MXPA01006060A - Retinamidas del acido 7-aril-6(z)heptatrenoico, como compuestos que inducen la aptosis y su uso como agentes anticancerigenos - Google Patents

Abstract

Nuevos compuestos retinoideos trienoicos, de fórmula en donde R1 - R7 son como se ha definido en la especificación, poseen actividad apoptótica, y son de utilidad para la prevención y tratamiento del cáncer.

Description

RETINAMIDAS DEL ACIDO 7 -ARIL-6 (Z ) HEPTATRIENOICO , COMO COMPUESTOS QUE INDUCEN LA APTOSIS Y SU USO COMO AGENTES ANTICANCERÍGENOS Descripción de la Invención Los ácidos retinoicos (RA) s modulan el crecimiento y diferenciación de las células normales y malignas i n vi tro e i n vi vo y han sido ampliamente estudiados para su potencial utilización como agentes terapéuticos y preventivos de una gran variedad de dolencias malignas.

El RA todo-trans y el 13-cis RA, los cuales actúan mediante los receptores nucleares del ácido retinoico (RAR) , a, ß y ?, son conocidos por ocasionar la diferenciación de ciertas células tumorales in vitro. El 9-cis RA y sus análogos, los cuales se unen a un grupo de receptores conocidos como receptores a, ß y ?, del ácido retinoico X (RXR) , asi como los receptores , ß y ?, de RAR, han sido mostrados como que causan la regresión del tumor. Se ha demostrado que la capacidad del RA todo trans y el RA 13-cis para inducir la apoptosis, es muy limitada pero, sin embargo, la 4-hidroxifenilamida del RA todo-trans (4-HPR) se ha informado que inhibe la formación de tumores y el crecimiento de tumores via apoptosis [JBC 271, 22441 REF: 129861 (1996) A.N. Fanjul y col.; BBRC 224, 837 (1996) A. Dipietrantonio y col.; Cáncer Res. 55, 853 (1995) M.Ponzoni, y col.]. La apoptosis, o muerte celular programada, es una de las formas más corrientes de muerte de células eucariotas, y se caracteriza por la pérdida de contacto con las células vecinas, condensación de la cromatina, formación de ampollas en la membrana, condensación del citoplasma y activación de una endonucleasa endógena que genera los característicos fragmentos de ADN (uno de los puntos de referencia de la apoptosis celular) y finalmente generación de cuerpos apoptóticos que son fagocitados por otras células. La apoptosis es un proceso normal y está involucrado en la construcción, desarrollo y mantenimiento de los tejidos durante el desarrollo y a través de la vida. La apoptosis es también un mecanismo de defensa importante contra la infección vírica y contra la aparición súbita de un cáncer. El desarrollo de un cáncer parece que involucra tanto un exceso de proliferación celular como la resistencia a un estimulo normal de la apoptosis. Se ha descubierto un cierto número de promotores de tumores que inducen resistencia a la apoptosis [FASEB Journal 8, 864 (1994) S.C. Wright y col.] Mientras que los ácidos retinoicos se ha encontrado que son eficaces para el tratamiento de carcinomas, muchos ácido retinoicos y otros compuestos retinoideos son muy tóxicos, producen efectos perjudiciales adversos tales como la hipervitaminosis A, lo cual limita su empleo en la prevención y tratamiento del cáncer. En el tratamiento del cáncer de mama la situación es todavia más complicada por las células cancerosas que son capaces de cambiar su sensibilidad a los compuestos empleados en el tratamiento. Las células que inicialmente son positivas para el receptor de estrógeno (ER+) pueden convertirse en negativas para el receptor de estrógeno (ER-) después de terapias anti-es trógenas . Los ácidos retinoicos y los retinoides, como la mayoria de agentes quimioterapéuticos, son activos solamente contra las células ER+ del carcinoma de mama, y no son activos contra las células ER- del carcinoma de mama que son negativas al receptor de estrógeno (Can Res 50, 1997 (1990) J.A. Fontana, y col.; Mol Cell Endocrinol 91, 149 (1993) B. Van der Burg, y col.] Asi, los compuestos que presentan actividad tanto contra las células ER- como contra las ER+ del carcinoma de mama, son muy importantes para el tratamiento del cáncer de mama . Una medida preliminar para la posible actividad terapéutica antitumor/anticáncer es la inducción de la apoptosis, o muerte programada de las células, en células de carcinoma inmortalizadas. Un cierto número de agentes quimioterapéuticos existentes (por ejemplo el SFU, Adriamycin, Taxol) asi como la terapia de radiaciones, inducen la apoptosis en las células de carcinomas humanos in vitro [Cáncer 79, 12 (1997) K.Sugamura y col.; Cáncer Lett. 93, 147 (1995) S.M. Tu y col.; Ann NY Acad. Sci 784, 550 (1996) R.M. Gangemi, y col] . Otra medida de la actividad antitumoral o anticancerigena es la inhibición del crecimiento celular, o interrupción del ciclo celular, que previene la división celular, aunque no necesariamente la muerte de las células. Se ha descubierto que una amida especifica del ácido retinoico, la todo-trans 4- idroxifenil retinamida (4-HPR), es capaz de inhibir el crecimiento celular e "inducir la apoptosis tanto en las células ER+ como en las ER- del carcinoma de mama [Cáncer Lett. 107, 65 (1996) T.T.Y. Wang y col.,]. Este compuesto es también conocido por inhibir el crecimiento celular e inducir la apoptosis en muchos otros tipos de células tumorales, incluyendo las células de carcinomas de los pulmones y malignidades hematopoyéticas. La 4-HPR es efectiva para la inducción de apoptosis en células que son resistentes a los retinoides que activan los RARs eficientemente. [Carcinogenesis 16, 2477 (1995) M.S. Sheikh, y col.; Cáncer Res. 53, 6036 (1993) D. Delia y col]. La 4-HPR es capaz de lograr la regresión de tumores in vivo [Clin. Cáncer Res. 4, 1345 (1998) C.P. Zou y col.; Otolaryngol Head Neck Surg 118, 464 (1998) R.L. Scheri y col.; Cáncer Lett 47, 187 (1989) K. Dowlatsha i , y col.), y actúa como un potente agente quimiopreventivo contra un cierto número de maliqnidades [Cáncer Res. 39, 1339 (1979) R.C. Moon, y col.; Cáncer Res. 54, 2032S (1994) A, Costa, y col.; Anticancer Res. 17, 499 (1997) L.N. Chan, y col.]. In vitro, la 4-HPR parece que induce la apoptosis y ocasiona la inhibición del crecimiento celular tanto en las lineas celulares del carcinoma de mama ER+ como ER- . La mayor toxicidad observada en estudios clínicos con la 4-HPR fue un deterioro de la visión nocturna. Se ha descubierto que los ácidos 6-cis trienoicos aromáticos inducen la apoptosis en células de carcinomas y que tienen una baja toxicidad (W096/20913) . Sin embargo, se ha comprobado que dicho compuesto es inactivo contra las células ER- y ER+ de carcinoma en las que no se induce la apoptosis (ácido (2E,4E,6Z)-7-(3,5-bis (trifluorometil) fenil) -3,7-dimetil-2 , 4, 6-heptatrienoico] . Por lo tanto, dichos compuestos parecerían ser de poco interés. Sorprendentemente, las retinamidas del ácido 7-aril-6-cis heptatrienoico de esta invención, son efectivas tanto contra las células de carcinomas de mama ER+ como contra las ER- in vitro, reducen el número de tumores en el modelo de tumor de la rata NMU; y no presentan los efectos tóxicos o adversos generalmente asociados con los retinoides. En un aspecto, la invención comprende los compuestos de fórmula I Formula I en donde R1 y R2 son independientemente entre si, hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxilo o trihalametilo, R3 es hidrógeno o alquilo; y R4 es hidrógeno excepto cuando R3 es alquilo entonces R4 puede ser alquilo; R5' R6 y R8 y R9 son independientemente entre si, halógeno, hidrógeno, hidroxilo, alquilo o alquiloxilo; y R7 es hidrógeno o alquilo; los cuales están libres de isómeros 6-trans . Estos compuestos de la retinamida del ácido 6Z (por ejemplo 7-aril- 6-cis) eptatrienoico, son efectivos para la inducción de la apoptosis en células premalignas y malignas. Los compuestos inhiben la proliferación de células derivadas de tumores sólidos cancerosos, especialmente de células no pequeñas de carcinomas de pulmón, carcinoma rectal, y carcinoma de mama, por lo que son de utilidad para el tratamiento del cáncer que forma tumores sólidos, especialmente carcinoma de pulmón de células no pequeñas, carcinoma colorectal y carcinoma de mama. Los compuestos descritos aqui son particularmente efectivos para la inducción de apoptosis en células ER-del carcinoma de mama, asi como también en las células ER+ . Además, los compuestos de la 6-cis retinamida de esta invención son efectivos para la inducción de apoptosis en células de carcinoma que una vez fueron ER+ y se han convertido en ER- . Finalmente, es.tos compuestos son efectivos a niveles de dosificación lo bastante bajos para no tener efectos secundarios nocivos o tóxicos. Aunque el significado preferido de R7 es hidrógeno, en alguno de los compuestos de esta invención, R7 puede ser alquilo como por ejemplo, metilo. De manera similar, aunque los compuestos preferidos son los de la fórmula II que figura más adelante, en donde las posiciones ocupadas por R5, R6 y R8 y R9 en la fórmula I son todas hidrógeno, en algún compuesto de esta invención, alguno o más de estos substituyentes puede ser halógeno o hidroxilo o alquilo o alcoxilo, en cualquier combinación. Compuestos de particular interés son los compuestos de fórmula II en donde R1, R2, R3, y R4 tienen los mismos significados de más arriba. Otros compuestos de interés incluyen compuestos de fórmula I en donde R3 es alquilo tal como metilo, y R4 es hidrógeno, ó R3 y R4 son alquilo tal como metilo, ó R3 y R4 son hidrógeno. También son de interés los compuestos de fórmula I en donde R1 y R2 son independientemente entre si, hidrógeno, halógeno tal como bromo, alquilo tal como metilo, alcoxilo tal como metoxilo o trihalometilo especialmente trifluorometilo. Son también parte de este invento los compuestos de fórmula II en donde R3 es alquilo tal como el metilo, y R4 es hidrógeno ó R3 y R4 son alquilo tal como el metilo, o R3 y R4 son hidrógeno, y compuestos de fórmula II en donde R1 y R2 son independientemente entre si, hidrógeno, halógeno tal como el bromo, alquilo tal como el metilo, alcoxilo tal como el metoxilo, o trihalametilo, especialmente trifluorometilo. En cualquiera de las composiciones de esta invención, R1 y R2 pueden ser iguales o diferentes. Asi, en cualquiera de los compuestos descritos más abajo (compuestos de fórmula I: i, ii ó iii y compuestos de fórmula II i, ii ó iii), R1 y R2, son de preferencia iguales, pero pueden también ser diferentes. Asi en compuestos en donde R1 y R2 son halógeno, pueden ser los mismos halógenos o halógenos diferentes. De manera similar, R1 y R2 pueden también ser alquilo o alcoxilos iguales o diferentes. Además, R1 y R2 pueden ser miembros de diferentes grupos, es decir, R1 puede ser un halógeno mientras R2 es un alquilo, ó R1 puede ser un alquilo mientras R2 es hidrógeno, etcétera. Son de interés, los compuestos de fórmula I en donde i) R3 es alquilo tal como metilo y R4 es hidrógeno; ó ii) R3 y R4 son hidrógeno; ó iii) R3 y R4 son ambos alquilo tal como metilo. En particular, los compuestos de i, ii, ó iii, son de interés cuando R1 y R2 son trifluorometilo. En otros compuestos de i, ii ó iii, R1 y R2 pueden ser también halógeno tal como bromo, alquilo tal como metilo, alcoxilo tal como metoxilo, o hidrógeno. En los compuestos más preferidos, R3 es alquilo tal como metilo, y R4 es hidrógeno. Asi por ejemplo, compuestos en donde R3 es alquilo y R4 es hidrógeno, y R1 y R2 son trifluorometilo, o en donde R3 y R4 son ambos hidrógeno y R1 y R2 son halógeno, ó R3 y R4 son hidrógeno y R1 y R2 son metoxilo, son parte de esta invención, asi como también los otros compuestos que tienen las características descritas en la primera sección de este parágrafo, por ejemplo los que representan un compuesto de i ó ii ó iii, en donde R1 y R2 son halógeno, alquilo, alcoxilo o hidrógeno, etc., como se describe más arriba. Además son de interés, los compuestos de fórmula II en donde i) R3 es alquilo tal como metilo, y R4 es hidrógeno; ó ii) R3 y R4 son hidrógeno; ó iii) R3 y R4 son ambos alquilo tal como metilo. En particular, estos compuestos de i, ii ó iii son de interés cuando R1 y R2 son trifluorometilo. En otros compuestos de i, ii ó iii, R1 y R2 pueden ser también halógeno tal como bromo, alquilo tal como metilo, alcoxilo tal como metoxilo, o hidrógeno. En los compuestos más preferidos, R3 es alquilo tal como metilo, y R4 es hidrógeno. Asi, por ejemplo, los compuestos en donde R3 y R4 son hidrógeno y R1 y R2 son bromo, ó R3 y R4 son alquilo y R1 y R2 son halógeno, ó R3 es alquilo y R4 es hidrógeno y R1 y R2 son metoxilo, son parte de esta invención, asi como también otros componentes que tienen las características descritas en la primera sección de esta parágrafo, por ejemplo los que representan un compuesto de i ó ii ó iii en donde R1 y R2 son halógeno, alquilo, alcoxilo o hidrógeno, etc., como se ha descrito más arriba. Asi por ejemplo, los compuestos de esta invención incluyen compuestos de fórmula II en donde R3 es metilo y R4 es hidrógeno. En uno de dichos compuestos, R1 y R2 son trifluorometilo. Un ejemplo de dichos compuestos es la N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) -7- [3, 5-bis trifluoro-metil ) fenil ] -3, 7-dimetil-2, 4 , 6-heptatrienamida, un compuesto particularmente preferido. En otro de dichos compuestos R1 y R2 son bromo. Un ejemplo de dichos compuestos es la N- ( 4-hidroxi-fenil ) - (2E, 4E, 6Z ) -7- [ 3 , 5-dibromofenil ) -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida . Todavia, en otro de dichos compuestos, R1 y R2 son metilo. Un ejemplo de dichos compuestos es la N-(4-hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3, 5-dibromofenil ) -3,7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida . En otro de dichos compuestos R1 y R2 son metoxilo. Un ejemplo de dichos compuestos es la N ( 4-hidroxifenil ) - ( 2E , 4E, 6Z ) -7- [ 3 , 5-dimetoxifenil ) -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida . Todavia en otro de dichos compuestos, R1 y R2 son hidrógeno. Un ejemplo de dichos compuestos es la N-(4-hidroxi fenil) - (2E, 4E, 6Z) -7-fenil-3, 7 dimeti 1-2, 4,6-heptatrienamida . También están incluidos en esta invención los compuestos de fórmula II en donde R3 y R4 son hidrógeno. En uno dedichos compuestos, R1 y R2 son trifluorometilo. Un ejemplo de dichos compuestos es la N-(4-hidroxifenil) -(2E,4E, 6Z)-7-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil-2 , 4, 6-heptatrienamida . En otro de dichos compuestos, R1 y R2 son bromo. Todavia en otro de dichos compuestos R1 y R2 son metilo. En otro de dichos compuestos, R1 y R2 son metoxilo. Todavia en otro de dichos compuestos, R1 y R2 son hidrógeno. También están incluidos en esta invención los compuestos de fórmula II en donde R3 y R4 son metilo. En uno de estos compuestos R1 y R2 son trifluorometilo. Un ejemplo de estos compuestos es la N- ( 4-hidroxifenil ) -(2E, 4E, 6Z) -7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil {3, 6, 7-trimetil-2, 4, 6-heptatrienamida . En otro de dichos compuestos, R1 y R2 son bromo. Todavia en otros compuestos, R1 y R2 son metilo. En otro de dichos compuestos R1 y R2 son metoxilo. Todavia en otro de dichos compuestos, R1 y R2 son hidrógeno. Como se emplea aqui, el término "alquilo" significa un grupo hidrocarburo saturado que contiene hasta 7 átomos de carbono. El término "alcoxilo" se refiere análogamente a un compuesto que tiene hasta 7 átomos de carbono unidos mediante un átomo de oxigeno. Los grupos alquilo y alcoxilo pueden ser de cadena lineal o de cadena ramificada, tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo y t-butilo, o metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo y t-butoxilo. Los grupos trihalometilo son grupos metilo substituidos con tres halógenos, los cuales de preferencia son los mismos pero pueden ser diferentes. El trifluorometilo fluorometilo es un ejemplo de grupo trihalometilo. El término "halo" significa flúor, cloro, bromo o yodo, y el término halógeno significa flúor, cloro, bromo o yodo. Estos compuestos son efectivos para la inhibición o prevención del crecimiento de tumores en células premalignas y malignas, y son de utilidad para el tratamiento de carcinomas que forman tumores sólidos, especialmente del colon, próstata, o cérvix, carcinoma del pulmón de células no pequeñas, carcinoma del pulmón de células pequeñas, carcinoma de cabeza y cuello y carcinoma de mama tanto si las células implicadas son ER-, como si son ER+ . Estos compuestos son especialmente de utilidad en el carcinoma de mama, colorectal, y carcinoma de pulmón de células no pequeñas. Los compuestos de esta invención pueden ser empleados para tratar dichos tumores, para retardar el desarrollo de dichos tumores, y para prevenir el aumento del número de tumores. La actividad terapéutica anticáncer de los compuestos de esta invención puede demostrarse mediante varios ensayos estándar in vi tro . Estos ensayos descritos más adelante y en los ejemplos, son conocidos por indicar la actividad anticáncer y son ensayos utilizados en la terapéutica del cáncer. Los compuestos de esta invención tienen la estructura representada en la fórmula I, y la actividad anticáncer se determina mediante un ensayo estándar, especialmente los ensayos para la apoptosis. Los compuestos son particularmente efectivos para inducir la apoptosis en las células de carcinoma, causando la muerte de la célula. Asi pues, un compuesto tiene la actividad deseada si el compuesto causa la muerte de las células del carcinoma cuando las células de carcinoma utilizadas en los ensayos (por ejemplo, de mama, pulmón, colorectal, etc.) pueden obtenerse fácilmente en los depósitos celulares tales como la American Type Culture Collection (ATCC) ó pueden ser aisladas por personas expertas a partir de pacientes de cáncer. El tipo de cáncer contra el cual el compuesto es mas activo, se determinara por el tipo de célula empleada en los ensayos. Por ejemplo un compuesto que afecta las células de carcinoma de mama ER-, seria de utilidad para tratar el carcinoma de mama, especialmente en células ER+ revertidas.

Las células de carcinoma desarrolladas en un cultivo, pueden ser incubadas con un compuesto especifico y los cambios de viabilidad de las células pueden determinarse por ejemplo, mediante tinturas que tiñen selectivamente las células muertas, o mediante la medida de la densidad óptica (O.D.) . Si han muerto más del 10% de células, el compuesto es considerado como activo en la inducción de la apoptosis. Los compuestos pueden no causar directamente la muerte de las células (toxicidad celular) pero pueden modular ciertos fenómenos intra o extracelulares que ocasionan la apoptosis. La actividad anticáncer de los compuestos de esta invención puede también determinarse mediante ensayos que muestran los efectos de los compuestos sobre el crecimiento y diferenciación celular. La inhibición del crecimiento celular puede determinarse añadiendo el compuesto en cuestión a las células en cultivo del carcinoma con colorantes o precursores radioactivos, y determinando mediante contaje celular microscópico, contaje del centelleo, o medición de la O.D., si el número de células ha aumentado durante el periodo de incubación. Si el número de células no ha aumentado, el crecimiento ha sido inhibido y se considera que el compuesto tiene actividad terapéutica.

De forma similar, la proporción de células que se han diferenciado después de la adición de un compuesto de ensayo, puede determinarse mediante métodos ya conocidos (por ejemplo mediante la medición del estallido oxidante de las células HL-60, un indicador de la diferenciación, mediante NBT) . Si el 10% o más de las células se han diferenciado, entonces el compuesto se considera que tiene actividad terapéutica. Ejemplos de ensayos específicos están descritos en el ejemplo IIA. Los ensayos in vi vo son también de utilidad para demostrar la actividad anticáncer. Los compuestos de esta invención pueden actuar para reducir el tamaño y/o el número de tumores en animales de laboratorio tales como ratones, en los cuales se ha inducido el crecimiento de un tumor. El tipo de tumor indica el tipo de cáncer contra el cual se espera la actividad primaria. Los tumores específicos pueden ser inducidos perturbando tejidos específicos con carcinógenos, o mediante la inyección de tipos específicos de células de carcinoma. Un ejemplo de esta clase se describe en el ejemplo IIB. Los compuestos de la presente invención muestran una significativa actividad profiláctica y terapéutica cuando se evalúan contra tumores mamarios (de pecho) inducidos con NMU, en ratas. Sorprendentemente las dosis y regímenes que son efectivos están libres de toxicidad significativa. Los compuestos muestran también eficacia en la reducción del número de tumores durante el curso del experimento (es decir, quimioprevención) a dosis y regímenes no asociados con una toxicidad. Además, los compuestos son terapéuticamente activosi es decir, son capaces de efectuar la regresión de tumores primarios establecidos primeramente. Los compuestos son también preventivos, es decir, son capaces de prevenir significativamente la formación de nuevos tumores. Los retinoides que tiene estas actividades terapéuticas y preventivas no han sido observados anteriormente en este modelo animal experimental. Asi pues, los compuestos de la invención son terapéuticamente activos, produciendo la regresión o remisión de tumores sólidos, especialmente aquellos tumores asociados con carcinomas tales como el de mama (ER+ y especialmente ER-), de pulmón y colorectal. De acuerdo con la presente invención, el tratamiento de cánceres se efectúa mediante la administración de un compuesto de la invención sistémicamente a un paciente en una cantidad efectiva para tratar el cáncer. En particular, la invención incluye un método de tratamiento del cáncer de mama suministrando a un individuo con cáncer de mama una cantidad de un compuesto de esta invención, efectivo para inhibir el crecimiento del cáncer o de las células del carcinoma. Mediante la inhibición del crecimiento de las células del cáncer (carcinoma) se quiere significar la interrupción del crecimiento, lo cual causa la apoptosis, o causando la diferenciación, o de otra manera, cambiando la naturaleza de la célula para convertirla en inofensiva. El compuesto puede también ser administrado profilácticamente, por ejemplo a una persona con riesgo de cáncer, o a una persona que ya ha sufrido un tratamiento efectivo, generalmente con una dosificación inferior a la del tratamiento. La cantidad de compuesto empleado depende del tipo de cáncer, de la cantidad y tamaño de los tumores y de los requerimientos del paciente. En general una dosificación diaria de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal, de preferencia aproximadamente 20 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, es un margen básico de ayuda, que puede variarse por los expertos prácticos en dependencia de las características y requerimientos del paciente y de su condición. El tratamiento se efectúa tipicamente durante un periodo de aproximadamente tres meses, pero esto depende de la condición del paciente y del dictamen del experto. En la administración profiláctica, la duración de la administración depende nuevamente de la condición del paciente y del plan del experto, pero generalmente continuará durante un periodo de tiempo mayor de tres meses. Para los tratamientos indicados más arriba, el compuesto de la invención se administra sistémicamente como una composición que contiene el compuesto de la invención junto con un soporte farmacéuticamente aceptable compatible con dichos compuestos. En la preparación de dicha composición puede emplearse cualquier soporte convencional farmacéuticamente aceptable. Generalmente la forma de dosificación unitaria preferida son los comprimidos o cápsulas, los cuales pueden ser administrados una vez o dos veces diariamente en dependencia del peso y tamaño del paciente. Los compuestos de esta invención pueden ser administrados como tratamiento único o pueden emplearse en conjunción con otros tratamientos químicos o bioquímicos o con radiaciones o cirugia. De acuerdo con la invención, un compuesto de la invención puede administrarse en forma de sus esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptable o profármacos. Puede emplearse cualquier éster hidrolizable farmacéuticamente aceptable en las composiciones y métodos de esta invención. Entre los esteres están los esteres aromáticos como el de benzoilo, por ejemplo, en donde R7 es C(0) fenilo, o esteres de alcanoilo, por ejemplo, en donde R7 es C(0) alquilo, en donde alquilo puede ser metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo y similares. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden prepararse en cualquier forma convencional incluyendo (a) una forma sólida para la administración oral o como supositorio tal como comprimidos, cápsulas, pildoras, polvos, granulados y similares; (b) una forma en solución o suspensión estéril, tipicamente acuosa para administración intravenosa o parenteral, y (c) preparaciones para la administración tópica tales como soluciones, suspensiones, ungüentos, cremas, geles, polvos micronizados, aerosoles y similares. Las composiciones farmacéuticas pueden ser esterilizadas y/o pueden contener coadyuvantes tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, sales para variar la presión osmótica, y/o tampones . Los compuestos de la invención son especialmente de utilidad en las modalidades orales farmacéuticamente aceptables. Estas composiciones farmacéuticas contienen uno o más compuestos de la invención o sus sales farmacéuticamente aceptables y sus esteres hidrolizables farmacéuticamente aceptables en asociación con un material de soporte farmacéuticamente aceptable. Puede emplearse cualquier material de soporte convencional. El material de soporte puede s er un material de soporte inerte orgánico o inorgánico adecuado para la administración oral. Son soportes adecuados el agua, gelatina, goma arábiga, lactosa, almidón. estearato de magnesio, talco, aceites vegetales, polialquilenglicoles, vaselina filante y similares. Además, las preparaciones farmacéuticas pueden contener otros agentes farmacéuticamente activos, de preferencia un retinoide con actividad RARa . Aditivos adicionales tales como agentes aromatizantes, conservantes, estabilizantes, agentes emulsionantes, tampones y similares pueden ser añadidos de acuerdo con las prácticas aceptadas en las composiciones farmacéuticas. Las preparaciones farmacéuticas pueden efectuarse en una forma convencional de dosificación oral, incluyendo una forma sólida para la administración oral tal como comprimidos, cápsulas, pildoras, polvos, granulados y similares. Una forma preferida, de dosificación oral comprende los comprimidos, cápsulas de gelatina dura o blanda, metilcelulosa u otro material adecuado fácilmente soluble en el tracto digestivo. Las dosificaciones por via oral contempladas de acuerdo con la presente invención variarán de acuerdo con las necesidades del paciente individual determinadas por el médico que las prescribe. Los compuestos de esta invención pueden prepararse por una persona experta, exentos de isómeros 6-trans, empleando materiales de partida, reactivos y métodos estándar, con la guia descrita más adelante en el ej emplo 1. Esquema 1 Un derivado halogenado de fenilo (de preferencia bromurado o yodurado) , en donde R1 y R2 son como en la fórmula I (1) se hace reaccionar con un acetileno tal como el trimetilsililacetileno (a) empleando condiciones estándar para una reacción de copulación (por ejemplo, yoduro de cobre, PPh3, Pd (PPh3) 2C12, en diisopropilamina) para substituir el bromo con acetileno de preferencia de 0 grados centígrados a temperatura ambiente (2) . El grupo sililo se hidroliza con una base fuerte tal como el hidróxido de potasio y una mezcla de disolventes, de preferencia un éter, éter dietilico, o tetrahidrofurano y un disolvente acuoso adecuado tal como un alcohol inferior (de preferencia metanol) y agua (b) . El acetileno resultante (3) se hace reaccionar con una base fuerte tal como el litio bis (trimetilsilil) amida y C02 (c) para obtener el ácido carboxilico (4) . El ácido se esterifica con un agente esterificante estándar (d) , por ejemplo el diazometano puede emplearse para obtener el éster metilico (5) . El enlace triple se reduce a continuación a un doble enlace cis en condiciones estándar para tales reducciones, por ejemplo con H2 mediante el catalizador de Lindiar (e), para obtener el compuesto (Z) ó cis (6) .

Esquema 2 En el esquema 2, se efectúan los pasos (a) y (b) como se ha descrito en el esquema 1. El acetileno resultante (3) se hace reaccionar con una base fuerte tal como el n-butil litio y cloroformiato de metilo en un disolvente aprótico tal como el tetrahidrofurano (c) para obtener el éster (4) . El doble enlace cis tri-substituido se obtiene haciendo reaccionar (4) con dimetil cobre litio en un disolvente aprótico tal como el tetrahidrofurano y el acetato de etilo, de preferencia a aproximadamente -70 grados C (d) para obtener el compuesto (Z) o cis (5) . Es quema 3 Un derivado de benzaldehido en donde R1 y R2 son como en la fórmula I (1) se hace reaccionar con un fosfonoacetato tal como el trietil-2-yodo-fos fonacetato empleando condiciones estándar para una reacción de Horner empleando una base tal como el hidruro de sodio en dimetoxietano de preferencia a -78 a 0 grados C. Los productos de esta reacción se hacen reaccionar con litio bis (trimetilsilil ) amida en tetrahidrofurano (a) para la conversión completa del intermediario yoduro de vinilo en el acetileno (2) . El doble enlace cis trisubstituido, se genera haciendo reaccionar (2) con dimetil cobre litio en tetrahidrofurano de preferencia a aproximadamente -70 grados C (b) para obtener el compuesto (Z) ó cis (3) . Esquema 4 Un derivado de acetofenona en donde R1 y R2 son como en la fórmula I (1), se hace reaccionar con un reactivo de Horner (a) tal como el 2-fosfonoalcanoato de trialquilo, por ejemplo, el fosfonoacetato de trietilo, en donde R4 es H, ó 2-fosfonopropionato de trietilo, en donde R4 es CH3, empleando las condiciones estándar de una reacción de Horner (por ejemplo, t-butóxido de potasio), para obtener el éster (2) como una mezcla de los isómeros E/Z. Los isómeros resultantes E y Z (trans y cis) se separan a continuación mediante métodos estándar.

Esquema 5 Un derivado de acetofenona, en donde R1 y R2 son como en la fórmula I (1) , se hace reaccionar con (trimetilsilil) acetato de etilo (a) empleando las condiciones estándar de una reacción Peterson de olefinación, empleando una base fuerte tal como el litio diisopropilamida, ó un alquillitio en disolventes éter apróticos, tal como el THF ó éter, para obtener el éster (2), como una mezcla de isómeros E/Z. Los isómeros E y Z resultantes se separan a continuación mediante métodos estándar. Los esquemas 4 y 5 son directos, pero el producto es una mezcla de isómeros que hay que separar, mientras que los otros esquemas producen solamente el isómero (Z) cis Esquema 6 El éster metilico o etílico del ácido (Z) propenoico de los esquemas anteriores (1) se reduce al correspondiente alcohol (2) en condiciones estándar empleando un agente para la reducción de esteres a alcoholes, por ejemplo el hidruro de litio aluminio o hidruro de diisobutilaluminio (a) en un disolvente adecuado tal como el tolueno, éter u otros hexanos, de preferencia a aproximadamente -30 a O grados C. El alcohol (2) se oxida mediante un agente adecuado tal como el dióxido de manganeso (b) , en el aldehido (3) . El aldehido se hace reaccionar con 3-metil-4-fosfonocrotonato y una base adecuada como la litio bis (trimetilsilil ) amida, de preferencia a aproximadamente -70 a aproximadamente 5 grados C (c) para obtener el éster (4) . El éster se hace reaccionar con un agente hidrolizante tal como una base fuerte por ejemplo hidróxido de potasio o sodio en un disolvente acuoso tal como el agua y un alcohol inferior (por ejemplo metanol o etanol) de preferencia a aproximadamente 80 grados C (d) para obtener el ácido carboxilico (5) . El ácido carboxilico se hace reaccionar con un agente para generar los cloruros de ácido tales como el cloruro de dimetilcloroformamidinio o con cloruro de oxalilo (e) para obtener el cloruro de ácido (6) . El cloruro de ácido se hace reaccionar en condiciones estándar para la conversión de un cloruro de ácido en una amida (por ejemplo piridina y dimetilformamida) con el siguiente: en donde R5, R6, R8 y R9 son como en la fórmula I y R7 es un grupo protector estándar del hidroxilo, tal como el trimetil silio (f), obteniéndose la amida 6(Z) ó 6-cis (7) . A continuación puede prepararse cualquiera de los aminofenoles con grupos R5 a través de R9, empleando materiales y métodos ya conocidos por una persona experta. Los siguientes ejemplos se aportan para ilustrar la invención y no se proponen limitarla de ninguna forma . Ejemplo I Sintesis General : odas las reacciones se efectuaron en atmósfera de argón y protegidas de la luz. La columna de HPLC fue una Waters Prep Pak con silicagel (Porasil) 15-20 µm, 125 A. IA) Preparación de la N- ( 4-hidroxi fenil ) - (2E,4E,6Z).-7-[3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3,7 dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida Una solución de 1- [ 3 , 5-bis ( trifluorometil ) -fenil] acetileno (31.0 g, 130 mmoles) en 600 ml de THF se enfrió a -40°C y se trató con litio bis (trimetilsilil ) amida (1.0 M) (135 ml, 135 mmoles) . Después de agitar unos pocos minutos, se burbujeó dióxido de carbono gaseoso en la solución fria mediante una cánula. Cuando ya se habia añadido un exceso, se agitó la reacción a temperatura ambiente hasta que se calentó a -20°C. La reacción se vertió en 1.5 litros de agua y se pasó a pH 3 con ácido fosfórico acuoso (50%) . Se añadió sal muera y el producto se extrajo en cloroformo (2x) . Los extractos orgánicos se lavaron con agua/sal muera, se secaron (MgS04) y se eliminó el disolvente obteniéndose 31 g de ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] propiónico, el cual solidificó por reposo no se purificó posteriormente LH RMN (CDC13) . d 8,80 (1H, ancho), 8,06 (2H, s , aromático ) , 7,98 (1H, s, aromático ) . El ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] -propiónico, se disolvió en una mezcla de THF y éter y se trató con diazometano hasta que todo el ácido quedó metilado. Todo el disolvente se eliminó y el aceite resultante se purificó mediante cromatografía (10% éter/hexano) obteniéndose 30.5 g del éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -propiónico LH RMN ;CDC13) d 8,06 (2H, s, aromático^ 7, 94 (1H, s, aromático) , 3,88 (3H, 0-CH ) . El complejo bromuro de cobre ( I ) -sulfuro de dimetilo (22.6 g, 110 mmoles) se suspendió en 1.2 litros de THF (anhidro) que habia sido previamente desgasificado y puesto en atmósfera de Ar . La suspensión agitada se enfrió a 0°C y se añadió una solución 1 , 4M de MeLi en éter (157 ml, 220 mmoles) gota a gota. Después de agitar durante 15 minutos, la solución se enfrió a -78°C y se añadió el éster metilico del ácido 3- [ 3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] -propiónico, en THF (150 ml ) , gota a gota. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a esta temperatura. A continuación se vertió la reacción directamente sobre una solución de THF (500 ml ) bien agitada conteniendo 250 ml de ácido fosfórico acuoso 20%. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 10 minutos y se extrajo con hexano. Los extractos orgánicos se juntaron, se lavaron con agua/sal muera, se secaron (MgS04) y el disolvente se eliminó obteniéndose 35 g del éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil ] -3-meti 1-2 ( Z ) -propenoico, que no se purificó sino que se redujo directamente, 1H RMN (CDC13) d 7,83 (1H, s, aromático) , 7,72 ( 2H, s , aromático ) , 6, 04 (1H, s,C2-H) , 3,59 (3H, 0-CH3), 2,21 (3H,s) . El éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil ] -3-metil-2 (Z) -propenoico, 15g, 53 mmoles), se disolvió en hexanos (600 ml) y se enfrió a -40°C y se añadió hidruro de diisobutilaluminio (DIBAH, ÍM en hexanos, 122 ml, 122 mmoles), gota a gota. Una vez terminada la adición, se dejo que la temperatura de la reacción se calentara hasta +5°C y se trató con solución acuosa 10% de sal de Rochelle (100 ml) y se agitó durante 2 horas más. Las sales se separaron por filtración y el filtrado se lavó con agua, se secó (MgS04) y se concentró obteniéndose 12 g de 3- [ 3, 5-bis (trifluorometil ) fenil ] -3-meti 1-2 ( Z) -propen-1-ol: XH RMN (CDC13) 6 7,77 ( 1H, s , aromático) , 7,61 (2H, s, aromático) , 5,88 (lH,t,C2-H), 4,02 (2H, 0-CH2), 2, 14 (3H, s,CH3) . El alcohol, 3- [ 3 , 5-bis ( trifluorometil ) fenil ] -3-metil-2 (Z) -propen-1-ol, (12 g, 40 mmoles), en EtOAc (800 ml), se añadió a una suspensión de Mn02 vigorosamente agitada (100 g) en EtOAc (800 ml ) .

Después de agitar durante 4 horas a 32°C, la mezcla de reacción se enfrió y se filtró a través de una torta de celite. El filtrado se concentró y el producto se purificó mediante HPLC (15-20% EtOAc/hexanos) obteniéndose 8 g de 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil 2 ( Z ) -propenal : 1H RMN (CDC13) d 9,40 (1H, d,CHO), 7,93 ( 1H, s , aromático ) , 7,72 (2H, s, aromático) , 6, 24 (lH,d,C2-H), 2, 37(3H, s, CH3). Se disolvió el 3-metil-4-fos fonocrotonato de trietilo (13 g, 49 mmoles) en THF (600 ml) y se enfrió a -75°C y se trató con litio bis ( trimetilsilil ) amida (1M en THF) , 45 ml, 45 mmoles) . La reacción se mantuvo a -75°C a la vez que se anadia lentamente el 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil-2 (Z) -propenal (10.5g, 37 mmoles) en THF (50 ml) . Se continuó la agitación a -75°C durante 0.5 horas, dejando que la reacción se calentara suavemente a +5°C y se vertió en una solución acuosa diluida de ácido fosfórico. El producto se extrajo con hexanos y la fase orgánica se lavó con agua, se secó (Na2S04) y se concentró obteniéndose el producto crudo. La purificación del isómero deseado se efectuó mediante cromatografía con silicagel (5% de éter/hexanos) , seguido de la cristalización con hexanos obteniéndose el éster etílico del ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7 -dimeti1-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico, puro: 1E RMN (CDC13) d 7,82 (1H, s, aromático) , 7,70 (2H, s, aromático) , 6 t 49 (1H, dd, C5-H) , 6,40 (2H,m, C4, 6-H) , 5, 79 ( 1H, s , C2-H) , 4,18 (2H, q, CH2-0) , 2,22 ( 3H, s , C3-CH3 ) , 2 , 13 ( 3H, s , C7-CH3 ) , 1, 30 (3H, t, CH2CH3) . La conversión en ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7 -dimeti 1-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico, se efectuó tratando el éster etílico del ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico (0.46 g, 1.0 mmoles) con una solución de etanol (20 ml) y KOH acuoso 10% (4 ml ) a reflujo durante 1.5 horas. La solución se enfrió y se vertió en ácido fosfórico acuoso 10% (100 ml) . Esta mezcla se extrajo con CHC13, y el extracto de CHC13 se lavó una vez con agua, se secó (MgS04), y se concentró obteniéndose un sólido. El sólido se cristalizó con THF/hexanos obteniéndose 0.3 g de ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7-dimetil-2 (E) , 4(E), 6(Z)-heptatrienoico: 1R RMN (CDC13-DMS0) d 7,82 (1H, s, aromático) , 7,72 (2H, s, aromático) , 6, 50 ( 1H, dd, C5-H) , 6,40 (2H,m, C4, 6-H) , 5, 80 ( 1H, s , C2-H) , 2,24 (3H,s,C3-CH3) / 2, 12 (3H, s, C7-CH3) .

Una solución de éter anhidro (60 ml) y DMF (1.4 g, 18 mmoles), se enfrió a 15°C, se trató con cloruro de oxalilo (1.1 g, 8.7 mmoles), y se agitó durante 15 minutos. Todo el disolvente se evaporó y el cloruro de dimetilcloroformamidinio resultante obtenido en forma de un sólido de color blanco se suspendió en DMF (50 ml) (cloruro de dimetilcloroformamidinio preparado de acuerdo con el método de Helv. Chim. Acta 42, 1653 (1959)). A esta mezcla se añadió el ácido 7-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7-dimetil-2 (E) , 4(E), 6(Z)-heptatrienoico (0.95 g, 2.6 mmoles), y la mezcla se agitó durante 3-4 horas. Esta se entrió a 0°C y se trató durante 10 minutos con una solución de 0,N-bis- ( trimetilsilil) -4-aminotenol (4.8 g, 19 mmoles) en DMF (50 ml) . Esta se agitó durante 1 hora y se vertió en KF acuoso 5% (100 ml ) y se agitó de nuevo durante 1 hora. La mezcla acuosa se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó (MgS04), y el disolvente se eliminó obteniéndose un aceite. Este se purificó mediante cromatografía (HPLC - 35% EtOAc/hexano) obteniéndose la N- (4-hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3, 5-bis (trifluorometil ) fenil ] -3, 7-dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienamida en forma de un aceite de color amarillo. FABMS m/z (intensidad reí.) 455(M+H+, base), 347 (50), 239 (22); 1E RMN (DMSO) d 9, 80 (1H,S,NH), 9,18 (lH,s,OH), 8, 08 (1H, s, aromático) , 7,98 (2H, s, aromático) , 7 , 41 (2H, d, aromático) , 6,67 (2H, d, aromático) , 6,6-6, 4 (3H, ancho, C4, 5, 6-H) , 6,02 (lH,s,C2-H), 2,26 (3H, S,C3CH3) , 2,09 ( 3H, s , C7CH3 ) . IB) Preparación de la N- ( 4-hidroxi fenil ) - (2E,4E,6Z)-7-[3, 5-dimetil fenil ) -3, 7-dimeti 1-2, 4,6-heptatrienamida . Una solución de 5-bromo-xileno (19.4 g, 105 mmoles) y diisopropilamina (100 ml), se desgasificó con argón y se mantuvo en atmóstera de argón. Se añadió Cul (2.07 g, 10.7 mmoles), PPh3 (4.06 g, 15.3 mmoles) y Pd(PPh3)2Cl2 (2.09 g, 2.92 mmoles) seguido por la adición de trimetilsililacetileno (12.3 g, 18 ml, 125 mmoles) . La reacción se calentó a 75°C durante 2 horas obteniéndose una mezcla viscosa de color pardo oscuro. Se añadió trimetilsililacetileno (6.15 g, 9 ml, 63 mmoles), PPh3 (2.04 g, 7.78 mmoles), Cul (1.05 g, 5.51 mmoles), y Pd(PPh3)2Cl2 (1.62 g, 2.31 mmoles), y a continuación se calentó la reacción a 80°C durante 4 horas. Después de enfriar la reacción a temperatura ambiente, se añadieron hexanos (300 ml) y la solución se filtró a través de celite. La capa de hexano se lavó con HCl 1N (600 ml), sal muera (300 ml ) se secó (Na2S04), y se concentró obteniéndose el 1-trimetilsilil-2- ( 3, 5-dimetilfenil ) acetileno crudo, que se empleó para el próximo paso. 1H RMN (CDC13) d 7,10 (2H,d), 6,94 (1H,S), 2,27(6H,s), 0,23 (9H,s) . Una solución de l-trimetilsilil-2- ( 3, 5-dimetilfenil ) -acetileno crudo (105 mmoles, máximo teórico) en THF (70 ml) y MeOH (280 ml ) se entrió en un baño de hielo/agua durante la adición de KOH 8N (16 ml, 128 mmoles) y agua (25 ml) y a continuación se sacó la reacción del baño de hielo/agua. Después de 1 hora, se eliminó aproximadamente la mitad del disolvente orgánico, al vacio. Se añadieron hexanos (1 litro) y agua (400 ml) . La capa orgánica se lavó con sal muera saturada, se secó (Na2S04), y se concentró para dar 11.3 g de 1- ( 3, 5-dimetilfenil) acetileno en forma de un aceite de color pardo: 1H RMN (CDCl3)d 7,12 (2H,s), 6,98 (lH,s), 3,00 (1H,S) , 2,29 (6H,s) . El 1- ( 3 , 5-dimetil fenil ) acetileno (11.3 g, 86.3 mmoles) en THF anhidro (80 ml),se enfrió en un baño de hielo seco/acetona en atmósfera de argón. Se añadió lentamente n-BuLi ( 1 , 6M en hexanos, 65 ml, 104 mmoles), seguido de la adición de cloroformiato de metilo (11.4 g, 9.4 ml, 121 mmoles) . El recipiente de reacción se transfirió a un baño de hielo/agua y se agitó durante 1 hora. Se añadieron solución saturada de bicarbonato de sodio y éter etílico a la mezcla de reacción. La capa orgánica se lavó con sal muera saturada, se secó (Na2S04) y se concentró obteniéndose el éster metilico del ácido 3- (3, 5-dimetilfenil) propinoico crudo, el cual se empleó para el próximo paso. XH RMN (CDCl3) d 7,22 (2H,s), 7,08 (lH,s), 3,83(3H,s), 2,29 (6H,s) . En un matraz de fondo redondo de 2 litros de 3 bocas con un agitador mecánico elevado y en atmósfera de argón, se enfriaron CuBr'SMe2 (21.2 g, 103 mmoles) en 200 ml de THF, en un baño de NaCl/hielo/agua a 5°C. Se añadió MeLi ( 1.4M en Et20, 180 ml , 252 mmoles) manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. A continuación, se enfrió el recipiente de reacción en un baño de hielo seco/isopropanol a -70°C. Se añadió el éster metilico del ácido 3- ( 3 , 5-dimetilfenil ) propinoico (16.2 g, 86.1 mmoles) en 70 ml de THF, lentamente de manera que la temperatura de la reacción no exceda los -65°C. El baño de enfriamiento se apartó y la temperatura de la reacción se dejó calentar hasta -35°C. La mezcla de reacción se añadió rápidamente a continuación a una mezcla de ácido acético (40 ml ) y hexanos (300 ml) los cuales hablan sido enfriados en un baño de hielo seco/isopropanol. Un precipitado de color blanco en una solución de color azul claro, se formó después de la adición. La mezcla se agitó manualmente con una pala a temperatura ambiente. El precipitado se separó por filtración a través de un cartucho de celite y los sólidos se lavaron con Et20. Después de quitar la mayor parte del disolvente orgánico al vacio, la capa orgánica se lavó con agua (2x300 ml ) , sal muera saturada (300 ml) y se secó (Na2S0 ) . La eliminación del disolvente seguida de una filtración a través de un cartucho de silicagel con Et20 como fase móvil, proporcionó un aceite de color amarillo (16.9 g, conteniendo un 8% del isómero E no deseado. Múltiples pasos de purificación empleando cromatografía liquida de media presión, sobre silicagel con 4% de Et20/hexanos como fase móvil, obteniéndose el éster metilico del ácido 3- ( 3 , 5-dimetilfenil ) -3-metil-2 ( Z ) -propenoico (11.8 g, 57.8 mmoles, 55% de rendimiento para 4 pasos). XH RMN (CDCl3) d 6,93 (lH,s), 6,80 (2H,s), 5,87(lH,d) 3,55 (3H,s), 2,30 (6H,s con división fina, 2CH3) , 2,14 (3H, s, con división fina, CH3). Empleando un matraz de fondo redondo de 2 litros de 3 bocas, con agitador mecánico superior, se enfrió el éster metilico del ácido 3- (3, 5-dimetilfenil) -3-metil-2 (Z) -propenoico (14.9 g, 73 mmoles) en Et20 (418 ml), a 50°C y se mantuvo a esta temperatura en atmósfera de argón. Se añadió lentamente, hidruro de diisobutilaluminio (DIBAH, 1.5M en tolueno, 108 ml , 162 mmoles) . El recipiente de reacción se colocó en un baño de hielo/agua, se mantuvo a 0°C y se añadió una solución al 20% de sal de Rochelle (585 ml ) agitando vigorosamente y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La capa orgánica se separó por decantación Y seguidamente se añadió una solución 8:2 de hexanos/Et20 (1.25 litros) a la capa acuosa. Después de agitar manualmente con suavidad las capas, se separó por decantación la capa orgánica. Las capas orgánicas juntas, se lavaron con sal muera saturada, se secaron (Na2S0 ) y se concentraron, obteniéndose el 3- (3, 5-dimetilfenil ) -3-metil-2 ( Z ) -propen-1-ol en forma de un aceite (15 g, 116% del rendimiento teórico), el cual se oxidó sin posterior purificación. 1H RMN (CDC13) d 6,92 (1H, s); 6,78 (2H,s); 5, 67 ( 1H, dt ) ; 4,07 (2H,d), 2,31 ( 6H, s ) ; 2,06 ( 3H, s, con división fina) . En un matraz de fondo redondo de 5 litros de 3 bocas, con un agitador mecánico superior, mantenido con una atmósfera de argón, se enfrió Mn02 (271 g, 3.12 mmoles) en Et20 (3 litros) a 10°C. Se añadió el 3-(3,5-dimetilfenil ) -3-metil-2 ( Z ) -propen-1-ol (17.8 g de crudo, 90.8 mmoles máximo) en Et20 (250 ml ) , lentamente a una suspensión de Mn02. La temperatura de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió una cantidad adicional de Mn02 (30.7 g, 353 mmoles) . Después de 20 minutos la reacción se completó mediante TLC. La mezcla se filtró a través de celite, el filtrado se secó (Na2S04), y se concentró obteniéndose el 3- (3, 5-dimetilfenil ) -3-metil-2 (Z) -propenal en forma de un aceite (14.1 g de producto impurificado 89% de rendimiento máximo en 2 pasos) . 1H RMN (CDC13) d 9,48 (lH,d);7,04 (lH,s); 6,91(2H,s); 6,10 (lH,d); 2,35 (6H,s); 2,29 (3H,s). En un matraz de 5 litros de fondo redondo, de 3 bocas con agitador mecánico superior y mantenido en atmósfera de argón, se enfrió el 3-metil-4-fosfonocrotonato de metilo (43.6 g, 165 mmoles, mezcla 1:1 de cis/trans) en THF (1.25 litros), a -70°C en un baño de hielo seco/acetona. Se añadió lentamente litio bis (trimetilsilil) amida ( ÍM en THF, 116 ml, 116 mmoles) . La reacción se agitó durante lo minutos y a continuación se añadió lentamente el 3- (3, 5-dimetilfenil ) -3-metil-2 ( Z ) -propenal (16.4 g de crudo, 94.1 mmoles) ) en THF (250 ml) . La reacción se dejó calentar a -40°C. Se añadió una solución de cloruro de amonio (55 g en 550 ml de agua) a la mezcla de reacción, seguido de la adición de ácido fosfórico 3N (163 ml) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, a continuación se añadió Et20 (1500 ml ) , seguido de hexanos (4 litros) y agua (3 litros) . La capa orgánica se lavó con sal muera saturada (500 ml), se secó (Na2S0 ), y se concentró obteniéndose un aceite de color pardo (46.7 g) el cual se pasó a través de un cartucho de silicagel con Et20/CH2C12/ hexanos (3:20:77) como eluyente, obteniéndose una mezcla de isómeros de isómeros E/Z (8:2) en la posición 2,3, (24.7 g, 86.8 mmoles, 92% de rendimiento de la mezcla) Se empleó la cromatografía de media presión sobre silicagel, obteniéndose el éster etílico del ácido 7- (3, 5-dimet ilfenil) -3, 7-di-metil-2 (9:1 E/Z),4(E),6(Z)-heptatrienoico con el 90% de pureza (20.7 g, 90% de rendimiento), el cual se empleó para la siguiente reacción de hidrólisis. 1H RMN (CDC13) . d 6,96 (s,lH); 6,87 (s,2H); 6,73(dd,lH); 6,26 (d, 1H) ; 6,22 (d, 1H) ; 5,74 (s,lH), 4,15(q,2H), 2,34(s,6H); 2,17(s,6H), 1, 28 (t, 3H) . En un matraz de fondo redondo de 1 litro se añadió NaOH (10M, 50.7 ml ) , a una solución del éster etílico del ácido 7- (3, 5-dimetilfenil) -3, 7-dimetil-2 ( 9 : 1 E/Z) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico (14.4 g, 50.6 mmoles) en MeOH (70 ml) y THF (30 ml) . La reacción se calentó a 80°C durante 1 hora y a continuación se colocó en un baño de hielo/agua. Se añadió una solución fria 3N de ácido fosfórico (525 ml ) para acidificar la solución. Se añadió agua (300 ml), y la solución se extrajo con Et20 (1100 ml) . La capa orgánica se lavó con sal muera saturada, se secó (Na2S04) y se concentró obteniéndose un polvo de color amarillo (12.4 g, 95%) . Las recristalizaciones con THF caliente/hexanos proporcionaron cristales de color blancuzco del ácido 7- (3, 5-dimetilfenil) -3, 7 -dimeti 1-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico en forma de un isómero único (8.64 g, 67% de rendimiento) 1H RMN (CDC13) d 6,96 (s,lH); 6,87 (s,2H); 6,76(dd,lH); 6,26(d,lH); 6,23 (d,lH); 5,77 (s,lH), 2,33(s,6H), 2,17(s,6H); HRMS calculado para C?7H2002; 256,1463; encontrado 256.1465. Se disolvió cloruro de dimetilcloroformamidinio (Helv. Chim. Acta 42, 1653(1959) (65.1 mmoles) en DMF anhidro (180 ml ) y se enfrió en un baño de hielo/agua. Se añadió el ácido 7- (3, 5—dimetilfenil) -3, 7-dimetil~2 (E) , 4 (E) , 6 (z) -heptatrienoico (10.2 g, 39.7 mmoles) en DMF (50 ml ) , y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 70 minutos. La solución del cloruro de 7- ( 3 , 5-dimetilfenil ) -3 , 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z ) -heptatrienoilo se enfrió en un baño de hielo/agua y se empleó para el próximo paso de la secuencia de reacciones. Se preparó el O, N-bis ( trimetilsilil ) -4-aminofenol de acuerdo con el procedimiento de la patente WO 95/03274. El O, N-bis ( trimet ilsilil ) -4-aminofenol (26.5g, 105 mmoles) en DMF (50 ml ) y piridina (19.3 ml, 238 mmoles), se añadieron a una solución de cloruro de 7- (3, 5-dimetilfenil) -3, 7 -dimeti 1-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoilo en DMF, enfriada con un baño de hielo/agua. Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente finalizando a los 30 minutos. La eliminación de los grupos trimetil sililo con KF (9.14 g, 157 mmoles) en agua (80 ml) fue completa en 20 minutos. Se añadieron EtOAc (1400 ml) y agua (1400 ml) a la mezcla de reacción. Después de la separación, la capa orgánica se lavó con sal muera saturada (500 ml), se secó (Na2S04) y se concentró obteniéndose un aceite de color pardo (25.6 g) . Este material se cromatografió con 285 g de silicagel (230-400 mallas) empleando una fase móvil de hexanos/EtOAc 1:1, obteniéndose 13.6 g de producto. La recristalización con EtOAc/hexanos dio la N- (4 -hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-(3, 5-dimetilfenil ) -3,7-dimetil-2 , 4, 6-heptatrienamida pura (10.3 g, 75% de rendimiento) . H RMN (CDC13) d 7,37 (d,2H), 7,03 (s,lH); 6,95 (s,lH); 6,87(s,2H); 6,77 (d,2H); 6,72 (dd,lH); 6,24(d,lH), 6,23(d,lH), 5,75(s,lH), 4,94 (ancho, 1H), 2,34(s,6H), 2,23 (s,3H), 2,17(s,3H); HRMS calculado para C23H25N02; 347,1885; encontrado 347,1895. IC) Preparación de la N- (4-hidroxifenil ) - (2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil-2, 4, 6-heptatrienamida . El éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil ] propinoico, se preparó como se ha indicado en el ejemplo experimental IA, pasos 1 y 2) . El éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil ] propinoico, se disolvió en hexano (300 ml), se trató con 1.0 g de catalizador Lindiar, y se redujo con hidrógeno a 1 atmósfera y 22°C. Cuando se hubieron absorbido 1,1 equivalentes de hidrógeno, se filtró la reacción a través de celite y se eliminó el disolvente. El aceite crudo se purificó mediante HPLC (5% de éter/hexano) obteniéndose 3.5 g de éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis ( trifluorometii) fenil] -2 (Z) -propenoico.1H RMN (CDCl3) d 8,02 (2H, s, aromático) , 7,83 ( 1H, s, aromático) , 7,00 (lH,d,C3-H) , 6, 17 (lH,d,C2-H) ; 3,73 (3H,0-CH3). 3.5 g (11 mmoles) del éster metilico del ácido 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] -2 (Z) -propenoico, se disolvieron en 350 ml de hexano. La mezcla se enfrió a -40°C en atmósfera de argón, y se añadió lentamente hidruro de diisobutilaluminio (DIBAH 1 , OM en hexano, ml, 35 mmoles) . Una vez terminada la adición, se agitó la reacción y se dejó calentar lentamente a +5°C. A continuación, la reacción se trató con 50 ml de una solución acuosa 30% de sal de Rochelle, 100 ml de éter, y se agitó a 30-35°C durante 2 horas. Los extractos orgánicos se lavaron con agua, se secaron (MgS0 ) y el disolvente se eliminó obteniéndose 3.0 g del 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil ] -2 ( Z) -propen~l-ol , en forma de un aceite:^ RMN (CDC13) d 7,80 ( 1H, s , aromático ) , 7,68 (2H, s, aromático) , 6,62 ( 1E , d, J=10Hz ) , 6, 12 ( 1H, dd, J=l 0 y 6Hz),4,40 (2H, t,HO-CH2-) . El 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] -2 (Z) -propen-1-ol (3.0 g, 10 mmoles) se disolvió en 300 ml de éter (anhidro) y se añadió a una suspensión de Mn02 enfriada (10°C) y bien agitada (40 g) en 300 ml de éter. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora.

La suspensión se filtró y el filtrado se lavó con THF.

Los orgánicos se juntaron y el disolvente se eliminó obteniéndose el 3- [3, 5-bis ( trifluoro-metil) fenil] -2 (Z) -propenal en forma de un aceite. Este no se purificó y se empleó para el próximo paso: 1H RMN (CDC13) d 9,88 (lH,d, J=4Hz, CHO) , 7,94 ( 1H, s , aromático ) , 7,85 (2H, s, aromático) , 7,61 ( 1H, d, J=8Hz ) , 6,35 (lH,dd, J=8&4Hz) . 3.4 g (13 mmoles) de 3-metil-4-fosfonocrotonato de trietilo, se disolvió en 150 ml de THF, se enfrió a -78°C, y se trató con 12 ml (12 mmoles) ( 1 , OM en THF) de litio bis (trimetilsilil ) amida . Manteniendo a -78°C, se añadió lentamente el aldehido 3- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil ] -2 ( Z ) -propenal (2.5g, 9.3 mmoles) en 5 ml de THF. Se agitó la mezcla a -78°C durante 0.5 horas, y se agitó dejando que la temperatura aumentara a +15°C. Esta se vertió en ácido fosfórico acuoso diluido frió. El producto se extrajo con hexano y la porción orgánica se lavó con agua, se secó (Na2S04) y el disolvente se eliminó obteniéndose un aceite crudo que contenia 4 isómeros. La purificación y separación de los isómeros se efectuó mediante cromatografía con silicagel (5% de éter/hexano) obteniéndose dos isómeros. El isómero E,E,Z deseado, se cristalizó con hexano obteniéndose 500 mg del éster etílico del ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil ] - 3-meti 1- 2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico. 1H RMN (CDCl3) d 7,80 (1H, s, aromático ) , 7,78 ( 2H, s , aromático ) , 6,96 (1H, dd, C6-H) , 6,48-6,78 ( 3H, olefinas ) , 5 , 78 ( 1H, s , C2-H) , 4, 18 (2H, q,0-CH2) , 2 , 23 ( 3H, s , C3CH3) , 1 , 30 ( 3H, t , CH3) . El éster etílico del ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3 -metil-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico (500 mg, 1.2 mmoles) se disolvió en 50 ml de etanol y se trató con una solución acuosa de KOH (0.5 g de K0H/5 ml de agua) . La mezcla se trató a reflujo durante 1.5 horas. La solución se enfrió, se vertió en agua y se acidificó con ácido fosfórico diluido. El sólido que precipitó, se extrajo con cloroformo. La parte orgánica se lavó con agua, se secó (Na2S04) y el disolvente se eliminó obteniéndose un sólido que se cristalizó con THF/hexanos obteniéndose el ácido 7- [ 3 , 5-bis ( trifluoromet il ) fenil ] -3-metil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico. XH RMN (CDCl3) d7,79 (1H, s, aromático) , 7,77 ( 2H, s , aromático ) , 6,96 (1H, dd, J=ll, 5Hz) , 6,50-6,63 ( 3H, olefinas ) , 5,89 (lH,s,C2-H), 2, 24 (3H, s, C3CH3) . Una solución de éter anhidro (60 ml) y DMF (1.0 g, 12 mmoles), se enfrió a 15°C, se trató con cloruro de oxalilo (0,7 g, 5,9 mmoles) y se agitó durante 15 minutos. Se evaporó todo el disolvente y el cloruro de dimetilcloroformamidinio (Helv. Chim. Acta 42, 1653 (1959) en forma de un sólido de color blanco se suspendió en DMF (10 ml ) . A esto se añadió el ácido 7-[3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3-met i 1-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico (0.90 g, 2.6 mmoles) y la mezcla se agitó durante 3 horas. Esta se enfrió a 0°C y se trató durante 10 minutos con una solución de 0,N-bis (trimetilsilil) -4-aminofenol (1.6 g, 5.9 mmoles) en 5 ml de DMF. Este se agitó durante 1 hora y se vertió en KF acuoso 15% (20 ml ) y de nuevo se agitó durante 1 hora. La mezcla acuosa se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó (MgS04) y el disolvente se eliminó obteniéndose un aceite. Este aceite se purificó mediante cromatografía (40% acetato de etilo/hexano) obteniéndose la N- (4-hidroxifenil ) - (2E, 4E, 6Z)-7-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil-2, 4, 6-heptatrienami-da, en forma de un sólido de color amarillo: ^"H RMN (DMSO/CDCI3) 6 8,50 (lH,s,NH), 7,78 ( 3H, s , aromático ) , 7,31 (2H, d, aromático) , 6,68 (2H, d, aromático ) , 6,48 (1H,-0H), 6,9-6,4 ( 3H, ancho , C4 , 5, 6-H) , 5, 92 ( 1H, s , C2-H) , 2, 26 (3H, s,C3CH3) . ID) Preparación de la N- ( 4-hidroxi fenil ) - (2E,4E,6Z)-7-[3, 5-dimetoxifenil ) -3, 7 -dimetil -2, 4,6-heptatrienamida . Un matraz de 1 litro, de fondo redondo, de 3 bocas, equipado con un agitador magnético, entrada de argón y embudo de adición, se cargó con hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 2.53 g, 63.3 mmoles)) y dimetoxietano anhidro (60 ml) . La suspensión de color gris se enfrió a 0°C con un baño de hielo y se le añadió fosfonoacetato de trietilo (11.94 ml, 60.2 mmoles) gota a gota, manteniendo la temperatura por debajo de 10 C, A la solución transparente de color pardo claro resultante, a 0°C se le añadió lentamente una solución de yodo (15.27 g, 60.2 mmoles) en dimetóxietano anhidro (50 ml) manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. La mezcla de color pardo resultante se agitó a aproximadamente 10°C durante media hora. Después de reenfriar la mezcla de reacción a 0°C, se añadió con cuidado, hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 5.05 g, 126.3 mmoles), en dos porciones. La suspensión de color amarillo verdoso se agitó a continuación a 25°C hasta que cesó el desprendimiento de hidrógeno. Después de reenfriar la mezcla a 0°C, se añadió lentamente una solución de 3,5-dimetoxibenzaldehido (9.5 g, 57.2 mmoles) en dimetoxietano anhidro (30 ml), y la mezcla se calentó a continuación hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de color pardo claro se concentré al vacio y se diluyó con agua (300 ml) y se extrajo con éter etílico (2x400 ml) . Las capas orgánicas juntas, se lavaron con solución saturada de tiosulfato de sodio, agua, sal muera, se secaron (MgS04), y se concentraron al vacio obteniéndose un producto crud en forma de un aceite pardo claro (18.65 g, rendimiento teórico superado) . El producto crudo se disolvió en hexanos y se cromatografió sobre silicagel. La elución empleando hexanos (1.2 litros) > 30% de acetato de etilo/hexanos dio una mezcla aproximadamente 2:1 del éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil) -2-propinoico y 3- ( 3, 5-dimetoxi fenil ) -2-yodo-2-propenoico (12 g) . Un matraz de 500 ml, de 3 bocas, de fondo redondoequipado con un agitador magnético, termómetro y entrada de argón, se cargó con la mezcla aproximadamente 2:1 del éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil ) -2-propinoico y el éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil) -2-yodo-2-propenoico, obtenido más arriba y tetrahidrofurano anhidro (100 ml) . La mezcla se enfrió a -70°C con un baño de hielo seco/acetona se añadió lentamente litio bis (trimetilsilil) amida (1,0M en THF, 15.8 mmoles) . La mezcla se calentó inmediatamente a -20° y se agitó media hora cuando el análisis por RMN de un alícuota indicó la incompleta conversión del éster etílico del ácido 3- ( 3, 5-dimetoxifenil) -2-yodo-2-propenoico en el éster etílico del ácido 3- ( 3 , 5-dimetilfenil ) -2-propinoico (solamente el isómero E_ del éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil ) -2-yodo-2-propenoico, permaneció sin reaccionar) . Se añadió a la mezcla una cantidad adicional de litio bis ( trimetilsilil ) amida (1,0M en THF, 4.0 ml, 4.0 mmoles), a -20°C y se agitó durante una hora más. El análisis RM? de un alícuota mostró la presencia del éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil) -2-yodo-2-propenoico . La mezcla se calentó hasta 0°C y se agitó durante 90 minutos. La reacción se interrumpió con solución saturada de cloruro de amonio (60 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante lo minutos. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x200 ml) y las capas orgánicas juntas se lavaron con agua, sal muera, se secaron (?a2S04), se concentraron al vacio, obteniéndose el producto crudo en forma de un aceite (11.0 g) . Este material se cromatografió sobre sobre una HPLC preparativa empleando acetato de etilo/hexanos 1:5 como eluyente. La concentración de las fracciones apropiadas proporcionó el éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxi fenil) -2 -propinoico (9.32 93% de rendimiento), enforma de un aceite incoloro: 1H RMN (400 MHz, CDC13) d 6,73 (2H,s ancho), 6,55 (1H, ancho), 4,30 (2H,g),3,79 (6H,s), l,36(3H,t) HRMS calculado para C?3H?404: 234,09892. Encontrado : 234 , 0900. Un matraz de 2 litros, de 3 bocas, de fondo redondo equipado con un agitador magnético, termómetro y entrada de argón, se cargó con el complejo bromuro de cobre (I) -sulfuro de dimetilo (10.63 g 51.71 mmoles) y THF anhidro (450 ml ) . La suspensión se enfrió empleando un baño de hielo seco/acetona y se añadió MeLi ( 1 , 5M en éter etílico, 69.0 ml , 103.5 mmoles), a una velocidad tal que la temperatura interna se mantuvo a -5°C. La solución incolora transparente se enfrió a continuación a -70°C con un baño de hielo seco/acetona. Una solución del és ter etílico del ácido 3- ( 3, 5-dimetoxifenil ) -2-propinoico (9.32 g, 39.8 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (50 ml), se añadió lentamente de forma que la temperatura de la reacción no excediera -65°C. Después de agitar a -70°C durante dos horas, la mezcla de reacción se transfirió rápidamente a un mezcla helada constantemente agitada de ácido acético (75 ml) y hexanos (750 ml) en un embudo separador. Se añadió agua y la mezcla se agitó vigorosamente para dar una suspensión de color blanco que por reposo se separó en dos capas. La suspensión de color blanco del fondo se filtró a través de celite y se lavó a fondo con hexanos. El filtrado y el liquido de las lavados se juntaron y se lavaron con agua (3 veces), sal muera y se secaron (Na2S04) .La capa superior del embudo separador mencionado más arriba se lavó con agua (3 veces), sal muera, se secó (Na2S04) y se concentró al vacio obteniéndose el producto crudo (9.19 g, 92%) en forma de un aceite de color pardo claro empleado en el próximo paso sin posterior purificación. '^H RMN (200 MHz, CDC13) d 6,40 (t,2H), 6,33 (d,lH), 5,86 (d,lH), 4,01 (g,2H), 3,75 (s,6H), 2,13 (s,3H), 1,09 (t,3H) . Un matraz de 2 litros, de 3 bocas, de fondo redondo equipado con un agitador magnético, termómetro y entrada de argón, se cargó con éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil ) -3-metil-2 (Z) -propenoico (10,42 g, 41,63 mmoles) y hexanos (1000 ml) . Se añadió lentamente, hidruro de diisobutilaluminio (DIBAH, 1 , OM en hexano, 104 ml, 104 mmoles), a la mezcla de reacción manteniendo la temperatura entre -20°C y -30°C empleando un baño de hielo seco/acetona. A continuación, se calentó la mezcla a 0°C y se agitó durante 75 minutos. Se añadió una solución de sal de Rochelle (solución 30%, 60 ml) a la mezcla de reacción agitando vigorosamente y se mantuvo toda la mezcla a 35°C durante 30 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante otros 30 minutos, la capa transparente de hexano se decantó en un embudo separador y se lavó con agua, sal muera y se secó (Na2S04) . Las emulsiones acuosas de color blanco que quedaron en el matraz de reacción se volvieron a extraer con éter etílico (4x150 ml) . Los extractos orgánicos juntos, se lavaron con agua, sal muera, se secaron (Na2S04)/y se concentraron obteniéndose el 3- (3, 5-dimetoxifenil ) -3-metil-2 (Z ) -propen-1-ol, crudo, en forma de un aceite viscoso de color pardo claro (8.68 g, >100%) el cual se empleó en el próximo paso sin posterior purificación. XH RMN (400 MHz, CDC13) d 6,39 (lH,t), 6,33 (2H,d), 5,68 (lH,t), 4,09 (2H,d), 3,79 (6H,s), 2,06 (3H,s). HRMS calculado para C?2Ha603: 208, 1099. Encontrado: 208,1096. Un matraz de 2 litros, de 3 bocas, de fondo redondo equipado con un agitador mecánico elevado, embudo de adición y entrada de argón, se cargó con Mn02 activado (85%, 86.8 g, 849 mmoles) en acetato de etilo (700 ml) . Se añadió una solución de 3- (3, 5-dimetoxifenil) -3-metil-2 (Z ) -propen-1-ol , crudo (8.68 g, 41.7 mmoles) en acetato de etilo (160 ml), a la suspensión de color negro. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente tres horas. La mezcla se filtró a través de celite y la torta del filtro se lavó a fondo con acetato de etilo (3 litros) .Los filtrados juntos se concentraron al vacio obteniéndose un aceite de color pardo claro (8.45 g, 98% de rendimiento en crudo) . El aceite crudo se purificó mediante HPLC preparativa empleando acetato de etilo 15%/hexanos como eluyente. Las fracciones apropiadas se juntaron obteniéndose el 3- (3, 5-dimetoxifenil ) -3-metil-2 ( Z ) -propenal , en forma de un aceite de color pardo claro. XH RMN (200 MHz, CDC13) d 9,52 (lH,d), 6,47 (lH,t), 6,41 (2H,d) , 6,07 (lH,d), 3, 79 (6H, s) , 2, 27 (3H, s) . Un matraz de 2 litros, de 3 bocas, de fondo redondo equipado con un agitador magnético, termómetro y entrada de argón, se cargó con el 3-metil-4-fosfonocrotonato de trietilo (recién destilado 14.75 g, 55.82 mmoles) y tetrahidrofurano anhidro (670 ml) . A la solución anterior se añadió lentamente litio bis (trimetilsilil) amida (ÍM en THF, 55.7 ml, 55.7 mmoles) manteniendo la temperatura interna a -40°C con un baño de hielo seco/acetona. Una vez terminada la adición, se agitó la mezcla a -40°C durante 15 minutos y a continuación se enfrió a -70°C. Se añadió lentamente una solución de 3- ( 3, 5-dimetoxifenil ) -3-metil-2 (Z ) -propenal crudo (6.38 g, 30.93 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (50 ml), y la mezcla se dejó calentar a 5°C durante un periodo de aproximadamente dos horas. La reacción se interrumpió con una solución enfriada de ácido fosfórico (85%, 5 ml ) en agua (300 ml) y a continuación se diluyó con hexanos (300 ml) . La capa acuosa se extrajo una vez con éter etilico/hexanos 1:1. Las capas orgánicas juntas, se lavaron con agua, sal muera y se secaron con sulfato de sodio anhidro. La filtración y concentración al vacio proporcionaron el éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil) -3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico crudo, en forma de un aceite de color pardo. El aceite crudo se purificó mediante HPLC preparativa empleando acetato de etilo 15%/hexanos como eluyente. Las fracciones apropiadas se juntaron y se concentraron obteniéndose el éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxi fenil) -3,7-dimetil-2 (E) ,4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico, (9.68 g, 99% de rendimiento, aproximadamente 80:20 E/Z isómeros en C-2), en forma de un aceite de color pardo claro. El aceite se disolvió en 5 ml de acetato de etilo y 100 ml de hexanos, la solución se mantuvo en el congelador y se filtró en frió obteniéndose 2.83 g de agujas de color blanco como primera recolección. Las aguas madre se recristalizaron de la misma forma empleando 2.5 ml de acetato de etilo y 50 ml de hexanos obteniéndose 1.04 g como segunda recolección. La cantidad total de éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxifenil) -3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico, puro, fue de 3.87 g. 1H RMN (400 MHz, CDC13) d 6,76 (lH,dd), 6,42 (lH,t), 6,40 (2H,d), 6,24 (lH,d), 6,22 (1H, d) , 5,75 (lH,s), 4,15 (2H,q), 3,80 (6H,S), 2,18 (3H,S), 2,16 (3H,s), 1,28 (3H,t) . HRMS calculado para C?gH240 : 316,1675. Encontrado: 316,1673.

Un matraz de 500 ml, de una boca, de fondo redondo equipado con un agitador magnético, condensador de agua y entrada de argón, se cargó con el éster etílico del ácido 3- (3, 5-dimetoxi fenil) -3, 7-dimetil-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico, recristalizado, (3.87 g, 12.23 mmoles) y etanol (graduación 190,110 ml). Se añadió a continuación una solución de hidróxido de potasio (2.21 g, 39.39 mmoles) en agua (22 ml), y la mezcla se calentó a 80°C durante 90 minutos. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y a continuación se añadió lentamente una solución helada de ácido fosfórico 1M, hasta que el pH de la solución pasó aproximadamente a 3. La suspensión de color blanco se extrajo con acetato de etilo/éter etílico 1:1, dos veces. Los extractos orgánicos juntos, se lavaron con agua, sal muera y se seco con sulfato de sodio anhidro. La filtración y la concentración al va cí o proporcionaron un sólido de color amarillo claro. El sólido se disolvió en THF y se pasó a través de una columna corta de silicagel empleando acetato de etilo como eluyente. La concentración de las fracciones apropiadas proporcionó el ácido 3- ( 3, 5-dimetoxifenil ) -3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico (3.45 g, 98% de rendimiento), en forma de un sólido de color amarillo y se empleó en el próximo paso sin posterior purificación (56% de rendimiento en dos pasos, incluyendo la saponificación y purificación de las aguas madres, a partir del 3- ( 3, 5-dimetoxifenil) -3, 7-dimetil-2 (Z) -propenal . XH RMN (200 MHz, CDC13) d 6,78 (lH,dd),6,42 (lH,t), 6,39 (2H,d), 6,25 (lH,d),6,21 (lH,d), 5,75 (lH,s) 3,79 (6H,s) 2,18 (3H,s), 2,16 (3H, s) . Un matraz de 500 ml, de una boca, de fondo redondo equipado con un agitador magnético, y entrada de argón, se cargó con cloruro de oxalilo (1.74 ml, 19.95 mmoles) y éter (50 ml) . La solución se enfrió en un baño de hielo seco/acetona y se añadió lentamente dimetilformamida anhidra (1.62 ml , 20.92 mmoles) (Helv. Chim. Acta 42, 1653 (1959) . Después de completar la adición, la mezcla se calentó hasta 0°C y se agitó durante treinta minutos. Los volátiles se eliminaron con cuidado al vacio y el matraz conteniendo el cloruro de dimetilcloroformamidinio se llenó de argón. Al cloruro de dimetilcloroformamidinio se añadió dimetilformamida anhidra (50 ml ) y una solución de ácido 3- (3, 5-dimetoxi fenil) -3, 7-dimet il-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico crudo (3.45 g, 11.96 mmoles) en dimetilforrnamida anhidra (35 ml ) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos. La solución transparente resultante se enfrió a 0°C y se añadió una solución de O, N-bis ( trimetilsilil ) -4-aminofenol (7.98 g, 31.48 mmoles) en dimetilformamida anhidra (18 ml) , manteniendo la temperatura por debajo de los 12°C.

Inmediatamente después de la adición de 0,N-bis ( trimetilsil ) -4-aminofenol, se añadió piridina (5.8 ml, 71.71 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 150 minutos. La mezcla se reenfrió a 0~C y se añadió una solución de fluoruro de potasio (2.74 g, 47.2 mmoles), y la mezcla se agitó vigorosamente durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua (450 ml ) y se extrajo con acetato de etilo (450 ml ) y hexanos (200 ml) . La capa orgánica se lavó con ácido fosfórico ÍN (2x200 ml) , agua, sal muera, y se secó (Na2S04) .Los lavados acuosos juntos se extrajeron de nuevo con acetato de etilo (2x250 ml ) . Las capas orgánicas juntas se lavaron con agua, sal muera, se secaron con (Na2S04) y se concentraron obteniéndose una espuma de color pardo oscuro. El material se cromatografió mediante HPLC preparativa empleando 45% acetato de etilo/hexanos como eluyente. La concentración de las fracciones apropiadas proporcionó el N- ( 4-hidroxifenil ) - (2E,4E,6Z)-7-(3, 5-dimetoxi fenil ) -3, 7 -dimeti 1-2, 4,6-heptatrienamida (4,24 g, 93% de rendimiento), en forma de una espuma de color amarillo. La recristalización con acetato de etilo/hexanos caliente, proporcionó en dos recolecciones 2.61 g (57%) de N- ( 4-hidroxifenil ) - (2E,4E,6Z)-7~(3, 5-dimetoxi fenil ) -3, 7-dimetil-2, 4,6-heptatrienamida, p . f .162-163°C . 1H RMN (200 MHz, CDC13) d 7,34 (2H,d), 7,05 (1H,S ancho), 6,65-6,85 (3H,m), 6,40 (3H,bs), 6,15-6,30 (2H,m) 5,74 (lH,s), 4,98 (lH,s), 3,79 (6H,s), 2,22 (3H,s), 2,16 (3H,s). HRMS calculado para C23H25N04: 379,1784. Encontrado : 379, 1779. 1E) Preparación de la N- ( 4-hidroxi fenil ) - (2E,4E,6Z)-7-[3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3,6,7-heptatriena ida Una solución de 2-tosfonopropionato de trietilo (20 g, 84 mmoles) se disolvió en 300 ml de THF y se enfrió a 0°C y se trató con t-butóxido de potasio (1,0M en THF) (80 ml, 80 minóles) Después de 5 minutos, se añadió una solución de 3- [ 3 , 5-bis ( trifluorometii ) fenil] acetotenona (12 g, 47 mmoles) en 20 ml de THF, y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con hexano Los extractos orgánicos se lavaron con agua y sal muera, se secaron (MgS04), y se eliminó el disolvente obteniéndose 15 g del éster etílico del ácido 3- [3, 5-bis ( tri- fluorometil) fenil] -2, 3 dimeti1-2 (E/Z) -propenoico, crudo, el cual se purificó en los isómeros individuales mediante HPLC (silicagel, 5% éter/hexano), éster etílico del ácido 3- [ 3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] -2, 3 dimetil-2 (Z) -propenoico, XH RMN (CDCl3) d 7, 80 (1H, aromático) ,7,61 (2H, aromático) ,3,85 (2H, q,CH2) , 2, 13 ( 3H, s , CH3 ) , 2 , 08 (3H,s,CH3). 5.0 g (14.7 mmoles) del éster etílico del ácido 3- [3, 5-bis (triflurometil) fenil] -2, 3 dimeti1-2 (Z) -propenoico, se disolvieron en 300 ml de hexano. Este se enfrió a -20°C en atmósfera de argón. Se añadió lentamente, hidruro de diisobutilaluminio (DIBAH-1,0M en hexano) (35 ml, 35 mmoles) . Una vez terminada la adición, se agitó la reacción a temperatura ambiente hasta alcanzar los 5°C. A continuación, se trató la reacción con 50 ml de una solución acuosa 30% de sal de Rochelle, 100 ml de éter y se agitó bien a 30-35°C durante 2 horas. Los extractos orgánicos se lavaron con agua, se secaron (MgS04), y el disolvente se eliminó obteniéndose 3.0 g del 3-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] -2, 3 dimeti 1-2 (Z ) -propen- l-ol en forma de un aceite: XH RMN (CDC13) d 7,75 ( 1H, s , aromático ) , 7,61 ( 2H, s , aromático ) , 3,90 (2H,s,CH2-), 2,04 (3H,S,CH3), 1,96 (3H,s,CH3) . El alcohol 3- [3, 5-bis ( trifluorometil ) fenil ] -2 , 3 dimetil-2 ( Z ) -propen-1-ol (4.0 g, 12 mmoles), se disolvió en 200 ml de acetato de etilo y se añadió a una suspensión enfriada (10°C), bien agitada, de MnQ2 (40 g) en 200 ml de éter. Esta se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La suspensión se filtró y los sólidos se lavaron con THF. Los orqánicos se juntaron y el disolvente se eliminó para dar un aceite. Este se purificó mediante HPLC (silicagel, 10% acetato de etilo/hexano) obteniéndose 3.4 g de 3-[3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -2, 3 dimeti 1-2 (Z ) -propenal : LH RMN (CDC13) d 9,40 (1H, s,aldehido) , 7,90 ( 1H, s, aromático) , 7,70 ( 2H, s , aromático ) , 2,32 (3H, s, CH3) , 1, 96 (3H,s,CH3) . 4.0 g (15 mmoles) de 3-metil-4-fos tonocrotonato de trietilo, se disolvieron en 180 ml de TH, se enfriaron a-78°C y se trataron con litio bis (trimetilsilil ) amida (l.OM en THF, 14.5 ml, 14.5 mmoles) . Manteniendo a -78°C, se añadió lentamente 3- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -2 , 3-dimetil-2 (Z ) propen- 1 -al (3.4 g, 11.3 mmoles) en 5 ml de THF. La mezcla se agitó a -78°C durante 0.5 horas, y se agitó a temperatura ambiente hasta que la temperatura alcanzó los 15°C. La mezcla se vertió en ácido fosfórico acuoso diluido enfriado. El producto se extrajo con hexano y la parte orgánica se lavó con agua, se secó con Na2S04 y el disolvente se eliminó obteniéndose un aceite crudo conteniendo 4 isómeros. La purificación y la separación de los isómeros se efectuó mediante cromatografía con silicagel (5% éter/hexano) obteniéndose dos isómeros.

El isómero deseado se cristalizó a continuación con hexano obteniéndose 500 mg del éster etílico del ácido 7-[3, 5-bis ( tri fluorometil ) fenil ] -3, 6, 7 -trimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico: XH RMN (CDC13) d 7,80 (1H, s, aromático) , 7,61 (2H, s, aromático) , 6,43 (2H,dd,C4 y C6-H) , 5, 71 (1H, s,C2-H) , 4,18 ( 2H, q, 0-CH2CH3) , 2,20 (3H,s,C3 metilo), 2 , 02 ( 3H, s , CH3) , 2,00 (3H, s,CH3) , 1, 30 (3H, t, 0-CH2CH3) . El éster etílico del ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 6, 7-trimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z ) -heptatrienoico (2.9 g, 6.5 mmoles), se disolvió en 50 ml de etanol y se trató con una solución acuosa de KOH (0.5 g de K0H/5 ml de agua) . La mezcla se hirvió a reflujo durante 1.5 horas. La solución se enfrió, se vertió en agua y se acidificó con ácido fosfórico diluido. El sólido que precipitó se extrajo con cloroformo. La parte orgánica se lavó con agua, se secó (Na2S04) y se eliminó el disolvente. Se obtuvo un sólido que se cristalizó con THF/hexano obteniéndose el ácido 7- [3, 5-bis ( tritluorometil ) fenil] -3, 6, 7-trimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico.1H RMN (DMSO) d 8,07 (1H, s, aromático) , 7, 78 (2H, s , aromático ), 6, 96 (2H,dd,C4 y C5-H) , 5, 88 (1H, s, C2-H) , 2 , 22 ( 3H, s , C3CH3 ) , 2,02 (3H,s,CH3), 1, 93 (3H, S,CH3) . Una solución de éter anhidro (20 ml) y DMF (0.50 g, 6 mmoles), se enfrió a 15°C, y se trató con cloruro de dimetilcloroformamidinio (Helv. Chim. Acta 42, 1653 (1959) (0.3 g, 2,4 mmoles)) agitando durante 15 minutos. Se evaporó todo el disolvente y el sólido de color blanco resultante se suspendió en DMF (20 ml) . A la suspensión resultante se añadió el ácido 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3,6, 7- trimetil-2 (E),4(E),6(Z)-heptatrienoico (0.60 g, 1.6 mmoles) y la mezcla se agitó durante 3 horas. Esta se enfrió a 0°C y se trató durante 10 minutos con una solución de 0,N-bis (trimetilsilil) -4-aminofenol (1.1 g. 4.3 mmoles) (CAS # 52726-86-0) en 5 ml de DMF. La mezcla se agitó durante 1 hora y se vertió en KF acuoso 15% (20 ml) y se agitó de nuevo durante 1 hora. La mezcla acuosa se extrajo con éter, se lavó con agua, se secó (MgS04) y el disolvente se eliminó obteniéndose un aceite. El aceite se purificó mediante cromatografía (40% acetato de etilo/hexano) obteniéndose N- ( 4-hidroxifenil ) -(2E,4E,6Z)-7-[3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3,6,7-trimetil-2, 4 , 6-heptatrienamida en forma de un sólido de color amarillo. XE RMN (DMSO) d 9,75 (lH,s,NH), 9,20 (1H, -OH) , 8, 18 (1H, s, aromático) , 7 , 89 ( 2H, s , aromático ) , 7, 40 (2H, d, aromático) , 688 ( 2H, d, aromático) , 6, 42 (2H,dd, C4, 5-H) , 6,04 (1H,S,C2-H), 2 , 22 ( 3H, s , CH3 ) , 2,04 (3H,s,CH3), 1,98 (3H,S,CH3) .

IF) Preparación de la N- (4-hidroxifenil ) - (2E,4E,6Z)-7-(3, 5-dibromofenil ) -3, 7-dimet il-2, 4, 6-heptatrienamida . Una solución agitada de trietilfosfonoacetato (28 g, 125 mmoles) en dimetoxietano (DME) se enfrió a °C y se trató con NaH (55% en aceite, 5.9 g, 135 mmoles) . Cuando cesó el desprendimiento de hidrógeno, se añadió gota a gota una solución de yodo (32 g, 125 mmoles) en 150 ml de DME. A continuación, se enfrió la reacción a -20°C y se añadió gota a gota, litio bis (trimetilsilil) amida ( 1 , OM THF, 125 ml , 125 mmoles) .La mezcla se agitó a -10°C durante 10 minutos y se añadió una solucción de 3, 5-dibromobenzaldehido (33.0 g, 125 mmoles) en 150 ml de DME. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y 40-45°C durante 4 horas. La reacción se vertió en agua fría y se extrajo en hexano. La parte orgánica se lavó con agua y sal muera. Se secó (MgS04) y se eliminó el disolvente obteniéndose un aceite denso. Este se purificó mediante HPLC (10% acetato de etilo/hexano) obteniéndose una mezcla de isómeros de yodoolefina. Este material se empleó en el próximo paso Una solución agitada del éster etílico del ácido 2-yodo-3- (3, 5-dibromofenil ) -2 (E, Z ) -propenoico (44 g, 96 mmoles) en THF (700 ml ) se enfrió a -75°C y se trató gota a gota con litio bis (trimetilsilil ) amida (l.OM THF, 100 ml, 100 mmoles) . La temperatura se aumentó cuidadosamente a -30°C y se virtió en agua y se extrajo con hexano. El extracto se secó (MgS0 ) y el disolvente se eliminó obteniéndose un aceite denso. La purificación mediante HPLC (3% éter/hexano) proporcionó el éster etílico del ácido 3- ( 3, 5-dibromofenil ) -2-propinoico. XH RMN (CDC13) d 7,73 ( 1H, d, aromático ) , 7, 65 (2H,d, aromático) , 4,30 (2H,q,0CH2), 1,35 (3H,t,CH3).

El complejo bromuro de cobre ( I ) -sulturo de dimetilo (20.7 g, 101 mmoles) se suspendió en 1.0 litros de THF (anhidro) que habia sido previamente desgasificado y se colocó en atmósfera de argón. La suspensión agitada se enfrió a -5°C y se añadió una soluccion 1.5M de metillitio en éter (137 ml, 205 mmoles) . Después de agitar durante 10 minutos, la reacción se enfrió a -78°C y se añadió gota a gota éster etílico del ácido 3- ( 3 , 5-dibromofenil ) -2-propinoico (31 g, 91mmoles) en THF (150 ml) . La mezcla de reacción se agitó de -65 a -60°C durante 2 horas. A continuación, la reacción se vertió directamente en una solución de hexano (500 ml) bien agitada conteniendo 100 ml de ácido acético. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos, y a continuación se lavó con agua, sal muera, y se secó (MgS04) y se eliminó el disolvente. La purificación mediante HPLC (5% EtOAc/hexano) proporcionó 14 g del éster etílico del ácido 3- ( 3, 5-dibromofenil ) -3-metil- 2- (Z) -propenoico. XH RMN (CDC13) d 7,61 ( 1H, s, aromático ) , 7,25 ( 2H, s , aromático ) , 5,92 (lH,s,C2- H) , 4,01 (2H,q,CH2), 2,13 (3H,s,CH3), 1,11 (3H,t,CH3) . El éster etílico del ácido 3- (3, 5-dibromofenil ) -3-metil-2- ( Z) -propenoico (14 g, 41 mmoles), se disolvió en hexano (1.1 litros) y se enfrió a -40°C. La solución se trató gota a gota con DIBAH (90 ml,l,OM en hexanos) y se agitó a temperatura ambiente hasta que la temperatura alcanzó +5°C. Esta se trató con una solución acuosa de sal de Rochelle 10% (100 ml) y se agitó durante 2 horas. Las sales se filtraron y el residuo orgánico se lavó con agua y se secó (MgS04) , y el disolvente se eliminó obteniéndose 12 g de 3- (3, 5-dibromofenil) -3-metil-2- (Z) -propen-1-ol : XH RMN (CDC13) d 7 , 58 ( 1H, s, aromático ) , 7,25 ( 2H, s , aromático ) , 5,75 (lH,t,C2-H), 4,05 (2H,d,CH20), 2,04 (3H,s,CH3) . Se añadió el 3- ( 3, 5-dibromofenil ) -3-metil-2- ( Z ) -propen-1-ol (12 g, 40 mmoles) en acetato de etilo (200 ml) a una suspensión de Mn02 en acetato de etilo bien agitada (1.8 litros) . Después de 2 horas a 35°C se enfrió la suspensión, se filtró a través de celite, y se eliminó el disolvente. Este se purificó mediante HPLC (10-15% acetato de etilo/hexano), obteniéndose 9.4 g de 3- ( 3, 5-dibromofenil ) -3-metil-2- (Z ) -propenal .

XH RMN (CDC13) d 9,45 ( 1H, d, aldehido ) , 7,71 (1H, s, aromático ) , 7,38 (2H, s , aromático ) , 6, 24 ( 1H, d, C2-H) , 2,29 (3H, s,CH3) . 10.6 g (40 mmoles) de 3-metil-4-fosfonocrotonato de trietilo, se disolvieron en 500 ml de THF, se enfriaron a -78°C y se trataron con 36 ml (36 mmoles/l,0M en THF) de litio bis ( trimetilsilil ) amida . Manteniendo la temperatura a -78°C, se añadiolentamente el 3- ( 3, 5-dibromofení 1 ) -3-metil-2 ( Z ) -propenal (9.3 g, 31 mmoles) en 50 ml de THF. Se agitó la mezcla a -78°C durante 0.5 horas y se agitó a temperatura ambiente hasta que la temperatura alcanzó los 10°C. La mezcla se vertió en ácido fosfórico acuoso diluido. El producto se extrajo con hexano y la porción orgánica se lavó con agua, se secó (Na2S04), y se eliminó el disolvente obteniéndose un aceite crudo. La purificación y la separación del isómero se efectuó mediante cromatografía con silicaqel (5% éter/hexano), obteniéndose 5.5 g del éster etílico del ácido (2E, 4E, 6Z) -7- (3, 5-dibromofeni 1-3 , 7 -dimeti 1-2, 4,6-heptatrienoico. 1H RMN (CDC13) d 7,60 ( 1H, s , aromático ) , 7,31 (2H, s, aromático) , 6,52 ( 1H, dd, C5-H) , 6, 28 (2H,m,C4 y C6-H) , 5,74 (1H,S,C2-H), 4,10 ( 2H, q, 0-CH2 ) , 2,20 (3H,s,C3 CH3) , 2,13 (3H,s,C7 CH3) . 1,30 (3H,t,CH3) . La conversión en el ácido (2E, 4E, 6Z ) -7- ( 3, 5-dibromofenil-3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienoico, se efectuó como se ha indicado en la, b, c y d: Una solución del éster etílico del ácido (2E, 4E, 6Z ) -7- ( 3, 5-dibromofenil-3, 7-dimetil-2 , 4 , 6- heptatrienoico (113 mg, 0.272 mmoles) en 800 µl de THF, 800 µl de metanol, 70 µl de agua, y 2.7 ml de solución de NaOH I ON, se calentó a 80°C. Los pasos implicados fueron la neutralización de la solución de reacción enfriada, con H3P04 3? (900 µl ) . La recristalización con THF/hexanos proporcionó 50 mg del ácido (2E, 4E, 6Z ) -7- ( 3 , 5-dibromofenil-3 , 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienoico: XH RM? (CDC13) d 7,62 1H, s, aromático) , 7,33 (2H, s , aromático) , 6,60 (lH,dd,C5-H) , 6,32 (lH,d), 6,28 (lH,d), 5,80 (1H,S,C2-H), 2,20 (3H, s, C3CH3) , 2,15 (3H,s,C7 CH3); HRMS calculado para C?5H?4Br202: 383,9361; encontrado 383,9360. Una solución de éter anhidro (30 ml) y DMF (0.5 g, 7 mmoles), se enfrió a 15°C y a continuación, se trató con cloruro de oxalilo (0.2 g, 1.5 mmoles) y se agitó durante 15 minutos. A continuación se eliminó todo el disolvente y se suspendió cloruro de dimetilcloroformamidinio (Helv. Chim. Acta 42, 1653 (1959)) en forma de un sólido de color blanco, en DMF (5 ml) . A la mezcla se añadió el ácido (2E, 4E, 6Z ) -7-(3, 5-dibromofenil-3 , 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienoico (0.30 g, 0.8 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3-4 horas. La reacción se enfrió a 0°C y se trató durante un período de 10 minutos con una solución de O, N-bis (trimetilsilil ) -4-aminofenol (0.6 g, 2.4 mmoles) en DMF (5 ml ) . Una vez terminada la adición se continuó la agitación durante 1 hora y a continuación se vertió la mezcla en KF acuoso 5% (10 ml) y se agitó 1 hora más. La mezcla acuosa se extrajo con éter, se purificó mediante HPLC empleando EtOAc 35%/hexanos como eluyente obteniéndose la N-(4-hidro-xifenil) -(2E,4E,6Z)-7-(3, 5-dibromofenil-3 , 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida . XH RMN (DMSO) d 9,80 (lH,s,NH), 9,18 (1H, s, OH), 7,82 ( 1H, s , aromático ) , 7,51 (2H, s, aromático) , 7,41 (2H, d, aromático ) , 6,67 (2H,d, aromático) , 6,6-6,4 (3H,br m, C4,5,6-H), 6, 00 (1H, s,C2-H) , 2,16(3H,s,C3 CH3) 2,13(3H,s, C7 CH3) .

IG) Preparación de la N- ( 4-hidroxi fenil ) - (2E, 4E, 6 (Z) -7-fenil-3, 7 -dimeti1-2, 4, 6-heptatrienamida . El etil (trimetilsilil ) acetato (4.2 g, 40 mmoles) en 40 ml de THF, se enfrió en un baño de NaCl/hielo/agua a 0°C y a continuación, se añadió lentamente, litio diisopropil amida (2.0M en heptano/THF/etilbenceno, 18.2 ml, 36.3 mmoles) . A continuación, se enfrió el recipiente de reacción en un baño de hielo seco/isopropanol a -70°C y se añadió acetofenona (2.0 g, 16.5 mmoles) a la mezcla de reacción. Se retiró el baño de enfriamiento y la temperatura de reacción se dejó calentar hasta 0°C y se añadió ácido fosfórico (3N, 100 ml) a la mezcla de reacción a esta temperatura. La mezcla de reacción se diluyó a continuación con agua y se extrajo con éter y la solución orgánica se lavó con sal muera saturada, se secó (MgS04), y se concentró obteniéndose un aceite amarillo. La cromatografía de media presión con silicagel empleando 3% éter/hexanos permitió la separación de ambos isómeros. Ester etílico del ácido 3-fenil-3-metil-2 (Z) -propenoico, puro, (604 mg) :1H RMN (CDC13) d 7,12-7,40 (5H,m, aromático) , 5,90 (lH,s), 3,97 (2H, q, 0-CH2) , 2,14 ( 3H, s , vinil-CH3 ) , 1,06 (3H,t,-CH3) . El 3-fenil-3-met il-2 ( Z ) -propen-1-ol, se preparó de la misma manera que el 3- ( 3 , 5-dibromofenil ) -3-metil- 2 ( Z ) -propen-1-ol de la sección IF) de más arriba. El éster etílico del ácido 3-fenil-3-metil-2 ( Z ) -propenoico (543 mg, 2.96 mmoles) DIBAH ( 1 , 5M en tolueno, 5.9 ml, 8.9 mmoles), proporcionó 423 mg de 3-fenil-3-metil-2 (Z) -propen-1-ol : XE RMN (CDCl3) d 7,1-7,40 (5H,m, aromático) , 5,71 (lH,dt), 4,08 (2H,d), 2,09 (3H,d) , 1, 25 (lH,bs,OH) . El 3-fenil-3-metil-2 (Z ) -propenal, se preparó de la misma manera que el 3- ( 3 , 5-dibromofenil-3-met il-2 ( Z ) -propenal de la sección IF) de más arriba. El 3-fenil-3-metil-2 (Z) -propen-1-ol (400 mg, 2.7 mmoles); Mn02 (2.8g, 32.3 mmoles) en 10 ml de éter, proporcionaron 340 mg de 3-fenil-3-metil-2 (Z) -propenal: 1H RMN (CDC13) d 9,48 (lH,d,CH0), 7,20-7,45 ( 5H, m, aromático ) , 6,14 (lH,d), 4,08 (2H,d), 2,32(3H,s con división fina) . El éster etílico del ácido 7-fenil-3, 7-dimetil- 2 (E) , 4 (E) , 6 ( Z) -heptatrienoico, se preparó de la misma manera que el éster etílico del ácido 7- (3, 5-dibromo fenil) -3, 7-dimeti 1-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico de la sección IF de más arriba. El 3-metil-4-fosfonocrotonato de trietilo (433 mg, 1.64 mmoles) en 3 ml de THF, litio bis ( trimetilsilil ) amida ( ÍM en THF, 1.5 ml, 1.5 mmoles), 3-fenil-3-metil-2 ( Z ) -propenal (200 mg, 1.37 mmoles) en 2 ml de THF: Rendimiento 270 mg del éster etílico del ácido 7-fenil-3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico. XH RMN (CDC13) d 7,23-7,45 (5H,m, aromático) , 6,70 (lH,dd), 6,26 (2H,d), 5,74 (1H,S), 4,26(2H,q), 2,19 (3H,s), 2,16 (3H,s), 1,28 (3H, t) . El ácido 7-fenil-3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (z) -heptatrienoico, preparado de la misma manera que el ácido 7- (3, 5-dibromofenil) -3, 7-dimetil-2 (E) , 4(E), 6(Z) -heptatrienoico, en la sección IF) de más arriba. El éster etílico del ácido 7-fenil-3 , 7-dimet il-2 (E ) , 4(E), 6 (Z ) -heptatrienoico (259 mg, 1.01 mmoles) en 4 ml de MeOH, 0.5 ml de THF con 1 ml de NaOH ION. La cristalización proporcionó 93 mg del ácido 7-fenil-3,7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 (Z) -heptatrienoico. ?E RMN (CDC13) d 7,41 (2H, t, aromático) , 7,32 ( 1H, t , aromático ) , 7,25 (2H,d, aromático) , 6,73 (lH,dd), 6,29 (lH,d), 6,27 (1H, d) , 5,76 (lH,s), 2,20 (3H,s), 2,17 (3H,s); HRMS calculado para C?5H?602: 228,1150; encontrado 228,1152. La N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) -7-fenil-3, 7-dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienamida, preparada de la misma manera que la N- (4-hidroxifenil ) - ( 2E, 4É, 6Z ) -7- ( 3, 5-dibromofenil ) -3 , 7-dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienamida en la sección IF) de mas arriba. El cloruro de dimetilcloroformamidio (Helv . Chim. Acta 42, 1653 (1959)) (42.1 mg, 0.33 mmoles) en 1 ml de DMF reaccionó con el' ácido 7-fenil-3, 7-dimetil-2 (E) , 4 (E) , 6 ( Z ) -heptatrienoico (50 mg, 0.22 mmoles) en 1 ml de DMF para obtener el cloruro de ácido. El cloruro de ácido se hizo reaccionar con 0 , N-bis (trimetilsilil ) -4-aminofenol (167 mg, 0.66 mmoles) en 1 ml de DMF, piridina (106 ml, 1.32 mmoles), obteniéndose después de la cristalización 12 mg de N- ( 4-hidroxi fenil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7- fenil-3 , 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida. XH RMN (CDC13) 6 7, 40 (2H, d, aromático) , 7,22-7,40 ( 5H, m, aromático) , 7,03 (lH,br m) , 6,77 (2H,d), 6,68 (lH,dd), 6,24 (lH,d), ,75 (lH,s), 4,77 (lH,brs), 2,22 (3H,s), 2,19 (3H,s); HRMS calcul ado para C2?H2 iN 02 : 31 9 , 1572 ; encontrado 319 , 157 6 . Ejemplo II Actividad farmacológica IIA. Ensayos in vi tro : Los compuestos de fórmula I se ensayaron para determinar la inhibición del crecimiento celular y la actividad apoptosis en ensayos celulares empleando los siguientes lineas celulares: Células de carcinoma de mama ER+, humano (ZR-75-1) obtenidas en ATCC (CRL 1500), fueron crecidas en medio Gibco RPMI 1640 suplementado con piruvato de sodio, 10% de FBS y 13 ng/ml de gentamicina. Las células se incubaron a 37°C, 4.5% de C02 y aire humidificado 95.5%. El carcinoma de mama ER-, humano (MDA-435) obtenido del Dr . Janet Price, MDA Cáncer Center, Houston, Texas, se crecieron en medio Gibco RPMI 1640 suplementado con piruvato de sodio, 10% de FBNS y 13 ng/ml de gentamicina. Las células se incubaron a 37°C, 4.5% de C02 y aire humidificado 95.5%. Células de carcinoma de mama ER-, humano, (MDA-231) obtenido de ATCC (HTB 22), fueron crecidas en medio de Eagle MEM suplementado con aminoácidos no esenciales, piruvato de sodio, y BSS de Earle, FBS 10% y 13 ng/ml de gentamicina. Las células se incubaron a 37°C, 4.5% de C02 y aire humidificado 95.5%. El carcinoma de pulmón de células grandes, humano, (H1299), obtenido de la ATCC (CRL-5803), se hizo crecer enmedio Delbecco Mínimo Esencial (DMEM) de Gíbco, alta glucosa, suplementado con piruvato de sodio, 10% de FBS y 13 ng/ ml de gentamicina. Las células fueron incubadas a 37°C, 4.5% de C02 y aire humidificado 95.5%. El carcinoma colorectal, humano (RKO) obtenido del Dr. Bernie Vogelstein, se hizo crecer en medio Delbecco Mínimo Esencial de Gibco (DMEM) , alta glucosa, suplementado con piruvato de sodio, 10% de FBS y 13 ng/ml de gentamicina. Las células se incubaron a 37°C, 4.5% de C02 y aire humidificado 95.5%. 1. Inhibición del crecimiento celular; Ensayo MTT Los compuestos de fórmula I fueron ensayados para determinar la capacidad de inhibir el crecimiento celular empleando el ensayo estándar MTT, un ensayo basado en el tetrazolio, el cual mide la viabilidad de las células en cultivo. Las células fueron recogidas después de alcanzar el 70-80% de confluencia y centrifugadas. A continuación, las células se resuspendieron en el medio en el cual el FBS fue reemplazado con FBS de Hyclone separado de carbón/dextrano, y sembrado (2 ml/pocillo) en placas de 6 pocilios (Corning) a una densidad que permitía el crecimiento lineal después de un periodo de ensayo de cuatro días: Los compuestos de formula I (10 mM de stock en sulfuro de dimetilo (DMSO), se añadieron 18-24 horas después de la siembra: Las diluciones de los compuestos se prepararon en el medio de crecimiento apropiado y se añadieron a las células en unas concentraciones finales de 10, 3.3 y 1 µM en 0.1% de DMSO. A las 24, 48 y 72 horas, se añadió MTT (bromuro de 3- [4, 5-dimetiltiazol-2-il-2-5-difeniltetrazolio) solución de stock (5 mg/ml en lxPBS) a las placas de células (625 µl pocilio) las cuales fueron incubadas a continuación durante 2.5 horas. El líquido se aspiró de los pocilios y se añadió 1 ml/pocillo de etanol 95%, para solubilizar el producto de reacción formazán. Las placas fueron agitadas (sacudidor Mini-Orbital Bélico) durante 15 minutos. El formazán solubilizado se transfirió a continuación (50 µls) en una placa de 96 pocilios y las densidades ópticas (OD) se midieron (lector de microplacas Bio-Tek) a 570 nm y longitud de onda de referencia 660 nm. El tanto por ciento de inhibición del crecimiento celular se calculó de acuerdo con la siguiente fórmula: % IN = OD (sin tratar) - OD (tratado) x 100 OD (sin tratar) Los resultados están indicados en las tablas 1-3 Tabla 1 Inhibición del crecimiento celular en células ZR-75-1 Compuesto horas % de inhibición 1) concentración de fármaco (µM) 1. 3.3 10.0 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 14.0 21.0 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] 3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 0 18.0 30.0 72 56.0 64.0 ?-(4-hidroxifenil)-(2E,4E, 6Z)- 48 60.0 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] 2,4, 6-heptatrienamida 72 10.0 80.0 % de inhibición menos % de inhibición del crecimiento celular comparado con un control sin el fármaco .

Tabl a 2 Inhibi ción del crecimi ento celul ar en célul as MDA 2 31 Ccppuesto horas % de inhibi ci ón 1) consentración de fármaco(µM) 1.0 3.3 10.0 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 18 30 26 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 39 35 61 72 46 62 71 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 40 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] 2, 4, 6-heptatrienamida 48 57 72 38 48 76 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 22 33 37 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 42 51 50 72 50 68 73 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 50 51 58 7- [3, 5-bis (metil) fenil] -3, 7-dirae-til-2, 4, 6-heptatrienamida 48 60 70 72 72 81 82 85 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 18 21 30 7- [3, 5-bis (metoxi) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 30 52 65 72 25 61 64 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 65 65 7- [3, 5-bis (bromo) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 72 81 82 72 78 86 87 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) • 24 45 57 58 7- [fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 67 80 81 72 76 87 88 i ) % de inhibición menos % de inhibición del crecimiento celul ar comparado con un control s in el fármaco .

Tabla 3 Inhibición del crecimiento celular en células MDA 435 Compuesto horas % de inhibición x) aoncentración de fázmaco(µM) 1. 3.3 10.0 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 47 78 77 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] 3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 59 91 95 72 94 96 98 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 67 68 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 6, 7-trimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 95 96 72 98 99 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 19 81 91 7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3-metil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 45 93 99 72 73 83 100 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 56 53 53 7- [3, 5-bis (metil) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 95 92 98 72 95 94 91 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 21 36 25 7- [3, 5-bis (metoxi) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 64 61 61 72 86 87 87 N-(4-hidroxifenil)-(2E,4E,6Z)- 24 27 28 37 7- [3, 5-bis (bramo) fenil] -3, 7-dimetil 2,4, 6-heptatrienamida 48 70 66 70 72 86 88 87 N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) - 24 7- [fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida 48 39 40 42 72 41 51 68 i) % de inhibición menos % de inhibición del crecimiento celular comparado con el control sin el fármaco Estos resultados indican que los compuestos de fórmula I son capaces de inhibir el crecimiento celular. El tanto por ciento (%) de inhibición aumenta con la concentración y con las horas de incubación, en las células ER- de carcinoma de mama y en las células de carcinoma colorectal. Sin embargo, todos los compuestos ensayados ocasionan la reducción del crecimiento celular. Por ejemplo, la tabla 3 muestra que la _ N- ( 4-hidroxifenil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7- [ fenil ] -3 , 7 dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienamida inhibe el crecimiento de las células MDA-435 un 68% comparado con el control sin fármaco a 10 µM después de 72 horas. Esto significa que estas células tratadas con los compuestos de fórmula I muestran un correspondiente descenso en su conversión del substrato en formazan, el cual es debido a la reducción de la cantidad de crecimiento celular o inducción de la apoptosis. 2. Apoptosis: Detección de la muerte celular mediante ELISA: Se ensayaron los compuestos de fórmula I para determinar su capacidad de ocasionar la apoptosis, como sigue : a) Preparación de la muestra Las células y los medios se recogieron, las células se centrifugaron, se resuspendieron en 100 µl de tampón de lisis (50 mM Tris-Cl (pH=8,0), 20 mM EDTA, 1% NP-40e) y se incubaron 30 minutos a 4°C para la lisis. Los residuos celulares se separaron por centrifugación, y se extrajo un alicuota (30 µl ) del suplemento para la determinación de la proteina y se guardó a -20°C. Se añadieron 280 µl de tampón de lisis, se mezcló a tondo y se centrifugó a 14.000 rpm durante 10 minutos a 4°C Se extrajo un alícuota (180 µl) y la muestra se guardó a -20°C hasta el momento del ensayo. b) ELISA Se empleó un kit de detección de la apoptosis obtenido comercialmente en Boehringer Mannheim (n° de catálogo 1544-674), siguiendo las indicaciones previstas en el kit (ELISA para detección de la muerte celular) . Sin embargo, el protocolo se modificó en que se preparó una dilución 1:40 a 1:100 de la muestra, en lugar de la dilución 1: 10 recomendada, debido al aumento del número de células empleado para preparar el extracto de la muestra y el susbsiguiente aumento de la reactividad de ELISA. El ensayo mide la apoptosis por cuantificación de la cantidad de fragmentación nucleosomal de los extractos de células tratados con los compuestos de ensayo (muestras) . Estos fragmentos nucleosomales, generados por la activación de endonucleasas, son un conocido determinante de la apoptosis. Los anticuerpos antihistonas se emplean para fijar cualquier fragmento nucleosomal de la muestra al pocilio de las placas de microtitulación. La muestra se incuba a continuación con anticuerpos anti-ADN conjugados con la peroxidasa y seguida-mente se incuban con el substrato de peroxidasa, ABTS. El cambio colorimétrico resultante se mide espectrofotometricamente a 405/490 nm. c) Determinación de la proteina El contenido total de proteína de cada muestra se determinó con la finalidad de normalizar los valores de ELISA con la cantidad de muestra cargada. El protocolo del ensayo con microplaca está descrito en el manual de instrucciones (ensayo Biorad DC, Cat # 500-0116) Sección 5.2. Las concentraciones de proteína se calcularon en base a una curva de regresión lineal. d) Cálculos del ensayo ELISA Las lecturas relativas de la O.D. mediante el ELISA, se determinaron restando el valor O.D. del fondo de la placa ELISA. No se restó ningún valor O.D, del control sin fármaco (solamente tampón de lisis) del valor O.D. de la muestra. Se determinó un coeficiente de corrección (CC) basado sobre la concentración de proteína de la muestra comparada con el control sin fármaco, para corregir la O.D. de la muestra, después de restar la O.D. del fondo (BCS O.D.). Se calcula el número de veces de aumento sobre el control sin fármaco y se normaliza a la concentración total de proteína de las muestras, multiplicando por el coeficiente de corrección. Para determinar el número de veces de aumento de la O.D. ELISA, se obtienen las siguientes mediciones de la O.D. : Fondo de la placa ELISA - solamente tampón de lisis. Control no tratado con fármaco - Muestra de células tratada con DMSO (NDT) ; Muestra tratada con fármaco - Muestra de células tratada con un compuesto de fórmula I (DT) . Se resta EPB de NDT (NDT-EPB) y de DT (DT- EPB) . Se calcula el número de veces de aumento de la muestra tratada respecto al control, mediante la ecuación (DT- EPB) / (NDT-EPB) . Para determinar la concentración total de proteina de las muestras, se obtiene la concentración total de proteína en mg/ul calculada empleando la fórmula estándar de regresión lineal (y = mx + b) basada en los estándares BSA.B= fondo de ELISA. Concentración de proteína (PC) (mg/ml) = (absorbancia de la muestra b/x. El coeficiente de corrección (cc) es (NDT) (PC) (DT) (PC) Determinar el número de veces de aumento del ELISA (Fl) normalizado a la PC total: nDT es DT x cc (el cual es la O.D. de DT normalizada a la PC) nNDT es NDT x cc (el cual es la OD.de NDT normalizada a la PC) Fl normalizada a la PC es nDT/nNDT. Los resultados están indicados en la tabla 4 siguiente. o Tabla 4 Inducción de la apoptosis ZR-75-1 MDA-435 RKO Compuesto Inducción, veces 1) Inducción, veces } Inducción, veces1 I hrs 10uM(cont.?. 3.3u luM lOuMfcont.2) 3.3uM luM lOu ícont.2. 3.3uM luM 10uM Acido 24 KD i 1 1(13) 1 1 ND ND ND (2E.4E.6Z)- 7-[3,5-bis(tri- 48 KD i 1 1(15) 1 1 ND ND ND fluorometil) fenil]-3,7-di- 72 2(9) 1 1 1(19) 1 1 ND ND ND metil-2,4,6-lieptatrienoico N-(4-hidroxi- 24 3(2) 2 2 6(5) 3 21(8) 14 2 fenil)-(2E,4E, 6Z)-7-[3,5-bis 48 15(30) 19 2 16(10) 10 3 23(9) 5 4 1 (trifluorometil) fenil]-3,7-di- 72 64(47) 69 2 34(12) 12 4 15(5) 1 1 metil-2,4,6-lieptatrienamida " Inducción veces - Veces de aumento de la apoptosis, comparado con el control sin fármaco, después de la corrección de la cantidad de pr 2 cont. - Una comparación de la actividad con los ensayos del control positivo interno 9-cis 4-HPR.

Los resultados de la tabla 4 demuestran que los compuestos de fórmula I ensayados en este ensayo son aptos para producir la apoptosis en las células ER+ y ER- del carcinoma de mama y las células del carcinoma colorectal. Por ejemplo la N- ( 4-hidroxifenil ) - (2E,4E,6Z)-7-[3,5bis ( trifluoro-metil ) fenil] -3,7-dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienamida, da como resultado una significativa inducción de la apoptosis a la 24-48 horas, mientras que el ácido correspondiente, ácido (2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis ( tri flúoro-metil ) fenil] -3,7-dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienoico, induce cantidades considerablemente más baja de apoptosis solamente después de 72 horas. Sí, el ejemplo N- ( 4-hidroxifenil ) - (2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] -3,7-dimetil-2 , 4 , 6-heptatrienamida, induce una apoptosis significativa en las líneas celulares MDA-435 y RKO después de 24 horas y adicionalmente en las células ZR-75-1 después de 48 horas. IIB. Ensayos in vi vo El compuesto N- ( 4-hidroxi fenil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7- [ 3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7 -dimeti 1-2 ,4,6-heptatrienamida, se ensayó y se encontró que disminuía tanto el tamaño del tumor como el número de tumores . Así pues, los compuestos de fórmula I tienen eficacia contra los tumores mamarios establecidos inducidos con nitrosometilurea (NMU), en ratas. La inducción de tumores invasores específicos de tejidos mamarios en ratas mediante el NMU (Gullino y col., 1975), produce primariamente carcinomas estrógeno-dependientes (Arafah y col./ 1980) en el intervalo tan corto de 4 semanas, seguido de una dosis única de baja toxicidad (McCormick y col., 1981) y da como resultado un alto tanto por ciento de inducción tumoral. Las propiedades de los tumores inducidos en las ratas mediante la NMU en este modelo experimental son representativas del carcinoma mamario humano y son invasivos (McCormick y col., 1981) . Materiales y métodos, 750 ratas Sprague-Dawley hembras vírgenes, de 26 a 32 días de edad (Harían Laboratories) se alojaron en jaulas de policarbonato (3 ratas/jaula) y se les proporcionó comida y agua ad libi t um . Los tumores mamarios fueron inducidos esencialmente como se ha descrito anteriormente (Gullino y col., 1975 y McCormick y col., 1981) . A la edad de 50 +/-3 días, cada animal recibió una dosis única (50 mg/Kg de peso corporal) de NMU (Sigma, St. Louis, MO) en 0.85% de cloruro de sodio acidificado a pH 5,0 con ácido acético. El carcinógeno se administró con una aguja de 26 g por vía i.v. en la vena caudal en un volumen de 0.5 ml . Las ratas se comprobaron semanalmente 4 semanas después de la administración del NMU, para detectar, tumores por palpación, y aquellas que portaban por lo menos un tumor mamario, palpable durante 11 días o menos, se entraron en el estudio el día 61 después de la administración de NMU. Se entraron quince animales en los grupos de tratamiento o de control. Los diámetros de los tumores se midieron semanalmente con calibres a lo largo de sus ejes longitudinal y transversal, y el volumen del tumor se calculó a partir de la fórmula del elipsoide (Dxd2)/2, en donde D es el diámetro largo y d es el diámetro corto. Los días en los que se palparon nuevos tumores o aquellos en los que desaparecieron los tumores ya establecidos, fueron anotados junto con su posición anatómica. Los tumores que aparecieron en la misma posición anatómica en la cual un tumor habia anteriormente remitido se consideraron como rebrotes del mismo tumor. Las ratas que desarrollaron ulceraciones de los tumores fueron inmediatamente separadas de los estudios. Todos los animales comprendidos en los grupos fueron pesados diariamente todos los días de la semana durante 6 semanas . Se preparó la N- ( 4-hidroxifenil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7- ( 3 , 5 bis ( trif?uorometil) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida, en 4% de etanol, 8% de PEG400, 7.2% de Cremophor RH40 y 80% de D5 y se administró intraperitonealmente en un volumen de 2.8 ml vía una aguja de 21 g 5 veces por semana, q. d., durante 4 semanas . Resultados y discusión Para el tratamiento de tumores inducidos por NMU en ratas, se prepararon diariamente soluciones del compuesto de ensayo N- (4-hidroxifenil) - (2E, 4E, 6Z) -7-[3, 5-bis ( trifluorometil) fenil] -3-7 -dimeti1-2 , 4,6-heptatrienamida, en 4% de etanol, 8% de PEG400, 7.2% de Cremophor RH40 y 80% de D5 . Estos resultados (ver tablas 5-7) demuestran que el compuesto ensayado es capaz de ocasionar que los tumores existentes, se reduzcan y además, ocasiona que el número de tumores disminuya, eliminando primeramente los tumores y evitando que se formen tumores adicionales, en animales que se palparon nuevos tumores o aquellos en los que desaparecieron los tumores ya establecidos, fueron anotados junto con su posición anatómica. Los tumores que aparecieron en la misma posición anatómica en la cual un tumor había anteriormente remitido se consideraron como rebrotes del mismo tumor. Las ratas que desarrollaron ulceraciones de los tumores fueron inmediatamente separadas de los estudios. Todos los animales comprendidos en los grupos tueron pesados diariamente todos los dias de la semana durante 6 semanas Se preparó la N- (4-hidroxifenil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7-[3, 5-bis ( trifluorometil) fenil] -3, 7 -dimetil-2 ,4,6-heptatrienamida, en 4% de etanol, 8% de PEG400, 7.2% de Cremophor RH40 y 80% de D5W y se administró intraperitonealmente en un volumen de 2.8 ml vía una aguja de 21 g 5 veces por semana, q. d., durante 4 semanas . Resultados y discusión Para el tratamiento de tumores inducidos por NMU en ratas, se prepararon diariamente soluciones del compuesto de ensayo N- ( 4-hidroxifenil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7-[3, 5-bis (trifluorometil) fenil] -3, 7-dimetil 2,4,6-heptatriepamida, en 4% de etanol, 8% de PEG400, 7.2% de Cremophor RH40 y 80% de D5 . Estos resultados (ver tablas 5-7) demuestran que el compuesto ensayado es capaz de ocasionar que los tumores existentes, se reduzcan y además, ocasiona que el número de tumores disminuya, eliminando primeramente los tumores y evitando que se formen tumores adicionales, en animales tratados con el compuesto.

Tabla 5 Efecto de cuatro semanas de administración intrapentoneal de la N- ( 4-hidroxi f enil ) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7-[3, 5-bis ( trifluorometil) fenil ] -3, 7 -dime ti 1-2 , 4, 6-heptatrienamida (compuesto) en tumores previamente inducidos por NNU en ratas Sprague -Dawley.

Número de primeros tumores que remiten número de palpables el día O en las semanas Grupo 1 2 3 4 5 6 Control del vehículo - 2.8 ml 5x/semana 0/22 0/22 1/21 0/20 0/19 0/15 Compuesto 25 mg/kg/2.8 ml, 5x/semana 7/20** 5/19* 3/19 4/19* 4/18* 5/18* Probabilidad de que el tanto por ciento de primeros tumores que remiten a impalpables sea mayor que el grupo de control del vehículo (ensayo exacto de Fiseher) ; *p <0.05 y **p<0.005.

Tabla 6 Efectos de la administración intraperitoneal de cuatro semanas de la N- (4-hidroxif enil) - (2E, 4E, 6Z ) -7- [3, 5-bis (trif luo ro-me til) fenil] -3, 7 -dimet i 1-2 ,4, 6-heptatrienamida (compuesto) sobre el volumen de los primeros tumores inducidos por NMU en ratas Sprague-Dawley. Volumen del tumor principal + SEM (mm3) en las semanas Grupo 1 2 3 4 5 6 Control del vehículo - 1600+56 3684+13 6060+26 5176+14 8600+28 6485+23 2.8 ml, 5x/semana 3 30 32 90 38 75 Compuesto 25 mg/kg/ 358+243 801+3952162+70 3370+10 5433+17 8052+25 2.8 ml, 5x/semana ** * 5 22 21 84 Probabilidad de que el volumen del tumor principal por rata sea significativamente menor que el grupo de control del vehiculo (ensayo Rank Sum de Wilcoxon); *p <0.05 y **p<0.0O5.

Tabla 7 Efectos de la N- ( 4-hidroxif enil) - ( 2E, 4E, 6Z ) -7-[3, 5-bis ( trifluorometil) fenil] -3, 7- dimet il-2, 4, 6-heptatrienamida (compuesto) , administrada intraperitonealmente contra tumores mamarios primeramente inducidos con NMU, en ratas Sprague-Dawley* Volumen relativo del tumor el dia 0 Semanas después del tratamiento 2 3 vehículo compuesto vehíc. comp. vehíc . comp remitido >50% 0 10 0 8 2 6 estático 6 5 1 5 1 3 progresado > 100% 16 21 18 6 total 22 19 22 19 21 19 * Compuesto administrado en 4% de etanol 8% de PEG400, 7.2% de Cremophor RH40 y 80% de D5W a 25 mg/kg/2.8 ml . q.d., 5x/semana durante 4 semanas; 3 de 15 ratas tratadas perecieron por toxicidad y fueron excluidas de los datos .

ALa disminución del número total de tumores a lo largo del tiempo es debido al sacrificio de animales cuyos tumores se ulceraron. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional para la manufactura de los objetos a que la misma se refiere .

Claims (10)

1. R E I V I N D I C A C I O N E S Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Compuestos de fórmula I
2. Formula I caracterizados porque R y R son independientemente entre sí, hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxilo o trihalametilo, R3 es hidrógeno o alquilo; y R4 es hidrógeno excepto cuando R3 es alquilo entonces R4 puede ser alquilo; R5' R6 y R8 y R9 son independientemente entre sí, halógeno, hidrógeno, hidroxilo, alquilo o alquiloxilo; y R7 es hidrógeno o alquilo; los cuales están libres de isómeros 6-trans.
3. Compue s to s de l a re ivindi caci ón 1 de fórmul a
4. I I Formula II caracterizados porque R1, R2, R3, y R4 tienen los mismos significados de la reivindicación 1. 3. Compuestos de la reivindicación 2, caracterizadados porque R3 es metilo y R4 es hidrógeno. 4. Un compuesto de la reivindicación 2, caracterizado porque R3 y R4 son hidrógeno.
5. 5. Un compuesto de la reivindicación 2, caracterizado porque R3 y R4 son metilo.
6. 6. El compuesto de la reivindicación 2, N- (4-hidroxifenil)- (2E,4E,6Z) -7- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil) -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida .
7. 7. El compuesto de la reivindicación 2, N- (4 -hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis(tri-fluorometil) fenil] -3-metil-2, 4, 6-heptatrienamida, N- (4 -hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis (trifluorometil ) fenil] -3/ 6, 7-trimetil-2 ,4,6-heptatrienamida, N- (4 -hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis (bromo) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida, N- (4 -hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis(metil) fenil] -3, 7-dime ti 1-2 , 4 , 6-heptatri enamida, N- (4 -hidroxi fenil) -(2E,4E,6Z)-7-[3,5-bis(metoxi) fenil] -3, 7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida, y N- (4 -hidroxi fenil) - (2E, 4E, 6Z ) -7- [fenil] -3,7-dimetil-2, 4, 6-heptatrienamida .
8. 8. Una composición farmacéutica caracterizada porque contiene un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un soporte farmacéuticamente aceptable .
9. 9. Los compuestos de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, como medicamentos.
10. 10. El empleo de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer de mama.