TW202315868A

TW202315868A - 人類整合素α4β7之抑制

Info

Publication number: TW202315868A
Application number: TW111149835A
Authority: TW
Inventors: 馬修Ｇ伯沙維奇; 東暉崔; 詹姆士Ｅ道齡; 克里斯多夫Ｎ漢; 拜爾斯Ａ哈里森; 林富揚; 布雷斯Ｓ莉琶; 布魯斯Ｎ羅傑斯; 唐Ｍ特洛斯特; 鍾誠; 凱爾Ｄ康梓; 艾力克西Ｉ傑洛西鄔圖; 丙澯金; 薩爾瑪拉菲; 泰勒帒; 尤金希克奇; 思敏林; 羅伯特札勒
Original assignee: 美商莫菲克醫療股份有限公司
Priority date: 2019-10-16
Filing date: 2021-10-15
Publication date: 2023-04-16
Also published as: US20240174632A1; TW202126624A; JP2022542184A; TW202332675A; WO2021076890A1; JP7437490B2; WO2021076902A1; UY38926A; TWI840047B; JP2024054293A; CN116783161A; DOP2022000081A; WO2022081983A1; EP4228634A1; WO2021076890A4; CA3154269A1; TWI775182B; ZA202303992B; KR20220102669A; JP2024116230A

Abstract

本發明揭示人類α ₄β ₇整合素之小分子拮抗劑及使用其等治療多種疾病及病況之方法。

Description

人類整合素α4β7之抑制

本發明揭示可用於抑制α ₄β ₇整合素之新穎化合物及相關方法。本文所揭示之化合物及方法適用於研發用以治療諸如發炎性腸病(inflammatory bowel disease；IBD)、潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis；UC)及克羅恩氏病(Crohn's disease，CD)之α ₄β ₇整合素介導之病況的藥劑。

整合素為參與諸多細胞過程之非共價締合α/β異二聚體細胞表面受體。整合素之差異表現可調節細胞之黏附特性，允許向特定器官補充不同白血球群，響應於不同發炎性信號。包括α ₄β ₇之α ₄整合素在整個胃腸道中之淋巴球遷移中起作用。其係在包括B淋巴球及T淋巴球之大部分白血球上進行表現，其中其係經由選擇性結合至其初級配位體，亦即黏膜位址素細胞黏附分子(MAdCAM)來介導細胞黏附。表現α ₄β ₇整合素之記憶T淋巴球經由堅固地黏附至黏膜血管位址素細胞黏附分子1 (MAdCAM-1)而優先遷移至胃腸道中。

已使用特定整合素-配位體相互作用抑制劑以治療各種疾病。舉例而言，對α ₄β ₇展現高結合親和力之單株抗體已展現針對諸如克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎之胃腸自體發炎/自體免疫疾病之治療性效益。然而，此等療法亦具有非患者所需之某些特性。單株抗體α ₄β ₇整合素抑制劑係藉由非經腸投與來進行投與，具有不伴隨迅速調節暴露之能力之長半衰期及由於抗藥物抗體形成而降低之活性。與小分子療法相比而言，單株抗體療法之製造可能具挑戰性。另外，一些α ₄β ₇抑制療法亦干擾α ₄β ₁整合素-配位體相互作用，藉此對患者造成危險副作用。α ₄β ₁整合素處之活動涉及免疫抑制患者中作為危及生命且進行性腦感染之進行性多部腦白質病(PML)之出現。

醫學上仍需要醫藥性質改善之有效且安全之口服α ₄β ₇整合素抑制劑，作為用於α ₄β ₇整合素介導之病況(諸如發炎性腸病(IBD)、潰瘍性結腸炎(UC)及克羅恩氏病(CD))之治療物資的重要補充。

本發明係關於拮抗α ₄β ₇整合素之化合物以及製備及分離該等化合物之方法。此外，本文揭示之小分子化合物顯示出良好的醫藥性質，包括口服生物可用度、ADME(吸收、分佈、代謝及排泄)、藥物動力學、CYP抑制及/或其他安全特性，此對獲得治療功效同時最大限度地減少非所需性質係非常有用的。

相關申請案

本申請案主張2020年10月16日申請之PCT國際申請案第PCT/US20/55986號之優先權。

在某些實施例中，本發明係關於拮抗α ₄β ₇整合素之化合物。化合物可用於治療藉由抑制α ₄β ₇整合素來治療之疾病(例如，克羅恩氏病(CD)及潰瘍性結腸炎(UC))。

定義出於方便起見，在進一步描述本發明之前，在此處收集本說明書、實例及所附申請專利範圍中所採用之某些術語。此等定義應依據本發明之剩餘部分來閱讀且如熟習此項技術者所理解。除非另外定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語皆具有與一般熟習此項技術者通常所理解之含義相同之含義。

為更容易地理解本發明，在下文及整個本說明書中對某些術語及片語進行定義。

冠詞「一(a/an)」在本文中用於指該冠詞之文法對象中之一個或超過一個(亦即，至少一個)。舉例而言，「一要素」意謂一個要素或超過一個要素。

如本文在說明書及申請專利範圍中所使用之片語「及/或」應理解為意謂如此結合之要素中之「任一個或兩個」，亦即，在一些情況下結合地存在且在其他情況下分離地存在的要素。用「及/或」列出之多個要素應以相同方式解釋，亦即，如此結合之要素中之「一或多個」。可視情況存在除藉由「及/或」子句特定地標識之要素之外之其他要素，無論與特定地標識之彼等要素相關或無關均如此。因此，作為非限制性實例，在結合諸如「包含」之開放式語言使用時之「A及/或B」之提及可在一個實施例中僅指A (視情況包括除B之外之要素)；在另一實施例中可僅指B (視情況包括除A之外之要素)；在又另一實施例中可指A及B (視情況包括其他要素)；等。

如本文在說明書及申請專利範圍中所使用之「或」應理解為具有與如上文所定義之「及/或」之含義相同之含義。舉例而言，當分離清單中之項目時，「或」或「及/或」應解釋為包括性的，亦即，包括多個要素或要素清單及視情況選用之額外未列出項目中的至少一個，但亦包括超過一個。僅諸如「……中之僅一個」或「……中之恰好一個」或在申請專利範圍中使用時「由……組成」之相反地清楚指示之術語指包括多個要素或要素清單中之恰好一個要素。一般而言，如本文所使用之術語「或」當在諸如「任一個」、「……中之一個」、「……中之僅一個」或「……中之恰好一個」之排他性術語之前存在時應僅解釋為指示排他性替代方案(亦即，「一個或另一個、但非兩個」)。「基本上由……組成」在申請專利範圍中使用時應具有如在專利法領域中所使用之其一般含義。

如本文在說明書及申請專利範圍中所使用之片語「至少一個」在關於一或多個要素之清單時應理解為意謂選自要素清單中之要素中的任一個或多個中的至少一個要素，但不一定包括要素清單內特定地列出的每一個要素中的至少一個且不排除要素清單中的要素的任何組合。此定義亦允許可視情況存在除片語「至少一個」所指之要素清單內特定地標識之要素之外的要素，無論與特定地標識之彼等要素相關或無關均如此。因此，作為非限制性實例，「A及B中之至少一個」(或等效地「A或B中之至少一個」，或等效地「A及/或B中之至少一個」)可在一個實施例中指至少一個(視情況包括超過一個) A且不存在B (且視情況包括除B之外之要素)；在另一實施例中指至少一個(視情況包括超過一個) B且不存在A (且視情況包括除A之外之要素)；在又另一實施例中指至少一個(視情況包括超過一個) A及至少一個(視情況包括超過一個) B (且視情況包括其他要素)；等。

亦應理解，除非相反地清楚指示，否則在本文所主張之包括超過一個步驟或操作之任何方法中，該方法之步驟或操作之次序不必限於該方法之步驟或操作之敍述次序。

在申請專利範圍中以及在以上說明書中，諸如「包含」、「包括」、「攜載」、「具有」、「含有」、「涉及」、「擁有」、「由……構成」及其類似片語之全部過渡性片語皆應理解為開放的，亦即，意謂包括但不限於……。如United States Patent Office Manual of Patent Examining Procedures第2111.03節中所闡述，僅過渡性片語「由……組成」及「基本上由……組成」分別為封閉或半封閉過渡性片語。

本發明組合物中所含之某些化合物可以特定幾何或立體異構形式存在。另外，本發明聚合物亦可具光學活性。本發明涵蓋如落入本發明範疇內之包括順式及反式異構體、 R-對映異構體及 S-對映異構體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體、其外消旋混合物及其另外混合物之全部該等化合物。額外不對稱碳原子可存在於諸如烷基之取代基中。本發明中意欲包括全部該等異構體以及其混合物。

舉例而言，若需要本發明化合物之特定對映異構體，則其可藉由不對稱合成或藉由用手性助劑進行之衍生來製備，其中分離所得非對映異構混合物且裂解輔助基團以得到純的所需對映異構體。可替代地，在分子含有諸如胺基之鹼性官能基或諸如羧基之酸性官能基之情況下，用適當之光學活性酸或鹼形成非對映異構鹽，接著藉由此項技術中熟知之分步結晶或層析手段解析由此形成之非對映異構體，且隨後回收純對映異構體。

本文所描繪之結構亦意圖包括僅在存在一或多個經同位素增濃之原子之情況下不同之化合物。舉例而言，藉由用氘或氚置換氫或用經 ¹³C或 ¹⁴C增濃之碳置換碳而產生之化合物處於本發明範疇內。

如本文所使用之術語「α4β7 (α4β7/alpha-4 beta-7/alpha 4 beta 7)」、「a4B7」、「a4b7」及其類似術語全部指α ₄β ₇。

如本文所使用之片語「醫藥學上可接受之賦形劑」或「醫藥學上可接受之載劑」意謂諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料之醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，以上物質參與將本發明化學物質自身體之一個器官或部分攜載或運輸至身體之另一器官或部分。各載劑必須在與調配物之其他成分相容、對患者無害且實質上非致熱之意義上為「可接受的」。可充當醫藥學上可接受之載劑之材料之一些實例包括：(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3)纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10)二醇，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原質水；(17)等張性鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩衝溶液；及(21)醫藥調配物中所採用之其他無毒可相容物質。在某些實施例中，本發明之醫藥組合物為非致熱的，亦即，在向患者投與時不誘發溫度顯著升高。

術語「醫藥學上可接受之鹽」係指該一或多種化合物之相對無毒之無機及有機酸加成鹽。此等鹽可在該一或多種化合物之最終分離及純化期間原位製備，或藉由單獨地使呈其游離鹼形式之一或多種經純化化合物與合適之有機或無機酸反應且分離由此形成之鹽來製備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、順丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、萘甲酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽及月桂基磺酸鹽以及其類似鹽。(參見例如Berge等人(1977) 「Pharmaceutical Salts」, J. Pharm. Sci. 66:1-19)。

在其他情況下，可用於本發明方法中之化合物可含有一或多個酸性官能基，且因此能夠與醫藥學上可接受之鹼一起形成醫藥學上可接受之鹽。在此等情況下，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指一或多種化合物之相對無毒之無機及有機鹼加成鹽。此等鹽同樣可在該一或多種化合物之最終分離及純化期間原位製備，或藉由單獨地使呈其游離酸形式之一或多種經純化化合物與諸如具有醫藥學上可接受之金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽之合適鹼、與氨或與醫藥學上可接受之有機伯胺、仲胺或叔胺反應來製備。代表性鹼金屬鹽或鹼土鹽包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鋁鹽以及其類似鹽。可用於形成鹼加成鹽之代表性有機胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌𠯤及其類似胺(參見例如Berge等人，同前文獻)。

關於治療中之使用之化合物之「治療有效量」(或「有效量」)係指當作為所需劑量方案之一部分投與(至哺乳動物，較佳人類)時，根據針對待治療之病症或病況或美容目的之臨床上可接受之標準，例如在適用於任何醫療之合理效益/風險比下緩解症狀、改善病況或減緩疾病病況發作之製備物中的化合物的量。

術語「預防性或治療性」治療係此項技術中公認的且包括向宿主投與本發明組合物中之一或多種。若其係在臨床表現不合需要之病況(例如宿主動物之疾病或其他不合需要之狀態)之前投與，則治療為預防性的(亦即，其保護宿主免於罹患不合需要之病況)，而若其係在表現不合需要之病況之後投與，則治療為治療性的(亦即，預期減少、改善或穩定現有不合需要之病況或其副作用)。

術語「患者」係指需要特定治療之哺乳動物。在某些實施例中，患者為靈長類動物、犬、貓或馬。在某些實施例中，患者為人類。

如本文所使用之術語「前驅藥」涵蓋在生理條件下轉化成治療活性劑之化合物。用於製造前驅藥之常見方法包括在生理條件下水解以顯露所需分子之經選擇部分。在其他實施例中，前驅藥係藉由宿主動物之酶活性轉化。

出於本發明之目的，根據元素週期表(Periodic Table of the Elements), CAS版, Handbook of Chemistry and Physics, 第67版, 1986-87，內封面來標識化學元素。

例示性化合物在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：

。

在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一種，其中化合物係呈醫藥學上可接受之鹽之形式。

在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群之化合物：

結構	名稱
	(S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸；
	(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(3S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸
	(S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-((S)-2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸
	(S)-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸
	(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸

例示性醫藥組合物本文揭示之化合物可在各種醫藥組合物中經調配。本文揭示之化合物以及其醫藥學上可接受之鹽可為與一或多種其他成分組合以形成藥物物質醫藥組合物之活性醫藥成分(API)。藥物物質(DS)醫藥組合物可包含API (亦即，本文揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽)及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。可選擇與調配物之其他成分相容且適當地對預期療法而言安全且有效之一或多種載劑、一或多種稀釋劑或一或多種賦形劑。所需重量濃度之作為活性醫藥成分(API)之化合物可在調配物批料中與其他非活性成分組合以形成藥物物質(DS)。醫藥學上可接受之組合物可經調配用於藉由適當途徑，例如藉由經口遞送(包括以膠囊或錠劑形式)以單位劑型投與。該等組合物可藉由使包含式(I)化合物之活性醫藥成分(API)與一或多種載劑或一或多種賦形劑締合來製備。

在某些實施例中，本發明提供經調配用於經口遞送α ₄β ₇整合素抑制劑之醫藥組合物，該組合物包含作為API之α ₄β ₇整合素抑制劑化合物及經調配用於經口治療性投與α ₄β ₇整合素抑制劑化合物之醫藥學上可接受之載劑。

在某些實施例中，本發明提供包含作為活性醫藥成分(API)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之醫藥組合物。

在某些實施例中，本發明係關於包含作為活性醫藥成分(API)之選自由以下組成之群之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物：

結構	名稱
	(S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸；
	(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(3S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸
	(S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-((S)-2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸
	(S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸
	(S)-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸
	(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸。

包含本發明化合物之醫藥學上可接受之組合物可藉由各種程序來製備。舉例而言，化合物可用合適賦形劑、稀釋劑或載劑來調配且成形為錠劑或膠囊及其他合適劑型。

醫藥組合物可以每單位劑量含有預定量之包含本發明化合物之API的單位劑型提供。此類單位可視所治療之病況、投與途徑以及患者年齡、體重及病況而含有所需量之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。因此，該等單位劑量可以所需劑量間隔投與。藥物組合物中之活性化合物之濃度應視諸如藥物之吸收、失活及排泄速率以及熟習此項技術者已知之其他因素的各種適用參數及考慮因素而定。應注意，劑量值亦隨待緩解之病況之嚴重程度而變化。應進一步理解，對於任何特別個體，特定劑量方案應根據個體需要及投與組合物或監督組合物投與之人員之專業判斷而隨時間推移加以調整，且本文所闡述之濃度範圍僅為例示性的且不意欲限制所主張組合物之範疇或實踐。活性成分可一次投與，或可分成多次較小劑量以不同時間間隔投與。

在某些實施例中，活性化合物之投與模式為口服。口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載劑。其可封閉在明膠膠囊中或壓縮成錠劑。出於經口治療性投與之目的，活性化合物可併有賦形劑且以錠劑、糖衣錠或膠囊形式使用。醫藥學上可相容之黏合劑及/或佐劑材料可作為該組合物之一部分包括在內。經調配用於經口遞送之包含本發明化合物之醫藥組合物可以諸如膠囊之單位劑型以化合物之所需劑量濃度製備。對於以液體形式進行之經口投與，口服藥物組分可與諸如乙醇、甘油、水及其類似物之任何口服無毒醫藥學上可接受之惰性載劑組合。對於以錠劑或膠囊形式進行之經口投與，化合物可與口服無毒醫藥學上可接受之惰性載劑組合。適用於該等調配物之賦形劑、稀釋劑及載劑之其他實例包括以下：諸如澱粉及糖之填充劑及增量劑；及諸如纖維素衍生物之黏合劑。此外，當需要或必要時，亦可將合適黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑併入混合物中。合適黏合劑包括澱粉、天然糖、天然及合成膠及其類似物。潤滑劑及/或助滑劑可用於此等劑型中。

錠劑、丸劑、膠囊、糖衣錠及其類似者可含有以下成分或具有類似性質之化合物中之任一種：黏合劑，諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉或乳糖；崩解劑，諸如海藻酸、澱粉羥基乙酸鈉(Primogel)或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或斯特羅特斯(Sterotes)；助滑劑，諸如膠態二氧化矽；甜化劑，諸如蔗糖或糖精；或調味劑，諸如胡椒薄荷、柳酸甲酯或橙調味劑。當單位劑型為膠囊時，除以上類型之材料之外，其亦可含有諸如脂肪油之液體載劑。另外，單位劑型可含有例如糖包衣或其他腸溶劑之調節劑量單位之物理形式之各種其他材料。

化合物可作為酏劑、懸浮液、糖漿、粉片或其類似者之組分投與。除一或多種活性化合物之外，糖漿亦可含有作為甜化劑之蔗糖或甜味劑以及某些防腐劑、染料及著色劑及調味劑。

化合物可調配為適合於非經腸投與，例如肌內、皮下或靜脈內途徑投與之溶液。舉例而言，本發明化合物可溶解於合適緩衝液中。包含所需濃度之化合物之醫藥組合物可調配為可注射藥物溶液(在有用動物研究中，例如在臨床前動物研究中)。

例示性方法抑制α ₄β ₇之化合物可用於研發用以治療潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病患者之藥劑。潰瘍性結腸炎(UC)及克羅恩氏病(CD)患者患有消化道中自體免疫發炎，且對於許多此等患者，CD4 ⁺記憶T細胞經由其在腸內分泌促發炎效應細胞介素之能力驅動疾病之發展及病發，影響周圍免疫細胞及組織。咸信此等疾病病況之發展及病發包括T細胞外滲，使得血液進入腸中之組織中，經由整合素相關機制導致在UC及CD中所見之發炎性病況。α ₄β ₇抑制可破壞此機制，藉此防止T細胞定位至組織且有效地治療及預防諸如UC及CD之疾病。導向至腸之T細胞需要整合素α ₄β ₇及趨化介素受體CCR9之表面表現。儘管細胞利用CCR9以逆著於小腸中表現之CCL25之梯度遷移，但α ₄β ₇為結合配位體，亦即黏膜位址素細胞黏附分子1 (MAdCAM-1)之連繫分子。整合素α ₄β ₇以高親和力結合MAdCAM-1，促進細胞滾動及堅固黏附，接著外滲至組織中。

醫藥組合物可包含抑制發炎性細胞上使得此等細胞能夠黏附至黏膜位址素細胞黏附分子-1 (MAdCAM-1)之α ₄β ₇整合素且抑制或防止此等細胞進入腸固有層及腸相關淋巴組織的化合物。

本發明化合物係使用如實例4中所描述之螢光偏振(FP)分析來加以評估。FP分析係用於評估經純化蛋白質上之化合物之效力。FP分析由量測結合至替代或經截短配位體之經純化整合素αβ異二聚體胞外域或頭段(headpiece)組成。本文提供針對例示性化合物之FP分析結果。

本發明化合物進一步使用如實例5中所描述之用於檢驗結合至於細胞上表現之受體之自由配位體之化合物效力的配位體結合分析(LBA)來加以評估。MAdCAM配位體結合分析使用流動式細胞量測術以量測在存在Mn++之情況下經螢光標記之MAdCAM-1-Fc與RPMI 8866細胞的結合。此分析評估化合物與細胞表面上之天然全長受體之結合。MAdCAM配位體結合分析之一個優勢在於其定量且鑑別超出FP分析之功能性敏感度限值[在Mn中為~10 nM]之強效化合物活性的能力。配位體結合分析(LBA)係用於檢驗結合至於細胞上表現之受體之自由配位體的化合物效力及選擇性。

在某些實施例中，本發明係關於前述方法中之任一種，其中個體為哺乳動物。在某些實施例中，本發明係關於前述方法中之任一種，其中個體為人類。

實例現已大體上描述本發明，本發明參考以下實例而更容易理解，該等實例僅出於說明本發明之某些態樣及實施例之目的而包括在內且不意欲限制本發明。

實例1-3描述本發明化合物之合成。化合物可作為具有(3 S)組態(亦即，在羧酸部分之立構中心 β處)之非對映異構化合物混合物及在共價結合至化合物之吡啶酮環氮原子之手性中心處之非對映異構體混合物來製備。

在實例4之螢光偏振(FP)分析中具有較大活性之化合物顯示為具有式(Ia)之特定非對映異構體。實例4描述螢光偏振(FP)分析。實例5描述配位體結合(LB)分析。實例6描述細胞黏附(CA)分析。

實例 1. 用於合成 α4β7 抑制劑之通用流程 β- 胺基酸合成β-胺基酸合成可使用諸如但不限於以下之文獻中所描述之熟知程序來達成：「Enantioselective Synthesis of β‐Amino Acids」, 第二版, 編者: Eusebio Juaristi, Vadim A. Soloshonok, 首次出版: 2005年1月27日, John Wiley & Sons公司；Ellman等人Acc. Chem. Res.2002. 35, 984-995；Franklin A. Davis及Bang-Chi Chen Chem. Soc. Rev., 1998, 27, 13-18；Jacobsen, M. F.; Skrydstrup, T. J. Org. Chem. 2003, 68, 7122；Tang, T. P.; Ellman, J. A. J. Org. Chem. 2002, 67, 7819；及Tang, T. P.; Ellman, J. A. J. Org. Chem. 1999, 64, 12。

還原性胺化

程序 A ：將胺(1當量)、醛(1.2當量)於DCM (1-2 mL/mmol胺)中之混合物在室溫下攪拌30 min。隨後，逐份添加NaBH(OAc) ₃(1.5當量)且在室溫下攪拌隔夜。真空中濃縮溶劑且藉由矽膠層析法純化殘餘物，得到所需胺。

程序 B ：將醛(1當量)、胺(1.05-2當量)於DCE (3-4 mL/mmol醛)中之混合物在室溫下攪拌10-30 min。隨後，逐份添加NaBH(OAc) ₃(3-4當量)且在室溫下攪拌1-16小時直至根據LC/MS完成為止。真空中濃縮溶劑且藉由矽膠層析法純化殘餘物，得到所需胺。

程序 C ：將醛(1當量)、AcOH (1.2當量)、胺(1.05-2當量)於DCM (2-3 mL/mmol醛)及MeOH (0.5 mL/mmol醛)中之混合物在室溫下攪拌15-30 min。隨後，逐份添加NaBH(OAc) ₃(2當量)且在室溫下攪拌1-16小時直至根據LC/MS完成為止。真空中濃縮溶劑且藉由矽膠層析法純化殘餘物，得到所需胺。

烷基化

程序 A ：向胺(1當量)於MeCN (3-4 mL/mmol胺)中之溶液添加甲磺酸酯(1.5當量)及K ₂CO ₃(3當量)。反應混合物在80℃下攪拌16小時。真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC純化殘餘物，得到烷基化產物。

程序 B ：向胺(1當量)於MeCN (3-4 mL/mmol胺)中之溶液添加烷基溴化物(2當量)及K ₂CO ₃(2當量)。反應混合物在80℃下攪拌16小時。真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC純化殘餘物，得到烷基化產物。

酚去保護

將甲氧基吡啶(1當量)於44% HBr/AcOH (10 mL/mmol基質)中之混合物在55-75℃下加熱5-16小時直至根據LCMS完成為止。真空中濃縮反應物且藉由逆相HPLC純化殘餘物，得到酚產物。

威悌反應 (Wittig Reactions)

程序 A ：將氯化(甲氧基甲基)三苯鏻(1.5當量)、t-BuOK (2.5當量)於二㗁烷(2 mL/mmol鏻鹽)中之混合物在室溫下攪拌15分鐘。隨後，添加含醛(1當量)之THF (1 mL/mmol醛)。混合物在室溫下攪拌2-16 h。對反應混合物進行處理(用水稀釋且用EtOAc萃取；使合併萃取物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)且藉由矽膠層析法純化，得到烯醇醚產物。

程序 B ：將氯化(甲氧基甲基)三苯鏻(1.1當量)、t-BuOK (2.5當量)於THF (4 mL/mmol鏻鹽)中之混合物在0℃下攪拌1 h。隨後，添加含醛(1當量)之THF (2 mL/mmol醛)。混合物在室溫下攪拌16 h。對反應混合物進行處理(用水稀釋且用EtOAc萃取；使合併萃取物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)且藉由矽膠層析法純化，得到烯醇醚產物。

烯醇醚成為醛

程序 A ：室溫下用TFA (2 mL/mmol)處理烯醇醚(1當量) 4小時。真空中移除溶劑，得到所需醛。

程序 B ：70℃下用HCOOH (2 mL/mmol)處理烯醇醚(1當量) 2小時。真空中移除溶劑，得到所需醛。

程序 C ：向烯醇醚(1當量)於DCM (15 mL/mmol烯醇醚)中之溶液添加TFA (2 mL/mmol)及水(0.25 mL/ mmol烯醇醚)。反應物在45℃下攪拌18 h。對反應物進行處理(用NaHCO ₃淬滅，用DCM萃取；使合併萃取物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)，得到所需醛。

施蒂勒反應 (Stille Reaction)

N ₂下向芳基溴化物(1當量)及烯丙基錫烷(1.2當量)於DMF (3 mL/mmol芳基溴化物)中之溶液添加Pd(PPh ₃) ₄(0.1當量)。反應物在100℃下攪拌16小時。真空中濃縮反應物，隨後用EtOAc稀釋，傾入至20% KF水溶液中且攪拌1 h且萃取。使合併有機層經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮，且藉由矽膠層析法純化，得到所需產物。

烯成為醛

0℃下向烯(1當量)於THF/H ₂O (1:1) (10 mL/mmol烯)中之溶液添加K ₂OsO ₄-2H ₂O (0.01當量)。混合物在0℃下攪拌5 min，隨後逐滴添加NaIO ₄(3當量) H ₂O溶液(1 mL/mmol烯)且在0℃下攪拌1 h，隨後升溫至室溫且攪拌直至根據LCMS完成為止。對反應物進行處理(用水稀釋且用EtOAc萃取；使合併有機層經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)，得到所需醛。

酯成為酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (3-5當量)之MeOH (1-3 mL/mmol酯)及水(1-3 mL/mmol酯)處理酯(1當量) 1-5 h。反應物用1 N HCl酸化至pH=3且濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需羧酸產物。

胺保護

將胺(1當量)、DIEA (3當量)及Boc ₂O (2當量)之混合物在DCM (5毫升/毫莫耳胺)中在室溫下攪拌16 h直至根據LCMS完成為止。對反應物進行處理(用0.5 N HCl、飽和NaHCO ₃、鹽水洗滌，用DCM萃取；使合併有機層經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)且藉由矽膠層析法純化。

製備芳硼烷

將芳基溴化物(1當量)、B ₂pin ₂(1.2當量)、Pd(dppf)Cl ₂(0.05當量)及KOAc (3當量)於二㗁烷(10 mL/mmol芳基溴化物)中之混合物在N ₂下在110℃下攪拌2-5 h直至根據LCMS完成為止。將反應物過濾，真空中濃縮，且藉由矽膠層析法純化，得到所需芳硼烷。

鈴木偶合 (Suzuki Coupling)「Palladium-Catalyzed Cross-Coupling Reactions of Organoboron Compounds」 N. Miyaura；A. Suzuki Chem. Rev.1995, 957, 2457-2483。

程序 A ：向芳硼烷(1當量)於二㗁烷(10 mL/mmol芳硼烷)中之溶液添加芳基溴化物(1.2當量)、Pd(dppf)Cl ₂(0.1當量)、K ₂CO ₃(2當量)及水(2 mL/mmol)。反應物在N ₂下在110℃下攪拌3 h。對反應物進行處理(用鹽水洗滌且用EtOAc萃取；使合併萃取物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)且藉由矽膠層析法純化，得到所需聯芳基產物。

程序 B ：向芳基溴化物(1當量)及芳硼烷(1.1當量)於二㗁烷(10 mL/mmol芳基溴化物)中之溶液添加K ₂CO ₃(2當量)水溶液(2 mL/mmol)及Pd(dppf)Cl ₂(0.1當量)。反應物在N ₂下在110℃下攪拌2 h。對反應物進行處理(用鹽水洗滌且用EtOAc萃取；使合併萃取物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)且藉由矽膠層析法純化，得到所需聯芳基產物。

程序 C ：將芳基溴化物(1當量)、芳硼烷(2.0當量)、K ₂CO ₃(3當量)及Pd(dppf)Cl ₂(0.05當量)於二㗁烷(10 mL/mmol芳基溴化物)及水(1 mL/mmol)中之混合物在N ₂下在110℃下攪拌2 h直至根據LCMS完成為止。對反應物進行處理(用鹽水洗滌且用EtOAc萃取；使合併萃取物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾且濃縮)且藉由矽膠層析法純化，得到所需聯芳基產物。

Boc 去保護

將含經Boc保護之胺(1當量)之DCM (4 mL/mmol胺)添加至4M HCl-二㗁烷(12當量)中。反應物攪拌1-2 h直至根據LCMS完成為止。真空中濃縮反應物，得到所需胺。

三級丁基亞磺醯基 去保護

向三級丁基亞磺醯基胺(1當量)於DCM (0.5 mL/mmol胺)中之溶液添加4M HCl-二㗁烷(1.7當量)。反應物攪拌0.5-1 h直至根據LCMS完成為止。將反應物濃縮且藉由製備型HPLC純化，得到所需胺。

醯胺鍵形成「Peptide Coupling Reagents, More than a Letter Soup」 A. El-Faham, F. Albericio Chem. Rev. 2011, 111, 11, 6557-6602；「Amide bond formation and peptide coupling」 C. A. G. N. Montalbetti; V. Falque Tetrahedron2005, 61, 10827-10852。

將胺(1當量)、羧酸(1當量)、TCFH (2當量)及NMI (4當量)於CH ₃CN (10 mL/mmol胺)中之混合物在室溫下攪拌1-2 h直至根據LCMS完成為止。真空中濃縮反應物且藉由矽膠層析法純化，得到所需醯胺產物。

酯水解

室溫下用含LiOH-H ₂O (3-5當量)之MeOH (1-3 mL/mmol酯)及水(1-3 mL/mmol酯)處理酯(1當量) 1-5 h。反應物用1 N HCl酸化至pH=4-5且濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需羧酸產物。

分析方法 LCMS 分析方法使用LC/MS條件，於214 nm及254 nm處進行UV偵測器監測且在ESI+電離模式下進行110-800 amu質譜法掃描之情況下分析最終化合物。

LC/MS A ：管柱：XBridge C18, 4.6 × 50 mm, 3.5 µm；移動相：A水(10 mM碳酸氫銨)、B CH ₃CN；梯度：在1.4 min內5%-95% B，隨後保持1.6 min；流速：1.8 mL/min；烘箱溫度50℃。

LC/MS B ：管柱：SunFire C18, 4.6 × 50 mm, 3.5 µm；移動相：A水(0.01% TFA)、B CH ₃CN；梯度：在1.5 min內5%-95% B，隨後保持1.5 min；流速：2.0 mL/min；烘箱溫度50℃。

LC/MS C：管柱：XBridge C18, 4.6 × 50 mm, 3.5 µm；移動相：A水(10 mM碳酸氫銨)、B CH3CN；梯度：在1.5 min內5%-95% B，隨後保持1.5 min；流速：1.8 mL/min；烘箱溫度50℃。

LC/MS D ：管柱：Poroshell 120 EC-C138, 4.6 × 30 mm, 2.7 µm；移動相：A水(0.01% TFA)、B CH ₃CN (0.01% TFA)；梯度：在1.2 min內5%-95% B，隨後保持1.8 min；流速：2.2 mL/min；烘箱溫度50℃。

實例 2A. 製備中間物 製備 (3S)-3- 胺基 -3-(2,4,4'- 三氟 -2',3',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯 步驟 1 ： 2,6- 二溴 -4- 氟 -3- 甲基苯胺

室溫下在1.5小時內向4-氟-3-甲基苯胺(50.0 g，400 mmol)於MeOH (120 mL)及DCM (120 mL)中之混合物中逐滴添加溴(52 mL，1.0 mol)且在室溫下攪拌4小時。添加1N Na ₂S ₂O ₃水溶液(300 mL)及乙酸乙酯(500 mL)且攪拌10 min，隨後小心地用1N Na ₂CO ₃水溶液(300 mL)鹼化。分離有機層且用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取水層。將合併有機層用1N Na ₂S ₂O ₃水溶液(300 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾且真空中濃縮，得到呈白色固體狀之2,6-二溴-4-氟-3- 甲基苯胺(80 g)。70.7%產率(ESI 284.0[M+H] ⁺)。

步驟 2 ： 4- 氟 -2,3,6- 三甲基苯胺

向乙基2,6-二溴-4-氟-3-甲基苯胺(50.0 g，273 mmol)於二㗁烷(500.0 mL)及水(50 mL)中之溶液添加甲基

酸(49.0 g，819 mmol)、K ₂CO ₃(111.0 g， 819 mmol)及1,1'-雙(二苯膦基) 二茂鐵-鈀(II)二氯化物二氯甲烷複合物(10.0 g，13.65 mmol)。混合物在110℃下攪拌隔夜。將反應物傾入水(500 mL)中且用乙酸乙酯(500 mL)萃取。使合併有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由矽膠管柱(1:5石油醚:EtOAc)純化殘餘物，得到呈無色油狀之4-氟-2,3,6-三甲基苯胺(20.0 g)。47.6%產率(ESI 154.3 (M+H) ⁺)。

步驟 3 ： 2- 溴 -5- 氟 -1,3,4- 三甲基苯

0℃下向4-氟-2,3,6-三甲基苯胺(3.8 g，24.8 mmol)於MeCN (30 mL)中之混合物中添加t-BuONO (3.8 g，37.2 mmol)，隨後添加CuBr (4.3 g，29.7 mmol)。混合物在60℃下攪拌2小時。真空中濃縮反應混合物且藉由矽膠管柱(石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之2-溴-5-氟-1,3,4-三甲基苯(1.3 g)。33.9%產率。

步驟 4 ： (3S)-3-(((R)- 三級丁基亞磺醯基 ) 胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',3',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將(3-((S)-1-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-乙氧基-3-側氧基丙基)-2,4-二氟-5-(三氟甲基)苯基)

酸(1.5 g，3.3 mmol)、2-溴-5-氟-1,3,4-三甲基苯(950 mg，4.3 mmol)、K ₃PO ₄(2.1 g，9.9 mmol)、X-Phos Pd G2 (285 mg，0.33 mmol)於二㗁烷(10 mL)及H ₂O (2 mL)中之混合物在N ₂氛圍下在110℃下攪拌2 h。將混合物傾入水(100 mL)中且用EtOAc (100 mL × 3)萃取。使合併有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由矽膠管柱(1:1石油醚:EtOAc)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(380 mg)。21.3%產率( ESI 538.0(M+H) ⁺)。

步驟 5 ： (3S)-3- 胺基 -3-(2,4,4'- 三氟 -2',3',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

向(3S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(380 mg，0.70 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液添加HCl-二㗁烷(4 M，5 mL)且在室溫下攪拌1小時。真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(3S)-3-胺基-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(340 mg)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。100%產率(ESI 434.2 [M+H] ⁺)。

製備 (S)-3- 胺基 -3-(5- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯 步驟 1 ： 3-(5- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基聯苯 -3- 基 )-3-(( R)-1,1- 二甲基乙基亞磺醯胺基 ) 丙酸 ( S)- 乙酯

向3-(3-溴-5-環丙基-2,6-二氟苯基)-3-(( R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)丙酸( S)-乙酯(600 mg，1.3 mmol)、

基

酸(246 mg，1.5 mmol)及K ₃PO ₄(848 mg，43.0 mmol)於二㗁烷(10 mL)及H ₂O (1 mL)中之混合物中添加X-Phos Pd G2 (79 mg，0.1 mmol)。混合物在氮氣氛圍下加熱至110℃達2小時。添加水(20 mL)且用EtOAc (20 mL × 3)萃取溶液。真空中濃縮合併有機相且藉由矽膠管柱(2:1石油醚:EtOAc)純化殘餘物，得到呈暗色固體狀之3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基聯苯-3-基)-3-(( R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)丙酸( S)-乙酯(400 mg)。80%產率(ESI 492.1 [M-100+H] ⁺)。

步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(5- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

向3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基聯苯-3-基)-3-(( R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)丙酸( S)-乙酯(550 mg，1.12 mmol)於DCM (1mL)及EtOH (2mL)中之混合物中添加4M HCl-二㗁烷(2 mL，5.0 mmol)且將混合物在rt下攪拌0.5小時。隨後，真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(S)-3-胺基-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(360 mg，粗製物)，其直接用於下一反應中。(ESI 388.1(M+H) ⁺)。

製備 (3 S)-3- 胺基 -3-(5- 環丙基 -2,3',4- 三氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯 步驟 1 ： (S)-3-(((R)- 三級丁基亞磺醯基 ) 胺基 )-3-(3- 環丙基 -2,6- 二氟 -5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼雜環戊 -2- 基 ) 苯基 ) 丙酸乙酯

將(S)-3-(3-溴-5-環丙基-2,6-二氟苯基)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)丙酸乙酯(800 mg，1.8 mmol)、KOAc (529 mg，5.4 mmol)、 Xphos-PdG ₂(142 mg，0.18 mmol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷) (686 mg，2.7 mmol)於二㗁烷(10 mL)中之混合物在氮氣氛圍下在110℃下攪拌2小時。將反應混合物傾入15 mL水中且用EtOAc (15 × 3 mL × 3)萃取。合併有機層用鹽水(5 mL)洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾，且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(3:1石油醚:EtOAc)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(3-環丙基-2,6-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯基)丙酸乙酯(500 mg)。56%產率(ESI 500.2 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： (3S)-3-(((R)- 三級丁基亞磺醯基 ) 胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,3',4- 三氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(3-環丙基-2,6-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)苯基)丙酸乙酯(500 mg，1.0 mmol)、K ₃PO ₄(636 mg，3.0 mmol)、 Xphos-PdG ₂(78.7 mg，0.1 mmol)及2-溴-4-氟-1,3-二甲基苯(263 mg，1.3 mmol)於二㗁烷(10 mL)及H ₂O (1 mL)中之混合物在氮氣氛圍下在110℃下攪拌2小時。將反應混合物傾入15 mL水中且用EtOAc (15 × 3 mL × 3)萃取。將合併有機層用鹽水(5 mL)洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾，且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(3:1石油醚:EtOAc)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(3S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(200 mg)。40%產率(ESI 496.2 (M+H) ⁺)。

步驟 3 ： (3 S)-3- 胺基 -3-(5- 環丙基 -2,3',4- 三氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

向(3S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(200 mg，0.4 mmol)於EtOH (2 mL)中之混合物中添加HCl-二㗁烷(4 M，2 mL，8.0 mmol)。混合物在室溫下攪拌1小時。真空中濃縮混合物且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水/0.01% TFA，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到(3 S)-3-胺基-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯油(120 mg)。76%產率(ESI 392.2 [M+H] ⁺)。

實例 2B. 製備中間物 製備 2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸 步驟 1 ： (E)-2- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙烯基 )-4-( 三氟甲基 ) 吡啶

0℃下向氯化(甲氧基甲基)三苯鏻(1.0 g，2.95 mmol)於THF (13.406 mL)中之溶液添加三級丁醇鉀(376 mg，3.35 mmol)。0℃下攪拌1小時之後，添加6-甲氧基-4-(三氟甲基)菸鹼醛(550 mg，2.68 mmol)於THF (6.5 mL)中之溶液。使反應物在室溫下攪拌隔夜且用NH ₄Cl溶液淬滅。對混合物進行萃取(EtOAc × 3)，濃縮且藉由矽膠層析法(0-100乙酸乙酯:己烷)純化，得到(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶(450 mg)。72%產率(ESI 234.2 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： 2-(6- 甲氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 ) 乙醛

向(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶(450 mg，1.930 mmol)於DCM (29.689 mL)中之溶液添加TFA (0.595 mL，7.72 mmol)及水(0.591 mL，32.8 mmol)。反應物在45℃下攪拌18小時。反應物用DCM稀釋且用NaHCO ₃淬滅。混合物用水洗滌，用Na ₂SO ₄乾燥，過濾且濃縮，得到2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(343 mg)，其不經進一步純化即使用。81%產率(ESI 220.18 (M+H) ⁺)。

步驟 3 ： 5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 甲氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶

向2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(4 g，18.1 mmol)於DCE (50 mL)中之溶液添加氮雜環丁烷鹽酸鹽(3.4 g，36.2 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌20 min。添加NaBH(OAc) ₃(7.7 g，36.2 mmol)且在室溫下攪拌16小時。藉由添加MeOH (20 mL)淬滅反應混合物且將其過濾。真空中濃縮濾液且藉由逆相HPLC在C18/80 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈黃色油狀之5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶(3 g)。63%產率(ESI 261.2(M+H) ⁺)。

步驟 4 ： 5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮

將5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶(2.95 g，11.3 mmol)於HBr/AcOH (20 mL)中之混合物在50℃下攪拌5 h。真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC在C18/80 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈黃色油狀之5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(710 mg)。25%產率(ESI 247.1(M+H) ⁺)。

步驟 5 ： 2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯

向5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(710 mg，2.9 mmol)於MeCN (10 mL)中之溶液添加4-甲基-2-(甲基磺醯基氧基)戊酸乙酯(1.1 g，4.4 mmol)及K ₂CO ₃(1.2 g，8.7 mmol)。反應混合物在80℃下攪拌16小時。真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈黃色油狀之2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500 mg)。44%產率(ESI 389.2(M+H) ⁺)。

步驟 6 ： 2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (270 mg，6.5 mmol)之EtOH (5 mL)及水(1 mL)處理2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500 mg，1.3 mmol) 2小時。反應混合物用2 N HCl中和且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈黃色油狀之2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(410 mg)。88%產率(ESI 361.2(M+H) ⁺)。

製備 2-(5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸 步驟 1 ： 2-(6- 甲氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 胺

向2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(0.34 g，1.6 mmol)於DCE (7.8 mL)中之溶液添加二甲胺(3.9 mL，7.8 mmol)及乙酸(0.05 mL，0.78 mmol)且攪拌1小時。向溶液添加三乙醯氧基硼氫化鈉(0.6 g，3.1 mmol)。使反應物攪拌12小時，隨後濃縮且藉由矽膠層析法(0-35% DCM (1% TEA): 0-30% MeOH)純化，得到2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙-1-胺(305 mg)。79%產率(ESI 249.27 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： 5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮

將HBr (33%於乙酸中) (4.04 mL，24.57 mmol)添加至2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙-1-胺(0.305 g，1.229 mmol)中且在壓力容器中加熱至75℃。4小時之後，移除溶劑且藉由矽膠層析法(0-25% DCM:MeOH及作為改質劑之1% TEA)純化殘餘物，得到5-(2-(二甲胺基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(219 mg)。76%產率(ESI 235.15 (M+H) ⁺)。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.56 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 2.76 (m, 2H), 2.61 (m, 1H), 2.37 (m, 6H)。

步驟 3 ： 2-(5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯

將5-(2-(二甲胺基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(685 mg，2.92 mmol)、K ₂CO ₃(1.60 g，11.55 mmol)及4-甲基-2-(甲基磺醯基氧基)戊酸乙酯(1.60 g，6.70 mmol)於CH ₃CN (60 mL)中之混合物在85℃下攪拌隔夜。真空中濃縮溶劑且藉由矽膠管柱(2:1 DCM:MeOH)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(390 mg)。35%產率(ESI 377.2 (M+H) ⁺)。 ¹H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.84 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.51 (dd, J= 11.0, 5.0 Hz, 1H), 4.23 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 2.77 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.53 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.33 (s, 6H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.46 - 1.38 (m, 1H), 1.27 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 0.97 (t, J= 7.0 Hz, 6H)。

步驟 4 ： 2-(5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸

室溫下用含LiOH單水合物(435 mg，10.36 mmol)之EtOH (10 mL)及H ₂O (1 mL)處理2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(390 mg，1.0 mmol) 1小時。混合物用1 N HCl水溶液酸化至pH 4~5。混合物在真空中濃縮且藉由矽膠管柱(1:2 MeOH:EtOAc)純化，得到呈油狀之2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(358 mg)。99%產率(ESI 349.1 (M+H) ⁺)。

製備 2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸 步驟 1 ： 2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯

向2-(5-溴-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(68.0 g，177 mmol，1.00 eq)於THF (408 mL)中之溶液添加N,N-二甲基丙-2-炔-1-胺(19.1 g，230 mmol，24.4 mL，1.3 eq)、CuI (3.37 g，17.7 mmol，0.10 eq)、Pd(PPh ₃) ₂Cl ₂(6.21 g，8.85 mmol，0.05 eq)及TEA (358 g，3.54 mol，493 mL，20 eq)。反應混合物在25℃下攪拌12小時。反應物用乙酸乙酯稀釋，用飽和氯化銨溶液洗滌兩次且用鹽水洗滌一次。使合併有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析法(石油醚:乙酸乙酯=3:1)純化粗製物，得到呈黃色油狀之2-(5-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(20.0 g，51.8 mmol，29.2%產率)。

步驟 2 ： 2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯

向2-(5-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(20.0 g，51.8 mmol，1 eq)於EtOH (200 mL)中之溶液添加Pd/C (6.00 g，2.59 mmol，5%純度，0.05 eq)。混合物在H ₂(50 psi)下在15℃下攪拌24小時。過濾反應混合物且濃縮濾液，得到呈黃色油狀之2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(19.7 g，44.4 mmol，85.7%產率)。

步驟 3 ： 2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸

0℃下向2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(19.7 g，50.4 mmol，1 eq)於THF (98.0 mL)及H ₂O (20.0 mL)中之溶液添加LiOH.H ₂O (4.23 g，101 mmol，2.00 eq)。使反應混合物升溫至20℃且在20℃下攪拌12小時。反應混合物用1 N HCl水溶液調節至pH = 7且在真空下濃縮，得到粗產物。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 (250 × 70 mm，10 μm)；移動相：[水(0.05% HCl)-ACN]；B %：15%-45%，20 min)純化粗產物，得到呈白色固體狀之2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(5.40 g，13.5 mmol，26.8%產率，HCl)。 ¹H NMR：400 MHz D ₂O δ: 7.71 (s, 1H), 7.00 (s,1H), 5.40-5.45 (d, J= 20 Hz, 1H), 3.13-3.17 (m, 2H), 2.84 (s, 6H), 2.65-2.67 (m, 2H), 1.95-1.99 (m, 4H), 1.25-1.30 (m, 1H), 0.86 (s, 9H)。

實例 3 ：合成本發明之例示性化合物 製備型 HPLC 方法將粗樣品溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC使用偵測波長為214 nm之Gilson 215儀器純化：製備型HPLC A：管柱：Xtimate C18, 21.2 × 250 mm, 10 µm；移動相：A水(10 mM碳酸氫銨)、B CH ₃CN；如同上下文中一般之梯度溶析；流速：30 mL/min。

3-52. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,3',4- 三氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 HH-P1 及 HH-P2) 步驟 1 ： (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,3',4- 三氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將(3 S)-3-胺基-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(120 mg，0.3 mmol)、2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊酸(108 mg，0.3 mmol)、 TCFH(126 mg，0.45 mmol)及NMI (123 mg，1.5 mmol)於CH ₃CN (3 mL)中之混合物在室溫下攪拌隔夜。真空中濃縮反應物且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，20%~95%)上純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之(3 S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg)。62%產率(ESI 734.2 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,3',4- 三氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (24 mg，0.57 mmol)之EtOH (2 mL)及水(0.5 mL)處理(3 S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg，0.19 mmol) 1小時。反應混合物用2 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (20%-85% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 HH-P1(35 mg)及 HH-P2(58 mg)。

HH-P1ESI 706.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.80 (s, 1H), 7.12 - 7.03 (m, 1H), 7.00 - 6.91 (m, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.62 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 5.80 - 5.58 (m, 2H), 4.00 (t, J= 7.7 Hz, 4H), 3.30 - 3.19 (m, 2H), 2.97 - 2.78 (m, 3H), 2.71 - 2.62 (m, 1H), 2.49 - 2.34 (m, 2H), 2.13 - 1.76 (m, 9H), 1.46 - 1.33 (m, 1H), 1.00 - 0.86 (m, 8H), 0.66 (d, J= 4.8 Hz, 2H)。

HH-P2ESI 706.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.70 (s, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 1H), 7.02 - 6.87 (m, 2H), 6.67 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 5.98 - 5.86 (m, 1H), 5.62 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 4.11 (t, J= 8.1 Hz, 4H), 3.45 - 3.33 (m, 2H), 2.99 - 2.71 (m, 3H), 2.60 - 2.36 (m, 3H), 2.17 - 2.03 (m, 1H), 2.00 - 1.86 (m, 7H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.41 - 1.29 (m, 1H), 1.06 - 0.94 (m, 2H), 0.93 - 0.82 (m, 6H), 0.72 - 0.62 (m, 2H)。

3-57. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 HM-P1 及 HM-P2) 步驟 1 ： 3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸 (3 S)- 乙酯

將3-胺基-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基聯苯-3-基)丙酸( S)-乙酯(120 mg，0.31 mmol)、2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(112 mg，0.31 mmol)、TCFH (174 mg，0.62 mmol)及NMI (82 mg，1.0 mmol)於MeCN (5mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(97:3 DCM:MeOH)純化殘餘物，得到呈無色油狀之3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基聯苯-3-基)丙酸(3 S)-乙酯(120 mg)。53%產率(ESI 730.3 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (35 mg，0.9 mmol)之EtOH (3 mL)及H ₂O (1 mL)處理3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基聯苯-3-基)丙酸(3 S)-乙酯(120 mg，0.16 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-60% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 HM-P1(30.2 mg)及 HM-P2(31.8 mg)。

HM-P1ESI 702.3 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.80 (s, 1H), 6.97 - 6.79 (m, 3H), 6.58 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 5.84 - 5.61 (m, 2H), 4.00 (t, J= 8.1 Hz, 4H), 3.30 - 3.21 (m, 2H), 2.88-2.85 (m, 3H), 2.67 (dd, J= 14.8, 4.8 Hz, 1H), 2.48 - 2.37 (m, 2H), 2.28 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 2.13 - 1.96 (m, 3H), 1.90 (d, J= 21.3 Hz, 6H), 1.46 - 1.31 (m, 1H), 0.94 -0.90(m, 8H), 0.64-0.62 (m, 2H)。

HM-P2ESI 702.3 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.70 (s, 1H), 7.00 - 6.86 (m, 3H), 6.63 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 5.93 (dd, J= 11.4, 3.5 Hz, 1H), 5.62 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 4.11 (t, J= 8.0 Hz, 4H), 3.50 - 3.33 -3.30(m, 2H), 2.97 - 2.76 (m, 3H), 2.47-2.45 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.08-2.05 (m, 1H), 2.00 - 1.89 (m, 7H), 1.74-1.70 (m, 1H), 1.37 -1.35(m, 1H), 1.04 - 0.95 (m, 2H), 0.88 (dd, J= 11.4, 6.6 Hz, 6H), 0.67-0.65 (m, 2H)。

3-62. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,3',4- 三氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 HR-P1 及 HR-P2) 步驟 1 ： (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,3',4- 三氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將(3 S)-3-胺基-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(90 mg，0.21 mmol)、2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(81 mg，0.21mmol)、NMI (0.2 mL)及TCFH (88 mg，0.32 mmol)於CH ₃CN (3 mL)中之混合物在室溫下攪拌2小時。真空中濃縮溶劑且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：CH ₃CN，0~100%)上純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3 S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(80 mg)。50%產率(ESI 776.2 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,3',4- 三氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (13 mg，0.3mmol)之MeOH (2.0 mL)及H ₂O (0.5 mL)處理(3 S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(80 mg，0.1 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 5~6。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (50%-80% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 HR-P1(22.0 mg)及 HR-P2(25.0 mg)。

HR-P1ESI 748.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 7.40 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 5.78 - 5.60 (m, 2H), 4.04 (t, J= 8.0 Hz, 4H), 3.29 - 3.20 (m, 2H), 2.95 - 2.80 (m, 3H), 2.77 - 2.68 (m, 1H), 2.51 - 2.37 (m, 2H), 2.25 (d, J= 1.6 Hz, 3H), 2.09 - 1.75 (m, 8H), 1.37 (s, 1H), 0.93 (t, J= 6.4 Hz, 6H)。

HR-P2ESI 748.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.72 (s, 1H), 7.46 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.87 - 5.82 (m, 1H), 5.63 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 4.12 (t, J= 7.8 Hz, 4H), 3.45 - 3.34 (m, 2H), 2.95 - 2.74 (m, 3H), )、2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 2.27 (d, J= 1.5 Hz, 3H), 2.02 - 1.83 (m, 7H), )、1.78 - 1.65 (m, 1H), )、1.40 - 1.26 (m, 1H), )、0.93 - 0.84 (m, 6H)。

3-65. 製備 (3 S)-3-(4'- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',6'- 二甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ( 化合物 HU-P1 及 HU-P2) 步驟 1 ： (3 S)-3-(4'- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',6'- 二甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸乙酯

將( S)-3-胺基-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140.0 mg，0.32 mmol)、2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊酸(116.0 mg，0.32 mmol)、TCFH (106.6 mg，0.38 mmol)及NMI (131.4 mg，1.60 mmol)於CH ₃CN (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌隔夜。真空中濃縮反應物且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃， B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之(3 S)-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸乙酯(150.0 mg)。60%產率(ESI 786.3 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(4'- 環丙基 -2,4- 二氟 -2',6'- 二甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (23.9 mg，0.57 mmol)之EtOH (2 mL)及水(0.5 mL)處理(3 S)-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸乙酯(150.0 mg，0.19 mmol) 1小時。反應混合物用2 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-80% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 HU-P1(54.5 mg)及 HU-P2(50.5 mg)。

HU-P1ESI 758.3 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 (s, 1H), 7.34 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.87 - 6.76 (m, 3H), 5.81 - 5.67 (m, 2H), 3.12 - 3.04 (m, 2H), 2.98 - 2.90 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.76 - 2.57 (m, 3H), 2.11 - 1.79 (m, 11H), 1.41 - 1.27 (m, 1H), 0.99 - 0.89 (m, 8H), 0.71 - 0.65 (m, 2H)。

HU-P2ESI 758.3 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.85 (s, 3H), 5.85 - 5.79 (m, 1H), 5.62 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 3.13 - 2.94 (m, 2H), 2.93 - 2.84 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.70 - 2.57 (m, 3H), 2.09 - 1.81 (m, 10H), 1.70 - 1.58 (m, 1H), 1.36 - 1.26 (m, 1H), 0.99 - 0.92 (m, 2H), 0.89 - 0.83 (m, 6H), 0.72 - 0.65 (m, 2H)。

3-67. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',6'- 二甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 HW-P1 及 HW-P2) 步驟 1 ： (3 S)-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',6'- 二甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊酸(100.0 mg，0.28 mmol)、( S)-3-胺基-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(117.3 mg，0.28 mmol)、TCFH (156.8 mg，0.56 mmol)及NMI (91.8 mg，1.12 mmol)於CH ₃CN (10 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。真空中濃縮反應物且藉由矽膠管柱(4:1 DCM:MeOH)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之(3 S)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(150.0 mg)。71%產率(ESI 764.7 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',6'- 二甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (33.6 mg，0.80 mmol)之MeOH (4 mL)及H ₂O (1 mL)處理(3 S)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(150 mg，0.20 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 HW-P1(60.1 mg)及 HW-P2(50.0 mg)。

HW-P1ESI 736.6 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 (s, 1H), 7.39 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 9.3 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 5.78 - 5.67 (m, 2H), 3.14 - 3.02 (m, 2H), 3.01 - 2.88 (m, 1H), 2.80 (s, 6H), 2.75 - 2.55 (m, 3H), 2.12 - 1.84 (m, 10H), 1.34 (s, 1H), 0.94 (d, J= 6.6 Hz, 6H)。

HW-P2ESI 736.6 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 7.45 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.96 - 6.80 (m, 3H), 5.86 - 5.75 (m, 1H), 5.62 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 3.14 - 2.97 (m, 2H), 2.97 - 2.85 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.71 - 2.50 (m, 3H), 2.07 - 1.87 (m, 8H), 1.67 - 1.52 (m, 1H), 1.35 - 1.25 (m, 1H), 0.93 - 0.77 (m, 6H)。

3-70. 製備 ( 3S)-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 ) 聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ( 化合物 HZ-P1 及 HZ-P2) 步驟 1 ： 3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 ) 聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ( 3S)- 乙酯

將3-胺基-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)聯苯-3-基)丙酸( S)-乙酯(208 mg，0.50 mmol)、2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(180 mg，0.50 mmol)、TCFH (280 mg，1.0 mmol)及NMI (123 mg，1.5 mmol)於MeCN (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌3小時。真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(97:3 DCM:MeOH)純化殘餘物，得到呈無色油狀之3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)聯苯-3-基)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸(3 S)-乙酯(200 mg)。53%產率(ESI 760.3 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： ( 3S)-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 ) 聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (55 mg，1.3 mmol)之EtOH (3 mL)及H ₂O (1 mL)處理3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)聯苯-3-基)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸(3 S)-乙酯(200 mg，0.26 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-60% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 HZ-P1(7.0 mg)及 HZ-P2(62.0 mg)。

HZ-P1ESI 732.3 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 (s, 1H), 7.35 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.94 (s, 2H), 6.80 (s, 1H), 5.79 - 5.70 (m, 2H), 3.14 - 3.07 (m, 2H), 2.95-2.90 (m, 1H), 2.81 (s, 6H), 2.72 - 2.58 (m, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.11 - 1.92 (m, 7H), 1.87 (s, 3H), 1.34 (s, 1H), 0.94 (d, J= 6.5 Hz, 6H)。

HZ-P2ESI 732.3 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 7.40 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.85 (s, 1H), 5.82-5.80 (m, 1H), 5.62 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 3.15 - 2.95 (m, 2H), 2.89-2.85 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.63 -2.60(m, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.08 - 1.83 (m, 9H), 1.72 - 1.58 (m, 1H), 1.31-1.25 (m, 1H), 0.86-0.82 (m, 6H)。

3-76. 製備 (3S)-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ( 化合物 IF-P1 及 IF-P2) 步驟 1 ： (3S)-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸乙酯

將( S)-3-胺基-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(210 mg，0.5 mmol)、2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(200 mg，0.57 mmol)、TCFH (364 mg，1.3 mmol)及NMI (246 mg，3.0 mmol)於CH ₃CN (4 mL)中之混合物在50℃下攪拌1小時。將反應物濃縮且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，0~90%)上純化，得到呈黃色固體狀之(3 S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸乙酯(330 mg)。88.5%產率(ESI 746.3 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3S)-3-(2,4- 二氟 -2',4',5,6'- 四甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (56 mg，1.34 mmol)之MeOH (4 mL)及H ₂O (1 mL)處理(3S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸乙酯(330 mg，0.44 mmol) 30 min。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 5~6。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-58% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 IF-P1(96 mg)及 IF-P2(94 mg)。

IF-P1ESI 718.3 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.86 (s, 1H), 7.34 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 3.7 Hz, 2H), 6.82 (s, 1H), 5.76 - 5.65 (m, 2H), 3.12 - 3.04 (m, 2H), 2.99 - 2.88 (m, 3H), 2.80 - 2.70 (m, 7H), 2.29 (s, 3H), 2.06 - 1.92 (m, 5H), 1.86 (s, 3H), 1.44 - 1.33 (m, 1H), 0.93 (t, J= 7.0 Hz, 6H)。

IF-P2ESI 718.3 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.84 (s, 1H), 7.41 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.89 (s, 1H), 5.85 - 5.76 (m, 1H), 5.66 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 3.25 - 3.09 (m, 2H), 2.96 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.90 - 2.81 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.71 - 2.62 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.98 (d, J= 3.1 Hz, 6H), 1.93 - 1.81 (m, 1H), 1.76 - 1.67 (m, 1H), 1.36 - 1.27 (m, 1H), 0.92 - 0.82 (m, 6H)。

3-77. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 ) 聯苯 -3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 IG-P1 及 IG-P2) 步驟 1 ： 3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 ) 聯苯 -3- 基 ) 丙酸 (3 S)- 乙酯

將2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150 mg，0.41 mmol)、3-胺基-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)聯苯-3-基)丙酸( S)-乙酯(173 mg，0.41 mmol)、NMI (0.5 mL)及TCFH (364 mg，1.30 mmol)於CH ₃CN (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。真空中濃縮溶劑且藉由製備型HPLC A (30%-90% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)聯苯-3-基)丙酸(3 S)-乙酯(150 mg)。54%產率(ESI 758.2 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 ) 聯苯 -3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (42 mg，1.00 mmol)之MeOH (4 mL)及H ₂O (0.4 mL)處理3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)聯苯-3-基)丙酸(3 S)-乙酯(150 mg，0.19 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-70% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 IG-P1(33.0 mg)及 IG-P2(51.0 mg)。

IG-P1ESI 730.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 7.37 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.95 (s, 2H), 6.85 (s, 1H), 5.79 - 5.65 (m, 2H), 4.03 (t, J= 8.1 Hz, 4H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 3.00 - 2.69 (m, 4H), 2.50 - 2.38 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.05 - 1.83 (m, 8H), 1.52 - 1.28 (m, 1H), 0.93 (t, J= 6.4 Hz, 6H)。

IG-P2ESI 730.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.73 (s, 1H), 7.43 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.00 - 5.83 (m, 1H), 5.63 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 4.11 (t, J= 8.0 Hz, 4H), 3.50 - 3.33 (m, 2H), 2.99 - 2.75 (m, 3H), 2.69 - 2.57 (m, 1H), 2.49 - 2.37 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.02 - 1.84 (m, 7H), 1.77 - 1.64 (m, 1H), 1.46 - 1.19 (m, 1H), 1.03 - 0.80 (m, 6H)。

3-86. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(3-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 IP-P1 及 IP-P2) 步驟 1 ： (3 S)-3-(2-(5-(3-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將( S)-3-胺基-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(112.0 mg，0.27 mmol)、2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊酸(100.0 mg，0.27 mmol)、TCFH (151.2 mg，0.54 mmol)及NMI (88.6 mg，1.08 mmol)於CH ₃CN (8 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。真空中濃縮反應物且藉由矽膠管柱(4:1 DCM:MeOH)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之(3 S)-3-(2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(130.0 mg)。63%產率(ESI 772.6 (M+H) ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(3-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4- 二氟 -2',4',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (28.6 mg，0.68 mmol)之MeOH (4 mL)及H ₂O (1 mL)處理(3 S)-3-(2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(130 mg，0.17 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (30%-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 IP-P1(38.0 mg)及 IP-P2(42.0 mg)。

IP-P1ESI 744.7 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 (s, 1H), 7.34 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.79 (s, 2H), 5.74 (d, J= 4.1 Hz, 2H), 4.08 (t, J= 7.7 Hz, 4H), 3.21 - 3.11 (m, 2H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.71 - 2.58 (m, 3H), 2.45 (s, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.06 - 1.91 (m, 5H), 1.83 (d, J= 43.4 Hz, 5H), 1.34 (s, 1H), 0.93 (d, J= 6.5 Hz, 6H)。

IP-P2ESI 744.7 (M+H) ⁺。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.78 (s, 1H), 7.40 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 55.2 Hz, 3H), 5.87 - 5.78 (m, 1H), 5.61 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 4.15 - 3.99 (m, 4H), 3.19 - 2.97 (m, 2H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.69 - 2.54 (m, 3H), 2.50 - 2.37 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.03 - 1.71 (m, 9H), 1.73 - 1.53 (m, 1H), 1.39 - 1.20 (m, 1H), 0.89 - 0.72 (m, 6H)。

3-93. 製備 (3 S)-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,3',4- 三氟 -2',4',5,6'- 四甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 IW-P1 及 IW-P2) 步驟 1 ： (3 S)-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,3',4- 三氟 -2',4',5,6'- 四甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將(3 S)-3-胺基-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(170 mg，0.45 mmol)、2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊酸(151 mg，0.54 mmol)、 TCFH(213.2 mg，0.76 mmol)及NMI (177 mg，2.16 mmol)於CH ₃CN (3 mL)中之混合物在室溫下攪拌隔夜。真空中濃縮反應物且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：MeOH，20%~95%)上純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之(3 S)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(210.0 mg)。65%產率(ESI 724.2 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3 S)-3-(2-(5-(3-( 二甲胺基 ) 丙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2 H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,3',4- 三氟 -2',4',5,6'- 四甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (36.5 mg，0.87 mmol)之EtOH (2 mL)及水(0.5 mL)處理(3 S)-3-(2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2 H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(210.0 mg，0.29 mmol) 1小時。反應混合物用2 N HCl酸化至pH 4~5。真空中濃縮反應物且藉由製備型HPLC A (20%-85% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 IW-P1(68 mg)及 IW-P2(52 mg)。

IW-P1ESI 696.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 6.98 - 6.80 (m, 3H), 5.83 - 5.69 (m, 2H), 3.09 (t, J= 7.9 Hz, 2H), 3.00 - 2.90 (m, 1H), 2.81 (d, J= 0.8 Hz, 6H), 2.73 - 2.58 (m, 3H), 2.26 (d, J= 1.3 Hz, 6H), 2.15 - 1.78 (m, 10H), 1.43 - 1.30 (m, 1H), 1.00 - 0.90 (m, 6H)。

IW-P2ESI 696.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 (s, 1H), 7.02 - 6.79 (m, 3H), 5.89 - 5.79 (m, 1H), 5.57 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 3.09 - 2.95 (m, 2H), 2.91 - 2.71 (m, 7H), 2.70 - 2.47 (m, 3H), 2.32 - 2.19 (m, 6H), 2.07 - 1.83 (m, 9H), 1.67 - 1.55 (m, 1H), 1.37 - 1.27 (m, 1H), 0.90 - 0.80 (m, 6H)。

3-142. 製備 (3S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',3',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ( 化合物 KT-P1 及 KT-P2) 步驟 1 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',3',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯

將(3S)-3-胺基-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg，0.32 mmol)、2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(116 mg，0.32 mmol)、TCFH (179 mg，0.64 mmol)及NMI (131 mg，1.6 mmol)於CH ₃CN (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌2小時。真空中移除溶劑且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH ₄HCO ₃，B：CH ₃OH，0~85%)上純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg)。56.4%產率(ESI 776.3 [M+H] ⁺)。

步驟 2 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2,4,4'- 三氟 -2',3',6'- 三甲基 -5-( 三氟甲基 )-[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸

室溫下用含LiOH-H ₂O (22 mg，0.54 mmol)之EtOH (4 mL)及H ₂O (1 mL)處理(3S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg，0.18 mmol) 2小時。反應混合物用1 N HCl酸化至pH 5~6。真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30%-65% CH ₃CN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之非對映異構體產物 KT-P1(24 mg)及 KT-P2(30 mg)。

KT-P1ESI 748.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.81 (s, 1H), 7.39 (m, J= 7.5 Hz, 1H), 6.99 - 6.80 (m, 2H), 5.71 (m, J= 9.2, 5.9 Hz, 2H), 4.12 (m, J= 8.1 Hz, 4H), 3.42 - 3.30 (m, 2H), 2.99 - 2.71 (m, 4H), 2.52 - 2.35 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.09 - 1.93 (m, 5H), 1.86 (s, 3H), 1.45 - 1.32 (m, 1H), 0.94 (m, J= 6.9 Hz, 6H)。

KT-P2ESI 748.2 (M+H) ⁺。 ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.72 (s, 1H), 7.44 (m, J= 7.6 Hz, 1H), 7.00 - 6.77 (m, 2H), 5.90 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.63 (m, J= 7.7 Hz, 1H), 4.12 (m, J= 8.1 Hz, 4H), 3.39 (m, J= 19.1, 13.7 Hz, 2H), 2.86 (m, J= 14.4, 13.3 Hz, 3H), 2.60 (m, J= 15.6, 4.2 Hz, 1H), 2.45 (m, J= 8.1 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.94 (m, J= 21.4, 9.3, 4.8 Hz, 7H), 1.72 (m, J= 14.4, 7.3 Hz, 1H), 1.33 (m, J= 13.4, 6.7 Hz, 1H), 0.88 (m, J= 10.6, 6.6 Hz, 6H)。

對實例 4-6 中所描述之活體外分析之介紹使用以下三項活體外分析以檢查細胞所使用之α ₄β ₇機制過程：1)配位體:受體親和力；2)細胞表面上之彼等相互作用之親合力；及3)彼等相互作用如何在強加力下進行。在實例4中，使用螢光偏振(FP)分析以經由與螢光素標記肽之結合競爭來量測化合物活性。在實例5中，化合物抗α ₄β ₇之效力係在基於細胞之配位體結合分析(LBA)中使用與同可溶MAdCAM-1配位體競爭之化合物樣品一起培育之RPMI 8866細胞來加以量測。在實例6中，化合物活性係在當運輸細胞利用α ₄β ₇以在外滲過程期間黏附至腸之表現MAdCAM-1之HEV時機制上測試活體內發生何種事件的細胞黏附分析中來加以評估。在實例6之細胞黏附分析中，MAdCAM1-(Fc)經塗佈於塑膠上，且在存在測試化合物之情況下使表現α ₄β ₇之細胞(RPMI-8866)黏附至經塗佈表面。接著，用緩衝劑進行之洗滌之力施加至細胞，藉此測試彼黏附之強度。移除未附著細胞且定量剩餘黏附細胞。

實例 4 ：針對 α ₄β ₇ 結合之化合物之螢光偏振分析使用螢光偏振(FP)分析以經由與螢光素標記肽CRSDTLCGE {Lys(FITC)}之結合競爭來量測化合物活性。在分析中，將6.5 nM整合素α ₄β ₇與測試化合物一起在2 mM氯化錳、0.1 mM氯化鈣、20 mM pH 7.3 HEPES緩衝劑、150 mM氯化鈉、0.01% Triton X-100、2% DMSO及3 nM螢光素標記肽中培育。在384孔盤中運行分析，將整合素蛋白與測試化合物一起在22℃下預培育15分鐘，之後添加螢光素標記肽。在添加螢光素標記肽之後，將分析物在22℃下培育1小時且量測螢光偏振。藉由非線性回歸四參數曲線擬合來測定IC ₅₀值。

使用實例4之FP分析對包括圖1中之某些化合物之化合物進行α ₄β ₇抑制效力量測。在圖1中，使用實例4之FP分析獲得之IC ₅₀值係以數值範圍(在圖1中，A：＜ 5 nM；B：5-500 nM；C：＞ 500 nM)形式提供。

亦使用實例4之FP分析對下表1及(比較)表2中之化合物執行α ₄β ₇抑制效力量測，其中結果係以所得IC ₅₀值之數值範圍(在表1及2中，A：≤ 10 nM；B：＞ 10-500 nM；C：＞ 500 nM)形式提供。

實例 5 ： 配位體結合分析為在基於細胞之配位體結合分析(LBA)中量測化合物抗α ₄β ₇之效力，將RPMI 8866細胞與體積為10 µl之化合物樣品一起在室溫下在含有50 mM pH 7.3 HEPES、150 mM氯化鈉、1%牛血清白蛋白、3 mM氯化錳、0.15 mM氯化鈣、15 mM葡萄糖、1.5%二甲亞碸及0.025% e780可固定活力染料之緩衝劑中培育15分鐘。將5 μl含經Dylight 650螢光標記之33 nM MAdCAM-1-Fc的50 mM pH 7.3 HEPES、150 mM氯化鈉及1%牛血清白蛋白添加至細胞中。將樣品在室溫下培育45分鐘，在室溫下用0.8%甲醛固定30分鐘，且用50 mM pH 7.5 Tris、150 mM NaCl、1 mM EDTA及1%牛血清白蛋白洗滌。經由流動式細胞量測術量測各細胞之螢光強度。基於用780可固定活力染料進行之染色之另一分析中不包括死細胞。測定各樣品之Dylight 650中值螢光強度且使用4參數非線性回歸分析針對IC50值對濃度-反應曲線加以分析。

用實例5之配位體結合分析對圖1中所列之化合物執行α ₄β ₇配位體結合分析量測。在圖1中，使用實例5之LB分析獲得之IC ₅₀值係藉由數值範圍(在圖1中，A：＜ 5 nM；B：5-500 nM；C：＞ 500 nM)提供。

亦使用實例5之配位體結合分析對下表1及(比較)表2中之化合物執行α ₄β ₇配位體結合分析量測，其中所得IC ₅₀值係以數值範圍(在表1及2中，A：≤ 10 nM；B：＞ 10-500 nM；C：＞ 500 nM)形式提供。

實例 6 ： 細胞黏附分析實例6描述細胞黏附分析。由實例6之分析進行之α ₄β ₇細胞黏附量測獲自下表1中之化合物以及用於表2中之比較化合物，其中結果係以所得IC ₅₀值之數值範圍(對於表1及2，A：＜ 5 nM；B：5至＜ 10 nM；C 10-50 nM；D：＞ 50 nM；E：＞ 100 nM及F＞ 500 nM)形式呈現。

向96孔盤之各孔中添加含100 μg重組人類MAdCAM之100 μl PBS且在4℃下培育隔夜。在培育之後，藉由抽吸來移除MAdCAM且在37℃及5% CO ₂下添加200 μl PBS + 1% BSA以阻斷盤2小時。在此培育期間，製作於96孔V形底盤中100% DMSO中之化合物之稀釋曲線。隨後，將1.75 μl經稀釋化合物轉移至含有20 μl分析培養基(不含磷酸鹽之DMEM + 25 mM HEPES + 1% BSA)之新96孔U形底盤中。向此盤中添加額外155 μl分析培養基且藉由上下移液來混合。使此混合物在37℃及5% CO ₂下培育15分鐘。在培育之後，將每毫升含有2e6個RPMI8866細胞之175微升分析培養基添加至含有化合物之孔中且不進行混合，且使盤在37℃及5% CO ₂下再培育15分鐘。在此培育期間，自培育箱移除經MAdCAM塗佈之盤且用200 μl PBS + 0.1% BSA洗滌兩次。在已將細胞與化合物一起培育15分鐘之後，藉由上下移液將其混合，且將100 μl混合物一式三份地轉移至經洗滌之經MAdCAM塗佈之盤。隨後，將此盤在37℃及5% CO ₂下培育1小時。在培育之後，用200 μl不含酚之RPMI + 1% BSA洗滌盤兩次且用50 μl洗滌盤一次。在最後一次洗滌之後，將最終50 μl不含酚之RPMI + 1% BSA添加至孔中。接著，將50 μl Promega細胞活性效價發光劑(cell titer glow)添加至孔中。將盤在搖動器上在200 RPM下培育2分鐘，接著在搖動器外再培育8分鐘，之後在Biotek Citation 5盤讀取器上讀取發光。將原始資料轉換成相較於曲線底部而言之抑制%且在Prism中使用4參數非線性曲線以測定IC50及IC90來加以分析。表 1. 經選擇之例示性化合物 .

表 2. 比較化合物(參見PCT國際申請公開案第WO 2019/200202號；其以引用之方式併入)

以引用之方式併入

本文所引用之全部美國專利及美國專利申請公開案以及PCT專利申請公開案皆特此以引用之方式併入。 等效方案

熟習此項技術者應認識到或能夠僅使用常規實驗確定本文所描述之本發明特定實施例之許多等效方案。以下申請專利範圍意欲涵蓋該等等效方案。

圖 1為概述藉由例示性化合物進行之α ₄β ₇整合素之活體外抑制之表(亦即，獲自實例4之螢光偏振分析及實例5之配位體結合分析的資料)。

Claims

一種組合物之用途，其係用於製備治療α ₄β ₇整合素介導之病況的藥物，其中該組合物包含選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之用途，其中該化合物為
或其醫藥學上可接受之鹽。
一種化合物之用途，其係用於製備治療α ₄β ₇整合素介導之病況的藥物，其中該化合物係選自由以下組成之群： (S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (3S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸； (S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (S)-3-((S)-2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸； (S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸； (S)-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸；及 (3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-環丙基-2,3',4-三氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(3S)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',5,6'-四甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4,4'-三氟-2',3',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-((S)-2-(5-(3-(氮雜環丁烷-1-基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-(2,4-二氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(S)-3-(4'-環丙基-2,4-二氟-2',6'-二甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-((S)-2-(5-(3-(二甲胺基)丙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該化合物為(3S)-3-((S)-2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2,3',4-三氟-2',4',6'-三甲基-5-(三氟甲基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至12中任一項之用途，其中該組合物進一步包含醫藥學上可接受之賦形劑。
如請求項1至24中任一項之用途，其中該α ₄β ₇整合素介導之病況為胃腸自體發炎或自體免疫疾病。
如請求項1至24中任一項之用途，其中該α ₄β ₇整合素介導之病況為發炎性腸病(inflammatory bowel disease；IBD)、潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis；UC)及克羅恩氏病(Crohn's disease，CD)。
如請求項27之用途，其中該α ₄β ₇整合素介導之病況為發炎性腸病(IBD)。
如請求項27之用途，其中該α ₄β ₇整合素介導之病況為潰瘍性結腸炎(UC)。
如請求項27之用途，其中該α ₄β ₇整合素介導之病況為克羅恩氏病(CD)。