TW449482B - Radiolabeled peptides for diagnosis and therapy - Google Patents
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Description
經濟部中央標準局員工消費合作社印製 449482 A7 A7 ___B7五、發明説明(1 ) 發明背景 1. 發明範圍 本發明係有關放射性治療之製劑與肽、放射性診斷之製 劑與肽,及製造此等放射性標記之放射性診断劑與放射性 治療劑之方法。明確言之,本發明係有關受體結合性血管 活性腸肽(包括天然血管活性腸肽(VIP)及其片斷、衍生物 、類似物’及模擬物)’及此等標記發射-射線之同位素 如:i|-99m(Tc-99m)之化合物之具體實施例,及製造及放 射性擦記此等肽之方法與套組,及此等肽於哺乳動物體内 定位顯影之用途。本發明亦有闕受體結合性血管活性腸肽 與其標記細胞毒性放射性同位素如:銖-186 (l86Re)及鍊_ ι88 (188Re)之衍生物,類似物與模擬物,及製造輿放射性標記 此等化合物之方法與套组,及此等化合物於哺乳動物體内 之治療用途。 2. 先前技藝之説明 天然之血管活性腸肽(VIP)爲28個胺基酸肽,首先自豬上 小腸分離出(赛德(Said)輿慕特(Mutt), 1970, Science 169: 1217-1218)。此肽屬於包括helodermin、小勝内泌素、生 長激素釋放抑制素及胰增血糖素之結構相近之小肽族群。 該肽如下式:^L HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN.醯胺 (其中胺基酸之單字母縮窝可見於茲貝(Zubay)之"生化學 M (Biochemistry),第2版,1988年,紐約麥克米連出版公 -4- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(2丨0X297公釐) 4 4 9 482 A7 B7 五、發明説明(2 ) 司(MacMillan Publishing: New York,p. 33) 0 VIP之生物故應係受與膜結合之受體蛋白質之活化,該 蛋白質會與細胞内環狀腺甞單磷酸訊號系統偶合。在組織 及器官中,VIP調節許多種不同生物活性。其調節細胞代 謝活性及調節外分泌與内分泌^亦誘發平滑肌放鬆並造成 血管擴張效果。VIP亦涉及調節許多種不同細胞型態之細 胞增殖與存活,此等細胞包括:角蛋白細胞'平滑肌細胞 '交感神經胚細胞、海馬體細胞 '及在活體外之NIH 3T3 細胞。 VIP受體廣泛分佈在胃腸道中,亦出現在多種其他細胞 型態中。在例如:腺癌瘤、乳癌、黑色素瘤、神經母細胞 瘤及胰癌瘤之腫瘤細胞t會表現大量VIP受體。事實上, VIP (包括VIP受體蛋白質)之高親和性結合位置之表現爲此 等腫瘤細胞標誌物,VIP舆此等細胞之專一結合性可發展 成在活體内定位及鑑別此等腫瘤細胞標誌物。 已知許多種放射性核種適用於放射顯影,包括67Ga、 99ltlTc(下文稱爲 Tc-99m)、inIn ' 123I、125I、i69Yb或 186Re 。在人體内達最適當放射顯影時,必須考慮許多因素。爲 了使檢測效率達最大程度,最好使用可發射200至200KeV 範圍内之r -能量之放射性核種。爲了使患者儘量減少吸 收放射線劑量,放射性核種之物理性半衰期必須在顯影法 所容許之儘可能縮短之範圍内°爲了可以在任一天或該天 之任何時間進行檢查,放射性核種之來原宜爲臨床位置經 常可取得者。 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(21〇X297公釐) , • , _ 0¾ Ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 經濟部中央橾率局員工消費合作社印製 A7__/^Α3ΑΆΆ—____五、發明説明(3 ) 先前技藝已知使用123ι或125ι在νιρ序列之酪胺酸殘基上 (Tyri()或Tyr22)對VIP類似物進行放射性碘化作用之方法e 此等放射性碘化物質亦已用來分析腫瘤細胞上VIP與受體 之結合性。 包薩(Boissard)等人,1986,Concer Res. 46^: 4406-4413説 明VIP之放射性碘化法及與人類結腸腸癌瘤細胞之結合。 艾爾巴特利(El Battari)等人 ’ 1988,J. Biol. Chem. 263: 17685-17689説明VIP之放射性碘化法及與人類結腸腺癌瘤 細胞之結合.。 薩佛(Shaffer)等人,1987, Peptides 是:1101-1106説明 VIP之放射性碘化法及輿人類小細胞及非小細胞癌瘤細胞 之結合。 史佛包達(Svoboda)等人,1988,Eur. J· Biochem. 176: 707-713説明VIP之放射性碘化法及輿老鼠轉化之腺泡細胞 之結合。 葛仕巴哈(Gespaeh)等人,1988, Cancer Res. 48: 5079-5083説明VIP之放射性碘化法及輿人類乳癌細胞之結合。 慕勒(Muller)等人,1989, J. Biol. Chem. 264: 3647-3650 揭示VIP之放射性碘化法及輿人類神經母細胞瘤細胞之結 合0 李(Lee)等人,1990, Peptides 11: 1205-1210揭示 VIP之 放射性碘化法及與人類小細胞及非小細胞癌瘤細胞之結合 〇 派克(Park)等人,1990, Cancer Rds.拉:2773-2780揭示 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS ) A4規格(210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装· 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 4 2 A7 I_____ —_B7 五、發明説明(4 )
VIP之放射性辨化法及與人類胃癌細胞之結合D 畢蘭(Bellan)等人 ’ 1992, Exp Cell Res· 200; 34-40揭示 VIP之放射性辨化法及與人類黑色素瘤細胞之結合。 慕迪(Moody)等人,1993, Proc. Natl. Aead. Sci. USA 90: 4345-4349揭示VIP之放射性碘化法及與非小細胞肺癌瘤細 胞之結合。 維格里尼(Virgolini)等人,I"4, Cancer Res· 54: 690-700説明VIP之放射性碘化法及與初級細胞及腫瘤細胞系之
結合D 先前技藝已知在γΐ〇或γ22上使用nijtvw類似物放射性 碘化法。 哈珊(Hassan)等人,1994,Nucl. Med. Biol. 2J_: 865-872 揭示VIP之放射性碘化法及由閃爍照相術測定放射性標記 物在老鼠活體内之分佈。 此等方法之用途在於利用放射性顯影法,特定言之放射 性閃爍照相術,在活體内檢測腫瘤細胞。VIP爲適用於此 等故射性顯影法之標誌物,因爲許多種不同腫瘤細胞對 VIP (VIP受體蛋白質)均表現高親和性結合位置,然而,放 射性碘化肽具有顯著之商業性缺點。123丨昂貴且供應量有 限。此外,通常無法在臨床位置上製備合格之放射性碘化 放射性藥劑。
Tc-99m爲較佳之放射性核種,因爲其發射i4〇keV之r射 線,物理性半衰期爲6小時,且很容易使用鉬_99/鍀-99m發 生器於原位製得。先前技藝曾使用之其他放射性核種則不 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS M4規格(210X297公釐) --:.1-II----裝------訂------^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 449482 g 五、發明説明(5 ) 如Tc-99m有利。其原因爲此等放射性核種之物理半衰期較 長,以致患者會吸收較多放射劑量(例如:銦-1 11)。或者 ,此等替代之放射性核種之r射線能顯著低於(例如:碘-125)或高於(例如:碘-131)Tc-99m,因此不遑合閃爍照相 顯影法。此外,使用原位發生器不會產生許多種不適用之 放射性核種。
Tc_99m爲過渡金屬,可利用金屬錯合部份有利地螯合 。可結合Tc-99m之放射性標記錯合部份可與各種專一結 合性化合物共價連接,作爲此等專一結合性化合物之放射 性標記方式。此係因最常使用之Tc-99m,過鍀酸根 (Tc04·)化學物質無法直接與大多數專一性結合化合物充份 強力結合,因此不適用於放射性藥劑。Tc-99tn與此等放 射性標記錯合部份之錯合作用典型地需要使用如:氣化亞 錫之還原劑進行過鍀酸根之化學還原反應。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 雖然Tc-9 9 m爲閃爍照相顯影術之較佳放射性核種,但 並未廣泛用於標記肽(參見蘭柏特(Lamberts,1991,J. Nucl. Med. 32^: Π89-1191)。此係因先前技藝已知Tc-99m用於 標記較大型蛋白質分子(即大小>10,000道爾呑)之方法並不 適合標示肽(分子大小小於10,〇〇〇道爾呑)。結果大多數肽 之放射性標記物必須由放射性核種螯合部份與肽共會連接 ’因此使螯合物依位置選擇性地進入胜肽中不會干擾胜肽 之專一結合性質之位置。 以Tc-99m標記胜肽之方法揭示於共同擁有之美國專利案 系列No. 5,225,180及同在申請中之美國專利申請案系列N〇. 8 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 449 48 2 A7 B7 五、發明説明(6 ) 07/653,012, 07/807,062, 07/851,074, 07/871,282, 07/886,752, 07/893,981, 07/902,935, 07/955,466, 07/977,628, 08/019,864, 08/044,825輿 08/073,577, 08 092,355, 08/095,760, 08/210?8225 與 PCT國際申請案 PCT/US92/00757, PCT/US92/10716, PCT/US93/02320; PCT/US93/03687, PCT/US9^/04794? PCT/US93/05372, PCT/US93/06029, PCT/US93/09387,與 PCT/US94/01894 ,該等專利案已併爲本文之參考文獻。然 而,此等文獻均未明確説明如何製備標記鍀-99m之血管活 性勝肽。 製僙之Tc-99m錯合物之方法係相關技藝已知者,並提 供下列實例作爲一般參考: 拜尼(Byrne)等人,美國專利案Nos. 4,434,15卜 4,575,556與4,571,430説明半胱胺酸硫内酯衍生之雙官能 螯合劑。 佛立茲柏格(Fritzberg),美國專利案No. 4,444,690説明一 系列以2,3-雙(氫硫基乙醯胺基)丙酸鹽爲主之鍀-螯合劑。 諾斯可(Nosco)等人,美國專利案No. 4,925,650説明Tc-99m螯合錯合物。 肯得(Kondo)等人,歐洲專利申請案,公告案號483704 A1揭示一種製備含氫硫基-Gly-Gly-Gly部份之Tc-99m錯合 物= 歐洲專利申請案No. 8410983 1.2説明雙醢胺基、雙硫醇 Tc-99m配位體及其鹽作爲腎功能追腙劑。 戴維森(Davison)等人,1981, Inorg. Chem. 20^: 1629-1632 -9- 本紙張尺度適用中國國家榡準(CNS ) A4规格(2i〇x297公釐) II ^—:1:----裳------訂------.Λτ^—:1-1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁〕 449482 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明(7 ) 揭示氧鍀鰲合錯合物。 佛立茲柏格(Tritzberg)等人,1982, J Nucl. Med. 592-598揭示以N,N,-雙(氩硫基乙醯基)-2,3-二胺基丙酸鹽爲主 之Tc-99m螯合劑。 拜尼(Byrne)等人,1983, J. Nucl. Med_ 巧:P126説明含高 半胱胺酸之Tc-99m螯合劑。 布萊森(Bryson)等人,1988, Inorg. Chem. T7} 2154-2161 説明Tc-99之中性錯合物,其對過量配位體不安定。 米蘇拉(Misra)等人,1989, Tet. Lett·拉:1885-1888 説明 用於放射性標記法之雙胺雙硫醇化合物。 螯合劑於放射性標記專一結合性化合物上之用途係相關 技藝上已知者,提供下列實例作爲一般參考: 甘塞(0这!18〇\^)等人,美國專利案]^〇.4,472,509説明1^-99m螯合物-共軛單株抗體之製法舆純化法。 史塔里安語普洛斯(Stavrianopoulos),美國專利案No. 4,943,523説明含有金屬螯合部份之可檢測分予。 佛立茲柏格(Fritzberg)等人,歐洲專利申請案No. 86100360.6説明適用於製備標記鍀之顯影劑之二硫醇、二 胺基、或二醯胺基羧酸或胺錯合物6 艾柏特(Albert)等人,英國牟利申請案8927255.3揭示利 用生長激素釋放抑制素衍生物(如:標記ϊ I i ln之克奇肽 (Octreotide),經由與胺基末端結合之螯合基團進行放射性 顯影。 艾柏特(Albert)等人’歐洲專利申請案N〇. w〇 91/01144 -10- 本紙張.尺度適财酬家鮮(CNS ) Λ4規格(210X297公| ) ---- ^^1 nn n^i ^ϋ· I n^i m m· ,, -. 洚 i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 49 482 A7 B7 五、發明説明(8 ) 揭示利用與生長因子、漱素、干擾素及細胞素有關之放射 性標記胜肽進行放射性顯影法,且包括由專一辨識性肽利 用該肽之胺基與放射性核種酱合基®共價連接。 費雪曼(Fischman)等人,國際專利申請案公告案號 W093/13317揭示附接螯合部份之向化性肽。 奎克布恩(Kwekkeboom)等人,1991,J_ Nucl. Med. 32: 981摘要#305係有關放射性擦記11 lIn之生長激素釋放抑制 素° 艾柏特(Albert)等人,1"1,1991年第12屆美國胜肽研 討會摘要LM10説明由標記luIn之二乙烯-三胺基五乙酸衍 化之生長激素釋放抑制素類似物之用途。 寇克斯(Cox)等人,1991年第7屆國際放射性醫藥學研討 會,(7th International Symposium on Radiopharmacology, p. 16,揭示標記Tc-99m、131I及⑴In之生長激素釋放抑制素 類似物於活體内利用閃爍照相術,爲内分泌腫瘤進行放射 性定位上之用途。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本買) 以Tc-99m標記某些專一結合性化合物,主要指大型蛋 白質之方法係先前技藝已知者,提供下列實例作爲一般參 考: 漢特威奇(Hnatowich),美國專利案No. 4,668,503説明 T c - 9 9 m蛋白質放射性標記法。 托曼(To丨man) ’美國專利案No. 4,732,(584説明目標分子 輿金屬硫新質之片段之共軛。 尼可洛提(>^〇1〇出)等人’美國專利案_.4,861,869説明 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標率(CNS ) Λ4規格(210X29*7公釐) A7 B7 449482 五、發明説明(9 雙官能偶合劑’適用於輿生物性分子如:抗體形成共軛物 〇 I- - ϊ —^Γ ^^1 —L. H· n -- t - - - -I m n ^^1 1.^1 > * - - 03 Te (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 佛立兹柏格㈣zberg)等人,美國專利案N0 4 965奶説 明以各種以S-受保護之氫硫基乙敢基甘胺酿基甘胺酸爲主 之螯合物來標記蛋白質。 索哈特(S—)等人,美國專利案N〇 5〇61 ’ 641説明包 含至少-個"側接"氫硫基之蛋白質之直接放射性標記法。 佛立兹柏格(Fdtzberg)等人,美國專利案N〇 5,〇91514説 明以各種以S-受冑護之氫硫基乙醯基甘胺醢基甘胺酸爲主 之螯合物來標記蛋白質。 古斯塔文森(Gustavscm),美國專利案N〇 5,112 953説明 以Tc-99m螯合劑放射性標記蛋白質n 卡辛那(Kasina)等人’美國專利案n〇 5,175,257説明目 標分予與Tc-99m螯合基團之各種組合。 狄恩(Dean)等人,美國專利案Ν〇· 5,180,816説明Tc-99m 利用雙官能性螯合劑放射性標記蛋白質之方法。 森奇哈根(Sundrehagen),國際專利申請案公告案號 WO85/03231揭示蛋白質之1^-99〇1標記法。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 雷错(Reno)輿波提諾(Bottino),歐洲專利申請案 87300426.1揭示以Tc-99m放射性標記抗體〇 布雷莫(Bremer)等人,歐洲專利申請案N〇. 871 18142.6揭 示抗禮分子之T c - 9 9 m放射性標記法f 派克(Pak)等人,歐洲專利申請案N〇. WO 88/07832揭示 以Tc-99m標記蛋白質之方法。 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(21 Οχ297公餐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 449482 A7 ____ B7 五、發明説明(10 ) 哥德曼(Goedemans)等人,PCT 申請案 No. WO 89/07456 説明使用環狀硫醇化合物,特定言之2-亞胺基嘍茂烷及衍 生物,爲蛋白質進行放射性標記=« 狄恩(Dean)等人,國際專利申請案公告案號w〇 89/12625説明雙官能性偶合劑用於爲蛋白質標記Tc_99ηι ο 索馬克(Schoemaker)等人,國際專利申請案公告案號 W090/06323揭示含有金屬結合區之嵌合蛋白質。 童貝克(Thornback)等人,EPC申請案 No. 90402206.8説 明使用含硫醇化合物,特定言之2-亞胺基嘧茂烷製備放射 性標記蛋白質或胜肽之方法輿用途。 古斯塔文森(Gustavson)等人,國際專利申請案公告案號 W〇91/09876揭示以Tc-99m螯合劑放射性標記蛋白質。 洛德斯(Rhodes),1974, Sem. Nucl. Med_ 4:281-293説明以 鍀-99m標記人類血清白蛋白。 克豪(Khaw)等人,1982, J. Nucl. Med. 23: 1011-1019揭 示以Tc-99m標記生物活性大分子之方法。 史瓦茲(Schwartz)等人,1991, Bioconjugate Chem.足:333 説明一種使用肼基菸酿胺基,由Tc-99m標記蛋白質之方法 〇 先前技藝曾提出嘗試標記胜肽之報告。 伊格(Ege)等人,美國專利案No. 4J32,940説明以放射性 標記肽爲T-淋巴細胞進行顯影定位。 摩根(Morgan)等人,美國專利案No. 4,986,979揭示爲發 -13- 本紙張尺度適用中國國家標隼(CNS ) A4規格(2!0'犬297公釐~5 ----ILM----.裝------訂------in (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中夬標準局員工消費合作社印掣 4 49 48 2 A7 A7 ________ B7 五、發明説明(11 ) '~~~ ~~ - 炎位置顯影之方法。 佛那根(Flanagen)等A ’美國專利案N〇 5 248’764説明放 射性標記之螯合部份與衍生自前房鈉尿因子之肽之間之共 概物。 蘭迪(Ranby)等人,1988, PCT/US88/02276說明一種在動 物艘内檢測血纖維蛋白沉積之方法,其包括由放射性標記 化合物與血纖維蛋白共償連接。 李斯(Lees)等人’ 1989, PCT/US89/01854説明放射性標記 胜肽之動脈顯影法。 摩根(Morgan)等人,國際專利申請案公告案號 W090/10463揭示消炎位置之顯影方法。 佛那根(Flanagan)等人,歐洲專利申請案N〇. 90306428.5 揭示合成胜肽片段利用一组有機螯合分子標記Tc_99m。 史都鐸(8!11«16),?(:丁申請案公告案號评〇 90/15818建議 在含RGD之寡肽上標記Tc-99m。 洛德威爾(Rodwell)等人,1991,PCT/US91/03116揭示"分 子辨識單位”與·’效應物區”之共軛物。 寇克斯(Cox),國際專利申請案NO. PCT/US92/04559揭 示含有二個半胱胺酸殘基之放射性標記生長激素釋放抑制 素衍生杨。 洛德斯(Rhodes)等人,國際專利申請案公告案號 \¥〇93/128丨9説明含有金屬離子結合區之肽。 萊里(Lyle)等人,國際專利申請公告案號W093/1577〇揭 示Tc-99m螯合物及標記Tc-99m之肚。 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2】0X297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 • I - - I - - I - A7 449482 ____87 五、發明説明(12) ~~ 考佛林(Coughlin)等人,國際專利申請案公告案號 W093/21151揭示含有硫脉基之雙官能螯合創,用於放射 性標記目標分子。 奈特(Knight)等人,1"0,第3?屆核子蟹學學會年度會 議(37th Annual Meeting of the Socity of Nuclear Medicine),摘 要#209提出使用Tc-99m標記肽之血栓顯影法。 巴畢希(Babich)等人,1 993, J. Nucl. Med. 34: 1964-1974 説明標記Tc-99m之肽,包括肼基菸醯胺衍生物。 VIP受體結合性肽與片段之放射性標記衍生物,其類似 物與模擬物亦可用於醫療。此等用途中,以具細胞毒性之 放射性同位素-186及銖-188特別逋用。 因此仍需要可放射性標記Te-99m之合成性(以便進行例 行性製造並方便調節接受性)VIP受體結合性肽,衍生物, 類似物輿模擬物,以用爲閃爍照相劑,且可放射性標記銖 -186或姝-188,用爲放射性治療劑。本發明所提供含有可 與Tc-99m、Re-186或Re-1 88螯合之螯合基團之小型合成性 VIP受體結合性肽,其衍生物、類似物及模擬物,及其標 記Tc-99m、Re-186與Re-188之衍生物特別符合此需要。 發明概要 本發明提供放射性藥劑,其係標記Tc-99m、、Re-186或 Re-188之受體結合性血管活性腸肽,可用於放射性治療與 放射性診斷,特定言之閃爍照相顯影用途。本發明亦提供 受體結合性血管活性腸肽試劑,其包含受體結合性血管活 性腸肽、其衍生物、類似物與模擬物,其中此等化合物與 -15- 本紙張尺度適用巾酬家標準(CNS )_八鐵格(21GX297公董) ~ - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 經濟部中央榡率局員Η消費合作杜印— 經濟部中央標準局員工消費合作社印笨 4 49 48 2 A7 ____ B7 五、發明説明(13 ) 鰲合部份共價連接,本發明提供此等受體結合性血管活性 腸肽、受體結合性血管活性腸肚試劑及放標性標記之受體 結合性血管活性腸肽試劑,其係閃爍照相顯影劑Λ放射性 #斷劑及放射性治療劑。 本發明之閃爍照相顯影劑包含放射性標記鍀_99ιη之受體 結合性血管活性腸肽試劑。本發明之放射性治療劑包括放 射性標記銖-186或銖-188之受體結合性血管活性腸肽試劑 。亦提供製造此等受體結合性血管活性腸肽、受體結合性 血管活性腸肽試劑及其放射性標記具體實施例之方法與用 途。 本發明提供一種製備放射性藥劑之試劑,其中該試劑爲 合成之受體結合性血管活性腸肽(合成性化合物之定義包 括:VIP、其與VIP受髏結合之片段、衍生物、類似物及 模擬物),會與可螯合鍀或銖放射性標記物之螯合部份共 價連接。該螯合部份係於試劑之合成期間加至試劑中。此 外,本發明標記鍀或銖之放射性藥劑具有VIP受體結合親 和力,未低於放射性標記天然VIP之親和力之十分之一。 在一項較佳具體實施例中,本發明提供含有放射性標記 Tc-9 9m之本發明試剤之閃爍照相顯影劑。其他較佳具體 實施例中’本發明提供含有放射性標記選自:鍊_186與鍊· 1 88中之細胞毒性放射性同位素之本發明試劑之放射性治 療劑。試劑輿Tc-99m、Re-186或Re-188放射性標記物之 錯合物係由本發明試劑與放射性標記物於還原劑,例如: 亞錫離子之存在下反應形成。Tc·99m、Re-186或Re-188 -16- 本紙張尺度適用巾國國家標準(CNS ) Μ規格(公羞) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 449482 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印裝 五、發明説明(14 與本發明試劑之錯合物亦可由已先還原之放射性標記物錯 合物進行配位體交換而形成。 因此,本發明亦提供含有本發明受體結合性血管活性腸 肽試劑之閃爍照相顯影劑,其中螯合部份已與Tc_99m# 定地錯合 本發明亦提供放射性治療劑,其係放射性標記鍊·186或 銖-188之本發明受體結合性血管活性腸肽試劑。 本發明亦提供在醫藥上可接受之載體中包含本發明放射 性標記受體結合性血管活性腸肽之醫藥組合物。 本發明另一方面提供用於製備放射性治療與放射性珍斷 之放射性藥劑之試劑,最妤包括閃爍照相顯影劑β此等試 劑分別包含與螯合部份共價連接且爲血管活性腸肽、衍生 牧、類似物或模擬物之化合物ρ 本發明第一方面所提供用於製備放射性標記製劑之試劑 爲分別包含如上述受體結合性血管活性腸肽,其輿如下式 之螯合部份共價連接: c(Pgp)S-(aa)-C(pgp)s 其中(pgp)s爲氫或硫醇保護基團,且(aa)爲不含硫醇基之α 或胺基酸。較佳具體實施例中,胺基酸爲甘胺酸。另 一項較佳具體實施例中,該製劑爲閃爍照相顯影劑。另— 項較佳具體實施例中,該製劑爲放射性治療劑。 第二項具體實施例中,本發明提供受體結合性血管活性 腸肽試劑,可經放射性標記,形成放射性診斷劑與放射性 治療劑,其各包含i管活性腸肽輿包含含如下式部份之單 -17 私紙張尺度適财ϋ财標準(CNS)八4規格(2ΐϋχ 297公董) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝_ 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 44948 2 __ 五、發明説明(15) 一硫醇之鰲合基團共價連接:
A-CZ(B)-{C(RaRb)}n-X 其中 A 爲 Η、HOOC、H2NOC、(肽)-HNOC、(肽)-〇〇C、 Re2NCO或 Rd ; B爲 Η ' SH或-NHRC、-N(RC)-(肽)或 Rd ; Z 爲 H或 Rd ; X爲 SH或 _NHRC、_N(RC)·(肽)或 Rd ; Ra、Rb、
Rc_Rd分別爲H或直鏈或分支鏈或環狀之低碳數烷基;n 爲〇、1或2 ; 1^爲<^-04烷基、胺基酸或含有2至約10個胺 基酸之肽;且:(1)其中B爲·(肽),X爲SH 且η爲1或2 ; (2)其中X爲-NHRC或-N(RC)(肽),B爲SH且η 爲 1或 2 ; (3)其中 Β爲 Η或 Rd,Α爲 HOOC、H2NOC、(肽)-NHCO或(肽)-〇〇c,X爲SHJLn爲0或1 ; (4)其中A爲Η或Rd 時,則其中B爲SH,X爲-NHRC或-N-Rc-(肽)且其中X爲SH ’ B爲-NHRC或-N(RC)-(肽)且η爲1或2; (5)其中X爲11或1^ ,八爲1100€、H2NOC、(肽)-NHOC 或(肽).〇〇CJLB 爲 SH ; (6)其中Z爲甲基,X爲甲基,A爲HOOC、H2NOC、(肽)-NHOC或(肽)-〇〇C且B爲SH且η爲0。較佳具體實施例中, 該製劑爲閃爍照相顯影劑。另一項較佳具體實施例中,該 製劑爲放射性治療劑。 此螯合部份之較佳具體實施例之化學式如下:
RlCCK胺基酸)L(胺基酸 其中(胺基酸)1與(胺基酸)2分別爲任何不含硫醇基之一級泛 -或々·胺基酸,Z爲含硫醇部份之半肤胺酸、高半脱胺酸 '異半胱胺酸、音撒胺、:Z-氳硫基乙胺或3·氫硫基丙胺, 且R 1爲低碳數(C丨-C4)坑基、胺基跋或含有2至1〇個鞍基 -18- 本紙張尺度適用令國國家標準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.
、1T 經濟部中央標準局員工消費合作杜印裝 ά d 9 4 8 2 α7 ___ ____ Β7 五、發明説明(16 ) 酸之肤。當Z爲半胱胺酸、高半犹胺酸、異半脱胺酸或青 微胺時’該部份之羰基係與羥基、NR3R4基® (其中各R3與 R4分別爲Η或低碳數(Ci_C4)烷基)、胺基酸或含2至1〇個 胺基睃之肽共價連接;或 y-(胺基酸)2-(胺基酸)2-nhr_2 其中Y爲含硫醇部份之半胱胺酸、高半胱胺酸、異半胱胺 酸、青黴胺、2 -氫硫基乙酸根或3 -氫硫基丙酸根,(胺基 酸)1與(胺基酸)2分別爲不含硫醉基之一級α或0 -胺基酸 ,且R2爲Η或低碳數(Crc4)烷基、胺基酸或含有2至1〇個 胺基酸之肽。當Y爲半胱胺酸 '高半胱胺酸、異半胱胺酸 或青黴胺時,該部份之胺基係與-H、胺基酸或含2至10個 胺基酸之肽共價連接。 本發明此方面之特別具體實施例中,螯合部份如下式: Ila. ·(胺基酸)〖·(胺基酸, lib. -Α-(:Ζ(Β>_{(:(Ι^Ι12)}η-Χ}-(胺基酸)i-(胺基酸)2, lie.-(一級 α -或点,r -二胺基酸)-(胺基酸)!-A-CZ(B)-,或 lid· -A-CZiBHCWRbVXH胺基酸)匕(一級從,点-或久 r -二胺基酸〉,其中(胺基酸:)1與(胺基酸)2分別爲任何不含 硫醇基之天然、經修飾、經取代或經改造之或/?-胺基 酸;Α爲Η、HOOC ' H2NOC、(胺基酸或肽)-NHOC、(胺 基酸或肽)-OOC或R4 ; B爲Η ' SH或-NHR3、-Ν(ϋ3)-(胺基 酸或肽〉或R4 ; Ζ爲Η或R4 ; X爲SH或-NHR3、-N(R3)-(胺 基酸或肽)或R4 ; R1、砭2 ' R3與R4分別爲η或直鏈或分 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公f ) ---L--U----裝------訂------J (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 4 9 48 2 五、發明説明(17 ) I-.--Γ - -I ...... . - - ·. I— n^i ^^1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 支鍵或環狀低碳數燒基;η爲0、1或2之整數;(肽)或2至 約10個胺基酸之肽;且(1)其中Β爲_NHR3或-N(R3)-(胺基 酸或肽)’ X爲SH且η爲1或2 ; (2)其中X爲-NHR3或-N(R3)-( 胺基酸或肽)’ B爲SH且η爲1或2 ; (3>其中B爲Η或R4,A爲 HOOC、H2NOC、(胺基酸或肽)-NHOC、(胺基酸或肽)· OOC,X爲SH且η爲0或1 ; (4)其中A爲Η或R4時,則其中B 爲SH,X爲-NHR3或- N(R3)-(胺基酸或肽),且其中X爲 SH ’ B爲-NHR3或-N(R3)-(胺基酸或肽),且„爲!或2 ; (5) 其中X爲Η或R4,A爲HOOC、H2NOC、(胺基酸或肽)-NHOC ' (胺基酸或肽)-OOC且B爲SH; (6)其中Z爲甲基,X 爲甲基,A爲HOOC、H2NOC ' (胺基酸或肽)-NHOC、(胺 基酸或肽>-OOC且B爲SH且η爲0。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其也較佳具體實施例包括如下式之螯合部份:-〇1>?-01丫· Cys-, Cys-Gly-Gly-, Gly-Gly-Cys-, -( ε -Lys)-Gly-Cys-, ( d -Orn)-Gly-Cys-, ( γ -Dab)-Gly~Cys-,及 ~(/?-Dap>Gty-Cys-。(此等式中,咸了解 ε-Lys 代表離胺酸殘基,其中ε-胺基(而非典型之心胺基)與相鄰 胺基酸之羧基共價連接,形成肽鍵;d*〇rn代表烏胺酸殘 基,其β胺基(而非典型之胺基)輿相鄰胺基酸之羧基共 價速接,形成肽鍵;r-Dab代表2,4-二胺基丁酸殘基,其 Γ -胺基與相郝胺基酸之羧基共價連接,形成肽鍵;且办_ Dap代表1,3·二胺基丙酸,其胺基與相鄰胺基酸之羧基 共價連接,形成肽键)。 本發明另一項具體實施例提供可放射性標記放射性同位 素之受體結合性血管活性腸肽試劑,用於在哺乳動物體内 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 449482 A7 B7 五、發明説明(18) 位置顯影或用於放射性治療’其各包含與雙胺基-雙硫醇 螯合部份共價連接之血管活性腸肽。本發明此具體實施例 中,雙胺基雙硫醇螯合部份如下式:
/NH NIJ-A-CO-X S-(pgp)S S-(pgp)S 其中各R分別爲H、CHs或C.2H5 ;备^8口)5可分別爲硫醇保 護基阁或Η ; m、η與p分別爲2或3 ; a爲直鏈或環狀低碳 數烷基 '芳基、雜環基、其組合或其經取代衍生物;且X 爲肽;或 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
NH /
(CRj)*, SH
(CRA
經濟部中央標準局負工消費合作社印製 其中各R分別爲Η、CH3或C2H5 ; m、η與p分別爲2或3 ; A 爲直鏈或環狀低碳數烷基、芳基、雜環基、其組合或經取 代之衍生物;V爲Η或CO-肽;Ri爲η或肽;但其限制條件 爲當V爲Η時,R1爲肽,且當Rl爲η時,V爲肽。爲了本 發明之目的,具有此等結構之螯合部份稱爲"Β ΑΤ ”部份。 較佳具體實施例中’該製劑爲閃爍照相顯影劑。另—項較 佳具體實施洌中,該製劑爲放射性治療劑。 本發明亦提供放射性藥劑及用於製備此等放射性藥劑之 試劑,其包含受體結合性血管活性腸肽,輿選自下列之整 21 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS )从規格(21〇χ297公楚) 44948 ? Α7 --^ Β7 五、發明説明(19 ) 合部份共價連接; ⑴如下式之基圓:
(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} (H)如下式之基困
•11 .I Λ 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 其中η,m輿p分別爲0或1之整數;各R】分别爲η、低碳數 概基、CrC:4羥烷基或(:2_(:4烷氧烷基,且各r分別爲η或 R",其中R"爲不含硫醇基之經取代或未取代之低碳數烷 基或笨基’且R或R’之一爲L,其中L爲連接金屬螯合物輿 3標部份之二價連接頭部份,且其申當一個R,爲[時, -22- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS ) A4規;公着) 4 49 48 2 A7 _______ _ B7五、發明説明(2〇 ) NR、爲胺。 較佳具體實施例中,L爲C「Cg直鏈、分支鏈或環狀烷基 、羧酸酯、羧醯胺、磺醯胺、醚、硫醚、胺、烯、炔、 、1,3·或1,4-連接之可視需要取代之苯環、或胺基酸或 2至約1 〇個胺基酸之肽,或其組合 較佳具體實施例中,R"爲Ci-C^直鏈、分支鏈或環狀烷 基;-Cq-OCr-、-CqNHCr-或-CqSCr-基困,其中q與r分別爲 1至5之整數’其中q + r之總和不超過6 ; (Ci.C^)娱(基-X’ 其中X爲羥基、經取代之胺、胍、脒、經取代之硫醇基、 或羧酸、酯、磷酸根或硫酸根基團;苯基或經下列基團取 代之苯基:齒素、經基、經取代之胺、脈、脉、經取代之 硫醉、醚、磷酸根或硫酸根;吲哚基;含有1至3個氮、氧 或硫原子之Ci_Cg雜環基或其組合。 衣發明之較佳螯合部份包括如下式之螯合物: .ΝΗ ίώί.
L-Z n —· » - -- - - - -i * 士^^^1 ^^1 n ... ^^1 -- f - ,言 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本1) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 R3>^nr1r2 ^R7 HS^r8 m. 其中R1與R2分別爲H、低碳數烷基、C2-C4羥烷基或c2-c4 烷氧烷基;R3、R4、R5輿R6分別爲H、不含硫醇基之經 取代或未經取代之低碳數烷基或苯基;R7與R8分別爲Η、 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(2ί0X 297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 4 9 482 A7 B7 五、發明説明(21 ) 低碳數坑基、低碳數羥烷基或低碳數烷氧烷基:L爲二價 連接頭基固且Z爲血管活性腸肽。 本發明其他較佳金屬螯合物包括如下式之螯合物:
IV. 其中R1與R2分別爲Η、低碳數烷基、C2_C4羥烷基、或c2-C4烷氧烷基;R3、R4、R5與R6分別爲Η、不含硫醇基之 經取代或未經取代之低碳數烷基或苯基,且R3、R4、R5 與R6中之一爲Z-L-HN(CH2)n-,其中L爲二價連接頭基團 ,Z爲目標部份,且η爲1至6之整數;R7與R8分別爲Η、 低碳數烷基、低碳數羥烷基或低碳數烷氧烷基;且X爲胺 基、經取代之胺基或-nrLy,其中Υ爲胺基酸、胺基酸醯 胺、或含2至10個胺基酸之肽。 本發明之更佳金屬螯合物包括如下式之螯合物:
本紙張尺度適用中國國家梯準(CNS ) A4規格(21〇><297公楚) nn nn 1 ^^^^1 ^^^^1 flms — -一.-¾ j (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 4 49 4B2 五、發明説明( 22 其中R1與R2分別爲Η、低碳數烷基、低碳數羥烷基、或低 碳數烯烷基;R3與R4分別爲Η、不含硫醇基之經取代或未 經取代之低碳數烷基或苯基:η爲1至6之整數;L爲二償 連接頭基團;且Ζ爲血管活性腸肽部份。 其他更佳螯合部份包括如下式之螯合物:
Z-L-N
V 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 其中L爲二價連接頭基團且Ζ爲血管活性腸肽部份。 本發明最佳螯合部份包括如下式之螯合物: (胺基酸)i-(胺基酸)2·半胱胺酸-, (胺基酸”“胺基酸”-異半胱胺酸-, (胺基酸胺基酸)2-高半胱胺酸-, (胺基酸)匕(胺基酸)2-青黴胺-, (胺基酸胺基酸)2-2-氫硫基乙胺-, (胺基酸”-(胺基酸)2-2-氫硫基丙胺-, (胺基酸)1 -(胺基酸)2 - 2 ·氫硫基-2 -甲基丙胺-, (胺基酸)^(胺基酸)2-3-氫硫基丙胺·, 其中一級或卢-胺基酸中之(胺基酸)不含硫醇基且其中 螯合物與目標部份或連接頭基團利用輿螯合物或其中_個 胺基酸上側鏈之羧基末端形成共價鍵而連接。 25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4規格(210'乂 297公釐) I_--Μ----'裝------訂------ J;, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾隼局員工消費合作社印装 449482 A7 ______B7 五、發明説明(23 ) 最隹螯合物亦包括如上式之螯合物,其中(胺基酸)1爲沈 Γ或胺基酸,其中α-或万·胺基爲游離胺且或 r -胺基酸利用r -胺基共價連接。 其他最佳螯合物包括選自下列者: -半胱胺酸-(胺基酸)-(汉,々-或々,r-二胺基酸); -異半恍胺酸-(胺基酸-或々,厂-二胺基酸); -高半胱胺酸·(胺基酸)-(〇Τ,θ-或0,r -二胺基酸); -青擻胺-(胺基酸或点,r -二胺基酸); 2 -氫硫基乙酸-(胺基酸)-(α,点-或卢,r •二胺基酸); 2-或3-氫硫基丙酸-(胺基酸)-(汉,万-或点,r 二胺基酸); 2-氫硫基-2-甲基丙酸-(胺基酸点-或二胺基酸); 其中一級α -或0 -胺基酸中之(胺基酸)不含硫醇基,且其 中螯合物與目標部份或連接頭基團利用與螯合物或其中一 個胺基酸基團上之側鏈之胺基末端形成共價鍵而連接。 特別佳之金屬螯合物係選自下列:-Gly-Gly-Cys-, Arg-Gly-Cys-, (ε -Lys)-Gly-Cys-,( i -Om)-Gly-Cys·,( γ -Dab)-Gly-Cys,輿-Dap)-Giy-Cys-。(此等式中,咸了解ε -Lys代表離胺酸殘基,其ε -胺 基(而非典型之π-胺基)輿相鄰胺基酸之羧基共價連接,形 成肽鍵;d -Orn代表烏胺酸殘基,其d胺基(而非典型之π -胺基)與相鄰胺基酸之羧基共價連接,形成肽键:F -Dab 代表2,4-二胺基丁酸殘基,其;r-胺基與相鄰胺基酸之羧基 共價連接,形成肽键;且万-Dap代表1,3-二胺基丙酸,其 胺基與相鄰胺基酸之羧基共價連接,形成肽鍵)。 上述(III)類結構之較佳螯合物部份之實例爲螯合物Gly- -26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格UlOX29?公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 49 482 A7 B7 五、發明説明(24
Gly-Cys-,其形成如下結構之螯合部份 Ο
[目標部份] VII類結構(螯合配位體形成如下結構之氧锝錯合物 〇
[目標部份】 如上述V類結構之更佳螯合部份之實例爲LyS_(W -肽) Gly-Cys ‘醯胺,其形成如下結構之螯合部份: 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂
[目標部份J
H2 IX. IX類結構之螯合配位體形成如下結構之氡鍔錯合物 -27- 本纸張尺度適用中國國家操準(CNS) Α<ί規格(21〇χ297公慶) n - - —Μ.— ί — Lr - - - i ^^1 ^^1 j j ml I In 1 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 04 49 432 A7 B7 五、發明説明(a
用於製備如本發明所提供放射性藥劑且包含如上述11類 結構之螯合部份之試劑實例爲(目標部份ycys-Giy-a -二胺基丙醸胺,可形成如下結構之螯合部份: ---L--U----裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
[目標部份]HN
XI. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製
[目標部份]HN IX類結構之放射性診斷劑形成如下結構之氧锝錯合物
s H.N ΧΠ. 本發明較佳具體實施例中,螯合部份與受體結合性血管 活性腸肽中組成肽之胺基以外之部位共價連接。如本文所 -28 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2ί0Χ297公釐> 經濟部中央標準局貝工消費合作社印掣 4 49 48 2 A7 —-------------B7 五、發明説明(26 ) 逑,特別有利之作法爲在合成期間,將螯合部份加至肽令 或在化學合成期間,使作爲螯合部份之獨特連接部份加至 肽中。離胺酸殘基侧鏈中之胺基出現在血管活性腸肽之數 個位置上,因此螯合部份沒有位置專一性連接之優點。特 定言之,硫醇基較適合作爲螯合物與受體結合性血管活性 腸肽之獨特連接位置《 本發明亦提供在活體外利用化學合成法製備本發明之肽 試劑之方法。較佳具體實施例中,利用固相肽合成法合成 受體結合性血管活性腸肽。 本發明提供製備放射性標記之血管活性腸受體結合劑, 其包含本發明之受體結合性血管活性腸肽與螯合部份共價 連接。較佳具體實施例中,以Tc_ 9 9m放射性標記該試劑 。另一項較佳具體實施例中’以或丨88Re放射性標記 該試劑。 本發明亦包括本發明之受體結合性血管活性腸肽試劑與 放射性同位素之錯合物製劑,及放射性標記本發明肽試劑 之方法。例如:本發明提供之閃爍照相顯影劑包含標記 Tc-99m之錯合物,其係由本發明之血管活性腸肽試劑輿 Tc-99m於還原劑之存在下反應形成。較佳還原劑包括(但 不限於):連二亞硫酸根離子、亞錫離子及亞鐵離子^本 發明此等Tc-99m錯合物之形成亦可利用本文所提供預先 製成之Tc-99m錯合物之配位體交換作用,由Tc-99m標 記本發明之血管活性腸肽試劑。 本發明亦提供由本發明之血管活性腸肽試劑製備放射性 -29 - 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS ) Λ4规格(2】0χ297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- -11 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 4 49 48 2 at _ B7 五、發明説明(27 ) 標記受體結合性血管活性腸肽之套組。用於放射性標記本 發明肽試劑之套組包括含有預定量之本發明肽試劑及可放 射標記該試劑之足量還原劑之密封瓶。本發明套组之較佳 具體實施例中一方面爲用於以Tc-99m放射性標記本發明 肽試劑之套組。亦提供用於製備放射治療劑之套組,其中 較佳放射性同位素爲銖-186與鍊-188。 本發明提供本發明放射性標記之血管活性腸受雜結合性 肽試劑用於診斷上及治療上之方法。本發明一項具體實施 例中,本發明提供以標記T c - 9 9 m肽試劑作爲閃爍照相顯 影劑,可在活體内得到r -閃爍照相顯影像,用於在喷乳 動物體内定位顯影之方法。此等方法包括投與診斷有效量 之本發明放射性標記肽並在哺乳動物體内檢測放射性標記 物發射之r -射線,而加以定位。 本發明亦提供減輕動物(最好指人類)之與VIP有關之疾 病之方法’其包括爲動物投與治療有效量之本發明放射性 標記VIP受體結合性肽試劑。較佳具體實施例中,試劑係 經186Re或188Re進行放射活性標記。 本發明亦提供輿金屬結合部份共價連接之VIP受體結合 性肽’該金屬結合部份會與磁性、順磁性、超磁性或超順 磁性金屬原子 '離子或粒子錯合,並提供使用此等錯合物 於活體内朦瘤或其他組織位置進行以磁性爲主之檢測法, 爲此等受體結合性血管活性腸肽錯合物定位之方法。因此 本發明提供非放射活性法,用於活體内爲腫瘤及其他Vjp 受體表現組織定位。 -30- ^張尺度適^中國國家樣準(CNS ) A4規格(210X297公楚) - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·
,1T A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 4 49 482 五、發明説明(28 ) 本發明之受體結合性血管活性腸肽及受體結合性血管活 性腸肤試劑亦可包含多價連接部份。本發明之多價連接部 份包含至少二個可與受體結合性血管活性腸肽或螯合部份 或二者共價鍵結之相同連接頭官能基。較佳連接頭官能基 爲一級或二級胺、羥基、羧酸根或硫醇反應性基團。較佳 具體實施例中,多價連接基團包括:雙-琥珀醢亞胺基甲 基链(BSME)、4-(2,2-二甲基乙醯基)苯甲酸(DMBA)、N-{2-(Ν',Ν·-雙(2-琥ί白釀亞胺基-乙基)胺乙基)卜N6,N9_雙(2-曱基-2-氩硫基-丙基重氮壬醯胺(BA丁_BS)、參(琥珀 醢亞胺基乙基)胺(TSEA)、雙-琥珀醯亞胺基己烷(BSH)、4-(OCH2CO-Gly-Gly-Cys醯胺)-2-甲基丙醢苯(ETAC)、參(乙 醯胺乙基)胺、雙·乙醯胺甲基醚、雙乙醯胺乙基醚、汉_ ε·雙-乙醯基離胺酸、離胺酸及ι,8-雙-乙醯胺基_3,6-二哼 辛燒,或其衍生物= 由下列某些較佳具體實施例中及申請專利範圍之更詳細 説明,將了解本發明明確之較佳具體實施例。 本發明之詳細説明 本發明提供適用爲製備診斷及治療用之受體結合性血管 活性腸肽放射性藥劑之試劑之受體結合性血管活性腸肽及 其片段、衍生物、類似物及模擬物。 本發明所提供此等受體結合性血管活性腸肽之較佳具體 實掩例爲受體結合性血管活性腸肽試劑,其中受體結合性 血管活性腸肽、其片段、衍生物、類似物及模擬物係與螯 合部份共價連接。此等受體結合性血管活性腸肽試劑可經 -31 _ 本^:尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(2l〇X297公釐> ~ I - --1— —1 - - ' I I ί ----i ^ In- - -- . ϋ I I J— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局員工消費合作社印t 449482 A7 A7 _ B7 五、發明説明(29) 敢射性標記,形成放射性診斷劑或放射性治療劑。使用本 發明放射性標記製劑之放射性診斷用途之實例之一爲閃爍 照相顯影,其中可決定帶有VIP受體之腫瘤位置及程度。 本發明之受體結合性血管活性腸肽試劑亦適合經細胞毒性 之放射性同位素(如:銖-186或鍊-188)進行放射性標記, 用於放射性治療。 本文所採用"放射性照相顯影劑"一詞係涵括可利用放射 活性檢測法(包括但不限於:;· ·相機或閃爍檢測探針)檢 測之放射性標記製劑。 另一方面’本發明之放射性治療具體實施例爲適合標記 鍊-186及銖-188。此等具體實施例適用於治療動物(最好指 人類)之與VIP有關之疾病或其他病症,包括(但不限於)結 腸直腸癌及其他出現利用表現在細胞(包括此等腫瘤)之細 胞表面上之VIP受體而可與VIP或VIP類似物結合之良性或 惡性腫瘤生長特徵之疾病。 爲了本發明之目的,"VIP受體結合親和力一詞係指依 相關技藝上已知任何方法,特別包括彼等利用解離常數、 抑制常數或IC5t)値測定結合親和力之方法測得之結合親和 力p ”其親和力爲放射性碘化VIP之親和力之至少十分之一" —詞係指其親和力低於放射性碘化VIP之親和力未超過10 焙,或抑制常數(Ki)或IC5()未超過放射性碘化VIP之1 0倍 〇 在含有輿本發明所提供硫醇保護基團Kpgp)s}共價連接 之硫醇之螯合部份中及輿此等部份共價連接之受體結合性 -32 本紙張又度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2丨0'乂297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 449482 經濟部中央標準局員Η消費合作社印製 五、發明説明(3Q) 血管活性暘肽中,硫醇保護基團可相同或相異,且可爲( 但不限於): -ch2-芳基(芳基爲苯基或經烷基或烷氧基取代之苯基) ♦ -CH-(芳基)2(芳基爲苯基或經烷基或烷氧基取代之苯基) * -C-(芳基)3(芳基爲苯基或經坑基或烷氧基取代之苯基) ♦ -CH2-(4-甲氧苯基); 淀基)(私基)2 ; -c(ch3)3 -9-苯基苟基; -CH2NHCOR (R爲未經取代或經取代之烷基或芳基); -CH2NHCOOR (R爲未經取代或經取代之烷基或芳基); -CONHR(R爲未經取代或經取代之烷基或芳基); -CH2-S-CH2苯基 較佳保護基團如下式:-CH2-NHCOR,其中R爲1至8個 碳原子之低碳數烷基、苯基或經低碳數烷基、羥基、低碳 數烷氧基、羧基或低碳數烷氧羧基取代之苯基。最佳保護 基團爲乙醸胺甲基。 爲了本發明之目的,"受體結合性血管活性腸肽” 一詞係 涵括可與相關技藝上可辨識之各種細胞型態中所表現VIP 受體專一性結合之天然VIP、片段、類似物、其衍生物。 模擬VIP之受體結合性質而設計之化合物(即”模擬物”)亦 -33- '------訂------,Α-^---1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4規格(210X 297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 449 48 2 a? B7 _ 五、發明説明(31 ) 包括在此定義及本發明中。 本發明試劑之特別佳具體實施例包括: Ή;ΦΑνΚΤΤ)ΝΥΤΚΙΚΚ(3ΜΑνΚΚΥΙΝ3ΙΙΝ(:((:Η2(:0,(-Dap)KCK.醯胺).醯胺 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNC(CH2CO.GG€K.随胺).醯胺 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNC(CH2Ca( J -Om)GCK.麟).醯胺 HSDAYFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNCCB AT).醯胺 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNGGC.醯胺 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNC(CH2C0.GGCE.醯胺).醯胺 與 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN( ε -K)GC.醢胺 所有天然胺基酸均採用標準縮寫表示(可參見G.茲貝 (Zubay), Biochemistry(第2版),1988年(紐約麥克米餘出版 社(MacMillen Publishing: New York) p.33)。爲了本發明之 目的,天然胺基酸之特徵爲親脂性(丙胺酸、異白胺酸、 白胺酸、甲硫胺酸、苯基丙胺酸、貉胺酸、脯胺酸、色胺 酸及纈胺酸,及半胱胺酸之S-烷化衍生物),親水性(天冬 醸胺、麩醯胺、蘇胺酸' 絲胺酸)' 酸性(麩胺酸及天冬脖 酸)' 鹼性(精胺酸、組胺酸及離胺酸)》ε -K係指利用離 胺酸殘基侧鏈上s -胺基之共償連接。J -Orn代表烏胺酸殘 基,其中ό' *胺基(而非典型之π -胺基)與相鄰胺基酸之羧 基共價連接,形成肽键結。r -Dab代表2,4-二胺基丁酸殘 基,其中r-胺基輿相鄰胺基酸之羧基共價連接,形成肽 鍵結。/? -Dap代表1,3·二胺基丙酸殘基,其中疗-胺基與相 鄰胺基酸之羧基共價連接,形成肽鍵結。(BAT)代表 -34- 本紙張尺度適用中國國家榡準(CNS ) A4規格(210X297公釐) n^i —^l· n^i m1*·!^ ^^1 ^^1 in In i ,- -. U3 售 t讀先閱讀JtA面之注意事項再填寫本頁〕 經濟部中央標準局員工消費合作社印31 4 4 9 48 2 A7 __;__B7 五、發明説明(32 ) Νό,Ν9-雙(2·氫硫基-:2-甲基丙基)-6,9-重氮壬酸;Κ,(ΒΑΤ)及 Lys.(ΒΑΤ)代表胺基酸離胺酸,在(ΒΑΤ)之胺基酸側鏈上ε -胺基上醯化;C(BAT)與Cys(BAT)代表S-(N6,N9·雙(2-氫硫 基-2-甲基丙基)-6,9-重氮壬坑-1-基)半胱胺酸;(BAM)爲 (N1,N4-雙(2-氫硫基-2-甲基丙基10-三氮錐癸烷; (BAT-BM)爲Ν-{2-(Ν·,Ν·-雙(2-馬來醢亞胺乙基)胺乙基}-Ν9-(三級丁氧羰基)·Ν6,Ν9-雙(2-甲基-2-三苯基甲硫丙基)-6,9-重氮壬麄胺;(BAT-BS)爲Ν-{2-(Ν,,Ν,-雙(2-琥珀醢亞胺 乙基)胺乙基)-Ν6,Ν9-雙(2-氫硫基-2-甲基丙基)-6,9-重氪壬 醢胺;(BMME)爲雙-馬來醃亞胺基甲基醚;及(BSME)爲雙 琥珀醯亞胺基甲基醚。本文中所使用下列胺基酸及胺基 酸類似物以下列縮寫代表:Acm爲氫硫基保護基團乙醯胺 甲基;Pen爲青擻胺;Aca爲6-胺基己酸;Hly爲高離胺酸 ;Ape爲L-(S-(3-胺丙基)半胱胺酸;FD爲〇-苯基丙胺酸; WD爲D-色胺酸:YD爲D-酪胺酸;Cpa爲L-(4-氣苯基)丙胺 酸;Thp爲4-胺基-四氫硫吡喃-4-羧酸;D-Nal爲D-2-苯基 丙胺酸;Dpg爲二丙基甘胺酸;Nle爲正白胺酸;Hey爲高 半胱胺酸;Hhc爲高高半胱胺酸;Aib爲胺基異丁酸;Nal 爲2-苔基丙胺酸;D-Na丨爲D-2-茬基丙胺酸;Ain爲2-胺基 茹滿-2-羧酸;Achxa爲4-胺基-環己基丙胺基;Amf爲4-胺 甲基-苯基丙胺酸;Aec爲S-(2-胺乙基)半胱胺酸;Ape爲S-(3-胺丙基)半胱胺酸:Aes爲0-(2-胺乙基)絲胺酸;Aps爲0-(3-胺丙基)絲胺酸;Abu爲2-胺基丁酸;且Nva爲正纈胺酸 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2丨0 X 297公1 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 4 4 9 4 8 2 a? B7 五、發明説明(33 ) 本發明所提供之受體結舍性血管活性腸肽及其衍生物輿 類似物可於活體外化學合成15本發明之肽通常宜在肽合成 機上製備。本發明所合成之肽中螯合部份,或螯合劑之獨 特附接部份係在活體外之化學合成期間與肽共價連接,該 化學轉化法係相關技藝專家們習知者。此等在合成期間與 螯合部份或附接該部份之獨特螯合劑共價連接之肽較有利 ,因爲可決定明確之共價連接位置。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之螯合部份係在肽合成期間加至目標受體結合性 血管活性腸肽、衍生物或類似物中,或在肽合成期間,經 由附接已加至血管活性腸肽中之獨特胺基酸而加至目標受 體結合性血管活性腸肽、衍生物或類似物中。因此半胱胺 酸及高半胱胺酸可在肽合成期間加至肽中特定位置,且螯 合部份稍後可與半胱胺酸或高半胱胺酸硫醇基依位置專一 性共價連接。本發明提供螯合部份依位置選擇性方式加至 肽中實質上任何位置之方法。本發明特定言之係提供含有 放射性標記螯合部份與胺基酸侧鏈連接之胺基酸衍生物, 其中螯合物或螯合物隨後可依位置專一性連接之獨特胺基 酸,可在活體外肽合成作用中加至肽中專一位置。本發明 亦提供已含放射性標記之螯合部份加至肽中羧基末端之肽 。較佳具體實施例中,放射性標記之螯合部份係加至合成 性血管活性腸肽之胺基酸侧鏈中或之上,其中胺基酸爲如 下序列肤之天然或替代性胺基酸。 -SDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN.醯胺 其他較佳具體實施例中,放射性標記之螯合部份加至合成 -36- 本紙浪尺度適用令國國表標準(CNS ) A4規格(210'〆297公羞) 449482 A7 B7 五、發明説明(34) ~' ' 性血管活性腸肽中胺基酸側鏈之位置,其中胺基酸爲如下 序列肽之天然或替代性胺基酸。 -NYTRLRKQMAVKKYLNSILN.醯胺 其他較佳具體實施例中,放射性標記之螯合部份係加至合 成性血管活性腸肽中天然或替代性胺基酸之侧鏈位置,其 t胺基酸爲如下序列肽之胺基酸: -KQM AVKKYLNSILN.醯胺 另一項較佳具體實施例中,放射性標記之螯合部份係加 i合成性血管活性腸肽中羧基末端位置。 本發明試劑之特別優點爲其含有放射性標記之螫合部份 ,或該螯合物隨後可依位置專一性附接之獨特胺基酸,可 在合成期間加至肽中。此舉之優點在於因爲可在血管活性 腸肤中或在血管活性腸狀片段、類似物或衍生物中之已知 位置置入螯合物,因此避免降低肽對VIP受體之親和性。 先前技藝中已知將螯合物加至肽令之方法主要係由先爲遠 大於肽且對螯合部份之非位置專一性引進之效果較不敏感 之蛋白質發展而來之方法發展形成。使用先前技藝方法製 造之肽不如在本發明之肽中依位置專一性引進螯合物之作 法有利,因爲當使用先前技藝之方法時,依此方法加入之 螯合物會因相似性而降低肽結合親和性。
本發明另一個優點爲所提供之肽爲化學合成性肽0此乃 因化學合成法爲配合化學工程技術之有控制之方法,可以 提供有品質控制及醫藥上合適之產品。化學合成法優於其 他方法’如:可能涉及使用病原菌(病毒、微衆菌,等等;I -37- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS ) A4規格(210X297公釐)~~ ------ f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 449482 A7 ---—_ B7 五、發明説明(35 ) 並需要昴貴成本排除或證實其不存在之生物合成法與萃取 法依化學合成法製得之產物生產成本較便宜且更容易取 得法規上之許可,因此有能力由醫藥上之具體實施例迅速 帶到臨床及市場上。 當放射性鍀與本發明之試劑形成錯合物時,由鲟錯合物 (最好爲Tc-99m過锝酸鹽)與試劑於還原劑之存在下反應 。較佳運原劑爲連二亞硫酸根,亞錫及亞鐵離予;最佳還 原劑爲氡化亞錫。製備此等錯合物之方式可由套組形式方 便地提供,套組中包括含有預定量待標記之本發明試劑及 可使Te-9 9m標記該試劑之足量還原之密封瓶。或者,可 由本發明之試劑與已預先形成之不安定之鍀錯合物及另一 種已知爲轉移配位體之化合物反應形成錯合物s已知此方 法爲配位體交換作用,且係相關技藝上習知者。這種不安 定錯合物可使用如,例如:酒石酸鹽、檸檬酸鹽,葡糖酸 鹽或甘露糖醇等轉移配位體形成。適用於本發明之Tc_ 99m過得酸鹽中包括:檢金屬鹽如:鈉鹽,或敍鹽或低碳 數烷基銨鹽。 經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 本發明較佳具體實施例中,提供製備標記鍀或銖之肽之 套組。取適量肽試劑加至含有還原劑如:氣化亟錫之小瓶 中,還原劑之含量足以使T c _ 9 9 m、Re-18 6或Re-1 88標記 在肽上。亦可包含適量之上述轉移配位體(如,例如:酒 石酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖庚酸鹽或甘露糖醇) °套組中亦可包含習知之醫藥用輔劑如,例如:調節渗透 壓之醫藥上可接受之鹽、缓衝劑、防腐劑,等等。套組之 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4规格(210X297公釐) 'w49482 at ----- ' B7 _ _ 五、發明説明(36) 成份可爲液體、冷凍或乾燥形式。在較佳具體實施例中, 套組之成份係呈冷凍乾燥型。 根據本發明標記T c - 9 9 m、Re-1 86與Re-188之放射性帛 劑之製法爲添加適量Tc-99m、Re-186或Re-】88,或其放 射性核種錯合物至小瓶中,並在下文實例2所述之條件下 反應。 本發明所提供之標記放射活性之閃爍照相顯影劑具有適 量放射活性。當形成較佳具體實施例放射活性錯合物時, 通常最好在放射活性濃度每毫升約0.01毫居禮(mCi)至1〇〇 毫居禮之溶液中形成放射活性錯合物0 經濟部令央樣準局員工消費合作杜印製 本發明所提供之顯影劑可用於顯現表現或過度表現之 受體’包括如:結腸之器官,以診斷此等器官之病變 ’及腫瘤,特定言之腸胃腫瘤,明確言之可顯影之結腸直 腸腫瘤。根據本發明,標記Tc-99m之肽試劑係呈單一單 位之立射劑量投藥。本發明所提供之標記Tc-99m之肽試 劑可於靜脈注射常用之任何介質如:生理食鹽水溶液介質 中’或於i槳介質中,經靜脈内投藥。通常,投藥之單位 劑量之放射活性爲約〇 〇1 mCi至約100 mCi,以1 mCi至20 mCi較佳.以單位劑量注射之溶液爲約〇 〇丨毫升至約1 〇毫 井。經靜脈内投藥後,可在幾分鐘内即在活體内顯影。然 而’若需要時’在放射性標記之肽注入患者體内數小時或 甚至更久後仍可顯影。大多數情況下,在約〇1小時内, 即有足量投藥劑量累積在待顯影之區域内,便於拍下閃爍 照片。根據本發明可採用供診斷用之任何習知閃爍照相顯 -39- 本紙張尺度適财咖家榡準(CNS ) ( 21GX297公羞) U9 482 . A7 B7 五、發明説明(37) 影方法ΰ 本發明亦提供放射性標記細胞毒性放射性同位素如:鍊 186或銖188之肽,可用於放射性治療上述某些腫瘤。爲了 此目的,可經由任何合適之臨床途徑,最好利用靜脈内注 射法,投與約10 mCi至約200 mCi之放射活性同位素。 本發明亦提供與金屬結合性部份共價連接之VIP •受體結 s性血管活性腸肤,該金展結合性部份會與磁性、順磁性 超磁性或超順磁性金屬原予,離子或粒子錯合,並提供 使用此等錯合物於活體内之腫瘤或其他組織位置,爲此等 梵體結合性金管活性腸肽錯合物進行以磁性爲主之檢測法 加以定位。因此,本發明提供非放射活性法,用於活體内 爲腫瘤及其他血管活性腸受體表現組織定位。 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 ---'“-----坤衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明提供使用本發明診斷劑及放射性診斷劑及治療劑 及放射性治療劑之方法。本發明製劑,例如:標記Tc-99m之閃爍照相顯影劑之放射性標記具體實施例中,係投 與診斷或治療有故量之本發明診斷劑或放射性診斯劑或治 療劑或放射性治療劑。在放射性診斷之具體實施例中,使 用習知方法如:r -閃爍照相法,檢測放射性標記物之位 置。在非放射活性診斷具體實施例中,使用磁共振顯影法 測定本發明標記順磁性金屬之診斷劑之累積位置。爲了本 發明之目的,放射治療術之定義爲產生減輕疼痛至疫癒範 圍之治療故果。 本發明所提供之顯影劑可用於爲腫瘤顯影,特定言之用 於顯影初級及轉移之贅生瘤位置,其中該等贅生細胞會表 -40 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(2〖0'X 297公釐) A7 4 49 482 ___________B7 五、發明説明(38 ) ' 現νιρ受體,且特定言之,指一般方法不容易檢測之初級 且尤指轉移性結腸直暘腫瘤細胞。 彼等相關技藝之專家咸了解,可使用許多種相關技藝上已 知之任何活體外方法鑑定、測試及鑑別有效之放射性藥劑 a此等方法特別包括測定本發明放射性藥劑與其同系之 VIP受體結合性之解離常數或抑制常數,並比較此等與放 射性標記,例如:標記1251之VIP本身之結合親和性或活動 性’及使用本發明之放射性藥劑與放射性標記之νιρ競爭 之實驗,或使用未標記之VIP與本發明之放射性藥劑競爭 之反貧驗。 操作本發明時’依下列方法製備有效之放射性診斷劑及 故射性治療劑。包含受體結合性血管活性腸肤及血管活性 腸肤片段’其類似物與衍生物之本發明試劑係採用本發明 方法合成,其中係在化學合成期間,將螯合部份加至肽中 。本發明試劑因此再依本文進一步揭示之方式,與鍊錯合 ,最好呈ReO錯合物。然後依下列實例4所述,使用放射 性碘化VIP,於本文所述之活體外競爭性結合分析法中評 估VIP受體結合性。 下列實例更詳細説明製造及標記此等化合物之方法。此 等f例說明上述方法之某些方面及有利之結果,且以説明 方式表示且不受限制。 實例1 BAT螯合物之合成法 A. N-B〇C-N'-(5-羧戊基)·Ν,Ν、雙(2-甲基-2-三苯甲硫丙 -41 - 本紙張尺度適用中國囷家標準{ CNS ) Λ4规格(210X297公釐) t請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 449482 : 五、發明説明(39 ) 基〇乙二胺之舍成法 a. 2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙醛 取三苯甲基硫酵(362.94克,1.31莫耳,100莫耳%)溶於 在冰浴中冷卻及氬氣下之無水THF(四氬呋喃;2升)中。以 20分鐘時間,分批添加氫化鈉(60%油中;54.39克,1.35 莫耳,104莫耳%)。然後以20分鐘時間慢慢添加2-溴-2♦甲 基丙越r (2〇6.〇6克,I·36莫耳,1〇4莫耳%;參見史帝文斯 (Stevens)與奇里斯(Gillis), 1957,J. Amer. Chem. Soc.巧: 3448-51)。使反應混合物回升至室溫,攪拌12小時。加水 (1升)中止反應,以乙謎(3X1升)萃取。合併酸萃液,以飽 和NaCl溶液(500毫升)洗滌’以Na2S04脱水及過濾。減| 排除溶劑,產生濃稠燈色油。此粗油溶於甲笨(2〇〇毫升)中 ,以熱己烷稀釋至2升。混合物經熔結玻璃漏斗過濾,於 -5°C下冷卻12小時。過濾排除所形成之白色晶體,產生 266.36克(收率59%)標題化合物。測定所得化合物之熔點 爲83-85 C °核磁共振鐘定實驗產生下列分子特徵: *H NMR(300MHZ, CDC13): d 1.24 (s, 6H, 2CH3), 7.2-7.35 (m, 9H), 7.59-7.62 (m, 6H), 8.69 (s? H, -COH) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 i^n· ft ^ϋ— m —A m 1 nn « I ^^^1 ^^^1 ^^^1 ^^^1 ^ J> -. -. ,v# (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i3C NMR (75 MHZ, CDC13): d: 22.86, 55.66, 67.48, 126.85, 127.75, 129.72, 144.79, 197.31。 b. N,N·-雙(2-甲基-2-三苯甲硫丙基)乙二脬 添加6二胺(1.3毫升’0.0194莫耳,1〇〇莫耳%)至溶於氬 氣下之甲醇(40毫升)及無水THF(40毫升)之2-甲基-2-(三笨 甲硫基)丙越"(13.86克’ 0.0401莫耳,206莫耳%)中,滴加 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 4 49 48 2 A7 ____B7 五、發明説明(4〇 ) (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 乙酸詞至pH 6 :溶液於20Ό下攪拌20分鐘。添加氰基氫硼 化鈉(1_22克,0.0194莫耳,100莫耳%)。反應於室溫下攪 拌3小時。再添加氰硼化鈉(1.08克),於20aC下攙拌反應17 小時。添加最後一份氰基氩硼化鈉(1.02克),反應於氬氣 下回流加熱6小時。加〇·5 M HCK100毫升)中止反應,以6 酸乙酯(2 X 100毫升)萃取。合併有機萃液,依序以2 Μ NaOH(60毫升)、飽和NaCl溶液(60毫升)洗滌,脱水 (Na2S04)及過濾。減壓排除溶劑,產生16.67克粗產物, 自甲笨/己烷中結晶,產生10.20克(收率73%)標題化合物之 白色晶體。測定所得化合物之熔點爲83-86sC。FABMS分 析法產生m/z爲721 (MH+)。核磁共振鑑別實驗產生下列分 子特徵: lll NMR(300 MHZ, CDC13): d 1.12 (s, 12H, 4 CH3), 1.64 (s, 4H; N-CH2-C(Me)2-S), 2.52 (s, 4H, N-CHrCHrN), 5.31 (S, 2H, 2-NH), 7.12-7.30 (m, 18H, Ar), 7.62-7.65 (m, 12H, Ar) o c. N-f5-乙酯戊基)-N,N、雙(2-甲基-2-三苯甲硫丙基)乙 二胺 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 添加K2C03(1.92克,13·9毫莫耳,100莫耳%)至含N,N,-雙(2-甲基-2-三笨甲硫丙基)乙二胺(10.03克,13.9毫莫耳) 之CH3CN(60毫升)中,然後添加5-溴戊酸乙酯(3_30毫升, 20.8毫莫耳,1 50莫耳%)。反應於氬氣下回流一夜。然後 濃縮溶液成糊狀,並分佈在0.25 M K〇H( 100毫升)與乙酸 6酯(100毫升)之間。以乙酸乙酯(1χ 50毫升)萃取水層, -43- 本紙張尺度適用中國國家標率(CNS ) Λ4規格(210Χ297公釐> ~ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 4 9 48 2 A7 B7 五、發明説明(41 ) 合併之乙酸乙酯層以50毫升水及NaC丨溶液(2 X 50毫升)洗 滌’以Na2S〇4脱水及滚縮成橙色油。經急驟層析法純化 (300克急驟矽石,1〇〇%CHC13 至 5%MeOH/CHCl3),產生 純標題化合物(7.75克,收率66%)。FABMS分析法產生之 (MH+ )爲849(相較於化合物C55H64N2〇2S2)之分子量計算値 爲 849.24)。 土 N-B〇C-N’-(5-羧戊基)-N,N··雙(2-甲基-2-三笨甲硫丙 基)乙二胺 添加1ΜΚΟΗ(25毫升,25.0毫莫耳,274莫耳。/。)至含N-(5-乙酯戍基)-N,N,-雙(2-甲基-2-三苯f硫丙基)乙二胺(7.75 克’ 9.13毫莫耳)之二氧陸園(200毫升)中,然後加水(250 毫升)°攪拌滴加二氧陸園,直到得到均勻溶液爲止。反 應緩慢回流加熱一夜。利用旋轉蒸發法排除大部份二氧陸 園’並以1 Μ ΚΗ2Ρ04及飽和NaHC03調至pH約7至8。以乙 酸乙酯(3 X 75毫升)萃取溶液,合併之有機層以NaCi溶液 (50毫升)洗滌,以Na2S04脱水,濃縮成泡沫物/固體(6.35 克;收率85。/〇)。 在上述製得之粗產物中添加(BOC)20(3.35克,15.4毫莫 耳,200莫耳》/0)、CH3CN(50毫升)及二氯甲烷(50毫升),然 後添加三乙胺(1.〇毫升,7.2毫莫耳,93莫耳%)。反應於室 溫及氬氣下攪拌一夜。反應溶液濃縮,並分佈在水(100毫 升)與乙酸乙酯(50毫升)之間。水層以乙酸乙酯(〗X 5〇毫升) 萃取,合併之乙酸乙酯層以5%檸檬酸及NaCl溶液(各50毫 升)洗滴後’脱水(Na.2S〇4) ’並淡縮成檢色油。經急骤層 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210x297公董1 n nn HI* m 一·· • - T妒 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部中央標準局員工消费合作杜印製 449482_Βτ__ 五、發明説明(42) 析法純化(200克急驟矽石,100%CDC13至5〇/〇甲醇/氣仿), 產生純標題化合物(2.58克,收率36%) " FABMS分析產生 之(MH+)爲921(相較於C58H68N2〇4S2化合物之計算値爲 921.31)。 B. N-Boc-N’-(5-羧戊基}-Ν,Ν·-雙[2-(4-甲氧芊硫基)-2- 甲基丙基j乙二胺之合成法 a. Ν,Ν1-雙-「2-(4-甲氧芊硫基)-2-甲基丙基卜乙二胺 取含Ν,Ν·-雙-(2-氫硫基·2·甲基丙基)乙二胺(11.23克, 47.5毫莫耳;參見狄奇歐(Dizio)等人’ 199〗,Bioconjugate Chem 足:353及柯賓(Corbin)等人,1976, J. Org. Chem. 41: 489)之甲醇(500毫升)溶液於冰/水浴中冷卻後,以氨氣飽 和45分鐘。添加4-甲氧芊基氣(17.0毫升,125毫莫耳,264 莫耳%) a使反應於氬氣下攪拌一夜回升至室溫。溶液濃縮 成糊狀物後,分佈在乙謎(1 50毫升)與0.5 Μ KOH(200毫升) 之間。以乙醚(2 X 50毫升)萃取水層。合併之有機層以 NaCl溶液洗務,濃縮成澄清無色油《此油溶於乙謎(2〇〇毫 升)中’以含4.0 M HC丨之二氧陸園酸化,直到未再出現沉 殿爲止。過濾收集白色沉澱,以乙链洗務。白色固體於pH 〜2下,自熱水中再結晶。過濾收集產物,產生29.94克單 HC丨鹽及二-HC丨鹽之混合物。使HC1鹽分佈在1 Μ KOH(〗0〇 毫升)及乙酸乙酯(100毫升)之間。水相以乙酸乙酯(2 X 30 毫升)萃取,合併之有機層以NaCl溶液洗滌,以Na2S04脱 水,濃縮產生純產物之游離鹼,爲淺黃色油(丨8.53克,收 率82%)。核磁共振鑑別督輪產生下列分子特徵。 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4规格(210X297公釐) --:-:--.4---.裝------訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁〕 449482 , Λ7 _;_B7 五 '發明説明(43) •H NMR(300 MHz, CDCL3): d 7.25 (d, 4H, J=9), 6.83 (d, 4H, J=9), 3.78 (s, 6H), 3.67 (s, 4H), 2.63 (s, 4H), 2.56 (s, 4H), 1.34 (s, 12H)。 b. N-(5-乙酯戊基)-N,N’-雙〖2-(4-H爷硫基)_2_甲秦1 基1乙二胺 依序添加K2C03(1.21克,8,75毫莫耳,ιοί莫耳%)及5-溴 戊酸乙酯(2·80毫升,17_7毫莫耳,204莫耳%)至含Ν,Ν·-雙* [2-(4-甲氧苄硫基)-2-甲基丙基]乙二胺(4.Π克,8.66毫莫 耳)之CH3CN(50毫升 >中。反應於回流下攪拌—夜,眞空濃 縮成糊狀物。殘質分配在乙酸乙酯(100毫升)及0.5 Μ ΚΟΗ(100毫升)之間。水層以乙酸乙酯(1 X 50毫升)萃取, 合併之有機層以NaCl溶液(50毫升)洗滌,以Na2S04脱水, 濃縮成黃色油(〜6克)。以正相製備性HPLC純化(以25分鐘 由100%CHC13至5%甲醇/氣仿),產生純標題化合物(1.759 克,收率340/。)。FABMS分析法之(MH+)爲605(相較於 C33H52N204S2之計算値爲604.90)。核磁共振鑑定實驗產生 下列分子特徵: lH NMR(300 mHzf CDC13): d 7.25 (d, 4H, J=8.5), 6.83 (d, 4H, J-8.5), 4.13 (q, 2H, J=7); 3.793 (s, 3H), 3.789 (s, 3H), n-ln _-* 1^1 ^11- —^1· m 士^^^1 HI ^^1 TJ ' f · 0¾^'t (請先閱讀背面之注意事項再瑱寫本頁) 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 3.74 (s, 2H), 3,67 (s? 2H), 2.6 (m, l〇H), 2.31 (t, 2H, J = 7), 1.6 (m, 2H), 1.5 (m, 2H>, 1.34 (s 12H), i.28 (t, 3H, J=7)。 c. N-(B〇C-N,-(5-幾戊基)-N,N,-雙 甲氧节硫基)_2- 甲基丙基]乙二胺 添加水(30毫升)及1 mKOH(2.5毫井,2_5毫莫耳,260莫 -46- 本紙張尺度適用中國國家橾準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 49 482 A7 ________B7 五、發明説明(44 ) 耳%)至含N-(5-乙酯戊基)-N,N,-雙-[2-(4-甲氧苄硫基)-2-甲 基丙基]乙二胺(586毫克,0.969毫莫耳)之thF(40毫升)中 。均句溶液加熱至緩緩回流一夜。溶液冷卻至室溫,於旋 轉蒸發法下排除THF。殘質以H2〇稀釋至50毫升,以1 Μ HC1調至pH〜2至3。以乙酸乙酯(3 X 毫升)萃取溶液。合 併有機層,以NaCl溶液(50毫升)洗滌,以Na2S04脱水及濃 ‘輪,產生粗酸(422毫克,收率75%)。 在得自上述反應之粗產物中添加CH3CN(40毫升)與 (BOC)2〇(240毫克,1.1〇毫莫耳,15〇莫耳%)後,添加三乙 胺(0.200毫升,1.43毫莫耳,196莫耳。/〇)。均勻溶液於室溫 及氬氣下攪拌一夜,溶液濃縮成糊狀物,分佈在乙酸乙酯 (25毫升)與1 Μ KH2P04(25毫升)之間。有機層以5%檸檬酸 (2X 25毫升)及NaCl溶液(25毫升)洗滌,以Na2S04脱水及 濃縮成黃色油。經急驟層析法純化(50毫升急驟矽膠, 100%氣仿至15°/。甲醇/氣仿),產生純標題化合物(344毫克 ’收率70%)。FABMS分析法產生之(MH+)爲677(相較於 (:'36^561^20682之計算値爲676.97”核磁共振鑑定實驗產生 下列分子特徵: lE NMR(300 MHz, CDC13): d 7.20 (d? 4H, J=7)? 6.79 (d, 4H; .1-7), 3.75 (S, 3H), 3.74 (S} 3H), 3.68 (Μ, 4H), 3.35 (M, 4H), 2.65 (Μ, 2H), 2.53 (Μ, 4H), 2.31 (Μ, 2H), 1.59 (U, 2H)S 1.43 (S, 11H), 1.30 (S, 6H), 1.26 (S, 6H) c BAT-BM(N-[2-(N',N'-雙(2-馬來醯亞胺乙基)胺乙基 ]-Ν6,Ν9-雙(2·甲墓-2-三苯甲硫丙基)-6,9-重氮壬烷醯 -47- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· --¾ 本紙張尺度適财_家縣(CNS ) M規格(210χ 297公楚) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印聚 “9482 s at _ _1 B7五、發明説明(45 ) — 胺)之合成法 BAT-BM之製法如下。添加BAT酸(N9-(三級丁氧幾基)_ N6,N9-雙(2-甲基-2-三苯甲硫丙基)-6,9-重氮壬酸)(1〇.〇3克 ,1〇.89毫莫耳)及75毫升無水二氟甲烷((:112(:〗2)至附裝磁 鐵攙拌棒及氬氣球之250毫升圓底燒瓶中。在此溶液中添 加二異丙基碳化二亞胺(3.40毫升,21.7毫莫耳,199莫耳 %),然後添加N-羥基琥珀醯亞胺(3.12克,27.1毫莫耳, 249莫耳。/。)。觀察此溶液在1小時内轉呈混濁,續於室溫下 攪拌培養共4小時。添加含參-(2-胺乙基)胺(30毫升,200 毫莫耳,1840莫耳。/。)之30毫升二氣甲烷溶液,續挽拌一夜 。反應混合物減壓濃縮,殘質分佈在乙酸乙酯(15〇毫升)及 0.5 Μ碳酸鉀(K2C.〇3,150毫升)之間。分離有機層,以鹽 水洗滌及濃縮,產生粗產物N-(2-(N,,N,-雙(2-胺乙基)胺乙 基)]-N9-(三級丁氧羰基)_>^,^_雙(2_甲基_2·三苯甲硫丙基) -6,9-重氮壬醯胺之泡沫物/油。 此粗產物加至含有300毫升THF且附裝磁鐵攪拌棒之1〇〇〇 毫升圓底燒瓶中,添加30毫升飽和碳酸氫鈉(NaHC03)、 100毫升水及N-甲氧羰基馬來醯亞胺(6.13克,39.5毫莫耳 ’ 363莫耳%)。此不均相混合物於室溫下攪拌一夜,利用 旋轉蒸發法排除混合物中之THF,水性殘質以乙酸乙酯(2 X 75毫升)萃取2次。合併此等萃取之有機層,以鹽水洗滌 ’以硫酸鈉脱水,經中孔玻璃過濾,濃縮至約12克粗產物 °經液相層析法純化(250克二氧化矽/以氣仿2%甲醇之 氣仿溶液梯度溶離),產生5.3克粗產物(N-[2-(N,,N,-雙(2 -48- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝* I11 本纸張尺度適财_家料(CNS ) Α4ί1格(21{}><297公势) 449482 A7 B7 五、發明説明(46) 〜' 馬來醣亞胺乙基)胺乙基)]-N9-(三級丁氧羰基)-N6,N9-雙(2· 甲基-2-三苯甲硫丙基)-6,9-重氮壬醯胺(相當於收率4〇%)及 約5克粗產物’可再純化成純產物D純產物之化學分析法 證實其與BAT-BM相同,分析數據如下: lR NMR(200 mHz, CDC13): d 0.91 (12H,s), 1.38 (9H,s), 1.2-1.6 (4H,m), 2.06 (2H,s),2.18 (2H’U=7), 2.31 (4H,m), 2.55(2H,t,J=5), 2.61 (4H,t,J=6), 2.99 (2H,s); 3.0-3.3 (4H,m), 3,46 (4II,t,J=6),6.49 (-NH,t,J=4),6.64 (4H,s), 7.1-7.3 (18H,m),7.6 (12H,tJ=17)。 D. [BAT]-共耗(eN) Lys(aN-Fmoc)[N-e-(N9 ·三級 丁氧幾 基)-N6,N9-雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]-6,9-重氣 妥醯基)-N-a*Fmoc-離胺酸之合成法 於室溫下,在附裝攪拌棒及氬氣球之100毫升單頸圓底 燒瓶中添加含N9-(三級丁氧羰基)-N6,N9-雙[2-甲基-2-(三笨 肀硫基)丙基-6,9-重氮壬酸(BAT酸;3.29克,3.57毫莫耳) A 50毫升CH2C12溶液。在其中添加二異丙基碳化二亞胺 (DIC ; 580微升,3.70毫莫耳,104莫耳。/〇),隨後立即添加 N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu ; 432毫克,3.75毫莫耳,105莫 耳。'b)。反應於室溫下攪拌一夜,此期間出現白色沉澱。過 濾混合物,濾液濃縮成固體泡沫物。於100毫升阗底燒瓶 中,取該粗泡沫物溶於75毫井2:1二甲氧乙烷與水之混合 物中。在此均勻溶液中添加N_a-Fmoc-離胺酸鹽酸鹽(1.52 克,3.75毫莫耳,1〇5莫耳%>,然後添加1<:2003(517毫克, 3.74毫莫耳,105莫耳%),黃色溶液於室溫下攪掉一夜。 -49- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X 297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 經濟部中央樣準局員工消費合作杜印製 A7 ____B7 五、發明説明(47 ) 溶液倒至含100毫升乙酸乙酯與1 〇〇毫升水之250毫升錐形 燒瓶中,分離有機層,水層以5〇毫升乙酸乙酯萃取。合併 之有機層以鹽水(100毫/卜)洗滌一次,以Na2S〇4脱水,濃 縮成黃色固體。此粗產物經低壓液相層析法純化(150克 Si〇2,以曱醇之CHC13溶液溶離)。依此方式 製得3.12克標題化合物(收率69%)。純產物之化學分析證 實其特性如下: 4 NMR(300MHz, CDC13): d 0.88 (12H, s,寬),1.05-1.45 (19H,m), 18-2.1 (4H,m); 1.8-2.47 (4H,m), 2.75-3.2 (6H,m), 3.9-4.3 (4H,m),7.2 (22H,m),7.6 (16H,s, bound)。 FABMS MH+預钴値爲1270.6且實測値爲1272。 E. BAM(N’-(三級丁氧羰基)-N'N4·雙[2-甲基-2-(三苯 甲硫基)丙基]-1,4-10-三氮雜癸烷之合成法 在附裝攪拌棒、回流冷凝器及氬氣球之250毫升單頸圓 底燒瓶中添加含N^N4-雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]乙 二胺(BAT-I: 10_0克;14.01毫莫耳)之50毫升0叫狀30 毫升二氧陸圜,在其中依序添加N-(5-溴戊基)酞醯亞胺 (8,04 克,27.1毫莫耳,194 莫耳 %)及K2C03(2.95 克,21.3 毫莫耳’ 152莫耳。/。)。混合物於氬氣下回流加熱2天。反應 混合物濃縮,殘質分佈在150毫升水及150毫井乙酸乙酯之 間。分離有機層,水層(pH約10)再以50毫升乙酸乙酯萃取 。合併之有機層以鹽水(75毫升)洗滌一次,以\&2(:03脱水 ,濃縮成油。以低壓液相層析法純化(300克Si02,CHC13-、2%甲醇之(:11(:13溶液),產生9.20克9-酞醯亞胺基->11-以- -50- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Μ規格(21〇Χ297公嫠) H— ^^1 - In - - — -ί 1 -- - I ---- - - - -(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部.^央標準局員工消費合作社印裂 ίΊ ^9482 Α7 ^ Β7 五、發明説明(48) 雙[2_甲基-2-(三笨甲硫基)丙基】-1,4-重氮士烷之黃色泡沫 物(收率70%)。此中間物純產物之化學分析法證實其特性 如下: !H NMR(300 MHz, CDC13): d l.〇l (6H,s), l.〇3 (6H,s); 115-1.4 (2H, t), 1.98 (2H, s), 2.10 (2H, s), 2.28 (2H, m), 2.45 (3H, m), 3.68 (2H, t), 7.15-7.35 (18H, m), 7.62 (12H, t), 7.72(2H,m),7.85(2H,m” FABMSMH+預估値爲 935.4且實測値爲936。 在附裝攪拌棒之500毫升單頸圓底燒瓶中添加含9-S太醯亞 胺基雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]-1,4·重氮壬烷 (8.83克,9.43毫莫耳>之75毫升〇113€1^及20毫升(^2(:12。 在其中依序添加K2C03 (1.30克,9.41毫莫耳,1〇〇莫耳%) 及二碳酸二-三級丁酯(2.15克,9_85毫莫耳,104莫耳%), 反應於室溫下攪拌一夜。反應混合物濃縮,分佈在各100 毫升水與乙酸乙酯之間。分離有機層,水層以5〇毫升乙酸 乙酯萃取。合併之有機層以鹽水(75毫井)洗滌一次,以 NasSO]脱水及濃縮,產生9.69克粗9-酞醯亞胺基_:^1-(三級 丁氧羰基)-N】,N4-雙[2·甲基-2-(三苯甲硫基)丙基卜】,4-重 氮妥烷之黃色泡沫物(粗收率99%)。此粗產物未再純化即 使用 在附裝攪拌棒與回流冷凝器之250毫升單頸圓底燒瓶中 ’添加含9-献醯亞胺基-Ν1·^三級丁氧羰基)·ν〗,ν4-雙[2-甲 基-2-(三苯甲硫基)丙基卜1,4_重氮壬烷(5,5〇克,5.319.43毫 莫耳)之25毫升THF。在其中添加ι〇〇毫升乙醇及5毫升水。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格( (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. ,-* -51 - 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 449482 a? — ^_B7 ___ 五、發明説明(49 ) 添加水,使起始物自溶液中沉澱析出s添加肼水合物(1.2 毫升,24.7毫莫耳,466莫耳%),反應回流加熱2天。反應 混合物濃縮,分佈在备100毫升水及〇.25MK2C〇3之間。 分離有機層,以鹽水(75毫升)洗滌一次,以Na2S〇4脱水, 濃縮成固體泡沫物。粗產物經低壓液相層析法純化(100克 Si〇2),CHC丨3->5%甲醇之CHC13溶液,管柱先經200毫升 2%三乙胺之cHCl3溶前處理),產生3·27克純N1 -(三級丁氧 羰基)->^,1^4-雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]-1,4,10-三氮 雜妥烷之黃色泡沫物(收率68%”純化產物之化學分析法 證實其特性如下: ln NMR(300MHz, CDC13): d 0.9 (12H, s), 1.2 (6H, s), 1.36 (9H,s), 2.05 (4H, m), 2.24 (2H, t), 2.31 (2H, t), 2.62 (3H, t), 3.0 (2H,s,寬),3.1 (2H,s,寬),7.2 (18H,m), 7.6 (12H,t)。FABMS MH+之預估値爲9 〇 5 5,且實測値爲9 〇 6.5。 F· [BAT]·共軛(s) Cys(aN-Fmoc)(N(Fmoc)-S-(N9-三級 丁氧羰基)-N6,N9-雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]-6,9-重氮士烷基)半胱胺酸)之合成法 a- (N9*三鈒丁氧羰基)-N6,N9-雙[2-甲基-2-(三苯甲硫 基)丙基丨-6,9-重氮壬-1-醇(BAT-戊醇)之合成法 於氣氣下’以5分鐘時間,在含BAT酸(10.4克,10.89毫 莫耳)之2S0毫升無水THF溶液之500毫井圓底燒瓶中缓缓添 加12.1毫升1M BH3-THF(12.1毫莫耳)。添加時會起泡。此 反應產物於室溫下攪拌培養一夜。以過量甲醇(5〇毫升)中 止反應,再攪拌培養2小時。蒸發濃縮溶液,殘質分佈在 -52- 本紙張尺度賴中_家縣( I n Lt n IJ-II ----II 丁 _I —I—A*_ * ————— ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 “9 48 2 a A 7 -- B7 五、發明説明(50 ) — 200毫升乙酸乙酯,100毫升…檸懞酸及I⑻毫升 ΚΑΡΟ4之間。分離有機層’依序以各1〇〇毫升水、飽和 NaHC〇3及幾水洗務。祕後之有機層以無水Na2S〇4脱水 ,篆發濃縮成白色泡珠物,產生8 82克粗產物(收率89%) -純化產物义化學分析法證實其特性如下: JH NMR(300MHz; CDC13): d 0.91 (12H5s)? 1.2-1.3 (4H,m), 1.38 (9H,s), 1.4-1.6(4H,m), 2.08 (lH,s), 2.2-2.4 (4H,m), 2.95-3.05 (2H,br), 3.05-3.25 (2H,br), 3.58 (ΖΗ,ΐ,Ι-ό), 7.12-7.28 (18H,m),7.61 (12H,t,J=7)。 b. 〇-甲磺醯基_(N9-三級丁氧羰基)_n6,N9-雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]-6,9-重氣壬烷-1-醇(BAT-甲磺酸鹽)之 合成法 於氬氣下’在含BAT-戊醇(8.8〇克,9·7〇毫莫耳)之1〇0毫 升無水THF溶液之500毫井圓底燒瓶中,依序攪拌添加! 6 毫升三乙胺(11.5毫莫耳)及0.83毫升甲磺醃氣(10.7毫莫耳) 。此等添加過程之數分鐘内,溶液轉呈混濁》續於室溫下 攪拌一夜。溶液蒸發濃縮,分佈在100毫升乙酸乙酯與100 毫升1Μ KHjPOj之間。分離乙酸乙酯層,以100毫升鹽水 洗滌,以無水Na2S04脱水,蒸發,產生9.61克粗產物(收 車100%)之淺黃色泡沫物s c. S-(N9-三級丁氧羰基)-N6,N9-雙[2-甲基-2-(三苯甲 硫基)丙基]〇重氮妥烷-1-基)半胱胺酸(H· Cvs(BAT)-OH)之合成法 在20毫升閃爍測定瓶中混合半耽胺酸(1.3克,10.7毫莫 -53 - 本紙張尺度通财關緖準(CNS ) Λ视格(21GX297公釐) ' —Γ ϋ, ' 裝—-I—. 訂-------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 49 482 at _________B7 五、發明説明(51 ) 耳)'4毫升5_4^1甲醇納(21.6毫莫耳)及5毫升無水甲醇。添 加此均勻溶液至含BAT-甲磺酸鹽(9.57克,9.71毫莫耳)之 80毫升無水二甲基甲醯胺(DMF)溶液中,於室溫及氬氣下 嫌拌一夜。以旋轉蒸發法減壓排除溶劑,殘質分佈在1 00 毫外乙酸乙酯與100毫升1M ΚΗ2Ρ04之間。分離乙酸乙酯 層’依序以各1〇〇毫升炮和NaHC03及鹽水洗滌後,以無水 Na2S〇4脱水及蒸發濃縮,產生白色泡沫物。此產物未再鑑定 ,立即用於下列合成反應。 d. N-芴曱氧羰基-S-(N9-三級丁氧羰基)-N6,N9·雙[2-甲基-2-(三苯甲硫基)丙基]-6,9-重氮壬烷-卜基)半胱 胺酸(Fmoc-Cys(BAT)-OH)之合成法 假設依上述製得之粗H-Cys(BAT)-OH含有9.71毫莫耳產 物。取全量此粗產物溶於1升錐形瓶中之2〇〇毫升THF及 150毫井水中。在此均勻溶液中依序添加L34克K2C03 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (9_72毫莫耳>及3.28克N-芴甲氧羰氧基琥珀醯亞胺(9J3毫 莫耳此反應混合物於室溫下攪拌一夜。利用旋轉蒸發 法排除反應混合物中大部份THF,殘質分佈在100毫升乙 酸乙酯與100毫升1MKH2P04之間。分離乙酸6酯層,以 50毫升鹽永洗滌,以無水Na2S04脱水及濃縮,產生黃色泡 沫物。此粗產物經液相層析法,使用300克矽膠及0-3% f 醇之氣仿溶液線性梯度純化。層析法產生10.1克純Fmoc-Cys(B AT)-OH(來自B AT-甲磺酸鹽之收率爲84%)。純化產 物之化學分析法證實其特性如下: ]H NMR(300MHz, CDC13): d 0.85 (12H,s), 1.23 (4H,br), -54- 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS ) A4規格(210 X 297公釐〉 A7 B7 449482 五、發明説明(52 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1-35 (9H,s), 1.5 (2H,m), 2.0-2.15 (2H,m), 2.15-2.35 2.51 (2H,t,J=6), 2.85-3.05 (4H,m), 3.15 (2H,br), 4.1-4.2 (lH,m), 4.2-4.4 (3H,m), 7.05-7.4 (22H,m)? 7.5-7.65 (14H,m), 7.71 (2H,d,J=7) 6 實例2 固相肽合成法 依0.25毫莫耳规模,使用應用生物系統公司(Applied Biosystems) 431A型肽合成機並使用9-芴甲氧幾基(Fmoc)保 護胺基末端,輿二環己基碳化二亞胺/羥基苯並三唑或 2(1H-苯並三唑-1-基)·〗,1,3,3-四甲基糖醛鑌六氟磷酸鹽/羥 基苯並三唑(HBTU/HOBT)偶合,並使用對羥甲基 henoxymethyl-聚苯乙烯(ΗΜΡ)樹脂或Sasrin δ或氣三苯甲基 樹脂(供製備羧基末端酸)或Rink醯胺樹脂(供製備羧基末端 醯胺),進行固相肽合成法(SPPS)。 若適當時,依實例1所述,製備Fmoc-Cys(BAT)及Na-Fmoc-Ne-(BAT)Lys。 經濟部中央標準局員工消費合作杜印褽 苦逋當時,在SPPS期間,使用適當之2-南代酸作爲最後 一個偶合殘基,或以2-鹵代酸/二異丙基碳化二亞胺/N-輕 基琥珀醯亞胺/'NMP或2-鹵代酸酐/二異丙基乙胺/NMP處理 輿樹脂結合之N-末端游離胺基酸肽,引進2-氣乙醯基、2-溴6醯基及2-溴-3-苯基丙醯基》 若適當時’取經HPLC純化之2-卣代酿基化之肤於轉酸鹽 或碳酸氫鹽緩衝液或稀氫氧化按(pH 8.0)中,可視需要含 0.5-1.0 mM EDTA、或乙腈或THF中,形成〇卜1 _〇毫克/毫 -55 - "A ^ 尺 張 紙 I本 率 I標 一家 i祕 I* 公 經濟郎中央標準局員工消費合作社印繁 4 4 9 4 8 2 at __B7___五、發明説明(53 ) 升之溶液,攪拌1-48小時,可視需要以乙酸酸化而環化, 冷凍乾燥及HPLC純化。 若適當時,由含硫醇肽與含氯乙醯基之硫醇受保護之Tc-99m錯合部份,於pH 10及室溫下反應0.5至4小時,隨後以 6酸酸化,蒸發溶液,產生相應之肽-硫化物加合物。依 例行方式脱除保護及純化,產生螯合物-肽共軛物。 若適當時,由含單一硫醇之肽(5至50毫克/毫升於已利用 N-甲基嗎啉或N·乙基嗎啉緩衝至pH 7之DMF中,或50 mM 磷酸納緩衝液,pH 7至8,可視需要含0.5 mM EDTA或 DMF或THF或乙腈)與0,5莫耳當量預先溶於乙腈中之 BMME(雙馬來醯亞胺基甲基醚)於室溫下反應約1至18小時 ,製備BSME加合物。溶液濃縮,以HPLC純化產物。 若逋當時,由含單一硫醇之肽(肽濃度爲10至100毫克/毫 升於已利用N·甲基嗎啉或N-乙基嗎啉缓衝至pH 7之DMF中 ,或5至50毫克/毫升肽於可視需要含有0.5 mM EDTA或 DMF或THF或乙腈之50 酸鈉,pH 7-8中)與0.33莫耳 當量TMEA(參(2-馬來醯亞胺乙基)胺)(預先溶於乙腈或 DMF中),使用或不使用1莫耳當量三乙醇胺,於室溫下反 應約1至18小時,製備TSE A加合物。含加合物之反應混合 物濃縮,加合物再使用HPLC純化。 若適當時,由(ΒΑΜΗΝ^Ν4-雙(2-氬硫基-2-甲基丙基)-i,4,10-三氮雜癸烷)與肽共軛,其係先以含二異丙基碳化 二亞胺/N-經基琥珀醯亞胺或HBTU/HOBt之DMF、NMP或 二氣f烷混合物活化肽叛酸鹽,然後於二異丙基乙胺之存 -56- (讀先閱讀背面之注項再填寫本頁) .裝.
、1T .1. 本紙張尺度適用中國國家橾隼(CNS ) Λ4规格(2〗0 X 2?7公釐) 經濟部中夬標準局員工消費合作杜印11 ^ 49 48 2 a? —____B7_____ 五、發明説明(54 ) 在下偶合。偶合後,依上述脱除共軛物之保護。 若適當時,(BAT) (N6,N9-雙(2-氫硫基-2-甲基丙基)-6,9-重氮壬酸)在肽合成期間,以受保護之胺基酸衍生物形式 ’如:(Na(Fmoc)-Ne(N-Boc)-S,S,-三苯甲基-BAT)離胺酸( 依共同擁有且同在申請中之美國專利案系列No. 08/__ (已併爲本文之參考文獻)之實例2所述,由Na(Fmoc)-離胺 酸與 Ne(N-Boc)-S,S.-雙-三苯甲基-BAT製備),或(N(Fmoc)-S,S、雙-三苯甲基·ΒΑΤ)半胱胺酸(依上述實例IF製備)加至 狀中’自合成樹腊上裂解完成之肽後,再脱除保護。 若適當時,由含單一硫醇之肽(肽濃度爲2至50毫克/毫升 於利用N-甲基嗎嗛或N-乙基嗎啉緩衝至pH 7之DMF t,或 於可視需要含0.5 mM EDTA或DMF或THF或乙腈之50 mM 磷酸鈉(pH 7-8)中)0‘5莫耳當量ΒΑΤ-ΒΜ (Ν-{2-(Ν,,Ν·-雙(2-馬來醯亞胺6基)胺乙基)}-Ν9-(三級丁氧羰基)-Ν6,Ν9-雙 (2-甲基-2-三苯甲硫丙基)·6,9-重氮壬醯胺)(預先溶於乙腈 或THF中)於室溫下反應約1_18小時,製備baT-BS(N-{2-(Ν·:Ν·_雙(2-琥iE白醯亞胺乙基)胺乙基)}_Νό,Ν9·雙(2_甲基_2. 氫硫基丙基)-6,9-重氮壬醯胺)加合物。溶液蒸發至乾,以 10毫升TFA及0_2毫升三乙矽烷處理卜]、時,脱除(BAT-BS)- 肽共軛物之保護。溶液濃縮,加合產物經醚沉澱,以 IIP LC純化。 若適當時,肚前體由側鏈受保護之N-末端游離胺與C-末 端游離酸使用二苯基.轉醯疊氮化物反應而環化(胺基-與羧 基末端之間)。 -57 - 本紙浪纽剌巾關家料(CNS ) Λ4規格( ---!丄-----装------訂-----:%I..--Ί1 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^9 482 1 A7 __B7___五、發明説明(55 ) 使用含丨% TFA之二氣甲坑溶液裂解與Sasrin樹腊結合之 肽,產生受保護之肽。若適當時,受保護之肽前體由侧鏈 受保護之胺基末端游離胺及羧基末端游離酸使用二苯基磷 醯晏氮化物反應,使胺基-與羧基-末端之間環化。 照例裂解與HMP或Rink醯胺樹脂結合之產物並使用含三 氟乙酸(TFA)、或TFA與二氣甲烷,可視需要含水、硫苯 甲醚、乙二硫醇、或三乙矽烷或三異丙矽烷,(比例爲 100:5:5:2.5:2)之溶液,於室溫下反應0.5-3小時,脱除受保 護之環化肽之保護。若適當時,產物於三苯酚甲醇/TFA中 再次S-三苯甲基化,並使用(Boc)2 Ο將N-Boc基團再次加至 肚中。 以製備性高壓液相層析法(HPLC),使用Waters Delta Pak C18管柱及使用含0.1%三氟乙酸(TFA)之水與乙腈之梯度溶 液溶離。蒸發溶出之溶離份中之乙腈後,冷凍乾燥°以快 速原子撞擊質譜(FABMS)或電子噴灑質譜(ESMS)證實各產 物之特性e 下表丨出示本文所提供合成之受體結合性血管活性腸肽 、衍生物及類似物,及由F A B M S銀別此等合成法之產物 (請先閱讀背Ι&之注意事項再填寫本頁) -裝' 訂 " 58 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS ) Α4規格(2丨0><297公麓) 4 49 482 A7 B7五、發明説明(56 ) 經濟部中央標準局舅工消費合作社印製 8ε 3Ρ1 ί 导 3D00.8sCJ3IS3AMXAVWiwnrmu2aldAvasH 震 31 si ^00(E2).8*H0u3ISNTASXAVWC0WTalANaxdAvasH sfn3P1 <315J300 8„Hu)uisNTA*iAvwax>rmLANaJUIAyasH (33?s8*s>uNTISNTA5WAVW0x>rmAzaLdlAvasH δε ^ρίιυτανβυι'ΠΚΝΤΑ^ΧΛνΜσ^πΉΙΑΝαυΛνανίΗ i ^tnuKDOOisNTAXHAVWiwMTULANalilAvasH 2νοε lauo^w,ow§wi.^§<sa^is2PE><QS tslslsars_
iM lid §ld §Id -59- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Λ4規格(210Χ2<Π公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝- 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 449482 , A7 ____B7__五、發明説明(w) 實例3 ---' I - _ 以Tc-99m進行放和ϋ記之一般方法 取0.1毫克依實例2製備之肽溶於〇.1毫升或0.2毫升水或 0.9%生理食鹽水中。由葡聚糖瓶(E.I. DuPont杜邦公司(Ε.Ι DuPont, de Nemours, Inc·, Wilmington,DE))與 〇·25毫升丁c-99m過锊酸鈉(含至高200 mCi)重新组合,於室溫下靜置15 分鐘,製成Tc-99m gluceptate。然後取25微升Tc-99m gluceptate加至狀中,於室溫或100°C下反應15或55分鐘, 然後經0.2微米濾紙過濾。 由逆相HPLC使用下列條件測定標記Tc-99m之肽純度: Waters Delta Pak C-18,5微米,在 3.9毫米 X 1 50毫米分析 級管柱上承載各經放射性標記之肽,以流速等於1毫升/分 鐘(Delta-Pak)之溶劑溶離肽。使用20至50%溶劑B/溶劑A之 悌度溶液(溶劑A爲含0.1%CF3COOH之水,且溶劑B爲含 0_1% CF3COOH之 90/10 CH3CN/H20)進行梯度溶離20 分鐘 後,以100% B/A溶離3分鐘。 採用與積分記錄器連線之放射性檢測器檢測放射活性成 份。在此等條件下,Tc-99mgluceptate與Tc-99m過得酸納 在1至4分鐘之間溶出,而標記Tc-99m之肽則在較久之後溶 出°使用連線之光度計,於220nm檢測肽D 由本發明各肽試劑與約1莫耳當量四丁基銨氧四溴銖酸 鹽(+ 5)(依葛登(Cotton)等人所述製備(1996, Inorg. Chem. L 9-16))共同溶於二甲基甲醯胺或乙腈/水中,攪拌0.5-5天, 製成非放射活性铼錯合物,依上述分離標記Tc-99m之肽之 -60- (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装· --訂 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS〉A4規格(210X297公釐) 4 4 9 48 2 A7 B7 五、發明説明(58 逆相HPLC法,分離銖錯化物,以FABMS或ESMS鑑別。依 檢測肽之方法,使用連線之光度計,於220nm下檢測非放 射活性肽。 使用例如:R e -18 6或R e -18 8之放射活性鍊錯合物係由適 當過鍊酸鹽依標記Tc-99m之相同方式製備,或添加還原劑 至肽與過銖酸鹽之溶液中製備,或可視需要使用配位體轉 移劑如:檸檬酸鹽,並於室溫至l〇〇°C之溫度間培養反應5 至60分鐘製備。 肽、標記Tc-99m之肽及ReO-錯合肽之HPLC純化結果示 於表II。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 Λ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 61 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) Λ d9 482五、發明説明(59 ) t-odl οοτι 6εί 日 66ύ1.^錐 11碘 5Ϊ SI δ #φφ-ο*Η (鋇令)S:—抄ri-υΉΗ οοπ ΙΤΪ 9ΊΙ 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 着,οοεκΛΛ} 鸽谖 DCKXiKnA}
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*1T Λ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(21〇X297公釐) 經濟部中央標_局員工消費合作社印製 4 49 482 A7 A7 r______B7 五、發明説明(60) 實例4 生物分析法 在競爭結合分析法中,使用標記1251之VIP分析本發明之 肽或其ReO-錯合物具體實施例之生物活性。
此等分析法係於VIP結合性之標準分析法中,使用自天 竺鼠肺部分離之膜進行;於周邊自液單細胞與血小板上; 及於許多種人類腫瘤細胞系上進行P 操作此等方法時’使用埃形成法(i〇d〇gen meth〇d)(述於 珊納(Schanen)等人(1991,Lancet 色:395-396)爲 VIP 進行放 射性碘化作用。簡言之,取含5〇微克VIP之10微升〇.5M碍 酸鹽緩衝液(pH 7.5)、適量放射性同位素及6微克碘源 (iodogen),於室溫下溫和攪拌培養約3〇分鐘。利用HPLC 層析法,自未被?丨進之放射性碘中純化放射性碘化之VIP ,溶於補充〇. 10/〇人類血清白蛋白及〇 1% Tween-80清潔劑 之磷酸鹽緩衝之生理食鹽水(PBS)中。 在使用已分離出之天竺鼠肺膜之分析法中,肺部係來自 雄性天竺鼠,且基本上依卡斯捷爾(Carstairs)與巴恩斯 (Barnes)所述(1986, J. Pharmacol. Exp· Ther. 239: 249-255 ,已併爲本文之參考文獻)分離膜。取0.2毫克膜標本與 0.01 nM標記1251之VIP,於各種不同濃度之本發明肽或其 ReO錯合物之存在或不存在下培養。比較在未標記之Vlp 化合物之存在或不存在下之結合程度,決定各化合物抑制 50%標記12之VIP之結合性時之濃度(稱爲1C50)。 各試驗化合物使用此等方法得到之結果示於表III。此等 •63- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) ~~~' '~~ (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. -訂 A7 經濟部中央標傘局員工消費合作杜印f d 49 4B2 B7 五、發明説明(61 ) 結果表示本發明之肽及肽ReO錯合物爲VIP對表現VIP受體 之肺膜之結合性之強力抑制劑。 -64- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210 X 297公釐) 449482 A7 B7 五、發明説明(62 ) S3 (i)2
- - 98 -9 Γ9 09 S '9 - 卜 •C 0t --ι.ς II _ I I - nn ti 1^— Λ 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 $ (o°6COJWr^_ 遂请 ZTISNTANXAVW0x>nHlANauAvasHilA 雄镡 Οοίϋύ-&Λ) 建磨 3§·8£ϋ> 鸪馋-&-雄?βόοο'λι 建镛 tLVHXJUI-囊镡 XJOis) 8¾})建瘠-<0-S 檐-ΝΟΟΟΧΚΛΟ)缕谊ϋί&Λ) <ΠΛ s£ sold 9l£ -£ sold S2d 00£ §ld -65- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4規格ί 210X 297公釐) (請先85讀背面之注意事項再填寫本頁) Ί---‘裝------訂 449482 A7 _____________ B7 五、發明説明(63 ) 採用正常人類周邊血小板及單核細胞進行類似實驗。 此等實驗中,根據維格里尼(Virgolini)等人之方法單離 血小板(1990,Brit. J. Cancer 12: 849-861〉。利用菲克 (Fico丨1)密度梯度離心法(r=l.〇77),自全血血塊黃層中分離 出周邊單核細胞(PMNCs)。分析前,以50 mM Tris-HCl緩 衝液,1>117.5洗滌細胞,然後再懸浮於補充5|111^\^(:12、 1 iiiM CaCl 2、及〇. 1 M NaCl之相同緩衝液中。每次分析法 使用約5 X 107個細胞^ 此等使用血小板及PMNCs之分析結果示於表IV,證實本 發明肽之ReO錯合物爲對此等周邊血球上之血管活性腸受 體結合性之強力拮抗劑。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) '裝.
表 IV Μ IUnM):血小板 IC^(nM): PMNCs 血管活性腸肽 4.0 5.5 Ρ887 6 6.0 Ρ915 4.5 7.5 Ρ916 3.0 6.5 Ρ917 0.8 2.7 其中血管活性腠肽爲:HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 採用上述結合性競爭分析法分析下列腫瘤細胞系: KU812細胞(人類慢性骨髄性白血病細胞系);COLO320細 胞(人類結腸腺癌瘤細胞系);HT29細胞(人類結腸直腸腺 癌瘤細胞系);PANC1細胞(人類胰癌瘤細胞系);HMC1細 臉(人類肥胖細胞)。各細跑系基本上係如上述分析人類周 -66- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Μ規格(210 X 297公釐) 449482 A7 __B7__ 五、發明説明(64 ) 邊血球之方法分析。細胞生長於補充10%胎牛血清 '麩醯 胺及抗生素之RPMI培養基或杜貝克氏改良培養基 (Dulbecco’s Modified Media>(HMCl 細胞)中,採用標準細胞 培養技術培養(參見英國牛津,IRL出版社,佛雷斯尼編輯 之”動物細胞培養:實際操作法",1992年(Animal Cell Culture: A Pratical Approach, Freshney, ed, IRL Press: Oxford, UKJ992)) c 此等分析法之結果示於表V,證實本發明肽之Re〇錯合 物爲血管活性腸肽與此等人類腫瘤細胞之結合性之強力抑 制劑。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一---.餐------ir----- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -67- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS >八4規格(2丨〇><297公釐) 4 49 48 2 A7 B7 五、發明説.明(65 ) L L 2 ?00 LS3 stst寸一 01 < 5 TuNvd ττ 2 s 99 ·. fsl9W ) 831 s,l 938 s 3 s 0.9 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· 訂 M.o sd.z a.N t« 經濟部中央標率局員工消費合作杜印製 s' £I6d 目 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 4 4 9 482 / 3 482 ' A7 ________B7 五、發明説明(δ6 ) 此等結果證實本發明所提供之金管活性腸肽與其㈣錯 合物可於標準活體外分析法中,與許多種正常及人類應瘤 細胞型態上之血管活性暘受體專一性結合。此等結果顯示 ,本發明之血管活性腸肽具有閃爍照相顯影劑之用途,可 用於爲人體内腫瘤位置顯影。 採用此等分析法來選擇本發明所提供之有效放射性治療 劑,其中活體外血管活性腸受體表現細胞及膜係用來檢測 及定量血管活性腸受體與本發明Re-錯合試劑之結合量, 其中該試劑含有血管活性腸肽,係在肽合成期間,與加至 試劑中之螯合部份共價連接。然後可依本文所述之競爭性 結合分析法,使用經放射性碘化之血管活性腸肽分析Re-錯合試劑。 咸了解,上述説明係強調本發明某些專一性具體實施例 ,且其所有修飾法或同等替代法均涵括在本發明示於申請 專範圍中之精神及範圍内。 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-=" 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -69- 本紙張尺㈣财誠家鱗(CNS ) ( 21QX297/>ft>
Claims (1)
- 4 9 4 8 2 第851〇5〇13號專利申請案 Ββ Ρ申請專利範圍修正本(90年5月)S 、申請專利範圍 1 ·—種用於製備放射性藥劑之試劑,其包括共價連接至 鍀或銖螯合基團之化學合成之受體結合性血管活性腸 跃(VIP) ’其中該螯合基困在肽合成期間加入至肽的 特定位置’及其中鍀或銖標記之放射性藥劑具有v I P 受體結合親和力’此對該受體之親和力不低於經放射 性碘化之天然VI P親和力之約十分之一。 2 根據申請專利範圍第1項之試劑,其中該肽具有選自 包括下列之胺基酸序列: SDAVFTDNYTRLRK-QMAVKKYLNSILN.醯 胺; -NYTRLRKQMAVKKYLNSILN.醯胺,·及 -K Q M A V K K: Y L N S I L N .醯胺; 及其中該螯合基團加至試劑中至上述序列之胺基酸侧 鍵或該肚之獲基端 3 ·根據申請專利範圍第1或2項任一項之試劑,其中該 螯合基團具有選自包括下列之式: I. C(pgp)S-(aa)-(pgp)s 經濟部中央標率局貝工消費合作社印裝 修正 | 本年月R 補充 90. 5. 3G Α8 Β8 ml n^i f a^v— I i fl^— n^— n I. I^h. (請先閲讀背面之注意事項存填寫本肓) 其中(pgp)sS Η或硫醇保護基團,且(aa)為一級ci-或冷-胺基酸; II. 一螯合基團,其包括具有下式之單硫醇: A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X 其中 A為Η、HOOC ' H2NOC、(胺基酸或肽)_ ' 0:W3\45412.D0C - 1 · 本紙張尺度適用中困國家橾準(CNS M4規格(210X297公釐) 449482 A8 B8 C8 D8 經濟部中央揉準局月工消費合作社印装 六、申請專利範圍 NHOC、(胺基酸或肽)-00C或R4 ; B為 Η、SH、-NHR3 ' -N(R3)-(胺基酸或 肽),或R4 ; X為 Η、SH ' -NHR3、-N(R3)-(胺基酸或 肽),或R4 : Z為Η或R4 ; R1 ' R2、R3與R4分別為Η或低碳數直鍵或分 支鏈或.環狀烷基; η為 0、1 或2 ; * - (肽)為2至約1 0個胺基酸之肽; 且: 其中Β為-NHR3或-N(R3)-(胺基酸或肽),X為SH且η 為1或2 ; 其中X為-NHR3或-N(R3)-(胺基酸或肽),Β為SH且η 為1或2 ; 其中Β為Η或R4,Α為HOOC ' H2NOC、(胺基酸或 肽)-NHOC、(胺基酸或肽)-00C,X為SH,且η為0 或1 ; 其中Α為Η或R4時,則其中Β為SH * X為-NHR3或-N(R3)-(胺基酸或肽)且其中X為SH,Β為-NHR3或-N ( R 3)-(胺基酸或肽)且η為1或2 ; 其中X為Η或R4,Α為HOOC、H2NOC、(胺基酸或 肽)-NHOC、(胺基酸或肽)-〇〇C且B為SH ; 其中Z為甲基,X為甲基,A為HOOC、H2NOC、(胺- O:\43\4J4I2.DOC - 2 I —^ϋ n ^ Μ <請先閲讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家揉準(CNS ) Α4規格(2丨0Χ297公釐) 449482 A8 BS C8 D8 六、申請專利範圍 基酸或肽)-NHOC、(胺基酸或肽)-O0C,B為SH且η 為0 ; 且其中硫醇基團呈還原形式且(胺基酸)為不含硫醇基 之任何一致α -或胺基酸; III. (CR2)fl ΜΗ (CRz)m S-(pgp)s N-A-CO-peptide (CR:)P S-(pgp)S D\ 其中 各R分別為H'CH3或C2H5; 各(P g P ) s可分別為硫醇保護基團或η ; m、η與p分別為2或3 ; A=直鏈或環狀低碳數烷基、芳基、雜環基 其组合或其經取代之衍生物; IV. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央搮準局貝工消費合作社印装 (CRA NH (ΐ:Κ·2)η 3Η \T-A-CH(V)NHR' (iR:)p SH 〆 O:\43\434J2.DOC 3- 本紙張尺度適用中國囷家標準(CNS ) A4現格(210X297公釐) 4 9 482 8 88 8 ABCD 六、申請專利範圍 其中 各R分別為H'CH3或C2H5 ; m、η與p分別為2或3 ; A =直鏈或環狀低碳數烷基、芳基、雜環基、 其組合或經取代之衍生物; V = H或·C0-肽; R' = H或肽; 且其中當V=H時,R1為肽,且當R' = H時,V = -CO-肽; 及具有下式之單胺、二醯胺、單硫醇基: R R------------装-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) ,1Τ 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 其中: η、m與p分別為0或1, 各R'分別為Η、低碳數烷基、羥烷基(C2-C4)或 烷氧烷基(C2-C4); 各R分別為Η或R ”,其中R "為不含硫醇基之經取 代或未經取代之低碳數烷基或苯基; R或R·之一為L,其中當R·為L時,-NR·為胺; 且 OM3\4im.DOC - 4 - 本紙張尺度適用中圃國家揉準(CNS ) Α4規格(210Χ 297公釐) /149 4-B2 as CS _________£8 六、申請專利範團 L為連接放射性標記物結合部份與肽之二價連接 基團; 及具有下式之單胺、二醯胺、單硫醇基:其中: η、m與p分別為〇或1, 各R1分別為Η、低碳數烷基、羥烷基(c2-C4)或 烷氧烷基(C2-C4); 各R分別為Η或R ”,其中R "為不含硫醇基之經取 .代或未經取代之低碳數烷基或苯基; R或R'之一為L ’其中當R1為L時,-NR1為胺; 且 經濟部中央揉準局負工消费合作社印装 I I .......... I I 1 I I f i I 1^1 -- ! - 」j-aJ (請先w讀背面之注意事項再填寫本頁} L為連接放射性標記物結合部份與肽之二價連接 基團。 4 .根據申請專利範圍第3項之試劑,其中該螯合基團為 選自包括下列之含單硫醇基團: -(胺基酸)匕(胺基酸)2-{A-CZ(B){ ¢:(111 R2)}n-X ; O:\43\4M11.DOC - 5 - 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS ) A4说格(210X297公釐) 449402 ABCD 經濟部中央標準局貝工消費合作社印策 六、申請專利範圍 -A-CZtBhiC^WR2)}!!·^}、胺基酸)!-(胺基 酸)2 ; -(一級-或万,r -二胺基酸)-(胺基酸广-八-C Z ( B ) - { C (R 1 R2 ) } η - X ; -A-CZtBhiC^WHn-X}^ 胺基酸)’-(一級 α, /3-或石,7^-二胺基酸); (胺基酸^-(胺基酸)2 -半胱胺酸-; (胺基酸广-(胺基酸)2 -異半胱胺酸-; (胺基酸^-(胺基酸)2 -高半胱胺酸-; (胺基酸V-C胺基酸)2 -青黴胺-; (胺基酸广-(胺基酸)2-2 -氫硫基乙胺-; (胺基酸)】-(胺基酸)2-2 -氫硫基丙胺-; (胺基酸)^(胺基酸)2-2 -氫硫基-2-甲基丙胺-; (胺基酸广-(胺基酸)2-3 -氫硫基丙胺-; -半胱胺酸-(胺基酸)-(α,石-或厶,r -二胺基酸); -異半胱胺酸-(胺基酸)-(α,/5 -或沒,r-二胺基 酸); -高半胱胺酸-(胺基酸)-(α,θ -或石,r -二胺基 酸); -青黴胺-(胺基酸或;5,r-二胺基酸); 2·氫硫基乙酸-(胺基酸)-0,/5 -或-二胺基 酸); 2 -或3 -氮破基丙酸·-(胺基)-((2,/5 -或γ - —胺 基酸); O:\43\4M 12.D0C - 6 _ ---------^------.1τ------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家梯率(CNS ) Α4規格(210Χ;297公釐) Α8 Β8 C8 D8 449482 六、申請專利範圍 2”_氫领基·2_甲基丙酸-(胺基酸)-(a,jS -或/9,γ -二 胺基酸); Gly-Gly-Cys-Ala-Gly-Cys--(ε -Lys)-Gly-Cys--(<5 - Orn)-Gly-Cys--(7 - Dab)-Gly-Cys- -(^-DappGly-Cys-;及 -Cys(BAT); ' 其中(胺基酸)為不含硫醇之一級a -或yS -胺基酸。 根據申請專利範園第3項之試劑,其中該螯合基囷為 選自包括下列之單胺、二醯胺、單硫醇基: I 1^1 I I - ·1 I -I I -I - I - I i -I ' i I —^n (請先»讀背面之注意事項再填寫本頁) R4 Rs-^° 〇 .NH L-Z. R3 Re 經濟部_央標率局貞工消费合作社印装 其中: R1與R2分別為H、低碳數烷基、羥烷基(C2-C4)或 烷氧烷基(C2-C4); R 3、R 4、R 5與R6分別為Η、不含硫醇基之經取代或 未經取代之低碳數烷基或苯基; R7與R8分別為Η、低碳數烷基、低碳數羥烷基或低' O:\43VtMl2XlOC 本紙张尺度逍用中®國家揉準(CNS ) A4规格(210X297公釐) i9 48 2 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 碳數烷氧烷基; L為二價連接部价;且 Z為肤,(請先聞读背面之注意事項再填寫本頁) 装· 經濟部中央揉率局貞工消费合作社印装 其中: R1與R2分別為Η、低碳數烷基、羥烷基(C2-C4) 或烷氧烷基(C2-C4); R3、R4、R 5與R6分別為Η、不含硫醇基之經取代 或未經取代之低碳數烷基或苯基;JLR3、R4、R5與 R6中之一為Z-L-(CR2)n-,其中η為1至6之整數’且 各R分別為Η、低碳數烷基或經取代之低碳數烷基; R7與R8分別為Η、低碳數烷基、低碳數羥烷基或 低碳數烷氧烷基: L為二價連接部份; Ζ為肽;且 X為- NH2、-NR1!^2、或-NR】-Y,其中Υ為胺基 酸、胺基酸醯胺、或2至約20個胺基酸之肽; 〇如\43412.DOC - 8 - 本紙張尺度速用中國國家標準(CNS ) A4规格(210X29?公釐) ir 4 49432 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 O^NH z-uHS^-f ,- R1 〇〇 其中: R1與R2分別為H、低碳數烷基、羥烷基(C2-C4) 或烷氧烷基(C2-C4); R3與R4分別為Η、不含硫醇基之經取代或未經取 代之低碳數烷基或苯基; 其中η為1至6之整數; L為二價連接部份;且 Ζ為肽; 2-L.(請先閲讀背面之注意事項再4寫本頁) 装' '1Τ 經濟部中央揉準局負工消費合作社印装 其中: L為連接基團;且 Ζ為肤。 6.根據申請專利範圍第1項之試劑 成之群: 其係選自下式所組 O:\43V43Un.DOC 9 本纸張尺度逋用中國固家揉準(CNS ) Α4规格(210Χ297公釐) 4 49 48 2 A8 B8 C8 D8 、申請專利範圍 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNhK)GC,醯胺; HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNGGC.醯胺; AGCHSDAVtTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN.醯胺; HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNC(BAT).醯胺; HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNCiCHeo^-DapiKCK.醯胺)‘醯胺; HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNC(CH:CO‘GGCK:.醯胺J .醯胺; HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNC(CH2CO,(S-Om)GCK.S& 胺).醯胺;及 ^ΌΑνΠΌΝΥΤΙΙϋΙΚ(5ΜΑνΚΚΥυ<ί5ΠϋΝ(:(αΗϊ<:0.(Κ^Ε·3ΐηί£ΐε)·醯胺)·醯胺。 7 .—種閃爍照相顯影劑,其包括經鍀-9 9 m放射性標記 之根據申請專利範圍第1至6項任一項之試劑。 8. 一種在哺乳動物體内某-位置顯影之方法,其包括投與 診斷有效量之根據申請專利範圍第7項之顯影劑’並 於哺乳動物體内檢測定位於該位置之鍀-9 9 m。 9 . 一種放射性治療劑,其包含經選自銖-1 8 6與銖-1 8 8 之細胞毒性放射性同位素、進行放射性標記之根據申 請專利範圍第1至6項任一項之試劑。 10. —種用於製備放射性醫藥製劑之套組,其中該套組包 括含有預定量根據申請專利範園第1至6項任一項之 試劑及可以使得- 99m、鍊-186或鍊-188標記在試 劑上之足量還原劑之密封瓶。 1^1 · I t^i —t^— I- - I - -I ^1.^1 i ^aJ (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部中央標率局貝工消費合作社印«. O:\43\4MI2.DOC - 10 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS > Α4ϋ格(210X297公嫠) 4 9 4 8 2 第851〇5〇13號專利申請案 Ββ Ρ申請專利範圍修正本(90年5月)S 、申請專利範圍 1 ·—種用於製備放射性藥劑之試劑,其包括共價連接至 鍀或銖螯合基團之化學合成之受體結合性血管活性腸 跃(VIP) ’其中該螯合基困在肽合成期間加入至肽的 特定位置’及其中鍀或銖標記之放射性藥劑具有v I P 受體結合親和力’此對該受體之親和力不低於經放射 性碘化之天然VI P親和力之約十分之一。 2 根據申請專利範圍第1項之試劑,其中該肽具有選自 包括下列之胺基酸序列: SDAVFTDNYTRLRK-QMAVKKYLNSILN.醯 胺; -NYTRLRKQMAVKKYLNSILN.醯胺,·及 -K Q M A V K K: Y L N S I L N .醯胺; 及其中該螯合基團加至試劑中至上述序列之胺基酸侧 鍵或該肚之獲基端 3 ·根據申請專利範圍第1或2項任一項之試劑,其中該 螯合基團具有選自包括下列之式: I. C(pgp)S-(aa)-(pgp)s 經濟部中央標率局貝工消費合作社印裝 修正 | 本年月R 補充 90. 5. 3G Α8 Β8 ml n^i f a^v— I i fl^— n^— n I. I^h. (請先閲讀背面之注意事項存填寫本肓) 其中(pgp)sS Η或硫醇保護基團,且(aa)為一級ci-或冷-胺基酸; II. 一螯合基團,其包括具有下式之單硫醇: A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X 其中 A為Η、HOOC ' H2NOC、(胺基酸或肽)_ ' 0:W3\45412.D0C - 1 · 本紙張尺度適用中困國家橾準(CNS M4規格(210X297公釐)
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