順式化合物（3)。 圖4

R1 C(0)CHa H,Cv R1 R4 'CfOjOCHjCHj 由式中R1與R2如式〖之乙酷苯衍生物⑴與霍尼試劑 ⑷（如：2-亞蹲叛基坡酸三坡基§旨，例如：亞磷羧基己酸 三乙酯，其中R4爲Η，或2-亞磷羧基丙酸三乙酯，其中R4 爲，使用霍尼反應之標準條件（例如：第三丁醇鉀）反 應，得到E/Z異構物混合物之酷（2卜所得日血 式）異構物則利用標準方法分離。 “ 、 圖5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) • I. n n n n n a IE n (I 1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

由式中R1與R2如式I之乙磕苯衍生物 酸乙酯⑷使用皮特森烯化反應之 M三甲矽烷基)乙

CfOlOCHjCHj …二異丙胺化赶），或境基上t:件’使用強驗 \非質子性醚溶劑 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A找格（210^97公£ Λ7 455575 ϋ7 五、發明說明（16) (如：THF或乙醚）中反應，得到E / Z異構物混合物之酯 (2)。所得E與Z異構物再利用標準方法分離。 圖4與5爲直接製法，但產物爲需要繼續分離之異構物混 合物_，而其他圖則只產生（Z)或順式異構物。 圖6 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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本紙張尺度適用令國國家標準（CNS)A-l規格（210 X 297公1 ) 455575 Λ7 ______J£____ 五、發明說明（17 ) 於標準條件下’使用還原酯形成醇之試劑，於標準條件 下，例如：於合適溶劑中如：甲苯、醚或其他己烷，最好 在約-30至0°C下，使用氫化鋰鋁或二異丁基鋁化氫（a)，使 前圖，(1)之丙烯酸甲酯或乙酯（z)還原成相應醇（2)。該醇（2) 使用合適試劑如：二氧化錳（b)，氧化成醛（3)。此醛與3 -甲基-4-亞磷羧基巴豆酸酯及合適鹼（如：雙（三甲矽烷基） 胺化鋰），於約-70至約5 °C下較佳（c)，反應得到酯（4)。此 酯與水解劑（如：強鹼，例如：氫氧化鉀或鈉），於水性溶 劑中（如：水及低碳數醇，例如：甲醇或乙醇），最好在約 80°C下（d)反應，得到羧酸（5)。此羧酸與產生醯基氣之試劑 (如：一甲基氣甲膦鏘化氣）或與.草酷氣（e)反應，得到睦基 氣（6)。此醯基氣於使醯基氣轉化成醯胺（例如：吡啶及二 甲基甲醯胺）之標準锋件下反應，該醯胺如下式

其中R5 ' R6、R8及R9如式I且R7,爲標準羥基保護基團如： 三甲矽烷基⑴’得到6 (Z)或6 -順式醯胺（7)。使用相關技藝 習知之材料與方法製備含R5至R9基團之任何胺基苯酚。 提供下列實例説明本發明，且未以任何方式加以限制。 實例I 备成法 一般説明：所有反應均於氬大氣下及隔離光線下進行。 HPLC管柱爲Waters Prep pak 矽膠(Porasil) 15_2〇 細，125A。 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------^--訂 --------^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4 5 5 5 7 5 Λ7 U7 $、發明說明（18) ΙΑ) N-(4-羥苯基 _(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙（三氟甲基）笨基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺 (請先閲讀背面之注意窨項再填寫本頁) 取含1-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]乙炔（31.0克，130毫莫耳） 之600毫升THF溶液冷卻至-40°C，以雙（三甲矽烷基）銨化 |里（1.0 M)( 1 35毫升，1 35毫莫耳）處理。攪拌數分鐘後。使 二氧化碳氣體經由導管通入冷溶液中P當添加過量後，反 應於周溫下攪拌直到回升至-20°C爲止。反應倒入1.5升水 中，以磷酸水溶液（50%)調至pH 3。加鹽水，以氣仿萃取 產物2次。有機萃液以水/鹽水洗滌，脱水（MgS04)，排除 溶劑’產生3丨克3-[3,5-雙（三氟曱基）苯基]-丙炔酸，靜置 時固化’不再純化。NMR(CDCI3) β 8.80(m，寬），8,06 (2Η, s，芳香系），7.98(1Η，s，芳香系）。 取3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]，丙炔酸溶於THF與醚之混 合物中’以重氮甲烷處理，直到所有酸均甲基化爲止。排 除所有溶劑，所得油經層析純化（1 〇%醚/己烷），產生30.5 克3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-丙块酸甲酯=〗hNMR(CDC13) j 8.〇6(2H，s，芳香系），7.94(1H, s，芳香系），3.88(3H，0-CH3)。 經濟部智慧財產局員工.消f合作社印製 取溴化亞銅⑴-二曱疏禝合物（22.6克，1 ι〇毫莫耳）懸浮 於1.2升已脱氣且於A r下之THF(無水）中_禮拌懸浮液冷卻 至0°C，滴加1.4 M MeLi之醚（157毫升，22〇毫莫耳）溶 液。攪拌1 5分鐘後，反應冷卻至_7δχ；，滴加3_[3,5_雙（三 氣甲基）苯基]-丙块酸甲醋之THF(i5〇毫升）溶液。反應混 合物於此溫度下攪拌1小時。反應直接倒入含25〇毫升20% -21 - 本紙張適用中囷國家標準（CNS) A-丨規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印*Jrt 55575 Λ7 ____[ί7__ 五、發明說明（19 ) 碼酸水溶液之均勻揽拌THF(500毫升）溶液中。於周溫下攪 拌丨0分鐘’以己烷萃取。合併有機萃液，以水/鹽水洗 滌，脱水（MgS〇4)，排除溶劑，產生3 5克3-[3,5-雙（三氟甲 基）苯基]-3-甲基-2(Z)-丙晞酸甲酷，未再純化，但直接還 原。1H NMR(CDC 丨 3)d 7.83(1H，s，芳香系），7.72(2H，s，芳香 系），6·04(1Η，s，C2-H)，3.69(3H，〇-CH3)，2.21(3H, s)。 取酯3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]·3-甲基-2(Z)-丙烯酸甲酯 (1 5克，53毫莫耳）溶於己烷（600毫升）中，冷卻至， 滴加二異丁基铭化氫（D丨B AH，1 Μ己燒溶液，1 2 2毫升， 1 22毫莫耳）’ 一旦添加完畢時’即使反應溫度回升至+5。〇， 以10%洛希爾鹽（Rochelle salt)水溶液（1〇〇毫升）處理，再揽 拌2小時。鹽濾出’以水洗滌濾液’脱水（MgS〇4)及濃縮， 產生12克3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_3 -甲基·2(ζ)-丙晞-1-醇：NMR(CDCi3)d 7.77(1H，s，芳香系），7.61(2H，s，芳香 系），5·88(1Η，t，C2-H)，4.02(2H，0-CH2)，2.14(3H, s, CH3)。 添加醇3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_3_甲基-2(z)_丙烯-丨_醇 (12克，40毫莫耳）之EtOAc(800毫升）溶液至激烈攪拌之含 Μ η 02 (1 0 0克）之E t Ο A c (8 0 0毫升）懸浮液中。於3 2 °C下攪拌4 小時後，反應混合物冷卻，經寅式鹽墊過濾。濾液濃縮， 產物經HPLC純化（1 5至20% EtOAc/己烷），產生8克3-[3,5-雙（三氟甲基）笨基]-3-曱基-2(Z)-丙晞越：NMR (CDC13) ώ'9·40(ΙΗ，d, CHO)，7·93(1Η，s，芳香系），7_72(2H，s，芳香系）, 6.24(IH，s，C2-H)，2‘37(3H，s，CH3)。 取3 -甲基-4-亞磷羧基巴豆酸三乙酯（13克，49毫莫耳）溶 -22- 本纸張尺度適用中國國家標準（CXS)A·!規格（210x297公釐） ---:--------- ------—訂·---------§ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _____117 455575 Λ7 五、發明說明（20 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 於THF(600毫升）中’冷卻至_75°C，以雙（三甲矽烷基）胺化鋰 (1 M THF溶液’ 4 5毫升，4 5毫莫耳）處理。反應保持_75。(；， 同時緩緩添加3-[3,5-雙（三氣甲基）苯基]-3-甲基_2(Ζ)-丙烯 醛（10_5克’ 37毫莫耳）之丁丨仆（50毫升）溶液。續於-75χ下攪 拌0.5小時後’使反應緩緩回升至+5°C，倒至稀磷酸水溶液 中。以己烷萃取產物，有機相以水洗滌，脱水（Na2s〇4)及 濃縮，產生粗產物。利用矽膠層析法純化所需異構物（5 % 醚/己烷），然後自己烷中結晶，產生純7-[3,5-雙（三氟甲 基）苯基]-3,7-二甲基-2(E),4(E)，6(Z)-庚三烯酸乙酯：【Η NMR (CDC13) ci 7.82(1H，s，芳香系），7.70(2H，s，芳香系）， 6.49(1H, dd, C5-H), 6.40(2H: m, C4.6-H)f 5.79(1H, s, C2-H), 4.18(2H, q, CH,-0)s 2.22(3H, s, C3-CH3), 2.13(3H, s, C7-CH3), 1.30(3H, t, CH2CH3)。 經濟釙智慧財產局員工消費合作社印製 轉化成7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,7-二甲基-2(E),4(E)， 6(Z)-庚三烯酸之方法爲以含乙醇（2 0毫升）與丨0% KOH水 溶液（4毫升）之溶液於回流下處理7-(3,5-雙（三氟曱基）苯 基]-3,7-二甲基-2(E),4(E),6(2)-三烯酸乙酯（0.46 克，1.0 毫 莫耳）1.5小時。溶液冷卻，倒至10%磷酸水溶液（I 00毫升） 中。以CHC13萃取此混合物’ chci3萃液以水洗滌一次，脱 水（MgS04)，及濃縮，產生固體。此固體自THF/己烷中結 晶，產生0.3克7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,7-二甲基-2(E)， 4(E),6(Z)-庚三烯酸：'H NMR (CDClrDMSO) β 7.82(1H，s， 芳香系），7,72(2H, s,芳香系），6‘50(1H，dd, C5-H), 6.40(2H，m， C4,6-H), 5.80(1H, s, C2-H), 2.24(3H, s, C3CH3), 2.12(3H, s, -23- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)/V4規烙（210 x 297公釐） 455575 Λ7 ------ -M7__ 五、發明說明（21 ) C7 CH3)。 (請先閱請背面之注意事項再填寫本頁) 取含無水醚（6 0毫升）與【)M F( I 4克，1 8毫莫耳）之溶液 冷卻至1 5 C，以半醯氣（丨丨克，8 7毫莫耳）處理，攪拌丨5分 鐘。所有溶劑蒸·發，所得二甲基氣甲脒鏘化氣白色固體懸 浮液DMF(50毫升）中，（二甲基氣甲脒鏘化氣係根據Heiv. Chim，Acta 42, 1653 (丨969)之方法製備）。添加7-[3,5_雙（三 氟曱基）苯基]-3,7-二甲基_2(E)，4(E)，6(Z)_庚三烯酸（〇 % 克，2.6毫莫耳），混合物攪拌3至4小時。冷卻至〇，以 1 0分鐘時間，使用〇，氺雙（三曱矽烷基）_4_胺基笨酚（4 8 克’ 1 9笔莫耳）之DFM(50毫升）溶液處理。揽拌丨小時，倒 至5 % KF水溶液（丨〇〇毫升）中，再攪拌i小時。以醚萃取此 水性混合物，以水洗綠，脱水（MgS04)，排除溶劑，產生 油。此油經層析純化（HPLC-35% EtOAc/己烷），產生N-(4-經苯基）-(2£，4已，6冗）-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,7，二甲基- 經濟部智慧財產局昊工消費合作社印製 2.4.6- 庚三烯醯胺之黃色固體。faBMS m/z(相對強度）455 (M+H-，鹼）347(50), 239(22) ; NMR (DMSO) J 9.80(1H, s, NH), 9.18(1H，s, ΟΗ)，8·08〇Η，s，芳香系），7.98(2H，s,芳香 系），7·4(2Η，d，芳香系），6·67(2Η，d,芳香系），6.6-6.4(3Η,寬， C4,5,6-H), 6.02(1H, s, C2-H), 2.26(3H, s, C3 CH3), 2.09(3H, s, C7 CH3)。 13).(4-羥笨基）-(2[，4£562)-7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二甲基- 2.4.6- 庚三晞醯胺之製法

取含5 -溴-鄰二甲苯（19.4克，105毫莫耳）與二異丙胺（100 毫升）之溶液經氬氣脱氣，並保持在氬大氣下。添加C u I -24 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNSM4規格（210x297公M) 經濟部中央標率局員工消費合作社印¾ 455575 第88122200號專利申請案 中文說明書修正頁（90年4月）

五、發明説明（d Η# ' ^ , n A (2.07克，10.7毫莫耳），PPh3(4.06克，15.3毫莫耳）及 Pd(PPH3)2Cl2(2.09克’2.92毫升）後，添加三甲梦烧基乙炔 (12·3克，1 8毫升，125毫莫耳）。反應加熱至75°C 2小時， 產生深褐色黏稠混合物。再添加三甲矽烷基乙炔（6.15克， 9 毫升，63 毫莫耳），PPh3(2.04 克，7.78 毫莫耳），CuI (1.05 克，5.51毫莫耳），及卩(1(??113)2(：12(1.62克，2.31毫莫耳）， 然後加熱反應至80°C 4小時。反應冷卻至室溫後，添加己 烷（ 300毫升），溶液經寅式鹽過濾。己烷層以IN HC1 (60毫 升）、鹽水（300毫升）洗滌，脫水（Na2S04)，及濃縮，產生 粗產物1-三甲矽烷基-2-(3,5-二甲苯基）乙炔，即用於下一 個步驟 》4 NMR (CDC13) 5 7.10(2H，d)，6.94(1H，s)， 2.27(6Η, s), 0.23(9Η, s) » 取含粗產物1-三甲矽烷基-2-(3,5-二甲苯基）乙炔（105毫 莫耳，理論最大值）之THF(70毫升）與MeOH(280毫升）溶液 於冰/水浴中冷卻，此期間添加8N KOH( 16毫升，128毫莫 耳）及水（2 5毫升），然後使反應離開冰/水浴。1小時後， 真空排除約半量有機溶劑*添加己虎（1升）與水（400毫 升）。以飽和鹽水洗蘇有機層，脫水（Na2S04)及濃縮’產生 11_3克1-(3,5-二甲苯基）乙炔之褐色油：4 NMR (CDC13)<5 7.12(2H，s)，6.98(1H，s)，3.00(1H，s)，2‘29(6H，s)。 取1-(3,5-二甲苯基）乙炔（11.3克，86_3毫莫耳）之無水THF (80毫升）溶液於乾冰/丙酮浴及氬大氣下冷卻。緩緩添加π_ BuLi(1.6M己烷溶液’ 65毫升，104毫莫耳），然後添加氣 甲酸甲酯（11.4克，9.4毫升1 121毫莫耳）。反應瓶移至冰/ -25- 本紙浪尺度適财SIS家揉準（CNS ) -^-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 455575 Λ7 n? 五、發明說明（23 ) 水洛中’攪拌丨小時。添加飽和碳酸氫鈉溶液及乙醚至反 應混合物中。有機層以飽和鹽水洗滌，脱水（Na2S〇4)及濃 縮’產生粗產物3-(3,5-二甲苯基）丙炔酸甲酯，即用於下 一個步驟。NMR (CDCI3) J 7.22(2H, s), 7‘08(1H，s)， 3.S3(3H，s)，2.29(6H，s)。 在附加塔頂機械式攪拌器且保持在氬大氣下之2升三頭 RB燒瓶中，使CuBr . SMe2(21.2克，1 〇3毫莫耳）之200毫升 THF洛液，在NaCl/冰/水浴中冷卻至_5°C。添加MeLi(l .4M Et:0落液’ 1 80毫升’ 252毫莫耳），並保持在1 〇。(：以下溫 度。反應瓶經乾冰/異丙醇浴冷卻至_7〇°C。緩緩添加3-(3,5-二甲苯基）丙炔酸甲酯（丨6.2克，86.丨毫莫耳）之7 0毫升 THF溶液，並保持反應溫度不超過-65χ;。離開冷卻槽，使 反應溫度回升至-35°C。然後迅速添加反應混合物至已於乾 冰/異丙醇浴中冷卻之含乙酸（4 〇毫升）與己烷（3〇〇毫升）混 合物中。添加時’有白色沈澱自淺藍色溶液中析出。於室 溫下以手動攪拌混合物。經寅式鹽墊過濾排除沈澱，以 Et20洗滌固體。眞空排除大部份有機溶劑後，以水（2 X 300 毫升）、飽和鹽水（300毫升）洗滌有機層，並脱水（Na2S04)。 排除溶劑後，經矽膠墊’以Et20爲流動相過濾，產生黃色 油（1 6 · 9克，含8 %不要之E異構物）。採用中壓液相層析 法，於矽膠上使用4% Et20/己；!：完流動相進行多重純化步 騍，產生3-(3,5-二甲苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯酸曱酯（1 1.8 克，57.8毫莫耳，4個步驟收率5 5%)。旧NMR (CDC13) 6.93 (1H, s), 6.80(2H, s), 5.87(1H, d), 3.55(3H, s), 2.30(6H, s, -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A.1規格（210 X 297公t ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------J--訂 *-------I ^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 A7 B7 五、發明說明（24) 細裂，2 CH3)，2.14(3 H, s,細裂，ch3)。 採用附加塔頂攪拌器之2升三頸R B燒瓶，使3_(3,5二甲 苯基）-3 -甲基-2(Z)-丙烯酸甲酯（14 9克’ 73毫莫耳）之Et20 (41 8毫升）溶液冷卻至，並保持在氬大氣下。緩緩添加 二異丁基鋁化氫（DIBAH，1.5M甲苯溶液，108毫升，162毫 莫耳）。反應瓶置入冰/水浴中，保持〇乇，在持續激烈攪 拌下添加20°/。洛希爾鹽溶液85毫升），使反應回升室溫。 傾析有機層，添加8 : 2己烷/ Et2〇溶液（1.25升）至水層 中。以手動攪拌分層後’傾析有機層。合併之有機層以飽 和鹽水洗滌’脱水（Na2S04)，濃縮，產生3_(3,5_二甲苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯-1-醇之油（15克，丨丨6%理論收率），末再 純化即氧化。iH NMR (CDC13) ci 6.92(1H，s); 6.78(2H, s); 5.67 (1H，dt); 4.07(2H，d); 2·31(6Η，s); 2.06(3H, s，細裂）° 在附加塔頂機械攪拌器並保持在氬大氣下之5升三頭r B 燒瓶中，使含Mn02(27 I克，3.12莫耳）之Et20(3升）冷卻至 10 C。緩緩添加3-(3,5-二甲苯基）-3_甲基-2(Z)-丙烯·1-醇 (17.8克粗產物’ 90.8毫莫耳最大値）之Et2〇(250毫升）溶液 至Μn〇2懸浮液中。使反應溫度以1小時回升至室溫。再添 加Mn〇2(30.7克’ 353'毫莫耳）。2〇分鐘後，由TLC得知反應 完成。混合物經寅式鹽過濾’濾液脱水（Xa2S〇4)及濃縮， 產生3-(3,5-二甲苯基）-3 -甲基-2(Z)·丙烯醛之油（14.1克，2 個步驟之未純化產物達89%最大收率）。iH NMR (CDC13) c? 9.48(1H, d); 7.04(1HS s); 6.91(2H, s); 6.10(1H, d); 2.35(6H, s); 2.29(3H，s)。 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A.l規格公餐） (請先閲讀背面之注意事4再填寫本頁) B^l rip Ff f n —ϋ n ^ip ^r— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消f合作社印製 五、發明說明（25) 在附加塔頂機械攪拌器並保持在氬大氣下之5升三頸燒 瓶中’使含3-曱基-4·亞磷羧基巴豆酸三乙酯（43.6克，165 毫莫耳’順/反式1 : 1混合物）之THF(1.25升）使用乾冰/丙 酮浴冷卻至-7 〇 °C。緩緩添加雙（三甲矽烷基）胺化鋰（丨μ THF溶液’ U6毫升，Π 6毫莫耳）。反應攪拌1 0分鐘後，緩 緩添加含3-(3,5-二甲苯基）_3_甲基_2(2)-丙烯醛（16,4克粗產 物，94.1毫莫耳）之thF(25〇毫升）。使反應回升至-4CTC。添 加氣化銨（5 5克含於5邛毫升水中）溶液至反應混合物中 後’添加3 N磷酸（163毫升），於室溫下攪拌1小時後，添 加匕2〇( 1 500毫升），然後添加己烷（4升）及水（3升）。以飽 和鹽水（500毫升）洗滌有機層，脱水（Na2s〇4)及濃縮，產生 褐色油（46.7克），通過矽膠墊，以Et20/CH2C12/己烷（3 : 20 : 77)爲溶離液，產生2,3-位置之E/Z異構物混合物（8 : 2) (24.7克，86.8毫莫耳，混合物收率92%)。採用中壓矽膠層 析法得到純度90% 7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二曱基-2(9:1 E/Z)， 4(E)，6(Z)-庚三烯酸乙酯（20.7克，收率90%)，續用於水解 反應。NMR (CDC13) d 6.96(s，1H)，6.87(s，2H)，6.73(dd， 1H), 6.26(d, 1H), 6.22(d, 1H), 5.74(s, 1H), 4.15(q, 2H), 2.34 (s, 6H), 2.17(s, 6H), i .28(t，3H)。 在1升RB燒瓶中，添加NaOH(10M，50.7毫升）至含7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二甲基-2(9:1 E/Z),4(E)，6(Z)-庚三烯酸 乙酯（14.4克，50.6毫莫耳）之MeOH(70毫升）與THF(30毫升） 溶液中。反應加熱至80°C 1小時後，置入冰/水浴中。添加 冷3 N磷酸溶液（525毫升），以酸化溶液。加水（300毫升）， -28 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)Al規格（21〇χ297公釐） ^---''--------- 拍衣------7--訂 ----------^ (靖先間讀背*之注意事項再填寫本頁) Λ7 B7 455575 五、發明說明（26 ) 以Et2〇( 1 1 〇〇毫升）萃取溶液。以飽和鹽水洗蘇有機層，赋 水（Na2S04)，及濃縮，產生黃色粉末（12.4克，95%)。自熱 THF/己烷中再結晶，產生7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二甲基-2(E),4(E)，6(Z)-庚三烯酸之單一異構物之灰白色晶體（8.64 克，收率 67%)。'H NMR (CDC13) c? 6.96(s，1H)，6.87(s, 2H)， 6.76(dd, 1H), 6.26(d, 1H), 6.23(d, 1H), 5.77(s, 1H), 2.33(s, 6H)，2.17(s，6H) ; HRMS C17H20O2 :計算値：256.1463 :實測 値 256.1465 。 取二甲基氣甲胲鏘化氣（Helv. Chim_ Acta 42，1653 (1959))(65.1毫莫耳）溶於無水DMF( 180毫升）中，於冰/水浴 中冷卻。添加 7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二甲基-2(E),4(E),6(Z)-庚三烯酸（10,2克，39.7毫莫耳）之DMF(50毫升）溶液，反應 於室溫下攪拌70分鐘。取7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二甲基-2(E)，4(E)56(Z)-庚三烯醯基氣溶液於冰/水浴中冷卻，並用 於下一個反應步驟。 根據專利案WO 95/03274製備Ο,Ν-雙（三甲矽烷基）-4-胺 基苯酚。添加含Ο,Ν-雙（三甲矽烷基）-4-胺基苯酚（26.5克， 105毫莫耳）之DMF(50毫升）及吡啶（19,3毫升，238毫莫耳） 至於冰/水浴中冷卻之含7-(3,5-二甲苯基）-3,7-二甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三烯醯基氣之DMF溶液中。使反應回升 室溫，30分鐘後完成反應。使用含KF(9.14克，157毫莫 耳）之水（8 0毫升），於2 0分鐘内完全排除三甲矽烷基。添 加EtOAc( 1400毫升）與水（1400毫升）至反應混合物中。分層 後，以飽和鹽水（500毫升）洗滌有機層，脱水（Na〕S04)’濃 -29- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)AJ規格（2〗〇χ 297公釐） (請先閟讀背面之注意事項再槙窝本艮，) ------J—訂---------§ 經濟部智慧时產局員工消費合作社印製 A5 55 7 5 a? B7 五、發明說明（27) 縮產生褐色油（25.6克）。此物質經285克矽膠（230至400篩 目）’使用1 : 1己烷/ EtOAc流動相層析’產生13.6克產 物。自熱EtOAc/己烷中再結晶，產生純N-(4-羥苯基）-(2£，4£，62)-7-(3,5-二甲基苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯 胺（10.3 克，收率 75%)。4 NMR (CDC13) ci 7.37(d，2H)， 7.〇3(s, 1H), 6.95(s, 1H), 6.87(s, 2H), 6.77(d, 2H), 6.72(dd, 1扣，6.24((1，1^{),6.23(〇1，11'1)，5.75(5，1叫，4.94(寬，1出，2.34 (s，6H)，2.23(s，3H), 2.17(s，3H); HRMS C23H25N〇2 計算値 347.1885 ;實測値347.1895。 IC) N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]，3-甲基-2,4,6-庚三烯醯胺之製法 依實驗實例I A步驟1與2)所示製備3-[3,5-雙（三氟曱基） 苯基]丙炔酸甲酯。 取3-[35孓雙（三氟甲基）笨基]丙炔酸甲酯溶於己烷（300毫 升）中，以1.0克林德勒觸媒處理，於1大氣壓氫氣及22°C下 還原。當吸收Μ當量氫氣後，反應經寅式鹽過濾，排除 溶劑。粗油產物經HPLC(5%醚/己烷）純化，產生3.5克3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-2(Z)-丙炔酸甲酯。4 NMR (CDCl3)i 8.02(2H，s，芳香系），7.83(1H, s，芳香系），7.00(1H，d, C3-H)，6.17(1H，d, C2-H), 3.73(3H, 0-CH3)。 取3.5克（1 1毫莫耳）3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-2(Z)·丙炔 酸甲酯溶於350毫升己烷中。於A r下冷卻至-40°C，緩緩添 加二異丁基鋁化氫（DIB AH，1.0M己烷溶液，3 5毫升，3 5 毫莫耳）。添加完畢後，反應攪拌，使之緩緩回升至+5Ό。 -30- 本紙張尺度適用中0國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公餐） <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45557 5 A7 ______B7________ 五、發明說明（28 ) 然後以5 0毫升30%洛希爾鹽水溶液，1 00毫升醚處理，於 3 0至3 5 °C下攪拌2小時。有機萃液以水洗滌，脱水 (MgS04)，排除溶劑，產生3.0克3-[3,5-雙（三氟甲基）笨 基]-2(Z)-丙烯-1-醇之油：！H NMR (CDC13) β 7.80(1H，s，芳 香系），7.68(2H，s，芳香系），6.62(1H，d，J=10 Hz)，6_12(1H，dd, J=10與6 Hz), 4,40(2H, t，HO-CH2-)。 取3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-2(Z)-丙烯-1-醇（3.0克，l〇 毫莫耳）溶於3 0 0毫升（無水）醚中，加至冷卻（1 〇 °C )且均勻 攪拌之含MnO2(40克）之300毫升醚漿物中。於周溫下攪拌1 小時。懸浮液過濾’濾液以THF洗滌，合併有機層，排除 溶劑，產生3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_2(z)_丙烯醛之油。 未再純化即用於下一個步驟：iH nmr (CDC1J d 9.88( 1H，d， J=4 Hz, CHO)，7.94(1H，s，芳香系），7.85(2H，s，芳香系）， 7.61(1H，d, J=8 Hz), 6.35(1H，dd，J = 8 & 4 Hz)。 取3‘4克（1 3毫莫耳）3 -甲基-4_亞磷羧酸-巴豆酸三乙酯溶 於1 50毫升THF中’冷卻至-78°C，以1 2毫升（1 2毫莫耳） (1 ·0 M THF落液）雙（三甲矽烷基）胺化鋰處理。同時在-78°c 下，緩缓添加醚3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_2(z)_丙烯醛 (2.5克，9.3*莫耳）之5毫升THF溶液。於-78°C下攪拌0.5小 時’同時使溫度回升至+1 5 °C。倒至冷的稀磷酸水溶液 中。以己烷萃取產物。有機相以水洗滌，脱水， 排除洛劑，產生含4種異構物之油粗產物。利用矽膠層析 法（5 %醚/己燒·）純化及分離異構物，產生二種異構物。所 需之E，E，Z異構物自己烷中結晶，產生5〇〇毫克7 _[3,5-雙（三 -31 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑵0 X 297公ϋ — — — .— — til — — — — I I ---1 I 訂----I I I I--^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Λ7 455575 B7__ 五、發明說明（29 ) 氟甲基）苯基]-3-甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三烯酸乙酯。1Η NMR(CDC13) β 7·80(1Η，s，芳香系），7·78(2Η，s，芳香系）， 6,96(1Η，dd，C6-H)，6·48-6,78(3Η，烯烴），5.78(1Η，s，C2-H)， 4.18(2Η，q，〇-CH2)，2,23(3Η，s，C3 CH3)，1.30(3Η，t，CH3)。 取7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3-甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三 烯酸乙酯（500毫克，1.2毫莫耳）溶於50毫升乙醇中，以 KOH水溶液（0.5克KOH/5毫升水）處理。回流1.5小時。溶 液冷卻，倒至水中，以稀磷酸酸化。以氣仿萃取沈澱之固 體。有機相以水洗;條，脱水（Na2S04)，排除溶劑，產生之 固體自THF/己烷中結晶，產生7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3-甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三烯酸。1H NMR (CDC13) cJ 7.79 (1H，s,芳香系），7.77(2H，s，芳香系），6.96(1H, dd，J=11.5 Hz), 6.50-6.63(3H，烯烴)，5.89(1H，s，C2-H)，2.24(3H，s, C3 CH])。 取含無水醚（60毫升）與DMF(1.0克，12毫莫耳）之溶液冷 卻至1 5 °C ’以草醯氣（0.7克，5.9毫莫耳）處理，攪拌1 5分 鐘。蒸發所有溶劑，所得二甲基氣甲脒鏆化氣（Helv. Chim. Acta 42，165 3 (1959))之白色固體懸浮於DMF(10毫升）中。 添加7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3-甲基-2(E),4(E),6(Z)-庚三 烯酸（0.90克，2.6毫莫耳），混合物攪拌3小時。冷卻至〇。(：， 以1 0分鐘時間，以含〇，N-雙（三甲矽烷基）-4-胺基苯酚（1.6 克，5.9毫莫耳）之5毫升DMF溶液處理。攪拌1小時，倒至 15% KF水溶液（2〇毫升）中，再攪拌1小時。以醚萃取水性 混合物’以水洗;條’脱水（MgS04)，及排除溶劑，產生 油。此油經層析純化（40%乙酸乙酯/己烷），產生 -32- ^紙系尺度遶用中國國家標準（CNS)A4規格（2〗0 X 297公坌） <請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝----- 訂----------^ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Λ7 B7 i、發明說明（30) 苯基）-(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3·甲基-2,4,6- 庚三烯醯胺之黃色固體：ΑΝΜΐΐφίν^ο/εοαοί?8.50^1·1， s，ΝΗ)，7·78(3Η，s，芳香系），7.31(2Η，d，芳香系），6.68(2H, d， 芳香系），6.48(1H，-OH), 6·9-6.4(3Η,寬，C4,5,6-H)，5.92(1H，s， C2-H)，2.26(3H，s, C3 CH3)。 ID)^^(4-羥苯基）-(2E，4E,6Z)-7-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲 基-2,4,6-庚三烯醯胺之製法 在附加磁鐵搜:掉器、氣氣入口及滴加漏斗之1升三頸圓 底燒瓶中添加氫化鈉（60%礦物油中，2.53克，63,3毫莫耳） 與無水二甲氧乙烷（6 0毫升）。灰色漿物經冰浴冷卻至0 °C，滴加亞磷羧基乙酸三乙酯（1 1.94毫升，60.2毫莫耳）， 同時保持1 o°c以下之溫度=> 在0 °c下，在所形成之淺褐色 透明溶液中緩緩添加碘（15_27克，60.2毫莫耳）之無水二甲 氧乙燒（5 0毫升）溶液，同時控制溫度在1 〇 °C以下。所得 褐色混合物於約1 0°C下攪拌半小時。再度冷卻反應混合物 至0 °C，分二次小心添加氫化鈉（60%礦物油中，5.05克， 126.3毫莫耳）。黃綠色漿物於25°C下攪拌，直到氫氣停止 釋出止。再度冷卻混合物至〇°C後，緩緩添加3,5-二曱氧苯 曱醛（9.5克，57.2毫莫耳）之無水二甲氧乙烷（30毫升）溶 液，混合物回升至室溫，攪拌一夜。淺褐色混.合物眞空濃 縮，加水（3 00毫升）稀釋，以乙醚（2 X 400毫升）萃取。合併之 有機層以飽和硫代硫酸鈉、水、鹽水洗滌，脱水（MgS04)， 及眞空濃縮，產生粗產物之淺褐色油（18.65克’超過理論 收率）。粗產物溶於己烷中，經矽膠層析。使用己烷（1.2 -33- 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS)A4規格（210x297公釐） (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 a Is n· 1 蛵濟部智韃財產局員工消費合作社印製 45557 5 A7 B7 五、發明說明（31) 升）-->30%乙酸乙酯/己烷溶離’產生3_(3,5-二甲氧尽基）_ 2-丙炔酸乙酯與3-(3,5-二甲氧苯基）-2-峨-2-丙歸奴乙酷之 約2 : 1混合物（12克）。

在附加磁鐵攪拌器、溫度計及氬氣入口之500毫升三頸 圓底燒瓶中添加上述製得之3-(3,5-二甲氧苯基）-2·丙決酸 乙酯與3-(3,5-二甲氧苯基）-2-蛾-2-丙烯酸乙醋約2 . 1 合 物及無水四氫呋喃（1〇〇毫升）。混合物經乾冰/丙嗣浴冷卻 至-70°C，緩緩添加雙（三甲矽烷基）胺化裡（1，0M THF溶 液，15.8毫莫耳）D當NMR分析部份混合物顯示3-(3,5-二甲 氧笨基）_2_碘-2-丙炔酸乙酯未完全轉化成3-(3,5-二甲苯 基）-2-丙晞酸乙酿（僅3-(3,5-二甲氧苯基）-2 -破-2-丙卸8¾乙 酯之E -異構物仍未反應）時，混合物立即加溫至-20°C，並 攪拌半小時。再加一份雙（三甲矽烷基）胺化鋰（丨·〇Μ THF 溶液，4,0毫升，4.0毫莫耳）至-20°C之混合物中，再攪拌1 小時。NMR分析部份反應混合物顯示含有3-(3,5-二甲氧苯 基）-2-碘-2-丙烯酸乙酯。混合物回升至〇 °C，揽拌9 0分 鐘。以飽和氯化敍溶液（6 0毫升）中止反應，於室溫下揽拌 1 0分鐘。以乙酸乙酯（2 X 200毫升）萃取混合物，合併之有 機層以水、鹽水洗滌’脱水（NajOd，眞空濃縮，產生油 粗產物（1 1.0克）。此物質經Prep-HPLC使用1 : 5乙酸乙酷/ 己烷爲溶離液層析。取適當溶離份濃縮，產生3_(3 5_二甲 氧苯基）-2-丙炔酸乙酯（9,32克，收率93%)之無色油：lH NMR (400 MHz，CDC13) β 6.73(2H，寬，s)，6.55(1H 寬） 4.30(2H，q)，3_79(6H，S)，1.36(3H, t)。HRMS (Γ13Ηη04計算値. -34- 本紙張尺度遶用中0國家標準（CNS)A4規格（2]〇χ 297公釐） (請先閲讀背面之注急事項再填寫本頁)

n HI IV n n 一/ > n I n· 1^1 m m ^^1 I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 /15557 5 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印制^ A7 B7 五、發明說明（32) 234·09892。實測値：234.0900。 在附加磁鐵攪拌器' 溫度計及氬氣入口之2升三頸圓底 燒瓶中添加溴化亞銅（I)-二甲硫複合物（丨〇 63克，5 1.71毫 莫耳）及無水THF(450毫升）。漿物使用乾冰/丙酮浴冷卻， 添加MeLi(1.5M乙醚溶液，69.〇毫升，103.5毫莫耳），添加 速率應使内溫保持約-5°C。透明之無色溶液以乾冰/丙酮浴 冷卻至-70°C。緩緩添加含3_(3,5_二曱氧苯基）_2_丙炔酸乙 醋（9,32克’ 39.8毫莫耳）之無水四氫呋喃（5 〇毫升）溶液， 但保時反應溫度不超過_65°C。於-7〇°C下授拌2小時後，反 應混合物迅速移至含在分離漏斗中低溫冷卻且經常振盪之 乙酸（7 5毫升）與己烷（750毫升）混合物中。加水，混合物 激烈振盪，產生之白色漿物於靜置時分成二層。底層白色 聚物經寅式鹽過濾’以己烷徹底洗滌。合併濾液與洗滌， 以水（X3) '鹽水洗滌，脱水（Na2S〇4)。上述分離漏斗之上 層則以水（X 3 )、鹽水洗滌，脱水（Na2S〇4)，眞空濃縮，產 生粗產物（9,19克，92%)之淺褐色油，未再純化即用於下一 個步驟 lH NMR (200 MHz, CDCI3) (ί 6.40(t，2H), 6.33(d， 1H), 5.86(d, 1H), 4.01(q, 2H), 3.75(s, 6H), 2.13(s, 3H), 1.09(t, 3H)。 在附加磁鐵攪拌器、溫度計及氬氣入之2升三頸圓底燒 瓶中添加粗產物3-(3,5-二甲氧苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯酸乙 醋（10.42克’ 41.63毫莫耳）與己烷（丨〇〇〇毫升）。緩緩添加二異 丁基鋁化氫（DIB AH，1.0 Μ己烷溶液，1 〇4毫升，丨〇4毫莫耳） 至反應混合物中’同時利用乾冰/丙酮浴保持反應在-2〇t至 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉AJ規格（210 X 297公发） 111,*---— — ——I. I I I I I Ί I 訂--------- ^ . (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 455575 A7 B7 五、發明說明（33) -30°C之間。混合物回溫至〇°C，攪拌75分鐘。在激烈攪拌 下添加洛希爾鹽溶液（30%溶液，6〇毫升）至反應混合物 中’全部混合物保持3 5 C 3 0分鐘。於室溫下再攪拌3 〇分 鐘後’傾析澄清之己烷層至分離漏斗中，以水、鹽水洗 將’脱水（NaJO4)。留在反應瓶中之水性白色乳液經乙随 (4 X 1 5 0裳升）回萃取。合併之有機層以水、鹽水洗務，脱 水（NajSO4)，及濃縮’產生粗產物3_(3,5-二甲氧苯基）-3 -曱 基-2(2)-丙烯-1-醇之淺褐色黏稠油（8·68克，>ι00%)，未再 純化即用於下一個步驟。1H NMR (400 MHz, CDC13) J 6.39 (1H，6.33(2H，d)，5.68(lH，t)，4,09(2H，d)，3·79(6Η，s)，2.06 (3H，s)。HRMS Cl2H1603 計算値：208.1099。實測値： 208.1096 。 在附加塔頂機械攪拌器、滴加漏斗及氬氣入口之2升三 頸圓底燒瓶中添加活化Mn02(85%，86.8克，849毫莫耳）之 乙酸乙S旨（7 0 0毫升）溶液。在此黑色懸浮液中添加含粗產物 3-(3,5-二甲氧苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯-卜醇（8.68克，41.7毫 莫耳）之乙酸乙酯（1 60毫升）溶液。反應混合物於室溫下攪 拌約3小時。混合物經寅式鹽過濾，以乙酸乙酯（3升）徹底 洗務遽塊。合併之濾液眞空濃縮，產生淺褐色油（8.45克， 粗收率98%)。粗油產物經prep_HJPLC使用〗5%乙酸乙酯/己 烷爲溶離液純化。合併適當溶離份，得到3-(3,5-二甲氧苯 基）-3-甲基-2(Z)-丙烯醛之淺褐色油。lH NMR (200 MHz， CDCl3)d 9.52(1H，d)，6·47(1Η，t)，6.41(2H，d)，6·07(1Η，d), 3.79(6H，s)，2.27(3H，s)。 -36- 本紙張尺度適用中國固家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱^ (請先閱讀背面之龙意^再填寫本頁) 裝，-----Ί1 訂’--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 455575 A7 -—-----B7____ 五、發明說明（34 ) 在附加磁鐵攪拌器、溫度計及氬氣入口之2升三頭圓底 燒缻中添加3 -甲基-4-亞磷羧基巴豆酸三乙酯（新鮮蒸餾， 14·75克’ 55.82毫莫耳）與無水四氫呋喃（ 670毫升卜在上述 落液中緩緩添加雙（三甲矽烷基）胺化鋰（丨M THF溶液， 5 5.7毫升’ 55.7毫莫耳）’同時利用乾冰/丙酮浴保持内溫在 -40 C。添加完畢後，混合物於_4〇°c下攪拌丨5分鐘，再冷 部至-70°C。緩緩添加含粗產物3-(3,5-二甲氧苯基）-3-甲基_ 2(Z)-丙烯醛（6.38克’ 30.93毫莫耳）之無水四氫呋喃（5〇毫 升）溶液’使混合物在約2小時期間回升至5。(：。以冰冷罐 酸水溶液（85%，5毫升）中止反應後，以己烷（3〇〇毫升）稀 釋。以1 : 1乙鍵/己烷萃取水層一次。合併之有機層以 水、鹽水洗;丨条’以無水硫酸鈉脱水D過滤及眞空濃縮，產 生粗產物3-(3,5-二甲氧笨基）-3,7-二甲基-2(E),4(E),6(Z)-庚 三烯酸乙酯之褐色油。此油粗產物經Prep —HPLC使用15% 乙酸乙酯/己烷爲溶離液純化。合併適當溶離份，濃縮， 產生3-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三烯 酸乙酯（9,68克，收率99%，C-2位置之E/Z異構物之約80 : 20混合物）之淺褐色油。此油溶於5毫升乙酸乙酯與1 〇〇毫 升己烷中，溶液保存在冷凍庫中，趁冷過濾，產生2.83克 白色針狀物之第一份產物。母液依相同方式使用2.5毫升 乙酸乙酯及5 0毫升己烷再結晶，產生1.〇4克第二份產物。 3-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基-2(£)，4(E)，6(Z)-庚三烯酸乙 酯之總量爲 3.87 克。1H NMR (400 MHz, CDCI3) J 6.76(1H， dd), 6.42(1H, t)} 6.40(2H, d), 6.24(1H, d), 6.22(1H, d), 5.75 -37- 本紙張尺度適用中國固家標準（CNS)A4規格（210 X 297公t ) '^1 II n» n m I (. _TI n 一 ΟΪ * 1— ϋ ϋ It [ I 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 5 557 5 at _ B7_____ 五、發明說明（35 ) (1H, s), 4.15(2H, q), 3.80(6H, s), 2.18(3H, s), 2.16(3H, s), 1.28(3H，t)。HRMS C|9H2404 計算値：3 16.1675。實測値： 3 16.1673。 在附加磁鐵授摔器、水冷凝器及風氣入口之5 〇 〇毫升單· 頭圊底燒瓶中添加再結晶之3-(3,5-^—甲乳苯基）-3 7 -二甲基 -2斤），4卬），6(2)-庚三烯酸乙酯（3.87克，12.23毫莫耳）與乙 醇（190酒精度，110毫升）。然後添加氫氧化_ (2 23克， 3 9.39毫莫耳）之水（2 2毫升）溶液，混合物加熱至8〇。〇 90分 鐘。反應混合物於冰浴中冷卻，緩緩添加冰冷1 Μ ί舞酸溶 液至溶液ρ Η约3爲止。白色漿物經1 : 1乙酸乙酯/乙醚萃 取2次。合併之有機萃液以水、鹽水洗將，經無水硫酸納 脱水。過濾及眞空濃縮’產生淺黃色固體。此固體溶於 THF中，經填充矽膠之短管柱使用乙酸乙酯溶離。取適當 溶離份濃縮，產生3-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基· 2卩),4(丑），67)-庚三烯酸（3.45克，收率98%)之黃色固體，未 再純化即用於下一個步驟。（二個步驟，包括皂化及自母 液中純化，由3-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基-2(Z)-丙烯醛 得到之收率 56%)。NMR (200 MHz，CDC13) ci 6.78(1H, dd)， 6.42(1H, t), 6.39(2H, d), 6.25(1H, d), 6.21(1H, d), 5.75(IH, s), 3.79(6H, s), 2.18(3H, s), 2.16(3H, s)= 在附加磁鐵攪拌器與氬氣入口之5 0 0毫升單頸圓底燒叙 中添加草酿氣（1,7 4毫升，1 9 · 9 5毫莫耳）及酸（5 0毫升）。溶 液於乾冰/丙酮浴中冷卻，緩緩添加無水二甲基甲醯胺 (1.62 毫升，20.92 毫莫耳）(Helv. Chim. Acta 42，1653 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)/U規格（2】C X 297公笼） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------,.—訂--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Λ7 455575 _____B7_____ 五、發明說明（36 ) (1959))。添加完畢後，混合物回升至〇。〇，攪拌3 〇分鐘。 小心真空排除揮發性物質，以氬氣填充含有二甲基氣甲脒 鑌化氣之燒瓶。添加無水二甲基甲醢胺（5〇毫升）及含粗產 物3-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基，2(E)，4(E),6(Z)-庚三烯酸 (3.45克’ Π.96毫莫耳）之無水二甲基甲醯胺（35¾升）溶液 至二甲基氣甲脒鑕化氣中。反應於室溫下攪拌9 0分鐘。所 得澄清溶液冷卻至0 °C，添加含〇，N-雙（三甲矽烷基）-4-胺 基苯酚（7.98克’ 3 1.48毫莫耳）之無水二甲基甲醯胺（1 8毫 升）溶液中，同時保持在12°C以下溫度。Ο,Ν-雙（三甲矽烷 基）-4 -胺基苯酿添加完畢後，立即添加u比淀（5.8毫升’ 7 1.7 1毫莫耳），混合物於室溫下攪拌150分鐘。混合物再冷 卻至0 aC，添加氟化鉀溶液（2.74克，47_2毫莫耳），混合物 於室溫下激烈攪拌1小時。反應混合物加水（450毫升）稀 釋，以乙酸乙酯（45 0毫升）及己烷（200毫升）萃取。有機層 以1 N磷酸（2 X 200毫升）、水、鹽水洗滌，及脫水 (Na2S04)。合併之水相以乙酸乙酯（2 X 250毫升）回萃取。合 併之有機層以水、鹽水洗滌，脫水（Na2S04)，及濃縮，產 生深褐色泡沫狀物。此物質經Prep-HPLC使用45%乙酸乙 酯/己烷為溶離液層析。取適當溶離份濃縮，產生N-(4-羥 苯基）-(2£，4£，62)-7-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基.2,4,6-庚 三烯醯胺（4.24克，收率93%)之黃色泡沫狀物。自熱乙酸乙 酯/己烷中再結晶，得到第二份2.61克（57%) N-(4-羥苯基）τ (2£，4£,62)-7-(3,5-二甲氧苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯 胺，mp 162-163 °C。NMR (200 MHz，CDCI3) 6 7.34 -39- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2]0 X 297公釐） (請先閱讀背面之法意事項再填寫本頁) - n n I— ^eJf- n n < 經濟部智慧財產局員工消費合作社印一Λ 455575 A7 B7 五、發明說明（37) (2H，d)，7.05(lH，t，s)，6.65-6.85(3H，m)，6.40(3H，bs),6.15- 6.30(2H, m), 5.74(1H, s), 4.98(1H, s), 3.79(6H, s), 2.22(3Η, s), 2‘16(3H, s); HRMS C23H25N04計算値：379.1784。實測 値：379.1779。 IE) N-(4-羥苯基-(2E，4E，6Z)-7-[3,5 -雙（三氟甲基）苯基]_ 3,6,7-三甲基-2,4,6-庚三晞Si胺之製法 取含2 -亞磷羧基丙酸三乙酯（2〇克，84毫莫耳）溶於3〇〇 冗升丁!·^之浴液冷卻至0 C ’以第三丁醇钾（[.ο μ THF溶 液）（8〇毫升，80毫莫耳）處理。5分鐘後，添加含3_[3 5-雙（二氟甲基）冬基]乙酿苯（12克，47毫莫耳）之20毫升 THF落液’於周溫下攪拌3小時。倒至水中，以已燒萃取。 有機卒液以水及鹽水洗蔣：，脱水（MgS04)，排除溶劑，產 生15克粗產物3-[3,5-雙（三默甲基）苯基]_2,3-二甲基_2(E/Z") 丙烯酸乙酯’經HPLC純化成個別異構物（矽膠，5 %酿/己 烷）。3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_2,3_二甲基-2(Z)丙烯酸乙 酯。1H NMR (CDCl3)e 7.80(1H，芳香系），7.61(2H，s,芳香系）， 3.85(2H，q，CH2), 2.13(3H，s，CH3), 2.08(3H，s，CH3)。 取5.0克（14.7毫莫耳）3-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-2,3-二甲基 -2 (Z)-丙晞酸乙酷溶於3 0 0毫升己J：完中。於Ar下冷卻至_2〇°C。 緩緩添加二異丁基鋁化氫（DIBAH，1.0M己烷溶液3 5毫 升，3 5毫莫耳）。添加完畢後，反應於周溫下攪拌直到達 5 °C止。反應以5 0毫升30%洛希爾鹽水溶液，1 〇〇毫升醚處 理，於3 0至3 5°C下均勻攪拌2小時。有機萃液以水洗滌， 脱水（MgS〇4) ’排除溶劑，產生3.0克3-[3,5-雙（三氟甲基） -40- 本紙張尺度適用中國因家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公:g ) {請先閱讀背面之>i意事項再填寫本頁)

------VI--訂---------I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45557 5 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 五、發明說明（38) 苯基]-2,3-二甲基-2(Z)-丙烯-1-醇之油：〖HNMRiCDCldd 7·75(1Η} s}芳香系），7.61(2H，S,芳香系），3.90(2H, s，CH2-)， 2.04(3H, s, CH3), 1.96(3H, s, CH3) 0 取醇3-[3,5-雙（三氟曱基）苯基]-2,3-二曱基-2(Z)-丙烯-卜 醇（4·0克，1 2毫莫耳）溶於2 0毫升乙酸乙酯中，加至含 Μη〇2(40克）之200毫升醚之冷卻（l〇°C)且均勻攪拌漿物中。 於周溫下攪拌1小時。懸浮液過濾，以THF洗滌固體。合 併有機相，排除溶劑，產生油。經HPLC純化（矽膠，ι〇% 乙酸乙酯/己烷），產生3.4克3，[3,5·雙（三氟甲基）苯基]_ 2,3-二甲基-2(Z)-丙烯醛：NMR (CDC13) J 9.40(1H，s，醛）， 7.90(1H，s,芳香系），7.70(2H，s，芳香系），2.32(3H, CH3)， 1.96(3H，s, CH3)。 取4.◦克（1 5毫莫耳）3 -甲基-4-亞鱗敌基巴豆酸三乙酯溶 於1 80毫升THF中，冷卻至-78X：，以雙（三曱矽烷基）胺化鋰 (1.0 M THF溶液’ 14.5毫升，14.5毫莫耳）處理。同時在_78Ό 下，緩緩添加3-[3,5-雙（三氟曱基）苯基卜2,3-二甲基-2(Ζ)-丙烯-I-搭（3.4克，1 1.3毫莫耳）之5毫升THF溶液。於-78°C 下攪拌0.5小時’於周溫下攪拌至溫度爲丨5。〇。倒至冷的稀 碼酸水溶液中。以己烷萃取產物，有機相以水洗滌，脱水 (NaJC»4) ’排除溶劑’產生含4種異構物之油粗產物。利 用矽膠層析法純化及分離異構物（5 %醚/己烷），產生二種 異構物。所需異構物則自己烷中結晶，產生500毫克7_ [3,5-雙（二敗甲基）豕基]-3,6,7-三甲基-2(E),4(E),6(Z)-庚三 烯酸乙酯：iH NMR (COC13H 7,80(1H, s，芳香系），7_61(2H, -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A.l規格mo X 297公釐） ------------- ------»--訂'---------^ r (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 455575 A7 B7 五、發明說明（39) s，芳香系），6.43(2H, dd, C4 與 C6-H), 5.71(IH，s, C2-H)， 4.18(2H，q，〇-CH2CH3)，2·2(3Η，s，C3 甲基），2,02(3H，s，CH3)， 2.00(3H，s，CH3)，1.30(3H，t，0-CH2CH3)。 取酯7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,6,7-三甲基-2(E)，4(E)， 6(Z)-庚三烯酸乙酯（2,9克，6.5毫莫耳）溶於5 0毫升乙醇 中，以ΚΟΗ水溶液（0.5克ΚΟΗ/5毫升水）處理。回流1.5小 時。溶液冷卻，倒至水中，以稀麟酸酸化。以氣仿萃取沈 澱之固體。有機相以水洗滌，脱水（Na2S04)，排除溶劑。 產生之固體自THF/己烷中結晶，產生7-[3,5-雙（三氟甲基） 苯基；l·3,6,7-三甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三烯酸。1HNMR (DMSO)d8.07(iH，s,芳香系），7.78(2H，s，芳香系），6.96(2H， dd，C4與C5-H), 5.88(1H; s，C2-H), 2.22(3H，s，CH3)，2.02(3H， s，CH3)，1.93(3H，s，CH3)。 取含無水醚（20毫升）與DMF(0.5克，6毫莫耳）之溶液冷 卻至15 C，以二甲基氣甲腺錐化氣（Helv, Chim. Acta 42, 1653 (1959))(0.3克，2.4毫莫耳）處理，攪拌15分鐘。蒸發 所有溶劑，所得白色固體懸浮於D M F ( 2 0毫升）。添加7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,6,7-三甲基-2(Ε)，4(Ε)，6(Ζ)-庚三 烯酸（0.60克，1.6毫莫耳），混合物攪拌3小時。冷卻至0 °C， 以10分鐘時間，以含〇，N-雙（三甲矽烷基）-4-胺基苯酚（1.1 克，4.3毫莫耳）(CAS # 52726-86-0)之5毫升DMF溶液處 理。攪拌1小時，倒至15% KF水溶液（20毫升）中，再攪拌 1小時。水性混合物以醚萃取，以水洗滌，脱水（MgS04)， 排除溶劑，產生油產物。此油經層析純化（40%乙酸乙酯/ -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A.l規格（2〗0 X 297公发） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------!--訂' --------I . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45557 5 A7 B7 五、發明說明（40) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 己烷），產生N-(4-羥苯基）-(2£，4£，62)-7-[3,5-雙（三氟甲基） 苯基]-3,6,7-三甲基-2,4,6-庚三缔醯胺之黃色固體： NMR (DMSO)d9.75(lH，s，NH)，9‘20(1H，-OH), 8.18(1H，s， 芳香系），7.89(2H, s,芳香系），7·40(2Η，d,芳香系），6·88(2Η，d， 芳香系），6.42(2Η, dd，C4,5-H)，6.04(1Η, s, C2-H), 2,22(3Η，s， CH3), 2.04(3H，s，CH3)，1.98(3H，s，CH3)。 1?)化(4-羥苯基）-(2£，4£,62)-7-(3,5-二溴苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三缔醯胺之製法 取含亞磷羧基乙酸三乙酯（28克，125毫莫耳）之二甲氧 乙烷（DME)攪拌溶液冷卻至5 X：，以NaH(55%油中，5.9克， 135毫莫耳）處理。當氫氣停止釋出時，滴加碘（32克，125 毫莫耳）之1 50毫升DME溶液。反應冷卻至-2(TC，滴加雙 (三甲矽烷基）胺化鋰（1.0 M THF，125毫升，125毫莫耳）。 於-10 C下攪拌1 〇分鐘，添加含3,5 -二漠苯甲搭（3 3 · 0克， 125毫莫耳）之1 50毫升DME溶液。於周溫下攪拌1小時，於 4 0至45°C下4小時。反應倒至冷水中，以己烷萃取。有機 相以水及鹽水洗滌。脱水（MgS04)，排除溶劑，產生濃稠 油。經HPLC純化（1 0%乙酸乙酯/己烷），產生碘烯烴異構 物之混合物。此物質直择用於下一個步驟。 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 取含2-碘-3^3,5-二溴苯基）-2(E，Z)-丙烯酸乙酯（44克， 96毫莫耳）之THF(700毫升）攪拌溶液冷卻至-75°C，滴加雙 (三甲矽烷基）胺化鋰（1 ·〇 M THF溶液，1 00毫升，1 〇〇毫莫 耳）處理。小心提高溫度至-30°C，倒至水中，以己烷萃 取。脱水（MgS04)及排除溶劑，產生濃稠油。經HPLC純化 -43 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2】0 X 297公釐） 455575 A7 ___D7____ 五、發明說明（41) (3 %醚/己烷），產生純3-(3,5-二溴苯基）-2-丙炔酸乙酯。屮 NMR (CDC13) c? 7.73(1H, d,芳香系），7.65(2H，d，芳香系）, 4‘30(2H, q, OCH2), 1.35(3H, t, CH3)。 取溪化亞銅（I)-二甲疏複合物（20.7克，1 〇 1毫莫耳）懸浮 於已脱氣且置於Ar下之（無水）THF中。攪拌之懸浮液冷卻 至-5°C ’添加1.5M曱基鋰之醚（137毫升，205毫莫耳）溶 液。攪拌10分鐘後，反應冷卻至-78°C，滴加3-(3,5-二溴苯 基）-2-丙炔酸乙酯（31克’ 91毫莫耳）之THF( 150毫升）溶 液。反應混合物於-65至-60°C下攪拌2小時。反應直接倒入 含100毫升乙酸之均勻攪拌己烷（500毫升）溶液中。於周溫 下攪拌1 0分鐘後，以水 '鹽水洗滌，及脱水（MgS〇4)及排 除溶劑。經HPLC純化（5% EtOAc/己烷），產生Μ克3-(3,5-二漠苯基）-3-曱基-2(Z)-丙烯酸乙酯。NMR (CDC13) J 7.61(1H, s，芳香系），7.25(2H，s，芳香系），5.92(1H，s，C2-H)， 4.01(2H，q，CH2)，2.13(3H，s，CH3)，l.ll(3H，t, CH3) ° 取3-(3,5-二溴苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯酸乙酯（14克，4 1 毫莫耳）溶於己烷（1 · 1升）中，冷卻至·4〇1。滴加dIBAH(90 毫升，1 ·0Μ己烷溶液），於周溫下攪拌至達+5之溫度。 以1 0%洛希爾鹽水溶液（1 〇〇毫升）處理，攪拌2小時。過濾 鹽’以水洗滌有機殘質，脱水（MgS04)，排除溶劑，產生 12 克 3·(3,5 - 一臭冬基）-3 -甲基-2(Ζ)-丙缔-1-醇·：【HNMR (CDCl3)(i 7·5 8(1Η，S，芳香系），7.25(2H，S，芳香系），5.75(1H，t, C2-H)，4.45(2H，d，CH2-0)，2·04(3Η，s，CH3)。 取3-(3,5-二溴苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯-l·醇2克，40毫 -44 - 衣纸張又度適用中0國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公g ) {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------,--訂·-------- 經濟部智慧財產局員工消费合作社印制拆 4 5 5 5 7 Λ7 B7 五、發明說明（42) 莫耳）之乙酸乙酯（2〇〇毫升）溶液加至含Μη02之乙酸乙酯 (1 · 8升）均勻攪拌懸浮液中。於3 5 2小時後，冷卻，經寅 式鹽過濾，排除溶劑。經HPLC純化（1 0至1 5%乙酸乙酯/ 己坑），產生9.4克3-(3，5-二溴苯基）-3-甲基-2(Z)-丙烯醛。 NMR (CDC13) 9.45(1H, d，醛），7.71(1H，s，芳香系）， 7.38(2H，s，芳香系），6.24(1H, d，C2-H), 2.29(3H，s，CH3)。 取10.6克（40毫莫耳）3 -甲基_4_亞磷羧基巴豆酸三乙酯溶 於500毫升THF中，冷卻至_78。(；，以36毫升（36毫莫耳/1.0 M THF溶液）雙（三甲矽烷基）胺化鋰處理。同時在_78。〇 下’緩緩添加3-(3,5-二溴苯基）-3-甲基-2(Ζ)-丙烯醛（9.3 克’ 3 1毫莫耳）之5 〇毫升THF溶液。於-78°C下攪拌〇.5小 時’於周溫下攪拌至達丨〇。(：之溫度。倒至稀磷酸水溶液中。 以己烷萃取產物’有機相以水洗滌，脱水（Na2S〇4)，排除 溶劑’產生油粗產物。利用矽膠層析法純化及分離異構物 (5% 醚/己烷），產生 5 5克（2E，4E，6Z)_7_(3,5_:溴苯基）3,7_ 二曱基-2,4,6-庚三烯酸乙酯。lHNMR(CDCl3)tϊ7.60(lHss, 芳香系），7.31(2H, s,芳香系），6.52(1H, dd，C5-H), 6.28(2H, m, C4#C6-H), 5.74(1H, s, C2-H), 4.10(2H, q, 0-CH2), 2.20(3H, s, C3 CH3), 2.13(3H, s, C7 CH3), 1.30(3H, t, CH3) ° 依13’|3，（；，（1之方法轉化成（2丘，4£,62)-7-(3,5-二溴笨基）· 3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯酸：取含（2E，4E,6Z)-7-(3,5-二溴苯 基）-3,7-二甲基—2,4,6-庚三烯酸乙酯（1 π毫克，0.272毫莫耳） 之800微升THF ’ 800微升甲醇，7 0微升水及2.7毫升10 N NaOH溶液加熱至8〇°C。操作法包括以3 n H3P04(900微升） -45- 本紙張尺度適用令國國家標準（CNS)Al規格（2.10 >：297公髮） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> * n I -1 - 1^1 一 ( 1 n n^i I r^. 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 455575 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _______B7___ 五、發明說明（43 ) 中和冷卻之反應溶液。自THF/己烷中再結晶，產生5 0毫 克（2£，4£,6乙）-7-(3,5-二溴苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯 酸：lH NMR (CDC13) c? 7.62(1H, s,芳香系），7.33(2H, s，芳香 系），6·60(1Η, dd，C5-H), 6.32(1H, d)，6.28(1H，d), 5·80(1Η，s， C2-H)，2‘20(3Η，s，C3 CH3)，2.15(3Η，s，C7 CH3); HRMS Cl5Hl4Br202計算値：383.936 1 ;實測値：383.9360。 取含無水醚（30毫升）與DMF(0.5克，7毫莫耳）之溶液冷 卻至1 5°C後，以草醯氣（0,2克，1.5毫莫耳）處理，並攪拌1 5 分鐘。排除所有溶劑，取二甲基氣甲脒鐳化氣（Helv. Chim. Acta 42, 1653 (195 9))之白色固體懸浮於DMF(5毫升）中。添 加（2£，4£，62)-7-(3,5-二溴苯基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯酸 (0.30克，0.8毫莫耳），混合物於室溫下攪拌3至4小時。反 應冷卻、至0 °C，以1 0分鐘時間，以〇，N-雙（三甲矽烷基）-4-胺基笨酚（0.6克，2.4毫莫耳）之DMF(5毫升）溶液處理。一 旦添加完畢，即續攪拌1小時，然後倒至5 % KF水溶液 (1 〇毫升）中，再攪拌1小時。以醚萃取水性混合物，經 HPLC使用35% EtOAc/己烷爲溶離液純化，產生N-(4-羥苯 基）-(2£,4已，62)-7-(3,5-二溴苯基），3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯 醯胺。NMR (DMSO) d 9.80( 1H，s，NH)，9,18(1 H，s，0H)， 7·82(1Η, s,芳香系），7.51(2H, s，芳香7.41(2H，d,芳香系）， 6.67(2H, d,芳香系），6.6-6.4(3H，br m, C4,5,6-H), 6.00(1H，s， C2-H)，2.17(3H，s，C3 CH3)，2.13(3H，s，C7 CH3)。 IG) Ν·(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-苯基-3,7-二甲基-2,4,6-庚三 稀臨胺之製法 取含（三甲矽烷基）乙酸乙酯（4,2克，4 0毫莫耳）之4 0毫 -46- 本纸張尺度適用中固國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） <請先閱讀背面之注t事項再填寫本頁) '-----；—訂*------ " 45557 5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（44) 升THF溶液於NaCl/冰/水浴中冷卻至〇 °C，然後緩緩添加二 異丙基胺化鋰（2.0 Μ庚烷/THF/乙基苯溶液，丨8.2毫升， 36.3毫莫耳）。反應瓶於乾冰/異丙醇浴中冷卻至，添 加乙醯苯（2.0克，1 6.5毫莫耳）至反應混合物中。離開冷卻 槽，使反應溫度回升至0 °C，於此溫度下添加磷酸（3 Ν， 1 00毫升）至反應混合物中。加水稀釋反應混合物，以醚萃 取，以飽和鹽水洗滌有機溶液，脱水（MgS04)，濃縮，產 生黃色油。使用3 %醚/己烷進行中壓矽膠層法析，可以分 離二種異構物。純3 -笨基-3-甲基-2(Z)-丙烯酸乙酯（604毫 克）：NMR (CDCI3) β 7·12-7·40(5Η，ηι,芳香系），5.90(1H， s)，3.97 (3H，q，0-CH2), 2.14(3H，s，乙烯基-CH3)，l.〇6(3H，t, -CH3)。 依上述1?)小節之3-(3,5-二溴笨基）_3_甲基_2(2)-丙烯-1-醇之相同方式製備3-苯基-3 -甲基-2(Z)-丙烯-1-醇。由3-苯 基-3-甲基-2(Z)-丙烯酸乙酯（543毫克，2.96毫莫耳）與 DIBAH(1‘5 Μ甲苯溶液，5.9毫升，8.9毫莫耳）製得423毫克 3-苯基-3-甲基-2(Ζ)-丙烯-1-醇：NMR (CDC13) d 7.1-7.40(5H, m，芳香系），5.71(1H，dt)，4_08(2H，d), 2_09(3H, d)， 1.25(1H，bs，OH)。 依上述I F )小節中3·(3,5·二溴苯基）_3-甲基_2(z)-丙烯醛 之相同方式’製備3 -本基-3-曱基-2(Z)-丙稀越。由3 -苯基· 3-甲基-2(Z)-丙晞-1-醇（ 400毫克，2.7毫莫耳）：Mn02(2.8 克，32.3毫莫耳），1〇毫升醚’產生340毫克3-苯基-3-甲基乂 2(Z)-丙烯醛：’H NMR (CDC13) β 9.48(1H, d，CHO)，7.20-7.45(5H，m，芳香系），6‘14(1H，d)，4.08(2H，d)，2.32(3H，s 細 -47- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)AJ規格（210 X 297公坌） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -I、 ------Ϊ--* I I I---I ψ 455575 Λ7 B7 五、發明說明（45) 裂）。 依上述IF)小節7-(3,5-二溴笨基）_3,7·二甲基 _2(E),4(E)，6(Z)_ 庚二稀酸乙酯之相同方式製備7_苯基_3,7_二甲基-2(E)， 4(E)，6(Z)-庚三烯酸乙酯。由3 曱基_4-亞磷酸基巴豆酸三 乙酯（433毫克’ 1.64¾莫耳）之3毫升thf溶液，雙（三甲矽 烷基）胺化鋰（1M THF溶液，1,5毫升，1 5毫莫耳），3 _苯基 -3-甲基-2(Ζ)-丙烯醛（2〇〇毫克，1.37毫莫耳）之2毫升THF溶 液產生270毫克7-笨基-3,7-二甲基_2(£)，4(£)，6(2)-庚三烯酸 乙酯·· NMR (CDC13) ci 7,23-7_45(5H，m,芳香系），6.70(1Η， dd), 6.26(2H, d), 5.74(1H, s), 4.26(2H, q), 2.19(3lH, s), 2.16 (3H, s)5 1,28(3H, t)。 依上述I F )小節中7-(3,5-二溴苯基二甲基_2(E)，4(E)， 6(Z)-庚三烯酸之相同方式製備7_苯基-3,7_二甲基·2(ε),4(Ε)， 6(2)-庚三烯酸。使用7-笨基-3,7-二曱基-2(^)，4(£)，6(2)-庚 三烯酸乙酯（259毫克，1.01毫莫耳）之4毫升NaOH溶液，0.5 毫升THF與1毫升10 N NaOH。結晶後，產生9 3毫克7-苯基-3,7-二甲基-2(E)，4(E)，6(Z)-庚三烯酸：】H NMR (CDC13) d 7.41(2H, t,芳香系），7.32(IH，t,芳香系），7.25(2H, d,芳香系）， 6.73(1H, dd), 6.29(1H, d)3 6.27( 1 H, d), 5.76(1H, s), 2.20(3H, s)，2.17(3H, s); HRMS Cl5Hl602計算値：228.1 1 50 ;實測値： 228.1 152。 依上述IF)小節中N-(4-羥苯基）-(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二溴苯 基）-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺之相同方式，製備N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-苯基-3,7-二甲基-2,4,6-庚三晞醯胺。 由含二甲基氣曱脒錯化氣（Helv. Chim. Acta 42, 1653 (1959)) -48- 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS)A4規格（2丨0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> ------,--訂--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45 557 5 A7 _B7 _____ 五、發明說明（46 ) (42.1毫克，0.33毫莫耳）之1毫升DMF溶液與7-苯基-3,7-二 甲基-2(£)，4(8),6(2)-庚三烯酸（50毫克，0.22毫莫耳）之1毫 升DMF溶液反應，產生醯基氣。此醯基氣與0，N-雙（三甲 矽烷基）-4-胺基苯酚（167毫克，0.66毫莫耳）之1毫升DMF溶 液，吡啶（106毫升，1.32毫莫耳）反應，結晶後，產生1 2毫 克1^-(4-羥笨基）-(2£，4£,62)-7-苯基-3,7-二甲基-2,4,6-庚三 晞醯胺：NMR (CDC13) 7.40(2H，d，芳香系），7.22- 7·40(5Η, m,芳香系），7·03(1Η，br m)，6.77(2H，d)，6.68(1H， dd)，6.24(1H，d)，5.75(1H，s)，4.77(1H，brs)，2,22(3H, s)， 2.19(3H, s); HRMS C21H21N02計算値：3 1 9.1 5 72 ;實測値： 319,1576。 實例11 醫藥活性 IIA.試管内分析法： 於細胞分析法中，採用下列細胞株，試驗式I化合物抑 制細胞生長及使細胞凋亡之活性： 取人類ER+乳癌瘤（ZR-75-1)，來自ATCC(CRL 1500)，於 補充丙酮酸鈉，10% FBS及1 3毫微克/毫升健大黴素之奇 布可（Gibco) RPMI 1640培養基中生長。細胞於37°C，4.5% (：02及95.5%濕空氣下培養。 取人類ER-乳癌瘤（MDA·435)，來自珍妮普莱斯博士（Dr. Janet Price, MDA Cancer Center, Houston, Texas) ’ 於補充丙 酮酸納、1 0°/。FBS及13毫微克/毫升健大黴素之奇布可RPMI 1640培養基中生長。細胞於37°C，4.5% C02及9 5 , 5 %濕空 氣中培養° -49 - 本纸張尺度適用中园國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公笼） (請先閱讀背面之沒意事項再填寫本頁) - 1 ! I I I wi I 11111--- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 455575 _ ____B7__ 五、發明說明（47 ) 取人類ER-乳癌瘤’（MDA-231)，來自ATCC(HTB 22)於補 充非必需胺基酸、丙酮酸鈉、及伊爾氏（Earle's) BSS，10% FBS及13毫微克/毫升健大黴素之伊格氏（Eag丨e’s)培養基中 生長。細胞於37°C ’ 4,5% (：02及95.5%濕空氣中培養。 取人類肺部大細胞癌瘤（H 1299)，來自ATCC(CRL-5803) 於補充丙酮酸納、1 〇% FB S及13毫微克/毫升健大黴素之奇 布可公司之高葡萄糖狄克（Delbecco)最基本培養基（DMEM) 中生長。細胞於37°C，4.5% (：02及95.5%濕空中培養。 取人類結腸直腸癌瘤（RKO)，來自柏尼·佛格斯坦博士 (Dr, Bernie Voge丨stein)，於補充丙 S同酸鈉、10% FBS及 13 毫 微克/毫升健大黴素之奇布可公司之高葡萄糖狄克最基本 培養基（DMEM)中生長。細胞於37°C，4.5% (：02及95.5%濕 空中培養。 1 . ii胞生長抑制作用：MTT分析法 採用標準MTT分析法試驗式I化合物抑制細胞生長之能 力，其係一種以四0i #鐳爲主之分析法，測量細胞在培養 物中之活力。當達70-80%融合度時收集細胞，並離心成 塊。細胞再懸浮於培養基中，其中改用不含FBS之海克隆 (Hyclones)木炭/葡聚糖替代FBS，並接種（2毫升/孔）至6孔 板（康寧公司（Corning))中，其密度可使四天分析期出現線 性生長。接種後1 8至2 4小時，添加式I化合物（1 〇 mM母 液，含於二甲亞颯（DMS0))。於適當生長培養基中製備化 合物稀釋液，加至細胞中，終濃度爲1 〇，3.3及1 " Μ之 0.1% DMSO溶液。於24、48及72小時之時間點，添加ΜΤΤ (3-[4,5_二曱基嘧唑-2-基-2,5-二苯基四唑啉鑕化溴）母液（5 -50- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · I I ---1 I 訂.-----1—·'·" 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 455575 A7 __D7___五、發明說明（48 ) 毫克/毫升，含於i X PBS中）至細胞板（625微升/孔）後，培 養2.5小時。自孔中吸出液體，添加丨毫升/孔95%乙醇以溶 解甲腊反應產物。板子振盪（貝克逨你旋轉式振盪機 (Bellco Mini-Orbita丨Shaker)) 15分鐘。溶解之曱贈再移至 96孔板中（50微升），於57〇 nm測定光密度（0D)(生技微板 讀數機（Bio-Tek Microplate Reader))，參考波長 660 nm。根 據下列公式計算抑制細胞生長百分比： %IN: 〇D(未處理）-〇D(已處理） 0D(未處理） X 100 (請先閱讀背面之江意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 結果示於表1至3 表1 對ZR-75 -1細胞生長之抑制 化合物 小時 Μ 1.0 N-(4-羥苯基）_(2E，4E，6Z)-7- 24 1.0 [3,5-雙（三氟甲基）苯基]_3,7_ 二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 0 72 13.0 N-(4-羥苯基）_(2E，4E,6Z)-7- 48 3.0 6.0 [3,5-芝（三氟甲基）苯基]_3,6,7_ 二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺 72 )減去相對於無藥物對照组之細胞生 長抑Ί 抑制°〆。1 勿濃度 3.3 18‘0 30.0 56.0 64.0 %之抑制％ 10.0 21.0

I *--I--.--訂 *-----I--S 0 60.0 80.0 -51 - Μ氏張尺度適用中國國(CNS)A4 (210 X F97 ) A7 4 5 557 5 _Β7 五、發明說明（49 ) 表2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 對MD A 23 1細胞生長之抑制 化合物 小時 Ν-(4-羥苯基)-(2Ε,4Ε,6Ζ)-7-[3,5_雙（三氟甲基）苯基]-3,7- 24 二甲基-2,4,6·庚三烯醯胺 48 12_ Ν-(4-羥苯基)-(2E，4E，6Z)-7- [3,5-雙（三氟甲基）苯基]- 3,6,7.-三甲基·2,4,6-庚三烯醯 24 胺 48 72 Ν-(4-羥苯基）-(2Ε,4Ε,6Ζ)-7- 24 [3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3-甲 基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 72 Ν-(4-羥苯基)-(2Ε，4Ε，6Ζ)-7-[3,5-雙（曱基）苯基]-3,7-二甲 24 基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 72 Ν-(4_ 羥笨基）-(2Ε，4Ε，6Ζ)-7-[3,5-雙（甲氧基）苯基]-3,7-二 24 甲基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 11_ Ν-(4-羥苯基 雙 （溴） 苯基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺 r 1A 48 72 -52- 藥物濃度u Μ) 1.0 3,3 10.0 18 30 26 39 35 61 46 62 71 0 0 40 ο ο 8 2 3 2 8 3 4 3 7 6 5 7 ί請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁> 2 0 0 4 5 5 18 5 6 11 5 7 0 3 8 3 5 7 5 ο I 6 8 8 0 5 3 2 2 1 5 6 6 2 8 7 7 5 6 TL 8 8 2 5 0 5 4 5 2 7 8 3 6 6 6 8 8 - —----»— J1I*--------. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2〗0 X 297公釐） A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4 5 5 5 7 5 B7 五、發明說明（50 ) N-(4-羥苯基)-(2E,4E，6Z)-7- 24 45 57 58 [苯基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三 烯醯胺 48 67 80 81 72 76 87 88 1 >減去相對於無藥物對照組之細胞生長抑制％之抑制％。 表3 對MDA 435細胞生長之抑制 化合物 小時 抑制％1 > 藥物濃度（μ Μ) 1.0 3.3 10.0 N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7- 24 47 78 77 [3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,7_ 二曱基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 59 91 95 72 94 96 98 N-(4-羥苯基)-(2E，4E,6Z)-7- [3,5-雙（三氟甲基）苯基]- 3,6,7-三甲基-2,4,6-庚三烯醯 24 3 67 68 胺 48 3 95 96 72 4 98 99 Ν·(4-羥苯基）-(2Ε，4Ε,6Ζ)-7- 24 19 81 91 [3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3-甲 基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 45 93 99 72 73 83 100 Ν-(4-羥苯基）-(2Ε，4Ε,6Ζ)-7- 24 56 53 53 [3,5-雙（甲基）苯基]-3,7-二甲 基-2,4，ό -庚三晞驢胺 48 95 92 98 72 95 94 91 Ν-(4-羥苯基）-(2Ε，4Ε,6Ζ)-7-[3,5-雙（甲氧基）苯基]-3,7-二 24 21 36 25 曱基-2,4,6-庚三烯醯胺 48 64 61 61 72 86 87 87 -53- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ------；—訂--------- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A:1規格（210 X 297公釐）

羥苯基)-(2E，4E，6Zp. [3,5_ 雙（溴）苯基]-3,7-二 + 基. ^4,6-庚三烯醯胺 24 27 28 37 M-(4-羥苯基）-(2E，4E,6Z)-7-[苯笋二 _ 基-2,4,6-庚三 }希S產胺 48 72 24 70 86 3 66 88 3 70 87 2 48 72 39 41

經濟部智祛財產局員工消費合作社印M C請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 40 51 42 68 減去相對於典藥物對照組之細胞生長抑 - J < 抑制。/〇。 結果顯示’式I化合物可以抑制細胞 ? ^ί*ρ AjJ γ (% )隨濃度及隨著與ER-乳癌瘤細胞及結胪亩 刀比 之培養時間提高。然而，所有試驗化合物 "^―』啐低細胞生 長。例如：表3出示1〇 a μ N-(4-羥苯基），（2F 4C ^41，外，62)-7-[苯 基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺在72小時後，拙η " 1丨市J DMA- 435細胞生長相對於無藥物對照組之故果爲68% ^此表 示，此等接受式I化合物處理之細胞在使受質轉化成甲贈 之反應上亦相對下降，此反應係因細胞生長量減少或誘發 細胞凋亡所致。 2 ,細胞凋亡：由ELISA檢測細胞死亡 依下列方法試驗式[化合物引起細胞凋亡之能力： a)樣本製備 收集細胞與培養基，細胞離心成塊’再懸浮於100微升 溶胞緩衝液中（50 mM Tris-Cl(pH = 8.〇) ’ 20 mM EDTA ’ 1% NP-40e)，於4 °C下培養3 0分鐘溶解細胞°細胞碎片離〜’ I) -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A·!規格（210 X 297公釐） 45557 5 A7 _____B7___ 五 '發明說明（52 ) 取一份（3 0微升）上澄液測定蛋白質，保存在_2(rc下。再 添加280微升溶胞緩衝液，均勻混合，於4。(；及丨4,〇〇〇 rpm 下離心1 0分鐘。取出一份樣本（18〇微升），保存在_2〇χ：下 直到試驗時爲止。

b) ELISA 自百靈藥廠（Boehringer Mannheim)取得細胞凋亡檢測套 組（目綠No. 1544-674) ’根據套组提供之指示使用（細胞死 亡檢測ELISA)。然而，該方法經過修改，樣本稀釋度改爲 1 : 40至1 : 1〇〇，而非廠商建議之！ ： 1〇，因爲製備樣本萃物 所使用細胞數增加’進而提高ELIS A反應性。該分析法定 量經試驗化合物處理之細胞萃液（樣本）中核體片段含量。 已知此等由内核酸酶活化作用產生之核體片段爲細胞调亡 之下游效應物。採用抗組織蛋白抗體將樣本中任何核體片 段固定在微滴定板孔中。樣本再與已與過氧化酶共軏之抗 DN A抗體培養，隨後與過氧化酶受質aBTS培養。所產生 比色變化則於405/490 nm下，以光度計測定。 c) 蛋白質測定 測定各樣本之蛋白質總量，使EUSA數値隨樣本添加量 規度化。微板分析法説明於操作手册中，第5 2節（Bi〇rad DC分析法，Cat·# 500-0 1 1 6)。根據線性迴歸曲線計算蛋白 質濃度。 d) ELISA分析法計算 扣除EUSA板背景O.D.値，測得相對ELISA 0，D.讀數。 由樣本O.D.値扣除無藥物對照组0,D·値（僅含緩衝液）。根 -55- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> > H ϋ n T^i 1^1 I ^1- .^1 n - -1 (. * 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4 557 5 A7 -------- 五、發明說明（53) 據樣本蛋白質濃度與無藥物對照組比較，決定校正係數 (CC) ’扣除背景〇,d.(BCS O.D.)後，校正樣本0 D·。計算 相對於無藥物對照組之增加倍數，並乘以校正係數’使樣 本蛋白質總濃度規度化。 為了測定ELISA 0.D·提高倍數，得到下列〇.D.測定值： EUSA板背景-僅含溶胞緩衝液（EPB); 無藥物處理對照組-經DMSO處理之細胞樣本（NDT); 藥物處理组樣本-式I化合物處理之細胞樣本（DT) 自 NDT扣除 EPB(NDT-EPB)，及自 DT扣除 EPB(DT-EPB)。處 理組相對於對照组之提高倍數則為（DT-EPB)/(NDT-EPB) -為了測定樣本蛋白質總濃度，採用標準線性迴歸公式 (产mx +b) ’根據BSA標準物計算蛋白質總濃度（毫克/微 升）° B = ELISA背景。蛋白質濃度（PC)(毫克/毫升）=(樣本 吸光度- 。 权正係數（CC)為（NDT)(PC)/(DT)(PC)。 測定ELISA之提高倍數（FI)換算成總PC : nDT為DT X cc(係由DT Q.D.換算成PC) nDT為NDT Xcc(係由 NDTO.D,換算成 PC) FI換算成 pc為nDT/nNDT。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 結果示於下表4。 -56 本紙張尺度適用申國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 4 5 5 5 7 5 A7 _B7 五、發明說明（Μ ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -)If滞帝焯二s-^-t"^IH#焯-犄聆艨尝^-玲-胬-障族嘟处鸸吟一:萍-^。 ^<:01-.-聆今茸"五添"^-^9-"-41-11^^^-窩" SE,§-PV 24^s'w-^ to.," 2ΛΡ淬 h^菸 72 支4-尨沭栌> 24 l^v 鴻(WIL-9^)^戋 s^'nr^ 72 131(1) § 3(2) so) 67(47} 2 s 69 1 2 1(13)1§209) 6C5) 1600) 34<12) 6 10 12 NR-75- 1--命 t-一 -h-10UM(§,r~-) juM 101M§!-);ΰϋΜ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) MD s s 2i 23(9) s ZD ZD ND 5 ZD 2 ZD2(1) 12((15)2§ 17 10

ND ND 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） Ι-° 聲產-) ιρυΓν^ς^ι^)ιΰ1:^ _4 蹀-ί& 运" MDA435

_isf 1-) luM 10UM{S^) E ZD B2D ND 2DZD ND 之 D 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 45 55 7 5 A7 B7 五、發明說明（55) 表4結果證明，本分析法試驗之式I化合物可以誘發ER+ 與ER-乳癌瘤細胞及結腸直腸癌瘤細胞凋亡。例如：n-(4-羥苯基）-(2£，4£,62)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,7-二甲基_ 2,4,6,庚三烯醯胺在2 4至4 8小時時即有顯著誘發細胞凋亡 之反應，而相應酸：（2£，4£,62)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_ 3,7-二曱基-2,4,6-庚三烯酸則在72小時後仍只誘發相當少 量細胞凋亡°因此例如：>1-(4-藉苯基）-(2£，4£，62)-7-[3,5-雙（三氟甲基）笨基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺在24小 時後，對MDA-435及RKO細胞株及在48小時後，對ZR-75-1細胞，誘發顯著之細臉凋亡。 IIB.活體内分析法 試驗化合物N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙（三氟甲基） 笨基]-3,7-二曱基-2,4,6-庚三烯醯胺，並發現可降低腫瘤大 小及腫瘤數目。因此，式1化合物在老鼠體内具有對抗已 形成之亞硝曱基脲（NMU)誘發之乳房腫瘤之效力。利用 NMU έ秀發老鼠乳房组織專一性之侵略性腫瘤（古利諾 (Gullino)等人，1975)，只在短短4週内接受單一低毒性劑 量後（麥考米克（McCormick)等人} 1981)即產生主要依賴雌 激素之癌瘤（阿拉法（Arafah)等人，1980)，並達到高百分比 之腫瘤誘發效果。此實驗模式中由NMU誘發老鼠產生腫瘤 之性質爲人類乳房癌瘤代表，且具侵略性（麥考米克考等 人，1981)。 —^ ^ ^ ^ ’取750隻史普勞道利（SpragUe_£>awley)處女 老机’ 2 6至3 2天大（哈蘭貫驗室（Har]ail Laboratories)) ’置 於聚碳酸醋蘢内（3隻/籠）’並自由攝食及飲水。基本上依 前述説明誘發乳房腫瘤（古利諾等人，丨975及麥考米克等 -58- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 297公釐） c請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-t n n 1 It 一0<· n n I 45557 5 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印*1衣 五、發明說明（56 人’ 1981)。當達50 ± 3天大時，各動物分別接受含於 0.85%氣化鈉（經乙酸酸化至pH 5 〇)之單一劑量（5〇毫克/公 斤姐重）NMU(希格馬公司Sigma, St. Louis, MO))。經由尾 靜脈’使用26 g針筒i · V .投與致癌物〇,5毫升。 投與NMU 4週後開始每週檢測老鼠可觸知之腫瘤，且選 出在1 1天或I 1天以内可觸及至少一個乳房腫瘤之老鼠， 於投與NMU後6 1天時開始進行實驗。取1 5隻動物分成處 理組或對照組。利用量徑器每週測量腫瘤直徑，及其長軸 與短軸，並由橢圓體公式（D X d2)/2計算腫瘤體積，其中D 爲長直徑，d爲短直徑。注意出現新的可觸知腫瘤或已形 成腫瘤消失之時間（曰數），並注意解剖位置。原先腫瘤已 完全消退之相同解剖位置再出現腫瘤時，視之爲相同腫瘤 再度生長。發展出潰爛腫瘤之老鼠立即退出實驗。所有分 組之動物均於工作日每天稱重，共6週。 於 4% 乙醇、8% PEG 400，7_2% cAmophor RH 40 及 80% D5W中製備N-(4-羥苯基）-(2£，4£，62)-7-[3,5-雙（三氟甲基） 苯基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺，利用21g針頭’經腹 膜内投與2.8毫升，每週5次，g.d.共4週。 結果與討論 處理老鼠之NMU誘發之腫瘤時’每天於4 %乙醉’ 8% PEG 400，7.2% Cremophor RH40及80% D5W中試驗化合物 〜(4-羥苯基）-(2£邱,62)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]-3,7-二 甲基-2,4,6-庚三烯醯胺。 這些結果（見表5 - 7 )證明試驗化合物可以使腫瘤縮小’ 並使腫瘤數減少，其係使接受化合物處理之動物消除+ 刀生 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） ------------^------3 可 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 455575 ___B7____ 五、發明說明（57 ) 腫瘤，並防止其他腫瘤產生。 表5 對史普勞-道利老鼠經腹膜内投與N-(4-羥笨基）-(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙（三氟甲基）苯基]」3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醢胺 (化合物）四週後對NMU誘發初生腫瘤之影響 消退至無法觸知之初生腫瘤數 目/於各週第0天時可觸知之腫瘤數 組別 1 2 3 4 5 6 載劑對照组-2.8毫升 0/22 0/22 1/21 0/20 0/19 0/15 5X/週 化合物25毫克/公斤/2.8毫升 7/20* 5/19* 3/19 4/19* 4/18* 5/18* 5X/週 初生腫瘤消退成不可觸知之百分比大於載劑對照組之機率 (費雪精密試驗（Fisher Exact Test)) : *p,0.05及**p<0.005。 表6

對史普勞-道利老鼠經腹膜内投與N-(4-羥苯基）-(2E，4E，6Z)-7-[3,5-雙（三氟甲基）笨基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺（化 合物）四週後對NMU誘發之初生腫瘤體積之影響 各週平均腫瘤體積土 SEM(mmM 1 2 3 4 5 6 載劑對照組-2.8 毫升 1600±56 3684±13 6060 土 26 5176±14 S600 土28 6485±23 5X,週 3 30 32 90 38 75 化合物 25 毫克/公斤辽8 毫升 358±243 80丨±395 2丨62±70 3370±10 5433±17 8052±25 5χ/週 ** * 5 22 21 84 每隻老鼠平均腫瘤體積顯著低於載劑對照組之機率（威克 森分級總分試驗（Wilcoxon Rank Sum Test) ; *ρ<〇.〇5 及 **Ρ<0.005 。 -60- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2]〇χ297公芨） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---------------f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 455575 Α7 Β7 五、發明說明（58) 表7 對史普勞-道利老鼠經腹膜内投與N-(4-羥苯基）_(2Ε，4Ε,6Ζ)-7_[3,5-雙（三氟甲基)苯基]-3,7-二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺（化 合物）對抗NMU誘發之初生乳房腫瘤體積之影響*

Ml第〇天時之腫瘤體精 處理後週數 12 3 載劑 化合物 載劑 化合物 載荆 化合物 消退>50% 0 10 0 8 2 6 不變 6 5 1 5 1 3 增加>100% 16 4 21 6 18 6 總數 22 19 22 19 2 1Λ 19 * 化合物含於 4% 乙醇，8% PEG 400 ’ 7.2% Cremophor RH40 及80% D5W中投與，25毫克/公斤/2.8毫升，q.d.，5X/週， 共4週；15隻老鼠中有3隻中毒，並自數據中挑出。 Λ由於殺死彼等腫瘤潰爛之動物，因此腫瘤總數隨時間減 少。 ：--- I--------- -------- 訂- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)AJ規格（210*297公爱）

Claims (1)

1. 4 5 5 ^1^22200號專利申請案 g 中文申請專利範圍修正本(90年4月）g88 經濟部中央棣隼局貝工消費合作社印装 申請專利範圍 1. 一種式I化合物： a. 補充肌夂 R3

   式1 此 其中R1與R2分別為氫、自素、C卜4烷基、Ci·4 ^ β3 或三画甲基；R3為氫或C丨·4烷基；且R4為氫’ 7 ^與 為C μ烷基時，則R4可為Cu烷基；R5、R6、R R9為氩。 2.根據申請專利範圍第1項之化合物，其如式II

   -〇~oh 式I1 其中R1，R2，R3與R4如申請專利範圍第1項之定義° 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R3為甲基且V 為氫 4.根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R3與R4為氣 本紙it尺度適用中國國家樣率（CNS > Α4说格（210Χ297公釐） -装 Γη;; 經濟部中央揉率局員工消費合作社印装 45557 5 A8 B8 CS ~~ ______ D8 六'申請專利範固 5.根據_請專利範圍第2項之化合物，其中與Μ為甲 基a 6 _根據申請專利範圍第2項之化合物， ^-(4-羥苯基）_(2£,4162)_7_[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_ 3’7_二弔基-2,4,6-庚三烯醯胺。 7 根據申請專利範圍第2項之化合物’ N，(4-經苯基）_(2^，4艮62；)_7_[3,5-雙（三氟甲基）苯基]_ 3-甲基-2,4,6-庚三烯醯胺’ N-(4-羥苯基）_(2艮4£，62)_7_[3,5-雙（三氟甲基）笨基]_ 3,6,7_三甲基_2,4,6·庚三蹄醯胺， N-(4-羥苯基）-(2艮4162)_7_[3,5-雙（溴）苯基]_3,7_二甲 基-2,4,6-庚三缔酿胺， N-(4-羥苯基）.（2ε，4Ε，6Ζ)·7·[3,5-雙（甲基）苯基]_3,7_二 甲基·2,4,6·庚三婦酿胺， 义(4-羥苯基）_(2£，4£，62)_7_[3,5-雙（甲氧基）苯基]_3,7_ 二甲基-2,4,6-庚三烯醯胺，及 Ν-(4-經苯基）_(2ε,4Ε,6Ζ)-7-[苯基]-3,7-二甲基·2,4,6-庚三烯醯胺。 8. —種用於預防或治療癌症之醫藥組合物，其包含根據申 請專利範圍第1至7項之任一項之化合物及醫藥上可接受 之載體。 9. 根據申請專利範圍第1至7項中任一項之化合物’其係用 於製造治療乳癌之醫藥。 -2- 本紙張尺度逋用中國國家樣準< CNS ) Α4说格（2丨0X297公着 ---------i----hplr------線 (請先閏讀背面之注$項再填寫本J) 經濟部中央標率局員工消費合作社印¾ 455575 第88122200號專利申請案 中文說明書修正頁（90年4月） 五、發明説明（d Η# ' ^ , n A (2.07克，10.7毫莫耳），PPh3(4.06克，15.3毫莫耳）及 Pd(PPH3)2Cl2(2.09克’2.92毫升）後，添加三甲梦烧基乙炔 (12·3克，1 8毫升，125毫莫耳）。反應加熱至75°C 2小時， 產生深褐色黏稠混合物。再添加三甲矽烷基乙炔（6.15克， 9 毫升，63 毫莫耳），PPh3(2.04 克，7.78 毫莫耳），CuI (1.05 克，5.51毫莫耳），及卩(1(??113)2(：12(1.62克，2.31毫莫耳）， 然後加熱反應至80°C 4小時。反應冷卻至室溫後，添加己 烷（ 300毫升），溶液經寅式鹽過濾。己烷層以IN HC1 (60毫 升）、鹽水（300毫升）洗滌，脫水（Na2S04)，及濃縮，產生 粗產物1-三甲矽烷基-2-(3,5-二甲苯基）乙炔，即用於下一 個步驟 》4 NMR (CDC13) 5 7.10(2H，d)，6.94(1H，s)， 2.27(6Η, s), 0.23(9Η, s) » 取含粗產物1-三甲矽烷基-2-(3,5-二甲苯基）乙炔（105毫 莫耳，理論最大值）之THF(70毫升）與MeOH(280毫升）溶液 於冰/水浴中冷卻，此期間添加8N KOH( 16毫升，128毫莫 耳）及水（2 5毫升），然後使反應離開冰/水浴。1小時後， 真空排除約半量有機溶劑*添加己虎（1升）與水（400毫 升）。以飽和鹽水洗蘇有機層，脫水（Na2S04)及濃縮’產生 11_3克1-(3,5-二甲苯基）乙炔之褐色油：4 NMR (CDC13)<5 7.12(2H，s)，6.98(1H，s)，3.00(1H，s)，2‘29(6H，s)。 取1-(3,5-二甲苯基）乙炔（11.3克，86_3毫莫耳）之無水THF (80毫升）溶液於乾冰/丙酮浴及氬大氣下冷卻。緩緩添加π_ BuLi(1.6M己烷溶液’ 65毫升，104毫莫耳），然後添加氣 甲酸甲酯（11.4克，9.4毫升1 121毫莫耳）。反應瓶移至冰/ -25- 本紙浪尺度適财SIS家揉準（CNS ) -^-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 5 5 ^1^22200號專利申請案 g 中文申請專利範圍修正本(90年4月）g88 經濟部中央棣隼局貝工消費合作社印装 申請專利範圍 1. 一種式I化合物： a. 補充肌夂 R3

   式1 此 其中R1與R2分別為氫、自素、C卜4烷基、Ci·4 ^ β3 或三画甲基；R3為氫或C丨·4烷基；且R4為氫’ 7 ^與 為C μ烷基時，則R4可為Cu烷基；R5、R6、R R9為氩。 2.根據申請專利範圍第1項之化合物，其如式II

   -〇~oh 式I1 其中R1，R2，R3與R4如申請專利範圍第1項之定義° 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R3為甲基且V 為氫 4.根據申請專利範圍第2項之化合物，其中R3與R4為氣 本紙it尺度適用中國國家樣率（CNS > Α4说格（210Χ297公釐） -装 Γη;;