TW202003466A - 人類整合素α４β７拮抗劑 - Google Patents

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泰勒 帒
林富揚
克里斯多夫 奈爾 漢
麥斯 Ａ 史維森
丙澯 金
鍾誠
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Abstract

本發明揭示α4β7整合素之小分子拮抗劑，及使用其治療多種特定疾病或病狀之方法。

Description

人類整合素α4β7拮抗劑
異二聚體整合素家族受體對於外來及內在信號反應而調節細胞形狀及細胞黏著於胞外基質。
整合素信號傳導控制細胞存活、細胞週期進行、細胞分化及細胞遷移。
整合素受體可獨特地雙向地向細胞發信號，既可「由內向外(inside-out)」又可「由外向內(outside-in)」。因此，整合素受體藉由將力自細胞外基質傳輸至細胞骨架來介導細胞遷移且調節細胞骨架組織以達成細胞遷移期間所需之形狀變化。
整合素表現於大部分人類細胞之表面上。其病變造成一組不同的人類疾病，包括血小板病症、動脈粥樣硬化、癌症、骨質疏鬆、纖維化、腎臟之糖尿病神經病變、黃斑變性及各種自體免疫及慢性發炎疾病。
整合素形成兩條不同鏈之異二聚體：α (阿爾法)及β (貝塔)次單位。α4β7整合素表現於淋巴球上且負責T細胞經由與黏膜位址素細胞黏附分子(mucosal addressin cell adhesion molecule，MAdCAM)結合而復位至腸相關淋巴組織中，該MAdCAM存在於黏膜淋巴器官之高內皮微靜脈上。
特異性整合素配位體相互作用之抑制劑作為用於治療各種自體免疫疾病之消炎劑已展示有效。舉例而言，對α4β7展現高結合親和力之單株抗體已顯示對胃腸自體發炎/自體免疫疾病(諸如克隆氏病(Crohn's disease)及潰瘍性結腸炎)之治療益處。
整合素作為藥物目標之作用已長期受到公認，且美國食品及藥物管理局(Food and Drug Administration)已審批通過總共六種可注射整合素抑制劑，用以治療數種治療適應症：發炎性腸病(Entyvio®、Tysabri®)、多發性硬化症(Tysabri®)、牛皮癬(Raptiva®)及急性冠狀動脈症候群(Reopro®、Aggrastat®、Integrilin®)。然而，經口的生物可用整合素抑制劑在治療上很少獲得成功。
在二十四種已知的整合素異二聚體中，至少一半與發炎、纖維化、腫瘤學及血管疾病有關。因此，需要新類別之整合素抑制劑。
在某些實施例中，本發明係關於一種式I化合物：
Figure 02_image003
其中： R1 為H、烷基、伸烷基-環烷基、雜環基、伸烷基-O-烷基、芳基、雜芳基或伸烷基-CF3 ； R2 為雜環基； R3 為
Figure 02_image005
； R4 為H或(C1 -C6 )-烷基； Ra 為H、烷基、環烷基、CN或-O-烷基； Rb 為H、芳基、雜環基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜環基； Rc 為H、烷基、環烷基、雜環基或伸烷基-CF3 ； Rd 為芳基、雜芳基、雜環基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜環基； Re 為芳基、雜芳基或雜環基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，本發明係關於一種治療選自由以下組成之群的疾病或病狀之方法：發炎性腸病、迴腸肛門吻合術、嗜酸性食道炎、胰臟炎、胰島素依賴型糖尿病、乳房炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘及移植物抗宿主疾病、慢性肺發炎疾病、HIV及血液腫瘤，該方法包含以下步驟：向對其有需要之個體投與治療有效量之本文所描述之化合物中的任一者。
相關申請 本申請案主張2018年4月12日申請之美國臨時專利申請案第62/656,742號之優先權。
在某些實施例中，本發明係關於拮抗α4β 7整合素之化合物。該等化合物將適用於治療發炎性腸病、迴腸肛門吻合術、嗜酸性食道炎、胰臟炎、胰島素依賴型糖尿病、乳房炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘、移植物抗宿主疾病、慢性肺發炎疾病、HIV或血液腫瘤。定義 為方便起見，在本發明之進一步描述前，此處收集本說明書、實例及隨附申請專利範圍中所用之某些術語。此等定義應根據本發明之其餘部分來閱讀且如熟習此項技術者所理解。除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習此項技術者通常所理解相同之含義。
為了使本發明更易於理解，在下文及在整個說明書中定義某些術語及片語。
本文所用之冠詞「一(a)」及「一(an)」係指一或多於一個(亦即指至少一個)該冠詞之文法對象。藉助於實例，「一個要素」意謂一個要素或多於一個要素。
如在本說明書及申請專利範圍中所使用，片語「及/或」應理解為意謂如此連接之要素中之「任一者或兩者」，亦即，要素在一些情況下結合存在而在其他情況下分離地存在。應以相同方式解釋藉由「及/或」列出之複數個要素，亦即，如此連接之要素中之「一者或多於一者」。除由「及/或」句式特別指出之要素外，其他要素可視情況存在，無論其與彼等特別指出之要素相關抑或不相關。因此，作為非限制性實例，「A及/或B」之提法，當與諸如「包含」之開放式用語結合使用時，在一個實施例中，可僅指A (視情況包括除B外之要素)；在另一個實施例中，可僅指B (視情況包括除A外之要素)；在又一實施例中，可指A及B兩者(視情況包括其他要素)；等等。
如本說明書及申請專利範圍中所使用，應理解，「或」具有與上文所定義之「及/或」相同之含義。舉例而言，當分隔一系列中之項目時，應將「或」或「及/或」解釋為包括性的，亦即，包括數個或一系列要素中之至少一者，且亦包括超過一者，且視情況包括額外之未列出項目。術語只有在明確指示相反含義時(諸如「只有一個」或「恰好一個」)，或當用於申請專利範圍中時(「由……組成」)，係指數個或一系列要素中之恰好一者。一般而言，如本文中所使用之術語「或」僅在其之前有排他性術語(諸如「任一」、「一個」、「只有一個」或「恰好一個」)時可解釋為指示排他性替代物(亦即，「一個或另一個而非兩者」)。當用於申請專利範圍中時，「基本上由……組成」將具有其如用於專利法律領域之一般含義。
如本文在說明書中及申請專利範圍中所使用，關於一系列一或多個要素之片語「至少一個」應理解為意謂選自一系列要素中之任何一或多個要素中的至少一個要素，但不必包括一系列要素中特別列出之每一要素中之至少一者且不排除一系列要素中之要素的任何組合。此定義亦允許片語「至少一個」所指之一系列要素中特別指出之要素外的要素視情況存在，無論其與彼等特別指出之要素相關抑或不相關。因此，作為非限制性實例，「A及B中之至少一者」(或等效地「A或B中之至少一者」或等效地「A及/或B中之至少一者」)可在一個實施例中指至少一個(視情況包括多於一個)A且不存在B (且視情況包括除B外之要素)；在另一個實施例中指至少一個(視情況包括多於一個)B且不存在A (且視情況包括除A外之要素)；在又一實施例中指至少一個(視情況包括多於一個)A及至少一個(視情況包括多於一個)B (且視情況包括其他要素)；等等。
亦應理解，除非明確指示相反含義，否則在本文中所主張的包括一個以上之步驟或操作之任何方法中，該方法之步驟或操作次序不一定受限於所述的該方法之步驟或操作次序。
在申請專利範圍中以及在以上說明書中，諸如「包含」、「包括」、「攜有」、「具有」、「含有」、「涉及」、「持有」、「由……構成」及其類似者之所有過渡片語均應理解為開放式，亦即意謂包括但不限於。如美國專利局專利審查程序手冊(United States Patent Office Manual of Patent Examining Procedures)章節2111.03中所闡述，僅有「由……組成」及「基本上由……組成」之過渡片語可各自為封閉或半封閉式過渡片語。
本發明之組合物中所含之某些化合物可以特定幾何形式或立體異構形式存在。另外，本發明之聚合物亦可為光學活性的。本發明涵蓋在本發明範疇內之所有此類化合物，包括順式及反式異構體、R 及S 對映異構體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體、其外消旋混合物及其其他混合物。諸如烷基之取代基中可存在額外不對稱碳原子。意欲包括所有此類異構體以及其混合物於本發明中。
舉例而言，若需要本發明化合物之特定對映異構體，則其可藉由不對稱合成或藉由用對掌性佐劑提取來製備，其中分離所得非對映異構體混合物且裂解佐劑基團以提供所需純對映異構體。或者，當分子含有鹼性官能基(諸如胺基)或酸性官能基(諸如羧基)時，用適當光學活性酸或鹼形成非對映異構體鹽，接著分離隨後藉由此項技術中熟知之分步結晶或層析手段形成之非對映異構體，且隨後回收純對映異構體。
本文中所描繪之結構亦意欲包括僅在存在一或多個經同位素增濃之原子時不同的化合物。舉例而言，藉由用氘或氚置換氫或用13 C或14 C增濃之碳置換碳產生之化合物屬於本發明之範疇內。
如本文所使用之片語「醫藥學上可接受之賦形劑」或「醫藥學上可接受之載劑」意謂參與將目標化學物質自身體一個器官或部分運載或傳輸至身體另一器官或部分的醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液態或固態填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。各載劑必須在與調配物之其他成分相容、對患者無害且實質上為非致熱的意義上為「可接受」的。可充當醫藥學上可接受之載劑的材料之一些實例包括：(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3)纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10)二醇，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原質水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸緩衝溶液；及(21)其他在醫藥調配物中使用之無毒可相容物質。在某些實施例中，本發明之醫藥組合物為非致熱的，亦即，在投與患者時不引起顯著溫度升高。
術語「醫藥學上可接受之鹽」係指化合物之相對無毒的無機及有機酸加成鹽。此等鹽可在化合物之最終分離及純化期間就地製備，或藉由分別使呈游離鹼形式之經純化化合物與適合有機或無機酸反應且分離由此形成之鹽來製備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苄酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、順丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽及月桂基磺酸鹽及其類似物。(參見例如Berge等人(1977) “Pharmaceutical Salts”，J. Pharm. Sci. 66:1-19。)
在其他情況下，適用於本發明方法之化合物可含有一或多個酸性官能基，且因此能夠與醫藥學上可接受之鹼形成醫藥學上可接受之鹽。在此等情況下，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指化合物之相對無毒的無機及有機鹼加成鹽。此等鹽同樣可在化合物之最終分離及純化期間就地製備，或藉由分別使呈游離酸形式之經純化化合物與適合之鹼(諸如醫藥學上可接受之金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)、氨或醫藥學上可接受之有機一級、二級或三級胺反應來製備。代表性鹼鹽或鹼土鹽包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鋁鹽及其類似物。適用於形成鹼加成鹽之代表性有機胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪及其類似物(參見例如Berge等人，同上)。
關於治療使用之化合物之「治療有效量」(或「有效量」)係指製劑中化合物之量，其在作為所需劑量方案之一部分投與(至哺乳動物，較佳人類)時根據用於待治療之病症或病狀之臨床上可接受的標準或美觀性目的(例如在適用於任何醫學治療之合理益處/風險比率下)緩解症狀，改善病狀，或減緩疾病病狀的發作。
術語「預防性或治療性」治療係此項技術中公認的且包括向宿主投與一或多種本發明之組合物。若其在臨床上表現出不期望的病狀(例如宿主動物之疾病或其他不期望的狀態)之前投與，則治療為預防性的(亦即，其防止宿主罹患不期望的病狀)，而若其在表現出不期望的病狀之後投與，則治療為治療性的(亦即，其意欲減輕、改善或穩定現有不期望的病狀或其副作用)。
術語「患者」係指需要特定治療之哺乳動物。在某些實施例中，患者為靈長類、犬科、貓科或馬科動物。在某些實施例中，患者為人類。
脂族鏈包含以下定義之烷基、烯基及炔基之類別。直脂族鏈限於未分支碳鏈部分。如本文中所使用，術語「脂族基團」係指直鏈、分支鏈或環狀脂族烴基且包括飽和及不飽和脂族基團，諸如烷基、烯基或炔基。
「烷基」係指具有指定碳原子數之完全飽和環狀或非環狀、分支或未分支碳鏈部分，或在無指定之情況下具有最多30個碳原子。舉例而言，具有1至8個碳原子之烷基係指諸如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基及辛基之部分及為此等部分之位置異構體的部分。具有10至30個碳原子之烷基包括癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基及二十四烷基。在某些實施例中，直鏈或分支鏈烷基在其主鏈中具有30個或少於30個碳原子(例如，對於直鏈，C1 -C30 ，對於分支鏈，C3 -C30 )，且更佳具有20個或少於20個碳原子。烷基可為經取代或未經取代的。
如本文所用，術語「伸烷基」係指具有指定數目個碳(例如2至12個碳原子)之烷基，其在其最長碳鏈上含有與化合物之其餘部分連接的兩個連接點。伸烷基之非限制性實例包括亞甲基-(CH2 )-、伸乙基-(CH2 CH2 )-、伸正丙基-(CH2 CH2 CH2 )-、伸異丙基-(CH2 CH(CH3 ))-及其類似物。伸烷基可為環狀或非環狀、分支或未分支碳鏈部分，且可視情況經一或多個取代基取代。
「環烷基」意謂各自具有3至12個碳原子之單環或雙環或橋聯或螺環或多環飽和碳環。同樣，較佳環烷基在其環結構中具有3-10個碳原子，且更佳在環結構中具有3-6個碳。環烷基可為經取代或未經取代的。
除非另外指定碳數目，否則如本文所使用之「低碳數烷基」意謂如上文所定義但在其主鏈結構中具有1至10個碳、更佳1至6個碳原子之烷基，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基。同樣地，「低碳數烯基」及「低碳數炔基」具有類似鏈長。在整個申請案中，較佳烷基為低碳數烷基。在某些實施例中，本文中指代為烷基之取代基為低碳數烷基。
「烯基」係指具有指定碳原子數之任何環狀或非環狀、分支或未分支不飽和碳鏈部分，或若未指定對碳原子數之限制，則具有最多26個碳原子；且在部分中具有一或多個雙鍵。具有6至26個碳原子之烯基藉由以下例示：呈其各種異構形式之己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一烯基、十二烯基、十三烯基、十四烯基、十五烯基、十六烯基、十七烯基、十八烯基、十九烷基、二十烯基、二十一烯基、二十二烯基、二十三烯基及二十四烯基，其中不飽和鍵可位於部分中之任何位置且雙鍵可具有(Z)或(E)構形。
「炔基」係指烯基範疇內之烴基部分，但在該部分中具有一或多個參鍵。
術語「烷硫基」係指具有與其連接之硫部分的如上文所定義之烷基。在某些實施例中，「烷硫基」部分由以下中之一者表示：-(S)-烷基、-(S)-烯基、-(S)-炔基及-(S)-(CH2 )m -R1 ，其中m及R1 於下文定義。代表性烷硫基包括甲硫基、乙硫基及其類似物。如本文所使用之術語「烷氧基(alkoxyl)」或「烷氧基(alkoxy)」係指如下文所定義之具有與其連接之氧部分的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、第三丁氧基及其類似物。「醚」係藉由氧共價鍵聯之兩個烴。因此，使烷基成為醚的彼烷基之取代基係或類似於烷氧基，諸如可由-O-烷基、-O-烯基、-O-炔基、-O-(CH2 )m -R10 中之一者表示，其中m及R10 於下文描述。
術語「胺」及「胺基」係此項技術中公認的且係指未經取代及經取代之兩者，例如可由下式表示之部分：
Figure 02_image007
其中R11 、R12 及R13 各自獨立地表示氫、烷基、烯基、-(CH2 )m -R10 ，或R11 及R12 和與其連接之N原子共同形成環結構中具有4至8個原子之雜環；R10 表示烯基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基或聚環基；且m為零或在1至8範圍內之整數。在某些實施例中，僅R11 或R12 中一者可為羰基，例如R11 、R12 及氮一起不形成醯亞胺。在甚至更多某些實施例中，R11 及R12 (及視情況R13 )各自獨立地表示氫、烷基、烯基或-(CH2 )m -R10 。因此，如本文所使用之術語「烷基胺」意謂如上文所定義之具有與其連接之經取代或未經取代之烷基的胺基，亦即R11 及R12 中之至少一者為烷基。在某些實施例中，胺基或烷基胺為鹼性的，意謂其具有pKa ＞7.00之共軛酸，亦即此等官能基之質子化形式具有高於約7.00的相對於水之pKa 。
如本文所用，術語「醯胺」係指基團
Figure 02_image009
其中各R14 獨立地表示氫或烴基，或兩個R14 及與其連接之N原子共同形成在環結構中具有4至8個原子之雜環。
如本文所使用，術語「芳基」包括3員至12員經取代或未經取代之單環芳族基，其中環之各原子為碳(亦即碳環芳基)或其中一或多個原子為雜原子(亦即雜芳基)。較佳地，芳基包括5員至12員環，更佳6員至10員環。術語「芳基」亦包括具有兩個或兩個以上環之多環系統，其中兩個或兩個以上碳為兩個鄰接環共用，其中至少一個環為芳族，例如其他環可為環烷基、環烯基、環炔基、芳基、雜芳基及/或雜環基。碳環芳基包括苯、萘、菲、酚、苯胺及其類似物。雜芳基包括經取代或未經取代之芳族3員至12員環結構，更佳5員至12員環，更佳5員至10員環，其環狀結構包括1至4個雜原子。雜芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪及嘧啶及其類似物。芳基及雜芳基可為單環、雙環或多環。
如本文所用之術語「鹵基」、「鹵化物」或「鹵素」意謂鹵素且包括例如且不限於呈放射性及非放射性形式兩者之氟、氯、溴、碘及其類似物。在一較佳實施例中，鹵基係選自由氟、氯及溴組成之群。
術語「雜環基(heterocyclyl)」或「雜環基(heterocyclic group)」係指3員至12員環結構，更佳5員至12員環，更佳5員至10員環，其環結構包括1至4個雜原子。雜環可為單環、雙環、螺環或多環。雜環基包括例如噻吩、噻嗯、呋喃、哌喃、異苯并呋喃、苯并哌喃、二苯并哌喃、啡噁噻、吡咯、咪唑、吡唑、異噻唑、異噁唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、吲哚嗪、異吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、呔嗪、萘啶、喹噁啉、喹唑啉、噌啉、喋啶、咔唑、咔啉、啡啶、吖啶、嘧啶、啡啉、吩嗪、啡噻嗪、啡噻嗪、呋呫、啡噁嗪、吡咯啶、氧雜環戊烷、硫雜環戊烷、噁唑、哌啶、哌嗪、嗎啉、內酯、內醯胺(諸如氮雜環丁烷酮及吡咯啶酮)、磺內醯胺、磺內酯及其類似物。雜環可在一或多個位置處經如上所述之取代基取代，如例如鹵素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、胺基、硝基、硫氫基、亞胺基、醯胺基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、羰基、羧基、矽烷基、胺磺醯基、亞磺醯基、醚、烷硫基、磺醯基、酮、醛、酯、雜環基、芳族或雜芳族部分、-CF3 、-CN及其類似物。
術語「羰基」係此項技術中公認的且包括可由下式表示之部分：
Figure 02_image011
其中X'為一鍵或表示氧或硫，且R15 表示氫、烷基、烯基、-(CH2 )m -R10 或醫藥學上可接受之鹽，R16 表示氫、烷基、烯基或-(CH2 )m -R10 ，其中m及R10 如上文所定義。當X'為氧且R15 或R16 不為氫時，該式表示「酯」。當X'為氧且R15 如上文所定義時，該部分在本文中稱為羧基，且特定言之當R15 為氫時，該式表示「羧酸」。當X'為氧且R16 為氫時，該式表示「甲酸根」。一般而言，當上式之氧原子經硫置換時，該式表示「硫羰基」基團。當X'為硫且R15 或R16 不為氫時，該式表示「硫酯」基團。當X'為硫且R15 為氫時，該式表示「硫代羧酸」基團。當X'為硫且R16 為氫時，該式表示「硫代甲酸酯(thioformate)」基團。另一方面，當X'為一鍵且R15 不為氫時，上式表示「酮」基團。當X'為一鍵且R15 為氫時，上式表示「醛」基團。
如本文所使用，術語「經取代」涵蓋包括有機化合物之所有可容許取代基。在一廣泛態樣中，可容許取代基包括有機化合物之非環狀及環狀、分支鏈及未分支鏈、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。說明性取代基包括例如上文所述之彼等取代基。對於適當有機化合物，可容許取代基可為一或多個且相同或不同。出於本發明之目的，諸如氮之雜原子可具有氫取代基及/或本文所描述之滿足雜原子價數之有機化合物的任何可容許取代基。本發明並不意欲以任何方式受有機化合物之可容許取代基限制。應理解，「取代」或「經……取代」包括暗示的限制條件，即此類取代符合經取代原子及取代基之容許價數，且取代產生穩定化合物，例如其不自發地經歷轉型，諸如藉由重排、環化、消除等。
如本文所用，術語「硝基」意謂-NO2 ；術語「鹵素」指代-F、-Cl、-Br或-I；術語「硫氫基」意謂-SH；術語「羥基」」意謂-OH；術語「磺醯基」意謂-SO2 -；術語「疊氮基」意謂-N3 ；術語「氰基」意謂-CN；術語「異氰酸酯基」意謂-NCO；術語「硫氰基」意謂-SCN；術語「異硫氰基」意謂-NCS；且術語「氰氧基」意謂-OCN。
術語「胺磺醯基」係此項技術中公認的且包括可由下式表示之部分：
Figure 02_image013
其中R11 及R12 如上文所定義。
術語「硫酸根」係此項技術中公認的且包括可由下式表示之部分：
Figure 02_image015
其中R15 如上文所定義。
術語「磺醯胺」係此項技術中公認的且包括可由下式表示之部分：
Figure 02_image017
其中R11 及R16 如上文所定義。
術語「磺酸根」係此項技術中公認的且包括可由下式表示之部分：
Figure 02_image019
其中R15 為電子對、氫、烷基、環烷基或芳基。
如本文所使用之術語「亞碸」或「亞磺醯基」係指可由下式表示之部分：
Figure 02_image021
其中R17 係選自由以下組成之群：氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳烷基或芳基。
術語「尿素」係此項技術中公認的且可由通式表示
Figure 02_image023
其中各R18 獨立地表示氫或諸如烷基之烴基，或任何出現的R18 與另一者及插入的原子一起構成在環結構中具有4至8個原子之雜環。
如本文中所使用，各表述(例如烷基、m、n等)之定義在其在任何結構中出現超過一次時意欲獨立於其在別處同一結構中之定義。
如本文所使用之術語「前藥」涵蓋在生理學條件下轉化為治療活性劑之化合物。製備前藥之常用方法為包括在生理學條件下水解以展現所需分子之所選部分。在其他實施例中，前藥藉由宿主動物之酶活性轉化。
出於本發明之目的，化學元素係根據化學與物理手冊(Handbook of Chemistry and Physics) (CAS版本，第67版，1986-87)內封的元素週期表識別。例示性化合物 在某些實施例中，本發明係關於一種式I化合物：
Figure 02_image025
其中： R1 為H、烷基、伸烷基-環烷基、雜環基、伸烷基-O-烷基、芳基、雜芳基或伸烷基-CF3 ； R2 為雜環基； R3 為
Figure 02_image027
； R4 為H或(C1 -C6 )-烷基； Ra 為H、烷基、環烷基、CN或-O-烷基； Rb 為H、烷基、芳基、雜芳基、雜環基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜環基； Rc 為H、烷基、環烷基、雜環基或伸烷基-CF3 ； Rd 為芳基、雜芳基、雜環基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜環基；且 Re 為芳基、雜芳基或雜環基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R1 為烷基。在某些實施例中，R1 為甲基、乙基、異丙基、正丙基、異丁基、正丁基或第三丁基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R1 為伸烷基-環烷基。在一些實施例中，伸烷基-環烷基為亞甲基-環丙基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R1 為雜環基。在一些實施例中，R1 為經取代之雜環基。在一些實施例中，R1 為含N雜環基。在一些實施例中，R1 為經取代之含N雜環基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R1 為-伸烷基-O-烷基。在一些實施例中，R1 為亞甲基-O-甲基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R1 為芳基。在一些實施例中，R1 為苯基。在一些實施例中，R1 為未經取代之苯基。在一些實施例中，R1 為經取代之苯基。在一些實施例中，經取代之苯基係經一或多個選自烷基及鹵素之取代基取代。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R1 為伸烷基-CF3 。在一些實施例中，R1 為亞甲基-CF3 。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R2 為雜環基。在某些實施例中，R2 為經取代之雜環基。在某些實施例中，R2 為含N雜環基。在某些實施例中，含N雜環基為6員至12員雜環基。在一些實施例中，R2 係經一或多個選自胺基、烷基及烷氧基之取代基取代，其中烷基或烷氧基係經嗎啉基、環狀胺基或非環胺基取代，且其中該烷基、烷氧基、嗎啉基、環狀胺基或非環胺基部分係視情況經一或多個烷氧基或氟取代。
在某些實施例中，R2 為未經取代之吡啶酮基。在某些實施例中，R2 為經取代之吡啶酮基。在一些實施例中，經取代之吡啶酮基係經一或多個選自以下之取代基取代：烷基、環烷基、雜環烷基、鹵素、芳基、雜芳基及CF3 。
在一些實施例中，R2 係選自
Figure 02_image029
Figure 02_image031
Figure 02_image033
Figure 02_image035
。
在一些實施例中，R2 係選自
Figure 02_image037
Figure 02_image039
Figure 02_image041
Figure 02_image043
Figure 02_image045
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R3 為
Figure 02_image047
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R4 為H。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R4 為(C1 -C6 )-烷基。在一些實施例中，R4 為甲基、乙基、異丙基、正丙基、異丁基、正丁基或第三丁基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Ra 為H。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Ra 為烷基。在一些實施例中，Ra 為甲基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Ra 為環丙基。在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Ra 為CN。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Ra 為-O-烷基。在一些實施例中，Ra 為-OMe。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為H。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為烷基。在一些實施例中，Rb 為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在一些實施例中，Rb 為第三丁基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為芳基。在一些實施例中，Rb 為經取代之芳基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為雜芳基。在一些實施例中，Rb 為經取代之雜芳基。在一些實施例中，經取代之芳基或經取代之雜芳基係經一或多個選自以下之取代基取代：烷基、鹵素、OH、-O-烷基、CN、環烷基或雜環烷基。在一些實施例中，Rb 為經取代之芳基。在一些實施例中，Rb 係選自
Figure 02_image049
Figure 02_image051
Figure 02_image053
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為雜環基。在一些實施例中，Rb 為經取代之雜環基。在一些實施例中，經取代之雜環基係經一或多個選自烷基、OH及-O-烷基之取代基取代。在一些實施例中，Rb 係選自
Figure 02_image055
。在一些實施例中，Rb 係選自
Figure 02_image057
Figure 02_image059
Figure 02_image061
Figure 02_image063
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為-O-環烷基。在一些實施例中，Rb 為-O-環丁基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rb 為-O-芳基。在一些實施例中，Rb 為-O-苯基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R3 為
Figure 02_image065
。在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R3 為
Figure 02_image067
。在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中R3 為
Figure 02_image069
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rc 為H。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rc 為烷基。在一些實施例中，Rc 為甲基或乙基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rc 為環烷基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rc 為雜環基烷基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rc 為鹵素。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rc 為CF3 。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rd 為芳基。在一些實施例中，Rd 為經取代之芳基。在一些實施例中，經取代之芳基係經一或多個選自以下之取代基取代：烷基、環烷基、雜環基烷基、鹵素、OH、OMe、CF3 及CN。在一些實施例中，Rd 係選自
Figure 02_image071
Figure 02_image073
Figure 02_image075
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rd 為雜環基。在一些實施例中，Rd 為經取代之雜環基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rd 為雜芳基。在一些實施例中，Rd 為經取代之雜芳基。在一些實施例中，經取代之雜環基或經取代之雜芳基係經一或多個選自烷基及環烷基之取代基取代。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rd 為
Figure 02_image077
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Rd 係選自
Figure 02_image079
Figure 02_image081
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Re 為芳基。在一些實施例中，Re 為苯基。在一些實施例中，Re 為經取代之苯基。在一些實施例中，經取代之苯基為經烷基取代之苯基。在一些實施例中，Re 為
Figure 02_image083
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Re 為雜芳基。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中Re 為雜環基。
在一些實施例中，Re 為經取代之吡咯啶基。在一些實施例中，Re 為經烷基取代之吡咯啶基。在一些實施例中，Re 為
Figure 02_image085
。
在某些實施例中，本發明係關於前述化合物中之任一者，其中該化合物為醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image087
Figure 02_image089
Figure 02_image091
Figure 02_image093
Figure 02_image095
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image097
Figure 02_image099
Figure 02_image101
Figure 02_image103
Figure 02_image105
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image107
Figure 02_image109
Figure 02_image111
Figure 02_image113
Figure 02_image115
Figure 02_image117
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image119
Figure 02_image121
Figure 02_image123
Figure 02_image125
Figure 02_image127
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image129
Figure 02_image131
Figure 02_image133
Figure 02_image135
Figure 02_image137
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image139
Figure 02_image141
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image143
Figure 02_image145
Figure 02_image147
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image149
Figure 02_image151
Figure 02_image153
Figure 02_image155
Figure 02_image157
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image159
。
在某些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image161
Figure 02_image163
Figure 02_image165
。
在一些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image167
。
在一些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image169
Figure 02_image171
Figure 02_image173
Figure 02_image175
Figure 02_image177
。
在一些實施例中，本發明係關於選自由以下組成之群的化合物：
Figure 02_image179
Figure 02_image181
Figure 02_image183
Figure 02_image185
Figure 02_image187
。例示性醫藥組合物 在某些實施例中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含前述化合物中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
可藉由在醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑的存在下向患者投與有效量之活性化合物或其醫藥學上可接受之鹽來治療患者(包括但不限於人類)。活性材料可以液體或固體形式藉由任何適當途徑投與，例如經口、腸外、靜脈內、皮內、皮下、經直腸或局部投與。
藥物組合物中活性化合物之濃度將視藥物之吸收、失活及排泄速率以及熟習此項技術者已知之其他因素而定。應注意，劑量值亦將隨待緩解之病狀之嚴重程度而變化。應進一步理解，對任何特定個體而言，特定劑量方案應根據個體需要及投與組合物或監督投與組合物之人員的專業判斷而隨時間調整，且本文所闡述之濃度範圍僅為例示性的，而不意欲限制所主張之組合物的範疇或實施。活性成分可一次性投與，或可分成數個較小劑量以不同時間間隔投與。
在某些實施例中，活性化合物之投與模式為經口投與。口服組合物將通常包括惰性稀釋劑或可食用載劑。其可封裝於明膠膠囊中或壓縮成錠劑。出於口服投與治療之目的，活性化合物可與賦形劑合併且以錠劑、糖衣錠或膠囊之形式使用。可包括醫藥學上相容之黏合劑及/或佐劑材料作為組合物之一部分。
錠劑、丸劑、膠囊、糖衣錠及其類似物可含有以下成分或具有類似性質之化合物中之任一者：黏合劑，諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉或乳糖；崩解劑，諸如褐藻酸、澱粉羥基乙酸鈉(Primogel)或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或Sterotes；助滑劑，諸如膠態二氧化矽；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；或調味劑，諸如胡椒薄荷、柳酸甲酯或橙味調味劑。當單位劑型為膠囊時，除以上類型之材料外，其亦可含有液體載劑，諸如脂肪油。另外，單位劑型可含有修改劑量單位之物理形式之各種其他材料，例如糖包衣、蟲膠或其他腸溶劑。
化合物可作為酏劑、懸浮液、糖漿、粉片、口嚼錠或其類似物之組分投與。除活性化合物之外，糖漿可含有蔗糖或甜味料作為甜味劑及某些防腐劑、染料及著色劑及調味劑。
化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可與不損害所需作用之其他活性材料或與補充所需作用之材料混合，諸如抗生素、抗真菌劑、消炎劑或其他抗病毒劑，包括但不限於核苷化合物。用於腸外、皮內、皮下或局部施用之溶液或懸浮液可包括以下組分：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液、不揮發性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，諸如苄醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及張力調節劑，諸如氯化鈉或右旋糖。腸外製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。
若靜脈內投與，則載劑包括生理鹽水及磷酸緩衝鹽水(phosphate buffered saline，PBS)。
在某些實施例中，用防止化合物自身體快速除去之載劑製備活性化合物，諸如經控制之釋放調配物，包括但不限於植入物及微膠囊化遞送系統。可使用可生物降解、生物相容聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。舉例而言，可使用包覆腸溶衣之化合物以防止被胃酸裂解。用於製備此類調配物之方法對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的。適合之材料亦可經市售購得。
脂質體懸浮液(包括但不限於靶向具有針對病毒抗原的單株抗體之經感染細胞的脂質體)亦為較佳的醫藥學上可接受之載劑。可根據熟習此項技術者已知之方法製備此等脂質體懸浮液，舉例而言，如美國專利案第4,522,811號(以引用之方式併入)中所描述。舉例而言，脂質體調配物可藉由將適當脂質(諸如硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺、硬脂醯基磷脂醯基膽鹼、花生醯(arachadoyl)磷脂醯基膽鹼及膽固醇)溶解於隨後蒸發之無機溶劑中來製備，留下容器表面上之乾燥脂質薄膜。隨後將活性化合物之水溶液引入容器中。隨後用手旋動容器以使脂質材料自容器之側面脫離且使脂質聚集物分散，進而形成脂質體懸浮液。例示性方法 在某些實施例中，本發明係關於一種治療選自由以下組成之群的疾病或病狀之方法：發炎性腸病、迴腸肛門吻合術、嗜酸性食道炎、胰臟炎、胰島素依賴型糖尿病、乳房炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘、移植物抗宿主疾病、慢性肺發炎疾病、HIV及血液腫瘤，該方法包含以下步驟：向對其有需要之個體投與治療有效量之前述化合物中的任一者。
在某些實施例中，疾病或病狀為發炎性腸病。在某些實施例中，發炎性腸病為結腸炎、克隆氏病、迴腸炎、乳糜瀉、非熱帶性口瘡、與血清陰性關節病相關之腸病、胃腸炎或結腸袋炎。
在某些實施例中，疾病或病狀為結腸炎；且結腸炎為潰瘍性結腸炎、顯微結腸炎(microscopic colitis)或膠原性結腸炎。
在某些實施例中，疾病或病狀為結腸袋炎；且結腸袋炎為直腸結腸切除術之結果。
在某些實施例中，疾病或病狀為胃腸炎。在某些實施例中，胃腸炎為嗜酸性胃腸炎。
在某些實施例中，疾病或病狀為嗜酸性食道炎。
在某些實施例中，疾病或病狀為慢性肺發炎疾病。在某些實施例中，慢性肺發炎疾病為間質纖維化。在某些實施例中，間質纖維化為過敏性肺炎、膠原蛋白疾病或類肉瘤病。
在某些實施例中，疾病或病狀為血液腫瘤。在某些實施例中，血液腫瘤係選自由以下組成之群：急性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)及多發性骨髓瘤。
在某些實施例中，本發明係關於前述方法中之任一者，其中個體為哺乳動物。在某些實施例中，本發明係關於前述方法中之任一者，其中個體為人類。示例 現已大體描述本發明，參考以下實例將更容易理解本發明，該等實例包括僅出於說明本發明之某些態樣及實施例之目的且不意欲限制本發明。
實例 1. 用於合成 α4β 7 抑制劑之通用流程 通用程序 鈴木偶合 (Suzuki Coupling)
Figure 02_image189
在90℃下在N2 氛圍下將芳基溴(1當量)、
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(2當量)、PdCl2 (dppf) (0.05當量)及K3 PO4 (2當量)於DME及H2 O (10:1比率)中之混合物攪拌30分鐘。混合物經矽藻土過濾，在真空中濃縮且藉由矽膠管柱純化，得到所需產物。
醯胺鍵形成
Figure 02_image191
在室溫下將醯胺(1當量)、酸(1當量)、EDCI (1.5當量)、HOBt (1.5當量)及DIEA (3.0當量)於DMF中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱純化殘餘物以提供所需產物。
酯水解
Figure 02_image193
在室溫下用含LiOH-H2 O (7當量)之MeOH:H2 O (3:1比率)處理酯2小時。用1 N HCl將溶液調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC條件純化殘餘物。分析方法 LCMS 分析方法 使用LC/MS條件分析最終化合物，用UV偵測器在214 nm及254 nm處監測，且用質譜法在ESI+電離模式中掃描110-800 amu。
LC/MS A： 管柱：XBridge C18，4.6×50 mm，3.5 µm；移動相：A水(10 mM碳酸氫銨)，B CH3 CN；梯度：在1.4 min內B為5%-95%，隨後保持1.6 min；流動速率：1.8 mL/min；烘箱溫度50℃。
LC/MS B： 管柱：SunFire C18，4.6×50 mm，3.5 µm；移動相：A水(0.01% TFA)，B CH3 CN；梯度：在1.5 min內B為5%-95%，隨後保持1.5 min；流動速率：2.0 mL/min；烘箱溫度50℃。
LC/MS C：管柱：XBridge C18，4.6×50 mm，3.5 µm；移動相：A水(10 mM碳酸氫銨)，B CH3 CN；梯度：在1.5 min內B為5%-95%，隨後保持1.5 min；流動速率：1.8 mL/min；烘箱溫度50℃。
LC/MS D： 管柱：Poroshell 120 EC-C138，4.6×30 mm，2.7 µm；移動相：A水(0.01% TFA)，B CH3 CN (0.01% TFA)；梯度：在1.2 min內B為5%-95%，隨後保持1.8 min；流動速率：2.2 mL/min；烘箱溫度50℃。製備型 HPLC 方法 將粗樣品溶解於MeOH中且使用Gilson 215儀器藉由製備型HPLC純化，偵測波長214 nm：
製備型HPLC A：管柱：XBridge C18，21.2*250 mm，10 µm；移動相：A水(10 mM碳酸氫銨)，B CH3 CN；梯度溶離如本文中所示；流動速率：20 mL/min。
製備型HPLC B：管柱：XBridge C18，21.2*250 mm，10 µm；移動相：A水(10 mM甲酸)，B CH3 CN；梯度溶離如本文中所示；流動速率：20 mL/min。製備型對掌性 SFC 方法 使用SFC-80 (Thar，Waters)儀器藉由對掌性製備型SFC將外消旋及/或非對映異構產物分離成個別對映異構體，偵測波長214 nm：
製備型對掌性SFC A：管柱：(R,R)-Whelk-O1，20*250mm，5 µm (大賽璐(Decial))，管柱溫度：35℃，移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)=60/40，流動速率：80 g/min，背壓：100巴(bar)。
製備型對掌性SFC B：管柱：AD 20*250mm，10 µm (大賽璐)，管柱溫度：35℃。
移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)=60/40，流動速率：80 g/min，背壓：100巴。
製備型對掌性SFC C：管柱：AS 20*250mm，10 µm (大賽璐)，管柱溫度：35℃。
移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)=60/40，流動速率：80 g/min，背壓：100巴。
製備型對掌性SFC D：管柱：OD 20*250mm，5 µm (大賽璐)，管柱溫度：35℃。
移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)=60/40，流動速率：80 g/min，背壓：100巴。
製備型對掌性SFC E：管柱：(S,S)-Whelk-O1，20*250mm，5 µm (大賽璐)，管柱溫度：35℃，移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)=60/40，流動速率：80 g/min，背壓：100巴。
製備型對掌性SFC F：管柱：OZ 20*250mm，5 µm (大賽璐)，管柱溫度：35℃。
移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)=60/40，流動速率：80 g/min，背壓：100巴。分析製備型 SFC 方法 使用SFC-80 (Thar，Waters)儀器藉由對掌性SFC分析對掌性產物，偵測波長214 nm：
對掌性SFC A：管柱：(R,R)-Whelk-O1，4.6*100mm，5 µm (大賽璐)，管柱溫度：40℃，移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)，等度溶離如本文中所示，流動速率：4 g/min，背壓：120巴。
對掌性SFC B：管柱：AD 4.6*100mm，5 µm (大賽璐)，管柱溫度：40℃。
移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)，等度溶離如本文中所示，流動速率：4 g/min，背壓：120巴。
對掌性SFC C：管柱：AS 4.6*100mm，5 µm (大賽璐)，管柱溫度：40℃。
移動相：CO2 /甲醇(0.2%甲醇氨)，等度溶離如本文中所示，流動速率：4 g/min，背壓：120巴。實例 2. 製備中間物 (R)-2- 溴 -4- 甲基戊酸
Figure 02_image195
在0℃下將NaNO2 (62.7 g，909 mmol)於H2 O (200 mL)中之溶液添加至含化合物D-白胺酸(75.0 g，572 mmol)之HBr (6.0 M，850 mL)中。在20℃下攪拌反應物14小時。合併兩批反應物，且隨後用乙酸乙酯(1.5 L×2)萃取反應混合物，用NaCl飽和水溶液(1.0 L×2)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈紅色油狀之化合物(R)-2-溴-4-甲基戊酸(230 g，粗產物)。NMR (400 MHz CDCl3 ) 11.18 (br, 1H), 4.30 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 1.94 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.80-1.87 (m, 1H), 0.93-0.99 (m, 6H)。(S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡嗪 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image197
在N2 下在25℃下將化合物吡嗪-2(1H)-酮(11.0 g，114 mmol)、Mg(OtBu)2 (39.0 g，229 mmol)及t-BuOK (13.5 g，120 mmol)於THF (220 mL)中之溶液攪拌20分鐘。且隨後將化合物(R)-2-溴-4-甲基戊酸(33.5 g，172 mmol)逐滴添加至混合物中。在25℃下攪拌反應物20小時。將HCl (3.0 M，153 mL)逐滴添加至混合物中。有機相用鹽水(100 mL)洗滌，且濃縮。藉由SFC (儀器：Thar SFC80製備型SFC；管柱：Chiralpak AD-H 250*30 mm內直徑(i.d.) 5u；移動相：A用於CO2 及B用於IPA (0.1% NH3 H2 O)；梯度：B%=35%；流動速率：75 g/min；波長：220 nm；管柱溫度：40℃；系統背壓：100巴；循環時間：13 min；注射量：每次注射105 mg)純化混合物，得到呈黃色固體之(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡嗪-1(2H)-基)戊酸(15.0 g，61.7%產率，99.0%純度)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.96 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.14-5.21 (m, 1H), 1.84-1.92(m, 2H), 1.17-1.26 (m, 1H), 0.82-0.84 (m, 6H)。4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image199
向KOtBu (24.8 g，221 mmol)及Mg(Ot-Bu)2 (71.7 g，421 mmol)於THF (300 mL)中之混合物添加吡啶-2(1H)-酮(20.0 g，210 mmol)。攪拌混合物10分鐘。在N2 下將化合物(R)-2-溴-4-甲基戊酸(61.5 g，315 mmol)逐滴添加至反應混合物，隨後在25℃下攪拌40小時。將反應物冷卻至0℃且逐滴添加HCl (3.0 M)以將混合物調節至pH=3。隨後，分離混合物且在真空中濃縮有機層。藉由過濾收集白色固體產物，用EA (100 mL×2)及水(100 mL×2)洗滌，得到呈灰白色固體之化合物4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(27.0 g，60.7%產率，99.0%純度)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.06 (br, 1H), 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.39-7.43 (m, 1H), 6.38 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.26-6.23 (m, 1H), 5.32-5.36 (m, 1H), 2.06-2.01 (m, 1H), 1.85-1.88 (m, 1H), 1.30-1.20 (m, 1H), 0.86-0.83 (m, 6H)。(S)-4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image201
在N2 下向KOtBu (21.6 g，192 mmol)及Mg(Ot-Bu)2 (62.5 g，367 mmol)於THF (300 mL)中之溶液中添加化合物4-甲基吡啶-2(1H)-酮(20.0 g，183 mmol)。攪拌反應混合物10分鐘。將(R)-2-溴-4-甲基戊酸(53.6 g，275 mmol)逐滴添加至反應混合物。隨後，在25℃下攪拌所得反應混合物40小時。將反應混合物冷卻至0℃且添加HCl (3.0 M)以將混合物調節至pH=3。使用旋轉蒸發器濃縮有機層且藉由過濾收集灰白色固體產物。將水(50 mL)添加至固體且將其攪拌2小時。過濾反應混合物。收集濾餅，得到呈灰白色固體之(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(21.0 g，51.1%產率，99.5%純度，99.0%ee)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 13.00 (br, 1H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.19 (s, 1H), 6.10 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.30-5.33 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.99-2.03 (m, 1H), 1.82-1.86 (m, 1H), 1.24-1.26 (m, 1H), 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。(S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image203
向(R)-2-溴-4-甲基戊酸(238 mg，1.2 mmol)於無水THF (10 mL)中之溶液中添加(t-BuO)2 Mg (425mg，2.5 mmol)且在N2 氛圍下在30℃下攪拌溶液1小時。隨後添加4-(三氟乙基)吡啶-2-醇(200 mg，1.2 mmol)及t-BuOK (134 mg，1.2 mmol)，且在N2 氛圍下在70℃下攪拌反應混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用稀HCl (4 M)溶液酸化至pH=5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC B (30-60% MeCN)純化殘餘物以提供呈白色固體之所需產物(S)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸(150 mg)。產率44% (98%純度，UV=214 nm，ESI 278 (M+H)+ )。步驟 1 ： 3- 甲氧基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image205
在室溫下將4-甲基吡啶-2(1H)-酮(350 mg，3.2 mmol)、2-溴-3-丙酸甲酯(690 mg，3.5 mmol)及K2 CO3 (880 mg，6.4 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物攪拌18小時。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之產物3-甲氧基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(200 mg)。產率28% (97%純度，UV=214 nm，ESI 226 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 3- 甲氧基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙酸
Figure 02_image207
在室溫下用含LiOH-H2 O (180 mg，4.4 mmol)之THF (8 mL)及H2 O (2 mL)將3-甲氧基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(200 mg，0.89 mmol)處理18小時。反應物用1 N HCl酸化至pH=3。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物3-甲氧基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙酸(95 mg)。產率50% (93%純度，UV=214 nm，ESI 212 (M+H)+ )。合成 2-(5- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-2- 苯基乙酸 步驟 1 ： 2-(5- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-2- 苯乙酸甲酯
Figure 02_image209
在室溫下將5-甲基-2-吡啶酮(1.463 g，13.40 mmol)、α-溴苯乙酸甲酯(2.291 g，10.00 mmol)及碳酸鉀(1.852 g，13.40 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(40 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮混合物且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化殘餘物，得到呈淡褐色油狀之所需產物2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯乙酸甲酯(2.5 g)。產率68% (97%純度，UV=214 nm，ESI 258 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(5- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-2- 苯基乙酸
Figure 02_image211
在室溫下用含LiOH-H2 O (2.3 g，54 mmol)之甲醇(134 mL)及水(27 mL)將2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯乙酸甲酯(2.5 g，9.6 mmol)處理16小時。反應物用1 N鹽酸酸化至pH=3。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B (30-65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酸(2.32 g)。產率84% (100%純度，UV=254 nm，ESI 244 (M+H)+ )。合成 (S)-3-(2- 溴吡啶 -4- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image213
(S,E)-N-((2- 溴吡啶 -4- 基 ) 亞甲基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺
Figure 02_image215
在N2 下在20℃下向2-溴異菸醛(68.0 g，365 mmol)及化合物(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(48.7 g，402 mmol)於THF (400 mL)中之混合物一次性添加Ti(OEt)4 (125 g，548 mmol，113 mL)。在35℃下攪拌混合物1小時。將水(200 mL)及EtOAc (200 mL)添加至混合物中且攪拌5分鐘。過濾混合物且用EtOAc (200 mL)洗滌濾餅。將合併之有機層用水(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥且在真空中濃縮，得到呈黃色固體之化合物(S,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(90.0 g，粗產物)。(R,E)-N-((2- 溴吡啶 -4- 基 ) 亞甲基 )-2- 甲基丙烷 -2- 亞磺醯胺
Figure 02_image217
以類似方式，使100 g 的2-溴異菸醛與(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺反應以提供100公克的(R,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺。(R)-3-(2- 溴吡啶 -4- 基 )-3-(((S)- 第三丁基亞磺醯基 ) 胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image219
在N2 下在20℃下向Zn (142 g，2.18 mol)於THF (900 mL)中之混合物一次性添加CuCl (46.2 g，466 mmol)。在60℃下攪拌混合物1小時。將反應混合物冷卻至20-30℃，且在N2 下在20-30℃下向混合物中饋入2-溴乙酸乙酯(129 g，778 mmol)。在50-60℃下攪拌混合物1小時。在N2 下在0-10℃下將(S,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(90 g，311 mmol)於無水THF (50 mL)中之溶液添加至反應混合物中。將MTBE (500 mL)及含檸檬酸(10 g)之水(200 mL)溶液添加至混合物中。用MTBE (500 mL及300 mL)萃取水層。合併之有機相用鹽水(500 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((S)-第三丁基亞磺醯基)胺基)丙酸乙酯(80.0 g，粗產物)。(S)-3-(2- 溴吡啶 -4- 基 )-3-(((R)- 第三丁基亞磺醯基 ) 胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image221
以類似方式，將45 g×3 (R,E)-N-((2-溴吡啶-4-基)亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺進行反應以提供200公克 (S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((R)-異丙基亞磺醯基)胺基)丙酸乙酯。(R)-3- 胺基 -3-(2- 溴吡啶 -4- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image223
在20℃下向化合物(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((S)-第三丁基亞磺醯基)胺基)丙酸乙酯(80.0 g，212 mmol)於EtOAc (150 mL)中之混合物一次性添加HCl/EtOAc (4.00 M，212 mL)。在20℃下攪拌混合物1小時。添加水(400 mL)且分離水層。用Na2 CO3 將水層調節至pH=8-9，且用EtOAc (400 mL，250 mL)萃取兩次。用鹽水(200 mL)洗滌合併之有機相，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之化合物(R)-3-胺基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯(55.0 g，粗產物)。(S)-3- 胺基 -3-(2- 溴吡啶 -4- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image225
以類似方式，將150 g的(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(((R)-第三丁基亞磺醯基)胺基)丙酸乙酯進行反應以提供90公克的(S)-3-胺基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯。(R)-3-(2- 溴吡啶 -4- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image227
在25℃下向(R)-3-胺基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯(55.0 g，201 mmol)於THF (550 mL)中之混合物中一次性添加含Na2 CO3 (42.6 g，402 mmol)之H2 O (550 mL)混合物。在25℃下攪拌混合物，隨後將(Boc)2 O (48.3 g，221 mmol，50.8 mL)添加至混合物。在25℃下攪拌混合物1小時。TLC (石油醚/乙酸乙酯=3/1，Rf =0.5)顯示反應完成。將水(400 mL)及CH2 Cl2 (400 mL)添加至混合物中。分離混合物且用CH2 Cl2 (400 mL×2)萃取水溶液。合併之有機相用鹽水(400 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析法(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=20/1至3/1)純化殘餘物，得到呈黃色固體之粗產物(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸乙酯(30 g)，其藉由SFC進一步分離得到呈灰白色固體(21 g，97%純度)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.32-8.33 (m, 1 H), 7.44 (s, 1H), 7.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.05 (s, 1 H), 4.03-4.18 (m, 2 H), 2.83 (d, J = 3.6 Hz, 2 H), 1.45 (m, 9 H), 3.19-3.21 (m, 3 H)。(S)-3-(2- 溴吡啶 -4- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image229
以類似方式，將90 g的(S)-3-胺基-3-(2-溴吡啶-4-基)丙酸乙酯進行反應以提供40公克(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸乙酯。
3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image231
步驟 1 ： 3- 胺基 -3-(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image233
在25℃下向5-溴菸醛(180 g)於EtOH (414 mL，2.30×按體積計)中添加丙二酸(100 g)及NH4 OAc (157 g)。將混合物加熱至75-80℃且攪拌4小時。過濾混合物且用冷EtOH (180 mL)洗滌所得固體兩次。濃縮濾液，得到呈白色固體之3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(246 g，粗產物)。1 H NMR 400 MHz CDCl3 δ 8.62 - 8.58 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 4.28 (s, 1H), 2.69 (s, 1H), 2.50 (s, 1H)。合成 3- 胺基 -3-(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image235
在0℃下向含3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(50.0 g，1.00×按重量計)之MeOH (800 mL，16.0×按體積計)中添加SOCl2 (36.4 g，0.73×按重量計)。將混合物加熱至10-20℃且在10-20℃下攪拌16小時。濃縮混合物得到粗產物。向粗物質中添加水(500 mL)及CH2 Cl2 (500 mL，10.0×按體積計)。分離所得相，且用CH2 Cl2 (250 mL)萃取水溶液兩次。將NaHCO3 添加至水層中以調節pH=8-9，且用CH2 Cl2 (500 mL)及CH2 Cl2 (250 mL)萃取五次。合併有機層，經Na2 SO4 乾燥且濃縮，得到呈黃色固體之3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(23.6 g，40.2%產率，89.9%純度)。1 H NMR: 400 MHz CDCl3 δ 8.56 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.91 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.81 (s, 2H)。合成 3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image237
在10-20℃下向3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(23.4 g)於THF (234 mL)中添加含Na2 CO3 (19.1 g，0.82×按重量計)之水(234 mL)溶液。將Boc2 O (21.7 g)添加至混合物，隨後在10-20℃下攪拌16小時。將水(234 mL)及CH2 Cl2 (234 mL)添加至混合物中。分離相且用CH2 Cl2 (234 mL)萃取水溶液兩次。合併有機相且濃縮以提供3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯。經由SFC純化得到呈灰白色固體之兩種立體異構體A1 (97.6%純度)及A2 (97.0%純度)，其藉由1 H NMR、LCMS確認。
化合物A1 1 H NMR δ 8.58 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.87 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H)。
化合物A2 1 H NMR δ 5.58 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.87 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H)。
合成 (S)-3- 胺基 -3-(2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯 步驟 1 ： (S)-3- 胺基 -3-(3- 溴苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image239
在0℃下向(S)-3-胺基-3-(3-溴苯基)丙酸(150 mg，0.62 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加SOCl2 (2 mL)。將溶液加熱至65℃且攪拌16小時。在真空中移除溶劑，且將殘餘物溶解於NaHCO3 溶液中。用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機層，得到呈無色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯(150 mg)。產率95% (86%純度，UV=214 nm，ESI 258 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image241
在微波中在100℃下在N2 氛圍下將(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯(150 mg，0.58 mmol)、鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(118 mg，0.87 mmol)、PdCl2 (dppf) (22 mg，0.029 mmol)及K2 CO3 (240 mg，1.74 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌1小時。混合物經矽藻土過濾，且在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=3:1)純化殘餘物以提供呈白色固體之所需產物(S)-3-胺基-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(110 mg)。產率72% (92%純度，UV=254 nm，ESI 270 (M+H)+ )。實例 3. 製 備本發明之代表性化合物 製備 ((3S)-3-(3',5'- 二甲基 -[3,4'- 聯吡啶 ]-5- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 ( 化合物 1-D1 及 1-D2) 步驟 1 ： (S)-(5-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ) 吡啶 -3- 基 )
Figure 108112877-A0304-12-01
酸
Figure 02_image243
在95℃下將(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(300 mg，0.83 mmol)、B2 (Pin)2 (254 mg，1.00 mmol)、PdCl2 (dppf) (59 mg，0.08 mmol)及KOAc (325 mg，3.32 mmol)於二噁烷(5 mL)中之混合物攪拌3小時。在真空中濃縮溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:2)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(S)-(5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)吡啶-3-基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(200 mg)。產率74% (75%純度，UV=254 nm，ESI 325 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(3',5'- 二甲基 -[3,4'- 聯吡啶 ]-5- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image245
在100℃下將(S)-(5-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)吡啶-3-基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(200 mg，0.62 mmol)、4-溴-3,5-二甲吡啶(230 mg，1.23 mmol)、PdCl2 (dppf) (88 mg，0.12 mmol)及K2 CO3 (510 mg，3.69 mmol)於二噁烷(5 mL)及H2 O (1 mL)中之混合物攪拌3小時。添加水(20 mL)且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。在真空中濃縮合併之有機相且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 5:4)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-5-基)丙酸甲酯(300 mg)。產率63% (92%純度，UV=254 nm，ESI 386 (M+H)+ )。
步驟 3 ： (S)-3- 胺基 -3-(3',5'- 二甲基 -[3,4'- 聯吡啶 ]-5- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image247
在室溫下用4N HCl/二噁烷(3 mL)將(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-5-基)丙酸酯(300 mg，0.77 mmol)處理2小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色油狀之所需產物(S)-3-胺基-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-5-基)丙酸甲酯(350 mg，粗產物)。(64%純度，UV=254 nm，ESI 286 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3S)-3-(3',5'- 二甲基 -[3,4'- 聯吡啶 ]-5- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image249
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-5-基)丙酸甲酯(250 mg，0.87 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(196 mg，0.87 mmol)、EDCI (249 mg，1.3 mmol)、HOBt (176 mg，1.3 mmol)及DIEA (335 mg，2.6 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化殘餘物以提供呈棕色油狀之所需產物(3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(300 mg)。產率70% (94%純度，UV=254 nm，ESI 491 (M+H)+ )。
步驟 5 ： ((3S)-3-(3',5'- 二甲基 -[3,4'- 聯吡啶 ]-5- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image251
在室溫下用含LiOH-H2 O (72 mg，1.83 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(3',5'-二甲基-[3,4'-聯吡啶]-5-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(300 mg，0.61 mmol)處理2小時。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30-80% MeCN)純化殘餘物，得到呈黃色固體之化合物B1 (50 mg)及B2 (55 mg)。
化合物 B1 LC/MS A：100%純度，UV= 214 nm，Rt=1.40 min，ESI 477 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.61 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.24 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.25 - 6.23 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 9.6, 6.6 Hz, 1H), 5.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.94 - 1.92 (m, 5H), 1.51 - 1.40 (m, 1H), 0.98 - 0.95 (m, 6H)。
化合物 B2 LC/MS A：100%純度，UV= 214 nm，Rt=1.43 min，ESI 477 (M+H)+ 。1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.67 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.36 (s, 2H), 8.32 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.30 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 9.3, 6.8 Hz, 1H), 5.36 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 2.88 - 2.84 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.08 (s, 6H), 1.85 - 1.81 (m, 2H), 1.32 - 1.31 (m, 1H), 0.91 - 0.88 (m, 6H)。
製備 (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 步驟 1 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image253
在室溫下將(S)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸(150 mg，0.54 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(169 mg，0.59 mmol)、HATU (246 mg，0.65 mmol)及DIEA (0.2 mL)於DMF (5 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮混合物且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(200 mg)。產率68% (100%純度，UV=214 nm，ESI 544 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image255
在室溫下用含LiOH-H2 O (74 mg，1.84 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(200 mg，0.37 mmol)處理2小時。用1 N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸(130 mg，67%產率)。藉由製備型對掌性SFC A分離非對映異構混合物，得到呈白色固體之化合物C1 (40 mg)及C2 (20 mg)。
化合物 C1 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=2.01 min，ESI 530 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.83 (s, 1H), 6.57 (dd, J = 7.7, 2.0 Hz, 1H), 5.78 - 5.68 (m, 1H), 5.39 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 2.91- 2.80 (m, 2H), 2.02 (s, 6H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.38 - 1.33 (m, 1H), 0.98 - 0.88 (m, 6H)。對掌性SFC A (15% MeOH)：ee 100%，Rt=2.49 min。
化合物 C2 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.98 min，ESI 530 (M+H)+ 。1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.19 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 - 7.12 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 6.53 (dd, J = 7.3, 2.0 Hz, 1H), 5.72 (dd, J = 9.2, 6.9 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.85 (t, J = 15.6 Hz, 2H), 2.04 - 1.92 (m, 5H), 1.85 (s, 3H), 1.55 - 1.42 (m, 1H), 0.98 - 0.86 (m, 6H)。對掌性SFC A (15% MeOH)：ee 98%，Rt=3.59 min。
製備化合物 D1 及 D2 步驟 1 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image257
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(100 mg，0.27 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊酸(97 mg，0.35 mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(77 mg，0.40 mmol)、1-羥基苯并三唑(40 mg，0.30 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.22 mL，1.35 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物攪拌16小時。在真空中濃縮混合物且藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:2)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(54 mg，產率23%) (Rf = 0.75，76%純度，UV=254 nm，ESI 544 (M+H)+ )及呈無色油狀之(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(31 mg，產率17%) (Rf =0.71，86%純度，UV=254 nm，ESI 544 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2R)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image259
在氫氣氛圍下在40℃下將(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(54 mg，0.099 mmol)及鈀/活性碳(11 mg，10%，0.0099 mmol)於無水乙醇(15 mL)中之混合物攪拌隔夜。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(63 mg)。產率95% (92%純度，UV=254 nm，ESI 548 (M+H)+ )。
步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2R)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image261
在室溫下用含LiOH-H2 O (51 mg，1.22 mmol)之甲醇(9.6 mL)及水(0.61 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(67 mg，0.12 mmol)處理2小時。反應物用1 N鹽酸酸化至pH=3。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B (30-65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物D1 (9 mg)及D2 (4 mg)。
化合物 D1 LC/MS E：98%純度，UV=214 nm，Rt=1.74 min，ESI 534 (M+H)+ ，1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ: 8.55 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 9.0, 6.5 Hz, 1H), 3.59 - 3.55 (m, 1H), 3.33 - 3.28 (m, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 2H), 2.84 - 2.79 (m, 1H), 2.66 (ddd, J = 17.5, 6.0, 1.5 Hz, 1H), 2.50 (dd, J = 17.3, 10.8 Hz, 1H), 2.14 - 2.11 (m, 1H), 2.00 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.86 (ddd, J = 26.0, 12.0, 5.0 Hz, 1H), 1.74 - 1.68 (m, 1H), 1.63 - 1.58 (m, 1H), 1.47 - 1.41 (m, 1H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。
化合物 D2 LC/MS E：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.76 min，ESI 534 (M+H)+ ，1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ: 8.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 9.0, 6.5 Hz, 1H), 3.46 - 3.42 (m, 1H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 2.90 - 2.85 (m, 3H), 2.71 - 2.66 (m, 1H), 2.46 (dd, J = 17.0, 10.3 Hz, 1H), 2.19 - 2.15 (m, 1H), 2.00 (d, J = 7.5 Hz, 6H), 1.83 - 1.76 (m, 1H), 1.72 - 1.66 (m, 1H), 1.61 - 1.55 (m, 1H), 1.43 - 1.37 (m, 1H), 0.91 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。製備化合物 E 步驟 1 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image263
在氫氣氛圍下在40℃下將(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(31 mg，0.057 mmol)及鈀/活性碳(10%，11 mg，0.0099 mmol)於無水乙醇(15 mL)中之混合物攪拌隔夜。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2S)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(23 mg)。產率74% (92%純度，UV=254 nm，ESI 548 (M+H)+ )。步驟 2 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image265
在室溫下用含LiOH-H2 O (10 mg，0.25 mmol)之甲醇(4 mL)及水(1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((2R)-4-甲基-2-(2-側氧基-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(23 mg，0.042 mmol)處理2小時。反應物用1 N鹽酸酸化至pH=3。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B (30-65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物E (2 mg)。
化合物 E LC/MS E：98%純度，UV=214 nm，Rt=1.72 min，ESI 534 (M+H)+ ；1 H 1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ: 8.55 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 9.0, 6.5 Hz, 1H), 3.59 - 3.55 (m, 1H), 3.33 - 3.28 (m, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 2H), 2.84 - 2.79 (m, 1H), 2.66 (ddd, J = 17.5, 6.0, 1.5 Hz, 1H), 2.50 (dd, J = 17.3, 10.8 Hz, 1H), 2.14 - 2.11 (m, 1H), 2.00 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.86 (ddd, J1 = 26.0, 12.0, 5.0 Hz, 1H), 1.74 - 1.68 (m, 1H), 1.63 - 1.58 (m, 1H), 1.47 - 1.41 (m, 1H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。製備化合物 F 步驟 1 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-2- 苯基乙醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image267
在室溫下將2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙酸(478 mg，1.96 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(300 mg，0.94 mmol)、O-(7-氧雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(764 mg，2.01 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.93 mL，5.61 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)中之混合物攪拌66小時。在真空中濃縮混合物且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 2:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙醯胺基)丙酸甲酯(200 mg)。產率42% (100%純度，UV=214 nm，ESI 510 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((R)-2-(5- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-2- 苯基乙醯胺基 ) 丙酸及 (S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((S)-2-(5- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-2- 苯基乙醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image269
在室溫下用含LiOH-H2 O (394 mg，9.4 mmol)之甲醇(10 mL)及水(1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙醯胺基)丙酸甲酯(200 mg，0.39 mmol)處理16小時。反應物用1 N HCl酸化至pH=3。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30-65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙醯胺基)丙酸(86 mg，43%產率) (100%純度，UV=254 nm，ESI 496 (M+H)+ )及(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙醯胺基)丙酸(81 mg，41%產率) (100%純度，UV=254 nm，ESI 496 (M+H)+ )。
步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2R)-2-(5- 甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 )-2- 苯基乙醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image271
在氫氣氛圍下在40℃下將(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙醯胺基)丙酸(76 mg，0.15 mmol)及鈀/活性碳(10%，16 mg，0.015 mmol)於無水乙醇(50 mL)中之混合物攪拌隔夜。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，且隨後藉由製備型HPLC A (30-65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物化合物 F (56 mg)。
化合物 F LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.60 min，ESI 500 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.53 (dd, J = 5.0, 2.0 Hz, 1H), 8.22 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 7.56 (dt, J = 11.0, 2.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.23 (m, 3H), 7.19 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.14 - 7.11 (m, 4H), 6.28 (d, J = 30.0 Hz, 1H), 5.50 - 5.46 (m, 1H), 3.05 (dd, J = 12.0, 11.0 Hz, 1H), 2.94 - 2.78 (m, 3H), 2.54 - 2.41 (m, 2H), 1.97 (t, J = 2.8 Hz, 6H), 1.82 - 1.70 (m, 2H), 1.57 - 1.31 (m, 1H), 0.85 (dd, J = 21.3, 6.8 Hz, 3H)。製備 化合物 G 步驟 1 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2S)-2-(5- 甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 )-2- 苯基乙醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image273
在氫氣氛圍下在40℃下將(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((S)-2-(5-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-2-苯基乙醯胺基)丙酸(81 mg，0.16 mmol)及鈀/活性碳(17 mg，10%，0.016 mmol)於無水乙醇(50 mL)中之混合物攪拌16小時。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，且隨後藉由製備型HPLC A (30-65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物G (41 mg)。
化合物 G LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.57 min，ESI 500 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.60 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 3H), 7.32 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.19 (dd, J = 8.8, 1.5 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.32 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 5.52 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.02 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.86 - 2.83 (m, 3H), 2.41 (q, J = 4.5 Hz, 2H), 2.00 (d, J = 4.5 Hz, 6H), 1.78 - 1.69 (m, 2H), 1.48 - 1.31 (m, 1H), 0.83 (dd, J = 16.8, 6.8 Hz, 3H)。製備化合物 H1 及 H2 步驟 1 ： 3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(3- 甲氧基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image275
在室溫下將3-甲氧基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙酸(95 mg，0.45 mmol)、3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(130 mg，0.45 mmol)、HOBT (91 mg，0.675 mmol)、EDCI (130 mg，0.675 mmol)及DIEA (145 mg，1.13 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物攪拌18小時。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 3:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體之產物3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(3-甲氧基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙醯胺基)丙酸甲酯(150 mg)。產率70% (78%純度，UV=254 nm，ESI 477 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(3- 甲氧基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image277
在室溫下用含LiOH-H2 O (66 mg，1.6 mmol)之THF (8 mL)及H2 O (1 mL)將3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(3-甲氧基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙醯胺基)丙酸甲酯(150 mg，0.32 mmol)處理2小時。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B (30-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物H1 (10 mg)及H2 (30 mg)。
化合物 H1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.64 min，ESI 463 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.60 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.13 - 7.09 (m, 1H), 7.05 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 6.99 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.30 (s, 1H), 6.20 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 7.6, 5.1 Hz, 1H), 5.38 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.92 (ddd, J = 16.0, 10.8, 6.4 Hz, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.86 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.93 (s, 3H)。
化合物 H2 LC/MS A：98%純度，UV=214 nm，Rt=1.66 min，ESI 463 (M+H)+ 。1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.63 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.10 (dt, J = 16.6, 6.2 Hz, 3H), 7.01 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.35 (s, 1H), 6.24 (dd, J = 7.2, 1.9 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 6.7, 4.9 Hz, 1H), 5.37 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 10.6, 6.8 Hz, 1H), 3.82 - 3.79 (m, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.83 - 2.78 (m, 2H), 2.23 - 2.19 (m, 3H), 1.99 (d, J = 3.5 Hz, 6H)。製備化合物 I 步驟 1 ： (S)-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image279
在室溫下將(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(100 mg，0.38 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(104 mg，0.38 mmol)、EDCI (145 mg，0.76 mmol)、HOBt (103 mg，0.76 mmol)及DIEA (129 mg，1.0 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌16小時。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物以提供呈棕色油狀之所需產物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(75 mg)。產率39% (85%純度，UV=254 nm，ESI 512.1 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image281
在室溫下用含LiOH-H2 O (25.2 mg，0.6 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(75 mg，0.15 mmol)處理2小時。用1 N HCl將溶液調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(30 mg)。
化合物 I LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.69 min，ESI 498.1 (M+H)+ 。
1 H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.45(s, 1H), 8.28-8.26(m, 1H), 7.88-7.86(m, 1H), 7.72(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61-7.57(m, 1H), 7.43(t, J = 15.5Hz, 1H), 7.37(d, J = 7.5Hz, 1H), 7.34(s, 1H), 5.29-7.19(m, 5H), 5.74(m, 1H), 5.77-5.74(m, 1H), 5.41(t, J = 15Hz, 1H), 2.93-2.83(m, 2H), 2.26(s, 3H), 2.02-1.92(m, 2H), 1.47-1.41(m, 1H), 0.95 - 0.91 (m, 6H)。
製備化合物 J1 步驟 1 ： (S)-3-((R)-2- 羥基 -4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image283
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(250 mg，0.93 mmol)、(R)-2-羥基-4-甲基戊酸(123 mg，0.93 mmol)、EDCI (382 mg，2.0 mmol)、HOBt (270 mg，2.0 mmol)及DIPEA (258 mg，2.0 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌16小時。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=2:1)純化殘餘物以提供呈無色油狀之所需產物(S)-3-((R)-2-羥基-4-甲基戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(160 mg)。產率45% (97%純度，UV=254 nm，ESI 384.1 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)- 3-((R)-4- 甲基 -2-( 甲基磺醯氧基 ) 戊醯胺基 )-3-(2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image285
向(S)-3-((R)-2-羥基-4-甲基戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(130 mg，0.34 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中逐滴添加TEA (101 mg，1.0mmol))及甲磺醯氯(46 mg，0.4 mmol)，且在室溫下攪拌3小時。添加水(10 mL)，且用DCM (10 mL×3)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機相，得到呈無色油狀之粗產物(S)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(323 mg)。產率62% (100%純度，UV=254 nm，ESI 462.1 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。
步驟 3 ： (3S)-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(2'- 甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image287
向(S)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊醯胺基)-3-(2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(130 mg粗產物)於MeCN (10 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (69 mg，0.5 mmol)及吡啶-2(1H)-酮(38 mg，0.4 mmol)。在80℃下攪拌混合物16小時且過濾。在減壓下濃縮濾液，且藉由製備型HPLC A (40~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物J1a (30 mg)及J1b (40 mg)。化合物 J1a ：(100%純度，UV=254 nm，ESI 461.1 (M+H)+ )。化合物 J1b ： ( 100%純度，UV=254 nm，ESI 461.1 (M+H)+ )。
步驟 4 ：化合物 J1
Figure 02_image289
在室溫下用含LiOH-H2 O (25.2 mg，0.6 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將化合物 J1a (30 mg，0.065 mmol)處理2小時。用1 N HCl將溶液調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物化合物 J1 (20 mg)。
化合物 J1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.62 min，ESI 447.1 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.76 (m, J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 7.51 (m, 1H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.24 -7.18(m, 5H), 6.56 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.42 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 5.78-5.75(m, 1H), 5.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.90-2.79 (m , 2H), 2.26 (s, 3H), 1.92 - 1.76 (m, 2H), 1.44 - 1.23 (m, 1H), 0.91-089 (m, 6H)。
步驟 5 ：化合物 J2
Figure 02_image291
在室溫下用含LiOH-H2 O (25.2 mg，0.6 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將化合物 J2a (40 mg，0.087 mmol)處理2小時。用1 N HCl將溶液調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物化合物 J2 (7 mg)。
化合物 J2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.66 min，ESI 447.1 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.83 - 7.68 (m, 1H), 7.63-7.55 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.31 - 7.09 (m, 6H), 7.08 - 6.66 (m, 3H), 5.41 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 5.33 - 5.25 (m, 1H), 2.92 - 2.72 (m, 2H), 2.20 (s, 1H), 2.13 (s, 2H), 1.99 - 1.82 (m, 2H), 1.73-1.66 (m, 1H), 1.06 - 0.87 (m, 6H)。
製備化合物 K 步驟 1 ： (S)-3-(2',6'- 二氟聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image293
在110℃下在微波中在N2 氛圍下將(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.2 mmol)、2,6-二氟苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(47 mg，0.3 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (15 mg，0.02 mmol)及K2 CO3 (83 mg，0.6 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌1小時。混合物經矽藻土過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:3)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(2',6'-二氟聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(60 mg)。產率58% (93%純度，UV=214 nm，ESI 534 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3-(2',6'- 二氟聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image295
在室溫下用LiOH-H2 O (14 mg，0.33 mmol)及H2 O (0.5 mL)將含(S)-3-(2',6'-二氟聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(60 mg，0.11 mmol)之THF (5 mL)處理16小時。用HCl (1 M)酸化混合物直至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(S)-3-(2',6'-二氟聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸(15 mg)。
化合物 K LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.87 min，ESI 520 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.45 (s, 1H), 8.27 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.92 - 7.82 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.51 - 7.33 (m, 5H), 7.17 - 7.01 (m, 2H), 5.77 (dd, J = 10.0, 6.5 Hz, 1H), 5.47 - 5.39 (m, 1H), 2.92 - 2.78 (m, 2H), 2.12 - 1.89 (m, 2H), 1.46 - 1.41 (m, 1H), 0.95 - 0.93 (m, 6H)。
製備化合物 L 步驟 1 ： (S)-3-(3- 溴苯基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image297
在室溫下將(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(860 mg，3.3 mmol)、(S)-3-胺基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯鹽酸鹽(980 mg，3.3 mmol)、EDCI (1.15 g，6 mmol)、HOBt (810 mg，6 mmol)及DIEA (1.29 g，10 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液攪拌12小時。將溶液用H2 O (10 mL×2)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在真空中移除濾液且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=2:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(1.5 g)。產率62% (97%純度，UV=214 nm，ESI 500.1 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (S)-3-(2'- 氰基聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H) 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image299
在90℃下在N2 氛圍下將(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.2 mmol)、2-氰苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(59 mg，0.4 mmol)、PdCl2 (dppf) (7 mg，0.01 mmol)及K3 PO4 (85 mg，0.4 mmol)於5 mL的DME及0.5 mL的H2 O中之混合物攪拌30分鐘。混合物經矽藻土過濾。在真空中移除濾液且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(2'-氰基聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(30 mg)。產率29% (60%純度，UV=214 nm，ESI 523 (M+H)+ )。步驟 3 ： (S)-3-(2'- 氰基聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image301
在室溫下用含LiOH-H2 O (7 mg，0.17 mmol)之3 mL的THF及1 mL的H2 O將(S)-3-(2'-氰基聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(30 mg，0.057 mmol)處理1小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(S)-3-(2'-氰基聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸(11 mg)。
化合物 L LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.81 min，ESI 509.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.44 (s, 1H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.85 (m, 2H), 7.78 - 7.75 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.64 - 7.47 (m, 7H), 5.77 (dd, J = 10.4, 6.0 Hz, 1H), 5.47 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.07 - 2.72 (m, 2H), 2.09 - 1.88 (m, 2H), 1.53 - 1.28 (m, 1H), 0.96 - 0.92 (m, 6H)。製備化合物 M 步驟 1 ： (S)-3-(2'- 氟 -6'- 甲氧基聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image303
在100℃下在微波中在N2 氛圍下將(S)-3-(3-溴苯基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(120 mg，0.24 mmol)、2-氟-6-甲氧基苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(62mg，0.36mmol)、Pd(dppf)Cl2 (18 mg，0.024 mmol)及K2 CO3 (100 mg，0.72 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌1小時。添加水(15 mL)，且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。在真空中濃縮合併之有機相。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:2)純化所得殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg)。產率76% (100%純度，UV=214 nm，ESI 546 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (S)-3-(2'- 氟 -6'- 甲氧基聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image305
在室溫下用含LiOH-H2 O (23 mg，0.54 mmol)之THF (10 mL)及H2 O (0.5 mL)將(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.18 mmol)處理16小時。用HCl (1 M)酸化混合物直至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC B (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之產物(S)-3-(2'-氟-6'-甲氧基聯苯-3-基)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)丙酸(40 mg)。
化合物 M LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.86 min，ESI 532 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.45 (s, 1H), 8.26 (dd, J = 8.1, 1.1 Hz, 1H), 7.93 - 7.79 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 1H), 7.44 - 7.25 (m, 5H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.81 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 10.1, 6.4 Hz, 1H), 5.47 - 5.32 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.95 - 2.71 (m, 2H), 2.13 - 1.85 (m, 2H), 1.58 - 1.33 (m, 1H), 0.94 - 0.92 (m, 6H)。製備化合物 M1 步驟 1 ： (S)-3-(3- 溴苯基 )-3-( 第三丁氧基羰基胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image307
在0℃下向(S)-3-胺基-3-(3-溴苯基)丙酸甲酯(6 g，23 mmol)及三乙胺(9.65 mL，69 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(5 g，23 mmol)且在20℃下攪拌反應物16小時。添加水且用DCM (70 mL×2)萃取溶液。有機相用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=10:1)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(S)-3-(3-溴苯基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(7 g)。產率84% (92%純度，UV=214 nm，ESI 258 (MH-Boc)+ )。
步驟 2 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(3-( 哌啶 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image309
在N2 下在120℃將(S)-3-(3-溴苯基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(300 mg，0.84 mmol)、哌啶(143 mg，1.68 mmol)、Cs2 CO3 (822 mg，2.52 mmol)、Pd(OAC)2 (19 mg，0.084 mmol)及XPhos (81 mg，0.17 mmol)於甲苯(4 mL)中之混合物攪拌16小時。混合物經矽藻土過濾，且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=2:1)純化殘餘物，得到(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(200 mg)。產率66% (92%純度，UV=214 nm，ESI 263 (MH-Boc)+ )。步驟 3 ： (S)-3- 胺基 -3-(3-( 哌啶 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image311
在室溫下用含HCl (1 mL)之二噁烷(5 mL)將(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(200 mg，0.55 mmol)處理1小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(145 mg)。產率100% (98%純度，UV=254 nm，ESI 263 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (S)-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(3-( 哌啶 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image313
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(145 mg，0.55 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(144 mg，0.55 mmol)、EDCI (159 mg，0.83 mmol)、HOBt (112 mg，0.83 mmol)及DIPEA (214 mg，1.66 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物攪拌4小時。將混合物倒入10 mL的水中且用DCM (30 mL×3)萃取溶液。有機層用鹽水洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾。在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物以提供呈淺橙色油狀之所需產物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(224 mg)。產率80% (95%純度，UV=254 nm，ESI 505 (M+H)+ )。
步驟 5 ： (S)-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(3-( 哌啶 -1- 基 ) 苯基 ) 丙酸
Figure 02_image315
在室溫下用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6 mL)之THF (2 mL)將(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯(224 mg，0.44 mmol)處理2小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(3-(哌啶-1-基)苯基)丙酸(44 mg)。
化合物 M1 ： LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.62 min，ESI 491 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.43 (s, 1H), 8.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 11.2, 4.2 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.92 - 6.81 (m, 2H), 5.75 (dd, J = 10.1, 6.3 Hz, 1H), 5.29 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.11 (m, 4H), 2.75 - 2.79 (m, 2H), 1.98 - 2.03 (m, , 2H), 1.78 - 1.67 (m, 4H), 1.60 - 1.62 (m, 2H), 1.50 - 1.37 (m, 1H), 0.99 - 0.91 (m, 6H)。製備化合物 M2 及 M2a 步驟 1 ： 3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(2- 鄰甲苯基吡啶 -4- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image317
在100℃下在微波中在N2 氛圍下將3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(600 mg，1.71 mmol)、鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(267 mg，1.97 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (63 mg，0.086 mmol)及K2 CO3 (692 mg，5.13 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌1.5小時。經矽藻土過濾，且在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:3)純化，得到呈無色油狀之所需產物3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(2-鄰甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(500 mg)。產率72% (74%純度，UV=214 nm，ESI 371 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 3- 胺基 -3-(2- 鄰甲苯基吡啶 -4- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image319
向3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(2-鄰甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(500 mg，1.35 mmol)於DCM (6 mL)中之溶液中添加含HCl之1,4-二噁烷(4 M，2 mL)，且在室溫下攪拌溶液4小時。在真空中移除溶劑，得到呈黃色固體之粗產物3-胺基-3-(2-鄰甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(400 mg)。產率99% (83%純度，UV=214 nm，ESI 271 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。
步驟 3 ： 3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(2- 鄰甲苯基吡啶 -4- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image321
在室溫下將(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(110 mg，0.53 mmol)、3-胺基-3-(2-鄰甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(173 mg，0.64mmol)、HOBt (87 mg，0.64 mmol)、EDCI (123 mg，0.64 mmol)及DIEA (273 mg，2.12 mmol)於DCM (20 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液，合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~80%EtOAc/石油醚)純化，獲得呈無色油狀之所需產物3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(2-鄰甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(200 mg)。產率82% (91%純度，UV=214 nm，ESI 462 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(2- 鄰甲苯基吡啶 -4- 基 ) 丙酸
Figure 02_image323
在室溫下用含LiOH-H2 O (54 mg，1.29 mmol)之THF (10 mL)及H2 O (1 mL)將3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(2-鄰甲苯基吡啶-4-基)丙酸甲酯(200 mg，0.43 mmol)處理16小時。用HCl (1 M)酸化混合物直至pH=5。在減壓下濃縮溶液得到殘餘物，其藉由製備型HPLC A純化，得到呈白色固體之化合物M2 (90 mg)及M2a (50 mg)。
化合物 M2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.53 min，ESI 448 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 6.9, 1.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.27 (m, 7H), 6.57 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.42 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 5.78 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.35 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.97 - 2.79 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.89 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.37 - 1.35 (m, 1H), 0.93 - 0.90 (m, 6H)。
步驟 5 ： 化合物 M2a 化合物 M2 (50 mg)藉由製備型對掌性SFC E分離成呈白色固體之M2a (6 mg)及M2b (12 mg)。
M2a LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.49 min，ESI 448 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.60 - 7.25 (m, 7H), 6.57 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.42 (m, 1H), 5.78 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.35 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.00 - 2.75 (m, 2H), 1.89 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.37 - 1.35 (m, 1H), 0.93 - 0.90 (m, 6H)。
製備化合物 N1 及 N2 步驟 1 ： 3- 環丁氧基苄醛
Figure 02_image325
在微波中在120℃下在N2 氛圍下將3-羥苄醛(488 mg，4.0 mmol)、溴環丁烷(1.08 mg，8.0 mmol)及K2 CO3 (1.11 mg，8.0 mmol)、NaI (120 mg，0.8 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液攪拌3小時。用EtOAc (12 mL)及水(6 mL)稀釋混合物。分離有機相且經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(5~10% EtOAc/石油醚)純化，得到呈淺橙色油狀之所需產物3-環丁氧基苄醛(550 mg)。產率61% (90%純度，UV=214 nm，ESI 177 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 3- 胺基 -3-(3- 環丁氧基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image327
在95℃下在密封管中將3-環丁氧基苄醛(550 mg，3.12 mmol)、丙二酸(487 mg，4.68 mmol)、NH4 OAc (481 mg，6.24 mmol)於EtOH (12 mL)中之混合物攪拌3小時。在真空中濃縮混合物且藉由矽膠管柱(10~50% MeOH/DCM)純化，得到呈無色油狀之所需產物3-胺基-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸(257 mg)。產率35% (100%純度，UV=254 nm，ESI 236 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(3- 環丁氧基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image329
在室溫下向3-胺基-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸(257 mg，1.09 mmol)及TEA (165 mg，1.63 mmol)於DCM (12 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(250 mg，1.15 mmol)。在室溫下攪拌溶液1小時。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(5%~10% EtOAc/石油醚)純化殘餘物以提供呈無色油狀之所需產物3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸(361 mg)。產率98% (91%純度，UV=214 nm，ESI280 (MH-Bu)+ )。
步驟 4 ： 3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(3- 環丁氧基苯基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image331
在室溫下將3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸(360 mg，1.07 mmol)、BnBr (183 mg，1.07 mmol)及K2 CO3 (298 mg，2.14 mmol)於DMF (10mL)中之溶液攪拌隔夜。用DCM (18 mL)及水(5 mL)稀釋混合物。分離有機相且經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且濃縮濾液，得到棕色油狀物，其藉由矽膠急驟(5%~10% EtOAc/石油醚)純化以提供呈無色油狀之所需產物3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸苄酯(386 mg)。產率85% (91%純度，UV=214 nm，ESI 326 (MH-Boc)+ )。步驟 5 ： 3- 胺基 -3-(3- 環丁氧基苯基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image333
在室溫下用含TFA (1 mL)之DCM (3 mL)將3-胺基-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸苄酯(340 mg，0.8 mmol)處理0.5小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色油狀之粗產物3-胺基-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸苄酯(218 mg)。產率84% (97%純度，UV=254 nm，ESI 326 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 6 ： 3-(3- 環丁氧基苯基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image335
在室溫下將3-胺基-3-(3-環丁氧基苯基)丙酸苄酯(109 mg，0.33 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(77 mg，0.36 mmol)、EDCI (96 mg，0.50 mmol)、HOBt (68 mg，0.50 mmol)及DIEA (86 mg，0.67 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物攪拌4小時。混合物用DCM (10 mL)及5 mL的水稀釋。分離有機相且經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液得到橙色油狀物，其藉由矽膠管柱(5~30% EtOAc/石油醚)純化以提供呈無色油狀之所需產物3-(3-環丁氧基苯基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸苄酯(151 mg)。產率87% (81%純度，UV=254 nm，ESI 517 (M+H)+ )。步驟 7 ：化合物 N1 及 N2
Figure 02_image337
在室溫下在H2 氛圍下將含3-(3-環丁氧基苯基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸苄酯(150 mg，0.29 mmol)及Pd/C (10%，30 mg)之EtOAc (18 mL)攪拌隔夜。混合物經矽藻土墊過濾且在減壓下濃縮濾液。藉由製備型HPLC B (30-70% MeCN)純化殘餘物以提供呈白色固體之所需化合物N1 (15 mg)及N2 (10 mg)。
化合物 N1 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=9.01 min，ESI 45127 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.74 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 1H), 7.52 - 7.48 (m, 1H), 7.16 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.84 (d, J =6.0 Hz, 1H), 6.74 (m, 1H), 6.68 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 9.5, 0.5 Hz, 1H), 6.41-6.39 (m, 1H), 5.78 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.30 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.44 - 2.40 (m, 2H), 2.09 - 2.04 (m, 2H), 2.09 - 2.04 (m, 2H), 1.95-1.92 (m, 2H), 1.82(m, 1H), 1.70(m, 1H), 1.48 - 1.44 (m, 1H), 1.03 - 0.96 (m, 6H)。
化合物 N1 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=9.26 min，ESI 45127 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.74 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 1H), 7.23 (t, J = 7.5 Hz ,1H), 6.91 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.74 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.41-6.39 (m, 1H), 5.76 (m,1H), 5.28 (t, J = 8.0 Hz,1H), 4.69 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.78 (m, 2H), 2.50 - 2.45 (m, 2H), 2.15 - 2.11 (m, 2H), 1.88 - 1.84 (m, 3H), 1.76-1.74 (m, H), 1.36-1.34 (m, 1H), 1.03 - 0.96 (m, 6H)。製備化合物 O2 及 O4 步驟 1 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(3-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼戊環 -2- 基 )(dioxaborolan-2-yl) 苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image339
將(S)-3-(3-溴苯基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(537 mg，1.5 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(765 mg，3.0 mmol)及KOAc(442 mg，4.5 mmol)於二噁烷(20 mL)中之溶液用鼓泡氮氣脫氣，添加PdCl2 (dppf) (54 mg，0.037 mmol)且在80℃下攪拌該反應物3小時。混合物用EtOAc (12 mL)稀釋且經由矽藻土墊過濾。在減壓下濃縮濾液，得到棕色油狀物，其藉由矽膠管柱(5~10% EtOA/石油醚)純化，得到呈白色固體狀之(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基)丙酸甲酯(565 mg)。產率93% (92%純度，UV=214 nm，ESI306 (MH-Boc)+ )。步驟 2 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(3-(3,5- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image341
在N2 氛圍下在微波下85℃下將(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基)丙酸甲酯(405 mg，1.0 mmol)、4-溴-3,5-二甲基-1H-吡唑(350 mg，2.0 mmol)、PEPPSI-IPr (34 mg，0.05 mmol)及K2 CO3 (276 mg，2.0 mmol)於二噁烷(20 mL)及H2 O (4 mL)中之混合物攪拌4小時。添加水(8 mL)，且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。在真空中濃縮合併之有機相且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=2:3)純化殘餘物，得到呈淺橙色油狀之所需產物(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(240 mg)。產率64% (100%純度，UV=254 nm，ESI 374 (M+H)+ )。步驟 3 ： (S)-3- 胺基 -3-(3-(3,5- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image343
在室溫下將(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(112 mg，0.3 mmol)用含TFA (0.5 mL)之DCM (2 mL)處理1小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(79 mg)。產率96% (98%純度，UV=254 nm，ESI 274 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (S)-3-(3-(3,5- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image345
將(S)-3-胺基-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)丙酸甲酯(78 mg，0.28 mmol)、4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(63 mg，0.30 mmol)、EDCI (82 mg，0.43 mmol)、HOBt (58 mg，0.43 mmol)及DIEA (110 mg，0.85 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物在室溫攪拌4小時。用DCM (10 mL)及5 mL水稀釋混合物。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到橙色油狀物，其藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc= 10:1~4:1)純化，提供呈淺橙色油狀之所需化合物O1 (51 mg)及O2 (70 mg)。產率91% (95%純度，UV=254 nm，ESI 465 (M+H)+ )。步驟 5 ：化合物 O2
Figure 02_image347
在室溫用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6 mL)之THF (2 mL)處理O1 (50 mg，0.11 mmol)隔夜。混合物用1 M HCl調節至pH=5~6，且在真空中移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30-64% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物O1 (37 mg)及O2 (15 mg)。
化合物 O2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=7.27 min，ESI 451 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.75 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 1H), 7.50 - 7.53 (m, 1H), 7.39-7.42 (m, 1H), 7.31-7.30 (m, 2H), 7.20 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.44-6.41 (m, 1H), 5.75 (dd, J = 7.0, 9.5 Hz, 1H), 5.35 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.87 - 2.77 (m, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.88-1.84 (m, 2H), 1.37 - 1.32 (m, 1H), 0.92 - 0.89 (m, 6H)。步驟 6 ：化合物 O4
Figure 02_image349
在室溫下用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6 mL)之THF (2 mL)處理化合物 O2 (70 mg，0.15 mmol)隔夜。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6，且在真空中移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30-64% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物O3 (35 mg)及O4 (26 mg)。
化合物 O4 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=7.26 min，ESI 451 (M+H)+ 。
1H- NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.75 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 1H), 7.50 - 7.53 (m, 1H), 7.38-7.42 (m, 1H), 7.31-7.30 (m, 2H), 7.21 (d, J = 6.5 Hz,1H), 6.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.44-6.41 (m, 1H), 5.75 (dd, J = 7.0, 9.5 Hz, 1H), 5.35 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.88 - 2.78 (m, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.88-1.84 (m, 2H), 1.37 - 1.32 (m, 1H), 0.92 - 0.89 (m, 6H)。製備化合物 P2 步驟 1 ： 6- 羥基 -2'- 甲基聯苯 -3- 甲醛
Figure 02_image351
在N2 氛圍下在微波下110℃下將3-溴-4-羥基苯甲醛(2 g，9.9 mmol)、鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(2 g，15 mmol)、PdCl2 (dppf) (364 mmg，0.5 mmol)及K2 CO3 (4.1 g，29.8 mmol)於9 mL 1,4-二噁烷及0.9 mL H2 O中之混合物攪拌1小時。經矽藻土過濾混合物。在真空中移除濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=3:1)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之所需產物6-羥基-2'-甲基聯苯-3-甲醛(1.5 g)。產率71% (62%純度，UV=214 nm，ESI 213 (M+H)+ )。步驟 2 ：三氟甲烷磺酸 5- 甲醯基 -2'- 甲基聯苯 -2- 酯
Figure 02_image353
在0℃下向6-羥基-2'-甲基聯苯-3-甲醛(600 mg，2.83 mmol)於20 mL吡啶中之溶液中添加三氟甲烷磺酸酐(957 mg，3.39 mmol)。使溶液升溫至室溫且在室溫下攪拌16小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=5:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物三氟甲烷磺酸5-甲醯基-2'-甲基聯苯-2-酯(650 mg)，產率67% (89%純度，UV=214 nm，ESI 345 (M+H)+ )。步驟 3 ： 6- 環丙基 -2'- 甲基聯苯 -3- 甲醛
Figure 02_image355
在100℃下將三氟甲烷磺酸5-甲醯基-2'-甲基聯苯-2-酯(650 mg，1.89 mmol)、環丙基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(811 mg，9.44)、Pd(PPh3 )2 Cl2 (133 mg，0.19 mmol)及KF (329 mg，5.66 mmol)於5 mL甲苯及0.5 mL H2 O中之混合物攪拌16小時。經矽藻土過濾混合物。在真空中移除濾液且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=5:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-甲醛(380 mg)。產率85% (87%純度，UV=214 nm，ESI 237 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3- 胺基 -3-(6- 環丙基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image357
在85℃下將6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-甲醛(350 mg，1.48 mmol)、丙二酸(185 mg，1.78 mmol)及乙酸銨(571 mg，7.41 mmol)於EtOH (5 mL)中之混合物攪拌16小時。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液，得到粗產物3-胺基-3-(6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(400 mg)。產率91% (46%純度，UV=214 nm，ESI 296 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 5 ： 3- 胺基 -3-(6- 環丙基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image359
在0℃下向3-胺基-3-(6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(400 mg，1.74 mmol)於20 mL無水甲醇中之溶液中逐滴添加二氯化硫(25 mL)。將溶液加熱至75℃，且在75℃下攪拌2小時。在真空中移除溶劑，得到粗產物3-胺基-3-(6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(400 mg)。產率85% (42%純度，UV=214 nm，ESI 310 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 6 ： 3-(6- 環丙基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 )-3-((S)-4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image361
在室溫下將3-胺基-3-(6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(400 mg，1.15 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(290 mg，1.38 mmol)、EDCI (483 mg，2.31 mmol)、HOBt (234 mg，1.73 mmol)及DIEA (598 mg，4.62 mmol)於25 mL DCM中之溶液攪拌16小時。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=2:1)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之所需化合物P1 (180 mg)及P2 (140 mg)。(ESI 501 (M+H)+ )。步驟 7 ： 3-(6- 環丙基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image363
在室溫下用含LiOH-H2 O (35 mg，0.84 mmol)之6 mL THF及2 mL H2 O處理P2 (140 mg，0.28 mmol)3小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之產物3-(6-環丙基-2'-甲基聯苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸(47 mg)。
化合物 P2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.69 min，ESI 487.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.76 (dd, J = 9.0, 3.7 Hz, 1H), 7.52 - 7.49 (m, 1H), 7.32 - 7.19 (m, 4H), 7.15 (dd, J = 10.2, 7.0 Hz, 1H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.41 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.76 - 5.72 (m, 1H), 5.30 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.86 - 2.68 (m, 2H), 2.11 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.94 - 1.77 (m, 2H), 1.60 - 1.46 (m, 1H), 1.41 - 1.24 (m, 1H), 0.92 - 0.86 (m, 6H), 0.83 - 0.71 (m, 2H), 0.69 - 0.59 (m, 2H)。
製備化合物 Q2 步驟 1 ： 3- 胺基 -3-(3- 溴 -4- 甲基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image365
向3-溴-4-甲基苯甲醛(6.0 g，30.1 mmol)於EtOH (50 mL)中之溶液中添加丙二酸(3.1 g，30.1 mmol)及NH4 OAc (4.6 g，60.2 mmol)。將混合物加熱至80℃且攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到呈白色固體狀之粗產物3-胺基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸(7.4 g)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。(11%純度，UV=214 nm，ESI 258 (M+H)+ )。步驟 2 ： 3- 胺基 -3-(3- 溴 -4- 甲基苯基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image367
在0℃下向3-胺基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸(7.4 g，28.8 mmol)於MeOH (50 mL)中之溶液中逐滴添加SOCl2 (5 mL，20.6 mmol)，且在80℃下攪拌反應混合物2小時。添加水(50 mL)且用EtOAc (50 mL×3)萃取溶液。合併之有機相用NaHCO3 飽和水溶液(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(EtOAc)純化，得到呈無色油狀之所需產物3-胺基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(2.5 g)。產率33%，兩個步驟(90%純度，UV=214 nm，ESI 272 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3- 胺基 -3-(2',6- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image369
在N2 氛圍下在微波下將3-胺基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(350 mg，1.29 mmol)及鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(263 mg，1.94 mmol)、PdCl2 (dppf) (94 mg，0.13 mmol)及K2 CO3 (535 mg，3.87 mmol)於二噁烷(3 mL)及H2 O (0.6 mL)中之混合物加熱至110℃維持1小時。添加水(10 mL)且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機相得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化，得到呈無色油狀之所需產物3-胺基-3-(2',6-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸甲酯(280 mg)。產率77% (70%純度，UV=254 nm，ESI 284 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3-(2',6- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image371
在室溫下將3-胺基-3-(2',6-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸甲酯(130 mg，0.46 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(96 mg，0.46 mmol)、HOBt (74 mg，0.55 mmol)、EDCI (105 mg，0.55 mmol)及DIEA (178 mg，1.38 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物，其藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物3-(2',6-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(150 mg)。產率63% (86.83%純度，UV=214 nm，ESI 475 (M+H)+ )。步驟 5 ： 3-(2',6- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image373
在室溫下將3-(2',6-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(150 mg，0.32 mmol)用含LiOH-H2 O (67 mg，1.60 mmol)之THF (10 mL)及H2 O (2 mL)處理0.5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5~6。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物Q1 (24 mg)及Q2 (20 mg)。
化合物 Q2 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.91 min，ESI 461 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD-d4 ) δ 7.80 - 7.72 (m, 1 H), 7.52-7.49 (m, 1H), 7.30 - 7.19 (m, 5H), 7.08-7.04 (m, 2H), 6.55 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.41 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 5.77-5.72 (m, 1H), 5.31 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.84 - 2.70 (m, 2H), 2.07 - 1.98 (m, 6H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.37 - 1.32 (m, 1H), 0.90 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 R1 及 R2 步驟 1 ： 3- 胺基 -3-(3- 第三丁基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image375
在80℃下將3-第三丁基苯甲醛(500 mg，3.08 mmol)、丙二酸(285 mg，3.7 mmol)及乙酸銨(962 mg，9.25 mmol)於EtOH (15 mL)中之混合物攪拌16小時。過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液。藉由製備型HPLC B (20~50% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需產物3-胺基-3-(3-第三丁基苯基)丙酸(65 mg)。產率9% (90%純度，UV=214 nm，ESI 222 (M+H)+ )。步驟 2 ： 3-(3- 第三丁基苯基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image377
在室溫下將3-胺基-3-(3-第三丁基苯基)丙酸(59 mg，0.27 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(70 mg，0.33 mmol)、EDCI (128 mg，0.67 mmol)、HOBt (46 mg，0.34 mmol)及DIEA (103 mg，0.8 mmol)於DCM (15 mL)中之溶液攪拌1小時。將混合物倒入30 mL水中，且溶液用乙酸乙酯(30 mL×2)萃取。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，且藉由製備型HPLC A (30~65% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需化合物R1 (19 mg)及R2 (13 mg)。
化合物 R1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.58 min，ESI 413 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.73 (dd, J = 6.9, 1.7 Hz, 1H), 7.50 - 7.46 (m, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.39 - 6.36 (m, 1H), 5.79 (dd, J = 9.1, 7.0 Hz, 1H), 5.34 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.79 (dd, J = 11.8, 5.1 Hz, 2H), 1.99 - 1.87 (m, 2H), 1.54 - 1.37 (m, 1H), 1.27 (s, 9H), 1.03 - 0.89 (m, 6H)。
化合物 R2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.63 min，ESI 413 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.76 (dd, J = 7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.52 - 7.50 (m, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.33 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.43 - 6.41 (m, 1H), 5.77 (dd, J = 9.2, 6.9 Hz, 1H), 5.33 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 2H), 1.91 - 1.79 (m, 2H), 1.41 - 1.35 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 0.98 - 0.91 (m, 6H)。
製備化合物 S1 及 S2 步驟 1 ： 3- 胺基 -3-(3- 苯氧基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image379
在80℃下將3-苯氧基苯甲醛(1 g，5 mmol)、丙二酸(467 mg，6.1 mmol)及乙酸銨(1.6 g，15.1 mmol)於EtOH (10 mL)中之混合物攪拌16小時。過濾混合物且在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC B (20~50% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需產物3-胺基-3-(3-苯氧基苯基)丙酸(300 mg)。產率23% (90%純度,UV=214 nm,ESI 258 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(3- 苯氧基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image381
在室溫下將3-胺基-3-(3-苯氧基苯基)丙酸(49 mg，0.19 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(50 mg，0.24 mmol)、EDCI (92 mg，0.48 mmol)、HOBt (48 mg，0.36 mmol)及DIEA (93 mg，0.72 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液攪拌1小時。將混合物倒入30 mL水中，且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，且殘餘物藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化，得到呈白色固體狀之所需化合物S1 (6.6 mg)及S2 (1 mg)。
化合物 S1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.58 min，ESI 449 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.69 (dd, J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 7.47 - 7.45 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.27 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 6.99 - 6.91 (m, 3H), 6.82 (dd, J = 8.1, 1.7 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.37 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.76 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.31 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.90 - 2.65 (m, 2H), 1.93 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.46 - 1.41 (m, 1H), 0.97 - 0.93 (m, 6H)。
化合物 S2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.84 min，ESI 449 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.61 (dd, J = 7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 3H), 7.04 - 6.98 (m, 2H), 6.94 - 6.84 (m, 3H), 6.79 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.30 (t, J = 6.9, 1H), 5.62 (dd, J = 9.6, 6.6 Hz, 1H), 5.17 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.74 - 2.32 (m, 2H), 1.77 - 1.55 (m, 2H), 1.33 - 1.03 (m, 1H), 0.80 - 0.77 (m, 6H)。
製備化合物 T2 步驟 1 ： 3 3- 胺基 -3-(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image383
在80℃下將5-溴菸醛(3 g，16.1 mmol)、丙二酸(1.7 g，16.1 mmol)及乙酸銨(2.6 g，33.9 mmol)於EtOH (10 mL)中之混合物攪拌3小時。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液，得到呈白色固體狀之粗產物3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(1.7 g)。產率43% (UV=214 nm，ESI 245 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 2 ： 3- 胺基 -3-(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image385
在0℃下向3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(1.7 g，6.9 mmol)於20 mL甲醇中之溶液中添加SOCl2 (3 mL)。在室溫下攪拌溶液15小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:2)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.2 g)，產率67% (94%純度，UV=214 nm，ESI 259 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image387
在N2 下在微波下110℃下將3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(200 mg，0.77 mmol)、2,6-二甲基苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(174 mg，1.16 mmol)、PdCl2 (dppf) (28 mg，0.039 mmol)及K2 CO3 (320 mg，2.32 mmol)於2 mL 1,4-二噁烷及0.1 mL H2 O中之混合物攪拌1小時。經矽藻土過濾混合物。在真空中移除濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:2)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200 mg)。產率91% (90%純度，UV=214 nm，ESI 285 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image389
在室溫下將3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100 mg，0.35 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(88 mg，0.42 mmol)、EDCI (135 mg，0.7 mmol)、HOBt (71 mg，0.53 mmol)及DIEA (136 mg，1.06 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物攪拌1小時。在減壓下移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到所需產物3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg)。產率60% (97%純度，UV=214 nm，ESI 476 (M+H)+ )。步驟 5 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image391
在室溫下將3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.21 mmol)用含LiOH-H2 O (26 mg，0.63 mmol)之6 mL THF及2 mL H2 O處理1小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物T1 (43 mg)及T2 (38 mg)。
化合物 T1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.57 min，ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.53 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.43 - 7.40 (m, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.10 (m, 2H), 6.44 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.79 - 5.65 (m, 1H), 5.42 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.88 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.94 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.48 - 1.42 (m, 1H), 0.98 - 0.95 (m, 6H)。
化合物 T2 LC/MS A：99%純度，UV=214 nm，Rt=1.59 min，ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.50 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 2H), 6.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.43 - 6.40 (m, 1H), 5.80 - 5.70 (m, 1H), 5.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.96 - 2.85 (m, 2H), 2.02 (s, 6H), 1.91 - 1.75 (m, 2H), 1.35 - 1.30 (m, 1H), 0.91 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 T2a 及 T2b T2混合物藉由製備型對掌性SFC D進一步分離，得到呈白色固體狀之非對映異構化合物T2a (8 mg)及T2b (7.5 mg)。
化合物 T2a LC/MS A：99%純度，UV=214 nm，Rt=1.56 min，ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 6.9, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.50 (m 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 2H), 6.56 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.43 - 6.40 (m, 1H), 5.75 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 2H), 2.02 (s, 6H), 1.83 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.36 - 1.30 (m, 1H), 0.91 - 0.88 (m, 6H)。
化合物 T2b LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.49 min，ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.52 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.43 - 7.39 (m, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.45 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.36 - 6.33 (m, 1H), 5.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.42 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.91 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.97 (s, 3H), 1.96 - 1.92 (m, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.49 - 1.43 (m, 1H), 0.98 - 0.95 (m, 6H)。
製備化合物 U2 步驟 1 ： 2- 溴 -4,4,4- 三氟丁酸
Figure 02_image393
在0℃下向2-胺基-4,4,4-三氟丁酸(1.0 g，6.4 mmol)於HBr (40%水溶液，6 mL)中之溶液中逐滴添加NaNO2 (0.66 g，9.6 mmol)於H2 O (4 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時。用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到呈橙色固體狀之粗產物2-溴-4,4,4-三氟丁酸(1 g)。粗產物直接用於下一步驟。
步驟 2 ： 4,4,4- 三氟 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁酸
Figure 02_image395
在30℃下在N2 氛圍下將2-溴-4,4,4-三氟丁酸 (1 g，4.5 mmol)及(t-BuO)2 Mg (1.02 g，6 mmol)於無水THF (20 mL)中之混合物攪拌3小時，且接著添加吡啶-2-醇(336 mg，3 mmol)及t-BuOK (340 mg，3.06 mmol)。在70℃下在N2 下攪拌反應混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用HCl (4 M)酸化直至pH=5。在減壓下濃縮溶液，得到殘餘物。經由逆相急驟層析法(0%~60% MeOH/H2 O (5% TFA))純化以提供所需產物(4,4,4-三氟-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁酸(130 mg)。產率23% (96%純度，UV=214 nm，ESI 236 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4,4,4- 三氟 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image397
在室溫下將(4,4,4-三氟-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁酸(130 mg，0.55 mmol)、3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(140 mg，0.5 mmol)、HOBt (81 mg，0.6 mmol)、EDCI (115 mg，0.6 mmol)及DIEA (258 mg，2 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物倒入水中且用DCM (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液以得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~80% EtOAc/石油醚)純化，得到所需產物3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4,4,4-三氟-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁醯胺基)丙酸甲酯(160 mg)。產率64% (92%純度，UV=214 nm，ESI 502 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4,4,4- 三氟 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image399
在室溫下將3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4,4,4-三氟-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁醯胺基)丙酸甲酯(160 mg，0.32 mmol)用含LiOH-H2 O (40 mg，0.96 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)處理16小時。用HCl (1 M)酸化混合物直至pH=5。在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC B (30~70% MeCN)純化，得到呈白色固體狀之化合物U1 (34 mg)及U2 (12 mg)。
化合物 U2 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.50 min，ESI 488 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.23 - 7.14 (m, 3H), 6.58 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.45 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.44 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 3.06 - 2.93 (m, 1H), 2.88 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.01 (s, 6H)。
製備化合物 V2 步驟 1 ： 2- 溴 -3- 環丙基丙酸
Figure 02_image401
在0℃下向(2-胺基-3-環丙基丙酸(300 mg，2.32 mmol)於HBr (40%水溶液，4 mL)中之溶液中逐滴添加NaNO2 (321 mg，4.65 mmol)於H2 O (4 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時。用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液，且合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在真空中濃縮濾液以提供呈黃色油狀之粗產物2-溴-3-環丙基丙酸(447 mg)。產率100%。粗產物直接用於下一步驟。步驟 2 ： 3- 環丙基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙酸
Figure 02_image403
向(2-溴-3-環丙基丙酸(740 mg，3.85 mmol)於無水THF (20 mL)中之溶液中添加(t-BuO)2 Mg (1.32 g，7.71 mmol)且在N2 氛圍下在30℃下攪拌溶液1小時。隨後添加吡啶-2-醇(366 mg，3.85 mmol)及t-BuOK (431 mg，3.85 mmol)，且在70℃下在N2 下攪拌反應混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用HCl (4 M)溶液酸化至pH=5。在減壓下濃縮溶劑，得到殘餘物，其藉由逆相急驟層析法(0%~80% MeOH/H2 O (5% NH4 HCO3 ))純化以提供呈白色固體狀之所需產物3-環丙基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙酸(83 mg)。產率10% (98%純度，UV=214 nm，ESI 208 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3-(3- 環丙基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image405
在室溫下將3-環丙基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙酸(83 mg，0.40 mmol)、3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(114 mg，0.40 mmol)、HATU (228 mg，0.60 mmol)及DIEA (155 mg，1.20 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入10 mL水中且用DCM (30 mL×3)萃取溶液。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液以提供黃色油狀物，其藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化以提供呈黃色油狀之所需產物3-(3-環丙基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200 mg)。產率88% (95%純度，UV=254 nm，ESI 474 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3-((S)-3- 環丙基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丙醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image407
在室溫下將3-(3-環丙基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丙醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200 mg，0.42 mmol)用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6mL)之THF (2 mL)處理2小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6，且在真空中移除溶劑。藉由製備型HPLC B (30-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需化合物V1 (23.6 mg)及V2 (30.4 mg)。
化合物 V2 LC/MS A：98%純度，UV=214 nm，Rt=1.52 min，ESI 460 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.51 (t, J = 8.8, 6.7, 1.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.55 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.41 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.00 - 2.83 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.88 - 1.94 (m, 1H), 1.84 - 1.76 (m, 1H), 0.53 (s, 1H), 0.33 - 0.35 (m, 1H), 0.23 - 0.27 (m, 1H), 0.02 - 0.04 (m, 2H)。
製備化合物 W1 及 W2 步驟 1 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image409
在室溫下將3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100 mg，0.35 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(94 mg，0.42 mmol)、EDCI (135 mg，0.7 mmol)、HOBt (71 mg，0.53 mmol)及DIEA (136 mg，1.06 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物攪拌1小時。在減壓下移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到所需產物3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg)。產率58% (96%純度，UV=214 nm，ESI 490 (M+H)+ )。步驟 2 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image411
在室溫下將3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.20 mmol)用含LiOH-H2 O (26 mg，0.6 mmol)之6 mL THF及2 mL H2 O處理1小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物W1 (28 mg)及W2 (27 mg)。
化合物 W1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.58 min，ESI 475.8 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.53 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.21 - 7.11 (m, 3H), 6.27 (s, 1H), 6.23 (dd, J = 7.1, 1.8 Hz, 1H), 5.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.87 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.91 (dd, J = 18.5, 11.1 Hz, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.46 - 1.43 (m, 1H), 0.98 - 0.94 (m, 6H)。
化合物 W2 LC/MS A：99%純度，UV=214 nm，Rt=1.61 min，ESI 475.8 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.1, 1.8 Hz, 1H), 5.70 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.88 - 2.85 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.02 (s, 6H), 1.81 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.33 - 1.31 (m, 1H), 0.90 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 W1a 及 W1b 步驟 1 ： (S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image413
在N2 氛圍下在80℃下將(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(3.0 g，8.38 mmol)、(2,6-二甲基苯基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(2.5 g，16.78 mmol)、Pd(PPh3 )4 (969 mg，0.84 mmol)及K2 CO3 (2.3 mg，16.76 mmol)於THF (20 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=4:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7 g)。產率63% (73%純度，UV=214 nm，ESI 385.1 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image415
向(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7 g，7.03 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加含HCl之二噁烷(4 M，5 mL)。在室溫下攪拌溶液2小時。添加NaHCO3 飽和水溶液(20 mL)，且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液以提供呈黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.9 g)。產率95% (68%純度，UV=214 nm，ESI 285.1 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image417
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.5 g，5.28 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(1.4 g，6.34 mmol)、HOBt (1.06 g，7.92 mmol)、EDCI (1.5 g，7.92 mmol)及DIEA (2.04 g，15.85 mmol)於DCM (30 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中，且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀之粗產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(3.95 g)。產率52% (52%純度，UV=214 nm，ESI 490.1 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image419
在室溫下將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(3.95 g，8.08 mmol)用含LiOH-H2 O (1.02 g，24.23 mmol)之THF (10 mL)及H2 O (2 mL)處理2小時。用HCl (1 M)酸化混合物直至pH=5。在真空中移除溶劑且殘餘物藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化，得到呈白色固體狀之化合物W1a (380 mg)及W1b (453 mg)。
化合物 W1a LC/MS B：99%純度，UV=214 nm，Rt=1.59 min，ESI 476.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.53 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.58 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 6.32 - 6.15 (m, 2H), 5.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.43 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.94 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.92 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.47 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 1.40 - 1.40 (m, 1H), 0.95 - 0.92 (m, 6H)。
化合物 W1b LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.62 min，ESI 476.3(M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.54 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.59 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.34 (s, 1H), 6.26 (dd, J = 7.1, 1.5 Hz, 1H), 5.65 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.34 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 17.3, 7.4 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.97 (s, 6H), 1.78 - 1.75 (m, 2H), 1.32 - 1.25 (m, 1H), 0.87 - 0.80(m, 6H)。製備化合物 W2a 及 W2b 步驟 1 ： (R)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image421
在N2 氛圍下在80℃下將(R)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(3.0 g，8.38 mmol)、2,6-二甲基苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(2.5 g，16.78 mmol)、Pd(PPh3 )4 (969 mg，0.84 mmol)及K2 CO3 (2.3 g，16.76 mmol)於THF (20 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物冷卻至室溫且倒入水中。用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱(0%~20% EtOAc/石油)純化以提供呈黃色油狀之所需產物(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7 g)。產率63% (73.57%純度，UV=214 nm，ESI 385 (M+H)+ )。步驟 2 ： (R)-3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image423
向(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(2.7 g，7 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4 M，5 mL)，且在室溫下攪拌溶液2小時。將混合物倒入NaHCO3 飽和水溶液(20 mL)中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液以提供呈黃色油狀之粗產物(R)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.9 g)。產率95% (68.19%純度，UV=214 nm，ESI 285 (M+H)+ )。粗產物未經進一步純化即直接用於下一步驟。步驟 3 ： (3R)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image425
在室溫下將(R)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100 mg，0.31 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(84 mg，0.37 mmol)、EDCI (120 mg，0.62 mmol)、HOBt (63 mg，0.47 mmol)及DIEA (121 mg，0.94 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物攪拌1小時。在減壓下移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:2)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg)。產率66% (76%純度，UV=214 nm，ESI 490 (M+H)+ )。步驟 4 ： (3R)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image427
在室溫下將(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.20 mmol)用含LiOH-H2 O (26 mg，0.6 mmol)之6 mL THF及2 mL H2 O處理3小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物W2a (31 mg)及W2b (22 mg)。
化合物 W2a LC/MS A：99%純度，UV=214 nm，Rt=1.57 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.52 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.23 - 7.10 (m, 3H), 6.26 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.23 (dd, J = 7.1, 1.9 Hz, 1H), 5.72 - 5.66 (m, 1H), 5.42 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.94 - 1.89 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.52 - 1.37 (m, 1H), 0.98 - 0.87 (m, 6H)。
化合物 W2b LC/MS A：99%純度，UV=214 nm，Rt=1.60 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.67 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.27 - 7.10 (m, 3H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.2, 1.9 Hz, 1H), 5.70 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 2.99 - 2.83 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.02 (s, 5H), 1.89 - 1.74 (m, 2H), 1.35 - 1.30 (m, 1H), 0.90 - 0.87 (m, 6H)。
製備化合物 X1 及 X2 步驟 1 ： 3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-( 第三丁氧基羰基胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image429
在室溫下向3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(300 mg，1.16 mmol)及Et3 N (351 mg，3.48 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(278 mg，1.27 mmol)，且在室溫下攪拌溶液16小時。在真空中濃縮混合物，得到粗產物，其藉由製備型TLC (EtOAc:石油醚 1:1)純化以提供呈無色油狀之所需產物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(301 mg)。產率72% (100%純度，UV=214 nm，ESI 359 (M+H)+ )。步驟 2 ： 3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image431
在N2 下在120℃下將3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(260 mg，0.73 mmol)、(S)-3-甲基嗎啉(147 mg，1.46 mmol)、Pd(OAc)2 (17 mg，0.073 mmol)、X-Phos (65 mg，0.146 mmol)及Cs2 CO3 (714 mg，2.19 mmol)於甲苯(3 mL)中之溶液攪拌16小時。將混合物冷卻至室溫且經矽藻土過濾。在減壓下濃縮濾液，且殘餘物藉由急驟管柱層析法(0%~60% EtOAc/石油)純化以提供呈黃色油狀之所需產物3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(162 mg)。產率52% (90%純度，UV=214 nm，ESI 280 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3- 胺基 -3-(5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯鹽酸鹽
Figure 02_image433
向3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(162 mg，0.43 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加含HCl之二噁烷(4 M，2 mL)，且在室溫下攪拌溶液16小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色固體狀之粗產物3-胺基-3-(5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(119 mg)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。產率99% (92.24%純度，UV=214 nm，ESI 280 (M+H)+ )。步驟 4 ： (S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊酸甲酯
Figure 02_image435
在35℃下將喹唑啉-4(3H)-酮(1.0 g，6.85 mmol)、(S)-2-胺基-4-甲基戊酸甲酯鹽酸鹽(1.49 g，8.22 mmol)、DBU (1.57 g，10.3 mmol)及HATU (3.38 g，8.9 mmol)於THF (20 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱(0%~25% EtOAc/石油)純化以提供呈無色油狀之所需產物(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯(612 mg)。產率33% (88.42%純度，UV=214 nm，ESI 275 (M+H)+ )。步驟 5 ： (S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image437
在室溫下將(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸甲酯(612 mg，2.23 mmol)用含LiOH-H2 O (281 mg，6.69 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)處理3小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。用HCl (1 M)將水相酸化至pH=3，且隨後用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈無色油狀之粗產物(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(494 mg)。產率85% (100%純度，UV=214 nm，ESI 261 (M+H)+ )。粗產物未經進一步純化即直接用於下一步驟。步驟 6 ： 3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image439
在室溫下將3-胺基-3-(5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(119 mg，0.43 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(168 mg，0.645 mmol)、HOBt (87 mg，0.645 mmol)、EDCI (123 mg，0.645 mmol)及DIEA (166 mg，1.29 mmol)於DMF (6 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液，合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型TLC (EtOAc)純化以提供呈無色油狀之所需產物3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40 mg)。產率18%，兩個步驟(96%純度，UV=214 nm，ESI 522 (M+H)+ )。步驟 7 ： 3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image441
在室溫下將3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40 mg，0.077 mmol)用含LiOH-H2 O (10 mg，0.231 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)處理2小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物X1 (2.3 mg)及X2 (8.7 mg)。
化合物 X1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.40 min，ESI 508 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.41 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 11.1, 4.2 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.69 (dd, J = 10.0, 6.4 Hz, 1H), 5.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.94-3.60 (m, 5H), 3.09-3.03 (m, 2H), 2.97 - 2.79 (m, 2H), 2.22 - 1.96 (m, 2H), 1.68 - 1.46 (m, 1H), 1.07 - 0.78 (m, 9H)。
化合物 X 2 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.36 min，ESI 508 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.44 (s, 1H), 8.27 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.87 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 5.72 (dd, J = 10.4, 5.9 Hz, 1H), 5.36 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.08 - 3.63 (m, 5H), 3.30 - 3.09 (m, 2H), 2.81 (s, 2H), 2.17 - 1.88 (m, 2H), 1.44 (s, 1H), 1.14 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.07 - 0.78 (m, 9H)。製備化合物 Y1 、 Y2 以及 Y4 步驟 1 ： 4,5- 二甲吡啶 -2- 醇
Figure 02_image443
在0℃下向4,5-二甲吡啶-2-胺(1.0 g，8.2 mmol)於HCl (4N，12mL)中之溶液中添加NaNO2 (1.13 g，16.4 mmol)於H2 O (4mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時且在真空中濃縮以得到粗產物，其藉由逆相層析法(0%~40% MeOH/H2 O (5% TFA))純化以提供呈白色固體狀之所需產物4,5-二甲吡啶-2-醇(466 mg)。產率46% (96.34%純度，UV=214 nm，ESI 124 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-2-(4,5- 二甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image445
向(R)-2-溴-4-甲基戊酸(500 mg，2.56 mmol)於無水THF (20 mL)中之溶液中添加(t-BuO)2 Mg (581 mg，3.42 mmol)，且在30℃下在N2 氛圍下攪拌溶液3小時。隨後添加4,5-二甲吡啶-2-醇(210 mg，1.71 mmol)及t-BuOK (195 mg，1.74 mmol)，且在70℃下在N2 下攪拌反應混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用HCl (1 M)酸化至pH=5。在減壓下濃縮溶液，得到殘餘物，其藉由逆相急驟層析法(0%~60% MeOH/H2 O (5% TFA))純化以提供呈白色固體狀之所需產物(S)-2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(169 mg)。產率42% (96%純度，UV=214 nm，ESI 238 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3R)-3-(2-(4,5- 二甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image447
在室溫下將(S)-2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(89 mg，0.375 mmol)、(R)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(70 mg，0.25 mmol)、HOBt (51 mg，0.37 mmol)、EDCI (72 mg，0.37 mmol)及DIEA (97 mg，0.75 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~80% EtOAc/石油)純化以提供呈無色油狀之所需產物(3R)-3-(2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(92 mg)。產率74% (86.01%純度，UV=214 nm，ESI 504 (M+H)+ )。步驟 4 ： (3R)-3-(2-(4,5- 二甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image449
在室溫下將(3R)-3-(2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(92 mg，0.18 mmol)用含LiOH-H2 O (23 mg，0.54 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)處理5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物Y1 (24.7 mg)及Y2 (22.1 mg)。
化合物 Y1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.58 min，ESI 490 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.51 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 6.30 (s, 1H), 5.68 (dd, J = 9.0, 7.0 Hz, 1H), 5.42 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 2.91 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.96 (d, J = 7.9 Hz, 3H), 1.95-1.87 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.47-1.40 (m, 1H), 0.97 - 0.94 (m, 6H)。
化合物 Y2 LC/MS A：97%純度，UV=214 nm，Rt=1.60 min，ESI 490 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.66 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.41 (s, 1H), 5.67 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.97-2.86 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.02 (s, 6H), 1.82 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.36-1.28 (m, 1H), 0.90 - 0.87 (m, 6H)。步驟 5 ： (3S)-3-(2-(4,5- 二甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image451
在室溫下將(S)-2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(89 mg，0.375 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(70 mg，0.25 mmol)、HOBt (51 mg，0.375 mmol)、EDCI (72 mg，0.375 mmol)及DIEA (97 mg，0.75 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~80% EtOAc/石油)純化以提供呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(85 mg)。產率68% (93.96%純度，UV=214 nm，ESI 504 (M+H)+ )。步驟 6 ： (3S)-3-(2-(4,5- 二甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image453
在室溫下將(3S)-3-(2-(4,5-二甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(92 mg，0.18 mmol)用含LiOH-H2 O (23 mg，0.54 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)處理5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5。在真空中移除溶劑，且殘餘物藉由製備型HPLC A (30-70% MeCN)純化，得到呈白色固體狀之化合物Y3 (14.9 mg)及Y4 (20.8 mg)。
化合物 Y4 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.60 min，ESI 490 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.66 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.28 - 7.11 (m, 3H), 6.41 (s, 1H), 5.67 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.95-2.71 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.02 (s, 6H), 1.84 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.37-1.28 (m, 1H), 0.90 - 0.87 (m, 6H)。製備化合物 Z 步驟 1 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image455
在N2 氛圍下在微波下110℃下將(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(1.0 g，2.79 mmol)、2,6-二甲基苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(628 mg，4.19 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (164 mg，0.22 mmol)及K2 CO3 (963 mg，7.0 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物攪拌4小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~45% EtOAc於石油中)純化，提供呈淡黃色油狀之所需產物(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(987 mg)。產率82% (88%純度，UV=214 nm，ESI 385 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯鹽酸鹽
Figure 02_image457
向(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(410 mg，1.07 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4 M，2 mL)，且在室溫下攪拌溶液2小時。在減壓下濃縮混合物以提供呈白色固體狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(303 mg)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。產率99% (90.38%純度，UV=214 nm，ESI 285 (M+H)+ )。
步驟 3 ： (S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((R)-2- 羥基 -4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image459
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(303 mg，1.07 mmol)、(R)-2-羥基-4-甲基戊酸(169 mg，1.28 mmol)、HOBt (217 mg，1.61 mmol)、EDCI (308 mg，1.61 mmol)及DIEA (690 mg，5.35 mmol)於DMF (6 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~85% EtOAc/石油)純化以提供呈無色油狀之所需產物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-羥基-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(340 mg)。產率80% (90%純度，UV=214 nm，ESI 399 (M+H)+ )。步驟 4 ： (S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((R)-4- 甲基 -2-( 甲基磺醯氧基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image461
在0℃下向(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-2-羥基-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(340 mg，0.85 mmol)及Et3 N (258 mg，2.55 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加MsCl (116 mg，1.02 mmol)。在室溫下攪拌溶液16小時。將混合物倒入水中且用DCM (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~60% EtOAc/石油)純化以提供呈淡黃色油狀之所需產物(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊醯胺基)丙酸甲酯(337 mg)。產率83% (95%純度，UV=214 nm，ESI 477 (M+H)+ )。步驟 5 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2- 碘 -4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image463
在85℃下將(S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((R)-4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊醯胺基)丙酸甲酯(337 mg，0.71 mmol)、NaI (319 mg，2.13 mmol)及K2 CO3 (490 mg，3.55 mmol)於MeCN (20 mL)中之混合物攪拌20小時。將混合物冷卻至室溫且過濾。在減壓下濃縮濾液得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~40% EtOAc/石油)純化以提供呈淡黃色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-碘-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(233 mg)。產率64% (96%純度，UV=214 nm，ESI 509 (M+H)+ )。步驟 6 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(1- 側氧基 -3,4- 二氫異喹啉 -2(1H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image465
向3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮(135 mg，0.92 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加NaH (60%於油中，37 mg，0.92 mmol)，且在室溫下在N2 氛圍下攪拌溶液0.5小時。隨後在室溫下逐滴添加(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-碘-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(233 mg，0.46 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液，且在室溫下再攪拌反應混合物1小時。用HCl (1 M)溶液淬滅反應混合物。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-側氧基-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基)戊醯胺基)丙酸(52.7 mg)。
化合物 Z LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.67 min，ESI 514 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59-8.56 (m, 1H), 8.25-8.18 (m, 1H), 7.97-7.84 (m, 1H), 7.73 - 7.58 (m, 1H), 7.49 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.00 (m, 5H), 5.49 - 5.32 (m, 2H), 3.76 - 3.42 (m, 2H), 3.17 - 2.78 (m, 4H), 2.01 - 1.95 (m, 5H), 1.87 - 1.66 (m, 3H), 1.65 - 1.43 (m, 1H), 1.07 - 0.89 (m, 6H)。製備化合物 AA1 及 AA2 步驟 1 ： 4- 甲基 -2-(1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 ) 戊酸乙酯
Figure 02_image467
向異吲哚啉-1-酮(120 mg，0.90 mmol)於MeCN (10 mL)中之溶液中添加Cs2 CO3 (652 mg，2.0 mmol)及2-碘-4-甲基戊酸乙酯(540 mg，2.0 mmol)。在85℃下攪拌混合物12小時且過濾。在壓力下濃縮濾液，且殘餘物藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=3:1)純化，得到呈無色油狀之所需產物4-甲基-2-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)戊酸乙酯(120 mg)。產率50% (95%純度，UV=254 nm，ESI 276.1 (M+H)+ )。步驟 2 ： 4- 甲基 -2-(1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 ) 戊酸
Figure 02_image469
在室溫下將4-甲基-2-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)戊酸乙酯(120 mg，0.44 mmol)用含LiOH-H2 O (82 mg，2.0 mmol)之MeOH (4 mL)及H2 O (1 mL)處理2小時。在真空中移除溶劑，且用H2 O (10 mL)稀釋殘餘物。用1 N HCl將溶液調節至pH=6。藉由過濾收集固體以提供呈白色固體狀之標題化合物4-甲基-2-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)戊酸(95 mg)。產率81% (100%純度，UV=254 nm，ESI 248.1 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image471
在室溫下將4-甲基-2-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)戊酸(95 mg，0.38 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(114 mg，0.4 mmol)、EDCI (153 mg，0.8 mmol)、HOBt (108 mg，0.8 mmol)及DIEA (129 mg，1.0 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌16小時。在真空中移除溶劑，且殘餘物藉由矽膠管柱(石油:EtOAc=2:1)純化以提供呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(65 mg)。產率35% (97%純度，UV=254 nm，ESI 514.1 (M+H)+ )。步驟 4 ： 化合物 AA1 及 AA2
Figure 02_image473
在室溫下將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(65 mg，0.13 mmol)用含LiOH-H2 O (25.2 mg，0.6 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)處理2小時。用1 N HCl將溶液調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物AA1 (13 mg)及AA2 (12 mg)。
化合物 AA1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.61 min，ESI 500.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.55 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.69 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.59 - 7.45 (m, 3H), 7.16 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.42 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.92 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.89-1.85 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.54-1.49 (m, 1H), 1.03-0.97 (m, 6H)。
化合物 AA2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.63 min，ESI 500.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71 - 7.56 (m, 3H), 7.52 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.42 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 2.97-2.87 (m, 2H), 2.02 (s, 6H), 1.78 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.39-1.34 (m, 1H), 0.95-0.93 (m, 6H)。製備化合物 AB2 步驟 1 ： 2- 溴 -4- 甲醯基苄腈
Figure 02_image475
在-78℃向3-溴-4-腈基苯甲酸甲酯(500 mg，1.97 mmol)於25 mL DCM中之溶液中逐滴添加DIBAL-H (1 M於甲苯中，2.56 mL，2.56 mmol)。在-78℃下攪拌混合物4小時。用MeOH (10 mL)淬滅溶液。在室溫下攪拌混合物10分鐘，且用酒石酸鉀鈉飽和水溶液處理。用DCM (30 mL×2)萃取混合物。有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=5:1)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之所需產物2-溴-4-甲醯基苄腈(240 mg)。產率58% (97%純度，UV=214 nm，ESI 210 (M+H)+ )。步驟 2 ： 5- 甲醯基 -2'- 甲基聯苯 -2- 腈
Figure 02_image477
在N2 氛圍下在85℃下將2-溴-4-甲醯基苄腈(210 mg，1 mmol)、鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(272 mg，2 mmol)、Pd(PPh3 )2 Cl2 (70 mg，0.1 mmol)及K2 CO3 (415 mg，3 mmol)於甲苯(5 mL)、乙醇(1 mL)及H2 O (1 mL)中之混合物攪拌隔夜。添加水且溶液用DCM (30 mL×2)萃取。在減壓下濃縮合併之有機層，且殘餘物藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=5:1)純化，得到呈棕色固體狀之所需產物5-甲醯基-2'-甲基聯苯-2-腈(250 mg)，產率99% (100%純度，UV=214 nm，ESI 222 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3- 胺基 -3-(6- 氰基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image479
在85℃下將5-甲醯基-2'-甲基聯苯-2-腈(250 mg，1.1 mmol)、丙二酸(141 mg，1.4 mmol)及乙酸銨(435 mg，5.6 mmol)於EtOH (5 mL)中之混合物攪拌16小時。過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色油狀之粗產物3-胺基-3-(6-氰基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(120 mg)。產率38% (19%純度，UV=214 nm，ESI 281 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： 3- 胺基 -3-(6- 氰基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image481
在0℃下向3-胺基-3-(6-氰基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(120 mg，0.43 mmol)於15 mL 甲醇中之溶液中逐滴添加SOCl2 (2 mL)。使溶液升溫至室溫且攪拌2小時。在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之粗產物3-胺基-3-(6-氰基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(100 mg)。產率70% (28%純度，UV=214 nm，ESI 295 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 5 ： 3-(6- 氰基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image483
在室溫下將3-胺基-3-(6-氰基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(100 mg，0.3 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(76 mg，0.36 mmol)、EDCI (116 mg，0.6 mmol)、HOBt (61 mg，0.45 mmol)及DIEA (156 mg，1.21 mmol)於15 mL DCM中之混合物攪拌16小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(乙酸乙酯)純化殘餘物以得到呈棕色油狀之所需產物3-(6-氰基-2'-甲基聯苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg)。產率48% (50%純度，UV=214 nm，ESI 486 (M+H)+ )。步驟 6 ： 3-(6- 氰基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image485
在室溫下將3-(6-氰基-2'-甲基聯苯-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg，0.14 mmol)用含LiOH-H2 O (18 mg，0.43 mmol)之3 mL THF及1 mL H2 O處理1小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物AB1 (8.8 mg)及AB2 (8.4 mg)。
化合物 AB2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.59 min，ESI 472 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.57 - 7.55(m, 1H), 7.53 - 7.50 (m, 1H), 7.42 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.34 (m, 2H), 7.31 (dd, J = 10.7, 5.3 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.43 - 6.40 (m, 1H), 5.75 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.36 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.93 - 2.73 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.85 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.36 - 1.31 (m, 1H), 0.91 - 0.89 (m, 6H)。製備化合物 AC2 步驟 1 ： 6- 甲氧基 -2'- 甲基聯苯 -3- 甲醛
Figure 02_image487
在微波下在110℃下將3-溴-4-甲氧基苯甲醛(200 mg，0.93 mmol)、鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(190 mg，1.4 mmol)、PdCl2 (dppf) (34 mg，0.05 mmol)及K2 CO3 (386 mg，2.79 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)及H2 O (0.2 mL)中之混合物攪拌1小時。添加水且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機層，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=5:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物6-甲氧基-2'-甲基聯苯-3-甲醛(245 mg)。產率99% (96%純度，UV=214 nm，ESI 227 (M+H)+ )。步驟 2 ： 3- 胺基 -3-(6- 甲氧基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image489
在85℃下將6-甲氧基-2'-甲基聯苯-3-甲醛(245 mg，1.08 mmol)、丙二酸(100 mg，1.3 mmol)及乙酸銨(563 mg，5.41 mmol)於EtOH (10 mL)中之混合物攪拌20小時。過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色油狀之粗產物3-胺基-3-(6-甲氧基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(70 mg)。產率23% (22%純度，UV=214 nm，ESI 269 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： 3- 胺基 -3-(6- 甲氧基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image491
在0℃下向3-胺基-3-(6-甲氧基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸(70 mg，0.25 mmol)於10 mL甲醇中之溶液中逐滴添加SOCl2 (2 mL)。在65℃下攪拌溶液3小時。在真空中移除溶劑，得到呈棕色油狀之粗產物3-胺基-3-(6-甲氧基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(80 mg)。產率97% (27%純度，UV=214 nm，ESI 283 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： 3-(6- 甲氧基 -2'- 甲基聯苯 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image493
在室溫下將3-胺基-3-(6-甲氧基-2'-甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(80 mg，0.27 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(67 mg，0.32 mmol)、EDCI (102 mg，0.53 mmol)、HOBt (54 mg，0.4 mmol)及DIEA (104 mg，0.8 mmol)於10 mL DCM中之混合物攪拌16小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀(70 mg)之所需化合物AC1 (40 mg)及AC2 (30 mg)。產率60% (90%純度，UV=214 nm，ESI 491 (M+H)+ )。步驟 5 ：化合物 AC2
Figure 02_image495
在室溫下將AC1 (30 mg，0.06 mmol)用含LiOH-H2 O (8 mg，0.18 mmol)之3 mL THF及1 mL H2 O處理1小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需產物AC2 (10 mg)。
化合物 AC2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.60 min，ESI 477 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.64 (dd, J = 6.9, 1.6 Hz, 1H), 7.39 - 7.35(m, 1H), 7.26 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.12 - 7.03 (m, 3H), 7.00 - 6.99 (m, 2H), 6.87 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 6.8, 5.7 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 9.4, 6.8 Hz, 1H), 5.15 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.54 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.97 (s, 3H), 1.72 (d, J = 32.4 Hz, 2H), 1.22 (br, 1H), 0.78 - 0.76 (m, 6H)。製備化合物 AD1 及 AD2 步驟 1 ： 3-(3- 溴 -4- 甲基苯基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image497
向3-胺基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(1.8 g，6.6 mmol)及Et3 N (2.0 g，19.8 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(1.2 g，5.28 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16小時。在減壓下濃縮混合物得到粗產物，其藉由矽膠管柱(20% EtOAc/石油醚)純化以提供呈白色固體狀之所需產物3-(3-溴-4-甲基苯基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(2.0 g)。產率81% (96%純度，UV=214 nm，ESI 272 (MH-Boc)+ )。步驟 2 ： 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(4- 甲基 -3- 嗎啉基苯基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image499
在N2 下將3-(3-溴-4-甲基苯基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(550 mg，1.5 mmol)、嗎啉(261 mg，3.0 mmol)、Pd(OAc)2 (34 mg，0.15 mmol)、X-Phos (143 mg，0.30 mmol)及Cs2 CO3 (1.5 g，4.5 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物加熱至120℃且攪拌16小時。經由矽藻土墊過濾混合物且在減壓下濃縮濾液，得到粗產物，其藉由矽膠管柱(15% EtOAc/石油醚)純化以提供呈白色固體狀之所需產物3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-甲基-3-嗎啉基苯基)丙酸甲酯(200 mg)。產率34% (89%純度，UV=254 nm，ESI 379 (M+H)+ )。步驟 3 ： 3- 胺基 -3-(4- 甲基 -3- 嗎啉基苯基 ) 丙酸甲酯鹽酸鹽
Figure 02_image501
向3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-甲基-3-嗎啉基苯基)丙酸甲酯(130 mg，0.34 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中添加含HCl之二噁烷(4 M) (1 mL)且在室溫下攪拌溶液1小時。在減壓下濃縮混合物以提供呈白色固體狀之粗產物3-胺基-3-(4-甲基-3-嗎啉基苯基)丙酸甲酯鹽酸鹽(95 mg)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。產率99% (80%純度，UV=254 nm，ESI 279 (M+H)+ )。步驟 4 ： 4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(4- 甲基 -3- 嗎啉基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image503
在室溫下將3-胺基-3-(4-甲基-3-嗎啉基苯基)丙酸甲酯鹽酸鹽(95 mg，0.30 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊酸(79 mg，0.30 mmol)、HOBt (53 mg，0.39 mmol)、EDCI (69 mg，0.39 mmol)及DIEA (116 mg，0.90 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物得到殘餘物，其藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(4-甲基-3-嗎啉基苯基)丙酸甲酯(100 mg)。產率73% (98%純度，UV=254 nm，ESI 521 (M+H)+ )。步驟 5 ： 3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 側氧基喹唑啉 -3(4H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(4- 甲基 -3- 嗎啉基苯基 ) 丙酸
Figure 02_image505
在室溫下將3-((S)-4-甲基-2-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)戊醯胺基)-3-(4-甲基-3-嗎啉基苯基)丙酸甲酯(100 mg，0.19 mmol)用含LiOH-H2 O (24 mg，0.57 mmol)之THF (5 mL)及H2 O (2 mL)處理1小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5~6，且在減壓下移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需化合物AD1 (29 mg)及AD2 (13 mg)。
化合物 AD1 LC/MS C：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.54 min，ESI 507 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.41 (s, 1H), 8.28 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.88 - 7.82 (m, 1H), 7.70 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.94 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.75 (dd, J = 9.4, 6.9 Hz, 1H), 5.32 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.76 - 3.69 (m, 4H), 2.77 (dd, J = 10.5, 6.0 Hz, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.11 - 2.02 (m, 2H), 1.60 - 1.52 (m, 1H), 1.05 - 0.98 (m, 6H)。
化合物 AD2 LC/MS B：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.76 min，ESI 507 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.45 (s, 1H), 8.28 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.01 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.75 (dd, J = 10.0, 6.4 Hz, 1H), 5.31 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.88 - 3.81 (m, 4H), 2.95 - 2.89 (m, 4H), 2.79-2.74 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.07 - 1.92 (m, 2H), 1.48-1.43 (m, 1H), 0.98 - 0.95 (m, 6H)。製備化合物 AE1 及 AE2 步驟 1 ： 6- 甲基 -5- 鄰甲苯基菸鹼酸 甲酯
Figure 02_image507
將5-溴-6-甲基菸鹼酸甲酯(460 mg，2.0 mmol)、鄰甲苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(544 mg，4.0 mmol)及K2 CO3 (553 mg，4.0 mmol)於二噁烷(12 mL)及水(3 mL)中之溶液用鼓泡氮氣脫氣，並添加PdCl2 (PPh3 )2 (70 mg，0.1 mmol)且隨後在100℃下攪拌反應物1小時。用EtOAc (18 mL)及水(5 mL)稀釋混合物。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到棕色油狀物，其藉由矽膠管柱(石油醚/EtOAc=10:1~5:1)純化以提供呈黃色固體狀之所需產物6-甲基-5-鄰甲苯基菸鹼酸甲酯(410 mg)。產率85% (98%純度，UV=214 nm，ESI 242 (M+H)+ )。步驟 2 ： (6- 甲基 -5- 鄰甲苯基吡啶 -3- 基 ) 甲醇
Figure 02_image509
在-78℃下向6-甲基-5-鄰甲苯基菸鹼酸甲酯(591 mg，2.45 mmol)於甲苯(16 mL)中之溶液中逐滴添加DIBL-H (1M於甲苯中，7.35ml，7.35 mmol)。在-78℃下攪拌混合物1小時。在-10℃下用Na2 SO4 -10H2 O淬滅混合物且在室溫下攪拌溶液0.5小時，將混合物自鹽中濾出且用MeCN洗滌。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之粗產物(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)甲醇(490 mg)。產率90% (85%純度，UV=214 nm，ESI 214 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： 6- 甲基 -5- 鄰甲苯基 菸 醛
Figure 02_image511
向(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)甲醇(490 mg，2.32 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加PCC (750 mg，3.48 mmol)，且在室溫下攪拌溶液1小時。用EtOAc (12 mL)及水(6 mL)稀釋混合物。有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到棕色油狀物，其藉由矽膠管柱(DCM/MeOH=20:1~2:1)純化以提供呈橙色固體狀之所需產物6-甲基-5-鄰甲苯基菸醛(448 mg)。產率91% (99%純度，UV=214 nm，ESI212 (M+H)+ )。步驟 4 ： 3- 胺基 -3-(6- 甲基 -5- 鄰甲苯基吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image513
將6-甲基-5-鄰甲苯基菸醛(254 mg，1.2 mmol)、丙二酸(187 mg，1.8 mmol)、NH4 OAc (185 mg，2.4 mmol)於EtOH (16 mL)中之混合物加熱至回流隔夜。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH=8:1~1:1)純化殘餘物以提供呈棕色固體狀之粗產物3-胺基-3-(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)丙酸(155 mg)。產率31% (91%純度，UV=254 nm，ESI 271 (M+H)+ )。步驟 5 ： 3- 胺基 -3-(6- 甲基 -5- 鄰甲苯基吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image515
在室溫下向3-胺基-3-(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)丙酸(128 mg. 0.31 mmol)於MeOH (5 mL)中之混合物中添加SOCl2 (184 mg，1.55 mmol)。在室溫下攪拌混合物1小時。溶液用NaHCO3 飽和溶液調節至pH=7~8，且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。在減壓下濃縮有機層，得到油狀物，其藉由矽膠管柱(DCM:MeOH=20:1~2:1)純化以提供呈綠色油狀物之所需產物3-胺基-3-(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯(41 mg)。產率47% (99%純度，UV=254 nm，ESI 284 (M+H)+ )。步驟 6 ： 3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(6- 甲基 -5- 鄰甲苯基吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image517
在室溫下將3-胺基-3-(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯(41 mg，0.14 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(34 mg，0.15 mmol)、EDCI (41 mg，0.21 mmol)、HOBt (29 mg，0.21 mmol)及DIEA (56 mg，0.43 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌0.5小時。用DCM (10 mL)及5 mL水稀釋混合物。有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液得到棕色油狀物，其藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:10)純化以提供呈無色油狀之所需產物3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)丙酸甲酯(53 mg)。產率75% (99%純度，UV=254 nm，ESI 490 (M+H)+ )。步驟 5 ： 化合物 AE1 及 AE2
Figure 02_image519
在室溫下將3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(6-甲基-5-鄰甲苯基吡啶-3-基)丙酸(53 mg，0.108 mmol)用含LiOH (1 M於H2 O中，0.54 mL)之THF (2 mL)處理1小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6，且在真空中移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30-64% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物AE1 (14 mg)及AE2 (11 mg)。
化合物 AE1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=8.25 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.40 (s, 1H), 7.57 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.38 - 7.24 (m, 3H), 7.05 (dd, J = 26.6, 7.4 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 7.1, 1.9 Hz, 1H), 5.70 - 5.65 (m, 1H), 5.38 (dd, J = 15.1, 7.7 Hz, 1H), 2.99 - 2.78 (m, 2H), 2.21 (dd, J = 13.4, 2.6 Hz, 6H), 2.10 - 1.89 (m, 5H), 1.45 - 1.42 (m, 1H), 0.97 - 0.94 (m, 6H)。
化合物 AE2-P2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=8.44 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.46 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 7.0, 5.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 7.42 - 7.23 (m, 3H), 7.12 (dd, J = 10.8, 7.3 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.69 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 5.34 - 5.32 (m, 1H), 3.02 - 2.76 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.91 - 1.71 (m, 2H), 1.43 - 1.22 (m, 1H), 0.98 - 0.75 (m, 6H)。製備化合物 AF1 及 AF2 步驟 1 ： 5- 溴 -6- 碘 菸鹼酸 甲酯
Figure 02_image521
在室溫下將5-溴-6-氯菸鹼酸甲酯(3.2 g，0.013 mol)、碘基三甲基矽烷(2.57 g，0.013 mol)及NaI (5.8 g，0.039 mol)於MeCN (50 mL)中之混合物攪拌16小時。用2 N NaOH溶液將混合物調節至pH=8且用EtOAc (50 mL×2)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機層，得到呈白色固體狀之粗產物5-溴-6-碘菸鹼酸甲酯(290 mg)。產率100% (43%純度，UV=254 nm，ESI 341.9 (M+H)+ )。步驟 2 ： 5- 溴 -6- 甲基菸鹼酸甲酯
Figure 02_image523
在75℃下將5-溴-6-碘菸鹼酸甲酯(5.2 g，0.015 mol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼𠮿(50%於THF中，6.4 mL，0.045 mol)、PdCl2 (dppf) (1.11 g，1.52 mmol)及K2 CO3 (6.3 g，0.046 mol)於1,4-二噁烷(80 mL)之混合物攪拌16小時。添加水(50 mL)，且用EtOAc (60 mL×2)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機層，且藉由急驟管柱層析法(20% EtOAc/石油醚)純化殘餘物以提供呈白色固體狀之所需產物5-溴-6-甲基菸鹼酸甲酯(1.67 g)。產率48% (92%純度，UV=254 nm，ESI 230 (M+H)+ )。步驟 3 ： (S)-6- 甲基 -5-(3- 甲基嗎啉基 ) 菸鹼酸甲酯
Figure 02_image525
在N2 氛圍下將5-溴-6-甲基菸鹼酸甲酯(1.6 g，6.95 mmol)、(S)-3-甲基嗎啉(2.1 g，20.85 mmol)、RuPhos-Pd-G2 (270 mg，0.35 mmol)及Cs2 CO3 (6.8 g，20.85 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物加熱至110℃且攪拌24小時。經由矽藻土墊過濾混合物且在減壓下濃縮濾液，得到粗產物，其藉由矽膠管柱(20% EtOAc/石油醚)純化以提供呈白色固體狀之所需產物(S)-6-甲基-5-(3-甲基嗎啉基)菸鹼酸甲酯(290 mg)。產率17% (43%純度，UV=254 nm，ESI 251 (M+H)+ )。步驟 4 ： (S)-(6- 甲基 -5-(3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 甲醇
Figure 02_image527
在-78℃下向(S)-6-甲基-5-(3-甲基嗎啉基)菸鹼酸甲酯(290 mg，1.16 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中逐滴添加DIBAL-H (1 M於己烷中，3.5 mL，3.5 mmol)，且在室溫下攪拌反應溶液16小時。緩慢添加水(5 mL)且攪拌混合物10分鐘。經由矽藻土墊過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液以提供呈無色油狀之粗產物(S)-(6-甲基-5-(3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)甲醇(220 mg)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。產率86% (60%純度，UV=254 nm，ESI 223 (M+H)+ )。步驟 5 ： (S)-6- 甲基 -5-(3- 甲基嗎啉基 ) 菸 醛
Figure 02_image529
向(S)-(6-甲基-5-(3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)甲醇(220 mg，0.99 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加PCC (320 mg，1.49 mmol)且在室溫下攪拌溶液2小時。經由矽藻土墊過濾混合物且在減壓下濃縮濾液以提供粗產物，其藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:1)純化以提供呈無色油狀之所需產物(S)-6-甲基-5-(3-甲基嗎啉基)菸醛(150 mg)。產率69% (44%純度，UV=254 nm，ESI 221 (M+H)+ )。步驟 6 ： 3- 胺基 -3-(6- 甲基 -5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image531
向(S)-6-甲基-5-(3-甲基嗎啉基)菸醛(130 mg，0.59 mmol)於EtOH (10 mL)中之溶液中添加丙二酸(92 mg，0.89 mmol)及NH4 OAc (136 mg，1.77 mmol)。將混合物加熱至60℃且攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到呈白色固體狀之粗產物3-胺基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸(164 mg)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。產率100% (21%純度，UV=214 nm，ESI 280 (M+H)+ )。步驟 7 ： 3- 胺基 -3-(6- 甲基 -5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image533
在0℃下向3-胺基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸(164 mg，0.59 mmol)於MeOH (10 mL)中之溶液中逐滴添加SOCl2 (1 mL)，且在室溫下攪拌溶液2小時。添加水(20 mL)且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。有機層用NaHCO3 飽和水溶液(10 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:1)純化，得到呈白色固體之所需產物3-(2',6-二甲基-3-胺基-3-(3-溴-4-甲基苯基)丙酸甲酯(50 mg)。產率29%，兩個步驟(76%純度，UV=254 nm，ESI 294 (M+H)+ )。步驟 8 ： 3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(6- 甲基 -5-((S)-3- 甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 甲酯
Figure 02_image535
在室溫下將3-胺基-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg，0.17 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(49 mg，0.22 mmol)、HOBt (34 mg，0.26 mmol)、EDCI (49 mg，0.26 mmol)及DIEA (66 mg，0.51 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物得到殘餘物，其藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(60 mg)。產率71% (58%純度，UV=254 nm，ESI 499 (M+H)+ )。步驟 9 ：化合物 AF1 、 AF2 及 AF3
Figure 02_image537
在室溫下將3-((S)-3-((S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(6-甲基-5-((S)-3-甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯甲酯(60 mg，0.12 mmol)用含LiOH-H2 O (15 mg，0.36 mmol)之THF (5 mL)及H2 O (2 mL)處理1小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5~6。在減壓下移除溶劑，且藉由製備型HPLC B (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之化合物AF1 (4 mg)、AF2 (2 mg)及AF3 (2 mg)。
化合物 AF1 LC/MS A：97%純度，UV=214 nm，Rt=1.26 min，ESI 485 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.14 (s, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.68-5.66 (m, 1H), 5.32 (s, 1H), 3.92 - 3.71 (m, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.20-3.15 (m, 1H), 2.89 - 2.73 (m, 3H), 2.69-2.66 (m, 0.5H), 2.58-2.55 (m, 0.5H), 2.47 (s, 3H), 2.24 (d, J = 4.1 Hz, 3H), 2.01 - 1.86 (m, 2H), 1.48-1.43 (m, 1H), 0.99 - 0.96 (m, 6H), 0.72 (d, J = 6.1 Hz, 1.5H), 0.63 (d, J = 6.1 Hz, 1.5H)。
化合物 AF2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt=1.27 min，ESI 485 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.21 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.41 (s, 1H), 6.32 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.70 - 5.65 (m, 1H), 5.30 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.94 - 3.77 (m, 3H), 3.43 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 2.97 - 2.71 (m, 4H), 2.53 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.87 - 1.82 (m, 2H), 1.39 - 1.33 (m, 1H), 0.95 - 0.91 (m, 6H), 0.80 (d, J = 6.2 Hz, 3H)。
化合物 AF3 LC/MS A：96%純度，UV=214 nm，Rt=1.28 min，ESI 485 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.21 (s, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 2H), 6.40 (s, 1H), 6.32 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.72-5.69 (m, 1H), 5.29 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.94 - 3.76 (m, 3H), 3.40 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 2.97 - 2.73 (m, 4H), 2.53 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.87-1.80 (m, 2H), 1.38-1.32 (m, 1H), 0.94 - 0.91 (m, 6H), 0.79 (d, J = 6.1 Hz, 3H)。製備化合物 AG1b 步驟 1 ： (S)-3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-( 第三丁氧基羰基胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image539
在N2 下在120℃下將(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(300 mg，0.84 mmol)、(S)-2-甲基哌啶(166 mg，1.68 mmol)、Pd(OAc)2 (19 mg，0.084 mmol)、Xphos (80 mg，0.168 mmol)及Cs2 CO3 (822 mg，2.52 mmol)於甲苯(2 mL)中之混合物攪拌16小時。經矽藻土過濾混合物且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(30 mg)。產率10% (98%純度，UV=214 nm，ESI 378 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-((S)-2- 甲基 哌啶 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image541
在室溫下用含HCl (1 mL)之二噁烷(5 mL)將(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg，0.13 mmol)處理1小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37 mg)。產率100% (98%純度，UV=214 nm，ESI 278 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： (3S)-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(5-((S)-2- 甲基 哌啶 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image543
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37 mg，0.13mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(29 mg，0.13 mmol)、HOBt (27 mg，0.20 mmol)、EDCI (38 mg，0.20 mmol)及DIEA (52 mg，0.40 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入10 mL水中且用DCM (30 mL×3)萃取溶液。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之所需產物(3S)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40 mg)。產率63% (95%純度，UV=254 nm，ESI 483 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (S)-3-((S)-4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(5-((S)-2- 甲基哌啶 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image545
在室溫下用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6 mL)之THF (2 mL)將(3S)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40 mg，0.08 mmol)處理2小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6，且在真空中移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物AG1a (7.4 mg)及呈白色固體之AG1b (10.0 mg)。
化合物 AG1b LC/MS A：98%純度，UV=214 nm，Rt = 1.57 min，ESI 469 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.09 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 6.30 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H), 5.70 (dd, J = 9.3, 6.8 Hz, 1H), 5.26 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.10 (s, 1H), 3.39 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.00 - 3.04 (m, 1H), 2.76 - 2.89 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.95 - 1.57 (m, 9H), 1.42 - 1.28 (m, 1H), 1.07 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.90 - 0.93 (m, 6H)。
製備化合物 AG2b 步驟 1 ： (R)-3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-( 第三丁氧基羰基胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image547
在N2 在120℃下將(R)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(300 mg，0.84 mmol)、(S)-2-甲基哌啶(166 mg，1.68 mmol)、Pd(OAc)2 (19 mg，0.084 mmol)、Xphos (80 mg，0.168 mmol)及Cs2 CO3 (822 mg，2.52 mmol)於甲苯(2 mL)中之混合物攪拌16小時。經矽藻土過濾混合物且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(30 mg)。產率10% (98%純度，UV=214 nm，ESI 378 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (R)-3- 胺基 -3-(5-((S)-2- 甲基哌啶 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image549
在室溫下用含HCl (1 mL)之二噁烷(5 mL)將(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg，0.13 mmol)處理1小時。在真空中移除溶劑以提供呈黃色油狀之粗產物(R)-3-胺基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37 mg)。產率100% (98%純度，UV=214 nm，ESI 278 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。
步驟 3 ： (3R)-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(5-((S)-2- 甲基哌啶 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image551
在室溫下將(R)-3-胺基-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(37 mg，0.13 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(29 mg，0.13 mmol)、HOBt (27 mg，0.20 mmol)、EDCI (38 mg，0.20 mmol)及DIEA (52 mg，0.40 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入10 mL水中且用DCM (30×3)萃取溶液。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之所需產物(3R)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40 mg)。產率63% (95%純度，UV=254 nm，ESI 483 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3R)-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 )-3-(5-((S)-2- 甲基哌啶 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image553
在室溫下用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6 mL)之THF (2 mL)將(3R)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)-3-(5-((S)-2-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(40 mg，0.08 mmol)處理2小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6，且在真空中移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30-70% MeCN)純化所得殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物AG2a (1.3 mg)及AG2b (5.6 mg)。
化合物AG2b LC/MS A：98%純度，UV=214 nm，Rt = 1.58 min，ESI 469 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.11 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.64 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.43 - 6.25 (m, 2H), 5.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.29 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.42 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.04 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 2.82 - 2.86 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.98 - 1.58 (m, 8H), 1.41 - 1.31 (m, 1H), 1.09 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.95 - 0.91 (m, 6H)。
製備化合物 AH1 步驟 1 ： (R)-3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸苄酯鹽酸鹽
Figure 02_image555
向(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(150 mg，0.33 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2 mL)且在室溫下攪拌溶液1小時。在減壓下濃縮混合物以提供呈淡黃色油狀之粗產物(R)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯鹽酸鹽(117 mg)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。產率99% (97%純度，UV=214 nm，ESI 361(M+H)+ )。步驟 2 ： (3R)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image557
在室溫下將(R)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯鹽酸鹽(117 mg，0.325 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(71 mg，0.34 mmol)、HOBt (66 mg，0.49 mmol)、EDCI (94 mg，0.49 mmol)及DIEA (126 mg，0.98 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌3小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型TLC (EtOAc:石油醚=1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸苄酯(80 mg)。產率44% (70%純度，UV=214 nm，ESI 552 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3R)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image559
向(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸苄酯(80 mg，0.145 mmol)於THF (6 mL)中之溶液中添加Pd/C (10%，40 mg)，且在H2 氛圍下在室溫下攪拌溶液16小時。經矽藻土過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化以提供呈白色固體之所需產物(3R)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基哌啶-1-基)戊醯胺基)丙酸 (26.2 mg)。
化合物 AH1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.58 min，ESI 466 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.67-7.59 (m, 1H), 7.27 - 7.07 (m, 3H), 5.42 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.31 - 5.19 (m, 1H), 3.32 - 3.09 (m, 2H), 2.98 - 2.86 (m, 2H), 2.56 - 2.21 (m, 2H), 2.06 - 1.95 (m, 6H), 1.91 - 1.36 (m, 7H), 1.09 - 0.83 (m, 6H)。
製備化合物 AH2 步驟 1 ： 3- 胺基 -3-(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image561
向5-溴菸醛(20.0 g，107.5 mmol)於EtOH (100 mL)中之溶液中添加丙二酸(11.2 g，107.5 mmol)及NH4 OAc (16.6 g，215.0 mmol)。將混合物加熱至80℃且攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到呈白色固體之粗產物3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(26.3 g)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。(ESI 245 (M+H)+ ).
步驟 2 ： 3- 胺基 -3-(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image563
在0℃下向3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸(26.3 g，107.3 mmol)於MeOH (50 mL)中之溶液中逐滴添加SOCl2 (8 mL)，且在80℃下攪拌反應混合物2小時。添加水(50 mL)且用EtOAc (50 mL×3)萃取溶液。合併之有機相用NaHCO3 飽和水溶液(20 mL×2)及鹽水(20 mL)洗滌。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(5% MeOH/EtOAc)純化，得到呈無色油狀之所需產物3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(10 g)。產率36%，兩個步驟(73%純度，UV=214 nm，ESI 260 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image565
向3-胺基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯(5.0 g, 19.3 mmol)及Et3 N (5.8 g，57.9 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(4.3 g，19.3 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16小時。在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(35% EtOAc/石油醚)純化以提供呈無色油狀之所需產物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(5.1 g)。產率74% (86%純度，UV=214 nm，ESI 361 (M+H)+ )。
步驟 4 ： 3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸
Figure 02_image567
向3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(5.1 g，14.2 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加含LiOH-H2 O (1.2 g, 28.4 mmol)之水(5 mL)。在室溫下攪拌混合物1小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=6~7。用EtOAc (20 mL×5)萃取混合物。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈無色油狀之粗產物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(4.2 g)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。產率86% (98%純度，UV=214 nm，ESI 347 (M+H)+ )。
步驟 5 ： 3-(5- 溴吡啶 -3- 基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image569
向3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(4.2 g，12.2 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (3.4 g, 24.4 mmol)及(溴乙基)苯(2.5 g，14.6 mmol)。在室溫下攪拌混合物16小時。添加水(100 mL)且用EtOAc (30 mL×3)萃取溶液。合併之有機相用鹽水(20 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(35% EtOAc/石油醚)純化，得到呈無色油狀之產物3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸苄酯(4.2 g)。產率79% (83%純度，UV=214 nm，ESI 436 (M+H)+ )。
步驟 6 ： 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image571
在微波中在N2 氛圍下將3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸苄酯(4.3 g，9.9 mmol)、(2,6-二甲基苯基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(1.78 g，11.9 mmol)、PdCl2 (dppf) (724 mg，0.99 mmol)及K2 CO3 (2.7 g，19.8 mmol)於二噁烷(10 mL)及H2 O (2 mL)中之混合物加熱至110℃維持1小時。添加水(20 mL)且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機相，得到殘餘物，其藉由矽膠管柱(35% EtOAc/石油醚)純化，得到呈棕色油狀之所需產物3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(3.1 g)。產率70% (94 %純度，UV=214 nm，ESI 461 (M+H)+ )。藉由製備型對掌性HPLC將外消旋產物分離成呈白色固體之(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(1.3 g)及(R)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(1.3 g)。
步驟 7 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸苄酯鹽酸鹽
Figure 02_image573
向(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯(150 mg，0.33 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2 mL)且在室溫下攪拌溶液1小時。在減壓下濃縮混合物以提供呈淡黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯鹽酸鹽(117 mg)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。預期產率99% (97.70%純度，UV=214 nm，ESI 361 (M+H)+ )。
步驟 8 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸苄酯
Figure 02_image575
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸苄酯鹽酸鹽(117 mg，0.325 mmol)、(S)-4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(71 mg，0.34 mmol)、HOBt (66 mg，0.49 mmol)、EDCI (94 mg，0.49 mmol)及DIEA (126 mg，0.98 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌3小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型TLC(EtOAc:石油醚=1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸苄酯(103 mg)。產率57% (83%純度，UV=214 nm，ESI 552 (M+H)+ )。
步驟 9 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image577
向(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸苄酯(103 mg，0.19 mmol)於THF (6 mL)中之溶液中添加Pd/C (10%，50 mg)且在H2 氛圍下在室溫下攪拌混合物24小時。經矽藻土過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC A (30~70 MeCN)純化以提供呈白色固體之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基哌啶-1-基)戊醯胺基)丙酸(38.8 mg )。
化合物 AH2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.58 min，ESI 466 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (dd, J = 6.2, 2.1 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.67-7.59 (m, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 7.15 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 5.41 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 5.32 - 5.20 (m, 1H), 3.30 - 3.20 (m, 2H), 2.91 (dd, J = 7.0, 4.9 Hz, 2H), 2.52 - 2.23 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 2.01 (d, J = 3.0 Hz, 3H), 1.92 - 1.56 (m, 6H), 1.55-1.41 (m, 1H), 0.99-0.90 (m, 6H)。
製備化合物 AI 步驟 1 ： (R)-2- 溴戊酸
Figure 02_image579
在N2 氛圍下在0℃下向(R)-2-胺基戊酸(2.0 g, 17.1 mmol)於含40% HBr之H2 O (10 mL)中之溶液中逐滴添加含NaNO2 (1.89 g，27.4 mmol)之H2 O (8 mL)溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時。用EtOAc (20 mL×2)萃取混合物。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色油狀之粗產物(R)-2-溴戊酸(2.5 g)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。產率81%
步驟 2 ： (S)-2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image581
向(R)-2-溴戊酸(1.45 g，8.02 mmol)於無水THF (15 mL)中之溶液中添加(t-BuO)2 Mg (1.56 g，9.16 mmol)。在N2 氛圍下在30℃下攪拌混合物3小時。隨後，將4-甲基吡啶-2-醇(500 mg，4.58 mmol)及t-BuOK (524 mg，34.67 mmol)添加至反應混合物。隨後，在N2 氛圍下在70℃下攪拌混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用HCl (1 M)酸化至pH=3~4。混合物用EtOAc (20 mL×5)萃取且合併之有機層經Na2 SO4 乾燥。過濾混合物且在減壓下濃縮濾液且藉由逆相急驟層析法(0%~60% MeOH/H2 O (5% TFA))純化以提供所需產物(S)-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(110 mg)。產率11% (94%純度，UV=214 nm，ESI 210 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image583
在室溫下將(S)-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(65 mg，0.31 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(83 mg，0.26 mmol)、HOBt (42 mg，0.31 mmol)、EDCI (59 mg，0.31 mmol)及DIEA (101 mg，0.78 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物，其藉由製備型TLC (石油醚:EtOAc 1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg)。產率57% (100%純度，UV=214 nm，ESI 476 (M+H)+ )。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image585
在室溫下用含LiOH-H2 O (19mg，0.45 mmol)之THF (4 mL)及H2 O (2 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg，0.15 mmol)處理1小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5~6。在減壓下移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AI1 (16.7 mg)及AI2 (16.8 mg)。
化合物 AI1 LC/MS A 100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.54 min，ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.53 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.21 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 6.26 (s, 1H), 6.23 (dd, J = 7.1, 1.8 Hz, 1H), 5.57 (dd, J = 8.8, 7.1 Hz, 1H), 5.42 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.96 - 1.88 (m, 1H), 1.87 (s, 3H), 1.37 - 1.27 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。
化合物 AI2 LC/MS A 100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.57 min，ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H), 5.56 (dd, J = 8.9, 6.9 Hz, 1H), 5.39 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.96-2.87(m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.05 - 1.93 (m, 7H), 1.90 - 1.79 (m, 1H), 1.31 - 1.12 (m, 2H), 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。
製備化合物 AJ1a 及 AJ1b 步驟 1 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2R)-4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image587
向W1a (60 mg 0.13 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加Pd/C (10%，50 mg)且在H2 氛圍下在40℃下攪拌混合物48小時。經矽藻土過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液以提供殘餘物，其藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化，得到呈白色固體之所需產物AJ1a (23.6 mg)。
化合物 AJ1a LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.64 min，ESI 480 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.57 (dd, J = 3.9, 2.1 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.19 - 7.13 (m, 2H), 5.42 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.26 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 3.42 - 3.34 (m, 1H), 3.16 (m, 1H), 2.94 (dd, J = 6.8, 1.9 Hz, 2H), 2.49 - 2.29 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 2.00 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 1.98 - 1.61 (m, 5H), 1.56 - 1.13 (m, 2H), 0.96 - 0.91 (m, 9H)。步驟 2 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((2S)-4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image589
向W1b (30 mg，0.06 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加Pd/C (10%，50 mg)且在40℃下在H2 氛圍下攪拌20小時。經矽藻土過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液以提供殘餘物，其藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化，得到呈白色固體之所需產物AJ1b (9.1 mg)。
化合物AJ1b LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.62 min，ESI 480 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.42 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 5.27-5.23(m, 1H), 3.50 - 3.36 (m, 1H), 3.31 - 3.20 (m, 1H), 2.98 - 2.88 (m, 2H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.01 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.94-1.88 (m, 2H), 1.74 - 1.34 (m, 4H), 1.08 - 1.00 (m, 3H), 0.96 - 0.83 (m, 6H)。
製備化合物 AK1 及 AK2 步驟 1 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(5-(2,2- 二甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image591
在N2 氛圍下在120℃下將(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(150 mg，0.42 mmol)、2,2-二甲基嗎啉(96 mg，0.84 mmol)、Pd(OAc)2 (9 mg，0.04 mmol)、X-Phos (40 mg，0.08 mmol)及Cs2 CO3 (408 mg，1.25 mmol)於甲苯(2 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物冷卻至室溫且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型TLC (EtOAc:石油醚=1:2)純化，獲得呈無色油狀之所需產物(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,2-二甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(88 mg)。產率54% (21%純度，UV=214 nm，ESI 394 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2,2- 二甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯鹽酸鹽
Figure 02_image593
向(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,2-二甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯甲酯(88 mg，0.22 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4 M，10 mL)，且在室溫下攪拌溶液3小時。在減壓下濃縮混合物以提供呈淡黃色固體之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2,2-二甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(80 mg)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。產率100% (79%純度，UV=214 nm，ESI 294 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,2- 二甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image595
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2,2-二甲基嗎啉基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽 (80 mg，0.24 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(65 mg，0.29 mmol)、HOBt (49 mg，0.36 mmol)、EDCI (93 mg，0.49 mmol)及DIEA (125 mg，0.97 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到粗產物，其藉由製備型TLC (EtOAc)純化，得到呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,2-二甲基嗎啉基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(68 mg)。產率56% (69%純度，UV=214 nm，ESI 499 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,2- 二甲基嗎啉基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image597
在室溫下用含LiOH-H2 O (18 mg，0.42 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2,2-二甲基嗎啉基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(68 mg，0.14 mmol)處理2小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30%至70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物AK1 (20.9 mg)及AK2 (13.6 mg)。
化合物 AK1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.49 min，ESI 485 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.08 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.36 (s, 1H), 6.28 (dd, J = 7.1, 1.8 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 9.3, 6.8 Hz, 1H), 5.33 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.95 - 3.82 (m, 2H), 3.18 - 3.11 (m, 2H), 3.06 - 2.99 (m, 2H), 2.83 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.98 - 1.83 (m, 2H), 1.49 - 1.43 (dtm, 1H), 1.32 (s, 6H), 0.99 - 0.96 (m, 6H)。
化合物 AK2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.52 min，ESI 485 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.14 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.1, 1.8 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 9.1, 7.0 Hz, 1H), 5.28 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.98 - 3.79 (m, 2H), 3.24 - 3.17 (m, 2H), 3.08 (s, 2H), 2.91-2.79 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.93 - 1.75 (m, 2H), 1.40 - 1.35 (m, 1H), 1.34 (s, 6H), 0.94 - 0.90 (m, 6H)。
製備化合物 AL1 及 AL 2步驟 1 ： 2-(5,5- 二甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image599
向5,5-二甲基哌啶-2-酮(100 mg，0.79 mmol)於DMF (3 mL)中添加NaH (60%於油中，158 mg，3.95 mmol)且在120℃下攪拌2小時。隨後，添加2-碘-4-甲基戊酸乙酯(320 mg，1.19 mmol)且在室溫下攪拌溶液2小時。用MeOH淬滅反應且在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC B (20~50% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物2-(5,5-二甲基-2-側氧基哌啶-1-基)-4-甲基戊酸(38 mg)。產率20% (100%純度，UV=254 nm，ESI 242 (M+H)+ )。步驟 2 ： (3S)-3-(2-(5,5- 二甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image601
在室溫下將2-(5,5-二甲基-2-側氧基哌啶-1-基)-4-甲基戊酸(38 mg，0.16 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(56 mg，0.18 mmol)、HOBt (26 mg，0.19 mmol)、EDCI (36 mg，0.19 mmol)及DIEA (62 mg，0.48 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌16小時。在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物，其藉由製備型TLC(石油醚:EtOAc 1:1)純化，獲得呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-側氧基哌啶-1-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg)。產率63% (94%純度，UV=254 nm，ESI 508 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3S)-3-(2-(5,5- 二甲基 -2- 側氧基哌啶 -1- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image603
在室溫下用含LiOH-H2 O (21 mg，0.5 mmol)之THF (5 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-側氧基哌啶-1-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg，0.1 mmol)處理1小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5~6，且在減壓下移除溶劑。藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之產物(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-側氧基哌啶-1-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸(35 mg)。產率72% (100 %純度，UV=254 nm，ESI 494 (M+H)+ )。藉由製備型對掌性SFC F將非對映異構體(3S)-3-(2-(5,5-二甲基-2-側氧基哌啶-1-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸分離成兩種呈白色固體之化合物AL1 (10 mg)及AL2 (11 mg)。
化合物 AL1 LC/MS B 99%純度，UV=214 nm，Rt = 1.66 min，ESI 494 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.46 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.13 - 6.98 (m, 3H), 5.27 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 5.18 - 5.08 (m, 1H), 3.02 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.91 (dd, J = 25.8, 9.8 Hz, 1H), 2.84 - 2.70 (m, 2H), 2.46 - 2.25 (m, 2H), 1.90 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.62 - 1.45 (m, 3H), 1.45 - 1.34 (m, 1H), 1.35 - 1.27 (m, 1H), 0.91 (d, J = 1.2 Hz, 6H), 0.83 - 0.71 (m, 6H)。
化合物 AL2 LC/MS B 99%純度，UV=214 nm，Rt = 1.66 min，ESI 494 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.23 - 7.14 (m, 3H), 5.43 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 8.4, 7.1 Hz, 1H), 3.06 (dd, J = 19.3, 9.8 Hz, 1H), 2.97 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.92 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.42 - 2.25 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.76 - 1.66 (m, 1H), 1.64 - 1.58 (m, 1H), 1.58 - 1.47 (m, 2H), 1.46 - 1.41 (m, 1H), 1.05 - 0.86 (m, 9H), 0.77 (s, 3H)。
製備化合物 AM 步驟 1 ： 4- 甲基 -2-( 甲基磺醯氧基 ) 戊酸酯
Figure 02_image605
在0℃下向2-羥基-4-甲基戊酸乙酯(5.0 g，31.2 mmol)及Et3 N (6.3 g，62.4 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中逐滴添加MsCl (4.3 g，37.4 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色油狀之粗產物4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(7.2 g)。產率95% (68%純度，UV=214 nm，ESI 239 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 2 ： 2- 碘 -4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image607
向4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(2.0 g, 8.4 mmol)於MeCN (80 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (3.5 g，25.2 mmol)及NaI (2.5 g，16.8 mmol)。在80℃下攪拌反應混合物16小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀之粗產物2-碘-4-甲基戊酸乙酯(1.8 g)。產率79%。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： 4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -3,4- 二氫喹啉 -1(2H)- 基 ) 戊酸乙酯
Figure 02_image609
向3,4-二氫-2(1H)-喹啉酮(500 mg，3.4 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加60% NaH (163 mg，6.8 mmol)且在120℃下攪拌1小時，隨後冷卻至室溫且添加2-碘-4-甲基戊酸乙酯(1.0 g，3.4 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~10% EtOAc/石油醚)純化，獲得呈白色固體之所需產物4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊酸酯(370 mg)。產率38% (89%純度，UV=214 nm，ESI 290 (M+H)+ )。步驟 4 ： 4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -3,4- 二氫喹啉 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image611
在室溫下用含LiOH-H2 O (74 mg，1.77 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊酸酯(170 mg，0.59 mmol)處理16小時。用HCl (1 M)將混合物酸化直至pH=3。用EtOAc（20 mL×2)萃取水溶液，且合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到呈無色油狀之粗產物4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊酸(150 mg)。產率95% (97%純度，UV=214 nm，ESI 262 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 5 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image613
向(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯甲酯(70 mg，0.18 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4 M，2 mL)，且在室溫下攪拌溶液2小時。在真空中移除溶劑以提供呈白色固體之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(50 mg)。產率99% (88%純度，UV=214 nm，ESI 285 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 6 ： 3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -3,4- 二氫喹啉 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸酯
Figure 02_image615
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(50 mg，0.18 mmol)、4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊酸(56 mg，0.22 mmol)、HOBt (30 mg，0.22 mmol)、EDCI (60 mg，0.22 mmol)及DIEA (93 mg，0.72 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌3小時。將混合物倒入水中且用DCM (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~70% EtOAc/石油醚)純化，得到呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg)。產率75% (93%純度，UV=214 nm，ESI 528 (M+H)+ )。步驟 7 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(2- 側氧基 -3,4- 二氫喹啉 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image617
在室溫下用含LiOH-H2 O (16 mg，0.39 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg，0.13 mmol)處理4小時。用HCl (1 M)將混合物酸化直至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(2-側氧基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸(16 mg)。
化合物 AM LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.67 min，ESI 514 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (s, 0.5H), 8.48 (s, 0.5H), 8.25 (s, 0.5H), 8.19 (s, 0.5H), 7.67 (s, 0.5H), 7.45 (s, 0.5H), 7.31 - 6.77 (m, 7H), 5.67 - 5.52 (m, 2H), 3.00 - 2.77 (m, 4H), 2.77 - 2.58 (m, 2H), 2.05 - 1.87 (m, 8H), 1.35 (s, 1H), 0.96 - 0.75 (m, 6H)。製備化合物 AN1 及 AN2 步驟 1 ： (S)-5-(1-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ) 吡啶 -3- 基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸
Figure 02_image619
在N2 氛圍下在105℃下將(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸甲酯(600 mg，1.68 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-辛甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧雜硼戊環)(1,3,2-dioxaborolane)(850 mg，3.36 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (61 mg，0.084 mmol)及KOAc (3300 mg，3.36 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物攪拌16小時。將混合物冷卻至室溫且經矽藻土過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由逆相管柱(0%~50% MeOH/H2 O (TFA5%))純化，得到呈無色油狀之所需產物(S)-5-(1-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)吡啶-3-基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(350 mg)。產率64% (82.10%純度，UV=214 nm，ESI 325 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(5-(2- 氯 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image621
在80℃下在微波中在N2 氛圍下將2-溴-1-氯-3-甲基苯(100 mg，0.49 mmol)、(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(199 mg，0.49 mmol)、PdCl2 (dppf) (30 mg，0.04 mmol)及K2 CO3 (138 mg，1.0 mmol)於二噁烷(3 mL)及H2 O (0.4 mL)中之混合物攪拌50分鐘。添加水(20 mL)，且用EtOAc (10 mL×3)萃取溶液。合併之有機相在真空中濃縮且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 2:1)純化，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(120 mg)。產率51% (85%純度，UV=214 nm，ESI 405.1 (M+H)+ )。步驟 3 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2- 氯 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image623
向(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(120 mg，0.30 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加含HCl之二噁烷(4 M，2 mL)且在室溫下攪拌2小時。在真空中移除溶劑以提供呈白色固體之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110 mg)。(82%純度，UV=214 nm，ESI 305.1 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2- 氯 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image625
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110 mg，0.36 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(81 mg，0.36 mmol)、HOBt (81 mg，0.6 mmol)、EDCI (115 mg，0.6 mmol)及DIEA (93 mg，0.72 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌5小時。添加水，且用DCM (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱(10%~90% EtOAc/石油)純化，得到呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(105 mg)。產率49% (83%純度，UV=214 nm，ESI 510.2 (M+H)+ )。步驟 5 ： (3S)-3-(5-(2- 氯 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image627
在室溫下用含LiOH-H2 O (42 mg，1.0 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2-氯-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(105 mg，0.21 mmol)處理4小時。用HCl (1 M)將溶液酸化直至pH=5，且在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AN1 (22 mg)及AN2 (23 mg)。
化合物 AN1 LC/MS 100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.77 min，ESI 496.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.56 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.65 - 7.47 (m, 2H), 7.42 - 7.21 (m, 3H), 6.28 (s, 1H), 6.25 - 6.19 (m, 1H), 5.74 - 5.64 (m, 1H), 5.45-5.41 (m, 1H), 2.91 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.19 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.94-1.86 (m, 4H), 1.48-1.42 (m, 1H), 0.978-0.88 (m, 6H)。
化合物 AN2 LC/MS 100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.82 min，ESI 496.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.65 - 8.56 (m, 1H), 8.34 - 8.25 (m, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 1H), 7.64-7.62 (m, 1H), 7.41-7.38 (m, 1H), 7.30 (t, J = 19.1 Hz, 2H), 6.39 (s, 1H), 6.32-6.30 (m, 1H), 5.72-5.68 (m, 1H), 5.42-5.37 (m, 1H), 3.01 - 2.74 (m, 2H), 2.21 (d, J = 30.5 Hz, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.88 - 1.72 (m, 2H), 1.35-1.30 (m, 1H), 0.91-0.88 (m, 6H)。
製備化合物 AO1 及 AO2 步驟 1 ： (4- 氟 -2,6- 二甲基苯基 )
Figure 108112877-A0304-12-01
酸
Figure 02_image629
在-78℃下在N2 氛圍下向2-溴-5-氟-1,3-二甲苯(2 g，9.9 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中逐滴添加n-BuLi (2.5 M於己烷中，6 mL，14.8 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物30分鐘。添加硼酸三異丙酯(5.58 g，29.7 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時。添加HCl (5 M，20 mL)且在室溫下攪拌混合物10分鐘。用EtOAc (30 mL×2)萃取混合物。用HCl (5 M)將水相酸化直至pH=1且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到粗產物(4-氟-2,6-二甲基苯基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(500mg)。產率30% (86%純度，UV=214 nm，ESI 167.2 (M+H)+ 。粗產物直接用於下一步驟。
步驟 2 ： (S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(5-(4- 氟 -2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image631
在微波下在110℃下在N2 氛圍下將(4-氟-2,6-二甲基苯基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(171 mg，1.02 mmol)、(S)-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(120 mg，0.34 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (20 mg，0.027 mmol)及K2 CO3 (117 mg，0.85 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌3小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 2:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物甲酯(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(150 mg)。產率76% (68%純度，UV=214 nm，ESI 403.2 (M+H)+ )。步驟 3 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(4- 氟 -2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image633
向(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(150 mg，0.37 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加含HCl之二噁烷(4 M，1 mL)。在室溫下攪拌溶液1小時。添加NaHCO3 飽和水溶液(20 mL)且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經NaSO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液以提供呈無色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110 mg)。產率99% (81%純度，UV=214 nm，ESI 303.2 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(4- 氟 -2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image635
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110 mg，0.36 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(81 mg，0.36 mmol)、HOBt (59 mg，0.43 mmol)、EDCI (83 mg，0.43 mmol)及DIEA (94 mg，0.72 mmol)於DMF (6 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀之粗產物(3S)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(117 mg)。產率63% (26%純度，UV=214 nm，ESI 508.3 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。
步驟 5 ： (S)-3-(5-(4- 氟 -2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((R)-4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image637
在室溫用含LiOH-H2 O (29 mg，0.69 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(4-氟-2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(117 mg，0.23 mmol)處理1.5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化直至pH=5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AO1 (4 mg)及AO2 (5 mg)。
化合物 AO1 LC/MS C：99%純度，UV=214 nm，Rt = 1.58 min，ESI 494.0 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.53 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.57 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.96 - 6.84 (m, 2H), 6.29 (s, 1H), 6.25 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.68 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.89 (s, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.93 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.47 - 1.42 (m, 1H), 1.03 - 0.85 (m, 6H)。
化合物 AO2 LC/MS C：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.61 min，ESI 494.0 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.60 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.72 - 7.57 (m, 2H), 6.93 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 6.41 (s, 1H), 6.34 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.71 - 5.61 (m, 1H), 5.37 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 2.85 (s, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.02 (s, 5H), 1.92 - 1.75 (m, 2H), 1.46 - 1.26 (m, 1H), 0.97 - 0.87 (m, 6H)。
化合物 AP1 及 AP2 之 製備 步驟 1 ： 2- 溴 -1- 甲氧基 -3- 甲基苯
Figure 02_image639
在0℃向2-溴-3-甲基酚(500 mg，2.7 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加NaH (60%於油中，82 mg，3.4 mmol)。在0℃攪拌混合物30分鐘。隨後添加碘甲烷(761 mg，5.4 mmol)。將反應混合物升溫至室溫且攪拌12小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱(0%~10% EtOAc於石油中)純化，提供呈無色油狀之所需產物2-溴-1-甲氧基-3-甲基苯(420 mg)。
步驟 2 ： (S)-3-( 第三丁氧基羰基胺基 )-3-(5-(2- 甲氧基 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image641
將2-溴-1-甲氧基-3-甲基苯(85 mg)、(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(199 mg，0.49 mmol)、PdCl2 (dppf) (30 mg，0.04 mmol)及K2 CO3 (138 mg，1.0 mmol)於二噁烷(3 mL)及H2 O (0.4 mL)中之混合物在N2 氛圍下於微波中在80℃攪拌50分鐘。添加水(20 mL)，且用EtOAc (10 mL× 3)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機相，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 2:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110 mg)。產率44% (61%純度，UV=214 nm，ESI 401.1 (M+H)+ )。步驟 3 ： (S)-3- 胺基 -3-(5-(2- 甲氧基 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image643
向(S)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(110 mg，0.27 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中添加含HCl之二噁烷(4M，2 mL)，且在室溫下攪拌溶液2小時。在真空中移除溶劑以提供呈白色固體之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(90 mg )。(74%純度，UV=214 nm，ESI 301.1 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2- 甲氧基 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image645
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(90 mg，0.36 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(81 mg，0.36 mmol)、HOBt (81 mg，0.6 mmol)、EDCI (115 mg，0.6 mmol)及DIEA (93 mg，0.72 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌5小時。將混合物倒入水中，且用DCM (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱(10%~50% EtOAc/石油)純化，得到所需產物(3S)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(72 mg)。產率52% (67%純度，UV=214 nm，ESI 506.2 (M+H)+ )。步驟 5 ： (3S)-3-(5-(2- 甲氧基 -6- 甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image647
在室溫下用含LiOH-H2 O (42 mg，1.0 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(72 mg，0.14 mmol)處理4小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5且在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC A (30~70% MecN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AP1 (17 mg)及AP2 (36 mg)。
化合物 AP1 ：LC/MS 100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.73 min ESI 492.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.64 - 7.48 (m, 2H), 7.29 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.29 (s, 1H), 6.25-6.21 (m, 1H), 5.71 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.42 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.92 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.03 - 1.73 (m, 5H), 1.47-1.42 (m, 1H), 1.01 - 0.83 (m, 6H)。
化合物 AP2 ：LC/MS 100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.59 min，ESI 492.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.52 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.38 (s, 1H), 6.32-6.30 (m, 1H), 5.72-5.69 (m, 1H), 5.39 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.98 - 2.73 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.88 - 1.67 (m, 2H), 1.40 - 1.21 (m, 1H), 1.01 - 0.83 (m, 6H)。
製備化合物 AQ1b 步驟1：(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯
Figure 02_image649
在微波下在110℃下在N2 氛圍下將(R)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸乙酯(250 mg，0.67 mmol)、2,6-二甲基苯基
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(201 mg，1.34 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (40 mg，0.054 mmol)及K2 CO3 (232 mg，1.68 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~40% EtOAc/石油)純化，獲得呈黃色油狀之所需產物(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(270 mg)。產率52% (51%純度，UV=214 nm，ESI 399 (M+H)+ )。步驟 2 ： (R)-3- 胺基 -3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 ) 丙酸乙酯鹽酸鹽
Figure 02_image651
向(R)-3-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(270 mg，0.346 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2 mL)且在室溫下攪拌溶液1小時。. 在真空中濃縮混合物以提供呈黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(200 mg)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。預期產率99% (31%純度，UV=214 nm，ESI 299 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3R)-3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image653
在室溫下將(R)-3-胺基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯鹽酸鹽(200 mg，0.67 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(181 mg，0.81 mmol)、HOBt (135 mg，1.0 mmol)、EDCI (191 mg，1.0 mmol)及DIEA (258 mg，2.0 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~50% EtOAc/石油)純化以提供呈淡黃色油狀之所需產物(3R)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸乙酯(183 mg)。產率54%，三個步驟(93%純度，UV=214 nm，ESI 504(M+H)+ )。步驟 4 ： (3R)-3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image655
在室溫下用含LiOH-H2 O (46 mg，1.09 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3R)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸乙酯(183 mg，0.36 mmol)處理1.5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AQ1a (40.2 mg)及AQ1b (48.4 mg)。
化合物 AQ1b LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.56 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.60 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 5.3, 1.6 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.29 - 7.20 (m, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.1, 1.7 Hz, 1H), 5.71 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.34 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 2.99 - 2.80 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.01 (s, 6H), 1.84 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.38-1.32 (m, 1H), 0.98 - 0.84 (m, 6H)。製備化合物 AQ2b 步驟 1 ： (S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image657
在微波下在110℃在N2 氛圍下將(S)-3-(2-溴吡啶-4-基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸乙酯(300 mg，0.81 mmol)、(2,6-二甲基苯基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(181 mg，1.22 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (47 mg，0.07 mmol)及K2 CO3 (278 mg，2.03 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及H2 O (0.5 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 3:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(265 mg)。產率82% (83%純度，UV=214 nm，ESI 399.1 (M+H)+ )。步驟 2 ： (S)-3- 胺基 -3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image659
向(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(265 mg，0.67 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加HCl/二噁烷(4M，1 mL)。在室溫下攪拌溶液1小時。添加NaHCO3 飽和水溶液(20 mL)且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機相經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液以提供呈黃色油狀之粗產物(S)-3-胺基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(240 mg)。產率99% (72%純度，UV=214 nm，ESI 299.0 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： (3S)-3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image661
在室溫下將(S)-3-胺基-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)丙酸乙酯(240 mg，0.81 mmol)、(S)-4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(180 mg，0.81 mmol)、HOBt (130 mg，0.96 mmol)、EDCI (185 mg，0.96 mmol)及DIEA (208 mg，1.61 mmol)於DMF (8 mL)中之混合物攪拌2小時。添加水(20 mL)且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。在減壓下濃縮合併之有機相且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 2:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(3S)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸乙酯(233 mg)。產率57% (11%純度，UV=214 nm，ESI 504.1(M+H)+ )。步驟 4 ： (3S)-3-(2-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image663
在室溫下用含LiOH-H2 O (58 mg，1.39 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(2,6-二甲基苯基)吡啶-4-基)-3-(4-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸乙酯(233 mg，0.46 mmol)處理1.5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化直至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AQ2a (26 mg)及AQ2b (15 mg)。
化合物 AQ2b LC/MS A：98%純度，UV=214 nm，Rt = 1.55 min，ESI 476.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 5.3, 1.5 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.27 - 7.07 (m, 3H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.1, 1.7 Hz, 1H), 5.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.34 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.00 - 2.74 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.01 (s, 6H), 1.84 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.38 - 1.32 (m, 1H), 0.98 - 0.83 (m, 6H)。
製備化合物 AR1 及化合物 AR2 步驟 1 ： 2-(4- 溴 -5- 氟 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image665
在85℃下將4-溴-5-氟吡啶-2-醇(442 mg，2.31 mmol)、2-碘-4-甲基戊酸乙酯(937 mg，3.47 mmol)及K2 CO3 (958 mg，6.94 mmol)於MeCN (10 mL)中之混合物攪拌隔夜且過濾。在真空中濃縮濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=4:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之所需產物2-(4-溴-5-氟-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(402 mg)。產率52% (97%純度，UV=214 nm，ESI 334.0 (M+H)+ )。步驟 2 ： 2-(5- 氟 -4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image667
在75℃在N2 氛圍下將2-(4-溴-5-氟-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(402 mg，1.21 mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼𠮿(913 mg，3.62 mmol)、PdCl2 (dppf) (88 mg，0.12 mmol)及K2 CO3 (500 mg，3.62 mmol)於6 mL 1,4-二噁烷中之混合物攪拌隔夜。過濾。在真空中濃縮濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=3:1)純化殘餘物得到呈無色油狀之所需產物2-(5-氟-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(299 mg)，產率92% (90%純度，UV=214 nm，ESI 270.1 (M+H)+ )。步驟 3 ： 2-(5- 氟 -4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image669
在室溫下用含LiOH-H2 O (61 mg，1.44 mmol)之3 mL THF及0.5 mL H2 O將2-(5-氟-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(299 mg，1.11 mmol)處理2小時。用TFA將溶液調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑，得到呈黃色油狀之粗產物2-(5-氟-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(300 mg) 產率100% (75%純度，UV=214 nm，ESI 242.2 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5- 氟 -4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image671
在室溫下將2-(5-氟-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100 mg，0.41 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(118 mg，0.41 mmol)、HATU (189 mg，0.5 mmol)及DIEA (107 mg，0.83 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌1小時。將混合物倒入30 mL水中，且用EtOAc (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥。過濾。在減壓下濃縮濾液，得到粗產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-氟-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(220 mg)。產率100%。(85%純度，UV=214 nm，ESI 508.3 (M+H)+ )。步驟 5 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5- 氟 -4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image673
在室溫下用含LiOH-H2 O (27 mg，0.65 mmol)之3 mL THF 及0.5 mL H2 O將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-氟-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(220 mg，0.43 mmol)處理1小時。用TFA將溶液調節至pH=3~4。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A(33-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AR1 (41 mg)及AR2 (47 mg)。
化合物 AR1 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.65 min，ESI 494.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.54 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.68 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.20 - 7.18 (m, 1H), 7.14 - 7.11 (m, 2H), 6.32 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.67 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.89 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.94 - 1.89 (m, 2H), 1.88 (s, 3H), 1.47 - 1.44 (m, 1H), 0.99 - 095 (m, 6H)。
化合物 AR2 LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.68 min，ESI 494.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.74 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 7.16 - 7.15 (m, 2H), 6.43 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.74 - 5.58 (m, 1H), 5.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.90 - 2.86 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.02 (s, 6H), 1.86 - 1.72 (m, 2H), 1.41 - 1.20 (m, 1H), 0.91 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 AS2 步驟 1 ： 3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁酸乙酯
Figure 02_image675
向2-溴-3-甲基丁酸乙酯(200 mg，0.96 mmol) 及4-甲基吡啶-2-醇(105 mg，0.96 mmol)於甲苯(2 mL)中之溶液中添加Cs2 CO3 (626 mg，1.92 mmol)且在110℃下攪拌反應物16小時。向混合物中添加碳酸鈉飽和水溶液(30 mL)且用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。有機相用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥且過濾。在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=2:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之所需產物3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁酸乙酯(200 mg)。產率46% (98%純度，UV=214 nm，ESI 238 (M+H)+ )。步驟 2 ： 3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁酸
Figure 02_image677
在室溫下用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6 mL)之THF (5 mL)將3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁酸乙酯(200 mg，0.93 mmol)處理2小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6。在真空中移除溶劑以提供呈白色固體之粗產物3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁酸(194 mg)。產率100% (98%純度，UV=214 nm，ESI 210 (M+H)+ )。粗產物直接用於下一步驟。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image679
在室溫下將3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁酸(100 mg，0.48 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(136 mg，0.48 mmol)、HOBT (97 mg，0.72 mmol)、EDCI (138 mg，0.72 mmol)及DIEA (186 mg，1.44 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入10 mL水中且用DCM (30 mL×3)萃取溶液。有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc=1:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁醯胺基)丙酸甲酯(100 mg)。產率44% (95%純度，UV=254 nm，ESI 476 (M+H)+ )。步驟 4 ： (S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((S)-3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 丁醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image681
在室溫下用含LiOH (1 M於H2 O中，0.6mL)之THF (5 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)丁醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.21 mmol)處理2小時。用1 M HCl將混合物調節至pH=5~6，在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC B (30-70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需化合物AS1 (17 mg)及AS2 (20 mg)。
化合物 AS2 LC/MS A: 98%純度, UV=214 nm, Rt = 1.55 min, ESI 462 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 6.44 - 6.30 (m, 2H), 5.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 2.88 - 2.95 (m, 2H), 2.42 - 2.22 (m, 4H), 1.99 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 0.86 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.74 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。
製備化合物 AT1b 步驟 1 ： (2R,3S)-2- 溴 -3- 甲基戊酸
Figure 02_image683
在0℃下向((2R,3S)-2-胺基-3-甲基戊酸(1.0 g，7.6 mmol)於HBr (40%於水中，8 mL)中之溶液中逐滴添加含NaNO2 (0.78 g，11.4 mmol)之H2 O (4 mL)溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時。用EtOAc (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下濃縮濾液，得到呈橙色油狀之粗產物(2R,3S)-2-溴-3-甲基戊酸(1.1 g)。粗產物直接用於下一步驟。步驟 2 ： (2S,3S)-3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image685
在N2 氛圍下在30℃下將(2R,3S)-2-溴-3-甲基戊酸(1.1g，5.7 mmol)及(t-BuO)2 Mg (1.29 g，7.6 mmol)於無水THF (20 mL)中之混合物攪拌3小時，且隨後添加4-甲基吡啶-2-醇(420 mg，3.8 mmol)及t-BuOK (430 mg，3.88 mmol)。在70℃下在N2 下攪拌反應混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用HCl (4 M)酸化直至pH=5。在減壓下濃縮溶液，得到殘餘物，其藉由逆相急驟管柱層析法(0%~60% MeOH/H2 O(5% TFA))純化以提供呈橙色油狀之所需產物(2S,3S)-3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(100 mg)。產率20% (97%純度，UV=214 nm，ESI 224 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image687
在室溫下將(2S,3S)-3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(100 mg，0.45 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(140 mg，0.5 mmol)、HOBt (73 mg，0.54 mmol)、EDCI (100 mg，0.54 mmol)及DIEA (230 mg，1.8 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌3小時。將混合物倒入水中且用DCM (30 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由急驟管柱層析法(0%~80% EtOAc/石油醚)純化以提供呈無色油狀之所需產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(150 mg)。產率68% (93%純度，UV=214 nm，ESI 490 (M+H)+ )。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image689
在室溫下用含LiOH-H2 O (39 mg，0.93 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(150 mg，0.31 mmol)處理2小時。用HCl (1 M)將混合物酸化直至pH=5。在減壓下濃縮溶液，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC A(30~70% MeCN)純化，得到呈白色固體之化合物AT1a (17 mg)及AT1b (17 mg)。
化合物 AT1b LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.69 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.62 (s, 0.5H), 8.59 (s, 0.6H), 8.26 (s, 4H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 0.6H), 7.70 (s, 0.6H), 7.67 (s, 0.4H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 0.4H), 7.27 - 7.10 (m, 3H), 6.39 (s, 1H), 6.32 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.72 -5.29 (m, 2H), 3.02 - 2.74 (m, 2H ), 2.24 (s, 3H), 2.18 -1.85(m, 1H), 2.01 (s, H), 1.99 (s, 3H), 1.43 - 1.07 (m, 1H), 1.02 - 0.95 (m, , 1H), 0.91 - 0.57 (m, 6H)。
製備化合物 AT2b 步驟 1 ： (2R,3R)-2- 溴 -3- 甲基戊酸
Figure 02_image691
在0℃下向(2R,3R)-2-胺基-3-甲基戊酸(1.0 g，7.6 mmol)於HBr (40%於水中，8 mL)中之溶液中逐滴添加含NaNO2 (0.78 g，11.4 mmol)之H2 O (4 mL)溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時。溶液用EtOAc (30 mL×2)萃取，且合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈紅色油狀之粗產物(2R,3R)-2-溴-3-甲基戊酸(1.41 g)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。產率95%。步驟 2 ： (2S,3R)-3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image693
向(2R,3R)-2-溴-3-甲基戊酸(1.37 g，5.81 mmol)於無水THF (20 mL)中之溶液中添加(t-BuO)2 Mg (1.97 g，11.62 mmol)且在N2 氛圍下在30℃下攪拌溶液3小時。隨後添加4-甲基吡啶-2-醇(546 mg，5.0 mmol)及t-BuOK (664 mg，5.93 mmol)，且在70℃下在N2 下攪拌反應混合物16小時。將混合物冷卻至室溫且用稀HCl (4 M)溶液酸化至pH=5。在減壓下濃縮溶劑，得到殘餘物，其藉由逆相管柱層析法(0%~80% MeOH/H2 O (5% NH4 HCO3 ))純化以提供呈黃色油狀之所需產物(2S,3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(68 mg)。產率4% (94%純度，UV=214 nm，ESI 224 (M+H)+ )。步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((3R)-3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image695
在室溫下將(2S,3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(68 mg，0.30 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(102 mg，0.36 mmol)、HOBt (61 mg，0.45 mmol)、EDCI (86 mg，0.45 mmol)及DIEA (116 mg，0.9 mmol)於DCM (8 mL)中之混合物攪拌2小時。將混合物倒入水中，且用DCM (20 mL×2)萃取溶液。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，且過濾。在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀之粗產物(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(90 mg)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。產率68% (68%純度，UV=214 nm，ESI 490 (M+H)+ )。步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-((3R)-3- 甲基 -2-(4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image697
在室溫下用含LiOH-H2 O (23 mg，0.54 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-((3R)-3-甲基-2-(4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(90 mg，0.18 mmol)處理1.5小時。用HCl (1 M)將混合物酸化至pH=5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30~70% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之化合物AT2a (30.9 mg)及AT2b (25.6 mg)。
AT2b LC/MS A：100%純度，UV=214 nm，Rt = 1.72 min，ESI 476 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.62 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.38 (s, 1H), 6.31 (dd, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H), 5.41 - 5.28 (m, 2H), 2.96-2.85 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.20 - 2.13 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.20 - 1.15 (m, 1H), 1.02 - 0.96 (m, 1H), 0.88 - 0.76 (m, 6H)。
製備化合物 AU1 及 AU2 步驟 1 ： 5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image699
在室溫下將6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(2 g，16.2 mmol)、二甲胺(2 M於THF中，4 mL)於DCM (10 mL)中之混合物攪拌30分鐘。接著逐份添加NaBH(OAc)3 (5.2 g，24.39 mmol)且在室溫下攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑且藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物5-((二甲基胺基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(1 g)。產率41% (ESI 153 (M+H)+ )步驟 2 ： 2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image701
在70℃下將5-((二甲基胺基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(500 mg，3.28 mmol)、K2 CO3 (1.36 g，9.86 mmol)及4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.17 g，4.93 mmol)於CH3 CN (20ml)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:2)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300 mg)。產率31% (ESI 295(M+H)+ )。步驟 3 ： 2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image703
在室溫下用含LiOH-H2 O (120 mg，3.02 mmol)之甲醇(2 mL)及水(1 mL)將2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300 mg，1.02 mmol)處理2小時。反應物用1 N鹽酸酸化至pH=3。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A(30-80% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100 mg)。產率37% (ESI 267(M+H)+ )。步驟 4 ： (3S)-3-(2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image705
在室溫下將(2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100 mg，0.375 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(117 mg，0.413 mmol)、HATU (142.5 mg，0.375 mmol)及DIEA (0.5 mL)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑且藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到呈黃色固體之所需產物(3S)-3-(2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(80 mg)。產率41% (ESI 533 (M+H)+)。
步驟 5 ： (S)-3-((S)-2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image707
在室溫下用含LiOH-H2 O (18 mg，0.45 mmol)之甲醇(2 mL)及水(1 mL)將3-(2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸酯(80 mg，0.15 mmol)處理3小時。用1 N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物AU1 (18.3 mg)及AU2 (22.3 mg)。化合物 AU1 ESI 519 (M+H)+ 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.57 (t,J = 13.2 Hz, 1H), 8.21 (t,J = 8.7 Hz, 1H), 7.91 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.88 - 7.86 (m, 1H), 7.65 (t,J = 1.9 Hz, 1H), 7.53 (dd,J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.14 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 6.55 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.76 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 5.34 (dd,J = 8.4, 5.9 Hz, 1H), 4.01 (d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.86 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 2.87 (dd,J = 14.9, 8.6 Hz, 1H), 2.77 (dd,J = 14.9, 5.8 Hz, 1H), 2.70 (s, 6H), 2.05 - 1.88 (m, 8H), 1.48 - 1.38 (m, 1H), 0.99 - 0.91 (m, 6H)。化合物 AU2 ESI 519 (M+H)+ 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 8.24 (dd,J = 14.9, 1.9 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.64 (t,J = 1.9 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 9.3, 2.5 Hz, 1H), 7.22 (dd,J = 8.4, 6.6 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 6.60 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.57 (ddd,J = 18.8, 9.4, 5.5 Hz, 2H), 4.23 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 3.84 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 2.81 (s, 6H), 2.73 (dd, J = 15.3, 4.4 Hz, 1H), 2.60 (dd, J = 15.3, 11.0 Hz, 1H), 2.07 - 2.00 (m, 7H), 1.58 (dt, J = 13.5, 6.8 Hz, 1H), 1.48 (td, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 0.93 - 0.84 (m, 6H)。
製備化合物 AV1 及化合物 AV2 步驟 1 ： 2- 側氧基 -2,3- 二氫吡啶 -4- 甲醛
Figure 02_image709
在N2 氛圍下將4-甲基吡啶-2-醇(3 g，27.5 mmol)及SeO2 (4 g，35.8 mmol)於二噁烷(40 ml)中之混合物回流隔夜且過濾。在真空中移除濾液且藉由矽膠管柱(DCM: MeOH = 1: 10)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物(300 mg)。產率9% (ESI 124 (M+H)+ )步驟 2 ： 4-(( 二甲基胺基 ) 甲基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image711
在室溫下將2-側氧基-2,3-二氫吡啶-4-甲醛(300 mg，2.4 mmol)、二甲胺(2 M於THF中，6 mL)於DCM (5ml)中之混合物攪拌30分鐘。隨後逐滴添加NaBH(OAc)3 (775.6 mg，3.65 mmol)且在室溫下攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑且藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物4-((二甲基胺基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(150 mg)。產率41% (ESI 153 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(4-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image713
在70℃下將4-((二甲基胺基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(150 mg，0.98 mmol)、K2 CO3 (408.5 mg，2.96 mmol)及4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(350 mg，1.47 mmol)於CH3CN (5 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:2)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之所需產物2-(4-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100 mg)。產率35% (ESI 295(M+H)+ )。步驟 4 ： 2-(4-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image715
在室溫下用含LiOH-H2 O (40 mg，1.01 mmol)之甲醇(2 mL)及水(1 mL)將2-(4-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100 mg，0.33 mmol)處理2小時。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30%-80% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之所需產物2-(4-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(80 mg)。產率90% (ESI 267(M+H)+ )。
步驟 5 ： (S)-3-((S)-2-(4-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image717
在室溫下將(2-(4-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(80 mg，0.30 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(85 mg，0.3 mmol)、HATU (125.4 mg，0.33 mmol)及DIEA (0.3 mL)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑且藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到所需產物(S)-3-((S)-2-(4-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(80 mg)。產率50% (ESI 533 (M+H)+ )。步驟 6 ： (S)-3-((S)-2-(4-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image719
在室溫下用含LiOH-H2 O (18 mg，0.45 mmol)之甲醇(2 mL)及水(1 mL)將(S)-3-((S)-2-(4-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(80 mg，0.15 mmol)處理3小時。用1 N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A (30%-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物AV1 (14 mg)及AV2 (17 mg)。化合物 AV1 ESI 519 (M+H)+ 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.68 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.88 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.26 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.18 (dd,J = 7.2, 3.8 Hz, 2H), 6.60 (s, 1H), 6.53 - 6.38 (m, 1H), 5.70 (dd,J = 10.1, 6.0 Hz, 1H), 5.46 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 4.24 - 4.12 (m, 2H), 3.02 (t,J = 15.9 Hz, 2H), 2.92 (s, 6H), 2.10 - 1.81 (m, 8H), 1.56 - 1.43 (m, 1H), 0.99 (dd,J = 14.8, 6.6 Hz, 6H)。化合物 AV2 ESI 519 (M+H)+ 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.72 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.88 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H), 7.20 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 6.68 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.49 (dd,J = 7.2, 2.0 Hz, 1H), 5.73 (dd,J = 10.1, 6.1 Hz, 1H), 5.39 (t,J = 7.3 Hz, 1H), 4.26 - 4.10 (m, 2H), 3.10 - 2.88 (m, 8H), 2.04 (s, 6H), 1.97 - 1.80 (m, 2H), 1.39 - 1.30 (m, 1H), 0.97 - 0.80 (m, 6H)。
製備化合物 AW1 及 AW2 步驟 1 ： 5-(2- 甲氧基乙烯基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image721
在室溫下將氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻(12.5 g，36.6 mmol)、t-BuOK (6.83 g，61 mmol)於二噁烷(60 mL)中之混合物攪拌15分鐘。隨後添加含6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(3 g，24.4 mmol)之20 mL THF。在室溫下將混合物攪拌16小時。向反應混合物中添加80 mL水。用EtOAc (80 mL×2)萃取混合物且在真空中濃縮水相。藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到呈紅色油狀之所需產物5-(2-甲氧基乙烯基)吡啶-2(1H)-酮(1.3 g)。產率35% (ESI 152.2 (M+H)+ )。步驟 2 ： 2-(6- 側氧基 -1,6- 二氫吡啶 -3- 基 ) 乙醛
Figure 02_image723
在70℃下用HCOOH (20 mL)將5-(2-甲氧基乙烯基)吡啶-2(1H)-酮(1.2 g，7.95 mmol)處理2小時。在真空中移除溶劑以提供呈紅色油狀之粗產物2-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)乙醛(0.8g，粗產物)。(ESI 138.3 (M+H)+ )。步驟 3 ： 5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image725
在室溫下將2-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)乙醛甲酯(750 mg，5.47 mmol)、AcOH (394 mg，6.56 mmol)及二甲胺(40%於水中) (1.23 g，10.94 mmol)於DCM (10 mL)及MeOH (2.5 mL)中之混合物攪拌30分鐘且添加NaBH(OAc)3 (2.32 g，10.94 mmol)。在室溫下攪拌混合物隔夜。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 2:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之所需產物5-(2-(二甲基胺基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(500 mg)。產率55% (ESI 167.2 (M+H)+ )。步驟 4 ： 2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image727
在70℃下將5-(2-(二甲基胺基)乙基)吡啶-2(1H)-酮甲酯(500 mg，3 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.07 g, 4.5 mmol)及K2 CO3 (828 mg，6 mmol)於MeCN (15 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 1:2)純化殘餘物以提供呈白色固體之所需產物2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸甲酯乙酯(100 mg)。產率11% (ESI 309.2 (M+H)+ )。步驟 5 ： 2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image729
在室溫下用含LiOH-H2 O (54 mg，1.28 mmol)之EtOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(100 mg，0.32 mmol)處理2小時。用1 N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到呈白色固體之產物2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(70 mg)。產率78% (ESI 281.2 (M+H)+ )。步驟 6 ： (S)-3-((S)-2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image731
在室溫下將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(70 mg，0.25 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(107 mg，0.375 mmol)、HATU (143 mg，0.375 mmol)及DIEA (129 mg，1 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑且藉由combiflash (溶離劑A：水10 mM NH4 HCO3 ，溶離劑B：MeOH，梯度A-＞B 0~100%)純化殘餘物，得到呈油狀固體之所需產物(S)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg)。產率37% (ESI 548.3 (M+H)+ )。步驟 7 ： (S)-3-((S)-2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image733
在室溫下用含LiOH-H2 O (15 mg，0.36 mmol)之EtOH (2 mL)及H2 O (0.5 mL)將(S)-3-((S)-2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(50 mg，0.09 mmol)處理2小時。用1 N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A 30%-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之產物AW1 (7.4 mg)及AW2 (20 mg)。
化合物 AW1 ESI 533.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.50 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 8.21 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.76 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 2H), 7.21 (dd,J = 8.2, 6.8 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 6.59 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.64 (dd,J = 10.7, 5.2 Hz, 1H), 5.25 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 3.43 - 3.36 (m, 1H), 3.31 - 3.25 (m, 1H), 2.99 - 2.85 (m, 2H), 2.86 - 2.77 (m, 6H), 2.70 (ddd,J = 35.4, 15.0, 5.8 Hz, 2H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 2.05 - 1.86 (m, 7H), 1.51 - 1.40 (m, 1H), 0.96 (dd,J = 19.2, 6.6 Hz, 6H)。
化合物 AW2 ESI 533.3 (M+H)+ 。1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.54 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 8.23 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.67 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.55 (dd,J = 9.3, 2.5 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.16 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 6.60 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.64 (dd,J = 9.4, 6.3 Hz, 1H), 5.37 (dd,J = 8.8, 4.7 Hz, 1H), 3.44 - 3.36 (m, 1H), 3.31 - 3.26 (m, 1H), 2.94 (ddd,J = 14.5, 9.5, 5.1 Hz, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 7H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.54 (dd,J = 15.0, 8.9 Hz, 1H), 2.09 - 1.94 (m, 7H), 1.94 - 1.85 (m, 1H), 1.49 - 1.32 (m, 1H), 0.93 (dd,J = 11.1, 6.6 Hz, 6H)。製備化合物 BA1 及 BA2 ((3S)-3-(2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 )) 步驟 1 ： 2-(4- 溴 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image735
在80℃下將4-溴吡啶-2(1H)-酮(1.2 g，6.94 mmol)、K2 CO3 (1.92 g，13.88 mmol)及4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.98 g，8.33 mmol)於CH3 CN (20ml)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之2-(4-溴-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.6 g)。產率73% (ESI 316.1(M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(4-(2-( 苄氧羰基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image737
在N2 氛圍下在90℃下將2-(4-溴-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.6 g，5.0 mmol)、 N-[2-(三氟硼基)乙基]胺基甲酸鉀苄酯(1.71 g，6 mmol)、 Pd(dppf)Cl2 (366 mg，0.5 mmol)及 Na2 CO3 (1.06 g，10 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)及H2 O (10 mL)中之混合物攪拌4小時。完成後，濃縮反應物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水/0.01% TFA，B：MeOH，0-100%)上純化，得到呈黃色油狀之2-(4-(2-(苄氧羰基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(700 mg)。產率35% (ESI 415.1 (M+H)+ )。 步驟 3 ： 2-(4-(2- 胺基乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image739
在50℃下用TFA (10 mL)將2-(4-(2-(苄氧羰基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(0.7 g，1.7 mmol)處理4小時。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱上純化殘餘物(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)以提供呈紅色油狀之2-(4-(2-胺基乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(0.4 g)。產率84% (ESI 281.2 (M+H)+ )。
步驟 4 ： 2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image741
向2-(4-(2-胺基乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(400 mg，1.43 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物中添加HCHO (37%於H2 O中，1 mL)且在室溫下攪拌5分鐘。添加NaBH(OAc)3 (1.21 g，5.72 mmol)且在室溫下攪拌1小時。在真空中移除溶劑且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈黃色油狀之2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(400 mg)。產率91% (ESI 309.2(M+H)+ )。
步驟 5 ： 2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image743
在室溫下用含LiOH-H2 O (218 mg，5.2 mmol)之MeOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(400 mg，1.3 mmol)處理1小時。用1N HCl將混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水/0.01% TFA，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈白色固體之2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(310 mg)。產率85% (ESI 281.2(M+H)+ )。
步驟 6 ： (3S)-3-(2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image745
在室溫下將2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(230 mg，0.82 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(284 mg，1 mmol)、HATU (467 mg，1.23 mmol)及DIEA (423 mg，3.28 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物攪拌1小時。混合物藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈黃色油狀之產物(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200 mg)。產率45% (ESI 547.2 (M+H)+ )。
步驟 7 ： (3S)-3-(2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image747
在室溫下用含LiOH單水合物(62 mg，1.48 mmol)之MeOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(200 mg，0.37 mmol)處理2小時。 用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除混合物且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BA1 (48.9 mg)及BA2 (53.6 mg)。
化合物 BA1 ESI 533.3 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.48 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 8.20 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.70 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.58 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.17 - 7.11 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 6.50 - 6.45 (m, 1H), 5.71 - 5.60 (m, 1H), 5.19 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 3.38 - 3.27 (m, 1H), 3.32 - 3.28 (m, 1H), 3.03 - 2.87 (m, 2H), 2.78 (s, 6H), 2.64 - 2.58 (m, 2H), 2.07 - 2.00 (m, 2H), 2.00 (d,J = 7.0 Hz, 6H), 1.48 - 1.42 (m, 1H), 0.97 - 0.87 (m, 6H)。
化合物 BA2 ESI 533.3 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.51 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 8.20 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.71 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 7.15 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 6.59 (s, 1H), 6.52 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 5.65 - 5.59 (m, 1H), 5.19 (s, 1H), 3.44 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 3.34 (s, 1H), 2.96 (s, 2H), 2.80 (s, 6H), 2.67 - 2.62 (m, 2H), 2.03 - 1.97 (m, 8H), 1.53 - 1.39 (m, 1H), 0.95 - 0.91(m, 6H)。
製備化合物 BB1 及 BB2 ((3S)-3-(2-(5-((3,3- 二氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 5-((3,3- 二氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 ) 吡啶 -2(1H )- 酮
Figure 02_image749
在室溫下將6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(153 mg，1.24 mmol)及3,3-二氟代氮雜環丁烷鹽酸鹽(193 mg，1.49 mmol)於MeOH (3 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加NaBH3 CN (231 mg，3.73 mmol)且在室溫下攪拌1小時。在真空中移除溶劑以提供呈白色固體之粗產物5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(248 mg)，其未經進一步純化即使用。(ESI 201.1 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(5-((3,3- 二氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image751
在80℃下將5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(248 mg，1.24 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(443 mg，1.86 mmol)及K2 CO3 (514 mg，3.72 mmol)於MeCN (5 mL)中之混合物攪拌隔夜。過濾混合物且用MeCN(5 mL)洗滌。在真空中濃縮濾液且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 2:1)純化殘餘物，得到呈無色油狀之2-(5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(150 mg)。產率36% (ESI 343.1 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(5-((3,3- 二氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image753
在室溫下用含LiOH-H2 O (28 mg，0.66 mmol)之THF (3 mL)及H2 O (0.5 mL)將2-(5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(151 mg，0.44 mmol)處理30分鐘。用1N HCl將混合物酸化至pH 4~5。將混合物在真空中濃縮以提供呈白色固體之2-(5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(138 mg)，其未經進一步純化即使用。產率100% (ESI 315.1 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3S )-3-(2-(5-((3,3- 二氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image755
在室溫下將2-(5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(138 mg，0.44 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(125 mg，0.44 mmol)、HATU (200 mg，0.53 mmol)及DIEA (171 mg，1.32 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌30分鐘。將混合物倒入水(10 mL)中且用EtOAc (20 mL×3)萃取。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(86 mg)。產率34% (ESI 581.3 (M+H)+ )。
步驟 5 ： (3S )-3-(2-(5-((3,3- 二氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image757
在室溫下用含LiOH單水合物(9 mg 0.22 mmol)之THF (3 mL)及H2 O (0.5 mL)將(3S)-3-(2-(5-((3,3-二氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(86 mg，0.15 mmol)處理1小時。將反應混合物酸化用1N HCl水溶液至pH 4~5，在真空中濃縮且藉由製備型HPLC A純化，得到呈白色固體之非對映異構產物BB1 (10 mg)及BB2 (20 mg)。
化合物 BB1 ESI 567.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.51 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.44 (dd,J = 9.3, 2.3 Hz, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 1H), 7.14 -7.11 (m, 2H), 6.44 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.72 (dd,J = 9.5, 6.6 Hz, 1H), 5.41 (t,J = 7.3 Hz, 1H), 3.66 - 3.44 (m, 6H), 2.92 (d,J = 7.3 Hz, 2H), 2.08 - 1.76 (m, 8H), 1.53 - 1.32 (m, 1H), 1.02 - 0.89 (t,J = 12.0 Hz , 6H)。
化合物 BB22 ESI 567.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.58 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.67 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.51 (dd,J = 9.3, 2.3 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.15 (d,J = 7.4 Hz, 2H), 6.54 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.72 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 5.40 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 3.71 - 3.54 (m, 6H), 2.94 - 2.88 (m, 2H), 2.01 (s, 6H), 1.83 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 1.36 - 1.29 (m, 1H), 0.89 (dd,J = 6.5, 4.3 Hz, 6H)。製備化合物 BC1 及 BC2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image759
在室溫下將2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100 mg，0.38 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸甲酯(99 mg，0.35 mmol)、EDCI (81 mg，0.42 mmol)、HOBt (57 mg，0.42 mmol)及DIEA (136 mg，1.05 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌4小時。將混合物倒入水(10 mL)中且用EtOAc (20 mL×3)萃取。將有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2 SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈無色油狀之非對映異構產物P1 (20 mg)及P2 (35 mg)。總產率28% (ESI 532.2 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 (BC1)
Figure 02_image761
在室溫下用含LiOH-H2 O (8 mg，0.19 mmol)之甲醇(2 mL)及水(0.5 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(20 mg，0.038 mmol)處理1小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之BC1 (10 mg)。化合物 BC1 ESI 518.2 (M+H)+ 1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.89 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.51 (dd,J = 9.3, 2.5 Hz, 1H), 7.42 - 7.30 (m, 2H), 7.14 - 7.07 (m, 4H), 6.99 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.55 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.77 (dd,J = 9.5, 6.6 Hz, 1H), 5.33 (dd,J = 9.1, 5.3 Hz, 1H), 3.97 (d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.79 (d,J = 13.2 Hz, 1H), 2.84 - 2.72 (m, 2H), 2.66 (s, 6H), 2.02 - 1.88 (m, 8H), 1.49 - 1.36 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.5 Hz, 6H)。
步驟 2b ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(( 二甲基胺基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 (BC22)
Figure 02_image763
在室溫下用含LiOH-H2 O (14 mg，0.34 mmol)之甲醇(4 mL)及水(1 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-((二甲基胺基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(35 mg，0.067 mmol)處理1小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之產物BC2 (10 mg)。化合物 BC2 ESI 518.2 (M+H)+ 1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.80 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.56 (dd,J = 9.3, 1.8 Hz, 1H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 4H), 7.03 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.58 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.55 (dd,J = 11.2, 3.9 Hz, 1H), 5.49 (dd,J = 8.5, 5.6 Hz, 1H), 4.22 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 3.79 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.68 (dd,J = 15.1, 4.0 Hz, 1H), 2.54 (dd,J = 15.1, 11.3 Hz, 1H), 2.07 - 2.03 (m, 1H), 2.00 (d,J = 7.7 Hz, 6H), 1.58-1.49 (m, 2H), 0.92 (t,J = 5.9 Hz, 6H)。製備 BD1 及 BD2 ((3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 2-(5- 甲醯基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image765
在80℃下將6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醛(400 mg，3.2 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1 g，4.2 mmol)及K2 CO3 (1.1 g，8 mmol)於MeCN (10 mL)中之混合物攪拌隔夜。過濾混合物，用ACN (5 mL)洗滌。在真空中濃縮濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 4:1)純化以提供呈無色油狀之2-(5-甲醯基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(650 mg)。產率70% (ESI 266.3 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image767
在室溫下將2-(5-甲醯基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300 mg，1.13 mmol)及3-氟代氮雜環丁烷鹽酸鹽(251 mg，2.26 mmol)於DCE (4 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉(959 mg，4.52 mmol)且在室溫下攪拌隔夜。將混合物在真空中濃縮，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化，得到呈無色油狀之2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(264 mg)。產率72% (ESI 325.2 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image769
在室溫下用含LiOH-H2 O (171 mg，4 mmol)之EtOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(264 mg，0.81 mmol)處理2小時。用1N HCl將混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化，得到呈白色固體之2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(217 mg)。產率90% (ESI 297.1 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image771
向2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(217 mg，0.73 mmol)及(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(208 mg，0.73 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中添加EDCI (154 mg，0.81 mmol)、HOBT (109 mg，0.81 mmol)及DIEA (282 mg，2.19 mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌隔夜。濃縮反應混合物，且藉由逆相HPLC在C18/80 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈褐色固體之(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(288 mg)。產率70% (ESI 563.2 (M+H)+ )。
步驟 5 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image773
環境溫度在室溫下用含LiOH-H2 O (38 mg，0.9 mmol)之甲醇(3 mL)及水(1 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(100 mg，0.18 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/80 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：ACN，0~60%)上純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BD1 (33 mg)及BD2 (35 mg)。化合物 BD1 ESI 549.3 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.53 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 8.19 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.59 (t,J = 1.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 1H), 7.21 - 7.19 (m, 1H), 7.17 - 7.09 (m, 2H), 6.47 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.74 - 5.65 (m, 1H), 5.47 - 5.35 (m, 1H), 5.19 - 5.02 (m, 1H), 3.79 - 3.66 (m, 2H), 3.65 - 3.58 (m, 2H), 3.54 - 3.41 (m, 2H), 2.95 - 2.81 (m, 2H), 2.05 - 1.81 (m, 8H), 1.55 - 1.33 (m, 1H), 0.97 - 0.88 (m, 6H)。化合物 BD2 ESI 549.3 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.59 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 8.26 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 7.67 (d,J = 2.1 Hz, 2H), 7.56 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 7.30 - 7.09 (m, 3H), 6.57 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.62 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 5.52 - 5.35 (m, 1H), 5.29 - 5.15 (m, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 2H), 4.01 - 3.79 (m, 4H), 2.90 - 2.67 (m, 2H), 2.09 - 1.87 (m, 7H), 1.68 - 1.62 (m, 1H), 1.55 - 1.33 (m, 1H), 0.91 (d,J = 6.5 Hz, 6H)。
製備化合物 BE1 及 BE2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(3-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 2-(3- 溴 -2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image775
在80℃下將3-溴吡啶-2(1H)-酮(1 g，5.78 mmol)、K2 CO3 (1.6 g，11.56 mmol)及4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.65 g，6.94 mmol)於CH3 CN (20 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化，得到呈白色固體之2-(3-溴-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.6 g)。產率88% (ESI 316.1(M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(3-(2-( 苄氧羰基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image777
在110℃下將2-(3-溴-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1 g，3.17 mmol)、N-[2-(三氟硼基)乙基]胺基甲酸鉀苄酯(1.08 g，3.8 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (36 mg，0.16 mmol)、Cs2 CO3 (2 g，6.34 mmol)及RuPhos (144 mg，0.32 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)及H2 O (10 mL)中之混合物攪拌2小時。完成後，濃縮反應物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水/0.01% TFA，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈黃色油狀之2-(3-(2-(苄氧羰基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.1 g)。產率84% (ESI 415.2(M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(3-(2- 胺基乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image779
在50℃下用TFA (20 mL)將2-(3-(2-(苄氧羰基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(1.07 g，2.58 mmol)處理4小時。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈黃色油狀之2-(3-(2-胺基乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(0.6 g)。產率83% (ESI 281.2 (M+H)+ )。
步驟 4 ： 2-(3-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image781
向2-(3-(2-胺基乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600 mg，2.14 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物添加HCHO (37%於H2 O中，1 mL)。在室溫下將混合物攪拌5分鐘。添加NaBH(OAc)3 (1.81 g，8.56 mmol)且在室溫下攪拌1小時。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈黃色油狀之2-(3-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600 mg)。產率91% (ESI 309.2(M+H)+ )。
步驟 5 ： 2-(3-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image783
在室溫下用含LiOH單水合物(328 mg，7.8 mmol)之EtOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將2-(3-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600 mg，1.95 mmol)處理1小時。用1N HCl水溶液將混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水/0.01% TFA，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈白色固體之2-(3-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(500 mg)。產率92% (ESI 281.2(M+H)+ )。
步驟 6 ： (3S )-3-(2-(3-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image785
在室溫下將2-(3-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150 mg，0.54 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(229 mg，0.81 mmol)、EDCI (206 mg，1.08 mmol)、HOBt (146 mg，1.08 mmol)及DIEA (279 mg，2.16 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌1小時。藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化混合物，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(130 mg)。產率44% (ESI 546.3(M+H)+ )。
步驟 7 ： (3S )-3-(2-(3-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H )- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image787
在室溫下用含LiOH單水合物(40 mg，0.96 mmol)之MeOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(3-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基丙酸甲酯(130 mg，0.24 mmol)處理1小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除混合物，且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BE1 (40 mg)及BE2 (36.4 mg)。
化合物 BE1 ESI 532.3 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.52 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 7.36 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.18 - 7.13 (m, 1H), 7.09 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 6.97 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.23 (t,J = 6.9 Hz, 1H), 5.66 (s, 1H), 5.07 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.17 - 3.08 (m, 1H), 3.06 - 2.97 (m, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 7H), 2.67 - 2.63 (m, 1H), 2.53 - 2.50 (m, 1H), 2.09 - 2.02 (m, 2H), 1.97 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.42 - 1.39 (m, 1H), 0.95 (t,J = 7.0 Hz, 6H)。
化合物 BE2 ESI 532.3 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.65 - 7.62 (m, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.40 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.17 - 7.05 (m, 4H), 7.02 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.45 (t,J = 6.9 Hz, 1H), 5.77 - 5.73 (m, 1H), 5.02 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 3.52 (t,J = 8.9 Hz, 1H), 3.11 - 3.07 (m, 2H), 2.88 - 2.78 (m, 1H), 2.66 (s, 6H), 2.52 - 2.46 (m, 2H), 2.11 - 2.07 (m, 1H), 2.06 - 2.01 (m, 4H), 1.99 (s, 3H), 1.49 - 1.36 (m, 1H), 0.93 - 0.87 (m, 6H)。製備化合物 BF1 及 BF2 ((3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(5-( 嗎啉基甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 4- 甲基 -2-(5-( 嗎啉基甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸乙酯
Figure 02_image789
在室溫下將2-(5-甲醯基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300 mg，1.13 mmol)及嗎啉(147 mg，1.70 mmol)於DCE (5 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加NaBH(OAc)3 (715 mg，3.39 mmol)且在室溫下攪拌1小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 2:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之4-甲基-2-(5-(嗎啉基甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸乙酯(150 mg)。產率39% (ESI 337.2 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 4- 甲基 -2-(5-( 嗎啉基甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊酸
Figure 02_image791
在室溫下用含LiOH-H2 O (56 mg，1.34 mmol)之THF (3 mL)及H2 O (0.5 mL)將4-甲基-2-(5-(嗎啉基甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸乙酯(150 mg，0.45 mmol)處理2小時。用1N HCl將混合物酸化至pH=4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈白色固體之4-甲基-2-(5-(嗎啉基甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(110 mg)。產率80% (ESI 309.3 (M+H)+ )。
步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(5-( 嗎啉基甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image793
在室溫下將4-甲基-2-(5-(嗎啉基甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊酸(90 mg，0.29 mmol)、(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(100 mg，0.35 mmol)、EDCI (83 mg，0.44 mmol)、HOBt (59 mg，0.44 mmol)及DIEA (113 mg，0.88 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌1小時。將混合物倒入水(10 mL)中且用EtOAc (20 mL×3)萃取。將有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(嗎啉基甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯)(70 mg)。產率25% (ESI 575.1 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(4- 甲基 -2-(5-( 嗎啉基甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 ) 戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image795
在室溫下用含LiOH-H2 O (15 mg，0.36 mmol)之THF (3 mL)及H2 O (0.5 mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(4-甲基-2-(5-(嗎啉基甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)戊醯胺基)丙酸甲酯(70 mg，0.12 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BF1 (30.1 mg)及BF2 (33.4 mg)。
化合物 BF1 ESI 561.0 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.53 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 8.20 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.70 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.49 (dd,J = 9.3, 2.3 Hz, 1H), 7.21 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 - 7.06 (m, 2H), 6.48 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.74 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 5.45 - 5.26 (m, 1H), 3.72 (t,J = 4.3 Hz, 4H), 3.46 (s, 2H), 2.92 (t,J = 7.8 Hz, 2H), 2.59 (s, 4H), 1.99 - 1.92 (m, 5H), 1.89 (s, 3H), 1.47 - 1.42 (m, 1H), 0.97 (t,J = 6.3 Hz, 6H)。
化合物 BF2 ESI 561.1 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.59 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 8.26 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.71 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.67 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.16 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 6.57 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.64 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 5.53 - 5.50 (m, 1H), 3.86 - 3.71 (m, 5H), 3.62 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 2.91 - 2.79 (m, 5H), 2.74 (dd,J = 15.1, 9.4 Hz, 1H), 2.02 (d,J = 2.9 Hz, 6H), 1.97 - 1.91 (m, 1H), 1.75 - 1.65 (m, 1H), 1.45 - 1.40 (m, 1H), 0.92 (dd,J = 6.6, 2.9 Hz, 6H)製備化合物 BG1 及 BG2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 2-(5-(((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image797
在室溫下將2-(5-甲醯基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(300 mg，1.13 mmol)、(R)-3-氟吡咯啶鹽酸鹽(284 mg，2.26 mmol)及三乙胺(0.31 mL，2.26 mmol)於DCE (10 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉(959 mg，4.52 mmol)且在室溫下攪拌隔夜。在真空中濃縮混合物，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化，得到呈無色油狀之2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(237 mg)。產率62% (ESI 339.2 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(5-(((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image799
在室溫下用含LiOH-H2 O (237 mg，5.65 mmol)之EtOH (6 mL)及H2 O (0.6 mL)將2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(426 mg，1.13 mmol)處理2小時。用1N HCl將混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化殘餘物，得到呈白色固體之2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(348 mg)。產率99% (ESI 311.1 (M+H)+ )。
步驟 3 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5-(((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image801
在環境溫度下向2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(200 mg，0.64 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中之攪拌溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(247 mg，1.29 mmol)、1-羥基苯并三唑(174 mg，1.29 mmol)及三乙胺(0.36 mL，2.58 mmol)。在環境溫度下將混合物攪拌30分鐘。添加(S)-3-胺基-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)丙酸甲酯(183 mg，0.64 mmol)，且在環境溫度下攪拌15分鐘，隨後加熱至50℃維持3小時。完成後，濃縮混合物，且藉由逆相在C18/80 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈褐色固體之(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(285 mg)。產率77% (ESI 577.0 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (3S)-3-(5-(2,6- 二甲基苯基 ) 吡啶 -3- 基 )-3-(2-(5-(((R)-3- 氟吡咯 啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image803
在室溫下用含LiOH-H2 O (134 mg，3.20 mmol)之MeOH (6 mL)及H2 O (0.3mL)將(3S)-3-(5-(2,6-二甲基苯基)吡啶-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(285 mg，0.64 mmol)處理2小時。用1N HCl將混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之產物BG1 (66 mg)及呈淡黃色固體之BG2 (78 mg)。
化合物 BG1 ESI 563.0 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, CD3 OD) δ 8.51 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 8.17 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.77 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 1H), 7.19 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 6.48 - 6.38 (m, 1H), 5.73 - 5.63 (m, 1H), 5.36 - 5.29 (m, 1H), 5.26 - 5.21 (m, 1H), 3.80 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.72 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.21 - 3.13 (m, 1H), 3.12 - 3.01 (m, 2H), 2.92 - 2.79 (m, 3H), 2.32 - 2.07 (m, 2H), 1.97 - 1.93 (m, 5H), 1.89 (s, 3H), 1.46 - 1.40 (m, 1H), 0.95 - 0.91 (m, 6H)。
化合物 BG2 ESI 563.1 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, CD3 OD) δ 8.56 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 8.23 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.71 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (t,J = 1.5 Hz, 1H), 7.61 - 7.52 (m, 1H), 7.20 - 7.16 (m, 1H), 7.14 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 6.57 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 5.57 - 5.54 (m, 2H), 5.34 (d,J = 53.0 Hz, 1H), 4.16 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.84 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.46 (s, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 3.92 - 3.25 (m, 1H), 2.75 - 2.72 (m, 1H), 2.61 - 2.58 (m, 1H), 2.38 - 2.23 (m, 2H), 2.00 (d,J = 3.0 Hz, 6H), 1.97 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 1.62 - 1.57 (m, 1H), 1.48 - 1.43 (m, 1H), 0.90 (d,J = 6.5 Hz, 6H)。
製備化合物 BH1 及 BH2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image805
在56℃下將2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(950 mg，3.06 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(979 mg，3.06 mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.17 g，6.12 mmol)、1-羥基苯并三唑(827 mg，6.12 mmol)及三乙胺(3.40 mL，24.49 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 1:1)純化殘餘物，得到呈褐色固體之(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(1.6 g)。產率83% (ESI 576.2 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image807
在室溫下用含LiOH-H2 O (1.18 g，28.00 mmol)之MeOH (30 mL)及H2 O (3 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(((R)-3-氟吡咯啶-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(1.6 g，2.80 mmol)處理16小時。完成後，用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BH1 (568 mg)及BH2 (586 mg)。
化合物 BH1 ESI 562.3 (M+H)+ 。1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.75 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.50 - 7.47 (m, 1H), 7.36 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.29 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.05 (d,J = 10.5 Hz, 3H), 6.97 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 6.48 (d,J = 9.5 Hz, 1H), 5.75 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 5.35 - 5.31 (m, 1H), 5.23 - 5.20 (m, 1H), 3.69 - 3.65 (m, 2H), 3.14 - 2.94 (m, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 2H), 2.74 - 2.69 (m, 1H), 2.30 - 2.17 (m, 1H), 2.14 - 2.03 (m, 1H), 1.96 - 1.92 (m, 5H), 1.88 (s, 3H), 1.47 - 1.39 (m, 1H), 0.95 - 0.93 (m, 6H)。
化合物 BH2 ESI 562.2 (M+H)+ 。1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.72 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 - 7.54 (m, 1H), 7.41 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.12 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 6.0 Hz, 2H), 7.02 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.56 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 5.54 - 5.50 (m, 2H), 5.32 - 5.48 (m, 1H), 4.13 (d,J = 13.5 Hz, 1H), 3.81 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.42 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 3.37 - 3.33 (m, 2H), 3.26 - 3.22 (m, 1H), 2.72 - 2.68 (m, 1H), 2.56 - 2.52 (m, 1H), 2.36 - 2.22 (m, 2H), 2.00 - 1.94 (m, 7H), 1.60 - 1.54 (m, 1H), 1.49 - 1.44 (m, 1H), 0.89 - 0.85 (m, 6H)。
製備化合物 BI1 及 BI2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (3S)-3-(2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image809
在40℃下將2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸 (182 mg，0.65 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸乙酯 (150 mg，0.5 mmol)、EDCI (191 mg，1 mmol)、HOBt (135 mg，1 mmol)及DIEA (258 mg，7 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌4小時。藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化混合物，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸乙酯(140 mg)。產率50% (ESI 560.3(M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(2-(4-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image811
在室溫下用含LiOH-H2 O (32 mg，0.75 mmol)之EtOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸乙酯(140 mg，0.25 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A(30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BI1 (44 mg)及BI2 (44 mg)。
化合物 BI1 ESI 532.3(M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.65 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.37 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 6.99 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.44 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 5.69 - 5.64 (m, 1H), 5.13 (s, 1H), 3.31 - 3.21 (m, 2H), 3.01 - 2.85 (m, 2H), 2.73 (s, 6H), 2.60 - 2.57 (m, 2H), 2.05 - 2.01 (m, 2H), 1.98 (s, 6H), 1.48 - 1.42 (m, 1H), 0.97 - 0.94 (m, 6H)。
化合物 BI2 ESI 532.2 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.69 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.38 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.18 - 7.03 (m, 4H), 6.99 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.50 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.15 (s, 1H), 3.39 (s, 1H), 3.29 (s, 1H), 2.94 (s, 2H), 2.77 (s, 6H), 2.58 - 2.53 (m, 2H), 2.01 (d,J = 11.7 Hz, 8H), 1.46 (s, 1H), 0.94 - 0.90 (m, 6H)。
製備化合物 BJ1 及 BJ2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image813
向2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100 mg，0.33 mmol)及(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸乙酯(99 mg，0.33 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加EDCI (95 mg，0.5 mmol)、HOBT (68 mg，0.5 mmol)及DIEA (129 mg，1 mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌16小時。在真空中濃縮反應混合物，且藉由逆相HPLC在C18/80 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈褐色固體之(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸乙酯(70 mg)。產率37% (ESI 576.3 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-((3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image815
在環境溫度下用含LiOH-H2 O (38 mg，0.9 mmol)之甲醇(2 mL)及水(1 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-((3-氟代氮雜環丁烷-1-基)甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸乙酯(70 mg，0.12 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：ACN，0~60%)上純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BJ1 (24 mg)及BJ2 (30 mg)。化合物 BJ1 ESI 548.3 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.70 (s, 1H), 7.45 - 7.26 (m, 3H), 7.15 - 6.94 (m, 5H), 6.47 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.76 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 5.38 (t,J = 7.3 Hz, 1H), 5.16 (d,J = 57.3 Hz, 1H), 3.82 - 3.66 (m, 2H), 3.57 - 3.53 (m, 2H), 3.47 - 3.37 (m, 2H), 2.84 - 2.81 (m, 2H), 1.94 (m, 8H), 1.50 - 1.37 (m, 1H), 0.97 (t,J = 6.7 Hz, 6H)。化合物 BJ2 ESI 548.3 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.67 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.55 - 7.51 (m, 1H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.18 - 7.00 (m, 5H), 6.56 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.59 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 5.49 - 5.41 (m, 1H), 5.27 - 5.24 (m, 1H), 4.09 - 4.05 (m, 2H), 3.96 - 3.75 (m, 4H), 2.71 - 2.67 (m, 2H), 2.04 - 1.88 (m, 7H), 1.66 - 1.58 (m, 1H), 1.44 - 1.38 (m, 1H), 0.91 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 BK1 及 BK2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image817
在室溫下將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(80 mg，0.29 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸甲酯(96 mg，0.34 mmol)、EDCI (109 mg，0.57 mmol)、HOBt (77 mg，0.57 mmol)及DIEA(185 mg，1.43 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌4小時。濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(140 mg)。產率50% (ESI 546.3 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image819
在室溫下用含LiOH-H2 O (54 mg，1.28 mmol)之THF (6 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)-3-(2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(140 mg，0.26 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BK1 (25.2 mg)及BK2 (37.3 mg)。
化合物 BK1 ESI 532.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.72 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.56 (dd,J = 9.4, 2.3 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.16 - 6.98 (m, 5H), 6.61 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.66 (dd,J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 5.16 (t,J = 5.3 Hz, 1H), 3.37-3.35 (m, 1H), 3.22 - 3.14 (m, 1H), 2.95 - 2.80 (m, 2H), 2.71 (s, 6H), 2.62 (m, 2H), 2.08 - 1.94 (m, 8H), 1.50 - 1.40 (m, 1H), 0.95 (dd,J = 19.9, 6.6 Hz, 6H)。
化合物 BK2 ESI 532.3 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.67 (s, 1H), 7.54 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 7.41 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.14-7.08 (m, 4H), 7.02 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.61 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.68 - 5.59 (m, 1H), 5.38 - 5.31 (m, 1H), 3.36-3.33 (m, 1H), 3.28-3.25 (m, 1H), 2.95-2.90 (m, 1H), 2.85-2.81 (m, 7H), 2.61 (dd,J = 14.8, 4.2 Hz, 1H), 2.52-2.47 (m, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 7H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.43-1.41 (m, 1H), 0.92 (t,J = 7.2 Hz, 6H)。
製備化合物 BL1 及 BL2 ((3S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image821
在室溫下將甲基2-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)乙醛(1.0 g，7.29 mmol)及氮雜環丁烷(416 mg，7.30 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加NaBH(OAc)3 (4.6 g，21.9 mmol)且在室溫下攪拌1小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 2:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(800 mg)。產率62% (ESI 179.1 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image823
在80℃下將5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(800 mg，4.49 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(2.2 g，6.74 mmol)及K2 CO3 (1.8 g，13.47 mmol)於MeCN (40 mL)中之混合物攪拌隔夜。將混合物過濾且用ACN(5 mL)洗滌。在真空中濃縮濾液，且藉由逆相HPLC在C18/80 g管柱(A：水/0.01% TFA，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈無色油狀之2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600 mg)。產率42% (ESI 321.2 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image825
在室溫下用含LiOH-H2 O (394 mg，9.40 mmol)之THF (10 mL)及H2 O (2 mL)將2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(600 mg，1.88 mmol)處理1小時。用1N HCl將混合物酸化至pH=4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈紅色固體之2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150 mg)。產率27% (ESI 293.2 (M+H)+ )。
步驟 4 ： (S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image827
向(S)-3-胺基-3-(3-溴苯基)丙酸乙酯(200 mg，0.54 mmol)、(4-氟-2,6-二甲基苯基)
Figure 108112877-A0304-12-01
酸(110 mg，0.65 mmol)及K2 CO3 (224 mg，1.62 mmol)於二噁烷 (6 mL)於H2 O (1.5 mL)中之混合物中添加PdCl2 (dppf) (40 mg，0.054 mmol)。將混合物在氮氣氛圍下加熱至110℃維持2小時。添加水(20 mL)且用EtOAc (20 mL×3)萃取溶液。在真空中濃縮合併之有機相，且藉由矽膠管柱(15% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(190 mg)。產率80% (ESI 316.1 [M-100+H]+ )。
步驟 5 ： (S)-3- 胺基 -3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image829
向(S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(90 mg，0.29 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物中添加HCl-二噁烷(4M，1 mL)。在室溫下攪拌混合物2小時且在真空中濃縮，得到呈白色固體之(S)-3-胺基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(68 mg)，其未經進一步純化即使用。產率99% (ESI 316.1 [M+H]+ )。
步驟 6 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁 烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image831
在室溫下將2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(53 mg，0.18 mmol)、(S)-3-胺基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(68 mg，0.22 mmol)、EDCI (52 mg，0.27 mmol)、HOBt (36 mg，0.27 mmol)及DIEA (70 mg，0.54 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌6小時。在真空中濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到(3S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸酯(50 mg)。產率47% (ESI 590.2 (M+H)+ )。
步驟 8 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image833
在室溫下用含LiOH-H2 O (11 mg，0.255 mmol)之THF (4 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(5-(2-(氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸甲酯(50 mg，0.085 mmol)處理3小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BL1 (7.5 mg)及BL2 (10.5 mg)。
化合物 BL1 ESI 562.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.64 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.52 (dd,J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.01 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.85 (dd,J = 9.6, 2.6 Hz, 2H), 6.61 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.63 (dd,J = 10.4, 5.2 Hz, 1H), 5.22 (t,J = 5.5 Hz, 1H), 4.02 - 4.01 (m, 2H), 3.89 (q,J = 8.5 Hz, 2H), 3.40 - 3.35 (m, 2H), 2.78 - 2.75 (m, 2H), 2.67 (d,J = 5.6 Hz, 2H), 2.33 - 2.27 (m, 2H), 2.11 - 1.94 (m, 8H), 1.49 - 1.37 (m, 1H), 0.95 (dd,J = 17.8, 6.6 Hz, 6H)。
化合物 BL2 ESI 562.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.55 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.48 (dd,J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.02 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.85 (d,J = 9.7 Hz, 2H), 6.60 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.63 (dd,J = 8.5, 7.0 Hz, 1H), 5.41 (dd,J = 10.0, 3.9 Hz, 1H), 4.17 - 3.99 (m, 4H), 3.48 - 3.35 (m, 2H), 2.82 - 2.60 (m, 3H), 2.55 - 2.38 (m, 3H), 2.04 - 1.94 (m, 7H), 1.85 - 1.76 (m, 1H), 1.52 - 1.36 (m, 1H), 0.94 - 0.89 (m, 6H)。
製備化合物 BM1 及 BM2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (E)-2- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙烯基 )-4- 甲基吡啶
Figure 02_image835
在室溫下將氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻(8.5 g，24.8 mmol)及t-BuOK (4.6 g，41.3 mmol)於THF (40 mL)中之混合物攪拌20分鐘。添加含10 mL THF之6-甲氧基-4-甲基菸醛(2.5 g，16.5 mmol)，且在室溫下將混合物攪拌2小時。將反應混合物倒入40 mL水中，且用EtOAc (50 mL×2)萃取。在真空中濃縮有機相，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈無色油狀之(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶(1.8 g)。產率61% (ESI 180.1(M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(6- 甲氧基 -4- 甲基吡啶 -3- 基 ) 乙醛
Figure 02_image837
在室溫下用TFA (20 mL)將(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶(1.8g，10 mmol)處理4小時。在真空中移除溶劑以提供呈紅色油狀之2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(1.5 g，粗產物)，其未經進一步純化即使用。(ESI 166.1 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(6- 甲氧基 -4- 甲基吡啶 -3- 基 )-N,N- 二甲基乙基胺
Figure 02_image839
在室溫下將2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(1.45 g，8.78 mmol)、二甲胺(於THF中，17.5 mL，35.72 mmol)及Achoo (0.8 g，13.2 mmol)於DCE (30 mL)中之混合物攪拌15分鐘。添加NaBH(OAc)3 (3.71 g，17.5 mmol)且在室溫下攪拌3小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙基胺(850 mg)。產率50% (ESI 195.1(M+H)+ )。
步驟 4 ： 5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4- 甲基吡啶 -2- 醇
Figure 02_image841
在75℃下將2-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-N,N-二甲基乙胺(850 mg，4.38 mmol)於HBr/AcOH (20 mL)中之混合物加熱16小時。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈紅色固體之5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇(650 mg)。產率82% (ESI 181.1 (M+H)+ )。
步驟 5 ： 2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image843
在80℃下將5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇(650 g，3.6 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.71 g，7.2 mmol)及K2 CO3 (1.49 g，10.8 mmol)於MeCN (20 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500 mg)。產率43% (ESI 323.2(M+H)+ )。
步驟 6 ： 2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image845
在室溫下用含LiOH-H2 O (260 mg，6.2 mmol)之MeOH (10 mL)及H2 O (2 mL)將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500 mg，1.55 mmol)處理2小時。將混合物用1N HCl酸化至pH 4~5，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈白色固體之2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(420 mg)。產率92% (ESI 295.2(M+H)+ )。
步驟 7 ： (3S)-3-(2-(3-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4- 甲基 -6- 側氧基環己 -2,4- 二烯基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image847
在40℃下將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(100 mg，0.34 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(101 mg，0.34 mmol)、EDCI (130 mg，0.68 mmol)、HOBt (92 mg，0.68 mmol)及DIEA (175 mg，1.36 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌2小時。濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈紅色油狀之(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(130 mg)。產率67% (ESI 574.2 (M+H)+ )。
步驟 8 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image849
在室溫下用含LiOH-H2 O (39 mg，0.92 mmol)之MeOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(130 mg，0.23 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BM1 (36.9 mg)及BM2 (42.3 mg)。
化合物 BM1 ESI 546.2(M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.52 (s, 1H), 7.40 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 7.17 - 7.11 (m, 1H), 7.08 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 7.05 (s, 1H), 7.00 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.65 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 5.37 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 5.18 (d,J = 57.3 Hz, 1H), 4.01 (d,J = 9.4 Hz, 2H), 3.80 - 3.55 (m, 2H), 3.05 (s, 2H), 2.78 (d,J = 6.7 Hz, 2H), 2.66 - 2.61 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.00 - 1.87 (m, 8H), 1.42 - 1.38 (m, 1H), 0.95 - 0.91 (m, 6H)。
化合物 BM2 ESI 546.2 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.56 (s, 1H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.12 (m,J = 18.3, 11.4, 6.5 Hz, 4H), 7.02 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.62 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 5.41 - 5.37 (m, 1H), 3.32 - 3.26 (m, 1H), 3.24 - 3.12 (m, 1H), 3.00 - 2.87 (m, 2H), 2.84 (s, 6H), 2.63 - 2.58 (m, 1H), 2.58 - 2.45 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.05 - 1.90 (m, 7H), 1.83 - 1.70 (m, 1H), 1.49 - 1.29 (m, 1H), 0.91 - 0.86 (m, 6H)。
製備化合物 BN1 及 BN2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image851
在室溫下將2-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)乙醛(1.5 g，11 mmol)、AcOH (0.8 g，13.2 mmol)及3-氟代氮雜環丁烷鹽酸鹽(1.47 g，13.2 mmol)於MeOH (30 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加NaBH(OAc)3 (4.66 g，22 mmol)且在室溫下攪拌3小時。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/120 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈黃色油狀之5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(2 g，粗產物)。(ESI 197.2 (M+H)+ )。
步驟 4 ： 2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image853
在110℃下將5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)吡啶-2(1H)-酮(1.9 g，9.7 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(3.45 g，14.5 mmol)及Cs2 CO3 (9.5 g，29.1 mmol)於甲苯(40 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/120g管柱(A：水10mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物以提供呈黃色油狀之2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(650 mg)。產率20% (ESI 339.1(M+H)+ )。
步驟 5 ： 2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image855
在室溫下用含LiOH-H2 O (322 mg，7.68 mmol)之MeOH (10 mL)及H2 O (2.5 mL)將2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(650 mg，1.92 mmol)處理2小時。用1N HCl將混合物酸化至pH=4~5，藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈白色固體之2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(350 mg)。產率59% (ESI 311.2(M+H)+ )。
步驟 6 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image857
在45℃下將2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(120 mg，0.39 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(133 mg，0.47 mmol)、EDCI (150 mg，0.78 mmol)、HOBt (105 mg，0.78 mmol)及DIEA(201 mg，1.56 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌2小時。藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化混合物，得到呈油狀之(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(120 mg)。產率52% (ESI 576.2 (M+H)+ )。
步驟 7 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image859
在室溫下用含LiOH-H2 O (34 mg，0.8 mmol)之MeOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(120 mg，0.2 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A(30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BN1 (30 mg)及BN2 (34.9 mg)。
化合物 BN1 ESI 562.0 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.59 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.42 (m, 1H), 7.40 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.17 - 7.12 (m, 1H), 7.11 - 7.06 (m, 2H), 7.04 (s, 1H), 7.01 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.54 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.68 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 5.28 (t,J = 6.2 Hz, 1H), 5.16 - 5.11 (m, 1H), 4.04 - 4.00 (m, 2H), 3.78 - 3.61 (m, 2H), 3.22 - 3.06 (m, 2H), 2.78 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.59 (m, 2H), 1.97 - 1.93 (m, 8H), 1.45 - 1.39 (m, 1H), 0.95 - 0.92 (m, 6H)。
化合物 BN2 ESI 562.0 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.55 (s, 1H), 7.48 - 7.45 (m, 1H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.12 - 7.08 (m, 4H), 7.04 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.59 (d,J = 9.3 Hz, 1H), 5.66 - 5.61 (m, 1H), 5.40 - 5.36 (m, 1H), 5.37 - 5.19 (m, 1H), 4.31 (d,J = 42.0 Hz, 2H), 3.95 (d,J = 10.3 Hz, 2H), 3.32 (s, 2H), 2.79 - 2.63 (m, 3H), 2.56 - 2.51 (m, 1H), 2.04 - 1.91 (m, 7H), 1.86 - 1.72 (m, 1H), 1.41 - 1.38 (m, 1H), 0.92 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 BO1 及 BO2 ((3S)-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： (E)-2- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙烯基 )-4-( 三氟甲基 ) 吡啶
Figure 02_image861
在0℃下向氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻(1.0 g，2.95 mmol)於THF (13.406 mL)中之溶液中添加第三丁醇鉀(376 mg，3.35 mmol)。在0℃下攪拌反應物1小時之後，添加6-甲氧基-4-(三氟甲基)菸醛(550 mg，2.68 mmol)於THF (6.5 mL)中之溶液。將反應物在室溫下攪拌隔夜且用NH4 Cl溶液淬滅。將混合物萃取(EtOAc×3)，濃縮且藉由矽膠層析法(0-100%乙酸乙酯：己烷)純化以提供(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶(450 mg)。產率72% (ESI 234.2 (M+H)+ )。
步驟 2 ： 2-(6- 甲氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 ) 乙醛
Figure 02_image863
向(E)-2-甲氧基-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-(三氟甲基)吡啶(450 mg，1.930 mmol)於DCM (29.689 mL)中之溶液中添加TFA (0.595 mL，7.72 mmol)及水(0.591 mL，32.8 mmol)。將反應物在45℃下攪拌18小時。將反應物用DCM稀釋且用NaHCO3 淬滅。將混合物用水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮以提供2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(343 mg)，其未經進一步純化即使用。產率81% (ESI 220.18 (M+H)+ )。步驟 3 ： 2-(6- 甲氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 )-N,N- 二甲基胺 -1- 胺
Figure 02_image865
向2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醛(0.34 g，1.6 mmol)於DCE(7.8 mL)中之溶液中添加二甲胺(3.9 mL，7.8 mmol)及乙酸(0.05 mL，0.78 mmol)且攪拌1小時。向溶液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(0.6 g，3.1 mmol)。將反應物攪拌12小時，隨後濃縮且藉由矽膠層析法(0-35% DCM (1% TEA)：MeOH 0-30%)純化以提供2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基胺-1-胺(305 mg)。產率79% (ESI 249.27 (M+H)+ )。步驟 4 ： 5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -2(1H)- 酮
Figure 02_image867
將HBr (33%於乙酸中)(4.04 mL，24.57 mmol)添加至2-(6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N,N-二甲基胺-1-胺(0.305 g，1.229 mmol)且在壓力容器中加熱至75℃。在4小時之後，移除溶劑，且藉由矽膠層析法(0-25% DCM:MeOH，1% TEA作為改質劑)純化殘餘物以提供5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(219 mg)。產率76% (ESI 235.15 (M+H)+ )。1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.56 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 2.76 (m, 2H), 2.61 (m, 1H), 2.37 (m, 6H)。
步驟 5 ： 2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image869
在85℃下將5-(2-(二甲基胺基)乙基)-4-(三氟甲基)吡啶-2(1H)-酮(685 mg，2.92 mmol)、K2 CO3 (1.60 g，11.55 mmol)及4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.60 g，6.70 mmol)於CH3 CN (60 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 2:1)純化殘餘物，得到呈褐色油狀之2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(390 mg)。產率35% (ESI 377.2 (M+H)+ )。1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.84 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.51 (dd,J = 11.0, 5.0 Hz, 1H), 4.23 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 2.77 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 2.53 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 2.33 (s, 6H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.46 - 1.38 (m, 1H), 1.27 (t,J = 7.0 Hz, 3H), 0.97 (t,J = 7.0 Hz, 6H)。
步驟 6 ： 2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image871
在室溫下用含LiOH單水合物(435 mg，10.36 mmol)之EtOH (10 mL)及H2 O (1 mL)將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(390 mg，1.0 mmol)處理1小時。用1N HCl水溶液將混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由矽膠管柱(MeOH:EtOAc 1:2)純化，得到呈油狀之2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(358 mg)。產率99% (ESI 349.1 (M+H)+ )。
步驟 7 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image873
在室溫下將2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(167 mg，0.25 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯鹽酸鹽(167 mg，0.52 mmol)、EDCI (196 mg，1.01 mmol)、HOBt (135 mg，1.00 mmol)及DIEA (0.83 mL，5.00 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物攪拌9小時。濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~92%)上純化，得到呈褐色固體之(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(99 mg)。產率64% (ESI 614.2 (M+H)+ )。
步驟 8 ： (3S)-3-(2-(5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基 -4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image875
在室溫下用含LiOH單水合物(68 mg，1.62 mmol)之MeOH (10 mL)及H2 O (0.1 mL)將(3S)-3-(2-(5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基-4-(三氟甲基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(99 mg，0.16 mmol)處理20小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中濃縮混合物，且藉由製備型HPLC A純化，得到呈白色固體之非對映異構產物BO1 (26 mg)及BO2 (28 mg)。
化合物 BO 1 ESI 600.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.89 (s, 1H), 7.36 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.10 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.05 (m, 3H), 6.96 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.70 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 5.35 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 3.07 - 3.00 (m, 2H), 2.95 - 2.90 (m, 2H), 2.74 - 2.69 (m, 8H), 1.98 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.47 - 1.39 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.5 Hz, 3H), 0.94 (d,J = 6.5 Hz, 3H)。
化合物 BO2 ESI 600.2 (M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.84 (s, 1H), 7.41 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (t,J = 7.5 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 7.02 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.62 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 5.48 - 5.45 (m, 1H), 3.27 - 3.22 (m, 1H), 3.20 - 3.15 (m, 1H), 2.97 (t,J = 7.0 Hz, 2H), 2.79 (s, 6H), 2.67 - 2.63 (m, 1H), 2.58 - 2.53 (m, 1H), 2.00 - 1.94 (m, 7H), 1.74 - 1.68 (m, 1H), 1.43 - 1.35 (m, 1H), 0.90 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 BP1 及 BP2 ((3S)-3-(2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 )-3-(2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 6- 羥基 -4- 甲基 菸 醛
Figure 02_image877
在100℃下將6-甲氧基-4-甲基菸醛(5 g，33 mmol)於HBr/AcOH (50 mL)中之混合物加熱4小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(EtOAc:MeOH 4:1)純化殘餘物以提供呈紅色固體之6-羥基-4-甲基菸醛(6 g，粗產物)。(ESI 138.1 (M+H)+ )。
步驟 2 ： (E)-5-(2- 甲氧基乙烯基 )-4- 甲基吡啶 -2- 醇
Figure 02_image879
在0℃下在N2 氛圍下向氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻(10.3 g，30 mmol)於THF (40mL)中之混合物中逐滴添加LiHMDS (38 mL，50 mmol)且在0℃下攪拌20分鐘。添加6-羥基-4-甲基菸醛(2.74 g，20 mmol)，且在室溫下將混合物攪拌3小時。將反應混合物冷卻至0℃並添加40 mL水，且在0℃下攪拌10分鐘。濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/120 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈紅色油狀之(E)-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶-2-醇(1.5 g)。產率45% (ESI 166.1 (M+H)+ )。
步驟 3 ： 2-(6- 羥基 -4- 甲基吡啶 -3- 基 ) 乙醛
Figure 02_image881
在室溫下用TFA (15 mL)將(E)-5-(2-甲氧基乙烯基)-4-甲基吡啶-2-醇(1.5 g，9.1 mmol)處理3小時。在真空中移除溶劑以提供呈紅色油狀之2-(6-羥基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(2.2 g，粗產物)，其未經進一步純化即使用。(ESI 152.2 (M+H)+ )。
步驟 4 ： 5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4- 甲基吡啶 -2- 醇
Figure 02_image883
在室溫下將2-(6-羥基-4-甲基吡啶-3-基)乙醛(2 g，13.2 mmol)、3-氟代氮雜環丁烷鹽酸鹽(2.2 g，19.8 mmol)於MeOH (20 mL)中之混合物攪拌30分鐘。添加NaBH(OAc)3 (5.6 g，26.4 mmol)且在室溫下攪拌2小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 2:1)純化殘餘物以提供呈黃色油狀之5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基吡啶-2-醇(1 g)。產率36% (ESI 211.1(M+H)+ )。
步驟 5 ： 2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image885
在85℃下將5-(2-(二甲基胺基)乙基)吡啶-2(1H)-酮甲酯(1 g，4.76 mmol)、4-甲基-2-(甲基磺醯氧基)戊酸乙酯(1.36 g，5.71 mmol)及K2 CO3 (1.97 g，14.28 mmol)於MeCN (20 mL)中之混合物攪拌隔夜。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 1:2)純化殘餘物以提供2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500 mg)。產率30% (ESI 353.2(M+H)+ )。
步驟 6 ： 2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image887
在室溫下用含LiOH-H2 O (298 mg，7.1 mmol)之MeOH (10 mL)及H2 O (2.5 mL)將2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(500 mg，1.42 mmol)處理2小時。將混合物用1N HCl酸化至pH 4~5，藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈白色固體之2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(360 mg)。產率78% (ESI 325.1(M+H)+ )。
步驟 7 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸甲酯
Figure 02_image889
在室溫下將2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(150 mg，0.46 mmol)、(S)-3-胺基-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)丙酸甲酯(130 mg，0.46 mmol)、EDCI (177 mg，0.92 mmol)、HOBt (124 mg，0.92 mmol)及DIEA (237 mg，1.84 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物攪拌2小時。濃縮混合物，且藉由逆相HPLC在C18/40 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化，得到呈黃色油狀之(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)丙酸甲酯(200 mg)。產率74% (ESI 590.2 (M+H)+ )。
步驟 8 ： (3S)-3-(2',6'- 二甲基聯苯 -3- 基 )-3-(2-(5-(2-(3- 氟代氮雜環丁烷 -1- 基 ) 乙基 )-4- 甲基 -2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 ) 丙酸
Figure 02_image891
在室溫下用含LiOH-H2 O (57 mg，1.36 mmol)之MeOH (4 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2',6'-二甲基聯苯-3-基)-3-(2-(5-(2-(3-氟代氮雜環丁烷-1-基)乙基)-4-甲基-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基丙酸甲酯(200 mg，0.34 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之產物BP1 (77 mg)及BP2 (80 mg)。
化合物 BP1 ESI 576.2(M+H)+ 。
1 H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.52 (s, 1H), 7.40 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 7.17 - 7.11 (m, 1H), 7.08 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 7.05 (s, 1H), 7.00 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.65 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 5.37 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 5.18 (d,J = 57.3 Hz, 1H), 4.01 (d,J = 9.4 Hz, 2H), 3.80 - 3.55 (m, 2H), 3.05 (s, 2H), 2.78 (d,J = 6.7 Hz, 2H), 2.66 - 2.61 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.00 - 1.87 (m, 8H), 1.42 - 1.39 (m, 1H), 0.95 - 0.92 (m, 6H)。
化合物 BP2 ESI 576.2 (M+H)+ 。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.46 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.43 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 7.14 - 7.10 (m, 2H), 7.10 (d,J = 6.9 Hz, 2H), 7.04 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.62 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 5.45 - 5.41 (m, 1H), 5.31 (d,J = 57.6 Hz, 1H), 4.31 (s, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.30 - 3.17 (m, 2H), 2.84 (d,J = 15.8 Hz, 1H), 2.73 - 2.61 (m, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.01 (d,J = 2.0 Hz, 6H), 1.93 - 1.89 (m, 1H), 1.82 - 1.73 (m, 1H), 1.39 - 1.35 (m, 1H), 0.91 - 0.88 (m, 6H)。
製備化合物 BQ1 及 BQ2 ((3S)-3-(2-(3-( 二氟甲基 )-5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸 ) 步驟 1 ： 5- 溴 -3-( 二氟甲基 )-2- 甲氧基吡啶
Figure 02_image893
在0℃下在N2 下向5-溴-2-甲氧基菸醛(10.0 g，46.3 mmol於無水DCM (100 mL)中之混合物中添加DAST (29.8 g，185.2 mmol)且在0℃下攪拌2天。將反應物用100 mL飽和NaHCO3 溶液淬滅。用DCM (100 mL×3)萃取水層。將合併之有機層用NaHCO3 (飽和，100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲氧基吡啶(11.0 g)。產率100% (ESI 238.1(M+H)+ )。
步驟 2 ： 5- 溴 -3-( 二氟甲基 ) 吡啶 -2- 醇
Figure 02_image895
在室溫下將5-溴-3-(二氟甲基)-2-甲氧基吡啶(11.0 g，46.2 mmol)於HBr (33%於乙酸中，100 mL)中之混合物攪拌5小時且隨後在40℃下攪拌75分鐘。將混合物濃縮並倒入100 mL飽和NaHCO3 溶液中且用DCM萃取。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥且在真空中濃縮，得到呈白色固體之5-溴-3-(二氟甲基)吡啶-2-醇(8.5 g)，其未經進一步純化即使用。產率73.2% (ESI 226.0(M+H)+ )。
步驟 3 ：乙基 2-(5- 溴 -3-( 二氟甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4
Figure 02_image897
在80℃下將5-溴-3-(二氟甲基)吡啶-2-醇(7.0 g，31.2 mmol)、4-甲基-2-((甲磺醯基)氧基)戊酸乙酯(14.0 g，37.4 mmol)及K2 CO3 (14.0 g，62.5 mmol)於ACN (100 mL)中之混合物攪拌隔夜。將混合物過濾且用ACN (20 mL)洗滌。在真空中濃縮濾液，且藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 4:1)純化殘餘物以提供呈白色固體之乙基2-(5-溴-3-(二氟甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4 (10.0 g)。產率80.3% (ESI 366.0(M+H)+ )。
步驟 4 ： 乙基 2-(5- 烯丙基 -3-( 二氟甲基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4
Figure 02_image899
在100℃下將乙基2-(5-溴-3-(二氟甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4 (6.0 g，16.2 mmol)、烯丙基三丁基錫烷(7.0 g，19.2 mmol)、CsF (5.0 g，32.4 mmol)、Pd(dba)3 (720 mg，1.62 mmol)及PCy3 (450 mg，0.135 mmol)於二噁烷(100 mL)中之混合物攪拌隔夜。將混合物倒入水(200 mL)中，用EtOAc (100 mL×3)萃取。將合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由矽膠管柱(石油醚:EtOAc 4:1)純化殘餘物，得到呈白色固體之2-(5-烯丙基-3-(二氟甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4 (3.0 g)。產率71.6% (ESI 328.1(M+H)+ )。
步驟 5 ： 2-(3-( 二氟甲基 )-2- 側氧基 -5-(2- 側氧基乙基 ) 吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image901
向2-(5-烯丙基-3-(二氟甲基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4 (3.0 g，9.1 mmol)於THF/H2 O (2/1，100 mL)中之混合物中添加K2 OsO4 (33.7 mg，0.09 mmol)，且在室溫下攪拌1小時。添加NaIO4 (3.9，18.3 mmol)且將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物倒入水(200 mL)中且用EtOAc (100 mL×3)萃取。將合併之有機層經鹽水(200 mL)洗滌且經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之2-(3-(二氟甲基)-2-側氧基-5-(2-側氧基乙基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(3.0 g，粗產物)，其未經進一步純化即使用。(ESI 330.1(M+H)+ )。
步驟 6 ： 2-(3-( 二氟甲基 )-5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸乙酯
Figure 02_image903
在室溫下將2-(3-(二氟甲基)-2-側氧基-5-(2-側氧基乙基)吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(3.0 g，9.1 mmol)、二甲胺(2M於THF中，14 mL，28 mmol)於DCE (50ml)中之混合物攪拌30分鐘。逐份添加NaBH(OAc)3 (3.8 g，18.2 mmol)，且在室溫下將反應物攪拌隔夜。在真空中濃縮溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/120 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈黃色油狀之2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(2.0 g)。產率33.6% (ESI 359.2 (M+H)+ )。
步驟 7 ： 2-(3-( 二氟甲基 )-5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊酸
Figure 02_image905
在室溫下用含LiOH-H2 O (40 mg，1.01 mmol)之THF (20 mL)及水(10 mL)將2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸乙酯(2.0 g，5.5 mmol)之混合物處理2小時。在真空中移除溶劑，且藉由逆相HPLC在C18/120 g管柱(A：水10 mM NH4 HCO3 ，B：MeOH，0~100%)上純化殘餘物，得到呈白色固體之2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(1.2 g)。產率85.6% (ESI 331.1(M+H)+ )。
步驟 8 ： (3S)-3-(2-(3-( 二氟甲基 )-5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸乙酯
Figure 02_image907
在室溫下將2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊酸(120 mg，0.36 mmol)、(S)-3-胺基-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(137 mg，0.43 mmol)、TCFH (151.2 mg，0.54 mmol)及NMI (149 mg，1.8 mmol)於MeCN (5 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱(DCM:MeOH 10:1)純化殘餘物，得到呈黃色固體之(3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg)。產率61% (ESI 628 (M+H)+ )。
步驟 12 ： (3S)-3-(2-(3-( 二氟甲基 )-5-(2-( 二甲基胺基 ) 乙基 )-2- 側氧基吡啶 -1(2H)- 基 )-4- 甲基戊醯胺基 )-3-(4'- 氟 -2',6'- 二甲基 -[1,1'- 聯苯 ]-3- 基 ) 丙酸
Figure 02_image909
在室溫下用含LiOH-H2 O (46.8 mg，1.1 mmol)之EtOH (3 mL)及H2 O (1 mL)將(3S)-3-(2-(3-(二氟甲基)-5-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-側氧基吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊醯胺基)-3-(4'-氟-2',6'-二甲基-[1,1'-聯苯]-3-基)丙酸乙酯(140 mg，0.22 mmol)處理2小時。用1N HCl將反應混合物酸化至pH 4~5。在真空中移除溶劑，且藉由製備型HPLC A (30-60% MeCN)純化殘餘物，得到呈白色固體之非對映異構產物BQ1 (11 mg)及BQ2 (14 mg)。
化合物 BQ1 ESI 600.2 (M+H)+ 。1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.89 (d,J = 15.3 Hz, 2H), 7.39 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.00 - 6.96 (m, 1H), 6.74 - 6.64 (m, 3H), 5.67 - 5.58 (m, 1H), 5.21 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 3.23 - 3.15 (m, 6.4 Hz, 1H), 3.04 - 2.86 (m, 3H), 2.76 (s, 6H), 2.68 - 2.59 (m, 2H), 2.03 - 1.93 (m, 8H), 1.45 (s, 1H), 0.96 - 0.92 (m, 6H)。
化合物 BQ2 ESI 600.3 (M+H)+ 。1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.84 (d,J = 10.8 Hz, 2H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.01 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.89 - 6.60 (m, 3H), 5.65 - 5.58 (m, 1H), 5.38 - 5.32 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 1H), 3.27 - 3.19 (m, 1H), 3.00 - 2.81 (m, 8H), 2.64 - 2.58 (m, 1H), 2.50 - 2.42 (m, 1H), 2.05 - 1.98 (m, 7H), 1.85 - 1.78 (m, 1H), 1.48 - 1.39 (m, 1H), 0.96 - 0.89 (m, 6H)。
實例 4 ： 用於 α 4 β 7 結合之化合物之螢光偏振分析 使用螢光偏振(fluorescence polarization，FP)分析經由與螢光素標記之肽CRSDTLCGE{Lys(FITC)}之結合競爭量測化合物活性。在分析中，將6.5 nM整合素a4b7與測試化合物一起在2 mM氯化錳、0.1 mM氯化鈣、20 mM HEPES緩衝液(pH 7.3)、150 mM氯化鈉、0.01% 曲拉通(Triton) X-100、2% DMSO及3 nM螢光素標記肽中培育。在384槽培養盤中進行分析，在添加螢光素標記肽之前，在22℃下將整合素蛋白質與測試化合物一起預培育15分鐘。在添加螢光素標記肽之後，分析在22℃下培育1小時且量測螢光偏振。藉由非線性回歸、四參數曲線擬合測定IC50 值。
以引用的方式併入 本文中所引用之所有美國專利及美國及PCT專利申請公開案均以引用的方式併入本文中。
等效物 熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗確定本文所述之本發明之特定實施例的許多等效物。此類等效物意欲由以下申請專利範圍涵蓋。
圖 1 為概述例示性化合物對α4β7整合素之活體外抑制的表。
Figure 108112877-A0101-11-0001-1

Claims (104)

  1. 一種由式(I)表示之化合物，
    Figure 03_image001
    其中： R1 為H、烷基、伸烷基-環烷基、雜環基、伸烷基-O-烷基、芳基、雜芳基或伸烷基-CF3 ； R2 為雜環基； R3 為
    Figure 03_image912
    ； R4 為H或(C1 -C6 )-烷基； Ra 為H、烷基、環烷基、CN或-O-烷基； Rb 為H、烷基、芳基、雜芳基、雜環基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜環基； Rc 為H、烷基、環烷基、雜環基或伸烷基-CF3 ； Rd 為芳基、雜芳基、雜環基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜環基；且 Re 為芳基、雜芳基或雜環基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中R1 為烷基。
  3. 如請求項2之化合物，其中烷基為甲基、乙基、異丙基、正丙基、異丁基、正丁基或第三丁基。
  4. 如請求項1之化合物，其中R1 為伸烷基-環烷基。
  5. 如請求項4之化合物，其中伸烷基-環烷基為亞甲基-環丙基。
  6. 如請求項1之化合物，其中R1 為雜環基。
  7. 如請求項6之化合物，其中雜環基為含N雜環基。
  8. 如請求項6或7之化合物，其中雜環基為經取代之雜環基。
  9. 如請求項1之化合物，其中R1 為-伸烷基-O-烷基。
  10. 如請求項9之化合物，其中-伸烷基-O-烷基為-亞甲基-O-甲基。
  11. 如請求項1之化合物，其中R1 為芳基。
  12. 如請求項11之化合物，其中芳基為苯基。
  13. 如請求項12之化合物，其中苯基為未經取代之苯基。
  14. 如請求項12之化合物，其中苯基為經取代之苯基。
  15. 如請求項14之化合物，其中經取代之苯基係經一或多個選自烷基及鹵素之取代基取代。
  16. 如請求項1之化合物，其中R1 為伸烷基-CF3 。
  17. 如請求項16之化合物，其中伸烷基-CF3 為亞甲基-CF3 。
  18. 如請求項1至17中任一項之化合物，其中R2 為雜環基。
  19. 如請求項18之化合物，其中雜環基為經取代之雜環基。
  20. 如請求項18或19之化合物，其中雜環基為含N雜環基。
  21. 如請求項20之化合物，其中該含N雜環基為6員至12員雜環基。
  22. 如請求項19至21中任一項之化合物，其中R2 係經一或多個選自胺基、烷基及烷氧基之取代基取代，其中烷基或烷氧基係經嗎啉基、環狀胺基或非環胺基取代，且其中該烷基、烷氧基、嗎啉基、環狀胺基或非環胺基部分係視情況經一或多個烷氧基或氟取代。
  23. 如請求項21之化合物，其中R2 為未經取代之吡啶酮基。
  24. 如請求項21之化合物，其中R2 為經取代之吡啶酮基。
  25. 如請求項24之化合物，其中經取代之吡啶酮基係經一或多個選自以下之取代基取代：烷基、環烷基、雜環烷基、鹵素、芳基、雜芳基及CF3 。
  26. 如請求項18之化合物，其中R2 係選自
    Figure 03_image914
    Figure 03_image916
    Figure 03_image918
    。
  27. 如請求項18之化合物，其中R2 係選自
    Figure 03_image920
    Figure 03_image922
    Figure 03_image924
    Figure 03_image926
    。
  28. 如請求項1至27中任一項之化合物，其中R3 為
    Figure 03_image928
    。
  29. 如請求項28之化合物，其中Ra 為甲基、環丙基、CN或-OMe。
  30. 如請求項1至29中任一項之化合物，其中Rb 為烷基、芳基、雜環基、雜芳基、-O-環烷基、-O-芳基或-O-雜芳基。
  31. 如請求項30之化合物，其中Rb 為烷基。
  32. 如請求項31之化合物，其中烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。
  33. 如請求項32之化合物，其中烷基為第三丁基。
  34. 如請求項30之化合物，其中Rb 為芳基或雜芳基。
  35. 如請求項34之化合物，其中Rb 為經取代之芳基。
  36. 如請求項34之化合物，其中Rb 為經取代之雜芳基。
  37. 如請求項35或36之化合物，其中經取代之芳基或經取代之雜芳基係經一或多個選自以下之取代基取代：烷基、鹵素、OH、-O-烷基、CN、環烷基及雜環烷基。
  38. 如請求項34之化合物，其中Rb 係選自
    Figure 03_image930
    Figure 03_image932
    Figure 03_image934
    。
  39. 如請求項30之化合物，其中Rb 為雜環基。
  40. 如請求項39之化合物，其中雜環基為經取代之雜環基。
  41. 如請求項40之化合物，其中經取代之雜環基係經一或多個選自烷基、環烷基、OH及-O-烷基之取代基取代。
  42. 如請求項41之化合物，其中Rb 係選自
    Figure 03_image936
    Figure 03_image938
    。
  43. 如請求項39之化合物，其中Rb 係選自
    Figure 03_image940
    Figure 03_image942
    Figure 03_image944
    。
  44. 如請求項30之化合物，其中Rb 為-O-環烷基。
  45. 如請求項44之化合物，其中-O-環烷基為-O-環丁基。
  46. 如請求項30之化合物，其中Rb 為-O-芳基。
  47. 如請求項46之化合物，其中-O-芳基為-O-苯基。
  48. 如請求項1至27中任一項之化合物，其中R3 為
    Figure 03_image946
    。
  49. 如請求項48之化合物，其中Rc 為烷基、環烷基、(雜環基)烷基、鹵素或CF3 。
  50. 如請求項49之化合物，其中烷基為甲基或乙基。
  51. 如請求項49之化合物，其中Rc 為CF3 。
  52. 如請求項1至27中任一項之化合物，其中R3 為
    Figure 03_image948
    。
  53. 如請求項48至52中任一項之化合物，其中Rd 為芳基、雜芳基或雜環基。
  54. 如請求項53之化合物，其中Rd 為芳基。
  55. 如請求項54之化合物，其中芳基為經取代之芳基。
  56. 如請求項55之化合物，其中經取代之芳基係經一或多個選自以下之取代基取代：烷基、環烷基、(雜環基)烷基、鹵素、OH、OMe、CF3 及CN。
  57. 如請求項54之化合物，其中Rd 係選自
    Figure 03_image950
    Figure 03_image952
    Figure 03_image954
    。
  58. 如請求項53之化合物，其中Rd 為雜環基。
  59. 如請求項58之化合物，其中雜環基為經取代之雜環基。
  60. 如請求項53之化合物，其中Rd 為雜芳基。
  61. 如請求項60之化合物，其中雜芳基為經取代之雜芳基。
  62. 如請求項61之化合物，其中Rd 為
    Figure 03_image956
    。
  63. 如請求項59或61之化合物，其中經取代之雜環基或經取代之雜芳基係經一或多個選自烷基及環烷基之取代基取代。
  64. 如請求項53之化合物，其中Rd 係選自
    Figure 03_image958
    Figure 03_image960
    。
  65. 如請求項1至27中任一項之化合物，其中R3 為
    Figure 03_image962
    。
  66. 如請求項65之化合物，其中Re 為芳基。
  67. 如請求項66之化合物，其中芳基為苯基。
  68. 如請求項67之化合物，其中苯基為經取代之苯基。
  69. 如請求項68之化合物，其中經取代之苯基為經烷基取代之苯基。
  70. 如請求項69之化合物，其中Re 為
    Figure 03_image964
    。
  71. 如請求項65之化合物，其中Re 為雜環基。
  72. 如請求項71之化合物，其中雜環基為經取代之吡咯啶基。
  73. 如請求項72之化合物，其中經取代之吡咯啶基為經烷基取代之吡咯啶基。
  74. 如請求項73之化合物，其中Re 為
    Figure 03_image966
    。
  75. 如請求項1至74中任一項之化合物，其中R4 為H。
  76. 如請求項1至74中任一項之化合物，其中R4 為(C1 -C6 )-烷基。
  77. 如請求項76之化合物，其中R4 為甲基、乙基、異丙基、正丙基、異丁基、正丁基或第三丁基。
  78. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image968
    Figure 03_image970
    Figure 03_image972
    Figure 03_image974
    Figure 03_image976
    Figure 03_image978
    。
  79. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image980
    Figure 03_image982
    Figure 03_image984
    Figure 03_image986
    Figure 03_image988
    Figure 03_image990
    。
  80. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image992
    Figure 03_image994
    Figure 03_image996
    Figure 03_image998
    Figure 03_image1000
    。
  81. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1002
    Figure 03_image1004
    Figure 03_image1006
    Figure 03_image1008
    Figure 03_image1010
    。
  82. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1012
    Figure 03_image1014
    Figure 03_image1016
    Figure 03_image1018
    。
  83. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1020
    Figure 03_image1022
    。
  84. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1024
    Figure 03_image1026
    。
  85. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1028
    Figure 03_image1030
    Figure 03_image1032
    Figure 03_image1034
    Figure 03_image1036
    Figure 03_image1038
    Figure 03_image1040
    。
  86. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1042
    。
  87. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1044
    Figure 03_image1046
    。
  88. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1048
    。
  89. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1050
    Figure 03_image1052
    Figure 03_image1054
    Figure 03_image1056
    Figure 03_image1058
    Figure 03_image1060
    。
  90. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1062
    Figure 03_image1064
    Figure 03_image1066
    Figure 03_image1068
    Figure 03_image1070
    Figure 03_image1072
    。
  91. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至90中任一項之化合物；及醫藥學上可接受之賦形劑。
  92. 一種如請求項1至90中任一項之化合物之用途，其用於製造供治療選自由以下組成之群的疾病或病狀之藥物：發炎性腸病、迴腸肛門吻合術、嗜酸性食道炎、胰臟炎、胰島素依賴型糖尿病、乳房炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘、移植物抗宿主疾病、慢性肺發炎疾病、HIV及血液腫瘤。
  93. 如請求項92之用途，其中該疾病或病狀為發炎性腸病。
  94. 如請求項93之用途，其中該發炎性腸病為結腸炎、克隆氏病(Crohn's disease)、迴腸炎、乳糜瀉、非熱帶性口瘡、與血清陰性關節病相關之腸病、胃腸炎或結腸袋炎(pouchitis)。
  95. 如請求項94之用途，其中該疾病或病狀為結腸炎；且該結腸炎為潰瘍性結腸炎、顯微結腸炎(microscopic colitis)或膠原性結腸炎。
  96. 如請求項94之用途，其中該疾病或病狀為結腸袋炎；且該結腸袋炎為直腸結腸切除術(proctocolectomy)之結果。
  97. 如請求項92之用途，其中該疾病或病狀為胃腸炎。
  98. 如請求項97之用途，其中胃腸炎為嗜酸性胃腸炎。
  99. 如請求項92之用途，其中該疾病或病狀為嗜酸性食道炎。
  100. 如請求項92之用途，其中該疾病或病狀為慢性肺發炎疾病。
  101. 如請求項100之用途，其中該慢性肺發炎疾病為間質纖維化。
  102. 如請求項101之用途，其中該間質纖維化為過敏性肺炎、膠原蛋白疾病或類肉瘤病。
  103. 如請求項92之用途，其中該疾病或病狀為血液腫瘤。
  104. 如請求項103之用途，其中該血液腫瘤係選自由以下組成之群：急性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)及多發性骨髓瘤。
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