JP5529280B2

JP5529280B2 - 癌治療用のジ（フェニルプロパノイド）・グリセロール誘導体

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Publication number: JP5529280B2
Application number: JP2012532432A
Authority: JP
Inventors: マグレガー，アレクサンダー
Original assignee: マグレガー，アレクサンダー
Priority date: 2009-10-09
Filing date: 2010-10-08
Publication date: 2014-06-25
Anticipated expiration: 2030-10-08
Also published as: HRP20201217T1; MY187188A; CA2715662C; EP2486026A4; US20150246014A1; US10052301B2; WO2011041907A1; DK2486026T3; EP2486026A1; EP2486026B1; MX360417B; PT2486026T; CN102264713A; CA2715662A1; BR112012008204A2; MX2012004160A; CY1123161T1; US9061993B2; LT2486026T; ES2810906T3

Description

本発明は、癌を治療するための治療薬に関する。より詳細には、本発明は癌を治療するためのプロパン・ジイル・ジシンナメート誘導体およびその調製法に関する。

世界保健機関（ＷＨＯ）によれば、２０００年の世界の全死亡者は約５６００万人で、そのうちの１２％は悪性腫瘍が死因であった。詳細には、男性５３０万人および女性４７０万人が悪性腫瘍を発症し、合わせて６２０万人がこの病気で死亡した。この報告書では、癌が発展途上国で大きな公衆衛生問題として浮上してきていることも明らかとされ、その影響は先進国に匹敵する。

過去２０年で大きな前進があったとはいえ、従来の療法では効果不十分であったり、まったく効果が得られない癌が多く残っている。これら治療法に共通する主な問題は認容できない毒性である。

したがって、癌の発生を予防するための、または、既に悪性新生物が発生している場合には、宿主生物を無癌状態にするか、命に別状ないレベルまで腫瘍細胞量を減らすか、または、少なくとも併用療法の使用を容易にするための、新規な化合物、医薬品、または方法が必要とされている。

本質的に、癌等の腫瘍は、細胞再生と細胞死の間の微妙な調和が崩れた状態での不適切な細胞の蓄積と考えられる。悪性新生物が発生する場合、細胞再生の増加、細胞死の減少、またはその両方が生じているはずである。この関係の当然の帰結として、宿主生物の有利（したがって、腫瘍の不利）に上記プロセスに影響を及ぼす薬剤が潜在的な抗新生物薬ということになる。

抗新生物剤の中には天然源から単離および特定されているものもある。例えば、一般にウコンと呼ばれる植物ウコン由来のポリフェノールであるクルクミン（ジフェルロイルメタン）は、この５０年以上にわたって広範囲に研究され、このポリフェノールが癌予防と癌治療の両方が可能であることが示されている。具体的には、これら一連の研究により、乳癌、大腸癌、急性骨髄白血病、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌を含む様々な腫瘍細胞の増殖をクルクミンが抑制することが証明されている（１−７）。その優れた薬理学的安全性にもかかわらず、投与量での全身吸収性の低さおよび代謝作用の高さより、この化合物の抗癌剤としての効果は制限されてきた。

カフェ酸フェニルエステル（ＣＡＰＥ）として識別される、ミツバチの巣材であるプロポリスの特定成分が、多形成膠芽腫（ＧＢＭ−１８）、結腸腺癌（ＨＴ−２９）及びメラノーマ（ＨＯ−１）細胞を含むヒト腫瘍細胞、ならびに、バイタル転換及び発癌転換げっ歯類細胞の増殖を選択的に抑制することが実証されている。これらの研究は、ＣＡＰＥおよび他のいくつかのカフェ酸エステルがアゾキシメタン誘導性コロニー前癌性病変およびオルニチン脱炭素酵素、タンパク質チロシンキナーゼ、大腸発癌と関連するリポキシゲナーゼの活性を阻害することも示している（８−１３）。

ＣＡＰＥとクルクミノイドは別々の天然資源に由来するものであるが構造的類似性があり、これがその抗癌特性、少なくともその安全性と選択性、を明らかにすると考えられる。抗癌特性に関する上記構造的類似性の意味は現時点では不明である。

新しい抗新生物剤開発のための取り組みの１つは、癌に対して選択的であり、生物学的環境において安定であり、癌に対する効力を継続的に維持し、全体として低毒性の新規な化合物を合成することである。

Ｂａｎｓｋｏｔａらは、オランダ産プロポリスのメタノール抽出物から、桂皮酸誘導体、カフェ酸ベンジル、カフェ酸フェネチルおよびカフェ酸シンナミル、またジシンナメート化合物（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート）および（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートを単離した（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００２）,８０（１）,６７-７３）。
カフェ酸ベンジル、カフェ酸フェネチル、およびカフェ酸シンナミルは、Ｂ１６−ＢＬ６に対してそれぞれＥＣ_５０値が２．０３μＭ、３．１６μＭ、１．９２μＭであった。
ジシンナメート化合物（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートおよび（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートは、同一細胞株に対してそれぞれ８１．９μＭおよび６６μＭという中度のＥＣ_５０を示した。

一態様において、本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉ’）
[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^３およびＲ^４は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ^６は、Ｈ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである]
で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−メトキシフェニル）アクリレート；または
（Ｅ）−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（４−メトキシフェニル）アクリレート、
ではない化合物または製薬上許容されるその塩）
を提供する。

別態様において本発明は、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）
［式中、Ｒ^１，Ｒ^２，Ｒ^３，Ｒ^４，Ｒ^５，Ｒ^６およびＲ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートおよび（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートではない化合物または製薬上許容されるその塩）
を被験者に投与することを含む、被験者の癌を治療する方法を提供する。

さらに別態様において、本発明は、以下の式
［式中、Ｒ^１およびＲ^２がいずれもアルコキシである］
で示される中間体を提供する。

本発明の上記及びその他の特徴は、添付図面を参照する以下の説明から更に明らかになろう。

式（ＩＩ）のジエステル化合物を製造するための合成スキームの例を示す。式（ＩＩ’）のジエステル化合物を製造するための合成スキームの例を示す。グリシジジル皮酸エステル誘導体を製造する方法の例を示す。対称的な終わりのある式（ＩＩ）および式（ＩＩ’）のジエステル化合物を製造するための合成スキームの例を示す。本発明の化合物を構成する中間体の三置換誘導体の例を示す。本発明の化合物を構成する中間体の三置換誘導体の例を示す。本発明の化合物を構成する中間体の二置換誘導体の例を示す。本発明の化合物を構成する中間体の二置換誘導体の例を示す。式（ＩＩ）のジエステル化合物を製造するための合成スキームの例を示す。式（ＩＩ）のジエステル化合物を製造するための合成スキームの例を示す。式（ＩＩ）のジエステル化合物を製造するための合成スキームの例を示す。化合物で処理を行わなかったヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の顕微鏡写真を示す（コントロール）。３０μＭ化合物（ｌｉｂ）で処理した後のヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の顕微鏡写真を示す。３０μＭ化合物（ｌｅ）で処理した後のヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の顕微鏡写真を示す。３０μＭ化合物（ｌｄ）で処理した後のヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の顕微鏡写真を示す。

一態様において本発明は、式（Ｉ）または式（Ｉ’）
［式中：Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^３およびＲ^４は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ^５は、Ｈ、ＯＨ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ^６は、Ｈ、またはアルコキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、上記化合物は
（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−メトキシフェニル）アクリレート、または
（Ｅ）−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（４−メトキシフェニル）アクリレートではない化合物である）
を提供する。

上記化合物の式（Ｉ）または式（Ｉ’）の一例において、Ｒ^１およびＲ^２はいずれも、ＯＨ、アルコキシまたはアルキルカルボニルオキシである。

より詳細には、本発明は、式（Ｉａ）または式（Ｉａ’）
［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^４は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ^６は、Ｈ、またはアルコキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩を提供する。

上記式（Ｉａ）または式（Ｉａ’）の化合物の一例において、Ｒ^１およびＲ^２はいずれもＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである。

別の例において、本発明は、上記式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉ’）および（Ｉａ’）［式中、Ｒ^１およびＲ^２はいずれもＯＨまたはアルコキシである］で示される化合物に関する。

また、本発明は、上記式（Ｉ），（Ｉａ），（Ｉ’）および（Ｉａ’）［式中、Ｒ^４はＨまたはＯＨである］で示される化合物に関する。

また、本発明は、式（Ｉｂ）または式（Ｉｂ’）
［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^６は、Ｈ、アルコキシまたはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩、に関する。

例において、本発明は、式（Ｉｃ）または式（Ｉｃ’）
［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^４は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩に関する。

より詳細には、本発明は、式（Ｉｄ）、（Ｉｅ）、（Ｉｆ）、（Ｉｇ）、（Ｉｈ）、（Ｉｉ）、（Ｉｊ）、（Ｉｄ’）、（Ｉｅ’）、（Ｉｆ’）、（Ｉｇ’）、（Ｉｈ’）、（Ｉｉ’）、（Ｉｊ’）：
で示される化合物に関する。

第２の態様において、本発明は、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、上記化合物は、（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートおよび（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート以外の化合物である）
を被験者に投与することを含む、被験者の肺癌、乳癌、大腸癌、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、または白血病などの癌を治療する方法を提供する。

第３の態様において、本発明は、被験者の癌治療用の薬剤を調製するための、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、上記化合物は、（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート）および（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート以外の化合物である）
の使用を提供する。

本発明の第３の態様による一例において、癌は、肺癌、乳癌、大腸ガン、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、または白血病である。

第４の態様において、本発明は、式（ＩＩ）または（ＩＩ’）
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、上記化合物は、（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート）および（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート以外の化合物である）
に癌細胞を接触させることを含む、肺癌細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、前立腺癌細胞、卵巣癌細胞、皮膚ガン細胞、または白血病細胞などの癌を死滅させる方法を提供する。

第５の態様において、本発明は、癌を死滅させるための、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである、で示される化合物または製薬上許容されるその塩
（但し、上記化合物は、（２Ｅ，２’Ｅ）−２−アセトキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート）および（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート以外の化合物である）
の使用を提供する。

本発明の第５の態様による使用の一例において、癌細胞は、肺癌細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、前立腺癌細胞、卵巣癌細胞、皮膚癌細胞、または白血病細胞である。

上記方法の一例において、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）の化合物のＲ^１およびＲ^２は、いずれもＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである。

より詳細には、本発明は、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）の化合物が、式（ＩＩａ）または式（ＩＩａ’）
［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^６およびＲ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩である、上記方法または上記使用に関する。

本発明は、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）の化合物が、式（Ｉａ）または式（Ｉａ’）
［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^４は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ^６は、Ｈ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩である、上記方法または上記使用に関する。

本発明はさらに、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）の化合物が式（Ｉｃ）または式（Ｉｃ’）
［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^４は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩である、上記方法または上記使用に関する。

上記方法または使用の一例において、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（Ｉａ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ’）、（ＩＩａ’）、（Ｉａ’）および（Ｉｃ’）のＲ^１およびＲ^２が、いずれもＯＨ、アルコキシまたはアルキルカルボニルオキシである。

その他の例において、本発明は、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（Ｉａ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ’）、（ＩＩａ’）、（Ｉａ’）および（Ｉｃ’）のＲ^１およびＲ^２がいずれもＯＨまたはいずれもアルコキシである、上記方法または上記使用に関する。

本発明はまた、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（Ｉａ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ’）、（ＩＩａ’）、（Ｉａ’）および（Ｉｃ’）のＲ^４がＨまたはＯＨである、上記方法または上記使用に関する。

より詳細には、本発明は、被験者に投与される化合物が、式（Ｉｄ），（Ｉｅ），（Ｉｆ），（Ｉｇ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｅ）、（Ｉｄ’）、（Ｉｅ’）、（Ｉｆ’）、（Ｉｇ’）、（ＩＩｂ’）、（ＩＩｃ’）、（ＩＩｄ’）、（ＩＩｅ’）：
で示される化合物またはその組み合わせである、上記方法または上記使用に関する。

第６の態様において、本発明は、
式（Ｉ）または式（Ｉ’）
［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシあり、
Ｒ^３およびＲ^４は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ^６は、Ｈ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシである］
で示される化合物、または、製薬上許容されるその塩と、
製薬上許容される希釈剤またはキャリアと、
を含む
（但し、上記化合物は、
（Ｅ）−２−アセトキシ−３−（（（Ｅ）−３−（４−アセトキシ−３−メトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）プロピル３−（４−アセトキシフェニール）アクリレート；または
（Ｅ）−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（４−メトキシフェニル）アクリレートではない）、
医薬組成物を提供する。

第７の態様においては、本発明は、式
［式中、Ｒ^１およびＲ^２はいずれもアルコキシである］
で示される中間体を提供する。

また、本発明は、上記化合物と、製薬上許容される希釈剤およびキャリアとを含む、医薬組成物に関する。

また、本発明は、一般式（Ｉ），（Ｉ’），（ＩＩ）および（ＩＩ’）の化合物またはその混合物を含む医薬組成物および投薬剤に関する。

本願明細書で使用される用語「ａｌｋｙｌ（アルキル）」は、１個〜１０個、１個〜９個、１個〜８個、１個〜７個、１個〜６個、１個〜５個、１個〜４個、１個〜３個、または１個〜２個の炭素原子を有するアルキル基をはじめとする一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１の直鎖又は分岐鎖の炭化水素基のことを言う。アルキル基の例として、限定的ではないが、メチル（基）、エチル（基）、プロピル（基）、イソプロピル（基）およびｔ−ブチル（基）などが掲げられる。

「製薬上許容される塩」とは、対応する遊離基または遊離酸の生物学的効果および特性を維持し、生物学的または他の意味で有害ではない塩のことである。無機塩基由来の塩類として、限定的ではないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム塩等が掲げられる。有機塩基由来の塩類として、限定的ではないが、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペリジンおよびポリアミン樹脂など、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂が掲げられる。

本発明の化合物またはそれらに対応する製薬上許容される塩は、経腸投与、非経口投与、または局所投与用の医薬品組成物の形態で使用可能である。

無機担体材料だけででなく有機担体材料も担体材料として適している。したがって、例えば、ラクトース、コーンスターチ、またはそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩類を、タブレット、コーティング錠、糖衣錠、硬ゼラチンカプセルの担体材料として使用できる。ソフトゼラチンカプセルに適した担体材料は、例えば、植物油、ろう状物質、脂質、半個体状および液状のポリオールである（有効成分の性質による。ソフトゼラチンカプセルの場合は担体不要のことがある）。液剤やシロップ剤の製造に適した担体材料は、例えば、水、ポリオール、スクロース、転化糖等である。座薬に適した担体材料は、例えば、天然オイル、硬化油、ろう状物質、脂質、半液体状あるいは液体状ポリオールである。局所用製剤に適した担体材料は、例えば、グリセリド、半合成および合成グリセリド、硬化油、液体ワックス、流動パラフィン、液状脂肪アルコール、ステロール、ポリエチレングリコールおよびセルロース誘導体である。

一般式（Ｉ），（Ｉ’），（ＩＩ）および（ＩＩ’）で示されるプロパン・ジイル・ジシンナメート誘導体は、限定的ではないが、癌ならびに腫瘍、炎症およびヒト免疫不全（ＨＩＶ）などのその他の増殖性疾患の治療、予防、防止に有益である本発明の化合物の抗癌活性は、細胞毒性、増殖防止、細胞周期キナーゼ抑制、あるいは細胞分化に発揮される場合がある。

また、本発明は、一般式（Ｉ），（Ｉ’），（ＩＩ）および（ＩＩ’）によって定義されている化合物の調製過程、あるいは混合物、その立体異性体、多形体、製薬上許容されるその塩、製薬上許容される溶媒和物に関する。

一般式（ＩＩ）の化合物は図１および９〜１１参照の合成経路に従って生成できる。ジエステル５をさらにアルキル化またはアシル化することによって、誘導体化ジエステル６を生成できる。

Ｒ^４が水素である式（ＩＩ）の化合物は、架橋結合剤７で桂皮酸誘導体１および２を架橋させてジエステル化合物８を生成することによって生成される。その後、ＲＣ（Ｏ）Ｌ等のアシル化剤を用いたジエステル８の部分的、あるいは完全なアシル化によって、アシル化誘導体１７を得ることができる。

図２に示されるように、式（ＩＩ’）の化合物は、相間移動触媒（ＰＴＣ）の存在下で、桂皮酸誘導体９または１０を対応するグリシジル・シンナメート誘導体３または４でエステル化して１，２グリセロール・ジエステル誘導体１３を生じ、さらにアルキル化またはアシル化してジエステル１４を生成することによって作製できる。

Ｒ^４が水素である式（ＩＩ）の化合物は、ジエステル化合物１６を作るために架橋結合剤１５で、桂皮酸酸誘導体１および２の架け橋結合で形成できる。その後、ＲＣ（Ｏ）Ｌ等のアシル化剤を用いたジエステル８の部分的、あるいは完全なアシル化によって、アシル化誘導体１８を得ることができる。

ジエステル化合物５および１３の生成に使用できる相間移動触媒の例として、臭化テトラブチルアンモニウムまたはテトラブチルアンモニウムクロリドが掲げられる。

化合物７および１５で使用できる脱離基の例として、限定的ではないが、塩素、ブロム（臭素）、ヨード、メタンスルホニル、フェニルスルホニルオキシ、ｐ−トシルオキシ、メタンスルホニルオキシ、アセトキシまたはベンゾイルオキシ等のハロゲンがカカベラレル。

中間体のグリシジル・シンナメート化合物３および４は、対応するシンナメート誘導体１または２、およびエピクロルヒドリンあるいは他の適切なエピクロルヒドリンのモル過剰量を含む置換反応によって生成できる（図３）。ジオキサンなどの適切な不活性溶媒の中で、また任意により５０℃〜１００oＣあるいは７０℃〜９５oＣの反応温度でおよそ１２時間〜１８時間、触媒の存在下でその反応を誘導する。

置換基Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、置換基Ｒ^７、Ｒ^６、Ｒ^５とそれぞれ同じである場合、一般式（ＩＩ）の化合物は、ピジリンなどの第三級アミンの存在下で、ジエステル５を生成するために、シンナミル・ハロゲン誘導体９および化学量論量のグリセロールを含む反応で調製できる。それは、保護化合物６を得るのにさらにアルキル化あるいはエステル化することが可能である（図４）。

一般式（ＩＩ’）の化合物を調製するには、変数Ｒ^４がＨであり、また変数Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３はＲ^７、Ｒ^６、Ｒ^５とそれぞれ同等であり、ジエステル化合物１６を生成するための触媒量のピリジンの存在下でメチルグリコールでシンナミル・ハロゲン誘導体９と反応させることができる。

シンナミル・ハロゲン化誘導体９または１０は、約１５−２０分間室温でジオキサン等の適切な溶媒で、塩化チオニルなどのチオニルハライドで、桂皮酸を反応させて調製できる。

ジエステル誘導体５、８、１３および１６を形成するための反応は、ピリジンの存在下で通常実行され、およそ２０−３０分間で反応可能である。反応終了後、反応混合物は重曹または他の適切な中和剤で中和される。それから、反応混合物をろ過し、最終化合物を、酢酸エチルまたは酢酸エチルとシクロヘキサンの混合物の結晶化の後、有機層を減圧乾燥させて単離する。

図５および図６は、珪皮酸１または２の異なる三置換誘導体を生成するための合成反応概略の実施例を説明する。本合成反応概略には、没食子酸メチル２１を生成するために、没食子酸２０のエステル化をまず取り入れており、保護誘導体２２を生成するのにパラ配置で選択的にベンジル化される。ハロゲン化アルキルＲＸの２つの等価物で誘導体２２のアルキル化は、ジアルキル化エステル２３を得て、その後フェノール誘導体２４を生成するのに、水素化分解する。ピリジニウム塩化クロム（ＰＣＣ）で生じるアルキルアルコールの部分酸化に続いて、水素化アルミニウムリチウム（ＬＡＨ）を用いてフェノール２４を還元した結果、アルデヒド２５を形成し、桂皮酸誘導体２６を生成するのに、ピリジン中のマロン酸およびピペリジンと反応する。

あるいは、没食子酸メチル２１は直接還元でき、そのようにして得られたメチルアルコールはＰＣＣで部分酸化してアルデヒド２７を得て、次いで桂皮酸誘導体２６を生成するためのピリジン中のマロン酸およびピペリジンと反応させる。

他の実験例では、ハロゲン化アルキルＲＸの１つの等価物で誘導体２２をアルキル化して、モノアルキル化エステル２９を得て、次いでベンジル保護基を取り除くため水素化分解する。

図６は、モノアキレル化、ジアキレル化、トリアルキル化の誘導体を生成するための合成スキームの実例を示している。合成スキームは、正当な１、２あるいは３で没食子酸メチル２１の第一印象を含んでいる。モノにアルキル化されたエステル３２、ジにアルキル化されたエステル３５およびトリにアルキル化されたエステル３８を生産するためにテトラブチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）ヨウ化物およびＫ_２ＣＯ_３がある状態でハロゲン化アルキルＲＸにそれぞれ。その後、本エステルは、アルデヒド３３、３６、３９をそれぞれ形成するためＰＣＣで部分酸化したそれぞれのアルコールを生成するため、ＬＡＨで還元され、それからアルキル化桂皮酸誘導体３４、３７、４０を生成するため、ピリジン中のマロン酸およびピペリジンに反応させる。

図７は、モノを生産する合成計画の例およびモノヒドロキシル化した、またジヒドロキシル化した珪皮酸（４４、４６および５０）を生成するための合成スキーム実施例を説明している。カフェ酸４１は、カフェ酸メチルエステル４２を生成するために、まずＭｅＯＨ中でエステル化する、その後、モノ‐アルキル化中間体４３またはジアキレル化中間体４５を生成するためＴＢＡＩおよびＫ_２ＣＯ_３の存在下で、アルキル化剤ＲＸを１ｅｑまたは２ｅｑで反応する。エステル４３および４５は、対応する酸４４および４６をそれぞれ生成するため、塩基性条件下でそれぞれ加水分解する。

ベンゼン環の３位に置換しているアルコキシ基を有するカフェ酸誘導体を生成するため、フェニル環のパラの位置に置換基を有するベンジルオキシ基を有する保護誘導体４７を得るため、エステル４２をハロゲン化ベンゾイル１ｅｑでまず保護し、さらにモノ‐アルキル誘導体４８を生成するために、ハロゲン化アルキル１ｅｑで反応させる。誘導体４８脱保護によって、フェニル環のパラの位置に置換基を有する遊離ヒドロキシル基およびフェニル環の３位に置換しているアルコキシ基を有しているエステル４９を生成する。結果として、塩基性条件下でのエステル４９の加水分解によってカルボン酸５０を生成する。

図８では、３、５−ジヒドロキシケイ皮酸のアルキル化誘導体を生成する合成スキームを例示している。例示されている合成スキームでは、３、５−ジヒドロキシケイ皮酸５１を、３、５−ジヒドロキシケイ皮酸メチルエステル５２を生成するため、ＭｅＯＨ内で最初にエステル化する。それから、モノアルキル化中間体５３またはジアルキル化中間体を生成するため、ＴＢＡＩおよびＫ_２ＣＯ_３の存在下でアルキル化剤ＲＸ１〜２ｅｑで反応させる。および、エステル５３および５５を、対応する酸５４および５６をそれぞれ生成するために塩基性条件下で、加水分解する。

同様に、ｍ−またはｐ−クマル酸のモノアルキル化誘導体は、クマル酸メチルエステルを生成するのに、ＭｅＯＨ中のクマル酸をエステル化することにより生成でき、その後、モノアルキル化中間体を生成するためにアルキル化剤で反応させる。この中間物は、対応するアルキル化された誘導体を生産するのに塩基性条件下で加水分解される。

図９〜図１１は、ジエステル５および１３の異なる保護誘導体を形成するための合成スキーマを例示している。図９を参照すると、シアル化フェノール残基を有するジエステル誘導体の合成スキームを例示しており、ＴＢＳ−エーテル６０を形成するためｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基でジエステル５の第二級ヒドロキシル基をまず保護し、次にアシル化保護誘導体６１を形成するため、ハロゲン化アシルなどのアシル化剤で遊離ヒドロキシル基でアシル化することが示されている。それから、ＴＢＳ基はアルコール６２を生成するためテトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）で取り除かれ、さらにアシル化アルキルエーテル６３を得るため、アルキル化が可能である。

図１０に例証された別の例において、ＴＢＳのエーテル６０のフェノール性水酸基は一つ以上の自由なフェノール性水酸基があるＴＢＳエーテル６１ａを形成するために部分的にアシル化される。ＴＢＡＦでのＴＢＳエーテル６１ａ脱保護の後、得られたアルコール６２ａのフェノール性ヒドロキシル基は、遊離第二級ヒドロキシル基を有する、トリチル化誘導体６２ｂを形成させるため、トリチル基−Ｃｌで選択的に保護される。および、アルコール６２ｂは部分的にアシル化されたアルキル・エーテル６３ａを得るためさらにアルキル化できる。

１１に例証されたさらに次の例において、自由なフェノール性水酸基およびジエステル５の第二アルコール基は、ハロゲン化アシルのようなアシル化剤を使用してアシル化することができる。あるいは、第２水酸基がある誘導体７０を形成するために、ジエステル５のフェノール性水酸基は、トリチル基−Ｃｌで選択的に防御されるかもしれない。またはアルキル化されて、アルコール７０のアルキル化あるいはアシル化で、誘導体７２をアシル化した。

限定的な例を示す。

［例１：グリシジルシンナメートの調製（１３０）］
脱イオン水５０ｍＬに溶解し、５０℃〜６０℃に加熱した水酸化カリウム５．６６ｇ（０．１０モル）に、珪皮酸１５ｇ（０．１０モル）を攪拌しながら加えた。結果として生じた反応スラリーを、４０℃〜５０℃で真空オーブンで乾燥させ、カリウム・シンナメート（１１０）を得た。

［カリウム・シンナメート（１１０）を生成するための別の方法］
約３０℃の珪皮酸（１１０,１５ｇ；０．１０モル）のＴＨＦ溶液（１５０ｍＬ）に、粉砕したばかりの珪皮酸ペレットの粉末５．６６ｇ（０．１０モル）を加え、カリウム・シンナメート（１１０）の白降汞を得た。この白降汞を濾過し、真空乾燥器内で４０℃〜５０℃で乾燥させた。

カリウム・シンナメート（１１０；５．３ｇ；０．０２８モル）および触媒量の臭化テトラブチルアンモニウム（０．８５ｇ；２．７ミリモル）を、撹拌機および還流アセンブリを備えた反応槽にエピクロロヒドリン５０ｇ（０．５４ｍｏｌ）（１２０）に加え、９５℃〜１０５℃で熱し、６０分間反応させ混合物を生成させた。さらに、その混合物を室温まで冷まし、クロロホルム５５ｍＬで希釈し、ろ過して、固体沈殿を取り除いた。有機物の濾液を、順次５％のＮａＨＣＯ_３（炭酸水素ナトリウム）および脱イオン水で洗浄し、結果として生じた有機層を、３０°〜４０°で減圧蒸留し、グリシジルシンナメート（１３０）を得た。

［例２：（Ｅ）−３−（シンナモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリレート（ＩＤ）の調製］
３，４−ジメトキシけい皮酸（１４０；３．８２ｇ；１８．３７モル）を、ジオキサン６０ｍＬで溶解し、還流させた（６０℃〜７０℃）。触媒量の臭化テトラブチルアンモニウム（２２．５ｍｇ；０．７ミリモル）、グリシジルシンナメート１．５ｇ（１３０）を、３，４−ジメトキシけい皮酸水溶液に順次加えた。結果として生じた混合物を１００℃〜１０５℃で１５時間〜１６時間攪拌しながら順次加熱し、減圧蒸留させて化合物（Ｉｄ）を生じさせた。^１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ３.８１（ｓ,３Ｈ）,３.８３（ｓ,３Ｈ）,４.１４（ｍ,１Ｈ）,４.２７（ｄ,４Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ）,６.４２（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.６４（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.１５（ｄｄ,１Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ,２Ｈｚ）,６.９２（ｄ,１Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ）,７.１８（ｄ,１Ｈ,Ｊ=２Ｈｚ）,６.５３（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.７０（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.３５（ｍ,３Ｈ）,７.５６（ｍ,２Ｈ）

［例３：（Ｅ）−オキシラン−２−イルメチル（３−（３，４−ジメトキシフェニル）（１７０）の調製］
脱イオン水３０ｍＬに溶解し、５０℃〜６０℃で加熱した水酸化カリウム５．０ｇ（０．２４モル）に、３，４−ジメトキシけい皮酸１．３４ｇ（０．０２４モル）（１４０）を攪拌しながら加えた。結果として生じた反応スラリーを、４０℃〜５０℃で真空オーブンで乾燥させ、３，４−ジメトキシけい皮酸（１６０）を得た。

カリウム３、４‐ジメトキシ・シンナメート（１６０；１１．８３ｇ；０．０４８モル）および触媒量の臭化テトラブチルアンモニウム０．７７２ｇ（０．００２４ミリモル）を、撹拌機および還流アセンブリを備えた反応槽にエピクロロヒドリン５５．３２ｇ（０．６０ｍｏｌ）（１２０）に加え、８５℃〜９５℃に熱し、６０分間反応させ混合物を生成した。それから混合物は、室温まで冷まし、個体沈殿物を取り除くためにろ過して、真空中で乾燥させ、化合物１７０を生じさせた。

［例４：（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル・クロリド（１８０）の調製］
反応槽に入った乾燥させた塩化チオニル（ＳＯＣｌ_２）５ｍＬに、３，４−ジメトキシけい皮酸４ｇ（１９ミリモル）（１４０）と乾燥させたＮ’Ｎ’−ジメチルホルムアミド５０μＬを少しずつ加えた。反応槽の中身を、１０分〜１５分間室温で順次混ぜ合わせ、結果的に生じた生成物を、３０℃〜４０℃で真空内乾燥させ、（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイルクロリド（１８０）を生じさせた。

［例５：（Ｅ）−２−（シンナモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリレート（Ｉｄ’）の調製］
３，４−ジメトキシ塩化シンナモイル（１８０；２．５ｇ；１１ミリモル）を、ジオキサン２０ｍＬに溶解し、触媒量の臭化テトラブチルアンモニウム（２５０ｍｇ）およびグリシジルシンナメート１．３３ｇ（６．５ミリモル）（１３０）を順次加えた。結果として生じた混合物を９０℃〜９５℃の温度で１６〜１７時間攪拌しながら順次加還流させ、減圧蒸留させて化合物（Ｉｄ’）を生じさせた。

例６：カフェオイルクロリドの調製（２００）
カフェ酸５００ｍｇを（１９０）は室温で乾燥させたジオキサン１２ｍＬに溶解し、次に、（塩化チオニル）６００μＬを約２０分間でゆっくりと混ぜ合わせ、カフェオイルクロリド（２００）を含んだ反応混合物を作った。

［例７：（２Ｅ，２’Ｅ）−２−ヒドロキシプロパン−１，３−ジイル・ビス（３−（３、４−ジヒドロキシフェニル）アクリレート（ＩＩｂ）の調製］
例６の未処理の反応混合物に、無水グリセロール２４８ｍｇ（１．３９ミリモル）と触媒量のピリジン（３００μＬ）を加えた。その混合物を３０分〜４０分間攪拌し、およびＮａＨＣＯ_３（炭酸水素ナトリウム）約１．０ｇおよびメタノール酢酸エチル（５０：５０）を加えた。さらに室温で約３０分間攪拌し、反応混合物をろ過し、溶媒を取り除いた。および、反応混合物を約６０℃で減圧乾燥させた。乾燥させた物質を、酢酸エチル５０ｍＬに溶かし、ギ酸アンモニウム１００ｍＬ、ｐＨ３．７で３回洗浄した。洗浄した有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下に置き、化合物（ＩＩｂ）を得た。それから、化合物（ＩＩｂ）を酢酸エチルおよびシクロヘキサンの混合物から再結晶させた。^１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）ｄ４.１５（ｓ,３Ｈ）,３.８３（ｓ,３Ｈ）,６.３２（ｍ,１Ｈ）,４.２７（ｄ,４Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ）,６.４２（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.６０（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,６.９５（ｄｄ,１Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ,２Ｈｚ）,６.７７（ｄ,１Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ）,７.０５（ｄ,１Ｈ,Ｊ=２Ｈｚ）,６.５３（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.７０（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.３５（ｍ,３Ｈ）,７.５６（ｍ,２Ｈ）

［例８：カリウム３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレートの調製（２００）］
水酸化カリウム水溶液１５ｍＬ（０．００２ｍＭ）に、クマル酸５ｇ（３０ミリモル）をゆっくり加え、混ぜ合わせた。得られたクマル酸カリウム（２００）は、３０℃〜４０℃で真空乾燥した。

［例９：（Ｅ）−３−（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（４−ヒドロキシフェニル）アクリレート（ＩＩｃ）の調製］
オキシラン−２−イルメチル（３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリレート１．５ｇ（５．６８ミリモル）（１７０）溶液に、乾燥させたジオキサンの３０ｍＬを溶解し、ジオキサン２０ｍＬで溶解したクマル酸カリウム２．２９ｇ（１１．３６ミリモル）と触媒量の臭化テトラブチルアンモニウム１００ｍｇを加え、得られた混合物を１６〜１８時間、１０５〜１１０℃の温度まで熱し、自エステル（ＩＩｃ）を生成した。

［例１０：（Ｅ）−３−（シンナモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アクリレート（Ｉｅ）の調製］
カフェ酸（４１；１８.０２ｇ；０.１０モル）をＴＨＦ（１８０ｍＬ）に約３０℃で攪拌溶解させて１０％溶液を得た。粉砕されたばかりの珪皮酸ペレットの粉末（４.００ｇ；０．１０モル）をカフェ酸溶液に加え、カフェ酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｃａｆｆｅａｔｅ）（２１０）の白色固体を生成し、濾過し、減圧下で乾燥させた。

６０℃〜７０℃のカフェ酸ナトリウム（２１０；７.３５ミリモル）のＤＭＳＯ溶液（２０ｍＬ）にグリシジル・シンナマート（１３０；７.３５ミリモル）を加えた。
このようにして得られた混合物を６０℃〜７５℃に加熱して２２時間〜２４時間連続攪拌し、次いで、減圧下で蒸留して化合物（Ｉｅ）を得た。^１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）８４.１６（ｓ,１Ｈ）,２.２８（ｓ,４Ｈ）,６.２９（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,６.６５（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,６.７５（ｄ,１Ｈ,Ｊ=８Ｈｚ）,６.９３（１Ｈ,ｄｄ,Ｊ=８,２Ｈｚ）,７.０３（ｄ,１Ｈ,Ｊ=２Ｈｚ）,７.３７（ｍ,１Ｈ）,７.３８（ｍ,１Ｈ）,７.５５（ｍ）,７.５９（ｄ,１Ｈ,Ｊ=１６Ｈｚ）,７.７２（ｄ,１Ｈ,Ｊ-１６Ｈｚ）.

［抗癌作用］
本発明で調製した化合物は、ヒトＢ−１６メラノーマ細胞株に対して優れたｉｎｖｉｔｒｏ抗癌作用を示した。細胞株は、１０％ＦＣＳと０．１％重炭酸ナトリウムと１２ｍＭグルタミンとで補充されたＥＭＥＭ培地内で維持した。一般的な処理手順では、培地９０μＬの９６ウェルプレートのそれぞれに１×１０^４細胞を播種した。細胞接着を可能にするために上記プレートをＣＯ_２存在下で２４時間インキュベートした。２４時間後、試験化合物を、５段階の１０倍希釈液（１：１０、１：１００、１：１０００、１：１００００、および１：１０００００）で評価した。各試験ウェルに試験化合物溶液１００μＬを加え、対照ウェルにビヒクルを含有する培地を加え、これらのプレートをさらにインキュベートした。２４時間のインキュベーション後、１０μＬの［３Ｈ］−チミジンを加えて１０μＣｉ濃度／ウェルとし、さらに２４時間インキュベートした。プレートを終了し、細胞を採取し、マクロベータ（Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ）プレートリーダーで測定した。このようにしてられた結果を表１に示す。

［表１Ｂ−１６メラノーマ細胞株での本発明の化合物のＥＣ_５０値（μＭ）］
［本発明の抗癌化合物のＭＴＴ（細胞増殖および細胞生存）分析］

ヒト正常線維芽細胞株（ＧＭ９５０３およびＧＭ８３９９）とヒト癌細胞株（ＭＣＦ-７、Ａ５４９、ＨＣＴ１１６、ＳＫＯＶ-３およびＰＣ-３）を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）に保持した。また、マウス白血病ＭＤＡＹ−Ｄ２細胞を５％ＦＢＳを補充したＰＲＭＩ１６４０に保持した。全ての培地にストレプトマイシン２０００単位/ｍＬおよびペニシリン１００μｇ/ｍＬ（いずれもユタ州ローガンのＨｙｃｌｏｎｅ社製）を補充した。５％ＣＯ_２を含む加湿空気雰囲気中で細胞を３７℃でインキュベートした。

細胞の成長および生存を３-（４,５-ジメチル-２-チアゾリル）-２,５-ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）還元アッセイを用いて計測した。ＭＴＴ試薬（ミズーリ州セントルイス、Ｓｉｇｍａ社）をｄｄＨ２０で５ｍｇ/ｍｌ（５倍希釈）に調製し、濾過滅菌し、−２０℃の暗所に保存した。

１ウェル当たりの最適細胞数を確認するために、９６ウェルプレート内の細胞密度を増やしながら調べる事前実験を行った。細胞を種々の密度で播種し、９６時間後に顕微鏡下で調べた。これらの実験および成長曲線分析に基づいて細胞株ごとに最適細胞密度を選択した。簡単に記載すると、増殖細胞を採取し、約２０００細胞を含む細胞懸濁液１００μＬを９６ウェル微量定量プレートに入れた。細胞を接着させるために２４時間培養後、５％ＦＢＣ補充培地（６０μＬ／ウェル）内にて種々濃度の試験サンプルで細胞を処理し、３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートした。ＭＴＴ補充３時間後に、スペクトラマックスプラス（ＳｐｅｃｔｒａｍａｘＰｌｕｓ）３８４プレートリーダーを用いて生成量のホルマザンの５７０ｎｍの吸光度を測定した。

成長および生存に対する新規化合物の効力を評価するために、９６ウェルプレートの補充培地に、ＧＭ９５０３（ヒト正常線維芽細胞、２.０８×１０^３細胞/ウェル）、ＧＭ８５９９（ヒト正常線維芽細胞、２.０５×１０^３細胞/ウェル）、ＨＣＴ１１６（ヒト大腸癌細胞、２.０１９×１０^３細胞/ウェル）、ＭＦＣ−７（ヒト乳癌細胞、２.１９×１０^３細胞/ウェル）、ＳＫＯＶ−３（ヒト卵巣癌細胞、２.１０×１０^３細胞/ウェル）、ＰＣ−３（ヒト前立腺癌細胞、２.０８×１０^３細胞/ウェル）、およびＭＤＡＹ−Ｄ２（マウス白血病細胞、２.５×１０^３細胞/ウェル）を播種した。播種から２４時間後に、５％ＦＢＳ（コントロールとして）を補充したＤＭＥＭまたは高濃度の化合物（ｌｉｂ）、（Ｉｅ）および（Ｉｄ）を補充したＤＭＥＭで細胞を処理した。７２時間培養した後、細胞の成長と生存を測定した。各化合物を３回ずつ試験した。表２〜表４に記載されているデータは、培地対照と比較された生細胞の平均値である。

表２Ｉｎ-Ｖｉｔｒｏでの癌細胞の阻害、比較ＥＣ_５０（μΜ）

表３Ｉｎ-Ｖｉｔｒｏでの癌細胞の阻害、比較ＩＣ_５０μＭ

表４Ｉｎ-Ｖｉｔｒｏでのヒト正常線維芽細胞における本発明の化合物の比較毒性（ＩＣ_５０,μＭ）

表４に示されるように、ヒト正常線維芽細胞株では、タキソールは化合物（ＩＩｂ）、（Ｉｅ）、および（Ｉｄ）よりも毒性が高い。

抗癌化合物の治療指数は、化合物の正常細胞における毒性と癌細胞における増殖抑制効果を比較するものであり、抗癌化合物の安全性の目安である。特定の抗癌化合物の、正常ヒト細胞株におけるＩＣ５０値とヒト癌細胞株におけるＩＣ_５０値の比率は、当該抗癌化合物の安全性および選択性に関する比較情報となる。表５記載の治療指数値は、パクリタクセル（承認抗癌剤）と比較して化合物（Ｉｂ）、（Ｉｅ）、および（Ｉｄ）は、治療指数が大きく、したがって毒性が低いことを示している。適切な抗癌治療は、抗腫瘍細胞毒性だけでなく、健康な正常細胞に対して許容毒性であることも必須であるので、上記結果は有意義である。

表５本発明の抗癌化合物の治療（安全）指数*

［作用機序］
ヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６を化合物ＩＩｂ、Ｉｅ、Ｉｄで処理し、細胞死の機序を確認するために一定期間にわたって観察した。実験は以下のように実施した。

ＨＣＴ１１６細胞を播種し、各化合物で処理した。各時間点で、生きた細胞を６３Ｘ（ニュートラル）で撮像した後、固定した。時間点は、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間であった。

化合物で処置された細胞は、アポトーシス中に通常見られる特徴的な膜ブレブ形成形態を示す（図１２〜図１５参照）。化合物ＩＩｂが最も攻撃的であり、化合物Ｉｅと化合物Ｉｄがこれに続くように見える。４時間で各ウェル内の少数の細胞が膜ブレブ形成を呈し、６時間点および８時間点において初期細胞集団の多くがアポトーシスに陥いっているように見える。１０時間点および１２時間点の生細胞は、２時間点および４時間点と比較して著しく少ないが、１６時間点では細胞集団が若干増加しているように見える。これは、この時間点における細胞集団倍加によって引き起こされた可能性がある。

本願に開示された本発明の実施形態は、本発明の基本原理を例示したものであると理解されるべきである。採用され得る他の変更形態も本発明の範囲内である。したがって、限定的にではなく一例として、本発明の代替構成を本明細書の教示に従って利用することもできる。したがって、本発明は、図示および説明されている通りの態様に限定されるものではない。

本願で引用されている特許、特許出願、および刊行物はいずれも参照によって、あたかも個々の特許、特許出願、および刊行物がそれぞれ表記されているかのように、その全体が本願に実際に組み込まれているものとする。

［参考文献］

Claims

式（Ｉ）または式（Ｉ’）
［前記式（Ｉ）または式（Ｉ’）中、
Ｒ^１およびＲ^２は、いずれもＯＨ、またはいずれもアルコキシであり、
Ｒ^３は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、
Ｒ ^４は、ＯＨであり、
Ｒ^５はＨであり、および
Ｒ^６は、Ｈまたはアルコキシである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩であって、
前記化合物は、
（Ｅ）−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）−２−ヒドロキシプロピル−３−（４−メトキシフェニル）アクリレートではない化合物。
前記Ｒ^３がＨである、請求項１に記載の化合物。
前記化合物は、以下の式
で示される化合物の少なくとも１つである、請求項１に記載の化合物。
製薬上許容される希釈剤あるいはキャリアと、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または製薬上許容されるその塩の少なくとも１つとを含む医薬組成物。
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または製薬上許容されるその塩を含む薬剤。
式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）
［前記式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）中、
Ｒ ^１およびＲ ^２は、いずれもＯＨ、またはいずれもアルコキシであり、
Ｒ ^３、Ｒ ^５、Ｒ ^６およびＲ ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、ならびに
Ｒ ^４は、ＯＨである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩を含む薬剤であって、
前記化合物は、
（Ｅ）−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）−２−ヒドロキシプロピル−３−（４−メトキシフェニル）アクリレートではなく、且つＲ ^６がＯＨである場合にはＲ ^７がＯＨである、薬剤。
被験者の癌を治療するための薬剤を製造するための、式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）
［前記式（ＩＩ）または式（ＩＩ’）中、
Ｒ^１およびＲ^２は、いずれもＯＨ、またはいずれもアルコキシであり、
Ｒ ^３、Ｒ ^５、Ｒ ^６およびＲ ^７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、またはアルキルカルボニルオキシであり、ならびに
Ｒ ^４は、ＯＨである］
で示される化合物または製薬上許容されるその塩の使用であって、
前記化合物は、
（Ｅ）−３−（（（Ｅ）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）アクリロイル）オキシ）−２−ヒドロキシプロピル−３−（４−メトキシフェニル）アクリレートではなく、且つＲ ^６がＯＨである場合にはＲ ^７がＯＨである、使用。
前記化合物が、以下の式
で示される化合物の少なくとも１つである、請求項６に記載の薬剤。
前記化合物が、以下の式
で示される化合物の少なくとも１つである、請求項７に記載の使用。
被験者の癌の治療をするための、請求項５または６に記載の薬剤。
被験者の癌の治療をするための薬剤を製造するための、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物または製薬上許容されるその塩の使用。
アポトーシスによって癌細胞を死滅させるための、請求項５または６に記載の薬剤。
前記化合物は、単離された形態である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。